ES2555544T3 - Composiciones que incluyen hemaglutinina, métodos de preparación y métodos de uso de las mismas - Google Patents

Composiciones que incluyen hemaglutinina, métodos de preparación y métodos de uso de las mismas Download PDF

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Albert E. Price
Lynda G. Tussey
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Thomas J. Powell
Robert K. Evans
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Abstract

Un método de preparación de una proteína que estimula una respuesta inmunitaria protectora ante el virus de la gripe en un sujeto, que comprende las etapas de: a) separar una porción de proteína de una hemaglutinina vírica de gripe de origen natural, en la que la porción de proteína incluye al menos una porción de una cabeza globular y al menos una porción de al menos una estructura secundaria que tiene al menos una lámina ß en la parte inferior de la cabeza globular que causa que la cabeza globular retenga esencialmente su estructura terciaria, y carece de un dominio de fusión con membrana, un dominio transmembrana y un dominio citoplasmático; b) transformar una secuencia de ácido nucleico que codifica la porción de proteína en una célula hospedadora eucariótica que no es una célula hospedadora eucariótica de Pichia pastoris ni una célula hospedadora de insecto transfectada establemente; y c) cultivar la célula hospedadora para preparar así la proteína que estimula una respuesta inmunitaria protectora en un sujeto; y d) fusionar al menos una porción de una flagelina con la porción de proteína de la hemaglutinina vírica de origen natural o ligar operativamente una secuencia de ácido nucleico que codifica la flagelina con una secuencia de ácido nucleico que codifica la porción de proteína de la hemaglutinina vírica de origen natural, en la que la flagelina activa el receptor de tipo Toll 5.

Description

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La Figura 22 representa el reconocimiento de epítopos de flagelina de proteínas STFΔ en ELISA.
La Figura 23 representa la secreción dependiente de TLR5 de IL-8 después de la estimulación de células HEK293 con las proteínas STF2Δ indicadas.
La Figura 24 representa el cromatograma S200 de STF2Δ.HingeCys:CysH1C1. Vacío= volumen de columna vacía; conjugado= pico de elución de proteína: conjugado peptídico; se indican A260, A280 y conductividad.
La Figura 25 representa la secreción dependiente de TLR5 de IL-8 después de la estimulación de células RAWhTLR5 (símbolos negros) o células RAW negativas de TLR5 (símbolos blancos) con STF2Δ.HingeCys (cuadrados), conjugado de STF2Δ.HingeCys:CysH1C1 (círculos) o STF2.OVA (triángulos).
La Figura 26 representa el cromatograma S200 de STF2.4xH1C1. Vacío= volumen de columna vacía; conjugado= pico de elución de proteína: conjugado peptídico; se indican A260, A280 y conductividad.
La Figura 27 representa la respuesta de anticuerpo anti-H1C1 de ratones BALB/c inmunizados con péptido H1C1 nativo o péptido Pam3Cys.H1C1.
La Figura 28 representa una gráfica de la supervivencia de ratones BALB/c inmunizados con péptido H1C1 nativo o péptido Pam3Cys.H1C1 y después expuestos a una DL90 de virus de la gripe A/Puerto Rico/8/34.
La Figura 29 representa la secuencia aminoacídica de flagelina de tipo 2 de Salmonella typhimurium (fljB/STF2) con la región de bisagra subrayada (SEQ ID NO: 498).
La Figura 30 representa la secuencia de ácido nucleico (SEQ ID NO: 499) que codifica la SEQ ID NO: 498. La secuencia de ácido nucleico que codifica la región de bisagra está subrayada.
La Figura 31 representa la secuencia aminoacídica de fljB/STF2 sin la región de bisagra (a la que también se hace referencia en la presente memoria como "fljB/STF2Δ" o "STF2Δ") (SEQ ID NO: 500).
La Figura 32 representa la secuencia de ácido nucleico (SEQ ID NO: 501) que codifica la SEQ ID NO: 500.
La Figura 33 representa la secuencia aminoacídica de flagelina fliC de E. coli (a la que también se hace referencia en la presente memoria como "fliC de E. coli") con la región de bisagra subrayada (SEQ ID NO: 502).
La Figura 34 representa la secuencia de ácido nucleico (SEQ ID NO: 503) que codifica la SEQ ID NO: 502. La secuencia de ácido nucleico que codifica la región de bisagra está subrayada.
La Figura 35 representa la secuencia aminoacídica de flagelina fliC de S. muenchen (a la que también se hace referencia en la presente memoria como "fliC de S. muenchen") con la región de bisagra subrayada (SEQ ID NO: 504).
La Figura 36 representa la secuencia de ácido nucleico (SEQ ID NO: 505) que codifica la SEQ ID NO: 504 La secuencia de ácido nucleico que codifica la región de bisagra está subrayada.
La Figura 37 representa la secuencia aminoacídica de pMT/STF2. El ligador está subrayado y la secuencia de la señal de secreción BiP está en negrita (SEQ ID NO: 506).
La Figura 38 representa la secuencia de ácido nucleico (SEQ ID NO: 507) de SEQ ID NO: 506. La secuencia de ácido nucleico que codifica el ligador está subrayada y la secuencia de ácido nucleico que codifica la secuencia BiP está en negrita.
La Figura 39 representa una proteína de fusión Pam3Cys.M2e. Se muestra la secuencia aminoacídica (SEQ ID NO: 510) de M2e en negrita.
La Figura 40 representa la activación de una célula presentadora de antígeno (APC) por señalización de receptor de tipo Toll (TLR).
Las Figuras 41A y 41B representan constructos de plásmido para expresar el extremo amino de aislamientos víricos de gripe A de M2 (p.ej., SEQ ID NO: 510, 554) de H1 y H5 (SEQ ID NO: 536). pMT: vector de expresión basado en el promotor de metalotioneína. BiP: secuencia señal de secreción de proteína de unión a inmunoglobulina. STF2: flagelina completa de S. typhimurium. STF2Δ: STF2 con región de bisagra eliminada. MCS: sitio de clonación múltiple.
La Figura 42 representa constructos de plásmido diseñados para expresar HA de los aislamientos de virus de la gripe A H1 y H5. AOX1: promotor AOX1 del vector de expresión pPICZα (Invitrogen Corporation, Carlsbad, CA). αf: secuencia señal de secreción de levadura. STF2: flagelina completa de S. typhimurium. STF2Δ: STF2 con región de bisagra eliminada. MCS: sitio de clonación múltiple.
La Figura 43 representa la secuencia aminoacídica (SEQ ID NO: 561) de HA (PR8).
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Se produjo este antígeno (60) en Drosophila como una proteína marcada con his.
La Figura 66 representa la inmunidad protectora de STF2Δ.EIII+ (SEQ ID NO: 673, 674) y STF2.EIII+ (SEQ ID NO: 657, 658) ante exposición vírica a WNV. Se inmunizaron los ratones y se expusieron a una dosis letal de WNV cepa 2741 el día 35. Se monitorizó la supervivencia durante 21 días.
La Figura 67 representa los títulos séricos de IgG después de inmunización con proteínas de fusión. Las proteínas STF2Δ.EIII+ inducen anticuerpos de IgG específicos de WNV. Se inmunizaron los ratones s.c. los días 0, 14 y 28 con PBS solo o aproximadamente 25 µg de STF2Δ.EIII+ (SEQ ID NO: 673, 674) (045 [control positivo]), STF2Δ.EIII+ (067, trímero), STF2Δ.EIII+ (070, monómero) o STF2Δ.EIIIs+ (SEQ ID NO: 675, 676) (069). El día 35, se caracterizaron los sueros de ratones individuales por ELISA directa para determinar los niveles de IgG. Se usó proteína WNV-E purificada (060, producida en Drosophila como una proteína marcada con his) como antígeno en este ensayo.
La Figura 68 representa la inmunidad protectora de STF2Δ.EIII+ (SEQ ID NO: 673, 674) y STF2ΔEIIIs+ (SEQ ID NO: 675, 673) en ratones ante exposición letal a WNV. El día 38 después de la inmunización con proteínas de fusión, se expusieron todos los grupos a una dosis letal de WNV cepa 2741 y se monitorizó la supervivencia durante 21 días. Se indica la supervivencia para cada grupo (10 ratones/grupo) como un porcentaje.
La Figura 69 representa ensayos de competición. Se incubaron diluciones en serie (de 5 veces partiendo de 1:25) de antisueros de animales inmunizados con proteína WNE biotinilada (SEQ ID NO: 642) y se añadieron entonces a los pocillos de placas ELISA recubiertas con mAb 7H2 a aproximadamente 2 mg/ml. Se desarrollaron los pocillos usando avidina-HRP para determinar la inhibición de la unión a proteína del Nilo occidental como resultado de la competición con mAb 7H2.
La Figura 70 representa la cartografía epitópica de la respuesta de anticuerpo inducida por las proteínas de fusión STF2Δ.EIII+ (SEQ ID NO: 675, 676). Se examinó en los sueros inmunitarios de animales inmunizados con las proteínas de fusión de STF2Δ indicadas (E2-21, E27-E52, Figura 142) la capacidad de reconocer péptidos superpuestos correspondientes al empalme de los dominios I y III de la proteína de envoltura de WNV.
La Figura 71 representa la cartografía epitópica de la respuesta de anticuerpo inducida por las proteínas de fusión epitópicas E-21 (proteína de envoltura) de STF2Δ.EIIIs+ (SEQ ID NO: 675, 676). Se evaluaron los sueros inmunitarios de animales inmunizados con las proteínas de fusión STF2Δ indicadas (E2-21, E2-21-1(S,C), E2-21-2(C,S), E2-21-2(C,S) y E2-21-4 a E2-21-24, véase la Figura 139) para identificar los residuos que definen el epítopo E-21 de la proteína de envoltura del Nilo occidental. Los datos reflejan la respuesta de los sueros ante E-21 después de la sustitución de cisteína por serina (indicada por C, S) y el reemplazo secuencial de aminoácidos por alanina. Se enumeran en la Figura 139 los péptidos ensayados.
La Figura 72 representa anticuerpos de IgG específicos de EIII inductores de Pam3Cys.WNV001 (SEQ ID NO: 771). Se inmunizaron los ratones s.c. los días 0, 14 y 28 con PBS solo, 22 mg de WNV001 no modificado (SEQ ID NO: 771) o 30 µg de Pam3Cys.WNV001. El día 35, se caracterizaron los sueros de ratones individuales por ELISA directa para determinar los niveles de IgG contra péptido WNV001 sintético.
La Figura 73 representa las secuencias aminoacídicas (SEQ ID NO: 691-698) del empalme EI/EIII para virus del Nilo occidental, de encefalitis japonesa y del dengue (serotipos 1 a 4). El epítopo del Nilo occidental identificado usando antisueros de animales inmunizados con STF2Δ.EIIIs + está subrayado. Esta secuencia corresponde al péptido E221 (SEQ ID NO: 728).
La Figura 74 representa un péptido tripalmitoilado.
La Figura 75 representa el dominio D1, el dominio D2, el dominio de activación de TLR5 e hipervariable (dominio D3) de flagelina.
La Figura 76 representa el dominio D1, el dominio D2, el dominio de activación de TLR5 e hipervariable (dominio D3) de flagelina (Yonekura, et al. Nature 424, 643-650 (2003)).
La Figura 77 representa los dominios D0, D1, D2 y D3 de flagelina y las regiones de los dominios D2 y D3 adecuadas para inserción o sustitución con antígenos (p.ej. sitio de escisión madurativa, HA, M2e).
La Figura 78 representa la secuencia aminoacídica de flagelina de Pseudomonas aeruginosa (SEQ ID NO: 815). Los residuos de lisina están indicados por asteriscos.
La Figura 79 representa la secuencia aminoacídica de flagelina de S. typhimurium (SEQ ID NO: 816). Los residuos de lisina están indicados por asteriscos.
La Figura 80 representa la secuencia aminoacídica (SEQ ID NO: 820) de flagelina de Listeria monocytogenes (nº de acceso a GenBank: Q92DW3). Los residuos de lisina están indicados por asteriscos.
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Se cree que la inhibición de la unión de hemaglutinina es indicativa de la capacidad de los anticuerpos, formados a partir de las composiciones y mediante los métodos de la invención, de neutralizar los sitios de unión de ácido siálico de la hemaglutinina vírica de origen natural ("neutralización de la unión de HA") y, así, prevenir la infección de la célula hospedadora como consecuencia de la estimulación de una respuesta inmunitaria protectora. Se cree que la inhibición o neutralización de la unión de hemaglutinina se correlaciona con la capacidad de una respuesta inmunitaria de proteger frente a una dosis letal de virus.
La neutralización de la unión de HA puede valorarse mediante ensayos in vitro (véanse, por ejemplo, "Current Protocols in Immunology" 19.11.1-19.11.32, Cottey, R., et al., Supl. 42, John Wiley & Sons, Inc. (2001) y "WHO Manual on Animal Influenza Diagnosis and Surveillance", Webster, R., et al., páginas 28-36, 48-54, 82-92 (2002)). Los ensayos de neutralización vírica ejemplares se basan en la capacidad del suero de unirse específicamente a y prevenir la replicación de virus de la gripe en cultivo, tal como en la estirpe celular de riñón canino Madin-Darby (MDCK). Brevemente, se cultivan células en placas de 96 pocillos en presencia de un virus previamente titulado y se observa el efecto citopático del virus replicante al microscopio. Para ensayar el suero, se preparan diluciones en serie del suero y se preincuban con la disolución madre vírica durante 2 horas a 37 ºC antes de infectar las células MDCK. Se incuba la mezcla durante 2 horas adicionales, después de lo cual se retira la mezcla de virus/suero y se reemplaza por medio reciente. Se hacen crecer las células durante 4 días. Se puntúan los pocillos como positivos de crecimiento vírico si al menos aproximadamente un 50 % de las células mueren en al menos aproximadamente la mitad de los pocillos para una dilución sérica dada. El recíproco de la dilución máxima de suero que protege al menos aproximadamente a la mitad de las células de la muerte, en al menos aproximadamente la mitad de los pocillos, se considera el título de neutralización.
Como alternativa, puede efectuarse un ensayo de microneutralización in vitro para valorar la neutralización de la unión de HA. Por ejemplo, se diluye suero, se preincuba con un título conocido de virus y se mezcla con células MDCK, como se describe anteriormente. Después de 2 días de incubación, se lavan las células y se fijan con acetona. Se desarrollan las placas como ELISA usando un anticuerpo monoclonal del antígeno nuclear de la gripe NP. Se determina el título de microneutralización como el recíproco de la dilución máxima que procura menos de aproximadamente un 50 % de la lectura anti-NP de los pocillos de control de solo virus.
El ensayo de inhibición de hemaglutinina (HAI) está basado en el antígeno HA sobre la superficie del virus de la gripe, que aglutina eritrocitos (RBC) y previene que los eritrocitos precipiten. Los anticuerpos que se unen específicamente a las regiones de unión a ácido siálico de HA previenen la aglutinación al permitir la precipitación. Se efectúa el ensayo en placas de fondo en V de 96 pocillos con RBC de pollo recientes. Se titula una disolución madre de antígenos víricos de modo que esté presente aproximadamente un exceso de 4 veces respecto a la cantidad mínima necesaria para prevenir la precipitación. El suero de ensayo, que puede ser de varias especies incluyendo ratón, hurón, ave de corral o humano, se calienta a aproximadamente 56 ºC para inactivar el complemento. Se efectúan diluciones en serie 2x del suero inactivado y se mezclan con la disolución madre de HA. Después de aproximadamente 30 minutos a temperatura ambiente, se añaden RBC y se incuba la placa durante aproximadamente 30 a aproximadamente 45 minutos. Se puntúan los resultados mediante las observaciones: la aglutinación da como resultado pocillos turbios mientras que la inhibición da como resultado un "botón" de eritrocitos precipitados en el fondo del pocillo. Los controles incluyen RBC sin HA, que forma un botón, y HA y RBC sin suero, que permanece turbio. El título de HAI de una muestra sérica particular es el recíproco de la última dilución que previene la aglutinación (concretamente, forma un botón). Por ejemplo, si una dilución de aproximadamente 1:128 se lee como un botón, pero la dilución 1:256 no, el título de HAT es de aproximadamente 128.
En una realización, la invención incluye preparar una proteína que estimula una respuesta inmunitaria protectora en un sujeto, que comprende las etapas de separar una porción de proteína de una hemaglutinina vírica de origen natural preparando así una porción de proteína, en el que la porción de proteína incluye al menos una porción de una cabeza globular y al menos una porción de al menos una estructura secundaria que causa que la cabeza globular retenga esencialmente su estructura terciaria, y en el que la porción de proteína carece de un dominio de fusión con membrana, un dominio transmembrana y un dominio citoplasmático. La secuencia de ácido nucleico que codifica la porción de proteína se transforma en una célula procariótica y se cultiva la célula procariótica hospedadora para preparar así la proteína que estimula una respuesta inmunitaria protectora en un sujeto.
"Una porción de una proteína" o "porción de proteína", como se usa en la presente memoria con referencia a una hemaglutinina vírica de origen natural, hace referencia a cualquier parte de la hemaglutinina vírica de origen natural que es menor que la hemaglutinina vírica de origen natural entera. "Hemaglutinina vírica de origen natural", como se usa en la presente memoria, hace referencia a la hemaglutinina vírica entera, como aparece en la naturaleza.
La porción de proteína puede carecer además de una secuencia señal. La porción de proteína puede incluir además un sitio de unión a ácido siálico.
Las porciones de proteína de hemaglutinina vírica de origen natural para uso en las composiciones y métodos de la invención pueden ser una porción de Orthomyxoviridae (gripe A, B, C), Paramyxovirus (paragripe, virus respiratorio sincitial, virus de la enfermedad de Newcastle, Nipah, sarampión, moquillo canino, virus de Sendai), Reoviridae (rotavirus), Parvoviridae (parvovirus humano, parvovirus porcino), Orthopoxvirus (virus de la viruela de los monos, virus de ectromelia), Flaviviridae (del Nilo occidental, de la encefalitis japonesa, de St. Louis, del valle del Murray, de
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Kunjin), Avipoxvirus (viruela aviar), virus de Nipah (Guillaume V., et al., J. Virol., 80: 7546-54 (2006)); virus del moquillo canino (Singethan K., et al., J. Gen. Virol., 87: 1635-42 (2006)); virus de la enfermedad de Newcastle, (de Leeuw O.S., et al., J. Gen. Virol., 86: 1759-69 (2005) y Melanson V.R., et al., J. Virol., 78: 13053-61 (2004); Deng R., et al., Virology, 204: 17-26; (1994)), sarampión (Masse N., et al., J. Virol., 78: 9051-63 (2004)), virus de Sendai (Tomasi M., et al., FEBS Lett., 11: 56-60 (2003)), paragripe humana (Porotto M., et al., J. Virol., 79: 2383-92 (2005); Tsurudome M., et al., Virology, 213: 190-203 (1995); Bousse T., et al., Virology, 209: 654-7 (1995) y Takimoto T., et al., J. Virol., 66: 7597-600 (1992)).
Las porciones de hemaglutinina vírica ("porciones de proteína") (p.ej., una hemaglutinina vírica de gripe A, gripe B y gripe C) pueden incluir al menos un miembro seleccionado del grupo consistente en porciones de proteína a las que se hace referencia en la presente memoria como "HA1-1," "HA1-2" y "HA1-3."
"HA1-1," como se usa en la presente memoria, hace referencia a una porción de proteína de una hemaglutinina vírica que incluye al menos un sándwich β que incluye el sitio de unión a sustrato, que incluye al menos aproximadamente dos láminas β, al menos aproximadamente de 2 a 3 hélices α cortas, al menos una lámina β pequeña y un sándwich β pequeño adicional en la parte inferior de la molécula y al menos aproximadamente 4 enlaces disulfuro. El sándwich β que incluye el sitio de unión a sustrato de HA1-1 incluye al menos aproximadamente 4 hebras β como lámina superior y al menos de aproximadamente 3 a aproximadamente 4 hebras β como lámina inferior. Al menos aproximadamente una hélice α de la porción HA1-1 está localizada al lado del sándwich β que incluye el sitio de unión a sustrato y al menos aproximadamente 1 a aproximadamente 2 están localizadas en la parte inferior del sándwich β que incluye el sitio de unión a sustrato. El sándwich β pequeño de HA1-1 puede incluir al menos de aproximadamente 2 a aproximadamente 3 hebras β en cada lámina β; o de aproximadamente 3 a aproximadamente 4 hebras β. Las porciones de proteína HA1-1 ejemplares incluyen las SEQ ID NO: 8, 11, 14, 17, 20, 38, 40, 45, 47, 49, 179, 180, 181 y 182.
"HA1-2," como se usa en la presente memoria, hace referencia a una porción de proteína de una hemaglutinina vírica que incluye al menos un sándwich β que incluye el sitio de unión a sustrato, al menos de aproximadamente 2 a aproximadamente 3 hélices α cortas, al menos aproximadamente una lámina β pequeña en la parte inferior de la molécula y al menos aproximadamente 2 enlaces disulfuro. Una hebra β en una hemaglutinina vírica puede incluir entre aproximadamente 2 y aproximadamente 15 aminoácidos. Una hebra β pequeña puede incluir aproximadamente 2 aminoácidos, o entre aproximadamente 2 y aproximadamente 3 aminoácidos, o entre aproximadamente 2 y 4 aminoácidos, o entre aproximadamente 2 y aproximadamente 5 aminoácidos. Una lámina β pequeña puede incluir entre aproximadamente 2 y aproximadamente 3 hebras β, o entre aproximadamente 3 y aproximadamente 4 hebras β. El sándwich β que incluye el sitio de unión a sustrato de HA1-2 puede incluir además al menos aproximadamente 4 hebras β como lámina superior y al menos de aproximadamente 3 a aproximadamente 4 hebras β como lámina inferior. Al menos aproximadamente una hélice α de la porción HA1-2 está localizada al lado del sándwich β que incluye el sitio de unión a sustrato, y al menos aproximadamente 1 a aproximadamente 2 están localizadas en la parte inferior del sándwich β que incluye el sitio de unión a sustrato. Las porciones de proteína HA1-2 ejemplares incluyen las SEQ ID NO: 9, 12, 15, 18, 21, 24, 26, 28, 30, 32, 39, 41, 46, 48 y 50.
"HA1-3," como se usa en la presente memoria, hace referencia a una porción de proteína de una hemaglutinina vírica que incluye al menos un sándwich β que incluye el sitio de unión a sustrato, al menos aproximadamente 2 hélices α cortas y al menos un enlace disulfuro. "Sándwich ß," como se usa en la presente memoria, hace referencia a al menos aproximadamente 2 conjuntos de láminas ß que forman al menos aproximadamente una capa interactiva. "Sitio de unión a sustrato", como se usa en la presente memoria con referencia al sándwich β, significa cualquier parte de la porción de hemaglutinina vírica de origen natural que tenga la capacidad de interaccionar o unirse a una molécula. Por ejemplo, el sándwich β que incluye el sitio de unión a sustrato de la porción puede incluir una porción que se une a ácido siálico. El sándwich β que incluye el sitio de unión a sustrato de HA1-3 puede incluir además al menos aproximadamente 4 hebras β como lámina superior y al menos aproximadamente 3 hebras β como lámina inferior. Al menos aproximadamente una hélice α de la porción HA1-1 está localizada al lado del sándwich β que incluye el sitio de unión a sustrato y al menos otra hélice α está localizada en la parte inferior del sándwich β que incluye el sitio de unión a sustrato. Una hélice α corta puede incluir menos de aproximadamente 5 giros (2, 3, 4, 5 giros) en una hélice α. Una hélice α en una hemaglutinina vírica puede ser de entre 1 y aproximadamente 15 giros, o de entre aproximadamente 2 a 15 giros. Las porciones de proteína HA1-3 ejemplares incluyen las SEQ ID NO: 10, 13, 16, 19, 22, 25, 27, 29, 31 y 33.
"Un sitio de unión a ácido siálico", como se usa esa frase en la presente memoria con referencia a la porción de la proteína de hemaglutinina vírica de origen natural, significa una parte de la porción de proteína que tiene la capacidad de interaccionar con residuos de ácido siálico. Se hace referencia también en la presente memoria a "un sitio de unión a ácido siálico" como "un dominio de unión a ácido siálico".
"Al menos una porción", como se usa en la presente memoria, hace referencia a cualquier parte de un componente (p.ej., una cabeza globular, una estructura secundaria) o molécula (p.ej., una proteína, antígeno, receptor de tipo Toll, un péptido, flagelina, HA, proteína de matriz 2 (M2), ectodominio de matriz 2 (M2e)) o la totalidad del componente o la molécula. Se hace referencia también en la presente memoria a "al menos una porción" como un "fragmento".
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Se hace referencia con "al menos una porción", como se usa en la presente memoria con referencia a una flagelina (p.ej. fljB/STF2, fliC de E. coli, fliC de S. muenchen), a cualquier parte de la flagelina (p.ej., motivo C motivo N, dominio 1, 2, 3) o a la totalidad de la flagelina que puede iniciar una ruta de transducción de señal intracelular para un receptor de tipo Toll.
Un solo polipéptido puede exhibir varios tipos de estructura secundaria. Sin interacciones estabilizadoras, un polipéptido puede asumir una conformación de ovillo aleatorio. Sin embargo, las estructuras secundarias tales como hélices alfa (α) y hebras beta (β) pueden estabilizar una proteína o una porción de una proteína. La asociación lateral de hebras β forma láminas β (a las que también se hace referencia en la presente memoria como "láminas β plegadas"). Las estructuras secundarias pueden localizarse en las superficies de la porción, proteína o proteína de origen natural (p.ej. hemaglutinina vírica, flagelina, M2e). La estructura terciaria de una proteína es la disposición tridimensional de residuos aminoacídicos. En contraposición con la estructura secundaria, que se estabiliza por ejemplo por enlaces de hidrógeno, hélices α o hebras β, la estructura terciaria es el resultado de interacciones hidrófobas entre las cadenas laterales no polares de la porción, proteína o hemaglutinina vírica de origen natural. Las interacciones hidrófobas mantienen las hebras de hélices en ovillos aleatorios con una estructura interna compacta. El tamaño y forma de una proteína pueden depender de su secuencia aminoacídica primaria así como del número, tamaño y disposición de las estructuras secundarias.
"Una cabeza globular", como se usa esa frase en la presente memoria, hace referencia a una porción de una proteína de hemaglutinina vírica de origen natural que incluye las regiones de unión a receptor o ácido siálico. Se hace referencia también en la presente memoria a "cabeza globular" como un "dominio globular". La cabeza globular de las proteínas de hemaglutinina vírica se ha determinado basándose en cristalografía de rayos X como se describe, por ejemplo, en Wilson I.A., et al. Nature 289: 366-373 (1981); Chen, J., et al., Cell 95: 409-417 (1998);Ha Y., et al., The EMBO Journal 21: 865-875 (2002); Russell, R.J., et al., Virology 325: 287-296 (2004) y Cox, N.J., et al., en: "Toply and Wilson's Microbiology and Microbial Infections", eds. BWJ Mathy, et al., Vol. 1 (9ª ed.) Nueva York, NY, Oxford Univ. Press, Cap. 32, pág. 634 (1998). La cabeza globular de una hemaglutinina vírica de origen natural es un componente de la subunidad HA1 de, por ejemplo, hemaglutinina vírica de la gripe. Además del dominio de unión a receptor, la cabeza globular puede incluir el subdominio E y el subdominio F como se describen, por ejemplo, en Ha, Y., et al. The EMBO Journal 21: 865-875 (2002).
La frase "causa que la cabeza globular retenga esencialmente su estructura terciaria", como se usa en la presente memoria, hace referencia a un mantenimiento de la estructura terciaria de la cabeza globular de la hemaglutinina vírica de origen natural suficiente para estimular una respuesta inmunitaria protectora en un sujeto.
El dominio de fusión con membrana de una hemaglutinina vírica es aquella región de la hemaglutinina vírica (implicada en la unión de hemaglutinina vírica) que se une a una célula hospedadora. Un dominio transmembrana de la hemaglutinina vírica es aquella porción de la hemaglutinina vírica que atraviesa la membrana del virus. Un dominio citoplasmático de una hemaglutinina vírica es aquella porción de la hemaglutinina vírica localizada en la superficie citoplasmática del virus.
La porción de la proteína de hemaglutinina vírica de origen natural (a la que también se hace referencia en la presente memoria como "porción de proteína" puede carecer además de una secuencia señal. La porción de cabeza globular empleada en los métodos descritos en la presente memoria puede incluir al menos una porción de al menos una estructura secundaria que incluye al menos una porción de al menos una lámina β plegada, al menos una hélice α y/o al menos un miembro seleccionado del grupo consistente en un puente salino, una cremallera de leucina y un dedo de cinc. La porción de cabeza globular puede incluir además al menos aproximadamente 1 enlace disulfuro, al menos aproximadamente 2 enlaces disulfuro, al menos 3 enlaces disulfuro, al menos aproximadamente 4 enlaces disulfuro, al menos aproximadamente 5 enlaces disulfuro y al menos aproximadamente 6 enlaces disulfuro.
El método de preparación de una proteína que estimula una respuesta inmunitaria protectora en un sujeto puede incluir además la etapa de sustituir una secuencia de ácido nucleico que codifica al menos un residuo aminoacídico hidrófobo en la porción de proteína por una secuencia de ácido nucleico que codifica al menos un residuo aminoacídico seleccionado del grupo consistente en un residuo aminoacídico hidrófilo, un residuo aminoacídico polar y un residuo aminoacídico neutro. El residuo aminoacídico hidrófobo sustituido puede incluir al menos un miembro seleccionado del grupo consistente en un residuo de fenilalanina, un residuo de triptófano y un residuo de tirosina. El residuo aminoacídico polar que sustituye al aminoácido hidrófobo puede incluir al menos un miembro seleccionado del grupo consistente en un residuo de ácido aspártico y un residuo de ácido glutámico.
La porción de proteína de una hemaglutinina vírica de origen natural puede ser una porción de una proteína de hemaglutinina vírica de origen natural de la gripe (p.ej., gripe A, B y C). La proteína de hemaglutinina vírica de gripe A puede ser al menos un miembro seleccionado del grupo consistente en H1, H2, H3, H5, H7 y H9.
La célula hospedadora empleada en los métodos descritos en la presente memoria puede ser una célula hospedadora procariótica. La célula hospedadora procariótica puede ser al menos un miembro seleccionado del grupo consistente en una célula hospedadora procariótica de E. coli, una célula hospedadora procariótica de Pseudomonas, una célula hospedadora procariótica de Bacillus, una célula hospedadora procariótica de Salmonella y una célula hospedadora procariótica de P. fluorescens.
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El método de preparación de una proteína que estimula una respuesta inmunitaria protectora en un sujeto puede incluir además la etapa de transformar la célula hospedadora procariótica con una secuencia de ácido nucleico chaperona. La secuencia de ácido nucleico chaperona puede ser al menos un miembro seleccionado del grupo consistente en una chaperona groES-groEL, una chaperona dnaK-dnaJ-grpE, una chaperona groES-groEL-tig y una chaperona tig.
El método de preparación de una proteína que estimula una respuesta inmunitaria protectora en un sujeto puede incluir además la etapa de fusionar al menos una porción de un agonista de receptor de tipo Toll (TLR) con la proteína. La secuencia de ácido nucleico que codifica al menos una porción de un agonista de receptor de tipo Toll puede ligarse operativamente con la secuencia de ácido nucleico que codifica la porción de proteína de hemaglutinina vírica. Puede haber un ligador (p.ej. ligador peptídico) entre el agonista de receptor de tipo Toll y la porción de hemaglutinina vírica.
Los receptores de tipo Toll hacen referencia a una familia de proteínas receptoras que son homólogas de la proteína Toll de Drosophila melanogaster. Los receptores de tipo Toll son proteínas receptoras de señalización transmembrana de tipo I caracterizadas por un dominio extracelular repetido rico en leucina y un dominio intracelular homólogo de un receptor de interleucina 1. Los receptores de tipo Toll incluyen TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR 8, TLR9, TLR10, TLR11 y TLR12.
"Agonista," como se usa en la presente memoria con referencia a un TLR, significa una molécula que activa una ruta de señalización de TLR. Una ruta de señalización de TLR es una ruta de transducción de señal intracelular empleada por un TLR particular que puede activarse por un ligando de TLR o agonista de TLR. Se emplean rutas intracelulares comunes por los TLR e incluyen, por ejemplo, NF-κB, cinasa N-terminal Jun y proteína cinasa activada por mitógeno. El agonista de receptor de tipo Toll puede incluir al menos un miembro seleccionado del grupo consistente en un agonista de TLR1, un agonista de TLR2 (p.ej. Pam3Cys, Pam2Cys, lipoproteína bacteriana), un agonista de TLR3 (p.ej., ARNbc), un agonista de TLR4 (p.ej., lipopolisacárido bacteriano), un agonista de TLR5 (p.ej. una flagelina), un agonista de TLR6, un agonista de TLR7, un agonista de TLR8, un agonista de TLR9 (p.ej. motivos de ADN no metilados), un agonista de TLR10, un agonista de TLR11 y un agonista de TLR12. La presente invención se refiere a una flagelina, concretamente un antagonista de TLR5.
Los agonistas de receptor de tipo Toll para uso en los métodos y composiciones de la invención pueden ser un componente agonista de receptor de tipo Toll que es al menos una porción de un agonista de receptor de tipo Toll, en el que el componente agonista de receptor de tipo Toll incluye al menos un residuo de cisteína en una posición en que no aparece una cisteína en el agonista de receptor de tipo Toll nativo, activando el componente agonista de receptor de tipo Toll un receptor de tipo Toll.
Los ligandos de TLR4 (p.ej. agonistas de TLR4) para uso en las composiciones y métodos de la invención pueden incluir al menos un miembro seleccionado del grupo consistente en las SEQ ID NO: 359-406 (véanse los documentos PCT/US 2006/002906/WO 2006/083706, PCT/US 2006/003285/WO 2006/083792, PCT/US 2006/041865 y PCT/US 2006/042051).
GGKSGRTG
(SEQ ID NO: 359)
KGYDWLVVG
(SEQ ID NO: 360)
EDMVYRIGVP
(SEQ ID NO: 361)
VKLSGS
(SEQ ID NO: 362)
GMLSLALF
(SEQ ID NO: 363)
CVVGSVR
(SEQ ID NO: 364)
IVRGCLGW
(SEQ ID NO: 365)
AAEERTLG
(SEQ ID NO: 366)
WARVVGWLR
(SEQ ID NO: 367)
SEGYRLFGG
(SEQ ID NO: 368)
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WYLPWLG
(SEQ ID NO: 396)
WPFPRTF
(SEQ ID NO: 397)
WPFPAYW
(SEQ ID NO: 398)
FLGLRWL
(SEQ ID NO: 399)
SRTDVGVLEV
(SEQ ID NO: 400)
REKVSRGDKG
(SEQ ID NO: 401)
DWDAVESEYM
(SEQ ID NO: 402)
VSSAQEVRVP
(SEQ ID NO: 403)
LTYGGLEALG
(SEQ ID NO: 404)
VEEYSSSGVS
(SEQ ID NO: 405)
VCEVSDSVMA
(SEQ ID NO: 406)
Los ligandos de TLR2 (p.ej., agonistas de TLR2) para uso en las composiciones y métodos de la invención pueden incluir también al menos un miembro seleccionado del grupo consistente en las SEQ ID NO: 455-494 (véanse los documentos PCT/US 2006/002906/WO 2006/083706, PCT/US 2006/003285/WO 2006/083792, PCT/US 2006/041865/WO 2006/042051).
NPPTT
(SEQ ID NO: 455)
MRRIL
(SEQ ID NO: 456)
MISS
(SEQ ID NO: 457)
RGGSK
(SEQ ID NO: 458)
RGGF
(SEQ ID NO: 459)
NRTVF
(SEQ ID NO: 460)
NRFGL
(SEQ ID NO: 461)
SRHGR
(SEQ ID NO: 462)
IMRHP
(SEQ ID NO: 463)
EVCAP
(SEQ ID NO: 464)
ACGVY
(SEQ ID NO: 465)
CGPKL
(SEQ ID NO: 466)
AGCFS
(SEQ ID NO: 467)
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nucleico que codifica la porción de proteína a una célula hospedadora eucariótica, en el que la célula hospedadora eucariótica no es una célula hospedadora eucariótica de insecto y cultivar la célula hospedadora eucariótica preparando así la proteína que estimula una respuesta inmunitaria protectora en un sujeto.
En una realización adicional, el método de preparación de una proteína que estimula una respuesta inmunitaria protectora en un sujeto comprende las etapas de separar una porción de proteína de una hemaglutinina vírica de origen natural para formar así una porción de proteína, en el que la porción de proteína incluye al menos una porción de una cabeza globular y al menos una porción de al menos una estructura secundaria que causa que la cabeza globular retenga esencialmente su estructura terciaria, y en el que la porción de proteína carece de un dominio de fusión con membrana, un dominio transmembrana y un dominio citoplasmático; transfectar una secuencia de ácido nucleico que codifica la porción de proteína a una célula hospedadora eucariótica, en el que la célula hospedadora eucariótica no es una célula de insecto transformada establemente y cultivar la célula hospedadora eucariótica preparando así la proteína que estimula una respuesta inmunitaria protectora en un sujeto.
En otra realización adicional, el método de preparación de una proteína que estimula una respuesta inmunitaria protectora en un sujeto comprende las etapas de separar una porción de proteína de una hemaglutinina vírica de origen natural para preparar así una porción de proteína, en el que la porción de proteína incluye al menos una porción de una cabeza globular y al menos una porción de al menos una estructura secundaria que causa que la cabeza globular retenga esencialmente su estructura terciaria, y en el que la porción de proteína carece de un dominio de fusión con membrana, un dominio transmembrana y un dominio citoplasmático; infectar una secuencia de ácido nucleico que codifica la porción de proteína en una célula hospedadora de insecto (p.ej., una célula hospedadora de insecto con baculovirus tal como células Sf9 o High5) y cultivar la célula hospedadora de insecto preparando así la proteína que estimula una respuesta inmunitaria protectora en un sujeto.
Los métodos de preparación de una proteína que estimula una respuesta inmunitaria protectora en un sujeto pueden incluir además la etapa de eliminar al menos un sitio de glucosilación en la secuencia de ácido nucleico que codifica la porción de proteína. El sitio de glucosilación que se elimina puede incluir un sitio de N-glucosilación.
Las células hospedadoras eucarióticas empleadas en los métodos de la invención pueden incluir una célula hospedadora eucariótica de Saccharomyces, una célula hospedadora eucariótica de insecto (p.ej., al menos un miembro seleccionado del grupo consistente en una célula de insecto infectada con Baculovirus, tal como células de Spodoptera frugiperda (Sf9) o Trichhoplusia ni (High5) y una célula de insecto de Drosophila tal como células Dme12), una célula hospedadora eucariótica fúngica, una célula hospedadora eucariótica parásita (p.ej., una célula hospedadora eucariótica de Leishmania tarentolae), células CHO, células de levadura (p.ej. Pichia) y una célula hospedadora de Kluyveromyces lactis.
Las células hospedadoras eucarióticas adecuadas pueden incluir también células vegetales (p.ej. tomate, cloroplasto, células de plantas monocotiledóneas y dicotiledóneas, Arabidopsis thaliana, Hordeum vulgare, Zea mays, patata tal como Solanum tuberosum, zanahoria tal como Daucus carota L. y tabaco tal como Nicotiana tabacum, Nicotiana benthamiana (Gils, M., et al., Plant Biotechnol. J. 3: 613-20 (2005); He, D.M., et al., "Colloids Surf B Biointerfaces", (2006);Huang, Z., et al., Vaccine 19: 2163-71 (2001); Khandelwal, A., et al., Virology. 308: 207-15 (2003); Marquet-Blouin, E., et al., Plant Mol. Biol. 51: 459-69 (2003); Sudarshana, M.R., et al. Plant Biotechnol. J. 4: 551-9 (2006); Varsani, A., et al., Virus Res., 120: 91-6 (2006); Kamarajugadda S., et al., Expert Rev. Vaccines 5: 839-49 (2006); Koya V, et al., Infect. Immun. 73: 8266-74 (2005); Zhang, X., et al., Plant Biotechnol. J. 4: 419-32 (2006)).
Las proteínas preparadas mediante los métodos de la invención y las composiciones de la invención pueden purificarse y caracterizarse empleando métodos bien conocidos (p.ej., cromatografía en gel, cromatografía de intercambio catiónico, PAGE-SDS) como se describe en la presente memoria.
Para la producción a gran escala, pueden emplearse técnicas de fermentación como se describen en la presente memoria. Las técnicas de fermentación ejemplares adicionales pueden incluir un ciclo propuesto que puede empezar con un cultivo inoculado en 6 l de medio MRBR, como se describe en la presente memoria, mantenido a aproximadamente 30 ºC aproximadamente a pH 7 y controlado por DO a más de aproximadamente un 30 %. Puede iniciarse entonces una alimentación de 6 l al menos aproximadamente 30 minutos después del agotamiento de la glucosa. El medio de alimentación de 6 l propuesto, cuando se combina con 6 l de medio MRBR, puede proporcionar las condiciones necesarias para el crecimiento de E. coli basado en la utilización de aproximadamente un 52 % del carbono para crecimiento. La alimentación puede incluir o no IPTG. El lote puede inducirse con IPTG al menos 2 mM, introducido como un bolo poco después de comenzar la alimentación para iniciar la producción. La velocidad de alimentación puede comenzar a aproximadamente 20 ml de alimentación por hora por litro de volumen de biorreactor y aumentar con el tiempo basándose en la capacidad del cultivo de aceptar más glucosa sin acumulación de glucosa. El cultivo puede recolectarse cuando la alimentación se completa. El medio de alimentación de 6 l, aproximadamente a pH 6,0, puede incluir glucosa 180 g/l, KH2PO4 2 g/l, NaH2PO4 (H2O) 4 g/l, (NH4)2HPO4 12 g/l, (NH4)2HSO4 4 g/l, DL-alanina 40 g/l, ácido cítrico 4 g/l, MgSO4 (7H2O) 5,5 g/l, trazas metálicas 6 ml, CaCl2 2,5 g/l, FeSO4 7H2O 1 g/l.
La disgregación y clarificación celular en una producción a gran escala pueden incluir la retirada de Triton X-100 del
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producto; (d) el producto producido en huevos no puede usarse en individuos con alergia a los huevos y (e) un riesgo significativo de que la vacuna multivalente típica no confiera protección ante una cepa pandémica de virus ante el que la población humana no tenga inmunidad preexistente.
El componente protector dominante de la vacuna de la gripe actualmente disponible es la hemaglutinina vírica (HA). Una vacuna más eficaz puede incluir no solo HA específica de cepa, sino antígenos protectores cruzados tales como de M2e y sitio de escisión madurativa. Es también preferible un proceso de producción de vacuna que sea más fiable, económico y escalable que el método basado en huevos actual. Las composiciones, proteínas de fusión y polipéptidos de la invención proporcionan composiciones que incluyen HA, M2e y sitio de escisión madurativa de proteínas de la gripe que pueden estimular una respuesta inmunitaria, específicamente una respuesta inmunitaria protectora, ante varios antígenos de la gripe en el sujeto.
Las enseñanzas de todas las patentes, solicitudes publicadas y referencias citadas en la presente memoria se incorporan como referencia en su totalidad.
EJEMPLIFICACIÓN
EJEMPLO 1: DISEÑO DE PORCIONES DE UNA HEMAGLUTININA DE GRIPE A DE ORIGEN NATURAL
Materiales y Métodos
Diseño de los constructos de cabeza globular HA1-1, 1-2 y 1-3 para A/Puerto Rico/8/34 (H1N1). La cepa de la gripe A/Puerto Rico/8/34 (PR8) es una cepa de virus de la gripe A adaptada a ratón bien caracterizada. La estructura cristalina publicada de la HA de PR8 madura (SEQ ID NO: 1) (Gamblin et al. 2005. Science 303: 1838-1842; número de acceso a PDB 1 RU7) se usó en combinación con la base de datos Molecular Modeling para determinar los límites de los tres constructos de cabeza globular de PR8. La lista completa de estructuras cristalinas resueltas para moléculas de hemaglutinina de la gripe A puede encontrarse en el Protein Data Bank (PDB) o en el sitio web de estructuras del National Center for Biotechnology Information (NCBI) (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Structure).
Se observó la estructura cristalina tridimensional de HA de PR8 usando el programa Cn3D del sitio web del NCBI. La molécula de HA trimérica tiene la forma de un champiñón. Se hace referencia a la cabeza globular como la porción de la molécula de hemaglutinina en la parte superior que se parece a la cabeza de un champiñón, y se hace referencia al tallo de hélice superenrrollada como la parte inferior de la molécula que se parece al tallo del champiñón (Figura 1). La cabeza globular contiene el sitio de unión a sustrato que se une a ácido siálico sobre la superficie celular, y por lo tanto es importante para la entrada vírica. Además, la mayoría de epítopos de anticuerpos neutralizantes están localizados cerca y alrededor de este sitio de unión a receptor, haciendo a la cabeza globular una buena diana para vacunas protectoras. La cabeza globular contiene la mayoría del péptido HA1, incluyendo los residuos numerados de E51 a K327 en PR8, por ejemplo.
Se usó la estructura monomérica de la cadena A de PR8, que engloba la cabeza globular, para guiar el diseño de los constructos HA1-1, 1-2 y 1-3 de PR8 (Figura 1). Los constructos de HA se diseñaron con límites de dominios dentro de la cabeza globular, de modo que cuando la molécula se expresa en una célula hospedadora, la proteína codificada puede plegarse o replegarse espontáneamente in vitro para imitar la conformación nativa. Un dominio estructural (al que también se hace referencia en la presente memoria como "dominio") en una proteína es un elemento de estructura global que es autoestabilizante y a menudo se pliega independientemente del resto de la cadena proteica. La mayoría de los dominios puede clasificarse en plegamientos. Muchos dominios no son únicos de las proteínas producidas por un gen o una familia génica, sino que en lugar de ello aparecen en una variedad de proteínas. Los dominios se nombran y distinguen a menudo porque desempeñan un papel importante en la función biológica de la proteína a la que pertenecen, por ejemplo, el dominio de unión a sustrato de la hemaglutinina puede participar en la unión al sustrato. Debido a que los dominios pueden ser autoestabilizantes, pueden intercambiarse los dominios entre una proteína y otra o asociarse con otras proteínas portadoras mediante ingeniería genética, preparando proteínas quiméricas. Un dominio puede estar compuesto por ninguno, uno o muchos motivos estructurales. En los casos del diseño de constructo de hemaglutinina de la gripe, se conservan muchos motivos estructurales. La selección de límites está guiada por las estructuras cristalinas conocidas. En el caso de PR8, los residuos de E51 a K327 (SEQ ID NO: 1) se pliegan en una estructura compacta que se distingue del resto de las moléculas de HA, es por tanto la región en que centrarse para diseñar los constructos de HA.
Diseño de los constructos de cabeza globular HA1-1, 1-2 y 1-3 para A/Viet Nam/1203/2004 (H5N1). La estructura de HA usada como referencia en el diseño de constructos de cabeza globular de Viet Nam/1203/2004 (H5N1) se describe en Stevens et al., 2006, Science 312: 404-410 (número MMDB 38730; número de acceso a PDB 2FK0). Como se describe para los constructos de cabeza globular de PR8 anteriores, se usó la estructura cristalina publicada de A/Viet Nam/1203/2004 HA (SEQ ID NO: 2) madura en combinación con la base de datos Molecular Modeling para determinar los límites de dominios de los tres constructos de cabeza globular de Viet Nam. Se aplicaron los mismos criterios estructurales para la conservación de la estructura secundaria y terciaria del dominio estructural al diseño de constructos de Viet Nam. Aunque las diferentes moléculas de aglutinina pueden diferir en la naturaleza o número de los residuos que comprenden la molécula de hemaglutinina, la estructura global es notablemente similar. Por tanto, el diseño de los límites de dominios para los constructos de cabeza globular de Viet
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se usó para infectar células de insecto High Five para expresar proteína recombinante. Tabla 7: Constructos de HA de PR8 para expresión en Baculovirus
SEQ ID NO:
Constructo (marcaje de His) MÉTODO Cebador de cod. de SEQ ID NO: Cebador inv. de SEQ ID NO: Molde de ADN de SEQ ID NO:
100
STF2.HA0s nº 1 101 102 103
104
STF2.HA1-1 nº 1 105 106 103
107
STF2.HA1-2 nº 1 108 109 103
110
STF2.HA1-2mut nº 2 N/A N/A 111
112
STF2.HA1-3 nº 1 113 114 103
115
STF2.HA1-3mut nº 2 N/A N/A 116
117
ngSTF2.HA0s nº 2 N/A N/A 118
119
ngSTF2.HA1-1 nº 2 N/A N/A 120
121
ngSTF2.HA1-2 nº 2 N/A N/A 122
123
ngSTF2.HA12mut nº 2 N/A N/A 124
125
ngSTF2.HA1-3 nº 2 N/A N/A 126
127
ngSTF2.HA13mut nº 2 N/A N/A 128
129
wtSTF2.HA1-1 ng nº 2 N/A N/A 130
131
ngSTF2.HA1-1 wt nº 2 N/A N/A 132
133
HA1-1 nº 1 134 135 136
137
HA1-1 (sin marcador) nº 1 134 138 136
Tabla 8: Constructos de HA de NC, VN y NC para expresión en Baculovirus
SEQ ID NO:
Constructo (marcaje de His) MÉTODO Cebador de cod. de SEQ ID NO: Cebador inv. de SEQ ID NO: Molde de ADN de SEQ ID NO:
139
HA1-1(NC) nº 1 140 141 142
143
HA1-1(VN) nº 1 144 145 146
147
HA1-1(IND) nº 1 148 149 150
Expresión de proteína: Se cultivaron células de insecto Spodoptera frugiperda (Sf9) en medio celular de insecto de Grace (Invitrogen; Carlsbad, CA). Se purificaron los bácmidos recombinantes a partir de clones de DH10Bac y se
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El receptor de tipo Toll 5 (TLR5) reconoce un sitio conservado en la flagelina necesario para la formación del protofilamento y la motilidad bacteriana (Nature Immunology 4(12): 1247-1253). El análisis mutacional demostró que la actividad de TLR5 de la flagelina reside en dos regiones en los dominios N y C-terminales, tramos de 39 y 31 aminoácidos, respectivamente (Smith, et al.). Estas regiones se destacan en gris en la Figura 18. La mutagénesis
5 por barrido de alanina de estas regiones identificó una serie de mutaciones que reducían la activación de TLR5, pero ninguna mutación individual anulaba completamente la actividad, sugiriendo que existe un grado de flexibilidad o redundancia en el sitio de unión a TLR5. Esto tiene sentido desde la perspectiva evolutiva, de otro modo las bacterias podrían evolucionar fácilmente para evadir la detección por TLR5. La deleción de la región de bisagra hipervariable y la retención de los dominios N-y C-terminales conservados da como resultado una proteína (STF2Δ) que retiene la actividad de TLR5 completa, demostrando que los dominios N-y C-terminales (juntos) son necesarios y suficientes para la activación de TLR5.
Los residuos de lisina son sustratos convenientes para la conjugación química de diversas estructuras químicas con un portador proteico tal como flagelina. De los 30 residuos de lisina de STF2 (SEQ ID NO: 312), solo uno se encuentra dentro del sitio de activación de TLR5 definido experimentalmente, y esta lisina particular no está
15 conservada entre todas las flagelinas bacterianas (Smith, et al., Nature Immunology 4: 1247-1253 (2003)). De las 29 lisinas restantes, 24 están localizadas en la región de bisagra hipervariable de la flagelina, dejando por tanto solo 5 residuos de lisina en STF2Δ (SEQ ID NO: 313). La estructura en las Figuras 19 y 20 muestra que la mayoría de lisinas están espacialmente distales del dominio de activación de TLR5, por tanto parecería que las lisinas puedan conjugarse aleatoriamente con antígenos de péptido o carbohidrato con una probabilidad razonable de no interferir con la actividad de TLR5 de la proteína STF2Δ (SEQ ID NO: 313) conjugada resultante. 5 lisinas parecen bordear el sitio de activación de TLR5 bastante estrechamente; estos residuos serían los primeros que se consideraría mutar si la conjugación de antígeno con lisina afecta a la actividad de TLR5.
Pueden genomanipularse posibles sitios adicionales para conjugación (tales como cisteínas o lisinas adicionales) en flagelina completa (STF2 (SEQ ID NO: 312)) o STF2Δ (SEQ ID NO: 313) disponiendo dichos residuos en la región
25 hipervariable o en la cola de los dominios N-y C-terminales conservados distales del sitio de unión a TLR5. Existen también métodos químicos para conjugación con otros aminoácidos. Estos incluyen carboxiaminoácidos (ácido glutámico, ácido aspártico) y los aminoácidos carboxiterminales arginina, histidina, triptófano, tirosina y serina. Puede utilizarse cualquiera de estas estrategias para conjugar estructuras antigénicas con la flagelina sin interferir con el sitio de activación de TLR5.
Algunos tipos de antígenos que incluyen polisacáridos no son susceptibles de tecnología de ADN de fusión recombinante ni de química de péptidos sintéticos, y por tanto no pueden ligarse genética o sintéticamente a un ligando de un receptor de tipo Toll (TLR). Además, es posible que la fusión genética o sintética de un péptido con un ligando de TLR pueda inhibir el plegamiento apropiado del ligando de TLR. Puede ser útil la conjugación química del antígeno con el ligando de TLR, que se pliega y purifica. La conjugación química de los antígenos de péptido permite
35 también la situación del antígeno en sitios específicos del ligando de TLR, limitando por tanto la interferencia con la unión a receptor del ligando de TLR o maximizando la exposición a receptores de antígeno. La conjugación de muchos antígenos de péptido con un ligando de TLR puede maximizar también la inmunogenicidad, aumentando la heterogeneidad conformacional con la que se presenta el antígeno al sistema inmunitario. Para proporcionar un sitio para la conjugación química de dichos antígenos con flagelina, se genomanipuló un residuo de cisteína en diferentes sitios del gen que codifica STF2Δ (flagelina con la región de bisagra hipervariable eliminada; SEQ ID NO: 313 y SEQ ID NO: 314).
Materiales y Métodos
Reacción en cadena de la polimerasa (PCR): Se usó el kit Platinum® PCR SuperMix High Fidelity (número de catálogo 12532-016, Invitrogen Corporation, Carlsbad, CA) para todas las amplificaciones por PCR, usando el
45 siguiente protocolo basado en las instrucciones del fabricante.
1. Se añadieron los siguientes componentes en cualquier orden a cada tubo de reacción:
a.
45 µl de Platinum® PCR SuperMix High Fidelity (tampón de reacción de PCR)
b.
Disolución cebadora (concentración final 10 pmol de cada cebador)
c.
Disolución de ADN de molde (10 ng de ADN de plásmido)
2.
Se rellenó el volumen de reacción hasta 50 µl con agua
3.
Se taparon los tubos y se cargaron en un termociclador
4.
Se incubaron los tubos a 94 ºC durante 30 a 120 segundos para desnaturalizar completamente el molde y activar la enzima
5.-Se efectuó la siguiente amplificación por PCR durante 25-35 ciclos:
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células fue tal que el flujo de aire comprimido era de aproximadamente 1,5 vvm y la agitación estaba al máximo, aproximadamente 6 horas, cuando la temperatura caía a entre aproximadamente 25 y aproximadamente 33 ºC. La alimentación puede iniciarse antes de inducir el cultivo, o hasta aproximadamente 1 y aproximadamente 0,5 horas después. La velocidad de alimentación puede quedarse constante, o ajustarse basándose en las variable de proceso (oxígeno disuelto, concentración de glucosa). Se indujo el cultivo con IPTG tras el agotamiento de la glucosa por lotes. Se mantuvo el cultivo durante un mínimo de aproximadamente 2 horas y un máximo de aproximadamente 20 horas.
Medios MRBR
imagen176 Disolución de oligometales 1000x imagen177
Composición
g/l Componente g/l
Glucosa
20 EDTA de disodio 5
KH2PO4
2,2 FeSO4(7H2O) 10
(NH4)2SO4
4,5 ZnSO4(7H2O) 2
Ácido cítrico
1,0 MnSO4(H2O) 2
MgSO4(7H2O)
1,0 CoCl2(6H2O) 0,2
CaCl2
0,04 CuSO4(5H2O) 0,1
Oligometales
1 ml Na2MoO4(2H2O) 0,2
HCl de tiamina
0,01 H3BO3 0,1
Antiespumante
0,05 imagen178 imagen179
Medios MRSF
imagen180 Medios de alimentación
Composición
g/l Composición g/l
Glucosa
10 (20 en biorreactor) NaCl 0,5
KH2PO4
7,8 FeSO4(7H2O) 2
(NH4)2SO4
2,33 CaCl2 3,5
Ácido cítrico
1,0 MgSO4(7H2O) 12
MgSO4(7H20)
1,0 HCl de tiamina 1
CaCl2
0,04 Oligometales 1 ml
Oligometales
1 ml Glucosa 100
HCl de tiamina
0,01 imagen181 imagen182
Kanamicina
0,0075 (matraz agitado solo) imagen183 imagen184
10 Se produjo STF2Δ.EIIIs+ como cuerpos de inclusión. Tras la recolección, se separaron las células de los medios 188
imagen185
imagen186
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imagen188
se expusieron los ratones a una dosis letal de virus del Nilo occidental cepa 2741. Se monitorizó la supervivencia durante 21 días después de la exposición.
Se inmunizaron los ratones con PBS, medio acondicionado en Drosophilia que contenía STF2.E (CM, control positivo), 25 µg de STF2Δ.EIII+ i.p., 25 µg de STF2Δ.EIII+ s.c., 25 µg de STF2.EIII+ i.p. y 25 µg de STF2.EIII+ s.c. 5 Se muestran en las Figuras 65 y 66 las respuestas de anticuerpo de proteína de envoltura del virus del Nilo occidental y los datos de supervivencia. Para el día 35, todos los grupos que recibieron STF2Δ.EIII+ tenían niveles significativos de IgG de proteína de envoltura del virus del Nilo occidental. En contraposición, los ratones que recibieron STF2.EIII+ no tenían una respuesta mensurable de anticuerpo de proteína de envoltura del virus del Nilo occidental. La administración de STF2Δ.EIII+ i.p. o s.c conducía a un 100 % de supervivencia después de exposición
10 al virus del Nilo occidental. Concordantemente con la baja inmunogenicidad de STF2.EIII+, se proporcionó por este candidato de poca a ninguna protección cuando se comparaba con el control de PBS. La baja inmunogenicidad y eficacia de STF2.EIII+ en este estudio se atribuyen a la actividad de TLR5 reducida y/o a la débil reactividad del epítopo de EIII de esta proteína.
Títulos de neutralización de reducción de placa
15 Para evaluar además la respuesta de anticuerpo de proteína de envoltura del virus del Nilo occidental provocada por STF2Δ.EIII+ y correlacionar potencialmente la eficacia protectora con los títulos de anticuerpo neutralizante, se efectuó el ensayo de neutralización por reducción de placa (PRNT). El día 35, se ensayó en muestras de suero de los estudios de eficacia descritos anteriormente su capacidad de bloquear la infección por virus del Nilo occidental en células Vero cultivadas. Brevemente, se termoinactivaron muestras de suero de ratón agrupadas y se diluyeron
20 en serie dos veces en PBS con 0,5 % de gelatina. Se incubaron diluciones a partir de 1:10 con aproximadamente 100 ufp de virus del Nilo occidental cepa 2741. Se incubó la mezcla de virus/suero a aproximadamente 37 ºC durante 1 h y se inoculó entonces en monocapas confluentes de células Vero (ATCC, número de catálogo CCL-81, Manassas, Virginia) en pocillos por duplicado de placas de cultivo de tejido de 6 pocillos. Se dejó adsorber el virus en la monocapa celular ante de añadir un revestimiento de agarosa al 1 %. Se incubaron los cultivos de células
25 infectadas durante 4 días a 37 ºC, seguido de un segundo revestimiento de agarosa que contenía 4 % de rojo neutro. Se contaron las placas víricas 12 h después. Se registraron los títulos séricos que conducían a un 80 % de reducción de los números de placas víricas (PRNT80).
Se presenta en la Tabla 12 siguiente un resumen de los datos de PRNT80 de estudios de eficacia referentes a STF2.EIII+ y STF2Δ.EIII+. En dos estudios independientes que implican a STF2.EIII+ en que se registró una
30 supervivencia de aproximadamente un 50 % o menos, los sueros agrupados no consiguieren inhibir la formación de placa. Este descubrimiento no es sorprendente dada la débil respuesta de anticuerpo provocada por este constructo. En tres estudios de eficacia que implican a STF2Δ.EIII+ en que la supervivencia era de aproximadamente un 70 % o más, los sueros agrupados tenían títulos de neutralización de 1:40 o mejores. Los títulos de neutralización de 1:40 o mayores se correlacionan típicamente con protección in vivo.
35 Tabla 12: Supervivencia y resultados de PRNT80 para las proteínas de fusión STF2.EIII+ (SEQ ID NO: 658), STF2Δ.EIII+ (SEQ ID NO: 674) y STRF2.E (SEQ ID NO: 762) en CM (medios de control)
Lote
Candidato Vía nº de estudio Supervivencia (%) PRNT80 (dilución)
054
STF2.EIII+ i.p. 3 50 Negativo
057
STF2.EIII+ i.p. 4 11 Negativo
057
STF2.EIII+ s.c. 4 20 Negativo
044
STF2Δ.EIII+ i.p. 2 70 1:40
045
STF2Δ.EIII+ i.p. 3 90 1:40
045
STF2Δ.EIII+ s.c. 3 100 1:160
045
STF2Δ.EIII+ i.p. 4 100 1:80
045
STF2Δ.EIII+ s.c. 4 100 1:40
--
STF2.E CM i.p. 3 90 1:640
--
STF2.E CM i.p. 4 - 1:1280
193
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Families Citing this family (79)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9453251B2 (en) 2002-10-08 2016-09-27 Pfenex Inc. Expression of mammalian proteins in Pseudomonas fluorescens
CA2529647C (en) 2003-06-16 2013-08-13 Medimmune Vaccines, Inc. Influenza hemagglutinin and neuraminidase variants
EP1774017B1 (en) 2004-07-26 2013-05-15 Pfenex Inc. Process for improved protein expression by strain engineering
JP2008527009A (ja) 2005-01-19 2008-07-24 バクシネート コーポレーション 病原体関連分子パターンおよび抗原を含む組成物ならびに免疫応答を刺激するためのそれらの使用
EP2441471B1 (en) 2005-03-08 2014-10-08 MedImmune, LLC Reassortant influenza viruses
EP2476432B1 (en) 2006-03-07 2015-08-19 Vaxinnate Corporation Compositions that include hemagglutinin, methods of making and methods of use thereof
JP2010504760A (ja) * 2006-09-29 2010-02-18 サノフィ パスツール バイオロジクス カンパニー 組換え型ライノウイルスベクター
EP2527363A1 (en) * 2007-02-02 2012-11-28 Baylor Research Institute Vaccines based on targeting antigen to dcir expressed on antigen-presenting cells
WO2009002372A2 (en) * 2007-03-26 2008-12-31 The University Of Tennessee Research Foundation Prevention and treatment of gram negative, flagellated bacterial infections
US9580719B2 (en) 2007-04-27 2017-02-28 Pfenex, Inc. Method for rapidly screening microbial hosts to identify certain strains with improved yield and/or quality in the expression of heterologous proteins
US9394571B2 (en) 2007-04-27 2016-07-19 Pfenex Inc. Method for rapidly screening microbial hosts to identify certain strains with improved yield and/or quality in the expression of heterologous proteins
US10004799B2 (en) 2007-08-27 2018-06-26 Longhorn Vaccines And Diagnostics, Llc Composite antigenic sequences and vaccines
CA2697373C (en) 2007-08-27 2019-05-21 Longhorn Vaccines & Diagnostics, Llc Immunogenic compositions and methods
JP5743315B2 (ja) * 2007-10-09 2015-07-01 ザ ユニバーシティー オブ メルボルン トランスフェクション方法及びそのための組成物
GB0720250D0 (en) * 2007-10-17 2007-11-28 Univ Edinburgh Immunogenic compositions containing escherichia coli h7 flagella and methods of use thereof
US20100233714A1 (en) * 2007-11-13 2010-09-16 Beadling Leslie C Multistate affinity ligands for the separation and purification of antibodies, antibody fragments and conjugates of
WO2009073133A1 (en) * 2007-11-29 2009-06-11 Vaxinnate Corporation Compositions of toll-like receptor agonists and papillomavirus antigens and uses thereof
US20100330190A1 (en) * 2007-12-17 2010-12-30 Compans Richard W Immunogenic compositions and methods of use thereof
KR20110005826A (ko) * 2008-03-27 2011-01-19 사노피 파스테르 바이오로직스 씨오 재조합 라이노바이러스 벡터
AU2009236585B2 (en) * 2008-04-18 2013-03-07 Vaxinnate Corporation Deletion mutants of flagellin and methods of use
BRPI0915487A2 (pt) * 2008-07-11 2017-06-27 Medimmune Inc hemaglutina de nfluenza e variantes de neuraminidase
US8658180B2 (en) 2008-08-15 2014-02-25 Mark A. Miller Vaccines against influenza virus
JP2012504413A (ja) * 2008-10-03 2012-02-23 ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド パピオシノセファラス（Ｐａｐｉｏｃｙｎｏｃｅｐｈａｌｕｓ）Ｔｏｌｌ様受容体３
BRPI0923249A2 (pt) 2008-12-03 2016-01-26 Inst Pasteur Ct Nat De La Rech Scient Cnrs uso de modulinas solúveis em fenol no desenvolvimento de vacinas
US8765171B2 (en) * 2009-03-09 2014-07-01 The Regents Of The University Of California Methods and compositions for liposomal formulation of antigens and uses thereof
US8741311B2 (en) 2009-03-27 2014-06-03 Academia Sinica Methods and compositions for immunization against virus
EP3009145A1 (en) 2009-03-30 2016-04-20 Mount Sinai School of Medicine of New York University Influenza virus vaccines and uses thereof
NZ596058A (en) * 2009-04-30 2013-08-30 Cytos Biotechnology Ag Influenza hemagglutinin compositions and uses thereof
WO2011011390A1 (en) * 2009-07-20 2011-01-27 Novavax, Inc. Purified recombinant influenza virus ha proteins
DE102009034779A1 (de) 2009-07-25 2011-02-03 Emc Microcollections Gmbh Synthetische Analoga bakterieller Lipopeptide und ihre Anwendung zur Therapie und Prophylaxe allergischer Erkrankungen
US9163068B2 (en) 2009-11-03 2015-10-20 The United States of America as represented by the Secretary of the Department of Health and Human Services, National Institutes of Health, Office of Technology Transfer Influenza virus recombinant proteins
CA3153553A1 (en) * 2009-12-28 2011-07-28 Sanofi Vaccine Technologies, S.A.S. Methods of producing heterologous proteins comprising membrane domains in microalgal extracellular bodies
CN105399833B (zh) 2010-01-04 2019-09-06 Kj 生物科学有限公司 用于疫苗和诊断学的Dps融合蛋白
WO2011084967A2 (en) * 2010-01-06 2011-07-14 Vaxinnate Corporation Methods and compositions for providing protective immunity in the elderly
MX342716B (es) 2010-02-18 2016-10-11 Sinai School Medicine Vacunas para su uso en la profilaxis y tratamiento de la enfermedad del virus de influenza.
EP3900740A1 (en) 2010-03-30 2021-10-27 Icahn School of Medicine at Mount Sinai Influenza virus vaccines and uses thereof
WO2011126370A1 (en) 2010-04-09 2011-10-13 Universiteit Utrecht Holding B.V. Recombinant multimeric influenza proteins
CN102906266A (zh) * 2010-05-21 2013-01-30 高等教育联邦系统-匹兹堡大学 登革病毒通用序列及其使用方法
WO2012006561A2 (en) * 2010-07-08 2012-01-12 New York Medical College Influenza virus detection and diagnosis
BR112013002940A2 (pt) * 2010-08-13 2019-09-24 Baylor Res Institute adjuvantes de nova vacina baseados no direcionamento dos adjuvantes para os anticorpos diretamente às células que apresentam antígenos
US20120321694A1 (en) * 2010-10-27 2012-12-20 Daniel Larocque Compositions and uses
TWI537385B (zh) 2010-11-04 2016-06-11 中央研究院 產生具簡單醣基化之表面蛋白質之病毒顆粒的方法
CA2824526C (en) 2011-01-11 2020-07-07 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Pegylated lipids and their use for drug delivery
WO2012115715A2 (en) * 2011-02-21 2012-08-30 Vaxinnate Corporation Compositions with enhanced immunogenicity and/or reduced reactogenicity and methods of use
DE102011018499A1 (de) 2011-04-23 2012-10-25 Emc Microcollections Gmbh Topische Nanopartikel-Vakzine zur Immunstimulation der dendritischen Zellen in der Haut
WO2013020074A2 (en) * 2011-08-03 2013-02-07 Children's Medical Center Corporation A broadly neutralizing human antibody that recognizes the receptor-binding pocket of influenza hemagglutinin
CN116162175A (zh) 2011-09-20 2023-05-26 西奈山伊坎医学院 流感病毒疫苗及其应用
CA2849822C (en) 2011-09-23 2021-05-11 Gary J. Nabel, M.D. Novel influenza hemagglutinin protein-based vaccines
GB201116416D0 (en) * 2011-09-23 2011-11-02 Isis Innovation Composition
US11390878B2 (en) 2011-09-30 2022-07-19 Medicago Inc. Increasing protein yield in plants
TWI700368B (zh) 2011-09-30 2020-08-01 苜蓿股份有限公司 增加植物類病毒顆粒產率
EP2773674A4 (en) * 2011-11-04 2015-04-29 Vaxinnate Corp IMMUNOLOGICAL CONSTRUCTIONS AND ASSOCIATED METHODS
CA2908414A1 (en) * 2012-04-02 2013-10-10 Folia Biotech Inc. Recombinant papaya mosaic virus coat proteins and uses thereof in influenza vaccines
AU2013295242C1 (en) 2012-07-27 2018-08-09 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale CD147 as receptor for pilus-mediated adhesion of meningococci to vascular endothelia
US8932598B2 (en) 2012-08-28 2015-01-13 Vaxinnate Corporation Fusion proteins and methods of use
US9889189B2 (en) * 2012-11-05 2018-02-13 Georgia State University Research Foundation Universal influenza vaccine based on heterologous multiple M2E proteins
KR20150104117A (ko) 2012-12-18 2015-09-14 이칸 스쿨 오브 메디슨 엣 마운트 시나이 인플루엔자 바이러스 백신 및 그의 용도
WO2014159960A1 (en) 2013-03-14 2014-10-02 Icahn School Of Medicine At Mount Sinai Antibodies against influenza virus hemagglutinin and uses thereof
CN113101294A (zh) * 2013-03-15 2021-07-13 杭州惠瑞生物医药有限公司 感染相关疾病或病症的生物治疗产品
CA2907591A1 (en) * 2013-03-28 2014-10-02 Medicago Inc. Influenza virus-like particle production in plants
WO2014179464A1 (en) * 2013-04-30 2014-11-06 Massachusetts Institute Of Technology Human adaptation of h3 influenza
BR112016007868A2 (pt) 2013-10-11 2017-12-05 Us Health vacinas contra o vírus de epstein-barr
CA2936350C (en) 2014-01-10 2023-01-31 Medicago Inc. Cpmv enhancer elements
EP3122883B1 (en) 2014-03-27 2022-03-02 Medicago Inc. Modified cpmv enhancer elements
WO2015166010A1 (en) * 2014-04-30 2015-11-05 Centro Di Riferimento Oncologico Peptide agonists of toll-like receptor 5 ligand and methods of use
PL235555B1 (pl) 2014-06-24 2020-09-07 Inst Biotechnologii I Antybiotykow Wyizolowany i oczyszczony polipeptyd hemaglutyniny (HA ) wirusa grypy H5N1, kompozycja zawierająca polipeptyd i jej zastosowanie, przeciwciało wiążące się specyficznie z polipeptydem oraz sposób otrzymywania tego polipeptydu
EP3240567A2 (en) 2014-12-31 2017-11-08 The U.S.A. as represented by the Secretary, Department of Health and Human Services Novel multivalent nanoparticle-based vaccines
AU2016209032A1 (en) 2015-01-23 2017-08-10 Icahn School Of Medicine At Mount Sinai Influenza virus vaccination regimens
KR20170137867A (ko) * 2015-04-16 2017-12-13 인벤트프라이즈 엘엘씨 보르데텔라 퍼투시스 면역원성 백신 조성물
DE102016005550B4 (de) 2016-05-09 2024-09-26 Hans-Georg Rammensee Adjuvans zur lnduzierung einer zellulären lmmunantwort
JP7237344B2 (ja) 2016-06-15 2023-03-13 アイカーン スクール オブ メディシン アット マウント サイナイ インフルエンザウイルス血球凝集素タンパク質及びその使用
KR20190056382A (ko) 2016-09-02 2019-05-24 더 유나이티드 스테이츠 오브 어메리카, 애즈 리프리젠티드 바이 더 세크러테리, 디파트먼트 오브 헬쓰 앤드 휴먼 서비씨즈 안정화된 그룹 2 인플루엔자 헤마글루티닌 줄기 영역 삼량체 및 그의 용도
JP2020510650A (ja) 2017-02-23 2020-04-09 アルファ−オ ペプティデス アクツィエンゲゼルシャフト 免疫刺激性核酸（ｎｕｃｌｅｉｄ ａｃｉｄｓ）を封入する自己集合タンパク質ナノ粒子
US11254733B2 (en) 2017-04-07 2022-02-22 Icahn School Of Medicine At Mount Sinai Anti-influenza B virus neuraminidase antibodies and uses thereof
KR20200031144A (ko) 2017-07-20 2020-03-23 스포겐 바이오테크 인코포레이티드 식물 보호, 성장 및 생산성 향상을 위한 생물활성 폴리펩타이드
CN113646008A (zh) * 2019-01-28 2021-11-12 罗德岛大学理事会 pHLIP®肽介导的细胞表面的表位束缚
BR112021025630A8 (pt) 2019-06-26 2023-04-11 Axelia Oncology Pty Ltd Moléculas novas
CN113817031B (zh) * 2021-10-09 2023-04-11 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 一种分离的抗原表位多肽
CN114496073B (zh) * 2022-01-21 2022-11-08 至本医疗科技（上海）有限公司 用于识别阳性重排的方法、计算设备和计算机存储介质

Family Cites Families (112)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IL61904A (en) * 1981-01-13 1985-07-31 Yeda Res & Dev Synthetic vaccine against influenza virus infections comprising a synthetic peptide and process for producing same
US4659669A (en) * 1981-03-02 1987-04-21 Regents Of The Univ. Of California Microbial expression of human influenza hemagglutinin proteins
US4625015A (en) * 1982-08-23 1986-11-25 Scripps Clinic & Research Foundation Broad spectrum influenza antisera
US4666839A (en) * 1982-12-01 1987-05-19 Amgen Methods and materials for obtaining microbial expression of polypeptides including bovine prolactin
US4752473A (en) * 1984-10-12 1988-06-21 The Regents Of The University Of California Expression of glycosylated human influenza hemagglutinin proteins
IL78775A (en) 1985-05-15 1992-06-21 Biotech Australia Pty Ltd Oral vaccines
US5817753A (en) * 1985-12-04 1998-10-06 The Ohio State University Research Foundation Antigenic modification of polypeptides
EP0237045B1 (en) * 1986-03-11 1993-10-20 Shionogi & Co., Ltd. DNA encoding flagellin and vector having the same
CA1331355C (en) 1986-04-21 1994-08-09 Bioenterprises Pty. Ltd Immunopotentation
ATE108067T1 (de) 1986-09-22 1994-07-15 Univ Emory Impfstoff und verfahren zur herstellung.
NZ219516A (en) 1987-02-10 1991-02-26 Wellcome Found Fusion proteins of hbcag (hepatitis b virus core antigen)
NZ219515A (en) * 1987-02-10 1989-09-27 Wellcome Found Fusion proteins comprising influenza virus ha and a nonnatural antigenic epitope
US6130082A (en) * 1988-05-05 2000-10-10 American Cyanamid Company Recombinant flagellin vaccines
EP0419513B1 (en) 1988-05-05 1995-04-26 American Cyanamid Company Recombinant flagellin vaccines
US5777095A (en) * 1988-10-24 1998-07-07 Symbicom Aktiebolag Osp A and B Sequence of Borrelia burgdonferi strains ACA1 and IP90
ES2150450T3 (es) * 1989-03-09 2000-12-01 American Cyanamid Co Procedimiento para el aislamiento de la proteina e de haemophilus influenzae.
DE4192335T1 (de) * 1990-09-18 1993-10-07 Biotech Australia Pty Ltd T-Zell-Epitope
US5290686A (en) * 1991-07-31 1994-03-01 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Expression of influenza a M2 protein in baculovirus
GB9200117D0 (en) * 1992-01-06 1992-02-26 Connaught Lab Production of recombinant chimeric proteins for vaccine use
US6037135A (en) * 1992-08-07 2000-03-14 Epimmune Inc. Methods for making HLA binding peptides and their uses
IL101639A0 (en) 1992-04-17 1992-12-30 Yeda Res & Dev Recombinant influenza vaccines
FR2695563B1 (fr) * 1992-09-11 1994-12-02 Pasteur Institut Microparticules portant des antigènes et leur utilisation pour l'induction de réponses humorales ou cellulaires.
EP0621339B1 (en) 1992-09-17 2001-10-24 Takara Shuzo Co. Ltd. Immunogenic human influenza A virus haemagglutinin polypeptides
US6337070B1 (en) * 1993-04-29 2002-01-08 Takara Shuzo Co., Ltd. Polypeptides for use in generating anti-human influenza virus antibodies
GB9307371D0 (en) 1993-04-08 1993-06-02 Walls Alan J Fusion proteins
US6485729B1 (en) 1993-09-13 2002-11-26 Protein Sciences Corporation Neuraminidase-supplemented compositions
US5762939A (en) 1993-09-13 1998-06-09 Mg-Pmc, Llc Method for producing influenza hemagglutinin multivalent vaccines using baculovirus
US5976552A (en) 1995-04-28 1999-11-02 Protein Sciences Corporation Virus vaccines
ES2370937T3 (es) * 1993-09-13 2011-12-23 Protein Sciences Corporation Un método para producir vacunas antigripales polivalentes a base de hemaglutinina.
AUPM322393A0 (en) * 1993-12-24 1994-01-27 Austin Research Institute, The Mucin carbohydrate compounds and their use in immunotherapy
WO1995018861A1 (en) * 1994-01-11 1995-07-13 Vlaams Interuniversitair Instituut Voor Biotechnologie Influenza vaccine
US5612037A (en) * 1994-07-26 1997-03-18 Connaught Laboratories, Inc. Influenza virus subunit conjugates
US6309853B1 (en) 1994-08-17 2001-10-30 The Rockfeller University Modulators of body weight, corresponding nucleic acids and proteins, and diagnostic and therapeutic uses thereof
US5681570A (en) * 1995-01-12 1997-10-28 Connaught Laboratories Limited Immunogenic conjugate molecules
US6251405B1 (en) * 1995-06-07 2001-06-26 Connaught Laboratories, Inc. Immunological combination compositions and methods
DE19643314A1 (de) 1996-10-21 1998-04-23 Boehringer Mannheim Gmbh Monoklonale Antikörper gegen das Epitop YPYDVPDYA, Verfahren zu deren Herstellung und Verwendung
SE9604322D0 (sv) 1996-11-25 1996-11-25 Astra Ab Bacterial antigens and vaccine compositions II
JP4484969B2 (ja) 1996-11-26 2010-06-16 ヌベンタ バイオファーマスティカル コーポレイション ストレスタンパク質を含む組成物を使用する免疫応答
AU753688B2 (en) 1997-03-10 2002-10-24 Ottawa Civic Loeb Research Institute Use of nucleic acids containing unmethylated CpG dinucleotide as an adjuvant
WO1998048026A1 (en) 1997-04-18 1998-10-29 Gesellschaft für Biotechnologische Forschung mbH Attenuated salmonella strain used as a vehicle for oral immunization
PT1798288E (pt) 1997-05-07 2009-12-23 Schering Corp Proteínas receptoras humanas semelhantes a toll, reagentes e métodos relacionados
US6589940B1 (en) * 1997-06-06 2003-07-08 Dynavax Technologies Corporation Immunostimulatory oligonucleotides, compositions thereof and methods of use thereof
AU753172B2 (en) 1997-06-06 2002-10-10 Dynavax Technologies Corporation Immunostimulatory oligonucleotides, compositions thereof and methods of use thereof
DK0996717T3 (da) 1997-08-05 2006-04-10 Vlaams Interuniv Inst Biotech Immunbeskyttende influenzaantigen og anvendelse deraf til vaccination
US7731972B1 (en) * 2000-02-04 2010-06-08 Vlaams Interuniversitair Instituut Voor Biotechnologie Immunoprotective influenza antigen and its use in vaccination
US6169175B1 (en) 1997-08-06 2001-01-02 Centers For Disease Control And Prevention Preparation and use of recombinant influenza A virus M2 construct vaccines
US20030125278A1 (en) * 1997-08-13 2003-07-03 Tang De-Chu C. Immunization of animals by topical applications of a salmonella-based vector
US5965714A (en) * 1997-10-02 1999-10-12 Connaught Laboratories, Inc. Method for the covalent attachment of polysaccharides to protein molecules
CN1216640C (zh) 1998-02-06 2005-08-31 研究发展基金会 人免疫缺陷病毒的活疫苗
US6541011B2 (en) 1998-02-11 2003-04-01 Maxygen, Inc. Antigen library immunization
US6562798B1 (en) * 1998-06-05 2003-05-13 Dynavax Technologies Corp. Immunostimulatory oligonucleotides with modified bases and methods of use thereof
IL127331A0 (en) 1998-11-30 1999-09-22 Yeda Res & Dev Peptide-based vaccine for influenza
EP1165779A1 (en) 1999-04-01 2002-01-02 The Governing Council Of The University Of Toronto A presenilin associated membrane protein and uses thereof
US20040009936A1 (en) * 1999-05-03 2004-01-15 Tang De-Chu C. Vaccine and drug delivery by topical application of vectors and vector extracts
AU4709401A (en) 1999-11-29 2001-06-12 Inotek Corporation Composition and method for treating a microbial infection
EP1255562B1 (en) * 2000-02-18 2008-01-16 Vlaams Interuniversitair Instituut voor Biotechnologie vzw. Use of opri lipoprotein from pseudomonas as a th1 inducing natural adjuvant for heterologous antigens
US7129222B2 (en) * 2000-03-10 2006-10-31 Dynavax Technologies Corporation Immunomodulatory formulations and methods for use thereof
US6872395B2 (en) * 2000-04-14 2005-03-29 Wisconsin Alumni Research Foundation Viruses comprising mutant ion channel protein
US20020165176A1 (en) * 2000-05-01 2002-11-07 Haynes Joel R. Nucleic acid immunization
BRPI0111830B8 (pt) * 2000-06-23 2021-05-25 American Cyanamid Co método de produção de partículas semelhantes ao vírus da influenza (vlps), vlps da influenza, vlps quiméricas, composições imunogênica e farmacêutica, e, usos de vlps da influenza e de vlps quiméricas
US20020061312A1 (en) * 2000-07-31 2002-05-23 Ruslan Medzhitov Innate immune system-directed vaccines
AU8640501A (en) 2000-07-31 2002-02-13 Univ Yale Innate immune system-directed vaccines
US20030232055A1 (en) * 2000-07-31 2003-12-18 Ruslan Medzhitov Innate immune system-directed vaccines
KR20040029311A (ko) 2000-11-22 2004-04-06 제론 코포레이션 다능성 줄기 세포의 동종이식편의 내성화
US20030175287A1 (en) * 2001-01-03 2003-09-18 Yale University Innate immune system-directed vaccines
DK1362109T3 (da) * 2001-01-18 2009-07-27 Vlaams Interuniv Inst Biotech Rekombinante oligomere protein-komplekser med foröget immunogent potentiale
US20020125278A1 (en) * 2001-03-12 2002-09-12 Wagmild C. Edwin Carrier for percussion instruments and the like
US8703146B2 (en) * 2001-04-20 2014-04-22 Institute For Systems Biology Toll-like receptor 5 ligands and methods of use
ATE463505T1 (de) * 2001-04-20 2010-04-15 Inst Systems Biology Toll-ähnlichen-rezeptor-5-liganden und verwendungsverfahren
US7361352B2 (en) * 2001-08-15 2008-04-22 Acambis, Inc. Influenza immunogen and vaccine
WO2003102165A2 (en) 2002-02-21 2003-12-11 Apovia, Inc. IMMUNOGENIC HBc CHIMER PARTICLES STABILIZED WITH AN N-TERMINAL CYSTEINE
US20030175863A1 (en) * 2001-08-15 2003-09-18 Birkett Ashley J. Influenza immunogen and vaccine
DE60234375D1 (de) * 2001-09-14 2009-12-24 Cytos Biotechnology Ag VERPACKUNG VON IMMUNSTIMULIERENDEM CpG IN VIRUSÄHNLICHEN PARTIKELN: HERSTELLUNGSVERFAHREN UND VERWENDUNG
AU2002361682A1 (en) 2001-12-14 2003-06-30 Elizabeth Kopp Innate immune system-directed vaccines
TW558693B (en) 2002-04-17 2003-10-21 Au Optronics Corp Driving circuit design for display device
AU2003250586B2 (en) 2002-08-12 2010-09-23 The Council Of The Queensland Institute Of Medical Research Novel immunogenic lipopeptides comprising T-helper and B-cell epitopes
US7786279B2 (en) 2003-02-27 2010-08-31 Yeda Research And Development Co. Ltd. Nucleic acid molecules, polypeptides, antibodies and compositions for treating and detecting influenza virus infection
AU2004220549B2 (en) * 2003-03-07 2007-07-05 Instituto Di Ricerche Di Biologia Molecolare P. Angeletti S.P.A. Influenza virus vaccine
WO2004110296A1 (ja) 2003-06-12 2004-12-23 Bear Dental Laboratory Co., Ltd 歯科用咬合ナビ装置
US8592197B2 (en) * 2003-07-11 2013-11-26 Novavax, Inc. Functional influenza virus-like particles (VLPs)
JP2005074747A (ja) 2003-08-29 2005-03-24 Canon Inc インクジェットヘッドの製造方法およびインクジェットヘッド
WO2005042564A1 (en) 2003-10-20 2005-05-12 Sidney Kimmel Cancer Center Flagellin fusion proteins as adjuvants or vaccines and methods of use
CA2555253A1 (en) 2004-02-06 2005-08-25 Yale University Compositions of pamps and listeria monocytogenes and methods of use
US7620937B2 (en) 2004-08-20 2009-11-17 Sap Ag System and method for debugging programs
US20060042051A1 (en) 2004-08-27 2006-03-02 Irwin Jere F Strips of clips and clip
WO2006039701A1 (en) * 2004-10-01 2006-04-13 University Of South Florida Flagellin-based adjuvants and vaccines
DE102004049223A1 (de) * 2004-10-08 2006-04-20 Johannes-Gutenberg-Universität Mainz Zubereitung zum Impfen, Impfverfahren und Verwendung einer Impf-Zubereitung
WO2006066214A2 (en) * 2004-12-16 2006-06-22 Wake Forest University Health Sciences Use of flagellin in the immunotherapy of yersinia pestis
US20090162400A1 (en) * 2004-12-21 2009-06-25 Powell Thomas J Compositions of influenza viral proteins and methods of use thereof
SG160424A1 (en) 2004-12-21 2010-04-29 Vaxinnate Corp Compositions of influenza viral proteins and methods of use thereof
HU227285B1 (en) 2004-12-29 2011-01-28 Mta Enzimologiai Intezet Modified flagellins and flagellar filaments useful as receptors and processes for producing same
JP2008527009A (ja) 2005-01-19 2008-07-24 バクシネート コーポレーション 病原体関連分子パターンおよび抗原を含む組成物ならびに免疫応答を刺激するためのそれらの使用
CA2596248A1 (en) 2005-01-31 2006-08-10 Vaxinnate Corporation Method to identify polypeptide toll-like receptor (tlr) ligands
EP2042186A1 (en) 2005-01-31 2009-04-01 Vaxinnate Corporation Novel polypeptide ligands for toll-like receptor 2 (TLR2)
EP1863529A1 (en) 2005-03-23 2007-12-12 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Novel composition
WO2007022425A2 (en) 2005-08-16 2007-02-22 Hawaii Biotech, Inc. Influenza recombinant subunit vaccine
AR056591A1 (es) 2005-10-28 2007-10-10 Vaxinnate Corp Polipeptidos ligandos para receptor 4 simil toll (tlr4)
US20070111331A1 (en) 2005-11-16 2007-05-17 Chin-Yih Rex Hong Diagnostic methods using magnetic nanoparticles
CA2632483C (en) 2005-12-06 2014-11-25 Yeda Research And Development Co. Ltd. At The Weizmann Institute Of Science Improved influenza vaccine
JP6087041B2 (ja) 2006-01-27 2017-03-08 ノバルティス アーゲー 血球凝集素およびマトリックスタンパク質を含むインフルエンザウイルスワクチン
WO2007103048A2 (en) 2006-03-01 2007-09-13 Regents Of The University Of Colorado Tlr agonist (flagellin)/cd40 agonist/antigen protein and dna conjugates and use thereof for inducing synergistic enhancement in immunity
EP2476432B1 (en) 2006-03-07 2015-08-19 Vaxinnate Corporation Compositions that include hemagglutinin, methods of making and methods of use thereof
WO2007125535A1 (en) 2006-05-01 2007-11-08 Biondvax Pharmaceuticals Ltd. Recombinant flagellin gene and uses thereof
WO2009073133A1 (en) * 2007-11-29 2009-06-11 Vaxinnate Corporation Compositions of toll-like receptor agonists and papillomavirus antigens and uses thereof
WO2009082440A2 (en) * 2007-12-18 2009-07-02 Vaxinnate Corporation Compositions of toll-like receptor agonists and malaria antigens and methods of use
AU2009236585B2 (en) * 2008-04-18 2013-03-07 Vaxinnate Corporation Deletion mutants of flagellin and methods of use
CN102046198A (zh) 2008-04-25 2011-05-04 系统生物学研究所 鞭毛蛋白多肽疫苗
WO2011084967A2 (en) 2010-01-06 2011-07-14 Vaxinnate Corporation Methods and compositions for providing protective immunity in the elderly
WO2012115715A2 (en) * 2011-02-21 2012-08-30 Vaxinnate Corporation Compositions with enhanced immunogenicity and/or reduced reactogenicity and methods of use
EP2681246A4 (en) 2011-02-28 2015-05-06 Vaxinnate Corp VACCINE AGAINST DENGUE TATRAVALENT AND MIXED BIVALENT
EP2773674A4 (en) 2011-11-04 2015-04-29 Vaxinnate Corp IMMUNOLOGICAL CONSTRUCTIONS AND ASSOCIATED METHODS
US8932598B2 (en) 2012-08-28 2015-01-13 Vaxinnate Corporation Fusion proteins and methods of use

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