KR20110005826A - 재조합 라이노바이러스 벡터 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 인플루엔자 바이러스와 같은 면역원의 운반에 사용할 수 있는 라이노 바이러스 벡터 및 이에 대응하는 조성물 및 방법을 제공한다.

Description

재조합 라이노바이러스 벡터{Recombinant Rhinovirus Vectors}
본 발명은 인플루엔자 바이러스 면역원과 같은 면역원의 운반에 사용하는 라이노바이러스 벡터 및 이들의 조성물 및 방법에 관한 것이다.
세계 인구가 면역성을 보유하지 않거나, 거의 보유하지 않은 새로운 인플루엔자 바이러스 아형이 나타날 경우, 인플루엔자 대유행이 발생한다. 20세기 동안, 인플루엔자 대유행은 수백만의 죽음, 사회적 혼란 및 심각한 세계 경제 손실의 원인이었다. 인플루엔자 전문가들은 언젠가 다른 대유행이 발생할 것이라는 것에 동의한다. 대유행이 발생한 순간 세계적 방어 수준은 질병이 미치는 공중보건 및 경제적 영향을 결정할 것이다. 오늘날, 세계 보건 기구(WHO)는 매우 짧은 기간 내 전 세계적으로 적어도 수 억 명의 병원 외래 환자, 2500만명 이상의 입원환자, 및 수백만의 사망자가 발생할 것이라고 평가했다. 이러한 걱정은 2003년 조류 H5N1 바이러스가 몇 몇 아시아 국가의 가금류에서 유행하여 유럽 및 아프리카까지 확산된 때에 최고조가 되었다. 다행히, 이들의 인간에게 전이는 2006년 9월 14일 보고(세계 보건기구(WHO) 웹사이트)에 따르면, 144명의 사망이 집계되어 높은 사망률을 동반하는 감염이 246건으로 제한적이었다.
종래의 인플루엔자 백신은 인플루엔자 바이러스 헤마글루티닌(hemagglutinin) 단백질(HA)에 대해 중화 항체 반응을 유도하도록 디자인되었다. HA 단백질에서 계속적인 항원성의 변화 때문에, 예상되는 순환성 바이러스 스트레인에 맞추기 위하여 백신 조성물은 매년 변화되어야 한다. 이러한 백신 접근은 대유행 스트레인의 분리, 확인 및 적절한 백신의 구축 및 제조에 긴 시간이 필요한 관계상 대유행 국면에서는 받아들일 수 없다. 인플루엔자 대유행의 조절 또는 예방을 위한 보다 효율적은 접근은 최근 밝혀지고, 잘 보존된 인플루엔자 바이러스 면역학적 결정자에 대해 방어성 면역력을 유도하는 능력이 있는“유니버셜”백신의 개발을 고려한다. 이러한 백신은 인플루엔자 A 바이러스 스트레인 전반에 넓은 방어성을 제공해야 한다. 게다가, 이러한 백신은 해당 연도에 제조되고, 해당 연도에 비축 및/또는 접종될 수 있어야 한다. 헤마글루티닌의 단백질 가수분해 절단 위치를 둘러싸고 있는 19-25 아미노산 서열은 보존된 인플루엔자 A 바이러스 에피토프이다(Bianchi et al., J. Virol. 79:7380-7388, 2005; Mundy et al., Science 303:1870-1873, 2004). 상기 성숙한 인플루엔자바이러스 HA는 HA0 전구체로부터 단백질 가수분해 절단에 의해 유래된 두 개의 서브유닛 HA1 및 HA2로 구성된다(Chen et al., Cell 95:409-417, 1998; Skehel et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 72:93-97, 1975). 결정학적 자료에 기초하면(Gamblin et al., Science 303:1838-1842, 2004; Stevens et al., Science 303:1866-1870, 2004), 상기 절단 위치가 확장되고, 용액-노출된 루프를 형성한다는 것을 알 수 있다. 절단이 되면, HA2의 새롭게 형성된 N-말단이 바이러스 막 및 세포막의 융합을 매개하는 융합 펩타이드를 호스트한다. HA0 절단은 바이러스 감염성(Klenk et al., Virology 68:426-439, 1975; Klenk et al., Virology 68:426-439, 1975) 및 병원체성(Klenk et al., Trends Microbiol. 2:39-43, 1994; Steinhauer, Virology 258:1-20, 1999)에 필수적이다. 기능적 제약 때문에, 상기 에피토프는 매우 잘 보존되어 있고 따라서 넓은 교차-방어 반응을 유도할 수 있다(Bianchi et al., J. Virol. 79:7380-7388, 2005).
수막구균(Neisseria meningitides)의 외막 단백질 복합체와 컨쥬게이트된 인플루엔자 B 바이러스의 HA0 펩타이드는 Balb/c 마우스에서 방어성 면역을 유도한다(Bianchi et al., J. Virol. 79:7380-7388, 2005). 인간 및 조류 인플루엔자 A 및 B HA0 서열의 어라인먼트(alignment)는 하기에서 보여준다. 이러한 부위의 보존된 유형은 700건이 넘는 인도네시아 및 베트남 인플루엔자 A 및 조류 바이러스 스트레인의 연구에서 확인되었다(Smith et al., Virology 350:258-268, 2006). 일부 변이가 관찰되었으나, 이들은 대부분 절단 위치 상부(하기 어라인먼트에서 화살표가 지시하고 있음)에서 발생했다(Smith et al., Virology 350:258-268, 2006). 인플루엔자 B의 상기 HA0 펩타이드의 체계적인 알라닌-스캐닝 변이는 세 가지 방어성 HA0-특이적 모노클로날 항체와 바인딩을 위한 가장 중요한 잔기로서 R6, F9 및 F15 세 잔기(어라인먼트에서 박스친 부분)를 자세히 설명하였다(Bianchi et al., J.Virol. 79:7380-7388, 2005). 이러한 잔기는 모든 조류 및 인간 인플루엔자 A 및 인플루엔자 B 스트레인 사이에서 보존되었다(하기; SEQ ID NOs:1-8 참조).
Figure pct00001
인플루엔자 바이러스 매트릭스 단백질 M2는 백신 개발의 효율적인 타겟으로 제공하기 위해 설명하였다(DeFilette et al., Virology 337:149-161, 2005). M2는 인플루엔자 타입 A 바이러스의 97-아미노산 막통과 단백질이다(Lamb et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 78:4170-4174, 1981; Lamb et al., Cell 40:627-633, 1985). 성숙한 단백질은 pH-유도성 이온 채널 활성을 보유하고 있는(Pinto et al., Cell 69:517-528, 1992; Sugrue et al., Virology 180:617-624, 1991) 동형 사중체(homotetramer)(Holsinger et al., Virology 183:32-43, 1991; Sugrue et al., Virology 180:617-624, 1991)를 형성한다. M2-테르라머는 감염된 세포의 플라즈마 막에서 높은 밀도로 발현되고, 또한 성숙 바이러스 입자의 막으로 낮은 빈도로 혼입된다(Takeda et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 100:14610-14617, 2003; Zebedee et al., J. Virol. 62:2762-2772, 1998). 상기 M2 N-말단 24-아미노산 외부도메인(M2e)은 타입 A 인플루엔자 바이러스 사이에서 높게 보존되었다(Fiers et al., Virus Res. 103:173-176, 2004). 상기 M2e의 높은 수준의 보존은 상기 바이러스의 가장 보존 잘된 단백질인 M1(Ito et al., J. Virol. 65:5491-5498, 1991)과의 유전적 관계로부터 초래된 제약 및 자연 감염동안 M2e-특이적 항체의 부재에 의해 설명된다(Black et al., J. Gen. Virol. 74 (Pt 1):143-146, 1993).
NCBI 인플루엔자 데이터베이스의 서열을 사용하여 얻은 하기 얼라인먼트에 나타난 바와 같이, 조류 H5N1 인플루엔자 바이러스 M2e는 전형적인 인간 H1, H2, 및 H3 바이러스에서 발견되는 보존 서열쪽으로 진화하는 것으로 판단되는데,“인간”인플루엔자 M2e 에피토프를 사용한 새로운 조류 바이러스를 포함한 광범위의 방어가 가능할 것이다(아래, SEQ ID NOs:9-12).
Figure pct00002
상기 H5N1 M2e 서열에서 상기 H1N1 M2e 서열로 진화 현상은 최근 인도네시아 및 베트남에서 인간 및 조류로부터 분리한 800 H5N1 스트레인의 서열 분석에 기초하여 보고되었다(Smith et al., Virology 350:258-268, 2006). 진화한 조류 M2e 펩타이드 EVETPTRN(SEQ ID NO:13), 이들의“선대”가 아닌 EVETLTRN (SEQ ID NO:14)는 항-인간 M2e 모노클로날 항체에 의해 효율적으로 인식된다(Mab)(Liu et al., Microbes Infect. 7:171-177, 2005). 이는 일부“조류-독감-유사”변화가 인간 M2e 특이적 모노클로날 항체에 의한 방어 효율을 감소시킨다는 것을 최근 보여주었기 때문에 중요하다. 흥미롭게도, M2e에서 일부“조류-독감-유사”아미노산 변화가 마우스에서 인간 H1N1 바이러스의 병원체성을 감소시킨다(Zharikova et al., J. Virol. 79:6644-6654, 2005).
WHO는“2004년 캐나다에서의 H7N3 및 아시아에서의 H5N1 가금류 전염병과 같이 다른 국가에서 다른 위험 수위 및 대유행 잠재성을 동반한 동시 발생”의 가능성을 강조하였다. 하기 얼라인먼트에서 보여주는 것과 같이, M2e H7N7은 N5N1“인간화”변종과 오직 하나의 아미노산만 다르다. 상기 H7N7 아형은 종간 전이(Koopmans et al., Lancet 363:587-593, 2004) 및 인간에 치명적인 것(Fouchier et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101:1356-1361, 2004)으로 설명되는 능력을 보유하고 있다. 다른 스트레인(H9N2)는 가금을 감염시킬 수 있고, 인간에게 확산될 수 있는 것을 또한 보여준다(Cameron et al., Virology 278:36-41, 2000; Li et al., J. Virol. 77:6988-6994, 2003; Wong et al., Chest 129:156-168, 2006)(SEQ ID NOs:9 and 15-18 참조).
Figure pct00003
M2e-기초 재조합 단백질 백신은 동일하거나 다른 인플루엔자 A 바이러스 챌린지 둘다에 대한 방어성 면역 반응을 유도하는 것을 보여준다(Fiers et al., Virus Res. 103:173-176, 2004; Slepushkin et al., Vaccine 13:1399-1402, 1995). 키홀-림펫 헤모시아닌 및 외막 단백질에 결합된 M2e 펩타이드를 사용한 추가적인 최근 연구에서는 마우스뿐만 아니라 펠릿 및 레수스 원숭이에서 우수한 면역 반응을 나타내는 것을 보여주었다(Fan et al., Vaccine 22:2993-3003, 2004). 리포조말 M2e 백신을 이용한 H1, H5, H6 및 H9 인플루엔자 A 바이러스에 대한 방어가 바우스에서 입증되었다(Fan et al., Vaccine 22:2993-3003, 2004).
인플루엔자 면역원에 대한 효율적인 운반 시스템은 대유행 백신과 같은, 인플루엔자 바이러스 감염에 대한 백신의 개발에 중요하다.
본 발명은 인플루엔자 바이러스 HAO 항원을 포함하는 라이노바이러스 벡터를 제공한다. 상기 벡터는 인간 라이노바이러스 14(HRV14)와 같이 인간에서 병원성을 나타내지 않는다. HAO 서열에 추가적으로 상기 라이노바이러스 벡터는 선택적으로 하나 또는 그 이상의 M2e 펩타이드를 포함할 수 있다. 상기 펩타이드(HA0 및/또는 M2e)는 예를 들어, 중화 면역원 Ⅰ(NimI), 중화 면역원 Ⅱ(NimII)(예를 들어, 아미놋나 158 및 160 사이), 중화 면역원 Ⅲ(NimIII) 및 중화 면역원(NimIV)로 구성된 군으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 중화 면역원 위치에 삽입될 수 있다. 게다가, 상기 펩타이드는 선택적으로 링커 서열의 일측 또는 양측 말단에 플랭크될 수 있다.
본 발명은 또한 본 명세서에서 언급하고 있는 라이노바이러스 벡터 및 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제를 포함하는 약제학적 또는 면역원성 조성물을 제공한다. 선택적으로 이러한 조성물은 하나 또는 그 이상의 어쥬번트 및/또는 하나 또는 그 이상의 추가적 활성 성분을 포함할 수 있다(예를 들어, HAO 및/또는 M2e 서열과 융합된 B형간염 코어 단백질 및/또는 HAO 펩타이드를 포함하는 라이노바이러스 벡터 및 M2e 펩타이드를 포함하는 라이노바이러스 벡터).
본 발명은 또한 본 명세서에서 언급하고 있는 약제학적 조성물을 대상(subject)에 투여하여 대상(예를 들어, 인간)에서 인플루엔자 바이러스에 대해 면역 반응을 유도하는 방법을 포함한다. 상기 대상(subject)은 인플루엔자 바이러스에 감염되지 않았으나, 감염 위험이 있거나 또는 상기 대상은 인플루엔자 바이러스에 감염될 수 있다. 상기 조성물은 예컨대, 비강 경로로 투여될 수 있다. 본 발명은 또한 본 명세서에서 언급하고 있는 면역 반응을 유도하는 방법에서 본 명세서에서 언급하고 있는 벡터 및 조성물의 사용 및 본 명세서에서 언급하고 있는 것에 사용하기 위한 의약의 제조에서 벡터 및 조성물의 사용을 포함한다.
본 발명은 또한 본 명세서에서 언급하고 있는 상기 라이노바이러스 벡터와 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제(선택적으로, 본 명세서에서 언급하고 있는 추가적 성분)를 혼합하여 본 명세서에서 언급하고 있는 약제학적 조성물을 제조하는 방법을 제공한다.
게다가, 본 발명은 본 명세서에서 언급하고 있는 상기 라이노바이러스 벡터의 지놈을 암호화하거나 또는 이와 대응하는 핵산 분자를 제공한다.
본 발명은 추가적으로 본 명세서에서 언급하고 있는 하나 또는 그 이상의 삽입된 인플루엔자 바이러스 HAO 면역원을 포함하는 NimII 펩타이드를 포함한다. 본 발명은 하나 또는 그 잇아의 인플루엔자 바이러스 HAO 면역원을 포함하는(및, 선택적으로 M2e 면역원 같은 다른 면역원)라이노바이러스 벡터(예를 들어, HRV14)의 생성 방법을 제공한다. 상기 방법은 (i) 삽입된 인플루엔자 바이러스 HAO 항원 서열을 포함하는 감염성 cDNA 클론에 기초한 재조합 라이노바이러스 벡터의 라이브러리 생성; 및 (ii) (a) 계대에서 삽입된 서열을 유지하고, 및 (b) 상기 삽입된 서열에 대해 항체로 중화된 재조합 바이러스 라이브러리로부터 선별하는 단계를 포함한다. 상기 방법에서, 삽입된 인플루엔자 항원 서열은 NimI, NimII, NimIII 및 NimIV로 구성된 군으로부터 선택된 위치에 삽입될 수 있다. 추가적으로, 상기 삽입된 서열은 선택적으로 무작위 링커 서열의 일측 또는 양측 말단에 플랭크될 수 있다.
본 발명은 또한 헬라(HeLa) 또는 MRC-5와 같은 세포에서 계대하는 것을 포함하는 인플루엔자 바이러스 HAO 항원을 포함하는 본 명세서에서 언급하고 있는 라이노바이러스 벡터의 배양 방법을 제공한다.
추가적으로, 본 발명은 본 명세서에서 언급하고 있는 하나 또는 그 이상의 면역원을 포함하는 본 명세서에서 언급하고 있는 라이노바이러스 벡터를 포함한다.
본 발명은 장점은 다음과 같다. 예를 들어, 본 발명의 상기 생 벡터에서, HAO와 같은 면역연을 운반하기 위한 이러한 생 벡터 시스템의 사용은 다음을 포함하는 장점을 제공한다: (i) 단일 용량의 백신으로도 매우 강하고, 길게 지속되는 항체 반응을 유도하는 능력, 및 (ii) 서브유닛 또는 사백신과 비교하여 향상된 제조 확장성(예를 들어, 보다 적은 비용으로 많은 용량의 생산). 따라서, 대유행 상황에서, 비교적 짧은 기간에 보다 많은 사람들이 생백신을 이용하여 면역화될 수 있다. 추가적으로, 본 발명의 상기 HRV 벡터는 비강 경로로 운반될 수 있어, 전신성 및 점막성 면역 반응을 유발할 수 있다. HRV14의 사용은 비병원성이고, 인간에서 드믈게 관찰되어(Andries et al., J. Virol. 64:1117-1123, 1990; Lee et al., Virus Genes 9:177-181, 1995), 백신 수여자에서 항-벡터 면역성이 선재(先在하)는 확률을 줄일 있는 장점을 추가적으로 제공한다. 추가적으로, 인간을 감염시키는데 필요한 HRV의 용량이 매우 적은데(조직 배양 감염성 용량(TCID50))(Savolainen-Kopra, "Molecular Epidemiology of Human Rhinoviruses,"Publications of the National Public Health Institute 2/2006, Helsinki, Finland, 2006), 이는 HRV-기반 백신 제조의 비용-효과 측면에서 매우 이상적인 특징에 해당한다.
본 발명의 다른 특징 및 장점은 하기 발명의 상세한 설명, 도면 및 특허청구범위에서 명백하게 기술할 것이다.
본 발명은 인플루엔자 바이러스 결정자의 효율적인 운반 및 표현을 위한 인간 라이노바이러스의 사용에 기초한 유내버셜(대유행) 인플루엔자 백신을 제공한다. 하기 추가적 설명과 같이, 상기 인플루엔자 바이러스 매트릭스 단백질 2(M2e)의 세포외 도메인 및 인플루엔자 바이러스 헤마글루티닌(HA)(HAO)의 단백질 가수분해 절단 사이트는 본 발명에 따른 유니버셜 인플루엔자(인플루엔자 A) 백신내 포함하고 있는 2개의 에피토프이다. 본 발명의 상기 백신은 하나 또는 그 이상의 HAO-기반 면역원을 포함하는 벡터를 포함하고, 선택적으로 동일 조성물에서 상기 HAO-기반 면역원처럼 HAO-기반 면역원에 링크(예컨대, 직접적으로 또는 비직접적으로 링커에 의해)된 M2e-기반 면역원과 혼합하여 사용되거나, 또는 HAO-기반 면역원과 분리된 조성물에서 사용될 수 있다. 본 발명의 상기 백신 조성물은 인플루엔자 대유행 컨텍스트를 포함하는 인플루엔자 바이러스 감염을 예방하거나 치료하는 방법에 이용할 수 있다. 본 발명은 또한 하기에서 추가적으로 기술할 다른 면역원을 포함한 본 명세서에서 언급하고 있는 벡터를 포함한다. 본 발명의 상기 벡터, 백신, 조성물 및 방법은 하기에서 구체적으로 기술한다.
HRV 벡터
본 발명의 상기 벡터는 비-병원성 혈청형 인간 라이노바이러스 14(HRV14)와 같은 인간 라이노바이러스 벡터에 기초한다. 상기 HRV14 바이러스 입자 및 지놈 구조는 바이러스 구조 단백질(VP1, VP2, VP3, 및 VP4), HRV14(Nims: NimI, NimII, NimIII, and NimIV)의 주요 중화 면역원 사이트뿐만 아니라 비-구조 단백질(P2-A, P2-B, P-2C, P3-A, 3B(VPg), 3C, 및 3D)을 보여주는 도 1에서 도식적으로 보여준다.
본 발명에서 이용될 수 있는 HRV14 분자 클론의 예시는 pWR3.26 이다(American Type Culture Collection: ATCCNumber: VRMC-7TM). 상기 클론은 Lee et al., J. Virology 67(4):2110-2122, 1993뿐만 아니라 하기에서 추가적으로 설명한다(SEQ ID NOs:29 및 30 또한 참조). HRV14의 추가적 소스는 본 발명에 이용될 수 있다(예를 들어, ATCC Accession No. VR284; GenBank Accession Nos. L05355 (June 11, 1993) 및 K02121(January 2, 2001) 및 이들의 다른 버전; Stanway et al., Nucleic Acids Res. 12(20):7859-7875, 1984; 및 Callahan et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 82(3):732-736, 1985 또한 참조). HRV14에 추가적으로, 다른 인간 라이노바이러스 혈청형이 본 발명에 사용될 수 있다. 당업계에서 알려진 바와 같이, 100가지가 넘는 혈청형이 존재하는데, 이들은 HRV14에서와 같은 방식으로 감염성 클론의 유래로 사용될 수 있다. 따라서 본 명세서에서 HRV14에 관해 언급하고 있음에도 불구하고, 본 발명은 다른 라이노바이러스 혈청형 및 이들이 변이체에 적용할 수 있다(예컨대, 변이체는 자연적으로 발생하거나 인위적으로 만들어지되, 바이러스 조성에 중대한 영향을 미치지 않거나, 또는 약독화를 제공하는 서열 차이를 포함하고, 또한 변이체는 하나 또는 그 이상(예를 들어,, 1-100, 2-75, 5-50, or 10-35)의 보존성 아미노산 치환을 포함한다.).
하기에서 추가적으로 언급한 것처럼, 항원 서열은 본 발명에 따라 HRV 벡터 다른 사이트에 삽입될 수 있다. 일예로, 상기 서열은 HRV14와 같은 혈청형의 NimII 사이트로 삽입된다. NimII(중화 면역원Ⅱ)은 VP1의 210 아미노산 및 아미노산 156, 158, 159, 161 및 162의 VP2를 포함하고 있는 HRV14에서 면역우세 부위이다(Savolainen-Kopra, "Molecular Epidemiology of Human Rhinoviruses," Publications of the National Public Health Institute 2/2006, Helsinki, Finland, 2006). 하기에서 언급하는 구체적인 예시에서, 상기 서열은 VP2의 아미노산 158 및 160 사이 또는 158 및 162 사이에 삽입된다. 삽입은 상기 NimII 사이트 내 다른 사이트에서도 이루어질 수 있다. 예를 들어, 상기 삽입은 VP2의 156, 158, 159, 161, 또는 162 위치 또는 VP1의 210 위치 또는 이들의 조합에서 이루어질 수 있다. 본 명세서에서 삽입위치에 대한 언급은 별도의 지시가 없는 한 일반적으로 상기 지시한 아미노산에서 카르복시-말단의 삽입을 나타내고, 또한 본 명세서 언급과 같이 결손과 결합하여 이루어질 수 있다.
단독으로 또는 다른 사이트들에 삽입과 결합하여(예컨대, 상기 NimII 사이트), 삽입이 이루어지는 추가적인 사이트 는 NimI(A 및 B), NimII 및 NimIII을 포함한다. 따라서, 삽입은 예를 들어, VP1의 91 및/또는 95 위치(NimIA), VP1의 83, 85, 138, 및/또는 139 위치(NimIB), 및/또는 VP1의 287 위치(NimIII)에서 이루어질 수 있다(예를 들어, 도 7 참조). NimIV는 VP1의 카르복시-말단 부위 내에, HRV14 VP1의 아미노산 274-289를 나타내는 다음 서열을 포함하는 부위 내에 있다: NTEPVIKKRKGDIKSY(SEQ ID NO:28). 삽입은 상기 NimIV 사이트 또는 다른 HRV 혈청형에 대응하는 부위에서 이루어질 수 있다. 상기 부위에서 어떤 아미노산 사이의 삽입은 본 발명 내에 포함된다. 따라서, 본 발명은 예를 들어, 아미노산 274 및 275; 275 및 276; 276 및 277; 277 및 278; 278 및 279; 279 및 280; 280 및 281; 281 및 282; 282 및 283; 283 및 284; 284 및 285; 285 및 286; 286 및 287; 287 및 288; 및 288 및 289 사이의 삽입을 포함한다. 본 발명에 추가하여, 본 발명은 상기 부위 내에 하나 또는 그 이상의(예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10) 아미노산 결손이 발생한 곳에 삽입을 포함한다. 따라서, 예를 들어, 본 발명은 아미노산 274 및 276; 275 및 277; 276 및 278; 277 및 279; 278 및 280; 279 및 281; 280 및 282; 281 및 283; 282 및 284; 283 및 285; 284 및 286; 285 및 287; 286 및 288; 287 및 289; 288 및 290; 및 289 및 291 사이의 삽입을 포함한다. 상기 삽입은 추가적으로 지시한 아미노산의 일단 또는 양단에서 예를 들어, 1, 2, 3, 4 또는 5 아미노산 결손을 대체하여 이루어질 수 있다.
본 발명의 상기 벡터는 하기 HRV14의 NimII에서 삽입을 포함하는 벡터에서 예를 든 분자생물학의 표준 방법을 사용하여 만든다. 추가적으로 및 하기에서 추가적으로 논의한 것과 같이, 본 발명의 상기 벡터는 생 바이러스 형태로 투여하거나, 또는 투여에 우선하여 예를 들어, 포르말린 불활화 또는 자외선 처리, 당업계에 주지된 방법으로 불활화한다.
선택적으로, 상기 벡터는 HRV 벡터 서열 및 삽입된 인플루엔자 서열 사이 아미노 및/또는 카르복실-말단에 링커 서열을 포함할 수 있다.
상기 링커 서열을 삽입된 서열의 탄력성을 제공하여, 면역 반응을 유도할 수 있는 삽입된 서열의 삽입된 에피토프를 표현하는 능력을 어느 정도 부여하기 위해 사용할 수 있다. 이러한 링커 서열은 하기에서 제공한다. 특별한 삽임체로 사용하기 위한 링커 서열의 확인은 예를 들어, 본 발명의 명세서에 기재된 라이브러리 스크리닝 방법에 의해 실시될 수 있다. 간단하게, 상기 방법에서, 효율적인 링커 서열의 확인을 바라는 부위에서 다양한 길이의 무작위 서열을 가지고 있는 라이브러리를 구축했다. 상기 라이브러리로부터 생성된 바이러스는 효율적인 링커를 확인하기 위해서, 상기 삽입된 서열의 생존력 및 면역원성을 테스트하였다. 본 발명의 상기 바이러스는 예를 들어, 세포 컬쳐에서 계대배양과 같은 표준 방법을 사용하여 키울 수 있다. 예를 들어, MRC-5 또는 헬라와 같은 세포로부터 키워지고, 정제될 수 있다.
이종 펩타이드
본 발명의 상기 바이랄 벡터는 어떤 펩타이드, 단백질 또는 예방 또는 치료 목적의 다른 아미노산-기초 면역원을 운반하는데 이용할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 상기 벡터는 HRV 단백질에 삽입되는 어떤 단백질-기초 항원에 대한 면역 반응(예방 또는 치료)을 유도하는데 이용될 수 있다. 본 명세서에서 사용하는 예방 및 방어는 본 발명의 면역원성 조성물을 본 발명의 벡터에 삽입된 펩타이드 또는 단백질에서 유래한 병원체에 감염되지 않은 대상에 주입하는 것을 포함한다. 상기 대상에 본 발명의 조성물을 투여하는 것은 만약 이러한 대상이 투여 이후 병원체에 감염되었다면, 증상을 나타내는 감염으로 발전하는 것을 방어하거나 또는 근본적으로 방어할 수 있다. 따라서, 상기 투여는 상기 대상의 면역 반응을 가능하게 하여 예를 들어, 감염이 증상을 나타내는 단계로 발단하는 것을 방어하거나, 근본적으로 방어할 수 있다. 치료 목적의 투여는 이미 삽입된 펩타이드 또는 단백질로부터 유래한 병원체의 감염된 대상에 투여하는 것을 포함한다. 이러한 대상은 상기 감염의 증상을 나타낼 것이다. 이러한 용어는 종양-연관 항원의 컨텍스트에서 동등하게 적용할 수 있다. 예를 들어, 예방 또는 방어적 투여는 종양을 보유하지 않은 환자(또는 종양을 가지고 있다고 진단되지 않은)에서 실시될 수 있고, 이러한 투여는 대상에서 증식하는 종양에 대항하는 면역 반응을 유도할 수 있다. 종양-연관 항원의 투여를 포함하는 치료목적의 처치는 이미 종양으로 진단받은 환자에서 실시될 수 있다.
본 발명의 상기 벡터는 삽입 서열의 단일 에피토프를 각각 유도할 수 있다. 양자택일로, 다중 에피토프는 단일 사이트(예컨대, 다른 에피토프를 선택적으로 하기 예시에서 기재하는 아미노산들 또는 1 아미노산의 폴리글라이신 스트레치(polyglycine stretch)와 같은 신축성 링커에 의해 분리할 수 있는 폴리토프(polytope)와 같이), 다른 싸이트(예컨대, 다른 Nim 사이트) 또는 이들의 조합 중 둘 중 하나에서 벡터로 삽입될 수 있다. 상기 다른 에피토프는 단일 종, 스트레인 또는 병원체의 혈청형(또는 다른 소스)로부터 유래할 수 있고, 또는 다른 종, 스트레인 혈청형, 및/또는 속에서 유래할 수 있다. 상기 벡터는 예를 들어, 본 명세서에서 나열하는 펩타이드의 다중 카피 또는 본 명세서에서 나열하는 펩타이드의 결합과 같은 다중 펩타이드를 포함할 수 있다. 일예로, 상기 벡터는 HAO 및 M2e 서열 또는 인간 및 조류 HAO 및/또는 M2e 펩타이드를 포함할 수 있다(및/또는 이들의 보존적 서열; 및/또는 본 명세서에서 기술하는 다른 펩타이드).
본 발명에서 사용할 수 있는 면역원은 예를 들어, 바이러스, 박테리아 및 기생충과 같은 감염성 물질로부터 유래할 수 있다. 이러한 감염성 물질의 구체적인 예로는 조류 인플루엔자 바이러스뿐만 아니라, 인간에 감염되는 바이러스를 포함한 인플루엔자 바이러스(예를 들어, A, B 및 C 스트레인)가 있다.
인플루엔자 바이러스 면역원의 예로는 헤마글루티닌(HA; 예를 들어, H1-H16 중 하나 또는 이들의 서브유닛)(HAO 또는 HA 서브유닛 HA1 및 HA2), M2(예컨대 M2e), 뉴라미니다제(NA; 예컨대, N1-N9 중 하나), M1, 핵단백질(NP) 및 B단백질을 포함한다.
본 발명의 상기 벡터에 포함될 수 있는 세열의 예시는 상기 헤마글루티닌 전구체 단백질 절단 사이트(HA0)(A/H1 스트레인에 대한 NIPSIQSRGLFGAIAGFIE(SEQ ID NO:31), A/H3 스트레인에 대한 NVPEKQTRGIFGAIAGFIE(SEQ ID NO:32), 및 인플루엔자 B 스트레인에 대한 PAKLLKERGFFGAIAGFLE(SEQ ID NO:33))를 포함하는 인플루엔자 바이러스 펩타이드이다. 이러한 펩타이드의 두 가지 구체적인 예는 RGIFGAIAGFI(SEQ ID NO:34) 및 NVPEKQTQGIFGAIAGFI(SEQ ID NO:35)를 포함한다.
다른 예시에서, 상기 HAO-기초 백신은 추가적인 면역원 서열을 포함하거나(예를 들어, 인플루엔자 바이러스 M2e 서열), 또는 추가적인 면역원(예를 들어, 인플루엔자 바이러스 M2e)과 함께 주입된다. 이러한 서열의 예는 본 명세서 및 표 6-9를 통해 제공한다. 이러한 서열의 구체적인 예시는 다음을 포함한다: MSLLTEVETPIRNEWGCRCNDSSD(SEQ ID NO:9); MSLLTEVETPTRNEWECRCSDSSD(SEQ ID NO:10); MSLLTEVETLTRNGWGCRCSDSSD(SEQ ID NO:11); EVETPTRN(SEQ ID NO:13); SLLTEVETPIRNEWGCRCNDSSD(SEQ ID NO:36); 및 SLLTEVETPIRNEWGCR (SEQ ID NO:37). 본 발명에서 이용될 수 있는 추가적인 M2e 서열은 인플루엔자 B(보존적 MLEPFQ; SEQ ID NO:38) BM2 단백질의 세포외 부위로부터의 서열 및 H5N1 조류 독감 펩타이드(MSLLTEVETLTRNGWGCRCSDSSD; SEQ ID NO:11)를 포함한다. 다음은 본 발명에 사용될 수 있는 결합된 HAO 및 M2e 서열의 예시이다: SLLTEVETPIRNEWGSERGIFGAIAGFIE(SEQ ID NO:39).
하나 이상의 면역원을 포함하는 백신의 경우, 다중 면역원을 본 발명의 상기 HRV-기초 벡터와 같은 같거나 또는 다른 운반체에 포함할 수 있다. 본 발명의 상기 벡터는 본 명세서에서 추가적으로 기재하고 있는 B형간염 코어-기초 벡터와 같은 다른 타입의 벡터U.S. Patent No. 7,361,352 참조) 및/또는 서브유닛 백신과 결합하여 투여될 수 있다. 인플루엔자에서 보존된 펩타이드의 다른 예시는 HAO-기초 백신과 결합하여 본 발명에서 사용할 수 있고, 인플루엔자에 대해 보존된 NBe 펩타이드를 포함한다(보존적 서열 MNNATFNYTNVNPISHIRGS; SEQ ID NO:40). 본 발명에서 사용될 수 있는 인플루엔자 펩타이드 뿐만 아니라 이들로부터 유래할 수 있는 단백질(예를 들어, 조각화 및/또는 아날로그의 창조; 하기 참조)의 추가적 예시는 US 2002/0165176, US 2003/0175290, US 2004/0055024, US 2004/0116664, US 2004/0219170, US 2004/0223976, US 2005/0042229, US 2005/0003349, US 2005/0009008, US 2005/0186621, U.S. Patent No. 4,752,473, U.S. Patent No. 5,374,717, U.S. 6,169,175, U.S. Patent No. 6,720,409, U.S. Patent No. 6,750,325, U.S. Patent No. 6,872,395, WO 93/15763, WO 94/06468, WO 94/17826, WO 96/10631, WO 99/07839, WO 99/58658, WO 02/14478, WO 2003/102165, WO 2004/053091, WO 2005/055957, 및 표 6-9(및 이들의 인용 문헌), 참조에 의해 본 명세서에 구체화된 내용들에서 기재되었다. 추가적으로, 인플루엔자의 보존된 면역적/방어적 T 및 B 세포 에피토는 공중이 접근 가능한 데이터베이스를 통해 선택될 수 있다(예를 들어, Bui et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 104:246-251, 2007 및 추가 표 참조). 본 발명은 또한 예를 들어, Bui et al., supra에 기재된 보존된 B 및 T 세포 에피토프를 포함하는 인플루엔자와 같은 펩타이드를 온라인 IEDB로부터 이용할 수 있다.
기생충(예를 들어, 말라리아), 다른 병원체 바이러스(예를 들어, 인간 파필로마 바이러스(HPV), 헤르페스 심플렉스 바이러스(HSV), 인간 면역결피 바이러스(HIV; 예를 들어, gag), 및 C형간염(HCV)), 및 박테리아(예를 들어, Mycobacterium tuberculosis, Clostridium difficile, 및 Helicobacter pylori)로부터의 에피토프와 같은 다른 인간/가축 병원체로부터의 방어적 에피토프는 또한 본 발명의 HAO-기초 백신과 결합하거나 또는 본 발명의 상기 벡터를 사용하여 HAO-기초 펩타이드없이 투여될 수 있다. 다양한 이들 또는 다른 병원체의 적절한 에피토프가 당업계에 알려졌다. 예를 들어, 예컨대, HPV16 바이러스 L2 단백질의 아미노산 1-88, 아미노산 1-200, 또는 아미노산 17-36을 포함하는 펩타이드(WO 2006/083984 A1; QLYKTCKQAGTCPPDIIPKV; SEQ ID NO:41)와 같이 다른 HPV 유전자형에 방어가 가능하고, 넓은 교차-중화 항체를 유도하는 파필로마바이러스 L2 단백질로부터 유래한 교차-방어적 에피토프/펩타이드는 이용될 수 있다. 본 발명에서 이용할 수 있는 추가적 병원체, 이러한 병원체의 면역원 및 에피토프의 예시는 WO 2004/053091, WO 03/102165, WO 02/14478, 및 US 2003/0185854, 참조에 의해 본 명세서에 구체화된 내용들에서 제공한다.
면역원을 얻을 수 있는 병원체의 추가적인 예시는 하기 표 1에 열거하였고, 상기 면역원의 예시는 표 2에 열거한 것들을 포함한다. 추가적으로, 본 발명의 상기 벡터로 삽입될 수 있는 에피토프의 구체적인 예시는 표 3에서 제공한다. 표 3에서 언급한 바와 같이, 본 발명의 상기 벡터에 이용되는 에피토프는 B 세포(예컨대, 중화 에피토프) 또는 T 세포(예컨대, T-헬퍼 및 세포독성 T 세포-특이적 에피토프) 에피토프일 수 있다.
본 발명의 상기 벡터는 병원체-유래 항원에 추가하여, 항원 운반에 이용될 수 있다. 예를 들어, 상기 벡터는 암에 대한 면역 치료법에서 사용을 위한 종양-연관 항원의 운반에 사용될 수 있다. 다양한 종양-연관 항원은 당업계에 알려졌고, 본 발명에 의해 투여될 수 있다. 암(및 대응하는 종양 연관 항원)의 예시는 다음과 같다: 흑색종(NY-ESO-1 단백질 (구체적으로 아미노산 157-165에 위치한 CTL 에피토프), CAMEL, MART 1, gp100, 티로신-연관 단백질 TRP1 및 2, 및 MUC1); 선암(ErbB2 단백질); 결장암(17-1A, 791Tgp72, 및 암태아성(癌胎兒性) 항원); 전립선암(PSA1 및 PSA3). 열충격 단백질(hsp110)이 이러한 면역원으로 사용될 수 있다.
본 발명의 다른 예시에서, 소망하는 면역 반응을 일으키는 알러지-유도 항원의 에피토프를 암호화하는 외인성 서열을 사용할 수 있다. 추가적으로, 본 발명의 상기 벡터는 벡터가 투여되는 대상에서 벡터가 항원과 같은 펩타이드를 특별한 세포(예를 들어, 리간드에 대한 수용체를 포함하는 세포)로 운반하기 위한 타케팅에 사용하는 리간드를 포함할 수 있다. 병원체, 종양 및 알러지-연간 펩타이드 및 본 발명의 상기 벡터에서 면역원처럼 포함될 수 있는 이들의 소스의 추가적 예시는 다음에서 기술한다. 이러한 펩타이드 면역원은 각각 및/또는 본 명세서에서 기재하고 있는 다른 펩타이드(예를 들어, 본 명세서에서 기술하고 있는 HAO 및/또는 M2e-연관 서열)와 결합하여 사용할 수 있다. 본 발명은 상기 면역원에 대한 면역 반응을 유도하는 벡터의 사용 방법뿐만 아니라 이러한 벡터를 포함하는 조성물을 포함한다. 따라서, 상기에서 기재하는 면역원에 추가하여, 본 명세서에서 기술하고 있는 상기 벡터는 예컨대, dsDNA 바이러스(예컨대, 아데노바이러스, 헤르페스바이러스, 엡스타인-바 바이러스, 헤르페스 심플렉스 타입 1, 헤르페스 심플렉스 타입 2, 인간 헤르페스 바이러스 심플렉스 타입 8, 인간 사이토메갈로 바이러스, 바리셀라-조스터 바이러스, 폭스 바이러스); ssDNA 바이러스(예컨대, 파보바이러스, 파필로마바이러스 (예컨대, E1, E2, E3, E4, E5, E6, E7, E8, BPV1, BPV2, BPV3, BPV4, BPV5, 및 BPV6 (In Papillomavirus 및 Human Cancer, edited by H. Pfister (CRC Press, Inc. 1990)); Lancaster et al., Cancer Metast. Rev. pp. 6653-6664, 1987; Pfister et al., Adv. Cancer Res. 48:113-147, 1987)); dsRNA 바이러스(예컨대, 레오바이러스); (+)ssRNA 바이러스(예컨대, 피코나바이러스, 콕사키 바이러스, A형 간염 바이러스, 폴리오 바이러스, 토가바이러스, 루벨라 바이러스, 플라비 바이러스, C형 간염 바이러스, 황열병 바이러스, 뎅기 바이러스, 웨스트 나일 바이러스); (-)ssRNA 바이러스 (예컨대, 오르토믹소 바이러스, 독감 바이러스, 랩도 바이러스, 파라믹소 바이러스, 홍역 바이러스, 멈프스 바이러스, 파라독감 바이러스, 랩도 바이러스, 광견병 바이러스); ssRNA-RT 바이러스(예컨대, 레트로 바이러스, 인간 면역결핍 바이러스 (HIV)); 및 dsDNA-RT 바이러스 (예컨대, 헤파드나 바이러스, B형 간염 바이러스)를 포함하는 하나 또는 그 이상의 바이러스(예컨대, 바이럴 타켓 항원)에 대해 면역 반응을 지시하거나 또는 이들로부터 유래한 면역원을 포함할 수 있다. 면역원은 또한 상기에서 기재된 것아 아닌 당업계에서 이용 가능한 기술을 이용하여 다른 바이러스로부터 유래될 수 있다.
HIV에 관하여, 면역원은 어떤 분리된 HIV로부터 선택될 수 있다. 당해 분야에서 주지된 바와 같이, 분리된 HIV는 현재 분리된 유전적 아형으로 분류된다. HIV-1는 적어도 10 아형을 포함하는 것으로 알려졌다(A, B, C, D, E, F, G, H, J, 및 K). HIV-2는 적어도 5 아형을 포함하는 것으로 알려졌다(A, B, C, D, 및 E). 아형 B는 남성 동성애자 및 전 세계 정맥주사 마약 사용자의 유행성 HIV와 연관이 있다. 대부분의 HIV-1 면역원, 실험실 적용된 분리된 것, 시약 및 지도화된 에피토프는 아형 B에 속한다. 새로운 HIV 감염 빈도가 높은 아-사하라 아프리카, 인도 및 중국 지역은 HIV-1 아형 B는 낮은 감염 비율을 차지하고, 아형 HIV-1 C가 가장 빈번하게 감염되는 아형에 해당한다. 이와 같이, 어떤 구현예에서는 HIV-1 아형 B 및/또는 C 면역원의 선택이 바람직할 수 있다. 단독의 면역학적 조성물에 복수의 HIV 아형으로부터(예컨대, HIV-1 아형 B 및 C, HIV-2 아형 A 및 B, 또는 a combination of HIV-1 및 HIV-2 아형) 면역원을 포함하는 것이 바람직할 수 있다. 적절한 HIV 면역원은 ENV, GAG, POL 및 NEF 뿐만 아니라 예컨대 이들의 변형물, 파생물 및 융합 단백질을 포함한다.
면역원은 또한 예컨대, 바실러스 종(예컨대, Bacillus anthracis), 보데텔라 종(예컨대, Bordetella pertussis), 보렐리아 종(예컨대, Borrelia burgdorferi), 부르셀라 종(예컨대, Brucella abortus, Brucella canis, Brucella melitensis, Brucella suis), 캄필로박터 종(예컨대, Campylobacter jejuni), 클라미디아 종(예컨대, Chlamydia pneumoniae, Chlamydia psittaci, Chlamydia trachomatis), 클로스트리듐 종(예컨대, Clostridium botulinum, Clostridium difficile, Clostridium perfringens, Clostridium tetani), 코리네박테리움 종(예컨대, Corynebacterium diptheriae), 엔테로코쿠스 종(예컨대, Enterococcus faecalis, enterococcus faecum), 에스케리치아 종(예컨대, Escherichia coli), 프란시셀라 종(예컨대, Francisella tularensis), 헤모필러스 종(예컨대, Haemophilus influenza), 헬리코박터 종(예컨대, Helicobacter pylori), 리지오넬라 종(예컨대, Legionella pneumophila), 렙토스피라 종(예컨대, Leptospira interrogans), 리스테리아 종(예컨대, Listeria monocytogenes), 마이코박테리아 종(예컨대, Mycobacterium leprae, Mycobacterium tuberculosis), 마이코플라즈마 종(예컨대, Mycoplasma pneumoniae), 네이세리아 종(예컨대, Neisseria gonorrhea, Neisseria meningitidis), 슈도모나스 종(예컨대, Pseudomonas aeruginosa), 리켓시야 종(예컨대, Rickettsia rickettsii), 살모넬라 종(예컨대, Salmonella typhi, Salmonella typhinurium), 시젤라 종(예컨대, Shigella sonnei), 스테필로 코코스 종(예컨대, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus saprophyticus, coagulase negative staphylococcus (예컨대, U.S. Patent No. 7,473,762)), 스트렙토코코스 종(예컨대, Streptococcus agalactiae, Streptococcus pneumoniae, Streptococcus pyrogenes), 트레포니아 종(예컨대, Treponema pallidum), 비브리오 종(예컨대, Vibrio cholerae), 및 예르시니아 종(Yersinia pestis)을 포함하는 하나 또는 그 이상의 박테리아종(spp.)에 대해 면역 반응을 지시하거나, 이들로부터 유래할 수 있다(예컨대, 박테리아 타겟 항원). 면역원은 또한 상기에서 기재된 것아 아닌 당업계에서 이용 가능한 기술을 이용하여 다른 박테리아로부터 유래될 수 있다.
면역원은 또한 예컨대, 안실로스토마 종(예컨대, A. duodenale), 애니사키스(Anisakis) 종, 아스크리스룸브리코이더스(Ascaris lumbricoides), 발란티듐 콜라이(Balantidium coli), 세스토다(Cestoda) 종, 시미시대(Cimicidae) 종, 크로노치스 시넨시스(Clonorchis sinensis), 디크로코에리움 덴드리티큠(Dicrocoelium dendriticum), 디크로코에리움 호스페스(Dicrocoelium hospes), 디필로보트리움 라튬(Diphyllobothrium latum), 드라쿤크루스(Dracunculus) 종, 에치노코쿠스(Echinococcus) 종(예컨대, E. granulosus, E. multilocularis), 엔타모에바 히스토리티카(Entamoeba histolytica), 엔테로비우스 버미큘라리스(Enterobius vermicularis), 파스시올라(Fasciola) 종(예컨대, F. hepatica, F. magna, F. gigantica, F. jacksoni), 파시오롭시스 부스키(Fasciolopsis buski), 지알디아 종(Giardia lamblia), 그나토스토마(Gnathostoma) 종, 히메노레피스(Hymenolepis) 종(예컨대, H. nana, H. diminuta), 레쉬마니아(Leishmania) 종, 로아 로아(Loa loa), 메토르치스(Metorchis) 종(M. conjunctus, M. albidus), 네카토 아메리카누스(Necator americanus), 오에느트로이대(Oestroidea) 종(예컨대, botfly), 온코세르시대(Onchocercidae) 종, 오피스토르치스(Opisthorchis) 종(예컨대, O. viverrini, O. felineus, O. guayaquilensis, 및 O. noverca), 플라스모디움(Plasmodium) 종(예컨대, P. falciparum), 프로토패스시올라 로버스타(Protofasciola robusta), 파라파시오립시스 파시오몰패(Parafasciolopsis fasciomorphae), 파라고니무스 웨스터마니(Paragonimus westermani), 시스토소마(Schistosoma) 종(예컨대, S. mansoni, S. japonicum, S. mekongi, S. haematobium), 스피로메트라 에리내세이유로파이(Spirometra erinaceieuropaei), 스트로지로이데스 스터코라리스(Strongyloides stercoralis), 태니아(Taenia) 종(예컨대, T. saginata, T. solium), 톡소카라(Toxocara) 종(예컨대, T. canis, T. cati), 톡소플라스마(Toxoplasma) 종(예컨대, T. gondii), 트리코빌하비아 리젠티(Trichobilharzia regenti), 트리시넬라 스피라리스(Trichinella spiralis), 트리큘리스 트리키우라(Trichuris trichiura), 트롬비큘리대(Trombiculidae) 종, 트리파노소마(Trypanosoma) 종, 퉁가 페넨트란스(Tunga penetrans), 및/또는 유케렐리아 방크로프티(Wuchereria bancrofti)를 포함하는 하나 또는 그 이상의 기생충종(spp.)에 대해 면역 반응을 지시하거나, 이들로부터 유래할 수 있다(예컨대, 기생충 타겟 항원). 면역원은 또한 상기에서 기재된 것아 아닌 당업계에서 이용 가능한 기술을 이용하여 다른 기생충 조직체로부터 유래될 수 있다.
면역원은 종양 표적 항원으로부터 유래하거나 또는 이들로부터 면역 반응을 지시할 수 있다(예컨대, 종양 타겟 항원). 상기 종양 표적 항원(TA) 용어는 암세포 항원의 소스인 종양-관련 항원(TAAs) 및 종양-특이적 항원 (TSAs)을 모두 포함할 수 있다. TA는 종양 세포의 표면에서 정상 세포에서 관찰되는 것보다 많은 양이 발현되는 항원이거나, 또는 태아 발달기간에 정상세포에서 발현되는 항원일 수 있다. TSA는 정상 세포에서는 발현되지 않고, 종양 세포에서 독특하고, 전형적인 항원이다. TAs는 그들의 발현 패턴, 기능, 또는 유전적 기원에 따라 전형적으로 5가지 카테고리로 분류된다: 고환암(CT) 항원(예컨대, MAGE, NY-ESO-1); 멜라닌세포 분화 항원(예컨대, Melan A/MART-1, tyrosinase, gp100) 돌연변이 항원(예컨대, MUM-1, p53, CDK-4); 과발현‘자가’항원(예컨대, HER-2/neu, p53); 및 바이러스 항원(예컨대, HPV, EBV). 적절한 TAs는 예컨대, gp100(Cox et al., Science 264:716-719, 1994), MART-1/Melan A(Kawakami et al., J. Exp. Med., 180:347-352, 1994), gp75(TRP-1)(Wang et al., J. Exp. Med., 186:1131-1140, 1996), 티로시나제(Wolfel et al., Eur. J. Immunol., 24:759-764, 1994), NY-ESO-1(WO 98/14464; WO 99/18206), 멜라노마 프로테오글리칸(Hellstrom et al., J. Immunol., 130:1467-1472, 1983), MAGE과 항원(e.gl, MAGE-1, 2, 3, 4, 6, 및 12; Van der Bruggen et al., Science 254:1643-1647, 1991; U.S. Patent No. 6,235,525), BAGE과 항원(Boel et al., Immunity 2:167-175, 1995), GAGE과 항원(예컨대, GAGE-1,2; Van den Eynde et al., J. Exp. Med. 182:689-698, 1995; U.S. Patent No. 6,013,765), RAGE과 항원(예컨대, RAGE-1; Gaugler et al., Immunogenetics44:323-330, 1996; U.S. Patent No. 5,939,526), N-아세틸글루코사미닐트랜스퍼라제-V(Guilloux et al., J. Exp. Med. 183:1173-1183, 1996), p15(Robbins et al., J. lmmunol. 154:5944-5950, 1995), ß-카테닌(Robbins et al., J. Exp. Med., 183:1185-1192, 1996), MUM-1(Coulie et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 92:7976-7980, 1995), 사이클린 의존 키나제-4(CDK4)(Wolfel et al., Science 269:1281-1284, 1995), p21-ras(Fossum et al., Int. J. Cancer56:40-45, 1994), BCR-abl(Bocchia et al., Blood 85:2680-2684, 1995), p53(Theobald et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 92:11993-11997, 1995), p185 HER2/neu(erb-B1; Fisk et al., J. Exp. Med., 181:2109-2117, 1995), 표피성장인자수용체(EGFR)(Harris et al., Breast Cancer Res. Treat, 29:1-2, 1994), 암배항원(CEA)(Kwong et al., J. Natl. Cancer Inst., 85:982-990, 1995) 미국 특허번호 5,756,103; 5,274,087; 5,571,710; 6,071,716; 5,698,530; 6,045,802; EP 263933; EP 346710; 및 EP 784483; 암종-연관 변이 뮤신(예컨대, MUC-1 gene products; Jerome et al., J. Immunol., 151:1654-1662, 1993); EBV의 EBNA 유전자 산물(예컨대, EBNA-1; Rickinson et al., Cancer Surveys 13:53-80, 1992); 인간 파필로마바이러스의 E7, E6 단백질(Ressing et al., J. Immunol. 154:5934-5943, 1995); 전립선 특이 항원(PSA; Xue et al., The Prostate 30:73-78, 1997); 전립선 특이 막 항원(PSMA; Israeli et al., Cancer Res. 54:1807-1811, 1994); 예컨대,면역글로블린 유전자형 또는 T 세포 수용체 유전자형과 같은 에피토프 또는 항원의 유전자형(Chen et al., J. Immunol. 153:4775-4787, 1994); KSA (U.S. Patent No. 5,348,887), 키네신 2(Dietz, et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 275(3):731-738, 2000), HIP-55, TGFβ-1 사멸-억제 인자(Toomey et al., Br. J. Biomed. Sci. 58(3):177-183, 2001), 종양 단백질 D52(Bryne et al., Genomics 35:523-532, 1996), H1FT, NY-BR-1(WO 01/47959), NY-BR-62, NY-BR-75, NY-BR-85, NY-BR-87, 및 NY-BR-96(Scanlan, M. Serologic 및 Bioinformatic Approaches to the Identification of Human Tumor Antigens, in Cancer Vaccines 2000, Cancer Research Institute, New York, NY), 및/또는 췌장암 항원(예컨대, SEQ ID NOs: 1-288 of U.S. Patent No. 7,473,531)을 포함한다. 면역원은 또한 상기에서 언급하지 않았으나, 당업계의 실시가능한 기술 중 하나인 TAs에 면역 반응을 지시하거나, 또는 이들로부터 유래할 수 있다.
본 발명의 상기 벡터로 삽입되는 펩타이드 또는 단백질의 사이즈는 당업계에서 통상적으로 적절하다고 결정될 수 있는 예컨대, 3-1,000 아미노산, 예컨대, 5-500, 10-100, 20-55, 25-45, 또는 35-40 아미노산의 범위일 수 있다. 따라서, 예를 들어, 7-45, 10-40, 12-30, and 15-25 길이 범위의 아미노산이 본 발명에서 사용될 수 있다. 본 발명의 상기 벡터에 포함된 상기 펩타이드는 본 명세서에서 구체화하고, 참조한 완전한 서열 또는 소망하는 면역 반응을 유도할 수 있는 하나 또는 그 이상의 에피토프를 포함한 조각을 포함할 수 있다. 상기 조각은 상기 펩타이드 내부로부터 예컨대, 2-50, 3-40, 4-30, 5-25, 또는 6-20 아미노산 조각을 포함할 수 있다. 게다가, 상기 펩타이드는 예를 들어, 자연적으로 발생한 연속 서열(예컨대, 상기 인플루엔자 바이러스(또는 다른 소스) 지놈에서 펩타이드가 연속적인 서열) 또는 합성 링커서열을 포함하는, 한쪽 또는 양쪽 말단에 1, 2, 3, 4, 5, 6,7, 8, 9, 10, 11-20 등 아미노산까지 서열의 절단 또는 확장을 포함할 수 있다(예컨대, 추가적/반복 면역우세/헬퍼 에피토프의 삽입). 상기 펩타이드는 따라서 일측 또는 양측 말단에 예컨대, 1-25, 2-20, 3-15, 4-10, 또는 4-8 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 구체적인 예로서, 상기 펩타이드는 아미노 및/또는 카르복시 터미널 말단에 1-3 아미노산 링커 서열을 포함할 수 있다. 상기 펩타이드 또는 단백질의 절단은 예컨대, 알고 있는 구조적/면역적 부위 내부 또는 부위 사이에서 면역적으로 비중요 또는 방해 서열을 제거하거나, 전체 비소망 부위를 제거할 수 있으며, 이러한 변형은 21-30, 31-50, 51-100, 101-400 등 아미노산 범위에서 이루어질 수 있다.
The ranges also include, e.g., 20-400, 30-100, and 50-100 아미노산. 상기 범위는 또한 예컨대, 20-400, 30-100, 및 50-100 아미노산을 포함한다. 추가적으로, 상기 서열은 펩타이드의 내부 및/또는 일측 또는 양측 말단에 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 또는 그 이상의 아미노산(예컨대, 1-50, 3-40, 5-30, 8-25, 10-20, 또는 12-15 아미노산)의 결손 또는 치환을 포함할 수 있다. 상기에서 언급한 모든 가능한 서열의 펩타이드 조각은 본 발명에 포함된다. 따라서, 분 명세서에서 나열하고 참조한 구체적인 펩타이드 서열(및 이들의 절단 및 확장)에 추가하여, 본 발명은 또한 상기 서열의 유사 형태를 포함한다. 이러한 유사형태는 예컨대, 참조서열 또는 이들의 조각과 적어도 80%, 90%, 95%, 또는 99% 일치하는 서열을 포함한다. 일치 비율의 결정은 표준 방법 및 소프트웨어(예컨대, 유니버시티 오브 위스콘신 바이오테크놀러지 센터, 1710 유니버시티 애비뉴, 매디슨, WI 53705에 위치한 제네틱 컴퓨터 그룹의 서열 분석 소프트웨어 패키지, BLAST 또는 PILEUP/PRETTYBOX 프로그램과 같은)를 사용하여 실시하였다. 이러한 소프트웨어는 다양한 치환, 결손 또는 다른 변형에서 동일성의 어사이닝 정도에 의해 동일 또는 유사한 서열을 매치한다.
상기 유사 형태는 다양한 예시에서 보존적 아미노산 치환을 포함할 수 있다. 보존적 치환은 전형적으로 다음 그룹 내에서의 치환을 포함한다: 글리신, 알라닌, 발린, 이소류신 및 류신; 아스파틱 산, 글루타믹 산, 아스파라진, 및 글루타민; 세린 및 트레오닌; 리신 및 아르기닌; 및 페닐알라닌 및 티로신. 본 명세서에서 기술하고 있는 상기 조각 및 유사 형태는 표준 면역 어쎄이 및 본 명세서에서 기술하고 있는 동물 모델 시스템에서 면역원성을 테스트할 수 있다.
투여( Administration )
면역화 방법에서 사용할 경우, 본 발명의 상기 벡터는 예컨대, 인플루엔자 바이러스와 같은 특별한 병원체에 감염 위험이 있는 성인 또는 아동에 주요 예방 물질로 투여될 수 있다. 상기 벡터는 또한 상기 펩타이드 항원으로부터 유래한 상기 병원체에(또는 다른 소스) 대한 면역 반응 자극에 의한 감염된 대상을 치료하는 제 2 물질로서 사용될 수 있다. 암에 대한 면역화의 컨텍스트에서, 상기 백신은 암으로 발전할 위험이 있는 대상 또는 이미 암에 걸린 대상에 투여될 수 있다. 인간 대상에 추가하여, 본 발명의 상기 방법은 비-인간 동물에 투여를 포함한다(예컨대, 소, 돼지, 말, 양, 염소 및 새(닭, 칠면조, 오리 또는 거위), 개, 고양이 및 새롤 포함하는 애완 동물과 같은 가축).
면역화 적용을 위해, 선택적으로 당업계에서 주지된 어쥬번트가 사용될 수 있다. 어쥬번트는 투여 루트에 기초하여 선택될 수 있다. 비가 투여의 경우, 키틴 미세 입자(CMP)가 사용될 수 있다(Asahi-Ozaki et al., Microbes and Infection 8:2706-2714, 2006; Ozdemir et al., Clinical and Experimental Allergy 36:960-968, 2006; Strong et al., Clinical and Experimental Allergy 32:1794-1800, 2002). 점막 경로 투여(예컨대, 비강 또는 구강 경로)에 이용되는 다른 어쥬번트는 대장균의 열-불안정 독소(LT) 또는 이들의 변이 파생물을 포함한다. 불활화 바이러스의 경우, 비경구 어쥬번트가 예컨대, 알루미늄 화합물(예컨대, 알루미늄 하이드록사이드, 알루미늄 하이드록시 포스페이트 화합물), 리포좀 제제, QS21, 뮤라닐 디펩티드, 모노포스포릴 지질 A, 또는 폴리포스파진과 같은 합성 어쥬번트를 포함하여 사용될 수 있다.
추가적으로, 어쥬번트 활성을 보유하는 사이토카인을 인코딩한 유전자는 벡터에 삽입될 수 있다. 따라서 GM-CSF, IL-2, IL-12, IL-13 및 IL-5 와 같이 사이토카인을 암호화하는 유전자는 보강된 면역 반응을 유도하는 백신을 생산하기 위해서 또는 세포성, 체액성 또는 점막성 반응에 대한 면역원성 지시 조절을 좀더 구체적으로 지시하기 위해서 외래 면역원 유전자와 함께 삽입될 수 있다. 선택적으로, 사이토카인은 주지된 방법을 이용하여(예컨대, 직접 주입, 나출된 DNA, 바이랄 벡터 내, 등) 재조합 백신 바이러스와는 분리되어 동시에 또는 순차적으로 운반될 수 있다.
본 발명의 상기 바이러스는 다른 면역화 방식과 결합하여 사용될 수 있다. 예를 들어, 상기 바이러스는 같거나 다른 항원을 포함하고 있는 서브유닛 백신과 결합하여 투여될 수 있다. 본 발명의 상기 결합 방법은 다른 폼의 항원으로(또는 다른 항원들) 본 발명의 바이러스들을 상호-투여하는 것을 포함할 수 있다. 이러한 일예에서, 대장균에서 생산된 M2e 펩타이드를 표면에 포함하는 B형간염 코어 입자가 사용될 수 있다(HBc-M2e; Fiers et al., Virus Res. 103:173-176, 2004; WO 2005/055957; US 2003/0138769 A1; US 2004/0146524A1; US 2007/0036826 A1).
이러한 다른 예에서, HAO 펩타이드를 포함하는 B형간염 코어 입자를 사용하였다. 이러한 입자를 만드는데 사용하는 B형간염 코어 서열은 절단된 서열 뿐만 아니라, 전체 서열도 포함한다(예컨대, 카르복시 말단 절단 서열, 예컨대, 아미노산 149, 150, 163, 또는 164에 절단; U.S. Patent No. 7,361,352 참조). 상기 인플루엔자 바이러스 서열은 HBc 서열 내 또는 상기 HBc 서열의 일측 또는 양측 말단에 삽입될 수 있다. 예컨대, 서열은 약 75-83 HBc 아미노산에 위치한 HBc의 주요 면역우세 부위(MIR)에 삽입될 수 있다. 상기 MIR 부위로 삽입은 상기 부위의 어떤 아미노산 사이에서 이루어질 수 있고(예컨대, 75-76, 76-77, 77-78, 78-79, 79-80, 80-81, 81-82, 또는 82-83), 또는 상기 부위의 결손(예컨대, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 또는 7 아미노산)을 대체해서 나타날 수 있다(예컨대, HBc 서열의 아미노산 78 및 82 사이에 인플루엔자 B 바이러스 서열의 삽입). 다른 예시에서, 삽입은 상기 HBc 단백질의 아미노-말단에서 이루어질 수 있다.
양자택일로, 본 발명의 상기 벡터는 본 발명의 상기 벡터 또는 상기 다른 접근 둘 중 하나를 프라임으로 사용하고, 이어 다른 접근을 부스트로 사용하거나 또는 이와 반대로 사용하는 프라임-부스트 전략과 같은 다른 접근(서브유닛 또는 HBc 접근과 같은)와 결합하여 사용할 수 있다. 추가적으로, 본 발명은 본 발명의 상기 벡터를 프라임 및 부스트 물질로서 이용하는 프라임-부스트 전략을 포함한다. 따라서, 이러한 방법은 본 발명에 따른 벡터의 최초 투여 이후 1 또는 그 이상의 주, 달, 또는 년을 경과하여 하나 또는 그 이상(예컨대, 1, 2, 3, 또는 4) 의 추가투여를 하는 것을 포함할 수 있다.
본 발명의 상기 벡터는 표준 방법을 사용하여 생, 생-약독화, 또는 불활화 백신 형태로 대상에 투여될 수 있다. 상기 생 백신은 예컨대, 당업게에서 주지된 방법을 이용하여 비강으로 투여될 수 있다(see, 예컨대, Gret al., Am. J. Respir. Crit. Car. Med. 156:609-616, 1997). 비강 투여에서, 상기 벡터는 점비제(nose-drop) 형태로 또는 에어로졸 또는 분무의 흡입에 의해 투여될 수 있다. 상기 바이러스는 감압하에 동결 건조된 형태 또는 살린 또는 물과 같이 생리적으로 양립 가능한 용액 또는 버퍼에 용해된 형태일 수 있다. 제조 및 제제의 표준 방법은 예컨대, Remington’s Pharmaceutical Sciences (18th edition), ed. A. Gennaro, 1990, Mack Publishing Company, Easton, PA에 기재된 방법을 사용할 수 있다. 추가적으로, 적절한 복용량 및 처방법의 결정은 통상적인 당업계 기술에 의해 쉽게 결정될 수 있다. 적절한 복용량 및 처방법은 당업계 통상적인 기술에 의해서 쉽게 결정될 수 있다. 일예로, 상기 용량 범위는 용량당 103에서 108 pfu일 수 있으나, 1 TCID50만큼 낮을 수 있다. 상기 백신은 바람직하게는 단일 용량으로 투여될 수 있으나, 당업계 통상적 기술에 의해 필요하다고 인정될 경우, 상기에서 언급한 바와 같이, 부스팅도 역시 수행될 수 있다. 불활화 백신에 관해, 상기 바이러스는 예컨대, 포르말린 또는 UV 처리에 의해 불활화될 수 있고, 선택적으로, 적절한 어쥬번트(예컨대, 키틴 또는 변이 LT; 상기 참조)와 함께 용량당 약 108 pfu로(예컨대, 불활화에 앞서 결정된 것처럼) 비강 투여될 수 있다. 다른 예시에서, 불활화 백신은 또한 선택적으로, 적절한 어쥬번트(예컨대, 알루미늄 하이드록사이드와 같은 알루미늄 어쥬번트)와 함께 예컨대, 피하 투여와 같이 비경구로 투여될 수 있다. 이러한 접근에서, 하나 또는 그 이상(예컨대, 2-3) 용량으로 투여하는 것이 바람직할 수 있다.
본 발명은 하기 실험예에 기초한다.
도 1은 바이러스 입자(상부 패널) 및 HRV14의 지놈(하부 패널)의 도식적 표현이다. 상기 인간 라이노바이러스 14(HRV14) 캡시드는 슈도(pseudo)-T=3(P=3) 아이소헤드랄 시메트리(symmetry)를 전시하고, 바이랄 단백질 VP1, VP2, VP3, 및 RNA-캡시드 접점의 VP4로 구성된다(Rossmann et al., Nature 317:145-153, 1985). VP1-3 단백질은 세포내 고착 분자 1(ICAM-1)인 세포 수용체에 대한 수용체-바인딩 사이트를 포함하는 캐년(canyon)을 형성한다(Colonno et al., J. Virol. 63:36-42, 1989). 세 가지 주요 중화 면역원(Nim) 사이트인 NimI(AB), NimII, 및 NimIII가 상기 캐년 림(rim)의 표면에서 중화 항체에 대한 바인딩 사이트로 밝혀졌다(Sherry et al., J. Virol. 57:246-257, 1986). 상기 HRV14 입자의 재구축이 NimI-특이적 mAb17(단백질 데이터뱅크 데이터베이스 #1RVF)로 HRV14 결정 구조에 기초하여 창출되었다.
도 2는 다음과 같다: (A) 본 연구에서 창출된 HRV14-M2e 구조체(SEQ ID NOs:19-21). HRV14 cDNA 클론의 파생물로서, 플라스미드 pWR1은 M2e-삽입 변이체의 구축에 사용되었다. (B) pWR1로부터 유래한 야생형 HRV14 뿐만 아니라, HRV14-NimII-XXX17AA(Arnold et al., J. Mol. Biol. 177:417-430, 1984) 및 HRV14-NimII-XXX23AA(Arnold et al., US 2006/0088549 A1) 바이러스 라이브러리에 의해 생성된 플라그. 구조체 #1은 본문에서 논의하고, 추가적 데이터에 의해 뒷받침되는 것과 같이 플라그를 형성하지 않았는데, 이는 무작위 링커 전략이 HRV에서 새로운 에피토프를 제작하는 수단으로서 효율적이라는 것을 시사한다. 패널(C)는 본 발명(SEQ ID NOs:22-24)에 따fms, HRV14-M2e(17AA), HRV14-HA0(19AA), 및 HRV14-M2e16HA012 구조체를 보여준다.
도 3은 다른 HRV14-M2e에서 상기 M2e 인서트의 안정성을 보여준다. 상기 인서트-포함 조각은 P1-up100Fw, VP1-dwn200Rv(초록), 또는 14FAflII-1730Rv(빨강)인 결과 각각 "PCR B"(초록) 또는 "PCR A"(빨강) DNA 조각을 나타내는 한쌍의 프라이머를 이용하여 RT-PCR로 증폭되었다. 세 가지 조각은 XhoI로 처리되었다. 아가로즈 젤 전기영동은 계대 2, 3 및 4에서 HRV14-M2e 키메라 및 계대 4에서 HRV14-NimII-XXX17AA 및 HRV14-NimII-XXX17AA 바이러스 라이브러리에 대한 결과를 보여준다. 상기 두 가지 절단 조각(화살표로 표시)은 인서트-포함 바이러스를 나타낸다.
도 4는 NimII 사이트에서 상기 HRV14의 수용체-바인딩 도메인으로 상기 23 아미노산 M2e 인서트의 가능한 스테릭 간섭을 보여준다. 상기 링커 없는 인서트는 사진에서 보여주는 것과 같이, NimII로부터 뻗어나가서 거의 캐년의 반대편 사이드까지(예를 들어, 상기 NimI 사이트) 도달한다. 이러한 장벽은 효율적으로 수용체가 상기 캐년안으로 출입하는 것을 차단할 수 있다. N-말단 링커는 상기 인서트의 위치를 바꿀 수 있고(방향은 화살표로 표시함), 상기 캐년으로 접근할 수 있다. 이러한 HRV14-NimII-M2e(23 amino acids) VP1-VP4 서브유닛의 분자 모델은 엑설러리 디스커버리 스튜디오(Accelrys Software, Inc)에서 만들어졌다. 이는 본 발명자들의 상기 적용 가능한 구조 자료 및 모델링 소프트웨어에 의해 HRV14내의 신규한 에피토프를 제조할 수 있는 능력을 나타낸다.
도 5는 항-M2e Mab 14C2를 이용하여(Abcam, Inc; Cat# ab5416) 상기 HRV14-NimII-XXX23AA 라이브러리, 및 상기 HRV14-NimII-XXX17AA 라이브러리인 HRV14의 플라그 감소 중화 테스트(PRNT)를 나타낸다. 상기 결과는 양 라이브러리의 효율적 중화를 나타내지만, 벡터 바이러스(HRV14)를 나타내지는 않는다. 양 라이브러리의 순도(WT 오염의 부재)는 또한 본 결과로부터 명백하게 나타난다.
도 6은 챌린지에 우선하여 면역화된 마우스에서 M2e-특이적 IgG 항체 반응(풀 샘플)을 나타낸다. 종말점 역가(ETs)는 해당 그룹 타이틀 이후 보여준다. 대응하는 면역화 시간은 삽입어구에서 보여준다(d0 및 d21은 0 일 및 21 일을 각각 나타냄).
도 7은 챌린지에 앞서 면역화된 마우스에서 HRV14-특이적 IgG 항체 반응을 보여준다: (A) 1, 2 또는 3 용량의 HRV14-M2e(17AA) 바이러스로 면역화된 그룹; 및 (B) 1 또는 2 용량의 부모 HRV14 바이러스로 면역화된 그룹.
도 8은 면역화된 마우스의 개개의 HRV14-특이적 IgG 항체 반응을 보여준다.
도 9는 표 4에 의해 면역화된 마우스에서 M2e-특이적 항체 아이소타입 IgG1 및 IgG2a를 보여준다: (A) IgG1 ELISA(풀 샘플 그룹); (B) IgG2a ELISA(풀 샘플 그룹); (C) 도 A 및 B의 타이틀; (D) 그룹 4(빨강; 첫째 및 셋째 일련의 데이터) 및 그룹 7(초록; 둘째 및 넷째 일련의 데이터)마우스의 각각 세럼 샘플(1:2,700 희석)에서 M2e-특이적 IgG1(점) 및 IgG2a(다이아몬드)의 레벨(표 4 참조).
도 10은 표 4에 의해 면역화된 마우스에서 IgG2b 아이소타입의 M2e-특이적 항체를 보여준다. (A) M2e 펩타이드로 ELISA(풀 샘플 그룹); (B) M2e-특이적 펩타이드에 대한 ELISA에서 테스트된 그룹 4(빨강) 및 그룹 7(초록) 마우스의 개개의 세럼 샘플(1:2,700 희석).
도 11은 표 4에서 언급한 방법에 의해 면역화된 마우스에서 IgG1, IgG2a 및 IgG2b의 M2e-특이적 항체를 나타낸다(상위 패널).
도 12는 PR8 인플루엔자 A 스트레인으로 챌리지 이후 28 일째 모든 그룹의 생존률을 나타낸다.
도 13은 PR8 인플루엔자 A 스트레인으로 챌리지 이후 28 일째 모든 그룹의 질병률을 나타낸다(도 13A); 그룹 4(도 13B) 및 그룹 7(도 13C)의 개개의 체중.
도 14는 챌린지에 앞서 면역화된 마우스에서 M2e(A-D) 및 HA0(E)-특이적 IgG 항체 반응(풀 샘플)을 나타낸다(그룹은 표 5 참조).
도 15는 PR8 인플루엔자 A 스트레인으로 치명적 챌린지 이후 21일 동안 모든 그룹의 질병률(B; 체중의 퍼센티지) 및 사망률(A; 생존 %)을 나타낸다.
도 16은 마우스 항-HRV14-NimIVHRV6 혈청에 의한 HRV14 및 HRV6의 플라그 감소 중화 시험(PRNT)의 결과를 나타낸다. 이 데이터는 HRV14 캡시드의 백그라운드에서 NimIVHRV6의 면역우세에 대한 증거이며, 이는 외래 에피토프의 신규한 삽입 위치를 보여준다.
도 17은 HRV14의 비리온 단백질에서 삽입 사이트를 나타내는 도해식 설명이다. M2e 또는 HAO는 NimI, NimII, NimIII 및 NimIV의 지시된 위체에 도입된다. XXXM2e는 본 명세서에서 묘사하는 M2e 라이브러리를 의미한다(SEQ ID NOs:25-28).
도 18은 인간 라이노바이러스 14(HRV14) 서열을 제공한다. 암호화된 아미노산 서열(SEQ ID NO:30)은 지시된 핵산 서열(SEQ ID NO:29)의 뉴클레오티드 629-7168의 번역에 의해 얻는다.
도 19는 플라스미드 맵 및 HRV14의 NimII 사이트에 삽입되는 19 아미노산 HA 서열(SEQ ID NO:77) 및 CMVHRV14MGM19aaHAGQ의 전체 서열(SEQ ID NO:78) 정보를 제공한다.
도 20은 플라스미드 맵 및 HRV14-M2e17aa의 P1 지역 아미노산 서열(SEQ ID NO:79) 및 NimII HRV14에서 M2e17aa의 플라스미드 서열(SEQ ID NO:80)의 정보를 제공한다.
도 21은 플라스미드 맵 및 M2e 23 아미노산(변이된) 서열(SEQ ID NO: 81), HRV14-M2e23aa의 P1 지역 아미노산 서열(SEQ ID NO:82) 및 NimII HRV14에서 M2e23aa의 플라스미드 서열(SEQ ID NO:83)에 관한 정보를 제공한다.
도 22는 플라스미드 맵 및 HRV14-M2e16aa-HA012aa의 P1 지역 아미노산 서열(SEQ ID NO:84) 및 NimII HRV14에서 HA012-M2e16의 플라스미드 서열(SEQ ID NO:85)의 정보를 제공한다.
도 23은 구축 맵 및 HRV14-M2e(17AA) 키메라의 VP4-VP1(구조 지역)(SEQ ID NO:86) 및 HRV14-M2e(23AA) 키메라의 VP4-VP1(구조 지역)(SEQ ID NO:87)의 서열 정보를 제공한다.
실험예
Ⅰ. HRV14 NimII-M2e 키메라의 구축
본 발명자들은 HRV14 NimII-M2e 재조합 바이러스를 구축하였다. 상기 바이러스는 비리온 표면에서 M2e를 발현하는 것으로 규명되었고, 이는 상기 재조합 바이러스의 감염성을 중화시키는 항-M2e 모노클로날 항체의 능력에 의해 입증된다.
세가지 타입의 HRV14-M2e 구조체를 제조하였다(도 2A).
1. HRV14-NimII-23AA, VP2의 아미노산 159와 160 사이(NimII 위치)에 삽입되는 M2e의 23개 아미노산의 운반;
2. HRV14-NimII-XXX23AA 라이브러리. 이러한 일련의 구조체(플라스미드 라이브러리)는 상기 펩타이드에 융합된 무작위 선택된 3-아미노산 N-말단 링커의 존재를 제외하고는 첫 번째 구조체와 유사하다. 상기 무작위 선택된 링커는 상기 링커 아미노산을 코딩하는 무작위 9 뉴클레오티드를 포함하는 5’(direct) 프라이머를 사용한 상기 M2e에 의해 생성되었다; 및
3. HRV14-NimII-XXX17AA 라이브러리. 상기 라이브러리는 첫 번째 방법과 동일하게 생성되나, 오직 M2e의 최초 17 아미노산만 포함하는 짧은 M2e 펩타이드를 포함한다.
HRV14 감염성 클론에서의 클로닝을 촉진하기 위해서, 본 발명자들은 pUC 플라스미드 백본을 pEt 벡터(Novagen)의 백본으로 대체하여 플라스미드 pWR1을 생성시켜 상기 pWR3.26 감염성 클론(Lee et al., J. Virol. 67:2110-2122, 1993)을 변형하였다(도 2).
바이러스 라이브러리 #2 및 #3의 플라그 형태는 HRV14 부모와 구별되었다(도 2B). 상기 라이브러리의 상기 플라그 크기는 야생형과 유사하게 나타났으나, 상기 플라그는 불투명하였다. 구조체 #1은 트랜스펙션이후 플라그를 형성하지 않았다.
상기 구축된 바이러스들의 유전적 안전성을 모니터하기 위해서, 본 발명자들은 잠재 돌연변이(silent mutagenesis)에 의해서 상기 M2e 서열의 중앙에 XhoI 절단 위치를 추가하였다. 변이 M2e 유전자를 포함하는 바이러스로부터 수득된 RT-PCR 조각은 절단된 반면에, 대비되는 야생형 HRV14로부터 생산된 DNA 산물은 절단되지 않았다(도 3). 상기 HRV14-NimII-23AA 키메라 구조체(#1)는 독자 생존이 가능하나, 다소 불안정한 바이러스로 나타났다. 도 3에서 보여주는 것과 같이, "PCR A" 조각의 상기 두 XhoI 처리 산물은 오직 계대 2에서만 탐지되었으나, 이후 계대에서는 그러하지 않았다. 라이브러리 (#2) 및 (#3)은 대조적으로, 상기 M2e 인써트를 안정적으로 유지했다: H1 헬라(HeLa)내 4번째 계대에서의 바이러스 라이브러리로부터 획득한 "PCR B" 조각은 XhoI에 완전히 처리되었다(도 3). 상기 구조체 #1의 불안전성은 상기 수용체 바인딩 부위에(도 4) 상기 삽입된 펩타이드의 스테릭 방해에 기인할 수 있는데, 이는 구조체 #2 및 #3에서와 같이 변이 링커가 공급되었을 때 완화될 수 있다. 상기 무작위 선택된 N-말단 링커는 상기 펩타이드를 바이러스의 효율적인 바인딩을 허용하는 상기 수용체 바인딩 부위를 포함하는 캐년(canyon)으로부터 멀어지게 조정할 수 있다(도 4).
본 발명자들은 항-M2e 모노클로날 항체를 사용한 바이러스 라이브러리로 중화 연구를 수행하였다(14C2 MAb, Abcam, Inc. Cat# ab5416). 바이러스 중화는 상기 라이브러리의 순수도를 입증하기 위한 도구로서 또한 사용될 수 있다(i.e., the absence of wild type HRV14). 플라그 감소 중화 실험(PRNT)은 두 라이브러리에 대한 Mab 14C2의 매우 우수한 특이성 및 중화 능력을 입증하였다(그림 5).
두 라이브러리는 대조군 바이러스(pWR1)가 상기 모노클로날 항체의 가장 낮은 1:10 희석에서 조차 중화되지 않은 반면에, 상기 항-M2e Mab에 의한 중화에 매우 민감한 것으로 나타났다(그림 5). 항체의 ~ 1:2,000,000 희석에서 두 라이브러리가 50% 중화되는 것을 관찰하였다(14C2의 농축 저장은 1 mg/ml). 이와 같은, 상기 재조합 바이러스의 효율적인 중화는 HRV14의 NimII에서 나타나는 M2e 펩타이드는 항체에 쉽게 인식되는 적절한 콘포메이션(conformation)이라는 것을 보여준다.
II. 안정적 HRV14-NimII-M2e 재결합체의 확인
H1 헬라 세포에서 4 계대 이후, 각 라이브러리로부터 6개의 클론은 각각 플라그 정제를 하였고, 추가적 4 계대 이후, 상기 운반된 인써트의 시퀀싱에 의해 특성을 밝혔다. 각각의 라이브러리는 하나의 우세하고, 안정적으로 복제하는 바이랄 클론의 근원이 되었다. 상기 HRV14-NimII-XXX23AA 라이브러리로부터 분리된 모든 바이러스는 N-말단 링커로서 GHT를 포함한 인써트 서열 GHTSLLKEVETPIRNEWGSRSNDSSD(SEQ ID NO:42)를 보유하였고, 이에 반하여, HRV14-NimII-XXX17AA 라이브러리로부터의 모든 바이러스는 N-말단 링커로서 QPA를 포함한 같은 서열 QPASLLTEVETPIRNEWGSR(SEQ ID NO:43)을 나타냈다. 23 아미노산 인써트를 운반하는 모든 독자 생존 가능한 클론은 아미노산 7 위치에서 티로신에서 리신으로 치환되었다(상기 M2e 외래 인써트에서 4 위치). 상기 17 아미노산 인써트를 운반하는 상기 클론 모두는 야생형 M2e 서열을 포함하고 있었다. 이러한 결과는 유전적으로 안정적인 재조합 HRV-M2e 바이러스가 분리될 수 있다는 것을 나타낸다. 추가적 인 비보 연구에서, 인플루엔자 A의 PR8 스트레인에 대한 방어를 제공하는 상기 HRV14-M2e(17AA)의 잠재성은 복막내 경로 투여를 이용하여 평가될 수 있었다.
III. HRV14-M2e 및 HRV14-HA0 재조합체에 의한 인 비보 연구
A. 인 비보 실험 #1: 복막내 면역화
1. 실험 설계
9 주령 암컷 Balb/c 마우스(그룹당 8 마우스)를 0 째날 프라임하였고, 이후 21일째 슈크로즈 정제된 HRV14-M2e 5.0x106 pfu(17AA; 표 4의 노트 4 참조) 및 부모 HRV14의 1.3x107 pfu 또는 네가티브 대조군으로서 모크(PBS) 둘 중 하나를 500 μl 부피내 100 μg의 어쥬번트(aluminum hydroxide)를 혼합하여 복막내 투여에 의해 부스트하였다. 대조군으로서, M2e의 3 카피를 운반하는 재조합 B형 간염 코어 입자(본 명세서에서 HBc-3XM2e VLPs로 언급함)가 사용되었다. 상기 후자는 단독으로 사용되거나 또는 프라임/부스트에 대한 HRV14-M2e or HRV14와 함께 사용하였다(표 4). 방어성을 입증하기 위해서, 모든 마우스는 35일째 인플루엔자 A/PR/8/34 (H1N1)의 4 LD50으로 챌린지 되었다. 질병률 및 사망률이 21 일째 모니터되었다. 상기 운반된 펩타이드에 대한 세럼 항체를 테스트하기 위해서, 접종에 우선해서 채혈 하였고(베이스라인), 33 일째 반복하였다. 세럼에서 M2e-특이적 항체 역가는 합성 M2e 펩타이드에 코팅된 미량 역가판(microtiter plate)에서 확립된 ELISA 수행에 의해 결정되었다. M2e-특이적 총 IgG, Ig2a, 및 Ig2b의 역가는 결정되었다.
2. 실험 결과a. 면역원성
i. 면역화 동물에서의 총 IgG
M2e-특이적 항체 역가는 개개의 동물 샘플(도 7)뿐만 아니라, 풀 세럼 샘플(도 6)을 사용하여 각각의 그룹에서 측정되었다. 상기 풀 샘플의 결과(도 6)는 17 아미노산 M2e 서열을 운반하는 재조합 HRV14에 의한 프라이밍 및 B형 간염 코어-M2e 재조합 바이러스-유사 입자(VLPs)에 의한 부스팅은 B형간염 바이러스 코어-M2e VLPs 2 용량에서(10 μg/dose) 처럼 같은 레벨의 항체를 유도했다(종말 역가 (ET) = 218,700). HRV14 벡터(그룹 6; ET=2,700)로 프라임 했을 경우와 비교하여 HRV14-M2e(17AA)로 프라임 했을 때(그룹 4; ET=218,700), B형 간염 코어-M2e VLPs로 부스팅은 약 100배 높은 M2e-특이적 반응을 유도했다. 따라서, 상기 HRV14-M2e의 프라이밍 효과는 전적으로 M2e에 의존하는 것이지, 벡터에 의존하는 것은 아니다.
Arnold et al., US 2006/0088549 A1에 의한 가정에 기초할 경우, HRV14 의 109 pfu 면역화 용량은 대략 10 μg의 단백질에 해당한다. 본 발명자들은 재조합 HRV14-M2e 바이러스의 1 면역화 용량은 10 ng의 단백질을 나타낸다고 대략적으로 평가했다. 상기 재조합 B형 간염 코어 입자에서 분자량 및 써브유닛의 다양성을 고려했을 경우, HBc-M2e의 1 면역화 용량은 HRV-M2e와 비교하여 대략 10,000배 이상 M2e 단백질을 보유하고 있다고 판단되었다. HRV 벡터를 사용하여 얻은 유사한 항체 레벨들은, 보다 저가의 생산방법을 사용하여 보다 높은 면역성을 나타내는 시스템을 제공함을 있음을 보여주는 것이다.
상기 M2e 항체 레벨은 HRV14-M2e(17AA) 용량 수와 반비례했다. 실제로, 3 용량의 HRV14-M2e(17AA) 바이러스(그룹 1)은 가장 적은 M2e-특이적 반응을 유도하였으나(ET=2.700), 2 용량 투여는 10배 높은 반응을 유도하였으며(그룹 2; ET=24, 300), 1 용량 투여는 2 용량 투여에 비해 3배 높은 반응을 유도하였다(그룹 5; ET=72,900). 이러한 상관관계가 항-벡터 면역성에 기인하는지 확인하기 위해서, 본 발명자들은 HRV14 벡터에 대한 모든 그룹의 면역 반응의 테스트를 분리해서 수행하였다(도 7). HRV14-M2e(17AA)의 세 타입의 모든 투여는(1, 2, 또는 3 용량) HRV14-특이적 반응과 동등한 레벨을 보여주었다(ET=72,900)(도 7A). 이는 감소한 면역 반응의 이유로서 항-벡터 면역성을 주장하고, 1 용량 투여가 충분할 수 있다는 것을 추측케 한다.
개개의 세럼 샘플의 M2e-특이적 ELISA 분석(도 8)은 풀 샘플에서 보여주는 것과 같이 같은 내부-그룹 차이를 탐지했다: 2 세럼 희석에서 보여주는 것과 같이(1:300 및 1:2,700) 그룹 4 및 7의 각각의 마우스에서의 평균 항체 레벨은 다른 그룹 연구에서 보다 상당히 높았다.
ii. 면역화된 동물에서 항체의 IgG2a, IgG2b, 및 IgG1 서브타입
M2e 백신된 마우스에서 우세한 M2-특이적 항체 아이소타입은 IgG2b와 소량의 IgG2a를 보여주었다(Jegerlehner et al., J. Immunol. 172(9):5598-5605, 2004). 이러한 두 가지 아이소타입은 마우스에서 M2e-의존적 방어의 주요 메카니즘인 항체-의존적 세포독성(ADCC)의 가장 중요한 매개자라는 것을 보여준다(Denkers et al., J. Immunol. 135:2183, 1985). 본 연구에서, 본 발명자들은 IgG1, IgG2a, 및 IgG2b 아이소타입 역가에 대한 풀 그룹 및 각각의 세럼 샘플을 테스트하였다.
그룹 4(HRV14-M2e(17AA)로 프라임/B형 간염 바이러스 코어-M2e VLPs로 부스트) 및 7(B형 간염 바이러스 코어-M2e VLPs로 프라임 및 부스트)는 다른 그룹 사이에서 IgG1 및 IgG2a 항체의 가장 높은 역가를 보여주었다(도 9). IgG2a 역가는 그룹 4에서 더 높고(도 9B 및 9D), 그룹 7 동물의 IgG2b 역가는 그룹 4보다 높음(도 10)에 반해서, IgG1 역가는 그룹 7에서 그룹 4보다 상당히 높았다(도 9A 및 9D). 마우스에서 IgG2a 아이소타입의 M2e-특이적 항체는 도 11에서 보여준다.
b. 질병률 및 사망률
마우스에 대하여, PR8 스트레인에 의한 챌린지 이후 28일째 질병률 및 사망률을 모니터링 하였다. 도 12에서 보여주는 것과 같이, 그룹 7은 상기 네가티브 대조군(PBS)으로부터 유의적인 차이를 나타내지 않았음에 반해, 그룹 4는 다른 그룹 연구에 비해서 가장 높은 생존률(80%)을 나타냈다. 또한 그룹 4는 질병률 측면에서도 가장 우수한 결과를 나타내었다: 체중 변화는 다른 모든 그룹들에 비해서 상당히 덜 변화가 없었다(도 13A, B).
따라서, HRV14-M2e(17AA) 바이러스는 마우스에서 높은 면역성과 방어성을 보여주었다. 이는 전통적인 재조합 단백질 처방 및 프라임-부스트 처방에서 상기 둘의 조합과 비교된다. 상기 후자는 재조합 단백질 단독과 비교하여 면역 반응에서 상당한 차이를 나타냈다: HRV14-M2e(17AA)로 프라이밍 및 B형간염 바이러스 코어-dap VLPs로 부스팅은 우세 아이소타입으로 ADCC에 대해 중요한 것으로 나타나는 IgG2a를 산출했음에 반해서, 재조합 B형간염 바이러스 코어-M2e VLPs의 2 용량은 우세한 IgG1 항체 서브타입을 유도하였다. 게다가, 상기 후자 그룹은 다른 그룹에 비해서 가장 높은 방어를 나타냈다.
HRV는 마우스에서 복제하지 않기 때문에 상기 모델에서 HRV-M2e 재조합체의 주입은 는 불활화 백신과 함께 적당한 비경구 어쥬번트 및 미믹(mimics) 면역화와 함께 실시하는 것은 중요하다. 두 가지 옵션이 인간에서 사용될 수 있다.: 재조합 생 HRV14-M2e 바이러스 백신 및/또는 불활화 백신(예를 들어, 포르말린-불활화)가 알루미늄 하이드록사이드와 같은 허가된 비경구 어쥬번트와 함께 투여되었다(역시 상술함).
B. 인 비보 실험 #2. 비강 면역화
1. 면역화에 사용되는 바이러스
인 비보 연구에서, 이중 인써트 구조체 HRV14-M2e(16AA)-HA0(12AA)뿐만 아니라, 단일 인써트 변이체 HRV14-M2e(17AA), HRV14-HA0(19AA), 또는 이들의 혼합물의 인플루엔자 A PR8 스트레인에 의한 치명적인 챌린지에 대한 방어를 제공하는 잠재력은 비강 경로 투여를 사용하여 평가되었다. 상기 HRV14-M2e(17AA) 서열은 상기에서 설명하였다. HRV14-HA0(19AA)는 NimII VP2의 아미노산 159 및 160 사이에 삽입된 인써트 NVPEKQTQGIFGAIAGFIE(SEQ ID NO:44)를 포함한다. 이러한 인써트는 인플루엔자 A의 HAO 서열과 하나의 변인된 아미노산을 제외하고는(R8Q 대체) 일치하였다. 상기 후자 구조체는 프랭킹(flanking) 링커를 보유하지 않는다(도 2C). 상기 세 번째 구조체는 수정된 NimII 위치에 인써트 서열 SLLTEVETPIRNEWGSERGIFGAIAGFIE(SEQ ID NO:39)을 운반하였다. 상기 후자 인써트 서열은 M2e 서열(밑줄 부분)의 16 아미노산 및 인플루엔자 A/H3의 HAO 서열(굵은 부분)을 포함한다. 이러한 두 가지 서열은 1 아미노산 링커(E)에 의해 분리되었다. 상기 세 번째 구조체의 상기 삽입 위치(NimII)는 수정되었다: VP2의 3 아미노산은 프로린으로 교체하였다(도 2C). 바이러스 성장은 9 순차 계대를 초과하여 인써트를 안정적으로 유지하여 HRV14와 비슷한 수준을 나타냈다.
2. 실험 디자인
본 동물 실험의 목적은 2 용량 HBc-3XM2e VLPs와 비교하여, 주어진 1 용량 재조합 라이노 바이러스 키메라가 어쥬번트와 함께하거나 그렇지 않게 비강 투여되었을 경우 인플루엔자 A/PR/8/34(H1N1) 스트레인에 치명적 챌린지에 대한 방어 면역 반응을 유도하는 것을 확인하는 것이다.
상기 실험 디자인은 표 5에서 나타낸다. 간략하게, 9 주령 암컷 Balb/c 마우스(그룹당 10 마우스)는 HBc-M2e VLPs(그룹 1 및 2), HRV14-M2e(17AA)(그룹 3 및 4), HRV14(그룹 5), HRV14-HA0(19AA)(그룹 6), HRV14-M2e(17AA)와 혼합된 HRV14-HA0(19AA)(그룹 7 및 8) 또는 PBS 대조구(그룹 9), 또는 HRV14-M2e(16AA)-HA0(12AA)로 각각 0 일째 비강 투여 방식으로 면역화하였다. 그룹 2, 4 및 8은 어쥬번트 없이 투여되었음에 반해서, 그룹 1, 3, 5, 6, 7 및 13은 5 μg의 대장균(E. coli)의 이열성 독소 어쥬번트(LT)와 함께 투여되었다(표 5). 상기 투여 부피는 50 이었다. 그룹 1 및 2는 21 일째 50 μl 투여 부피에서 LT 어쥬번트와 함께 HBc-3XM2e 10 를 비강 투여하였다.
다른 어쥬번트(키틴)을 입증하기 위해서 50 투여 부피에서 25 μg 키틴과 함께 혼합하여 HBc-M2e VLPs(그룹 10), HRV14-M2e(17AA)(그룹 11) 또는 HRV14(그룹 12)를 각각 비강 루트로 마우스를 면역화하였다. 그룹 10은 21 일째 50 μl 투여부피로 상기와 같은 어쥬번트와 함께 10 HBc-3XM2e 비경 투여에 의해 부스트하였다.
방어성을 입증하기 위해서, 모든 마우스는 35 일째 인플루엔자 A/PR/8/34 (H1N1)의 4 LD50으로 챌린지하였다. 질병률 및 사망률은 21일째 모니터하였다. 상기 운반된 단백질에 대한 세럼 항체를 테스트하기 위해서, 마우스는 접종(baseline)에 앞서 채혈하였고, 33 일째 반복하였다. 세럼에서 M2e- 및 HAO-특이적 항체 역가는 합성 M2e 및 HAO 펩타이드로 토팅된 미량 역가판에서 수행된 확립된 ELISA로 결정되었다. M2e-특이적 총 IgG, Ig2a, 및 Ig2b의 역가는 결정되었다.
3. 결과a. 면역원성
i. M2e - 및 HA0 -특이적 항체 역가
M2e 항체 역가는 풀 세럼 샘플을 사용하여 각각의 그룹에서 측정하였다(도 14 A-D). 17 아미노산 M2e 펩타이드를 운반하는 1 용량 재조합 HRV14는 2 용량 상기 B형간염 바이러스 코어-M2e 재조합 VLPs(10 ug/용량)과 유사한 총 IgG의 레벨을 유도하였다(HBc-M2e 및 1 HRV14-M2e(17AA)에 대한 종말점 역가(ET)는 각각 218,700 및 72,900이었음(도 14A)). 어쥬번트(LT)는 HBc- 및 HRV-기초 백신 모두에서 제공하는 방어에서 중요한 역할을 수행하였다: LT 없는 그룹에서의 면역반응은 LT-그룹에서의 면역 반응과 비교하여 평균 10배 적었다. 키틴 어쥬번트 그룹은 >100-1000배 적은 M2e 반응을 나타냈다. HRV14-M2e 바이럴 로드(load)(그룹 7)에서 2-배 감소는 총 IgG 역가에서 3배 감소 효과를 나타냈다(그룹 7; ET=24,300 vs 그룹 3; ET=72,900).
1 용량 HRV14-M2e는 두 번째로 높은 IgG2a의 레벨을 생성하였다(도 14C; ET=72, 900 vs. HBc-M2e; ET=218.700). 가장 높은 역가 IgG2b(도 14B) 및 IgG1(도 14D)은 2 용량의 B형간염의 코어-M2e VLPs에서 나타났다. 항체 HAO 역가는 개개의 세럼 샘플을 이용하여 그룹 6, 7, 및 13에서 측정되었다(도 14E). 종말점 역가의 기하평균(Geometric means)은 그룹 6(HRV14-HA0(19 AA) with LT)에서 4750, 그룹 7(mix of HRV14-HA0 (19AA) with HRV14-M2e (17AA) with LT)에서 1440, 및 그룹 13(HRV14-M2e (16AA)- HA0 (12AA) with LT)에서 9200에 이르렀다. 그룹 13에서 가장 큰 HAO 반응은 상기 A/H3의 야생형 HAO 서열의 존재에 의해 설명될 수 있으며, 한편 그룹 6 및 7에서 재조합 키메라는 상기 HAO 절단 위치(R8Q)의 변이된 버전을 운반하였다.
HAO의 8 포지션에서 아르기닌 잔기는 3개의 방어성 모노클로날 항체의 바인딩 사이트 중 하나로서 설명되어진 것뿐만 아니라 이전에는 방어에 비판적인 것으로 나타났다(Bianchi et al., J. Virol. 79:7380-7388, 2005). 그룹 7 및 13에 대한 M2e 풀 샘플 역가는 도 14E에서 그룹 13의 M2e 반응이 낮음을 나타내는(ET=2700; Et=7,200 어쥬번트 없는 그룹 5; HRV14-M2e와 비교하여) 박스로 강조한 지역에서 보여주는데, 이는 HRV14-M2e(16AA)-HA0(12AA) 키메라에서 상기 M2e 에피토프는 이들의 바이러스 표면에서의 적은 노출에 기인하여 면역화 되지 않은 것으로 보여졌다. 따라서, 이러한 변이체의 높은 면역원성/방어(하기 참조)는 상기 M2e 에피토프가 아닌 HAO에 기인한다고 판단된다.
b. 질병률 및 사망률
마우스는 PR8 스트레인에 의한 챌린지 이후 21일째 질병률이 모니터되었다(도 15B). 1 용량의 HRV14-M2e(그룹 3) 또는 HRV14-M2e(16AA)-HA0(12AA)(그룹 13) 둘 중 하나는 2 용량 HBc-M2e VLPs(그룹 1)과 같이 질병에 대해 동등한 방어를 제공하였다. 이러한 그룹의 모든 마우스는 치명적인 챌린지에서 살아남았다(도 15A). 이러한 두 그룹의 면역원성의 차이를 고려할 경우(상기 참조), 이러한 두 그룹에서 방어는 다른 에피토프에 의해 제공된다고 강력하게 추축할 수 있다: 그룹 3(HRV14-M2e)에 대한 M2e 및 그룹 13(HRV14-M2e(16AA)-HA0(12AA))에 대한 HAO.
변이된 HAO 절단 위치(그룹 6)을 운반하는 HRV14 의 1용량은 대조군 HRV14 그룹 5에서 생존한 2 마우스와 유사하게 높은 질병률을 나타냈다. 이는 낮은 생존률(75%)과 연관이 있다. HRV14-M2e(17AA) 및 HRV14- HA0(19AA) 바이러스의 혼합 1 용량은 HRV14-M2e(17AA) 그룹과 비교하여 약간 높은 사망률을 보여주었는데, 이는 면역화 용량에서 바이럴 로드가 반으로 감소한 것과 연관이 있었다(도 15B). 그러나, 그룹 7의 모든 마우스는 치명적 인플루엔자 챌린지에 대해 100% 방어되었다. 상기 후자 방어는 상기 HAO 에피토프 보다는 M2e 에피토프에 기인하는데, HRV14-HA0(19AA)(그룹 6)의 더블링은 상기에서 언급한 것과 같이 75% 생존율을 초래했기 때문이다.
어쥬번트는 방어에서 중요한 역할을 했다: 어쥬번트가 없는 그룹의 경우 모든 마우스는 챌린지 이후 9-10 일째 죽었다. LT는 키틴에 비해 향상된 방어를 제공한다: HRV-3XM2e VLPs+키틴(그룹 10)의 2 용량은 89% 방어를 나타냈음에 비해, HRV14-M2e(17AA)+키틴(그룹 11)에서 모든 마우스는 죽었다(도 15A).
따라서, 본 발명자들은 유니버셜(universal) 방어성 에피토프 HAO 또는 M2e 둘 중 하나를 운반하는 1 용량의 HRV14 재조합 키메라는 비강 경로를 통해 투여했을 때 치명적인 인플루엔자 A에 대한 100% 방어를 제공한다는 것을 입증하였다. 상기 방어는 같은 경로로 HBc-3XM2e VLPs의 2-용량 투여에 의해 제공되는 방어와 유사하였다.
IV . 인플루엔자 마우스 챌린지 모델
백신 후보군의 방어적 효율은 적절한 바이러스 스트레인을 사용하여 마우스 인플루엔자 챌린지 모델에서 테스트할 수 있다. 본 명세서에서 언급하고 있는 연구에서 사용하는 원형 인플루엔자 챌린지 스트레인은 마우스-개조된 스트레인 A/PR/8/34 (H1N1)이다. 상기 바이러스는 ACTT로부터 구했고(카탈로그 번호 VR-1469, 로트 번호 2013488), Balb/c 마우스에서 연속계대에 의해 인 비보 성장으로 적응하였다. 마우스 계대를 위하여, 바이러스를 비강 접종하였고, 3일 후 폐 조직 균질물을 준비하였다. 상기 균질물을 이용하여 추가적인 마우스에서 5 계대에 걸친 블라인드 계대(blind-passage)를 실시하였다. 추가적인 계대배양을 실시하여 챌린지 스톡(stock)으로 제공되는 폐 균질물의 분획을 준비하였다.
마우스의 챌린지를 위해서, 50 부피의 바이러스를 비강 투여한다. 상기 마우스는 접종동안 구역 반사(gag reflex)를 방지하고, 상기 바이러스의 폐에서 계대를 허용하기 위해서 마취되었다. 바이러스의 치사량으로 감염된 마우스는 빠르게 체중이 감소하였고, 대부분 접종 후 7-9일 후 죽었다. 마우스-적응 A/PR/8/34 바이러스의 반 치사량(LD50)은 성체 Balb/c 마우스에서 7.5 플라그-형성 유닛(pfu)으로 결정하였다. 전형적인 실험 결과가 도 16에서 보여준다. 10 마우스 그룹이 알루미늄 하이드록사이드 어쥬번트로 샴(sham) 또는 알루미늄 하이드록사이드와 혼합된 인플루엔자 M2e 펩타이드 면역원 둘 중 하나로 면역화 되었다. 상기 면역원은 M2e 펩타이드를 발현하는 B형간염 코어 단백질 VLPs로 구성되었다. 상기 마우스는 3-주 간격으로 두 번 면역화 하였고, 4주 후 마우스-적응 A/PR/8/34 바이러스의 4 LD50으로 비강 챌린지 하였다. 면역화 그룹에서는 1 마우스만이 죽었음에 반해, 샴-면역화 그룹의 모든 마우스는 챌린지 이후 10 일째 죽었다. 두 그룹에서챌린지 이후 체중 감소가 발생하였으나, 상기 샴-면역 그룹에서는 더욱 그러하였다.
다른 인플루엔자 바이러스 스트레인들은 마우스 폐에서 유사하게 적응하여 성장할 수 있다. 일부 경우, 스트레인은 인 비보 적응 없이 사용될 수 있고, 또는 연속 폐 계대 이후에도 충분한 병원체성을 나타내지 않을 수도 있다. 이러한 경우, 질병률 및 사망률을 측정하기 보다는, 본 발명자들은 폐 및 비갑개(nasal turbinate) 조직에서 바이러스 복제를 측정할 수 있다. 챌린지 이후 3일째 조직을 수집하고, 1 ml 조직 배지에서 초음파에 의해 분쇄한 다음, 플라그 또는 TCID50 분석으로 바이러스 농도를 적정하였다.
상기에서 언급한 챌린지 모델에 추가하여, 본 발명은 또한 Bartlett et al., Nature Medicine 14(2):199-204, 2008에 기술한 것과 같은 동물 모델 시스템의 사용을 포함한다. 일예로, 본 발명은 상기 Bartlett에서 언급한 방법에 따라 산출될 수 있는 마우스-인간 세포내 고착 분자-1(ICAM-1) 키메라를 발현하는 BALB/c 마우스를 이용할 수 있다. 당업계에 주지된 것과 같이, ICAM-1은 마우스 ICAM-1에 바인드하지 않는 90% 인간 라이노바이러스의 세포 수용체이다. Bartlett의 지시에 따르면, 인간 라이노바이러스는 트랜스제닉 마우스의 컨텍스트에서 인간 ICAM-1의 라이노바이러스-바인딩 세포외 도메인 1 및 2를 포함하는 키메라에 바인드한다. 이는 본 명세서에서 언급하고 있는 것과 같은 라이노바이러스 생 벡터의 연구에 유용한 시스템을 제공한다. 본 발명은 그러므로 이러한 마우스 모델에서 백신 후보군의 테스트 및 스크리닝을 포함한다.
에피토프/항원/펩타이드가 유래한 병원체의 예시 리스트
바이러스:
Flaviviridae
Yellow Fever virus
Japanese Encephalitis virus
Dengue virus, types 1, 2, 3, and 4
West Nile Virus
Tick Borne Encephalitis virus
Hepatitis C virus (e.g., genotypes 1a, 1b, 2a, 2b, 2c, 3a, 4a, 4b, 4c, and 4d)
Papoviridae :
Papillomavirus
Retroviridae
Human Immunodeficiency virus, type I
Human Immunodeficiency virus, type II
Simian Immunodeficiency virus
Human T lymphotropic virus, types I & II
Hepnaviridae
Hepatitis B virus
Picornaviridae
Hepatitis A virus
Rhinovirus
Poliovirus
Herpesviridae :
Herpes simplex virus, type I
Herpes simplex virus, type II
Cytomegalovirus
Epstein Barr virus
Varicella-Zoster virus
 바이러스:
Togaviridae
Alphavirus
Rubella virus
Paramyxoviridae
Respiratory syncytial virus
Parainfluenza virus
Measles virus
Mumps virus
Orthomyxoviridae
Influenza virus
Filoviridae
Marburg virus
Ebola virus
Rotoviridae
Rotavirus
Coronaviridae
Coronavirus
Adenoviridae
Adenovirus
Rhabdoviridae
Rabiesvirus
BACTERIA :
Enterotoxigenic E. coli
Enteropathogenic E. coli
Campylobacter jejuni
Helicobacter pylori
Salmonella typhi
Vibrio cholerae
Clostridium difficile
Clostridium tetani
Streptococccus pyogenes
Bordetella pertussis
Neisseria meningitides
Neisseria gonorrhoea
Legionella neumophilus

Clamydial spp.
Haemophilus spp.
Shigella spp.
 PARASITES :
Plasmodium spp .
Schistosoma spp .
Trypanosoma spp .
Toxoplasma spp .
Cryptosporidia spp .
Pneumocystis spp .
Leishmania spp .
리스트된 바이러스로부터 선택된 항원의 예시
바이러스 항원
Flaviviridae
Yellow Fever virus Nucleocapsid, M & E glycoproteins
Japanese Encephalitis virus “
Dengue virus, types 1, 2, 3 & 4 “
West Nile Virus “
Tick Borne Encephalitis virus “
Hepatitis C virus Nucleocapsid, E1 & E2 glycoproteins
Papoviridae :
Papillomavirus L1 & L2 capsid protein, E6 & E7 transforming protein (oncogenes)
Retroviridae
Human Immunodeficiency virus, type I gag, pol, vif, tat, vpu, env, nef
Human Immunodeficiency virus, type II “
Simian Immunodeficiency virus “
Human T lymphotropic virus, types I & II gag, pol, env
열거한 바이러스/항원으로부터의 B 및 T 세포 에피토프의 예시
바이러스 항원 에피토프 위치 서열(5’-3’)
Flaviviridae
Hepatitis C Nucleocapsid CTL 2-9 STNPKPQR
(SEQ ID NO:45)
35-44 YLLPRRGPRL (SEQ IDNO:46)
41-49 GPRLGVRAT
(SEQ ID NO:47)
81-100 YPWPLYGNEGCGWAGWLLSP
(SEQ ID NO:48)
129-144 GFADLMGYIPLVGAPL (SEQ ID NO:49)
132-140 DLMGYIPLV
(SEQ ID NO:50)
178-187 LLALLSCLTV
(SEQ ID NO:51)
E1 glycoprotein CTL 231-250 REGNASRCWVAVTPTVATRD(SEQ ID NO:52)
E2 glycoprotein CTL 686-694 STGLIHLHQ
(SEQ ID NO:53)
725-734 LLADARVCSC
(SEQ ID NO:54)
489-496 CWHYPPRPCGI
(SEQ ID NO:55)
569-578 CVIGGVGNNT
(SEQ ID NO:56)
460-469 RRLTDFAQGW
(SEQ ID NO:57)
621-628 TINYTIFK
(SEQ ID NO:58)
B cell 384-410 ETHVTGGNAGRTTAGLVGLLTPGAKQN
(SEQ ID NO:59)
411-437 IQLINTNGSWHINSTALNCNESLNTGW
(SEQ ID NO:60)
441-460 LFYQHKFNSSGCPERLASCR(SEQ ID NO:61)
511-546 PSPVVVGTTDRSGAPTYSWGANDTDVFVLNNTRPPL
(SEQ ID NO:62)
T helper 411-416 IQLINT
(SEQ ID NO:63)
Papoviridae
HPV 16 E7 T helper 48-54 DRAHYNI
(SEQ ID NO:64)
CTL 49-57 RAHYNIVTF
(SEQ ID NO:65)
B cell 10-14 EYMLD (SEQ ID NO:66)
38-41 IDGP (SEQ ID NO:67)
44-48 QAEPD (SEQ ID NO:68)
HPV 18 E7 T helper 44-55 VNHQHLPARRA (SEQ ID NO:69)
81-90 DDLRAFQQLF
(SEQ ID NO:70)
면역화 그룹(복강내 연구)
그룹
번호		 동물의
수		 프라임 부스트 어쥬번트 도우징
(일자)
1 8 HRV14-M2e(17AA) HRV14-M2e(17AA) Alum 0, 7, 21
2 8 HRV14-M2e(17AA) HRV14-M2e(17AA) Alum 0, 21
3 8 HRV14 HRV14 Alum 0, 21
4 8 HRV14-M2e(17AA) HBc-M2e Alum 0, 21
5 8 HRV14-M2e(17AA) HBcAg Alum 0, 21
6 8 HRV14 HBc-M2e Alum 0, 21
7 8 HBc-M2e HBc-M2e Alum 0, 21
8 8 HBcAg HBcAg Alum 0, 21
9 8 PBS PBS Alum 0, 21
표 4에 대한 설명:
(1) HBc-M2e는 23 AA M2e 펩타이드의 세 카피를 운반하는 B형간염 코어 항원(HBc)에 기초한다; 용량 = 마우스 당 10
(2) HBcAg는 “원시적”HBc 항원이다; HBc-M2e에 대한 운반체 콘트롤로서 이용됨; 용량 = 마우스 당 10
(3) HRV14는 pWR3.26 감염성 클론으로부터 생산되는“야생형”HRV14이다(ATCC); HBc-M2e(17AA)에 대한 운반체 콘트롤로서 이용됨.
(4) HRV14M2e(17AA)는 VP2(NimII site)의 159 및 160 아미노산 사이의 QPASLLTEVETPIRNEWGSR (SEQ ID NO:43)를 운반하는 HRV14바이러스이다. 상기 삽입체의 첫 번째 세 아미노산(QPA)은 이전에 기재한 것처럼, HRV14M2eXXX (17AA) 라이브러리로부터 선택된 독특한 링커를 나타낸다.
(5) 어쥬번트- 모든 면역화에 alum을 사용하였다.
(6) 모든 그룹을 복강내 투여에 의해 면역화하였다.
면역화 그룹(비강내 연구)
그룹
번호		 동물의
수		 프라임(0 일째) 부스트(21 일째) 어쥬번트
1 10 HBc-M2e VLPs (10 μg) HBc-M2e VLPs (10 μg) LT
(5 μg)
2 10 HBc-M2e VLPs (10 μg) HBc-M2e VLPs (10 μg)
3 10 HRV14-M2e (17AA) (~108 pfu) LT
(5 μg)
4 10 HRV14-M2e (17AA) (~108 pfu)
5 10 HRV14 (~108 pfu) LT
(5 μg)
6 10 HRV14- HA0 (19AA) (~108 pfu) LT
(5 μg)
7 10 HRV14- HA0 (19AA) + HRV14-M2e (17AA) (~0.5x108 pfu each) LT
(5 μg)
8 10 HRV14- HA0 (19AA) + HRV14-M2e (17AA)
(~0.5x108 pfu each)
9 10 PBS LT
(5 μg)
10 10 HBc-M2e VLPs (10 μg) HBc-M2e VLPs (10 μg) Chitin (25 μg)
11 10 HRV14-M2e (17AA) (~108 pfu) Chitin (25 μg)
12 10 HRV14 (~108 pfu) Chitin (25 μg)
13 10 HR-M2e- HA012aa (~108 pfu) LT
(5 μg)
표 5에 대한 설명:
(1) HBc-M2e는 23 AA M2e 펩타이드의 세 카피를 운반하는 B형간염 코어 항원(HBc)에 기초한다; 용량 = 마우스 당 10
(2) HRV14는 pWR3.26 감염성 클론으로부터 생산되는“야생형”HRV14이다(ATCC); HBc-M2e(17AA)에 대한 운반체 콘트롤로서 이용됨.
(3)HRV14M2e(17AA)는 VP2(NimII site)의 159 및 160 아미노산 사이의 QPASLLTEVETPIRNEWGSR (SEQ ID NO:43)를 운반하는 HRV14바이러스이다. 상기 삽입체의 첫 번째 세 아미노산(QPA)은 이전에 기재한 것처럼, HRV14M2eXXX (17AA) 라이브러리로부터 선택된 독특한 링커를 나타낸다.
(4) HRV14-HAO(11AA)는 NimII에서 VP2(NimII site)의 159 및 160 아미노산 사이에서 삽입되는 인써트 GIFGAIAGFIE(SEQ ID NO:71)를 포함한다. 이러한 구조체는 링커를 보유하지 않는다.
(5) 어쥬번트 - 모든 면역화에서 alum이 사용되었다; LT = 대장균의 열-불안정 독소.
(6) 모든 그룹을 비강 투여 방식으로 면역화하였다.
(7) 그룹 3, 4, 5 및 6은 대응하는 바이러스로 용량당 108 pfu로 면역화하였다; 그룹 8은 HRV14-M2e(17AA) 및 HRV14-HAO의 혼합물로 각각의 바이러스마다 용량당 5x107 pfu로 면역화하였다.
인간 인플루엔자 A 스트레인의 M2 단백질의 세포외 파트
바이러스 스트레인
A/WS/33 (H1N1) SLLTEVETPIRNEWGCRCNDSSD1
A/WSN/33 (H1N1) SLLTEVETPIRNEWGCRCNDSSD
A/NWS/33 (H1N1) SLLTEVETPIRNEWGCRCNDSSD
A/PR/8/34 (H1N1) SLLTEVETPIRNEWECRCNGSSD2
A/Fort Monmouth/1/47 (H1N1) SLLTEVETPTKNEWGCRCNDSSD3
A/fort Warren /1/50 (H1N1) SLLTEVETPIRNEWGCRCNDSSD
A/JapanxBellamy/57 (H2N1) SLLTEVETPIRNEWGCRCNDSSD
A/Singapore/1/57 (H2N2) SLLTEVETPIRNEWGCRCNDSSD
A/Leningrad/134/57 (H2N2) SLLTEVETPIRNEWGCRCNDSSD
A/Ann Harbor/6/60 (H2N2) SLLTEVETPIRNEWGCRCNDSSD
A/NT/60/68 (hxNy) SLLTEVETPIRNEWGCRCNDSSD
A/Aichi/2/68 (H3N2) SLLTEVETPIRNEWGCRCNDSSD
A/Korea/426/68 (H2N2) SLLTEVETPIRNEWGCRCNDSSD
A/Hong Kong/1/68 (H3N2) SLLTEVETPIRNEWGCRCNDSSD
A/Udorn/72 (H3N2) SLLTEVETPIRNEWGCRCNDSSD
A/Port Chalmers/73 (H3N2) SLLTEVETPIRNEWGCRCNDSSD
A/USSR/90/77 (H1N1) SLLTEVETPIRNEWGCRCNDSSD
A/Bangkok/1/79 SLLTEVETPIRNEWGCRCNDSSD
A/Philippines/2/82/BS (H3N2) SLLTEVETPIRNEWGCRCNGSSD4
A/NY/83 (H3N2) SLLTEVETPIRNEWGCRCNDSSD
A/Memphis/8/88 (H3N2) SLLTEVETPIRNEWGCRCNDSSD
A/Beijing/353/89 (H3N2) SLLTEVETPIRNEWGCRCNDSSD
A/Guangdong/39/89 (H3N2) SLLTEVETPIRNEWGCRCNDSSD
A/Kitakyushu/159/93 (H3N2) SLLTEVETPIRNEWGCRCNDSSD
A/Hebei/12/93 (H3N2) SLLTEVETPIRNEWGCRCNDSSD
A/Aichi/69/94 (H3N2) SLLTEVETPIRNEWECRCNGSSD2
A/Saga/447/94 (H3N2) SLLTEVETPIRNEWECRCNGSSD2
A/Sendai/c182/94 (H3N2) SLLTEVETPIRNEWGCRCNDSSD
A/Akita/1/94 (H3N2) SLLTEVETPIRNEWGCRCNDSSD
A/Sendai/c384/94 (H3N2) SLLTEVETPIRNEWGCRCNDSSD
A/Miyagi/29/95 (H3N2) SLLTEVETPIRNEWGCRCNDSSD
A/Charlottesville/31/95 SLLTEVETPIRNEWGCRCNDSSD
A/Akita/1/95 (H3N2) SLLTEVETPIRNEWECRCNGSSD2
A/Shiga/20/95 (H3N2) SLLTEVETPIRNEWGCRCNDSSD
A/Tochigi/44/95 (H3N2) SLLTEVETPIRNEWECRCNGSSD2
A/Hebei/19/95 (H3N2) SLLTEVETPIRNEWECRCNGSSD2
A/Sendai/c373/95 (H3N2) SLLTEVETPIRNEWECRCNGSSD2
A/Niigata/124/95 (H3N2) SLLTEVETPIRNEWECRCNGSSD2
A/Ibaraki/1/95 (H3N2) SLLTEVETPIRNEWECRCNGSSD2
A/Kagoshima/10/95 (H3N2) SLLTEVETPIRNEWECRCNGSSD
A/Gifu/2/95 (H3N2) SLLTEVETPIRNEWECRCNGSSD2
A/Osaka/c1/95 (H3N2) SLLTEVETPIRNEWECRCNGSSD2
A/Fukushima/140/96 (H3N2) SLLTEVETPIRNEWGCRCNDSSD
A/Fukushima/114/96 (H3N2) SLLTEVETPIRNEWGCRCNDSSD
A/Niigata/137/96 (H3N2) SLLTEVETPIRNEWGCRCNDSSD
A/Hong Kong/498/97 (H3N2) SLLTEVETPIRNEWGCRCNDSSD
A/Hong Kong/497/97 (H3N2) SLLTEVETPIRNEWGCRCNDSSD
A/Hong Kong/470/97 (H1N1) SLLTEVETPIRNEWGCRCNDSSD
A/Shiga/25/97 (H3N2) SLLTEVETPIRNEWGCRCNDSSD
A/Hong Kong/427/98 (H1N1) SLLTEVETPIRNEWECRCNDSSD5
A/Hong Kong/1143/99 (H3N2) SLLTEVETPIRNEWGCRCNDSSD
A/Hong Kong/1144/99 (H3N2) SLLTEVETPIRNEWGCRCNDSSD
A/Hong Kong/1180/99 (H3N2) SLLTEVETPIRNEWGCRCNDSSD
A/Hong Kong/1179/99 (H3N2) SLLTEVETPIRNEWGCRCNDSSD
1본 표의 모든 서열은 다른 지시가 없다면 SEQ ID NO:36과 대응한다.
2SEQ ID NO:72
3SEQ ID NO:73
4SEQ ID NO:74
5SEQ ID NO:75
핵단백질의 인플루엔자 A 바이러스 CTL 에피토프
아미노산 위치( ref .) 호스트 MHC 제한
44-52 (ref. 14) Human HLA-A1
50-63 (ref. 3) Mouse (CBA) H-2Kk
91-99 (ref. 13) Human HLA-Aw68
147-158 (ref. 5) Mouse (Balb/c) H-2Kd
265-273 (ref. 14) Human HLA-A3
335-349 (ref. 1) Human HLA-B37
335-349 (ref. 2) Mouse HLA-B37
365-380 (ref. 2) Mouse H-2Db
366-374 (ref. 9) Mouse (C57B1/6) H-2Db
380-388 (ref. 16) Human HLA-B8
383-391 (ref. 16) Human HLA-B27
핵단백질의 인플루엔자 A 바이러스 T 세포 에피토프
아미노산 위치( ref .) 호스트 MHC 제한
55-69 (ref. 8) Mouse (Balb/c) H-2Kd
182-205 (ref. 11) Human
187-200 (ref. 8) Mouse (CBA)
Mouse (Balb/c)		 H- 2Kk
H- 2Kd
216-229 (ref. 8) Mouse (Balb/c) H- 2Kd
206- 229 (ref. 11) Human HLA-DR1, HLA-DR2 en
HLA-DRw13
260-283 (ref. 8) Mouse (CBA)
Mouse (C57B1/6)
Mouse (B10.s)		 H-2Kk
H-2Db
H-2s
297-318 (ref. 11) Human
338- 347 (ref. 16) Human HLA-B37
341- 362 (ref. 11) Human
413- 435 (ref. 8) Mouse (C57B1/6) H-2Db
다른 바이러스 단백질의 인플루엔자 A 바이러스 T 세포 에피토프
펩타이드 호스트 T 세포 타입 MHC 제한
PB1 (591-599) (ref. 14)
HA (204-212) (ref. 16)
HA (210-219) (ref. 16)
HA (259-266) (ref. 16)
HA (252- 271) (ref. 7)
HA (354-362) (ref. 16)
HA (518-526) (ref. 16)
HA (523-545) (ref. 10)
NA (76-84) (ref. 16)
NA (192-201) (ref. 16)
M1 (17-29) (ref. 6)
M1 (56-68) (ref. 4)
M1 (58-66) (ref. 12)
M1 (128-135) (ref. 15)
NS1 (122-130) (ref. 15)
NS1 (152-160) (ref. 16)		 Human
Mouse
Mouse
Mouse
Mouse
Mouse
Mouse
Mouse
Mouse
Mouse
Human
Human
Human
Human
Human
Mouse		 CTL
CTL
CTL
CTL
CTL
CTL
CTL
CTL
CTL
CTL
T helper
CTL
CTL
CTL
CTL
CTL		 HLA-A3
H-2Kd
H-2Kd
H-2Kk
H-2Kk
H-2Kk
H-2Kk

H-2Dd
H-2Kd
HLA-DR1
HLA-A2
HLA-A2
HLA-B35
HLA-A2
H-2Kk
표 7-9의 참조
(1) McMichael et al., J. Exp. Med. 164:1397-1406, 1986.
(2) Townsend et al., Cell 44:959-968, 1986.
(3) Bastin et al., J. Exp. Med. 165:1508-1523, 1987.
(4) Gotch et al., Nature 326:881-882, 1987.
(5) Bodmer et al., Cell 52:253-258, 1988.
(6) Ceppelini et al., Nature 339:392-394, 1989.
(7) Sweetser et al., Nature 342:180-182, 1989.
(8) Gao et al., J. Immunol. 143:3007-3014, 1989.
(9) Rotzschke et al., Nature 348:252-254, 1990.
(10) Milligan et al., J. Immunol. 145:3188-3193, 1990.
(11) Brett et al., J. Immunol. 147:984-991, 1991.
(12) Bednarek et al., J. Immunol. 147:4047-4053, 1991.
(13) Cerundolo et al., Proc. Roy. Soc. Lond. Series B boil. Sci. 244:169-177, 1991.
(14) DiBrino et al., J. Immunol. 151:5930-5935, 1993.
(15) Dong et al., Eur. J. Immunol. 26:335-339, 1996.
(16) Parker et al., Seminars in Virology 7:61-73, 1996.
다른 구현예
본 명세서에 언급된 모든 공개문헌, 특허출원 문헌 및 특허 문헌은 그 전체로서 본 명세서에 참조로 삽입되어 각각의 공개문헌, 특허출원 문헌 및 특허 문헌은 특정적으로 그리고 개별적으로 참조로 삽입된다. 본 명세서에서, "a" 및 "the"와 같은 단수형의 사용은, 다르게 언급되지 않는 한, 대응되는 복수형을 배제하는 것은 아니다. 본 발명은 특정 구현예와 연관되어 설명되어 있지만, 본 발명은 그러한 구현예들에 과도하게 제한되지 않는다는 것은 명확하다. 본 발명의 구현을 위한 서술된 방식들의 다양한 변형들(의학, 의약 또는 관련 기술분야의 당업자에 명백한 변형들)은 본 발명의 범위에 속한다.
본 발명의 다른 구현예들은 하기의 특허청구범위에 속한다.
<110> SANOFI PASTEUR BIOLOGICS CO. et al. <120> Recombinant Rhinovirus Vectors <130> 06132/130WO2 <140> PCT/US2009/001941 <141> 2009-03-27 <150> 61/072,036 <151> 2008-03-27 <160> 87 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 25 <212> PRT <213> Human Influenza A Virus Subtype H1Nx <400> 1 Pro Ser Ile Gln Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile 1 5 10 15 Glu Gly Gly Trp Thr Gly Met Val Asp 20 25 <210> 2 <211> 25 <212> PRT <213> Human/Avian Influenza A Virus Subtype H2Nx <400> 2 Pro Gln Ile Glu Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile 1 5 10 15 Glu Gly Gly Trp Gln Gly Met Val Asp 20 25 <210> 3 <211> 25 <212> PRT <213> Human Influenza A Virus Subtype H3Nx <400> 3 Pro Glu Lys Gln Thr Arg Gly Ile Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile 1 5 10 15 Glu Asn Gly Trp Glu Gly Met Val Asp 20 25 <210> 4 <211> 25 <212> PRT <213> Human Influenza A Virus Subtype H5N1 <400> 4 Arg Arg Arg Lys Lys Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile 1 5 10 15 Glu Gly Gly Trp Gln Gly Met Val Asp 20 25 <210> 5 <211> 25 <212> PRT <213> Avian Influenza A Virus Subtype H6Nx <400> 5 Pro Gln Ile Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile 1 5 10 15 Glu Gly Gly Trp Thr Gly Met Ile Asp 20 25 <210> 6 <211> 25 <212> PRT <213> Avian/Equine/Human Influenza A Virus Subtype H7Nx <400> 6 His Lys Arg Lys Gly Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile 1 5 10 15 Glu Asn Gly Trp Glu Gly Leu Ile Asp 20 25 <210> 7 <211> 25 <212> PRT <213> Avian/Human/Swine Influenza A Virus Subtype H9Nx <400> 7 Pro Ala Arg Ser Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile 1 5 10 15 Glu Gly Gly Trp Ser Gly Leu Val Ala 20 25 <210> 8 <211> 25 <212> PRT <213> Human Influenza B Virus <400> 8 Lys Leu Leu Lys Glu Arg Gly Phe Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Leu 1 5 10 15 Glu Gly Gly Trp Glu Gly Met Ile Ala 20 25 <210> 9 <211> 24 <212> PRT <213> Human Influenza A Virus Subtype H1N1 <400> 9 Met Ser Leu Leu Thr Glu Val Glu Thr Pro Ile Arg Asn Glu Trp Gly 1 5 10 15 Cys Arg Cys Asn Asp Ser Ser Asp 20 <210> 10 <211> 24 <212> PRT <213> Human Influenza A Virus Subtype H5N1 <400> 10 Met Ser Leu Leu Thr Glu Val Glu Thr Pro Thr Arg Asn Glu Trp Glu 1 5 10 15 Cys Arg Cys Ser Asp Ser Ser Asp 20 <210> 11 <211> 24 <212> PRT <213> Human Influenza A Virus Subtype H5N1 <400> 11 Met Ser Leu Leu Thr Glu Val Glu Thr Leu Thr Arg Asn Gly Trp Gly 1 5 10 15 Cys Arg Cys Ser Asp Ser Ser Asp 20 <210> 12 <211> 24 <212> PRT <213> Avian Influenza A Virus Subtype H5N1 <400> 12 Met Ser Leu Leu Thr Glu Val Glu Thr Leu Thr Arg Asn Gly Trp Gly 1 5 10 15 Cys Arg Cys Ser Asp Ser Ser Asp 20 <210> 13 <211> 8 <212> PRT <213> Avian Influenza A Virus <400> 13 Glu Val Glu Thr Pro Thr Arg Asn 1 5 <210> 14 <211> 8 <212> PRT <213> Avian Influenza A Virus <400> 14 Glu Val Glu Thr Leu Thr Arg Asn 1 5 <210> 15 <211> 24 <212> PRT <213> Avian/Equine Influenza A Virus Subtype H7N7 <400> 15 Met Ser Leu Leu Thr Glu Val Glu Thr Pro Thr Arg Asn Gly Trp Glu 1 5 10 15 Cys Arg Cys Ser Asp Ser Ser Asp 20 <210> 16 <211> 24 <212> PRT <213> Avian Influenza A Virus Subtype H9Nx <400> 16 Met Ser Leu Leu Thr Glu Val Glu Thr Pro Thr Arg Asn Gly Trp Glu 1 5 10 15 Cys Lys Cys Ser Asp Ser Ser Asp 20 <210> 17 <211> 24 <212> PRT <213> Avian Influenza A Virus Subtype H9Nx <400> 17 Met Ser Leu Leu Thr Glu Val Glu Thr His Thr Arg Asn Gly Trp Gly 1 5 10 15 Cys Arg Cys Ser Asp Ser Ser Asp 20 <210> 18 <211> 24 <212> PRT <213> Human Influenza A Virus Subtype H9N2 <400> 18 Met Ser Leu Leu Thr Glu Val Glu Thr Leu Thr Arg Asn Gly Trp Glu 1 5 10 15 Cys Lys Cys Ser Asp Ser Ser Asp 20 <210> 19 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Sequence <400> 19 Ser Ser Ala Ser Leu Leu Thr Glu Val Glu Thr Pro Ile Arg Asn Glu 1 5 10 15 Trp Gly Cys Arg Cys Asn Asp Ser Ser Asp Asn Glu Val 20 25 <210> 20 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> UNSURE <222> (4)..(6) <223> Where Xaa is any amino acid <400> 20 Ser Ser Ala Xaa Xaa Xaa Ser Leu Leu Thr Glu Val Glu Thr Pro Ile 1 5 10 15 Arg Asn Glu Trp Gly Cys Arg Cys Asn Asp Ser Ser Asp Asn Glu Val 20 25 30 <210> 21 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> UNSURE <222> (4)..(6) <223> Where Xaa is any amino acid <400> 21 Ser Ser Ala Xaa Xaa Xaa Ser Leu Leu Thr Glu Val Glu Thr Pro Ile 1 5 10 15 Arg Asn Glu Trp Gly Cys Arg Asn Glu Val 20 25 <210> 22 <211> 31 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 22 Ser Ser Ala Gln Pro Ala Ser Leu Leu Thr Glu Val Glu Thr Pro Ile 1 5 10 15 Arg Asn Glu Trp Gly Ser Arg Asn Glu Val Gly Gly Pro Val Lys 20 25 30 <210> 23 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 23 Ser Ser Ala Asn Val Pro Glu Lys Gln Thr Gln Gly Ile Phe Gly Ala 1 5 10 15 Ile Ala Gly Phe Ile Glu Asn Glu Val Gly Gly Pro Val Lys 20 25 30 <210> 24 <211> 41 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 24 Ser Ser Ala Gln Pro Ala Ser Leu Leu Thr Glu Val Glu Thr Pro Ile 1 5 10 15 Arg Asn Glu Trp Gly Ser Glu Arg Gly Ile Phe Gly Ala Ile Ala Gly 20 25 30 Phe Ile Glu Pro Gly Gly Pro Val Lys 35 40 <210> 25 <211> 5 <212> PRT <213> Human Rhinovirus 14 <400> 25 Ser Ala Asn Glu Val 1 5 <210> 26 <211> 7 <212> PRT <213> Human Rhinovirus 14 <400> 26 Asn Ala Asn Arg Gln Asn Glu 1 5 <210> 27 <211> 5 <212> PRT <213> Human Rhinovirus 14 <400> 27 Asp Asn His Arg Glu 1 5 <210> 28 <211> 16 <212> PRT <213> Human Rhinovirus 14 <400> 28 Asn Thr Glu Pro Val Ile Lys Lys Arg Lys Gly Asp Ile Lys Ser Tyr 1 5 10 15 <210> 29 <211> 7212 <212> DNA <213> Human Rhinovirus 14 <400> 29 ttaaaacagc ggatgggtat cccaccattc gacccattgg gtgtagtact ctggtactat 60 gtacctttgt acgcctgttt ctccccaacc acccttcctt aaaattccca cccatgaaac 120 gttagaagct tgacattaaa gtacaatagg tggcgccata tccaatggtg tctatgtaca 180 agcacttctg tttccccgga gcgaggtata ggctgtaccc actgccaaaa gcctttaacc 240 gttatccgcc aaccaactac gtaacagtta gtaccatctt gttcttgact ggacgttcga 300 tcaggtggat tttccctcca ctagtttggt cgatgaggct aggaattccc cacgggtgac 360 cgtgtcctag cctgcgtggc ggccaaccca gcttatgctg ggacgccctt ttaaggacat 420 ggtgtgaaga ctcgcatgtg cttggttgtg agtcctccgg cccctgaatg cggctaacct 480 taaccctgga gccttatgcc acgatccagt ggttgtaagg tcgtaatgag caactccggg 540 acgggaccga ctactttggg tgtccgtgtt tctcattttt cttcatattg tcttatggtc 600 acagcatata tatacatata ctgtgatcat gggcgctcag gtttctacac agaaaagtgg 660 atctcacgaa aatcaaaaca ttttgaccaa tggatcaaat cagactttca cagttataaa 720 ttactataag gatgcagcaa gtacatcatc agctggtcaa tcactgtcaa tggacccatc 780 taagtttaca gaaccagtta aagatctcat gcttaagggt gcaccagcat tgaattcacc 840 caatgttgag gcctgtggtt atagtgatag agtacaacaa atcacactcg ggaattcaac 900 aataacaaca caagaagcag ccaacgctgt tgtgtgttat gctgaatggc cagagtacct 960 tccagatgtg gacgctagtg atgtcaataa aacttcaaaa ccagacactt ctgtctgtag 1020 gttttacaca ttggatagta agacatggac aacaggttct aaaggctggt gctggaaatt 1080 accagatgca ctcaaagata tgggtgtgtt cgggcaaaac atgtttttcc actcactagg 1140 aagatcaggt tacacagtac acgttcagtg caatgccaca aaattccata gcggttgtct 1200 acttgtagtt gtaataccag aacaccaact ggcttcacat gagggtggca atgtttcagt 1260 taaatacaca ttcacgcatc caggtgaacg tggtatagat ttatcatctg caaatgaagt 1320 gggagggcct gtcaaggatg tcatatacaa tatgaatggt actttattag gaaatctgct 1380 cattttccct caccagttca ttaatctaag aaccaataat acagccacaa tagtgatacc 1440 atacataaac tcagtaccca ttgattcaat gacacgtcac aacaatgtct cactgatggt 1500 catccctatt gcccctctta cagtaccaac tggagcaact ccctcactcc ctataacagt 1560 cacaatagca cctatgtgca ctgagttctc tgggataagg tccaagtcaa ttgtgccaca 1620 aggtttgcca actacaactt tgccggggtc aggacaattc ttgaccacag atgacaggca 1680 atcccccagt gcactgccaa attatgagcc aactccaaga atacacatac cagggaaagt 1740 tcataacttg ctagaaatta tacaggtaga tacactcatt cctatgaaca acacgcatac 1800 aaaagatgag gttaacagtt acctcatacc actaaatgca aacaggcaaa atgagcaggt 1860 ttttgggaca aacctgttta ttggtgatgg ggtcttcaaa actactcttc tgggtgaaat 1920 tgttcagtac tatacacatt ggtctggatc acttagattc tctttgatgt atactggtcc 1980 tgccttgtcc agtgctaaac tcattctagc atacaccccg cctggtgctc gtggtccaca 2040 ggacaggaga gaagcaatgc taggtactca tgttgtctgg gatattggtc tgcaatccac 2100 catagtaatg acaataccat ggacatcagg ggtgcagttt agatatactg atccagatac 2160 atacaccagt gctggctttc tatcatgttg gtatcaaact tctcttatac ttcccccaga 2220 aacgaccggc caggtctact tattatcatt cataagtgca tgtccagatt ttaagcttag 2280 gctgatgaaa gatactcaaa ctatctcaca gactgttgca ctcactgaag gcttaggtga 2340 tgaattagaa gaagtcatcg ttgagaaaac gaaacagacg gtggcctcaa tctcatctgg 2400 tccaaaacac acacaaaaag tccccatact aactgcaaac gaaacagggg ccacaatgcc 2460 tgttcttcca tcagacagca tagaaaccag aactacctac atgcacttta atggttcaga 2520 aactgatgta gaatgctttt tgggtcgtgc agcttgtgtg catgtaactg aaatacaaaa 2580 caaagatgct actggaatag ataatcacag agaagcaaaa ttgttcaatg attggaaaat 2640 caacctgtcc agccttgtcc aacttagaaa gaaactagaa ctcttcactt atgttaggtt 2700 tgattctgag tataccatac tggccactgc atctcaacct gattcagcaa actattcaag 2760 caatttggtg gtccaagcca tgtatgttcc acctggtgcc ccgaatccaa aagagtggga 2820 cgattacaca tggcaaagtg cttcaaaccc cagtgtattc ttcaaggtgg gggatacatc 2880 caggtttagt gtgccttatg taggattggc atcagcatat aattgttttt atgatggtta 2940 ctcacatgat gatgcagaaa ctcagtatgg cataactgtt ctaaaccata tgggtagtat 3000 ggcattcaga atagtaaatg aacatgatga acataaaact cttgtcaaga tcagagttta 3060 tcacagggca aagcacgttg aagcatggat tccaagagca cccagagcac taccctacac 3120 atcaataggg cgcacaaatt atcctaagaa tacagaacca gtaattaaga agaggaaagg 3180 tgacattaaa tcctatggtt taggacctag gtacggtggg atttatacat caaatgttaa 3240 aataatgaat taccacttga tgacaccaga agaccaccat aatctgatag caccctatcc 3300 aaatagagat ttagcaatag tctcaacagg aggacatggt gcagaaacaa taccacactg 3360 taactgtaca tcaggtgttt actattccac atattacaga aagtattacc ccataatttg 3420 tgaaaagccc accaacatct ggattgaagg aaacccttat tacccaagta ggtttcaagc 3480 aggagtgatg aaaggggttg ggccagcaga accaggagac tgcggtggga ttttgagatg 3540 catacatggt cccattggat tgttaacagc tggaggtagt ggatatgttt gttttgctga 3600 catacgacag ttggagtgta tcgcagagga acaggggctg agtgattaca tcacaggttt 3660 gggtagagct tttggtgtcg ggttcactga ccaaatctca acaaaagtca cagaactaca 3720 agaagtggcg aaagatttcc tcaccacaaa agttttgtcc aaagtggtca aaatggtttc 3780 agctttagtg atcatttgca gaaatcatga tgacttggtc actgttacgg ccactctagc 3840 actacttgga tgtgatggat ctccctggag atttctgaag atgtacattt ccaaacactt 3900 tcaggtgcct tacattgaaa gacaagcaaa tgatggatgg ttcagaaagt ttaatgatgc 3960 atgtaatgct gcaaagggat tggaatggat tgctaataag atttccaaac tgattgaatg 4020 gataaaaaac aaagtacttc cccaagccaa agaaaaacta gaattttgta gtaaactcaa 4080 acaacttgat atactagaga gacaaataac caccatgcat atctcgaatc caacacagga 4140 aaaacgagag cagttgttca acaacgtatt gtggttggaa caaatgtcgc aaaagtttgc 4200 cccacattat gccgttgaat caaaaagaat cagggaactc aagaacaaaa tggtaaatta 4260 tatgcaattt aaaagtaaac aaagaactga accagtgtgt gtattaatcc atggtacacc 4320 cggttctggt aaatcattaa caacatccat tgtgggacgt gcaattgcag aacacttcaa 4380 ttcagcagta tattcacttc caccagatcc caagcacttt gatggttatc agcaacagga 4440 agttgtgatt atggatgatc tgaaccaaaa tccagatgga caggatataa gcatgttttg 4500 tcaaatggtt tcttcagtgg atttcttgcc tccaatggct agtttagata acaagggcat 4560 gttattcacc agtaattttg ttctagcctc cacaaattct aacacactaa gccccccaac 4620 aatcttgaat cctgaagctt tagtcaggag atttggtttt gacctggata tatgtttgca 4680 tactacctac acaaagaatg gaaaactcaa tgcaggcatg tcaaccaaga catgcaaaga 4740 ttgccatcaa ccatctaatt tcaagaaatg ttgccccctg gtctgtggaa aagctattag 4800 cttggtagac agaactacca acgttaggta tagtgtggat caactggtca cagctattat 4860 aagtgatttc aagagcaaaa tgcaaattac agattcccta gaaacactgt ttcaaggacc 4920 agtgtataaa gatttagaga ttgatgtttg caacacacca cctccagaat gtatcaacga 4980 tttactgaaa tctgtagatt cagaagagat tagggaatat tgtaagaaga agaaatggat 5040 tatacctgaa attcctacca acatagaaag ggctatgaat caagccagca tgattattaa 5100 tactattctg atgtttgtca gtacattagg tattgtttat gtcatttata aattgtttgc 5160 tcaaactcaa ggaccatatt ctggtaaccc gcctcacaat aaactaaaag ccccaacttt 5220 acgcccagtt gttgtgcaag gaccaaacac agaatttgca ctatccctgt taaggaaaaa 5280 cataatgact ataacaacct caaagggaga gttcacaggg ttaggcatac atgatcgtgt 5340 ctgtgtgata cccacacacg cacagcctgg tgatgatgta ctagtgaatg gtcagaaaat 5400 tagagttaag gataagtaca aattagtaga tccagagaac attaatctag agcttacagt 5460 gttgacttta gatagaaatg aaaaattcag agatatcagg ggatttatat cagaagatct 5520 agaaggtgtg gatgccactt tggtagtaca ttcaaataac tttaccaaca ctatcttaga 5580 agttggccct gtaacaatgg caggacttat taatttgagt agcaccccca ctaacagaat 5640 gattcgttat gattatgcaa caaaaactgg gcagtgtgga ggtgtgctgt gtgctactgg 5700 taagatcttt ggtattcatg ttggcggtaa tggaagacaa ggattttcag ctcaacttaa 5760 aaaacaatat tttgtagaga aacaaggcca agtaatagct agacataagg ttagggagtt 5820 taacataaat ccagtcaaca cgccaaccaa gtcaaaatta catcccagtg tattctatga 5880 tgttttccca ggtgacaagg aacctgctgt attgagtgac aatgatccca gactggaagt 5940 taaattgact gaatcattat tctctaagta caaggggaat gtaaatacgg aacccactga 6000 aaatatgctt gtggctgtag accattatgc agggcaacta ttatcactag atatccccac 6060 ttctgaactt acactaaaag aagcattata tggagtagat ggactagaac ctatagatat 6120 tacaaccagt gcaggatttc cctatgtgag tcttgggatc aaaaagagag acattctgaa 6180 caaagagacc caggacacag aaaagatgaa gttttatcta gacaagtatg gcattgactt 6240 gcctctagtt acatatatta aggatgaatt aagaagtgtt gacaaagtcc gattagggaa 6300 aagtagatta attgaagcct ccagtttgaa tgattctgtt aacatgagaa tgaaactagg 6360 caacctttac aaagcattcc atcaaaatcc cggtgttctg actgggtcag cagtgggttg 6420 tgatcctgat gtgttttggt ctgtcatccc ttgcttaatg gatgggcacc tgatggcatt 6480 tgattactct aattttgatg cctctttgtc accagtttgg tttgtctgtc tagagaaggt 6540 tttgaccaag ttaggctttg caggctcttc attaattcaa tcaatttgta atacccatca 6600 tatctttagg gatgaaatat atgtggttga aggtggcatg ccctcagggt gttcaggaac 6660 cagcatattc aattccatga tcaacaacat aatcattagg actttgatat tagatgcata 6720 taaaggaata gatttagaca aacttaaaat cttagcttac ggtgatgatt tgattgtttc 6780 ttatccttat gaactggatc cacaagtgtt ggcaactctt ggtaaaaatt atggactaac 6840 catcacaccc ccagacaaat ctgaaacttt tacaaaaatg acatgggaaa acttgacatt 6900 tttaaagaga tacttcaagc ctgatcaaca atttcccttt ttggttcacc cagttatgcc 6960 catgaaagat atacatgagt caatcagatg gacaaaggat cctaaaaaca cacaggatca 7020 cgtccgatca ttatgcatgt tagcatggca ctcaggagaa aaagagtaca atgaattcat 7080 tcagaagatc agaactactg acattggaaa atgtctaatt ctcccagaat acagcgtact 7140 taggaggcgc tggttggacc tcttttaggt taacaatata gacacttaat ttgagtagaa 7200 gtaggagttt at 7212 <210> 30 <211> 2179 <212> PRT <213> Human Rhinovirus 14 <400> 30 Met Gly Ala Gln Val Ser Thr Gln Lys Ser Gly Ser His Glu Asn Gln 1 5 10 15 Asn Ile Leu Thr Asn Gly Ser Asn Gln Thr Phe Thr Val Ile Asn Tyr 20 25 30 Tyr Lys Asp Ala Ala Ser Thr Ser Ser Ala Gly Gln Ser Leu Ser Met 35 40 45 Asp Pro Ser Lys Phe Thr Glu Pro Val Lys Asp Leu Met Leu Lys Gly 50 55 60 Ala Pro Ala Leu Asn Ser Pro Asn Val Glu Ala Cys Gly Tyr Ser Asp 65 70 75 80 Arg Val Gln Gln Ile Thr Leu Gly Asn Ser Thr Ile Thr Thr Gln Glu 85 90 95 Ala Ala Asn Ala Val Val Cys Tyr Ala Glu Trp Pro Glu Tyr Leu Pro 100 105 110 Asp Val Asp Ala Ser Asp Val Asn Lys Thr Ser Lys Pro Asp Thr Ser 115 120 125 Val Cys Arg Phe Tyr Thr Leu Asp Ser Lys Thr Trp Thr Thr Gly Ser 130 135 140 Lys Gly Trp Cys Trp Lys Leu Pro Asp Ala Leu Lys Asp Met Gly Val 145 150 155 160 Phe Gly Gln Asn Met Phe Phe His Ser Leu Gly Arg Ser Gly Tyr Thr 165 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1805 Ile Pro Thr Ser Glu Leu Thr Leu Lys Glu Ala Leu Tyr Gly Val Asp 1810 1815 1820 Gly Leu Glu Pro Ile Asp Ile Thr Thr Ser Ala Gly Phe Pro Tyr Val 1825 1830 1835 1840 Ser Leu Gly Ile Lys Lys Arg Asp Ile Leu Asn Lys Glu Thr Gln Asp 1845 1850 1855 Thr Glu Lys Met Lys Phe Tyr Leu Asp Lys Tyr Gly Ile Asp Leu Pro 1860 1865 1870 Leu Val Thr Tyr Ile Lys Asp Glu Leu Arg Ser Val Asp Lys Val Arg 1875 1880 1885 Leu Gly Lys Ser Arg Leu Ile Glu Ala Ser Ser Leu Asn Asp Ser Val 1890 1895 1900 Asn Met Arg Met Lys Leu Gly Asn Leu Tyr Lys Ala Phe His Gln Asn 1905 1910 1915 1920 Pro Gly Val Leu Thr Gly Ser Ala Val Gly Cys Asp Pro Asp Val Phe 1925 1930 1935 Trp Ser Val Ile Pro Cys Leu Met Asp Gly His Leu Met Ala Phe Asp 1940 1945 1950 Tyr Ser Asn Phe Asp Ala Ser Leu Ser Pro Val Trp Phe Val Cys Leu 1955 1960 1965 Glu Lys Val Leu Thr Lys Leu Gly Phe Ala Gly Ser Ser Leu Ile Gln 1970 1975 1980 Ser Ile Cys Asn Thr His His Ile Phe Arg Asp Glu Ile Tyr Val Val 1985 1990 1995 2000 Glu Gly Gly Met Pro Ser Gly Cys 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catggtgtga agactcgcat gtgcttggtt gtgagtcctc cggcccctga atgcggctaa 480 ccttaaccct ggagccttat gccacgatcc agtggttgta aggtcgtaat gagcaactcc 540 gggacgggac cgactacttt gggtgtccgt gtttctcatt tttcttcata ttgtcttatg 600 gtcacagcat atatatacat atactgtgat catgggcgct caggtttcta cacagaaaag 660 tggatctcac gaaaatcaaa acattttgac caatggatca aatcagactt tcacagttat 720 aaattactat aaggatgcag caagtacatc atcagctggt caatcactgt caatggaccc 780 atctaagttt acagaaccag ttaaagatct catgcttaag ggtgcaccag cattgaattc 840 acccaatgtt gaggcctgtg gttatagtga tagagtacaa caaatcacac tcgggaattc 900 aacaataaca acacaagaag cagccaacgc tgttgtgtgt tatgctgaat ggccagagta 960 ccttccagat gtggacgcta gtgatgtcaa taaaacttca aaaccagaca cttctgtctg 1020 taggttttac acattggata gtaagacatg gacaacaggt tctaaaggct ggtgctggaa 1080 attaccagat gcactcaaag atatgggtgt gttcgggcaa aacatgtttt tccactcact 1140 aggaagatca ggttacacag tacacgttca gtgcaatgcc acaaaattcc atagcggttg 1200 tctacttgta gttgtaatac cagaacacca actggcttca catgagggtg gcaatgtttc 1260 agttaaatac acattcacgc atccaggtga acgtggtata gatttatcat ctgcagggaa 1320 tgtaccagag aaacaaactc aaggtatatt tggtgcaata gcaggtttta tagaaaatga 1380 agtgggaggg cctgtcaagg atgtcatata caatatgaat ggtactttat taggaaatct 1440 gctcattttc cctcaccagt tcattaatct aagaaccaat aatacagcca caatagtgat 1500 accatacata aactcagtac ccattgattc aatgacacgt cacaacaatg tctcactgat 1560 ggtcatccct attgcccctc ttacagtacc aactggagca actccctcac tccctataac 1620 agtcacaata gcacctatgt gcactgagtt ctctgggata aggtccaagt caattgtgcc 1680 acaaggtttg ccaactacaa ctttgccggg gtcaggacaa ttcttgacca cagatgacag 1740 gcaatccccc agtgcactgc caaattatga gccaactcca agaatacaca taccagggaa 1800 agttcataac ttgctagaaa ttatacaggt agatacactc attcctatga acaacacgca 1860 tacaaaagat gaggttaaca gttacctcat accactaaat gcaaacaggc aaaatgagca 1920 ggtttttggg acaaacctgt ttattggtga tggggtcttc aaaactactc ttctgggtga 1980 aattgttcag tactatacac attggtctgg atcacttaga ttctctttga tgtatactgg 2040 tcctgccttg tccagtgcta aactcattct agcatacacc ccgcctggtg ctcgtggtcc 2100 acaggacagg agagaagcaa tgctaggtac tcatgttgtc tgggatattg gtctgcaatc 2160 caccatagta atgacaatac catggacatc aggggtgcag tttagatata ctgatccaga 2220 tacatacacc agtgctggct ttctatcatg ttggtatcaa acttctctta tacttccccc 2280 agaaacgacc ggccaggtct acttattatc attcataagt gcatgtccag attttaagct 2340 taggctgatg aaagatactc aaactatctc acagactgtt gcactcactg aaggcttagg 2400 tgatgaatta gaagaagtca tcgttgagaa aacgaaacag acggtggcct caatctcatc 2460 tggtccaaaa cacacacaaa aagtccccat actaactgca aacgaaacag gggccacaat 2520 gcctgttctt ccatcagaca gcatagaaac cagaactacc tacatgcact ttaatggttc 2580 agaaactgat gtagaatgct ttttgggtcg tgcagcttgt gtgcatgtaa ctgaaataca 2640 aaacaaagat gctactggaa tagataatca cagagaagca aaattgttca atgattggaa 2700 aatcaacctg tccagccttg tccaacttag aaagaaacta gaactcttca cttatgttag 2760 gtttgattct gagtatacca tactggccac tgcatctcaa cctgattcag caaactattc 2820 aagcaatttg gtggtccaag ccatgtatgt tccacctggt gccccgaatc caaaagagtg 2880 ggacgattac acatggcaaa gtgcttcaaa ccccagtgta ttcttcaagg tgggggatac 2940 atccaggttt 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gcgaaagatt tcctcaccac aaaagttttg tccaaagtgg tcaaaatggt 3840 ttcagcttta gtgatcattt gcagaaatca tgatgacttg gtcactgtta cggccactct 3900 agcactactt ggatgtgatg gatctccctg gagatttctg aagatgtaca tttccaaaca 3960 ctttcaggtg ccttacattg aaagacaagc aaatgatgga tggttcagaa agtttaatga 4020 tgcatgtaat gctgcaaagg gattggaatg gattgctaat aagatttcca aactgattga 4080 atggataaaa aacaaagtac ttccccaagc caaagaaaaa ctagaatttt gtagtaaact 4140 caaacaactt gatatactag agagacaaat aaccaccatg catatctcga atccaacaca 4200 ggaaaaacga gagcagttgt tcaacaacgt attgtggttg gaacaaatgt cgcaaaagtt 4260 tgccccacat tatgccgttg aatcaaaaag aatcagggaa ctcaagaaca aaatggtaaa 4320 ttatatgcaa tttaaaagta aacaaagaac tgaaccagtg tgtgtattaa tccatggtac 4380 acccggttct ggtaaatcat taacaacatc cattgtggga cgtgcaattg cagaacactt 4440 caattcagca gtatattcac ttccaccaga tcccaagcac tttgatggtt atcagcaaca 4500 ggaagttgtg attatggatg atctgaacca aaatccagat ggacaggata taagcatgtt 4560 ttgtcaaatg gtttcttcag tggatttctt gcctccaatg gctagtttag ataacaaggg 4620 catgttattc 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gactgttgca ctcactgaag gcttaggtga tgaattagaa 1800 gaagtcatcg ttgagaaaac gaaacagacg gtggcctcaa tctcatctgg tccaaaacac 1860 acacaaaaag tccccatact aactgcaaac gaaacagggg ccacaatgcc tgttcttcca 1920 tcagacagca tagaaaccag aactacctac atgcacttta atggttcaga aactgatgta 1980 gaatgctttt tgggtcgtgc agcttgtgtg catgtaactg aaatacaaaa caaagatgct 2040 actggaatag ataatcacag agaagcaaaa ttgttcaatg attggaaaat caacctgtcc 2100 agccttgtcc aacttagaaa gaaactagaa ctcttcactt atgttaggtt tgattctgag 2160 tataccatac tggccactgc atctcaacct gattcagcaa actattcaag caatttggtg 2220 gtccaagcca tgtatgttcc acctggtgcc ccgaatccaa aagagtggga cgattacaca 2280 tggcaaagtg cttcaaaccc cagtgtattc ttcaaggtgg gggatacatc caggtttagt 2340 gtgccttatg taggattggc atcagcatat aattgttttt atgatggtta ctcacatgat 2400 gatgcagaaa ctcagtatgg cataactgtt ctaaaccata tgggtagtat ggcattcaga 2460 atagtaaatg aacatgatga acataaaact cttgtcaaga tcagagttta tcacagggca 2520 aagcacgttg aagcatggat tccaagagca cccagagcac taccctacac atcaataggg 2580 cgcacaaatt atcctaagaa tacagaacca gtaattaaga agaggaaagg tgacattaaa 2640 tcctat 2646

Claims (30)

  1. 인플루엔자 바이러스 HAO 항원을 포함하는 라이노바이러스 벡터.
  2. 제 1 항에 있어서, 상기 라이노바이러스는 인간에서 병원성을 나타내지 않는 것을 특징으로 하는 라이노바이러스 벡터.
  3. 제 2 항에 있어서, 상기 라이노바이러스 벡터는 인간 라이노바이러스 14(HRV14)인 것을 특징으로 하는 라이노바이러스 벡터.
  4. 제 1 항 내지 제 3 항에 있어서, 상기 라이노바이러스 벡터는 M2e 펩타이드를 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 라이노바이러스 벡터.
  5. 제 1 항 내지 제 4 항에 있어서, 상기 인플루엔자 바이러스 HAO 항원은 중화 면역원 Ⅰ(NimI), 중화 면역원 Ⅱ(NimII), 중화 면역원 Ⅲ(NimIII) 및 중화 면역원IV(NimIV)로 구성된 군으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 중화 면역원 위치에 삽입되는 것을 특징으로 하는 라이노바이러스 벡터.
  6. 제 5 항에 있어서, 상기 인플루엔자 바이러스 HAO 항원은 중화 면역원 Ⅱ(NimII) 위치에 삽입되는 것을 특징으로 하는 라이노바이러스 벡터.
  7. 제 6 항에 있어서, 상기 인플루엔자 바이러스 HAO 항원은 NimII의 158 및 160 아미노산 사이에 삽입되는 것을 특징으로 하는 라이노바이러스 벡터.
  8. 제 1 항 내지 제 7 항에 있어서, 상기 인플루엔자 바이러스 HAO 항원의 일측 또는 양측 말단에 링커 서열이 있는 것을 특징으로 하는 라이노바이러스 벡터.
  9. 제 1 항 내지 제 8 항에 있어서, 상기 라이노바이러스 벡터는 살아있는(live) 것을 특징으로 하는 라이노바이러스 벡터.
  10. 제 1 항 내지 제 8 항에 있어서, 상기 라이노바이러스 벡터는 불활화(inactivated)된 것을 특징으로 하는 라이노바이러스 벡터.
  11. 상기 제 1 항 내지 제 10 항의 라이노바이러스 벡터 및 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제를 포함하는 약제학적 조성물.
  12. 제 11 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물은 어쥬번트를 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
  13. 제 11 항 또는 제 12 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물은 하나 또는 그 이상의 추가적인 유효 성분을 포함하는 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
  14. 제 11 항 내지 제 13 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물은 M2e 및/또는 HAO 서열과 융합된 B형간염 코어 단백질을 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
  15. 제 11 항 내지 제 14 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물은 HAO 펩타이드를 포함하는 라이노바이러스 벡터 및 M2e 펩타이드를 포함하는 라이노바이러스 벡터를 포함하는 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
  16. 상기 제 11 항 내지 제 15 항의 약제학적 조성물을 대상(subject)에 투여하는 것을 포함하는 대상(subject)에서 인플루엔자 바이러스에 대해 면역 반응을 유도하는 방법.
  17. 제 16 항에 있어서, 상기 대상(subject)은 인플루엔자 바이러스에 감염되지 않았으나, 감염 위험이 있는 것을 특징으로 하는 방법.
  18. 제 16 항에 있어서, 상기 대상(subject)은 인플루엔자 바이러스에 감염된 것을 특징으로 하는 방법.
  19. 제 16 항 내지 제 18 항에 있어서, 상기 조성물은 대상(subject)에 비강으로 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
  20. 제 16 항 내지 제 19 항에 있어서, 상기 대상(subject)은 인간인 것을 특징으로 하는 방법.
  21. 상기 제 1 항 내지 제 10 항의 라이노바이러스 벡터 및 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제를 혼합하는 단계를 포함하는 약제학적 조성물을 제조하는 방법.
  22. 상기 제 1 항 내지 제 10 항의 라이노바이러스 벡터의 지놈을 암호화하거나 또는 이와 대응하는 핵산 분자.
  23. 삽입된 인플루엔자 바이러스 HAO 항원을 포함하는 NimII 펩타이드.
  24. 다음 단계를 포함하는 인플루엔자 바이러스 HAO 항원을 포함하는 라이노바이러스 벡터를 생성하는 방법:
    (i) 삽입된 인플루엔자 바이러스 HAO 항원 서열을 포함하는 감염성 cDNA 클론에 기반한 재조합 라이노바이러스 벡터의 라이브러리를 생성시키는 단계; 및
    (ii) 상기 라이브러리로부터 (a) 계대에서 삽입된 서열을 유지하고, 및 (b) 상기 삽입된 서열에 대한 항체로 중화된 재조합 바이러스를 선별하는 단계.
  25. 제 24 항에 있어서, 상기 라이노바이러스 벡터는 인간 라이노바이러스 14(HRV14)인 것을 특징으로 하는 방법.
  26. 제 24 항 또는 제 25 항에 있어서, 상기 삽입된 인플루엔자 항원 서열은 NimI, NimII, NimIII 및 NimIV로 구성된 군으로부터 선택된 위치에 삽입되는 것을 특징으로 하는 방법.
  27. 제 24 항 내지 제 26 항에 있어서, 상기 방법은 인플루엔자 바이러스 M2e 서열의 삽입을 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  28. 제 24 항 내지 제 27 항에 있어서, 상기 삽입된 인플루엔자 바이러스 HAO 항원 서열의 일측 또는 양측 말단에 무작위 링커 서열이 위치하는 것을 특징으로 하는 방법.
  29. 헬라(HeLa) 또는 MRC-5 세포에서 인플루엔자 바이러스 HAO 항원을 포함하는 라이노바이러스 벡터를 계대배양 하는 단계를 포함하는 인플루엔자 바이러스 HAO 항원을 포함하는 라이노바이러스 벡터의 배양 방법.
  30. 본 명세서에 기재된 면역원을 포함하는 본 명세서에 기재된 라이노바이러스 벡터.
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Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2007347184A1 (en) * 2006-09-29 2008-08-21 Sanofi Pasteur Biologics Co Recombinant rhinovirus vectors
CN105399833B (zh) 2010-01-04 2019-09-06 Kj 生物科学有限公司 用于疫苗和诊断学的Dps融合蛋白
US9566307B2 (en) * 2012-04-19 2017-02-14 Kyushu University, National University Corporation Pharmaceutical composition
EP3193922B1 (en) * 2014-09-18 2019-08-28 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Vaccine
EP3095866B1 (de) 2015-05-20 2019-05-08 Secarna Pharmaceuticals GmbH & Co. KG Mittel zur prophylaxe und therapie von virusinfektionen
EP3103474A1 (en) * 2015-06-12 2016-12-14 Institut Pasteur Live recombinant measles-m2 virus and its use in eliciting immunity against influenza viruses
WO2016205389A1 (en) * 2015-06-15 2016-12-22 Emory University Multivalent enterovirus vaccine compositions and uses related thereto
US10428116B2 (en) * 2016-04-22 2019-10-01 Wisconsin Alumni Research Foundation Rhinovirus C immunogenic peptides
CN109694401A (zh) * 2017-10-20 2019-04-30 金协国际实业有限公司 败血性巴氏杆菌毒素重组蛋白、其类病毒颗粒及其应用
CN115991744A (zh) * 2021-07-26 2023-04-21 北京万泰生物药业股份有限公司 人鼻病毒的通用亲和表位多肽、抗体及其用途

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5714374A (en) * 1990-09-12 1998-02-03 Rutgers University Chimeric rhinoviruses
US5541100A (en) * 1990-09-12 1996-07-30 Rutgers University Chimeric rhinoviruses
US6541011B2 (en) * 1998-02-11 2003-04-01 Maxygen, Inc. Antigen library immunization
EP1256803A1 (en) * 2001-05-07 2002-11-13 Crucell Holland B.V. Methods for the identification of antiviral compounds
CN1551782A (zh) * 2001-06-01 2004-12-01 ��������ķ������ 嵌合黄病毒载体
US20060088549A1 (en) * 2004-07-08 2006-04-27 Arnold Gail F Chimeric virus vaccine
WO2007082734A2 (en) * 2006-01-17 2007-07-26 Creatogen Laboratories Gmbh Influenza vaccine
EP1991264B1 (en) * 2006-03-07 2015-01-07 Vaxinnate Corporation Compositions that include hemagglutinin, methods of making and methods of use thereof
AU2007347184A1 (en) * 2006-09-29 2008-08-21 Sanofi Pasteur Biologics Co Recombinant rhinovirus vectors
EP2066343B1 (en) * 2006-09-29 2017-06-14 Sanofi Pasteur Biologics, LLC Novel neutralizing immunogen (nimiv) of rhinovirus and its use for vaccine applications
CA2676689C (en) * 2007-01-31 2014-12-16 Sanofi Pasteur Biologics Co. Recombinant bicistronic flavivirus vectors
US20110110973A1 (en) * 2008-02-09 2011-05-12 Sanofi Pasteur Biologics Co. Influenza B Vaccines
BRPI0908936A2 (pt) * 2008-03-14 2017-03-28 Sanofi Pasteur Biologics Co vacinas de flavivírus de replicação defeituosa e vetores de vacina

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