ES2400561T3 - Péptidos inhibidores de enzima conversora de angiotensina - Google Patents
Péptidos inhibidores de enzima conversora de angiotensina Download PDFInfo
- Publication number
- ES2400561T3 ES2400561T3 ES04721339T ES04721339T ES2400561T3 ES 2400561 T3 ES2400561 T3 ES 2400561T3 ES 04721339 T ES04721339 T ES 04721339T ES 04721339 T ES04721339 T ES 04721339T ES 2400561 T3 ES2400561 T3 ES 2400561T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- peptide
- tripeptide
- tyr
- val
- leu
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- 101710086378 Bradykinin-potentiating and C-type natriuretic peptides Proteins 0.000 title description 3
- MSFITIBEMPWCBD-ULQDDVLXSA-N Leu-Val-Tyr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 MSFITIBEMPWCBD-ULQDDVLXSA-N 0.000 claims abstract description 25
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract 4
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 84
- UUUHXMGGBIUAPW-UHFFFAOYSA-N 1-[1-[2-[[5-amino-2-[[1-[5-(diaminomethylideneamino)-2-[[1-[3-(1h-indol-3-yl)-2-[(5-oxopyrrolidine-2-carbonyl)amino]propanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]pentanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]pyrrolidine-2-carbon Chemical compound C1CCC(C(=O)N2C(CCC2)C(O)=O)N1C(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C1CCCN1C(=O)C(CCCN=C(N)N)NC(=O)C1CCCN1C(=O)C(CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)C1CCC(=O)N1 UUUHXMGGBIUAPW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 48
- 102000004270 Peptidyl-Dipeptidase A Human genes 0.000 claims description 48
- 108090000882 Peptidyl-Dipeptidase A Proteins 0.000 claims description 48
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 28
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims description 23
- 235000013361 beverage Nutrition 0.000 claims description 12
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 claims description 11
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 claims description 5
- 230000037406 food intake Effects 0.000 claims description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 39
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 28
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 27
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- 108090001109 Thermolysin Proteins 0.000 description 20
- 239000000047 product Substances 0.000 description 19
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 18
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 17
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 16
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 239000005541 ACE inhibitor Substances 0.000 description 14
- 229940044094 angiotensin-converting-enzyme inhibitor Drugs 0.000 description 14
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 13
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 13
- 244000000231 Sesamum indicum Species 0.000 description 13
- 235000003434 Sesamum indicum Nutrition 0.000 description 13
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 13
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 13
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 13
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 13
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 12
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 11
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 11
- 244000075850 Avena orientalis Species 0.000 description 10
- 235000007319 Avena orientalis Nutrition 0.000 description 10
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 10
- 230000001077 hypotensive effect Effects 0.000 description 10
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 10
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 10
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 description 9
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 description 9
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 9
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 9
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 9
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 8
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 8
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 8
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 7
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 7
- IRMLZWSRWSGTOP-CIUDSAMLSA-N Leu-Ser-Ala Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O IRMLZWSRWSGTOP-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 7
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 7
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 7
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 7
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 7
- 239000012264 purified product Substances 0.000 description 7
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 235000007558 Avena sp Nutrition 0.000 description 5
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 5
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 5
- 240000005979 Hordeum vulgare Species 0.000 description 5
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 description 5
- 244000098338 Triticum aestivum Species 0.000 description 5
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 5
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 5
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 5
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 5
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 5
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 5
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 101800004538 Bradykinin Proteins 0.000 description 4
- 102400000967 Bradykinin Human genes 0.000 description 4
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QXZGBUJJYSLZLT-UHFFFAOYSA-N H-Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-Pro-Phe-Arg-OH Natural products NC(N)=NCCCC(N)C(=O)N1CCCC1C(=O)N1C(C(=O)NCC(=O)NC(CC=2C=CC=CC=2)C(=O)NC(CO)C(=O)N2C(CCC2)C(=O)NC(CC=2C=CC=CC=2)C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(O)=O)CCC1 QXZGBUJJYSLZLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 4
- QXZGBUJJYSLZLT-FDISYFBBSA-N bradykinin Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)CCC1 QXZGBUJJYSLZLT-FDISYFBBSA-N 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 4
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 4
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 4
- CUKWUWBLQQDQAC-VEQWQPCFSA-N (3s)-3-amino-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s,3s)-1-[[(2s)-1-[(2s)-2-[[(1s)-1-carboxyethyl]carbamoyl]pyrrolidin-1-yl]-3-(1h-imidazol-5-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-methyl-1-ox Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 CUKWUWBLQQDQAC-VEQWQPCFSA-N 0.000 description 3
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102400000345 Angiotensin-2 Human genes 0.000 description 3
- 101800000733 Angiotensin-2 Proteins 0.000 description 3
- 208000001953 Hypotension Diseases 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 3
- 150000003862 amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 3
- 229950006323 angiotensin ii Drugs 0.000 description 3
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 3
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 3
- 208000021822 hypotensive Diseases 0.000 description 3
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 3
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 3
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 3
- 239000002952 polymeric resin Substances 0.000 description 3
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 3
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 3
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 3
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 3
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 229920003002 synthetic resin Polymers 0.000 description 3
- 235000013616 tea Nutrition 0.000 description 3
- CNBUSIJNWNXLQQ-NSHDSACASA-N (2s)-3-(4-hydroxyphenyl)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 CNBUSIJNWNXLQQ-NSHDSACASA-N 0.000 description 2
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102400000344 Angiotensin-1 Human genes 0.000 description 2
- 101800000734 Angiotensin-1 Proteins 0.000 description 2
- 108010082495 Dietary Plant Proteins Proteins 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MDXGYYOJGPFFJL-QMMMGPOBSA-N N(alpha)-t-butoxycarbonyl-L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OC(C)(C)C MDXGYYOJGPFFJL-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 2
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 2
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 2
- 244000098345 Triticum durum Species 0.000 description 2
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 2
- ORWYRWWVDCYOMK-HBZPZAIKSA-N angiotensin I Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 ORWYRWWVDCYOMK-HBZPZAIKSA-N 0.000 description 2
- 239000002220 antihypertensive agent Substances 0.000 description 2
- 235000019568 aromas Nutrition 0.000 description 2
- 235000019658 bitter taste Nutrition 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 102000038379 digestive enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108091007734 digestive enzymes Proteins 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 2
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 2
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 2
- 235000001497 healthy food Nutrition 0.000 description 2
- 230000001631 hypertensive effect Effects 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 2
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 2
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 2
- IWDCLRJOBJJRNH-UHFFFAOYSA-N p-cresol Chemical compound CC1=CC=C(O)C=C1 IWDCLRJOBJJRNH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 2
- 230000036454 renin-angiotensin system Effects 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 2
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 2
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- FHOAKXBXYSJBGX-YFKPBYRVSA-N (2s)-3-hydroxy-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O FHOAKXBXYSJBGX-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- PUUABEGDHGDROR-RYUDHWBXSA-N (2s)-4-methyl-2-[[(2s)-3-methyl-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]butanoyl]amino]pentanoic acid Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)OC(C)(C)C PUUABEGDHGDROR-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- QJCNLJWUIOIMMF-YUMQZZPRSA-N (2s,3s)-3-methyl-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]pentanoic acid Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OC(C)(C)C QJCNLJWUIOIMMF-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 206010002383 Angina Pectoris Diseases 0.000 description 1
- 101710129690 Angiotensin-converting enzyme inhibitor Proteins 0.000 description 1
- 102000004881 Angiotensinogen Human genes 0.000 description 1
- 108090001067 Angiotensinogen Proteins 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 206010008111 Cerebral haemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 1
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 108010061435 Enalapril Proteins 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- MMFKFJORZBJVNF-UWVGGRQHSA-N His-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 MMFKFJORZBJVNF-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- QSXSHZIRKTUXNG-STECZYCISA-N Ile-Val-Tyr Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 QSXSHZIRKTUXNG-STECZYCISA-N 0.000 description 1
- 102000001399 Kallikrein Human genes 0.000 description 1
- 108060005987 Kallikrein Proteins 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 1
- 108090000783 Renin Proteins 0.000 description 1
- 102100028255 Renin Human genes 0.000 description 1
- 241000269851 Sarda sarda Species 0.000 description 1
- 241001125046 Sardina pilchardus Species 0.000 description 1
- 241000893841 Schlechterella abyssinica Species 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000032851 Subarachnoid Hemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 description 1
- 244000191914 Triticum persicum Species 0.000 description 1
- 240000002805 Triticum turgidum Species 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- BZWUSZGQOILYEU-STECZYCISA-N Val-Ile-Tyr Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 BZWUSZGQOILYEU-STECZYCISA-N 0.000 description 1
- 240000006677 Vicia faba Species 0.000 description 1
- 235000010749 Vicia faba Nutrition 0.000 description 1
- 240000004922 Vigna radiata Species 0.000 description 1
- 235000006582 Vigna radiata Nutrition 0.000 description 1
- 235000007244 Zea mays Nutrition 0.000 description 1
- 229920002494 Zein Polymers 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003276 anti-hypertensive effect Effects 0.000 description 1
- 229940124572 antihypotensive agent Drugs 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- FAKRSMQSSFJEIM-RQJHMYQMSA-N captopril Chemical compound SC[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O FAKRSMQSSFJEIM-RQJHMYQMSA-N 0.000 description 1
- 229960000830 captopril Drugs 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 206010008118 cerebral infarction Diseases 0.000 description 1
- 208000026106 cerebrovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 235000020965 cold beverage Nutrition 0.000 description 1
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 235000008504 concentrate Nutrition 0.000 description 1
- 235000013409 condiments Nutrition 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 230000008602 contraction Effects 0.000 description 1
- 235000014510 cooky Nutrition 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010612 desalination reaction Methods 0.000 description 1
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 239000012156 elution solvent Substances 0.000 description 1
- GBXSMTUPTTWBMN-XIRDDKMYSA-N enalapril Chemical compound C([C@@H](C(=O)OCC)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 GBXSMTUPTTWBMN-XIRDDKMYSA-N 0.000 description 1
- 229960000873 enalapril Drugs 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 235000019688 fish Nutrition 0.000 description 1
- 239000010200 folin Substances 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 108010016268 hippuryl-histidyl-leucine Proteins 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010025306 histidylleucine Proteins 0.000 description 1
- 239000008240 homogeneous mixture Substances 0.000 description 1
- 229910000040 hydrogen fluoride Inorganic materials 0.000 description 1
- -1 hydrogen fluoride anhydride Chemical class 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 108010060857 isoleucyl-valyl-tyrosine Proteins 0.000 description 1
- 235000015110 jellies Nutrition 0.000 description 1
- 150000002576 ketones Chemical class 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 210000002464 muscle smooth vascular Anatomy 0.000 description 1
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- 239000005445 natural material Substances 0.000 description 1
- 201000009925 nephrosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 229940054441 o-phthalaldehyde Drugs 0.000 description 1
- 229920002113 octoxynol Polymers 0.000 description 1
- 229940126701 oral medication Drugs 0.000 description 1
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 1
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- ZWLUXSQADUDCSB-UHFFFAOYSA-N phthalaldehyde Chemical compound O=CC1=CC=CC=C1C=O ZWLUXSQADUDCSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 150000003147 proline derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 1
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 1
- 230000013777 protein digestion Effects 0.000 description 1
- 229960000948 quinine Drugs 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 235000019512 sardine Nutrition 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 235000021055 solid food Nutrition 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 230000035488 systolic blood pressure Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 235000015961 tonic Nutrition 0.000 description 1
- 230000001256 tonic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005526 vasoconstrictor agent Substances 0.000 description 1
- 229940124549 vasodilator Drugs 0.000 description 1
- 239000003071 vasodilator agent Substances 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 239000005019 zein Substances 0.000 description 1
- 229940093612 zein Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/08—Tripeptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/08—Tripeptides
- C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
- C07K5/0804—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
- C07K5/0808—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms, e.g. Val, Ile, Leu
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- A61K38/06—Tripeptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/55—Protease inhibitors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/12—Antihypertensives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
Abstract
Un tripéptido que tiene una secuencia de aminoácidos Leu-Val-Tyr.
Description
Péptidos inhibidores de enzima conversora de angiotensina.
La presente invención se refiere a un péptido que inhibe la enzima conversora de angiotensina y que es por lo tanto útil como un ingrediente de alimentos sanos y fármacos que tienen un efecto hipotensivo.
El número de pacientes con hipertensión, que es un ejemplo típico de enfermedades relacionadas con el estilo de vida, está aumentando cada año. Se sabe que la hipertensión induce diversas complicaciones tales como hemorragia cerebral, hemorragia subaracnoidea, infarto cerebral, infarto de miocardio, angina, nefroesclerosis y así sucesivamente. Por lo tanto, se han realizado diversos estudios sobre el mecanismo de aparición de hipertensión.
Como sistemas reguladores de la presión sanguínea, el sistema de renina-angiotensina relacionado con el aumento de la presión sanguínea y el sistema de calicreína-quinina relacionado con la reducción de la presión sanguínea desempeña papeles importantes. En el sistema de renina-angiotensina, el angiotensinógeno secretado del hígado se convierte en angiotensina I por la renina producida en el riñón. La angiotensina I se convierte adicionalmente en angiotensina II por enzima conversora de angiotensina (ACE). La angiotensina II induce la contracción de músculos lisos vasculares y de este modo eleva la presión sanguínea. Por otro lado, la calicreína en el sistema hipotensivo actúa en quininógeno y produce de este modo bradiquinina. La bradiquinina tiene un efecto vasodilatador y reduce la presión sanguínea. Sin embargo, ACE tiene un efecto de degradación de bradiquinina. Es decir, se sabe que ACE participa en el aumento de la presión sanguínea a través de los dos efectos descritos anteriormente, es decir, produciendo angiotensina II que es un péptido vasopresor e inactivando bradiquinina que es un péptido hipotensivo. Por lo tanto, es posible reducir el aumento de la presión sanguínea suprimiendo la actividad enzimática de ACE. Se han empleado ampliamente derivados de prolina tales como captoprilo y enalaprilo desarrollados como inhibidores de ACE, en el tratamiento de hipertensión.
En años recientes, se ha indicado que los péptidos obtenidos digiriendo materiales alimentarios con enzimas tienen una actividad inhibidora de ACE. Por ejemplo, se ha presentado un gran número de tales productos de digestión, por ejemplo, un producto de digestión con colagenasa de gelatina (Divulgación Pública de Patente Japonesa SHO 52148631), un producto de digestión con tripsina de caseína (Divulgación Pública de Patente Japonesa SHO 58109425, Divulgación Pública de Patente Japonesa SHO 59-44323, Divulgación Pública de Patente Japonesa SHO 60-23086, Divulgación Pública de Patente Japonesa SHO 60-23087, Divulgación Pública de Patente Japonesa SHO 61-36226 y Divulgación Pública de Patente Japonesa SHO 61-36227), un producto de digestión con termolisina de zeína (Divulgación Pública de Patente Japonesa SHO 2-32127), un producto de digestión con pepsina de músculo de sardina (Divulgación Pública de Patente Japonesa HEI 3-11097), un producto de digestión de termolisina de bonito seco (Divulgación Pública de Patente Japonesa HEI 4-144696), un producto de digestión con termolisina de proteína de sésamo (Divulgación Pública de Patente Japonesa de HEI 8-231588), un producto de digestión con
pepsina de -caseína (Divulgación Pública de Patente Japonesa 8-269088) y similares. Estos péptidos inhibidores de ACE, que son de origen alimentario, tienen ventajas significativas, es decir, presentan pocos problemas de seguridad (es decir, efectos secundarios, toxicidad, etc.) y son comestibles como alimentos habituales. Sin embargo, se ha indicado que los productos peptídicos descritos anteriormente comprenden principalmente péptidos de 5 o más aminoácidos (Divulgación Pública de Patente Japonesa SHO 52-148631, Divulgación Pública de Patente Japonesa SHO 58-109425, Divulgación Pública de Patente Japonesa SHO 5944323, Publicación de Patente Japonesa SHO 60-23086, Divulgación Pública de Patente Japonesa SHO 61-36226, Divulgación Pública de Patente Japonesa SHO 61 -36227, Divulgación Pública de Patente Japonesa HEI 3-11097, Patente Japonesa Nº 3135812 y Divulgación Pública de Patente Japonesa HEI 8-269088). Se ha indicado que los péptidos que consistían en cadenas de aminoácidos más largas no podían conseguir un efecto hipotensivo del nivel esperado basándose en la fuerte actividad inhibidora de ACE in vitro, probablemente debido a que son susceptibles a digestión por enzimas digestivas en el cuerpo y por lo tanto pierden la actividad inhibidora de ACE o, incluso si permanecen sin digerir, no se absorben fácilmente debido a sus estructuras moleculares voluminosas.
El documento EP-A-1 092 724 describe una composición inhibidora de ACE que contiene péptidos obtenidos digiriendo una carne de pescado con enzima termolisina.
El documento EP-A-1 018 341 describe tripéptidos inhibidores de ACE obtenidos por tratamiento de un material alimentario como leche, maíz, trigo y soja con bacterias de ácido láctico.
El documento EP-A-1 445 606 describe péptidos inhibidores de ACE por tratamiento de un extracto de proteína de maíz con una enzima específica, tal como papaína o termolisina.
El documento WO-A-01/68115 describe un proceso para la preparación de péptidos que tienen una actividad inhibidora de ACE. El proceso comprende formar una mezcla homogénea de una fuente de alimento como soja, maíz, trigo y arroz, ajustar el pH y mezclar un agente de escisión selectivo, tal como termolisina.
H. Ohno y K. Mitsutani describen en Gekkan Fudo Kemiraku (Compuestos Químicos Alimentarios), 2002, 18 (3), 1115 el efecto antihipertensivo de péptido del sésamo.
En consecuencia, un objeto de la presente invención es proporcionar un tripéptido inhibidor de ACE que no se digiere fácilmente por enzimas digestivas cuando se toma por vía oral y por lo tanto tiene menor tendencia a perder la actividad inhibidora de ACE in vivo.
En la presente invención, también se pretende proporcionar composiciones comestibles (alimento/bebida), inhibidores de enzima conversora de angiotensina y agentes hipotensivos que comprenden el tripéptido descrito anteriormente.
La presente invención se resume por las siguientes realizaciones preferidas:
- 1.
- El tripéptido que tiene la secuencia de aminoácidos Leu-Val-Tyr.
- 2.
- El tripéptido de acuerdo con el artículo 1 para su uso en la inhibición de enzima conversora de angiotensina (ACE).
- 3.
- El tripéptido de acuerdo con el artículo 1 para su uso en un método para prevenir o tratar la hipertensión o suprimir el riesgo de elevación de la presión sanguínea por ingestión oral del péptido.
- 4.
- El uso del tripéptido de acuerdo con el artículo 1 en alimentos o bebidas.
- 5.
- El uso de acuerdo con el artículo 4 en el que los alimentos o bebidas comprenden de 0,001 a 100 mg de dicho tripéptido en una dosis de consumo única.
- 6.
- El tripéptido para su uso de acuerdo con el artículo 2 o 3 en una cantidad de 0,001 a 100 mg en una dosis de consumo único para administración oral.
La Figura 1 es un gráfico que muestra el resultado de un examen sobre el efecto hipotensivo del péptido de acuerdo con la presente invención con el uso de ratas hipotensivas espontáneas.
Los presentes inventores buscaron péptidos inhibidores de ACE que consistían en no más de 3 aminoácidos, asumiendo que los productos de digestión con termolisina de materiales alimentarios contendrían péptidos capaces de superar los problemas anteriormente descritos. Como resultado, consiguieron descubrir 3 tripéptidos en un producto de digestión con termolisina de sésamo, teniendo dichos tripéptidos una actividad inhibidora de ACE y mostrando un efecto hipotensivo en un experimento animal. Estos 3 tripéptidos tienen respectivamente las secuencias de aminoácidos Leu-Ser-Ala, Val-lle-Tyr y Leu-Val-Tyr de las que el tripéptido Leu-Val-Tyr es la materia objeto de la presente memoria descriptiva.
La presente invención posibilita además el uso terapéutico y no terapéutico del tripéptido como inhibidor de enzima conversora de angiotensina y agente hipotensivo.
El tripéptido de acuerdo con la presente invención puede producirse por síntesis química. Sin embargo, en una realización de la invención en la que el tripéptido se añade a alimentos, bebidas, o fármacos orales para aprovechar su actividad inhibidora de ACE, se prefiere producir una composición comestible enriquecida con el tripéptido anteriormente descrito digiriendo proteína vegetal que se origina por ejemplo en sésamo con termolisina y purificando adicionalmente la misma.
Como una fuente de proteínas vegetales, se pueden usar tejidos vegetales ricos en proteínas (preferentemente semillas), por ejemplo, cereales tales como arroz, trigo, cebada, avena y maíz, o judías tales como alubia, haba, soja y frijol chino y sésamo.
Cuando el péptido de acuerdo con la invención deba obtenerse por digestión con termolisina, el procedimiento de tratamiento varía dependiendo de las propiedades del material de partida. Se prefiere que, como un pretratamiento, el material primero se desgrase, por ejemplo, retirando el jugo exprimiendo o extrayendo la grasa con un disolvente tal como un alcohol, cetona o hexano. Para mejorar la eficacia de la digestión del material de partida con termolisina, también se prefiere que el material de partida se muela finamente y después se suspenda en agua con agitación. En el caso de una proteína apenas soluble, también es posible emplear otro pretratamiento tal como adición de hidróxido sódico o calentamiento para de este modo disolver uniformemente o suspender la proteína. Después se añade termolisina a la misma en una cantidad apropiada, preferentemente de 500 a 50.000 UP por g de la proteína y la reacción de digestión de la proteína se lleva a cabo a pH 5 a 9, a una temperatura de 10 a 80 ºC, durante 0,5 a 48
horas bien en un estado estacionario o bien con agitación. (“UP” significa “unidad de proteasa” y 1 UP se define
como la cantidad de una enzima que proporciona un aumento en color de Folin sin proteínas equivalente a 1 tirosina por minuto usando caseína de la leche como el sustrato a pH 7,2 y a 35 ºC). Para examinar si se ha producido o no suficiente progreso de la reacción (es decir, la reacción es suficiente para obtener los tripéptidos
pretendidos), puede usarse un método que comprende “aplicar la mezcla de reacción líquida a cromatografía líquida
de alto rendimiento usando una columna ODS y determinando el patrón de elución midiendo la absorbancia a 210
nm”. La reacción se detiene añadiendo, por ejemplo, ácido clorhídrico. Como alternativa, la termolisina puede
inactivarse por calentamiento. También es posible detener la reacción tanto añadiendo ácido clorhídrico como calentando. La mezcla de reacción líquida se somete a centrifugación, filtración, etc. y se retira el precipitado. El filtrado obtenido de este modo se neutraliza con hidróxido sódico o ácido clorhídrico y después se concentra. Además, pueden retirarse aromas extraños (por ejemplo, amargor, aspereza, olor desagradable, etc.) si es necesario tratándolo con carbón activado. Los péptidos de sésamo obtenidos de este modo contienen Leu-Ser-Ala, Val-lle-Tyr y Leu-Val-Tyr cada uno en una cantidad de 0,001% en peso a 0,1% en peso.
El producto de digestión con termolisina obtenido de la manera descrita anteriormente puede usarse como la composición de tripéptido de la invención con o sin un tratamiento adicional con una resina de intercambio iónico, una resina polimérica altamente porosa, etc. para retirar proteínas de alto peso molecular, para proporcionar de este modo un producto parcialmente purificado rico en los tripéptidos de la presente invención. Estos productos de digestión y productos parcialmente purificados en general se denominarán en ocasiones en lo sucesivo en este
documento “composición rica en tripéptidos”. Dicha composición puede tratarse adicionalmente, si es necesario, por
carbón activado para retirar aromas extraños (por ejemplo, amargor, aspereza, olor desagradable, etc.) antes de su uso.
Para obtener una preparación purificada de los péptidos de la invención, el concentrado descrito anteriormente se somete a cromatografía en columna de filtración en gel, cromatografía con el uso de una resina de intercambio iónico o una resina polimérica altamente porosa, cromatografía de afinidad, etc. y se combinan fracciones peptídicas de la invención que tienen la actividad inhibidora de ACE. A continuación, las fracciones activas combinadas pueden purificarse por un método habitualmente empleado en la purificación de péptidos, por ejemplo, cromatografía líquida de alto rendimiento con el uso de una columna de fase inversa tal como una columna ODS o una columna C30 para proporcionar de este modo formas sencillas de los péptidos en un estado sustancialmente puro. Los tripéptidos de la invención pueden obtenerse no solamente del sésamo (por ejemplo, Sesamum indicum L.) sino también de cereales tales como el arroz (por ejemplo, Oryza sativa L.), trigo (por ejemplo, Triticum aestivum L., T. durum Desf., T. turgidum L., T. pyramidale (Delile) Perciv. non Delile ex Schult, T. abyssinicum Vavilov y T. carthlicum Nevski), cebada (por ejemplo, Hordeum vulgare L.), avena (por ejemplo, Avena sativa L.) o maíz (por ejemplo, Zea mays L),
o judías tales como alubia (por ejemplo, Phaseolus vulgaris L), haba (por ejemplo, Vicia faba L), soja (por ejemplo, Glycine max (L.) Merrill) o frijol chino (por ejemplo, Vigna radiata (L.) R. Wilcz.) por el método descrito anteriormente. La actividad inhibidora de ACE de los tripéptidos o composiciones ricas en tripéptidos puede medirse, por ejemplo, mediante un método de ensayo in vitro y/o un método de ensayo in vivo como se describirá en los Ejemplos posteriores de este documento.
Cuando el péptido de la invención se prepara por síntesis químicas, la síntesis puede llevarse a cabo por cualquiera del método de fase sólida y el método de fase líquida empleados convencionalmente en la síntesis de un péptido. El péptido de la invención obtenido por la síntesis puede purificarse por un procedimiento de purificación empleado habitualmente, por ejemplo, cromatografía líquida de alto rendimiento de fase inversa, cromatografía con el uso de una resina de intercambio iónico o una resina polimérica altamente porosa y cromatografía de afinidad.
El tripéptido obtenido de este modo y la composición enriquecida con el tripéptido tienen una fuerte actividad de inhibición de ACE y muestran el fuerte efecto inhibidor de ACE cuando se toman por vía oral. Por lo tanto, son útiles como inhibidores de ACE altamente potentes. Además, se absorben fácilmente por el tracto gastrointestinal y son relativamente estables ante el calor. Debido a estas características, también son aplicables a alimentos, bebidas y preparaciones medicinales en diversas formas.
En consecuencia, la presente invención posibilita el uso del tripéptido en una composición comestible que se espera que tenga un efecto inhibidor de enzima conversora de angiotensina.
En un caso en el que el tripéptido de la invención se usa en alimentos, bebidas o fármacos puede usarse un tripéptido suficientemente purificado de, por ejemplo, el producto de digestión con termolisina de la fracción proteica del sésamo, o se puede usar un producto sintetizado químicamente. Como alternativa, puesto que el tripéptido de la invención tiene una alta estabilidad y una fuerte actividad inhibidora de ACE, el producto parcialmente purificado descrito anteriormente o el producto de digestión con termolisina o el producto parcialmente purificado del mismo pueden usarse como tales como una composición rica en tripéptidos; en tal caso también se obtendrá una actividad inhibidora de ACE suficiente y por lo tanto esta es una realización preferida de la invención.
Se produce una composición comestible añadiendo el tripéptido anteriormente descrito en una cantidad de 0,001 mg a 100 mg, preferiblemente de 0,01 mg a 20 mg y más preferiblemente de 0,1 mg a 10 mg en una dosis de consumo única. El tripéptido de la invención está en forma de un sólido o un polvo que puede manipularse fácilmente y es altamente soluble en agua. Además, el tripéptido puede absorberse bien mediante el tracto gastrointestinal. A continuación, el tripéptido puede añadirse a alimentos en cualquier etapa por cualquier método sin restricción particular. Es decir, el tripéptido puede añadirse, por ejemplo, en forma de un polvo, una solución o una suspensión en la etapa de partida, la etapa intermedia o la etapa final de un proceso de producción de alimentos usando un método habitualmente empleado en el campo de la industria alimentaria. El consumo temporal, intermitente, continuo o diario de la composición comestible que contiene el tripéptido de la invención hace posible inhibir la enzima conversora de angiotensina y obtener, por ejemplo, un efecto hipotensivo. Los alimentos y bebidas pueden estar en forma de, por ejemplo, un sólido, un semifluido o un fluido. Los ejemplos de alimentos sólidos incluyen alimentos generales y alimentos sanos en forma de galletas, láminas, píldoras tales como comprimidos y cápsulas, gránulos, polvos y así sucesivamente. Los ejemplos de alimentos semifluidos incluyen productos en forma de pastas, gelatinas, geles y así sucesivamente. Los ejemplos de alimentos fluidos incluyen productos de bebidas generales y bebidas sanas en forma de zumos, bebidas frías, tés, bebidas tónicas y así sucesivamente. Tales alimentos o bebidas pueden proporcionarse en forma de una bebida de complemento nutricional o un condimento para permitirnos tomar continuamente los tripéptidos de la invención, suprimiendo de este modo el riesgo de aumento de la presión sanguínea.
Una composición medicinal contiene el tripéptido de la invención en una cantidad similar a la composición comestible como se ha descrito anteriormente. La composición medicinal puede administrarse temporalmente a un paciente hipertensivo para suprimir la enzima conversora de angiotensina en el cuerpo y obtener de este modo un efecto hipotensivo. Como alternativa, la composición medicinal puede administrarse continuamente de forma segura, puesto que el principio activo se origina en un material natural. Como ejemplo de las enfermedades que pueden tratarse y/o prevenirse por la composición medicinal puede mencionarse la hipertensión. Es preferible que la composición medicinal esté en forma de una preparación oral tal como comprimidos, cápsulas, polvos, gránulos o jarabes. Los ejemplos de preparaciones para administración parenteral incluyen soluciones asépticas para administrar por vía intravenosa, vía intraarterial, vía subcutánea, vía intramuscular o vía intranasal. Dicha solución puede estar en forma de un sólido seco que debe disolverse antes de su uso. Puede producirse una preparación de inyección disolviendo una cantidad eficaz del tripéptido en solución salina fisiológica y tratando en condiciones asépticas como se emplean habitualmente en la producción de preparaciones de inyección.
Ejemplos
Ahora se describirá la presente invención en más detalle por referencia a los siguientes Ejemplos.
Método para medir la actividad inhibidora de ACE.
En la presente invención, la actividad inhibidora de ACE (CI50) se midió de acuerdo con el siguiente método.
Tampón: HEPES 0,1 M, NaCI 0,3 M, Triton-X 0,01% (pH 8,3).
Enzima: ACE del pulmón de conejo (Sigma). Disuelta en el tampón anterior y ajustada a una concentración de 1 mU/50
Sustrato: Bz-Gly-His-Leu H2O (Peptides Institute Inc.). Se disolvieron 8,95 mg del sustrato en 1 ml de dimetil sulfóxido y se diluyeron adicionalmente 5 veces con agua (concentración final: 4 mM).
Se pipetearon 5
I de una muestra que contenía péptido de la invención en una microplaca de 96 pocillos. Después
de añadir 25 l del tampón y 10 l de la enzima, la mezcla se agitó minuciosamente y se incubó a 37 ºC durante 5 minutos. Después de añadir 10 l del sustrato, la mezcla se hizo reaccionar a 37 ºC durante 30 minutos. Después la reacción se detuvo añadiendo 40 l de NaOH 0,1 N. Después de añadir 20 l de una solución de metanol de oftalaldehído 1% y permitir que se mantuviera a temperatura ambiente durante 10 minutos, se añadieron 100 HCl 0,1 N y la mezcla resultante se incubó a 37 ºC durante 30 minutos. Después se determinó la cantidad de His-Leu formada por la hidrólisis por ACE excitando (a 355 nm) la sustancia fluorescente formada por la reacción entre el grupo amino en el resto de histidina y o-ftalaldehído y midiendo la longitud de onda de fluorescencia a 460 nm. Después se determinó el porcentaje de inhibición por el péptido de la invención de acuerdo con la siguiente ecuación y se calculó la actividad inhibidora de ACE (CI50).
Porcentaje de inhibición = {1-(A-a) / (B-b)}x100
A: Medición de fluorescencia cuando se añadió la muestra.
a: Medición de fluorescencia cuando se añadió la muestra y se añadió el tampón como un sustituto de la enzima.
B: Medición de fluorescencia cuando se añadió agua destilada como un sustituto de la muestra.
b: Medición de fluorescencia cuando se añadió agua destilada como un sustituto de la muestra y se añadió el tampón como un sustituto de la enzima.
Ejemplo 1: Producción y purificación de péptido
Se añadieron 2 l de agua a 100 g de sésamo desgrasado y el valor de pH de la mezcla resultante se ajustó a 12,0 a 12,5 añadiendo NaOH. Después de agitar a 55 ºC durante 1 hora, la mezcla se filtró para proporcionar un extracto proteico. Se añadió HCl al extracto proteico para ajustar el valor de pH a 4,0. Después de centrifugar se obtuvo la proteína del sésamo (peso seco: 19,8 g).
A 10 g de la proteína de sésamo obtenida, se añadieron 300 ml de agua y se ajustó el valor del pH de la mezcla a 7,5 con NaOH. Después se añadieron 10 mg de termolisina (Nacalai Tesque, 7000 UP/mg) a la misma y la mezcla se hizo reaccionar con agitación suave a 65 ºC durante 6 horas. Después de completar la reacción, se añadió HCl a la mezcla de reacción para ajustar a pH 4,0 y la termolisina se inactivó calentando a 90 ºC durante 10 minutos.
Después de calentar, el precipitado formado de este modo se retiró por centrifugación y el sobrenadante se filtró a través de papel de filtro (Toyo, Nº 2). El filtrado se liofilizó para proporcionar 5,9 g de un polvo de péptido.
Se disolvieron 80 mg de este polvo de péptido en 2 ml de solución de etanol al 10% y se sometió a cromatografía en columna de filtración en gel. Las condiciones empleadas fueron las siguientes.
Columna: Bio-Gel P-2 (15 mm ID x 820 mm L, Bio-Rad).
Eluyente: etanol 10%.
Caudal: 0,15 ml/min.
Detección: UV 210 nm.
El eluato de la columna se recogió en fracciones a intervalos de 15 minutos con el uso de un recolector de fracciones. La actividad inhibidora de ACE de cada fracción se midió de acuerdo con el método descrito anteriormente. Como resultado, la actividad inhibidora de ACE principal en las condiciones anteriores se observó en las fracciones 32 a 38. Estas fracciones se combinaron y se liofilizaron. Este procedimiento se repitió tres veces y se obtuvieron de este modo 37,5 mg de péptidos en total.
A continuación, se disolvieron 37,5 mg de los péptidos activos inhibidores de ACE obtenidos por la cromatografía en columna de filtración en gel Bio-Gel P-2 en 2 ml de agua purificada y se sometieron a cromatografía líquida de alto rendimiento con el uso de una columna ODS para fraccionar de este modo los péptidos. Las condiciones empleadas fueron las siguientes:
Columna: Develosil ODS-10 (20 mm ID x 250 mm L, Nomura Chemical).
Fase móvil: Tampón A: CH3CN 5%, TFA 0,1%, Tampón B: CH3CN 40%, TFA 0,1 %.
Gradiente: 0 a 20 minutos: Tampón B 0% 20 a 80 minutos: Tampón B 0 a 100%.
Caudal: 10 ml/min.
Detección: UV 210 nm.
En las condiciones anteriores, el eluato se recogió en fracciones a intervalos de 1 minuto con el uso de un recolector
de fracciones. Se pipeteó una parte de 5 l de cada fracción en una microplaca de 96 pocillos y se evaporó hasta sequedad con presión reducida. A continuación, el resto se disolvió en 5 l de agua purificada para proporcionar una muestra para medir la actividad inhibidora de ACE. A continuación se midió una actividad inhibidora de ACE de cada fracción de acuerdo con el método descrito anteriormente. Como resultado, las fracciones 39, 52 y 54 mostraron fuertes actividades inhibidoras de ACE. Las tres fracciones se liofilizaron y de este modo se obtuvo una cantidad pequeña de péptidos de cada fracción.
Purificación de péptido inhibidor de ACE en la fracción 39 (Ejemplo de Referencia)
El péptido liofilizado de la fracción 39 se disolvió en 200 l de agua purificada y se sometió a cromatografía líquida de alto rendimiento con el uso de una Columna C30 para fraccionar de este modo los péptidos. Las condiciones empleadas fueron las siguientes.
Columna: Develosil C30-UG-5 (10 mm ID x 250 mm L, Nomura Chemical).
Fase móvil: Tampón: CH3CN 10%, TFA 0,1%.
Caudal: 4 ml/min.
Detección: UV 210 nm.
En las condiciones anteriores, el eluato se recogió en fracciones a intervalos de 15 segundos con el uso de un recolector de fracciones. Se pipeteó una parte de 5 l de cada fracción en una microplaca de 96 pocillos y se evaporó hasta sequedad con presión reducida. Después, se disolvió el resto en 5 l de agua purificada para proporcionar una muestra para medir la actividad inhibidora de ACE. Después se midió la actividad inhibidora de ACE de cada fracción de acuerdo con el método descrito anteriormente. Como resultado, las fracciones 44 y 45 mostraron fuertes actividades inhibidoras de ACE. Las dos fracciones se liofilizaron por separado y de este modo se obtuvo una cantidad pequeña de péptidos de cada fracción. A continuación estas fracciones se sometieron a análisis de aminoácidos y análisis de TOF MS/MS. Como resultado, se descubrió que el péptido de las fracciones 44 y 45 era Leu-Ser-Ala.
Purificación de péptido inhibidor de ACE en la fracción 52 (Ejemplo de Referencia)
El péptido liofilizado de la fracción 52 se disolvió en 200
l de agua purificada y se sometió a cromatografía líquida de alto rendimiento con el uso de una Columna C30 para fraccionar de este modo los péptidos. Las condiciones empleadas fueron las siguientes.
Columna: Develosil C30-UG-5 (10 mm ID x 250 mm L).
Fase móvil: Tampón: CH3CN 14%, TFA 0,1%.
Caudal: 4 ml/min.
Detección: UV210 nm.
En las condiciones anteriores, el eluato se recogió en fracciones a intervalos de 15 segundos con el uso de un recolector de fracciones. Se pipeteó una parte de 5 l de cada fracción en una microplaca de 96 pocillos y se evaporó hasta sequedad con presión reducida. A continuación, el resto se disolvió en 5 l de agua purificada para proporcionar una muestra para medir la actividad inhibidora de ACE. A continuación la actividad inhibidora de ACE de cada fracción se midió de acuerdo con el método descrito anteriormente. Como resultado, las fracciones 89 y 90 y las fracciones 96 y 97 mostraron fuertes actividades inhibidoras de ACE. Las cuatro fracciones se liofilizaron por separado y de este modo se obtuvo una cantidad pequeña de péptido de cada fracción. A continuación, estas fracciones se sometieron a análisis de aminoácidos y análisis TOF MS/MS.
Como resultado, se descubrió que el péptido de las fracciones 89 y 90 era Ile-Val-Tyr, mientras que el péptido de las fracciones 96 y 97 era Val-lle-Tyr.
Purificación de péptido inhibidor de ACE en la fracción 54.
El péptido liofilizado de la fracción 54 se disolvió en 200 l de agua purificada y se sometió a cromatografía líquida de alto rendimiento con el uso de una Columna C30 para fraccionar de este modo los péptidos. Las condiciones empleadas fueron las siguientes.
Columna: Develosil C30-UG-5 (10 mm ID x 250 mm L, Nomura Chemical).
Fase móvil: Tampón: CH3CN 17%, TFA 0,1%.
Caudal: 4 ml/min.
Detección: UV 210 nm.
En las condiciones anteriores, el eluato se recogió en fracciones a intervalos de 15 segundos con el uso de un
recolector de fracciones. Se pipeteó una parte de 5 l de cada fracción en una microplaca de 96 pocillos y se evaporó hasta sequedad con presión reducida. A continuación, el resto se disolvió en 5 l de agua purificada para proporcionar una muestra para medir la actividad inhibidora de ACE. Después la actividad inhibidora de ACE de cada fracción se midió de acuerdo con el método descrito anteriormente. Como resultado, las fracciones 69 a 73 mostraron fuertes actividades inhibidoras de ACE. Las cinco fracciones se liofilizaron por separado y de este modo se obtuvo una cantidad pequeña de péptido de cada fracción. A continuación, las fracciones 69, 70, 72 y 73 entre ellas se sometieron a análisis de aminoácidos y análisis de TOF MS/MS. Como resultado, se descubrió que el péptido de cada una de estas fracciones era Leu-Val-Tyr.
Ejemplo 2: Producción de péptidos por síntesis química
Usando un sintetizador peptídico automático (Modelo ABI 430) fabricado por Applied Biosystems, se sintetizó una resina peptídica protegida pretendida comenzando con el extremo C terminal y extendiendo la cadena peptídica sucesivamente por el método BOC de acuerdo con el programa.
Después de terminar la construcción del péptido en la resina, se secó la resina peptídica protegida. El péptido protegido obtenido de este modo se desprotegió y el péptido se retiró del soporte de resina tratándolo con fluoruro de hidrógeno anhídrido (HF/p-Cresol 8:2 v/v, 60 minutos). El péptido en bruto obtenido de este modo se extrajo con ácido acético 90% y después se liofilizó para proporcionar un sólido en polvo. El péptido en bruto obtenido de este modo se purificó además por cromatografía líquida de alto rendimiento con el uso de una Columna ODS y de este modo se obtuvo el péptido pretendido.
Columna: YMC-Pack ODS-2 (30 mm ID x 250 mm L, YMC).
Fase móvil: Tampón A: CH3CN 5%, TFA 0,1 %. Tampón B: CH3CN 40%, TFA 0,1 %.
Gradiente: 0 a 10 minutos: Tampón B 0% 10 a 90 minutos: Tampón B 0 a 100%.
Caudal: 20 ml/min.
Detección: UV 220 nm.
La pureza del péptido purificado de este modo se examinó por cromatografía líquida de alto rendimiento con el uso de una Columna ODS. Columna: Zorbax 300SB-C18 (4,6 mm ID x 150 mm L, Agilent Technologies). Fase móvil: Tampón A: CH3CN 1%, TFA 0,1%. Tampón B: CH3CN 60%, TFA 0,1%. 5 Gradiente: 0 a 25 minutos: Tampón B 0 a 100% Caudal: 1 ml/min. Detección: UV 220 nm. Síntesis de Leu-Ser-Ala (Ejemplo de Referencia) Usando resina Boc-Ala (BrZ) (0,5 mmol) como el soporte de resina de aminoácidos de partida, la cadena peptídica
10 se extendió con el uso de partes 2 mM de los derivados de aminoácidos Boc-Ser y Boc-Leu. Después se obtuvo Leu-Ser-Ala purificado por el método de purificación descrito anteriormente en el Ejemplo 2. La pureza del producto purificado medida por el método descrito anteriormente en el Ejemplo 2 fue del 99,0%.
Síntesis de Val-lle-Tyr (Ejemplo de Referencia) Usando resina Boc-Tyr (BrZ) (0,5 mmol) como el soporte de resina de aminoácidos de partida, se extendió una 15 cadena peptídica con el uso de partes 2 mM de los derivados de aminoácidos Boc-Ile y Boc-Val. Después se obtuvo
Val-Ile-Tyr purificado por el método de purificación descrito anteriormente en el Ejemplo 2. La pureza del producto purificado medida por el método descrito anteriormente en el Ejemplo 2 fue del 98,8%. Síntesis de Leu-Val-Tyr Usando resina Boc-Tyr (BrZ) (0,5 mmol) como el soporte de resina de aminoácidos de partida, se extendió una
20 cadena peptídica con el uso de partes 2 mM de los derivados de aminoácidos Boc-Val y Boc-Leu. Después se obtuvo Leu-Val-Tyr purificado por el método de purificación descrito anteriormente en el Ejemplo 2. La pureza del producto purificado medida por el método descrito anteriormente en el Ejemplo 2 fue del 99,2%.
Ejemplo 3: Medición de la actividad inhibidora de ACE del péptido Las actividades inhibidoras de ACE de los 3 péptidos obtenidos en el Ejemplo 2 se midieron de acuerdo con el 25 método descrito anteriormente y se determinaron los valores de CI50. La tabla 1 muestra los resultados. Como control, se midió también la actividad inhibidora de ACE del polvo de péptido de sésamo obtenido en el Ejemplo 1 y se determinó el valor de CI50 del mismo. Tabla 1
Péptido Actividad inhibidora (CI50)
g/ml
M
Leu-Ser-Ala (Ejemplo de Referencia) 2,4 8,4 Val-lle-Tyr (Ejemplo de Referencia) 1,6 4,2 Leu-Val-Tyr 0,84 2,1 Polvo de péptido -50,3
Ejemplo 4: Efecto hipotensivo del péptido en rata hipertensiva espontánea
Se sometieron a ayunas durante una noche a ratas SHR de 17 a 22 semanas de edad. Después se administraron por vía oral cada uno de los 3 péptidos obtenidos en el Ejemplo 2 en una dosis de 1 mg/kg. A un grupo de control, se le administró por vía oral la misma cantidad de agua para comparación. Antes y hasta 24 horas después de la
35 administración, se midieron los cambios de la presión sanguínea sistólica (BP-98A, SOFTRON). La Figura 1 muestra los resultados.
Ejemplo 5
Usando los productos sintéticos del Ejemplo 2 se produjo una bebida de té de cereales a partir de los siguientes ingredientes. Composición:
cebada tostada 60 g
agua caliente 2000 ml
Péptidos del Ejemplo 2
Leu-Ser-Ala 19 mg
Val-lle-Tyr 18 mg
Leu-Val-Tyr 18 mg
Método de producción:
5 Se añadió agua caliente a cebada tostada y se calentó a 90 ºC durante 5 minutos. Después de enfriar a 40 ºC, se filtró la mezcla. Después se añadió agua al extracto para ajustar el volumen a 2000 ml. A continuación, se añadieron los péptidos anteriores y se disolvieron agitando para proporcionar una bebida de té de cereales.
Ejemplo 6: Aislamiento y cuantificación de Leu-Val-Tyr de semillas vegetales tratadas con proteinasa
Se pesaron 25 g de granos de arroz y avena respectivamente, que después se molieron para proporcionar polvos.
10 Se añadieron 50 ml de hexano a cada harina y el disolvente se retiró a través de un papel de filtro (Whattman, Nº 1). Se repitió el mismo tratamiento con hexano 4 veces en total. Se retiró el hexano del resto en el papel de filtro para proporcionar 18,8 g de un polvo de arroz desgrasado y 15,9 g de un polvo de avena desgrasado, respectivamente.
Se pesaron 10 g de cada una de las harinas desgrasadas, se suspendieron en 200 ml de NaOH 0,01 N y se agitó a 55 ºC durante 1 hora. Después de enfriar a temperatura ambiente, la suspensión se filtró a través de un papel de
15 filtro (Whattman, Nº 1). El filtrado se ajustó a pH 4,0 mediante una adición de HCl 0,1 N. El precipitado formado de este modo se recogió por centrifugación, se liofilizó para producir 0,38 g y 0,57 g de polvos de proteína en bruto de arroz y avena, respectivamente.
Se pesaron 0,2 g del polvo obtenido y se suspendieron en 10 ml de CaCI2 0,1 mM. La suspensión se ajustó a pH 7,5 y se añadieron 0,2 mg de termolisina (7.000 UP/mg, Nacalai Tesque) a la misma para efectuar la reacción
20 enzimática con agitación suave a 65 ºC durante 6 horas. Después del periodo de reacción, el pH se ajustó a 4,0 por HCl 1 N y la termolisina se inactivó calentando la mezcla a 90 ºC durante 10 minutos. El precipitado formado por el calentamiento se retiró por centrifugación a 3.000 rpm durante 30 minutos. El sobrenadante se liofilizó para proporcionar polvos peptídicos de 28,6 mg de arroz y 87,8 mg de avena.
Se llevó a cabo aislamiento y cuantificación de Leu-Val-Tyr, como el péptido de la invención, de los polvos de 25 péptido del arroz y la avena obtenidos anteriormente como sigue.
i) Pretratamiento en Columna PD-10
Se pesaron 20 mg de cada uno de los polvos de péptido de arroz y avena, se disolvieron en ácido acético 0,1 N para
ser 5 mg/ml, se filtraron a través de un microfiltro (Millex-HV, tamaño de poro 0,45 m, diámetro de filtro 13 mm, Millipore Corporation) para retirar componentes insolubles. Se introdujo una parte de 2,5 ml del filtrado en una
30 Columna PD-10 (Columna de desalación, Amersham Biosciences) equilibrada con ácido acético 0,1 N. La columna se lavó con un volumen adicional de 3,5 ml de ácido acético 0,1 N. Después se recogió la fracción eluida con un volumen adicional de 3,0 ml de ácido acético 0,1 N, se evaporó hasta sequedad, se disolvió en 0,5 ml de agua y después se liofilizó.
ii) HPLC de filtración en gel con el uso de TSK-GEL G2000SWXL
35 La muestra de ensayo preparada por el pretratamiento en la Columna PD-10 se disolvió en 250 l de CH3CN 45%, TFA 0,1% para centrifugar a 2.000 rpm durante 5 minutos. El filtrado se filtró a través de un microfiltro (Millex-HV,
tamaño de poro 0,45 m, diámetro de filtro 13 mm, Millipore Corporation) para retirar componentes insolubles. Se cargó una parte de 50
l del filtrado a una columna de TSK-GEL G2000SWXL (7,8 x 300 mm, Tosoh Corporation) equilibrada con CH3CN 45%, TFA 0,1 %, y se realizó HPLC con CH3CN 45%, TFA 0,1 % (caudal 0,7
40 ml/minuto longitud de onda de detección 280 nm). Se recogió el eluato de 1 minuto entre 30 segundos antes y después del tiempo de retención, se evaporó hasta sequedad, se disolvió en 0,5 ml de agua y se liofilizó. El tiempo de retención de Leu-Val-Tyr se predeterminó sometiendo por separado a Leu-Val-Tyr sintético a HPLC en las mismas condiciones.
iii) HPLC inversa en Develosil C30-UG-5 (Cuantificación de Leu-Val-Tyr)
Leu-Val-Tyr en las fracciones peptídicas activas de la filtración en gel se analizó cuantitativamente por HPLC inversa en una Columna Develosil C30-UG-5 (3 x 150 mm, Nomura Chemical Co., Ltd.). La fracción de la HPLC de filtración
en gel en TSK-GEL G2000SWXL se disolvió en 250 l de CH3CN 5%, TFA 0,1%, se centrifugó a 2.000 rpm durante
5 5 minutos y el sobrenadante se filtró a través de un microfiltro (Millex-HV, tamaño de poro 0,45 m, diámetro de filtro 13 mm, Millipore Corporation) para retirar componente insolubles. Se cargó una parte de 50 l del filtrado en una Columna Develosil C30-UG-5 equilibrada con CH3CN 5 %, TFA 0,1% para realizar una cromatografía en las siguientes condiciones:
Disolvente de elución
0-5 minutos: CH3CN 5%, TFA 0,1%
5-10 minutos CH3CN 5-14%, TFA 0,1%
10-35 minutos: CH3CN 14%, TFA 0,1%
Caudal: 0,4 ml
10 Longitud de onda de detección: 280 nm Se recogió el pico de cada péptido de arroz y avena en la cromatografía en Columna de Develosil C30-UG-5, cuyo tiempo de retención correspondía al del auténtico Leu-Val-Tyr del péptido. La fracción se sometió a un análisis TOF MS y un análisis TOF MS/MS para confirmar que la fracción era Leu-Val-Tyr.
15 Se preparó una curva de calibración cargando diferentes cantidades del auténtico Leu-Val-Tyr a la misma Columna Develosil C30-UG-5 en las mismas condiciones que se han descrito anteriormente y representando las áreas pico frente a las cantidades cargadas.
Curva de Calibración Y = 249197X - 2150,6 (R2 = 0,9991)
Y: área de pico, X: cantidad de Leu-Val-Tyr (
g)
20 Las áreas pico de las fracciones de Leu-Val-Tyr de la cromatografía de Develosil C30-UG-5 de arroz y avena se aplicaron a la curva de calibración. Como resultado, se determinó que las cantidades de Leu-Val-Tyr en 1 mg del
péptido de arroz y avena eran 0,71 g y 1,05 g, respectivamente.
Claims (4)
- REIVINDICACIONES
- 1.
- Un tripéptido que tiene una secuencia de aminoácidos Leu-Val-Tyr.
-
- 2.
- Un tripéptido que tiene la secuencia de aminoácidos Leu-Val-Tyr para su uso en la inhibición de enzima conversora de angiotensina (ACE).
- 5 3. Un tripéptido que tiene la secuencia de aminoácidos Leu-Val-Tyr para su uso en un método para prevenir o tratar hipertensión o suprimir el riesgo de aumento de la presión sanguínea por ingestión oral del péptido.
-
- 4.
- El uso del tripéptido de acuerdo con la reivindicación 1 en alimentos o bebidas.
-
- 5.
- El uso de acuerdo con la reivindicación 4, en el que los alimentos o bebidas comprenden de 0,001 a 100 mg de dicho tripéptido en una dosis de consumo única.
- 10 6. El tripéptido para su uso de acuerdo con la reivindicación 2 o 3 en una cantidad de 0,001 a 100 mg en una dosis de consumo única para administración oral.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2003074488 | 2003-03-18 | ||
| JP2003074488 | 2003-03-18 | ||
| PCT/JP2004/003588 WO2004082709A1 (en) | 2003-03-18 | 2004-03-17 | Angiotensin-converting enzyme inhibitory peptides |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2400561T3 true ES2400561T3 (es) | 2013-04-10 |
Family
ID=33027809
Family Applications (3)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES08153738T Expired - Lifetime ES2400308T3 (es) | 2003-03-18 | 2004-03-17 | Péptidos inhibidores de enzima conversora de angiotensina |
| ES09172830T Expired - Lifetime ES2398788T3 (es) | 2003-03-18 | 2004-03-17 | Péptidos inhibidores de enzima conversora de angiotensina |
| ES04721339T Expired - Lifetime ES2400561T3 (es) | 2003-03-18 | 2004-03-17 | Péptidos inhibidores de enzima conversora de angiotensina |
Family Applications Before (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES08153738T Expired - Lifetime ES2400308T3 (es) | 2003-03-18 | 2004-03-17 | Péptidos inhibidores de enzima conversora de angiotensina |
| ES09172830T Expired - Lifetime ES2398788T3 (es) | 2003-03-18 | 2004-03-17 | Péptidos inhibidores de enzima conversora de angiotensina |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US7833985B2 (es) |
| EP (3) | EP1938832B1 (es) |
| JP (3) | JP4283848B2 (es) |
| KR (3) | KR101078628B1 (es) |
| CN (1) | CN100402089C (es) |
| AU (3) | AU2004222435B2 (es) |
| CA (3) | CA2743539C (es) |
| CY (1) | CY1114072T1 (es) |
| DK (1) | DK1605969T3 (es) |
| ES (3) | ES2400308T3 (es) |
| HK (1) | HK1084604A1 (es) |
| PL (3) | PL1938832T3 (es) |
| PT (1) | PT1605969E (es) |
| TW (3) | TWI411441B (es) |
| WO (1) | WO2004082709A1 (es) |
Families Citing this family (40)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP4046708B2 (ja) * | 2004-06-04 | 2008-02-13 | 明治製菓株式会社 | ３−アルケニルセフェム化合物の製造方法 |
| JP2006219420A (ja) * | 2005-02-10 | 2006-08-24 | Nagase Chemtex Corp | 抗高血圧剤 |
| EP1874140B1 (en) * | 2005-04-28 | 2011-02-09 | Unilever N.V. | Peptides having a health benefit and compositions comprising them |
| US20090304869A1 (en) * | 2005-04-28 | 2009-12-10 | Christianus Jacobus Van Platerink | Peptides Having an Ace Inhibiting Effect |
| EP1874129A1 (en) * | 2005-04-28 | 2008-01-09 | Unilever PLC | Peptides having an ace inhibiting effect |
| BRPI0612183A2 (pt) * | 2005-04-28 | 2010-10-26 | Unilever Nv | metionina-alanina-prolina e/ou isoleucina-treonina-prolina ou seus sais, seus usos, métodos de tratamento, medicamento, suplemento alimentìcio, alimento, composições, processos de produção de isoleucina-treonina-prolina ou seu sal, de produção de metionina-alanina-prolina ou seu sal e de produção de metionina-alanina-prolina e/ou isoleucina-treonina-prolina |
| DE602005018612D1 (de) * | 2005-05-24 | 2010-02-11 | Chr Hansen As | Isolierte Dipeptide mit ACE-Inhibitionseffekt |
| JP4994093B2 (ja) * | 2006-04-13 | 2012-08-08 | ロート製薬株式会社 | 育毛剤 |
| CN100456948C (zh) * | 2006-06-30 | 2009-02-04 | 北京三友汇智生物技术有限公司 | 一种燕麦肽及其提取方法 |
| KR100787949B1 (ko) * | 2007-08-29 | 2007-12-24 | 한양대학교 산학협력단 | 대두 발효 조성물의 제조방법 및 이 조성물로부터 유래된펩타이드 |
| JP2009073765A (ja) * | 2007-09-20 | 2009-04-09 | Nitsukoku Seifun Kk | アンジオテンシン変換酵素（ａｃｅ）阻害剤組成物及びその製造方法 |
| JP2010163400A (ja) * | 2009-01-19 | 2010-07-29 | Kikkoman Corp | 新規アンジオテンシン変換酵素阻害ペプチド |
| CN101618207B (zh) * | 2009-06-17 | 2011-08-03 | 中国科学院大连化学物理研究所 | 多肽在制备ace抑制剂及降血压药物中的应用 |
| WO2011007612A1 (ja) * | 2009-07-13 | 2011-01-20 | 不二製油株式会社 | 経口性抗炎症剤及び経口性抗炎症ペプチド |
| CN101696233B (zh) * | 2009-10-29 | 2012-02-01 | 吉林大学 | 蛋清蛋白血管紧张素转化酶抑制肽及其制备 |
| JP5654290B2 (ja) * | 2010-08-27 | 2015-01-14 | ユニチカ株式会社 | アンジオテンシン変換酵素阻害ペプチド及びその製造方法。 |
| CN102399261B (zh) * | 2010-09-07 | 2014-06-25 | 任发政 | 具有血管紧张素转化酶c-端选择性抑制活性的三肽及其应用和组合物 |
| CN102475884B (zh) * | 2010-11-29 | 2013-08-14 | 中国科学院大连化学物理研究所 | 四个多肽在制备ace抑制剂及降血压药物中的应用 |
| CN102276690B (zh) * | 2011-08-05 | 2013-03-20 | 成都中医药大学 | 降血压功能性多肽及其用途 |
| JP6296722B2 (ja) * | 2012-07-31 | 2018-03-20 | サンスター株式会社 | 米糠酵素処理組成物 |
| KR101481416B1 (ko) * | 2012-10-17 | 2015-01-13 | 건국대학교 산학협력단 | 안지오텐신 전환 효소 저해 활성을 갖는 펩타이드 |
| JP2014141462A (ja) * | 2012-12-27 | 2014-08-07 | Raffinee International Co Ltd | ペプチド、並びに、アンジオテンシン変換酵素阻害剤、抗高血圧剤、及び飲食品 |
| WO2014138304A1 (en) | 2013-03-08 | 2014-09-12 | Axiom Foods, Inc., | Rice protein supplements |
| US9820504B2 (en) | 2013-03-08 | 2017-11-21 | Axiom Foods, Inc. | Rice protein supplement and methods of use thereof |
| CN103172698B (zh) * | 2013-04-10 | 2015-02-18 | 华东理工大学 | 降血压多肽 |
| CN103242430B (zh) * | 2013-05-31 | 2014-10-08 | 南京中医药大学 | 血管紧张素转化酶抑制肽及其制备方法和应用 |
| CN103290086B (zh) * | 2013-06-25 | 2015-01-14 | 广州合诚实业有限公司 | 具有ace抑制活性的绿豆蛋白肽及其制备方法与应用 |
| CN104558109B (zh) * | 2013-10-21 | 2018-06-08 | 中国科学院大连化学物理研究所 | 源于油菜花粉的具有ace抑制活性的多肽化合物及应用 |
| CN104558110B (zh) * | 2013-10-21 | 2018-06-08 | 中国科学院大连化学物理研究所 | 具有ace抑制活性的多肽及其在降血压药物中的应用 |
| CN107417768B (zh) * | 2014-11-25 | 2021-01-29 | 烟台市华昕生物医药科技有限公司 | 一种从荠莱中分离获得的降血压多肽 |
| US10676505B2 (en) | 2016-06-16 | 2020-06-09 | Sunstar Inc. | Tripeptides having angiotensin converting enzyme inhibitory activity and uses thereof |
| CN110028550B (zh) * | 2016-07-07 | 2022-08-05 | 华东理工大学 | 降血压肽和降血压蛋白质及其应用 |
| CN110868870A (zh) | 2017-05-12 | 2020-03-06 | 艾斯姆食品公司 | 大米产物及制备它们的系统和方法 |
| WO2019006955A1 (zh) * | 2017-07-07 | 2019-01-10 | 广州世优生物科技有限公司 | 酸性、酰胺二肽在制备降血压药物或保健品中的应用 |
| CN110498833B (zh) * | 2019-08-30 | 2021-01-15 | 华南理工大学 | 一种具有ace抑制作用的三肽及其应用 |
| JP7391738B2 (ja) * | 2020-03-19 | 2023-12-05 | Ｋｉｓｃｏ株式会社 | ペプチド、及び苦味付与剤 |
| CN111548387B (zh) * | 2020-03-31 | 2020-12-18 | 华南农业大学 | 一种具有降血压功效的寡肽及其制备方法与应用 |
| CN111471086B (zh) * | 2020-04-16 | 2023-01-24 | 河南省农业科学院 | 芝麻多肽及其制备方法和应用 |
| CN111825754B (zh) * | 2020-07-16 | 2022-02-11 | 河南省农业科学院 | 一种从芝麻蛋白中获得的具有降血压与降血糖活性的多肽 |
| WO2022168413A1 (ja) * | 2021-02-04 | 2022-08-11 | ユーハ味覚糖株式会社 | デプレスタチン含有組成物の製造方法 |
Family Cites Families (35)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS52148631A (en) | 1976-06-01 | 1977-12-10 | Kitazato Daigaku Yakurigakubu | Enzym obstruction agent |
| DE3112394A1 (de) * | 1980-07-22 | 1982-07-08 | Eltreva AG, 4147 Aesch | "einrichtung zur luftregulierung einer energiefassade" |
| JPS6023085B2 (ja) | 1981-12-23 | 1985-06-05 | 工業技術院長 | アンジオテンシン転換酵素阻害剤 |
| US5156840A (en) * | 1982-03-09 | 1992-10-20 | Cytogen Corporation | Amine-containing porphyrin derivatives |
| US4867973A (en) * | 1984-08-31 | 1989-09-19 | Cytogen Corporation | Antibody-therapeutic agent conjugates |
| JPS6023086B2 (ja) | 1982-09-04 | 1985-06-05 | 工業技術院長 | アンジオテンシン転換酵素阻害剤 |
| JPS6023087A (ja) | 1983-07-20 | 1985-02-05 | Canon Inc | リボンカセツト |
| JPS6023086A (ja) | 1983-07-20 | 1985-02-05 | Canon Inc | リボンカセツト |
| DE3485587D1 (de) * | 1983-08-16 | 1992-04-23 | Univ Georgia Res Found | Herstellung von aminocyclopropancarbonsaeuren und von peptiden. |
| JPS6136227A (ja) | 1984-07-28 | 1986-02-20 | Agency Of Ind Science & Technol | アンジオテンシン転換酵素阻害剤 |
| JPS6136226A (ja) | 1984-07-28 | 1986-02-20 | Agency Of Ind Science & Technol | アンジオテンシン転換酵素阻害剤 |
| JPS6286741A (ja) | 1985-10-11 | 1987-04-21 | Mitsubishi Electric Corp | パタ−ンの位置合わせずれ量評価方法 |
| JP2805032B2 (ja) | 1988-07-27 | 1998-09-30 | 工業技術院長 | アンジオテンシン変換酵素阻害剤 |
| JP2873318B2 (ja) | 1989-03-14 | 1999-03-24 | 工業技術院長 | 血圧降下剤 |
| JPH0311097A (ja) | 1989-06-07 | 1991-01-18 | Senmi Ekisu Kk | 新規ペプチド |
| JPH0623086B2 (ja) | 1989-07-19 | 1994-03-30 | 花王株式会社 | 洗浄剤組成物 |
| EP0445606B1 (en) | 1990-02-27 | 1997-01-22 | The Agency of Industrial Science and Technology | Novel oligopeptides, pharmaceutical composition and food containing the same, and use of oligopeptides |
| JP3103363B2 (ja) * | 1990-03-30 | 2000-10-30 | 昭和産業株式会社 | 新規トリペプチド及び血圧降下剤 |
| JP3073762B2 (ja) | 1990-10-03 | 2000-08-07 | 日本合成化学工業株式会社 | アンギオテンシン変換酵素阻害剤含有組成物の製造方法 |
| JPH06136227A (ja) | 1992-10-22 | 1994-05-17 | Nippon Steel Chem Co Ltd | 熱可塑性樹脂組成物 |
| JP3357097B2 (ja) | 1992-10-27 | 2002-12-16 | 株式会社クラレ | 耐衝撃性メタクリル樹脂組成物 |
| JP2820868B2 (ja) | 1993-08-27 | 1998-11-05 | 日清食品株式会社 | アンジオテンシン変換酵素阻害蛋白分解物 |
| EP0722457B1 (fr) * | 1993-10-04 | 2002-01-02 | Institut Pasteur | Composes modifiant la transmission serotoninergique; applications diagnostiques et therapeutiques |
| US5558993A (en) * | 1994-06-17 | 1996-09-24 | The Regents Of The University Of California | Cloned Borrelia burgdorferi virulence protein |
| JP3135812B2 (ja) | 1995-03-01 | 2001-02-19 | 日清食品株式会社 | アンジオテンシン変換酵素阻害ペプチドおよびその製造方法 |
| JP3567012B2 (ja) | 1995-03-28 | 2004-09-15 | 雪印乳業株式会社 | 新規ペプチド及びその利用 |
| JP4727770B2 (ja) * | 1997-09-26 | 2011-07-20 | カルピス株式会社 | 尿中カテコールアミン低下、尿中ノルアドレナリン低下、尿中ドーパミン低下及びＦｉｓｃｈｅｒ比低下の少なくとも１つの軽減剤 |
| JP3028411B2 (ja) * | 1997-09-26 | 2000-04-04 | カルピス株式会社 | トリペプチド高生産性ラクトバチルス・ヘルベチカス乳酸菌 |
| EP1207897A2 (en) * | 1999-08-09 | 2002-05-29 | Tripep Ab | Pharmaceutical compositions containing tripeptides |
| JP3592593B2 (ja) * | 1999-10-15 | 2004-11-24 | 日本合成化学工業株式会社 | アンギオテンシン変換酵素阻害剤 |
| FI113741B (fi) * | 1999-11-01 | 2004-06-15 | Valio Oy | Menetelmä verenpainetta alentavia peptidejä sisältävän tuotteen valmistamiseksi |
| AU2001245547A1 (en) * | 2000-03-13 | 2001-09-24 | Monsanto Technology Llc | Process for producing peptide sequences possessing anti-hypertension activity |
| AU2001255501A1 (en) * | 2000-04-21 | 2001-11-07 | Monsanto Technology Llc | Blood-pressure reducing polypeptides containing vpp derived from microorganisms |
| WO2002062973A2 (en) * | 2001-02-07 | 2002-08-15 | Novozymes A/S | Lipase variants |
| JP4144696B2 (ja) | 2002-11-07 | 2008-09-03 | タイヨーエレック株式会社 | 遊技機 |
-
2004
- 2004-03-15 TW TW100111621A patent/TWI411441B/zh not_active IP Right Cessation
- 2004-03-15 TW TW093106867A patent/TWI328457B/zh not_active IP Right Cessation
- 2004-03-15 TW TW097129374A patent/TWI344371B/zh not_active IP Right Cessation
- 2004-03-17 EP EP08153738A patent/EP1938832B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2004-03-17 CA CA2743539A patent/CA2743539C/en not_active Expired - Fee Related
- 2004-03-17 KR KR1020117000079A patent/KR101078628B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2004-03-17 CA CA2526891A patent/CA2526891C/en not_active Expired - Fee Related
- 2004-03-17 AU AU2004222435A patent/AU2004222435B2/en not_active Ceased
- 2004-03-17 US US10/549,176 patent/US7833985B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2004-03-17 KR KR1020117000078A patent/KR101077801B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2004-03-17 PL PL08153738T patent/PL1938832T3/pl unknown
- 2004-03-17 ES ES08153738T patent/ES2400308T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2004-03-17 CN CNB2004800112694A patent/CN100402089C/zh not_active Expired - Lifetime
- 2004-03-17 EP EP09172830A patent/EP2145630B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2004-03-17 PL PL09172830T patent/PL2145630T3/pl unknown
- 2004-03-17 EP EP04721339A patent/EP1605969B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2004-03-17 DK DK04721339.2T patent/DK1605969T3/da active
- 2004-03-17 WO PCT/JP2004/003588 patent/WO2004082709A1/en active Application Filing
- 2004-03-17 ES ES09172830T patent/ES2398788T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2004-03-17 CA CA2743313A patent/CA2743313C/en not_active Expired - Fee Related
- 2004-03-17 KR KR1020057017447A patent/KR101119449B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2004-03-17 PL PL04721339T patent/PL1605969T3/pl unknown
- 2004-03-17 PT PT47213392T patent/PT1605969E/pt unknown
- 2004-03-17 JP JP2006507670A patent/JP4283848B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2004-03-17 ES ES04721339T patent/ES2400561T3/es not_active Expired - Lifetime
-
2006
- 2006-06-20 HK HK06107004.3A patent/HK1084604A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2008
- 2008-12-01 JP JP2008306249A patent/JP4369985B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2008-12-01 JP JP2008306269A patent/JP4369986B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
2009
- 2009-06-12 US US12/483,676 patent/US7943578B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2009-11-12 AU AU2009236034A patent/AU2009236034B2/en not_active Ceased
- 2009-11-12 AU AU2009236033A patent/AU2009236033B2/en not_active Ceased
-
2013
- 2013-04-26 CY CY20131100344T patent/CY1114072T1/el unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2400561T3 (es) | Péptidos inhibidores de enzima conversora de angiotensina | |
| KR20110060940A (ko) | 항염증성 펩티드 | |
| Matsui et al. | Antihypertensive peptides from natural resources | |
| JP5417405B2 (ja) | アンジオテンシン変換酵素阻害性降圧ペプチド組成物の製造方法 | |
| JP5416964B2 (ja) | 新規トリペプチドおよびそれらトリペプチドの製造法、ならびにアンジオテンシン変換酵素阻害物質の製造方法 | |
| WO2014002571A1 (ja) | アンジオテンシン変換酵素阻害ジペプチド |