ES2355565T3 - Nuevos nucleósidos o nucleótidos tricíclos como agentes terapéuticos. - Google Patents

Nuevos nucleósidos o nucleótidos tricíclos como agentes terapéuticos. Download PDF

Info

Publication number
ES2355565T3
ES2355565T3 ES04782317T ES04782317T ES2355565T3 ES 2355565 T3 ES2355565 T3 ES 2355565T3 ES 04782317 T ES04782317 T ES 04782317T ES 04782317 T ES04782317 T ES 04782317T ES 2355565 T3 ES2355565 T3 ES 2355565T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
alkyl
independently
compound
halogen
mmol
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Lifetime
Application number
ES04782317T
Other languages
English (en)
Inventor
Phillip Dan Cook
Gregory Ewing
Yi Jin
John Lambert
Marija Prhavc
Vasanthakumar Rajappan
Vivek K. Rajwanshi
Kandasamy Sakthivel
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Biota Scientific Management Pty Ltd
Original Assignee
Biota Scientific Management Pty Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Biota Scientific Management Pty Ltd filed Critical Biota Scientific Management Pty Ltd
Application granted granted Critical
Publication of ES2355565T3 publication Critical patent/ES2355565T3/es
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/23—Heterocyclic radicals containing two or more heterocyclic rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, not provided for in groups C07H19/14 - C07H19/22

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Un compuesto de la fórmula (I) que puede ser un D- o L-nucleótido o nucleósido A es O, S, CH2, NH, CHF o CF2; R 1 , R 2 , R 2', R 3 , R 3' y R 4 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, F, Cl, Br, I, OH, SH, NH2, NHOH, NHNH2, N3, COOH, CN, CONH2, C(S)NH2, COOR, R, OR, SR, SSR, NHR y NR2; en donde al menos uno de R 2 o R 2' no es H; R 4 ' es -L-R 5 ; L se selecciona del grupo que consiste en O, S, NH, NR, CY2O, CY2S, CY2NH, CY2, CY2CY2, CY2OCY2, CY2SCY2 y CY2NHCY2, en donde Y se selecciona del grupo que consiste en H, F, Cl, Br, alquilo, alquenilo y alquinilo, en donde el alquilo, el alquenilo y el alquinilo pueden contener cada uno opcionalmente uno o más heteroátomos; R 5 es OH, monofosfato, difosfato o trifosfato o un fosfonato, fosfoamidato o fosfoéster de los mismos; B es una base seleccionada del grupo de heterociclos que consiste en cada Z se selecciona independientemente del grupo que consiste en N, N-(BH2G) - M + , C-G, O, S, NR, >C=O, >C=S, >C=NH, >C=NR, >S=O, >S(O)2 y CH-G; en donde si Z es un participante en un enlace π, Z es independientemente N o C-G, y si Z no es un participante en un enlace π, Z es independientemente N-(BH2G) - M + , O, S, NR, >C=O, >C=S, >C=NH, >C=NR, >S=O, >S(O)2 y CH-G; X es O, S, SO, SO2, Se, SeO, SeO2, N, NH o NR; W es C, CH o N; en donde si W es un participante en un doble enlace (enlace π), W es C; en donde si W no es un participante en un doble enlace (enlace π), W es CH o N; en donde las líneas de trazos (---) indican un enlace π opcional; (BH2G) - M + es un par iónico y M + es un catión; G se selecciona del grupo que consiste en H, F, Cl, Br, I, OH, SH, NH2, NHOH, N3, COOH, CN, CONH2, C(S)NH2, C(=NH)NH2, R, OR, SR, NHR y NR2, cuando están presentes dos o más grupos G en una molécula, pueden ser iguales o diferentes entre sí; y R se selecciona del grupo que consiste en alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, acilo y aralquilo, que contienen opcionalmente uno o más heteroátomos.

Description

Campo de la Invención
La presente invención se refiere a nuevos nucleósidos y nucleótidos tricíclicos, su preparación y su uso para el tratamiento de una enfermedad infecciosa, incluyendo infecciones virales, y de trastornos proliferativos, incluyendo el 5 cáncer.
Antecedentes de la Invención
Las enfermedades virales son una importante amenaza para la salud humana y representan muchas enfermedades infecciosas graves. El virus de la hepatitis C (HCV), una causa importante de la hepatitis viral, ha infectado a más de 200 millones de personas en el mundo. El tratamiento actual de la infección por HCV está restringido 10 a inmunoterapia con interferón-α solo o en combinación con ribavirina, un análogo de nucleósido. Este tratamiento es eficaz sólo en aproximadamente la mitad de la población de pacientes. Por lo tanto, existe una necesidad urgente de nuevos fármacos para el HCV. El virus de la hepatitis C comprende un genoma de RNA de hebra positiva encerrado en una nucleocápsida y una envuelta lipídica y consiste en aproximadamente 9600 ribonucleótidos, que codifica una poliproteína de alrededor de 3000 aminoácidos (Dymock et ál. Antiviral Chemistry & Chemotherapy 2000, 11, 79). Una 15 proteína del HCV, NS5B, liberada de la poliproteína, posee actividad de polimerasa y está implicada en la síntesis de RNA de doble hebra a partir del genoma de RNA viral de una sola hebra que sirve como la plantilla. La reproducción del virus HCV puede evitarse a través de la manipulación de la actividad de polimerasa de NS5B. La inhibición competitiva de la proteína NS5B suprimiría o evitaría la formación del RNA de HCV de doble hebra. Alternativamente, también puede incorporarse un análogo de nucleósido a la hebra de RNA que se extiende, y actúa como un terminador de 20 cadena. Por otra parte, también puede incorporarse un análogo de nucleósido deteriorante al RNA que se extiende, lo que puede provocar daño mutagénico al genoma viral. Recientemente, varias solicitudes de patente PCT (WO99/43691, WO 01/32153, WO 01/60315, WO 01/79246, WO 01/90121, WO 01/92282, WO 02/18404, WO 02/057287, WO 02/057425) han descrito análogos de nucleósidos como agentes anti-HCV en ensayos in vitro.
El virus de la hepatitis B (VHB) ha infectado agudamente a casi un tercio de la población humana mundial, y 25 alrededor de 5% de los infectados son portadores crónicos del virus (Delaney IV et ál. Antiviral Chemistry & Chemotherapy 2001, 12, 1-35). La infección crónica por VHB provoca daño hepático que frecuentemente avanza hasta cirrosis y/o cáncer hepático más tarde a lo largo de la vida. A pesar de la disponibilidad y el uso extendido de vacunas y quimioterapia eficaces, el número de portadores crónicos se aproxima a los 400 millones en todo el mundo. Por lo tanto, necesitan desarrollarse fármacos anti-VHB más eficaces. El virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) provoca una 30 degeneración progresiva del sistema inmunitario, conduciendo al desarrollo del sida. Se ha usado clínicamente un número de fármacos, incluyendo inhibidores de transcriptasa inversa e inhibidores de proteasa. Actualmente, se usan ampliamente terapias de combinación para el tratamiento del sida a fin de reducir la resistencia a fármacos. A pesar del progreso en el desarrollo de fármacos anti-VIH, el sida todavía es una de las principales enfermedades epidémicas. Ciertas infecciones virales agudas también suponen una gran amenaza a la vida humana, incluyendo el virus del Nilo 35 occidental y el virus del SARS recientemente descubiertos.
Las infecciones bacterianas han sido desde hace mucho tiempo las fuentes de muchas enfermedades infecciosas. El uso extendido de antibióticos produce muchas nuevas cepas de bacterias potencialmente letales. Las infecciones fúngicas son otro tipo de enfermedades infecciosas, algunas de las cuales también son potencialmente letales. Existe una demanda creciente para el tratamiento de infecciones bacterianas y fúngicas. Los fármacos 40 antimicrobianos basados en nuevos mecanismos de acción son especialmente importantes.
Los trastornos proliferativos son una de las principales enfermedades potencialmente letales y se han investigado intensivamente durante décadas. Actualmente, el cáncer es la segunda causa principal de muerte en los Estados Unidos, y más de 500.000 personas mueren anualmente de este trastorno proliferativo. Todos los diversos tipos de células del cuerpo pueden transformarse en células tumorales benignas o malignas. La transformación de 45 células normales en células cancerosas es un proceso complejo y así no se entiende completamente hasta ahora. El tratamiento del cáncer consiste en cirugía, radiación y quimioterapia. Mientras que la quimioterapia puede usarse para tratar todos los tipos de cáncer, la cirugía y la terapia por radiación están limitadas a ciertos cánceres en ciertas zonas del cuerpo. Existe un número de fármacos anticancerosos ampliamente usados clínicamente. Entre ellos están un agente alquilante tal como cisplatino, antimetabolitos, tales como 5-fluorouracilo, y gemcitabina. Aunque están 50 disponibles la cirugía, la radiación y las quimioterapias para tratar a pacientes con cáncer, no existe en la actualidad una cura para el cáncer. La investigación contra el cáncer es todavía una de las tareas más importantes en las organizaciones médicas y farmacéuticas.
Los fármacos nucleosídicos se han usado clínicamente para el tratamiento de infecciones virales y trastornos proliferativos durante décadas. La mayoría de los fármacos nucleosídicos se clasifican como antimetabolitos. Después 55 de que entren en las células, los análogos de nucleósido se fosforilan sucesivamente hasta 5’-monofosfatos, 5’-difosfatos y 5’-trifosfatos de nucleósido. En la mayoría de los casos, los trifosfatos de nucleósido, p. ej., trifosfato de 3’-azido-3’-desoxitimidina (AZT, un fármaco anti-VIH) y trifosfato de arabinosilcitosina (citarabina, un fármaco
anticanceroso), son las entidades químicas activas que inhiben la síntesis de ADN o RNA, a través de una inhibición competitiva de polimerasas y una incorporación subsiguiente de nucleótidos modificados en secuencias de ADN o RNA. En unos pocos casos, los análogos de nucleósido ejercen efectos a niveles de fosfato inferiores. Por ejemplo, se ha observado que el 5’-monofosfato de 5-fluoro-2’-desoxiuridina (un fármaco anticanceroso) y el 5’-difosfato de 2’,2’-difluoro-2’-desoxicitidina (un fármaco anticanceroso) inhiben timidilato sintasa y ribonucleótido reductasa, 5 respectivamente. Aunque los propios análogos de nucleósido a nivel de ausencia de fosfato, tales como los inhibidores de adenosina quinasas y los ligandos de receptores de adenosina, actualmente, los fármacos nucleosídicos clínicamente útiles dependen principalmente de la activación celular por nucleósido quinasas y nucleótido quinasas.
Al menos dos criterios son pertinentes para los fármacos antivirales nucleosídicos: 1. los análogos de nucleósido deben anabolizarse en nucleótidos en las células; y 2. los nucleótidos anabolizados deben orientarse 10 selectivamente a enzimas virales. A fin de ser fosforilados en las células y orientarse selectivamente a enzimas preferidas, los análogos de nucleósido deben tener modificaciones favorables en sus restos de azúcar y base. Para obtener tales análogos de nucleósido favorables, un sistema general es generar diversos análogos de nucleósido al modificar la base o el azúcar, o al modificar los restos tanto de base como de azúcar. Existen numerosos ejemplos en la bibliografía para la síntesis de nucleósidos (Chemistry of Nucleosides and Nucleotides Vol. 1 (1988), Vol. 2 (1991), Vol. 15 3 (1994), editados por Leroy B. Townsend, Plenum Press).
Sin embargo, hay ciertas clases de compuestos nucleosídicos que no se exploraron intensivamente con respecto a sus actividades antiviral y antiproliferativa antes de la presente invención. Una clase de tales compuestos es la de los nucleósidos tricíclicos. Las divulgaciones sobre nucleósidos tricíclicos son muy limitadas considerando la existencia de diversos heterociclos tricíclicos. Un nucleósido tricíclico muy conocido es la triciribina (TCN), que tiene una 20 potente citotoxicidad contra células cancerosas (Porcari et ál. J. Med. Chem. 2000, 43, 2438-2448). Un número de sus derivados modificados se preparó y se rastreó contra virus y cáncer (Porcari et ál. Nucleosides Nucleotides 1999, 18, 2475-2497; J. Med. Chem. 2000, 43, 2457-2463). Otro nucleósido tricíclico es la 2-(2-desoxi-β-D-eritro-pentofuranosil)-2,6-dihidro-7H-2,3,5,6-tetraazabenz[cd]azulen-7-ona, pero no se ha presentado su actividad biológica (Helv. Chim. Acta, 2000, 83, 911-927). La publicación PCT WO 03/061385 describe bibliotecas de nucleósidos tricíclicos. La presente 25 invención divulga nuevos nucleósidos y nucleótidos tricíclicos y su uso para el tratamiento de una enfermedad infecciosa, incluyendo infecciones virales, y de trastornos proliferativos, incluyendo el cáncer.
Sumario de la Invención
La presente invención se refiere a nuevos nucleósidos tricíclicos y derivados de los mismos, su preparación y su uso para el tratamiento de infecciones virales y trastornos proliferativos. 30
En una realización, se proporciona un compuesto de la fórmula (I), que puede ser un D- o L-nucleósido,
en el que
A es O, S, CH2, CHF o CF2;
R1, R2, R2’, R3, R3’ y R4 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, F, Cl, Br, I, OH, SH, 35 NH2, NHOH, NHNH2, N3, COOH, CN, CONH2, C(S)NH2, COOR, R, OR, SR, SSR, NHR y NR2;
en donde al menos uno de R2 o R2’ no es H;
R4’ es -L-R5;
L se selecciona del grupo que consiste en O, S, NH, NR, CY2O, CY2S, CY2NH, CY2, CY2CY2, CY2OCY2, CY2SCY2 y CY2NHCY2, en donde Y se selecciona del grupo que consiste en H, F, Cl, Br, alquilo, alquenilo y 40 alquinilo, en donde el alquilo, el alquenilo y el alquinilo pueden contener cada uno opcionalmente uno o más heteroátomos;
R5 es OH, monofosfato, difosfato o trifosfato o un fosfonato, fosfoamidato o fosfoéster de los mismos;
B es una base seleccionada del grupo de heterociclos que consiste en
cada Z se selecciona independientemente del grupo que consiste en N, N--BH2GM+, C-G, O, S, NR, >C=O, >C=S, >C=NH, >C=NR, >S=O, >S(O)2 y CH-G;
en donde si Z es un participante en un enlace π (doble enlace), Z es independientemente N o C-G;
en donde si Z no es un participante en un enlace π, Z es independientemente N--BH2GM+, O, S, NR, >C=O, 5 >C=S, >C=NH, >C=NR, >S=O, >S(O)2 y CH-G;
X es O, S, SO, SO2, Se, SeO, SeO2, NH o NR;
W es C, CH o N;
en donde si W es un participante en un enlace π, W es C;
en donde si W no es un participante en un enlace π, W es CH o N; y 10
-BH2GM+ es un par iónico y M+ es un catión;
G se selecciona del grupo que consiste en H, F, Cl, Br, I, OH, SH, NH2, NHOH, N3, COOH, CN, CONH2, C(S)NH2, C(=NH)NH2, R, OR, SR, NHR y NR2, cuando están presentes dos o más grupos G en una molécula, pueden ser iguales o diferentes entre sí;
R se selecciona del grupo que consiste en alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, acilo y aralquilo, que contienen 15 opcionalmente uno o más heteroátomos;
las líneas de trazos (---) indican un posible enlace π o doble.
Así, las estructuras de las fórmulas II y III pueden tener uno o más dobles enlaces de anillo y, en algunos casos, pueden tener dos o más dobles enlaces de anillo.
En una realización preferida, L es CH2. 20
Preferiblemente, W es C. Preferiblemente X es NH.
En otra realización, la porción anular de siete miembros de la base contiene uno o dos y preferiblemente un N en la cadena principal del anillo.
En otra realización, la Z en el anillo de cinco miembros de la base es C.
En otra realización más, cada Z en la porción anular de siete miembros de la base es preferiblemente C-G, 25 >C=O, >C=S. Preferiblemente, CH-G es CH2, CH-halo y C-G es CH, C-alquilo, preferiblemente CCH2, C-OR, preferiblemente, C-O-alquilo, más preferiblemente, COCH3.
Al menos uno de R2 o R2’ no es H. En otra realización preferida, el azúcar
Así, los compuestos de la invención pueden tener la fórmula
En algunas realizaciones, en compuestos de la invención de la fórmula (I), B es una base seleccionada del 5 grupo de heterociclos que consiste en
Z1, Z2, Z3, Z4, Z7 y Z8 son independientemente N o C-G; y
Z5, Z6 y Z9 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en N--BH2GM+, O, S, NR, >C=O, >C=S, 10 >C=NH, >C=NR, >S=O, >S(O)2 y CH-G.
En una realización preferida, la base es
La presente invención también proporciona un compuesto de la fórmula I que puede ser un D- o L-nucleótido o 5 nucleósido
en el que
A es O, S, CH2, NH, CHF o CF2;
R1, R2, R2’, R3, R3’ y R4 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, F, Cl, Br, I, OH, SH, 10 NH2, NHOH, NHNH2, N3, COOH, CN, CONH2, C(S)NH2, COOR, R, OR, SR, SSR, NHR y NR2;
R4’ es -L-R5;
L se selecciona del grupo que consiste en O, S, NH, NR, CY2O, CY2S, CY2NH, CY2, CY2CY2, CY2OCY2, CY2SCY2 y CY2NHCY2, en donde Y se selecciona del grupo que consiste en H, F, Cl, Br, alquilo, alquenilo y alquinilo, en donde el alquilo, el alquenilo y el alquinilo pueden contener cada uno opcionalmente uno o más 15 heteroátomos;
R5 es OH, monofosfato, difosfato o trifosfato o un fosfonato, fosfoamidato o fosfoéster de los mismos;
B es una base seleccionada del grupo de heterociclos que consiste en
cada Z se selecciona independientemente del grupo que consiste en N, N-(BH2G)-M+, C-G, O, S, NR, <C=O, <C=S, <C=NH, <C=NR, <S=O, <S(O)2 y CH-G; 5
en donde si Z es un participante en un enlace π, Z es independientemente N o C-G, y si Z no es un participante en un enlace π, Z es independientemente N-(BH2G)-M+, O, S, NR, <C=O, <C=S, <C=NH, <C=NR, <S=O, <S(O)2 y CH-G;
X es O, S, SO, SO2, Se, SeO, SeO2, N, NH o NR;
W es C, CH o N; 10
en donde si W es un participante en un doble enlace (enlace π), W es C;
en donde si W no es un participante en un doble enlace (enlace π), W es CH o N; en donde las líneas de trazos (---) indican un enlace π opcional;
(BH2G)-M+ es un par iónico y M+ es un catión;
G se selecciona del grupo que consiste en H, F, Cl, Br, I, OH, SH, NH2, NHOH, N3, COOH, CN, CONH2, 15 C(S)NH2, C(=NH)NH2, R, OR, SR, NHR y NR2; cuando están presentes dos o más grupos G en una molécula, pueden ser iguales o diferentes entre sí; y
R se selecciona del grupo que consiste en alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, acilo y aralquilo, que contienen opcionalmente uno o más heteroátomos; o
un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8; o 20
una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para uso en terapia.
Se describe un método para el tratamiento de una infección viral o bacteriana o un trastorno proliferativo que comprende administrar una cantidad eficaz de un compuesto de la fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable o un profármaco del mismo, opcionalmente en combinación con uno o más agentes antivirales, antibacterianos o antiproliferativos. En un aspecto, la infección viral está provocada por un virus de RNA, tal como HCV, o un virus de 25 ADN o retrovirus, tal como VHB o VIH.
La invención también se dirige a un procedimiento para elaborar compuestos de la invención.
Por ejemplo, un compuesto que tiene la fórmula
o
puede elaborarse al ciclar un compuesto que tiene la fórmula
en el que cada uno de Z1-Z4 es independientemente Z; y en el que cada uno de W1-W2 es independientemente 5 W. Preferiblemente, en este procedimiento,
A es O, CH2, o N opcionalmente protegido;
W1 es C (si hay enlace p) o N (si no hay enlace p);
W2 es C, CH o N;
W4 es H o trialquilestaño; 10
Z1 y Z2 son cada uno independientemente CH, C-halógeno, C-alquilo, C-arilo, C-O-alquilo o C-S-alquilo;
Z3 es CH, C-alquilo, C-halógeno, N, CNHR, CNH2, CNR2, C=O o C=S;
Z4 es CH, C-halógeno, C-alquilo, C-arilo, C-O-alquilo, C-S-alquilo, C-OH, C-NH2, C-NHR o C-NR2;
R1, R2, R2’, R3, R3’, R4 son cada uno independientemente H, halógeno, alquilo, O-alquilo, OH, O opcionalmente protegido, metilo, H o F; y 15
R5 es un OH o NH2 opcionalmente protegido. Este procedimiento puede comprender además hacer reaccionar
para formar
en donde Y es un halógeno; y
en donde W4 es H o un compuesto que contiene metal capaz de un acoplamiento cruzado mediado por metal. Los grupos OH y NH pueden opcionalmente estar desprotegidos.
En otra realización, un procedimiento para elaborar 5
comprende ciclar un compuesto que tiene la fórmula
en el que cada uno de Z1-Z4 y Z6 es independientemente Z;
cada uno de W1 y W2 es independientemente W; 10
en donde Y es halógeno; y
Nu es un nucleófilo. Preferiblemente, A es O, CH2, o N opcionalmente protegido;
X es N, O o S opcionalmente protegido;
Nu es un alcohol, un alquiltiol o una alquilamina;
W1 es C (si hay enlace p) o N (si no hay enlace p); 15
W2 es C, CH o N;
Z1 y Z2 son cada uno independientemente CH, C-halógeno, C-alquilo, C-arilo, C-O-alquilo o C-S-alquilo;
Z3 es CH, C-alquilo, C-halógeno, N, CNHR, CNH2, CNR2, C=O o C=S;
Z4 es CH o C-halógeno, C-alquilo, C-arilo, C-O-alquilo, C-S-alquilo, C-OH, C-NH2, C-NHR o C-NR2;
R1, R2, R2’, R3, R3’, R4 son cada uno independientemente H, halógeno, alquilo, O-alquilo, OH, O opcionalmente protegido, metilo o F;
R5 es un OH o NH2 opcionalmente protegido; y
Z6 es CH2, O, NH, NR o S. Este procedimiento comprende además hacer reaccionar
5
en donde W4 es H o un compuesto que contiene metal capaz de acoplamiento cruzado.
Además, el compuesto de la invención puede modificarse adicionalmente, por ejemplo, para añadir diversos grupos funcionales. En una realización, un compuesto que tiene la fórmula
puede modificarse usando un nucleófilo y/o electrófilo para formar un compuesto seleccionado del grupo que consiste 10 en:
en donde cada uno de Z1-Z4 son independientemente Z;
en donde cada uno de W1 y W2 son independientemente W; y
en donde Nu es un nucleófilo. Preferiblemente, en este procedimiento,
A es O, CH2, o N opcionalmente protegido; 5
Nu es un alcohol, un alquiltiol o una alquilamina;
W es C (si hay enlace p) o N (si no hay enlace p);
W2 es C, CH o N;
Z1 y Z2 son cada uno independientemente CH, C-halógeno, C-alquilo, C-arilo, C-O-alquilo o C-S-alquilo;
Z3 es CH, C-alquilo, C-halógeno, N, CNHR, CNH2, CNR2, C=O o C=S; 10
Z4 es CH o C-halógeno, C-alquilo, C-arilo, C-O-alquilo, C-S-alquilo, C-OH, C-NH2, C-NHR o C-NR2;
R1, R2, R2’, R3, R3’, R4 son cada uno independientemente H, halógeno, alquilo, O-alquilo, OH, O opcionalmente protegido, metilo o F;
R5 es un OH o NH2 opcionalmente protegido;
Q es O, NR, NH o S; y 15
R6 es alquilo, arilo, alquenilo o alquinilo.
En otra realización, se proporciona una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la fórmula (I) o sal farmacéuticamente aceptable o profármaco del mismo.
Descripción Detallada de la Invención
Los nucleósidos tricíclicos de la invención también incluyen derivados en los que, por ejemplo, R5 en la fórmula 20 (I) es un fosfonato, fosfoamidato o fosfoéster de OH, monofosfato, difosfato o trifosfato.
Por ejemplo, en algunas realizaciones, miméticos nucleotídicos de los compuestos de la invención de la fórmula (I) analizada anteriormente incluyen:
un compuesto en el que R5 es un mimético de monofosfato que tiene la fórmula (X):
25
donde X1’ es O; X2’ y X3’ se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, F, OH, SH, NH2, NHOH, N3, CN, -BH2GM+, -BH3M+, R, OR, SR, NHR y NR2. Los sustituyentes -BH2GM+ y -BH3M+ son pares iónicos, que están enlazados al fósforo a través del boro cargado negativamente. M+ es un catión.
En algunas realizaciones, los miméticos nucleotídicos de los compuestos de la invención de la fórmula (I) analizados anteriormente incluyen miméticos de di- y tri-fosfato que incluyen: 30
un compuesto en el que R5 es un resto de di- o tri-fosfato de la fórmula (XII):
X2, X3 y X4 son O;
X5 y X6 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en O, S, Se, O2, CY2CO, CHOH, C(OH)2, CH2O, CH2CH2, CH2CHNH2, CH2CH2CHNH2, CY2OCY2, CY2, CRY, CY2CY2, CHR, CC, HC=CH, NH, NR, 5 NOH, NOR, NNH2 y NNHR;
Y se selecciona del grupo que consiste en H, F, Cl, Br, alquilo, alquenilo y alquinilo, en donde el alquilo, el alquenilo y el alquinilo pueden contener cada uno opcionalmente uno o más heteroátomos;
R se selecciona del grupo que consiste en alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, acilo y aralquilo, conteniendo cada uno opcionalmente uno o más heteroátomos; 10
X7, X8, X9 y X10 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, F, OH, SH, NH2, NHOH, NHOR, NHNH2, NHNHR, CN, N3, -BH3M+, -BH2GM+, R, OR, SR, SeH, SeR, NHR y NR2.
en el que n es 0 o 1. Los sustituyentes -BH2GM+ y -BH3M+ son pares iónicos, que están enlazados al fósforo a través del boro cargado negativamente. M+ es un catión.
Miméticos nucleotídicos de fosfato adicionales y métodos para elaborar los miméticos de fosfato apropiados 15 para los compuestos de la invención se describen en las Publicaciones PCT WO 2003/072757 y WO 2003/073989, presentadas el 28 de febrero de 2003. Muchos miméticos nucleotídicos de la presente invención pueden prepararse mediante sistemas similares a los publicados o al usar los conocidos principios de la química del fósforo. Generalmente, los miméticos de fosfato de los nucleósidos y nucleótidos de la invención pueden inhibir una función enzimática sin fosforilación y/o tener estabilidad incrementada a nucleasas con relación a nucleótidos con fosfato no modificado. 20
El término mimético de fosfato, a no ser que se especifique otra cosa, se refiere a un análogo de fosfato, incluyendo, pero no limitado a, fosfonato, fosfotioato, fosfoselenato, P-boranofosfato, fosforamidato y/o una combinación de los mismos. Realizaciones preferidas de los miméticos de fosfato incluyen fosfonato, metilfosfonato, flurometilfosfonato, difluorometilfosfonato, vinilfosfonato, fenilfosfonato, fluorofosfato, 5’-metilenfosfonato, 5’-difluorometilenfosfonato, 5’-desoxifosfonato y 5’-aminofosforamidato. Se prefiere más el fosfonato. 25
Los términos mimético de difosfato y mimético de trifosfato se refieren específicamente a un análogo de difosfato y un análogo de trifosfato, respectivamente, que comprende al menos uno de los miméticos de fosfato, una de las modificaciones en el sitio de puenteo de difosfato y trifosfato o sustituciones de oxígenos de fosfato que no sirven de puente. La modificación en el sitio de puenteo, es decir en las posiciones X5 y X6 de la fórmula (XII), incluye la sustitución de O por otros átomos o funciones tales como S, Se, O2, NH, NHR, NR, CH2, CHF, CHCl, CHBr, CF2, CCH, 30 CBr2, CHR, CYCO2, CH2O, CHOH, C(OH)2, CH2CH2, CC, CH=CH, CH2CH2CHNH2, CH2CHNH2, CY2OCY2, CY2, CY2CY2 y CR2, donde R se selecciona del grupo que consiste en alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, acilo y aralquilo, conteniendo cada uno de los cuales opcionalmente uno o más heteroátomos. Los oxígenos de fosfato que no sirven de puente, p. ej., en las posiciones X7-X10 de la fórmula (XII), pueden reemplazarse por una variedad de sustituyentes, incluyendo H, F, OH, SH, NH2, NHOH, NHOR, NHNH2, NHNHR, CN, N3, -BH3M+, R, OR, SR, SeH, SeR, NHR, NR2 y R*, 35 donde R es como se definió en la presente memoria y en donde R* es un sustituyente de tipo profármaco. M+ es un catión, preferiblemente un catión farmacéuticamente aceptable tal como Ca2+, amonio, trialquilamonio o tetraalquilamonio, p. ej., NH4+, Et3NH+, Bu3NH+ y Bu4N+.
El P α, el P β y el P γ en los miméticos de difosfato y los miméticos de trifosfato pueden adoptar independientemente configuraciones bien R o bien S cuando se convierten en un fósforo quiral. 40
En algunas realizaciones, los nucleósidos y nucleótidos tricíclicos de la invención son derivados de tipo profármaco. Además de los descritos en la presente memoria, derivados de tipo profármaco de nucleósidos, nucleótidos y miméticos de fosfato nucleotídicos y métodos para elaborar los profármacos apropiados para el uso en la presente invención se describen en las Publicaciones PCT WO 2003/072757 y WO 2003/073989. Tal modificación de tipo profármaco es para mejorar la absorción del fármaco y/o el aporte del fármaco a las células. 45
En una realización, tales compuestos de la invención incluyen profármacos (p. ej., uno o más de un grupo -OH de un mono-, di- o tri-fosfato, uno o más de X2’ y X3’ en (X) o X7-X10 en (XII) es un sustituyente tipo profármaco R*).
R* es un sustituyente tipo profármaco que puede estar conjugado a una o más posiciones X7-X10. El término profármaco, a no ser que se especifique otra cosa, se refiere a una forma enmascarada (protegida) de un nucleótido, tal como un mimético de la fórmula (X) que se forma cuando uno o más de X2’ y X3’ es R*, o a una forma enmascarada (protegida) de un mimético nucleotídico de la fórmula (XII) cuando uno o más de X7-X10 es R*. El profármaco de un mimético de 5’-monofosfato de nucleósido puede enmascarar las cargas negativas del resto del mimético de fosfato 5 totalmente o parcialmente, enmascarar las cargas negativas del resto del mimético de di-fosfato (X7, X8, X10) o mimético de trifosfato (X7-X10) o el resto de fosfato, totalmente o parcialmente, o enmascarar parcialmente un alquilo, arilo o arialquilo sustituido con heteroátomo (W’, véase posteriormente) ligado a un resto de fosfato o mimético de fosfato a fin de mejorar la absorción de fármaco y/o el aporte de fármaco a las células. El profármaco puede activarse bien mediante enzimas celulares tales como lipasas, esterasas, reductasas, oxidasas, nucleasas o bien mediante escisión química tal 10 como hidrólisis para soltar (liberar) el mimético nucleotídico después de que el profármaco entre en las células. Los profármacos se denominan a menudo profármacos escindibles. Sustituyentes tipo profármaco incluyen, pero no se limitan a: proteínas; antibióticos (y fragmentos de antibiótico); D- y L-aminoácidos ligados a un resto de fosfato o un resto de mimético de fosfato a través de un átomo de carbono (fosfonatos), un átomo de nitrógeno (fosfoamidatos) o un átomo de oxígeno (fosfoésteres); péptidos (hasta 10 aminoácidos) ligados a un resto de fosfato o un resto de mimético 15 de fosfato a través de un átomo de carbono (fosfonatos), un átomo de nitrógeno (fosfoamidatos) o un átomo de oxígeno (fosfoésteres); restos de fármaco ligados a un resto de fosfato o un resto de mimético de fosfato a través de un átomo de carbono (fosfonatos), un átomo de nitrógeno (fosfoamidatos) o un átomo de oxígeno (fosfoésteres); esteroides; colesteroles; ácidos fólicos; vitaminas; poliaminas; carbohidratos; polietilenglicoles (PEG); ciclosaligenilos; anillos de 4 a 8 miembros sustituidos, con o sin sustituciones de heteroátomos, ligazones de 1,3-fosfoamidato a un resto de fosfato o 20 mimético de fosfato terminal (γ o β) o que conecta entre un resto de fosfato o resto de mimético de fosfato α,β o β,γ; aciltioetoxi, (SATE) RCOSCH2CH2O-; RCOSCH2CH2O-W’-O-; RCOSCH2CH2O-W’-S-; RCOSCH2CH2O-W’-NH-; RCOSCH2CH2O-W’-; RCOSCH2CH2O-W’-CY2-; aciloximetoxi, RCOOCH2O-; RCOOCH2O-W’-O-; RCOOCH2O-W’-S-; RCOOCH2O-W’-NH-; RCOOCH2O-W’-; RCOOCH2O-W’-CY2-; alcoxicarboniloximetoxi, ROCOOCH2O-; ROCOOCH2O-W’-O-; ROCOOCH2O-W’-S-; ROCOOCH2O-W’-NH-; ROCOOCH2O-W’-; ROCOOCH2O-W’-CY2-; aciltioetilditioetoxi 25 (DTE) RCOSCH2CH2SSCH2CH2O-; RCOSCH2CH2SSCH2CH2O-W’-; RCOSCH2CH2SSCH2CH2O-W’-O-; RCOSCH2CH2SSCH2CH2O-W-S-; RCOSCH2CH2SSCH2CH2O-W-NH-; RCOSCH2CH2SSCH2CH2O-CY2-; aciloximetilfenilmetoxi (PAOB) RCO2-C6H4-CH2-O-; RCO2-C6H4-CH2-O-W-; RCO2-C6H4-CH2-O-W’-O-; RCO2-C6H4-CH2-O-W’-S-; RCO2-C6H4-CH2-O-W’-NH-; RCO2-C6H4-CH2-O-W’-CY2-; 1,2-O-diacil-gliceriloxi, RCOO-CH2-CH(OCOR)-CH2O-; 1,2-O-dialquil-gliceriloxi, RO-CH2-CH(OR)-CH2O-; 1,2-S-dialquil-gliceriloxi, RSCH2-CH(SR)-CH2O-; 1-O-alquil-2-O-acil-30 gliceriloxi, RO-CH2-CH(OCOR)-CH2O-; 1-S-alquil-2-O-acil-gliceriloxi, RSCH2-CH(OCOR)-CH2O-; 1-O-acil-2-O-alquil-gliceriloxi, RCOO-CH2-CH(OR)-CH2O-; 1-O-acil-2-S-alquil-gliceriloxi, RCOO-CH2-CH(SR)-CH2O-; cualquier sustituyente ligado a través de un átomo de carbono, nitrógeno u oxígeno a un mimético de di- o tri-fosfato de nucleósido que libere el mimético de di- o tri-fosfato in vivo.
Una combinación de sustituyentes tipo profármaco puede ligarse (conjugarse) a una o más posiciones X2’, X3’ y 35 X5’en un mimético de mono-fosfato de nucleósido o a una o más posiciones X7-X10 en un mimético de di- o tri-fosfato de nucleósido. W’ es alquilo, arilo, aralquilo según se describió anteriormente o un heterociclo. Sustituyentes tipo profármaco (R*) preferidos en las posiciones X2’, X3’ o X5’ incluyen 2,3-O-diacilgliceriloxi, 2,3-O-dialquilgliceriloxi, 1-O-alquil-2-O-acilgliceriloxi, 1-O-acil-2-O-alquilgliceriloxi, 1-S-alquil-2-O-acil-1-tiogliceriloxi, aciloximetoxi, S-acil-2-tioetoxi, S-pivaloil-2-tioetoxi, aciloximetoxi, pivaloiloximetoxi, alcoxicarboniloximetoxi, S-alquilditio-S’-etoxiaciloximetoxi, S-acil-2-40 tioetoxi, S-pivaloil-2-tioetoxi, pivaloiloximetoxi, alcoxicarboniloximetoxi y S-alquilditio-S’-etoxi.
El término resto, a no ser que se especifique otra cosa, se refiere a una porción de una molécula. Un resto puede ser, pero no se limita a, un grupo funcional, una cadena acíclica, un grupo enmascarante tipo profármaco, un anillo aromático, un carbohidrato, un anillo carbocíclico o un heterociclo.
El término base, a no ser que se especifique otra cosa, se refiere al resto de base de un nucleósido o 45 nucleótido. El resto de base es la porción heterocíclica de un nucleósido o nucleótido. El resto de base de un nucleótido de la fórmula (I) es un heterociclo tricíclico representado por las fórmulas II-III. Preferiblemente, el resto de base de un nucleótido de la fórmula (I) puede ser un heterociclo tricíclico representado por una cualquiera de las fórmulas IV-IX. La base del nucleósido está ligada al resto de azúcar de un nucleósido de tales modos que puede producirse tanto un β-D- como un β-L-nucleósido. 50
El término azúcar se refiere a la porción de ribofuranosa de un nucleósido. El resto de azúcar de nucleósidos y miméticos de nucleósido y/o profármacos de los mismos de la fórmula (I) puede contener uno o más sustituyentes en su posición C1, C2, C3 y C4 de la ribofuranosa. Los sustituyentes pueden estar dirigidos a la cara bien α o bien β de la ribofuranosa. La base del nucleósido, que puede considerarse un sustituyente en la posición C-1 de la ribofuranosa, se dirige a la cara β del azúcar. La cara β es el lado de una ribofuranosa sobre el que está presente una base de purina o 55 pirimidina de β-D-nucleósidos naturales. La cara α es el lado del azúcar opuesto a la cara β. El resto de azúcar de la presente invención no está limitado a una ribofuranosa y sus derivados, en su lugar puede ser un carbohidrato, un análogo de carbohidrato, un anillo carbocíclico u otros análogos de ribofuranosa.
El término nucleósido o nucleótido modificado en el azúcar se refiere a un nucleósido o nucleótido que contiene un resto de azúcar modificado. 60
El término nucleósido o nucleótido modificado en la base se refiere a un nucleósido o nucleótido que contiene un resto de base modificado.
El término alquilo, a no ser que se especifique otra cosa, se refiere a un hidrocarburo saturado lineal, ramificado o cíclico de C1 a C18. Los alquilos pueden incluir, pero no se limitan a, metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, ciclopropilo, n-butilo, isobutilo, t-butilo, ciclobutilo, n-pentilo, isopentilo, neopentilo, ciclopentilo, n-hexilo, ciclohexilo, 5 dodecilo, tetradecilo, hexadecilo u octadecilo.
El término alquenilo, a no ser que se especifique otra cosa, se refiere a un hidrocarburo insaturado de C2 a C18 que contiene al menos un doble enlace carbono-carbono y puede ser lineal, ramificado o cíclico. Los alquenilos pueden incluir, pero no se limitan a, olefinas, propenilo, alilo, 1-butenilo, 3-butenilo, 1-pentenilo, 4-pentenilo, 1-hexenilo o ciclohexenilo. 10
El término alquinilo, a no ser que se especifique otra cosa, se refiere a un hidrocarburo insaturado de C2 a C18 que contiene al menos un triple enlace carbono-carbono y puede ser lineal, ramificado o cíclico. Los alquinilos pueden incluir, pero no se limitan a, etinilo, 1-propinilo, 2-propinilo, 1-butinilo o 3-butinilo.
El término arilo, a no ser que se especifique otra cosa, se refiere a un resto aromático con o sin uno o más heteroátomos. Los arilos pueden incluir, pero no se limitan a, fenilo, bifenilo, naftilo, piridinilo, pirrolilo e imidazolilo que 15 contienen opcionalmente uno o más sustituyentes. Los sustituyentes pueden incluir, pero no se limitan a, hidroxi, amino, tio, halógeno, ciano, nitro, alcoxi, alquilamino, alquiltio, hidroxicarbonilo, alcoxicarbonilo o carbamoílo.
El término aralquilo, a no ser que se especifique otra cosa, se refiere a un resto que contiene tanto un arilo como un alquilo, un alquenilo o un alquinilo. Los aralquilos pueden ligarse a través bien de la porción aromática o bien de la porción no aromática. Los aralquilos pueden incluir, pero no se limitan a, bencilo, fenetilo, fenilpropilo, metilfenilo, 20 etilfenilo, propilfenilo, butilfenilo, feniletenilo, fenilpropenilo, feniletinilo o fenilpropinilo.
El término acilo, a no ser que se especifique otra cosa, se refiere a alquilcarbonilo. Los acilos pueden incluir, pero no se limitan a, formilo, acetilo, fluoroacetilo, difluoroacetilo, trifluoroacetilo, cloroacetilo, dicloroacetilo, tricloroacetilo, propionilo, benzoílo, toluoílo, butirilo, isobutirilo o pivaloílo.
El término heteroátomo se refiere a oxígeno, azufre, nitrógeno o halógeno. Cuando uno o más heteroátomos 25 están ligados a alquilo, alquenilo, alquinilo, acilo, arilo o aralquilo, puede producirse un nuevo grupo funcional. Por ejemplo, cuando uno o más heteroátomos están ligados a un alquilo, pueden producirse alquilos sustituidos, incluyendo, pero no limitados a, fluoroalquilo, cloroalquilo, bromoalquilo, yodoalquilo, alcoxi, hidroxialquilo, alquilamino, aminoalquilo, alquiltio, tioalquilo, azidoalquilo, cianoalquilo, nitroalquilo, carbamoilalquilo, carboxilalquilo y acilalquilo.
Los benzoazulenos, tales como benzo[cd]azuleno, se refieren a una clase de compuestos tricíclicos que tienen 30 un anillo condensado de 5, 6 y 7 miembros que puede contener uno o más heteroátomos, preferiblemente O o N, en la cadena principal del anillo y así también se incluyen en tal término los derivados de benzoazuleno.
El término halógeno o halo se refiere a flúor, cloro, bromo o yodo.
El término función se refiere a un sustituyente. Las funciones pueden incluir, pero no se limitan a, hidroxi, amino, sulfhidrilo, azido, ciano, halo, nitro, hidroxiamino, hidroxicarbonilo, alcoxicarbonilo o carboxilo, bien protegido o 35 bien desprotegido.
R en la fórmula (I) es un sustituyente univalente y está presente en el resto de base, de azúcar y otros. R puede seleccionarse del grupo que consiste en alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, acilo y aralquilo que contienen opcionalmente uno o más heteroátomos, que son como se definieron anteriormente.
Un “grupo protector”, por ejemplo para O, S o N, tal como hidroxi o NH2, incluye grupos acilo, grupos sililo y 40 similares. Grupos protectores adecuados son descritos por Greene, T.W., et ál., en Protecting Groups in Organic Synthesis. 2ª Ed., John Wiley & Sons, Inc. (1991), incorporado en la presente memoria mediante referencia. “Nucleófilo y “electrófilo” tienen su significado habitual en la técnica. Ejemplos de nucleófilos preferidos son alcoholes, alquiltioles o alquilaminas, que opcionalmente pueden estar protegidos. “Nu” se refiere tanto a los nucleófilos libres como a los nucleófilos que están ligados al compuesto tricíclico de la invención. Así, un nucleófilo puede ser, por ejemplo, DMF o 45 MeO-. Preferiblemente, un nucleófilo puede ser N, O o S opcionalmente protegido.
Además de usar sistemas tipo profármaco, el aporte de los nucleósidos y nucleótidos puede apoyarse al usar un portador terapéuticamente aceptable tal como suspensiones liposómicas, lípidos catiónicos y poliiminas. En los compuestos de la fórmula (I) en los que está presente un centro quiral, la invención abarca enantiómeros o estereoisómeros y mezclas de los mismos, tales como mezclas enantiómeramente enriquecidas. 50
El término “infección” o “infección microbiana” se refiere a la infección provocada por un agente infeccioso o microbio, tal como una bacteria, un parásito (incluyendo un protozoo), un virus o un hongo (incluyendo unicelular y multicelular). Ejemplos de microbios que provocan tal infección incluyen: Acanthamoeba, enfermedad del sueño (tripanosomiasis) africana, amebiasis, tripanosomiasis americana (enfermedad de Chagas), bilharziasis
(esquistosomiasis), criptosporidiosis (enfermedad diarreica, Cryptosporidium Parvum), giardiasis (enfermedad diarreica, Giardia lamblia), hepatitis A, B, C, D, E, leishmaniasis (úlceras cutáneas y visceral), malaria (Plasmodium falciparum), infección por Salmonella enteritides (calambres estomacales, diarrea y fiebre), tuberculosis (Mycobacterium tuberculosis), varicela (peste cristal), fiebre amarilla, neumonías, infecciones del tracto urinario (Chlamydia y Mycoplasma), meningitis y septicemia meningocócica, infecciones de la piel y los tejidos blandos (Staphylococcus 5 aureus), infecciones del tracto respiratorio inferior (patógenos bacterianos o hepatitis C).
Infecciones comunes provocadas por microbios se esbozan adicionalmente en el siguiente cuadro:
Infección
Bacteria Hongo Protozoo Virus
Sida
X
Pie de Atleta
X
Varicela
X
Resfriado Común
X
Enfermedad Diarreica
X X X
Gripe
X
Herpes Genital
X
Malaria
X X
Meningitis
X
Neumonía
X X
Sinusitis
X X
Enfermedad Cutánea
X X X X
Faringitis Estreptocócica
X
Tuberculosis
X
Infecciones del Tracto Urinario
X
Infecciones Vaginales
X X
Hepatitis Viral
X
Síntesis Química
Los nuevos nucleósidos y nucleótidos, y profármacos de los mismos, de la presente invención, pueden ser 10 preparados por los expertos en la química orgánica sintética y de los nucleósidos usando metodología sintética establecida (Chemistry of Nucleosides and Nucleotides Vol. 1, 2, 3, editados por Townsend, Plenum Press; Handbook of Nucleoside Synthesis de Vorbrüggen Ruh-Pohlenz, John Wiley & Sons, Inc., 2001; The Organic Chemistry of Nucleic Acids de Yoshihisa Mizuno, Elsevier, 1986). Los nucleósidos de la presente invención pueden convertirse en su correspondiente monofosfato, difosfato y trifosfato mediante procedimientos de fosforilación establecidos. De forma 15 similar, pueden usarse métodos conocidos en la técnica para sintetizar los profármacos nucleótidicos y miméticos de fosfato. Los siguientes esquemas y descripciones sirven como síntesis representativas de los nucleósidos de la presente invención. Como tales, otros compuestos tales como los que tienen grupos -L-R4’ distintos de CH2R5 pueden elaborarse de forma similar.
Pueden prepararse glicosilbenzo[cd]azulenos mediante la modificación de análogos de 7-desazapurina opcionalmente protegidos y funcionarizados, seguida por química de acoplamiento cruzado de Stille, Heck u otra mediada por metal para introducir un éster α,β-insaturado u otro grupo carbonilo. Tal procedimiento permite la síntesis estereoselectiva de un producto intermedio capaz de ciclación eficaz hasta el compuesto de la invención. Puede usarse cualquier compuesto capaz de acoplamiento mediado por metal, tal como un derivado de estaño, tal como 5 trialquilestaño, más preferiblemente tributilestaño. La ciclación y la desprotección opcional del producto aporta el nucleósido buscado que contiene el benzo[cd]azuleno, un elemento clave de la invención.
En el Esquema 1, preferiblemente A es O, CH2, o N opcionalmente protegido; Y es halógeno; W1 es C (si hay enlace p) o N (si no hay enlace p); W2 es C, CH o N; W4 es H o trialquilestaño; Z1 y Z2 son cada uno independientemente CH, C-halógeno, C-alquilo, C-arilo, C-O-alquilo o C-S-alquilo; Z3 es CH, C-alquilo, C-halógeno, N, 10 CNHR, CNH2, CNR2, C=O o C=S; Z4 es CH, C-halógeno, C-alquilo, C-arilo, C-O-alquilo, C-S-alquilo, C-OH, C-NH2, C-NHR o C-NR2; R1, R2, R2’, R3, R3’, R4 son cada uno independientemente H, halógeno, alquilo, O-alquilo, OH, O opcionalmente protegido, metilo, H o F; R5 es un OH o NH2 opcionalmente protegido.
Esquema 2
Una alternativa al uso de ésteres vinílicos en el acoplamiento cruzado mediado por metal es el uso de 15 vinilnitrilos. En este caso, la ciclación y la desprotección opcional del producto aportan el nucleósido buscado en la forma de un benzo[cd]azuleno que contiene amidina.
En el Esquema 2, preferiblemente A es O, CH2, o N opcionalmente protegido; Y es halógeno; W1 es C (si hay enlace p) o N (si no hay enlace p); W2 es C, CH o N; W4 es H o trialquilestaño; Z1 y Z2 son cada uno 20 independientemente CH, C-halógeno, C-alquilo, C-arilo, C-O-alquilo o C-S-alquilo; Z3 es CH, C-alquilo, C-halógeno, N, CNHR, CNH2, CNR2, C=O o C=S; Z4 es CH, C-halógeno, C-alquilo, C-arilo, C-O-alquilo, C-S-alquilo, C-OH, C-NH2, C-NHR o C-NR2; R1, R2, R2’, R3, R3’, R4 son cada uno independientemente H, halógeno, alquilo, O-alquilo, OH, O opcionalmente protegido, metilo o F; R5 es OH o NH2 opcionalmente protegido.
Esquema 3 25
Puede aplicarse una metodología de acoplamiento cruzado similar cuando la parte de alqueno en la reacción de acoplamiento cruzado está equipada con un nucleófilo que puede estar presente en forma protegida. La sustitución nucleófila intramolecular por el nucleófilo colgante aporta el benzo[cd]azuleno requerido. Las reacciones de desplazamiento SNAr son un ejemplo de tales sustituciones nucleófilas.
30
En el Esquema 3, preferiblemente A es O, CH2, o N opcionalmente protegido; Y es halógeno; X es N, O o S opcionalmente protegido; W1 es C (si hay enlace p) o N (si no hay enlace p); W2 es C, CH o N; W4 es H o trialquilestaño; Z1 y Z2 son cada uno independientemente CH, C-halógeno, C-alquilo, C-arilo, C-O-alquilo o C-S-alquilo; Z3 es CH, C-alquilo, C-halógeno, N, CNHR, CNH2, CNR2, C=O o C=S; Z4 es CH o C-halógeno, C-alquilo, C-arilo, C-O-alquilo, C-S-alquilo, C-NH2, C-NHR o C-NR2; Z6 es CH2, O, NH o NR; R1, R2, R2’, R3, R3’, R4 son cada uno independientemente H, 35 halógeno, alquilo, O-alquilo, OH, O opcionalmente protegido, metilo o F; R5 es un OH o NH2 opcionalmente protegido; Nu es N, O o S opcionalmente protegido.
Esquema 4
Un sistema alternativo al uso de acoplamientos cruzados mediados por metal implica el intercambio halógeno-metal de un derivado de 7-desazapurina adecuadamente funcionalizado y la intercepción del producto intermedio 40 organometálico así formado con un electrófilo adecuado. Si este electrófilo también está equipado con un nucleófilo
opcionalmente protegido, la sustitución nucleófila intramolecular por el nucleófilo colgante aporta el benzo[cd]azuleno requerido.
En el Esquema 4, preferiblemente A es O, CH2, o N opcionalmente protegido; Y es halógeno; X es N, O o S opcionalmente protegido; W1 es C (si hay enlace p) o N (si no hay enlace p); W2 es C, CH o N; W4 es H o trialquilestaño; 5 Z3 es CH, C-alquilo, C-halógeno, N, CNHR, CNH2, CNR2, C=O o C=S; Z4 es CH o C-halógeno, C-alquilo, C-arilo, C-O-alquilo, C-S-alquilo, C-NH2, C-NHR o C-NR2; Z5, Z6, Z9 son cada uno independientemente CH2, O, NH o NR; R1, R2, R2’, R3, R3’, R4 son cada uno independientemente H, halógeno, alquilo, O-alquilo, OH, O opcionalmente protegido, metilo o F; R5 es un OH o NH2 opcionalmente protegido; Nu es un nucleófilo tal como N, O o S opcionalmente protegido; Lv es un grupo de salida. 10
Los glicosilbenzo[cd]azulenos pueden prepararse alternativamente mediante la glicosilación de benzo[cd]azulenos intactos mostrada en el Esquema 2. Las condiciones usadas para tales glicosilaciones son muy conocidas por los operarios de la técnica y pueden encontrarse en las referencias citadas anteriormente.
Esquema 5
15
En el Esquema 5, preferiblemente A es O, CH2, o N opcionalmente protegido; Z1 y Z2 son cada uno independientemente CH, C-halógeno, C-alquilo, C-arilo, C-O-alquilo o C-S-alquilo; Z3 es CH, C-alquilo, C-halógeno; N, CNHR, CNH2, CNR2, C=O o C=S; Z4 es CH, C-halógeno, C-alquilo, C-arilo, C-O-alquilo, C-S-alquilo, C-OH, C-NH2, C-NHR o C-NR2; R2, R2’, R3, R3’, R4 son cada uno independientemente H, halógeno, alquilo, O-alquilo, OH, O opcionalmente protegido, metilo o F; R5 es un OH o NH2 opcionalmente protegido; Lv es un grupo de salida. 20
Ciertas glicosilbenzo[cd]azulen-7-onas pueden modificarse mediante interconversiones de grupos funcionales (FGI) muy conocidas. Por ejemplo, el doble enlace 8,9 puede manipularse mediante procedimientos de hidrogenación, adición o adición-eliminación. La función carbonilo en 7 también puede convertirse en un tiocarbonilo en 7 o sufrir alquilación en O.
Cuando está equipado con un grupo de salida apropiado tal como un átomo de cloro en la posición 4 del armazón de glicosil-benzo[cd]azuleno, una gama de nucleófilos puede encajar en las sustituciones nucleófilas en esta posición. Nucleófilos adecuados incluyen alcoholes, alquiltioles y alquilaminas.
En el Esquema 6, preferiblemente A es O, CH2, o N opcionalmente protegido; Nu es un nucleófilo tal como N, 5 O o S opcionalmente protegido; W1 es C (si hay enlace p) o N (si no hay enlace p); W2 es C, CH o N; Z1 y Z2 son cada uno independientemente CH, C-halógeno, C-alquilo, C-arilo, C-O-alquilo o C-S-alquilo; Z3 es CH, C-alquilo, C-halógeno, N, CNHR, CNH2, CNR2, C=O o C=S; Z4 es CH o C-halógeno, C-alquilo, C-arilo, C-O-alquilo, C-S-alquilo, C-OH, C-NH2, C-NHR o C-NR2; R1, R2, R2’, R3, R3’, R4 son cada uno independientemente H, halógeno, alquilo, O-alquilo, OH, O opcionalmente protegido, metilo o F; R5 es un OH o NH2 opcionalmente protegido; X es O o S; R6 es alquilo, arilo, 10 alquenilo o alquinilo.
Esquema 7
Cuando está equipado con un grupo amino en 4, el armazón del glicosil-benzo[cd]azuleno puede modificarse mediante la intercepción de un ion diazonio derivado usando técnicas estándar. 15
En el Esquema 7, preferiblemente A es O, CH2, o N opcionalmente protegido; W1 es C (si hay enlace π) o N (si no hay enlace π); W2 es C, CH o N; Z1 y Z2 son cada uno independientemente CH, C-halógeno, C-alquilo, C-arilo, C-O-
alquilo o C-S-alquilo; Z3 es CH, C-alquilo, C-halógeno, N, CNHR, CNH2, CNR2, C=O o C=S; Y es halógeno; R1, R2, R2’, R3, R3’, R4 son cada uno independientemente H, halógeno, alquilo, O-alquilo, OH, O opcionalmente protegido, metilo o F; R5 es OH, NH2 o un grupo protector opcional; R6, R7 y R8 son cada uno independientemente alquilo, arilo, alquenilo o alquinilo.
Esquema 8 5
En el Esquema 8, preferiblemente A es O, CH2, o N opcionalmente protegido; W1 es C (si hay enlaceace π) o N (si no hay enlace π); W2 es C, CH o N; Z1 y Z2 son cada uno independientemente CH, C-halógeno, C-alquilo, C-arilo, C-O-alquilo o C-S-alquilo; Z3 es CH, C-alquilo, C-halógeno, N, CNHR, CNH2, CNR2, C=O o C=S; Y es halógeno; R1, R2, R2’, R3, R3’, R4 son cada uno independientemente H, halógeno, alquilo, O-alquilo, OH, O opcionalmente protegido, metilo 10 o F; R5 es OH o NH2 opcionalmente protegido.
Los compuestos aquí descritos pueden convertirse en sus correspondientes mono-, di- y tri-fosfatos usando métodos bien establecidos. Por otra parte, pueden prepararse profármacos de mono-, di- y tri-fosfatos a fin de optimizar la eficacia biológica de estos compuestos fosforilados. Métodos para preparar tales profármacos son muy conocidos en la técnica (véase Wagner, C.R., et ál. Med. Res. Rev., 2000, 20, 417-451). 15
Esquema 9
En el Esquema 9, preferiblemente A es O, CH2, o N opcionalmente protegido; R1, R2, R2’, R3, R3’, R4 son cada uno independientemente H, halógeno, alquilo, O-alquilo, OH, O opcionalmente protegido, metilo o F, la base es como se describió en la presente memoria. 20
Una alternativa al uso de fosfatos y profármacos de estos es el uso de miméticos de fosfato y sus profármacos (para los profármacos, véase Wagner, C.R., et ál. Med. Res. Rev., 2000, 20, 417-451). Uno de tales miméticos de fosfato se muestra posteriormente y este puede prepararse usando nucleósidos apropiadamente protegidos y condiciones conocidas.
25
Esquema 10
Métodos para preparar miméticos de tri-, di- y mono-fosfato útiles para elaborar compuestos de la invención se encuentran en WO 2003/072757 y WO 2003/073989, presentadas el 28 de febrero de 2003. Un esquema representativo se describe anteriormente. 5
En el Esquema 10, preferiblemente A es O, CH2, o N opcionalmente protegido; R1, R2, R2’, R3, R3’, R4 son cada uno independientemente H, halógeno, alquilo, O-alquilo, OH, O opcionalmente protegido, metilo o F; X’ es O, S, NH, CF2, CHF, CClH, CBr2 o CHBr; la base es como se describió anteriormente en la presente memoria.
Ensayos biológicos
Se efectúan ensayos biológicos de acuerdo con protocolos publicados ampliamente usados. A fin de obtener el 10 índice terapéutico, la citotoxicidad inducida por el compuesto para células huésped también se mide en paralelo con las actividades antivirales. Para determinar el modo de acción de los nucleósidos antivirales, los correspondientes trifosfatos de nucleósido se someten a ensayos basados en enzimas para la inhibición de polimerasas virales de acuerdo con protocolos conocidos (Ranjith-Kumar et ál. J. Virol. 2001, 75, 8615; Dhanak et ál. J. Biol. Chem. 2002, 277, 38322-38327). Algunos compuestos de la presente invención mostraban valores de Ki de menos de 1 mM contra NS5B 15 de HCV.
Puesto que la replicación del RNA del replicón imita la replicación de RNA de HCV en hepatocitos infectados, los compuestos que tienen los efectos inhibidores en ensayos de replicones son potencialmente útiles como fármacos anti-HCV. Las líneas celulares que contienen el replicón de HCV (Randall y Rice, Current Opinion en Infectious Diseases 2001, 14, 743) se usan para la identificación de compuestos anti-HCV potenciales. Entre ellos está un sistema 20 de replicón subgenómico ampliamente usado desarrollado por Lohmann et ál. (Science 1999, 285, 110; J. General Virol. 2000, 81, 1631; J. Virol. 2001, 75, 1437, 2002, 76, 4008). Algunos compuestos de la presente invención mostraban potente actividad anti-HCV con valores de EC50 de bajos μM.
Protocolos ampliamente usados desarrollados por Korba et ál. (Antiviral Res. 1992, 19, 55) y Pai et ál. (Antimicrobial Agents Chemother. 1996, 40, 380) son útiles para la determinación de la actividad anti-VHB in vitro. 25
Los ensayos anti-VIH pueden efectuare de acuerdo con los protocolos desarrollados por Schinazi et ál. (Antimiromobial Agents Chemother. 1990, 34, 1061; 1992, 36, 2423; 1993, 37, 875) u otros protocolos ampliamente usados (Kimpton et ál. J. Virol. 1992, 66, 2232; Chan et ál. J. Med Chem. 2001, 44, 1866).
Aplicaciones Biológicas y Administración
Los nucleósidos, miméticos nucleotídicos y/o sus profármacos de la presente invención pueden ser útiles para 30 la inhibición de una variedad de enzimas, incluyendo, pero no limitadas a, ADN o RNA polimerasas, helicasas, ribonucleótido reductasas, proteína quinasas y telomerasas, y para la modulación de proteínas G, receptores purinérgicos P2 y los sitios alostéricos de una variedad de enzimas.
Los nucleósidos, miméticos nucleotídicos y/o sus profármacos de la presente invención son útiles como agentes terapéuticos para seres humanos para el tratamiento de enfermedades infecciosas provocadas por virus, 35 incluyendo, pero no limitados a, VIH, VHB, HCV, HDV, HSV, HCMV, virus de la viruela, virus del Nilo occidental, virus del SARS, virus de la gripe, virus del sarampión, rinovirus, RSV, VZV, EBV, virus vacunal y papilomavirus.
Los nucleósidos, miméticos nucleotídicos y/o sus profármacos de la presente invención son útiles para el tratamiento de enfermedades infecciosas provocadas por agentes infecciosos tales como parásitos, bacterias y hongos.
Aquellos nucleósidos, miméticos nucleotídicos y/o sus profármacos que tienen potentes citotoxicidades para 40 células cancerosas que se dividen rápidamente son útiles para el tratamiento de trastornos proliferativos, incluyendo,
pero no limitados a, cáncer de pulmón, cáncer de hígado, cáncer de próstata, cáncer de colon, cáncer de mama, cáncer de ovario, melanoma y leucemia.
Como los ligandos de receptores P2 y proteínas G así como los inhibidores de proteína quinasas, los nucleósidos, miméticos nucleotídicos y/o sus profármacos de la presente invención son útiles para el tratamiento de una amplia gama de otras enfermedades y trastornos tales como enfermedades inflamatorias, enfermedades autoinmunes, 5 diabetes tipo 2 y enfermedades cardiovasculares.
A fin de vencer la resistencia a los fármacos, se usan ampliamente terapias de combinación en el tratamiento de enfermedades infecciosas y trastornos proliferativos. Los nucleósidos, miméticos nucleotídicos y/o sus profármacos de la presente invención pueden administrarse terapéuticamente como un solo fármaco o alternativamente pueden administrarse en combinación con uno o más de otras entidades químicas activas para formar una terapia de 10 combinación. Las otras entidades químicas activas pueden ser una molécula pequeña, un polipéptido o un polinucleótido.
La composición farmacéutica de la presente invención comprende al menos uno de los compuestos representados por las fórmulas de la presente memoria o sales farmacéuticamente aceptables o ésteres de los mismos como ingredientes activos. Las composiciones incluyen las adecuadas para administración oral, tópica, intravenosa, 15 subcutánea, nasal, ocular, pulmonar y rectal. Los compuestos de la invención pueden administrarse a individuos mamíferos, incluyendo seres humanos, como agentes terapéuticos.
De acuerdo con esto, los compuestos de la invención son útiles como agentes contra infecciones microbianas. Se describe un método para el tratamiento de un paciente afectado por una infección, que comprende administrar al paciente una cantidad antimicrobiana terapéuticamente eficaz de un compuesto de la invención. El término “infección 20 microbiana”, según se usa en la presente memoria, se refiere a un estado o situación anormal caracterizado por la transformación microbiana de células, replicación microbiana y/o proliferación microbiana. Infecciones microbianas para las que será particularmente útil el tratamiento con un compuesto de la invención incluyen los microbios mencionados anteriormente.
El término “tratar”, como en “tratar una enfermedad”, está destinado a incluir cualquier medio para tratar una 25 enfermedad en un mamífero, incluyendo (1) prevenir la enfermedad, es decir, evitar cualesquiera síntomas clínicos de la enfermedad, (2) inhibir la enfermedad, esto es, reprimir el desarrollo o avance de los síntomas clínicos y/o (3) aliviar la enfermedad, es decir, provocar la regresión de los síntomas clínicos.
Por ejemplo, los compuestos de la invención son útiles como agentes antivirales. Se describe un método para el tratamiento de un paciente afectado por una infección, que comprende administrar al paciente una cantidad antiviral 30 terapéuticamente eficaz de un compuesto de la invención. El término “infección viral”, según se usa en la presente memoria, se refiere a un estado o situación anormal caracterizado por transformación viral de células, replicación y proliferación viral. Infecciones virales para las que será particularmente útil el tratamiento con un compuesto de la invención incluyen los virus mencionados anteriormente.
Una “cantidad terapéuticamente eficaz” de un compuesto de la invención se refiere a una cantidad que es 35 eficaz, en la administración en dosis individuales o múltiples al paciente, para controlar el crecimiento de, p. ej., el microbio o tumor o para prolongar la supervivencia del paciente más allá de la esperada en ausencia de tal tratamiento. Según se usa en la presente memoria, “controlar el crecimiento” se refiere a frenar, interrumpir, reprimir o detener la transformación microbiana o proliferativa de células o la replicación y la proliferación del microbio y no indica necesariamente una eliminación total de, p. ej., el microbio o el tumor. 40
De acuerdo con esto, la presente invención incluye composiciones farmacéuticas que comprenden, como un ingrediente activo, al menos uno de los compuestos de la invención en asociación con un portador farmacéutico. Los compuestos de esta invención pueden administrarse mediante las rutas de administración oral, parenteral (inyección intramuscular, intraperitoneal, intravenosa (IV) o subcutánea), tópica, transdérmica (bien pasivamente o bien usando iontoforesis o electroporación), transmucosal (p. ej., nasal, vaginal, rectal o sublingual) o pulmonar (p. ej., a través de 45 inhalación de polvo seco) o usando inserciones bioerosionables y pueden formularse en formas de dosificación apropiadas para cada ruta de administración.
Formas de dosificación sólidas para administración oral incluyen cápsulas, comprimidos, píldoras, polvos y gránulos. En tales formas de dosificación sólidas, el compuesto activo se mezcla con al menos un portador farmacéuticamente aceptable inerte tal como sacarosa, lactosa o almidón. Tales formas de dosificación también pueden 50 comprender, como es la práctica normal, sustancias adicionales distintas de los diluyentes inertes, p. ej., agentes lubricantes tales como estearato magnésico. En el caso de las cápsulas, los comprimidos y las píldoras, las formas de dosificación también pueden comprende agentes tamponadores. Las tabletas y las píldoras pueden prepararse adicionalmente con revestimientos entéricos.
Formas de dosificación líquidas para la administración oral incluyen emulsiones, soluciones, suspensiones y 55 jarabes farmacéuticamente aceptables, conteniendo los elixires diluyentes inertes usados comúnmente en la técnica, tales como agua. Además de tales diluyentes inertes, las composiciones también pueden incluir adyuvantes, tales como agentes humectantes, agentes emulsionantes y de suspensión y agentes edulcorante, saborizantes y perfumantes.
Las preparaciones de acuerdo con esta invención para administración parenteral incluyen soluciones, suspensiones o emulsiones acuosas o no acuosas estériles. Ejemplos de disolventes o vehículos no acuosos son propilenglicol, polietilenglicol, aceites vegetales, tales como aceite de oliva y aceite de maíz, gelatina y ésteres orgánicos inyectables tales como oleato de etilo. Tales formas de dosificación también pueden contener adyuvantes tales como agentes conservantes, humectantes, emulsionantes y dispersantes. Pueden esterilizarse mediante, por ejemplo, 5 filtración a través de un filtro que retiene bacterias, al incorporar agentes esterilizantes a las composiciones, al irradiar las composiciones o al calentar las composiciones. También pueden fabricarse usando agua estéril o algún otro medio inyectable estéril, inmediatamente antes de usar.
Las composiciones para administración rectal o vaginal son preferiblemente supositorios que pueden contener, además de la sustancia activa, excipientes tales como mantequilla de cacao o una cera para supositorios. Las 10 composiciones para administración nasal o sublingual también pueden prepararse con excipientes estándar bien conocidos en la técnica.
Las formulaciones tópicas comprenderán generalmente pomadas, cremas, lociones, geles o soluciones. Las pomadas contendrán una base para pomadas convencional seleccionada de cuatro clases reconocidas: bases oleaginosas; bases emulsionables; bases para emulsiones y bases solubles en agua. Las lociones son preparaciones 15 que han de aplicarse a la piel o la superficie mucosal sin fricción y típicamente son preparaciones líquidas o semilíquidas en las que están presentes partículas sólidas, incluyendo el agente activo, en una base acuosa o alcohólica. Las lociones son habitualmente suspensiones de sólidos y, preferiblemente, para el presente propósito, comprenden una emulsión oleosa líquida del tipo de aceite en agua. Las cremas, como se sabe en la técnica, son emulsiones líquidas viscosas o semisólidas, bien de aceite en agua o bien de agua en aceite. Las formulaciones tópicas 20 también pueden estar en la forma de un gel, es decir un sistema semisólido tipo suspensión, o en la forma de una solución.
Finalmente, las formulaciones de estos fármacos en forma de polvo seco para el aporte mediante un inhalador de polvo seco ofrecen otro medio de administración más. Este vence muchas de las desventajas de las rutas oral e intravenosa. 25
La dosificación de ingrediente activo en las composiciones de esta invención puede variarse; sin embargo, es necesario que la cantidad del ingrediente activo sea tal que se obtenga una forma de dosificación adecuada. La dosificación seleccionada depende del efecto terapéutico deseado, de la ruta de administración y de la duración del tratamiento deseado. Generalmente, se administran a mamíferos niveles de dosificación de entre 0,001 y 10 mg/kg de peso corporal al día. 30
Los siguientes ejemplos se presentan a fin de proporcionar a los expertos normales en la técnica una divulgación y descripción completas de cómo preparar y usar los compuestos divulgados y reivindicados en la presente memoria.
A fin de vencer la resistencia a los fármacos, se usan ampliamente terapias de combinación en el tratamiento de infecciones virales. Los análogos de nucleósido, los correspondientes 5’-monofosfato, 5’-difosfato, 5’-trifosfato y 35 profármacos de los mismos de la presente invención pueden administrarse terapéuticamente como un solo fármaco o alternativamente pueden administrarse en combinación con una o más de otras entidades químicas activas para formar una terapia de combinación. Las otras entidades químicas activas pueden ser una molécula pequeña, un polipéptido o un polinucleótido.
Los siguientes Ejemplos se ofrecen para ilustrar pero no para limitar la invención. 40
Ejemplos
Ejemplo 1
2-(2-C-metil-β-D-ribofuranosil)-2,6-dihidro-7H-1,2,3,5,6-pentaazabenzo[cd]azulen-7-ona (1.7)
Para la preparación del nucleósido tricíclico 1.7, se preparó 4-amino-3-yodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina 1.2 5 mediante la yodación de 4-amino-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina 1.1 usando N-yodosuccinimida en DMF a 80˚C. La glicosilación de 1.2 con 2-C-metil-tetrabenzoil-ribofuranosa 1.3 disponible comercialmente en nitrometano a ebullición en presencia de eterato de trifluoruro de boro daba el 2’C-metil-nucleósido 1.4 con 65% de rendimiento después de la purificación. La retirada de grupos bloqueadores éster con amoníaco en MeOH proporcionaba el nucleósido libre 1.5 con 83% de rendimiento aislado. El uso de acrilato de metilo en la reacción de acoplamiento cruzado catalizada por 10 Pd[0] de 1.5 proporcionaba el 7-alquenil-nucleósido 1.6. El tratamiento del compuesto 1.6 con NaOMe/MeOH daba como resultado una ciclación intramolecular, dando el nucleósido tricíclico buscado 1.7.
Ejemplo 1. Etapa-A: 4-Amino-3-yodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (1.2)
Se preparó 4-amino-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina de acuerdo con el método publicado (J. Med. Chem. 1993, 36, 3424-3430). 15
Ejemplo 1. Etapa-B: 4-Amino-3-yodo-1-(2-C-metil-2,3,5-tri-O-benzoil-β-D-ribofuranosil)pirazolo[3,4-d]pirimidina (1.4)
Se disolvió 1-O-acetil-2-C-metil-2,3,5-tri-O-benzoil-D-ribofuranosa (1,0 g, 1,72 mmol) en nitrometano anhidro (10,0 ml) y a esta solución se añadió el compuesto 1.2 (312 mg, 1,21 mmol). La suspensión resultante se llevó hasta reflujo y se añadió eterato de trifluoruro de boro (0,23 ml, 1,78 mmol). La suspensión se volvió una solución transparente, que se calentó a reflujo durante 2 h. La mezcla se enfrió, los disolventes se evaporaron y el residuo 20 espumoso blanquecino se disolvió en acetato de etilo y a continuación se vertió con agitación en NaHCO3 acuoso saturado. La capa acuosa se extrajo dos veces con acetato de etilo y las capas orgánicas combinadas se secaron (Na2SO4), se filtraron y se evaporaron para dar un sólido blanquecino. Este material se purificó mediante cromatografía en columna de desarrollo rápido sobre gel de sílice usando CH2Cl2 hasta MeOH al 2-3% en diclorometano como eluyente para dar el compuesto deseado 1.4 (811 mg) como una espuma amarilla. 25
Ejemplo 1. Etapa-C: 4-Amino-3-yodo-1-(2-C-metil-β-D-ribofuranosil)-1H-pirazolo[3.4-d]pirimidina (1.5)
Una solución del compuesto 1.4 (540 mg, 0,75 mmol) en MeOH en NH3 (120 ml, saturado a 0˚C) se agitó en una bomba a 45˚C durante 16 h. La mezcla se evaporó hasta sequedad y a continuación el residuo se coevaporó con
MeOH adicional. La purificación mediante cromatografía en columna de gel de sílice usando MeOH al 6-14% en diclorometano como eluyente daba el compuesto deseado 1.5 (244 mg) como un sólido blanquecino.
Ejemplo 1. Etapa-D: 4-Amino-1-(2-C-metil-β-D-ribofuranosil)-3-[2-metoxicarbonil)etenil]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (1.6)
A una solución del compuesto 1.5 de la Etapa-C (392 mg, 0,54 mmol) en DMF (10 ml) se añadieron CuI (44 mg, 0,23 mmol), acrilato de metilo (2,0 ml, 23,23 mmol), trietilamina (0,332 ml, 2,36 mmol) y 5 tetraquis(trifenilfosfina)paladio[0] (133 mg, 0,12 mmol), calentados a 70˚C bajo Ar. La mezcla de reacción se calentó a 70˚C durante 36 h. Después de este tiempo, se añadieron, CuI (44 mg, 0,23 mmol), acrilato de metilo (2,0 ml, 23,23 mmol), trietilamina (0,332 ml, 2,36 mmol) y tetraquis(trifenilfosfina)paladio[0] (133 mg, 0,12 mmol) adicionales y la mezcla se calentó a 70˚C durante 6 h más. A continuación, la mezcla de reacción se enfrió hasta temperatura ambiente y se añadieron 8 ml de MeOH/CH2Cl2 1/1. Se añadieron 100 mg de Dowex 1x2-100, forma de bicarbonato, la 10 suspensión se agitó a temperatura ambiente durante 45 min y a continuación se filtró. La resina se lavó con 5 x 10 ml de MeOH/CH2Cl2: 1/1, los disolventes se evaporaron y la DMF residual se evaporó finalmente mediante evaporación azeotrópica con tolueno (2 x 10 ml). El residuo se redisolvió en MeOH y se preabsorbió sobre gel de sílice. La purificación cromatográfica sobre gel de sílice usando MeOH al 4-4,5% en CH2Cl2 como eluyente daba el éster deseado 1.6 (216 mg, rendimiento 52%). 15
Ejemplo 1, Etapa-E: 2-(2-C-Metil-β-D-ribofuranosil)-2,6-dihidro-7H-1,2,3,5,6-pentaazabenzo[cd]azulen-7-ona (1.7)
Una solución del éster 1.6 (208,3 mg, 0,57 mmol) en NaOCH3 0,1 M en MeOH se calentó a reflujo durante 3 h, se enfrió hasta 0˚C y se añadió Dowex 50 x 100 (forma ácida) hasta que el pH de la solución se hacía neutro. La mezcla de reacción se filtró y la resina se lavó con MeOH. El disolvente se evaporó y el residuo se purificó usando cromatografía en columna de gel de sílice usando MeOH de 4 a 4,5% en CH2Cl2 como eluyente para dar el compuesto 20 deseado 1.7 (26,5 mg) como un sólido blanquecino.
1H NMR (DMSO-d6) δ 11,6 (s, NH, 1H), 8,56 (s, H-4, 1H), 7,31 (d, J 12 Hz, CH, 1H), 6,28 (d, J 12 Hz, CH, 1H), 6,15 (s, H-1’, 1H), 5,28 (s, 2’-OH, 1H), 5,14 (d, J 6,9 Hz, 3’-OH, 1H), 4,65 (t, J 5,7 Hz, 5’-OH, 1H), 3,95-4,09 (m, H-3’, H-4’, 2H), 3,62-3,69 (m, H-5’, 2H), 0,83 (s, CH3, 3H). MS m/z 332 (M-H)+.
Ejemplo 2 25
2-(2-C-metil-β-D-ribofuranosil)-2,6,8,9-tetrahidro-7-oxa-2,3,5,6-tetraazabenzo[cd]azuleno (2.9)
La bromación (NBS/THF) de la pirrolopirimidina de partida 2.1 proporcionaba la bromopirrolopirimidina 2.2 con un rendimiento de 63%. El tratamiento de 2.2 con n-butil-litio en THF a -78˚C daba como resultado un intercambio selectivo de litio-bromo para dar un producto intermedio que durante el tratamiento con (2-bromoetoxi)-terc-30 butildimetilsilano (-30˚C/5 h) proporcionaba la pirimidina 2.3 con un rendimiento de 43% junto con la pirimidina de partida 2.2 recuperada (30%). Cuando la reacción se repetía a gran escala (7,0 g de 2.2), se alcanzaba una mejora significativa (-20˚C/ 16 h) y la pirimidina 2.3 se aislaba con un rendimiento de 55% (5,5 g). La glicosilación estereoselectiva de 2.3 con el azúcar bromado 2.4 (recientemente preparado a partir de 3,5-bis-O-(2,4-diclorofenilmetil)-2-C-metil-1-O-metil-α-D-ribofuranosa disponible comercialmente usando HBr en ácido acético/CH2Cl2) con KOH al 85%/TDA-1 (tris[2-(2-35 metoxietoxi)etil]amina) proporcionaba el nucleósido 2.5 con un rendimiento aislado de 26%. La retirada del grupo
TBDMS de 2.5 con fluoruro de tetrabutilamonio/THF daba el diol 2.6. El compuesto 2.6 se sometía a acoplamiento de Mitsunobu con N-hidroxiftalimida para dar el correspondiente ftalimidooxietil-nucleósido 2.7 con un rendimiento de 88%. 2.7 se trató con H2NNH2 anhidro para retirar el grupo ftaloílo y este producto intermedio de aminooxi libre (en bruto) 2.8 se calentó en EtOH para dar 2.8. La retirada de los grupos diclorobencilo de 2.8 al usar BCl3 en CH2Cl2 suministraba el nucleósido tricíclico 2.9. 5
Ejemplo 2, Etapa-A: 5-Bromo-4-cloropirrolo[2,3-d]pirimidina (2.2)
Una solución de 4-cloro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina se preparó de acuerdo con un procedimiento de la bibliografía (Townsend, L.B. et ál., J. Med. Chem. 1988, 31, 2086-2092).
Ejemplo 2, Etapa-B: 5[2-(terc-Butildimetilsiloxi)etil]-4-cloro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (2.3)
Una suspensión del compuesto 2.2 de la Etapa A (2,0 g, 8,6 mmol) en THF (40,0 ml) se enfrió hasta -78˚C bajo 10 una atmósfera de argón. A continuación, se añadió n-BuLi (1,6 M en hexanos, 13,4 mmol) durante 1,0 h a través de una jeringa. Una suspensión formada por (2-bromoetoxi)-terc-butildimetilsilano (7,4 ml, 34,4 mmol) se añadió a través de una jeringa mientras se mantenía la mezcla de reacción a -78˚C. Se dejó que la mezcla de reacción alcanzara lentamente -30˚C y se agitó durante 2 h, a continuación de -30 a -10˚C durante 1 h y de -10 a 0˚C durante 1 h. La mezcla de reacción se volvió de color pardo oscuro, se trató con NH4Cl, CH2Cl2 y agua. La mezcla de reacción se extrajo con 15 CH2Cl2 y los extractos se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se evaporaron. El residuo beis se purificó mediante cromatografía en columna de desarrollo rápido usando EtOAc al 23% en hexanos como eluyente para dar el compuesto deseado 2.3 (1,16 g, 43%) como un sólido blanco. (Brown, D.M. et ál., J. Chem. Soc. PT-1, 3565-3570,)
Ejemplo 2, Etapa-C: 5-[2-(terc-Butildimetilsiloxi)etil]-4-cloro-7-[2-C-metil-3,5-bis-O-(2,4-diclorofenilmetil)-β-D-ribofuranosil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (2.5) 20
El compuesto 2.3 (2,5 g, 8,00 mmol) se suspendió en CH3CN (50 ml) y se añadieron KOH al 85% en polvo (1,3 g, 19,73 mmol), seguido por TDA -1 (tris[2-(2-metoxietoxi)etil]amina) (0,2 ml, 0,62 mmol). Después de agitar a temperatura ambiente durante 10 min, una solución recientemente preparada del azúcar bromado 2.4 (preparado a partir de 3,5-bis-O-(2,4-diclorofenilmetil)-2-C-metil-1-O-metil-α-D-ribofuranosa disponible comercialmente; (i) Helv.Chim.Acta, 1995, 78, 486; (ii) WO 02/057287, 2002) (10,1 mmol) en acetonitrilo anhidro (50 ml) se añadió a través 25 de una cánula y la reacción se agitó durante 24 h a temperatura ambiente y a continuación se enfrió en un baño de hielo/agua y se trató con CH2Cl2 (100 ml) y agua (80 ml). El material acuoso se extrajo tres veces con CH2Cl2, las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se evaporaron. El producto en bruto se purificó sobre una columna de gel de sílice usando acetato de etilo al 20%/hexanos como eluyente para dar el nucleósido deseado 2.5 (1,03 g, 13%). La elución adicional con EtOAc al 25%/hexanos como eluyente daba una mezcla del nucleósido deseado 30 2.5 y la base de partida 2.3 (350 mg).
Ejemplo 2 Etapa-D: 4-Cloro-7-[2-C-metil-3,5-bis-O-(2,4-diclorofenilmetil)-β-D-ribofuranosil]-5-(2-hidroxietil)- 7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (2.6)
A una solución del compuesto 2.5 (1,14 g, 1,47 mmol) en THF (30 ml) se añadió una solución 1,0 M de fluoruro de tetrabutilamonio en THF (2,2 mmol) a temperatura ambiente. La solución incolora se agitó durante 5 h a temperatura 35 ambiente y a continuación se diluyó mediante la adición de 10 ml de CH2Cl2 y 10 ml de salmuera. La capa acuosa se extrajo tres veces con CH2Cl2, se secó sobre Na2SO4, se filtró y se evaporó. El residuo obtenido se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice usando MeOH al 1-1,5% en CH2Cl2 como eluyente para dar el compuesto deseado 2.6 (900 mg, 88%) como un sólido blanco.
Ejemplo 2, Etapa-E: 4-Cloro-7-[2-C-metil-3,5-bis-O-(2,4-diclorofenil)-β-D-ribofuranosil]-5-(2-ftalimidooxietil)- 7H-40 pirrolo[2,3-d]pirimidina (2.7)
A una solución del compuesto 2.6 (359,0 mg, 0,54 mmol) en THF (10 ml) se añadieron trifenilfosfina (215,0 mg, 0,82 mmol) y N-hidroxiftalimida (132,0 mg, 0,081 mmol) seguido por azodicarboxilato de dietilo (DEAD) (153 ml, 0,88 mmol) y la solución se agitó durante la noche a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se diluyó al añadir 10 ml de CH2Cl2 y 10 ml de agua. La capa acuosa se extrajo tres veces con CH2Cl2, se secó sobre Na2SO4, se filtró y se 45 evaporó. El producto se purificó mediante cromatografía en columna de desarrollo rápido usando EtOAc al 15-20% en hexanos como eluyente para dar el compuesto deseado 2.7 (369 mg, 85%) como un sólido blanco.
Ejemplo 2, Etapa-F: 2-(2-C-metil-3,5-bis-O-(2,4-diclorofenilmetil)-β-D-ribofuranosil)-2,6,8,9-tetrahidro-7-oxa- 2,3,5,6-tetraazabenzo[cd]azuleno (2.8)
A una suspensión del compuesto 2.7 (880,0 mg, 1,09 mmol) en acetonitrilo (60 ml) se añadió hidrazina anhidra 50 (38 μl, 1,19 mmol) y la solución se agitó durante 2 h a temperatura ambiente. No quedaba material de partida, según se juzgaba por la tlc. El precipitado blanco (hidrazida ftálica) se separó por filtración y se lavó con acetonitrilo anhidro y a continuación la solución se evaporó hasta sequedad. El producto de reacción en bruto se secó bajo alto vacío para dar 864 mg de un sólido blanco. El producto intermedio de aminooxi resultante se redisolvió en EtOH anhidro (50 ml) y la solución se calentó a reflujo durante 2 d. Después de la evaporación, la mezcla de reacción se purificó mediante 55
cromatografía en columna de gel de sílice usando CH2Cl2 hasta MeOH al 2% en CH2Cl2 para dar el compuesto deseado 2.8 (466 mg) como una espuma blanca.
Ejemplo 2, Etapa-G: 2-(2-C-metil-β-D-ribofuranosil)-2,6,8,9-tetrahidro-7-oxa-2,3,5,6-tetraazabenzo[cd]azuleno (2.9)
A una solución del compuesto 2.8 (128,0 mg, 0,20 mmol) en CH2Cl2 (25 ml) a -78˚C se añadió una solución 1,0 M de BCl3 en CH2Cl2 (2,0 ml, 2,0 mmol) gota a gota a través de una jeringa. La mezcla se agitó a -78˚C durante 1,5 h y 5 a continuación a de -35˚C a -40˚C durante 2,5 h. La reacción se extinguió con MeOH (8,0 ml) y los disolventes se evaporaron. El producto en bruto resultante se purificó mediante cromatografía en columna de desarrollo rápido sobre gel de sílice usando MeOH al 5% en CH2Cl2 como eluyente para dar el compuesto del epígrafe 2.9 (59,2 mg) como una espuma blanca.
1H NMR (DMSO-d6) δ 10,62 (s, NH, 1H), 8,19 (s, H-2, 1H), 7,47 (s, H-6, 1H), 6,15 (s, H-1’, 1H), 5,09 (s an, 2’-10 OH, 3’-OH, 5’-OH, 3H), 4,29 (s an, OCH2CH2, 2H), 3,63-3,96 (m, H-3’, H-4’, H5’, 4H), 2,91-2,96 (m, OCH2CH2, 2H), 0,70 (s, CH3, 3H). MS m/z 381 (M + CH3COO)-.
Ejemplo 3
2-(β-D-ribofuranosil)-2,6-dihidro-7H-1,2,3,5,6-pentaazabenzo[cd]azulen-7-ona (3,3)
15
Ejemplo 3, Etapa-A: 4-Amino-1-(β-D-ribofuranosil)-3-[2-metoxicarbonil)etenil]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (3.2)
A una solución del compuesto 3.1* (300 mg, 0,76 mmol) en DMF (10 ml) se añadieron CuI (29 mg, 0,15 mmol), acrilato de metilo (1,3 ml, 15,1 mmol), trietilamina (1,3 ml, 3,09 mmol) y tetraquis(trifenilfosfina)paladio[0] (88 mg, 0,08 mmol) y la mezcla se calentó a 70˚C durante 36 h bajo argón. Después de este tiempo, se añadieron CuI, acrilato de metilo, trietilamina y catalizador de Pd adicionales y la mezcla de reacción parda oscura se calentó durante 6 h más. A 20 continuación, la mezcla de reacción se enfrió hasta temperatura ambiente y se añadieron 8 ml de MeOH/CH2Cl2 1/1. Se añadieron 100 mg de Dowex 1x2-100, forma de bicarbonato, y la mezcla se agitó durante 45 min a temperatura ambiente y a continuación se filtró. La resina se lavó con 2 x 10 ml de MeOH/CH2Cl2: 1/1 y los disolventes se evaporaron. La purificación cromatográfica sobre gel de sílice usando MeOH al 6-7% en CH2Cl2 daba el compuesto deseado 3.2 (120 mg) como un sólido amarillo claro. 25
*J. Med. Chem. 1993, 36, 3424-3430,
Ejemplo 3, Etapa-B: 2-(β-D-ribofuranosil)-2,6-dihidro-7H-1,2,3,5,6-pentaazabenzo[cd]azulen-7-ona (3.3)
Una solución del compuesto 3.2 (110 mg, 0,31 mmol) en NaOCH3 0,1 M en MeOH se calentó a reflujo durante 3 h, se enfrió hasta 0˚C y se trató con Dowex 50 x 100 (forma ácida) hasta que el pH de la mezcla se hacía neutro. El contenido de la reacción se filtró y la resina se lavó con MeOH/CH2Cl2 (1:1). Los disolventes se evaporaron y el residuo 30 obtenido se purificó mediante cromatografía en columna de desarrollo rápido usando MeOH al 4-4,5% en CH2Cl2 como eluyente para dar el compuesto del epígrafe 3.3 (10,7 mg) como un sólido blanco. 1H NMR (DMSO-d6) δ 11,6 (s, NH, 1H), 8,58 (s, H-4, 1H), 7,35 (d, J 12 Hz, CH, 1H), 6,31 (d, J 12 Hz, CH, 1H), 6,11 (d, J 4,5 Hz, H-1’, 1H), 5,46 (d, J 5,7 Hz, 2’-OH, 1H), 5,21 (d, J 3,9 Hz, 3’-H, 1H), 4,80 (t, J 5,1 Hz, 5’-OH, 1H), 4,62-4,64 (m, H-2’, 1H), 3,92-3,94 (m, H-3’, 1H), 3,44-3,61 (m, H-4’, H5’, 2H), 0,83 (s, CH3, 3H). 35
Ejemplo 4
2-(2-C-metil-β-D-ribofuranosil)-6,7,8,9-tetrahidro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo[cd]azuleno (4.6)
El tratamiento de 2.2 con n-butil-litio en THF a -78˚C daba como resultado un intercambio selectivo de halógeno-metal para dar un producto intermedio que durante el tratamiento con (3-bromopropoxi)-terc-butildimetilsilano 5 (-30˚C/5 h) proporcionaba la pirimidina 4.1 con un rendimiento de 36% junto con la recuperación de la pirimidina de partida (30%). Cuando la reacción se repetía a gran escala (partiendo de 7,0 g de 2.2), se alcanzaba una mejora significativa (-20˚C/16 h) y la pirimidina 4.1 se aislaba con 55% de rendimiento. La glicosilación estereoselectiva de 4.1 con el azúcar bromado 2.4 en presencia de KOH/TDA-1 proporcionaba el nucleósido 4.2 con un rendimiento aislado de 17%. La retirada del grupo protector TBDMS de 4.2 permitía el acoplamiento de Mitsunobu con ftalimida para dar el 10 correspondiente derivado de ftalimido 4.4 con un rendimiento cuantitativo. La escisión de la ftalimida usando hidrazina en diferentes disolventes no producía la amina primaria y se encontró que una condición de reacción alternativa que usaba etilendiamina/etanol daba como resultado la escisión de la ftalimida seguida por ciclación in situ del producto intermedio amínico libre para dar 4.5 tricíclico protegido con un rendimiento de 56%. La desprotección de los grupos diclorobencilo de 4.5 usando BCl3 en CH2Cl2/de -78˚C a - 30˚C suministraba el nucleósido tricíclico 4.6 buscado con un 15 rendimiento aislado de 84% después de la purificación mediante cromatografía en columna de gel de sílice.
Ejemplo 4, Etapa-A: 5-[2-(terc-Butildimetilsiloxi)propil]-4-cloro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (4.1)
Una suspensión del compuesto 2.2 (10,0 g, 43,0 mmol) en THF (140,0 ml) se enfrió hasta -78˚C bajo una atmósfera de argón y n-BuLi (1,6 M en hexanos, 67,3 mmol) se añadió a continuación a través de una jeringa a lo largo de 1,5 h. La suspensión resultante se agitó durante los siguientes 30 min a -78˚C y a continuación se añadió lentamente 20 (3-bromopropoxi)-terc-butildimietilsilano (21,4 ml, 172,0 mmol) a través de una jeringa a -78˚C durante 1 h. Se dejó que la mezcla de reacción alcanzara lentamente -30˚C y se agitó durante las 2 h siguientes y de -30 a 10˚C durante 1 h y de -10 a 0˚C durante 1 h. La mezcla de reacción se volvió de color pardo oscuro y se mantuvo a 4˚C durante la noche. La reacción se extinguió al añadir NH4Cl acuoso (100 ml) y se diluyó con CH2Cl2 (600 ml) y agua (120 ml) y a continuación se extrajo con CH2Cl2. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se evaporaron. El 25 residuo de color beis se purificó mediante cromatografía en columna de desarrollo rápido usando EtOAc al 25% en hexanos como eluyente para dar el compuesto deseado 4.1 (5,5 g) como un sólido blanco.
Ejemplo 4, Etapa-B: 5-[2-(terc-Butildimetilsiloxi)propil]-4-cloro-7-(2-C-metil-3,5-bis-O-(2,4-diclorofenilmetil)-β-D-ribofuranosil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (4.2)
El compuesto 4.1 (5,24 g, 16,0 mmol) se suspendió en CH3CN (120 ml) y se añadió KOH al 85% en polvo (2,63 30 g, 40,0 mmol) seguido por TDA-1 (tris[2-(2-metoxietoxi)etil]amina) (0,4 ml, 1,24 mmol). Después de agitar a temperatura ambiente durante 30 min, una solución recientemente preparada de azúcar bromado 2.4 (20,0 mmol) en acetonitrilo anhidro (120 ml) se añadió a través una cánula y la mezcla se agitó durante 2 días a temperatura ambiente, se enfrió en
un baño de hielo y se trató con CH2Cl2 (200 ml) y agua (100 ml). El material acuoso se extrajo tres veces con CH2Cl2 y los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se evaporaron. El producto en bruto se purificó sobre una columna de gel de sílice usando acetato de etilo al 15%/hexanos como eluyente para dar el compuesto deseado 4.2 (2,6 g) como un sólido amarillo claro.
Ejemplo 4, Etapa-C: 4-Cloro-7-[2-C-metil-3,5-bis-O-(2,4-diclorofenilmetil)-β-D-ribofuranosil]-5-(2-hidroxipropil)- 7H-5 pirrolo[2,3-d]pirimidina (4.3)
A una solución del compuesto 4.2 (800 mg, 1,01 mmol) en THF (20 ml) se añadió una solución 1,0 M de fluoruro de tetrabutilamonio en THF (1,5 mmol) a temperatura ambiente. La solución incolora se agitó durante 4 h a temperatura ambiente y a continuación se diluyó mediante la adición de 150 ml de CH2Cl2 y agua (50 ml). Las capas acuosas se extrajeron tres veces con CH2Cl2 y a continuación se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se evaporaron. La 10 purificación mediante cromatografía en columna de gel de sílice usando MeOH al 1-2% en CH2Cl2 como eluyente daba el compuesto deseado 4.3 (460 mg, 67%) como un sólido blanco.
Ejemplo 4, Etapa-D: 4-Cloro-7-[2-C-metil-3,5-bis-O-(2,4-diclorofenilmetil)-β-D-ribofuranosil]-5-(2-ftalimidopropil)- 7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (4.4)
A una solución del compuesto 4.3 (1,28 g, 1,89 mmol) en THF (70 ml) se añadieron trifenilfosfina (648 mg, 2,47 15 mmol) y ftalimida (364,0 mg, 2,47 mmol) seguido por DEAD (440 ml, 2,53 mmol) y la solución se agitó durante la noche a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se diluyó al añadir 100 ml de CH2Cl2 y agua (100 ml) y las capas acuosas se extrajeron tres veces con CH2Cl2, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se evaporaron. El residuo obtenido se purificó mediante cromatografía en columna de desarrollo rápido usando EtOAc al 20-30% en hexanos como eluyente para dar el compuesto deseado 4.4 (1,5 g, 100%) como un sólido blanco. 20
Ejemplo 4, Etapa-E: 2-[2-C-metil-3,5-bis-O-(2,4-diclorofenilmetil)-β-D-ribofuranosil]-6,7,8,9-tetrahidro-2H- 2,3,5,6-tetraazabenzo[cd]azuleno (4.5)
A una solución del compuesto 4.4 (161 mg, 0,2 mmol) en EtOH absoluto (15 ml) se añadió etilendiamina (24 ml, 0,4 mmol) y la mezcla se agitó a 50˚C durante 2 días. Los disolventes se evaporaron y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna usando MeOH al 2-3% en CH2Cl2 como eluyente para dar el compuesto deseado 25 4.5 (70,7 mg, 55%) como una espuma blanquecina.
Ejemplo 4, Etapa-F: 2-(2-C-metil- β -D-ribofuranosil)-6,7,8,9-tetrahidro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo[cd]azuleno (4.6)
A una solución del compuesto 4.5 (68,0 mg, 0,1 mmol) en CH2Cl2 (10 ml) a -78˚C se añadió solución 1,0 M de BCl3 en CH2Cl2 (1,07 mmol) gota a gota a través de una jeringa. La mezcla se agitó a -78˚C durante 1,5 h y a continuación durante 3 h a de -35˚C a -40˚C. La reacción se extinguió al añadir MeOH (6,0 ml), los disolventes se 30 evaporaron y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna de desarrollo rápido sobre gel de sílice usando MeOH al 6-7% en CH2Cl2 como eluyente para dar el compuesto del epígrafe 4.6 (31,8 mg) como un espuma blanca.
1H NMR (DMSO-d6) δ 7,99 (s, H-2, 1H), 7,5 (s, NH, 1H), 7,23 (s, H - 7, 1H), 6,12 (s, H-1’, 1H), 3,82-3,94 (m, H-3’, H-4’, H-5’, 4H), 2,78 (m, NCH2CH2CH2, 2H), 1,9 (m, NCH2CH2CH2, 4H), 0,70 (s, CH3, 3H). MS m/z 379 (M + 35 CH3COO)-
Ejemplo 5
2-(2-O-Metil-β-D-ribofuranosil)-2,6-dihidro-7H-2,3,5,6-tetraazabenzo[cd]azulen-7-ona (5.9)
La metilación en 2’-O selectiva de nucleósidos tricíclicos se buscó mediante la introducción de protección selectiva y simultánea de los grupos hidroxilo en 3’ y 5’ en 5.1 a través de un puente de 3’,5’-O-tetraisopropildisiloxano, seguido por 5 metilación y retirada de la protección de OH en 3’,5’ para proporcionar 5.4.
La reacción de 6-clorotubercidina 5.1 disponible comercialmente con TIPDSCl2/imidazol en DMF/temperatura ambiente/durante la noche daba el compuesto 5.2 protegido con TIPDS en el O 5’,3’ con un rendimiento de 75%. La metilación de 5.2 en DMF usando NaH/MeI/4 h/0˚C daba el compuesto 2’OCH3 5.3 con un rendimiento de 35% (2 etapas). Se encontró que al disminuir el tiempo de reacción de 4 h a 1 h, el compuesto 5.3 podía aislarse con un 10 rendimiento de 68%. La retirada del TIPDS de 5.3 se efectuó al usar 4 equivalentes de fluoruro de tetrabutilamonio 1,0 M en THF a 0˚C/1 h para dar 5.4. El producto intermedio 5.4 se acetiló usando Ac2O/piridina para dar 5.5 con un rendimiento cuantitativo. La yodación de 5.5 usando ICl en CH2Cl2 daba el compuesto yodado 5.6 con un rendimiento de 66% y la aminación subsiguiente de 5.6 con amoníaco metanólico 120˚C/16 h proporcionaba 5.7 con un rendimiento aislado de 89%. El acoplamiento de Stille de 5.7 usando (Z)-3-(tributilestannil)acrilato de metilo proporcionaba 5.8 15 (isómero Z) con un rendimiento de 27%, y el producto del acoplamiento de Stille 5.8, cuando se sometía a ciclación usando DBU/dioxano, proporcionaba el nucleósido tricíclico buscado 5.9 con un rendimiento de 48%.
Ejemplo 5, Etapa-A: 4-Cloro-7-[3,5-O-(tetraisopropildisiloxano-1,3-diil)-β-D-ribofuranosil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (5.2)
A una solución de la 6-clorotubercidina 5.1 disponible comercialmente (3,0 g, 10,5 mmol) en DMF (140 ml) se añadieron imidazol (3,6 g, 52,9 mmol) y TIPDSiCl2 (1,2 eq) (4,0 ml, 12,5 mmol) a temperatura ambiente bajo argón. La 20 mezcla de reacción se agitó durante 16 h a temperatura ambiente y a continuación se extinguió al añadir 20 ml de EtOH. Los disolventes se evaporaron, se añadió agua (100 ml) y la suspensión blanca se extrajo, con CH2Cl2. Los extractos orgánicos se secaron sobre Na2SO4, se filtraron, se evaporaron y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de desarrollo rápido usando gradiente de EtOAc al 5-7% en hexanos para dar el compuesto deseado 5.2 (4,14 g, 75%) como un sólido vítreo. 25
Ejemplo 5, Etapa-B: 4-Cloro-7-[2-O-metil-3,5-O-(tetraisopropildisiloxano-1,3-diil)-β-D-ribofuranosil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (5.3)
A una solución del compuesto 5.2 (2,0 g, 3,79 mmol) en DMF (45,0 ml) a 0˚C se añadió yoduro de metilo (1,88 ml, 15,23 mmol) seguido por NaH (en una porción) (228 mg, 5,7 mmol, suspensión al 60%). La mezcla de reacción resultante se agitó durante 1 h a 0˚C y a continuación se extinguió con etanol anhidro (20 ml) y se diluyó con 100 ml de 30 CH2Cl2. La mezcla de reacción diluida se lavó con agua y la fase orgánica se lavó sobre Na2SO4, se filtró, se evaporó y se coevaporó tres veces con tolueno. El residuo obtenido se purificó mediante cromatografía en columna de desarrollo
rápido usando un gradiente de EtOAc al 5-7% en hexanos y proporcionaba el 2’-O-metil-nucleósido deseado 5.3 (1,4 g, 68%)
Ejemplo 5, Etapa-C: 4-Cloro-7-(2-O-metil-β-D-ribofuranosil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (5.4)
A una solución del compuesto 5.3 (3,62 g, 6,66 mmol) en THF (100 ml) se añadió una solución 1,0 M de fluoruro de tetrabutilamonio en THF (26,0 mmol) a temperatura ambiente. La solución incolora se agitó durante 1 h a 5 temperatura ambiente y a continuación se diluyó al añadir 150 ml de CH2Cl2 y agua, 50 ml. La porción acuosa se extrajo tres veces con CH2Cl2, se secó sobre Na2SO4, se filtró y se evaporó. La purificación mediante cromatografía en columna de gel de sílice usando de CH2Cl2 puro a MeOH al 2% en CH2Cl2 como eluyente daba el compuesto deseado 5.4 (1,24 g, 59%) como un aceite incoloro.
Ejemplos 5, Etapa-D: 4-Cloro-7-(2-O-metil-3,5-di-O-acetil-β-D-ribofuranosil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (5.5) 10
A una solución del compuesto 5.4 (2,44 mmol) en piridina (40 ml) se añadió anhídrido acético (1,23 ml, 8,44 mmol) a través de una jeringa y la solución se agitó durante la noche a temperatura ambiente. Los disolventes se evaporaron a vacío, el residuo se disolvió en CH2Cl2 y la solución se lavó con agua y a continuación se secó sobre Na2SO4, se filtró, se evaporó y se coevaporó con tolueno tres veces. El residuo obtenido se purificó mediante cromatografía en columna de desarrollo rápido usando un gradiente de CH2Cl2 puro hasta MeOH al 2,5% en CH2Cl2 15 para dar el compuesto deseado 5.5 (1,26 g) como un aceite incoloro.
Ejemplo 5, Etapa-E: 4-Cloro-5-yodo-7-(2-O-metil-3,5-di-O-acetil-β-D-ribofuranosil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (5.6)
A una solución del compuesto 5.5 (1,25 g, 3,26 mmol) en CH2Cl2 (80 ml) se añadió una solución 1,0 M de ICl en CH2Cl2 (8,12 mmol) a temperatura ambiente y la solución parda oscura resultante se agitó durante 4 h a temperatura ambiente. Los disolventes se evaporaron a vacío a 25˚C-35˚C y el residuo se secó bajo alto vacío durante 30 min. Se 20 obtuvo un material pegajoso pardo claro que se purificó mediante cromatografía en columna de desarrollo rápido usando un gradiente de CH2Cl2 puro hasta MeOH al 1,5% en CH2Cl2 para proporcionar el compuesto deseado 5.6 (1,1 g, 66%) como un sólido blanco.
Ejemplo 5, Etapa-F: 4-Amino-5-yodo-7-(2-O-metil-β-D-ribofuranosil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (5.7)
Una solución del compuesto 5.6 (28,8 mg, 0,057 mmol) en MeOH (3 ml) se transfirió a una bomba de acero, se 25 enfrió hasta de -50 a -60˚C y se trató con una solución saturada de amoníaco en MeOH (10 ml). El reactor se cerró herméticamente y se calentó a 118˚C durante la noche. El recipiente de reacción se enfrió (0-5˚C), se abrió cuidadosamente y la mezcla de reacción se evaporó hasta sequedad. El producto en bruto se disolvió en MeOH, se adsorbió sobre gel de sílice y se purificó mediante cromatografía en columna de desarrollo rápido sobre gel de sílice usando de CH2Cl2 puro a MeOH al 4% en CH2Cl2 como eluyentes para dar el compuesto deseado 5.7 (20,7 mg) como 30 un sólido blanquecino.
Ejemplo 5, Etapa-G: 4-Amino-7-(2-O-metil-β-D-ribofuranosil)-3-[2-metoxicarbonil)etenil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (5.8)
A una solución del compuesto 5.7 (156 mg, 0,38 mmol) en DMF (12,0 ml) se añadieron (Z)-3-(tributilestannil)acrilato de metilo (J. Am. Chem. Soc., 1993, 115, 1619) (0,29 ml, 0,77 mmol) y CuI (14,6 mg, 0,08 mmol). La mezcla se agitó durante 10 min a temperatura ambiente y a continuación se añadió Pd(PPH3)2Cl2 y la mezcla de 35 reacción se calentó durante 3,5 h a 70˚C bajo argón. La mezcla de reacción se enfrió hasta temperatura ambiente y se filtró a través de un bloque de celita. El bloque de celita se lavó con 8 ml de MeOH/CH2Cl2 1/1. Después de la filtración, los lavados se combinaron y los disolventes se evaporaron a vacío. El residuo se redisolvió en MeOH y se adsorbió sobre gel de sílice y se purificó mediante cromatografía en columna de desarrollo rápido usando MeOH al 2,5% en CH2Cl2 como eluyente para dar el compuesto deseado 5.8 (38 mg, 27%) como un sólido amarillo. 40
Ejemplo 5, Etapa-H: 2-(2-O-Metil-β-D-ribofuranosil)-2,6-dihidro-7H-2,3,5,6-tetraazabenz[cd]azulen-7-ona (5.9)
A una solución del compuesto 5.8 (36 mg, 0,1 mmol) en 1,4-dioxano (6,0 ml) se añadieron tamices moleculares de 3 Ǻ seguido por DBU (38 μl, 0,25 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 3,5 h a 110˚C y a continuación se enfrió hasta temperatura ambiente y se filtró, los disolventes se evaporaron y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de desarrollo rápido usando de CH2Cl2 a MeOH al 2 en CH2Cl2 como eluyente para dar el 45 compuesto del epígrafe 5.9 (16 mg) como un sólido blanquecino.
1H NMR (DMSO-d6) δ 10,69 (s, NH, 1H), 8,33 (s, H-4, 1H), 7,8 (s, H-1, 1H), 7,04 (d, J 11,7 Hz, CH, 1H), 6,13 (d, J 6,0 Hz, H-1’, 1H), 5,67 (d, J 11,7 Hz, CH, 1H), 5,25 (d, J 5,4 Hz, 3’-OH, 1H), 5,12 (t, J 5,7 Hz, 5’-OH, 1H), 4,24-4,27 (m, H-4’, 1H), 4,12-4,15 (m, H-3’, 1H), 3,93 (m, H-2’, 1H), 3,55-3,61 (m, H-5’, 2H), 3,28 (s, OCH3, 3H). MS m/z 331 (M-H)+ 50
Ejemplo 6
2-(2-C-Metil-β-D-ribofuranosil]-2,6-dihidro-7H-2,3,5,6-tetraazabenzo[cd]azulen-7-ona (6.6)
El nucleósido tricíclico 6.7 se sintetizó partiendo de la 4-cloro-1H-pirrolo[2,3-d]pirimidina 2.1. La nucleobase 2.1 se trató con N-yodosuccinimida en THF a temperatura ambiente durante 4 h para proporcionar 4-cloro-5-yodo-7H-5 pirrolo[ 2,3-d]pirimidina 6.1. A continuación, 6.1 se convirtió en la sal sódica correspondiente con hidruro sódico en acetonitrilo y se hizo reaccionar con el azúcar bromado 2.4 ((i) Helv. Chim. Acta. 1995, 78, 486; (ii) WO 02/057287, 2002), para dar el nucleósido 6.2, que se convertía directamente en la 4-amino-5-yodo-7-[3,5-bis-O-(2,4-diclorofenilmetil)-2-C-metil-β-D-ribofuranosil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina 6.3. Una reacción de acoplamiento de Stille entre el nucleósido 6.3 y Z-3-tributilestannil-acrilato proporcionaba el compuesto 6.4. La ciclación del compuesto 6.4 se 10 efectuó al calentar en DBU/dioxano durante la noche para proporcionar el nucleósido tricíclico protegido 6.5, que se trató a continuación con tricloruro de boro en CH2Cl2 para producir el nucleósido 6.6.
4-cloro-5-yodo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (6.1)
El compuesto 6.1 se preparó de acuerdo con un procedimiento publicado (Townsend, L.B. et ál., 1990, 33, 1982-1992, 15
Ejemplo 6, Etapa A: 4-Cloro-5-yodo-7-[3,5-bis-O-(2,4-diclorofenilmetil)-2-C-metil-β-D-ribofuranosil]-7H-pirrolo[ 2,3-d]pirimidina (6.2)
El compuesto 2.4 se preparó de acuerdo con el procedimiento publicado. ((i). Helv. Chim. Acta. 1995, 78, 486; (ii). WO 02/057287, 2002).
Una solución del compuesto 2.4 (25 mmol) en acetonitrilo anhidro (90 ml) se añadió a una solución de la sal 20 sódica de 4-cloro-5-yodo-1H-pirrolo[2,3-d]pirimidina [generada in situ a partir de la 4-cloro-5-yodo-1H-pirrolo[2,3-d]pirimidina 6.1 (6,99 g, 25 mmol) en acetonitrilo anhidro ( 250 ml) y NaH (60% en aceite mineral, 1,0 g, 25 mmol), después de 4 h de agitación vigorosa a temperatura ambiente]. La mezcla combinada se agitó a temperatura ambiente durante 24 h y a continuación se evaporó hasta sequedad. El residuo se suspendió en agua (250 ml) y se extrajo con CH2Cl2 (2 x 500 ml). Los extractos combinados se lavaron con salmuera (300 ml), se secaron sobre Na2SO4, se filtraron 25 y se evaporaron. El producto en bruto se purificó en una columna de gel de sílice usando acetato de etilo/hexanos (1/4-1/2) como el eluyente. Las fracciones que contenían el producto se combinaron y se evaporaron a vacío para dar el producto deseado 6.2 (6,26 g, rendimiento 34%) como una espuma amarilla clara.
Ejemplo 6, Etapa B: 4-amino-5-yodo-7-[3,5-bis-O-(2,4-diclorofenilmetil)-2-C-metil-β-D-ribofuranosil]-7H-pirrolo [2,3-d]pirimidina (6.3) 30
A un compuesto 6.2 (5 g, 6,7 mmol) en dioxano (100 ml) se añadió NH4OH conc. (100 ml). La mezcla se calentó en un autoclave de acero inoxidable a 100˚C durante 3 h, a continuación se enfrió y se evaporó a vacío. La mezcla en bruto se disolvió en 100 ml de CH2Cl2 y se lavó con agua y salmuera, se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró para proporcionar el producto en bruto. El producto en bruto se purificó a continuación sobre una columna de gel de sílice con MeOH al 5% en CH2Cl2 como eluyente para dar 4,32 g de 6.3 como una espuma blanca (rendimiento 35 88%).
Ejemplo 6, Etapa C: 4-Amino-5-[2-(metoxicarbonil)etenil]-7-[3,5-bis-O-(2,4-diclorofenilmetil)-2-C-metil-β- D-ribofuranosil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (6.4)
A una solución del compuesto 6.3 (1,25 g, 1,726 mmol) en 10 ml de DMF anhidra se añadieron Z-3-tributilestannil-acrilato (1,1 ml, 2 eq.) (J. Am. Chem. Soc., 1993, 115, 1619), CuI (66 mg, 0,2 eq.) y PdCl2(PPH3)2 (121 40
mg, 0,1 eq.) a temperatura ambiente bajo la atmósfera de argón. La mezcla de reacción se calentó a 70˚C durante 8 h. A continuación, la mezcla de reacción se enfrió hasta temperatura ambiente y se filtró a través de un bloque de celita. El filtrado se concentró a vacío para proporcionar un aceite naranja-rojo como el producto en bruto que se purificó en una columna de gel de sílice con THF al 10-30% en CH2Cl2 como eluyente para dar 995 mg de 6.4 como una espuma amarilla (rendimiento 81%). 5
Ejemplo 6, Etapa D: 2-[3,5-Bis-O-(2,4-diclorofenilmetil)-2-C-metil-β-D-ribofuranosil]-2,6-dihidro-7H- 2,3,5,6-tetraazabenzo[cd]azulen-7-ona (6.5)
A una solución del compuesto 6.4 (1,15 g, 1,69 mmol) en 150 ml de dioxano anhidro bajo una atmósfera de argón a temperatura ambiente se añadieron DBU (630 ml, 2,5 eq.) y 1 g de tamices moleculares de 4 Ǻ. La mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 16 h y a continuación se enfrió hasta temperatura ambiente y se evaporó hasta 10 sequedad a vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice con MeOH al 1% en CH2Cl2 como eluyente para proporcionar 772 mg de compuesto 6.5 como un sólido amarillo (rendimiento: 71%).
Ejemplo 6, Etapa E: 2-(2-C-Metil-β-D-ribofuranosil)-2,6-dihidro-7H-2,3,5,6-tetraazabenzo[cd]azulen-7-ona (6.6)
A una solución del compuesto 6.5 (0,71 g, 1,1 mmol) en 30 ml de CH2Cl2 anhidro a -78˚C se añadió gota a gota tricloruro de boro (solución 1 M en CH2Cl2, 11 ml, 11 mmol). La mezcla se agitó a -78˚C durante 2,5 h y a continuación a 15 de -30˚C a -20˚C durante 3 h. La reacción se extinguió mediante la adición de metanol/CH2Cl2 (1:1) (5 ml) y la mezcla resultante se agitó a -15˚C durante 30 min., a continuación se neutralizó con amoníaco acuoso a 0˚C y se agitó a temperatura ambiente durante 15 min. El sólido se filtró y se lavó con CH2Cl2/MeOH (1/1, 3 x 30 ml). La cromatografía sobre gel de sílice usando MeOH al 5% en CH2Cl2 como eluyente producía los 282 mg del compuesto deseado 6.6 como un sólido amarillo (rendimiento: 77,8%). 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 10,67 (s an 1H, NH), 8,32 (s, 1H, H-4), 20 7,86 (s, 1H, H-1), 7,00 (d, J 12,6 Hz, H-8), 6,09 (s, 1H, H-1’), 5,63 (d, J 12,6 Hz, H-9), 5,16 (m, 3H, 3xOH), 3,95 (m, 1H, H-3’), 3,88-3,56 (m, 3H, H-4’, 2xH-5’), 0,73 (s, 3H, CH3); ES MS: 391,5 (M+CH3COO)-.
Ejemplo 7
2-(2-C-metil-β-D-ribofuranosil)-8,9-dihidro-3,5,6,9a-tetraazabenzo[cd]azuleno (7.14)
25
Ejemplo 7, Etapa A: 2-C-Metil-D-ribofuranosa (7.2)
A una suspensión de 2-C-metil-1,2,3,5-tetra-O-benzoil-β-D-ribofuranosa 1.3. (50 g) en MeOH anhidro (1000 ml) se añadió KCN (150 mg) y la mezcla se dejó agitar a temperatura ambiente bajo argón a lo largo de 15 h, tiempo durante el cual todo el material se disolvía en el disolvente y la solución se volvía transparente. El disolvente se evaporó y el residuo se secó bajo vacío para suministrar 14,9 g de producto 7.2. 5
Ejemplo 7, Etapa B: 2,3-O-Isopropiliden-2-C-metil-D-ribofuranosa (7.3)
El material de la Etapa A (7.2) (14,9 g, 86 mmol) se disolvió en acetona seca (1000 ml) y se añadió 1 ml de H2SO4 conc. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche y a continuación se neutralizó cuidadosamente con NaHCO3 acuoso saturado y el disolvente se evaporó. El residuo se disolvió en 500 ml de acetato de etilo y se lavó con agua (100 ml) y salmuera (100 ml). La solución se secó sobre Na2SO4, se filtró y se evaporó. El 10 residuo se purificó en una columna de gel de sílice usando hexanos:EtOAc 2:1. La evaporación del disolvente proporcionaba 14 g del producto 7.3.
Ejemplo 7, Etapa C: 2,3-O-Isopropiliden-2-C-metil-5-O-(trifenilmetil)-D-ribofuranosa (7.4).
A una solución del compuesto 7.3 (13,7 g, 67,4 mmol) en piridina se añadió clorotrifenilmetano (23,5 g, 84,2 mmol) y la mezcla se calentó a 60˚C durante 15 h bajo una atmósfera de argón. El disolvente se evaporó y el residuo se 15 disolvió en acetato de etilo (200 ml) y se lavó con agua (150 ml), salmuera (150 ml) y se secó sobre sulfato sódico. Después de la filtración y la evaporación, el residuo se cargó a una columna de gel de sílice y se eluyó con hexano:acetato de etilo 10:1 seguido por 5:1. La evaporación del disolvente bajo presión reducida proporcionaba 15 g de 7.4 como un jarabe incoloro.
Ejemplo 7, Etapa D: 3,6-Anhidro-2-desoxi-4,5-O-isopropiliden-4-C-metil-7-O-(trifenilmetil)-D-alo- y D-altro-septononitrilo 20 (7.5).
A una suspensión de NaH (95%, 1,23 g, 48,2 mmol) en DME seco (250 ml)se añadió cianometilenfosfonato de dietilo (10,06 ml, 62 mmol) gota a gota a 0˚C a lo largo de 15 minutos. Después de que cesara el desprendimiento de hidrógeno, el compuesto 7.4 (15 g, 33,5 mmol) en 250 ml de DME seco se añadió a la solución resultante a lo largo de 30 minutos y a continuación la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla de reacción se sometió a 25 reparto entre éter (1000 ml) y agua (1000 ml) y la capa acuosa se extrajo con 1000 ml de éter. Los extractos etéreos combinados se lavaron con agua, se secaron (Na2SO4) y se filtraron. El disolvente se evaporó bajo presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice usando hexano:acetato de etilo 4:1 como eluyente. El disolvente se evaporó para dar 7.5 como una espuma blanquecina (14,8 g).
Ejemplo 7, Etapa E: (2E)-3,6-Anhidro-2-desoxi-2-C-[(N,N-dimetilamino)metiliden]-4,5-O-isopropiliden-4-C-metil-7-O-30 (trifenilmetil)-D-alo- y D-altro-septononitrilo (7.6).
A una solución del compuesto 7.5 (13,0 g, 27,68 mmol) en CH2Cl2 anhidro (60 ml) se añadió bis(dimetilamino)-terc-butoximetano (22,87 ml, 110,74 mmol) seguido por dimetilformamida seca (2,3 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 20 h. Después de la retirada de los disolventes, la mezcla se cromatografió en una columna de gel de sílice pretratada con trietilamina para suministrar 11,4 g de 7.6 como un aceite a viscoso. 35
Ejemplo 7, Etapa F: (2E)-3,6-Anhidro-2-desoxi-2-C-(hidroximetiliden)-4,5-O-isopropiliden-4-C-metil- 7-O-(trifenilmetil)-D-alo- y D-altro-septononitrilo (7.7).
A una solución del compuesto 7.6 (6 g, 11,44 mmol) en CHCl3 (120 ml) se añadió una solución de TFA (3 ml) en agua (200 ml) y la mezcla se agitó vigorosamente a temperatura ambiente durante 16 h. La capa orgánica se separó y se lavó con agua y se secó (Na2SO4) y a continuación se filtró. La retirada del disolvente proporcionaba el 2-40 formilnitrilo (7.7) (2,5 g) en una forma que se usaba como tal en la siguiente etapa.
Ejemplo 7, Etapa G: (2E)-3,6-Anhidro-2-desoxi-2-C-[(cianometilamino)metiliden]-4,5-O-isopropiliden-4-C-metil-7-O-(trifenilmetil)-D-alo- y D-altro-septononitrilo (7.8).
Se disolvió 7.7 en bruto en MeOH (25 ml) y se añadieron 1,6 ml de agua seguida por hidrocloruro de aminoacetonitrilo (0,78 g, 8,77 mmol) y trihidrato de acetato sódico (1,3 g, 9,55 mmol). La mezcla se agitó a temperatura 45 ambiente durante 16 h. Después de la evaporación del disolvente, el residuo se disolvió en un volumen mínimo de CH2Cl2 y se cargó a una columna de gel de sílice que se eluyó con CH2Cl2:MeOH 30:1. La evaporación del disolvente bajo presión reducida daba 2,2 g del producto 7.8 como una mezcla anómera.
Ejemplo 7, Etapa H: 3-Amino-2-ciano-4-(2,3-O-isopropiliden-2-C-metil-5-O-trifenilmetil-β-D-ribofuranosil)- 1H-pirrol (7.9).
A una solución del compuesto 7.8 (8 g, 14,94 mmol) en CH2Cl2 (100 ml) a 0˚C se añadió 1,5-diaza[4,3,0]non-5-50 eno (DBN) (2,95 ml, 23,89 mmol) seguido por cloroformiato de etilo (2,35 ml, 23,89 mmol). La mezcla se mantuvo a 0-4˚C durante 16 h. Se añadieron 2 ml de DBN adicionales y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 24 h. Después de la evaporación del disolvente, el residuo se purificó en una columna de gel de sílice usando hexanos:EtOAc 4:1 seguido por hexanos:EtOAc 3:1 para obtener una fracción principal como una mezcla de anómeros. A esta mezcla
de anómeros (6,42 g, 10,56 mmol) en MeOH (100 ml) se añadió carbonato sódico (3 g) y se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. El residuo insoluble se separó por filtración y el disolvente se retiró bajo vacío. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice usando hexanos:EtOAc 3:1 para obtener 5 g de producto 7.9 como anómero β.
Ejemplo 7, Etapa I:
Parte A.: 4-Metilbencenosulfonato de 3-(terc-butildifenilsililoxi)propilo 5
El compuesto del epígrafe se preparó de acuerdo con el procedimiento descrito por Caprio et ál. Tetrahedron, 2001, 57, 4023-4034.
Parte B: 3-Amino-1-(3-terc-butildifenilsililoxipropil)-2-ciano-4-(2,3-O-isopropiliden-2-C-metil-5-O-trifenilmetil-β-D-ribofuranosil)-1H-pirrol (7.10)
A una solución de t-butóxido potásico (solución de THF 1 M, 4,32 ml) en THF (30 ml) se añadió el compuesto 10 7.9 (2 g, 3,73 mmol), seguido por una cantidad catalítica de 18-corona-6. La mezcla se agitó bajo argón a lo largo de 10 minutos, tiempo durante el cual la solución se volvía parda rojiza transparente. A esta solución se añadió el compuesto preparado de acuerdo con la Parte A (3,68 g, 7,47 mmol) disuelto en 1,5 ml de dicloroetano (anhidro). Después de 1 hora, se añadió un equivalente adicional de tosilato y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Después de la evaporación del disolvente bajo vacío, el residuo disuelto en CH2Cl2 mínimo se cargó a una columna de 15 gel de sílice y se eluyó con hexano:EtOAc 6:1 seguido por 4:1. La evaporación del disolvente de las fracciones apropiadas proporcionaba 1,5 g de producto 7.10.
Ejemplo 7, Etapa J: 4-Amino-5-(3-terc-butildifenilsililoxipropil)-7-(2,3-O-isopropiliden-2-C-metil-5-O-trifenilmetil-β-D-ribofuranosil)-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidina (7.11).
El compuesto 7.10 (600 mg, 0,72 mmol) y acetato de formamidina (227,5 mg, 2,61 mmol) se mezclaron con 20 20 ml de alcohol etílico y se calentaron a reflujo bajo atmósfera de argón durante 8 h. El disolvente se evaporó y el residuo se cargó a una columna de gel de sílice y se eluyó con MeOH:CH2Cl2 20:1 para proporcionar 555 mg del producto 7.11.
Ejemplo 7, Etapa K: 4-Amino-5-(3-hidroxipropil)-7-(2,3-O-isopropiliden-2-C-metil-5-O-trifenilmetil-β-D-ribofuranosil)- 5H-pirrolo[3,2-d]pirimidina (7.12).
El compuesto 7.11 (555 mg, 0,65 mmol) se disolvió en THF anhidro (10 ml) y se añadieron 1,3 ml (1,3 mmol) 25 de una solución 1 M en THF de fluoruro de tetrabutilamonio. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 h y el disolvente se evaporó a continuación bajo presión reducida y el residuo se cargó a una columna de gel de sílice y se eluyó con CH2Cl2:MeOH 15:1 para dar 281 mg del producto 7.12.
Ejemplo 7, Etapa L: 2-(2,3-O-Isopropiliden-2-C-metil-5-O-trifenilmetil-β-D-ribofuranosil)-8,9-dihidro-3,5,6,9a-tetraazabenzo[ cd]azuleno (7.13). 30
El compuesto 7.12 (160 mg, 0,26 mmol) se recogió en 2 ml de CH2Cl2 y se mantuvo a 0˚C. A esto se añadió TEMPO (2,2,6,6-tetrametil-1-piperidiniloxi, radical libre, 1 mg) seguido por una solución acuosa de KBr (1mg en 0,2 ml de agua) y Aliquat®366 (6 ml) y NaOCl (0,35 M, 0,92 ml). La mezcla se agitó a 0˚C durante 30 minutos. Se añadió más CH2Cl2 y la reacción se lavó con agua (5 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4, se filtró y se evaporó bajo presión reducida. El residuo se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. 35
Ejemplo 7, Etapa M: 2-(2-C-metil-β-D-ribofuranosil)-8,9-dihidro-3,5,6,9a-tetraazabenzo[cd]azuleno (7.14).
El compuesto 7.13 se calentó a 80˚C en ácido acético al 90% durante 12 h. El disolvente se evaporó y el producto en bruto se purificó mediante HPLC en fase inversa en una columna C18 para proporcionar 3 mg de producto 7.14 puro. 1H NMR (DMSO-d6). δ 8,10 (s, 1H), 7,49 (s, 1H), 6,60 (s, 1H), 5,33 (s, 1H), 4,57 (m, 3H), 4,03 (m, 1H), 3,72 (m, 1H), 3,51 (m, 2H), 2,91 (m, 2H), 2,77 (m, 2H), 1,02 (s, 3H). 40
Ejemplo 8
2-(2-C-Metil-β-D-ribofuranosil]-2,6,8,9-tetrahidro-7H-2,3,5,6-tetraazabenzo[cd]azulen-7-ona (8.1)
Una mezcla del nucleósido tricíclico 6.6 (20 mg, 0,06 mmol) y Pd al 10%/C (12,8 mg, 0,2 eq.) en 20 ml de MeOH bajo presión de H2 (2,20 bar, 32 psi) se batió durante 7 h a temperatura ambiente. La mezcla se filtró a través de un filtro de 0,45 μm. Los filtrados combinados se evaporaron y se purificaron en una columna de gel de sílice con MeOH al 5% en CH2Cl2, se obtuvieron 12 mg de compuesto 8.1 puro (rendimiento 60%). 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 10,65 (s an, 1H, NH), 8,37 (s, 1H, H-4), 7,48 (s, 1H, H-1), 6,12 (s, 1H, H-1’), 5,05 (m, 3H, 3xOH), 3,89-3,12 (m, 4H, H-3’, 5 H-4’, 2xH-5’), 2,86-2,74 (m, 4H, 2xH-8, 2xH-9), 0,64 (s, 3H, CH3); LCMS: ES-MS 393,6 (M+CH3COO).
Ejemplo 9
2-(β-D-ribofuranosil)-2,6-dihidro-7H-2,3,5,6-tetraazabenzo[c]azulen-7-ona (9,4)
El nucleósido 9.2 se produjo directamente a partir del nucleósido 9.1, que se preparó partiendo de D-ribosa 10 (Bheemarao G. et al; J. Med. Chem. 2000, 43, 2883-2893), usando amoníaco líquido a 85˚C durante la noche. La reacción de acoplamiento cruzado catalizada por paladio[0] del compuesto 9.2, seguida por la ciclación del compuesto 9.3 en NaOMe 0,1 N en MeOH, suministraba el nucleósido tricíclico deseado 9.4.
Ejemplo 9, Etapa A: 4-amino-5-yodo-7-β-D-ribofuranosil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (9.2)
El compuesto 9.2 se preparó de acuerdo con un método publicado (Bergstrom, D.E., et ál., J. Org. Chem., 15 1981, 46, 1423).
Ejemplo 9, Etapa B: 4-Amino-5-[2-(metoxicarbonil)etenil]-7-(2-C-metil-β-D-ribofuranosil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (9.3)
A una solución del compuesto 9.2 (300 mg, 0,76 mmol) en 10 ml de DMF anhidra se añadieron CuI (29 mg, 0,2 eq.), acrilato de metilo (1,37 ml, 20 eq.), trietilamina (212 ml, 2 eq.) y Pd(PPH3)4 (88 mg, 0,1 eq.) a temperatura ambiente bajo una atmósfera de argón. La mezcla de reacción se calentó a 70˚C durante 24 h y a continuación se enfrió hasta 20 temperatura ambiente y se añadieron 20 ml de MeOH/CH2Cl2 1/1. A continuación, se añadieron 1,0 g de Dowex 1x2-100, forma de bicarbonato, y la suspensión se agitó a temperatura ambiente durante 45 min. y a continuación se filtró. La resina se lavó con 5 x 20 ml de MeOH/CH2Cl2: 1/1, la DMF se evaporó finalmente mediante coevaporación con tolueno (2 x 10 ml). La purificación en columna cromatográfica sobre gel de sílice (eluyente: CH2Cl2/MeOH: 90/10) daba 224 mg del producto final 9.3 (rendimiento 84%) 25
1H NMR (CD3OD) δ 8,11 (s, 1H, H-2), 8,00 (s, 1H, H-6), 7,96 (d, J 15,54 Hz, 1H), 6,35 (d, J 15,54 Hz, H2”), 6,52 (d, 1H, H-1’), 4,43 (t, 1H, H-3’), 4,34-4,26 (m, 2H, H-4’, H-2’), 3,85-3,64 (m, 2H, 2xH-5’), 3,79 (s, 3H, OCH3).
Ejemplo 9, Etapa C: 2-(β-D-Ribofuranosil)-2,6-dihidro-7H-2,3,5,6-tetraazabenzo[cd]azulen-7-ona (9.4)
Una solución del compuesto 9.3 (140 mg, 0,4 mmoles) en NaOMe 0,1 M en MeOH (80 ml) se calentó a 70˚C durante 4 h. La solución se enfrió y el disolvente se evaporó y el residuo se purificó mediante una columna de gel de 30 sílice usando CH2Cl2/ MeOH: 90/10 como eluyente para dar el producto final 9.4.
1H NMR (CD3OD) δ 8,32 (s, 1H, H-2), 7,86 (s, 1H, H-6), 7,07 (d, J 12 Hz, H-8), 6,09 (s, 1H, H-1’), 5,70 (d, J 12 Hz, H-9), 4,57 (m, 1H, H-2’), 4,29 (m, 1H, H-3’), 4,12 (m, 1H, H-4’), 3,88-3,72 (m, 2H, 2xH-5’); ES-MS: 377,4 (M+CH3COO)-.
35
Ejemplo 10
2-(3-Desoxi-β-D-ribofuranosil)-2,6-dihidro-7H-2,3,5,6-tetraazabenzo[cd]azulen-7-ona (10.6)
El nucleósido 5.1 se preparó partiendo de D-ribosa ((i) Journal of Heterocyclic Chemistry, 25(6), 1893-8, 1988; (ii) Helvetica Chimica Acta, 71(6), 1573-85, 1988) y a continuación se convirtió en el 3’-desoxinucleósido 10.2 como 5 sigue: 4,0 equivalentes de bromuro de α-acetoxiisobutirilo se añadieron a una suspensión del nucleósido 5.1 en acetonitrilo que contiene 1,1 equivalentes de H2O a temperatura ambiente, seguido por tratamiento con resina DOWEX OH- en MeOH para proporcionar una muestra cristalina de 4-metoxi-7-(2,3-anhidro-β-D-ribofuranosil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina 10.1. El epóxido se trató con 4,0 equivalentes de LiEt3BH en THF a temperatura ambiente para dar el 3’-desoxinucleósido 10.2 con un rendimiento combinado de 50% para las dos etapas precedentes. El grupo yodo en 7 se 10 introdujo al hacer reaccionar el 3’-desoxinucleósido 10.2 con N-yodosuccinimida en DMF para dar el compuesto 10.3 que, a su vez, se trató con amoníaco líquido anhidro para proporcionar el compuesto 10.4. Después de la reacción de acoplamiento cruzado catalizada con paladio[0] y la ciclación para formar el triciclo buscado, se obtuvo el nucleósido deseado 10.6.
Ejemplo 10, Etapa A: 4-metoxi-7-(2, 3-anhidro-β-D-ribofuranosil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (10.1) 15
A una mezcla del nucleósido 5.1 (250 mg, 0,875 mmol) en 12 ml de acetonitrilo se añadieron H2O/acetonitrilo (1/9) (157 ml, 1 eq.) y bromuro de α-acetoxiisobutirilo (0,537 ml, 4 eq.). Después de 2 h de agitación a temperatura ambiente, se añadió NaHCO3 sat. (ac.) y la mezcla se extrajo con acetato de etilo. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO4 y se evaporaron. El residuo espumoso se suspendió en MeOH y se agitó durante la noche con Dowex OH- (previamente lavada con MeOH anhidro). La resina se separó por filtración, se 20 lavó con MeOH y los filtrados combinados se evaporaron para dar 225 mg de una espuma amarilla clara 10.1, que se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación adicional.
Ejemplo 10, Etapa B: 4-Metoxi-7-(3-desoxi-β-D-ribofuranosil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (10.2)
El superhidruro LiBt3BH en THF 1 M (8 ml, 10 eq.) se añadió gota a gota a una solución desoxigenada (después de 15 min de purga con argón) enfriada con hielo de nucleósido anhidro 10.1 (218 mg, 0,8 mmol) en THF 25 anhidro (10 ml) bajo argón. La mezcla resultante se agitó a 0˚C durante 2 h, a continuación se acidificó cuidadosamente y finalmente se purgó con argón durante 1 h. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice con MeOH al 5% en CH2Cl2 par dar 117 mg del compuesto buscado 10.2 como un sólido blanquecino (rendimiento 55%).
Ejemplo 10, Etapa C: 4-Metoxi-5-yodo-7-(3-desoxi-β-D-ribofuranosil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (10.3)
A una solución del nucleósido 10.2 (350 mg, 1,32 mmol) en DMF (10 ml) se añadió N-yodosuccinimida (327 30 mg, 1,1 eq.) a 0˚C. La mezcla de reacción se agitó a 0˚C bajo argón durante 2 h, a continuación se calentó hasta temperatura ambiente y se agitó durante la noche. La reacción se extinguió mediante la adición de 4 ml de MeOH. La solución se evaporó hasta sequedad, a continuación se redisolvió en CHCl3, se lavó con NaHCO3 ac. sat., Na2SO3 y agua, y a continuación se secó sobre MgSO4. Después de la evaporación, el residuo se purificó en una columna de gel de sílice usando MeOH al 0-3% en CH2Cl2 para proporcionar 353 mg de compuesto 10.3 puro como un sólido blanco 35 (rendimiento: 68%).
Ejemplo 10, Etapa D: 4-Amino-5-yodo-7-(3-desoxi-β-D-ribofuranosil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (10.4)
Una mezcla del compuesto 10.3 (50 mg, 0,128 mmol) y amoníaco líquido anhidro (15 ml) se calentó en un autoclave de acero inoxidable a 120˚C 2 días, a continuación se enfrió y se evaporó a vacío. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice con MeOH al 3% en CH2Cl2 como eluyente para dar 30 mg del compuesto 10.4 como un sólido blanco (rendimiento: 62%). 5
Ejemplo 10, Etapa E: 4-Amino-5-[2-(metoxicarbonil)etenil]-7-(3-desoxi-β-D-ribofuranosil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (10.5)
A una solución del compuesto 10.4 (50 mg, 0,132 mmol) en 2 ml de DMF anhidra se añadieron CuI (5 mg, 0,2 eq.), acrilato de metilo (240 μl, 20 eq.), trietilamina (37 μl, 2 eq.) y Pd(PPH3)4 (15 mg, 0,1 eq.) a temperatura ambiente bajo una atmósfera de argón. La mezcla de reacción se calentó a 70˚C durante 48 h y a continuación se enfrió hasta 10 temperatura ambiente y se añadieron 20 ml de MeOH/CH2Cl2 1/1. Se añadieron a continuación 100 mg de Dowex 1x2-100, forma de bicarbonato, y la suspensión se agitó a temperatura ambiente durante 45 min. y a continuación se filtro. La resina se lavó con 3 x 10 ml de MeOH/CH2Cl2:1/1 y el disolvente se evaporó. La DMF se evaporó finalmente mediante coevaporación azeotrópica con tolueno (2x5 ml). El residuo se purificó mediante purificación en columna cromatográfica sobre gel de sílice (eluyente: CH2Cl2/MeOH=95/5) para dar 20 mg del producto final 10.5 (rendimiento 15 45%).
Ejemplo 10, Etapa F: 2-(3-Desoxi-β-D-ribofuranosil)-2,6-dihidro-7H-2,3,5,6-tetraazabenzo[cd]azulen-7-ona (10.6)
Una solución del compuesto 10.5 (20 mg, 0,06 mmoles) en NaOMe 0,1 M en MeOH (12 ml) se calentó a 70˚C durante 4 h. El disolvente se evaporó y el residuo se purificó mediante una columna de gel de sílice con CH2Cl2/MeOH=90/10) para dar el producto final 10.6. 20
1H NMR (300 MHz, CD3OD): δ 8,31 (s, 1H,), 7,71 (s, 1H,), 7,05 (d, J 12 Hz), 6,05 (s, 1H, H-1’), 5,73 (d, J 12Hz, 1H,), 3,87-3,66 (m, 4H, H-2’, H-4’ 2xH-5’), 2,31- 2,09 (m, 1H, 2xH-3’); ES MS: 360,9 (M+CH3COO).
Ejemplo 11
2-(2-C-Metil-β-D-ribofuranosil)-9-metil-2,6-dihidro-7H-2,3,5,6-tetraazabenzo[cd]azulen-7-ona (11,4]
25
Ejemplo 11, Etapa A: 4-Cloro-5-yodo-7-(2-C-metil-β-D-ribofuranosil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (11.1)
A una solución del compuesto 6.3 (7,73 g, 10,39 mmoles) en diclorometano (200 ml) a -78˚C se añadió gota a gota tricloruro de boro (1M en diclorometano, 104 ml, 104 mmol). La mezcla se agitó a -78˚C durante 2,5 h, y a continuación a de -30˚C a -20˚C durante 3 h. La reacción se extinguió mediante la adición de metanol/diclorometano (1:1) (105 ml) y la mezcla resultante se agitó a -15˚C durante 30 min., a continuación se 30 neutralizó con amoníaco acuoso a 0˚C y se agitó a temperatura ambiente durante 15 min. El sólido se filtró y se lavó con CH2Cl2/MeOH (1/1, 250 ml). La cromatografía sobre gel de sílice usando CH2Cl2 y un gradiente de CH2Cl2/MeOH (de 99/1 a 90/10) como el eluyente para producir el compuesto deseado 11.1 (2,24 g, rendimiento 51%) como una espuma incolora.
Ejemplo 11, Etapa B: 4-Amino-5-yodo-7-(2-C-metil-β-D-ribofuranosil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (11.2) 35
Se añadió amoníaco líquido (20 ml) al compuesto 11.1 (425 mg, 1 mmol). La mezcla se calentó en un autoclave de acero inoxidable a 85˚C durante la noche, a continuación se enfrió y se evaporó a vacío. La mezcla en
bruto se purificó en una columna de gel de sílice con metanol al 5% en diclorometano como eluyente para dar el producto 11.2 como una espuma amarilla clara (400 mg, 100% de rendimiento).
Ejemplo 11, Etapa C: 4-Amino-5-[1-metil-2-(metoxicarbonil)etenil]-7-(2-C-metil-β-D-ribofuranosil)-7H-pirrolo [2,3-d]pirimidina (11.3)
A una solución del compuesto 11.2 (1 g, 2,46 mmol) en 20 ml de DMF anhidra se añadieron CuI (94 mg, 0,2 5 eq.), crotonato de metilo (5,33 ml, 20 eq.), trietilamina (686 ml, 2 eq.) y Pd(PPH3)4 (285 mg, 0,1 eq.) a temperatura ambiente bajo una atmósfera de argón. La mezcla de reacción se calentó a 70˚C durante 24 h, a continuación se enfrió hasta temperatura ambiente y se añadieron 100 ml de MeOH/CH2Cl2 1/1. Se añadieron a continuación 2,0 g de Dowex 1x2-100, forma de bicarbonato, y la suspensión se agitó a temperatura ambiente durante 45 min., y a continuación se filtró. La resina se lavó con 3x50 ml de MeOH/CH2Cl2:1/1, la DMF se evaporó finalmente mediante coevaporación 10 azeotrópica con tolueno (2 x 5 ml). La purificación cromatográfica sobre gel de sílice (eluyente: CH2Cl2/MeOH: 95/5) daba 463 mg del producto 11.2 (rendimiento: 50%).
Ejemplo 11, Etapa D: 2-(2-C-Metil-β-D-ribofuranosil)-9-metil-2,6-dihidro-7H-2, 3, 5, 6-tetraazabenz[cd]azulen- 7-ona (11.4)
Una solución del compuesto 11.3 (33 mg, 0,087 mmoles) en NaOMe 0,1 M en MeOH (17 ml) se calentó a 70˚C 15 durante 4 h. La solución se evaporó y el residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice usando CH2Cl2/MeOH: 95/5 como eluyente para proporcionar 24 mg del producto final 11.4 (rendimiento 80%).
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 10,66 (an. 1H, NH), 8,33 (s, 1H, H-4), 8,09 (s, 1H, H-1), 6,10 (s, 1H, H-1’), 5,67 (s, 1H, H-8), 5,16 (m, 3H, 3xOH), 4,05-3,65 (m, 4H, H-3’, H-4’ 2xH-5’), 2,11 (s, 3H, CH3), 0,73 (s, 3H, CH3); ESMS: 405,5 (M+CH3COO). 20
Ejemplo 12
2-(2-C-Metil-β-D-ribofuranosil)-8-metil-2,6-dihidro-7H-2,3,5,6-tetraazabenzo[cd]azulen-7-ona (12.2)
Ejemplo 12, Etapa A: 4-amino-5-[2-metil-2-(metoxicarbonil)etenil]-7(2-C-metil-β-D-ribofuranosil)-7H-pirrolo [2,3-d]pirimidina (12.1) 25
A una solución del compuesto 11.2 (200 mg, 0,492 mmol) en 4 ml de DMF anhidra se añadieron CuI (19 mg, 0,2 eq.), metacrilato de α-metilo (1,06 ml, 20 eq.), trietilamina (137 ml, 2 eq.) y Pd(PPH3)4 (57 mg, 0,1 eq.) a temperatura ambiente bajo una atmósfera de argón. La mezcla de reacción se calentó a 70˚C durante 24 h, a continuación se enfrió hasta temperatura ambiente y se añadieron 100 ml de MeOH/CH2Cl2 1/1. Se añadieron a continuación 400 mg de Dowex 1x2-100, forma de bicarbonato, la suspensión se agitó a temperatura ambiente durante 45 min. y a continuación 30 se filtró. La resina se lavó con 3 x 10 ml de MeOH/CH2Cl2: 1/1 y la DMF se evaporó finalmente mediante coevaporación azeotrópica con tolueno (2 x 5 ml). La purificación cromatográfica del residuo en gel de sílice (eluyente: CH2Cl2/MeOH: 95/5) daba 100 mg del éster 12.1 (rendimiento: 54%).
Ejemplo 12, Etapa B: 2-(2-C-Metil-β-D-ribofuranosil)-8-metil-2,6-dihidro-7H-2, 3, 5, 6-tetraazabenzo[cd]azulen-7-ona (12.2) 35
Una solución del compuesto 12.1 (30 mg, 0,079 mmoles) en NaOMe 0,1 M en MeOH (16 ml) se calentó a 70˚C durante 4 h. La solución se evaporó y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice usando CH2Cl2/MeOH: 95/5) para proporcionar el producto 12.2.
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 10,60 (s an. 1H, NH), 8,28 (s, 1H, H-4), 7,73 (s, 1H, H-1), 7,09 (s, 1H, H-9), 6,07 (s, 1H, H-1’), 5,16 (m, 3H, 3xOH), 3,93-3,63 (m, 4H, H-3’, H-4’ 2H-5’), 1,97 (s, 3H, CH3), 0,72 (s, 3H, CH3); ES MS: 40 405,3 (M+CH3COO).
Ejemplo 13
2-(2-C-Metil-β-D-ribofuranosil)-9-metoxi-2,6-dihidro-7H-2,3,5,6-tetraazabenz[c,d]azulen-7-ona (13.2)
Ejemplo 13, Etapa A: 4-Amino-5-[1-metoxi-2-(metoxicarbonil)etenil]-7-(2-C-metil-β-D-ribofuranosil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (13.1) 5
A una solución del compuesto 11.2 (200 mg, 0,492 mmol) en 5 ml de DMF anhidra se añadieron CuI (19 mg, 0,2 eq.), E-3-metoximetacrilato (1,06 ml, 20 eq.), trietilamina (137 ml, 2 eq.) y Pd(PPH3)4 (57 mg, 0,1 eq.) a temperatura ambiente bajo una atmósfera de argón. La mezcla de reacción se calentó a 70˚C durante 24 h, a continuación se enfrió hasta temperatura ambiente y se añadieron 100 ml de MeOH/CH2Cl2 1/1. Se añadieron a continuación 400 mg de Dowex 1x2, forma de bicarbonato, y la suspensión se agitó a temperatura ambiente durante 45 min. y a continuación se 10 filtró. La resina se lavó con 3 x 10 ml de MeOH/CH2Cl2: 1/1, la DMF finalmente se evaporó mediante coevaporación azeotrópica con tolueno (2 x 5 ml). La purificación cromatográfica del residuo en gel de sílice (eluyente: CH2Cl2/MeOH: 95/5) daba 87 mg del producto 13.1 (rendimiento: 45%).
Ejemplo 13, Etapa B: 2-(2-C-Metil-β-ribofuranosil)-9-metoxi-2,6-dihidro-7H-2,3,5,6-tetraazabenzo[cd]azulen-7-ona (13.2)
Una solución del compuesto 13.1 (30 mg, 0,076 mmoles) en NaOMe 0,1 M en MeOH (15 ml) se calentó a 70˚C 15 durante 4 h. La solución se evaporó y el residuo se purificó mediante una columna de gel de sílice con CH2Cl2/MeOH: 95/5 para proporcionar el nucleósido 13.2.
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 10,63 (s an 1H, NH), 8,35 (s, 1H, H-4), 8,06 (s, 1H, H-1), 6,13 (s, 1H, H-1’), 5,30 (s, 1H, H-8), 5,22 (m, 3H, 3xOH), 3,32 (s, 3H, OCH3), 3,98-3,63 (m, 4H, H-3’, H-4’ 2xH-5’), 0,71 (s, 3H, CH3); ES MS: 421,5 (M+CH3COO-). 20
Ejemplo 14
2-(2-C-Metil-β-D-ribofuranosil)-8-bromo-9-metoxi-2,6,8,9-tetrahidro-7H-2,3,5,6-tetraazabenzo[cd]azulen- 7-ona (14.1)
A una solución agitada del nucleósido 6.6 (10 mg, 0,030 mmol) en DMF (0,5 ml) se añadió N-bromosuccinimida (11,25 mg, 2,10 eq.) a 0˚C bajo argón. La mezcla de reacción se agitó a 0˚C durante 1 h y a continuación se extinguió 25 con MeOH (0,5 ml). La mezcla se evaporó hasta sequedad y el residuo se purificó en una columna de gel de sílice con MeOH al 5% en CH2Cl2 para dar el compuesto 14.1 como una mezcla de diastereoisómeros (8 mg, 65%). El compuesto aislado se caracterizó mediante 1H NMR, COSY, NOESY y LCMS. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 11,29 (s, 1H, NH), 8,54 (s, 1H, H-4), 8,00 (s, 1H, H-1), 6,24, 6,21 (2s, 1H, H-1’), 5,22-5,08 (m, 4H, 3xOH, H-8), 4,77 - 4,73 (m, 1H, H-9 ), 3,95 - 3,7 (m, 4H, H-3’, H- 4’ 2xH-5’), 3,24, 3,21 (2s, 3H, OCH3), 0,68, 0,66 (2s, 3H, CH3). ES MS: 501,7 (M+CH3COO-). 30
Ejemplo 15
4-Amino-2-(2-C-metil-β-D-ribofuranosil)-2,6-dihidro-7H-2,3,5,6-tetraazabenzo[cd]azulen-7-ona (15.6)
La sal sódica de 4-cloro-5-yodo-2-pivaloilamino-1H-pirrolo[2,3-d]pirimidina 15.1 (preparada in situ usando hidruro sódico) se hizo reaccionar con 1-bromo-2-C-metil-D-ribofuranosa protegida 2.4 (que se preparó con HBr/AcOH 5 en CH2Cl2 a partir del correspondiente análogo 1-O-metílico) para dar el anómero β 15.2. La retirada de los grupos protectores diclorofenilmetilo se realizó usando tricloruro de boro en CH2Cl2 para dar el 4-cloro-nucleósido 15.3. La amonolisis adicional y la desprotección a temperatura elevada daban el 2,4-diamino-nucleósido 15.4, que se convirtió bajo las condiciones de acoplamiento de Heck con acrilato de metilo en el correspondiente propenoato de metilo en 5 15.5. Este compuesto se convirtió en el tetraazabenzo[cd]azuleno-nucleósido buscado 15.6 a través de cierre de anillo 10 mediado por metóxido.
Ejemplo 15, Etapa A: 4-Cloro-5-yodo-2-pivaloilamino-7-[3,5-bis-O-(2,4-diclorofenilmetil)-2-C-metil-β-D-ribofuranosil]- 7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (15.2)
Una solución de 2.4 (36,7 mmol) en acetonitrilo anhidro (50 ml) se añadió a una solución de la sal sódica de de 4-cloro-5-yodo-2-pivaloilamino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina en acetonitrilo [generada in situ a partir de 4-cloro-5-yodo-2-15 pivaloilamino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (Nucl. Acid Res. 1998 (26), 3350-3357) (20,87 g, 55,1 mmol) en acetonitrilo anhidro (1000 ml) y NaH (60% en aceite mineral, 2,20 g, 55,1 mmol) después de 4 h de agitación vigorosa a temperatura ambiente]. La mezcla combinada se agitó a temperatura ambiente durante 48 h. Los sólidos se filtraron, a continuación se lavaron con acetonitrilo (100 ml) y el filtrado combinado se evaporó para proporcionar un aceite viscoso. La purificación en una columna de gel de sílice, usando gradiente de hexanos/EtOAc (15/1, 13/1, 11/1, 9/1, 7/1) como el 20 eluyente, daba el compuesto buscado como una espuma incolora (7,02 g, 23%).
Ejemplo 15, Etapa B: 4-Cloro-5-yodo-2-pivaloilamino-7-(2-C-metil-β-D-ribofuranosil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (15.3)
A una solución del compuesto 15.2 (7,03 g, 8,43 mmol) en CH2Cl2 (200 ml) a -75˚C se añadió tricloruro de boro (1M en CH2Cl2; 83,4 ml, 83,4 mmol). La mezcla se agitó a de -75 a -70˚C durante 2 h y a continuación a de -30 a -20˚C durante 3 h. La reacción se extinguió mediante la adición de MeOH/CH2Cl2 (1/1, 9 ml) y la mezcla resultante se agitó a 25 de -20 a -15˚C durante 30 min., a continuación se neutralizó con amoníaco ac. (28%, 35 ml) a 0˚C y se agitó a temperatura ambiente durante 10 min. El sólido que se separaba se filtró y se lavó con MeOH/CH2Cl2 (1/1, 500 ml). Los filtrados combinados se evaporaron y el residuo se purificó en una columna de gel de sílice usando CH2Cl2/MeOH (50/1, 40/1) como los eluyentes para producir el compuesto buscado 15.3 como un sólido blanquecino (2,93 g, 80%).
Ejemplo 15, Etapa C: 2,4-Diamino-5-yodo-7-(2-C-metil-β-D-ribofuranosil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (15.4) 30
Una mezcla del compuesto de la Etapa B (2,92 g, 5,6 mmol) y amoníaco líquido anhidro (50 ml) se calentó en un autoclave de acero inoxidable a 110˚C durante 1 d, a continuación se enfrió y el disolvente se evaporó. El residuo se
trató con MeOH para dar 0,30 g de 15.4. El filtrado se evaporó y se purificó en una columna de gel de sílice con CH2Cl2/MeOH (20/1) para proporcionar 1,52 g adicionales del compuesto buscado (rendimiento total 77%).
Ejemplo 15, Etapa D: 2,4-Diamino-5-[(E)-1-(metoxicarbonil)-2-etenil]-7-(2-C-metil-β-D-ribofuranosil)-7H-pirrolo [2,3-d]pirimidina (15.5)
A una solución del compuesto de la Etapa C (1,54 g, 3,66 mmol) en DMF (35 ml) se añadieron yoduro de cobre 5 (139 mg, 0,73 mmol), acrilato de metilo (6,6 ml, 73,1 mmol), trietilamina (1,02 ml, 7,3 mmol) y tetraquis(trifenilfosfina)paladio[0] (422,5 mg, 0,37 mmol). La mezcla resultante de agitó a 70˚C durante 10 h, a continuación se enfrió hasta temperatura ambiente y se diluyó con MeOH/CH2Cl2 (1/1, 50 ml). Se añadió a continuación Dowex HCO3- (3 g) y, después de 45 min de agitación, la resina se separó por filtración, se lavó con CH2Cl2/MeOH (1/1, 150 ml) y los filtrados combinados se concentraron. El residuo se trató con MeOH y el catalizador, que se separaba, se 10 filtró. El filtrado evaporado se trató de nuevo con MeOH y el compuesto buscado, que se separaba, se filtró (627 mg). El filtrado se concentró a vacío y se purificó en una columna de gel de sílice usando un gradiente de CH2Cl2/MeOH (50/1, 30/1, 20/1 y 15/1) para proporcionar 175 mg adicionales de compuesto 15.5 (rendimiento total 58%).
Ejemplo 15, Etapa E: 4-Amino-2-(2-C-metil-β-D-ribofuranosil)-2,6-dihidro-7H-2,3,5,6-tetraazabenzo[cd]azulen- 7-ona (15.6) 15
Una solución del compuesto de la Etapa D (578 mg, 1,52 mmol) en NaOMe 0,1 N/MeOH (250 ml) se calentó a 60˚C durante 12 h y a continuación se neutralizó a temperatura ambiente con Dowex H+. La resina se filtró, se lavó con MeOH y los filtrados combinados se concentraron a vacío. La purificación en una columna de gel de sílice con CH2Cl2/MeOH (10/1 y 5/1) daba el compuesto buscado 15.6 como un sólido amarillo (245 mg, 46%).
1H-NMR (DMSO-d6): δ 10,04 (s an, NH, 1H), 7,42 (s, 1H, H-1), 6,90 (d, H-9, J 11,7 Hz, 1H), 6,26 (an, NH2, 2H), 20 5,91 (s, H-1’, 1H), 5,56 (dd, J 11,7 Hz, J 1,6 Hz, H-8, 1H), 5,21 (s an, 3’-OH, 1H), 5,06 (t, J 4,8 Hz, 5’-OH, 1H), 4,98 (s, 2’-OH, 1H), 3,75-3,88 (m, H-3’, H-4’, H-5’, 3H), 3,62 (m, H-5’,1H), 0,78 (s, Me, 3H). MS m/z = 406,5 (M+CH3COO-).
Ejemplo 16
4-Fluoro-2-(2-C-metil-β-D-ribofuranosil)-2,6-dihidro-7H-2,3,5,6-tetraazabenzo[cd]azulen-7-ona (16.2)
25
El nucleósido 15.6 se convirtió con HF en piridina y nitrito de terc-butilo a baja temperatura en el correspondiente análogo fluorado en 4 16.2, después de la derivación del 5’-O-terc-butildimetilsililo con cloruro de terc-butildimetilsililo e imidazol en DMF.
Ejemplo 16, Etapa A: 4-Amino-2-(5-O-terc-butildimetilsilil-2-C-metil-β-D-ribofuranosil)-2,6-dihidro-7H- 2,3,5,6-tetraazabenzo[cd]azulen-7-ona (16.1) 30
Una mezcla de 4-amino-2-(2-C-metil-β-D-ribofuranosil)-2,6-dihidro-7H-2,3,5,6-tetraazabenzo[cd]azulen-7-ona (65 mg, 0,19 mmol) en DMF, cloruro de terc-butildimetilsililo (70 mg, 0,45 mmol) e imidazol (61 mg, 0,90 mmol) se agitó durante la noche a temperatura ambiente y a continuación se concentró a vacío. El residuo oleoso se disolvió en CH2Cl2 (20 ml), se lavó con HCl ac. (0,1 N), NaHCO3 ac. sat., agua, salmuera y se secó (Na2SO4). El residuo evaporado se purificó en gel de sílice con hexanos/EtOAc (1/1) + Et3N al 0,5% y EtOAc + Et3N al 0,5% para dar el compuesto buscado 35 16.1 como un aceite incoloro (38 mg, 44%).
Ejemplo 16, Etapa B: 4-Fluoro-2-(2-C-metil-β-D-ribofuranosil)-2,6-dihidro-7H-2,3,5,6-tetraazabenzo[cd]azulen-7-ona (16.2)
A una solución de HF/piridina (1,5 ml) y piridina (1 ml) a -25˚C se añadió una solución de 16.1 (30 mg, 0,07 mmol) en piridina (0,5 ml) seguido por nitrito de terc-butilo (15 ml, 0,13 mmol). La mezcla de reacción se dejó calentar 40 hasta -5˚C, se extinguió con NaOH ac. 6 N y se evaporó. El residuo amarillo claro se trituró con MeOH, se filtró y se lavó a fondo con MeOH (100 ml de filtrado combinado). El filtrado evaporado se purificó en una columna de gel de sílice con CH2Cl2/MeOH 20/1 para dar el compuesto buscado 16.2 como un sólido amarillo (5 mg, 22%).
1H-NMR (CD3OD): δ 7,05 (d, H-9, JH8,H9 = 11,7 Hz, 1H), 7,81 (s, 1H, H-1), 6,09 (s, H-1’, 1H), 5,78 (d, JH8,H9 11,7 Hz, H-8, 1H), 3,99-4,10 (m, H-3’, H-4’, H-5’, 3H), 3,85 (dd, Jgem 12,9 Hz, JH5’,H4’ 3,5 Hz, H-5’,1H), 0,92 (s, Me, 3H). 19F-NMR (CD3OD): δ -52,58, MS m/z = 409,6 (M+CH3COO-).
Ejemplo 17
7-Amino-2-(2-C-metil-β-D-ribofuranosil)-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo[cd]azuleno (17.2) 5
El nucleósido 11.2 se hizo reaccionar con acrilonitrilo bajo condiciones de acoplamiento tipo Heck. El nitrilo 17.1 se convirtió en el 7-amino-tetraazabenzoazuleno-nucleósido buscado 17.2 a través de cierre de anillo mediado por metóxido sódico.
Ejemplo 17, Etapa A: 4-Amino-5-[(E/Z)-1-ciano-2-etenil]-7-(2-C-metil-β-D-ribofuranosil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (17.1) 10
A una solución de 11.2 (200 mg, 0,49 mmol) en DMF (5 ml) se añadieron yoduro de cobre (19 mg, 0,1 mmol), acrilonitrilo (0,65 ml, 9,8 mmol), trietilamina (0,137 ml, 0,99 mmol) y tetraquis(trifenilfosfina)paladio[0] (57 mg, 0,05 mmol). La mezcla resultante de agitó a 70˚C durante 4 d., a continuación se enfrió hasta temperatura ambiente, se diluyó con MeOH/CH2Cl2 (1/1, 6 ml) y se trató con Dowex HCO3- (0,5 g). Después de 1 h de agitación la resina se separó por filtración, se lavó con CH2Cl2/MeOH (1/1, 50 ml) y el filtrado combinado se concentró. El residuo en bruto se 15 purificó en una columna de gel de sílice con un gradiente de CH2Cl2/MeOH (50/1, 30/1, 10/1) para dar la mezcla estereoisómera buscada (E/Z, 3/1) como un sólido amarillo (75 mg, 46%).
Ejemplo 17, Etapa B: 7-Amino-2-(2-C-metil-β-D-ribofuranosil)-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo[cd]azuleno (17.2)
Una mezcla del compuesto de la Etapa A (75 mg, 0,23 mmol) en NaOMe 0,1 N/MeOH (18 ml) se calentó a 60˚C durante 8 h, a continuación se enfrió hasta temperatura ambiente y se evaporó a vacío. El residuo en bruto se 20 purificó en una columna de gel de sílice con un gradiente de CH2Cl2/MeOH (20/1, 10/1, 5/1) para dar el compuesto buscado 17.2 como un sólido amarillo (44 mg, 59%).
1H-NMR (DMSO-d6): δ 8,10 (s, H-4, 1H), 7,51 (s, 1H, H-1), 7,6-8,0 (2 an, NH2, 2H), 6,85 (d, H-9, JH8,H9 = 11,6 Hz, 1H), 6,01 (s, H-1’, 1H), 5,52 (d, H-8, JH8,H9 11,6 Hz, 1H), 5,11 (m, 2’-OH, 3’-OH, 5’-OH), 3,77-3,91 (m, H-3’, H-4’, H-5’, 3H), 3,63 (m, H-5’,1H), 0,70 (s, Me, 3H). MS m/z = 390,8 (M+CH3COO-). 25
Ejemplo 18
7-Metoxi-2-(2-C-metil-β-D-ribofuranosil)-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo[cd]azuleno (18.3)
El nucleósido peracetilado 18.1, preparado al tratar el compuesto 6.6 con anhídrido acético, trietilamina y DMAP en acetonitrilo, se hizo reaccionar con tetrafluoroborato de trimetiloxonio en CH2Cl2 a temperatura ambiente para 5 proporcionar el metoxinucleósido 18.2. La retirada de los grupos acetilo en MeOH saturado con carbonato potásico daba el nucleósido buscado 18.3.
Ejemplo 18, Etapa A: 2-(2,3,5-Tri-O-acetil-2-C-metil-β-Dribofuranosil)-2,6-dihidro-7H-2,3,5,6-tetraazabenzo[cd] azulen-7-ona (18.1).
A una solución de 2-(2-C-metil-β-D-ribofuranosil)-2,6-dihidro-7H-2,3,5,6-tetraazabenzo[cd]azulen-7-ona 6.6 10 (136 mg, 0,41 mmol) en acetonitrilo se añadieron anhídrido acético (0,71 ml, 7,5 mmol), trietilamina (1,05 ml) y DMAP (58 mg, 0,47 mmol). La mezcla se agitó durante la noche a temperatura ambiente, a continuación se evaporó y el residuo se sometió a reparto entre agua (75 ml) y CH2Cl2 (200 ml). La capa orgánica se lavó con salmuera y se secó sobre Na2SO4. El residuo evaporado se trató con MeOH para dar el compuesto buscado como un sólido amarillo (150 mg, 80%). 15
Ejemplo 18, Etapa B: 7-Metoxi-2-(2,3,5-tui-O-acetil-2-C-metil-β-D-ribofuranosil)-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo[cd]azulen-7-ona (18.2).
Una solución del compuesto de la Etapa A (50 mg, 0,11 mmol) en CH2Cl2 (1 ml) y tetrafluoroborato de trimetoxioxonio (18 mg, 0,12 mmol) bajo argón se agitó a temperatura ambiente durante 2 d. En este punto la reacción se extinguió con K2CO3 ac. sat. (1 ml) y la mezcla resultante se diluyó con CH2Cl2 (50 ml), se lavó con agua, salmuera y 20 se secó sobre Na2SO4. El residuo evaporado se purificó en una columna de gel de sílice con CH2Cl2/MeOH (50/1) como el eluyente para dar el compuesto buscado 18.2 como un sólido amarillo (29 mg, 56%).
Ejemplo 18, Etapa C: 7-Metoxi-2-(2-C-metil-β-D-ribofuranosil)-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo[cd]azuleno (18.3).
Una mezcla del compuesto de la Etapa B (28 mg, 0,06 mmol) en K2CO3 metanólico saturado (5 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. y a continuación se concentró a vacío. El residuo evaporad en bruto se purificó 25 en una columna de gel de sílice con CH2Cl2/MeOH (20/1) como el eluyente para proporcionar el compuesto buscado 18.3 (15 mg, 72%) como un sólido amarillo.
1H-NMR (DMSO-d6): δ 8,30 (s, H-4, 1H), 7,68 (s, 1H, H-1), 6,83 (d, H-9, JH8,H9 11,6 Hz, 1M), 5,98 (s, H-1’, 1M), 5,84 (d, H-8, JH8,H9 11,4 Hz, 1H), 5,22 (s, 2’-OH, 1H), 5,17 (m, 3’-OH, 1H), 5,12 (t, 5’-OH, J5’OH,H5’ 5,0 Hz, 1H), 3,78-3,88 (m, H-3’, H-4’, H-5’, 3H), 3,65 (m, H-5’,1H), 3,49 (s, OMe, 3H), 0,72 (s, Me, 3H). MS m/z = 405,9 (M+CH3COO-). 30
Ejemplo 19
2-(2-C-Metil-β-D-ribofuranosil)-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo[cd]azulen-4,7(3H,6H)-diona (19.1)
A una solución de 4-amino-2-(2-C-metil-β-D-ribofuranosil)-2,6-dihidro-7H-2,3,5,6-tetraazabenzo[cd]azulen-7-ona 15.6 (35 mg, 0,1 mmol) en ácido acético acuoso al 50% (5 ml) se añadió nitrito sódico (42 mg, 0,6 mmol) y la 5 mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 4 h. La mezcla se neutralizó con tampón de TEAB 1 M y se purificó mediante HPLC de apareamiento iónico en fase inversa en una columna Phenomenex Luna C18(2) 250 x 21 mm, 10 μm. Se usó acetato de trietilamonio (TEAA) 100 mM, pH 7, como el agente de apareamiento iónico. Se aplicó un gradiente de MeOH de 20% a 55% a lo largo de 40 min. El compuesto buscado se eluía a los 26 min seguido por dos picos menores a 29 y 31 min. El TEAA se retiró mediante liofilización repetida para dar el compuesto buscado como un 10 material amarillo apelusado (28 mg, 80%).
1H-NMR (DMSO-d6): δ 11,0 (s an, 2NH, 2H), 7,53 (s, 1H, H-1), 6,95 (d, H-9, JH8,H9 11,7 Hz, 1H), 5,91 (s, H- 1’, 1H), 5,62 (d, JH8,H9 11,7 Hz, H-8, 1H), 5,10 (an, 5’-OH, 3’-OH, 2’-OH, 3H), 3,77-3,89 (m, H-3’, H-4’, H-5’, 3H), 3,63 (m, H-5’,1H), 0,79(s, Me, 3H). MS m/z 347,7 (M-1).
Ejemplo 20 15
4-Cloro-2-(2-C-metil-β-D-ribofuranosil)-2,6-dihidro-7H-2,3,5,6-tetraazabenzo[cd]azulen-7-ona (20.8)
El nucleósido tricíclico 20.8 se sintetizó partiendo de 2-amino-4-cloro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina 20.1. La nucleobase 20.1 se diazotizó en presencia de cloruro de cobre y la base resultante, 2,4-dicloro-7H-pirrolo [2,3-d]pirimidina, se trató con N-yodosuccinimida en THF a temperatura ambiente para proporcionar 2,4-dicloro-5-yodo-7H-20 pirrolo[ 2,3-d]pirimidina 20.3. A continuación, 20.3 se convirtió en la correspondiente sal sódica con hidruro sódico en acetonitrilo y se hizo reaccionar con el azúcar bromado 2.4, que se preparaba a partir de 3,5-bis-O-(2,4-diclorofenilmetil)-2-C-metil-1-O-metil-α-D-ribofuranosa ((i) Helv. Chim. Acta. 1995, 78, 486; (ii) WO 02/057287, 2002), para dar el nucleósido 20.4. El producto de glicosilación 20.4 se dejó reaccionar con hidróxido amónico en dioxano a 100˚C para proporcionar 20.5. Se acopló cis-β-(tributilestannil)acrilato de metilo (J. Am. Chem. Soc; 1993, 115, 1619) 25
con el compuesto 20.5 bajo reacciones de acoplamiento de Stille usando PdCh(PPH3)2 y yoduro de cobre para dar el análogo de Z-éster 20.6, que se hizo reaccionar adicionalmente con DBU en dioxano para dar el triciclo protegido 20.7. El nucleósido 20.7 se trató con tricloruro de boro en CH2Cl2 para proporcionar el nucleósido tricíclico 20.8.
Ejemplo 20 Etapa A: 2-Amino-4-cloro-5-yodo-1H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (20.2)
El compuesto 20.2 se preparó como se describe en Seela, F., et ál., Liebigs Ann. Chem., 1985, 312-320. 5
Ejemplo 20, Etapa B: 2,4-Dicloro-5-yodo-1H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (20.3)
El compuesto 20.2 (3,80 g, 20,0 mmol) se disolvió en THF (200 ml) y se enfrió hasta -20˚C durante 20 min. Se añadió lentamente N-yodosuccinimida (7,0 g, 30,0 mmol) y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente. Después de 2 h, la mezcla se evaporó hasta sequedad y el residuo se redisolvió en acetato de etilo, se lavó con tiosulfato sódico al 5%, solución saturada de cloruro sódico y a continuación se secó sobre sulfato sódico y se evaporó 10 hasta sequedad. El producto en bruto se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice usando acetato de etilo al 20% en hexano para dar 4,6 g del compuesto 20.3 como un sólido amarillento.
Ejemplo 20 Etapa C: 2,4,-Dicloro-5-yodo-7-[3,5-bis-O-(2,4-diclorofenilmetil)-2-C-metil-β-D-ribofuranosil]- 7H-pirrolo[2,3-d]-pirimidina (20.4)
Una solución de 2.4 ((i) Helv. Chim. Acta. 1995, 78, 486; (ii) WO02/057287, 2002) (8,8 g, 20,0 mmoles) en 15 acetonitrilo anhidro (300 ml) se añadió a una solución de la sal sódica de 4,6-dicloro-5-yodo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina [generada in situ a partir de 4,6-dicloro-5-yodo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (3,1 g, 10,0 mmol) en acetonitrilo anhidro (100 ml) y NaH (60% en aceite mineral, 0,90 g, 37,0 mmol), después de 4 h de agitación vigorosa a temperatura ambiente]. La mezcla combinada se agitó a temperatura ambiente durante 40 h y a continuación se evaporó hasta sequedad. La mezcla se filtró a través de un bloque de celita y el residuo sólido se lavó a fondo con 500 ml de acetonitrilo. Los filtrados 20 se evaporaron hasta sequedad y el producto en bruto se purificó en una columna de gel de sílice usando acetato de etilo al 25% en hexano para dar 2,8 g del producto deseado 20.4 como una espuma blanca.
Ejemplo 20, Etapa D: 4,2-Dicloro-5-yodo-7-[3,5-bis-O-(2,4-diclorofenilmetil)-2-C-metil-β-D-ribofuranosil]- 7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (20.5)
El material de la Etapa C (2,5 g, 2,5 mmol) en dioxano (50 ml) se puso en un recipiente a presión y se añadió 25 hidróxido amónico acuoso (50 ml). La mezcla se cerró herméticamente y se calentó hasta 100˚C durante 2 h. Después de la reacción, la mezcla se evaporó hasta sequedad y el producto en bruto se purificó usando cromatografía en columna de gel de sílice con MeOH al 5-10% en CH2Cl2 como eluyente para dar 2,10 g del producto deseado 20.5 puro.
Ejemplo 20, Etapa E: 4-Amino-2-cloro-5-[1-(metoxicarbonil)-2-etenil]-7-[3,5-bis-O-(2,4-diclorofenilmetil)-2-C-metil-β-D-ribofuranosil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (20.6). 30
Al material de la Etapa D (2,1 g, 1,90 mmol) en 100 ml de DMF anhidra se añadieron CuI (83,80 mg, 0,44 mmol), cis-β-(tributilestannil)acrilato de metilo (1,5 ml, 4,4 mmol) y PdCl2(PPH3)2 (150,0 mg, 0,22 mmol) a temperatura ambiente bajo una atmósfera de argón. La mezcla de reacción se calentó a 70˚C durante 24 h, a continuación se enfrió hasta temperatura ambiente y se filtró a través de un taco de celita. El filtrado se evaporó hasta sequedad y el producto en bruto se purificó en una columna de gel de sílice usando THF al 5-30% en CH2Cl2 como eluyente para dar 2,2 g del 35 éster deseado 20.6 puro.
Ejemplo 20, Etapa F: 2-[3,5-Bis-O-(2,4-diclorofenilmetil)-2-C-metil-β-D-ribofuranosil]-4-cloro-2,6-dihidro-7H- 2,3,5,6-tetraazabenzo[cd]azulen-7-ona (20.7)
A una solución del compuesto 20.6 (1,9 g, 2,5 mmol) en dioxano (40 ml) se añadió DBU (1,3 ml, 9,0 mmol). La mezcla se calentó a reflujo durante 2 h y a continuación se evaporó hasta sequedad. El producto en bruto se purificó 40 mediante cromatografía en columna de gel de sílice usando MeOH al 5-10% en CH2Cl2 como eluyente para dar 1,7 g del producto 20.7 puro.
Ejemplo 20, Etapa G: 4-Cloro-2-(2-C-metil-β-D-ribofuranosil)-2,6-dihidro-7H-2,3,5,6-tetraazabenzo[cd]azulen- 7-ona (20.8)
A una solución del compuesto 20.7 obtenido de la Etapa F (1,7 mg, 2,4 mmol) en CH2Cl2 (200 ml) a -78˚C se 45 añadió tricloruro de boro (1M en CH2Cl2, 25 ml, 25,0 mmol), gota a gota. La mezcla se agitó a -78˚C durante 2,5 h y a continuación a de -30˚C a - 20˚C durante 3 h. La reacción se extinguió mediante la adición de MeOH/CH2Cl2 (1:1) (50 ml) y la mezcla resultante se agitó a -15˚C durante 30 minutos, a continuación se neutralizó con amoniaco acuoso a 0˚C y se agitó a temperatura ambiente durante 15 minutos. La mezcla se evaporó hasta sequedad y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice usando etanol al 5-20% en CH2Cl2 como eluyente para dar 560 mg 50 de producto tricíclico amarillento 20.8 puro.
1H NMR (DMSO-d6) δ 11,04 (d, J 1,5 Hz, 1H, NH), 7,89 (s, 1H, H-6), 7,04 (d, J 11,7 Hz, H1”), 5,96 (s, 1H, H- 1’), 5,69 (dd, J 11,7, 1,5 Hz, H2”), 5,16 (m, 3H, 3xOH), 3,88-3,32 (m, 4H, H-3’, H-4’, 2xH-5’), 0,76 (s, 3H, CH3).
Se encontró que el nucleósido tricíclico 20.8 era un producto intermedio adecuado para la síntesis de nucleósidos tricíclicos funcionalizados en C-4. El nucleósido 20.8 se hizo reaccionar con tiometóxido sódico en DMF a temperatura elevada. Se aislaron dos productos en una relación de 1:1. Estos productos se separaron usando HPLC en fase inversa y se caracterizaron como los nucleósidos tricíclicos 21.1 y 21.2 usando análisis de 1H NMR y LCMS. El compuesto 20.8 se trató con cloruro de terc-butildimetilsililo e imidazol en DMF a temperatura ambiente para dar el 5 nucleósido tricíclico protegido con TBDMS en 5’ 21.3. La reacción de desplazamiento nucleófilo del compuesto 21.3 usando metilamina 2 M en THF, seguida por la reacción de desprotección usando fluoruro de tetrabutilamonio (TBAF), proporcionaba el derivado 4-metilaminado 21.4. De un modo similar, 21.3 se hizo reaccionar con metóxido sódico en MeOH a reflujo y el producto resultante se desprotegió con TBAF para dar el análogo 4-OMe 21.5.
Ejemplos 21 y 22 10
2-(2-C-metil-β-D-ribofuranosil)-4-metiltio-2,6-dihidro-7H-2,3,5,6-tetraazabenzo[cd]azulen-7-ona (21.1) y 2-(2-C-metil-β-D-ribofuranosil)-4,9-di(metiltio)-2,6,8,9-tetrahidro-7H-2,3,5,6-tetraazabenzo[cd]azulen-7-ona (21.2)
A una solución del compuesto obtenido del Ejemplo 20 (20.8) (100,0 mg, 0,30 mmol) en DMF (10 ml) se añadió tiometóxido sódico (105 mg, 1,5 mmol). La mezcla se agitó a 120˚C durante 24 h. Después de la evaporación de la DMF 15 bajo presión reducida, el residuo se purificó en una columna de gel de sílice usando MeOH al 5-12% en CHCl3 para dar una mezcla de dos productos (1:1). Estos dos productos se separaron mediante HPLC en fase inversa para dar 25 mg de 21.1 y 30 mg de 21.2.
Para el Ejemplo 21 (21.1): 1H NMR (CD3OD) δ 7,70 (s, 1H, H-6), 7,00 (d, J 12,0 Hz, H1”), 6,19 (s, 1H, H-1’), 5,72 (d, J 12,0 Hz, H2”), 4,07-3,80 (m, 4H, H-3’, H-4’, 2xH-5’), 2,56 (s, 3H, SCH3), 0,91 (s, 3H, CH3). 20
Para el Ejemplo 22 (21.2): 1H NMR (CD3OD) δ 7,54 (s, 1H, H-6), 6,29 (s, 1H, 2 x H1’), 4,51-3,79 (m, 5H, H-3’, H- 4’, 2xH-5’, CH), 3,21 (m, 2H, CH2), 2,59 (s, 3H, SCH3), 2,14 (2 x s, 3H, SCH3), 0,88 (2 x s, 3H, 2 x CH3).
Ejemplo 23
2-(2-C-Metil-β-D-ribofuranosil)-4-metilamino-2,6-dihidro-7H-2,3,5,6-tetraazabenzo[cd]azulen-7-ona (21.4)
4-Cloro-2-(5-O-terc-butildimetilsilil-2-C-metil-β-D-ribofuranosil)-2,6-dihidro-7H-2,3,5,6-tetraazabenzo[cd]azulen- 7-ona 25 (21.3)
A una solución del compuesto 20.8 (366 mg, 1,0 mmol) e imidazol (68,0 mg, 1,0 mmol) en DMF (20 ml) se añadió cloruro de terc-butildimetilsililo (150,7 mg, 1,0 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 6 h bajo una atmósfera inerte y a continuación se trató con solución saturada de bicarbonato sódico y se extrajo con acetato
de etilo, se secó sobre sulfato sódico y se evaporó hasta sequedad. El producto en bruto se purificó usando cromatografía en columna de gel de sílice usando MeOH al 2-5% en CHCl3 para dar 380 mg del producto deseado 21.3,
1H NMR (CDCl3) δ 7,68 (s, 1H, H-6), 7,24 (d, J 11,4 Hz, H1”), 6,83 (s, 1H, H-1’), 5,85 (d, J 11,4 Hz, H2”), 4,14-3,72 (m, 4H, H-3’, H-4’, 2xH-5’), 0,99 (s, 12H, CH3, (CH3)3), 0,18 (s, 6H, 2xCH3)
2-(2-C-Metil-β-D-ribofuranosil)-4-metilamino-2,6-dihidro-7H-2,3,5,6-tetraazabenzo[cd]azulen-7-ona (21.4) 5
El compuesto 21.3 (100 mg, 0,20 mmol) se añadió a solución de metilamina 2 M en THF (25 ml) en un recipiente a presión. El recipiente se cerró herméticamente y se calentó a 90˚C durante 8 h. Después de la evaporación del disolvente y la amina en exceso, el residuo se redisolvió en THF (20 ml). Se añadió a esta solución fluoruro de tetrabutilamonio en THF (2 ml) y la solución se agitó a temperatura ambiente durante 4 h. Después de una evaporación cuidadosa del disolvente, el residuo se purificó en una columna de gel de sílice usando MeOH al 5-7% en CHCl3 como 10 eluyente para dar 46 mg del producto amarillento deseado.
1H NMR (DMSO-d6) δ 10,05 (s an. 1H, NH), 7,42 (s, 1H, H-6), 6,89 (d, J 11,7 Hz, H1”), 6,65 (s an, 1H, NH), 5,93 (s, 1H, H-1’), 5,61 (d, J 11,7 Hz, H2”), 5,19-5,00 (m, 3H, 3xOH), 3,90-3,3,63 (m, 4H, H-3’, H-4’, 2xH-5’), 3,32, (s, 3H, NCH3), 0,80 (s, 3H, CH3).
Ejemplo 24 15
4-Metoxi-2-(2-C-metil-β-D-ribofuranosil)-2,6-dihidro-7H-2,3,5,6-tetraazabenzo[cd]azulen-7-ona (21.5)
A una solución del compuesto 21.3 (100,0 mg, 0,20 mmol) en MeOH anhidro (25 ml) se añadió metóxido sódico recientemente preparado (540,0 mg, 10,0 mmol). La solución homogénea resultante se calentó hasta reflujo durante 24 h y a continuación se neutralizó con resina DOWEX H+ y se filtró. La solución metanólica neutra se evaporó y el residuo se redisolvió en THF. Se añadió a esta solución fluoruro de tetrabutilamonio en THF (2 ml) y la mezcla se agitó a 20 temperatura ambiente durante 4 h. Después de la evaporación cuidadosa del disolvente, el residuo se purificó en una columna de gel de sílice para dar 38 mg del producto amarillento deseado.
1H NMR (CD3OD) δ 7,64 (s, 1H, H-2), 7,00 (d, J 11,7 Hz, H1”), 6,129 (s, 1H, H-1’), 5,73 (d, J 11,7 Hz, H2”), 3,81-4,13 (m, 7H, H-3’, H-4’, 2xH5’, OCH3), 0,92 (s, 3H, CH3).
Ejemplo 25 25
2-(2-C-Metil-β-D-ribofuranosil)-2,6-dihidro-7H-2,3,5,6-tetraazabenzo[cd]azulen-7-tiona (23.2)
Ejemplo 25, Etapa A: 2-(2-C-Metil-2,3,5-tri-O-acetil-β-D-ribofuranosil)-2,6-dihidro-7H-2,3,5,6-tetraazabenzo[cd] azulen-7-tiona (23.1).
El compuesto 18.1 (250 mg, 0,54 mmol) se disolvió en dioxano (5 ml) y se añadió piridina (7 ml), seguido por 30 pentasulfuro de fósforo (242 mg, 0,5 mmol). La mezcla se calentó a reflujo durante 24 h, a continuación el disolvente se evaporó y el residuo se lavó con piridina (3 x 4 ml). Los lavados combinados se evaporaron y el residuo se disolvió en 50 ml de CHCl3 y se lavó con 30 ml de bicarbonato sódico acuoso al 10% seguido por agua. La fase orgánica se secó sobre sulfato sódico anhidro, se filtró, se evaporó y el residuo (180 mg) que contenía 23.1 se usó inmediatamente en la siguiente etapa. 35
Ejemplo 25, Etapa B: 2-(2-C-Metil-β-D-ribofuranosil)-2,6-dihidro-7H-2,3,5,6-tetraazabenzo[cd]azulen-7-tiona (23.2).
A una suspensión del compuesto 23.1 (180 mg, 0,38 mmol) en 4 ml de etanol se añadieron 0,22 ml de solución de hidróxido sódico 1 N en agua. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1,5 h, tiempo después del cual el pH se llevó hasta 6 con ácido acético y el disolvente se evaporó. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (10:1 CH2Cl2:MeOH) para proporcionar 30 mg del producto 23.2. 1H NMR (DMSO-d6) δ 10,49 (s, 1H), 8,52 (s, 1H), 7,50 40 (s, 1H), 7,00 (d, J 12 Hz, 1H), 6,08 (s, 1H), 5,65 (d, J 12 Hz, 1H), 5,18 (m, 3H), 3,82 (m, 3H), 3,68 (m, 1H), 0,73 (s, 3H).
Ejemplo 26
2-(2-C-Metil-β-D-ribofuranosil)-6,7-dihidro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo[cd]azuleno (24.2)
Ejemplo 27, Etapa A: 2-[3,5-Bis-O-(2,4-diclorofenilmetil)-2-C-metil-β-D-ribofuranosil]-6,7-dihidro-2H- 2,3,5,6-tetraazabenzo[cd]azuleno (24.1). 5
Al compuesto 6.2 (372 mg, 0,5 mmol) y alilamina de tri-n-butilestaño (preparada de acuerdo con el procedimiento de la bibliografía (de Corriu et ál. Journal of Organic Chemistry 1993, 58, 1443-1448) en 10 ml de tolueno anhidro se añadió tetraquis(trifenilfosfina)paladio[0] y la mezcla se calentó a reflujo durante 5 h. El disolvente se evaporó y el residuo se disolvió en CH2Cl2 y se cargó a una columna de gel de sílice y se eluyó sucesivamente con CH2Cl2:MeOH 75:1, 60:1, 40:1. La reunión y la evaporación de las fracciones producían 160 mg del producto 24.1. 10
Ejemplo 27, Etapa B: 2-(2-C-Metil-β-D-ribofuranosil)-6,7-dihidro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo[cd]azuleno (24.2).
Al compuesto 24.1 (160 mg, 0,25 mmol) en CH2Cl2 (10 ml) a -78˚C se añadió solución 1 M de tricloruro de boro en CH2Cl2 gota a gota a lo largo de 5 minutos y la solución se agitó a -78˚C durante 2,5 h y a continuación a -25˚C durante 3 h. Se añadieron a esta mezcla 25 ml de CH2Cl2:MeOH 1:1 v/v y la solución se agitó a -15˚C durante 30 minutos. La mezcla se llevó hasta temperatura ambiente y el disolvente se evaporó bajo presión reducida. El residuo se 15 coevaporó con MeOH (5 x 10 ml) y una solución de 10 ml de MeOH se neutralizó con NH4OH y se evaporó de nuevo. El residuo se adsorbió en 2 g de gel de sílice y se cargó a una columna de sílice y se eluyó sucesivamente con CH2Cl2:MeOH 50:1, 20:1 y 15:1. Las fracciones que se eluían a 20:1 y 15:1 se recogieron. La reunión de la fracción y la evaporación daban 16 mg del producto 24.2. 1H NMR (DMSO-d6) δ 8,10 (s, 1H), 7,51 (s, 1H), 7,30 (t, 1H), 6,61 (d, J 9 Hz, 1H), 6,11 (s, 1H), 5,71 (dt, J 6, 12 Hz, 1H), 5,08 (m, 3H), 3,86 (m, 5H), 3,78 (m, 1H), 0,72 (s, 3H). 20
Ejemplo 27
9-Metoxi-2-(2-C-metil-β-D-ribofuranosil)-6,7,8,9-tetrahidro-2H-2,3,5,6-tetraazabenzo[cd]azuleno (25.1).
La fracción que se mueve más lentamente de la Etapa B en el Ejemplo 27, Etapa B se aisló para proporcionar 8 mg del éter 25.1. 1H NMR (DMSO-d6) δ 8,00 (s, 1H), 7,53 (m, 3H), 6,11 (s, 1H), 5,11 (m, 4H), 4,43 (m, 1H), 3,97 (m, 25 1H), 3,84 (m, 3H), 3,66 (m, 2H), 3,26 (s, 3H), 0,68 (s, 3H).
Ejemplo 28
Monofosfatos de nucleósido
Al compuesto nucleosídico apropiado (0,156 mmol) (secado sobre P2O5 a vacío durante la noche) se añadió fosfato de trimetilo (1,5 ml). La mezcla se agitó durante la noche en un contenedor cerrado que contenía tamices moleculares de 4 Ǻ. A continuación, se enfrió hasta 0˚C y se añadió oxicloruro de fósforo (35,8 ml, 2,5 eq.) a través de 5 una jeringa. La mezcla se agitó durante 3 h a 0˚C y a continuación la reacción se extinguió mediante la adición de bicarbonato de tetraetilamonio (TEAB) (1M) (1,5 ml) y agua (15 ml). La solución acuosa se lavó con CHCl3 y éter y a continuación se liofilizó. El producto en bruto se purificó mediante HPLC usando una columna C18 con agua y acetonitrilo al 5% en agua para proporcionar el monofosfato como una sal de trietilamonio después de la liofilización.
Ejemplo 29 10
Profármacos de metoxialaninilfosfato de 5’-p-fenilo
A una solución del compuesto nucleosídico apropiado (0,6 mmol) en THF anhidro (5 ml) se añadió metoxialaninilfosforocloridato de fenilo (40 mg, 5 eq.) (recientemente preparado siguiendo el procedimiento de la bibliografía: J. Med. Chem. 1993, 36, 1048-1052 y Antiviral Research, 1999, 43, 37-53) y 1-metilimidazol (95 ml, 10 eq.) 15 a temperatura ambiente bajo argón. La reacción fue seguida por TLC. Después de 36 h, la mezcla de reacción se evaporó y el residuo se purificó en gel de sílice con MeOH al 0-10% en CH2Cl2 como eluyente para proporcionar una mezcla 1:1 de diastereoisómeros.
Ejemplo 30
Profármacos de 2-[5-O-Bis(pivaloiloximetil)fosforilo 20
A una solución de sal de trietilamonio del compuesto de monofosfato de nucleósido (0,024 mmol) en MeOH anhidro (0,5 ml) se añadió metóxido de tributilestannilo (14 ml, 2 eq.) a temperatura ambiente bajo argón. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 30 min y a continuación se evaporó y se coevaporó con acetonitrilo tres veces. El residuo se disolvió en acetonitrilo anhidro (3 ml) y se añadieron bromuro de tetrabutilamonio (15,5 mg, 2 25 eq.) y pivalato de yodometilo (58 mg, 10 eq). La mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 1 h, se enfrió hasta temperatura ambiente y el disolvente se evaporó. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice con MeOH al 1-5% en CH2Cl2 para proporcionar el profármaco.
Ejemplo 31
Difosfatos de nucleósido 30
A una solución de la sal de trietilamonio de 5’-monofosfato (0,031 mmol) [secada mediante coevaporación con DMF anhidra dos veces (2 x 1 ml)] en 0,5 ml de DMF anhidra se añadió N,N’-carbonildiimidazol (25 mg, 5 eq.) a temperatura ambiente bajo argón. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 h después de las cuales la TLC analítica no mostraba material de partida. A continuación, se añadió a la solución anterior sal de fosfato de tributilamonio (fosfato de n-Bu3N 1,5, que se preparó (véase PCT, WO 88/03921) y se secó adicionalmente mediante 5 coevaporación con DMF anhidra tres veces). La reacción fue seguida por TLC y, típicamente después de 3 días, la LC-MS mostraba una conversión significativa (>50%) en producto. La reacción se extinguió con 1 ml de trietilamina, 1 ml de agua y se agitó a temperatura ambiente durante 40 min. El producto en bruto se purificó mediante HPLC en fase inversa para proporcionar el producto 29.1 puro.
Ejemplos 32-42 10
5’-Trifosfatos de nucleósido
A una mezcla enfriada con hielo de nucleósido (0,1 mmol) en fosfato de trimetilo (1 ml, anhidro) se añadió POCl3 (18,6 ml, 0,2 mmol) y la mezcla se agitó a 0˚C durante 1 h. Se añadió tributilamina (71,5 ml, 0,3 mmol), seguida por acetonitrilo (0,1 ml, anhidro) y pirofosfato de tributilamonio (182 mg, 0,4 mmol). Después de 30 min., la reacción se extinguió con tampón de bicarbonato de trietilamonio 1 M (5 ml, 1 M, pH 8,5) enfriado con hielo. Los productos se 15 purificaron mediante HPLC.
Ejemplo 43
Mimético de 5’-trifosfato de nucleósido
2-(5-α-PI-borano-β,γ-difluorometilen)trifosfono-2-C-metil-β-D-ribofuranosil)-2, 6, 8, 9-tetrahidro-7-oxa- 2,3,5,6-tetraazabenzo[cd]azuleno (43.2) 5
Ejemplo 43, Etapa A 2-(2-C-metil-2,3-di-O-acil-β-D-ribofuranosil)-2,6,8,9-tetrahidro-7-oxa-2,3,5,6-tetraazabenzo[cd] azuleno (43.1)
A una solución del compuesto 2.9 del Ejemplo 2, Etapa G (76 mg, 0,24 mmol) en piridina (2,0 ml) se añadió cloruro de terc-butildimetilsililo (60 mg, 0,38 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 16 h bajo una atmósfera inerte. El anhídrido acético añadido (0,44 ml, 4,32 mmol) se agitó durante 3 h a temperatura ambiente. Se 5 añadieron trietilamina (0,61 ml, 6,0 mmol) y DMAP (35 mg, 0,29 mmol). La mezcla se agitó durante la noche a temperatura ambiente, a continuación se evaporó y el residuo se sometió a reparto entre agua (20 ml) y CH2Cl2 (60 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4. Los disolventes se evaporaron a vacío. El producto en bruto resultante se secó a alto vacío durante 2 h y se redisolvió en THF (2,0 ml) y se enfrió hasta 0˚C y se añadió solución 1,0 M de TBAF en THF (0,6 mmol) y se agitó a 0˚C durante 1 h. La reacción se extinguió al añadir etanol absoluto (2 ml) y los disolventes 10 se evaporaron. El residuo restante se redisolvió en diclorometano y se lavó con agua. Las porciones orgánicas se secaron sobre Na2SO4 y se filtraron, se evaporaron y el producto en bruto se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice usando metanol al 1-2% en diclorometano para dar 43.1 como una espuma amarilla clara (57 mg).
1H NMR (DMSO-d6) δ 8,57 (s, H-2, 1H), 7,70 (s, H-6, 1H), 6,62 (s, H-1’, 1H), 5,39 (d J 5,7, H-3’, 1H), 5,23 (t, J 15 5,7, 5’-OH, 1H), 4,52 (s an, OCH2CH2, 2H), 4,09-4,13 (m, H-4’, 1H), 3,62-3,81 (m, H-5’, 2H), 3,08-3,1 (m, OCH2CH2, 2H), 2,51 (s, N-COCH3, 3H), 2,08, 2,04 (cada s, 2xO-COCH3, 6H), 1,34 (s, CH3, 3H).
Ejemplo 43, Etapa B: 2-(5-α-PI-borano-β,γ-difluorometilen)trifosfono-2-C-metil-β-D-ribofuranosil)-2,6,8,9-tetrahidro-7-oxa-2,3,5,6-tetraazabenzo[cd]azuleno (43.2)
Se añadió 2-cloro-4H-1,3,2-benzodioxafosforin-4-ona (29 mg, 0,15 mmol) a una solución agitada de 43.1 (43 20 mg, 0,1 mmol) en DMF anhidra (0,5 ml) y piridina (0,1 ml) a 0˚C bajo argón. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 h y se enfrió con un baño de hielo. Se añadió tributilamina (65 μl, 0,28 mmol), seguido por la adición de sal de bis(tributilamonio) de ácido (difluorometilen)difosfónico (89 mg, 0,15 mmol) en DMF (0,5 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 h y se enfrió con hielo. Se añadió complejo de borano-diisopropiletilamina (377 μl, 2,11 mmol) y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 6 h, se enfrió 25 con hielo y se extinguió mediante la adición lenta de agua (2 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 h, se diluyó con agua (3 ml), se extrajo dos veces con cloroformo y la porción acuosa se concentró hasta aproximadamente 2 ml. Se añadió amoníaco acuoso (33%) (2 ml) y se agitó a temperatura ambiente durante 10 h y el amoníaco se evaporó y la porción acuosa restante se analizó mediante LCMS. La LCMS mostraba la presencia de dos diastereoisómeros de 43.2. MS m/z 592,1 [M-H] 30
Ejemplo 44
Ensayos con Replicón de HCV
El doblamiento o las diluciones ½-log de cada compuesto se realizaron en DMSO y las partes alícuotas se transfirieron a microplacas de 96 pocillos para dar un intervalo de concentración final de 100-400 mM descendente en presencia de una concentración constante de 1% de DMSO (ELISA y métodos del informador) o 0,4% de DMSO 35 (método de hibridación). La actividad inhibidora de estos se determinó mediante tres métodos en células Huh-7 transfectadas con replicones que codifican para proteínas no estructurales (NS) de HCV.
Método de ELISA con replicón: células Huh-7 que contenían un replicón NS3 - NS5b de HCV se sembraron en microplacas que contenían diluciones de compuesto a una concentración de 20.000 células por pocillo. Después de 3 días de incubación las monocapas celulares se lavaron y se fijaron con acetona/MeOH 1:1. Se realizó un ELISA sobre 40 las láminas celulares fijadas mediante la adición secuencial de anticuerpo monoclonal específico de HCV, anticuerpo secundario conjugado a peroxidasa de rábano picante y solución de sustrato, con lavado a fondo entre adiciones. La reacción de desarrollo de color se detuvo con ácido sulfúrico al 12,5% y las placas se leyeron a 490 nm. A continuación, las monocapas se lavaron, se secaron y se tiñeron con carbol fucsina para la determinación microscópica de la citotoxicidad. 45
Método del informador con replicón: células Huh-7 que contienen un replicón que expresa NS3 - NS5b de HCV más un gen informador se sembraron en las microplacas de prueba a una concentración de 15.000 células por pocillo. Después de 2 días de incubación, la viabilidad de las células se determinó mediante la adición de Resazurin (Sigma TOX-8) a todos los pocillos y leyendo las placas a 595 nm 3 horas después de la adición. La señal procedente del producto del gen informador se midió inmediatamente después. 50
Método de hibridación con replicón y citotoxicidad: células Huh-7 que contienen un replicón NS3 - NS5b de HCV se sembraron en microplacas que contenían diluciones de compuesto a una concentración de 5.000 células por pocillo. Después de 3 días de incubación, el medio se reemplazó por solución de MTS y la citotoxicidad se determinó mediante el desarrollo del color. Después de leer las placas a 490 nm, la solución de MTS se aspiró y las células se sometieron a lisis y se hibridaron contra secuencias de HCV usando una lectura de salida quimioluminiscente. 55
Análisis de datos: La lectura media de pocillos duplicados a cada concentración de compuesto se expresó como un porcentaje del valor medio para pocillos de control libres de compuesto. El porcentaje de inhibición se representó frente a la concentración para cada compuesto y se calculó la concentración inhibidora al 50% (IC50).
Los compuestos de los Ejemplos 1-27 típicamente eran activos en ensayos con replicón en el intervalo de 5 a > 1000 μM 5
Ejemplo 45
Células Huh-7 y Vero: Se determinó adicionalmente la citotoxicidad de los compuestos en cultivos de células Huh-7 y Vero que crecen exponencialmente. Se realizaron diluciones de doblamiento de los compuestos, según se describió previamente, y se transfirieron a microplacas de prueba para dar concentraciones finales de 500 μM descendentemente. Bien células Huh-7 o bien células Vero se añadieron a concentraciones de 12.000 y 3.000 células 10 por pocillo, respectivamente. Después de la incubación durante 4 días a 37˚C, se añadió MTT a todos los pocillos y las placas se reincubaron durante 2 horas. Se añadió a continuación isopropanol acidificado a todos los pocillos para someter a lisis a las células y disolver cualquier formazano que se hubiera producido. La absorbancia se leyó a 570 nm y las lecturas medias procedentes de pocillos de prueba duplicados se expresaron como porcentajes de las lectura medias de pocillos de control libres de compuesto. La concentración citotóxica al 50% (CCID50) de cada compuesto se 15 calculó a partir de la gráfica de porcentaje de supervivencia celular frente a la concentración de compuesto.
Células HFF: Las células se sembraron en placas de microvaloración que contenían diluciones ½ -log de los compuestos a una concentración de 5.000 células por pocillo. Después de 3 días de incubación el medio se reemplazó por solución de MTS en medio y la citotoxicidad se determinó mediante desarrollo del color. Las placas se leyeron a 490 nm y las CC50 se calcularon a partir del porcentaje de inhibición según se apuntó anteriormente. 20
Células Huh-7 y Vero: Se determinó adicionalmente la citotoxicidad de los compuestos en cultivos de células Huh-7 y Vero que crecen exponencialmente. Se realizaron diluciones de doblamiento de los compuestos, según se describió previamente, y se transfirieron a microplacas de prueba para dar concentraciones finales de 500 μM descendentemente. Bien células Huh-7 o bien células Vero se añadieron a concentraciones de 12.000 y 3.000 células por pocillo, respectivamente. Después de la incubación durante 4 días a 37˚C, se añadió MTT a todos los pocillos y las 25 placas se reincubaron durante 2 horas. Se añadió a continuación isopropanol acidificado a todos los pocillos para someter a lisis a las células y disolver cualquier formazano que se hubiera producido. La absorbancia se leyó a 570 nm y las lecturas medias procedentes de pocillos de prueba duplicados se expresaron como porcentajes de las lecturas medias de pocillos de control libres de compuesto. La concentración citotóxica al 50% (CCID50) de cada compuesto se calculó a partir de la gráfica de porcentaje de supervivencia celular frente a la concentración de compuesto. 30
Células HFF: Las células se sembraron en placas de microvaloración que contenían diluciones ½ -log de los compuestos a una concentración de 5.000 células por pocillo. Después de 3 días de incubación el medio se reemplazó por solución de MTS en medio y la citotoxicidad se determinó mediante desarrollo del color. Las placas se leyeron a 490 nm y las CC50 se calcularon a partir del porcentaje de inhibición según se apuntó anteriormente.
Células Huh-7 y Vero: Se determinó adicionalmente la citotoxicidad de los compuestos en cultivos de células 35 Huh-7 y Vero que crecen exponencialmente. Se realizaron diluciones de doblamiento de los compuestos, según se describió previamente, y se transfirieron a microplacas de prueba para dar concentraciones finales de 500 μM descendentemente. Bien células Huh-7 o bien células Vero se añadieron a concentraciones de 12.000 y 3.000 células por pocillo, respectivamente. Después de la incubación durante 4 días a 37˚C, se añadió MTT a todos los pocillos y las placas se reincubaron durante 2 horas. Se añadió a continuación isopropanol acidificado a todos los pocillos para 40 someter a lisis a las células y disolver cualquier formazano que se hubiera producido. La absorbancia se leyó a 570 nm y las lecturas medias procedentes de pocillos de prueba duplicados se expresaron como porcentajes de las lecturas medias de pocillos de control libres de compuesto. La concentración citotóxica al 50% (CCID50) de cada compuesto se calculó a partir de la gráfica de porcentaje de supervivencia celular frente a la concentración de compuesto.
Células HFF: Las células se sembraron en placas de microvaloración que contenían diluciones ½ -log de los 45 compuestos a una concentración de 5.000 células por pocillo. Después de 3 días de incubación el medio se reemplazó por solución de MTS en medio y la citotoxicidad se determinó mediante desarrollo del color. Las placas se leyeron a 490 nm y las CC50 se calcularon a partir del porcentaje de inhibición según se apuntó anteriormente.
Los compuestos de los Ejemplos 1-27 típicamente eran citotóxicos en el intervalo de 30 a > 100 μM.
Ejemplo 46 50
Ensayo de inhibición de polimerasa de HCV
El gen de polimerasa de HCV de longitud completa etiquetado con his C-terminal (Bartenschlager 1b) se clonó y se expresó en células Sf9 mediante procedimientos estándar. La enzima se purificó mediante cromatografía de afinidad en níquel seguida por cromatografía en columna de S-Sepharose. Las reacciones contenían Tris HCl 20 mM, pH 7,0, Hepes 5 mM, pH 7,0, NaCl 90 mM, MgCl2 12,5 mM, glicerol al 2%, Triton X-100 al 0,005%, DTT 1,5 mM, 0,4 55 U/μl de RNasin, 20 μg/ml de RNA correspondiente a 696 nucleótidos de la región no codificante 3’ del genoma de HCV
1b, UTP 2 μM (= Km), 0,02 μCi/ml de UTP marcado con 33P, una concentración igual a la Km de NTP competitivo (ATP 20 μM, GTP 3 μM o CTP 0,5 μM), NTP “no competitivos” 500 μM y polimerasa de HCV 1b (Bartenschlager, enzima de longitud completa) 100 nM en un volumen total de 25 ml. Las reacciones se iniciaron con la adición de enzima y se terminaron después de 2 horas con 5 ml de EDTA 0,5 M. Las reacciones detenidas se trasfirieron en forma de gota bien sobre mallas filtrantes de DEAE o bien sobre placas filtrantes de 96 pocillos de DEAE (Millipore). Los nucleótidos no 5 incorporados se lavaron de los filtros. La malla filtrante se lavó y se cerró herméticamente en una bolsa junto con 10 ml de fluido de centelleo OptiScint HiSafe. Las placas filtrantes se secaron y 75 ml de fluido de centelleo OptiPhase se añadieron a cada pocillo. La radiactividad restante se cuantificó en un contador de placas Wallac 1205 Betaplate o un contador de placas Wallac 1240 MicroBeta.
Los compuestos de los Ejemplos 32-42 típicamente eran inhibidores de NS5B en el intervalo de 100 a > 1000 10 nM. Los Ejemplos seleccionados eran más activos y presentaban valores de IC50 en el intervalo de 30 a 100 nM.

Claims (24)

  1. REIVINDICACIONES
  2. 1. Un compuesto de la fórmula (I) que puede ser un D- o L-nucleótido o nucleósido
    en el que
    A es O, S, CH2, NH, CHF o CF2; 5
    R1, R2, R2’, R3, R3’ y R4 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, F, Cl, Br, I, OH, SH, NH2, NHOH, NHNH2, N3, COOH, CN, CONH2, C(S)NH2, COOR, R, OR, SR, SSR, NHR y NR2;
    en donde al menos uno de R2 o R2’ no es H;
    R4’ es -L-R5;
    L se selecciona del grupo que consiste en O, S, NH, NR, CY2O, CY2S, CY2NH, CY2, CY2CY2, CY2OCY2, 10 CY2SCY2 y CY2NHCY2, en donde Y se selecciona del grupo que consiste en H, F, Cl, Br, alquilo, alquenilo y alquinilo, en donde el alquilo, el alquenilo y el alquinilo pueden contener cada uno opcionalmente uno o más heteroátomos;
    R5 es OH, monofosfato, difosfato o trifosfato o un fosfonato, fosfoamidato o fosfoéster de los mismos;
    B es una base seleccionada del grupo de heterociclos que consiste en 15
    cada Z se selecciona independientemente del grupo que consiste en N, N-(BH2G)-M+, C-G, O, S, NR, >C=O, >C=S, >C=NH, >C=NR, >S=O, >S(O)2 y CH-G;
    en donde si Z es un participante en un enlace π, Z es independientemente N o C-G, y si Z no es un participante en un enlace π, Z es independientemente N-(BH2G)-M+, O, S, NR, >C=O, >C=S, >C=NH, 20 >C=NR, >S=O, >S(O)2 y CH-G;
    X es O, S, SO, SO2, Se, SeO, SeO2, N, NH o NR;
    W es C, CH o N;
    en donde si W es un participante en un doble enlace (enlace π), W es C;
    en donde si W no es un participante en un doble enlace (enlace π), W es CH o N; 25
    en donde las líneas de trazos (---) indican un enlace π opcional;
    (BH2G)-M+ es un par iónico y M+ es un catión;
    G se selecciona del grupo que consiste en H, F, Cl, Br, I, OH, SH, NH2, NHOH, N3, COOH, CN, CONH2, C(S)NH2, C(=NH)NH2, R, OR, SR, NHR y NR2, cuando están presentes dos o más grupos G en una molécula, pueden ser iguales o diferentes entre sí; y
    R se selecciona del grupo que consiste en alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, acilo y aralquilo, que contienen opcionalmente uno o más heteroátomos. 5
  3. 2. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1
    en el que B se selecciona del grupo que consiste en
    10
    Z1, Z2, Z3, Z4, Z7 y Z8 son independientemente N o C-G;
    W es independientemente N o C-H; y
    Z5, Z6 y Z9 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en N-(BH2G)-M+, O, S, NR, >C=O, >C=S, >C=NH, >C=NR, >S=O, >S(O)2 y CH-G.
  4. 3. El compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2, en el que la base es 15
    o
  5. 4. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el compuesto de la fórmula (I) 5
  6. 5. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, seleccionado del grupo que consiste en
    y 5
  7. 6. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, que es
    o
  8. 7. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, seleccionado del grupo de compuestos que tienen la fórmula
    y
    en el que
    A es O, CH2, o N opcionalmente protegido; 5
    Nu es un nucleófilo;
    X es N, O o S opcionalmente protegido;
    W1 es C (si hay enlace π) o N (si no hay enlace π);
    W2 es C, CH o N;
    Z1 y Z2 son cada uno independientemente CH, C-halógeno, C-alquilo, C-arilo, C-O-alquilo o C-S-alquilo; 10
    Z3 es CH, C-alquilo, C-halógeno, N, CNHR, CNH2, CNR2, C=O o C=S;
    Z4 es CH o C-halógeno, C-alquilo, C-arilo, C-O-alquilo, C-S-alquilo, C-OH, CNH2 o CNHR, C=O o C=S;
    R1, R2, R2’, R3, R3’, R4 son cada uno independientemente H, halógeno, alquilo, O-alquilo, OH, O opcionalmente protegido, metilo o F;
    en donde al menos uno de R2 o R2’ no es H; 15
    R5 es un OH o NH2 opcionalmente protegido;
    Q es NH, NR, O o S;
    Z5, Z6, Z9 son cada uno independientemente CH2, O, NH, NR o S y
    R6, R7 y R8 son cada uno independientemente alquilo, arilo, alquenilo o alquinilo.
  9. 8. Un compuesto de la fórmula (I) que puede ser un D- o L-nucleótido o nucleósido 20
    en el que
    A es O, S, CH2, NH, CHF o CF2;
    R1, R2, R2’, R3, R3’ y R4 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, F, Cl, Br, I, OH, SH, NH2, NHOH, NHNH2, N3, COOH, CN, CONH2, C(S)NH2, COOR, R, OR, SR, SSR, NHR y NR2;
    R4’ es -L-R5; 5
    L se selecciona del grupo que consiste en O, S, NH, NR, CY2O, CY2S, CY2NH, CY2, CY2CY2, CY2OCY2, CY2SCY2 y CY2NHCY2, en donde Y se selecciona del grupo que consiste en H, F, Cl, Br, alquilo, alquenilo y alquinilo, en donde el alquilo, el alquenilo y el alquinilo pueden contener cada uno opcionalmente uno o más heteroátomos;
    R5 es OH, monofosfato, difosfato o trifosfato o un fosfonato, fosfoamidato o fosfoéster de los mismos; 10
    B es una base seleccionada del grupo de heterociclos que consiste en
    cada Z se selecciona independientemente del grupo que consiste en N, N-(BH2G)-M+, C-G, O, S, NR, >C=O, >C=S, >C=NH, >C=NR, >S=O, >S(O)2 y CH-G;
    en donde si Z es un participante en un enlace π, Z es independientemente N o C-G, y si Z no es un 15 participante en un enlace π, Z es independientemente N-(BH2G)-M+, O, S, NR, >C=O, >C=S, >C=NH, >C=NR, >S=O, >S(O)2 y CH-G;
    X es O, S, SO, SO2, Se, SeO, SeO2, N, NH o NR;
    W es C, CH o N;
    en donde si W es un participante en un doble enlace (enlace π), W es C; 20
    en donde si W no es un participante en un doble enlace (enlace π), W es CH o N;
    en donde las líneas de trazos (---) indican un enlace π opcional;
    (BH2G)-M+ es un par iónico y M+ es un catión;
    G se selecciona del grupo que consiste en H, F, Cl, Br, I, OH, SH, NH2, NHOH, N3, COOH, CN, CONH2, C(S)NH2, C(=NH)NH2, R, OR, SR, NHR y NR2, cuando están presentes dos o más grupos G en una molécula, 25 pueden ser iguales o diferentes entre sí; y
    R se selecciona del grupo que consiste en alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, acilo y aralquilo, que contienen opcionalmente uno o más heteroátomos; o
    un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-8; o
    una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para el uso en terapia. 30
  10. 9. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 8, para el uso en el tratamiento de una infección viral o bacteriana, opcionalmente en combinación con uno o más agentes antivirales o antibacterianos.
  11. 10. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 9, en el que dicha infección viral está provocada por un virus de RNA.
  12. 11. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 10, en el que el virus de RNA es HCV. 35
  13. 12. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 9, en el que dicha infección viral está provocada por un virus de ADN o retrovirus.
  14. 13. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 12, en el que el virus de ADN es VHB o VIH.
  15. 14. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 8, para el uso en el tratamiento de una enfermedad proliferativa, opcionalmente en combinación con uno o más agentes antiproliferativos. 5
  16. 15. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-14 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
  17. 16. Un procedimiento para elaborar el compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, que tiene la fórmula
    que comprende ciclar un compuesto que tiene la fórmula 10
    en el que cada uno de Z1-Z4 es independientemente Z; y en el cada uno de W1-W2 es independientemente W.
  18. 17. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 16, en el que
    A es O, CH2, o N opcionalmente protegido;
    W1 es C (si hay enlace π) o N (si no hay enlace π); 15
    W2 es C, CH o N;
    Z1 y Z2 son cada uno independientemente CH, C-halógeno, C-alquilo, C-arilo, C-O-alquilo o C-S-alquilo;
    Z3 es CH, C-alquilo, C-halógeno, N, CNHR, CNH2, CNR2, C=O o C=S;
    Z4 es CH, C-halógeno, C-alquilo, C-arilo, C-O-alquilo, C-S-alquilo, C-OH, C-NH2, C-NHR o C-NR2;
    R1, R2, R2’, R3, R3’, R4 son cada uno independientemente H, halógeno, alquilo, O-alquilo, OH, O opcionalmente 20 protegido, metilo o F; y
    R5 es un OH o NH2 opcionalmente protegido.
  19. 18. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 16 o 17, que comprende además hacer reaccionar
    o
    en donde Y es un halógeno; y
    en donde W4 es H o un compuesto que contiene metal capaz de acoplamiento cruzado mediado por metal. 5
  20. 19. Un procedimiento para elaborar el compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 u 8, que tiene la fórmula
    que comprende ciclar un compuesto que tiene la fórmula
    en el que cada uno de Z1-Z4 y Z6 es independientemente Z; 10
    cada uno de W1 y W2 es independientemente W;
    en el que Y es halógeno; y
    Nu es un nucleófilo.
  21. 20. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 19, en el que
    A es O, CH2, o N opcionalmente protegido;
    X es N, O o S opcionalmente protegido;
    Nu es un alcohol, un alquiltiol o una alquilamina;
    W1 es C (si hay enlace π) o N (si no hay enlace π); 5
    W2 es C, CH o N;
    Z1 y Z2 son cada uno independientemente CH, C-halógeno, C-alquilo, C-arilo, C-O-alquilo o C-S-alquilo;
    Z3 es CH, C-alquilo, C-halógeno, N, CNHR, CNH2, CNR2, C=O o C=S;
    Z4 es CH o C-halógeno, C-alquilo, C-arilo, C-O-alquilo, C-S-alquilo, C-OH, C-NH2, C-NHR o C-NH2;
    R1, R2, R2’, R3, R3’, R4 son cada uno independientemente H, halógeno, alquilo, O-alquilo, OH, O opcionalmente 10 protegido, metilo o F;
    R5 es un OH o NH2 opcionalmente protegido; y
    Z6 es CH2, O, NH, NR o S.
  22. 21. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 10 o 20, que comprende además hacer reaccionar
    15
    en el que W4 es H o un compuesto que contiene metal capaz de acoplamiento cruzado.
  23. 22. Un procedimiento que comprende hacer reaccionar un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 u 8, que tiene la fórmula
    con un nucleófilo y/o electrófilo para formar un compuesto seleccionado del grupo que consiste en: 20
    en el que cada uno de Z1-Z4 son independientemente Z;
    en el que cada uno de W1 y W2 son independientemente W; y 5
    en el que Nu es un nucleófilo.
  24. 23. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 22
    en el que
    A es O, CH2, o N opcionalmente protegido;
    Nu es un alcohol, un alquiltiol o una alquilamina; 10
    W1 es C (si hay enlace π) o N (si no hay enlace π);
    W2 es C, CH o N;
    Z1 y Z2 son cada uno independientemente CH, C-halógeno, C-alquilo, C-arilo, C-O-alquilo o C-S-alquilo;
    Z3 es CH, C-alquilo, C-halógeno, N, CNHR, CNH2, CNR2, C=O o C=S;
    Z4 es CH o C-halógeno, C-alquilo, C-arilo, C-O-alquilo, C-S-alquilo, C-OH, C-NH2, C-NHR o C-NR2; 15
    R1, R2, R2’, R3, R3’, R4 son cada uno independientemente H, halógeno, alquilo, O-alquilo, OH, O opcionalmente protegido, metilo o F;
    R5 es un OH o NH2 opcionalmente protegido;
    Q es NH, NR, O o S; y
    R6 es alquilo, arilo, alquenilo o alquinilo. 20
ES04782317T 2003-08-27 2004-08-27 Nuevos nucleósidos o nucleótidos tricíclos como agentes terapéuticos. Expired - Lifetime ES2355565T3 (es)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US49842503P 2003-08-27 2003-08-27
US498425P 2003-08-27

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2355565T3 true ES2355565T3 (es) 2011-03-29

Family

ID=34272671

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES04782317T Expired - Lifetime ES2355565T3 (es) 2003-08-27 2004-08-27 Nuevos nucleósidos o nucleótidos tricíclos como agentes terapéuticos.

Country Status (18)

Country Link
US (3) US7713941B2 (es)
EP (1) EP1660511B1 (es)
JP (1) JP2007504152A (es)
KR (1) KR20060123707A (es)
CN (1) CN1863813B (es)
AT (1) ATE486883T1 (es)
AU (1) AU2004269026B2 (es)
BR (1) BRPI0414019A (es)
CA (1) CA2537114C (es)
DE (1) DE602004029904D1 (es)
ES (1) ES2355565T3 (es)
IL (1) IL173888A0 (es)
MX (1) MXPA06002198A (es)
NO (1) NO20060979L (es)
NZ (1) NZ546055A (es)
RU (1) RU2006109491A (es)
WO (1) WO2005021568A2 (es)
ZA (1) ZA200602439B (es)

Families Citing this family (112)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MY164523A (en) 2000-05-23 2017-12-29 Univ Degli Studi Cagliari Methods and compositions for treating hepatitis c virus
HUE033832T2 (en) 2002-11-15 2018-01-29 Idenix Pharmaceuticals Llc 2'-methyl nucleosides in combination with interferon and Flaviviridae mutation
PL3521297T3 (pl) 2003-05-30 2022-04-04 Gilead Pharmasset Llc Zmodyfikowane fluorowane analogi nukleozydów
WO2005021568A2 (en) * 2003-08-27 2005-03-10 Biota, Inc. Novel tricyclic nucleosides or nucleotides as therapeutic agents
US7534767B2 (en) 2004-06-15 2009-05-19 Merck & Co., Inc. C-purine nucleoside analogs as inhibitors of RNA-dependent RNA viral polymerase
WO2006031725A2 (en) 2004-09-14 2006-03-23 Pharmasset, Inc. Preparation of 2'­fluoro-2'- alkyl- substituted or other optionally substituted ribofuranosyl pyrimidines and purines and their derivatives
WO2006121468A1 (en) 2004-11-22 2006-11-16 Genelabs Technologies, Inc. 5-nitro-nucleoside compounds for treating viral infections
EA200701849A1 (ru) 2005-02-28 2008-02-28 Дженелабс Текнолоджис, Инк. Пролекарственные соединения трициклических нуклеозидов, фармацевтическая композиция на их основе и способ лечения и/или ингибирования вирусной инфекции у млекопитающего
EP1957510A1 (en) * 2005-12-09 2008-08-20 F.Hoffmann-La Roche Ag Antiviral nucleosides
JP5156644B2 (ja) * 2006-01-25 2013-03-06 オーエスアイ・フアーマシユーテイカルズ・エル・エル・シー 不飽和ｍＴＯＲ阻害剤
US7666851B1 (en) * 2006-05-18 2010-02-23 Steven Albert Benner Three ring fused analogs of isoguanosine
WO2008005542A2 (en) * 2006-07-07 2008-01-10 Gilead Sciences, Inc., Antiviral phosphinate compounds
SI2065388T1 (sl) * 2006-09-19 2012-03-30 Daiichi Sankyo Co Ltd Derivati pirazolo pirimidina
CA2666098C (en) * 2006-10-10 2012-09-25 Steven D. Axt Preparation of nucleosides ribofuranosyl pyrimidines
US20080261913A1 (en) 2006-12-28 2008-10-23 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of liver disorders
US7964580B2 (en) 2007-03-30 2011-06-21 Pharmasset, Inc. Nucleoside phosphoramidate prodrugs
ES2393038T3 (es) * 2007-05-10 2012-12-18 Biocryst Pharmaceuticals, Inc. Compuestos de tretrahidrofuro[3,4-D]dioxolano para su utlilización en el tratamiento de las infecciones víricas y del cáncer
US20090048189A1 (en) * 2007-08-15 2009-02-19 Genelabs Technologies, Inc. Tricyclic-nucleoside compounds for treating viral infections
WO2009029729A1 (en) * 2007-08-31 2009-03-05 Genelabs Technologies, Inc. Amino tricyclic-nucleoside compounds, compositions, and methods of use
GB0718575D0 (en) 2007-09-24 2007-10-31 Angeletti P Ist Richerche Bio Nucleoside derivatives as inhibitors of viral polymerases
US20090318380A1 (en) 2007-11-20 2009-12-24 Pharmasset, Inc. 2',4'-substituted nucleosides as antiviral agents
MX2010006313A (es) 2007-12-19 2010-06-25 Boehringer Ingelheim Int Inhibidores de la polimerasa virica.
EP2231689B1 (en) * 2008-01-18 2016-07-20 Institute Of Organic Chemistry And Biochemistry Of The Academy Of Sciences Of The Czech Republic Novel cytostatic 7-deazapurine nucleosides
TW200942243A (en) 2008-03-05 2009-10-16 Biocryst Pharm Inc Antiviral therapeutic agents
JP4951116B2 (ja) * 2008-03-12 2012-06-13 国立大学法人北陸先端科学技術大学院大学 光応答性プローブを用いたメチルシトシンの検出法
US8227431B2 (en) * 2008-03-17 2012-07-24 Hetero Drugs Limited Nucleoside derivatives
SI2937350T1 (en) 2008-04-23 2018-05-31 Gilead Sciences, Inc. 1'-SUBSTITUTED CARBON-NUCLEOUS ANALOGS FOR ANTIVIRUSAL TREATMENT
US8173621B2 (en) 2008-06-11 2012-05-08 Gilead Pharmasset Llc Nucleoside cyclicphosphates
WO2010015637A1 (en) * 2008-08-06 2010-02-11 Novartis Ag New antiviral modified nucleosides
KR101881596B1 (ko) 2008-12-02 2018-07-24 웨이브 라이프 사이언시스 재팬 인코포레이티드 인 원자 변형된 핵산의 합성 방법
WO2010068708A2 (en) 2008-12-09 2010-06-17 Rfs Pharma, Llc 3'-azido purine nucleotide prodrugs for treatment of viral infections
NZ593648A (en) 2008-12-23 2013-09-27 Gilead Pharmasset Llc Nucleoside phosphoramidates
CL2009002206A1 (es) 2008-12-23 2011-08-26 Gilead Pharmasset Llc Compuestos derivados de pirrolo -(2-3-d]-pirimidin-7(6h)-tetrahidrofuran-2-il fosfonamidato, composicion farmaceutica; y su uso en el tratamiento de enfermedades virales.
EP2376514A2 (en) 2008-12-23 2011-10-19 Pharmasset, Inc. Nucleoside analogs
RU2011127080A (ru) 2009-01-07 2013-02-20 Сайнексис, Инк. Производное циклоспорина для применения в лечении заражения вирусом гепатита с и вич
KR101774429B1 (ko) 2009-02-06 2017-09-04 코크리스탈 파마, 아이엔씨. 암 및 바이러스 감염 치료용 퓨린 뉴클레오시드 모노포스페이트 프로드럭
AU2010218853A1 (en) 2009-02-25 2011-10-06 Daiichi Sankyo Company, Limited Tricyclic pyrazolopyrimidine derivative
EP2408306A4 (en) 2009-03-20 2012-11-07 Alios Biopharma Inc SUBSTITUTED NUCLEOSIDE AND NUCLEOTIDE ANALOGUES
AU2010232647A1 (en) 2009-03-31 2011-10-20 Arqule, Inc. Peri-fused pyrazolo-pyrimidine compounds
JP2012526834A (ja) 2009-05-12 2012-11-01 シェーリング コーポレイション ウイルス疾患治療に有用な縮合型三環式アリール化合物
US8618076B2 (en) 2009-05-20 2013-12-31 Gilead Pharmasset Llc Nucleoside phosphoramidates
TWI583692B (zh) 2009-05-20 2017-05-21 基利法瑪席特有限責任公司 核苷磷醯胺
JP2012528195A (ja) 2009-05-29 2012-11-12 メルク・シャープ・アンド・ドーム・コーポレーション Ｃ型肝炎などの疾患を処置するための３つの結合アリール部分で構成された抗菌性化合物
JP2012528194A (ja) 2009-05-29 2012-11-12 メルク・シャープ・アンド・ドーム・コーポレーション Ｃ型肝炎などの疾患を処置するための３つの整列型アリール部分で構成された抗菌性化合物
CN102596204B (zh) 2009-07-06 2016-11-23 波涛生命科学有限公司 新的核酸前药及其使用方法
US10023600B2 (en) 2009-09-21 2018-07-17 Gilead Sciences, Inc. Processes and intermediates for the preparation of 1′-substituted carba-nucleoside analogs
JP2013515068A (ja) 2009-12-22 2013-05-02 メルク・シャープ・アンド・ドーム・コーポレーション ウイルス性疾患の治療のための縮合三環式化合物およびその使用方法
BR112012022125A2 (pt) * 2010-03-09 2016-11-01 Merck Sharp & Dhme Corp composto, sal de dicloridrato, composição farmacêutica, uso do composto, e, método para tratar um paciente
EP2552933A1 (en) 2010-03-31 2013-02-06 Gilead Pharmasset LLC Purine nucleoside phosphoramidate
PL3290428T3 (pl) 2010-03-31 2022-02-07 Gilead Pharmasset Llc Tabletka zawierająca krystaliczny (S)-2-(((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-diokso-3,4-dihydropirymidyn-1(2H)-ylo)-4-fluoro-3-hydroksy-4-metylotetrahydrofuran-2-ylo)metoksy)(fenoksy)fosforylo)amino)propanian izopropylu
KR101715981B1 (ko) 2010-03-31 2017-03-13 길리애드 파마셋 엘엘씨 뉴클레오사이드 포스포르아미데이트
EP2805960A1 (en) 2010-07-19 2014-11-26 Gilead Sciences, Inc. Methods for the preparation of diasteromerically pure phosphoramidate prodrugs
SG186830A1 (en) 2010-07-22 2013-02-28 Gilead Sciences Inc Methods and compounds for treating paramyxoviridae virus infections
CN103052642A (zh) 2010-08-23 2013-04-17 第一三共株式会社 三环吡唑并嘧啶衍生物的晶体
WO2012026433A1 (ja) 2010-08-23 2012-03-01 第一三共株式会社 三環性ピラゾロピリミジン誘導体のフリー体結晶
WO2012040124A1 (en) 2010-09-22 2012-03-29 Alios Biopharma, Inc. Azido nucleosides and nucleotide analogs
EA025341B1 (ru) 2010-09-22 2016-12-30 Алиос Биофарма, Инк. Замещенные аналоги нуклеотидов
WO2012039448A1 (ja) 2010-09-24 2012-03-29 株式会社キラルジェン 不斉補助基
US8841275B2 (en) 2010-11-30 2014-09-23 Gilead Pharmasset Llc 2′-spiro-nucleosides and derivatives thereof useful for treating hepatitis C virus and dengue virus infections
JP2014514295A (ja) 2011-03-31 2014-06-19 アイディニックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド ウイルス感染の治療のための化合物および薬学的組成物
ES2626488T3 (es) 2011-07-19 2017-07-25 Wave Life Sciences Pte. Ltd. Procedimientos para la síntesis de ácidos nucleicos funcionalizados
EP2755983B1 (en) 2011-09-12 2017-03-15 Idenix Pharmaceuticals LLC. Substituted carbonyloxymethylphosphoramidate compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections
DE202012013074U1 (de) 2011-09-16 2014-10-29 Gilead Pharmasset Lcc Zusammensetzungen zur Behandlung von HCV
US8889159B2 (en) 2011-11-29 2014-11-18 Gilead Pharmasset Llc Compositions and methods for treating hepatitis C virus
CA2860234A1 (en) 2011-12-22 2013-06-27 Alios Biopharma, Inc. Substituted phosphorothioate nucleotide analogs
US9073960B2 (en) 2011-12-22 2015-07-07 Alios Biopharma, Inc. Substituted nucleosides, nucleotides and analogs thereof
EP2639238A1 (en) * 2012-03-15 2013-09-18 Universität Bern Tricyclic nucleosides and oligomeric compounds prepared therefrom
WO2013142124A1 (en) 2012-03-21 2013-09-26 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Solid forms of a thiophosphoramidate nucleotide prodrug
USRE48171E1 (en) 2012-03-21 2020-08-25 Janssen Biopharma, Inc. Substituted nucleosides, nucleotides and analogs thereof
US9441007B2 (en) 2012-03-21 2016-09-13 Alios Biopharma, Inc. Substituted nucleosides, nucleotides and analogs thereof
NZ630805A (en) 2012-03-22 2016-01-29 Alios Biopharma Inc Pharmaceutical combinations comprising a thionucleotide analog
EP2861611B1 (en) 2012-05-25 2016-07-13 Janssen Sciences Ireland UC Uracyl spirooxetane nucleosides
AU2013288048A1 (en) 2012-07-13 2015-01-22 Wave Life Sciences Ltd. Asymmetric auxiliary group
WO2014100505A1 (en) 2012-12-21 2014-06-26 Alios Biopharma, Inc. Substituted nucleosides, nucleotides and analogs thereof
SI2950786T1 (sl) 2013-01-31 2020-03-31 Gilead Pharmasset Llc Formulacija kombinacije dveh protivirusnih spojin
ES2900570T3 (es) 2013-08-27 2022-03-17 Gilead Pharmasset Llc Formulación de combinación de dos compuestos antivirales
TW201524990A (zh) 2013-10-11 2015-07-01 Alios Biopharma Inc 經取代之核苷、核苷酸及其類似物
JP6115897B2 (ja) * 2013-12-09 2017-04-19 国立大学法人 鹿児島大学 抗ｂ型肝炎ウイルス薬
CN106068325B (zh) 2014-01-16 2021-07-09 波涛生命科学有限公司 手性设计
TWI698444B (zh) 2014-10-29 2020-07-11 美商基利科學股份有限公司 製備核糖苷的方法
EP3265102A4 (en) 2015-03-06 2018-12-05 ATEA Pharmaceuticals, Inc. Beta-d-2'-deoxy-2'alpha-fluoro-2'-beta-c-substituted-2-modified-n6-substituted purine nucleotides for hcv treatment
CA2984183C (en) 2015-05-01 2021-11-09 Pfizer Inc. Pyrrolo[2,3-d]pyrimidinyl, pyrrolo[2,3-b]pyrazinyl, pyrrolo[2,3-b]pyridinyl acrylamides and epoxides thereof
BR112018005048B8 (pt) 2015-09-16 2021-03-23 Gilead Sciences Inc uso de um composto antiviral ou sal do mesmo para o tratamento de uma infecção por coronaviridae
CN107286212B (zh) * 2016-04-11 2020-07-07 天方药业有限公司 一种高纯度去羟肌苷杂质的制备方法
US10202412B2 (en) 2016-07-08 2019-02-12 Atea Pharmaceuticals, Inc. β-D-2′-deoxy-2′-substituted-4′-substituted-2-substituted-N6-substituted-6-aminopurinenucleotides for the treatment of paramyxovirus and orthomyxovirus infections
LU100724B1 (en) 2016-07-14 2018-07-31 Atea Pharmaceuticals Inc Beta-d-2'-deoxy-2'-alpha-fluoro-2'-beta-c-substituted-4'-fluoro-n6-substituted-6-amino-2-substituted purine nucleotides for the treatment of hepatitis c virus infection
CZ307334B6 (cs) * 2016-08-02 2018-06-13 Ăšstav organickĂ© chemie a biochemie AV ÄŚR, v.v.i. Substituované heteropentadieno-pyrrolopyrimidinové ribonukleosidy pro terapeutické použití
PT3512863T (pt) 2016-09-07 2022-03-09 Atea Pharmaceuticals Inc Nucleótidos de purina 2'-substituídos-n6-substituídos para tratamento de vírus de rna
WO2018089786A1 (en) * 2016-11-11 2018-05-17 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Atg7 inhibitors and the uses thereof
SG10202012214WA (en) 2017-02-01 2021-01-28 Atea Pharmaceuticals Inc Nucleotide hemi-sulfate salt for the treatment of hepatitis c virus
AU2018235754B2 (en) 2017-03-14 2021-04-08 Gilead Sciences, Inc. Methods of treating feline coronavirus infections
ES2938859T3 (es) 2017-05-01 2023-04-17 Gilead Sciences Inc Una forma cristalina de (S)-2-etilbutilo 2-(((S)-(((2R,3S,4R,5R)-5-(4-aminopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-5-ciano-3,4-dihidroxitetrahidrofuran-2-il)metoxi)(fenoxi)fosforil)amino)propanoato
CN111093627B (zh) 2017-07-11 2024-03-08 吉利德科学公司 用于治疗病毒感染的包含rna聚合酶抑制剂和环糊精的组合物
TW202012001A (zh) 2018-04-10 2020-04-01 美商亞堤製藥公司 C型肝炎病毒(hcv)感染硬化之患者的治療
KR20210145787A (ko) 2019-04-02 2021-12-02 알리고스 테라퓨틱스 인코포레이티드 Prmt5를 표적으로 하는 화합물
AR120680A1 (es) 2019-12-06 2022-03-09 Vertex Pharma Tetrahidrofuranos sustituidos como moduladores de canales de sodio
CN118766947A (zh) 2020-01-27 2024-10-15 吉利德科学公司 用于治疗SARS CoV-2感染的方法
TWI794742B (zh) 2020-02-18 2023-03-01 美商基利科學股份有限公司 抗病毒化合物
CN118598916A (zh) 2020-02-18 2024-09-06 吉利德科学公司 抗病毒化合物
TW202245800A (zh) 2020-02-18 2022-12-01 美商基利科學股份有限公司 抗病毒化合物
US10874687B1 (en) 2020-02-27 2020-12-29 Atea Pharmaceuticals, Inc. Highly active compounds against COVID-19
WO2021183750A2 (en) 2020-03-12 2021-09-16 Gilead Sciences, Inc. Methods of preparing 1'-cyano nucleosides
KR20220164784A (ko) 2020-04-06 2022-12-13 길리애드 사이언시즈, 인코포레이티드 1'-시아노 치환된 카르바뉴클레오시드 유사체의 흡입 제형
CN115666570A (zh) 2020-05-29 2023-01-31 吉利德科学公司 瑞德西韦治疗方法
EP4172160A2 (en) 2020-06-24 2023-05-03 Gilead Sciences, Inc. 1'-cyano nucleoside analogs and uses thereof
CA3190702A1 (en) 2020-08-27 2022-03-03 Elaine Bunyan Compounds and methods for treatment of viral infections
US11697666B2 (en) 2021-04-16 2023-07-11 Gilead Sciences, Inc. Methods of preparing carbanucleosides using amides
AR126073A1 (es) 2021-06-04 2023-09-06 Vertex Pharma N-(hidroxialquil(hetero)aril)tetrahidrofuran carboxamidas como moduladores de canales de sodio
CA3228162A1 (en) 2021-08-18 2023-02-23 Gilead Sciences, Inc. Phospholipid compounds and methods of making and using the same
CN114213491B (zh) * 2021-12-31 2024-04-02 中南民族大学 一类内源性核苷M1dG及其衍生物的合成方法及其应用
CN114213490B (zh) * 2021-12-31 2024-04-02 中南民族大学 一类三环核苷酸类似物及其合成方法和应用
TW202400185A (zh) 2022-03-02 2024-01-01 美商基利科學股份有限公司 用於治療病毒感染的化合物及方法

Family Cites Families (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1998043991A1 (en) 1997-04-02 1998-10-08 Amersham Pharmacia Biotech Uk Limited Tricyclic base analogues
US6600028B1 (en) * 1997-04-02 2003-07-29 Amersham Pharmacia Biotech Uk Limited Tricyclic base analogues
DK1058686T3 (da) 1998-02-25 2007-03-05 Univ Emory 2'-fluornukleosider
AU1262001A (en) 1999-11-04 2001-05-14 Biochem Pharma Inc. Method for the treatment or prevention of flaviviridae viral infection using nucleoside analogues
WO2001060315A2 (en) 2000-02-18 2001-08-23 Shire Biochem Inc. Method for the treatment or prevention of flavivirus infections using nucleoside analogues
JP2003532643A (ja) 2000-04-13 2003-11-05 フアーマセツト・リミテツド 肝炎ウイルス感染症を治療するための３’−または２’−ヒドロキシメチル置換ヌクレオシド誘導体
MY164523A (en) 2000-05-23 2017-12-29 Univ Degli Studi Cagliari Methods and compositions for treating hepatitis c virus
NZ547204A (en) 2000-05-26 2008-01-31 Idenix Cayman Ltd Methods and compositions for treating flaviviruses and pestiviruses
US20030008841A1 (en) 2000-08-30 2003-01-09 Rene Devos Anti-HCV nucleoside derivatives
CA2434386C (en) 2001-01-22 2006-12-05 Merck & Co., Inc. Nucleoside derivatives as inhibitors of rna-dependent rna viral polymerase
WO2003061385A1 (en) 2002-01-17 2003-07-31 Ribapharm Inc. Tricyclic nucleoside library compounds, synthesis, and use as antiviral agents
WO2005021568A2 (en) * 2003-08-27 2005-03-10 Biota, Inc. Novel tricyclic nucleosides or nucleotides as therapeutic agents
EA200701849A1 (ru) * 2005-02-28 2008-02-28 Дженелабс Текнолоджис, Инк. Пролекарственные соединения трициклических нуклеозидов, фармацевтическая композиция на их основе и способ лечения и/или ингибирования вирусной инфекции у млекопитающего
US7624825B2 (en) * 2005-10-18 2009-12-01 Smith International, Inc. Drill bit and cutter element having aggressive leading side
US20090048189A1 (en) * 2007-08-15 2009-02-19 Genelabs Technologies, Inc. Tricyclic-nucleoside compounds for treating viral infections
WO2009029729A1 (en) * 2007-08-31 2009-03-05 Genelabs Technologies, Inc. Amino tricyclic-nucleoside compounds, compositions, and methods of use

Also Published As

Publication number Publication date
NZ546055A (en) 2010-05-28
EP1660511B1 (en) 2010-11-03
ZA200602439B (en) 2007-07-25
CN1863813A (zh) 2006-11-15
NO20060979L (no) 2006-05-02
CA2537114C (en) 2012-10-02
CA2537114A1 (en) 2005-03-10
JP2007504152A (ja) 2007-03-01
EP1660511A2 (en) 2006-05-31
MXPA06002198A (es) 2007-08-14
AU2004269026B2 (en) 2010-02-25
BRPI0414019A (pt) 2006-10-24
US7268119B2 (en) 2007-09-11
US7713941B2 (en) 2010-05-11
CN1863813B (zh) 2011-03-30
ATE486883T1 (de) 2010-11-15
WO2005021568B1 (en) 2005-06-09
US20080200423A1 (en) 2008-08-21
AU2004269026A1 (en) 2005-03-10
WO2005021568A2 (en) 2005-03-10
KR20060123707A (ko) 2006-12-04
WO2005021568A3 (en) 2005-04-21
DE602004029904D1 (de) 2010-12-16
US20100311684A1 (en) 2010-12-09
RU2006109491A (ru) 2006-08-10
IL173888A0 (en) 2006-07-05
US20070135363A1 (en) 2007-06-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2355565T3 (es) Nuevos nucleósidos o nucleótidos tricíclos como agentes terapéuticos.
AU2002243600B2 (en) Nucleoside derivatives as inhibitors of RNA-dependent RNA viral polymerase
WO2004080466A1 (en) Cytidine analogs and methods of use
AU2002243600A1 (en) Nucleoside derivatives as inhibitors of RNA-dependent RNA viral polymerase
US20100291031A2 (en) Bicyclic nucleosides and nucleotides as therapeutic agents
AU2002243791A1 (en) Nucleoside derivatives as inhibitors of RNA-dependent RNA viral polymerase
EP1804812A2 (en) Fluorinated pyrroloý2,3-d¨pyrimidine nucleosides for the treatment of rna-dependent rna viral infection
WO2003068244A1 (en) Methods of inhibiting orthopoxvirus replication with nucleoside compounds
KR20070106767A (ko) 바이러스 감염을 치료하기 위한 트리시클릭-뉴클레오시드화합물
WO1994006438A1 (en) Adenosine analogues and method of increasing adenosine release
US20040158054A1 (en) Di-ribonucleotides as specific viral RNA-polymerase inhibitors for the treatment or prevention of viral infections