KR101774429B1 - 암 및 바이러스 감염 치료용 퓨린 뉴클레오시드 모노포스페이트 프로드럭 - Google Patents

암 및 바이러스 감염 치료용 퓨린 뉴클레오시드 모노포스페이트 프로드럭 Download PDF

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Abstract

본 발명은 숙주에서 암 또는 HIV-1, HIV-2, HCV, 노로바이러스 (Norovirus), 사포로바이러스 (Saporovirus), HSV-1, HSV-2, 뎅기열 바이러스 (Dengue virus), 황열 (Yellow fever), 또는 HBV 감염의 치료 및 예방용 화합물, 방법 및 조성물에 관한 것이다. 상기 방법은 암 또는 HIV-1, HIV-2, HCV, 노로바이러스 (Norovirus), 사포로바이러스 (Saporovirus), HSV-1, HSV-2, 뎅기열 바이러스 (Dengue virus), 황열 (Yellow fever), 또는 HBV 감염의 치료 또는 예방을 위하여 기술되어진 하나 이상의 화합물을 치료학적으로 또는 예방활성-유효량 투여함 또는 생물학적 활성의 감소를 위하여 충분한 양을 투여함을 포함한다. 상기 약학적 조성물은 암 또는 HIV-1, HIV-2, HCV, 노로바이러스 (Norovirus), 사포로바이러스 (Saporovirus), HSV-1, HSV-2, 뎅기열 바이러스 (Dengue virus), 황열 (Yellow fever), 또는 HBV 감염의 치료 또는 예방을 위하여, 여기에서 기술되어진 하나 이상의 화합물, 약학적으로 허용가능한 담체 (carrier)또는 부형제 (excipient)와의 조합을 포함한다. 상기 화학식들은 나아가 최소한 하나 이상의 치료학적인 제제를 포함할 수 있다. 추가적으로, 본 발명은 그러한 화합물의 제조 공정을 포함한다.
C형 간염 바이러스 리플리콘처럼, 노로바이러스 리플리콘은 생성되는 리플리콘의 복제를 위한 기능을 가지는 바이러스 헬리카제 (viral helicase), 프로테아제 (protease), 및 폴리머라제 (polymerase)를 필요로 한다. 상기 리플리콘은 고처리량 분석에서 사용될 수 있고, 이것은 활성 확인되는 화합물이 리플리콘의 복제를 저해하는 것에 대한 증거로서, 노로바이러스 헬리카제, 프로테아제, 및/또는 폴리머라제가 기능을 가지는 능력을 저해하는지를 평가한다.
상기 화합물은 다양한 6-서브스티튜드-2-아미노 퓨린 뉴클레오시드 (6-substituted-2-amino purine nucleosides)의 모노포스페이트 또는 모노포스네이트 형태, 또는 모노포스페이트 형태의 유사체이고, 인체 내로 투여될 때 트리포스포릴레이티드 (triphosphorylated)로 변형된다. 우리는 매우 놀랍게도, 상기 뉴클레오시드의 모노포스페이트 프로드럭 형태의 제조가 6-위치 치환체가 G 유사체로 변환되는 것을 보호하는 것을 발견하였다. 모노포스페이트 프로드럭을 제조함에 따라, 우리는 본 발명 전에는 가능하지 않았거나, 최소한 약학적으로 허용가능한 농도에서는 불가능하였던, 뉴클레오티드 트리포스페이트를 폴리머라제 EH는 역전사효소로 전달하는 방법을 발견하였다. 본 발명은 인체 내에서 제조되는 뉴클레오티드 트리포스페이트의 새롭고 신규한 시리즈를 가능하게 하고 항바이러스제 또는 항암제로서의 사용이 요청된다. 본 발명에서 기술되어진 상기 화합물은 β-D 및 β-L-6-서브스티튜티드-2-아미노 퓨린 뉴클레오시드의 모노포스페이트, 포스포네이트, 및 다른 유사체를 포함한다. 본원 발명의 일 구체예에서, 활성 화합물은 화학식 I이다:
Figure 112011069709164-pct00073

또는 화학식 I의 약학적으로 허용되는 염 또는 프로드럭에 있어서:
ⅲ) R1은 모뉴클레오사이드 (parent nucleoside)로서 투여될 때 OH를 형성하기 위하여 생체 내에서 제거되는 원자 또는 그룹으로, 예를 들면, 할로겐 (F, Cl, Br, I), OR', N(R')2, SR', OCOR', NHCOR', N(COR')COR', SCOR' 및 NHCOOR'이고
각 R'은 독립적으로 H, 저급 알킬 (C1-C6), 저급 할로알킬 (C1-C6), 저급 알 콕시 (C1-C6), 저급 알케닐 (C2-C6), 저급 알키닐 (C2-C6), 저급 사이클로알킬 (C3-C6) 아릴, 헤테로아릴, 알킬아릴, 또는 아릴알킬이고, 상기 그룹은 상기
정의한 하나 이상의 치환기들, 예를 들면, 하이드록시알킬, 아미노알킬 및 알콕시 알킬로 치환될 수 있다.
ⅳ) W는 독립적으로, N, CH, CF, CCN, CC≡CH, 또는 CC(O)N(R')2이고;
ⅸ) 당 (Sugar)은 리보오스 또는 화학식 Ⅱ의 구조를 가지는 변형된 리보오스이고;
Figure 112011069709164-pct00074

상기 화학식 Ⅱ에서,
Y는 O 또는 S이고;
Z는 CL2, CL2CL2, CL2OCL2, CL2SCL2, CL2O, OCL2 및 CL2NHCL2로 구성된 군으로부터 선택되는데, 여기서 L은 독립적으로 H, F, 알킬, 알케닐 및 알키닐로 구성된 그룹에서 선택되는데, 여기서 알킬, 알케닐, 알키닐은 각각 하나 이상의 헤테로원자들을 필요에 따라 포함할 수 있고;
A는 O,S,CH2, CHF, CF2, C=CH2, C=CHF, 또는 C=CF2이고;
R4', R5, R5', R6, R6' 및 R7'은 독립적으로 H, F, Cl, Br, I, OH, SH, NH2, NHOH, NHNH2, N3, C(O)OH, CN, C(O)NH2, C(S)NH2, C(O)OR, R, OR, SR,SSR, NHR, 및 NR2로 구성된 그룹에서 선택되는데;
화학식 Ⅱ의 당을 가지는 화학식 Ⅰ에 있어서, A가 O일 때, 당은 화학식 Ⅱ이고, R4', R5, R5', R6, R7'은 H이고, R6'은 N3가 될 수 없고;
화학식 Ⅱ의 당을 가지는 화학식 Ⅰ에 있어서, A가 O 또는 S일 때, R7'은 OH, SH, NH2, NHOH, NHNH2, OR, SR,SSR, NHR, 및 NR2가 될 수 없고;
R은 독립적으로 저급 알킬 (C1-C6 알킬), 저급 알케닐, 저급 알키닐, 저급 사이클로알킬 (C3-C6 사이클로알킬), 아릴, 알킬아릴, 또는 아릴알킬이며, 상기 그룹은 상기 정의한 하나 이상의 치환기들, 예를 들면, 하이드록시알킬, 아미노알킬 및 알콕시 알킬로 치환될 수 있다.
R2 및 R3는, 생체 내에서 투여될 때, 이론상 상기 뉴클레오시드 모노포스페이트 (monophosphate), 모노포스포네이트 (monophosphonate), 싸이오모노포스포네이트 (thiomonophosphonate), 또는 싸이오모노포스페이트 (thiomonophosphate)를 제공하는 증력이 있다. 대표적인 R2 및 R3는 하기로부터 독립적으로 선택되어진다:
(a) OR8에 대하여,, R8은 H, C1 -20 알킬, C3 -6 사이클로알킬, C1 -6 할로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴인데 이에 제한되지는 않지만 C1 -6 알킬, C2 -6 알케닐, C2 -6 알키닐, C1 -6 알콕시, (CH2)1-6 CO2R9a, 할로겐, C1 -6 할로알킬, -N(R9a)2, C1 -6 아실아미노, - NHSO2C1 -6 알킬, -SO2N(R9a)2, -SO2C1 -6 알킬, COR9b, 나이트로 및 시아노로 이루어진 군에서 독립적으로 선택되는 1 내지 3 개의 치환기로 필요에 따라 치환되는 페닐 또는 나프틸을 포함하고 ;
R9a는 독립적으로 H 또는 C1 -6 알킬이고;
R9b는 -OR9a 또는 -N(R9a)2이고;
(b)
Figure 112011069709164-pct00075
에 대하여, R10a 와 R10b는

(ⅰ) H, C1 -10 알킬, -(CH2)rNR9a 2, C1 -6 하이드록시알킬, -CH2SH, -(CH2)2S(O)pMe, -(CH2)3NHC(=NH)NH2, (1H-인돌-3-일)메틸, (1H-이미다졸-4
-일)메틸, -(CH2)mCOR9b, 아릴 및 아릴-C1 -3 알킬로 구성되어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, 상기 아릴 그룹은 하이드록실, C1 -10 알킬, C1 -6 알콕시, 할로겐, 나이트로, 및 시아노로 이루어진 군으로부터 필요에 따라 선택되는;
(ⅱ) R10a 는 H이고 R10b 및 R12 는 함께 인접한 N 및 C 원자를 포함하는 고리를 형성하는 (CH2)2- 4 이고;
(ⅲ) R10a 및 R10b 는 함께 고리를 형성하는 (CH2)n 이고;
(ⅳ) R10a 및 R10b 모두 C1 -6 알킬이고; 또는
(ⅴ) R10a은 H이고 R10b은 H, CH3, CH2CH3, CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, CH(CH3)CH2CH3, CH2Ph, CH2-인돌-3-일, -CH2CH2SCH3, CH2CO2H, CH2C(O)NH2, CH2CH2COOH, CH2CH2C(O)NH2, CH2CH2CH2CH2NH2-CH2CH2CH2NHC(NH)NH2, CH2-이미다졸-4-일, CH2OH, CH(OH)CH3, CH2((4'-OH)-Ph), CH2SH, 또는 저급 사이클로알킬이고;
p는 0 내지 2이고;
r은 1 내지 6이고;
n은 4 내지 5이고;
m은 0 내지 3이고;
R11은 H, C1 -10 알킬, 또는 저급 알킬로 치환되어 있는 C1 -10 알킬, 알콕시, 다이 (저급 알킬)-아미노 (di(lower alkyl)-amino), 플로로 (fluoro), C3 -10 사이클로알킬, 사이클로알킬 알킬 (cycloalkyl alkyl), 사이클로헤테로알킬 (cycloheteroalkyl), 페닐 (phenyl) 등의 아릴, 피리디닐 (pyridinyl) 등의 헤테로아릴, 치환된 아릴, 또는 치환된 헤테로아릴인데 여기서 상기 치환기는 C1 -5 알킬, 또는 저급 알킬로 치환된 C1 -5 알킬 , 알콕시, 디 (저급알킬)-아미노, 플로로, C3 -10 사이클로알킬 또는 사이클로알킬이고,
R12 는 H, C1 -3 알킬, 또는 R10a 이거나 또는, R10b 및 R12 는 함께 N 및 C 원자를 포함하는 고리를 형성하기 위한 (CH2)2- 4 이다.
(c) 지질(인지질 포함)이 부착된 O, 펩티드가 부착된 N 또는 O, 콜레스테롤이 부착된 O, 또는 피토스테롤 (phytosterol)이 부착된 O;
(d) R2 및 R3는 함께
Figure 112011069709164-pct00076
고리를 만들 수 있는데, 여기서 W2는 페닐 또는 모노사이클릭 헤테로아릴로 구성된 군에서 선택되고 필요에 따라 C1 -6 알킬, CF3, C2 -6 알케닐, C1 -6 알콕시, OR9c, CO2R9a, COR9a, 할로겐, C1 -6 할로알킬, -N(R9a)2, C1-6 아실아미노, CO2N(R9a)2, SR9a, -NHSO2C1 -6 알킬, -SO2N(R9a)2, -SO2C1 -6 알킬, COR9b, 및 시아노로 구성된 군에서 선택된 하나 내지 세 개의 치환기로 독립적으로 치환되고, 여기서 상기 모노사이클릭 헤테로아릴 및 치환된 모노사이클릭 헤테로아릴은 하기 조건 하에서, N, O 및 S로 구성되어진 군에서 독립적으로 선택되는 1-2 헤테로원자를 가진다:
a) 2 개의 헤테로 원자가 있고 하나가 O일 때, 나머지 하나는 O 또는 S가 될 수 없고,
b) 2 개의 헤테로 원자가 있고 하나가 S일 때, 나머지 하나는 O 또는 S가 될 수 없고;
R9a는 독립적으로 H 또는 C1 -6 알킬이고;
R9b는 -OR9a 또는 -N(R9a)2이고;
R9c는 H 또는 C1 -6 아실이고;
(e)
Figure 112011069709164-pct00077
인데 여기서, R13은 H, C1 -10 알킬, 저급 알킬로 필요에 따라 치환된 C1 -10 알킬, 알콕시, 다이 (저급알킬)-아미노 (di(lower alkyl)-amino), 플로로 (fluoro), C3 -10 사이클로알킬, 사이클로알킬 알킬 (cycloalkyl alkyl), 사이클로헤테로알킬, 페닐 등의 아릴, 피리디닐 등의 페테로아릴, 치환된 아릴, 또는 치환된 헤테로 아릴이고; 상기 치환기는 C1 -5 알킬, 또는 저급 알킬이 치환된 C1 -5 알킬, 알콕시, 다이 (저급알킬)-아미노 (di(lower alkyl)-amino), 플로로 (fluoro), C3 -10 사이클로알킬, 또는 사이클로알킬이고;
f) R2 및 R3는 함께
Figure 112011069709164-pct00078
고리를 형성할 수 있는데, 여기서 R14는 (i) H, C1 -10 알킬, -(CH2)rNR2 9a, C1 -6 하이드록시알킬, -CH2SH, -(CH2)2S(O)pMe, -(CH2)3NHC(=NH)NH2, (1H-인돌-3-일)메틸, (1H-이미다졸-4-일)메틸, -(CH2)mCOR9b, 아릴 및 아릴-C1 - 3알킬 또는 헤테로아릴 및 헤테로아릴-C1 -3 알킬로 구성되어진 군에서 독립적으로 선택되는데, 상기 아릴 및 헤테로아릴 그룹은 필요에 따라 하이드록실, C1 -10 알킬, C1 -6 알콕시, 할로겐, 나이트로, 및 시아노로 구성된 군에서 선택되는 그룹으로 치환되고; ( ii ) R14는 H, CH3, CH2CH3, CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, CH(CH3)CH2CH3, CH2Ph, CH2-인돌-3-일, -CH2CH2SCH3, CH2CO2H, CH2C(O)NH2, CH2CH2COOH, CH2CH2C(O)NH2, CH2CH2CH2CH2NH2, CH2CH2CH2NHC(NH)NH2, CH2-이미다졸-4-일, CH2OH, CH(OH)CH3, CH2((4'-OH)-Ph), CH2SH, 또는 저급 사이클로알킬이고;
p는 0 내지 2이고;
r은 1 내지 6이고;
m은 0 내지 3이고
Q1 은 NR9a, O, 또는 S이며;
Q2는 C1 -10 알킬, C1 -6 하이드록시알킬, 아릴 및 아릴-C1 -3 알킬, 헤테로아릴 및 헤테로아릴-C1 -3 알킬이고, 상기 아릴 및 헤테로아릴 그룹은 필요에 따라 하이드록실, C1 -10 알킬, C1 -6 알콕시, 플로로 및 클로로로 구성된 군에서 선택된 그룹으로 치환되고;
R11은 H, C1 -10 알킬, 저급 알킬, 알콕시, 다이 (저급알킬)-아미노 (di(lower alkyl)-amino), 플로로 (fluoro), C3 -10 사이클로알킬, 사이클로알킬 알킬 (cycloalkyl alkyl), 사이클로헤테로알킬, 페닐 등의 아릴, 피리디닐 등의 페테로아릴, 치환된 아릴, 또는 치환된 헤테로 아릴로 필요에 따라 치환된 C1 -10 alkyl이고; 여기에서 상기 치환기는 C1 -5 알킬, 또는 저급 알킬이 치환된 C1 -5 알킬, 알콕시, 다이 (저급알킬)-아미노 (di(lower alkyl)-amino), 플로로 (fluoro), C3 -10 사이클로알킬, 또는 사이클로알킬이고;
R12는 H, 또는 C1 -3 알킬이거나, 또는 R14b 와 R12 는 인접한 N 및 C원자를 포함하는 고리를 형성하기 위한 (CH2)2- 4 이고;
ⅹ) 다른 당 (Sugar)은 일반적으로 화학식 (Ⅲ)의 구성을 가지는 변형된 리보오스이고:
Figure 112011069709164-pct00079

여기에 있어서:
A, R2, R3, Y, Z, R4' R5', R6', 및 R7'는 상기 정의한 바와 같고;
화학식 (Ⅲ)의 당을 가지는 화학식 (Ⅰ)에 있어서, A가 O 또는 S일 때, R7'은 OH, SH, NH2, NHOH, NHNH2, OR, SR, SSR, NHR, 및 NR2가 될 수 없고,
R은 독립적으로 저급 알킬 (C1-C6 알킬), 저급 알케닐 (lower alkenyl), 저급 알키닐 (lower alkynyl), 저급 사이클로알킬 (C3-C6 cycloalkyl) 아릴, 알킬아릴, 또는 아릴알킬이고, 여기서, 상기 그룹은 상기 정의된 하나 이상의 치환기, 예를 들면, 하이드록시알킬, 아미노알킬, 및 알콕시알킬로 치환될 수 있다.
ⅹⅰ) 다른 당은 화학식 (Ⅳ), (Ⅴ), (Ⅵ) 및 (Ⅶ)의 다이옥소레인 (dioxolane) 또는 옥사싸이오레인 (oxathiolane)이다.
Figure 112011069709164-pct00080

(Ⅳ) (Ⅴ) (Ⅵ) (Ⅶ)
여기에 있어서:
V는 S 또는 Se이고,
R2, R3, Y, 및 Z는 상기 정의한 바와 같다.
ⅹⅱ) 다른 당은 화학식 (Ⅷ)을 가지는 포스포닐메톡시알킬 (phosphonylmethoxyalkyl)이다.

여기에 있어서:
R2, R3 및 Y는 상기 정의한 바와 같고;
R15는 알킬 (C1-C6을 포함하지만 이에 제한되지 않음),알케닐 (C2-C6를 포함하지만 이에 제한되지 않음), 및 알키닐 (C2-C6를 포함하지만 이에 제한되지 않음), 사이클로알킬 (C3-C8를 포함하지만 이에 제한되지 않는), 아릴 (C6-C10를 포함하지만 이에 제한되지 않는), 헤테로아릴 (C6-C10를 포함하지만 이에 제한되지 않음), 아릴알킬, 및 알킬아릴로 구성된 군으로부터 선택된다;
ⅹⅲ) 다른 당은 일반적으로 화학식 (Ⅸ), 또는 화학식 (Ⅹ)를 가진다.
Figure 112011069709164-pct00082


여기에 있어서:
R2, R3, 및 Y는 상기에서 정의한 바와 같고;
Y2 는 O, S, Se NR이고;
R은 독립적으로 저급 알킬 (C1-C6 알킬), 저급 알케닐, 저급 알키닐, 저급 사이클로알킬 (C3-C6 사이클로알킬) 아릴, 알킬아릴, 또는 아릴알킬이고, 여기서 상기 그룹은 상기 정의된 하나 이상의 치환기, 예를 들면, 하이드록시알킬, 아미노알킬 및 알콕시알킬로 치환될 수 있고;
R16 및 R17 는 H, CH3, CH2OR18로서 정의되고;
R18 는 H 또는 저급 아실 (C1-C6)이다.
ⅹⅳ) 다른 당은 일반적으로 화학식 (ⅩⅠ)을 가지는 변형된 리보오스이다.
Figure 112011069709164-pct00083

여기에 있어서:
R2, R3, 및 Y는 상기 정의된 바와 같고;
R4' R5, R5', R6, 및 R6'는 상기 정의된 바와 같고;
R19는 H, F, Cl, Br, I, N3, C(O)OH, CN, C(O)NH2, C(S)NH2, C(O)OR, R이다.
R은 독립적으로 저급 알킬 (C1-C6 알킬), 저급 알케닐, 저급 알키닐, 저급 사이클로알킬 (C3-C6) 아릴, 알킬아릴, 또는 아릴알킬이고, 여기에 있어서 상기 그룹은 상기 정의된 하나 이상의 치환기, 예를 들면, 하이드록시알킬, 아미노알킬 및 알콕시알킬로 치환될 수 있다.
본 발명의 일 구체예에서, 활성 화합물은 H, F, Cl, Br, I, OH, SH, NH2, NHOH, NHNH2, C(O)OH, CN, C(O)NH2, C(S)NH2, C(O)OR, R, OR, SR, SSR, NHR, 및 NR2;로 구성된 군에서 선택된 R6'을 가지는 화학식 (Ⅰ)이다.
본 발명의 다른 구체예에서, 활성 화합물은 화학식 (XII), (XIII), 또는 (XIV)이다:
Figure 112011069709164-pct00084

또는 상기 화학식들의 약학적으로 허용되는 염 또는 프로드럭에 있어서:
R4' R5, R5', R6, Y, A, 및 R7' 는 상기 정의된 바와 같고;
R20는 저급 알킬 (C1-C6 알킬)이고;
M은 O, S, 또는 NR이고;
R은 저급 알킬 (C1-C6 알킬), 저급 알케닐, 저급 알키닐, 저급 사이클로알킬 (C3-C6 사이클로알킬) 아릴, 알킬아릴, 또는 아릴알킬이고, 여기에 있어서 상기 그룹은 상기 정의된 하나 이상의 치환기, 예를 들면, 하이드록시알킬, 아미노알킬 및 알콕시알킬로 치환될 수 있고;
염기는 하기로부터 선택될 수 있다:
Figure 112011069709164-pct00085

본 발명의 다른 구체예에서, 활성 화합물은 화학식 (XV) 또는 (XVI)이다:
Figure 112011069709164-pct00086

( XV ) ( XVI )
또는 상기 화학식들의 약학적으로 허용되는 염 또는 프로드럭에 있어서:
R4', R5, R5', R6, Y, A, R7', R20 및 염기는 상기 정의된 바와 같고;
R21은 H, C1 -10 알킬, 저급 알킬, 알콕시, 다이 (저급알킬)-아미노 (di(lower alkyl)-amino), 플로로 (fluoro), C3 -10 사이클로알킬, 사이클로알킬 알킬 (cycloalkyl alkyl), 사이클로헤테로알킬, 페닐 등의 아릴, 피리디닐 등의 헤테로아릴, 치환된 아릴,또는 치환된 헤테로 아릴로 필요에 따라 치환된 C1 -10 알킬이고; 여기에서 상기 치환기는 C1 -5 알킬, 또는 저급 알킬이 치환된 C1 -5 알킬, 알콕시, 다이 (저급알킬)-아미노 (di(lower alkyl)-amino), 플로로 (fluoro), C3 -10 사이클로알킬, 또는 사이클로알킬이고;
R22는 H, CH3, CH2CH3, CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, CH(CH3)CH2CH3, CH2Ph, CH2-인돌-3-일, -CH2CH2SCH3, CH2CO2H, CH2C(O)NH2, CH2CH2COOH, CH2CH2C(O)NH2, CH2CH2CH2CH2NH2, CH2CH2CH2NHC(NH)NH2, CH2-이미다졸-4-일, CH2OH, CH(OH)CH3, CH2((4'-OH)-Ph), CH2SH, 또는 저급 사이클로알킬이다;
본 발명의 다른 구체예에서, 활성 화합물은 화학식 (XVⅡ) 또는 (XVⅢ)이다:
Figure 112011069709164-pct00087

또는 상기 화학식들의 약학적으로 허용되는 염 또는 프로드럭에 있어서:
R4' R5, R5', R6, Y, M, R7', R20, R21, R22, 및 염기는 상기 정의한 바와 같고;
상기 기술한 화합물은 β-L- 또는 β-D- 배열 또는 그것들의 라세믹 혼합물을 포함하는 혼합물의 형태를 가질 수 있다.
상기 화합물은 예를 들면, 5'-OH 유사체의 제조 후에, 상기 유사체를 모노-포스페이트. 포스포네이트, 또는 다른 유사체로 변형시킴에 의하여 제조될 수 있다.
추가적으로, 본 발명에서 기술되어진 상기 화합물은 HIV-1, HIV-2, HCV, 노로바이러스, 사포로바이러스, HSV-1, HSV-2, 뎅기열 바이러스, 황열, 암, 및/또는 HBV의 저해제이다. 그러므로, 상기 화합물은 또한 HIV-1, HIV-2, HCV, 노로바이러스, 사포로바이러스, HSV-1, HSV-2, 뎅기열 바이러스, 황열, 암, 및/또는 HBV에 공동으로 감염된 환자를 치료하기 위하여 사용될 수 있다.

Description

암 및 바이러스 감염 치료용 퓨린 뉴클레오시드 모노포스페이트 프로드럭 {PURINE NUCLEOSIDE MONOPHOSPHATE PRODRUGS FOR TREATMENT OF CANCER AND VIRAL INFECTIONS}
본원 발명은 뉴클레오티드 유사체 (nucleotide analogs)를 이용하는 바이러스 감염 치료 또는 예방용 화합물, 방법 및 조성물에 관한 것이다. 더욱 자세하게는, 본원 발명은 6-서브스티튜티드-2-아미노 퓨린 뉴클레오시드 모노포스페이트 (6-substituted-2-amino purine nucleoside monophosphate) 및 모노포스포네이트 (monophosphonate) 프로드럭 (prodrugs) 및 변형된 전구약 유사체, 약학적으로 허용가능한 염, 또는 그의 다른 유도체, 및 암 또는, 구체적으로, 1) 인간 면역결핍 바이러스 (human immunodeficiency virus (HIV- 1 and HIV-2)); 2) C형 간염 바이러스 (hepatis C virus (HCV)), 웨스트 나일 바이러스 (West Nile virus), 뎅기열 바이러스 (Dengue virus) 및 황열 (Yellow fever)을 포함하는 플라비바이러스 과 (Flaviviridae family); 3) 노로바이러스 (Norovirus) 및 사포로바이러스 (Saporovirus)를 포함하는 칼리시바이러스과 감염 (Caliciviridae infection); 및 4) B형 간염 바이러스(hepatitis B virus (HBV))감염의 바이러스 감염 치료에 있어서 그의 용도에 관한 것이다. 본원 발명은 특정한 6-서브스티튜티드-2-아미노 퓨린 뉴클레오시드의 대사 경로를 변형하고 뉴클레오티드 트리포스페이트 (nucleotide triphosphates)를 이전에는 가능하지 않았던 치료학적으로-적절한 농도로 역전사 효소 (reverse transcriptases)및 폴리머라아제 (polymerases)로 전달하는 방법에 관한 것이다.
동일한 계통으로서의 뉴클레오시드 유사체는 잘 정립된 규제 역사를 가지는데, 인간 면역결핍 바이러스(HIV), B형 간염 바이러스(HBV), 또는 C형 간염 바이러스 (HCV)를 치료하기 위해 현재 10개가 넘는 뉴클레오시드 유사체가 미국 식품 안전청 (US FDA)에 의해 승인되었다. 항바이러스성 치료법의 발전에 있어서 시험대는 숙주 세포를 손상시키지 않으면서 바이러스의 복제를 막는 것이다. HIV에 있어서, 약물 개발을 위한 주요 표적은 역전사 효소 (HIV-RT), 특정 바이러스의 폴리머라아제는 바이러스의 복제 주기 초기에 활성화되어 지속적인 바이러스의 복제를 위해 필요한 과정인 바이러스의 유전 정보를 RNA에서 DNA로 전환시킨다. 뉴클레오시드 역전사 효소 저해제 (Nucleoside reverse transcriptase inhibitors (NRTI)는 천연 뉴클레오시드를 모방한다. 트리포스페이트 형태에서, 각각의 NRTI 하나당 HIV-1 RT의 활성부위 근처에 결합해서 DNA 사슬 연장을 위하여 자연적으로 생성되는 4개의 2'-디옥시뉴클레오시드 5'-트리포스페이트 (2'- deoxynucleoside 5 '-triphosphate (dNTP)), 다시 말해서, dCTP, dTTP, dATP 또는 dGTP와 경쟁한다.
역전사는 HIV-I 복제 주기에 있어서 필수적인 과정이고 항레트로바이러스 약물의 발달을 위하여 주요한 표적이다 [참조 : Parniak MA, Sluis- Cremer N. Inhibitors of HIV-I reverse transcriptase. Adv. Pharmacol. 2000, 49, 67-109; Painter GR, Almond MR, Mao S, Liotta DC. Biochemical and mechanistic basis for the activity of nucleoside analogue inhibitors of HIV reverse transcriptase. Curr. Top. Med. Chem. 2004, 4, 1035-44; Sharma PL, Nurpeisov V, Hernandez-Santiago B, Beltran T, Schinazi RF. Nucleoside inhibitors of human immunodeficiency virus type 1 reverse transcriptase. Curr. Top. Med. Chem. 2004, 4 895-919]. 뚜렷이 다른 화합물의 군은 HIV-I RT를 저해하는 것에 의하여 구별될 수 있었다. 이것은 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드 RT 저해제 (nucleotide RT inhibitors (NRTI))와 비뉴클레오시드 RT 저해제 (non-nucleoside RT inhibitors (NNRTI))이다.
NRTI는 리보오스 당에서 3'-OH 기가 결실된 디옥시뉴클레오시드 (deoxyribonucleosides)의 유사체이다. 그것은 HIV-1 감염을 치료하기 위해 사용되었던 첫 번째 약물이었으며 거의 모든 항레트로바이러스 요법 (antiretro viral regimens)의 필수적인 구성요소이다.
1985년, HIV의 복제를 저해하는 대표적인 NRTI인 합성 뉴클레오시드 3'-아지도-3'-디옥시티미딘 (3'-azido-3'- deoxythymidine (zidovudine, AZT))이 보고되었다. 그 이후로, 2',3'-디디옥시이노신 (2', 3'- dideoxyinosine (didanosine, ddl)), 2',3'-디디옥시사이티딘 (2',3'-dideoxycytidine (zalcitabine, ddC)), 2',3'-디디옥시-2',3'-디디하이드로티미딘(2',3'- dideoxy-2',3'-didehydrothymidine (stavudine, d4T)), (-)-2',3'-디디옥시-3'-티아사이티딘 ((-)-2',3'-dideoxy-3'-thiacytidine (lamivudine, 3TC)), (-)-2',3'-디디옥시-5-플루오로-3'-티아사이티딘 ((-)-2',3'-dideoxy-5-fluoro-3'-thiacytidine (emtricitabine, FTC)), (lS,4R)-4-[2-아미노-6-(사이클로프로필-아미노)-9H-퓨린-9-일]-2-사이클로펜텐-1-메타놀 숙시네이트 ((lS,4R)-4-[2-amino-6-(cyclopropyl-amino)-9H-purin-9-yl]-2-cyclopentene-l- methanol succinate (abacavir, ABC)), (R)-9-(2-포스포닐메톡시프로필)아데닌 ((R)-9-(2-phosphonylmethoxypropyl)adenine (PMPA, tenofovir disoproxil fumarate)) (TDF), 및 (-)-카복실릭 2',3'-디디하이드로-2',3'-디디옥시구아노신 ((-)-carbocyclic 2',3'-didehydro- 2',3'-dideoxyguanosine (carbovir))을 포함하지만 그에 제한되지 않는 몇몇 다른 NRTI과 그것의 프로드럭 아바카비어 (abacavir)가 HIV에 대하여 효과적임이 증명되었다. 세포의 키나아제 (kinases)에 의해 5'-트리포스페이트로 인산화된 후, 이러한 NRTI은 3'-하이드록실 군이 결실되었기 때문에 사슬 종결을 유도하기 위해 바이러스 DNA의 성장하는 가닥으로 합체된다.
일반적으로, 항바이러스 활성을 보이기 위하여, NRTI는 숙주-세포 키나아제에 의하여, 상응하는 트리포스페이트 형태 (NRTI-TP)로 생물학적으로 변형되어야 한다. 상기 NRTI-TP는 DNA 합성의 사슬-종결자로 행동하여 HIV-1 RT DNA 합성을 저해한다 (see Goody RS, Muller B, Restle T. Factors contributing to the inhibition of HIV reverse transcriptase by chain terminating nucleotides in vitro and in vivo. FEBS Lett. 1991, 291, 1-5). 하나 이상의 NRTI를 포함하는 혼합 치료법이 에이즈와 관련있는 질병률 및 사망률을 감소시켰지만, 승인받은 NRTI는 중요한 한계를 가질 수 있다. 급성 및 만성적인 독성, 다른 항레트로바이러스와의 약물 동태학적인 반응 및 다른 NRTI에 교차내성을 보이는 HIV-1의 약물-내성 변종의 선발이 그것이다.
한 개인에 있어서 HIV- 1 약물 내성은 바이러스 집단의 유전적 다양성과 치료법에서 내성 변종의 선발로부터 발생한다 (see Chen R, Quinones-Mateu ME, Mansky LM. Drug resistance, virus fitness and HIV-1 mutagenesis. Curr. Pharm. Des. 2004, 10, 4065-70). HIV-1의 유전적 다양성은 HIV-1 RT가 복제기간 동안 뉴클레오티드 시퀀스를 교정하지 못하기 때문이다. 이러한 다양성은 HIV-1 복제의 빠른 속도, HIV-1 감염 단계동안 프로바이러스 변종들의 축적, 및 다른 시퀀스를 가지는 바이러스가 동일한 세포로 침투했을 때 유전적 재조합에 의해서 증가한다. 결과적으로, 유전적으로 구별되는 무수한 변종들 (유사- 종 (quasi- species)이라고 부름)이 최초 감염 이후 여러 해 동안 신체 내부에서 진화한다. 상기와 같은 약물 내성의 성장은 약물 치료 동안 바이러스 복제가 계속된 정도, 특정 돌연변이 (또는 돌연변이 집단) 획득의 용이함, 및 약물 내성 돌연변이의 약물 민감성 및 바이러스 활성에 있어서의 효과에 의존한다. 일반적으로, NRTI 치료법은 RT 단계에서 돌연변이를 보이는 바이러스에 대한 것이다. 선발되어진 NRTI 내성 돌연변이에 의하여, 상기 돌연변이 바이러스는 전형적으로 몇몇, 또는 어떤 상황에서는, 모든 NRTI에 대하여 줄어든 감수성을 보인다. 임상적인 관점으로부터, HIV-1 약물 내성의 성장은 내성 바이러스에 대하여 효능을 유지하는 이용 가능한 약물 수를 효과적으로 감소시킴에 의하여 향후 치료 선택권에 있어서 한계를 보인다. 이것은 종종 강력한 복용 스케쥴을 포함하는 더 복잡한 약물 요법 및 약물 중독에 의한 심각한 부작용이라는 더 큰 위험을 가져온다. 이러한 요소들은 종종 약물 요법의 불완전한 점에 기여한다. 그러므로, 우수한 활성 및 안전한 프로파일을 가지는 신규한 NRTI의 개발 및 제한되거나 교차-내성이 없고 현재-이용가능한 약물의 개발은 HIV-1 감염의 효과적인 치료법에 있어서 중요하다.
약물-내성 HIV-1에 대한 뉴클레오시드 유사체 활성의 개발은 이러한 계통의 화합물에 대한 내성과 관련하여 분자 메커니즘의 상세한 이해를 필요로 한다. 그래서, NRTI에 대한 HIV-1 내성의 돌연변이 및 분자 메커니즘의 간단한 개요를 제공한다. NRTI에 대한 HIV-1 내성의 동태학적으로 뚜렷한 2가지의 분자 메커니즘이 제안되었다 (see Sluis-Cremer N, Arion D, Parniak MA. Molecular mechanisms of HIV-I resistance to nucleoside reverse transcriptase inhibitors (NRTIs). Cell MoI. Life Sci. 2000; 57, 1408-22). 하나의 메커니즘은 바이러스의 DNA 합성 동안 NRTI-TP 대 (versus) 정상 dNTP 함입에 있어서 선택적인 감소를 포함한다. 상기 내성 메커니즘을 변별 (discrimination)이라고 부른다. 두번째 메커니즘은 예상보다 이르게 종결되어진 DNA 사슬로부터 사슬-종결 NRTI-모노포스페이트 (NRTI-monophosphate (NRTI-MP))의 선택적인 제거에 의한다 (see Arion D, Kaushik N, McCormick S, Borkow G, Parniak MA. Phenotypic mechanism of HIV-I resistance to 3'-azido-3'-deoxythymidine (AZT): increased polymerization processivity and enhanced sensitivity to pyrophosphate of the mutant viral reverse transcriptase. Biochemistry. 1998, 37, 15908-17; Meyer PR, Matsuura SE, Mian AM, So AG, Scott WA. A mechanism of AZT resistance: an increase in nucleotide-dependent primer unblocking by mutant HIV- 1 reverse transcriptase. MoI. Cell. 1999, 4, 35-43). 상기 메커니즘을 제거 (excision)라고 한다.
상기 변별 메커니즘은 자연적인 dNTP 기질과 NRTI-TP 사이에 있어서 하나 이상의 내성 돌연변이의 획득을 포함한다. 이러한 측면에 있어서, 내성은 NRTI-TP 함입의 감소된 촉매 효율과 전형적으로 연관되어 있다. NRTI-TP (및 dNTP) 촉매 효율은 2가지 동태학적인 파라미터, (i) RT 폴리머라아제 활성 자리 (Kd) 및 (ii) 뉴클레오티드 함입의 최대 속도 (kpol) 에 의하여 이루어지며, 두 가지 모두 예비-정상-상태 동태학적 분석 (pre-steady-state kinetic analyses)을 이용하여 알아낼 수 있다 (see Kati WM, Johnson KA, Jerva LF, Anderson KS. Mechanism and fidelity of HIV reverse transcriptase. /. Biol. Chem. 1992, 26: 25988- 97).
NRTI 내성의 제거 메커니즘에 있어서, 상기 돌연변이 HIV-1 RT는 뉴클레오티드 함입 단계에서 자연적인 dNTP 기질과 NRTI-TP 사이에 있어서 차이를 두지 않는다 (see Kerr SG, Anderson KS. Pre-steady-state kinetic characterization of wild type and 3'-azido-3'- deoxythymidine (AZT) resistant human immunodeficiency virus type 1 reverse transcriptase: implication of RNA directed DNA polymerization in the mechanism of AZT resistance. Biochemistry . 1997, 36, 14064-70). 대신에, 생리적 농도의 ATP (일반적으로 0.8-4mM의 범위 내) 및 파이로포스페이트 (pyrophosphate (PPi))의 존재 하에서, "제거" 돌연변이를 포함하는 RT는 프라이머를 종결시키는 NRTI-MP를 뚫는 능력의 상승을 보인다 (see Arion D, Kaushik N, McCormick S, Borkow G, Parniak MA. Phenotypic mechanism of HIV-I resistance to 3'-azido-3'-deoxythymidine (AZT): increased polymerization processivity and enhanced sensitivity to pyrophosphate of the mutant viral reverse transcriptase. Biochemistry. 1998, 37, 15908-17; Meyer PR, Matsuura SE, Mian AM, So AG, Scott WA. A mechanism of AZT resistance: an increase in nucleotide-dependent primer unblocking by mutant HIV-I reverse transcriptase. MoI. Cell. 1999, 4, 35-43). 제거 메커니즘과 관련되어 있는 RTI 내성 돌연변이는 티미딘 유사체 돌연변이 (TAMS)와 T69S 삽입 돌연변이를 포함한다.
심각한 인류의 건강 문제를 초래하는 다른 바이러스는 B형 간염 바이러스 (HBV)이다. HBV는 담배에 이어서 인간의 암을 초래하는 2번째 원인이다. HBV가 암을 초래하는 메커니즘은 밝혀져 있지 않다. 그것은 직접적으로 종양 발달을 유발하거나, 또는 만성 염증, 간경변 및 감염과 연관된 세포 재생을 통하여 간접적으로 종양 발달을 유발하는 것으로 상정되고 있다.
2 내지 6달의 잠복기 후에, 일반적으로 숙주가 감염되었음을 모르는 기간 동안, HBV 감염은 극심한 간염 및 간 손상에 이르러, 어떤 효소에 의해 복부 통증, 황달 및 혈압 상승을 야기하게 된다. HBV는 빠르고 점진적으로, 때로는 치명적인 질병으로 간의 대부분을 파괴하는 급성 간염을 초래할 수 있다.
환자는 일반적으로 HBV 감염의 극심한 측면으로부터 회복된다. 몇몇 환자에 있어서, 그러나, 상기 바이러스가 연장되거나 무기한의 기간 동안 복제를 계속하여,만성 염증을 초래한다. 만성 감염은 만성적이고 지속적인 간염을 초래할 수 있다. 만성 지속성 HBV 감염 환자는 대부분 공통적으로 개발 도상국에서 발견된다.
1991년 중반, 아시아에만 대략 2억 2천 5백만명의 HBV 보균자가 있었고, 전세계적으로 3억명의 HBV 보균자가 있었다. 만성 지속성 간염은 피로, 간경변, 및 간세포 암종, 1차 간암을 초래할 수 있다.
공업 국가에서, 상기 HBV 감염의 고위험군은 HBV 보균자 또는 그들의 혈액 샘플과 접촉한 사람들이다. 상기 HBV의 역학은 HIV/ AIDS와 상당히 유사하며, 그것은 HBV 감염이 HIV 또는 에이즈로 고통받는 환자들에게 있어서 공통적이기 때문이다. 그러나, HBV는 HIV보다 조금 더 전염성이 크다.
3TC (lamivudine), interferon alpha-2b, peginterferon alpha-2a, hepsera (adefovir dipivoxil), baraclude (entecavir), 및 Tyzeka (Telbivudine)는 최근 HBV 감염의 치료 목적으로 미국 식품의약국으로부터 승인받은 약물들이다. 그러나, 일부 약물들은 심각한 부작용을 가지며, 상기 약물로 치료받은 환자들에게서 바이러스 내성이 빠르게 진행된다.
노로바이러스 (Norovirus)는 외피비보유 양성 가닥 RNA 칼리시바이러스 과 (non-enveloped positive strand RNA family Caliciviridae)이다. 칼리시바이러스 과의 다른 세 가지 종은 라고바이러스 (Lagovirus), 베시바이러스 (Vesivirus), 및 사포바이러스 (Sapovirus)이다. 사포바이러스는 숙주로서 인간을 이용하는 노로바이러스외 상기 종의 유일한 구성원이다. 노로바이러스 게놈은 약 7.56 kb에 이르는 3개의 오픈리딩프레임 (open reading frames (ORFs))을 포함한다. 첫 번째 ORF는 헬리카제 (helicase), 프로테아제 (protease), 및 바이러스의 복제기간 동안 얻어진 RNA 폴리머라아제 (RNA polymerase (RDRP))에 의하여 유도된 RNA를 포함하는 비구조단백질 (nonstructural proteins)을 암호화한다. 나머지 2개의 ORF는 캡시드 단백질 (Capsid proteins)을 암호화한다 (Jiang, X. (1993) Virology 195(1):51- 61). 노로바이러스의 수많은 사슬들은 I, IV, 및 V가 인간을 감염시키는 5가지 유전자 그룹으로 분류되었고 (Zheng, D.P., et al. (2006) Virology 346(2):312- 323), CDC에 의하면 미국에서 매년 식품매개 질병의 40%에 대응하는, 약 2천 3백만 건의 위장염을 초래하는 것으로 추측되고 있다 (Mead P. S. (1999) Emerg. Infect. Dis. 5(5):607-625).
공통적인 증상은 구토, 설사 및 장 경련이다. 구토는 어린이들에게 가장 흔한 증상인 반면, 설사는 감염된 어른들에게 더 공통적이다. 탈수증은 중요한 관심사이다. 이 바이러스로 인하여 미국에서는 매년 300명 환자의 인명 손실이 있고, 이러한 사망은 대개 약한 면역 시스템을 가진 환자들에게 발생한다 (Centers for Disease Control and Prevention. "Norwalk- like viruses:" public health consequences and outbreak management. MMWR 2001;50 (No. RR-9):3). 완전 감염에 이르는 잠복기는 대개 24시간 내지 48시간이고 약 30%의 감염 환자는 아무 증상도 보이지 않는다. 일반적으로 증상은 24시간 내지 60시간동안 지속된다 (Adler, J. L. and Zickl, R., J. (1969) Infect. Dis. 119:668-673). 바이러스 발산 (Viral shedding)은 감염 후 2주까지 지속될 수 있지만, 상기 바이러스가 전염성인지 여부는 명확하지 않다.
노로바이러스는 오염된 음식 또는 물, 개인간의 접촉, 구토 또는 대변 샘플의 에어로졸을 통하여 분변-경구 경로를 통하여 우선적으로 전달된다. 대변 샘플에서 바이러스 역가는 mL당 106 내지 107 입자에 도달할 수 있고, 입자들은 0℃(32°F) 내지 600℃ (140°F) 의 온도에서 안정하다 (Duizer, E. et al., (2004) Appl. Environ. Microbiol. 70(8); 4538-4543). 상기 바이러스는 높은 전염성을 가지고, 다양한 근원은 전염병이 10 내지 100 바이러스 입자만을 가지는 예방접종을 필요로 할지도 모른다는 것을 제시한다 (Centers for Disease Control and Prevention. "Norwalk-like viruses:" public health consequences and outbreak management. MMR 2001; 50(No. RR-9):3- 6). 이것은 학교, 양로원, 유람선, 병원 또는 사람이 모이는 다른 장소에서 전염병을 유발한다.
노로바이러스는 노워크-유사 바이러스 (Norwalk-like viruses)라고 불리며, 1968년 오하이오주 노워크에 있는 학교에서 발생한 사건으로부터 유래되었다. 상기 노워크 질병의 원인이 되는 바이러스 입자는 1972년 세 가지 유형의 자원봉사자들을 통하여 직장 도말 여과 (rectal swab filtrates)의 패시지에 따른 면역전자현미경관찰법 (immune electron microscopy)에 의하여 확인되었다 (Kapikian, A.Z. et al. (1972) J. Virol. 10:1075-1081). 그 후 여러 해 동안, 상기 바이러스는 그것의 전자 현미경 사진 때문에 작고 둥근 모양을 가진 바이러스, 칼리시바이러스 과에 속하기 때문에 칼리시바이러스 (calicivirus), 및/ 또는 아마도 공통적으로 최초로 분리된 이후로 노워크-유사 바이러스로 불렸다. 상기 바이러스의 공통적인 이름은 겨울 구토 바이러스 (winter vomiting virus), 위장염, 식중독, 및 바이러스성 장염을 포함한다. 감염의 결과는 일반적으로 생명에 위협을 가져오지는 않는 반면, 기능 사용 및 생산성 손실의 비용이 크고, 결과적으로, 인간에게 있어서 노로바이러스 감염의 치료법은 매우 가치 있는 일이다.
최근에 노로바이러스 감염을 위해 승인받은 약학적 치료법이 없고 (http://www.cdc. gov/ncidod/dvrd/revb/gastro/norovirus-qa.htm), 이것은 아마도 적어도 해당 분야에서 세포 배양 시스템이 부족하기 때문이었을 것이다. 최근, 리플리콘 시스템 (replicon system)은 원본 노워크 G-I사슬을 개발하였다 (Chang, K. O., et al. (2006) Virology 353:463-473). 노로바이러스 리플리콘 및 C형 간염 리플리콘 모두 존재하는 리플리콘의 복제가 실용적으로 일어나기 위하여 바이러스 헬리카제, 프로테아제, 및 폴리머라아제를 필요로 한다. 가장 최근, 시험관 세포 배양 전염성 분석은 노로바이러스 유전자 그룹 I 및 II 접종원의 사용을 보고하였다 (Straub, T. M. et al. (2007) Emerg. Infect. Dis. 13(3):396-403). 이러한 분석은 마이크로캐리어 비드 (microcarrier beads) 상에서 소장 상피 세포를 이용하여 로테이팅-월 바이오리액터 (rotating- wall bioreactor)에서 수행되어지고, 적어도 처음에는 이 시스템에서 의미 있는 숫자의 화합물들을 스크리닝하는 것이 어려운 것처럼 보인다. 결국 전염성 분석은 저해제를 스크리닝하는데 유용하다. 리고사이트 제약회사 (http://Vww.Kgocyie.com/) 같은, 다른 그룹은 노로바이러스에 대한 백신을 개발하는데 초점을 맞추었지만, 이러한 노력은 아직 성공적이지 않고 낮은 레플리카아제 정확도가 진화적인 이익을 가져오는 바이러스 시스템 하에서 종종 상기와 같은 경우를 증명하는 것이 어려울 수 있다.
C형 간염 바이러스 (Hepatitis C virus (HCV))는 전세계적으로 1억 8천만명 이상의 사람들을 감염시켰다. 매년 3천만 내지 4천만명의 사람들이 새롭게 감염되고, 그 중에서 70%가 만성 간염으로 진행되는 것으로 추정되고 있다. HCV는 전체 간암 케이스의 50-76% 에 대하여 원인이 되고 있고, 선진국에서 전체 간 이식의 3분의 2를 차지한다. 기존 치료법 [pegylated interferon alfa plus ribavirin (뉴클레오사이드 유사체)]은 오직 50-60%의 환자에게만 효과적이고 중요한 부작용과 관련 있다. 그러므로,새로운 HCV 약물에 대한 긴급한 요구가 있다.
C형 간염 바이러스 게놈은 뉴클레오시드 및 지질 외피로 둘러싸인 양성-가닥 RNA로 구성되어 있고 9.6kb 리보뉴클레오티드로 이루어져 있으며, 약 3000개의 아미노산의 거대한 폴리펩티드를 암호화한다 (Dymock et al. Antiviral Chemistry & Chemotherapy 2000, 11, 79). 성숙 (maturation)함에 따라서, 이 폴리펩티드는 최소한 10개의 단백질로 잘린다. 상기 단백질 중의 하나인, NS5B는, 폴리머라제 활성을 가지고 주형 (template)으로 제공되는 단일-가닥 바이러스 RNA 게놈으로부터 이중-가닥 RNA의 합성에 관여한다. 필요에 따라 HCV 복제를 저해하는 신규한 항바이러스 전략의 발견은 HCV의 증식을 위한 편리한 세포 배양 모델의 부족으로 오랫동안 저해되었다. 이러한 장애물은 우선 1999년 HCV 레플리콘 시스템 (Bartenschlager, R., Nat. Rev. Drug Discov. 2002, 1, 911-916 and Bartenschlager, R., J. Hepatol. 2005, 43, 210-216)의 확립 및 2005년 탄탄한 HCV 세포 배양 모델 (Wakita, T., et al., Nat. Med. 2005, 11, 791-6; Zhong, J., et al., Proc. Natl. Acad. ScL U.S.A. 2005, 102, 9294-9; Lindenbach, B.D., et al., Science 2005, 309, 623-6)의 발달에 따라 극복되었다.
HCV 복제는 NS5B 단백질의 경쟁적 저해를 통하여 NS5B의 폴리머라제 활성의 조작을 통하여 예방할 수 있을지도 모른다. 그렇지 않으면, 또한 사슬-종결 뉴클레오시드 유사체가 성장하는 RNA 가닥으로 함입될 수도 있다. 최근에, 몇몇 특허 출원들 (WO 99/43691, WO 01/32153, WO 01160315, WO 01179246, WO 01/90121, WO 01/92282, WO 02/48165, WO 02/18404, WO 02/094289, WO 02/057287, WO 02/100415(A2), US 06/040890, WO 02/057425, EP 1674104(Al), EP 1706405(Al), US 06/199783, WO 02/32920, US 04/6784166, WO 05/000864, WO 05/021568을 포함하는) 은 항-HCV 물질로서 뉴클레오시드 유사체에 대하여 기술하고 있다.
전염성을 가지는 질병들은 인간의 생명을 위협하는 주요한 요인이고 수십 년간 집중적으로 연구되었다. 현재 암은 미국에서 죽음에 이르는 두 번째 요인이고, 매년 상기 전염성을 가지는 질병에 의해 50만 이상의 사람들이 죽고 있다. 종양은 세포 성장의 규제되지 않고, 무질서한 확산이다. 종양은 침입성과 전이성을 가진다면, 악성 또는 불치이다. 침입성은 종양이 조직의 경계선을 의미하는 하는 기저판 (basal laminas)을 찢고 주위 조직에 침입함으로써, 종종 인체 혈액순환 시스템으로 들어가는 경향을 말한다. 전이성은 종양이 인체의 다른 부분으로 증식되어 최초 발현 장소로부터 증식되어 있는 경향을 의미한다.
암은 분자 수준에서 완전히 이해되어 있지 않다. 어떤 바이러스, 어떤 화학물질, 또는 방사능 같은 발암물질에 노출된 세포는 "억제 (suppressive)" 유전자를 불활성화시키거나 "발암유전자 (oncogene)"를 활성화시킨다. 억제 유전자는 성장 조절 유전자이고, 돌연변이에 의해 더 이상 세포 성장을 조절할 수 없다. 발암 유전자는 돌연변이 또는 표현형의 바뀐 부분으로 인해 유전자를 변형시키는 처음에는 정상적인 유전자 (원발암유전자, prooncongenes)이다. 변형된 유전자의 산물은 부적절한 세포 성장이다. 유전적 변화에 의하여 20개 이상의 정상적인 다른 세포 유전자가 원암유전자가 된다. 변형되어진 세포는 세포 모양, 세포간 반응, 막 조성물, 세포 골격 구조, 단백질 분비, 유전자 발현 및 사망률 (변형된 세포는 영구히 성장할 수 있다)을 비롯하여 많은 부분에서 정상적인 세포와 다르다. 인체의 다양한 세포 타입은 모두 양성 또는 악성 종양 세포로 변형되어질 수 있다. 가장 흔한 종양 발생 부위는 폐이고, 그 뒤를 이어서 직장, 유방, 전립선, 방광, 이자 및 난소이다. 다른 일반적인 암의 종류는 백혈병 및 뇌암, 흑색종, 림프종, 적백혈병, 자궁암을 포함하는 중추 신경계 암 및 두경부암이다.
암은 이제 주로 수술, 방사선 치료 및 화학 요법의 3가지 수단 중 하나 또는 상기 수단의 조합으로 치료된다. 수술은 환부 대부분의 제거를 수반한다. 수술은 가끔 예를 들면, 유방, 결장 및 피부와 같은 자리에 위치하는 종양의 제거에는 효과적인 반면, 척추와 같이 다른 곳에 위치하는 종양의 치료법 또는 백혈병 같은 산재성 종양의 치료법으로는 사용될 수 없다.
화학요법은 세포 복제 또는 세포 대사의 중단을 수반한다. 그것은 유방, 폐, 고환암 뿐만 아니라, 백혈병의 치료법으로도 가장 자주 사용되어진다. 최근 암치료용으로 사용되는 화학 치료법 물질에는 주요한 5가지 종류가 있다: 천연물 및 그들의 유도체; 안트라사이클린 (anthracyclines); 알킬화제 (alkylating agents); 대사저해제 (antimetabolites)라고도 불리는 증식저해제 (antiproliferatives); 및 호르몬제. 화학 치료제는 종종 항종양제로 불린다.
5-플로로우라실 (5-fluorouracil)와 같은 몇몇 합성 뉴클레오시드는 항암 활성을 보이는 것으로 확이노디었다. 5-플로로우라실은 의학적으로 예를 들면, 상피성 암, 육종, 피부암, 소화기관의 암, 및 유방암을 포함하는 악성 종양의 치료법으로 사용되었다. 그러나, 5-플로로우라실은 메스꺼움, 탈모, 설사, 구내염, 백혈구의 혈소판 감소, 식용부진, 색소침착, 및 부종과 같은 심각한 부정적인 반응을 초래한다. 백신의 유용성에도 불구하고 (Crit. Rev. Clin. Lab. Sci. 2004, 41, 391- 427), 황열 바이러스 (YFV)는 매년 3만명의 죽음을 초래하면서, 인류 건강과 관련하여 심각하게 지속되었다. YFV는 인간에게 가장 치명적인 바이러스 중 하나이다 (Expert Rev. Vaccines 2005, 4, 553-574.). 감염자의 약 15%가 심각한 질병으로 발전하고 치사율이 20 내지 50%에 이른다. YFV의 치료에 대하여 사용가능한 특별한 승인받은 치료법은 없다. Treatment is symptomatic -rest, fluids, and 이부프로펜 (ibuprofen), 나프록센 (naproxen), 아세트아미노펜 (acetaminophen) 또는 파라세타몰 (paracetamol)은 열과 재채기 증상을 완화시킬 수 있다. 아스피린은 피해야 한다. 비록 상기 바이러스는 아프리카 및 남아메리카에서 풍토성을 가지지만, 이 지역 밖에서 YFV의 발생 역시 가능성이 있으며 그러한 경우가 보고된 바 있다 (J. Travel Med. 2005, 72(Suppl. 1), S3-S11).
웨스트 나일 바이러스 (WNV)는 플라비바이러스 과 (Flaviviridae family)이고 대부분 모기-매개성 질병이다. 그것은 1937년 우간다의 서쪽 나일 지역에서 최초로 발견되었다. 질병관리예방본부의 보고서의 의하면, WNV은 아프리카, 중동, 유럽, 오세아니아, 중서아시아, 북아메리카에서 발견되었다. 북아메리카에서 그것의 첫 번째 출현은 1999년 뉴욕 메트로폴리탄 지역에서 시작되었다. 그것은 북아메리카에서 환경 위생에 위협을 가하는, 보통 여름에 시작되어서 가을까지 계속되는 계절성 유행병이다. 그것의 자연적인 주기는 새-모기-새 및 포유동물이다. 모기, 특히 쿠렉스 피피엔스 (Culex pipiens) 종은 감염된 새로부터 먹이를 채울 때 감염된다. 감염된 모기는 그들이 물 때, 다른 새 및 인간을 포함하는 포유동물들에게 WNV를 퍼뜨린다. 인간 및 말에서, 치명적인 뇌염은 WNV 감염의 가장 심각한 징후이다. WNV는 몇몇 감염된 새에서 사망을 초래할 수 있다. WNV 감염을 치료할 수 있는 특별한 치료법은 없다. 가벼운 증상에 있어서, 비록 건강한 사람이라도 몇 주 동안 아프기는 하지만, 자체적으로 치료할 수 있는 열과 재채기 같은 증상을 경험한다. 조금 더 심각한 상황에서는, 사람들은 대개 도움이 되는 치료를 받을 수 있는 병원으로 가는 것을 필요로 하게 된다.
뎅기열 바이러스 감염 또한 플라비바이러스 과 (Flaviviridae family)이고, 싱가포르에서 가장 영향력이 큰 절족동물매개성 감염 (arthropod- borne infection)이다 (Epidemiol News Bull 2006, 32,62- 6). 전세계적으로, 5천만 내지 1억 건의 뎅기열 (DF) 및 평균적인 치사율이 5%에 이르는 매년 수만 건의 뎅기출혈열 (DHF)이 발생하는 것으로 추정되고 있다. 많은 환자들은 최소한 또는 후유증 없이 뎅기열 바이러스 감염으로부터 회복된다. 뎅기열 바이러스 감염은 보통 증상이 없지만, 대표적인 뎅기열, 뎅기 출혈열 또는 뎅기쇼크증후군을 보인다. 외래환자조차도, 적절한 수분을 유지하는 것이 매우 필요하다. 뎅기열 바이러스 감염은 정맥으로 주입하는 액체 대안 요법에 의하여 효과적으로 처리될 수 있고, 만약 조기에 진단한다면, 치사율을 1% 미만으로 유지할 수 있다. 통증과 열을 견디기 위하여, 뎅기열 바이러스에 감염된 것으로 의심되는 환자들은 아세트아미노펜의 준비가 필요하게 된다. 아스피린 및 비-스테로이드 항-염증 약물치료는 몇몇 뎅기열 바이러스 감염과 관련한 출혈 경향 (bleeding tendency)을 약화시킬 수 있다. 그러나, 이전에 묘사되었던 뎅기열 바이러스 감염의 몇몇 징후는 간부전 (Dig Dis Sci 2005, 50, 1146-7), 뇌증 (J Trap Med Public Health 1987, 18, 398-406), 및 길랭-바레 증후군 (Intern Med 2006, 45, 563-4)을 포함한다.
세포 배양에서 잠복기, 또는 인체 내에서 투여에 따라서, 매우 다양한 6-서브스티튜티드-3'-아지도-2',3'-디디옥시 퓨린 뉴클레오시드(6-substituted-3'-azido-2',3'-dideoxy purine nucleosides)가 대응하는 6-하이드록시-3'-아지도-2',3'-디디옥시퓨린 뉴클레오시드(6-hydroxy-3'-azido-2',3'-dideoxy purine nucleosides)로 전환되어지는 것이 발견되었다. 우리는 또한 이것이 다양한 다른 종류의 6-서브스티튜티드 퓨린 뉴클레오시드 (6-substituted purine nucleosides)에 대하여도 적용된다는 것을 발견하였다. 상기 화합물은 비록 프로드럭 아바카비어 (Abacavir) 및 인체에서 G 유사체 카보비어 (Carbovir ((-)-carbocyclic 2',3'-didehydro-2',3'-dideoxyguanosine))에 대응하도록 변형되지만, G 또는 I 유사체의 프로드럭로서 행동한다. 상기 변환은 인체 내에서 잠재적인 항바이러스제로 형성되어질 수 있는 6-서브스티튜티드 퓨린 뉴틀레오시드 트리포스페이트의 다양성을 매우 제한한다. 영향 있는 환자들에게 비극적인 결과를 가져오는 몇몇 경우에 있어서, 후천성 면역 결핍 증후군, 에이즈-관련 집합체, HCV, 노로바이러스, 사포로바이러스, HSV-1, HSV-2, 뎅기열 바이러스, 황열, 암, 및 HBV는 전세계적으로 두렵고 현저한 단계에 도달하였음에 비추어 볼 때, 숙주 세포에 낮은 독성을 가져오면서 상기 질병들을 치료할 수 있는 새롭고 효과적인 약제를 제공하는 것이 필요하다.
상세하게는 약물 내성 암 또는 돌연변이 바이러스를 치료하기 위한 새로운 항바이러스 또는 화학요법 약물 , 상기 약물을 포함하는 구성물, 및 상기 약물을 이용하는 치료 방법을 제공하는 것은 유익할 것이다. 본 발명은 이러한 약물, 구성물 및 방법에 관한 것이다.
도 1: 50 μM RS-457의 인간 말초혈액단구세포 (human peripheral blood mononuclear (PBM) cells)에서 4시간 동안 배양한 후 형성된 뉴클레오티드의 LC/MS 분석
도 2: 50 μM RS-527의 PBM 세포에서 4시간 동안 배양한 후 형성된 뉴클레오티드의 LC/MS 분석
도 3: 50 μM RS-464의 PBM 세포에서 4시간 동안 배양한 후 형성된 뉴클레오티드의 LC/MS 분석
도 4: 50 μM RS-512의 PBM 세포에서 4시간 동안 배양한 후 형성된 뉴클레오티드의 LC/MS 분석
도 5: 50 μM RS-506의 PBM 세포에서 4시간 동안 배양한 후 형성된 뉴클레오티드의 LC/MS 분석
도 6: 50 μM RS-667의 PBM 세포에서 4시간 동안 배양한 후 형성된 뉴클레오티드의 LC/MS 분석
도 7: 50 μM 약물 (화합물 6415 또는 RFS-457, 또한 본 발명에서 AZG로 언급된 화합물)을, 4시간동안 배양한 후 MT-2 및 PBM 세포에서 AZG-TP 레벨
도 8: 50 μM RS-788의 PBM 세포에서 4시간 동안 배양한 후 형성된 뉴클레오티드의 LC/MS 분석
도 9: 디옥시코포마이신 (deoxycoformycin (DCF))으로 전처리된 50 μM RS-788의 PBM 세포에서 4시간 동안 배양한 후 형성된 뉴클레오티드의 LC/MS 분석
도 10: 50 μM (-)-β-D-2,6-디아미노퓨린 디옥소란 ((-)-β-D-2,6-diaminopurine dioxolane (DAPD))의 PBM 세포에서 4시간 동안 배양한 후 형성된 뉴클레오티드의 LC/MS 분석
도 11: 50 μM RS-864의 PBM 세포에서 4시간 동안 배양한 후 형성된 뉴클레오티드의 LC/MS 분석
도 12: xxLAI 바이러스의 유전자타입의 그래픽 묘사
본 발명에서 6-서브스티튜티드-2-아미노 퓨린 뉴클레오티드 모노포스페이트 프로드럭 (6-substituted-2-amino purine nucleotides monophosphate prodrugs)은 HIV (human immunodeficiency virus), HCV ((hepatis C virus), 노로바이러스 (Norovirus), 사포로바이러스 (Saporovirus), HSV-1, HSV-2, 뎅기열 바이러스 (Dengue virus), 황열 (Yellow fever), 암 (cancer), 및 HBV (hepatitis B virus )에 대한 활성 억제를 나타낸다. 그러므로, 상기 화합물은 숙주 세포에서 바이러스 감염의 치료 또는 예방, 또는 바이러스의 생물학적 활성의 감소시키는 데 사용되어질 수 있다. 상기 숙주는 포유동물, 상세하게는 HIV-I, HIV-2, HCV, 노로바이러스, 사포로바이러스, HSV-1, HSV-2, 뎅기열 바이러스, 황열, 암, 및/또는 HBV에 감염된 인간이 될 수 있다. 상기 방법은 본 발명에서 기술되어진 6-서브스티튜티드-2-아미노 퓨린 뉴클레오티드 모노포스페이트 프로드럭의 하나 이상을 유효량으로 포함한다.
아울러, 본 발명에서 기술되어진 하나 이상의 화합물과 약학적으로 허용가능한 담체 (carrier) 또는 부형제 (excipient)의 조합을 포함하는 약학 제제가 개시되어진다. 일구체예에서, 상기 제제는 본 발명에서 기술되어진 화합물을 최소한 하나 포함하고 뿐만 아니라 최소한 하나의 치료 약물을 포함한다.
본 발명은 이하 정의를 참고하면 더 명확히 이해될 수 있을 것이다.
Ⅰ. 정의
본 발명에서 사용된 용어 "독립적으로"는 출원인에 따라서 독립적으로 각각 다르게 사용되는 변수를 지칭하는 것으로 사용된다. 그러므로, R"은 "독립적으로 탄소 또는 질소"인 R"XYR" 같은 화합물에 있어서, 두 가지 R"은 모두 탄소 또는 두 가지 R"은 모두 질소이거나, 하나의 R"은 탄소이고 나머지 R"은 질소가 될 수 있다.
본 발명에서 사용된 용어 "거울상 이성질체적으로 순수한"은 최소한 약 95%, 바람직하게는 약 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 단일한 거울상 이성질체 뉴클레오티드로 구성된 뉴클레오티드 화합물을 의미한다.
본 발명에서 사용된 용어 "실질적으로 없는" 또는 "실질적으로 부재"는 뉴클레오티드의 지정된 거울상 이성질체의 중량비가 85% 내지 90%, 바람직하게는 95% 내지 98%, 더욱 바람직하게는 99% 내지 100%인 뉴클레오티드 화합물을 의미한다. 본 발명에서 사용되는 화합물은, 바람직한 실시예에서, 실질적으로 거울상 이성질체를 포함하지 않는다.
마찬가지로, 용어 "분리된"은 상기 뉴클레오티드가 85% 내지 90%, 바람직하게는 95% 내지 98%, 더욱 바람직하게는 99% 내지 100% 포함되고, 나머지는 다른 화학 종 또는 거울상 이성질체인 뉴클레오티드 화합물뉴클레오티드 화합물을 의미한다.
본 발명에서 사용된 용어 "알킬"은 다르게 정의되지 않는 한, 치환되거나 치환되지 않은 알킬 그룹을 포함하는, 포화된 직쇄, 측쇄 또는 사이클릭, 1급, 2급 또는 3급 탄화수소를 의미한다. 상기 알킬 그룹은 본원에 참고로 인용된 문헌 (Greene, et al, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley and Sons, Second Edition, 1991)에 개시되고 , 보호되지 않거나 필요한 경우 보호된 할로 (halo), 할로알킬 (haloalkyl), 하이드록실 (hydroxyl), 카르복실 (carboxyl), 아실 (acyl), 아릴 (aryl), 아실옥시 (acyloxy), 아미노 (amino), 아미도 (amido), 카르복실 유도체 (carboxyl derivatives), 알킬아미노 (alkylamino), 다이알킬아미노 (dialkylamino), 아릴아미노 (arylamino), 알콕시 (alkoxy), 아릴옥시 (aryloxy), 나이트로 (nitro), 시아노 (cyano), 설폰산 (sulfonic acid), 싸이올 (thiol), 이민 (imine), 설포닐 (sulfonyl), 설파닐 (sulfanyl), 설피닐 (sulfinyl), 설파모닐 (sulfamonyl), 에스터 (ester), 카르복실 산 (carboxylic acid), 아마이드 (amide), 포스포닐 (phosphonyl), 포스피닐 (phosphinyl), 포스포릴 (phosphoryl), 포스핀 (phosphine), 싸이오에스터 (thioester), 싸이오에터 (thioether), 산 할라이드 (acid halide), 언하이드라이드 (anhydride), 옥심 (oxime), 하이드라진 (hydrazine), 카바메이트 (carbamate), 포스포닉 산 (phosphonic acid), 포스포네이트 (phosphonate)를 포함하지만 제한되지 않는, 반응에 간섭하지 않거나 그렇지 않으면 반응 과정에서 개량되지 않는 어떠한 잔기로 필요에 따라 치환될 수 있다. 상세하게 포함된 것은 CF3 and CH2CF3이다.
본 명세서에서, 용어 C (알킬 영역)가 사용되어질 때마다, 독립적으로 자세하고 개별적으로 구성되어진 분류로 이루어진 개개의 구성을 포함한다. 상기 용어 "알킬"은 C1 -22 알킬 잔기를 포함하고, 용어 "저급 알킬"은 C1 -6 알킬 잔기를 포함한다. 당업계에 있어서 관련 있는 알킬 라디칼은 접미사 "-에인"을 접미사 "-일"로 치환하여 명명한다.
용어 "알케닐 (alkenyl)"은 하나 이상의 이중결합을 포함하는 불포화된, 탄화수소 라디칼, 직쇄 또는 측쇄를 의미한다. 본 발명에서 개시된 상기 알케닐 그룹은 알킬 잔기에서 치환기로서 개시된 다른 잔기를 포함하지만 제한되지 않는, 반응 과정에 반대의 영향을 주지 않는 잔기로 필요에 따라 치환될 수 있다. 알케닐 그룹의 제한되지 않는 예는 에틸렌 (ethylene), 메틸에틸렌 (methylethylene), 이소프로필리덴 (isopropylidene), 1,2-에테인-다일 (1,2-ethane-diyl), 1,1-에테인-다일 (1,1-ethane-diyl), 1,3-프로판-다일 (1,3-propane-diyl), 1,2-프로판-다일 (1,2-propane-diyl), 1,3-부탄-다일 (1,3-butane-diyl), 및 1,4-부탄-다일 (1,4-butane-diyl)를 포함한다.
용어 "알키닐 (alkynyl)"은 하나 이상의 삼중결합을 포함하는 불포화된, 비고리 탄화수소 라디칼, 직쇄 또는 측쇄를 의미한다. 본 발명에서 개시된 상기 알키닐 그룹은 알킬 잔기에서 치환기로서 개시된 다른 잔기를 포함하지만 제한되지 않는, 반응 과정에 반대의 영향을 주지 않는 잔기로 필요에 따라 치환될 수 있다. 적절한 알키닐 그룹의 제한되지 않는 예는 에티닐 (ethynyl), 프로피닐 (propynyl), 하이드록시프로피닐 (hydroxypropynyl), 부틴-1-일 (butyn-1-yl), 부틴-2-일 (butyn-2-yl), 펜틴-1-일 (pentyn-1-yl), 펜틴-2-일 (pentyn-2-yl), 4-메톡시펜틴-2-일 (4-methoxypentyn- 2-yl), 3-메틸부틴-1-일 (3-methylbutyn-l-yl), 헥신-1-일 (hexyn-1-yl), 헥신-2-일 (hexyn-2-yl), 및 헥신-3-일 (hexyn-3-yl), 3,3-디메틸부틴-1-일 라디칼 (3,3-dimethylbutyn- 1-yl radical)을 포함한다.
용어 "알킬 아미노 (alkylamino)" 또는 "아릴아미노 (arylamino)"는 각각 하나 또는 두 개의 알킬 또는 아릴 치환기를 가지는 아미노 그룹을 의미한다.
용어 "보호된 (protected)"은 별도로 규정하지 않는 한, 산소, 질소, 또는 인 원자의 추가적인 반응을 막거나 다른 목적으로 이에 부가된 그룹을 나타낸다. 매우 다양한 산소 및 질소 보호기가 유기 합성 분야의 당업자에게 공지 (예를 들면, Greene, et al, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley and Sons, Second Edition, 1991)되어 있다.
용어 "아릴 (aryl)"은 하나만으로 또는 조합에서, 하나, 둘, 세 개의 고리를 포함하고 그러한 고리들이 매달린 채로 붙어있을 수 있거나, 결합되어 있을 수 있는 카르복실 방향족계를 의미한다. 아릴의 제한되지 않은 예는 페닐 (phenyl), 바이페닐 (biphenyl), 또는 나프틸 (naphthyl), 또는 방향족계로부터 수소가 제거된 후에 남아있는 다른 방향족 그룹을 포함한다. 상기 용어 아릴은 양쪽 모두 치환되거나 치환되지 않은 잔기를 포함한다. 상기 아릴 그룹은 알킬 잔기에서 치환기로서 개시된 다른 잔기를 포함하지만 제한되지 않는, 반응 과정에 반대의 영향을 주지 않는 잔기로 필요에 따라 치환될 수 있다. 치환된 아릴의 제한되지 않는 예는 헤테로아릴아미노 (heteroarylamino), N-아릴-N-알킬아미노 (N-aryl-N-alkylamino), N-헤테로아릴아미노-N-알킬아미노 (N-heteroarylamino-N-alkylamino), 헤테로아랄콕시 (heteroaralkoxy), 아릴아미노 (arylamino), 아랄킬아미노 (aralkylamino), 아릴싸이오 (arylthio), 모노아릴아미도설포닐 (monoarylamidosulfonyl), 아릴설폰아미도 (arylsulfonamido), 다이아릴아미도설포닐 (diarylamidosulfonyl), 모노아릴 아미도설포닐 (monoaryl amidosulfonyl), 아릴설피닐 (arylsulfinyl), 아릴설포닐 (arylsulfonyl), 헤테로아릴싸이오 (heteroarylthio), 헤테로아릴설피닐 (heteroarylsulfinyl), 헤테로아릴설포닐 (heteroarylsulfonyl), 아로일 (aroyl), 헤테로아로일 (heteroaroyl), 아랄카노일 (aralkanoyl), 헤테로아랄카노일 (heteroaralkanoyl), 하이드록시아랄킬 (hydroxyaralkyl), 하이드록시헤테로아랄킬 (hydoxyheteroaralkyl), 할로알콕시알킬 (haloalkoxyalkyl), 아릴 (aryl), 아랄킬 (aralkyl), 아릴옥시 (aryloxy), 아랄콕시 (aralkoxy), 아릴옥시알킬 (aryloxyalkyl), 포화 헤테로사이클릴 (saturated heterocyclyl), 부분적으로 포화 헤테로사이클릴, 헤테로아릴 (heteroaryl), 헤테로아릴옥시 (heteroaryloxy), 헤테로아릴옥시알킬 (heteroaryloxyalkyl), 아릴알킬 (arylalkyl), 헤테로아릴알킬 (heteroarylalkyl), 아릴알케닐 (arylalkenyl), 및 헤테로아릴알케닐 (heteroarylalkenyl), 카보아랄콕시 (carboaralkoxy)를 포함한다.
용어 "알칼릴 (alkaryl)" 또는 "알킬아릴 (alkylaryl)"은 아릴 치환기를 가지는 알킬 그룹을 의미한다. 상기 용어 "아랄킬 (aralkyl)" 또는 "아릴알킬 (arylalkyl)"은 알킬 치환기를 가지는 아릴 그룹을 의미한다.
본 발명에서 사용된 상기 용어 "할로 (halo)"는 클로로 (chloro), 브로모 (bromo), 아이오도 (iodo) 및 플로로 (fluoro)를 포함한다.
상기 용어 "아실 (acyl)"은 직쇄, 측쇄, 또는 사이클릭 알킬 또는 저급 알킬, 메톡시메틸 (methoxymethyl)을 포함하지만 이에 제한되지 않는 알콕시알킬, 벤질 (benzyl)을 포함하지만 이에 제한되지 않는 아랄킬, 페녹시메틸 (phenoxymethyl) 같은 아릴옥시알킬 (aryloxyalkyl), 필요에 따라 할로겐 (F, Cl, Br, I), 알킬 (C1, C2, C3, 및 C4를 포함하지만 이에 제한되지 않는), 알콕시 (C1, C2, C3, 및 C4를 포함하지만 이에 제한되지 않는)로 치환된 페닐을 포함하지만 이에 제한되지 않는 아릴, 알킬 또는 아랄킬 설포닐 (aralkyl sulphonyl)같은 설포네이트 에스터 (sulfonate esters), 모노-, 다이-, 트리포스페이트 에스터, 트리틸 (trityl)및 모노메톡시트리틸 (monomethoxytrityl), 치환된 벤질, 트리알킬실릴 (trialkylsilyl) (예, 다이메틸-t-부틸실릴 (dimethyl-t-butylsilyl)) 또는 다이페닐메틸실릴 (diphenylmethylsilyl)로부터 선택되어진 에스터 그룹의 비카보닐 잔기를 가지는 카복실산 에스터를 의미한다. 상기 에스터에서 아릴 그룹은 필요에 따라 페닐 그룹으로 구성된다. 상기 용어 "저급 아실"은 비카보닐 잔기가 저급 알킬인 아실그룹을 의미한다.
상기 용어 "알콕시 (alkoxy)" 및 "알콕시알킬 (alkoxyalkyl)"은 메톡시 라디칼 같은 알킬 잔기를 가지는 라디칼을 포함하는 직쇄 또는 측쇄 산소를 포괄한다. 상기 용어 "알콕시알킬 (alkoxyalkyl)"은 또한 알킬 라디칼이 붙어 있는 하나 이상의 알콕시 라디칼을 가지는 알킬 라디칼, 즉, 모노알콕시알킬 및 다이알콕시알킬 라디칼을 형성하는 알킬 라디칼을 포괄한다. 아울러, 상기 "알콕시" 라디칼은 "할로알콕시 (haloalkoxy)" 라디칼을 제공하기 위하여, 플로로, 클로로 또는 브로모 같은 하나 이상의 할로겐 원자로 치환될 수 있다. 상기 라디칼들의 예는 플로로메톡시 (fluoromethoxy), 클로로메톡시 (chloromethoxy), 트리클로로메톡시 (trifluoromethoxy), 디플로로메톡시 (difluoromethoxy), 트리플로로메톡시 (trifluoroethoxy), 플로로에톡시 (fluoroethoxy), 테트라플로로에톡시 (tetrafluoroethoxy), 펜타플로로에톡시 (pentafluoroethoxy), 및 플로로프로폭시 (fluoropropoxy)를 포함한다.
상기 용어 “알킬아미노 (alkylamino)”는 아미노 라디칼에 붙어있는, 각각, 하나 또는 두 개의 알킬 라디칼을 포함하는 “모노알킬아미노 (monoalkylamino)" 및 ”다이알킬아미노 (dialkylamino)“를 나타낸다. 상기 용어 아릴아미노 (arylamino)는 아미노 라디칼에 붙어있는, 각각, 하나 또는 두 개의 아릴 라디칼을 포함하는 “모노아릴아미노 (monoarylamino)" 및 ”다이아릴아미노 (diarylamino)“를 나타낸다. 상기 용어 아랄킬아미노 (aralkylamino)는 아미노 라디칼에 붙어있는, 각각, 하나 또는 두 개의 아랄킬 라디칼을 포함하는 “모노아랄킬아미노 (monoaralkylamino)" 및 ”다이아랄킬아미노 (diaralkylamino)“를 나타낸다. 아울러 상기 용어 아랄킬아미노 (aralkylamino)는 아미노 라디칼에 붙어 있는 하나의 아랄킬 라디칼 및 하나의 알킬 라디칼을 포함하는 ”모노아랄킬 모노알킬아미노 (monoaralkyl monoalkylamino)를 의미한다.
본 발명에서 사용되는 상기 용어 “헤테로원자 (heteroatom)”는 산소, 황, 질소 및 인을 의미한다.
본 발명에서 사용되는 “헤테로아릴 (heteroaryl)” 또는 “헤테로아로마틱 (heteroaromatic,)”은 방향족 고리에서 적어도 하나의 황, 산소, 질소, 또는 인을 포함하는 방향족성을 의미한다.
상기 용어 “헤테로사이클릭 (heterocyclic)”, “헤테로사이클릴(heterocycly)” 및 “사이클로헤테로알킬 (cycloheteroalkyl)”은 예를 들면, 고리에서 3개 내지 10개의 원자를 포함하고 적어도 하나의 산소, 황, 질소, 또는 인 같은 하나 이상의 헤테로원자가 고리에 포함되어 있는 비방향성 사이클릭 그룹을 의미한다.
헤테로아릴 (heteroaryl) 및 헤테로사이클릭 (heterocyclic) 그룹의 제한되지 않는 예는 퓨릴 (furyl), 퓨라닐 (furanyl), 피리딜 (pyridyl), 피리미딜 (pyrimidyl), 싸이에닐 (thienyl), 이소싸이아졸릴 (isothiazolyl), 이미다졸릴 (imidazolyl), 테트라졸릴 (tetrazolyl), 피라지닐 (pyrazinyl), 벤조퓨라닐 (benzofuranyl), 벤조싸이오페닐 (benzothiophenyl), 퀴노릴 (quinolyl), 이소퀴노릴 (isoquinolyl), 벤조싸이에닐 (benzothienyl), 이소벤조퓨릴 (isobenzofuryl), 피라졸릴 (pyrazolyl), 인돌릴 (indolyl), 이소인돌릴 (isoindolyl), 벤즈이미다졸릴 (benzimidazolyl), 퓨리닐 (purinyl), 카보졸릴 (carbazolyl), 옥사졸릴 (oxazolyl), 싸이아졸릴 (thiazolyl), 이소싸이아졸릴 (isothiazolyl), 1,2,4-싸이아디아졸릴 (1,2,4-thiadiazolyl), 이소옥사졸릴 (isooxazolyl), 피롤릴 (pyrrolyl), 퀴나졸리닐 (quinazolinyl), 신노리닐 (cinnolinyl), 프탈아지닐 (phthalazinyl), 산티닐 (xanthinyl), 하이포산티닐 (hypoxanthinyl), 싸이오펜 (thiophene), 퓨란 (furan), 피롤 (pyrrole), 이소피롤 (isopyrrole), 피라졸 (pyrazole), 이미다졸 (imidazole), 1,2,3-트리아졸 (1,2,3-triazole), 1,2,4-트리아졸 (1,2,4-triazole), 옥사졸 (oxazole), 이소옥사졸 (isoxazole), 싸이아졸 (thiazole), 이소싸이아졸 (isothiazole), 피리미딘 (pyrimidine) 또는 피리다진 (pyridazine), 및 프테리디닐 (pteridinyl), 아지리딘 (aziridines), 싸이아졸 (thiazole), 이소싸이아졸 (isothiazole), 1,2,3-옥사다이졸 (1,2,3-oxadiazole), 싸이아진 (thiazine), 피리딘 (pyridine), 피라진 (pyrazine), 피페라진 (piperazine), 피롤리딘 (pyrrolidine), 옥사지렌 (oxaziranes), 페나진 (phenazine), 페노싸이아진 (phenothiazine), 모포리닐 (morpholinyl), 피라조릴 (pyrazolyl), 피리다지닐 (pyridazinyl), 피라지닐 (pyrazinyl), 퀴노산리닐 (quinoxalinyl), 산티닐 (xanthinyl), 하이포산티닐 (hypoxanthinyl), 프테리디닐 (pteridinyl), 5-아자사이티디닐 (5-azacytidinyl), 5-아자우라실릴 (5-azauracilyl), 트리아조로피리디닐 (triazolopyridinyl), 이미다조로피리미디닐 (imidazolopyridinyl), 피로로피리미디닐 (pyrrolopyrimidinyl),피라조로피리미딜 (pyrazolopyrimidinyl), 아데닌 (adenine), N6-알킬퓨린 (N6-alkylpurines), N6-벤질퓨린 (N6-benzylpurine), N6-할로퓨린 (N6-halopurine), N6-비닐퓨린 (N6-vinypurine), N6-아세틸에닉 퓨린 (N6- acetylenic purine), N6-아실 퓨린 (N6-acyl purine), N6-하이드록시알킬 퓨린 (N6-hydroxyalkyl purine), N6-싸이오알킬 퓨린 (N6-thioalkyl purine), 티민 (thymine), 시토신 (cytosine), 6-아자피리미딘 (6-azapyrimidine), 2-머갑토피리미딘 (2-mercaptopyrimidine), 우라실 (uracil), N5-알킬피리미딘 (N5-alkylpyrimidines), N5-벤질피리미딘 (N5-benzylpyrimidines), N5-할로피리미딘 (N5-halopyrimidines), N5-비닐피리미딘 (N5-vinylpyrimidine), N5-아세틸에닉 피리미딘 (N5-acetylenic pyrimidine), N5-아실 피리미딘 (N5-acyl pyrimidine), N5-하이드록시알킬 퓨린 (N5-hydroxyalkyl purine) 및 N6-싸이오알킬 퓨린 (N6- thioalkyl purine) 및 이소사졸릴 (isoxazolyl)을 포함한다. 헤테로아로마틱 그룹은 필요에 따라 상기 아릴과 동일한 치환기로 치환되어질 수 있다. 헤테로사이클릭 또는 헤테로 아로마틱 그룹은 할로겐 (halogen), 할로알킬 (haloalkyl), 알킬 (alkyl), 알콕시 (alkoxy), 하이드록시 (hydroxy), 카복실 유도체 (carboxyl derivatives), 아미도 (amido), 아미노 (amino), 알킬아미노 (alkylamino), 다이알킬아미노 (dialkylamino)로 구성되어진 군에서 선택되는 하나 이상의 치환기로 필요에 따라 치환될 수 있다. 상기 헤테로 아로마틱은 부분적으로 또는 완전히 원하는 만큼 수소화되어질 수 있다.
제한되지 않는 예로서, 다이하이드로피리딘은 피리딘으로 대안되어 사용될 수 있다. 헤테로사이클릭 또는 헤테로아릴 그룹에서 기능을 가지는 산소 및 질소 그룹은 필요하거나 원하는 만큼 보호될 수 있다. 적절한 보호기는 당업계에서 잘 알려진 바와 같이, 트리메틸실릴 (trimethylsilyl), 다이메틸실릴 (dimethylhexylsilyl), t-부틸다이메틸실릴 (t-butyldimethylsilyl), 및 t-부틸다이페닐실릴 (t-butyldiphenylsilyl), 트리틸 (trityl) 또는 치환된 트리틸 (substituted trityl), 알킬 그룹 (alkyl groups), 아세틸 (acetyl) 및 프로피오닐 (propionyl), 메테인설포닐 (methanesulfonyl), 및 p-톨루엔설포닐 (p-toluenelsulfonyl) 같은 아실 그룹 (acyl groups)을 포함한다. 상기 헤테로사이클릭 또는 헤테로아로마틱 그룹은 아릴 잔기에서 치환기로서 개시된 다른 잔기를 포함하지만 제한되지 않는, 반응 과정에 반대의 영향을 주지 않는 잔기로 치환될 수 있다.
본 발명에서 사용된 용어 "숙주"는 세포주 및 동물, 바람직하게는 사람을 포함하지만 이에 제한되지 않는, 바이러스가 복제할 수 있는 단세포 또는 다세포 유기체를 의미한다. 그 대신에, 상기 숙주는 바이러스 게놈의 부분이 운반되어지도록 할 수 있고, 그러한 복제 또는 기능은 본 발명의 화합물에 의하여 변화시킬 수 있다. 상기 용어 숙주는 구체적으로 감염된 세포, 바이러스 게놈의 전체 또는 부분으로 감염되어진 세포 또는 동물, 더 상세하게는 영장류 (침팬지를 포함하지만 이에 제한되지 않는) 및 사람을 의미한다. 본 발명의 대부분의 동물 실험에서, 숙주는 인간 환자이다. 그러나, 특정한 경우, 가축 적용이 본 발명에 의하여 분명히 예상된다 (침팬지에 처리하는 경우와 마찬가지로).
상기 용어 "펩티드 (peptide)"는 하나의 아미노산의 카복실 그룹에 의해 다른 아미노산의 아미노 그룹에 연결되어 있는 2개 내지 100개의 아미노산을 포함하는 다양한 천연물 및 합성 화합물을 의미한다.
상기 용어 "약학적으로 허용가능한 염 또는 프로드럭"은 명세서 전반에 걸쳐 환자에게 투여시 뉴클레오티드 모노포스페이트 화합물을 제공하는, 뉴클레오티드 화합물의 약제학적으로 허용가능한 임의의 형태 (에스터, 포스페이트 에스터, 에스터 또는 관련 그룹의 염)를 기재하는데 사용된다. 약학적으로 허용가능한 염은 약학적으로 허용가능한 무니 또는 유기 염기 및 산으로부터 유도된 염을 포함한다. 적절한 염으로는 약제학 분야에서 널리 알려진 다수의 기타 산 중에서, 칼륨 및 나트륨과 같은 알칼리 금속, 칼슘 및 마그네슘과 같은 알칼리토금속으로부터 유도된 염이 있다. 약제학적으로 허용되는 프로드럭은 숙주에서 대사되어, 예를 들면 가수분해 또는 산화되어 본 발명의 화합물을 형성하는 화합물을 의미한다. 프로드럭의 통상적인 예는 활성 화합물의 기능적 잔기에 생물학적으로 불안정한 보호 그룹을 갖는 화합물을 포함한다. 프로드럭은 산화 (oxidized), 환원 (reduced), 아민화 (aminated), 탈아민화 (deaminated), 하이드록시화 (hydroxylated), 탈하이드록시화 (dehydroxylated), 가수분해 (hydrolyzed), 탈가수분해 (dehydrolyzed), 알킬화 (alkylated), 탈알킬화 (dealkylated), 아실화 (acylated), 탈아실화 (deacylated), 포스포릴화 (phosphorylated), 또는 탈포스포릴화( dephosphorylated)되어 활성 화합물을 생성할 수 있는 화합물을 포함한다. 본 발명의 화합물의 프로드럭 형태는 항바이러스 활성을 가지거나, 이러한 활성을 가지는 화합물로 대사될 수 있다.
아울러 프로드럭은 개시된 뉴클레오시드의 아미노산 에스터를 포함한다 (예를 들면, 아시클로비어 (acyclovir)의 아미노산 에스터를 기재하는, 구체적으로는 아시클로비어와 비교하여 개선된 수용성을 보이는 글라이신 및 알라닌 에스터에 대한 참조인 European Patent Specification No. 99493, 및 α-탄소원자에 가깝게 가지치는 측쇄에 의하여 특징되어지는, 알라닌 및 글라이신 에스터와 비교하여 경구 투여 후에 향상된 생물효용을 가지는, 아시클로비어의 발린 에스터를 개시하는 참조로서 US Pat. No. 4,957,924 (Beauchamp). 그러한 아미노산 에스터를 준비하기 위한 과정은 참고로서 포함되어진 문헌인 US Pat. No. 4,957,924 (Beauchamp)에서 개시되어 있다. 발린 그 자체에 대한 대안으로서, 아미노산의 기능을 가지는 등가물이 사용되어질 수 있다 (예를 들면, 산 클로라이드 또는 산 언하이드라이드 같은 아실 할라이드). 상기와 같은 경우에 있어서, 원하지 않는 부반응을 피하기 위해서, 아미노-보호 유도체를 사용하는 것이 효과적이다.
Ⅱ. 활성 화합물 ( Active Compound )
본원 발명의 일 구체예에서, 활성 화합물은 화학식 I이다:
Figure 112011069709164-pct00001

또는 화학식 I의 약학적으로 허용되는 염 또는 프로드럭에 있어서:
ⅲ) R1은 모뉴클레오사이드 (parent nucleoside)로서 투여될 때 OH를 형성하기 위하여 생체 내에서 제거되는 원자 또는 그룹으로, 예를 들면, 할로겐 (F, Cl, Br, I), OR', N(R')2, SR', OCOR', NHCOR', N(COR')COR', SCOR' 및 NHCOOR'이고
각 R'은 독립적으로 H, 저급 알킬 (C1-C6), 저급 할로알킬 (C1-C6), 저급 알 콕시 (C1-C6), 저급 알케닐 (C2-C6), 저급 알키닐 (C2-C6), 저급 사이클로알킬 (C3-C6) 아릴, 헤테로아릴, 알킬아릴, 또는 아릴알킬이고, 상기 그룹은 상기
정의한 하나 이상의 치환기들, 예를 들면, 하이드록시알킬, 아미노알킬 및 알콕시 알킬로 치환될 수 있다.
ⅳ) W는 독립적으로, N, CH, CF, CCN, CC≡CH, 또는 CC(O)N(R')2이고;
ⅸ) 당 (Sugar)은 리보오스 또는 화학식 Ⅱ의 구조를 가지는 변형된 리보오스이고;
Figure 112011069709164-pct00002

상기 화학식 Ⅱ에서,
Y는 O 또는 S이고;
Z는 CL2, CL2CL2, CL2OCL2, CL2SCL2, CL2O, OCL2 및 CL2NHCL2로 구성된 군으로부터 선택되는데, 여기서 L은 독립적으로 H, F, 알킬, 알케닐 및 알키닐로 구성된 그룹에서 선택되는데, 여기서 알킬, 알케닐, 알키닐은 각각 하나 이상의 헤테로원자들을 필요에 따라 포함할 수 있고;
A는 O,S,CH2, CHF, CF2, C=CH2, C=CHF, 또는 C=CF2이고;
R4', R5, R5', R6, R6' 및 R7'은 독립적으로 H, F, Cl, Br, I, OH, SH, NH2, NHOH, NHNH2, N3, C(O)OH, CN, C(O)NH2, C(S)NH2, C(O)OR, R, OR, SR,SSR, NHR, 및 NR2로 구성된 그룹에서 선택되는데;
화학식 Ⅱ의 당을 가지는 화학식 Ⅰ에 있어서, A가 O일 때, 당은 화학식 Ⅱ이고, R4', R5, R5', R6, R7'은 H이고, R6'은 N3가 될 수 없고;
화학식 Ⅱ의 당을 가지는 화학식 Ⅰ에 있어서, A가 O 또는 S일 때, R7'은 OH, SH, NH2, NHOH, NHNH2, OR, SR,SSR, NHR, 및 NR2가 될 수 없고;
R은 독립적으로 저급 알킬 (C1-C6 알킬), 저급 알케닐, 저급 알키닐, 저급 사이클로알킬 (C3-C6 사이클로알킬), 아릴, 알킬아릴, 또는 아릴알킬이며, 상기 그룹은 상기 정의한 하나 이상의 치환기들, 예를 들면, 하이드록시알킬, 아미노알킬 및 알콕시 알킬로 치환될 수 있다.
R2 및 R3는, 생체 내에서 투여될 때, 이론상 상기 뉴클레오시드 모노포스페이트 (monophosphate), 모노포스포네이트 (monophosphonate), 싸이오모노포스포네이트 (thiomonophosphonate), 또는 싸이오모노포스페이트 (thiomonophosphate)를 제공하는 증력이 있다. 대표적인 R2 및 R3는 하기로부터 독립적으로 선택되어진다:
(a) OR8에 대하여,, R8은 H, C1 -20 알킬, C3 -6 사이클로알킬, C1 -6 할로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴인데 이에 제한되지는 않지만 C1 -6 알킬, C2 -6 알케닐, C2 -6 알키닐, C1-6 알콕시, (CH2)1-6 CO2R9a, 할로겐, C1 -6 할로알킬, -N(R9a)2, C1 -6 아실아미노, - NHSO2C1 -6 알킬, -SO2N(R9a)2, -SO2C1 -6 알킬, COR9b, 나이트로 및 시아노로 이루어진 군에서 독립적으로 선택되는 1 내지 3 개의 치환기로 필요에 따라 치환되는 페닐 또는 나프틸을 포함하고 ;
R9a는 독립적으로 H 또는 C1 -6 알킬이고;
R9b는 -OR9a 또는 -N(R9a)2이고;
(b)
Figure 112011069709164-pct00003
에 대하여, R10a 와 R10b는
(ⅰ) H, C1 -10 알킬, -(CH2)rNR9a 2, C1 -6 하이드록시알킬, -CH2SH, -(CH2)2S(O)pMe, -(CH2)3NHC(=NH)NH2, (1H-인돌-3-일)메틸, (1H-이미다졸-4
-일)메틸, -(CH2)mCOR9b, 아릴 및 아릴-C1 -3 알킬로 구성되어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, 상기 아릴 그룹은 하이드록실, C1 -10 알킬, C1 -6 알콕시, 할로겐, 나이트로, 및 시아노로 이루어진 군으로부터 필요에 따라 선택되는;
(ⅱ) R10a 는 H이고 R10b 및 R12 는 함께 인접한 N 및 C 원자를 포함하는 고리를 형성하는 (CH2)2- 4 이고;
(ⅲ) R10a 및 R10b 는 함께 고리를 형성하는 (CH2)n 이고;
(ⅳ) R10a 및 R10b 모두 C1 -6 알킬이고; 또는
(ⅴ) R10a은 H이고 R10b은 H, CH3, CH2CH3, CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, CH(CH3)CH2CH3, CH2Ph, CH2-인돌-3-일, -CH2CH2SCH3, CH2CO2H, CH2C(O)NH2, CH2CH2COOH, CH2CH2C(O)NH2, CH2CH2CH2CH2NH2-CH2CH2CH2NHC(NH)NH2, CH2-이미다졸-4-일, CH2OH, CH(OH)CH3, CH2((4'-OH)-Ph), CH2SH, 또는 저급 사이클로알킬이고;
p는 0 내지 2이고;
r은 1 내지 6이고;
n은 4 내지 5이고;
m은 0 내지 3이고;
R11은 H, C1 -10 알킬, 또는 저급 알킬로 치환되어 있는 C1 -10 알킬, 알콕시, 다이 (저급 알킬)-아미노 (di(lower alkyl)-amino), 플로로 (fluoro), C3 -10 사이클로알킬, 사이클로알킬 알킬 (cycloalkyl alkyl), 사이클로헤테로알킬 (cycloheteroalkyl), 페닐 (phenyl) 등의 아릴, 피리디닐 (pyridinyl) 등의 헤테로아릴, 치환된 아릴, 또는 치환된 헤테로아릴인데 여기서 상기 치환기는 C1 -5 알킬, 또는 저급 알킬로 치환된 C1 -5 알킬 , 알콕시, 디 (저급알킬)-아미노, 플로로, C3 -10 사이클로알킬 또는 사이클로알킬이고,
R12 는 H, C1 -3 알킬, 또는 R10a 이거나 또는, R10b 및 R12 는 함께 N 및 C 원자를 포함하는 고리를 형성하기 위한 (CH2)2- 4 이다.
(c) 지질(인지질 포함)이 부착된 O, 펩티드가 부착된 N 또는 O, 콜레스테롤이 부착된 O, 또는 피토스테롤 (phytosterol)이 부착된 O;
(d) R2 및 R3는 함께
Figure 112011069709164-pct00004
고리를 만들 수 있는데, 여기서 W2는 페닐 또는 모노사이클릭 헤테로아릴로 구성된 군에서 선택되고 필요에 따라 C1 -6 알킬, CF3, C2 -6 알케닐, C1 -6 알콕시, OR9c, CO2R9a, COR9a, 할로겐, C1 -6 할로알킬, -N(R9a)2, C1-6 아실아미노, CO2N(R9a)2, SR9a, -NHSO2C1 -6 알킬, -SO2N(R9a)2, -SO2C1 -6 알킬, COR9b, 및 시아노로 구성된 군에서 선택된 하나 내지 세 개의 치환기로 독립적으로 치환되고, 여기서 상기 모노사이클릭 헤테로아릴 및 치환된 모노사이클릭 헤테로아릴은 하기 조건 하에서, N, O 및 S로 구성되어진 군에서 독립적으로 선택되는 1-2 헤테로원자를 가진다:
a) 2 개의 헤테로 원자가 있고 하나가 O일 때, 나머지 하나는 O 또는 S가 될 수 없고,
b) 2 개의 헤테로 원자가 있고 하나가 S일 때, 나머지 하나는 O 또는 S가 될 수 없고;
R9a는 독립적으로 H 또는 C1 -6 알킬이고;
R9b는 -OR9a 또는 -N(R9a)2이고;
R9c는 H 또는 C1 -6 아실이고;
(e)
Figure 112011069709164-pct00005
인데 여기서, R13은 H, C1 -10 알킬, 저급 알킬로 필요에 따라 치환된 C1 -10 알킬, 알콕시, 다이 (저급알킬)-아미노 (di(lower alkyl)-amino), 플로로 (fluoro), C3 -10 사이클로알킬, 사이클로알킬 알킬 (cycloalkyl alkyl), 사이클로헤테로알킬, 페닐 등의 아릴, 피리디닐 등의 페테로아릴, 치환된 아릴, 또는 치환된 헤테로 아릴이고; 상기 치환기는 C1 -5 알킬, 또는 저급 알킬이 치환된 C1 -5 알킬, 알콕시, 다이 (저급알킬)-아미노 (di(lower alkyl)-amino), 플로로 (fluoro), C3 -10 사이클로알킬, 또는 사이클로알킬이고;
f) R2 및 R3는 함께
Figure 112011069709164-pct00006
고리를 형성할 수 있는데, 여기서 R14는 (i) H, C1 -10 알킬, -(CH2)rNR2 9a, C1 -6 하이드록시알킬, -CH2SH, -(CH2)2S(O)pMe, -(CH2)3NHC(=NH)NH2, (1H-인돌-3-일)메틸, (1H-이미다졸-4-일)메틸, -(CH2)mCOR9b, 아릴 및 아릴-C1 - 3알킬 또는 헤테로아릴 및 헤테로아릴-C1 -3 알킬로 구성되어진 군에서 독립적으로 선택되는데, 상기 아릴 및 헤테로아릴 그룹은 필요에 따라 하이드록실, C1 -10 알킬, C1 -6 알콕시, 할로겐, 나이트로, 및 시아노로 구성된 군에서 선택되는 그룹으로 치환되고; ( ii ) R14는 H, CH3, CH2CH3, CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, CH(CH3)CH2CH3, CH2Ph, CH2-인돌-3-일, -CH2CH2SCH3, CH2CO2H, CH2C(O)NH2, CH2CH2COOH, CH2CH2C(O)NH2, CH2CH2CH2CH2NH2, CH2CH2CH2NHC(NH)NH2, CH2-이미다졸-4-일, CH2OH, CH(OH)CH3, CH2((4'-OH)-Ph), CH2SH, 또는 저급 사이클로알킬이고;
p는 0 내지 2이고;
r은 1 내지 6이고;
m은 0 내지 3이고
Q1 은 NR9a, O, 또는 S이며;
Q2는 C1 -10 알킬, C1 -6 하이드록시알킬, 아릴 및 아릴-C1 -3 알킬, 헤테로아릴 및 헤테로아릴-C1 -3 알킬이고, 상기 아릴 및 헤테로아릴 그룹은 필요에 따라 하이드록실, C1-10 알킬, C1 -6 알콕시, 플로로 및 클로로로 구성된 군에서 선택된 그룹으로 치환되고;
R11은 H, C1 -10 알킬, 저급 알킬, 알콕시, 다이 (저급알킬)-아미노 (di(lower alkyl)-amino), 플로로 (fluoro), C3 -10 사이클로알킬, 사이클로알킬 알킬 (cycloalkyl alkyl), 사이클로헤테로알킬, 페닐 등의 아릴, 피리디닐 등의 페테로아릴, 치환된 아릴, 또는 치환된 헤테로 아릴로 필요에 따라 치환된 C1 -10 alkyl이고; 여기에서 상기 치환기는 C1 -5 알킬, 또는 저급 알킬이 치환된 C1 -5 알킬, 알콕시, 다이 (저급알킬)-아미노 (di(lower alkyl)-amino), 플로로 (fluoro), C3 -10 사이클로알킬, 또는 사이클로알킬이고;
R12는 H, 또는 C1 -3 알킬이거나, 또는 R14b 와 R12 는 인접한 N 및 C원자를 포함하는 고리를 형성하기 위한 (CH2)2- 4 이고;
ⅹ) 다른 당 (Sugar)은 일반적으로 화학식 (Ⅲ)의 구성을 가지는 변형된 리보오스이고:
Figure 112011069709164-pct00007

여기에 있어서:
A, R2, R3, Y, Z, R4' R5', R6', 및 R7'는 상기 정의한 바와 같고;
화학식 (Ⅲ)의 당을 가지는 화학식 (Ⅰ)에 있어서, A가 O 또는 S일 때, R7'은 OH, SH, NH2, NHOH, NHNH2, OR, SR, SSR, NHR, 및 NR2가 될 수 없고,
R은 독립적으로 저급 알킬 (C1-C6 알킬), 저급 알케닐 (lower alkenyl), 저급 알키닐 (lower alkynyl), 저급 사이클로알킬 (C3-C6 cycloalkyl) 아릴, 알킬아릴, 또는 아릴알킬이고, 여기서, 상기 그룹은 상기 정의된 하나 이상의 치환기, 예를 들면, 하이드록시알킬, 아미노알킬, 및 알콕시알킬로 치환될 수 있다.
ⅹⅰ) 다른 당은 화학식 (Ⅳ), (Ⅴ), (Ⅵ) 및 (Ⅶ)의 다이옥소레인 (dioxolane) 또는 옥사싸이오레인 (oxathiolane)이다.
Figure 112011069709164-pct00008
(Ⅳ) (Ⅴ) (Ⅵ) (Ⅶ)
여기에 있어서:
V는 S 또는 Se이고,
R2, R3, Y, 및 Z는 상기 정의한 바와 같다.
ⅹⅱ) 다른 당은 화학식 (Ⅷ)을 가지는 포스포닐메톡시알킬 (phosphonylmethoxyalkyl)이다.
Figure 112011069709164-pct00009

여기에 있어서:
R2, R3 및 Y는 상기 정의한 바와 같고;
R15는 알킬 (C1-C6을 포함하지만 이에 제한되지 않음),알케닐 (C2-C6를 포함하지만 이에 제한되지 않음), 및 알키닐 (C2-C6를 포함하지만 이에 제한되지 않음), 사이클로알킬 (C3-C8를 포함하지만 이에 제한되지 않는), 아릴 (C6-C10를 포함하지만 이에 제한되지 않는), 헤테로아릴 (C6-C10를 포함하지만 이에 제한되지 않음), 아릴알킬, 및 알킬아릴로 구성된 군으로부터 선택된다;
ⅹⅲ) 다른 당은 일반적으로 화학식 (Ⅸ), 또는 화학식 (Ⅹ)를 가진다.
Figure 112011069709164-pct00010
여기에 있어서:
R2, R3, 및 Y는 상기에서 정의한 바와 같고;
Y2 는 O, S, Se NR이고;
R은 독립적으로 저급 알킬 (C1-C6 알킬), 저급 알케닐, 저급 알키닐, 저급 사이클로알킬 (C3-C6 사이클로알킬) 아릴, 알킬아릴, 또는 아릴알킬이고, 여기서 상기 그룹은 상기 정의된 하나 이상의 치환기, 예를 들면, 하이드록시알킬, 아미노알킬 및 알콕시알킬로 치환될 수 있고;
R16 및 R17 는 H, CH3, CH2OR18로서 정의되고;
R18 는 H 또는 저급 아실 (C1-C6)이다.
ⅹⅳ) 다른 당은 일반적으로 화학식 (ⅩⅠ)을 가지는 변형된 리보오스이다.
Figure 112011069709164-pct00011
여기에 있어서:
R2, R3, 및 Y는 상기 정의된 바와 같고;
R4' R5, R5', R6, 및 R6'는 상기 정의된 바와 같고;
R19는 H, F, Cl, Br, I, N3, C(O)OH, CN, C(O)NH2, C(S)NH2, C(O)OR, R이다.
R은 독립적으로 저급 알킬 (C1-C6 알킬), 저급 알케닐, 저급 알키닐, 저급 사이클로알킬 (C3-C6) 아릴, 알킬아릴, 또는 아릴알킬이고, 여기에 있어서 상기 그룹은 상기 정의된 하나 이상의 치환기, 예를 들면, 하이드록시알킬, 아미노알킬 및 알콕시알킬로 치환될 수 있다.
본 발명의 일 구체예에서, 활성 화합물은 H, F, Cl, Br, I, OH, SH, NH2, NHOH, NHNH2, C(O)OH, CN, C(O)NH2, C(S)NH2, C(O)OR, R, OR, SR, SSR, NHR, 및 NR2;로 구성된 군에서 선택된 R6'을 가지는 화학식 (Ⅰ)이다.
본 발명의 다른 구체예에서, 활성 화합물은 화학식 (XII), (XIII), 또는 (XIV)이다:
Figure 112011069709164-pct00012
또는 상기 화학식들의 약학적으로 허용되는 염 또는 프로드럭에 있어서:
R4' R5, R5', R6, Y, A, 및 R7' 는 상기 정의된 바와 같고;
R20는 저급 알킬 (C1-C6 알킬)이고;
M은 O, S, 또는 NR이고;
R은 저급 알킬 (C1-C6 알킬), 저급 알케닐, 저급 알키닐, 저급 사이클로알킬 (C3-C6 사이클로알킬) 아릴, 알킬아릴, 또는 아릴알킬이고, 여기에 있어서 상기 그룹은 상기 정의된 하나 이상의 치환기, 예를 들면, 하이드록시알킬, 아미노알킬 및 알콕시알킬로 치환될 수 있고;
염기는 하기로부터 선택될 수 있다:
Figure 112011069709164-pct00013

본 발명의 다른 구체예에서, 활성 화합물은 화학식 (XV) 또는 (XVI)이다:
Figure 112011069709164-pct00014
( XV ) ( XVI )
또는 상기 화학식들의 약학적으로 허용되는 염 또는 프로드럭에 있어서:
R4', R5, R5', R6, Y, A, R7', R20 및 염기는 상기 정의된 바와 같고;
R21은 H, C1 -10 알킬, 저급 알킬, 알콕시, 다이 (저급알킬)-아미노 (di(lower alkyl)-amino), 플로로 (fluoro), C3 -10 사이클로알킬, 사이클로알킬 알킬 (cycloalkyl alkyl), 사이클로헤테로알킬, 페닐 등의 아릴, 피리디닐 등의 헤테로아릴, 치환된 아릴,또는 치환된 헤테로 아릴로 필요에 따라 치환된 C1 -10 알킬이고; 여기에서 상기 치환기는 C1 -5 알킬, 또는 저급 알킬이 치환된 C1 -5 알킬, 알콕시, 다이 (저급알킬)-아미노 (di(lower alkyl)-amino), 플로로 (fluoro), C3 -10 사이클로알킬, 또는 사이클로알킬이고;
R22는 H, CH3, CH2CH3, CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, CH(CH3)CH2CH3, CH2Ph, CH2-인돌-3-일, -CH2CH2SCH3, CH2CO2H, CH2C(O)NH2, CH2CH2COOH, CH2CH2C(O)NH2, CH2CH2CH2CH2NH2, CH2CH2CH2NHC(NH)NH2, CH2-이미다졸-4-일, CH2OH, CH(OH)CH3, CH2((4'-OH)-Ph), CH2SH, 또는 저급 사이클로알킬이다;
본 발명의 다른 구체예에서, 활성 화합물은 화학식 (XVⅡ) 또는 (XVⅢ)이다:
Figure 112011069709164-pct00015
또는 상기 화학식들의 약학적으로 허용되는 염 또는 프로드럭에 있어서:
R4' R5, R5', R6, Y, M, R7', R20, R21, R22, 및 염기는 상기 정의한 바와 같고;
상기 기술한 화합물은 β-L- 또는 β-D- 배열 또는 그것들의 라세믹 혼합물을 포함하는 혼합물의 형태를 가질 수 있다.
Ⅲ. 입체이성질체 및 동질이상
본 발명에서 기술되어진 상기 화합물은 비대칭 중심을 가질 수 있고, 본 발명에서 포함되는 모든 이성질체 형태로서, 라세미체, 라세믹 혼합물, 각각의 부분입체이성질체 및 입체이성질체가 발견될 수 있다. 키랄 중심을 가지는 본 발명의 화합물은 광학 활성 및 라세믹 형태로 존재할 수 있고 분리되어질 수 있다. 몇몇 화합물은 동질이상 (polymorphism)으로 존재할 수 있다. 본 발명은 명세서에서 기술되어지는 유용한 성질을 가지는 본 발명의 화합물의 라세믹, 광학-활성 동질이상, 또는 입체이성질체 형태, 또는 그것들의 혼합물을 포함한다. 상기 광학 활성 형태는, 예를 들면, 재결정 기술, 광학-활성 시작 물질로부터의 합성, 키랄 합성 또는 키랄 정지상을 사용하는 크로마토그래피 분리 또는 효소 분리 (enzymatic resolution)에 의하여 준비될 수 있다. 개별적인 뉴클레오시드를 분리하고 나서, 본 발명에서 기술되어진 화합물을 형성하기 위해 상기 뉴클레오시드를 합성하거나, 또는 상기 뉴클레오티드 자체를 분리하는 것 역시 가능하다.
상기 화합물의 광학적 활성 형태는 재결정 기술, 광학-활성 시작 물질로부터의 합성, 키랄 합성 또는 키랄 정지상을 사용하는 크로마토그래피 분리를 포함하지만 이에 제한되지 않는, 당업계에서 알려진 어떠한 방법을 사용하여도 얻어질 수 있다.
광학 활성 물질을 얻는 방법의 예는 최소한 다음 사항을 포함한다.
ⅰ) 결정의 물리적 분리 : 각 거울상 이성질체의 육안으로 보이는 결정 (macroscopic crystals)을 수동으로 분리하는 기술. 상기 기술은 별개의 거울상 이성질체의 결정이 존재한다면, 예를 들어 물질이 복합체이거나, 결정이 시각적으로 구분되는 경우, 이용될 수 있다;
ⅱ) 동시 결정화 ( simultaneous crystallization ) : 각 거울상이성질체가 상기 라세미체의 용액으로부터 개별적으로 결정화되는 기술로서, 마지막 결정이 고체 상태에서 복합체로 존재하는 경우에만 가능하다;
ⅲ) 효소 분해 ( enzymatic resolutions ) : 효소의 존재 하에서 거울상 이성질체의 반응 속도가 다른 점을 이용하여 라세미체의 부분적 또는 완전한 분리를 가져오는 방법;
iv ) 효소 비대칭 합성 ( enzymatic asymmetric synthesis ) : 거울상이성질적으로 순수 또는 목적하는 거울상이성질체를 얻기 위하여 최소한 한 단계의 효소 반응을 사용하는 반응을 가지는 합성 기술;
ⅴ) 화학적 비대칭 합성 ( chemical asymmetric synthesis ) : 목적하는 거울상 이성질체가 비대칭 (예. 키랄성) 생산물을 생산하는 조건 하, 키랄 촉매 또는 키랄 보조제 (chiral auxiliaries)를 사용하여 얻어지는, 키랄 비키랄 전구물질로부터 합성되어지는 합성 방법;
ⅵ) 부분입체이성질체 분리 ( diastereomer separations ) : 라세믹 화합물과, 각각의 거울상 이성질체를 부분입체이성질체로 바꾸는, 거울상이성질적으로 순수한 시약 (키랄 보조제)이 반응하는 기술. 결과적으로 얻어진 부분입체이성질체는 그들의 조금 더 명확한 구조적 차이 및 목적하는 거울상이성질체를 얻기 위하여 나중에 제거되는 키랄 보조제에 의하여 크로마토그래피 또는 결정화됨으로써 분리된다;
ⅶ) 1차-2차-순 비대칭 변형 ( first - and second - order asymmetric transformations) : 라세미체로부터 부분입체이성질체가 평형을 이루어 목적하는 거울상이성질체로부터의 부분입체이성질체가 용액에서 우세하거나, 목적하는 거울상이성질체로부터 부분입체이성질체의 우세한 결정화가 평형을 방해하여 결국에는 모든 물질이 목적하는 거울상이성질체로부터 결정질 부분입체이성질체로 전환되는 기술. 목적하는 거울상이성질체는 그 후에 부분입체이성질체로부터 분리된다;
ⅷ) 키네틱 분해 ( kinetic resolutions ) : 이 기술은 키네틱 조건 하에서 거울상이성질체와가 키랄, 비-라세믹 시약 또는 촉매와 동등하지 않은 반응 속도를 가지는 점을 이용하여 라세미체 (또는 부분적으로 분해된 화합물의 더 나은 분해능을 가지는 라세미체)의 완전한 부분적 또는 완전한 분해를 가져오는 것을 의미한다;
ⅸ) 비- 라세믹 전구물질로부터 거울상이성질 특이적 합성 ( enantio specific synthesis from non - racemic precursors ) : 목적하는 거울상이성질체가 비-키랄 시작물질로부터 얻어지고 입체화학적 온전함이 없거나 전 반응 과정에 걸쳐서 아주 적게 얻어지는 합성 기술;
ⅹ) 키랄 액체크로마토그래피 ( chiral liquid chromatography ) : 라세미체의 거울상이성질체가 정지상 (HPLC를 포함하지만 이에 제한되지 않는)에서의 다른 반응을 보이는 점을 이용하여 액체이동상으로 분리되는 기술. 상기 정지상은 키랄 물질로 만들어질 수 있고 이동상은 다른 반응을 유도하기 위하여 추가적인 키랄 물질을 포함할 수 있다;
ⅹⅰ) 키랄 가스 크로마토그래피 ( chiral gas chromatography ) : 고정된 비-라세믹 키랄 흡착상을 포함하는 컬럼을 가지는 기체 이동상에서의 다른 반응을 이용하여 라세미체가 휘발되고 거울상이성질체가 분리되는 기술;
ⅹⅱ) 키랄용매와 함께 추출 ( extraction with chiral solvents ) : 하나의 거울상이성질체가 특별한 키랄 용매로 우선적으로 용해됨에 의해 거울상 이성질체가 분리되는 기술;
ⅹⅲ) 키랄 막을 가로지르는 운반 ( transport across chiral membranes ): 라세미체가 얇은 막 장벽과 접촉하여 존재하는 기술이다. 상기 장벽은 일반적으로 하나의 층이 라세미체를 포함하는 두 개의 혼합성 액체로 분리되고, 농도 또는 압력 구배 같은 구동력이 막 장벽을 가로지르는 우선 운반을 초래한다. 분리는 라세미체에서 오직 하나의 거울상 이성질체만 통과를 허락하는 막의 비-라세믹 키랄 성질의 결과로서 일어난다.
연속 모사 이동층 크로마토그래피 (simulated moving bed chromatography)를 포함하지만 이에 제한되지 않는, 키랄 크로마토그래피는 하나의 구체예에서 사용되어진다. 매우 다양한 종류의 키랄 정지상을 상업적으로 구매할 수 있다.
IV . 뉴클레오티드 염 또는 프로드럭 제제 ( Nucleotide Salt or Prodrug Formulations )
화합물이 안정하고 독성이 없는 산 또는 염기 염을 형성하기 위해서 충분히 염기성이거나 산성인 경우에 있어서, 약학적으로 허용가능한 염으로서 상기 화합물의 투여는 적절할 것이다. 약학적으로 허용가능한 염의 예는 산과 함께 생성되는 유기산 부가 염 (organic acid addition salts)이고, 이것은 생리적으로 허용가능한 음이온, 예를 들면, 토실레이트 (tosylate), 메탄설포네이트 (methanesulfonate), 아세테이트 (acetate), 시트레이트 (citrate), 말로네이트 (malonate), 타르타레이트 (tartarate), 숙시네이트 (succinate), 벤조에이트 (benzoate), 아스코베이트 (ascorbate), α-케토글루타레이트 (α-ketoglutarate) 및 α-글리세로포스페이트 (α- glycerophosphate)를 형성한다. 아울러, sulfate, nitrate, bicarbonate and carbonate salts를 포함하지만 이에 제한되지 않는 적절한 무기 염 역시 생성될 수 있다.
약학적으로 허용가능한 염은 당업계에서 알려진 통상적인 방법, 예를 들면 아민 같은 염기 화합물과 적절한 산과의 반응에 의하여, 생리학적으로 허용되는 염을 제공함으로써 얻어질 수 있다.
카복실산의 알칼리 금속 (예. 소듐, 포타슘 또는 리튬) 또는 알칼리 토금속 (예. 칼슘) 염 또한 만들어질 수 있다.
본 발명에서 기술하는 상기 뉴클레오티드 프로드럭은 활성,생물이용가능성, 안정성 또는 뉴클레오티드 모노포스페이트의 성질을 바꾸는 다른 것들을 높이기 위하여 추가적으로 투여될 수 있다.
다수의 뉴클레오티드 프로드럭 리간드가 알려져 있다. 일반적으로 알킬화, 아실화 또는, 상기의 모노포스페이트 또는 뉴클레오시드의 다른 유사체의 친유성 변형은 뉴클레오티드의 안정성을 증가시킬 것이다.
모노포스페이트 잔기상에서 하나 이상의 수소로 대안될 수 있는 치환 그룹의 예로는 알킬 (alkyl), 아릴 (aryl), 스테로이드 (steroids), 카보하이드레이트 (carbohydrates), 당 (sugars)을 포함하지만 이에 제한되지 않으며, 1,2-다이아실글리세롤 (1,2-diacylglycerol) 및 알콜 (alcohols)가 있다. 많은 것이 R. Jones & N. Bischofberger, Antiviral Research, 1995, 27, 1-17 and SJ. Hecker & M.D. Erion, /. Med. Chem., 2008, 57, 2328-2345에서 기술되어 있다. 개시된 뉴클레오티드가 조합된 어떤 것도 원하는 결과를 얻기 위하여 사용될 수 있다.
상기 활성 뉴클레오티드는 또한 하기 제시된 참고 문헌에 개시된 5'-포스포에터 리피드 (5'-phosphoether lipid)로서 제공될 수 있으며, 참고문헌은 다음과 같다: Kucera, L.S., N. Iyer, E. Leake, A. Raben, Modest E.K., D.L.W., and C. Piantadosi, "Novel membrane-interactive ether lipid analogs that inhibit infectious HIV-I production and induce defective virus formation," AIDS Res. Hum. Retroviruses, 1990, 6, 491-501; Piantadosi, C, J. Marasco CJ. , S. L. Morris-Natschke, K.L. Meyer, F. Gumus, J.R. Surles, K.S. Ishaq, L.S. Kucera, N. Iyer, CA. Wallen, S. Piantadosi, and EJ. Modest, "Synthesis and evaluation of novel ether lipid nucleoside conjugates for anti-HIV activity," /. Med. Chem., 1991, 34, 1408-14; Hosteller, K.Y., D.D. Richman, D.A. Carson, L.M. Stuhmiller, G.M. T. van Wijk, and H. van den Bosch, "Greatly enhanced inhibition of human immunodeficiency virus type 1 replication in CEM and HT4-6C cells by 3'-deoxythymidine diphosphate dimyristoylglycerol, a lipid prodrug of 3,-deoxythymidine," Antimicrob. Agents Chemother., 1992, 36, 2025-29; Hostetler, K.Y., L.M. Stuhmiller, H. B. Lenting, H. van den Bosch, and D.D. Richman, "Synthesis and antiretroviral activity of phospholipid analogs of azidothymidine and other antiviral nucleosides." J. Biol. Chem., 1990, 265, 61127.
뉴클레오시드로 공유 결합적으로 함입될 수 있는, 바람직하게는 본 발명에서 기술된 뉴클레오티드의 R2 및/또는 R3위치에서, 적절한 친유성 치환기 또는 친유성 물질을 개시하는 제한되지 않는 예는 US Pat. Nos. 5,149,794 (Yatvin et al); 5,194,654 (Hostetler et al), 5,223,263 (Hostetler et al); 5,256,641 (Yatvin et al); 5,411,947 (Hostetler et al); 5,463,092 (Hostetler et al); 5,543,389 (Yatvin et al); 5,543,390 (Yatvin et al); 5,543,391 (Yatvin et al); and 5,554,728 (Basava et al)을 포함하고, 상기 모든 문헌은 참고문헌으로 포함된다. 본 발명의 뉴클레오시드에 붙을 수 있는 친유성 치환기 또는 친유성 물질을 개시하는 외국 특허출원은 WO 89/02733, WO 90/00555, WO 91/16920, WO 91/18914, WO 93/00910, WO 94/26273, WO 96/15132, EP 0 350 287, EP 93917054.4, 및 WO 91/19721를 포함한다.
Ⅴ. 치료 방법
.HIV-I, HIV-2, HBV, HCV, 노로바이러스, 사포로바이러스, HSV-I, HSV-2, 뎅기열 바이러스, 황열 또는 그것들의 유전자 조각에 의하여 감염된, 인간을 포함하지만 이에 제한되지 않는, 숙주는 약학적으로 허용되는 담체 또는 담체의 존재 하에서, 상기 활성 화합물, 약학적으로 허용되는 프로드럭 또는 그것을의 염을 환자에게 유효량 투여함으로써 치료될 수 있다. 상기 활성 물질은 액체 또는 고체 형태로 적절한 어떠한 경로, 예를 들면, 경구, 비경구, 정맥 주사, 피부층내 주사, 피하 주사, 또는 국소성으로 투입되는 것이 가능하다.
아울러 상기 화합물은 암을 치료하는 데 이용될 수 있다. 본 발명의 방법에 따라, 본 발명에 기재된 상기 화합물, 및 상기 화합물의 약학적으로 허용가능한 염 및 프로드럭로 치료할 수 있는 환자는, 예를 들면, 폐암, 뼈에 생기는 암, 췌장암, 피부암, 두경부암, 피부 또는 안구 흑색증, 자궁암, 난소암, 직장암, 항문암, 위암, 결장암, 유방암, 부인과 종양 (예. 자궁의 육종, 나팔관의 암종, 자궁내막 암종, 질 또는 외음부 암종), 호지킨 병, 식도암, 소장암, 내분비 시스템의 암 (예. 갑상선암, 부갑상선샘암, 부신암), 부드러운 조직의 암종, 요도암, 음경암, 전립선암, 만성 또는 급성 백혈병, 유년기의 단단한 고형 종양, 림프성 림프종, 방광암, 신장 또는 수뇨관암 (예. 신장세포 암중, 신장 골반의 암종) 또는 중추 신경계 암 (예. 1차 CNS 림프종, 척추암, 뇌간 교종 또는 뇌하수체 선종)환자이다.
아울러 본 발명은 환자의 비정상적인 세포 증식을 억제하기 위한 방법 및 환자의 비정상적인 세포 증식을 억제하기 위하여 본 발명에서 기재된 화합물의 상당량, 또는 그들의 약학적으로 허용가능한 염 또는 프로드럭의 상당량 및 신생혈관형성억제 물질 (anti-angiogenesis agents), 신호 전달 저해제 (signal transduction inhibitors)및 증식 억제 물질 (antiproliferative agents)로 구성된 약학적 조성물에 관한 것이다.
MMP-2 (matrix-metalloprotienase 2) 저해제, MMP-9 (matrix-metalloprotienase 9) 저해제, 및 COX-II (cyclooxygenase II) 저해제 같은, 신생혈관형성억제 물질은 화학식 (Ⅰ) 의 화합물 및 본 발명에서 기재된 약학적 조성물의 결합으로 사용될 수 있다. 유용한 COX-II 저해제의 예로서는 CELEBREX. TM. (alecoxib), valdecoxib, 및 rofecoxib가 있다. 유용한 매트릭스 메탈로프로테이나제 저해제 (matrix metalloproteinase inhibitors)의 예는 WO 96/33172 (1996.10.24 공개), WO 96/27583 (1996.3.7 공개), 유럽 특허 출원 No. 97304971.1 (1997.7.8 출원), 유럽 특허 출원 No. 99308617.2 (1999.10.29 출원), WO 98/07697 (1998.2.26 공개), WO 98/03516 (1998.1.29 공개), WO 98/34918 (1998.8.13 공개), WO 98/34915 (1998.8.13 공개), WO 98/33768 (1998.8.6 공개), WO 98/30566 (1998.7.16 공개), 유럽 특허 공개 606,046 (1994.7.13 공개), 유럽 특허 공개 931,788 (1999.7.28 공개), WO 90/05719 (1990.5.31 공개), WO 99/52910 (1999.10.21 공개), WO 99/52889 (1999.10.21 공개), WO 99/29667 (1999.6.17 공개), PCT 국제출원 No. PCT/IB98/01113 (1998.7.21 출원), 유럽 특허 출원 No. 99302232.1 (1999.3.25 출원), 영국 특허 출원번호 9912961.1 (1999.6.3 출원), 미국 가출원 No. 60/148,464 (1999.8.12 출원), 미국 특허 No. 5,863,949 (1999.1.26 등록), 미국 특허 No. 5,861,510 (1999.1.19 등록), 및 유럽 특허 공개 780,386 (1997.6.25 공개)에 의하여 기술되고, 여기에서 언급한 모든 항목은 참고문헌으로 포함된다. 바람직한 MMP 저해제는 관절통을 보이지 않는다. 보다 바람직한 MMP 저해제 다른 매트릭스 메탈로프로테이나제 (예. MMP-1, MMP-3, MMP-4, MMP-5, MMP-6, MMP-7, MMP-8, MMP-IO, MMP-I l, MMP- 12, 및 MMP-13) 와 연관된 MMP-2 및/또는 MMP-9 를 필요에 따라 저해하는 것들이다.
본 발명에서 기재된 상기 화합물은 또한 EGFR 항체, EGF 항체 및 EGFR 저해제 분자 같은 EGFR (상피세포성장인자수용체, epidermal growth factor receptor) 반응을 저해할 수 있는 물질; VEGF 수용체 및 VEGF를 저해할 수 있는 분자 같은 VEGF (혈관내피세포증식인자, vascular endothelial growth factor) 저해제; 및 유기 분자 또는 erbB2 수용체에 결합하는 항체로서 예를 들면 HERCEPTIN™ (Genentech, Inc. of South San Francisco, Calif., USA) 같은 erbB2 수용체 저해제처럼 신호 전달 저해제 (signal transduction inhibitors)와 함께 사용될 수 있다.
EGFR 저해제는 예를 들면, WO 95/19970 (1995.7.27 공개), WO 98/14451 (1998.4.9 공개), WO 98/02434 (1998.1.22 공개), 미국 특허 No. 5,747,498 (1998,5,5 등록)에서 기술되어 있고, 그러한 물질은 본 발명에서 기재된 것으로 사용될 수 있다. EGFR 저해 물질은 모노클론항체 (monoclonal antibodies) C225 및 anti-EGFR 22Mab (ImClone Systems Incorporated of New York, N.Y., USA), ABX-EGF (Abgenix/Cell Genesys), EMD-7200 (Merck KgaA), EMD-5590 (Merck KgaA), MDX-447/H-477 (Medarex Inc. of Annandale, NJ. , USA and Merck KgaA), and the compounds ZD- 1834, ZD-1838 and ZD-1839 (AstraZeneca), PKI- 166 (Novartis), PKI-166/CGP- 75166 (Novartis), PTK 787 (Novartis), CP 701 (Cephalon), leflunomide (Pharmacia/Sugen), CI-1033 (Warner Lambert Parke Davis), CI-1033/PD 183,805 (Warner Lambert Parke Davis), CL-387,785 (Wyeth-Ayerst), BBR-1611 (Boehringer Mannheim GmbH/Roche), Naamidine A (Bristol Myers Squibb), RC-3940-II (Pharmacia), BIBX-1382 (Boehringer Ingelheim), OLX-103 (Merck & Co. of Whitehouse Station, N.J., USA), VRCTC-310 (Ventech Research), EGF fusion toxin (Seragen Inc. of Hopkinton, Mass.), DAB-389 (Seragen/Lilgand), ZM-252808 (Imperical Cancer Research Fund), RG-50864 (INSERM), LFM-A12 (Parker Hughes Cancer Center), WHI-P97 (Parker Hughes Cancer Center), GW-282974 (Glaxo), KT- 8391 (Kyowa Hakko) 및 EGFR Vaccine (York Medical/Centro de Immunologia Molecular (CIM))를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 상기 및 다른 EGFR 저해 물질은 본 발명에서 사용될 수 있다.
VEGF 저해제, 예를 들면 CP-547,632 (Pfizer Inc., N.Y.), AG-13736 (Agouron Pharmceuticals, Inc. a Pfizer Company), SU-5416 및 SU-6668 (Sugen Inc. of South San Francisco, Calif., USA), 및 SH-268 (Schering), 역시 본 발명의 화합물과 결합될 수 있다. VEGF 저해제는, 예를 들면, WO 99/24440 (1999.5.20 공개), PCT 국제출원 PCT/IB99/00797 (1999.3.3 출원), WO 95/21613 (1995.9.17 ㄱ공개), WO 99/61422 (1999.12.2 공개), 미국 특허 No. 5,834,504 (1998.11.10 등록), WO 98/50356 (1998. 11. 12 공개), 미국 특허 No. 5,883,113 (1999.3.16 등록), 미국 특허 No. 5,886,020 (1999.3.23 등록), 미국 특허 No. 5,792,783 (1998.8.11 등록), WO 99/10349 (1999.3.4 공개), WO 97/32856 (1997.9.12 공개), WO 97/22596 (1997.1.26 공개), WO 98/54093 (1998.12.3 공개), WO 98/02438 (1998.1.22 공개), WO 99/16755 (1999. 4.8 공개), and WO 98/02437 (1998.1.22 공개)에서 개시되어 있고, 여기 기재된 모든 문헌이 참고문헌으로서 제시되어 있다. 본 발명에서 유용한 몇몇 특별한 다른 VEGF 저해제는 IM862 (Cytran Inc. of Kirkland, Wash., USA); 캘리포니아주의 남샌프란시스코에 있는 Genentech 사의 항-VEGF 모로클로날 항체; 및 리보자임 (ribozyme)으로부터 유래한 합성 리보자임인angiozyme (Boulder, Colo.), 및 Chiron (Emeryville, Calif.)이다. 상기 및 다른 VEGF 저해 물질은 본 발명에서 사용될 수 있다.
CP-358,774 (OSI-774) (Tarceva) (OSI Pharmaceuticals, Inc.), GW-282974 (Glaxo Wellcome pic), 및 모노클로날 항체 AR-209 (Aronex Pharmaceuticals Inc. of The Woodlands, Tex., USA) 및 2B- 1 (Chiron)같은, ErbB2 수용체 저해제는 본 발명의 화합물과 결합될 수 있으며, 예를 들면 WO 98/02434 (1998.1.22 공개), WO 99/35146 (1999.7.15 공개), WO 99/35132 (1999.7.15 공개), WO 98/02437 (1998.1.22 공개), WO 97/13760 (1997.4.17 공개), WO 95/19970 (1995.7.27 공개), 미국 특허 No. 5,587,458 (1996.12.24 등록), 및 U미국 특허 No. 5,877,305 (1999.3.2 등록)에서 이를 언급하고 있고, 여기 기재된 모든 문헌이 참고문헌으로서 제시되어 있다. 상기 PCT 출원, 미국 특허, 및 미국 가출원 명세서에 기재되어 있는 erbB2 수용체 저해제 화합물 및 물질뿐만 아니라, erbB2 수용체를 저해하는 다른 화합물 및 물질 역시 본 발명에 기재된 화합물과 함께 사용될 수 있다.
아울러 상기 화합물은 비정상적인 세포 증식 및 암을 치료하는 데 유용한 CTLA4 (cytotoxic lymphocite antigen 4) 항체 같은 항종양 면역 반응을 증강시킬 수 있는 물질 및 CTLA4 의 효능을 막을 수 있는 다른 물질; 및 다른 파르네실 단백질 트랜스퍼레이즈 억제제 같은 항증식 물질 및 이와 유사한 물질을 포함하지만 이에 제한되지 않는 다른 물질과 함께 사용될 수 있다.
본 발명에서 사용될 수 있는 특별한 CTLA4 항체는, 참고문헌으로서 전체가 포함된 미국 가출원 60/113,647 (1998.12.23 출원)에서 개시된 것들을 포함하지만, 다른 CTLA4 항체가 본 발명에서 사용 가능하다.
다른 COX-II 저해제, 다른 MMP 저해제, 다른 항-VEGF 항체 또는 혈관생성의 다른 효과인자의 저해제를 포함하지만 이에 제한되지 않는 다른 신생혈관형성억제 물질 또한 사용가능하다.
본 발명에서 개시된 상기 화합물 및 약학적 조성물은 노로 바이러스 뿐만 아니라 분류학상 칼리시바이러스 과 (Caliciviridae family)에 속하는 다른 바이러스에 의한 감염의 피료 또는 예방에 있어서도 사용될 수 있다.
노로바이러스 감염을 치료하기 위한 치료법의 용도에서, 상기 화합물 및/또는 조성물은 노로바이러스 감염으로 진단받은 환자들에게 치료적으로 도움을 얻기 위한 적당한 복용량으로 투여될 수 있다. "치료학적인 도움" 및 등가물에 의한다는 것은, 화합물의 투여가 시간이 지남에 EK라 환자에게 도움이 되는 효과를 이끌어낸다는 것을 의미한다. 예를 들면, 치료학적인 도움은 환자에게서 노로바이러스 역가 또는 바이러스 양이 감소하거나 증가를 멈출 때 얻어질 수 있다.
아울러 만약 화합물의 투여가 느리거나 노로바이러스 감염에 일반적으로 동반하게 되는 다양한 증상의 시작을 완전히 멈춘다면, 환자의 노로바이러스 역가 또는 바이러스 양과는 무관하게 치료학적 도움이 얻어질 수 있다. 본 발명에서 개시된 상기 화합물 및/또는 조성물은 또한 노로바이러스 감염의 위험이 있거나 노로바이러스에 노출된 환자에게 노로바이러스의 발달을 예방하기 위하여 투여될 수 있다.
예를 들면, 상기 화합물 및/또는 그것의 조성물은 노로바이러스에 노출되었을 것으로 예상되는 환자에게 투여될 수 있다.
노로바이러스 질병의 발생은 종종 바이러스가 한번 도입되었던 장기 요양시설, 병원, 감옥 및 여객선 같은 폐쇄되거나 반-폐쇄된 공동체에서 일어나고, 감염은 매우 빠르게 대면 전달 또는 오염된 음식에 의하여 퍼진다. 많은 노로바이러스 발생은 감염된 사람에 의해 다뤄졌던 음식으로 전파되었다. 즉, 이러한 시설에서 노로바이러스 또는 칼리시 바이러스 과의 바이러스에 접촉한 것 같은 개인에게 본 발명에서 기술한 상기 화합물의 예방용 복용을 제공하는 것은 유익하다.
Ⅵ. 조합 또는 대안 치료법
일 구체예에서, 본 발명의 상기 화합물은 유입 저해제 (entry inhibitors), 리버스 트랜스크립타제 저해제(reverse transcriptase inhibitors), 프로테아제 저해제 (protease inhibitors), 및 면역-기초 치료용 물질 (immune-based therapeutic agents.)로부터 선택된 최소한 하나의 다른 항바이러스 물질과 함께 사용될 수 있다.
예를 들면, HIV 또는 HBV 감염 예방 또는 치료용으로 사용되어질 때, 상기 활성 화합물 EH는 그것의 프로드럭 또는 약학적으로 허용가능한 염은 항-HIV, 항-HBV, 또는 항-HCV 물질과 같은 상기 화학식을 포함하지만 이에 제한되지 않는 다른 항바이러스 물질과 함께 조합하거나 또는 대안적으로 투여되어질 수 있다.
일반적으로, 조합 치료법에서, 둘 이상 물질의 효과적인 복용은 함께 투여되는 것인 반면, 대안 치료법에 있어서, 각각의 물질의 효과적인 복용은 연속적으로 투여되는 것이다. 상기 복용은 약물의 흡수, 불활성화 및 배설 속도에 의존할 뿐만 아니라, 당업계에 알려진 다른 요인들에도 의존한다. 복용값은 또한 완화되는 상태의 혹독함에 따라 다양할 것임에 주목한다. 더욱이 어떤 특별한 사안에 있어서 특별한 복용 요법 및 스케쥴은 개인적 필요 및 투여하거나 상기 조성물의 투여를 감독하는 사람의 전문적인 지식에 따라서 시간이 조절되는 것으로 이해되어진다.
본 발명에서 개시되어진 상기 화합물과의 조합으로 사용되는 항바이러스 물질의 제한되지 않는 예는 하기 표에서 개시되어 있다.
B형 간염 치료법
Figure 112011069709164-pct00016
Figure 112011069709164-pct00017
Figure 112011069709164-pct00018
HIV 치료법 : 프로테아제 저해제 ( PIs )
Figure 112011069709164-pct00019
Figure 112011069709164-pct00020
HIV 치료법 : 뉴클레오시드/뉴클레오티드 역전사효소 저해제 ( NRTIs )
Figure 112011069709164-pct00021
Figure 112011069709164-pct00022
Figure 112011069709164-pct00023
HIV 치료법 : 비-뉴클레오시드/뉴클레오티드 역전사효소 저해제 ( NNRTIs )
Figure 112011069709164-pct00024
HIV 치료법 : 다른 종류의 약물
Figure 112011069709164-pct00025

세포 저해제
Figure 112011069709164-pct00026

함입 ( Entry ) 저해제 (융합 저해제 포함)
Figure 112011069709164-pct00027
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HIV 치료법 : 면역-기초 치료법
Figure 112011069709164-pct00029

최근의 의학 발달에서 항-C형 간염 바이러스 화합물에 대한 표
Figure 112011069709164-pct00030
Figure 112011069709164-pct00031
Figure 112011069709164-pct00032

Ⅶ. 증식 조건 치료용 결합 치료법
다른 구체예에서, 상기 화합물은, 항증식성 물질로서 사용되어질 때, 상기 치료의 효율성을 높이는 다른 물질, 엽산길항제(antifolate), (5-플로로우라실 (5-fluorouracil)을 포함하는) 5-플로로피리미딘 (5- fluoropyrimidine) , β-L-1,3-디옥솔아닐 사이티딘 (β-L-1,3- dioxolanyl cytidine) 또는 β-L-1,3-디옥소날 (β-L-l,3-dioxolanyl) 같은 5-fluorocytidine사이티딘 유사체 (a cytidine analogue),(퓨린 안티메타볼라이트 (purine antimetabolites), 사이타라빈 (cytarabine), 퓨다라빈 (fudarabine), 플록수리딘 (floxuridine), 6-머캅토퓨린 (6-mercaptopurine), 메토트레세이트 (methotrexate), 및 6-싸이오구아닌 (6-thioguanine)을 포함하는) 안티메타볼라이트 (antimetabolites), 하이드록시우레아 (hydroxyurea), (CPT-11, 에토포사이드 (VP-21) (Etoposide (VP-21))을 포함하는) 미토틱 저해제 (mitotic inhibitors) , 탁솔 (taxol), 및 빈크리스틴 (vincristine) 및 빈블라스틴 (vinblastine) 같은 빈카 알칼로이드 (vinca alkaloids), (부술판 (busulfan), 클로람부실 (chlorambucil), 사이클로포스파마이드 (cyclophosphamide), 이포파마이드 (ifofamide), 메클로레타민 (mechlorethamine), 멜파란 (melphalan), 및 싸이오테파 (thiotepa)를 포함하지만 이에 제한되지 않는) 알킬화 시약 (an alkylating agent), 비전통적 알킬화 시약 (nonclassical alkylating agents), 화합물을 포함하는 플래티늄 (platinum), 블레오마이신 (bleomycin), 항종양 항생제 (an antitumor antibiotic), 독소루비신 (doxorubicin) 및 단노마이신 같은 단노마이시난 안트라사이클린 (dannomycinan anthracycline), 안트라세네디온 (an anthracenedione), 토포이소머라제 II 저해제 (topoisomerase II inhibitors), (코르티코스테로이드 (corticosteroids (덱사메타손 (dexamethasone), 프레드니손 (prednisone), 및 메틸프레드니손 (methylprednisone))를 포함하지만 이에 제한되지 않는 호르몬 물질, 플루옥시메스테론 (fluoxymesterone) 및 메틸테스토스테로네안드로겐 (methyltestosteroneandrogens) 같은 안드로겐 (androgens), 디에틸스틸베스테롤 (diethylstilbesterol) 같은 에스트로겐 (estrogens), 타목시펜 (tamoxifen) 같은 안티에스트로겐 (antiestrogens), 류프리드 (leuprolide), 플루타미드 (flutamide) , 아미노글루테티미드 (aminoglutethimide), 메게스트롤 아세테이트 (megestrol acetate), 및 메드록시프로게스테론 (medroxyprogesterone) 같은 안티안드로겐 (antiandrogens), 아스파라지나제 (asparaginase), 카무스틴 (carmustine), 로무스틴 (lomustine), 헥사메틸-멜라민 (hexamethyl- melamine), 다카바진 (dacarbazine), 미토탄 (mitotane), 스트렙토조신 (streptozocin), 시스플라틴 (cisplatin), 카보플라틴 (carboplatin), 레바마졸 (levamasole), 및 루코보린 (leucovorin) 을 포함하지만 이에 제한되지 않는, 다른 화합물과 조합되어 투여될 수 있다. 아울러 본 발명의 상기 화합물은 효소 치료 물질 및 인터루킨 (interleukin), 종양 괴사 인자 (tumor necrosis factor), 대식세포증식자극인자 (macrophage colony-stimulating factor) 및 집락자극인자 (colony stimulating factor) 같은 면역 체계 조절인자 (immune system modulators)와 결합되어 사용될 수 있다. 일 구체예에서, 본 발명에서 기재된 상기 화합물은 리버스 트랜스크립타제 저해제(reverse transcriptase inhibitors), 프로테아제 저해제 (protease inhibitors), 융합 저해제 (fusion inhibitors), 유입 저해제 (entry inhibitors)및 폴리머라제 저해제 (polymerase inhibitors)로부터 선택된 최소한 하나의 다른 항바이러스 물질과 함께 사용될 수 있다.
더불어, 본 발명에 의한 화합물은 항-레트로바이러스 (anti-retrovirus), 항-HBV (anti-HBV), 인터페론 (interferon), 항암 또는 항박테리아 물질 (anti-cancer or antibacterial agents), 본 발명의 다른 화합물을 포함하지만 이에 제한되지 않는 하나 이상의 물질의 조합 또는 대안로 투여될 수 있다. 본 발명에서 기재된 어떤 화합물은 다른 화합물의 대사작용, 이화작용 또는 불활성을 감소시킴에 의하여 본 발명에 의한 어떤 물질의 생물학적 활성을 증강시키는데 있어서 효과적이고, 이러한 의도된 효과를 위하여 동시에 투약된다.
Ⅷ. 노로바이러스 감염 치료용 결합 치료법
본 발명에서 기재된 상기 항바이러스 물질과 더불어, 다른 화합물 또한 존재할 수 있다. 예를 들면, 타입 I 인터페론 (type I interferon (IFN))은 노로바이러스 복제를 저해하는 것으로 알려져 있다. 어떤 비타민, 구체적으로 비타민 C는 어떤 바이러스 감염을 치료하는데 효과적인 것으로 알려져 있다. 한 연구는 비타민 A 보충이 노로바이러스 GII 감염의 유행을 감소시키고, 노로바이러스 GI 및 GII 쉐딩 (shedding) 모두의 길이를 증가시키고, NoV-연관 설사를 감소시키는 것을 보여준다 (1: J Infect Dis. 2007 Oct l;196(7):978-85. Epub 2007 Aug 22). 리신 (Lysine)은 항바이러스 물질로 알려져 있다. 아울러 유전자그룹 II 노로바이러스 (genogroup II (GII) Norovirus)로부터 유래한 바이러스-유사 물질 (VLPs)은 세포 표면 헤파란황산프로테오글리칸 (heparan sulfate proteoglycan) 및 다른 음성 전하의 글리코사미노글리칸 (glycosaminoglycans)에 결합하는 것으로 알려져 있다. 감염 증상을 치료하기 위하여, 구토방지, 설사방지 물질, 및/또는 진통제가 함께 투여될 수 있다.
Ⅸ. 약학 조성물
인간 면역결핍 바이러스, B형 간염 바이러스, 플라비 바이러스과 또는 칼리시바이러스 과 또는 그것들의 유전자 조각, 또는 암에 의하여 감염된, 인간을 포함하지만 이에 제한되지 않는, 숙주는 약학적으로 허용되는 담체 또는 담체의 존재 하에서, 상기 활성 화합물, 약학적으로 허용되는 프로드럭 또는 그것을의 염을 환자에게 유효량 투여함으로써 치료될 수 있다. 상기 활성 물질은 액체 또는 고체 형태로 적절한 어떠한 경로, 예를 들면, 경구, 비경구, 정맥 주사, 피부층내 주사, 피하 주사, 또는 국소성으로 투입되는 것이 가능하다.
상기 화합물의 바람직한 투여량은 하루에 수용자의 체중에 따라 0.1 내지 약 100 mg/kg이 될것이고, 조금 더 일반적으로는 1 내지 50 mg/kg이며, 바람직하게는 1 내지 약 20 mg/kg의 범위가 될 것이다. 상기의 약학적으로 허용되는 염 및 프로드럭의 효과적인 투여 범위는 배달되는 모뉴클레오티드의 무게에 기초하여 계산될 수 있다. 만약 염 또는 프로드럭이 그 자체로서 활성을 보인다면, 효과적인 투여량은 상기 염 또는 프로드럭의 무게를 이용하는 상기의 기재처럼 추산되거나 당업계에서 알려진 다른 방법에 의할 수 있다.
상기 화합물은, 유닛 제형당 7 내지 3000 mg, 바람직하게는 70 내지 1400 mg의 활성 성분을 가지지만 이에 제한되지 않는, 어떤 적절한 유닛 제형의 형태로 알맞게 투여된다. 50-1000 mg의 경구 투여가 일반적으로 알맞다.
이론상 상기 활성 성분은 상기 활성 화합물의 최고혈장농도가 0.2 내지 70 μM, 바람직하게는 1.0 내지 15 μM에 이르도록 투여되어야 한다. 이것은, 예를 들면, 필요에 따라 식염수에서, 상기 활성 성분의 0.1 내지 5% 용액의 정맥 주사에 의하거나, 또는 활성 성분의 1회분으로 투여됨으로써 가능할 수 있다.
약학 조성물에서 활성 성분의 농도는 약물의 흡수, 불활성화 및 배설 속도에 의존할 뿐만 아니라, 당업계에 알려진 다른 요인들에도 의존한다. 복용값은 또한 완화되는 상태의 혹독함에 따라 다양할 것임에 주목한다. 더욱이 어떤 특별한 사안에 있어서 특별한 복용 요법 및 스케쥴은 개인적 필요 및 상기 조성물을 투여하거나 투여를 감독하는 사람의 전문적인 지식에 따라서 시간이 조절되는 것이고, 본 발명에서 제시하는 농도 범위는 오직 예시를 보이기 위한 것이고 청구항에 기재된 조성물의 범위나 실시를 제한하려는 것은 아니다. 상기 활성 성분은 한번에 투여될 수 있고, 또는 다양한 시간적 간격을 가지면서 소량 복용을 반복하여 투여될 수 있다.
상기 활성 화합물의 바람직한 투여 방법은 경구 투여이다. 경구 투여 조성물은 일반적으로 비활성의 희석액 또는 먹을 수 있는 담체를 포함할 것이다. 그것들은 젤라틴 캡슐 내에 넣어지거나 정제 (tablets)로 압착될 수 있다. 경구 치료법 투여의 목적으로, 상기 활성 화합물은 첨가제를 포함할 수 있고, 정제, 트로키 (troches), 또는 캡슐의 형태로 사용될 수 있다. 약학적으로 호환가능한 결합 물질, 또는/및 보조제가 상기 조성물의 일부로서 포함될 수 있다.
상기 정제, 알약, 캡슐, 트로키 및 그와 유사한 것은 다음 성분, 또는 비슷한 성질을 가지는 화합물을 포함할 수 있다 : 마이크로크리스달린 셀롤로즈 (microcrystalline cellulose)같은 바인더; 트래캔거스 고무 또는 젤라틴; 녹말 또는 락토오즈 같은 첨가제, 알지닉 산 (alginic acid) 같은 분해 물질, 프리모겔 또는 옥수수 전분; 마그네슘 스테아레이트 (magnesium stearate) 또는 스테로데스 (Sterotes)같은 윤활유; 콜로이달 실리콘 디옥사이드 (colloidal silicon dioxide)같은 활택제; 설탕 또는 사카린 같은 단맛이 나는 물질; 또는 페퍼민트, 메틸 살리시레이트 또는 오렌지 맛 같은 맛을 내는 물질. 유닛 제형이 캡슐일 때, 상기 타입의 재료에 더하여, 지방유 (fatty oil)같은 액상 담체를 포함할 수 있다. 추가적으로, 유닛 제형은 ,예를 들면, 설탕코팅, 셀락 (shellac), 또는 다른 장용성 물질과 같은 유닛제형을 생리적은 형태로 변형시키는 다양한 다른 물질을 포함할 수 있다.
상기 화합물은 엘릭서제 (elixir), 현탁액, 시럽, 웨이퍼 (wafer), 껌 또는 이와 유사한 것의 구성요소로서 투여될 수 있다. 상기 활성 구성요소에 추가적으로, 시럽은, 단맛을 내는 물질로서 설탕, 및 다른 보존제, 염료 및 색을 내고 맛을 내는 물질을 포함할 수 있다.
상기 화합물 또는 그것의 약학적으로 허용가능한 전구 약물 또는 염은 또한 목적하는 반응을 악화시키지 않는 다른 활성 물질, 또는 목적하는 반응을 보충하는 항생제, 항진균제, 항염증제 또는 다른 뉴클레오시드 화합물을 포함하지만 이에 제한되지 않는 항바이러스 물질과 함께 혼합될 수 있다.
비경구, 피내,피하, 국부 적용에 사용되는 용액 또는 현탁액은 다음 구성물을 포함할 수 있다: 주사용으로 물과 같은 살균 희석제, 식염수, 불휘발유 (fixed oils), 폴리에틸렌 글리콜 (polyethylene glycols), 글리세린 (glycerine), 프로필렌 글리콜 (propylene glycol) 또는 다른 합성 용매; 벤질 알콜 또는 메틸 파라벤과 같은 항박테리아 물질; 아스코르빅 산 또는 소듐 비설파이트 (sodium bisulfite)과 같은 항산화제, 에틸렌디아민테트라아세틱 산 (ethylenediaminetetraacetic acid)과 같은 킬레이트제; 아세테이트, 시트레이트, 또는 포스페이트 같은 버퍼 (buffers), 및 소듐 클로라이드 (sodium chloride) 또는 덱스트로즈 (dextrose) 같은 긴장성 조정용 물질. 상기 비경구용 제제는 앰플, 일회용 주사기 또는 유리 또는 플라스틱으로 만들어진 다양한 병에 동봉할 수 있다.
만약 정맥 주사로 투여되는 경우, 바람직한 담체는 생리 식염수 또는 PBS (phosphate buffered saline)이다.
바람직한 실시예에서, 상기 활성 화합물은 신체에서 신속한 제거에 대항하여 상기 화합물을 보호할, 주입 및 마이크로캡슐로 싸여 있는 전달 시스템 (microencapsulated delivery systems)을 포함하지만 이에 제한되지 않는, 방출조절제 (controlled release formulation) 같은 담체와 함께 조제된다. 에틸렌 비닐 아세테이트 (ethylene vinyl acetate), 폴리언하이드라이드 (polyanhydrides), 폴리글리코릭 산 (polyglycolic acid), 콜라겐 (collagen), 폴리오소에스터 (polyorthoesters) 및 폴리악틱 산 (polylactic acid) 같은 생분해성, 생체에 적합한 폴리머가 사용될 수 있다. 예를 들면, 장용 코팅 화합물은 위산에 의한 분해로부터 보호되도록 만들어진다. 그러한 제형을 준비하는 방법은 당업계에서 명백할 것이다. 적절한 재료는 또한 상업적으로 구매 가능할 것이다.
아울러 리포솜 현탁액 (바이러스 항원에 대한 모노클로날 항체를 가지면서 감염 세포를 표적으로 하는 리포솜을 포함하지만 이에 제한되지 않는)은 약학적으로 허용가능한 담체로서 선호된다. 이것들은 당업계에서 널리 알려진 방법, 예를 들면 미국 특허 No. 4,522,811 (참고문헌으로 포함된)에 개시된 바와 같이 조제될 수 있다. 예를 들면, 리포솜 제형은 용기의 표면에 건조된 지질의 얇은 층을 남기고 증발되는 무기 용매에 적절한 지질 (스테아로릴 포스파티딜 에탄올 아민 (stearoyl phosphatidyl ethanolamine), 스테아로릴 포스파티딜 콜린 (stearoyl phosphatidyl choline), 아라카도일 포스파티딜 콜린 (arachadoyl phosphatidyl choline), 및 콜레스테롤 (cholesterol))을 용해시켜서 제조될 수 있다. 상기 활성 화합물 또는 그것의 모노포스페이트, 디포스페이트, 및/또는 트리포스페이트 유도체의 수용성 용액은 그 후에 용기 속으로 들어간다. 그 후 상기 용기는 용기의 벽면으로부터 지질이 없는 물질을 손으로 저어주게 되고 지질 응고물질이 용해되어 리포솜 현탁액이 생성된다.
상기 발명을 설명하기 위하여 사용되는 용어는 당업계에서 공통적이고 당업자에게 잘 알려져 있는 것이다. 본 발명에서 사용된, 축약형은 다음과 같은 의미를 가진다.
aq 수용성 (aqueous)
CDI 카보닐디이미다졸 (carbonyldiimidazole)
DMF N,N-디메틸포름아마이드 (N,N -dimethylformamide)
DMSO 디메틸설폭사이드 (dimethylsulfoxide)
EDC 1-에틸-3-(3-디메틸라미노프로필)카보디이미드 하이드로클로라이드 (1-ethyl-3-(3-dimethyllaminopropyl)carbodiimide hydrochloride)
EtOAc 에틸 아세테이트 (ethyl acetate)
h 시 (hour/hours)
HOBt N -하이드록시벤조트리아졸 (N-hydroxybenzotriazole)
M 몰 (molar)
min 분 (minute)
rt or RT 실내 온도 (room temperature)
TBAT 테트라부틸암모늄 트리페닐디플로로실리케이트
(tetrabutylammonium triphenyldifluorosilicate)
TBTU O-(벤조트리아졸-1-일)-N,N, N' , N'-테트라메틸우로늄
(O-(Benzotriazol-1-yl)-N,N, N' , N'-tetramethyluronium tetrafluoroborate)
THF 테트라하이드루퓨란 (tetrahydrofuran)
Ⅹ. 활성 화합물 제조용 일반적인 반응식
6-서브스티튜티드-2-아미노 퓨린 뉴클레오시드 모노포스페이트 (6-substituted-2-amino purine nucleoside monophosphate) 및 포스포네이트 프로드럭 (phonates prodrugs)의 손쉬운 제조를 위한 방법 또한 제공된다. 본 발명에서 개시되어진 상기 6-서브스티튜티드-2-아미노 퓨린 뉴클레오시드 모노포스페이트 및 포스포네이트 프로드럭은 이하 기재된 바와 같이 제조되거나, 또는 당업계에서 알려진 다른 방법으로 제조될 수 있다. 당업계에서 일반적인 기술자는 이러한 반응식이 제한이 없고 본 발명의 목적 및 범위를 벗어남이 없이 세부사항의 변경이 가능함을 이해할 것이다.
일반적으로, 화학식 I- XVIII 의 뉴클레오티드는, 먼저 대응하는 뉴클레오시드를 준비하고 5'-하이드록시 그룹을 모노포스페이트 또는 인체 내에서 상기 화합물의 활성 트리포스페이트 형태로 즉시 변환될 수 있는 다른 유사체에 의하여 캡핑 (capping)시켜서 준비된다.
다양한 반응식이 이하 요약되어 있다.
반응식 1은 본 발명의 활성 화합물의 합성에 있어서 제한이 없는 예시이고, 상세하게는, 모노포스페이트 프로드럭 XII , XIII , XIV (monophosphate prodrugs XII, XIII, XIV)의 합성법이다.
반응식 2는 본 발명의 활성 화합물의 합성에 있어서 제한이 없는 예시이고, 상세하게는, 모노포스페이트 프로드럭 XII , XIII , XIV 대안합성법이다.
반응식 3은 본 발명의 활성 화합물의 합성에 있어서 제한이 없는 예시이고, 상세하게는, 모노포스페이트 프로드럭 XV의 합성법이다.
반응식 4는 본 발명의 활성 화합물의 합성에 있어서 제한이 없는 예시이고, 상세하게는, 모노포스페이트 프로드럭 XVI의 합성법이다.
반응식 5는 본 발명의 활성 화합물의 합성에 있어서 제한이 없는 예시이고, 상세하게는, 모노포스페이트 프로드럭 XVII의 합성법이다.
반응식 6은 본 발명의 활성 화합물의 합성에 있어서 제한이 없는 예시이고, 상세하게는, 모노포스페이트 프로드럭 XVII의 대안합성법이다.
반응식 7은 본 발명의 활성 화합물의 합성에 있어서 제한이 없는 예시이고, 상세하게는, 모노포스페이트 프로드럭 XVIII의 합성법이다.
반응식 8은 본 발명의 활성 화합물의 합성에 있어서 제한이 없는 예시이고, 상세하게는, 모노포스페이트 프로드럭 XVIII의 대안합성법이다.
반응식 9는 본 발명의 활성 화합물의 합성에 있어서 제한이 없는 예시이고, 상세하게는, 뉴클레오시드 1의 합성법이다.
반응식 10은 본 발명의 활성 화합물의 합성에 있어서 제한이 없는 예시이고, 상세하게는 뉴클레오시드 1의 대안합성법이다.
일 구체예에서, 화학식 XII , XIII 또는 XIV의 뉴클레오시드는 당의 3'위치에 자유 알파 하이드록실 그룹 (free alpha- hydroxyl group)을 포함하는 화합물 2를 제공하기 위하여 TIPS와 같은 그룹에 의하여 화합물 1이 보호되어 제조된다 (반응식 1). 화합물 1의 제조는 이하 개요가 제시된 방법 및 반응식 9-10에 의하여 당업자에 의해 수행된다 : a) Rajagopalan, P.; Boudinot, F. D; Chu, C. K.; Tennant, B. C; Baldwin, B. H.; Antiviral Nucleosides: Chiral Synthesis and Chemotheraphy: Chu, C. K.; Eds. Elsevier: 2003. b) Recent Advances in Nucleosides: Chemistry and Chemotherapy: Chu, C. K.; Eds. Elsevier: 2002. c) Frontiers in Nucleosides & Nucleic Acids, 2004, Eds. R. F. Schinazi & D. C. Liotta, IHL Press, Tucker, GA, USA, pp: 319-37 d) Handbook of Nucleoside Synthesis: Vorbruggen H. & Ruh-Pohlenz C. John Wiley & sons 2001). 화합물 2와 화합물 3 및 4와 같은 산과의 커플링은 화합물 5 또는 6과 같은 에스터기를 도입하는 DC, EDC/HOBt, TBTU, 또는 CDI 같은 시약에 의하여 수행될 수 있다. 보호기가 제거된 후, 결과물인 아미노 알콜은 포스포러스 옥시클로라이드 (phosphorous oxychloride, POCl3) 또는 포스포로싸이올 트리클로라이드 (phosphorothioyl trichloride, PSCl3 )에 노출됨에 따라 모노포스페이트 프로드럭 XII 또는 XIII로 변환될 수 있거나 또는 대안적으로 상기 포스포러스 옥시클로라이드 또는 포스포로싸이올 트리클로라이드 반응의 워터 워크업 (water workup)후에 DCC 같은 커플링 시약이 화학식 XII 또는 XIII의 생성에 있어서 이용될 수 있다. 화합물 7은 상기 포스포러스 옥시클로라이드 또는 포스포로싸이올 트리클로라이드 반응의 워터 워크업 (water workup) 후에 얻어질 수 있고 그 다음의 포스포겐 (phosgene) 또는 CDI 또는 트리포스포겐 (triphosgene) 같은 포스포겐 등가물에의 노출은 모노포스페이트 프로드럭 XIV을 가져온다.
Figure 112011069709164-pct00033
반응식 1 모노포스페이트 프로드럭 XII, XIII, XIV 합성법. (염기는 천연 또는 인공적인 뉴클레오시드 염기이고; R4' R5, R5', R6, Y, M, R20, 및 R7'는 활성 화합물 부분에서 정의하였음)
대안적으로 모노포스페이트 프로드럭 XII, XIII, XIV 은 반응식 2의 개요에 따라, 즉 트리메틸 포스페이트에서 포스포러스 옥시클로라이드 또는 포스포로싸이올 트리클로라이드의 반응에 의하여 뉴클레오시드 1 이 즉시 모노포스페이트, 8로 변형될 수 있다. 아미노 에스터 9 또는 10과의 커플링은 포스포라미데이트 (phosphoramidates) 7 및 11을 가져오는 DCC 같은 일반적인 커플링 시약으로 수행될 수 있다. 탈보호 및 그 다음에 이어지는 EDC, EDC/HOBt, TBTU, 또는 CDI같은 시약과 화합물 7 또는 11의 커플링은 모노포스페이트 프로드럭 XII 및 XIII를 제공한다. 모노포스페이트 프로드럭 XIV는 반응식 1에서 기술한 바와 같이 화합물 7로부터 얻어질 수 있다.
Figure 112011069709164-pct00034
반응식 2 모노포스페이트 프로드럭 XII, XIII, XIV 대안적 합성법. (염기는 천연 또는 인공적인 뉴클레오시드 염기이고; R4' R5, R5', R6, Y, M, R20, 및 R7'는 활성 화합물 부분에서 정의하였음)
모노포스페이트 프로드럭 XV은 페놀 12 로부터 출발되는 반응식 3의 개요에 의하여 제조될 수 있다 (반응식 3). 화합물 12의 포스포러스 옥시클로라이드 또는 포스포로싸이올 트리클로라이드에 대한 노출은 화합물 13을 제공하고, 그 후에 아미노 에스터 14과 반응하여 포스포라미데이트 15가 얻어진다. 뉴클레오시드 1은 그 다음에 5'-하이드록실 그룹과 클로로포스포릴아미노 프로파네이트 (chlorophosphorylamino propanoate) 15의 반응에 의해 모노포스페이트 유사체 16으로 변형된다. 탈보호 및 그 다음에 이어지는 EDC, EDC/HOBt, TBTU, 또는 CDI같은 시약과 화합물 16과의 커플링은 모노포스페이트 프로드럭 XV을 제공한다.
Figure 112011069709164-pct00035
반응식 3 모노포스페이트 프로드럭 XV 합성법. (염기는 천연 또는 인공적인 뉴클레오시드 염기이고; R4' R5, R5', R6, Y, R20,R21, R22 및 R7'는 활성 화합물 부분에서 정의하였음)
모노포스페이트 프로드럭 XVI은 페놀 12 와 포스포러스 옥시클로라이드 또는 포스포로싸이올 트리클로라이드가 반응하여 다이페놀 포스포로클로리데이트 (diphenyl phosphorochloridate) 17 를 제공함에 의하여 제조될 수 있다 (반응식 4). 뉴클레오시드 1은 그 다음에 5'-하이드록실 그룹과 다이페놀 포스포로클로리데이트의 반응에 의하여 중간체 모노포스페이트 유사체로 변환될 수 있다. 탈보호 및 그 다음에 이어지는 3'-하이드록실 그룹과 EDC, EDC/HOBt, TBTU, 또는 CDI같은 시약과의 반응으로 에스터를 형성하고 난 후, R21OH와의 재에스터화반응 (reesterification)에 의해 모노포스페이트 프로드럭 XVI 을 제공한다.
Figure 112011069709164-pct00036
반응식 4 모노포스페이트 프로드럭 XVI 합성법. (염기는 천연 또는 인공적인 뉴클레오시드 염기이고; R4' R5, R5', R6, Y, M, R21, 및 R7'는 활성 화합물 부분에서 정의하였음)
모노포스페이트 프로드럭 XVII 은 보호된 트립토판 18, 보호된 아미노산 19와 EDC, EDC/HOBt, TBTU, 또는 CDI같은 커플링 시약과의 반응으로 디펩티드 20 을 얻게 된다 (반응식 5). 그 후, 아민 보호기의 제거로 다이아민 (diamine) 21이 얻어지고, 포스포러스 옥시클로라이드 또는 포스포로싸이올 트리클로라이드와의 반응에 의하여 사이클릭 포스포로다디아미딕 클로라이드 (cyclic phosphorodiamidic chloride) 22를 얻어진다. 뉴클레오시드 1은 그 다음에 5'-하이드록실 그룹과 사이클릭 포스포로디아미딕 클로라이드 22와의 반응에 의하여 모노포스페이트 유사체로 변형된다. 탈보호 및 그 다음에 이어지는 EDC, EDC/HOBt, TBTU, 또는 CDI 같은 시약과의 커플링은 모노포스페이트 프로드럭 XVII을 제공한다.
Figure 112011069709164-pct00037

반응식 5 모노포스페이트 프로드럭 XVII 합성법. (염기는 천연 또는 인공적인 뉴클레오시드 염기이고; R4' R5, R5', R6, Y, R20, R21, R22 및 R7'는 활성 화합물 부분에서 정의하였음)
대안적으로, 모노포스페이트 프로드럭 XVII 은 디펩티드 20과의 커플링에 의하여 모노포스페이트 유사체 8 로부터 제조될 수 있다 (반응식 6).
Figure 112011069709164-pct00038
반응식 6 모노포스페이트 프로드럭 XVII 대안적 합성법. (염기는 천연 또는 인공적인 뉴클레오시드 염기이고; R4' R5, R5', R6, Y, R20, R21,R22, 및 R7'는 활성 화합물 부분에서 정의하였음)
모노포스페이트 프로드럭 XVIII 는 포스포라미딕 디클로라이드 23과 뉴클레오시드 1 과의 최초 반응에 의하여 제조될 수 있다 (반응식 7). 물, 하이드로겐 설파이드 (hydrogen sulfide), 또는 아민과 반응하여 중간체를 생성하는 그 다음 반응은 모노포스페이트 유사체 24를 제공한다 (반응식 7). 비스 뉴클레오파일 (bis nucleophile) 24 와 포스포겐 또는 CDI 같은 포스포겐 등가물에의 노출은 모노포스페이트 프로드럭 XVIII을 가져온다.
Figure 112011069709164-pct00039
반응식 7 모노포스페이트 프로드럭 XVIII 합성법. (염기는 천연 또는 인공적인 뉴클레오시드 염기이고; R4' R5, R5', R6, Y, M, R20, R21,R22, 및 R7'는 활성 화합물 부분에서 정의하였음)
대안적으로, 모노포스페이트 프로드럭 XVIII (M은 NR이 아닌)은 반응식 8에서 보인 바와 같이 뉴클레오시드 1과 포스포러스 옥시클로라이드 또는 포스포로싸이올 트리클로라이드와의 최초반응에 의하여 제조될 수 있다. 포스포겐 EH는 CDI 같은 포스포겐 등가물과의 반응에 따라 물 또는 하이드로겐 설파이드 (hydrogen sulfide)와 반응하여 중간체를 생성하는 그 다음 반응은 모노포스페이트 프로드럭 XVIII를 제공한다 (화학식 8).
Figure 112011069709164-pct00040
반응식 8 모노포스페이트 프로드럭 XVIII 대안적 합성법. (염기는 천연 또는 인공적인 뉴클레오시드 염기이고; R4' R5, R5', R6, Y, M, R20, R21,R22, 및 R7'는 활성 화합물 부분에서 정의하였음)
뉴클레오시드 1은 TMSOTf와 같은 루이스 산 존재하에서, 당 26과 보호 또는 실릴화된 (silylated) 퓨린 베이스와의 커플링에 의해 제조되어진다. 3'- 및 5'-하이드록실의 탈보호는 뉴클레오시드 1을 가져온다.
Figure 112011069709164-pct00041
반응식 9 뉴클레오시드 1 합성법. (염기는 천연 또는 인공적인 뉴클레오시드 염기
이고; R4' R5, R5', R6, Y, R20, R21,R22, 및 R7'는 활성 화합물 부분에서 정의하였음)
대안적으로, 뉴클레오시드 1은 1'-할로 또는 1'-하이드록시 화합물 27로부터 제조될 수 있다. 1'-할로 화합물인 경우에 있어서, 보호 또는 자유로운 퓨린 염기는 트리메틸 아민 (triethyl amine) 또는 소듐 하이드라이드 (sodium hydride) 같은 염기의 존재하에서, 탈보호가 이어지면, 뉴클레오시드 1을 얻게 된다. 1'-하이드록시 화합물인 경우에 있어서, 보호 또는 자유로운 퓨린 염기는 디이소프로필 아조디카르복시레이트 (diisopropyl azodicarboxylate) 같은 미쓰노부 (Mitsunobu) 커플링 시약의 존재하에서, 탈보호가 이어지면, 뉴클레오시드 1을 얻게 된다.
Figure 112011069709164-pct00042
반응식 10 뉴클레오시드 1 대안 합성법. (염기는 천연 또는 인공적인 뉴클레오시드 염기이고; R4' R5, R5', R6, Y, R20, R21,R22, 및 R7'는 활성 화합물 부분에서 정의하였음)
나아가 본 발명은 하기 실시예에 의하여 설명된다. 반응식 11-14 및 실시예 1-6은 6-서브스티튜티드 퓨린 뉴클레오티드 프로드럭(6-substituted purine nucleotide prodrugs)을 합성하는 예비적인 방법에 관한 것이고, 실시예 7-35는 6-서브스티튜티드 퓨린 뉴클레오시드, 뉴클레오티드, 및 뉴클레오티드 유사체의 생물학적 평가용 방법에 관한 것이다. 당업계에서 일반적인 기술자는 이러한 실시예가 제한이 없고 본 발명의 목적 및 범위를 벗어남이 없이 세부사항의 변경이 가능함을 이해할 것이다.
실시예
본 발명의 대표적인 특별한 화합물은 이하 실시예 및 반응 순서에 따라 준비되었다; 상기 실시예 및 반응 순서를 묘사한 도표는 발명의 이해를 돕기 위한 것이고 그 후에 제시하는 청구항에서 제시하는 발명을 어떤 식으로 제한하는 것으로 이해되어서는 안 된다. 아울러 본 발명의 화합물은 본 발명의 추가적인 화합물을 생산하기 위하여 그 다음의 예에서 중간체로 사용될 수 있다. 상기 반응의 어떠한 단계에서 얻어진 수득률을 최적화하기 위한 시도는 없었다. 당업자는 반응 시간, 온도, 용매 및/또는 시약의 일반적인 변형을 통하여 수득률을 증가시키는 방법을 알고 있을 것이다.
무수 용매는 알드리히 화학 회사에서 구매하였다 (밀워키, Milwaukee). 시약은 상업적으로 구매되었다. 별도로 언급하지 않는다면, 본 발명의 실시예에서 사용된 상기 물질은 쉽게 이용가능한 상업적 공급원으로부터 얻어지거나 또는 화학 합성 분야의 당업자에게 알려진 일반적인 방법에 의하여 합성되어진다. 녹는 점 (Melting points (mp))은 일렉트로써말 디지트 녹는 점 측정기 (Electrothermal digit melting point apparatus)에 의하여 측정되었고 정정되지 않았다. 1H and 13C NMR 스펙트라는 실온에서 Varian Unity Plus 400 스펙트로미터를 사용하였고 내부 테트라메틸실레인 (internal tetramethylsilane)으로부터 ppm 다운필드 (ppm downfield)가 보고되었다. 중수소 교환, 디커플링 (decoupling) 실험 또는 2D-COSY는 수소 배치를 확인하기 위하여 수행되었다. 신호 개수 (Signal multiplicities)는 s (단일선, singlet), d (이중선, doublet), dd (복합이중선, doublet of doublets), t (삼중선, triplet), q (사중선, quadruplet), br (넓은 선, broad), bs (넓은 단일선, broad singlet), m (다중선, multiplet)으로 표현된다. 모든 J-값은 Hz이다. 질량 분석기 (Mass spectra)는 일렉트로스프레이 (electrospray) 기술을 이용하여 Micromass Platform LC 스펙트로미터로 분석된다. 기본적인 분석은 아틀란틱 마이크로랩사 (노크로스, 조지아주)에 의하여 수행되었다. 분석용 TLC는 왓트만 LK6F 실리카겔 판상에서, 조제용 TLC는 왓트만 PK5F 실리카겔 판상에서 수행되었다. 컬럼 크로마토그래피는 실리카겔 또는 역상 크로마토그래피 (reverse-phase high performance liquid chromatography)를 이용하여 수행되었다.
Figure 112011069709164-pct00043
반응식 11 2,6-디아미노-퓨린 2'-C 메틸 모노포스페이트 프로드럭 (2,6-diamino purine 2'-C-Me monophosphate prodrug)의 합성
실시예 1
(2S)-에틸 2-((((2R,3R,4R,5R)-5-(2,6- 다이아미노 -9H-퓨린-9-일)-3,4- 디하이드록시 -4- 메틸테 트라하이드로퓨란-2-일) 메톡시 )( 페녹시 ) 포스포릴아미노 ) 프로파노에이트 ( 75 ) ((2S)- ethyl 2-((((2R,3R,4R,5R)-5-(2,6- diamino -9H- purin -9- yl )-3,4- dihydroxy -4- methyltetrahydrofuran -2-yl)methoxy)(phenoxy)phosphorylamino)propanoate ( 75 ))
THF (1 mL) 및 DMF (1 mL) 조건 하에서 화합물 (74) (30 mg, 0.1 mmol)의 용액에 (2R)-에틸 2-(클로로(페녹시)포스포릴아미노)프로파토에이트1 ((2R)-ethyl 2-(chloro(phenoxy)phosphorylamino)propanoate1 )(0.4 mL, 0.4 mmol)을 첨가하고 난 후에, t-BuMgCl (0.4 mL, 0.4 mmol)을 첨가한다. 실온에서 하룻밤동안 휘젓고 난 후, 상기 반응 혼합물은 농축한 암모늄 클로라이드( aq ) (ammonium chloride( aq ))로 중화시키고 난 후, 화합물 75 (1 mg, 1.8%)가 얻기 위하여 디클로로메탄 (dichloromethane) : 메탄올 (methanol) = 7:1-7:2의 비율을 가지는 플래시 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)를 이용하여 정제한다.
LC/MS calcd. for C22H30N7O8P 551.1, observed: 552.1 (M+1).
참조 :
1. (a) Perrone, P.; Daverio, F.; Valente, R.; Rajyaguru, S.; Martin J. A.; Leveque,, V.; Pogam, S. L.; Najera, I.; Klumpp, K.; Smith, D.; B. and McGuigan, C. First Example of Phosphoramidate Approach Applied to a 4'-Substituted Purine Nucleoside (4'-Azidoadenosine): Conversion of an Inactive Nucleoside to a Submicromolar Compound versus Hepatitis C Virus. J. Med . Chem. 2007, 50, 5463-5470. (b) Uchiyama, M.; Aso, Y.; Noyori, R.; Hayakawa, Y. O-Selective phosphorylation of nucleosides without N-protection. J. Org . Chem. 1993, 58, 373-379.
Figure 112011069709164-pct00044
반응식 12. . 2,6-디아미노 퓨린 디옥소레인 모노포스페이트 전구 약물 (2,6-diamino purine dioxolane monophosphate prodrug)의 합성
실시예 2
(2R)-에틸-2-((((4R)-4-(2,6- 디아미노 -9H-퓨린-9-일)-1,3- 디옥소란 -2-일) 메톡시 )(페 녹시 ) 포스포릴아미노 ) 프로파노에이트 ( 77) ((2R)- ethyl -2-((((4R)-4-(2,6- diamino -9H- purin -9- yl )-1,3- dioxolan -2-yl)methoxy)(phenoxy)phosphorylamino)propanoate ( 77) )
THF (5 mL)용매에 화합물 76 (30 mg, 0.12 mmol)이 첨가된 용액에 t-BuMgCl (0.36 mL, 0.36 mmol)의 1 M용액을 첨가하고 30분동안 젓는다. 상기 반응 혼합물은 실온에서 THF용매에 있는 (2R)-에틸 2-(클로로(페녹시)포스포릴아미노)프로파노에이트 (0.36 mL, 0.36 mmol) ((2R)-ethyl 2-(chloro(phenoxy)phosphorylamino)propanoate)에 첨가되고 화합물 77 (28 mg, 46%)을 얻기 위하여 에틸 아세테이트 (ethyl acetate) : 메탄올 (methanol) = 5:1 의 비율을 가지는 플래시 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)를 이용하여 정제한다.
1H-NMR(CD3OD, 300 MHz) d: 7.80-7.79(s, 1H), 7.26-7.09(m, 5H), 6.27(m, 1H), 6.12(brs, 2H), 5.25(m, 3H), 4.47(m, 2H), 4.22(m, 2H), 4.03(m, 2H), 3.83(m, 1H), 1.33-1.15(m, 6H).
LC/MS calcd. for C20H27N7O7P 508.2, observed: 508.3 (M+1).
Figure 112011069709164-pct00045
반응식 13. 3'아지도-2',3'-디데옥시구아노신 모노포스페이트 전구약물 (3'-azido-2',3'-dideoxyguanosine monophosphate prodrug)의 합성
실시예 3
(2R)-에틸 2-((((2S,3S,5R)-3- 아지도 -5-(2,6- 디아미노 -9H-퓨린-9-일) 테트라하이드로퓨란 -2-일) 메톡시 )-( 페녹시 ) 포스포릴아미노 ) 프로파노에이트 ( 79) ((2R)- ethyl 2-((((2S,3S,5R)-3- azido -5-(2,6- diamino -9H- purin -9- yl ) tetrahydrofuran -2- yl ) methoxy )-(phenoxy)phosphorylamino)propanoate ( 79) )
t-BuMgCl (0.22 mL, 0.22 mmol)를 THF (5 mL) 내의 화합물 78 (34 mg, 0.11 mmol) 현탁액에 첨가했다. 상기 반응 혼합물을 30분동안 저어주고 난 후, THF 내의 (2R)-에틸 2-(클로로(페녹시)포스포릴아미노)프로파노에이트 (0.22 mL, 0.22 mmol) ((2R)-ethyl 2-(chloro(phenoxy)phosphorylamino)propanoate)를 첨가한 후, 0°C에서 냉각시킨다. 상기 반응 혼합물을 실온에서 하루밤동안 저어주고, 화합물 79 (12 mg, 19%)을 얻기 위하여 에틸 아세테이트 (ethyl acetate) : 메탄올 (methanol) = 5:1 의 비율을 가지는 플래시 컬럼 크로마토그래피 (flash column chromatography)를 이용하여 정제한다.
1H-NMR(CD3OD, 300 MHz) d: 7.85,7.89(2s, 1H), 7.12(m, 5H), 6.17(m, 1H), 4.60(m, 1H), 4.37(m, 1H), 4.22(m, 2H), 4.03(m, 3H), 3.83(m, 1H), 2.85(m, 1H), 2.46(m, 1H), 1.22(m, 3H), 1.15(m, 3H).
LC/MS calcd. for C21H28N10O6P 547.2, observed: 547.3 (M+1).
Figure 112011069709164-pct00046
반응식 14. 3'-아지도-2',3'-디데옥시구아노신 유사체 (3'-Azido-2',3'-dideoxyguanosine analog) (83)
실시예 4
메틸 -3-(2-( 디클로로포스포릴옥시 ) 페닐 ) 프로파노에이트 ( 81) 2 ( Methyl 3-(2-(dichlorophosphoryloxy)phenyl)propanoate ( 81) 2)
건조 에터(9.2 mL)내의 건조 트리에틸아민 (triethylamine) (0.38 mL, 2.8 mmol) 및 건조 에터 메틸 3-(2-하이드록시페닐)프로파노에이트 (methyl 3-(2-hydroxyphenyl)propanoate) 80 (0.5 g, 2.77 mmol)를 질소 존재 하, 78°C에서 포스포러스 옥시클로라이드 (phosphorus oxychloride ) (0.25 mL, 2.8 mmol)가 포함되어 있는 건조 에터 용액 (5 mL)에 한 방울씩 첨가한다. 첨가 후 상기 반응 혼합물을 실온에서 천천히 가열하고 1시간동안 저어준다. 상기 용매는 상당량의 고체를 포함하는 오일로서 정제되지 않은 생성물을 얻기 위하여 감압 조건 하에서 제거된다.
참조 :
2. Lemmens, R. WO2003/070944, Method Of Separation Using Aromatic Thioether Ligands.
실시예 5
(2R)-에틸 2-(클로로(2-(3- 메톡시 -3- 옥소프로필 ) 페녹시 )포스포릴아미노) 프로파노에 이트 ( 82) ((2R)- ethyl 2-(chloro(2-(3- methoxy -3-oxopropyl)phenoxy)phosphorylamino)propanoate ( 82) )
메틸 3-(2-(디클로로포스포릴옥시)페닐)프로파노에이트 (Methyl 3-(2-(dichlorophosphoryloxy)phenyl)propanoate) 81 (2.77 mmol) 및 L-알라닌 메틸 에스터 하이드로클로라이드 (L-alanine methyl ester hydrochloride) (0.42 g, 2.77 mmol)가 무수 디클로로메탄 (anhydrous dichloromethane) (10 mL)에서 부유하고 있다. 무수 트리에틸아민 (Anhydrous triethylamine) (0.37 mL, 2.77 mmol) 및 디클로로메탄 (dichloromethane) (5 mL) 이 질소 존재 하, 78°C에서 한방울씩 첨가되었다. 상기 첨가 후에, 상기 반응 혼합물을 실온에서 천천히 가열시키고 하루밤동안 저어준다. 상기 용매는 감압하에서 제거되었고, 상기 고체는 무수 에터 (anhydrous ether (20 mL x 2))로 세척한 후, 여과시켰다. 상기 여과물은 오일로서 정제되지 않은 생성물을 얻기 위하여 잔여물로 농축되었다. THF (2.77 mL)에 의한 희석으로 1 M 용액이 되고, 이것은 다음 단계에서 다른 추가적인 정제 없이 사용되었다.
실시예 6
(2R)-에틸 2-((((2S,3S,5R)-3- 아지도 -5-(2,6- 디아미노 -9H-퓨린-9-일)
테트라하이드로퓨란-2-일) 메톡시 )-(2-(3- 메톡시 -3- 옥소프로필 ) 페녹시 ))
포스포릴아미노)프로파노에이트 ( 83) ((2R)- ethyl 2-((((2S,3S,5R)-3-azido-5-(2,6- diamino -9H- purin -9- yl ) tetrahydrofuran -2- yl ) methoxy )-(2-(3- methoxy -3-oxopropyl)phenoxy)phosphorylamino)propanoate ( 83) )
상기 화합물은 실시예 3의 화합물 79 에서 개시한 방법으로 제조되었다.
실시예 7
6- 서브스티튜티드 -2-아미노- 퓨린 뉴클레오시드 (6- substituted -2- amino purine nucleosides)의 6- 하이드록시 -2-아미노- 퓨린 뉴클레오시드 (6- hydroxy -2- amino purine nucleosides )로의 변환
상기 기재한 바와 같이 제조되었던 6' 위치에 작용기를 가지는 다양한 뉴클레오시드는, 인체 내에서 5'-OH 그룹이 모노포스페이트 프로드럭으로 변환되지 않을 때, 다른 하이드록시 그룹보다 쉽게 6'-하이드록시 형태로 변환된다.
PBM 세포에서 50 μM 6-서브스티튜티드-2-아미노 퓨린 뉴클레오시드 (6-substituted-2-amino purine nucleosides)를 4시간동안 배양한 후 형성되어진 뉴클레오티드의 LC/MS 질적 분석의 다양한 예시가 이하 제시되어 있다. 말초혈액단핵세포 (Peripheral Blood Mononuclear (PBM))에 50 μM의 3'-아지도 (azido) G (RS-527) 배양 및 질량분석기 검출와 함께 액상 크로마토그래피를 이용한 그 다음 단계의 분석은 RS-527-모노포스페이트 (monophosphate) (MP)의 신호가 검출 단계 근처에 있었던 반면 RS-527-디포스페이트 (diphosphate) (DP) 및 RS-527-트리포스페이트 (triphosphate) (TP)의 강한 신호를 보여준다 (도 1).
PBM 세포에서, 6-N-알릴 (allyl) 그룹을 포함하는, RFS-427의 배양은 RFS-457-DP 및 RFS-457-TP의 검출라는 결과를 가져온다. RFS-427, RFS-427-MP, RFS-427-DP, 또는 RFS-427-TP는 검출되지 않는다 (도 2).
PBM 세포에서, 6-N-알릴 (allyl), 6-N-메틸 (Me) 그룹을 포함하는 RFS-464의 배양은 RFS-457-TP의 검출라는 결과를 가져온다. RFS-464, RFS-464-MP, RFS-464-DP, 또는 RFS-464-TP는 검출되지 않는다 (도 3).
PBM 세포에서, 6-N-사이클로프로필 (cyclopropyl) 그룹을 포함하는 RFS-512의 배양은 RFS-457-DP 및 RFS-457-TP의 검출라는 결과를 가져온다. RFS-512, RFS-512-MP, RFS-512-DP, 또는 RFS-512-TP는 검출되지 않는다 (도 4).
PBM 세포에서, 6-메톡시 (methoxy) 그룹을 포함하는 RFS-506의 배양은 RFS-506-DP, RFS-457-DP, 및 RFS-457-TP의 검출라는 결과를 가져온다. RFS-506, RFS-506-MP, 또는 RFS-506-TP는 검출되지 않는다 (도 5).
PBM 세포에서, 6-아미노 (amino) 그룹을 포함하는 RFS-667의 배양은 RFS-457, RFS-457-MP, RFS-457-DP, RFS-457-TP RFS-667-DP, 및 RFS-667-TP의 검출라는 결과를 가져온다. RFS-667 또는 RFS-667-MP는 검출되지 않는다 (도 6).
PBM 및 MT-2 세포에서, 형성되어진 세포내부 트리포스페이트 (intracelluar triphosphates)의 분석에 뒤따르는, 6-클로로 (chloro) 그룹을 포함하는 화합물 6415의 배양은 RFS-457-TP의 검출라는 결과를 가져왔다. 화합물 6415는 PBM 및 MT-2 세포에서, AZG 및 AZG-TP으로 변환되었다. 30분동안 약물로 처리한 MT-2 세포에서 무시할만한 수준의 6415가 검출되었다. PBM 세포에서는 화합물 6415이 검출되지 않았고 그것의 포스페이트 역시 검출되지 않았다 (도 7).
AZG-TP 레벨은 MT-2 및 PBM 세포에서, 화합물 6415로 처리되었을 때 상승하고, 이것은 화합물 6415를 사용하였을 때 트리포스페이트 형태로 더 빠르게 변환하는 것을 의미한다. MT-2에서 네 가지 다른 농도에서의 AZG 배양은 인산화 (phosphorylation)가 30μM에서 정상 상태 (steady state)에 도달한 것을 제시하였다. AZG-TP/dGTP 비율은 MT-2 세포에서 PBM 세포에 비해 5배가 더 높았다. AZG 또는 6415를 48시간동안 처리한 후, 모든 dNTP 레벨이 증가하였지만 (~2배까지), dGTP 레벨은 그렇지 않다는 것은 AZG에 의한 인산화가 경쟁적이라는 것을 제시한다.
상기 6-서브스티튜티드 화합물이 효소 아데노신 디아미나제 (adenosine deaminase)에 의하여 G 유사체로 변형된 것인지를 확인하기 위하여, 엔자임 키네틱 실험 (enzyme kinetics experiments)이 수행되었다. 표 1에서 볼 수 있는 바와 같이, 아데노신 디아미나제에 의하여 G 유사체로 변형되는 6-서브스티튜티드 뉴클레오시드의 대표적인 숫자가 발견되었다. 화합물 69, 6-N, N-디메틸 (dimethyl) 유사체는 실험된 조건 하에서 아데노신 디아미나제를 안정하게 만드는 것으로 밝혀졌다.
구조 (Structure) 화합물 숫자 (Compound Number) pH7.4에서 흡수 계수 (Extinction Coefficient at pH 7.4) 7분 후 디아미노화 (Deamination in 7 min)

(0.002 유닛 아데노신 디아미나제)		 120분 후 디아미노화 (Deamination in 120 min)

(0.002 유닛 아데노신 디아미나제)
Figure 112015013159447-pct00047
 2'-디옥시-아데노신 (2'-deoxy-adenosine) ε265 = 14.3
mM-1 cm-1 		59.30% 105.50%
Figure 112015013159447-pct00048
 2'-디옥시-구아노신 (2'-deoxy-guanosine) ε265 = 9.6
mM-1 cm-1 		검출이하레벨
(below level of detection)		 검출이하레벨
(below level of detection)
Figure 112015013159447-pct00049
 69 ε265 = 19.6
mM-1 cm-1 		검출이하레벨
(below level of detection)		 검출이하레벨
(below level of detection)
Figure 112015013159447-pct00050
 72 ε265 = 9.6
mM-1 cm-1 		0.56% 33.40%
Figure 112015013159447-pct00051
 62 ε265 = 10.9
mM-1 cm-1 		검출이하레벨
(below level of detection)		 7.60%
Figure 112015013159447-pct00052
 5415 (RS457)ε265 = 5.6
mM-1 cm-1 		12.81 ± 1.57 240.53 ±5.86
Figure 112015013159447-pct00053
 70 (RS457)ε265 = 5.6
mM-1 cm-1 		0.55 ±5.8 130.22 ±4.72
표 1 : 아데노신 디아미나제에 의한 뉴클레오시드의 디아미노화
2'-디옥시아데노신은 또한 본 발명에서 RFS-667로서 사용된다. 아울러 화합물 72는 본 발명에서 RFS-512로 언급된다. 화합물 62는 RFS-427로 사용된다. 더불어 화합물 70은 본 발명에서 RFS-506로 언급된다.
표 2는 HIV 및 MP 프로드럭 RS-788 및 모뉴클레오시드 RS-667에 대한 독성 데이타이다. RS-788에 대한 항-HIV 활성 증가가 EC50 및 EC90 모두에서 발견되지만 모뉴클레오시드 RS-667와 관련있는 독성 역시 증가한다. 본 화합물은 HIV에 대한 EC50에서 각각의 PBM 세포에 대하여 4300배 및 CEM 세포에 대하여 3400배 차이를 나타낸다.
Figure 112011069709164-pct00054

표 2 : HIV 및 MP 프로드럭 RS-788 및 모뉴클레오시드 RS-667에 대한 독성 데이타 (HIV and Toxicity data for MP prodrug RS-788 and the parent nucleoside RS-667)
PBM 세포에서 6-아미노 그룹 및 5'-MP 프로드럭을 포함하는 RS-788의 배양은 RFS-457-MP, RFS-457-DP, 및 RFS-457-TP의 검출이라는 결과를 가져왔다. 반면에, RS-667의 배양은 이와 반대로, RS-667DP, 및 RS-667TP가 매우 높게 검출되었다 (도 8). MP 프로드럭 RS-788의 배양에 따라 생성되는 세포내 RS-667-TP의 높은 수준은 6-아미노 그룹이 6-OH로 변환되는 것을 MP 프로드럭이 효율적으로 제한하였거나 정지시킨 것을 의미한다.
디옥시포르마이신 (deoxycoformycin), 알려진 아데노신디아미나제 저해제 ( known adenosine deaminase inhibitor)로 전처리한 PBM 세포에서 6-아미노 그룹 및 5'-MP 프로드럭을 포함하는 RS-788의 배양은 RFS-457-MP, RFS-457-DP, 및 RFS-457-TP가 매우 낮은 수준으로 검출되는 결과를 가져왔다. 그러나, RS-667의 배양과는 반대로 매우 높은 수준의 RS-667-MP, RS-667-DP, 및 RS-667-TP가 검출되었다 (도 9).
PHA-자극 인간 PBMCs (PHA-stimulated human PBMCs (PHA-stimulated human PBMCs)) 및 CEM 세포에서 (-)-β-D-2,6-디아미노퓨린 디옥고레인 ((-)-β-D-2,6-diaminopurine dioxolane (DAPD))의 대사는 이전에에 파악되었다 (Antimicrob. Agents Chemother. 2001, 45, 158-165). 상기 이전에의 연구에서 DAPD 는 즉시 (-)-β-D-디옥소란 구아닌 ((-)-β-D-dioxolane guanine (DXG))로 디아민화되는 것을 발견하였다. DXG 및 DAPD가 모두 탐지되었던 반면, PBMC에서 DAPD 수준은 CEM 세포에서 탐지되었던 DAPD 수준보다 27배 높았다; DXG의 수준은 두 가지 타입의 세포에서 거의 비슷했다. DAPD 및 DXG의 세포 내 농도 및 그들의 인산화된 유도체 (phosphorylated derivatives)는 이전에의 비슷한 연구에서 파악되었다. 대응하는 모노-, 디-, 트리- 형태로 바뀌는 DAPD의 인산화는 어떤 세포 타입에서도 검출되지 않았다. DAPD는 DXG로 디아민화되는 것이 발견되었고 그 다음에 DXG-TP로 인산화되었다. PBM 세포에서 4시간동안, 50μM, 37°C에서 6-아미노 그룹을 포함하는 상기 DAPD의 세포 내 대사의 재검토는 DXG 및 DXG-MP에 추가적으로, DXG-TP의 높은 수준의 검출이라는 결과를 가져왔다. 그러나, DAPD가 낮은 수준에서 발견되었고, DAPD의 인산화 형태는 검출되지 않았다 (도 10).
표 3에서 보이는 것은 HIV 및 DAPD-MP 프로드럭 RS-864과 모뉴클레오시드 DAPD에 대한 독성 데이타이다. RS-864에 대한 항 -HIV 활성 증가를 보이는 이러한 경우는 EC50 및 EC90 모두에서 발견되었지만 모뉴클레오시드 DAPD에 관련된 독성은 약간의 증가를 보인다.
Figure 112011069709164-pct00055
표 3. HIV 및 DAPD-MP 프로드럭 RS-864과 모뉴클레오시드 DAPD에 대한 독성 데이타 (HIV and Toxicity data for MP prodrug RS-864 and the parent nucleoside DAPD)
PBM 세포에서 6-아미노 그룹 및 5'-MP 프로드럭을 포함하는, RS-864의 배양은 DXG, DXG-MP, 및 DXG-TP의 낮은 수준의 검출이라는 결과를 가져왔다 (도 11). 그러나, DAPD의 배양과는 반대로, DAPD-TP가 높은 수준으로 검출되었다. 추가적으로, 낮은 수준의 DAPD, DAPD-MP, DAPD-DP가 발견되었다. DAPD-MP 프로드럭의 배양으로 생성된 높은 수준의 세포내 DAPD-TP는 MP 프로드럭이 6-아미노 그룹에서 6-OH로 변환되는 것을 효과적으로 제한하거나 중단시켰다.
실시예 8
항- HIV ( PBM 세포에서) 분석
상기 화합물의 뉴클레오시드 유사체는 6-하이드록시 유사체로 변환 및 이러한 변환에 뉴클레오시드의 모노포스페이트 유사체의 저항에 대한 상기 언급은 본 발명에서 기술하는 상기 화합물의 생물학적 활성을 논의하는 것과 연관이 있다.
이전에 언급한 바와 같이, 상기 화합물의 항-HIV-1 활성은 인간 말초혈액단핵세포 (peripheral blood mononuclear (PBM) cells)에서 밝혀졌다 (참조 Schinazi R.F., McMillan A., Cannon D., Mathis R., Lloyd R.M. Jr., Peck A., Sommadossi J.-P., St. Clair M., Wilson J., Furman P.A., Painter G., Choi W.-B., Liotta D.C. Antimicrob. Agents Chemother. 1992, 36, 2423; Schinazi R.F., Sommadossi J.-P., Saalmann V., Cannon D., Xie M.-Y., Hart G., Smith G., Hahn E. Antimicrob. Agents Chemother. 1990, 34, 1061).
상기 화합물의 보관액 (Stock solutions)(20-40 mM)은 소독한 DMSO에서 제조되었고 증식 배지에서 목적하는 농도로 희석되었다. 세포는 감염다중도 (multiplicity of infection) 0.01에서 원형 HIV-1LAI (prototype HIV-1LAI)으로 감염되었다. 세포 표면에 뜨는 물질로부터 얻어진 바이러스는 감염 6일 후에 (rA)nㆍ(dT)12- 18 를 주형으로 사용하는 역전사 분석법 (reverse transcriptase assay)으로 수량화되었다. 희석 용액 (< 0.1%) 내에 존재하는 DMSO는 바이러스 분야에서 어떠한 영향도 없다. AZT는 양성 대조군으로 포함되었다. 상기 항바이러스 EC50 및 EC90는 이전에 기술되었던 (참조 Chou T.-C. & Talalay P. Adv . Enzyme Regul . 1984, 22, 27-55; Belen'kii M.S. & Schinazi R.F. Antiviral Res . 1994, 25, 1-11) 메디안 이펙티브 메쏘드 (median effective method)를 이용하여 농도-반응 커브를 이용하여 얻어졌다.
실시예 9
HIV -1 RT 에 의한 뉴클레오시드- TPs 의 함입 평가
i) 단백질 발현 및 정제 : HIV-1 RT (xxLAI background) (see Shi C, Mellors JW. A recombinant retroviral system for rapid in vivo analysis of human immunodeficiency virus type 1 susceptibility to reverse transcriptase inhibitors. Antimicrob Agents Chemother. 1997; 41:2781-5)는 p6HRT-PROT 발현벡터를 이용하는 박테리아에서 과발현되었고, 이전에 언급하였던 바와 같이 (참조 Le Grice SF, Gruninger-Leitch F. Rapid purification of homodimer and heterodimer HIV-1 reverse transcriptase by metal chelate affinity chromatography. Eur J Biochem. 1990; 187: 307-14; Le Grice SF, Cameron CE, Benkovic SJ. Purification and characterization of human immunodeficiency virus type 1 reverse transcriptase. Methods Enzymol. 1995; 262:130-44) 동종성을 가지도록 정제되었다. 정제된 효소의 단백질 농도는 260450M-1cm- 1 의 흡광계수를 사용하여 280 nm에서 분광학적으로 결정되었다. RT의 활성 자리 농도는 이전에 기재하였던 바와 같이 (참조 Kati WM, Johnson KA, Jerva LF, Anderson KS. Mechanism and fidelity of HIV reverse transcriptase. J Biol. Chem. 1992; 267: 25988-97), 예비-정상-상태 파열 실험 (pre-steady-state burst experiments)으로 계산되었다. 하기 기술된 모든 반응은 활성 자리 농도로 수행되었다.
ii ) 예비-정상-상태 키네틱 분석 ( Pre - steady - state Kinetic Analyses ): 모든 실험에서 57 뉴클레오티드 DNA 주형 (5'-CTCAGACCCTTTTAGTCAGAATGGAAANTCTCTAGCAGTGGCGCCCG AACAGGGACA-3')에 어닐링된 5'-말단이 20 nucleotide DNA primer (5'-TCGGGCGCCACTGCTAGAGA-3')로 라벨링된 [r32P]-ATP가 사용되었다. 상기 DNA 주형은 30 (N) 위치에서 T 또는 C를 포함하고, 이것은 동일한 20 뉴클레오티드 프라이머를 사용하는 단일 뉴클레오티드 함입의 키네틱스 평가를 가능하게 한다. 빠른 퀀치 실험 (Rapid quench experiments)은 킨텍 RQF-3 인스트루먼트 (Kintek RQF-3 instrument (Kintek Corporation, Clarence, PA))를 이용하여 수행되었다. 모든 반응에서, 300 nM RT 및 60nM DNA 주형/프라이머 (template/primer (T/P))는 20mM MgCl2를 포함하는 동일한 반응 버퍼에서 동일한 부피의 뉴클레오티드와 혼합되기에 앞서 반응 버퍼 (50mM Tris-HCl pH 7.5, 50 mM KCl)에서 전배양되었다. 10 ms 에서 30분에 이르는 시간동안 0.5M EDTA, pH 8.0로 어닐링 (quenching)함에 따라 반응은 종결되었다. 상기 어닐링된 샘플을 겔 로딩 버퍼 (gel loading buffer)(98% deionized formamide, 10 mM EDTA 및 bromophenol blue과 xylene cyanol 각각 1mg/mL)와 동일한 부피로 혼합하고 85°C에서 5분동안 변성 시키면 상기 생성물이 7M 우레아-16% 폴리아크릴아미드 겔 (7M urea-16% polyacrylamide gel) 상에서 기질로부터 분리되어졌다. 생성물 형성은 바이오-라드 GS525 몰레큘러 이매져 (Bio-Rad GS525 Molecular Imager (Bio-Rad Laboratories, Inc., Hercules, CA))를 이용하여 분석되었다.
iii ) 데이터 분석 : 키네틱 분석으로부터 얻어진 데이터는 적절한 수식 (참조 Johnson KA. Rapid quench kinetic analysis of polymerases, adenosinetriphosphatases, and enzyme intermediates. Methods Enzymol. 1995; 249:38-61)과 함께 시그마 플롯 소프트웨어 (Sigma Plot software (Jandel Scientific))를 사용하는 비선형 회귀 (nonlinear regression)에 의하여 적합하게 되었다. dNTP의 각각의 특별한 농도에 대한 겉보기 파열 속도 상수 (apparent burst rate constant (kobs))는 하기 식으로 제품 형성에 대한 시간 코스를 맞춰보아 결정되었다. 식 : [product] = A[1-exp(-kobst)], A는 파열 진폭을 의미한다. 턴오버 수 (turnover number (kpol)) 및 dNTP에 대한 겉보기 분리 상수 (K d)는 dNTP 농도에 대하여 겉보기 촉매 속도, kobs를 그래프로 나타내고 다름의 쌍곡선 식에 대입하는 것으로 얻어진다 : kobs = (kpol[dNTP])/([dNTP] + K d).
. 실시예 10
6- 서브스티튜티드 -2-아미노 퓨린 뉴클레오시드 모노포스페이트 (6-Substituted-2-amino purine nucleoside monophosphate )의 항- HIV 및 세포 독성 평가
i) 바이러스 : 보관 바이러스 (stock viruses)는 5 내지 10 ㎍의 플라스미드 DNA를 1.3 x 107 MT-2 세포로 일렉트로포레이트 시킴에 따라 얻어지는 xxHIV-1LAI clone75을 이용하여 제조되었다. 7일간의 후-형질주입 (post-transfection)에서, 무세포 (cell-free) 상층액이 얻어졌고 -80°C에서 보관되었다. 보관 바이러스의 유전자 타입은 비리온 ()으로부터의 RNA 추출, 상기 추출물을 DNase I으로 처리, RT-PCR에 의한 RT의 전체 코딩 영역 (아미노산 1 내지 560)의 증폭, 상기 PCR 생성물의 정제, 및 ABI 3100 automated DNA sequencer (Applied Biosystems, Foster City, Calif.) 상에서 Big Dye terminator kit (v. 3.1)를 이용하여 상기 PCR 생성물의 시퀀스 결정으로 확인되었다.
바이러스 보관용 50% 조직 배양 감염량 (50% tissue culture infective dose (TCID50))은 3중 종점 희석법 (three-fold endpoint dilution assays) (6 wells per dilution) 에 의하여 MT-2 세포, P4/R5 세포 또는 PBM 세포용으로 결정되었고 리드-무엔크 식 (Reed and Muench equation)을 이용하여 계산되었다 (참조 Reed LJ, Muench H. A simple method of estimating fifty per cent endpoints. Am. J. Hyg. 1938; 27:493-497).
ii ) 단일-복제-사이클 약물 민감성 분석 ( Single - Replication - Cycle Drug Susceptibility Assay ) : 96-well 플레이트에서, 저해제의 2번 또는 3번의 연속적인 희석액은 P4/R5 세포로 3번 첨가되었다. 세포는 약물 처리되지 않은, 바이러스 감염 대조군에서 상대적인 빛 유닛 값 (relative light unit value) 100으로 수득되어진 많은 양의 바이러스로 감염되었다. 감염 후 48시간에, 세포 용해 버퍼 및 발광성 기질 (Gal-Screen; Tropix/Applied Biosystems)이 각각의 웰에 첨가되었고, 상대 빛 유닛 값은 광도계 (ThermoLabSystems, Waltham, Mass.)를 이용하여 결정되었다. 바이러스 복제 저해는 50% (EC50)에 의하여 바이러스 복제를 저해하기 위하여 얻어지는 화합물의 농도로 산출되었다.
iii ) 다중-복제-사이클 약물 민감성 분석 ( Multiple - Replication - Cycle Drug Susceptibility Assay ) : 96-well 플레이트에서, 저해제의 3번의 연속적인 희석액은 MT-2 세포로 3번 첨가되었다. 상기 세포는 MT-2 세포에서 종점 희석에 의하여 결정된 0.01의 감염 다양성에서 감염되었다. 7일간의 후-감염 (post-infection)에서, 세포 상층액이 얻어졌고 0.5% Triton X-100으로 처리되었다. 상기 상층액에서의 p24 안티겐 농도는 상업적인 효소 면역측정법(enzyme-linked immunosorbent assay (DuPont, NEN Products, Wilmington, Del.))을 이용하여 결정되었다. EC50 값은 상기 언급한 바와 같이 계산되었다.
iv ) PBM 세포에서 약물 민감성 분석 : PBM 세포는 이전에 언급한 바와 같이 (참조 Schinazi RF, Cannon DL, Arnold BH, Martino-Saltzman D. Combinations of isoprinosine and 3'-azido-3'-deoxythymidine in lymphocytes infected with human immunodeficiency virus type 1. Antimicrob. Agents Chemother. 1988; 32:1784-1787; Schinazi RF, Sommadossi JP, Saalmann V, Cannon DL, Xie MY, Hart GC, Smith GA. Hahn E.F. Activities of 3'-azido-3'-deoxythymidine nucleotide dimers in primary lymphocytes infected with human immunodeficiency virus type 1. Antimicrob. Agents Chemother. 1990; 34:1061-1067) 건강하고 음성혈청의 공여체로부터 Ficoll-Hypaque 비연속적 경사 원심분리법 (discontinuous gradient centrifugation)에 의하여 분리되었다. 세포는 사용하기 전 2-3일 동안 피토헤마글루티닌 A (phytohemagglutinin A (PHA, Difco, Sparks, MD)로 활성화되었다. 감염은 1시간동안, 플라스크 (T25) 분석에 대하여 100 TCID50/1 x 107 세포 또는 24-well 플레이트 분석에 대하여 TCID50/6 x 107 세포/well과 같이 대량으로 수행되었다. 세포는 연속적으로 10회 희석된 상기 테스트 화합물을 포함하는 플레이트 또는 플라스크에 첨가되었다. 감염 후 5일째에, 배양 상층액을 0.5% Triton X-100으로 처리하였다. 상층액에서 p24 안티겐 농도는 상기 기재한 바와 같이 결정되었다. EC50 및 폴드-저항 값 (fold-resistance values)은 상기 기재한 바와 같이 계산되었다.
v) 세포 독성 분석: 6-서브스티튜티드-2-아미노 퓨린 뉴클레오시드 모노포스페이트 (6-Substituted-2-amino purine nucleoside monophosphate) 프로드럭은 P4/R5 세포, MT-2 세포 및 PHA에 감염되지 않은-활성화된 인간 PBM 세포에서 독성을 가질 가능성이 있는 것으로 평가되었다.
로그기 P4/R5, MT-2, 및 PHA-활성화된 인간 PBM 세포는 10회 연속적인 희석되어진 상기 테스트 약물을 포함하는 96-well 세포 배양 플레이트에서 5 x 103 내지 5 x 104 세포/well가 되도록 배양되었다. 상기 배양은 2-4일동안 계속되었고 그 후 3-(4,5-디메틸싸이아졸-2-일)-2,5-디페닐테트라졸리움 브로마이드 (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT)) 염료 용액 (Promega, Madison, WI)이 각각의 웰에 첨가되었고, 하루밤동안 배양하였다. 상기 반응은 가용화 정지 용액 (stop solubilization solution (Promega, Madison, WI))으로 중단되었고 플레이트는 570 nm파장에서 분석되었다. 중앙값 50% 세포독성 농도 (median 50% cytotoxic concentration (CC50))는 메디안 이펙티브 메쏘드 (median effective method)를 이용한 농도-반응 커브를 이용하여 얻어졌다.
실시예 11
약물-내성 HIV 에 대한 6- 서브스티튜티드 -2-아미노 퓨린 뉴클레오시드 모노포스페이트 (6- Substituted -2- amino purine nucleoside monophosphate ) 프로드럭의 활성 평가
모 유사체 (parent analog)와 비교하여 향상된 활성 및 감소된 세포 독성을 가지는 상기 언급한 유사체는 약물 내성 바이러스의 벽에 대하여 활성을 가지는 것으로 평가되었다. 본 발명에서 사용된 상기 약물 내성 바이러스는 HIV-1K65R, HIV-1K70E, HIV-1L74V, HIV-1M184V, HIV-1AZT2, HIV-1AZT3, HIV-1AZT7, HIV-1AZT9, HIV-1Q151M 및 HIV-169 Insertion 를 포함한다. HIV-RT에서 상기 바이러스 및 돌연변이의 유전자 타입은 도 12에 기재되어 있다. 상기 돌연변이 바이러스는 모두 우리의 HIV-1xxLAI clone에서 생성되었다.
실시예 12
약물 내성 HIV 에 대한 6- 서브스티튜티드 -2-아미노 퓨린 뉴클레오시드 모노포스페이 트 (6- Substituted -2- amino purine nucleoside monophosphate )의 활성 평가
i) 바이러스 및 약물 민감성 분석 : 저장 바이러스는 상기 언급한 바와 같이 준비되었다. 약물 민감성 분석은 역시 상기 언급한 바와 같이 단일- 및 다중-복제-사이클 분석을 이용하여 수행되었다. 바이러스 복제의 저해는 50% (EC50)에 의하여 바이러스 복제를 저해하여 얻어지는 화합물의 농도로 계산되었다. 폴드-저항 값 (fold-resistance values)은 돌연변이 HIV-1에 대한 EC50를 WT HIV-1에 대한 EC50 값으로 나누어 결정되었다.
ii ) 통계 분석 : 폴드-저항 값 (fold-resistance values)이 통계학적으로 현저한지 여부를 결정하기 위하여, 2가지 샘플 연구원의 t test를 이용하여 Sigma Stat 소프트웨어 (Jandel Scientific)로 변형되고 비교된 최소한 3개의 독립된 실험으로부터 얻어진 EC50 값은 log10 이었다. 0.05 미만의 P values는 통계학적으로 유의한 결과로 고려되어졌다.
실시예 13
돌연변이 HIV -1 RTs 에 의한 뉴클레오티드의 함입 및 절제 평가
i) 효소 : 다음의 돌연변이 HIV-1 RT 효소가 이하 사용될 수 있다 : K65R RT, K70E RT, L74V RT, M184V RT, AZT2 RT, AZT3 RT, Q151M RT 및 69Insert RT. 상기 돌연변이 RT 각각에 대한 E. coli 단백질 발현 벡터가 개발될 수 있고 , 단백질 발현 및 정제는 이전에에 기술되었던 바처럼 수행될 수 있다. 단백질 농도 및 활성 자리 농도는 상기 언급한 바와 같이 결정된다.
ii ) 뉴클레오시드 함입의 키네틱 분석 : 예비-정상-상태 키네틱 분석 (Pre-steady-state kinetic analyses)은 K65R, K70E RT, L74V RT, M184V RT 및 Q151M RT에 대한 각각의 신규한 뉴클레오시드-TPs (nucleoside-TPs)의 키네틱 파라미터 (kinetic parameters) Kd 및 kpol를 결정하는 데 이용될 수 있다. 실험 디자인 및 데이터 분석은 상기 기술한 바와 같이 수행될 수 있다.
iii ) 절제 ( Excision )분석 : 사슬-종결된 주형/프라이머 (chain-terminated template/primer)로부터 신규한 유사체의 ATP-매개 가인산분해 절제 (ATP-mediated phosphorolytic excision)는 WT RT, AZT2 RT, AZT3 RT 및 69Insert RT를 이용하여 수행될 수 있다. 상기 언급된 20 뉴클레오티드 DNA 프라이머는 5'-말단이 [γ32P]-ATP로 라벨링될 수 있고 그 후 적절한 57 뉴클레오티드 DNA 주형으로 어닐링 될 수 있다. 상기 프라이머의 3'-말단은 WT RT 및 적절하게 변형된 뉴클레오티드 유사체 100μM를 37°C에서 30분동안 배양하여 사슬-종결시킬 수 있다. 상기 32P-라벨링되고, 사슬 종결된 21 뉴클레오티드 프라이머는 나아가 7M 우레아 (urea)-16% 아크릴아미드 (acrylamide) 변성 겔 전기영동 (denaturing gel electrophoresis) 처리 후에 적절한 밴드의 절개에 의하여 정제될 수 있다. 상기 정제된 사실-종결된 프라이머는 가인산분해 (phosphorolysis) 실험에서 사용되기 위하여 적절한 DNA 주형으로 다시 어닐링 될 수 있다. 50 mM Tris-HCl pH 8.0, 50 mM KCl에서 300 nM (활성 자리) WT 또는 돌연변이 RT와 관심 있는 사슬-종결된 T/P 복합체 60 nM를 배양하여 상기 nucleoside-MP의 가인산분해 제거가 얻어질 수 있다. 상기 반응은 3.0 mM ATP 및 10 mM MgCl2의 첨가로 시작될 수 있다. 무기 피로포스파타제 (Inorganic pyrophosphatase (0.01 U))는 상기 반응을 통하여 나타날 수 있다. 정의되어진 배양 시간 후, 부분 표본 (aliquots)은 반응 큐브에서 제거되고 겔 로딩염료 (gel loading dye)(98% deionized formamide, 10mM EDTA 및 bromophenol blue 및 xylene cyanol 각각 1mg/mL)와 동일한 부피로 담금질 시킬 수 있다. 생성물은 변성 겔 전기영동 (denaturing gel electrophoresis)으로 분리될 수 있고, 생성물의 형성과 일치하는 기질의 소멸이 바이오-라드 GS525 몰레큘러 이매져 (Bio-Rad GS525 Molecular Imager)를 이용하여 분석될 수 있다. 데이터는 ATP-매개 절제 (ATP-mediated excision)의 확실한 속도 (kATP)를 측정하기 위하여 다음의 단일 지수식으로 결정되었다 : [product] = A[exp(-kATPt)], 여기에서 A는 생성물 형성을 위한 진폭을 나타낸다. 막다른 복합체 형성은 이전에 기술하였던 것처럼 알아낼 수 있다 (참조 Meyer PR, Matsuura SE, Mian AM, So AG, Scott WA. A mechanism of AZT resistance: an increase in nucleotide-dependent primer unblocking by mutant HIV-1 reverse transcriptase. Mol Cell. 1999;4:35-43; Sluis-Cremer N, Arion D, Parikh U, Koontz D, Schinazi RF, Mellors JW, Parniak MA. The 3'-azido group is not the primary determinant of 3'-azido-3'-deoxythymidine (AZT) responsible for the excision phenotype of AZT-resistant HIV-1. J Biol Chem. 2005; 280: 29047-52).
실시예 14
HepG2 세포에서 미토콘드리아 독성 분석 :
i) 세포 증식 및 젖산 생산에 있어서 6- 서브스티튜티드 -2-아미노 퓨린 뉴클레오시드 모노포스페이트 (6- Substituted -2- amino purine nucleoside monophosphate) 프로드럭의 효과 : HepG2 세포의 성장 결과는 0μM, 0.1μM, 1μM, 10μM 및 100μM 약물 존재 하에서 세포를 배양함에 의하여 확인되었다. 10% 우태아 혈청, 1% 소듐 피루베이트 (sodium pyruvate) 및 1% 페니실린/스트렙토마이신 (penicillin/streptomycin)이 추가된 비필수 아미노산이 처리된 최소한의 필수 배지에서 세포 (5 x 104 per well)가 12-well 세포 배양 클러스터로 배양되었고 37°C에서 4시간동안 처리되었다. 상기 배양 시간이 끝날 무렵에 세포 수는 혈구계수기 (hemocytometer)를 이용하여 측정되었다. 아울러 Pan-Zhou X-R, Cui L, Zhou X-J, Sommadossi J-P, Darley-Usmer VM. "Differential effects of antiretroviral nucleoside analogs on mitochondrial function in HepG2 cells"Antimicrob. Agents Chemother. 2000; 44: 496-503에 의하여 알려졌다. 젖산 생성에 있어서 뉴클레오시드 유사체의 효과를 측정하기 위하여, 보관용 배양의 HepG2 세포를 희석시키고 각 웰마다 2.5 x 104 세포를 가지도록 12-웰 배양 플레이트에 심어주었다. 다양한 농도 (0μM, 0.1 μM, 1 μM, 10 μM 및 100μM)의 뉴클레오시드 유사체가 추가되었고, 37°C, 습기가 많은 5% CO2 조건에서 상기 배양은 4일 동안 계속되었다. 4일째 되는 날 각각의 웰에서 세포의 숫자가 결정되었고 배양 배지가 수집되었다. 상기 배양 배지는 여과되었고, 상기 배지에서 젖산 함량은 비색분석 젖산 분석 (colorimetric lactic acid assay (Sigma-Aldrich))으로 분석되었다. 젖산 생성물이 손상된 미토콘드리아의 작용을 위한 마커로 고려될 수 있고, 6-서브스티튜티드-2-아미노 퓨린 뉴클레오시드 모노포스페이트 (6-substituted-2-amino purine nucleoside monophosphate) 프로드럭 유사체의 존재 하에서 증식한 세포를 탐지하는 젖산 생성물의 증가된 레벨은 약물-유도 독성 효과를 나타낼 수 있다.
ii ) 미토콘드리아 DNA 합성에 있어서 6- 서브스티튜티드 -2-아미노 퓨린 뉴클레오시드 모노포스페이트 프로드럭의 효과 : 미토콘드리아 DNA 함량을 정확하게 수량화하기 위한 실시간 PCR (real-time PCR) 분석법이 개발되었다 (참조 Stuyver LJ, Lostia S, Adams M, Mathew JS, Pai BS, Grier J, Tharnish PM, Choi Y, Chong Y, Choo H, Chu CK, Otto MJ, Schinazi RF. Antiviral activities and cellular toxicities of modified 2',3'-dideoxy-2',3'-didehydrocytidine analogs. Antimicrob. Agents Chemother. 2002; 46: 3854-60). 상기 분석법은 미토콘드리아 DNA 함량에 대한 뉴클레오시드 유사체의 효과를 결정하는 본 출원에 기술된 모든 실시예에서 사용되었다. 상기 분석법에서, 계대수가 적은 (low-passage-number) HepG2 세포가 콜라겐-코팅 96-웰 플레이트 (96-well plates)에서 5,000 세포/웰 (cells/well) 이 되도록 심어졌다. 뉴클레오시드 모노포스페이트 유사체는 최후 농도가 0μM, 0.1 μM, 10 μM 및 100μM가 되도록 배지에 추가되었다. 배양 7일 째에, 세포의 핵산은 상업적으로 이용가능한 컬럼 (RNeasy 96 kit; Qiagen)을 이용하여 준비되었다. 상기 키트는 RNA 및 DNA, 나아가, 컬럼으로부터 녹여서 분리되는 전체 핵산을 함께 정제한다. 상기 미토콘드리아 시토크롬 c 산화효소 서브유닛 II (mitochondrial cytochrome c oxidase subunit II (COXII))유전자 및 β-actin 또는 rRNA 유전자는 양쪽 표적 및 보조 증폭에 대한 적절한 프라이머 (primers) 및 프로브 (probes)를 가지는 복합 Q-PCR 프로토콜 (multiplex Q-PCR protocol)을 이용하여 녹여서 분리된 핵산 5 ㎕로부터 증폭되었다. COXII에 대하여 이어지는 센스, 프로브 및 안티센스 프라이머 (antisense primers)는 각각 다음과 같이 사용하였다: 5'-TGCCCGCCATCATCCTA-3', 5'-테트라클로로 (tetrachloro)-6-카복시플루오레세인 (carboxyfluorescein)-TCCTCATCGCCCTCCCATCCC-TAMRA-3' 및 5'-CGTCTGTTATGTAAAGGATGCGT-3'. β-액틴 (β-actin) 유전자 (GenBank accession number E01094)의 엑손 3 (exon 3)에 대한 센스, 프로브, 및 안티센스 프라이머는 각각 5'-GCGCGGCTACAGCTTCA-3', 5'-6-FAMCACCACGGCCGAGCGGGATAMRA-3' 및 5'-TCTCCTTAATGTCACGCACGAT-3'이다. rRNA 유전자에 대한 상기 프라이머 및 프로브는 Applied Biosystems사로부터 사업적으로 구매가능하다. 모든 유전자에서 동일한 증폭 효율이 얻어졌기 때문에, 상대적인 CT 방법 (The comparative CT method)은 미토콘드리아 DNA 합성의 저해 가능성을 연구하는데 사용되었다. 상기 상대적인 CT 방법은 표적 (COXII gene)의 총량이 내생성 보조 (endogenous reference (β-actin 또는 rRNA gene))의 총량으로 정상화되고 교정기 (calibrator) (7일동안 약품처리를 하지 않은 대조군)와 연관된 계산식을 사용한다. 상기 접근을 위한 계산식은 2-△△CT에 의하여 얻어지고, 상기 △△CT 는 (평균 타겟 테스트 샘플용 CT ( CT for average target test sample)- 표적 대조군용 CT ( CT for target control) ) - (평균 보조 테스트용 CT ( CTfor average reference test) -보조 대조군용 CT ( CT for reference control))이다 (참조 Johnson MR, K Wang, JB Smith, MJ Heslin, RB Diasio. Quantitation of dihydropyrimidine dehydrogenase expression by real-time reverse transcription polymerase chain reaction. Anal. Biochem. 2000; 278:175-184). 약물 존재 하에서 증식한 세포에서 미토콘드리아 DNA 양의 감소는 미토콘드리아의 독성을 알려줄 수 있다.
iii ) 전자 현미경 형태 분석 ( Electron Microscopic Morphologic Evaluation): 독성을 유도하는 NRTI는 투과 전자 현미경 (transmission electron microscopy)을 이용하는 초미세구조 분석법 (ultrastructural analysis)에 의하여 발견될 수 있는 미토콘드리아에서 형태적인 변형 (예. 크리스타(cristae), 매트릭스 (matrix) 용해, 팽윤 (swelling)의 감소 및 지질 덩어리 형성)을 유도하는 것으로 관찰되었다 (참조 Cui L, Schinazi RF, Gosselin G, Imbach JL. Chu CK, Rando RF, Revankar GR, Sommadossi JP. Effect of enantiomeric and racemic nucleoside analogs on mitochondrial functions in HepG2 cells. Biochem. Pharmacol. 1996, 52, 1577-1584; Lewis W, Levine ES, Griniuviene B, Tankersley KO, Colacino JM, Sommadossi JP, Watanabe KA, Perrino FW. Fialuridine and its metabolites inhibit DNA polymerase gamma at sites of multiple adjacent analog incorporation, decrease mtDNA abundance, and cause mitochondrial structural defects in cultured hepatoblasts. Proc Natl Acad Sci U S A. 1996; 93: 3592-7; Pan-Zhou XR, L Cui, XJ Zhou, JP Sommadossi, VM Darley-Usmar. Differential effects of antiretroviral nucleoside analogs on mitochondrial function in HepG2 cells. Antimicrob . Agents Chemother. 2000, 44, 496-503). 예를 들면, 10 μM 피얼루리다인 (fialuridine (FIAU; 1,2'-deoxy-2'-fluoro-1-D-arabinofuranosly-5-iodo-uracil))으로 배양한 HepG2 세포의 전자 현미경 사진은 미토콘드리아 기능장애와 일치하는 형태 변형과 함께 팽창된 미토콘드리아의 존재를 보여주었다. 6-서브스티튜티드-2-아미노 퓨린 뉴클레오시드 모노포스페이트 (6-substituted-2-amino purine nucleoside monophosphate) 전구약물이 미토콘드리아에서 형태학적 변형을 촉진하는지를 확인하기 위하여, HepG2 세포 (2.5 x 104 cells/mL)가 0μM, 0.1 μM, 1 μM, 10μM 및 100 μM 뉴클레오시드 유사체의 존재 하에서 세포 배양접시 (35 by 10 mm)로 심어진다. 8일째에, 상기 세포는 이전에 언급하였던 에포나스 (Eponas )에서 고정되고, 탈수되고, 끼워 넣어진다. 얇은 부분이 우라실 아세테이트 (uranyl acetate) 및 리드 시트레이트 (lead citrate)로 제조 및 염색되고 나서 투과 전자 현미경을 이용하여 검사되었다.
실시예 15
Neuro2A 세포에서 미토콘드리아 독성 분석
신경 세포 독성을 유래하는 뉴클레오시드 유사체의 가능성을 평가하기 위하여, 마우스 Neuro2A 세포 (American Type Culture Collection 131)가 모델시스템으로 이용될 수 있다 (참조 Ray AS, Hernandez-Santiago BI, Mathew JS, Murakami E, Bozeman C, Xie MY, Dutschman GE, Gullen E, Yang Z, Hurwitz S, Cheng YC, Chu CK, McClure H, Schinazi RF, Anderson KS. Mechanism of anti-human immunodeficiency virus activity of beta-D-6-cyclopropylamino-2',3'-didehydro-2',3'-dideoxyguanosine. Antimicrob . Agents Chemother . 2005, 49, 1994-2001). 50% (CC50)에 의하여 세포 증식을 방해하는 필수 농도는 언급된 바와 같이, 3-(4,5-디메틸-싸이아졸-2-일)-2,5-디페닐테트라아조리움 브로마이드 (3-(4,5-dimethyl-thiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) 시료-기반 분석법을 이용하여 측정될 수 있다. 약물의 정의된 농도에서 세포내 젖산 및 미토콘드리아 DNA 레벨의 변화는 상기 언급한 바와 같이 수행될 수 있다. 모든 실시예에서 ddC 및 AZT는 뉴클레오시드 유사체의 대조군으로 사용될 수 있다.
실시예 16
DNA 폴리머라제에서 뉴클레오티드 유사체의 효과 및 미토콘드리아 DNA 폴리 머라제 γ의 엑소뉴클리아제 ( Exonuclease )활성
i) 인간 폴리머라제 γ의 정제 : 폴리머라제 γ의 대형 재조합체 서브유닛 및 폴리머라제 γ의 소형 재조합체 서브유닛은 이전에 기술한 바와 같이 정제될 수 있다 (참조 Graves SW, Johnson AA, Johnson KA. Expression, purification, and initial kinetic characterization of the large subunit of the human mitochondrial DNA polymerase. Biochemistry. 1998, 37, 6050-8; Johnson AA, Tsai Y, Graves SW, Johnson KA. Human mitochondrial DNA polymerase holoenzyme: reconstitution and characterization. Biochemistry 2000; 39: 1702-8). 상기 단백질 농도는 280 nm에서 분광광도계 (spectrophotometrically)로 측정될 수 있고, 폴리머라제 γ의 대형 재조합체 서브유닛 및 폴리머라제 γ의 소형 재조합체 서브유닛 각각에 대하여 234,420, 및 71,894 M-1 cm-1의 흡광 계수를 가진다.
ii ) 뉴클레오시드 함입의 키네틱 분석 : 예비-정상-상태 키네틱 분석 (Pre-steady-state kinetic analyses)은 뉴클레오시드-TP 및 천연 dNTP 기질에 대한 DNA 폴리머라제 γ 함입의 촉매 효율을 결정하는데 사용될 수 있다. 이것은 상기 효소가 변형된 유사체에 함입 및 독성 예측과 관련된 능력을 결정하도록 해 준다. DNA 폴리머라제 γ에 의한 뉴클레오티드 유사체 함입의 예비-정상-상태 키네틱 분석은 이전에 언급한 바와 같이 필수적으로 수행될 수 있다 (참조 Murakami E, Ray AS, Schinazi RF, Anderson KS. Investigating the effects of stereochemistry on incorporation and removal of 5-fluorocytidine analogs by mitochondrial DNA polymerase gamma: comparison of D- and L-D4FC-TP. Antiviral Res. 2004, 62, 57-64; Feng JY, Murakami E, Zorca SM, Johnson AA, Johnson KA, Schinazi RF, Furman PA, Anderson KS. Relationship between antiviral activity and host toxicity: comparison of the incorporation efficiencies of 2',3'-dideoxy-5-fluoro-3'-thiacytidine-triphosphate analogs by human immunodeficiency virus type 1 reverse transcriptase and human mitochondrial DNA polymerase. Antimicrob Agents Chemother. 2004, 48, 1300-6). 간단히, 50mM Tris-HCl, 100 mM NaCl, pH 7.8 조건에서 폴리머라제 γ의 대형 (250 nM) 및 소형 (1.25 mM) 서브유닛과 6 0nM DNA 주형/프라이머의 전-배양 (pre-incubated) 혼합물은 MgCl2 (2.5 mM)및 뉴클레오티드 유사체를 다양한 농도로 포함하는 용액으로 첨가될 수 있다. 반응은 이전에 언급한 바와 같이 어닐링되고 분석될 수 있다. 데이터는 상기 언급한 바와 동일한 식으로 얻을 수 있다.
iii) 인간 폴리머라제 γ3' 5' 엑소뉴클리아제 활성 분석 : 상기 인간 폴리머라제 γ 엑소뉴클리아제 활성은 dNTP 부재 하에서 절단 생성물의 형성 속도를 측정하여 연구될 수 있다. 상기 반응은 50mM Tris-HCl, 100mM NaCl, pH 7.8 조건에서 MgCl2 (2.5mM)을 폴리머라제 γ의 대형 서브유닛 (40nM), 소형 서브유닛 (270nM), 및 1,500nM 사슬-종결 주형/프라이머의 전-배양 혼합물에 첨가하여 시작될 수 있고, 정해진 시간 조건에서 0.3M EDTA으로 어닐링시킬 수 있다. 모든 반응 혼합물은 20% 변성 폴리아크릴 아미드 시퀀싱 겔 (denaturing polyacrylamide sequencing gels (8M urea)) 상에서 분석, 바이오-라드 GS525 몰레큘러 이매져 (Bio-Rad GS525 Molecular Imager) 시스템에서 이미지화, 및 몰레쿨러 분석기 (Molecular Analyst (Bio-Rad))로 정량화될 수 있다. 초기에 형성되는 생성물은 시간 함수로 표시할 수 있다. 데이터는 시그마 플롯 (Sigma Plot (Jandel Scientific))으로 선형회귀 (linear regression)로 얻어졌다. 상기 선의 기울기는 엑소뉴클레아제 활성에 대한 kexo를 계산하기 위하여 반응에서 활성 효소 농도에 의하여 나뉠 수 있다 (참조 Murakami E, Ray AS, Schinazi RF, Anderson KS. Investigating the effects of stereochemistry on incorporation and removal of 5-fluorocytidine analogs by mitochondrial DNA polymerase gamma: comparison of D- and L-D4FC-TP. Antiviral Res. 2004; 62: 57-64; Feng JY, Murakami E, Zorca SM, Johnson AA, Johnson KA, Schinazi RF, Furman PA, Anderson KS. Relationship between antiviral activity and host toxicity: comparison of the incorporation efficiencies of 2',3'-dideoxy-5-fluoro-3'-thiacytidine-triphosphate analogs by human immunodeficiency virus type 1 reverse transcriptase and human mitochondrial DNA polymerase. Antimicrob Agents Chemother. 2004; 48: 1300-6).
실시예 17
골수 세포독성 분석
1차 인간 골수 단핵 세포 (Primary human bone marrow mononuclear cells)는 Cambrex Bioscience (Walkersville, MD)사로부터 상업적으로 얻어졌다. 1 unit/mL 에리스로포이에틴 (erythropoietin)을 포함하는 메틸셀룰로오즈 매트릭스를 사용하는 BFU-E 분석법에 반하여, CFU-GM 분석법은 50 units/mL 인간 재조합 과립구대식세포집락자극인자 (human recombinant granulocyte/macrophage colony-stimulating factor)의 존재 하에서 이중층 한천을 사용하여 수행되었다 (참조 Sommadossi JP, Carlisle R. Toxicity of 3'-azido-3'-deoxythymidine and 9-(1,3-dihydroxy-2-propoxymethyl) guanine for normal human hepatopoietic progenitor cells in vitro. Antimicrob. Agents Chemother. 1987; 31: 452-454; Sommadossi, JP, Schinazi, RF, Chu, CK, and Xie, MY. Comparison of Cytotoxicity of the (-) and (+) enantiomer of 2',3'-dideoxy-3'-thiacytidine in normal human bone marrow progenitor cells. Biochem. Pharmacol. 1992; 44:1921-1925). 각각의 실험은 세 개의 다른 공여자 유래 세포의 사본으로 수행되었다. AZT는 양성 대조군으로 사용되었다. 세포는 상기 화합물의 존재 하에서 5% CO2 , 37 °C 조건에서 14-18일 동안 배양되었고, IC50를 결정하기 위하여 50세포보다 더 큰 콜로니는 도립 현미경 (inverted microscope)을 사용하여 계산된다. 상기 50% 저해 농도 (IC50)는 약물 농도 대 생존 분획의 로그 (logarithm)의 최소제곱법 선형회귀분석 (east-squares linear regression analysis)에 의하여 얻어진다. 통계학적 분석은 독립 비대응 샘플 (independent non-paired samples)에 대하여 연구원들의 t-test로 수행되었다.
실시예 18
항- HBV 분석
상기 화합물의 항-HBV 활성은 테트라사이클린 (tetracycline)의 통제 하에서 야생형 HBV를 옮기는 AD-38 세포 주를 처리하는 것에 의하여 결정되었다 (참조 Ladner S.K., Otto M.J., Barker C.S., Zaifert K., Wang G.H., Guo J.T., Seeger C. & King R.W. Antimicrob. Agents Chemother. 1997, 41, 1715-20). 상기 배지 [Tet (-)] 로부터 테트라사이클린의 제거는 HBV의 생산이라는 결과를 가져온다. 상기 화합물로 처리된 세포의 배양 상층액에서 HBV 레벨은 처리되지 않은 대조군의 HBV 레벨가 비교되었다. 테트라사이클린 [Tet (+)]의 대조군 배양은 또한 HBV 표현의 기본적인 레벨을 결정하기 위하여 유지되었다. 3TC가 양성 대조군으로 포함되었다.
실시예 19
세포 독성 분석
상기 화합물의 독성은 이전에 언급한 바와 같이, 베로 (Vero), 인간 PBM, CEM (인간 임파섬유아세포 (human lymphoblastoid)), MT-2, 및 HepG2 에서 평가될 수 있다 (참조 Schinazi R.F., Sommadossi J.-P., Saalmann V., Cannon D.L., Xie M.-Y., Hart G.C., Smith G.A. & Hahn E.F. Antimicrob. Agents Chemother. 1990, 34, 1061-67). 사이클로헥스이미드 (Cycloheximide) 는 양성 세포독성 대조군으로 포함될 수 있고, 용매에 노출된 비처리 세포는 음성 대조군으로서 포함될 수 있다. 상기 세포독성 IC 50 은 이전에 언급되었던 메디안 이펙티브 메쏘드 (median effective method)를 이용하는 농도-반응 곡선으로부터 얻어질 수 있다 (참조 Chou T.-C. & Talalay P. Adv. Enzyme Regul. 1984, 22, 27-55; Belen'kii M.S. & Schinazi R.F. Antiviral Res. 1994, 25, 1-11).
실시예 20
아데노신 디아미나제 ( Adenosine Deaminase ) 분석
6-서브스티튜티드-2-아미노 퓨린 뉴클레오시드 모노포스페이트 (6-substituted-2-amino purine nucleoside monophosphate) 전구약물의 디아민화 경향을 측정하기 위하여, 뉴클레오시드 화합물이 상업적으로 이용가능한 효소와 함께 배양되었고 상기 반응은 분광광도계로 측정되었다. 반응 조건은 25°C에서 50 μM 뉴클레오시드 유사체 0.5 mL를 포함하는 pH 7.4, 50 mM 포타슘 포스페이트 (potassium phosphate)이었다. 반응 시간은 효소의 0.002 유닛에 대하여 7분이고 효소의 0.2 유닛에 대하여 120분이었다 (아데노신 디아미나제의 유닛의 정의는 pH 7.5 , 25°C에서 분당 아데노신 1.0 μmol이 이노신으로 디아민화되는 것이 일 유닛이라고 정의한다).
디옥시아데노신 (Deoxyadenosine)은 효소 0.002유닛을 7분동안 주어진 조건 하에서 59% 디아민시킨 양성 대조군이었다. 디옥시구아노신 (Deoxyguanosine)은 음성 대조군이었다. 광학 밀도 (Optical density)는 265 nm 또는 285 nm에서 측정되었다. 상기 실험의 처음과 끝 사이에서 광학 밀도의 차이점은 생성물로 변형되는 기질의 몰수를 결정하기 위하여 흡광 계수에 의하여 나누어졌고 반응 부피로 곱해졌다. 생성물의 몰 (Mol)수는 디아민화 퍼센트를 얻기 위하여 100% 완전 반응에 이르기까지 기질 등가물 몰수로 나누어졌고 그 후 100으로 곱하여졌다. 상기 검출의 한계는 0.001 광학 밀도 유닛이었다.
실시예 21
뉴클레오티드 모노포스페이트 프로드럭에 대한 내성 바이러스의 선택
말초혈액단핵세포 (Peripheral blood mononuclear (PBM) cell1)는 2개의 T25 플라스크에서 100 mL 열불활성화 우태아 혈청 (heat inactivated fetal bovine serum (Hyclone, Logan, Utah)), 83.3 IU/mL 페니실린 (penicillin), 83.3 μg/mL 스트렙토마이신 (streptomycin (Mediatech Inc., Herndon, VA)), 1.6 mM L-글루타민 (L-glutamine (Mediatech Inc., Herndon, VA)), 0.0008% DEAE-덱스트란 (DEAE-Dextran (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO)), 0.047% 소디움 비카보네이트 (sodium bicarbonate), 및 26 IU/mL 재조합 인터루킨-2 (recombinant interleukin-2 (Chiron Corporation, Emeryville, CA))을 포함하는 RPMI-1640 (Mediatech Inc., Herndon, VA) 5 mL 합계에서 1 x 107 세포로 심어져 있을 수 있고, 둘 중 하나는 대조군 (비처리)이고 나머지 하나는 약물 처리한 것이다.
1PBM 세포는 American Red Cross (Atlanta, GA)사로부터 얻어진 버피코트
(Buffy coats)를 ficoll-hypaque (Histopaque 1077: Sigma) 밀도 구배 원심
분리 (density gradient centrifugation)하여 분리될 수 있다. 버피 코트는
건강하고 음성 혈청반응의 공여자로부터 유래할 수 있다. 세포는 사용하기
2-3일 전에 100 mL 열불활성 우태아 혈청 (heat inactivated fetal bovine
serum (Hyclone, Logan, Utah )), 83.3 IU/mL 페니실린 (penicillin), 83.3
㎍/mL 스트렙토마이신 (streptomycin), 1.6 mM L-글루타민 (L-glutamine
(Mediatech Inc., Herndon, VA))을 포함하는 RPMI-1640 (Mediatech Inc.,
Herndon, VA) 500 mL에서 3㎍/mL 피토헤마글루타닌 A (phytohemagglutinin A
(Sigma-Aldrich, St. Louis, MO))으로 활성화될 수 있다.
천연의 PBM 세포는 100 x TCID50에서 HIV-1LAI 2 로 접종되기 전에 1시간 동안 0.1 μM 뉴클레오티드 모노포스페이트 전구약물로 처리될 수 있다. 상기 처리된 PBM 세포 그룹 및 대조군 비처리 PBM 세포 그룹은, 예를 들면, 1시간 동안 감염시킬 수 있다. 추가적인 5 mL RTU 배지는 각각의 플라스크에 추가될 수 있고 세포는 예를 들면, 37 oC에서 6일동안 배양될 수 있다.
2HIV-1/LAI는 질병관리 및 예방 본부에서 얻어질 수 있고 내성 바이러스 군
으로 사용될 수 있으며 PBM 세포에서 한계희석법 (limiting dilution
method)으로 결정된 0.1의 감염 다양성 (multiplicity of infection (MOI)
)은 감염군으로 시작되기 위하여 선택될 수 있다.
6일째 되는 날, 각각의 플라스크 상층액 1 mL 는 제거될 수 있고 4 oC에서 9,740 g으로 2 시간 동안 회전시킬 수 있다. 상기 결과로 초래된 바이러스 펠렛은 그리고 나서 RT 분석용 바이러스 가용성 버퍼에서 부유하는 상태가 될 수 있다. 전체 RNA 는 상업적인 QIAmp Viral RNA mini kit (Quiagen)를 사용하여 배양 상층액으로부터 분리될 수 있다. 시퀀싱은 바이러스가 내성을 보이는 몇 주 동안 투여된 약물 압력 (drug pressure)에 의하여 만들어지는 어떤 돌연변이가 있는지 결정하기 위하여 대조군 바이러스 및 뉴클레오티드 모노포스페이트 전구약물 처리 바이러스 사이에서 동시에 수행될 수 있다.
상기 비처리 바이러스 군에 관하여 처리 바이러스 군의 퍼센트 저해가 계산될 수 있고 처리 전 몇 주 동안 주의 깊게 관찰될 수 있다. 상기 바이러스 군에 대한 선별적인 압력은 47 주 또는 그 이상의 기간동안 0.1 μM 에서 3.5 μM (EC50 값의 40배)으로 증가될 수 있다.
실시예 22
뉴클레오시드 유사체 트리포스페이트 ( Nucleoside analog triphosphates )의 합성
뉴클레오시드 유사체 트리포스페이트는 Ludwig 및 Eckstein 방법을 이용하여, 대응하는 뉴클레오시드로부터 합성되었다 (Ludwig J, Eckstein F. "Rapid and efficient synthesis of nucleoside 5'-O-(1-thiotriphosphates), 5'-triphosphates and 2',3'-cyclophosphorothioates using 2-chloro-4H-1,3,2-benzodioxaphosphorin-4-one" J. Org . Chem. 1989, 54 631-5). 상기 미가공의 뉴클레오시드 유사체 트리포스페이트는, 예를 들면, HiLoad 26/10 Q 세파로즈 패스트 플로 파마시아 컬럼 (Sepharose Fast Flow Pharmacia column)및 TEAB 버퍼 (pH 7.0)의 기울기를 이용하는 FPLC에 의하여 정제될 수 있다. 상기 생성물은 UV 분광학 (UV spectroscopy), 수소 및 인 NMR (proton and phosphorus NMR), 질량분석기 (mass spectroscopy) 및 HPLC에 의하여 특성화 될 것이다.
상기 결과로 얻어진 트리포스페이트는 상기 언급한 세포 내 약리학 분석 및 HIV-RT (예를 들면, HIV-RT와 함께하는 6-서브스티튜티드-2-아미노 퓨린 뉴클레오시드 트리포스페이트)에 대한 키네틱 결과에 대한 대조군으로 사용될 수 있을 것이다.
실시예 23
HSV -1 및 HSV -2에 대한 활성 스크리닝 분석법
CPE-저해 분석법에서, 약물은 감염 1시간 전에 투여될 수 있어서 상기 분석 시스템은 최대 민감성을 가지고 흡수 또는 투과 뿐만 아니라 그 다음의 사건 같은 초기 복제 단계의 저해를 검출할 것이다. 세포에 결합하는 바이러스의 비-특이적 저해를 제외시키기 위하여, CPE 분석법에서 적정한 활성을 보이는 모든 화합물은 감염 1시간 후에 첨가되는 약물에서 전통적인 플라그 감소분석법 (plaque reduction assay)을 이용하여 확인할 수 있다. 화합물이 부착을 차단하는 상기 경우에 있어서, CPE 분석법에서 양성을 보일 것이지만, 플라그 분석법에 의하여는 음성을 보일 것이다. 효능 : 최소 6개의 약물 농도는 5배 증가된, 100 mg/ml 내지 0.03 mg/ml 범위를 회복시키는데 사용될 수 있을 것이다. 50% (유효 농도 (effective concentration) 50; EC50) 바이러스 복제를 저해하는 복용량이 상기 데이터로부터 계산될 수 있다. 독성 : 효능을 측정하기 위하여 사용되었던 약물 농도와 동일한 농도는 또한, 각각의 실험 화합물의 독성을 결정하기 위한 각각의 분석법에서 비감염 세포 상에서 사용될 수 있다. 생체 염색 (vital strain), 중성 염색 (neutral red)을 계속하는 그들의 실패로부터 결정되어진 세포에 대하여 세포독성이 있는 약물 농도.
HSV-1 약물 민감성 분석은 아울러 이전에 언급된 바와 같이 수행될 수 있다: Schinazi, R.F., Peters, J., Williams, C.C., Chance, D., Nahmias, A.J. "Effect of combinations of acyclovir with vidarabine or its 5'-monophosphate on herpes simplex virus in cell culture and in mice" Antimicrob . Agents Chemother. 1982, 22, 499-507.
실시예 24
HCV 복제 분석법 1
HCV 리플리콘 RNA를 포함하는 Huh 7 Clone B 세포는 96 웰 플레이트에서 5000 세포/웰로 심어질 수 있고, 상기 화합물은 10 μM에서 세포가 심어진 후 즉시 3배가 되는 것으로 시험되었다. 배양 (37°C, 5% CO2)5일 후, 전체 세포 내 RNA는 Gentra 유래의 versaGene RNA purification kit를 이용하여 분리되었다. 리플리콘 RNA 및 내부 대조군 (TaqMan rRNA control reagents, Applied Biosystems)은 단일 단계 멀티플렉스 실시간 RT-PCR 분석 (single step multiplex Real Time RT-PCR Assay)에서 증폭되었다. 상기 화합물의 항바이러스 유효성은 상기 약물 비처리 대조군 (△Ct HCV)의 한계값 RT-PCR 주기 (threshold RT-PCR cycle)로부터 상기 실험 화합물의 한계값 RT-PCR 주기 (threshold RT-PCR cycle)를 빼는 것에 의하여 계산되었다. 3.3의 △Ct는 리플리콘 RNA 레벨에서 1-로그 감소 (1-log reduction (90% 적은 시작물질과 동등한)) 와 동일하다. 아울러 상기 화합물의 세포독성은 △Ct rRNA 값을 이용하여 계산되었다. (2'-Me-C)가 대조군으로 사용되었다. EC90 및 IC5O 값을 결정하기 위하여, △Ct:값은 첫번째로 출발 물질의 분획으로 변했고 그 후 % 저해를 계산하기 위하여 사용되었다.
참조 :
1. Stuyver L et al., Ribonucleoside analogue that blocks replication or bovine viral diarrhea and hepatitis C viruses in culture. Antimicrob . Agents Chemother. 2003, 47, 244-254.
2. Reed IJ & Muench H, A simple method or estimating fifty percent endpoints. Am. J. Hyg . 27: 497, 1938.
3. Applied Biosystems Handbook
실시예 25
웨스트 나일 바이러스 약물 민감성 분석 역시 이전에 언급된 바와 같이 진행될 수 있다 : Song, G.Y., Paul, V., Choo, H., Morrey, J., Sidwell, R.W., Schinazi, R.F., Chu, C.K. Enantiomeric synthesis of D- and L-cyclopentenyl nucleosides and their antiviral activity against HIV and West Nile virus. J. Med. Chem . 2001, 44, 3985-3993.
실시예 26
황열 약물 민감성 분석 역시 이전에 언급된 바와 같이 진행될 수 있다 : Julander, J.G., Furuta, Y., Shafer, K., Sidwell, R.W. Activity of T-1106 in a Hamster Model of Yellow Fever Virus Infection. Antimicrob . Agents Chemother. 2007, 51, 1962-1966.
실시예 27
뎅기열 바이러스 치료에 효과적인 화합물을 확인하기 위한 대표적인 고처리 분석은 이전에 언급하였다 : Lim et al., A scintillation proximity assay for dengue virus NS5 2'-O-methyltransferase-kinetic and inhibition analyses, Antiviral Research, Volume 80, Issue 3, December 2008, Pages 360-369. 뎅기열 바이러스 (Dengue virus (DENV)) NS5는 그것의 N-말단 아미노산 시퀀스에서 메틸트랜스퍼라제 (methyltransferase (MTase)) 활성을 가지고 바이러스 게놈의 RNA에서타입 1 모자 구조 ( type 1 cap structure), m7GpppAm2'-O 의 형성 원인이 된다. 시험관 조건에서 DENV2 2'-O-MTase에 대한 최상의 활성은 정제된 재조합 단백질 및 짧은 바이오티니레이티드 GTP-모자씌워진 RNA 주형 (biotinylated GTP-capped RNA template)을 이용하여 특징지울 수 있다.
초기 속도로부터 파생된 정상-상태 키네틱 파라미터 (Steady-state kinetics parameters)는 화합물 시험용 강력한 근접 측정법 (scintillation proximity assay)을 설정하는데 사용될 수 있다. Lim et al., Antiviral Research, Volume 80, Issue 3, December 2008, Pages 360-369에 의하여 연구되었던 전배양 (Pre-incubation)은 MTase-AdoMet 및 MTase-RNA 복합체가 촉매반응적으로 동일하게 유능했고 (competent) 상기 효소는 무작위적인 bi bi 키네틱 반응을 지원하는 것을 보여준다. Lim은 경쟁적 저해제, S-아데노실-호모시스테인 (S-adenosyl-homocysteine) 및 2개의 동족체, 시네펑인 (sinefungin)및 디하이드로시네펑인 (dehydrosinefungin)으로 상기 분석을 입증하였다. DENV2 MTase의 N-말단에 존재하는 GTP-결합 주머니 (GTP-binding pocket)는 이전에 모자-결합 위치 (cap-binding site)로 생각되었다. 이러한 분석은 2'-O-MTase 활성의 신속, 고민감성 검출을 가능하게 하고 저해 화합물에 대한 고-처리량 스크리닝을 즉시 조정하도록 할 수 있다. 그것은 다양한 종류의 RNA 모자씌워진 MTases (RNA capping MTases)의 효소 활성을 결정하는데 적절하다.
실시예 28
항- 노로바이러스 활성
화합물은 노로바이러스 폴리머라제 및/또는 헬리카제 저해, 복제에 필요한 다른 효소를 저해, 또는 다른 반응에 의하여 항-노로바이러스 활성을 보일 수 있다.
최근 노로바이러스 감염에 대하여 승인받은 약학적 치료법이 없고 (http://www.cdc.gov/ncidod/dvrd/revb/gastro/norovirus-qa.htm), 이것은 아마도 이용가능한 세포 배양 시스템이 부족하기 때문이다. 최근, 리플리콘 시스템이 원본 노워크 G-I 가닥에 대하여 발전하였다 (Chang, K. O., et al. (2006) Virology 353:463-473).
노로바이러스 리플리콘 및 C형 간염 리플리콘 모두 생성되는 리플리콘의 복제를 위하여 바이러스 헬리바제, 프로테아제, 및 폴리머라제를 필요로 한다. 조금 더 최근에는, 시험관 내에서 세포 배양 감염성 분석이 노로바이러스 유전자그룹 I 및 II 접종원을 이용하여 보고되었다 (Straub, T. M. et al. (2007) Emerg. Infect. Dis. 13(3):396-403). 이러한 분석은 마이크로캐리어 비드 (microcarrier beads) 상에서 소장 상피 세포를 이용하여 로테이팅-월 바이오리액터 (rotating- wall bioreactor)에서 수행되어진다. 상기 감염성 분석은 침입 저해제 (entry inhibitors)를 스크리닝하는데 유용할 수 있다.
실시예 29
HepG2 세포에서 활성 트리포스페이트에 대한 뉴클레오시드의 인산화 분석
상기 화합물의 세포내 대사과정을 결정하기 위하여, HepG2 세포는 American Type Culture Collection (Rockville, MD)으로부터 얻어질 수 있고, 비필수 아미노산, 1% 페니실린-스트렙토마이신 (penicillin-streptomycin을 포함하는 최소한의 필수 배지에서 225 cm2 세포 배양으로 자랄 수 있다. 상기 배지는 3일마다 교체하고, 상기 세포는 일주일에 한번씩 계대배양한다. 30 mL trypsin-EDTA 에 10분동안 노출하고 배지를 연속적으로 3번 세척하여 붙어 있는 단일 층의 분리 후, 융합 HepG2 세포는 6-웰 플레이트에서 웰당 2.5 x 106 세포 밀도를 가지도록 심어질 수 있고 명시된 시간 동안 10 μM of [3H] 라벨링된 활성 화합물 (500 dpm/pmol)에 노출될 수 있다.
상기 세포는 5% CO2 조건, 37°C에서 유지된다. 선별된 시간점에서, 상기 세포는 아주 차가운 포스페이트버퍼드셀라인 (phosphate-buffered saline (PBS))으로 세 번 세척된다.
세포내 활성 화합물 및 그것과 연관있는 대사물질은 60% 메탄올로 -20 °C에서 하룻밤동안 세포 펠렛을 배양하고 그 후 차가운 용기에서 1시간 동안 차가운 메탄올 추가 20 pal로 추출함에 따라 추출된다. 상기 추출물은 그 다음에, 결합, 가볍게 여과된 공기 흐름 하에서 건조 및 HPLC qnstjrRK지-20 °C에서 보관된다.
실시예 30
키노몰구스 원숭이 ( Cynomolgus Monkeys )에서 생물학적이용도 분석
이어지는 반응은 상기 화합물이 생물학적으로 이용가능한지 여부를 결정하기 위하여 사용될 수 있다. 본 연구 시작 전 1주일 이내에, 키노몰구스 원숭이는 혈액을 수집하여 이용하기 위하여 만성 정맥 카테터 (chronic venous catheter ) 및 피하 정맥 접근 포트 (subcutaneous venous access port (VAP) )를 외과적으로 삽입할 수 있고 혈액학 및 세럼 화학 측정을 포함하는 생리적 시험 및 체중 측정을 가능하게 할 수 있다. 각각의 원숭이들 (총 6마리)은 복용 농도 5 mg/mL, 복용량 10 mg/kg으로, 정맥 볼누스 (intravenous bolus (3 monkeys, IV)) 또는 경구게비지 (oral gavage (3 monkeys, PO))를 통하여 약 250 μCi 3H 활성을 받아들인다. 각각의 복용 시린지 (syringe)는 복용 전에 투여되는 화합물의 양을 중량 측정하여 결정된 무게이다. 소변 샘플은 목적하는 구간 (약 복용전 18-0 시간, 복용 후 0-4, 4-8 및 8-12 시간)에서 팬 캣취 (pan catch)로 수집되고 보관되었다. 혈액 샘플 또한 만성
정맥 카테터 (chronic venous catheter ) 및 VAP 또는 만성 정맥 카테터 생산이 가능하지 않다면 말초 혈관으로부터 수집되었다 (복용 전0.25, 0.5, 1,2, 3,6, 8, 12 시간 및 복용 후 24 시간). 상기 혈액 및 소변 샘플은 최대 농도 (Cmax), 최대 농도가 얻어질 때의 시간 (TmaX), 커브 지역 (AUC), 상기 복용 농도의 반감기 (TV), 소멸 (CL), 정상 상태 부피 및 분배 (Vss) 및 생물학적이용도 (F)에 의하여 분석된다.
실시예 31
세포 보호 분석 ( CPA )
상기 분석은 Baginski, S. G.; Pevear, D. C.; Seipel, M.; Sun, S. C. C.; Benetatos, C. A.; Chunduru, S. K.; Rice, C. M. and M. S. Collett "Mechanism of action of a pestivirus antiviral compound"PNAS USA 2000, 97 (14), 7981- 7986에 언급된 바와 같이 필수적으로 수행된다. MDBK 세포 사용전 24시간에 (ATCC)는 96-웰 플레이트로 심어진다 (웰당 4000세포). 세포당 0.02 플라그 형성 유닛
(plaque forming units (PFU))의 감염 다양성 (multiplicity of infection (MOI))에서 BVDV (strain NADL, ATCC)으로 감염되고 난 후, 테스트 화합물의 연속적인 희석액은 증식 배지에서 0.5% DMSO 최종농도에서 감염 및 비감염 세포 모두에 첨가된다. 각각의 희석액은 4번 테스트되었다.
세포 밀도 및 바이러스 접종원은 실험을 통하여 계속적인 세포 성장을 보장하고 감염 4일 후에 비처리 대조군에서 90% 이상의 바이러스-유래 세포 파괴를 얻기 위하여 적응된다. 플레이트는 50% TCA에서 고정되고 설포로다민 B (sulforhodamine B)로 염색된다. 상기 웰의 광학 밀도는 마이크로플레이트 리더 (microplate reader)에서 550 nm로 읽힌다.
상기 유효 농도 (effective concentration, (EC50) 값은 바이러스의 세포 용해력의 50% 감소를 가져오는 상기 화합물의 농도로 정의된다.
실시예 32
플라그 감소 분석
화합물에 대하여, 상기 유효 농도는 플라그 감소 분석에 의하여 복제 24-웰 플레이트에서 결정되었다. 세포 단일층은 바이러스의 PFU/웰로 감염된다. 그 후, 2% 비활성 세럼 및 0.75% 메틸 셀룰로오즈 (methyl cellulose)가 첨가된 MEM에서 테스트 화합물의 연속적인 희석액이 단일층으로 첨가된다. 나아가 37 °C에서 3일동안 배양한 배양액은 그 후, 50% 에탄올 및 0.8% 크리스탈 바이올렛 (Crystal Violet)으로 고정, 세척 및 공기 건조된다. 그리고 나서 플라그는 90% 바이러스 제거를 얻기 위한 농도를 결정하기 위하여 계산된다.
실시예 33
수득량 감소 분석
화합물에 대하여, 바이러스 부하 (viral load)에서 6-로그 감소 (6-log reduction)를 얻는 농도는 수득량 감소 분석에 의하여 복제 24-웰 플레이트에서 결정된다. 상기 분석은 Baginski, S. G.; Pevear, D. C.; Seipel, M.; Sun, S. C. C.; Benetatos, C. A.; Chunduru, S. K.; Rice, C. M. and M. S. Collett "Mechanism of action of a pestivirus antiviral compound" PNAS USA 2000,97 (14), 7981-7986에 기재된 바에 대하여 작은 변형을 가하여 수행된다.
간단히, MDBK 세포는 세포당 0.1 PFU의 감염 다양성 (multiplicity of infection (MOI))에서 BVDV (NADL strain)으로 감염되기 24시간 전에 24-웰 플레이트 (웰당 2 x 105 세포)상으로 심어진다. 테스트 화합물의 연속적인 희석액은 증식 배지에서 최종 농도 0.5% DMSO를 가지는 세포로 첨가된다. 각각의 희석액은 3회 시험된다. 3일 후, 세포 배양액 (세포 단일층 및 상층액)은 3번의 동결 용해 주기 (freeze-thaw cycles) 에 의하여 용해되고, 바이러스 수득량은 플라그 분석 (plaque assay)에 의하여 수량화된다. 요약하면, MDBK 세포는 사용하기 24시간 전에 6-웰 플레이트 (웰당 5 x 105 세포)로 심어진다. 세포는 1시간동안 테스트 용해물 (lysates)0.2 mL로 접종되고 증식 배지에서 0.5% 한천으로 덮어 씌워진다. 3일 후, 세포 단일층은 3.5% 포름알데하이드로 고정되고 플라그를 보기 위하여 1% 크리스탈 바이올렛 (w/v in 50% ethanol)으로 염색된다. 상기 플라그는 바이러스 부하에서 6-로그 감소를 얻기 위한 농도를 결정하기 위하여 계산된다.
실시예 34
노로바이러스 감염 진단
감염된 사람의 대변에서 역전사-폴리머라제 사슬 반응 (reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR))분석법을 이용하여 바이러스 RNA를 검출함에 의하여 노로바이러스 감염 진단이 가능하다. 상기 바이러스는 비록 증상이 확인된 후 7일에 샘플에 대하여 RT-PCR을 사용하면 만족할만한 결과를 얻을 수 있지만, 증상이 확인된 후 48 내지 72시간 이내에 가검물로부터 확인될 수 있다. 다른 진단 방법은 전자 현미경 관찰 및 최소한 3주 후 수집된 대합혈청 (paired sera) 역가에서 상승에 대한 혈청분석법을 포함한다. 상업적으로 이용가능한 효소-관련 면역분석법 (immunoassay)이 있지만, 이것은 상대적으로 낮은 민감성, 발병의 병인학 진단의 사용에 있어서 제한점을 가지는 경향이 있다. 노로바이러스 감염의 의학적인 진단은 종종 사용되고, 상세하게는 위장염의 다른 원인이 되는 물질이 배제되어질 때 사용된다.
실시예 35
시험관내 항-바이러스 활성
시험관내 항-바이러스 활성은 다음의 세포주에서 평가될 수 있다 : 노워크 G-I 스트레인 (The Norwalk G-I strain (Chang, K. O., et al. (2006) Virology 353:463-473)), GII-4 스트레인 리플리콘 (the GII-4 strain replicon), 뿐만 아니라 다른 노로바이러스 리플리콘 (Norovirus replicons) 역시 본 발명에 기재된 화합물, 또는 다른 화합물 또는 화합물 집단의 시험관내 항바이러스 활성을 결정하기 위한 분석에서 사용될 수 있다.
몇몇 구체예에서, 상기 리플리콘 시스템은 서브게노믹 (subgenomic)이고 따라서 비구조 단백질의 작은 분자 저해제 평가가 가능하도록 한다. 이것은 노로바이러스 약물 발견이 상기 바이러스의 치료에 유용한 치료학적 발견 (Stuyver, L. J., et al. (2006) Antimicrob. Agents Chemother. 47:244-254)에 공헌하는 C형 간염 바이러스와 동일한 이익을 줄 수 있다. 노로바이러스 리플리콘 및 C형 간염 바이러스 리플리콘은 모두 생성되는 리플리콘의 복제를 위하여 바이러스 헬리카제, 프로테아제 및 폴리머라제를 필요로 한다. 본 발명에서 기술되어진 상기 화합물은 바이러스 폴리머라제 및/또는 바이러스 헬리카제를 저해한다고 믿어지고 있다.
노로바이러스 유전자그룹 I 및 II 접종원을 이용하여 보고된 시험관 내 세포 배양 감염성 분석 (Straub, T. M. et al. (2007) Emerg. Infect. Dis. 13(3):396-403) 또한 사용될 수 있다. 이러한 분석은 마이크로캐리어 비드 (microcarrier beads) 상에서 소장 상피 세포를 이용하여 로테이팅-월 바이오리액터 (rotating- wall bioreactor)에서 수행되어진다. 상기 감염성 분석은 목적하는 바이러스를 저해하는 능력에 대한 스크리닝 화합물을 위하여 사용될 수 있다.
실시예 36
항암 화합물 확인용 스크리닝 방법
항암 화합물을 확인하기 위한 대표적인 스크리닝 방법은 Skehan et al., Journal of the National Cancer Institute, Vol. 82, No. 13, 1107-1112, July 4, 1990에 기술되어 있다.
Skehan 방법은 96-웰 마이크로타이터 플레이트에서 착생 및 부유하는 배양액의 세포 내 단백질 함량을 측정하고, 일반적인 실험 목적 및 극히 대량 생산 적용시 적절하다.
배양은 트리클로로아세트산 (trichloroacetic acid)에서 고정되고 1% 아세트산 (acetic acid)에 용해된 0.4% (wt/vol) 설-포호드아민 (sul-forhodamine B (SRB))로 30분동안 염색된다. 풀려있는 염료는 1% 아세트산으로 4번의 세척에 의하여 제거되고, 단백질-결합된 염료는 컴퓨터 인터페이스된, 96-웰 마이크로타이터 리더에서 광학 밀도의 결정을 위하여 10 mM 비버퍼 트리스 염기 (unbuffered Tris base [tris (hydroxymethyl)aminomethane])로 추출된다.
상기 SRB 분석 결과는 세포 숫자 및 드문드문한 하층융합 (subconfluence) 에서 여러층으로 쌓아져 있는 상층융합 (supraconfluence)에 이르는 범위의 밀도에서 로우리 및 브래드포드 분석에 의하여 측정된 세포내 단백질을 위한 값과 함께 직선으로 나타난다.
564 nm에서 상기 신호대잡음비율 (signal-to-noise ratio)은 웰당 1,000 세포에 대하여 약 1.5이다. 상기 SRB 분석의 민삼성은 몇몇 광학 분석의 감수성과 알맞게 비교되고 로우리 및 브래드포드 분석 및 다른 눈에 보이는 염료 모두의 것보다 우세하다고 알려진다. 상기 SRB 분석은 비파괴적이고, 무기한적으로 안정하고, 눈에 보이는 비색종점 (colorimetric end point)을 제공한다. 그것은 약물-유래 세포독성의 민감한 측정을 제공하고, 수량화된 세포생존분획에 있어서 유용하며 고부피, 자동화된 약물 스크리닝에 매우 적절하다. SRB는 488 nm에서 레이저 자극으로 강하게 형광을 내고 고정된 형광 혈구 계산 (static fluorescence cytometry)으로 단일 세포 레벨에서 수량적으로 측정될 수 있다.
앞서 언급한 명세서는 예시 목적으로 제공된 실시예와 함께 본 발명의 원리를 언급하지만, 본 발명의 실시는 이하 청구항 및 그들의 등가물 내에서 초래하는 일반적인 변화, 적용, 및/또는 변형을 포함하는 것으로 이해되어질 것이다.


Claims (63)

  1. 다음 화학식 (I)의 화합물, 또는 이것의 약학적으로 허용되는 염 또는 프로드럭:
    화학식 (I)
    Figure 112017049585047-pct00122

    식 중에서,
    i) R1은 할로겐, OR', N(R')2, SR', OCOR', NHCOR', N(COR')COR', SCOR' 또는 NHCOOR'이고,
    ii) W는 N, CH, CF, CCN, CC≡CH 또는 CC(O)N(R')2이며,
    여기서 각각의 R'은 H, C1-C6 알킬, C1-C6 할로알킬, C1-C6 알콕시, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐 또는 C3-C6 사이클로알킬이고, 상기 그룹들은 비치환되거나 하나 또는 그 이상의 C1-C6 하이드록시알킬, C1-C6 아미노알킬 또는 C1-C6 알콕시 C1-C6 알킬 치환기로 치환되며,
    iii) 당 (Sugar)은 리보오스 또는 화학식 (Ⅱ)의 구조를 가지는 변형된 리보오스이고,
    화학식 (Ⅱ)
    Figure 112017049585047-pct00123

    식 중에서,
    Y는 O 또는 S이고,
    Z는 C(L1L2)2이고, 여기서 L1 및 L2는 독립적으로 H, F, C1-6 알킬, C2-6 알케닐 및 C2-6 알키닐로 구성된 그룹에서 선택되고,
    A는 O이고,
    R4', R5, R5', R6 및 R6은 독립적으로 H, F, Cl, Br, I, OH, SH, NH2, NHOH, NHNH2, N3, C(O)OH, CN, C(O)NH2, C(S)NH2, C(O)OR, R, OR, SR,SSR, NHR, 및 NR2로 구성된 그룹에서 선택되며,
    R7'은 H이고,
    R은 독립적으로 C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐 또는 C3-C6 사이클로알킬이며, 상기 그룹은 비치환되거나 C1-C6 하이드록시알킬, C1-C6 아미노알킬 또는 C1-C6 알콕시 C1-C6 알킬로 구성된 그룹에서 선택된 하나 또는 그 이상의 치환기로 치환되고,
    R2 은 O-페닐이고, 여기에서 페닐은 비치환되거나 (CH2)1-6CO2R9a. C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, C1-C6 알콕시, (CH2)1-6CO2R9a, 할로겐, C1-C6 할로알킬, -N(R9a)2, C1-6 아실아미노, -NHSO2C1-6 알킬, -SO2N(R9a)2, -SO2C1-6 알킬, COR9b, 니트로 및 시아노로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택된 하나 또는 그 이상의 치환기로 치환되며,
    R3는 하기로부터 선택된다;
    (a) OR8에 대하여, R8이 H, C1-20 알킬, C3-6 사이클로알킬, C1-6 할로알킬 또는 C6-10 아릴인데, 여기서 아릴은 C1-6 알킬, C2-6 알케닐, C2-6 알키닐, C1-6 알콕시, (CH2)1-6 CO2R9a, 할로겐, C1-6 할로알킬, -N(R9a)2, C1-6 아실아미노, - NHSO2C1-6 알킬, -SO2N(R9a)2, -SO2C1-6 알킬, COR9b, 나이트로 및 시아노로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되는 1 내지 3 개의 치환기로 치환되고,
    R9a는 독립적으로 H 또는 C1-6 알킬이고,
    R9b는 -OR9a 또는 -N(R9a)2인 OR8,
    (b)
    Figure 112017049585047-pct00124
    에 대하여, R10a와 R10b는,

    (ⅰ) H, C1-10 알킬, -(CH2)rNR9a 2, C1-6 하이드록시알킬, -CH2SH, -(CH2)2S(O)pMe, -(CH2)3NHC(=NH)NH2, (1H-인돌-3-일)메틸, (1H-이미다졸-4-일)메틸, -(CH2)mCOR9b, C6-10 아릴 및 C6-10 아릴-C1-3 알킬로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택되고, 상기 아릴 그룹은 하이드록실, C1-10 알킬, C1-6 알콕시, 할로겐, 나이트로 및 시아노로 이루어진 군으로부터 선택되며,
    (ⅱ) R10a 는 H이고, R10b 및 R12 는 함께 인접한 N 및 C 원자를 포함하는 고리를 형성하는 (CH2)2-4 이고;
    (ⅲ) R10a 및 R10b 는 함께 고리를 형성하는 (CH2)n 이고;
    (ⅳ) R10a 및 R10b 모두 C1-6 알킬이고; 또는
    (ⅴ) R10a은 H이고 R10b은 H, CH3, CH2CH3, CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, CH(CH3)CH2CH3, CH2Ph, CH2-인돌-3-일, -CH2CH2SCH3, CH2CO2H, CH2C(O)NH2, CH2CH2COOH, CH2CH2C(O)NH2, CH2CH2CH2CH2NH2-CH2CH2CH2NHC(NH)NH2, CH2-이미다졸-4-일, CH2OH, CH(OH)CH3, CH2((4'-OH)-Ph), CH2SH, 또는 저급 사이클로알킬이고,
    p는 0 내지 2이고,
    r은 1 내지 6이고,
    n은 4 내지 5이고,
    m은 0 내지 3이고,
    R11은 H, C1-10 알킬, 또는 C1-6 알킬로 치환되어 있는 C1-10 알킬, C1-10 알콕시, 다이(C1-6 알킬)-아미노, 플로로(fluoro), C3-10 사이클로알킬, C3-10 사이클로알킬 C1-6 알킬(cycloalkyl alkyl) 또는 C3-10 사이클로헤테로알킬(cycloheteroalkyl)인데 여기서 상기 치환기는 C1-5 알킬 또는 C1-6 알킬로 치환된 C1-5 알킬, C1-5 알콕시, 디(C1-6 알킬)-아미노, 플로로 또는 C3-10 사이클로알킬이고,
    R12 는 H, C1-3 알킬, 또는 R10a 이거나 또는, R10b 와 R12는 함께 인접한 N 및 C 원자를 포함하는 고리를 형성하도록 하기 위한 (CH2)2-4 인
    Figure 112017049585047-pct00125

    (c) 지질이 부착된 O, 펩티드가 부착된 N 또는 O, 콜레스테롤이 부착된 O, 또는 피토스테롤 (phytosterol)이 부착된 O,
    (d)
    Figure 112017049585047-pct00126
    인데 여기서, R13은 H, C1-10 알킬, C1-6 알킬이 치환된 C1-10 알킬, 알콕시, 다이 (C1-6 알킬)-아미노, 플로로 (fluoro), C3-10 사이클로알킬, C3-10 사이클로알킬 C1-6 알킬(cycloalkyl alkyl),
    p는 0 내지 2이고,
    r은 1 내지 6이고,
    m은 0 내지 3이며,
    Q1 은 NR9a, O, 또는 S이며,
    Q2는 C1-10 알킬, C1-6 하이드록시알킬, C6-10 아릴 또는 C6-10 아릴-C1-3 알킬이고, 상기 아릴 그룹은 비치환되거나 하이드록실, C1-10 알킬, C1-6 알콕시, 플로로 및 클로로로 구성된 군에서 선택된 그룹으로 치환되고;
    R11은 H, C1-10 알킬, C1-6 알킬, 알콕시, 다이 (C1-6 알킬)-아미노, 플로로 (fluoro), C3-10 사이클로알킬, C3-10 사이클로알킬 C1-6 알킬(cycloalkyl alkyl)이고; 여기에서 상기 치환기는 C1-5 알킬, 또는 C1-6 알킬이 치환된 C1-5 알킬, C1-6 알콕시, 다이 (C1-6 알킬)-아미노, 플로로 (fluoro) 또는 C3-10 사이클로알킬이고,
    R12는 H, 또는 C1-3 알킬이거나, 또는 R14b 와 R12는 인접한 N 및 C원자를 포함하는 고리를 형성하기 위한 (CH2)2-4이고,
    상기 기술한 화합물은 β-L- 또는 β-D- 배열 또는 이들의 라세믹 혼합물을 포함하는 혼합물의 형태일 수 있다.
  2. 제 1 항에 있어서, R6'는 H, F, Cl, Br, I, OH, SH, NH2, NHOH, NHNH2, C(O)OH, CN, C(O)NH2, C(S)NH2, C(O)OR, R, OR, SR, SSR, NHR, 및 NR2로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 화합물.
  3. 삭제
  4. 삭제
  5. 삭제
  6. 제 1 항에 있어서, R5 는 NH2, 디메틸아민 (dimethylamine), 메틸-알릴-아민 (methyl-allyl-amine), 메톡시 (methoxy), 클로로 (chloro), 사이클로프로필아민 (cyclopropylamine), 5-하이드록시-펜틸아민 (5-hydroxy-pentylamine), 1,1,-디메틸-에탄올아민 (1,1-dimethyl-ethanolamine), 및 2-메톡시-에틸아민 (2-methoxy-ethylamine)으로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 화합물.
  7. 청구항 제 1 항에 있어서, 상기 화합물은 β-L- 또는 β-D 배열 (configuration), 또는 이들의 라세믹 혼합물인 것을 특징으로 하는 화합물.
  8. 제1항의 화합물의 유효량을 포함하는, HIV-1 또는 HIV-2로 감염된 숙주를 치료 또는 숙주 내에서의 HIV-1 또는 HIV-2 감염의 생물학적 활성을 감소시키기 위한 조성물.
  9. 삭제
  10. 삭제
  11. 삭제
  12. 제8항에 있어서, 다른 항-HIV제와 배합하여 상기 화합물을 투여하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  13. 삭제
  14. 삭제
  15. 제1항의 화합물의 유효량을 포함하는 HBV 감염 숙주를 치료 또는 숙주 내에서의 HIV-1 또는 HIV-2 감염의 생물학적 활성을 감소시키기 위한 조성물.
  16. 삭제
  17. 삭제
  18. 제12항에 있어서, 다른 항-HIV제와 배합하여 상기 화합물을 투여하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  19. 삭제
  20. 제1항의 화합물의 유효량을 포함하는 노로바이러스 (Norovirus) 또는 사포로바이러스 (Saporovirus)로 감염된 숙주를 치료 또는 숙주 내에서의 노로바이러스 또는 사포로바이러스 감염의 생물학적 활성을 감소시키기 위한 조성물.
  21. 삭제
  22. 삭제
  23. 제20항에 있어서, 다른 항-노로바이러스제 또는 항-사포로바이러스제를 추가로 포함하는 조성물.
  24. 삭제
  25. 제1항, 제2항, 제6항 및 제7항 중 어느 한 항의 화합물의 유효량을 포함하는 HCV, 황열(Yellow fever), 뎅기열 바이러스(Dengue) 및 웨스트 나일 바이러스(West Nile virus)를 포함하는 플라비 바이러스과(Flaviviridae family of viruses) 중 어느 하나로 감염된 숙주를 치료하기 위한 조성물.
  26. 삭제
  27. 삭제
  28. 제25항에 있어서, 다른 항-노로바이러스제 또는 항-사포로바이러스제를 추가로 포함하는 조성물.
    .
  29. 삭제
  30. 제1항의 화합물의 유효량을 포함하는 HSV-1 또는 HSV-2로 감염된 숙주를 치료 또는 숙주 내에서의 HSV-1 또는 HSV-2 감염의 생물학적 활성을 감소시키기 위한 조성물.
  31. 삭제
  32. 삭제
  33. 제18항에 있어서, 다른 항-HSV-1제 및 항-HSV-2제를 추가로 포함하는 조성물.
  34. 삭제
  35. 삭제
  36. 삭제
  37. 삭제
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  63. 제25항에 있어서, 상기 바이러스는 HCV, 황열 (Yellow fever), 뎅기열 바이러스 (Dengue) 및 웨스트 나일 바이러스 (West Nile virus)로 구성된 그룹에서 선택되는 조성물.

KR1020117020840A 2009-02-06 2010-02-09 암 및 바이러스 감염 치료용 퓨린 뉴클레오시드 모노포스페이트 프로드럭 KR101774429B1 (ko)

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Families Citing this family (76)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MY164523A (en) 2000-05-23 2017-12-29 Univ Degli Studi Cagliari Methods and compositions for treating hepatitis c virus
HUE033832T2 (en) 2002-11-15 2018-01-29 Idenix Pharmaceuticals Llc 2'-methyl nucleosides in combination with interferon and Flaviviridae mutation
MX2009012433A (es) * 2007-05-14 2010-04-30 Rfs Pharma Llc Azido nucleosidos de purina para el tratamiento de infecciones virales.
WO2010068708A2 (en) 2008-12-09 2010-06-17 Rfs Pharma, Llc 3'-azido purine nucleotide prodrugs for treatment of viral infections
CN102395590A (zh) 2009-02-06 2012-03-28 Rfs制药公司 用于治疗癌症和病毒感染的嘌呤核苷单磷酸酯前药
GEP20156313B (en) 2010-09-22 2015-07-10 Alios Biopharma Inc Substituted nucleotide analogs
EP2619215B1 (en) 2010-09-22 2018-09-05 Alios Biopharma, Inc. Azido nucleosides and nucleotide analogs
US9243025B2 (en) 2011-03-31 2016-01-26 Idenix Pharmaceuticals, Llc Compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections
KR20140033446A (ko) * 2011-05-19 2014-03-18 알에프에스 파마 엘엘씨 바이러스 감염 치료용 퓨린 모노포스페이트 프로드럭
WO2013039920A1 (en) 2011-09-12 2013-03-21 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Substituted carbonyloxymethylphosphoramidate compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections
TW201331221A (zh) 2011-10-14 2013-08-01 Idenix Pharmaceuticals Inc 嘌呤核苷酸化合物類之經取代的３’，５’－環磷酸酯及用於治療病毒感染之醫藥組成物
ES2734495T3 (es) 2011-12-22 2019-12-10 Geron Corp Análogos de guanina como sustratos de telomerasa y afectores de la longitud de los telómeros
EP2794630A4 (en) 2011-12-22 2015-04-01 Alios Biopharma Inc SUBSTITUTED PHOSPHORTHIOAT NUCLEOTIDE ANALOGUE
HUE041509T2 (hu) 2011-12-22 2019-05-28 Janssen Biopharma Inc Szubsztituált nukleozidok, nukleotidok és ezek analógjai
CN104321333A (zh) 2012-03-21 2015-01-28 沃泰克斯药物股份有限公司 硫代氨基磷酸酯核苷酸前药的固体形式
US9441007B2 (en) 2012-03-21 2016-09-13 Alios Biopharma, Inc. Substituted nucleosides, nucleotides and analogs thereof
EP2828278A4 (en) * 2012-03-21 2015-12-09 Alios Biopharma Inc PROCESSES FOR PREPARING SUBSTITUTED NUCLEOTIDE ANALOGS
USRE48171E1 (en) 2012-03-21 2020-08-25 Janssen Biopharma, Inc. Substituted nucleosides, nucleotides and analogs thereof
WO2013142157A1 (en) 2012-03-22 2013-09-26 Alios Biopharma, Inc. Pharmaceutical combinations comprising a thionucleotide analog
AU2013266393B2 (en) 2012-05-22 2017-09-28 Idenix Pharmaceuticals Llc D-amino acid compounds for liver disease
EP2852605B1 (en) 2012-05-22 2018-01-31 Idenix Pharmaceuticals LLC 3',5'-cyclic phosphate prodrugs for hcv infection
WO2013177188A1 (en) 2012-05-22 2013-11-28 Idenix Pharmaceuticals, Inc. 3',5'-cyclic phosphoramidate prodrugs for hcv infection
SG11201407336PA (en) 2012-05-25 2015-03-30 Janssen Sciences Ireland Uc Uracyl spirooxetane nucleosides
CN103665043B (zh) 2012-08-30 2017-11-10 江苏豪森药业集团有限公司 一种替诺福韦前药及其在医药上的应用
US9192621B2 (en) 2012-09-27 2015-11-24 Idenix Pharmaceuticals Llc Esters and malonates of SATE prodrugs
GEP201706723B (en) 2012-10-08 2017-08-25 Idenix Pharmaceuticals Llk 2'-chloro nucleoside analogs for hcv infection
WO2014066239A1 (en) 2012-10-22 2014-05-01 Idenix Pharmaceuticals, Inc. 2',4'-bridged nucleosides for hcv infection
RU2015119999A (ru) * 2012-10-29 2016-12-20 Кокристал Фарма, Инк. Пиримидиновые нуклеозиды и их монофосфатные пролекарства для лечения вырусных инфекций и рака
WO2014099941A1 (en) 2012-12-19 2014-06-26 Idenix Pharmaceuticals, Inc. 4'-fluoro nucleosides for the treatment of hcv
CA2894542C (en) 2012-12-21 2023-10-31 Alios Biopharma, Inc. Substituted nucleosides, nucleotides and analogs thereof
US9339541B2 (en) 2013-03-04 2016-05-17 Merck Sharp & Dohme Corp. Thiophosphate nucleosides for the treatment of HCV
WO2014137926A1 (en) 2013-03-04 2014-09-12 Idenix Pharmaceuticals, Inc. 3'-deoxy nucleosides for the treatment of hcv
WO2014160484A1 (en) 2013-03-13 2014-10-02 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Amino acid phosphoramidate pronucleotides of 2'-cyano, azido and amino nucleosides for the treatment of hcv
BR112015023705A8 (pt) 2013-03-15 2020-03-17 Univ California compostos, composições farmacêuticas, usos de um composto, e método para síntese do composto da fórmula (ia)
WO2014165542A1 (en) 2013-04-01 2014-10-09 Idenix Pharmaceuticals, Inc. 2',4'-fluoro nucleosides for the treatment of hcv
CN105705511A (zh) 2013-04-12 2016-06-22 艾其林医药公司 用于治疗hcv的氘化核苷前药
EP3004130B1 (en) 2013-06-05 2019-08-07 Idenix Pharmaceuticals LLC. 1',4'-thio nucleosides for the treatment of hcv
EP3013340B9 (en) * 2013-06-26 2023-10-04 Janssen Pharmaceuticals, Inc. Substituted nucleosides, nucleotides and analogs thereof
WO2015017713A1 (en) 2013-08-01 2015-02-05 Idenix Pharmaceuticals, Inc. D-amino acid phosphoramidate pronucleotides of halogeno pyrimidine compounds for liver disease
CN103483414B (zh) * 2013-08-30 2016-05-04 郑州大学 一种4-氮杂甾体嘌呤核苷类似物及其制备、应用
US9862743B2 (en) 2013-10-11 2018-01-09 Alios Biopharma, Inc. Substituted nucleosides, nucleotides and analogs thereof
CN104211748B (zh) * 2013-11-15 2017-05-31 南京济群医药科技股份有限公司 6‑羟基双脱氧鸟嘌呤核苷磷酸酯制备和用途
CA2934902C (en) 2014-02-03 2018-08-14 Halliburton Energy Services, Inc. Geomechanical and geophysical computational model for oil and gas stimulation and production
RU2016144076A (ru) * 2014-04-15 2018-05-16 Кокристал Фарма, Инк. Сильнодействующие и селективные ингибиторы вируса гепатита с
US10202411B2 (en) 2014-04-16 2019-02-12 Idenix Pharmaceuticals Llc 3′-substituted methyl or alkynyl nucleosides nucleotides for the treatment of HCV
PL3194411T3 (pl) 2014-09-15 2022-06-20 The Regents Of The University Of California Analogi nukleotydów
ES2742167T3 (es) * 2014-11-28 2020-02-13 NuCana plc Nuevos derivados éster 2' y/o 5' de fosforamidato de aminoácidos de la 3'-desoxiadenosina como compuestos anticancerígenos
EP3261008B1 (en) * 2015-02-17 2021-09-08 Cipherome, Inc. Method for selecting anticancer agent based on protein damage information of individual to prevent anticancer agent side effects
KR102363946B1 (ko) 2015-03-06 2022-02-17 아테아 파마슈티컬즈, 인크. HCV 치료를 위한 β-D-2'-데옥시-2'-α-플루오로-2'-β-C-치환된-2-변형된-N6-치환된 퓨린 뉴클레오티드
CA2984421C (en) * 2015-05-01 2024-04-09 Cocrystal Pharma, Inc. Nucleoside analogs for treatment of the flaviviridae family of viruses and cancer
WO2017024310A1 (en) 2015-08-06 2017-02-09 Chimerix, Inc. Pyrrolopyrimidine nucleosides and analogs thereof useful as antiviral agents
WO2017048956A1 (en) 2015-09-15 2017-03-23 The Regents Of The University Of California Nucleotide analogs
GB201522764D0 (en) 2015-12-23 2016-02-03 Nucana Biomed Ltd Formulations of phosphate derivatives
WO2017165489A1 (en) 2016-03-23 2017-09-28 Emory University Antiviral agents for treating zika and dengue virus infections
CN109562113A (zh) 2016-05-10 2019-04-02 C4医药公司 用于靶蛋白降解的螺环降解决定子体
EP3455218A4 (en) 2016-05-10 2019-12-18 C4 Therapeutics, Inc. C3 CARBON-BASED GLUTARIMIDE DEGRONIMERS FOR TARGET PROTEIN REDUCTION
CN109562107A (zh) 2016-05-10 2019-04-02 C4医药公司 用于靶蛋白降解的杂环降解决定子体
US10202412B2 (en) 2016-07-08 2019-02-12 Atea Pharmaceuticals, Inc. β-D-2′-deoxy-2′-substituted-4′-substituted-2-substituted-N6-substituted-6-aminopurinenucleotides for the treatment of paramyxovirus and orthomyxovirus infections
WO2018013937A1 (en) 2016-07-14 2018-01-18 Atea Pharmaceuticals, Inc. Beta-d-2'-deoxy-2'-alpha-fluoro-2'-beta-c-substituted-4'-fluoro-n6-substituted-6-amino-2-substituted purine nucleotides for the treatment of hepatitis c virus infection
KR20190043602A (ko) 2016-09-07 2019-04-26 아테아 파마슈티컬즈, 인크. Rna 바이러스 치료를 위한 2'-치환된-n6-치환된 퓨린 뉴클레오티드
GEP20237457B (en) 2017-02-01 2023-01-10 Atea Pharmaceuticals Inc Nucleotide hemi-sulfate salt for treatment of hepatitis c virus
WO2019060692A1 (en) 2017-09-21 2019-03-28 Chimerix, Inc. MORPHIC FORMS OF 4-AMINO-7- (3,4-DIHYDROXY-5- (HYDROXYMETHYL) -ETRAHYDROFURAN-2-YL) -2-METHYL-7H-PYRROLO [2,3-D] PYRIMIDINE-5-CARBOXAMIDE AND THEIR USES
EP3687514A4 (en) 2017-09-27 2021-06-30 Ohio State Innovation Foundation METHODS AND COMPOSITIONS FOR INHIBITION OF STAT3
TW202012001A (zh) 2018-04-10 2020-04-01 美商亞堤製藥公司 C型肝炎病毒(hcv)感染硬化之患者的治療
CN108640959B (zh) * 2018-07-06 2021-01-19 成果 3’-脱氧-3’,4’-二脱氢核苷类化合物及其应用
WO2020121123A2 (en) 2018-12-12 2020-06-18 Janssen Biopharma, Inc. Cyclopentyl nucleoside analogs as anti-virals
CN114072407A (zh) 2019-04-02 2022-02-18 阿里戈斯治疗公司 靶向prmt5的化合物
MX2021015772A (es) * 2019-06-18 2022-01-31 Taiho Pharmaceutical Co Ltd Compuesto de carbonato novedoso que tiene esqueleto de pirrolopirimidina o sal farmaceuticamente aceptable del mismo.
WO2021173713A1 (en) 2020-02-27 2021-09-02 Atea Pharmaceuticals, Inc. Highly active compounds against covid-19
US10874687B1 (en) 2020-02-27 2020-12-29 Atea Pharmaceuticals, Inc. Highly active compounds against COVID-19
WO2021231361A1 (en) * 2020-05-11 2021-11-18 Anovent Pharmaceutical (U.S.), Llc Pharmaceutical formulation containing active metabolites of remdesivir for inhalation
CN112979735B (zh) * 2021-04-25 2021-09-17 南京颐媛生物医学研究院有限公司 抗肝炎病毒的化合物及其制备方法和应用
CN113501847B (zh) * 2021-09-13 2022-01-11 南京颐媛生物医学研究院有限公司 高效抗乙型肝炎病毒的化合物及其制备方法和应用
CN116768949A (zh) * 2022-07-12 2023-09-19 南京工业大学 一种基于3’-脱氧腺苷经化学修饰改性的具有抗癌效应的化合物
CN116444522B (zh) * 2023-06-14 2023-08-25 齐泽(云南)生物科技有限公司 一种姜黄素腺嘌呤衍生化合物
CN116496277B (zh) * 2023-06-14 2023-08-25 齐泽(云南)生物科技有限公司 一种姜黄素2,6-二氨基嘌呤衍生化合物

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0398231A2 (en) 1989-05-15 1990-11-22 Institute Of Organic Chemistry And Biochemistry Of The Academy Of Sciences Of The Czech Republic Nucleoside analogs
US20070042988A1 (en) 2005-08-15 2007-02-22 Roche Palo Alto Llc Antiviral phosphoramidates
WO2008121634A2 (en) * 2007-03-30 2008-10-09 Pharmasset, Inc. Nucleoside phosphoramidate prodrugs

Family Cites Families (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0468119A1 (en) 1990-07-24 1992-01-29 Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. Novel carbocyclic analogs of certain nucleosides
US5444063A (en) 1990-12-05 1995-08-22 Emory University Enantiomerically pure β-D-dioxolane nucleosides with selective anti-Hepatitis B virus activity
AU6551800A (en) 1999-08-17 2001-03-13 Adani, Alexander Dinucleoside 5',5'-tetraphosphates as inhibitors of viral reverse transcriptasesand viruses
MY164523A (en) 2000-05-23 2017-12-29 Univ Degli Studi Cagliari Methods and compositions for treating hepatitis c virus
PT1411954E (pt) 2000-10-18 2011-03-16 Pharmasset Inc Nucleosídeos modificados para o tratamento de infecções virais e proliferação celular anormal
GB0114286D0 (en) 2001-06-12 2001-08-01 Hoffmann La Roche Nucleoside Derivatives
US7452901B2 (en) 2003-04-25 2008-11-18 Gilead Sciences, Inc. Anti-cancer phosphonate analogs
KR20060026426A (ko) * 2003-06-19 2006-03-23 에프. 호프만-라 로슈 아게 4'-아지도 뉴클레오사이드 유도체의 제조 방법
KR20060123707A (ko) 2003-08-27 2006-12-04 바이오타, 인코포레이티드 치료제로서의 신규 트리시클릭 뉴클레오시드 또는뉴클레오티드
WO2006130217A2 (en) 2005-04-01 2006-12-07 The Regents Of The University Of California Substituted phosphate esters of nucleoside phosphonates
WO2006121820A1 (en) 2005-05-05 2006-11-16 Valeant Research & Development Phosphoramidate prodrugs for treatment of viral infection
WO2007027248A2 (en) 2005-05-16 2007-03-08 Valeant Research & Development 3', 5' - cyclic nucleoside analogues for treatment of hcv
EP1910394A4 (en) 2005-07-29 2010-10-27 Rhode Island Education MODIFIED OLIGONUCLEOTIDES CONTAINING DIPHOSPHODIESTER INTERNUCOIDIC LINKS
WO2008005542A2 (en) 2006-07-07 2008-01-10 Gilead Sciences, Inc., Antiviral phosphinate compounds
US8324179B2 (en) 2007-02-09 2012-12-04 Gilead Sciences, Inc. Nucleoside analogs for antiviral treatment
MX2009012433A (es) 2007-05-14 2010-04-30 Rfs Pharma Llc Azido nucleosidos de purina para el tratamiento de infecciones virales.
WO2009116044A2 (en) 2008-03-19 2009-09-24 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. Compounds for treating bacterial infections
WO2010068708A2 (en) * 2008-12-09 2010-06-17 Rfs Pharma, Llc 3'-azido purine nucleotide prodrugs for treatment of viral infections
CN102395590A (zh) 2009-02-06 2012-03-28 Rfs制药公司 用于治疗癌症和病毒感染的嘌呤核苷单磷酸酯前药

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0398231A2 (en) 1989-05-15 1990-11-22 Institute Of Organic Chemistry And Biochemistry Of The Academy Of Sciences Of The Czech Republic Nucleoside analogs
US20070042988A1 (en) 2005-08-15 2007-02-22 Roche Palo Alto Llc Antiviral phosphoramidates
WO2008121634A2 (en) * 2007-03-30 2008-10-09 Pharmasset, Inc. Nucleoside phosphoramidate prodrugs

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Journal of antimicrobial chemistry Vol. 52, Pages 543-546(공개일: 2003. 9. 1.)*

Also Published As

Publication number Publication date
CA2751458A1 (en) 2010-08-12
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