CZ307334B6 - Substituované heteropentadieno-pyrrolopyrimidinové ribonukleosidy pro terapeutické použití - Google Patents

Substituované heteropentadieno-pyrrolopyrimidinové ribonukleosidy pro terapeutické použití Download PDF

Info

Publication number
CZ307334B6
CZ307334B6 CZ2016-465A CZ2016465A CZ307334B6 CZ 307334 B6 CZ307334 B6 CZ 307334B6 CZ 2016465 A CZ2016465 A CZ 2016465A CZ 307334 B6 CZ307334 B6 CZ 307334B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
pyrimidine
pyrrolo
ribofuranosyl
amino
furo
Prior art date
Application number
CZ2016-465A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ2016465A3 (cs
Inventor
Michal Hocek
Anna Tokarenko
Sabina Smoleń
Marián Hajdúch
Petr Džubák
Original Assignee
Ústav organické chemie a biochemie AV ČR, v.v.i.
Univerzita Palackého v Olomouci
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ústav organické chemie a biochemie AV ČR, v.v.i., Univerzita Palackého v Olomouci filed Critical Ústav organické chemie a biochemie AV ČR, v.v.i.
Priority to CZ2016-465A priority Critical patent/CZ307334B6/cs
Priority to EP17768661.5A priority patent/EP3494122B1/en
Priority to PCT/CZ2017/050031 priority patent/WO2018024265A1/en
Priority to PL17768661T priority patent/PL3494122T3/pl
Priority to CA3031049A priority patent/CA3031049C/en
Priority to ES17768661T priority patent/ES2761050T3/es
Priority to US16/308,796 priority patent/US10730905B2/en
Priority to JP2019523161A priority patent/JP6685475B2/ja
Publication of CZ2016465A3 publication Critical patent/CZ2016465A3/cs
Publication of CZ307334B6 publication Critical patent/CZ307334B6/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/23—Heterocyclic radicals containing two or more heterocyclic rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, not provided for in groups C07H19/14 - C07H19/22
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/24—Heterocyclic radicals containing oxygen or sulfur as ring hetero atom

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)

Abstract

Substituované heteropentadieno-pyrrolopyrimidinové ribonukleosidy obecného vzorce I, kde R je furan-2-yl, furan-3-yl, benzofuran-2-yl, methyl, methylsulfanyl, methoxy-, amino- nebo dimethylamino- skupina a kde X je atom kyslíku nebo C1-C5 alkylaminoskupina, nebo farmaceuticky přijatelné soli takových sloučenin, jejich optické izomery či směs takových optických izomerů. Sloučeniny podle tohoto vynálezu vykazují silné cytostatické a cytotoxické účinky na buněčných liniích preferenčně nádorového původu a to u širokého spektra nemocí, zahrnujících nádory různého histogenetického původu.

Description

Oblast techniky
Vynález se týká nového typu látek s protinádorovou aktivitou a jejich terapeutického použití.
Dosavadní stav techniky
Přestože existují desítky schválených antiproliferačních léčiv, léčba řady typů leukémií a nádorových onemocnění má stále nízkou úspěšnost. Současná léčiva mají navíc často výrazné nežádoucí účinky. Proto je třeba vyvíjet další nové typy protinádorových látek pro terapeutické použití.
V nedávné době byly námi objeveny, patentovány a publikovány dvě třídy silných cytostatik, jedná se o 7-(het)aryl-7-deazaadenosiny (viz níže obecný vzorec A, WO2010121576; Bourderioux, A. a kol., J. Med. Chem. 2011, 54, 5498-5507) a také 6-hetaryl-7-deazapurinové ribonukleosidy nesoucí v poloze 7 vodík nebo fluor (viz níže obecný vzorec B) (W02009089804; Nauš, P. a kol. J. Med. Chem. 2010,53, 460^170).
Jediným známým typem anelovaných deazapurinovaných ribonukleosidů jsou námi připravené pyrimidoindolové ribonukleosidy, které však jsou cytotoxické jen velmi málo, nebo vůbec (viz níže obecný vzorec C) (Tichý, M. a kol. Bioorg. Med. Chem. 2012, 20, 6123-6133; Tichý, M. a kol. Bioorg. Med. Chem. 2013, 21, 5362-5372).
R = aryl, heteroaryl
(A)
R1 = aryl, heteroaryl
R2 = H, halo, heteroaryl (B)
R1= NH2, Me, MeNH2, Me2NH, cyklopropyl, heteroaryl, aryl
R2 = H, Cl, heteroaryl
R3 = H, Cl, heteroaryl (C)
Podstata vynálezu
Tento vynález popisuje nové 4-substituované heteropentadieno-pyrrolopyrimidinové ribonukleosidy obecného vzorce 1, které na buněčných liniích preferenčně nádorového původu vykazují silné cytostatické a cytotoxické účinky, a to vůči širokému spektru nemocí, zahrnujících nádory různého histogenetického původu.
Od všech předchozích typů 7-deazapurinových derivátů obecných vzorců A a B a také od pyrimidoindolových ribonukleosidů obecného vzorce C se zásadně liší přítomností kondenzované heterocyklické struktury vázané v polohách 7 a 8 deazapurinového skeletu, nesoucí heteroatomy ve specifických polohách kruhu.
- 1 CZ 307334 B6
Předkládané heteropentadieno-pyrrolopyrimidinové báze tohoto typu jsou dosud nepopsanými sloučeninami, které se nevyskytují v přírodě a ani nebyly nikdy syntetizovány, tudíž nebyla studována jejich biologická aktivita. Zmíněné nukleosidy jsou zcela unikátním a novým typem nukleosidů s rigidní tricyklickou bází, což vede k odlišnému typu interakce s cílovými biologickými systémy a pravděpodobně i k jinému mechanizmu účinku, než jaký vykazují jiné 7substituované 7-deazapurinové nukleosidy.
Předmětem vynálezu jsou substituované heteropentadieno-pyrrolopyrimidinové ribonukleosidy obecného vzorce I
kde
R je zvolen ze skupiny, zahrnující
- C1-C5 alkyl, volitelně substituovaný alespoň jedním substituentem vybraným z hydroxyskupiny, sulfanylu, aminoskupiny, C1-C5 alkoxyskupiny, C1-C5 sulfanylu, ClC5 alkylaminoskupiny, di(C 1—C5 alkylaminoskupiny;
- C4-12 heteroaryl, dále obsahující alespoň jeden atom O; volitelně substituovaný alespoň jedním substituentem vybraným z hydroxyskupiny, sulfanylu, aminoskupiny, C1-C5 alkoxyskupiny, C1-C5 sulfanylu, C1-C5 alkylaminoskupiny, di(Cl-C5 alkylaminoskupiny;
- aminoskupinu;
- C1-C5 alkylaminoskupinu;
- di(Cl-C5 alkyljaminoskupinu;
- C1-C5 alkoxyskupinu;
- C1-C5 alkylsulfanyl;
X je zvolen z atomu kyslíku, nebo C1-C5 alkylaminoskupiny;
a farmaceuticky přijatelné soli takových sloučenin, jejich optické izomery a směsi takových optických izomerů, včetně racemických směsí.
Ve výhodném provedení je R zvolen ze skupiny, sestávající z C1-C5 alkylu, 2-furylu, 3-furylu, benzofurylu, dibenzofurylu, C1-C5 alkylsulfanylu, aminoskupiny, C1-C5 alkylaminoskupiny, di(CI-C5 alkylaminoskupiny, C1-C5 alkoxyskupiny.
Ještě výhodněji je R zvolen ze skupiny, sestávající z furan-2-ylu, furan-3-ylu, benzofuran-2ylu, methylsulfanylu, methylu, methoxyskupiny, aminoskupiny, dimethylaminoskupiny.
Tak, jak jsou zde popsány a pokud není uvedeno jinak, mají jednotlivé substituenty následující významy:
-2 CZ 307334 B6
- alkyl je rovný nebo rozvětvený uhlovodíkový řetězec, obsahující počet uhlíků, uvedený v místě použití tohoto termínu;
- heteroaryl je uhlovodíková skupina obsahující alespoň jeden heteroatom a alespoň jeden aromatický kruh; přičemž počet uhlíků a počet a typ heteroatomu jsou uvedeny v místě použití tohoto termínu. Heteroaryl může rovněž obsahovat více než jeden aromatický kruh, potom mohou být tyto kruhy kondenzované nebo nekondenzované;
- hydroxy označuje skupinu -OH;
- sulfanyl označuje skupinu -SH;
- amino označuje skupinu -NH2;
- alkylamino je skupina, vytvořená substituováním jednoho nebo dvou vodíkových atomů aminoskupiny výše definovaným alkylem;
- dialkylamino je skupina, vytvořená substituováním obou vodíkových atomů aminoskupiny dvěma výše definovanými alkyly, stejnými nebo rozdílnými;
- alkoxy označuje skupinu -OR', kde R' odpovídá definici alkylu;
- alkylsulfanyloznačuje skupinu -SR', kde R' odpovídá definici alkylu.
Tak, jak je zde použit, zahrnuje výraz farmaceuticky přijatelná sůl takové soli, které vykazují srovnatelnou biologickou účinnost a srovnatelné vlastnosti jako nárokovaná sloučenina obecného vzorce I, jsou v rámci rozumného lékařského úsudku vhodné pro použití v kontaktu s tkáněmi lidí a nižších živočichů bez nežádoucí toxicity, podráždění, alergické reakce a podobně a vykazují přijatelný poměr prospěchu a rizika. V mnoha případech jsou sloučeniny podle předkládaného vynálezu schopné vytvářet kyselé a/nebo bazické soli na základě přítomnosti aminových a/nebo karboxylových skupin či skupin jim podobných (příkladem jsou fenol nebo hydroxamová kyselina). Farmaceuticky přijatelné kyselé adiční soli mohou být vytvářeny s anorganickými i organickými kyselinami. Anorganické kyseliny, od nichž mohou být soli odvozeny, zahrnují například kyselinu chlorovodíkovou, bromovodíkovou, sírovou, dusičnou, fosforečnou a podobně. Organické kyseliny, od nichž mohou být soli odvozeny, zahrnují například kyselinu octovou, propionovou, glykolovou, pyrohroznovou, šťavelovou, maleinovou, malonovou, jantarovou, fumarovou, vinnou, citrónovou, benzoovou, skořicovou, mandlovou, methansulfonovou, ethansulfonovou, />-toluensulfonovou, salicylovou a podobně. Farmaceuticky přijatelné bazické adiční soli mohou být vytvářeny s anorganickými i organickými bázemi. Anorganické báze, od nichž mohou být soli odvozeny, zahrnují například sodík, draslík, lithium, amonium, vápník, hořčík, železo, zinek, měď, mangan, hliník a podobně; zvláště upřednostňovány jsou amonné, draselné, sodné, vápenaté a horečnaté soli. Organické báze, od nichž mohou být soli odvozeny, zahrnují například primární, sekundární a terciární aminy, substituované aminy včetně přírodně se vyskytujících substituovaných aminů, cyklické aminy, bazické iontově výměnné pryskyřice a podobně, konkrétními příklady jsou isopropylamin, trimethylamin, diethylamin, triethylamin, tripropylamin a ethanolamin. Farmaceuticky přijatelné soli podle předkládaného vynálezu mohou být syntetizovány z mateřské bazické nebo kyselé sloučeniny běžnými chemickými metodami. Obecně mohou být takové soli připraveny reakcí volných kyselých forem těchto sloučenin se stechiometrickým množstvím příslušné báze (jako jsou hydroxid sodný, vápenatý, horečnatý nebo draselný, uhličitan, hydrogenuhličitan a podobně), nebo reakcí volných bazických forem takových sloučenin se stechiometrickým množstvím vhodné kyseliny. Takové reakce se typicky provádějí v organickém rozpouštědle, ve vodě, nebo v jejich směsi. Pokud jsou použitelná, obecně se upřednostňují nevodná media, jako jsou ether, ethylacetát, ethanol, isopropanol, nebo acetonitril. Seznam vhodných adičních solí lze nalézt např. v publikaci Remingtonů Pharmaceutical Sciences, 20. vydání, Mack Publishing Company, Easton, Pa., (1985), která je zde uvedena jako odkaz.
Ve výhodném provedení předkládaný vynález poskytuje 4-substituované heteropentadienopyrrolopyrimidinové ribonukleosidy obecného vzorce I, kterými jsou:
4-methyl-8-(P-D-ribofuranosyl)-877-furo[2',3':4,5]pyrrolo[2,3-ď]pyrimidin,
-3 CZ 307334 B6
4-methoxy-8-(3-D-ribofuranosyl)-8Z7-furo[2',3':4,5]pyrrolo[2,3-ď]pyrimidin, 4-(methylsulfanyl)-8-(P-P-ribofuranosyl)-8//-furo[2',3':4,5]pyrrolo[2,3-<7]pyrimidin, 4-amino-8-(P-D-ribofiiranosyl)-8//-furo[2',3’:4,5]pyrrolo[2,3-č/|pyrimidin, 4-(furan-2-yl)-8-(3-D-ribofuranosyl)-8/í-furo[2',3':4,5]pyrrolo[2,3-<7]pyrimidin, 4-(furan-3-yl)-8-(P-D-ribofuranosyl)-877-furo[2',3':4,5]pyrrolo[2,3-íZ]pyrimidin, 4-(benzofuran-2-yl)-8-(P-D-ribofuranosyl)-8//-furo[2',3':4,5]pyrrolo[2,3-í/]pyrimidin, 4-(A'A'r-dimethylamino)-8-(P-D-ribofuranosyl)-8//-furo[2\3\4,5]pyrrolo[2,3-</jpyrimidin. 4,5-dimethyl-8-(3-D-ribofuranosyl)-5,8-dihydropyrrolo[2’,3':4,5]pyrrolo[2,3-<7]pyrimidin,
4- methoxy-5-methyl-8-(P-D-ribofuranosyI)-5,8-dihydropyrrolo[2',3':4,5]pyrrolo[2,3-<7]pyrimidin,
5- methyM-(methylsulfanyl)-8-(P-D-ribofuranosyl)-5,8-dihydropyrrolo[2',3':4,5]pyrrolo[2,3t/]pyrimidin,
4-amino-5-methyl-8-(p-D-ribofuranosyl)-5,8-dihydropyrrolo[2',3':4,5]pyrrolo[2,3-</]pyrimidin.
Kromě toho předkládaný vynález poskytuje také 4-substituované heteropentadienopyrrolopyrimidinové ribonukleosidy obecného vzorce 1 pro použití jako léčiva.
Dále tento vynález předkládá 4-substituované heteropentadieno-pyrrolopyrimidinové ribonukleosidy obecného vzorce I pro použití k inhibici patologické buněčné proliferace nádorového i nenádorového původu a/nebo k léčbě nádorového nebo nenádorového onemocnění spojeného s buněčnou hyperproliferací.
Vynález předkládá i 4-substituované heteropentadieno-pyrrolopyrimidinové ribonukleosidy obecného vzorce I pro použití k léčení nádorových onemocnění, zahrnujících nádory epiteliálního, mesenchymálního i neuroektodermálního původu.
Tento vynález předkládá také 4-substituované heteropentadieno-pyrrolopyrimidinové ribonukleosidy obecného vzorce I pro výrobu léčiva k léčbě nádorových onemocnění, zahrnujících nádory epiteliálního, mesenchymálního i neuroektodermálního původu.
Předmětem předkládaného vynálezu je rovněž farmaceutický prostředek, který obsahuje terapeuticky účinné množství alespoň jedné sloučeniny obecného vzorce I a případně alespoň jeden farmaceuticky přijatelný nosič, plnivo a/nebo ředidlo.
Předmětem tohoto vynálezu je také farmaceutický prostředek pro použití k inhibici patologické buněčné proliferace nádorového i nenádorového původu a/nebo k léčbě nádorového nebo nenádorového onemocnění spojeného s buněčnou hyperproliferací.
Termín terapeuticky účinné množství, jak se zde používá, se týká takového množství sloučeniny nebo léčiva, které je účinné při léčení onemocnění nebo poruchy u člověka, popřípadě savce. V případě léčby rakoviny může terapeuticky účinné množství léčiva snížit počet rakovinných buněk; snížit velikost nádoru; inhibovat (tj. do určité míry zpomalit a s výhodou zastavit) infiltraci rakovinných buněk do periferních orgánů; inhibovat (tj. zpomalit do určité míry a s výhodou zastavit) tvorbu metastází nádoru, inhibovat, do určité míry, růst nádoru a/nebo zmírnit do určité míry jeden nebo více symptomů spojených s rakovinou. Vzhledem k tomu, že léčivo může zabránit růstu a/nebo zabíjet existující rakovinné buňky, může být cytostatické a/nebo cytotoxické.
Výraz farmaceutický prostředek označuje formulaci sloučeniny a média, obecně uznávanou v oboru, pro dodání biologicky účinné látky savci, např. člověku. Takové médium zahrnuje všechny farmaceuticky přijatelné nosiče, ředidla nebo pomocné látky.
-4CZ 307334 B6
Výraz farmaceuticky přijatelný nosič, ředidlo nebo plnivo, jak se zde používá, zahrnuje bez omezení jakoukoliv pomocnou látku, nosič, kluznou látku, sladidlo, konzervant, barvivo, látku zvýrazňující chuť, povrchově aktivní činidlo, dispergační činidlo, suspendační činidlo, stabilizátor, izotonický prostředek, rozpouštědlo, nebo emulgátor, které byly schválené pro použití u lidí nebo domácích zvířat.
Vynález se dále týká sloučenin obecného vzorce I pro použití ve formě účinné látky ve farmakologicky přijatelném prostředku, který může být připraven běžnými postupy známými v oboru, např. účinná látka může být ve směsi s farmaceuticky přijatelnými inertními organickými a/nebo anorganickými nosiči a/nebo pomocnými látkami, popřípadě je na ně navázána.
Vynález se také týká sloučenin obecného vzorce I pro použití jako druhých nebo dalších účinných látek, majících synergický účinek s jinými účinnými látkami ve známých léčivech, nebo podávání sloučenin obecného vzorce I spolu s těmito léčivy.
V jednom provedení se předkládaný vynález týká také použití sloučenin obecného vzorce I jako proléčiva nebo v jiné vhodné formě, která uvolňuje aktivní látku in vivo.
Číslování sloučenin
V předkládané přihlášce vynálezu je použito následujícího číslování sloučenin, kde ribonukleosidy, mající X = O jsou označeny jako sloučeniny 1 a-h, ribonukleosidy, mající X =N nebo alkylaminoskupina, jsou označeny jako 2 a-d, přičemž
Syntetický postup byl připraven
4-chlorfuropyrrolopyrimidinový ribonukleosid postupem (Schéma 1), vycházejícím z 4,6—dichlorpyrimidinu (3),
Klíčový benzoylovaný pětikrokovým syntetickým který byl nejprve zinkován (sloučenina 4 nebyla isolována) (Mosrin, M.; Knochel, P. Chem. Eur. J. 2009, 75, 1468-1477) a poté spojen s 2-jodfuranem za vzniku 4,6-dichlor-5-(furan-2yl)pyrimidinu (5) v dobrém (46%) výtěžku. 2-Jodfuran byl připraven podle dříve popsaného postupu (L. Brandsma, H. Verkruijsse, Preparative Polar Organometallic Chemistry, Springer, Berlín 1987, díl 1, str. 135-136). V dalším kroku byla nukleofilní substitucí za použití NaN3 zavedena azidová skupina do polohy 4 sloučeniny 5. Fotocyklizací získaného 4-azído-6-chlor5-(furan-2-yl)pyrimidinu (6) byl vytvořen furopyrrolopyrimidin 7. Tricyklická nukleobáze 7 pak byla převedena na nukleosid 8 Vorbrúggenovou glykosylací.
-5CZ 307334 B6
BzÓ OBz a: (TMP)2Zn-MgCI2-2LiCI, THF, 0 °C, 1 h, pak t.m., 1 h; b: 2-jodfuran, Pd(PPh3)4, THF, °C, 16 h; c: NaN3, LÍCI, DMF, t.m.; d: TFA, UV, t.m., 2 dny; e: BSA, MeCN, 60 °C, min; pak 1-O-acetyl-2,3,5-tri-O-benzoyl-P-D-ribofuranosa, TMSOTf, 60 °C, 4 h.
Schéma 1: Syntéza benzoylovaného furopyrrolopyrimidinového nukleosidu
Požadované 4-substituované furopyrrolopyrimidinové ribonukleosidy byly připraveny palladiem katalyzovanými reakcemi a/nebo nukleofilními substitucemi (Schéma 2). 4-Methylderivát 9a byl syntetizován palladiem katalyzovanou reakcí 4-halogenovaného nukleosidu 8 s trimethylhliníkem; následné Zemplénovo odchránění poskytlo volný 4-methylfuropyrrolopyrimidinový ribonukleosid la. Sloučeniny lb-d byly získány nukleofilní substitucí v poloze 4 methoxidem sodným, thiomethoxidem sodným nebo amoniakem. Ve všech případech bylo dosaženo simultánní debenzylace za reakčních podmínek poskytujících volné nukleosidy. 4-(Het)arylfuropyrrolopyrimidinové ribonukleosidy 9e-g byly připraveny Stilleho reakcí nebo Suzuki-Miyaurovými reakcemi typu cross-coupling. Dimethylaminoderivát 9h byl syntetizován nukleofilní substitucí s dimethylaminem. Cílové nukleosidy le-h byly připraveny ze sloučenin 9e-h po odstranění chránících skupin methoxidem sodným v methanolu.
b nebo c nebo d
a: Me3AI, Pd(PPh3)4, THF, 70 °C, 16 h; b: MeONa, MeOH, t.m., 12 h; c: MeSNa, MeOH, t.m.,12 h; d: NH3 (aq.), dioxan, 120 °C, 16 h; e: 2-tributylstannylfuran, PdCI2(PPh3)2, DMF, 100 °C, 1 h; f: R-boronová kyselina, Pd(PPh3)4, K2CO3, toluen, 100 °C, 6 h; g: Me2NH v THF, propan-2-ol/EtOH 1:1, t.m., 16 h; h: 1M MeONa v MeOH, MeOH, t.m., 24 h.
Schéma 2: Syntéza 4-substituovaných furopyrrolopyrimidinových nukleosidu 9a, e-h a la-h
Výsledky jsou uvedeny v Tabulce 1.
-6CZ 307334 B6
Tabulka 1: Syntéza 4-substituovaných furopyrrolopyrimidinových nukleosidu 9a, e-h a la-h
Krok Podmínky R Chráněný nukleosid Výtěžek [% hm.] Volný nukleosid Výtěžek [% hm.]
1 a Me 9a - la 50
2 b OMe - - lb 77
3 c SMe - - lc 50
4 d nh2 - - ld 64
5 e 2-furyl 9e 81 le 77
6 f 3-furyl 9f 92 lf 81
7 f 2-benzofuryl 9g 81 ig 69
8 g NMe2 9h 61 Ih 67
Klíčový meziprodukt, benzoylovaný 4-chlor-5-methylpyrrolopyrrolopyrimidinový ribonukleosid, byl syntetizován z 4,6-dichlorpyrimidinu (3), který byl nejprve zinkován a 5 následně spojen s 2-jod-l-methylpyrrolem za vzniku 4,6-dichlor-5-(l-methylpyrrol-2yljpyrimidinu (10) (Schéma 3). 2-Jod-l-methylpyrrol byl připraven lithiací a následnou jodací 1-methylpyrrolu dříve zveřejněným postupem (viz Malkina, A. G. a spol., Synthesis 1996, 5, 589-590). Sloučenina 10 byla následně podrobena nukleofilní substituci za použiti jednoho ekvivalentu azidu sodného v dimethylformamidu (DMF) za vzniku odpovídajícího azidoderivátu 10 11, který byl poté termálně cyklizován na požadovaný 5-methylpyrrolopyrrolopyrimidin 12.
Vorbriiggenova glykosylace sloučeniny 12 poskytla benzoylovaný 4-chlor-5methylpyrrolopyrrolopyrimidinový nukleosid 13.
BzO' OBz a: 1) (TMP)2Zn MgCI2-2LiCI, THF, 1 h při 0 °C, pak 1 h při t.m.; 2) 2-jod-1-methylpyrrol, Pd(PPh3)4, THF, 65 °C, 16h; b: NaN3, LiCI, DMF, t.m., 16 h; c: 1,4-dibrombenzen, 180 °C, 30 min; d: 1) BSA, MeCN, t.m., 30 min; 2) 1-0-acetyl-2,3,5-tri-0-benzoyl-b-D-ribofuranosa, TMSOTf, 80 °C, 3 h.
Schéma 3: Syntéza benzoylovaného 4-chlor-5-methylpyrrolopyrrolopyrimidinového nukleosidu
Požadované 4—substituované nukleosidy byly připraveny za použití palladiem katalyzovaných reakcí a nukleofilních substitucí (Schéma 4). Methylderivát 2a byl syntetizován palladiem katalyzovanou alkylací trimethylhliníkem a následným odstraněním chránící skupiny za použití methoxidu sodného v methanolu. Methoxyskupiny, methylsulfanylové skupiny a aminoskupiny byly zavedeny nukleofilními substitucemi a odstranění benzoylové skupiny za reakčních podmínek poskytlo volné nukleosidy 2b-d.
Podmínky: a: 1) Me3AI, Pd(PPh3)4, THF, 70 °C, 3 h; 2) MeONa, MeOH, t.m., 3 h;
b: MeONa, MeOH, t.m., 12 h; c: MeSNa, MeOH, t.m., 12 h; d: NH3 (aq.), dioxan, 120 °C, 12 h.
Schéma 4: Syntéza 4-substituovaných 5-methylpyrrolopyrrolopyrimidinových nukleosidu 2 Výsledky jsou uvedeny v Tabulce 2.
Tabulka 2: Syntéza of 4-substituovaných 5-methylpyrrolopyrrolopyrimidinových nukleosidu 2
Krok Podmínky R Chráněný nukleosid Výtěžek [% hm.J
1 a Me 2a 89
2 b OMe 2b 83
3 c SMe 2c 77
4 d nh2 2d 75
Příklady uskutečnění vynálezu
Seznam použitých zkratek a symbolů:
APCI chemická ionizace za atmosférického tlaku
aq. vodný
bd široký dublet
bq široký kvartet
bs široký singlet
bt široký triplet
btd široký triplet dubletu
BSA hovězí sérový albumin
Bz benzoyl
d dublet
dd dublet dubletu
ddd dublet dubletu dubletu
DCM dichlormethan
DMF V, jV-dimethy 1 formám id
DMSO dimethylsulfoxid
dt dublet tripletů
El elektronová ionizace
eq. ekvivalent
EtOH ethanol
ESI elektrosprejová ionizace
-8CZ 307334 B6
h hodina
HPLC vysokoúčinná kapalinová chromatografie
HR vysoké rozlišení
iPr isopropyl
m multiplet
Me methyl
MeCN aceton itril
MeOH methanol
MeONa methoxid sodný
MeSNa thiomethoxid sodný
m.p. teplota tání
MS hmotnostní spektrometrie
NMR jaderná magnetická rezonance
Ph fenyl
q kvartet
s singlet
SiO2 silikagel jako stacionární chromatografická fáze
t triplet
td triplet dubletů
t.m. teplota místnosti
TMSOTf trimethylsilyl trifluormethansulfonát
TFA kyselina trifluoroctová
THF tetrahydrofuran
(TMP)2Zn bis(2,2,6,6-tetramethypiperidinyl)zinek
Obecná experimentální část
NMR spektra byla změřena na spektrometrech Bruker AVANCE o pracovních frekvencích 400 MHz ('H při 400 MHz, l3C při 100,6 MHz), nebo 500 MHz (’H při 500 MHz, l3C při 125,7 MHz). Teploty tání byly určeny za použití přístroje Stuart SMP40 a jsou nekorigované. Pro fotocyklizační reakce byla použita germicidní ultrafialová žárovka, model EUV-13B; 3,5W. Optické otáčivosti byly změřeny při 25 °C, hodnoty [a]D 20 jsou udány v 10 1 deg cm2 g“1. Hmotnostní spektra s vysokým rozlišením (HR MS) byla získána pomocí elektrosprejové ionizace (ESI), elektronové ionizace (El) nebo chemické ionizace za atmosférického tlaku (APCI). Čistota všech látek k biologickému testování byla ověřena pomocí HPLC a byla vyšší než 95 %.
Tabulka 3: Přehled sloučenin připravených v následujících příkladech
Příklad Látka Struktura Systematický název
5 la ΪΗ3 O53 HO' 'OH 4-methyl-8-(P-D-ribofuranosyl)-8H- -furo[2',3':4,5]pyrrolo[2,3-tZ]pyrimidin
6 lb ÝCÝ HO' 'OH 4-methoxy-8-(P-D-ribofuranosyl)-8J7- -furo[2',3':4,5]pyrrolo[2,3-t/]pyrimidin
-9CZ 307334 B6
7 lc CXH3 Λ Λ ťW w/ \ / HCř' ÓH 4-(methylsulfanyl)-8-(P-D-ribofuranosyl)-8H- -furo[2',3':4,5]pyrrolo[2,3-í/]pyrimidin
8 ld T2 ťxú 'νΛν HO^O HO' 'OH 4-amino-8-(p-D-ribofuranosyl)-8/7- -furo[2',3':4,5]pyrrolo[2,3-í/]pyrimidin
10 le 0. J 1 /°~Ί N iTz^ 4-(furan-2-yl)-8-(P-D-ribofuranosyl)-8//- -furo[2',3':4,5]pyrrolo[2,3-ď]pyrimidin
HC*íd ho'' bn
12 lf ϋ I °Ί uV >/n πο-d HO' 'OH 4-(furan-3-yl)-8-(P-D-ribofuranosyl)-8/7-furo [2',3':4,5]pyrrolo[2,3-</]pyrimidin
14 ig O j Ο-η Πν 4-(benzofuran-2-yl)-8-(p-D-ribofuranosyl)-87/- -furo[2',3':4,5]pyrrolo[2,3-óZ]pyrimidin
^.OJ HO \_J HO'' ÓH
16 Ih h3c.xh3 N A Ho^d HO' 'OH 4-(JV,jV-dimethylamino)-8-(P-D-ribofuranosyl)- -8H-furo[2',3':4,5]pyrrolo[2,3-J]pyrimidin
21 2a h3c ch3 l ťxb Ho^d HO'' 'OH 4,5-dimethyl-8-(P-D-ribofuranosyl)-5,8- -dihydropyrrolo[2',3':4,5]pyrrolo[2,3-í/]pyrimidin
- 10CZ 307334 B6
22 2b h3c, h3c HO' 'OH 4-methoxy-5-methyl-8-(P-D-ribofuranosyl)-5,8- -dihydropyrrolo[2',3':4,5]pyrrolo[2,3-</]pyrimidin
23 2c h3c. h3c ód3 ho^O HO' 'OH 5-methyl-4-(methylsulfanyl)-8-(P-D- -ribofuranosyl)-5,8- -dihydropyrrolo[2',3':4,5]pyrrolo[2,3-ď]pyrimidin
24 2d h3c NH2 m Ó53 ho^Q HO'' <3H 4-amino-5-methyl-8-(p-D-ribofuranosyl)-5,8- -dihydropynolo[2',3':4,5]pyrrolo[2,3-í/]pyrimidin
Obecný postup pro Suzukiho reakci (Postup A):
Chráněný nukleosid 8, boronová kyselina (1,5 ekv.), K2CO3 (2 ekv.) a Pd(PPh3)4 (0,1 ekv.) byly rozpuštěny v toluenu a reakční směs byla zahřívána pod argonovou atmosférou na 100 °C po dobu 6 hodin. Po zreagování byla reakční směs naředěna vodou a extrahována chloroformem. Organické vrstvy byly promyty nasyceným roztokem NH4C1, znovu vodou a sušeny pomocí MgSO4. Rozpouštědlo bylo odpařeno a surový produkt byl přečištěn sloupcovou chromatografií (SiO2, 0 až 15% ethylacetát v petroletheru).
Obecný postup pro Stilleho reakci (Postup B)
Chráněný nukleosid 8, tributylcín (1,2 ekv.) a PdCl2(PPh3)2 (0,1 ekv.) byly rozpuštěny v DMF a reakční směs byla zahřívána na 100 °C po dobu 6 až 8 hodin. Rozpouštědlo bylo odpařeno ve vakuu a surová směs byla přečištěna sloupcovou chromatografií (SiO2, 0 až 15% ethylacetát v petroletheru).
Obecný postup pro Zemplénovo odstranění benzoylových skupin (Postup C):
Chráněný nukleosid (0,2 mmol) byl rozpuštěn v methanolu (10 ml), do roztoku byl přidán 1 mol.l1 roztok methoxidu sodného v methanolu (0,3 ekv.) a reakční směs byla míchána za teploty místnosti přes noc. Rozpouštědlo bylo odpařeno za sníženého tlaku a surový produkt byl přečištěn pomocí sloupcové chromatografie (0 až 40% ethylacetát v petroletheru).
Příklad 1
4,6-Dichlor-5-(furan-2-yl)pyrimidin (5)
Roztok 4,6-dichlorpyrimidinu (3,2 mg, 0,021 mol) v bezvodém THF (35 ml) byl po kapkách přidán k ledem vychlazenému roztoku (TMP)2Zn-MgCl2 LiCl (0,35 mol.F1 ve směsi THF/toluen 9:1, 30 ml, 10,6 mmol). Reakční směs byla míchána při 0 °C jednu hodinu, poté při teplotě místnosti další hodinu a následně byla přidána k předem míchanému (20 minut při teplotě místnosti) roztoku of 2-jodfuranu (4,44 g, 0,023 mol) a Pd(PPh3)4 (2,61 g, 2,25 mmol) ve
- 11 CZ 307334 B6 vysušeném THF (10 ml). Reakční směs byla míchána 16 h při 65 °C, rozpouštědlo bylo odpařeno za sníženého tlaku a surová směs byla čištěna za použití sloupcové chromatografie (0 až 1% ethylacetát v petroletheru) k získání sloučeniny 5 (2,1 mg, 46% výtěžek) ve formě nažloutlého prášku, m.p. 257 až 265 °C (rozklad). 'H NMR (401 MHz, DMSO) δ 6,73 (dd, 1H, J43 = 3,4, J45 = 1,8 Hz, HM-furyl); 6,93 (dd, 1H, J3,4 = 3,4, J35 = 0,7 Hz, H-3-furyl); 7,97 (dd, 1H, J5,4 = 1,8, Js,3 = 0,7 Hz, H-5-furyl); 8,96 (s, 1H, H-2), ,3C NMR (101 MHz, DMSO) δ 112,06, 114,90, 124,65, 143,51, 145,48, 158,15, 161,27. HR MS (El) pro C8H4N2OC12 [M+]: vypočteno 213,9701; nalezeno 213,9703.
Příklad 2
4-Azido-6-chlor-5-(furan-2-yl)pyrimidin (6)
Sloučenina 5 (860 mg, 4,03 mmol) byla rozpuštěna ve vysušeném DMF (20 ml); poté byly přidány LiCl (210 mg, 4,03 mmol) a NaN3 (330 mg, 4,03 mmol). Reakční směs byla míchána 12 h při teplotě místnosti, poté byla vlita do ethylacetátu a dvakrát promyta vodou a solným roztokem. Organická vrstva byla vysušena nad Na2SO4, zfiltrována a zahuštěna. Surový produkt byl čištěn za použití sloupcové chromatografie (0 až 5% ethylacetát v petroletheru) k získání sloučeniny 16 (576 mg, 65% výtěžek) ve formě oranžového oleje. 'H NMR (400 MHz, DMSO) δ 6,90 (dd, 1H, J43 = 3,6, J4.5 = 1,8 Hz, HM-furyl); 7,77 (dd, 1H, J3.4 = 3,6, J35 = 0,8 Hz, H-3furyl); 8,17 (dd, 1H,J5j = 1,8, J5.3 = 0,8 Hz, H-5-furyl); 10,12 (s, 1H, H-2). 13CNMR(101 MHz, DMSO) δ 112,70 (C—5); 113,20 (CM-furyl); 118,03 (C-3-furyl); 137,53 (C-5-furyl); 141,43 (C—6); 143,40 (C-2-furyl); 146,70 (C-2); 149,31 (CM). HR MS (El) pro C8H4N5OC1 [M+]: vypočteno 221,0104; nalezeno 221,0106.
Příklad 3
4-Chlor-877-furo[2',3':4,5]pyrrolo[2,3M]pyrimidin (7)
Roztok azidu 6 (540 mg, 2,44 mmol) v TFA (35 ml) byl míchán při teplotě místnosti za ozařování UV lampou (4W) po dobu 48 h. Poté bylo rozpouštědlo odpařeno a surová reakční směs byla čištěna pomocí sloupcové chromatografie (0 až 20% ethylacetát v petroletheru) k získání sloučeniny 7 (198 mg, 42% výtěžek) ve formě nažloutlého prášku, m.p. >300 °C. 'H NMR (400 MHz, DMSO) δ 7,05 (d, 1H, J7fi = 2,1 Hz, H-7); 8,11 (d, 1H, Jfi,7 = 2,1 Hz, H-6); 8,59 (s, 1H, H-2); 12,67 (s, 1H, NH-8). I3C NMR (101 MHz, DMSO) δ 100,89 (CMa); 104,32 (CH-7); 131,69 (C-7a); 145,80 (CM); 149,77 (CH-6); 150,25 (CH-2); 153,88 (C-8a). HR MS (APCI) pro C8H5ON3C1 [M+H]: vypočteno 194,01157; nalezeno 194,01157.
Příklad 4
4-Chlor-8-(2,3,5-tri-(9-benzoyl-P-D-ribofuranosyl)-8//-furo[2',3':4,5]pyrroIo[2,3-í/]pyrimidin (8)
K roztoku báze 7 (440 mg; 2,3 mmol) v MeCN (60 ml) byl přidán BSA (565 μΐ, 2,3 mmol). Reakční směs byla zahřívána na 60 °C po dobu 30 minut, pak byly přidány TMSOTf (1 ml, 5,71 mmol) a l-0-acetyl-2,3,5-tri-0-benzoyl-P-D-ribofuranosa (2,3 g, 4,6 mmol ) a směs byla dále zahřívána na 60 °C po další 4 h. Po ochlazení na teplotu místnosti byla směs extrahována ethylacetátem, organická vrstva byla promyta NaHCO3 a poté vodou, vysušena MgSO4 a rozpouštědla byla odpařena za sníženého tlaku. Surová reakční směs byla čištěna pomocí sloupcové chromatografie (0 až 15% ethylacetát v petroletheru) k získání nukleosidu 8 (900 mg, 62% výtěžek) ve formě stéblovité pěny. [a]D -53,5 (c 0,258). 'H NMR (500 MHz,
- 12CZ 307334 B6
CDC13): 4,68 (dd, 1H, = 12,0 Hz, J3íl,r = 3,4 Hz, H-5'a); 4,82 (dt, 1H, 4,7 Hz, J4iya = = 3,2 Hz, H-4'); 4,85 (dd, 1H, Jgem = 12,0 Hz, J5Kr= 3,0 Hz, H-5'b); 6,11 (dd, 1H, Jyy = 5,9 Hz, J3>4· = 4,6 Hz, H-3'); 6,29 (t, 1H, = Jyy = 5,8 Hz, H-2'); 6,84 (d, 1H, J76 = 2,2 Hz,
H-7); 6,92 (d, 1H, Λ , = 5,7 Hz, Η-Γ); 7,36, 7,42 a 7,44 (3xm, 3x2H, H-m-Bz); 7,54 (m, 1H, H-p-Bz); 7,57 - 7,62 (m, 2H, H-p-Bz); 7,60 (d, 1H, J6.7 = 2,2 Hz, H-6); 7,92, 8,01 a 8,02 (3xm, 3x2H, H-o-Bz); 8,62 (s, 1H, H-2). 13C NMR (125,7 MHz, CDC13): 63,42 (CH2-51); 71,06 (CH-3'); 72,82 (CH-2'); 79,87 (CH-4'); 85,41 (CH-V); 100,15 (CH-7); 106,30 (C-4a); 128,35 (C-i-Bz); 128,50, 128,56 a 128,57 (CH-m-Bz); 128,63 a 129,26 (C-i-Bz); 129,66 a 129,82 (CH-o-Bz); 129,96 (C-7a); 133,49 a 133,79 (CH-p-Bz); 136,77 (C^lb); 147,67 (C-^l); 148,57 (CH-6); 149,99 (CH-2); 153,79 (C-8a); 165,11, 165,56 a 166,08 (CO). HR MS (ESI) pro C34H24O8N3ClNa [M+Na]: vypočteno 660,11441; nalezeno 660,11482.
Příklad 5
4-Methyl-8-(|3-D-ribofuranosyl)-87Muro[2',3':4,5]pyrrolo[2,3-ť/]pyrimidin (la) (Me)3Al (785 μΙ, 2 mokl-1 v toluenu) a Pd(PPh3)4 (213 mg, 0,2 mmol) byly přidány k roztoku nukleosidu 8 (590 mg, 0,96 mmol v THF (15 ml)); reakční směs byla poté míchána přes noc při 70 °C. Rozpouštědlo bylo následně odpařeno a surová reakční směs byla čištěna sloupcovou chromatografií (0 až 15% MeOH v DCM). Benzoylovaný nukleosid 9a byl odchráněn za použití obecného postupu C. Nukleosid la (149 mg, 50% výtěžek) byl získán ve formě nažloutlých krystalů, m.p. 195 až 203 °C (rozklad). [a]D -39,6 (c 0,252). 'H NMR (500 MHz, DMSO-dó): 2,81 (s, 3H, CH3-4); 3,58 (ddd, 1H, Jgem = 11,8 Hz, J5i,OH = 5,2 Hz, Jya.4- = 4,0 Hz, H-5'a); 3,62 (ddd, 1H, Jgem = 11,8 Hz, J5-h,OH = 5,5 Hz, J5K4-= 4,1 Hz, H-5'b); 3,94 (td, 1H, J4^a = J4^ = 4,1 Hz, J4'3’ = 2,4 Hz, H^'); 4,12 (td, 1H, J3;2- = JyOH = 4,9 Hz, J3^= 2,4 Hz, H-3'); 4,50 (td, 1H, h'!' = J2'OH = 7,0 Hz, Jyy = 5,3 Hz, H-2'); 5,05 (t, 1H, Jouya = = 5,3 Hz, OH-5'); 5,21 (d,
1H, Joh,3' = 4,5 Hz, OH-3’); 5,32 (d, 1H, J(W2-= 6,7 Hz, OH-2’); 6,37 (d, 1H, JK2, = 7,4 Hz, ΗΓ); 7,21 (d, 1H, J7.6 = 2,1 Hz, H-7); 8,04 (d, 1H, J6J = 2,1 Hz, H-6); 8,68 (s, 1H, H-2). 13C NMR (125,7 MHz, DMSO-d6): 22,60 (CH3^l); 61,96 (CH2-5'); 70,76 (CH-3'); 72,55 (CH-2’);
85,45 (CH-4'); 85,68 (CH-T); 101,86 (CH-7); 105,47 (C-4a); 129,08 (C-7a); 137,57 (C-4b); 148,57 (CH-6); 150,48 (CH-2); 153,04 (C-8a); 154,46 (C-4). HR MS (ESI) pro C14H15O5N3Na [M+Na]: vypočteno 328,09039; nalezeno 328,09044.
Příklad 6
4-Methoxy-8-(p-D-ribofuranosyl)-8//-furo[2’,3':4,5]pyrroIo[2,3-í/]pyrimidin (1 b)
K suspenzi nukleosidu 8 (370 mg, 0,58 mmol) v MeOH (25 ml) byl přidán methoxid sodný (63 mg, 1,16 mmol). Reakční směs byla míchána přes noc při teplotě místnosti, poté bylo rozpouštědlo odpařeno a surová reakční směs byla čištěna sloupcovou chromatografií (0 až 5% MeOH v DCM) k získání nukleosidu lb (144 mg, 77% výtěžek) ve formě nažloutlého prášku, m.p. 216 až 219 °C. [a]D -40,1 (c 0,172). *H NMR (500 MHz, DMSO-d6): 3,58 (bdt, 1H, Jsem = 11,8 Hz, J5^r = JyaOH = 4,5 Hz, H-5'a); 3,61 (bdt, 1H, Jgem = 11,8 Hz, J^.r = Js-b.OH = 4,6 Hz, H-5'b); 3,93 (td, 1H, J4.ya = Jyyh = 4,0 Hz, J4,y = 2,4 Hz, H4'); 4,11 (m, 1H, H-3'); 4,12 (s, 3H, CH3O); 4,49 (td, 1H, J2,r= JyOH = 7,0 Hz, J2ír = 5,3 Hz, H-2'); 5,05 (t, 1H, JÍW.5'a = Jow = 5,3 Hz, OH-5'); 5,21 (d, 1H, J(m,3.= 4,5 Hz, OH-3'); 5,32 (d, 1H, J()H^= 6,7 Hz, OH-2'); 6,34 (d, 1H, Jy2,= 7,4 Hz, Η-Γ); 7,16 (d, 1H, J7,6 = 2,1 Hz, H-7); 7,95 (d, 1H, J6- = 2,1 Hz, H-6);
8,45 (s, 1H, H-2). I3C NMR (125,7 MHz, DMSO^16): 54,13 (CH3O); 61,99 (CH2-5'); 70,80 (CH-3'); 72,63 (CH-21); 85,50 (CH^l'); 86,01 (CH-T); 92,90 (C-4a); 101,78 (CH-7); 127,57 (C-7a); 136,80 (C^lb); 147,81 (CH-6); 150,09 (CH-2); 154,27 (C-8a); 159,92 (C^l). HR MS (ESI) pro C|4H|5O6N3Na [M+Na]: vypočteno 344,08531; nalezeno 344,08529.
- 13 CZ 307334 B6
Příklad 7
4-Methylsulfanyl-8-(3-D-ribofuranosyl)-8//-furo[3',2':4,5]pyrrolo[2,3-í/]pyrimidin (1 c)
Nukleosid 8 (200 mg, 0,31 mmol) byl rozpuštěn v MeOH (12 ml) a poté byl jednorázově přidán thiomethoxid sodný (45 mg, 0,64 mmol). Reakční směs byla míchána přes noc při teplotě místnosti, poté bylo rozpouštědlo odpařeno a surová reakční směs byla čištěna sloupcovou chromatografií (SiO2, 0 až 5% MeOH v DCM) k získání nukleosidu lc (52 mg, 50% výtěžek) ve formě nažloutlého prášku; m.p. 213 až 217 °C. [a]D -35,5 (c 0,135). 'H NMR (500 MHz, DMSO-d6): 2,73 (s, 3H, CH,S); 3,58 (ddd, 1H, =11,8 Hz, J5WH = 5,2 Hz, Jya,r = 4,0 Hz, H5'a); 3,61 (ddd, 1H, = 11,8 Hz, J5WH = 5,4 Hz, J5Kr = 4,0 Hz, H-5'b); 3,93 (td, 1H, Jyya = = 4,0 Hz, Jyy = 2,4 Hz, H-4’); 4,12 (btd, 1H, Jyy = Jy()H = 4,9 Hz, Jyy = 2,4 Hz, H-3'); 4,49 (btd, 1H, J2'r = J2'.oh = 7,0 Hz, J2',3'= 5,2 Hz, H-2'); 5,05 (t, 1H, JoH,5'a = Jonst = 5,3 Hz, OH-5'); 5,22 (d, 1H, JOH.3' = 4,5 Hz, OH-3'); 5,33 (d, 1H, = 6,6 Hz, OH-2'); 6,34 (d, 1H,
Jyy = 7,3 Hz, Η—1'); 7,20 (d, 1H, J7,6 = 2,1 Hz, H-7); 8,05 (d, 1H, ,Jfy = 2,1 Hz, H-6); 8,65 (s, 1H, H-2). I3C NMR (125,7 MHz, DMSO-d6): 11,63 (CH3S); 61,92 (CH2-5'); 70,74 (CH-3'); 72,61 (CH-2'); 85,53 (CH-4'); 85,80 (CH-T); 101,83 (CH-7); 103,19 (C^la); 128,62 (C-7a); 136,92 (C4b); 148,89 (CH-6); 150,02 (CH-2); 151,08 (C-8a); 156,42 (C-4). ESI MS m/z (rel %): 376 (100) [M+Na]. HR MS (ESI) pro C14H|6O5N3S [M+H]: vypočteno 338,08052; nalezeno 338,08061.
Příklad 8
4-Amino-8-(3-D-ribofuranosyl)-8//-furo[2',3':4,5]pyrrolo[2,3-ď]pyrimidin (ld)
K roztoku nukleosidu 8 (243 mg, 0,38 mmol) ve vysušeném 1,4-dioxanu (5 ml) byl přidán 30% vodný roztok amoniaku (15 ml). Poté byla reakční směs zahřívána v tlakové trubici 24 hodin na teplotu 100 °C a po následném odpaření rozpouštědel byla surová reakční směs čištěna sloupcovou chromatografií (0 až 5% MeOH v DCM). Nukleosid ld (75 mg, 64% výtěžek) byl získán ve formě nažloutlého prášku o m.p. 246 až 253 °C. [ct]D -40,8 (c 0,147). 'H NMR (500 MHz, DMSO-d6): 3,55 (ddd, 1H, Jgem = 11,8 Hz, Jya.()H = 5,5 Hz, Jya,r = 4,1 Hz, H-5'a); 3,60 (ddd, 1H, Jgem = 11,8 Hz, J5KOH = 5,4 Hz, Jyh.y = 4,1 Hz, H-5'b); 3,89 (td, 1H, = 4,1 Hz, Jyy = 2,5 Hz, H-4'); 4,09 (td, 1H, Jyy = Jy(M = 4,9 Hz, Jyy = 2,5 Hz, H-3'); 4,48 (td, 1H, Jyy = JyoH = 7,0 Hz, Jyy = 5,3 Hz, H-2'); 5,08 (t, 1H, J()H,ya = = 5,4 Hz, OH-5');
5,15 (d, 1H, JOHy = 4,6 Hz, OH-3'); 5,25 (d, 1H, JOH,y = 6,8 Hz, OH-2’); 6,23 (d, 1H, Jy2' = 7,3 Hz, Η—1'); 7,05 (d, 1H, J7y> = 2,1 Hz, H-7); 7,06 (bs, 2H, NH2); 7,86 (d, 1H, J6.7 = 2,1 Hz, H-6); 8,09 (s, 1H, H-2). I3C NMR (125,7 MHz, DMSO-d6): 62,08 (CH2-5'); 70,79 (CH-3'); 72,43 (CH-2'); 85,16 (CH-4'); 85,88 (CH-1'); 90,71 (C4a); 101,51 (CH-7); 127,25 (C-7a); 138,20 (C^lb); 146,08 (CH-6); 151,41 (CH-2); 153,19 (C-8a); 154,64 (C-4). HR MS (ESI) pro Ci3HI5O5N4 [M+H]: vypočteno 307,10370; nalezeno 307,10374.
Příklad 9
4-(Furan-2-yl)-8-(2,3,5-tri-O-benzoyl-p-D-ribofuranosyl)-8/7-furo[2',3':4,5]pyrrolo[2,3-c/]pyriinidin (9e)
Nukleosid 9e byl připraven podle obecného postupu B z chráněného nukleosidu 8 (800 mg, 1,256 mmol) a 2-(tributylstannyl)furanu (475 μΐ, 1,5 mmol). Požadovaný produkt 9e (684 mg, 81% výtěžek) byl získán ve formě žlutého oleje. *H NMR (400 MHz, DMSO-íú) δ 4,67 - 4,84 (m, 2H); 4,93 (dd, 1H); 6,16 (dd, 1H); 6,40 (dd, 1H); 6,86 (dd, 1H); 6,94 (d, 1H); 7,30 (d, 1H); 7,38 - 7,54 (m, 6H); 7,58 - 7,72 (m, 4H); 7,80 - 7,85 (m, 2H); 7,93 - 7,99 (m, 2H); 7,99 - 8,03
- 14CZ 307334 B6 (m, 2H); 8,13 - 8,17 (m, 2H); 8,75 (s, 1H). HR MS (ESI) pro C3gH2gO9N3 [M+H]: vypočteno 670,18201; nalezeno 670,18215.
Příklad 10
4-(Furan-2-yl)-8-(3-D-ribofuranosyl)-8//-furo[2',3' :4,5] pyrrolo[2,3-ď]pyrimidin (le)
Sloučenina 9e (630 mg, 0,94 mmol) byla zbavena chránící skupiny podle obecného postupu C. Nukleosid le (263 mg, 77% výtěžek) byl získán jako nažloutlý prášek o m.p. 128 až 151 °C (rozklad). [a]D -24,1 (c 0,345). 'H NMR (500 MHz, DMSO-d6): 3,61 (ddd, 1H, = 11,8 Hz,
Jy<,.on = 5,2 Hz, J5-aJ' = 4,0 Hz, H-5'a); 3,64 (ddd, 1H, = 11,8 Hz, J5hx)H = 5,3 Hz, r =
4,0 Hz, H-5'b); 3,96 (td, 1H, J4-ya = J4-S1, 4,0 Hz, J4>y = 2,4 Hz, H^l'); 4,14 (btd, 1H, J3;2, = Jyon = 4,9 Hz, Jyr = 2,4 Hz, H-3'); 4,54 (btd, 1H, J2:r = J2W = 7,0 Hz, Jy3- = 5,3 Hz, H-2’); 5,08 (t, 1H, J0H,5'a = Joh.51, = 5,3 Hz, OH-5'); 5,23 (d, 1H, JOHy = 4,5 Hz, OH-3'); 5,36 (d, 1H, J()H.2'= 6,6 Hz, OH-2'); 6,43 (d, 1H, = 7,4 Hz, Η-Γ); 6,86 (dd, 1H, J4.3 = 3,5 Hz, J4,5 =
1,8 Hz, H-4-furyl); 7,28 (d, 1H, J7,6 = 2,1 Hz, H-7); 7,62 (dd, 1H, J3.4 = 3,5 Hz, J3,5 = 0,9 Hz, H-3-furyl); 8,13 (d, 1H, J6,7 = 2,1 Hz, H-6); 8,14 (bd, 1H, Jx4 = 1,8 Hz, H-5-furyl); 8,78 (s, 1H, H-2). I3C NMR (125,7 MHz, DMSO-d6): 61,93 (CH2-5'j; 70,75 (CH-3’); 72,50 (CH-2'); 85,54 (CH-4'); 85,69 (CH-Γ); 99,90 (C-4a); 101,91 (CH-7); 113,17 (CH^E-furyl); 113,21 (CH3-furyl); 130,59 (C-7a); 137,01 (CMb); 142,61 (C-4); 146,57 (CH-5-furyl); 148,95 (CH-6); 150,37 (CH-2); 151,65 (C-2-furyl); 154,40 (C-8a). HR MS (ESI) pro Ci7Hi6O6N3 [M+H]: vypočteno 358,10336; nalezeno 358,10348.
Příklad 11
4-(Furan-3-yl)-8-(2,3,5-tri-0-benzoyl-3-D-ribofuranosyl)-8//-furo[2',3':4,5]pyrrolo[2,3ďjpyrimidin (9f)
Nukleosid 9f byl připraven podle obecného postupu A z chráněného nukleosidu 8 (210 mg, 0,315 mmol) a furan-3-boronové kyseliny (53 mg, 0,473 mmol). Požadovaný produkt 9f (193 mg, 92% výtěžek) byl získán ve formě žlutého oleje. ’H NMR (400 MHz, CDC13) δ 4,70 (dd, 1H); 4,81 - 4,89 (m, 2H); 6,12 (dd, 1H); 6,29 (t, 1H,); 6,89 (d, 1H); 7,03 (d, 1H); 7,34-7,46 (m, 7H); 7,51-7,64 (m, 6H); 7,91 (d, 1H); 7,93 (d, 1H); 8,01-8,06 (s, 4H); 8,88 (s, 1H). HR MS (ESI) pro C3gH2gO9N3 [M+H]: vypočteno 670,18201; nalezeno 670,18215.
Příklad 12
4-(Furan-3-yl)-8-(3-D-ribofuranosyl)-8//-furo[2’,3':4,5]pyrrolo[2,3-í7]pyrimidin (1 f)
Sloučenina 9f (170 mg, 0,25 mmol) byla zbavena chránící skupiny podle obecného postupu C. Nukleosid lf (74 mg, 81% výtěžek) byl získán jako nažloutlý prášek o m.p. 216 až 220 °C. [a]D23,7 (c 0,135). 'H NMR (500 MHz, DMSO-d6): 3,60 (ddd, 1H, Jsem = 11,8 Hz, Jya.OH = 5,2 Hz, Jya.r= 4,0 Hz, H-5'a); 3,63 (ddd, 1H, Jsem = 11,8 Hz, Jyh()H= 5,4 Hz, Jyhr = 4,0 Hz, H-5'b); 3,96 (td, 1H, Jyya = Jryh = 4,0 Hz, J4\3 ,= 2,4 Hz, H-4'); 4,14 (btd, 1H, Jyy = JyoH = 4,9 Hz, Jyr = 2,4 Hz, H-3'); 4,54 (td, 1H, Jyr = J2.()H= 7,0 Hz, J2,3,= 5,2 Hz, H-2'); 5,08 (t, 1H, JOH,ya = Joh.51, = 5,3 Hz, OH-5'); 5,23 (d, ÍH, J()H,y = 4,5 Hz, OH-3'); 5,35 (d, ÍH, J(W' = 6,7 Hz, OH2'); 6,43 (d, ÍH, = 7,4 Hz, Η-Γ); 7,30 (d, ÍH, J7;(5 = 2,l Hz, H-7); 7,43 (dd, 1H,J,5= l,9 Hz, J4,2 = 0,8 Hz, H-4-furyl); 7,98 (t, ÍH, J32 = J34 = 1,7 Hz, H-5-furyl); 8,15 (d, ÍH, J6<7 = 2,1 Hz, H-6); 8,78 (dd, ÍH, J25 = 1,6 Hz, J2,4 = 0,8 Hz, H-2-furyl); 8,80 (s, ÍH, H-2). I3C NMR (125,7 MHz, DMSO-d6): 66,22 (CH2-5’); 71,04 (CH-3'); 72,83 (CH-2'); 85,83 (CH-4’); 86,00 (CH-Γ); 101,96 (C^la); 102,35 (CH-7); 109,28 (CH-4-furyl); 125,67 (C-3-furyl); 130,26 (C-7a);
- 15CZ 307334 B6
137,06 (C^lb); 144,72 (CH-2-furyl); 145,63 (CH-5-furyl); 146,38 (C-4); 149,23 (CH-6);
150,82 (CH-2); 154,46 (C-8a). HR MS (ESI) pro C17H16O6N3 [M+H]: vypočteno 358,10336; nalezeno 358,10332.
Příklad 13
4-(Benzofuran-2-yl)-8-(2,3,5-tri-0-benzoyl-P-D-ribofuranosyl)-8//-furo[2',3':4,5]pyrrolo[2,3-ď]pyrimidin (9g)
Nukleosid 9g byl připraven podle obecného postupu A z chráněného nukleosidu 8 (360 mg, 0,56 mmol) a benzofuran-2-boronové kyseliny (136 mg, 0,84 mmol). Požadovaný produkt 9g (330 mg, 81%o výtěžek) byl získán ve formě žlutého oleje. 'H NMR (401 MHz, DMSO-d6): 4,56 -4,68 (m, 1H); 4,77 - 4,84 (m, 2H); 6,18 - 6,46 (m, 2H); 6,98 (d, 1H,); 7,34 - 7,54 (m, 8H); 7,59 - 7,70 (m, 3H); 7,72 - 8,01 (m, 10H); 8,24 (d, 1H); 8,90 (s, 1H). HR MS (ESI) pro C42H30O9N3 [M+H]: vypočteno 720,19766; nalezeno 720,19781.
Příklad 14
4-(Benzofuran-2-yl)-8-(P-D-ribofuranosyl)-8/7-furo[2',3':4,5]pyrrolo[2,3-<7]pyriniidin (lg)
Sloučenina 9g (260 mg, 0,36 mmol) byla zbavena chránící skupiny podle obecného postupu C. Nukleosid lg (101 mg, 69% výtěžek) byl získán ve formě citrónově žlutého prášku o m.p. 223 až 240 °C (rozklad). [a]D -21,6 (c 0,241). 'H NMR (500 MHz, DMSO-d6): 3,59 - 3,68 (m, 2H, H5'); 3,98 (td, 1H, J4.ya = J4·^ = 4,0 Hz, J4^ = 2,4 Hz, H^'); 4,17 (bddd, 1H, J3-y= 5,2 Hz, J3-()H = 4,3 Hz, J3-4< = 2,4 Hz, H-3'); 4,56 (td, 1H, J2J-= J2;OH = 7,0 Hz, J2;r = 5,2 Hz, H-2’); 5,12 (t, 1H, J()H^a = J()H^ = 5,3 Hz, OH-5'); 5,27 (d, 1H, = 4,3 Hz, OH-3'); 5,39 (d, 1H, JOH.2' =
6,6 Hz, OH-2'); 6,47 (d, 1H, = 7,4 Hz, Η-Γ); 7,34 (d, 1H, J76 = 2,1 Hz, H-7); 7,39 (ddd,
1H, J5,4 = 7,8 Hz, J5,6 = 7,2 Hz, J5,7 = 1,0 Hz, H-5-benzofuryl); 7,50 (ddd, 1 Η, Λ/ = 8,3 Hz, Jfi,3 = 7,2 Hz, Jfí,4 = 1,3 Hz, H-6-benzofuryl); 7,79 (dq, 1H, J7ň = 8,3 Hz, J7,5 =J7.4 = J7.3 = 0,9 Hz, H7-benzofuryl); 7,89 (ddd, 1H, J45 = 7,8 Hz, J4,6 = 1,3 Hz, J47 = 0,7 Hz, H-4-benzofuryl); 8,08 (d, 1H, J37 = 1,0 Hz, H-3-benzofuryl); 8,23 (d, 1H, J6J = 2,1 Hz, H-6); 8,89 (s, 1H, H-2). 13C NMR (125,7 MHz, DMSO-d6): 61,91 (CH2-5'); 70,76 (CH-3'); 72,58 (CH-2'); 85,63 (CH-4'); 85,79 (CH—1'); 101,12 (C-4a); 102,04 (CH-7); 108,81 (CH-3-benzofuryl); 111,91 (CH-7benzofuryl); 122.70 (Cl fol-benzofuryl); 124,02 (CH-5-benzofuryl); 126,83 (CH-6benzofuryl); 128,22 (C-3a-benzofuryl); 131,34 (C-7a); 136,85 (C-4b); 142,32 (C-4); 149,57 (CH-6); 150,33 (CH-2); 153,19 (C-2-benzofuryl); 154,60 (C-8a); 155,36 (C-7a-benzofuryl). HR MS (ESI) pro C21H18O6N3 [M+H]: vypočteno 408,11901; nalezeno 408,11911.
Příklad 15
4-A(A-Dimethylamino-8-(2,3,5-tri-0-benzoyl-3-D-ribofuranosyl)-8/7-furo[2',3':4,5]pyrrolo[2,3-<7]pyrimidin (9h)
K roztoku nukleosidu 8 (460 mg, 0,72 mmol) v isopropanolu (20 ml) byl jednorázově přidán dimethylamin (460 μΙ, 2 mol.U1 v THF). Reakční směs byla míchána přes noc při teplotě místnosti, poté bylo rozpouštědlo odpařeno a surová reakční směs byla čištěna sloupcovou chromatografií (0 až 35% ethylacetát v petroletheru). Požadovaný nukleosid 9h (280 mg, 61% výtěžek) byl získán ve formě žlutého oleje. 'H NMR (401 MHz, DMSO-d6) δ 3,39 (s, 6H); 4,64 - 4,80 (m, 2H); 4,86 (dd, 1H); 6,11 (dd, 1H); 6,32 (dd, 1H); 6,83 (d, 1H); 7,10 (d, 1H); 7,38 -
7,46 (m, 2H); 7,48 - 7,55 (m, 4H); 7,59 - 7,66 (m, 1H): 7,67 - 7,73 (m, 2H); 7,80 - 7,83 (m,
- 16CZ 307334 B6
3H); 7,96 - 7,99 (m, 4H); 8,17 (s, 1H). HR MS (ESI) pro C36H31O8N4 [M+H]: vypočteno 647,21364; nalezeno 647,21374.
Příklad 16
4-(A',/V-Dimethylamino)-8-(P-D-ribofuranosyl)-8//'-fůro[2',3':4,5]pyrrolo[2,3-<?]pyrimidin (lh)
Sloučenina 9h (250 mg, 0,39 mmol) byla zbavena chránící skupiny podle obecného postupu C. Nukleosid lh (129 mg, 67 %) byl získán ve formě žlutých krystalů o m.p. 212 až 255 °C (rozklad). [a]D -40,0 (c 0,065). 'H NMR (500 MHz, DMSO-d6): 3,40 (s, 6H, (CH3)2N); 3,56 (dd, 1H, Jgem = 11,8 Hz, = 4,1 Hz, H-5'a); 3,60 (dd, 1H, J^, = 11,8 Hz, J5Kr= 4,1 Hz, H-5'b); 3,89 (td, 1H, J4^a = Jryh = 4,1 Hz, Jr.3' = 2,7 Hz, H-4'); 4,10 (dd, 1H, J3^ = 5,4 Hz, J3^= 2,7 Hz, H-3'); 4,46 (dd, 1H, 7,3 Hz, J2;r = 5,4 Hz, H-2'); 4,97 - 5,69 (m, 3H, OH-2',3',5');
6,29 (d, 1H, Ji^= 7,3 Hz, Η-Γ); 7,08 (d, 1H, J7,ň = 2,1 Hz, H-7); 7,82 (d, 1H, J6,7 = 2,1 Hz, H6); 8,16 (s, 1H, H-2). I3C NMR (125,7 MHz, DMSO-d6): 38,14 ((CH3)2N); 62,04 (CH2-5'); 70,72 (CH-3'); 72,42 (CH-2'); 85,15 (CH-4'); 85,94 (CH-Γ); 90,78 (C-+la); 101,71 (CH-7); 124,75 (C-7a); 138,01 (C-Mb); 145,87 (CH-6); 150,43 (CH-2); 153,31 (C-8a); 155,01 (C^l). HR MS (ESI) pro C15H19O5N4 [M+H]: vypočteno 335,13500; nalezeno 335,13512.
Příklad 17
4,6-Dichlor-5-( 1 -methy 1-17/-pyrrol-2-yl)pyrimidin (10)
Roztok 4,6-dichlorpyrimidinu (3) (5,52 g, 37 mmol) ve vysušeném THF (15 ml) byl po kapkách přidán k TMP2Zn-2MgCl2-2LiCl (0,35 mol.F1 v roztoku THF/toluen 9:1, 59,5 ml, 21 mmol) při 0 °C a reakční směs byla při této teplotě míchána 1 h, poté byla zahřátá na teplotu místnosti a míchána další 1 h. Výsledný roztok byl přidán ke směsi 2-jod-l-methylpyrrolu (7,66 g, 37 mmol) a Pd(PPh3)4 (4,3 g, 3,7 mmol) ve vysušeném THF (20 ml) a míchán 16 h při 65 °C. Rozpouštědlo bylo následně odpařeno za sníženého tlaku a surová reakční směs byla čištěna zábleskovou chromatografií na silikagelu (0 až 5% ethylacetát v petroletheru) k získání sloučeniny 10 jako nažloutlé pevné látky (6,4 g, 28 mmol, 75% výtěžek; m.p. 56 až 58 °C). *H NMR (400,0 MHz, DMSO-<76): 3,43 (s, 3H); 6,15 (dd, 1H); 6,18 (dd, 1H); 6,97 (dd, 1H); 8,96 (s, 1H). HR MS (El) pro C9H7C12N3: vypočteno 227,0017; nalezeno 227,0019.
Příklad 18
4-Azido-6-chlor-5-(l -methyl-1 //-pyrrol-2-yl)pyrimidin (11)
Sloučenina 10 (lg, 4,4 mmol); NaN3 (285 mg, 4,4 mmol) a LiCl (186 mg, 4,4 mmol) byly rozpuštěny ve vysušeném DMF (10 ml) a výsledný roztok byl míchán při teplotě místnosti 16 h. Poté byla reakční směs extrahována ethylacetátem a spojené organické vrstvy byly sušeny nad bezvodým MgSO4 a zahuštěny za sníženého tlaku. Surový materiál byl čištěn bleskovou chromatografií na silikagelu (0 až 10% ethylacetát v petroletheru) k získání sloučeniny 11 ve formě žlutého oleje (1,01 g, 4,3 mmol, 98% výtěžek). 'H NMR (400,0 MHz, CDC13): 3,46 (s, 3H); 6,21 (dd, 1H); 6,28 (dd, 1H); 6,81 (dd, 1H); 8,69 (s, 1H). HR MS (El) pro C9H7C1N6: vypočteno 234,0421; nalezeno 234,0420.
- 17CZ 307334 B6
Příklad 19
4-Chlor-5-methyl-5,8-dihydropyrrolo[2',3':4,5]pyrrolo[2,3-í/]pyrimidin (12)
Směs azidu 11 (350 mg, 1,5 mmol) a 1,4-dibrombenzenu (3,54 g, 15 mmol) byla zahřívána 30 minut na 180 °C s přívodem argonu a výstupem plynu. Surová reakční směs byla čištěna bleskovou chromatografií na silikagelu (25 až 40% ethylacetát v petroletheru) k získání sloučeniny 12 jako bílé pevné látky (280 mg, 1,35 mmol, 90% výtěžek; m.p. 231 až 236 °C). 'H NMR (400,0 MHz, DMS(W6): 4,07 (s, 3H); 6,17 (d, 1H); 7,18 (d, 1H); 8,45 (s, 1H); 12,18 (bs, 1H). HR MS (El) pro C9H7CIN4: vypočteno 206,0359; nalezeno 206,0357.
Příklad 20
4-Chlor-5-methyl-8-(2,3,5-tri-(9-benzoyl-p-D-ribofuranosyl)-5,8-dihydropyrrolo[2',3':4,5]pyrrolo[2,3-í4]pyrimidin (13)
K suspenzi sloučeniny 12 (496 mg, 2,4 mmol) ve vysušeném acetonitrilu (20 ml) byl přidán BSA (0,59 ml, 2,4 mmol) a výsledná směs byla míchána při teplotě místnosti 30 minut. Následně byly přidány l-0-acetyl-2,3,5-tri-C>-benzoyl-|3-D-ribofuranosa (1,82 g, 3,6 mmol) a TMSOTf (0,43 ml, 2,4 mmol) a reakční směs byla míchána 3 h při 80 °C; po ochlazení na teplotu místnosti byla extrahována ethylacetátem. Spojené organické vrstvy byly sušeny nad bezvodým MgSO4 a zahuštěny za sníženého tlaku. Surová reakční směs byla čištěna bleskovou chromatografií na silikagelu (5 až 50% ethylacetát v petroletheru) k získání benzoylovaného nukleosidu 13 ve formě žluté pěny (1,19 g, 1,82 mmol, 76% výtěžek). 'H NMR (400,0 MHz, DMSO-<76): 4,08 (s, 3H); 4,67 (dd, 1H); 4,78 (dd, 1H); 4,90 (td, 1H); 6,12 (dd, 1H); 6,37 (t, 1H); 6,47 (d, 1H); 6,89 (d, 1H); 7,21 (d, 1H); 7,40 (m, 2H); 7,51 (m, 4H); 7,61 (m, 1H); 7,68 (m, 2H); 7,80 (m, 2H); 7,96 (m, 4H); 8,52 (s, 1H). HR MS (ESI) pro C^^sCl^CE [M+H]: vypočteno 651,16410; nalezeno 651,16443.
Příklad 21
4,5-Dimethyl-8-(P-D-ribofuranosyl)-5,8-dihydropyrrolo[2',3':4,5]pyrrolo[2,3-íZ]pyrimidin (2a)
Nukleosid 13 (150 mg, 0,23 mmol) a Pd(PPh3)4 (13 mg, 0,012 mmol) byly rozpuštěny ve vysušeném THF (6 ml) a výsledná směs byla míchána 3 h při 70 °C. Po ochlazení na teplotu místnosti byla reakce potlačena přídavkem methanolu a zfiltrována přes Cellit (v acetonu rozpustná acetylcelulosa). Rozpouštědla byla odstraněna za sníženého tlaku a surová reakční směs byla rozpuštěna v methanolu (10 ml). Poté byl přidán methoxid sodný (4,37 mol.F1 v methanolu; 16 μΙ, 0,07 mmol) a reakční směs byla míchána při teplotě místnosti 3 h. Rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku a surová reakční směs byla čištěna bleskovou chromatografií na silikagelu (0 až 10% methanol v dichlormethanu) k poskytnutí volného nukleosidu 2a jako bílého prášku (64 mg, 0,2 mmol, 89% výtěžek; m.p. 237 až 241 °C). 'H NMR (400,0 MHz, DMSO-4,): 2,91 (s, 3H); 3,57 (m, 2H); 3,89 (td, 1H); 4,07 (s, 3H); 4,11 (m, 1H); 4,58 (td, 1H); 4,97 (t, 1H); 5,14 (d, 1H); 5,18 (d, 1H); 6,33 (d, 1H); 6,35 (d, 1H); 7,08 (d, 1H); 8,54 (s, 1H). HR MS (ESI) pro C,5H19N4O4 [M+H]: vypočteno 319,14008; nalezeno 319,14014.
Příklad 22
4-Methoxy-5-methyl-8-(P-D-ribofuranosyl)-5,8-dihydropyrrolo[2',3':4,5]pyrrolo[2,3-í7]pyrimidin (2b)
- 18CZ 307334 B6
K suspenzi nukleosidu 13 (150 mg, 0,23 mmol) v bezvodém methanolu (10 ml) byl přidán methoxid sodný (4,37 mol.l 1 v methanolu; 0,1 ml, 0,46 mmol) a reakční směs byla míchána při teplotě místnosti 12 h. Rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku a surová reakční směs byla čištěna bleskovou chromatografií na silikagelu (0 až 10% methanol v dichlormethanu) k poskytnutí volného nukleosidu 2b jako bílého prášku (63 mg, 0,19 mmol, 83% výtěžek; m.p. 231 až 234 °C). 'H NMR (400,0 MHz, DMSO-c/6): 3,57 (m, 2H); 3,88 (td, 1H); 3,98 (s, 3H); 4,10 (m, 1H); 4,12 (s, 3H); 4,58 (td, 1H); 4,97 (t, 1H); 5,14 (d, 1H); 5,20 (d, 1H); 6,30 (d, 1H); 6,32 (d, 1H); 7,02 (d, 1H); 8,36 (s, 1H). HR MS (ESI) pro CI5Hi9N4O5 [M+H]: vypočteno 335,13500; nalezeno 335,13519.
Příklad 23
5-Methyl-4-(methylsulfanyl)-8-(p-D-ribofuranosyl)-5,8-dihydropyrrolo[2',3':4,5]pyrrolo[2,3-<7]pyrimidin (2c)
K suspenzi nukleosidu 13 (150 mg, 0,23 mmol) v bezvodém methanolu (10 ml) byl přidán thiomethoxid sodný (32 mg, 0,46 mmol) a reakční směs byla míchána při teplotě místnosti 12 h. Rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku a surová reakční směs byla čištěna bleskovou chromatografií na silikagelu (0 až 10% methanol v dichlormethanu) k poskytnutí volného nukleosidu 2c jako bílého prášku (62 mg, 0,18 mmol, 77% výtěžek; m.p. 212 až 214 °C). ’H NMR (400,0 MHz, DMSO-4,): 2,72 (s, 3H); 3,58 (m, 2H); 3,89 (td, 1H); 4,10 (m, 1H); 4,15 (s, 3H); 4,57 (td, 1H); 4,97 (t, 1H); 5,14 (d, 1H); 5,20 (d, 1H); 6,33 (d, 1H); 6,36 (d, 1H); 7,11 (d, 1H); 8,56 (s, 1H). HR MS (ESI) pro C15H19N4O4S [M+H]: vypočteno 351,11215; nalezeno 351,11236.
Příklad 24
4-Amino-5-methyl-8-(|3-D-ribofuranosyl)-5,8-dihydropyrrolo[2',3':4,5]pyrrolo[2,3-<7]pyrimidin (2d)
Nukleosid 13 (150 mg, 0,23 mmol) byl rozpuštěn ve směsi 1,4-dioxanu (2 ml) a 30%) vodného roztoku amoniaku (2 ml) v tlakové trubici. Reakční směs byla míchána po dobu 12 h při 120 °C, pak byla ochlazena na teplotu místnosti a zahuštěna za sníženého tlaku. Vyčištěním bleskovou chromatografií na silikagelu (0 až 30% methanol v dichloromethanu) byl získán volný nukleosid 2d ve formě fialového prášku (54 mg, 0,17 mmol, 75% výtěžek; m.p. 240 až 245 °C (rozklad)). 'H NMR (400,0 MHz, DMSO-fy): 3,55 (m, 2H); 3,85 (td, 1H); 4,02 (s, 3H); 4,08 (m, 1H); 4,56 (td, 1H); 5,04 (t, 1H); 5,12 (d, 1H); 5,16 (d, 1H); 6,20 (d, 1H); 6,22 (d, 1H); 6,32 (bs, 2H) 6,88 (d, 1H); 8,08 (s, 1H). HR MS (ESI) pro ί'|4Η|8Ν5Ο4 [M+H]: vypočteno 320,13533; nalezeno 320,13555.
Protinádorová aktivita in vitro
K hodnocení protinádorové účinnosti nově připravených látek v in vitro podmínkách jsme použili cytotoxický MTT test (Nosková V. et al., Neoplasma 2002, 49, 418^125) na buněčných liniích, derivovaných z normálních tkání i nádorů. Konkrétně testy zahrnuly linie K562 (lidská myeloidní leukémie), K562-Tax (lidská myeloidní leukémie rezistentní na taxol a overexprimující protein mnohočetné lékové rezistence PgP), CEM (T-lymfoblastická leukémie), CEM-DNR-bulk (Tlymfoblastická leukémie rezistentní na doxorubicin); linie A549 (lidský adenokarcinom plic), HCT116wt (lidská rakovina tlustého střeva, wild-type), HCT116p53—/—(lidská rakovina tlustého střeva, mutant p53) a U20S (lidský kostní osteosarkom).
Expresní charakteristiky, profily vnímavosti na klasická protinádorová léčiva i metodologie cytotoxického MTT testu byly opakovaně publikovány (např. Denizot, F. a Lang, R., J. Immunol. Meth. 1986, 89, 271-277; Šarek J. et al., J, Med. Chem., 2003; Nosková viz výše).
- 19CZ 307334 B6
Výsledky biologických testů:
Pokud testované látky vykázaly v in vitro cytotoxickém testu aktivitu (Tabulka 4), byla selektivní vůči širokému spektru nádorových linií různého histogenetického původu (mesenchymální i epiteliální nádory), s významně menší aktivitou vůči liniím normálních lidských fibroblastů (MRC-5 buň. linie). Hodnoty IC5o sloučenin ld-g ležely v oblasti mikromolární koncentrace, hodnoty IC5o sloučenin la-c a 2a-c byly sub-mikromolámí až nanomolámí. Cytotoxická aktivita vůči nádorovým buňkám nebyla závislá na statusu genu p53, jelikož podobné aktivity byly nalezeny jak u linií HCT116 (wild type), tak u mutantní linie s deletovaným genem HCT116 (p53
Tabulka 4. Cytotoxické aktivity připravených sloučenin
OS CCRF-CEM CEM-DNR i HCT116 HCT116p53 K562 K562-TAX U2OS MRC-5
.3 c Q >O Z* O 55 A549
la C B E B B B C B E
lb C A C B B B B B D
lc c B C B B B C ’ B C
ld E E E E E C E C E
le E B E E E C C C E
lf E B E D D B C B E
ig E D E E E E D E E
lh E E E E E E E E E
2a - B E B B B E B E
2b E B E B B B E C E
2c E B E B B B E C E
2d E E E E E E E E E
1.1-i
IC50 A = 10-200 nmol Γ1;
B = 200-900 nmol Γ1;
C = 0,9-10 pmoi r1;
D = 10-25 pmolT1;
E = 25-50 pmolT1.
Průmyslová využitelnost
Látky uvedené v tomto patentu jsou použitelné jako léčiva nebo složky léčiv účinných proti rakovině a leukémiím.

Claims (10)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. 4-Substituované heteropentadieno-pyrrolopyrimidinové ribonukleosidy obecného vzorce I kde
    R je zvolen ze skupiny, zahrnující
    - C1-C5 alkyl, volitelně substituovaný alespoň jedním substituentem vybraným z hydroxyskupiny, sulfanylu, aminoskupiny, C1-C5 alkoxyskupiny, C1-C5 sulfanylu, ClC5 alkylaminoskupiny, di(Cl-C5 alkyl)aminoskupiny;
    - C4-12 heteroaryl, dále obsahující alespoň jeden atom O; volitelně substituovaný alespoň jedním substituentem vybraným z hydroxyskupiny, sulfanylu, aminoskupiny, C1-C5 alkoxyskupiny, C1-C5 sulfanylu, C1-C5 alkylaminoskupiny, di(Cl-C5 alkyl)aminokupiny;
    - aminoskupinu;
    - C1-C5 alkylaminoskupinu;
    - di(Cl-C5 alkyl)aminoskupinu;
    - C1-C5 alkoxyskupinu;
    - C1-C5 alkylsulfanyl;
    X je zvolen z atomu kyslíku, nebo C1-C5 alkylaminoskupiny;
    a farmaceuticky přijatelné soli takových sloučenin, jejich optické izomery a směsi takových optických izomerů, včetně racemických směsí.
  2. 2. 4-Substituované heteropentadieno-pyrrolopyrimidinové ribonukleosidy obecného vzorce I podle nároku 1, kde R je zvolen ze skupiny, sestávající z C1-C5 alkylu, 2-furylu, 3-furylu, benzofurylu, dibenzofurylu, C1-C5 alkylsulfanylu, aminoskupiny, C1-C5 alkylaminoskupiny, di(Cl-C5 alkylaminoskupiny, C1-C5 alkoxyskupiny.
  3. 3. 4-Substituované heteropentadieno-pyrrolopyrimidinové ribonukleosidy obecného vzorce I podle nároku 1, kde R je zvolen ze skupiny, sestávající z furan-2-ylu, furan-3-ylu, benzofuran2-ylu, methylsulfanylu, methylu, methoxyskupiny, aminoskupiny, dimethylaminoskupiny.
  4. 4. 4-Substituované heteropentadieno-pyrrolopyrimidinové ribonukleosidy obecného vzorce 1 podle nároku 1, kterými jsou:
    4-methyl-8-(P-D-ribofuranosyl)-8H-fiiro[2',3':4,5]pyrrolo[2,3-Jjpyrimidin, 4-methoxy-8-(P-D-ribofuranosyl)-8Á/-furo[2',3':4,5]pyrrolo[2,3-<7]pyrimidin,
    -21 CZ 307334 B6
    4-(methylsulfanyl)-8-(3-D-ribofuranosyl)-82/-furo[2',3':4,5]pyrrolo[2,3-ď]pyrimidin, 4-amino-8-(3-D-ribofuranosyl)-8//-furo[2',3':4,5]pyrrolo[2,3-í/]pyrimidin, 4-(furan-2-yl)-8-(P-D-ribofuranosyl)-87/-furo[2',3':4,5]pyrrolo[2,3-íZ]pyrimidin, 4-(furan-3-yl )-8-( P-D-ribofuranosyl)-8//-furo [2',3':4,5]pyrrolo[2,3-</]pyrimidin, 4-(benzofuran-2-yl)-8-(3-D-ribofuranosyl)-8//-furo[2',3':4,5]pyrrolo[2,3-í/]pyrimidin, 4-(A//V-dimethylamino)-8-(P-D-ribofuranosyl)-8/ř-furo[2',3’:4,5]pyrroIo[2,3-íZ]pyrimidin, 4,5-dimethyl-8-(P-D-ribofuranosyl)-5,8-dihydropyrrolo[2',3':4,5]pyrrolo[2,3-í/]pyrimidin,
    4- methoxy-5-methyl-8-([3-D-ribofuranosyl)-5,8-dihydropyrrolo[2',3':4,5]pyrrolo[2,3-í/]pyrimidin,
  5. 5- methyl-4-(methylsulfanyl)-8-(P-D-ribofuranosyl)-5,8-dihydropyrrolo[2',3':4,5]pyrrolo[2,3</]pyrimidin,
    4-amino-5-methyl-8-(P-D-ribofuranosyl)-5,8-dihydropyrrolo[2',3':4,5]pyrrolo[2,3-<7]pyrimidin.
    5. 4-Substituované heteropentadieno-pyrrolopyrimidinové ribonukleosidy obecného vzorce 1 podle nároků 1 až 4 pro použití jako léčiva.
  6. 6. 4-Substituované heteropentadieno-pyrrolopyrimidinové ribonukleosidy obecného vzorce I podle nároků 1 až 4 pro použití k inhibici patologické buněčné proliferace nádorového i nenádorového původu a/nebo k léčbě nádorového nebo nenádorového onemocnění spojeného s buněčnou hyperproliferací.
  7. 7. 4-Substituované heteropentadieno-pyrrolopyrimidinové ribonukleosidy obecného vzorce I podle nároků 1 až 4 pro použití k léčení nádorových onemocnění, zahrnujících nádory epiteliálního, mesenchymálního i neuroektodermálního původu.
  8. 8. 4-Substituované heteropentadieno-pyrrolopyrimidinové ribonukleosidy obecného vzorce I podle nároků 1 až 4 pro výrobu léčiva k léčbě nádorových onemocnění, zahrnujících nádory epiteliálního, mesenchymálního i neuroektodermálního původu.
  9. 9. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje terapeuticky účinné množství alespoň jedné sloučeniny obecného vzorce I podle nároků 1 až 4 a případně alespoň jeden farmaceuticky přijatelný nosič, plnivo a/nebo ředidlo.
  10. 10. Farmaceutický prostředek podle nároku 9 pro použití k inhibici patologické buněčné proliferace nádorového i nenádorového původu a/nebo k léčbě nádorového nebo nenádorového onemocnění spojeného s buněčnou hyperproliferací.
CZ2016-465A 2016-08-02 2016-08-02 Substituované heteropentadieno-pyrrolopyrimidinové ribonukleosidy pro terapeutické použití CZ307334B6 (cs)

Priority Applications (8)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CZ2016-465A CZ307334B6 (cs) 2016-08-02 2016-08-02 Substituované heteropentadieno-pyrrolopyrimidinové ribonukleosidy pro terapeutické použití
EP17768661.5A EP3494122B1 (en) 2016-08-02 2017-07-31 Substituted heteropentadieno-pyrrolopyrimidine ribonucleosides for therapeutic use
PCT/CZ2017/050031 WO2018024265A1 (en) 2016-08-02 2017-07-31 Substituted heteropentadieno-pyrrolopyrimidine ribonucleosides for therapeutic use
PL17768661T PL3494122T3 (pl) 2016-08-02 2017-07-31 Podstawione rybonukleozydy heteropentadienopirolopirymidynowe do użytku terapeutycznego
CA3031049A CA3031049C (en) 2016-08-02 2017-07-31 Substituted heteropentadieno-pyrrolopyrimidine ribonucleosides for therapeutic use
ES17768661T ES2761050T3 (es) 2016-08-02 2017-07-31 Ribonucleósidos de heteropentadieno-pirrolopirimidina sustituidos para uso terapéutico
US16/308,796 US10730905B2 (en) 2016-08-02 2017-07-31 Substituted heteropentadieno-pyrrolopyrimidine ribonucleosides for therapeutic use
JP2019523161A JP6685475B2 (ja) 2016-08-02 2017-07-31 治療に使用するための、置換ヘテロペンタジエノ−ピロロピリミジンリボヌクレオシド

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CZ2016-465A CZ307334B6 (cs) 2016-08-02 2016-08-02 Substituované heteropentadieno-pyrrolopyrimidinové ribonukleosidy pro terapeutické použití

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ2016465A3 CZ2016465A3 (cs) 2018-02-14
CZ307334B6 true CZ307334B6 (cs) 2018-06-13

Family

ID=59901302

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ2016-465A CZ307334B6 (cs) 2016-08-02 2016-08-02 Substituované heteropentadieno-pyrrolopyrimidinové ribonukleosidy pro terapeutické použití

Country Status (8)

Country Link
US (1) US10730905B2 (cs)
EP (1) EP3494122B1 (cs)
JP (1) JP6685475B2 (cs)
CA (1) CA3031049C (cs)
CZ (1) CZ307334B6 (cs)
ES (1) ES2761050T3 (cs)
PL (1) PL3494122T3 (cs)
WO (1) WO2018024265A1 (cs)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CZ308104B6 (cs) * 2018-03-12 2020-01-08 Ăšstav organickĂ© chemie a biochemie AV ÄŚR, v. v. i. Pyridinopyrrolopyrimidinové ribonukleosidy pro terapeutické použití

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005021568A2 (en) * 2003-08-27 2005-03-10 Biota, Inc. Novel tricyclic nucleosides or nucleotides as therapeutic agents
CZ2013845A3 (cs) * 2013-11-04 2015-05-13 Ústav organické chemie a biochemie Akademie věd České republiky, v. v. i. Substituované 7-deazapurinové ribonukleosidy pro terapeutické použití
US20160159844A1 (en) * 2014-12-05 2016-06-09 Institute Of Organic Chemistry And Biochemistry Ascr, V.V.I. Novel substituted 7-deazapurine ribonucleosides for therapeutic uses

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TR201815961T4 (tr) 2008-01-18 2018-11-21 Inst Of Organic Chemistry And Biochemistry Of The Academy Of Sciences Of The Czech Republic Yeni sitostatik 7-deazapürin nükleozidleri.
PL2421879T3 (pl) 2009-04-22 2014-02-28 Inst Of Organic Chemistry And Biochemistry As Cr V V I Nowe nukleozydy 7-deazapurynowe do zastosowań terapeutycznych

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005021568A2 (en) * 2003-08-27 2005-03-10 Biota, Inc. Novel tricyclic nucleosides or nucleotides as therapeutic agents
CZ2013845A3 (cs) * 2013-11-04 2015-05-13 Ústav organické chemie a biochemie Akademie věd České republiky, v. v. i. Substituované 7-deazapurinové ribonukleosidy pro terapeutické použití
US20160159844A1 (en) * 2014-12-05 2016-06-09 Institute Of Organic Chemistry And Biochemistry Ascr, V.V.I. Novel substituted 7-deazapurine ribonucleosides for therapeutic uses

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
PERLÍKOVÁ, Pavla, a kol.. 7-(2-Thienyl)-7-deazaadenosine (AB61), a new potent nucleoside cytostatic with a complex mode of action. Molecular cancer therapeutics, 2016, 15(5), 922-937 *

Also Published As

Publication number Publication date
CZ2016465A3 (cs) 2018-02-14
CA3031049A1 (en) 2018-02-08
JP2019522057A (ja) 2019-08-08
US10730905B2 (en) 2020-08-04
WO2018024265A1 (en) 2018-02-08
CA3031049C (en) 2020-07-07
JP6685475B2 (ja) 2020-04-22
US20190144486A1 (en) 2019-05-16
PL3494122T3 (pl) 2020-03-31
EP3494122A1 (en) 2019-06-12
ES2761050T3 (es) 2020-05-18
EP3494122B1 (en) 2019-09-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP6289361B2 (ja) ５−アザシチジンの合成
JP2008546653A (ja) Ｎ２−キノリン又はイソキノリン置換のプリン誘導体及びその製造方法並びにその用途
US9416143B2 (en) Griseofulvin derivatives
CA3125505C (en) Fluorine-containing substituted benzothiophene compound, and pharmaceutical composition and application thereof
CZ307334B6 (cs) Substituované heteropentadieno-pyrrolopyrimidinové ribonukleosidy pro terapeutické použití
US11299510B2 (en) Substituted pyridopyrrolopyrimidine ribonucleosides for therapeutic uses
EP3478701B1 (en) Substituted thienopyrrolopyrimidine ribonucleosides for therapeutic use
CN114437114B (zh) 二酮哌嗪类天然产物及衍生物的应用、制备与所得衍生物
US9586986B2 (en) Substituted 7-deazapurine ribonucleosides for therapeutic uses
CN102153517A (zh) 二芳基嘧啶酮腙衍生物及其制备方法和用途
CZ2013845A3 (cs) Substituované 7-deazapurinové ribonukleosidy pro terapeutické použití
HK40053728A (en) Fluorine-containing substituted benzothiophene compound, and pharmaceutical composition and application thereof
AU2014277740B1 (en) Novel substituted 7-deazapurine ribonucleosides for therapeutic uses
Peréz-Pérez et al. Novel antiviral compounds

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Patent lapsed due to non-payment of fee

Effective date: 20240802