ES2232604T3 - Pigmento de cochinilla purificado y procedimiento para la produccion del mismo. - Google Patents
Pigmento de cochinilla purificado y procedimiento para la produccion del mismo.Info
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Abstract
Procedimiento para la producción de un color de cochinilla, que comprende someter una solución de extracto de cochinilla a proteolisis y eliminar una fracción de un peso molecular no inferior a 6000.
Description
Pigmento de cochinilla purificado y procedimiento
para la producción del mismo.
La presente invención se refiere a un
procedimiento para producir de forma muy pura y sin alérgenos, el
color de la cochinilla.
La cochinilla, utilizada ampliamente como un
agente colorante, por ejemplo, en los productos farmacéuticos y en
los alimentos, se deriva de la materia colorante roja que se
presenta en los cuerpos de los insectos hembras de Coccus
cacti L., que crece sobre Nopalea coccinellifera y otras
plantas de la familia Cactaceae, que se cultiva en las áreas
desérticas de México y de América Central y del Sur. Como tal, la
cochinilla se recupera a partir de dichos insectos, extrayendo sus
cuerpos secos con agua o alcohol.
Se ha informado últimamente, que siendo una
sustancia derivada de un insecto, la cochinilla contiene proteínas
de impureza alergénica y como tales, pueden constituir un factor
etiológico en las enfermedades alérgicas (Ann Allergy
Asthma, Vol. 84 (5), 549-552, 2000).
Además, la utilización de los colores de la
cochinilla producidos mediante los procedimientos convencionales da
lugar a ciertos problemas: que los tipos y aplicaciones de los
productos, y la concentración de la utilización del color, están
limitados, debido a los olores, atribuibles probablemente a la
materia prima anterior. También se señala otro problema: que los
colores convencionales de la cochinilla tienden a formar un
sedimento con el tiempo, ya que contienen proteínas y contaminantes
derivados de la materia prima mencionada.
Los inventores de la presente invención llevaron
a cabo una exhaustiva investigación para superar el problema
alergénico anteriormente mencionado de los colores convencionales
de la cochinilla, y han desarrollado los colores de la cochinilla
que se definen a continuación.
La presente invención, por tanto, se refiere a
procedimientos para la producción de los siguientes colores
purificados de la cochinilla: (1) y (2).
(1) Un color purificado de la cochinilla,
caracterizado porque está sustancialmente libre de los alérgenos
derivados del insecto de C. cacti L. D1 (Ann. Allergy
Asthma) da a conocer un procedimiento para la obtención de carmín,
que comprende la extracción acuosa de la precipitación del carmín de
la cochinilla con sulfato sódico y carbonato cálcico, filtración,
esterilización, y secado (véase página 549 columna del centro,
líneas 1 a 5, y Fig. 3 en la página 551). Sin embargo, D1 ni expresa
ni sugiere que una solución de extracto de la cochinilla se someta
a proteolisis y a eliminar una fracción de peso molecular no
inferior a 6.000.
D2
(JP-B1-46011115) da a conocer un
procedimiento para la extracción del ácido carmínico, especificado
como un procedimiento para la extracción de una alta concentración
del ácido carmínico, que comprende el calentamiento de una
cochinilla (insecto) hasta una alta temperatura bajo presión,
utilizando como extractora agua de intercambio iónico que contiene
un adyuvante de quelación y un coloide protector. Sin embargo, D2
ni expresa ni sugiere que una solución de extracto de la cochinilla
se someta a proteolisis y a eliminar una fracción de un peso
molecular no inferior a 6.000.
D3
(JP-A-53060934) da a conocer un
procedimiento para la producción de un color cochinilla, que
comprende las etapas siguientes:
- (1)
- añadir ácido a un extracto acuoso (alcohólico) del (insecto) cochinilla pulverizado, y eliminar el precipitado que se forma;
- (2)
- secar el extracto calentando bajo presión reducida;
- (3)
- volver a humedecer el producto seco con un peso de agua del 10-20%;
- (4)
- añadir por lo menos un disolvente, seleccionado de entre el grupo formado por propilenglicol, glicerina y sorbitol, para disolver el producto seco;
- (5)
- calentar la solución bajo presión reducida para eliminar el agua;
- (6)
- añadir un disolvente hidrofílico que no disuelva los colores cochinilla para precipitar un color de ésta; y
- (7)
- recuperar, lavar y secar el color cochinilla.
Sin embargo, D3 ni expresa ni sugiere que una
solución de extracto de la cochinilla se someta a proteolisis y a
eliminar una fracción de un peso molecular no inferior a 6.000.
D4 (JP-A-8283600)
da a conocer un procedimiento para la fabricación de un colorante
de carmín desodorizado, que comprende la puesta en contacto de un
colorante de carmín con dióxido de carbono que se encuentre en
estado supercrítico o en un estado cercano a éste, para, de este
modo, extraer los componentes olorosos del colorante de carmín, en
el cual procedimiento, el colorante de carmín y el dióxido de
carbono se ponen en contacto en presencia o ausencia de un
disolvente orgánico polar que pueda disolver los componentes
olorosos.
Sin embargo, en este procedimiento dado a conocer
por D4, el colorante de carmín se desodoriza mediante etapas
completamente distintas de las utilizadas por el procedimiento de
la presente invención. Además, D4 ni expresa ni sugiere que una
solución de extracto de la cochinilla se someta a proteolisis y a
eliminar una fracción de un peso molecular no inferior a 6.000.
(2) Un color purificado de la cochinilla, tal
como se define en el párrafo (1), caracterizado además porque está
sustancialmente libre de proteínas de peso molecular no inferior a
6000.
La presente invención se refiere asimismo a la
producción de las siguientes composiciones de color y de los
productos colorantes asociados (3) -(5).
(3) Composición de color que comprende el color
purificado de la cochinilla definido en el párrafo (1) y un
transportador o aditivo farmacéuticamente aceptable o un
transportador o aditivo alimentario acertado e higiénico.
(4) Composición de color según se define en el
párrafo (3), en la cual el color de la cochinilla es por lo menos
uno de los miembros seleccionados de entre el grupo formado por
ácido carmínico, laca alumínica del ácido carmínico, laca cálcica
del ácido carmínico, y un polímero de laca alumínica del ácido
carmínico o de laca cálcica del ácido carmínico.
(5) Producto colorante para aplicar a los
alimentos, preparaciones farmacéuticas, preparaciones casi
medicinales o productos cosméticos, que comprende la composición de
color definida en el párrafo (3).
La invención se refiere asimismo a los
procedimientos siguientes (6)-(16) para la producción de un color
de cochinilla.
(6) Procedimiento para la producción de un color
de cochinilla, que comprende someter una solución de extracto de
cochinilla a proteolisis y eliminar una fracción de un peso
molecular no inferior a 6000.
(7) Procedimiento para la producción de un color
de cochinilla, que comprende someter una solución de extracto de
cochinilla a proteolisis y entonces a, por lo menos, uno de los
tratamientos, que se seleccionan de entre el grupo formado por
tratamiento de adsorción, tratamiento de intercambio iónico,
tratamiento ácido y tratamiento de la membrana.
(8) Procedimiento para la producción de un color
de cochinilla, que comprende someter una solución de extracto de
cochinilla a proteolisis y a un tratamiento de adsorción, y
entonces a, por lo menos, uno de los tratamientos seleccionados de
entre el grupo formado por tratamiento de adsorción, tratamiento de
intercambio iónico, tratamiento ácido y tratamiento de la
membrana.
(9) Procedimiento para la producción de un color
de cochinilla, según se define en el párrafo (6), en el cual la
solución de extracto de la cochinilla es un producto extraído
obtenido del insecto de Coccus cactus L, utilizando un
alcohol acuoso.
(10) Procedimiento para la producción de un color
de cochinilla, según se define en el párrafo (6), en el cual la
solución de extracto de cochinilla se somete a proteolisis bajo
condiciones acídicas.
(11) Procedimiento para la producción de un color
de cochinilla, según se define en el párrafo (7) u (8), en el cual
el tratamiento de adsorción se lleva a cabo bajo condiciones
acídicas.
(12) Procedimiento para la producción de un color
de cochinilla, según se define en el párrafo (7) u (8), en el cual
el tratamiento de adsorción comprende la adsorción del color de la
cochinilla en un adsorbente bajo condiciones acídicas y su
desadsorción con alcohol acuoso bajo un pH de
7-9.
(13) Procedimiento para la producción de un color
de cochinilla, según se define en el párrafo (7) u (8), en el cual
el tratamiento ácido se lleva a cabo con un ácido utilizado como
aditivo alimentario.
(14) Procedimiento para la producción de un color
de cochinilla, según se define en el párrafo (7) u (8), en el cual
el tratamiento de la membrana es, por lo menos, un tratamiento
seleccionado de entre el grupo formado por el tratamiento de
membrana de ósmosis inversa, tratamiento de membrana de
nanofiltración, tratamiento de la membrana de ultrafiltración y
tratamiento de la membrana de microfiltración.
(15) Procedimiento para la producción de un color
de cochinilla, según se define en el párrafo (7) u (8), en el cual
el tratamiento de la membrana es, por lo menos, un tratamiento
seleccionado de entre el grupo formado por el tratamiento de
membrana de ósmosis inversa (RO), tratamiento de membrana de
filtración (MF), tratamiento de membrana de nanofiltración (NF), y
tratamiento de membrana de ultrafiltración (UF).
(16) Procedimiento para la producción de un color
de cochinilla, según se define en el párrafo (7) u (8), en el cual
el tratamiento de la membrana se lleva a cabo utilizando una
membrana que posee un peso molecular límite de 2000- 8000.
(17) Procedimiento para la producción de un color
de cochinilla, según se define en el párrafo (7) u (8), en el cual
una fracción del peso molecular no inferior a 6000 se elimina
mediante el tratamiento de membrana.
La Figura 1 es un electroforetograma en gel de
SDS-poliacrilamida (SDS-PAGE) de
los fluidos en varios estados de producción. Los carriles, de
izquierda a derecha, representan (1) marcadores de peso molecular
(16950Da, 14410Da, 10704Da, 8167Da, 6217Da, 2512Da), (2) solución
de extracto de cochinilla, (3) hidrolizado de proteínas, (4)
solución tratada con adsorción, (5) filtrado MF y (6) filtrado
NF.
La presente invención se refiere a procedimientos
para la producción del color de la cochinilla derivado de Coccus
cacti L., caracterizado por estar sustancialmente libre de
alérgenos.
La cochinilla es una materia colorante roja
compuesta predominantemente de ácido carmínico que es un color
antraquinónico y, tal como se ha mencionado anteriormente, se
produce mediante un procedimiento que utiliza Coccus cacti
L. como material de partida.
El color de la cochinilla producido mediante el
procedimiento de la invención se ha purificado, para satisfacer la
característica anteriormente citada, hasta un grado que
sustancialmente no contiene proteínas de peso molecular no inferior
a 6000.
El color de la cochinilla producido mediante el
procedimiento de la invención como tal, puede producirse mediante
una tecnología que incluye la utilización de una solución de
extracto de cochinilla obtenido extrayendo los cuerpos de los
insectos de C. cacti con un disolvente apropiado, sometiendo
dicha solución de extracto de cochinilla a proteolisis, y,
entonces, a un apropiado tratamiento de purificación, tal como el
tratamiento de intercambio iónico y/o el tratamiento de membrana
para eliminar una fracción de peso molecular no inferior a 6000 del
extracto de cochinilla.
Más particularmente, un color de cochinilla muy
purificado, producido según la invención, puede obtenerse y
adquirirse sometiendo los fluidos después de la proteolisis de una
solución de extracto de la cochinilla a cualquiera de los
tratamientos de adsorción, tratamiento de intercambio iónico,
tratamiento ácido o tratamiento de la membrana, o a una combinación
arbitraria de cualesquiera dos o más de dichos tratamientos.
La solución de extracto de la cochinilla que va a
utilizarse en la presente invención puede obtenerse, triturando
ventajosamente los cuerpos secos de los insectos de C.
cactis L. y extrayendo el polvo con agua, un alcohol o un
alcohol acuoso. El alcohol incluye alcoholes inferiores que
contienen átomos de carbono 1-4, tales como
metanol, etanol, propanol, alcohol isopropílico y butanol. El
preferido es etanol.
El procedimiento de extracción puede ser uno que
se utilice rutinariamente para llevar a cabo ésta. Así, el
procedimiento de extracción incluye pero no se limita a un
procedimiento que comprende empapar el polvo seco de los cuerpos de
C. cactis L. en dicho disolvente mediante una técnica de
extracción fría o de una técnica de extracción en caliente y
agitando y filtrando el polvo, y un procedimiento de filtración. La
técnica preferida comprende la inmersión del polvo seco de los
cuerpos de los insectos de C. cacti L. en un disolvente,
preferentemente precalentado, durante varios minutos a algunas
horas, preferentemente durante diez minutos. El pH del disolvente
extractante no está particularmente limitado, pero es
preferentemente neutro-alcalino, específicamente pH
6-8, preferentemente pH 7-8, más
preferentemente alrededor de pH 7,5. El compuesto básico que va a
utilizarse para alcalinizar el disolvente extractante puede
seleccionarse a partir de una amplia gama de compuestos que pueden
utilizarse en los alimentos y, de otra forma, no está
particularmente sometido a restricción. Como ejemplos típicos,
pueden mencionarse hidróxido sódico, carbonato sódico,
hidrogencarbonato sódico y citrato de sodio.
La solución de extracto de la cochinilla obtenida
de la forma anterior, se filtra, se coprecipita o se centrifuga
para eliminar una fracción sólida si es necesario, y, entonces, se
somete a proteolisis bien tal como está, o después de la
concentración. La proteolisis puede llevarse a cabo generalmente
mediante un enzima.
El enzima que va a utilizarse en la proteolisis
no está particularmente sometido a restricción, en la medida en que
es capaz de digerir las proteínas o los péptidos. Pueden utilizarse
de modo conveniente las preparaciones enzimáticas disponibles
comercialmente como proteasas o peptidasas. La proteolisis
enzimática puede llevarse a cabo bajo condiciones específicas que se
adaptan a los enzimas respectivos. Para el tratamiento enzimático
bajo condiciones ácidas, por ejemplo, dicha solución de extracto de
la cochinilla se ajusta preferentemente a pH 3-5,
preferentemente a pH 3,5-4,5, utilizando un ácido
inorgánico tal como el clorhídrico, el ácido sulfúrico o el
fosfórico, o un ácido orgánico, tal como el cítrico, málico,
tartárico, láctico, acético o fumárico. La temperatura para esta
proteolisis no está particularmente restringida, pero puede ser
generalmente del orden de 30-60ºC.
El hidrolizado de proteínas así obtenido se
somete a filtración, coprecipitación o centrifugación para la
eliminación del precipitado formado, si es necesario y, bien
directamente o después de concentración, se somete posteriormente a
tratamiento de adsorción, tratamiento de intercambio iónico,
tratamiento ácido o tratamiento de membrana. El preferido es el
tratamiento de membrana.
El procedimiento de filtración para eliminar los
precipitados formados en las diversas etapas en el procedimiento
según la invención, incluso del precipitado que se acaba de
mencionar, puede llevarse a cabo en presencia de la ayuda de un
filtro, tal como la tierra de diatomeas o la celita, cuya
utilización permite eliminar partículas finas que no son fáciles de
filtrar.
El tratamiento de adsorción puede realizarse de
forma rutinaria. Por ejemplo, puede ser un tratamiento de adsorción
que utilice un adsorbente tal como carbono activado, gel de sílice
o un material cerámico poroso, o un tratamiento de adsorción que
utilice una resina adsorbente, de la forma siguiente: una resina
estirénica adsorbente tal como Duolite S-861 (TM,
Diamond Shamrock, USA; la misma se aplica a continuación), Duolite
S-862, Duolite S863 y Duolite S-866;
una resina adsorbente aromática tal como Sepabeads SSP700 (TM,
Mitsubishi Chemical; la misma se aplica a continuación), Sepabeads
SP825, Diaion HP10 (TM, Mitsubishi Chemical; la misma se aplica a
continuación), Diaion HP20, Diaion HP21, Diaion HP40 y Diaion HP50,
etc.; y Amberlita XAD-4 (TM Organo; la misma se
aplica a continuación), Amberlita XAD-7 y Amberlita
XAD-2000, etc.., por ejemplo.
El tratamiento de adsorción se lleva a cabo
preferente, pero no esencialmente, bajo condiciones ácidas. Para
ser específico, la muestra que va a ser adsorbida se ajusta
preferentemente al pH 2-4 anterior, más
preferentemente a un pH de alrededor de 3, con dicho ácido
inorgánico u orgánico.
El color adsorbido de la cochinilla sobre el
adsorbente, puede recuperarse desadsorbiéndolo (eluyéndolo) con un
disolvente apropiado tal como un alcohol acuoso.
Preferentemente, antes de la elución, el
adsorbente se lava con un disolvente apropiado, tal como agua, que
no provoca la desabsorción del color de la cochinilla. El alcohol
acuoso preferido contiene generalmente entre 10 y 60%, más
preferentemente entre 20 y 80% del volumen de alcohol. El alcohol
incluye alcoholes inferiores de 1-4 átomos de
carbono, tales como metanol, etanol, propanol, alcohol isopropílico
y butanol. El alcohol preferido es etanol.
En este caso, el disolvente de desabsorción o
eluyente es preferentemente neutro-alcalino,
principalmente un pH de 7-9, preferentemente un pH
de 8-9, y el ajuste a tal nivel de pH puede
realizarse utilizando citrato sódico, hidróxido sódico, carbonato
sódico, hidrogencarbonato sódico, o similar.
El fluido disponible en el tratamiento de
adsorción de la solución de extracto de cochinilla puede someterse
a otro tratamiento de adsorción o a cualquiera de los otros
diversos tratamientos, tales como el tratamiento del intercambio
iónico, el tratamiento de membrana y el tratamiento ácido.
Este tratamiento de adsorción puede ser el mismo
tratamiento que el descrito anteriormente.
El tratamiento del intercambio iónico no está
particularmente sometido a restricción pero incluye el tratamiento
de intercambio aniónico o del intercambio catiónico de rutina
utilizando la resina convencional de intercambio iónico. La resina
de intercambio catiónico, por ejemplo, incluye pero no está
restringida a resinas de intercambio catiónico intenso y a resinas
de intercambio catiónico débil, tal como Diaion SK1B, (TM,
Mitsubishi Chemical; la misma se aplica se aplica a continuación),
Diaion SK102, Diaion SK116, Diaion PK208, Diaion WK10 y Diaion
WK20, entre otros. También, la resina de intercambio aniónico no
está particularmente restringida, pero incluye Diaion SA10A (TM,
Mitsubishi Chemical; la misma se aplica a continuación), Diaion
SA12A, Diaion SA20A, Diaion PA306, Diaion WA10, y Diaion WA20,
entre otros.
El tratamiento de membrana en el contexto de la
presente invención significa diversos tratamientos de filtración
utilizando membranas, incluyendo así un tratamiento con un filtro
de membrana (MF), una membrana funcional altamente polimérica tal
como una membrana de ultrafiltración (UF), de nanofiltración (NF),
de ósmosis inversa (RO) o de electrodiálisis.
La tecnología conocida del tratamiento de
membrana incluye no sólo los procedimientos de membrana UF y RO,
sino también el tratamiento de diálisis utilizando el gradiente de
concentración a través de una membrana iónica selectiva y el
tratamiento de electrodiálisis, utilizando una membrana de
intercambio iónico que aplica un voltaje, entre otros.
Industrialmente, se prefiere el procedimiento de nanofiltración,
NF, de la membrana. El material de membrana que va a utilizarse en
el procedimiento de tratamiento de la membrana puede ser natural,
sintético o semisintético, e incluye la celulosa, el diacetato o
triacetato de celulosa, poliamidas, polisulfonas, poliestirenos,
poliimidas y poliacrilonitrilo, entre otros.
El tratamiento de la membrana según la invención,
incluye un tratamiento por el cual compuestos de alto peso
molecular se eliminan con una membrana que presenta un peso
molecular límite de, por ejemplo, 10000-1000000 y un
tratamiento por el cual compuestos de peso molecular bajo son
eliminados con una membrana que posee un peso molecular límite de
alrededor de 2000-8000, preferentemente alrededor de
6000, más preferentemente de 3000.
La primera tecnología incluye específicamente la
técnica UF de membrana utilizando cualquiera de las membranas
NTU-3150, membranas NTU-3250,
NTU-3550 y NTU-3800 UF (también
disponible en Nitto Denko Corporation); Cefilt-UF
(producto de Nippon NGK Insulators, Ltd); membrana
AHP-2013, membrana AHP-3013 y
membrana AHP-1010 (todas disponibles en Asahi
Chemical Industry), entre otras. La última tecnología incluye la
técnica de membrana de ósmosis inversa (membrana NF: peso molecular
límite de 3000), utilizando cualquiera de las membranas
NTR-7250, NTR- 7410, NTR-7430 y
NTR-7450 (todas de Nitto Denko Corporation);
membrana AIP-3013, membrana
ACP-3013, membrana ACP-2013,
membrana AIP-2013 y membrana
AIO-1010 (todas disponibles en Asahi Chemical
Industry), entre otras. Estas membranas pueden utilizarse
independientemente o en una combinación apropiada.
El tratamiento ácido puede llevarse a cabo
ajustando el hidrolizado proteico de una solución de extracto de la
cochinilla o del fluido sometido, a los diversos tratamientos
mencionados anteriormente, a pH 1-6, preferentemente
a pH 1,5-4, para exponer, por tanto, el fluido a un
medio ácido. El tratamiento ácido puede llevarse a cabo
convenientemente añadiendo un ácido a dicho fluido. El ácido que va
a utilizarse no está particularmente sometido a restricción en la
medida en que se utiliza rutinariamente como un aditivo
alimentario, y puede seleccionarse arbitrariamente de entre dichos
ácidos. Por ejemplo, pueden utilizarse dichos ácidos orgánicos como
el ácido cítrico, ácido acético, ácido málico y ácido láctico,
etc., y pueden emplearse dichos ácidos inorgánicos, como sulfúrico,
clorhídrico, fosfórico, nítrico, etc.. El preferido es un
tratamiento que utilice un ácido inorgánico que se utilice
rutinariamente, como un aditivo alimentario.
La condición térmica para dicho tratamiento ácido
no está particularmente restringida, pero puede ser seleccionada
arbitrariamente de modo habitual entre 5 y 100ºC. Por ejemplo,
pueden utilizarse los intervalos de 20-100ºC o
40-100ºC. La duración del tratamiento ácido no está
particularmente restringida, pero puede ser seleccionada
arbitrariamente de modo habitual entre 1 y 300 minutos.
Generalmente hablando, para una temperatura de tratamiento alta, es
suficiente un tiempo de tratamiento más corto y, en este sentido,
para un tratamiento entre 40 y 100ºC, puede seleccionarse un tiempo
de tratamiento de entre 5 y 60 minutos. En este tratamiento el
fluido de carga del tratamiento puede someterse opcionalmente a
agitación, no existiendo ninguna norma particular para llevar ésta
a
cabo.
cabo.
Como tratamiento opcional, el gas dióxido de
carbono, el etileno, el propano o similar, puede ponerse en
contacto con el hidrolizado proteico de una solución de extracto de
la cochinilla, o dicho fluido después de dicho tratamiento de
adsorción, bajo condiciones de temperatura y presión supercríticas
en un sistema herméticamente cerrado.
Sólo puede llevarse a cabo uno de los
tratamientos que se acaban de mencionar, o, en una combinación
opcional y en un orden arbitrario, dos o más de ellos. O puede
llevarse a cabo repetidamente uno de ellos bajo las mismas
condiciones u otras.
El procedimiento de tratamiento preferido, aunque
no particularmente sometido a restricción, comprende someter el
extracto de la cochinilla después del tratamiento proteolítico a un
tratamiento de adsorción, y someter el fluido obtenido mediante
desadsorción del adsorbente, a un tratamiento de membrana. Además,
cuando sea necesario, puede llevarse a cabo un tratamiento de
intercambio iónico, después de dicho tratamiento de adsorción. El
tratamiento de membrana mencionado anteriormente es preferentemente
un tratamiento MF, UF o NF de membrana, más preferentemente un
tratamiento MF o NF de membrana. Además, este tratamiento de
membrana se realiza preferentemente utilizando una membrana que
tenga un peso molecular límite de 2000-8000,
preferentemente de alrededor de 6000, más preferentemente de
alrededor de 3000, para eliminar, de este modo, compuestos de alto
peso molecular, preferentemente aquéllos que tengan pesos
moleculares superiores a 6000, más preferentemente superiores a
3000.
Al color de la cochinilla obtenido de esta forma,
se le ha privado efectivamente de varios contaminantes, incluidas
las proteínas derivadas de insectos de C. cacti L. que son
alergénicas o potencialmente alergénicas. Puede, por tanto,
proporcionarse un color de cochinilla que, cuando se formule en
alimentos, especialidades farmacéuticas, casi medicamentos o
productos cosméticos que van o son capaces de ser ingeridos
oralmente, no induzca respuestas alérgicas. Además, el color
obtenido de la cochinilla mediante el procedimiento anteriormente
mencionado de la invención, raramente forma un precipitado con el
tiempo, mostrando de esta forma un tiempo de conservación
aceptable.
Incidentalmente, el término "color
cochinilla" significa principalmente ácido carmínico, pero el
color cochinilla en el contexto de la invención incluye no sólo el
ácido carmínico, sino también el carmín, que es el pigmento (que
incluye sus complejos y sus polímeros) que se forma cuando un ión
metálico, tal como el alumínico o el cálcico, forma un complejo con
el ácido carmínico. Como el carmín, pueden mencionarse tipos de
complejos tales como el de ácido carmínico con el ión de aluminio,
que incluye a su polímero (laca alumínica), y el del ácido carmínico
con el ión calcio, que incluye a su polímero (laca cálcica).
El color cochinilla, tal como se obtiene del modo
que se acaba de mencionar, puede formularse con un transportador
y/o un aditivo, que sea aceptable desde un punto de vista sanitario
o farmacéutico, y puede proveerse en forma de una composición de
color. Esta composición de color puede utilizarse con la ventaja de
que el producto colorante se añade con el propósito de colorear
alimentos que incluyen bebidas, productos farmacéuticos, casi
medicamentos o productos cosméticos, particularmente aquéllos
productos que van a o son capaces de ingerirse oralmente.
La forma de dosificación del producto colorante
no está particularmente restringida, pero puede consistir en una
solución o dispersión del color cochinilla en un medio tal como
agua, un alcohol, por ejemplo, etanol, o otros disolventes
apropiados, por ejemplo, propilenglicol, glicerol o similar), o un
producto seco (sólido) que se prepara formulando el color cochinilla
en un transportador (excipiente) tal como la dextrina, lactosa,
jarabe solidificado de almidón o similar, y moldeando la mezcla en
polvo, gránulos comprimidos o píldoras.
No existe restricción particular para los
aditivos que pueden formularse en el producto colorante, pero
incluyen aquéllos aditivos alimentarios que se utilizan
generalmente en los colores y en los productos colorantes, tales
como conservantes (acetato sódico, protamina, etc.), estabilizantes
(goma arábiga, goma ..., carragenina, trehalosa, hemicelulosa
soluble en agua, fosfato sódico, metafosfato sódico, etc..),
emulsificantes (lecitina, ésteres de ácidos grasos de sacarosa,
ésteres de ácidos grasos de poliglicerol, etc.), antioxidantes,
(extracto de té, extracto de café en bruto, extracto de semillas de
girasol, extracto de Myrica, extracto de rutina, extracto de
romero, rutina tratada enzimáticamente, producto de descomposición
de la rutina (quercetina), isoquercitrina tratada enzimáticamente,
tocoferoles, compuestos de ácido ascórbico, etc.).
Tal como se muestra en el Ejemplo 3 que se
proporciona a continuación, el color cochinilla significativamente
desodorizado puede prepararse mediante el procedimiento de la
invención. El procedimiento para la producción de un color
cochinilla de la invención puede entenderse como un procedimiento
para desodorizar un color cochinilla. De este modo, la invención
incluye los modos siguientes:
(a) Un procedimiento para desodorizar un color
cochinilla, que comprende someter una solución de extracto de
cochinilla a proteolisis y a eliminar una fracción de peso
molecular no inferior a 6000.
(b) Un procedimiento para desodorizar un color
cochinilla, que comprende someter la solución de extracto de
cochinilla a proteolisis y entonces, a por lo menos un tratamiento,
seleccionado de entre el grupo formado por un tratamiento de
adsorción, un tratamiento de intercambio iónico, un tratamiento
ácido y un tratamiento de membrana.
(c) Un procedimiento para desodorizar un color
cochinilla, que comprende someter la solución de extracto de
cochinilla a proteolisis y a adsorción y entonces, a por lo menos
un tratamiento, seleccionado de entre el grupo formado por un
tratamiento de adsorción, tratamiento de intercambio iónico y
tratamiento de membrana.
(d) Un procedimiento para desodorizar un color
cochinilla, tal como se define en el párrafo (a), en el que la
solución de extracto de cochinilla es un producto extractado
obtenido a partir de los insectos de Coccus cactus L. con la
utilización de u alcohol acuoso.
(e) Un procedimiento para desodorizar un color
cochinilla, tal como se define en el párrafo (a), en el que la
solución de extracto de cochinilla se somete a proteolisis bajo
condiciones ácidas.
(f) Un procedimiento para desodorizar un color
cochinilla, tal como se define en el párrafo (b) o (c), en el que
el tratamiento de adsorción se lleva a cabo bajo condiciones
ácidas.
(g) Un procedimiento para desodorizar un color
cochinilla, tal como se define en el párrafo (b) o (c), en el que
el tratamiento de adsorción comprende la adsorción del color
cochinilla sobre un adsorbente bajo condiciones ácidas y su
desadsorción con un alcohol acuoso bajo condiciones de pH
7-9.
(h) Un procedimiento para desodorizar un color
cochinilla, tal como se define en el párrafo (b) o (c), en el que
el tratamiento ácido se lleva a cabo con un ácido que se utiliza
como un aditivo alimentario.
(i) Un procedimiento para desodorizar un color
cochinilla, tal como se define en el párrafo (b) o (c), en el que
el tratamiento de membrana es, por lo menos, un tratamiento
seleccionado de entre el grupo formado por el tratamiento de
membrana de ósmosis inversa, el tratamiento de membrana de filtro,
el tratamiento de membrana de ultrafiltración y el tratamiento de
membrana de nanofiltración.
(j) Un procedimiento para desodorizar un color
cochinilla, tal como se define en el párrafo (b) o (c), en el que
el tratamiento de membrana se lleva a cabo utilizando una membrana
que tiene un peso molecular límite de 2000-8000.
(k) Un procedimiento para desodorizar un color
cochinilla, tal como se define en el párrafo (b) o (c), en el que
una fracción de peso molecular no inferior a 6000, se elimina
mediante el tratamiento de membrana.
Los ejemplos siguientes ilustran la invención más
detalladamente. Se entenderá, sin embargo, que el alcance de la
invención no está definido de ningún modo por estos ejemplos.
A 35 kg del polvo seco del insecto Coccus
cacti L. se añadieron 800 l de agua ajustada a un pH de 7,5 con
hidróxido sódico, y el color cochinilla se extrajo a
90-100ºC con agitación, durante
20-30 minutos. La solución de extracto se hizo
pasar a través de un cedazo de metal, de malla 60, para la
separación sólido-líquido y la fase líquida
(solución de extracto de cochinilla) se ajustó a un pH 4 con ácido
cítrico y se enfrió a alrededor de 50ºC. En esta etapa, se añadió
0,1% de proteasa y la mezcla se agitó a esa temperatura durante 3
horas. Entonces, el hidrolizado proteico obtenido se ajustó a pH 3
con ácido cítrico, se mezcló con ayuda del filtro y de tierra de
diatomeas, y se filtró a través de papel de filtro para recuperar
alrededor de 250 l del hidrolizado de proteínas. Este hidrolizado
proteico de cochinilla se procesó sobre una columna empaquetada con
la resina adsorbente Amberlita XAD-7 (150 L) para
adsorber el color cochinilla. Después, la columna de resina se lavó
con 8 volúmenes de agua, se eluyó el color cochinilla con 130 l de
una solución acuosa al 50% de etanol (pH 7,5), para recuperar 82 l
del eluado. Entonces, este fluido sometido a la adsorción, se trató
con una membrana MF (un filtro de cerámica, 0,2 \mum; NGK
Insulators) con 2 kg/cm^{2} y 20ºC para recuperar 82 l de filtrado
MP.
Posteriormente, se llevó a cabo un tratamiento
que utilizó una membrana MF (CF30-S, peso molecular
límite = 6000; Nitto Denko), con 3 kg/cm^{2} y 20ºC, para dar 80
l de filtrado NF. Este filtrado NF se concentró bajo presión
reducida para producir 20 kg de una solución de color
significativamente purificada, con un valor colorimétrico de
E^{10%}_{1 \ cm} = 200. A 20 kg de esta solución de color se
añadieron 32,4 kg de agua, 13 kg de alcohol etílico y 600 g de
ácido cítrico (cristales), para dar lugar a 66 kg de un producto
colorante de la cochinilla, con un valor colorimétrico de
E^{10%}_{1 \ cm} = 60.
El valor del color (E^{10%1}_{1 \ cm})
mencionado anteriormente es un valor que se ha encontrado midiendo
la absorbancia de una solución del color objetivo cochinilla (0,1 N
HCl) a la longitud de onda máxima de absorción (ca 410 nm) en la
región visible del espectro y convirtiendo el valor de la
absorbancia en la absorbancia de una solución de un porcentaje de
10 peso/vol.
Si la solución tratada obtenida en cada estadio
de la producción (solución de extracto de cochinilla, filtrado MF o
filtrado NF) se somete directamente a electroforesis, difícilmente
puede llevarse a cabo un análisis proteico, debido a la influencia
de pigmentos, sales, etc., que tiene lugar en el color cochinilla.
Por tanto, utilizando una cromatografía líquida, de cada solución
tratada y analizada mediante electroforesis, se separó la proteína
sola, selectivamente. De este modo, 5 \mul de cada solución con un
valor colorimétrico de E^{10%}_{1 \ cm} = 80, se procesó sobre
una columna Symmetry C18:ODS (\diameter 0,46 mm x 250 mm) bajo
las condiciones del disolvente revelador: 70% MeOH, velocidad de
flujo: 1 ml/min, y longitud de onda de detección de 280 nm para
separar pigmentos y sales de la proteína, recuperándose sola la
fracción proteica. Este tratamiento se repitió 10 veces y las
fracciones proteicas se reunieron, se concentraron hasta sequedad,
se disolvieron en 100 \mul de agua, para preparar una muestra y
someterla a electroforesis. Ésta se llevó a cabo según el
procedimiento de Laemmli (Nature, 227, 680 (1970), y el gel
se sometió a la tinción argéntica de forma rutinaria. La muestra
para electroforesis se preparó mezclando 105 \mul de la muestra
anterior con 10 \mul de 2-mercaptoetanol, 25
\mul de 0,5 M Tris-HCl (pH 6,8), 40 \mul de SDS
al 10% en peso y 20 \mul de glicerina al 70% en peso, hirviendo la
mezcla durante 3 minutos.
Las condiciones de la SDS-PAGE
fueron las siguientes:
- Muestra para el ensayo: 10 \mul/carril
- Tampón: Tris-glicina (pH 6,8), SDS al 0,1%
Los resultados de la electroforesis se muestran
en la Fig. 1. En ésta, los carriles de izquierda a derecha
representan (1) marcadores de pesos moleculares (16950Da, 14410Da,
10704Da, 8167Da, 6217Da, 2512Da), (2) solución de extracto de
cochinilla, (3) hidrolizado proteico, (4) solución tratada mediante
adsorción, (5) filtrado MF y (6) filtrado NF.
Recientemente, M.T. Lizaso et al. han
informado de que los alérgenos que se encuentran en el color de la
cochinilla son proteínas con pesos moleculares de 17000, 28000 y
50000 (Ann Allergy Asthma, Vol 84(5),
549-552 (2000)). Aunque se admite generalmente que
las proteínas que inducen respuestas alérgicas son proteínas
comparativamente grandes con pesos moleculares superiores a 10000,
también se ha informado de que una proteína puede convertirse en
alérgeno acoplándose a otro componente.
Sólo a partir de los resultados que se muestran
en la Fig. 1, está claro que, según la tecnología de producción de
la invención, no sólo dichas proteínas con pesos moleculares de
17000, 28000 y 50000, sino también las que presentan pesos
moleculares de 6000 y más, que son alérgenos potenciales, pueden
eliminarse más, hasta un grado no detectable por la tinción
argéntica (valor inferior a 100 ppb).
Además, mediante la tecnología de producción de
la invención, la muestra después del tratamiento NF, muestra tal
grado de pureza que ninguna proteína puede ya sustancialmente
detectarse, indicando que el color cochinilla puede obtenerse con
una valoración extremadamente alta de la seguridad.
A 24 kg del producto colorante de la cochinilla
con un valor colorimétrico de E^{10%}_{1 \ cm} = 60, tal como
se preparó en el Ejemplo 1, se añadieron 156 kg de agua, y 8 kg de
ácido tartárico, 9,3 kg de alumbre y 0,6 kg de cal apagada
(hidróxido cálcico) se disolvieron en el fluido coloreado resultante
(solución de pigmento). Entonces, bajo agitación, la temperatura se
elevó hasta 80ºC y se mantuvo a este nivel durante 5 horas, por lo
que se obtuvo una laca alumínica insoluble de la cochinilla
(carmín). Esta suspensión acuosa de carmín se filtró con una prensa
filtro (Yabuta Co) para recuperar un residuo sólido de carmín, que
se secó entonces al vacío a 50ºC y se pulverizó para preparar un
polvo de carmín.
El análisis proteico de este carmín mediante el
mismo procedimiento de electroforesis que en el Ejemplo 1, no
mostró evidencia de proteínas. Se demostró claramente, pues, que se
podría preparar un carmín sustancialmente libre de proteínas como
alérgenos potenciales, mediante el procedimiento que se ha descrito
en el Ejemplo 1.
Relacionado con esto, según los hallazgos
obtenidos por los inventores de la presente invención, cuando se
provoca que una laca alumínica de ácido carmínico o laca cálcica
(carmín) forme un polímero, existe la tendencia a que cuando se
deja que una proteína de bajo peso molecular esté presente, pueda
obtenerse una laca más limpia con un aumento de la intensidad del
color rojo. Por tanto, puede prepararse un color de cochinilla
(carmín) con una intensidad más alta del color rojo y con un
aumento de su valor en el mercado, añadiendo una proteína de un
peso molecular comparativamente bajo, que no llega a convertirse en
un alérgeno para la solución coloreada libre de alérgenos
anteriormente mencionada.
El producto colorante de la cochinilla con un
valor colorimétrico de E^{10%}_{1 \ cm} = 60 preparado en el
Ejemplo 1, se examinó respecto a la presencia de olor. Más
específicamente, 5 g del producto colorante de la cochinilla se
diluyeron en agua para preparar, de este modo, 1 l de una solución
con un valor colorimétrico de E^{10%}_{1 \ cm} = 0,3. La
solución resultante se calentó hasta una temperatura de 50ºC,
evaluándose entonces respecto a su olor, basándose en el juicio
expuesto por un conjunto de 10 especialistas altamente entrenados.
Como muestra comparativa para la evaluación, se utilizó un extracto
de cochinilla (pH 7,5) obtenido del polvo seco del insecto Coccus
cacti L. mediante una extracción acuosa, siguiendo los
procedimientos del Ejemplo 1 (color comparativo 1) y un color de
cochinilla preparado sometiendo posteriormente el extracto
cochinilla obtenido mediante extracción acuosa a un tratamiento de
adsorción en la resina (color comparativo 2). Las muestras
comparativas se utilizaron para la evaluación de olores después de
diluirlas de la misma forma que se ha descrito anteriormente, para
preparar una solución con un valor colorimétrico de E^{10%}_{1 \
cm} = 0,3, calentándose entonces hasta la temperatura de 50ºC. Los
resultados se muestran en la tabla 1.
Evaluación | Producto del color de | Color comparativo 1 | Color comparativo 2 |
cochinilla purificado | |||
+ + + | 0 | 7 | 3 |
+ + | 0 | 3 | 6 |
+ | 0 | 0 | 1 |
\pm | 2 | 0 | 0 |
- | 8 | 0 | 0 |
(Cada número en la Tabla 1 muestra el número de
especialistas que realizaron la selección según los "Criterios de
evaluación" que se exponen a continuación).
+ + +: | El olor desprendido por el insecto Coccus cacti L. se percibe fuertemente. |
+ +: | El olor desprendido por el insecto Coccus cacti L. se percibe. |
+: | El olor desprendido por el insecto Coccus cacti L. se percibe ligeramente. |
\pm: | El olor desprendido por el insecto Coccus cacti L. se percibe con dificultad. |
-: | El olor desprendido por el insecto Coccus cacti L. no se percibe. |
De estos resultados se deduce que el color de la
cochinilla de la invención puede olerse o no en un grado que se
percibe con dificultad, y que el color de la cochinilla
desodorizado significativamente puede preparase mediante el
procedimiento de la invención.
El producto colorante de la cochinilla con un
valor colorimétrico de E^{10%}_{1 \ cm} = 60 preparado en el
Ejemplo 1, se examinó respecto a la precipitación con el tiempo.
Específicamente, el producto colorante de la cochinilla se conservó
en estado disuelto a una temperatura de 5ºC durante seis meses,
observándose entonces visualmente durante la formación del
precipitado. Como resultado, el producto colorante de la invención
no se precipitó y mostró estabilidad durante largo tiempo.
El resultado muestra que el color de la
cochinilla, inhibido significativamente de la estabilización
durante un almacenamiento a largo plazo, puede prepararse mediante
el procedimiento de la invención.
El color de la cochinilla producido según la
presente invención es un color seguro, sustancialmente libre de
alérgenos, que se ha purificado intensamente para eliminar las
proteínas y otros contaminantes derivados del material en bruto del
insecto Coccus cacti L. Por tanto, este color y el producto
colorante que contiene el color según la invención puede utilizarse
sin miedo a los riesgos respecto a las respuestas alérgicas, pues
la materia colorante para los distintos productos (en los que se
aplica), son o van a ser capaces de ser ingeridos por vía oral,
tales como bebidas u otros alimentos, productos farmacéuticos, casi
medicamentos y productos cosméticos.
Además, el color de la cochinilla producido
mediante el procedimiento de la invención es desodorizado
significativamente hasta un grado difícilmente perceptible, de
forma que el color puede utilizarse para colorear productos tales
como alimentos, cosméticos, etc., cuyos valores comerciales están
influenciados por su olor.
Además, el color de la cochinilla producido
mediante el procedimiento según la invención, es por lo menos
propenso a formar un precipitado con el tiempo, de modo que puede
colorear varios productos uniformemente, como bebidas, alimentos
incluyendo dulces, etc., sin necesidad de llevar a cabo una
filtración antes de utilizarlo.
Claims (22)
1. Procedimiento para la producción de un color
de cochinilla, que comprende someter una solución de extracto de
cochinilla a proteolisis y eliminar una fracción de un peso
molecular no inferior a 6000.
2. Procedimiento para la producción de un color
de cochinilla según la reivindicación 1, en el que una fracción del
peso molecular no inferior a 6000, es eliminada mediante
tratamiento de la membrana.
3. Procedimiento para la producción de un color
de cochinilla según la reivindicación 1, que comprende someter una
solución de extracto de cochinilla a proteolisis y por lo menos, a
uno de los tratamientos seleccionados de entre el grupo formado por
tratamiento de adsorción, tratamiento de intercambio iónico,
tratamiento ácido y tratamiento de la membrana, y eliminar una
fracción del peso molecular no inferior a 6000.
4. Procedimiento para la producción de un color
de cochinilla según la reivindicación 1, que comprende someter una
solución de extracto de cochinilla a proteolisis, tratamiento de
adsorción, y por lo menos, uno de los tratamientos seleccionados de
entre grupo formado por tratamiento de intercambio iónico,
tratamiento ácido y tratamiento de la membrana, y eliminar una
fracción de peso molecular no inferior a 6000.
5. Procedimiento para la producción de un color
de cochinilla según la reivindicación 1, en el que la solución de
extracto de la cochinilla es un producto extraído obtenido de los
cuerpos de los insectos Coccus cactus L, utilizando un
alcohol acuoso.
6. Procedimiento para la producción de un color
de cochinilla según la reivindicación 1, en el que la solución de
extracto de cochinilla se somete a proteolisis bajo condiciones
acídicas.
7. Procedimiento para la producción de un color
de cochinilla según la reivindicación 3 ó 4, en el que el
tratamiento de adsorción se lleva a cabo bajo condiciones
acídicas.
8. Procedimiento para la producción de un color
de cochinilla según las reivindicaciones 3 ó 4, en el que el
tratamiento de adsorción comprende provocar que un color de
cochinilla se adsorba en un adsorbente bajo condiciones acídicas y,
a continuación, que se desadsorba con alcohol acuoso bajo un pH de
7-9.
9. Procedimiento para la producción de un color
de cochinilla según la reivindicación 3, en el que el tratamiento
ácido se lleva a cabo con un ácido utilizado como aditivo
alimentario.
10. Procedimiento para la producción de un color
de cochinilla según la reivindicación 2, en el que el tratamiento
de la membrana es por lo menos un tratamiento seleccionado de entre
el grupo formado por tratamiento de la membrana de ósmosis inversa,
tratamiento de la membrana de filtro, tratamiento de la membrana de
nanofiltración y tratamiento de la membrana de ultrafiltración.
11. Procedimiento para la producción de un color
de cochinilla según la reivindicación 2, en el que el tratamiento
de la membrana es un tratamiento que utiliza una membrana que posee
un peso molecular límite de 2000 a 8000.
12. Procedimiento para la producción de un color
de cochinilla según la reivindicación 1, en el que el color es
oloroso de una forma escasamente perceptible, que comprende someter
una solución de extracto de cochinilla a proteolisis y eliminar una
fracción de peso molecular no inferior a 6000.
13. Procedimiento para la producción de un color
de cochinilla según la reivindicación 12, en el que una fracción de
peso molecular no inferior a 6000 se elimina mediante tratamiento
de la membrana.
14. Procedimiento para la producción de un color
de cochinilla según la reivindicación 12, que comprende someter una
solución de extracto de cochinilla a proteolisis y a por lo menos
un tratamiento seleccionado de entre el grupo formado por
tratamiento de adsorción, tratamiento de intercambio iónico,
tratamiento ácido y tratamiento de la membrana, y eliminar una
fracción del peso molecular no inferior a 6000.
15. Procedimiento para la producción de un color
de cochinilla según la reivindicación 12, que comprende someter una
solución de extracto de cochinilla a proteolisis, tratamiento de
adsorción y por lo menos, uno de los tratamientos seleccionados de
entre grupo formado por tratamiento de intercambio iónico,
tratamiento ácido y tratamiento de la membrana, y eliminar una
fracción de peso molecular no inferior a 6000.
16. Procedimiento para la producción de un color
de cochinilla según la reivindicación 12, en el que la solución de
extracto de cochinilla es un producto extraído obtenido extrayendo
cuerpos del insecto Coccus cacti L. con la utilización de un
alcohol acuoso.
17. Procedimiento para la producción de un color
de cochinilla según la reivindicación 12, en el que la solución de
extracto de la cochinilla se somete a proteolisis bajo condiciones
ácidas.
18. Procedimiento para la producción de un color
de cochinilla según la reivindicación 14 ó 15, en el que el
tratamiento de adsorción se lleva a cabo bajo condiciones
ácidas.
19. Procedimiento para la producción de un color
de cochinilla según la reivindicación 14 ó 15, en el que el
tratamiento de adsorción comprende provocar que un color de
cochinilla sea adsorbido sobre un adsorbente bajo condiciones
ácidas y, a continuación, que sea desadsorbido con un alcohol acuoso
bajo condiciones de pH 7 a 9.
20. Procedimiento para la producción de un color
de cochinilla según la reivindicación 14, en el que el tratamiento
ácido se realiza con un ácido utilizado como aditivo
alimentario.
21. Procedimiento para la producción de un color
de cochinilla según la reivindicación 12, en el que el tratamiento
de membrana es por lo menos un tratamiento seleccionado de entre el
grupo formado por tratamiento de la membrana de ósmosis inversa,
tratamiento del filtro de membrana, tratamiento de la membrana de
nanofiltración y tratamiento de la membrana de ultrafiltración.
22. Procedimiento para la producción de un color
de cochinilla según la reivindicación 12, en el que el tratamiento
de membrana es un tratamiento que utiliza una membrana que posee un
peso molecular límite de 2000 a 8000.
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