ES2230912T3 - Analogo de glp-1. - Google Patents

Abstract

Un compuesto de fórmula: (Aib8, 35)hGLP-1(7-36)NH2 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Description

Análogos de GLP-1.

Antecedentes de la invención

La presente invención se dirige a un análogo de péptido del péptido-1 tipo glucagón, sus sales farmacéuticamente aceptables, a procedimientos para usar dicho análogo para tratar mamíferos y a composiciones farmacéuticas útiles para ello que comprenden dicho análogo.

La amida (GLP-1) del péptido-1 tipo glucagón (7-36) se sintetiza en las células L intestinales mediante procesamiento post-traductor específico de tejido del precursor del glucagón preproglucagón (Varndell, J.M., y col., J. Histochem Cytochem, 1985:33:1080-6) y se libera a la circulación en respuesta a una comida. GLP-1 (7-36)NH_{2} tiene la secuencia de aminoácidos: His-Ala-Glu-Gli-Tre-Fen-Tre-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tir-Leu-Glu-Gli-Glu-Ala-Ala-Lis- Glu-Fen-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lis-Gli-Arg-NH_{2}.

La concentración de GLP-1 en plasma se eleva de un nivel de ayuno de aproximadamente 15 pmol/l a un nivel posprandial pico de 40 pmol/l. Se ha demostrado que, para un incremento determinado de la concentración de glucosa en plasma, el incremento de insulina en plasma es aproximadamente tres veces mayor cuando la glucosa se administra oralmente en comparación con la administración intravenosa (Kreymann, B., y col., Lancet 1987:2, 1300-4). Esta activación alimentaria de la liberación de la insulina, conocida como efecto incretina, es principalmente humoral y ahora se piensa que GLP-1 es la incretin fisiológica más potente en humanos. Además del efecto insulinotrópico, GLP-1 suprime la secreción de glucagón, retrasa el vaciado gástrico (Wettergren A., y col., Dig Dis Sci 1993:38:665-73) y puede activar la disponibilidad de glucosa periférica (D'Alessio, D.A. y col., J. Clin Invest 1994:93:2293-6).

En 1994, se sugirió el potencial terapéutico de GLP-1 siguiendo la observación de que una única dosis subcutánea (s/c) de GLP-1 podía normalizar completamente los niveles de glucosa posprandiales en pacientes con diabetes mellitus no insulina dependiente (NIDDM) (Gutniak, M. K., y col., Diabetes Care 1994:17:1039-44). Se pensó que este efecto estaba mediado tanto por el incremento en la liberación de insulina como por una reducción en la secreción de glucagón. Además, se ha mostrado que una infusión intravenosa de GLP-1 retrasa el vaciado gástrico posprandial en pacientes con NIDDM (Williams, B., y col., J. Clin Endo Metab 1996:81:327-32). A diferencia de las sulfonilureas, la acción insulinotrópica de GLP-1 depende de la concentración de glucosa en plasma (Holz, G.G. 4º, y col., Nature 1993:361:362-5). Así, la pérdida de liberación de insulina mediada por GLP-1 a bajos niveles de concentración de glucosa en plasma protege contra la hipoglucemia severa. Esta combinación de acciones da a GLP-1 ventajas terapéuticas potenciales únicas frente a otros agentes usados habitualmente para tratar NIDDM.

Numerosos estudios han mostrado que cuando se administra a sujetos sanos, GLP-1 influye potentemente sobre los niveles de glucemia al igual que sobre las concentraciones de insulina y glucagón (Orskov, C, Diabetologia 35:701-711, 1992; Holst, J.J., y col., Potential of GLP-1 in diabetes management en Glucagon III, Manual de Farmacología Experimental, Lefevbre PJ, Ed. Berlín, Springer Verlag, 1996, págs. 311-326), efectos que son glucosa dependientes (Kreymann, B., y col., Lancet ii:1300-1304, 1987; Weir, G.C., y col., Diabetes 38:338-342, 1989). Además, también es efectivo en pacientes con diabetes (Gutniak, M., N. Engl J Med 226:1316-1322, 1992; Nathan, D.M., y col., Diabetes Care 15:270-276, 1992), normalizando los niveles de glucosa en sangre en sujetos con diabetes de tipo 2 (Nauck, M.A., y col., Diagbetologia 36:741-744, 1993), y mejorando el control glucémico en pacientes de tipo 1 (Creutzfeldt, W.O., y col., Diabetes Care 19:580-586, 1996), elevando la posibilidad de su uso como agente terapéutico.

Sin embargo, GLP-1 es metabólicamente inestable, teniendo una vida media en plasma (t_{1/2}) de sólo 1-2 min in vivo. Si se administra de manera exógena GLP-1 también se degrada rápidamente (Deacon, C.F., y col., Diabetes 44:1126-1131, 1995). Esta inestabilidad metabólica limita el potencial terapéutico del GLP-1 nativo. Por lo tanto, se necesitan análogos de GLP-1 que sean más activos o más estables metabólicamente que el GLP-1 nativo.

Resumen de la invención

En un aspecto, la presente invención se dirige a un compuesto con la fórmula:

(1)(Aib^{8,35})hGLP-1(7-36)NH_{2},

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

La secuencia de aminoácidos del compuesto de la invención es: His-Aib-Glu-Gli-Tre-Fen-Tre-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tir-Leu-Glu-Gli-Glu-Ala-Ala-Lis- Glu-Fen-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lis-Aib-Arg-NH_{2}.

En otro aspecto, la presente invención proporciona una composición farmacéutica que comprende una cantidad efectiva de un compuesto de fórmula (1) como se define anteriormente en la presente memoria descriptiva o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para la fabricación de un medicamento capaz de permitir un efecto agonista de un receptor de GLP-1 en un sujeto que lo necesite.

En otro aspecto, la presente invención proporciona el uso de un compuesto de fórmula (1) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para la fabricación de un medicamento capaz de permitir un efecto agonista de un receptor GLP-1 en un sujeto que lo necesita.

En otro aspecto, la presente invención proporciona el uso de un compuesto de fórmula (1) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad seleccionada del grupo formado por la diabetes Tipo I, diabetes Tipo II, obesidad, glucagonomas, trastornos secretorios de las vías respiratorias, trastorno metabólico, artritis, osteoporosis, enfermedad del sistema nervioso central, reestenosis, enfermedad neurodegenerativa, fallo renal, fallo cardiaco congestivo, síndrome nefrótico, cirrosis, edema pulmonar, hipertensión, y trastornos en los que la reducción de la ingesta alimentaria sea deseable. Un uso preferente del uso inmediatamente anterior es cuando la enfermedad que se está tratando es diabetes de Tipo I o diabetes de Tipo II.

Con la excepción del aminoácido N- terminal, todas las abreviaturas (por ejemplo, Ala) de aminoácidos en esta presentación corresponden a la estructura de -NH-CH(R)-CO-, en la que R es la cadena lateral de un aminoácido (por ejemplo, CH_{3} para Ala). Aib es la abreviatura del \alpha-aminoácido, ácido \alpha-aminoisobutírico.

Los nombres completos de otras abreviaturas usadas en la presente memoria descriptiva son las siguientes: Boc para t-butiloxicarbonilo, HF para fluoruro de hidrógeno, Fm para formilo, Xan para xantilo, Bzl para benzilo, Tos para tosilo, DNP para 2,4-dinitrofenilo, DMF para dimetilformamida, DCM para diclorometano, HBTU para hexafluorofosfato de 2-(1H-Benzotriazol-1-ilo)-1,1,3,3-tetrametil uronio, DIEA para diisopropiletilamina, HOAc para ácido acético, TFA para ácido trifluoroacético, 2CIZ para 2-clorobenziloxicarbonilo, 2BrZ para 2-bromobenziloxicarbonilo, OcHex para O-ciclohexilo, Fmoc para 9-fluorenilmetoxicarbonilo, HOBt para N-hidroxibenzotriazol y resina PAM para resina de 4-hidroximetilfenilacetamidometilo.

El término "halo" engloba fluoro, cloro, bromo y yodo.

El término "mitad de hidrocarburo(C_{1}-C_{30})" engloba alquilo, alquenilo y alquinilo, y en el caso de alquenilo y alquinilo hay C_{2}-C_{30}.

El péptido de esta invención se indica en la presente memoria descriptiva por el formato, (Aib^{8,35})hGLP-1(7-36)NH_{2}, con los aminoácidos sustituidos de la secuencia natural situados entre el primer grupo de paréntesis (por ejemplo, Aib^{8} para Ala^{8} en hGLP-1). La abreviatura GLP-1 significa péptido-1 tipo glucagón; hGLP-1 significa péptido-1 tipo glucagón humano. Los números entre los paréntesis se refieren al número de aminoácidos presentes en el péptido (por ejemplo, hGLP-1(7-36) son los aminoácidos 7 a 36 de la secuencia peptídica para GLP-1 humano). La secuencia para hGLP-1 (7-37) se enumera en Mojsov, S., Int. J. Peptide Protein Res., 40, 1992, págs. 333-342. La denominación "NH_{2}" en hGLP-1(7-36)NH_{2} indica que el extremo C del péptido está amidado. hGLP-1(7-36) significa que el extremo C es el ácido libre. En hGLP-1(7-38), los residuos en las posiciones 37 y 38 son Gli y Arg, respectivamente.

Descripción detallada

Los péptidos de esta invención se pueden preparar mediante síntesis de péptido en fase sólida estándar. Véase, por ejemplo, Stewart, J.M., y col., Solid Phase Synthesis (Pierce Chemical Co., 2ª ed. 1984).

El aminoácido protegido ácido 1-(N-tert-butoxicarbonil-amino)-1-ciclohexano-carboxílico (Boc-A6c-OH) se sintetizó de la siguiente manera. Se disolvieron 19,1 g (0,133 mol) de ácido 1-amino-1-ciclohexanocarboxílico (Acros Organics, Fisher Scientific, Pittsburgh, PA) en 200 ml de dioxano y 100 ml de agua. A ello se añadieron 67 ml de NaOH 2N. La solución se enfrió en un baño de agua helada. Se añadieron 32,0 g (0,147 mol) de di-tert-butil-dicarbonato a esta solución. La mezcla de reacción se removió durante la noche a temperatura ambiente. Luego se retiró el dioxano a presión reducida. Se añadieron 200 ml de acetato de etilo a la solución acuosa remanente. La mezcla se enfrió en un baño de agua helada. Se ajustó el pH de la capa acuosa a aproximadamente 3 añadiendo HCl 4N. Se separó la capa orgánica. Se extrajo la capa acuosa con acetato de etilo (1 x 100 ml). Se combinaron las dos capas orgánicas y se lavaron con agua (2 x 150 ml), se secaron sobre MgSO_{4} anhidro, se filtraron, y se concentraron hasta el secado a presión reducida. El residuo se recristalizó en acetato de etilo/hexanos. Se obtuvieron 9,2 g de producto puro. Rendimiento del 29%.

Boc-A5c-OH se sintetizó de una manera análoga a la de Boc-A6c-OH. Una persona con habilidad normal en la técnica puede preparar otros aminoácidos Acc protegidos de manera análoga según permiten las enseñanzas de la presente memoria descriptiva.

En la síntesis de un análogo de GLP-1 de esta invención conteniendo Aib, el tiempo de emparejamiento para estos residuos y para el residuo inmediatamente posterior es de 2 horas.

Se puede probar la actividad como compuesto de unión de GLP-1 de un compuesto de la presente invención según el siguiente procedimiento.

Cultivo celular

Se cultivaron células de insulinoma de rata RIN 5F (ATCC-# CRL-2058, Colección de Cultivos de Tipo Americano, Manassas, VA), expresando el receptor de GLP-1, en medio Eagle modificado de Dulbecco (DMEM) conteniendo suero fetal de ternera al 10%, y mantenido a aproximadamente 37ºC en una atmósfera humidificada de 5% de CO_{2}/ 95% de aire.

Unión del radioligando

Se prepararon membranas para los estudios de unión del radioligando mediante homogenización de las células RIN en 20 ml de Tris-HCl 50 mM helado con un Polytron Brinkman (Westbury, NY) (posición 6, 15 seg.).Los homogenizados se lavaron dos veces mediante centrifugación (39.000 g/10 min.), y las pastillas finales se volvieron a suspender en Tris-HCl 50 mM, conteniendo MgCl_{2} 2,5 mM, 0,1 mg/ml de bacitracina (Sigma Chemical, San Luis, MO), y BSA al 0,1%. Para el ensayo, se incubaron alícuotas (0,4 ml) con (^{125}I)GLP-1(7-36) 0,05 nM (\sim2200 Ci/mmol, New England Nuclear, Boston, MA), con y sin 0,05 ml de péptidos de prueba que compiten sin marcar. Tras una incubación de 100 min (25ºC), el (^{125}I)GLP-1(7-36) unido se separó del libre mediante filtración rápida a través de filtros GF/C (Brandel, Gaithersburg, MD), que antes se habían empapado en polietilenimina al 0,5%. Luego se lavaron los filtros tres veces con alícuotas de 5 ml de Tris-HCl 50 mM helado, y se contó la radioactividad unida atrapada en los filtros mediante espectrometría gamma (Wallac LKB, Gaithersburg, MD). Se definió la unión específica como el (^{125}I)GLP-1(7-36) unido total menos el unido en presencia de GLP1(7-36) 1000 nM (Bachem, Torrence, CA).

El péptido de esta invención se puede presentar en forma de sales farmacéuticamente aceptables. Ejemplos de dichas sales incluyen, pero no se limitan a, aquellas que se forman con ácidos orgánicos (por ejemplo, ácido acético, láctico, maleico, cítrico, málico, ascórbico, succínico, benzoico, metanosulfónico, toluenosulfónico, o parnoico), ácidos inorgánicos (por ejemplo, ácido hidroclórico, ácido sulfúrico, o ácido fosfórico), y ácidos poliméricos (por ejemplo, ácido tánico, carboximetil celulosa, poliláctico, poliglicólico, o copolímeros de ácidos poliláctico-glicólico). Un procedimiento típico para hacer una sal de un péptido de la presente invención se conoce bien en la técnica y se puede conseguir por procedimientos estándares de intercambio de sales. En concordancia, la sal TFA de un péptido de la presente invención (la sal TFA resulta de la purificación del péptido usando HPLC preparativo, eluyendo con TFA conteniendo soluciones tampón) se puede convertir en otra sal, como una sal de acetato disolviendo el péptido en una pequeña cantidad de solución acuosa de ácido acético 0,25 N. La solución resultante se aplica a una columna de HPLC semi-prep (Zorbax, 300 SB, C-8). La columna se eluye con (1) solución acuosa de acetato de amonio 0,1 N durante 0,5 horas, (2) solución acuosa de ácido acético 0,25 N durante 0,5 horas y (3) un gradiente linear (20% al 100% de solución B durante 30 minutos) a una tasa de flujo de 4 ml/min (la solución A es solución acuosa de ácido acético 0,25 N; la solución B es ácido acético 0,25 N en acetonitrilo/agua, 80:20). Se recogen las fracciones conteniendo el péptido y se liofilizan hasta secarlas.

Como bien saben aquellos con destreza en la técnica, los usos conocidos y potenciales de GLP-1 son variados e innumerables (Véase, Todd, J. F., y col., Clinical Science, 1998, 95, págs. 325-329; y Todd, J. F. Y col., European Journal of Clinical Investigation, 1997, 27, págs. 533-536). Así, la administración de los compuestos de esta invención con el fin de permitir un efecto agonista puede tener los mismos efectos y usos que el mismo GLP-1. Estos usos variados de GLP-1 se pueden resumir de la siguiente manera, tratamiento de: diabetes Tipo I, diabetes Tipo II, obesidad, glucagonomas, trastornos secretorios de las vías respiratorias, trastorno metabólico, artritis, osteoporosis, enfermedades del sistema nervioso central, reestenosis, enfermedades neurodegenerativas, fallo renal, fallo cardiaco congestivo, síndrome nefrótico, cirrosis, edema pulmonar, hipertensión, y trastornos en los que la reducción de la ingesta de alimentos es deseable. Los análogos de GLP-1 de la presente invención que permiten un efecto antagonista de un sujeto se pueden usar para el tratamiento de lo siguiente: hipoglucemia y síndrome de mala absorción asociadas con gastroectomía o resección del intestino delgado.

En concordancia, la presente invención incluye dentro su alcance composiciones farmacéuticas que comprenden, como ingrediente activo, un compuesto de fórmula (I) en asociación con un vehículo farmacéuticamente aceptable.

Se puede variar la dosificación de ingrediente activo en las composiciones de esta invención; sin embargo, es necesario que la cantidad de ingrediente activo sea tal que se obtenga una forma de dosificación adecuada. La dosis seleccionada depende del efecto terapéutico deseado, de la vía de administración, y de la duración del tratamiento. En general, una dosis efectiva para las actividades de esta invención está en el intervalo de 1x10^{-7} para 200 mg/kg/día, preferentemente 1x10^{-4} para 100 mg/kg/día, que se puede administrar como dosis única o dividida en múltiples dosis.

El compuesto de esta invención se puede administrar por vía oral, parenteral (por ejemplo, inyección intramuscular, intraperitoneal, intravenosa o subcutánea, o implante), nasal, vaginal, rectal, sublingual o tópica y se puede formular con vehículos farmacéuticamente aceptables para proporcionar formas de dosificación adecuadas para cada vía de administración.

Las formas de dosificación sólida para la administración oral incluyen cápsulas, comprimidos, píldoras, polvos y gránulos. En dichas formas de dosificación sólida, el compuesto activo se mezcla con al menos un vehículo farmacéuticamente aceptable inerte como sacarosa, lactosa, o almidón. Dichas formas de dosificación también pueden comprender, como es práctica normal, sustancias adicionales distintas de dichos diluyentes inertes, por ejemplo, agentes lubricantes como estearato de magnesio. En el caso de las cápsulas, tabletas y píldoras, las formas de dosificación también pueden comprender agentes tamponadores. Las tabletas y las píldoras también se pueden preparar con cubiertas entéricas.

Las formas de dosificación líquidas para la administración oral incluyen emulsiones, soluciones, suspensiones, siropes, los elixires que contienen diluyentes inertes usados habitualmente en la técnica, como agua, farmacéuticamente aceptables. Aparte de dichos diluyentes inertes, las composiciones también pueden incluir adyuvantes, como agentes humectantes, agentes emulsionantes y suspensores, y agentes edulcorantes, aromatizantes y odorizantes.

Las preparaciones según esta invención para administración parenteral incluyen soluciones acuosas y no acuosas estériles, suspensiones, o emulsiones. Ejemplos de solventes no acuosos y vehículos son propilen glicol, polietilen glicol, aceites vegetales, como aceite de oliva y aceite de maíz, gelatina, y ésteres orgánicos inyectables como oleato de etilo. Dichas formas de dosificación también pueden contener adyuvantes como agentes conservantes, humectantes, emulsionantes, y dispersantes. Se pueden esterilizar, por ejemplo, mediante filtrado a través de un filtro que retiene bacterias, incorporando agentes esterilizantes a las composiciones, irradiando las composiciones, o calentando las composiciones. También se pueden fabricar en forma de composiciones sólidas estériles que se pueden disolver en agua estéril, o en otro medio inyectable estéril inmediatamente antes de su uso.

Las composiciones para la administración rectal o vaginal son preferentemente supositorios que pueden contener, además de la sustancia activa, excipientes como mantequilla de coco o una cera de supositorio.

Las composiciones para la administración nasal o sublingual también se preparan con excipientes estándares bien conocidos en la técnica.

Además, un compuesto de esta invención se puede administrar en una composición de liberación sostenida como aquellas descritas en las siguientes patentes y solicitudes de patentes. La Patente Estadounidense Nº 5.672.659 enseña composiciones de liberación sostenida que comprenden un agente bioactivo y un poliéster. La Patente Estadounidense Nº 5.595.760 enseña composiciones de liberación sostenida que comprenden un agente bioactivo en una forma gelificable. La Solicitud Estadounidense Nº 08/929.363 presentada el 9 de septiembre de 1997, enseña composiciones de liberación sostenida poliméricas que comprenden un agente bioactivo y quitosán. La Solicitud Estadounidense Nº 08/740.778 presentada el 1 de noviembre de 1996, enseña composiciones de liberación sostenida que comprenden un agente bioactivo y ciclodextrina. La Solicitud Estadounidense Nº 09/015.394 presentada el 29 de enero de 1998, enseña composiciones de liberación sostenida absorbibles de un agente bioactivo. La Solicitud Estadounidense Nº 09/121.653 presentada el 23 de julio de 1998, enseña un procedimiento para crear micropartículas que comprenden un agente terapéutico como un péptido en un procedimiento de aceite en agua. La Solicitud Estadounidense Nº 09/131.472 presentada el 10 de agosto de 1998, enseña complejos que comprenden un agente terapéutico como un péptido y un polímero fosforilado. La Solicitud Estadounidense Nº 09/184.413 presentada el 2 de noviembre de 1998, enseña complejos que comprenden un agente terapéutico como un péptido y un polímero portando una lactona no polimerizable.

A no ser que se defina de otra manera, todos los términos técnicos y científicos usados en la presente memoria descriptiva tienen el mismo significado que el que entiende habitualmente una persona con habilidad normal en la técnica a la que pertenece esta invención.

Los siguientes ejemplos describen procedimientos sintéticos para realizar el péptido de esta invención, los cuales son bien conocidos para los expertos en la técnica. Los expertos en la técnica también conocen otros procedimientos. Los ejemplos se presentan con el objeto de ilustrar y no pretenden limitar el alcance de la presente invención de ninguna manera.

Boc-\betaAla-OH, Boc-D-Arg(Tos)-OH y Boc-D-Asp(OcHex) se compraron a Nova Biochem, San Diego, California. Boc-Aun-OH se compró a Bachem, King of Prussia, PA. Boc-Ava-OH y Boc-Ado-OH se compraron a Chem-Impex International, Wood Dale, IL. Boc-Nal-OH se compró a Synthetech, Inc. Albany, OR.

Ejemplo 1 (Aib^{8,35})hGLP-1(7-36)NH_{2}

El péptido titular se sintetizó en un sintetizador de péptidos modelo 430A de Applied Biosystems (Foster City, CA) que se modificó para realizar síntesis peptídica de fase sólida acelerada Bocchemistry. Véase Schnolzer, y col., Int. J. Peptide Protein Res., 90:180 (1992). Se usó resina de 4-metilbenzidrilamina (MBHA) (Península, Belmont, CA) con la sustitución de 0,91 mmol/g. Los aminoácidos Boc (Bachem, CA, Torrance, CA; Nova Biochem., LaJolla, CA) se usaron con la siguiente protección de cadena lateral: Boc-Ala-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asp(OcHex)-OH, Boc-Tyr(2BrZ)-OH, Boc-His(DNP)-OH, Boc-Val-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Gli-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Ile-OH, Boc-Lis(2CIZ)-OH, Boc-Tre(Bzl)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Fen-OH, Boc-Aib-OH, Boc-Glu(OcHex)-OH y Boc-Trp(Fm)-OH. La síntesis se llevó a cabo a una escala de 0,20 mmol. Se eliminaron los grupos Boc mediante tratamiento con TFA al 100% durante 2 x 1 min. Los aminoácidos Boc (2,5 mmol) se preactivaron con HBTU (2,0 mmol) y DIEA (1,0 ml) en 4 ml de DMF y se emparejaron sin neutralización previa de la sal TFA de péptido-resina. Los tiempos de emparejamiento fueron de 5 min., excepto para los residuos Boc-Aib-OH y los siguientes residuos, Boc-Lis(2CIZ)-OH y Boc-His(DNP)-OH en los que los tiempos de emparejamiento fueron de 2 horas.

Al final del ensamblaje de la cadena peptídica, la resina se trató con una solución de mercaptoetanol al 20%/DIEA al 10% en DMF durante 2 x 30 min. para eliminar el grupo DNP en la cadena lateral His. Luego se eliminó el grupo Boc N-terminal mediante tratamiento con TFA al 100% durante 2 x 2 min. Tras la neutralización del péptido-resina con DIEA al 10% en DMF (1 x 1 min), se eliminó el grupo formilo de la cadena lateral de Trp mediante tratamiento con una solución de etanolamina al 15%/agua al 15%/DMF al 70% durante 2 x 30 min. Se lavó el péptido-resina con DMF y DCM y se secó a presión reducida. La división final se realizó removiendo el péptido-resina en 10 ml de HF conteniendo 1 ml de anisol y ditiotreitol (24 mg) a 0ºC durante 75 min. Se eliminó el HF mediante un flujo de nitrógeno. El residuo se lavó con éter (6 x 10 ml) y se extrajo con HOAc 4N (6 x 10 ml).

La mezcla de péptido en el extracto acuoso se purificó en cromatografía en fase líquida a alta presión (HPLC) preparativa de fase reversible usando una columna VYDAC® C_{18} de fase reversible (Nest Group, Southborough, MA). La columna se eluyó con un gradiente linear (20% a 50% de solución B durante 105 min.) a una tasa de flujo de 10 ml/min (Solución A = agua conteniendo TFA al 0,1%; Solución B = acetonitrilo conteniendo 0,1% de TFA). Se recogieron las fracciones y se comprobaron en HPLC analítica. Aquellas que contenían el producto puro se combinaron y liofilizaron hasta secado. Se obtuvieron 135 mg de un sólido blanco. La pureza era del 98,6% basándose en análisis mediante HPLC analítica. El análisis por espectrómetro de masa con electro-spray (MS(ES))S dio el peso molecular en 3339,7 (de acuerdo con el peso molecular calculado de 3339,7).

Claims (6)

1. Un compuesto de fórmula:

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\hskip1,5cm

(Aib^{8,35})hGLP-1(7-36)NH_{2}

\hskip1,5cm

(I)

\vskip1.000000\baselineskip

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

2. Un compuesto como se reivindica en la reivindicación 1 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso como medicamento para el tratamiento de enfermedades.

3. Un compuesto según la reivindicación 2 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso en una composición farmacéutica que comprende el compuesto y un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable.

4. Un compuesto como se reivindica en la reivindicación 2 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que la enfermedad se selecciona del grupo formado por diabetes Tipo I, diabetes Tipo II, obesidad, glucagonomas, trastornos secretorios de las vías respiratorias, trastorno metabólico, artritis, osteoporosis, enfermedad del sistema nervioso central, reestenosis y enfermedad neurodegenerativa.

5. Un compuesto como se reivindica en la reivindicación 4 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que dicha enfermedad es diabetes Tipo I o diabetes Tipo II.

6. Uso de un compuesto según la reivindicación 1 para la fabricación de un medicamento capaz de permitir un efecto agonista de un receptor de GLP-1 en un sujeto que lo necesita.