EA029987B1 - Антитела к cd33 и их применение в лечении рака - Google Patents

Антитела к cd33 и их применение в лечении рака Download PDF

Info

Publication number
EA029987B1
EA029987B1 EA201492137A EA201492137A EA029987B1 EA 029987 B1 EA029987 B1 EA 029987B1 EA 201492137 A EA201492137 A EA 201492137A EA 201492137 A EA201492137 A EA 201492137A EA 029987 B1 EA029987 B1 EA 029987B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
antibody
heavy chain
variable region
seeg
light chain
Prior art date
Application number
EA201492137A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201492137A1 (ru
Inventor
Мэй Кунг Сазерленд
Морин РАЙАН
Джанго Сассман
Патрик Берк
Скотт Джеффри
Original Assignee
Сиэтл Дженетикс, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Сиэтл Дженетикс, Инк. filed Critical Сиэтл Дженетикс, Инк.
Publication of EA201492137A1 publication Critical patent/EA201492137A1/ru
Publication of EA029987B1 publication Critical patent/EA029987B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/55—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole
    • A61K31/551—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole having two nitrogen atoms, e.g. dilazep
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2896—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against molecules with a "CD"-designation, not provided for elsewhere
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/567—Framework region [FR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/808—Materials and products related to genetic engineering or hybrid or fused cell technology, e.g. hybridoma, monoclonal products
    • Y10S530/809—Fused cells, e.g. hybridoma

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

Изобретение относится к мышиным, химерным и гуманизированным антителам, которые специфически связываются с CD33. Данные антитела полезны для лечения и диагностики различных форм рака, а также для обнаружения CD33.

Description

Изобретение относится к мышиным, химерным и гуманизированным антителам, которые специфически связываются с СЭ33. Данные антитела полезны для лечения и диагностики различных форм рака, а также для обнаружения СЭ33.
029987 Β1
029987
Перекрестная ссылка на родственные заявки
Данная заявка является продолжающей для заявки 13/804227, поданной 14 марта 2013 г., и претендует на преимущество относительно предварительной заявки США № 61/649110, поданной 18 мая 2012 г.
Уровень техники
СИ33 представляет собой 67-кДа мембранный белок плазмы, который связывается с сиаловой кислотой и является членом белкового семейства связывающих сиаловую кислоту 1д-родственных лектинов (8ЮЬЕС). Известно, что СИ33 экспрессируется на миелоидных клетках. Также сообщалось об экспрессии СИ33 на ряде злокачественных клеток. Хотя СИ33 был признан мишенью в терапии рака, например острого миелоидного лейкоза, на рынке в настоящее время нет эффективных методов лечения, направленных на СИ33. Настоящее изобретение решает эти и другие проблемы.
Сущность заявленного изобретения
В настоящем документе предложены моноклональные антитела, которые специфически связываются с белком СТ)33 человека, и способы применения данных антител для лечения форм рака, при которых экспрессируется белок СИ33. Моноклональные антитела содержат определяющие комплементарность области (СИКл) с 8Е^ ГО N08:19, 20 и 21 в вариабельной области тяжелой цепи и СТ Ж с 8Е^ ГО N08:22, 23 и 24 в вариабельной области легкой цепи. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одна СОК имеет консервативную аминокислотную замену. В некоторых вариантах осуществления любые отличия в СИКл зрелой вариабельной области тяжелой цепи и зрелой вариабельной области легкой цепи от 8Е^ ГО N08:18 и 8 соответственно имеют место в положениях Н60-Н65. Моноклональные антитела могут быть мышиными антителами, химерными антителами или гуманизированными антителами. Предпочтительным гуманизированным антителом является антитело Е2Н12, раскрытое в настоящем документе. В одном аспекте изобретение относится к гуманизированному антителу, содержащему СТЖ с 8Е^ ГО N08:19, 20 и 21 в вариабельной области тяжелой цепи и СИКл с 8Е^ ГО N08:22, 23 и 24 в вариабельной области легкой цепи и, кроме того, имеющему зрелую вариабельную область тяжелой цепи по меньшей мере с 90% идентичностью с 81%) ГО N0:18 и зрелую вариабельную область легкой цепи по меньшей мере с 90% идентичностью с 8Е^ ГО N0:8. Кроме того, сохраняются следующие аминокислотные остатки тяжелой цепи: положение Н48 занято I, положение Н66 занято К, положение Н67 занято А, положение Н69 занято Б, положение Н71 занято А и положение Н94 занято 8; и сохраняются следующие аминокислотные остатки легкой цепи: положение К-22 занято N положение Е46 занято Т, положение Б69 занято О и положение Б71 занято Υ. Следующий вариант осуществления относится к гуманизированному антителу, содержащему СИКл с 8Е^ ГО N08 19, 20 и 21 в вариабельной области тяжелой цепи и СИКл с 8Е^ ГО N08:22, 23 и 24 в вариабельной области легкой цепи и кроме того, имеющему зрелую вариабельную область тяжелой цепи по меньшей мере с 95% идентичностью с 8Е^ ГО N0:18 и зрелую вариабельную область легкой цепи по меньшей мере с 95% идентичностью с 8Е^ ГО N0:8.
В другом варианте осуществления гуманизированное антитело 2Н12 имеет зрелую вариабельную область тяжелой цепи, которая слита с константной областью тяжелой цепи, и зрелую вариабельную область легкой цепи, которая слита с константной областью легкой цепи. В следующем варианте осуществления константная область тяжелой цепи является мутантной формой природной константной области человеческого антитела и отличается пониженным связыванием с рецептором Ееу по сравнению с природной константной областью человеческого антитела. В другом варианте осуществления константная область тяжелой цепи относится к изотипу 1§С1. Иллюстративные аминокислотные последовательности константной области тяжелой цепи включают 8Е^ ГО N0:27 и 8Е^ ГО N0:29, константную область тяжелой цепи с заменой серина на цистеин в положении 239, (8239С). Иллюстративные аминокислотные последовательности константной области легкой цепи включают 81%) ГО N0:25.
В одном варианте осуществления гуманизированное антитело содержит зрелую вариабельную область тяжелой цепи, имеющую аминокислотную последовательность 8Е^ ГО N0:18, и зрелую вариабельную область легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность 81%) ГО N0:8.
В одном варианте осуществления гуманизированное антитело конъюгировано с цитотоксическим или цитостатическим средством. В следующем варианте осуществления гуманизированное антитело конъюгировано с цитотоксическим средством. Цитотоксическое средство может представлять собой, например, средство, связывающееся с малой бороздкой ДНК. Пирроло[1,4]бензодиазепин (ΡΒΏ) является примером цитотоксического средства, связывающегося с малой бороздкой ДНК, которое можно конъюгировать с гуманизированными антителами к СИ33, раскрытыми в настоящем документе. В одном варианте осуществления ΡΒΙ) конъюгирован с антителом к СИ33 через расщепляемый ферментами линкер. В другом варианте осуществления цитотоксическое средство имеет формулу
н
- 1 029987
где волнистой линией указано место присоединения линкера. В одном варианте осуществления гуманизированное антитело имеет константу ассоциации для СЭ33 человека или яванского макака, равную 0,5-2х109 М-1.
В одном аспекте изобретение относится к способам лечения пациента, имеющего рак или риск развития рака, при котором экспрессируется СЭ33, путем введения пациенту в эффективном режиме гуманизированного антитела к СЭ33, раскрытого в настоящем документе. Экспрессирующие СЭ33 формы рака включают острый миелоидный лейкоз (АМЕ), миелодиспластический синдром (МЭ8), острый промиелоцитарный лейкоз (АРЕ), хронический миелогенный лейкоз (СМЬ), хронический миеломоноцитарный лейкоз (СММЬ), хроническое миелопролиферативное заболевание, пре-В-клеточный острый лимфобластный лейкоз (ргеВ-ЛВЬ), пре-Т-клеточный острый лимфобластный лейкоз (ргеТ-АВЬ), множественную миелому (ММ), болезнь тучных клеток и миелоидную саркому. В одном аспекте изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей гуманизированное или химерное антитело, которое содержит определяющие комплементарность области (СЭКа) с 8Е9 ГО N08:19, 20 и 21 в вариабельной области тяжелой цепи и СЭКа с 81%) ГО N08:22, 23 и 24 в вариабельной области легкой цепи.
В одном аспекте изобретение относится к гуманизированному антителу со зрелой вариабельной областью тяжелой цепи, по меньшей мере на 90% идентичной ΗΙ, аминокислотной последовательности 8Ε^ ГО N0:18, и зрелой вариабельной областью легкой цепи, по меньшей мере на 90% идентичной ЕО, аминокислотной последовательности 8Е9 ГО N0:8. В следующем варианте осуществления гуманизированное антитело имеет зрелую вариабельную область тяжелой цепи, по меньшей мере на 95% идентичную 8Е9 ГО N0:18, и зрелую вариабельную область легкой цепи, по меньшей мере на 95% идентичную 8Е9 ГО N0:8. В другом варианте осуществления положения Η48, Η66, Η67, Η69, Η71 и Η94 в вариабельной области тяжелой цепи заняты I, К, А, Е, А и 8, и положения Е22, Е46, Е69 и Е71 в вариабельной области легкой цепи заняты N Т, 9 и Υ. В некоторых вариантах осуществления любые отличия в СЭКа зрелой вариабельной области тяжелой цепи и зрелой вариабельной области легкой цепи от 8Е9 ГО N08:18 и 8 соответственно имеют место в положениях Η60-Η65.
В следующем варианте осуществления гуманизированное антитело имеет СЭКа зрелой вариабельной области тяжелой цепи, которые идентичны таковым в 8Е9 ГО N0:18, и СЭКа зрелой вариабельной области легкой цепи, которые идентичны таковым в 8Е9 ГО N0:8. В одном варианте осуществления гуманизированное антитело содержит зрелую вариабельную область тяжелой цепи, имеющую аминокислотную последовательность 81%) ГО N0:18, и зрелую вариабельную область легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность 81%) ГО N0:8.
В одном варианте осуществления гуманизированное антитело конъюгировано с цитотоксическим или цитостатическим средством. В одном варианте осуществления гуманизированное антитело конъюгировано с цитотоксическим или цитостатическим средством. В следующем варианте осуществления гуманизированное антитело конъюгировано с цитотоксическим средством. Цитотоксическое средство может представлять собой, например, средство, связывающееся с малой бороздкой ДНК. Пирроло [1,4] бензодиазепин (РВЭ) является примером цитотоксического средства, связывающегося с малой бороздкой ДНК, которое можно конъюгировать с гуманизированными антителами к СЭ33, раскрытыми в настоящем документе. В одном варианте осуществления РВЭ конъюгирован с антителом к СЭ33 через расщепляемый ферментами линкер. В другом варианте осуществления цитотоксическое средство имеет формулу
н
где волнистой линией указано место присоединения линкера. В другом варианте осуществления гуманизированное антитело имеет константу ассоциации для СЭ33 человека или яванского макака, равную 0, 5-2х109 М-1.
В другом варианте осуществления гуманизированное антитело имеет зрелую вариабельную область тяжелой цепи, которая слита с константной областью тяжелой цепи, и зрелую вариабельную область легкой цепи, которая слита с константной областью легкой цепи. В следующем варианте осуществления константная область тяжелой цепи является мутантной формой природной константной области человеческого антитела и отличается пониженным связыванием с рецептором Реу по сравнению с природной константной областью человеческого антитела. В другом варианте осуществления константная область тяжелой цепи относится к изотипу 1дО1. Иллюстративные аминокислотные последовательности константной области тяжелой цепи включают 81%) ГО N0:27 и 81%) ГО N0:29 (8239С). Иллюстративные аминокислотные последовательности константной области легкой цепи включают 8Е^ ГО N0:25.
В следующем аспекте изобретение относится к нуклеиновой кислоте, кодирующей любую из зрелых вариабельных областей тяжелой или легкой цепи, описанных в настоящем документе. Иллюстративные нуклеиновые кислоты, кодирующие вариабельные области тяжелой цепи, включают 81%) ГО
- 2 029987
N08:39-47; иллюстративные нуклеиновые кислоты, кодирующие вариабельные области легкой цепи, включают 8Е9 ГО N08: 32-38.
В одном аспекте изобретение относится к способам лечения пациента, имеющего рак или риск развития рака, при котором экспрессируется СЭ33, путем введения пациенту в эффективном режиме гуманизированного антитела к СЭ33, раскрытого в настоящем документе. Экспрессирующие СЭ33 формы рака включают острый миелоидный лейкоз (АМЕ), миелодиспластический синдром (МЭ8), острый промиелоцитарный лейкоз (АРЕ), хронический миелогенный лейкоз (СМЬ), хронический миеломоноцитарный лейкоз (СММЬ), хронические миелопролиферативные заболевания, пре-В-клеточный острый лимфобластный лейкоз (ргеВ-ЛВЬ), пре-Т-клеточный острый лимфобластный лейкоз (ргеТ-ЛВЬ), множественную миелому (ММ), болезнь тучных клеток и миелоидную саркому. Гуманизированные антитела предпочтительно вводят в фармацевтически подходящей композиции. В некоторых вариантах осуществления вводимое гуманизированное антитело конъюгировано с цитотоксическим или цитостатическим средством. В одном варианте осуществления вводимое гуманизированное антитело конъюгировано с цитотоксическим или цитостатическим средством. В следующем варианте осуществления вводимое гуманизированное антитело конъюгировано с цитотоксическим средством. Цитотоксическое средство может представлять собой, например, средство, связывающееся с малой бороздкой ДНК. Пирроло[1,4]бензодиазепин (РВЭ) является примером цитотоксического средства, связывающегося с малой бороздкой ДНК, которое можно конъюгировать с вводимыми гуманизированными антителами к СЭ33, раскрытыми в настоящем документе. В одном варианте осуществления РВГ) конъюгирован с вводимым антителом к СЭ33 через расщепляемый ферментами линкер. В другом варианте осуществления цитотоксическое средство имеет формулу
где волнистой линией указано место присоединения линкера.
Краткое описание фигур
На фиг. 1А и 1В показано выравнивание аминокислотных последовательностей исходного мышиного мАт (называемого т2Н12) с вариабельными областями тяжелой (фиг. 1А) и легкой цепи (фиг. 1В) гуманизированного 2Н12.
На фиг. 2 представлены результаты ίη νότο анализа цитотоксичности для проверки активности полученных из 2Н12 конъюгатов антитело-лекарственное средство (АЭС) в отношении СЭ33положительных линий клеток НЬ-60 и НЕЬ 92.1.7 АМЕ. Е2Н126 конъюгировали с 8ΘΏ-1910; т2Н12 и Е2Н126 конъюгировали с 8ΘΏ-1269. Не связывающиеся контрольные АЭС (Ε00ά-8Θϋ-1910 и Ε00-8Θϋ1269) использовали в тестах в качестве контролей на антигенную специфичность. Милотарг® (гемтузумаб озагомицин) представляет собой хорошо известный конъюгат СЭ33-направленного антитела с лекарственным средством, состоящий из анти-СЭ33 антитела №67.6, связанного с цитотоксическим лекарственным средством калихеамицином, и его также использовали в тестах.
Определения.
Изобретение относится, в частности, к моноклональным антителам, которые специфически связываются с человеческим белком СЭ33, и их конъюгатам. Данные антитела полезны для лечения и диагностики экпрессирующих СЭ33 форм рака, а также для обнаружения белка СЭ33.
"Выделенное" антитело означает антитело, которое было идентифицировано и отделено и/или извлечено из компонентов его природного окружения, и/или антитело, которое было получено рекомбинантными методами. "Очищенное антитело" представляет собой антитело, которое, как правило, по меньшей мере на 50 мас.% очищено от интерферирующих белков и других примесей, возникающих в процессе его продуцирования или очистки, но при этом не исключена возможность того, что моноклональное антитело скомбинировано с избытком фармацевтически приемлемого носителя(ей) или другого растворителя, предназначенного для облегчения его использования. Интерферирующие белки и другие примеси могут включать, например, клеточные компоненты клеток, из которых антитело выделено или в которых оно получено рекомбинантными методами. Иногда моноклональные антитела по меньшей мере на 60, 70, 80, 90, 95 или 99 мас.% очищены от интерферирующих белков и примесей, возникающих в результате продуцирования или очистки. Антитела, описанные в настоящем документе, включая мышиные, химерные и гуманизированные антитела, можно получать в выделенной и/или очищенной форме.
Используемый в настоящем документе термин "моноклональное антитело" означает антитело, полученное из популяции практически однородных антител, то есть отдельные антитела, составляющие популяцию, являются идентичными, за исключением возможных природных мутаций, которые могут присутствовать в незначительных количествах. Определение "моноклональное" указывает на характер антитела, как полученного из практически однородной популяции антител, и не должно быть истолковано в том смысле, что антитело должно быть получено каким-либо конкретным методом. Например, моноклональные антитела, используемые по настоящему изобретению, могут быть получены гибридомным
- 3 029987
методом, впервые описанным в статье КоЫет е! а1. (1975) №1игс 256: 495, или могут быть получены методами рекомбинантной ДНК (см., например, патент США № 4816567). "Моноклональные антитела" могут быть также выделены из фаговых библиотек антител с использованием методик, описанных в статьях С1аск8оп е! а1. (1991) ЫаШге, 352: 624-628 и Маткь е! а1. (1991) 1. Мо1. ΒίοΙ., 222: 581-597, например, или могут быть получены другими методами. Антитела, описанные в настоящем документе, являются моноклональными антителами.
Специфическое связывание моноклонального антитела с его целевым антигеном означает аффинность по меньшей мере 106, 107, 108, 109 или 1010 М-1. Специфическое связывание является значительно более интенсивным и отличается от неспецифического связывания, которое происходит по меньшей мере с одной неродственной мишенью. Специфическое связывание может быть результатом образования связей между конкретными функциональными группами или конкретного пространственного соответствия (например, по типу замок-ключ), тогда как неспецифическое связывание, как правило, является результатом ван-дер-ваальсовых сил.
Основной структурной единицей антитела является тетрамер из субъединиц. Каждый тетрамер содержит две идентичные пары полипептидных цепей, каждая пара имеет одну "легкую" (примерно 25 кДа) и одну "тяжелую" цепь (примерно 50-70 кДа). Аминоконцевая часть каждой цепи содержит вариабельную область из примерно 100-110 или более аминокислот, которая в первую очередь ответственна за узнавание антигена. Эта вариабельная область изначально экспрессируется, будучи связанной с отщепляемым сигнальным пептидом. Вариабельную область без сигнального пептида иногда называют зрелой вариабельной областью. Таким образом, например, зрелая вариабельная область легкой цепи означает вариабельную область легкой цепи без сигнального пептида легкой цепи. Карбоксиконцевая часть каждой цепи является константной областью, в первую очередь отвечающей за эффекторную функцию.
Легкие цепи классифицируются либо как каппа, либо как лямбда. Тяжелые цепи классифицируются как гамма, мю, альфа, дельта или эпсилон, и определяют изотип антитела как 1§С, 1дМ, 1дА, Ι§Ό и 1дЕ соответственно. В составе легкой и тяжелой цепей вариабельные и константные области соединены "1"областью из примерно 12 или более аминокислот, при этом тяжелая цепь также содержит "Ό''-область из примерно 10 или более аминокислот (см. в основном Рипбатейа1 1тшипо1о§у (Раи1 ^., еб., 2пб еб. Кауеп Рте88, Ν.Υ., 1989, СИ. 7, полное содержание которой включено посредством ссылки для всех целей).
Зрелые вариабельные области каждой пары легкой/тяжелой цепей образуют связывающий сайт антитела. Таким образом, интактное антитело имеет два связывающих сайта. За исключением бифункциональных или биспецифических антител, два связывающих сайта являются одинаковыми. Все цепи имеют одинаковую общую структуру из относительно консервативных каркасных областей (РК), соединенных тремя гипервариабельными областями, также называемыми определяющими комплементарность областями или СЭК8. СЭК8 из двух цепей каждой пары выстроены в ряд с помощью каркасных областей, что позволяет связывать специфический эпитоп. От Ν-конца к С-концу обе цепи, и легкая, и тяжелая, содержат домены РК1, СЭК1, РК2, СЭК2, РК3, СЭК3 и РК4. Отнесение аминокислот к каждому домену находится в соответствии с определениями по Кабату, 5>ес.|иепсе5 о£ Рто1ет8 о£ 1ттипо1одюа1 йИегеЛ (№бопа1 ΙπδΙίΙιιΥ о£ НеаНИ, ВеШекба, МЭ, 1987 и 1991), или СИо1Ыа & Ьекк, 1. Мо1. Вю1. 196: 901-917 (1987); СИоΙΐιί;·ι е! а1., №Циге 342: 878-883 (1989). В работе по Кабату также предложена широко используемая система нумерации (нумерация по Кабату), в которой соответствующим остаткам в разных тяжелых цепях или в разных легких цепях присвоен один и тот же номер.
Термин "антитело" охватывает интактные антитела и их связывающие фрагменты. Как правило, фрагменты антитела конкурируют с интактным антителом, из которого они получены, за специфическое связывание с мишенью, включая отдельные тяжелые цепи, легкие цепи, РаЬ, РаЬ', Р(аЬ')2, Р(аЬ)с, диатела, дАт, нанотела и Ρν. Фрагменты можно получать методами рекомбинантной ДНК или путем ферментативного или химического разделения интактных иммуноглобулинов. Термин "антитело" также включает диатело (гомодимерный Ρν-фрагмент) или минитело (Уь-УН-СН3), биспецифическое антитело или тому подобное. Биспецифическое или бифункциональное антитело представляет собой искусственное гибридное антитело, имеющее две разные пары тяжелой/легкой цепей и два различных связывающих сайта (см., например, БопдкМЫ апб ЬасИтапп, С1ш. Ехр. 1ттипо1., 79: 315-321 (1990); Ко51е1пу е! а1., 1. 1ттипо1., 148: 1547-53 (1992)).
Термин "антитело" включает антитело само по себе ("голое" антитело) или антитело, конъюгированное с цитотоксическим или цитостатическим лекарственным средством.
Термин "эпитоп" означает сайт на антигене, с которым связывается антитело. Эпитоп может быть образован из смежных аминокислот или несмежных аминокислот, сближенных в результате сворачивания в третичную структуру одного или более белков. Эпитопы, образованные из смежных аминокислот, как правило, сохраняются при воздействии денатурирующих растворителей, тогда как эпитопы, образованные в результате сворачивания третичной структуры, как правило, утрачиваются при обработке денатурирующими растворителями. Эпитоп, как правило, включает по меньшей мере 3 и чаще по меньшей мере 5 или 8-10 аминокислот в уникальной пространственной конформации. Методы определения пространственной конформации эпитопов включают, например, рентгеновскую кристаллографию и 2мерный ядерный магнитный резонанс (см., например, ЕрПоре Марршд РгоЮсоЕ. в МеШобк ш Мо1еси1аг
- 4 029987
Вю1оду, νοί. 66, О1епп Ε. Мотк, Εά. (1996)).
Антитела, которые узнают одни и те же или перекрывающиеся эпитопы, можно идентифицировать в простом иммуноанализе, демонстрирующем способность одного антитела конкурировать с другим антителом за связывание с целевым антигеном. Эпитоп антитела можно также определять методом рентгеновской кристаллографии антитела, связанного с его антигеном, для выявления находящихся в контакте остатков. Альтернативно, два антитела имеют один и тот же эпитоп, если все аминокислотные мутации в антигене, которые уменьшают или ликвидируют связывание одного антитела, уменьшают или ликвидируют связывание другого. Два антитела имеют перекрывающиеся эпитопы, если некоторые аминокислотные мутации, которые уменьшают или ликвидируют связывание одного антитела, уменьшают или ликвидируют связывание другого. Конкуренцию между антителами определяют с помощью анализа, в котором тестируемое антитело ингибирует специфическое связывание эталонного антитела с общим антигеном (см., например, ЛтдНапк е1 а1., Сапсег Кек. 50: 1495, 1990). Тестируемое антитело конкурирует с эталонным антителом, если избыток тестируемого антитела (например, по меньшей мере 2х, 5х, 10х, 20х или 100х) ингибирует связывание эталонного антитела по меньшей мере на 50%, но предпочтительно на 75, 90 или 99%, что измеряют в конкурентном анализе связывания. Антитела, выявленные с помощью конкурентного анализа (конкурирующие антитела), включают антитела, связывающиеся с тем же эпитопом, что и эталонное антитело, и антитела, связывающиеся с соседним эпитопом, расположенным достаточно близко к эпитопу, связываемому эталонным антителом, чтобы могло возникнуть стерическое препятствие. Антитела, конкурирующие с антителом Й2Н12 за связывание с человеческим белком СЭ33, включены в данное изобретение.
Антитело 2Н12 представляет собой антитело, которое специфически связывается с человеческим белком СГО33 и которое содержит три определяющие комплементарность области (ЬСЭКк) тяжелой цепи: СЭК1 тяжелой цепи, например, 8Ε0 ГО N0:19 или последовательность, которая практически идентична 8Ε0 ГО N0:19, СЭК2 тяжелой цепи, например, 8Ε0 ГО N0:20 или последовательность, которая практически идентична 8Ε0 ГО N0:20, и СЭК3 тяжелой цепи, например, 8Ε0 ГО N0:21 или последовательность, которая практически идентична 8Ε0 ГО N0: 21; и три СЭКк легкой цепи: СЭК1 легкой цепи, например, 8Ε0 ГО N0: 22 или последовательность, которая практически идентична 8Ε0 ГО N0:22, СЭК2 легкой цепи, например, 8Ε0 ГО N0:23 или последовательность, которая практически идентична 8Ε0 ГО N0:23, и СГОК3 легкой цепи, например, 8Ε0 ГО N0:24 или последовательность, которая практически идентична 8Ε0 ГО N0:24. Антитела 2Н12 включают мышиное антитело 2Н12 (т2Н12) и химерные или гуманизированные антитела, полученные из мышиного антитела 2Н12.
Термин "пациент" включает человека и других млекопитающих, которые получают либо профилактическое, либо терапевтическое лечение.
Для целей классификации аминокислотных замен на консервативные или неконсервативные аминокислоты разделены на следующие группы: группа I (гидрофобные боковые цепи): те!, а1а, να1, 1еи, Пе; группа II (нейтральные гидрофильные боковые цепи) : сук, кег, 1Нг; группа III (кислые боковые цепи) : акр, д1и; группа IV (основные боковые цепи) : акп, д1п, Ык, 1ук, агд; группа V (остатки, влияющие на ориентацию цепи): д1у, рго и группа VI (ароматические боковые цепи): 1гр. 1уг, рйе. Консервативные замены предполагают замены, происходящие между аминокислотами одного и того же класса. Неконсервативные замены представляют собой замену члена одного из этих классов на член другого класса.
Процент идентичности последовательностей определяют для последовательностей антител, максимально выровненных в соответствии с системой нумерации по Кабату. После выравнивания, если изучаемую область антитела (например, всю зрелую вариабельную область тяжелой или легкой цепи) сравнивают с такой же областью эталонного антитела, процент идентичности последовательностей между изучаемой и эталонной областями антитела представляет собой число положений, занятых одинаковыми аминокислотами как в изучаемой, так и в эталонной областях антитела, деленное на общее число выровненных положений двух областей, без учета разрывов, умноженное на 100 для преобразования в проценты.
Композиции или способы, "включающие" один или более из перечисленных элементов, могут включать и другие элементы, конкретно не перечисленные. Например, композиция, включающая антитело, может включать только антитело или антитело в сочетании с другими ингредиентами.
Указанный диапазон значений включает все целые числа, находящиеся внутри или задающие границы диапазона.
Эффекторная функция антитела означает функцию, выполняемую Рс доменом(ами) Щ Такими функциями могут быть, например, антителозависимая клеточная цитотоксичность, антителозависимый клеточный фагоцитоз или комплементзависимая цитотоксичность. Такая функция может осуществляться, например, путем связывания Рс эффекторного домена(ов) с Рс-рецептором на иммунной клетке, обладающей фагоцитирующей или литической активностью, или путем связывания Рс эффекторного домена(ов) с компонентами системы комплемента. Как правило, эффект(ы), опосредованные Рссвязывающими клетками или компонентами системы комплемента, приводят к ингибированию и/или сокращению численности клеток-мишеней с СГО33. Рс-области антител могут привлекать экспрессирующие Рс-рецептор (РсК) клетки и соединять их с покрытыми антителами клетками-мишенями. Клетки,
- 5 029987
экспрессирующие поверхностный РсК для 1§С, включая РсуКШ (СИ16), РсуКИ (СИ32) и РсуКШ (СИ64), могут действовать как эффекторные клетки для разрушения покрытых 1§О клеток. Такие эффекторные клетки включают моноциты, макрофаги, естественные киллеры (ΝΚ), нейтрофилы и эозинофилы. Взаимодействие РсуК с 1§С активирует антителозависимую клеточную цитотоксичность (АИСС) или антителозависимый клеточный фагоцитоз (АИСР). АИСС опосредована СИ16+ эффекторными клетками за счет секреции образующих поры в мембранах белков и протеаз, тогда как фагоцитоз опосредован СИ32+ и СИ64+ эффекторными клетками (см. Риибатеи!а1 1ттиио1о§у, 4Πι еб., Раи1 еб., Ырртсой-Кауеи, Ν.Υ., 1997, СЬар!егк 3, 17 и 30; ИсЫба е! а1., 2004, I. Ехр. Меб. 199: 1659-69; Лке\у;ш1ор е! а1., 2001, Саисег Кек. 61: 4061-65; ХУайтаЬе е! а1., 1999, Вгеак! Сапсег Кек. Тгеа!. 53: 199-207). В дополнение к АИСС и АИСР Рс-области связанных с клеткой антител могут также активировать классический путь комплемента, вызывая комплементзависимую цитотоксичность (СИС). Компонент С1с| системы комплемента связывается с Рс-областями антител, когда они находятся в комплексе с антигенами. Связывание С1с| со связанными с клетками антителами может вызывать каскад событий, включающий протеолитическую активацию С4 и С2, с образованием С3-конвертазы. Расщепление С3 до С3Ь С3-конвертазой запускает активацию конечных компонентов комплемента, включая С5Ь, С6, С7, С8 и С9. Коллективно эти белки образуют мембраноатакующий комплекс, образующий поры в мембранах покрытых антителами клеток. Эти поры нарушают целостность клеточной мембраны, уничтожая клетку-мишень (см. 1ттииоЬю1о§у, 6ΐ1ι еб., 1апе\уау е! а1., Оаг1аиб 8с1еисе, Ν. Υ., 2005, Сйар!ег 2).
Термин "антителозависимая клеточная цитотоксичность", или АИСС, означает механизм индукции клеточной гибели, который зависит от взаимодействия покрытых антителами клеток-мишеней с иммунными клетками, обладающими литической активностью (также называемыми эффекторными клетками). Такие эффекторные клетки включают клетки - естественные киллеры, моноциты/макрофаги и нейтрофилы. Эффекторные клетки связываются с Рс эффекторным доменом(ами) 1д, связанного с клеткамимишенями через их антигенсвязывающие участки. Гибель покрытой антителами клетки-мишени происходит в результате активности эффекторной клетки.
Термин "антителозависимый клеточный фагоцитоз", или АИСР, означает процесс, посредством которого покрытые антителами клетки интернализуются, либо полностью, либо частично, фагоцитирующими иммунными клетками (например, макрофагами, нейтрофилами и дендритными клетками), которые связываются с Рс эффекторным доменом(ами) 1д.
Термин "комплементзависимая цитотоксичность", или СЭС, означает механизм индукции клеточной гибели, в котором Рс эффекторный домен(ы) связанного с мишенью антитела активирует серию ферментативных реакций, приводящих к образованию отверстий в мембране клетки-мишени. Как правило, комплексы антиген-антитело, такие как те, которые находятся на покрытых антителами клеткахмишенях, связывают и активируют компонент С 1с| комплемента, который, в свою очередь, активирует каскад комплемента, приводящий к гибели клетки-мишени. Активация комплемента может также приводить к отложению компонентов комплемента на поверхности клетки-мишени, что способствует АИСС за счет связывания рецепторов комплемента (например, СК3) на лейкоцитах.
"Цитотоксический эффект" означает сокращение численности, элиминацию и/или уничтожение клеток-мишеней. "Цитотоксическое средство" означает средство, которое оказывает цитотоксическое действие на клетку.
Цитотоксические средства можно конъюгировать с антителом или вводить в сочетании с антителом.
"Цитостатический эффект" означает ингибирование клеточной пролиферации. "Цитостатическое средство" означает средство, которое оказывает цитостатическое действие на клетку, ингибируя рост и/или размножение определенного подмножества клеток. Цитостатические средства можно конъюгировать с антителом или вводить в сочетании с антителом.
Термин "фармацевтически приемлемый" означает одобренный или заслуживающий одобрения регулирующим органом федерального или государственного правительства, или входящий в список фармакопеи США или других общепризнанных фармакопей для применения для животных, и более конкретно, для человека. Термин "фармацевтически совместимый ингредиент" означает фармацевтически приемлемый разбавитель, адъювант, эксципиент или носитель, с которым анти-СИ33 антитело вводят субъекту.
Выражение "фармацевтически приемлемая соль" означает фармацевтически приемлемые органические или неорганические соли анти-СИ33-1 антитела или его конъюгата или средства, вводимого с антиСИ33-1 антителом. Иллюстративные соли включают соли, сульфаты, цитраты, ацетаты, оксалаты, хлориды, бромиды, иодиды, нитраты, бисульфаты, фосфаты, кислые фосфаты, изоникотинаты, лактаты, салицилаты, кислые цитраты, тартраты, олеаты, таннаты, пантотенаты, битартраты, аскорбаты, сукцинаты, малеаты, гентизинаты, фумараты, глюконаты, глюкуронаты, сахараты, форматы, бензоаты, глютаматы, метансульфонаты, этансульфонаты, бензолсульфонаты, п-толуолсульфонаты и памоаты (то есть 1,1'метилен-бис-(2-гидрокси-3-нафтоаты)). Фармацевтически приемлемая соль может включать другую молекулу, такую как ацетат-ион, сукцинат-ион или другой противоион. Противоион может быть любым
- 6 029987
органическим или неорганическим фрагментом, который стабилизирует заряд исходного соединения. Более того, фармацевтически приемлемая соль может иметь более одного заряженного атома в своей структуре. В случаях, когда несколько заряженных атомов являются частью фармацевтически приемлемой соли, могут присутствовать несколько противоионов. Таким образом, фармацевтически приемлемая соль может иметь один или более заряженных атомов и/или один или более противоионов.
Если иное не следует из контекста, термин "примерно" охватывает значения в пределах стандартного отклонения от указанного значения.
Подробное описание
I. Общие положения.
Изобретение относится к моноклональным антителам, которые специфически связываются с СИ33. Данные антитела полезны для лечения и диагностики различных форм рака, а также для обнаружения 033.
II. Молекулы-мишени.
Если не указано иное, 033 означает 033 человека. Иллюстративной человеческой последовательности присвоен регистрационный номер 8\νί55 Ρτοΐ Р20138. Последовательность Р20138 включена в настоящий документ как 8Е0 ГО N0:55. Р20138 содержит сигнальный пептид, аминокислоты 1-17; внеклеточный домен с фС-подобными доменами, аминокислоты 18-259; трансмембранный домен, аминокислоты 260-282 и цитоплазматический домен, аминокислоты 283-364. Если иное не следует из контекста, эталонный СГО33 означает, по меньшей мере, внеклеточный домен белка и, как правило, целый белок, кроме отщепляемого сигнального пептида (аминокислоты 1-17 в Р20138).
III. Антитела по изобретению.
Специфичность связывания и функциональные свойства.
Изобретение относится к мышиному антителу, т2Н12, и химерным или гуманизированным антителам, полученным из т2Н12. Мышиные антитела были выбраны за способность связываться как с белком 033 человека, так и с белком СГО33 яванского макака. Аминокислотные последовательности СГО33 яванского макака приведены как 8Е0 ГО N08: 56 и 57.
Аффинность гуманизированных или химерных форм мышиного антитела т2Н12 (то есть К а) может быть больше, чем аффинность антитела т2Н12, или отличаться в пределах коэффициента, равного пяти, или коэффициента, равного двум (то есть больше чем или меньше чем), от аффинности мышиного антитела т2Н12 в отношении человеческого 033. Один из способов измерения аффинности антитела для его целевого антигена заключается в определении кажущейся константы диссоциации антитела. Настоящее изобретение охватывает антитела (например, химерные и гуманизированные формы мышиного антитела 2Н12), имеющие кажущуюся константу диссоциации, которая практически такая же, что и у мышиного антитела 2Н12 (то есть в пределах ошибки эксперимента), а также антитела, имеющие константу диссоциации ниже или выше, чем таковая у мышиного антитела 2Н12 для СГО33 человека. В некоторых вариантах осуществления антитела по настоящему изобретению (например, химерные, гуманизированные и человеческие формы мышиного антитела 2Н12) имеют кажущуюся константу диссоциации, отличающуюся в диапазоне кратности 0,1-10 или предпочтительно в диапазоне кратности 0,1-5, 0,1-2 или даже 0,5-2 от кажущейся константы диссоциации мышиного антитела 2Н12 для СГО33 человека. В некоторых аспектах кажущаяся константа диссоциации (КД антитела для СГО33 человека предпочтительно находится в диапазоне от 0,1 до 50 нМ, даже более предпочтительно в диапазоне от 0,1 до 25 нМ, даже более предпочтительно в диапазоне от 0,1 до 10 нМ, от 0,5 до 5 нМ или от 0,5 до 2,5 нМ. Гуманизированные или химерные антитела т2Н12 специфически связываются с СГО33 человека в естественной форме и/или в форме рекомбинантно экспрессированного клетками СНО, как и мышиное антитело т2Н12, из которого они получены. Гуманизированные или химерные антитела т2Н12 связываются с тем же эпитопом и/или конкурируют с т2Н12 за связывание с СГО33 человека. В некоторых вариантах осуществления гуманизированные или химерные антитела т2Н12 также связываются с гомологом СГО33 яванского макака, таким образом, можно проводить доклинические испытания на приматах, отличных от человека.
Предпочтительные антитела (например, гуманизированные или химерные антитела т2Н12) подавляют рак (например, рост клеток, метастазирование и/или летальность для организма), как показано на размножающихся в культуре злокачественных клетках, животных моделях или в клинических испытаниях. Животные модели можно получать путем имплантации экспрессирующих СГО33 клеток опухолевых линий человека или первичных клеток опухоли пациента животным соответствующих иммунодефицитных линий грызунов, например бестимусным "голым" мышам, мышам ^С или §СГО. Эти клетки опухолевых линий в иммунодефицитных грызунах-хозяевах могут приводить к развитию либо солидной опухоли в результате подкожных инъекций, либо диссеминированных опухолей в результате внутривенных инъекций. После развития опухолей в организме хозяев эти опухолевые модели можно использовать для оценки терапевтической эффективности анти-СО33 антител или их конъюгированных форм, как описано в примерах.
В. Антитела.
Гуманизированное антитело представляет собой полученное генно-инженерными методами антите- 7 029987
ло, в котором СГОР5 из "донорского" антитела, отличного от человеческого, переносятся в "акцепторные" последовательности человеческого антитела (см., например, Онссп. И8 5530101 и 5585089; ХУиНек И8 5225539; Сайет, И8 6407213; Абай, И8 5859205; и Роо!е, И8 6881557). Акцепторные последовательности антитела могут представлять собой, например, зрелую последовательность человеческого антитела, комбинацию таких последовательностей, консенсусную последовательность из последовательности человеческого антитела или последовательность области зародышевой линии. Предпочтительной акцепторной последовательностью для тяжелой цепи является экзон УН1-18 из Ун зародышевой линии и для экзона 1 Цн) - экзон 1н-6. Для легкой цепи предпочтительной акцепторной последовательностью является экзон УД-16, для экзона 1 - экзон 1к-4. Таким образом, гуманизированное антитело представляет собой антитело, имеющее некоторые или все СИК8 полностью или в основном из донорского антитела, отличного от человеческого, и каркасные последовательности вариабельной области и константные области, при наличии, полностью или в основном из последовательностей человеческого антитела. Аналогично, гуманизированная тяжелая цепь имеет по меньшей мере одну, две и, как правило, все три СИК8 полностью или в основном из тяжелой цепи донорского антитела, и каркасную последовательность вариабельной области тяжелой цепи и константную область тяжелой цепи, при наличии, в основном из последовательностей каркаса вариабельной области и константной области тяжелой цепи антитела человека. Аналогично, гуманизированная легкая цепь имеет по меньшей мере одну, две и, как правило, все три СЭЮ полностью или в основном из легкой цепи донорского антитела, и каркасную последовательность вариабельной области легкой цепи и константную область легкой цепи, при наличии, в основном из последовательностей каркаса вариабельной области и константной области легкой цепи антитела человека. В отличие от нанотел и дАт гуманизированное антитело содержит гуманизированную тяжелую цепь и гуманизированную легкую цепь. СОК в гуманизированном или человеческом антителе в основном происходит из или в основном идентична соответствующей СОК в антителе, отличном от человеческого, при этом по меньшей мере 60, 85, 90, 95 или 100% соответствующих остатков (по определению по Кабату) идентичны у соответствующих СЭЮ. В некоторых вариантах осуществления СОК в гуманизированном антителе или человеческом антителе в основном происходит из или в основном идентична соответствующей СОК в антителе, отличном от человеческого, при этом имеют место не более 3 консервативных аминокислотных замен в каждой СОК. Последовательности каркаса вариабельной области цепи антитела или константной области цепи антитела в основном происходят из последовательностей каркаса вариабельной области антитела человека или константной области антитела человека соответственно, при этом по меньшей мере 70, 80, 85, 90, 95 или 100% соответствующих остатков по определению по Кабату являются идентичными. В некоторых гуманизированных антителах по настоящему изобретению существует по меньшей мере одна обратная мутация мышиного антитела 2н12 в каркасе вариабельной области тяжелой цепи антитела. Хотя гуманизированные антитела часто содержат все шесть СПК (предпочтительно по определению по Кабату) из антитела мыши, они также могут быть образованы из меньшего количества СПК (например, по меньшей мере 3, 4 или 5) из антитела мыши (например, РаксаПк е! а1., 1. 1ттипо1. 169: 3076, 2002; Уа)бо5 е! а1., 1оита1 о! Мо1еси1аг Вю1оду, 320: 415-428, 2002; Ι\ν;·ι1ι;·ΐ5ΐιί е! а1., Мо1. 1ттипо1. 36: 1079-1091, 1999; Татига е! а1., 1оита1 о! 1ттипо1оду, 164: 1432-1441, 2000).
Некоторые аминокислоты из остатков каркаса вариабельной области антитела человека могут быть выбраны для замены на основании их возможного влияния на конформацию и/или связывание с антигеном СОК. Исследование такого возможного влияния проводят путем моделирования, изучения характеристик аминокислот в конкретных положениях или эмпирического наблюдения эффектов от замены или мутагенеза конкретных аминокислот.
Например, если есть различие между аминокислотным остатком каркаса вариабельной области мышиного антитела и выбранным остатком каркаса вариабельной области человеческого антитела, аминокислоту каркаса человеческого антитела можно заменять эквивалентной аминокислотой каркаса из антитела мыши, если есть основания ожидать, что аминокислота:
1) нековалентно связывает антиген непосредственно,
2) примыкает к области СИК,
3) иным образом взаимодействует с областью СИК (например, находится в пределах примерно 6 А от области СИК) или
4) опосредует взаимодействие между тяжелой и легкой цепями.
По изобретению предложены гуманизированные формы мышиного антитела т2н12, включая девять иллюстративных гуманизированных зрелых вариабельных областей тяжелой цепи (ΗΑ-ΗΙ) и семь иллюстративных гуманизированных зрелых вариабельных областей легкой цепи (ЬА-ЬС). Пермутациями этих цепей с наиболее сильным связыванием (самым низким значением ЕС50) являются НСЬА, НСЬЕ, НСЬС, Н1ЬА, Н1ЬЕ и Н1ЬС. Из этих пермутаций Н1ЬС (также известная как Й2Н12) является предпочтительной, поскольку она отличается наиболее сильным связыванием.
Изобретение относится к антителам 2Н12, в которых вариабельная область тяжелой цепи имеет по меньшей мере 90% идентичности с НА (8ЕО ГО N0:10) и вариабельная область легкой цепи по меньшей мере на 90% идентична ЬА (8ЕО ГО N0:2). В некоторых аспектах антитело является гуманизированным антителом и существует по меньшей мере одна обратная мутация мышиного антитела 2Н12 в каркасе
- 8 029987
вариабельной области тяжелой цепи. В других аспектах антитело является гуманизированным антителом и существует по меньшей мере одна обратная мутация мышиного антитела 2Н12 в каркасе вариабельной области легкой цепи. Кроме того, изобретение относится к антителам 2Н12, в которых гуманизированная вариабельная область тяжелой цепи имеет по меньшей мере 90, 95, 96, 97, 98 или 99% идентичности последовательности с 8ЕО ГО N08:10-18, и гуманизированная вариабельная область легкой цепи имеет по меньшей мере 90, 95, 96, 97, 98 или 99% идентичности последовательности с 8Е0 ГО N08:2-8 (и любому их сочетанию (то есть антитело может содержать любую из вариабельных областей тяжелой цепи в паре с любой из вариабельных областей легкой цепи). Например, изобретение относится к антителам, в которых вариабельная область тяжелой цепи имеет по меньшей мере 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентичности последовательности с 8Е0 ГО N08:10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 или 18, и гуманизированная вариабельная область легкой цепи имеет по меньшей мере 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентичности последовательности с 8Е0 ГО N08:2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8. В другом варианте осуществления изобретение относится к антителам, в которых вариабельная область тяжелой цепи имеет по меньшей мере 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентичности последовательности с 8Е0 ГО N08:10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 или 18, и вариабельная область легкой цепи имеет по меньшей мере 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентичности последовательности с 8Е0 ГО N0:2. В другом варианте осуществления изобретение относится к антителам, в которых вариабельная область тяжелой цепи имеет по меньшей мере 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентичности последовательности с 8Е0 ГО N08:10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 или 18, и вариабельная область легкой цепи имеет по меньшей мере 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентичности последовательности с 8Е0 ГО N0:3. В другом варианте осуществления изобретение относится к антителам, в которых вариабельная область тяжелой цепи имеет по меньшей мере 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентичности последовательности с 8Е0 ГО N08:10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, или 18, и вариабельная область легкой цепи имеет по меньшей мере 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентичности последовательности с 8Е0 ГО N0:4. В другом варианте осуществления изобретение относится к антителам, в которых вариабельная область тяжелой цепи имеет по меньшей мере 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентичности последовательности с 8Е0 ГО N08:10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 или 18, и вариабельная область легкой цепи имеет по меньшей мере 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентичности последовательности с 8Е0 ГО N0:5. В другом варианте осуществления изобретение относится к антителам, в которых вариабельная область тяжелой цепи имеет по меньшей мере 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентичности последовательности с 8Е0 ГО N08:10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 или 18, и вариабельная область легкой цепи имеет по меньшей мере 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентичности последовательности с 8Е0 ГО N0:6. В другом варианте осуществления изобретение относится к антителам, в которых вариабельная область тяжелой цепи имеет по меньшей мере 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентичности последовательности с 8Е0 ГО N08:10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, или 18, и вариабельная область легкой цепи имеет по меньшей мере 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентичности последовательности с 8Е0 ГО N0:7. В другом варианте осуществления изобретение относится к антителам, в которых вариабельная область тяжелой цепи имеет по меньшей мере 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентичности последовательности с 8Е0 ГО N08:10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 или 18, и вариабельная область легкой цепи имеет по меньшей мере 90, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентичности последовательности с 8Е0 ГО N0:8.
В некоторых аспектах данные антитела являются гуманизированными антителами, и некоторые или все из обратных мутаций в соответствующих антителах сохраняются. В некоторых антителах положение Н94 занято 8. Предпочтительно в некоторых антителах по меньшей мере одно из положений Н48, Н66, Н67, Н69, Н71 и Н94 занято аминокислотой из соответствующего положения в мышином антителе 2Н12. Необязательно, в любом таком антителе положение Н48 занято I; положение Н66 занято К; положение Н67 занято А; положение Н69 занято Ь; положение Н71 занято А; положение Н94 занято 8. В других вариантах осуществления в таких антителах предпочтительно по меньшей мере одно из положений Ь22, Ь46, Ь69 и Ь71 занято аминокислотой из соответствующего положения в мышином антителе 2Н12. Необязательно, в любом таком антителе положение Ь22 занято И; положение Ь46 занято Т; положение Ь69 занято О и положение Ь71 занято Υ.
Предпочтительно в любом из антител, описанных выше, например, гуманизированных антителах 2Н12, в которых вариабельная область тяжелой цепи имеет по меньшей мере 90, 95, 96, 97, 98 или 99% идентичности последовательности с 8Е0 ГО N08:10-18, и вариабельная область легкой цепи имеет по меньшей мере 90, 95, 96, 97, 98 или 99% идентичности последовательности с 8Е0 ГО N08:2-8, области СОК. идентичны или практически идентичны областям СОК мышиного донорского антитела, то есть мышиного антитела 2Н12 (8Е0 ГО N08:19-24). Области СОК являются такими, как определено по Кабату. Антитела по настоящему изобретению включают антитела НСЬА, НСЬЕ, НСЬО, Н1ЬА, Н1ЬЕ и Н1Ь0.
Изобретение относится к вариантам гуманизированного антитела Н1Ь0, в которых гуманизированная зрелая вариабельная область тяжелой цепи имеет по меньшей мере 90, 95, 96, 97, 98 или 99% идентичности с 8Е0 ГО N0:18, и гуманизированная зрелая вариабельная область легкой цепи имеет по меньшей мере 90, 95, 96, 97, 98 или 99% идентичности последовательности с 8Е0 ГО N0:8. В некоторых таких антителах положение Н94 занято 8. Предпочтительно в таких антителах некоторые или все из обратных мутаций в Н1Ь0 сохраняются. Иными словами, по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5 или предпочтительно
- 9 029987
все 6 из положений Н48, Н66, Н67, Н69, Н71 и Н94 тяжелой цепи заняты I и К, и А, и Ь, и А, и δ соответственно. Кроме того, по меньшей мере 1, 2, 3 или предпочтительно все 4 из положений Ь22, Ь46, Ь69 и Ь71 легкой цепи заняты N и Т, и О. и Υ соответственно. Предпочтительно области СОР таких гуманизированных антител практически идентичны областям СОК в Н1ЬС, которые являются такими же, что и в мышином донорском антителе. Области СОК можно определять в соответствии с любой общепринятой системой нумерации (например, С/ПоПиа), но предпочтительно определяют в соответствии с системой по Кабату. В одном варианте осуществления гуманизированное антитело содержит тяжелую цепь, содержащую три СЭР5 из δΕΟ ΙΌ N0:18 и каркасы вариабельной области, имеющие по меньшей мере 95% идентичности с каркасами вариабельной области из δΕΟ ΙΌ N0:18. В другом варианте осуществления гуманизированное антитело содержит легкую цепь, содержащую три СЭРх из δΕΟ ΙΌ N0:8 и каркасы вариабельной области, имеющие по меньшей мере 95% идентичности с каркасами вариабельной области из δΕΟ ΙΌ N0:8. В следующем варианте осуществления гуманизированное антитело содержит тяжелую цепь, содержащую три СЭРх из δΕΟ ΙΌ N0:18 и каркасы вариабельной области, имеющие по меньшей мере 95% идентичности с каркасами вариабельной области из δΕΟ ΙΌ N0:18, и легкую цепь, содержащую три СЭРх из δΕΟ ΙΌ N0:8 и каркасы вариабельной области, имеющие по меньшей мере 95% идентичности с каркасами вариабельной области из δΕΟ ΙΌ N0:8.
В том случае, если гуманизированные антитела демонстрируют какое-либо изменение относительно иллюстративного гуманизированного антитела ШЬО, одной из возможностей для такой дополнительной вариации являются дополнительные обратные мутации в каркасах вариабельной области. Любое или все из положений также могут быть подвергнуты обратным мутациям в других иллюстративных гуманизированных зрелых вариабельных областях тяжелой или легкой цепи (то есть 1, 2, 3, 4 или все 5 из Н38, занятого N Н40, занятого Р, Н73, занятого К, Н82А, занятого δ, и Н83, занятого Т, в тяжелой цепи и 1 или оба из Ь3, занятого К, и Ь20, занятого Ι, в легкой цепи). Однако такие дополнительные обратные мутации не являются предпочтительными, поскольку они, как правило, не повышают аффинность и введение большего количества остатков мышиного антитела может привести к повышенному риску иммуногенности.
Другой возможной вариацией является замена некоторых остатков в С0Р8 мышиного антитела соответствующими остатками из последовательностей С0Р8 человеческого антитела, как правило, из С0Р8 акцепторных последовательностей человеческого антитела, использованных в разработке иллюстративных гуманизированных антител. В некоторых антителах только часть из СОР.8, а именно подгруппа остатков СОР, необходимых для связывания, называемых δ^Р8, необходима для сохранения связывающей способности в гуманизированном антителе. Остатки СОР, не контактирующие с антигеном и не входящие в δ^Р8, можно идентифицировать на основании предыдущих исследований (например, остатки Н60-Н65 в СОР Н2 часто не нужны), из областей СОР8 по Кабату, лежащих за пределами гипервариабельных петель по Οιοίΐιία (СЬо1Ыа, 1. Мо1. Вю1. 196: 901, 1987), с помощью молекулярного моделирования и/или эмпирически, либо как описано в статье Соп/а1с8 с1 а1., Мо1. Iттиηο1. 41: 863 (2004). В таких гуманизированных антителах в положениях, в которых один или более остатков донорской СОР отсутствуют или в которых донорская СОР полностью отсутствует, аминокислота, занимающая положение, может быть аминокислотой, занимающей соответствующее положение (согласно нумерации по Кабату) в последовательности акцепторного антитела. Число таких замен акцепторных на донорские аминокислоты во вводимых СОР8 отражает баланс конкурирующих соображений. Такие замены являются потенциально выгодными для уменьшения количества мышиных аминокислот в гуманизированном антителе и, следовательно, для уменьшения потенциальной иммуногенности. Однако замены могут также вызывать изменения аффинности, а значительного снижения аффинности предпочтительно избегать. Положения для замены внутри СОР8 и аминокислоты для замены также могут быть выбраны эмпирически.
Несмотря на это можно осуществлять не предпочтительные замены других аминокислот, например, в каркасных остатках, не контактирующих с СОР8, или даже в некоторых остатках аминокислот потенциального СОР-контакта в составе СОР8. Часто замены, выполненные в вариантных гуманизированных последовательностях, являются консервативными по отношению к замененным аминокислотам ШЬО в случае гуманизированных антител 2Н12. Предпочтительно замены, относящиеся к ШЬО (консервативные или нет), не оказывают существенного влияния на аффинность связывания или эффективность гуманизированного мАт, то есть его способность связывать СО33 человека и ингибировать рост раковых клеток.
Варианты, как правило, отличаются от последовательностей зрелых вариабельных областей тяжелой и легкой цепи ШЬО (Й2Н12) небольшим количеством (например, как правило, не более чем 1, 2, 3, 5 или 10 в зрелой вариабельной области либо легкой цепи или тяжелой цепи либо и той, и другой) замен, делеций или вставок.
В некоторых вариантах осуществления гуманизированные или химерные антитела имеют СОР Н2 с количеством вплоть до 1, 2, 3, 4, 5 или 6 замен, делеций или вставок относительно СОР Н2 из Ш тяжелой цепи, и СОР8 Н1, Н3, Ь1, Ь2 и Ь3, каждая из которых имеет вплоть до 1, 2, 3 или 4 замен, делеций или вставок относительно соответствующей СОР из Ш тяжелой цепи или ЬО легкой цепи. В некоторых
- 10 029987
вариантах осуществления гуманизированные или химерные антитела по изобретению имеют одну или не более двух консервативных аминокислотных замен в амнокислоте(ах), которые идентифицированы как часть СОК. Примеры предпочтительных аминокислотных замен включают следующие. В СОК1 легкой цепи остаток К может быть заменен на К в положении 24; С, δ или Т могут быть заменены на А в положении 25; М может быть заменен на Ь в положении 33 и Т может быть заменен на δ в положении 34. В СОК2 легкой цепи остаток К может быть заменен на остаток К в положении 53; остаток М может быть заменен на остаток Ь в положении 54; остаток I может быть заменен на остаток V в положении 55 и остаток Е может быть заменен на остаток Ό в положении 56. В СОК2 тяжелой цепи остаток Ό может быть заменен на остаток Е в положении 61; остаток К может быть заменен на остаток К в положении 62; остаток Υ может быть заменен на остаток Р в положении 63; остаток К может быть заменен на остаток К в положении 64 и остаток С может быть заменен на остаток А в положении 65.
В некоторых вариантах осуществления гуманизированные антитела по изобретению содержат зрелую вариабельную область тяжелой цепи δΕΟ ГО N0:18 с одной, двумя или тремя консервативными заменами в последовательности СОК, приведенной выше. В некоторых вариантах осуществления гуманизированные антитела по изобретению содержат зрелую вариабельную область легкой цепи δΕΟ ГО N0:8 с одной, двумя или тремя консервативными заменами в последовательности СОК, приведенной выше.
С. Выбор константной области.
Вариабельные области тяжелой и легкой цепи гуманизированных антител можно связывать по меньшей мере с частью константной области человеческого антитела. Выбор константной области частично зависит от того, желательно ли наличие антителозависимой опосредуемой клетками цитотоксичности, антителозависимого клеточного фагоцитоза и/или комплементзависимой цитотоксичности. Например, изотипы человеческих антител 1дС1 и 1дС3 отличаются сильной комплементзависимой цитотоксичностью, изотип человеческих антител 1дС2 отличается слабой комплементзависимой цитотоксичностью и изотип человеческих антител 1дС4 лишен комплементзависимой цитотоксичности. 1дС1 и 1дС3 человека также индуцируют более сильные опосредованные клетками эффекторные функции, чем 1дС2 и 1дС4 человека. Константные области легкой цепи могут быть лямбда или каппа типа. Антитела могут экспрессироваться в виде тетрамеров, содержащих две легкие и две тяжелые цепи, в виде отдельных тяжелых цепей, легких цепей, в виде РаЬ, РаЬ', Р(аЬ')2 и Ρν, или в виде одноцепочечных антител, в которых вариабельные домены тяжелой и легкой цепей связаны через спейсер.
Константные области человеческих антител демонстрируют изменчивость аллотипов и изменчивость изоаллотипов у разных индивидуумов, то есть константные области могут отличаться у разных индивидуумов по одному или нескольким полиморфным положениям. Изоаллотипы отличаются от аллотипов тем, что сыворотки, узнающие изоаллотип, связываются с не полиморфной областью одного или более других изотипов.
Одна или несколько аминокислот на амино- или карбоксиконце легкой и/или тяжелой цепи, например С-концевой остаток лизина тяжелой цепи, может отсутствовать или быть дериватизирован в части или во всех молекулах. Можно проводить замены в константных областях для снижения или повышения эффекторной функции, такой как комплементзависимая цитотоксичность или АОСС (см., например, ХУиНег е! а1., патент США № 5624821; Тко е! а1., патент США № 5834597; и Ьа/аг е! а1., Ргос. Ναίί. Асаб. δει. υδΑ 103: 4005, 2006), или для увеличения продолжительности периода полураспада в организме человека (см., например, Нш!оп е! а1., 1. Βίοί. СЬет. 279: 6213, 2004).
Иллюстративная замена включает аминокислотную замену природной аминокислоты на введенный остаток цистеина в аминокислотных положениях 234, 235, 237, 239, 267, 298, 299, 326, 330 или 332, предпочтительно мутацию δ239С в человеческом антителе 1дС1 изотипа (нумерация в соответствии с индексом ЕС (по Кабату, δе^иеηсе5 о£ Рто!еш8 о£ 1ттипо1ощса1 1п!еге§! (№Юопа1 1п8Й!и!е8 о£ НеаИЬ, Ве!Ье§ба, МО. 1987 и 1991); см. υδ 20100158909, который включен в настоящий документ посредством ссылки). Наличие дополнительного остатка цистеина делает возможным образование дисульфидной связи между цепями. Такое образование дисульфидной связи между цепями может приводить к возникновению стерических препятствий, тем самым снижая аффинность взаимодействия связывания Рс областиРсуК. Остаток(ки) цистеина, введенные в состав или находящиеся в непосредственной близости от Рсобласти константной области 1дС, могут также служить сайтами для конъюгации с терапевтическими средствами (то есть присоединения цитотоксических лекарственных средств с использованием тиолспецифических реагентов, таких как малеинимидные производные лекарственных средств). Присутствие терапевтического средства приводит к возникновению стерических препятствий, в результате чего дополнительно снижается аффинность взаимодействия связывания Рс области-РсуК. Другие замены в любом из положений 234, 235, 236 и/или 237 снижают аффинность для рецепторов Рсу, в частности рецептора РсуК1 (см., например, υδ 6624821, υδ 5624821.)
Период полураспада антитела ίη νί\Ό также может влиять на его эффекторные функции. Период полураспада антитела можно увеличивать или уменьшать для модификации его терапевтических активностей. РсКп представляет собой рецептор, который структурно подобен антигену МНС класса I, который нековалентно связывается с 32-микроглобулином. РсКп регулирует катаболизм молекул 1дС и их транс- 11 029987
цитоз по тканям (СНеОе апб \Уагб. 2000, Аппи. Кеу. 1ттипо1. 18: 739-766; СНейе апб \Уагб. 2002, 1ттипо1. Кек. 25: 97-113). Взаимодействие 1дС-РсКп имеет место при рН 6,0 (рН внутриклеточных везикул), но не при рН 7,4 (рН крови); это взаимодействие позволяет молекулам 1дС возвращаться в систему циркуляции (СНеОе апб ^агб, 2000, Апп. Кеу. 1ттипо1. 18: 739-766; СНейе апб ^агб, 2002, 1ттипо1. Кек. 25: 97-113). Область на человеческом 1дС1, вовлеченная в связывание РсКп, была картирована (8Ые1бк е! а1., 2001, 1. Вю1. СНет. 276: 6591-604). Замены на остатки аланина в положениях Рго238, ТНг256, ТНг307, С1п311, Акр312, С1и380, С1и382 или Акп434 человеческого 1дС1 усиливают связывание РсКп (§Ые1бк е! а1., 2001, 1. Вю1. СНет. 276: 6591-604). Молекулы 1дС1, несущие такие замены, имеют более продолжительные периоды полураспада в сыворотке. Следовательно, эти модифицированные молекулы 1дС1 могут быть способны выполнять свои эффекторные функции и, таким образом, оказывать свое терапевтическое действие в течение более длительного периода времени по сравнению с немодифицированными 1дС1. Другие иллюстративные замены для увеличения связывания с РсКп включают остаток С1п в положении 250 и/или остаток Ьеи в положении 428. Для всех положений в константной области используется нумерация ЕС.
Олигосахариды, ковалентно присоединенные к консервативному остатку Акп297, вносят вклад в способность Рс-области 1дС связывать РсуК (Ьипб е! а1., 1996, 1. 1ттипо1. 157: 4963-69; Χνηβΐιΐ апб Моткоп, 1997, Тгепбк Вю!есНпо1. 15: 26-31). Конструирование данной гликоформы на молекуле 1дС может значительно усиливать опосредованную 1дС АЭСС. Добавление модификаций биссекторным Νацетилглюкозамином (Итапа е! а1., 1999, №4. Вю!есНпо1. 17: 176-180; ОаОек е! а1., 2001, Вю!есН. Вюепд. 74: 288-94) к этой гликоформе или удаление фукозы (§Ые1бк е! а1., 2002, 1. Вю1. СНет. 277: 26733-40; ЗЫпка^а е! а1., 2003, 1. Вю1. СНет. 278: 6591-604; Νί\νη е! а1., 2004, Сапсег Кек. 64: 2127-33) из этой гликоформы являются двумя примерами генно-инженерной модификации Рс 1дС, которая улучшает связывание между Рс 1дС и РсуК, тем самым повышая опосредованную 1д активность АЭСС.
Системная замена экспонированных в растворитель аминокислот Рс-области человеческого 1дС1 приводит к созданию вариантов 1дС с измененными аффинностями связывания РсуК (§Ые1бк е! а1., 2001, 1. Вю1. СНет. 276: 6591-604). При сравнении с исходным 1дС1 подгруппа таких вариантов с заменами в ТНг256/§ег298, §ег298/О1и333, 8ег298/Ьук334 или §ег298/О1и333/Ьук334 на остатки А1а демонстрирует увеличение как аффинности связывания в отношении РсуК, так и активности АЭСС (8Ые1бк е! а1., 2001, 1. Вю1. СНет. 276: 6591-604; Окагак е! а1., 2004, 1. Мо1. Вю1. 336: 1239-49).
Комплементфиксирующую активность антител (как связывание Ск], так и активность СЭС) можно улучшать путем замен в положениях Ьук326 и С1и333 (1бикод1е е! а1., 2001, 1. 1ттипо1. 166: 2571-2575). Такие же замены в остове человеческого 1дС2 способны превращать изотип антитела, который плохо связывается с Ск| и в значительной степени лишен комплементактивирующей активности, в изотип, который способен как связывать Ск], так и опосредовать СЭС (1бикод1е е! а1., 2001, 1. 1ттипо1. 166: 257175). Некоторые другие методы также были применены для улучшения комплементфиксирующей активности антител. Например, присоединение 18-аминокислотного фрагмента карбоксиконцевого хвоста 1дМ к карбоксильному концу 1дС значительно увеличивает его активность СЭС. Это наблюдается даже в случае 1дС4, который обычно не имеет поддающейся обнаружению активности СЭС (8шНН е! а1., 1995, 1. 1ттипо1. 154: 2226-36). Кроме того, замена остатка 8ег444, расположенного близко к карбоксильному концу тяжелой цепи 1дС1 остатком Сук индуцирует димеризацию хвост-к-хвосту 1дС1 с 200-кратным возрастанием активности СЭС по сравнению с мономерным 1дС 1 (§Норек е! а1., 1992, 1. 1ттипо1. 148: 2918-22). Кроме того, биспецифический конструкт диатела со специфичностью к Ск] также придает активность СЭС (Коп!егтапп е! а1., 1997, ΝηΙ. Вю!есН. 15: 629-31).
Комплементфиксирующую активность можно снижать путем мутации по меньшей мере одного из аминокислотных остатков 318, 320 и 322 тяжелой цепи на остаток, имеющий отличающуюся боковую цепь, такой как А1а. Другие алкилзамещенные неионные остатки, такие как С1у, 11е, Ьеи или Уа1, или такие ароматические неполярные остатки, как РНе, Туг, Тгр и Рго, вместо любого из этих трех остатков также уменьшают или отменяют связывание Ск]. Остатки §ег, ТЬг, Сук и Ме! можно использовать в положениях 320 и 322, но не 318, для снижения или отмены Сф-связывающей активности. Замена остатка 318 (С1и) полярным остатком может модифицировать, но не отменять СЦ-связывающую активность. Замена остатка 297 (Акп) на А1а приводит к исчезновению литической активности, но лишь слегка снижает (примерно в три раза ослабляет) аффинность в отношении Ск]. Это изменение уничтожает сайт гликозилирования и присутствие углевода, который необходим для активации комплемента. Любая другая замена в этом сайте также уничтожает сайт гликозилирования. Следующие мутации и любые их сочетания также приводят к снижению связывания Ск|: И270А, К322А, Р329А и Р3118 (см. XVО 06/036291).
Ссылка на константную область человеческого антитела включает константную область с любым природным аллотипом или любой пермутацией остатков, занимающих полиморфные положения в природных аллотипах. Кроме того, могут присутствовать вплоть до 1, 2, 5 или 10 мутаций по сравнению с природной константной областью человеческого антитела, таких как те, которые указаны выше, для уменьшения связывания рецептора Рс гамма или увеличения связывания с РсКИ
- 12 029987
Ό. Экспрессия рекомбинантных антител.
Гуманизированные или химерные антитела, как правило, получают рекомбинантной экспрессией. Рекомбинантные полинуклеотидные конструкты, как правило, содержат последовательность контроля экспрессии, функционально связанную с кодирующими последовательностями цепей антитела, включая области естественным образом ассоциированных или гетерологичных промоторов. Предпочтительно последовательности контроля экспрессии представляют собой системы эукариотических промоторов в векторах, способных трансформировать или трансфицировать эукариотические клетки-хозяева. После того, как вектор введен в соответствующего хозяина, хозяин поддерживается в условиях, подходящих для высокого уровня экспрессии нуклеотидной последовательности, а также сбора и очистки перекрестно реагирующих антител.
Клетки млекопитающих являются предпочтительными хозяевами для экспрессии нуклеотидных сегментов, кодирующих иммуноглобулины или их фрагменты (см. Утпаскег, Ргот Сспсх ίο С1опе8, (УСН РиЬйкЬегк, ΝΥ, 1987). Множество подходящих линий клеток-хозяев, способных секретировать интактные гетерологичные белки, были разработаны в данной области, и сюда входят линии клеток СНО (например, ΌΟ44), различные линии СО8, клетки НеЬа, клетки НЕК293, Ь-клетки и не продуцирующие антитела миеломы, включая 8р2/0 и N80. Предпочтительно клетки не являются человеческими. Экспрессионные векторы для этих клеток могут содержать последовательности контроля экспрессии, такие как точка начала репликации, промотор, энхансер (Онееп е! а1., 1ттипо1. Кеу. 89: 49 (1986)), и необходимые сайты процессинга информации, такие как сайты связывания рибосом, сайты сплайсинга РНК, сайты полиаденилирования и последовательности терминации транскрипции. Предпочтительными последовательностями контроля экспрессии являются промоторы, полученные из эндогенных генов, цитомегаловируса, 8У40, аденовируса, бычьего папилломавируса и тому подобное (см. Со е! а1., 1. 1ттипо1. 148: 1149 (1992)).
Человеческие антитела против белка СГО33 можно получать различными методами, описанными ниже. Методы получения человеческих антител включают метод триом, описанный ОеЧЬегд е! а1., НуЬпйота 2: 361-367 (1983); Ое81Ьет§, патент США № 4634664; и ЕпЦетап е! а1., патент США 4634666; использование трансгенных мышей, имеющих гены человеческих иммуноглобулинов (см., например, ЬопЬетд е! а1., УО 93/12227 (1993); И8 5877397, И8 5874299, И8 5814318, И8 5789650, И8 5770429, И8 5661016, И8 5633425, И8 5625126, И8 5569825, И8 5545806, Ж!ите 148, 1547-1553 (1994), Уинге Бю!есйио1оду 14, 826 (1996), Кисйейарай, УО 91/10741 (1991); и методы фагового дисплея (см., например, 1)о\\ег е! а1., УО 91/17271 и МсСайейу е! а1., УО 92/01047, И8 5877218, И8 5871907, И8 5858657, И8 5837242, И8 5733743 и И8 5565332.
Экспрессированные антитела можно очищать стандартными методами в данной области, включая очистку методом ВЭЖХ, хроматографию на колонке, электрофорез в геле и тому подобное (см. в основном §соре8, Рто!еш Рипйсайоп (§ртшдег-Ует1ад, ΝΥ, 1982)).
IV. Нуклеиновые кислоты.
Изобретение также относится к нуклеиновым кислотам, кодирующим любые из гуманизированных тяжелых и легких цепей, описанных выше. Как правило, нуклеиновые кислоты также кодируют сигнальный пептид, слитый со зрелыми тяжелыми и легкими цепями. Кодирующие последовательности в нуклеиновых кислотах могут быть функционально связаны с регуляторными последовательностями для обеспечения экспрессии кодирующих последовательностей, такими как промотор, энхансер, сайт связывания рибосом, сигнал терминации транскрипции и тому подобное. Нуклеиновые кислоты, кодирующие тяжелую и легкую цепи, могут находиться в выделенной форме или могут быть клонированы в один или более векторов. Нуклеиновые кислоты могут быть синтезированы, например, методом твердофазного синтеза или ПЦР перекрывающихся олигонуклеотидов. Нуклеиновые кислоты, кодирующие тяжелую и легкую цепи, могут быть соединены в виде одной непрерывной нуклеиновой кислоты, например, в составе экспрессионного вектора, или могут быть разделены, например каждая клонирована в собственный экспрессионный вектор.
В одном варианте осуществления данное изобретение относится к выделенному полинуклеотиду, кодирующему вариабельную область тяжелой цепи антитела, содержащую аминокислотную последовательность 5>ЕО ГО NО:18. Этот выделенный полинуклеотид может дополнительно кодировать константную область тяжелой цепи 1§О человека. Изотипом константной области 1§О является, например, 1дО1, 1дО2, 1§О3 или 1дО4. В одном варианте осуществления изотипом константной области 1§О является ЦС1. В другом варианте осуществления кодируемая константная область 1§О1 имеет аминокислотную последовательность, содержащую замену на остатке 239, в соответствии с системой нумерации по Кабату, то есть 8239С. Изобретение также относится к экспрессионному вектору, содержащему выделенный полинуклеотид, кодирующий вариабельную область тяжелой цепи антитела, содержащую аминокислотную последовательность §ЕЦ ГО NО:18, и, кроме того, к клетке-хозяину, содержащей этот экспрессионный вектор. В некоторых вариантах осуществления клетка-хозяин представляет собой клетку-хозяина млекопитающего, например клетку СНО.
В другом варианте осуществления данное изобретение относится к выделенному полинуклеотиду, кодирующему вариабельную область легкой цепи антитела, содержащую аминокислотную последова- 13 029987
тельность δΕΟ ГО N0:8. Этот выделенный полинуклеотид может дополнительно кодировать константную область легкой цепи 1§0 человека. Изотипом константной области легкой цепи 1§0 является, например, константная область каппа. Изобретение также относится к экспрессионному вектору, содержащему выделенный полинуклеотид, кодирующий вариабельную область легкой цепи антитела, содержащую аминокислотную последовательность δΕΟ ГО N0:8, и, кроме того, к клетке-хозяину, содержащей этот экспрессионный вектор. В некоторых вариантах осуществления клетка-хозяин представляет собой клетку-хозяина млекопитающего, например клетку СН0. В другом варианте осуществления данное изобретение относится к выделенному полинуклеотиду или полинуклеотидам, кодирующим вариабельную область тяжелой цепи антитела, содержащую аминокислотную последовательность δΕΟ ГО N0:18, и вариабельную область легкой цепи антитела, содержащую аминокислотную последовательность δΕΟ ГО N0:8, при этом вариабельный домен тяжелой цепи и вариабельный домен легкой цепи образуют антитело или антигенсвязывающий фрагмент, который специфически связывается с СЭ33 человека. Данное изобретение также относится к экспрессионному вектору, содержащему выделенный полинуклеотид или полинуклеотиды, которые кодируют вариабельную область тяжелой цепи антитела, содержащую аминокислотную последовательность δΕΟ ГО N0:18, и вариабельную область легкой цепи антитела, содержащую аминокислотную последовательность δΕΟ ГО N0:8. Также предложена клетка-хозяин, содержащая экспрессионный вектор или векторы. Клетка-хозяин предпочтительно представляет собой клетку млекопитающего, например клетку СН0.
В другом варианте осуществления данное изобретение относится к первому и второму векторам, содержащим полинуклеотид, кодирующий вариабельную область тяжелой цепи антитела, содержащую аминокислотную последовательность δΕΟ ГО N0: 18, и полинуклеотид, кодирующий вариабельную область легкой цепи антитела, содержащую аминокислотную последовательность δΕΟ ГО N0:8, при этом вариабельный домен тяжелой цепи и вариабельный домен легкой цепи образуют антитело или антигенсвязывающий фрагмент, который специфически связывается с СГО33 человека. Также предложена клетка-хозяин, содержащая векторы, предпочтительно клетки-хозяева млекопитающих, например клетки СН0.
V. Конъюгаты антитело-лекарственное средство.
Анти-СГО33 антитела можно конъюгировать с цитотоксическими фрагментами для получения конъюгатов антитело-лекарственное средство (АЭСк). Особенно подходящими фрагментами для конъюгации с антителами являются цитотоксические средства (например, химиотерапевтические средства), ферменты, преобразующие пролекарства, радиоактивные изотопы или соединения или токсины (эти фрагменты коллективно называются терапевтическими средствами или лекарственными средствами). Например, анти-СГО33 антитело можно конъюгировать с цитотоксическим средством, таким как химиотерапевтическое средство или токсин (например, цитостатическое или цитоцидное средство, такое как, например, абрин, рицин А, экзотоксин псевдомонас или дифтерийный токсин). Примеры полезных классов цитотоксических средств включают, например, вещества, связывающиеся с малой бороздкой ДНК, ДНК-алкилирующие средства и ингибиторы тубулина. Иллюстративные цитотоксические средства включают, например, ауристатины, камптотецины, дуокармицины, этопозиды, майтанзины и майтанзиноиды (например, ΌΜ1 и ΌΜ4), таксаны, бензодиазепины (например, пирроло[1,4]бензодиазепины (ΡΒΌδ), индолинобензодиазепины и оксазолидинобензодиазепины) и алкалоиды барвинка. Методы конъюгации терапевтических средств с белками, и в частности, с антителами, хорошо известны (см., например, А11еу е! а1., Ситгеи! 0ρίηίοη ίη СЬешюа1 Вю1о§у 2010 14: 1-9; δβηΐβτ, Сапсег 1., 2008, 14(3): 154169)
Терапевтическое средство (например, цитотоксическое средство) можно конъюгировать с антителом таким образом, что его активность снижается, если оно не отделяется от антитела (например, путем гидролиза, вследствие распада антитела или за счет действия расщепляющего агента). Такое терапевтическое средство можно присоединять к антителу через линкер. Терапевтическое средство, конъюгированное с линкером, в настоящем документе также называют лекарственным линкером. Характер линкера может варьироваться в широких пределах. Компоненты, входящие в состав линкера, выбирают на основе их характеристик, которые могут быть частично продиктованы условиями в том участке, куда доставляется конъюгат.
Терапевтическое средство можно присоединять к антителу с помощью расщепляемого линкера, который чувствителен к расщеплению во внутриклеточной среде анти-СО33-экспрессирующей раковой клетки, но существенно не чувствителен к условиям внеклеточной среды, так что конъюгат отщепляет антитело, когда он интернализируется анти-СЭ33-экспрессирующей раковой клеткой (например, в эндосомальной или, например, в силу чувствительности к рН или чувствительности к протеазам, в лизосомальной среде или в кавеолярной среде). Терапевтическое средство можно также присоединять к антителу с помощью нерасщепляемого линкера. Как указано, линкер может содержать расщепляемый блок. В некоторых таких вариантах осуществления структуру и/или последовательность расщепляемого блока выбирают таким образом, что он расщепляется в результате действия ферментов, присутствующих в целевом участке (например, целевой клетке). В других вариантах осуществления можно также использовать расщепляемые блоки, которые расщепляются в результате изменения рН (например, кислотно- или
- 14 029987
щелочно-лабильные), температуры или при облучении (например, фотолабильные).
В некоторых вариантах осуществления расщепляемый блок может содержать одну аминокислоту или непрерывную последовательность аминокислот. Аминокислотная последовательность может быть целевым субстратом для фермента.
В некоторых аспектах расщепляемый блок представляет собой пептидильный блок и имеет по меньшей мере две аминокислоты в длину. Расщепляющие агенты могут включать катепсины В и Ό и плазмин (см., например, ЭиЬо\Ус1нк апй Аа1ксг, 1999, РИагт. ТИсгарсиОсз 83: 67-123). Наиболее типичными являются расщепляемые блоки, которые расщепляются ферментами, присутствующими в антиСЭ33-экспрессирующи\ клетках, то есть расщепляемый ферментами линкер. Соответственно линкер может расщепляться внутриклеточными ферментами пептидазой или протеазой, включая лизосомальную или эндосомальную протеазу. Например, можно использовать линкер, расщепляемый тиолзависимой протеазой катепсином-В, которая на высоком уровне экспрессируется в раковой ткани (например, линкер, содержащий пептид РИс-Иси или Уа1-Сй или пептид Уа1-А1а).
В некоторых вариантах осуществления линкер будет содержать расщепляемый блок (например, пептидильный блок), и расщепляемый блок будет непосредственно конъюгирован с терапевтическим средством. В других вариантах осуществления расщепляемый блок будет конъюгирован с терапевтическим средством через дополнительный функциональный блок, например саморасщепляющийся спейсерный блок или не саморасщепляющийся спейсерный блок. Не саморасщепляющийся спейсерный блок представляет собой блок, в случае которого часть или весь спейсерный блок остается связанным с блоком лекарственного средства после отщепления расщепляемого блока (например, аминокислоты) от конъюгата антитело-лекарственное средство. Для высвобождения лекарственного средства в целевой клетке происходит независимая реакция гидролиза для отщепления спейсерного блока от лекарственного средства. С саморасщепляющимся спейсерным блоком лекарственное средство высвобождается без необходимости для лекарственного средства этапа разделяющего гидролиза. В одном варианте осуществления, в котором линкер содержит расщепляемый блок и саморасщепляющуюся группу, расщепляемый блок расщепляется под действием ферментов, и после расщепления расщепляемого блока саморасщепляющаяся группа(ы) высвобождает терапевтическое средство. В некоторых вариантах осуществления расщепляемый блок линкера будет напрямую или опосредованно конъюгирован с терапевтическим средством на одном конце, а на другом конце будет напрямую или опосредованно конъюгирован с антителом. В некоторых таких вариантах осуществления расщепляемый блок будет напрямую или опосредованно (например, через саморасщепляющийся или не саморасщепляющийся спейсерный блок) конъюгирован с терапевтическим средством на одном конце, а на другом конце будет конъюгирован с антителом через удлиняющий блок. Удлиняющий блок связывает антитело с остальной частью лекарственного средства и/или лекарственным линкером. В одном варианте осуществления соединение между антителом и остальной частью лекарственного средства или лекарственным линкером происходит через малеимидную группу, например через малеимидокапроильный линкер. В некоторых вариантах осуществления антитело будет связано с лекарственным средством через дисульфидную связь, например связанные дисульфидной связью майтанзиноидные конъюгаты 5ΡΌΒ-ΌΜ4 и 8ΡΡ-ΌΜ1.
Связь между антителом и линкером может осуществляться множеством различных способов, например через тиоэфирную связь, через дисульфидную связь, через амидную связь или через сложноэфирную связь. В одном варианте осуществления связь между анти-СЭ33 антителом и линкером образована между тиоловой группой остатка цистеина антитела и малеимидной группой линкера. В некоторых вариантах осуществления межцепочечные связи антитела преобразуются в свободные тиоловые группы перед проведением реакции с функциональной группой линкера. В некоторых вариантах осуществления остаток цистеина вводится в тяжелую или легкую цепь антитела и реагирует с линкером. Положения для введения остатка цистеина путем замены в тяжелую или легкую цепи антитела включают те, которые описаны в опубликованной патентной заявке США № 2007-0092940 и международной патентной публикации АО 2008070593, каждая из которых включена в настоящий документ посредством ссылки в полном объеме и для всех целей.
В некоторых вариантах осуществления конъюгаты антитело-лекарственное средство имеют следующую формулу I:
где И представляет собой анти-СЭ33 антитело, ИС представляет собой блок линкера, и Ό представляет собой блок лекарственного средства (то есть терапевтического средства). Нижний индекс р равен числу в диапазоне от 1 до 20. Такие конъюгаты содержат анти-СЭ33 антитело, ковалентно связанное по меньшей мере с одним лекарственным средством через линкер. Блок линкера связан на одном конце с антителом и на другом конце с лекарственным средством.
Нагрузка лекарственного средства представлена индексом р, числом молекул лекарственного средства на антитело. Нагрузка лекарственного средства может находиться в диапазоне от 1 до 20 блоков лекарственного средства (Ό) на антитело. Специалисту в данной области будет понятно, что в некоторых аспектах нижний индекс р будет находиться в диапазоне значений от 1 до 20 (то есть как целых, так и дробных значений от 1 до 20). Специалисту в данной области будет понятно, что в некоторых аспектах
- 15 029987
нижний индекс р будет целым числом от 1 до 20 и будет представлять собой число лекарственных линкеров на одном антителе. В других аспектах р представляет собой среднее число молекул лекарственных линкеров на антитело, например среднее число лекарственных линкеров на антитело в реакционной смеси или композиции (например, фармацевтической композиции), и может быть целым или дробным значением. Соответственно в некоторых аспектах для композиций (например, фармацевтических композиций) р представляет собой среднюю нагрузку лекарственного средства в конъюгатах антителолекарственное средство в композиции, и р находится в диапазоне от 1 до 20.
В некоторых вариантах осуществления р составляет от примерно 1 до примерно 8 молекул лекарственного средства на антитело. В некоторых вариантах осуществления р равно 1. В некоторых вариантах осуществления р равно 2. В некоторых вариантах осуществления р составляет от примерно 2 до примерно 8 молекул лекарственного средства на антитело. В некоторых вариантах осуществления р составляет от примерно 2 до примерно 6, от 2 до примерно 5 или от 2 до примерно 4 молекул лекарственного средства на антитело. В некоторых вариантах осуществления р составляет примерно 2, примерно 4, примерно 6 или примерно 8 молекул лекарственного средства на антитело.
Среднее число молекул лекарственного средства на блок антитела в препарате, полученном в результате реакции конъюгации, может быть охарактеризовано общепринятыми методами, такими как масс-спектроскопия, анализ ЕЫ8Л, ХГВ (Н1С) и ВЭЖХ. Можно также определять количественное распределение конъюгатов в отношении р.
Иллюстративные конъюгаты антитело-лекарственное средство включают конъюгаты антителолекарственное средство на основе ауристатина, то есть конъюгаты, в которых компонент лекарственного средства представляет собой лекарственное средство ауристатин. Ауристатины связывают тубулин, как показано, они нарушают динамику микротрубочек, а также ядерное и клеточное деление, и обладают противораковой активностью. Как правило, конъюгат антитело-лекарственное средство на основе ауристатина содержит линкер между лекарственным средством ауристатином и анти-СО33 антителом. Ауристатины могут быть связаны с анти-СИ33 антителом в любом положении, подходящем для конъюгации с линкером. Линкер может представлять собой, например, расщепляемый линкер (например, пептидильный линкер) или не расщепляемый линкер (например, линкер, высвобождаемый в результате распада антитела). Ауристатин может представлять собой ауристатин Е или его производное. Ауристатин может быть, например, сложным эфиром, образованным из ауристатина Е и кетокислоты. Например, ауристатин Е может вступать в реакцию с параацетилбензойной кислотой или бензоилвалериановой кислотой с образованием АЕВ и ЛЕУБ соответственно. Другие типичные ауристатины включают ММЛЕ (монометилауристатин Е) и ММАЕ (монометилауристатин Е). Синтез и структура иллюстративных ауристатинов описаны в патентных публикациях США №№ 7659241, 7498298, 2009-0111756, 2009-0018086 и 7968687, содержание каждой из которых включено в настоящий документ посредством ссылки в полном объеме и для всех целей.
Иллюстративные конъюгаты антитело-лекарственное средство на основе ауристатинов включают конъюгаты антитело-лекарственное средство усММАЕ, усММАЕ и тсММАЕ, приведенные ниже, в которых Ат представляет собой антитело, описанное в настоящем документе, и уа1-сй представляет собой дипептид валин-цитруллин
- 16 029987
или их фармацевтически приемлемые соли. Нагрузка лекарственного средства представлена индексом р, числом молекул лекарственного линкера на антитело. В зависимости от контекста р может представлять собой среднее число молекул лекарственного линкера на антитело, также называемое средней нагрузкой лекарственного средства. Переменная р находится в диапазоне от 1 до 20 и предпочтительно от 1 до 8. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления, если р представляет собой среднюю нагрузку лекарственного средства, р находится в диапазоне от примерно 2 до примерно 5. В некоторых вариантах осуществления р составляет примерно 2, примерно 3, примерно 4 или примерно 5. В некоторых аспектах антитело конъюгировано с линкером через атом серы остатка цистеина. В некоторых аспектах остаток цистеина является остатком, который введен в антитело генно-инженерными методами. В других аспектах остаток цистеина является остатком цистеина межцепочечной дисульфидной связи.
Иллюстративные конъюгаты антитело-лекарственное средство включают конъюгаты антителолекарственное средство на основе РВБ; то есть конъюгаты антитело-лекарственное средство, в которых компонент лекарственного средства представляет собой лекарственное средство РВБ.
Молекулы РВБ имеют общую структуру
Они отличаются по количеству, типу и положению заместителей, как в их ароматических Акольцах, так и в пиррольных С-кольцах, а также по степени насыщения С-кольца. В В-кольце присутствует либо имин (N=0), карбиноламин ^Н-СН(ОН)), либо метиловый эфир карбиноламина ^НСН(ОМе)) в положении Ν10-ϋ11, которое является электрофильным центром, ответственным за алкилирование ДНК. Все из известных природных продуктов имеют (8)-конфигурацию в хиральном положении С11а, что обеспечивает им правостороннее закручивание, если смотреть с С-кольца в направлении Акольца. Это придает им соответствующую трехмерную форму, которая изоспиральна малой бороздке Вформы ДНК, результатом чего является плотное прилегание в сайте связывания. Способность молекул РВБ к образованию аддукта в малой бороздке позволяет им интерферировать с процессингом ДНК, вследствие чего их используют в качестве противоопухолевых средств.
Биологическая активность этих молекул может быть усилена путем объединения двух блоков РВБ вместе через их С8/С'-гидроксильные функциональные группы с помощью гибкого алкиленового линкера. Считается, что димеры РВБ образуют избирательные в отношении последовательности повреждения ДНК, такие как палиндромная 5'-Ри-САТС-Ру-3' межцепочечная поперечная связь, которая, как считают, в основном отвечает за их биологическую активность.
В некоторых вариантах осуществления конъюгаты антитело-лекарственное средство на основе РВБ содержат димер РВБ, связанный с анти-СБ33 антителом. Мономеры, которые образуют димер РВБ, могут быть одинаковыми или разными, то есть симметричными или несимметричными. Димер РВБ может быть связан с анти-СБ33 антителом в любом положении, подходящем для конъюгации с линкером. Например, в некоторых вариантах осуществления димер РВБ будет иметь заместитель в положении С2, который обеспечивает якорь для связывания соединения с анти-СБ33 антителом. В альтернативных вариантах осуществления положение N10 димера РВБ будет обеспечивать якорь для связывания соединения с анти-СБ33 антителом.
Как правило, конъюгат антитело-лекарственное средство на основе РВБ содержит линкер между лекарственным средством РВБ и анти-СБ33 антителом. Линкер может представлять собой расщепляемый блок (например, аминокислоту или непрерывную последовательность аминокислот, которая является целевым субстратом для фермента) или не расщепляемый линкер (например, линкер, высвобождаемый в результате распада антитела). Линкер может дополнительно содержать малеимидную группу для связывания с антителом, например малеимидокапроил. В некоторых вариантах осуществления линкер может дополнительно содержать саморасщепляющуюся группу, такую как, например, блок п- 17 029987
аминобензилового спирта (РАВ).
Иллюстративный РВЭ для использования в виде конъюгата описан в международной заявке № А0 2011/130613 и является таким соединением, как показано ниже, при этом волнистая линия указывает на сайт присоединения линкера
или его фармацевтически приемлемой солью. Иллюстративный линкер является таким соединением, как показано ниже, при этом волнистая линия указывает на сайт присоединения к лекарственному средству и антитело связано через малеимидную группу
Иллюстративные конъюгаты антитело-лекарственное средство на основе РВЭ включают конъюгат антитело-лекарственное средство, приведенный ниже, в котором Ат представляет собой антитело, опи-
или его фармацевтически приемлемую соль. Нагрузка лекарственного средства представлена индексом р, числом молекул лекарственного линкера на антитело. В зависимости от контекста р может представлять собой среднее число молекул лекарственного линкера на антитело, также называемое средней нагрузкой лекарственного средства. Переменная р находится в диапазоне от 1 до 20 и предпочтительно от 1 до 8. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления, если р представляет собой среднюю нагрузку лекарственного средства, р находится в диапазоне от примерно 2 до примерно 5. В некоторых вариантах осуществления р составляет примерно 2, примерно 3, примерно 4 или примерно 5. В некоторых аспектах антитело конъюгировано с лекарственным линкером через атом серы остатка цистеина, который введен в антитело генно-инженерными методами. В некоторых аспектах остаток цистеина введен в антитело в положении 239 (1дО1) согласно индексу ЕС (по Кабату, 8едиепсе§ о£ Рго1ет§ о£ 1шшипо1о£1са1 ИЯегеЛ (Иайопа1 1п8ЙШ1е8 о£ 11еаНИ, ВеШезба, МБ, 1987 и 1991)).
VI. Другие антитела к С1)33.
Как и гуманизированные формы антител т21112, описанные выше, другие антитела, связывающиеся с внеклеточным доменом СЭ33, можно использовать в некоторых способах по изобретению, в частности, для лечения рака. Химерные или венированные формы таких антител можно получать общепринятыми методами, описанными ниже.
Химерное антитело представляет собой антитело, в котором зрелые вариабельные области легкой и тяжелой цепей антитела, отличного от человеческого (например, мышиного), объединены с константными областями легкой и тяжелой цепей антитела человека. Такие антитела в значительной степени или полностью сохраняют специфичность связывания мышиного антитела и примерно на две трети состоят из человеческой последовательности.
Венированное антитело является видом гуманизированного антитела, которое сохраняет некоторые и, как правило, все из С1Ж и некоторые из остатков каркаса вариабельной области антитела, отличного от человеческого, но в котором заменены другие остатки каркаса вариабельной области, которые могут принимать участие в образовании В- или Т-клеточных эпитопов, например, экспонированные остатки (Раб1ап, Мо1. 1ттипо1. 28: 489, 1991), на остатки из соответствующих положений последовательности антитела человека. Результатом является антитело, в котором С1Ж полностью или в значительной степени происходят из антитела, отличного от человеческого, и каркасы вариабельной области антитела, отличного от человеческого, путем замен сделаны более похожими на человеческие.
Можно выбирать любое антитело, которое будет иметь специфичность в отношении тех же или перекрывающихся эпитопов, что и образцовое антитело, например антитело т2Ш2, с помощью анализа конкурентного связывания, такого как тот, что описан в разделе примеров, или иным образом. Предпочтительные антитела имеют такую же эпитопную специфичность, что и антитело т2Ш2. Специалисты в данной области способны идентифицировать эпитоп, связанный с антителом, при помощи различных методов. Например, в сканировании олигопептидов с помощью микрочипов или пепскан-анализе ис- 18 029987
пользуют библиотеку олигопептидных последовательностей из перекрывающихся и неперекрывающихся сегментов целевого антигена и тестируют их способность к связыванию интересующего антитела (см., например, Сеукеп с1 а1., ΡΝΆδ 81: 3998-4002 (1984)). Нелинейные эпитопы можно идентифицировать с использованием, например, технологии СЫР8™, разновидности олигопептидного сканирования с помощью микрочипов (см., например, Типтегтап е1 а1., Ореп Уаееше 1. 2: 56-67 (2009)). Антигенный белок также можно подвергать мутациям и затем использовать для оценки связывания интересующим антителом. Можно использовать систематический сайт-направленный мутагенез белков или можно создавать библиотеку мутаций и использовать для скрининга на связывание антитела. Библиотеки мутаций можно приобретать, например, у компании 1Шедга1 Мо1еси1аг. Можно использовать МС с заменой водород/дейтерий в амиде для идентификации эпитопов. Интересующие антигены помещают в дейтерированную воду и метят дейтронами. Затем белок расщепляют протеазой, и полученные пептидные фрагменты подвергают масс-спектрометрическому анализу. Антиген также оценивают в присутствии антитела и различия в мечении пептидных фрагментов указывают на области связывания с антителом.
VII. Терапевтическое применение.
Антитела, полученные из мышиного антитела 2Н12, например химерные или гуманизированные антитела, самостоятельно или в виде конъюгатов антител к СИ33 с лекарственным средством можно использовать для лечения рака. При некоторых формах рака наблюдают поддающиеся обнаружению количества СИ33, измеренные либо на уровне белка (например, иммуноанализом с использованием одного из иллюстративных антител) или на уровне мРНК. При некоторых формах рака наблюдают повышенные уровни СЭ33 по сравнению с доброкачественной тканью того же типа, предпочтительно от того же пациента. Типичный уровень СИ33 на клетках злокачественных опухолей, поддающихся лечению, составляет 5000-150000 молекул СИ33 на клетку, хотя лечение возможно и в случае более высоких или более низких уровней. Необязательно, уровень СИ33 при раке измеряют до проведения лечения.
Примеры форм рака, связанных с экспрессией СИ33 и поддающихся лечению, включают миелоидные заболевания, такие как острый миелоидный лейкоз (АМБ), хронический миелоидный лейкоз (СМИ), другие миелопролиферативные заболевания, включая хронический миеломоноцитарный лейкоз и хронические миелопролиферативные заболевания, острый промиелоцитарный лейкоз (АРБ), тромбоцитарный лейкоз, миелодиспластический синдром, пре-В-клеточный острый лимфобластный лейкоз (ргеВ-АКБ), пре-Т-клеточный острый лимфобластный лейкоз (ргеТ-А^), множественную миелому (ММ), заболевания тучных клеток, включая лейкоз тучных клеток и саркому тучных клеток, миелоидные саркомы, рефрактерную анемию, прелейкозный синдром, лимфоидный лейкоз или недифференцированный лейкоз. Лечение можно также применять к пациентам, которые ранее не подвергались лечению, которые невосприимчивы к общепринятым методам лечения (например, химиотерапии или препарату милотарг® (гемтузумаб озогамицин), или у которых развился рецидив после ответа на такое лечение.
Антитела к СИ33, полученные из мышиного антитела 2Н12, включая химерные антитела или гуманизированные антитела, такие как антитела 62Н12, можно использовать для лечения форм рака, при которых экспрессируется белок СИ33. В одном варианте осуществления гуманизированное антитело, полученное из мышиного антитела 2Н12, используют для лечения субъекта с СП33-положительным острым миелоидным лейкозом (АМБ). В следующем варианте осуществления антитело Ь2Н12 используют для лечения субъекта с СИ33-положительным АМБ. В другом варианте осуществления гуманизированное антитело, полученное из мышиного антитела 2Н12, используют для лечения субъекта с СИ33положительным хроническим миелоидным лейкозом (СМБ). В следующем варианте осуществления антитело Н2Н12 используют для лечения субъекта с СП33-положительныме СМБ. В другом варианте осуществления гуманизированное антитело, полученное из мышиного антитела 2Н12, используют для лечения субъекта с СИ33-положительным хроническим мнеломоноцитарным лейкозом (СММБ). В следующем варианте осуществления антитело Н2Н12 используют для лечения субъекта с СП33-положительным хроническим СММБ. В другом варианте осуществления гуманизированное антитело, полученное из мышиного антитела 2Н12, используют для лечения субъекта с СИ33-положительным лейкозом щитовидной железы. В следующем варианте осуществления антитело Н2Н12 используют для лечения субъекта с СИ33-положительным лейкозом щитовидной железы. В другом варианте осуществления гуманизированное антитело, полученное из мышиного антитела 2Н12, используют для лечения субъекта с СИ33положительным миелодиспластическим синдромом. В следующем варианте осуществления антитело Н2Н12 используют для лечения субъекта с СП33-положительным миелодиспластическим синдромом. В другом варианте осуществления гуманизированное антитело, полученное из мышиного антитела 2Н12, используют для лечения субъекта с СИ33-положительным миелопролиферативным заболеванием. В следующем варианте осуществления антитело 62Н12 используют для лечения субъекта с СИ33положительным миелопролиферативным заболеванием. В другом варианте осуществления гуманизированное антитело, полученное из мышиного антитела 2Н12, используют для лечения субъекта с СИ33положительной рефрактерной анемией. В следующем варианте осуществления антитело 62Н12 используют для лечения субъекта с СО33-положительной рефрактерной анемией. В другом варианте осуществления гуманизированное антитело, полученное из мышиного антитела 2Н12, используют для лечения субъекта с СИ33-положительным прелейкозным синдромом. В следующем варианте осуществления ан- 19 029987
титело Н2Н12 используют для лечения субъекта с СЭ33-положительным прелейкозным синдромом. В другом варианте осуществления гуманизированное антитело, полученное из мышиного антитела 2Н12, используют для лечения субъекта с СП33-положительным лимфоидным лейкозом. В следующем варианте осуществления антитело Н2Н12 используют для лечения субъекта с СЭ33 -положительным лимфоидным лейкозом. В другом варианте осуществления гуманизированное антитело, полученное из мышиного антитела 2Н12, используют для лечения субъекта с СО33-положительным недифференцированным лейкозом. В следующем варианте осуществления антитело Н2Н12 используют для лечения субъекта с СЭ33положительным недифференцированным лейкозом. В одном варианте осуществления гуманизированное антитело, полученное из мышиного антитела 2Н12, используют для лечения субъекта с СЭ33положительным пре-В-клеточным острым лимфобластным лейкозом (ргеВ-АЬЬ). В следующем варианте осуществления антитело Н2Н12 используют для лечения субъекта с СО33-положительным рге-В-АЬЬ. В одном варианте осуществления гуманизированное антитело, полученное из мышиного антитела 2Н12, используют для лечения субъекта с СП33-положительным пре-Т-клеточным острым лимфобластным лейкозом (ргеТ-АЬЬ). В следующем варианте осуществления антитело Н2Н12 используют для лечения субъекта с СЦ33-положительным ргеТ-АЬЬ. В одном варианте осуществления гуманизированное антитело, полученное из мышиного антитела 2Н12, используют для лечения субъекта с СП33-положительной множественной миеломой (ММ). В следующем варианте осуществления антитело Н2Н12 используют для лечения субъекта с СП33-положительной ММ. В одном варианте осуществления гуманизированное антитело, полученное из мышиного антитела 2Н12, используют для лечения субъекта с СЭ33положительным заболеванием тучных клеток, включая лейкоз тучных клеток и саркому тучных клеток. В следующем варианте осуществления антитело Н2Н12 используют для лечения субъекта с СЭ33положительным заболеванием тучных клеток, включая лейкоз тучных клеток и саркому тучных клеток.
Антитело к СЭ33 может быть, например, не конъюгированным или конъюгированным антителом, например конъюгатом антитела к СЭ33 с лекарственным средством. В некоторых вариантах осуществления антн-СО33 антитело может быть гуманизированным или химерным антителом 2Н12. В некоторых вариантах осуществления анти-СО33 антитело может быть антителом, которое конкурирует с мышиным, гуманизированным или химерным антителом 2Н12 за специфическое связывание с СЭ33.
Антитела к СЭ33. полученные из мышиного антитела 2Н12, включая химерные антитела или гуманизированные антитела, такие как Н2Н12, можно конъюгировать с терапевтическим средством и использовать для лечения субъектов с СЭ33 -положительными формами рака. Примеры терапевтических средств приведены в настоящем документе, включая активные терапевтические средства, например ауристатины, и высокоактивные терапевтические средства, например ΡΒΌδ. Антитело Н2Н12, конъюгированное с активным терапевтическим средством, то есть конъюгат антитело Н2Н12-лекарственное средство (АОС), можно использовать для лечения субъекта с СО33-положительной формой рака. Антитело Н2Н12, конъюгированное с ауристатином, можно использовать для лечения субъекта с СЭ33положительной формой рака. Антитело Н2Н12, конъюгированное с высокоактивным терапевтическим средством, можно использовать для лечения субъекта с СО33-положительной формой рака. Антитело Н2Н12, конъюгированное с ΡΒΌ, можно использовать для лечения субъекта с СО33-положительной формой рака.
Некоторые раковые клетки развивают устойчивость к терапевтическому средству после возрастания экспрессии белка, который увеличивает отток лекарственного средства из раковой клетки. Такие белки включают Ρ-гликопротеин, белок, связанный с множественной лекарственной устойчивостью, белок, связанный с лекарственной устойчивостью рака легкого, и белок, связанный с устойчивостью рака молочной железы. Специалист в данной области способен обнаруживать устойчивость к лекарственному средству в раковых клетках. Антитела или анализы, с помощью которых обнаруживают белки, обеспечивающие отток, коммерчески доступны, например, от компаний Ρ^отеда, Мййроге, АЬсат и 81дтаЛИпсН. В одном варианте осуществления антитело, полученное из мышиного антитела 2Н12, используют для лечения субъекта с формой рака, имеющей множественную лекарственную устойчивость, например СО33-положнтельной формой рака с множественной лекарственной устойчивостью. В другом варианте осуществления гуманизированное антитело, полученное из мышиного антитела 2Н12, используют для лечения субъекта с формой рака, имеющей множественную лекарственную устойчивость, например СО33-положнтельной формой рака с множественной лекарственной устойчивостью. В одном варианте осуществления антитело Н2Н12 используют для лечения субъекта с формой рака, имеющей множественную лекарственную устойчивость, например СО33-положнтельной формой рака с множественной лекарственной устойчивостью. В следующем варианте осуществления Н2Н12 АЭС используют для лечения субъекта с формой рака, имеющей множественную лекарственную устойчивость, например СЭ33положительной формой рака с множественной лекарственной устойчивостью. В другом варианте осуществления антитело Н2Н12, конъюгированное с высокоактивным терапевтическим средством, используют для лечения субъекта с формой рака, имеющей множественную лекарственную устойчивость, например СО33-положительной формой рака с множественной лекарственной устойчивостью. В другом варианте осуществления антитело Н2Н12, конъюгированное с ΡΒΌ, используют для лечения субъекта с формой рака, имеющей множественную лекарственную устойчивость, например СЭ33 -положительной формой
- 20 029987
рака с множественной лекарственной устойчивостью. В следующем варианте осуществления антитело Й2Н12, конъюгированное с ΡΒΌ, используют для лечения субъекта с СО33-положительным острым миелоидным лейкозом (ЛМЬ), имеющим множественную лекарственную устойчивость.
Гуманизированные или химерные антитела, полученные из мышиного антитела 2Н12, самостоятельно или в виде их конъюгатов с лекарственным средством, вводят в эффективном режиме, что означает дозировку, путь введения и частоту введения, которые приводят к задержке начала, снижению степени тяжести, сдерживанию дальнейшего ухудшения и/или ослаблению по меньшей мере одного признака или симптома рака. Если пациент уже страдает от рака, режим может быть назван терапевтически эффективным режимом. Если пациент имеет повышенный риск развития рака по сравнению с населением в целом, но симптомы пока отсутствуют, режим может быть назван профилактически эффективным режимом. В некоторых случаях терапевтическую или профилактическую эффективность можно наблюдать у отдельных пациентов относительно исторических контролей или прошлого опыта у того же пациента. В других случаях терапевтическую или профилактическую эффективность можно демонстрировать в доклиническом или клиническом испытании в популяции получающих лечение пациентов относительно контрольной популяции не получающих лечение пациентов.
Иллюстративные дозировки для моноклонального антитела составляют от 0,1 до 50 мг/кг массы тела пациента, более конкретно, от 1 до 30 мг/кг, от 1 до 20 мг/кг, от 1 до 15 мг/кг, от 1 до 12 мг/кг или от 1 до 10 мг/кг, или от 2 до 30 мг/кг, от 2 до 20 мг/кг, от 2 до 15 мг/кг, от 2 до 12 мг/кг или от 2 до 10 мг/кг, или от 3 до 30 мг/кг, от 3 до 20 мг/кг, от 3 до 15 мг/кг, от 3 до 12 мг/кг или от 3 до 10 мг/кг. Иллюстративные дозировки для конъюгатов моноклонального антитела с активным лекарственным средством, например ауристатинами, составляют от 1 до 7,5 мг/кг, или от 2 до 7,5 мг/кг, или от 3 до 7,5 мг/кг массы тела пациента или 0,1-20, или 0,5-5 мг/кг массы тела (например, 0,5, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 мг/кг) или 10-1500 или 200-1500 мг в виде фиксированной дозы. Иллюстративные дозировки для конъюгатов моноклонального антитела с высокоактивным лекарственным средством, например ΡΒΌ, составляют от 1,0 мкг/кг до 1,0 мг/кг, или от 1,0 до 500,0 мкг/кг массы тела субъекта. В некоторых способах пациенту вводят антитело или АЭС каждые две, три или четыре недели. Дозировка зависит от частоты введения, состояния пациента и ответа на предыдущее лечение, если таковое применялось, от того, является ли лечение профилактическим или терапевтическим, и является ли заболевание острым или хроническим в числе прочих факторов.
Введение может быть парентеральным, внутривенным, пероральным, подкожным, внутриартериальным, интракраниальным, интратекальным, внутрибрюшинным, местным, интраназальным или внутримышечным. Введение может также производиться непосредственно в опухоль. Введение в системный кровоток путем внутривенной или подкожной инъекции является предпочтительным. Внутривенное введение может быть, например, путем инфузии на протяжении периода времени, например 30-90 мин, или путем однократной болюсной инъекции.
Частота введения зависит от периода полураспада антитела или конъюгата антитело-лекарственное средство в системе кровообращения, состояния пациента и пути введения, среди прочих факторов. Частота введения может быть раз в сутки, раз в неделю, раз в месяц, раз в квартал или с нерегулярными интервалами в зависимости от изменений состояния пациента или прогрессирования рака, который подвергают лечению. Типичная частота для внутривенного введения составляет от двух раз в неделю до одного раза в квартал в непрерывном курсе лечения, хотя введение также может быть более частым или менее частым.
Другая типичная частота для внутривенного введения может быть от одного раза в неделю до одного раза в месяц в непрерывном курсе лечения, хотя введение также может быть более частым или менее частым. Для подкожного введения типичная частота дозирования составляет от одного раза в сутки до одного раза в месяц, хотя введение также может быть более частым или менее частым.
Число вводимых доз зависит от природы рака (например, проявляющихся острых или хронических симптомов) и от реакции заболевания на лечение. Для острых заболеваний или обострений хронического заболевания от 1 до 10 доз часто бывает достаточно. Иногда одной болюсной дозы, необязательно в виде разделенных доз, бывает достаточно для острого заболевания или обострения хронического заболевания. Лечение можно повторять в случае рецидива острого заболевания или обострения. В случае хронических заболеваний антитело можно вводить с регулярными интервалами, например еженедельно, раз в две недели, ежемесячно, ежеквартально, каждые шесть месяцев в течение по меньшей мере 1, 5 или 10 лет, или на протяжении всей жизни пациента. Фармацевтические композиции для парентерального введения предпочтительно являются стерильными и практически изотоническими и произведенными в соответствии с требованиями ΟΜΡ. Фармацевтические композиции могут быть предоставлены в стандартной лекарственной форме (то есть в виде дозы для однократного введения). Фармацевтические композиции можно формулировать с использованием одного или более физиологически приемлемых носителей, разбавителей, эксципиентов или вспомогательных средств. Препарат зависит от выбранного пути введения. Для инъекции антитела можно формулировать в водных растворах, предпочтительно в физиологически совместимых буферах, таких как раствор Хэнка, раствор Рингера или физиологический солевой раствор, или ацетатный буфер (для уменьшения дискомфорта в месте инъекции). Раствор может содержать вспо- 21 029987
могательные средства, такие как суспендирующие, стабилизирующие и/или диспергирующие вещества. Альтернативно, антитела могут находиться в лиофилизированной форме для восстановления в соответствующем растворителе, например стерильной апирогенной воде, перед использованием. Концентрация антитела в жидком препарате может составлять, например, 0,01-10 мг/мл, например 1,0 мг/мл.
Лечение антителами по изобретению можно комбинировать с химиотерапией, облучением, лечением стволовыми клетками, хирургическими операциями и другими методами лечения, эффективными против заболевания, которое подвергают лечению. Полезные классы других средств, которые можно вводить с гуманизированными антителами к С'.П33. включают, например, антитела к другим рецепторам, экспрессированным на раковых клетках, антитубулиновые средства (например, ауристатины), средства, связывающиеся с малой бороздкой ДНК (например, ΡΒΌδ), ингибиторы репликации ДНК, алкилирующие средства (например, комплексы платины, такие как цисплатин, моно(платина), бис(платина) и трехъядерные комплексы платины, а также карбоплатин), антрациклины, антибиотики, антифолаты, антиметаболиты, сенсибилизаторы химиотерапии, дуокармицины, этопозиды, фторированные пиримидины, ионофоры, лекситропсины, нитрозомочевину, платинолы, предварительно формирующие соединения, антиметаболиты пурина, пуромицины, сенсибилизаторы облучения, стероиды, таксаны, ингибиторы топоизомеразы, алкалоиды барвинка и тому подобное.
Лечение антителом, полученным из мышиного антитела 2Н12, например химерным антителом, гуманизированным антителом или антителом Й2Н12, необязательно в сочетании с любым из других средств или режимов, описанных выше, в чистом виде или в виде конъюгата антитело-лекарственное средство, может увеличивать среднюю выживаемость без прогрессирования или общий срок выживания пациентов с раком (например, АЬЬ, СМЬ, СММЬ), особенно в случае рецидивирующих или невосприимчивых к лечению форм, по меньшей мере на 30 или 40%, но предпочтительно на 50, 60-70 или даже 100% или более, по сравнению с таким же лечением (например, химиотерапией), но без антител, полученных из мышиного антитела 2Н12, в чистом виде или в виде конъюгата антитело-лекарственное средство. Дополнительно или альтернативно, лечение (например, стандартная химиотерапия), включающее антитело, полученное из мышиного антитела 2Н12, в чистом виде или в виде конъюгата антителолекарственное средство, может увеличивать показатель полного ответа, показатель частичного ответа или частоту объективных ответов (полный+частичный) пациентов с опухолями по меньшей мере на 30 или 40%, но предпочтительно на 50, 60-70 или даже 100% или более, по сравнению с таким же лечением (например, химиотерапией), но без антител, полученных из мышиного антитела 2Н12.
Как правило, в клиническом испытании (например, испытании фазы II, фазы ΙΙ/ΙΙΙ или фазы III) вышеуказанное увеличение средней выживаемости без прогрессирования и/или показателей ответа пациентов, получающих стандартное терапевтическое лечение плюс антитело, полученное из мышиного антитела 2Н12, по сравнению с контрольной группой пациентов, получающих только стандартное терапевтическое лечение (или плюс плацебо), является статистически значимым, например, при уровне р=0,05 или 0,01 или даже 0,001. Показатели полного или частичного ответа определяют с помощью объективных критериев, обычно используемых в клинических испытаниях противораковых средств, например, входящих в список или одобренных Национальным институтом рака и/или Управлением по контролю за качеством пищевых продуктов и лекарственных средств.
VIII. Другие варианты применения.
Анти-СО33 антитела, раскрытые в настоящем документе, можно использовать для обнаружения СЭ33 в контексте клинической диагностики или лечения или в научных исследованиях. Экспрессия СЭ33 на раковых клетках указывает на то, что данная форма рака поддается лечению с помощью антител по настоящему изобретению. Антитела также можно продавать в качестве исследовательских реагентов для лабораторных исследований, направленных на обнаружение клеток, несущих СО33, и изучение их ответа на различные стимулы. В таких вариантах применения моноклональные антитела можно метить флуоресцентными молекулами, спин-мечеными молекулами, ферментами или радиоизотопами, и можно предоставлять в виде набора со всеми необходимыми реагентами для проведения анализа на СЭ33. Антитела, описанные в настоящем документе, т2Н12, а также их химерные или гуманизированные варианты, например Й2Н12, можно использовать для обнаружения экспрессии белка СЭ33 и определения того, поддается ли рак лечению с помощью АЭСк к СЭ33. В качестве примера мышиное антитело 2Н12, а также его химерные или гуманизированные варианты, например Й2Н12, можно использовать для обнаружения экспрессии СО 33 на лимфоцитах, лимфобластах, моноцитах, миеломоноцитах или других СО33-экспрессирующих клетках. Антитела можно также использовать для очистки белка СО33, например, методом аффинной хроматографии.
Любой признак, этап, элемент, вариант осуществления или аспект по изобретению можно использовать в сочетании с любым другим, если определенно не указано иное. Хотя настоящее изобретение было описано в некоторых деталях путем иллюстрации и примеров для большей наглядности и понимания, очевидно, что некоторые изменения и модификации могут быть осуществлены в пределах объема прилагаемой формулы изобретения.
Примеры
I. Получение анти-СЭ33 антител.
- 22 029987
Материалы.
Линии клеток, описанные в следующих примерах, поддерживали в культуре в соответствии с условиями, рекомендованными Американской коллекцией типовых культур (АТСС) (Маиаккак, УА) или Иеи!ксЬе §ашт1иид уои М1кгоогдатктеи ииб 2е11ки1!игеи ОтЬН (ΌδΜΖ), (ВгаииксЬетегд, Оегтаиу). Первичные клетки АМЬ поддерживали в среде Дульбекко, модифицированной по способу Исков (1МИМ), содержащей 20% инактивированной нагреванием ЭБС с добавлением 25 нг/мл каждого из гранулоцитомакрофаго-колониестимулирующего фактора (ОМ-С8Р), гранулоцитарного колониестимулирующего фактора (О-С8Р), интерлейкина-3 (1Ь-3) и фактора стволовых клеток (§СР). Реагенты для культивирования клеток приобретали у 1иуйгодеи Согр (Саг1кЬаб, СА) и цитокины приобретали у РергоТесЬ (Коску НШ, N1).
Методологии.
Анализы насыщающего связывания.
Сто тысяч СИ33-положительных клеток (клеток НЬ-60, НЕБ 92.1.7 и НЕК-293Р, трансфицированных для экспрессии СИ33 человека или яванского макака) переносили в 96-луночные планшеты. Меченые А1ехаР1иог-647 мАт к СИ33 добавляли в диапазоне концентраций от 50 нМ до 0,85 пМ, и клетки инкубировали на льду в течение 30 мин. Клетки осаждали центрифугированием, промывали 3 раза раствором РВ§+1% БСА и ресуспендировали в 125 мкл раствора РВ§+1% БСА. Флуоресценцию анализировали с использованием проточного цитометра, и процентную долю насыщенного флуоресцентного сигнала использовали для определения процента связывания и для последующего расчета кажущейся Кб.
Анализы конкурентного связывания.
Сто тысяч СИ33-положительных клеток переносили в 96-луночные планшеты и инкубировали в течение 1 ч на льду с 1 нМ мечеными А1ехаР1иог-647 т2Н12 и немечеными гибридными, гуманизированными или химерными мАт 2Н12 в возрастающих концентрациях (от 0,03 до 600 нМ). Клетки центрифугировали, промывали 3 раза РВ§ и ресуспендировали в 125 мкл раствора РВ§+1% БСА. Флуоресценцию анализировали с использованием проточного цитометра, и процентную долю насыщенного флуоресцентного сигнала использовали для определения процента связанного меченого мАт 2Н12. Значение ЕС50 экстраполировали путем подгонки данных под сигмоидную кривую доза-ответ с вариабельным углом наклона.
Анализ цитотоксичности.
Линии клеток АМЬ или первичные клетки АМЬ обрабатывали специфичными для СИ33 мАт и конъюгатами антитело-лекарственное средство (АЭС) в течение 96 ч при 37°С. В некоторых экспериментах были задействованы не связывающие антиген АИС в качестве отрицательных контролей. Жизнеспособность клеток для клеточных линий измеряли с помощью Се11й!егО1о (Рготеда Согрогайои, Маб1кои, VI) в соответствии с инструкциями изготовителя. Клетки инкубировали в течение 25 мин при комнатной температуре с реагентами Се11ШегО1о, и люминесценцию измеряли на флуоресцентном планшетном ридере Рикюи НТ (Регкш Е1тег, Vа1ίЬат, МА). Для первичных клеток АМЬ жизнеспособность измеряли методом проточной цитометрии, используя окрашивание аннексином V и пропидия иодидом. Результаты представлены в виде 1С50, концентрации соединения, необходимой для достижения 50%ного уменьшения жизнеспособности по сравнению с клетками, обработанными растворителем (контроль=100%).
Получение конъюгатов антитело-лекарственное средство.
Конъюгаты антитело-лекарственное средство из антител к СИ33 получали, как описано в И8 20050238649 и νθ 2011/130613, используя анти-СИ33 антитела, описанные в настоящем документе. Лекарственный линкер 8ОИ-1269 (тсММАР) описан в И8 20050238649 и лекарственный линкер 8ОИ-1910 описан в νθ 2011/130613. Получение цистеиновых мутантов мАт Ι§Ο1, в целом, описано в И8 20100158909. Лекарственный линкер 8ОИ-1269 конъюгировали с анти-СИ33 антителом Ь2Н12 через тиоловую группу остатка цистеина межцепочечной дисульфидной связи, и средняя нагрузка лекарственного средства составляла примерно 4 молекулы лекарственного средства на антитело. Лекарственный линкер 8ОИ-1910 конъюгировали с анти-СИ33 антителом через тиоловую группу остатка цистеина, введенного в положение 239 цепи антитела Ι§Ο1, и средняя нагрузка лекарственного средства составляла примерно 2 молекулы лекарственного средства на антитело. Антитела с остатком цистеина в положении 239 обозначены ЕС, например, Ь2Н12ЕС или Ь00ЕС.
Исследования активности ш У1уо.
Модель диссеминированного АМЬ.
Мышам линии СВ-17/1сгНкб-Ргкбс8С1И (8С1И) инокулировали внутривенно 5х106 опухолевых клеток НЬ-60 в хвостовую вену. Через день после инокуляции опухоли мышам (и=8/группу) не вводили лекарственное средство или вводили внутрибрюшинно каждые четыре дня в общей сложности две дозы анти-СИ33 мАт и АИС или не связывающихся контрольных мАт и АИС. В общей сложности две дозы милотарга вводили внутрибрюшинно каждые семь дней в качестве положительного контроля в этой чувствительной к милотаргу модели АМЬ. Животных подвергали эвтаназии, когда потеря массы тела составляла >20%, или когда у мышей наблюдали признаки диссеминированного заболевания, проявляю- 23 029987
щиеся в виде симптомов центральной нервной системы, включающих отек в краниальной области и/или паралич задних конечностей, или развитие пальпируемой диссеминированной опухолевой массы.
Подкожные модели АМЕ.
Мышам 8СГО инокулировали подкожно 5х106 опухолевых клеток ИЕ-60 или ТЕ1-а АМЕ. Рост опухолей контролировали с помощью штангенциркуля, и средний объем опухолей рассчитывали по формуле (0,5х[длинахширина2]). Когда средний объем опухолей достигал примерно 100 мм3, мышам (п=6-7/группу) не вводили лекарственное средство или вводили внутрибрюшинно одну дозу анти-СГ)33 АОС или не связывающегося контрольного АОС. Для модели ИЕ-60 мышам вводили 1У1§ человека (одна внутрибрюшинная инъекция 10 мг/кг) примерно за четыре часа до введения терапевтического антитела, чтобы свести к минимуму взаимодействие тестируемого ЛЕС с Ес-рецепторами на клетках АМЕ. Мышей подвергали эвтаназии, когда объем опухолей достигал примерно 1000 мм3. Все процедуры с животными проводили в соответствии с протоколом, одобренным институциональным комитетом по содержанию и использованию лабораторных животных, в учреждении, аккредитованном Ассоциацией по оценке и аккредитации условий содержания лабораторных животных.
Результаты.
1. Получение мышиных мАт к С1Х33.
Антитела, направленные против человеческого антигена С1Х33, получали путем иммунизации мышей Ва1Ь/с рекомбинантным слитым белком СИ33-Ес человека. Мышиные мАт 2Н12 (т2Н12) отбирали на основе аффинности связывания для СИ33 человека и СИ33 яванского макака, чтобы иметь возможность проводить доклинические испытания на приматах, отличных от человека.
2. Разработка и тестирование гуманизированных антител.
Гуманизированные антитела получали из мышиного антитела 2Н12. Были получены девять гуманизированных тяжелых цепей (НА-Н1) и семь гуманизированных легких цепей (ЕА-ЕО), содержащих обратные мутации в различных положениях (см. выравнивание последовательностей на фиг. 1А, В и табл. 1-4).
Таблица 1
Гуманизирующие мутации в вариантах тяжелой цепи
Вариант νΗ Акцепторная последовательность экзона νΗ Донорские остатки каркаса
ΗνΗΑ УН1-18 Нет
НУнВ ΥΗ1-18 Н71
ЬУнС УН1-18 Н94
ηνΗο УН1-18 Н73
ΗνΗΕ УН1-18 Н48
ηνΗΒ УН1-18 Н38, Н40
ηνΗο УН1-18 Нбб, Н67, Н69
ηνΗΗ УН1-18 Н82А, Н83
ηνΗι ΥΗ1-18 Н48, Нбб, Н67, Н69, Н71, Н94
Таблица 2
Гуманизирующие мутации в вариантах легкой цепи
Вариант Уь Акцепторная последовательность экзона Уь Донорские остатки каркаса
ЬУьА УЫ-16 Нет
ЬУьВ УЫ-16 ЪЗ
ЬУьС УЫ-16 Ъ4б
ϊΑΥϋ УЫ-16 Ъб9
ЬУьЕ УЫ-16 Ъ71
ЬУьЕ УЫ-16 Ъ20, Ъ22
ЬУьС УЫ-16 Ъ22, Ъ4б, Ъб9, Ъ71
- 24 029987
Таблица 3
Специфические мутации в вариантах тяжелой цепи 2Н12
Вариант Н38 Н40 Н48 Нбб Н67 Нб9 Н71 Н73 Н82А Н83 Н94
НА К А М К V М Т Т К К К
НВ К А М К V М А* Т К К К
НС И А М К V М Т Т К К 3*
Ηϋ И А М К V М Т К* К К К
НЕ И А I* К V М Т Т К К К
НЕ Ν* В* М К V М Т Т К К К
НС К А М К* А* ъ* Т Т К К К
НН К А М К V м Т Т 3* К
ΗΙ к А I* к* А* ъ* А* Т К к 3*
* - остатки мышиного антитела.
Таблица 4
Специфические мутации в вариантах легкой цепи 2Н12
Вариан т ЬЗ Ъ20 Ъ22 Ъ4б Ъб9 Ъ71
ЪА 0 Т Т 3 Т Е
ЪВ К* Т Т 3 Т Е
ЬС 0 Т Т Т* Т Е
ιω 0 Т Т 3 0* Е
ЪЕ 0 Т Т 3 Т Υ*
ЪЕ 0 I* Ν* 3 т Е
ЪС 0 Т Ν* Т* 0* Υ*
* - остатки мышиного антитела.
Гуманизированные тяжелые и легкие цепи объединяли в пары с химерными легкими и тяжелыми цепями (химерные цепи состояли из вариабельных областей антитела мыши и константных областей антитела человека) соответственно. Гибридные гуманизированные/химерные варианты мАт к СЭ33 тестировали на связывание с СЭ33 человека, экспрессированным на поверхности клеток НЕЬ 92.1.7 ЛМЬ (табл. 5). Тяжелые цепи НС и Ш были выбраны для дальнейшего исследования. Были экспрессированы гуманизированные антитела, представляющие пермутации гуманизированных тяжелых цепей НС и Ш и гуманизированных легких цепей ЬЛ, ЬЕ и ЬС, и определено связывание с клетками, экспрессирующими СЭ33 человека или яванского макака (супо) (табл. 6). Антитело ШЬС (2Н12 ШЬС) было выбрано в качестве гуманизированного антитела, которое наиболее близко соответствовало характеристикам связывания мышиного мАт т2Н12 к СЭ33. Антитело ШЬС получило название антитело И2Н12 (человеческое антитело 2Н12). Ко для т2Н12, Н2Н12 и Н2Н12 с мутацией 8239С (нумерация ЕС) в тяжелой цепи ^01 (называемого Н2Н12ЕС из-за введенного искусственно остатка цистеина) определяли в отношении человеческого СЭ33, экспрессированного в виде эндогенного белка в двух линиях клеток ЛМЬ или в виде рекомбинантного белка в линии клеток НЕК293Р. Ко для этих антител также определяли в отношении супо СЭ33, экспрессированного в виде рекомбинантного белка в клетках линии НЕК293Р (табл. 7).
Таблица 5
Определение ЕС 50 связывания для гибридных химерных гуманизированных вариантов мАт к СР33 на экспрессирующих СР33 клетках НЕР9217 АМР
- 25 029987
Таблица 6
Определение ЕС 50 связывания для гуманизированных вариантов мАт к С1)33 на клетках, экспрессирующих СВ33 человека и Супо СВ33
Вариант 2Н12 НЕИ9217 НЕК293Е СОЗЗ человека НЕК293Е супоСОЗЗ
ЕС50 (нМ) ЕС50 (нМ) ЕС50 (нМ)
т2Н12 5,4 11, б 30, 6
НСЬА 13, б 31,7 141,4
НСЬЕ 12,8 22,2 129, 3
НСЪС 7,9 17,9 63
ΗΙΙΑ. 12,2 26, 8 126, 4
Н1ЬЕ 11,1 19, 3 64,8
Н1ЬС 7,8 14,4 39, 9
Таблица 7
Измерения аффинности гуманизированных мАт к С1)33 в отношении клеток, экспрессирующих СВ33 человека и Супо СВ33
НЕ-60 НЕИ9217 НЕК293ЕЬСОЗЗ НЕК293Е-супо СОЗЗ
т2Н12 0,144 0,170 НВ 2,718
Н2Н12 0,208 0,161 0, 958 1,218
Н2Н12ЕС 0,253 0,204 1, 000 5, 128
НВ - не выполнено.
Противоопухолевая активность К2Н12 АВС ΐη νΐΐίο.
Цитотоксическую активность конъюгатов антитело-лекарственное средство с К2Н12 тестировали с использованием двух систем лекарственных линкеров, 801)-1269 (лекарственный линкер ауристатина) и 801 )-1910 (лекарственный линкер димера пирролобензодиазепина). Анализ цитотоксичности проводили в отношении двух СВ33-положительных линий клеток АМЬ, НЕ-60 и НЕЕ 92.1.7. с использованием неконъюгированного антитела, Е2Н12-АВС и контрольных АВС, которые не связываются с СВ33. Как показано на фиг. 2, неконъюгированные антитела Е2Н12 и Е2Н12ЕС (также называемое Е2Н12ф не имели активности в отношении какой-либо линии клеток. Аналогично, не связывающиеся контрольные АВС (Е00ЕС-80В-1910 и Е00-80В-1269) не были цитотоксическими. Напротив, Е2Н12ЕС-80В-1910 проявлял цитотоксичность в отношении НБ-60 (1С50~1,6 нг/мл) и ΙΙΗΙ. 92.1.7 (1С50~12,9 нг/мл). Активность Е2Н12ЕС-80В-1910 была сходной с таковой у милотарга, хорошо известного направленного против СВ33 конъюгата антитело-лекарственное средство, в отношении клеток НЕ-60 и более сильной при тес- 26 029987
тировании на клетках НЕЬ 92.1.7 (линия клеток с множественной лекарственной устойчивостью (МЛУ)), в отношении которых милотарг не эффективен. т2Н12-30Ц-1269 и И21112-301)-1269 были активны против клеток НЬ-60 (1С50 1,3 и 5,3 нг/мл соответственно) и в меньшей степени против НЕЬ 92.1.7 (фиг. 2). В отдельных экспериментах И21112-301)-1269 и И2Н12ЕС-300-1910 были дополнительно протестированы на расширенной панели СЭ33-положительных линий клеток АМЬ. Как видно из табл. 8, И21112-301)1269 проявлял активность против 4 из 7 линий клеток АМЕ (среднее значение 1С50 для восприимчивых линий клеток 72,8 мг/мл) и И2Н12ЕС-300-1910 обладал сильной активностью против 7 из 7 протестированных линий клеток АМЕ (среднее значение 1С50 20,4 нг/мл). И2Н12ЕС-300-1910 был более эффективным, чем милотарг, который был активен против 3 из 8 СЭ33-положительных линий клеток АМЕ. Никакой активности не наблюдали в случае, когда АЭС были протестированы против трех линий клеток, не относящихся к АМЕ и не экспрессирующих С1)33 (табл. 8). В совокупности эти данные показывают, что конъюгаты антител И2Н12 и И2Н12ЕС с лекарственным средством избирательно направлены на С1 )33-ιположительные клетки и проявляют цитотоксическую активность в отношении этих клеток.
Таблица 8
Активность конъюгатов И2Н12 с лекарственным средством и милотарга против линий клеток АМЕ ш νίΐΐΌ
Линия клеток Тип клеток Число рецепторов СОЗЗ (х103) Статус МЛУ 1С50 (нг/мл)
Η2Η12-3ΘΟ1269 Н2Н12ЕС360-1910 Милотарг
НЬ-60 АМЬ 17 - 2 1 11
и937 АМЬ 20 +/- 19 22 >1000
МУ4-11 АМЬ 18 +/- 0,1 0,1 6
КС-1 АМЬ 23 + 270 3 3
НЕЬ 92.1.7 АМЬ 19 + >1000 7 >1000
ТЕ-1 АМЬ 6 + >1000 61 >1000
ТЕ1-ос АМЬ 17 + >1000 49 >1000
Катоз ΝΗΣ 0 нт >10,000 >1000 нт
Е5-2 Карцинома яичников 0 нт >10,000 >1000 300
5ΚΟΥ-3 Карцинома яичников 0 нт >10,000 >5000 10,000
МЛУ - множественная лекарственная устойчивость; + - отток красителя > 2-раза выше фона; НТ - не тестировано.
Противоопухолевая активность И2Н12 АЭС ш νινί).
Активность И21112-301)-1269 тестировали в модели, в которой линию клеток НЕ-60 АМЕ вводили в мышей 3СГО для инициирования диссеминированного заболевания. На следующий день мыши получали антитело И2Н12, неспецифическое антитело 1\Чу в качестве отрицательного контроля, 1)21112-301)-1269, не связывающийся контрольный АЭС (ΗΒΕΊ2-30Ι )-1269) или милотарг в соответствии с уровнями доз и режимом, приведенными в табл. 9. Средняя выживаемость НЬ-60-инокулированных мышей возрастала с 22 дней в группе не получавших лечение контрольных животных или группе животных, получавших ΙΥ'Ιμ человека, до 29 дней (р=0,007), 41 дня (р=0,001) и 52 дней (р<0,001) в группах животных, получавших И2Н12 (3 мг/кг) и 1 или 3 мг/кг Й2Н12-30П-1269 соответственно (табл. 9). Й2Н12ЕС-30П-1269 продлевал срок выживания аналогично тому, что наблюдали у мышей, получавших И21112-301)-1269 (средняя выживаемость 50 и 52 дня соответственно). Милотарг также был активен в этой МЛУ-отрицательной модели; более 50% получавших милотарг мышей выживали до окончания исследования в день 99. Выживаемость мышей, получавших неконъюгированное антитело И2Н12 или не связывающийся контрольный АЭС (ΗΒΕΊ2-30Ι )-1269), была продлена на 6-7 дней по сравнению с не получавшими лечение контрольными мышами, но в гораздо меньшей степени, чем у мышей, получавших СЭ33-направленный АЭС.
- 27 029987
Таблица 9
Активность конъюгата с лекарственным средством Ь2Н12АСО-1269 в модели диссеминированного АМЕ с ксенотрансплантатом НР-60
Уровень дозы (мг/кг) Режим дозирования Средняя выживаемость (день) Р-значение
Без лечения — — 22 —
ЫУ1д 3 Каждые 4 дня, 2 дозы 22 νΑ
Н2Н12 3 Каждые 4 дня, 2 дозы 29 0,0072
Н2Н12-5СБ1269 1 Каждые 4 дня, 2 дозы 41 0,0013
Н2Н12-5СБ1269 3 Каждые 4 дня, 2 дозы 52 <0,0013
Н2Н12ЕС-ЗСБ1269 3 Каждые 4 дня, 2 дозы 50 <0,0013
ЬВи12-ЗСБ1269 3 Каждые 4 дня, 2 дозы 28 <0, 0012
Милотарг 3 Каждые 7 дней, 2 дозы НД <0, 0012
- экспериментальные против не получавших лечение;
- экспериментальные против получавших ΙιΙΥΊρ;
3 - экспериментальные против получавших ЬΒυ12-δС^-1269 (не связывающийся контрольный А1)С);
НЗ - не значимо;
НД - не достигнуто;
----не применимо;
ЬГ^С - человеческий иммуноглобулин для внутривенного введения; ЬΒυ12-δС^-1269 - не связывающийся контрольный АОС.
Активность Ь2Н12ЕСАСЭ-1910 тестировали в двух моделях АМР с подкожными ксенотрансплантатами, НБ-60 и ТР1-а. Мышам δΟΙΌ, несущим сформировавшиеся (~100 мм3) опухоли, вводили Ь2Н12ЕСАСЭ-1910 или не связывающийся контрольный АЭС (Ь00ЕСАСЭ-1910), как описано в табл. 10 для модели НБ-60 и в табл. 11 для модели ТР1-а опухолей. Лечение с помощью Ь2Н12ЕСАСЭ-1910 значительно уменьшало рост опухолей по сравнению с не получавшими лечение и получавшими не связывающийся контрольный АЭС мышами, что определяли по среднему времени, необходимому для увеличения объема опухоли в четыре раза (табл. 10 и 11). Противоопухолевая активность, наблюдаемая в случае СЭ33-направленного АЭС, была дозозависимой. В случае опухолей НБ-60 одна доза 0,1 мг/кг приводила к полной и надежной регрессии опухоли у 6 из 6 экспериментальных мышей. Более низкая доза 0,03 мг/кг приводила к полной регрессии у 1 из 6 экспериментальных мышей и увеличению времени для четырехкратного роста объема опухоли до 20 дней в сравнении с 15 днями в случае не получавших лечение мышей и мышей, которые получали аналогичные дозы не связывающегося контрольного АЭС (Ь000АСЭ-1910). В МЛУ-положительной модели опухоли ТР1-а (табл. 11) одна доза 0,3 мг/кг Ь2Н12ЕСδС^-1910 приводила к полной и надежной регрессии опухоли у 5 из 7 экспериментальных мышей. Средний срок для четырехкратного роста объема опухоли не был достигнут до окончания исследования в день 117. Напротив, у мышей, получавших аналогичные дозы не связывающегося контрольного АЭС (Ь00ЕСАСЭ-1910), опухоли четырехкратно увеличивались в объеме через 27 дней. Аналогично, средний срок для четырехкратного роста объема опухолей у мышей, получавших 0,1 или 0,03 мг/кг Ь2Н12ЕСδС^-1910, был значительно более долгим (р=0,0001), чем срок у не получавших лечение или получавших Ь00ЕСАСЭ-1910 мышей. Милотарг не был эффективен в модели опухоли ТР1-а; рост опухолей у получавших милотарг мышей не отличался от такового у мышей, не получавших лечение. В совокупности эти данные показывают, что в модели АМР с ксенотрансплантатами Ь2Н12-АЭС проявляет противоопухолевую активность, которая является дозозависимой и значительно более высокой, чем у ненаправленного АЭС.
- 28 029987
Таблица 10
Активность конъюгата с лекарственным средством Η2Ι Ι12ΙΑ-δίιΙ)-1910 в модели АМк с подкожным ксенотрансплантатом III .-60
Уровень дозы, одна доза (мг/кг) Средний срок для четырехкратного увеличения опухоли (день) Р-значение: эксперимент против СПО
Без лечения Контрольный АБС
Без лечения — 15 — — 0/6
ЫУ1д 10 15 — — 0/6
Н2Н12ЕС5СБ-1910 0,1 НД 0,0005 0,0005 6/6
Н2Н12ЕС56ϋ-1910 0, 03 20 0,0005 0,0016 1/6
Н00ЕС-5СБ1910 0,1 17 0, 009 0/6
Н00ЕС-5СБ1910 0, 03 15 НЗ 0/6
НЗ - не значимо;
НД - не достигнуто;
----не применимо;
ΙιΙΥΊίι - человеческий иммуноглобулин для внутривенного введения (введен за 4 ч до введения ЛОС);
1ι00Η(''-δίιΙ)-1910 - не связывающийся контрольный АОС;
СПО - стойкий полный ответ (не поддающаяся измерению опухоль при завершении исследования в день 50).
Таблица 11
Активность конъюгата с лекарственным средством Ε2Η12Ε^δΟΌ-1910 в модели АМЬ с подкожным ксенотрансплантатом ТЕ1-а
Уровень дозы, одна доза (мг/кг) Средний срок для четырехкратного увеличения опухоли (день) Р-значение: эксперимент против СПО
Без лечения Контрольный АБС
Без лечения — 20 — — 0/7
Н2Н12ЕС5СБ-1910 0,3 НД 0,0001 0,0001 5/7
Н2Н12ЕС500-1910 0,1 51 0,0001 0,0001 0/7
Н2Н12ЕСЗСО-19Ю 0, 03 32 0,0001 0,0001 0/7
НООЕС-5СО1910 0,3 27 0, 001 0/7
НООЕС-5СО1910 0,1 23 0, 03 0/7
НООЕС-5СО1910 0, 03 22 0, 05 0/7
Милотарг 1 21 НЗ — 0/7
НЗ - не значимо;
НД - не достигнуто;
----не применимо;
1ι00Η('’-δίιΙ)-1910 - не связывающийся контрольный АОС;
СПО - стойкий полный ответ (не поддающаяся измерению опухоль при завершении исследования в день 117).
- 29 029987
Список последовательностей
3Εζ) Ю N0:1, легкая цепь 2Н12 мыши
01КМТ<25Р55МУА5ЬСЕКУ11НСКА5<201Н5УЬ5№Е<2<2КР6К5РКТЫУКАККЬУ06УР5КЕ565656<20У5ЬТ15 ЗЬЕУЕОМС1УУСЬОУОЕЕРЬТЕСАСТКЬЕЬК
3Εζ) Ю N0:2, 2Н12 ЬА
О1<2МТ<23РЗЗЬЗАЗУСОКУТ1ТСКАЗ<2О1НЗУЬ31лГЕ<2<2КРеКАРКЗЫУКАНКЬУ0еУРЗ
КЕзезезетоЕтьт13зь<2РЕОЕАТУУСИ2УОЕЕРЬТЕеееткУЕ1к
3Εζ) Ю N0:3, 2Н12 ЬВ
О1КМТ<23РЗЗЬЗАЗУСОКУТ1ТСКАЗ<2О1НЗУЬ31лГЕ<2<2КРеКАРКЗЫУКАНКЬУ0еУРЗ
КЕзезезетоЕтьт13зь<2РЕОЕАТУУСИ2УОЕЕРЬТЕеееткУЕ1к
3Εζ) Ю N0:4, 2Н12 ЬС
О1<2МТ<23РЗЗЬЗАЗУСОКУТ1ТСКАЗ<2О1НЗУЬ31лГЕ<2<2КРеКАРКТЫУКАНКЬУ0еУРЗ
КЕЗезезеТОЕТЬТ133Ы2РЕОЕАТУУСЫ2УОЕЕРЬТЕСееТКУЕ1К
3Εζ) Ю N0:5, 2Н12 ЬО
О1<2МТ<23РЗЗЬЗАЗУСОКУТ1ТСКАЗ<2О1НЗУЬ31лГЕ<2<2КРеКАРКЗЫУКАККЬУ0еУРЗ
КЕЗезезе<2ОЕТЬТ133Ы2РЕОЕАТУУСЫ2УОЕЕРЬТЕСееТКУЕ1К
3Εζ) Ю N0: б, 2Н12 ЬЕ
О1<2МТ<23РЗЗЬЗАЗУСОКУТ1ТСКАЗ<2О1НЗУЬ31лГЕ<2<2КРеКАРКЗЫУКАККЬУ0еУРЗ
КЕЗезезеТОУТЬТ133Ы2РЕОЕАТУУСЫ2УОЕЕРЬТЕСееТКУЕ1К
3Εζ) Ю N0:7, 2Н12 ЬЕ
О1<2МТ<23РЗЗЬЗАЗУСОКУЫНСКАЗ<2О1НЗУЬ31лГЕ<2<2КРеКАРКЗЫУКАККЬУ0еУРЗ
КЕЗСЗСЗСТОЕТЬПЗЗЬОРЕОЕАТУУСЬОУОЕЕРЬТЕСССТКУЕТК
3Εζ) Ю N0:8, 2Н12 ЬС
О1<2МТ<23РЗЗЬЗАЗУСОКУТ1НСКАЗ<2О1НЗУЬ31лГЕ<2<2КРеКАРКТЫУКАККЬУ0еУРЗ
КЕЗезезе<2ОУТЬТ133Ы2РЕОЕАТУУСЫ2УОЕЕРЬТЕСееТКУЕ1К
3Εζ) Ю N0:9 Тяжелая цепь 2Н12 мыши
1 <2У<2Ь<2<23СРЕ ЬУКРСТЕУК1 ЗСКАЗСУТЕТ ΝΥ0ΙΝ№νΝ<2Κ РС<2СЬЕШС№ 1УРС0СЗТКУ 61 ЫЕКЕКАКАТЬ ТАОКЗЗЗТАУ ЫЗЬЫНЬТЗЕЫ ЗАУУЕСАЗСУ Е0АМ0У№С<2С ТЗУТУЗЗ
3Εζ) Ю N0:10 2Н12 НА
1 <2У<2ЬУ<23САЕ УККРСАЗУКУ ЗСКАЗСУТЕТ ΝΥϋΙΝΙ/ίνΚΟΑ РСОСЬЕЧМСЧ ЬУРСОСЗТКУ 61 ΝΕΚΕΚΑΚνΤΜ ТТОТЗТЗТАУ МЕЬКЗЬКЗОО ТАУУУСАКСУ ΕϋΑΜϋΥΙ/ίΟΟΟ ТТУТУЗЗ
3Εζ) Ю N0:11 2Н12 НВ
1 <2У0ЬУ05САЕ УККРСАЗУКУ ЗСКАЗСУТЕТ ΝΥϋΙΝΝνΚΟΑ РС2СЬЕ№МС№ ЬУРСОСЗТКУ 61 ΝΕΚΕΚΑΚνΤΜ ТАОТЗТЗТАУ МЕЬКЗЬКЗОО ТАУУУСАКСУ ΕϋΑΜϋΥΙ/ίΟΟΟ ТТУГУЗЗ
ЗЕ<2 Ю N0:12 2Н12 НС
1 <2У<2ЬУ<23САЕ УККРСАЗУКУ ЗСКАЗСУТЕТ ΝΥΌΙΝΙ/ίνΚζΙΑ РС<2СЬЕ1лМе1лГ 1УРСЬСЗТКУ 61 ΝΕΚΕΚΑΚνΤΜ ТТОТЗТЗТАУ МЕЬКЗЬКЗОО ТАУУУСАЗСУ Е0АМ0У№С<2С ТТУГУЗЗ
ЗЕ<2 Ю N0: 13 2Н12 ΗΌ
1 С>У(2ЬУ(23ОАЕ УККРСАЗУКУ ЗСКАЗСУТЕТ ΝΥΌΙΝΙ/ίνΚζΙΑ РСОСЬЕИМСИ ЬУРСОСЗТКУ 61 ΝΕΚΕΚΑΚνΤΜ ΤΤΌΚ3Τ3ΤΑΥ МЕЬКЗЬКЗОО ТАУУУСАКСУ Е0АМ0У№С<2С ТТУГУЗЗ
ЗЕ<2 Ю N0: 14 2Н12 НЕ
1 <2У<2ЬУ<23САЕ УККРСАЗУКУ ЗСКАЗСУТЕТ ΝΥΌΙΝΙ/ίνΚζΙΑ РС<2СЬЕШСИ 1УРСЬСЗТКУ 61 ЫЕКЕКАКУТМ ТТОТЗТЗТАУ МЕЬКЗЬКЗОО ТАУУУСАКСУ ΕϋΑΜϋΥΙ/ίΟΟΟ ТТУТУЗЗ
3Εζ) Ю N0:15 2Н12 НЕ
1 ОУОЬУОЗСАЕ УККРСАЗУКУ ЗСКАЗСУТЕТ ΝΥϋΙΝΜνΝΟΚ РС<2СЬЕСТМССТ 1УРС0СЗТКУ 61 ΝΕΚΕΚΑΚνΤΜ ТТОТЗТЗТАУ МЕЬКЗЬКЗОО ТАУУУСАКСУ ΕϋΑΜϋΥΙ/ίΟΟΟ ТТУТУЗЗ
ЗЕ2 10 N0:16 2Н12 НС
1 С>У(2ЬУ(230АЕ УККРСАЗУКУ ЗСКАЗСУТЕТ ΝΥ0ΙΝ1/ίνΚ<2Α РСОСЬЕИМСИ ΙΥΡ0003ΤΚΥ 61 ЫЕКЕКАКАТЬ ТТОТЗТЗТАУ МЕЬКЗЬКЗОО ТАУУУСАКСУ Е0АМ0УМС<2С ТТУТУЗЗ
5Е<2 Ю N0:17 2Н12 НН
1 £>У2ЬУ(250АЕ УККРСАЗУКУ ЗСКАЗСУТЕТ ΝΥ0ΙΝ№νΚ<2Α РСОСЬЕИМСИ ΙΥΡ0005ΤΚΥ 61 ЫЕКЕКАКУТМ ТТОТЗТЗТАУ МЕЬЗЗЬТЗОО ТАУУУСАКСУ Е0АМ0У№С<2С ТТУТУЗЗ
5Е<2 Ю N0:18 2Н12 ΗΙ
1 £>У2ЬУ<23САЕ УККРСАЗУКУ ЗСКАЗСУТЕТ ΝΥ0ΙΝΜνΚ<2Α Ре<2СЬЕИ1СИ 1УРС0СЗТКУ 61 ЫЕКЕКАКАТЬ ТАОТЗТЗТАУ МЕЬКЗЬКЗОО ТАУУУСАЗСУ Е0АМ0У№С<2С ТТУТУЗЗ
ЗЕ<2 Ю N0:19 С0К1 тяжелой цепи 2Н12
ΝΥϋΙΝ
5Е<2 Ю N0:20 С0К2 тяжелой цепи 2Н12
ШУРСОСЗТКУЫЕКЕКА
ЗЕО Ю N0:21 СОКЗ тяжелой цепи 2Н12
СУЕОАМРУ
ЗЕ<2 Ю N0:22 СРК! легкой цепи 2Н12
- 30 029987
ΚΑ3<2ΟΙΝ5ΥΣ3
ЗЕО Ю N0:23 ΟϋΚ2 легкой цепи 2Н12
ΚΑΝΚΙΛ/Ό
ЗЕО Ю N0:24 0ΏΚ3 легкой цепи 2Н12
ЬОУОЕЕРЬТ
ЗЕО Ю N0:25 < Константная область легкой цепи; РКТ/1; Кото зар1епз> ΤνΑΑΡ3νΕΙΕΡΡ3ΟΕ0ΕΚ3ΟΤΑ3ννθΕΕΝΝΕΥΡΚΕΑΚν01/ίΚγΐ];ΗΚΕ03ΟΝ30Ε3νΤΕ0Ο3ΚΟ3ΤΥ3Ε3 3ΤΕΤΕ3ΚΑ ОУЕКНКУУАСЕУТНОбЬЗ 3РУТКЗ ΕΝΚ6Ε0
ЗЕО Ю N0:26 ССН1-СНЗ; РКТ/1; Кото зар1епз>
АЗТКСРЗУЕРЬАРЗЗКЗТЗеСТААЬеСЬУКОУЕРЕРУТУЗШГЗеАЬТЗСУНТЕРАУЫЗЗЗСЬУЗЬЗЗУУТУРЗЗЗЬ
6Τ0ΤΥΙΟΝλΛ4ΗΚΡ3ΝΤΚνθΚΚνΕΡΚ3ΟΡΚΤΗΤΟΡΡ0ΡΑΡΕΕΕΟΟΡ3νΕΕΕΡΡΚΡΚΡΤΕΜΙ3ΚΤΡΕνΤ0ννν0ν3ΗΕ
ΡΡΕνΚΕΝ1/ίΥνθθνΕνΗΝΑΚΤΚΡΚΕΕ0ΥΝ3ΤΥΕνν3νΈΤνΕΗ0Ό1/ίΕΝΟΚΕΥΚΟΚν3ΝΚΑΕΡΑΡΙΕΚΤΙ3ΚΑΚΟ0ΡΕΕ
Ρ0νΥΤΕΡΡ3ΚΟΕΕΤΚΝ0ν3ΕΤΟΕνΚΟΕΥΡ3ΟΙΑνΕ№Ε3ΝΟ0ΡΕΝΝΥΚΤΤΡΡνΕΟ3ΟΟ3ΕΕΕΥ3ΚΕΤνΡΚ3Κ№00ΟΝ
УЕЗСЗУМНЕАЬНЫНУТОКЗЬЗЬЗРСК
ЗЕО Ю N0:27 < СН1-СНЗ тяжелой цепи (без с-концевой К); РКТ/1; Кото зарцепз> АЗТКСРЗУЕРЬАРЗЗКЗТЗССТААЬССЬУКОУЕРЕРУТУЗтаЗСАЬТЗеУНТЕРАУЕОЗЗСЬУЗЕЗЗУУТУРЗЗЗЬ ΟΤ0ΤΥΙΟΝνΝΗΚΡ3ΝΤΚνΌΚΚνΕΡΚ3ΟΟΚΤΗΤΟΡΡΟΡΑΡΕΕΕΟΟΡ3νΕΕΕΡΡΚΡΚΟΤΕΜΙ3ΚΤΡΕνΤθνννθν3ΗΕ ΟΡΕνΚΕΝ№ΥνΡθνΕνΗΝΑΚΤΚΡΚΕΕ0ΥΝ3ΤΥΚνν3νΕΤνΕΗ0ϋ№ΕΝΟΚΕΥΚΟΚν3ΝΚΑΕΡΑΡΙΕΚΤΙ3ΚΑΚΟ0ΡΚΕ Ρ<2νΥΤΕΡΡ3ΚΌΕΕΤΚΝ0ν3ΕΤΟΙΛ/ΚΟΕΥΡ3ΌΙΑνΕ1/ίΕ3ΝΟ0ΡΕΝΝΥΚΤΤΡΡνΕΟ3ΟΟ3ΕΕΕΥ3ΚΕΤνθΚ3Κ1/ί0<2ΟΝ УЕЗСЗУМНЕАЬНЫНУТОКЗЬЗЬЗРС
ЗЕО Ю ΝΟ:28<3239Ο СН1-СНЗ тяжелой цепи; РКТ/1; Ното зар1епз>
АЗТКСРЗУЕРЬАРЗЗКЗТЗССТААЬеСЬУКОУЕРЕРУТУЗШГЗСАЬТЗСУНТЕРАУЬОЗЗСЬУЗЬЗЗУУТУРЗЗЗЬ
ΘΤΟΤΥΙΟΝνΝΗΚΡ3ΝΤΚνθΚΚνΕΡΚ30ΡΚΤΗΤΟΡΡΟΡΑΡΕΕΕΟΟΡθνΕΕΕΡΡΚΡΚΡΤΕΜΙ3ΚΤΡΕνΤθνννθν3ΗΕ
ΌΡΕνΚΕΝ№ΥνΌθνΕνΗΝΑΚΤΚΡΚΕΕ0ΥΝ3ΤΥΚνν3νΕΤνΕΗ0ΌΐΛίΕΝΟΚΕΥΚΟΚν3ΝΚΑΕΡΑΡΙΕΚΤΙ3ΚΑΚΟ0ΡΚΕ
Ρ0νΥΤΕΡΡ3ΚΟΕΕΤΚΝ0ν3ΕΤΟΕνΚΟΕΥΡ3ΟΙΑνΕ№Ε3ΝΟ0ΡΕΝΝΥΚΤΤΡΡνΕΟ3ΟΟ3ΕΕΕΥ3ΚΕΤνΡΚ3Κ№00ΟΝ
УЕЗСЗУМНЕАЬНЫНУТОКЗЬЗЬЗРСК
ЗЕО Ю N0:29 <32390 СН1-СНЗ тяжелой цепи (без с-концевой К); РКТ/1; Кото
АЗТКСРЗУЕРЬАРЗЗКЗТЗеСТААЬССЬУКОУЕРЕРУТУЗШГЗОАЬТЗСУНТЕРАУЫЭЗЗСЬУЗЬЗЗУУТУРЗЗЗЬ
ΟΤ0ΤΥΙΟΝνΝΗΚΡ3ΝΤΚνθΚΚνΕΡΚ3Ο0ΚΤΗΤΟΡΡ0ΡΑΡΕΕΕΟΟΡ0νΕΕΕΡΡΚΡΚ0ΤΕΜΙ3ΚΤΡΕνΤ0ννν0ν3ΗΕ
ΟΡΕνΚΕΝ№ΥνθθνΕνΗΝΑΚΤΚΡΚΕΕ0ΥΝ3ΤΥΚνν3νΕΤνΕΗ0Ό№ΕΝΟΚΕΥΚΟΚν3ΝΚΑΕΡΑΡΙΕΚΤΙ3ΚΑΚΟ0ΡΚΕ
Ρ0νΥΤΕΡΡ3ΚΟΕΕΤΚΝ0ν3ΕΤΟΕνΚΟΕΥΡ3ΟΙΑνΕ№Ε3ΝΟ0ΡΕΝΝΥΚΤΤΡΡνΕΡ3ΡΟ3ΕΕΕΥ3ΚΕΤνΡΚ3Κ№00ΟΝ
УЕЗСЗУМНЕАЬНЫНУТОКЗЬЗЬЗРС
ЗЕО Ю N0:30 <лидерная последовательность легкой цепи мАт Ь2Н12>
ΜϋΜΚΤРАОЕЬСIЬЬШΕΡСIКС
ЗЕО Ю N0:31 <лидерная последовательность тяжелой цепи мАт Ь2Н12>
Μ01/ίΚ1/ίΙ ЕЬЕЬЬЗСТАСУНС
ЗЕО Ю N0:32 > 2Н12 ЬА
5303600353653000356060036006030656065036065635535303535603003603066563355063 5бса55аса66аа6а5с6а66б5а5сб55б66са5са5ааасса555ааа5сссс6аа5бсссб5а6с6а6а5а5с 3336353665563536555560003603355660606550356553606555аса5а666сас6с6сасса6са5с а5ссб5са5ссб5аа5а666б5саас66а66а06506650356365365356660060603036665535535553 ссаа55б55а5а6сааа
ЗЕО Ю N0:33 > 2Н12 ЬВ
5асабсаа5аб5ассса5бобссабссбса0656065036065635535аса5а5бсасса6сас6б5баа55с6а 5бса55асаббааба5сбаббб5а5сб55бббса5са5ааасса555ааа5ссссбаа5бсссб5абсбаба5а5с аааба5абб55ба5аб5555бсссабсаа55ббоб06550356553606555аса5абббсаобобсассаб0350 а5ссб5са5ссб5аа5абббб5саасббабба0650665035636536535666ссбоб03036665535535553 ссаа55б55а5абсааа
ЗЕО Ю N0:34 > 2Н12 ЬС
5асабсса5аб5ассса5бобссабссбса0656сб5саб065635535а035356сассабсасбб5баа55сба 5бса55асаббааба5сбаббб5а5сб55бббса5са5ааасса555ааа5ссссбаа5асссб5абсбаба5а5с аааба5абб55ба5аб5555бсссабсаа55ббобсб55са5б55аб06555аса5абббсаобобсассаб0350 а5ссб5са5ссб5аа5абббб5саасббабба0650665035636536535666ссбоб03036665535535553 ссаа55б55а5абсааа
ЗЕО Ю N0:35 > 2Н12 ЬЬ
5асабсса5аб5ассса5бобссабссбса0656сб5саб065635535а035356сассабсасбб5баа55сба 5бса55асаббааба5сбаббб5а5сб55бббса5са5ааасса555ааа5ссссбаа5бсссб5абсбаба5а5с аааба5абб55ба5аб5555бссса6саа55ббсбсб55са5б55абсб555саа5абббсасбсбсассабса5с а5ссб5са5ссб5аа5абббб5саасббабба0650665035636536535666ссбоб03036665535535553 ссаа55б55а5абсааа
ЗЕО Ю N0:36 > 2Н12 ЬЕ
5асабсса5аб5ассса5бобссабссбса0656сб5саб065635535а035356сассабсасбб5баа55сба 5бса55асаббааба5сбаббб5а5сб55бббса5са5ааасса555ааа5ссссбаа5бсссб5абсбаба5а5с аааба5абб55ба5аб5555бсссабсаа55ббоб06550356553606555аса5аббабаобобсассаб0350 3500650350065335366665033066366306506650356365365356660060603036665535535553 ссаа55б55а5абсааа
ЗЕО Ю N0:37 > 2Н12 ЬЕ
5асабсса5аб5ассса5бобссабссбсасб5бсб5саб065635535аса5а5бсаббабсаабб5баа55сба 5бса55асаббааба5сбаббб5а5сб55бббса5са5ааасса555ааа5ссссбаа5бсссб5абсбаба5а5с аааба5абб55ба5аб5555бсссабсаа55ббоб06550356553606555аса5абббсаобобсассаб0350
- 31
029987
адссНдсадссНдаадаННННдсаасННаННасНдсННдсадНаНдаНдадНННссНсНсасаНННддаддаддда
ссааддНддадаНсааа
5Ε0 Ю ΝΟ:38> 2Н12 ЬС
дасаНссадаНдасссадНсНссаНссНсасНдНсНдсаНсНдНаддадасададНсассаНсааННдНааддсНа
дНсаддасаННааНадсНаНННдадсНддНННсадсадааассадддааадссссНаадасссНдаНсНаНададс
аааНадаННддНадаНддддНсссаНсааддННсНсНддсадНддаНсНдддсаадаННаНасНсНсассаНсадс
адссНдсадссНдаадаННННдсаасННаННасНдсННдсадНаНдаНдадНННссНсНсасаНННддаддаддда
ссааддНддадаНсааа
ЗЕО Ю N0:39 > 2Н12 НА
саддННсадсНддНдсадНсНддадсНдаддНдаадаадссНддддссНсадНдааддНсНссНдсааддсННсНд
дННасассНННассааННаНдаНаНаааННдддНдадасаддссссНддасаадддсННдадНддаНдддаНддаН
ННаНссНддадаНддНадНассаааНаНааНдадаааННсааддссададНсассаНдассасадасасаНссасс
адсасадссНасаНддадсНдаддадссНдадаНсНдаНдасасадсНдНдНаННасНдНдсНададдаНаНдаад
аНдсНаНддасНасНдддддсаадддассасадНсасадНсНссНса
ЗЕО Ю N0:40 > 2Н12 НВ
саддННсадсНддНдсадНсНддадсНдаддНдаадаадссНддддссНсадНдааддНсНссНдсааддсННсНд
дННасассНННассааННаНдаНаНаааННдддНдадасаддссссНддасаадддсННдадНддаНдддаНддаН
ННаНссНддадаНддНадНассаааНаНааНдадаааННсааддссададНсассаНдасадсНдасасаНссасс
адсасадссНасаНддадсНдаддадссНдадаНсНдаНдасасадсНдНдНаННасНдНдсНададдаНаНдаад
аНдсНаНддасНасНдддддсаадддассасадНсасадНсНссНса
ЗЕО Ю N0:41 > 2Н12 НС
саддННсадсНддНдсадНсНддадсНдаддНдаадаадссНддддссНсадНдааддНсНссНдсааддсННсНд
дННасассНННассааННаНдаНаНаааННдддНдадасаддссссНддасаадддсННдадНддаНдддаНддаН
ННаНссНддадаНддНадНассаааНаНааНдадаааННсааддссададНсассаНдассасадасасаНссасс
адсасадссНасаНддадсНдаддадссНдадаНсНдаНдасасадсНдНдНаННасНдНдсННсНддаНаНдаад
аНдсНаНддасНасНдддддсаадддассасадНсасадНсНссНса
ЗЕО Ю N0:42 > 2Н12 Ηϋ
саддННсадсНддНдсадНсНддадсНдаддНдаадаадссНддддссНсадНдааддНсНссНдсааддсННсНд
дННасассНННассааННаНдаНаНаааННдддНдадасаддссссНддасаадддсННдадНддаНдддаНддаН
ННаНссНддадаНддНадНассаааНаНааНдадаааННсааддссададНсассаНдассасадасаадНссасс
адсасадссНасаНддадсНдаддадссНдадаНсНдаНдасасадсНдНдНаННасНдНдсНададдаНаНдаад
аНдсНаНддасНасНдддддсаадддассасадНсасадНсНссНса
ЗЕО Ю N0:43 > 2Н12 НЕ
СаддННсадсНддНдсадНсНддадсНдаддНдаадаадссНддддссНсадНдааддНсНссНдсааддсННсНд
дННасассНННассааННаНдаНаНаааННдддНдадасаддссссНддасаадддсННдадНддаННддаНддаН
ННаНссНддадаНддНадНассаааНаНааНдадаааННсааддссададНсассаНдассасадасасаНссасс
адсасадссНасаНддадсНдаддадссНдадаНсНдаНдасасадсНдНдНаННасНдНдсНададдаНаНдаад
аНдсНаНддасНасНдддддсаадддассасадНсасадНсНссНса
ЗЕО Ю ΝΟ:44> 2Н12 НЕ
саддННсадсНддНдсадНсНддадсНдаддНдаадаадссНддддссНсадНдааддНсНссНдсааддсННсНд
дННасассНННассааННаНдаНаНаааННдддНдаассададдссНддасаадддсННдадНддаНдддаНддаН
ННаНссНддадаНддНадНассаааНаНааНдадаааННсааддссададНсассаНдассасадасасаНссасс
адсасадссНасаНддадсНдаддадссНдадаНсНдаНдасасадсНдНдНаННасНдНдсНададдаНаНдаад
аНдсНаНддасНасНдддддсаадддассасадНсасадНсНссНса
ЗЕО Ю N0:45 > 2Н12 НС
саддННсадсНддНдсадНсНддадсНдаддНдаадаадссНддддссНсадНдааддНсНссНдсааддсННсНд
дННасассНННассааННаНдаНаНаааННдддНдадасаддссссНддасаадддсННдадНддаНдддаНддаН
ННаНссНддадаНддНадНассаааНаНааНдадаааННсааддссааддсНасссНдассасадасасаНссасс
адсасадссНасаНддадсНдаддадссНдадаНсНдаНдасасадсНдНдНаННасНдНдсНададдаНаНдаад
аНдсНаНддасНасНдддддсаадддассасадНсасадНсНссНса
ЗЕО Ю N0:46 > 2Н12 НН
саддННсадсНддНдсадНсНддадсНдаддНдаадаадссНддддссНсадНдааддНсНссНдсааддсННсНд
дННасассНННассааННаНдаНаНаааННдддНдадасаддссссНддасаадддсННдадНддаНдддаНддаН
ННаНссНддадаНддНадНассаааНаНааНдадаааННсааддссададНсассаНдассасадасасаНссасс
адсасадссНасаНддадсНдадсадссНдассНсНдаНдасасадсНдНдНаННасНдНдсНададдаНаНдаад
аНдсНаНддасНасНдддддсаадддассасадНсасадНсНссНса
ЗЕО Ю N0:47 > 2Н12 ΗΙ
саддННсадсНддНдсадНсНддадсНдаддНдаадаадссНддддссНсадНдааддНсНссНдсааддсННсНд
дННасассНННассааННаНдаНаНаааННдддНдадасаддссссНддасаадддсННдадНддаННддаНддаН
ННаНссНддадаНддНадНассаааНаНааНдадаааННсааддссааддсНасссНдасадсНдасасаНссасс
адсасадссНасаНддадсНдаддадссНдадаНсНдаНдасасадсНдНдНаННасНдНдсННсНддаНаНдаад
аНдсНаНддасНасНдддддсаадддассасадНсасадНсНссНса
3Εζ) Ю N0:48<константная область легкой цепи;ДНК; Ното заргепз>
асддНддсНдсассаНсНдНсННсаНсННсссдссаНсНдаНдадсадННдаааНсНддаасНдссНсНдННдНдН
дссНдсНдааНаасННсНаНсссадададдссааадНасадНддааддНддаНаасдсссНссааНсдддНаасНс
ссаддададНдНсасададсаддасадсааддасадсассНасадссНсадсадсасссНдасдсНдадсааадса
дасНасдадааасасааадНсНасдссНдсдаадНсасссаНсадддссНдадсНсдсссдНсасааададсННса
асаддддададНдН
ЗЕО Ю N0:49 ССН1-СНЗ; ДНК; Ното заргепз>
дсНадсассаадддсссаНсНдНсННсссссНддсасссНссНссаададсассНсНдддддсасадсНдсссНдд дсНдссНддНсааддасНасННсссНдаассНдНдасадНдНссНддаасНсаддсдсссНдассадсддсдНдса сассННсссддсНдНссНасадНссНсаддасНсНасНсссНсадсадсдНддНдассдНдсссНссадсадсННд ддсасссадассНасаНсНдсаасдНдааНсасаадсссадсаасассааддНддасаадааадННдадсссаааН сННдНдасаааасНсасасаНдсссассдНдсссадсассНдаасНссНддддддассдНсадНсННссНсННссс
- 32 029987
00033330003355^^00503555160500055^^0551159^^516505655^99^99^917939^3055151 5а 000(15355^ саз5'Ы1сззс1155'Ьасд'Ьддас55сд'Ьдда55'Ьдса113з115ссзз5асззз5СС5С55даддадс 35(130330350305(13005(1511551103505110011030051100115030035530115501153311550335535113033 5(1503355(10(1003303335000110003500000311053533330031101100333500333555035000053533 0030355(15(1303000(15000003110005553115350115300335330035511035001153001150011551103335 50(1(10(131100035053031105005115535115553535033115550350055353303301130335300305001100 05(150(15530(1005305501100111101111001101130350335011030051155303353503551155035035555330 5(10(1(101103115011005115311503115355011011503033003011303030353353500110110001151101100555113
зэ
5Εζ) Ю N0:50 ССН1-СНЗ (без с-концевой К); ДНК; йото заргепзУ
50(1350300335550003(10(151101111000001155030001100110033535030011011555550303501150001155 50(1500(155(1033553011301111000115330011511530351151100115533011035505000115300350550511503 0300(1(1000550(151100113035110011035530110113011000110350350511551153005115000110035035011115 5503 00035300(13 03(10(15033 05(1533(10303350003503303003355(1553 03353335(1(1535000333(1 0(1(15(153 сззззсб 030303(150003005(15000350300(153301100115555553005110351101111001101111 ссс сссззззсссзз55зсзссс1103(153(10(10005530000(15355(103 03(1505(155(1551155305115350030533 5а 000(15355(1033511110330(155(13 05(1553 05505(155355(1503(133115003353033350050555355350 Э5(1асааса5сас511асс5115115511са5с511сс11сасс511сс115сасса55ас1155с115аа1155саа55а511асаа 5(1503355(1 об ссаасааа5ссс1!ссса5ссссса1!с5а5аааасса1! об ссааа5ссааа555са5сссс5а5аа оса0355656асасссб5сссссабссс555аб5а5сб5ассаа5аасса55бса5ссб5ассб5ссб55бсааа5 5066063600035053036050056553565553535033655503500553533033063033530030500600 0565065530600530550600660660060630350335060300565530335350355655035035555330 5бс66с6саб5с6сс5б5аб5саб5а55с6сб5сасаассас6асасаса5аа5а5сс6с6сссб5бс6сс555б
5Е<2 Ю N0:51 <52390 СН1-СНЗ; ДНК; искусственная>
5сба5сассаа555сссаб0656сббсссссб55саособссбссаа5а5сассб06555550а035065000655 5065006556саа55аобас66сссб5аа006565а0356560065533060355050006530035055056503 са0066000550656собаса5бссбса55аобобаобособ0350350565565300565000600350350665 55сассса5асобасабсб5саас5б5аабсасаа5ссса5саасассаа55б55асаа5ааа5бб5а5сссаааб 066565асаааас6сасасаб5сссасс5б5ссса5сассб5аас6006555555а00565656066006066ссс сссаааасссаа55асаособсаб5абоб00055а0000653556са036505655655655а0565350030533 5асссб5а55бсаа5б6саа06556а05655а05505655355650363365003353033350050555355350 а5басааса5сас5басс5б5б55бса5с5бсс6сасс5бссб5сасса55асб55сб5ааб55саа55а5басаа 5б5саа55бс6ссаасааа5ссс6ссса5ссссса6с5а5аааасса6с6ссааа5ссааа555са5сссс5а5аа оса0355656асасссб5ссссса6000555365350653ссаа5аасса55бса5ссб5ассб5ссб55бсааа5 5066с6а6ссса5С5асабС5сс5б55а5б555а5а5сааб555са5сс55а5аасаас6асаа5ассас5сс6сс 0565065530600530550600660660060630350335060300565530335350355655035035555330 56сббсбсаб5сбсс5б5аб5саб5а55сбсб5сасаассасбасасаса5аа5а5ссбоб00065606005556а
аа
5Е<2 Ю N0:52 <32390 СН1-СНЗ (без с-концевой К); ДНК; искусственная>
Ссба5сассаа555сссаб0656сббсссссб55саособссбссаа5а5сассб06555550а035065000655 5065006556саа55аобас66сссб5аа006565а035656ссб55аас6са55с5сссб5асса5с55с5б5са 030066000550656006303560060355306обасбособ0350350565565300565000600350350665 55сассса5асс6аса6сб5саас5б5аа6сасаа5ссса5саасассаа55б55асаа5ааа5бб5а5сссааа6 066565асаааас6сасасаб5сссасс5б5ссса5сассб5аа06006555555а00565656066006066ссс сссаааасссаа55асаособсаб5а6с600055а0000653556са036505655655655аО5б5а5ссас5аа 5а000653556саа5ббсаа06556а05655а05505655355650363365003353033350050555355350 а5басааса5сас5басс5б5б55бса5с5бсс6сасс5бссб5сасса55асб55сб5ааб55саа55а5басаа 5б5саа55бс6ссаасааа5ссс6ссса5ссссса6с5а5аааасса6с6ссааа5ссааа555са5сссс5а5аа сса0355656а03000650000036000555365350653003353300355603500653006500655603335 5сббсбабссса5с5асаб050056553565553535033655503500553533033обасаа5асса0500600 С5б5сб55ас6сс5ас55с6сс66с66сс6с6аса5саа5с6сасс5б55асаа5а5са55б55са5са5555аас 560660603650600565365036535506065030330030630303035335350060600065606005556
3Εζ) Ю N0:53 <лидерная последовательность легкой цепи мАт Н2Н12>
Абррасабраррассссбрсбсарбббсббррааб0665665060655666ссаррбабсааабрб
3Εζ) Ю N0:54 <лидерная последовательность тяжелой цепи мАт Н2Н12>
Аб555аб55а5аб55абсбббсббббссбссб5бс555аа0650355656ссабб5с
3Εζ) Ю N0:55 Р20138 Белок СБЗЗ, Ното заргепз
1 тр11111р11 ка5а1атбрп £κΐ5ν5θ3ν6 ν5θ5ΐον1νρ ο6££Ηρίργγ с^кηзρν1τ5ум
61 £ге5аПзг1 3ρν3Εη]<165 βν5βθ£55Γ£ г115брзгпп сз1з^багг гбп5зу££гт
121 ег5з£кузук 3ρ5ΐ3νΗν6ά. 1££тгрк1Ир 5£1ер5кзкп 1£θ3ν3Κ3θθ 55брр1£зк1
181 заар£з15рг ££1τ33ν1ϋ£ ргр5сНт5бп1 Εθ5ν^3535 ν66θΓ6ί5ΐη ν6уνρ^ηρ66
241 51£р50535к 5θ6Γ35νν1τ5 3ί5535ν£3ΐ 1а1с1сИ££ ^кбкггкаа Γ63ν5Γηά61τ
301 р££5зазрк£т 5ккзк11т5р£ е£ззсз5аар ΕνβπιοΙθθΙΙ^ аз1п£1т5тпр зкббзбеузе
361 ντ£5
3Εζ) Ю N0:56 Белок СБЗЗ, яванский макак
тρ1111ρ11^лίа5а1атс^ρ^ν^1еν^езν£ν^е51сν1νρс£££1τρνρу1τ£^ηзρν1τ5ум£^е5а^νз1с^зρνа£ηк 1с^^еν^ее£^5^£^115с^ρз^ηηсз1з^νс^а^^^с1η5зу££^тек5з£кузукз£^1зν1τν£с^1£1τ^ρ^^1^ρ5а1 άρά£τ3^1Εθ3νρΜ3θθ55Ερρί£3Μπΐ3 33ρΕ3ΐ5ΐΓΕΕ1ΐ3 3ν1ϋ6ρΓρ5ά1ΐ5Εη1Εθ5νΜρ535νΕΕθΓΕί5ΐ ηνзуаз^ηρ^6с^^£15с^53 5к^5νν^5а^55а5ν6ν11а1с1с1^£££νк£1τ^^каа^6аν5^^с^£1τρа£5ρ£ззк 1τ^ккзк11τ5а6е£з5сз5££1£νетс^ее11τуаз1η£1τ5тηρзес^£з6еузеν^£^
ЗЕ<2 Ю N0:57 Белок СБЗЗ, яванский макак
тρ1111ρ11^лίа5а1атс^ρ^ν^1еν^езν£ν^е51сν1νρс£££1τρνρу1τа^ηзρν1τ5ум£^е5а^νз1с^зρνа£ηк 1с^^еν^ее£^5^£^115с^ρз^ηηсз1з^νс^а^^^с1η5зу££^тек5з£кузукз£^1зν1τν£с^1£1τ^ρ^^1^ρ5а1 άρά£τ3^1£θ3νρΜ3θθ55£ρρί£3Μπΐ3 33ρ£3ΐ5ΐΓ££1ΐ3 3ν1ϋ6ρΓρ5ά1ΐ5£η1£θ5νΜρ535ν££θΓ£ί5ΐ ηνзуаз^ηρ^6с^^£15с^53 5к^5νν^5а^55а5ν6ν11а1с1с1^£££νк£1τ^^каа^6аν5^^с^£1τρа£5ρ£ззк 1τ^ккзк11τ5а6е£з5сз5££1£νетс^ее11τуаз1η£1τ5тηρзес^£з6еузеν^£^
- 33 029987
СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> Зибкег1апД, Мау Кипд Куап, Маигееп Зиззшап, Ьдапдо Вигке, РабгФск Леббгеу, Зсобб
<120> АНТИТЕЛА К ΟΌ33 И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ В ЛЕЧЕНИИ РАКА
<130> 057762/431172
<140> 13/804,227
<141> 2013-03-14
<150> 61/649,110
<151> 2012-05-18
<160> 57
<170> КазбЗЕ12 £ог МФпДот-’з УегзФоп 4.0
<210> 1
<211> 107
<212> РКТ
<213> Миз тизси1из
<400> 1
Азр 11е Ьуз Меб Ткг О1п Зег Рго Зег Зег Меб Туг А1а Зег Ьеи О1у
1 5 10 15
О1и Агд Уа1 11е 11е Азп Суз Ьуз А1а Зег О1п Азр 11е Азп Зег Туг
20 25 30
Ьеи Зег Тгр Рке О1п О1п Ьуз Рго О1у Ьуз Зег Рго Ьуз Ткг Ьеи 11е
35 40 45
Туг Агд А1а Азп Агд Ьеи Уа1 Азр О1у Уа1 Рго Зег Агд Рке Зег О1у
50 55 60
Зег О1у Зег О1у О1п Азр Туг Зег Ьеи Ткг 11е Зег Зег Ьеи О1и Туг
65 70 75 80
О1и Азр Меб О1у 11е Туг Туг Суз Ьеи О1п Туг Азр О1и Рке Рго Ьеи
85 90 95
Ткг Рке О1у А1а О1у Ткг Ьуз Ьеи О1и Ьеи Ьуз
100 105
<210> 2 <211>
<212>
<213>
<220>
<223> Синтезированная
107
РКТ
Искусственная
последовательность
<400> 2
Азр 1 11е О1п Меб Ткг 5 О1п Зег Рго
Азр Агд Уа1 Ткг 20 11е Ткг Суз Ьуз
Ьеи Зег Тгр 35 Рке О1п О1п Ьуз Рго 40
Туг Агд 50 А1а Азп Агд Ьеи Уа1 55 Азр
Зег Зег 10 Ьеи Зег А1а Зег Уа1 15 О1у
А1а 25 Зег О1п Азр 11е Азп 30 Зег Туг
О1у Ьуз А1а Рго Ьуз 45 Зег Ьеи 11е
О1у Уа1 Рго Зег 60 Агд Рке Зег О1у
- 34 029987
Зег О1у Зег О1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг 11е Зег Зег Ьеи О1п Рго
65 70 75 80
О1и Азр РЬе А1а ТЬг Туг Туг Суз Ьеи О1п Туг Азр О1и РЬе Рго Ьеи
85 90 95
ТЬг РЬе О1у О1у О1у ТЬг Ьуз Уа1 О1и 11е Ьуз
100 105
<210> 3
<211> 107
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтезированная
<400> 3
Азр 11е Ьуз МеЬ ТЬг О1п Зег Рго Зег Зег Ьеи Зег А1а Зег Уа1 О1у
1 5 10 15
Азр Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг Суз Ьуз А1а Зег О1п Азр 11е Азп Зег Туг
20 25 30
Ьеи Зег Тгр РЬе О1п О1п Ьуз Рго О1у Ьуз А1а Рго Ьуз Зег Ьеи 11е
35 40 45
Туг Агд А1а Азп Агд Ьеи Уа1 Азр О1у Уа1 Рго Зег Агд РЬе Зег О1у
50 55 60
Зег О1у Зег О1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг 11е Зег Зег Ьеи О1п Рго
65 70 75 80
О1и Азр РЬе А1а ТЬг Туг Туг Суз Ьеи О1п Туг Азр О1и РЬе Рго Ьеи
85 90 95
ТЬг РЬе О1у О1у О1у ТЬг Ьуз Уа1 О1и 11е Ьуз
100 105
<210> 4
<211> 107
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтезированная
<400> 4
Азр 11е О1п МеЬ ТЬг О1п Зег Рго Зег Зег Ьеи Зег А1а Зег Уа1 О1у
1 5 10 15
Азр Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг Суз Ьуз А1а Зег О1п Азр 11е Азп Зег Туг
20 25 30
Ьеи Зег Тгр РЬе О1п О1п Ьуз Рго О1у Ьуз А1а Рго Ьуз ТЬг Ьеи 11е
35 40 45
Туг Агд А1а Азп Агд Ьеи Уа1 Азр О1у Уа1 Рго Зег Агд РЬе Зег О1у
50 55 60
Зег О1у Зег О1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг 11е Зег Зег Ьеи О1п Рго
65 70 75 80
О1и Азр РЬе А1а ТЬг Туг Туг Суз Ьеи О1п Туг Азр О1и РЬе Рго Ьеи
85 90 95
ТЬг РЬе О1у О1у О1у ТЬг Ьуз Уа1 О1и 11е Ьуз
100 105
<210> 5
<211> 107
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
- 35 029987
<220>
<223> Синтезированная
<400> 5
Азр 11е О1п МеЕ ТЬг О1п Бег Рго Бег Бег Ьеи Бег А1а Бег Уа1 О1у
1 5 10 15
Азр Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг Суз Ьуз А1а Бег О1п Азр 11е Азп Бег Туг
20 25 30
Ьеи Бег Тгр РЬе О1п О1п Ьуз Рго О1у Ьуз А1а Рго Ьуз Бег Ьеи 11е
35 40 45
Туг Агд А1а Азп Агд Ьеи Уа1 Азр О1у Уа1 Рго Бег Агд РЬе Бег О1у
50 55 60
Бег О1у Бег О1у О1п Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг 11е Бег Бег Ьеи О1п Рго
65 70 75 80
О1и Азр РЬе А1а ТЬг Туг Туг Суз Ьеи О1п Туг Азр О1и РЬе Рго Ьеи
85 90 95
ТЬг РЬе О1у О1у О1у ТЬг Ьуз Уа1 О1и 11е Ьуз
100 105
<210> 6 <211> 107 <212> РКТ <213> Искусственная последовательное ть
<220>
<223> Синтезированная
<400> 6
Азр 11е О1п МеЕ ТЬг О1п Бег Рго Бег Бег Ьеи Бег А1а Бег Уа1 О1у
1 5 10 15
Азр Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг Суз Ьуз А1а Бег О1п Азр 11е Азп Бег Туг
20 25 30
Ьеи Бег Тгр РЬе О1п О1п Ьуз Рго О1у Ьуз А1а Рго Ьуз Бег Ьеи 11е
35 40 45
Туг Агд А1а Азп Агд Ьеи Уа1 Азр О1у Уа1 Рго Бег Агд РЬе Бег О1у
50 55 60
Бег О1у Бег О1у ТЬг Азр Туг ТЬг Ьеи ТЬг 11е Бег Бег Ьеи О1п Рго
65 70 75 80
О1и Азр РЬе А1а ТЬг Туг Туг Суз Ьеи О1п Туг Азр О1и РЬе Рго Ьеи
85 90 95
ТЬг РЬе О1у О1у О1у ТЬг Ьуз Уа1 О1и 11е Ьуз
100 105
<210> 7 <211> 107 <212> РКТ <213> Искусственная последовательнос ть
<220>
<223> Синтезированная
<400> 7
Азр 11е О1п МеЕ ТЬг О1п Бег Рго Бег Бег Ьеи Бег А1а Бег Уа1 О1у
1 5 10 15
Азр Агд Уа1 11е 11е Азп Суз Ьуз А1а Бег О1п Азр 11е Азп Бег Туг
20 25 30
Ьеи Бег Тгр РЬе О1п О1п Ьуз Рго О1у Ьуз А1а Рго Ьуз Бег Ьеи 11е
35 40 45
Туг Агд А1а Азп Агд Ьеи Уа1 Азр О1у Уа1 Рго Бег Агд РЬе Бег О1у
50 55 60
Бег О1у Бег О1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг 11е Бег Бег Ьеи О1п Рго
- 36 029987
65 70 75 80
О1и Азр РЬе А1а ТЬг Туг Туг Суз Ьеи О1п Туг Азр О1и РЬе Рго Ьеи
85 90 95
ТЬг РЬе О1у О1у О1у ТЬг Ьуз Уа1 О1и 11е Ьуз 100 105
<210> 8
<211> 107
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтезированная
<400> 8
Азр 11е О1п МеЬ ТЬг О1п Зег Рго Зег Зег Ьеи Зег А1а Зег Уа1 О1у
1 5 10 15
Азр Агд Уа1 ТЬг 11е Азп Суз Ьуз А1а Зег О1п Азр 11е Азп Зег Туг
20 25 30
Ьеи Зег Тгр РЬе О1п О1п Ьуз Рго О1у Ьуз А1а Рго Ьуз ТЬг Ьеи 11е
35 40 45
Туг Агд А1а Азп Агд Ьеи Уа1 Азр О1у Уа1 Рго Зег Агд РЬе Зег О1у
50 55 60
Зег С1у Зег С1у О1п Азр Туг ТЬг Ьеи ТЬг 11е Зег Зег Ьеи О1п Рго
65 70 75 80
О1и Азр РЬе А1а ТЬг Туг Туг Суз Ьеи О1п Туг Азр О1и РЬе Рго Ьеи
85 90 95
ТЬг РЬе С1у С1у С1у ТЬг Ьуз Уа1 О1и 11е Ьуз
100 105
<210> 9
<211> 117
<212> РКТ
<213> Миз тизси1из
<400> 9
О1п Уа1 О1п Ьеи О1п О1п Зег О1у Рго О1и Ьеи Уа1 Агд Рго О1у ТЬг
1 5 10 15
РЬе Уа1 Ьуз 11е Зег Суз Ьуз А1а Зег О1у Туг ТЬг РЬе ТЬг Азп Туг
20 25 30
Азр 11е Азп Тгр Уа1 Азп О1п Агд Рго О1у О1п О1у Ьеи О1и Тгр 11е
35 40 45
О1у Тгр 11е Туг Рго О1у Азр О1у Зег ТЬг Ьуз Туг Азп О1и Ьуз РЬе
50 55 60
Ьуз А1а Ьуз А1а ТЬг Ьеи ТЬг А1а Азр Ьуз Зег Зег Зег ТЬг А1а Туг
65 70 75 80
Ьеи О1п Ьеи Азп Азп Ьеи ТЬг Зег О1и Азп Зег А1а Уа1 Туг РЬе Суз
85 90 95
А1а Зег О1у Туг О1и Азр А1а МеЬ Азр Туг Тгр О1у О1п О1у ТЬг Зег
100 105 110
Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115
<210> 10
<211> 117
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтезированная
- 37 029987
<400> 10
О1п Уа1 О1п Ьеи Уа1 О1п Зег О1у А1а О1и Уа1 Ьуз Ьуз Рго О1у А1а
1 5 10 15
Зег Уа1 Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз А1а Зег О1у Туг ТЬг РЬе ТЬг Азп Туг
20 25 30
Азр 11е Азп Тгр Уа1 Агд О1п А1а Рго О1у О1п О1у Ьеи О1и Тгр МеЬ
35 40 45
О1у Тгр 11е Туг Рго О1у Азр О1у Зег ТЬг Ьуз Туг Азп О1и Ьуз РЬе
50 55 60
Ьуз А1а Агд Уа1 ТЬг МеЬ ТЬг ТЬг Азр ТЬг Зег ТЬг Зег ТЬг А1а Туг
65 70 75 80
МеЬ О1и Ьеи Агд Зег Ьеи Агд Зег Азр Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд О1у Туг О1и Азр А1а МеЬ Азр Туг Тгр О1у О1п О1у ТЬг ТЬг
100 105 110
Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115
<210> 11
<211> 117
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтезированная
<400> 11
О1п Уа1 О1п Ьеи Уа1 О1п Зег О1у А1а О1и Уа1 Ьуз Ьуз Рго О1у А1а
1 5 10 15
Зег Уа1 Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз А1а Зег О1у Туг ТЬг РЬе ТЬг Азп Туг
20 25 30
Азр 11е Азп Тгр Уа1 Агд О1п А1а Рго О1у О1п О1у Ьеи О1и Тгр МеЬ
35 40 45
О1у Тгр 11е Туг Рго О1у Азр О1у Зег ТЬг Ьуз Туг Азп О1и Ьуз РЬе
50 55 60
Ьуз А1а Агд Уа1 ТЬг МеЬ ТЬг А1а Азр ТЬг Зег ТЬг Зег ТЬг А1а Туг
65 70 75 80
МеЬ О1и Ьеи Агд Зег Ьеи Агд Зег Азр Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд О1у Туг О1и Азр А1а МеЬ Азр Туг Тгр О1у О1п О1у ТЬг ТЬг
100 105 110
Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115
12
117
РКТ
Искусственная последовательность
<210>
<211>
<212>
<213>
<220>
<223> Синтезированная
<400> 12
О1п 1 Уа1 О1п Ьеи Уа1 5 О1п Зег О1у
Зег Уа1 Ьуз Уа1 20 Зег Суз Ьуз А1а
Азр 11е Азп 35 Тгр Уа1 Агд О1п А1а 40
О1у Тгр 11е Туг Рго О1у Азр О1у
А1а О1и 10 Уа1 Ьуз Ьуз Рго О1у 15 А1а
Зег 25 О1у Туг ТЬг РЬе ТЬг 30 Азп Туг
Рго О1у О1п О1у Ьеи 45 О1и Тгр МеЬ
Зег ТЬг Ьуз Туг Азп О1и Ьуз РЬе
- 38 029987
50 55 60
Ьуз А1а Агд Уа1 ТЬг МеФ ТЬг ТЬг Азр ТЬг Зег ТЬг Зег ТЬг А1а Туг
65 70 75 80
МеФ О1и Ьеи Агд Зег Ьеи Агд Зег Азр Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Зег О1у Туг О1и Азр А1а МеФ Азр Туг Тгр О1у О1п О1у ТЬг ТЬг
100 105 110
Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115
<210> 13 <211> 117 <212> РКТ <213> Искусственная последовательно ть
<220>
<223> Синтезированная
<400> 13
О1п Уа1 О1п Ьеи Уа1 О1п Зег О1у А1а О1и Уа1 Ьуз Ьуз Рго О1у А1а
1 5 10 15
Зег Уа1 Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз А1а Зег О1у Туг ТЬг РЬе ТЬг Азп Туг
20 25 30
Азр 11е Азп Тгр Уа1 Агд О1п А1а Рго О1у О1п О1у Ьеи О1и Тгр МеФ
35 40 45
О1у Тгр 11е Туг Рго О1у Азр О1у Зег ТЬг Ьуз Туг Азп О1и Ьуз РЬе
50 55 60
Ьуз А1а Агд Уа1 ТЬг МеФ ТЬг ТЬг Азр Ьуз Зег ТЬг Зег ТЬг А1а Туг
65 70 75 80
МеФ О1и Ьеи Агд Зег Ьеи Агд Зег Азр Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд О1у Туг О1и Азр А1а МеФ Азр Туг Тгр О1у О1п О1у ТЬг ТЬг
100 105 110
Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115
14
117
РКТ
Искусственная последовательность
<210>
<211>
<212>
<213>
<220>
<223> Синтезированная
<400> 14
О1п Уа1 О1п Ьеи Уа1 О1п Зег О1у
1 5
Зег Уа1 Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз А1а
20
Азр 11е Азп Тгр Уа1 Агд О1п А1а
35 40
О1у Тгр 11е Туг Рго О1у Азр О1у
50 55
Ьуз А1а Агд Уа1 ТЬг МеФ ТЬг ТЬг
65 70
МеФ О1и Ьеи Агд Зег Ьеи Агд Зег
85
А1а Агд О1у Туг О1и Азр А1а МеФ
100
Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
А1а О1и 10 Уа1 Ьуз Ьуз Рго О1у 15 А1а
Зег 25 О1у Туг ТЬг РЬе ТЬг 30 Азп Туг
Рго О1у О1п О1у Ьеи 45 О1и Тгр 11е
Зег ТЬг Ьуз Туг 60 Азп О1и Ьуз РЬе
Азр ТЬг Зег 75 ТЬг Зег ТЬг А1а Туг 80
Азр Азр 90 ТЬг А1а Уа1 Туг Туг 95 Суз
Азр 105 Туг Тгр О1у О1п О1у 110 ТЬг ТЬг
115
- 39 029987
<210> 15
<211> 117
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтезированная
<400> 15
О1п Уа1 О1п Ьеи Уа1 О1п Зег О1у А1а О1и Уа1 Ьуз Ьуз Рго О1у А1а
1 5 10 15
Зег Уа1 Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз А1а Зег О1у Туг ТЬг РЬе ТЬг Азп Туг
20 25 30
Азр 11е Азп Тгр Уа1 Азп О1п Агд Рго О1у О1п О1у Ьеи О1и Тгр МеЬ
35 40 45
О1у Тгр 11е Туг Рго О1у Азр О1у Зег ТЬг Ьуз Туг Азп О1и Ьуз РЬе
50 55 60
Ьуз А1а Агд Уа1 ТЬг МеЬ ТЬг ТЬг Азр ТЬг Зег ТЬг Зег ТЬг А1а Туг
65 70 75 80
МеЬ О1и Ьеи Агд Зег Ьеи Агд Зег Азр Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд О1у Туг О1и Азр А1а МеЬ Азр Туг Тгр О1у О1п О1у ТЬг ТЬг
100 105 110
Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115
<210> 16
<211> 117
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтезированная
<400> 16
О1п Уа1 О1п Ьеи Уа1 О1п Зег О1у А1а О1и Уа1 Ьуз Ьуз Рго О1у А1а
1 5 10 15
Зег Уа1 Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз А1а Зег О1у Туг ТЬг РЬе ТЬг Азп Туг
20 25 30
Азр 11е Азп Тгр Уа1 Агд О1п А1а Рго О1у О1п О1у Ьеи О1и Тгр МеЬ
35 40 45
О1у Тгр 11е Туг Рго О1у Азр О1у Зег ТЬг Ьуз Туг Азп О1и Ьуз РЬе
50 55 60
Ьуз А1а Ьуз А1а ТЬг Ьеи ТЬг ТЬг Азр ТЬг Зег ТЬг Зег ТЬг А1а Туг
65 70 75 80
МеЬ О1и Ьеи Агд Зег Ьеи Агд Зег Азр Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд О1у Туг О1и Азр А1а МеЬ Азр Туг Тгр О1у О1п О1у ТЬг ТЬг
100 105 110
Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115
<210> 17
<211> 117
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтезированная
- 40 029987
<400> 17
οίη ναι о1п Ьеи Уа1 О1п Зег О1у А1а О1и Уа1 Ьуз Ьуз Рго О1у А1а
1 5 10 15
Зег Уа1 Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз А1а Зег О1у Туг ТЬг РЬе ТЬг Азп Туг
20 25 30
Азр 11е Азп Тгр Уа1 Агд О1п А1а Рго О1у О1п О1у Ьеи О1и Тгр Меб
35 40 45
О1у Тгр 11е Туг Рго О1у Азр О1у Зег ТЬг Ьуз Туг Азп О1и Ьуз РЬе
50 55 60
Ьуз А1а Агд Уа1 ТЬг Меб ТЬг ТЬг Азр ТЬг Зег ТЬг Зег ТЬг А1а Туг
65 70 75 80
Меб О1и Ьеи Зег Зег Ьеи ТЬг Зег Азр Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд О1у Туг О1и Азр А1а Меб Азр Туг Тгр О1у О1п О1у ТЬг ТЬг
100 105 110
Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115
<210> 18
<211> 117
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтезированная
<400> 18
О1п Уа1 О1п Ьеи Уа1 О1п Зег О1у А1а О1и Уа1 Ьуз Ьуз Рго О1у А1а
1 5 10 15
Зег Уа1 Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз А1а Зег О1у Туг ТЬг РЬе ТЬг Азп Туг
20 25 30
Азр 11е Азп Тгр Уа1 Агд О1п А1а Рго О1у О1п О1у Ьеи О1и Тгр 11е
35 40 45
О1у Тгр 11е Туг Рго О1у Азр О1у Зег ТЬг Ьуз Туг Азп О1и Ьуз РЬе
50 55 60
Ьуз А1а Ьуз А1а ТЬг Ьеи ТЬг А1а Азр ТЬг Зег ТЬг Зег ТЬг А1а Туг
65 70 75 80
Меб О1и Ьеи Агд Зег Ьеи Агд Зег Азр Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Зег О1у Туг О1и Азр А1а Меб Азр Туг Тгр О1у О1п О1у ТЬг ТЬг
100 105 110
Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115
<210> 19
<211> 5
<212> РКТ
<213> Миз тизси1из
<400> 19
Азп Туг Азр 11е Азп 1 5
<210> 20
<211> 17
<212> РКТ
<213> Миз тизси1из
<400> 20
- 41 029987
Тгр 11е Туг Рго О1у Азр О1у Бег ТЬг Ьуз Туг Азп О1и Ьуз РЬе Ьуз
1 5 10 15
А1а
<210> 21
<211> 8
<212> РКТ
<213> Миз тизси1из
<400> 21
О1у Туг О1и Азр А1а МеЬ Азр Туг
1 5
<210> 22
<211> 11
<212> РКТ
<213> Миз тизси1из
<400> 22
Ьуз А1а Бег О1п Азр 11е Азп Бег Туг Ьеи Бег 1 5 10
<210> 23
<211> 7
<212> РКТ
<213> Миз тизси1из
<400> 23
Агд А1а Азп Агд Ьеи Уа1 Азр 1 5
<210> 24
<211> 9
<212> РКТ
<213> Миз тизси1из
<400> 24
Ьеи О1п Туг Азр О1и РЬе Рго Ьеи ТЬг 1 5
<210> 25
<211> 106
<212> РКТ
<213> Ното зартепз
<400> 25
ТЬг Уа1 А1а А1а Рго Бег Уа1 РЬе 11е РЬе Рго Рго Бег Азр О1и С1п
1 5 10 15
Ьеи Ьуз Бег О1у ТЬг А1а Бег Уа1 Уа1 Суз Ьеи Ьеи Азп Азп РЬе Туг
20 25 30
Рго Агд О1и А1а Ьуз Уа1 С1п Тгр Ьуз Уа1 Азр Азп А1а Ьеи О1п Бег
35 40 45
О1у Азп Бег О1п О1и Бег Уа1 ТЬг О1и С1п Азр Бег Ьуз Азр Бег ТЬг
50 55 60
Туг Бег Ьеи Бег Бег ТЬг Ьеи ТЬг Ьеи Бег Ьуз А1а Азр Туг О1и Ьуз
65 70 75 80
Н1з Ьуз Уа1 Туг А1а Суз О1и Уа1 ТЬг Н1з С1п О1у Ьеи Бег Бег Рго
- 42 029987
85 90 95
Уа1 ТЬг Ьуз Зег РЬе Азп Агд О1у О1и Суз
100 105
<210> 26
<211> 330
<212> РКТ
<213> Ното зартепз
<400> 26
А1а 1 Зег ТЬг Ьуз О1у 5 Рго Зег Уа1 РЬе Рго 10 Ьеи А1а Рго Зег Зег 15 Ьуз
Зег ТЬг Зег О1у О1у ТЬг А1а А1а Ьеи О1у Суз Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг
20 25 30
РЬе Рго О1и Рго Уа1 ТЬг Уа1 Зег Тгр Азп Зег О1у А1а Ьеи ТЬг Зег
35 40 45
О1у Уа1 Н1з ТЬг РЬе Рго А1а Уа1 Ьеи О1п Зег Зег О1у Ьеи Туг Зег
50 55 60
Ьеи Зег Зег Уа1 Уа1 ТЬг Уа1 Рго Зег Зег Зег Ьеи О1у ТЬг О1п ТЬг
65 70 75 80
Туг 11е Суз Азп Уа1 Азп Н1з Ьуз Рго Зег Азп ТЬг Ьуз Уа1 Азр Ьуз
85 90 95
Ьуз Уа1 О1и Рго Ьуз Зег Суз Азр Ьуз ТЬг Н1з ТЬг Суз Рго Рго Суз
100 105 110
Рго А1а Рго О1и Ьеи Ьеи О1у О1у Рго Зег Уа1 РЬе Ьеи РЬе Рго Рго
115 120 125
Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи МеЬ 11е Зег Агд ТЬг Рго О1и Уа1 ТЬг Суз
130 135 140
Уа1 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Зег Н1з О1и Азр Рго О1и Уа1 Ьуз РЬе Азп Тгр
145 150 155 160
Туг Уа1 Азр О1у Уа1 О1и Уа1 Н1з Азп А1а Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд О1и
165 170 175
О1и О1п Туг Азп Зег ТЬг Туг Агд Уа1 Уа1 Зег Уа1 Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи
180 185 190
Н1з О1п Азр Тгр Ьеи Азп О1у Ьуз О1и Туг Ьуз Суз Ьуз Уа1 Зег Азп
195 200 205
Ьуз А1а Ьеи Рго А1а Рго 11е О1и Ьуз ТЬг 11е Зег Ьуз А1а Ьуз О1у
210 215 220
О1п Рго Агд О1и Рго О1п Уа1 Туг ТЬг Ьеи Рго Рго Зег Агд Азр О1и
225 230 235 240
Ьеи ТЬг Ьуз Азп О1п Уа1 Зег Ьеи ТЬг Суз Ьеи Уа1 Ьуз О1у РЬе Туг
245 250 255
Рго Зег Азр 11е А1а Уа1 О1и Тгр О1и Зег Азп О1у О1п Рго О1и Азп
260 265 270
Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго Уа1 Ьеи Азр Зег Азр О1у Зег РЬе РЬе
275 280 285
Ьеи Туг Зег Ьуз Ьеи ТЬг Уа1 Азр Ьуз Зег Агд Тгр О1п О1п О1у Азп
290 295 300
Уа1 РЬе Зег Суз Зег Уа1 МеЬ Н1з О1и А1а Ьеи Н1з Азп Н1з Туг ТЬг
305 310 315 320
О1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго О1у Ьуз
325 330
<210> 27
<211> 329
<212> РКТ
<213> Ното зар1епз
<400> 27
А1а Зег ТЬг Ьуз О1у Рго Зег Уа1 РЬе Рго Ьеи А1а Рго Зег Зег Ьуз 1 5 10 15
- 43 029987
Зег ТЬг Зег О1у 20 О1у ТЬг А1а А1а Ьеи 25 О1у Суз Ьеи Уа1 Ьуз 30 Азр Туг
РЬе Рго О1и Рго Уа1 ТЬг Уа1 Зег Тгр Азп Зег О1у А1а Ьеи ТЬг Зег
35 40 45
О1у Уа1 Няз ТЬг РЬе Рго А1а Уа1 Ьеи О1п Зег Зег О1у Ьеи Туг Зег
50 55 60
Ьеи Зег Зег Уа1 Уа1 ТЬг Уа1 Рго Зег Зег Зег Ьеи О1у ТЬг О1п ТЬг
65 70 75 80
Туг 11е Суз Азп Уа1 Азп Няз Ьуз Рго Зег Азп ТЬг Ьуз Уа1 Азр Ьуз
85 90 95
Ьуз Уа1 О1и Рго Ьуз Зег Суз Азр Ьуз ТЬг Няз ТЬг Суз Рго Рго Суз
100 105 110
Рго А1а Рго О1и Ьеи Ьеи О1у О1у Рго Зег Уа1 РЬе Ьеи РЬе Рго Рго
115 120 125
Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи МеЬ 11е Зег Агд ТЬг Рго О1и Уа1 ТЬг Суз
130 135 140
Уа1 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Зег Няз О1и Азр Рго О1и Уа1 Ьуз РЬе Азп Тгр
145 150 155 160
Туг Уа1 Азр О1у Уа1 О1и Уа1 Няз Азп А1а Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд О1и
165 170 175
О1и О1п Туг Азп Зег ТЬг Туг Агд Уа1 Уа1 Зег Уа1 Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи
180 185 190
Няз О1п Азр Тгр Ьеи Азп О1у Ьуз О1и Туг Ьуз Суз Ьуз Уа1 Зег Азп
195 200 205
Ьуз А1а Ьеи Рго А1а Рго 11е О1и Ьуз ТЬг 11е Зег Ьуз А1а Ьуз О1у
210 215 220
О1п Рго Агд О1и Рго О1п Уа1 Туг ТЬг Ьеи Рго Рго Зег Агд Азр О1и
225 230 235 240
Ьеи ТЬг Ьуз Азп О1п Уа1 Зег Ьеи ТЬг Суз Ьеи Уа1 Ьуз О1у РЬе Туг
245 250 255
Рго Зег Азр 11е А1а Уа1 О1и Тгр О1и Зег Азп О1у О1п Рго О1и Азп
260 265 270
Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго Уа1 Ьеи Азр Зег Азр О1у Зег РЬе РЬе
275 280 285
Ьеи Туг Зег Ьуз Ьеи ТЬг Уа1 Азр Ьуз Зег Агд Тгр О1п О1п О1у Азп
290 295 300
Уа1 РЬе Зег Суз Зег Уа1 МеЬ Няз О1и А1а Ьеи Нтз Азп Нтз Туг ТЬг
305 310 315 320
О1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго О1у
325
<210> 28
<211> 330
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтезированная
<400> 28
А1а 1 Зег ТЬг Ьуз О1у 5 Рго Зег Уа1 РЬе Рго 10 Ьеи А1а Рго Зег Зег 15 Ьуз
Зег ТЬг Зег О1у О1у ТЬг А1а А1а Ьеи О1у Суз Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг
20 25 30
РЬе Рго О1и Рго Уа1 ТЬг Уа1 Зег Тгр Азп Зег О1у А1а Ьеи ТЬг Зег
35 40 45
О1у Уа1 Няз ТЬг РЬе Рго А1а Уа1 Ьеи О1п Зег Зег О1у Ьеи Туг Зег
50 55 60
Ьеи Зег Зег Уа1 Уа1 ТЬг Уа1 Рго Зег Зег Зег Ьеи О1у ТЬг О1п ТЬг
65 70 75 80
Туг 11е Суз Азп Уа1 Азп Нтз Ьуз Рго Зег Азп ТЬг Ьуз Уа1 Азр Ьуз
85 90 95
- 44 029987
Ьуз Уа1 О1и Рго 100 Ьуз Зег Суз Азр Ьуз 105 ТЬг Няз ТЬг Суз Рго 110 Рго Суз
Рго А1а Рго О1и Ьеи Ьеи О1у О1у Рго Суз Уа1 РЬе Ьеи РЬе Рго Рго
115 120 125
Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи МеЬ 11е Зег Агд ТЬг Рго О1и Уа1 ТЬг Суз
130 135 140
ναι Уа1 Уа1 Азр Уа1 Зег Няз О1и Азр Рго О1и Уа1 Ьуз РЬе Азп Тгр
145 150 155 160
Туг Уа1 Азр О1у Уа1 О1и Уа1 Няз Азп А1а Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд О1и
165 170 175
О1и О1п Туг Азп Зег ТЬг Туг Агд Уа1 Уа1 Зег Уа1 Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи
180 185 190
Няз О1п Азр Тгр Ьеи Азп О1у Ьуз О1и Туг Ьуз Суз Ьуз Уа1 Зег Азп
195 200 205
Ьуз А1а Ьеи Рго А1а Рго 11е О1и Ьуз ТЬг 11е Зег Ьуз А1а Ьуз О1у
210 215 220
О1п Рго Агд О1и Рго О1п Уа1 Туг ТЬг Ьеи Рго Рго Зег Агд Азр О1и
225 230 235 240
Ьеи ТЬг Ьуз Азп О1п Уа1 Зег Ьеи ТЬг Суз Ьеи Уа1 Ьуз О1у РЬе Туг
245 250 255
Рго Зег Азр 11е А1а Уа1 О1и Тгр О1и Зег Азп О1у О1п Рго О1и Азп
260 265 270
Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго Уа1 Ьеи Азр Зег Азр О1у Зег РЬе РЬе
275 280 285
Ьеи Туг Зег Ьуз Ьеи ТЬг Уа1 Азр Ьуз Зег Агд Тгр О1п О1п О1у Азп
290 295 300
ναι РЬе Зег Суз Зег Уа1 МеЬ Няз О1и А1а Ьеи Нтз Азп Нтз Туг ТЬг
305 310 315 320
О1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго О1у Ьуз
325 330
<210> 29
<211> 329
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтезированная
<400> 29
А1а 1 Зег ТЬг Ьуз О1у 5 Рго Зег Уа1 РЬе Рго 10 Ьеи А1а Рго Зег Зег 15 Ьуз
Зег ТЬг Зег О1у О1у ТЬг А1а А1а Ьеи О1у Суз Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг
20 25 30
РЬе Рго О1и Рго Уа1 ТЬг Уа1 Зег Тгр Азп Зег О1у А1а Ьеи ТЬг Зег
35 40 45
О1у Уа1 Няз ТЬг РЬе Рго А1а Уа1 Ьеи О1п Зег Зег О1у Ьеи Туг Зег
50 55 60
Ьеи Зег Зег Уа1 Уа1 ТЬг Уа1 Рго Зег Зег Зег Ьеи О1у ТЬг О1п ТЬг
65 70 75 80
Туг 11е Суз Азп Уа1 Азп Няз Ьуз Рго Зег Азп ТЬг Ьуз Уа1 Азр Ьуз
85 90 95
Ьуз Уа1 О1и Рго Ьуз Зег Суз Азр Ьуз ТЬг Няз ТЬг Суз Рго Рго Суз
100 105 110
Рго А1а Рго О1и Ьеи Ьеи О1у О1у Рго Суз Уа1 РЬе Ьеи РЬе Рго Рго
115 120 125
Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи МеЬ 11е Зег Агд ТЬг Рго О1и Уа1 ТЬг Суз
130 135 140
Уа1 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Зег Няз О1и Азр Рго О1и Уа1 Ьуз РЬе Азп Тгр
145 150 155 160
Туг Уа1 Азр О1у Уа1 О1и Уа1 Нтз Азп А1а Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд О1и
165 170 175
- 45 029987
О1и О1п Туг Азп 180 Зег ТЬг Туг Агд Уа1 185 Уа1 Зег Уа1 Ьеи ТЬг 190 Уа1 Ьеи
Няз О1п Азр Тгр Ьеи Азп С1у Ьуз О1и Туг Ьуз Суз Ьуз Уа1 Зег Азп
195 200 205
Ьуз А1а Ьеи Рго А1а Рго 11е О1и Ьуз ТЬг 11е Зег Ьуз А1а Ьуз О1у
210 215 220
О1п Рго Агд О1и Рго О1п Уа1 Туг ТЬг Ьеи Рго Рго Зег Агд Азр О1и
225 230 235 240
Ьеи ТЬг Ьуз Азп О1п Уа1 Зег Ьеи ТЬг Суз Ьеи Уа1 Ьуз О1у РЬе Туг
245 250 255
Рго Зег Азр 11е А1а Уа1 О1и Тгр О1и Зег Азп О1у О1п Рго О1и Азп
260 265 270
Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго Уа1 Ьеи Азр Зег Азр О1у Зег РЬе РЬе
275 280 285
Ьеи Туг Зег Ьуз Ьеи ТЬг Уа1 Азр Ьуз Зег Агд Тгр О1п О1п О1у Азп
290 295 300
Уа1 РЬе Зег Суз Зег Уа1 МеЕ Няз О1и А1а Ьеи Няз Азп Няз Туг ТЬг
305 310 315 320
О1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго О1у
325
<210> 30
<211> 22
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтезированная
<400> 30
МеЕ Азр МеЕ Агд ТЬг Рго А1а О1п РЬе Ьеи О1у 11е Ьеи Ьеи Ьеи Тгр
1 5 10 15
РЬе Рго О1у 11е Ьуз Суз
20
<210> 31
<211> 19
<212> РКТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтезированная
<400> 31
МеЕ О1у Тгр Агд Тгр 11е РЬе Ьеи РЬе Ьеи Ьеи Зег О1у ТЬг А1а О1у 1 5 10 15
Уа1 Няз Суз
<210> 32
<211> 321
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтезированная
<400> 32
дасаЕссада ЕдасссадЕс ЕссаЕссЕса сЕдЕсЕдсаЕ сЕдЕаддада сададЕсасс 60 аЕсасЕЕдЕа аддсЕадЕса ддасаЕЕааЕ адсЕаЕЕЕда дсЕддЕЕЕса дсадааасса 120
- 46 029987
дддааадссс сбаадбсссб дабсбабада дсааабадаб бддбадабдд ддбсссабса 180
аддббсбсбд дсадбддабс бдддасадаб ббсасбсбса ссабсадсад ссбдсадссб 240
даадаббббд саасббабба сбдсббдсад бабдабдадб ббссбсбсас абббддадда 300
дддассаадд бддадабсаа а 321
<210> 33
<211> 321
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтезированная
<400> 33
дасабсаада бдасссадбс бссабссбса сбдбсбдсаб сбдбаддада сададбсасс 60
абсасббдба аддсбадбса ддасаббааб адсбабббда дсбддбббса дсадааасса 120
дддааадссс сбаадбсссб дабсбабада дсааабадаб бддбадабдд ддбсссабса 180
аддббсбсбд дсадбддабс бдддасадаб ббсасбсбса ссабсадсад ссбдсадссб 240
даадаббббд саасббабба сбдсббдсад бабдабдадб ббссбсбсас абббддадда 300
дддассаадд бддадабсаа а 321
<210> 34
<211> 321
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтезированная
<400> 34
дасабссада бдасссадбс бссабссбса сбдбсбдсаб сбдбаддада сададбсасс 60
абсасббдба аддсбадбса ддасаббааб адсбабббда дсбддбббса дсадааасса 120
дддааадссс сбаадасссб дабсбабада дсааабадаб бддбадабдд ддбсссабса 180
аддббсбсбд дсадбддабс бдддасадаб ббсасбсбса ссабсадсад ссбдсадссб 240
даадаббббд саасббабба сбдсббдсад бабдабдадб ббссбсбсас абббддадда 300
дддассаадд бддадабсаа а 321
<210> 35
<211> 321
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтезированная
<400> 35
дасабссада бдасссадбс бссабссбса сбдбсбдсаб сбдбаддада сададбсасс 60
абсасббдба аддсбадбса ддасаббааб адсбабббда дсбддбббса дсадааасса 120
дддааадссс сбаадбсссб дабсбабада дсааабадаб бддбадабдд ддбсссабса 180
аддббсбсбд дсадбддабс бдддсаадаб ббсасбсбса ссабсадсад ссбдсадссб 240
даадаббббд саасббабба сбдсббдсад бабдабдадб ббссбсбсас абббддадда 300
дддассаадд бддадабсаа а 321
<210> 36
<211> 321
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтезированная
<400> 36
дасабссада бдасссадбс бссабссбса сбдбсбдсаб сбдбаддада сададбсасс 60
- 47 029987
аЕсасЕЕдЕа аддсЕадЕса ддасаЕЕааЕ адсЕаЕЕЕда дсЕддЕЕЕса дсадааасса 120
дддааадссс сЕаадЕсссЕ даЕсЕаЕада дсаааЕадаЕ ЕддЕадаЕдд ддЕсссаЕса 180
аддЕЕсЕсЕд дсадЕддаЕс ЕдддасадаЕ ЕаЕасЕсЕса ссаЕсадсад ссЕдсадссЕ 240
даадаЕЕЕЕд саасЕЕаЕЕа сЕдсЕЕдсад ЕаЕдаЕдадЕ ЕЕссЕсЕсас аЕЕЕддадда 300
дддассаадд ЕддадаЕсаа а 321
<210> 37
<211> 321
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтезированная
<400> 37
дасаЕссада ЕдасссадЕс ЕссаЕссЕса сЕдЕсЕдсаЕ сЕдЕаддада сададЕсаЕЕ 60
аЕсааЕЕдЕа аддсЕадЕса ддасаЕЕааЕ адсЕаЕЕЕда дсЕддЕЕЕса дсадааасса 120
дддааадссс сЕаадЕсссЕ даЕсЕаЕада дсаааЕадаЕ ЕддЕадаЕдд ддЕсссаЕса 180
аддЕЕсЕсЕд дсадЕддаЕс ЕдддасадаЕ ЕЕсасЕсЕса ссаЕсадсад ссЕдсадссЕ 240
даадаЕЕЕЕд саасЕЕаЕЕа сЕдсЕЕдсад ЕаЕдаЕдадЕ ЕЕссЕсЕсас аЕЕЕддадда 300
дддассаадд ЕддадаЕсаа а 321
<210> 38
<211> 321
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтезированная
<400> 38
дасаЕссада ЕдасссадЕс ЕссаЕссЕса сЕдЕсЕдсаЕ сЕдЕаддада сададЕсасс 60
аЕсааЕЕдЕа аддсЕадЕса ддасаЕЕааЕ адсЕаЕЕЕда дсЕддЕЕЕса дсадааасса 120
дддааадссс сЕаадасссЕ даЕсЕаЕада дсаааЕадаЕ ЕддЕадаЕдд ддЕсссаЕса 180
аддЕЕсЕсЕд дсадЕддаЕс ЕдддсаадаЕ ЕаЕасЕсЕса ссаЕсадсад ссЕдсадссЕ 240
даадаЕЕЕЕд саасЕЕаЕЕа сЕдсЕЕдсад ЕаЕдаЕдадЕ ЕЕссЕсЕсас аЕЕЕддадда 300
дддассаадд ЕддадаЕсаа а 321
<210> 39
<211> 351
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтезированная
<400> 39
саддЕЕсадс ЕддЕдсадЕс ЕддадсЕдад дЕдаадаадс сЕддддссЕс адЕдааддЕс 60
ЕссЕдсаадд сЕЕсЕддЕЕа сассЕЕЕасс ааЕЕаЕдаЕа ЕаааЕЕдддЕ дадасаддсс 120
ссЕддасаад ддсЕЕдадЕд даЕдддаЕдд аЕЕЕаЕссЕд дадаЕддЕад ЕассаааЕаЕ 180
ааЕдадаааЕ Есааддссад адЕсассаЕд ассасадаса саЕссассад сасадссЕас 240
аЕддадсЕда ддадссЕдад аЕсЕдаЕдас асадсЕдЕдЕ аЕЕасЕдЕдс ЕададдаЕаЕ 300
даадаЕдсЕа ЕддасЕасЕд ддддсааддд ассасадЕса садЕсЕссЕс а 351
<210> 40
<211> 351
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтезированная
<400> 40
- 48 029987
саддЬЬсадс ЬддЬдсадЬс ЬддадсЬдад дЬдаадаадс сЬддддссЬс адЬдааддЬс 60
ЬссЬдсаадд сЬЬсЬддЬЬа сассЬЬЬасс ааЬЬаЬдаЬа ЬаааЬЬдддЬ дадасаддсс 120
ссЬддасаад ддсЬЬдадЬд даЬдддаЬдд аЬЬЬаЬссЬд дадаЬддЬад ЬассаааЬаЬ 180
ааЬдадаааЬ Ьсааддссад адЬсассаЬд асадсЬдаса саЬссассад сасадссЬас 240
аЬддадсЬда ддадссЬдад аЬсЬдаЬдас асадсЬдЬдЬ аЬЬасЬдЬдс ЬададдаЬаЬ 300
даадаЬдсЬа ЬддасЬасЬд ддддсааддд ассасадЬса садЬсЬссЬс а 351
<210> 41
<211> 351
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтезированная
<400> 41
саддЬЬсадс ЬддЬдсадЬс ЬддадсЬдад дЬдаадаадс сЬддддссЬс адЬдааддЬс 60
ЬссЬдсаадд сЬЬсЬддЬЬа сассЬЬЬасс ааЬЬаЬдаЬа ЬаааЬЬдддЬ дадасаддсс 120
ссЬддасаад ддсЬЬдадЬд даЬдддаЬдд аЬЬЬаЬссЬд дадаЬддЬад ЬассаааЬаЬ 180
ааЬдадаааЬ Ьсааддссад адЬсассаЬд ассасадаса саЬссассад сасадссЬас 240
аЬддадсЬда ддадссЬдад аЬсЬдаЬдас асадсЬдЬдЬ аЬЬасЬдЬдс ЬЬсЬддаЬаЬ 300
даадаЬдсЬа ЬддасЬасЬд ддддсааддд ассасадЬса садЬсЬссЬс а 351
<210> 42
<211> 351
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтезированная
<400> 42
саддЬЬсадс ЬддЬдсадЬс ЬддадсЬдад дЬдаадаадс сЬддддссЬс адЬдааддЬс 60
ЬссЬдсаадд сЬЬсЬддЬЬа сассЬЬЬасс ааЬЬаЬдаЬа ЬаааЬЬдддЬ дадасаддсс 120
ссЬддасаад ддсЬЬдадЬд даЬдддаЬдд аЬЬЬаЬссЬд дадаЬддЬад ЬассаааЬаЬ 180
ааЬдадаааЬ Ьсааддссад адЬсассаЬд ассасадаса адЬссассад сасадссЬас 240
аЬддадсЬда ддадссЬдад аЬсЬдаЬдас асадсЬдЬдЬ аЬЬасЬдЬдс ЬададдаЬаЬ 300
даадаЬдсЬа ЬддасЬасЬд ддддсааддд ассасадЬса садЬсЬссЬс а 351
<210> 43
<211> 351
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтезированная
<400> 43
саддЬЬсадс ЬддЬдсадЬс ЬддадсЬдад дЬдаадаадс сЬддддссЬс адЬдааддЬс 60
ЬссЬдсаадд сЬЬсЬддЬЬа сассЬЬЬасс ааЬЬаЬдаЬа ЬаааЬЬдддЬ дадасаддсс 120
ссЬддасаад ддсЬЬдадЬд даЬЬддаЬдд аЬЬЬаЬссЬд дадаЬддЬад ЬассаааЬаЬ 180
ааЬдадаааЬ Ьсааддссад адЬсассаЬд ассасадаса саЬссассад сасадссЬас 240
аЬддадсЬда ддадссЬдад аЬсЬдаЬдас асадсЬдЬдЬ аЬЬасЬдЬдс ЬададдаЬаЬ 300
даадаЬдсЬа ЬддасЬасЬд ддддсааддд ассасадЬса садЬсЬссЬс а 351
<210> 44
<211> 351
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтезированная
- 49 029987
<400> 44
саддббсадс бддбдсадбс бддадсбдад дбдаадаадс сбддддссбс адбдааддбс 60
бссбдсаадд сббсбддбба сассбббасс ааббабдаба баааббдддб даассададд 120
ссбддасаад ддсббдадбд дабдддабдд абббабссбд дадабддбад бассааабаб 180
аабдадаааб бсааддссад адбсассабд ассасадаса сабссассад сасадссбас 240
абддадсбда ддадссбдад абсбдабдас асадсбдбдб аббасбдбдс бададдабаб 300
даадабдсба бддасбасбд ддддсааддд ассасадбса садбсбссбс а 351
<210> 45
<211> 351
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтезированная
<400> 45
саддббсадс бддбдсадбс бддадсбдад дбдаадаадс сбддддссбс адбдааддбс 60
бссбдсаадд сббсбддбба сассбббасс ааббабдаба баааббдддб дадасаддсс 120
ссбддасаад ддсббдадбд дабдддабдд абббабссбд дадабддбад бассааабаб 180
аабдадаааб бсааддссаа ддсбасссбд ассасадаса сабссассад сасадссбас 240
абддадсбда ддадссбдад абсбдабдас асадсбдбдб аббасбдбдс бададдабаб 300
даадабдсба бддасбасбд ддддсааддд ассасадбса садбсбссбс а 351
<210> 46
<211> 351
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтезированная
<400> 46
саддббсадс бддбдсадбс бддадсбдад дбдаадаадс сбддддссбс адбдааддбс 60
бссбдсаадд сббсбддбба сассбббасс ааббабдаба баааббдддб дадасаддсс 120
ссбддасаад ддсббдадбд дабдддабдд абббабссбд дадабддбад бассааабаб 180
аабдадаааб бсааддссад адбсассабд ассасадаса сабссассад сасадссбас 240
абддадсбда дсадссбдас сбсбдабдас асадсбдбдб аббасбдбдс бададдабаб 300
даадабдсба бддасбасбд ддддсааддд ассасадбса садбсбссбс а 351
<210> 47
<211> 351
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтезированная
<400> 47
саддббсадс бддбдсадбс бддадсбдад дбдаадаадс сбддддссбс адбдааддбс 60
бссбдсаадд сббсбддбба сассбббасс ааббабдаба баааббдддб дадасаддсс 120
ссбддасаад ддсббдадбд даббддабдд абббабссбд дадабддбад бассааабаб 180
аабдадаааб бсааддссаа ддсбасссбд асадсбдаса сабссассад сасадссбас 240
абддадсбда ддадссбдад абсбдабдас асадсбдбдб аббасбдбдс ббсбддабаб 300
даадабдсба бддасбасбд ддддсааддд ассасадбса садбсбссбс а 351
<210> 48
<211> 318
<212> ДНК
<213> Ното зарФепз
<400> 48
асддбддсбд сассабсбдб сббсабсббс ссдссабсбд абдадсадбб дааабсбдда 60
- 50 029987
асЕдссЕсЕд
ааддЕддаЕа
ааддасадса
сасааадЕсЕ
ЕЕсаасаддд
<210> 49 <211> 990 <212> ДНК <213> Ното
<400> 49
дсЕадсасса
ддсасадсЕд
ЕддаасЕсад
ддасЕсЕасЕ
ЕасаЕсЕдса
аааЕсЕЕдЕд
ссдЕсадЕсЕ
даддЕсасаЕ
ЕасдЕддасд
адсасдЕасс
дадЕасаадЕ
ааадссааад
сЕдассаада
дссдЕддадЕ
сЕддасЕссд
садсадддда
садаададсс
<210> 50 <211> 987 <212> ДНК <213> Ното
<400> 50
дсЕадсасса
ддсасадсЕд
ЕддаасЕсад
ддасЕсЕасЕ
ЕасаЕсЕдса
аааЕсЕЕдЕд
ссдЕсадЕсЕ
даддЕсасаЕ
ЕасдЕддасд
адсасдЕасс
дадЕасаадЕ
ааадссааад
сЕдассаада
дссдЕддадЕ
сЕддасЕссд
садсадддда
садаададсс
<210> 51
<211> 990
<212> ДНК
<213> Иску
ЕЕдЕдЕдссЕ
асдсссЕсса
ссЕасадссЕ
асдссЕдсда
дададЕдЕ
зартепз
адддсссаЕс
сссЕдддсЕд
дсдсссЕдас
сссЕсадсад
асдЕдааЕса
асаааасЕса
ЕссЕсЕЕссс
дсдЕддЕддЕ
дсдЕддаддЕ
дЕдЕддЕсад
дсааддЕсЕс
ддсадссссд
ассаддЕсад
дддададсаа
асддсЕссЕЕ
асдЕсЕЕсЕс
ЕсЕсссЕдЕс
зартепз
адддсссаЕс
сссЕдддсЕд
дсдсссЕдас
сссЕсадсад
асдЕдааЕса
асаааасЕса
ЕссЕсЕЕссс
дсдЕддЕддЕ
дсдЕддаддЕ
дЕдЕддЕсад
дсааддЕсЕс
ддсадссссд
ассаддЕсад
дддададсаа
асддсЕссЕЕ
асдЕсЕЕсЕс
ЕсЕсссЕдЕс
дсЕдааЕаас
аЕсдддЕаас
садсадсасс
адЕсасссаЕ
ЕЕсЕаЕссса
Есссаддада
сЕдасдсЕда
садддссЕда
дададдссаа
дЕдЕсасада
дсааадсада
дсЕсдсссдЕ
адЕасадЕдд
дсаддасадс
сЕасдадааа
сасааададс
120
180
240
300
318
ЕдЕсЕЕсссс
ссЕддЕсаад
садсддсдЕд
сдЕддЕдасс
саадсссадс
сасаЕдссса
сссаааассс
ддасдЕдадс
дсаЕааЕдсс
сдЕссЕсасс
саасааадсс
адаассасад
ссЕдассЕдс
Едддсадссд
сЕЕссЕсЕас
аЕдсЕссдЕд
ЕссдддЕааа
ЕдЕсЕЕсссс
ссЕддЕсаад
садсддсдЕд
сдЕддЕдасс
саадсссадс
сасаЕдссса
сссаааассс
ддасдЕдадс
дсаЕааЕдсс
сдЕссЕсасс
саасааадсс
адаассасад
ссЕдассЕдс
Едддсадссд
сЕЕссЕсЕас
аЕдсЕссдЕд
ЕссдддЕ
следова
сЕддсасссЕ
дасЕасЕЕсс
сасассЕЕсс
дЕдсссЕсса
аасассаадд
ссдЕдсссад
ааддасассс
сасдаадасс
аадасааадс
дЕссЕдсасс
сЕсссадссс
дЕдЕасассс
сЕддЕсааад
дадаасаасЕ
адсаадсЕса
аЕдсаЕдадд
ссЕссаадад
сЕдаассЕдЕ
сддсЕдЕссЕ
дсадсЕЕддд
Еддасаадаа
сассЕдаасЕ
ЕсаЕдаЕсЕс
сЕдаддЕсаа
сдсдддадда
аддасЕддсЕ
ссаЕсдадаа
ЕдсссссаЕс
дсЕЕсЕаЕсс
асаадассас
ссдЕддасаа
сЕсЕдсасаа
сассЕсЕддд
дасадЕдЕсс
асадЕссЕса
сасссадасс
адЕЕдадссс
ссЕдддддда
ссддассссЕ
дЕЕсаасЕдд
дсадЕасаас
дааЕддсаад
аассаЕсЕсс
ссдддаЕдад
садсдасаЕс
дссЕсссдЕд
дадсаддЕдд
ссасЕасаса
60
120
180
240
300
360
420
480
540
600
660
720
780
840
900
960
990
сЕддсасссЕ
дасЕасЕЕсс
сасассЕЕсс
дЕдсссЕсса
аасассаадд
ссдЕдсссад
ааддасассс
сасдаадасс
аадасааадс
дЕссЕдсасс
сЕсссадссс
дЕдЕасассс
сЕддЕсааад
дадаасаасЕ
адсаадсЕса
аЕдсаЕдадд
ссЕссаадад
сЕдаассЕдЕ
сддсЕдЕссЕ
дсадсЕЕддд
Еддасаадаа
сассЕдаасЕ
ЕсаЕдаЕсЕс
сЕдаддЕсаа
сдсдддадда
аддасЕддсЕ
ссаЕсдадаа
ЕдсссссаЕс
дсЕЕсЕаЕсс
асаадассас
ссдЕддасаа
сЕсЕдсасаа
сассЕсЕддд
дасадЕдЕсс
асадЕссЕса
сасссадасс
адЕЕдадссс
ссЕдддддда
ссддассссЕ
дЕЕсаасЕдд
дсадЕасаас
дааЕддсаад
аассаЕсЕсс
ссдддаЕдад
садсдасаЕс
дссЕсссдЕд
дадсаддЕдд
ссасЕасаса
60
120
180
240
300
360
420
480
540
600
660
720
780
840
900
960
987
ность
<220>
<223> Синтезированная
<400> 51
- 51 029987
дсЕадсасса адддсссаЕс ЕдЕсЕЕсссс сЕддсасссЕ ссЕссаадад сассЕсЕддд 60
ддсасадсЕд сссЕдддсЕд ссЕддЕсаад дасЕасЕЕсс сЕдаассЕдЕ дасадЕдЕсс 120
ЕддаасЕсад дсдсссЕдас садсддсдЕд сасассЕЕсс сддсЕдЕссЕ асадЕссЕса 180
ддасЕсЕасЕ сссЕсадсад сдЕддЕдасс дЕдсссЕсса дсадсЕЕддд сасссадасс 240
ЕасаЕсЕдса асдЕдааЕса саадсссадс аасассаадд Еддасаадаа адЕЕдадссс 300
аааЕсЕЕдЕд асаааасЕса сасаЕдссса ссдЕдсссад сассЕдаасЕ ссЕдддддда 360
ссдЕдЕдЕсЕ ЕссЕсЕЕссс сссаааассс ааддасассс ЕсаЕдаЕсЕс ссддассссЕ 420
даддЕсасаЕ дсдЕддЕддЕ ддасдЕдадс сасдаадасс сЕдаддЕсаа дЕЕсаасЕдд 480
ЕасдЕддасд дсдЕддаддЕ дсаЕааЕдсс аадасааадс сдсдддадда дсадЕасаас 540
адсасдЕасс дЕдЕддЕсад сдЕссЕсасс дЕссЕдсасс аддасЕддсЕ дааЕддсаад 600
дадЕасаадЕ дсааддЕсЕс саасааадсс сЕсссадссс ссаЕсдадаа аассаЕсЕсс 660
ааадссааад ддсадссссд адаассасад дЕдЕасассс ЕдсссссаЕс ссдддаЕдад 720
сЕдассаада ассаддЕсад ссЕдассЕдс сЕддЕсааад дсЕЕсЕаЕсс садсдасаЕс 780
дссдЕддадЕ дддададсаа Едддсадссд дадаасаасЕ асаадассас дссЕсссдЕд 840
сЕддасЕссд асддсЕссЕЕ сЕЕссЕсЕас адсаадсЕса ссдЕддасаа дадсаддЕдд 900
садсадддда асдЕсЕЕсЕс аЕдсЕссдЕд аЕдсаЕдадд сЕсЕдсасаа ссасЕасаса 960
садаададсс ЕсЕсссЕдЕс ЕссдддЕааа 990
<210> 52
<211> 987
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтезированная
<400> 52
дсЕадсасса адддсссаЕс ЕдЕсЕЕсссс сЕддсасссЕ ссЕссаадад сассЕсЕддд 60
ддсасадсЕд сссЕдддсЕд ссЕддЕсаад дасЕасЕЕсс сЕдаассЕдЕ дасадЕдЕсс 120
ЕддаасЕсад дсдсссЕдас садсддсдЕд сасассЕЕсс сддсЕдЕссЕ асадЕссЕса 180
ддасЕсЕасЕ сссЕсадсад сдЕддЕдасс дЕдсссЕсса дсадсЕЕддд сасссадасс 240
ЕасаЕсЕдса асдЕдааЕса саадсссадс аасассаадд Еддасаадаа адЕЕдадссс 300
аааЕсЕЕдЕд асаааасЕса сасаЕдссса ссдЕдсссад сассЕдаасЕ ссЕдддддда 360
ссдЕдЕдЕсЕ ЕссЕсЕЕссс сссаааассс ааддасассс ЕсаЕдаЕсЕс ссддассссЕ 420
даддЕсасаЕ дсдЕддЕддЕ ддасдЕдадс сасдаадасс сЕдаддЕсаа дЕЕсаасЕдд 480
ЕасдЕддасд дсдЕддаддЕ дсаЕааЕдсс аадасааадс сдсдддадда дсадЕасаас 540
адсасдЕасс дЕдЕддЕсад сдЕссЕсасс дЕссЕдсасс аддасЕддсЕ дааЕддсаад 600
дадЕасаадЕ дсааддЕсЕс саасааадсс сЕсссадссс ссаЕсдадаа аассаЕсЕсс 660
ааадссааад ддсадссссд адаассасад дЕдЕасассс ЕдсссссаЕс ссдддаЕдад 720
сЕдассаада ассаддЕсад ссЕдассЕдс сЕддЕсааад дсЕЕсЕаЕсс садсдасаЕс 780
дссдЕддадЕ дддададсаа Едддсадссд дадаасаасЕ асаадассас дссЕсссдЕд 840
сЕддасЕссд асддсЕссЕЕ сЕЕссЕсЕас адсаадсЕса ссдЕддасаа дадсаддЕдд 900
садсадддда асдЕсЕЕсЕс аЕдсЕссдЕд аЕдсаЕдадд сЕсЕдсасаа ссасЕасаса 960
садаададсс ЕсЕсссЕдЕс ЕссдддЕ 987
<210> 53
<211> 66
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтезированная
<400> 53
аЕддасаЕда ддассссЕдс ЕсадЕЕЕсЕЕ ддааЕсЕЕдЕ ЕдсЕсЕддЕЕ ЕссаддЕаЕс 60 аааЕдЕ 66
<210> 54
<211> 57
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
- 52 029987
<223> Синтезированная
<400> 54
абдддабдда дабддабсбб бсббббссбс сбдбсдддаа сбдсаддбдб ссаббдс
<210> 55
<211> 364
<212> РКТ
<213> Ното зардепз
57
<400> 55
Меб 1 Рго Ьеи Ьеи Ьеи 5 Ьеи Ьеи Рго Ьеи Ьеи 10 Тгр А1а О1у А1а Ьеи 15 А1а
Меб Азр Рго Азп РЬе Тгр Ьеи О1п Уа1 О1п О1и Зег Уа1 ТЬг Уа1 О1п
20 25 30
О1и О1у Ьеи Суз Уа1 Ьеи Уа1 Рго Суз ТЬг РЬе РЬе Н1з Рго 11е Рго
35 40 45
Туг Туг Азр Ьуз Азп Зег Рго Уа1 Н1з О1у Туг Тгр РЬе Агд О1и О1у
50 55 60
А1а 11е 11е Зег Агд Азр Зег Рго Уа1 А1а ТЬг Азп Ьуз Ьеи Азр О1п
65 70 75 80
О1и Уа1 О1п О1и О1и ТЬг О1п О1у Агд РЬе Агд Ьеи Ьеи О1у Азр Рго
85 90 95
Зег Агд Азп Азп Суз Зег Ьеи Зег 11е Уа1 Азр А1а Агд Агд Агд Азр
100 105 110
Азп О1у Зег Туг РЬе РЬе Агд Меб О1и Агд О1у Зег ТЬг Ьуз Туг Зег
115 120 125
Туг Ьуз Зег Рго О1п Ьеи Зег Уа1 Н1з Уа1 ТЬг Азр Ьеи ТЬг Н1з Агд
130 135 140
Рго Ьуз 11е Ьеи 11е Рго О1у ТЬг Ьеи О1и Рго О1у Н1з Зег Ьуз Азп
145 150 155 160
Ьеи ТЬг Суз Зег Уа1 Зег Тгр А1а Суз О1и О1п О1у ТЬг Рго Рго 11е
165 170 175
РЬе Зег Тгр Ьеи Зег А1а А1а Рго ТЬг Зег Ьеи О1у Рго Агд ТЬг ТЬг
180 185 190
Н1з Зег Зег Уа1 Ьеи 11е 11е ТЬг Рго Агд Рго О1п Азр Н1з О1у ТЬг
195 200 205
Азп Ьеи ТЬг Суз О1п Уа1 Ьуз РЬе А1а О1у А1а О1у Уа1 ТЬг ТЬг О1и
210 215 220
Агд ТЬг 11е О1п Ьеи Азп Уа1 ТЬг Туг Уа1 Рго О1п Азп Рго ТЬг ТЬг
225 230 235 240
О1у 11е РЬе Рго О1у Азр О1у Зег О1у Ьуз О1п О1и ТЬг Агд А1а О1у
245 250 255
Уа1 Уа1 Н1з О1у А1а 11е О1у О1у А1а О1у Уа1 ТЬг А1а Ьеи Ьеи А1а
260 265 270
Ьеи Суз Ьеи Суз Ьеи 11е РЬе РЬе 11е Уа1 Ьуз ТЬг Н1з Агд Агд Ьуз
275 280 285
А1а А1а Агд ТЬг А1а Уа1 О1у Агд Азп Азр ТЬг Н1з Рго ТЬг ТЬг О1у
290 295 300
Зег А1а Зег Рго Ьуз Н1з О1п Ьуз Ьуз Зег Ьуз Ьеи Н1з О1у Рго ТЬг
305 310 315 320
О1и ТЬг Зег Зег Суз Зег О1у А1а А1а Рго ТЬг Уа1 О1и Меб Азр О1и
325 330 335
О1и Ьеи Н1з Туг А1а Зег Ьеи Азп РЬе Н1з О1у Меб Азп Рго Зег Ьуз
340 345 350
Азр ТЬг Зег ТЬг О1и Туг Зег О1и Уа1 Агд ТЬг О1п
355 360
<210> 56
<211> 359
<212> РКТ
<213> Масаса базсдсиТагдз
- 53 029987
<400> 56
Меб 1 Рго Ьеи Ьеи Ьеи 5 Ьеи Рго Ьеи Ьеи Тгр 10 А1а О1у А1а Ьеи А1а 15 Меб
Азр Рго Агд Уа1 Агд Ьеи О1и Уа1 О1п О1и Зег Уа1 Ткг Уа1 О1п О1и
20 25 30
О1у Ьеи Суз Уа1 Ьеи Уа1 Рго Суз Ткг Рке Рке НФз Рго Уа1 Рго Туг
35 40 45
НФз Ткг Агд Азп Зег Рго Уа1 НФз О1у Туг Тгр Рке Агд О1и О1у А1а
50 55 60
11е Уа1 Зег Ьеи Азр Зег Рго Уа1 А1а Ткг Азп Ьуз Ьеи Азр О1п О1и
65 70 75 80
Уа1 О1п О1и О1и Ткг О1п О1у Агд Рке Агд Ьеи Ьеи О1у Азр Рго Зег
85 90 95
Агд Азп Азп Суз Зег Ьеи Зег 11е Уа1 Азр А1а Агд Агд Агд Азр Азп
100 105 110
О1у Зег Туг Рке Рке Агд Меб О1и Ьуз О1у Зег Ткг Ьуз Туг Зег Туг
115 120 125
Ьуз Зег Ткг О1п Ьеи Зег Уа1 НФз Уа1 Ткг Азр Ьеи Ткг НФз Агд Рго
130 135 140
О1п 11е Ьеи 11е Рго О1у А1а Ьеи Азр Рго Азр НФз Зег Ьуз Азп Ьеи
145 150 155 160
Ткг Суз Зег Уа1 Рго Тгр А1а Суз О1и О1п О1у Ткг Рго Рго 11е Рке
165 170 175
Зег Тгр Меб Зег А1а А1а Рго Ткг Зег Ьеи О1у Ьеи Агд Ткг Ткг НФз
180 185 190
Зег Зег Уа1 Ьеи 11е 11е Ткг Рго Агд Рго О1п Азр НФз О1у Ткг Азп
195 200 205
Ьеи Ткг Суз О1п Уа1 Ьуз Рке Рго О1у А1а О1у Уа1 Ткг Ткг О1и Агд
210 215 220
Ткг 11е О1п Ьеи Азп Уа1 Зег Туг А1а Зег О1п Азп Рго Агд Ткг Азр
225 230 235 240
11е Рке Ьеи О1у Азр О1у Зег О1у Ьуз О1п О1у Уа1 Уа1 О1п О1у А1а
245 250 255
11е О1у О1у А1а О1у Уа1 Ткг Уа1 Ьеи Ьеи А1а Ьеи Суз Ьеи Суз Ьеи
260 265 270
11е Рке Рке Ткг Уа1 Ьуз Ткг НФз Агд Агд Ьуз А1а А1а Агд Ткг А1а
275 280 285
Уа1 О1у Агд 11е Азр Ткг НФз Рго А1а Ткг О1у Рго Ткг Зег Зег Ьуз
290 295 300
НФз О1п Ьуз Ьуз Зег Ьуз Ьеи НФз О1у А1а Ткг О1и Ткг Зег О1у Суз
305 310 315 320
Зег О1у Ткг Ткг Ьеи Ткг Уа1 О1и Меб Азр О1и О1и Ьеи НФз Туг А1а
325 330 335
Зег Ьеи Азп Рке НФз О1у Меб Азп Рго Зег О1и Азр Ткг Зег Ткг О1и
340 345 350
Туг Зег О1и Уа1 Агд Ткг О1п
355
<210> 57
<211> 359
<212> РКТ
<213> Масаса ЕазсФсиФагФз
<400> 57
Меб 1 Рго Ьеи Ьеи Ьеи 5 Ьеи Рго Ьеи Ьеи Тгр А1а О1у 10 А1а Ьеи А1а 15 Меб
Азр Рго Агд Уа1 Агд Ьеи О1и Уа1 О1п О1и Зег Уа1 Ткг Уа1 О1п О1и
20 25 30
О1у Ьеи Суз Уа1 Ьеи Уа1 Рго Суз Ткг Рке Рке НФз Рго Уа1 Рго Туг
35 40 45
НФз А1а Агд Азп Зег Рго Уа1 НФз О1у Туг Тгр Рке Агд О1и О1у А1а
- 54 029987
50 55 60
11е Уа1 Зег Ьеи Азр Зег Рго Уа1 А1а ТЬг Азп Ьуз Ьеи Азр О1п О1и
65 70 75 80
Уа1 Агд О1и О1и ТЬг О1п О1у Агд РЬе Агд Ьеи Ьеи О1у Азр Рго Зег
85 90 95
Агд Азп Азп Суз Зег Ьеи Зег 11е Уа1 Азр А1а Агд Агд Агд Азр Азп
100 105 110
О1у Зег Туг РЬе РЬе Агд МеЕ О1и Ьуз О1у Зег ТЬг Ьуз Туг Зег Туг
115 120 125
Ьуз Зег ТЬг О1п Ьеи Зег Уа1 Няз Уа1 ТЬг Азр Ьеи ТЬг Няз Агд Рго
130 135 140
О1п 11е Ьеи 11е Рго О1у А1а Ьеи Азр Рго Азр Няз Зег Ьуз Азп Ьеи
145 150 155 160
ТЬг Суз Зег Уа1 Рго Тгр А1а Суз О1и О1п О1у ТЬг Рго Рго 11е РЬе
165 170 175
Зег Тгр МеЕ Зег А1а А1а Рго ТЬг Зег Ьеи О1у Ьеи Агд ТЬг ТЬг Няз
180 185 190
Зег Зег Уа1 Ьеи 11е 11е ТЬг Рго Агд Рго О1п Азр Няз О1у ТЬг Азп
195 200 205
Ьеи ТЬг Суз О1п Уа1 Ьуз РЬе Рго О1у А1а О1у Уа1 ТЬг ТЬг О1и Агд
210 215 220
ТЬг 11е О1п Ьеи Азп Уа1 Зег Туг А1а Зег О1п Азп Рго Агд ТЬг Азр
225 230 235 240
11е РЬе Ьеи О1у Азр О1у Зег О1у Ьуз О1п О1у Уа1 Уа1 О1п О1у А1а
245 250 255
11е О1у О1у А1а О1у Уа1 ТЬг Уа1 Ьеи Ьеи А1а Ьеи Суз Ьеи Суз Ьеи
260 265 270
11е РЬе РЬе ТЬг Уа1 Ьуз ТЬг Няз Агд Агд Ьуз А1а А1а Агд ТЬг А1а
275 280 285
Уа1 О1у Агд 11е Азр ТЬг Няз Рго А1а ТЬг О1у Рго ТЬг Зег Зег Ьуз
290 295 300
Нтз О1п Ьуз Ьуз Зег Ьуз Ьеи Няз О1у А1а ТЬг О1и ТЬг Зег О1у Суз
305 310 315 320
Зег О1у ТЬг ТЬг Ьеи ТЬг Уа1 О1и МеЕ Азр О1и О1и Ьеи Няз Туг А1а
325 330 335
Зег Ьеи Азп РЬе Няз О1у МеЕ Азп Рго Зег О1и Азр ТЬг Зег ТЬг О1и
340 345 350
Туг Зег О1и Уа1 Агд ТЬг О1п
355

Claims (3)

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Выделенное антитело, которое специфически связывается с человеческим белком СИ33, где антитело содержит три определяющие комплементарность области (СЭР) тяжелой цепи: СПР1 тяжелой цепи, состоящую из 8ΕΟ ΙΌ N0:19, СЭР2 тяжелой цепи, состоящую из 8Εφ ΙΌ N0:20, и СИР3 тяжелой цепи, состоящую из 8Ε0 ΙΌ N0:21; и три СЭР легкой цепи: СЭР1 легкой цепи, состоящую из 8Εφ ΙΌ N0:22, СЭР2 легкой цепи, состоящую из 8Εφ ΙΌ N0:23, и СЭР3 легкой цепи, состоящую из 8Εφ ΙΌ N0:24.
2. Антитело по п.1, выбранное из мышиного антитела, химерного антитела и гуманизированного антитела.
3. Антитело по п.2, представляющее собой гуманизированное антитело 2Н12.
4. Гуманизированное антитело по п.3, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, имеющую аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную 8Ε0 ΙΌ N0:18, при условии, что положение Н48 занято Ι, положение Н66 занято К, положение Н67 занято А, положение Н69 занято Ь, положение Н71 занято А и положение Н94 занято 8, и вариабельную область легкой цепи, по меньшей мере на 90% идентичную 8Ε0 ΙΌ N0:8, при условии, что положение Ь22 занято N положение Ь46 занято Т, положение Ь69 занято О и положение Ь71 занято Υ в соответствии с системой нумерации по Кабату.
5. Гуманизированное антитело по п.3, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, имеющую аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную 8Εφ ΙΌ N0:18, и вариабельную область легкой цепи, по меньшей мере на 95% идентичную 8Εφ ΙΌ N0:8.
6. Гуманизированное антитело по п.3, в котором вариабельная область тяжелой цепи слита с кон- 55 029987
стантной областью тяжелой цепи и вариабельная область легкой цепи слита с константной областью легкой цепи.
7. Гуманизированное антитело по п.3, в котором константная область тяжелой цепи представляет собой мутантную форму природной константной области антитела человека, отличающуюся пониженным связыванием с рецептором Есу в сравнении с природной константной областью антитела человека.
8. Гуманизированное антитело по п.2, в котором константная область тяжелой цепи относится к изотипу Ι§Θ1.
9. Гуманизированное антитело по любому из пп.3-6, в котором константная область тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность, содержащую δΗΟ ГО N0:27, и константная область легкой цепи имеет аминокислотную последовательность, содержащую δΡΟ ГО N0:25.
10. Гуманизированное антитело по п.3, в котором константная область тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность, содержащую δΡΟ ГО N0:29 (8239С), и константная область легкой цепи имеет аминокислотную последовательность, содержащую δΡΟ ГО N0:25.
11. Гуманизированное антитело по п.3, в котором вариабельная область тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность, обозначенную 8Е9 ГО N0:18, и вариабельная область легкой цепи имеет аминокислотную последовательность, обозначенную δΡΟ ГО N0:8.
12. Антитело по любому из предшествующих пунктов, конъюгированное с цитотоксическим средством.
13. Антитело по п.12, отличающееся тем, что цитотоксическое средство конъюгировано с антителом через расщепляемый ферментами линкер.
14. Антитело по п.12 или 13, отличающееся тем, что цитотоксическое средство представляет собой средство, связывающееся с малой бороздкой ДНК.
15. Антитело по любому из пп.12-14, отличающееся тем, что цитотоксическое средство имеет формулу
16. Способ лечения пациента, имеющего рак, при котором экспрессируется СЭ33, или риск его развития, включающий введение пациенту в эффективном режиме гуманизированного антитела по любому из предшествующих пунктов.
17. Способ по п.16, в котором рак представляет собой острый миелоидный лейкоз (АМЬ), миелодиспластический синдром (МЭ8), острый промиелоцитарный лейкоз (АРЬ), хронический миелогенный лейкоз (СМЬ), хронический миеломоноцитарный лейкоз (СММЬ), хронические миелопролиферативные заболевания, пре-В-клеточный острый лимфобластный лейкоз (ргеВ-АЕЬ), пре-Т-клеточный острый лимфобластный лейкоз (ргеТ-АЕЬ), множественную миелому (ММ), болезнь тучных клеток или миелоидную саркому.
18. Фармацевтическая композиция для лечения рака, при котором экспрессируется белок СЭ33, содержащая гуманизированное или химерное антитело по п.1.
19. Фармацевтическая композиция по п.18, содержащая гуманизированное антитело, включающее вариабельную область тяжелой цепи, имеющую аминокислотную последовательность, обозначенную 8Е9 ГО N0:18, и вариабельную область легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность, обозначенную δЕ^ ГО N0:8, где указанная вариабельная область тяжелой цепи слита с константной областью тяжелой цепи, имеющей аминокислотную последовательность, содержащую δЕ^ ГО N0:27 или 8Е9 ГО N0:29, и указанная вариабельная область легкой цепи слита с константной областью легкой цепи, имеющей аминокислотную последовательность, содержащую δΡΟ ГО N0:25, где указанное гуманизированное антитело конъюгировано с цитотоксическим средством, имеющим формулу
20. Гуманизированное антитело, которое специфически связывается с человеческим белком СЭ33, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, имеющую аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную 8Е9 ГО N0:18, и вариабельную область легкой цепи, по меньшей мере на 90% идентичную δΡΟ ГО N0:8.
21. Нуклеиновая кислота, кодирующая вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи по любому из пп.1-15 или 20.
22. Способ по п.17, в котором рак представляет собой острый миелоидный лейкоз (АМЬ).
- 56 029987
2Н12 НА ОУОЬУОЗСАЕУККРСАЗУКУЗСКАЗСУТРтаУОтаЮУКОАРСОСЬЕВДМСВДТУРСПСЗТКУ 2Н12 НВ 2Н12 НС 2Н12 ΉΤ) 2Н12 НЕ . . . . I............ 2Н12 НР ............Ν.Ε. . . 2Н12 НС 2Н12 НН 2Н12 ΗΙ . . . . I............ т2Н12 Н . . Р.ЬУЕ. .ТЕ. .I..... ............Ν.Κ.... . . . .1............ СВЕз ***** ***********
60
80
110
2Н12 НА 2Н12 НВ 2Н12 НС 2Н12 НВ 2Н12 НЕ 2Н12 НР 2Н12 НС 2Н12 НН 2Н12 ΗΙ т2Н12 Н СВЕз
ΝΕΚΡΚΑΚνΤΜΤΤϋΤ8Τ5ΤΑΥΜΕΕΡ.3ΕΚ5ΟϋΤΑνΥΥ€ΑΚσΥΕϋΑΜϋΥΝΟ05ΤΤντν83
...........А.............................................
.....................................3...................
.............К...........................................
. -КА.Ь.............................
...................3. .Т............
. .КА.Ь.А.........................3.
. .КА.Ь.А.К.8. . . . Ь<2. NN . Т . ΕΝ8 . . . Р . .3.
EA201492137A 2012-05-18 2013-05-15 Антитела к cd33 и их применение в лечении рака EA029987B1 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201261649110P 2012-05-18 2012-05-18
US13/804,227 US20130309223A1 (en) 2012-05-18 2013-03-14 CD33 Antibodies And Use Of Same To Treat Cancer
PCT/US2013/041209 WO2013173496A2 (en) 2012-05-18 2013-05-15 Cd33 antibodies and use of same to treat cancer

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201492137A1 EA201492137A1 (ru) 2015-08-31
EA029987B1 true EA029987B1 (ru) 2018-06-29

Family

ID=49581477

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201492137A EA029987B1 (ru) 2012-05-18 2013-05-15 Антитела к cd33 и их применение в лечении рака

Country Status (19)

Country Link
US (4) US20130309223A1 (ru)
EP (2) EP3421048A1 (ru)
JP (1) JP6454269B2 (ru)
KR (2) KR102241478B1 (ru)
CN (1) CN104936617B (ru)
AU (3) AU2013262788B2 (ru)
CA (1) CA2873286C (ru)
DK (1) DK2850104T3 (ru)
EA (1) EA029987B1 (ru)
ES (1) ES2686618T3 (ru)
HK (1) HK1206750A1 (ru)
IL (1) IL235733B (ru)
IN (1) IN2014DN10653A (ru)
MX (1) MX350808B (ru)
NZ (1) NZ702748A (ru)
SG (1) SG11201407610WA (ru)
TW (1) TWI593707B (ru)
WO (1) WO2013173496A2 (ru)
ZA (1) ZA201409224B (ru)

Families Citing this family (60)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2523915T5 (es) 2006-12-01 2022-05-26 Seagen Inc Agentes de unión a la diana variantes y usos de los mismos
US20130309223A1 (en) 2012-05-18 2013-11-21 Seattle Genetics, Inc. CD33 Antibodies And Use Of Same To Treat Cancer
SG11201600954XA (en) 2013-10-15 2016-03-30 Seattle Genetics Inc Pegylated drug-linkers for improved ligand-drug conjugate pharmacokinetics
KR102306493B1 (ko) * 2013-11-25 2021-09-28 씨젠 인크. 접합을 위한 ｃｈｏ 세포 배양물로부터의 항체 제조
CN110590950A (zh) 2013-12-13 2019-12-20 基因泰克公司 抗cd33抗体和免疫缀合物
CA3211226A1 (en) 2014-02-11 2015-08-20 Seagen Inc. Selective reduction of proteins
AU2015218202B2 (en) 2014-02-17 2020-10-15 Seagen Inc. Hydrophilic antibody-drug conjugates
JP6673848B2 (ja) * 2014-04-03 2020-03-25 セレクティスＣｅｌｌｅｃｔｉｓ 癌免疫療法のためのｃｄ３３特異的キメラ抗原受容体
BR112017001242A2 (pt) * 2014-07-21 2017-12-05 Novartis Ag tratamento de câncer usando um receptor antigênico quimérico a cd33
KR102329836B1 (ko) 2015-01-26 2021-11-19 셀렉티스 암 면역치료를 위한 항-CLL1 특이적 단일-체인 키메라 항원 수용체들(scCARS)
TW201709932A (zh) * 2015-06-12 2017-03-16 西雅圖遺傳學公司 Ｃｄ１２３抗體及其共軛物
JP7497953B2 (ja) 2015-06-12 2024-06-11 アレクトル エルエルシー 抗ｃｄ３３抗体及びその使用方法
CN116063499A (zh) 2015-06-12 2023-05-05 艾利妥 抗cd33抗体及其使用方法
FI3316909T3 (fi) 2015-06-30 2023-09-07 Seagen Inc NTB-A-vasta-aineita ja liittyviä koostumuksia ja menetelmiä
US11793880B2 (en) 2015-12-04 2023-10-24 Seagen Inc. Conjugates of quaternized tubulysin compounds
TWI814699B (zh) 2015-12-04 2023-09-11 美商思進公司 四級胺化妥布賴森(tubulysin)化合物之結合物
WO2017160954A1 (en) 2016-03-15 2017-09-21 Seattle Genetics, Inc. Combinations of pbd-based antibody drug conjugates with bcl-2 inhibitors
EA201892040A1 (ru) 2016-03-25 2019-04-30 Сиэтл Дженетикс, Инк. Способ получения пегилированных соединений лекарственный препарат - линкер и их промежуточных соединений
WO2017180768A1 (en) * 2016-04-15 2017-10-19 Seattle Genetics, Inc. Combinations of cd33 antibody drug conjugates with hypomethylating agents
EP3463463A4 (en) 2016-06-03 2020-01-15 Seattle Genetics, Inc. COMBINATION OF CD33 ANTIBODY-ACTIVE SUBSTANCE CONJUGATES WITH CHEMOTHERAPEUTICS
US11191771B2 (en) 2016-06-09 2021-12-07 Seagen Inc. Combinations of PBD-based antibody drug conjugates with FLT3 inhibitors
KR20240010534A (ko) 2016-08-09 2024-01-23 씨젠 인크. 개선된 물리화학적 특성을 갖는 자기 안정화 링커를 구비한 약물 접합체
SG11201903013SA (en) 2016-10-18 2019-05-30 Seattle Genetics Inc Targeted delivery of nicotinamide adenine dinucleotide salvage pathway inhibitors
CA3045466A1 (en) 2016-12-01 2018-06-07 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Radiolabeled anti-pd-l1 antibodies for immuno-pet imaging
EP3589320A4 (en) 2017-02-28 2020-12-23 Seagen Inc. CYSTEIN-MUTED ANTIBODIES FOR CONJUGATION
EP3589291A4 (en) 2017-02-28 2020-11-25 Vor Biopharma, Inc. COMPOSITIONS AND METHODS OF INHIBITION OF LINE-SPECIFIC PROTEINS
WO2018175994A1 (en) 2017-03-24 2018-09-27 Seattle Genetics, Inc. Process for the preparation of glucuronide drug-linkers and intermediates thereof
BR112019022445A2 (pt) 2017-04-27 2020-05-12 Seattle Genetics, Inc. Composição de conjugado ligante-fármaco, formulação, método para inibir a multiplicação de uma célula tumoral ou célula cancerosa ou causar apoptose em uma célula tumoral ou cancerosa, e, composto de conector de fármaco
WO2018213430A1 (en) * 2017-05-17 2018-11-22 Immunogen, Inc. Anti-cd33 immunoconjugate dosing regimens
WO2018218207A1 (en) * 2017-05-26 2018-11-29 Fred Hutchinson Cancer Research Center Anti-cd33 antibodies and uses thereof
CR20230170A (es) 2017-08-03 2023-05-31 Alector Llc ANTICUERPOS ANTI-TREM2 Y MÉTODOS PARA UTILIZARLOS (divisional 2019-0485)
WO2019028283A1 (en) 2017-08-03 2019-02-07 Alector Llc ANTI-CD33 ANTIBODIES AND METHODS OF USE
WO2019065964A1 (ja) 2017-09-29 2019-04-04 第一三共株式会社 抗体－ピロロベンゾジアゼピン誘導体コンジュゲート
CA3090805A1 (en) 2018-02-20 2019-08-29 Seattle Genetics, Inc. Hydrophobic auristatin f compounds and conjugates thereof
SG11202007943RA (en) * 2018-02-20 2020-09-29 Dragonfly Therapeutics Inc Antibody variable domains targeting cd33, and use thereof
EP3844187A1 (en) 2018-08-28 2021-07-07 Vor Biopharma, Inc. Genetically engineered hematopoietic stem cells and uses thereof
CN113801229A (zh) * 2018-08-31 2021-12-17 艾利妥 抗cd33抗体及其使用方法
EP3849565A4 (en) * 2018-09-12 2022-12-28 Fred Hutchinson Cancer Research Center REDUCING CD33 EXPRESSION FOR SELECTIVE PROTECTION OF THERAPEUTIC CELLS
US20210292413A1 (en) * 2018-09-25 2021-09-23 Academia Sinica Anti-siglec antibody, pharmaceutical composition comprising the same, and uses thereof
WO2020095107A1 (en) 2018-11-07 2020-05-14 Crispr Therapeutics Ag Anti-cd33 immune cell cancer therapy
SG11202104993SA (en) 2018-11-14 2021-06-29 Daiichi Sankyo Co Ltd Anti-cdh6 antibody-pyrrolobenzodiazepine derivative conjugate
EP3927749A4 (en) * 2019-02-22 2022-10-26 Memorial Sloan Kettering Cancer Center CD33 ANTIBODIES AND METHODS OF USE FOR THE TREATMENT OF CANCER
US20220168440A1 (en) 2019-03-25 2022-06-02 Daiichi Sankyo Company, Limited Antibody-pyrrolobenzodiazepine deprivative conjugate
WO2020196475A1 (ja) 2019-03-25 2020-10-01 第一三共株式会社 抗ｈｅｒ２抗体－ピロロベンゾジアゼピン誘導体コンジュゲート
BR112021017350A2 (pt) 2019-03-27 2021-11-16 Daiichi Sankyo Co Ltd Combinação de conjugado de anticorpo-derivado de pirrolobenzodiazepina e inibidor de parp
CN114007642A (zh) 2019-04-30 2022-02-01 森迪生物科学公司 嵌合受体及其使用方法
WO2021138407A2 (en) 2020-01-03 2021-07-08 Marengo Therapeutics, Inc. Multifunctional molecules that bind to cd33 and uses thereof
CN115955980A (zh) 2020-04-10 2023-04-11 思进公司 电荷可变接头
US20210402001A1 (en) * 2020-06-30 2021-12-30 David I. Cohen Zinc Porters, and their Monoclonal Antibody Conjugates, for the Prevention and Treatment of COVID-19 (SARS-CoV-2), Other Infections, and Cancers
WO2022050300A1 (ja) 2020-09-02 2022-03-10 第一三共株式会社 新規エンド－β－Ｎ－アセチルグルコサミニダーゼ
KR20230107628A (ko) * 2020-11-11 2023-07-17 버사퓨틱스 인코포레이티드 Wnt 수용체 ryk에 대한 항체 변이체
KR20230146521A (ko) 2021-01-13 2023-10-19 메모리얼 슬로안 케터링 캔서 센터 항체-피롤로벤조디아제핀 유도체 접합체
US20240115607A1 (en) 2021-01-26 2024-04-11 Cytocares (Shanghai) Inc. Chimeric antigen receptor (car) constructs and nk cells expressing car constructs
KR20230158005A (ko) 2021-03-18 2023-11-17 씨젠 인크. 생물학적 활성 화합물의 내재화된 접합체로부터의 선택적 약물 방출
IL307548A (en) 2021-04-20 2023-12-01 Seagen Inc Modulation of antibody-dependent cellular cytotoxicity
AU2022283467A1 (en) 2021-05-28 2023-12-07 Seagen Inc. Anthracycline antibody conjugates
IL312728A (en) 2021-11-30 2024-07-01 Daiichi Sankyo Co Ltd Antibodies masked in protease-wells
US20230381321A1 (en) 2022-03-17 2023-11-30 Seagan Inc., Camptothecin conjugates
WO2024129756A1 (en) 2022-12-13 2024-06-20 Seagen Inc. Site-specific engineered cysteine antibody drug conjugates
CN116375874B (zh) * 2023-04-14 2023-12-26 上海精翰生物科技有限公司 一种cd33抗体及其应用

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20020022031A1 (en) * 2000-08-08 2002-02-21 Goldenberg David M. Immunotherapy for chronic myelocytic leukemia
US20070190060A1 (en) * 2004-03-15 2007-08-16 Wyeth Passive targeting of cytotoxic agents
US20100158909A1 (en) * 2006-12-01 2010-06-24 Seattle Genetics, Inc. Variant Target Binding Agents and Uses Thereof
US20110206700A1 (en) * 2002-11-07 2011-08-25 Immunogen Inc. Anti-cd33 antibodies and methods for treatment of acute myeloid leukemia using the same
US20120082670A1 (en) * 2010-10-04 2012-04-05 Boehringer Ingelheim International Gmbh Cd33 binding agents

Family Cites Families (48)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CH652145A5 (de) 1982-01-22 1985-10-31 Sandoz Ag Verfahren zur in vitro-herstellung von hybridomen welche humane monoklonale antikoerper erzeugen.
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4634666A (en) 1984-01-06 1987-01-06 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Human-murine hybridoma fusion partner
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
DE3883899T3 (de) 1987-03-18 1999-04-22 Sb2, Inc., Danville, Calif. Geänderte antikörper.
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5859205A (en) 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
DE69133566T2 (de) 1990-01-12 2007-12-06 Amgen Fremont Inc. Bildung von xenogenen Antikörpern
US5427908A (en) 1990-05-01 1995-06-27 Affymax Technologies N.V. Recombinant library screening methods
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
US5877397A (en) 1990-08-29 1999-03-02 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5874299A (en) 1990-08-29 1999-02-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5814318A (en) 1990-08-29 1998-09-29 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5789650A (en) 1990-08-29 1998-08-04 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5770429A (en) 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
EP0814159B1 (en) 1990-08-29 2005-07-27 GenPharm International, Inc. Transgenic mice capable of producing heterologous antibodies
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5871907A (en) 1991-05-15 1999-02-16 Medical Research Council Methods for producing members of specific binding pairs
US5858657A (en) 1992-05-15 1999-01-12 Medical Research Council Methods for producing members of specific binding pairs
AU675916B2 (en) 1991-06-14 1997-02-27 Genentech Inc. Method for making humanized antibodies
ES2136092T3 (es) 1991-09-23 1999-11-16 Medical Res Council Procedimientos para la produccion de anticuerpos humanizados.
CA2124967C (en) 1991-12-17 2008-04-08 Nils Lonberg Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5733743A (en) 1992-03-24 1998-03-31 Cambridge Antibody Technology Limited Methods for producing members of specific binding pairs
ATE199392T1 (de) 1992-12-04 2001-03-15 Medical Res Council Multivalente und multispezifische bindungsproteine, deren herstellung und verwendung
US5877218A (en) 1994-01-10 1999-03-02 Teva Pharmaceutical Industries, Ltd. Compositions containing and methods of using 1-aminoindan and derivatives thereof and process for preparing optically active 1-aminoindan derivatives
US5834597A (en) 1996-05-20 1998-11-10 Protein Design Labs, Inc. Mutated nonactivating IgG2 domains and anti CD3 antibodies incorporating the same
JP2002536750A (ja) 1999-02-05 2002-10-29 サムスン エレクトロニクス カンパニー リミテッド 映像テキスチャー抽出方法及びその装置
EP2298809A3 (en) 2001-07-12 2012-02-15 FOOTE, Jefferson Super humanized antibodies
HUE027549T2 (hu) 2002-07-31 2016-10-28 Seattle Genetics Inc Hatóanyagot tartalmazó konjugátumok és alkalmazásuk rák, autoimmun betegség vagy fertõzéses betegség kezelésére
WO2004078215A2 (en) 2003-02-28 2004-09-16 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Use of antibody conjugated deoxycytidine kinase for adept
DK2489364T3 (en) 2003-11-06 2015-03-02 Seattle Genetics Inc Monomethylvaline compounds conjugated to antibodies
US7807165B2 (en) 2004-07-30 2010-10-05 Rinat Neuroscience Corp. Antibodies directed against amyloid-beta peptide and methods using same
AU2005286607B2 (en) 2004-09-23 2011-01-27 Genentech, Inc. Cysteine engineered antibodies and conjugates
AU2006269422B2 (en) 2005-07-07 2012-12-06 Seagen Inc. Monomethylvaline compounds having phenylalanine side-chain modifications at the C-terminus
US8871720B2 (en) 2005-07-07 2014-10-28 Seattle Genetics, Inc. Monomethylvaline compounds having phenylalanine carboxy modifications at the C-terminus
US7910702B2 (en) 2006-07-28 2011-03-22 The Governors Of The University Of Alberta Recombinant antibodies to sclerotinia antigens
DK2211904T3 (en) 2007-10-19 2016-10-24 Seattle Genetics Inc Cd19-binding agents and uses thereof
CN106039307A (zh) * 2008-08-05 2016-10-26 东丽株式会社 用于治疗和预防癌症的药物组合物
GB0819095D0 (en) * 2008-10-17 2008-11-26 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
WO2010104208A1 (en) * 2009-03-10 2010-09-16 Gene Techno Science Co., Ltd. Generation, expression and characterization of the humanized k33n monoclonal antibody
DE102009045006A1 (de) 2009-09-25 2011-04-14 Technische Universität Dresden Anti-CD33 Antikörper und ihre Anwendung zum Immunotargeting bei der Behandlung von CD33-assoziierten Erkrankungen
EA024118B1 (ru) 2010-04-15 2016-08-31 Сиэтл Дженетикс, Инк. Конъюгаты пирролбензодиазепина направленного действия
US20130309223A1 (en) 2012-05-18 2013-11-21 Seattle Genetics, Inc. CD33 Antibodies And Use Of Same To Treat Cancer
HUE057977T2 (hu) * 2012-12-13 2022-06-28 Immunomedics Inc Ellenanyagok és SN-38 immunkonjugátumainak dózisai javított hatásossággal és csökkentett toxicitással
SG10202009046SA (en) 2013-03-13 2020-10-29 Seattle Genetics Inc Cyclodextrin and antibody-drug conjugate formulations

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20020022031A1 (en) * 2000-08-08 2002-02-21 Goldenberg David M. Immunotherapy for chronic myelocytic leukemia
US20110206700A1 (en) * 2002-11-07 2011-08-25 Immunogen Inc. Anti-cd33 antibodies and methods for treatment of acute myeloid leukemia using the same
US20070190060A1 (en) * 2004-03-15 2007-08-16 Wyeth Passive targeting of cytotoxic agents
US20100158909A1 (en) * 2006-12-01 2010-06-24 Seattle Genetics, Inc. Variant Target Binding Agents and Uses Thereof
US20120082670A1 (en) * 2010-10-04 2012-04-05 Boehringer Ingelheim International Gmbh Cd33 binding agents

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
FELDMAN et al. "Phase III Randomized Multicenter Study of a Humanized Anti-CD33 Monoclonal Antibody, Lintuzumab, in Combination With Chemotherapy, Versus Chemotherapy Alone in Patients With Refractory or First-Relapsed Acute Myeloid Leukemia," Journal of Clinical Oncology, 20 June 2005 (20.06.2005), vol, 23, No. 18, Pgs. 4110-4116. entire document *

Also Published As

Publication number Publication date
US10787514B2 (en) 2020-09-29
KR102100467B1 (ko) 2020-04-14
WO2013173496A3 (en) 2015-06-04
US20210047404A1 (en) 2021-02-18
AU2013262788A1 (en) 2015-01-22
CA2873286A1 (en) 2013-11-21
SG11201407610WA (en) 2014-12-30
MX2014013866A (es) 2015-05-07
TWI593707B (zh) 2017-08-01
AU2018203508A1 (en) 2018-06-07
US20130309223A1 (en) 2013-11-21
AU2018203508B2 (en) 2020-03-12
KR20200039031A (ko) 2020-04-14
AU2013262788B2 (en) 2018-02-22
EP3421048A1 (en) 2019-01-02
CN104936617B (zh) 2018-11-02
US20150147316A1 (en) 2015-05-28
EP2850104A4 (en) 2016-07-13
DK2850104T3 (en) 2018-09-10
EA201492137A1 (ru) 2015-08-31
JP2015520758A (ja) 2015-07-23
US9587019B2 (en) 2017-03-07
IL235733A0 (en) 2015-01-29
EP2850104B1 (en) 2018-07-11
HK1206750A1 (en) 2016-01-15
EP2850104A2 (en) 2015-03-25
IN2014DN10653A (ru) 2015-09-11
ES2686618T3 (es) 2018-10-18
US20170204180A1 (en) 2017-07-20
TW201408700A (zh) 2014-03-01
CA2873286C (en) 2023-08-01
AU2020203365B2 (en) 2023-04-20
KR102241478B1 (ko) 2021-04-16
WO2013173496A2 (en) 2013-11-21
BR112014028507A2 (pt) 2017-06-27
NZ702748A (en) 2017-04-28
ZA201409224B (en) 2016-08-31
AU2020203365A1 (en) 2020-06-11
IL235733B (en) 2021-07-29
CN104936617A (zh) 2015-09-23
AU2018203508C1 (en) 2020-09-10
JP6454269B2 (ja) 2019-01-16
MX350808B (es) 2017-09-20
KR20150013321A (ko) 2015-02-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA029987B1 (ru) Антитела к cd33 и их применение в лечении рака
JP7330996B2 (ja) Ｃｄ７３を標的とする抗体および抗体－薬物複合体、その製造方法と使用
CA2984639C (en) Cd123 antibodies and conjugates thereof
JP6879947B2 (ja) 抗ｎｔｂ−ａ抗体及び関連組成物ならびに方法
US20090208418A1 (en) Superantibody synthesis and use in detection, prevention and treatment of disease
US7569674B2 (en) Autophilic antibodies
JP2020527136A (ja) チェックポイントインヒビター二重特異性抗体
KR20200121317A (ko) 글리피칸 3 항체 및 그의 접합체
US20120052515A1 (en) Therapeutic applications of noncovalent dimerizing antibodies
WO2009002939A2 (en) Autophilic antibodies
TW202330041A (zh) 抗cd37抗體-藥物結合物
KR20240095534A (ko) 화학요법 내성 암의 치료 방법에서 사용하기 위한 항체-약물 접합체
EA044092B1 (ru) Анти-ntb-a антитела и терапевтические композиции, их содержащие
BR112014028507B1 (pt) Anticorpos cd33 e uso dos mesmos para tratar câncer

Legal Events

Date Code Title Description
TC4A Change in name of a patent proprietor in a eurasian patent