EA025148B1

EA025148B1 - БИСПЕЦИФИЧЕСКИЕ СВЯЗЫВАЮЩИЕ МОЛЕКУЛЫ, СВЯЗЫВАЮЩИЕСЯ С VEGF И Ang2

Info

Publication number: EA025148B1
Application number: EA201301108A
Authority: EA
Inventors: Андреас Гшвинд; Рене Георг Отт; Жоашен Букно; Мари-Анж Бюйз; Эрик Депла
Original assignee: Бёрингер Ингельхайм Интернациональ Гмбх
Priority date: 2011-04-01
Filing date: 2012-03-30
Publication date: 2016-11-30
Also published as: EP2694546A1; HRP20161689T1; US9527925B2; AP2013007085A0; AU2012237234B2; US20220017642A1; US20130078248A1; IL227936B; CA2827817C; PT2694546T; EA036746B1; EP3144322A3; CA2827817A1; WO2012131078A1; CN105820243A; MX337543B; US20200010569A1; CN103562222B; HUE030148T2; UA114707C2

Abstract

В изобретении описаны биспецифические связывающие молекулы, которые связываются и с VEGF, и с Ang2, предпочтительно в форме иммуноглобулиновых единичных вариабельных доменов типа VHH и доменных антител, фармацевтические композиции, содержащие их, и их применение для лечения заболеваний, которые ассоциированы с опосредуемыми VEGF и/или опосредуемыми Ang2 воздействиями на ангиогенез. Кроме того, описаны нуклеиновые кислоты, кодирующие биспецифические связывающие молекулы, клетки-хозяева и способы их получения.

Description

Настоящее изобретение относится к области терапии человека, в частности противораковой терапии, и к агентам и композициям, применяемым в такой терапии.

Предпосылки создания изобретения

Когда опухоли достигают критического размера, составляющего примерно 1 мм³, они начинают зависеть от ангиогенеза для обеспечения поступления с кровью кислорода и питательных веществ, позволяющих им продолжать рост. Антиангиогенные терапии стали важным методом лечения при некоторых типах опухолей. Эти терапии сфокусированы на блокаде пути УЕОР (Ретгата с1 а1., ΝαΙ Ксу Эгид Όίδεον. 3(5), май 2004 г., р. 391-400) путем нейтрализации УЕОР (авастин) или его рецепторов (сутент и сорафиниб). Современные поведенные на мышах исследования продемонстрировали, что ангиопоэтин-2 (Апд2), лиганд Т1е2-рецептора, контролирует ремоделирование сосудов, обеспечивая функционирование других ангиогенных факторов, таких как УЕОР. Апд2 экспрессируется главным образом эндотелиальными клетками, установлено, что имеет место его сильная индукция под действием гипоксии и других ангиогенных факторов, и было продемонстрировано, что он регулирует пластичность сосудов опухоли, что позволяет сосудам реагировать на УЕОР и РОР2 (Аидикйп е1 а1., Ναι. Ке\'. Мо1. Се11. Βίο1. 10(3), март 2009 г., р. 165-177). Установлено, что элиминирование или ингибирование Апд2 приводит к пониженному ангиогенезу (Оа1е е! а1., ^еν Се11. 3(3), сентябрь 2002 г., р. 302-304; Ра1соп е! а1., Ат 1 Ра!йо1. 175(5), ноябрь 2009 г., р. 2159-2170), что согласуется с указанной ролью. Повышенные концентрации Апд2 в сыворотке обнаружены у пациентов с колоректальным раком (СКС), ЖС'ЪС и меланомой (ОоеДе е! а1., Вг 1 Сапсег. 103(9), 26 октября 2010 г., р. 1407-1414); Рагк е! а1., Сйек!. 132(1), июль 2007 г., р. 200-206; Не1Гпсй е! а1., Сйп Сапсег Кек. 15(4), 15 февраля 2009 г., р. 1384-1392). При СКС-раке уровни Апд2 в сыворотке коррелируют с терапевтическим ответом на анти-УЕОР терапию.

Система Апд-Т1е состоит из двух рецепторов (Т1е1 и Т1е2) и трех лигандов (Апд1, Апд2 и Апд4) (Аидикйп е! а1., ΝηΙ Кет Мо1 Се11 Βίο1. 10(3), март 2009 г., р. 165-177). Т1е2, Апд1 и Апд2 являются наиболее хорошо изученными представителями этого семейства, Т1е1 представляет собой сиротский рецептор, а роль Апд4 в ремоделировании сосудов подлежит изучению. Апд2 и Апд1 опосредуют противоположные функции при связывании с Т1е2 и активации. Опосредуемая Апд2 активация Т1е2 приводит к активации эндотелиальных клеток, диссоциации перицитов, просачиванию из сосудов и индукции и разрастанию сосудов. В отличие от Апд2 передача сигналов Апд1 поддерживает целостность сосудов путем рекрутмента перицитов, поддерживая, тем самым, состояние покоя эндотелиальных клеток.

Ангиопоэтин 2 (Апд2) представляет собой секретируемый лиганд для тирозинкиназного Т1е2рецептора с молекулярной массой 66 кДа (Аидикйп е! а1., Ν! Ке\' Мо1 Се11 Вю1. 10(3), март 2009 г., р. 165-177.). Апд2 состоит из Ν-концевого сойеД-соП домена и С-концевого фибриногенподобного домена, последний необходим для взаимодействия с Т1е2. Апд2 экспрессируется главным образом эндотелиальными клетками, было установлено, что имеет место его сильная индукция под действием гипоксии и других ангиогенных факторов, включая УЕОР. Т1е2 обнаружен в эндотелиальных клетках, гематопоэтических стволовых клетках и опухолевых клетках. Установлено, что Апд2-Т1е2 регулирует пластичность сосудов опухоли, что позволяет сосудам реагировать на УЕОР и РОР2.

1п νίΙΐΌ установлено, что Апд2 действует в качестве несильного митогена, хемоаттрактанта и индуктора образования трубочек в эндотелиальных клетках пупочной вены человека (НиУЕС). Апд2 индуцирует фосфорилирование тирозина при эктопической экспрессии Т1е2 в фибробластах и стимулирует передачу сигналов по ходу транскрипции, таких как фосфорилирование ЕКК-МАРК, АКТ и РАК, в НиУЕС. Описано антагонистическое воздействие Апд2 на индуцируемые Апд1 ответы эндотелиальных клеток.

Установлено, что дефицит Апд2 приводит у мышей к выраженному дефекту лимфатической структуры. Хотя снижение уровня Апд2 не имеет решающего значения для развития эмбриональных сосудов, мыши с дефуцитом Апд2 имели устойчивые дефекты сосудов в сетчатке и почке. В сочетании со схемой динамики экспрессии Апд2 в местах ангиогенеза (например, в яичнике), указанные данные свидетельствуют о том, что Апд2 контролирует ремоделирование сосудов, обеспечивая функции других ангиогенных факторов, таких как УЕОР.

Система Апд2-Т1е2 имеет решающее значение в процессе ангиогенного переключения и на последних стадиях ангиогенеза опухоли. Для экспрессии Апд2 характерна сильная повышающая регуляция в ассоциированном с опухолью эндотелии. Замедленный рост опухолей обнаружен при имплантации в мышей с дефицитом Апд2, прежде всего на ранних стадиях роста опухоли. Установлено, что терапевтическая блокада Апд2 с помощью тАЬ к Апд2 обладает широким спектром эффективности в отношении моделей различных опухолей, созданных с использованием ксенотрансплантатов.

Описано дополнительное воздействие тАЬ к Апд2 с использованием ингибиторов УЕОРК2 (тАЬ и низкомолекулярные ингибиторы).

Как обобщено в И8 2008/0014196 и \УО 2008/101985, ангиогенез принимает участие в патогенезе ряда нарушений, включая плотные (солидные) опухоли и метастазы, а также глазные болезни. Одним из наиболее важных проангиогенных факторов является сосудистый эндотелиальный фактор роста (УЕОР), который обозначают также как УЕОР-А или фактор сосудистой проницаемости (УРР). УЕОР принадле- 1 025148 жит к семейству генов, включающему плацентарный фактор роста (РЬОР), УЕОР-В, УЕОР-С, УЕОР-Э, УЕОР-Е и УЕОР-Р. Альтернативный сплайсинг мРНК единичного гена человеческого УЕОР приводит к образованию по меньшей мере шести изоформ (УЕОР121, УЕОР145, УЕОР165, УЕОР183, УЕОР189 и УЕОР206), при этом наиболее часто встречающейся изоформой является УЕОР165.

Идентифицировано два тирозинкиназных рецептора УЕОР (УЕОРК), которые взаимодействуют с УЕОР, а именно УЕОРК-1 (который обозначают также как ΡίΙ-1) и УЕОРК-2 (который обозначают также как КИК или Р1К-1). УЕОРК-1 обладает наиболее высокой аффинностью к УЕОР, а УЕОРК-2 характеризуется несколько более низкой аффинностью к УЕОР. У Реггага (Епбосппе Кеу., 25, 2004, р. 581-611) представлено подробное описание УЕОР, данные о его взаимодействии с рецепторами и его функция при нормальных и патологических процессах описаны, например, у НоеЬеп е1 а1., Рйагтасо1. Кеу., 56, 2004, р. 549-580.

Известно, что УЕОР представляет собой имеющий решающее значение регулятор как нормального, так и аномального ангиогенеза (Реггага и Эаук-Зтубг Епбосппе Кеу., 18, 1997, р. 4-25; Реггага, 1. Мо1. Меб., 77, 1999, р. 527-543). По сравнению с другими факторами роста, которые участвуют в процессах формирования сосудов, УЕОР является уникальным благодаря его высокой специфичности в отношении эндотелиальных клеток в сосудистой системе. В большинстве человеческих опухолей обнаружена сверхэкспрессия мРНК УЕОР. В случае роста опухолей ангиогенез, по-видимому, имеет решающее значение для перехода от гиперплазии к неоплазии и для обеспечения питания, необходимого для роста и метастазирования опухоли (Ро1ктап е1 а1., Иа1иге, 339, 1989, р. 58), что позволяет опухолевым клеткам приобретать преимущества с позиций роста по сравнению со здоровыми клетками. Таким образом, антиангиогенные терапии могут стать важным средством лечения некоторых типов опухолей. Эти терапии сфокусированы на блокаде УЕОР-пути (Реггага е1 а1., Иа1 Кеу Эгид П18соу., 3(5), май 2004 г., р. 391-400).

УЕОР принимает участие также в патогенезе глазных болезней. Обнаружен высокий уровень корреляции между концентрацией УЕОР в глазных жидкостях и наличием активной пролиферации кровеносных сосудов у пациентов с диабетическими и другими связанными с ишемией ретинопатиями. Кроме того, в современных исследованиях продемонстрирована локализация УЕОР в хороидальных неоваскулярных мембранах у пациентов, страдающих возрастной дегенерацией желтого пятна (АМЭ). При различных воспалительных заболеваниях обнаружена также повышающая регуляция УЕОР. УЕОР принимает участие в патогенезе ревматоидного артрита (РА), воспалительного заболевания, в котором ангиогенез играет значительную роль.

Раскрытие роли УЕОР в ангиогенезе и различных процессах свидетельствует о том, что он представляет собой новую потенциальную мишень для терапевтического вмешательства. Функцию УЕОР ингибировали с помощью малых молекул, которые блокируют или предупреждают активацию рецепторных тирозинкиназ УЕОР (8сЬ1аерр1 и ^ооб, Сапсег Ме1а81а818 Кеу., 18, 1999, р. 473-481) и, как следствие, оказывают воздействие на путь трансдукции сигнала рецептора УЕОР. Цитотоксические конъюгаты, содержащие бактериальные или растительные токсины, могут ингибировать стимулирующее действие УЕОР на ангиогенез опухолей. Например, конъюгаты УЕОР-токсин ΌΤ385 (домены дифтерийного токсина, слитые или химически конъюгированные с УЕОР165), эффективно ингибируют рост опухолей ίη У1уо. Ингибирование роста опухолей можно осуществлять также путем введения мутанта Р1к-1 или растворимых УЕОР-рецепторов с использованием ретровирусов.

Разработаны нейтрализующие УЕОР антитела, такие как А4.6.1 и МУ833, которые блокируют связывание УЕОР с его рецепторами, и в доклинических исследованиях была продемонстрирована их противоопухолевая активность (йт е1 а1., ИаФге, 362, 1993, р. 841-844; Ро1ктап Ν;·ιΙ. Меб., 1, 1995, р. 27-31; Рге51а е1 а1., Сапсег Ке8., 57, 1997, р. 4593-4599; Капш е1 а1., Ιηΐ. 1. Сапсег, 77, 1998, р. 933-936; Реггага и А1йа1о, ΝηΙ. Меб., 5, 1999, р. 1359-1364; 320, 340). Обзор исследований с использованием терапевтических подходов, основанных на применении антител к УЕОР, представлен у СатросЫаго и Наскей, Опсодепе, 22, 2003, р. 6537-6548.

В клинических исследованиях наиболее изученным является антитело А4.6.1, которое обозначают также как бевацизумаб (Ауакйп®; фирма ОепеШеск Сан-Франциско, шт. Калифорния).

В \УО 2008/101985 описаны иммоноглобулиновые единичные вариабельные домены верблюдовых (УНН или ’^апоЬоФек®, представленные в настоящем описании), которые связываются с УЕОР, и их применение для лечения состояний и заболеваний, отличающихся чрезмерным и/или патологическим ангиогенезом или неоваскуляризацией.

Таким образом, в основу настоящего изобретения была положена задача разработать новые ангиогенные связывающие молекулы, предназначенные для лечения человека.

Еще одним объектом изобретения являются способы предупреждения, лечения, облегчения и/или диагностирования указанных заболеваний, нарушений или состояний, заключающиеся в том, что применяют или вводят указанные связывающие молекулы и содержащие их композиции. В частности, объектом изобретения являются указанные фармакологически активные связывающие молекулы, композиции и/или способы, обладающие преимуществами по сравнению с агентами, композициями и/или методами, которые применяют в настоящее время и/или которые известны в данной области. Указанные преимуще- 2 025148 ства включают улучшенные терапевтические и/или фармакологические свойства и/или другие обладающие преимуществами свойства, например, для целей изготовления, прежде всего по сравнению с каноническими антителами, описанными выше, или их фрагментами.

Краткое изложение сущности изобретения

Первым объектом изобретения являются биспецифические связывающие молекулы, предпочтительно биспецифические иммуноглобулины, предпочтительно иммуноглобулиновые единичные вариабельные домены типа УНН и доменных антител, которые содержат по меньшей мере один УЕОР-связывающий компонент и по меньшей мере один Ли§2-связывающий компонент в одной молекуле. Эти биспецифические связывающие молекулы предпочтительно содержат также компонент, связывающий сывороточный альбумин.

Более конкретно, биспецифическая связывающая молекула, предлагаемая в изобретении, практически содержит (I) Лпд2-связывающий компонент, который специфически связывается по меньшей мере с одним эпитопом Лп§2, и (II) УЕОР-связывающий компонент, который специфически связывается по меньшей мере с одним эпитопом УЕОР, где компоненты сцеплены друг с другом таким образом, что они одновременно связываются с Лп§2 и УЕОР, или таким образом, что они связываются в определенный момент времени с Лп§2 или УЕОР.

Таким образом, согласно предпочтительным объектам изобретения два компонента содержат один или несколько иммуноглобулиновых единичных вариабельных доменов, которые могут независимо друг от друга представлять собой УНН или доменные антитела и/или любой другой вид иммуноглобулиновых единичных вариабельных доменов, таких как УЪ-домены, как они представлены в настоящем описании, при условии, что каждый из указанных иммуноглобулиновых единичных вариабельных доменов должен связываться с антигеном, т.е. Лп§2 или УЕОР соответственно.

Согласно предпочтительному варианту осуществления изобретения иммуноглобулиновые единичные вариабельные домены относятся к одному и тому же типу, в частности, все иммуноглобулиновые единичные вариабельные домены представляют собой УНН или доменные антитела.

Согласно наиболее предпочтительному варианту осуществления изобретения все иммуноглобулиновые единичные вариабельные домены представляют собой УНН, предпочтительно гуманизированные (или с оптимизированными последовательностями, как указано в настоящем описании) УНН. Таким образом, изобретение относится к биспецифическим связывающим молекулам, которые содержат (необязательно гуманизированное или с оптимизированной последовательностью) антитело к Лп§2 типа УНН (анти-Лп§2 УНН) и (необязательно гуманизированное или с оптимизированной последовательностью) антитело к УЕОР типа УНН (анти-УЕОР УНН).

Однако, как должно быть очевидно специалисту в данной области, настоящее изобретение аналогичным образом относится к биспецифическим связывающим молекулам, которые включают другие анти-Лп§2 или анти-УЕОР иммуноглобулиновые единичные вариабельные домены, такие как доменные антитела.

Другим объектом изобретения являются нуклеиновые кислоты, кодирующие биспецифические связывающие молекулы, предлагаемые в изобретении, а также клетки-хозяева, которые их содержат.

Изобретение относится также к продукту или композиции, который/которая содержит или представляет собой по меньшей мере одну биспецифическую связывающую молекулу, предлагаемую в изобретении, и необязательно один или несколько дополнительных компонентов указанной композиции.

Изобретение относится также к способам получения или создания биспецифических связывающих молекул, нуклеиновых кислот, клеток-хозяев, продуктов и композиций, указанных в настоящем описании.

Изобретение относится также к вариантам применения биспецифических связывающих молекул, нуклеиновых кислот, клеток-хозяев, продуктов и композиций, указанных в настоящем описании, а также к способам предупреждения и/или лечения заболеваний и нарушений, которые можно модулировать путем ингибирования Лп§2.

Было установлено, что Лпд2-связывающий компонент биспецифических связывающих молекул, предлагаемых в настоящем изобретении, связывается с Апд2 по меньшей мере в 5000 сильнее, предпочтительно в 10000 раз сильнее, чем с Апд1 или Апд4. Это должно в большой степени позволять избегать блокады активации опосредуемой Аи§1 передачи сигналов, что может препятствовать требуемому антиангиогенному действию.

Установлено также, что УЕОР-связывающий компонент биспецифических свяызвающих молекул, предлагаемых в изобретении, связывается с УЕОР-А с аффинностью по меньшей мере в 1000 раз более высокой, предпочтительно по меньшей мере в 5000 раз более высокой, более предпочтительно по меньшей мере в 10000 раз более высокой, чем с УЕОР-В, УЕОР-С, УЕОР-Ό или РЬОР. Благодаря наиболее выраженному связыванию с УЕОР-А не происходит взаимодействия с передачей сигнала УЕОРК3, которой модулирует ангиогенез лимфатических сосудов.

Предпочтительным вариантом осуществления изобретения являются биспецифические связывающие молекулы, предлагаемые в настоящем изобретении, в виде сцепленных УНН-доменов. Указанные молекулы существенно меньше канонических антител и поэтому могут глубже проникать в опухоль, чем

- 3 025148 указанные канонические антитела. Это полезное свойство дополнительно усиливается с помощью специфических последовательностей, указанных в настоящем описании, после элиминиации в них сайтов гликозилирования.

Кроме того, благодаря биспецифической природе (УБОР- и Апд2-связывающие компоненты в одной молекуле) проникновение в опухоль обеих функциональностей неизбежно должно быть одинаковым, что должно гарантировать, что благоприятные действия объединенного антагонизма УЕОР и Апд2 должно распространяться на всю глубину проникновения в опухоль. Это может являться преимуществом по сравнению с применением комбинации индивидуальных антагонистов к этим мишеням, поскольку глубина проникновения индивидуальных антагонистов всегда может варьироваться в некоторой степени.

Другим преимуществом предпочтительных биспецифических связывающих молекул, предлагаемых в настоящем изобретении, является их более продолжительное время полужизни в сыворотке благодаря наличию компонента, связывающего сывороточный альбумин, такого как связывающая сывороточный альбумин молекула, представленная в настоящем описании.

Эти и другие объекты, варианты осуществления изобретения, преимущества и варианты применения изобретения должны стать более понятными после ознакомления с дополнительно представленным ниже описанием.

Определения

Если не указано или определено иное, то все применяемые понятия употребляются в их обычном значении, принятом в данной области, которое очевидно специалистам в данной области. В качестве ссылки можно указать, например, стандартные руководства, такие как ЗатЬгоок с1 а1., Мо1еси1аг С1ошид: А БаЬогаГОгу Мапиа1, 2-е изд., тома 1-3, изд-во Со1б 8ртшд НагЬог каЬогаФгу Рге88, 1989; Ьсут, Оспс8 IV, изд-во ОхГогб ишусгзПу Рге88, №\ν Уотк, 1990, и РоШ с1 а1., 1тшиио1о§у (2-е изд.), изд-во Оо\усг Мебюа1 РиЬ118Ыи§, Бопбоп, №\ν Уотк, 1989, а также документы, касающиеся общего уровня техники, процитированные в настоящем описании; кроме того, если не указано иное, все методы, стадии, процессы и манипуляции, которые не описаны конкретно в деталях, можно осуществлять (и их осуществляли) хорошо известными методами, что должно быть очевидно специалисту в данной области. И в этом случае также в качестве ссылки можно, например, указать на известные руководства, сведения, касающиеся общего уровня техники, указанные выше, и дополнительные процитированные в них ссылки.

Понятие биспецифическая связывающая молекула относится к молекуле, которая содержит по меньшей мере одну Апд2-связывающую молекулу (или Апд2-связывающий компонент) и по меньшей мере одну УЕОР-связывающую молекулу (или УЕОР-связывающий компонент). Биспецифическая связывающая молекула может содержать более одной Апд2-связывающей молекулы и/или более одной УЕОР-связывающей молекулы, что имеет место в том случае, когда биспецифическая связывающая молекула содержит бипаратопную (что будет описано ниже) Апд2-связывающую молекулу и/или бипаратопную УЕОР-связывающую молекулу, в той части молекулы, которая связывается с Апд2 или с УЕОР, т.е. в ее Апд2-связывающем компоненте или (анти-Апд2-компоненте) или УЕОР-связывающем компоненте (или в анти-УЕОР-компоненте) соответственно. Однако понятие биспецифический в этом контексте не предусматривает, что из биспецифической связывающей молекулы исключаются дополнительные связывающие компоненты, которые имеют связывающую специфичность в отношении молекул, отличных от УЕОР и Апд2. Примерами указанных дополнительных связывающих компонентов являются (но не ограничиваясь только ими) связывающие компоненты, которые связываются с сывороточным альбумином.

Если не указано иное, то понятия иммуноглобулин и последовательность иммуноглобулина, если их используют в контексте настоящего описания касательно состоящего только из тяжелых цепей антитела или канонического, состоящего из 4 цепей антитела, применяют в качестве общих понятий, которые включают полноразмерное антитело, его индивидуальные цепи, а также все его области, домены или фрагменты (включая (но не ограничиваясь только ими) антигенсвязывающие домены или фрагменты, такие как УНН-домены или УН/УЪ-домены соответственно). Кроме того, понятие последовательность в контексте настоящего описания (например, в понятиях типа последовательность иммуноглобулина, последовательность антитела последовательность (единичного) вариабельного домена, последовательность УНН или последовательность белка), как это обычно принято, относится как к соответствующим аминокислотным последовательностям, так и к последовательностям нуклеиновых кислот или нуклеотидным последовательностям, которые их кодируют, если из контекста не следует более ограниченная интерпретация.

Понятие домен (область) (полипептида или белка) в контексте настоящего описания относится к складчатой белкой структуре, которая обладает способностью сохранять свою третичную структуру, независимо от остального белка. Как правило, домены ответственны за отдельные функциональные свойства белков и во многих случаях их можно добавлять, удалять или переносить в другие белки без потери функции оставшейся части белка и/или домена.

Понятие иммуноглобулиновый домен в контексте настоящего описания относится к глобулярной области цепи антитела (такой, например, как цепь канонического, состоящего из 4 цепей антитела или состоящего из тяжелых цепей антитела) или к полипептиду, который состоит практически из указанной

- 4 025148 глобулярной области. Иммуноглобулиновые домены отличаются тем, что они сохраняют присущую иммуноглобулину складчатую структуру молекул антитела, которая представляет собой 2-слойный сэндвич, состоящий примерно из 7 антипараллельных бета-цепей, упакованных в две бета-складки, необязательно стабилизированных с помощью консервативного дисульфидного мостика. Иммуноглобулиновый домен содержит вариабельный(ые) домен(ы), т.е. один или несколько иммуноглобулиновых вариабельных доменов. Понятие иммуноглобулиновый вариабельный домен (область) в контексте настоящего описания относится к иммуноглобулиновому домену, состоящему практически из четырех каркасных участков, как они определены в данной области, и обозначены ниже как каркасный участок 1 или РК1; каркасный участок 2 или РК2; каркасный участок 3 или РК3 и каркасный участок 4 или РК4 соответственно; указанные каркасные участки перемежаются тремя гипервариабельными участками, участками, определяющими комплементарность или СЭР, как они определены в данной области, и обозначены ниже как гипервариабельный участок 1 или СИК1; гипервариабельный участок 2 или СИК.2 и гипервариабельный участок 3 или С.ПР3 соответственно. Таким образом, общую структуру или последовательность вариабельного домена иммуноглобулина можно обозначать как РК1СПК1-РК2-СПК2-РК3-СИК3-РК.4. Именно вариабельный(ые) домен(ы) иммуноглобулина придает(ют) специфичность антителу в отношении антигена, поскольку он(они) несут антигенсвязывающий центр. В контексте настоящего изобретения предпочтительными являются иммуноглобулиновые единичные вариабельные домены типа УНН и доменных антител.

Понятие иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен в контексте настоящего описания относится к иммуноглобулиновому вариабельному домену, который обладает способностью специфически связываться с эпитопом антигена без спаривания с дополнительным иммуноглобулиновым вариабельным доменом. Одним из примеров иммуноглобулиновых единичных вариабельных доменов согласно настоящему изобретению являются доменные антитела, такие как единичные вариабельные домены УН и УЪ (УН-домены и УЪ-домены). Другим примером иммуноглобулиновых единичных вариабельных доменов являются УНН-домены (или просто УНН) из представителей верблюдовых, как указано ниже в настоящем описания.

В свете вышеуказанных определений антигенсвязывающий домен канонического, состоящего их 4 цепей антитела (такого как молекула 1дО, 1дМ, 1§Л, 1§И или 1дЕ; известная в данной области) или РаЬ-фрагмента, Р(аЬ')₂-фрагмента, Ρν-фрагмента, такого как связанный дисульфидным мостиком Ρν или 8еРу-фрагмент, или димерного антитела (которые все известны в данной области), выведенный из указанного канонического, состоящего из 4 цепей антитела, не следует рассматривать как иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен, поскольку в этих случаях связывание с соответствующим эпитопом антигена в норме не может осуществляться с помощью одного (единичного) иммуноглобулинового домена, а должно происходить посредством спаривания (ассоциации) иммуноглобулиновых доменов, таких как вариабельные области легкой и тяжелой цепей, т.е. с помощью пары УН-УЪ иммуноглобулиновых доменов, которые совместно связываются с эпитопом соответствующего антигена.

УНН-домены, которые обозначают также как УНН, У_НН-домены, фрагменты УНН-антитела и УНН-антитела, впервые были описаны как антигенсвязывающие иммуноглобулиновые (вариабельные) домены состоящих из тяжелых цепей антител (т.е. антител, в которых отсутствуют легкие цепи), Натег8-Сак1егтап С., АШгНоисН Т., МцуМегтапк З., КоЬшкоп О., Нашего С., Зопда Е.В., ВеийаЬтаи Ν., Нашего К. в №Цига11у оеештшд апйЬоФек άеνо^ά о! Ιφΐιΐ сНатк; №Циге 363, 1993, р. 446-448). Понятие УНН-домен было выбрано для того, что можно было отличать эти вариабельные домены от вариабельных областей тяжелых цепей, которые присутствуют в канонических, состоящих из 4 цепей антителах (они обозначены далее как У_Н-домены (области) или УН-домены (области)) и от вариабельных областей легких цепей, которые присутствуют в канонических, состоящих из 4 цепей антителах (они обозначены далее как У_ъ-домены (области) или УЪ-домены (области)). УНН-домены могут специфически связываться с эпитопом без дополнительного антигенсвязывающего домена (в отличие от УН- или УЪ-доменов в каноническом состоящем из 4 цепей антителе, в котором для распознавания эпитопа требуется присутствие УЪ-домена в сочетании с УН-доменом). УНН-домены представляют собой небольшие, сильные и эффективные распознающие антиген структуры (единицы), образованные единичным иммуноглобулиновым доменом.

В контексте настоящего изобретения понятия УНН-домен, УНН, УНН-домен, фрагмент УНН-антитела, УНН-антитело, а также №шоЬо4у® и домен NаηоЬоάу® (№шоЬо4у является товарным знаком компании АЬ1упх КУ.; Гент, Бельгия) применяют взаимозаменяемо, и они относятся к иммуноглобулиновым единичным вариабельным доменам (которые имеют следующее строение: РК.1-СНК1-РК2-СНК2-РК3-СНК.3-РК4 и которые специфически связываются с эпитопом, не требуя присутствия второго иммуноглобулинового вариабельного домена), и они отличаются от УН-доменов наличием так называемых отличительных остатков, остатков-маркеров, как они определены, например, в АО 2009/109635, фиг. 1.

Аминокислотные остатки иммуноглобулинового единичного вариабельного домена, например УНН, нумеруют согласно общей номенклатуре Кэбота для УН-доменов (Зедиепсе о! рго1ешк о! 1штипо1од1са1 ш1еге81, изд-во ИЗ РиЬйс НеаНН ЗеМсек, КН ВеШекйа, ΜΌ, публикация № 91), в том виде, в

- 5 025148 котором ее применяют для УНН-доменов верблюдовых, например, как продемонстрировано на фиг 2 у КтесЬтапп и Миу1бегтап8, 1. 1ттипо1. МеШобк 231, 1999, р. 25-38. Согласно этой нумерации:

РК1 содержит аминокислотные остатки, присутствующие в положениях 1-30,

СЭК1 содержит аминокислотные остатки, присутствующие в положениях 31-35,

РК2 содержит аминокислотные остатки, присутствующие в положениях 36-49,

СЭК2 содержит аминокислотные остатки, присутствующие в положениях 50-65,

РК3 содержит аминокислотные остатки, присутствующие в положениях 66-94,

СЭК3 содержит аминокислотные остатки, присутствующие в положениях 95-102 и

РК4 содержит аминокислотные остатки, присутствующие в положениях 103-113.

Однако следует отметить, что, как хорошо известно для У_Н-доменов и для УНН-доменов, общее количество аминокислотных остатков в каждом СОК может варьироваться и может не соответствовать общему количеству аминокислотных остатков, указанных в номенклатуре Кэбота (т.е. одно или несколько положений согласно номенклатуре Кэбота может быть незанятым в фактической последовательности или фактическая последовательность может содержать большее количество аминокислотных остатков, чем количество остатков, которое должно присутствовать согласно номенклатуре Кэбота). Это означает, что, в целом, нумерация по Кэботу может как соответствовать, так и не соответствовать фактической нумерации аминокислотных остатков в фактической последовательности.

В данной области известны альтернативные методы нумерации аминокислотных остатков У_Н-доменов, указанные методы также можно применять аналогичным образом к УНН-доменам. Однако в настоящем описании, формуле изобретения и на чертежах нумерация соответствует номенклатуре Кэбота, и ее применяют к описанным выше УНН-доменам, если специально не указано иное.

Общее количество аминокислотных остатков в УНН-домене, как правило, составляет от 110 до 120, чаще от 112 до 115. Однако следует отметить, что для целей настоящего изобретения можно применять также как более короткие, так и более длинные последовательности.

Иммуноглобулиновые единичные вариабельные домены (например, УНН и доменные антитела), имеют ряд уникальных структурных характеристик и функциональных свойств, которые делают их наиболее предпочтительными для применения в терапии в качестве функциональных антигенсвязывающих молекул. В частности (но не ограничиваясь только ими), УНН-домены (которые созданы природой таким образом, что они могут функционально связываться с антигеном без спаривания с вариабельной областью легкой цепи) могут функционировать как единичные относительно мелкие функциональные антигенсвязывающие структурные единицы.

Благодаря своим уникальным свойствам иммуноглобулиновые единичные вариабельные домены, как они определены в настоящем описании, типа УНН или УН (или УЬ), либо индивидуально, либо в качестве части более крупного полипептида, например бипаратопной молекулы, обладают рядом важных преимуществ:

только один домен необходим для связывания антигена с высокой аффинностью и высокой селективностью, поэтому отсутствует как необходимость в наличии двух отдельных доменов, так и необходимость в требовании, чтобы эти два домена находились в правильной пространственной конформации и конфигурации (т.е. необходимость в применении специально созданных линкеров, как в случае 8сРу);

иммуноглобулиновые единичные вариабельные домены можно экспрессировать с одной молекулы нуклеиновой кислоты, и при этом отсутствует необходимость в какой-либо посттрансляционной модификации (типа гликозилирования);

иммуноглобулиновые единичные вариабельные домены легко можно конструировать в многовалентных и мультиспецифических форматах (что подробно обсуждено ниже в настоящем описании);

иммуноглобулиновые единичные вариабельные домены обладают высокой специфичностью и аффинностью к мишени, низкой присущей им токсичностью, и их можно вводить путями, отличными от инфузии или инъекции;

иммуноглобулиновые единичные вариабельные домены обладают высокой устойчивостью к нагреванию, рН, протеазам и другим денатурирующим агентам или условиям, и поэтому их можно получать, хранить или транспортировать без применения охлаждающего оборудования;

иммуноглобулиновые единичные вариабельные домены можно легко и относительно дешево получать как в лабораторном, так и в промышленном масштабе. Например, иммуноглобулиновые единичные вариабельные домены и полипептиды, содержащие их, можно получать с использованием ферментации микроорганизмов (что более подробно описано ниже), и для этой цели не требуется применения экспрессионных систем млекопитающих, что имеет место в случае канонических антител;

иммуноглобулиновые единичные вариабельные домены являются относительно небольшими (примерно 15 кДа или в 10 раз меньше, чем канонический 1§О) по сравнению с каноническими состоящими из 4 цепей антителами и их антигенсвязывающими фрагментами, и поэтому для них характерна высокая (более высокая) способность проникать в ткани (включая (но не ограничиваясь только ими) плотные опухоли и другие плотные ткани), и их можно вводить в более высоких дозах, чем дозы канонических, состоящих из 4 цепей антител и их антигенсвязывающих фрагментов;

- 6 025148

УНН обладают специфической так называемой способностью связываться с сайтом, расположенном в расщелине (бороздке) (в том числе благодаря их удлиненной СЭКЗ -петле, в отличие от УН-доменов состоящих из 4 цепей антител), и поэтому для них являются доступными также мишени и эпитопы, которые не доступны для канонических, состоящих из 4 цепей антител и их антигенсвязывающих фрагментов;

УНН обладают важным преимуществом, которое заключается в том, что они обладают высокой растворимостью и очень высокой стабильностью и не имеют тенденцию к агрегации (что имеет место в случае полученных из антител мышей антигенсвязывающих доменов, описанных у Аатб с1 а1., №Цигс. 341, 1989, р. 544-546)).

Иммуноглобулиновые единичные вариабельные домены, предлагаемые в изобретении, не ограничены каким-либо конкретным биологическим источником, из которого их получают, или конкретным методом получения. Например, процесс получения УНН может включать следующие стадии:

(1) выделение УНН-домена из встречающегося в естественных условиях содержащего (только) тяжелые цепи антитела; или скрининг библиотеки содержащих (только) тяжелые цепи антител или УНН, и выделение из них УНН;

(2) экспрессия молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей УНН-домен, имеющий встречающуюся в естественных условиях последовательность;

(3) гуманизация (или оптимизация последовательности) УНН, необязательно после созревания аффинности, с помощью имеющей встречающуюся в естественных условиях последовательности, или экспрессия нуклеиновой кислоты, которая кодирует гуманизированный УНН;

(4) камелизация (согласно описанному ниже методу) иммуноглобулинового единичного вариабельного домена тяжелой цепи встречающегося в естественных условиях антитела, полученного из различных видов животных, в частности видов млекопитающих, таких как человек, или экспрессия молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей указанный камелизированный домен;

(5) камелизация УН или экспрессия молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей камелизированный УН;

(6) применение методик для получения синтетических или полусинтетических белков, полипептидов или других аминокислотных последовательностей;

(7) получение молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей УНН-домен, с помощью методов синтеза нуклеиновых кислот с последующей экспрессией полученной таким образом нуклеиновой кислоты;

(8) подвергание содержащих тяжелые цепи антител или УНН процессу созревания аффинности, мутагенезу (например, неспецифическому мутагенезу или сайтаправленному мутагенезу) и/или любой(ым) другой(им) обработке(ам) для повышения аффинности и/или специфичности УНН; и/или (9) сочетание или выбор некоторых из вышеизложенных стадий.

Приемлемые методы и процессы осуществления указанных выше стадий известны в данной области и должны быть очевидны специалисту в данной области. Например, методы получения УНН-доменов, которые связываются со специфическим антигеном или эпитопом, описаны в АО 2006/040153 и АО 2006/122786.

Согласно конкретным вариантам осуществления изобретения иммуноглобулиновые единичные вариабельные домены, предлагаемые в изобретении, или присутствующие в полипептидах, предлагаемых в изобретении, представляют собой УНН-домены, аминокислотная последовательность которых практически соответствует аминокислотной последовательности встречающегося в естественных условиях УНН-домена, но является гуманизированной (имеет оптимизированную последовательность) необязательно в результате созревания аффинности), т.е. имеет(ют) место замена(ы) одного или нескольких аминокислотных остатков в аминокислотной последовательности указанного встречающегося в естественных условиях УНН на один или несколько аминокислотных остатков, которые находятся в соответствующем(их) положении(ях) в вариабельной области тяжелой цепи канонического, состоящего из 4 цепей человеческого антитела. Для этой цели можно применять методы, известные в данной области, которые являются общепринятыми для специалиста в данной области.

Гуманизированный УНН-домен может содержать одну или несколько последовательностей полностью человеческих каркасных участков и в еще более конкретном варианте осуществления изобретения может содержать последовательности человеческих каркасных участков, выведенные из последовательностей человеческой зародышевой линии УЬЗ, таких как ΌΡ-29, ΌΡ-47, ΌΡ-51, или их части, или обладать высоким уровнем гомологии с ними, необязательно в сочетании с 1Н-последовательностями, такими как 1Н5. Так, протокол гуманизации может предусматривать замену любого из остатков УНН на соответствующие остатки каркасного участка 1, 2 и 3 (РК1, РК2 и РК3) генов УН зародышевой линии, таких как ΌΡ 47, ΌΡ 29 и ΌΡ 51 либо индивидуально, либо в комбинации. Приемлемые каркасные участки (РК) иммуноглобулиновых единичных вариабельных доменов, предлагаемых в изобретении, можно выбирать из участков, описанных, например, в АО 2006/004678, и, в частности, они включают так называемые классы КЕКЕ и ОЬЕА. Наиболее предпочтительными являются иммуноглобулиновые единичные вариабельные домены, которые имеют аминокислотную последовательность С-Ь-Е-А примерно в положениях 44-47, и их соответствующие гуманизированные копии. Гуманизированный УНН-домен может

- 7 025148 содержать одну или несколько последовательностей полностью человеческого каркасного участка.

Например, применяемая с целью гуманизации замена ΥΗΗ, принадлежащих к 103 Ρ,Κ,δ-группе и/или ΟΕΕν-группе (что описано ниже), представляет собой замену 1080 на 108Ь. Методы гуманизации иммуноглобулиновых единичных вариабельных доменов известны в данной области.

Связывающие иммуноглобулиновые единичные вариабельные домены с улучшенными с позиций терапевтического применения свойствами, например обладающие повышенной аффинностью или пониженной иммуногенностью, можно получать из индивидуальных связывающих молекул с помощью методик, известных в данной области, таких как созревание аффинности (например используя в качестве исходных синтетические, произвольные или встречающиеся в естественных условиях последовательности иммуноглобулинов), СЭК-трансплантация, гуманизация, объединение фрагментов, полученных из различных последовательностей иммуноглобулинов, ПЦР-сборка с использованием перекрывающихся праймеров и аналогичные методики, предназначенные для конструирования последовательностей иммуноглобулинов, которые хорошо известны специалисту в данной области; или любой приемлемой комбинации любых вышеизложенных методов, что обозначают также понятием оптимизация последовательности, употребляемым в настоящем описании. В качестве ссылки можно указать, например, стандартные руководства, а также можно использовать приведенное ниже описание и сведения, представленные в примерах.

При необходимости связывающую молекулу, предлагаемую в изобретении, которая обладает повышенной аффинностью, получают из другой связывающей молекулы путем созревания аффинности, последняя представляет собой родительскую связывающую молекулу относительно молекулы с созревшей аффинностью.

Ранее были описаны методы получения ΥΗΗ, которые связываются со специфическим антигеном или эпитопом, см., например, XVО 2006/040153 и XVО 2006/122786. Как подробно описано в указанных документах, νΗΗ-домены, выведенные из представителей верблюдовых, можно гуманизировать (в контексте настоящего описания этот процесс обозначен также как оптимизация последовательности, при этом оптимизация последовательности, помимо гуманизации, может включать дополнительную модификацию последовательности с помощью одной или нескольких мутаций, которые позволяют получать νΗΗ с улучшенными свойствами, таких как удаление потенциальных сайтов посттрансляционных модификаций) путем замены одного или нескольких аминокислотных остатков в аминокислотной последовательности исходной последовательности νΗΗ на один или несколько аминокислотных остатков, которые находятся в соответствующем(их) положении(ях) в νΗ-области канонического, состоящего из 4 цепей человеческого антитела. Гуманизированный νΗΗ-домен может содержать одну или несколько последовательностей полностью человеческого каркасного участка и в более конкретном варианте осуществления изобретения может содержать последовательности человеческих каркасных участков, выведенные из ΌΡ-29, ΌΡ-47, ΌΡ-51, или их части, необязательно в сочетании с Ш-последовательностями, такими как Ш5.

Доменные антитела, которые обозначают также как ЭаЬ или ЙЛЬ (понятия доменные антитела и ЙЛЬ являются товарным знаком группы компаний О1ахо8тййК1те), описаны, например, у ΧναπΙ Е.8. е( а1. в Βίηάίη§ асйуЫез οί а гереПопе οί зшд1е 1ттипод1оЬи1т уапаЫе йотатз зесге1ей Ггот ЕзсйепсЫа сой, ЫаЫге 341, 1989, р. 544-546; у ИоЙ ЬТ е( а1. в Поташ апйЬоЫез: ргоЮиъ Гог 1йегару, ΤΡΕΝΏ8 ίη Вю1есйпо1оду 21(11), 2003, р. 484-490 и в νθ 2003/002609.

Доменные антитела в основном соответствуют νΗ- или МЪ-доменам антител из представителей млекопитающих, не относящихся к верблюдовым, в частности человеческих, состоящих из 4 цепей антител. Для придания способности связываться с эпитопом в виде единичного антигенсвязывающего домена, т.е. без спаривания с УЬ- или νΗ-доменом соответственно, требуется осуществлять специфическую селекцию в отношении указанных антигенсвязывающих свойств, например, с использованием библиотек человеческих последовательностей единичных νΗ- или МЪ-доменов.

Доменные антитела подобно νΗΗ имеют молекулярную массу, составляющую от примерно 13 до примерно 16 кДа, если их выводят из полностью человеческих последовательностей, и они не нуждаются в гуманизации, например, для терапевтического применения на людях. Так же как и в случае νΗΗ-доменов, их можно с успехом экспрессировать в прокариотических системах экспрессии, что приводит к существенному снижению общей стоимости производства.

Кроме того, что также должно быть очевидно специалисту в данной области, можно трансплантировать один или несколько указанных выше СОК в другие каркасы, включая (но не ограничиваясь только ими) человеческие каркасы или неиммуноглобулиновые каркасы. Приемлемые каркасы и методики такой трансплантации СОК известны в данной области.

Понятия эпитоп и антигенная детерминанта, которые можно применять взаимозаменяемо, относятся к участку макромолекулы, такой как полипептид, который распознается антигенсвязывающими молекулами, такими как канонические антитела или полипептиды, предлагаемые в изобретении, и более конкретно антигенсвязывающими центрами указанных молекул. Эпитопы представляют собой минимальный сайт связывания для иммуноглобулина и поэтому представляют собой специфическую мишень для иммуноглобулина.

- 8 025148

Считают, что полипептид (такой как иммуноглобулин, антитело, иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен, предлагаемый в изобретении, или в целом связывающая молекула или ее фрагмент), который может связываться с или специфически связываться с, который обладает аффинностью к и/или специфичностью к определенному эпитопу, антигену или белку (или по меньшей мере одному его участку, фрагменту или эпитопу), действует против или является направленным против указанного эпитопа, антигена или белка, или является связывающей молекулой в отношении указанного эпитопа, антигена или белка. В этом контексте УЕОР-связывающий компонент можно обозначать также как УЕОР-нейтрализующий компонент.

Как правило, понятие специфичность относится к ряду антигенов или эпитопов различных типов, с которыми конкретная антигенсвязывающая молекула или молекула антигенсвязывающего белка (такая как иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен, предлагаемый в изобретении) может связываться. Специфичность антигенсвязывающей молекулы можно определять на основе ее аффинности и/или авидности. Аффинность, характеризующаяся константной равновесия реакции диссоциации комплекса антиген:антигенсвязывающий белок (К_с), является мерой силы связывания между эпитопом и антигенсвязывающим центром антигенсвязывающего белка: чем меньше величина К_с, тем выше сила связывания между эпитопом и антигенсвязывающей молекулой (в альтернативном варианте аффинность можно выражать в виде константы аффиннности (К_А), которая представляет собой 1/К_с). Как должно быть очевидно специалисту в данной области (например, после ознакомления с представленным ниже дополнительным описанием), аффинность можно определять хорошо известным методом в зависимости от специфичности представляющего интерес антигена. Авидность представляет собой меру силы связывания между антигенсвязывающей молекулой (такой как иммуноглобулин, антитело, иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен или полипептид, содержащий их) и соответствующего антигена. Авидность связана как с аффинностью между эпитопом и его антигенсвязывающем центром антигенсвязывающей молекулы, так и с количеством соответствующих сайтов связывания, которые присутствует в антигенсвязывающей молекуле.

Часть антигенсвязывающей молекулы, которая распознает эпитоп, называется паратопом.

Если не указано иное, то понятие УЕОР-связывающая молекула или Апд2-связывающая молекула включает антитела к УБОР или к Аи§2, фрагменты антитела к УБОР или антитела к Аи§2, молекулы, напоминающие антитело к УЕОР или молекулы, напоминающие антитело к Аи§2, как они определены в настоящем описании, и конъюгаты, включающие любую из них. Антитела представляют собой (но не ограничиваясь только ими) моноклональные и химерные моноклональные антитела. Понятие антитело относится к полным иммуноглобулинам, например, моноклональным антителам, которые получают путем рекомбинантной экспрессии в клетках-хозяевах, а также к фрагментам антител или молекулам, напоминающим антитела, включая одноцепочечные антитела и линейные антитела, так называемые 8ΜΙΡ (§ша11 Моби1ат 1ттипорЬагтасеийса15, малые модульные иммунофармацевтические средства), например, описанные в \УО 02/056910. Напоминающие антитела молекулы включают иммуноглобулиновые единичные вариабельные домены, представленные в настоящем описании. Другими примерами напоминающих антитела молекул являются антитела из суперсемейства иммуноглобулинов (1§§Р) или молекулы с трансплантированными СОК.

Понятие Апд2-связывающая молекула или УЕОР-связывающая молекула соответственно относится как к одновалентным мишень связывающим молекулам (т.е. к молекулам, которые связываются с одним эпитопом соответствующей мишени), так и к двух- или многовалентным связывающим молекулам (т.е. связывающим молекулам, которые связываются более чем с одним эпитопом, например бипаратопным молекулам, как они описаны ниже). Ап§2-(или УЕОР)-связывающие молекулы, которые содержат более одного связывающегося с Апд2 (или УЕОР) иммуноглобулинового единичного вариабельного домена, обозначают так же как форматированные связывающие молекулы, они могут содержать в мишеньсвязывающем компоненте, помимо иммуноглобулиновых единичных вариабельных доменов, также линкеры и/или фрагменты с эффекторными функциями, например фрагменты, удлиняющие время полужизни, типа альбуминсвязывающих иммуноглобулиновых единичных вариабельных доменов, и/или партера по слиянию типа сывороточного альбумина и/или присоединенного полимера типа ПЭГ.

Понятие бипаратопная Ап§2-(или УЕОР)-связывающая молекула или бипаратопный иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен в контексте настоящего описания означает связывающую молекулу, которая содержит первый иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен и второй иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен, как они определены в настоящем описании, при этом две молекулы связываются с двумя неперекрывающимися эпитопами соответствующего антигена. Бипаратопные связывающие молекулы состоят из иммуноглобулиновых единичных вариабельных доменов, которые обладают различными специфичностями в отношении эпитопа. Паратопом называют часть антигенсвязывающей молекулы (такой как антитело или иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен, предлагаемый в изобретении), которая распознает эпитоп.

Форматированная связывающая молекула может, хотя этот является менее предпочтительным, содержать также два идентичных иммуноглобулиновых единичных вариабельных домена или содержать два различных иммуноглобулиновых единичных вариабельных домена, которые распознают один и тот

- 9 025148 же или перекрывающиеся эпитопы или соответствующий антиген. В этом случае касательно УЕОР два иммуноглобулиновых единичных вариабельных домена могут связываться с одним и тем же или перекрывающимся эпитопом в каждом из двух мономеров, которые образуют димер УЕОР.

Как правило, связывание связывающих молекул, предлагаемых в изобретении, характеризуется значением константы диссоциации (К_с), составляющей от 10Е-5 до 10Е-14 моль/л (М) или менее, предпочтительно от 10Е-7 до 10Е-14 моль/л (М) или менее, более предпочтительно от 10Е-8 до 10Е-14 моль/л и еще более предпочтительно от 10Е-11 до 10Е-13 моль/л, по данным, полученным, например, с помощью В1асоге- или Кшеха-анализа), и/или значением константы ассоциации (К_А), составляющей по меньшей мере 10Е8 МЕ^-1, более предпочтительно по меньшей мере 10Е9 МЕ-1, например по меньшей мере 10Е11 МЕ^-1. Как правило, считается, что любое значение величины К_с, превышающее 10Е-4 М, свидетельствует о неспецифическом связывании. Предпочтительно связывание полипептида, предлагаемого в изобретении, с требуемым антигеном, т.е. УЕОР или Апд2 соответственно, должно характеризоваться значением К_с, составляющим менее 500 нМ, предпочтительно менее 200 нМ, более предпочтительно менее 10 нМ, например менее 500 пМ. Специфическое связывание антигенсвязывающего участка с антигеном или эпитопом можно определять с помощью любого приемлемого хорошо известного метода, такого, например, как анализы, представленные в настоящем описании, анализ Скэтчарда и/или анализы связывания в условиях конкуренции (анализы конкурентного связывания), такие как радиоиммуноанализы (РИА), ферментные иммуноанализы (ФИА) и сэндвич-анализы в условиях конкуренции и их различные варианты, хорошо известные в данной области.

Аминокислотные остатки обозначают согласно стандартному трехбуквенному или однобуквенному коду аминокислот, что хорошо известно и является общепризнанным в данной области. При сравнении двух аминокислотных последовательностей понятие различие в аминокислотах относится к инсерциям, делециям или заменам указанного количества аминокислотных остатков в определенном положении референс-последовательности по сравнению со второй последовательностью. В случае замен(ы) указанные(ая) замены(а) предпочтительно должны(а) представлять собой консервативные(ую) аминокислотные(ную) замены(у), это означает, что аминокислотный остаток заменяют на другой аминокислотный остаток сходного химического строения, который оказывает незначительное влияние или практически не оказывает влияния на функцию, активность или другие биологические свойства полипептида. Указанные консервативные аминокислотные замены хорошо известны в данной области, например они описаны в \νϋ 98/49185, при этом консервативные аминокислотные замены предпочтительно представляют собой замены, при которых одну из аминокислот из следующих групп (I )-(У) заменяют на другой аминокислотный остаток, входящий в эту же группу: (I) небольшие алифатические неполярные или имеющие невысокую полярность остатки: А1а, Зег, ТЬг, Рго и О1у; (II) полярные отрицательно заряженные остатки и их (незаряженные) амиды: Акр, Акп, О1и и О1п; (III) полярные положительно заряженные остатки: Ηίκ, Агд и Ьук; (IV) крупные алифатические неполярные остатки: Ме!, Ьеи, Не, Уа1 и Сук и (V) ароматические остатки: РЬе, Туг и Тгр. Наиболее предпочтительными являются следующие аминокислотные замены: А1а на О1у или на Зет; Агд на Ьук; Акп на О1п или на Ηίκ; Акр на О1и; Сук на Зет; О1п на Акп; О1и на Акр; О1у на А1а или на Рго; Нщ на Акп или на О1п; Не на Ьеи или на Уа1; Ьеи на Не или на Уа1; Ьук на Агд, на О1п или на О1и; Ме! на Ьеи, на Туг или на Не; РЬе на Ме!, на Ьеи или на Туг; Зег на ТЬг; ТЬг на Зег; Тгр на Туг; Туг на Тгр или на РЬе; Уа1 на Не или на Ьеи.

Молекула полипептида или нуклеиновой кислоты рассматривается как практически выделенная (находится в практически выделенной форме), например, из ее нативного биологического источника и/или реакционный среды или среды для культивирования, из которой ее получают, когда она отделена по меньшей мере от одного компонента, с которым она обычно ассоциирована в указанном источнике или указанной среде, такой как другой белок/полипептид, другая нуклеиновая кислота, другой биологический компонент или макромолекула или по меньшей мере один загрязнитель, примесь или минорный компонент. В частности, молекула полипептида или нуклеиновой кислоты рассматривается как практически выделенная, когда степень ее чистоты повышена по меньшей мере в 2 раза, в частности по меньшей мере в 10 раз, более предпочтительно по меньшей мере в 100 раз и вплоть до 1000 раз или более. Молекула полипептида или нуклеиновой кислоты, которая находится в практически выделенной форме, предпочтительно является практически гомогенной, что определяют с помощью приемлемого метода, такого как приемлемый хроматографический анализ, электрофорез в полиакриламидном геле.

Идентичность последовательностей последовательностей двух УЕОР-связывающих молекул или последовательностей двух Апд2-связывающих молекул означает процент аминокислот, идентичных для последовательностей. Его можно рассчитывать или определять согласно методу, изложенному в разделе 1) на с. 49 и с. 50 νθ 2008/020079. Сходство последовательностей означает процент аминокислот, которые либо идентичны, либо представляют собой консервативные аминокислотные замены.

В данной области известны альтернативные методы нумерации аминокислотных остатков У_н-доменов, указанные методы аналогичным образом можно применять для нумерации УНН-доменов. Однако в настоящем описании, формуле изобретения и на чертежах, если не указано иное, используют номенклатуру Кэбота для нумерации УНН-доменов, которая описана выше.

- 10 025148

УЕОР-связывающая молекула или Апд2-связывающая молекула с созревшей аффинностью, в частности УНН или доменное антитело, несет одно или несколько изменений в одном или нескольких СОК, что приводит к улучшенной аффинности к УБОР или Апд2 по сравнению с соответствующей родительской УЕОР-связывающей молекулой или УЕОР-связывающей молекулой. УЕОР-связывающие молекулы или Апд2-связывающие молекулы с созревшей аффинностью можно получать методами, описанными в данной области, например описанными Магкк е! а1., Вю!ескпо1оду, 10, 1992, р. 779-783 или ВагЬак е! а1., Ргос. №1. АсаФ. δα, И8А, 91, 1994, р. 3809-3813.; 8Ыег е! а1., Оепе, 169, 1995, р. 147-155; Уе1!оп е! а1., 1ттипо1. 155, 1995, р. 1994-2004; 1аск§оп е! а1., 1. 1ттипо1. 154(7), 1995, р. 3310-3319 и На\укт5 е! а1., 1. Мо1. Вю1. 226(3), 1992, р. 889-896; Κ.δ. 1окп8оп и К.Е. На\укш5 в: АГГиШу та!ига!юп о! апФЬоФ1е8 шшд ркаде Ф18р1ау, изд-во ОхГогФ Ишуегейу Рге88, 1996. В контексте настоящего изобретения аминокислотные последовательности δΕΟ ГО N0: х включают, если не указано иное, аминокислотную последовательность, которая на 100% идентична последовательности, представленной в соответствующей δΕΟ ΙΌ N0: х:

а) аминокислотные последовательности, которые по меньшей мере на 80% идентичны последовательности, представленной в соответствующей δΕΟ ГО N0: х;

б) аминокислотные последовательности, которые имеют 3, 2 или 1 различие в аминокислотах относительно последовательности, представленной в соответствующей δΕΟ ГО N0: х.

Понятие рак и злокачественный относится или описывает физиологическое состояние у млекопитающих, которое, как правило, характеризуется нерегулируемым ростом/пролиферацией клеток. Примерами рака, который можно лечить с помощью биспецифической связывающей молекулы, предлагаемой в изобретении, является (но не ограничиваясь только ими) карцинома, лимфома, бластома, саркома и лейкоз. Более конкретными примерами указанных видов рака, которые предложено лечить с помощью антагонистов УЕОР согласно υδ 2008/0014196, являются плоскоклеточный рак, мелкоклеточный рак легкого, немелкоклеточный рак легкого, аденокарционома легкого, плоскоклеточная карцинома легкого, рак брюшины, печеночно-клеточный рак, рак кишечно-желудочной системы, рак поджелудочной железы, глиобластома, рак шейки матки, рак яичника, рак печени, рак мочевого пузыря, гепатома, рак молочной железы, рак ободочной кишки, колоректальный рак, саркома эндометрия или матки, карцинома слюнных желез, рак почки, рак предстательной железы, рак вульвы, рак щитовидной железы, карцинома печени, рак желудка, меланома и различные виды рака головы и шеи. Нарушение регуляции ангиогенеза может приводить ко многим нарушениям, которые можно лечить с помощью композиций и способов, предлагаемых в изобретении. Эти нарушения включают как ненеопластические, так и неопластические состояния. Неопластические заболевания включают (но не ограничиваясь только ими) описанные выше заболевания.

Ненеопластические нарушения включают (но не ограничиваясь только ими) нарушения, которые в υδ 2008/0014196 предложено лечить с помощью антагонистов УЕОР, а именно, нежелательную или аберрантную гипертрофию, артрит, ревматоидный артрит (РА), псориаз, псориатические бляшки, саркоидоз, атеросклероз, атеросклеротические бляшки, диабетические и другие пролиферативные ретинопатии, включая ретинопатию недоношенных, ретролентальную фиброплазию, неоваскулярную глаукому, возрастную дегенерацию желтого пятна, диабетический макулярный отек, неоваскуляризацию роговицы, неоваскуляризацию трансплантата роговицы, отторжение трансплантата роговицы, ретинальную/хориоидальную неоваскуляризацию, неоваскуляризацию угла глаза (покраснение), глазное связанное с неоваскуляризацией заболевание, васкулярный рестеноз, артериовенозные пороки развития (АУМ), менингиому, гемангиому, ангиофиброму, гиперлазии щитовидной железы (включая болезнь Грейвса), трансплантацию роговицы и другой ткани, хроническое воспаление, воспаление легких, острое легочное повреждение/РДСВ (респираторный дистресс-синдром взрослых), сепсис, первичную легочную гипертензию, злокачественные пульмональные выпоты, отек головного мозга (например, ассоциированный с острым ударом/закрытым повреждением головы/травмой), синовиальное воспаление, формирование паннуса при КА, оссифицирующий миозит, гипертрофическое образование костной ткани, остеоартрит (ОА), рефрактерные асциты, поликистозное заболевание яичника, эндометриоз, болезни, связанные с накоплением жидкости в третьем пространстве организма (панкреатит, компартмент-синдром, ожоги, болезнь кишечника), фиброиды матки, преждевременные роды, хроническое воспаление, такое как ΙΒΌ (болезнь Крона и неспецифический язвенный колит), отторжение почечного аллотрансплантата, воспалительное заболевание кишечника, нефротический синдром, нежелательный или аберрантный рост тканевой массы (неракового происхождения), суставы при гемофилических артропатиях, гипертрофические рубцы, прекращение роста волос, синдром Ослера-Вебера, гнойную грануломатозную ретролентальную фиброплазию, склеродерму, трахому, васкулярные адгезии, синовиит, дерматит, преэклампсию, асциты, перикардиальный выпот (например, ассоциированный с перикардитом) и плевральный выпот.

- 11 025148

Подробное описание изобретения

Первым объектом настоящего изобретения является биспецифическая связывающая молекула, содержащая по меньшей мере один Апд2-связывающий компонент и по меньшей мере один УЕОР-связывающий компонент.

В предпочтительных вариантах осуществления настоящего изобретения биспецифическая связывающая молекула содержит по меньшей мере один УЕОР-связывающий компонент и по меньшей мере один Ли§2-связывающий компонент, который дополнительно содержит по меньшей мере еще один связывающий компонент, предпочтительно компонент, связывающий сывороточный альбумин (молекула, связывающая сывороточный альбумин).

В предпочтительном варианте осуществления изобретения компонент, связывающий сывороточный альбумин, связывающей молекулы, предлагаемой в настоящем изобретении, представляет собой выделенный иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен или полипептид, содержащий один или несколько указанных иммуноглобулиновых единичных вариабельных доменов, где указанный иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен состоит из четырех каркасных участков и трех гипервариабельных участков СЭР1, СЭР2 и СЭР3 соответственно и где указанный СЭР3 имеет аминокислотную последовательность, выбранную из аминокислотных последовательностей, представленных в §Еф ГО N0: 257, 260, 263, 266, 269, 272 или 275.

Более предпочтительно указанный(ые) один или несколько иммуноглобулиновый(ых) единичный(ых) вариабельный(их) домен(ов) компонента, связывающего сывороточный альбумин, содержит(ат):

а) СЭР3, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из первой группы аминокислотных последовательностей, представленных в §Еф ГО N0: 257, 260, 263, 266, 269, 272 или 275;

б) СГОР1, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из второй группы аминокислотных последовательностей, представленных в §Еф ГО N0: 255, 258, 261, 264, 267, 270 или 273;

в) СГОР2, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из второй группы аминокислотных последовательностей, представленных в §Еф ГО N0: 256, 259, 262, 265, 268, 271 или 274.

В более предпочтительном варианте осуществления изобретения указанный(ые) один или несколько иммуноглобулиновый(ых) единичный(ых) вариабельный(их) домен(ов) компонента, связывающего сывороточный альбумин, представляют собой УНН, которые предпочтительно имеют аминокислотную последовательность, представленную в §Еф ГО N0: 98 или 254.

Согласно предпочтительным вариантам осуществления изобретения указанный Апд2-связывающий компонент и указанный УЕОР-связывающий компонент содержат по меньшей мере один Апд2-связывающий иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен и по меньшей мере один УЕОР-связывающий иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен соответственно.

В предпочтительном объекте изобретения указанный Апд2-связывающий компонент и указанный УЕОР-связывающий компонент содержат по меньшей мере один Апд2-связывающий иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен и по меньшей мере один УЕОР-связывающий иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен соответственно, при этом, каждый из иммуноглобулиновых единичных вариабельных доменов содержит четыре каркасных участка и три гипервариабельных участка СГОРИ СГОР2 и СГОР3 соответственно.

Так, анти- Апд2 и/или анти-УЕОР-компонент, входящий в биспецифические связывающие молекулы, предлагаемые в изобретении, может включать два (или большее количество) анти-Ап§2 (или антиУЕОР соответственно) иммуноглобулиновых единичных вариабельных доменов, где мишенью иммуноглобулиновых единичных вариабельных доменов являются различные эпитопы в Апд2 (или УЕОР). Таким образом, два иммуноглобулиновых единичных вариабельных домена в биспецифической связывающей молекуле должны иметь различную антигенную специфичность и, следовательно, различные СГОР-последовательности.

Указанные двухвалентные связывающие молекулы называют также бипаратопными конструкциями однодоменных антител (если иммуноглобулиновые единичные вариабельные домены состоят или практически состоят из однодоменных антител) или бипаратопными УНН-конструкциями (если иммуноглобулиновые единичные вариабельные домены состоят или практически состоят из УНН) соответственно, поскольку два иммуноглобулиновых единичных вариабельных домена должны включать два различных паратопа.

В биспецифической связывающей молекуле, предлагаемой в изобретении, одна или обе связывающие молекулы могут быть двухвалентными; например УЕОР-связывающий компонент может быть бипаратопным и Апд2-связывающий компонент может представлять собой один иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен или УЕОР-связывающий компонент может представлять собой один иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен и Апд2-связывающий компонент может быть бипаратопным.

В биспецифических связывающих молекулах, предлагаемых в изобретении, предпочтительно УЕОР-связывающий компонент содержит двухвалентный УЕОР-связывающий иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен, например, бипаратопный УНН.

- 12 025148

Указанный УЕОР-связывающий иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен может содержать два или большее количество УЕОР-связывающих УНН, которые представляют собой:

а) идентичные УНН, которые обладают способностью блокировать взаимодействие человеческого рекомбинантного УБОР с человеческим рекомбинантным УЕОРК-2 с уровнем ингибирования >60%, или

б) различные УНН, которые связываются с неперекрывающимися эпитопами УЕОР, где по меньшей мере один УНН обладает способностью блокировать взаимодействие человеческого рекомбинантного УЕОР с человеческим рекомбинантным УЕОРК-2 с уровнем ингибирования >60% и где по меньшей мере один УНН может блокировать указанное взаимодействие с уровнем ингибирования <60%.

УЕОР-связывающий компонент содержит по меньшей мере вариабельный домен с четырьмя каркасными участками и тремя гипервариабельными участками СЭК1, СЭК2 и СЭК3 соответственно, где указанный СЭК3 имеет аминокислотную последовательность 8ег Агд А1а Туг Хаа 8ег Хаа Агд Ьеи Агд Ьеи Хаа Хаа ТЬг Туг Хаа Туг, представленную в 8ЕО ГО N0: 1, в которой

Хаа в положении 5 обозначает О1у или А1а;

Хаа в положении 7 обозначает 8ег или О1у;

Хаа в положении 12 обозначает О1у, А1а или Рго;

Хаа в положении 13 обозначает Азр или О1у;

Хаа в положении 16 обозначает Азр или О1и; и при этом указанная УЕОР-связывающая молекула обладает способностью блокировать взаимодействие человеческого рекомбинантного УЕОР165 с человеческим рекомбинантным УЕОРК-2 с уровнем ингибирования >60%.

Согласно предпочтительным вариантам осуществления изобретения Хаа в положении 5 обозначает О1у, Хаа в положении 7 обозначает 8ег, Хаа в положении 12 обозначает А1а и Хаа в положении 13 обозначает Азр.

В частности, указанный СГОК3 имеет последовательность, выбранную из

5Е<3 ГО ΝΟ: 2	δΚΑΥΟδδΚΕΚΕΟϋΤΥϋΥ,
ЗЕ() ГО ΝΟ: 3	δΚΑΥΟδδΚΕΚΕΑΟΤΥΟΥ;
ЗЕ<2 ГО ΝΟ: 4	δΚΑΥΟδδΚΕΚΕΑΏΤΥΕΥ;
ЗЕ() ГО N0: 5	δΚΑΥΟδΟΚΕΚΕΑΟΤΥϋΥ;
ЗЕ() ГО N0: 6	δΚΑΥΑδ 8ΚΙ.Κ1, Α ΟΤΥΟ Υ;
ЗЕр ГО ΝΟ: 7	3ΚΑ ΥΟ3 δΚΤΚΕΡΟΤ ΥΟ Υ;
8Е<3 ГО N0: 8	δΚΑΥΟδδΚ,ΕΚΕΡΟΤΥΟΥ.

Согласно конкретным вариантам осуществления изобретения УЕОР-связывающая молекула содержит один или несколько иммуноглобулиновых единичных вариабельных доменов, каждый из которых содержит:

а) СГОК3. аминокислотная последовательность которого выбрана из первой группы последовательностей, представленных в 8ЕС ГО N0: 2-8;

б) СГОК1 и СЭК2, аминокислотные последовательности которых входят, как показано в табл. 3, в число последовательностей, выбранных из второй группы аминокислотных последовательностей, представленных в 8ЕС ГО N0: 9-46, при этом указанная вторая последовательность содержит соответствующий СЭК3, выбранный из указанных в подпункте а).

Согласно предпочтительным вариантам осуществления изобретения иммуноглобулиновые единичные вариабельные домены представляют собой УНН.

Согласно конкретным вариантам осуществления изобретения УНН имеют аминокислотные последовательности, выбранные из последовательностей, представленных в 8Еф ГО N0: 9-46.

Согласно другому конкретному варианту осуществления изобретения УНН имеют аминокислотные последовательности, выбранные из 8Еф ГО N0: 15, 8Еф ГО N0: 18 и 8Еф ГО N0: 25.

Изобретение относится также к УЕОР-связывающему компоненту, полученному в результате созревания аффинности и/или оптимизации последовательности вышеуказанного УНН, например, к УНН, полученному в результате оптимизации последовательности УНН, аминокислотная последовательность которого представлена в 8ЕС ГО N0: 18. Примерами являются УНН, которые имеют аминокислотные последовательности, выбранные из последовательностей, представленных в 8ЕС ГО N0: 47-57.

Согласно некоторым вариантам осуществления изобретения УЕОР-связывающий компонент, предлагаемый в изобретении, можно форматировать согласно методу, указанному в настоящем описании, например, он может быть бипаратопным или может содержать два идентичных иммуноглобулиновых единичных вариабельных домена. Указанные УЕОР-связывающие компоненты могут содержать два или большее количество УНН, которые представляют собой:

а) идентичные УНН, которые обладают способностью блокировать взаимодействие человеческого рекомбинантного УЕОР с человеческим рекомбинантным УЕОРК-2 с уровнем ингибирования >60%, или

- 13 025148

б) различные УНН, которые связываются с неперекрывающимися эпитопами УЕОР, где по меньшей мере один УНН обладает способностью блокировать взаимодействие человеческого рекомбинантного УБОР с человеческим рекомбинантным УЕОРК-2 с уровнем ингибирования >60%, и где связывание по меньшей мере одного УНН может блокировать указанное взаимодействие с уровнем ингибирования <60%.

Процент блокирования указанного взаимодействия с уровнем ингибирования >60 или <60% соответственно относится к уровню ингибирования, определенному с помощью гомогенного анализа усиленной за счет эффекта близости люминесценции (А1рЬа8стееп®), конкурентного ЕЫ8А, анализа на основе резонанса плазмона (8РК) (Ыасоте®), которые применяли в примерах.

Ниже в настоящем описании активность УНН согласно подпункту а), обозначают также как блокирующая рецептор активность, а активность УНН согласно подпункту б) обозначают также как неблокирующая рецептор активность.

Предпочтительно для блокирующих рецептор УНН характерен уровень ингибирования >80%, более предпочтительно >90%; наиболее предпочтительные УНН являются полными блокаторами рецептора, т.е. для них характерен уровень ингибирования, равный 100%.

УЕОР-связывающий компонент может содержать два или большее количество идентичных УНН, указанных в подпункте а), выбранных из УНН, аминокислотные последовательности которых представлены в 8Εβ ГО N0: 9-46, или УНН, полученных в результате созревания аффинности и/или оптимизации последовательностей указанных УНН. УНН можно выбирать из УНН, аминокислотные последовательности которых представлены в 8ЕЦ ГО N0: 18 или 8ЕЦ ГО N0: 47-57.

Согласно предпочтительным вариантам осуществления изобретения форматированный УЕОР-связывающий компонент содержит два УНН, каждый из которых имеет аминокислотную последовательность, представленную в 8ЕЦ ГО N0: 57.

В форматированных УЕОР-связывающих компонентах, которые содержат два различных УНН:

а) указанный(ые) один или несколько УНН, для которых характерен уровень ингибирования >60%, выбирают из:

I) УНН, которые имеют аминокислотную последовательность, выбранную из аминокислотных последовательностей, представленных в 8ЕЦ ГО N0: 9-46, или

II) УНН, которые получены в результате созревания аффинности и/или оптимизации последовательности указанных УНН, и где

б) указанный(ые) один или несколько УНН, для которых характерен уровень ингибирования <60%, выбирают из:

I) 8ЕС ГО N0: 58-124 или

II) УНН, которые получены в результате созревания аффинности и/или оптимизации последовательностей указанных УНН.

Согласно предпочтительным вариантам осуществления изобретения два УНН, которые входят в полипептиды, аминокислотные последовательности которых представлены в 8ЕЦ ГО N0: 128-168, разделены линкерными последовательностями, указанными в табл. 15.

В предпочтительном УЕОР-связывающем компоненте УНН, указанный в подпункте а)^, имеет аминокислотную последовательность, представленную в 8ЕЦ ГО N0: 18, и УНН, указанный в подпункте б)^, имеет аминокислотную последовательность, представленную в 8ЕЦ ГО N0: 64.

В других предпочтительных УЕОР-связывающих компонентах УНН, указанные в подпункте а)П), выбирают из УНН, которые имеют аминокислотную последовательность, представленную в 8ЕС ГО N0: 47-57, и УНН, указанные в подпункте б)П), выбирают из УНН, которые имеют аминокислотную последовательность, представленную в 8ЕЦ ГО N0: 125-127.

Наиболее предпочтительным является бипаратопный УЕОР-связывающий компонент, который содержит два УНН, один из которых имеет аминокислотную последовательность, представленную в 8ЕС ГО N0: 57, и один из которых имеет аминокислотную последовательность, представленную в 8ЕС ГО N0: 127.

Апд2-связывающий компонент содержит, по меньшей мере, вариабельный домен с четырьмя каркасными участками и тремя гипервариабельными участками СЭК.1, СЭК.2 и СЭК.3 соответственно, где указанный СГОР3 имеет аминокислотную последовательность, выбранную из аминокислотных последовательностей, которые представлены в 8ЕЦ ГО N0: 226, 229, 232, 235, 238, 241, 244, 247, 250 или 253.

Согласно второму объекту изобретения указанный Апд2-связывающий компонент представляет собой выделенный иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен или полипептид, содержащий один или несколько иммуноглобулиновых единичных вариабельных доменов, где указанный иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен содержит четыре каркасных участка и три гипервариабельных участка СЭК.1, СГОВ2 и СГОВ3 соответственно и где СГОР3 имеет аминокислотную последовательность, выбранную из аминокислотных последовательностей, которые представлены в 8ЕС ГО N0: 226, 229, 232, 235, 238, 241, 244, 247, 250 или 253.

- 14 025148

Согласно следующему объекту изобретения указанный иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен Апд2-связывающего компонента содержит:

а) СЭРЗ. имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из первой группы аминокислотных последовательностей, представленных в 8ЕЦ ГО N0: 226, 229, 232, 235, 238, 241, 244, 247, 250 или 253 (см. также табл. 49);

б) СГОРИ имеющий аминокислотные последовательности, которые входят, как показано в табл. 36-А, 38-А, 41-А или 45-А, в качестве частичной последовательности в последовательность, выбранную из второй группы аминокислотных последовательностей, представленных в 8ЕЦ ГО N0: 224, 227, 230, 233, 236, 239, 242, 245, 248 или 251 (см. также табл. 49);

в) СОРТ, имеющий аминокислотные последовательности, которые входят, как показано в табл. 36-А, 38-А, 41-А или 45-А, в качестве частичной последовательности в последовательность, выбранную из второй группы аминокислотных последовательностей, которые представлены в 8ЕЦ ГО N0: 225, 228, 231, 234, 237, 240, 243, 246, 249 или 252 (см. также табл. 49).

Предпочтительно иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен Апд2-связывающего компонента представляет собой УНН, предпочтительно имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из аминокислотных последовательностей, которые представлены в 8ЕЦ ГО N0: 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, 222 или 223.

В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен Апд2-связывающего компонента получали путем созревания аффинности или гуманизации иммуноглобулинового единичного вариабельного домена согласно методу, представленному в настоящем описании.

Аналогично этому, настоящее изобретение относится также к УНН, полученному путем созревания аффинности или гуманизации УНН Апд2-связывающего компонента согласно методу, представленному в настоящем описании.

Настоящее изобретение относится также к Апд2-связывающему УНН, аминокислотная последовательность которого выбрана из аминокислотных последовательностей, представленных в 8ЕЦ ГО N0: 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, 222 или 223.

Приемлемыми для осуществления процедуры созревания аффинности родительскими Ап§2-связывающими молекулами являются, например, описанные выше УНН, аминокислотные последовательности которых представлены в 8ЕЦ ГО N0: 214, 215, 216, 217, 218 или 219.

Таким образом, изобретение относится также к Ап§2-связывающим молекулам, полученным путем созревания аффинности и/или оптимизации последовательности вышеуказанного УНН, например к УНН, который был получен путем оптимизации последовательности УНН, имеющего аминокислотную последовательность, представленную в 8ЕЦ ГО N0: 217, 218, 219, 220, 221, 222 или 223. Аминокислотные последовательности, которые представляли собой источник, применяемый для создания последних УНН, представлены в 8ЕЦ ГО N0: 214, 215 или 261. Кроме того, эти аминокислотные последовательности пригодны в качестве Ап§2-связывающих компонентов, которые можно применять в связывающих молекулах, предлагаемых в настоящем изобретении.

Как указано в настоящем описании, связывающая молекула, предлагаемая в настоящем изобретении, предпочтительно содержит по меньшей мере один компонент, связывающий сывороточный альбумин. Так, в частности, предпочтительные связывающие молекулы имеют по меньшей мере один УЕОР-связывающий компонент, по меньшей мере один Апд2-связывающий компонент и по меньшей мере один компонент, связывающий сывороточный альбумин. Порядок указанных трех связывающих компонентов может представлять собой любой возможный порядок, например порядок, представленный в табл. 36-Б, 38-Б, 40, 41-Б, 42, 43, 45-Б, 46-А или 47-А или на фиг. 20, 23, 27 или 30, например УЕОР-, Апд2- или связывающий сывороточный альбумин компонент может находиться на Оконце или на С-конце. В частности, 1Ό01 (8ЕЦ ГО N0: 214), 11В07, 00027 (8ЕЦ ГО N0: 216), 00908, 7О08 (8ЕЦ ГО N0: 215), 00919, 00921 (8ЕЦ ГО N0: 220), 00928 (8ЕЦ ГО N0: 221), 00932, 00933, 00934, 00935, 00936, 00937, 00938 (8ЕЦ ГО N0: 222) или 00956 (8ЕЦ ГО N0: 223) в таблицах и в описании к чертежам обозначают Апд2-связывающие компоненты, а 00038 обозначает УЕОР-связывающий компонент и АЬВ11 обозначает компонент, связывающий сывороточный альбумин. Ни один из них не ограничен конкретной последовательностью, а обозначает Ап§2-, УЕОР- и связывающий сывороточный альбумин компонент в целом, при применении в контексте возможных конструкций связывающих молекул, предлагаемых в настоящем изобретении.

Однако предпочтительно, чтобы компонент, связывающий сывороточный альбумин, находился между УЕОР- и Ап§2-связывающим компонентом (или наоборот), при этом наиболее предпочтительно, чтобы по меньшей мере один УЕОР-связывающий компонент находился на Оконце, за ним следовал по меньшей мере один компонент, связывающий сывороточный альбумин, а затем по меньшей мере один Ап§2-связывающий компонент, расположенный на С-конце. Установлено, что такой порядок является наиболее предпочтительным.

Таким образом, предпочтительным объектом настоящего изобретения являются связывающие молекулы, которые содержат по меньшей мере один УЕОР-связывающий компонент, по меньшей мере

- 15 025148 один Лпд2-связывающий компонент и по меньшей мере один компонент, связывающий сывороточный альбумин, имеющие аминокислотную последовательность, выбранную из аминокислотных последовательностей, представленных в §ЕЦ ГО N0: 180-213,

Понятие по меньшей мере один связывающий (УЕОР, Апд2 или сывороточный альбумин) компонент при применении в контексте настоящего описания указывает на то, что связывающая молекула, предлагаемая в настоящем изобретении, может содержать один, два, три, четыре или пять связывающих УЕОР, Апд2 и/или сывороточный альбумин компонентов (т.е. субстанций/единиц), которые предпочтительно представляют собой иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен, указанный в настоящем описании.

УЕОР- и/или Аид2-связывающие компоненты с улучшенными с позиций терапевтического применения свойствами, например, обладающие повышенной аффинностью или пониженной иммуногенностью, можно получать из индивидуальных УЕОР-или Аид2-связывающих компонентов с помощью методик, известных в данной области, таких как созревание аффинности (например используя в качестве исходных синтетические, произвольные или встречающиеся в естественных условиях последовательности иммуноглобулинов), СГОК-трансплантация. гуманизация, объединение фрагментов, полученных из различных последовательностей иммуноглобулинов, ПЦР-сборка с использованием перекрывающихся праймеров и аналогичные методики, предназначенные для конструирования последовательностей иммуноглобулинов, которые хорошо известны специалисту в данной области; или любой приемлемой комбинации любых вышеизложенных методов, обозначенных также как оптимизация последовательностей. В качестве ссылки можно указать, например, стандартные руководства, а также можно использовать приведенное ниже описание и сведения, представленные в примерах.

При необходимости УЕОР- или Аид2-связывающий компонент, предлагаемый в изобретении, с повышенной аффинностью получают путем созревания другого УЕОР- или Аид2-связывающего компонента, последний представляет собой родительский УЕОР- или Апд2-связывающий компонент относительно молекулы с созревшей аффинностью.

В анти-УЕОР или анти-Ап§2 УНН, предлагаемых в изобретении, начинающихся с ЕУЦ, Ν-концевой остаток Е можно заменять на Ό (что часто приводит к оптимизации последовательности) или он может отсутствовать (для экспрессии УНН в Е.соН). Для форматированных УЕОР-связывающих молекул это применяют, как правило, только для УНН, расположенных на Ν-конце.

Предпочтительная (но не ограничиваясь только ею) применяемая с целью гуманизации замена в УНН-доменах, принадлежащих к 103 Ρ,Κ,δ-группе и/или ОЬЕ^-группе (что описано ниже), представляет собой замену 1080 на 108Ь. Методы гуманизации иммуноглобулиновых единичных вариабельных доменов известны в данной области.

Согласно другому варианту осуществления изобретения иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен представляет собой доменное антитело, представленное в настоящем описании.

Согласно еще одному варианту осуществления изобретения репрезентативные представители класса УЕОР- и/или Аи§2-связывающих иммуноглобулиновых единичных вариабельных доменов, предлагаемых в изобретении, имеют аминокислотные последовательности, которые соответствуют аминокислотной последовательности встречающегося в естественных условиях УН-домена, который был камелизирован, т.е. изменен путем замены одного или нескольких аминокислотных остатков в аминокислотной последовательности, встречающейся в естественных условиях вариабельной области тяжелой цепи канонического, состоящего из 4 цепей антитела на один или несколько аминокислотных остатков, которые находятся в соответствующем(их) положении(ях) в УНН-домене состоящего из тяжелой цепи антитела. Это можно осуществлять хорошо известным методом, который очевиден специалисту в данной области, и дополнительную информацию о котором можно почерпнуть из νθ 1994/04678. Указанная камелизация может затрагивать главным образом аминокислотные положения, которые находятся в области контакта УН-УЪ, и так называемые остатки-маркеры верблюдовых (см., например, также XV0 1994/04678). Подробное описание указанных методов гуманизации и камелизации и предпочтительные последовательности каркасных участков, которые пригодны для осуществления этих методов, можно дополнительно почерпнуть из сведений, представленных на с. 46 и с. 98 νθ 2006/040153 и с. 107 νθ 2006/122786.

УЕОР-связывающие компоненты, предлагаемые в изобретении, например, иммуноглобулиновые единичные вариабельные домены, обладают специфичностью в отношении УЕОР, поскольку они содержат один или несколько иммуноглобулиновых единичных вариабельных доменов, специфически связывающихся с одним или несколькими эпитопами молекулы УЕОР. Вышесказанное относится и к Ап§2связывающим компонентам, предлагаемым в изобретении.

Специфическое связывание УЕОР-связывающего компонента с антигеном УЕОР можно определять с помощью любого приемлемого хорошо известного метода, включая, например, представленные в настоящем описании методы, такие как анализ Скэтчарда и/или анализы связывания в условиях конкуренции, такие как радиоиммуноанализы (РИА), ферментные иммуноанализы (ФИА и ЕЬРЗА) и конкурентные сэндвич-анализы и их различные варианты, хорошо известные в данной области. Это же относится к определению связывания Аид2-связывающего компонента с его антигеном.

- 16 025148

Касательно антигена УЕСР УЕСР-связывающий компонент, предлагаемый в изобретении, например, иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен, не ограничен происхождением из какоголибо конкретного вида. Так, иммуноглобулиновые единичные вариабельные домены, предлагаемые в изобретении, предпочтительно связываются с человеческим УЕСР, если они предназначены для лечения человека. Однако иммуноглобулиновые единичные вариабельные домены, которые связываются с УЕСР из других видов млекопитающих, также подпадают под объем изобретения. Иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен, предлагаемый в изобретении, который связывается с УЕСР из одного из видов, может обладать перекрестной реактивностью с УЕСР, который имеет последовательность, отличную от человеческой, из одного или нескольких других видов. Например, иммуноглобулиновые единичные вариабельные домены, предлагаемые в изобретении, которые связываются с человеческим УЕСР, могут обладать перекрестной реактивностью с УЕСР из одного или нескольких других видов приматов и/или УЕСР из одного или нескольких видов животных, которых применяют в качестве животных, на которых моделируют заболевание, например, обезьян, мышей, крыс, кроликов, свиней, собак, и, в частности из животных, на которых моделируют заболевания и нарушения, ассоциированные с опосредуемыми УЕСР действиями на ангиогенез (например, в качестве видов и животных моделей, упомянутых в настоящем описании). Иммуноглобулиновые единичные вариабельные домены, предлагаемые в изобретении, которые обладают указанной перекрестной реактивностью, являются важными для исследовательских целей и/или для разработки лекарственных средств, поскольку позволяют тестировать иммуноглобулиновые единичные вариабельные домены, предлагаемые в изобретении, на признанных моделях заболеваний, созданных на таких животных как обезьяны, в частности обезьяны циномолгус или макак резус, или мыши и крысы.

В свете перекрестной реактивности с одной или несколькими молекулами УЕСР из видов, отличных от человека, которая(ые) предназначена(ны) для применения на животной модели при разработке терапевтического антагониста УЕСР, является предпочтительным, когда УЕСР-связывающий компонент распознает эпитоп в той области представляющего интерес УЕСР, которая обладает высокой степенью идентичности с человеческим УЕСР.

Иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен, предлагаемый в изобретении, распознает эпитоп, который полностью или частично локализован в области УЕСР, которая пригодна для связывания с его рецептором, в частности с УЕСРК-2, который, как установлено, является рецептором, активация которого обусловливает неоваскуляризацию опухолей. Согласно предпочтительным объектам изобретения иммуноглобулиновые единичные вариабельные домены, предлагаемые в изобретении, блокируют активацию УЕСР-рецептора, в частности активацию УЕСРК-2, по меньшей мере частично, предпочтительно в значительной степени и наиболее предпочтительно полностью.

Как указано выше, способность УЕСР-связывающего компонента блокировать взаимодействие между УЕСР и его рецепторами, в частности, УЕСРК-2, можно определять с помощью гомогенного анализа усиленной за счет эффекта близости люминесценции (А1рЬа8сгееи®), конкурентного ЕЫ8Л или анализа на основе резонанса плазмона (8ΡΚ) (В1асоге®), которые описаны в примерах.

Предпочтительно связывание иммуноглобулинового единичного вариабельного домена, предлагаемого в изобретении, с УЕСР характеризуется величиной аффинности, составляющей менее 500 нМ, предпочтительно менее 200 нМ, более предпочтительно менее 10 нМ, например менее 500 пМ (что определяют с помощью анализа на основе резонанса поверхностного плазмона, описанного в примере 5.7). Вышесказанное относится и к связыванию иммуноглобулинового единичного вариабельного домена, предлагаемого в изобретении, с ангиопоэтином.

Предпочтительно для иммуноглобулиновых единичных вариабельных доменов, предлагаемых в изобретении, характерны величины 1С₅₀, измеренные с помощью конкурентного ЕЫ8Л, который описан в примере 5.1, составляющие от 10^-6 до 10^-10 моль/л или менее, более предпочтительно от 10^-8 до 10^-10 моль/л или менее и еще более предпочтительно от 10^-9 до 10^-10 моль/л или менее.

Согласно не ограничивающему объем изобретения предпочтительному варианту осуществления изобретения связывание с УЕСР УЕСР-связывающих иммуноглобулиновых единичных вариабельных доменов, предлагаемых в изобретении, характеризуется величиной константы диссоциации (К_с), составляющей от 10^-5 до 10^-12 моль/л (М) или менее и предпочтительно от 10^-7 до 10^-12 моль/л (М) или менее и более предпочтительно от 10^-8 до 10^-12 моль/л (М), и/или величиной константы ассоциации (КА), составляющей по меньшей мере 10⁷ М^-1, предпочтительно по меньшей мере 10⁸ М^-1, более предпочтительно по меньшей мере 10⁹ М^-1, например по меньшей мере 10¹² М^-1; и в частности, величиной Кс, составляющей менее 500 нМ, предпочтительно менее 200 нМ, более предпочтительно менее 10 нМ, например менее 500 пМ. Таким образом, можно определять величины К_с и К_А иммуноглобулинового единичного вариабельного домена, предлагаемого в изобретении, характеризующие связывание с УЕСР. Указанное относится и к связывающему Апд2 иммуноглобулиновому единичному вариабельному домену, предлагаемому в изобретении.

Бипаратопные УЕСР-связывающие компоненты, которые содержат два или большее количество иммуноглобулиновых единичных вариабельных домена, практически состоят из или содержат (I) первый

- 17 025148 иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен, специфически связывающийся с первым эпитопом УЕОР, и (II) второй иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен, специфически связывающийся со вторым эпитопом УЕОР, где первый эпитоп УЕОР и второй эпитоп УЕОР не являются идентичными эпитопами. Другими словами, указанный полипептид, предлагаемый в изобретении, содержит или практически состоит из двух или большего количества иммуноглобулиновых единичных вариабельных доменов, мишенью которых являются по меньшей два неперекрывающихся эпитопа, присутствующих в УЕОР, при этом указанные иммуноглобулиновые единичные вариабельные домены связаны друг с другом таким образом, чтобы они могли одновременно связываться с УЕОР. В этом плане полипептид, предлагаемый в изобретении, можно рассматривать как двухвалентную или многовалентную иммуноглобулиновую конструкцию и прежде всего как многовалентную конструкцию иммуноглобулинового единичного вариабельного домена, если полипептид содержит по меньшей мере два сайта связывания с УЕОР. (Указанные конструкции обозначают также как форматированные УЕОРсвязывающие молекулы, например форматированные УНН). С соответствующими изменениями указанное относится также к бипаратопным Апд2-связывающим компонентам.

Указанный УЕОР- или Апд2-связывающий компонент, предлагаемый в изобретении, включает (по меньшей мере) два анти-УЕОР или анти-Апд2 иммуноглобулиновых единичных вариабельных домена, при этом мишенью (указанных) двух иммуноглобулиновых единичных вариабельных доменов предпочтительно являются неперекрывающиеся эпитопы молекулы УЕОР или молекулы ангиопоэтина соответственно. Таким образом, эти два иммуноглобулиновых единичных вариабельных домена должны обладать специфичностью в отношении различных антигенов и поэтому содержать различные СОК-последовательности. По этой причине указанные полипептиды, предлагаемые в изобретении, в контексте настоящего описания можно обозначать также как бипаратопные полипептиды или бипаратопные конструкции доменных антител (если иммуноглобулиновые единичные вариабельные домены состоят или практически состоят из доменных антител), или бипаратопные УНН-конструкции (если иммуноглобулиновые единичные вариабельные домены состоят или практически состоят из УНН) соответственно, поскольку два иммуноглобулиновых единичных вариабельных домена должны включать два различных паратопа.

Если полипептид, предлагаемый в изобретении, представляет собой бипаратопную молекулу, указанную в настоящем описании, то по меньшей мере один из компонентов иммуноглобулинового единичного вариабельного домена связывается с эпитопом таким образом, что взаимодействие между рекомбинантным человеческим УЕОР и рекомбинантным человеческим УЕОРК-2 блокируется, что характеризуется уровнем ингибирования >80%. Как продемонстрировано в экспериментах, описанных в изобретении, определенные форматированные молекулы содержат два УНН, которые оба блокируют рецептор УЕОРК2, что характеризуется уровнем ингибирования >80%. Определенные УНН, предлагаемые в изобретении, блокируют УЕОРК-2 с уровнем ингибирования 100%, т. е. они являются полными блокаторами.

В обоих случаях дополнительные последовательности и фрагменты могут присутствовать в УЕОРсвязывающих молекулах, предлагаемых в изобретении, например, на Ν-конце, С-конце или они могут быть локализованы между двумя иммуноглобулиновыми единичными вариабельными доменами, например линкерные последовательности и последовательности, обеспечивающие эффекторные функции, которые более детально описаны ниже.

Согласно другому, хотя и менее предпочтительному варианту осуществления изобретения, УЕОР-связывающий компонент, предлагаемый в изобретении, может включать более двух анти-УЕОР иммуноглобулиновых единичных вариабельных доменов, т.е. три, четыре или даже еще большее количество анти-УЕОР УНН. В этом случае по меньшей мере два из анти-УЕОР иммуноглобулиновых единичных вариабельных доменов направлены против неперекрывающихся эпитопов внутри молекулы УЕОР, а любой дополнительный иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен может связываться с любым из двух неперекрывающихся эпитопов и/или дополнительным эпитопом, который присутствует в молекуле УЕОР.

Согласно изобретению два или большее количество иммуноглобулиновых единичных вариабельных доменов могут независимо друг от друга представлять собой УНН или доменные антитела и/или любой другой вид иммуноглобулиновых единичных вариабельных доменов, таких как УЪ-домены, указанные в настоящем описании, при условии, что эти иммуноглобулиновые единичные вариабельные домены должны связываться с антигеном, т.е. УЕОР или ангиопоэтином соответственно.

Подробное описание связывающих компонентов представлено в основном для УЕОР-связывающего компонента. Однако все особенности и характеристики, представленные в настоящем описании для УЕОР-связывающего компонента, относятся также (после внесения соответствующих изменений) и к Апд2-связывающему компоненту.

Согласно предпочтительным вариантам осуществления изобретения связывающие молекулы, присутствующие в биспецифических связывающих молекулах (Апд2-связывающие молекулы в Апд2связывающем компоненте или УЕОР-связывающие молекулы в УЕОР-связывающем компоненте или два

- 18 025148 смежных Апд2- и УЕОР-связывающих компонента), можно соединять друг с другом непосредственно (т.е. без применения линкера) или через линкер. Линкер предпочтительно представляет собой пептидный линкер и его выбирают так, чтобы он давал связываться двум различным связывающим молекулам с каждым из неперекрывающихся эпитопов на мишенях, которые присутствуют либо в одной и той же молекуле-мишени, либо в двух различных молекулах.

В случае бипаратопных связывающих молекул выбор линкеров для Апд2-или УЕОР-связывающего компонента зависит среди прочего от эпитопов и, в частности, расстояния между эпитопами на мишени, с которыми связываются иммуноглобулиновые единичные вариабельные домены, и очевиден для специалиста в данной области на основе настоящего описания, необязательно после проведения ограниченного количества некоторых рутинных экспериментов.

Две связывающие молекулы (два УНН или доменных антитела или УНН и доменное антитело) или два связывающих компонента можно соединять друг с другом через дополнительный УНН или доменное антитело соответственно (в таких связывающих молекулах два или большее количество иммуноглобулиновых единичных вариабельных доменов можно соединять непосредственно с дополнительным иммуноглобулиновым единичным вариабельным доменом или посредством приемлемых линкеров). Указанные дополнительные УНН или доменные антитела могут, например, представлять собой УНН или доменное антитело, которые обеспечивают увеличенное время полужизни. Например, последний УНН или последнее доменное антитело может представлять собой конструкцию, которая обладает способностью связываться с (человеческим) сывороточным белком, таким как (человеческий) сывороточный альбумин или (человеческий) трансферрин.

Альтернативно этому, два или большее количество иммуноглобулиновых единичных вариабельных доменов, которые связываются с соответствующей мишенью, можно соединять в серии (либо непосредственно, либо с помощью приемлемого линкера) и дополнительный УНН или дополнительное доменное антитело (которые могут обеспечивать увеличенное время полужизни) можно соединять непосредственно или с помощью линкера с одной из этих двух или большего количества вышеуказанных иммуноглобулиновых последовательностей.

Приемлемые линкеры представлены в настоящем описании в сочетании со специфическими полипептидами, предлагаемыми в изобретении, и они могут, например, содержать (но не ограничиваясь только ею) аминокислотную последовательность, при этом аминокислотная последовательность предпочтительно состоит из 9 или большего количества аминокислот, более предпочтительно по меньшей мере из 17 аминокислот, например, примерно из 20-40 аминокислот. Однако, хотя верхний предел не имеет решающего значения, но его выбирают, исходя из соображений пригодности, например для биофармацевтического производства таких полипептидов.

Линкерная последовательность может представлять собой встречающуюся в естественных условиях последовательность или не встречающуюся в естественных условиях последовательность. Для применения в терапевтических целях линкер предпочтительно является неиммуногенным для индивидуума, которому вводят биспецифическую связывающую молекулу, предлагаемую в изобретении.

Одной из пригодных групп линкерных последовательностей являются линкеры, выведенные из шарнирной области тяжелой цепи антител, описанные в \7О 1996/34103 и \7О 1994/04678.

Другими примерами являются полиаланиновые линкерные последовательности, такие как А1а-А1а-А1а.

Другими предпочтительными примерами линкерных последовательностей являются О1у/8е-линкеры различной длины, такие как (§1у_х8ег_у)₂-линкеры, включая (§1у₄§ег)₃, (§1у₄8ег)₄, (§1у₄8ег), (§1уз5ег), §1уз и (уЕлегУ.

Некоторые не ограничивающие объем изобретения примеры линкеров представлены в табл. 15 (8ЕЦ ГО N0: 128 - 168), например линкеры

00008000080000800008000080000800008 (3508; 8ЕС) ГО ΝΟ: 169);

000080008 (908; 8ЕЦ ГО N0; 170);

0000800008000080000800008000080000800008 (4008; 8ЕЦ ГО N0: 171).

Если биспецифическую связывающую молекулу модифицируют посредством присоединения полимера, например, полиэтиленгликольного (ПЭГ) (полиэтиленгликоль) фрагмента, то линкерная последовательность предпочтительно включает аминокислотный остаток, такой как цистеин или лизин, позволяющий осуществлять модификацию, например, пэгилирование в линкерной области.

- 19 025148

Примерами линкеров, пригодных для пэгилирования, являются:

ООООСООО5 (“089,С5”, 5Εζ> ΙϋΝΟ: 172),

0000000008000080000800008 («0825,С5», 3Εζ) ГО N0:173),

0008000080000С0000800008000 («0827,С14», ЗЕф ГО N0:174),

00008000030000000003000030000800003 («О835,С15», 8ЕЦ ГО

N0:175) и

ООООСООООЗООООЗООООЗООООЗООООЗООООЗ («0835,С5», ЗЕО ГО

N0:176).

Кроме того, линкер может представлять собой также поли(этиленгликольный) фрагмент, что описано, например, в νθ 2004/081026.

В другом варианте осуществления изобретения иммуноглобулиновые единичные вариабельные домены соединены друг с другом через другой фрагмент (необязательно посредством одного или двух линкеров), такой как другой полипептид, который в предпочтительном, но не ограничивающем объем изобретения, варианте осуществления изобретения может представлять собой дополнительный иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен, описанный выше. Указанный фрагмент может либо являться практически неактивным, либо может обладать биологической активностью, такой как улучшение требуемых свойств полипептида, либо может придавать полипептиду одно или несколько дополнительных требуемых свойств. Например, фрагмент может (но не ограничиваясь только этим) удлинять время полужизни белка или полипептида и/или снижать их иммуногенность или улучшать любое другое требуемое свойство.

Согласно предпочтительному варианту осуществления изобретения биспецифическая связывающая молекула, предлагаемая в изобретении, включает, прежде всего, если она предназначена для применения или ее применяют в качестве терапевтического агента, фрагмент, который удлиняет время полужизни полипептида, предлагаемого в изобретении, в сыворотке или другой общей воде организма пациента. Понятие время полужизни определяют как время, необходимое для снижения концентрации (модифицированного) полипептида на 50% ш νίνο, например в результате расщепления полипептида и/или клиренса, и/или секвестрования с помощью естественных механизмов.

Более конкретно, указанный удлиняющий время полужизни фрагмент можно ковалентно связывать или сливать с иммуноглобулиновым единичным вариабельным доменом, и он может представлять собой (но не ограничиваясь только ими) Рс-область, остаток альбумина, фрагмент остатка альбумина, альбуминсвязывающий остаток, такой как иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен антитела к альбумину, трансферринсвязывающий остаток, такой как иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен антитела к трансферрину, полиоксиалкиленовую молекулу, такую как молекула полиэтиленгликоля, альбуминсвязывающий пептид или производное гидроксиэтилкрахмала (НЕЗ).

В другом варианте осуществления изобретения биспецифическая связывающая молекула, предлагаемая в изобретении, содержит фрагмент, который связывается с антигеном, присутствующим в крови, таким как сывороточной альбумин, сывороточные иммуноглобулины, тироксинсвязывающий белок, фибриноген или трансферрин, что удлиняет время полужизни ш νίνο образовавшегося полипептида, предлагаемого в изобретении. Согласно конкретному предпочтительному варианту осуществления изобретения указанный фрагмент представляет собой альбуминсвязывающий иммуноглобулин и наиболее предпочтительно альбуминсвязывающий иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен, такой как альбуминсвязывающий УНН-домен.

Указанный альбуминсвязывающий иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен, если он предназначен для применения на людях, предпочтительно связывается с человеческим сывороточным альбумином и предпочтительно представляет собой гуманизированный альбуминсвязывающий УНН-домен.

Иммуноглобулиновые единичные вариабельные домены, которые связываются с человеческим сывороточным альбумином, известны в данной области и описаны более подробно, например, в νθ 2006/122786. В частности, пригодный для связывания с УНН альбумин представляет собой АЬВ 1 и его гуманизированную копию АЬВ 8 (νθ 2009/095489). Однако можно также с успехом применять другие альбуминсвязывающие УНН-домены, упомянутые в вышеуказанной патентной публикации.

Наиболее приемлемым альбуминсвязывающим УНН-доменом является АЬВ8, который состоит из или содержит аминокислотную последовательность, представленную в ЗЕЦ ГО N0: 98 или 254.

Согласно другому варианту осуществления изобретения два иммуноглобулиновых единичных вариабельных домена, предпочтительно УНН, можно сливать с молекулой сывороточного альбумина, как это описано, например, в νθ 2001/79271 и νθ 2003/59934. Например, согласно подходу, изложенному в ν0 2001/79271, слитый белок можно получать с помощью общепринятой методики рекомбинации: молекулу ДНК, кодирующую сывороточный альбумин, или ее фрагмент связывают с ДНК, кодирующей бипецифическую связывающую молекулу, полученную конструкцию встраивают в плазмиду, которую

- 20 025148 можно применять для экспрессии в выбранной клетке-хозяине, например в клетке дрожжей типа Р1сЫа ракЮпк, или в бактериальной клетке, и затем клетку-хозяина трансфектировать слитой нуклеотидной последовательностью и выращивать в приемлемых условиях. Последовательность человеческого сывороточного альбумина (ЧСА), которую можно применять, представлена в §ЕЦ ГО N0: 99.

Согласно другому варианту осуществления изобретения приводящая к удлинению времени полужизни модификация полипептида, предлагаемого в изобретении (указанная модификация снижает также иммуногенность полипептида), заключается в присоединении пригодного фармакологически приемлемого полимера, такого как поли(этиленгликоль) (ПЭГ) с прямой или разветвленной цепью или его производные (например, метоксиполи(этиленгликоль) или мПЭГ). Как правило, можно использовать любую приемлемую форму пэгилирования, такую как пэгилирование, известное в данной области для антител и фрагментов антител (включая (но не ограничиваясь только ими) доменные антитела и ксРу-фрагменты); в качестве ссылки можно указать, например, СЬартап, N1. Вю!есЬпо1., 54, 2002, р. 531-545; Уегопеке и Натк, Α6ν. Эгид ЭеЬу. Кеу. 54, 2003, р. 453-456; Натк и СЬекк, Ν;·ιΙ. Кеу. Эгид. Όίδсоу. 2, 2003 и \\'О 2004/060965.

Кроме того, в продажу поступают различные реагенты для пэгилирования полипептидов, например, от фирм №к1аг ТЬегареийск, США или NОР Согрогайоп, Япония, такие как серии БипЬйдЫ® ЕА, серии 8Н, серии МА, серии СА и серии МЕ, такие как БипЬйдЫ® МЕ-100МА, БипЬйдЫ® МЕ-200МА и БипЬйдЫ® МЕ-400МА.

Предпочтительно применяют сайт-направленное пэгилирование, в частности, через остаток цистеина (см., например, Уапд е! а1., Рго1еЫ Епдшеегтд, 16, 2003, р. 761-770). Например, для этой цели ПЭГ можно присоединять к остатку цистеина, который в естественных условиях присутствует в полипептиде, предлагаемом в изобретении, полипептид, предлагаемый в изобретении, можно модифицировать так, чтобы в него можно было вводить один или несколько остатков цистеина для присоединения ПЭГ или аминокислотную последовательность, содержащую один или несколько остатков цистеина, предназначенных для присоединения ПЭГ, можно сливать с Ν- и/или С-концом полипептида, предлагаемого в изобретении, для всех указанных подходов можно применять методики конструирования белков, хорошо известные специалисту в данной области.

Предпочтительно для полипептидов, предлагаемых в изобретении, применяют ПЭГ с молекулярной массой, превышающей 5 кДа, например превышающей 10 кДа, но более низкой чем 200 кДа, например более низкой чем 100 кДа; например составляющей от 20 до 80 кДа.

Касательно пэгилирования следует указать, что, как правило, изобретение относится также к любой биспецифической связывающей молекуле, которая пэгилирована в одном или нескольких аминокислотных положениях, предпочтительно таким образом, что пэгилирование либо (1) удлиняет время полужизни ш у1уо; либо (2) снижает иммуногенность; либо (3) обеспечивает одно или несколько дополнительных ценных свойств, хорошо известных для пэгилирования; либо (4) не оказывает существенного воздействия на аффинность полипептида с его мишенью (например, не снижает указанную аффинность более чем на 50% и более предпочтительно более чем на 10% при определении с помощью приемлемого анализа, описанного в данной области); либо (5) не оказывает влияния на любое другое из требуемых свойств биспецифических связывающих молекул, предлагаемых в изобретении. Приемлемые ПЭГ-группы и методы их присоединения, либо специфические, либо неспецифические, хорошо известны специалисту в данной области. Кроме того, в продажу поступают различные реагенты для пэгилирования полипептидов, например, от фирм №к!аг ТЬегареийск, США или NОР Согрогайоп, Япония, такие как серии БипЬйдЫ® ЕА, серии 8Н, серии МА, серии СА и серии МЕ, такие как БипЬйдЫ® МЕ-100МА, БипЬйдЫ® МЕ-200МА и БипЬйдЫ® МЕ-400МА.

Согласно наиболее предпочтительному варианту осуществления изобретения пэгилированный полипептид, предлагаемый в изобретении, включает один ПЭГ-фрагмент линейного ПЭГ с молекулярной массой 40 или 60 кДа, при этом ПЭГ-фрагмент присоединен к полипептиду в линкерной области и, в частности, к остатку Сук в положении 5 линкерного пептида О89, представленного в 8ЕЦ ГО N0: 93, в положении 14 линкерного пептида О827, представленного в 8ЕЦ ГО N0: 95, или в положении 15 линкерного пептида О835, представленного в 8ЕЦ ГО N0: 96, или в положении 5 линкерного пептида 35О8, представленного в БЕЦ ГО N0: 97.

Биспецифическую связывающую молекулу, предлагаемую в изобретении, можно пэгилировать с помощью одного из указанных выше реагентов для пэгилирования, такого как БипЬйдЫ® МЕ-400МА, химическая формула которого представлена ниже:

Биспецифические связывающие молекулы, которые содержат линкер и/или обеспечивающие удлинение времени полужизни функциональные группы, имеют последовательности, представленные в

- 21 025148 §Еф ΙΌ N0: 81 и на фиг. 48.

Согласно другому варианту осуществления изобретения иммуноглобулиновые единичные вариабельные домены представляют собой доменные антитела, как они определены в контексте настоящего описания.

Иммуноглобулиновые единичные вариабельные домены, которые присутствуют в биспецифических связывающих молекулах, предлагаемых в изобретении, могут иметь также последовательности, которые соответствуют встречающемуся в естественных условиях УН-домену, который был камелизирован, т.е. изменен путем замены одного или нескольких аминокислотных остатков в аминокислотной последовательности, встречающейся в естественных условиях вариабельной области тяжелой цепи канонического, состоящего из 4 цепей антитела на один или несколько аминокислотных остатков, которые находятся в соответствующем(их) положении(ях) в УНН-домене состоящего из тяжелой цепи антитела. Это можно осуществлять хорошо известным методом, который очевиден специалисту в данной области и дополнительную информацию о котором можно почерпнуть из \У0 94/04678. Указанная камелизация может затрагивать главным образом аминокислотные положения, которые находятся в области контакта УН-УЪ, и так называемые остатки-маркеры верблюдовых (см., например, также XV0 1994/04678). Подробное описание указанных методов гуманизации и камелизации и предпочтительные последовательности каркасных участков, которые пригодны для осуществления этих методов, можно дополнительно почерпнуть из сведений, представленных на с. 46 и с. 98 ν0 2006/040153 и с. 107 ν0 2006/122786.

Связывающие компоненты обладают специфичностью в отношении Апд2 или УЕОР соответственно, поскольку они содержат один или несколько иммуноглобулиновых единичных вариабельных доменов, специфически связывающихся с одним или несколькими эпитопами молекулы Апд2 или молекулы УЕОР соответственно.

Специфическое связывание связывающей молекулы с антигеном Апд2 или УЕОР можно определять с помощью любого приемлемого хорошо известного метода, включая, например, представленные в настоящем описании методы, такие как анализ Скэтчарда и/или анализы связывания в условиях конкуренции, такие как радиоиммуноанализы (РИА), ферментные иммуноанализы (ФИА и ЕЫ8А) и сэнвичанализы в условиях конкуренции, и их различные варианты, хорошо известные в данной области.

Касательно антигена Апд2 или УЕОР соответственно иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен не ограничен происхождением из какого-либо конкретного вида. Так, иммуноглобулиновые единичные вариабельные домены предпочтительно связываются с человеческим Апд2 или человеческим УЕОР соответственно, если они предназначены для лечения человека. При этом иммуноглобулиновые единичные вариабельные домены, которые связываются с Апд2 или УЕОР соответственно из других видов млекопитающих, или полипептиды, содержащие их, также подпадают под объем изобретения. Иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен, который связывается с Апд2 или УЕОР из одного из видов, может давать перекрестную реакцию с соответствующим антигеном из одного или нескольких других видов. Например, иммуноглобулиновые единичные вариабельные домены, которые связываются с человеческим антигеном, могут обладать перекрестной реактивностью с соответствующим антигеном из одного или нескольких других видов приматов и/или антигеном из одного или нескольких видов животных, которых применяют в качестве животных, на которых моделируют заболевание, например, обезьян (в частности циномолгус или макак резус), мышей, крыс, кроликов, свиней, собак), в частности из животных, на которых моделируют заболевания и нарушения, которые можно модулировать путем ингибирования Апд2 (например, в качестве видов и животных моделей, упомянутых в настоящем описании). Иммуноглобулиновые единичные вариабельные домены, предлагаемые в изобретении, которые обладают указанной перекрестной реактивностью, являются важными для исследовательских целей и/или для разработки лекарственных средств, поскольку позволяют тестировать иммуноглобулиновые единичные вариабельные домены, предлагаемые в изобретении, на признанных моделях заболеваний, созданных на таких животных как обезьяны, в частности циномолгус или макак резус, или мыши и крысы.

Кроме того, связывающие компоненты не ограничены или не определены конкретным доменом или антигенной детерминантой антигена, который/которая является их мишенью. Предпочтительно с позиций перекрестной реактивности с одним или несколькими молекулами антигенов из видов кроме человека, которая(ые) предназначена(ы) для применения в качестве животных моделей при разработке терапевтического антагониста Апд2/УЕОР, связывающий компонент распознает эпитоп в области соответствующего антигена, которая обладает высокой степенью идентичности с человеческим антигеном. Например, при применении мышиной модели анти-Ап§2 иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен, входящий в биспецифические связывающие молекулы, предлагаемые в изобретении, распознает эпитоп, который полностью или частично локализован в РИГО-домене Апд2, для которого характерна высокая идентичность при сравнении человеческой и мышиной последовательности.

Предпочтительно УЕОР-связывающий компонент связывается с изоформами УЕОР УЕОР165 и/или УЕОР121.

- 22 025148

Другим объектом изобретения являются молекулы нуклеиновых кислот, которые кодируют биспецифические связывающие молекулы, предлагаемые в изобретении. Указанные молекулы нуклеиновых кислот в контексте настоящего описания обозначают также как нуклеиновые кислоты, предлагаемые в изобретении, и они могут иметь также форму генетической конструкции, указанной в настоящем описании. Нуклеиновая кислота, предлагаемая в изобретении, может представлять собой геномную ДНК, кДНК или синтетическую ДНК (такую как ДНК с наиболее часто встречающимися кодонами, которая специально адаптирована для экспрессии в выбранной клетке-хозяине или организме-хозяине). Согласно одному из вариантов осуществления изобретения нуклеиновая кислота, предлагаемая в изобретении, находится в практически выделенной форме, как указано выше в настоящем описании.

Нуклеиновая кислота, предлагаемая в изобретении, может иметь также форму вектора, может присутствовать в векторе и/или представлять собой часть вектора, такого, например, как плазмида, космида или УЛС. Вектор может представлять собой прежде всего экспрессионный вектор, т.е. вектор, который может обеспечивать экспрессию биспецифической молекулы ίη νίίΐΌ и/или ίη νί\Ό (т.е. в приемлемой/приемлемом клетке-хозяине, организме-хозяине и/или экспрессионной системе). Указанный экспрессионный вектор, как правило, содержит по меньшей мере одну нуклеиновую кислоту, предлагаемую в изобретении, которая функционально связана с одним или несколькими приемлемыми регуляторными элементами, такими как промотор(ы), энхансер(ы), терминатор(ы) и т. п. Указанные элементы и их отбор с позиций экспрессии конкретной последовательности в конкретном хозяине находятся в компетенции специалиста в данной области. Конкретные примеры регуляторных элементов и других элементов, пригодных или необходимых для экспрессии Ό114-связывающих молекул, предлагаемых в изобретении, таких как промоторы, энхансеры, терминаторы, факторы интеграции, маркеры для селекции, лидерные последовательности, репортерные гены и т.п., описаны, например, на с. 131-133 νθ 2006/040153.

Нуклеиновые кислоты, предлагаемые в изобретении, можно создавать или получать хорошо известным методом (например, путем автоматического синтеза ДНК и/или методом рекомбинантной ДНК) на основе информации об аминокислотных последовательностях полипептидов, предлагаемых в изобретении, которая представлена в настоящем описании, и/или их можно выделять из пригодного встречающегося в естественных условиях источника.

Следующим объектом изобретения являются клетки-хозяева, которые экспрессируют или в которых может происходить экспрессия одной или нескольких биспецифических связывающих молекул, предлагаемых в изобретении; и/или которые содержат нуклеиновую кислоту, предлагаемую в изобретении. В одном из конкретных предпочтительных вариантов осуществления изобретения клетки-хозяева представляют собой бактериальные клетки; другими пригодными клетками являются клетки дрожжей, клетки грибов или клетки млекопитающих.

Приемлемыми бактериальными клетками являются клетки грамотрицательных штаммов бактерий, таких как штаммы ЕзсйепсЫа сой, Ρ^οΐеиз и Ρзеиάοтοηаз, и грамположительных штаммов бактерий, таких как штаммы ВасШиз, 81гер1отусез, 81арйу1ососсиз и ЬасЫсоссиз. Приемлемыми грибными клетками являются клетки видов Тпсйойегта. №игозрога и ЛзрегдШиз. Приемлемыми клетками дрожжей являются клетки видов §ассйаготусез (например, 8ассйаготусез се1^1з1ае), 8сЫ/озассйаготусез (например, 8сЫ/озассйаготусез ротЬе), ГюЫа (например, ГюЫа разЮпз и ГюЫа теФа^Ша) и Ηаηзеηи1а.

Приемлемыми клетками млекопитающих являются, например, СНО-клетки, ΒΗΚ-клетки, Ηе^а-клетки, СО8-клетки и т.п. Однако можно использовать также клетки амфибий, клетки насекомых, клетки растений и любые другие клетки, которые применяют в данной области для экспрессии гетерологичных белков.

Изобретение относится также к способам получения биспецифической связывающей молекулы, предлагаемой в изобретении, как правило, заключающимся в том, что осуществляют стадии, на которых культивируют клетки-хозяева, которые содержат нуклеиновую кислоту, обладающую способностью кодировать биспецифическую связывающую молекулу в условиях, которые обеспечивают экспрессию биспецифической связывающей молекулы, предлагаемой в изобретении; и высвобождают или выделяют из культуры полипептид, экспрессируемый клетками-хозяевами; и необязательно дополнительно очищают, и/или модифицируют, и/или включают в препаративную форму биспецифическую связывающую молекулу, предлагаемую в изобретении.

Для производства в промышленном масштабе предпочтительными организмами-хозяевами являются штаммы Е.сой, ГюЫа разЮпз и §.се1^1з1ае, которые пригодны для крупномасштабной экспрессии, производства и ферментации, и прежде всего для крупномасштабной экспрессии, производства и ферментации фармацевтических продуктов.

Выбор конкретной экспрессионной системы зависит, в частности, от требований к определенным посттрансляционным модификациям, более конкретно к гликозилированию. Для получения биспецифической связывающей молекулы, предлагаемой в изобретении, для которой гликозилирование является желательным или необходимым, требуется применять для экспрессии клетки-хозяева млекопитающих, обладающие способностью гликозилировать белок. В этом плане специалисту в данной области должно быть очевидно, что полученная схема гликозилирования (т. е. вид, количество и положение присоединенных остатков) должна зависеть от клетки или клеточной линии, применяемой для экспрессии.

- 23 025148

Биспецифические связывающие молекулы, предлагаемые в изобретении, можно получать либо в клетке, согласно описанному выше методу, внутриклеточно (например, в цитозоле, периплазме или в тельцах включения), а затем выделять из клеток-хозяев и необязательно дополнительно очищать; либо их можно получать внеклеточно (например, в среде, в которой культивируют клетки-хозяева), а затем выделять из культуральной среды и необязательно дополнительно очищать.

Методы и реагенты, которые применяют для получения полипептидов с помощью рекомбинантной ДНК, такие как специфические приемлемые экспрессионные векторы, методы трансформации или трансфекции, маркеры для селекции, методы индукции экспрессии белков, условия культивирования и т.п., известны в данной области. Аналогично этому методики выделения и очистки белков, применяемые в методе производства полипептида, предлагаемого в изобретении, хорошо известны специалисту в данной области.

Следующим объектом изобретения является пептид, который имеет аминокислотную последовательность СЭР3, входящую в конструкцию анти-УЕОР-УНН, которая имеет аминокислотную последовательность, выбранную из аминокислотных последовательностей, которые представлены в 8Е0 ГО N0: 9-57 и или 8Е0 ГО N0: 58-127 соответственно, и молекула нуклеиновой кислоты, которая его кодирует.

Эти пептиды соответствуют СЭР3, выведенным из УНН, предлагаемых в изобретении. Их, в частности, молекулы нуклеиновых кислот, которые кодируют их, можно применять для трансплантации СЭР для того, чтобы заменять СГОК3 в цепи иммуноглобулина или для инсерции в неимуноглобулиновый каркас, например, ингибитор протеазы, ДНК-связывающий белок, цитохром Ь562, состоящий из пучка спиралей белок, связанный дисульфидным мостиком пептид, липокаин или антикалин, которые придают указанному каркасу способность связываться с мишенью. Метод трансплантации СЭР хорошо известен в данной области и его широко применяли, например, для гуманизации антител (которые, как правило, содержит СЭР из антитела грызунов, трансплантированные в каркасные участки Ру человеческого антитела).

Для получения иммуноглобулинового или неиммуноглобулинового каркаса, содержащего СЭР3, предлагаемый в изобретении, ДНК, которая кодирует указанную молекулу, можно получать с помощью стандартных методов молекулярной биологии, например с помощью синтеза генов, отжига олигонуклеотидов или на основе перекрывающихся ПЦР-фрагментов, которые описаны, например, у ПаидНег1у е( а1., ШсЮс Лаб8 Ре8еатсЬ, т. 19, 9, 1991, р. 2471-2476. Метод инсерции УНН-СЭР3 в неиммуноглобулиновый каркас описан у №са18е е( а1., Рго1еш Заепсе, 13, 2004, р. 1882-1891.

Изобретение относится также к продукту или композиции, содержащему/содержащей по меньшей мере одну биспецифическую связывающую молекулу, предлагаемую в изобретении, и необязательно один или несколько хорошо известных дополнительных компонентов указанных композиций, т.е. которые зависят от предполагаемого применения композиции.

Для фармацевтического применения на основе биспецифической связывающей молекулы, предлагаемой в изобретении, или полипептида, который ее содержит, можно приготавливать формы в виде фармацевтического препарата или композиции, содержащего/содержащей по меньшей мере одну биспецифическую связывающую молекулу, предлагаемую в изобретении, и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или эксципиент и/или адъювант и необязательно один или несколько дополнительных фармацевтически активных полипептидов и/или соединений. Примерами таких препаративных форм являются (но не ограничиваясь только ими) формы, пригодные для орального введения, для парентерального введения (например, с помощью внутривенной, внутримышечной или подкожной инъекции или внутривенной инфузии), для местного применения, для применения путем ингаляции, с помощью кожного пластыря, с помощью имплантата, суппозитория и т.д. Указанные приемлемые для введения формы, которые могут быть твердыми, полутвердыми или жидкими в зависимости от пути введения, а также методы и носители для их применения в препаратах, должны быть очевидные специалисту в данной области и дополнительно представлены в настоящем описании.

Таким образом, следующим объектом изобретения является фармацевтическая композиция, которая содержит по меньшей мере одну биспецифическую связывающую молекулу, в частности один иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен, предлагаемый в изобретении, или полипептид, который его содержит, и по меньшей мере один приемлемый носитель, разбавитель или эксципиент (т. е. пригодный для фармацевтического применения) и необязательно одну или несколько дополнительных активных субстанций.

Биспецифические связывающие молекулы, предлагаемые в изобретении, можно включать в препаративную форму и вводить с помощью любого пригодного хорошо известного метода: см. ссылки, прежде всего касающиеся иммуноглобулиновых единичных вариабельных доменов, например, в АО 2004/041862, АО 2004/041863, АО 2004/041865, АО 2004/041867 и АО 2008/020079, а также в стандартных справочниках, таких как Реш1п§1ои'8 РЬаттасеийса1 8с1епсе8, 18-е изд., изд-во Маск РиЬГОЫпд Сотрапу, США, 1990, Реттдоп, (Не ЗОепсе апб Ргасбсе оГ РНаттасу, 21-е изд., изд-во Е1рртсо(( А1Шат8 и Абкш8, 2005 или НапбЬоок оГ ТНегареийс Ли(^Ьоб^е8. под ред. 8. ПиЬе1, изд-во Абеу, АетИет-т 2007 (см., например, р. 252-255).

- 24 025148

Например, иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен, предлагаемый в изобретении, можно включать в препаративную форму и вводить любым методом, широко применяемым для канонических антител и фрагментов антител (включая δсРν и димерные антитела) и других фармацевтически активных белков. Указанные препаративные формы и методы их получения должны быть очевидны специалисту в данной области и, например, включают препараты, пригодные для парентерального введения (например, внутривенного, внутрибрюшинного, подкожного, внутримышечного, внутрипросветного, внутриартериального или внутриоболочечного введения) или для местного (т.е. трансдермального или внутридермального) применения.

Препараты для парентерального введения могут представлять собой, например, стерильные растворы, суспензии, дисперсии или эмульсии, которые можно применять для инфузии или инъекции. Приемлемыми носителями или разбавителями для таких препаратов являются, например (но не ограничиваясь только ими), стерильная вода и фармацевтически приемлемые водные буферы и растворы, такие как забуференный фосфатом физиологический раствор, раствор Рингера, раствор декстрозы, раствор Хэнкса; водные растворы масел; глицерин; этанол; гликоли, такие как пропиленгликоль, или также минеральные масла, животные масла и растительные масла, например арахисовое масло, соевое масло, а также их приемлемые смеси. Как правило, предпочтительными являются водные растворы или суспензии.

Так, биспецифическую связывающую молекулу, предлагаемую в изобретении, можно вводить системно, например орально, в сочетании с фармацевтически приемлемым наполнителем, таким как инертный разбавитель или усвояемый съедобный носитель. Для орального терапевтического применения биспецифическую связывающую молекулу, предлагаемую в изобретении, можно объединять с одним или несколькими эксципиентами и применять в форме предназначенных для приема внутрь таблеток, трансбуккальных таблеток, пастилок, капсул, эликсиров, суспензий, сиропов, облаток и т.п. Указанные композиции и препараты должны содержать связывающую молекулу, предлагаемую в изобретении, в количестве, составляющем по меньшей мере 0,1%. Указанное процентное содержание в композициях и препаратах может, естественно, варьироваться и может, как правило, составлять от примерно 2 до примерно 60% в пересчете на массу указанной стандартной дозы лекарственного средства. Количество биспецифической связывающей молекулы, предлагаемой в изобретении, в предназначенных для терапевтического применения композициях является таким, чтобы получать эффективный уровень доз.

Таблетки, пилюли, капсулы и т. п. могут содержать также связывающие агенты, эксципиенты, разрыхлители, замасливатели и подслащивающие вещества или корригенты, например, упомянутые на сс. 143-144 АО 2008/020079. Когда стандартная доза лекарственного средства представляет собой капсулу, то она может содержать помимо продуктов указанного выше типа жидкий носитель, такой как растительное масло или полиэтиленгликоль. Различные другие материалы могут присутствовать в виде покрытий или их можно применять для другой модификации физической формы твердой стандартной дозы лекарственного средства. Например, на таблетки, пилюли и капсулы можно наносить покрытие из желатина, воска, шеллака или сахара и т.п. Сироп или эликсир может включать биспецифические связывающие молекулы, предлагаемые в изобретении, сахарозу или фруктозу в качестве подслащивающего вещества, метил- и пропилпарабены в качестве консервантов, краситель и корригент, такой как вишневая или апельсиновая отдушка. Естественно, любой продукт, применяемый для приготовления любой стандартной дозы лекарственного средства, должен быть фармацевтически приемлемым и практически нетоксичным в применяемых количествах. Кроме того, биспецифические связывающие молекулы, предлагаемые в изобретении, можно включать в препараты или устройства с замедленным высвобождением.

Препараты и формы для орального введения могут иметь также энтеросолюбильное покрытие, которое позволяет конструкциям, предлагаемым в изобретении, сохраняться в среде желудка и проходить в кишечник. Более конкретно препараты и формы для орального введения можно приготавливать в виде, который позволяет осуществлять введение в требуемый отдел желудочно-кишечного тракта. Кроме того, для введения в желудочно-кишечный тракт можно применять суппозитории.

Биспецифические связывающие молекулы, предлагаемые в изобретении, можно вводить также внутривенно или внутрибрюшинно с помощью инфузии или инъекции, что более подробно описано на сс. 144 и 145 АО 2008/020079.

В случае предназначенных для местного применения биспецифических связывающих молекул, предлагаемых в изобретении, их требуется наносить на кожу в виде композиций или форм в сочетании с приемлемым для дерматологического применения носителем, который может быть твердым или жидким, что более подробно описано на с. 145 АО 2008/020079.

Как правило, концентрация биспецифических связывающих молекул, предлагаемых в изобретении, в жидкой композиции, такой как лосьон, должна составлять примерно 0,1-25 мас.%, предпочтительно примерно 0,5-10 мас.%. Концентрация в полутвердой или твердой композиции, такой как гель или порошок, должна составлять примерно 0,1-5 мас.%, предпочтительно примерно 0,5-2,5 мас.%.

Количество биспецифических связывающих молекул, предлагаемых в изобретении, которое требуется для лечения, должно варьироваться не только в зависимости от конкретной выбранной биспецифической связывающей молекулы, но также от пути введения, природы состояния, подлежащего лечению, и возраста и состояния пациента, и, в конце концов, оно определяется предписанием лечащего врача или

- 25 025148 клинициста. Кроме того, доза биспецифических связывающих молекул, предлагаемых в изобретении, варьирует в зависимости от клетки-, опухоли-, ткани-, трансплантата- или органа-мишени.

Требуемую дозу, как правило, можно применять в виде однократной дозы или в виде разделенных доз, которые предназначены для введения с соответствующими интервалами, например, в виде двух, трех, четырех или большего количества субдоз в день. Режим введения самих субдоз можно дополнительно разделять, например, на ряд введений, разделенных пустыми промежутками без обработки; например, на несколько ингаляций с использованием инсуффлятора, или путем внесения нескольких капель в глаз.

Схема введения может включать пролонгированную ежедневную обработку. Под пролонгированной подразумевают обработку в течение периода времени, составляющего по меньшей мере две недели и предпочтительно несколько недель, месяцев или лет. Необходимость изменений в этой схеме приема доз может определять обычный специалист в данной области с помощью общепринятых экспериментов, указанных в настоящем описании (см., Кетшдкоп'к РЬагшасеийса1 8с1епсе§, под ред. МаШп Е.^., 4-е изд., изд-во Маск РиЬНкЫпд Со., Еайоп. РА). Дозу может регулировать также каждый лечащий врач в случае любых осложнений.

Еще одним вариантом осуществления изобретения является применение биспецифических связывающих молекул, например иммуноглобулиновых единичных вариабельных доменов или содержащих их полипептидов, для следующих терапевтических целей:

для предупреждения, лечения и/или облегчения нарушения, заболевания или состояния, прежде всего у человека, которое ассоциировано с опосредуемыми УЕОР- и /или Апд2 воздействиями на ангиогенез или которое можно предупреждать, лечить или облегчать посредством модуляции пути передачи сигналов Ко1сН и/или передачи сигналов Т1е2 с помощью биспецифической связывающей молекулы, предлагаемой в изобретении, в способе лечения пациента, который нуждается в такой терапии, заключающемся в том, что вводят индивидууму, который нуждается в этом, в фармацевтически активном количестве по меньшей мере одну биспецифическую связывающую молекулу, предлагаемую в изобретении, например иммуноглобулиновый единичный вариабельный домен, или содержащую их фармацевтическую композицию;

для приготовления лекарственного средства, предназначенного для предупреждения, лечения или облегчения нарушений, заболеваний или состояний, ассоциированных с опосредуемыми УЕОР и/или опосредуемыми Апд2 воздействиями на ангиогенез;

в качестве действующего вещества в фармацевтической композиции или лекарственном средстве, применяемой/применяемом для указанных выше целей.

Согласно конкретному объекту изобретения нарушение, заболевание или состояние представляет собой рак или злокачественное заболевание, указанное в настоящем описании.

Согласно другому объекту изобретения заболевание представляет собой глазную болезнь, ассоциированную с опосредуемыми УЕОР и/или опосредуемыми Апд2 воздействиями на ангиогенез или которую можно лечить или облегчать посредством модуляции пути передачи сигналов №1сЬ и/или передачи сигналов Т1е2 с помощью биспецифической связывающей молекулы.

В зависимости от подлежащего лечению злокачественного заболевания биспецифическую связывающую молекулу можно применять индивидуально или в сочетании с одним или несколькими дополнительными терапевтическими средствами, в частности, выбранными из химиотерапевтических средств типа повреждающих ДНК агентов или терапевтически активных соединений, которые ингибируют ангиогенез, пути трансдукции сигналов или точки контроля митоза в раковых клетках.

Дополнительные терапевтические средства можно вводить одновременно, необязательно в виде компонента одного и того же фармацевтического препарата, или до, или после введения биспецифической связывающей молекулы.

В конкретных вариантах осуществления изобретения дополнительное терапевтическое средство может представлять собой (но не ограничиваясь только ими) один или несколько ингибиторов, выбранных из группы ингибиторов ЕОРК, УЕОРК, НЕК2-пеи, Нег3, АигогаА, АигогаВ, РЬК и РВ-киназы, РОРК, РООРК, Как, Как, К8Р, РОК1, РТК2, ЮР-К или ПК.

Другими примерами дополнительных терапевтических агентов являются ингибиторы СОК, АкЕ кгс/Ьсг аЬ1, сКД, сМеЕНОР, с-Мус, РИ3, Н8Р90, антагонисты ЬеДдеЬод, ингибиторы 1АК/8ТАТ, Мек, тТог, МР-кВ, протеосом, КЬо, ингибитор пути передачи сигналов \\Ш или ингибитор пути убикитинизации или другой ингибитор пути передачи сигналов №1еЬ.

Примерами ингибиторов киназы Аигога являются (но не ограничиваясь только ими) РНА-739358, А2П-1152, АТ 9283, СУС-116, К-763, УХ-680, УХ-667, МЬ№8045, РР-3814735.

Примером ингибитора РЬК является О8К-461364.

Примерами ингибиторов гак являются ВАУ-73-4506 (который является также ингибитором УЕОРК), РЬХ 4032, КАР-265 (который является также ингибитором УЕОРК), сорафениб (который является также ингибитором УЕОРК) и ХЬ 281.

Примерами ингибиторов К8Р являются испинесиб, АККУ-520, А2П-4877, СК-1122697, О8К 246053А, О8К-923295, МК-0731 и 8В-743921.

- 26 025148

Примерами ингибиторов кгс и/или Ьсг-аЬ1 являются дасатиниб, ΑΖΌ-0530, босутиниб, ХЬ 228 (который является также ингибитором 1ОР-1К), нилотиниб (который является также ингибитором РООРК и сКП), иматиниб (который является также ингибитором сКП) и N3-187.

Примером ингибитора ΡΌΚ1 является ВХ-517.

Примером ингибитора КНо является ВА-210.

Примерами ингибиторов Р13-киназы являются РХ-866, ΒΕΖ-235 (который является также ингибитором тТог), ХЬ 418 (который является также ингибитором Ак1), ХЬ-147 и ХЬ 765 (который является также ингибитором тТог).

Примерами ингибиторов сМе! или НОР являются ХЬ-184 (который является также ингибитором УЕОРК, сКП, Р1!3), РР-2341066, МК-2461, ХЬ-880 (который является также ингибитором УЕОРК), МОСО-265 (который является также ингибитором УЕОРК, Коп, Т1е2), ЗИ-11274, РНА-665752, АМО-102 и АУ-299.

Примером ингибитора с-Мус является СХ-3543.

Примерами ингибиторов Р1!3 являются АС-220 (который является также ингибитором сКП апП РИОРК), КА 2449, лестауртиниб (который является также ингибитором УЕОРК, РИОРК, РКС), ТО101348 (который является также ингибитором 1АК2), ХЬ-999 (который является также ингибитором сК11, РОРК, РЭСРК и УЕОРК), сунитиниб (который является также ингибитором РИОРК, УЕОРК и сКП) и тандутиниб (который является также ингибитором РОСРК и сКП).

Примерами ингибиторов Н3Р90 являются танеспимицин, алвеспимицин 1Р1-504 и СОТ¹ 2024.

Примерами ингибиторов 1АК/3ТАТ являются СУТ-997 (который взаимодействует также с тубулином), ТО 101348 (который является также ингибитором Р1!3) и ХЬ-019.

Примерами ингибиторов Мек являются АККУ-142886, РЭ-32590Р ΑΖ^-8330 и ХЬ 518.

Примерами ингибиторов тТог являются темсиролимус, АР-23573 (который действует также как ингибитор УЕОР), эверолимус (кроме того, является ингибитором УЕОР), ХЬ-765 (который является также ингибитором Р13-киназы) и ΒΕΖ-235 (который является также ингибитором Р13-киназы).

Примерами ингибиторов Ак! являются перифосин, О3К-690693, КХ-0201 и трицирибин.

Примерами ингибиторов сКИ являются АВ-1010, О31-930 (который действует также в качестве ингибитора УЕОРК), АС-220 (который является также ингибитором Р1!3 и РИОРК), тандутиниб (который является также ингибитором Р1!3 и РИОРК), акситиниб (который является также ингибитором УЕОРК и РИОРК), ХЬ-999 (который является также ингибитором Р1!3, РИОРК, УЕОРК, РОРК), сунитиниб (который является также ингибитором Р1!3, РИОРК, УЕОРК) и ХЬ-820 (который действует также как ингибитор УЕОРК и РИОРК), имиаиниб (который является также ингибитором Ьсг-аЬ1), нилотиниб (который является также ингибитором Ьсг-аЬ1 и РЭСРК).

Примерами антагонистов НеПдеНод являются 1Р1-609 и СИК-61414.

Примерами ингибиторов СОК являются селициклиб, АТ-7519, Р-276, ΖΚ-С^Κ (который является также ингибитором УЕОРК2 и РИОРК), РИ-332991, К-547, 3Ν3-032, РНА-690509 и АО 024322.

Примерами ингибиторов протеосомы являются бортезомиб, карфилзомиб и №1-0052 (который является также ингибитором ΝΤ-κΒ).

Примером ингибитора ΝΓ-κΒ-пути является №1-0052.

Примером ингибитора пути убикитинизации является НВХ-41108.

В предпочтительных вариантах осуществления изобретения дополнительное терапевтическое средство представляет собой антиангиогенный агент.

Примерами антиангиогенных агентов являются ингибиторы РОРК, РЭСРК и УЕОРК или соответствующие лиганды (например, ингибиторы УЕОР типа пэгаптаниба или антитело к УЕОР бевасизумаб) и талидомиды, указанные агенты выбраны из группы, включающей (но не ограничиваясь только ими) бевасизумаб, мотесаниб, СОР-791, 3И-14813, телатиниб, ККК951, ΖΚ-С^Κ (который является также ингибитором СОК), АВТ-869, ВМЗ-690514, КАР-265, 1МС-КОК, 1МС-18Р1, 1МГО (иммуномодуляторные лекарственные средства), производное талидомида СС-4047, леналидомид, ΕNΜ^ 0995, 1МС-О11, К1 23057, бриваниб, цедираниб, ХЬ-999 (который является также ингибитором сКП и Р1!3), 1В3, СР 868596, 1МС 3О3, К-1530 (который является также ингибитором Р1!3), сунитиниб (который является также ингибитором сКИ и Р1!3), акситиниб (который является также ингибитором сК11), лестауртиниб (который является также ингибитором Р1!3 и РКС), ваталаниб, тандутиниб (который является также ингибитором Р1!3 и сКП), пазопаниб, ОА 786034, РР-337210, 1МС-1121В, АУЕ-0005, АО-13736, Е-7080, СН1К 258, сорафениба тозилат (который является также ингибитором Ка!), КАР-265 (который является также ингибитором Ка!), вантетаниб, СР-547632, О31-930, АЕЕ-788 (ЕОРК и Нег2), ВАУ-57-9352 (который является также ингибитором Ка!), ВАУ-73-4506 (который является также ингибитором Ка!), ХЬ 880 (который является также ингибитором сМе!), ХЬ-647 (который является также ингибитором ЕОРК и ЕрНВ4), ХЬ 820 (который является также ингибитором сКП) и нилотиниб (который является также ингибитором сКП и Ьгс-аЬ1).

Дополнительное терапевтическое средство можно выбирать также из ингибиторов ЕОРК, оно может представлять собой низкомолекулярный ингибитор ЕОРК или антитело к ЕОРК. Примерами антител

- 27 025148 к ЕОРК являются (но не ограничиваясь только ими) цетуксимаб, панитумумаб, матузумаб; примером низкомолекулярного ингибитора ЕОРК является гефитиниб. Другим примером модулятора ЕОРК является конъюгат ЕОР с токсином.

Из ингибиторов ЕОРК и Нег2, которые можно применять в сочетании с биспецифической связывающей молекулой, предлагаемой в изобретении, следует упомянуть лапатиниб, гефитиниб, эрлотиниб, цетуксимаб, трастузумаб, нимотузумаб, залутумумаб, вандетаниб (который является также ингибитором УЕОРК), пертузумаб, ХЬ-647, НК1-272, ВМЗ-599626 АККУ-334543, АУ 412, тАВ-806, ВМЗ-690514, ΊΝΙ-26483327, АЕЕ-788 (который является также ингибитором УЕОРК), АККУ-333786, 1МС-11Р8, 2етаЬ.

Другими агентами, которые целесообразно применять для лечения в сочетании с биспецифической связывающей молекулой, предлагаемой в изобретении, являются тоситумумаб и ибритумомаба тиуксетан (два меченных с помощью радиоактивных изотопов антитела к СИ20), алемтузумаб (антитело к СИ52), деносумаб (ингибитор лиганда фактора дифференцировки остеокластов), галиксимаб (антагонист СИ80), офатумумаб (ингибитор СИ20), занолимумаб (антагонист СИ4), 8СШ0 (модулятор лиганда рецептора СИ40), ритуксимаб (ингибитор СИ20), мапатумумаб (агонист рецептора ТКА1Ь-1), КЕСШ21 (8АК153192) или ОМР-21М18 (ингибиторы Ό114).

Другими химиотерапевтическими лекарственными средствами, которые можно применять в сочетании с биспецифическими связывающими молекулами, предлагаемыми в настоящем изобретении, являются (но не ограничиваясь только ими) гормоны, аналоги гормонов и антигормональные средства (например, тамоксифен, торемифен, ралоксифен, фулвестрант, мегестрола ацетат, флутамид, нилутамид, бикалутамид, ципротерона ацетат, финастерид, бусерелина ацетат, флудрокортизон, флуоксиместерон, медроксипрогестерон, остреотид, арзоксифен, пасиреотид, вапреотид), ингибиторы ароматазы (например, анастрозол, летрозол, лиарозол, эксеместан, атаместан, форместан), агонисты и антагонисты ЬНКН (например, госерелина ацетат, леупролид, абареликс, цетрореликс, деслорелин, гистрелин, трипторелин), антиметаболиты (например, антифолаты типа метотрексата, пеметрекседа, аналоги пиримидина типа 5-фторурацила, капецитабина, децитабина, неларабина и гемцитабина, аналоги пурина и аденозина, такие как меркаптопурина тиогуанин, кладрибин и пентостатин, цитарабин, флударабин); противопухолевые антибиотики (например, антрациклины, такие как доксорубицин, даунорубицин, эпирубицин и идарубицин, митомицин-С, блеомицин, дактиномицин, пликамицин, митоксантрон, пиксантрон, стрептозоцин); производные платины (например, цисплатин, оксалиплатин, карбоплатин, лобаплатин, сатраплатин); алкилирующие средства (например, эстрамустин, меклорэтамин, мелфалан, хлорамбуцил, бусульфан, дакарбазин, циклофосфамид, ифосфамид, гидроксимочевина, темозоломид, нитрозомочевины, такие как кармустин и ломустин, тиотепа); антимитотические средства (например, алкалоиды барвинка типа винбластина, виндесина, винорелбина, винфлунина и винкристина; таксаны, такие как паклитаксел, доцетаксел и их препаративные формы, ларотаксел; симотаксел и эпотилоны типа иксабепилона, патупилона, ΖΕ-ЕРО); ингибиторы топоизомеразы (например, эпиподофиллотоксины, такие как этопосид и этопофос, тенипосид, амсакрин, топотекан, иринотекан) и химиотерапевтические агенты смешанного типа, такие как амифостин, анагрелид, интерферон альфа, прокарбазин, митотан и порфимер, бексаротен, целекоксиб.

Эффективность биспецифических связывающих молекул, предлагаемых в изобретении, или содержащих их полипептидов, или содержащих их композиций можно оценивать с помощью приемлемого анализа ш νίΙΐΌ. клеточного анализа, анализа ш νί\Ό и/или на хорошо известных животных моделях или с помощью любой их комбинации в зависимости от специфического представляющего интерес заболевания или нарушения. Приемлемые анализы и животные модели очевидны специалисту в данной области, и они представляют собой анализы, представленные в настоящем описании, и применяемые ниже в примерах, например анализ пролиферации.

Данные, полученные в экспериментах, проведенных при создании изобретения, подтверждают, что биспецифические связывающие молекулы, предлагаемые в изобретении, обладают свойствами, которые превышают свойства связывающих молекул, известных из существующего уровня техники. Одним из указанных свойств является полное ингибирование взаимодействия УЕОР165-УЕОРК2 и низкое значение 1С₅₀, которое можно рассчитывать, например, на основе полученных с помощью ЕЫ8А данных, представленных на фиг. 1 и в табл. 5, а также значения 1С₅₀ (нМ) для УНН по данным А1рйаЗсгеепанализа, которые представлены на фиг. 3, 17, 18 и в табл. 7; и данные об уровне аффинности К_с (нМ) очищенных УНН к рекомбинантному человеческому УЕОР и мышиному УЕОР, которые представлены в табл. 9, 10 и на фиг. 5. Кроме того, что видно из табл. 13, связывающие УЕОР агенты, предлагаемые в изобретении, обладают высокой эффективностью, т. е. при применении в концентрациях, находящихся в субнаномолярном диапазоне, при оценке пролиферации клеток линии НИУЕС. Эти данные свидетельствуют о том, что биспецифические связывающие молекулы, предлагаемые в изобретении, являются перспективными кандидатами, которые могут обладать терапевтической эффективностью в отношении заболеваний и нарушений, ассоциированных с опосредуемыми УЕОР-воздействиями на ангиогенез, таких как рак.

- 28 025148

Другим вариантом осуществления изобретения является способ диагностирования заболевания, заключающийся в том, что:

а) приводят в контакт образец со связывающей молекулой, предлагаемой в изобретении; и

б) определяют связывание указанной связывающей молекулы с образцом; и

в) сравнивают связывание, обнаруженное на стадии (б), со стандартом, при этом различие в связывании с указанным образцом является диагностическим в отношении заболевания или нарушения, ассоциированного с опосредуемыми УЕСР- и/или Апд2 воздействиями на ангиогенез.

Для указанного и других вариантов применения может оказаться целесообразным дополнительно модифицировать биспецифическую связывающую молекулу, предлагаемую в изобретении, например, путем интродукции функциональной группы, которая является компонентом специфически связывающейся пары, такой как связывающаяся пара биотин-(стрепт)авидин. Указанную функциональную группу можно применять для соединения связывающей молекулы, предлагаемой в изобретении, с другим белком, полипептидом или химическим соединением, который/которое связан/связано с другой половиной связывающейся пары, т.е. посредством формирования связывающейся пары. Например, биспецифическую связывающую молекулу, предлагаемую в изобретении, можно конъюгировать с биотином и связывать с другим белком, полипептидом, соединением или носителем, который конъюгирован с авидином или стрептавидином. Например, указанную конъюгированную биспецифическую связывающую молекулу, предлагаемую в изобретении, можно применять в качестве репортера, например, в диагностической системе, в которой выявляемый образующий сигнал агент конъюгирован с авидином или стрептавидином.

Краткое описание чертежей

На чертежах показано:

на фиг. 1 - результаты, демонстрирующие, что очищенные одновалентные УНН блокируют взаимодействие ЬУЕСР165/ЪУЕСРК2-Рс (ЕЬ18А);

на фиг. 2 - результаты, демонстрирующие, что очищенные одновалентные УНН блокируют взаимодействие ЬУЕСР165/ЪУЕСРК1-Рс (ЕЫ8А);

на фиг. 3 - результаты, демонстрирующие, что очищенные одновалентные УНН блокируют взаимодействие ЬУЕСР165/ЪУЕСРК2-Рс (А1рйа8сгееп);

на фиг. 4 - результаты, демонстрирующие, что очищенные одновалентные УНН блокируют взаимодействие ЬУЕСР165/ЪУЕСРК1-Рс (А1рйа8сгееп);

на фиг. 5 - результаты, демонстрирующие связывание одновалентных УНН с рекомбинантным человеческим и мышиным УЕСР (ЕЬ18А);

на фиг. 6 - результаты, демонстрирующие связывание одновалентных УНН с человеческим УЕСР121;

на фиг. 7- результаты, демонстрирующие, что очищенные УНН не связываются с УЕСРВ, УЕСРС, УЕСРО и ΡΙ.ΟΙ^;;

на фиг. 8 - результаты, демонстрирующие, что форматированные УНН блокируют взаимодействие ЬУЕСР165/ЪУЕСРК2-Рс (ЕЬ18А);

на фиг. 9 - результаты, демонстрирующие, что форматированные УНН блокируют взаимодействие ЬУЕСР165/ЪУЕСРК1-Рс (ЕЬ18А);

на фиг. 10 - результаты, демонстрирующие, что форматированные УНН блокируют взаимодействие ЬУЕСР165/ЪУЕСРК2-Рс (А1рйа8сгееп);

на фиг. 11 - результаты, демонстрирующие, что форматированные УНН блокируют взаимодействие ЬУЕСР165/ЪУЕСРК1-Рс (А1рйа8сгееп);

на фиг. 12 - результаты, демонстрирующие, что форматированные УНН блокируют взаимодействие тУЕСР164/тУЕСРК2-Рс (А1рйа8сгееп);

на фиг. 13 - результаты, демонстрирующие, что форматированные УНН связываются с мышиным и человеческим УЕСР;

на фиг. 14 - результаты, демонстрирующие, что форматированные УНН не связываются с УЕСРВ, УЕСРС, УРС.Р1) и ΡΙ .С.Р;

на фиг. 15 - результаты, демонстрирующие, что форматированные УНН связываются с УЕСР121; на фиг. 16 - сравнительный анализ последовательности УНН УЕСРВ1123В04 и человеческой консенсусной последовательности зародышевой линии УН3/ДН;

на фиг. 17 - результаты, демонстрирующие, что варианты УНН УЕСРВ1123В04 блокируют взаимодействие ЬУЕСР165/ЪУЕСРК2-Рс (А1рйа8сгееп);

на фиг. 18 - результаты, демонстрирующие, что клоны УЕСРВ1123В04 с оптимизированной последовательностью блокируют взаимодействие ЬУЕСР165/ЬУЕСРК2-Рс (А1рйа8сгееп);

на фиг. 19 - сравнительный анализ последовательности УНН УЕСРВ115В05 и человеческой консенсусной последовательности зародышевой линии УН3/ДН;

на фиг. 20 - описание двухвалентных УНН к Апд2;

на фиг. 21 - результаты, демонстрирующие, что очищенные двухвалентные УНН к Апд2 блокируют взаимодействие ЬАп§2-Мю2 (25-1), тАп§2-тТ1е2 (25-2) и сАпд2-сНе2 (25-3) (ЕЬ18А);

- 29 025148 на фиг. 22 - результаты, демонстрирующие, что очищенные двухвалентные УНН к Апд2 блокируют взаимодействие ЬАп§1-ЬТ1е2 (ЕЫЗА);

на фиг. 23 - описание трехвалентных биспецифических УНН УЕОРхАп§2;

на фиг. 24 - результаты, демонстрирующие, что очищенные трехвалентные нанотела УЕОРхАп§2 блокируют взаимодействие ЬУЕОР-ЬУЕОРР2 (А1рЬаЗсгееп);

на фиг. 26 - результаты, демонстрирующие, что очищенные трехвалентные УНН УЕОРхАп§2 блокируют взаимодействие ЬАп§2-ЬТ1е2 (ЕЫЗА);

на фиг. 26 - описание трехвалентных и четырехвалентных биспецифических УНН УЕОРхАп§2; на фиг. 27 - результаты, демонстрирующие, что очищенные трехвалентные и четырехвалентные

УНН УЕОРхАп§2 блокируют взаимодействие НУЕСР-НУЕСРР2 (31-1) и ЬУЕОР-ЬУЕОРР1 (31-2) (А1рЬаЗсгееп);

на фиг. 28 - результаты, демонстрирующие, что очищенные трехвалентные и четырехвалентные УНН УЕОРхАп§2 блокируют взаимодействие ЬАп§2-ЬТ1е2 (32-1), тАп§2-тНе2 (32-2) и сАп§2-сТ1е2 (32-3) (ЕЫЗА);

на фиг. 29 - результаты, демонстрирующие, что очищенные трехвалентные и четырехвалентные УНН УЕОРхАп§2 блокируют опосредуемое ЬАп§2 выживание клеток НИУЕС;

на фиг. 30 - описание биспецифических УНН УЕОРхАп§2 с оптимизированной последовательностью и аффинностью;

на фиг. 31 - результаты, демонстрирующие, что очищенные УНН УЕОРАNОВII00022-25-28 УЕОРхАп§2 блокируют взаимодействие ЬУЕОР-ЬУЕОРР2 (35-1) и ЬУЕОР-ЬУЕОРР1 (35-2) (А1рЬаЗсгееп);

на фиг. 32 - результаты, демонстрирующие, что очищенные УНН УЕОРАNОВII00022-25-28 УЕОРхАп§2 связываются с человеческим УЕОР165 (36-1) и ИУЕОР121 (36-2) (ЕЫЗА);

на фиг. 33 - результаты, демонстрирующие, что очищенные УНН УЕОРАNОВII00022-25-28 УЕОРхАп§2 связываются с (А) мышиным и (Б) крысиным УЕОР164 (ЕЫЗА);

на фиг. 34 - результаты, демонстрирующие, что очищенные УНН УЕОРАNОВII00022-25-28 УЕОРхАп§2 связываются с (А) человеческим УЕОР-В, (Б) человеческим УЕОР-С, (В) человеческим УЕОР-Э и (Г) человеческим РЬОР (ЕЫЗА);

на фиг. 35 - результаты, демонстрирующие, что очищенные УНН УЕОРАNОВII00022-25-28 УЕОРхАп§2 блокируют взаимодействие ЬАп§2-ЬТ1е2 (39-1), тАп§2-тПе2 (39-2) и сАп§2-сПе2 (39-3) (ЕЫЗА);

на фиг. 36 - результаты, демонстрирующие, что очищенные УНН УЕОРАNОВII00022-25-28 УЕОРхАп§2 блокируют взаимодействие ЬАп§1-ЬТ1е2 (ЕЫЗА);

на фиг. 37 - результаты, демонстрирующие, что очищенные УНН УЕОРАNОВII00022-25-28 УЕОРхАп§2 блокируют опосредуемое ЬАп§2 выживание клеток НИУЕС.

Материалы и методы.

а) Получение УЕОР109 и оценка его функциональной активности.

кДНК, кодирующую связывающий рецептор домен изоформы человеческого сосудистого эндотелиального фактора роста УЕОР165 (ОепВапк: ААМ03108.1; АК-остатки 27-135), клонировали в векторе рЕТ28а (фирма №уадеп, Мэдисон, шт. Висконсин) и сверхэкспрессировали в Е.соП (ВЬ21 З1аг ИЕ3) в виде меченного с помощью Н18 нерастворимого белка. Экспрессию индуцировали путем добавления 1 мМ изопропилтиогалактозида (ИПТГ) и давали осуществляться в течение 4 ч при 37°С. Клетки собирали центрифугированием и лизировали путем облучения клеточного дебриса ультразвуком. Тельца включения выделяли центрифугированием. После стадии отмывки с помощью 1% Тритон X 100 (фирма Зщта-АИпсП) белки солюбилизировали с помощью 7,5 М гидрохлорида гуанидина и осуществляли повторную укладку (рефолдинг) путем последовательных циклов диализа в течение ночи с использованием буферов с концентрациями мочевины, понижающимися с 6 до 0 М. Повторно уложенный белок очищали с помощью ионообменной хроматографии с использованием колонки МопоО5/50СЕ (фирма АтегкПат ВюЗаепсеЦ и последующей гель-фильтрации на колонке Супердекс75 10/300 ОЬ (фирма АтегеПеип ВюЗаепсеЦ. Чистоту и гомогенность белка подтверждали методом ДСН-ПААГ и Вестерн-блоттинга. Кроме того, оценивали с помощью ЕЫЗА активность в отношении связывания с УЕОРР1, УЕОРР2 и бевацизумабом. Для этой цели рекомбинантный человеческий УЕОР109 (1 мкг/мл) иммобилизовали в течение ночи при 4°С в 96-луночном планшете Мах1Зогр (фирма №пс, Висбаден, Германия). Лунки бло

- 30 025148 что УЕОР109 может связываться с УЕОРК1, УЕОРК2 и бевацизумабом, что свидетельствует об активности полученного УЕОР109.

б) Конъюгация УЕОР165 с КЬН и оценка функциональной активности УЕОР165, конъюгированного с КЬН.

Рекомбинантный человеческий УЕОР 165 (фирма К&Э §у51етз, Миннеаполис, шт. Миннесота, США) конъюгировали с гемоцианином лимфы улитки, выращенной в условиях марикультуры (тсКЬН), используя набор 1т)ес1 1ттиподеп ЕЭС, содержащий тсКЬН (фирма йегсе, Рокфорд, шт. Иллинойс, США), согласно инструкциям производителя. Эффективность конъюгации полипептида с тсКЬН подтверждали с помощью ДСН-ПААГ. Функциональную активность конъюгированного белка оценивали с помощью ЕЫ8А: для этой цели конъюгированный с КЬН УЕОР165 (2 мкг/мл) иммобилизовали в течение ночи при 4°С в 96-луночном планшете Махйогр (фира №пс, Висбаден, Германия). Лунки блокировали раствором казеина (1%). Добавляли серийные разведения УЕОРК1 или УЕОРК2 и оценивали связывание с использованием конъюгированного с пероксидазой из хрена (НКР) козьего античеловеческого 1дО, Рс-специфического (фирма 1аскзоп 1ттипо Кезеагск БаЪогаЮпез 1пс., Вест-Гров, шт. Пенсильвания, США) и последующей ферментативной реакции в присутствии субстрата ТМВ (3,3',5,5'-тетраметилбензидин) (фирма Р1егсе, Рокфорд, шт. Иллинойс, США). Конъюгированный с КЬН белок все еще сохранял способность взаимодействовать с УЕОРК1, УЕОРК2 и бевацизумабом, это подтверждает, что соответствующие эпитопы УЕОР165 все еще являлись доступными.

Пример 1.

Иммунизация с использованием различных форматов УЕОР индуцирует гуморальный иммунный ответ у лам.

1.1. Иммунизации.

После одобрения Комитетом по этике департамента ветеринарной медицины (Университет Гента, Бельгия) иммунизировали 4 лам (обозначены № 264, 265, 266, 267) согласно стандартным протоколам, осуществляя 6 внутримышечных инъекций (100 или 50 мкг/дозу с недельными интервалами) рекомбинантного человеческого УЕОР109. Для первой инъекции в день 0 применяли форму в полном адъюванте Фрейнда (фирма ЭКео, Детройт, шт. Мичиган, США), а для последующих инъекций применяли форму в неполном адъюванте Фрейнда (фирма Эбсо, Детройт, шт. Мичиган, США). Кроме того, иммунизировали четырех лам (обозначены № 234, 235, 280 и 281) согласно следующему протоколу: 5 внутримышечных инъекций с использованием конъюгированного с КЬН человеческого УЕОН165 (100 или 50 мкг/дозу с двухнедельными интервалами) с четырьмя последующими внутримышечными инъекциями человеческого УЕОР109 (первая доза 100 мкг, затем через 2 недели три инъекции с использованием 50 мкг/дозу с недельными интервалами).

1.2. Оценка индуцированных УЕОР иммунных ответов у лам.

Для мониторинга УЕОР-специфических сывороточных титров применяли анализ ЕЫ8А, при осуществлении которого взятый в концентрации 2 мкг/мл рекомбинантный человеческий УЕОР165 или УЕОР109 иммобилизовали в течение ночи при 4°С в 96-луночном планшете Махйогр (фирма №пс, Висбаден, Германия). Лунки блокировали раствором казеина (1%). После добавления разведений сыворотки выявляли связанный общий 1дО, используя конъюгированное с пероксидазой из хрена (НКР) козье антитело к иммуноглобулину лам (фирма Ве1ку1 БаЪогаЮпез 1пс., Монтгомери, шт. Техас, США) и осуществляя последующую ферментативную реакцию в присутствии субстрата ТМВ (3,3',5,5'-тетраметилбензидин) (фирма Р1егсе, Рокфорд, шт. Иллинойс, США). Для лам № 264, 265, 266 и 267 осуществляли дополнительный анализ методом ЕЫ8А, в котором оценивали специфические для изотипа ответы против УЕОР165 и УЕОР109. Специфические для изотипа ответы выявляли с использованием мышиных тАЪ, специфически распознающих канонический 1дО1 лам и состоящие только из тяжелой цепи 1дО2 и 1дО3 лам (Эа1еу е1 а1., С’Пп. Э1адп. ЬаЪ. 1тт. 12, 2005, р. 380-386), после чего использовали кроличье антимышиное антитело, конъюгированное с НКР (фирма ЭАК0). Для визуализации полученных с помощью ЕЫ8А результатов использовали ТМВ в качестве хромогенного субстрата и определяли абсорбцию при 450 нм. Данные о титрах в сыворотке каждой ламы представлены в табл. 1.

- 31 025148

Таблица 1

Антитело-обусловленный специфический сывороточный ответ на обработку УЕОР165 и УЕОР109 ЕЫ8А (твердая фаза сенсибилизирована рекомбинантным белком)

		Рекомбинантный человеческий ЕОР165	Рекомбинантный человеческий УЕОРЮ9
Лама	Иммуноген	Общий 1*0	1§О1	ι*02	1*03	Общий 1*0	1*01	1*02	1*03

234	УЕОГ165-К1.Н + УЕОРЮ9	++	η/ά	η/ά	п/а	++	п/а	п/а	п/а
235	УЕОР165-КП1 + УЕОРЮ9	44	η/ά	η/ά	п/а	44	п/а	п/а	п/а
2*0	УЕОР165-КЕН + УЕОР 109	+	п/а	η/ά	η/'ίΙ	+	п/а	п/а	п/а
2*1	УЕОР165-КЕН + УЕСР109	+	η/ά	η/ά	п/а	4	п/а	п/а	п/а

264	УЕОР 109	п/4	44	+	+	4 +	4+	4	4
265	УЕОРЮ9	η/ά	44	4	4	+	4+	4	4
266	УЕОРЮ9	η/ά	+4-	4	+/-	44	44	4	+/-
267	УЕОР 109	η/ά	+/-	-	-	»-/-	+/-	-	-

п/б: не определяли.

Пример 2.

Клонирование популяций содержащих только тяжелую цепь фрагментов антител и получение фага.

После последней инъекции иммуногена получали образцы иммунных тканей иммунизированных лам в качестве источника В-клеток, которые продуцировали антитела с тяжелой цепью. Как правило, собирали по два 150-миллилитровых образца крови через 4 и 8 дней после последней инъекции антигена и у каждого животного получали биопсию одного лимфатического узла через 4 дня после последней инъекции антигена. Из образцов крови получали мононуклеарные клетки периферической крови (РВМС), используя фиколл-пак согласно инструкциям производителя (фирма АтегкНат Вюкаепсек, Пискатавей, шт. Нью-Джерси, США). Из РВМС и биопсии лимфатических узлов экстрагировали общую РНК, которую применяли в качестве исходного материала для амплификации с помощью ОТ-ПЦР кодирующих УНН ДНК-сегментов согласно методу, описанному в νθ 2005/044858. Для каждой иммунизированной ламы конструировали библиотеку путем объединения общей РНК, выделенной из всех собранных образцов иммунных тканей каждого животного. В целом, метод состоял следующем: популяцию амплифицированных с помощью ПЦР УНН клонировали с использованием специфических сайтов рестрикции в векторе, созданном для облегчения фагового дисплея библиотеки УНН. Вектор выводили из рИС119, и он содержал промотор Ьас2, последовательность, кодирующую белок §Ш фага М13, ген, обусловливающий устойчивость к ампициллину или карбенициллину, сайт множественного клонирования и гибридную лидерную последовательность §Ш-ре1В (рАХ050). В рамке считывания с кодирующей последовательностью УНН вектор кодировал С-концевую с-тус-метку и Н186-метку. Фаг получали согласно стандартным протоколам и хранили после стерилизации фильтрацией при 4°С для последующего применения.

Пример 3.

Селекция УЕОР-специфических УНН с помощью фагового дисплея.

Фаговые библиотеки УНН применяли для различных стратегий селекции, используя различные условия селекции. Варьировали следующие компоненты: I) формат белка УЕОР (гНУЕОР165, гНУЕОР109 или гтУЕОР164), II) метод презентации антигена (твердофазный метод: непосредственно на сенсибилизированных планшетах или через биотиновую метку на сенсибилизированных нейтравидином планшетах; или жидкофазный метод: инкубация в растворе с последующей иммобилизацией на сенсибилизированных нейтравидином планшетах), III) концентрацию антигена и 1У) метод элюции (элюция с использованием трипсина или конкурентная элюция с использованием УЕОРК2). Все селекции осуществляли в 96-луночных планшетах Мах18огр (фирма Шпс, Висбаден, Германия).

Селекции осуществляли следующим образом: фаговые библиотеки инкубировали при КТ с взятым в различных концентрациях антигеном УЕОР, либо находящимся в растворе, либо иммобилизованным на твердой подложке. После инкубации в течение 2 ч с последующей интенсивной отмывкой элюировали связанный фаг. Когда для фаговой элюции применяли трипсин, то протеазную активность сразу же нейтрализовали, применяя 0,8 мМ протеазный ингибитор АВ8Р. Сборы фага, обогащенные по сравнению с фоновым уровнем (контроль без антигена), применяли для заражения Е.соН. Зараженные клетки Е.соН либо применяли для получения фага для следующего цикла селекции (сохранение (спасение) фага), либо высевали на агаровые пластины (ЬВ+атр+глюкоза (2%)) для анализа индивидуальных клонов УНН. Для скрининга продукта селекции в отношении специфических связывающих агентов индиви- 32 025148 дуальные колонии изымали из агаровых пластин и выращивали в объеме 1 мл в 96-луночных планшетах с глубокими лунками. Контролируемую ИасУ экспрессию УНН индуцировали, добавляя ИПТГ (конечная концентрация 0,1-1 мМ). Получали экстракты содержимого периплазматического пространства (периплазматические экстракты) (в объеме ~80 мкл) согласно стандартным методам.

Пример 4.

Идентификация связывающих УЕОР и блокирующих УЕОР-рецептор УНН.

Периплазматические экстракты тестировали в отношении связывания с человеческим УЕОР165 с помощью ЕЫЗА. В целом, метод состоял в следующем: рекомбинантный человеческий УЕОР165 (2 мкг/мл) иммобилизовали при 4°С в 96-луночном планшете Мах1Зогр (фирма №пс, Висбаден, Германия). Лунки блокировали с помощью раствора казеина (1%). После добавления, как правило, 10-кратного разведения периплазматических экстрактов связывание УНН оценивали с использованием мышиного антитела к тус (фирма РосНс) и антимышиного антитела, конъюгированного с НРР (фирма ΌΑΚ0). Клоны, для которых ЕЫЗА-сигналы более чем в 3 раза превышали фоновые, рассматривали как клоны УНН, обладающие способностью связывать УЕОР.

Кроме того, периплазматические экстракты подвергали скринингу в отношении взаимодействия человеческий УЕОР165/человеческий УЕОРР2 с использованием А1ркаЗсгееп-анализа (гомогенный анализ усиленной за счет эффекта близости люминесценции) для оценки блокирующей способности УНН. Человеческий УЕОР165 биотинилировали с помощью реагента сульфо-ИНЗ-ЬС-биотин (фирма Р1егсе, Рокфорд, шт. Иллинойс, США). Химеру человеческий УЕОРР2/Рс (фирма Ρ&Ό Зу81ет8, Миннеаполис, шт. Миннесота, США) иммобилизовали с помощью УНН к человеческой Рс-области, который сшивали с акцепторными гранулами согласно инструкциям производителя (фирма Регкш Е1тег, Валтхам, шт. Массачусетс, США). Для оценки нейтрализующей способности УНН периплазматические экстракты разводили в соотношении 1/25 в ЗФР-буфере, содержащем 0,03% Твин 20 (фирма З1дта-А1йг1сЬ), и предварительно инкубировали с 0,4 нМ биотинилированным человеческим УЕОР165 в течение 15 мин при комнатной температуре (КТ). Для этой цели добавляли смесь акцепторных гранул (10 мкг/мл) и 0,4 нМ УЕОРР2-киРс и дополнительно инкубировали в течение 1 ч при КТ в темноте. Затем добавляли донорские гранулы (10 мкг/мл) с последующей инкубацией в течение 1 ч при КТ в темноте. Флуоресценцию измеряли с помощью планшет-ридера типа Епу18юп Ми1й1аЬе1 (фирма Регкш Е1тег, Уолтем, шт. Массачусетс, США), при длине волны возбуждения 680 нм и длине волны испускания от 520 до 620 нм.

Периплазматические экстракты, содержащие несоответствующий УНН, применяли в качестве отрицательного контроля. Периплазматические экстракты, содержащие анти-УЕОР165 УНН, которые обладали способностью снижать флуоресцентный сигнал более чем на 60% относительно сигнала, соответствующего отрицательному контролю, рассматривали как соответствующие требованиям (хиты). Все хиты, идентифицированные с помощью А1ркаЗсгееп, подтверждали с использованием конкурентного ЕЫЗА. Для этой цели химеру (1 мкг/мл), содержащую человеческий УЕОРР2 (фирма Ρ&Ό Зу81ет8, Миннеаполис, шт. Миннесота, США), применяли для сенсибилизации 96-луночного планшета Мах1Зогр (фирма №пс, Висбаден, Германия). Пятикратные разведения периплазматических экстрактов инкубировали в присутствии биотинилированного человеческого УЕОР165 в фиксированной концентрации (4 нМ) в ЗФР-буфере, содержащем 0,1% казеина и 0,05% Твин 20 (фирма Зфта-АИпск). Связывание этих комплексов УНН/Ыо-УЕОР165 с планшетом, сенсибилизованным химерой, содержащей человеческий УЕОРР2, выявляли с помощью конъюгированного с пероксидазой из хрена (НРР) экстравидина (фирма Зфта, Сент-Луис, шт. Миссури, США). Идентификационные номера (ГО) УНН-последовательностей и соответствующие АК-последовательности УЕОР-связывающих (не блокирующих рецептор) УНН и ингибирующих (блокирующих рецептор) УНН представлены в табл. 2 и 3 соответственно.

- 33 025148

Таблица 2

ΙΌ последовательностей и АК-последовательности одновалентных не блокирующих рецептор анти-УЕОР УНН (РК, каркасный участок; СОК, гипервариабельный участок)

УНН ГО/ 5Е<Э ГО N0:	РК1	С0К1	РК2	СОК2	РКЗ	СОК!	РК4
УЕСГВИ 01С02/58	ЕУОЬУЕЗбССЬУОА ССЗЬКЬЗСТАЗССЗ ГЗ	5¥СМС	КГКОЗРСКЕК ЕГУЗ	ΑΙ5Εϊ£ΝΤΥΟ3Ο5 УКС	КРТ13В0ЫТК11ТУУЬ<2МЫ ЗЬТР00ТА1¥УСАА	5РТ1ЬЬТТЕ<2И¥КУ	исостоут УЗЗ
УЕСГВИ 01Е07/59	ЁУОЬУЕЗСССЬУОА СОЗЬКЬЗСУАТСКТ ГК	АЗОМС	МГКфАРСКЕК ЕГУА	АШИЗСЬЗТГУТО ЗУКС	ΚΓΤΙЗКОМОЫСАЬУЬСМЫ ТЬКРЕОТАУУЗСАА	СВПЗЗЗКГЗЗРААУАЗ	ИС<ЭСТС>УТ УЗЗ
УЕСГВИ 03012/60	ЕУОЬУЕЗСССЬУОА ССЗЬКЬЗСТАЗТЗЬ ΥΤ	1ТУМА	ИГКОАРСКЕК ЕГУА	ΑΙΤΚ5ΑΡΤΤΥΥΑ0 ЗУКС	КГПЗВОЫАКМТУУЬКМЫ ЗЬКРЕОЗАПУСАА	ОКГКСКЗПТРЗОУКУ	ИСОСТОУТ УЗЗ
УЕСГВИ 04В08/61	ЕУОЬУЕЗСССЬУОР ССЗЬКЬЗСААЗСЗА УС	01ТУА	ΜΥκςΑΡΟίβκ ОЬУА	ТЬТРЗСУТУУИОГ УКС	КГПЗНОЫЗКШУУЫЭМЫ ЗЬКРЕОТААУУСЫТ	ΟΓΥ	стс<эстоут УЗЗ
уеогви 05В02/62	ЕУОЬУЕЗСССЬУОА ССЗЬКЬЗСААЗСКТ ГЗ	ТООУС	ИГКОАРСКЕК ЕГУА	У1КИ5ТССТУТ5О ЗУКС	КГТЬЗКОМАКПТМУЬОМЫ ЗЬКРЕОТАУУУСАА	ЕЗКРЬСАСАИУЗСЕКНУМ Υ	иссстоут УЗЗ
УЕСГВИ 05Β03/63	ЕУОЬУЕЗСССЬАОА СОЗЬКЬЗСААЗСКЗ Р5	ΗΥΝΜΟ	НГКОАРСКЕК ЕГУА	ЗЬКССССЗТТУАК ЗУКЬ	КРИ 5ΚΕΝΑΚΝΤ УУЬОМЫ ЗЬКРЕОТАУУУСАА	ΤΑΓΥΒΟΡΥϋΥΟΥ	ЮСОСТОУТ УЗЗ
УЕСГВИ 05В05/64	еуоьуезсссьуфр ССЗЬКЬЗСУАЗСЬВ ГМ	5 МА	ΗΥΚΏΑΡΟΚΗΚ ЕЬУА	В.135ССТТАУУ05 УКС	ΚΓΤΙ5Κ0Ν5ΚΝΤνΥΕφΜΝ ЗЬКАЕОТАУУУСИТ	Γ55ΚΡΝΡ	ИСАСТОУТ УЗЗ
УЕСГВИ 06С02/65	ЕУ(ЭЬУЕ5ССеЬУ0Р СС5ЬКЬ5САА5СЫ1 ГЗ	ΝΝΑΜΑ	ИУВОАРСКОК ЕЬУА	К133СССГТУУЬ0 ЗУКС	КГТУЗКОЫАКЫТУУЬСМЫ ЗЬКРЕОТАУУУСИА	ΑΥΚΤΥΗΥ	исостоут УЗ 5
УЕСГВИ 07Α03/66	ЕУОЬУЕЗСССЬУОА ССЗЬКЬЗСААЗТЗ! Υ5	1ТУМА	ИГКОАРСКЕЗ ЕГУА	А1ТИЗАРЗЗУУА0 ЗУКС	ΚΓΤΙ3Κ0ΝΑΚΝΤνΥΕΰΜΝ ЗЬКРЕОЗАПУСАА	0ΚΓΚ6Κ5ΐνΤΚ50ΥΚΥ	исостоут УЗЗ
УЕСГВИ 07А06/67	ЕУйЬУЕЗСОСЬУСА ССЗЬВЬЗСАУЗТЗ! Υ5	13УМА	ИГВОАРСКЕК АГУА	А1ТИЗАРТТУУА0 ЗУКС	ΚΓΤΙ5ΒΟΝΑΚΝΤνΥΕ0ΤΝ 5ЬКРЕ05А1ΥΥΟΑΑ	ОКГКСКЗНТКЗОУКУ	исостоут УЗЗ
УЕСГВИ 07008/68	ЕУОЬУЕЗССбЪУйТ ССЗЬКЬЗСААЗСКТ ГЗ	ΝΥΑΜΑ	ИГКОАРСКЕК ЕГУЗ	ΑΙΝ<2ΕΟ5ΝΤΝΥΑΟ ЗУКС	КГТЬЗКОЗАКИЗУГЬОМЫ ЗЬКРЕЕТАУУУСАА	3ΤΗ¥0Υ5ΤΥΑΚΚΕΕΥΚΥ	ИСССТОУТ УЗЗ
УЕСГВИ 08009/69	еуоьуезсссьуоа ССЗЬКЬЗСААЗСКЗ гз	БЫУМС	МГВОААСКЕК ЕГУА	Н15РССЗРТЕУАЕ ЗУКС	ΚΓΤΙ5ΒΟΝΤΚΚΤΜΥΕ0ΜΝ ЗЬКРЕОТАУУУСАА	ЗКЗУАЬАТАКРУОУ	иссстоут УЗЗ
УЕСГВИ 08Е07/70	ЕУЭВУЕЗСССЪАОА ССЗЬКЬЗСТТЗСЬТ ГЗ	ЗУУМС	ИРКфАРСКЕК ЕГУА	ΤΙ5ΝΝΚΙ3ΤΙΥΤ0 ЗУКС	РГТУЗКОКЫКЫТУУЬОМЫ ЗЬКРЕОТАУУУСАА	ОАЗКРТЬШРОУ	ИСССТОУТ УЗЗ
УЕСГВИ 08Г06/71	еуоьуезсссьуор СС5ЬКЬ5САА5051 УК	ЗйУМС	ИУКОАРСКОК ЕЬУА	ИКЗЬСЗТУУАСЗ УКС	КГТТЗКООААМТУУЬСМЫ ЫЬКРЕОТАУУУСЫА	ΚΓ30Ε5Υ	ИСОСТРУТ УЗЗ
УЕСГВИ 08Г07/72	ЕУ0ЬУЕ5СССЪУ<2А ССЗЬКЬЗСАУЗСЗТ ГС	ьуамс	МГК<ЭАРСВЕВ ЕГЬЗ	А1ТИ5АС0Т0УА0 ЗУКС	ΚΓΤΙ5Κ0ΝΑΚΝΤνΝΕ0ΜΝ СЬКРЕЭТАУУУСАС	КОИОСТУΥΥΗ05ΥΑΥ	МСОСТОУТ УЗЗ
УЕСГВИ 09Ά09/73	ЕУСЬУЕЗСССЬУСР СС5ЬКЬ8СУА5С1К ГМ	5 МА	ВДУКОАРСКНК ЕЬУА	К155ЕСТТАУУ05 УКС	ΕΓΤΙ$ΚΟΝ5ΚΝΤνΥΕ<2ΜΝ ЗЬКАЕϋΤΑνΥΥΟΝΤ	Γ53ΚΡΝΡ	ИСАСТТУТ УЗЗ
УЕСГВИ 09А12/74	ЕУОЬУЕЗСССЬУЦА ССЗЬКЬЗСААЗСКТ ГЗ	тоэус	ВДГКОАРСКЕК ЕГУА	У1КИЗТ6СТУТЗО ЗУАС	КРТЬЗКОЫАКМТМУЬОМЫ ЗЬКРЕОТАУУУСАА	КЗЕРЬСАСАИУТСЕТЕУО 3	НСОСТОУТ УЗЗ
УЕСГВИ 09005/75	ЕУОЬУЕЗСССЬУ^Р СОЗЬКЬЗСААЗСЬЗ ГЗ	КУСМС	ИЕКОАРСКЕК ЕГУ1	А15ЕУ0КУУТА05 УКС	КГТТЗКОЫЗКЗТУУЬОМЫ ЗЬКЗЕОТАУУУСАА	ЗРНЬЬЗТОЕГОУКУ	НСКСТОУТ УЗЗ
УЕСГВИ 09Г05/76	ЕУОЬУЕЗСССЪУОА ССЗЬКЬЗСААЗСКТ ГЗ	ТООУС	ЮГК<ЭАРСК£К ЕГУА	У1ВИЗТССГУТЗО ЗУКС	К ГТЬ 3 К 0 КΑΚΝΤ МУЬ(2ΜΝ ЗЬКРЕЭТАУУУСАА	КЗКРЬСАСАМУТСЕТКУН Υ	МСОСТОУТ УЗЗ
УЕСГВИ 10С07/77	ЕУОЬУЕЗСССЪУОА ССЗЬЗЬЗСААЗАКА ГЗ	ΝΥΑΜ0	ИГКСУРСКЕК ЕГУА	νΐΤΚ5Ρ$ΝΤΥΥΤ0 ЗУКС	ΚΓΤΗΚΟΝΑΚΝίνΥίΟΜΝ ЗЬКРЕОТАУУУСАА	ΗΥΜΝ303ΥΤΥΤ08ΚίίΥΝΥ	ИС<2СТ<2УТ УЗЗ
УЕСГВИ 10Е07/78	ЕУОГУЕЗСССЬУОА ССЗЬКЬЗСААЗСКТ ГЗ	ΝΥΑΜΟ	ИГКОАРСКЕК УЬУА	01533С1ЫТУУА0 АУКС	ΚΓΤΗΚΟΝΑΚΝΤνΥΣΟΜΝ ЗЬКРЕОТАУУУСАА	5ΑΚ&ΪΥ50ΜΑΚ0ΝΥΚΥ	юсостсут УЗЗ
УЕСГВИ 10С04/79	ЕУОЬУЕЗСССЬУ^^А ССЗЬКЬ 5СААЗС ОТ ЬЗ	ΚΥΑΜΟ	ИГКОАРСКЕК ЕГУА	ЗТЫТЗСККТЗУАО змкс	ΚΓΑν3ΚΟΝΑΚΝΤΘΥ10ΜΝ ЗЬКЬЕОТАТУУСАА	ΟΚΡΓΟ3Ο3ΝΕΡΚΑΥΕΥ	М60СТ0УТ УЗЗ
УЕСГВИ 10С05/80	ЕУОЬУЕЗСССЬУйА ОЕЗЬКЬЗСУАЗСИ ГЗ	ΝΥΝΜΟ	ΝΓΚΩΑΡΟΚΕΚ ЕГУА	ΤΙΚΗΗΟΥΟΤΥΥΑΕ ЗУКС	К ГТ 13 К ΟΝ ΑΚΝΤ V УЬ <2ΜΝ ЗЬКРЕОТАЬУЗСАК	КЬГИОМОРКТСГЗЗ	исостсут УЗЗ
УЕСГВИ 11С08/81	ЕУОЬУЕЗСССЬУОА ССЗЬКЬЗСААЗСКТ ЬЗ	ЗУСЬС	ВДГКОАРСКЕК ЕГУА	Α10Ν5035ΤΥΥΆ0 ЗУКС	КГТУЗУОЫАКЫТУУЬКМЫ ЗЬЕРЕОТАУУУСАА	КУЕНГНЗОЧОЬЬТЗУНУ	МСОСТОУТ УЗЗ
УЕСГВИ 11С11/82	ЕУОЬУЕЗСССЬУОА ССЗЬМЬЗСААЗСКА ЬЗ	5ΥΑΙ6	ГСГКОАРСКЕК ЕГУА	КЬЗНЗСАМТУУАО ЗУКС	КЕТΪ5ΚΟΝΑΚΝΤνΥΣΟΜΝ ЗЬКРЕОТААУУСАА	0ΤΤ5ΚΥ0ΝΥ0ΑΚΑΥ5Υ	иссстоут УЗЗ
УЕСГВИ 11009/83	ЕЕОЬУЕЗСССЬУЦА ССЗЬМЬЗСААЗСКА ЬЗ	5ΥΑΙ6	ИГКОАРСВЕК ЕГУА	ЕТЗНЗСАЫТУУАО ЗУКС	КГНЗКСЫАКЫТУУЬСМН ЗЬКРЕОТААУУСАА	<2ΤΤ5ΚΥΟΝΥΟΑΚΑΥΟΥ	исостоут УЗЗ
УЕСГВИ 11Е04/84	ЕУОЬУЕЗСССЬУЭА ССЗЬКЬЗСААЗСКТ ГЗ	5ΥΑΜ5	ИГК<ЭАРСКЕК ЕГУА	ΤΙ523ΰΥ5ΤΥΥΑ0 ЗУКС	ΚΓΤΙ5ΚΟΝΑΚΝΤνΝΕ<2ΜΝ ЗЬЕРЕОТАУУУСАА	0ΡΓΥ3Υδ5Ρ3ΡΥΒΥ	исостоут УЗЗ

- 34 025148

УЕСГВИ

11Е05/85

УЕСГВИ

11Г10/86

УЕСГВИ

11Π2/Θ7 уесгвн

11609/88

УЕСГВИ

12А07/89

УЕСГВИ

12В01/90 уесгвн

12С04/91

УЕСГВИ

12Е10/92 уесгвн

12604/93

УЕСГВИ

16С03/94

УЕСГВИ

16Γ11/95

УЕСГВИ

36С08/96

УЕСГВН

37Γ09/97

УЕСГВИ

38Α06/98

УЕСГВН 39Η11/99	ЕУфЬУЕЗСССЬУфА ССЗЬКЬЗСААЗСКТ ГЗ	ΑΥΌΜ6	ИГКфАРСКЕК ЕГУА	УХЗИТССМТУУАО ЗУКС	К ГТ13 К ΟΚΑΚΝΤУЗЬфМЫ ЗЬКРЕОТАУУУСАУ	ОКВКТУЗКИКУУТСУЫЕУ ΕΥ	ИСфСТфУТ УЗЗ
уесгвн 41В06/ 100	ЕУфЬУЕЗСССЬУфА ССЗЬКЬЗСААЗСКТ РЗ	ауомс	ИГВфАРСКБК ЕГУА	УТЗИТСОМТУУАО ЗУКС	К ГТ15 КОКАКЫТУЗЬфМЫ ЗЬКРЕОТАУУУСАА	ОКККТУЗКИКУУТСУЫЕУ ΕΥ	ИСфСТфУТ УЗЗ
УЕСГВИ 41С05/ 101	ЕУфЬУЕЗСССЬУфА ббЗЬКЬЗСААЗСВТ ГЗ	УУТМС	ИГКфАРСКЕК ЕГУА	Т13КТС0КТ5УАМ ЗУКС	К ГТ Г3 ΚΕΝΑΚΝΤУУЬфМЫ ЗЬКРЕОТАУУЗСАА	6ΡΙΑΡ3ΡΚΡΚΕΥΥΥ	ИСфСТфУТ УЗЗ
УЕСГВИ 41011/ 102	ЕУфЬМБЗСССЬУфА ССЗЬКЬЗСААЗСКТ ГЗ	АУОМС	НГКфАГСКЕК ЕГУА	νΐ5ΗΤ66ΜΤΥΪΑ0 ЗУКС	КГТПКОКАКМТУЗЬфМН ЗЬКРЕОТАУУУСАУ	ОКККТУЗКИКУУТСУЫЕУ ΕΥ	ИСфСТфУТ УЗЗ
УЕСГВИ 42Е10/ 103	ЕУфЬУЕЗСССЬУфА ССЗЬКЬЗСААЗСКТ ГЗ	АУОМС	ИГКфАРСКЕК ЕГУА	У15ИЗС6МТ0УА0 ЗУКС	КРТ13 КЕ NАКЫТф ГЬфМЫ ЗЬКРЕОТАУУУСАУ	СКККАУЗВИВУУТСУЫЕУ ОУ	ИСфСТфУТ УЗЗ
УЕСГВН 36С11/ 104	ЕУфЬУЕЗСССЬУфА СОЗЬКЬЗСТАЗСКТ ΓΝ	5УАМС	ИГКфАРСКЕК ЕЗУА	Н1ЫК5С5£ТУУАО ЗУКС	ΚΓΤΙ5ΚΟΝΑΚΝΤνΥΕφΕΝ ЗЬКРЕВТАУУУСАА	СКУУЗЗОСУРЗАЗГЫУ	ИСОСТфУТ УЗЗ
УЕСГВН 86Е11/ 105 УЕСГВИ 86608/ 106 УЕСГВИ 86610/ 107 УЕСГВИ 86611/ 108 УЕСГВИ 86Н09/ 109 УЕСГВИ 87В07/ 110 УЕСГВН 88А01/ 111 УЕСГВИ 88А02/ 112 УНН ГО/ 8ЕО ГО ΝΟ:	ЕУфЬУЕЗСССЬУфА СОЗЬКЬЗСГТЗАКТ ГО ЕУфЬУЕЗСССЬМфТ бОЗЬКЬЗСААЗСЬК ГТ ЕУфЬУЕЗСССЬУфА ССЗЬКЬЗСААЗСКТ ΓΝ ЕУфЬУЕЗСССЬУфА ССЗЬКЬЗСААЗСЬТ ГЗ ЕУфЬУЕЗСССЬУфА ССЗЬГЬЗСТАЗСЗА ГК ЕУфЬУЕЗСССЬУфР ССЗЬКЬЗСТАЗСГТ РЗ КУфЬУЕЗСССЬУфА ССЗЬКЬЗСААЗЕКТ ГЗ ЕУфЬУЕЗСССЬУфА бСЗЬКЬЗСААЗСГТ ГС РШ	ТИАМА зтымс ΤΥΤΜ6 ЬУТУС 3ΥΚΜ6 Т5ИМН ΝΥΑΜΟ ϋΥϋΐ6 СОШ	ИГКфАРСКЕК ΕΓΙ3 ИРКфСРСКЕК ЕГУА НГКфТРСТЕК ЕГУА ИГКфАРСКЕК ЕГУА ИГКВТРСКЕО ЕГУА ИУКфАРСКСЬ ЕНУЗ ИГКфАРСКЕК ЕГУА ИГКфАРСЫЕК ЕСУЗ РК.2	А15И565МТУУТ0 ЗУКС АПЬЗСТТУУАБА УКС А1КИТУЫΙΤΥΥΑϋ ЗУКС ΥΙ5Η365ΝΚΥΥУО ЗУКС 315ИТУСЗТГУА0 ЗУКС 31РРУСНГАЫУАР ЗУКС ΑΙΤΚ5666ΤΥΥΑ0 ЗУКС СГТТОУСТТУУАО ЗУКС СОЯ2	КГНЗКОЫАфИТЬГЬфМЫ ЫТАРЕОТАУУУСАА К ГТ13 ΚΟΝΟΚΝΤУАЬфМЫ ЗЬКРЕОТАУУУССА КГТI3ΚΒΙУКЫТУУЬФМЫ ЗЬКРЕОТАУУУСАА КГТЬЗКОЫАКЫТУОЬФМЫ 3ЬКТЕВТАУУУСАА ВГТМЗКОКАКЫАСУЬфМЫ ЗЬКРЕВТАЬУУСАА К ГТ15 ΚΒΝАКЫТЬГЬфМЫ ЗЬКЗЕОТАУУУСАК КГТ13КОЫАКЫТУ¥ЬфМЫ ЗЬКРЕОТАУУУСАА КГТ155ОЫАКЫТУУЬФ1Ы ВЬКРЕОТАПУСАУ РЯЗ	КТУОУСЗАУЕСУАКЬЕУО У 0Ρ5ΥΥ3Τ5ΚΥΤΚΑΤΕΥΒΥ фТЗАРКЗЫКМЗЫЕУРУ ТЗКСЬЗЗЬАСЕУНУ САф50КУЫ1К5У0У О5АСКТ ТКЗЗТ1УУСУ6СМЕУ ОТфОЬСЬ 01ГСКСЫСРГО с сокз	ИСКСАФУТ УЗЗ ИСфСТфУТ УЗЗ ИСфСТфУТ УЗЗ ИСВСТфУТ УЗЗ ИСФСТФУТ УЗЗ КСфСТфУТ УЗЗ ИСКСТЬУТ УЗЗ ИСФСТФУТ УЗЗ РК4
УЕСГВИ 88В02/ 113	ЕУфЬУЕЗСССЬУфР ССЗЬКЬЗСТАЗСЬК ьс	0ΥΑΙ6	ИГКфАРСКЕК ЕСУЗ	С135У03УТУУА0 НУКС	КГИЗКОЗАКЫТЬУЬфМЫ 5Ь51ЕОТСУУУСАА	ЕКЕфЬКККЕЗРНОЕЬЬКЬ СГУСМКУ	ЗСКСТЬУТ УЗЗ
УЕСГВИ 88Е02/ 114	ЕУфЬУЕЗСССЬУфР еезькьзсУАЗбгк ьо	0УА1С	ИГКфАРСКЕК ЕАУЗ	С15550Т5IΟΥΤΝ ЗУКС	КГТГЗКОЫАКЫТУУЬфМЫ ЗЬКРЕОТАУУУСАА	АГКСЗСУЕЬКСГРТ	ИСфСТфУТ УЗЗ
УЕСГВИ 88С03/ 115	ЕУфЬУЕЗСССЬУфА ССЗЬКЬЗСААЗССТ ГЗ	ЗЬАУС	ИГКфАРСКЕК ЕГУА	ΚΙΤΝ56ΑΤΤΥΥΑΟ АУКО	КГПЗКОЫАКЫТМУЬфМЫ ЗЬКРЕОТАУУУСАА	ΒΚ3ΡΝΙΙΝννΤΑΥΕΥϋΥ	ИСфСТфУТ У55
УЕСГВИ 88С05/ 116	ЕУфЬУЕЗСССЬУфР САЗЬКЬЗСААЗСОС ГТ	ЬУЫМС	ИГКфАРСКЕК ЕГУА	ΑΙΤ55ΡΜ5ΤΥΥΑΒ ЗУКС	ΚΓ5Ι3ΙΝΝ0ΚΤΤ6ΠφΜΝ УЬКРЕОТСУУГСАА	РЕСЗГКВфУАОКАМУОУ	ИСФСТФУТ УЗЗ
УЕСГВИ 88611/ 117	ЕУфЬУЕЗСССЬАфА ССЗЬКЬЗСААЗСКТ ГЗ	650МС	ИГКФ5РСКЕК Е1УА	А1ВЬ5С31ТУУРО ЗУКС	КГПЗКОЫАКЫТУУЬфМЫ ЗЬКРЕОТАУУУСАА	КЗТУЗУУЬАЬАВКССУВУ	ИСФСТФУТ УЗЗ
УЕСГВИ 88Н01/ 11$	ЕУфЬУЕЗСССЬУфА ССЗЬКЬЗСУАЗСГТ ЬС	ТУА1С	ИГКфАРСКЕК ЕАУЗ	СМ5А6О51ΡΗΥΤΑ ЗУКС	КГТТЗТОЫАКЫТУУЬфМЫ ЗЬКРЕВТАНУУСАА	АКУНСОУСУУЕСУУРГ	ИСФСТФУТ УЗЗ
УЕСГВИ 89В04/ 119	ЕУфЬУЕЗСССЬУфА ССЗЬКЬ5САА5Т51 33	ТЫЕМС	ИУВфАРСКфК ЕЬУА	ΤΙΤ555ΙΤΝΥνΒ5 УКС	КГТГЗКОЫАКЫТУУЬфМТ ЗЬКРЕВТАУУУСНА	КИКН50УЕУ	ИСКСТЬУТ УЗЗ
УЕСГВИ 89В08/ 120	ЕУфЬУЕЗСССЬУфР ССЗЬКЬЗСААЗСТТ 53	ΙΓΑΜΚ	НУКфАРСКфК ЕЬУА	5ΙΤΚ58ΙΤΤΥΑΒ5 УКС	КГТРЗКОЫАКЫТУЗЬфМЫ ЗЬКРЕОТАУУУСЫА	АТКРЕЬУЗУУЫОУ	ИСФСТФУТ УЗЗ
УЕСГВИ $9004/ 121	ЕУфЬУЕЗСССЬУфР ССЗЬКЬЗСАТЗСЬТ ГЗ	ОУЫЬС	ИГКфАРСКЕК СЕУЛ	УЬЗИКОЗГАУУАЕ РУКС	ΚΓΤΓ5ΚΒΝΑΚΝΤνΥυ2ΜΝ ЗЬКРЕВТАУУУСАА	ОКУЗЗКЬУЬРЫТЗРОГСЗ	ИСфСТфУТ УЗЗ
УЕСГВИ 89Г09/ 122	ЕУфЬУЕЗСССЬУфА СОЗЬКЬЗСААЗСКТ ΓΝ	ΝΑΙΜ6	ИГКфАРСфЕК ЕГУА	ΑΜΝΝΒΟΰΡΤΥΥΑΒ ЗУКС	КГТ15С0ЫТКЫТУГЬфМИ ГЬКРЕОТАУУУСАА	ОЕОЬУНУЗЗУНУЗКУОЬУ НУ	ИСфСТфУТ УЗЗ
УЕСГВИ $9609/ 123	ЕУфЬУЕЗСССЬУфР ССЗЬКЬЗСААЗСТТ 53	ΙΓΑΜΚ	ИУКфАРСКфК ЕЬУА	3ΙΤΚ35ΙΤΤΥΑΒ3 УКС	КГТЬЗКОЫАКЫТУЗЬфМЫ ЗЬКРЕОТАУУУСЫА	А1КРЕЬУ5УУЫ0У	ИСфСТфУТ УЗЗ
УЕСГВИ 89Н08/ 124	ЕУфЬУЕЗСССЬУфА ССЗЬКЬЗСААЗССЗ ГЗ	5ΥΑΡ6	ИГКфАРСКЕК ЕГУА	ΑΡΤΚ33ΝΙΡΥΥΚΒ ЗУКС	КГТ15КВЫАНТУУЬ0МЫ5 ЬКРЕВТАТУУСАУ	ЫЬСЗТНЗКОфКТУОУ	ИСфСТфУТ УЗЗ

- 35 025148

Таблица 3

ГО последовательностей и АК-последовательности одновалентных блокирующих рецептор анти-УЕОР УНН (РК, каркасный участок; СОК, гипервариабельный участок) (ЗЕЦ ГО N0: 9-46)

УНН 10/ 8Е0 Ю N0:	ΡΚΙ	СОК1	РК2	СО&2	т	сою	РК4
УЕСРВ11 22А10/9	ЕУОЬУЕЗСССЬУО РСОЗЬКЬЗСАРЗС КТРЗ	ЗУЗМС	НРКОАОСКЕКЕР νν	А1535ССУ1У0£ УЗЬЕС	ΚΡΤΙ5ΚϋΝΤΚΝΤνΥίΟΤ РЗЬКРЕОТАОУУСАА	ЗКАУСЗЗКЬКЬАОТУО У	ИСОСТОУТУЗ 8
УЕСГВ11 22А11/10	ЕУОЬУЕЗСССЬУО РСОЗЬКЬЗСАРЗС КТРЗ	5Ϊ5ΜΑ	НРКОАОСКЕКЕР νν	А133ССГ1У0АУ ЗЬЕС	К РТ13 ΚΏΝΤΚΝΤ УУ ЬОТ РЗЬКРЕВТАУУУСАА	ЗКАУСЗЗКЬКЬАОТУО Υ	ИСОСТОУТУЗ 3
УЕСГВИ 22В06/11	еуоьуезсссьуо РСОЗЬКЬЗСААЗС КТРЗ	ЗУЗМС	ИГКОАОСКЕКЕГ νν	А1553ССУ1У03 УЗЬЕС	КГИЗКОЭТКЯТУУЬОТ РЗЬКРЕОТАУУУСАА	ЗКАУСЗЗКЬКЬАОТУО Υ	исостоутуз 3
УЕСГВИ 22В07/12	ЕУОЬУЕЗСССЬУО АСОЗЬКЬЗСААЗС КТРЗ	ЗУЗМС	ИРКОАОСКЕКЕР νν	ΑΙ5536ΝΥΚΥ05 УЗЬЕС	ΚΡΤΙΒΚΒΝΤΚΗΤνΥΣΟΙ Ν5ΣΚΡΕΒΤΑνΥΥϋΑΑ	ЗКАУЗЗЗКЬКЬСОТУО Υ	ИСОСТОУТУЗ 3
УЕСГВИ 22Е04/13	еуоьуезсссьуо РСОЗЬКЬЗСУАЗС ктзз	ЗУЗМС	НРКОАОСКЕКЕР νν	А1336С31У05У зьос	КРТI3Κ0ΝΤΚΝΤУУЬОТ РЗЬКРЕОТАУУУСАА	ЗКАУАЗЗКЬКЬАОТУО У	ИСОСТОУТУЗ 3
УЕСГВИ 23Α03/14	еуоьуезсссьуо РСОЗЬКЬЗСУАЗС КТРЗ	ЗУЗМС	НРКОАОСКЕКЕР νν	А1556СУ1У05У зьос	ΚΓΤΪ5ΚΟΝΤΚΝΤνΥΕΟΤ РЗЬКРЕОТАУУУСАА	ЗКАУСЗЗКЬКЬАОТУО У	ИСОСТОУТУЗ 3
УЕСРВ11 23Α06/15	ЕУОЬУЕЗСССЬУО РСОЗЬКЬЗСАРЗС КТРЗ	ЗУЗМС	НРКОАОСКЕКЕР νν	ΑΙ5500ΓΙΥϋΑν ЗЬЕС	ΚΡΤΙ5ΚΒΝΤΚΝΤνΥΕ0Τ РЗЬКРЕОТАУУУСАА	ЗКАУСЗЗКЬКЬАОТУО Υ	ИСОСТОУТУЗ 3
УЕСГВИ 23Α08/16	ЕУОЬУЕЗСССЬУО ТСОЗЬКЬЗСУАЗС КТРЗ	3Υ3Μ0	НРКОАОСКЕКЕР νν	ΑΙ5Ν0ΟΥΚΥ05ν ЗЬЕС	ΚΓΤΙ3Κ0ΝΤΚΝΤνΥΕ0Ι ПЗЬКРЕОТАУУУСАА	ЗКАУСЗЗКЬКЬАОТУО У	ИСОСТОУТУЗ 5
УЕСРВ11 23Α09/17	еуоьуезсссьуо РСОЗЬКЬЗСАРЗС КТ ГС	ЗУЗМС	НРКОАОСКЕКЕР νν	А133БССУ1У03 УЗЬЕС	ΚΡΤΙ3Κ0Ν5ΚΝΤνΥΕ0Τ РЗЬКРЕОТАУУУСАА	ЗКАУСЗЗКЬКЬРСТУО У	ИСОСТОУТУЗ 3
УЕСРВ11 23ВС4/18	ЕУОЬУЕЗСССЬУО ТСОЗЬКЬЗСЕУЗС КТРЗ	8Υ8Μ0	НРКОАОСКЕКЕР νν	А13КССУКУО5У ЗЬЕС	ΚΡΤ13Κ0ΝΑΚΝΤνΥΣ0Ι ИЗЬКРЕОТАУУУСАЗ	ЗКАУСЗЗКЬКЬАОТУЕ У	ИСОСТОУТУЗ 3
уесрви 23011/19	ЕУОЬУЕЗСССЬУО РСОЗЬКЬЗСАРЗС КТРЗ	5Υ5ΜΑ	НРКОАОСКЕКЕР νν	А133ССР1У0АУ ЗЬЕС	ΚΓΤΙ5Κ0ΝΤΚΝΤνΥΙ0Τ РЗЬКРЕОТАУУУСАА	ЗКАУСЗЗКЬКЬАОТУО У	ИСОСТОУТУЗ 3
УЕСГВ11 23Ε05/20	ЕУОЪУЕЗЕССЬУО РСОЗЬКЬЗСУАЗС ктзз	ЗУЗМС	НРКОАОСКЕКЕР νν	А133ССУ1У05У зьос	ΒΓΤΙ5ΚϋΝΤΚΝΤνΥΕ0Τ РЗЬКРЕОТАУУУСАА	ЗКАУСЗЗКЬКЬАОТУО У	ИСОСТОУТУЗ 5
уесрви 23Ρ02/21	ЕМОЬУЕЗСССЬУО РСОЗЬКЬЗСАРЗС КТРЗ	5Υ5Μ0	НРКОАОСКЕКЕР νν	А1555С6У1У05 УЗЬЕС	ΚΡΤΙ3Κ0ΝΤΚΝΤνΥΕ0Τ РЗЬКРЕОТАОУУСАА	ЗКАУСЗЗКЬКЬАОТУО У	ИСОСТОУТУЗ 3

УЕСРВИ 23Ρ05/22	ЕУОЬУЕЗСССЬУО АСОЗЬКЬЗСААЗС КТРЗ	ЗУЗМС	НРКОАОСКЕКЕР νν	А1553СЫУКУ05 УЗЬЕС	ΚΓΤΙδΚΟΝΤΚΝΤνΥΣΟΙ ^ЗЬКРКОТАУУУСАА	ЗКАУСЗЗКЬКЬСОТУО У	ИСОСТОУТУЗ 5
УЕСРВИ 23Ρ11/23	еуоьуезсссьуо РСОЗЬКЬЗСАГЗС КТРЗ	ЗУЗМС	НРКОАОСКЕКЕР νν	А153СССУ1У05 УЗЬЕС	ΚΡΤΙΒΚΟΝΤΚΝΤνΥΕΟΤ РЗЬКРЕОТАОУУСАА	ЗКАУСЗЗКЬКЬАОТУО У	ИСОСТОУТУЗ 5
УЕСРВИ 23С03/24	ЕУОЬУЕЗСССЬУО РСОЗЬКЬЗСАРЗС КТ ГС	ЗУЗМС	НРКОАОСКЕКЕР νν	А1335ССУ1У05 УЗЬЕС	ΚΓΤΙ5ΚϋΝ5ΚΝΤνΥΕ0Τ РЗЬКРЕОТАУУУСАА	ЗКАУСЗЗКЬКЬРСТУО У	ИСОСТОУТУЗ 5
УЕСРВИ 24С04/25	ЕУОЬУЕЗСССЬУО РСОЗЬКЬЗСУАЗС КТЗЗ	ЗУЗМС	НРКОАОСКЕКЕР νν	А155ССУ1У03У зьос	ΚΡΤΙЗКОЫТЮГГУУЬОТ РЗЬКРЕОТАУУУСАА	5КАУ С 3 ЗКЬ Р.ЬАГТ Υ 0 У	ИСОСТОУТУЗ 3
УЕСРВИ 27С08/26	ЕУОЬУЕЗСССЬУО ТСОЗЬКЬЗСААЗС КТРЗ	ЗУЗМС	НРКОАОСКЕКЕР νν	А135ССУКУ03У ЗЬЕС	ΚΡΤΙ5ΒΌΝΤ0ΝΤνΥΕ0Ι Ν3ΕΚΡΕΌΤΑνΥΥ0ΑΑ	ЗКАУСЗСКЬКЬАОТУО У	ИСОСТОУТУЗ 5
УЕСРВИ 27(307/27	ЕУОЬУЕЗСССЬУО РСОЗЬКЬЗСУАЗС ктзз	зузмс	НРКОАОСОЕКЕР νν	А155С0У1У03У зьос	кгтхзкэнткктууьот Р 3 ЬК Ρ Е ОТ А V У УСАА	ЗКАУСЗЗКЬКЬАОТУО У	ИСОСТОУТУЗ 5
УЕСГВ11 30С09/28	ЕУОЬУЕЗСССЬУО РС05ЬКЬ5С1А5С ктзз	ЗУЗМС	НРКОАОСОЕКЕР νν	А135ССУ1У05У зьос	КРТ13К0ЫТКНТУУЬ0Т РЗЬКРЕОТАУУУСАА	ЗКАУСЗЗКЬКЬАОТУО У	ИСОСТОУТУЗ 3
УЕСГВИ 30Ε07/29	Εν оьу е 3 ССС ЬVо АСОЗЬКЬЗСААЗС КТРЗ	ЗУЗМС	НРКОАОСКЕКЕР νν	ΑΙ3350ΝΥΚΥ03 УЗЬЕС	ΚΓΤΙ5Κ0ΝΤΚΝΤνΥΕ0Ι ЫЗЬКРЕОТАУУУСАА	ЗКАУСЗЗКЬКЬСОТУО У	НСОСТКУТУЗ 3
УЕСГВИ 31С07/30	ЕУОЬУЕЗСССЬУО ТСОЗЬКЬЗСААЗС СТРЗ	ЗУЗМС	НРКОАОСКЕКЕР νν	А1533ССУ1У05 УЗЬЕС	ΚΡΤΙЗКОИТКНТУУЬОТ РЗЬКРЕОТАОУУСАА	ЗКАУСЗЗКЬКЬАОТУО У	ИСОСТОУТУЗ 3
уесрви 39Ε02/31	ЕУОЬУЕЗСССЬУО РСОРЬКЬЗСАРЗС КТРЗ	ЗУЗМС	НРКОАОСКЕКЕР νν	ΑΙ5550αΥΙΥϋ5 УЗЬЕС	ΚΡΤΙ5Ε0ΝΤΚΝΤνΥΕ0Τ РЗЬКРЕОТАОУУСАА	ЗКАУСЗЗКЬКЬАОТУО Υ	ИСОСТОУТУЗ 3
УЕСГВИ 39С04/32	ЕУРЬУЕЗСССЬУО АСОЗЬКЬЗСААЗС КТРЗ	ЗУЗМС	НРКОАОСКЕКЕР νν	ΑΙ5530ΝΥΚΥ03 АЗЬЕС	ΚΓΤΙ5Κ0ΝΤΚΝΤνΥΕ0Ι ЫЗЬКРЕОТАУУУСАА	ЗКАУСЗЗКЬКЬСОТУО У	ИСОСТОУТУЗ 3
уесрви 40Ρ02/33	ЕУОЬУЕЗСССЬУО РСОЗЬКЬЗСАРЗС КТРЗ	5Υ5ΜΆ	НРКОАОСКЕКЕР νν	Αΐ3506ΓΐΥΌΑν ЗЬЕС	кгтьзкоыткытууьот РЗЬКРЕСТАУУУСАА	ЗКАУСЗЗКЬКЬАОТУО У	ИСОСТОУТУЗ 5
УЕСГВИ 40607/34	ЕУОЬУЕЗСССЬУО РСОЗЬКЬЗСАРЗС КТРЗ	ЗУЗМС	НРКОАОСКЕКЕР νν	ΑΙ35366ΥΙΥ05 УЗЬЕС	ΚΡΤΙ5ΚϋΝΤΚΝΑνΥΕ0Τ РЗЬКРЕОТАОУУСАА	ЗКАУСЗЗКЬКЬАОТУО Υ	ИСОСТОУТУЗ 5
УЕСРВ1 I 40Η10/35	ЕУОЬМЕЗСССЬУО РСОЗЬКЬЗСАРЗС КТРЗ	ЗУЗМС	НРКОАОСКЕКЕР νν	А1355ССУ1У05 УЗЬЕС	КГТГЗКОЫТКЫТУУЬОТ РЗЬКРЕОТАОУУСАА	ЗКАУСЗЗКЬКЬАОТУО У	ИСОСТОУТУЗ 3

- 36 025148

УЕСРВИ 41В05/36	ЕУОЪУЕЗСССЬУС РСЗЗЬКЬЗСАГЗС КТГЗ	5Υ5ΜΟ	НГК2АССКЕКЕГ νν	ΑΙ535ΘΓΙΥ0Αν 50ЕС	ΚΓΤΙδΚΟΝΤΚΝΤνγΐ,ΟΤ РЗЪКРЕОТАУУУСАА	5КА¥С55КЬКЪАОТУО Υ	κος>(3τς}ντν5 3
УЕОГВИ 41503/37	Εν<2Ι,νΕ56<36Ι.νΰ роозькьзсагзс КТГЗ	8Υ5ΜΑ	НПфАООКЕКЕР νν	ΑΙ536<3ΠΥΟΑν ЗЪЕС	ΚΓΤΙ5ΚΕΝΤΚΝΤνΥΙι<2Τ РЗЪКРЕОТАУУУСАА	ЗКАУСЗЗКЪКЪАОТУО Υ	нзостоутуз 3
уесгви 42А05/38	ЕУОЬУЕЗСССЬУО рсозькьзсагзс ктгз	3Υ3ΜΟ	ΝΓΡ,ΟΑΟΟΚΕΚΕΡ νν	А1355СС¥1¥05 УЗЬЕС	ΚΓΤΙ3ΚΟΝΤΚΝΤνΥΚ2Μ РЗЪКРЕОТАОУУСАА	ЗКАУСЗЗКЬВЬАОТУО Υ	Κ5<25Τ0ντν3 3
νΕΟΡΒΙΙ 42005/39	ΕνοινΕδβοβι,νο РООЗЬКЬЗСАГЗС КТГЗ	5Υ5ΜΟ	МГКОАОСКЕРЕГ νν	А1353СС¥1¥05 УЗЬЕС	ΚΓΤΙ5Κ0ΝΤΚΝΤνΥΕ3Τ РЗЪКРЕОТАУУУСАА	ЗКАУСЗЗКЪРЪАОТУО Υ	Κ5<2στς}ντν3 3
уесгвы 42Γ11/40	еуоьуезоссьус) рсозокьзсуазс КТ55	ЗУ5У5	ИГК0А03КЕКЕГ νν	ΑΙ55(3<3ΥΙΥ05ν зъоз	ΚΓΤΙ3ΚΟΜΤΚΝΤνΥΕΟΤ РЗЪКРЕОТАУУУСАА	5ΚΑΥ535ΚΣΚΣΑ0ΤΥ0 Υ	καοατ<2ντν5 3
УЕСГВИ 56Ε11/41	ЕУСЬУЕЗСЗСЬУО РЗОЗЬКЬЗСАГЗС КТГЗ	3Υ3Μ5	ИГКОАОСКЕКЕГ νν	ΑΙ555ΰ<3ΥΙΥ05 УЗЪЕС	ΚΓΤΙδΒΟΝΤΚΝΤνΥΙΟΤ РЗЪКРЕЕААОУУСАА	3 ΚΑΥ 533 КЪКЪАОТ Υ 0 Υ	КСОСТСУТУЗ 3
УЕСГВЫ 60Α09/42	ЕУОЬУЕЗСССЬУО рсозькьзсАгза КТГЗ	3Υ5Μ3	ΝΓΚΩΑΟΟΚΕΚΕΓ νν	ΑΙ353«35ΥΙΥ05 УЗЪБС	ΚΓΤΙ3Κ0ΝΤΚΝΤνΥΙ0Τ РЗЬКРЕОТАОУУСАА	ЗКАУСЗЗКЪКЬАОТУО Υ	мсостоутуз 3
УЕСГВИ 61Α01/43	ЕУОЬУЕЗСЗСЬУО АЗСЗЬКЬЗСАГЗС КТГЗ	3Υ3Μ5	ΝΓΚΏΑΏΰΚΕΚΕΓ νν	ΑΙ3356ΥΚΥ0Αν ЗЪЕС	ΚΓΤΙ5Κ0ΝΤΚΝΤνΥΣ£Τ РЗЬКРЕОТАУУУСАА	3 КΑΥА ЗЗКЪКЬАОТУО Υ	№3Ο5Τ2ντν3 3
УЕСГВ11 62Α09/44	ЕУОЬУЕЗССОЬУО РЗОЗЬКЬЗСААЗЗ КТГЗ	3Υ5Μ5	ЯГКОАОСКЕКЕГ νν	ΑΙ33300ΥΙΥ03 УЗЪЕС	ΚΓΤΙ5ΚΟΝΤΚΝΤνΥΙΟΤ РЗЬКРЕОТАУУУСАА	5КА¥С35КЪКЪА0Т¥0 Υ	ЯСОСТОУТУЗ 3
УЕСГВ11 62010/45	ЕУОЬУЕЗЕССЬУО АСОЗЬКЬЗСААЗЗ КТГЗ	5Υ5Μ0	ИГКСАССКЕКЕГ νν	ΑΙ3330ΝΥΚΥ05 УЗЪЕС	ΚΓΤΙΒΚΟΝΤΚΝΤνΥΙιΟΙ Ν5ΕΚΡΕ0ΤΑνΥΥ0ΑΑ	3ΚΑΪ555ΚΙΒΧ50ΤΥΟ Υ	Ν505Τ0ντν5 3
νΕδΡΒΙΙ 62Γ02/46	ЕУОЬУЕЗОСЗЬУО рсозькьзсАгзе КТГЗ	3Υ3Μ0	ΝΓΚ0ΑΏ<3ΚΕΚΕΓ νν	ΑΙΑ36ΟΥΙΥΟΑν ЗЪЕС	ΚΓΤΙ3ΚΟΝΤΚΟΤνΥΣΟΤ РЗЬКРЕОТАУУУСАА	ЗКАУСЗЗКЪКЬАОТУО Υ	Ν5θατς)ντν5 3

Скорости диссоциации ингибирующих ΥΗΗ анализировали с помощью В1асоге-анализа (устройство В1асоге Т100, фирма ОЕ Иеа11Нсаге). Буфер ΗΒδ-ЕР+ применяли в качестве подвижного буфера и эксперименты проводили при 25°С. Рекомбинантный человеческий ΎΡΟΡ165 необратимо иммобилизовали на сенсорном чипе СМ5 посредством аминного сочетания (используя ЕЭС и ΝΗδ) до достижения требуемого уровня ±1500КИ. После иммобилизации поверхности дезактивировали с помощью 10-минутной инъекции 1 М этаноламина, рН 8,5. Референс-поверхность активировали и дезактивировали с помощью ЕОС/ΝΗδ и этаноламина соответственно. Периплазматические экстракты, содержащие νΗΗ, инъецировали в виде 10-кратного разведения в подвижном буфере в течение 2 мин со скоростью потока 45 мкл/мин и давали пройти реакции диссоциации в течение 10 или 15 мин. Между введениями различных образцов поверхности регенерировали с помощью буфера для регенерации. Данные соотносили с двумя референс-вариантами путем вычитания кривых, соответствующих референс-каналу, и соответствующих пустому варианту, для создания которого осуществляли инъекцию только подвижного буфера. Обработанные кривые оценивали путем подгонки с использованием модели двухфазного расщепления с помощью программного обеспечения В1асоге Т100 Ενа1иаΐ^οη ν2.0.1. Величины к_й для быстрой фазы и к_йдля медленной фазы и % быстрой фазы приведены в табл. 4.

Скорости диссоциации блокирующих рецептор инти-УЕОР νΗΗ, определенные с помощью В1асоге-анализа

Таблица 4

В-клеточная линия дифферен- цировки	Уникальный вариант последователь- ности	ΙΟ репрезентативных νΗΗ	^(быстрая фаза)	^(медленная фаза)	% быстрой фазы	Уровень связывания (ки)
1	1	УЕОРВП22В07	Ι.50Ε-02	7.80Е-05	31	328
1	2	УЕОРВП23А08	1,ЗОЕ-02	5,О()Е-О5	19	502
1	3	УЕСРВН23В04	8.80Ε-03	4,ООЕ-О5	12	768
1	4	νΕΟΡΒ1Ι27ϋ08	2.40Ε-02	8,10Е-05	13	225
1	5	УЕСРВН24С04	1,ЗОЕ-02	3,40Е-05	17	456
1	6	УЕОРВН27О07	1,ЗОЕ-02	3,80Е-05	18	471
ι	7	УЕСРВП22Е04	Ι.80Ε-02	Ι,ΙΟΕ-04	14	520
1	8	УЕСРВП23А03	1.50Е-02	3.20Е-05	15	487
1	9	УЕОРВП22В06	3,80Е-02	9,00Е-05	23	168
1	10	УЕОРВН23А09	2,70Е-02	4,60Е-05	20	247
1	11	УЕСРВнгзооз	2.80Е-02	8.60ΕΌ5	28	141
ι	12	УЕОРВН22АН	2.20Е-02	4.70Е-05	12	461
1	13	УЕОРВН23А06	1.70Е-02	3,70Е-05	13	547

- 37 025148

1	14	УЕОРВИ23Р11	2.70Е-02	1,ЗОЕ-04	22	134
1	15	УЕОРВ1122АЮ	3.70Е-02	4,00Е-05	19	229
1	16	УЕСРВП23РО5	1,60 Е-02	1,ЗОЕ-04	29	198
1	17	УЕОРвигзон	1.90Е-02	5.80Е-05	13	510
I	1«	УЕОРВН23Р02	N/<1	11/0	. п/<1	η/ά
1	19	УЕОРВИ23Е05	1.50Е-02	6,90Е-05	18	275
1	20	УЕСРВ1131С07	3.70Е-02	1.50Е-04	25	77
1	21	УЕОРВ1130С09	1.50Е-02	7.60Е-05	19	264
1	22	УЕСРВП30Е07	1.70Е-02	1,ЗОЕ-04	29	226
1	23	УЕОРВ1139004	1.40Е-02	7.40Е-04	40	210
I	24	УЕОРВ 1141003	1.20Е-02	2.70Е-04	20	332
1	25	УЕСРВП41В05	1.90Е-02	1.20Е-04	16	324
1	26	УЕСРВН40Р02	1.20Е-02	9.80Е-05	20	258
]	27	УЕОЕВ1139Е02	1.90Е-02	2.40Е-04	13	181
]	28	УЕСГВН42О05	3.30Е-02	1.50Е-04	26	77
1	29	УЕСРВН40С07	1.80Е-02	3,20Е-04	19	139
1	30	УЕОГВП42А05	1.60Е-02	3.40Е-04	25	118
I	31	УЕОРВН42Р11	9,10Е-03	5.00Е-04	46	100
1	32	УЕОРВН40Н10	1.40Е-02	2.90Е-04	17	200
1	33	УЕОРВП62А09	4.10Е-02	Ι.10Ε-04	23	84
1	34	УЕСГВН60А09	3.70Е-02	9, ЗОЕ-05	20	106
1	35	УЕСРВН62Г02	Ι.40Ε-02	8.50Е-05	21	205
1	36	УЕОРВН62ОЮ	1.90Е-02	Ι.60Ε-04	40	94
1	37	УЕОРВ1161А01	7,40Е-03	1.70Е-04	21	275
1	38	УЕСРВП56Е11	3,ЗОЕ-02	1.40Е-04	24	76

п/б: не определяли.

Пример 5.

Характеризация очищенных анти-УЕОР УНН.

Три обладающих ингибирующим действием анти-УЕОР УНН УЕОРВ1123В04, УЕОРВ1124С4 и УЕОРВ1123А6 отбирали для дополнительной характеризации в виде очищенных белков. Эти УНН экспрессировали в клетках Е.сой ТО1 в виде меченных с-тус, Н186 белков. Экспрессию индуцировали путем добавления 1 мМ ИПТГ и давали осуществляться в течение 4 ч при 37°С. После центрифугирования клеточных культур получали периплазматические экстракты путем замораживания-оттаивания дебриса. Эти экстракты использовали в качестве исходного материала для очистки УНН с помощью ИМАХ (хроматография на иммобилизованном металле) и гель-фильтрации (ГФ).

Конечные УНН-препараты имели чистоту 95% по данным анализа методом ДСН-ПААГ.

5.1. Оценка способности УНН блокировать взаимодействие: человеческий УЕОР165/УЕОРР2 с помощью НиЗА, предназначенного для определения блокирующего действия в отношении взаимодействия: человеческий УЕОР165/человеческий УЕОРР2-Рс.

Блокирующую способность УНН оценивали с помощью ЕРЛЗА, предназначенного для определения блокирующего действия в отношении взаимодействия: человеческий УЕОР165/человеческий УЕОРР2-Рс. В целом, метод состоял в следующем: содержащую УЕОРР2-Рс химеру (1 мкг/мл) (фирма Р&Э Зу8!ет8, Миннеаполис, шт. Миннесота, США) применяли для сенсибилизации 96-луночного планшета МахЛЗогр (фирма Шпс, Висбаден, Германия). Серии разведений (в диапазоне концентраций от 1 мМ до 64 пМ) очищенных УНН в ЗФР-буфере, содержащем 0,1% казеина и 0,05% Твин 20 (фирма ЗЛдта), инкубировали в присутствии 4 нМ биотинилированного УЕОР165. Остаточное связывание Ыо-УЕОР165 с УЕОРР2 выявляли с помощью конъюгированного с пероксидазой из хрена (НРР) экстравидина (фирма ЗЛдта, Сент-Луис, шт. Миссури, США) и ТМВ в качестве субстрата. В качестве контролей применяли параллельно бевацизумаб (Ауа8Йп®) и ранибизумаб (ЕпсепЮ®). Кривые зависимости ингибирования от дозы представлены на фиг. 1, соответствующие значения 1С₅₀ и величины процента ингибирования обобщены в табл. 5.

- 38 025148

Таблица 5

Значения 1С₅₀ (нМ) и % ингибирования для одновалентных УНН, установленные с помощью конкурентного ЕЫБА, характеризующие способность ингибировать взаимодействие: ЬУЕОР165/ЬУЕОРК2-Рс

УНН го	1С₅о (нМ)	% ингибирования
УЕОРВН23В04	2,1	100
УЕСРВН23А06	3,0	100
УЕОРВН24С04	2,5	100
ранибизумаб	1,6	100
бевацизумаб	1,7	100

5.2. Оценка способности УНН блокировать взаимодействие: человеческий УЕОР165/УЕОРК1 с помощью ЕЫБА, предназначенного для определения блокирующего действия в отношении взаимодействия: человеческий УЕОР165/человеческий УЕОРК1-Рс.

УНН оценивали также с помощью ЕЫБА, предназначенного для определения блокирующего действия в отношении взаимодействия: человеческий УЕОР165/человеческий УЕОРК1-Рс. В целом, метод состоял в следующем: содержащую УЕОРК1-Рс химеру (2 мкг/мл) (фирма Ρ&Ό 8ук1етк, Миннеаполис, шт. Миннесота, США) применяли для сенсибилизации 96-луночного планшета МахЦЗогр (фирма №пс, Висбаден, Германия). Серии разведений (в диапазоне концентраций от 1мМ до 64пМ) очищенных УНН в ЗФР-буфере, содержащем 0,1% казеина и 0,05% Твин 20 (фирма 81дта), инкубировали в присутствии 0,5 нМ биотинилированного УЕОР165. Остаточное связывание Ыо-УЕОР165 с УЕОРК1 выявляли с помощью конъюгированного с пероксидазой из хрена (НКР) экстравидина (фирма 81дта, Сент-Луис, шт. Миссури, США) и ТМВ в качестве субстрата. В качестве контролей во всех случаях применяли бевацизумаб, ранибизумаб и несоответствующий УНН (2Е6). Кривые зависимости ингибирования от дозы представлены на фиг. 2; соответствующие значения 1С₅₀ и % ингибирования обобщены в табл. 6.

Таблица 6

Значения 1С₅₀ (нМ) и % ингибирования для одновалентных УНН, установленные с помощью конкурентного ЕЫБА, характеризующие способность ингибировать взаимодействие:

ЬУЕОР165/ЬУЕОРК1-Рс

УНН ГО	ГС₅о (нМ)	% ингибирования
УЕСРВП23В04	0,5	64
УЕСРВП23А06	0,9	55
УЕСРВП24С04	0,8	71
ранибизумаб	1,2	91
бевацизумаб	1,5	96

5.3. Оценка анти-УЕОР165 УНН с помощью А1рЬаБсгееп-анализа, предназначенного для определения способности блокировать взаимодействие: человеческий УЕОР165/человеческий УЕОРК2-Рс.

Блокирующую способность УНН оценивали также с помощью А1рЬаБсгееп-анализа, предназначенного для оценки блокирующего действия в отношении взаимодействия: человеческий УЕОР165/человеческий УЕОРК2-Рс. В целом, метод состоял в следующем: серийные разведения очищенных УНН (в диапазоне концентраций от 200 нМ до 0,7 пМ) в ЗФР-буфере, содержащем 0,03% Твин 20 (фирма 81дта), добавляли к 4 пМ Ыо-УЕОР165 и инкубировали в течение 15 мин. Затем добавляли УЕОРК2-Рс (0,4 нМ) и сенсибилизированные анти-Рс УНН акцепторные гранулы (20 мкг/мл) и указанную смесь инкубировали в течение 1 ч в темноте. И, наконец, добавляли покрытые стрептавидином донорские гранулы (20 мкг/мл) и после инкубации в течение 1 ч в темноте измеряли флуоресценцию с помощью ридера для микропланшетов типа Епуыоп. Кривые дозовой зависимости представлены на фиг. 3. Значения 1С₅₀, характеризующие способность УНН блокировать взаимодействие человеческий УЕОР165-человеческий УЕОРК2-РС, обобщены в табл. 7.

- 39 025148

Таблица 7

Значения Ю₅₀ (пМ) и % ингибирования для УНН, установленные с помощью конкурентного А1рЬа8сгееп, характеризующие способность ингибировать взаимодействие: НУЕСР165/йУЕСРР2-Рс

УНН го	1С₅₀ (пМ)	% ингибирования
УЕОРВП23В04	160	100
УЕОГВН23А06	250	100
УЕСРВН24С04	250	100
Ранибизумаб	860	100

5.4. Оценка анти-УЕОР165 УНН с помощью А1рЬа8сгееп-анализа, предназначенного для определения способности блокировать взаимодействие: человеческий УЕОР165/человеческий УЕОРК1-Рс.

Блокирующую способность УНН оценивали также с помощью А1рЬа8сгееп-анализа, предназначенного для оценки блокирующего действия в отношении взаимодействия: человеческий УЕОР165/человеческий УЕОРК1-Рс. В целом, метод состоял в следующем: серийные разведения очищенных УНН (в диапазоне концентраций от 500 нМ до 1,8 пМ) в ЗФР-буфере, содержащем 0,03% Твин 20 (фирма 81дта), добавляли к 4 нМ Ыо-УЕОР165 и инкубировали в течение 15 мин. Затем добавляли УЕОРК1-Рс (1нМ) и сенсибилизированные анти-Рс УНН акцепторные гранулы (20 мкг/мл) и указанную смесь инкубировали в течение 1 ч в темноте. И, наконец, добавляли покрытые стрептавидином донорские гранулы (20 мкг/мл) и после инкубации в течение 1 ч в темноте измеряли флуоресценцию с помощью ридера для микропланшетов типа Епу15юп. Кривые дозовой зависимости представлены на фиг. 4. Значения Ю50, характеризующие способность УНН блокировать взаимодействие: человеческий УЕОР165-человеческий УЕОРК1-Рс, и величины % ингибирования обобщены в табл. 8.

Таблица 8

Значения Κ.'₅₀ (нМ) и % ингибирования для УНН, установленные с помощью конкурентного А1рЬа8стееп, характеризующие способность ингибировать взаимодействие: ЬУЕОР165/ЬУЕОРК1-Рс

УНН ГО	1С₅₀ (нМ)	% ингибирования
УЕОРВП23В04	0,9	41
УЕОРВП23А06	0,4	46
УЕОРВИ24С04	0,2	53
ранибизумаб	3,3	79

5.5. Определение аффинности взаимодействия: человеческий УЕОР165-УНН.

Кинетические характеристики связывания УНН УЕОРВН23В4 с БУЕОР165 анализировали с помощью 8РК с использованием устройства В1асоге Т100. Рекомбинантный человеческий УЕОР165 иммобилизовали непосредственно на СМ5-чипе путем аминного сочетания (с использованием ЕЭС и НН8). УНН анализировали в различных концентрациях, находящихся в пределах от 10 до 360 нМ. Образцы инъецировали в течение 2 мин и давали пройти реакции диссоциации в течение вплоть до 20 мин при скорости потока 45 мкл/мин. Между инъекциями образцов поверхность чипа регенерировали с помощью 100 мМ НС1. НВ8-ЕР+ (Нерек-буфер, рН 7,4 + ЭДТК) применяли в качестве подвижного буфера. Кривые связывания аппроксимировали с помощью модели реакции между двумя состояниями с использованием программного обеспечения В1асоте Т100 Еуа1иайоп ν2.0.1. Данные о рассчитанных величинах аффинности анти-УЕОР УНН представлены в табл. 9.

Таблица 9

Аффинность К_с (нМ) очищенных УНН к рекомбинантному человеческому УЕОР165

	УЕОР 165
УНН ΙΟ	к, (М-’с¹)	к„1 (М'с¹)	к_а2 (М-’с¹)	к_а (с¹)	к л (с¹)	кл (с¹)	Ко (нМ)
УЕСРВП23В04^м	-	2ДЕ+05	1.4Е-02	-	8,бЕ-03	2,4Е-04	0.7
УЕОРВП23АОб'”	-	4.2Е+05	2.0Е-02	-	5.7Е-02	1,0Е-04	0.7
УЕаРВП24С04^(,)	-	3.2Е+05	1.8Е-02	-	2.6Е-02	9.6Е-05	0.4

(а) Гетерогенная кривая связывания приводила к невозможности осуществления аппроксимации с использованием модели 1:1, кривые аппроксимировали на основе модели реакции с двумя состояниями с использованием программного обеспечения В1асоге Т100 Еνа1иаΐ^оη ν2.0.1.

- 40 025148

5.6. Связывание с мышиным УЕОР164.

Перекрестную реактивность с мышиным УЕОР164 определяли с помощью предназначенного для оценки связывания ЕЬ18А. В целом, метод состоял в следующем: рекомбинантный мышиный УЕОР164 (фирма Κ&Ό 8ук!ет5, Миннеаполис, шт. Миннесота, США) (1 мкг/мл) применяли для сенсибилизации в течение ночи при 4°С 96-луночного планшета Мах18огр (фирма Шпс. Висбаден, Германия). Лунки блокировали раствором казеина (1% в ЗФР). УНН вносили в виде серийных разведений (диапазон концентраций: 500 нМ - 32пМ) в ЗФР-буфере, содержащем 0,1% казеина и 0,05% Твин 20 (фирма 81дта), и связывание оценивали с помощью мышиного антитела к тус (фирма Косйе) и антимышиного антитела, конъюгированного с НКР (фирма ОАКО), и последующей ферментативной реакции в присутствии субстрата ТМВ (3,3',5,5'-тетраметилбензидин) (фирма Р1егсе, Рокфорд, шт. Иллинойс, США) (фиг. 5). тАЬ, вступающее в реакцию с мышиным УЕОР164, применяли в качестве положительного контроля. В качестве эталона оценивали также связывание с человеческим УЕОР165. Значения ЕС₅₀ обобщены в табл. 10.

Таблица 10

Значения ЕС₅₀ (пМ), характеризующие связывание УНН с рекомбинантным человеческим УЕОР165 и мышиным УЕОР164, установленные с помощью ЕЫ8А

	И1УЕОР165	КшУЕСР164
УНН ГО	ЕС₅о (пМ)	ЕС₅₀ (пМ)
УЕОРВН23В04	297	ΝΒ
УЕОРВП24С04	453	ΝΒ
УЕСРВП23А06	531	ΝΒ

ИВ: отсутствие связывания.

5.7. Связывание с УЕОР121.

Связывание с рекомбинантным человеческим УЕОР121 определяли с помощью ЕЫ8А, предназначенного для оценки связывания на твердой фазе. В целом, метод состоял в следующем: рекомбинантный человеческий УЕОР121 (фирма Κ&Ό 8ук!ет5, Миннеаполис, шт. Миннесота, США) (1 мкг/мл) применяли для сенсибилизации в течение ночи при 4°С 96-луночного планшета Мах18огр (фирма Иипс, Висбаден, Германия). Лунки блокировали раствором казеина (1% в ЗФР). УНН вносили в виде серийных разведений (диапазон концентраций: 500 нМ - 32 пМ) в ЗФР-буфере, содержащем 0,1% казеина и 0,05% Твин 20 (фирма 81дта), и связывание оценивали с помощью мышиного антитела к тус (фирма Косйе) и антимышиного антитела, конъюгированного с НКР (фирма ЭЛКО), и последующей ферментативной реакции в присутствии субстрата ТМВ (3,3',5,5'-тетраметилбензидин) (фирма Р1егсе, Рокфорд, шт. Иллинойс, США) (фиг. 6). В качестве положительного контроля во всех случаях использовали серийные разведения УЕОРК2. Значения ЕС50 обобщены в табл. 11.

Таблица 11

Значения ЕС₅₀ (пМ), характеризующие связывание одновалентных УНН с рекомбинантным человеческим УЕОР121, установленные с помощью ЕЫ8А

УНН ГО	ЕС5о (пМ)
УЕОРВП23В04	510
УЕСРВП24С04	792
УЕСРВН23А06	928

5.8. Связывание с представителями семейства УЕОР УЕОРВ, УЕОРС, УЕСРЭ и РЬОР.

Связывание с УЕОРВ, УЕОРС, УЕОЕЭ и РЬОР определяли с помощью ЕЫ8А, предназначенного для оценки связывания на твердой фазе. В целом, метод состоял в следующем: УЕОРВ, УЕОРС, УЕСРЭ и РЬОР (фирма К&Э 8ук!ет5, Миннеаполис, шт. Миннесота, США) (1 мкг/мл) применяли для сенсибилизации в течение ночи при 4°С 96-луночного планшета Мах18огр (фирма Иипс, Висбаден, Германия). Лунки блокировали раствором казеина (1% в ЗФР). УНН вносили в виде серийных разведений (диапазон концентраций: 500 нМ-32 пМ) и связывание оценивали с помощью мышиного антитела к тус (фирма Косйе) и антимышиного антитела, конъюгированного с АР (фирма 81дта, Сент-Луис, шт. Миссури, США). В качестве положительных контролей параллельно использовали серийные разведения соответствующих рецепторов и для обнаружения применяли конъюгированное с пероксидазой из хрена (НКР) козье антитело к человеческому 1дО, Рс-специфическое (фирма 1асккоп 1ттипо Кекеагсй ЬаЬогаФпек 1пс., Вест-Гров, шт. Пенсильвания, США), и последующую ферментативную реакцию в присутствии субстрата ТМВ (3,3',5,5'-тетраметилбензидин) (Р1егсе, Рокфорд, шт. Иллинойс, США). Кривые дозовой зависимости для УНН и контролей представлены на фиг. 7. Результаты свидетельствуют об отсутствии выявляемого связывания выбранных УНН с УЕОРВ, УЕОРС, УЕСРЭ или РЬОР.

5.9. Группировка эпитопов.

Основанные на В1асоге-анализе эксперименты по группировке эпитопов осуществляли с целью решения вопроса о том, какие связывающие УЕОР агенты связываются с эпитопами, которые являются сходными или перекрывающимися с эпитопами УЕОРВ1123В04. Для этой цели УЕОРВ1123В04 иммоби- 41 025148 лизовали на сенсорном чипе СМ5. Для каждого образца человеческий УЕОР165 пропускали по поверхности чипа и обратимо иммобилизовали с помощью УЕОРВ1123В4. Затем очищенные УНН (100 нМ) или периплазматические экстракты (разведение 1/10) инъецировали так, чтобы время контакта с поверхностью составляло 240 с при скорости потока 10 мкл/мин. Между экспериментами с использованием различных образцов поверхность регенерировали с помощью буфера для регенерации (100 мМ НС1). Обработанные кривые оценивали с использованием программного обеспечения В1асоге Т100. Установлено, что УНН можно разделить на две группы: первая группа, для которой характерно дополнительное связывание с захваченным с помощью УЕОРВ1123В04 УЕОР165, и вторая группа, для которой не обнаружена способность одновременно связываться с захваченным с помощью УЕОРВ1123В04 УЕОР165. В табл. 12-А обобщены данные о группировке эпитопов оцененных УНН.

Такой же анализ применяли для решения вопроса о том, могут ли УЕОРК1, УЕОРК2, ранибизумаб и бевацизумаб связываться с человеческим УЕОР-165 одновременно с УЕОРВП23В04. В табл. 12-Б представлены данные о дополнительном связывании с захваченным с помощью УЕОРВП23В04 УЕОР165. Только УЕОРК2 не обладал способностью связываться с захваченным с помощью УЕОРВП23В04 УЕОР165, что подчеркивает блокирующее действие УЕОРВ1123В04 в отношении взаимодействия УЕОР-УЕОРК2. Кроме того, указанные данные демонстрируют, что распознаваемый УЕОРВП23В04 эпитоп не соответствует эпитопу, распознаваемому бевацизумабом и ранибизумабом.

Таблица 12-А

Группировка эпитопов анти-УЕСР УНН - одновременное связывание с УЕСРВП23В04

Дополнительное	1С02	1Е07	4В08	8Е07	8Р07	Ι2Α07	12 ВО)	86С11	86ΡΙ1	86008
связывание отсутствует или имеет место низкое дополнительное связывание с	86010	86011	87В07	88А01	88А02	88В02	88Е02	88003	88005	88011
«захваченным» с помощью 23В04 УЕСР165*	88Н01	89В04	89ϋ04	89Р09	89009	89Н08	24С04	23А6	27007	23В04
Имеет место дополнительное связывание с	3ϋ12	5ВО2	5ВОЗ	5В05	6002	7ϋ08	8009	8Р06	10С07	10Е07
«захваченным» ς помощью 23В04 УЕ0Р165	10С04	10005	11С08	11009	Ι1Ε04	ΙΙΕ05	11Р12	86Н09	41С05

* Свидетельствует о наличии таких же или перекрывающихся эпитопов.

Таблица 12-Б

Группировка эпитопов УЕОРВП23В04 - связывание эталонных (ЬепсЬтагк) ингибиторов или когнатных рецепторов с захваченным с помощью УЕСРВП23В04 УЕОР165

Стадия инъекции	Связывающий агент	Концентрация образца	Уровень связывания (ки)
1	УЕСР165	ЮОнМ	1727
2	УЕОРВП23В04	КЮнМ	-
3	ранибизумаб	ЮОнМ	763
4	бевацизумаб	ЮОнМ	1349
5	УЕОРК1	ЮОнМ	1011
6	УЕ0РК.2	ЮОнМ	-

5.10. Характеризация анти-УЕОР УНН с помощью анализа пролиферации клеток НИУЕС. Эффективность отобранных УНН оценивали с помощью анализа пролиферации. В целом, метод состоял в следующем: прежде всего НИУЕС-клетки (фирма ТесЬпос1опе) выращивали в минимальной среде в течение ночи и затем высевали в четырех повторностях по 4000 клеток/лунку в 96-луночные планшеты для культуры ткани. Клетки стимулировали в течение 5 мин с помощью 33 нг/мл УЕОР в отсутствии или в присутствии УНН. Уровни пролиферации измеряли по включению [³Н]-тимидина в день 4.

Результаты анализа пролиферации НИУЕС, представлены в табл. 13.

- 42 025148

Таблица 13

Значения 1С₅₀ (нМ) и % ингибирования для одновалентных УЕОРВ1123В04, УЕОРВ1123А06 и УЕОРВ1124С04, установленные в анализе индуцируемой УЕОР пролиферации клеток НИУЕС

5.11. Характеризация анти-УЕОР УНН с помощью анализа фосфорилирования Егк в клетках НИУЕС.

Эффективность отобранных УНН оценивали с помощью анализа фосфорилирования Егк в клетках НИУЕС. В целом, метод состоял в следующем: прежде всего НИУЕС-клетки выращивали в минимальной среде в течение ночи, затем стимулировали с помощью 10 нг/мл УЕОР в течение 5 мин в отсутствии или в присутствии УНН. Клетки фиксировали 4% формальдегида в ЗФР и уровни фосфорилирования ЕРК оценивали с помощью ЕЫЗА, используя специфические для фосфо-ЕРК антитела (антитело к фосфо-МАР-киназе рЕРК1/2, М8159, фирма Зщта) и поликлональное кроличье антитело к мышиному иммуноглобулину, конъюгированное с НРР (Р0161, фирма Иако). Как видно из табл. 14, УЕОРВ1123В4 и бевацизумаб ингибировали индуцируемое УЕОР фосфорилирование Егк по меньшей мере на 90%, что характеризовалось значениями 1С₅₀<1 нМ.

Таблица 14

Значения 1С₅₀ (нМ) и % ингибирования для одновалентных УЕОРВ1123В04, полученные в анализе индуцируемого УЕОР фосфорилирования Егк в клетках НИУЕС

УННЮ	1С50 (иМ)	% ингибирования
УЕСРВН23В04	0,37	90
бевацизумаб	0,63	98

Пример 6.

Создание многовалентных блокирующих анти-УЕОР УНН.

УНН УЕОРВ1123В04 сливали генетически либо с УЕОРВ1123В04 с получением гомодимерного УНН (АК-последовательности см. в табл. 15), либо с другими УЕОР-связывающими УНН с получением гетеродимерных УНН. Для создания гетеродимерных УНН соединяли УНН из панели, включающей 10 уникальных УЕОР-связывающих УНН, через состоящий из 9 или 40 О1у-Зег гибкий линкер в двух различных ориентациях относительно УЕОРВ1123В04 (АК-последовательности см. в табл. 15). Гомодимерный УЕОРВ1123В04 (УЕОРВ11010) и 40 гетеродимерных двухвалентных УНН экспрессировали в клетках Е. сой ТО1 в виде меченных с-тус, Н186 белков. Экспрессию индуцировали путем добавления 1 мМ ИПТГ и давали продолжаться в течение 4 ч при 37°С. После центрифугирования клеточных культур получали периплазматические экстракты путем замораживания-оттаивания дебриса. Эти экстракты применяли в качестве исходного материла и УНН очищали с помощью ИМАХ и обессоливали до достижения чистоты 90% по данным ДСН-ПААГ.

- 43 025148 последовательностей)

Таблица 15

ΙΌ последовательностей, ΙΌ УНН и АК-последовательности двухвалентных анти-УЕОР УНН (каждый из применяемых линкеров выделен цветом в одной из соответствующих

Ю последовательностей/ 8Е0 1Р N0;	1ϋ УНН	АК последовательности
УЕОРВП23В04-35О5- 23В04/128	УЕОРВПОЮ	ЕУрЕУЕЗОООЕУрТОРЗЕЯЕ8СЕУЗОЯТР38У8МО\УРЯрАрОКЕКЕРУУА13КООУКУРЗУ8ЕЕОЯРТ18К ΡΝΑΚΝΤνΥΕρΐΝ5ΕΚΡΕΡΤΑνΥΥ0Α55ΐυΐΥΟ55ΚΕΒΕΑΒΤΥΕΥ^σθΟΤθντν55ΒΗΗΜΗΜΜϋΜΜ·^<1 НИИИИИИ^ИИИЕУРЕУЕЗССОЕУ<ЗТСВЗЕКЕ5СЕУ$С&ТГ55У5МО^ГЮЭАООКЕкЕРУУ ΑΙ8ΚΟ0ΥΚΥΡ8ν8ΕΕΟΚΡΤΙ8ΚΡΝΑΚΝΤνΥΕςΐΝ8ΕΚΡΕΡΤΑνΥΥ€Α88ΕΑΥΟ88ΚΕΚΕΑΡΤΥΕΥλν09ΟΤ ОУТУ88
УЕОРВИ23В04-9ОЗ- 4В08/129		Εν0ΕνΕ5Ο0θΕν0ΤΟΡ5ΕΚΕ30ΕνδΟΚΤΡ53Υ8Μα\νΡΚς>Α<3θΚΕΚΕΡννΑΐ3ΚΟΟΥΚΎΒ3ν3ΕΕΟΚ.ΡΤΙ3Κ ΒΝΑΚΝΤνΥΕ<3ΙΝ3ΕΚΡΕΒΤΑνΥΥΟΑ55ΚΑΥ053ΚΕΚΕΑΡΤΥΕΥΜν<ΪΟΟΤ(}ντν55Κί§·Ββ8Εν<}ΕνΕ 500αΕνρΡα05ΕΡΕ5€ΑΑ303Αν0Β1ΤνΑν/ΥΚς>ΑΡ0ΐρκρΕνΑΤ[ΤΡ50ΥΤΥΥν/ΡΡνΚ0ΚΡΤΙ5ΚΒΝ5ΚΝΙ νΥΕφΜΝ3ΕΚΡΕΒΤΑΑΥΥΟΝΤ0ΡΥ\νθ0ΟΤ0ντν53
УЕОРВП23В04-9О8- 5В03/130		ЕУрЕУЕ8О0ОЕУ9ТОРЗЕЯЕ8СЕУ8ОЯТР58У8МО\УРИрА9ОКЕЯЕРУУА18КООУКУР8У8ЕЕОЯРТ18К ΒΝΑΚΝΤνΥΕ<3ΙΝ5ΕΚΡΕΒΤΑνΥΥ€Α85ΒΑΥΟ55Κ.ΕΚ.ΕΑΡΤΥΕΥΨΟ<5ΟΤ<3ντν53ΟΟΟΟ5ΟΟΟ5Εν0ΕνΕ 3000ΕΑΡΑ0Β3ΕΚ.Ε$€ΑΑ30Κ.3Ρ3ΗΥΝΜ0Ά/ΡΚ<3ΑΡ0Κ.ΕΚ.ΕΡνΑ3ΐΚ00003ΤΤΥΑΝ3νΚΡΚΡΤΐ5Κ.ΕΝΑΚ ΝΤνΥΕΟΜΝ5ΕΚΡΕΡΤΑνΥΥΟΑΑΤΑΡΥΒΟΡΥΡΥΡΥ\νθΟΟΤθντν58
УЕОРВП23В04-9С8- 5В05/131	УЕОРВП022	ЕУ<5ЕУЕ5СССЕУ(}ТСРЗЕЯЕ5СЕУ8СЯТР58У$МС\УРа(5АОСКЕКЕРУУА15КССУКУВЗУ$ЕЕСЯГТ1$К ΡΝΑΚΝΤνΥΕ<31Ν5ΕΚΡΕΒΤΑνΥΥ0Α5$ΚΑΥΟ53ΚΕΚΕΑΡΤΥΕΥ\ν00θΤ0ντν53ΟΟΟΟ5ΟΟΟ5Εν0Εν£ 3Ο0ΟΕν0ΡΟΟ8ΕΡΕ3€νΑ3ΟΙΚΡΜ3ΜΑΨΥΕ(3ΑΡΟΚΗΚΕΕνΑΚ133ΟΟΤΤΑΥνΡ3νΚΟΕΓ'Π8ΚΡΝ3ΚΝΤν ΥΕΟΜΝ5ΕΚΑΕΒΤΑνΥΥΟΝΤΡ53ΡΡΝΡν/ΟΑΟΤθντν55
УЕОРВП23В04-9О8- 6002/132		ЕУ<ЗЕУЕ5ОООЕУ(}ТСР5ЕКЕЗСЕУЗОКТР53У8МС\УРа9А9ОКЕКЕРУУА13КООУКУВЗУ5ЕЕОКГТ13К ΒΝΑΚΝΤνΥΕ9ΙΝ5ΕΚΡΕΒΤΑνΥΥΟΑ55ΚΑΥΟ53ΚΕΚ.ΕΑΒΤΥΕΥ\νθς»ατρντν55ΟΟΟΟ5ΟΟΟ$Εν<3ΕνΕ 3ΟΟΟΕν<}ΡΟΟ5ΕΚΕ50ΑΑ5ΟΝΙΡ8ΝΝΑΜΑ\νΥΚ.ρΑΡΟΚ9ΚΕΕνΑΚΙ33ΟΟΟΕΤΥΥΕΒ3νΚΟΚΓΤν3Κ.ΒΝΑΚ ΝΤνΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΡΤΑνΥΥΟΝΑΑΥΚΤΥΝΥλνΟΟΟΤΟντνδδ
УЕОРВ1123В04-9О8- 10Е07/133		ЕУ<ЗЕУ£5СОСЕУ<2ТСР$Е&ЕЗСЕУЗО&ТРЗ$У5МО\УРК.ОАОСКЕКЕРУУА15КССУКУР$УЗЕЕСКРТ1$К ΡΝΑΚΝΤνΥΙΛ}ΙΝ8ΕΚΡΕΒΤΑνΥΥ0Α83ΚΑΥΟ53ΚΕΚ1.ΑΡΤΥΕΥ\ν09ΟΤ(3ντν88ΟΟΟΟ8ΟΟΟ3Εν<3ΕνΕ 8СССЕУрАССЗЕЯЕЗСАА5СЯТР5КУАМС\УГЯ<5АРОКЕЯУЕУАВ1555О1НТУУАВАУКОЯРТ15ЯВ1ЧАК ΝΤνΥΕΟΜΝ3ΕΚΡΕΡΤΑνΥΥΟΑΑ3Α\ν\νΥ50ΜΑΚΡΝΥΚΥ1Α/ΟΡΟΤθντνδ3
УЕОРВ1123В04-9ОЗ- Ι2Β01/134		ЕУрЕУЕ5О0СЬУрТОР5ЕЯЬЗСЕУЗСЯТР$$У$МО5УРЕрА0ОКЕКЕГУУАТЗКОО¥КУР$У5ЕЕОКРТ15К ΡΝΑΚΝΤνΥΕρΐΝ3ΕΚΡΕΡΤΑνΥΥ0Α33ΚΑΥΟ33ΚΕΚΕΑΡΤΥΕΥ\ν0ρθΤρντν33ΟΟΟΟ5ΟΟΟ3Εν(3ΕνΕ 3ΟΟ0ΕνρΡ0Ο8ΕΚΕΑ€ΑΑ8ΟΡΤΕ538\νΜΥ\ννκρΑΡΟΚΟΕΕ%/ν3ΚΙ5ΡΟΟΕΡΤΥΥνΡ3νΚΟΚ.Ρ5ν5ΤΡΝΑ ΝΝΤΕΥΕ0ΜΝ5ΕΚΡΕΡΤΑΕΥ50ΑΚΰ0ΑΡΝΥΤΡΒθΚΟΤ0ντν55
УЕОРВ1123В04-9О886С11/135		ЕУрЕУЕЗСООЕУрТаРЗЕкЕ5СЕУЗСКТР85У5МОЧ/РКрА{ЗСКЕКЕРУУА13КСО¥КУВЗУ5ЕЕОКГТ13К. РМАКНТУУЕрШЗЕКРЕРТАУУУСАЗЗЯАУОЗЗВЕкЕАРТУЕУУУСрСТрУТУЗЗССОСЗСССЗЕУрЕУЕ 5Ο0<ΪΕν<3ΑΟΡ3ΕΚΕ3σΓΑ3ΟΙΠΤΝδΥΑΜΟΨΡΡ<3ΑΡΟΚΕΪ<Ε5νΑΗΙΝΚ305δΤΥΥΑΒ3νΚΟ&ΡΤΙ5ΚΡΝΑΚ ΝΤνΥΕΟΕΝδΕΚΡΕΡΤΑνΥΥΟΑΑΟΚΥΥδδϋΟνΡδΑδΡΝΥνΟΟΟΤΟντνδδ
УЕОРВН23В04-9О8- 86Η09/136		ЕУ<5ЕУЕЗОООЕУ<ЗТСВ8ЕВЕ8СЕУ50КТРЗЗУЗМОи/РК<5А<5аКЕКЕРУУА15КСОУКУВ8У5ЕЕОКГТ15К РЫАКМТУУЕрШЗЕКРЕРТАУУУСА88КАУ035ВЕЕЕАВТУЕ¥\УСг(ЗОТрУТУ33000050003ЕУрЕУЕ ЗОООЕУ<ЗАООЗЕЯЕ8СТА308АГКЗУЯМО^РЯЯТР<ЗКЕРЕРУА818\УТУ<38ТГУАР8УКОЯРТМ5ЯРКА ΚΝΑΟΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΡΤΑΕΥΥΟΑΑΟΑΟδϋΚΥΝΙΚδΥΡΥνΟΟΟΤΟντνδδ
УЕОРВП23В04-9ОЗ- 87Β07/137		ЕУС}ЕУЕ5О0ОЕУ<ЗТаР5ЕЯЕ5СЕУ8СЯТР35У5МО5УРЯ<ЗА(ЗОКЕЯЕГУУА15КОС¥КУВЗУ5ЕЕСЯРТ18К ΒΝΑΚΝΤνΥΕ<2ΓΝ8ίΚΡΕΒΤΑνΥΥΟΑ88ΒΑΥ088ΚΕΚΕΑΒΤΥΕΥ%/0<3<3Τ<)ντν83000080<308Εν<31.νΕ 8Ο<30ΕνρΡ0ΟδΕΚΕ8€ΤΑ80ΡΤΡ8Τ3ΨΜΗ\ννκρΑΡΟΚΟΕΕν/νδ8ΙΡΡν0ΗΡΑΝΥΑΡ5νΚΟΚΡΤΙ3ΕΡΝΑΚ ΝΤΕΡΕΟΜΝδΕΚδΕΡΤΑνΥΥΟΑΚΡδΑΟΚΤΚΟΟΟΤΟντνδδ
УЕОРВ1123В04-9О888Α01/138		ЕУрЕУЕЗОООЕУ<5ТСР8ЕК.Е5СЕУ50КТР38У5МО\УРР<ЗА<ЗОКЕЯЕРУУА15КаОУКУВЗУ5ЕЕОКРТ15К ΒΝΑΚΝΤνΥΕρίΝδΕΚΡΕΒΤΑνΥΥΟΑδδΚΑΥΟδδΚΕΚΕΑΒΤΥΕΥΧνορΟΤρντνδδΟΟΟΟδΟΟΟδΕνρΕνΕ 3Ο0αΕνς>ΑΟ05ΕΚΕ3€ΑΑ3ΕΚ.ΤΡ3ΝΥΑΜΒ\νΡΚΡΑΡΟΚΕΚΕΡνΑΑΙΤΚ5ΟΟΟΤΥΥΑΒδνΚΟΚ.ΡΤ15ΚΒΝΑΚ ΝΤνΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΡΤΑνΥΥΟΑΑΤΚδδΤίννονΟΟΜΕΥνΟΚΟΤΟντνδδ
УЕОРВ1Г23В04-4003- 4Β08/139		ЕУрЕУЕЗОООЕУ9ТОР8ЕКЕЗСЕУ5СКТРЗЗУ5МОиТК<5А(}СКЕКЕРУУА]8КООУКУРЗУЗЕЕОКРТ15К ΡΝΑΚΝΤνΥΕρΐΝ3ΕΚΡΕΡΤΑνΥΥ€Α33ΒΑΥΟ3δΒΕΚΕΑΡΤΥΕΥΨθρθΤρντν3δ0^δ05ΟϋΟϋ8Οθίϊ05 Вв5ЙВ4МЙР^8О8$<И!НВ0ЕУ<}кУЕ8ООСЕУ<ЗРаа81.Ы.8САА8(Э8АУОВ1ТУАЖУК<ЗАРа1<3 ΒΟΕνΑΤΙΤΡ80ΥΤΥΥ\νΡΡνΚΟΚΡΤΙδΚΡΝ8ΚΝΐνΥΕΟΜΝ3ΕΚΡΕΡΤΑΑΥΥ€ΝΤΟΡΥ\νθΟΟΤθντν8δ
νΕΟΡΒΠ23Β04-40Ο5- 5ΒΟ3/140		ЕУ<ДУЕЗОООЕУрТОР8ЕЯЕЗСЕУ5СЯТР88УЗМО%ТК<ЗА(?аКЕЯЕРУУА15КООУКУР8У5ЕЕОЯРТ15К ΡΝΑΚΝΤνΥΕ<5ΙΝ5ΕΚΡΕΡΤΑνΥΥ€Α33ΚΑΥΟ88ΚΕΚΕΑΒΤΥΕΥ\νθ<}ΟΤρντν33ΟΟ0ΟδΟ0αθ3Ο0Ο03 000080СС0300008000С8000СЗЕУр1-УЕЗООСЬАС>АОР&1-КЕ8СААЗОЯЗР8НУИМ09/РЯрАРОК ΕΚΕΡνΑδΐΕΟΟΟΟδΤΤΥΑΝδνΚΡΚΡΤΙδΚΕΝΑΚΝΤνΥΕΡΜΝδίΚΡΕΡΤΑνΥΥΟΑΑΤΑΡΥΚΟΡΥΡΥΡΥν/Ο ροτρντνδδ
УЕ<ЗРВП23В04-40О8- 5Β05/141	УЕОГВП021	ЕУрЬУЕ8ОООЬУ<}ТОВ8ЬЯЬЗСЕУ5СЯТРЗЗУ5МС%ТЯ<ЗАрСКЕЯЕРУУА13КСОУКУВ8У8ЕЕСЯРТ13К РЯАККТУУЬрШЗЬКРЕРТАУУУСАЗЗЯАУОЗЗЯЕЯЪАРТУЕУ^ОрОТрУТУЗЗООООЗООООЗООООЗ 00003000080000800008000<38ЕУрЬУЕ8000ЬУрР008ЬЯЬ8СУА301ЯРМ8МА^¥ЯрАРОКНЯ ΕΕνΑΚΙδδΟΟΤΤΑΥνΡδνΚΟΕΡΤ^ΒΝ3ΚΝΤνΥΕΟΜΝ8ΕΚΑΕΒΤΑνΥΥΟΝΤΡ85ΚΡΝΡ\Α/ΟΑΟΤθντνδ5
УЕОРВИ23В04-40О5- 6002/142		ЕУ<?ЕУЕ5ССОЕУ<}ТСВ5ЕЯЕ5СЕУ5СЯТР35У5МС%ТЯрА<}СКЕЯЕРУУА13КССУКУВ5УЗЕЕСЯРТ13К ΒΝΑΚΝΤνΥΕ<5ΙΝ8ΕΚ.ΡΕΒΤΑνΥΥΟΑ53ΚΑΥ053ΡΕΡΕΑΒΤΥΕΥ%/090Τ<3ντν53000050000800008 ΟΟΟΟδΟΟΟΟδΟΟΟΟδΟΟΟΟδΟΟΟΟδΕνρΕνΕδΟΟΟΕνρΡΟΟδΕΡΕδΟΑΑδΟΝΙΕδΝΝΑΜΑν/ΥΚΟΑΡΟΚ 9ΚΕΕνΑΡΙ550ΟΟΡΤΥΥΕΒ5νΚΟΡΡΤν5ΚΒΝΑΚΝΤνΥΕρΜΝ5ΕΚΡΕΒΤΑνΥΥ0ΝΑΑΥΡΤΥΝΥν/αρ0Τρ УТУЗЗ

- 44 025148

УЕОРВИ23В04-40О5- 10Ε07/143	УЕСРВП023	ЕУ()ЕУЕ8ОООЬУ9ТОО8ЬКЬ8СЕУ8ОКТР88У8МО\¥РК.9А0ОКЕЯЕРУУА13КООУКУО8У8ЬЕОКРТ18К ΟΝΑΚΝτνγυ^ίΝδΕΚΡΕϋΤΑνγγοΑδδΚΑΥΟδδΚΓΚΕΑΟΤΥΕΥχνοίχΐτςιντνδδοαοοδοοαοδΟΟΟΟδ 000050аС05ССа0500Са5ССОС5ЕУ<}ЕУЕ50СОЕУЗАС05ЬКГ5САА5СВТР5НУАМС1УРЯОАРСК ΕΒνΕνΑΟΙ$$$ΟΙΝΤΥνΑϋΑνκθ&ΡΤΙδΚθΝΑΚΝΤνΥΕΟΜΝ$ΕΚΡΕΡΤΑνΥΥ€ΑΑδΑ4/ψΥδρΜΑΚΒΝΥ ργν/οοοτφντνδδ
УЕОРВП23В04-40О8- 12Β01/Ι44		ΕνρΕνΕδΟΟΟΕν</Γ008ΕΚΕ30Εν$ΟΚΤΡ33ΥδΜΟ\νΡΚ<3Α<30ΚΕΚΕΡννΑΙ3ΚΟΟΥΚΥΟδν8ΕΕΟΚΡΤΙ3Κ ΌΝΑΚΝΤνΥΕΟΙΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΑδδΚΑΥΟδδΚΕΚΕΑΟΤΥΕΥν/ΟφΟΤρντνδδΟΟΟΟδαΟΟΟδΟΟΟΟδ ΟΟΟΟδΟΟΟΟδΟΟΟΟδΟΟΟΟδΟΟΟΟδΕνΟΕνΕδΟΟΟΕνρΡΟΟδΕΒΕΑΟΑΑδΟΡΤΕδδδψΜΥννΚΟΑΡΟΚ ΟΕΕ\νν5Κ.Ι8ΡΟΟΕΓΤΥΥνθ5νΚΟΚΓ3ν5ΤΟΝΑΝΝΤΕΥΕς>ΜΝδΕΚΡΕϋΤΑΕΥ30ΑΚΟΟΑΡΝΥΤΡΪ<ΟΚ.αΤ(3ν ТУ38
УЕОРВП23В04-40О8- 86СИ/145		ΕνρΕνΕδΟΟΟΕν<5Τ005ΕΚΕ80ΕνδΟΚΤΡδδΥ8ΜΟ\νΡΚΡΑ90ΚΕΒΕΡννΑί5ΚΟΟΥΚΥΟδν8ΕΕΟΚΡΤΙδΚ ϋΝΑΚΝΤνΥΕρΐΝ5ΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΑ55&ΑΥΟδ3&ΕΚΕΑΟΤΥΕΥν/0ς>ΟΤρντν55ΟΟΟΟ5ΟΟΟΟ50ΟΟΟ5 ΟΟΟΟ5ΟΟΟΟ5ΟΟΟΟδΟΟΟΟ5ΟΟΟΟδΕνς>ΕνΕ5ΟΟΟΕνς>ΑΟΕ>5ΕΙ<Ε5σΓΑ3ΟΙ<ΤΡΝ5ΥΑΜ0\νΓΚ.ς>ΑΡΟΚ ΕΚΕδνΑΗΙΝΚδΟδδΤΥΥΑϋδνΚΟΚΡΤΙδΚϋΝΑΚΝΤνΥΕρΕΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΑΑΟΚΥΥδδΟΟνΡδΑδΡΝ γχνοοοτοντνδδ
УЕОРВП23В04-40О8- 86Η09/146 νΕΟΓΒ1Ι23Β04-40Ο8- 87Β07/147	УЕСРВП024	ΕνθΕνΕδΟΟΟΕνςΤΟΒδΕΒΕ8€ΕνδΟΚΤΡ8$ΥδΜΟ\νΡΒ9Α()ΟΚΕΚΕΡννΑ15ΚΟΟΥΚΥΟδνδΕΕΟΚΡΤΙδΚ ΟΝΑΚΝΤνΥΕΡΓΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥγΟΑδδΚΑΥΟδδΚΕΚΕΑΟΤΥΕΥΜΟΟΟΤρνΤνδδΟσΟΟδΟΟΟΟδΟΟΟΟδ ООООЗОСОСЗООООЗОООаЗООООЗЕУСЭЕУЕЗОООЕУОАООЗЕКЕЗСТАЗаЗАРКЗУКМОШРККТРСК ΕΟΕΡνΑ$Ι8\νΤΥΟ8ΤΡΥΑϋ5νΚΟΚ.ΡΤΜ3ΚϋΚΑΚΝΑΟΥΕ<3ΜΝ8ΕΚΡΕΒΤΑΕΥΥ0ΑΑΟΑ<33ΟΚΥΝΙΚ8ΥΟΥ АУОООТОУТУЗЗ ЕУ0ЕУЕ5СССЕУ<ЗТСП5ЕЯЕ8СЕУЗОВТР58У8МС\¥РК9А<ЗОКЕКЕРУУА15КОСУКУОЗУ8ЕЕОЯРТ15К. ϋΝΑΚΝΤνΥΕζ!ΐΝ3ΕΚ.ΡΕΟΤΑνΥΥΟΑ55Κ.ΑΥΟ55ΚΕΚ.ΕΑΒΤΥΕΥ\ν<3ζ>ΟΤ0ντν550ΟΟΟ5ΟΟΟΟ3ΟΟΟ05 СОССЗССССЗСССОЗОООСЗООСОЗЕУркУЕЗОССкУрРОСЗЕКЕЗСТАЗОРТГЗТЗУУМНХУУМ^АРОК 0ΕΕ\νν55ΙΡΡνθΗΡΑΝΥΑΡδνΚ.ΟΚΡΤΙ5ΚΟΝΑΚΝΤΕΡΕ(3ΜΝ5ΕΚ8ΕΟΤΑνΥΥ0ΑΚΟ5ΑΟΚ.ΤΚ09ΟΤ(2νΓν
УЕОРВП23В04-4ОС$- 88Α01/148 УЕОРВН4В08-9ОЗ- 23Β04/149 УЕОРВП5ВОЗ-9С5- 23Β04/150		ΕνθΕνΕ$ΟΟΟΓν<3ΤΟΕ>3ΕΚΕ80ΕνδΟΚΤΡ35ΥδΜΟ\νΡΚςΑ(}ΟΚΕΚΕΡννΑΐ5ΚΰΟΥΚΥΟδν5ΕΕΟΚΡΤΐ$Κ ΒΝΑΚΝΤνΥΕ<?ΙΝδΕΚ.ΡΕϋΤΑνΥΥ0Α$5ΚΑΥΟ35ΚΕΚ.ΕΑΟΤΥΕΥ\νας>αΤ0ντν55ΟΟΟΟ5ΟΟΟΟ500008 ΟΟΟΟδΟΟΟΟδΟΟΟΟδΟΟΟΟδΟΟΟΟδΕνρΕνΕδΟΟΟΕνρΑΟΟδΕΚΕδΟΑΑδΕΚΤΡδΝΥΑΜϋνΡ^ΑΡΟΚ ΕΚΕΡνΑΑΙΤΚδΟΟΟΤΥΥΑϋδνΚΟΚΓΤΙδΚΟΝΑΚΝΤνΥΕρΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΑΑΤΚδδΤίννονΟΟΜΕΥ ν/οκοτοντνδδ ΕνςΕνΕδΟΟΟΕν<3Ρ005ΕΚΕ50ΑΑδ08ΑνθΟΙΤνΑ\νΥΚ9ΑΡΟΐρΚ9ΕνΑτΐΤΡ80ΥΤΥΥ\νθΡνΚΟΚΡΤΪ5Κ 0Ν3Κ.ΝΐνΥΕ<3ΜΝδΕΚΡΕΟΤΑΑΥΥ€ΝΤ<3ΡΥ>νθ<3ΟΤ(3ντνδ800003ΟΟ0δΕν<3ΕνΕδ000Εν<2Τ0ΟδΕΚΕ 3ΟΕνδΟΚΤΡδδΥ8ΜΟΨΡΚ(?Α9ΟΚΕΚΕΡννΑΙ8ΚΟΟΥΚΥΟδνδΕΕΟΒΡΤΙδΚΟΝΑΚΝΤνΥΕ0ΙΝδΕΚΡΕΟΤΑ νΥΥΟΑδδΚΑΥΟδδΡΕΚΕΑϋτΥΕΥν/ΟΟΟΤΟντνδδ ΕνρΕνΕ5000ΕΑ9ΑΟΟδΕΒΕ8ϋΑΑδΟΚδΡδΗΥΝΜ05νΡΚ(3ΑΡΟΚ.ΕΒΕΡνΑ5ΙΚΟΟΟΟδΤΤΥΑΝδνΚΟΚΡΤΙ 5ΚΕΝΑΚ.ΝΤνΥΕ9ΜΝ5ΕΚΡΕΟΤΑνΥΥ0ΑΑΤΑΓΥΚΟΡΥΟΥΟΥ\νθς>ΟΤ<3ντν55ΟΟΟΟ5ΟΟΟ5Εν<3ΕνΕ5Ο ΟΟΕν9ΤΟϋ5ΕΚΕ5€Εν50ΚΤΡ5δΥ5ΜΟΨΡΚς>Α90ΚΕΚΕΡννΑΙ5ΚΟΟΥΚΥ05ν5ΕΕΟΚΡΤΙ5ΚΠΝΑΚΝΤν ΥΕΟΙΝδΕΚΡΕΏΤΑνΥΥΟΑδδΚΑΥΟδδΚΕΚΕΑΟΤΥΕΥΨΟΟΟΤΟντνδδ
УЕОРВП5В05-9С5- 23В04/151		Εν(}ΕνΕδΟΟΟΕν9Ρ003ΕΚΕ3θνΑδΟΙΚ.ΡΜδΜΑ\νΥΚ.<3ΑΡΟΚΗΚΈΕνΑΚΙ5δΟΟΤΤΑΥνθδνΚΟΚΡΤΙ8ΚΟ Ν3ΚΝΤνΥΕ0ΜΝ5ΕΚΑΕϋΤΑνΥΥ0ΝΤΡ55ΚΡΝΡΐνθΑΟΤ<3ντνδ3ΟΟΟΟ5ΟΟ05Εν0ΕνΕ3ΟΟΟΕν<5ΤΟΟ3 ΕΚΕδ0Εν5ΟΚΤΡ$5ΥδΜθνΡΚ0Α9ΟΚΕΚΕΡννΑΐ5ΚθΟΥΚΥΟ$ν5ΕΕθΚΡΤΐ5ΚθΝΑΚΝΤνΥΕ01ΝδΕΚΡΕ Ε>ΤΑνΥΥ0Α55ΚΑΥ055Κ.ΕΚΕΑΠΤΥΕΥ\ν000Τρντν53
УЕОРВΙΙ6Ο02-9Ο323В04/152		ΕνρΕνΕδΟΟΟΕνρΡΟΟδΕΚΕδΟΑΑδΟΝΙΡδΝΝΑΜΑ^Υ^ΑΡΟΚ^ΚΕΕνΑΚΙδδΟΟΟΡΤΥΥΕϋδνΚΟΚΡΤν 8Κ.ΟΝΑΚΝΤνΥΕ<5ΜΝ8ΕΚΡΕΟΤΑνΥΥ0ΝΑΑΥΚ.ΤΥΝΥ\νθ<2ΟΤ(}ντν3δΟΟΟ0δΟΟΟ8ΕνρΕνΕ80ΟΟΕν <)ΤΟΟ3ΕΚΕ50Εν8ΟΒΤΡδ5Υ3ΜΟ\νΡΚ0Ας>ΟΚΕΚΕΡννΑ15Κ0ΟΥΚΥΟδν8ΕΕΟΚΡΤΓ5ΚηΝΑΚΝΤνΥΕ<3ΙΝ 8ΕΚΡΕΟΤΑνΥΥ0Α55ΚΑΥΟ55ΚΕΚΕΑΒΤΥΕΥΨ0ς)ΟΤ0νΤν55
УЕОРВИ10Е07-9ОЗ- 23В04/153		Εν9ΕνΕδΟ0ΟΕν9ΑθαδΕΚΕ80ΑΑδΟΚΤΡδΝΥΑΜΟΨΡΚ9ΑΡΟΚΕΚνΕνΑΟ155δΟΙΝΤΥνΑΟΑνΚΟΚΡΤ1 3Κ0ΝΑΚΝΤνΥΕ(}ΜΝδΕΚΡΕ0ΤΑνΥΥ0ΑΑδΑ\ν\νΥ3(3ΜΑΚηΝΥΚΥ\ν0ρ0Τ9ντν330α00δ0α0δΕνρΕ νΕδΟαΟΕνρΤΟϋδΕΚΕδΟΕνδΟΚΤΡδδΥδΜΟν/ΡΪ^ΑρΟΚΕΚΕΡννΑΙδΚΟΟΥΚΥΟδνδΕΕαΚΡΤΙδΚηΝΑ ΚΝΤνΥΕΟΙΝδΕΚΡΕϋΤΑνΥΥΟΑδδΚΑΥΟδδΡΕΡΕΑΟΤΥΕΥν/ΟΟΟΤΟντνδδ
УЕОРВП12В01-9ОЗ- 23В04/154		Εν0ΕνΕ5Ο0ΟΕνρΡΟΟ5ΕΚ.ΕΑ0ΑΑ3ΟΡΤΕ555νΜΥ\ννΕς>ΑΡΟΚ0ΕΕλννδΚΙ3ΡΟΟΕΡΤΥΥνθ5νΚΟΙ<Ρ5 νδΤϋΝΑΝΝΤΕΥΕςίΜΝδΕΚΡΕΒΤΑΕΥδΟΑΚΟΟΑΡΝΥΤΡΒΟΚΟΤρντνδδΟΟΟΟδΟΟΟδΕνί^ΕνΕδΟΟΟΕν (3ΤΟΟ5ΕΚ.Ε5€Εν3ΟΚΤΡδ3Υ3ΜΟ№ΓΙ«3Α(5ΟΚΕί<ΕΡννΑΙ3ΚΟΟΥΚΥϋ8ν8ΕΕΟΙ<ΡΤΊ3ΚΒΝΑΚΝΤνΥΕ(5ΓΝ δΕΚΡΕϋΤΑνΥΥΟΑδδΚΑΥΟδδΚΕΕΕΑΟΤΥΕΥνΟΟΟΤΟνΓνδδ
УЕОРВ1186С11-90523В04/155		ΕνςΕνΕδΟΟΟΕνρΑΟΟδΕΚΕδΟΤΑδΟΚΤΡΝδΥΑΜΟλνΡΚςΑΡΟΚΕΚΕδνΑΗΓΝΚδΟδδΤΥΥΑϋδνΚΟΚΓΤΙ δΚϋΝΑΚΝΤνΥΕΡΕΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΑΑΟΚΥΥδδϋΟνΡδΑδΡΝΥννορΟΓςντνδδΟΟΟΟδΟΟΟδΕνρΕ νΕδΟΟΟΕν9ΤΟΟ3ΕΚ.Ε30Εν3ΟΚΤΡ53Υ3Μα\νΡΚ<3Α<3ΟΚΕΚΕΡννΑΙ3Κ0ΟΥΚΥΟ3νδΕΕΟΚΓΤΙ3ΚΌΝΑ ΚΝΤνΥΕΟΙΝδΕΚΡΕϋΤΑνΥΥΟΑδδΚΑΥΟδδΒΕΒΕΑΟΤΥΕΥνΟΟΟΤΟντνδδ
УЕОРВ1186Н09-9О5- 23В04/156		Ενς>ΕνΕ5000Εν(3Α005ΕΚΕ50ΤΑ505ΑΡΚ5ΥΚΜΟ\νΓΚΚΤΡΟΚΕΒΕΡνΑ5Ι8\νΤΥ05ΤΡΥΑ05νΚΟΚΡΤΜ δΚΟΚΑΚΝΑΟΥΕρΜΝδΕΚΡΕϋΤΑΕΥΥΟΑΑΟΑρδΟΡΥΝΙΚδΥΟΥν/ΟρΟΤρντνδδΟΟΟΟδΟΟΟδΕνρΕνΕ 3Ο0ΟΕν9Τ0Ο3ΕΚΕ30Εν3ΟΚΤΡ33Υ3Μ0ν/ΡΡς>Α9ΟΚΈΚΕΡννΑΙ3ΚΟΟΥΚΥΟδν5ΕΕΟΚΡΤΙ5ΚΊ)ΝΑΚΝ ΤνΥΕ0ΙΝδΕΚΡΕΒΤΑνΥΥΟΑ85ΡΑΥΟδ5ΡΕΚΕΑΟΤΥΕΥ\νθ0ΟΤ0ντν5δ
УЕОРВ1Г87В07-9О5- 23В04/157		ΕνρΕνΕδΟαΟΕνρΡΟαδΕΚΕδΟΤΑδΟΡΤΡδΤδν/ΜΗν/νκςΑΡΟΚΟΕΕν/νδδΙΡΡνΟΗΡΑΝΥΑΡδνΚΟΚΡΤΙ 3Κ0ΝΑΚΝΤΕΡΕ<2ΜΝ3ΕΚ3ΕΟΤΑνΥΥ0ΑΚΒδΑΟΚ.ΤΚΟ<5ΟΤ<}ντνδ30ΟΟΟ3ΟΟΟ3Εν(2ΕνΕ30ΟΟΕνΐ3Τ ΟΟ8ΕΚΕ30Εν3ΟΡ.ΤΡδδΥ5Μ0\νΡΚΧ3Α(}ΟΚΕΚΕΡννΑϊ3ΚΟΟΥΚΥΟ3ν3ΕΕ0Κ.ΡΤΙ3ΚΟΝΑΚΝΤνΥΕ<2ΙΝ3Ε ΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΑδδΚΑΥΟδδ^ΕΚΕΑΟΤΥΕΥίνΟΟΟΤΟντνδδ

- 45 025148

УЕОРВ1188А01-9О523Β04/158

УЕСРВ114В08-40С523Β04/159

УЕСРВН5В03-40С523Β04/160

УЕСРВП5В05-400823Β04/161

УЕОРВП6О02-40ОЗ23Β04/162

УЕОРВ1П0Е07-40О823Β04/163

УЕОРВН025

УЕОРВН12В01-40ОЗ23Β04/164

УЕСРВП86С11-400323Β04/165

УЕОРВ1186Н09-40ОЗ23ΒΟ4/166

УЕОРВИ87В07-40ОЗ23Β04/Ι67

УЕСРВИ88А01-40СЗ23Β04/168

ЕУ<ЗЕУЕ5СООЕУОАОС5ЕК.Е5САА5ЕКТР5КУАМР\УРКЦАРОКЕКЕРУАА[ТК.5СООТУ¥АР5УКОК.РТ1 5ΚϋΝΑΚΝΤνΥΕ9ΜΝδΕΚΡΕ0ΤΑνΥΥ€ΑΑΤΚ35Τΐνν0ν0αΜΕΥ\Υ0ΚαΤ<3ντν55α<30050σ05ΕνρΕν Е5СССЬУрТСО5ЕКЬ5СЕУ5ОКТР55У8МСи'РЮЗА(?ОКЕ1<ЕРУУА15КОСУКУО5У5ЬЕСК.Г'П5К1ЖАК ΝΤνΥΕΟΙΝδΕΚΡΕΡΤΑνΥΥΟΑδδΒΑΥΟδδΚΕΚΕΑΡΤΥΕΥ^ΟΟΟΤΟντνδδ_

ЕУРЕУЕ5СОСЕУ(ЗРОС8ЕКЕ8САА6С$АУСР[ТУА5УУЯ9АРС1<3&РЕУАТ1ТР$С¥ТУУ%ГРРУКСКЕТ1$К

ΡΝδΚΝΐνΥΕ<3ΜΝδΕΚΡΕΡΤΑΑΥΥ€ΝΤ<5ΡΥΨΟ0<3Τ<3ντνδδ0ΟΟΟδ000ΟδΟ<3θαδθσθ<35ΟΟΟΟ5Οθσ

ΟδΟΟΟΟδΟσΟΟδΕνρΕνΕδΟΟΟΕνΟΤΟΡδΕΚΕδΟΕνδΟΚΤΡδδΥδΜαψΡΒ^ΑΟΟΚΕΒΕΡννΑΙδΚΟΟΥΚ

ΥΡ8νδΕΕ<3ΚΡΤΙδΚΡΝΑΚ.ΝΤνΥΕζ>ΙΝ8ΕΚΡΕΡΤΑνΥΥ€Αδ8ΚΑΥΟδ5ΚΕΚΕΑΡΤΥΕΥ^¥Ο<ΧιΤ<3ντν85

ΕνςΕνΕ5ΟΟΟΕΑ0ΑΟΡ8ΕΚΕ5€ΑΑ8ΟΒ8ΡδΗΥΝΜΟ\νΓΚ9ΑΡ<3ΚΕΒΕΡνΑ8ΙΒΟ<3αθ5ΤΤΥΑΝ5νΚΡΒΡΤΙ 3ΚΕΝΑΚΝΤνΥΕ<)ΜΝ5ΕΚΡΕΡΤΑνΥΥ€ΑΑΤΑΡΥΚΟΡΥΡΥΡΥνθ(50Τ<3ντν38Ο<3<305ΟΟΟΟ3ΟΟΟ<33α аОС5ОССО8ОООС5аССС5СООО5ЕУ<}ЕУЕЗОССЕУ1ЭТОР8ЕКЕЗСЕУЗОКТГ55У5МОАУРК9А<ЗОКЕК ΕΓννΑΙ8Κ0ΟΥΚΥΡ3ν3ΕΕΟΚΡΤ13ΚΡΝΑΚ.ΝΤνΥΕρΐΝ3ΕΚΡΕΡΤΑνΥΥ€Α38ΚΑΥΟ33Κ1ΚΕΑΡΤΥΕΥ\ν ОООТОУТУЗЗ_

ЕУ0ЕУЕ5ОООЕУ0РООЗЕКЕЗСУА8О1КРМЗМА\УУК0АРОКНКЕЕУАК133ООТТА¥УР5УКОКГТ15КР Ν5ΚΝΤνΥΕρΜΝ3ΕΚΑΕΡΤΑνΥΥ€ΝΤΡ5δΚΡΝΡ%ΌΑΟΤθντν5δ0000500005000050000500005 СС003000050000$ЕУ<5ЕУЕ5000ЕУ9ТОРЗЕКЕЗСЕУЗОКТР85УЗМ01УРКОАрОКЕКЕРУУА13КС ΟΥΚΥΡδνδΕΕΟΚ.ΡΤΙδΚΡΝΑΚΝΤνΥΕρίΝδΕΚΡΕΡΤΑνΥΥϋΑδδΒΑΥΟδδΚΕΡΧΑΡΤΥΕΥ^αρΟΤρντνδ _δ_

Εν<3ΕνΕδΟ0Ο1_νς>ΡΌΟδΕΡΕ50ΑΑδΟΝ1ΡδΝΝΑΜΑν/ΥΒρΑΡ0Ι«2ΚΕΕνΑΚΐ$δΟ<30ΡΤΥΥΕΟ$νΚ0Κ.ΡΤν δΚΡΝΑΚΝΤνΥΕ<3ΜΝδΕΚΡΕΡΤΑνΥΥ€ΝΑΑΥΚΤΥΝΥ5νθζι0Τς>ντν$$Ο0005ΟΟΟΟδ0<3<30$00σ0$ΰ οοοδσσοο5θθθθδ<3ααοδΕν9ΕνΕδθοσΕνοτ<3ΡδΕΚΕ3€Ενδθκ.ΤΓδδΥδΜσλνρκ<5Α<5θΚΕΚΕΡννΑ ΙδΚΟΟΥΚΥΡδνδΕΕΟΚ.ΡΤΙδΚΡΝΑΚΝΤνΥΕΟΙΝδΕΚΡΕΡΤΑνΥΥ€Α5δΚΑΥΟδδΚΕΚΕΑΡΤΥΕΥ1ΥΟ<}ΟΤρ УТУ83_

ΕνΟΕνΕδΟΟΟΕνρΑσΟδΕΚΕδΟΑΑδαΚΤΡδΝΥΑΜΟΨΡΗΟΑΡΟΚΕΚνΕνΑΡΙδδδσίΝΤΥνΑΡΑνΚΟΚΓΤΙ δΚΡΝΑΚΝΤνΥΕρΜΝδΕΚΡΕΡΤΑνΥΥΟΑΑδΑν^ΥδΟΜΑΚΡΝΥΚ,ΥνορΟΤρντνδδΟΟΟΟδΟΟΟΟδΟΟ |0050а<ЗОЗООООЗООСОЗСааОЗ<ЗООаЗЕУ<ЗЕУЕЗООаЕУ<5ТСРЗЕКЕЗСЕУЗОНТРЗЗУЗМСПУРВ<ЗА<3 ΟΚΕΚΕΡννΑΙδΚΟΟΥΚΥΡδνδΕΕσΕΡΤΙδΚΡΝΑΚΝΤνΥΕρίΝδΕΚΡΕΡΤΑνΥΥΟΑδδΚΑΥΟδδΚΕΒΕΑΡΤΥ ЕУ\УОО&Т<ЗУТУ88_

ЕУрЕУЕ8ССОЕУрРССЗЕКЕАСАА8СРТЕЗЗЗ\УМУ1УУК<ЗАРСКОЕЕ1УУ31иЗРССЕРТУУУРЗУКСРР5 ν3ΤΡΝΑΝΝΤΕΥΕ(}ΜΝ3ΕΚΡΕΒΤΑΕΥ3€ΑΚΟΟΑΡΝΥΤΡΚ.ΟΚΌΤ9ντν55000030000δ0000300003

ССОСЗССССЗССОСЗССССЗЕУОЕУЕЗССОЕУрТСРЗЕКЕЗСЕУЗСКТРЗЗУЗМСи/РКЗАОСКЕКЕГУУ

ΑΙδΚΟΟΥΚΥΡδνδΕΕΟΚΡΤΙδΚΡΝΑΚΝΤνΥΕρίΝδΕΚΡΕΡΤΑνΥΥϋΑδδΚΑΥσδδΚΕΕΕΑΡΤΥΕΥ^ΟρΟΤ οντνδδ

ЕУ(}ЕУЕ5еООЕУ<}АОРЗЕКЕЗСТАЗакТРКЗУАМО\УРК9АРОКЕКЕЗУАН1МК5ОЗЗТУУАРЗУКОКРТ1 8ΚΡΝΑΚΝΤνΥΕ0ΕΝ3ΕΚΡΕΡΤΑνΥΥ0ΑΑΟΚΥΥ3δΡθνΡ3Α3ΡΝΥ\νθ<?αΤ9ντνδδΟΟΟΟ3ΟΟΟΟδσθΟ ОЗССССЗСССС5СССС8ССССЗССССЗЕУ<5ЕУЕЗССОЕУ<ЗТСР5ЕКЕЗСЕУЗСКТР83¥8МС%ТКРА<ЗС ΚΕ&ΕΡννΑΙδΚΟΟΥΚΎΡδνδΕΕΟΚΓΤΙδΚΡΝΑΚΝΤνΥΕςίΝδΕΚΡΕΡΤΑνΥΥΟΑδδΚΑΥΟδδΚΕΗΕΑΡΤΥΕ γτνοοοτοντνδδ___

Εν(}ΕνΕ3Ο0αΕν<3Α0<ι5ΕΚ.ΕδΟΤΑδΟ3ΑΡΚ5ΥΚΜΟϊνΡΚΚΤΡΟΚΕΟΕΡνΑ8ΙδνΤΥΟ3ΤΡΥΑΡ3νΚΟΚΡΤΜ δΚΡΚΑΚΝΑΟΥΕρΜΝδΕΚΡΕΡΤΑΕΥΥσΑΑΟΑρδΡΚΥΝΙ&δΥΡΥΨΟΟατςίντνδδαΟΟΟδΟΟΟΟδΟΟΟΟδ ΟΟθαδ00003σθ003000030000δΕν<5ΕνΕ30θσΕν<3ΤΟΡ3ΕΚΕ30Εν30ΒΤΡ3δΥ3ΜθννΡ&<5Α<30ΚΈ ΚΕΡννΑ13ΚΟΟΥΚΥΡ3νδΕΕΟΚ.ΡΤΙδΚΡΝΑΚΝΤνΥΕ<3ΙΝ3ΕΚΡΕΡτΑνΥΥ€Α38ΚΑΥΟ55ΙΙΕΚΕΑΡΤΥΕΥ УУОООТОУТУЗЗ___

Ενς>ΕνΕ3ΟΟΟΕνρΡΟΟ3ΕΚΕ3(:ΤΑ5ΟΡΤΡ5Τ5)νΜΗν/νΐ«2ΑΡΟΚαΕΕνν38ΙΡΡνθΗΡΑΝΥΑΡ3νΚΟΚΡΤΙ 3ΚΡΝΑΚΝΤΕΡΕ<}ΜΝ3ΕΚ3ΕΡΤΑνΥΥ€ΑΚη3ΑΟΚΤΚ.Ο<30Τ<5ντνδ300003θαθ030000300003000 ОЗОСООЗСООСЗООСОЗЕУ()ЕУЕ8СООЕУ<5Т<ЗР8ЕКЕЗСЕУЗ<ЖТР38УЗМО\УГК9А(ЗСКБКЕРУУА13К 0ΟΥΚΥΡ3ν3ΕΕΟΒΡΤΙδΚΡΝΑΚΝΤνΥΕ<3ΙΝ8ΕΚΡΕΡΤΑνΥΥ€Α35ΚΑΥΟ55ΚΕΚΕΑΡΤΥΕΥν/Ο<χ;Τ<5νΤν δ$_

ΕνΟΕνΕδΟΟαΕνρΑΟΟδΕΚΕδΟΑΑδΕΚΤΡδΝΥΑΜΡΨΡΚΟΑΡΟΚΕΚΕΡνΑΑΙΤΚδΟΟΟΤΥΥΑΡδνκαΚΡΤΙ

3ΚΡΝΑΚΝτνΥΕ()ΜΝ8ΕΚΡΕΡΤΑνγγ€ΑΑτκ.3δτιννονααΜΕΥΑ¥ακοτρντν35<3οαο3αοαα3οααο

800008000С800С05ССС080С005БУС)ЕУЕ8000ЕУ<ЗТСРЗЕКЕ8СЕУ80КТГ88¥8МС%ТК<ЗАрСК

ΕΚΕΡννΑΙδΚ0αΥΚΥΡ3ν3ΕΕ0ΚΡΤΙδΚΡΝΑΚΝΤνΥΕ<31ΝδΕΚΡΕΡΤΑνΥΥϋΑδ3ΚΑΥ0δδΚΕΚΕΑΡΤΥΕΥ νοοοτοντνδδ

Панель из 40 двухвалентных УНН тестировали в отношении способности блокировать УЕСРК2 и

УЕСРК1 с помощью А1рЬа8сгееп-анализа, описанного в примерах 5.3 и 5.4 соответственно. На основе эффективности и максимального уровня ингибирования выбирали пять самых перспективных двухвалентных УНН (УЕСРВ11021, УЕСРВ11022, УЕСРВ1023, УЕСРВ1024 и УЕСРВ11025) для дополнительной характеризации. Обзор результатов скрининга пяти отобранных двухвалентных УНН, проведенного с помощью конкурентного А1рЬа8сгееп-анализа в отношении УЕСРК2 и УЕСРК1, представлен в табл. 16.

Таблица 16

Сила и эффективность пяти отобранных двухвалентных УНН в отношении взаимодействия: УЕСР/УЕСРК1 и УЕСР/УЕСРК2, установленные с помощью конкурентного А1рЬа8сгееп-анализа

УНН ю	УЕСРК2	УЕОРКЛ
	1С₅₀ (пМ)	1С₅₀ (пМ)	% ингибирования
УЕОРВП021	9	16	100
УЕСРВН022	7	8	100
уеорвпо23	38	44	91
УЕОРВП024	12	46	100
ΥΕΟΡΒΠ025	51	39	82

Пример 7.

Характеризация форматированных анти-УЕСР УНН.

УНН УЕСРВ11010, УЕСРВ11021, УЕСРВ11022, УЕСРВ11023, УЕСРВ11024 и УЕСРВ11025 сравнивали в параллельных опытах в отношении блокирования УЕСРК2 и УЕСРК1 с помощью ЕЫ8А (фиг. 8 и 9, табл. 17 и 18 соответственно) и А1рЬа8сгееп-анализа (фиг. 10 и 11, табл. 19 и 20) согласно методам, описанным в примерах 5.1, 5.2, 5.3 и 5.4 соответственно.

- 46 025148

Таблица 17

Значения 1С₅₀ (пМ) и % ингибирования для форматированных УНН, установленные с помощью конкурентного ЕЫЗА, характеризующие способность ингибировать взаимодействие: НУЕОР165/НУЕОРК2-Рс

УНН го	1С₅0 (пМ)	% ингибирования
УЕОРВНОЮ	49	100
УЕОРВН021	204	100
УЕОРВП022	164	100
УЕОРВП023	213	100
УЕОРВИ024	292	100
УЕОРВП025	577	100
бевацизумаб	315	100
ранибизумаб	349	100

Таблица 18

Значения 1С₅₀ (пМ) и % ингибирования для форматированных УНН, установленные с помощью конкурентного ЕЫЗА, характеризующие способность ингибировать взаимодействие НУЕОР165/НУЕОРК1-Рс

Значения 1С₅₀ (пМ) и % ингибирования для форматированных УНН, установленные с помощью конкурентного А1рНа3сгееп-анализа, характеризующие способность ингибировать взаимодействие: ЬУЕОР165/ЬУЕОРК2 -Р с

УНН го	1С₅о (пМ)	% ингибирования
УЕОРВНОЮ	16	100
УЕОРВП021	7	100
УЕОРВП022	7	100
УЕОРВП023	46	100
УЕОРВН024	50	100
УЕСРВП025	51	100
ранибизумаб	600	100

- 47 025148

Таблица 20

Значения 1С₅₀ (пМ) и % ингибирования для форматированных УНН, установленные с помощью конкурентного А1рЬаЗсгееп-анализа, характеризующие способность ингибировать взаимодействие: ЬУЕОР 165/ЬУЕОРР1-Рс

УНН го	1С50 (пМ)	% ингибирования
УЕОРВПОЮ	21	70
УЕОРВ1Ю21	12	100
УЕОРВИ022	9	98
УЕОРВП023	48	87
УЕОРВН024	69	98
УЕОРВН025	71	82
ранибизумаб	1300	87

Кроме того, оценивали способность форматированных УНН блокировать взаимодействие тУЕОЕ164/тУЕОЕР2-1шЕс. В целом, метод состоял в следующем; серийные разведения очищенных УНН (диапазон концентраций: 4 мкМ-14,5пМ) в ЗФР-буфере, содержащем 0,03% Твин 20 (фирма З1дта), добавляли к 0,1нМ биотинилированному тУЕОР164 и инкубировали в течение 15 мин. Затем добавляли комплекс мышиный УЕОРР2-ЬиРс (0,1 нМ) и сенсибилизированные анти-ЬиРс УНН акцепторные гранулы (20 мкг/мл) и указанную смесь инкубировали в течение 1 ч. И, наконец, добавляли покрытые стрептавидином донорские гранулы (20 мкг/мл) и после инкубации в течение 1 ч оценивали флуоресценцию с помощью ридера для микропланшетов типа Епу18юп. Кривые дозовой зависимости представлены на фиг. 12. Данные о значениях 1С₅₀, характеризующие способность УНН блокировать взаимодействие мышиный УЕОР164/УЕОРР2-ЬиРС, обобщены в табл. 21.

Таблица 21

Значения 1С₅₀ (пМ) и % ингибирования для форматированных анти-УЕОР УНН, установленные с помощью конкурентного А1рЬаЗсгееп-анализа, характеризующие способность ингибировать взаимодействие тУЕОР 164/тУЕОРР2 -ЬРс

УНН ГО	1С₅0 (пМ)	% ингибирования
УЕОРВП022	108	100
УЕСРВП024	-	-
тУЕСР 164	0,05	100
ранибизумаб	-	-

Оценивали также с помощью ЕЫЗА способность форматированных УНН связываться с тУЕОР164 и гЬУЕОР165 (пример 5.6; фиг. 13; табл. 22), УЕОР121 (пример 5.7; фиг. 15; табл. 23) и с представителями семейства УЕОР УЕОРВ, УЕОРС, УЕОЕЭ и РЬОР (пример 5.8; фиг. 14). Кинетические характеристики связывания с человеческим УЕОР165 анализировали согласно методу, изложенному в примере 5.5. Величины К_с представлены в табл. 24.

Таблица 22

Значения ЕС50 (пМ) для форматированных УНН, характеризующие связывание с рекомбинантным человеческим УЕОР165 и мышиным УЕОР164, установленные с помощью ЕЫЗА

	гЬУЕОР165	гтУЕСР164
УНН го	ЕС₅₀ (пМ)	ЕС₅о (пМ)
УЕОРВПОЮ	428	-
УЕОРВН021	334	502
УЕОРВП022	224	464
УЕОРВН023	221	•
УЕОГВП024	320	-
УЕОРВП025	668	-

- 48 025148

Таблица 23

Значения ЕС50 (пМ) для форматированных УНН, характеризующие связывание с рекомбинантным человеческим УЕОР121, установленные с помощью ЕЫ8А

	гЬУЕ0Р121
УНН Ιϋ	ЕС₅о (пМ)
УЕОРВПОЮ	920
УЕОРВ11022	540
УЕОРВП024	325
УЕОРВ11025	475

Таблица 24

Аффинность К (нМ) очищенных форматированных УНН к рекомбинантному человеческому УЕОР165

УНН го	к., (1/Мс)	к_а, (1/с)	кя2 (1/с)	каг(1/с)	Кц (нМ)^,а>
УЕОРВПОЮ ¹⁶⁾	4,5Е+05	1,7Е-02	2.9Е-02	1,ЗЕ-04	0,16
УЕОРВН021⁶	],2Е+06	],1Е-02	2.3Е-02	1,9Е-04	0,07
УЕОРВП022^<6>	1.2Е4-06	9,1Е-03	Ι.4Ε-02	2.6Е-04	0,14
УЕСРВП023^<6)	3.0Е4-05	1.8Е-02	2.4Е-02	2.7Е-04	0,69
УЕСРВ] 1024<^6>	3.0Е+05	1.3Е-02	2,бЕ-02	2,8Е-04	0,47
УЕСРВ1Ю25<⁶>	3,ЗЕ+05	],7Е-02	],8Е-02	3,7Е-04	1,1

^(а> Кр= ксл/ка| (к<12 (ка2⁺ка2)) (б) Аппроксимацию кривых осуществляли на основе модели реакции с двумя состояниями с использованием программного обеспечения В1асоге Т100 ЕуаИаНоп у2.0.1.

УНН УЕОРВ11010, УЕОРВ11022, УЕОРВ11024 и УЕОРВ11025 оценивали также в отношении опосредуемой УЕОР пролиферации клеток НИУЕС и фосфорилирования Егк.

Эффективность отобранных форматированных УНН оценивали с помощью анализа пролиферации. В целом, метод состоял в следующем: первичные клетки НИУЕС (фирма ТесЬпос1опе) выращивали в минимальной среде в течение ночи и затем по 4000 клеток/лунку высевали в четырех повторностях в 96-луночные планшеты для культуры ткани. Клетки стимулировали с использованием 33 нг/мл УЕОР в отсутствии или в присутствии УНН. Уровни пролиферации измеряли по включению [³Н]-тимидина в день 4. Результаты, представленные в табл. 25, продемонстрировали, что форматированные УНН и бевацизумаб ингибировали индуцируемую УЕОР пролиферацию НИУЕС более чем на 90%, при этом значения 1С₅₀ составляли <1нМ.

Таблица 25

Значения 1С₅₀ (нМ) и % ингибирования для форматированных УНН, установленные с помощью анализа индуцируемой УЕОР пролиферации клеток НИУЕС

УНН го	1С50 (нМ)	% ингибирования
УЕОРВПОЮ	0,22	95
УЕСРВП021	0,40	98
УЕСРВП022	0,34	100
УЕОРВП023	0,52	98
УЕОРВП024	0,38	96
УЕОРВП025	0,41	104
бевацизумаб	0,21	92

Эффективность отобранных форматированных УНН оценивали также с помощью анализа фосфорилирования Егк в клетках НИУЕС. В целом, метод состоял в следующем: первичные НИУЕС-клетки выращивали в минимальной среде в течение ночи, затем стимулировали с помощью 10 нг/мл УЕОР в течение 5 мин в отсутствии или в присутствии УНН. Клетки фиксировали 4% формальдегида в ЗФР и уровни фосфорилирования ЕКК оценивали с помощью ЕЬ18А, используя специфические для фосфоЕКК антитела (антитело к фосфоМАР-киназе рЕКК1&2, М8159, фирма 81дта) и поликлональное кроличье антитело к мышиному иммуноглобулину, конъюгированное с НКР (Р0161, фирма Иако). Как видно из табл. 26, форматированные УНН и бевацизумаб ингибировали индуцируемое УЕОР фосфорилирование Егк более чем на 90%, что характеризовалось значениями 1С₅₀<1нМ.

- 49 025148

Таблица 26

Значения Ю₅₀ (нМ) и % ингибирования для форматированных УНН, установленные при анализе индуцируемого УЕОР фосфорилирования Егк в клетках НИУЕС

УНН го	1С50 (нМ)	% ингибирования
УЕОРВНОЮ	0,19	92
УЕСГВП021	0,21	ЮЗ
УЕОРВН022	0,18	94
УЕОРВН023	0,25	100
УЕОРВП024	0,23	94
УЕОРВП025	0,23	99
бевацизумаб	0,63	98

Пример 8.

Оптимизация последовательностей.

8.1. Оптимизация последовательности УЕОРВН23В04.

Осуществляли сравнительный анализ аминокислотных последовательностей УЕОРВП23В04 и последовательности человеческой зародышевой линии УН3-23/Ш5, см. фиг. 16 (8ЕЦ ГО N0: 179).

Сравнительный анализ продемонстрировал, что УЕОРВП23В04 содержит 19 мутаций в каркасных участках относительно референс-последовательности зародышевой линии. Нечеловеческие остатки в положениях 14, 16, 23, 24, 41, 71, 82, 83 и 108 отбирали для замены на их копии из человеческой зародышевой линии. Создавали набор, включающий 8 вариантов УЕОРВП23В04, несущих различные комбинации человеческих остатков в этих положениях (АК-последовательности представлены в табл. 27). Конструировали один дополнительный вариант, в котором удаляли потенциальный сайт изомеризации в положении Ό59860 (СИК2-участок, см. фиг. 16, остатки обозначены выделенным жирным шрифтом курсивом) путем интродукции мутации §60А.

Таблица 27

АК-последовательность вариантов УНН УЕОРВП23В04 с оптимизированной последовательностью (РК, ка зкасный участок; СОК, гипервариабельный участок)

ΙΟ УНН/ ЗЕО ГО ΝΟ;	РЯ1	ΟϋΚΙ	РЯ2	СОК2	РЯЗ	сокз	РЯ4
УЕОРВП 11Ю05/47	ЕУОЬУЕЗОООЬ УОТООЗЬЯЬЗС ЕАЗОЯТР8	3Υ8ΜΟ	АУРЯОАРОКЕЯБГУ V	Α15ΚΟΟΥΚ УЭЗУЗЬЕО	ΚΡΤΙδΚϋΝΑΚΝΤνΥΕΟΙΝδ ЬЯРЕОТАУУУСАЗ	ЗЯАУОЗЗЯ ЬЯЬАОТУЕ Υ	ХУСООТЬУТУЗ 5
УЕОРВП 111006/48	ЕУОЬУЕЗОООЬ У0РСО8ЬЯЬ8С АА8СЯТРЗ	3Υ8ΜΟ	\УРЕрАРСКЕКЕРУ V	Α15ΚΟΟΥΚ уозузьес	ΚΡΤΙδΚϋΝΑΚΝΤνΥΕΟΜΝ ЗЬЯРЕОТАУУУСАЗ	ЗЯАУОЗЗЯ ЬЯЬАОТУЕ Υ	1УС0СТЬУТУЗ 5
УЕОРВП 112011/49	ЕУОЬУЕЗОООЬ УОРСС5ЬЯЬ5С ЕА5ОЯТГЗ	5Υ5ΜΟ	\νΡΚς>ΑΡΟΚΕΚΕΡν V	Α15ΚΟΟΥΚ УОЗУЗЬЕО	ΚΡΤΙδΚϋΝΑΚΝΤνΥΕΟΙΝδ ЬЯРЕОТАУУУСАЗ	ЗЯАУОЗЗЯ ЬЯЬАОТУЕ У	Ч/ОООТЬУТУЗ 5
УЕОРВП 113А08/50	ЕУОЬУЕЗОООЬ УОТООЗЬЯЬЗС ЕУ5СЯТР5	8Υ8ΜΟ	\УРЯрАРОКЕЯЕРУ V	Α18ΚΟΟΥΚ УЭЗУЗЬЕС	ΚΡΤΙδΚΟΝΑΚΝΤνΥΕ0ΙΝ3 ЬЯРЕОТАУУУСАЗ	ЗЯАУОЗЗЯ ЬЯЬАОТУЕ Υ	УУСООТЬУТУЗ 5
УЕОРВП 113Е03/51	ЕУОЬУЕЗССОЬ УОТООЗЬЯЬЗС ЕУ5СКТР5	8Υ5ΜΟ	УУРКОАООКЕКЕРУ V	ΑΙ8ΚΟΟΥΚ УОЗУЗЬЕО	ΡΡΤΙδΚϋΝΑΚΝΤνΥΕΟΜΝ ЗЬЯРЕОТАУУУСАЗ	ЗЯАУОЗЗЯ ЬЯЬАОТУЕ Υ	ХУСООТЬУТУЗ 5
УЕОРВП 114С09/52	ЕУОЬУЕЗОООЬ уОроозьяьзс ЕУЗОЯТРЗ	5Υ5ΜΟ	ХУГЯОАРОКЕКЕГУ V	Α15ΚΟΟΥΚ УОЗУЗЬЕО	ΡΓΤΙδΚϋΝΑΚΝΤνΥΙ,ΟΙΝδ ЬЯРЕОТАУУУСАЗ	ЗЯАУОЗЗЯ ЬЯЬАОТУЕ У	ЖЗОСТЬУТУЗ 5
УЕОРВП 114002/53	еуоьуезосоь УОТОСЗЬЯЬЗС ЕУ8ОЯТР8	8Υ5ΜΟ	иТКОАРСКЕЯЕГУ V	ΑΙ3ΚΟΟΥΚ УОЗУЗЬЕО	ΚΡΓΙδΚϋΝΑΚΝΤνΥΕΟΙΝδ ЬЯРЕОТАУУУСАЗ	δΚΑΥΟδδΚ ЬЯЬАОТУЕ Υ	АУОООТЬУТУЗ 5
УЕОРВП 114003/54	ЕУОЬУЕЗОСаЬ УОТООЗЬЯЬЗС АУЗОЯТРЗ	8Υ3ΜΟ	\νρκς)ΑςακΕΕΕΡν ν	ΑΙ8ΚΟΟΥΚ УОЗУЗЬЕО	ΚΓΤΙ5ΚϋΝΑΚΝΤνΥΕ0ΙΝ3 ЬЯРЕОТАУУУСАЗ	ЗЯАУОЗЗЯ ЬЯЬАОТУЕ Υ	ХУСООТЬУТУЗ 5
УЕОРВП 118Е10/55	еуоьуезоооь уотоозьяь8С ЕУ8СКТР$	δΥδΜΟ	иТКОАООКЕКЕРУ V	ΑΙ3ΚΟΟΥΚ УОАУЗЬЕО	ΚΡΤΙδΚΟΝΑΚΝΤνΥΙ,ΟΪΝδ ЬЯРЕОТАУУУСАЗ	ЗЯАУОЗЗЯ ЬЯЬАОТУЕ Υ	\УО0ОТ0УТУ8 3

Эти варианты характеризовали в виде очищенных белков в отношении взаимодействия

УЕОР165/УЕОРК2 с помощью А1рНа8сгееп-анализа (пример 5.3, фиг. 17). Определяли температуру плавления (Т_пл) для каждого клона с помощью анализа термального сдвига, который основан на оценке увеличения сигнала флуоресценции при включении реагента 8урго 0гапде (фирма ШуИгодеп) (Епсззоп е! а1., Апа1. Вюскет. 357, 2006, р. 289-298). Для всех вариантов характерны сопоставимые значения Ю₅₀при сравнении с УЕОРВП23В04, и значения Т_пл, превышающие или близкие к значениям Т_пл для родительского клона УЕОРВП23В04. В табл. 28 обобщены данные о значениях Κ.'₅₀ изученных 9 клонов и значениях Тпл при рН 7.

- 50 025148

Таблица 28

Значения 1С₅₀ (пМ), % ингибирования и температура плавления (рН 7) для вариантов с оптимизированной последовательностью УЕОРВ1123В04

УНН го	1С₅0	%	Т„л> рН 7
(пМ)	ингибирования	(°С)
УЕОРВП23В04 (νΛ)	169	100	63
УЕОРВ1П1ГО05	209	100	68
УЕСГВП111006	366	100	71
УЕОРВП112Ш 1	221	100	70
УЕ0РВП113А08	253	100	69
УЕОРВПИЗЕОЗ	290	100	68
УЕ0РВП114С09	215	100	71
УЕОРВП114002	199	100	74
УЕОРВ11114003	227	100	64
УЕОРВП118Е10	189	100	62

Во втором цикле объединяли приемлемые мутации, полученные в процессе гуманизации (УЕОРВ11111О06), и мутации, позволяющие избегать возможной посттрансляционной модификации выбранных сайтов (О16О, замена 860А и мутация ЕШ), получая клон с оптимизированной последовательностью, выведенный из УЕОРВ1123В04, а именно УЕОРВ110037. Специально был создан один вариант с оптимизированной последовательностью (УЕОРВ11038), который содержал все замены, указанные для УЕОРВ110037, за исключением мутации 182М, поскольку эта мутация может быть ассоциирована с небольшим снижением эффективности. Последовательности обоих клонов с оптимизированными последовательностями представлены в табл. 29.

УЕОРВ110037 и УЕОРВ110038 характеризовали в отношении блокады взаимодействия УЕОР165/УЕОРК2 с помощью А1рйа8сгееп-анализа (пример 5.3, фиг. 18), температуру плавления определяли с помощью описанного выше анализа термального сдвига, а аффинность связывания с УЕОР165 определяли с помощью В1асоге-анализа (пример 5.5). Обобщение характеристик двух УНН с оптимизированными последовательностями представлено в табл. 30.

Таблица 29

АК-последовательности вариантов с оптимизированной последовательностью УНН УЕОРВ1123В04

УНН 10/ 5Е0 ГО ΝΟ:	РЯ 1	СОЯ 1	РЯ2	СОЯ 2	РЯЗ	СОЯЗ	ГК 4
УЕОРВН037 56	ОУ<?ЬУ ЕЗСОС ίν<?ρο С8ЬЯЬ ЗСАА8 ОКТРЗ	5Υ8ΜΟ	ЗУРК<? АРОК.Е ЯЕРУУ	А15КСО ΥΚΥϋΑ У8ЕЕС	ΚΡΤΙδΚϋ ΝΑΚΝΤν Υί,ΟΜΝδ ЬКРЕОТА УУУСАЗ	5ΚΑΥΟ8 ЗЯЬЯЬА ΟΤΥΕΥ	ЗУОООТ ЕУТУ88
УЕОРВН038 57	ОУ<?ЬУ ЕЗОСО ίν<3ΡΟ СЗЬКЬ 5СААЗ ОЯТРЗ	8Υ8ΜΟ	ЗУРЖ? АРОКЕ ЯЕРУУ	А13КСО ΥΚΥΟΑ У8ЬЕС	ЯРТ13ЯО ΝΑΚΝΤν уигшзь ЯРЕОТЛУ УУСАЗ	8ΚΑΥΟ8 ЗЯЬЯЬА ϋΤΥΕΥ	ЗУОфСТ ЬУТУ83

Значения 1С₅₀ (пМ), % ингибирования, температура плавления (рН 7) и аффинность (пМ) для клонов с оптимизированной последовательностью УЕОРВ11037 и УЕОРВ11038

Таблица 30

УНН ГО	1С₅о (пМ)	% ингибирования	Т_пл <°С), рН 7	К_О (пМ)
УЕОРВН23В04	152	100	63	560
УЕОРВН037	300	100	72	270
УЕСРВП038	143	100	71	360

8.2. Оптимизация последовательности УЕОРВ115В05.

Осуществляли выравнивание аминокислотных последовательностей УЕОРВ1123В05 и последовательности человеческой зародышевой линии УН3-23/Ш5, см. фиг. 19 (8Е0 ГО ИО: 179). Сравнительный анализ продемонстрировал, что УЕОРВ1123В05 содержал 15 мутаций в каркасных участках относительно референс-последовательности зародышевой линии. Нечеловеческие остатки в положениях 23, 60, 83, 105, 108 выбирали для замены на их копии из человеческой зародышевой линии, в то время как гистидин в положении 44 выбирали для замены на глутамин. Создавали один гуманизированный вариант, несущий 6 описанных мутаций (АК-последовательности представлены в табл. 31).

- 51 025148

Таблица 31

АК-последовательности вариантов с оптимизированной последовательностью УНН УЕОРВ115В05 (РК, каркасный участок; СОК, гипервариабельный участок)

Конструировали один дополнительный вариант, в котором потенциальный сайт окисления в положении МЗО (С.НК1-участок, см. фиг. 19, остаток выделен жирным шрифтом и курсивом) удаляли путем интродукции мутации М301. Оценивали способность обоих вариантов связываться с НУЕОР165 с помощью системы Рго!еОп. В целом, метод состоял в следующем: сенсорный чип ОЬС Рго!еОп сенсибилизировали человеческим УЕОР165. Периплазматические экстракты вариантов разводили в соотношении 1/10 и инъецировали на чип, сенсибилизированный человеческим УЕОР165. Рассчитывали скорости реакции диссоциации и сравнивали со скоростями реакции диссоциации родительского УЕОРВ115В05. Скорости реакции диссоциации двух вариантов оказались такими же, что и скорости реакции диссоциации родительского УЕОРВ115В05, это свидетельствует о приемлемости всех мутаций (табл. 32).

Таблица 32

Скорости реакции диссоциации вариантов УЕОРВ115В05 с оптимизированной последовательностью

νΗΗ ГО	Уровень связывания (КО)	ка (1/с)
УЕОРВН5В05	242	б,15^Е-02
УЕОРВП119011	234	7,75^Ь-02
УЕОРВП120ЕЮ	257	4,68^Ь-02

Во втором цикле объединяли мутации, полученные в процессе гуманизации, и замену М301, получая клон с оптимизированной последовательностью, выведенный из УЕОРВ1123В05, обозначенный как УЕОРВ11032. Последовательность представлена в табл. 33. Аффинность УЕОРВ11032 определяли с помощью В1асоге-анализа (см. пример 5.5), а температуру плавления определяли с помощью описанного выше анализа термального сдвига. Обобщение характеристик УНН УЕОРВ11032 с оптимизированной последовательностью представлено в табл. 34.

Таблица 33

АК-последовательность клона с оптимизированной последовательностью УЕОРВ11032 (РК, каркасный участок; СОК, гипервариабельный участок)

УНН ГО/ ЗЕО ГО ΝΟ:	РК1	СОК1	РК.2	ΟϋΚ2	РКЗ	ΟϋΚ3	ΡΚ4
УЕОРВН032/ 127	ЕУСЭЬУЕ 8ОООЬУ <5РСО5Ь КЕЗСАА 3ΟΙΚΡΙ	5МА	\УУК<ЗА РСКГЖЕ ЬУА	К183О ОТТА ΥΑϋ3 УКО	ΚΡΤΙ8ΚΟΝ3Κ ΝΤνΥΙΛ>ΜΝ3 ίΚΑΕϋΤΑνΥ ΥΟΝΤ	Ρ83ΚΡ ΝΡ	χνοςοτί УТУЗЗ

Таблица 34

Температура плавления (рН 7) и аффинность (нМ) клона с оптимизированной последовательностью УЕОРВ11032

Эффективность клонов с оптимизированной последовательностью УЕОРВ11037 и УЕОРВ11038 оценивали с помощью анализа пролиферации. В целом, метод состоял в следующем: первичные клетки НИУЕС (фирма ТесНпос1опе) выращивали в минимальной среде в течение ночи и затем по 4000 клеток/лунку высевали в четырех повторностях в 96-луночные планшеты для культуры ткани. Клетки стимулировали с использованием 33 нг/мл УЕОР в отсутствии или в присутствии УНН. Уровни пролиферации оценивали по включению [^!Н]-тимидина в день 4. Результаты, представленные в табл. 35, демонстрируют что активность (эффективность и степень ингибирования) родительского УНН УЕОРВ1123В04 полностью соответствовала активности клона с оптимизированной последовательностью УЕОРВ11038.

- 52 025148

Таблица 35

Значения Ю₅₀ (нМ) и % ингибирования для клонов с оптимизированной последовательностью УЕОРВП037 и УЕОРВП038, установленные в анализе индуцируемой УЕОР пролиферации клеток НИУЕС

УНН ю	1С₅₀ (нМ)	% ингибирования
УЕОРВП23В04	0,68	92
УЕОРВП037	1,54	78
УЕОРВП038	0,60	92
бсвацизумаб	0,29	94

Пример 9.

Конструирование, получение и характеризация двухвалентных УНН, мишенью которых является Ап§2.

Осуществляли генетическое слияние УНН 1Ό01 (8ЕЦ ГО N0: 214), 11В07, 00908 и 00027 (81У) ГО N0: 216) с 1Ό01 (81Т) ГО N0: 214), 11В07, 00908 и 00027 (8ΙΤ) ГО N0: 216) соответственно с получением гомодимерных УНН. Двухвалентные УНН соединяли через гибкий линкер 9-О1у8ег или 40-О1у8ег. Кодирующие последовательности форматированных УНН клонировали в экспрессионном векторе рАХ172. УНН экспрессировали в РкЫа ракЮпк в виде белков, меченных на С-конце с помощью тус - Н156. В целом, метод состоял в следующем: начинали создание культуры ВОСМ с индивидуальной колонии, полученной посевом штрихом, которую инкубировали в течение выходных дней при 30°С (250 об/мин). После замены среды на ВМСМ культуры инкубировали до вечера при 30°С (250 об/мин) и осуществляли последующую индукцию с использованием 100% метанола. На следующий день культуры индуцировали еще трижды (утром, днем и вечером). На следующий день культуры центрифугировали в течение 20 мин при 4°С (1500х§). Меченные с помощью Н156 УНН, присутствующие в супернатанте, очищали с помощью хроматографии на иммобилизованном металле (ИМАХ) с последующим обессоливанием (Ό8) и, наконец, гель-фильтрации (ГФ) для удаления любых эндотоксинов/примесей. Обзор форматов и последовательностей всех двухвалентных УНН представлен на фиг. 20 и в табл. 36-А (линкерные последовательности подчеркнуты), 8ЕЦ ГО N0: 180-185. Уровни экспрессии представлены в табл. 36-Б.

Для исследования блокирующих свойства антител к Апд2 в сравнении с одновалентными конструктивными элементами двухвалентные УНН анализировали в отношении блокады взаимодействий: человеческий Ап§2/ЬТ1е2 (фиг. 21-1), мышиный Ап§2/тТ1е2 (фиг. 21-2), Ап§2 обезьяны циномолгус (супо)/сТ1е2 (фиг. 21-3) и человеческий Ап§1/ЬТ1е2 (фиг. 22) с помощью конкурентного ЕЫ8А. Обобщение данных о значениях !С₅₀ представлено в табл. 37.

- 53 025148

Таблица 36-А

Последовательности двухвалентных ΥΗΗ, мишенью которых является Ап2
УНН ГО	АК-последовательность
ΑΝΟΒΙΙΟΟΟΟΙ	ЕУ<ЭЬУЕ5ОСОЬУ<ЗАСО5Ы<Ь8САА8ОРТРООУАЬС\УРК(}ААСКЕКЕ<ЗУ8С ΙΚΟδΟΟδΤΥΥΑΟδνΚΟΚΡΤΙδδΟΝΑΚΝΤνΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΑΑδίνΡ К8КЬЕРУЕУОА1УООСТЬУТУ88СС008а008ЕУОЬУЕ8С100ЬУОАСП8ЕК. ΕδΟΑΑδΟΡΤΡΟΟΥΑΕΟΑΡΚΟΑΑΟΚΕΚΕΟνδΟΙΒΟδΟΟδΤΥΥΑΟδνΚΟΚΡΤΙ δδΒΝΑΚΝΤνΥΕ<2ΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥ€ΑΑ5ΐνΡΚ.δΚΕΕΡΥΕΥΟΑ\νθ<3ΟΤΕν Τνδδ(δΕΟ ГО ΝΟ: 180)
ΑΝΟΒΗ00002	ЕУ0ЕУЕЗОСОЕУ0ЛСО8ЕКЕ8СЛА8ОРТРООУЛЕОАРК0ЛАОКЕКЕОУЗС ΙΚ€5ΟΟ8ΤΥΥΑΟ5νΚΟΚΓΤΙδ5ΟΝΑΚΝΤνΥΕ<3ΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥεΑΑ5ΐνΡ ΚδΚΕΕΡΥΕΥΒΑΑΟΟΰΤΕντνδδΟΟΟΟδΟΟΟΟδΟΟΟΟδΟΟΟαδΟΟΟΟδΟΟ ΟΟδΟΟΟΟδΟΟΟΟδΕνΟΕνΕδΟΟΟΕνΟΑΟΟδΕΚΕδΌΑΑδΟΡΤΡΟΟΥΑΕΟΑΡ ΚΟΑΑΟΚΕΚΕΟνδαΚΕ’δίΧίδΤΥΥΑΠδνΚΟΚΙ-ΊΊδδηΝΑΚΝΐνΥΕί,ίΜΝδΕΚΡ ЫУГАУ ΥΥΟΑΑΚΙ νΐ’ΚδΚΕΕΡΥΕ ΥΙ)Α\νθΟΟΤΕΥΤν8$ (8Ε0 ГО ΝΟ: 181)
аыовпооооз	ЕУ0ЕУЕ5аОСЕУОУСО5ЕРЕ5САА5СКТР5ТУЕМУС\УРК.0АРСКЕКЕРАА ΟΙΑδδΟΟΤΑΥΑΟδνκαΚΕΤΙδΒΟΝΑΚΝΤνΥΕΟΜΝδΕΚΤΕΟΤΑνΥΥσΑΟδΥ ΟΟΝΥΥΙΡΟΡΥΚΟΑΟΟΟΤΕντνδδΟΟΟΟδΟΟΟδΕνΟΕνΕδΟΟΟΕνοναΟδΕ К ЬКС А Α δΟΚΤΡδΤ Υ ίΜ УОУ/ЕКО АРОК ΕΚΕΡ А АО I ΑδδΟϋΤΑ Υ Αϋδ УВОКР ΤΙδΚΟΝΑΚΝΤνΥΕΟΜΝδΕΚΤΕΟΤΑνΥΥΟΑΟδΥΟΟΝΥΥΙΡΟΡΥΚϋΑΟΟΟΤΕ УТУ88 {δΕΟ ГО ΝΟ: 182)
ΑΝΟΒΙΙ00004	ΕνΟΕνΕδΟΟΟΕνΟΑΟΟδΕΒΕδΟΑΑδΟΡΤΕΟΟΥΑΙΟΑΡΒΟΑΡΟΚΕΒΕΟνδδΙ ΚΟΝϋΟδΤΥΥΑΟδνΚΟΚΡΤΙδδΟΝΟΚΝΤνΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΑΑνΡΑ ΟΚΕΚΡΟΕΟΑΥΡΕΥΕΥϋΑΑΟΟΟΤΕντνδδΟΟαΟδΟΟΟδΕνΟΕνΕδαΟΟΕν ΟΑΟΟδΕΚΕδΟΑΑΚΟΡΤΕΟΟΥΑΙΟΑΡΚΟΑΡΟΚΕΚΕΟνδδΙΚϋΝΟΟδΤΥΥΑΟδ νΚΟΚΓΤΙδδΟΝΟΚΝΤνΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΑΑνΡΑΟΚΕΚΡΟΕΟΑΥΡΕ ΥΕΥϋΑΑΟΟΟΤΕντνδδ (δΕΟ ГО ΝΟ: 183)
ΑΝΟΒΙΙ00005	ΕνΟΕνΕδΟΟΟΕνΟΑΟΟδΕΚΕδΟΑΑδΟΡΤΕΟϋΥΑΙΟΑΡΚΟΑΡΟΚΕΚΕΟνδδΙ ΚϋΝΟΟδΤΥΥΑΟδνΚΟΒΡΤΙδδΟΝΟΚΝΤνΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΑΑνΡΑ ΟΚΕΒΓΟΕΟΑΥΡΕΥΕΥΟΑΑΟΟΟΤΕντνδδΟΟΟΟδΟΟΟΟδΟΟΟΟδΟΟΟΟδΟ ΟΟΟδΟΟΟΟδΟΟΟΟδΟΟΟΟδΕνΟΕνΕδΟΟΟΕνΟΑΟΟδΕΚΕδϋΑΑδΟΡΓΕΟΟ ΥΑΙΟΑΡΒΟΑΡΟΚΕΚΕΟνδδΙΚΟΝΟαδΤΥΥΑΟδνΚΟΚΡΤΙδδΟΝΟΚΝΤνΥΕΟ ΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΑΑνΡΑαΚΕΚΓΟΕΟΑΥΡΕΥΕΥΟΑΑΟΟΟΤΕντνδδ (ΒΕΟ ΙϋΝΟ: 184)
ΑΝΟΒΙΙ00006	ЕУ0ЕУЕ8ОаСЕУ0РОО8ЕКЕ8САА8О1ТЕПОУА1ОАРК0АРОКЕКЕОУ881К ΟΝΟΟδΤΥΥΑΟδνΚΟΚΡΤΙδδΟΝδΚΝΤνΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΑΑνΡΑΟ ΚΕΚΥΟΕΟΑΥΡΙΥΕΥΟΑΑΟΟΟΤΕντνδδΟΟΟΟδΟΟΟδΕνΟΕΕΕδΟΟΟΕνΟΡ ΟΟδΕΚΕδΟΑΑδΟΙΤΕΟϋΥΑίαΑΡΚΟΑΡΟΚΕΚΕΟνδδΙΚΒΝΟΟδΤΥΥΑΟδνΚ ΰΚΡΤΙδδΟΝδΚΝΤνΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΑΑνΡΑΟΚΕΚΥΟΕΟΑΥΡΙΥΕΥ ϋΑΑΟΟΟΤΕΥΤνδδ (8ΕΟ ГО ΝΟ: 185)

Таблица 36-Б

УНН ГО	Формат	Уровень экспрессии (мг/л)
ΑΝΟΒΙΙΟΟΟΟΙ		31
ΑΝΟΒΙΙ00002	φλφ	37
ΑΝΟΒΙΙ00003		28
ΑΝΟΒΙΙ00004		651
ΑΝΟΒΙ100005		203
ΑΝΟΒΙΙ00006		3

- 54 025148

Таблица 37

Значения 1С₅₀ (пМ), характеризующие блокаду взаимодействий: человеческий Апд2/человеческий Т1е2, мышиный Апд2/мышиный Т1е2, супо Апд2/супо Т1е2 и ЬАп§1/ЬПе2, полученные с помощью конкурентного ЕЫЗА

		ЬАп§2	тАй§2	сАп§2	Соотношение НАп§1
УНН Го	Формат	1С₅0 (пМ)	1С50 (пМ)	1С50 (пМ)
ГО01	ф	6973	10455	9,484	>10800
ΑΝΟΒΙ 100001		11	18	27	п.(1.
ΑΝΟΒΙΙ00002		20	32	п.Л.	пЛ.
11В07	А	15205	10000	16400	> 8570
ΑΝΟΒΙ 100003	АЛ\А \	24	47	35	η.ά.
00027	ф	541	1785	568	>14878
ΑΝΟΒΙΙ00004		17	33	34	п.б.
ΑΝΟΒΙΙ00005		13	32	η,ώ	п.4.
00908	ф	52	85	79	>192014
ΑΝΟΒΙΙ00006	ею©	19	28	25	6052631
АМО386		4	3	10	5600

п.с!.: не определяли.

Пример 10.

Конструирование, получение и характеризация трехвалентных УНН, мишенью которых являются УЕОР и Апд2, созданных с использованием антитела к сывороточному альбумину для удлинения времени полужизни.

Анти-УЕОР УНН УЕОРВ1100038 (ИЗ 2011/0172398 А1) и анти-Ап§2 УНН 00027 (З1Т) ГО N0: 216) применяли в качестве конструктивных элементов для создания биспецифических УНН УЕОРΑNОВII00001-00004. Генетическое слияние со связывающим сывороточный альбумин УНН применяли в качестве методологии удлинения времени полужизни. Конструктивные элементы соединяли через гибкий линкер, содержащий три А1а или 9 О1у-Зег. УНН получали и очищали согласно методу, описанному в примере 9. Обзор форматов и последовательностей всех четырех биспецифических УНН представлен на фиг. 23 и в табл. 37-А (линкерные последовательности подчеркнуты), ЗЕф ГО N0: 186189. Уровни экспрессии представлены в табл. 38-Б.

- 55 025148

Таблица 38-А

Последовательности биспецифических УНН,мишенью которых являются УЕОР и Λη^2
УНН ГО	АК-последовательность
νΕΟΡΑΝΟΒΙΙΟΟΟΟΙ	ОУ<ЗЕУЕ8ОааЬУ<}РаС8ЕКЕ5САА8СКТР38У8МС\УРК<ЗАРСКЕКЕГУУА1 3ΚΟΟΥΚΎΟΑν8ΕΕΟΚΡΤΙ8ΚΟΝΑΚΝΤνΥ1,<3ΙΝ8ΕΚΡΕΟΤΑνΥΥ€Α8δΚΑΥΟ 83КЕКЬАОТУЕУ\УаООТ1.УТУ35СаССЗСОа5ЕУОЕУЕ5СааЬУОРОНЗЕ ΚΕ8ϋΑΑ3αΡΤΡ38ΡαΜ3\ννΚ<3ΑΡΟΚΟΕΕ\νν33Ι3α8Ο3ΟΤΕΥΑΟ3νΚΟΚΡΤΙ 5ΚΟΝΑΚΤΤΕΥΕ0ΜΝ5ΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤΙΟΟ8Ε5Κ550ΟΤΕντν53ΟΟΟΟ5Ο СОЗЕУ0ЕУЕЗСООЕУ<5АССБЕКЕЗСААЗСРТЕОЦ¥А1С\УГК<ЭАРОКЕКЕС ν85ΙΚΟΝ008ΤΥΥΑ08νΚΟΚΡΤΙ550ΝΟΚΝΤνΥΕ<3ΜΝ5ΕΚ.ΡΕΟΤΑνΥΥΟΑΑ νΡΑΟΚΕΚΡΟΕΟ\νΥΡΕΥΕΥΟΑΜνΰΟΟΤΕνΤν3δ (ЗЕО ГО N0: 186)
νΕΟΡΑΝΟΒΗΟΟΟΟΪ	Εν<3ΕνΕ5Ο0ΟΕν<5ΑΟ05ΕΚΕ80ΑΑ8ΟΡΤΕΟΟΥΑΙΟ\νΡΚ0ΑΡαΚΕΚΕθν58Ι ΚΟΝ003ΤΥΥΑ03νΚΟΚΡΤΙ33ΠΝΟΚΝΤνΥΕ9ΜΝ8ΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΑΑνΡΑ 0ΚΕΚΡ0Ε0%ΎΡΕΥΕΥ0Α\ν000ΤΕντν58αα00500α3Εν0ΕνΕδ0Γ.0Εν <2РСК5ЕКЕЗСАА8СРТР88РСМ5\УУК.<ЗАРСКСЕЕ(УУ8818С8С8ОТЕУАО8 νΚΟΚΡΤΙ3ΒΟΝΑΚΤΤΕΥΕ0ΜΝ3ΕΚΡΕΟΤΑνΥΥεΤΙΟΟ3Ε3Κ3500ΤΕντν38 СССС5С0050У01.УЕ5000ЕУОРа05ии,5СААЗОКТР83У8МС\УР110АР ΟΚΕΚΕΡννΑΙ5ΚΟΟΥΚΥΟΑν5ΕΕΟΚΡΤΙ8ΚΙ)ΝΑΚΝΤνΥΕ(3ΙΝ5ΕΚΡΕΟΤΑνΥ УСАЗЗКАУОЗЗКЕКЕАОТУЕУЗУОООТЬУТУЗЗ (ЗЕО ГО ΝΟ: 187)
УЕСРАРЮВНООООЗ	ЕУ0ЕУЕ5ССОЕУ0А6С5ЕКЕЗСАА86РТЕООУА1С\УРК0АРСКЕКЕОУ551 ΚΓ>ΝΟ05ΤΥΥΑΟ5νΚΟΚΡΤΙ38ΟΝΟΚΝΤνΥΕ0ΜΝ5ΕΚΡΕΟΤΑνγΥΕΑΑνΡΑ ОК1.КРОЕО\УУР1.УЕУПА5УОООТЕУТУЗБС.С.ООЗООС.ЗОУОЕУЕКООО1.У 0ΡΟΟ8ΕΚΕ80ΑΑ8ΟΚΤΡ83Υ3ΜΟ\νΡΙί0ΑΡΟΚΕΚΕΡννΑΙ3ΚΟΟΥΚΥΟΑν8Ε ΕΟΚΓΤΙ3Κ.ΟΝΑΚΝΤνΥΕ0ΙΝ8ΕΚΡΕΟΤΑνΥΥ0Α88ΚΑΥΟ33ΚΕΚΕΑΟΤΥΕΥ (УООСТЕУТУЗЗССООЗОООЗЕУОЕУЕЗССОЕУОРСНЗЕКЕЗСААЗОРТРЗЗ ΡΟΜδ(ννΚ0ΑΡ0Κ0ΕΕ\νν88Ι8Ο8Ο3ΟΤΕΥΑΟ5νΚΟΚΡΤΙ8ΚΟΝΑΚΤΤΕΥΕ0 МНЗЬКРЕОТАУУУСТЮОЗЬЗКЗЗООТЕУТУЗЗ (ЗЕО ГО ΝΟ: 188)
νΕΟΡΑΝΟΒΙΙ00004	ОУ0ЕУЕ5ОССЕУ0РОО5ЕКЕ8САА5аВТР88¥ЗМОЗУРК0АРОКЕКЕРУУА1 3ΚΟΟΥΚΥΟΑν5ΕΕΟΚΡΤΙ8Κ.ΟΝΑΚΝΤνΥΕΟΙΝ3ΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΑ38ΚΑΥΟ ЗЗКЬКЕАОТУЕУАУОООТЕУТУЗЗАААЕУОЕУЕЗОССЕУОРОНЗЕКЕЗСААЗ

0ΓΤΡδδΡ0Μδ\ννΚ.<5ΑΡ0Κ0Ι,Εΐνν35130δ030ΤΕΥΑΟδνΚΌΚΓΠ8ΚΟΝΑΚ ТТЕУИЗММЗЬКРЕОТАУУУСТЮОЗЬЗКЗЗООТЬУТУЗЗАААЕУОЬУЕЗОО 0Εν0Α0Ο3ΕΚΕ30ΑΑ50ΡΤΕΟΟΥΑΙ0λνΓΚ0ΑΡΟΚΕΚΕθν58ΙΚ.0ΝΟ03ΤΥΥ ΑΟδνΚΟΚΡΤΙδδΟΝΟΚΝΤνΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΑΑνΡΑΟΕΕΚΡΟΕρίν ΥΡΙΛΈΥΡΑΙΥΟΟΟΤΕντνδδ (ЗЕО ГО ΝΟ: 189)

Таблица 38-Б

УНН ГО	Формат	Уровень экспрессии (мг/л)
νΕΟΡΑΝΟΒΙΙΟΟΟΟΙ		13,3
νΕΟΡΑΝΟΒΙ 100002		п,з
νΕΟΓΑΝΟΒΙΙ00003		15,4
νΕΟΡΑΝΟΒΙΙ00004		19,2

Для исследования блокирующих свойства антител к УЕОР в сравнении с одновалентным конструктивным элементом УЕОРВ1100038 все четыре биспецифических УНН анализировали в отношении блокады взаимодействия УЕОР/УЕОРР2-Рс (фиг. 22) с помощью конкурентного Л1рНаЗс^ееи. В анализ для его адаптации к рассматриваемому случаю были внесены небольшие изменения по сравнению с анализом, изложенным в примере 12.3 в патенте ИЗ 2011/0172398 А1. Как человеческий УЕОР165, так и человеческий УЕОРР2-Рс добавляли в концентрации 0,05 нМ. Этот анализ в условиях конкуренции осуществляли также после предварительной инкубации УНН с 25 мкМ человеческим сывороточным альбумином (ЧСА). Обобщенные данные о значениях 1С₅₀ и % ингибирования представлены в табл. 39.

- 56 025148

Таблица 39

Значения Ю₅₀ (нМ), характеризующие способность ингибировать взаимодействие: человеческий УЕОР165/человеческий УЕОРК2, полученные с помощью конкурентного А1рЬа8сгееп

УНН го	Формат	ЧСА	1С₅0 (нМ)	% ингибирования
УЕ6РВП00038		-	0,5	100
+	0,5	100
νΕΟΡΑΝΟΒΙΙΟΟΟΟΙ		-	0,4	100
+	0,6	100
νΕΟΓΑΝΟΒΙΙΟΟΟ<)2		-	ОД	100
+	1,2	100
УЕСРАРТОВПООООЗ	^^9 να,Βίν	-	0,6	100
+	1,3	100
νΕΟΡΑΝΟΒΠ00004		-	0,5	100
4-	0,7	100
ранибизумаб		-	0,8	100
	1,1	100

Для исследования блокирующих свойств антител к Апд2 в сравнении с одновалентным конструктивным элементом 00027 (8ЕЦ ГО N0: 216) все четыре биспецифических УНН анализировали в отношении блокады взаимодействия человеческий Ап§2/ЬТ1е2-Рс (фиг. 25) с помощью конкурентного ЕЫ8А. Этот анализ осуществляли также после инкубации УНН с 0,5 мкМ человеческим сывороточным альбумином. Обобщенные данные о значениях Κ\₀ представлены в табл. 40.

Таблица 40

Значения ΚΑ₀ (пМ), характеризующие способность ингибировать взаимодействие человеческий Аи§2/человеческий Т1е2, полученные с помощью конкурентного ЕЫ8А

УНН 10	Формат	ЧСА	1С_5О (пМ)
00027		-	516
+	п4.
νΕΟΡΑΝΟΒΙΙΟΟΟΟΙ	вуг©	-	240
+	179
УЕОРАИОВНООООг		-	463
+	330
νΕΟΡΑΝΟΒΙΙ00003		+	273 154
νΕΟΡΑΝΟΒΙΙ00004	И У*¹©	+	111 92
ΑΜΟ386		+	2 η.ά.

п.с!.: не определяли.

Пример 11.

Конструирование, получение и характеризация трехвалентных и четырехвалентных УНН, мишенью которых являются УЕОР и Апд2, созданных с использованием антитела к сывороточному альбумину для удлинения времени полужизни.

Создавали десять биспецифических УНН, мишенью которых является УЕОР и Апд2 (УЕОРАNОВII00005-00015). В эти конструкции включали одновалентные и двухвалентные конструктивные элементы 1Ό01 (8ЕЦ ГО N0: 214), одновалентные и двухвалентные конструктивные элементы 7О08 (8ЕЦ ГО N0:215) и двухвалентный конструктивный элемент 00027 (8ЕЦ ГО N0:216) анти-Апд2. Генетическое слияние со связывающим сывороточный альбумин УНН применяли в качестве методологии удлинения времени полужизни. Конструктивные элементы соединяли через гибкий линкер 9 О1у-8ег. УНН получали и очищали согласно методу, описанному в примере 8. Обзор форматов и последовательностей всех десяти биспецифических УНН представлен на фиг. 26 и в табл. 41-А (линкерные последовательности подчеркнуты), 8ЕЦ ГО N0: 190-199. Уровни экспрессии представлены в табл. 41-Б.

- 57 025148

Таблица 41-А

Последовательности биспецифических УНН, мишенью которых являются УЕОР и Αης2
УНН ГО	АК-последовательность
νΕΟΡΑΝΟΒΠΟΟΟΟί	ОУ(}ЕУЕ5СОСЕУ<>РО05и<ЕЗСААЗаКТГЗЗУЗМС\УРК0АРОКЕКЕРУУА1 δΚΟΟΥΚΥΟΑνδΕΕΟΚΡΤΙδΚϋΝΑΚΝΤνΥΕΟΙΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΑδδΚΑΥΟ ЗЗКЕКЕАОТУЕУЧУОООТЕУТУЗЗОООСЗОаОЗЕУОЕУЕЗООСЕУОРООЗЕ КЕ8САА8СГАЕОУУА1О\УРК<ЭУРОКЕКЕСУЗС1888ОО1ТУУУО8УК<ЗК.РТ1 5ΚΟΝΑΚΝΤνΥΕ0ΜΝ5ΕΚ.ΡΕΟΤΑν Υ ΥΟΑΤϋΒΟΟ ΥΙΟΥΟΟΜΟΕΟΥΟΥΎΟΟΟ ТЕУТУ880О008О008ЕУОЕУЕ5000ЕУОР0М8ЕКЕ8СААЗОРТР38Р0М8 \ννΚ<3ΑΡΟΚΟΕΕΐνν38Ι8Ο5Ο3ΟΤΕΥΑΟ8νΚΟΚΡΤΙ8ΚΒΝΑΚΤΤΕΥΕ<3ΜΝ5Ε КРЕОТАУУУСТКЗСЗЕЗКЗЗООТЕУТУЗЗ (ЗЕО ГО ΝΟ: 190)

УЕСРАРТОВПООООб	ϋ УОЕУЕЗСООЕУОРООЗЕКЕЗСААЗОКТРЗЗУ 8МС \У ΡΚΟ ΑΡΟΚΕΚΕΡ V V ΑΙ 5ΚΟΟΥΚΥΟΑν5ΕΕΟΚΡΤΙ5ΚΙ>ΝΑΚΝΤνΥΕΟΙΝ3ΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΑ55ΚΑΥΟ 58Κ.ΕΚΕΑ0ΤΥΕΥ\ν000ΤΕντν8300 00800Γ.8Εν0ΕνΡ.80Γ.0Εν0Ρ0Ν8Ε КЕ8СААвОРТР88РОМ8\УУК0АРОК0ЬЕ\УУЗЗГО08О5ОТЬУАО8УКОКРТ1 5Κ.ΟΝΑΚΤΤΕΥΕ0ΜΝ3ΕΚΡΕΒΤΑνΥΥΟΤΙΟΟ8Ε5Κ.530ΟΤΕντν53ΟΟΟΟ5Ο ΟΟ8Ε νθί УЕЗООСЕУОРООЗЬКЕЗС ΑΑ3ΟΡ АЬО Υ Υ А ΙΟ %'ΡΚΟ УРО КЕКЕО ν30Ι853ΟΟΙΤΥΥνθ3νΚΟΚΡΤΙ5ΚΟΝΑΚΝΤνΥΕ0ΜΝ5ΕΚΡΕΟΤΑνΥΥ0ΑΤ ОЗООУГОУОСМОЬОУОУ\УОООТЕУТУ88 (ЗЕО ГО N0: 191)
νΕΟΡΑΝΟΒΙΙ00007	ОУОЕУЕ5СООЕУОРООЗЕКЕ8САА50КТР53У5МО\УГКОАРОКЕКЕРУУА1 5ΚΟΟΥΚΥΟΑν5ΕΕΟΚΡΤΙ5ΚΙ>ΝΑΚΝΤνΥΕΟΙΝ8ΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΑ55ΚΑΥΟ ЗЗИЕКЕАВГ Υ Е Υ1УОООТЕ УТУ88ОООО8ОООЗ ЕУОЬУЕЗООО к УОРООЗЕ К.Е5САА5ОРАЕВУУА1С\УГК.0УРСКЕКЕСУ5С1558Оа1ТУУУО8УКаКРТ1 3ΚΟΝΑΚΝΤνΥΕ0ΜΝ5ΕΚΡΕΟΤΑνΥΥ0ΑΤΟ8ΟΟΥΙΟΥΟΟΜΟΕΟΥΟΥΐνσ0Ο ТЕУТУЗЗОССОЗОООЗЕУОЕУЕЗООСЕУОРСНЗЕКЕЗСААЗСРТРЗЗГОМЗ \ννκ0ΑΡΟΚΟΕΕ\νν38Ι805Ο8ΟΤΕΥΑΟ5νΚΟΚΡΤΙ8ΚΒΝΑΚΤΤΕΥΕ0ΜΝ5Ε КРЕОТАУУУСТ1ССЗЕ8К8800ТЕУТУ88000С30ОС8ЕУОЕУЕ3000ЕУ0 РО03ЕКЕЗСАА8ОРАЕОУУА1О1УРК0УРОКЕКЕОУЗС1338ОС1ТУУУО8УК ΟΚΡΤΙ8ΚϋΝΑΚΝΤνΥΕΟΜΝ5ΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΑΤ0800ΥΙΟΥΟΟΜΟΕΟΥΟΥ \УОООТЬУТУ88 (ЗЕО ГО ΝΟ: 192)
νΕΟΡΑΝΟΒΠΟΟΟΟβ	ОУ0ЕУЕ5СаОЕУ0РООЗЕКЕ5САА5СКТР58У5МО\УРК.0АРОКЕКЕРУУА1 5ΚΟΟΥΚΥΟΑν8ΕΕΟΚΡΤΙ8ΚΟΝΑΚΝΤνΥΕ0ΙΝ5ΕΚΡΕΟΤΑνΥΥ€Α55ΚΑΥΟ ЗЗКЕКЕАОТУЕУЗУОООТЕУТУЗЗСООСЗССОЗЕУОЕУЕЗСООЕУОАОСЗЕ ΚΕ30ΑΑ8ΟΡΤΕΟΟΥΑΙΟ\νΡΚ0ΑΡΟΚΕΚΕ0ν33ΙΕ.ΟΝΟΟ8ΤΥΥΑΟ3νΚΟΚΡΤΙ 53ΟΝΟΚ.ΝΤνΥΕ0ΜΝ3ΕΚΡΕΟΤΑνΥΥ0ΑΑνΡΑΟΚ.ΕΚΡ6Ε0\νΥΡΕΥΕΥΟΑ\ν ООСТЕУТУЗЗСаООЗааОЗЕУОЕУЕЗОаСЕУОАСОЗЕКЕЗСААЗОГТЕОО ΥΑΐα\νΡΚ0ΑΡΟΚΕΚ.Εθν83ΙΐωΝΒΟδΤΥΥΑΟ5νΚΟΚ.ΡΤΙ55ΟΝΟΚΝΤνΥΕ0 ΜΝ3ΕΚΡΕΟΤΑνΥΥ0ΑΑνΡΑΟΚΕΚΡΟΕΟ\νΥΡΕΥΕΥΟΑ\νθΟΟΤΕντν55Ο0 ОСЗСОаЗЕУОЕУЕЗСССЕУОРОКЗЕКЕЗСААЗОРТРЗЗРОМЗХУУКОАРОК ΟΕΕΐνν531303Ο3ΟΤΕΥΑΟ8νΚΟΚΡΤΙ8ΚΟΝΑΚΤΤΕΥΕ0ΜΝ5ΕΚΡΕΟΤΑνΥ УСТ1ОО8ЬЗК880ОТЬУТУ55 (ЗЕО ГО ΝΟ: 193)
νΕΟΡΑΝΟΒΙΙΟΟΟΟΟ	ОУОЕУЕЗСССЕУОРССЗЕКЬ8СААЗОКТР83УЗМО\УГКОАРОКЕКЕРУУА1 5ΚΟΟΥΚΥΟΑν3ΕΕΟΚΡΤΙ3ΚΟΝΑΚΝΤνΥΕΟΙΝ3ΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΑ38ΚΑΥΟ ЗЗКЕКЕ ΑΟΤΥΕ УЗУОООТЕУТУЗЗООСГО 5000 ЗЕУОЬ V ЕЗООСЕ νθΡΟΝ5 ί КЕ8САА8аРТР55Р0М8\УУК0АРОКОЕЕЗУУ551505ОБОТЕУАО8УК0КРТ1 8ΚΟΝΑΚΤΤΕΥΕ0ΜΝ3ΕΚΡΕΟΤΑνΥΥ€ΤΙΟΟ8Ε5Κ.580ΟΤΕντν55Ο0ΟΟ5Ο ООЗЕУОЕУЕЗСООЕУОАООЗЕКЕЗСААЗОРТЕООУАЮУУГКОАРСКЕКЕС ν53ΙΚΟΝΡΟ5ΤΥΥΑΟ8νΚΟΚΡΤ133ΟΝΟΚΝΤνΥΕ0ΜΝ3ΕΚΡΕΟΤΑνΥΥ0ΑΑ νΡΑΟΚΕΚΡΟΕ0ΨΥΡΕΥΕΥΟΑλν0Ο0ΤΕντν58000Ο80Ο08ΕνθΕνΕ500 ΟΕν0Αθα8ΕΚΕ3ΟΑΑ5ΟΡΤΕΟΟΥΑΙΟ3ΥΡΚ0ΑΡΟΚΕΚΕθν35ΙΚΕ>ΝΟΟ5ΤΥΥ ΑΟ5νΚΟΚΓΤΙ35ΟΝΟΚΝΤνΥΕ0ΜΝ5ΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΑΑνΡΑΟΚΕΚΡΟΕ0\ν ΥΡΕΥΕΥΟΑΐνθ0ΟΤΕντν83 (ЗЕО Η>Ν0: 194)
νΕΟΡΑΝΟΒΙΙΟΟΟΙΟ	ОУ0ЕУЕ5ОООЕУ0РСО5ЕКЕ5САА5СКТР55У5МС\УРК0АРОКЕКЕРУУА1 5ΚΟΟΥΚΥΟΑν3ΕΕΟΚ.ΡΤΙ5ΚΟΝΑΚΝΤνΥΕΟΙΝ3ΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΑ55ΚΛΥΟ 53КЕКЕАОТУЕУ\УООСТЕУТУ58СОСС5ССС5ЕУОЕУЕ5СССЕУОАСС5Е ΚΙ.δΟΑΑΒΟΡΤΙ.ΠΟΥΑΙΟίνΓΚΟΑΡΟΚΕΚΕΟνδΒΙΚΒΝΟΟδΤΥΥΛΟδ УКОКРТГ 550ΝΟΚΝΤνΥΕΟΜΝ8ΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΑΑνΡΑΟΚΕΚ.ΓΟΕΟ\νΥΡΕΥΕΥΟΑ\ν ООСТ1,УТУ85СОС080СОЗЕУО1.УЕЗОООЕУОРСМЗЕКЕ8СААЗСГТР88Р 0Μ5Ψ V ко АРОКОЬЕ\У У5815О8О5ОТЬУ ΑΟ5 УКО ΚΡΤΙ5ΚΡΝ ΑΚΤΤί ΥΙ® ΜΝ3ΕΚΡΕΒΤΑνΥΥ0ΤΙΟΟ5Ε5Κ3δΟΟΤΕντν53ΟΟΟΟ5ΟΟΟ5ΕνθΕνΕ3ΟΟ ΟΕν0ΑΟΟ8ΕΚΕδ0ΑΑ3ΟΡΤΕΟΟΥΑΙΟ%ΈΚ0ΑΡΟΚΕΚΕθν85ΙΚΟΝΟΟ5ΤΥΥ Α08νΚΟΚΓΤΙ8δΟΝΟΚΝΤνΥΕΟΜΝ3ΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΑΑνΡΑΟΚΕΚΡΟΕΟ\ν ΥΡΕΥΕΥΟΑΙΥΟΟΟΤΕντνδδ (ЗЕО ГО ΝΟ: 195)
νΕΟΡΑΝΟΒΙΙΟΟΟΙ 1	θν0ΕνΕ8ΟΟΟΕν0ΡΟΟ8ΕΚΕ80ΑΑ8ΟΚΤΓ88Υ5ΜΟ5νΡΚ0ΑΡΟΚΕΚΕΡννΑΙ δΚΟΟΥΚΥΟΑνδΕΕΟΚΡΤΙδΚϋΝΑΚΝΤνΥΕΟΙΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΑδδΚΑΥΟ

- 58 025148

Последовательности биспецифических УНН, мишенью которых являются УЕОР и Ап§2
УНН ГО	ЛК-послеловательность
	85КЬКЬАОТУЕ¥\УОООТЬУТУ85000080008ЕУОЬУЕ8000ЬУОА005Е КЬ8САА8ОРТРООУАЬа\УРК<?ААСКЕК.ЕСУ8С1КС8О08ТУУАО8УКСКРТ 1830ΝΑΚΝΤνΥΕ(3ΜΝ8ΕΚ.ΡΕ0ΤΑνΥΥ0ΑΑ8ΐνΡΚ3ΚΙ,ΕΡΥΕΥΟΑΑν090ΤΕν ТУ88000080008ЕУОЬУЕ8СООЕУОА008ЬКЕ8САА50РТРООУАЬ01УР Κ0ΑΑΟΚΕΚΕθνδΟΙΚ08ΟΟ8ΤΥΥΑΟ5νΚΟΚΡΤΙ83ΟΝΑΚΝΤνΥΕ<3ΜΝ8ΕΚΡ ΕΟΤΑνΥΥ0ΑΑ8ΐνΡΚ3ΚΕΕΡΥΕΥΟΑΆΌ0ΟΤΕνΤν88000080008Εν0Εν ЕЗОСОЬУ(уРСНвЫ<Ь$СА АЗС ΡΤΡ83ΓΟΜ3\ν νΡ<3ΑΡΟΚΟίΕ \ν V 3318Ο8Ο8 ΟΤΕΥΑΟ8νΚΟΚΡΤΙ5ΚΟΝΑΚΤΤΕΥΕ<?ΜΝ8ΕΚΡΕΟΤΑνΥΥ0ΤΙΟΟ5ΕδΚ880Ο ТЬУТУ88 (8Ε0 ГО ΝΟ: 196)
νΕΟΡΑΝΟΒΙΙΟΟΟΙ 2	ОУ0ЕУЕ8ОООЕУ<ЗРОО5ЕКЕ5САА8ОКТГ88УЗМС1УРК<ЗАРОКЕКЕРУУА1 8Κ.ΟΟΥΚΥΟΑν8ΕΕΟΚΓΤΙ3ΚΟΝΑΚΝΤνΥΕ(}ΙΝ3ΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΑ35ΚΑΥΟ 8δΚΕΚΕΑΟΤΥΕΥΐν0Ο0ΤΕντν880000δ0005ΕνθΕνΕ5000ΕνθΡ0Ν3Ε Κί3ΟΑΑδΟΡΤΡ3δΡΟΜ3ΐννΚ0ΑΡΟΚΟίΕνν88Ι3Ο3Ο3ΟΤΕΥΑΟ8νΚΟΚΡΤΙ 3ΚΟΝΑΚΤΤΕΥΕ0ΜΝ3ΕΚΡΕΟΤΑνΥΥ0ΤΙ003Ε3Κ33<5ΟΤΕντνδ5Ο000δΟ 2О8ЕУ0ЕУЕ8ОООЕУ0АОО8ЕКЕЗСАА8ОРТРООУАЕО\УРК0ААОКЕКЕО ν30ΙΚΟ8ηθ3ΤΥΥΑΟ3νΚΟΚΡΤ138ΟΝΑΚΝΤνΥΕ0ΜΝ8ΕΚΡΕΟΤΑνγΥ0ΑΑ 8ΐνΡΚδΚΕΕΡΥΕΥΟΑ\ν0Ο0ΤΕντν380ΟΟΟ8ΟΟΟ3ΕνθΕνΕ30ΟΟΕνθΑΟ ΟΒΕΚΕδΟΑΑδΟΡΤΡΟΟΥΑΕΟλνΡΚΟΑΑΟΚΕΚΕΟνδΟΙΒΟδΟΟδΤΥΥΑΟδνΚΟ ΗΡΤΙ58ΟΝΑΚΝΤνΥΕ0ΜΝ8ΕΚΡΕΟΤΑνΥΥ0ΑΑ3ΐνΡΚ8ΚΕΕΡΥΕΥΟΑ\νθ9Ο ТЕУТУ88 (8Ε0 Ю ΝΟ: 197)
νΕΟΡΑΝΟΒΙΙΟΟΟΒ	θνς>ΕνΕ3ΟΟΟΕν<3ΡΟΟ3ΕΚΕ8ΟΑΑ8ΟΚΤΡ38Υ8ΜΟΑνΡΚ.9ΑΡΟΚΕΚΕΡννΑΙ 3ΚΟΟΥΚ.ΥΒΑν5ΕΕαΚΡΤΙ5ίΙΟΝΑΚΝΤνΥΕς)ΙΝ8Εί<ΡΕΟΤΑνΥΥΟΑ53ΙΐΑΥΟ 88ΛΕΕΕΑΟΤΥΕΥΐν0ΟΟΤΕνΤν380ΟΟ0300Ο8ΕνθΕνΕ8ΟΟΟΕνθΑΟΟ3Ε Κ.Ε30ΑΑ8ΟΡΤΡΟΟΥΑΕΟ\νΡΚ9ΑΑ0ΚΕΚΕ0ν50ΙΚ0δΟΟδΤΥΥΑΟ3νΚΟΚΡΤ 158ΠΝΑΚΝΤνΥΕ0ΜΝ8ΕΚΡΕΟΤΑνΥΥ0ΑΑ8ΐνΡΡ5ΚΕΕΡΥΕΥΟΑ\νθ<3ΟΤΕν ТУ88ОООО8ООО8ЕУОЬУЕЗОООЕУОРОМЗЬКЬ8САА8ОРТР88РОМЗ^УК ОАРСКОЬЕ V V δδΙδΟδΟδϋΤί ΥΑΟδνΚΟΚΡΤΙδΚΟΝΑΚΤΤΕ ΥίίϊΜΝ 8ЫЕРЕ ΟΤΑνΥΥΟΤΙ005Ε8Κδ8ΘΟΤΕντνδδΟΟΟΟδΟΟΟδΕνθΕνΕδΟΟΟΕνθΑΟΟ 8ЬК.ЬЗСАА8ОГТГООУАЬО\УГК0ААОКЕКЕОУЗС1КСЗОС8ТУУАОЗУКак ΡΤΙδδϋΝΑΚΝΤνΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΑΑδίνΡΚδΚΕΕΡΥΕΥΟΑλνΟΟΟΤ ίντνδδ (8Ε0 ΙϋΝΟ: 198)
νΕΟΡΑΝΟΒΙΙΟΟΟΗ	ОУ0ЬУЕ8О0ОЬУ0РО08ЬКЬЗСАА8ОКТР88¥ЗМС5УРК9АРОКЕЕ.ЕРУУА1 8ΚΟΟΥΚΥΟΑνδΕΕΟΚΡΤΙδΚΙ)ΝΑΚΝΤνΥΕ<3ΙΝ3ΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΑ3δΚΑΥΟ 8δΚΕΚΕΑΟΤΥΕΥ\ν000ΤΕνΤνδ3000030008ΕνθΕνΕ3Ο00Ι.ν0ΡΟΝδΕ КЕ8САА8ОГТГ38РОМ8\УУ]«ЗАРОКОЕЕ\УУ3318О8С8ОТЕУАО8УКОКРТ1 δΚΟΝΑΚΤΤΕΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤΙΟΟδΕδΚδδΟΟΤΕντνδδΟΟΟΟδΟ 2О§ЕУ0ЕУЕ8ОООЬУ0АСО8Ы1ЕЗСАА8СРТРООУАЕО\УРК0АА0КЕКЕО ν50№05ΟΟ5ΤΥΥΑ05νΚΟΚΡΤ1550ΝΑΚΝΤνΥΕ<3ΜΝ5ΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΑΑ δίνΡΚδΚΧΕΡΥΕΥΟΑΐνΟΟΟΤΕντνδδ (5Ε0 Π7ΝΟ: 199)

Таблица 41-Б

		Уровень
УНН Ιϋ	Формат	экспрессии
		(мг/л)
νΕΟΡΑΝΟΒΙΙΟΟΟΟδ	Д^^Й^)	1,3
νΕΟΡΑΝΟΒΙΙΟΟΟΟδ		1,3
νΕΟΡΑΝΟΒΙΙΟΟΟ(>7	Β'β'ν··'^	0,3
νΕΟΡΑΝΟΒΙΙΟΟΟΟβ	Β<βΉ	30,0
νΕΟΡΑΝΟΒ1100009		71,4
νΕΟΡΑΝΟΒΗΟΟΟΙΟ	ДйДА^>Й^	25,0
νΕΟΡΑΝΟΒΙΙΟΟΟΙ 1		4,0
νΕΟΡΑΝΟΒΙΙΟΟΟΙ 2		6,6
νΕΟΡΑΝΟΒΙΙΟΟΟΙ 3		2,9
ΥΕΟΡΑΝΟΒΠΟΟΟΗ	Дй^рф	45,6

Для исследования блокирующих свойства антител к УЕОР в сравнении с одновалентным конструктивным элементом УЕОРВ1100038 все десять биспецифических УНН анализировали в отношении блокады взаимодействия: УЕОР/УЕОРК2-Рс (пример 10, фиг. 27-1) и УЕОР/УЕОРК1 (фиг. 27-2) с помощью конкурентного А1рЬа8сгееп. Анализ для УЕОРК1 слегка адаптировали по сравнению с анализом, изложенным в примере 12.4 в патенте И8 2011/0172398 А1. Как человеческий УЕОР165, так и человеческий УЕОРК2-Рс добавляли в концентрации 0,05 нМ. Эти анализы в условиях конкуренции осуществляли

- 59 025148 также после предварительной инкубации УНН с 25 мкМ человеческим сывороточным альбумином. Обобщенные данные о значениях 1С₅₀ представлены в табл. 42.

Таблица 42

Значения 1С50 (нМ), характеризующие способность ингибировать взаимодействия: человеческий УЕОР165/человеческий УЕОРР2 и человеческий УЕОР165/человеческий УЕОРР1, полученные с помощью конкурентного А1рЬаЗсгееп

			УЕ0РК1	УЕСРК2
УНН ГО	Формат	ЧСА	1С,„ (нМ)	% ингибирования	1С₅₀ (нМ)	% ингибирования
УЕСРВН00038		-	0,6	67	0,5	100
4-	0,6	64	0,5	100
УЕСРА№ЗВП00005	дд^^др^»^	-	н. 4.	и.ίί	11. 4.	и. И.
+	η.ίί	η.4.	ίΐτΐ.	Γί.ύ,
УЕОРАЫОВПООООб	Ж^Ж	-	0,8	64	1,0	100
+	1,0	71	1,4	100
УЕСГАЫСВПОООО?	ДД^^Д^А^уОД^	-	11 αΓ	пд!.	η.4.	п.4.
+	Илк	п.4.	л.и.	л ΰ.
ΥΕΟΡΑΝΟΒΗΟΟΟΟβ		-	0,6	77	о,3	100
+	0,7	73	0,4	100

νΕΟΡΑΝΟΒΙΙ00009		-	0,8	71	0,4	100
+	1,5	72	0,7	100
УЕСГАЫСВНОООЮ		-	0,5	72	0,3	100
-I-	1,1	78	0,7	100
УЕОР ΑΝΟΒΙ 100001		-	0,6	68	0,4	100
+	0,8	76	0,6	100
νΕΟΡΑΝΟΒΠΟΟΟΙ 1	ДД^фЮфП^	-	0,8	74	0,9	100
+	2,5	81	0,8	100
νΕΟΡΑΝΟΒΠΟΟΟΙ 2	ДД'^рф^ф	-	1,0	74	0,4	100
+	1,5	80	0,7	100
УЕОРАЫСВИОООЮ		-	11.4.	Ιι,ά.	1Ε(ί	11.4.
+	11.4.	η.ώ	η. 4	11,4.
νΕΟΡΑΝΟΒΙΙ00014		-	0,8	69	0.4	100
+	1,0	80	0,7	100
Ранибизумаб		-	2,5	92	1,2	100
+	5,3	86	ι,ι	100

п.с1.: не определяли.

Для исследования блокирующих свойства антител к Апд2 в сравнении с соответствующим одновалентным конструктивным элементом 7О08 (ЗЕР ГО N0: 215), 1Ό01 (ЗЕР ГО N0: 214) и 00027 (ЗЕР ГО N0: 216) все десять биспецифических УНН анализировали в отношении блокады взаимодействий: человеческий Ап§2/ЬПе2-Рс (см. пример 5.1, фиг. 28-1), мышиный Ап§2/тТ1е2-Рс (см. пример 5.2; фиг. 28-2) и супо Ап§2/сТ1е2-Рс (см. пример 5.2; фиг 28-3) с помощью конкурентного ЕЫЗА. Этот анализ осуществляли также после инкубации УНН с 0,5 мкМ человеческим сывороточным альбумином. Дополнительно осуществляли анализ опосредуемой ЬАпд2 выживаемости клеток НИУЕС (см. пример 5.5; фиг. 29). Обобщенные данные о значениях 1С₅₀ и % ингибирования представлены в табл. 43.

- 60 025148

Таблица 43

Значения 1С₅₀ (пМ) и % ингибирования, характеризующие способность ингибировать взаимодействия: человеческий Апд2/человеческий Т1е2, мышиный Апд2/мышиный Т1е2 и супо Апд2/супо Т1е2, полученные с помощью конкурентного ЕЫ8А, и значения 1С₅₀ (нМ) и % ингибирования, полученные при анализе опосредуемой ЬАпд2 выживаемости клеток НИУЕС

			НАпд2	ηΑη&2	οΑη£2	Выживаемость клеток НиУЕС
УНН го	Формат	ЧСА	1С_№ <пМ)	% ЙНГ.	1С₅₍₎ (πΜ)	% ИНГ.	1С_5й (пМ)	% ИНГ.	1С» (нМ)	% ИНГ.
7008		+	110	100	ПД.	П.Д,	η.ά.	π Ή.	1.5	100
-	п.4.	η.ά.	Л.Й.	пД.	Л.6.	П.Ц.	11.(1.	п.4.
νΕΟΡΑΝΟΒΙΙΟ		-	пД,	пД.	η.4.	η .4.	η.4.	Π.4.	л.а.	П.4.
0005	+	пД.	η .4.	11.(1.	,1.(1	η.4.	π.1.1.	Л.с1.	п.4.
νΕΟΡΑΝΟΒΙΙΟ		-	560	100	Π.4.	η .4.	π.4.	ιι.ίί	4,9	100
0006	+	400	100	π.4.	η.4.	П.Ц.	η 4.	пД.	пд.
νΕΟΡΑΝΟΒΙΙΟ		-	пД.	Π.4.	η.4.	η.4.	π.4.	пД.	лД.	п.4.
0007	+	пД.	η, 4.	П.4.	η.4.	π.4.	П.Й.	п а.	о.4,
АМО386		-	5	100	η,4.	пД,	η,ά,	η.ά.	1.2	100
	+	4	100	π.4.	η Д.	Я.4.	»1.4.	п.6.	пД

00027			540	100	1,800	100	570	100	2,0	100
+	пД.	ΙΙ.ώ	π.<1.	η.4.	ίΐ.ί.1.	Η.4.	пл!.	пД
νΕΟΡΑΝΟΒΙΙΟ			360	100	1,300	100	390	100	5,7	100
0001	+	290	100	П.4.	«Д.	η.4.	11.(1.	т,.(1.	п.4.
νΕΟΡΑΝΟΒΙΙΟ			47	100	71	100	79	100	5,6.	100
0008	+	52	100	η. 4.	П.4,	ιι.ίί.	пД.	11.(1.	пД.
νΕΟΡΑΝΟΒΙΙΟ			33	100	36	100	46	100	3,6	100
0009	+	39	100	η.4.	η.4.	!ι (1.	η.4.	11.(1,	η, (1.
νΕΟΡΑΝΟΒΙΙΟ		-	32	100	78	100	59	100	11.(1.	пЛ
0010	+	49	100		Л.4	пук	11.4.	11.(1.	п.;1.
ΑΜΟ386		-	5	100	4	100	3	100	1,3	100
	+	4	100	)).<!.	η.1	η.4.	П.4.	и.4.	н.;1.

ГО01		-	7,000	100	10,000	100	9,500	100	7,8	100

		+-	11.(1.	п.а.	пД..	яД.	пД.	пД.	п.6.	и 4.
νΕΟΡΑΝΟΒΙΙΟ ООП		-	31	100	56	100	95	100	3,7	100
+	34	100	п.Н.	т\|.<1.	11 .4.	п.4.	о.!.	п.4.
νΕΟΡΑΝΟΒΙΙΟ 0012		*	40	100	6$	100	100	100	3,6	100
+	65	100	1(.(1,	π .а.	11.(1.	п.4.	иД,	пД.
νΕΟΡΑΝΟΒΙΙΟ 0013		-	п.6.	л Д.	11.4.	и Д.	11.4.	п.4.	11.(1.	пД.
+	пД.	л.а.	п.(!.	Ώ Д.	11.(1.	пД.	».(1.	η.ίί
νΕΟΡΑΝΟΒΙΙΟ 0014		-	710	100	1,000	100	1,100	100	11.4.	11.(1.
+	1,200	100	П Д,	π Д,	п.4.	пД.	11.(1	ιι.ίί.
АМО386		-	4	100	4	100	10	100	1.3
+	4	100	пД.	пД.	п.4.	п.а.	пД.	η.ίί

п.с1. - не определяли.

Определяли аффинность к человеческому сывороточному альбумину, результаты представлены в табл. 44. В целом, метод состоял в следующем: человеческий сывороточный альбумин (фирма 81дта, Сент-Луис, шт. Миссури, США) иммобилизовали на СМ5-чипе путем аминного сочетания. Использовали подход, основанный на применении нескольких циклов кинетического анализа: инъецировали УНН в возрастающих концентрациях (2-8-31-125-500 нМ) и давали пройти реакции ассоциации в течение 2 мин и диссоциации в течение 10 мин при скорости потока 100 мкл/мин. Между инъекциями УНН поверхности регенерировали с использованием импульсного внесения в течение 10 с 10 мМ глицина-НС1, рН 1,5 и 60-секундного периода стабилизации. Результаты ассоциации/диссоциации оценивали путем аппроксимации с использованием модели взаимодействия 1:1 (связывание по Лэнгмюру) или модели на основе гетерогенных лигандов. Константу аффиности К_с рассчитывали на основе констант скорости ассоциации и диссоциации (к_а) и (к_а) (табл. 44).

- 61 025148

Таблица 44

Аффинность (К_с) очищенных УНН к человеческому (ЧСА), обезьян циномолгус (ЦСА) и мышиному сывороточному альбумину (МСА)

	ЧСА	ЦСА	МСА
	^а (1/Мс)	ка (1/с)	κ₀ (нМ)	ка (1/Мс)	ка (1/с)	Κ_Β (нМ)	(1/Мс)	ка (1/с)	Κϋ <ηΜ)
АЬВН	4.5Ε+05	1.8Ε-03	4	4.3Ε+05	1.6Ε-03	4	6.6Ε+05	3.2Ε-02	49
νΕΟΡΑΝΟΒΙΙΟΟΟΟΙ	2.3Ε+05	4.8Ε-03	22	1.8Ε+05	4.3Ε-03	24	η.ά.	η .(3.	η.ά.
νΕΟΡΑΝΟΒΙΙΟΟΟΟί	η.έ1.	η.ά.	(ΐ.ό.	п.Ц.	ιι.ά.	η.ά.	η.ά.	η.ά.	η.ά.
νΕΟΡΑΝΟΒΙΙΟΟΟΟό	2.0Ε+05	4.6Ε-03	22	Ι,ίΕ+05	4.5Ε-03	30	Ι,7Ε+05	6.0Ε-02	360
νΕΟΡΑΝΟΒΙΙ00007	η.ύ.	η.ίΐ,	η.ά.	η.ΰ.	π.ίί.	Π.ίϊ.	η.ά.	η.ά.	η.ά.
νΕΟΡΑΝΟΒΙΙΟΟΟΟί	1.3Ε+05	4.3Ε-03	34	Γϊ,ΰ.	' η.ά.	π,ΰ.		η.ά.	4.4.
νΕΟΡΑΝΟΒΙΙΟΟ0Ο9	1,5Ε+05	4,6Ε-03	30	1,1Ε+05	4,2Ε-03	39	1,2Ε+Ο5	4.0Ε-02	340
νΕΟΡΑΝΟΒΙΙΟΟΟΙΟ	η.ιΐ.	η.ά.	η.ά.	11.4.	».ά.	η.ά.	η .ά .	η.ά.	Л.Й.
νΕΟΡΑΝΟΒΙΙΟΟΟΙ 1	1.3Ε+05	4.0Ε-03	31	η.ά.	π.ά.	Β.ίΙ.	ΐΐ. 3.	ιι.ιΐ,	η.ϋ.
νΕΟΡΑΝΟΒΙΙΟΟΟΙ 2	1,5Ε+05	43Ε-03	31	1,2Ε+05	4.2Ε-03	24	Ι,ΟΕ+05	2.5Ε-02	240
νΕΟΡΑΝΟΒΙΙΟΟΒ	η.ίί.	η.ΐΐ.	η.ά.	η.ά.	η.ά.	η.ά.	п.с1.	,1.4.	и.а.
νΕΟΡΑΝΟΒΙΙ0014	η.ά.	ΐΐ.ά.	η .ά,	ιμΙ.	η.ά.	11.ά.	η.ά.	π.ά.	τι.ά.

п.с!.: не определяли.

Пример 12.

Конструирование, получение и характеризация биспецифических УНН с оптимизированной последовательностью и созревшей аффинностью, мишенью которых являются УЕОР и Апд2, созданных с использованием связывания с антителом к сывороточному альбумину для удлинения времени полужизни.

Создавали 14 биспецифических УНН, мишенью которых является УЕОР и Апд2 (УЕОРАNОВII00015-00028). В эти конструкции в качестве анти-Апд2 конструктивных элементов включали двухвалентный 00921 (вариант 1Ό01 с оптимизированной последовательностью) (8ЕО ГО N0: 220), одновалентные УНН 00908-00932-00933-00934-00935-00936-00937-00938 (варианты 28Ό10 с оптимизированной последовательностью /с созревшей аффинностью) (8ЕО ГО N0: 222), двухвалентный 00956 (8ЕО ГО N0 : 223) (вариант 28Ό10 с оптимизированной последовательностью) и одновалентный 00928 (8ЕО ГО N0: 221) (вариант 37Р02 с оптимизированной последовательностью). Генетическое слияние со связывающим сывороточный альбумин УНН применяли в качестве методологии удлинения времени полужизни. Конструктивные элементы соединяли через гибкий линкер 9 О1у-8ег. Обзор форматов и последовательностей всех 14 биспецифических УНН представлен на фиг. 30 и в табл. 45-А (линкерные последовательности подчеркнуты), 8Е0 ГО N0: 200-213. Уровни экспрессии представлены в табл. 45-Б.

- 62 025148

Таблица 45-А

Последовательности биспецифических УНН, мишенью которых являются УЕОР и Ап*2

УНН ГО	АК-последовательность
νΕΟΡΑΝΟΒΙΙ00015	ОУ0ЕУЕ8ОСОЕУ0РОС8ЕКЬ8САА8ОКТР88У5МО\УРВ0АРОКЕЕЕГУУА1 5ΚΟΟΥΚ.ΥΟΑν8ΕΕΟΚΡΤΙ8ΚΙ)ΝΑΚΝΤνΥΕ(}ΙΝ8ΕΚ.ΡΕΟΤΑνΥΥΟΑ5δΚΑΥΟ 55ΚΕΚΕΑ0ΤΥΕΥ\ν600ΤΕντν5800605ί>005Εν0ΕνΕδ000Εν0Ρ6Ν8Ε еезсллзсртгззрсмзч'уволрокоееу/узз^сзсзотеуаозуксегт! 3ΕΟΝ АКТТЬУ ΕζιΜΝδΕΚΡΕΟΤ Α V Υ ΥΟΤΙΟΟ ЗЕЗКЗЗОСТЕУТУЗЗСССО δΟ ОО8ЕУ()ЕУЕ8ОООЕУ<ЗРОО8ЕЕЕ8САА8О1ТЕООУА1С'\|УРЯ<2АРСКЕКЕСУ 8δΙΚΟΝ60δΤΥΥΑΟδνΚΟΚΡΤΙ880ΝδΚΝΤνΥΕ<}ΜΝ8ΕΚΡΕΟΤΑνΥΥ€ΑΑν ΡΑΟΚΕΚΥΟΕ0\νΥΡΙΥΕΥΟΑΛΌ0ΟΤΕντνδ8 (8ΕΟ ГО ΝΟ: 200)
νΕΟΡΑΝΟΒΙΙΟΟΟΙό	ОУ()ЕУЕ8000ЕУ(ЗР0С5ЕЕЕ8САА80ЕТР88У8М01УРЕ(ЗАР0К.ЕЕЕРУУА1 8ΚΟΟΥΚΥΟΑν8ΕΕΟΚΡΤΙ8ΚΟΝΑΚΝΤνΥΕΟΙΝ8ΕΚΡΕϋΤΑνΥΥΟΑ83ΚΑΥΟ 38ΚΕΚΕΑΟΤΥΕΥ\ν000ΤΕνΤν330α0080008ΕνθΕνΕ8000ΕνθΡ0Ν8Ε КЬЗС А АЗОРТРЗЗРСМЗХУ УК<}АРСКОЕЕ1У У331ЗОЗОЗОТЕ/У А 08 УКО ΒΓΤΙ δΚϋΝ ΑΚΤΤί ΥΕ0ΜΝ8ίΚΡΕΟΤΑ V Υ ΥΟΤΙΟΟ ЗЬЗКЗ δρΟΤί УТ УЗЗООООЗО ΟΟ5Εν0ΕνΕδΟ0αΕν0ΡΟΟ8ΕΚΕ50Αν8ΟΙΤΕΟΟΥΛΙΟ\νΡΓ<0ΑΡΟΚΕΚΕθν δδΙΒΟΝΟΟδΤΥΥΑΟδνΚΟΚΡΤΙδδΟΝδΚΝΤνΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΑΑν ΡΑΟΒΕΒΥΟΕΟ\νΥΡΙΥΕΥΟΑ\νθΟΟΤΕντν58 8ΕΟ Ю ΝΟ: 201)
νΕΟΡΑΝ6ΒΙΙ00017	ОУ<}ЕУЕ80СОЕУ<)РООЗЕКЕ5СААЗОКТГ83УЗМО\УРК()АРОКЕЕЕРУУА1 3ΚΟΟΥΚΥΟΑν3ΕΕαΚΡΤΓ3ΚΟΝΑΚΝΤνΥΕς>ΙΝ3ΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΑ33ΚΑΥΟ δδΕΕΚΕΑΟΤΥΕΥΙΥΟΟΟΤΕντνδδΟΟΟΟδΟΟΟδΕνΟΕνΕδΟΟΟΕνΟΡΟΝδΕ ΚΕδ0ΑΑδ0ΕΤΕ85ΕΟΜ5^,\ννΚ0ΑΡ0ΚΟΕΕΨνδδ15Οδ03ΟΤΕΥΑΟ8νΚ0ΚΡΤ1 δΚΟΝΑΚΤΤΕΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤΙΟΟδΕδΚδδΟΟΤΕντνδδΟΟΟΟδΟ СОЗЕУ<ЗЕУЕЗОООЕУ9РСС31,ВЕ8САА801ТЬООУА1С5УРЕОАРОКЕВЕОУ δΑΙΚΟΝΟΟδΤΥΥΑΟδνΚΟΒΡΤΙδδΟΝδΚΝΤνΥΕρΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΑΑν РАОКЕВ¥ОЕО\УУР1УЕУОА\УСООТЕУТУ88 8Ε0 Ю ΝΟ: 202)
νΕΟΓΑΝΟΒΠΟΟΟΙβ	ОУ0ЕУЕ80О0ЕУ0РО03ЬКЕ8СААЗОКТР88У8МО\УРК0АРОКЕКЕРУУА1 8ΚΟΟΥΚΎΟΑνδΕΕΟΚ.ΡΤΙ8Κ.ΟΝΑΚΝΤνΥΕ()ΙΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΑδ8ΚΑΥΟ 88ΒΕΚΕΑΟΤΥΕΥΨΟΟΟΤΕντν880ΟΟΟ8ΟΟΟ8ΕνθΕνΕ8ΟΟΟΕνθΡ0Ν8Ε ΒίδΟ АА8СГТР38РСМ8)У V В(ЗАРСКСЕЕ\УУ8313СЗС ЗОТЬУ Αϋ5 УКСКРТ1 5Κ0ΝΑΚΤΤΕΥΕ<3ΜΝ5ΕΚΡΕ0ΤΑνΥΥ€ΤΙ0α8Ε5Ε5δ<30ΤΕντν580α0050 ССЗЕУ<5ЕУЕЗСССЕУ9РОС81,К1,8САА8СПЪОО¥А1О\УРК9АРОКЕЕЕОУ 8ΑΙΕΕδΟΟ3ΤΥΥΑΟ3νΚΟΒΡΤΙ58ΟΝ3ΚΝΤνΥΙΛ>ΜΝ3ΕΕΡΕΟΤΑνΥΥΟΑΑν ΡΑΟΕΕΕΥΟΕΟλνΥΡΙΥΕΥΟΑΨΟΟΟΤΕντνδδ 5ΕΟ Ю ΝΟ: 203)
νΕΟΡΑΝΟΒΙΙΟΟΟΙΟ	ОУ<гЕУЕЗООСЕУ<ЗРОО5ЕЕЕЗСАА5ОЕТР88У5МО1УРК9АРОКЕВЕРУУА1 δΚΟΟΥΚΥΟΑνδΕΕΟΕΡΤΙδΕΟΝΑΚΝΤνΥΡςίΝδΡΕΡΕΟΤΑνΥΥΟΑδδΕΑΥΟ 83ΕΕΕΕΑ0ΤΥΕΥΨΟ00ΤΕντν83Ο0α080Ο08ΕνθΕνΕ3000Εν0Ρ0Ν8Ε ЕЕ8СААЗОРТР88РОМ8\УУЕ0АРОКОЕЕ1УУ3818О8О8ОТЕУАО8УКОЕРТ1 5ΕΟΝΑΚ.ΤΤΕΥΕ9ΜΝ8ΕΒΡΕΟΤΑνΥΥ<;ΤΙΟΟ3Ε8Ε58<3ΟΤΕντν55ΟΟθα5Ο ОО5ЕУ(}ЕУЕЗСССЕУ<)РСО8ЕЕЕ5САА8С1ТЕООУА1О\УГЕ<ЗАРСКЕВЕСУ 5ΑΙΕ35Ο05ΤΥΥΑΟ8νΚΟΕΡΤΙ550Ν8ΚΝΤνΥΕ<}ΜΝ3ΕΕΡΕΕ>ΤΑνΥΥ0ΑΑν ΡΑΟΚΕΕΥΟΕΟΙΥΥΡΙΥΕΥΟΑίνΟΟΟΤΕνΤνδδ 3Ε0 ГО ΝΟ: 204)
νΕΟΡΑΝΟΒΙΙ00020	ОУ0ЕУЕ8ОО0ЕУ9РООЗЕЕЕ8САА8ОЕТР88У8МО\УРК9АР0КЕЕЕРУУА1 δΚΟΟΥΚΥΟΑνβΕΕΟΕΡΤΙδΕΟΝΑΚΝΤνΥΙ/ΪΙΝδΕΒΡΕΟΤΑνΥΥΟΑδδΚΑΥΟ δδΕΕΕΕΑΟΤΥΕΥίνΟΟΟΤΕντνδδΟΟΟΟδΟΟΟδΕνΟΕνΕδΟΟΟΕνΟΡΟΝδΕ ЕЬЗСААЗОРТР83ГОМ31¥УЕ0АР0К0ЕЕ1УУ3813ОЗС8ОТЕУАО8УКОВРТ1 5ΕΟΝΑΚ.ΤΤΕΥΕ<3ΜΝδΕΕΡΕΟΤΑνΥΥεΤΙΟΟ8ΕδΒ88<5ΟΤΕντν33αθΰΟ5Ο ООЗЕУОЕУЕЗОООЕУОРОО δίΕίδΟ А УЗО1ГЬОО Υ ΑΓΟ У/РКОЛРО КЕЕЕО V 8ΑΙΕΟΝΟΟ8ΤΥΥΑΟ8νΚΟΕΡΤ138ΟΝ8ΚΝΤνΥΕ<3ΜΝ8ΕΕΡΕΟΤΑνΥΥ0ΑΑν ΡΑΟΕΕΚΥΟΕ0\νΥΡΙΥΕΥΟΑΐνθ0ΟΤΕντν33 8ΕΟ Ю ΝΟ: 205)
νΕΟΡΑΝΟΒΙΙ00021	ОУ0ЕУЕ5СООЕУ0РО63ЕКЕ8САА5СКТР55У5МС\УРК0АРСКЕЙЕГУУА1 5ΚΟΟΥΚΥΟΑν8ΕΕΟΕΡΤΙ5ΕΟΝΑΚΝΤνΥΕΟΙΝδΕΕΡΕΟΤΑνΥΥεΑ3δΕΑΥΟ 8δΕΕΕΕΑ0ΤΥΕΥ1Υ000ΤΕντν8300Ο08ΟΟΟ8Εν0ΕνΕ8000ΕΥΟΡ0Ν3Ε ЕЕ5СААЗОРТГ88РОМ31¥УК<ЗАРОКОЕЕ\УУ5818С8О8ОТЕУАО8УК0ВРТ1 3ΕΟΝΑΚΤΤΕΥΕΟΜΝ8ΕΕΡΕΟΤΑνΥΥετΐΟΟ3Ε8Ε38ΟΟΤΕντν85ΟΟΟΟ3Ο ООЗЕУОЬУЕЗОООЕУдРООЗЕЕЬЗСАУЗОИЕООУАЮАУРЕдАРОКЕЕЕОУ 8ΑΙΚΕ3ΟΟ8ΤΥΥΑΟ8νΚ.ΟΕΡΤ185ΟΝ5ΚΝΤνΥΙΛ}ΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥ0ΑΑν ΡΑΟΕΕΕΥΟΕΟΐνΥΡΙΥΕΥΟΑ\νθΟΟΤΕντν85 5Е<? ГО ΝΟ: 206)
νΕΟΡΑΝΟΒΙ100022	ОУ<31,УЕ500СЕУ<5РСС8ЕВЕ8САА30ВТР58УЗМС)УРЕ<>АРСКЕКЕРУУА1 8ΚΟΟΥΚΥΟΑν5ΕΕΟΒΡΤΙδΚΟΝΑΚΝΤνΥΕ<}ΙΝ5ΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΑ55ΒΑΥΟ 83ΕΕΕΕΑ0ΤΥΕΥ)να0ΟΤΕντν3800Ο030ΟΟ3Εν0ΕνΕδ0Ο0Εν0Ρ0Ν8Ε КЕЗСААЗСРТРЗЗРСМЗАУУЕОАРОКСЕЕАУУЗЗКОЗОЗОТЬУАОЗУКОЕРТ! 3ΕΟΝΑΚΤΤΕΥΕΟΜΝ8ΕΚΡΕΟΤΑνΥΥεΤΙ003Ε3Ε3300ΤΕνΤν33000030 ООЗЕУОЕУЕЗОООЕУОРООЗЕЕЬЗСАУ301ТЕООУА10)УРЕОАРакЕЕЕСУ 5ΑΙΒδ8003ΤΥΥΑΟ5νκΟΕΡΤΙ83ΟΝ5ΚΝΤνΥΙΑ3ΜΝ5Ι,ΚΡΕΟΤΑνΥΥ€ΑΑν ΡΑΟΚΕΕΥΟΕΟΙΥΥΡΙ ΥΕΥΟΑΎΟΟΟΤΕΥΤνδδ 5Ε0 ГО ΝΟ: 207)

- 63 025148

Последовательности биспецифических УНН, мишенью которых являются УЕОР и Ап§2

УНН ГО	АК-последовательность
УЕОРА140В1100023	ОУ<ЗЬУЕ8СООЬУрРОС8Ы<Е8САА8ОКТР85У5МС\УРК.<гАРСК.ЕКЕГУУА1 3Κ06ΥΚ.ΥΒΑν8ΕΕΟΚΡΤΙ3ΚΟΝΑΚΝΤνΥΕ()ΙΝ3ΕΚΡΕϋΤΑνγΥΟΑ33ΚΑΥΟ 85ΚΕΚΙ,Α0ΤΥΕΥϊν0Ο0ΤΕνΤν550Ο005000$Εν0Ι.νΕδ000ΕνθΡ0ΝδΕ Ε.Ε8ΟΑΑδΟΡΤΕδδΡΟΜδ\νν^ΑΡΟΚΟΕΕ\νν88ΙδΟ3ΟδΒΤΕΥΑϋδνΚΟΚΡΤΙ 8ΚϋΝΑΚΤΤΕΥΕ<3ΜΝδΕΚ.ΡΕΟΤΑνΥΥ<;ΤΙ005Ε5Κδ8<ΪΟΤΕντν3500 0050 0Ο3Εν<3ΕνΕ800ΟΕν(ίΡ003ΕΚΕ30ΑΑ30ΡΤΕϋΟΥΑΙ0\νΡΚ.ς>ΑΡΟΚΕΚΕ0ν 5ΑΙΚ.ΟΝΟΟ5ΤΥΥΑϋδνΚ.ΟΚΓΤΙ88ΟΝ3ΚΝΤνΥΕ<3ΜΝ$ΕΚΡΕΟΤΑνΥΥσΑΑν ΡΑ0ΚΕΚΡΟΕΟ4τγΡΕΥΕΥΟΑ\ν0ΟΟΤΕντνδδ00ΟΟ3ΟΟ03ΕνθΕνΕ3ΟΟΟΕ ν<3ΡΟΟ3ΕΚΕ30ΑΑδ0ΡΤΕΒΒΥΑΙΟΐνΡΚ<ΪΑΡ0ΚΕΚΕθν3ΑΙΚΒΝΟ0δΤΥΥΑΒ 3νΚΟΚΡΤΙδδΟΝδΚΝΤνΥΕ<3ΜΝδΕΛΡΕΟΤΑνΥΥΟΑΑνΡΑΟΚΕΚΡΟΕρ\νΥΡΕ ΥΕΥϋΑ\νθΟΟΤΕντν35 8Е<? ГО ΝΟ: 208)
νΕΟΡΑΝΟΒ1Ι00024	ОУ<}ЕУЕЗСССЕУ<}РОО8ЕКЕЗСАА8СКТЕЗЗУЗМО1¥РК<ЗАРОКЕКЕРУУА1 δΚΟΟΥΚΥϋΑν3ΕΕΟΚΡΤΙ8ΚΕ>ΝΑΚΝΤνΥΕ<3ΙΝ5ΕΚΡΕΟΤΑνγγθΑδδΚΑΥΟ δδΚΕΚΕΑϋΤΥΕΥίνΟΟΟΤΕντνδδΟΟΟΟδΟΟΟδΕνΟΕνΕδΟΟΟΕνΟΡΟΟδΕ ΚΕδΟΑΑδΟΡΤΕΟΒΥΑΙΟλνΡΚζίΑΡΟΚΕΚΕΟνδΑΙΚΌΝΟΟδΤΥΥΑΒδνΚΟΚΡΤ Ι55ΟΝδΚΝΤνΥΕ0ΜΝ3ΕΡΡΕ0ΤΑνΥΥ€ΑΑνΡΑαΚΕΚΡΟΕ0ν/ΥΡΕΥΕΥΟΑ\ν ОООТЕУТУ88О0О0800ОЗЕУОЕУЕЗСтС.ОЕУОРОО8ЕКЕ8САА8ОРТЕВВУ ΑΙΟν/ΡΚρΛΡΟΚΕΚΕΟνδΑΙΡΟΝΟΟδΤΥΥΑΟδνΚΟΒΡΤΙδδηΝδΚΝΤνΥΕΟΜ ΝδΕΚΡΕΒΤΑνΥΥΟΑΑνΡΑΟΚΕΚΡΟΕςμνΥΡΕΥΕΥϋΑΐνορΟΤΕντνδδΟΟΟ Ο8ΟΟΟ3ΕνθΕνΕ8ΟΟΟΕνθΡΟΝ8ΕΚΕ30ΑΑ8ΟΡΤΡ88ΡΟΜ8\ννΚ.ΟΑΡΟΚΟΕ Ε\νν33Ι303Ο30ΤΕΥΑΟ3νΚ0ΚΡΤΙ3ΕΟΝΑΚΤΤΕΥΕ<5ΜΝ3ΕΚΡΕΟΤΑνΥΥ0 ΤΙ003Ε3Κ53<30ΤΕντνδδ 8Ε0 ΙΒ ΝΟ; 209)
νΕΟΡΑΝΟΒΙΙ00025	ΟνΟΕνΕδΟΟΟΕνςΡΟΰδΕΚΕδΟΑΑδΟΚΤΡδδΥδΜΟν/ΡΚΟΑΡΟΚΕΚΕΡννΑΙ 3ΚΟΟΥΚΥΟΑνδΕΕΟΚΡ·Π8ΚΒΝΑΚΝΤνΥΕ(}ΙΝ3ΕΚ.ΡΕΟΤΑνΥΥΟΑ33Κ.ΑΥΟ 38ΒΕΚΕΑΟΤΥΕΥ\νθ00ΤΕντν38Ο0ΟΟ3ΟΟΟ3ΕνθΕνΕ8ΟΟΟΕν0Ρ0Ν5Ε ΚΕδ0ΑΑ8ΟΡΤΡ33Ρ0Μδ\ννΚ9ΑΡΟΚΟΕΕ\ννδδΙ303Ο3ΟΤΕΥΑΒ3νΚΟΚΡΤΙ 5ΚΟΝΑΚΤΤΕΥΕζ>ΜΝ3ΕΚΡΕϋΤΑνΥΥΕΠ005Ε3Κ33<20ΤΕντνδ3000030 еСЗЕУ<гЕУЕЗОООЕУ<ЗРООЗЕКЕЗСААЗОРТРООУАЕС%Т1«}АРСКЕКЕС νδΟΙΚΟδΟΟδΤΥΥΑΙίδνΚΟΚΡΤΙδδΟΝδΚΝΤνΥΕρΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΑΑ 8ΐνΡΚδΚΕΕΡΥΕΥΟΑ\ν0Θ0ΤΕντνδδ00Ο0δ0008Εν0ΕνΕ8ΟΟΟΕνθΡ0Ο 3ΕΚΕ30ΑΑ30ΡΤΓΒΒΥΑΕΟ\νΡΚ(?ΑΡΟΚΕΚΕθν30ΙΚ.ΟδααδΤΥΥΑΒ3νΚΟΚ ΡΤΙ5δΟΝ3ΚΝΤνΥΕ9ΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΑΑδΐνΡΚδΚΕΕΡΥΕΥΟΑ\νθ<30Τ ЬУТУ88 δΕ<3 ΙΒΝΟ: 210)
νΕΟΓΑΝΟΒΙΙ00026	ОУ9ЬУЕ800СЕУ<2Р008и<1,ЗСАА80КТР35УЗМО\УРКрАРОКЕКЕРУУА1 δΚΟΟΥΚΥΟΑνδΕΕΟΚΡΤίδΚΟΝΑΚΝΤνΥίρίΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΑδδΚΑΥΟ ЗЗВЬЕЬАОТУЕУХУОООТЬУТУЗЗСООСЗОООЗЕУОЬУЕЗССОЕУОРООЗЕ ЯЕЗСААЗОРТРОВУАЕСУУРК/ЭАРОКЕКЕОУЗСтСЗООЗТУУАОЗУКОКРТ Ι880Ν8ΚΝΤνΥΕ()ΜΝ3ΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΑΑ8ΐνΡΚ8ΚΕΕΡΥΕΥΟΑ\ΥΟ<}ΟΤΕν ΤνδδΟΟΟΟδΟΟΟδΕνΟΕνΕδΟΟΟΕνΟΡΟΟδΕΕΕδΟΑΑδΟΡΤΡϋΟΥΑΕΟΨΡΚ (ΪΑΡΟΚΕΚΕΟνδΟΙΚΟδΟΟδΤΥΥΑΒδνΚΟΚΡΤΙδδΒΝδΚΝΤνΥΕΟΜΝδΕΚ.ΡΕΒ ТАУУУСАА31УРКЗКЕЕРУЕУВА\УОО0ТЕУТУ83СССО8ОО08ЕУОЕУЕЗ ΟΟΟΕν<}ΡΟΝ3ΕΚ.Ε3ΟΑΑ3ΟΡΤΡ33ΡΟΜ3\ΥνΚ.ζ)ΑΡΟΚ.ΟΕΕΐνν53Ι3Ο3Ο8ϋΤ ΕΥΑΟδνΚΟΚΓΤΙδΚϋΝΑΚΤΤΕΥΕρΜΝδΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΤΙΟΟδΕδΚδδρΟΤΕ УТУ88 8ΕΟ ГО N0:211)
νΕΟΡΑΝΟΒΙΙ00027	ОУ<ЭЕУЕЗСССЕУ9РООЗЕаЕЗСААЗО1ПТ88УЗМО\УГ1УЗАРОКЕКЕРУУА1 8ΚΟΟΥΚΥΟΑν8ΕΕΟΚΡΤΙ8ΚΟΝΑΚΝΤνΥΕ9ΙΝ5ΕΚΡΕΟΤΑνγγθΑδδΚΑΥΟ ЗЗКЕКЕАОТ¥ЕУ\УООСТЕУТУ53ССССЗСОСЗЕУОЕУЕЗССОЕУОРаНЗЕ ΚΕ30ΑΑ3ΟΡΤΡ35ΡΟΜ8\ννΒ9ΑΡΟΚΟΕΕ\νν33Ι3Ο8Ο3ϋΤΕΥΑΟ8νΚΟΚΡΤΙ δΚΟΝΑΚΤΤΕΥΕΟΜΝδΕΚΡΕϋΤΑνΥΥΟΤΙΟΟδΕδΚδδΟΟΤΕντνδδΟΟΟΟδΟ 003Ενς>ΕνΕ5000Εν<2Ρ008ΕΚΕ50ΑΑ30ΡΑΕΟΥΥΑΙΟ\νΡΚ9ΑΡΟΚΕΚΈΟ νδ0Ι333ΟΟΠΎΥΑΟ$νΚ0ΚΓΤΙ8ΚΟΝδΚΝΤνΥΕ<}ΜΝ3ΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΑΤ0 800ΥΪΟΥΟ0δΟΕΟΥΟΥ\να<30ΤΕντν53 3Ε<3 ΙΒΝΟ: 212)
νΕΟΡΑΝΟΒΠ00028	0νζ)ΕνΕ3000Εν(3Ρ003ΕΚΕ30ΑΑ30Κ.ΤΡ33Υ3Μ0\νΡΚ(}ΑΡ0ΚΕΚ.ΕΓννΑΙ 8ΚΟΟΥΚ.ΥΒΑν8ΕΕΟΚΡΤΙ3ΚΒΝΑΚΝΤνΥΕς>ΙΝ8ΕΚΡΕΒΤΑνΥΥΟΑ58ΚΑΥΟ 35ΚΕΚΕΑΟΤΥΕΥΑΥΟΟΟΤΕντν88000Ο5ΟΟΟ8ΕνθΕνΕ8ΟΟΟΕνθΡ0Ν8Ε КЕЗСААЗОРТР35ГОМ5\УУК9АР0К0ЕЕ1УУ5315О5ОЗОТЕУАО8УК0КРТ1 δΚΒΝΑΚΠΈΥΕΟΜΝδΕΚΡΕΒΤΑνΥΥΟΤΙΟΟδΕδΚδδΟΟΤΕντνδδΟΟΟΟδα 0ΟδΕνρΕνΕ3ΟΟΟΕνς>ΡΟΟ3ΕΚΕ30ΑΑ3ΟΡΤΕΟΟΥΑΙΟ\νΡΚ<3ΑΡΟΚΕΚΕθν 3ΑΙΕ3300δΤΥΥΑ03νΚ0ΚΓΤΓ33ΟΝ3ΚΝΤνΥΕ<3ΜΝ3ΕΚΡΕΟΤΑνΥΥ0ΑΑν ΡΑΟΚΕΚΡΟΕΟΨΥΡΕΥΕΥϋΑΐνΟΟΟΤΕΥΤνδδΟΟΟΟδΟΟΟδΕνΟΕνΕδΟΟΟΕ νΟΡΟΟδΕΕΕδΟΑΑδΟΡΤΕΟΟΥΑΙΟν,ΤΚΟΑΡΟΚΕΚΕΟνδΑΙΚδδΟΟδΤΥΥΑΟ 3νΚΟΚΡΤΙ33ΟΝ3ΚΝΤνΥΕ0ΜΝ3ΕΚΡΕΟΤΑνΥΥΟΑΑνΡΑΟΚΕΚΡΟΕ<>\νΥΡΕ ΥΕΥϋΑΧνΟΟΟΤΕντνδδ δΕΟ ΙΒ ΝΟ: 213)

- 64 025148

Таблица 45-Б

УНН го	Формат	Уровень экспрессии (мг/л)
νΕΟΡΑΝΟΒΙΙ0ΟΟ22
νΕΟΡΑΝΟΒΙΙ00025
νΕΟΡΑΝΟΒΙΙΟ0Ο28	^8 ОД/ 88

Для исследования блокирующих свойства антител к УЕОР в сравнении с одновалентным конструктивным элементом УЕОРВ1100038 биспецифические νΗΗ анализировали в отношении блокады взаимодействия УЕОР/УЕОРК2-РС (пример 10, фиг. 31-1) и УЕОР/УЕОРК1 (пример 11, фиг. 31-2) с помощью конкурентного А1р1иШсгеет Эти анализы в условиях конкуренции осуществляли также после предварительной инкубации νΗΗ с 25 мкМ человеческим сывороточным альбумином. Обобщенные данные о значениях 1С₅₀ представлены в табл. 46-А.

Таблица 46-А

Значения 1С₅₀ (нМ), характеризующие способность ингибировать взаимодействия: человеческий \^гЕОР165/человеческий УЕОРК2 и человеческий VΕОΡ165/человеческий УЕОРК1, полученные с помощью конкурентного АфйаЗсгеен

УНН ГО УЕСРВП00038 νΕΟΡΑΝΟΒΙΙ00022	Формат	ЧСА + +	1С₅о (пМ) 0,4 η.ά. 0,4 0,6	УЕСРК1 % ингибирования 57 п.й. 64 75	1С₅₀ (нМ) 0,2 η.ίί 0,2 0,3	УЕОРК2 % ингибирования 100 пл1. 100 100
νΕΟΡΑΝ6ΒΙΙ00025		-	0,6	68	0,2	100
+	0,9	75	0,3	100
УЕОРА14ОВП00028		-	0,5	64	0,2	100
+	0,5	64	0,2	100
ранибизумаб		-	3,2	97	0,7	100
+	υ.Λ	ч.а.	0,9	100

η.Ι.: не определяли.

Кинетические характеристики связывания биспецифических νΗΗ с человеческим УЕОР165 анализировали с помощью δΡΚ с использованием устройства В1асоге Т100 (см. пример 12.5 в патенте υδ 2011/0172398 А1). Одновалентное NаηοЬοάу УЕОРВ1100038 применяли одновременно в качестве стандарта (табл. 46-Б).

Таблица 46-Б

Обобщение данных о кинетических параметрах, полученных с помощью В1асоге-анализа с использованием йУЕОР165

	ка1 (1/Мс)	ки (1/с)	кй (1/с)	к32 <1/с)	Он (М)
УЕСГВП00038	2.6Е+05	1.3Е-02	1.3Е-02	1.9Е-04	7,5Е-10
νΕΟΡΑΝΟΒΙΙ00022	1,6Е+О5	1,4Е-02	1.4Е-02	2,2Е-04	1,4Е-09
νΕΟΡΑΝΟΒΙΙΟΟ025	1.1Е+05	1.4Е-02	1.4Е-02	2,1Е-04	1.9Е-09
νΕΟΡΑΝΟΒΙ100028	1.7Е+05	1,ЗЕ-02	1,ЗЕ-02	2.1Е-04	1,1Е-09

Способность νΗΗ связываться с изоформой человеческого УЕОР121 определяли с помощью ЕЫδΑ, предназначенного для оценки связывания. Связывание серий разведений νΗΗ с человеческим УЕОР121 (фирма Κ&Ό), который в концентрации 1 мкг/мл применяли для непосредственной сенсибилизации планшетов (человеческий УЕОР165 применяли в качестве стандарта), определяли с использованием биотинилированного антитела к νΗΗ 1А4, а затем экстравидина-ΗΚΡ. 1А4 представляет собой антитело к νΗΗ в виде νΗΗ (созданное в лаборатории фирмы АЬ1упх Νν). Эталонное средство авастин служило в качестве положительного контроля и для его выявления использовали конъюгированное с ΗΚΡ антитело к человеческому Рс. Несоответствующий νΗΗ служил в качестве отрицательного контроля. Репрезентативные кривые, описывающие связывание с УЕОР165 и УЕОР121, представлены на фиг. 46, соответствующие значения ЕС50 обобщены в табл. 46-В.

- 65 025148

Таблица 46-В

Обобщенные данные о значениях ЕС₅₀, характеризующих связывание с НУЕОР165 и ЕУЕОР121, полученные с помощью ЕЫ§Л

Связывание с крысиным и мышиным УЕОР164 оценивали с помощью ЕЫ§Л, предназначенного для оценки связывания. Связывание УНН с мышиным или крысиным УЕОР164 (фирма Κ&Ό), который в концентрации 1 мкг/мл применяли для непосредственной сенсибилизации планшетов, оценивали с использованием биотинилированного антитела к УНН 1А4, а затем экстравидина-НКР. В качестве положительного контроля титровали мышиное/крысиное обладающее перекрестной реактивностью моноклональное антитело В20-4.1 (фирма ОепеШесН) и выявляли с помощью конъюгированного с НКР антитела к человеческому Рс. Несоответствующий УНН служил в качестве отрицательного контроля. Результаты представлены на фиг. 33. Все три биспецифических УНН не давали перекрестную реакцию с мышиным и крысиным УЕОР.

Связывание с человеческими УЕОР-В, УЕОР-С, УЕОР-Э и РЬОР оценивали с помощью ЕЫ§Л, предназначенного для оценки связывания. Связывание УНН с УЕОР-В (фирма Κ&Ό), УЕОР-С (фирма Κ&Ό), УЕОР-Ό (фирма Κ&Ό) и РЬОР (фирма Κ&Ό), которые в концентрации 1 мкг/мл применяли для непосредственной сенсибилизации планшетов, оценивали с использованием биотинилированного антитела к УНН 1А4, а затем экстравидина-НКР. В качестве положительного контроля применяли параллельно серии разведений соответствующих рецепторов (НУЕОРК1-Рс для НУЕОР-В и НРЬОР, НУЕОРК2Рс для НУЕОР-С, тАЬ к НУЕОР-Э (фирма Κ&Ό) для НУЕОР-Ό). Несоответствующий УНН служил в качестве отрицательного контроля.

Результаты представлены на фиг. 34. Все три биспецифических УНН не связывались с представителями семейства УЕОР.

Для исследования блокирующих свойства антител к Апд2 в сравнении с соответствующим одновалентным конструктивным элементом 00921 (8ЕО ГО N0: 220) и 00938 (8Е0 ГО N0: 222) все три биспецифических УНН анализировали в отношении блокады взаимодействий человеческий Апд2/НТ1е2-Рс (см. пример 5.1, фиг. 35-1), мышиный Ап§2/тТ1е2-Рс (см. пример 5.2; фиг. 35-2) и супо Ап§2/сТ1е2-Рс (см. пример 5.2; фиг 35-3) с помощью конкурентного ЕЬ1§А. Анализ с человеческими компонентами осуществляли также после инкубации УНН с 0,5 мкМ человеческим сывороточным альбумином. Кроме того, биспецифические УНН тестировали в отношении взаимодействия ЬАп§1/НТ1е2 с помощью конкурентного ЕЬ18А (см. пример 5.3; фиг. 36) и осуществляли анализ опосредуемой НАп§2 выживаемости клеток НИУЕС (см. пример 5.5; фиг. 37). Обобщенные данные о значениях 1С₅₀ и % ингибирования представлены в табл. 47-А.

Таблица 47-А

Значения 1С₅₀ (пМ), характеризующие способность ингибировать взаимодействия: человеческий Ап§2/человеческий Т1е2, мышиный Апд2/мышиный Т1е2 и супо Апд2/супо Т1е2, полученные с помощью конкурентного ЕЬ1§А, ЬАп§1-ЕЬ1§А, и значения 1С₅₀ (нМ), полученные при анализе опосредуемой НАп§2 выживаемости клеток НИУЕС

			ЕЫ5А	Выживаемость клеток ниУЕС
			Ап§2	тАп£2	сАп§2	Ь.Ап£1
УНН го	Формат	ЧСА	1С$0 (пМ)	% ИНГ.	1С₅₀ (пМ)	% ИНГ.	1С50 (пМ)	% ИНГ.	Отношение Ю50 ЬАпк1/ЬАп&2	1С₅₀ (нМ)	% ИНГ.
00938		-	33	100	58	100	86	100	> 60,395	4,3	100
νΕΟΡΑΝΟΒΙΙ00022			50	100	56	100	101	100	> 39,902	1,9	100
+	45	100	68	100	115	100	>44,771	η Ή.	η.ίΐ
АМО386			5	100	2	100	13	100	5,656	1.4	100

00921	ф	-	15,940	100	27,990	100	43,500	юо	> 125	18,8	100
νΕΟΡΑΝΟΒΙΙ00025			12	100	15	100	38	100	> 160,694	2,2	100
+	15	100	17	100	37	100	> 133,660	;1
АМО386			5	100	2	100	15	100	5,632	1,2	100

00956	©	-	1,010	100	1,816	100	1,294	100	> 1,979	6,8	100
νΕΟΡΑΝΟΒ1ΙΟΟΰ28	©в		30	100	72	100	65	100	> 66,222	3,7	100
+	39	100	69	100	78	100	> 50,816	η.ίΐ.	Π,ίΐ
АМС386			4	100	3	100	14	100	5,194	1.0	100

п.с!.: не определяли.

- 66 025148

Определяли аффинность VЕОРЛNОВII00022-25-28 к человеческому, мышиному, обезьяньему (циномолгус) и крысиному Апд2 (см. пример 5.4), данные представлены в табл. 47-Б.

Таблица 47-Б

Аффинность (К_с) очищенных УНН к рекомбинантному человеческому, супо, мышиному и крысиному Апд2

	человеческий Апе2-риэ	супо Ап£2-К1,Е>
	к_а (1/Мс)	ка (1/с)	К-0 (М>	ка (1/Мс)	ка (1/с)	Ко (М)
νΕ6ΡΑΝΟΒΙΙ00022	9,7Е+05	1,5Е-О5	1,6Е-11	1,5Е+О6	1.3Е-05	8.1Е-12
νΕΟΡΑΝΟΒ1Ι00025	2.7Е+О6	1ДЕ-02	4.5Е-09	4,ЗЕ+О6	1.1Е-02	2,7Е-09
νΕΟΡΑΝΟΒΙΙ00028	5,9Е+05	9,6Е-04	1.6Е-09	8,4Е+05	8.7Е-04	1,ОЕ-09

	мышиный Λη£2-ΡΕΏ	крысиный Ап£2-РЫ)
	(1/Мс)	^ка (1/с)	Κϋ (М)	ка (1/Мс)	^ка (1/с)	Ко (М)
νΕΟΡΑΝΟΒΙ 100022	5,5Е+05	2.8Е-05	5.1Е-11	3.9Е+05	3.8Е-05	9,9Е-11
νΕΟΡΑΝΟΒΙ 10002 5	1.3Е+06	1.4Е-02	1.1Е-08	8.7Е+05	2.9Е-02	3,ЗЕ-О8
νΕΟΡΑΝΟΒΙΙ00028	3,6Е+05	2,0Е-03	5.6Е-09	2,5Е+05	3.1Е-03	1.2Е-08

Определяли аффинность VЕОРЛNОВII00022-25-28 к человеческому, мышиному и обезьяньему (циномолгус) сывороточному альбумину (пример 11), и результаты представлены в табл. 48. Константу аффинности (К_с) рассчитывали на основе констант скорости ассоциации и диссоциации (к_а) и (к_б) (табл. 48).

Таблица 48

Аффинность (КО, нм) очищенных УНН к рекомбинантному человеческому, мышиному и обезьяньему (циномолгус) сывороточному альбумину, определенная с использованием модели взаимодействия 1:1 (А) или модели на основе гетерогенных лигандов (Б)

(А)	ЧСА	ЦСА
	к, (1/Мс)	к_й( 1/с)	(нМ)	к. (1/Мс)	ΜΙ/с)	Кп (нМ)
АЬВП	5.6Е+05	1.9Е-03	4	4.5Е+05	Ι.7Ε-03	4
νΕΟΡΑΝΟΒ1100022	6.7Е+05	б.ОЕ-ОЗ	9	6.2Е+05	5.4Е-03	9
νΕΟΡΑΝΟΒΙΙ00025	5,6Е+05	5.6Е-03	12	4.3Е+05	5.ΙΕ-Ο3	12
ΫΕΟΡΑΝΟΒΗΟΟΟίβ	5.6Е+05	5.8Е-03	10	5.2Е+05	5.3Е-ОЗ	10

	МСА
	к. (1/Мс)	кц (1/с)	К_в (нМ)
АЬВП	5.9Е+05	3.0Ε-02	51
νΕΟΡΑΝΟΒΙΙ00022	5.2Е+05	5.4Е-03	150
νΕΟΡΑΝΟΒΙΙ00025	-	-	-
νΕΟΡΑΝΟΒΙ100028	-	-	-

(Б)	МСА
	ка1 (1/Мс)	ка! (1/с)	ка2 (1/с)	каг (1/с)	Κοι (нМ)	Κϋ2 (нМ)
νΕΟΡΑΝΟΒΙΙ00025	6.2Е+05	9,9Е-02	4.7Е+04	5.7Е-04	160 *	12
νΕΟΡΑΝΟΒΙΙ00028	5.9Е+04	6.9Е-04	5.7Е+05	9,4 Е-02	12	160 *

* Описывает 70% или более взаимодействий.

- 67 025148

Таблица 49

Апд2-связывающие компоненты (1Ό01 (8ЕР ГО N0: 214); 7О08 (8Ер ГО N0: 215); 027 (8Ер ГО N0: 216); 00042 (8ЕР ГО N0: 217); 00050 (8Ер ΌΣ N0: 218); 00045 (8Ер ГО N0: 219); 00921 (8ЕР ГО N0: 220); 00928 (8Ер ГО N0: 221); 00938 (8Ер ГО N0: 222);

00956 (8ЕР ГО N0: 223)

Ю01

7С08

027

Ю01

7С08

027 “РК! СОЁ1 РК2 ' ~

Е70Ь7Е5СССЬ70АССЗЬЕЬЗСААЗСЕТЕ0 ОУАЬС МЕЕОААСКЕЕЕСУЗ

0ϋΚ2

С1ЕС30СЗТУУА037КС

Е7СЬ7ЕЗСССЬ70РССЗЬЕЬЗСААЗСЕАЬ0 ΥΥΑΙΟ ИЕЕО7РСКЕЕЕС73 С18330С1ТУУ7037КС Е70Ь7ЕЗСССЬ7САСС8ЪЕЬЗСАА5СЕТЬО ϋΥΑΙΟ ВДЕЕОАРСКЕЕЕС73 С1ЕОЗОСЗТУУАО87КС

РКЗ

СОКЗ

ΕΕΤΙ330ΝΑΚΝΤ7ΥΕ0ΜΝ3ΕΚΡΕ0ΤΑ7ΥΥ0ΑΑ 3Ι7ΡΕ3ΚΕΕΡΥΕΥϋΑ ΕΕΤΙ3ΕϋΝΑΚΝΤ7ΥΕ0ΜΝ3ΕΚΡΕ0ΤΑ7ΥΥ0ΑΤ ОЗССУЮУОСМСЬСУОУ

ΡΚ4

ИС0СТ07Т733

Μ0ζ)<ΞΤζ)7Τ755

ΕΕΤΙ33ϋΝϋΚΝΤ7Υ1ιζ)ΜΝ8ΕΚΡΕ0ΤΑ7ΥΥ0ΑΑ УРАСЕЬЕЕСЕОИУРЬУЕУОА МС<2СТ<2УТУ35

ΓΗ1 “СОК! ГЁ2

00042

00050

00045

00042

00050

00045

00921

00928

00938

00956

00921

00928

00938

00956

-сок2

Е70Ь7Е36ССЬ70РССЗЬЕЬЗСААЗСЕТЬО ϋΥΑΙΟ МЕЕ<2АРСКЕЕЕСУ5 3ΙΕ0Νϋ03ΤΥΥΑ037Κ0 Е7<ЭЬ7ЕЗСССЬ70РССЗЬЕЬЗСААЗСЕТЕО ОУАЬС NЕЕ0АРСКЕЕЕС73 СНЕСЗОСЗТУУАОЗУКС Е70Ь7ЕЗСССЬ7<ЭРССЗЬЕЬЗСААЗСЕАЬО ΥΥΑΙΟ МЕЕ<2АРСКЕЕЕСУ5 С15550С1ТУУА03УКС

РЕЗ

СОКЗ

РК4

ЕЕТ155ОМ5КЫТУУЬ<2МЫ5ЬЕРЕОТАУУУСАА УРАСЕЬЕЕСЕОИУРЬУЕУОА ИСОСТЬ7Т733

ΕΕΤΙ33ΟΝ3ΚΝΤνΥΕζ2ΜΝ3ΕΕΡΕϋΤΑνΥΥεΑΑ 31УРЕЗКЬЕРУЕУОА ΕΕΤΙ5Ε0Ν5ΚΝΤ7ΥΕ<2ΜΝ5ΕΕΡΕ0ΤΑ7ΥΥ0ΑΤ ОЗССУЮУЭСМСЬСУОУ

ИС<2СТЬУТУЗЗ

ИСОСТЬУТУЗЗ

РК1 СОК1 РК2 СОК2

Е70Ь7ЕЗС6СЬ72РССЗЬЕЬЗСААЗСЕТЕ0 ϋΥΑίΟ ИЕЕфАРСКЕЕЕСУЗ С1ЕСЗССЗТУУАО37КС ЕУОЬУЕЗСССЬУОРССЗЬЕЬЗСААЗСЕАЬО ΥΥΑΙ6 ИЕЕ<2АРСКЕЕЕСУЗ С1335СС1ТУУАО5УКС Е70ЬУЕЗСССЬУ0РССЗЬЕЬЗСАУЗС1ТЬО ϋΥΑΙ6 МЕЕ<2АРСКЕЕЕСУ5 А1ЕЗЗССЗТУУА037КС Е7СЬУЕ5СССЬУ<2РСС5ЬЕЬ5САА5СЕТЬ0 ΰΥΑΙΟ ВДЕЕ0АРСКЕЕЕС73 А1ЕЗЗССЗТУУА037КС

РКЗ

СОКЗ

ΕΕΤΙ33ΟΝ3ΚΝΤ7ΥΕ0ΜΝ3ΕΕΡΕϋΤΑ7ΥΥ0ΑΑ 3Ι7ΡΕ3ΚΣΕΡΥΕΥ0Α ЕЕТТЗЕОЫЗКЫТУУЬОММЗЬЕРЕОТАУУУСАТ ОЗССУЮУОСЗСЬСУОУ

РК4

ЮС<2СТЬУТУ53

МСОСТЬУТУЗЗ

ΕΕΤΙ330Ν3ΚΝΤ7ΥΕζ)ΜΝ81ιΚΡΕ0ΤΑ7ΥΥ3ΑΑ УРАСЕЬЕУСЕ<2ИУР1 ΥΕΥϋΑ №С0СТЬ7Т733 ΕΕΤΙ330Ν8ΚΝΤ7Υ1ι<2ΜΝ81,ΕΡΕ0ΤΑ7ΥΥ0ΑΑ УРАСЕЬЕЕСЕ<2МУРЬУЕУОА ИСОСТЬУТУЗЗ

- 68 025148

Перечень последовательностей <110> Бёрингер Ингельхайм Интернациональ ГмбХ <120> Биспецифические связывающие молекулы, связывающиеся с УЕСГ и АНС2 <130> 12-0332-рсЬ <160> 275 <170> РаЬепЫп, версия 3.3 <210> 1 <211> 17 <212> РКТ <213> Ьата д1ата <220>

<221> М15С_ГЕАТиКЕ <222> (5)..(5) <223> Хаа может обозначать С1у или А1а <220>

<221> К13С_ГЕАТПВЕ <222> (7)..(7) <223> Хаа может обозначать Зег или 01у <220>

<221> М13С_ЕЕАТиРЕ <222> (12)..(12) <223> Хаа может обозначать С1у, А1а или Рго <220>

<221> М15С_ГЕАТИКЕ <222> (13)..(13) <223> Хаа может обозначать Азр или С1у <220>

<221> М13С_ЕЕАТ0КЕ <222> (16)..(16) <223> Хаа может обозначать Азр или С1и <400> 1

Зег Агд А1а Туг Хаа Зег Хаа Агд Ьеи Агд Ьеи Хаа Хаа ТНг Туг Хаа

- 69 025148

10 15

Туг <210> 2 <211> 17 <212> РЕТ <213> Ьата д1аюа <400> 2

Зег Агд А1а Туг С1у Зег Зег Агд Ьеи Агд Ьеи С1у Азр ТЬг Туг Азр 15 10 15

Туг <210> 3 <211> 17 <212> РЕТ <213> Ьата д1ата <400> 3

Зег Агд А1а Туг 61у Зег Зег Агд Ьеи Агд Ьеи А1а Азр ТЬг Туг Азр 15 10 15

Туг <210> 4 <211> 17 <212> РКТ <213> Ьата д1ата <400> 4

Зег Агд А1а Туг С1у Зег Зег Агд Ьеи Агд Ьеи А1а Азр ТЬг Туг СЬи 15 10 15

- 70 025148

Туг <210> 5 <211> 17 <212> РКТ <213> Ьаша д1аша <400> 5

Зег Агд А1а Туг С1у Зег С1у Агд Ьеи Агд Ьеи А1а Азр ТЬг Туг Азр 15 10 15

Туг <210> 6 <211> 17 <212> РКТ <213> Ьаша д1аша <400> 6

Зег Агд А1а Туг А1а Зег Зег Агд Ьеи Агд Ьеи А1а Азр ТЬг Туг Азр 15 10 15

Туг <210> 7 <211> 17 <212> РКТ <213> Ьаша д1ата <400> 7

Зег Агд А1а Туг 51у Зег Зег Агд Ьеи Агд Ьеи Рго Азр ТЬг Туг Азр 15 10 15

Туг <210> 8 <211> 17 <212> РЕТ <213> Ьата д1ата <400> 8

Зег Агд 1

А1а

Туг

СЬу 5

Зег

Агд

Ьеи

Агд 10

Ьеи

Рго

СЬу

ТЬг

Туг 15

Азр

Туг

<210>

9

<211>

126

<212>

РКТ

<213> Ьата «

д1ата

<400>

9

СЬи УаЬ

СЬп

Ьеи

УаЬ

СЬи

Зег

СЬу

Ьеи

УаЬ

СЬп

Рго

СЬу

Азр

1

5

10

15

Зег Ьеи

Ьуз

Ьеи

Зег

Суз

А1а

РЬе

Зег

СЬу

Агд

ТЬг

РЬе

Зег

Туг

20

25

30

Зег МеЬ

СЬу

Тгр

РЬе

Агд

СЬп

А1а

СЬп

СЬу

Ьуз

С1и

Агд

СЬи

РЬе

УаЬ

35

40

45

УаЬ А1а

Не

Зег

СЬу

Туг

11е

Туг

Азр

Зег

УаЬ

Зег

Ьеи

50

55

60

СЬи СЬу

Агд

РЬе

ТЬг

11е

Зег

Агд

Азр

Азп

ТЬг

Ьуз

Азп

ТЬг

УаЬ

Туг

65

70

75

80

Ьеи СЬп

ТЬг

Рго

Зег

Ьеи

Ьуз

Рго

СЬи

Агр

ТЬг

А1а

Азр

Туг

Суз

90 95

А1а

Зег

Агд 100

А1а

Туг

С1у

Зег

Зег 105

Агд

Ьеи

Агд

Ьеи

А1а 110

Αερ

Ткг

Туг

Азр

Туг

Тгр

С1у

61п

С1у

ТНг

С1п

Уа1

ТНг

Уа1

Зег

115

120

125

<210>

10

<211>

125

<212>

РКТ

<213> Ъаша д!ата

<400>

10

С1и

Уа1

61п

Ьеи

Уа1

С1и

Зег

С1у

Ьеи

Уа1

61п

Рго

51у

Азр

1

5

10

15

Зег

Ьеи

Ьуз

Ьеи

Зег

Суз

А1а

РНе

Зег

61у

Агд

ТНг

РНе

Зег

Туг

20

25

30

Зег

Мер

А1а

Тгр

РНе

Агд

С1п

А1а

61п

С1у

Ьуз

С1и

Агд

С1и

РНе

Уа1

35

40

45

Уа1

А1а

Не

Зег

Й1у

С1у

РНе

Не

Туг

Азр

А1а

Уа1

Зег

Ьеи

С1и

50

55

60

С1у

Агд

РЬе

ТНг

Не

Зег

Агд

Азр

Азп

ТНг

Ьуз

Азп

ТНг

Уа1

Туг

Ьеи

65

70

75

80

С1п

ТНг

Рго

Зег

Ьеи

Ь_У8

Рго

С1и

Азр

ТНг

А1а

Уа1

Туг

Суз

А1а

85

90

95

А1а

Зег

Агд

А1а

Туг

61у

Зег

Агд

Ьеи

Агд

Ьеи

А1а

Агр

ТНг

Туг

100

105

110

Αερ

Туг

Тгр

С1у

С1п

С1у

ТНг

61п

Уа1

ТНг

УаЬ

Зег

115 120 125

<210> 11 <211> 126 <212> РКТ <213> Ьата д1аша

С1и

Зег

(Ну

С1у

(Ну 10

Ьеи

Уа1

Е1п

Рго

(Ну 15

Азр

<400> 61и Уа1 1

11 С1п

Ьеи Уа1 5

Зег Ьеи

Ьуз

Ьеи

Зег

Суз

А1а

Зег

<11у

Агд

ТЬг

РЬе

Зег

Туг

20

25

30

Зег МеЬ

С1у

Тгр

РЬе

Агд

С1п

А1а

61п

<31у

Ьуз

С1и

Агд

(Ни

РЬе

Уа1

35

40

45

УаЬ А1а

Не

Зег

(Ну

Туг

Не

Туг

Азр

Зег

νβΐ

Зег

Ьеи

50

55

60

С1и 61у

Агд

РЬе

ТЬг

11е

Зег

Агд

Азр

Азп

ТЬг

Ьуз

Азп

ТЬг

Уа1

Туг

65

70

75

80

Ьеи С1п

ТЬг

Рго

Зег

Ьеи

Ьуз

Рго

(Пи

Азр

ТЬг

А1а

Уа1

Туг

Суз

65

90

95

Д1а А1а

Зег

Агд

А1а

Туг

(Пу

Зег

Агд

Ьеи

Агд

Ьеи

А1а

Азр

ТЬг

100

105

110

Туг Азр

Туг

Тгр

61у

61п

(Ну

ТЬг

С1п

ν₃ι

ТЬг

Уа1

Зег

115

120

125

<210>	12
<211>	126
<212>	РКТ
<213>	Ьагаа
<4 00>	12

С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 <51и Зег С1у <31у С1у Ьеи 5/а1 С1п А1а С1у Азр 15 10 15

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у Агд ТЬг РЬе Зег Зег Туг 20 25 30

Зег МеЬ С1у Тгр РЬе Агд С1п А1а С1п 61у Ьуз С1и Агд С1и РЬе Уа1 35 40 45

Уа1 А1а Не Зег Зег Зег С1у Азп Туг Ьуз Туг Азр Зег Уа1 Зег Ьеи 50 55 60

С1и С1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп ТЬг Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг 65 70 75 80

Ьеи 61п 11е Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг А1а '/а1 Туг Туг Суз 85 90 95

А1а А1а Бег Агд А1а Туг С1у Зег Зег Агд Ьеи Агд Ьеи С1у Азр ТЬг 100 105 110

Туг Азр Туг Тгр С1у 61п С1у ТЬг 61п Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 120 125 <210> 13 <211> 125 <212> РКТ <213> Ьата д1ата <400> 13

С1и ν8ΐ С1п Ьеи Уа1 61и Зег С1у <31у С1у Ьеи 1?а1 С1п Рго С1у Азр 15 10 15

Зег Ьеи Ьуз Ьеи Зег Суз Уа1 А1а Зег Е1у Агд ТЬг Зег Зег Зег Туг 20 25 30

Зег МеГ С1у Тгр РЬе Агд С1п А1а С1п С1у Ьуз С1и Агд С1и РЬе Уа1 35 40 45

Уа1 А1а Не Зег Зег С1у 61у Зег 11е Туг Азр Зег Уа1 Зег Ьеи С1п 50 55 60

С1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп ТЬг Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг Ьеи 65 70 75 80

С1п ТЬг Рго Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТНг А1а Уа1 Туг Туг Суз А1а 85 90 95

А1а Зег Агд А1а Туг А1а Зег Зег Агд Ьеи Агд Ьеи А1а Азр ТЬг Туг 100 105 110

Азр Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг С1п Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 120 125 <210> 14 <211> 125 <212> РЕТ <213> Ьата д1ата <400> 14

С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у О1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у Азр 15 10 15

Зег Ьеи Ьуз Ьеи Зег Суз Уа1 А1а Зег С1у Агд ТЬг РЬе Зег Зег Туг 20 25 30

Зег МеЬ С1у Тгр РЬе Агд 61п А1а С1п 61у Ьуз С1и Агд С1и РЬе Уа1 35 40 45

Уа1 А1а 11е Зег Зег 61у С1у Туг 11е Туг Азр Зег Уа1 Зег Ьеи С1п 50 55 60

- 76 025148

Е1у Агд РЬе ТЬг Не Зег Агд Авр Азп ТЬг Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг Ьеи 65 70 75 80

С1п ТЬг Рго Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз А1а 85 90 95

А1а Зег Агд А1а Туг Е1у Зег Зег Агд Ьеи Агд Ьеи А1а Азр ТЬг Туг 100 105 110

Азр Туг Тгр С1у С1п С1у ТЫ С1п Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 120 125 <210? 15 <211> 125 <212> РЕТ <213> Ьаша д1аша <400> 15

С1и Уа1 61п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у Азр 15 10 15

Зег Ьеи Ьуз Ьеи Зег Суз А1а РЬе Зег С1у Агд ТЬг РЬе Зег Зег Туг 20 25 30

Зег Мер С1у Тгр РЬе Агд С1п А1а <51п <51у Ьуз С1и Агд С1и РЬе Уз1 35 40 45

Уа1 А1а 11е Зег Зег С1у С1у РЬе 11е Туг Азр А1а Уа1 Зег Ьеи С1и 50 55 60

- 77 025148

А1а

Зег

Агд

А1а 100

Туг

б1у

Зег

Агд 105

Ьеи

Агд

Ьеи

АЬа

Азр 110

ТЬг

Туг

Азр

Туг

Тгр

С1у

СЬп

61у

ТЬг

СЬп

Уа1

ТЬг

Уа1

Зег

115

120

125

<210>

16

<211>

125

<212>

РКТ

<213> Ьагоа д1ата

<400>

16

61и

УаЬ

С1п

Ьеи

Уа1

С1и

Зег

СЬу

Ьеи

УаЬ

еьп

ТЬг

61у

Азр

1

5

10

15

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

УаЬ

А1а

Зег

СЬу

Агд

ТЬг

РЬе

Зег

Туг

20

25

30

Зег

МеЬ

С1у

Тгр

РЬе

Агд

СЬп

А1а

С1п

СЬу

Ьуз

СЬи

Агд

СЬи

РЬе

УаЬ

35

40

45

Уа1

А1а

Пе

Зег

Азп

СЬу

61у

Туг

Ьуз

Туг

Азр

Зег

УаЬ

Зег

Ьеи

СЬи

50

55

60

С1у

Агд

РЬе

ТЬг

Не

Зег

Агд

Азр

Азп

ТЬг

Ьуз

Азп

ТЬг

УаЬ

Туг

Ьеи

65

70

75

80

61П

Не

Азп

Зег

Ьеи

Ьуз

Рго

С1и

Азр

ТЬг

АЬа

УаЬ

Туг

Суз

АЬа

85

90

95

АЬа

Зег

Агд

АЬа

Туг

С1у

Зег

Агд

Ьеи

Агд

Ьеи

АЬа

Азр

ТЬг

Туг

100

105

110

Азр

Туг

Тгр

Е1у

СЬп

СЬу

ТЬг

СЬп

УаЬ

ТЬг

Уа1

Зег

115

120

125

- 78 025148 <210> 17 <211> 126 <212> РКТ <213> Ьата д1аша <400> 17

С1и 1

Уа1

С1п

Ьеи

Уа1 5

С1и

Зег

61у

С1у

С1у 10

Ьеи

Уа1

<31п

Рго

С1у 15

Азр

Зег

Ьеи

Ьуз

Ьеи

Зег

Суз

А1а

РЬе

Зег

С1у

Агд

ТЬг

РЬе

С1у

Зег

Туг

20

25

30

Зег

Ме£

б1у

Тгр

РЬе

Агд

С1п

А1а

С1п

С1у

Ьуз

61и

Агд

С1и

РЬе

Уа1

35

40

45

Уа1

А1а

Не

Зег

С1у

Туг

11е

Туг

Азр

Зег

Уа1

Зег

Ьеи

50

55

60

С1и

С1у

Агд

РЬе

ТЬг

11е

Зег

Агд

Азр

Азп

Зег

Ьуз

Азп

ТЬг

Уа1

Туг

65

70

75

80

Ьеи

61п

ТЬг

Рго

Зег

Ьеи

Ьуз

Рго

С1и

Аэр

ТЬг

А1а

Уа1

Туг

Суз

85

90

95

А1а

Зег

Агд

А1а

Туг

С1у

Зег

Агд

Ьеи

Агд

Ьеи

Рго

Азр

ТЬг

100

105

110

Туг

Азр

Туг

Тгр

С1у

С1п

С1у

ТНг

С1п

Уа1

ТЬг

Уа1

Зег

115

120

125

<210>

18

<211>

125

<212>

РАТ

<213> Ьата д1агаа

<400>

18

01 и 1

Уа1

С1п

Ьеи

Уа1 5

С1и

Зег

С1у

61у 10

Ьеи

Уа1

С1п

ТЬг

С1у 15

Азр

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

С1и

Уа1

Зег

С1у

Агд

ТЬг

РЬе

Зег

Туг

20

25

30

Зег

МеЬ

С1у

Тгр

РЬе

Агд

61п

А1а

С1п

С1 у

Ьуз

61и

Агд

С1и

РЬе

Уа1

35

40

45

ν*1

А1а

11е

Зег

Ьуз

С1у

Туг

Ьуз

Туг

Азр

Зег

Уа1

Зег

Ьеи

С1и

50

55

60

С1у

Агд

РЬе

ТЬг

11е

Зег

Ьуз

Азр

Азп

АЬа

Ьуз

Азп

ТЬг

Уа1

Туг

Ьеи

65

70

75

80

С1п

Не

Ав η

Зег

Ьеи

Ьуз

Рго

С1и

Азр

ТЬг

А1а

Уа1

Туг

Суз

А1а

85

90

95

Зег

Агд

АЬа

Туг

С1у

Зег

Агд

Ьеи

Агд

Ьеи

АЬа

Азр

ТЬг

Туг

100

105

110

С1и

Туг

Тгр

61у

С1п

С1у

ТЬг

С1п

Уа1

ТЬг

Уа1

Зег

115 120 125 <210> 19 <211> 125 <212> РЕТ <213> Ьаша д1ата

<400> 19

61и Уа1 61п

Ьеи

Уа1

С1и

Зег

С1у

61у

Ьеи

Уа1

С1п

Рго

С1у

Азр

1

5

10

15

Зег Ьеи Агд

Ьеи

Зег

Суз

А1а

РЬе

Зег

С1у

Агд

ТЬг

РЬе

Зег

Туг

25 30

Зег

Меб

А1а 35

Тгр

РЬе

Агд

С1п

А1а 40

С1п

С1у

Ьуз

С1и

Агд 45

С1и

РЬе

Уа1

А1а

11е

Зег

С1у

РЬе

11е

Туг

Азр

А1а

Уа1

Зег

Ьеи

С1и

50

55

60

С1у

Агд

РЬе

ТЬг

11е

Зег

Агд

Αερ

Азп

ТЬг

Ьуз

АЗП

ТЫ

Уа1

Туг

Ьеи

65

70

75

80

С1п

ТЬг

Рго

Зег

Ьеи

Ьуз

Рго

С1и

Азр

ТЬг

А1а

Уа1

Туг

Суз

А1а

85

90

95

А1а

Зег

Агд

А1а

Туг

61у

Зег

Агд

Ьеи

Агд

Ьеи

А1а

Азр

ТЬг

Туг

100

105

110

Азр

Туг

Тгр

61у

С1п

С1у

ТЬг

01п

Уа1

ТЬг

Уа1

Зег

115 120 125 <210> 20 <211> 125 <212> РКТ <213> Ьата д1ата

<400>

20

Уа1 5

С1и

Зег

С1и

С1у

С1у 10

Ьеи

Уа1

С1п

Рго

С1у 15

Азр

С1и 1

Уа1

С1п

Ьеи

Зег

Ьеи

Ьуз

Ьеи 20

Зег

Суз

Уа1

А1а

Зег 25

С1у

Агд

ТЬг

Зег

Зег 30

Зег

Туг

Зег

МеЬ

С1у 35

Тгр

РЬе

Агд

61п

А1а 40

С1п

61 у

Ьуз

С1и

Агд 45

61и

РЬе

Уа1

А1а 50

11е

Зег

С1у

61у 55

Туг

11е

Туг

Азр

Зег 60

Уа1

Зег

Ьеи

61п

С1у 65

Агд

РЬе

ТНг

11е

Зег 70

Агд

Азр

Азп

ТЬг

Ьуз 75

А$п

ТЬг

Уа1

Туг

Ьеи 80

С1п

ТНг

Рго

Зег

Ьеи

Ьуз

Рго

С1и

Азр

ТЬг

А1а

Уа1

Туг

Суз

А1а

85

90

95

А1а

Зег

Агд

А1а

Туг

С1у

Зег

Агд

Ьеи

Агд

Ьеи

А1а

Азр

ТНг

Туг

100

105

110

Азр

Туг

Тгр

С1у

С1п

61у

ТНг

С1п

Уа1

ТЬг

Уа1

Зег

115 120 125 <210> 21 <211> 126 <212> РЕТ <213> Ьаша д!ата

<400> :

21

С1и

МеЬ

С1п

Ьеи

Уа1

61и

Зег

С1у

61у

Ьеи

Уа1

С1п

Рго

61у

Азр

1

5

10

15

Зег

Ьеи

Ьуз

Ьеи

Зег

Суз

А1а

РЬе

Зег

С1у

Агд

ТЬг

РЬе

Зег

Туг

20

25

30

Зег

Мер

С1у

Тгр

РЬе

Агд

61п

А1а

Е1п

01у

Ьуз

С1и

Агд

С1и

РЬе

Уа1

35

40

45

Уа1

А1а

11е

Зег

С1у

61у

Туг

11е

Туг

Азр

Зег

Уа1

Зег

Ьеи

50

55

60

б1и

С1у

Агд

РЬе

ТЬг

11е

Зег

Агд

Азр

Азп

ТЬг

Ьуз

Азп

ТЬг

Уа1

Туг

65

70

75

80

Ьеи

С1п

ТЬг

Рго

Зег

Ьеи

Ьуз

Рго

С1и

Азр

ТЬг

А1а

Азр

Туг

Суз

90 95

- 82 025148

А1а

Зег

Агд 100

А1а

Туг

61у

Зег

Бег 105

Агд

Ьеи

Агд

Ьеи

А1а но

Азр

ТЬг

Туг

Азр

Туг

Тгр

С1у

С1п

С1у

ТЬг

С1п

Уа1

ТНг

Уа1

Зег

115

120

125

<210>

22

<211>

126

<212>

РКТ

<213> Ьата д1ата

<400>

22

61и

Уа1

С1п

Ьеи

Уа1

С1и

Зег

С1у

Ьеи

Уа1

С1п

А1а

С1у

Агр

1

5

10

15

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

А1а

Зег

С1у

Агд

ТЬг

РЬе

Зег

Туг

20

25

30

Зег

Меь

<31у

Тгр

РЬе

Агд

61п

А1а

С1п

С1у

Ьуз

01и

Агд

С1и

РЬе

Уа1

35

40

45

Уа1

А1а

11е

Зег

61у

Азп

Туг

Ьуз

Туг

Аэр

Зег

Уа1

Зег

Ьеи

50

55

60

С1и

С1у

Агд

РЬе

ТЬг

11е

Зег

Агд

Азр

Азп

ТНг

Ьуз

Азп

ТЬг

Уа1

Туг

65

70

75

80

Ьеи

О1п

11е

Азп

Зег

Ьеи

Ьуз

Рго

Ьуз

Азр

ТНг

А1а

Уа1

Туг

Суз

85

90

95

А1а

Зег

Агд

А1а

Туг

С1у

Зег

Агд

Ьеи

Агд

Ьеи

С1у

Азр

ТЬг

100

105

но

Туг

Азр

Туг

Тгр

С1у

С1п

61у

ТЬг

61п

Уа1

ТНг

Уа1

Зег

115

120

125

- 83 025148 <210> 23 <211> 126 <212> РЕТ <213> Ъаша дЬата <400> 23

СЬи 1

νβΐ

СЬп

Ьеи

Уа1 5

СЬи

Зег

СЬу

61у СЬу Ьеи 10

Уа1

СЬп

Рго

СЬу 15

Азр

Зег

Ьеи

Ьуз

Ьеи

Зег

Суз

АЬа

РЬе

Зег

СЬу

Агд

ТЬг

РЬе

Зег

Туг

20

25

30

8ег

МеС

СЬу

Тгр

РЬе

Агд

61п

АЬа

СЬп

СЬу

Ьуз

СЬи

Агд

СЬи

РЬе

Уа1

35

40

45

УаЬ

А1а

11е

Зег

СЬу

Туг

11е

Туг

Азр

Зег

УаЬ

Зег

Ьеи

50

55

60

СЬи

СЬу

Агд

РЬе

ТЬг

Не

Зег

Агд

Азр

Азп

ТЬг

Ьуз

Азп

ТЬг

УаЬ

Туг

65

70

75

80

Ъеи

СЬп

ТЬг

Рго

Зег

Ьеи

Ьуз

Рго

СЬи

Азр

ТЬг

АЬа

Азр

Туг

Суз

85

90

95

АЬа

Зег

Агд

А1а

Туг

СЬу

Зег

Агд

Ьеи

Агд

Ьеи

АЬа

Азр

ТЬг

100

105

но

Туг

Азр

Туг

Тгр

СЬу

СЬп

СЬу

ТЬг

СЬп

УаЬ

ТЬг

УаЬ

Зег

115

120

125

<210>

24

<211>

126

<212>

РЕТ

<213> Ьата д!ата

<400>

24

СЬи

УаЬ

СЬп

Ьеи

УаЬ

СЬи

Зег

СЬу

Ъеи

УаЬ

СЬп

Рго

СЬу

Азр

Зег Ьей Ьуз Ьей Зег Суз А1а РЬе Зег С1у Агд ТЬг РЬе С1у Зег Туг 20 25 30

Зег МеЬ С1у Тгр РНе Агд С1п А1а 61п С1у Ьуз С1и Агд С1ч РЬе Уа1 35 40 45

Уа1 А1а Не Зег Зег Зег С1у С1у Туг 11е Туг Αερ Зег Уа1 Зег Ьей 50 55 60 <31и С1у Агд РЬе ТЫ 11е Зег Агд Азр Азп Зег Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг 65 70 75 80

Ьей С1п ТЬг Рго Зег Ьей Ьуз Рго С1и Αερ ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз 85 90 95

А1а А1а Зег Агд А1а Туг <ЗХу Зег Зег Агд Ьей Агд Ьей Рго С1у ТЬг 100 105 110

Туг Азр Туг Тгр <31у С1п <31у ТЬг С1п Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 120 125 <210> 25 <211> 125 <212> РРТ <213> Ьата д1ата <400> 25

С1и Уа1 С1п Ьей Уа1 61и Зег С1у С1у С1у Ьей Уа1 С1п Рго С1у Азр 15 10 15

Зег Ьей Ьуз Ьей Зег Суз Уа1 А1а Зег С1у Агд ТЬг Зег Зег Зег Туг 20 25 30

Зег Мер С1у Тгр РНе Агд Е1п А1а С1п Е1у Ьуз С1и Агд С1и РЬе Уа1

35

40

45

Уа1

А1а

11е

Зег

С1у

О1у

Туг

11е

Туг

Азр

Зег

ν_βι

Зег

Ьеи

61п

50

55

60

О1у

Агд

РЬе

ТЬг

11е

Зег

Агд

Азр

Αεη

ТЬг

Ьуз

Азп

ТЬг

Уа1

Туг

Ьеи

65

70

75

80

ζΐΐΓϊ

ТЬг

Рго

Зег

Ьеи

Ьуз

Рго

С1и

Азр

ТЬг

А1а

Уа1

Туг

Суз

А1а

85

90

95

А1а

Зег

Агд

А1а

Туг

61у

Зег

Агд

Ьеи

Агд

Ьеи

А1а

Азр

ТЬг

Туг

100

105

110

Азр

Туг

Тгр

С1у

СЬп

61у

ТЬг

61п

Уа1

ТЬг

Уа1

Зег

115 120 125 <210> 26 <211> 125 <212> РРТ <213> Ьата дЬата

<400>

26

С1и

Уа1

С1п

Ьеи

Уа1

С1и

Зег

С1у

Ьеи

Уа1

01п

ТЬг

ОЬу

Азр

1

5

10

15

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

А1а

Зег

С1у

Агд

ТЬг

РЬе

Зег

Туг

20

25

30

Зег

МеЬ

С1у

Тгр

РЬе

Агд

С1п

А1а

С1п

С1у

Ьуз

С1и

Агд

С1и

РЬе

Уа1

35

40

45

Уа1

А1а

11е

Зег

61у

01 у

Туг

Ьуз

Туг

Азр

Зег

УаЬ

Зег

Ьеи

С1и

50

55

60

С1у

Агд

РЬе

ТЫ

11е

Зег

Агд

Азр

Азп

ТЬг

С1п

Азп

ТЫ

νβΐ

Туг

Ьеи

100 105 110

Азр

Туг

Тгр 115

С1у

С1п

С1у

ТНг

61п 120

УаЬ

ТЬг

Уа1

Зег

Зег 125

<210>

28

<211>

125

<212>

РКТ

<213> Ьаша д1ата

<400>

28

С1и

Уа1

С1п

Ьеи

Уа1

С1и

Зег

С1у

61у

Ьеи

Уа1

61п

Рго

61у

Азр

1

5

10

15

Зег

Ьеи

Ьуз

Ьеи

Зег

Суз

11е

А1а

Зег

С1у

Агд

ТЬг

Зег

Туг

20

25

30

Зег

МеС

С1у

Тхр

РЬе

Агд

С1п

А1а

С1п

<31у

С1п

С1и

Агд

С1и

РНе

Уа1

35

40

45

Уа1

А1а

Не

Зег

С1у

Туг

11е

Туг

Азр

Зег

Уа1

Зег

Ьеи

С1п

50

55

60

С1у

Агд

РЬе

ТЬг

11е

Зег

Агд

Азр

АЗП

ТЬг

Ьуз

Азп

ТЬг

Уа1

Туг

Ьеи

65

70

75

80

С1п

ТЬг

Рго

Зег

Ьеи

Ьуз

Рго

61и

Азр

ТЬг

А1а

Уа1

Туг

Суз

А1а

85

90

95

А1а

Зег

Агд

А1а

Туг

С1у

Зег

Агд

Ьеи

Агд

Ьеи

А1а

Азр

ТЬг

Туг

100

105

110

Азр

Туг

Тгр

61у

С1п

С1у

ТЬг

С1п

Уа1

ТЬг

Уа1

Зег

115 120 125 <210> 29

<211>	126
<212>	РКТ
<213>	1аша
<400>	29
С1и Уа1 С1:

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег 61у Агд ТНг РЬе Зег Зег Туг 20 25 30

Зег Мер С1у Тгр РНе Агд С1п А1а С1п С1у Ьуз С1и Агд С1и РНе Уа1 35 40 45

Уа1 А1а 11е Бег Зег Зег С1у Азп Туг Ьуз Туг Азр Зег Уа1 Зег Ьеи 50 55 60

С1и С1у Агд РНе ТНг 11е Зег Агд Азр Азп ТНг Ьуз Азп ТНг Уа1 Туг 65 70 75 80

Ьеи С1п 11е Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТНг А1а Уа1 Туг Туг Суз 85 90 95

А1а А1а Зег Агд А1а Туг 61у Зег Зег Агд Ьеи Агд Ьеи С1у Азр ТНг 100 105 110

Туг Азр Туг Тгр С1у 51п 61у ТЬг Агд Уа1 ТНг Уа1 Зег Зег 115 120 125 <210> 30 <211> 126 <212> РКТ <213> Ьаша д1аша <400> 30

С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у <31у Ьеи Уа1 С1п ТНг 51у Азр 15 10 15

- 89 025148

Бег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у С1у ТЬг РЬе Зег Зег Туг 20 25 30

Бег МеГ Е1у Тгр РЬе Агд С1п А1а С1п С1у Ьуз С1и Агд С1и РЬе 1/а1 35 40 45

Уа1 А1а Не Зег Зег Зег О1у С1у Туг 11е Туг Азр Зег Уа1 Зег Ьеи 50 55 60 <31и С1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп ТЬг Ьуз Азп ТЬг 1/а1 Туг 65 70 75 80

Ьеи С1п ТЬг Рго Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг А1а Азр Туг Туг Суз 85 90 95

А1а А1а Зег Агд А1а Туг С1у Зег Зег Агд Ьеи Агд Ьеи А1а Азр ТЬг 100 105 110

Туг Азр Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг С1п Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 120 125 <210> 31 <211> 126 <212> РКТ <213> Ьаша д1аша <400> 31

С1и Уа1 31п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 31п Рго Е1у Азр 15 10 15

Рго Ьеи Ьуз Ьеи Зег Суз А1а РЬе Зег С1у Агд ТЬг РЬе Зег Зег Туг 20 25 30

Зег МеЬ С1у Тгр РЬе Агд С1п А1а С1п С1у Ьуз Е1и Агд С1и РЬе 7а1 35 40 45

- 90 025148

Уа1 А1а 11е Зег Зег Зег С1у 61у Туг 11е Туг Азр Зег Уа1 Зег Ьеи 50 55 60

С1и 61у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп ТЫ Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг 65 70 75 60

А1а А1а Зег Агд А1а Туг 61у Зег Зег Агд Ьеи Агд Ьеи А1а Азр ТЬг 100 105 110

Туг Азр Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг С1п Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 120 125 <210> 32 <211> 126 <212> РКТ <213> Ьата д1ата <400> 32 <31и Уа1 Рго Ьеи Уа1 С1и Зег 01у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п А1а С1у Азр 15 10 15

Зег МеЬ С1у Тгр РЬе Агд С1п А1а С1п О1у Ьуз С1и Агд <51и РЬе Уа1 35 40 45

Уа1 А1а 11е Зег Зег Зег С1у Азп Туг Ьуз Туг Азр Зег А1а Зег Ьеи 50 55 60

С1и 61у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп ТЬг Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг 65 70 75 80

- 91 025148

Ьеи СЬп 11е Азп Зег Ьеи Ьуз Рго СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз 85 90 95

АЬа АЬа Зег Агд АЬа Туг СЬу Зег Зег Агд Ьеи Агд Ьеи СЬу Азр ТЬг 100 105 110

Туг Азр Туг Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг СЬп УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег 115 120 125 <210> 33 <211> 125 <212> РКТ <213> Ьагг.а дЬаша <400> 33

СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп Рго СЬу Азр 15 10 15

Зег Ьеи Ьуз Ьеи Зег Суз АЬа РЬе Зег СЬу Агд ТЬг РЬе Зег Зег Туг 20 25 30

Зег МеЬ АЬа Тгр РЬе Агд Б1п АЬа 61п СЬу Ьуз СЬи Агд СЬи РЬе УаЬ 35 40 45

УаЬ АЬа Не Зег Зег СЬу СЬу РЬе Не Туг Азр АЬа УаЬ Зег Ьеи СЬи 50 55 60

СЬу Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп ТЬг Ьуз Азп ТЬг УаЬ Туг Ьеи 65 70 75 80

СЬп ТЬг Рго Зег Ьеи Ьуз Рго СЬи СЬу ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз АЬа 85 90 95

АЬа Зег Агд АЬа Туг СЬу Зег Зег Агд Ьеи Агд Ьеи АЬа Азр ТЬг Туг 100 105 110

Азр

Туг

Тгр 115

С1у

61п

С1у

ТЬг

С1п 120

Уа1

ТЬг

Уа1

Зег

Зег 125

<210>

34

<211>

126

<212>

РРТ

<213> Ьата д1ата

<400>

34

61и

Уа1

С1п

Ьей

Уа1

С1и

Зег

С1у

61у

Ьей

Уа1

<31п

Рго

<31 у

Азр

1

5

10

15

Зег

Ьей

Ьуз

Ьей

Зег

Суз

А1а

РЬе

Зег

С1у

Агд

ТЬг

РЬе

Зег

Туг

20

25

30

Зег

МеЬ

61у

Тгр

РНе

Агд

61п

А1а

С1п

61у

Ьуз

С1и

Агд

С1и

РНе

Уа1

35

40

45

Уа1

А1а

Не

Зег

С1у

61у

Туг

Не

Туг

Азр

Зег

Уа1

Зег

Ьей

50

55

60

С1и

С1у

Агд

РЬе

ТЫ

Не

Зег

Агд

Азр

Азп

ТЬг

Ьуз

Азп

А1а

Уа1

Туг

65

70

75

80

Ьей

С1п

ТЬг

Рго

Зег

Ьей

Ьуз

Рго

С1и

Азр

ТЫ

А1а

Азр

Туг

Суз

85

90

95

А1а

Зег

Агд

А1а

Туг

С1у

Зег

Агд

Ьей

Агд

Ьей

А1а

Азр

ТЬг

100

105

110

Туг

Азр

Туг

Тгр

61у

61п

61у

ТЬг

С1п

Уа1

ТЬг

Уа1

Зег

115 120 125 <210> 35 <211> 126 <212> РКТ <213> Ьаша дЬата <400> 35

С1и 1

Уа1

С1п

Ьеи

Мер 5

С1и

Зег

С1у

С1у 10

Ьеи

Уа1

ст

Рго

С1у 15

Αερ

5ег

Ьеи

Ьуз

Ьеи

Зег

Суз

А1а

РНе

Зег

СЬу

Агд

ТНг

РНе

Зег

Туг

20

25

30

Зег

МеН

61у

Тгр

РЬе

Агд

61п

А1а

С1п

С1у

Ьуз

С1и

Агд

С1и

РНе

Уа1

35

40

45

Уа1

А1а

Не

Зег

С1у

СЬу

Туг

11е

Туг

Азр

Зег

УаЬ

Зег

Ьеи

50

55

60

С1и

СЬу

Агд

РЬе

ТНг

11е

Зег

Агд

Аэр

Азп

ТНг

Ьуз

Азп

ТЬг

Уа1

Туг

65

70

75

80

Ьеи

С1п

ТНг

Рго

Зег

Ьеи

Ьуз

Рго

С1и

Азр

ТЬг

А1а

Азр

Туг

Суз

85

90

95

А1а

Зег

Агд

А1а

Туг

С1у

Зег

Агд

Ьеи

Агд

Ьеи

А1а

Азр

ТЬг

100

105

110

Туг

Азр

Туг

Тгр

С1у

С1п

С1у

ТНг

С1п

Уа1

ТЬг

Уа1

Зег

115 120 125 <210> 36 <211> 125 <212> РКТ <213> Ьагаа дЬагаа <400> 36

01и УаЬ 61п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у СЬу Е1у Ьеи УаЬ С1п Рго СЬу 61у 15 10 15

- 94 025148

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз АЬа РЬе Зег СЬу Агд ТЬг РЬе Зег Зег Туг 20 25 30

Зег МеЬ СЬу Тгр РЬе Агд СЬп АЬа СЬп СЬу Ьуз СЬи Агд СЬи РЬе УаЬ 35 40 45

УаЬ АЬа Не Зег Зег СЬу СЬу РЬе 11е Туг Азр АЬа УаЬ Зег Ьеи СЬи 50 55 60

СЬу Агд РЬе ТЬг Не Зег Агд Азр Азп ТЬг Ьуз Азп ТЬг УаЬ Туг Ьеи 65 70 75 80

СЬп ТЬг Рго Зег Ьеи Ьуз Рго СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз АЬа 85 90 95

Азр Туг Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг СЬп УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег 115 120 125 <210> 37 <211> 125 <212> РКТ <213> Ьата дЬаша <400> 37

Зег МеЬ АЬа Тгр РЬе Агд СЬп АЬа СЬп СЬу Ьуз СЬи Агд СЬи РЬе УаЬ 35 40 45

- 95 025148

СЬу Агд РЬе ТЬг Не Зег Агд СЬи Азп ТЬг Ьуз Азп ТЬг 7а1 Туг Ьеи 65 70 75 80

Азр Туг Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг СЬп УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег 115 120 125 <210> 38 <211> 126 <212> РЕТ <213> Ьата дЬата <4 00> 38

С1и Уа1 СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп Рго СЬу Азр 15 10 15

Зег Ьеи Ьуз Ьеи Зег Суз АЬа РЬе Зег С1у Агд ТЬг РЬе Зег Зег Туг 20 25 30

Зег МеЬ СЬу Тгр РЬе Агд С1п АЬа С1п С1у Ьуз С1и Агд С1и РЬе УаЬ 35 40 45

УаЬ АЬа 11е Зег Зег Зег С1у С1у Туг Не Туг Азр Зег УаЬ Зег Ьеи 50 55 60

СЬи СЬу Агд РЬе ТЬг Не Зег Агд Азр Азп ТЬг Ьуз Азп ТЬг УаЬ Туг 65 70 75 80

- 96 025148

Туг Азр

Туг 115

Тгр

С1у

С1п

С1у

ТЬг 120

ст

Уа1

ТЬг

Уа1

Зег 125

Зег

<210>

40

<211>

125

<212>

РЕТ

<213> Ъата д!ата

<400>

40

61и Уа1

61п

Ьеи

Уа1

С1и

Зег

С1у

Ьеи

Уа1

ст

Рго С1у Азр

1

5

10

15

Зег Ьеи

Ьуз

Ьеи

Зег

Суз

Уа1

А1а

Зег

С1у

Агд

ТЬг

Зег

Зег Зег Туг

20

25

30

Зег Уа1

С1у

Тгр

РЬе

Агд

61 η

А1а

61л

61у

Ьуз

61и

Агд

61и РЬе Уа1

35

40

45

Уа1 А1а

11е

Зег

С1у

Туг

Не

Туг

Азр

Зег

Уа1

Зег Ьеи 61п

50

55

60

С1у Агд

РЬе

ТЬг

Не

Зег

Агд

Азр

Азп

ТЬг

Ьуз

Азп

ТЬг

Уа1 Туг Ьеи

65

70

75

80

Е1п ТЬг

Рго

Зег

Ьеи

Ьуз

Рго

61и

Азр

ТЬг

А1а

Уа1

Туг

Туг Суз А1а

85

90

95

А1а Зег

Агд

А1а

Туг

С1у

Зег

Агд

Ьеи

Агд

Ьеи

А1а

Азр ТЬг Туг

100

105

НО

Азр Туг

Тгр

С1у

С1п

С1у

ТЬг

61п

Уа1

ТЬг

Уа1

Зег

115

120

125

<210>

41

<211>

126

<212>

РЕТ

<210> 42 <211> 126 <212> РЕТ <213> Ьата д1ата <400> 42

С1и Уа1 Е1п Ьеи Уа1 61и Зег С1у С1у 61у Ьеи Уа1 Е1п Рго Е1у Азр 15 10 15

Зег

Ьеи

Ьуз

Ьеи 20

Зег

Суз

А1а

РЬе

Бег 25

СЬу

Агд

ТЬг

РАе

Зег 30

Бег

Туг

Зег

НеЬ

С1у

Тгр

РЬе

Агд

СЬп

А1а

61п

СЬу

Ьуз

СЬи

Агд

СЬи

РЬе

УаЬ

35

40

45

Уа1

А1а

Не

Зег

СЬу

Туг

Не

Туг

Азр

Зег

УаЬ

Бег

Ьеи

50

55

60

61и

СЬу

Агд

РЬе

ТЬг

Не

Бег

Агд

Азр

Азп

ТАг

Агд

Азп

ТЬг

УаЬ

Туг

65

70

75

80

Ьеи

С1п

ТЬг

Рго

Зег

Ьеи

Ьуз

Рго

С1и

Азр

ТЬг

А1а

Азр

Туг

Суз

85

90

95

А1а

Бег

Агд

А1а

Туг

С1у

Бег

Агд

Ьеи

Агд

Ьеи

А1а

Азр

ТАг

100

105

110

Туг

Азр

Туг

Тгр

СЬу

С1п

СЬу

ТЬг

61п

УаЬ

ТЬг

УаЬ

Бег

Зег

115 120 125 <210> 43 <211> 125 <212> РКТ <213> Ьаша д1аша

<400>

43

С1и

УаЬ

СЬп

Ьеи

УаЬ

СЬи

Зег

СЬу

Ьеи

УаЬ

СЬп

А1а

СЬу

1

5

10

15

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Бег

Суз

А1а

РЬе

Зег

СЬу

Агд

ТЬг

РЬе

Зег

Бег

Туг

20

25

30

Зег

МеЬ

СЬу

Тгр

РЬе

Агд

СЬп

АЬа

СЬп

СЬу

Ьуз

СЬи

Агд

СЬи

РЬе

УаЬ

35

40

45

- 100 025148

7а1

А1а 50

11е

Зег

61у

С1у 55

Туг

Ьуз

Туг

Азр

А1а 60

Уа1

Зег

Ьеи

61и

61у

Агд

РЬе

ТЬг

11е

Бег

Агд

Азр

Азп

ТЬг

Ьуз

Азп

ТЬг

Уа1

Туг

Ьеи

65

70

75

80

61п

ТЬг

Рго

Зег

Ьеи

Ьуз

Рго

61и

Азр

ТЫ

А1а

Уа1

Туг

Суз

А1а

85

90

95

А1а

Зег

Агд

А1а

Туг

А1а

Зег

Агд

Ьеи

Агд

Ьеи

А1а

Азр

ТЬг

Туг

100

105

110

Азр

Туг

Тгр

61у

61п

61у

ТЬг

61п

Уа1

ТЬг

Уа1

Зег

115 120 125 <210> 44 <211> 126 <212> РКТ <213> Ьаша д1агаа

<400> -

44

61и

Уа1

С1п

Ьеи

Уа1

С1и

Зег

61у

<31у

Азр

Ьеи

Уа1

61п

Рго

61у

Азр

1

5

10

15

Зег

Ьеи

Ьуз

Ьеи

Зег

Суз

А1а

Бег

61 у

Агд

ТЬг

РЬе

Зег

Туг

20

25

30

Зег

Меб

61у

Тгр

РЬе

Агд

61п

А1а

<31п

С1у

Ьуз

61и

Агд

61и

РЬе

Уа1

35

40

45

Уа1

А1а

Х1е

Зег

С1у

61у

Туг

11е

Туг

Азр

Зег

Уа1

Зег

Ьеи

50

55

60

61и

61у

Агд

РЬе

ТПг

11е

Зег

Агд

Азр

Азп

ТЬг

Ьуэ

Азп

ТЬг

Уа1

Туг

65

70

75

80

- 101 025148

- 102 025148

Туг

Азр

Туг 115

Тгр

С1у

С1п

СЬу

ТЬг 120

ОЬп

УаЬ

ТЬг

УаЬ

Зег 125

5ег

<210>

46

<211>

125

<212>

РКТ

<213> Ьата д1ата

<400>

46

61и

Уа1

С1п

Ьеи

Уа1

С1и

Зег

СЬу

Ьеи

УаЬ

СЬп

Рго

СЬу

Азр

1

5

10

15

Зег

Ьеи

Ьуз

Ьеи

5ег

Суз

АЬа

РЬе

Зег

СЬу

Агд

ТЬг

РЬе

Зег

Туг

20

25

30

Зег

Меь

01 у

Тгр

РЬе

Агд

61п

АЬа

ОЬп

С1 у

Ьуз

СЬи

Агд

СЬи

РЬе

УаЬ

35

40

45

Уа 1

АЬа

Не

АЬа

5 ед

С 1 \! л

гл — 1

Тиг ~ .1

Не

Тиг -* 1 “

Д «г->

АЬа

Уа1

Зег

Ьеи

С1и

50

55

60

С1у

Агд

РЬе

ТЬг

11е

Зег

Агд

Азр

Азп

ТЬг

Ьуз

Азр

ТЬг

УаЬ

Туг

Ьеи

65

70

75

80

С1п

ТЬг

Рго

Зег

Ьеи

Ьуз

Рго

61и

Азр

ТЬг

А1а

УаЬ

Туг

Суз

АЬа

85

90

95

АЬа

Зег

Агд

АЬа

Туг

С1у

Зег

Агд

Ьеи

Агд

Ьеи

АЬа

Азр

ТЬг

Туг

100

105

110

Азр

Туг

Тгр

С1у

С1п

С1у

ТЬг

ОЬп

УаЬ

ТЬг

Уа1

Зег

115

120

125

<210>	47
<211>	125
<212>	РКТ
<213>	Искусственная

- 103 025148 <220>

<223> Мутантная последовательность Ьата дЬата <400> 47

С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег 61у С1у С1у Ьеи Уа1 <51п ТНг С1у С1у 15 10 15

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз Е1и А1а Зег С1у Агд ТЬг РЬе Зег Зег Туг 20 25 30

Зег Мер С1у Тгр РЬе Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз С1и Агд Б1и РЬе Уа1 35 40 45

Уа1 А1а Не Зег Ьуз 61у С1у Туг Ьуз Туг Азр Зег Уа! Зег Ьеи С1и 50 55 60

С1у Агд РЬе ТЬг Не Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг Ьеи 65 70 75 80

С1п Не Азп Зег Ьеи Агд Рго С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз А1а 85 90 95

Зег Зег Агд А1а Туг С1у Зег Зег Агд Ьеи Агд Ьеи А1а Азр ТЬг Туг 100 105 110

61и Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 120 125 <210> 48 <211> 125 <212> РКТ <213> Искусственная <220>

<223> Мутантная последовательность Ьата д1агаа <400> 48

- 104 025148

СЬи 1

УаЬ

еьп

Ьеи

УаЬ 5

СЬи

Зег

СЬу

СЬу 10

Ьеи

УаЬ

С1п

Рго

СЬу 15

СЬу

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

АЬа

Зег

СЬу

Агд

ТЬг

РНе

Зег

Туг

20

25

30

Зег

МеЬ

СЬу

Тгр

РЬе

Агд

СЬп

АЬа

Рго

СЬу

Ьу5

СЬи

Агд

СЬи

РЬе

УаЬ

35

40

45

УаЬ

АЬа

11е

Зег

Ьуз

СЬу

Туг

Ьуз

Туг

Азр

Зег

Уа1

Зег

Ьеи

СЬи

50

55

60

СЬу

Агд

РЬе

ТЬг

11е

Зег

Агд

Азр

Азп

АЬа

Ьуз

Азп

ТНг

УаЬ

Туг

Ьеи

65

70

75

80

ет

МеЬ

Азп

Зег

Ьеи

Агд

Рго

СЬи

Азр

ТЬг

АЬа

УаЬ

Туг

Суз

АЬа

85

90

95

Зег

Агд

АЬа

Туг

СЬу

Зег

Агд

Ьеи

Агд

Ьеи

А1ё

Азр

ТЬг

Туг

100

105

110

СЬи

Туг

Тгр

СЬу

СЬп

СЬу

ТЬг

Ьеи

УаЬ

ТЬг

УаЬ

Зег

Бег

115 120 125 <210> 49 <211> 125 <212> РКТ <213> Искусственная

<220>
<223>	Мутантная последовательность	Ьата	д!аша
<4 00>	49
СЬи УаЬ 1	СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу 5	СЬу 10	Ъеи Уа1	СЬп Рго СЬу СЬу 15

- 105

Зег Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

С1и

А1а

Зег

61у

Агд

ТЬг

РЬе

Зег

Туг

20

25

30

Зег Меь

С1у

Тгр

РЬе

Агд

<31п

А1а

Рго

С1у

Ьуз

С1и

Агд

С1и

РЬе

Уа1

35

40

45

Уа1 А1а

Не

Зег

Ьуз

С1у

Туг

Ьуз

Туг

Азр

Бег

Уа1

Зег

Ьеи

С1и

50

55

60

С1у Агд

РЬе

ТЬг

Не

Зег

Агд

Азр

Азп

А1а

Ьуз

Азп

ТЬг

Уа1

Туг

Ьеи

65

70

75

80

<31п Не

Азп

Зег

Ьеи

Агд

Рго

С1и

Азр

ТЬг

А1а

Уа1

Туг

Суз

А1а

85

90

95

Зег Зег

Агд

А1а

Туг

С1у

Зег

Агд

Ьеи

Агд

Ьеи

А1а

Азр

ТЬг

Туг

100

105

110

С1и Туг

Тгр

С1у

С1п

С1у

ТЬг

Ьеи

Уа1

ТЬг

Уа1

Зег

115

120

125

<210>

50

<211>

125

<212>

РРТ

<213>

Искусственная

<220>

<223>

Мутантная последовательность

Ьаша д1аша

<400>

50

С1и Уа1

С1п

Ьеи

Уа1

С1и

Зег

61у

С1у

Ьеи

Уа1

<31п

ТЫ

С1у

61у

1

5

10

15

Зег Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

<31и

Уа1

Зег

С1у

Агд

ТЬг

РЬе

Зег

Туг

20

25

30

Зег МеЬ

С1у

Тгр

РНе

Агд

С1п

А1а

Рго

С1у

Ьуз

С1и

Агд

С1и

РЬе

Уа1

- 106 025148

Уа1 А1а Не Зег Ьуз С1у О1у Туг Ьуз Туг Азр Зег Уа1 Зег Ьеи С1и 50 55 60

01у Агд РЬе ТЬг Пе Зег Ьуз Азр Азп А1а Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг Ьеи 65 70 75 80

С1и Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 120 125 <210> 51 <211> 125 <212> РЕТ <213> Искусственная <220>

<223> Мутантная последовательность Ьата д1ата <400> 51

С1и Уа1 61п Ьеи Уа1 61и Зег Е1у С1у 61у Ьеи Уа1 С1п ТЬг С1у Азр

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз С1и Уа1 Зег 61у Агд ТЬг РЬе Зег Зег Туг 20 25 30

Зег МеЬ 51у Тгр РЬе Агд С1п А1а С1п С1у Ьуз С1и Агд С1и РЬе Уа1 35 40 45

Уа1 А1а Не Зег Ьуз С1у С1у Туг Ьуз Туг Азр Зег Уа1 Зег Ьеи С1и 50 55 60

107 025148

61у 65

Агд

РНе

ТЬг

Не

Зег 70

Ьуэ

Азр

АЗП

А1а

Ьуз 75

Азп

ТЬг

Уа1

Туг

Ьеи 80

С1п

МеН

Азп

Зег

Ьеи

Агд

Рго

С1и

Азр

ТЬг

А1а

Уа1

Туг

Су8

А1а

85

90

95

Бег

Зег

Агд

А1а

Туг

61у

Зег

Агд

Ьеи

Агд

Ьеи

А1а

Азр

ТЬг

Туг

100

105

110

61и

Туг

Тгр

С1у

61п

С1у

ТНг

Ьеи

Уа1

ТЬг

Уа1

Зег

115

120

125

<210>

52

<211>

125

<212>

РЕТ

<213>

Искусственная

<220>

<223>

Мутантная последовательность

Ьата д!ата

<400>

52

С1и

Уа1

С1п

Ьеи

Уа1

61и

Зег

С1у

Ьеи

Уа1

С1п

Рго

С1у

Азр

1

5

10

15

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

С1и

Уа1

Зег

С1у

Агд

ТЬг

РЬе

Зег

Туг

20

25

30

Зег

Меб

С1у

Тгр

РЬе

Агд

С1п

А1а

Рго

С1у

Ьуз

С1и

Агд

С1и

РЬе

7а1

35

40

45

Ча1

А1а

11е

Зег

Ьуз

61у

С1у

Туг

Ьуз

Туг

Азр

Зег

Уа1

Зег

Ьеи

С1и

50

55

60

61у

Агд

РЬе

ТЬг

Не

Зег

Ьуз

Αερ

Азп

А1а

Ьуз

Азп

ТЬг

Уа1

Туг

Ьеи

65

70

75

80

- 108 025148

СЬп

11е

Азп

Зег

Ьеи 85

Агд

Рго

С1и

Азр

ТЬг 90

АЬа

УаЬ

Туг

Суз 95

АЬа

Зег

Агд

А1а

Туг

СЬу

Зег

Агд

Ьеи

Агд

Ьеи

А1а

Азр

ТЬг

Туг

100

105

110

СЬи

Туг

Тгр

С1у

СЬп

СЬу

ТЬг

Ьеи

УаЬ

ТЬг

Уа1

Зег

115 120 125 <210> 53 <211> 125 <212> РЕТ <213> Искусственная <220>

<223>	Мутантная последовательность	Ьата дЬата
<4 00>	53
СЬи Уа1 1	СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу 5	СЬу Ьеи УаЬ СЬп ТЬг СЬу СЬу 10 15
Зег Ьеи	Агд Ьеи Бег Суз С1и УаЬ Зег 20 25	СЬу Агд ТЬг РЬе Зег Зег Туг 30
Зег МеЬ	СЬу Тгр РЬе Агд СЬп АЬа Рго 35 40	С1у Ьуз С1и Агд СЬи РЬе УаЬ 45
УаЬ АЬа 50	11е Зег Ьуз СЬу СЬу Туг Ьуз 55	Туг Азр Зег УаЬ Зег Ьеи С1и 60
СЬу Агд 65	РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп 70	АЬа Ьуз Азп ТЬг УаЬ Туг Ьеи 75 80
СЬп 11е	Азп Зег Ьеи Агд Рго СЬи Агр 85	ТЬг А1а УаЬ Туг Туг Суз А1а 90 95

- 109 025148

С1и Туг Тгр 01у С1п С1у ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 120 125

<210>	54
<211>	125
<212>	РИТ
<213>	Искусственная
<220>
<223>	Мутантная последовательность	Ьата	д1ата
< 4 00>	54
61и Уа1	. С1п Ьеи Уа1 С1и Зег 61у С1у	С1у	Ьеи Уа1 С1п ТЬг С1у Азр

10 15

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а Уа1 Зег С1у Агд ТЬг РЬе Зег Зег Туг 20 25 30

Зег Мер С1у Тгр РЬе Агд С1п А1а С1п С1у Ьуз С1и Агд С1и РЬе Уа1 35 40 45

Уа1 А1а Не Зег Ьуз 61у С1у Туг Ьуз Туг Азр Зег Уа1 Зег Ьеи С1и 50 55 60

С1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Ьуз Азр Азп А1а Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг Ьеи 65 70 75 80

С1п 11е Азп Зег Ьеи Агд Рго С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз А1а 85 ЭО 95

С1и Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег

- 110 025148

115 120 125 <210> 55 <211> 125 <212> РРТ <213> Искусственная <220>

<223> Мутантная последовательность Ьата д1ата <400> 55

Е1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у 1 5

С1у С1у Ьеи Уа1 115 ТЬг С1у Азр 10 15

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз С1и Уа1 20

Зег С1у Агд ТЬг РЬе Зег Зег Туг 25 30

Зег Мес С1у Тгр РЬе Агд С1п А1а 35 40

С1п С1у Ьуз О1и Агд О1и РЬе νθΐ 45

Уа1 А1а 11е Зег Ьуз С1у С1у Туг 50 55

Ьуз Туг А5р А1а Уа1 Зег Ьеи С1и 60

С1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Ьуз Азр 65 70

Азп А1а Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг Ьеи 75 80

01п 11е Азп Зег Ьеи Ьуз Рго О1и 85

Азр ТЬг А1а '7а1 Туг Туг Суз А1а 90 95

Зег Зег Агд А1а Туг С1у Зег Зег 100

Агд Ьеи Агд Ьеи А1а Азр ТЬг Туг 105 110

С1и Туг Тгр О1у С1п С1у ТЬг С1п 115 120

Уа1 ТЬг ’7а1 Зег Зег 125 <210> 56 <211> 125

- 111 025148 <212> РКТ <213> Искусственная <220>

<223> Мутантная последовательность Ьата д1ата <400> 56

Азр Уа1 61п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго 61у С1у 15 10 15

Зег Мер Е1у Тгр РЬе Агд Е1п А1а Рго 61у Ьуз Б1и Агд С1и РЬе Уа1 35 40 45

Уа1 А1а 11е Зег Ьуз С1у С1у Туг Ьуз Туг Азр А1а Уа1 Зег Ьеи С1и 50 55 60

С1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг Ьеи 65 70 75 80

С1и Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 120 125 <210> 57 <211> 125 <212> РКТ <213> Искусственная <220>

<223> Мутантная последовательность Ьата д1ата

- 112 025148

<210? 58 <211? 122 <212? РКТ <213> Ьата д1ата <400? 58

С1и Уа1 61п ьеи Уа1 С1и Зег 61у <31у 31у Ьеи Уа1 61п А1а С1у С1у 15 10 15

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз ТЬг А1а Зег С1у С1у Зег РЬе Зег Зег Туг

- 113 025148

20

25

30

С1у

МеЪ

<31у

Тгр

РЬе

Агд

С1п

Зег

Рго

С1у

Ьуз

51и

Агд

61и

РЬе

Уа1

35

40

45

Зег

А1а

11е

Зег

С1и

Туг

Зег

Азп

ТЬг

Туг

Суз

Зег

Азр

Зег

Уа1

Агд

50

55

60

С1у

Агд

РЬе

ТЬг

11е

Зег

Агд

Азр

Азп

ТЬг

Ьуз

Азп

ТЬг

Уа1

Туг

Ьеи

65

70

75

80

С1п

Мер

Азп

Зег

Ьеи

ТЬг

Рго

Азр

ТЬг

А1а

11е

Туг

Суз

А1а

85

90

95

А1а

Зег

Рго

ТЬг

11е

Ьеи

ТЬг

<31и

С1п

Тгр

Туг

Ьуз

Туг

Тгр

100

105

110

61у

С1п

61у

ТЬг

61п

Уа1

ТЬг

Уа1

Зег

115 120 <210> 59 <211> 126 <212> РКТ <213> Ьата д!ата

<400>

59

С1и

Уа1

С1п

Ьеи

Уа1

С1и

Зег

С1у

Ьеи

νβΐ

С1п

А1а

С1у

Азр

1

5

10

15

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

Уа1

А1а

ТЬг

С1у

Агд

ТЬг

РЬе

Агд

А1а

Зег

20

25

30

Азр

Мер

С1у

Тгр

РЬе

Агд

С1п

А1а

Рго

С1у

Ьуз

С1и

Агд

С1и

РЬе

Уа1

35

40

45

А1а

11е

Азп

Тгр

Зег

С1у

Ьеи

Зег

ТЬг

РЬе

Туг

ТЬг

Азр

Зег

Уа1

- 114 025148

115 025148

85

90

95

А1а

Азр

Агд

РЬе

Ьуз

61у

Агд

Зег

Пе

Уа1

ТЬг

Рго

Зег

Азр Туг

100

105

110

Агд

Туг

Тгр

С1у

С1п

С1у

ТЬг

С1п

Уа1

ТЬг

Уа1

Зег

115 120 125 <210> 61 <2Η> 111 <212> РКТ <213? Ьаша д1ата

<400>

61

С1и

Уа1

С1п

Ьеи

Уа1

С1и

Зег

С1у

Ьеи

Уа1

С1п

Рго

С1у

1

5

10

15

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

А1а

Зег

С1у

5ег

А1а

Уа1

С1у

Азр

Пе

20

25

30

ТЬг

Уа1

А1а

Тгр

Туг

Агд

С1п

А1а

Рго

Е1у

Не

С1п

Агд

С1п

Ьеи

Уа1

35

40

45

А1а

ТЬг

Не

ТЬг

Рго

Зег

<31у

Туг

ТЬг

Туг

Тгр

Азр

РЬе

Уа1

Ьуз

50

55

60

С1у

Агд

РЬе

ТЬг

Не

Зег

Агд

Азр

Азп

Зег

Ьуз

АЗП

Пе

Уа1

Туг

Ьеи

65

70

75

80

С1п

МеЬ

Аэп

Зег

Ьеи

Ьуз

Рго

С1и

Азр

ТЬг

А1а

Туг

Суз

Азп

85

90

95

ТЬг

<31п

РЬе

Туг

Тгр

С1у

Е1п

61у

ТЬг

61п

Уа1

ТЬг

Уа1

Зег

100

105

110

<210?

62

- 116 025148

- 117 025148

- 118 025148

11е

Зег 50

Зег

С1у

ТЬг

ТЬг 55

А1а

Туг

Уа1

Азр

Зег 60

Уа1

Ьуз

О1у

Агд

РЬе

ТЬг

11е

Зег

Агд

Азр

Азп

Зег

Ьуз

Азп

ТЬг

Уа1

Туг

Ьеи

С1п

МеЬ

65

70

75

80

Азп

Зег

Ьеи

Ьуз

А1а

С1и

Азр

ТЬг

А1а

Уа1

Туг

Суз

Азп

ТЬг

РЬе

85

90

95

Зег

Агд

Рго

Азп

Рго

Тгр

61у

А1а

С1у

ТЬг

С1п

Уа1

ТЬг

Уа1

Зег

100 105 НО

Зег <210> 65 <211> 116 <212> РКТ <213> Ъата д!ата

<400>

65

С1и

ναΐ

С1п

Ьеи

Уа1

С1и

Зег

С1у

Ьеи

Уа1

<31п

Рго

61у

1

5

10

15

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

А1а

Зег

С1у

Азп

11е

РЬе

Зег

Азп

20

25

30

А1а

Ме£

А1а

Тгр

Туг

Агд

ст

А1а

Рго

С1у

Ьуз

С1п

Агд

С1и

Ьеи

Уа1

35

40

45

А1а

Агд

11е

Зег

С1у

РЬе

ТЬг

Туг

Ьеи

Азр

Зег

Уа1

50

55

60

Ьуз

С1у

Агд

РЬе

ТЬг

Уа1

Зег

Агд

Азр

Азп

А1а

Ьуз

Азп

ТЬг

Уа1

Туг

65

70

75

80

- 119 025148

Ьеи С1п

МеЬ

Азп

Зег 65

Ьеи

Ьуз

Рго

С1и

Азр 90

ТЬг

А1а

Уа1

Туг

Туг 95

Суз

Азп

А1а

Туг

Агд

ТНг

Туг

Азп

Туг

Тгр

С1у

С1п

Е1у

ТЬг

С1п

Уа1

100

105

110

ТЬг

Уа1

Зег

115 <210> 66 <211> 125 <212> РКТ <213> Ьата д!агпа

<400> 66

С1и

Уа1

С1п

Ьеи

Уа1

Е1и

Зег

61у

С1у

Ьеи

Уа1

Е1п

А1а

С1у

Е1у

1

5

10

15

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

А1а

Зег

ТЬг

Зег

11е

Туг

Зег

11е

ТЬг

20

25

30

Уа1

МеС

А1а

Тгр

РЬе

Агд

Е1п

А1а

Рго

Е1у

Ьуз

Е1и

Зег

О1и

РЬе

Уа1

35

40

45

А1а

Не

ТЬг

Тгр

Зег

А1а

Рго

Зег

Туг

А1а

Азр

Зег

Уа1

50

55

60

Ьуз

С1у

Агд

РЬе

ТЬг

11е

Зег

Агд

Азр

Азп

А1а

Ьуз

Азп

ТЫ

Уа1

Туг

65

70

75

60

Ьеи

С1п

МеЬ

Азп

Зег

Ьеи

Ьуз

Рго

Е1и

Азр

Зег

А1а

11е

Туг

Суз

85

90

95

А1а

Азр

Агд

РЬе

Ьуз

<31у

Агд

Зег

11е

Уа1

ТЬг

Агд

Зег

Азр

Туг

100

105

110

- 120 025148

Ьуз Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг 61п Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 120 125 <210> 67 <211> 125 <212> РКТ <213> Ьата дЬата <400> 67

О1и Ή 1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег О1у С1у ОЬу Ьеи Уа1 01п А1а С1у ОЬу 15 10 15

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а Уа1 Зег ТЬг Зег 11е Туг Зег 11е Зег 20 25 30

Та 7 МеЬ А1а Тгр РЬе Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз С1и Агд А1а РЬе Ή1 35 40 45

А1а А1а 11е ТЬг Тгр Зег А1а Рго ТЫ ТЬг Туг Туг А1а Азр Зег Ή1 50 55 60

Ьуз С1у Агд РЬе ТЬг Не Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг 65 70 75 80

Ьеи 01п ТЬг Азп Зег Ьеи Ьуз Рго О1и Азр Зег А1а Не Туг Туг Суэ 85 90 95

А1а А1а Азр Агд РЬе Ьуз С1у Агд Зег Не Уа1 ТЬг Агд Зег Азр Туг 100 105 110

Агд Туг Тгр С1у СЯп 61у ТЬг 61η Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 120 125 <210> 68 <211> 126

- 121 025148 <212> РЕТ <213> Ьата дЬата <400> 68

С1и Уа ί С1п Ьеи Уа1 СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи Уа1 С1п ТЬг СЬу С1у 15 10 15

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у Агд ТЬг РЬе Зег Азп Туг 20 25 30

А1а МеЬ АЬа Тгр РЬе Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз СЬи Агд С1и РЬе Уа I 35 40 45

Зег А1а 11е Азп СЬп Агд СЬу Зег Азп ТЬг Азп Туг АЬа Азр Зег УаЬ 50 55 60

Ьуз СЬу Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Аэр Зег АЬа Ьуз Азп Зег УаЬ РЬе 65 70 75 80

Ьеи СЬп МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго СЬи Азр ТЬг АЬа Уа1 Туг Туг Суз 85 90 95

АЬа АЬа Зег ТЬг Тгр Туг 61у Туг Зег ТЬг Туг АЬа Агд Агд СЬи СЬи 100 105 110

Туг Агд Туг Тгр СЬу С1п С1у ТЬг СЬп Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 120 125 <210> 69 <211> 123 <212> РЕТ <213> Ьата д1ата <400> 69

С1и УаЬ С1п Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп АЬа СЬу СЬу 15 10 15

- 122

Зег

Ьей

Агд

Ьей 20

Зег

Суз

А1а

Зег 25

С1у

Агд

Зег

РЬе

Зег 30

Азр

Азп

Уа1

МеЬ

С1у

Тгр

РНе

Агд

61п

А1а

С1у

Ьуз

61ц

Агд

С1и

РНе

Уа1

35

40

45

А1а

ΗΪ5

11е

Зег

Агд

С1у

Зег

Агд

ТЬг

С1и

Туг

А1а

С1и

Зег

Уа1

50

55

60

Ьуз

С1у

Агд

РЬе

ТЬг

11е

Зег

Агд

Азр

Азп

ТЬг

Ьуз

ТЬг

МеН

Туг

65

70

75

80

Ьей

С1п

МеЬ

Азп

Зег

Ьей

Ьуз

Рго

С1и

Азр

ТЫ

А1а

Уа1

Туг

Суз

85

90

95

А1а

Зег

Агд

Бег

Уа1

А1а

Ьей

А1а

ТЬг

А1а

Агд

Рго

Туг

Азр

Туг

100

105

110

Тгр

С1у

С1п

61у

ТЫ

61η

Уа1

ТЬг

Уа1

Зег

115 120 <210> 70 <211> 121 <212> РКТ <213> Ьата д1ата

<400>

70

С1и

Уа1

С1п

Ьей

Уа1

61и

Зег

С1у

О1у

Ьей

А1а

С1п

А1а

О1у

С1у

1

5

10

15

Зег

Ьей

Агд

Ьей

Зег

Суз

ТЬг

ТНг

Зег

С1у

Ьей

ТЬг

РЬе

Зег

Туг

20

25

30

Туг

МеЬ

С1у

Тгр

РЬе

Агд

С1п

А1а

Рго

С1у

Ьуэ

С1и

Агд

С1и

РЬе

Уа1

35

00

45

- 123 025148

А1а

ТЬг 50

11е

Зег

Тгр

Азп

Ьуз 55

11е

Зег

ТЬг

Не

Туг 60

ТЬг

Азр

Зег

УаЬ

Ьуз

61 у

Агд

РЬе

ТЬг

Уа1

Зег

Агд

Азр

Азп

Ьуз

Азп

ТЬг

УаЬ

Туг

65

70

75

80

Ьеи

С1п

Мер

Азп

Зег

Ьеи

Ьуз

Рго

СЬи

Азр

ТЬг

А1а

УаЬ

Туг

Суз

85

90

95

А1а

Азр

А1а

Зег

Агд

Рго

ТЬг

Ьеи

Агд

Не

Рго

СЬп

Туг

Тгр

СЬу

100

105

110

С1п

61у

ТЬг

С1п

Уа1

ТЬг

Уа1

Зег

115 120 <210> 71 <211> 115 <212> РКТ <213> Ьата д1ата

<400>

71

СЬи

Уа1

СЬп

Ьеи

УаЬ

СЬи

Зег

С1у

СЬу

Ьеи

УаЬ

СЬп

Рго

СЬу

1

5

10

15

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

А1а

Зег

61у

Зег

11е

Уа1

Агд

Зег

Азр

20

25

30

Уа1

МеЬ

СЬу

Тгр

Туг

Агд

СЬп

А1а

Рго

СЬу

Ьуз

СЬп

Агд

СЬи

Ьеи

УаЬ

35

40

45

А1а

РЬе

Не

Агд

Зег

Ьеи

СЬу

Зег

ТЬг

Туг

АЬа

СЬу

Зег

УаЬ

Ьуз

50

55

60

СЬу

Агд

РЬе

ТЬг

Не

Зег

Агд

Азр

АЬа

Азп

ТЬг

УаЬ

Туг

Ьеи

65

70

75

80

- 124 025148

С1п Мер

Азп

Авп

Ьеи 85

Ьуз

Рго

С1и

Азр

ТЬг 90

А1а

Уа1

Туг

Суз 95

Азп

А1а Агд

РЬе

Зег 100

01 у

С1и

Зег

Туг

Тгр 105

С1у

С1П

С1у

ты

Рго 110

Уа1

ТЬг

Уа1 Зег

Зег 115

<210> 72 <211> 124 <212> РКТ <213> Ьата д1ата

<400>

72

С1и Уа1 1

С1п

Ьеи

Уа1 5

С1и

Зег

61у

С1у

С1у 10

Ьеи

Уа1

СЬп

А1а

С1у 15

С1у

Зег Ьеи

Агд

Ьеи 20

Зег

Суэ

А1а

Уа1

Зег 25

61у

Зег

ТЬг

РЬе

01у 30

Ьеи

Туг

А1а Мер

С1у 35

Тгр

РЬе

Агд

С1п

А1а 40

Рго

С1у

Агд

01и

Агд 45

С1и

РЬе

Ьеи

Зег А1а 50

11е

ТЬг

Тгр

Зег

А1а 55

О1у

Азр

ТЬг

С1п

Туг 60

А1а

Азр

Зег

Уа1

Ьув 61у 65

Агд

РЬе

ТЬг

Не 70

Зег

Агд

Азр

Азп

А1а 75

Агд

Азп

ТЬг

Уа1

Азп 80

Ьеи С1п

МеЬ

Азп

С1у 35

Ьеи

Ьув

Рго

С1и

Азр 90

ТЬг

А1а

Уа1

Туг

Туг 95

Суз

А1а С1у

Агд

С1п 100

Тгр

С1у

ТЬг

Туг 105

Туг

ΗΪ.5

С1у

Зег 110

Туг

А1а

125

Туг

Тгр

СЬу 115

СЬп

СЬу

ТЬг

С1п

УаЬ 120

ТНг

УаЬ

Бег

<210>

73

<2Н>

113

<212>

РКТ

<213> Ьата дЬата

<400>

73

СЬи

Уаь

ст

Ьеи

УаЬ

СЬи

Бег

СЬу

С1у

СЬу

Ьеи

УаЬ

С1п

Рго

СЬу

1

5

10

15

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

Уа1

АЬа

Зег

СЬу

Не

Агд

РНе

МеЬ

Зег

Меб

20

25

30

АЬа

Тгр

Туг

Агд

СЬп

АЬа

Рго

СЬу

Ьуз

НЬз

Агд

СЬи

Ьеи

АЬа

Агд

35

40

45

Не

Зег

СЬи

СЬу

ТЬг

АЬа

Туг

УаЬ

Азр

Зег

νπ

Ьуз

СЬу

Агд

50

55

60

РЬе

ТЬг

Не

Бег

Агд

Аэр

Азп

Зег

Ьуз

Азп

ТЬг

УаЬ

Туг

Ьеи

СЬп

МеЬ

65

70

75

80

Азп

Зег

Ьеи

Ьуз

АЬа

СЬи

Азр

ТЬг

А1а

УаЬ

Туг

Суз

Азп

ТЬг

РЬе

85

90

95

Зег

Агд

Рго

Азп

Рго

Тгр

СЬу

А1а

СЬу

ТНг

ТЬг

ТНг

УаЬ

Зег

100 105 НО

Зег <210> 74 <211> 128 <212> РКТ

126 <213> Ьаша д1ата <400> 74

С1и Уа1 С1п Ьеи УаЬ С1и Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи УаЬ С1п АЬа 61у СЬу 15 10 15

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Бег С1у Агд ТЬг РЬе Бег ТЬг Азр 20 25 30

Азр Уа1 С1у Тгр РЬе Агд С1п А1а Рго СЬу Ьуз С1и Агд С1и РЬе УаЬ 35 40 45

АЬа УаЬ Не Агд Тгр Зег ТЬг СЬу СЬу ТНг Туг ТЬг Бег Азр Зег УаЬ 50 55 60

АЬа 61у Агд РНе ТНг Ьеи Зег Агд Азр Азп АЬа Ьуз Азп ТНг МеН Туг 65 70 75 80

Ьеи С1п МеГ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТНг АЬа УаЬ Туг Туг Суз 85 90 95

АЬа АЬа Агд Зег Агд Рго Ьеи СЬу АЬа СЬу АЬа Тгр Туг ТНг СЬу С1и 100 105 110

ТНг Агд Туг Азр Бег Тгр СЬу 61п С1у ТНг С1п УаЬ ТНг УаЬ Бег Зег 115 120 125 <210> 75 <211> 122 <212> РКТ <213> Ьаша дЬата <400> 75

С1и Уа1 61п Ьеи Уа1 С1и Бег С1у С1у СЬу Ьеи Уа1 С1п Рго СЬу Азр 15 10 15

- 127 025148

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи 20

Зег

Суз

А1а

Зег 25

С1у

Ьеи

Зег

РЬе

Зег 30

Агд

Туг

С1у

Мер

С1у

Тгр

РЬе

Агд

01п

А1а

Рго

<31у

Ьуз

О1и

Агд

С1и

РЬе

Уа1

35

40

45

11е

А1а

Не

Зег

СЬи

Туг

Азр

Азп

Уа1

Туг

ТНг

А1а

Азр

Зег

Уа1

Агд

50

55

60

С1у

Агд

РНе

ТЬг

11е

Зег

Агд

Аэр

Азп

Зег

Ьуз

Зег

ТЬг

Уа1

Туг

Ьеи

65

70

75

80

С1п

Мер

Азп

Зег

Ьеи

Ьуз

Зег

С1и

Азр

ТЬг

АЬа

Уа1

Туг

Суз

А1а

85

90

95

А1а

Зег

Рго

ТЬг

11е

Ьеи

Зег

ТЬг

Азр

С1и

Тгр

Туг

Ьуз

Туг

Тгр

100

105

110

С1у

Агд

<31у

ТЬг

С1п

Уа1

ТЬг

УаЬ

Зег

115 120 <210> 76 <211> 128 <212> РРТ <213> Ьаша д1аша

<400>

76

61и

Уа1

С1п

Ьеи

Уа1

С1и

Зег

С1 у

СЬ у

С1у

Ьеи

Уа1

С1п

А1а

61у

С1у

1

5

10

15

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

А1а

Зег

С1у

Агд

ТЬг

РЬе

Зег

ТЬг

Азр

20

25

30

Азр

Уа1

<31у

Тгр

РЬе

Агд

С1п

А1а

Рго

С1у

Ьуз

С1и

Агд

С1и

РЬе

Уа1

35

40

45

128

А1а Уа1 11е Агд Тгр Зег ТЬг С1у С1у ТЬг Туг ТЬг Зег Азр Зег Уа1 50 55 60

Ьуз 61у Агд РЬе ТЬг Ьеи Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп ТЬг Мер Туг 65 70 75 80

Ьеи С1п МеЪ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз 85 90 95

А1а А1а Агд Зег Агд Рго Ьеи С1у А1а 61у А1а Тгр Туг ТЬг С1у С1и 100 105 110

ТЬг Агд Туг Азп Туг Тгр Е1у С1п С1у ТЬг С1п Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 120 125 <210> 77 <211> 127 <212> РКТ <213> Ьата д1аша <400> 77

С1и Уа1 61п Ьеи \Га1 С1и Зег 61у 61у С1у Ьеи Уа1 С1п А1а С1у С1у 15 10 15

Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Суэ А1а А1а Зег А1а Агд А1а РЬе Зег Азп Туг 20 25 30

А1а Ме! С1у Тгр РЬе Агд С1п Уа1 Рго С1у Агд <31и Агд С1и РЬе '.'а1 35 40 45

А1а Уа1 11е ТЬг Агд Зег Рго Зег Азп ТЬг Туг Туг ТЬг Азр Зег Уа1 50 55 60

Ьуз С1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп 11е Уа1 Туг 65 70 75 80

- 129 025148

Ьеи

С1п

Ме£

Азп

Зег 85

Ьеи

Ьуз

Его

СЬи

Азр 90

ТЬг

АЬа

УаЬ

Туг

Туг 95

Суз

А1а

ΗΪ5

Туг

Тгр

Азп

Зег

Азр

Зег

Туг

ТЬг

Туг

ТЬг

Азр

Бег

Агд

100

105

110

Тгр

Туг

Азп

Туг

Тгр

СЬу

СЬп

СЬу

ТЬг

СЬп

УаЬ

ТЬг

УаЬ

Зег

115 120 125 <210> 78 <211> 124 <212> РКТ <213> Ьата дЬата

<400> '

78

СЬи

УаЬ

СЬп

Ьеи

УаЬ

01 и

Бег

СЬу

Ьеи

УаЬ

СЬп

АЬа

СЬу

1

5

10

15

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Бег

Суз

АЬа

Зег

СЬу

Агд

ТЬг

РЬе

Зег

Азп

Туг

20

25

30

АЬа

МеЬ

СЬу

Тгр

РЬе

Агд

СЬп

АЬа

Рго

СЬу

Ьуз

СЬи

Агд

УаЬ

Ьеи

УаЬ

35

40

45

АЬа

Азр

11е

Бег

Зег

5ег

СЬу

11е

Азп

ТЬг

Туг

УаЬ

АЬа

Азр

АЬа

УаЬ

50

55

60

Ьуз

СЬу

Агд

РЬе

ТЬг

Не

Бег

Агд

Азр

Азп

АЬа

Ьуз

Азп

ТЬг

УаЬ

Туг

65

70

75

80

Ьеи

СЬп

МеЬ

Азп

Бег

Ьеи

Ьуз

Рго

СЬи

Азр

ТЫ

АЬа

УаЬ

Туг

Суз

85

90

95

АЬа

Бег

АЬа

Тгр

Туг

Бег

СЬп

МеЬ

АЬа

Агд

Азр

Азп

Туг

Агд

100 105 110

130 025148

Туг Тгр СЬу С1п 61у ТЬг С1п Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 120 <210> 79 <211> 125 <212> РКТ <213> Ьаша дЬата <400> 79

С1и Уа1 СЬп Ьеи УаЬ С1и Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи Уа1 С1п АЬа С1у СЬу 15 10 15

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз АЬа А1а Зег СЬу Аер ТЬг Ьеи Зег Агд Туг 20 25 30

А1а Ме1 С1у Тгр РЬе Агд С1п АЬа Рго СЬу Ьуз С1и Агд 31и РЬе Уа1 35 40 45

АЬа Зег 11е Азп ТЬг Зег С1у Ьуз Агд ТЬг Зег Туг АЬа Αερ Зег МеЬ 50 55 60

Ьуз СЬу Агд РЬе АЬа Уа1 Зег Агд Азр Азп АЬа Ьуз Азп ТЬг СЬу Туг 65 70 75 80

Ьеи С1п Мер Азп Зег Ьеи Ьуз Ьеи С1и Азр ТЬг АЬа ТЬг Туг Туг Суз 85 90 95

А1а АЬа Азр Агд РЬе РЬе С1у Зег Азр Зег Азп С1и Рго Агд АЬа Туг 100 105 НО

Агд Туг Тгр 61у 61п С1у ТЬг 61п Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 120 125 <210> 80 <211> 123 <212> РКТ <213> Ьагаа дЬата

- 131 025148 <400> 80

С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п А1а С1у <31и 15 10 15

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз Уа1 АЬа Зег 61у 11е ТЬг РЬе Зег Азп Туг 20 25 30

Азп МеЬ С1у Тгр РЬе Агд 61п А1а Рго С1у Ьуэ С1и Агд С1и РЬе Уа1 35 40 45

А1а ТЬг Не Агд Н1з Шз 61у Туг Азр ТЬг Туг Туг А1а 61и Зег Уа1 50 55 60

Ьуз Е1у Агд РЬе ТЬг Не Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг 65 70 75 80

Ьеи Е1п МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго О1и Азр ТЬг А1а Ьеи Туг Зег Суз 85 90 95

А1а Ьуз Ьуз Ьеи РЬе Тгр Азр МеГ Азр Рго Ьуз ТЬг С1у РЬе Зег Зег 100 105 110

Тгр С1у С1п С1у ТЬг С1п Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 120 <210> 81 <211> 126 <212> РКТ <213> Ьата дЬата <400> 81

С1и ν₃1 С1п Ьеи УаЬ О1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 61п А1а С1у С1у 15 10 15

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у Агд ТЬг Ьеи Зег Зег Туг

- 132 025148

25 30

С1у

Ьеи 61у Тгр 35

РЬе

Агд

61п А1а 40

Рго С1у Ьуз

С1и Агд С1и 45

РЬе

Уа1

А1а

11е

С1у

Тгр

Зег

С1у

Зег

ТЬг

Туг

А1а

Азр

Зег

Уа1

50

55

60

Ьуз

С1у

Агд

РЬе

ТЬг

Уа1

Зег

Уа1

Азр

Азп

А1а

Ьуз

Азп

ТЬг

Уа1

Туг

65

70

75

80

Ьеи

Ьуз

Меб

Азп

Зег

Ьеи

61и

Рго

С1и

Азр

ТЬг

А1а

Уа1

Туг

Суз

85

90

95

А1а

Ьуз

Уа1

Агд

Азп

РЬе

Азп

Зег

Азр

Тгр

Азр

Ьеи

ТЬг

Зег

100

105

110

Туг

Азп

Туг

Тгр

С1у

С1п

С1у

ТЬг

61п

Уа1

ТЬг

Уа1

Зег

115 120 125 <210> 82 <211> 125 <212> РКТ <213> Ьата д1ата

<400>

82

<31и

Уа1

С1п

Ьеи

Уа1

<31и

Зег

С1у

61у

Ьеи

Уа1

С1п

А1а

С1у

1

5

10

15

Зег

Ьеи

Меб

Ьеи

Зег

Суз

А1а

Зег

С1у

Агд

А1а

Ьеи

Зег

Туг

20

25

30

А1а

11е

С1у

Тгр

РЬе

Агд

С1п

А1а

Рго

61у

Агд

С1и

Агд

61и

РЬе

Уа1

35

40

45

А1а

Агд

11е

Зег

Тгр

Зег

61у

А1а

Азп

ТЬг

Туг

А1а

Азр

Зег

Уа1

- 133 025148

55 60

Ьуз 65

СЬу

Агд

РЬе

ТЬг

Не 70

Зег

Агд СЬу Азп

АЬа 75

Ьуз

Азп

ТЬг

УаЬ

Туг 80

Ьеи

СЬп

МеЬ

Азп

Зег

Ьеи

Ьуз

Рго

СЬи

Азр

ТЫ

А1а

АЬа

Туг

Суз

85

90

95

АЬа

СЬп

ТЬг

Зег

Ьуз

Туг

Азр

Азп

Туг

Аэр

АЬа

Агд

А1а

Туг

100

105

110

СЬу

Туг

Тгр

СЬу

СЬп

СЬу

ТЬг

СЬп

УаЬ

ТЬг

УаЬ

Зег

115 120 125 <210> 83 <2Ы> 125 <212> ΡΡ.Τ <213> Ьаша дЬагаа

<401

)> :

33

СЬи

СЬп

Ьеи

УаЬ

СЬи

Зег

С1у

СЬу

Ьеи

УаЬ

СЬп

АЬа

СЬу

1

5

10

15

Зег

Ьеи

МеЬ

Ьеи

Зег

Суз

АЬа

А1а

Зег

СЬу

Агд

АЬа

Ьеи

Зег

Туг

20

25

30

АЬа

11е

СЬу

Тгр

РЬе

Агд

СЬп

А1а

Рго

СЬу

Агд

СЬи

Агд

СЬи

РЬе

УаЬ

35

40

45

АЬа

Агд

Не

Зег

Тгр

Зег

СЬу

А1а

Азп

ТЬг

Туг

АЬа

Азр

Зег

УаЬ

50

55

60

Ьуз

СЬу

Агд

РЬе

ТЬг

11е

Зег

Агд

СЬу

Азп

АЬа

Ьуз

Азп

ТЬг

УаЬ

Туг

65

70

75

80

Ьеи

СЬп

МеЬ

Азп

Зег

Ьеи

Ьуз

Рго

СЬи

Азр

ТЫ

А1а

АЬа

Туг

Суз

- 134 025148

90 95

А1а

С1п

ТЬг 100

ТЬг

Зег

Ьуз

Туг

Аар Азп Туг Азр А1а Агд

А1а

Туг

105

110

С1у

Туг

Тгр С1у

С1п

61у

ТЬг

61п

Уа1

ты

Уа1

Зег

115

120

125

<210>

84

<211>

123

<212>

РКТ

<213> Ьата д1ата

<400>

84

61и

Уа1

61п

Ьеи

Уа1

61и

Зег

С1у

61у

С1у

Ьеи

Уа1

61п

А1а

61у

С1у

1

5

10

15

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

А1а

Зег

С1у

Агд

ТЬг

РЬе

Зег

Туг

20

2 5

30

А1а

Мер

С1у

Тгр

РЬе

Агд

С1п

А1а

Рго

С1у

Ьуз

С1и

Агд

С1и

РЬе

Уа1

35

40

45

А1а

ТЬг

11е

Зег

С1п

Зег

С1у

Туг

Зег

ТЬг

Туг

А1а

Азр

Зег

Уа1

50

55

60

Ьуз

61у

Агд

РЬе

ТЬг

11е

Зег

Агд

Азр

Азп

А1а

Ьуз

Азп

ТЬг

Уа1

АЗП

65

70

75

80

Ьеи

<31п

Мер

Азп

Зег

Ьеи

Ьуз

Рго

С1и

Азр

ТЬг

А1а

Уа1

Туг

Суз

85

90

95

А1а

Азр

Рго

РЬе

Туг

Зег

Туг

С1у

Зег

Рго

Зег

Рго

Туг

Агд

Туг

100

105

110

Тгр

С1у

е1п

С1у

ТЬг

61п

Уа1

ТЬг

Уа1

Зег

- 135 025148

115

120

<210>

85

<211>

125

<212>

РКТ

<213> Ь

агаа дЬата

<400>

85

61и

Уа1

61п

Ьеи

УаЬ

С1и

Зег

СЬу

С1у

Ьеи

Уа1

СЬп

Рго

СЬу

1

5

10

15

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

АЬа

Зег

С1у

Агд

Ьеи

РЬе

Зег

РЬе

Зег

20

25

30

АЬа

МеЬ

С1у

Тгр

РЬе

Агд

СЬп

А1а

Рго

61у

Ьуз

С1и

Агд

С1и

РЬе

УаЬ

35

40

45

АЬа

РНе

Ьуз

Тгр

Зег

С1у

Зег

ТЬг

Туг

АЬа

Азр

Туг

УаЬ

50

55

60

Ьуз

СЬу

Агд

РЬе

ТЬг

11е

Зег

ТЬг

Азр

Азп

АЬа

Ьуз

Азп

11е

Ьеи

РЬе

65

70

75

80

Ьеи

СЬп

МеГ

Азп

Зег

Ьеи

Ьуз

Рго

С1и

Азр

ТЬг

АЬа

11е

Туг

Суз

85

90

95

АЬа

УаЬ

Азр

Агд

РЬе

Туг

ТЬг

61у

Агд

Туг

Зег

Азр

С1и

Туг

100

105

110

Азр

Туг

Тгр

С1у

СЬп

61у

ТЬг

СЬп

Уа1

ТЬг

Уа1

Зег

115

120

125

- 136 025148 <400> 86

СЬи 1

УаЬ

СЬп

Ьеи

УаЬ 5

СЬи

Зег

СЬу

СЬу 10

Ьеи

УаЬ

СЬп

АЬа

СЬу 15

СЬу

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

АЬа

Зег

ТЬг

Зег

Не

Туг

Зег

Не

ТЬг

20

25

30

УаЬ

МеЬ

АЬа

Тгр

РЬе

Агд

СЬп

АЬа

Рго

СЬу

Ьуз

СЬи

Агд

СЬи

РЬе

УаЬ

35

40

45

АЬа

Не

ТЬг

Тгр

Зег

АЬа

Рго

Зег

Туг

АЬа

Азр

Зег

УаЬ

50

55

60

Ьуз

СЬу

Агд

РЬе

ТЬг

Не

Зег

Агд

Азр

Азп

А1а

Ьуз

Азп

ТЬг

УаЬ

Туг

65

70

75

80

Ьеи

СЬп

УаЬ

Азп

Зег

Ьеи

Ьуз

Рго

СЬи

Азр

$ег

АЬа

Не

Туг

Суз

85

90

95

АЬа

Азр

Агд

РЬе

Ьуз

СЬу

Агд

Зег

Не

Уа1

ТЬг

Агд

Зег

Азр

Туг

100

105

НО

Агд

Туг

Тгр

СЬу

СЬп

СЬу

ТЬг

СЬп

УаЬ

ТЫ

Уа1

Зег

115 120 125 <210> 87 <211> 125 <212> РКТ <213> Ьата дЬата <400> 87

СЬи 1

Уа1

СЬп

Ьеи А/а1 5

СЬи

Зег

СЬу СЬу СЬу Ьеи УаЬ 10

С1п

Зег

СЬу 15

С1у

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

А1а

Зег

СЬу

Агд

Зег

РЬе

Зег

Ьеи

20

25

30

- 137 025148

А1а Ме! С1у Тгр РЬе Агд С1п Уа1 Рго С1у Ьуз Αερ Агд С1и РЬе А7а1 35 40 45

А1а Зег 11е Зег С1п Зег С1у 11е ТЬг ТЬг Зег Туг А1а Азр Зег νβΐ 50 55 60

Ьув Зег Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Зег А1а Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг 65 70 75 80

Ьеи С1п Ме! Аэп Ьеи Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз 85 90 95

А1а ТЬг Зег Уа1 РЬе Туг Зег ТЬг А1а Ьеи ТЬг Агд Рго Уа1 Азр Туг 100 105 110

Агд Туг Тгр С1у С1п 61у ТЬг 61п Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 120 125 <210> 88 <211> 125 <212> РРТ <213> Ьата д1ата <400> 88

С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п А1а 61у С1у 15 10 15

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег ТЬг Зег 11е Туг Зег 11е ТЬг 20 25 30

17а1 Ме! А1а Тгр РЬе Агд εΐη А1а Рго 61у Ьуз С1и Агд О1и РЬе Уа1 35 40 45

А1а А1а 11е ТЬг Тгр Зег А1а Рго ТЬг ТЬг Туг Зег А1а Азр Зег Уа1 50 55 60

- 138 025148

Ьуз 65

С1у

Агд

РЬе

ТЬг

11е 70

Зег

Агд

Азр

Азп

АЬа 75

Ьуз

Азп

ТЬг

Уа1

Туг 30

Ьеи

61п

МеС

Азп

Зег

Ьеи

Ьуз

Рго

61и

Азр

Зег

А1а

11е

Туг

Суз

85

90

95

А1а

Азр

Агд

РЬе

Ьуз

61у

Агд

Зег

Не

Уа1

ТЫ

Агд

Зег

Азр

Туг

100

105

110

Агд

Туг

Тгр

Б1у

61п

С1у

ТЬг

СЬп

Уа1

ТЬг

Уа1

Зег

115 120 125 <210> 89 <211> 129 <212> РКТ <213> Ьата д1ата

<400> !

39

СЬи

Уа1

СЬп

Ьеи

Уа1

С1и

Зег

С1у

СЬу

Ьеи

УаЬ

С1п

А1а

СЬу

С1у

1

5

10

15

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

Зег

Уа1

ТЬг

СЬу

Агд

ТЬг

РЬе

Азп

Ьуз

Туг

20

25

30

Уа1

Меб

С1у

Тгр

РЬе

Агд

С1п

А1а

Рго

СЬу

Азп

Азр

Агд

СЬи

РЬе

Уа1

35

40

45 .

А1а

АЬа

Не

ТЬг

Зег

Агд

Азр

С1у

Рго

ТЬг

Туг

А1а

Азр

Зег

Уа1

50

55

60

Ьуз

С1у

Агд

РЬе

ТЬг

Не

Зег

СЬу

Азр

Азп

ТЬг

Ьуз

Азп

Ьуз

Не

РЬе

65

70

75

80

Ьеи

С1п

Меб

Азп

Зег

Ьеи

Меб

Рго

С1и

Азр

ТЬг

А1а

Уа1

Туг

Суз

90 95

- 139 025148

140 025148

Уа1

ТНг

Уа1 115

Зег

<210>

91

<211>

115

<212?

РЕТ

<213> Ьата д!аиа

<400?

91

С1и

Уа1

С1п

Ьеи

Уа1

О1и

Зег

61у

С1у

Ьеи

Уа1

С1п

Рго

С1у

1

5

10

15

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

А1а

Зег

61у

Зег

11е

Уа1

Агд

Зег

Азр

20

25

30

Уа1

МеЬ

С1у

Тгр

Туг

Агд

01 п

А1а

Рго

О1у

Ьуз

С1п

Агд

01 и

Ьеи

Уа1

35

40

45

А1а

РЬе

11е

Агд

Зег

Ьеи

С1у

Зег

ТЬг

Туг

А1а

С1у

Зег

Уа1

Ьуз

50

55

60

С1у

Агд

РЬе

ТЬг

11е

Зег

Агд

Азр

Азп

А1а

Азп

ТЬг

Уа1

Туг

Ьеи

65

70

75

80

С1п

МеЬ

Азп

Ьеи

Ьуз

Рго

С1и

Азр

ТЬг

А1а

Уа1

Туг

Суз

Азп

85

90

95

А1а

Агд

РЬе

Зег

01 у

С1и

Зег

Туг

Тгр

01 у

С1п

01у

ТЫ

Рго

Уа1

ТЬг

100

105

110

Уа1

Зег

115

<210>

92

<211>

129

- 141 025148 <212> РКТ <213> Ьата дЬата <400> 92

Е1и Уа1 Е1п Ьеи 17а1 Е1и Зег С1у Е1у Е1у Ьеи А1а С1п А1а Е1у С1у 15 10 15

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз ТЬг А1а Зег Е1у Агд ТЬг РЬе Азп Азп Туг 20 25 30

Уа1 МеЬ О1у Тгр РЬе Агд Е1п А1а Рго С1у Азп Е1и Агд Е1и РЬе Ή1 35 40 45

А1а А1а Не ТЬг Зег ТЬг Азп Е1у Рго ТЬг Туг Туг А1а Азр Зег Уа1 50 55 60

Ьуз С1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег 01у Азр Азп ТЬг Ьуз Азп Ьуз 1/а1 РЬе 65 70 75 80

Ьеи С1п МеЬ Азр Зег Ьеи Агд Рго 61и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз 85 90 95

А1а 11е Азр Е1и Азр Ьеи Туг НЬз Туг Зег Бег Туг Н1з Туг ТЬг Агд 100 105 110

УаЬ А1а Ьеи Туг НЬз Туг Тгр Е1у 61п Е1у ТЬг Е1п УаЬ ТЬг УаЬ Зег 115 120 125

Зег <210> 93 <211> 124 <212> РРТ <213> Ьата д!ата <400> 93

- 142 025148

С1и 1

Уа1

С1п Ьеи

Уа1 5

С1и

Зег

С1у

С1у 10

Ъеи

Уа1

С1п

Зег

С1у 15

Азр

Зег

Ъеи

Агд

Ъеи

Зег

Суз

А1а

Уа1

Зег

С1у

Азп

ТЬг

РЬе

С1у

Ъеи

Туг

20

25

30

А1а

МеЬ

С1у

Тгр

РЬе

Агд

С1п

А1а

Рго

С1у

Агд

С1и

Агд

С1и

РЬе

Уа1

35

40

45

Зег

А1а

Не

ТЬг

Тгр

Зег

А1а

С1у

Азр

ТЬг

<31п

Туг

А1а

Азр

Зег

Уа1

50

55

60

Ьуз

С1у

Агд

РЬе

ТЬг

Не

Зег

Агд

Азр

Азп

А1а

Агд

Азп

ТЬг

Уа1

Азп

65

70

75

80

Ьеи

С1п

МеЬ

Азп

С1у

Ьеи

Ьуз

Рго

С1и

Азр

ТЬг

А1а

Уа1

Туг

Суз

85

90

95

А1а

С1у

Агд

С1п

Тгр

С1у

61у

ТЬг

Туг

Ηϊε

С1у

Зег

Туг

А1а

100

105

110

Тгр

С1у

С1п

С1у

ТЬг

С1п

Уа1

ТЬг

Уа1

Зег

115 120 <210> 94 <211> 128 <212> РКТ <213> Ъата д1ата

<400> 94
61и Уа1 61п	Ъеи Уа1 С1и	Зег <31и С1у С1у Ъеи Уа1	С1п А1а С1у СТу
1	5	10	15

Зег Ъеи Агд Ъеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у Агд ТЬг РЬе Зег ТЬг Азр
20	25	30

- 143 025148

Азр Уа1 С1у Тгр РЬе Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз С1и Агд С1и РЬе Уа1 35 40 45

Ьеи С1п Мер Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз 85 90 95

Д1а А1а Агд Зег Агд Рго Ьеи С1у А1а <51у АЬа Тгр Туг ТЬг С1у С1и 100 105 110

Азп Туг Туг Азп Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг С1п νβΐ ТЬг 17а1 Зег Зег 115 120 125 <210> 95 <211> 126 <212> РКТ <213> Ьата д1ата <400> 95 <31и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег Й1у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п А1а С1у С1у 15 10 15

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у Агд ТЬг Зег Зег С1у Туг 20 25 30

Азр Мер С1у Тгр РЬе Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз С1и Агд С1и РЬе Уа1 35 40 45

ТЬг А1а 11е ТЬг Тгр Зег С1у С1у Зег ТЬг Туг Зег Рго Аэр Зег Уа1 50 55 60

- 144 025148

Ьуз 65

61у

Агд

РЬе

ТЬг

11е 70

Зег

Агд

Азр Азп

А1а 75

Ьуз

Азп

ТЬг

Уа1

Туг 80

Ьеи

61п

Мер

Азп

Ьеи

ТЬг

Рго

Е1и

Аэр

ТЬг

А1а

Уа1

Туг

Суз

85

90

95

А1а

Зег

61 у

Агд

11е

Тгр

Агд

5ег

Агд

Азр

Туг

Азр

Зег

61и

Ьуз

Туг

100

105

но

Туг

Азр

11е

Тгр

61у

Нгз

61у

ТНг

С1п

Уа1

ТЬг

Уа1

Зег

115 120 125 <210> 96 <211> 129 <212> РЕТ <213> Ьагоа д1ата

<400>

96

С1и

Уа1

61п

Ьеи

Уа1

С1и

Зег

С1у

61у

С1у

Ьеи

Уа1

61п

А1а

61у

61 у

1

5

10

15

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

А1а

Зег

С1у

Агд

ТЬг

РЬе

Зег

А1а

Туг

20

25

30

Азр

Мер

61у

Тгр

РЬе

Агд

С1п

А1а

Рго

С1у

Ьуз

61и

Агд

61и

РЬе

Уа1

35

40

45

А1а

Уа1

11е

Бег

Тгр

ТЬг

Азп

Зег

Мер

ТЬг

Туг

А1а

Азр

Зег

Уа1

50

55

60

Ьуз

61у

Агд

РЬе

ТЬг

11е

Зег

Агд

Азр

Азп

А1а

Ьуз

Азп

ТЬг

Уа1

Туг

65

70

75

80

Ьеи

С1п

Мер

Азп

Зег

Ьеи

Ьуз

Рго

61и

Азр

ТЬг

А1а

Уа1

Туг

Суз

90 95

- 145 025148

146 025148

Уа1 Азп Азр Туг <71и РЬе Тгр С1у С1п 61у ТЬг С1п Уа1 ТЬг Уа1 Зег 115 120 125

Зег <210> 98 <211> 129 <212> РКТ <213> Ьата д1ата <400> 98

61и Ή1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п А1а О1у С1у 15 10 15

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у Агд ТЬг РЬе Зег А1а Туг 20 25 30

Азр Мер О1у Тгр РЬе Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз С1и Агд С1и РЬе Уа1 35 40 45

А1а Ή1 Не Зег Тгр Зег С1у С1у Мер ТЬг Туг Туг А1а Азр Зег Уа1 50 55 60

А1а Уа1 Азр Агд Агд Агд Ьеи Туг Зег Агд Тгр Агд Туг Туг ТЬг С1у 100 105 110

Уа1 Азп Азр Туг Азр Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг С1п Уа1 ТЬг Уа1 Зег 115 120 125

147 025148

Зег

<210>

99

<211>

129

<212>

РКТ

<213> Ьата «

д1ата

<400>

99

С1и

Уа1

С1п

Ьей

Уа1

61и

Зег

С1у

01 у

С1у

Ьей

Уа1

С1п

А1а

С1у

1

5

10

15

Зег

Ьей

Агд

Ьей

Зег

Суз

А1а

Зег

С1у

Агд

ТЬг

РЬе

Зег

А1а

Туг

20

25

30

Азр

МеЬ

Е1у

Тгр

РЬе

Агд

61п

А1а

Рго

С1у

Ьуз

С1и

Агд

С1и

РЬе

Уа1

35

40

45

А1а

Уа1

11е

Зег

Тгр

ТЬг

С1у

МеЬ

ТЬг

Туг

А1а

Азр

Зег

Уа1

50

55

60

Ьуз

С1у

Агд

РЬе

ТЬг

11е

Зег

Агд

Азр

Ьуз

А1а

Ьуз

Азп

ТЬг

Уа1

Зег

65

70

75

80

Ьей

С1п

МеЬ

Азп

Зег

Ьей

Ьуз

Рго

С1и

Азр

ТЬг

А1а

Уа1

Туг

Суз

85

90

95

А1а

Уа1

Азр

Агд

ТЬг

Туг

Зег

Агд

Тгр

Агд

Туг

ТЬг

61у

100

105

но

Уа1

Азп

С1и

Туг

С1и

Туг

Тгр

С1у

С1п

С1у

ТЬг

О1п

Уа1

ТЬг

Уа1

Бег

115

120

125

Зег

- 148 025148

<210>	100
<211>	129
<212>	РКТ
<213>	Ьата
<4 00>	100
СЬи УаЬ С1:

Бег Ьеи Агд Ьеи Бег Суз А1а АЬа Зег СЬу Агд ТЬг РЬе Бег АЬа Туг 20 25 30

Азр МеЬ СЬу Тгр РЬе Агд СЬп АЬа Рго СЬу Ьуз СЬи Агд СЬи РЬе УаЬ 35 40 45

АЬа УаЬ 11е Бег Тгр ТЬг СЬу Азр МеЬ ТЬг Туг Туг АЬа Азр Бег УаЬ 50 55 60

Ьуз СЬу Агд РЬе ТЬг Не Зег Агд Азр Ьуз АЬа Ьуз Азп ТЬг Уа1 Зег 65 70 75 80

Ьеи СЬп МеЬ Азп Бег Ьеи Ьуз Рго СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз 85 90 95

АЬа АЬа Азр Агд Агд Агд ТЬг Туг Зег Агд Тгр Агд Туг Туг ТЬг 61у 100 105 110

УаЬ Азп СЬи Туг СЬи Туг Тгр СЬу С1ь СЬу ТЬг СЬп УаЬ ТЬг Уа1 Бег 115 120 125

Бег <210> 101 <211> 123 <212> РКТ

149 025148 <213> Ьата дЬата <400> 101

СЬи 1

УаЬ

СЬп Ьеи УаЬ 5

СЬи

Зег

СЬу

СЬу 10

Ьеи

УаЬ

СЬп

АЬа

СЬу 15

СЬу

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

А1а

АЬа

Зег

СЬу

Агд

ТЬг

РЬе

Зег

УаЬ

Туг

20

25

30

ТЬг

Меб

СЬу

Тгр

РЬе

Агд

С1п

АЬа

Рго

СЬу

Ьу®

СЬи

Агд

СЬи

РЬе

УаЬ

35

40

45

АЬа

ТЬг

Не

Зег

Агд

ТЬг

б1у

Азр

Агд

ТЬг

Зег

Туг

АЬа

Азп

Зег

УаЬ

50

55

60

Ьуз

СЬу

Агд

РЬе

ТЬг

Не

Зег

Агд

СЬи

Азп

АЬа

Ьуз

Азп

ТЬг

УаЬ

Туг

65

70

75

80

Ьеи

СЬп

МеЬ

Азп

Зег

Ьеи

Ьуз

Рго

СЬи

Азр

ТЬг

АЬа

УаЬ

Туг

Зег

Суз

85

90

95

АЬа

СЬу

Рго

Не

АЬа

Рго

Зег

Рго

Агд

Рго

Агд

СЬи

Туг

100

105

110

Тгр

СЬу

СЬп

СЬу

ТЬг

СЬп

Уа1

ТЬг

УаЬ

Зег

115 120 <210> 102 <211> 129 <212> РКТ <213> Ьата д!ата

<400> 102
СЬи УаЬ СЬп	Ьеи Меб	С1и Зег С1у С1у 01у Ьеи	УаЬ СЬп АЬа СЬу СЬу
1	5	10	15

150 025148

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи 20

Зег

Суз

А1а

Зег 25

СЬу

Агд

ТЬг

РЬе

Зег 30

А1а

Туг

Азр

Ме!

С1у

Тгр

РЬе

Агд

61п

А1а

Рго

С1у

Ьуз

61и

Агд

С1и

РЬе

Уа1

35

40

45

А1а

Уа1

11е

Зег

Тгр

ТЬг

С1у

Ме!

ТЬг

Туг

А1а

Азр

Зег

Уа1

50

55

60

Ьуз

61у

Агд

РЬе

ТЫ

11е

Зег

Агд

Азр

Ьуз

А1а

Ьуз

Азп

ТЬг

Уа1

Зег

65

70

75

80

Ьеи

61п

Ме!

Азп

Зег

Ьеи

Ьуз

Рго

С1и

Азр

ТЬг

А1а

Уа1

Туг

Суз

85

90

95

А1а

Уа1

Азр

Агд

ТЬг

Туг

Зег

Агд

Тгр

Агд

Туг

ТЬг

61у

100

105

НО

Уа1

Азп

61и

Туг

61и

Туг

Тгр

61у

С1п

С1у

ТЬг

С1п

Уа1

ТЬг

Уа1

Зег

115 120 125

Зег <210> 103 <211> 129 <212> РКТ <213> Ьата д!агаа

<400> 103
61и Уа1 61п	Ьеи Уа1	С1и Зег СЬу Й1у 61у Ьеи УаЬ	61п АЬа 61у СЬу
1	5	10	15

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег СЬу Агд ТЬг РЬе Зег А1а Туг
20	25	30

- 151 025148

Азр

МеЬ

Е1у 35

Тгр

РЬе

Агд

Е1п

А1а 40

Рго

С1у

Ьуз

Е1и

Агд 45

61и

РЬе

Уа1

А1а

Уа1

11е

Зег

Тгр

Зег

Е1у

Ме£

ТЬг

Азр

Туг

А1а

Азр

Зег

Уа1

50

55

60

Ьуз

Е1у

Агд

РНе

ТЫ

11е

Зег

Агд

С1и

Азп

А1а

Ьуз

Азп

ТЬг

Е1п

РЬе

65

70

75

80

Ьеи

С1п

Ме!

Азп

Зег

Ьеи

Ьуз

Рго

<31и

Азр

ТЬг

А1а

Уа1

Туг

Суз

85

90

95

А1а

Уа1

С1у

Агд

А1а

Туг

Зег

Агд

Тгр

Агд

Туг

ТЬг

Е1у

100

105

110

Уа1

Азп

61и

Туг

Азр

Туг

Тгр

С1у

С1п

С1у

ТЬг

Е1п

Уа1

ТЬг

Уа1

Бег

115 120 125

Бег <210> 104 <211> 125 <212> РКТ <213> Ьата д1ата

<400>

104

Е1и

Уа1

Е1п

Ьеи

Уа!

С1и

Зег

Е1у

С1у

Ьеи

Уа1

С1п

А1а

С1у

Азр

1

5

10

15

Бег

Ьеи

Агд

Ъеи

Зег

Суз

ТЬг

А1а

Зег

Е1у

Агд

ТЬг

РЬе

Азп

Бег

Туг

20

25

30

А1а

МеЪ

С1у

Тгр

РЬе

Агд

С1п

А1а

Рго

Е1у

Ьуз

Е1и

Агд

Е1и

Зег

Уа1

40 45

152 025148

А1а

ΗΪ5 50

11е

Азп

Агд

Зег

61у 55

Зег

ТЬг

Туг

Туг 60

АЬа

Азр

Зег

Уа1

Ьуа

С1у

Агд

РЬе

ТЬг

11е

Зег

Агд

Авр

Азп

А1а

Ьув

Азп

ТЫ

Уа1

Туг

65

70

75

80

Ьеи

С1п

Ьеи

Авп

Зег

Ьеи

Ьуз

Рго

С1и

Азр

ТЫ

АЬа

Уа1

Туг

Сув

85

90

95

АЬа

А1а

С1у

Агд

Туг

Зег

Азр

С1у

Уа1

Рго

Зег

А1а

Зег

РЬе

100

105

110

Авп

Туг

Тгр

С1у

С1п

61у

ТЬг

С1п

Уа1

ТЬг

Уа1

Зег

115 120 125 <210> 105 <211> 128 <212> РКТ <213> Ьата д!ата

<400>

105

С1и

Уа1

С1п

Ьеи

Уа1

С1и

Зег

Е1у

С1у

Ьеи

Уа1

С1п

А1а

С1у

Авр

1

5

10

15

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

РЬе

ТЬг

Зег

А1а

Агд

ТЬг

РЬе

Азр

ТЫ

Тгр

20

25

30

А1а

Мер

А1а

Тгр

РЬе

Агд

61η

АЬа

Рго

С1у

Ьуз

Е1и

Агд

С1и

РЬе

Не

35

40

45

Зег

А1а

Не

Зег

Тгр

Зег

С1у

Зег

Μβΐ

ТЫ

Туг

ТЬг

Авр

Зег

Уа1

50

55

60

Ьуз

С1у

Агд

РЬе

Не

Зег

Агд

Аэр

Азп

А1а

С1п

Азп

ТЬг

Ьеи

РЬе

65

70

75

80

- 153 025148

Ъеи

СЬп Мер

Азп

Αεη 85

ТЬг АЬа

Рго

СЬи

Азр 90

ТЬг

АЬа

УаЬ

Туг

Туг 95

Суз

А1а

АЬа

Ьуз

ТЬг

Уа1

Азр

Туг

Суз

Зег

АЬа

Туг

СЬи

Суз

Туг

АЬа

Агд

100

105

110

Ьеи

СЬи

Туг

Азр

Туг

Тгр

СЬу

Агд

СЬу

АЬа

СЬп

УаЬ

ТЬг

УаЬ

Зег

115 120 125 <210> 106 <2Ы> 126 <212> РКТ <213> Ьата дЬата

<400>

106

СЬи

УаЬ

СЬп

Ьеи

УаЬ

СЬи

Зег

СЬу

Ьеи

Мер

СЬп

ТЬг

СЬу

Азр

1

5

10

15

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

АЬа

Зег

СЬу

Ъеи

Агд

РЬе

ТЬг

Зег

ТЬг

20

25

30

Азп

МеР

СЬу

Тгр

РЬе

Агд

СЬп

СЬу

Рго

СЬу

Ьуз

СЬи

Агд

СЬи

РЬе

УаЬ

35

40

45

АЬа

Не

ТЬг

Ьеи

Зег

СЬу

ТЬг

Туг

АЬа

СЬи

АЬа

УаЬ

Ьуз

50

55

60

СЬу

Агд

РЬе

ТЬг

Не

Зег

Агд

Азр

Азп

Азр

Ьуз

Азп

ТЬг

УаЬ

АЬа

Ьеи

65

70

75

80

СЬп

Мер

Азп

Зег

Ьеи

Ьуз

Рго

СЬи

Азр

ТЫ

АЬа

УаЬ

Туг

Суз

СЬу

85

90

95

АЬа

Азр

Рго

Зег

Туг

Зег

ТЬг

Зег

Агд

Туг

ТЬг

Ьуз

АЬа

ТЬг

СЬи

100

105

110

- 154 025148

Туг

Азр

Туг 115

Тгр

СЬу

СЬп

СЬу

гы 120

СЬп

УаЬ

ТЬг

УаЬ

Зег 125

Зег

<210>

107

<2Ы>

126

<212>

РКТ

<213> Ъаша ι

дЬата

<400>

107

СЬи

УаЬ

СЬп

Ьеи

УаЬ

СЬи

Зег

СЬу

Ьеи

УаЬ

СЬп

АЬа

СЬу

1

5

10

15

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

АЬа

Зег

СЬу

Агд

ТЬг

РЬе

Азп

ТЬг

Туг

20

25

30

ТЬг

Мер

•СЬу

Тгр

РЬе

Агд

СЬп

ТЬг

Рго

СЬу

ТЬг

СЬи

Агд

СЬи

РЬе

УаЬ

35

40

45

АЬа

Не

Агд

Тгр

ТЬг

УаЬ

Азп

Не

ТЬг

Туг

АЬа

Азр

Зег

УаЬ

50

55

60

Ьуз

СЬу

Агд

РЬе

ТЬг

11е

Зег

Агд

Азр

Не

УаЬ

Ьуз

Азп

ТЬг

УаЬ

Туг

65

70

75

80

Ьеи

СЬп

МеЬ

Азп

Зег

Ьеи

Ьуз

Рго

СЬи

Азр

ТЬг

АЬа

УаЬ

Туг

Суз

85

90

95

АЬа

СЬп

ТЬг

Зег

АЬа

Рго

Агд

Зег

Ьеи

Не

Агд

МеЬ

Зег

Азп

СЬи

100

105

НО

Туг

Рго

Туг

Тгр

СЬу

СЬп

СЬу

ТЬг

СЬп

УаЬ

ТЬг

УаЬ

Зег

1 15

120

125

<210>	108
<211>	123
<212>	РКТ
<213>	Ьата

- 155 025148 <400> 108

С1и 1

Уа1

С1п

Ьеи

νβΐ 5

61и

Зег

С1у

С1у 10

Ьеи

Уа1

С1п

А1а

С1у 15

С1у

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

А1а

Зег

<31у

Ьеи

ТЬг

РЬе

Зег

Ьеи

Туг

20

25

30

ТЬг

Уа1

С1у

Тгр

РЬе

Агд

61п

А1а

Рго

С1у

Ьуз

61и

Агд

С1и

РЬе

Уа1

35

40

45

А1а

Туг

11е

Зег

Агд

Зег

С1у

Зег

Азп

Агд

Туг

Уа1

Азр

Зег

Уа1

50

55

60

Ьуз

С1у

Агд

РЬе

ТЬг

Ьеи

Зег

Агд

Азр

Азп

А1а

Ьуз

Азп

ТЬг

Уа1

Азр

65

70

75

80

Ьеи

С1п

МеС

Азп

Зег

Ьеи

Ьуз

ТЬг

61и

Азр

ТЬг

А1а

Уа1

Туг

Суз

85

90

95

А1а

ТЬг

Зег

Агд

61у

Ьеи

Зег

Ьеи

А1а

С1у

С1и

Туг

Азп

Туг

100

105

110

Тгр

С1у

Агд

С1у

ТЬг

61п

Уа1

ТЫ

Уа1

Зег

115 120 <210> 109 <211> 123 <212> ΡΚΤ <213> Ьата д1ата

<400>

109

С1и Уа1

С1п

Ьеи

Уа1

С1и

Зег

61у

С1у

61у

Ьеи

Уа1

61п

А1а

С1у

61у

1

5

10

15

Зег Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

ТЬг

А1а

Зег

С1у

Зег

А1а

РЬе

Ьуз

Зег

Туг

- 156 025148

20

25

30

Агд

Мер

СЬу

Тгр

РНе

Агд

ТЬг

Рго

С1у

Ьуз

СЬи

Азр

СЬи

РЬе

УаЬ

35

40

45

А1а

Зег

Не

Зег

Тгр

ТЬг

Туг

СЬу

Зег

ТЫ

РЬе

Туг

АЬа

Азр

Зег

УаЬ

50

55

60

Ьуз

СЬу

Агд

РЬе

ТЬг

Мер

Зег

Агд

Азр

Ьуз

А1а

Ьуз

Азп

АЬа

СЬу

Туг

65

70

75

80

Ьеи

С1п

Мер

Азп

Зег

Ьеи

Ьуз

Рго

С1и

Азр

ТЬг

АЬа

Ьеи

Туг

Суз

85

90

95

АЬа

СЬу

АЬа

СЬп

Зег

Азр

Агд

Туг

Азп

Не

Агд

Зег

Туг

Азр

Туг

100

105

110

Тгр

СЬу

С1п

СЬу

ТЬг

СЬп

УаЬ

ТЬг

УаЬ

Зег

115 120 <210> НО <211> 115 <212> РКТ <213> Ьаша д1ата

<400>

но

СЬи

УаЬ

СЬп

Ьеи

УаЬ

СЬи

Зег

СЬу

Ьеи

УаЬ

СЬп

Рго

СЬу

1

5

10

15

Зег

Ьеи

Ьуз

Ьеи

Зег

Суз

ТЬг

АЬа

Зег

СЬу

РЪе

ТЫ

РЬе

Зег

ТЬг

Зег

20

25

30

Тгр

МеЪ

Ηίε

Тгр

УаЬ

Агд

СЬп

АЬа

Рго

СЬу

Ьуз

СЬу

Ьеи

СЬи

Тгр

УаЬ

35

40

45

Зег

Не

Рго

УаЬ

СЬу

НЬз

РЬе

А1а

Азп

Туг

АЬа

Рго

Зег

УаЬ

157 025148

55 60

Ьу5 65

С1у

Агд

РЬе

ТЬг

11е 70

Зег

Агд

Азр Азп

А1а 75

Ьуз

Азп

ТЫ

Ьеи

РЬе 80

Ьеи

С1п

МеЪ

Азп

Зег

Ьеи

Ьуз

Зег

С1и

Азр

ТЬг

А1а

Уа1

Туг

Суз

65

90

95

А1а

Ьуз

А5р

Зег

Д1а

С1у

Агд

ТЬг

Ьуз

С1у

С1п

01у

ТЬг

С1п

Уа1

ТЫ

100 105 НО

Уа1 Зег Зег 115 <210> 111 <211> 124 <212> РЕТ <213> Ьата д1аиа

<4оо> :

111

Ьуз

Уа1

61п

Ьеи

Уа1

С1и

Зег

С1у

61у

Ьеи

Уа1

С1п

А1а

С1у

1

5

10

15

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

А1а

Зег

С1и

Агд

ТЬг

РЬе

Зег

Азп

Туг

20

25

30

А1а

Меб

Азр

Тгр

РЬе

Агд

С1п

А1а

Рго

б!у

Ьуз

С1и

Агд

О1и

РЬе

Уа1

35

40

45

А1а

Не

ТЬг

Агд

Зег

С1у

ты

Туг

А1а

Азр

Зег

Уа1

50

55

60

Ьуз

С1у

Агд

РЬе

ТЬг

Не

Зег

Агд

Азр

Азп

А1а

Ьуз

Азп

ТЬг

Уа1

Туг

65

70

75

80

Ьеи

61п

Меб

Азп

Зег

Ьеи

Ьуз

Рго

С1и

Азр

ТЬг

А1а

Уа1

Туг

Суз

158 025148

90 95

АЬа АЬа ТЬг Агд Зег Зег ТЬг Не УаЬ УаЬ СЬу УаЬ СЬу СЬу МеС СЬи 100 105 110

Туг Тгр СЬу Ьуз СЬу ТЬг Ьеи УаЬ ТЬг УаЬ 5ег Зег 115 120 <210> 112 <211> 128 <212> РЕТ <213> Ьата дЬата <400> 112

С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 СЬи Зег СЬу С1у С1у Ьеи Уа1 С1п АЬа С1у СЬу 15 10 15

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз АЬа А1а Зег С1у РЬе ТЬг РЬе СЬу Азр Туг 20 25 30

Азр 11е С1у Тгр РЬе Агд СЬп А1а Рго СЬу Азп СЬи Агд СЬи СЬу УаЬ 35 40 45

Зег Суз 11е ТЬг ТЬг Азр Уа1 СЬу ТЬг ТЫ Туг Туг А1а Азр Зег Уа1 50 55 60

Ьуз С1у Агд РЬе ТЬг 11е Бег Зег Азр Азп АЬа Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг 65 70 75 80

Ьеи СЬп 11е Азп Азр Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг АЬа Не Туг Туг Суз 85 90 95

АЬа УаЬ Азр ТЬг С1п Азр Ьеи С1у Ьеи Азр 11е РЬе Суз Агд С1у Азп 100 105 110

СЬу Рго РЬе Азр СЬу Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг С1п УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег

- 159 025148

115 120 125 <210> 113 <211> 134 <212> РКТ <213> Ьата д1ата

<400>

113

С1и

Зег

61у

СЬу

СЬу 10

Ьеи

Уа1

С1п

Рго

СЬу 15

СЬу

С1и 1

УаЬ

СЬп

Ьеи

Уа1 5

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

ТЬг

АЬа

Зег

61у

Ьеи

Азп

Ьеи

Азр

Туг

20

25

30

А1а

Не

С1у

Тгр

РЬе

Агд

СЬп

А1а

Рго

61у

Ьуз

СЬи

Агд

СЬи

СЬу

Уа1

35

40

45

Бег

Суз

Не

Зег

Туг

Азр

Зег

Уа1

ТЬг

Туг

АЬа

Азр

ΗΪ3

Уа1

50

55

60

Ьуз

61у

Агд

РЬе

ТЬг

Не

Зег

Агд

Азр

Зег

АЬа

Ьуз

Азп

ТЬг

Ьеи

Туг

65

70

75

80

Ьеи

СЬп

Меб

Азп

Зег

Ьеи

Зег

Не

СЬи

Азр

ТЬг

С1у

Уа1

Туг

Суз

85

90

95

АЬа

СЬи

Агд

С1и

С1п

Ьеи

Агд

СЬи

Зег

Рго

НЬз

Азр

СЬи

100

105

НО

Ьеи

Агд

Ьеи

Суз

РЬе

Туг

С1у

Меб

Агд

Туг

Зег

61у

Ьуз

СЬу

ТЬг

115

120

125

Ьеи

Уа1

ТЬг

Уа1

Зег

130

<210> :

614

160 025148 <211> 123 <212> РКТ <213> Ьата д1ата <400> 114

С1и Уа1 1

С1п

Ьеи

Уа1 5

61и

Зег

С1у

61у 10

Ьеи

Уа1

61п

Рго

С1у 15

61у

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

Уа1

А1а

Зег

<31у

РЬе

Агд

Ьеи

Азр

Туг

20

25

30

А1а

11е

С1у

Тгр

РЬе

Агд

С1п

А1а

Рго

С1у

Ьуз

С1и

Агд

<31и

А1а

Уа1

35

40

45

Зег

Суз

11е

Зег

Азр

ТЬг

Зег

11е

Азр

Туг

ТЬг

Азп

Зег

Уа1

50

55

60

Ьуз

61у

Агд

РЬе

ТЫ

РЬе

Зег

Агд

Азр

Азп

А1а

Ьуз

Азп

ТЬг

Уа1

Туг

65

70

75

80

Ьеи

С1п

Мер

Азп

Зег

Ьеи

Ьуз

Рго

С1и

Азр

ТЬг

А1а

Уа1

Туг

Суз

85

90

95

А1а

РЬе

Агд

Суз

Зег

61у

Туг

С1и

Ьеи

Агд

С1у

РЬе

Рго

ТЬг

100

105

110

Тгр

С1у

61п

С1у

ТЬг

С1п

Уа1

ТЬг

Уа1

Зег

115 120 <210? 115 <211> 126 <212> РКТ <213> Ьата д1ата

<400> 115
С1и Уа1 61п	Ьеи Уа1 С1и Зег	С1у С1у <31у	Ьеи УаЬ С1п А1а С1у С1у
1	5	10	15

- 161 025148

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег Е1у 01у ТЬг РЬе Зег Зег Ьеи 20 25 30

А1а Уа1 Е1у Тгр РЬе Агд С1п А1а Рго Е1у Ьуз С1и Агд С1и РЬе Уа1 35 40 45

А1а Агд 11е ТЬг Тгр Зег С1у А1а ТЬг ТЬг Туг Туг А1а Азр А1а Уа1 50 55 60

Ьуз Азр Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп ТЬг МеЬ Туг 65 70 75 80

Ьеи Е1п Ме! Азп Зег Ьеи Ьуз Рго Е1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз 85 90 95

А1а А1а Азр Агд Зег Рго Азп 11е 11е Азп Уа1 Уа1 ТЬг А1а Туг Е1и 100 105 110

Туг Азр Туг Тгр С1у Е1п 61у ТЬг С1п Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 120 125 <210> 116 <211> 126 <212> РКТ <213> Ьата д1ата <400> 116

С1и Уа1 Е1п Ьеи Уа1 Е1и Зег Е1у С1у С1у Ьеи 7а 1 Е1п Рго Е1у А1а 15 10 15

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег 51у Азр Е1у РЬе ТЬг Ьеи Туг 20 25 30

Азп Ме! Е1у Тгр РЬе Агд Е1п А1а Рго О1у Ьуз С1и Агд С1и РЬе Уа1 35 4 0 4 5

- 162 025148

А1а АЬа 11е ТЬг Зег Зег Рго МеЬ Зег ТЬг Туг Туг А1а Азр Зег Уа1 50 55 60

Ьуз С1у Агд РЬе Зег 11е Зег 11е Агп Азп Азр Ьуз ТЬг ТЬг С1у РЬе 65 70 75 80

Ьеи С1п МеЬ Азп Уа1 Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг <51у Уа1 Туг РЬе Суз 85 90 95

А1а А1а Рго С1и С1у Зег РЬе Агд Агд С1п Туг А1а Азр Агд А1а МеЬ 100 105 110

Туг Азр Туг Тгр С1у С1п 61у ТЬг С1п Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 120 125 <210> 117 <211> 127 >01^4 ппт

ЧЫЬХ Г Л1 <213> Ьата д1ата <400> 117

С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у 61у С1у Ьеи А1а С1п АЬа С1у 61у 15 10 15

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у Агд ТЬг РЬе Зег 61у Зег 20 25 30

Азр МеЬ С1у Тгр РЬе Агд С1п Зег Рго С1у Ьуз СЬи Агд С1и 11е Уа1 35 40 45

А1а А1а 11е Агд Ьеи Зег С1у Зег 11е ТЬг Туг Туг Рго Азр Зег Уа1 50 55 60

Ьуз С1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг 65 70 75 80

- 163 025148

Ьеи 61п МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго 61и Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз 85 90 95

АЬа АЬа Агд Зег ТЬг Туг Зег Туг Туг Ьеи АЬа Ьеи АЬа Азр Агд СЬу 100 105 110

СЬу Туг Азр Туг Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг СЬп УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег 115 120 125 <210> 118 <211> 125 <212> РКТ <213> Ьата дЬата <400> 118

СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп АЬа СЬу СЬу 15 10 15

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз Уа1 АЬа Зег С1у РЬе ТЬг Ьеи СЬу ТЬг Туг 20 25 30

АЬа 11е С1у Тгр РЬе Агд СЬп АЬа Рго СЬу Ьуз СЬи Агд С1и АЬа УаЬ 35 40 45

Зег Суз МеЬ Зег АЬа СЬу Азр Зег 11е Рго Тгр Туг ТЬг АЬа Зег Уа1 50 55 60

Ьуз СЬу Агд РЬе ТЬг ТЬг Зег ТЬг Азр Азп АЬа Агд Азп ТЬг Уа1 Туг 65 70 75 80

Ьеи С1п МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг А1а НЬз Туг Туг Суз 85 90 95

АЬа А1а АЬа Агд Туг НЬз С1у Азр Туг Суз Туг Туг 61и СЬу Туг Туг 100 105 110

164 025148

Рго РЬе

Тгр

СЬу

СЬп

СЬу

ТЬг

СЬп

УаЬ

ТЬг

Уа1

Зег

115

120

125

<210>

119

<211>

117

<212>

РКТ

<213> Ьата д1ата

<400>

119

С1и УаЬ

СЬп

Ьеи

УаЬ

СЬи

Зег

СЬу

Ьеи

УаЬ

СЬп

АЬа

СЬу

21у

1

5

10

15

Зег Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

А1а

Зег

ТЬг

Зег

11е

Зег

ТЬг

Азп

20

25

30

РЬе Ме!

СЬу

Тгр

Туг

Агд

СЬп

АЬа

Рго

СЬу

Ьуз

СЬп

Агд

СЬи

Ьеи

Уа1

35

40

45

АЬа ТЬг

11е

ТЬг

Зег

11е

ТЬг

Азп

Туг

УаЬ

Азр

Зег

УаЬ

Ьуз

50

55

60

СЬу Агд

РЬе

ТЬг

11е

Зег

Агд

Азр

Азп

А1а

Ьуз

Азп

ТЬг

УаЬ

Туг

Ьеи

65

70

75

80

С1п Ме!

ТЬг

Зег

Ьеи

Ьуз

Рго

СЬи

Азр

ТЬг

АЬа

УаЬ

Туг

Суз

ΗΪ3

85

90

95

А1а Агд

Тгр

Агд

Тгр

Зег

Азр

Уа1

СЬи

Туг

Тгр

СЬу

Ьуз

СЬу

ТЬг

Ьеи

100

105

110

УаЬ ТЫ УаЬ Зег Зег 115 <210> 120 <211> 121

- 165 025148 <212> РКТ <213> Ьата д1ата <400> 120

61и 1

Уа1

С1п

Ьей

Уа1 5

С1и

Зег

51У

С1у

Е1у 10

Ьей

Уа1

Е1п

Рго

61у 15

<31 у

Зег

Ьей

Агд

Ьей

Зег

Суз

А1а

Зег

С1у

ТНг

Зег

11е

РНе

20

25

30

А1а

МеЬ

Агд

Тгр

Туг

Агд

61п

А1а

Рго

С1у

Ьуз

Е1п

Агд

Е1и

Ьей

Уа1

35

40

45

А1а

Зег

Х1е

ТНг

Агд

Зег

11е

ТНг

Туг

А1а

Азр

Зег

Уа1

Ьуз

50

55

ЙО

61у

Агд

РНе

ТНг

Рго

Зег

Агд

Аар

Азп

А1а

Ьуз

Азп

ТЬг

Уа1

Зег

Ьей

65

70

75

80

61п

МеЬ

Азп

Зег

Ьей

Ьуз

Рго

С1и

Азр

ТЫ

А1а

Уа1

Туг

Суз

А$п

85

90

95

А1а

11е

Агд

Рго

С1и

Ьей

Туг

Зег

Уа1

Азп

Азр

Туг

Тгр

С1у

100

105

110

С1п

61у

ТНг

С1п

Уа1

ТНг

Уа1

Зег

115 120 <210> 121 <211> 127 <212> РКТ <213> Ьата д1ата

<400> 121
Е1и Уа1 С1п	Ьей Уа1	С1и Зег С1у С1у С1у Ьей νθΐ С1п	РГО Е1у С1у
1	5	10	15

- 166 025148

Бег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а ТЬг Бег Б1у Ьеи ТЬг РЬе Зег Азр Туг 20 25 30

Азп Ьеи С1у Тгр РЬе Агд С1п А1а Рго Е1у Ьуз Е1и Агд Е1п РЬе Уа1 35 40 45

А1а Уа1 11е Зег Тгр Агд Азр Бег РЬе А1а Туг Туг А1а С1и Рго Уа1 50 55 60

Ьеи 61п Мер Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз 85 90 95

А1а А1а Азр Агд Уа1 Зег Зег Агд Ьеи Уа1 Ьеи Рго Азп ТЬг Зег Рго 100 105 110

Азр РЬе <3 1 у Зег Тгр С1у Е1п С1у ТЫ 61п Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 120 125 <210> 122 <211> 129 <212> РКТ <213> Ьагг.а д1ата <400> 122

С1и Уа1 Е1п Ьеи Уа1 Е1и Зег Е1у Е1у Е1у Ьеи Уа1 Е1п А1а Е1у Аэр 15 10 15

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Бег 61у Агд ТЬг РЬе Азп Азп А1а 20 25 30

11е Мер Е1у Тгр РЬе Агд С1п А1а Рго Е1у Е1п Е1и Агд Е1и РЬе Уа1 35 40 45

- 167 025148

АЬа

АЬа 50

меь

Азп

Тгр

Агд

СЬу СЬу 55

Рго

ТЬг

Туг

Туг 60

АЬа

Аэр

Зег

УаЬ

Ьуз

СЬу

Агд

РЬе

ТЬг

Не

Зег

СЬу

Азр

Азп

ТЬг

Ьуз

Азп

ТЬг

УаЬ

РЬе

65

70

75

80

Ьеи

СЬп

МеЬ

Азп

РЬе

Ьеи

Ьуз

Рго

СЬи

Азр

ТЬг

АЬа

УаЬ

Туг

Суз

85

90

95

АЬа

Азр

СЬи

Азр

Ьеи

Туг

ΗΪ 5

Туг

Зег

Туг

НЬз

Туг

Зег

Агд

100

105

110

УаЬ

Азр

Ьеи

Туг

НЬз

Туг

Тгр

СЬу

СЬп

СЬу

ТЕг

СЬп

УаЬ

ТЬг

УаЬ

Зег

115 120 125

Зег <210> 123 <211> 121 <212> РКТ <213> Ьата д1ата

<400>

123

СЬи

УаЬ

СЬп

Ьеи

УаЬ

СЬи

Зег

СЬу

Ьеи

УаЬ

СЬп

Рго

СЬу

1

5

10

15

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

АЬа

Зег

СЬу

ТЬг

Зег

Ые

РЬе

20

25

30

АЬа

Ме±

Агд

Тгр

Туг

Агд

СЬп

АЬа

Рго

СЬу

Ьуз

СЬп

Агд

СЬи

Ьеи

УаЬ

35

40

45

АЬа

Зег

Не

ТЫ

Агд

Зег

Не

ТЫ

ТЬг

Туг

АЬа

Азр

Зег

УаЬ

Ьуз

50

55

60

- 168 025148 <31 у Агд РЬе ТЬг Ьеи Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп ТЬг Уа1 Зег Ьеи 65 70 75 80

Е1п Ме! Азп Зег Ьеи Ьуэ Рго С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз Азп 35 90 95

А1а А1а Не Агд Рго С1и Ьеи Туг Зег Уа1 Уа1 Азп Азр Туг Тгр Е1у 100 105 110

С1п <31у ТЬГ С1п Уа1 ТЫ Уа1 Зег Зег 115 120 <210> 124 <211> 123 <212> РЕТ <213> Ьаша д1аша <400> 124

С1и Уа1 Е1п Ьеи Уа1 Е1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п А1а С1у С1у 15 10 15

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег 61у С1у Зег РЬе Зег Зег Туг 20 25 30

А1а Рго С1у Тгр РЬе Агд Е1п А1а Рго С1у Ьуз С1и Агд Е1и РЬе Уа1 35 40 45

А1а А1а РЬе ТЬг Агд Зег Бег Азп Не Рго Туг Туг Ьуз Азр Зег Уа1 50 55 60

Ьуз С1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп А1а Нгз ТЬг Уа1 Туг Ьеи 65 70 75 80

Е1п Ме! Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг А1а Не Туг Туг Суз А1а 85 90 95

- 169 025148

УаЬ Аеп Ъеи СЬу Зег ТЬг Тгр Зег Агд Азр С1п Агд ТЬг Туг Азр Туг 100 105 110

Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг СЬп УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег 115 120

<210>	125
<2 Ы >	113
<212>	РП.Т
<213>	Искусственная
<220>
<223>	Мутантная последовательность	Ьата	д1ата
<400>	125
СЬи УаЬ	. С1п Ьеи Уа! С1и Зег СЬу С1у	СЬу	Ьеи Уа1 СЬп Рго С1у СЬу

10 15

Зег Ъеи Агд Ъеи Зег Суз АЬа АЬа Зег СЬу 11е Агд РЬе МеЬ Зег МеЬ 20 25 30

АЬа Тгр Туг Агд СЬп АЬа Рго СЬу Ьуз СЬп Агд СЬи Ъеи УаЬ АЬа Агд 35 40 45

Не Зег Зег СЬу СЬу ТЬг ТЬг АЬа Туг АЬа Азр Зег УаЬ Ъуз СЬу Агд 50 55 60

РЬе ТЬг Не Зег Агд Азр Азп Зег Ъуз Азп ТЬг УаЬ Туг Ъеи СЬп МеГ 65 70 75 80

Азп Зег Ъеи Агд АЬа СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз Азп ТЬг РЬе 85 90 95

Зег Зег Агд Рго Азп Рго Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг Ъеи УаЬ ТЬг УаЬ Зег 100 105 110

- 170 025148

Зег <210> 126 <211> 113 <212> РКТ <213> Искусственная <220>

<223>	Мутантная последовательность	Ьаша дЬата
<400>	126
С1и Уа1	С1п Ьеи Уа1 СЬи Зег СЬу СЬу	СЬу Ьеи УаЬ СЬп Рго СЬу СЬу
1	5	10 15
Зег Ьеи	Агд Ьеи Зег Суз УаЬ А1а Зег	61у Не Агд РЬе Не Зег Ме!
	20 25	30
АЬа Тгр	Туг Агд СЬп АЬа Рго СЬу Ьуз	Нгз Агд С1и Ьеи Уа1 А1а Агд
	35 40	45
11е Зег	Зег Е1у СЬу ТЬг ТЬг АЬа Туг	Уа1 Азр Зег УаЬ Ьуз СЬу Агд
50	55	60
РЬе ТЬг	Не Зег Агд Айр Азп Зег Ьуз	Азп ТЬг УаЬ Туг Ьеи СЬп Ме1
65	70	75 80
Азп Зег	Ьеи Ьуз АЬа СЬи Азр ТЬг АЬа	Уа1 Туг Туг Суз Азп ТЬг РЬе
	85	90 95
Зег Зег	Агд Рго Азп Рго Тгр СЬу АЬа	СЬу ТЬг СЬп УаЬ ТЬг Уа1 Зег
	100 105	110
Зег
<210>	127

- 171 025148 <211> 113 <212> РКТ <213> Искусственная <220>

<223> Мутантная последовательность Ьата д1ата <400> 127

01и Уа1 Е1п Ьеи Уа1 Е1и Бег Е1у 1 5

Е1у Е1у Ьеи Уа1 Е1п Рго Е1у Е1у 10 15

Бег Ьеи Агд Ьеи Бег Суз А1а А1а 20

Бег Е1у Не Агд РЬе 11е Бег Ме1 25 30

А1а Тгр Туг Агд Е1п А1а Рго Е1у 35 40

Ьуз Е1п Агд Е1и Ьеи Уа1 А1а Агд 45

11е Бег Бег Е1у С1у ТЬг ТЬг А1а 50 55

Туг А1а Азр Бег Уа1 Ьуз Е1у Агд 60

РЬе ТЬг 11е Бег Агд Азр Азп Бег 65 70

Ьуз Азп ТЬг УаЬ Туг Ьеи Е1п МеЬ 75 80

Аэп Бег Ьеи Агд А1а Е1и Азр ТЬг 35

А1а Уа1 Туг Туг Суз Азп ТЬг РЬе 90 95

Зег Бег Агд Рго Азп Рго Тгр Е1у 100

Е1п Е1у ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Бег 105 110

Бег <210> 128 <211> 285 <212> РКТ <213> Искусственная <220>

- 172 025148 <223> Искусственный дЬата <400> 128

СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ 1 5 полипептид содержащий последовательности Ьагаа

СЬи Зег СЬу

СЬу СЬу Ьеи 10

УаЬ СЬп ТЬг СЬу Азр

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег 20

Суэ СЬи УаЬ

Зег СЬу Агд 25

ТЬг РЬе Зег Зег Туг 30

Зег Мер СЬу Тгр РЬе 35

Агд СЬп АЬа 40

СЬп СЬу Ьуз

СЬи Агд СЬи РЬе УаЬ 45

УаЬ АЬа Не Зег Ьуз 50

СЬу СЬу Туг 55

Ьуз Туг Азр

Зег УаЬ Зег Ьеи СЬи 60

СЬу Агд РЬе ТЬг Ые 65

Зег Ьуз Азр 70

Азп АЬа Ьуз 75

Азп ТЬг УаЬ Туг Ьеи 80

СЬп Ые Азп Зег Ьеи 85

Ьуз Рго СЬи

Азр ТЬг АЬа 90

УаЬ Туг Туг Суз АЬа 95

Зег Зег Агд АЬа Туг 100

СЬу Зег Зег

Агд Ьеи Агд 105

Ьеи АЬа Азр ТЬг Туг 110

СЬи Туг Тгр СЬу СЬп 115

СЬу ТЬг СЬп 120

УаЬ ТЬг УаЬ

Зег Зег СЬу СЬу СЬу 125

СЬу Зег СЬу СЬу СЬу 130

СЬу Зег СЬу 135

СЬу СЬу СЬу

Зег СЬу СЬу СЬу СЬу 140

Зег СЬу СЬу СЬу СЬу 145

Зег СЬу СЬу 150

СЬу СЬу Зег 155

СЬу СЬу СЬу СЬу Зег 160

61и УаЬ СЬп Ьеи УаЬ 165

СЬи Зег СЬу

СЬу СЬу Ьеи 170

УаЬ СЬп ТЬг СЬу Азр 175

- 173 025148

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи 180

Зег

Сув

С1и

Уа1

Зег 185

С1у

Агд

ТЬг

РЬе

Зег 190

Зег

Туг

Зег

Мер

61у

Тгр

РЬе

Агд

С1п

АЬа

С1п

С1у

Ьуэ

С1и

Агд

61и

РЬе

Уа1

195

200

205

Уа1

АЬа

11е

Зег

Ьуз

С1у

Туг

Ьуз

Туг

Азр

Зег

Уа1

Зег

Ьеи

61и

210

215

220

61у

Агд

РЬе

ТЬг

11е

Зег

Ьуз

Азр

Азп

АЬа

Ьуз

Азп

ТЬг

Уа1

Туг

Ьеи

225

230

235

240

51п

Не

Азп

Зег

Ьеи

Ьуз

Рго

61и

Азр

ТЬг

А1а

Уа1

Туг

Суз

А1а

245

250

255

Зег

Агд

А1а

Туг

С1у

Зег

Агд

Ьеи

Агд

Ьеи

А1а

Азр

ТЬг

Туг

260

265

270

<31и

Туг

Тгр

С1у

С1п

С1у

ТЬг

61п

Уа1

ТЬг

Уа1

Зег

275

280

285

<210>

129

<211>

245

<212>

РКТ

<213>

Искусственная

<220>

<223>

Искусственный полипептид,

, содержащий

последовательности Ьата

д1ата

< 4 00>

129

С1и

Уа1

61п

Ьеи

Уа1

С1и

$ег

С1у

Ьеи

Уа1

С1п

ТЬг

С1у Азр

1

5

10

15

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

С1и

Уа1

Зег

С1у

Агд

ТЬг

РЬе

Зег

Туг

25 30

- 174

- 175 025148

210

215

220

АЬа АЬа Туг Туг Суз Азп ТЬг СЬп РЬе Туг Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг СЬп 225 230 235 240

УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег 245

<210>	130
<211>	255
<212>	РКТ
<213>	Искусственная
<220>
<223>	Искусственный
дЬата
<400>	130
СЬи Уа1	. СЬп Ьеи УаЬ ι

СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп ТЬг СЬу Азр

Ц щ 14

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз СЬи УаЬ Зег СЬу Агд ТЬг РЬе Зег Зег Туг 20 25 30

Зег Ме! СЬу Тгр РЬе Агд СЬп А1а СЬп СЬу Ьуз СЬи Агд СЬи РЬе Уа1 35 40 45

Уа1 АЬа Не Зег Ьуз СЬу СЬу Туг Ьуз Туг Азр Зег УаЬ Зег Ьеи СЬи 50 55 60

СЬу Агд РЬе ТЬг 11е Зег Ьуэ Азр Азп АЬа Ьуз Азп ТЬг УаЬ Туг Ьеи 65 70 75 80

СЬп 11е Азп Зег Ьеи Ьуз Рго СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз АЬа 85 90 95

Зег Зег Агд АЬа Туг СЬу Зег Зег Агд Ьеи Агд Ьеи АЬа Азр ТЬг Туг

176 025148

100	105	110
С1и Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг 61η	Уа1	ТЬг Уа1 Зег Зег С1у С1у С1у
115 120		125
С1у Зег С1у С1у С1у Зег С1ц Уа1	С1п	Ьеи Уз1 С1и Зег С1у С1у С1у
130 135		140
Ьеи А1а С1п А1а С1у Азр Зег Ьеи	Агд	Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у
145 150		155 160
Агд Зег РЬе Зег ΗΪ3 Туг Аэп Ме£	С1у	Тгр РЬе Агд С1п А1а Рго С1у
165		170 175
Ьуз С1и Агд С1и РЬе Уа1 А1а Зег	Не	Агд С1у С1у <31у С1у Зег ТЬг
130	185	190
ТЬг Туг А1а Азп Зег Уа1 Ьуз Азр	Агд	РЬе ТЬг 11е Зег Агд С1и Азп
195 200		205
А1а Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг Ьеи С1п	МеЪ	Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр
210 215		220
ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз А1а А1а	ТЬг	А1а РЬе Туг Агд С1у Рго Туг
225 230		235 240
Азр Туг Азр Туг Тгр С1у «31п С1у	ТЬг	С1п Уа1 ТЫ Уа1 Зег Зег
245		250 255
<210> 131
<211> 247
<212> РЕТ
<213> Искусственная
<220>
<223> Искусственный полипептид,	содержащий последовательности Ьата
д!ата

- 177 025148 <400> 131

С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп ТЬг СЬу Азр 15 10 15

Зег Мер СЬу Тгр РЬе Агд СЬп АЬа СЬп СЬу Ьуз СЬи Агд СЬи РЬе УаЬ 35 40 45

УаЬ АЬа 11е Зег Ьуз СЬу СЬу Туг Ьуз Туг Азр Зег УаЬ Зег Ьеи СЬи 50 55 60

СЬу Агд РЬе ТЬг 11е Зег Ьуз Азр Аэп АЬа Ьуз Азп ТЬг УаЬ Туг Ьеи 65 70 75 80

СЬп 11е Азп Зег Ьеи Ьуз Рго СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суэ АЬа 85 90 95

Зег Зег Агд АЬа Туг СЬу Зег Зег Агд Ьеи Агд Ьеи АЬа Азр ТЬг Туг 100 105 110

С1и Туг Тгр 61у С1п СЬу ТЫ СЬп УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег СЬу СЬу СЬу 115 120 125

С1у Зег С1у С1у С1у Зег С1и Уа1 С1п Ьеи Уа! С1и Зег С1у С1у С1у 130 135 140

Ьеи УаЬ СЬп Рго СЬу СЬу Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз УаЬ АЬа Зег СЬу 145 150 155 160

- 178 025148

Агд С1и Ьеи Уа1 А1а Агд 11е Зег Зег С1у 61у ТЬг ТЬг А1а Туг Уа1 180 185 190

Аар Зег Уа1 Ьуз С1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп Зег Ьуз Азп 195 200 205

ТЬг Уа1 Туг Ьеи С1п МеС Азп Зег Ьеи Ьуз А1а С1и Азр ТЬг А1а Уа1 210 215 220

Туг Туг Суз Азп ТЬг РЬе Зег Зег Агд Рго Азп Рго Тгр С1у А1а С1у 225 230 235 240

ТЬг С1п Уа1 ТЬг У а! Зег Зег 245

<210>	132
<211>	250
<212>	РКТ
<213>	Искусственная
<220>
<223>	Искусственный
д1ата
<400>	132
Б1и Уа1	. 61η Ьеи Уа1 *

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз С1и Уа1 Зег С1у Агд ТЬг РЬе Зег Зег Туг 20 25 30

Зег МеС С1у Тгр РЬе Агд С1п А1а С1п С1у Ьуз С1и Агд С1и РЬе Уа1 35 40 45 ν'αΊ А1а 11е Зег Ьуз 61у С1у Туг Ьуз Туг Азр Зег Уа1 Зег Ьеи С1и 50 55 60

- 179

Е1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Ьуз Азр Азп А1а Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг Ьеи 65 70 75 80

С1п 11е Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТНг А1а Уа1 Туг Туг Суз А1а 85 90 95

С1и Туг Тгр С1у <31п 61у ТЬг С1п Уа1 ТНг Уа1 Зег Зег С1у 61у <31у 115 120 125

С1у Зег С1у 61у С1у Зег 61и Уа1 61п Ьеи Уа1 61и Зег С1у С1у С1у 130 135 140

Ьеи Уа1 С1п Рго 61у 61у Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у 145 150 155 160

Азп 11е РЬе Зег Азп Азп А1а Мер А1а Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у 165 170 175

Ьуз 61п Агд С1и Ьеи Уа1 А1а Агд 11е Зег Зег <31у С1у С1у РЬе ТЬг 180 185 190

Туг Туг Ьеи Азр Зег Уа1 Ьуз С1у Агд РЬе ТЬг Уа1 Зег Агд Азр Азп 195 200 205

А1а Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг Ьеи 61п Мер Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр 210 215 220

ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз Азп А1а А1а Туг Агд ТЬг Туг Азп Туг Тгр 225 230 235 240

61у 61п С1у ТЬг 61п Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 245 250

- 180 025148

<210>	133
<211>	258
<212>	РКТ
<213>	Искусственная
<220>
<223>	Искусственный
дЬаша
<400>	133
СЬи УаЬ	. С1п Ьеи Уа1 '

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз СЬи УаЬ Зег С1у Агд ТЬг РЬе Зег Зег Туг 20 25 30

Зег Меб СЬу Тгр РЬе Агд СЬп А1а СЬп 61у Ьуз СЬи Агд СЬи РЬе УаЬ 35 40 45

УаЬ АЬа Не Зег Ьуз С1у СЬу Туг Ьуз Туг Азр Зег УаЬ Зег Ьеи СЬи 50 55 60

СЬу Агд РЬе ТЬг Не Зег Ьуз Азр Азп АЬа Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг Ьеи 65 70 75 60

61п Не Азп Зег Ьеи Ьуз Рго СЬи Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз АЬа 85 90 95

Зег Зег Агд АЬа Туг СЬу Зег Зег Агд Ьеи Агд Ьеи АЬа Азр ТЬг Туг 100 105 НО

СЬи Туг Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг СЬп УаЬ ТЬг Уа1 Зег Зег СЬу СЬу СЬу 115 120 125

СЬу Зег СЬу СЬу СЬу Зег СЬи УаЬ СЬп Ьеи Ь7а1 СЬи Зег СЬу СЬу СЬу 130 135 140

181 025148

Ьеи 145

Уа1

Е1п

А1а

01 у

С1у 150

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег 155

Суз

А1а

Зег

С1у 160

Агд

ТЬг

РЬе

Зег

Азп

Туг

А1а

Меб

С1у

Тгр

РЬе

Агд

С1п

А1а

Рго

С1у

165

170

175

Ьуз

С1и

Агд

Уа1

Ьеи

Уа1

А1а

Азр

11е

Зег

С1у

Не

Азп

ТЫ

180

185

190

Туг

Уа1

А1а

Аэр

А1а

Уа1

Ьуз

С1у

Агд

РЬе

ТЬг

11е

Зег

Агд

Азр

Азп

195

200

205

А1а

Ьуз

Азп

ТЬг

Уа1

Туг

Ьеи

С1п

Меб

Азп

Зег

Ьеи

Ьуз

Рго

61и

Азр

210

215

220

ТЫ

А1а

Уа1

Туг

Суз

А1а

Зег

А1а

Тгр

Туг

Зег

С1п

Меб

225

230

235

240

А1а

Агд

Азр

Азп

Туг

Агд

Туг

Тгр

С1у

61п

С1у

ТЬг

С1п

Уа1

ТЬг

Уа1

245

250

255

Зег

<210>	134
<211>	251
<212>	РЕТ
<213>	Искусственная
<220>
<223>	Искусственный полипептид,	содержащий	последовательности Ьата
д1ата
<400>	134
С1и Уа1	. О1п Ьеи Уа1 Е1и Зег С1у	С1у С1у Ьеи	Уа1 С1п ТЬг С-1у Азр
1	5	10	15

- 182 025148

- 183 025148

А1а Азп 210

Азп

ТЬг

Ьеи Туг

Ьеи 215

61п

Ме!

Азп

Зег

Ьеи 220

Ьуз

Рго

С1и

Аэр

ТЬг А1а

Ьеи

Туг

Зег Суз

А1а

Ьуз

С1у

А1а

Рго

Азп

Туг

ТНг

Рго

225

230

235

240

Агд С1у

Агд

С1у

ТЬг С1п

Уа1

ТЬг

Уа1

Зег

245

250

<210>

135

<211>

259

<212>

РКТ

<213>

Искусственная

<220>

<223>

Искусственный полипептид,

содержащий

последовательности Ьаша

д1ата <400> 135

С1и Уа1 Е1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п ТЬг 01у Азр 15 10 15

Зег Ме! С1у Тгр РЬе Агд С1п А1а К1п 61у Ьуз С1и Агд 61и РЬе Уа1 35 40 45

Уа1 А1а 11е Зег Ьуз С1у С1у Туг Ьуэ Туг Аэр Зег Уэ1 Зег Ьеи С1и 50 55 60

С1п 11е Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз А1а 85 90 95

- 184

Зег Зег Агд А1а Туг Е1у Зег Зег Агд Ьеи Агд Ьеи А1а Азр ТЬг Туг 100 105 110

С1и Туг Тгр С1у (51п 61у ТЬг С1п Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег С1у <31у С1у 115 120 125

О1у Зег С1у С1у Е1у Зег С1и νβΐ 61п Ьеи 7а1 С1и Зег С1у С1у С1у 130 135 140

Ьеи Уа1 С1п А1а С1у Азр Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз ТЬг А1а Зег С1у 145 150 155 160

Агд ТЬг РЬе Азп Зег Туг А1а МеГ С1у Тгр РЬе Агд С1п А1а Рго С1у 165 170 175

Ьуз С1и Агд С1и Зег Уа1 А1а Нгз 11е Азп Агд Зег С1у Зег Зег ТЬг 180 185 190

Туг Туг А1а Азр Зег \?а1 Ьуз С1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп 195 200 205

А1а Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг Ьеи С1п Ьеи Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр 210 215 220

ТЬг А1а \/а1 Туг Туг Суз А1а А1а С1у Агд Туг Туг Зег Зег Аэр С1у 225 230 235 240

Уа1 Рго Зег А1а Зег РЬе Азп Туг Тгр С1у С1п Е1у ТЬг С1п Уа1 ТЬг 245 250 255

Уа1 Зег Зег <210> 136

- 185 025148 <211> 257 <212> РКТ <213> Искусственная <220>

<223> Искусственный полипептид, содержащий последовательности Ьата д1ата <400> 136

С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 О1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п ТЬг С1у Азр 15 10 15

Зег Мер 61у Тгр РЬе Агд С1п А1а С1п С1у Ьуз С1и Агд С1и РЬе 7э1 35 40 45

Уа I А1а 11е Зег Ьуз 61у С1у Туг Ьуз Туг Азр Зег Уа1 Зег Ьеи С1и 50 55 60

С1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Ьуз Азр Азп А1а Ьуз Азп ТЬг УаХ Туг Ьеи 65 70 75 80

С1п Не Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз А1г 85 90 95

С1и Туг Тгр Е1у С1п Е1у ТЬг 31п Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег С1у С1у <51у 115 120 125

О1у Зег 31у 61у <31у Зег С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у 130 135 140

Ьеи Уа1 С1п А1а С1у С1у Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз ТЬг А1а Зег С1у

186 025148

145

150

155

160

Зег АЬа РНе Ьуз Зег Туг Агд Мер СЬу Тгр РНе Агд Агд ТНг Рго СЬу 165 170 175

Ьуз СЬи Азр СЬи РЬе УаЬ АЬа Зег Ые Зег Тгр ТЬг Туг СЬу Зег ТЬг 180 185 190

РЬе Туг АЬа Азр Зег УаЬ Ьуз СЬу Агд РНе ТЬг Мер Зег Агд Азр Ьуз 195 200 205

АЬа Ьуз Азп АЬа СЬу Туг Ьеи СЬп Мер Азп Зег Ьеи Ьуз Рго СЬи Азр 210 215 220

ТЬг АЬа Ьеи Туг Туг Суз АЬа АЬа СЬу АЬа СЬп Зег Азр Агд Туг Азп 225 230 235 240

Ые Агд Зег Туг Азр Туг Тгр СЬу СЬп СЬу ТНг СЬп УаЬ ТЬг УаЬ Зег 245 250 255

Зег <210> 137 <2Ы> 249 <212> РКТ <213> Искусственная <220>

<223> Искусственный полипептид, содержащий последовательности Ьата дЬата <400> 137

СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп ТЬг СЬу Азр 15 10 15

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз СЬи УаЬ Зег СЬу Агд ТЬг РЬе Зег Зег Туг

- 187

- 188

АЬа Ьуз Азп ТЬг Ьеи РНе Ьеи СЬп МеЪ Азп Зег Ьеи Ьуз Зег СЬи Азр 210 215 220

ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз АЬа Ьуз Азр Зег АЬа СЬу Агд ТЬг Ьуз СЬу 225 230 235 240

СЬп СЬу ТНг СЬп УаЬ ТНг УаЬ Зег Зег 245

<210>	138
<211>	258
<212>	РКТ
<213>	Искусственная
<220>
<223>	Искусственный :
дЬата

<400 138

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз СЬи Уа1 Зег С1у Агд ТЬг РЬе Зег Зег Туг 20 25 30

УаЬ АЬа Не Зег Ьуз СЬу СЬу Туг Ьуз Туг Азр Зег Уа1 Зег Ьеи СЬи 50 55 60

СЬу Агд РЬе ТЬг 11е Зег Ьуз Азр Азп АЬа Ьуз Азп ТНг УаЬ Туг Ьеи 65 70 75 80

- 189 025148

Бег

Зег

Агд

АЬа 100

Туг

СЬу

Зег

Агд 105

Ьеи

Агд

Ьеи

АЬа

Азр 110

ТЬг

Туг

СЬи

туг

Тгр

СЬу

СЬп

СЬу

ТЬг

СЬп

УаЬ

ТЬг

УаЬ

Зег

СЬу

115

120

125

СЬу

Зег

СЬу

Зег

СЬи

Уа1

СЬп

Ьеи

УаЬ

СЬи

Зег

СЬу

130

135

140

Ьеи

УаЬ

СЬп

АЬа

СЬу

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

А1а

АЬа

Зег

СЬи

145

150

155

160

Агд

ТЬг

РЬе

Зег

Азп

Туг

АЬа

Ме!

Азр

Тгр

РЬе

Агд

СЬп

АЬа

Рго

СЬу

165

170

175

Ьуз

СЬи

Агд

СЬи

РЬе

УаЬ

АЬа

Не

ТЬг

Агд

Зег

СЬу

ТЬг

180

185

190

Туг

АЬа

Азр

Зег

УаЬ

Ьуз

СЬу

Агд

РЬе

ТЬг

Не

Зег

Агд

Азр

Азп

195

200

205

АЬа

Ьуз

Азп

ТЬг

УаЬ

Туг

Ьеи

СЬп

Ме!

Азп

Зег

Ьеи

Ьуз

Рго

СЬи

Азр

210

215

220

ТЬг

АЬа

УаЬ

Туг

Суз

АЬа

ТЬг

Агд

Зег

ТЬг

Не

УаЬ

225

230

235

240

СЬу

УаЬ

СЬу

Ме!

СЬи

Туг

Тгр

СЬу

Ьуз

СЬу

ТЬг

СЬп

УаЬ

ТЬг

УаЬ

245

250

255

Зег

<210> 139

<211> 276

190 025148 <212> РКТ <213> Искусственная <220>

<223> Искусственный полипептид, содержащий последовательности Ьата дЬата <400> 139

СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Ъеи УаЬ СЬп ТЬг СЬу Азр 15 10 15

Зег МеЪ СЬу Тгр РЬе Агд СЬп АЬа СЬп СЬу Ьуз СЬи Агд СЬи РЬе УаЬ 35 40 45

УаЬ АЬа Ые Зег Ьуз СЬу СЬу Туг Ьуг Туг Азр Зег УаЬ Зег Ьеи СЬи 50 55 60

СЬу Агд РЬе ТЬг Ые Зег Ьуз Азр Азп АЬа Ьуз Азп ТЬг УаЬ Туг Ьеи 65 70 75 80

СЬп Ые Азп Зег Ьеи Ьуз Рго СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз АЬа 85 90 95

Зег Зег Агд АЬа Туг СЬу Зег Зег Агд Ьеи Агд Ъеи АЬа Азр ТЬг Туг 100 105 110

СЬи Туг Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг СЬп УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег СЬу СЬу СЬу 115 120 125

СЬу Зег СЬу СЬу СЬу СЬу Зег СЬу СЬу СЬу СЬу Зег СЬу СЬу СЬу СЬу 130 135 140

Зег СЬу СЬу 61у СЬу Зег 61у СЬу СЬу СЬу Зег СЬу СЬу СЬу СЬу Зег 145 150 155 160

191 025148

СЬу СЬу СЬу 61у Зег СЬи УаЬ С1п Ьеи Уа1 СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи 165 170 175

Уа1 СЬп Рго СЬу СЬу Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз АЬа АЬа Зег СЬу Зег 180 185 190

АЬа Уа1 СЬу Азр 11е ТЬг Уа1 АЬа Тгр Туг Агд СЬп АЬа Рго СЬу 11е 195 200 205

СЬп Агд СЬп Ьеи Уз1 АЬа ТЬг 11е ТЬг Рго Зег СЬу Туг ТЬг Туг Туг 210 215 220

Тгр Азр РЬе Уй1 Ьуз С1у Агд РЬе ТЬг Пе Зег Агд Азр Азп Зег Ьуз 225 230 235 240

Азп 11е Уа1 Туг Ьеи 61п Ме! Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг А1а 245 250 255

А1а Туг Туг Суз Азп ТЬг СЬп РЬе Туг Тгр С1у СЬп СЬу ТЬг СЬп Уа1 260 265 270

ТЬг УаЬ Зег Зег 275

<210>	140
<211>	286
<212>	РКТ
<213>	Искусственная
<220>
<223>	Искусственный .
д1ата

<400> 140

С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 СЬи Зег С1у СЬу СЬу Ьеи Уа1 С1п ТЬг С1у Азр

192 025148

10 15

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз СЬи Уа1 Зег СЬу Агд ТНг РНе Зег Зег Туг 20 25 30

Зег Меб СЬу Тгр РНе Агд СЬп АЬа СЬп СЬу Ьуз СЬи Агд СЬи РНе Уа1 35 40 45

Уа1 АЬа 11е Зег Ьуз СЬу СЬу Туг Ьуз Туг Азр Зег Уа1 Зег Ьеи СЬи 50 55 60

С1у Агд РНе ТНг Ые Зег Ьуз Азр Азп АЬа Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг Ьеи 65 70 75 80

СЬи Туг Тгр СЬу С1п С1у ТЬг С1п \7а1 ТЬг Уа1 Зег Зег СЬу СЬу 61у 115 120 125

С1у Зег С1у С1у С1у С1у Зег 61у СЬу СЬу С1у Зег СЬу СЬу С1у СЬу 130 135 140

Зег СЬу СЬу СЬу С1у Зег СЬу СЬу С1у С1у Зег С1у С1у С1у СЬу Зег 145 150 155 160

С1у С1у С1у СЬу Зег О1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи 165 170 175

АЬа СЬп АЬа СЬу Азр Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз АЬа АЬа Зег СЬу Агд 180 185 190

193 025148

Зег РЬе Зег Ыз Туг Азп МеС С1у Тгр РЬе Агд 61п А1а Рго С1у Ьуз 195 200 205

С1и Агд 31и РЬе Уа1 А1а Зег 11е Агд С1у С1у С1у С1у Зег ТЬг ТЬг

210 215 220

Туг А1а Азп Зег Уа1 Ьуз Азр Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд 31и Азп А1а 225 230 235 240

Ьуз Азп ТЬг νβΧ Туг Ьеи С1п МеС Азп Зег Ьеи Ьуз Рго СХи Азр ТЬг 245 250 255

А1а Уа1 Туг Туг Суз А1а А1а ТЬг А1а РЬе Туг Агд С1у Рго Туг Азр 260 265 270

Туг Азр Туг Тгр С1у €1п С1у ТЬг С1п 17а1 ТЬг Уа1 Зег Зег 275 280 285 <210> 141 <211> 278 <212> РКТ <213> Искусственная <220>

<223> Искусственный полипептид, содержащий последовательности Ьата д!ата <400> 141

С1ц Уа1 О1п Ьеи Уа1 СХи Зег СХу 61у <31у Ьеи Уа1 С1п ТЬг С1у Азр

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз С1и Уа1 Зег С1у Агд ТЬг РНе Зег Зег Туг 20 25 30

Зег МеС 51у Тгр РЬе Агд С1п А1а С1п <31у Ьуз С1и Агд С1и РЬе Уа1 35 40 45

- 194 025148

УаЬ АЬа ЬЬе Зег Ьуз СЬу СЬу Туг Ьуз Туг Азр Зег УаЬ Зег Ьеи СЬи 50 55 60

СЬп Ые Азп Зег Ьеи Ьуэ Рго СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз АЬа 85 90 95

СЬи Туг Тгр СЬу 61п СЬу ТЬг СЬп УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег СЬу СЬу СЬу 115 120 125

СЬу Зег СЬу СЬу СЬу СЬу Зег С1у СЬу СЬу СЬу Зег СЬу СЬу СЬу СЬу 130 135 140

Зег СЬу СЬу СЬу СЬу Зег СЬу СЬу СЬу СЬу Зег СЬу СЬу СЬу СЬу Зег 145 150 155 160

СЬу СЬу СЬу СЬу Зег СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи 165 170 175

УаЬ СЬп Рго СЬу СЬу Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз УаЬ АЬа Зег СЬу Ые 180 185 190

Агд РНе Мер Зег Мер АЬа Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз НЬз Агд 195 200 205

СЬи Ьеи Уа1 А1а Агд Ые Зег Зег СЬу С1у ТНг ТЬг АЬа Туг УаЬ Азр 210 215 220

Зег УаЬ Ьуз СЬу Агд РНе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп Зег Ьуз Азп ТЬг 225 230 235 240

- 195 025148

УаЬ Туг Ьеи СЬп МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз АЬа СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг 245 250 255

Туг Суз Азп ТЬг РЬе Зег Зег Агд Рго Азп Рго Тгр СЬу АЬа СЬу ТЬг 260 265 270

СЬп УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег 275 <210> 142 <211> 281 <212> РКТ <213> Искусственная <220>

<223> Искусственный полипептид, содержащий последовательности Ьата дЬата <400> 142

СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп.ТЬг СЬу Азр 15 10 15

Зег МеС СЬу Тгр РЬе Агд СЬп АЬа СЬп СЬу Ьуз СЬи Агд СЬи РЬе УаЬ 35 40 45

- 196 025148

Зег Зег Агд А1а Туг Е1у Зег Зег 100

Агд Ьей Агд Ьей А1а Азр ТНг Туг 105 110

С1и Туг Тгр Е1у С1п Е1у ТЬг С1п 115 120

Уа1 ТНг Уа1 Зег Зег С1у 61у С1у 125

С1у Зег С1у С1у С1у <51у Зег 01у 130 135

С1у С1у С1у Зег С1у С1у С1у 61у 140

Зег 01у Е1у С1у С1у Зег С1у Е1у 145 150 <31у С1у Зег Е1у <31у Е1у Е1у Зег 155 160

Е1у Е1у Е1у Е1у Зег Е1и Уа1 Е1п 1Й5

Ьей Уа1 Е1и Зег Е1у Е1у С1у Ьей 170 175

Уа1 С1п Рго С1у Е1у Зег Ьей Агд 180

Ьей Зег Суз А1а А1а Зег С1у Азп 185 190

11е РНе Зег Аэп Азп А1а МеЬ А1а 195 200

Тгр Туг Агд Е1п А1а Рго С1у Ьуз 205

61п Агд Е1и Ьей Уа1 А1а Агд 11е 210 215

Зег Зег Е1у Е1у Е1у РНе ТЬг Туг 220

Туг Ьей Азр Зег Уа1 Ьуз 61у Агд 225 230

РНе ТНг Уа1 Зег Агд Азр Азп А1а 235 240

Ьуз Азп ТНг Уа1 Туг Ьей 01п МеС 245

Азп Зег Ьей Ьуз Рго С1и Азр ТНг 250 255

А1а Уа1 Туг Туг Суз Азп А1а А1а 260

Туг Агд ТНг Туг Азп Туг Тгр Е1у 265 270

С1п С1у ТНг Е1п Уа1 ТНг Уа1 Зег

Зег

- 197 025148

275

280 <210> 143 <2Ы> 289 <212> РКТ <213> Искусственная <220>

<223> Искусственный полипептид, содержащий последовательности Ьата дЬата <400> 143

УаЬ АЬа Ые Зег Ьуг СЬу СЬу Туг Ьуг Туг Азр Зег УаЬ Зег Ьеи СЬи 50 55 60

- 198 025148

Е1у Зег С1у 61у Е1у С1у Зег С1у СТу Е1у С1у Зег Е1у С1у Е1у С1у 130 135 140

Зег 61у 61у С1у С1у Зег Е1у 31у Е1у Е1у Зег С1у С1у 61у С1у Зег 145 150 155 160

Е1у Е1у С1у С1у Зег Е1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 Е1и Зег 61у С1у Е1у Ьеи 165 170 175

Уа1 Е1п А1а Е1у С1у Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег Е1у Агд 180 185 190

ТНг РЬе Зег Азп Туг А1а Мер Е1у Тгр РЬе Агд Е1п А1а Рго Е1у Ьуз 195 200 205

Е1и Агд Уа1 Ьеи Уа1 А1а Азр 11е Зег Зег Зег Е1у 11е Азп ТЬг Туг 210 215 220

Уа1 А1а Азр А1а Уа1 Ьуз 61у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Аэр Азп А1а 225 230 235 240

Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг Ьеи Е1п МеР Азп Зег Ьеи Ьуз Рго Е1и Азр ТНг 245 250 255

А1а Уа1 Туг Туг Суз А1а А1а Зег А1а Тгр Тгр Туг Зег Е1п Мер А1а 260 265 270

Агд Азр Аэп Туг Агд Туг Тгр 61у С1п Е1у ТЬг Е1п Уа1 ТНг Уа1 Зег 275 280 285

Зег <210> 144 <211> 282 <212> РКТ

- 199 025148 <213> Искусственная <220>

<223> Искусственный полипептид, д1аша <400> 144

Е1и Уа1 61п Ьеи Уа1 Е1и Зег 61у 1 5 содержащий последовательности Ьата

С1у Е1у Ьеи Уа1 Е1п ТЬг 61у Азр 10 15

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз С1и Уа1 20

Зег Е1у Агд ТЬг РЬе Зег Зег Туг 25 30

Зег МеЬ Е1у Тгр РЬе Агд 61п А1а 35 40

Е1п Е1у Ьуз С1и Агд С1и РЬе Уа1 45

Уа1 А1а Не Зег Ьуз С1у 61у Туг 50 55

Ьуз Туг Азр Зег Уа1 Зег Ьеи Е1и 60

С1у Агд РЬе ТЬг Не Зег Ьуз Азр 65 70

Азп А1а Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг Ьеи 75 80

61п Не Азп Зег Ьеи Ьуз Рго Е1и 85

Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз А1а 90 95

Зег Зег Агд АЬа Туг Е1у Зег Зег 100

Агд Ьеи Агд Ьеи А1а Азр ТЬг Туг 105 НО

С1и Туг Тгр Е1у 61п С1у ТЬг Е1п 115 120

Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег С1у С1у Е1у 125

Е1у Зег О1у Е1у О1у Е1у Зег С1у 130 135

С1у 61у Е1у Бег Й1у Е1у С1у Е1у 140

Зег С1у Е1у Е1у Е1у Зег Е1у Е1у 145 150

Е1у Е1у Зег Е1у Е1у Е1у С1у Зег 155 160

- 200 025148

С1у С1у С1у 61у Зег С1и Уа1 С1п Ьеи 7а1 СЬи Зег С1у С1у С1у Ьеи 165 170 175

Уа1 С1п Рго С1у С1у Зег Ьеи Агд Ьеи А1а Суз А1а А1а Зег 61у РЬе 180 185 190

ТЬг Ьеи Зег Зег Зег Тгр Мер Туг Тгр УзЬ Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз 195 200 205

С1у Ьеи С1и Тгр Уа1 Зег Агд 11е Зег Рго С1у С1у Ьеи РЬе ТЬг Туг 210 215 220

Туг Уа1 Азр Зег Уа1 Ьуз С1у Агд РЬе Зег Уа1 Зег ТЬг Азр Агп А1а 225 230 235 240

Азп Азп ТЬг Ьеи Туг Ьеи С1п Мер Азп Зег Ьеи Ьуз Рго 61и Азр ТЬг 245 250 255

А1а Ьеи Туг Зег Суз АЬа Ьуз С1у С1у АЬа Рго Азп Туг ТЬг Рго Агд 260 265 270

С1у Агд С1у ТЬг С1п 7а 1. ТЬг Уа1 Зег Зег 275 280

<210>	145
<211>	290
<212>	РЕТ
<213>	Искусственная
<220>
<223>	Искусственный
дЬата

<400> 145

С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 61и Зег <31у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п ТЬг Й1у Азр

- 201 025148

- 202 025148

ТНг РЬе Азп Зег Туг АЬа МеЬ СЬу Тгр РЬе Агд СЬп АЬа Рго СЬу Ьуз 195 200 205

СЬи Агд СЬи Зег УаЬ А1а НЬз Ые Азп Агд Зег С1у Зег Зег ТЬг Туг 210 215 220

Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз СЬу Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп А1а 225 230 235 240

Ьуз Азп ТЬг УаЬ Туг Ьеи С1п Ьеи Азп Зег Ьеи Ьуз Рго СЬи Азр ТЬг 245 250 255

АЬа УаЬ Туг Туг Суз АЬа АЬа СЬу Агд Туг Туг Зег Зег Азр СЬу УаЬ 260 265 270

Рго Зег АЬа Зег РЬе Азп Туг Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг СЬп УаЬ ТЬг УаЬ 275 280 285

Зег Зег 290 <210> 146 <211> 288 <212> РКТ <213> Искусственная <220>

<223> Искусственный полипептид, содержащий последовательности Ьата дЬата <400> 146

С1и УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп ТНг СЬу Азр 15 10 15

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз С1и Уа1 Зег СЬу Агд ТЬг РЬе Зег Зег Туг 20 25 30

- 203

- 204

Туг АЬа Азр Зег УаЬ Ьуз СЬу Агд РЬе ТЬг Ме! Зег Агд Азр Ьуз АЬа 225 230 235 240

Ьуз Азп АЬа СЬу Туг Ьеи СЬп Ме! Азп Зег Ьеи Ьуз Рго СЬи Азр ТЬг 245 250 255

АЬа Ьеи Туг Туг Суз АЬа АЬа СЬу АЬа СЬп Зег Азр Агд Туг Азп 11е 260 265 270

Агд Зег Туг Азр Туг Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг СЬп УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег 275 280 285 <210> 147 <211> 280 <212> РКТ <213> Искусственная <220>

<223> Искусственный полипептид, содержащий последовательности Ьата д1ата <400> 147

С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у СЬу Ьеи Уа1 С1п ТЬг С1у Азр 15 10 15

Зег Ме! СЬу Тгр РЬе Агд С1п АЬа С1п СЬу Ьуз С1и Агд СЬи РЬе Уа1 35 40 45

- 205 025148

- 206 025148

260

270

265

С1у ТЫ 61п Уа1 ТЬг Уа1 Бег Зег 275 280 <210> 148 <211> 289 <212> РКТ <213> Искусственная <220>

<22 3> Искусственный полипептид, содержащий последовательности Ьата д1ата <400> 148

61и Уа1 С1п Ьеи Уа1 <31и Зег Е1у 61у С1у Ьеи Уа1 С1п ТЬг С1у Азр 15 10 15

Зег Мер 61у Тгр РЬе Агд С1п А1а С1п С1у Ьуз С1и Агд С1и РЬе Уа1 35 40 45

Уа1 А1а 11е Зег Ьуз 61у С1у Туг Ьуз Туг Азр Зег Уа1 Зег Ьеи С1и 50 55 60

С1у Агд РЬе ТЬг Не Зег Ьуз Азр Азп А1а Ьуз Азп ТЬг Ή1 Туг Ьеи 65 70 75 80

207 025148

- 208 025148

<210>	149
<211>	245
<212>	РКТ
<213>	Искусственная
<220>
<223>	Искусственный
дЬата
<400>	149
СЬи Уа1	. С1п Ьеи Уа1 ι

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у Зег А1а Уа1 С1у Азр Не 20 25 30

ТЬг УаЬ А1а Тгр Туг Агд СЬп А1а Рго С1у 11е С1п Агд (51п Ьеи УаЬ 35 40 45

АЬа ТЬг 11е ТЬг Рго Зег СЬу Туг ТЬг Туг Туг Тгр Азр РЬе ν$1 Ьуз 50 55 60

СЬу Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Αεη Зег Ьуз Азп 11е Уа1 Туг Ьеи 65 70 75 80

СЬп МеГ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго СЬи Азр ТЬг АЬа АЬа Туг Туг Суз Азп 85 90 95

ТЬг СЬп РЬе Туг Тгр С1у С1п СЬу ТЬг СЬп Уа1 ТЬг УаЬ Зег Зег СЬу 100 105 110

СЬу СЬу СЬу Зег С1у С1у С1у Зег СЬи Уа1 СЬп Ьеи Уа1 С1и Зег С1у 115 120 125

С1у СЬу Ьеи Уа1 СЬп ТЬг СЬу Азр Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз СЬи Уа1 130 135 140

- 209

Зег С1у Агд ТЬг РЬе Зег Зег Туг Зег Ме! 61у Тгр РЬе Агд С1п А1а 145 150 155 160

С1п С1у Ьуз 61и Агд 61и РЬе Уа1 Уа1 А1а 11е Зег Ьуз С1у 61у Туг 165 ПО 175

Ьуз Туг Азр Зег Уа1 Зег Ьеи Е1и С1у Агд РЬе ТЬг Не Зег Ьуз Азр 180 185 190

Азп А1а Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг Ьеи С1п Не Аэп Зег Ьеи Ьуэ Рго Е1и 195 200 205

Азр ТНг А1а Уа1 Туг Туг Суз А1а Зег Зег Агд А1а Туг Е1у Зег Зег 210 215 220

Агд Ьеи Агд Ьеи А1а Азр ТЬг Туг С1и Туг Тгр 51у С1п С1у ТЬг 51п 225 230 235 240

Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 245

<210>	150
<211>	255
<212>	РКТ
<213?	Искусственная
<220>
<223>	Искусственный
д!аша

<400> 150

Е1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег Е1у С1у С1у Ьеи А1а С1п А1а С1у Азр 15 10 15

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег Е1у Агд Зег РЬе Зег ΗΪ5 Туг 20 25 30

- 210

Азп Меб С1у Тгр РНе Агд С1п АЬа 35 40

Рго С1у Ьуз СЬи Агд СЬи РЬе Уа1 45

АЬа Зег Ые Агд СЬу СЬу СЬу СЬу 50 55

Зег ТЬг ТЬг Туг АЬа Азп Зег Уа1 60

Ьуз Азр.Агд РНе ТНг Ые Зег Агд 65 7 0

С1и Азп АЬа Ьуз Азп ТНг Уа1 Туг 75 80

Ьеи СЬп Меб Азп Зег Ьеи Ьуз Рго 85

СЬи Азр ТНг АЬа Уа1 Туг Туг Суз 90 95

АЬа АЬа ТНг АЬа РНе Туг Агд СЬу ЮО

Рго Туг Азр Туг Азр Туг Тгр С1у 105 110

СЬп СЬу ТНг СЬп УаЬ ТНг УаЬ Зег 115 120

Зег СЬу С1у СЬу С1у Зег СЬу СЬу 125

С1у Зег СЬи Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и 130 135

Зег С1у СЬу СЬу Ьеи Уа1 СЬп ТНг 140

СЬу Азр Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз 145 150

С1и Уа1 Зег С1у Агд ТНг РЬе Зег 155 160

Зег Туг Зег Меб 61у Тгр РНе Агд 165

СЬп АЬа СЬп С1у Ьуз 31и Агд С1и 170 175

РНе Уа1 Уа1 А1а Ые Зег Ьуз СЬу 180

С1у Туг Ьуэ Туг Азр Зег Уа1 Зег 185 190

Ьеи С1и 61у Агд РНе ТНг Ые Зег 195 200

Ьуз Азр Азп АЬа Ьуз Азп ТНг Уа1 205

Туг Ьеи СЬп Ые Азп Зег Ьеи Ьуз

Рго С1и Азр ТНг АЬа Уа1 Туг Туг

- 211 025148

210

215

220

Суз А1а Зег Зег Агд АЬа Туг СЬу Зег Зег Агд Теи Агд Ьеи А1а Азр 225 230 235 240

ТЬг Туг СЬи Туг Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг СЬп УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег 245 250 255

<210>	151
<211>	247
<212>	РКТ
<213>	Искусственная
<220>
<223>	Искусственный .
дЬата

<400> 151

СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи Уа1 61п Рго СЬу СЬу 15 10 15

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз Уа1 АЬа Зег С1у 11е Агд РЬе Ме! Зег Ме! 20 25 30

АЬа Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз НЬз Агд СЬи Ьеи УаЬ АЬа Агд 35 40 45

11е Зег Зег СЬу СЬу ТЬг ТЬг АЬа Туг УаЬ Азр Зег УаЬ Ьуз СЬу Агд 50 55 60

РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп Зег Ьуз Азп ТЬг УаЬ Туг Ьеи СЬп Ме! 65 70 75 80

Азп Зег Ьеи Ьуз АЬа СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз Азп ТЬг РЬе 85 90 95

- 212 025148

Зег Зег Агд Рго Азп Рго Тгр СЬу АЬа СЬу ТЬг СЬп УаЬ ТЬг УаЬ Зег 100 105 110

Зег СЬу СЬу СЬу СЬу Зег СЬу СЬу СЬу Зег СЬи УаЬ СЬп Ъеи УаЬ СЬи 115 120 125

Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи УаЬ Е1п ТЬг СЬу Азр Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз 130 135 140

СЬи УаЬ Зег СЬу Агд ТЬг РЬе Зег Зег Туг Зег МеЪ СЬу Тгр РЬе Агд 145 150 155 160

СЬп АЬа СЬп СЬу Ьуз СЬи Агд СЬи РЬе УаЬ УаЬ АЬа Ые Зег Ьуз СЬу 165 170 175

СЬу Туг Ьуз Туг Азр Зег УаЬ Зег Ьеи СЬи СЬу Агд РЬе ТЬг Ые Зег 180 185 190

Ьуз Азр Азь АЬа Ьуз Азп ТЬг УаЬ Туг Ьеи СЬп Ые Азп Зег Ьеи Ьуз 195 200 205

Рго СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз АЬа Зег Зег Агд АЬа Туг СЬу 210 215 220

Зег Зег Агд Ьеи Агд Ьеи АЬа Азр ТЬг Туг СЬи Туг Тгр СЬу СЬп СЬу 225 230 235 240

ТЫ СЬп УаЬ ТЫ УаЬ Зег Зег 245

<210>	152
<211>	250
<212>	РКТ
<213>	Искусственная
<220>

- 213 025148 <223> Искусственный полипептид, содержащий д1ата <400> 152

С1и Уа1 О1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи 15 10 последовательности Ьата

Уа1 С1п Рго С1у <51у 15

5ег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а АЬа Зег С1у Азп 20 25

11е РЬе Зег Азп Азп 30

А1а МеР А1а Тгр Туг Агд С1п АЬа Рго С1у Ьуз 35 40

С1п Агд С1и Ьеи Уа1 45

А1а Агд Не Зег Зег С1у 51у 61у РЬе ТЬг Туг 50 55

Туг Ьеи Азр Зег Уа1 60

Ьуз <51у Агд РЬе ТЬг Уа1 Зег Агд Азр Азп АЬа 65 70 75

Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг 80

Ьеи 61п Мер Азп Зег Ьеи Ьуз Рго 61и Азр ТЬг 85 90

А1а Уа1 Туг Туг Суз 95

Азп А1а А1а Туг Агд ТЬг Туг Азп Туг Тгр С1у 100 105

61п С1у ТЬг С1п ’7а1 110

ТЬг Уа1 Зег Зег С1у С1у С1у С1у Зег С1у С1у 115 120

С1у Зег 61и Уа1 С1п 125

Ьеи Уа1 С1и Зег С51у <31у 61у Ьеи Уа1 <31п ТЬг 130 135

С1у Азр Зег Ьеи Агд 140

Ьеи Зег Суз С1и Уа1 Зег С1у Агд ТЬг РЬе Зег 145 150 155

Зег Туг Зег Мер С1у 160

Тгр РЬе Агд Е1п АЬа С1п С1у Ьуз 01и Агд С1и 165 170

РЬе Уа1 Уа1 А1а Не 175

- 214

Зег Ьуз С1у С1у Туг Ьуэ Туг Азр Зег νηΐ Зег Ьеи С1и С1у Агд РНе 180 185 190

ТЬг 11е Зег Ьуз Азр Азп А1а Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг Ьеи С1п 11е Азп 195 200 205

Зег Ьеи Ьуз Рго 61и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз А1а Зег Зег Агд 210 215 220

А1а Туг С1у Зег Зег Агд Ьеи Агд Ьеи А1а Азр ТЬг Туг С1и Туг Тгр 225 230 235 240

С1у С1п С1у ТЬг С1п Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 245 250

<210>	153
<211>	258
<212>	РКТ
<213>	Искусственная
<220>
<223>	Искусственный
д1аша
<400>	153
С1и Уа1	С1п Ьеи Уа1 (

А1а МеС С1у Тгр РЬе Агд С1п А1а Рго С1у Ьуг С1и Агд Уа1 Ьеи Уа1 35 40 45

А1а Азр 11е Зег Зег Зег <51у 11е Азп ТЬг Туг Уа1 А1а Азр А1а 7а1 50 55 60

- 215

- 216 025148

245

250

255

Зег Зег

<210>	154
<211>	251
<212>	РРТ
<213>	Искусственная
<220>
<223>	Искусственный :
д1ата

<400> 154

СЬи Уа1 С1п Ьеи Уа1 СЬи Зег С1у СЬу СЬу Ьеи Уа1 СЬп Рго СЬу СЬу 15 10 15

Зег Ьеи Агд Ьеи АЬа Суз АЬа АЬа Зег СЬу РЬе ТЬг Ьеи Зег Зег Зег 20 25 30

Тгр Ме! Туг Тгр Уа1 Агд СЬп АЬа Рго СЬу Ьуз СЬу Ьеи СЬи Тгр Уа1 35 40 45

Бег Агд 11е Зег Рго СЬу СЬу Ьеи РЬе ТЬг Туг Туг Уа1 Азр Зег 7а1 50 55 ЙО

Ьуз СЬу Агд РЬе Зег УаЬ Зег ТЬг Азр Азп АЬа Азп Азп ТЬг Ьеи Туг 65 70 75 80

Ьеи СЬп Ме! Азп Зег Ьеи Ьуз Рго СЬи Азр ТЬг АЬа Ьеи Туг Зег Суз 85 90 95

АЬа Ьуз СЬу СЬу АЬа Рго Азп Туг ТЬг Рго Агд СЬу Агд СЬу ТЬг СЬп ЬОО 105 110

- 217 025148

УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег СЬу СЬу СЬу СЬу Зег СЬу СЬу СЬу Зег СЬи УаЬ 115 120 125

СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп ТЬг СЬу Азр Зег Ьеи 130 135 140

Агд Ьеи Зег Суз СЬи УаЬ Зег СЬу Агд ТНг РЬе Зег Зег Туг Зег Мер 145 150 155 160

СЬу Тгр РЬе Агд СЬп АЬа СЬп СЬу Ьуз СЬи Агд СЬи РЬе УаЬ УаЬ АЬа 165 170 175

11е Зег Ьуз СЬу СЬу Туг Ьуз Туг Азр Зег УаЬ Зег Ьеи СЬи СЬу Агд 180 185 190

РЬе ТЬг Ые Зег Ьуз Азр Азп АЬа Ьуз Азп ТЬг УаЬ Туг Ьеи СЬп Ые 195 200 205

Азп Зег Ьеи Ьуз Рго СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз АЬа Зег Зег 210 215 220

Агд АЬа Туг СЬу Зег Зег Агд Ьеи Агд Ьеи АЬа Азр ТЬг Туг СЬи Туг 225 230 235 240

Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг СЬп УаЬ ТЬг УаЬ Бег Зег 245 250

<210>	155
<211>	259
<212>	РКТ
<213>	Искусственная
<220>
<223>	Искусственный ΐ
дЬата
<400>	155

218 025148

С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 <31и Бег С1у 1 5 (31у С1у Ьеи Уа1 С1п А1а С1у Азр 10 15

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз ТНг А1а 20

Бег С1у Агд ТЬг РЬе Азп Зег Туг 25 30

А1а МеЬ С1у Тгр РЬе Агд Е1п А1а 35 40

Рго С1у Ьуз С1и Агд 31и Зег Уа1 45

А1а НЬз 11е Азп Агд Бег С1у Зег 50 55

Бег ТЬг Туг Туг А1а Азр Бег Уа1 60

Ьуз 61у Агд РЬе ТЬг Не Зег Агд 65 70

Азр Азп А1а Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг 75 80

Ьеи Е1п Ьеи Азп Зег Ьеи Ьуз Рго 85

С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз 90 95

А1а А1а С1у Агд Туг Туг Зег Бег 100

Азр С1у Уа1 Рго Зег А1а Зег РЬе 105 110

Азп Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг С1п 115 120

Уа1 ТЬг Уа1 Бег Бег Й1у С1у Е1у 125

С1у Зег С1у С1у С1у Зег С1и Уа1 130 135

С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у 61у С1у 140

Ьеи Уа1 С1п ТЬг С1у Азр Зег Ьеи 145 150

Агд Ьеи Зег Суз 61и Уа1 Зег С1у 155 160

Агд ТЬг РЬе Зег Зег Туг Зег МеЬ 165

С1у Тгр РЬе Агд С1п А1а С1п С1у 170 175

Ьуз Е1и Агд 61и РЬе Уа1 Уа1 А1а 180

11е Зег Ьуз 61у 61у Туг Ьуз Туг 185 190

- 219 025148

Азр Зег УаЬ Зег Ъеи СЬи СЬу Агд РЬе ТЬг Ые Зег Ьуз Азр Азп АЬа 195 200 205

Ьуз Азп ТЬг УаЬ Туг Ьеи СЬп Ые Азп Зег Ьеи Ьуз Рго СЬи Азр ТЬг 210 215 220

АЬа УаЬ Туг Туг Суз АЬа Зег Зег Агд АЬа Туг СЬу Зег Зег Агд Ьеи 225 230 235 240

Агд Ьеи АЬа Азр ТЬг Туг СЬи Туг Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг СЬп УаЬ ТЬг 245 250 255

УаЬ Зег Зег

<210>	156
<21Ь>	257
<212>	РНТ
<213>	Искусственная
<220>
<223>	Искусственный
дЬата

<400> 156

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз ТЬг АЬа Зег СЬу Зег АЬа РЬе Ьуз Зег Туг 20 25 30

Агд Ме5 СЬу Тгр РЬе Агд Агд ТЬг Рго СЬу Ьуз СЬи Азр СЬи РЬе УаЬ 35 40 45

АЬа Зег Ые Зег Тгр ТЬг Туг СЬу Бег ТЬг РЬе Туг АЬа Азр Зег УаЬ

- 220 025148

55 60

Ьуз С1у Агд РЬе ТЬг Мер Зег Агд Азр Ьуз А1а Ьуз Азп А1а 61у Туг 65 70 75 80

Ьеи С1п Мер Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг А1а Ьеи Туг Туг Суз 85 90 95

А1а А1а С1у А1а С1п Зег Азр Агд Туг Азп Не Агд Зег Туг Азр Туг 100 105 110

Тгр С1у С1п Е1у ТЬг С1п Уа1 ТНг Уа1 Зег Зег С1у С1у С1у С1у Зег 115 120 125

С1у С1у С1у Зег С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у Е1у Ьеи Уа1 130 135 140

С1п ТЬг С1у Аэр Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз С1и Уа1 Зег С1у Агд ТЬг 145 150 155 160

РЬе Зег Зег Туг Зег Мер С1у Тгр РЬе Агд 61п А1а 61п С1у Ьуз 61и 165 170 175

Агд С1и РЬе Уа1 Уа1 А1а 11е Зег Ьуз 61у С1у Туг Ьуз Туг Азр Зег 180 185 190

Уа1 Зег Ьеи 51и С1у Агд РЬе ТЬг Не Зег Ьуз Азр Азп А1а Ьуз Азп 195 200 205

ТЬг Уа1 Туг Ьеи Е1п 11е Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг А1а Уа1 210 215 220

- 221

А1а Азр ТНг Туг Е1и Туг Тгр Е1у Е1п Е1у ТЬг С1п Уа1 ТНг Уа1 Зег 245 250 255

Зег

<210>	157
<211>	249
<212>	РКТ
<213>	Искусственная
<220>
<223>	Искусственный полипептид,	содержащий	последовательности Ьата
д1ата
<400>	157
С1и Уа1 Е1п Ьеи Уа1 Е1и Зег Е1у	С1у С1у Ьеи	Уа1 С1п Рго С1у С1у

10 15

Зег Ьеи Ьуз Ьеи Зег Суз ТЬг А1а Зег Е1у РЬе ТЬг РЬе Зег ТЫ Зег 20 25 30

Тгр Меб Шз Тгр Уа1 Агд 61п А1а Рго С1у Ьуз Е1у Ьеи Е1и Тгр Уа1 35 40 45

Зег Зег 11е Рго Рго Уа1 Е1у ΗΪ3 РЬе А1а Азп Туг А1а Рго Зег Уа1 50 55 60

Ьуз Е1у Агд РЬе ТНг 11е Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп ТЬг Ьеи РЬе 65 70 75 80

Ьеи Е1п Меб Азп Зег Ьеи Ьуз Зег Е1и Азр ТНг А1а 7а1 Туг Туг Суз 85 90 95

А1а Ьуз Азр Зег А1а С1у Агд ТЬг Ьуз Е1у Е1п Е1у ТЬг С1п Уа1 ТЬг 100 105 110

- 222

Уа1 Зег Зег СЬу СЬу СЬу СЬу Зег СЬу СЬу СЬу Зег СЬи УаЬ СЬп Ьеи 115 120 125

Уа1 С1и Зег СЬу СЬу С1у Ьеи УаЬ СЬп ТЫ СЬу Азр Зег Ьеи Агд Ьеи 130 135 140

Зег Суз С1и Уа1 Зег 61у Агд ТЬг РЬе Зег Зег Туг Зег Ме! СЬу Тгр 145 150 155 160

РЬе Агд С1п АЬа С1п СЬу Ьуз С1и Агд СЬи РЬе Уа1 Уа1 АЬа 11е Зег 165 170 175

Ьуз С1у СЬу Туг Ьуз Туг Азр Зег Уа1 Зег Ьеи С1и С1у Агд РЬе ТЬг 180 185 190

11е Зег Ьуз Азр Агп АЬа Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг Ьеи СЬп 11е Азп Зег 195 200 205

Ьеи Ьуз Рго СЬи Азр ТЬг АЬа Уа1 Туг Туг Суз А1а Зег Зег Агд А1а 210 215 220

Туг С1у Зег Зег Агд Ьеи Агд Ьеи АЬа Азр ТЬг Туг С1и Туг Тгр С1у 225 230 235 240

61п С1у ТЬг С1п Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 245 <210> 158 <211> 25Й <212> РКТ <213> Искусственная <220>

<223> Искусственный полипептид, содержащий последовательности Ьаша д!аша <400> 158

- 223 025148

СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу 1 5

СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп АЬа СЬу СЬу 10 15

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз АЬа АЬа 20

Зег СЬи Агд ТЬг РЬе Зег Азп Туг 25 30

АЬа Мер Аар Тгр РЬе Агд С1п АЬа 35 40

Рго СЬу Ьуз СЬи Агд СЬи РЬе УаЬ 45

АЬа АЬа ЬЬе ТЬг Агд Зег СЬу СЬу 50 55

СЬу ТЬг Туг Туг АЬа Азр Зег УаЬ 60

Ьуз СЬу Агд РЬе ТЬг ЬЬе Зег Агд 65 70

Азр Азп АЬа Ьуз Азп ТЬг УаЬ Туг 75 80

Ьеи СЬь Мер Азп Зег Ьеи Ьуз Рго 85

СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз 90 95

АЬа АЬа ТЬг Агд Зег Зег ТЬг Ые Ь00

УаЬ УаЬ СЬу УаЬ СЬу СЬу Мер СЬи 105 110

Туг Тгр СЬу Ьуз СЬу ТЬг СЬп УаЬ 115 120

ТЬг УаЬ Зег Зег СЬу СЬу СЬу СЬу 125

Зег С1у СЬу С1у Зег СЬи УаЬ СЬп 130 135

Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи 140

УаЬ СЬп ТЬг СЬу Азр Зег Ьеи Агд 145 150

Ьеи Зег Суз СЬи УаЬ Зег СЬу Агд 155 160

ТЬг РЬе Зег Зег Туг Зег Мер СЬу 165

Тгр РЬе Агд С1п АЬа С1п СЬу Ьуз 170 175

СЬи Агд СЬи РЬе Уа1 УаЬ АЬа 1Ье 180

Зег Ьуэ СЬу СЬу Туг Ьуз Туг Азр 185 190

224 025148

Бег

Уа1

Зег 195

Ьеи

С1и

С1у

Агд

РЬе 200

ТЬг

11е

Бег

Ьуз

Азр 205

Азп

А1а

Ьуз

Αεη

ТЬг

Уа1

Туг

Ьеи

Б1п

11е

Азп

Бег

Ьеи

Ьуз

Рго

С1и

Азр

ТЬг

А1а

210

215

220

Уа1

Туг

Суз

А1а

Бег

Зег

Агд

А1а

Туг

О1у

Бег

Зег

Агд

Ьеи

Агд

225

230

235

240

Ьеи

А1а

Азр

ТЬг

Туг

С1и

Туг

Тгр

61у

С1п

Б1у

ТЬг

С1п

Уа1

ТЬг

Уа1

245

250

255

Бег

<210>	159
<211>	276
<212>	РКТ
<213>	Искусственная
<220>
<223>	Искусственный полипептид, содержащий последовательности
д1ата
<400>	159
С1и Уа1	Б1п Ьеи Уа1 С1и Бег Б1у Б1у Б1у Ьеи Уа1 61п Рго С1у 61у
1	5 10 15
Бег Ьеи	Агд Ьеи Бег Суз А1а А1а Бег С1у Бег А1а Уа1 Б1у Азр 11е
	20 25 30
ТЬг Уа1	А1а Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у 11е С1п Агд 61п Ьеи Уа1
	35 40 45
А1а ТЬг	11е ТЬг Рго Бег С1у Туг ТЬг Туг Туг Тгр Азр РЬе Уа1 Ьуз
50	55 60

- 225

- 226 025148

245

250

255

Ьеи Агд Ьеи А1а Азр ТЬг Туг С1и Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг Е1п УаЬ 260 265 270

ТЬг Уа1 Зег Зег 275

<210>	160
<211>	286
<212?	РЕТ
<213?	Искусственная
<220>
<223>	Искусственный
д1аша

<400? 160

С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег 61у 61у 61у Ьеи А1а С1ь А1а С1у Азр 15 10 15

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суг А1а А1а Зег С1у Агд Зег РЬе Зег Ηίε Туг 20 25 30

Азп Ме! 61у Тгр РЬе Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз С1и Агд С1и РЬе Уа1 35 40 45

А1а Зег 11е Агд Е1у Е1у С1у С1у Зег ТЬг ТЬг Туг А1а Аэп Зег Уа1 50 55 60

Ьуз Азр Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд С1и Азп А1а Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг 65 70 75 80

Ьеи Й1п Ме! Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз 85 90 95

- 227

АЬа АЬа ТЬг АЬа РЬе Туг Агд СЬу Рго Туг Азр Туг Азр Туг Тгр 61у 100 105 110

С1п С1у ТЬг С1п УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег С1у С1у С1у С1у Зег СЬу С1у 115 120 125

С1у СЬу Зег СЬу С1у СЬу СЬу Зег СЬу СЬу СЬу СЬу Зег С1у СЬу СЬу 130 135 140

С1у Зег С1у СЬу С1у С1у Зег СЬу С1у С1у С1у Зег СЬу С1у С1у СЬу 145 150 155 160

Зег СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп ТЬг СЬу 165 170 175

Азр Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз СЬи УаЬ Зег СЬу Агд ТНг РЬе Зег Зег 180 185 190

Туг Зег Меб СЬу Тгр РЬе Агд СЬп АЬа СЬп СЬу Ьуз СЬи Агд СЬи РЬе 195 200 205

УаЬ УаЬ АЬа 11е Зег Ьуз СЬу СЬу Туг Ьуз Туг Азр Зег УаЬ Зег Ьеи 210 215 220

СЬи СЬу Агд РЬе ТЬг 11е Зег Ьуз Азр Азп А1а Ьуэ Азп ТЬг УаЬ Туг 225 230 235 240

Туг СЬи Туг Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг СЬп УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег 275 280 285

- 228 025148

<210>	161
<211>	278
<212>	РКТ
<213>	Искусственная
<220>
<223>	Искусственный
д1ата
<400>	161
С1и Уа1 С1п Ьей Уа! ι

Зег Ьей Агд Ьей Зег Суз Уа1 А1а Зег С1у 11е Агд РЬе МеЬ Зег МеЬ 20 25 30

А1а Тгр Туг Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз НгЗ Агд С1и Ьей Уа1 А1а Агд 35 40 45

11е Зег Зег С1у С1у ТЬг ТЬг А1а Туг Уа1 Азр Зег Уа1 Ьуз С1у Агд 50 55 60

РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп Зег Ьуз Азп ТНг Уа1 Туг Ьей Е1п МеЬ 65 70 75 80

Азп Зег Ьей Ьуз А1а С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз Аэп ТЬг РЬе 85 90 95

Зег Зег Агд Рго Азп Рго Тгр С1у А1а С1у ТЬг С1п Уа1 ТЬг Уа1 Зег 100 105 110

Зег С1у С1у С1у С1у Зег С1у С1у С1у 61у Зег Е1у 51у С1у Е1у Зег 115 120 125

С1у Е1у 61у С1у Зег С1у <51у Е1у С1у Зег 61у С1у <51у 61у Зег С1у 130 135 140

- 229

СЬу СЬу СЬу Зег СЬу СЬу СЬу СЬу Зег СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег 145 150 155 160

СЬу СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп ТЬг СЬу Азр Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз СЬи 165 170 175

УаЬ Зег СЬу Агд ТЬг РНе Зег Зег Туг Зег Мер СЬу Тгр РЬе Агд СЬп 180 185 190

АЬа СЬп СЬу Ьуз СЬи Агд СЬи РЬе УаЬ УаЬ АЬа Ые Зег Ьуз СЬу СЬу 195 200 205

Туг Ьуз Туг Азр Зег УаЬ Зег Ьеи СЬи СЬу Агд РЬе ТЬг Ые Зег Ьуз 210 215 220

Азр Азп АЬа Ьуз Азп ТЬг УаЬ Туг Ьеи СЬп Ые Азп Зег Ьеи Ьуз Рго 225 230 235 240

СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз АЬа Зег Зег Агд АЬа Туг СЬу Зег 245 250 255

Зег Агд Ьеи Агд Ьеи АЬа Азр ТЬг Туг СЬи Туг Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг 260 265 270

СЬп УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег 275 <210> 162 <211> 281 <212> РЕТ <213> Искусственная <220>

<223> Искусственный полипептид, содержащий последовательности Ьаша дЬата

230 025148 <400 162

СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп Рго СЬу СЬу

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз АЬа АЬа Зег СЬу Азп 11е РНе Зег Азп Азп 20 25 30

АЬа МеЬ АЬа Тгр Туг Агд СЬп АЬа Рго СЬу Ьуз СЬп Агд СЬи Ьеи УаЬ 35 40 45

АЬа Агд Не Зег Зег СЬу СЬу СЬу РНе ТНг Туг Туг Ьеи Азр Зег УаЬ 50 55 60

Ьуз СЬу Агд РНе ТНг УаЬ Зег Агд Азр Азп АЬа Ьуз Азп ТНг УаЬ Туг 65 70 75 80

Ьеи СЬп МеН Азп Зег Ьеи Ьуз Рго СЬи Азр ТНг АЬа УаЬ Туг Туг Суз 85 90 95

Азп АЬа АЬа Туг Агд ТЬг Туг Азп Туг Тгр СЬу СЬп СЬу ТНг СЬп УаЬ 100 105 110

ТЬг УаЬ Зег Зег СЬу СЬу СЬу СЬу Зег СЬу СЬу СЬу СЬу Зег СЬу СЬу 115 120 125

СЬу СЬу Зег СЬу СЬу СЬу СЬу Зег СЬу СЬу СЬу СЬу Зег СЬу СЬу СЬу 130 135 140

СЬу Зег СЬу СЬу СЬу СЬу Зег СЬу СЬу СЬу СЬу Зег СЬи УаЬ СЬп Ьеи 145 150 155 160

УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп ТЬг СЬу Азр Зег Ьеи Агд Ьеи 165 170 175

Зег Суз СЬи УаЬ Бег СЬу Агд ТЬг РНе Зег Зег Туг Зег МеЬ СЬу Тгр

- 231 025148

180

185

190

РЬе Агд

СЬп

АЬа

СЬп

СЬу

Ьуз

СЬи

Агд

С1и

РЬе

УаЬ

АЬа

11е

Зег

195

200

205

Ьуз С1у

СЬу

Туг

Ьуз

Туг

Азр

Зег

УаЬ

Зег

Ьеи

СЬи

СЬу

Агд

РЬе

ТЬг

210

215

220

11е Зег

Ьуз

Азр

Азп

АЬа

Ьуз

Азп

ТЬг

УаЬ

Туг

Ьеи

СЬп

Не

Азп

Зег

225

230

235

240

Ьеи Ьуз

Рго

СЬи

Азр

ТЬг

АЬа

УаЬ

Туг

Суз

АЬа

Зег

Агд

АЬа

245

250

255

Туг СЬу

Зег

Агд

Ьеи

Агд

Ьеи

АЬа

Азр

ТЬг

Туг

СЬи

Туг

Тгр

СЬу

260

265

270

СЬп СЬу

ТЬг

СЬп

УаЬ

ТЫ

УаЬ

Зег

275

280

<210>

163

<211> :

239

<212>

РЕТ

<213> Искусственная

<220>

<223> Искусственный полипептид, содержащий последовательности Ьата дЬата <400> 163

61и УаЬ СЬп Ьеи νβΐ 61и Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп АЬа СЬу СЬу 15 10 15

232 025148

233 025148

<210> 164 <2Ы> 282 <212> РКТ <213> Искусственная <220>

<223> Искусственный полипептид, содержащий последовательности Ьата дЬата <400> 164

СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи УаЬ. СЬп Рго СЬу СЬу 15 10 15

Тгр МеЬ Туг Тгр УаЬ Агд СЬп АЬа Рго СЬу Ьуз СЬу Ьеи СЬи Тгр УаЬ 35 40 45

Зег Агд Ые Зег Рго СЬу СЬу Ьеи РЬе ТЬг Туг Туг УаЬ Аэр Зег УаЬ 50 55 60

234

- 235 025148

245

250

255

А1а Туг СЬу Зег Зег Агд Ьеи Агд Ьеи АЬа Азр ТЬг Туг СЬи Туг Тгр 260 265 270

СЬу СЬп СЬу ТЬг СЬп УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег 275 280

<210>	165
<211>	290
<212>	РКТ
<213>	Искусственная
<220>
<223>	Искусственный ι
д!ата

<400? 165

СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу 61у Ьеи УаЬ СЬп АЬа СЬу Азр 15 10 15

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз ТЬг А1а Зег СЬу Агд ТЬг РЬе Азп Зег Туг 20 25 30

А1а Ме! СЬу Тгр РЬе Агд СЬп АЬа Рго СЬу Ьуз СЬи Агд СЬи Зег Уа1 35 40 45

АЬа НЬз 11е Азп Агд Зег СЬу Зег Зег ТЬг Туг Туг А1а Азр Зег Уа1 50 55 60

Ьуз СЬу Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп АЬа Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг 65 70 75 80

Ьеи С1п Ьеи Азп Зег Ьеи Ьуз Рго СЬи Азр ТЬг А1а УаЬ Туг Туг Суз 85 90 95

236 025148

А1а А1а 61у Агд Туг Туг Зег Зег Азр 61у Уа1 Рго Зег А1а Зег РНе 100 105 110

Азп Туг Тгр 61у С1п 61у ТНг 31п Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег б1у С1у С1у 115 120 125

Е1у Зег С1у С1у Б1у €1у Зег 61у С1у С1у С1у Зег С1у Е1у С1у Е1у 130 135 140

Зег С1у С1у С1у С1у Зег 01у С1у С1у С1у Зег С1у С1у С1у С1у Зег 145 150 155 160

61у 01у 61у С1у Зег 61и \7а1 С1п Ьеи Уа1 61и Зег С1у Е1у 61у Ьеи

165 170 175

Уа1 61п ТНг С1у Азр Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз Е1и Уа1 Зег С1у Агд 180 185 190

ТЬг РЬе Зег Зег Туг Зег МеС С1у Тгр РЬе Агд С1п А1а Е1п С1у Ьуз 195 200 205

Е1и Агд С1и РЬе ТЫ Уа1 А1а 11е Зег Ьуз С1у С1у Туг Ьуз Туг Азр 210 . 215 220

Зег 7а1 Зег Ьеи С1и С1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Ьуз Азр Азп А1а Ьуз 225 230 235 240

Азп ТЬг Уа1 Туг Ьеи С1п 11е Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг А1а 245 250 255

Уа1 Туг Туг Суз А1а Зег Зег Агд А1а Туг С1у Зег Зег Агд Ьеи Агд 260 265 270

Ьеи А1а Азр ТЬг Туг <51и Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг С1п ’/Ы ТЬг Уа1 275 280 285

- 237 025148

Зег Зег 290

<210>	166
<211>	288
<212>	РКТ
<213>	Искусственная
<220>
<223>	Искусственный
дЬаша

<400> 166

СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ С1и Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп АЬа СЬу СЬу 15 10 15

Агд Мер СЬу Тгр РЬе Агд Агд ТЬг Рго СЬу Ьуз СЬи Азр СЬи РЬе 17а1 35 40 45

АЬа Зег ЬЬе Зег Тгр ТЬг Туг СЬу Зег ТЬг РЬе Туг АЬа Азр Зег УаЬ 50 55 60

Ьуз СЬу Агд РЬе ТЬг Мер Зег Агд Азр Ьуз АЬа Ьуз Азп АЬа СЬу Туг 65 70 75 80

Ьеи СЬп Мер Азп Зег Ьеи Ьуз Рго СЬи Азр ТЬг АЬа Ьеи Туг Туг Суз 85 90 95

АЬа АЬа СЬу АЬа СЬп Зег Азр Агд Туг Азп 11е Агд Зег Туг Азр Туг 100 105 110

Тгр СЬу 61п СЬу ТЬг СЬп УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег СЬу С1у С1у СЬу Зег 115 120 125

238 025148

СЬу СЬу СЬу СЬу Зег СЬу СЬу СЬу 130 135

СЬу Зег СЬу СЬу СЬу СЬу Зег СЬу 140

СЬу СЬу СЬу Зег СЬу СЬу СЬу СЬу 145 150

Зег СЬу СЬу СЬу СЬу Зег СЬу СЬу 155 160

СЬу СЬу Зег СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ 165

СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп 170 175

ТЬг СЬу Азр Зег Ьеи Агд Ьеи Зег

180

Суз СЬи УаЬ Зег СЬу Агд ТЬг РЬе 185 190

Зег Зег Туг Зег Мер СЬу Тгр РЬе 1Э5 200

Агд СЬп АЬа СЬп СЬу Ьуз СЬи Агд 205

СЬи РЬе УаЬ УаЬ АЬа Ые Зег Ьуз 210 215

СЬу СЬу Туг Ьуз Туг Азр Зег УаЬ 220

Зег Ьеи СЬи СЬу Агд РЬе ТЬг Ые 225 230

Зег Ьуз Азр Азп АЬа Ьуз Азп ТЬг 235 240

УаЬ Туг Ьеи СЬп Ые Азп Зег Ьеи 245

Ьуз Рго СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг 250 255

Туг Суз АЬа Зег Зег Агд АЬа Туг 260

СЬу Зег Зег Агд Ьеи Агд Ьеи АЬа 265 270

Азр ТЬг Туг СЬи Туг Тгр СЬу СЬп 275 230

СЬу ТЬг СЬп УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег 285

<210>	167
<2115	280
<212>	РКТ
<213>	Искусственная

- 239 025148 <220>

<223> Искусственный полипептид, содержащий последовательности Ьата д1ата <400> 167

С1и УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп Рго СЬу СЬу 15 10 15

Зег Ьеи Ьуз Ьеи Зег Суз ТЬг АЬа Зег СЬу РЬе ТЬг РЬе Зег ТЬг Зег 20 25 30

Тгр Мер НЬз Тгр УаЬ Агд СЬп АЬа Рго С1у Ьуз С1у Ьеи СЬи Тгр УаЬ 35 40 45

Зег Зег Ые Рго Рго УаЬ СЬу Ηΐε РЬе АЬа Азп Туг АЬа Рго Зег УаЬ 50 55 60

Ьуз СЬу Агд РЬе ТЬг Ые Зег Агд Азр Азп АЬа Ьуз Азп ТЬг Ьеи РЬе 65 70 75 80

Ьеи СЬп Мер Азп Зег Ьеи Ьуз Зег СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз 85 90 95

АЬа Ьуэ Азр Зег АЬа СЬу Агд ТЬг Ьуз СЬу СЬп СЬу ТЬг СЬп УаЬ ТЬг 100 105 110

УаЬ Зег Зег СЬу СЬу СЬу СЬу Зег СЬу СЬу СЬу СЬу Зег СЬу СЬу СЬу 115 120 125

Зег СЬу СЬу СЬу СЬу Зег СЬу СЬу СЬу СЬу Зег СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ 145 150 155 160

- 240 025148

С1и Зег С1у СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп ТНг СЬу Азр Зег Ьеи Агд Ьеи Зег 165 170 175

Суз СЬи Уа1 Зег СЬу Агд ТНг РЬе Зег Зег Туг Зег Меб СЬу Тгр РЬе 180 185 190

Агд СЬп АЬа СЬп СЬу Ьуз СЬи Агд СЬи РЬе 17а1 Уа1 АЬа 11е Зег Ьуз 195 200 205

СЬу СЬу Туг Ьуз Туг Азр Зег УаЬ Зег Ьеи СЬи СЬу Агд РНе ТЬг Ые 210 215 220

Зег Ьуз Азр Азп АЬа Ьуз Азп ТЬг УаЬ Туг Ьеи СЬп Ые Азп Зег Ьеи 225 230 235 240

Ьуз Рго СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз АЬа Зег Зег Агд А1а Туг 245 250 255

СЬу Зег Зег Агд Ьеи Агд Ьеи АЬа Азр ТЬг Туг 01и Туг Тгр СЬу СЬп 260 265 270

СЬу ТЬг СЬп УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег 275 280

<210>	168
<211>	289
<212>	РЕТ
<213>	Искусственная
<220>
<223>	Искусственный
дЬата

<400> 168

СЬи Уа1 СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп АЬа СЬу СЬу 15 10 15

241 025148

- 242 025148

Агд

61и 210

РНе

УаЬ

АЬа

11е 215

Зег

Ьуз

СЬу

Туг 220

Ьуз

Туг

Азр

Зег

УаЬ

Зег

Ьеи

СЬи

СЬу

Агд

РЬе

ТНг

11е

Зег

Ьуз

Азр

Азп

АЬа

Ьуз

Азп

225

230

235

240

ТНг

УаЬ

Туг

Ьеи

61п

11е

Азп

Зег

Ьеи

Ьуз

Рго

СЬи

Азр

ТНг

АЬа

УаЬ

245

250

255

Туг

Суз

А1а

Зег

Агд

АЬа

Туг

СЬу

Зег

Агд

Ьеи

Агд

Ьеи

260

265

270

А1а

Азр

ТНг

Туг

СЬи

Туг

Тгр

СЬу

СЬп

СЬу

ТНг

СЬп

УаЬ

ТЬг

УаЬ

Зег

275

280

285

Зег <210> 169 <211> 35 <212> РКТ <213> Искусственная <220>

<223> Синтетический линкер <400> 169

СЬу 1

СЬу

Зег СЬу 61у СЬу СЬу Зег СЬу СЬу СЬу СЬу Зег СЬу

5

10

15

СЬу

Зег

С1у

СЬу

Зег

СЬу

Зег

СЬу

20

25

30

СЬу С1у Зег 35

- 243 025148 <210> 170 <211> 9 <212> РКТ <213> Искусственная <220>

<223> Синтетический линкер <400> 170

61у О1у 61у 61у Зег 61у С1у С1у Зег 1 5

<210>	171
<211>	40
<212>	РЕТ
<213>	Искусственная
<220>
<223>	Синтетический
<400>	171
С1у Е1у Е1у С1у Зег

С1у С1у Е1у Зег Е1у Е1у Е1у С1у Зег Е1у С1у Е1у Е1у Зег Е1у О1у 20 25 30

С1у Е1у Зег С1у Е1у Е1у Е1у Зег 35 40

<210>	172
<211>	9
<212>	РКТ
<213>	Искусственная
<220>
<223>	Синтетический
<400>	172

- 244 025148

СЬу СЬу СЬу СЬу Суз СЬу СЬу СЬу Зег Ь 5

<210>	173
<211>	25
<212>	РКТ
<213>	Искусственная
<220>
<223>	Синтетический линкер
<400>	173
СЬу СЬу СЬу СЬу Суз СЬу СЬу СЬу СЬу Зег СЬу СЬу СЬу СЬу Зег СЬу

Ь 5 ЬО 15

СЬу СЬу СЬу Зег СЬу СЬу СЬу СЬу Зег 20 25

<210>	174
<211>	27
<212>	РВТ
<213>	Искусственная
<220>
<223>	Синтетический линкер
<400>	174
СЬу СЬу СЬу Зег СЬу СЬу СЬу СЬу Зег СЬу СЬу СЬу СЬу Суз СЬу СЬу

Ь 5 ЬО 15

СЬу СЬу Зег СЬу СЬу СЬу СЬу Зег СЬу СЬу СЬу 20 25 <210> 175 <211> 35 <212> РКТ <213> Искусственная <220>

<223> Синтетический линкер

- 245 025148 <400> 175

С1у С1у й!у С1у Зег Б1у С1у С1у С1у Зег С1у С1у й1у С1у Суз С1у 15 10 15

С1у Е1у С1у Зег Е1у С1у Е1у й1у Зег Е1у С1у С1у Е1у Зег С1у С1у 20 25 30

О1у С1у Зег 35

<210>	176
<211>	35
<212>	РКТ
<213>	Искусственная
<220>
<223>	Синтетический
<400>	176
Е1у С1у 61у С1у Суз

С1у Е1у С1у Зег С1у С1у С1у Е1у Зег Е1у Е1у С1у 61у Зег Е1у С1у 20 25 30

С1у 61у Зег 35

<210>	177
<211>	115
<212>	РКТ
<213>	Искусственная
<220>
<223>	Мутантная пос.
<400>	177

- 246 025148

С1и Уа1 С1п Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп Рго СЬу Азп 15 10 15

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз АЬа АЬа Зег СЬу РНе ТЬг РЬе Зег Зег РЬе 20 25 30

С1у Ме! Зег Тгр Уа1 Агд 61п АЬа Рго С1у Ьуз СЬу Ьеи СЬи Тгр УаЬ 35 40 45

Зег Зег 11е Зег С1у Зег С1у Зег Азр ТЬг Ьеи Туг АЬа Азр Зег УаЬ 50 55 60

Ьуз СЬу Агд РНе ТЬг Не Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз ТЬг ТЬг Ьеи Туг 65 70 75 30

Ьеи С1п Ме! Азп Зег Ьеи Агд Рго СЬи Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз 85 90 95

ТЬг Не СЬу С1у Зег Ьеи Зег Агд Зег Зег СЬп СЬу ТЬг Ьеи УаЬ ТЬг 100 105 110

Уа1 Зег Зег 115 <210> 178 <211> 585 <212> РКТ <213> Ното зарЬепз <400> 178

Азр А1а Н1з Ьуз Зег С1и УаЬ А1а НЬз Агд РНе Ьуз Азр Ьеи СЬу С1и 15 10 15

СЬи Азп РЬе Ьуз А1а Ьеи УаЬ Ьеи 11е АЬа РЬе А1а О1п Туг Ьеи СЬп 20 25 30

- 247 025148

С1п Суз Рго РЬе С1и Αερ Ηίδ Уэ1 35 40

Ьуз Ьеи Уа1 Азп Е1и \7а1 ТЬг С1и 45

РЬе А1а Ьуз ТЬг Суз Уа1 А1а Азр 50 55

С1и Зег А1а С1и Азп Суз Азр Ьуз 60

Зег Ьеи (Из ТЬг Ьеи РЬе С1у Азр 65 70

Ьуз Ьеи Суз ТЬг Уа1 А1а ТЬг Ьеи 75 80

Агд 61и ТЬг Туг С1у С1и Меб А1а 85

Азр Суз Суз А1а Ьуз С1п С1и Рго 90 95

С1и Агд Азп С1и Суз РЬе Ьеи С1п 100

Шз Ьуз Азр Азр Азп Рго Азп Ьеи 105 110

Рго Агд Ьеи Уа1 Агд Рго С1и Уа1 115 120

Азр Уа1 Меб Суз ТЬг А1а РЬе Н1з 125

Азр Азп С1и С1и ТЬг РЬе Ьеи Ьуз 130 135

Ьуз Туг Ьеи Туг С1и 11е А1а Агд 140

Агд Н1з Рго Туг РЬе Туг А1а Рго 145 150

61и Ьеи Ьеи РЬе РЬе А1а Ьуз Агд 155 160

Туг Ьуз А1а А1а РЬе ТЬг 61и Суэ 165

Суз С1п А1а А1а Азр Ьуэ А1а А1а 170 175

Суз Ьеи Ьеи Рго Ьуз Ьеи Азр С1и 180

Ьеи Агд Азр С1и С1у Ьуз А1а Зег 185 190

Зег А1а Ьуз С1п Агд Ьеи Ьуз Суз 195 200

А1а Зег Ьеи С1п Ьуз РЬе С1у С1и 205

Агд А1а РЬе Ьуз А1а Тгр А1а 7а1 210 215

А1а Агд Ьеи Зег С1п Агд РЬе Рго 220

- 248 025148

- 249 025148

С1п Уа1 Зег ТЬг Рго ТЬг Ьеи Уа1 СЬи УаЬ Зег Агд Азп Ьеи СЬу Ьуз 420 425 430

Уа1 СЬу Зег Ьуз Суз Суз Ьуз НЬз Рго СЬи А1а Ьуг Агд Ме! Рго Суз 435 440 445

А1а СЬи Азр Туг Ьеи Зег УаЬ УаЬ Ьеи Азп СЬп Ьеи Суз Уа1 Ьеи НЬз 450 455 460

СЬи Ьуз ТЬг Рго \7аЬ Зег Азр Агд \7аЬ ТЬг Ьуз Суз Суз ТЬг СЬи Зег 465 470 475 480

Ьеи УаЬ Азп Агд Агд Рго Суз РЬе Зег АЬа Ьеи СЬи Уа1 Азр СЬи ТЬг 485 490 495

Туг Уа1 Рго Ьуз СЬи РЬе Азп А1а СЬи ТЬг РЬе ТЬг РЬе НЬз А1а Азр 500 505 510

11е Суз ТЬг Ьеи Зег С1и Ьуз СЬи Агд С1п 11е Ьуз Ьуз С1п ТЬг А1а 515 520 525

Ьеи Уа1 СЬи Ьеи УаЬ Ьуз НЬз Ьуз Рго Ьуз А1а ТЬг Ьуэ СЬи С1п Ьеи 530 535 540

Ьуз А1а Уа1 Ме! Азр Азр РЬе А1а А1а РЬе УаЬ СЬи Ьуз Суз Суз Ьуз 545 550 555 560

А1а Азр Азр Ьуз С1и ТЬг Суз РЬе А1а СЬи СЬи С1у Ьуз Ьуз Ьеи УаЬ 565 570 575

АЬа АЬа Зег С1п А1а А1э Ьеи С1у Ьеи 580 585 <210> 179

- 250 025148 <2Ы> 109 <212> РКТ <213> Ното зарЬепз <400> 179

СЬи 1

УаЬ

СЬп

Ьеи

УаЬ 5

СЬи

Зег

СЬу СЬу

СЬу 10

Ьеи

УаЬ

СЬп

Рго

СЬу 15

СЬу

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Су5

А1а

АЬа Зег

СЬу

РЬе

ТЬг

РЬе

Зег

Туг

20

25

30

АЬа

Мер

Зег

Тгр

УаЬ

Агд

СЬп

А1а Рго

СЬу

Ьуз

СЬу

Ьеи

СЬи

Тгр

УаЬ

35

40

45

Зег

АЬа

11е

Зег

СЬу

Зег

СЬу

СЬу Зег

ТЬг

Туг

АЬа

Азр

Зег

УаЬ

50

55

60

Ьуз

СЬу

Агд

РЬе

ТЬг

11е

Зег

Агд Азр

Азп

Бег

Ьуз

Азп

ТЬг

Ьеи

Туг

65

70

75

80

Ьеи

СЬп

Мер

Азп

Зег

Ьеи

Агд

АЬа СЬи

Азр

ТЬг

АЬа

УаЬ

Туг

Суз

85

90

95

АЬа

Ьуз

Тгр

СЬу

СЬп

СЬу

ТЬг

Ьеи УаЬ

ТЬг

УаЬ

Зег

100

105

<210>

180

<2Ы>

257

<212>

РКТ

<213> :

Искусственная

<220>

<223> ί

Мутантная последовательность

Ьата

ι дТатпа

<400>

180

61и

Уа1

СЬп

Ьеи

УаЬ

СЬи

Зег

СЬу СЬу

СЬу

Ьеи

УаЬ

СЬп

АЬа

СЬу

1

5

10

15

- 251 025148

- 252 025148

Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг Ьеи С1п Мер Азп Зег Ьеи Ьуз Рго СЬи Азр ТЬг 210 215 220

А1а Уа1 Туг Туг Суз А1а А1а Зег 11е Уа1 Рго Агд Зег Ьуз Ьеи С1и 225 230 235 240

Рго Туг С1и Туг Азр А1а Тгр С1у С1п 61у ТЬг Ьеи 7а1 ТЬг Уа1 Зег 245 250 255

Зег <210> 181 <211> 288 <212> РКТ <213> Искусственная <220>

<223> Мутантная последовательность Ьата д1ата <400> 181

С1и Уа1 С1п Ьеи ν.₄ 1 С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п А1а С1у С1у 15 10 15

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег СЬу РЬе ТЬг РЬе Азр Азр Туг 20 25 30

А1а Ьеи С1у Тгр РЬе Агд С1п АЬа А1а СЬу Ьуз С1и Агд С1и С1у Уя1 35 40 45

Зег Суз 11е Агд Суз Зег Азр С1у Зег ТЬг Туг Туг АЬа Азр Зег Уа1 50 55 60

Ьуз С1у Агд РЬе ТЬг Не Зег Зег Азр Азп А1а Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг 65 70 75 80

- 253 025148

- 254 025148

Туг

СЬи

Туг Азр 275

АЬа

Тгр

СЬу

СЬп 280

СЬу

ТЬг

Ьеи

УаЬ

ТЬг 285

УаЬ

Зег

<210>

182

<211>

255

<212>

РЕТ

<213>

Искусственная

<220>

<223>

Мутантная последовательность

Ьаша д1аша

<400>

182

СЬи

УаЬ

СЬп Ьеи

УаЬ

СЬи

Зег

СЬу

Ьеи

УаЬ

СЬп

УаЬ

СЬу

Азр

1

5

10

15

Зег

Ьеи

Агд Ьеи

Зег

Суз

АЬа

Зег

СЬу

Агд

ТЬг

РЬе

Зег

ТЬг

Туг

20

25

30

Ьеи

Мер

УаЬ СЬу

Тгр

РЬе

Агд

СЬп

АЬа

Рго

СЬу

Ьуз

СЬи

Агд

СЬи

РЬе

35

40

45

АЬа

СЬу ЬЬе

Тгр

Зег

СЬу

Азр

ТЬг

АЬа

Туг

АЬа

Азр

Зег

УаЬ

50

55

60

Агд

СЬу

Агд РЬе

ТЬг

Ые

Зег

Агд

Азр

Азп

АЬа

Ьуз

Азп

ТЬг

УаЬ

Туг

65

70

75

80

Ьеи

СЬп

Мер Азп

Зег

Ьеи

Ьуз

ТЬг

СЬи

Азр

ТЬг

АЬа

УаЬ

Туг

Суз

85

90

95

АЬа

СЬу

Зег Туг

Азр

СЬу

Азп

Туг

Ые

Рго

СЬу

РЬе

Туг

Ьуз

Азр

100

105

110

Тгр

СЬу

СЬп СЬу

ТЬг

Ьеи

УаЬ

ТЬг

УаЬ

Зег

СЬу

Зег

115

120

125

- 255 025148

СЬу СЬу СЬу

Зег

СЬи

УаЬ

СЬп 135

Ьеи

УаЬ

СЬи

Бег

СЬу 140

СЬу

Ьеи

УаЬ

130

СЬп

УаЬ

СЬу

Азр

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

СуБ

АЬа

Бег

СЬу

Агд

ТЬг

145

150

155

160

РЬе

Бег

ТЬг

Туг

Ьеи

МеЬ

УаЬ

СЬу

Тгр

РЬе

Агд

СЬп

АЬа

Рго

СЬу

Ьуз

165

170

175

СЬи

Агд

СЬи

РНе

А1а

СЬу

11е

Тгр

Бег

СЬу

Азр

ТЬг

АЬа

Туг

180

185

190

АЬа

Азр

Бег

УаЬ

Агд

СЬу

Агд

РЬе

ТЬг

Не

Бег

Агд

Азр

Азп

АЬа

Ьуз

195

200

205

Азп

ТЬг

УаЬ

Туг

Ьеи

СЬп

Ме!

Азп

Бег

Ьеи

Ьуз

ТЬг

СЬи

Азр

ТЬг

АЬа

210

215

220

УаЬ

Туг

Суз

А1а

СЬу

Зег

Туг

Азр

СЬу

Азп

Туг

Не

Рго

СЬу

225

230

235

240

РЬе

Туг

Ьуз

А$р

Тгр

СЬу

СЬп

СЬу

ТЬг

Ьеи

УаЬ

ТЬг

УаЬ

Зег

245 250 255 <210> 183 <211> 267 <212> РКТ <213> Искусственная <220>

<223>	Мутантная последовательность	Ьаша	д1ата
<400>	183
СЬи УаЬ	СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу	СЬу	Ьеи Уа1	СЬп АЬа СЬу СЬу
1	5	10		15

- 256 025148

257 025148

Зег

Зег 210

Азр

Азп

Азр

Ьуз

Азп 215

ТЬг

Уа1

Туг

Ьеи

еьп 220

Мер

Азп

Зег

Ьеи

Ьуз

Рго

С1и

Азр

ТЬг

А1а

Уа1

Туг

Суз

А1а

УаЬ

Рго

А1а

С1у

225

230

235

240

Агд

Ьеи

Агд

РЬе

С1у

С1и

61п

Тгр

Туг

Рго

Ьеи

Туг

С1и

Туг

Азр

А1а

245

250

255

Тгр

С1у

С1п

С1у

ТЬг

Ьеи

Уа1

ТЬг

Уа1

Зег

260

2 65

<210>

184

<211>

293

<212>

РЕТ

<213>

Искусственная

<220>

<223>

Мутантная последовательность

Ьата д1агаа

<400>

184

С1и

Уа1

еьп

Ьеи

Уа1

С1и

Зег

61у

С1у

Ьеи

Уа1

С1п

А1а

С1у

1

5

10

15

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

А1а

Зег

61у

РЬе

ТЬг

Ьеи

Азр

Туг

20

25

30

А1а

11е

С1у

Тгр

РЬе

Агд

С1п

А1а

Рго

С1у

Ьуз

С1и

Агд

С1и

С1у

Уа1

35

40

45

Зег

11е

Агд

Азр

Азп

Азр

С1у

Зег

ТЬг

Туг

А1а

Азр

Зег

Уа1

50

55

60

Ьуз

С1у

Агд

РЬе

ТЬг

11е

Зег

Азр

Азп

Азр

Ьуз

Азп

ТЬг

Уа1

Туг

65

70

75

80

- 258 025148

Ьей 01η МеЬ Азп Зег Ьей Ьуз Рго 01и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз 85 90 95

А1а А1а Уа1 Рго А1а С1у Агд Ьей Агд РЬе С1у С1и 01п Тгр Туг Рго 100 105 110

Ьей Туг С1и Туг Азр А1а Тгр С1у Е1п Е1у ТЬг Ьей Уа1 ТЬг Уа1 Зег 115 120 125

Зег 61у Е1у С1у 61у Зег С1у Е1у С1у Е1у Зег Е1у С1у С1у С1у Зег 130 135 140

С1у Е1у Е1у С1у Зег Е1у С1у 01у С1у Зег 01у 01у С1у 01у Зег С1у 145 150 155 160

Е1у Е1у Е1у Зег Е1у Е1у С1у С1у Зег С1и Уа1 О1п Ьей Уа1 С1и Зег 165 170 175

Е1у О1у Е1у Ьей Уа1 Е1п А1а С1у О1у Зег Ьей Агд Ьей Зег Суз А1а 180 185 190

А1а Зег С1у РЬе ТЬг Ьей Азр Азр Туг А1а 11е С1у Тгр РЬе Агд С1п 195 200 205

А1а Рго С1у Ьуз С1и Агд 01и О1у Уа1 Зег Зег 11е Агд Азр Αεη Азр 210 215 220

С1у Зег ТЬг Туг Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуэ Е1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег 225 230 235 240

Зег Азр Азп Азр Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг Ьей Е1п МеЬ Азп Зег Ьей Ьуз 245 250 255

Рго О1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз А1а А1а Уа1 Рго А1а С1у Агд 260 265 270

- 259 025148

Ъеи Агд РЬе СЬу СЬи СЬп Тгр Туг Рго Ьеи Туг СЬи Туг Азр АЬа Тгр 275 280 285

СЬу СЬп СЬу ТЫ Ьеи УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег 290 295

<210>	135
<211>	267
<212>	РКТ
<213>	Искусственная
<220>
<223>	Мутантная последовательность	Ьата	д1а1па
<4 00>	185
СЬи УаЬ	. С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у	С1у	Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у

ЬО

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Су® АЬа АЬа Зег СЬу Ые ТЬг Ьеи Азр Азр Туг 20 25 30

АЬа Ые СЬу Тгр РЬе Агд СЬп АЬа Рго СЬу Ьуз СЬи Агд СЬи СЬу УаЬ 35 40 45

Зег Зег ЬЬе Агд Азр Азп СЬу СЬу Зег ТЬг Туг Туг АЬа Азр Зег УаЬ 50 55 60

Ьуз СЬу Агд РЬе ТЬг Ые Зег Зег Азр Азп Зег Ьуз Азп ТЬг УаЬ Туг 65 70 75 80

Ьеи СЬп Ме1 Азп Зег Ьеи Агд Рго СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз 85 90 95

АЬа АЬа УаЬ Рго АЬа СЬу Агд Ьеи Агд Туг СЬу СЬи СЬп Тгр Туг Рго 100 105 110

- 260 025148

Не

Туг

СЬи 115

Туг

Азр

АЬа

Тгр

СЬу 120

СЬп

СЬу

ТЬг

Ьеи

УаЬ 125

ТНг

УаЬ

Зег

СЬу

Зег

СЬу

Зег

С1и

УаЬ

СЬп

Ьеи

СЬи

130

135

140

Зег

СЬу

Ьеи

УаЬ

СЬп

Рго

СЬу

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

145

150

155

160

АЬа

А1а

Зег

СЬу

Ые

ТНг

Ьеи

Азр

Туг

А1а

Ые

СЬу

Тгр

РНе

Агд

165

170

175

СЬп

А1а

Рго

СЬу

Ьуз

СЬи

Агд

СЬи

СЬу

УаЬ

Зег

Ые

Агд

Азр

Азп

180

185

190

СЬу

Зег

ТНг

Туг

АЬа

Азр

Зег

УаЬ

Ьуз

СЬу

Агд

РЬе

ТНг

Ые

195

200

205

Зег

Азр

Азп

Зег

Ьуз

Азп

ТНг

УаЬ

Туг

Ъеи

СЬп

Меб

Азп

Зег

Ьеи

210

215

220

Агд

Рго

СЬи

Азр

ТЬг

АЬа

УаЬ

Туг

Суз

А1а

АЬа

УаЬ

Рго

АЬа

СЬу

225

230

235

240

Агд

Ьеи

Агд

Туг

СЬу

СЬи

СЬп

Тгр

Туг

Рго

Не

Туг

СЬи

Туг

Азр

АЬа

245

250

255

Тгр

СЬу

СЬп

СЬу

ТЬг

Ьеи

УаЬ

ТНг

УаЬ

Зег

Бег

260

265

<210> 186 <2Ы> 387 <212> РКТ <213> Искусственная <220>

<223> Мутантная последовательность Ьата д1апга

- 261 025148

- 262 025148

- 263 025148

Туг Рго Ьеи Туг СЬи Туг Азр АЬа Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг Ьеи УаЬ ТЬг 370 375 380

1/аЬ 8ег Зег 385

<210>	187
<211>	387
<212>	РКТ
<213>	Искусственная
<220>
<223>	Мутантная последовательность	Ьагаа	дЬата
<4 00>	187
СЬи УаЬ	СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу	СЬу	Ьеи УаЬ СЬп АЬа СЬу СЬу

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у РЬе ТЬг Ьеи Азр Азр Туг 20 25 30

АЬа 11е С1у Тгр РЬе Агд СЬп А1а Рго СЬу Ьуз С1и Агд С1и СЬу УаЬ 35 40 45

Зег Зег Не Агд Азр Азп Азр СЬу Зег ТЬг Туг Туг АЬа Азр Зег УаЬ 50 55 60

Ьуз СЬу Агд РЬе ТЬг Не Зег Зег Азр Азь Азр Ьуз Азп ТЬг 1/аЬ Туг 65 70 75 80

Ьеи СЬп Ме! Азп Зег Ьеи Ьуз Рго СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз 85 90 95

АЬа АЬа УаЬ Рго АЬа СЬу Агд Ьеи Агд РЬе СЬу СЬи СЬп Тгр Туг Рго 100 105 Ы0

- 264 025148

- 265 025148

Ьуз 61и 305

Агд

61и

РЬе

Уа1 310

Уа1

А1а

11е

Зег

Ьуз 315

СЬу

С1у

Туг

Ьуз

Туг 320

Азр А1а

Уа1

Зег

Ьеи

С1и

СЬу

Агд

РЬе

ТЬг

11е

Зег

Агд

Азр

Азп

А1а

325

330

335

Ьуз Азп

ТЫ

Уа1

Туг

Ьеи

ст

Не

Азп

Зег

Ьеи

Агд

Рго

Е1и

Азр

ТЬг

340

345

350

А1а Уа1

Туг

Суз

А1а

Зег

Агд

А1а

Туг

С1у

Зег

Агд

Ьеи

355

360

365

Агд Ьеи

А1а

Азр

ТЬг

Туг

С1и

Туг

Тгр

СЬу

С1п

СЬу

ТЬг

Ьеи

Уа1

ТЬг

370

375

380

Уа1 Зег

Зег

385

<210>

188

<211>

387

<212>

РКТ

<213>

Искусственная

<220>

<223>

Мутантная последовательность

Ьата д1ата

<400>

188

С1и Уа1

С1п

Ьеи

Уа1

<51и

Зег

01у

С1у

Ьеи

Уа1

61п

А1а

С1у

1

5

10

15

Зег Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

А1а

5ег

С1у

РНе

ТЬг

Ьеи

Азр

Туг

20

25

30

А1а 11е

СЬу

Тгр

РЬе

Агд

С1п

А1а

Рго

С1у

Ьув

С1и

Агд

С1и

С1у

Уа1

35

40

45

- 266 025148

- 267 025148

<210>	189
<211>	375
<212>	ΡΚΤ
<213>	Искусственная
<220>

- 268 025148 <223> Мутантная последовательность Ьата д1ата <400> 189

Азр Уа1 61п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у 1 5

С1у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у 10 15

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а 20

Зег 61у Агд ТЬг РЬе Зег Зег Туг 25 30

Зег МеР С1у Тгр РЬе Агд С1п А1а 35 40

Рго С1у Ьуз С1и Агд Е1и РЬе УаЬ 45

Уа1 А1а 11е Зег Ьуз С1у С1у Туг 50 55

Ьуз Туг Азр А1а Уа1 Зег Ьеи С1и 60

61у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр 65 70

Азп А1а Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг Ьеи 75 80

С1п Т1е Азп Зег Ьеи Агд Рго С1и 85

Азр ТЬг АЬа Уа1 Туг Туг Суз А1а 90 95

Зег Зег Агд А1а Туг С1у Зег Зег 100

Агд Ьеи Агд Ьеи А1а Азр ТЬг Туг 105 110

61и Туг Тгр 61у С1п 51у ТЬг Ьеи 115 120

Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег А1а А1а А1а 125

Е1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у 130 135

С1у 61у Ьеи УаЬ 61п Рго С1у Азп 140

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а 145 150

Зег С1у РЬе ТЬг РЬе Зег Зег РЬе 155 160

61у Мер Зег Тгр Уа1 Агд Е1п А1а 165

Рго С1у Ьуз СЬу Ьеи С1и Тгр Уа1 170 175

- 269 025148

Зег Зег 11е Зег СЬу Зег СЬу Зег Азр ТЬг Ьеи Туг АЬа Азр Зег УаЬ 180 185 190

Ьуз СЬу Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз ТЬг ТЬг Ьеи Туг 195 200 205

Ьеи 61п МеЬ Азп Зег Ьеи Агд Рго СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз 210 215 220

ТЬг 11е СЬу СЬу Зег Ьеи Зег Агд Зег Зег СЬп СЬу ТЬг Ьеи УаЬ ТЬг 225 230 235 240

УаЬ Зег Зег АЬа АЬа АЬа СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу СЬу 245 250 255

Ьеи УаЬ СЬп АЬа СЬу СЬу Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз АЬа АЬа Зег СЬу 260 265 270

РЬе ТЬг Ьеи Азр Азр Туг АЬа 11е СЬу Тгр РЬе Агд СЬп АЬа Рго СЬу 275 280 285

Ьуз СЬи Агд СЬи СЬу УаЬ Зег Зег 11е Агд Азр Азп Азр СЬу Зег ТЬг 290 295 300

Туг Туг А1а Азр Зег УаЬ Ьуз СЬу Агд РЬе ТЬг 11е Зег Зег Азр Азп 305 310 315 320

Азр Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг Ьеи СЬп МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго СЬи Азр 325 330 335

ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз АЬа АЬа УаЬ Рго АЬа СЬу Агд Ьеи Агд РЬе 340 345 350

СЬу СЬи СЬп Тгр Туг Рго Ьеи Туг СЬи Туг Азр АЬа Тгр СЬу СЬп СЬу 355 360 365

- 270 025148

ТЬг Ьеи УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег 370 375 <210> 190 <211> 384 <212> РКТ <213> Искусственная <220>

<223>	Мутантная последовательность	Ьата дЬата
<400>	190
Азр УаЬ 1	СЬп Ьеи УаЬ 61и Зег С1у СЬу 5	61у Ьеи \7а1 СЬп Рго СЬу СЬу 10 15
Зег Ьеи	Агд Ьеи Зег Суз АЬа АЬа Зег 20 25	СЬу Агд ТЬг РЬе Зег Зег Туг 30
Зег Ме!	61 у Тгр РЬе Агд СЬп АЬа Рго 35 40	СЬу Ьуз 61и Агд СЬи РЬе Уа1 45
УаЬ АЬа 50	Не Зег Ьуз 61у СЬу Туг Ьуз 55	Туг Азр АЬа УаЬ Зег Ьеи СЬи 60
СЬу Агд 65	РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп 70	АЬа Ьуз Азп ТЬг УаЬ Туг Ьеи 75 80
СЬп Не	Азп Зег Ьеи Агд Рго СЬи Азр 85	ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз АЬа 90 95
Зег Зег	Агд АЬа Туг СЬу Зег Зег Агд 100 105	Ьеи Агд Ьеи АЬа Азр ТЬг Туг 110
СЬи Туг	Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг Ьеи УаЬ 115 120	ТЬг Уа1 Зег Зег СЬу СЬу СЬу 125

- 271 025148

С1у Зег С1у С1у С1у Зег СЬи 7а1 С1п Ьеи Уа1 СЬи Зег СЬу СЬу СЬу 130 135 140

Ьеи Уа1 61п Рго 61у С1у Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а АЬа Зег С1у 145 150 155 160

РЬе АЬа Ьеи Азр Туг Туг А1а 11е С1у Тгр РЬе Агд С1п Уа1 Рго СЬу 165 170 175

Ьуз 61и Агд 61и С1у Уа1 Зег Суз 11е Зег Зег Зег Азр СЬу Не ТЬг 180 185 190

Туг Туг 7а1 Азр Зег Уа1 Ьуз СЬу Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп 195 200 205

АЬа Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг Ьеи СЬп Ме! Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр 210 215 220

ТЬг АЬа Уа1 Туг Туг Суз А1а ТЬг Азр Зег С1у СЬу Туг Не Азр Туг

225 230 235 240

Азр Суэ Мер СЬу Ьеи СЬу Туг Азр Туг Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг Ьеи УаЬ 245 250 255

ТЬг Уа1 Зег Зег СЬу СЬу СЬу СЬу Зег СЬу СЬу СЬу Зег СЬи УаЬ 61п 260 265 270

Ьеи Уа1 СЬи Зег С1у СЬу С1у Ьеи Уа1 С1п Рго СЬу Азп Зег Ьеи Агд 275 280 285

Ьеи Зег Суз АЬа А1а Зег С1у РЬе ТЬг РЬе Зег Зег РЬе С1у Мер Зег 290 295 300

Тгр Уа1 Агд 61п А1а Рго СЬу Ьуз С1у Ьеи СЬи Тгр Уа1 Зег Зег Не 305 310 315 320

- 272 025148

Зег С1у

Зег

С1у

Зег 325

Αδρ

ТЬг

Ьеи

Туг

А1а 330

Азр

Зег

Уа1

Ьуз

61 у 335

Агд

РЬе ТЬг

11е

Зег

Агд

Азр

Азп

А1а

Ьуз

ТЬг

Ьеи

Туг

Ьеи

С1п

МеС

340

345

350

Азп Зег

Ьеи

Агд

Рго

С1и

Азр

ТЬг

А1а

Уа1

Туг

Суз

ТЬг

Не

С1у

355

360

365

С1у Зег

Ьеи

Зег

Агд

Зег

61п

С1у

ТНг

Ьеи

Уа1

ТЬг

Уа1

Зег

Бег

370

375

380

<210>

191

<211>

384

<212>

РЕТ

<213>

Искусственная

<220>

<223> :

Мутантная последовательность

Ьата дЬата

<400>

191

Азр Уа1

С1п

Ьеи

Уа1

С1и

Зег

61у

С1у

61у

Ьеи

Уа1

С1п

Рго

С1у

61у

1

5

10

15

Зег Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

А1а

5ег

61у

Агд

ТЬг

РЬе

Зег

Туг

20

25

30

Зег МеС

С1у

Тгр

РЬе

Агд

61п

А1а

Рго

61у

Ьуз

С1и

Агд

С1и

РЬе

Уа1

35

40

45

Уа1 А1а

Не

5ег

Ьуз

61у

Туг

Ьуз

Туг

Азр

А1а

Уа1

Зег

Ьеи

61и

50

55

60

61у Агд

РЬе

ТЬг

11е

Зег

Агд

Азр

Азп

А1а

Ьуз

Азп

ТЬг

Уа1

Туг

Ьеи

65

70

75

80

273 025148

СЬп Ые Азп Зег Ьеи Агд Рго СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз АЬа 85 90 95

СЬи Туг Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг Ьеи УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег СЬу СЬу СЬу 115 120 125

СЬу Зег СЬу СЬу СЬу Бег СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу СЬу 130 135 140

Ьеи УаЬ СЬп Рго СЬу Азп Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз АЬа АЬа Зег СЬу 145 150 155 160

РЬе ТЬг РЬе Зег Зег РЬе СЬу МеЬ Зег Тгр УаЬ Агд СЬп АЬа Рго СЬу 165 170 175

Ьуз СЬу Ьеи СЬи Тгр УаЬ Зег Зег Ые Зег СЬу Зег СЬу Зег Азр ТЬг 180 185 190

Ьеи Туг АЬа Азр Зег УаЬ Ьуз СЬу Агд РЬе ТЬг Ые Зег Агд Азр Азп 195 200 205

АЬа Ьуз ТЬг ТЬг Ьеи Туг Ьеи СЬп МеЬ Азп Зег Ьеи Агд Рго СЬи Азр 210 215 220

ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз ТЬг 11е СЬу СЬу Зег Ьеи Зег Агд Зег Зег 225 230 235 240

СЬп СЬу ТЬг Ьеи УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег СЬу СЬу СЬу СЬу Зег СЬу СЬу 245 250 255

СЬу Зег СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп Рго 260 265 270

- 274 025148

Е1у

Зег 275

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз 280

А1а

Зег

Е1у

РЬе 285

А1а

Ьеи

Азр

Туг

А1а

11е

Е1у

Тгр

РЬе

Агд

61п

Уа1

Рго

Е1у

Ьуз

С1и

Агд

Е1и

290

295

300

Е1у

Уа1

Зег

Суз

11е

Зег

Азр

Е1у

Не

ТЬг

Туг

Уа1

Азр

305

310

315

320

Зег

Уа1

Ьуз

Е1у

Агд

РЬе

ТЬг

11е

Зег

Агд

Азр

Азп

А1а

Ьуз

Азп

ТЬг

325

330

335

Уа1

Туг

Ьеи

С1п

Меб

Азп

Зег

Ьеи

Ьуз

Рго

С1и

Азр

ТЬг

А1а

Уа1

Туг

340

345

350

Туг

Суз

А1а

ТЬг

Азр

Зег

С1у

Е1у

Туг

11е

Азр

Туг

Азр

Суз

Меб

С1у

355

360

365

Ьеи

С1у

Туг

Азр

Туг

Тгр

С1у

Е1п

Е1у

ТЬг

Ьеи

Уа1

ТЬг

νβΐ

Бег

370 375 380 <210> 192 <211> 519 <212> РКТ <213> Искусственная <220>

<223> Мутантная последовательность Ьата д1ата <400> 192

Азр Уа1 Е1п Ьеи Уа1 Е1и Бег Е1у Е1у Е1у Ьеи Уа1 Е1п Рго Е1у С1у
1	5	10	15

- 275 025148

- 276 025148

ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суэ А1а ТЬг Азр Зег С1у С1у Туг 11е Азр Туг 225 230 235 240

Азр Суз МеЬ С1у Ьей С1у Туг Азр Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг Ьей νθΐ

245 250 255

ТЬг Уа1 Зег Зег 61у С1у 61у С1у Зег С1у С1у С1у Зег С1и Уа1 С1п 260 265 270

Ьей Уа1 Е1и Зег С1у С1у С1у Ьей Уа1 61п Рго С1у Азп Зег Ьей Агд 275 280 285

Ьей Зег Суз А1а А1а Зег С1у РЬе ТЬг РЬе Зег Зег РЬе С1у МеЬ Зег 290 295 300

Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз О1у Ьей С1и Тгр Уа1 Зег Зег 11е 305 310 315 320

Зег С1у Зег С1у Зег Азр ТЬг Ьей Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 61у Агд 325 330 335

РЬе ТЬг 11е Зег Агд Аэр Азп А1а Ьуэ ТЬг ТЬг Ьей Туг Ьей С1п МеЬ 340 345 350

Азп Зег Ьей Агд Рго <31ы Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТЬг 11е С1у 355 360 365

61у Зег Ьей Зег Агд Зег Зег С1п С1у ТЬг Ьей Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 370 375 380

С1у С1у 61у С1у Зег Е1у С1у С1у Зег Е1и Уа1 С1п Ьей Уа1 С1и Зег 385 390 395 400

С1у 61у С1у Ьей Уа1 С1п Рго С1у С1у Зег Ьей Агд Ьей Зег Суз А1а

- 277 025148

405

410

415

АЬа

Зег

С1у

РЬе

А1а

Ьеи

Азр

Туг

А1а

Не

СЬу

Тгр

РЬе

Агд

СЬп

420

425

430

УаЬ

Рго

СЬу

Ьуз

СЬи

Агд

СЬи

СЬу

Уа1

Зег

Суз

Не

Зег

Азр

435

440

445

СЬу

Не

ТЬг

Туг

УаЬ

Азр

Зег

УаЬ

Ьуз

СЬу

Агд

РЬе

ТЬг

Не

Зег

450

455

460

Агд

Азр

Азп

А1а

Ьуз

Азп

ТЬг

УаЬ

Туг

Ьеи

СЬп

МеЬ

Азп

Зег

Ьеи

Ьуз

4 65

470

475

480

Рго

61и

Азр

ТЬг

АЬа

УаЬ

Туг

Суз

АЬа

ТЬг

Азр

Зег

СЬу

Туг

485

4 90

495

Не

Азр

Туг

Азр

Суз

МеЬ

СЬу

Ьеи

СЬу

Туг

Азр

Туг

Тгр

СЬу

СЬп

СЬу

500

505

510

ТЬг

Ьеи

УаЬ

ТЫ

УаЬ

Зег

515 <210> 193 <211> 525 <212> РКТ <213> Искусственная <220>

<223> Мутантная последовательность Ьагаа дЬата <400> 193

Азр УаЬ СЬп Ьеи Уа1 СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп	Рго СЬу СЬу
1	5	10	15

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз АЬа АЬа Зег СЬу Агд ТЬг РЬе Зег Зег Туг
20	25	30

- 278 025148

- 279 025148

210 215 220

ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Сув АЬа АЬа УаЬ Рго АЬа СЬу Агд Ьеи Агд РЬе 225 230 235 240

СЬу СЬи СЬп Тгр Туг Рго Ьеи Туг СЬи Туг Азр АЬа Тгр СЬу СЬп СЬу 245 250 255

ТЬг Ьеи УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег СЬу СЬу СЬу СЬу Зег СЬу СЬу СЬу Бег 260 265 270

СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп АЬа СЬу СЬу 275 280 285

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз АЬа АЬа Зег СЬу РЬе ТЬг Ьеи Азр Азр Туг 290 295 300

АЬа Не СЬу Тгр РЬе Агд СЬп АЬа Рго СЬу Ьу® СЬи Агд СЬи СЬу УаЬ 305 310 315 320

Зег Зег 11е Агд Азр Азп Азр СЬу Зег ТЬг Туг Туг АЬа Азр Зег УаЬ 325 330 335

Ьуз СЬу Агд РЬе ТЬг 11е Зег Зег Аэр Азп Азр Ьуз Азп ТЬг УаЬ Туг 340 345 350

Ьеи СЬп МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз 355 360 365

АЬа АЬа УаЬ Рго АЬа СЬу Агд Ьеи Агд РЬе СЬу СЬи СЬп Тгр Туг Рго 370 375 380

Ьеи Туг СЬи Туг Азр АЬа Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг Ьеи УаЬ ТЬг УаЬ Зег 385 390 395 400

280 025148

Зег

СЬу СЬу

СЬу

СЬу 405

Зег

СЬу

Зег 410

СЬи

УаЬ

СЬп

Ьеи

УаЬ 415

СЬи

Зег

СЬу

Ьеи

УаЬ

СЬп

Рго

СЬу

Азп

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

420

425

430

АЬа

Зег

СЬу

РНе

ТЬг

РЬе

Зег

РЬе

СЬу

МеЬ

Зег

Тгр

УаЬ

Агд

435

440

445

СЬп

АЬа

Рго

СЬу

Ьуз

СЬу

Ьеи

СЬи

Тгр

УаЬ

Зег

Ые

Зег

СЬу

Зег

450

455

460

СЬу

Зег

Азр

ТЬг

Ьеи

Туг

АЬа

Азр

Зег

УаЬ

Ьуз

СЬу

Агд

РЬе

ТЬг

Ые

465

470

475

480

Зег

Агд

Азр

Азп

АЬа

Ьуз

ТЬг

Ьеи

Туг

Ьеи

СЬп

МеЬ

Азп

Зег

Ьеи

485

4 90

495

Агд

Рго

СЬи

Азр

ТЬг

АЬа

УаЬ

Туг

Суз

ТЬг

Ые

СЬу

Зег

Ьеи

500

505

510

Зег

Агд

Зег

СЬп

СЬу

ТЬг

Ьеи

УаЬ

ТЬг

УаЬ

Зег

515

520

525

<210> 194 <2Ы> 525 <212> РАТ <213> Искусственная <220>

<223> Мутантная последовательность Ьата дЬата <400> 194

Азр 1

УаЬ

СЬп

Ьеи

УаЬ 5

СЬи

Зег

СЬу

СЬу 10

Ьеи

УаЬ

СЬп

Рго

СЬу 15

СЬу

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

АЬа

Зег

СЬу

Агд

ТЬг

РЬе

Зег

Туг

- 281 025148

25 30

Бег Ме! СЬу Тгр РНе Агд СЬп АЬа Рго СЬу Ьуз СЬи Агд СЬи РНе УаЬ 35 40 45

УаЬ АЬа Не Зег Ьуз СЬу СЬу Туг Ьуз Туг Азр АЬа УаЬ Бег Ьеи СЬи 50 55 60

СЬу Агд РНе ТЬг 11е Бег Агд Азр Азп АЬа Ьуз Азп ТЬг УаЬ Туг Ьеи 65 70 75 80

СЬп Не Азп Бег Ьеи Агд Рго СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз АЬа 85 90 95

Бег Бег Агд АЬа Туг СЬу Бег Бег Агд Ьеи Агд Ьеи АЬа Азр ТЬг Туг 100 105 110

С1и Туг Тгр С1у СЬп СЬу ТЬг Ьеи УаЬ ТЬг УаЬ Бег Бег С1у СЬу СЬу 115 120 125

СЬу Бег СЬу СЬу СЬу Бег СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬи Бег СЬу СЬу СЬу 130 135 140

Ьеи УаЬ СЬп Рго СЬу Азп Бег Ьеи Агд Ьеи Бег Суз АЬа АЬа Бег СЬу 145 150 155 160

РЬе ТЬг РЬе Бег Бег РЬе СЬу Ме! Зег Тгр УаЬ Агд СЬп А1а Рго СЬу 165 170 175

Ьуз С1у Ьеи СЬи Тгр УаЬ Бег Зег 11е Зег СЬу Бег СЬу Бег Азр ТЬг 180 185 190

Ьеи Туг АЬа Азр Бег УаЬ Ьуз СЬу Агд РЬе ТЬг Не Бег Агд Азр Азп 195 200 205

- 282 025148

- 283 025148

νβΐ

СЬи

Зег

СЬу СЬу СЬу 405

Ьеи

УаЬ

СЬп

АЬа 410

СЬу

Зег

Ьеи

Агд 415

Ьеи

Зег

Суз

АЬа

АЬа Зег СЬу

РЬе

ТЬг

Ьеи

Азр

Туг

АЬа

Не

СЬу

Тгр

420

425

430

РЬе

Агд

61п

АЬа Рго СЬу

Ьуз

СЬи

Агд

СЬи

СЬу

УаЬ

Зег

Ые

Агд

435

440

445

Азр

Азп

Азр

СЬу Зег ТЬг

Туг

АЬа

Азр

Зег

УаЬ

Ьуз

СЬу

Агд

РЬе

450

455

4 60

ТЬг

11е

Зег

Зег Азр Азп

Азр

Ьуз

Азп

ТЬг

Уаь

Туг

Ьеи

СЬп

Ме!

АЗП

465

470

475

480

Зег

Ьеи

Ьуз

Рго СЬи Азр

ТЬг

АЬа

УаЬ

Туг

Суз

АЬа

УаЬ

Рго

485

490

495

АЬа

СЬу

Агд

Ьеи Агд РЬе

СЬу

СЬи

СЬп

Тгр

Туг

Рго

Ьеи

Туг

СЬи

Туг

500

505

510

Азр

АЬа

Тгр

СЬу СЬп СЬу

ТЬг

Ьеи

УаЬ

ТЬг

УаЬ

Зег

515

520

525

<210>

195

<211>

525

<212>

РЕТ

<213> :

Искусственная

<220>

<223> 1

Мутантная последовательность

Ьатс

ΐ д1аша

<4 00>

195

Азр

УаЬ

СЬп

Ьеи УаЬ СЬи

Зег

СЬу

Ьеи

УаЬ

СЬп

Рго

СЬу

1

5

10

15

- 284 025148

285 025148

- 286 025148

УаЬ

СЬи

Зег

СЬу

СЬу 405

СЬу

Ьеи

УаЬ

СЬп

АЬа 410

СЬу

Зег

Ьеи

Агд 4 15

Ьеи

Зег

Суз

АЬа

Зег

СЬу

РЬе

ТЬг

Ьеи

Азр

Туг

АЬа

Ые

С1у

Тгр

420

425

430

РЬе

Агд

СЬп

АЬа

Рго

СЬу

Ьуз

СЬи

Агд

СЬи

СЬу

УаЬ

Зег

Ые

Агд

435

440

445

Азр

Азп

Азр

СЬу

Зег

ТЬг

Туг

АЬа

Азр

Зег

УаЬ

Ьуз

СЬу

Агд

РЬе

450

455

460

ТЬг

11е

Зег

Азр

Азп

Азр

Ьуз

Азп

ТЬг

УаЬ

Туг

Ьеи

СЬп

Мер

Азп

465

470

475

480

Зег

Ьеи

Ьуз

Рго

СЬи

Азр

ТЬг

АЬа

УаЬ

Туг

Суз

АЬа

УаЬ

Рго

485

4 90

495

АЬа

СЬу

Агд

Ьеи

Агд

РЬе

СЬу

СЬи

СЬп

Тгр

Туг

Рго

Ьеи

Туг

СЬи

Туг

500

505

510

Азр

АЬа

Тгр

СЬу

СЬп

СЬу

ТЬг

Ьеи

УаЬ

ТЬг

УаЬ

Зег

515

520

525

<210>

196

<211>

515

<212>

РКТ

<213> 1

Искусственная

<220>

<223> 1

Мутантная последовательность

Ьата дЬата

<400>

196

Азр

УаЬ

СЬп

Ьеи

Уа1

СЬи

Зег

СЬу

Ьеи

УаЬ

СЬп

Рго

СЬу

1

5

10

15

- 287 025148

288 025148

- 289 025148

385

390

395

400

С1и

УаЬ

СЬп

Ьеи

УаЬ

СЬи

Зег

С1у

СЬу

Ьеи

Уа1

С1п

Рго

СЬу

Азп

405

410

415

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

АЬа

Зег

С1у

РНе

ТЬг

РЬе

Зег

РЬе

420

425

430

СЬу

Ме!

Зег

Тгр

УаЬ

Агд

СЬп

АЬа

Рго

С1у

Ьуз

С1у

Ьеи

СЬи

Тгр

УаЬ

435

440

445

Зег

11е

Зег

СЬу

Зег

СЬу

Зег

Азр

ТЬг

Ьеи

Туг

АЬа

Азр

Зег

УаЬ

450

455

460

Ьуз

СЬу

Агд

РЬе

ТЬг

11е

Зег

Агд

Азр

Азп

А1а

Ьуз

ТЬг

Ьеи

Туг

4 65

470

475

480

Ьеи

СЬп

Ме!

Азп

Зег

Ьеи

Агд

Рго

СЬи

Азр

ТЬг

А1а

УаЬ

Туг

Суз

485

490

495

ТЬг

Не

СЬу

Зег

Ьеи

Зег

Агд

Зег

С1п

СЬу

ТЬг

Ьеи

УаЬ

ТЬг

500

505

510

Уа1

Зег

515 <210> 197 <211> 515 <212> РКТ <213> Искусственная <220>

<223>	Мутантная последовательность	Ьата	д1ата
<400>	197
Азр УаЬ	СЬп Ьеи Уа1 О1и Зег С1у С1у	СЬу	Ьеи ν^Ι С1п Рго 61у С1у
1	5	10	15

- 290 025148

- 291 025148

- 292 025148

СЬу 385

СЬу

Зег

СЬу

С1у 390

Зег

СЬи

УаЬ

СЬп

Ьеи 395

УаЬ

СЬи

Зег

СЬу

СЬу 400

СЬу

Ьеи

УаЬ

СЬп

АЬа

СЬу

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

АЬа

Зег

405

410

415

СЬу

РЬе

ТЬг

РЬе

Азр

Туг

АЬа

Ьеи

СЬу

Тгр

РЬе

Агд

СЬп

АЬа

420

425

430

СЬу

Ьуз

СЬи

Агд

СЬи

СЬу

УаЬ

Зег

Суз

Не

Агд

Суз

Зег

Азр

СЬу

Зег

435

440

445

ТЬг

Туг

АЬа

Азр

Зег

Уа1

Ьуз

СЬу

Агд

РЬе

ТЬг

Не

Зег

Азр

450

455

4 60

Азп

АЬа

Ьуз

Азп

ТЬг

УаЬ

Туг

Ьеи

СЬп

Мер

Азп

Зег

Ьеи

Ьуз

Рго

СЬи

465

470

475

480

Азр

ТЫ

АЬа

УаЬ

Туг

Суз

АЬа

А1а

Зег

Не

УаЬ

Рго

Агд

Зег

Ьуз

485

490

495

Ьеи

СЬи

Рго

Туг

СЬи

Туг

Азр

А1а

Тгр

С1у

СЬп

СЬу

ТЬг

Ьеи

УаЬ

ТЬг

500

505

5Ь0

УаЬ

Зег

515

<210>

198

<211>

515

<212>

РКТ

<213>

Искусственная

<220>

<223>

Мутантная последовательность

Ьата дЬата

<400>

198

Азр

Уа1

СЬп

Ьеи

УаЬ

СЬи

Зег

СЬу

Ьеи

Уа!

СЬп

Рго

СЬу

- 293 025148

- 294 025148

Туг Туг АЬа Азр Зег УаЬ Ьуз СЬу 195 200

Агд РЬе ТЬг Не Зег 5ег Азр Азп 205

АЬа Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг Ьеи СЬп 210 215

Ме! Азп Зег Ьеи Ьуз Рго СЬи Азр 220

ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз АЬа АЬа 225 230

Зег 11е УаЬ Рго Агд Зег Ьуз Ьеи 235 240

СЬи Рго Туг СЬи Туг Азр АЬа Тгр 245

СЬу СЬп СЬу ТЬг Ьеи УаЬ ТЬг УаЬ 250 255

Зег Зег СЬу СЬу СЬу СЬу Зег СЬу 260

СЬу СЬу Зег СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ 265 270

СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп 275 280

Рго СЬу Азп Зег Ьеи Агд Ьеи Зег 285

Суз АЬа АЬа Зег СЬу РЬе ТЬг РЬе 290 295

Зег Зег РЬе СЬу Ме! Зег Тгр УаЬ 300

Агд СЬп АЬа Рго СЬу Ьуз СЬу Ьеи 305 310

СЬи Тгр УаЬ Зег Зег Не Зег СЬу 315 320

Зег СЬу Зег Азр ТЬг Ьеи Туг АЬа 325

Азр Зег УаЬ Ьуз СЬу Агд РЬе ТЬг 330 335

Не Зег Агд Азр Азп АЬа Ьуз ТЬг 340

ТЬг Ьеи Туг Ьеи СЬп Ме! Азп Зег 345 350

Ьеи Агд Рго СЬи Аэр ТЬг АЬа УаЬ

355 360

Туг Туг Суз ТЬг Ые СЬу СЬу Зег 365

Ьеи Зег Агд Зег Зег СЬп СЬу ТЬг 370 375

Ьеи УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег СЬу СЬу 380

- 295 025148

СЬу СЬу Зег СЬу СЬу СЬу Зег СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу 385 390 395 400

СЬу Ьеи УаЬ СЬп АЬа СЬу СЬу Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз АЬа АЬа Зег 405 410 415

СЬу РЬе ТЬг РЬе Азр Азр Туг АЬа Ьеи СЬу Тгр РЬе Агд СЬп АЬа АЬа 420 425 430

СЬу Ьуз СЬи Агд СЬи СЬу УаЬ Зег Суз Ые Агд Суз Зег Азр СЬу Зег 435 440 445

ТЬг Туг Туг АЬа Агр Зег УаЬ Ьуз СЬу Агд РЬе ТЬг Ые Зег Зег Азр 450 455 460

Азп АЬа Ьуз Азп ТЬг УаЬ Туг Ьеи СЬп Мер Азп Зег Ьеи Ьуз Рго СЬи 465 470 475 480

Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз АЬа АЬа Зег Ые УаЬ Рго Агд Зег Ьуз 485 490 495

Ьеи СЬи Рго Туг СЬи Туг Азр АЬа Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг Ьеи УаЬ ТЬг 500 505 510

УаЬ Зег Зег 515 <210> 199 <211> 382 <212> РЕТ <213> Искусственная <220>

<223> Мутантная последовательность Ьава дЬата <400> 199

- 296 025148

Азр Уа1 С1п Ьеи УаЬ С1и Зег С1у 1 5

СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп Рго СЬу СЬу 10 15

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз АЬа АЬа 20

Зег СЬу Агд ТЬг РЬе Зег Зег Туг 25 30

Зег Мер С1у Тгр РЬе Агд С1п АЬа 35 40

Рго С1у Ьуз С1и Агд С1и РЬе Уа1 45

Уа1 АЬа 11е Зег Ьуз СЬу С1у Туг 50 55

Ьуз Туг Азр АЬа УаЬ Зег Ьеи С1и 60

Е1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр 65 70

Азп А1а Ьуз Азп ТЬг УаЬ Туг Ьеи 75 80

СЬп Не Азп Зег Ьеи Агд Рго С1и 85

Азр ТЬг А1а УаЬ Туг Туг Суз А1а 90 95

Зег Зег Агд АЬа Туг СЬу Зег Зег 100

Агд Ьеи Агд Ьеи АЬа Азр ТЬг Туг 105 110

СЬи Туг Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг Ьеи 115 120

УаЬ ТЫ УаЬ Зег Зег СЬу С1у С1у 125

СЬу Зег СЬу 61у СЬу Зег С1и Ή1 130 135

О1п Ьеи УаЬ С1и Зег С1у СЬу СЬу 140

Ьеи УаЬ СЬп Рго СЬу Азп Зег Ьеи 145 150

Агд Ьеи Зег Суз АЬа АЬа Зег СЬу 155 160

РЬе ТЬг РЬе Зег Зег РЬе СЬу Мер 165

Зег Тгр УаЬ Агд О1п А1а Рго С1у 170 175

Ьуз СЬу Ьеи СЬи Тгр Уа1 Зег Зег 180

Не Зег СЬу Зег СЬу Зег Азр ТЬг 185 190

- 297 025148

- 298 025148 <210> 200 <2Ы> 387 <212> РКТ <213> Искусственная <220>

<223> Мутантная последовательность Ьата дЬата <400> 200

Аар УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу 1 5

СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп Рго 61у СЬу 10 15

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз АЬа АЬа 20

Зег С1у Агд ТНг РНе Зег Зег Туг 25 30

Зег Меб СЬу Тгр РНе Агд СЬп АЬа 35 40

Рго С1у Ьуз С1и Агд С1и РНе УаЬ 45

УаЬ АЬа 11е Зег Ьуз СЬу СЬу Туг 50 55

Ьуз Туг Азр А1а 1/аЬ Зег Ьеи СЬи 60

СЬу Агд РНе ТНг Ые Зег Агд Азр 65 70

Азп АЬа Ьуз Азп ТНг УаЬ Туг Ьеи 75 80

СЬп Ые Азп Зег Ьеи Агд Рго СЬи 85

Азр ТЬг АЬа ’Ы1 Туг Туг Суз АЬа 90 95

Зег Зег Агд АЬа Туг СЬу Зег Зег 100

Агд Ьеи Агд Ьеи АЬа Азр ТНг Туг 105 110

СЬи Туг Тгр СЬу СЬп СЬу ТНг Ьеи 115 120

УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег СЬу СЬу СЬу 125

СЬу Зег СЬу СЬу СЬу Зег СЬи УаЬ 130 135

СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу СЬу 140

- 299 025148

Ьеи Уа1 С1п Рго С1у Азп Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег 61у 145 150 155 160

РЬе ТЬг РЬе Зег Зег РЬе С1у МеР Зег Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго С1у 165 170 175

Ьуз С1у Ьеи С1и Тгр Уа1 Зег Зег 11е Зег С1у Зег С1у Зег Азр ТЬг 180 185 190

Ьеи Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз С1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп 195 200 205

А1а Ьуз ТЬг ТЬг Ьеи Туг Ьеи С1п Мер Азп Зег Ьеи Агд Рго С1и Азр 210 215 220

ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТЬг 11е С1у С1у Зег Ьеи Зег Агд Зег Зег 225 230 235 240

61п С1у ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег С1у 61у С1у С1у Зег С1у С1у 245 250 255

61у Зег С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег 31у С1у 01у Ьеи Уа1 Б1п Рго 260 265 270

С1у Е1у Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у 11е ТЬг Ьеи Азр 275 280 285

Азр Туг А1а 11е С1у Тгр РЬе Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз 61и Агд С1и 290 295 300

С1у Уа1 Зег Зег 11е Агд Азр Азп С1у С1у Зег ТЬг Туг Туг А1а Азр 305 310 315 320

- 300 025148

УаЬ Туг Ьеи СЬп МеЬ Азп Зег Ьеи Агд Рго СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг 340 345 350

Туг Суз АЬа АЬа УаЬ Рго АЬа СЬу Агд Ьеи Агд Туг СЬу СЬи СЬп Тгр 355 360 365

Туг Рго Не Туг СЬи Туг Азр АЬа Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг Ьеи УаЬ ТЬг 370 375 380

УаЬ Зег Зег 385 <210> 201 <211> 387 <212> РЕТ <213> Искусственная <220>

<223> Мутантная последовательность Ьата дЬата <400> 201

Азр УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп Рго СЬу СЬу 15 10 15

Зег МеЬ СЬу Тгр РЬе Агд СЬп АЬа Рго СЬу Ьуз СЬи Агд СЬи РЬе УаЬ 35 40 45

УаЬ АЬа Не Зег Ьуз СЬу СЬу Туг Ьуэ Туг Азр АЬа УаЬ Зег Ьеи СЬи 50 55 60

СЬу Агд РЬе ТЬг Не Зег Агд Азр Азп АЬа Ьуз Азп ТЬг УаЬ Туг Ьеи 65 70 75 80

301 025148

СЬп 11е Азп Зег Ьеи Агд Рго СЬи 85

Азр ТНг АЬа УаЬ Туг Туг Суз АЬа 90 95

Зег Зег Агд АЬа Туг СЬу Зег Зег 100

Агд Ьеи Агд Ьеи АЬа Азр ТЬг Туг 105 110

СЬи Туг Тгр С1у СЬп СЬу ТНг Ьеи 115 . 120

УаЬ ТЬг Уа1 Зег Зег СЬу СЬу СЬу 125

СЬу Зег СЬу СЬу СЬу Зег СЬи УаЬ 130 135

СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу СЬу 140

Ьеи УаЬ СЬп Рго СЬу Азп Зег Ьеи 145 150

Агд Ьеи Зег Суз АЬа АЬа Зег СЬу 155 160

РЬе ТЬг РЬе Зег Зег РНе СЬу Мер 165

Зег Тгр УаЬ Агд СЬп АЬа Рго СЬу 170 175

Ьуз СЬу Ьеи СЬи Тгр УаЬ Зег Зег 180

Ые Зег СЬу Зег СЬу Зег Азр ТЬг 185 190

Ьеи Туг АЬа Азр Зег УаЬ Ьуз СЬу 195 200

Агд РЬе ТЬг Ые Зег Агд Азр Азп 205

АЬа Ьуз ТНг ТНг Ьеи Туг Ьеи СЬп 210 215

Мер Азп Зег Ьеи Агд Рго СЬи Азр 220

ТНг АЬа УаЬ Туг Туг Суз ТНг Ые 225 230

СЬу СЬу Зег Ьеи Зег Агд Зег Зег 235 240

СЬп СЬу ТНг Ьеи УаЬ ТНг УаЬ Зег 245

Зег СЬу СЬу СЬу СЬу Зег СЬу СЬу 250 255

СЬу Зег СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬи 260

Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп Рго 265 270

- 302 025148

СЬу С1у

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

А1а

Уа1

Зег

С1у

Не

ТЬг

Ьеи

Азр

275

280

285

Азр Туг

А1а

Не

СЬу

Тгр

РЬе

Агд

С1п

А1а

Рго

СЬу

Ьуз

С1и

Агд

С1и

2 90

295

300

СЬу Уа1

Зег

Не

Агд

Авр

Азп

СЬу

Зег

ТЬг

Туг

А1а

Авр

305

310

315

320

Зег Уа1

Ьуз

СЬу

Агд

РЬе

ТЬг

Не

Зег

Азр

Азп

Зег

Ьуз

Азп

ТЬг

325

330

335

Уа1 Туг

Ьеи

С1п

МеЬ

Азп

Зег

Ьеи

Агд

Рго

С1и

Азр

ТЬг

А1а

Уа1

Туг

340

345

350

Туг Суз

А1а

Уа1

Рго

А1а

СЬу

Агд

Ьеи

Агд

Туг

СЬу

С1и

С1п

Тгр

355

360

365

Туг Рго

Не

Туг

61и

Туг

Азр

А1а

Тгр

СЬу

С1п

СЬу

ТЫ

Ьеи

Уа1

ТЬг

370

375

380

\Га1 Зег

Зег

385

<210>

202

<211>

387

<212>

РКТ

<213>

Искусственная

<220>

<223>

Мутантная последовательность

Ьата д1ата

<400>

202

Азр Уа1

С1п

Ьеи

Уа1

С1и

Зег

СЬу

С1у

Ьеи

Уа1

С1п

Рго

С1у

СЬу

1

5

10

15

- 303 025148

- 304 025148

- 305 025148

385 <210> 203 <211> 387 <212> РЕТ <213> Искусственная <220>

<223> Мутантная последовательность Ьата дЬата <400> 203

Азр УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи Уа1 СЬп Рго СЬу СЬу 15 10 15

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз АЬа АЬа Зег СЬу Агд ТНг РЬе Зег Зег Туг 20 25 30

Зег Ме! СЬу Тгр РЬе Агд СЬп АЬа Рго СЬу Ьуз СЬи Агд СЬи РЬе УаЬ 35 40 45

УаЬ АЬа 11е Зег Ьуз СЬу СЬу Туг Ьуз Туг Азр АЬа УаЬ Зег Ьеи СЬи 50 55 60

СЬу Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп АЬа Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг Ьеи 65 70 75 80

СЬп 11е Азп Зег Ьеи Агд Рго СЬи Азр ТЬг АЬа Уа1 Туг Туг Суз АЬа 85 90 95

СЬу Зег СЬу СЬу СЬу Зег СЬи УаЬ СЬп Ьеи Уа1 СЬи Зег СЬу СЬу СЬу 130 135 140

- 306 025148

Ьей Уа1 С1п Рго Е1у Азп Зег Ьей Агд Ьей Зег Суз А1а А1а Зег С1у 145 150 155 160

РЬе ТЬг РЬе Зег Зег РЬе Е1у МеЬ Зег Тгр Уа1 Агд Е1п А1а Рго 61у 165 170 175

Ьуз Е1у Ьей Е1и Тгр Уа1 Зег Зег 11е Зег Е1у Зег С1у Зег Азр ТЬг 180 185 190

Ьей Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз С1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп 195 200 205

А1а Ьуз ТЬг ТЬг Ьей Туг Ьеь Е1п МеЬ Азп Зег Ьей Агд Рго Е1и Азр 210 215 220

ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз ТЬг Не С1у Е1у Зег Ьей Зег Агд Зег Зег 225 230 235 240

С1п Е1у ТЬг Ьей Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег С1у С1у С1у С1у Зег С1у С1у

245 250 255

Е1у Зег Е1и Уа1 Е1п Ьей Уа1 С1и Зег Е1у Е1у С1у Ьей Уа1 С1п Рго 260 265 270

Е1у Е1у Зег Ьей Агд Ьей Зег Суз А1а А1а Зег С1у 11е ТЬг Ьей Азр 275 280 285

Азр Туг А1а 11е Е1у Тгр РЬе Агд Е1п А1а Рго С1у Ьуз Е1и Агд Б1ч 290 295 300

Е1у Уа1 Зег А1а Не Агд С1и Зег С1у 61у Зег ТЬг Туг Туг А1а Азр 305 310 315 320

Зег Уа1 Ьуз С1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Зег Азр Азп Зег Ьуз Азп ТЬг

- 307 025148

325

330

335

Уа1

Туг

Ьеи

С1п

Меб

Азп

Зег

Ьеи

Агд

Рго

С1и

Азр

ТЬг

А1а

Уа1

Туг

340

345

350

Туг

Суз

А1а

Уа1

Рго

А1а

61у

Агд

Ьеи

Агд

Туг

61у

С1и

61п

Тгр

355

360

365

Туг

Рго

Не

Туг

С1и

Туг

Азр

А1а

Тгр

Е1у

С1п

С1у

ТЬг

Ьеи

Уа1

ТЬг

370

375

380

Уа1 Зег Зег 385 <210> 204 <211> 387 <212> РКТ <213> Искусственная <220>

<223> Мутантная последовательность Ьата дЬата <400> 204

Азр 1

Уа1

С1п

Ьеи

Уа1 5

С1и

Зег

С1у

С1у 10

Ьеи

Уа1

С1п

Рго

С1у 15

С1у

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

А1а

Зег

С1у

Агд

ТЬг

РЬе

Зег

Туг

20

25

30

Зег

Меб

С1у

Тгр

РЬе

Агд

С1п

А1а

Рго

С1у

Ьуз

С1и

Агд

61и

РЬе

Уа1

35

40

45

Уа1

А1а

11е

Зег

Ьуз

С1у

61у

Туг

Ъуз

Туг

Азр

А1а

Уа1

Зег

Ьеи

61и

50

55

60

61у

Агд

РЬе

ТЬг

11е

Бег

Агд

Азр

Азп

А1а

Ьуз

Азп

ТЫ

Уа1

Туг

Ьеи

65

70

75

80

- 308 025148

- 309 025148

260

265

270

СЬу

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

АЬа

Зег

СЬу

1Ье

ТЬг

Ьеи

Азр

275

280

285

Азр

Туг

АЬа

Не

СЬу

Тгр

РЬе

Агд

СЬп

АЬа

Рго

СЬу

Ьуз

СЬи

Агд

СЬи

290

295

300

СЬу

УаЬ

Зег

АЬа

11е

Агд

Зег

СЬу

Зег

ТЫ

Туг

АЬа

Азр

305

310

315

320

Зег

УаЬ

Ьуз

СЬу

Агд

РНе

ТЬг

1Ье

Зег

Азр

Азп

Зег

Ьуз

Азп

ТЬг

325

330

335

УаЬ

Туг

Ьеи

СЬп

Меь

Азп

Зег

Ьеи

Агд

Рго

СЬи

Азр

ТЬг

АЬа

УаЬ

Туг

340

345

350

Туг

Суз

АЬа

УаЬ

Рго

АЬа

СЬу

Агд

Ьеи

Агд

Туг

СЬу

СЬи

СЬп

Тгр

355

360

365

Туг

Рго

1Ье

Туг

СЬи

Туг

Азр

АЬа

Тгр

СЬу

СЬп

СЬу

ТЬг

Ьеи

УаЬ

ТЬг

370 375 360

УаЬ Зег Зег 385 <210> 205 <211> 387 <212> РЕТ <213> Искусственная <220>

<223> Мутантная последовательность Ьата дЬата <400> 205

Азр УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп Рго СЬу СЬу
1	5	10	15

- 310 025148

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а 20

Зег СХу Агд ТЬг РЬе Зег Зег Туг 25 30

Зег МеС С1у Тгр РЬе Агд С1п А1а 35 40

Рго 61у Ьуз С1и Агд С1и РЬе Уа1 45 ’7я1 А1а 11е Зег Ьуз О1у С1у Туг 50 55

Ьуз Туг Азр А1а 1 Зег Ьеи С1и 60

С1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр 65 70

Азп А1а Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг Ьеи 75 80

С1п 11е Азп Зег Ьеи Агд Рго С1и 85

Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз А1а 90 95

Зег Зег Агд А1а Туг С1у Зег Зег 100

Агд Ьеи Агд Ьеи А1а Азр ТЬг Туг 105 110

61и Туг Тгр С1у <31п 61у ТЬг Ьеи 115 120

Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег С1у С1у 01у 125

С1у Зег С1у С1у 61у Зег С1и Уа1 130 135

С1п Ьеи 7а1 С1и Зег С1у С1у С1у 140

Ьеи Уа1 С1п Рго 61у Азп Зег Ьеи 145 150

Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег 61у 155 160

РЬе ТЬг РЬе Зег Зег РЬе С1у МеС 165

Зег Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго С1у 170 175

Ьуз С1у Ьеи 61и Тгр Уа1 Зег Зег 180

11е Зег С1у Зег 61у Зег Азр ТЬг 185 190

Ьеи Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 61у

Агд РЬе ТЬг Не Зег Агд Азр Азп

- 311 025148

- 312 025148

Уа1 Зег Зег 385 <210> 206 <211> 387 <212> РКТ <213> Искусственная <220>

<223> Мутантная последовательность Ьата дЬата <400> 206

Зег Меб СЬу Тгр РЬе Агд СЬп АЬа Рго СЬу Ьуз СЬи Агд СЬи РЬе УаЬ 35 40 45 νβΐ АЬа Ые Зег Ьуз СЬу СЬу Туг Ьуз Туг Азр АЬа УаЬ Зег Ьеи СЬи 50 55 60

СЬу Агд РЬе ТЬг Ые Зег Агд Азр Азп АЬа Ьуз Азп ТЬг 7а1 Туг Ьеи 65 70 75 80

СЬу Зег СЬу СЬу СЬу Зег СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу С1у

- 313 025148

130 135 140

Ьеи УаЬ СЬп Рго СЬу Азп Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а АЬа Зег СЬу 145 150 155 160

РНе ТЬг РЬе Зег Зег РЬе СЬу МеЬ Зег Тгр УаЬ Агд СЬп АЬа Рго СЬу 165 170 175

ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз ТЬг Ые СЬу СЬу Зег Ьеи Зег Агд Зег Зег 225 230 235 240

СЬу СЬу Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз АЬа УаЬ Зег СЬу Ые ТЬг Ьеи Азр 275 260 285

Азр Туг АЬа Ые СЬу Тгр РЬе Агд СЬп АЬа Рго СЬу Ьуз СЬи Агд СЬи 290 295 300

СЬу УаЬ Зег АЬа Ые Агд СЬи Зег СЬу СЬу Зег ТЬг Туг Туг АЬа Азр 305 310 315 320

- 314 025148

Зег

УаЬ

Ьуз

СЬу

Агд 325

РЬе

ТЫ

11е

Зег

Зег 330

Азр

Азп

Зег

Ьуз

Азп 335

ТЬг

УаЬ

Туг

Ьеи

СЬп

Мер

Азп

Зег

Ьеи

Агд

Рго

СЬи

Азр

ТНг

АЬа

УаЬ

Туг

340

345

350

Туг

Суз

АЬа

УаЬ

Рго

АЬа

СЬу

Агд

Ьеи

Агд

Туг

СЬу

СЬи

СЬп

Тгр

355

360

365

Туг

Рго

11е

Туг

СЬи

Туг

Азр

АЬа

Тгр

СЬу

СЬп

СЬу

ТЬг

Ьеи

УаЬ

ТЬг

370

375

380

УаЬ

Зег

335

<210>

207

<211>

337

<212>

РКТ

<213>

Искусственная

<220>

<223>

Мутантная последовательность

Ьата дЬата

<400>

207

Азр

УаЬ

СЬп

Ьеи

УаЬ

СЬи

Зег

СЬу

Ьеи

УаЬ

СЬп

Рго

61у

СЬу

1

5

10

15

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

АЬа

Зег

СЬу

Агд

ТНг

РЬе

Зег

Туг

20

25

30

Зег

Мер

СЬу

Тгр

РЬе

Агд

СЬп

АЬа

Рго

СЬу

Ьуз

СЬи

Агд

СЬи

РЬе

УаЬ

35

40

45

УаЬ

АЬа

Не

Зег

Ьуз

СЬу

Туг

Ьуз

Туг

Азр

АЬа

УаЬ

Зег

Ьеи

СЬи

50

55

60

СЬу

Агд

РЬе

ТЫ

не

Зег

Агд

Азр

Азп

АЬа

Ьуз

Азп

ТЬг

УаЬ

Туг

Ьеи

- 315 025148

- 316 025148

СЬу

Зег

СЬи

УаЬ 260

СЬп

Ьеи

УаЬ

СЬи

Зег 265

СЬу

Ьеи

УаЬ 270

СЬп

Рго

СЬу

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

АЬа

УаЬ

Зег

СЬу

Х1е

ТЫ

Ьеи

Азр

275

280

285

Азр

Туг

АЬа

11е

СЬу

Тгр

РЬе

Агд

СЬп

АЬа

Рго

СЬу

Ьуз

СЬи

Агд

СЬи

290

295

300

СЬу

УаЬ

Зег

АЬа

Не

Агд

Зег

СЬу

Зег

ТЬг

Туг

АЬа

Азр

305

310

315

320

Зег

УаЬ

Ьуз

СЬу

Агд

РЬе

ТЬг

Не

Зег

Азр

Аэп

Зег

Ьуз

Азп

ТЬг

325

330

335

УаЬ

Туг

Ьеи

СЬп

Ме!

Азп

Зег

Ьеи

Агд

Рго

СЬи

Азр

ТЫ

АЬа

УаЬ

Туг

340

345

350

Туг

Суз

АЬа

УаЬ

Рго

АЬа

СЬу

Агд

Ьеи

Агд

Туг

СЬу

СЬи

СЬп

Тгр

355

360

365

Туг

Рго

Не

Туг

СЬи

Туг

Азр

АЬа

Тгр

СЬу

СЬп

СЬу

ТЬг

Ьеи

УаЬ

ТЬг

370

375

380

УаЬ

Зег

385 <210> 208 <2Ы> 525 <212> РКТ <213> Искусственная <22О>

<223> Мутантная последовательность Ьаша дЬата <400> 208

Азр УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп Рго СЬу СЬу

- 317

15

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз АЬа АЬа 20

Зег СЬу Агд ТЬг РЬе Зег Зег Туг 25 30

Зег Ме! СЬу Тгр РЬе Агд СЬп АЬа 35 40

Рго СЬу Ьуз СЬи Агд СЬи РЬе УаЬ 45

УаЬ АЬа 1Ье Зег Ьуз СЬу СЬу Туг 50 55

Ьуз Туг Азр АЬа УаЬ Зег Ьеи СЬи 60

СЬу Агд РЬе ТЬг ЬЬе Зег Агд Азр 65 70

Азп АЬа Ьуз Азп ТЬг УаЬ Туг Ьеи 75 30

СЬп 11е Аеп Зег Ьеи Агд Рго СЬи 85

Аер ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз АЬа 90 95

Зег Зег Агд АЬа Туг СЬу Зег Зег 100

Агд Ьеи Агд Ьеи АЬа Азр ТЬг Туг 105 110

СЬи Туг Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг Ьеи 115 120

УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег СЬу СЬу СЬу 125

СЬу Зег СЬу СЬу СЬу Зег СЬи УаЬ 130 135

СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу СЬу 140

Ьеи УаЬ СЬп Рго СЬу Аеп Зег Ьеи 145 150

Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег СЬу 155 160

РЬе ТЬг РЬе Зег Зег РЬе СЬу Ме! 165

Зег Тгр Уа1 Агд СЬп АЬа Рго СЬу 170 175

Ьуз СЬу Ьеи СЬи Тгр УаЬ Зег Зег 180

11е Зег С1у Зег 61у Зег Азр ТЬг 185 190

318 025148

Ьеи Туг АЬа Азр Зег УаЬ Ьуз СЬу Агд РНе ТНг ЬЬе Зег Агд Азр Азп 195 200 205

АЬа Ьуз ТЬг ТНг Ьеи Туг Ьеи СЬп Мер Азп Зег Ьеи Агд Рго СЬи Азр 210 215 220

ТНг АЬа УаЬ Туг Туг Суэ ТНг Ые СЬу СЬу Зег Ьеи Зег Агд Зег Зег 225 230 235 240

СЬп СЬу ТНг Ьеи УаЬ ТНг УаЬ Зег Зег СЬу СЬу СЬу СЬу Зег СЬу СЬу 245 250 255

СЬу СЬу Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз АЬа АЬа Зег СЬу РЬе ТНг Ьеи Азр 275 230 265

Азр Туг АЬа Ые СЬу Тгр РНе Агд СЬп АЬа Рго СЬу Ьуз СЬи Агд СЬи 290 295 300

СЬу УаЬ Зег АЬа Ые Агд Азр Азп СЬу СЬу Зег ТНг Туг Туг АЬа Азр 305 310 315 320

Зег УаЬ Ьуз СЬу Агд РНе ТНг Ые Зег Зег Азр Азп Зег Ьуз Азп ТНг 325 330 335

УаЬ Туг Ьеи СЬп Мер Азп Зег Ьеи Агд Рго СЬи Азр ТНг АЬа УаЬ Туг 340 345 350

- 319 025148

Уа1 Зег Зег СЬу СЬу СЬу СЬу Зег СЬу СЬу СЬу Зег СЬи УаЬ СЬп Ьеи 385 390 395 400

УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп Рго СЬу СЬу Зег Ьеи Агд Ьеи 405 410 415

Зег Суз А1а А1а Зег С1у РЬе ТЬг Ьеи Азр Азр Туг А1а 11е СЬу Тгр 420 425 430

РЬе Агд С1п АЬа Рго СЬу Ьуз СЬи Агд СЬи СЬу УаЬ Зег АЬа 11е Агд 435 440 445

Азр Азп СЬу СЬу Зег ТЬг Туг Туг АЬа Азр Зег УаЬ Ьуэ СЬу Агд РЬе 450 455 460

ТЬг 11е Зег Зег Азр Азп Зег Ьуз Азп ТЬг УаЬ Туг Ьеи СЬп Мер Азп 465 470 475 480

Зег Ьеи Агд Рго СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз АЬа АЬа УаЬ Рго 485 490 495

АЬа СЬу Агд Ьеи Агд РЬе СЬу СЬи СЬп Тгр Туг Рго Ьеи Туг СЬи Туг 500 505 510

Азр АЬа Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг УаЬ Зег Зег 515 520 525 <210> 209 <211> 525 <212> РКТ <213> Искусственная <220>

<223> Мутантная последовательность Ьата дЬата <400> 209

- 320 025148

- 321 025148

322 025148

Ьеи 385

Туг

СЬи

Туг

Азр АЬа 390

Тгр

СЬу

СЬп

СЬу

ТЬг 395

Ьеи

УаЬ

ТЬг

УаЬ

Зег 400

Зег

СЬу

Зег

СЬу

Зег

СЬи

УаЬ

СЬп

Ьеи

УаЬ

С1и

405

410

415

Зег

СЬу

Ьеи

УаЬ

СЬп

Рго

СЬу

Азп

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

420

425

430

АЬа

Зег

СЬу

РЬе

ТЫ

РЬе

Зег

РЬе

СЬу

Ме!

Зег

Тгр

УаЬ

Агд

435

440

445

СЬп

АЬа

Рго

СЬу

Ьуз

СЬу

Ьеи

СЬи

Тгр

УаЬ

Зег

Ые

Зег

СЬу

5ег

450

455

460

СЬу

Зег

Азр

ТЬг

Ьеи

Туг

АЬа

Азр

Зег

УаЬ

Ьуз

СЬу

Агд

РЬе

ТЬг

Не

465

470

475

460

Зег

Агд

Азр

Азп

АЬа

Ьуз

ТЬг

Ьеи

Туг

Ьеи

СЬп

Ме!

Азп

Зег

Ьеи

485

490

495

Агд

Рго

СЬи

Азр

ТНг

АЬа

УаЬ

Туг

Суз

ТЬг

Ые

СЬу

Зег

Ьеи

500

505

510

Зег

Агд

Зег

СЬп

СЬу

ТНг

Ьеи

УаЬ

ТНг

УаЬ

Зег

515 520 525 <210> 210 <211> 515 <212> РКТ <213> Искусственная <220>

<223> Мутантная последовательность Ьата дЬата <400> 210

- 323 025148

Зег Мер СЬу Тгр РЬе Агд СЬп АЬа Рго СЬу Ьуз СЬи Агд СЬи РЬе УаЬ 35 40 45

УаЬ АЬа Ые Зег Ьуз СЬу СЬу Туг Ьуз Туг Азр АЬа УаЬ Зег Ьеи СЬи 50 55 60

СЬу Агд РЬе ТЬг Ые Зег Агд Азр Азп АЬа Ьуз Азп ТЬг УаЬ Туг Ьеи 65 70 75 80

Зег Зег Агд АЬа Туг СЬу Зег Зег Агд Ьеи Агд Ьеи АЬа Азр ТЬг Туг ЬОО 105 110

СЬи Туг Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг Ьеи УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег СЬу СЬу 61у 115 120 125

СЬу Зег СЬу СЬу СЬу Зег СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу СЬу 130 135 140

Ьеи УаЬ СЬп Рго СЬу Азп Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суэ А1а АЬа Зег СЬу 145 150 155 160

324 025148

- 325 025148

370 375 380

СЬу СЬу Зег СЬу СЬу СЬу Зег СЬи УаЬ СЬп Ъеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу 385 390 395 400

СЬу Ъеи УаЬ СЬп Рго СЬу СЬу Зег Ъеи Агд Ьеи Зег Суе АЬа АЬа Зег 405 410 415

СЬу РЬе ТЬг РЬе Азр Азр Туг АЬа Ьеи СЬу Тгр РЬе Агд СЬп АЬа Рго 420 425 430

СЬу Ьуз СЬи Агд СЬи СЬу УаЬ Зег Суз ЬЬе Агд Суз Зег СЬу СЬу Зег 435 440 445

ТЬг Туг Туг АЬа Азр Зег УаЬ Ьуз СЬу Агд РЬе ТЬг Ые Зег Зег Азр 450 455 460

Азп Зег Ьуз Азп ТЬг УаЬ Туг Ьеи СЬп МеЬ Азп Зег Ьеи Агд Рго СЬи 465 470 475 480

Азр ТЫ АЬа УаЬ Туг Туг Суз АЬа АЬа Зег Ые УаЬ Рго Агд Зег Ьуз 485 490 495

УаЬ Зег Зег 515 <210> 211 <211> 515 <212> РИТ <213> Искусственная <220>

<223> Мутантная последовательность Ьата дЬата

- 326 025148 <400> 211

Азр УаЬ 61п Ьеи 7а 1 61и Зег СЬу 1 5

СЬу С1у Ьеи 7а 1 61п Рго С1у СЬу 10 15

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз АЬа АЬа 20

Зег С1у Агд ТЬг РЬе Зег Зег Туг 25 30

Зег Мер СЬу Тгр РЬе Агд 61п АЬа 35 40

Рго С1у Ьуз СЬи Агд СЬи РЬе УаЬ 45

УаЬ АЬа Не Зег Ьуз СЬу СЬу Туг 50 55

Ьуз Туг Азр АЬа 7а1 Зег Ьеи СЬи 60

СЬу Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр 65 70

Азп АЬа Ьуз Азп ТЬг УаЬ Туг Ьеи 75 80

СЬп 11е Азп Зег Ьеи Агд Рго СЬи 85

Азр ТЬг АЬа \?а1 Туг Туг Суз АЬа 90 95

Зег Зег Агд АЬа Туг СЬу Зег Зег 100

Агд Ьеи Агд Ьеи АЬа Азр ТЬг Туг 105 110

С1и Туг Тгр СЬу С1п С1у ТЬг Ьеи 115 120

УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег СЬу СЬу СЬу 125

С1у Зег СЬу С1у 61у Зег 61и УаЬ 130 135

С1п Ьеи 7а1 СЬи Зег С1у СЬу СЬу 140

Ьеи Уа1 С1п Рго СЬу СЬу Зег Ьеи 145 150

Агд Ьеи Зег Суэ А1а А1а Зег С1у 155 160

РЬе ТЬг РЬе Азр Азр Туг АЬа Ьеи 165

С1у Тгр РЬе Агд С1п А1а Рго 61у 170 175

Ьуз С1и Агд С1и С1у 7а1 Зег Суз

11е Агд Суз Зег С1у 61у Зег ТЬг

- 327 025148

- 328 025148

Рго

Агд 370

Зег

Ьуз

Ьеи

СЬи

Рго 375

Туг

СЬи

Туг

Азр

АЬа 380

Тгр

СЬу

СЬп

СЬу

ТЬг

Ьеи

Уаь

ТЬг

УаЬ

Зег

СЬу

Зег

СЬу

Зег

385

390

395

400

СЬи

УаЬ

СЬп

Ьеи

УаЬ

СЬи

Зег

СЬу

Ьеи

УаЬ

СЬп

Рго

СЬу

Азп

405

410

415

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суэ

АЬа

Зег

СЬу

РЬе

ТЬг

РЬе

Зег

РЬе

420

425

430

СЬу

Меб

Зег

Тгр

УаЬ

Агд

СЬп

АЬа

Рго

СЬу

Ьуз

СЬу

Ьеи

СЬи

Тгр

УаЬ

435

440

445

Зег

1Ье

Зег

СЬу

Зег

СЬу

Зег

Азр

ТЬг

Ьеи

Туг

АЬа

Азр

Зег

νβΐ

450

455

460

Ьуз

СЬу

Агд

РЬе

ТЬг

Ые

Зег

Агд

Азр

Азп

АЬа

Ьуз

ТЬг

Ьеи

Туг

465

470

475

480

Ьеи

СЬп

Меб

Азп

Зег

Ьеи

Агд

Рго

СЬи

Азр

ТЬг

АЬа

УаЬ

Туг

Суз

485

4 90

495

ТЬг

Ые

СЬу

Зег

Ьеи

Зег

Агд

Зег

СЬп

СЬу

ТЬг

Ьеи

УаЬ

ТЬг

500

505

510

УаЬ

Зег

515

<210> :

212

<211>

384

<212>

РКТ

<213> 1

Искусственная

<220>

<223> 1

Мутантная последовательность

Ьата дЬата

- 329 025148 <400> 212

Азр 7а1 С1п Ьей Уа1 С1и Зег 01у 1 5

61у С1у Ьей Уа1 С1п Рго С1у С1у 10 15

Зег Ьей Агд Ьей Зег Суз А1а А1а 20

Зег С1у Агд ТЬг РЬе Зег Зег Туг 25 30

Зег МеЬ С1у Тгр РЬе Агд С1п А1а 35 40

Рго 61у Ьуз С1и Агд С1ы РЬе Уа1 45

Уа1 А1а 11е Зег Ьуз С1у 61у Туг 50 55

Ьуз Туг Азр А1а Уа1 Зег Ьей С1и 60

С1у Агд РЬе ТЬг Не Зег Агд Азр 65 70

Азп А1а Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг Ьей 75 80

С1п 11е Азп Зег Ьей Агд Рго С1ы 85 .

Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз А1а 90 95

Зег Зег Агд А1а Туг С1у Зег Зег 100

Агд Ьей Агд Ьей А1а Азр ТЬг Туг 105 110

61и Туг Тгр 61у С1п Е1у ТЬг Ьей 115 120

Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег С1у 61у 61у 125

61у Зег С1у С1у С1у Зег 61и Уа1 130 135

С1п Ьей Уа1 01и Зег С1у Е1у С1у 140

Ьей 1/а1 С1п Рго <31у Азп Зег Ьей 145 150

Агд Ьей Зег Суз А1а А1а Зег С1у 155 160

РЬе ТЫ РЬе Зег Зег РЬе С1у МеЬ 165

Зег Тгр Уа1 Агд 01п А1а Рго 61у 170 175

- 330 025148

- 331 025148

Ьеи СЬу Туг Агр Туг Тгр С1у СЬп С1у ТЬг Ьеи УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег 370 375 зео <210> 213 <211> 525 <212> РЕТ <213> Искусственная <220>

<223> Мутантная последовательность Ьата дЬата <400> 213

Азр 1

УаЬ

СЬп

Ьеи

УаЬ 5

СЬи

Зег

СЬу СЬу

СЬу 10

Ьеи

УаЬ

СЬп

Рго

СЬу 15

СЬу

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

АЬа

Зег

СЬу

Агд

ТЫ

РЬе

Зег

Туг

20

25

30

Зег

Ме!

СЬу

Тгр

РЬе

Агд

СЬп

АЬа

Рго

СЬу

Ьуз

СЬи

Агд

СЬи

РЬе

УаЬ

35

40

45

УаЬ

АЬа

Не

Зег

Ьуз

СЬу

Туг

Ьуз

Туг

Азр

АЬа

УаЬ

Зег

Ьеи

СЬи

50

55

60

СЬу

Агд

РЬе

ТЬг

ЬЬе

Зег

Агд

Азр

Аеп

АЬа

Ьуз

Азп

ТЬг

УаЬ

Туг

Ьеи

65

70

75

80

СЬп

Не

Азп

Зег

Ьеи

Агд

Рго

СЬи

Азр

ТЬг

АЬа

УаЬ

Туг

Суз

АЬа

85

90

95

Зег

Агд

АЬа

Туг

СЬу

Зег

Агд

Ьеи

Агд

Ьеи

АЬа

Азр

ТЫ

Туг

100

105

НО

СЬи

Туг

Тгр

СЬу

СЬп

СЬу

ТЬг

Ьеи

УаЬ

ТЬг

УаЬ

Зег

СЬу

115

120

125

- 332 025148

- 333 025148

Зег УаЬ Ьуз СЬу Агд РЬе ТЬг 11е 325

Зег Зег Азр Азп Зег Ьуз Азп ТЬг 330 335

УаЬ Туг Ьеи СЬп Мер Азп Зег Ьеи 340

Агд Рго СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг 345 350

Туг Суз АЬа АЬа УаЬ Рго АЬа СЬу 355 360

Агд Ьеи Агд РЬе СЬу СЬи СЬп Тгр 365

Туг Рго Ьеи Туг 61и Туг Азр АЬа 370 375

Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг Ьеи УаЬ ТЬг 380

УаЬ Зег Зег СЬу СЬу СЬу СЬу Зег 385 390

СЬу СЬу СЬу Зег СЬи УаЬ СЬп Ьеи 395 400

УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи УаЬ 405

СЬп Рго СЬу СЬу Зег Ьеи Агд Ьеи 410 415

Зег Суз АЬа АЬа Зег СЬу РЬе ТЬг 420

Ьеи Азр Азр Туг АЬа Ые СЬу Тгр 425 430

РЬе Агд СЬп АЬа Рго СЬу Ьуэ СЬи 435 440

Агд СЬи СЬу УаЬ Зег АЬа 11е Агд 445

Зег Зег СЬу СЬу Зег ТЬг Туг Туг 450 455

АЬа Азр Зег УаЬ Ьуз СЬу Агд РЬе 460

ТЬг Ые Зег Зег Азр Азп Зег Ьуз 465 470

Азп ТЬг УаЬ Туг Ьеи СЬп Мер Азп 475 480

Зег Ьеи Агд Рго СЬи Азр ТЬг АЬа 485

УаЬ Туг Туг Суз АЬа АЬа УаЬ Рго 490 495

АЬа СЬу Агд Ьеи Агд РЬе СЬу СЬи 500

СЬп Тгр Туг Рго Ьеи Туг СЬи Туг 505 510

- 334 025148

Азр

А1а

Тгр 515

С1у

С1п

С1у

ТЬг

Ьеи 520

Уа1

ТЬг

Уа1

Зег

Зег 525

<210>

214

<211>

124

<212>

РКТ

<213> Ьата д1ата

< 4 0 0 >

214

С1и

Уа1

С1п

Ьеи

Уа1

С1и

Зег

61 у

С1у

61у

Ьеи

Уа1

ст

А1а

С1у

61у

1

5

10

15

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

А1а

Зег

С1у

РЬе

ТЬг

РЬе

Азр

Туг

20

25

30

А1а

Ьеи

61у

Тгр

РЬе

Агд

61п

А1а

61у

Ьуз

61и

Агд

61и

61у

Уа1

35

40

45

Зег

Суз

Х1е

Агд

Суз

Зег

Азр

С1у

Зег

ТЬг

Туг

А1а

Азр

Зег

Уа1

50

55

60

Ьуз

С1у

Агд

РЬе

ТЬг

11е

Зег

Азр

Азп

А1а

Ьуз

Азп

ТЬг

Уа1

Туг

65

70

75

80

Ьеи

61п

Мер

Азп

Зег

Ьеи

Ьуз

Рго

61и

Азр

ТЬг

А1а

Уа1

Туг

Суз

85

90

95

А1а

Зег

11е

Уа1

Рго

Агд

Зег

Ьуз

Ьеи

С1и

Рго

Туг

С1и

Туг

Азр

100

105

110

А1а

Тгр

С1у

61п

С1у

ТЬг

61п

Уа1

ТЬг

Уа1

Зег

115

120

<210> 215 <211> 126

- 335 025148 <212> РКТ <213> Ьаша дЬата <400> 215

СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп Рго СЬу СЬу 15 10 15

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз АЬа АЬа Зег СЬу РНе АЬа Ьеи Азр Туг Туг 20 25 30

АЬа Ые СЬу Тгр РНе Агд СЬп УаЬ Рго СЬу Ьуз СЬи Агд СЬи СЬу УаЬ 35 40 45

Зег Суз Ые Зег Зег Зег Азр СЬу Ые ТЬг Туг Туг УаЬ Азр Зег УаЬ 50 55 60

Ьуэ СЬу Агд РЬе ТЬг Ые Зег Агд Азр Азп АЬа Ьуз Азп ТЬг УаЬ Туг 65 70 75 80

Ьеи СЬп Мер Азп Зег Ьеи Ьуз Рго СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз 85 90 95

АЬа ТЬг Азр Зег СЬу СЬу Туг Ые Азр Туг Азр Суз Мер С1у Ьеи СЬу 100 105 110

Туг Азр Туг Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг СЬп УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег 115 120 125 <210> 216 <211> 129 <212> РКТ <213> Ьата дЬата <400> 216

336 025148

Зег Ьеи

Агд

Ьеи

Бег

Суз

АЬа

Зег

СЬу

РЬе

ТЬг

Ьеи

Азр

Туг

20

25

30

АЬа ЬЬе

СЬу

Тгр

РЬе

Агд

СЬп

АЬа

Рго

СЬу

Ьуз

СЬи

Агд

СЬи

СЬу

УаЬ

35

40

45

Зег Суз

Ые

Агд

Азр

Зег

Азр

СЬу

Зег

ТЬг

Туг

АЬа

Азр

Зег

УаЬ

50

55

60

Ьуз СЬу

Агд

РЬе

ТЬг

Ые

Зег

Азр

Азп

Азр

Ьуз

Азп

ТЬг

УаЬ

Туг

65

70

75

80

Ьеи СЬп

Меб

Азп

Зег

Ьеи

Ьуз

Рго

СЬи

Азр

ТЬг

АЬа

УаЬ

Туг

Суз

85

90

95

АЬа АЬа

УаЬ

Рго

АЬа

СЬу

Агд

Ьеи

Агд

РЬе

СЬу

СЬи

СЬп

Тгр

Туг

Рго

100

105

ыо

Ьеи Туг

СЬи

Туг

Азр

АЬа

Тгр

СЬу

СЬп

СЬу

ТЬг

СЬп

УаЬ

ТЬг

УаЬ

Зег

115

120

125

Бег

<2Ь0>

217

<211>

129

<212>

РАТ

<213>

Искусственная

<220>

<223> 1

Мутантная последовательность

Ьата

ΐ дЬата

<400>

217

СЬи УаЬ

СЬп

Ьеи

УаЬ

СЬи

Зег

СЬу

Ьеи

УаЬ

СЬп

Рго

СЬу

1

5

10

15

- 337

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи 20

Зег

Суз

А1а

Зег 25

61у

РЬе

ТЬг

Ьеи

Азр 30

Азр

Туг

А1а

11е

С1у

Тгр

РЬе

Агд

61п

А1а

Рго

С1у

Ьуз

61и

Агд

С1и

С1у

Уа1

35

40

45

Зег

11е

Агд

Азр

Азп

Азр

С1у

Зег

ТЬг

Туг

А1а

Азр

Зег

Уа1

50

55

60

Ьуз

С1у

Агд

РЬе

ТЬг

Не

Зег

Азр

Азп

Зег

Ьуз

Азп

ТНг

Уа1

Туг

65

70

75

80

Ьеи

С1п

МеС

Азп

Зег

Ьеи

Агд

Рго

С1и

Азр

ТЬг

А1а

Уа1

Туг

Суз

85

90

95

А1а

Уа1

Рго

А1а

61у

Агд

Ьеи

Агд

РЬе

С1у

С1и

С1п

Тгр

Туг

Рго

100

105

110

Ьеи

Туг

С1и

Туг

Азр

А1а

Тгр

С1у

61п

61у

ТЬг

Ьеи

Уа1

ТЬг

Уа1

Зег

115

120

125

Зег <210> 218 <211> 124 <212> РЕТ <213> Искусственная <220>

<223> Мутантная последовательность Ьата д1ата <400> 218

61и

νβΐ

С1п

Ьеи

Уа1

С1и

Зег

С1у

61у

Ьеи

Уа1

С1п

Рго

С1у

1

5

10

15

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

А1а

Зег

С1у

РЬе

ТЬг

РЬе

Азр

Туг

- 338 025148

25

АЬа Ьеи СЬу Тгр РЬе Агд СЬп АЬа Рго 35 40

Зег Суз 1Ье Агд Суз Зег Азр СЬу Зег 50 55

Ьуз СЬу Агд РЬе ТЬг 11е Зег Зег Азр 65 70

Ьеи СЬп МеЬ Азп Зег Ьеи Агд Рго СЬи 85

АЬа АЬа Зег 11е УаЬ Рго Агд Зег Ьуз 100 105

АЬа Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг Ьеи УаЬ ТЬг 115 120

СЬу	Ьуз	СЬи	Агд 45	СЬи	СЬу	УаЬ
ТЬг	Туг	Туг 60	АЬа	Азр	Зег	УаЬ
Азп	Зег 75	Ьуз	Азп	ТЫ	УаЬ	Туг 80
Азр 90	ТЬг	АЬа	УаЬ	Туг	Туг 95	Суз
Ьеи	СЬи	Его	Туг	СЬи 110	Туг	Аэр
УаЬ	Зег	Зег

<210> 219 <211 > 126 <212> РЕТ <213> Искусственная <220>

<223> Мутантная последовательность <400> 219

С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 СЬи Зег СЬу С1у 1 5

Ьата дЬата

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег 20 25

А1а 11е СЬу Тгр РЬе Агд СЬп АЬа Рго 35 40

СЬу	Ьеи	УаЬ	СЬп	Рго	СЬу	СЬу
10					15
СЬу	РЬе	АЬа	Ьеи	Азр	Туг	Туг
				30
СЬу	Ьуз	СЬи	Агд	СЬи	СЬу	УаЬ

339

Зег Суз

Не

Зег

Азр 55

СЬу

11е

ТНг

Туг

Туг 60

АЬа

Азр

Зег

УаЬ

50

Ьуз

С1у

Агд

РЬе

ТЬг

Не

Зег

Агд

Азр

Азп

Зег

Ьуз

Азп

ТЬг

Уа1

Туг

Й5

70

75

ео

Ьеи

С1п

Меб

Азп

Зег

Ьеи

Агд

Рго

СЬи

Азр

ТЬг

АЬа

Уа1

Туг

Суз

35

90

95

А1а

ТЬг

Азр

Зег

С1у

СЬу

Туг

11е

Азр

Туг

Азр

Суз

Ме!

СЬу

Ьеи

С1у

100

105

110

Туг

Азр

Туг

Тгр

61у

СЬп

СЬу

ТЬг

Ьеи

Уа1

ТЬг

Уа1

Зег

115 120 125 <210> 220 <211> 124 <212> РКТ <213> Искусственная <220>

<223> ι <400>	Мутантная последовательность 220	Ьата	ι дЬата
СЬи Уа1 1	СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу 5	СЬу 10	Ьеи УаЬ СЬп Рго СЬу СЬу 15
Зег Ьеи	Агд Ьеи Зег Суз АЬа АЬа Зег 20 25	СЬу	РЬе ТЬг РЬе Азр Азр Туг 30
АЬа Ьеи	СЬу Тгр РЬе Агд СЬп АЬа Рго 35 40	СЬу	Ьуз С1и Агд С1и СЬу Уа1 45
Зег Суз 50	Не Агд Суз Зег СЬу СЬу Зег 55	ТЬг	Туг Туг А1а Азр Зег Уа1 60

- 340 025148

Ьуз 65

СЬу

Агд

РЬе

ТЬг

11е 70

Зег

Азр

Азп

Зег 75

Ьуз

Азп

ТЬг

Уа1

Туг 30

Ьеи

СЬп

Меб

Азп

Зег

Ьеи

Агд

Рго

С1и

Азр

ТЬг

А1а

Уа1

Туг

Суз

85

90

95

А1а

Зег

11е

Уа1

Рго

Агд

Зег

Ьуз

Ьеи

СЬи

Рго

Туг

С1и

Туг

Азр

100

105

110

А1а

Тгр

СЬу

С1п

С1у

ТЬг

Ьеи

Уа1

ТЬг

Уа1

Зег

115

120

<210>

221

<211>

126

<212>

РКТ

<213>

Искусственная

<22О>

<223>

Мутантная последовательность

Ьата д1ата

<400>

221

С1и

УаЬ

С1п

Ьеи

Уа1

С1и

Зег

С1у

СЬу

Ьеи

Уа1

СЬп

Рго

СЬу

1

5

10

15

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

А1а

Зег

С1у

РЬе

А1а

Ьеи

Азр

Туг

20

25

30

АЬа

Ые

СЬу

Тгр

РЬе

Агд

СЬп

А1а

Рго

С1у

Ьуз

С1и

Агд

СЬи

СЬу

17а 1

35

40

45

Зег

Суз

11е

Зег

СЬу

С1у

11е

ТЬг

Туг

А1а

Азр

Зег

УаЬ

50

55

60

Ьуз

СЬу

Агд

РНе

ТЬг

11е

Зег

Агд

Азр

Азп

Зег

Ьуз

Азп

ТЬг

УаЬ

Туг

65

70

75

80

341 025148

Ьеи

СЬп

МеР

Азп

Зег 85

Ьеи

Агд

Рго

СЬи

Азр 90

ТЬг

А1а

УаЬ

Туг

Туг 95

Суз

А1а

ТНг

Азр

Зег

СЬу

Туг

Ые

Азр

Туг

Азр

Суз

Зег

СЬу

Ьеи

СЬу

100

105

ыо

Туг

Азр

Туг

Тгр

СЬу

СЬп

СЬу

ТЬг

Ьеи

УаЬ

ТЬг

Уа1

Зег

115

120

125

<210>

222

<211>

129

<212>

РКТ

<213>

Искусственная

<220>

<223>

Мутантная последовательность

Ьаша д1ата

<400>

222

СЬи

УаЬ

СЬп

Ьеи

УаЬ

СЬи

Зег

СЬу

Ьеи

УаЬ

СЬп

Рго

СЬу

1

5

10

15

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

А1а

УаЬ

Зег

СЬу

Ые

ТЬг

Ьеи

Αερ

Азр

Туг

20

25

30

АЬа

Ые

СЬу

Тгр

РЬе

Агд

С1п

АЬа

Рго

СЬу

Ьуз

СЬи

Агд

СЬи

СЬу

УаЬ

35

40

45

Зег

АЬа

Ые

Агд

Зег

СЬу

Зег

ТЬг

Туг

АЬа

Азр

Зег

УаЬ

50

55

60

Ьуз

СЬу

Агд

РЬе

ТЫ

Ые

Зег

Азр

Азп

Зег

Ьуз

Азп

ТЬг

УаЬ

Туг

65

70

75

80

Ьеи

СЬп

Мер

Азп

Зег

Ьеи

Агд

Рго

СЬи

Азр

ТНг

АЬа

УаЬ

Туг

Суз

85

90

95

АЬа

УаЬ

Рго

АЬа

СЬу

Агд

Ьеи

Агд

Туг

СЬу

СЬи

СЬп

Тгр

Туг

Рго

- 342 025148

100

110

105

11е Туг СЬи Туг Азр АЬа Тгр СЬу СЬп СЬу ТНг Ьеи Уа1 ТНг УаЬ Зег 115 120 125

Зег <210> 223 <211> 129 <212> РКТ <213> Искусственная .

<220>

<223> Мутантная последовательность Ьата дЬата <400> 223

61и УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп Рго СЬу СЬу 15 10 15

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз АЬа АЬа Зег СЬу РЬе ТЬг Ьеи Азр Азр Туг 20 25 30

АЬа 1Ье СЬу Тгр РЬе Агд СЬп АЬа Рго СЬу Ьуз СЬи Агд СЬи СЬу УаЬ 35 40 45

Зег АЬа 11е Агд Зег Зег СЬу СЬу Зег ТЬг Туг Туг АЬа Азр Зег УаЬ 50 55 60

Ьуз СЬу Агд РЬе ТЬг 11е Зег Зег Азр Азп Зег Ьуз Азп ТЬг УаЬ Туг 65 70 75 80

Ьеи СЬп Мер Азп Зег Ьеи Агд Рго СЬи Азр ТНг А1а УаЬ Туг Туг Суз 85 90 95

АЬа АЬа УаЬ Рго АЬа СЬу Агд Ьеи Агд РЬе СЬу СЬи СЬп Тгр Туг Рго 100 105 110

- 343 025148

- 344 025148 <211> 5 <212> РКТ <213> Ьата дЬата <400> 227

Туг Туг АЬа 11е С1у 1 5 <210> 228 <211> 17 <212> РКТ <213> Ьата д1ата <400> 228

Суз 11е Зег Зег Зег Азр СЬу 11е ТЬг Туг Туг Уа1 Азр Зег Уа1 Ьуэ 15 10 15

61у <210> 229 <211> 17 <212> РКТ <213> Ьата д1ата <400> 229

Азр Зег СЬу СЬу Туг Не Азр Туг Азр Суз Мер С1у Ьеи 61у Туг Азр 15 10 15

Туг <210> 230 <211> 5 <212> РКТ <213> Ьата д1ата <400> 230

- 345 025148

Азр Туг АЬа 11е СЬу 1 5 <210> 231 <211> 17 <212> РКТ <213> Ьата дЬата <400> 231

Суз 1Ье Агд Азр Зег Азр СЬу Зег ТЬг Туг Туг АЬа Азр Зег УаЬ Ьуз 15 10 15

61у <210> 232 <211> 20 <212> РКТ <213> Ьата дЬата <400> 232 .

УаЬ Рго АЬа СЬу Агд Ьеи Агд РЬе СЬу СЬи СЬп Тгр Туг Рго Ьеи Туг 15 10 15

СЬи Туг Азр АЬа 20 <210> 233 <211> 5 <212> РКТ <213> Ьата дЬата <400> 233

Азр Туг АЬа Не 61у 1 5 <210> 234 <211> 17

- 346 025148 <212> РКТ <213> Ьагаа дЬата <400> 234

Зег Ые Агд Азр Азп Азр СЬу бег ТЬг Туг Туг АЬа Азр Зег УаЬ Ьуз 15 10 15

СЬу <210> 235 <211> 20 <212> РКТ <213> Ьата дЬата <400> 235

СЬи Туг Азр АЬа 20 <210> 236 <211> 5 <212> РКТ <213> Ьата дЬата <400> 236

Азр Туг АЬа Ьеи СЬу 1 5 <210> 237 <211? 17 <212> РКТ <213> Ьата дЬата <400? 237

Суз 11е Агд Суг Зег Азр СЬу Зег ТЬг Туг Туг АЬа Азр Зег УаЬ Ьуз

347 025148

- 348 025148

<213> Ьата д1ата
<400> 241
Азр Зег СЬу СЬу Туг 11е Азр Туг Азр Суз МеС 15 10	О1у Ьеи С1у Туг Азр 15
Туг

<210>	242
<211>	5
<212>	РКТ
<213>	Ьата дЬата
<400>	242
Аар Туг АЬа Ьеи 61у
1	5

<210>	243
<211>	17
<212>	РКТ
<213>	Ьата дЬата

<400> 243

Суз Не Агд Суз Зег СЬу СЬу Зег ТЬг Туг Туг АЬа Азр Зег УаЬ Ьуз 15 10 15

СЬу <210> 244 <211> 15 <212> РКТ <213> Ьата дЬата <400> 244

Зег 11е УаЬ Рго Агд Зег Ьуз Ьеи СЬи Рго Туг СЬи Туг Азр АЬа 15 10 15

- 349 025148

- 350 025148 <211> 5 <212> РКТ <213> Ьата д1ата <400> 248

Азр Туг А1а 11е С1у 1 5 <210> 249 <211> 17 <212> РКТ <213> Искусственная <220>

<223> Мутантная последовательность Ьата д1ата <400> 249

А1а 11е Агд Зег Зег С1у С1у Зег ТЬг Туг Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 15 10 15

С1у <210> 250 <211> 20 <212> РКТ <213> Искусственная <220>

<223> Мутантная последовательность Ьата д1ата <400> 250

Уа1 Рго А1а 61у Агд Ьей Агд Туг С1у С1и С1п Тгр Туг Рго 11е Туг 15 10 15

С1и Туг Азр А1а 20 <210> 251

- 351 025148 <2Ы> 5 <212> РЕТ <213> Ьата дЬата <400> 251

Аар Туг АЬа 11е СЬу 1 5 <210> 252 <211> 17 <212> РЕТ <213> Искусственная <220>

<223> Мутантная последовательность Ьата д1ата <400> 252

А1а 11е Агд Зег Зег СЬу СЬу Зег ТЬг Туг Туг А1а Азр Зег УаЬ Ьуз 15 10 15

СЬу <210> 253 <211> 20 <212> РКТ <213> Искусственная <220>

<223> Мутантная последовательность Ьаша дЬата <400> 253

СЬи Туг Азр АЬа 20 <210> 254

- 352 <211> 115 <212> РКТ <213> Искусственная <220>

<223> Мутантная последовательность Ьата д1ата <400> 254

СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп Рго СЬу Азп 15 10 15

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз АЬа АЬа Зег СЬу РНе ТНг РЬе Зег Зег РЬе 20 25 30

СЬу Мер Зег Тгр УаЬ Агд СЬп АЬа Рго СЬу Ьуз СЬу Ьеи СЬи Тгр УаЬ 35 40 45

Зег Зег Не Зег СЬу Зег СЬу Зег Азр ТЬг Ьеи Туг АЬа Азр Зег УаЬ 50 55 60

Ьуз СЬу Агд РЬе ТЬг Ые Зег Агд Азр Азп АЬа Ьуз ТЬг ТЬг Ьеи Туг 65 70 75 80

Ьеи СЬп Мер Азп Зег Ьеи Агд Рго СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз 85 90 95

ТЬг Ые СЬу СЬу Зег Ьеи Зег Агд Зег Зег СЬп СЬу ТЬг Ьеи УаЬ ТЬг 100 105 110

УаЬ Зег Зег 115 <210> 255 <211> 5 <212> РКТ <213> Ьата дЬата <400> 255

- 353 025148

- 354 025148

- 355 025148

1	5
<210>	264
<211>	5
<212>	РКТ
<213>	Ьата дЬата
<400>	264

Зег РЬе СЬу Меб Зег

Ь	5
<210>	265
<211>	17
<212>	РКТ
<213>	Ьата дЬата
<400>	265

Зег 11е Азп СЬу Агд СЬу Азр Азр ТЬг Агд Туг АЬа Азр Зег УаЬ Ьуз

1	5 10 15
СЬу

<210>	266
<211>	7
<212>	РКТ
<213>	Ьата дЬата
<4ОО>	266

СЬу Агд Зег УаЬ Зег Агд Зег 1 5

<210>	267
<2Ь1>	5
<212>	РКТ
<2ЬЗ>	Ьата дЬата
<400>	267

- 356 025148

Зег РЬе С1у Меб Зег 1 5 <210> 268 <211> 17 <212> РКТ <213> Ьата д1ата <400> 268

А1а 11е Зег А1а Азр Зег Зег Азр Ьуз Агд Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 15 10 15

С1у <210> 269 <211> 5 <212> РКТ <213> Ьата д1ата <400> 269

Е1у Агд Е1у Зег Рго 1 5 <210> 270 <211> 5 <212> РКТ <213> Ьата д1ата <400> 270

Зег РЬе С1у Меб Зег 1 5

<210>	271
<211>	17
<212>	РКТ
<213>	Ьата
<400>	271

д1ата

- 357 025148

А1а 11е Зег А1а Аер Зег Зег Азр Ьуз Агд Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 15 10 15

61у <210> 272 <211> 5 <212> РКТ <213> Ьата д1ата <400> 272

51у Агд С1у Зег Рго 1 5 <210> 273 <211> 5 <212> РКТ <213> Ьата д1ата <400> 273

Азп Туг Тгр Ме! Туг 1 5 <210> 274 <211> 17 <212> РКТ <213> Ьата д1ата <400> 274

Агд 11е Зег ТЬг С1у С1у С1у Туг Зег Туг Туг А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 15 10 15

С1у <210> 275 <211> 13 <212> РКТ <213> Ьата д1ата <400> 275

Азр Агд С1и А1а С1п Уз 1 Азр ТЬг Ьеи Азр РНе Азр Туг 15 10

- 358 025148

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Биспецифическая связывающая молекула, содержащая единичный вариабельный домен иммуноглобулина, связывающий УЕОР:

единичный вариабельный домен иммуноглобулина, связывающий сывороточный альбумин; единичный вариабельный домен иммуноглобулина, связывающий Апд2, где указанный единичный вариабельный домен иммуноглобулина, связывающий УЕОР, имеет следующие СЭР последовательности:

СИРТ: δΥδΜΟ,

СЭР2: ΑΙδΚΟΟΥΚΥΏΑνδΕΕΟ,

СЭР3: δΚΑΥΟδδΚΕΡΕΑΌΤΥΕΥ;

указанный единичный вариабельный домен иммуноглобулина, связывающий сывороточный альбумин, имеет следующие СИР последовательности:

СИРТ: δΡΟΜΟ (δΕΟ ΙΌ N0: 255),

СИР2: δΙδΟδΟδΌΤΕΥΑΌδνΚΟ (δΕΟ ΙΌ N0: 256),

СИР3: ΟΟδδΕδΡ (δΕΟ ΙΌ N0: 257), где указанный единичный вариабельный домен иммуноглобулина, связывающий Αη§2, имеет следующие СИР последовательности:

СОРЕ ΌΥΑΙΟ (δΕΟ ΙΌ N0: 248),

СИР2: ΑΚ^δΟΟδΊΥΥΑΟδ^Ο (δΕΟ ΙΌ N0: 249),

СОР3: УΡΑΟΡ^ΡΥΟΕ^№ΥΡIΥΕΥ^Α (δΕΟ ΙΌ N0: 250).
2. Биспецифическая связывающая молекула по п.1, в которой указанные единичные вариабельные домены иммуноглобулина представляют собой УНН.
3. Биспецифическая связывающая молекула по п.2, где указанный связывающий УЕОР УНН имеет следующие СИР последовательности:

СОР1: δΥδΜΟ,

СОР2: ΑΙδΚΟΟΥΚΥΌΑνδΕΕΟ,

СОР3: δΡΑΥΟδδΡ^Ρ^Α^ΤΥΕΥ;

указанный связывающий сывороточный альбумин УНН является Α1Ό11 УНН доменом (δΕφ ΙΌ N0:

254);

указанный связывающий Αη§2 УНН является ΑNΟΒII 00938 доменом (δΕφ ΙΌ N0: 222).
4. Биспецифическая связывающая молекула по п.3, где указанный связывающий УБОР УНН является УΕΟΡΒII00038 доменом (δΕΟ ΙΌ N0: 57).
5. Биспецифическая связывающая молекула УΕΟΡΑNΟΒII00022 (δΕφ ΙΌ N0: 207).
6. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая биспецифическую связывающую молекулу по пп.1-5.
7. Вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по п.6.
8. Клетка-хозяин, содержащая вектор по п.7.
9. Фармацевтическая композиция, содержащая в качестве действующего вещества по меньшей мере одну биспецифическую связывающую молекулу по одному из пп.1-5.
10. Фармацевтическая композиция по п.9, предназначенная для лечения рака и злокачественных болезней.
11. Фармацевтическая композиция по п.9, предназначенная для лечения глазных болезней.
12. Способ получения биспецифической связывающей молекулы по любому из пп.1-5, включающий этапы:

культивирование клетки-хозяина по п.8 в условиях, обеспечивающих экспрессию указанной биспецифической связывающей молекулы;

выделение или отделение указанной биспецифической связывающей молекулы, экспрессируемой указанной клеткой-хозяина, из культуры.
13. Способ по п.12, дополнительно включающий этап дополнительной очистки, или модификации, или включения в состав композиции указанной биспецифической связывающей молекулы.