CN104661679A

CN104661679A - 包含双重血管生成素-2/Dll4结合物和抗VEGF药剂的药物组合

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Publication number: CN104661679A
Application number: CN201380049946.0A
Authority: CN
Inventors: A·格施温德; A·鲍姆
Original assignee: Boehringer Ingelheim International GmbH
Current assignee: Boehringer Ingelheim International GmbH
Priority date: 2012-09-28
Filing date: 2013-09-26
Publication date: 2015-05-27
Also published as: AU2013322564A1; US20140093499A1; CL2015000762A1; IL237646A0; UY35055A; AR092737A1; CA2883880A1; KR20150060686A; PH12015500664A1; WO2014049100A1; EP2900260A1; TW201427680A; MX2015003894A; JP2015532273A; EA201500371A1

Abstract

本发明涉及包含双重血管生成素-2/Dll4结合物和抗VEGF药剂的药物组合，所述药物组合用于治疗像癌症和眼病的疾病。

Description

包含双重血管生成素-2/Dll4结合物和抗VEGF药剂的药物组合

发明领域

本发明涉及包含双重血管生成素-2/Dll4结合物和抗VEGF药剂的药物组合，所述药物组合用于治疗像癌症、眼病等的疾病。

发明背景

当肿瘤达到大约1mm³的临界尺寸时，肿瘤变得依赖于血管生成，用于维持以氧和营养物进行的血液供应以允许进一步生长。如US 2008/0014196中所概述，血管生成牵涉于包括实体肿瘤和转移的许多病症的发病机理中。

在肿瘤生长的情况下，血管生成似乎对从增生转变到瘤形成来说至关重要，并且对提供营养用于肿瘤的生长和转移来说至关重要(Folkman等,Nature339-58,1989)，这允许肿瘤细胞获得相较于正常细胞的生长优势。因此，抗血管生成疗法已变成对于一些类型肿瘤的重要治疗选择。这些疗法已集中于通过中和VEGF(阿瓦斯丁(Avastin))或它的受体(Sutent和索拉非尼(Sorafinib))来阻断VEGF途径(Ferrara等,Nat Rev Drug Discov.2004年5月；3(5):391-400.)。

如例如US2008/0014196和WO2008/101985中所述，血管生成牵涉于包括实体肿瘤和转移以及眼部疾病的许多病症的发病机理中。最重要的促血管生成因子之一是血管内皮生长因子(VEGF)，也称为VEGF-A或血管通透性因子(VPF)。VEGF属于包括胎盘生长因子(PIGF)、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D、VEGF-E以及VEGF-F的基因家族。人VEGF的单个基因的mRNA的选择性剪接产生至少六种亚型(VEGF121、VEGF145、VEGF165、VEGF183、VEGF189以及VEGF206)，VEGF165是最丰富的亚型。

已鉴定出与VEGF相互作用的两种VEGF酪氨酸激酶受体(VEGFR)，即VEGFR-1(也称为FIt-1)和VEGFR-2(也称为KDR或FIK-1)。VEGFR-1对VEGF的亲和力最高，而VEGFR-2对VEGF的亲和力稍微较低。Ferrara(Endocrine Rev.2004,25:581-611)提供VEGF的详细描述，正常过程和病理过程中VEGF与它的受体的相互作用和它的功能可见于Hoeben等Pharmacol.Rev.2004,56:549-580中。

VEGF已被报道是正常血管生成和异常血管生成的关键调节物(Ferrara和Davis-Smyth,Endocrine Rev.1997,18:4-25；Ferrara J.Mol.Med.1999,77:527-543)。相较于促进血管形成的过程的其它生长因子，VEGF在它对血管系统内的内皮细胞具有高特异性方面是独特的。

VEGF mRNA由大多数人肿瘤过度表达。在肿瘤生长的情况下，血管生成似乎对从增生转变到瘤形成来说至关重要，并且对提供营养用于肿瘤的生长和转移来说至关重要(Folkman等,1989,Nature 339-58)，这允许肿瘤细胞获得相较于正常细胞的生长优势。因此，抗血管生成疗法已变成对于一些类型肿瘤的重要治疗选择。这些疗法已集中于阻断VEGF途径(Ferrara等,Nat RevDrug Discov.2004年5月；3(5):391-400)。

对VEGF和它在血管生成和不同过程中的作用的解释已提供治疗性干预的潜在新目标。VEGF的功能受到小分子的抑制，这些小分子阻断或防止VEGF受体酪氨酸激酶的活化(Schlaeppi和Wood,1999,Cancer Metastasis Rev.,18:473-481)，并且因此干扰VEGF受体信号转导途径。含有细菌或植物毒素的细胞毒性缀合物可抑制VEGF对肿瘤血管生成的刺激作用。VEGF-DT385毒素缀合物(融合或化学缀合到VEGF165的白喉毒素结构域)例如有效地抑制体内肿瘤生长。肿瘤生长抑制还可通过由逆转录病毒递送FIk-1突变体或可溶性VEGF受体来实现。

VEGF中和抗体，如A4.6.1和MV833已被开发以阻断VEGF与它的受体结合，并且已显示临床前抗肿瘤活性(Kim等Nature 1993,362:841-844；Folkman Nat.Med.1995,1:27-31；Presta等Cancer Res.1997,57:4593-4599；Kanai等Int.J.Cancer 1998,77:933-936；Ferrara和Alitalo Nat.Med.1999,5:1359-1364；320,340。对于治疗性抗VEGF方法试验的综述，参见Campochiaro和Hackett,Oncogene 2003,22:6537-6548)。

大多数临床经验已利用A4.6.1获得，A4.6.1也称为贝伐单抗(bevacizumab)(Genentech,San Francisco,CA)。

在小鼠中的近期研究已显示，作为Tie2受体的配体的血管生成素2(Ang2)通过实现如VEGF的其它血管生成因子的功能来控制血管重塑。Ang2主要由内皮细胞表达，受缺氧和其它血管生成因子强烈诱导，并且已被证明调节肿瘤血管可塑性，允许血管对VEGF和FGF2作出反应(Augustin等,Nat Rev MolCell Biol.2009年3月；10(3):165-77)。与这种作用一致，Ang2的缺失或抑制导致血管生成减少(Falcón等,Am J Pathol.2009年11月；175(5):2159-70.)。已报道患有结肠直肠癌、NSCLC和黑素瘤的患者具有升高的Ang2血清浓度(Goede等,Br J Cancer.2010年10月26日；103(9):1407-14；Park等,Chest.2007年7月；132(1):200-6；Helfrich等,Clin Cancer Res.2009年2月15日；15(4):1384-92)。在CRC癌症中，Ang2血清水平与对抗VEGF疗法的治疗反应相关。

Ang-Tie系统由2种受体(Tie1和Tie2)和3种配体(Ang1、Ang2和Ang4)组成(Augustin等,Nat Rev Mol Cell Biol.2009年3月；10(3):165-77.)。Tie2、Ang1和Ang2是这个家族中研究最详尽的成员，Tie1是孤儿受体，并且Ang4对血管重塑的作用仍需要确定。Ang2和Ang1对Tie2结合和活化介导相反的功能。Ang2介导的Tie2活化导致内皮细胞活化、周皮细胞解离、血管渗漏以及诱导血管萌芽。与Ang2相反，Ang1信号传导通过周皮细胞的募集维持血管完整性，从而维持内皮细胞静止。

Ang2是Tie2受体酪氨酸激酶的分泌的66kDa配体(Augustin等,Nat RevMol Cell Biol.2009年3月；10(3):165-77)。Ang2由N-末端卷曲-螺旋结构域和C-末端纤维蛋白原样结构域组成，后者是Tie2相互作用所需的。Ang2主要由内皮细胞表达，并且受缺氧和包括VEGF的其它血管生成因子强烈诱导。Tie2见于内皮细胞、造血干细胞和肿瘤细胞上。已证明Ang2-Tie2调节肿瘤血管可塑性，允许血管对VEGF和FGF2作出反应。

在体外已显示Ang2在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中充当温和的有丝分裂原(mitogen)、化学趋化物(chemo-attractant)以及管形成的诱导物。Ang2诱导成纤维细胞中异位表达的Tie2的酪氨酸磷酸化，并且促进下游信号传导事件，如HUVEC中ERK-MAPK、AKT和FAK的磷酸化。已描述了Ang2在Ang1诱导的内皮细胞反应中的拮抗作用。

已显示Ang2缺乏导致小鼠中严重的淋巴模式化缺陷(lymphatic patterningdefect)。尽管Ang2的丧失对于胚胎血管发育来说不是必要的，但是Ang2缺陷型小鼠在视网膜和肾中具有持久的血管缺陷。结合血管生成部位(例如卵巢)处的Ang2表达的动态模式，这些发现表明Ang2通过实现如VEGF的其它血管生成因子的功能来控制血管重塑。

Ang2-Tie2系统在血管生成转换和肿瘤血管生成后期阶段期间发挥至关重要的作用。Ang2表达在肿瘤相关的内皮中强烈上调。已观察到当植入到Ang2缺陷型小鼠中，特别是在肿瘤生长的早期阶段期间植入时，肿瘤生长降低。以Ang2mAb治疗性阻断Ang2已在多种肿瘤异种移植物模型中显示出广泛的功效。

Notch信号传导途径对于细胞-细胞通信是重要的，所述途径涉及在胚胎发育期间和在成年生物体中控制多种细胞分化过程的基因调节机制。Notch信号传导在许多癌症中失调，例如在T细胞急性淋巴细胞白血病中和在实体肿瘤中(Sharma等2007,Cell Cycle 6(8):927–30；Shih等,Cancer Res.2007年3月1日；67(5):1879-82)。

Dll4(或Delta样4或delta样配体4)是Notch配体的Delta家族的一个成员。Dll4的细胞外结构域由N-末端结构域、Delta/Serrate/Lag-2(DSL)结构域以及一串八个表皮生长因子(EGF)样重复构成。总体上，认为EGF结构域包含氨基酸残基218-251(EGF-1；结构域1)、252-282(EGF-2；结构域2)、284-322(EGF-3；结构域3)、324-360(EGF-4；结构域4)以及362-400(EGF-5；结构域5)，其中DSL结构域在大致氨基酸残基173-217处，并且N-末端结构域在hDll4的大致氨基酸残基27-172处(WO 2008/076379)。

已报道，Dll4通过血管内皮，尤其在动脉内皮中展现高选择性表达(Shutter等(2000)Genes Develop.14:1313-1318)。在小鼠中的近期研究已显示，Dll4受VEGF诱导并且是限制血管萌芽和分枝的负反馈调节物。与这种作用一致，Dll4的缺失或抑制导致过度血管生成(Scehnet等,Blood.2007年6月1日；109(11):4753-60)。这种不受限制的血管生成由于非生产性血管系统的形成而反常地减缓肿瘤生长，即使在对抗VEGF疗法具有抗性的肿瘤中也是如此(Thurston等,Nat Rev Cancer.2007年5月；7(5):327-31；WO 2007/070671；Noguera-Troise等,Nature.2006年12月21日；444(7122))。此外，在多种肿瘤类型的异种移植物模型中，相较于单独的抗VEGF，VEGF和Dll4的组合抑制显示提供较优的抗肿瘤活性(Noguera-Troise等,Nature.2006年12月21日；444(7122):1032-7；Ridgway等,Nature.2006年12月21日；444(7122):1083-7)。

由于这些结果，Dll4被认为是癌症疗法的有希望的靶标，并且已描述处于临床(前)开发中的一些靶向Dll4的生物化合物：REGN-421(＝SAR153192；Regeneron,Sanofi-Aventis；WO2008076379)、OPM-21M18(OncoMed；Hoey等,Cell Stem Cell.2009年8月7日；5(2):168-77)和MEDI0639(MedImmuneLLC,AstraZeneca；Jenkins等,Mol Cancer Ther.2012年8月；11(8):1650-60)全人Dll4抗体；YW152F(Genentech)，一种人源化Dll4抗体(Ridgway等,Nature.2006年12月21日；444(7122):1083-7)；Dll4-Fc(Regeneron,Sanofi-Aventis)，一种由Dll4细胞外区和人IgG1的Fc区构成的重组融合蛋白(Noguera-Troise等,Nature.2006年12月21日；444(7122))。

但是，现有技术单克隆抗体(MAb)和融合蛋白鉴于它们的治疗应用而具有一些缺点：为防止它们降解，必须将它们储存在接近冰冻的温度下。此外，因为它们在肠内迅速消化，所以它们不适于口服施用。mAb用于癌症疗法的另一主要限制是肿瘤组织穿透不良，这导致低浓度和缺乏对肿瘤中所有细胞的靶向。本领域中现有技术抗体的最严重的缺点是它们受限的临床功效。

发明概述

当前可获得的抗血管生成疗法的缺点是受限的功效。因此本发明的一个目的为改进抗血管生成疗法。

本发明的另一目的是就对疗法的固有抗性或获得性抗性而言改进抗血管生成疗法。

本发明的另一目的是提供对患者耐受性良好的这类疗法。

本发明人已发现，包含双重抗Ang2/抗Dll4结合物和抗VEGF药剂的药物组合具有高于单独个别药剂的抗癌功效，其可用于人疗法中。

基于这个发现，本发明提供包含双重抗Ang2/抗Dll4结合物和抗VEGF药剂的新型药物组合，所述药物组合尤其适用于癌症和眼病的治疗。

根据本发明的组合的另一有益特征是，对疗法的抗性可通过若干冗余的血管生成信号转导途径介导。

在另一方面中，本发明还涉及用于与抗VEGF药剂组合治疗癌症的双重抗Ang2/抗Dll4结合物。

在另一方面中，本发明涉及一种治疗癌症的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的双重抗Ang2/抗Dll4结合物，并且还包括在施用所述双重抗Ang2/抗Dll4结合物之前或之后72小时内向同一患者施用治疗有效量的抗VEGF药剂。

附图简述

图1示出NCI-H1975肿瘤生长动力学。将携带NCI-H1975肿瘤的小鼠用贝伐单抗、BIBF 1120、BI-1、贝伐单抗与BI-1的组合、BIBF 1120与BI-1的组合或仅用媒介物治疗。随时间绘制中值肿瘤体积。第1天是实验的第一天，第14天是实验的最后一天。

图2示出第19天的绝对肿瘤体积。将携带NCI-H1975肿瘤的小鼠用贝伐单抗、BIBF 1120、BI-1、贝伐单抗与BI-1的组合、BIBF 1120与BI-1的组合或仅用媒介物治疗。在第14天绘制个别绝对肿瘤体积。每一符号表示个别肿瘤。水平线表示中值肿瘤体积。

图3示出体重随时间的变化。将携带NCI-H1975肿瘤的小鼠用贝伐单抗、BIBF 1120、BI-1、贝伐单抗与BI-1的组合、BIBF 1120与BI-1的组合或仅用媒介物治疗。随时间绘制体重的中值改变。第1天是实验的第一天，第14天是实验的最后一天。

图4示出CXF 243肿瘤生长动力学。将携带CXF 243肿瘤的小鼠用BI-1、BIBF 1120、BI-1与BIBF 1120的组合或仅用媒介物治疗。随时间绘制中值肿瘤体积。

图5示出LXFE 211肿瘤生长动力学。将携带LXFE 211肿瘤的小鼠用BI-1、贝伐单抗、BI-1与贝伐单抗的组合或仅用媒介物治疗。随时间绘制中值肿瘤体积。

图6示出LXFE 211肿瘤生长动力学。将携带LXFE 211肿瘤的小鼠用BI-1、BIBF 1120、BI-1与BIBF 1120的组合或仅用媒介物治疗。随时间绘制中值肿瘤体积。

图7示出LXFE 1422肿瘤生长动力学。将携带LXFE 1422肿瘤的小鼠用BI-1、贝伐单抗、BI-1与贝伐单抗的组合或仅用媒介物治疗。随时间绘制中值肿瘤体积。

图8示出LXFE 1422肿瘤生长动力学。将携带LXFE 1422肿瘤的小鼠用BI-1、BIBF 1120、BI-1与BIBF 1120的组合或仅用媒介物治疗。随时间绘制中值肿瘤体积。

图9示出MAXF 401肿瘤生长动力学。将携带MAXF 401肿瘤的小鼠用BI-1、贝伐单抗、BI-1与贝伐单抗的组合或仅用媒介物治疗。随时间绘制中值肿瘤体积。

图10示出MAXF 401肿瘤生长动力学。将携带MAXF 401肿瘤的小鼠用BI-1、BIBF 1120、BI-1与BIBF 1120的组合或仅用媒介物治疗。随时间绘制中值肿瘤体积。

图11示出OVXF 1353肿瘤生长动力学。将携带OVXF 1353肿瘤的小鼠用BI-1、BIBF 1120、BI-1与BIBF 1120的组合或仅用媒介物治疗。随时间绘制中值肿瘤体积。

图12示出PAXF 546肿瘤生长动力学。将携带PAXF 546肿瘤的小鼠用BI-1、贝伐单抗、BI-1与贝伐单抗的组合或仅用媒介物治疗。随时间绘制中值肿瘤体积。

图13示出PAXF 546肿瘤生长动力学。将携带PAXF 546肿瘤的小鼠用BI-1、BIBF 1120、BI-1与BIBF 1120的组合或仅用媒介物治疗。随时间绘制中值肿瘤体积。

图14示出RXF 1220肿瘤生长动力学。将携带RXF 1220肿瘤的小鼠用BI-1、舒尼替尼(Sunitinib)、BI-1与舒尼替尼的组合或仅用媒介物治疗。随时间绘制中值肿瘤体积。

发明详述

如本文所用的“药物组合”是指两种或更多种不同的药物活性物质，所述物质旨在当一起向患者应用时在所述患者中产生特定的治疗效果，即在本发明的情形下是一种或多种双重抗Ang2/抗Dll4结合物和一种或多种抗VEGF药剂。本文中“一起应用”意味着随后应用或同时应用。

在一个实施方案中，双重抗Ang2/抗Dll4结合物有待在抗VEGF药剂的施用之前6个月与1周之间的任何时间点施用。在优选实施方案中，双重抗Ang2/抗Dll4结合物有待在抗VEGF药剂的施用之前3个月与1周、6周与1周、1个月与1周、3周与1周以及2周与1周之间的任何时间点施用。在一个实施方案中，双重抗Ang2/抗Dll4结合物有待在抗VEGF药剂的施用之前1周与0天之间的任何时间点施用。

当然，抗VEGF药剂在双重抗Ang2/抗Dll4结合物之前施用也在本发明的范围内。因此，前述实施方案加以必要的改动适用于本替代实施方案。

与抗VEGF药剂同时施用双重抗Ang2/抗Dll4结合物意味着将两种药物同时施用。这可通过使双重抗Ang2/抗Dll4结合物和抗VEGF药剂存在于一个剂量、小瓶、袋子、容器、注射器等中实现。

随后施用双重抗Ang2/抗Dll4结合物和抗VEGF药剂意味着抗VEGF药剂在双重抗Ang2/抗Dll4结合物之后不久施用或反之亦然。不久包括1分钟、2分钟、3分钟、4分钟、5分钟、10分钟、20分钟、30分钟、45分钟、60分钟、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、12小时、14小时、16小时、18小时、20小时、22小时或24小时。

本文中“患者”是指哺乳动物，尤其指人。

如本文所用的“双重抗Ang2/抗Dll4结合物”是指能够抑制Ang2和Dll4的促血管生成活性至少80％的任何基于肽的分子。合适的双重抗Ang2/抗Dll4结合物优选包含Ang2和Dll4中每一个的单独的结合区。合适的双重抗Ang2/抗Dll4结合物可由本领域中已知的任何双特异性结合分子形成，例如交联Fab、交联scFv、双特异性IgG、crossmab、Fcab、zybody、替代抗体(surrobody)、单轻链(sLC)抗体、DART、结构域抗体(dAb)、DARPin。在一个具体实施方案中，双重抗Ang2/抗Dll4结合物是在优选实施方案中，双重抗Ang2/抗Dll4结合物具有用于延长它们在身体中的半衰期的装备(means)。用于这个目的的合适装备是例如与双重抗Ang2/抗Dll4结合物融合的人Fc区或血清白蛋白分子。本文中优选的其它合适装备是由双重抗Ang2/抗Dll4结合物所包含的另外结合区，这些区与血清白蛋白结合。尤其优选的是与人白蛋白-11(Alb11)结合的这类另外结合区。合适的双重抗Ang2/抗Dll4结合物可见于共同待审的PCT申请PCT/EP2012/055897中。在本发明的优选实施方案中，双重抗Ang2/抗Dll4结合物选自根据SeqID No:1-20中任一个的结合分子。

“BI-1”是根据SeqID No:14的双重抗Ang2/抗Dll4结合物。

如本文所用的“抗VEGF药剂”包括所有药学上可接受的分子，这些分子抑制至少VEGF-A的促血管生成活性，优选还抑制VEGF-B和/或VEGF-C和/或VEGF-D的促血管生成活性。尤其优选的抗VEGF药剂是贝伐单抗、哌加他尼(pegaptanib)、雷珠单抗(ranibizumab)、阿柏西普(aflibercept)以及PRS-050。

在一个优选实施方案中，本文的药物组合包含选自贝伐单抗、哌加他尼、雷珠单抗、阿柏西普以及PRS-050的一种或多种抗VEGF药剂和选自SeqIDNo:1-20的一种或多种双重抗Ang2/抗Dll4结合物。

在另一优选实施方案中，本文的药物组合包含根据SeqID No:14的双重抗Ang2/抗Dll4结合物和贝伐单抗。

在另一优选实施方案中，本文的药物组合包含根据SeqID No:15的双重抗Ang2/抗Dll4结合物和贝伐单抗。

在另一优选实施方案中，本文的药物组合包含根据SeqID No:16的双重抗Ang2/抗Dll4结合物和贝伐单抗。

在另一优选实施方案中，本文的药物组合包含根据SeqID No:17的双重抗Ang2/抗Dll4结合物和贝伐单抗。

在另一优选实施方案中，本文的药物组合包含根据SeqID No:18的双重抗Ang2/抗Dll4结合物和贝伐单抗。

如本文所用的“癌症”通常是指所有恶性肿瘤性疾病。例如，以下癌症可用根据本发明的组合来治疗，但不受限于此：

脑肿瘤，例如像听神经鞘瘤、星形细胞瘤(如毛细胞型星形细胞瘤、纤维型星形细胞瘤、原浆型星形细胞瘤、肥胖型星形细胞瘤、间变性星形细胞瘤以及成胶质细胞瘤)、脑淋巴瘤、脑转移、垂体肿瘤(如催乳素瘤、HGH(人生长激素)产生肿瘤和ACTH(促肾上腺皮质激素)产生肿瘤)、颅咽管瘤、髓母细胞瘤、脑膜瘤和少突胶质细胞瘤；神经肿瘤(赘生物)，例如像植物神经系统的肿瘤(如成交感神经细胞瘤(neuroblastoma sympathicum)、神经节瘤、副神经节瘤(嗜铬细胞瘤(pheochromocytoma)、嗜铬性细胞瘤(chromaffinoma))和颈动脉球肿瘤(glomus-caroticum tumour)、外周神经系统上的肿瘤(如截肢性神经瘤、神经纤维瘤、神经鞘瘤(神经鞘膜瘤(neurilemmoma)、许旺氏细胞瘤(Schwannoma))和恶性许旺氏细胞瘤；骨髓肿瘤；肠癌，例如像直肠和结肠的癌瘤以及小肠和十二指肠的肿瘤；食管癌或食管的癌症，如鳞状细胞癌瘤、巴勒特(Barret’s)食管腺癌、腺样囊性癌瘤、小细胞癌瘤和淋巴瘤；眼睑肿瘤，如基底细胞瘤或基底细胞癌瘤；胰腺癌或胰腺癌瘤，如胰腺的导管细胞腺癌、腺泡细胞癌瘤、胰岛细胞癌瘤、淋巴瘤和肉瘤；膀胱癌或膀胱的癌瘤，如浅表性和浸润性移行细胞癌瘤、鳞状细胞癌瘤和腺癌；肺癌(支气管癌瘤)，例如像小细胞支气管癌瘤(燕麦细胞癌瘤)和非小细胞支气管癌瘤(NSCLC)如鳞状细胞癌瘤、腺癌和大细胞支气管癌瘤；乳癌，例如像乳腺癌瘤，如原位和浸润性导管癌瘤、胶样癌瘤、小叶侵袭性癌瘤、管状瘤癌、腺样囊性癌瘤和乳头状瘤癌；非霍奇金氏淋巴瘤(non-Hodgkin′s lymphoma)(NHL)，例如像伯基特氏淋巴瘤(Burkitt′slymphoma)、低度恶性非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)和蕈样肉芽肿；子宫癌或子宫内膜癌瘤或子宫体癌瘤；CUP综合征(未知原发性癌症)；卵巢癌或卵巢癌瘤，如粘液性癌、子宫内膜样癌和浆液性癌；胆囊癌；胆管癌，例如像Klatskin肿瘤；睾丸癌，例如像精原细胞瘤和非精原细胞瘤；淋巴瘤(淋巴肉瘤)，例如像恶性淋巴瘤、霍奇金氏病、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)如慢性淋巴性白血病、白血病网状内皮组织增殖、免疫细胞瘤、浆细胞瘤(多发性骨髓瘤)、免疫母细胞瘤、伯基特氏淋巴瘤、T-区蕈样肉芽肿、大细胞间变性淋巴母细胞瘤和淋巴母细胞瘤；喉癌，例如像声带肿瘤、声门上型喉肿瘤、声门型喉肿瘤和声门下型喉肿瘤；骨癌，例如像骨软骨瘤、软骨瘤、成软骨细胞瘤、软骨粘液样纤维瘤、骨瘤、骨样骨瘤、成骨细胞瘤、嗜酸性细胞肉芽肿、巨细胞肿瘤、软骨肉瘤、骨肉瘤、尤文氏肉瘤(Ewing′s sarcoma)、网状细胞肉瘤、浆细胞瘤、纤维性结构异常、幼年骨囊肿和动脉瘤样骨囊肿；头部和颈部肿瘤，例如像唇部肿瘤、舌部肿瘤、口底肿瘤、口腔肿瘤、齿龈肿瘤、上颚肿瘤、唾液腺肿瘤、咽喉肿瘤、鼻腔肿瘤、鼻旁窦肿瘤、喉肿瘤和中耳肿瘤；肝癌，例如像肝部细胞癌瘤或肝细胞癌瘤(HCC)；白血病，例如像急性白血病，如急性淋巴性/淋巴母细胞性白血病(ALL)、急性髓性白血病(AML)；慢性白血病，如慢性淋巴性白血病(CLL)、慢性髓性白血病(CML)；胃癌或胃癌瘤，例如像乳头状腺癌、管状腺癌和粘液腺癌、印戒细胞癌瘤(signet ring cell carcinoma)、腺鳞癌、小细胞癌瘤和未分化癌瘤；黑素瘤，例如像浅表扩散性黑素瘤、结节性黑素瘤、恶性雀斑样痣黑素瘤和肢端雀斑样痣性黑素瘤；肾癌，例如像肾细胞癌瘤，例如像透明细胞肾细胞癌瘤或肾上腺样瘤或格拉维次氏肿瘤(Grawitz′s tumour)、乳头状癌瘤和嗜酸性细胞瘤；食管癌或食管癌瘤；阴茎癌；前列腺癌；喉癌或咽部癌瘤，例如像鼻咽的鳞状细胞癌瘤(鼻咽癌瘤)、口咽癌(口咽癌瘤)和下咽部癌瘤；视网膜母细胞瘤、阴道癌或阴道癌瘤和外阴癌，包括鳞状细胞癌瘤、腺癌和原位癌瘤；恶性黑素瘤和肉瘤；甲状腺癌瘤，例如像乳头状癌瘤、滤泡性癌瘤和甲状腺髓样癌瘤，以及间变性瘤癌；皮肤的棘细胞癌(spinalioma)、表皮状癌瘤和基底细胞癌瘤；胸腺瘤；尿道癌，包括原位和浸润性移行细胞癌。

与抗肿瘤剂的组合

在本发明的优选实施方案中，本文中的药物组合还包含一种或多种“抗肿瘤剂”，所述术语在本文中用于指代在组织、系统、动物、哺乳动物、人或其它受试者中产生抗肿瘤效果的物质。具体地说，在抗肿瘤疗法中，设想与其它化学治疗剂、激素药剂、抗体药剂的组合疗法以及不同于上文所提及的那些的外科手术和/或辐射治疗。根据本发明的组合疗法因此包括双重抗Ang2/抗Dll4结合物和抗VEGF药剂的施用，以及包括其它抗肿瘤剂的其它治疗剂的任选使用。这种药剂的组合可在一起施用或分开施用，并且当分开施用时，施用可同时发生或以任何顺序、在时间上接近和时间上远隔地顺次发生。

取决于待治疗的病症，本发明的本文药物组合可单独使用或与一种或多种抗肿瘤剂组合使用，所述抗肿瘤剂尤其选自DNA损伤剂、DNA脱甲基化剂或微管蛋白结合剂或抑制血管生成、信号转导途径或癌细胞中有丝分裂检查点或具有免疫调节功能(IMID)的治疗活性化合物。

抗肿瘤剂可与本文的药物组合同时施用(任选地作为同一药物组合物的组分)或在本文的药物组合施用之前或之后施用。

在某些实施方案中，抗肿瘤剂可以是但不限于选自以下的组的一种或多种抑制剂：EGFR家族抑制剂、VEGFR家族抑制剂、IGF-1R抑制剂、胰岛素受体抑制剂、AuroraA抑制剂、AuroraB抑制剂、PLK激酶和PI3激酶抑制剂、FGFR抑制剂、PDGFR抑制剂、Raf抑制剂、KSP抑制剂或PDK1抑制剂。

抗肿瘤剂的另外实例是：CDK抑制剂、Akt抑制剂、Src抑制剂、Bcr-Abl抑制剂、cKit抑制剂、cMet/HGF抑制剂、Her2抑制剂、Her3抑制剂、c-Myc抑制剂、Flt3抑制剂、HSP90抑制剂、刺猬(hedgehog)拮抗剂、JAK/STAT抑制剂、Mek抑制剂、mTor抑制剂、NFκB抑制剂、蛋白酶体抑制剂、Rho抑制剂、Wnt信号传导或Notch信号传导的抑制剂或遍在蛋白化途径抑制剂。

抗肿瘤剂的另外实例是：DNA聚合酶抑制剂、拓扑异构酶II抑制剂、多酪氨酸激酶抑制剂、CXCR4拮抗剂、IL3RA抑制剂、RAR拮抗剂、KIR抑制剂、免疫治疗性疫苗、TUB抑制剂、Hsp70诱导剂、IAP家族抑制剂、DNA甲基转移酶抑制剂、TNF抑制剂、ErbB1受体酪氨酸激酶抑制剂、多激酶抑制剂、JAK2抑制剂、RR抑制剂、细胞凋亡诱导剂、HGPRTase抑制剂、组胺H2受体拮抗剂以及CD25受体激动剂。

Aurora抑制剂的实例是但不限于：PHA-739358、AZD-1152、AT-9283、CYC-116、R-763、VX-667、MLN-8045、PF-3814735、SNS-314、VX-689、GSK-1070916、TTP-607、PHA-680626、MLN-8237、BI847325以及ENMD-2076。

PLK抑制剂的实例是GSK-461364、BI2536以及BI6727。

raf抑制剂的实例是BAY-73-4506(也是VEGFR抑制剂)、PLX-4032、RAF-265(也是VEGFR抑制剂)、索拉非尼(也是VEGFR抑制剂)、XL-281、Nevavar(也是VEGFR抑制剂)以及PLX4032。

KSP抑制剂的实例是伊斯平斯(ispinesib)、ARRY-520、AZD-4877、CK-1122697、GSK-246053A、GSK-923295、MK-0731、SB-743921、LY-2523355以及EMD-534085。

src和/或bcr-abl抑制剂的实例是达沙替尼(dasatinib)、AZD-0530、伯舒替尼(bosutinib)、XL-228(也是IGF-1R抑制剂)、尼洛替尼(nilotinib)(也是PDGFR和cKit抑制剂)、伊马替尼(imatinib)(也是cKit抑制剂)、NS-187、KX2-391、AP-24534(也是EGFR、FGFR、Tie2、Flt3的抑制剂)、KM-80以及LS-104(也是Flt3、Jak2的抑制剂)。

PDK1抑制剂的一个实例是AR-12。

Rho抑制剂的一个实例是BA-210。

PI3激酶抑制剂的实例是PX-866、PX-867、BEZ-235(也是mTor抑制剂)、XL-147以及XL-765(也是mTor抑制剂)、BGT-226、CDC-0941。

cMet或HGF抑制剂的实例是XL-184(也是VEGFR、cKit、Flt3的抑制剂)、PF-2341066、MK-2461、XL-880(也是VEGFR抑制剂)、MGCD-265(也是VEGFR、Ron、Tie2的抑制剂)、SU-11274、PHA-665752、AMG-102、AV-299、ARQ-197、MetMAb、CGEN-241、BMS-777607、JNJ-38877605、PF-4217903、SGX-126、CEP-17940、AMG-458、INCB-028060以及E-7050。

Notch途径抑制剂的一个实例是MEGF0444A。

c-Myc抑制剂的一个实例是CX-3543。

Flt3抑制剂的实例是AC-220(也是cKit和PDGFR的抑制剂)、KW-2449、LS-104(也是bcr-abl和Jak2的抑制剂)、MC-2002、SB-1317、来他替尼(lestaurtinib)(也是VEGFR、PDGFR、PKC的抑制剂)、TG-101348(也是JAK2抑制剂)、XL-999(也是cKit、FGFR、PDGFR和VEGFR的抑制剂)、舒尼替尼(也是PDGFR、VEGFR和cKit的抑制剂)以及坦度替尼(tandutinib)(也是PDGFR和cKit的抑制剂)。

HSP90抑制剂的实例是坦螺旋霉素(tanespimycin)、阿螺旋霉素(alvespimycin)、IPI-504、STA-9090、MEDI-561、AUY-922、CNF-2024以及SNX-5422。

JAK/STAT抑制剂的实例是CYT-997(也与微管蛋白相互作用)、TG-101348(也是Flt3抑制剂)以及XL-019。

Mek抑制剂的实例是ARRY-142886、AS-703026、PD-325901、AZD-8330、ARRY-704、RDEA-119以及XL-518。

mTor抑制剂的实例是西罗莫司(temsirolimus)、德罗莫司(deforolimus)(也充当VEGF抑制剂)、依维莫司(everolimus)(也是VEGF抑制剂)、XL-765(也是PI3激酶抑制剂)以及BEZ-235(也是PI3激酶抑制剂)。

Akt抑制剂的实例是哌立福新(perifosine)、GSK-690693、RX-0201以及曲西立滨(triciribine)。

cKit抑制剂的实例是马赛替尼(masitinib)、OSI-930(也充当VEGFR抑制剂)、AC-220(也是Flt3和PDGFR的抑制剂)、坦度替尼(也是Flt3和PDGFR的抑制剂)、阿西替尼(也是VEGFR和PDGFR的抑制剂)、舒尼替尼(也是Flt3、PDGFR、VEGFR的抑制剂)以及XL-820(也充当VEGFR-和PDGFR抑制剂)、伊马替尼(也是bcr-abl抑制剂)、尼洛替尼(也是bcr-abl和PDGFR的抑制剂)。

刺猬拮抗剂的实例是IPI-609、CUR-61414、GDC-0449、IPI-926以及XL-139。

CDK抑制剂的实例是赛立西尼(seliciclib)、AT-7519、P-276、ZK-CDK(也抑制VEGFR2和PDGFR)、PD-332991、R-547、SNS-032、PHA-690509、PHA-848125以及SCH-727965。

蛋白酶体抑制剂的实例是硼替佐米(bortezomib)、卡非佐米(carfilzomib)以及NPI-0052(也是NFκB抑制剂)。

蛋白酶体抑制剂/NFκB途径抑制剂的实例是硼替佐米、卡非佐米、NPI-0052、CEP-18770、MLN-2238、PR-047、PR-957、AVE-8680以及SPC-839。

遍在蛋白化途径抑制剂的一个实例是HBX-41108。

脱甲基化剂的实例是5-氮杂胞苷和地西他滨(decitabine)。

抗血管生成剂的实例是FGFR抑制剂、PDGFR抑制剂和VEGFR抑制剂以及沙利度胺(thalidomide)，这些药剂选自但不限于：奥拉木单抗(olaratumab)、哌啶他尼、莫特沙尼(motesanib)、CDP-791、SU-14813、替拉替尼(telatinib)、KRN-951、ZK-CDK(也是CDK抑制剂)、ABT-869、BMS-690514、RAF-265、IMC-KDR、IMC-18F1、IMiD、沙利度胺、CC-4047、来那度胺(lenalidomide)、ENMD-0995、IMC-D11、Ki-23057、博瑞拉尼(brivanib)、西地尼布(cediranib)、1B3、CP-868596、IMC-3G3、R-1530(也是Flt3抑制剂)、舒尼替尼(也是cKit和Flt3的抑制剂)、阿西替尼(也是cKit抑制剂)、来他替尼(也是Flt3和PKC的抑制剂)、瓦他拉尼(vatalanib)、坦度替尼(也是Flt3和cKit的抑制剂)、帕唑帕尼(pazopanib)、PF-337210、E-7080、CHIR-258、索拉非尼甲苯磺酸盐(也是Raf抑制剂)、凡德他尼(vandetanib)、CP-547632、OSI-930、AEE-788(也是EGFR和Her2的抑制剂)、BAY-57-9352(也是Raf抑制剂)、BAY-73-4506(也是Raf抑制剂)、XL-880(也是cMet抑制剂)、XL-647(也是EGFR和EphB4的抑制剂)、XL-820(也是cKit抑制剂)、尼洛替尼(也是cKit和brc-abl的抑制剂)、CYT-116、PTC-299、BMS-584622、CEP-11981、多韦替尼(dovitinib)、CY-2401401、ENMD-2976、雷莫芦单抗、哌啶他尼以及BIBF1120。

抗肿瘤剂还可选自EGFR抑制剂，它可以是小分子EGFR抑制剂或抗EGFR抗体。抗EGFR抗体的实例是但不限于：西妥昔单抗(cetuximab)、帕尼单抗(panitumumab)、尼妥珠单抗(nimotuzumab)、扎芦木单抗(zalutumumab)；小分子EGFR抑制剂的实例是吉非替尼(gefitinib)、埃罗替尼(erlotinib)、凡德他尼(vandetanib)(也是VEGFR抑制剂)以及阿法替尼(afatinib)(也是Her2抑制剂)。EGFR调节剂的另一实例是EGF融合毒素。

适用于与本发明的本文药物组合组合的另外EGFR和/或Her2抑制剂是拉帕替尼(lapatinib)、曲妥珠单抗(trastuzumab)、帕妥珠单抗(pertuzumab)、XL-647、来那替尼(neratinib)、BMS-599626ARRY-334543、AV-412、mAB-806、BMS-690514、JNJ-26483327、AEE-788(也是VEGFR抑制剂)、AZD-8931、ARRY-380ARRY-333786、IMC-11F8、Zemab、TAK-285、AZD-4769以及阿法替尼(Her2和EGFR的双重抑制剂)。

适用于与本文药物组合组合的DNA聚合酶抑制剂是Ara-C/阿糖胞苷、克罗拉(Clolar)/氯法拉滨(clofarabine)。

适用于与本文药物组合组合的DNA甲基转移酶抑制剂是维达扎(Vidaza)/阿扎胞苷(azacitidine)。

适用于与本文药物组合组合的细胞凋亡诱导剂是萃克森(Trisenox)/三氧化二砷。

适用于与本文药物组合组合的拓扑异构酶II抑制剂是伊达比星(idarubicin)、柔红霉素(daunorubicin)以及米托蒽醌(mitoxantrone)。

适用于与本文药物组合组合的RAR拮抗剂是Vesanoid/维甲酸。

适用于与本文药物组合组合的HGPRTase抑制剂是Mercapto/巯基嘌呤。

适用于与本文药物组合组合的组胺H2受体拮抗剂是Ceplene/二盐酸组胺。

适用于与本文药物组合组合的CD25受体激动剂是IL-2。

抗肿瘤剂还可选自靶向IGF-1R和胰岛素受体途径的药剂。这类药剂包括与IGF-1R结合的抗体(例如CP-751871、AMG-479、IMC-A12、MK-0646、AVE-1642、R-1507、BIIB-022、SCH-717454、rhu Mab IGFR)以及靶向IGF1-R的激酶结构域的新型化学实体(例如OSI-906或BMS-554417、XL-228、BMS-754807)。

可在疗法中有利地与本发明的本文药物组合组合的其它抗肿瘤剂是靶向CD20的分子，包括CD20特异性抗体如利妥昔单抗(rituximab)、LY-2469298、欧瑞立单抗(ocrelizumab)、MEDI-552、IMMU-106、GA-101(＝R7159)、XmAb-0367、奥法木单抗(ofatumumab)，放射性标记的CD20抗体如托西莫单抗(tositumumab)和替坦异贝莫单抗(ibritumomab tiuxetan)或其它CD20定向蛋白如SMIP Tru015、PRO-131921、FBT-A05、维尔托佐单抗(veltuzumab)、R-7159。

本文药物组合可与在白细胞上表达的其它表面抗原的抑制剂组合，尤其是抗体或抗体样分子，例如抗CD2(西利珠单抗(siplizumab))、抗CD4(扎木单抗(zanolimumab))、抗CD19(MT-103、MDX-1342、SAR-3419、XmAb-5574)、抗CD22(依帕珠单抗(epratuzumab))、抗CD23(鲁昔单抗(lumiliximab))、抗CD30(伊妥木单抗(iratumumab))、抗CD32B(MGA-321)、抗CD38(HuMax-CD38)、抗CD40(SGN40)、抗CD52(阿伦单抗(alemtuzumab))、抗CD80(加利昔单抗(galiximab))。

与本文药物组合组合的其它药剂是免疫毒素如BL-22(抗CD22免疫毒素)、伊珠单抗奥唑米星(inotuzumab ozogamicin)(抗CD23抗体-加利车霉素(calicheamicin)缀合物)、RFT5.dgA(抗CD25蓖麻毒蛋白毒素A链)、SGN-35(抗CD30-奥瑞斯他汀(auristatin)E缀合物)以及吉妥珠单抗奥唑米星(gemtuzumab ozogamicin)(抗CD33加利车霉素缀合物)、MDX-1411(抗CD70缀合物)或放射性标记的抗体如⁹⁰Y-依帕珠单抗(抗CD22放射免疫缀合物)。

此外，本文药物组合可与诱导细胞凋亡或修改信号转导途径的免疫调节剂、药剂，例如抗体组合，如TRAIL受体调节剂马帕木单抗(mapatumumab)(TRAIL-1受体激动剂)、来沙木单抗(lexatumumab)(TRAIL-2受体激动剂)、替加珠单抗(tigatuzumab)、Apomab、AMG-951和AMG-655；抗HLA-DR抗体(如1D09C3)、抗CD74、破骨细胞分化因子配体抑制剂(如德诺单抗(denosumab))、BAFF拮抗剂(如AMG-623a)或Toll样受体激动剂(例如TLR-4或TLR-9)。

可与本发明的本文药物组合组合使用的其它抗肿瘤剂选自但不限于：激素、激素类似物和抗激素(例如他莫昔芬(tamoxifen)、托瑞米芬(toremifene)、雷洛昔芬(raloxifene)、氟维司群(fulvestrant)、乙酸甲地孕酮(megestrol acetate)、氟他胺(flutamide)、尼鲁米特(nilutamide)、比卡鲁胺(bicalutamide)、乙酸环丙孕酮(cyproterone acetate)、非那雄胺(finasteride)、乙酸布舍瑞林(buserelinacetate)、氟氢可的松(fludrocortinsone)、氟甲睾酮(fluoxymesterone)、甲羟孕酮(medroxyprogesterone)、己酸羟孕酮(hydroxyprogesterone caproate)、己烯雌酚(diethylstilbestrol)、丙酸睾酮(testosterone propionate)、氟羟甲睾酮(fluoxymesterone)/等效物、奥曲肽(octreotide)、阿佐昔芬(arzoxifene)、帕瑞肽(pasireotide)、伐普肽(vapreotide)、肾上腺皮质类固醇(adrenocorticosteroid)/拮抗剂、强的松、地塞米松、氨鲁米特(ainoglutethimide))、芳香酶抑制剂(例如阿纳托唑(anastrozole)、来曲唑(letrozole)、利阿唑(liarozole)、依西美坦(exemestane)、阿他美坦(atamestane)、福美司坦(formestane))、LHRH激动剂和拮抗剂(例如乙酸戈舍瑞林(goserelin acetate)、亮丙瑞林(leuprolide)、阿巴瑞克(abarelix)、西曲瑞克(cetrorelix)、地洛瑞林(deslorelin)、组胺瑞林(histrelin)、曲普瑞林(triptorelin))、抗代谢物(例如抗叶酸剂如氨甲喋呤(methotrexate)、三甲曲沙(trimetrexate)、培美曲塞(pemetrexed)、嘧啶类似物如5-氟尿嘧啶、氟脱氧尿苷、卡培他滨(capecitabine)、地西他滨、奈拉滨(nelarabine)、5-氮杂胞苷和吉西他滨(gemcitabine)、嘌呤和腺苷类似物如巯基嘌呤、硫鸟嘌呤、硫唑嘌呤、克拉屈滨(cladribine)和喷司他丁(pentostatin)、阿糖胞苷(cytarabine)、氟达拉滨(fludarabine)、氯法拉滨)；抗肿瘤抗生素(例如蒽环霉素(anthracycline)如多柔比星(doxorubicin)、柔红霉素、表柔比星和伊达比星、丝裂霉素-C、博来霉素(bleomycin)、更生霉素(dactinomycin)、普卡霉素(plicamycin)、丝普卡霉素(splicamycin)、放线菌素D(actimomycin D)、米托蒽醌、米托蒽醌伊达比星(mitoxantroneidarubicin)、匹克生琼(pixantrone)、链佐星(streptozocin)、阿非迪霉素(aphidicolin))；铂衍生物(例如顺铂、奥沙利铂(oxaliplatin)、卡铂(carboplatin)、洛铂(lobaplatin)、沙铂(satraplatin))；烷基化剂(例如雌莫司汀(estramustine)、司莫司汀(semustine)、氮芥(mechlorethamine)、美法仑、苯丁酸氮芥、白消安、达卡巴嗪、环磷酰胺、异环磷酰胺(ifosfamide)、羟基脲、替莫唑胺(temozolomide)；亚硝基脲如卡莫司汀(carmustine)和洛莫司汀(lomustine)、塞替派(thiotepa))；抗有丝分裂剂(例如长春花生物碱如长春碱、长春地辛(vindesine)、长春瑞宾(vinorelbine)、长春氟宁(vinflunine)和长春新碱(vincristine)；和紫杉烷如紫杉醇、多西他赛(docetaxel)及其制剂、拉洛他赛(larotaxel)；司莫紫杉醇(simotaxel)和埃坡霉素(epothilone)如伊沙匹隆(ixabepilone)、帕妥匹隆(patupilone)、ZK-EPO)；拓扑异构酶抑制剂(例如表鬼臼毒素(epipodophyllotoxin)如依托泊苷(etoposide)和凡毕复(etopophos)、替尼泊苷(teniposide)、安吖啶(amsacrine)、拓朴替康(topotecan)、伊立替康(irinotecan)、巴诺蒽醌(banoxantrone)、喜树碱)和各种化学治疗剂如视黄酸衍生物、氨磷汀(amifostine)、阿那格雷(anagrelide)、干扰素α、干扰素β、干扰素γ、白介素-2、丙卡巴肼(procarbazine)、N-甲基肼、米托坦(mitotane)和普非莫(porfimer)、贝沙罗汀(bexarotene)、塞利克西(celecoxib)、乙烯亚胺(ethylenemine)/甲基-蜜胺、三亚乙基蜜胺(thriethyienemelamine)、三亚乙基硫代磷酰胺、六甲蜜胺和酶L-天冬酰胺酶、L-精氨酸酶和甲硝哒唑、米索硝唑、去甲基醇醚硝唑、哌莫硝唑、依他硝唑、尼莫唑、RSU 1069、EO9、RB 6145、SR4233、尼克酰胺(nicotinamide)、5-溴脱氧尿苷、5-碘脱氧尿苷、溴脱氧胞苷、赤式羟基壬基腺嘌呤(erythrohydroxynonyl-adenine)、蒽二酮(anthracenedione)、GRN-163L(竞争性端粒酶模板拮抗剂)、SDX-101(PPAR激动剂)、他来博斯塔(talabostat)(DPP抑制剂)、呋咯地辛(forodesine)(PNP抑制剂)、阿塞西普(atacicept)(靶向TNF家族成员BLyS和APRIL的可溶性受体)、TNF-α中和剂(Enbrel、Humira、Remicade)、XL-844(CHK1/2抑制剂)、VNP-40101M(DNA烷基化剂)、SPC-2996(反义bcl2抑制剂)、奥巴克拉(obatoclax)(bcl2抑制剂)、恩扎妥林(enzastaurin)(PKCβ调节剂)、沃瑞塞特(vorinistat)(HDAC抑制剂)、罗米地辛(romidepsin)(HDAC抑制剂)、AT-101(Bcl-2/Bcl-xL抑制剂)、普利肽新(plitidepsin)(多作用缩酚肽)、SL-11047(多胺代谢调节剂)。

本发明的本文药物组合还可与其它疗法组合使用，所述疗法包括外科手术、干细胞移植、放射疗法、内分泌疗法、生物应答修饰剂、高热和冷冻疗法、以及减轻任何副作用的药剂(例如止吐药)、G-CSF、GM-CSF、光敏剂(如血卟啉衍生物、光敏素(Photofrin)、苯并卟啉衍生物、Npe6、初卟啉锡、苯博瑞德-a(pheoboride-a)、细菌叶绿素-a(bacteriochlorophyll-a)、萘酞菁、酞菁、锌酞菁)。

药物组合物和施用方法

如本文所使用的“药物组合物”是指使本文药物组合可向患者施用的装置。这意味着将作为药物组合物的活性成分的药物组合与一种或多种药学上可接受的稀释剂和任选另外药学上可接受的药剂混合。本文药物组合物可以呈允许药物组合物向患者施用的任何形式。例如，药物组合物可以呈固体或液体形式。优选的应用方式是通过输注或注射(静脉内、肌内、皮下、腹膜内、皮内)的胃肠外应用，但如通过吸入、经皮、鼻内、经颊、口服以及肿瘤内的其它应用方式也是可适用的。胃肠外施用包括皮下注射、静脉内注射、肌内注射、胸骨内注射或输注技术。一方面，将药物组合物胃肠外施用。另一方面，将药物组合物静脉内施用。

可以配制药物组合物，以便允许化合物在向患者施用药物组合物之后是生物可利用的。药物组合物可采用一个或多个剂量单位的形式，其中例如以气溶胶形式的化合物的容器可容纳多个剂量单位。

制备药物组合物所用的材料可在所用的量下是无毒的。对于本领域一般技术人员来说明显的是，药物组合物中活性成分的最佳剂量将取决于多种因素。相关因素包括但不限于：患者的类型(例如，人)、活性成分的具体形式(即双重抗Ang2/抗Dll4结合物和抗VEGF药剂、任选地抗肿瘤剂)、施用方式以及所采用的药物组合物。

药学上可接受的载体或媒介物可以是颗粒，以使得药物组合物呈例如粉末形式。载体可以是液体，其中药物组合物是例如可注射的液体。药物组合物可以呈液体形式，例如用于胃肠外注射。在用于通过注射施用的药物组合物中，表面活性剂、防腐剂、润湿剂、分散剂、悬浮剂、缓冲剂、稳定剂以及等渗剂中的一种或多种也可包括在内。

不管液体药物组合物是溶液、混悬液或是其它类似形式，它们还可包含以下中的一种或多种：无菌稀释剂，如注射用水、盐水溶液(优选是生理盐水)、林格氏溶液(Ringer's solution)、等渗氯化钠、不挥发油(如可以用作溶剂或悬浮介质的合成甘油一酯或甘油二酯、聚乙二醇、甘油、环糊精、丙二醇或其它溶剂)；稳定剂，如氨基酸；表面活性剂，如聚山梨醇酯；抗细菌剂，如苯甲醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂，如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂，如乙二胺四乙酸；缓冲剂，如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐；以及用于调节张力的试剂，如氯化钠或右旋糖。胃肠外药物组合物可包封在安瓿、一次性注射器或由玻璃、塑料或其它材料制成的多剂量小瓶内。生理盐水是示例性佐剂。可注射的药物组合物优选是无菌的。

本文药物组合物还可以被干燥(冷冻干燥、喷雾干燥、喷雾冷冻干燥、由临界或超临界气体干燥、真空干燥、空气干燥)、沉淀或结晶或包埋在微胶囊中，所述微胶囊例如通过凝聚技术或通过使用例如羟甲基纤维素或明胶和聚-(甲基丙烯酸甲酯)的界面聚合，分别在胶态药物递送系统(例如脂质体、白蛋白微球、微乳液、纳米颗粒和纳米胶囊)中、在粗乳液中制备或例如通过pcmc技术(蛋白质包衣微晶(protein coated microcrystal))沉淀或固定到载体或表面上。这类技术公开于Remington:The Science and Practice of Pharmacy第21版，Hendrickson R.编写。

抗VEGF药剂的一个实例是贝伐单抗，贝伐单抗在许多国家中以商标名销售。可呈用于静脉内或动脉内应用的任何制剂的形式用于本发明的目的。

双重抗Ang2/抗Dll4结合物通常被配制成输注溶液用于静脉内应用。作为一个典型实例，BI-1可配制如下：

还可使用本领域中已知的其它合适的输注溶液。

在治疗具体病症或病状中有效的药物组合物的量将取决于病症或病状的特性，并且可通过标准临床技术确定。此外，可任选采用体外或体内测定以帮助鉴定最佳剂量范围。药物组合物中有待采用的精确剂量将还取决于施用途径以及疾病或病症的严重程度，并且应根据医生的判断和每一位患者的情况来决定。

药物组合物包含有效量的药物或药剂，以使得将获得合适的剂量。通常，这个量是药物组合物的至少约0.01重量％的药物或药剂。当意图用于口服施用时，这个量可变化以在药物组合物的约0.1重量％至约80重量％范围内。一方面，口服药物组合物可包含药物组合物的约4重量％至约50重量％的活性成分。另一方面，制备本发明药物组合物，以使得胃肠外剂量单位含有约0.01重量％至约2重量％的活性成分。

对于静脉内施用，药物组合物可包含每千克患者体重约1mg至约50mg的药物或药剂。一方面，药物组合物可包含每千克患者体重约1mg、1.5mg或2.5mg至约50mg的药物或药剂。另一方面，施用的量将在约1mg/kg体重、1.5mg/kg体重或2.5mg/kg体重至约25mg/kg体重的药物或药剂的范围内。

在一些实施方案中，向患者施用的剂量小于0.1mg/kg患者体重至约50mg/kg患者体重。(对于转换成mg/mm2，可使用1.8m2的BSA和80kg的体重。)

如本文所讨论，本文药物组合物可根据计划向患者静脉内或皮下施用，即例如每天、每周、每两周、每三周或每个月向患者施用。例如，本文药物组合物可每周施用，持续2周至10周的时间段，通常3-6周。在一些实施方案中，本文药物组合物的给药方案维持给药周期期间抗体的血清浓度在至少5μg/ml或至少10μg/ml。本文药物组合物可施用例如1-8个周期或更多个周期。在一些实施方案中，将本文药物组合物长期向受试者施用。

举例来说，本发明包括一种通过每周施用0.1mg/kg至50mg/kg，例如约1.5-8mg/kg或2.5-8mg/kg本文药物组合物来治疗如骨髓性白血病的癌症的方法。这种治疗通常可以持续约1-3个月，通常约2个月。在一个实施方案中，维持给药计划直到注意到胚细胞减少。例如，可持续给药长达约6个月。这种治疗之后可进行较低频率的给药计划，涉及例如每两周剂量(或每个月两次)。这种给药计划可维持1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月或更长时间以维持胚细胞减少和/或缓解。

在一些实施方案中，预防剂可与本文药物组合物一起施用以使输注反应最小。合适的预防剂包括例如甲基泼尼松龙、苯海拉明(diphenyldramine)、对乙酰氨基酚或其它合适的药剂。预防剂可在本文药物组合物之前施用或与本文药物组合物大约同时施用。

本文药物组合物可通过任何便利途径施用，例如通过输注或弹丸注射、通过经由上皮或粘膜皮肤内衬(lining)(例如，口腔粘膜、直肠和肠粘膜等)吸收。施用可以是全身的或局部的。已知各种递送系统，例如包封在脂质体、微粒、微胶囊、胶囊等中，并且可用于施用本文药物组合物。

向需要治疗的区域局部地施用本文药物组合物可以是合乎需要的，适当时药物或药剂。这可以通过以下实现，例如但不限于通过在外科手术期间局部输注；局部涂敷，例如在外科手术之后与伤口敷料结合；通过注射；借助于导管；借助于栓剂；或借助于植入物，所述植入物是多孔、非多孔或凝胶状材料，包括膜(如硅橡胶膜)或纤维。在一个实施方案中，施用可通过在癌症、肿瘤或肿瘤性组织或肿瘤前性组织部位(或早前部位)处直接注射来完成。

本文药物组合物可在控释系统中递送，如泵或各种聚合材料。在又另一实施方案中，控释系统可置于邻近本文药物组合物的靶标处，因此仅需要全身剂量的一部分(参见例如，Goodson,Medical Applications of ControlledRelease,第2卷,第115-138页,1984)。可使用Langer的综述(1990,Science 249:1527-1533)中所讨论的其它控释系统。

本文药物组合物根据常规程序配制成适于向动物，尤其是人静脉内施用的药物组合物，适当时药物或药剂。通常，用于静脉内施用的载体或媒介物是无菌等渗水性缓冲溶液。必要时，药物组合物还可包含增溶剂。用于静脉内施用的药物组合物可任选包含局部麻醉剂如利多卡因以减轻注射部位的疼痛。总体上，成分被分开供应或以单位剂型混合在一起供应，例如在指示活性剂的量的如安瓿或小药囊的气密性密封容器中呈干燥冻干粉末或无水浓缩物的形式。在药物或药剂有待通过输注施用的情况下，可例如用含有无菌药用级水或盐水的输注瓶来配药。在药物或药剂通过注射施用的情况下，可提供一安瓿的无菌注射用水或盐水，以使得成分可在施用前混合。

治疗剂的药物组合物还可根据例如呈以下形式的所接受的剂型来施用：片剂、菱形锭、水性或油性混悬液、颗粒剂、粉末、乳剂、胶囊、糖浆或酏剂。口服施用的药物组合物可含有一种或多种可选试剂以提供药学上适口的制剂，所述试剂例如，甜味剂，如果糖、阿斯巴甜或糖精；调味剂，如薄荷、冬青油或樱桃；着色剂；以及防腐剂。此外，当呈片剂或丸剂形式时，可将药物组合物包衣以延缓在胃肠道中的崩解和吸收，从而提供在延长的时间段内的持续作用。包围渗透活性驱动化合物的选择透过性膜也适用于口服施用的药物或药剂。在这些后来的平台中，包围胶囊的环境的流体由驱动化合物吸取，驱动化合物膨胀以通过小孔置换药剂或药剂药物组合物。这些递送平台可提供基本上零级递送曲线(delivery profile)，与立即释放制剂的锥形曲线相反。还可使用如单硬脂酸甘油酯或硬脂酸甘油酯的时间延迟材料。

药物组合物可包括修改固体或液体剂量单位的物理形式的各种材料。例如，药物组合物可包括在活性成分周围形成包衣壳的材料。形成包衣壳的材料通常是惰性的，并且可选自例如糖、虫胶及其它肠溶包衣剂。或者，活性成分可包裹在明胶胶囊中。

药物组合物可以一定频率，或在一段时间内向有需要的患者施用，这由主治医生决定。药物组合物可在1天、2天、3天、5天、7天、10天、14天、21天、28天、一个月、两个月或更长时间段的时期内施用。应理解，药物组合物可施用持续在1天与两个月或更长时间之间的任何时间段。

组合可呈现为组合制剂试剂盒。如本文所用的术语“组合制剂试剂盒”或“试剂盒”意指用于施用根据本发明的药物组合的一种或多种药物组合物。当药物组合的活性成分(即抗Ang2/抗Dll4结合物和抗VEGF药剂和任选地抗肿瘤剂)同时施用时，组合制剂试剂盒可在如片剂的单一药物组合物中或分开的药物组合物中含有每一活性成分。当活性成分不同时施用时，组合制剂试剂盒将在单一包装中分开的药物组合物中含有活性成分，或在分开的包装或隔室中分开的药物组合物中含有活性成分。

一方面，提供一种呈组合制剂试剂盒形式的药物组合物，其包含

(i)第一隔室，其含有包含抗Ang2/抗Dll4结合物的第一药物组合物；

(ii)第二隔室，其含有包含抗VEGF药剂的第二药物组合物；以及任选地

(iii)第三隔室，其含有包含一种或多种其它抗肿瘤剂的一种或多种药物组合物。

在一个实施方案中，提供一种组合制剂试剂盒，其包含活性成分作为合适的药物组合物，其中所述活性成分以呈适合于顺次、分开和/或同时施用的形式提供。

在一个实施方案中，提供一种组合制剂试剂盒，其包含以下组件：包含抗Ang2/抗Dll4结合物作为合适药物组合物的第一容器；和包含抗VEGF药剂作为合适药物组合物的第二容器，以及用于容纳所述第一容器和第二容器的容器装置。

组合试剂盒还可通过说明书提供，如剂量和施用说明书。这类剂量和施用说明书可以是例如通过药物产品标签向医生提供的一类说明书，或它们可以是由医生所提供的一类说明书，如对患者的说明书。

另一方面，本发明还涉及用于与抗VEGF药剂组合治疗癌症的双重抗Ang2/抗Dll4结合物。

另一方面，本发明涉及一种治疗癌症的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的双重抗Ang2/抗Dll4结合物，并且还包括在施用所述双重抗Ang2/抗Dll4结合物之前或之后72小时内向同一患者施用治疗有效量的抗VEGF药剂。

在另一实施方案中，抗VEGF药剂的施用是在所述双重抗Ang2/抗Dll4结合物的施用之前或之后36小时内进行。

在另一实施方案中，抗VEGF药剂的施用是在所述双重抗Ang2/抗Dll4结合物的施用之前或之后24小时内进行。

在另一实施方案中，抗VEGF药剂的施用是在所述双重抗Ang2/抗Dll4结合物的施用之前或之后12小时内进行。

在另一实施方案中，抗VEGF药剂的施用是在所述双重抗Ang2/抗Dll4结合物的施用之前或之后6小时内进行。

在另一实施方案中，抗VEGF药剂的施用是在所述双重抗Ang2/抗Dll4结合物的施用之前或之后3小时内进行。

在另一实施方案中，抗VEGF药剂的施用是在所述双重抗Ang2/抗Dll4结合物的施用之前或之后2小时内进行。

在另一实施方案中，抗VEGF药剂的施用是在所述双重抗Ang2/抗Dll4结合物的施用之前或之后1小时内进行。

在另一实施方案中，抗VEGF药剂的施用是在所述双重抗Ang2/抗Dll4结合物的施用之前或之后30分钟内进行。

在另一实施方案中，抗VEGF药剂的施用是与所述双重抗Ang2/抗Dll4结合物的施用同时进行。

抗VEGF药剂和双重抗Ang2/抗Dll4结合物的同时施用可通常通过以下实现

●通过从分开的输注容器同时输注来施用抗VEGF药剂和双重抗Ang2/抗Dll4结合物，或通过

●通过从同一输注容器同时输注来施用抗VEGF药剂和双重抗Ang2/抗Dll4结合物，或通过

●皮下施用抗VEGF药剂，同时通过输注施用双重抗Ang2/抗Dll4结合物，或通过

●输注施用抗VEGF药剂，同时皮下施用双重抗Ang2/抗Dll4结合物，或通过

●皮下施用抗VEGF药剂和双重抗Ang2/抗Dll4结合物。

实验部分

首字母缩写词和缩略语

FCS 胎牛血清

h 小时

IgG 免疫球蛋白G

PBS 磷酸盐缓冲盐水

TGI 肿瘤生长抑制，根据下式计算：

TGI＝100×{1-[(治疗最后一天–治疗第1天)/(对照最后一天–对照第1天)]}

1.BI-1与贝伐单抗和BIBF 1120组合在人非小细胞肺癌(NCI-H1975)的小鼠模型中的体内功效

本研究的目的是评估BI-1与贝伐单抗和BIBF 1120组合在裸小鼠中人非小细胞肺癌(NCI-H1975)模型中的功效。

1.1材料和方法

1.1.1研究设计

模型：生长在裸小鼠中的人非小细胞肺癌(NCI-H1975)的皮下异种移植物

1.1.2测试化合物

具有样品ID号D11B20V503的BI-1用于这个实验并且用PBS稀释。将具有批次数(batch chiffre)133562的BIBF 1120悬浮于Natrosol 0.5％(羟乙基纤维素Natrosol 250HX,VWR)中。

(贝伐单抗，25mg/ml)是购自Roche(Basel,Switzerland)，(溶解于0.9％盐水中)，用0.9％盐水稀释。

1.1.3小鼠

小鼠是购自Taconic,Denmark的7周龄的雌性BomTac:NMRI-Foxn1nu。到达之后，在将小鼠用于实验之前，允许小鼠适应于环境条件至少5天。将它们在标准化条件下在21.5±1.5℃温度和55±10％湿度下以7只一组(对照组10只)圈养在III型笼子中。随意地提供标准化饮食(PROVIMIKLIBA)和高压灭菌的自来水。皮下植入(在异氟烷麻醉下)的微芯片用于鉴别每一小鼠。显示研究号、动物鉴别号、化合物和剂量水平、施用途径以及计划的笼子卡片在整个研究中保持在动物上。

1.1.4肿瘤的建立，随机化

为建立皮下肿瘤，将NCI-H1975细胞通过离心收集，洗涤并且以5×107个细胞/毫升重悬浮在PBS+5％FCS中。然后将含有5×106个细胞的100μl细胞悬浮液皮下注射到小鼠的右侧腹中(每只小鼠1个部位)。当肿瘤良好地建立并且已达到63mm3至104mm3的体积时，将小鼠在治疗组与媒介物对照组之间随意分配(细胞注射后7天)。

1.1.5测试化合物的施用

将BI-1和贝伐单抗的剂量根据第1天所有小鼠的平均体重(28g)计算并且以每只小鼠100μl的体积腹膜内施用，每周两次。将BIBF 1120根据体重(mg/kg)给药并且每天经口施用。

1.1.6监测肿瘤生长和副作用

肿瘤直径用卡尺每周测量三次(周一、周三和周五)。将每一肿瘤的体积[以mm3计]根据式“肿瘤体积＝长度*直径2*π/6”来计算。为监测治疗的副作用，每天检查小鼠的异常并且每周测定体重三次(周一、周三和周五)。当对照肿瘤达到平均大致800mm3的尺寸时将动物处死。此外，出于伦理学原因对具有直径超过1.5cm的肿瘤尺寸或20％体重损失的动物实施安乐死。

TGI值计算如下：

1.1.7肿瘤采样

在安乐死下(分别在最后一次口服之后24h和在最后一次腹膜内治疗之后4天)，将每组五个肿瘤切除并且置于低温管中以在液氮中急速冷冻并且在-80℃下储存。

1.1.8统计分析

在第14天对参数，肿瘤体积和体重，进行统计评估。

对于肿瘤体积绝对值和对于体重，使用参照第1天的初始重量的百分比改变。

由于观察到的变化，采用非参数方法。

出于描述性考虑，计算观察次数和中值。为了快速概览可能的治疗效果，将每一治疗组的肿瘤体积的中值T参照对照中值C，为

从第1天直到第d天的肿瘤生长抑制(TGI)

TGI＝100*[(Cd-C1)-(Td-T1)]/(Cd-C1)

其中C1,T1＝实验开始时第1天对照组和治疗组中的中值肿瘤体积

Cd,Td＝第14天对照组和治疗组中的中值肿瘤体积

应用单侧减小曼-惠特尼(Mann-Whitney)检验来比较每一治疗组与对照，以及比较单一疗法与对应的组合疗法，寻找作为效果的肿瘤体积减小和作为不良事件的体重增加减小。

每一副题内肿瘤体积的p值根据邦费罗尼-霍姆(Bonferroni-Holm)来调整用于多重比较(相对于对照的比较、组合相对于单一药剂疗法的比较)，而体重的p值(耐受性参数)保持不调整以使得不忽略可能的副作用。

显著性水平固定在α＝5％。小于0.05的(调整)p值被认为显示组之间的统计学上显著差异，并且每当0.05≤p值<0.10，将差异视为指示性的。

1.2结果

1.2.1肿瘤体积-单一药剂

在14天治疗时间段期间，对照肿瘤从85mm³的中值体积生长至791mm³的体积。

用每周两次腹膜内施用的25mg/kg贝伐单抗的治疗持续2.5个周期显著延缓肿瘤生长(中值TGI＝82％，p＝0.0010)。

用每天口服施用50mg/kg BIBF 1120的治疗持续2.5个周期显著延缓肿瘤生长(中值TGI＝75％，p＝0.0010)。

用每周两次腹膜内施用13.6mg/kg BI-1的治疗持续2.5个周期显著延缓肿瘤生长(中值TGI＝75％，p＝0.0010)。

用每周两次腹膜内施用25mg/kg贝伐单抗和13.6mg/kg BI-1的治疗持续2.5个周期显著延缓肿瘤生长(中值TGI＝99％，p＝0.0010)。

用每天口服施用50mg/kg BIBF 1120并且每周两次腹膜内施用13.6mg/kg BI-1的治疗持续2.5个周期显著延缓肿瘤生长(中值TGI＝98％，p＝0.0010)。

1.2.2肿瘤体积-组合

贝伐单抗与BI-1的组合比单独的贝伐单抗(p＝0.0012)或BI-1(p＝0.0006)显著更有效。

BIBF 1120与BI-1的组合比单独的BIBF 1120(p＝0.0006)或BI-1(p＝0.0006)显著更有效。

1.2.3体重

对照动物增加了6.0％体重。所有治疗组的体重增加与对照相当(无显著差异)。

1.3结论

贝伐单抗、BIBF 1120、BI-1、贝伐单抗与BI-1的组合以及BIBF 1120与BI-1的组合全部显著延缓NCI-H1975肿瘤生长。

贝伐单抗与BI-1的组合以及BIBF 1120与BI-1的组合都比对应的单一药剂显著更有效。所有疗法都耐受良好。

基于从上文所述的实验获得的发现，可得出结论，包含双重抗Ang2/抗Dll4结合物和抗VEGF药剂的药物组合确实具有较优的抗血管生成功效，并且因此如所示还具有较优的抗癌功效。还显示出，这类药物组合对患者耐受性良好，因为在实验持续期间内所有动物的体重都未减少。

2.BI-1与贝伐单抗和BIBF 1120组合在人非小细胞肺癌的小鼠模型中的体内功效

本研究的目的是评估BI-1与贝伐单抗、BIBF1120或舒尼替尼在裸小鼠中人非小细胞肺癌(LXFE 211、LXFE 1422)、结肠癌(CXF 243)、乳腺癌(MAXF 401)、卵巢癌(OVXF 1353)、胰腺癌(PAXF 546)以及肾癌(RXF 1220)的模型中的功效。所有模型是从患者移植到裸小鼠并且皮下传代的患者来源的肿瘤异种移植物(PDX)。这些模型保留亲代患者肿瘤的大部分特征，包括组织学。

2.1材料和方法

2.1.1研究设计

模型：LXFE 211、LXFE 1422、CXF 243、MAXF 401、OVXF 1353以及PAXF 546

模型：RXF 1220

2.1.2测试化合物

具有样品ID号D11B20V503的BI-1用于这个实验并且用PBS稀释。具有批次数133562的BIBF1120悬浮于Natrosol 0.5％(羟乙基纤维素Natrosol250HX,VWR)中。

贝伐单抗(25mg/ml)是购自Roche(Basel,Switzerland)，溶解于0.9％盐水中，用0.9％盐水稀释。舒尼替尼(Pfizer)片剂用研钵和研杵研磨并且将108.48mg粉末(对应于32mg API；校正系数：3.39)溶解于PBS(pH 5)中。

2.1.3小鼠

小鼠是购自Charles River,Sulzfeld,Germany的5-7周龄的雌性Crl:NMRI-Foxn1^nu。到达之后，在将小鼠用于实验之前，允许小鼠适应于环境条件至少5天。将它们在标准化条件下在25±1℃温度和55±10％湿度下圈养在单独的通风II型长笼子中。随意地提供标准化饮食(来自Harlan实验室的Teklad Global 19％蛋白质挤出饮食(T.2019S.12))和无菌过滤的并酸化(pH 2.5)的自来水。耳夹用于鉴别每一小鼠。显示研究号、动物鉴别号、化合物和剂量水平、施用途径以及计划的笼子卡片在整个研究中保持在动物上。

2.1.4肿瘤的建立，随机化

肿瘤片段获自裸小鼠中连续传代的肿瘤异种移植物。在从供体小鼠移除之后，将肿瘤切割成片段(4-5mm直径)并且置于PBS中直到皮下植入。将受体小鼠通过吸入异氟烷来麻醉。做出小切口，并且将每个动物用镊子移植一个肿瘤片段。每天监测小鼠。

在随机化下，将携带肿瘤的动物根据肿瘤体积分成不同组。仅带有适当大小(50-250mm³体积)肿瘤的动物被考虑用于随机化。当小鼠的所需数目适合于随机化时，将小鼠随机化。将随机化的日子指定为第0天。给药的第一天为第1天。

2.1.5测试化合物的施用

将BI-1和贝伐单抗的剂量根据第1天所有小鼠的平均体重(28g)计算并且以每只小鼠100μl的体积腹膜内施用，每周两次。将BIBF1120和舒尼替尼根据体重(mg/kg)给药并且每天经口施用。

2.1.6监测肿瘤生长和副作用

肿瘤直径用卡尺每周测量两次。将每一肿瘤的体积[以mm³计]根据式“肿瘤体积＝长度*直径²*0.5”来计算。为监测治疗的副作用，每天检查小鼠的异常并且每周测定体重两次。将具有直径超过1.5cm的肿瘤尺寸或20％体重损失的动物出于伦理学原因实施安乐死。

TGI值计算如下：

2.1.7肿瘤采样

在安乐死下(在最后一次治疗之后24h)，将每组五个肿瘤切除并且置于低温管中以在液氮中急速冷冻并且在-80℃下储存。

2.1.8统计分析

为了评估肿瘤抑制的统计显著性，基于作用将仅在一个方向上是可测量的假设(即预期肿瘤抑制而不预期肿瘤刺激)，进行单尾非参数曼-惠特尼-威尔科克森U检验(one-tailed non-parametric Mann-Whitney-Wilcoxon U-test)。总体上，根据具体日子的绝对体积，U检验比较两组个别肿瘤的分级(组之间的成对比较(pairwise comparison))。在此U检验用于比较接受组合疗法的组与给予各自单一疗法的组。将获自U检验的p值使用邦费罗尼-霍姆校正(Bonferroni-Holm correction)来调整。按照惯例，p值≤0.05表明差异的显著性。

2.2结果

2.2.1肿瘤体积

BI-1/贝伐单抗组合疗法相对于BI-1和贝伐单抗单一疗法

BI-1/贝伐单抗组合疗法显示在所有七个肿瘤异种移植物中的显著功效，其中TGI值在对于RXF 1220的84％至对于PAXF 546的106％范围内。在所有七个肿瘤模型中组合疗法比贝伐单抗单一疗法显著更有效(贝伐单抗的TGI值在10％-68％之间)。在LXFE 211、LXFE 1422、MAXF 401以及PAXF 546中组合疗法比BI-1单一疗法显著更有效(BI-1的TGI值在76％与94％之间)。

BI-1/BIBF1120组合疗法相对于BI-1和BIBF1120单一疗法

BI-1/BIBF1120组合疗法在测试它的所有六个肿瘤异种移植物(CXF243、LXFE 211、LXFE 1422、MAXF 401、OVXF 1353、PAXF 546)中展示在测试的治疗中功效最强，其中TGI值在对于CXF 243的95％至对于MAXF401的110％范围内。在所有测试的肿瘤模型中，优于对应单一疗法的功效优势(TGI值的范围，对于BI-01：76％至94％，对于BI-20：40％至78％)是显著的。

BI-1/舒尼替尼组合疗法相对于BI-1和舒尼替尼单一疗法

因为舒尼替尼被登记用于治疗转移性肾细胞癌，所以仅测试携带RXF1220肿瘤移植物的小鼠中BI-1/舒尼替尼组合疗法的功效。这种治疗导致TGI值为103％。优于以BI-1(TGI值76％)和舒尼替尼(62％)的参考单一疗法的功效优势是显著的。

结果概述

2.2.2体重

对于所有治疗，在实验期间观察到的最大组中值体重损失一般小于5％，并且通常与对于相应媒介物对照组所观察的中值体重损失相当。但是，记录了以下例外：(i)在以恶病质诱导肿瘤移植物LXFE 211和RXF 1220用于媒介物对照组的实验中，观察到最大组中值体重损失分别为5.8％和13.7％。此外，在LXFE 211的实验中，对于贝伐单抗治疗组和BI-20治疗组，即对于展现抗肿瘤功效最微弱的两种治疗观察到最大中值体重损失分别为9.1％和5.9％。(ii)在CXF 243(最大组中值体重损失：10.2％)、LXFE 1422(3.4％)、MAXF 401(6.2％)、OVXF 1353(9.8％)和PAXF 546(4.3％)的实验中，对给予BI-1/BIBF1120组合疗法的组记录最高组中值体重损失。此外，在RXF 1220的实验中，对以BI-1/舒尼替尼组合给药的组记录第二最高最大中值体重损失(4.5％)。

在接受BI-01/BIBF1120或贝伐单抗/BI-01组合疗法的组中存在趋于更高死亡发生率的趋势，其中在所有实验中分别有11和6例死亡。这些死亡仅发生在延长治疗之后(在实验第25天之前无死亡)。单独地，在RXF 1220的实验中，11只动物由于体重损失而被实施安乐死或发现死亡。因为在这个后一实验中，大部分死亡发生在媒介物对照组中和贝伐单抗治疗组中，即在具有最微弱的抗肿瘤功效的治疗下，很可能那些死亡与肿瘤诱导的恶病质有关。相较于其它实验，CXF 243和OVXF 1353的实验中死亡数目更高(分别为9例死亡和6例死亡)的一个原因是两个实验的持续时间长(对于大部分组来说，分别>8周和>7周)。

2.3结论

以单一疗法的BI-1以及以组合疗法的BI-1/贝伐单抗、BI-1/BIBF1120和BI-1/舒尼替尼显示在所有七个测试的肿瘤异种移植物中显著的抗肿瘤功效。

所测试的组合疗法在所有情况下比相应的单一疗法显著更有效。

BI-1与NCE(BIBF1120或舒尼替尼)的组合是所有实验中极有效的治疗(TGI：95％-110％)。BI-1/贝伐单抗组合(TGI：84％-106％)也得到了高治疗功效。

基于从上文所述的实验获得的发现，可得出结论，包含双重抗Ang2/抗Dll4结合物和抗VEGF-R药剂的药物组合确实具有较优的抗血管生成功效，并且因此如所示还具有较优的抗癌功效。还显示出，这类药物组合对患者耐受性良好，因为在实验持续期间内所有动物的体重都未减少。

Claims

1.药物组合，其包含一种或多种双重抗Ang2/抗Dll4结合物和一种或多种抗VEGF药剂。

2.根据权利要求1所述的药物组合，其中所述双重抗Ang2/抗Dll4结合物选自SeqID No:1-20。

3.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合，其中所述抗VEGF药剂选自贝伐单抗、哌加他尼、雷珠单抗、阿柏西普以及PRS-050。

4.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合，其还包含一种或多种抗肿瘤剂。

5.根据权利要求3所述的药物组合，其包含根据SeqID No:14的双重抗Ang2/抗Dll4结合物和贝伐单抗。

6.根据权利要求3所述的药物组合，其包含根据SeqID No:14的双重抗Ang2/抗Dll4结合物和阿柏西普。

7.根据权利要求3所述的药物组合，其包含根据SeqID No:15的双重抗Ang2/抗Dll4结合物和贝伐单抗。

8.根据权利要求3所述的药物组合，其包含根据SeqID No:16的双重抗Ang2/抗Dll4结合物和贝伐单抗。

9.根据权利要求3所述的药物组合，其包含根据SeqID No:17的双重抗Ang2/抗Dll4结合物和贝伐单抗。

10.根据权利要求3所述的药物组合，其包含根据SeqID No:18的双重抗Ang2/抗Dll4结合物和贝伐单抗。

11.药物组合物，其包含与一种或多种药学上可接受的稀释剂和任选另外药学上可接受的试剂混合的根据权利要求1-10中任一项所述的药物组合。

12.根据权利要求11所述的药物组合物，其呈组合制剂试剂盒的形式，所述试剂盒包含

(i)第一隔室，其含有包含如权利要求2中所限定的双重抗Ang2/抗Dll4结合物的第一药物组合物，以及

(ii)第二隔室，其含有包含如权利要求3中所限定的抗VEGF药剂的第二药物组合物，以及任选地

13.根据权利要求1至10中任一项所述的组合的用途或根据权利要求11所述的药物组合物的用途，其用于制造用于治疗癌症的药物。

14.根据权利要求1至10中任一项所述的组合或根据权利要求11所述的药物组合物，其用作药物。

15.根据权利要求1至10中任一项所述的组合或根据权利要求11所述的药物组合物，其用于治疗癌症。

16.根据权利要求13所述的用途或根据权利要求15所述的组合或根据权利要求11所述的药物组合物，其中所述癌症选自非小细胞肺癌、肾细胞癌瘤、卵巢癌、乳癌、结肠直肠癌、胰腺癌。

17.双重抗Ang2/抗Dll4结合物，其用于与抗VEGF药剂组合治疗癌症。

18.一种治疗癌症的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的双重抗Ang2/抗Dll4结合物，并且此外包括在施用所述双重抗Ang2/抗Dll4结合物之前或之后72小时内向同一患者施用治疗有效量的抗VEGF药剂。

19.如权利要求18所述的方法，其中所述抗VEGF药剂的施用是在施用所述双重抗Ang2/抗Dll4结合物之前或之后36小时、优选24小时、优选12小时、优选6小时、优选3小时、优选2小时、优选1小时、优选30分钟内进行。

20.如权利要求18所述的方法，其中所述抗VEGF药剂的施用与所述双重抗Ang2/抗Dll4结合物的所述施用同时进行。