EA015514B1 - Применение бензоконденсированных гетероциклических сульфамидных производных для лечения маниакального синдрома и биполярного расстройства - Google Patents

Abstract

Данное изобретение представляет собой способ лечения маниакального синдрома, биполярного расстройства и биполярной депрессии, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества одного или нескольких бензоконденсированных гетероциклических сульфамидных производных формулы (I), представленных в настоящем описании.

Description

Данное изобретение относится к применению бензоконденсированных гетероциклических сульфамидных производных для лечения мании и биполярного расстройства.

Биполярное расстройство представляет собой психиатрическое нарушение, отличающееся непредсказуемыми колебаниями в настроении от мании (или гипомании) до депрессии. Некоторые пациенты страдают только от повторяющихся атак мании, которая в чистом виде ассоциируется с повышенной психомоторной активностью; излишней социальной экстравертированностью; пониженной потребностью во сне; импульсивностью и недостаточностью в оценке; экспансивным, грандиозным и иногда легко возбудимым настроением. В тяжелых случаях мании пациенты могут испытывать бред и параноидное мышление, неотличимое от шизофрении. Половина пациентов с биполярным расстройством воспроизводит смесь психомоторного возбуждения и активности с дисфорией, тревогой и болезненной чувствительностью. Это может представлять трудность для того, чтобы отличать смешанную манию от возбужденной депрессии. У некоторых пациентов с биполярностью (биполярное расстройство II) полные показатели мании отсутствуют и вынужденные повторяющиеся депрессии отделены периодами слабой активности и повышенной возбудимости (гипомания). При циклотимическом расстройстве имеется ряд периодов гипомании, обычно относительно короткой длительности, отличающихся совокупностью депрессивных симптомов, которые ослабевают, либо по тяжести, либо по продолжительности до возникновения показателя обширной депрессии. Колебания настроения являются хроническими и должны были присутствовать в течение по меньшей мере 2 лет перед постановкой диагноза.

Эпизоды мании обычно проявляются в продолжение периода от дней до недель, но начало возможно в пределах часов, обычно в ранние утренние часы. Не пролеченный эпизод либо депрессии, либо мании могут быть короткими до нескольких недель или длиться долго до 8-12 месяцев, и отдельные пациенты имеют непрерывное хроническое течение заболевания. Термин быстрая периодичность используется для пациентов, которые имеют четыре или более эпизодов либо депрессии, либо мании в данном году. Данная картина имеет место у 15% всех пациентов, почти все из которых являются женщинами. В некоторых случаях быстрая периодичность связана с основной дисфункцией щитовидной железы и в других она ятрогенно запускается пролонгированным антидепрессантным лечением. Приблизительно половина пациентов испытывали трудности в производственной активности и психосоциальной деятельности.

Пациенты, страдающие от биполярного расстройства, обычно жалуются на следующие типы симптомов, зависящие от того, находятся ли они в маниакальной или высокой фазе по отношению к депрессивной или низкой фазе. В маниакальной фазе симптомы включают, но без ограничения только ими, (а) повышенную физическую и умственную активность и деятельность, (Ь) повышенное настроение, гиперболизированный оптимизм и самоуверенность; (с) чрезмерную возбудимость, агрессивное поведение; (б) сниженную потребность во сне без проявления усталости; (е) бреды величия, завышенное чувство самомнения; (к) быструю речь, быстрые мысли, полет идей; (ί) импульсивность, слабую оценку, патологически повышенную отвлекаемость; О) необдуманное поведение и в большинстве тяжелых случаев (к) бреды и галлюцинации. В депрессивной фазе симптомы включают, но без ограничения только ими, (а) длительное уныние и необъяснимые приступы плача; (Ь) значительные изменения в формах аппетита и сна; (с) возбудимость, гнев, тревогу, волнение, страх; (б) пессимизм, равнодушие; (е) потерю активности, постоянную летаргию; (I) чувства вины, непригодности; (д) неспособность собраться с мыслями, нерешительность; (к) неспособность получить удовольствие от прежних интересов, социальный аутизм; (ί) необъяснимые тупые и прочие боли и О) повторяющиеся мысли о смерти или суициде.

Биполярное расстройство в целом воздействует на ~1% населения Соединенных Штатов. Начало обычно относится к возрасту от 20 до 30 лет, но многие индивидуумы описывают преклинические симптомы в позднем детстве или ранней юности. Широкая распространенность характерна как для мужчин, так и для женщин; женщины, вероятно, будут иметь больше депрессивных и мужчины больше маниакальных эпизодов на протяжении жизни.

Карбонат лития представляет собой основу лечения биполярного расстройства, хотя вальпроат натрия и оланзапин равно эффективны при острой мании, в то время как ламотриджин эффективен в стадии депрессии. Степень восприимчивости к карбонату лития составляет 70-80% при острой мании с полезными эффектами, проявляющимися в течение 1-2 недель. Литий обладает также профилактическим эффектом в предотвращении рецидивирующей мании и в меньшей степени в предотвращении рецидивирующей депрессии. Серьезные побочные эффекты от введения лития редки, но незначительные неудобства, такие как пищеварительный дискомфорт, тошнота, диарея, полиурия, увеличение веса, кожные сыпи, алопеция и эдема, являются обычными.

При лечении острой мании литий начинают вводить при 300 мг два или три раза в сутки и затем дозу повышают на 300 мг каждые 2-3 дня для достижения количеств в крови 0,8-1,2 мэкв/л. Так как терапевтический эффект лития может проявляться вплоть до 7-10 дней после лечения, дополнительное использование лоразепама (1-2 мг каждые 4 ч) или клозепама (0,5-1 мг каждые 4 ч) может быть полезным для контроля возбуждения. Средства против психоза показаны пациентам с тяжелым возбуждением, которые реагируют на бензодиазепины только частично.

Вальпроевая кислота представляет собой альтернативу у пациентов, которые не могут выносить литий или реагируют на него слабо. Вальпроевая кислота может быть более подходящей, чем литий, для

- 1 015514 пациентов, которые проявляют быструю периодичность (т.е. больше четырех эпизодов в год) или которые страдают смешанной или дисфорической манией. Тремор и увеличение веса являются самыми обычными побочными эффектами; гепатотоксичность и панкреатит являются редкими токсическими эффектами. Карбамазепин и окскарбазепин, хотя формально не утвержденные Управлением США по пищевым продуктам и медикаментам (И.8. Ροοά апб Эгид АбтччДгаЦоп, РЭА) для биполярного расстройства, обладают клинической эффективностью в лечении острой мании. Предварительное доказательство также предполагает, что другие антиконвульсанты, такие как левтирацетам, зонисамид и топирамат, могут обладать некоторой терапевтической пользой.

Рецидивирующая природа биполярного расстройства настроения требует поддерживающего лечения. Протяженность нередко является проблемой и часто требует выучки и знания соприкасающихся членов семьи. Важными являются усилия по идентификации и модификации психосоциальных факторов, которые могут инициировать эпизоды, такие как акцент на регулярность образа жизни. Лекарственные терапии с антидепрессантами требуются иногда для лечения тяжелых разрушительных депрессий, но их применение следует избегать в течение поддерживающего лечения из-за риска остаточной мании или ускорения частоты циклов. Потеря эффективности в течение долгого времени обычно может наблюдаться с любыми средствами, стабилизирующими настроение. В таких ситуациях альтернативное средство или терапия может быть, как правило, полезной.

Остается потребность в обеспечении эффективного лечения мании и/или биполярного расстройства. Предпочтительно лечение биполярного расстройства включает лечение депрессии и мании. Предпочтительнее лечение биполярного расстройства включает лечение депрессии, мании и периодичности, которые являются характерными для расстройства.

Сущность изобретения

Данное изобретение относится к способу лечения мании и/или биполярного расстройства, включающему введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) в которой К¹ и К², каждый независимо, выбраны из группы, состоящей из водорода и низшего алкила;

К⁴ выбран из группы, состоящей из водорода и низшего алкила;

а представляет собой целое число от 1 до 2;

(Я

и

где Ь представляет собой целое число от 0 до 4 и где с представляет собой целое число от 0 до 2; каждый К⁵ независимо выбран из группы, состоящей из водорода, низшего алкила и нитро;

при условии, что когда АА представляет собой

тогда а равно 1;

или его фармацевтически приемлемой соли.

Данное изобретение, кроме того, относится к способу лечения мании и/или биполярного расстрой

- 2 015514 ства, включающему введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения формулы (II)

или его фармацевтически приемлемой соли.

Данное изобретение, кроме того, относится к способу лечения мании, включающему совместную терапию с терапевтически эффективным количеством по меньшей мере одного антипсихотического средства и соединения формулы (I) или формулы (II), представленных в настоящем описании. Данное изобретение, кроме того, относится к способу лечения биполярного расстройства, включающему совместную терапию с терапевтически эффективным количеством по меньшей мере одного антидепрессанта и/или по меньшей мере одного антипсихотического средства и соединения формулы (I) или формулы (II), представленных в настоящем описании. Данное изобретение, кроме того, относится к способу лечения биполярного расстройства, включающему совместную терапию с терапевтически эффективным количеством по меньшей мере одного стабилизатора настроения и соединения формулы (I) или формулы (II), представленных в настоящем описании.

Иллюстрирование изобретения представляет собой способ лечения мании, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества любого из соединений, опи санных выше.

В варианте осуществления данное изобретение относится к лечению мании. В другом варианте осуществления данное изобретение относится к лечению биполярной мании. В другом варианте осуществления данное изобретение относится к лечению биполярной депрессии. В другом варианте осуществления данное изобретение относится к лечению биполярного расстройства. В другом варианте осуществления данное изобретение относится к лечению биполярной периодичности. В другом варианте осуществления данное изобретение относится к лечению депрессии и мании, связанных с биполярным расстройством. В еще другом варианте осуществления данное изобретение относится к лечению депрессии, мании и периодичности, связанных с биполярным расстройством. В еще другом варианте осуществления данное изобретение относится к способу лечения биполярного расстройства, включающему стабилизацию периодичности. Таким образом, в варианте осуществления данное изобретение относится к способу стабилизации биполярной периодичности.

Подробное описание изобретения

Данное изобретение относится к способу лечения мании и/или биполярного расстройства, включающему введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения формулы (I)

(О или его фармацевтически приемлемой соли, где 'а, К , К и К принимают значения, определенные в настоящем описании. Точнее, соединения данного изобретения применимы для лечения мании безотносительно к причине заболевания. Кроме того, соединения данного изобретения применимы для лечения депрессии, мании и/или периодичности, которые являются характерными, симптоматическими или связанными с биполярным расстройством.

Данное изобретение, кроме того, относится к способам лечения мании, биполярной депрессии, биполярной мании, биполярной периодичности и/или биполярного расстройства, включающим введение субъекту, нуждающемуся в этом, совместной терапии по меньшей мере с одним антидепрессантом, и/или по меньшей мере одним антипсихотическим средством, и/или по меньшей мере одним стабилизатором настроения и соединением формулы (I) или формулы (II), представленных в настоящем описании.

Биполярное расстройство представляет собой психиатрическое нарушение, отличающееся непредсказуемыми колебаниями в настроении от мании (или гипомании) до депрессии. Как используется в настоящем описании, термин биполярное расстройство должен включать биполярное расстройство I (т.е. отдельный маниакальный эпизод, самый недавний эпизод гипомании, самый недавний эпизод мании, самый недавний смешанный эпизод, самый недавний депрессивный эпизод и самый недавний невыясненный эпизод), биполярное расстройство II, циклотимическое расстройство и биполярное расстройство, не уточненное иным образом (поскольку данные термины определены их диагностическим критерием в 111с ОкщпоШе апй 8!а!1§!1са1 Мапиа1 оГМеп1а1 В1§огйег§, 4¹¹’ Εάΐίΐοη, Тех! Кеущюп, Лшепсап Р§усЫа!пс Л§§ос1а!юп, 2000 (БЗМИУ-ТК)). Предпочтительно биполярное расстройство характеризуется депрессивной и маниакальной фазами (или гипоманией), где фазы чередуются. Предпочтительно биполярное рас

- 3 015514 стройство представляет собой биполярное расстройство I или биполярное расстройство II.

Как используется в настоящем описании, термин мания должен включать манию или фазу маниакального настроения безотносительно к основной причине. Как используется в настоящем описании, термин биполярная мания предназначен для обозначения мании, связанной с особенностью или симптоматикой биполярного расстройства. Таким образом, способы лечения биполярной мании данного изобретения относятся к способам, которые лечат манию и/или маниакальную фазу биполярных расстройств.

Как используется в настоящем описании, термин биполярная депрессия предназначен для обозначения депрессии, связанной с особенностью или симптоматикой биполярного расстройства. Таким образом, способы лечения биполярной депрессии данного изобретения относятся к способам, которые лечат депрессию и/или фазу депрессии биполярных расстройств.

Как используется в настоящем описании, если не отмечено особо, термины периодичность или биполярная периодичность должны относиться к изменению настроения между депрессивными и маниакальными фазами, характерными для биполярных расстройств. Таким образом, данное изобретение включает способы стабилизации указанной периодичности, включающие, но без ограничения только ими, снижение частоты периодов и/или амплитуд маниакальной и/или депрессивной фаз.

Как используется в настоящем описании, термин стабилизатор настроения должен включать любое фармацевтическое средство, которое контролирует настроение, включающее, но без ограничения только ими, литий, вальпроевую кислоту, вальпроат натрия, карбамазепин, ламотриджин, топирамат и тому подобное. Точнее, стабилизатор настроения представляет собой любое фармацевтическое средство, которое стабилизирует настроение пациента, может действовать как антидепрессант, противоманиакальное средство или обладает действиями обоих и смещает настроение пациента в направлении к эутимии.

Как используется в настоящем описании, если не отмечено особо, термин антидепрессант должен обозначать любое фармацевтическое средство, которое лечит депрессию. Подходящие примеры включают, но без ограничения только ими, ингибиторы моноаминоксидазы, такие как фенелзин, транилципромин, моклобемид и тому подобное; трициклы, такие как имипрамин, амитриптилин, дезипрамин, нортриптилин, доксепин, протриптилин, тримипрамин, хломипрамин, амоксапин и тому подобное; тетрациклы, такие как мапротилин и тому подобное; не-циклы, такие как номифензин и тому подобное; триазолопиридины, такие как тразодон и тому подобное; ингибиторы обратного захвата серотонина, такие как флуоксетин, сертралин, пароксетин, циталопрам, флувоксамин и тому подобное; антагонисты рецептора серотонина, такие как нефазадон и тому подобное; ингибиторы обратного норадренергического захвата серотонина, такие как венлафаксин, милнаципран и тому подобное; норадренергические и специфические серотонинергические средства, такие как митразапин и тому подобное; ингибиторы обратного захвата норадреналина, такие как ребоксетин и тому подобное; атипичные антидепрессанты, такие как бупропион и тому подобное; природные продукты, такие как Кауа-Кауа, 8ΐ. боПп'к \Уог1 и тому подобное; диетические добавки, такие как 8-аденозилметионин и тому подобное; и нейропептиды, такие как гормон, высвобождающий тиротропин и тому подобное; соединения, нацеливающие нейропептидные рецепторы, такие как антагонисты рецептора нейрокинина и тому подобное; и гормоны, такие как трийодотиронин и тому подобное. Предпочтительно антидепрессант выбран из группы, состоящей из флуоксетина, имипрамина, бупропиона, венлафаксина и серталина.

Как используется в настоящем описании, термин антипсихотическое средство предназначен для включения, но без ограничения только ими, (а) типичных или традиционных антипсихотических средств, таких как фенотиазины, (например, хлорпромазин, тиоридазин, флуфеназин, перфеназин, трифлуоперазин, левомепромазин), тиоксантены (например, тиотиксен, флупентиксол), бутирофеноны (например, галоперидол), дибензоксазепины (например, локсапин), дигидроиндолоны (например, молиндон), замещенные бензамиды (например, сульприд, амисульприд) и тому подобное; и (Ь) атипичных антипсихотических средств, таких как дивальпроат натрия, палиперидон, клозапин, рисперидон, оланзапин, кветиапин, зотепин, ципразидон, илоперидон, пероспирон, блонансерин, сертиндол, ОКО-5222 (органон) и тому подобное; и других, таких как сонепипразол, арипипразол, немонаприд, 8К-31742 (Запой), СХ-516 (Сойех), 8С-111 (Зсойа), ΝΕ-100 (Та1кйо) и тому подобное.

Точнее, атипичные антипсихотические средства включают, но без ограничения только ими, 2-метил-4-(4-метил-1-пиперазинил)-10Н-тиено[2,3-Ь]бензодиазепин, известный как оланзапин и описанный в патенте США № 5229382 в качестве применимого для лечения шизофрении, шизофренеподобного расстройства, острой мании, легких тревожных состояний и психоза; рекомендуемой дозировкой в 5-30 мг/сутки, предпочтительно 5-10 мг/сутки (Рйу81С1ап'5 Эекк КеГегепсе; Кар1ап апб Забоск'к Сотртейепыуе Тех1Ьоок оГ РкусЫайу, 8еуеп1й Ебйюп, уо1. II, Ырршсой ^бйатк апб ХУПкшк: РЫ1абе1рЫа, 2000);

8-хлор-11-(4-метил-1-пиперазинил)-5Н-дибензо[Ь,е][1,4]диазепин, известный как клозапин и раскрытый в патенте США № 3539573 с клинической эффективностью в лечении шизофрении, описанной в Напек, е! а1., Ркусйорйагтасо1од1са1 Ви11ейп, 24, 62 (1988); рекомендуемой дозировкой в 12,5-600 мг/сутки, предпочтительно 250-450 мг/сутки (РйукЮап'к Эекк КеГегепсе; Кар1ап апб Забоск'к Сотртейепыуе Тех!Ьоок оГ РкусЫайу, 8еуеп1й Ебйюп, уо1. II, Ырршсой ХУПКатк апб ХУПктк: РЫ1абе1рЫа, 2000);

- 4 015514

3-[2-[4-(6-фтор-1,2-бензизоксазол-3-ил)пиперидино]этил]-2-метил-6,7,8,9-тетрагидро-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он, известный как рисперидон и описанный в патенте США Νο 4804663 в качестве применимого для лечения психотических заболеваний; рекомендуемой дозировкой в 0,25-16 мг/сутки, предпочтительно 1-16 мг/сутки, предпочтительнее 2-8 мг/сутки (Ρΐινδίοίαη'δ Эезк РеГегепсе; Кар1ап апб 8абоск'з Сотргсйсплус Тех!Ьоок оГ РзусШайу, 8сусп111 Εάίΐίοη, νοί. II, Ь1рртсой А1Шатз апб Абкшз: РЫ1абе1рЫа, 2000);

3-[2-[4-(6-фтор-1,2-бензизоксазол-3 -ил)-1 -пиперидинил]этил]-6,7,8,9-тетрагидро-9-гидрокси-2-метил-Н-пиридо-[1,2-а]пиримидин-4-он, известный как палиперидон, также известный как 9-гидроксирисперидон, описанный в патенте США 55158952, применимый для лечения психотических расстройств; рекомендуемыми дозировками в интервале от 0,01 до примерно 2 мг/кг массы тела в сутки;

1-[2-[3-[5-хлор-1-(4-фторфенил)-1Н-индол-3-ил]-1-пиперидинил]этил]имидазолидин-2-он, известный как сертиндол и раскрытый в патенте США N 4710500, патентом США № 5112838 и патентом США N 5238945, раскрывающими применение сертиндола для лечения шизофрении; начальной дозой в 4 мг/сутки с повышением на 4 мг в каждый последующий день вплоть до 24 мг/сутки и интервалом конечных рекомендуемых дозировок от 12 до 20 мг/сутки (Кар1ап апб 8абоск'з Сотргекепбще Тех!Ьоок оГ РзусЫайу, 8еνеηίй Ебйюп, νο1. II, Ырртсой Абйатб апб Айктз: РЫ1абе1рЫа, р. 2467-2468, 2000);

5-[2-(4-дибензо[Ь,Г][1,4]тиазепин-11-ил-1-пиперазинил)этокси]этанол, известный как кветиапин и раскрытый в патенте США N 4879288 для лечения шизофрении; рекомендуемой дозировкой в 25-800 мг/сутки, предпочтительно 150-750 мг/сутки (Ρΐινδίαηπ'δ Эезк РеГегепсе; Кар1ап апб 8абоск'б Сотргейепвще Тех!Ьоок оГ РзусШайу, 8еνеηίй Ебйюп, νο1. II, Ырршсой Абкатз апб Айктз: РЫ1абе1рЫа, 2000);

5-[2-[4-( 1,2-дибензоизотиазол-3 -ил)-1-пиперазинил]этил]-6-хлор-1,3-дигидро-2Н-индол-2-он, известный как ципразидон и раскрытый в патенте США № 4831031 и в патенте США № 5312925 с применением в лечении шизофрении, раскрытой в патенте США № 4831031; рекомендуемыми дозировками в 40-160 мг/сутки с предпочтительной дозировкой для поддержания лечения и предотвращения рецидива в 40-60 мг дважды в сутки (Кар1ап апб 8абоск'з Сотргекепвще Тех!Ьоок оГ РзусЫайу, 8еνеηΐй Ебйюп, νο1. II, Ырршсой А1Шатб апб Абкиъ: РЫ1абе1рЫа, р. 2470-2471, 2000); и натрия гидро-бис-(2-пропилпентаноат), также известный как дивальпроекс натрия, описанный в патенте США № 5212326 с рекомендуемой дозировкой для лечения мании при начальных 750 мг/сутки с максимальной рекомендуемой дозировкой в 60 мг/кг/сутки (Рйубюап'б Эезк РеГегепсе).

Термин субъект, как используется в настоящем описании, относится к животному, предпочтительно млекопитающему, наиболее предпочтительно к человеку, который был объектом лечения, наблюдения или эксперимента.

Термин терапевтически эффективное количество, как используется в настоящем описании, означает такое количество активного соединения или фармацевтического средства, которое вызывает биологический или медицинский ответ в системе ткани, животном или человеке, что оценивается исследователем, ветеринаром, врачом или другим клиницистом, который включает облегчение симптомов заболевания или расстройства, которое лечат.

Соединение(я) формулы (I) вводится любыми подходящими способами. Примеры подходящих способов введения включают, но без ограничения только ими, пероральное, внутривенное (ίν), внутримышечное (1т), подкожное (зс), трансдермальное и ректальное. Соединения могут быть также введены непосредственно в нервную систему, включая, но без ограничения только ими, интрацеребральный, интравентрикулярный, интрацеребровентрикулярный, внутриоболочечный, интрацистернальный, интраспинальный и/или периспинальный пути введения доставкой с помощью интракраниальных или интравертебральных игл и/или катетеров с или без насосных устройств.

В варианте осуществления данное изобретение относится к способу лечения депрессии, связанной с особенностью или симптоматикой биполярного расстройства. В другом варианте осуществления данное изобретение относится к способу лечения мании, связанной с особенностью или симптоматикой биполярного расстройства. В еще другом варианте осуществления данное изобретение относится к способу лечения периодичности (между депрессией и манией или депрессивной и маниакальной фазами), связанной с особенностью или симптоматикой биполярного расстройства.

В варианте осуществления данного изобретения Р¹ выбран из группы, состоящей из водорода и метила. В другом варианте осуществления данного изобретения Р² выбран из группы, состоящей из водорода и метила. В еще другом варианте осуществления данного изобретения каждый Р¹ и Р² представляют собой водород или каждый Р¹ и Р² представляют собой метил.

В варианте осуществления данного изобретения -(СН₂)_а- выбран из группы, состоящей из -СН₂- и -СН₂-СН₂-. В другом варианте осуществления данного изобретения -(СН₂)_а- представляет собой -(СН₂)-.

В варианте осуществления данного изобретения Р⁴ выбран из группы, состоящей из водорода и метила, предпочтительно Р⁴ означает водород.

В варианте осуществления данного изобретения а равно 1.

В варианте осуществления данного изобретения Ь представляет собой целое число от 0 до 2. В другом варианте осуществления данного изобретения с представляет собой целое число от 0 до 2. В другом

- 5 015514 варианте осуществления данного изобретения Ь представляет собой целое число от 0 до 1. В другом варианте осуществления данного изобретения с представляет собой целое число от 0 до 1. В еще другом варианте осуществления данного изобретения сумма Ь и с представляет собой целое число от 0 до 2, предпочтительно целое число от 0 до 1. В еще другом варианте осуществления данного изобретения Ь представляет собой целое число от 0 до 2 и с равно 0.

дигидробензо [1,4] диоксинил), 2-(бензо[1,3] диоксолил), 3-(3,4-дигидробензо [1,4] диоксепинил), 2-(6-хлор2,3-дигидробензо[1,4] диоксинил), 2-(6-фтор-2,3-дигидробензо[1,4] диоксинил), 2-(хроманил), 2-(5-фтор2,3-дигидробензо[1,4] диоксинил), 2-(7-хлор-2,3-дигидробензо[1,4] диоксинил), 2-(6-хлорбензо[1,3] диоксолил), 2-(7-нитро-2,3-дигидробензо[1,4]диоксинил), 2-(7-метил-2,3-дигидробензо[1,4]диоксинил), 2(5-хлор-2,3-дигидробензо[1,4]диоксинил), 2-(6-бром-2,3-дигидробензо[1,4] диоксинил), 2-(6,7-дихлор-2,3дигидробензо[1,4] диоксинил), 2-(8-хлор-2,3-дигидробензо[1,4] диоксинил), 2-(2,3-дигидронафто[2,3Ь][1,4] диоксинил) и 2-(4-метилбензо[1,3] диоксолил).

В другом варианте осуществления данного изобретения выбран из группы, включающей 2(бензо[1,3]диоксолил), 2-(2,3-дигидробензо[1,4]диоксинил), 2-(6-хлор-2,3-дигидробензо[1,4]диоксинил), 2-(7-хлор-2,3-дигидробензо[1,4]диоксинил), 2-(7-метил-2,3-дигидробензо[1,4]диоксинил), 2-(6-бром-2,3дигидробензо[1,4]диоксинил) и 2-(6,7-дихлор-2,3-дигидробензо[1,4]диоксинил).

В другом варианте осуществления данного изобретения выбран из группы, включающей 2(2,3-дигидробензо[1,4] диоксинил), 2-(7-метил-2,3-дигидробензо[1,4] диоксинил) и 2-(6-бром-2,3-дигидробензо[1,4]диоксинил).

В варианте осуществления данного изобретения К⁵ выбран из группы, состоящей из галогена и низшего алкила. В другом варианте осуществления данного изобретения К⁵ выбран из группы, состоящей из хлора, фтора, брома и метила.

В варианте осуществления данного изобретения стереоцентр на соединении формулы (I) представляет собой 8-конфигурацию. В другом варианте осуществления данного изобретения стереоцентр на соединении формулы (I) представляет собой К-конфигурацию.

В варианте осуществления данного изобретения соединение формулы (I) существует в виде смеси, обогащенной энантиомерами, в которой процент энантиомерного обогащения (% ее) равен больше чем примерно 75%, предпочтительно больше чем примерно 90%, предпочтительнее больше чем примерно 95%, наиболее предпочтительно больше чем примерно 98%.

Дополнительные варианты осуществления данного изобретения включают варианты, где заместители, выбранные для одного или нескольких переменных, определенных в настоящем описании (т.е. К¹, К², К³, К⁴, Х-Υ и А), независимо выбраны, чтобы представлять собой любой индивидуальный замести

- 6 015514 тель или любой набор заместителей, выбранных из полного перечня, определенного в настоящем описании.

Иллюстративные соединения данного изобретения перечислены в табл. 1 ниже. Дополнительные соединения данного изобретения перечислены в табл. 3. В табл. 1 и 2 ниже колонка, озаглавленная как стерео, определяет стереоконфигурацию при атоме углерода гетероцикла, присоединенного по связи со звездочкой. Где не приведено обозначение, соединение получали как смесь стереоконфигураций. Где приведено К или 8 обозначение стереоконфигурация была основана на энантиомерно обогащенном исходном продукте.

Таблица 1 Иллюстративные соединения формулы (I)

В4 О п1 ЛА I II / Г н Л-Т-(СН2)а Ν—-5-Ν ' о о2
№	/<ν\ (1 н >) \\ _ Ζ/	Стерео	(СН2)а	ΝΚ4	К1	к2
1	2- (2,3— дигидробензо[1,4]диоксинил)		сн2	ΝΗ	н	н
2	2-(бензо[1,3]диоксолил)		сн2	ΝΗ	н	н
3	3-(3,4-дигидро-2Нбензо[1,4]диоксепинил)		сн2	ΝΗ	н	н
4	2- (2,3- дигидробензо[1,4]диоксинил)	3	сн2	ΝΗ	н	н
5	2- (2,3- дигидробензо[1,4]диоксинил)	К	сн2	ΝΗ	н	н
6	2- (2,3- дигидробензо[1,4]диоксинил)		сн2	ΝΗ	метил	метил
7	2- (2,3— дигидробензо[1,4]диоксинил)		сн2	N (СН3)	Н	Н
8	2- (6-хлор-2,3 — дигидробензо[1,4]диоксинил)	3	сн2	ΝΗ	Н	Н
9	2- ( 6-фтор-2,3 — дигидробензо[1,4]диоксинил)	3	сн2	ΝΗ	Н	Н
10	2-(хроманил)		сн2	ΝΗ	Н	Н
13	2-(5-фтор-2,3дигидробензо[1,4]диоксинил)	3	сн2	ΝΗ	Н	Н
14	2-(7-хлор-2,3- дигидробензо[1,4]диоксинил)	3	сн2	ΝΗ	Н	Н
15	2-(6- хлорбензо[1,3]диоксолил)		сн2	ΝΗ	н	Н
16	2-(2,3- дигидробензо[1,4]диоксинил)		СН2СН2	ΝΗ	н	Н

- 7 015514

18	2-(7-нитро-2,3 — дигидробензо[1,4]диоксинил)	3	СН2	ΝΗ	Н	н
19	2-(7-метил-2,3дигидробензо[1,4]диоксинил)	3	сн2	ΝΗ	н	н
20	2- (5-хлор-2,3— дигидробензо[1,4]диоксинил)	3	сн2	ΝΗ	н	н
24	2-(б-бром-2,3— дигидробензо[1,4]диоксинил)	3	сн2	ΝΗ	н	н
29	2-(6,7-дихлор-2,3дигидробензо[1,4]диоксинил)	3	сн2	ΝΗ	н	н
30	2-(8-хлор-2,3— дигидробензо[1,4]диоксинил)	3	сн2	ΝΗ	н	н
33	2- (2,3-дигидронафто[2,3- Ь] [1,4]диоксинил)	3	сн2	ΝΗ	н	н
35	2-(4- метилбензо[1,3]диоксолил)		сн2	ΝΗ	н	н

Как используется в настоящем описании, если не оговорено особо, галоген будет означать хлор, бром, фтор и йод.

Как используется в настоящем описании, если не оговорено особо, алкил, примененный либо самостоятельно, либо как часть группы заместителя, включает прямую и разветвленную цепи. Например, алкильные радикалы включают метил, этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, пентил и тому подобное. Если не оговорено особо, термин низший при применении с алкилом означает углеродную цепь, состоящую из 1-4 атомов углерода.

Как используется в настоящем описании, если не оговорено особо, алкокси будет означать кислородный эфирный радикал вышеописанных алкильных групп с прямой или разветвленной цепью. Например, метокси, этокси, н-пропокси, втор-бутокси, трет-бутокси, н-гексилокси и тому подобное.

Как используется в настоящем описании, обозначение будет указывать на присутствие стереогенного центра.

Когда определенная группа является замещенной (т.е. алкил, арил и т.д.), эта группа может содержать один или несколько заместителей, предпочтительно от одного до пяти заместителей, предпочтительнее от одного до трех заместителей, наиболее предпочтительно от одного до двух заместителей, независимо выбранных из перечня заместителей.

По отношению к заместителям термин независимо означает, что в случае, когда возможен более чем один из таких заместителей, такие заместители могут быть одинаковыми или отличаться друг от друга.

По стандартной номенклатуре, примененной в данном описании, концевая часть указанной боковой цепи называется первой, затем соседние функциональные группы по направлению к точке присоединения. Таким образом, например, фенилалкиламинокарбонилалкильный заместитель относится к группе формулы

Сокращения, примененные в описании, особенно в схемах и примерах, означают следующее:

ЭСС = Дициклогексилкарбодиимид

ЭСЕ = Дихлорэтан

ЭСМ = Дихлорметан

Э1РЕА или Э1ЕА = Диизопропилэтиламин

ЭМЕ = Ν,Ν-Диметилформамид, ДМФА

ΩΜ3Ο = Диметилсульфоксид, ДМСО

ЕЭС = Этилкарбодиимид

ΕΕ₃Ν или ТЕА = Триэтиламин

- 8 015514

еь2о	= Диэтиловый эфир
ЕА или ЕЬОАс	= Этилацетат
ЕЬОН	= Этанол
ΙΡΑ	- 2-Пропанол
НерЬ	- Гептан
НОВТ	- 1-Гидроксибензотриазол
НРЬС	= Высокоэффективная жидкостная хроматография, ВЭЖХ
ЬАН	= Литийалюминийгидрид
М или МеОН	= Метанол

ΝΜΚ	= Ядерный магнитный резонанс, ЯМР
Ρά-С	= Палладиевый катализатор на угле
РР НРЬС	= Высокоэффективная жидкостная хроматография с обращенной фазой
НТ или гЬ	= Комнатная температура, к.т.
ТЕА	= Триэтиламин
ТЕА	= Трифторуксусная кислота
ТНЕ	= Тетрагидрофуран, ТГФ
ТЬС	= Тонкослойная хроматография, ТСХ

Когда соединения согласно данному изобретению имеют по меньшей мере один хиральный центр, они могут в соответствии с этим существовать как энантиомеры. Когда соединения обладают двумя или несколькими хиральными центрами, они могут дополнительно существовать как диастереомеры. Следует подразумевать, что все такие изомеры и их смеси охвачены объемом данного изобретения. Кроме того, некоторые кристаллические формы соединений могут существовать как полиморфы и как таковые предназначены для включения в данное изобретение. Кроме того, некоторые соединения могут образовывать сольваты с водой (т.е. гидраты) или обычными органическими растворителями, и такие сольваты также предназначены для охвата объемом данного изобретения.

Для применения в медицине соли соединений данного изобретения относятся к нетоксичным фармацевтически приемлемым солям. Однако другие соли могут быть применимы в приготовлении соединений согласно данному изобретению или их фармацевтически приемлемых солей. Подходящие фармацевтически приемлемые соли соединений включают кислотно-аддитивные соли, которые могут быть, например, получены смешиванием раствора соединения с раствором фармацевтически приемлемой кислоты, такой как хлористо-водородная кислота, серная кислота, фумаровая кислота, малеиновая кислота, янтарная кислота, уксусная кислота, бензойная кислота, лимонная кислота, винная кислота, угольная кислота или фосфорная кислота. Кроме того, там, где соединения изобретения имеют кислотную группу, подходящие их фармацевтически приемлемые соли могут включать соли щелочных металлов, например соли натрия или калия; соли щелочно-земельных металлов, например соли кальция или магния; и соли, образованные с подходящими органическими лигандами, например четвертичные аммониевые соли. Таким образом, иллюстративные фармацевтически приемлемые соли включают следующие: ацетат, бензолсульфонат, бензоат, бикарбонат, бисульфат, битартрат, борат, бромид, эдетат кальция, камзилат, карбонат, хлорид, клавуланат, цитрат, дигидрохлорид, эдетат, эдизилат, эстолат, эзилат, фумарат, глюкептат, глюконат, глутамат, гликолиларсанилат, гексилрезорцинат, гидрабамин, гидробромид, гидрохлорид, гидроксинафтоат, йодид, изотионат, лактат, лактобионат, лаурат, малат, малеат, манделат, мезилат, метилбромид, метилнитрат, метилсульфат, мукат, напсилат, нитрат, Ν-метилглюкаминовая аммонийная соль, олеат, памоат (эмбонат), пальмитат, пантотенат, фосфат/дифосфат, полигалактуронат, салицилат, стеарат, сульфат, субацетат, сукцинат, таннат, тартрат, теоклат, тозилат, триэтйодид и валерат.

Иллюстративные кислоты и основания, которые можно применять для приготовления фармацевтически приемлемых солей, включают следующие соединения: кислоты, включающие уксусную кислоту, 2,2-дихлоруксусную кислоту, ацилированные аминокислоты, адипиновую кислоту, альгиновую кислоту, аскорбиновую кислоту, Ь-аспарагиновую кислоту, бензолсульфоновую кислоту, бензойную кислоту,

4-ацетамидобензойную кислоту, (+)-камфорную кислоту, камфорсульфоновую кислоту, (+)-(18)-камфор10-сульфоновую кислоту, каприновую кислоту, капроновую кислоту, каприловую кислоту, коричную кислоту, лимонную кислоту, цикламовую кислоту, додецилсерную кислоту, этан-1,2-дисульфоновую кислоту, этансульфоновую кислоту, 2-гидроксиэтансульфоновую кислоту, муравьиную кислоту, фумаровую кислоту, галактаровую кислоту, гентизиновую кислоту, глюкогептоновую кислоту, И-глюконовую кислоту, ϋ-глюкуроновую кислоту, Ь-глутаминовую кислоту, α-оксоглутаровую кислоту, гликолевую кислоту, гипуровую кислоту, бромисто-водородную кислоту, хлористо-водородную кислоту, (+)-Ь-молочную кислоту, (±)-ПЬ-молочную кислоту, лактобионовую кислоту, малеиновую кислоту, (-)-Ь-яблочную кислоту, малоновую кислоту, (±)-ПЬ-миндальную кислоту, метансульфоновую кислоту,

- 9 015514 нафталин-2-сульфоновую кислоту, нафталин-1,5-дисульфоновую кислоту, 1-гидрокси-2-нафтойную ки слоту, никотиновую кислоту, азотную кислоту, олеиновую кислоту, оротовую кислоту, щавелевую кислоту, пальмитиновую кислоту, памовую кислоту, фосфорную кислоту, Ь-пироглутаминовую кислоту, салициловую кислоту, 4-аминосалициловую кислоту, себациновую кислоту, стеариновую кислоту, янтарную кислоту, серную кислоту, дубильную кислоту, (+)-Ь-винную кислоту, тиоциановую кислоту, п-толуолсульфоновую кислоту и ундециленовую кислоту; и основания, включающие аммиак, Ь-аргинин, бенетамин, бензатин, гидроксид кальция, холин, деанол, диэтаноламин, диэтиламин, 2-(диэтиламино)этанол, этаноламин, этилендиамин, Ν-метилглюкамин, гидрабамин, 1Н-имидазол, Ь-лизин, гидроксид магния, 4-(2-гидроксиэтил)морфолин, пиперазин, гидроксид калия, 1-(2-гидроксиэтил)пирролидин, вторичный амин, гидроксид натрия, триэтаноламин, трометамин и гидроксид цинка.

Соединения формулы (I) могут быть получены согласно способу, представленному на схеме 1

В соответствии с этим, замещенное подходящим образом соединение формулы (X), известное соединение или соединение, полученное известными способами, подвергают взаимодействию с сульфамидом, известным соединением, где сульфамид предпочтительно присутствует в количестве, находящемся в интервале от примерно 2 до примерно 5 экв., в органическом растворителе, таком как ТГФ, диоксан и тому подобное, предпочтительно при повышенной температуре в интервале от примерно 50 до примерно 100°С, предпочтительнее при примерно температуре кипения с обратным холодильником, с получением соответствующего соединения формулы (1а).

В альтернативном случае замещенное подходящим образом соединение формулы (X), известное соединение или соединение, полученное известными способами, подвергают взаимодействию с замещенным подходящим образом соединением формулы (XI), известным соединением или соединением, полученным известными способами, в присутствии основания, такого как ТЕА, ΌΙΡΕΆ, пиридин и тому подобное, в органическом растворителе, таком как ДМФА, ДМСО и тому подобное, с получением соответствующего соединения формулы (I).

Соединения формулы (X), где представляет собой

могут быть получены согласно способу, представленному на схеме 2

В соответствии с этим, замещенное подходящим образом соединение формулы (XII), известное соединение или соединение, полученное известным способом (например, как описано на приведенной выше схеме 3), подвергают взаимодействию с ΝΗ₄ΟΗ, известным соединением, необязательно в органическом растворителе, таком как ацетонитрил и тому подобное, с получением соответствующего соединения формулы (XIII).

Соединение формулы (XIII) подвергают взаимодействию с выбранным подходящим образом восстановителем, таким как ΕΆΗ, и тому подобное, в органическом растворителе, таком как ТГФ, диэтиловый эфир и тому подобное, с получением соответствующего соединения формулы (Ха).

- 10 015514

Соединения формулы (X), где

выбран из

могут быть получены согласно способу, представленному на схеме 3

В соответствии с этим, замещенное подходящим образом соединение формулы (XIV), известное соединение или соединение, полученное известными способами, подвергают взаимодействию с ΝΗ₄ΟΗ, в присутствии конденсирующего агента, такого как ОСС и тому подобное, необязательно в органическом растворителе, таком как ацетонитрил и тому подобное, с получением соответствующего соединения формулы (XV).

Соединение формулы (XV) подвергают взаимодействию с выбранным подходящим образом восстановителем, таким как ЬЛН и тому подобное, в органическом растворителе, таком как ТГФ, диэтиловый эфир и тому подобное, с получением соответствующего соединения формулы ^Ь).

Соединения формулы (X), где выбран из

и где а равно 2, могут быть получены согласно способу, представленному на схеме 4

В соответствии с этим, замещенное подходящим образом соединение формулы (XVI), где I¹ представляет собой удаляемую группу, такую как Вг, С1, I, тозил, мезил, трифлил и тому подобное, известное соединение или соединение, полученное известными способами (например, активацией соответствующего соединения, где I¹ означает ОН), подвергают взаимодействию с цианидом, таким как цианид калия, цианид натрия и тому подобное, в органическом растворителе, таком как ДМСО, ДМФА, ТГФ и тому подобное, с получением соответствующего соединения формулы (XVII).

Соединение формулы (XVII) восстанавливают согласно известным способам, например взаимодействием с подходящим восстановителем, таким как ЬЛН, боран и тому подобное, с получением соответствующего соединения формулы (Хс).

Соединения формулы (X), где

выбран из

- 11 015514 и где а равно 1, могут быть получены согласно способу, представленному на схеме 5

В соответствии с этим, замещенное подходящим образом соединение формулы (XVIII), известное соединение или соединение, полученное известными способами, активируют согласно известному способу с получением соответствующего соединения формулы (XIX), где I² представляет собой подходящую удаляемую группу, такую как тозилат, С1, Вг, I, мезилат, трифлат и тому подобное.

Соединение формулы (XIX) подвергают взаимодействию с фталимидной солью, такой как фталимид калия, фталимид натрия и тому подобное, в органическом растворителе, таком как ДМФА, ДМСО, ацетонитрил и тому подобное, предпочтительно при повышенной температуре в интервале от 50 до примерно 200°С, предпочтительнее при примерно температуре кипения с обратным холодильником с получением соответствующего соединения формулы (XX).

Соединение формулы (XX) подвергают взаимодействию с Ν₂Η₄, известным соединением, в органическом растворителе, таком как этанол, метанол и тому подобное, предпочтительно при повышенной температуре в интервале от 50 до примерно 100°С, предпочтительнее при примерно температуре кипения с обратным холодильником и тому подобное, с получением соответствующего соединения формулы Аф.

(Т)

Специалист в данной области будет представлять, что соединения формулы (X), где АА выбран из

могут быть получены аналогично по известным способам или, например, согласно способам, представленным на схемах 2-5, данных выше, подбором и заменой соответствующими нафтилконденсированными соединениями бензконденсированных исходных продуктов.

Специалист в данной области будет представлять, что в случаях, где требуется единственный энантиомер соединения формулы (X) (или смесь энантиомеров, в которой один энантиомер является обогащенным), вышепредставленные способы, описанные в схемах 1-5, могут быть применены с помощью замены на соответствующий отдельный энантиомер (или смесь энантиомеров, в которой один энантиомер является обогащенным) соответствующего исходного продукта.

Специалист в данной области будет представлять, что в случаях, где стадия реакции данного изобретения может быть выполнена во многих растворителях или системах растворителей, указанная стадия

- 12 015514 реакции может быть также выполнена в смеси подходящих растворителей или системах растворителей.

В случаях, где способы получения соединений согласно изобретению дают преимущественно смесь стереоизомеров, данные изомеры могут быть разделены обычными процедурами, такими как препаративная хроматография. Соединения могут быть приготовлены в рацемической форме или индивидуальные энантиомеры могут быть приготовлены либо энантиоспецифическим синтезом, либо разделением. Соединения, например, могут быть разделены на их составные энантиомеры стандартными процедурами, такими как получение диастереомерных пар образованием солей с оптически активной кислотой, такой как (-)-ди-п-толуоил-Э-винная кислота и/или (+)-ди-п-толуоил-Ь-винная кислота, с последующей фракционной кристаллизацией и регенерацией свободного основания. Соединения могут быть также разделены образованием диастереомерных сложных эфиров или амидов с последующим хроматографическим разделением и удалением хирального вспомогательного вещества. В альтернативном случае, соединения могут быть разделены применением хиральной ВЭЖХ колонки.

В ходе осуществления любого из способов получения соединений данного изобретения может потребоваться и/или желательно защитить чувствительные или реакционноспособные группы на любой из участвующих молекул. Это может быть достигнуто с помощью обычных защитных групп, таких как группы, описанные в Рго1есбуе Сгоирк ίη Огдаше Сйетщйу, еб. Ι.Ε.’Ψ. МеОт1е, Р1епит Ргекк, 1973 и Τ/Ψ. Сгеепе апб Р.С.М. \Уи1к. РгсИеебуе Сгоирк ίη Огдаше 8уп!йек1к, ίοΐιη \УПеу апб 8опк, 1991. Защитные группы могут быть удалены на подходящей последующей стадии при использовании способов, известных в данной области.

Способ лечения депрессии, описанный в данном изобретении, может быть также осуществлен применением фармацевтической композиции, содержащей любое из соединений, определенных в настоящем описании, и фармацевтически приемлемый носитель. Фармацевтическая композиция может содержать от примерно 0,1 до 1000 мг, предпочтительно от примерно 50 до 500 мг соединения и может быть составлена в любой форме, подходящей для выбранного способа введения. Носители включают необходимые и инертные фармацевтические наполнители, включающие, но без ограничения только ими, связующие вещества, суспендирующие средства, замасливатели, ароматизаторы, подсластители, консерванты, красители и средства для покрытия. Композиции, подходящие для перорального введения, включают твердые формы, такие как пилюли, таблетки, таблетки в виде капсулы, капсулы (причем каждые включают препаративные формы с немедленным высвобождением, периодичным высвобождением и пролонгированным высвобождение действующего вещества), гранулы и порошки, и жидкие формы, такие как растворы, сиропы, эликсиры эмульсии и суспензии. Формы, применимые для парентерального введения, включают стерильные растворы, эмульсии и суспензии.

Преимущественно соединения данного изобретения могут быть введены в однократной суточной дозе или общая суточная доза может быть введена в разделенных дозах два, три или четыре раза в сутки. Кроме того, соединения данного изобретения могут быть введены в интраназальной форме путем местного применения подходящих интраназальных наполнителей или трансдермальных кожных пластырей, хорошо известных специалистам в данной области. Предназначенное для поступления в форме трансдермальной системы доставки, введение дозы будет, конечно, непрерывным, а не скачкообразным на протяжении всего режима приема лекарственного средства.

Например, для перорального введения в форме таблетки или капсулы активный лекарственный компонент может быть смешан с пероральным, нетоксичным фармацевтически приемлемым инертным наполнителем, таким как этанол, глицерин, вода и тому подобное. Кроме того, при желании или необходимости в смесь могут быть включены подходящие связующие вещества, замасливатели, диспергаторы и красители. Подходящие связующие вещества включают, без ограничения, крахмал, желатин, природные сахара, такие как глюкоза или бета-лактоза, подсластители из кукурузы, природные и синтетические камеди/смолы, такие как аравийская камедь, трагакант или олеат натрия, стеарат натрия, стеарат магния, бензоат натрия, ацетат натрия, хлорид натрия и тому подобное. Диспергаторы включают, без ограничения, крахмал, метилцеллюлозу, агар, бентонит, ксантановую камедь и тому подобное.

Жидкость формируется в подходящим образом ароматизированных суспендирующих или диспергирующих средствах, таких как синтетические и природные камеди/смолы, например трагакант, аравийская камедь, метилцеллюлоза и тому подобное. Для парентерального введения желательны суспензии и растворы. Когда требуется внутривенное введение, используют изотонические препараты, которые содержат подходящие консерванты.

Соединения данного изобретения могут быть введены в любой из представленных выше композиций и согласно схемам приема лекарственных средств, установленным в данной области, всякий раз, когда требуется лечение депрессии.

Суточная доза продуктов может изменяться в широком интервале от 0,01 до 200 мг/кг на взрослого человека в сутки.

Для перорального введения композиции обычно предоставляются в форме таблеток, содержащих 0,01, 0,05, 0,1, 0,5, 1,0, 2,5, 5,0, 10,0, 15,0, 25,0, 50,0, 100, 150, 200, 250, 500 и 1000 мг активного ингредиента для симптоматической регулировки дозы по отношению к пациенту, подлежащему лечению. Эффективное количество лекарственного средства обычно снабжается уровнем доз от примерно 0,01 до

- 13 015514 примерно 200 мг/кг массы тела в сутки. Предпочтительно интервал составляет от примерно 0,1 до примерно 100,0 мг/кг массы тела в сутки, предпочтительнее от примерно 0,5 до примерно 50 мг/кг, предпочтительнее от примерно 1,0 до примерно 25,0 мг/кг массы тела в сутки. Соединения могут вводиться по схемам от 1 до 4 раз в сутки.

Оптимальные дозировки, подлежащие введению, могут быть легко определены специалистом в данной области и будут изменяться в зависимости от конкретного применяемого соединения, пути введения, эффективности препарата и улучшения болезненного состояния. Кроме того, факторы, связанные с конкретным пациентом, который лечится, включающие возраст пациента, массу, диету и время введения, будут приводить к необходимости регулировать дозировку.

Специалист в данной области будет представлять, что как т νίνο, так и т νίΐΐΌ опыты, использующие подходящие, известные и общепринятые клеточные и/или животные модели, являются прогностичными в отношении способности тест-соединений лечить или предохранять от данного расстройства.

Специалист в данной области, кроме того, будет представлять, что клинические опыты на человеке, включающие опыты на первом человеке, опыты по интервалу доз и опыты по эффективности, на здоровых пациентах и/или пациентах, страдающих от данного расстройства, могут быть завершены согласно методам, хорошо известным в клинической и медицинской областях.

Следующие примеры изложены, чтобы помочь в понимании изобретения и не предназначены и не должны быть восприняты так, чтобы ограничивать любым способом изобретение, представленное в пунктах формулы изобретения, которые следуют после этого.

Пример 1. ((3,4-Дигидро-2Н-бензо[Ь][1,4]диоксепин-3-ил)метил)сульфамид (соединение #3)

О

Катехин (5,09 г, 46,2 ммоль) и карбонат калия перемешивали в ацетонитриле и нагревали при кипячении с обратным холодильником в течение одного часа. Добавляли 2-хлорметил-3-хлор-1-пропен (5,78 г, 46,2 ммоль) и реакционную смесь продолжали кипятить с обратным холодильником в течение 24 ч. Раствор охлаждали до комнатной температуры и фильтровали. Фильтрат упаривали, остаток разбавляли водой и экстрагировали диэтиловым эфиром (3х). Объединенный органический раствор сушили над Мд8О₄ и концентрировали. Хроматография (2% этиловый эфир в гексане) приводила к 3-метилен3,4-дигидро-2Н-бензо[Ь][1,4]диоксепину в виде бесцветного масла.

М8 (Εδφ: 163,2 (М+Н⁺); ¹Н ЯМР (300 МГц, СЭС^): δ 6,94 (м, 4Н), 5,07 (с, 2Н), 4,76 (с, 4Н). 3-Метилен-3,4-дигидро-2Н-бензо[Ь][1,4]диоксепин (5,00 г, 30,8 ммоль) растворяли в сухом ТГФ (100 мл). Добавляли при 0°С боран-ТГФ (1,0 М в ТГФ, 10,3 мл). Реакционную смесь перемешивали при к.т. в течение 5 ч. Добавляли аминосульфоновую кислоту (6,97 г, 61,6 ммоль). Реакционную смесь кипятили с обратным холодильником в течение ночи. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и к ней добавляли водный гидроксид натрия (3,0 М, 100 мл). Раствор экстрагировали этилацетатом (3х100 мл). Объединенный органический раствор сушили над М§8О₄. Раствор концентрировали в вакууме и очищали хроматографией (от 2 до 8% метанол в дихлорметане) с получением ((3,4-дигидро-2Н-бензо[Ь][1,4]диоксепин-3-ил)метил)амина в виде бесцветного масла.

М8 (Е8ф: 180,1 (М+Н⁺); ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО): δ 6,92 (м, 4Н), 4,21 (м, 2Н), 4,07 (м, 2Н), 3,33 (уш, 2Н), 3,16 (д, 1=4 Гц, 1Н), 2,72 (д, 1=4 Гц, 1Н), 2,30 (м, 1Н).

((3,4-Дигидро-2Н-бензо[Ь][1,4]диоксепин-3-ил)метил)амин (2,90 г, 16,2 ммоль) и сульфамид (3,11 г, 32,4 ммоль) смешивали в сухом диоксане (60 мл) и кипятили с обратным холодильником в течение ночи. Добавляли хлороформ и осадок удаляли фильтрованием. Фильтрат концентрировали в вакууме и очищали хроматографией (от 2 до 8% ацетон в дихлорметане) с получением указанного в заголовке соединения в виде не совсем белого твердого вещества.

258,8 (М+Н⁺); ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО): δ 6,92 (м, 4Н), 6,71 (уш., 1Н), 6,59 (уш., 2Н), 4,19 (м, 2Н), 4,04 (м, 2Н), 3,00 (м, 2Н), 2,39 (м, 1Н).

Пример 2. №(2,3-Дигидробензо[1,4]диоксин-2-илметил)сульфамид (соединение #1)

Рацемический 2,3-дигидро-1,4-бенздиоксин-2-илметиламин (4,4 г, 26 ммоль) и сульфамид (5,1 г, 53 ммоль) смешивали в 1,4-диоксане (100 мл) и кипятили с обратным холодильником в течение 2 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и небольшое количество твердого вещества отфильтровывали и отбрасывали. Фильтрат упаривали в вакууме и остаток очищали, используя флэшколоночную хроматографию (ЭСМ:метанол - 10:1), с получением белого твердого вещества. Твердое вещество перекристаллизовывали из ЭСМ с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества.

- 14 015514

Т.пл.: 97,5-98,5°С.

Элементный анализ:

анал. вычислено: С, 44,25; Н, 4,95; Ν, 11,47; 8, 13,13;

анал. найдено: С, 44,28; Н, 4,66; Ν, 11,21; 8, 13,15.

Ή ЯМР (ДМСО ά₆): δ 6,85 (м, 4Н), 6,68 (уш.с, 3Н, ΝΗ), 4,28 (м, 2Н), 3,97 (дд, 1=6,9, 11,4 Гц, 1Н), 3,20 (м, 1Н), 3,10 (м, 1Н).

Пример 3. (Бензо [1,3] диоксол-2-илметил)сульфамид (соединение #2)

О

Катехин (10,26 г, 93,2 ммоль), метоксид натрия (25 мас.% в метаноле, 40,3 г, 186 ммоль) и метилдихлорацетат (13,3 г, 93,2 ммоль) смешивали в сухом метаноле (100 мл). Раствор нагревали при кипении с обратным холодильником в течение ночи. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, подкисляли добавлением концентрированной хлористо-водородной кислоты и затем концентрировали в вакууме до объема примерно 50 мл. Добавляли воду и смесь экстрагировали диэтиловым эфиром (3x100 мл). Объединенный органический раствор сушили с Мд8О₄, концентрировали до коричневого твердого вещества и хроматографировали (2% этилацетат в гексане) с получением метилового эфира бензо[1,3]диоксол-2-карбоновой кислоты в виде бесцветного масла.

М8 (Е8У 195,10 (М+Н⁺).

¹Η ЯМР (300 МГц, СЭС1₃): δ 6,89 (уш., 4Н), 6,29 (с, 1Н), 4,34 (кв, 1=7 Гц, 2Н), 1,33 (т, 1=7 Гц, 3Н).

К метиловому эфиру бензо[1,3]диоксол-2-карбоновой кислоты (7,21 г, 40,0 ммоль) добавляли гидроксид аммония (29% в воде, 10 мл) и ацетонитрил, достаточный, чтобы сделать смесь гомогенной (~5 мл). Раствор перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре и затем к нему добавляли дистиллированную воду. Осаждался амид бензо[1,3]диоксол-2-карбоновой кислоты в виде белого твердого вещества и его отделяли фильтрованием и использовали без дополнительной очистки.

М8 (Е8У 160,00 (М+Н⁺).

¹Η ЯМР (300 МГц, ДМСО): δ 7,99 (с, уш., 1Н), 7,72 (с, уш., 1Н), 6,94 (м, 2Н), 6,86 (м, 2Н), 6,30 (с, 1Н).

Амид бензо[1,3]диоксол-2-карбоновой кислоты (5,44 г, 32,9 ммоль) растворяли в тетрагидрофуране (ТГФ, 100 мл). Литийалюминийгидрид (ΕΆΗ, 1 М в ТГФ, 39,5 мл, 39,5 ммоль) медленно добавляли к раствору при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 24 ч. Дистиллированную воду добавляли для разложения избытка БАН Добавляли водный раствор гидроксида натрия (3,0 М, 100 мл) и раствор экстрагировали этилацетатом (3x100 мл). Объединенный органический раствор промывали водой и сушили над Мд8О₄. Растворитель выпаривали, получая С-бензо[1,3]диоксол-2-илметиламин в виде бесцветного масла.

М8 (Е8У 152,1 (М+Н⁺); ¹Н ЯМР (300 МГц, СЭС1₃): δ 6,87 (м, 4Н), 6,09 (т, 1=4 Гц, 1Н), 3,13 (д, 1=4 Гц, 2Н).

С-Бензо[1,3]диоксол-2-илметиламин (2,94 г, 19,4 ммоль) и сульфамид (3,74 г, 38,9 ммоль) смешивали в сухом диоксане (50 мл) и раствор нагревали при кипении с обратным холодильником в течение ночи. Реакционную смесь концентрировали и остаток хроматографировали (от 2 до 10% ацетона в дихлорметане) с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества.

М8 (Е8Г): 230,0 (М+Η).

¹Н ЯМР (300 МГц, СЭС1₃): δ 6,87 (м, 4Н), 6,25 (т, 1=4 Гц, 1Н), 4,79 (уш., 1Н), 4,62 (уш., 1Н), 3,64 (д, 1=4 Гц, 2Н).

Пример 4. (28)-(-)-П-(2,3-Дигидробензо[1,4]диоксин-2-илметил)сульфамид (соединение #4)

Катехин (13,2 г, 0,12 моль) и карбонат калия (16,6 г, 0,12 моль) перемешивали в ДМФА (250 мл) и добавляли (2К)-глицидилтозилат (22,8 г, 0,10 моль) и реакционную смесь перемешивали при 60°С в течение 24 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли ледяной водой (1 л) и экстрагировали диэтиловым эфиром (4 раза). Объединенный органический раствор промывали 3 раза 10% карбонатом калия, один раз водой, один раз насыщенным солевым раствором и упаривали в вакууме, получая белое твердое вещество, которое очищали флэш-колоночной хроматографией (ЭСМ:метанол - 50:1) с получением ((28)-2,3-дигидробензо [1,4] диоксин-2-ил)метанола в виде твердого вещества.

Твердое вещество (13,3 г, 68 ммоль) растворяли в пиридине (85 мл), охлажденном до 0°С, добавляли п-толуолсульфонилхлорид (13,0 г, 68 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 ч. Реакционную смесь разбавляли диэтиловым эфиром (1 л) и 1 Ν Η^ (1,2 л). Органический слой отделяли и промывали 2 раза 1 Ν Η^ (500 мл), 4 раза водой (150 мл), один раз на

- 15 015514 сыщенным солевым раствором, сушили (Мд8О₄), упаривали в вакууме с получением белого твердого вещества, которое очищали флэш-колоночной хроматографией (гептан:ЕА - 2:1), с получением (28)-2,3дигидробензо[1,4]диоксин-2-илметилового эфира толуол-4-сульфоновой кислоты в виде белого твердого вещества.

Белое твердое вещество смешивали с фталимидом калия (14,4 г, 78 ммоль) в ДМФА (250 мл) и нагревали при кипении с обратным холодильником в течение 1 ч, охлаждали до комнатной температуры и выливали в интенсивно перемешиваемую воду (1,5 л) и перемешивали 30 мин. Белое твердое вещество фильтровали и твердое вещество промывали несколько раз водой, 2% ЫаОН и снова водой и оставляли сохнуть на воздухе, получая (28)-2-(2,3-дигидробензо[1,4]диоксин-2-илметил)изоиндол-1,3-дион в виде белого порошкообразного твердого вещества.

Порошкообразное белое твердое вещество смешивали с гидразином (2,75 г, 86 ммоль) в ЕЮН (225 мл) и нагревали при кипении с обратным холодильником в течение 2 ч, охлаждали до комнатной температуры и добавляли 1 N НС1 до рН 1,0 и перемешивали в течение 15 мин. Белое твердое вещество фильтровали и промывали свежеперегнанным ЕЮН (твердое вещество отбрасывали) и фильтрат упаривали в вакууме до получения твердого вещества, которое распределяли между диэтиловым эфиром и разбавленным водным №011. Раствор в диэтиловом эфире сушили (№₂8О₄) и выпаривали в вакууме с получением светло-желтого масла. Масло очищали флэш-колоночной хроматографией (ЭСМ:МеОН 10:1) с получением масла. Порцию масла (4,82 г, 0,29 ммоль) в 2-пропаноле (250 мл) обрабатывали 1 N НС1 (30 мл) и нагревали на паровой бане до гомогенности и затем оставляли охлаждаться до комнатной температуры. Через 3 ч смесь охлаждали льдом в течение 2 ч. Белое хлопьевидное твердое вещество (соответствующую НС1 соль (28)-С-(2,3-дигидробензо[1,4]диоксин-2-ил)метиламина) отфильтровывали и затем снова перекристаллизовывали из 2-пропанола, получая белое твердое вещество.

[α]ο= -69,6° (с = 1,06, ЕЮН).

Белое твердое вещество распределяли между ЭСМ и разбавленным №ОН и ЭСМ сушили (№₂8О₃) и выпаривали в вакууме с получением (28)-С-(2,3-дигидробензо[1,4]диоксин-2-ил)метиламина в виде масла.

[α]ο= -57,8° (с = 1,40, СНС1₃).

Данное масло (2,1 г, 12,7 ммоль) и сульфамид (2,44 г, 25,4 ммоль) в диоксане (75 мл) нагревали при кипении с обратным холодильником в течение 2 ч и сырой продукт очищали флэш-колоночной хроматографией (ЭСМ:МеОН - 10:1) с получением белого твердого вещества, которое перекристаллизовывали из ЭСМ, получая указанное в заголовке соединение в виде белого кристаллического твердого вещества.

Т. пл. 102-103°С; [α]_ο = -45,1° (с = 1,05, М).

¹Н ЯМР (ДМСО 06): δ 6,86 (м, 4Н), 6,81 (уш.с, 3Н, ΝΠ), 4,3 (м, 2Н), 3,97 (дд, 1=6,9, 11,4 Гц, 1Н), 3,20 (дд, 1=5,5, 13,7 Гц, 1Н), 3,10 (дд, 1=6,9, 13,7 Гц, 1Н).

Элементный анализ:

анал. вычислено: С, 44,25; Н, 4,95; Ν, 11,47; 8, 13,13;

анал. найдено: С, 44,20; Н, 4,69; Ν, 11,40; 8, 13,22.

Пример 5. №(2,3-Дигидробензо[1,4]диоксин-2-илметил)-№,№диметилсульфамид (соединение #6)

Рацемический 2,3-дигидро-1,4-бенздиоксин-2-илметиламин (8,25 г, 5 ммоль) и триэтиламин (1,52 г, 15 ммоль) смешивали в ДМФА (10 мл) и охлаждали на ледяной бане, когда добавляли диметилсульфамоилхлорид (1,44 г, 10 ммоль). Затем реакционную смесь перемешивали в течение 3 ч с непрерывным охлаждением. Реакционную смесь распределяли между этилацетатом и водой и этилацетатный раствор промывали насыщенным солевым раствором, сушили (Мд8О₄) и упаривали в вакууме с получением масла. Масло очищали, используя флэш-колоночную хроматографию (этилацетат: гептан - 1:1) с получением белого твердого вещества, которое кристаллизовали (этилацетат/гексан) с получением указанного в заголовке соединения в виде белого хлопьевидного твердого вещества.

Т. пл. 76-78°С; М8 273 (МН⁺).

Элементный анализ:

анал. вычислено: С, 48,52; Н, 5,92; Ν, 10,29; 8, 11,78;

анал. найдено: С, 48,63; Н, 5,62; Ν, 10,20; 8, 11,90.

¹Н ЯМР (СЭС13): δ 6,87 (м, 4Н), 4,59 (уш.м, 1Н, Ν4), 4,35 (м, 1Н), 4,27 (дд, 1=2,3, 11,4 Гц, 1Н), 4,04 (дд, 1=7,0, 11,4, 1Н), 3,36 (м, 2Н), 2,82 (с, 6Н).

- 16 015514

Пример 6. №(2,3-Дигидробензо[1,4]диоксин-2-илметил)-№метилсульфамид (соединение #7)

Рацемический 2,3-дигидро-1,4-бенздиоксин-2-илметиламин (825 мг, 5 ммоль) растворяли в этилформиате (15 мл), кипятили с обратным холодильником в течение 30 мин и упаривали в вакууме с получением ^(2,3-дигидробензо[1,4]диоксин-2-илметил)формамида в виде масла.

Данное масло в диэтиловом эфире (25 мл) обрабатывали с помощью 1 М БАН в ТГФ (9,0 мл, 9,0 ммоль) при 0°С и перемешивали в течение 5 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь охлаждали на ледяной бане и гасили водой (0,50 мл), затем 3 Ν ΝαΟΙ I (0,50 мл) и водой (0,50 мл). Затем смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Твердое вещество фильтровали и фильтрат упаривали в вакууме с получением остатка, который распределяли между 1 N НС1 и диэтиловым эфиром. Водную фазу подщелачивали с помощью 1 Ν ΝαΟΙ I и экстрагировали диэтиловым эфиром. Органическую фазу сушили (Мд8О₄) и упаривали в вакууме с получением (2,3-дигидробензо[1,4]диоксин2-илметил)метиламина в виде масла.

М8 180 (МН⁺).

¹Н ЯМР (СЭС1₃): δ 6,85 (м, 4Н), 4,30 (м, 2Н), 4,02 (дд, 1=7,9, 11,6 Гц, 1Н), 2,85 (м, 2Н), 2,50 (с, 3Н).

Данное масло (380 мг, 2,1 ммоль) и сульфамид (820 мг, 8,5 ммоль) смешивали в диоксане (15 мл), нагревали при кипении с обратным холодильником в течение 1,5 ч и упаривали в вакууме с получением сырого остатка. Остаток очищали колоночной хроматографией (этилацетат/гептан 1:1) и полученное твердое вещество перекристаллизовывали из смеси этилацетат/гексан, получая указанное в заголовке соединение в виде белого твердого вещества.

Т. пл. 97-98°С.

М8 257 (М^-1).

Элементный анализ:

анал. вычислено: С, 46,50; Н, 5,46; Ν, 10,85; 8, 12,41;

анал. найдено: С, 46,48; Н, 5,65; Ν, 10,90; 8, 12,07.

¹Н ЯМР (СЭС1₃): δ 6,86 (м, 4Н), 4,52 (уш.с, 2Н), 4,46 (м, 1Н), 4,29 (дд, 1=2,3, 11,5 Гц, 1Н), 4,05 (дд, 1=6,5, 11,5 Гц, 1Н), 3,51 (дд, 1=6,7, 14,9 Гц, 1Н), 3,40 (дд, 1=5,9, 14,9 Гц, 1Н), 2,99 (с, 3Н).

Пример 7. (28)-(-)-№(6-Хлор-2,3-дигидробензо[1,4]диоксин-2-илметил)сульфамид (соединение #8)

Следуя методике примера 4, подвергают взаимодействию 4-хлоркатехин с получением смеси (28)С-(7-хлор-2,3-дигидробензо[1,4]диоксин-2-ил)метиламина и (28)-С-(6-хлор-2,3-дигидробензо[1,4]диоксин-2-ил)метиламина (отношение 6-хлор:7-хлор изомеры равно приблизительно 3:1 по данным ВЭЖХ).

Данную смесь растворяли в 2-пропаноле (100 мл) и к ней добавляли 1 Ν НС1 в диэтиловом эфире до достижения рН 1,0. Гидрохлоридную соль, которая осаждалась, фильтровали (2,65 г) и перекристаллизовывали из смеси метанолЛРА с получением белых кристаллов. Белые кристаллы распределяли между □СМ и разбавленным ΝαΟΗ. ЭСМ-раствор сушили и выпаривали в вакууме с получением очищенного (28)-С-(6-хлор-2,3-дигидробензо[1,4]диоксин-2-ил)метиламина в виде масла.

[α]η= -67,8° (с = 1,51, СНОД.

Данное масло (7,75 ммоль) и сульфамид (1,50 г, 15,5 ммоль) смешивали в диоксане (50 мл) и нагревали при кипении с обратным холодильником в течение 2,0 ч, охлаждали до комнатной температуры и упаривали в вакууме с получением твердого вещества. Продукт очищали флэш-колоночной хроматографией, используя ЭСМ/метанол 20:1, с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества.

М8 277 (М^-1); [α]ρ = -59,9° (с = 1,11, М).

¹Н ЯМР (СЭС13): δ 6,90 (д, 1=2,2 Гц, 1Н), 6,81 (м, 2Н), 4,76 (м, 1Н), 4,55 (с, 2Н), 4,40 (м, 1Н), 4,29 (дд, 1=2,4, 11,5 Гц, 1Н), 4,05 (дд, 1=7,1, 11,5 Гц, 1Н), 3,45 (м, 2Н).

Элементный анализ:

анал. вычислено: С, 38,78; Н, 3,98; Ν, 10,05;

анал. найдено: С, 38,80; Н, 3,67; Ν, 9,99.

Фильтраты от перекристаллизованной гидрохлоридной соли (28)-С-(6-хлор-2,3-дигидробензо[1,4]диоксин-2-ил)метиламина, полученной выше, выделяли (отношение 6-хлор:7-хлор изомеры равно приблизительно 1:1) и упаривали в вакууме с получением твердого вещества, которое распределяли между ОСМ (200 мл) и разбавленным ΝαΟΙ I (0,5 М, 50 мл). ЭСМ-раствор промывали один раз насыщенным солевым раствором, сушили (Να₂8Ο₄) и выпаривали в вакууме с получением масла, которое очища

- 17 015514 ли ВЭЖХ с обращенной фазой (10-50% Ά0Ν с 0,16% ТРА в воде с 0,20% ТРЛ) с получением (28)-С-(7хлор-2,3-дигидробензо[1,4]диоксин-2-ил)метиламина в качестве остатка.

Данный остаток смешивали с сульфамидом (0,90 г, 9,4 ммоль) в диоксане (25 мл) и нагревали при кипении с обратным холодильником в течение 2,5 ч, охлаждали до комнатной температуры и упаривали в вакууме с получением масла. Масло очищали флэш-колоночной хроматографией, используя БСМ/метанол 10:1, с получением (28)-(-)-№(7-хлор-2,3-дигидробензо[1,4]диоксин-2-илметил)сульфамида в виде белого твердого вещества.

М8 277 (М^-1).

¹Н ЯМР (СОС1з/СПзОП): δ 6,88 (д, 1=0,7 Гц, 1Н), 6,81 (м, 2Н), 4,37 (м, 1Н), 4,30 (дд, 1=2,3, 11,6 Гц, 1Н), 4,04 (дд, 1=7,0, 11,6 Гц, 1Н), 3,38 (м, 2Н).

Пример 8. Хроман-2-илметилсульфамид (соединение #10)

Хроман-2-карбоновую кислоту (4,5 г, 25 ммоль) и НОВТ (3,86 г, 25 ммоль) смешивали в ЭСМ (40 мл) и ДМФА (10 мл). Диметиламинопропилэтилкарбодиимид (БЭС, 4,84 г, 25 ммоль) добавляли при комнатной температуре и реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин. Добавляли гидроксид аммония (2,26 мл, 33,4 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение 16 ч. Реакционную смесь разбавляли ЭСМ (50 мл) и водой (50 мл) и рН смеси устанавливали до примерно рН 3,0 с помощью 1 N НС1. БСМ-слой отделяли и водную фазу экстрагировали дважды с помощью БСМ. Объединенную БСМ-фазу сушили (№₂8О₂) и упаривали в вакууме с получением масла, которое очищали флэшколоночной хроматографией (этилацетат), получая масло.

Данное масло (5,35 г, 30 ммоль) в ТГФ (90 мл) перемешивали по мере того, как добавляли 1 N БАН в ТГФ (36 мл, 36 ммоль), и реакционную смесь затем перемешивали в течение 20 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь гасили водой, перемешивали в течение 2 ч, раствор декантировали, сушили (№₂8О₂) и упаривали в вакууме с получением С-хроман-2-илметиламина в виде маслянистого амина.

Данный маслянистый амин (1,63 г, 10 ммоль) и сульфамид (1,92 г, 20 ммоль) смешивали в диоксане (50 мл) и нагревали при кипении с обратным холодильником в течение 2 ч. Раствор охлаждали и упаривали в вакууме с получением масла, которое очищали колоночной хроматографией (БСМ/метанол 10:1) с получением твердого белого вещества. Твердое вещество перекристаллизовывали из смеси этилацетат/гексан, получая хроман-2-илметилсульфамид в виде белого твердого вещества.

Т. пл. 100-101°С; М8 241 (М^-1).

Элементный анализ:

анал. вычислено: С, 49,57; Н, 5,82; Ν, 11,56; 8, 13,23;

анал. найдено: С, 49,57; Н, 5,80; Ν, 11,75; 8, 13,33.

Пример 9. 2-(2,3-Дигидробензо [1,4] диоксин-2-ил)этилсульфамид (соединение #16)

Цианид калия (2,05 г, 31,5 ммоль) добавляли к 2-бромметил-(2,3-дигидробензо[1,4]диоксину) (6,87 г, 30 ммоль) в ДМСО (90 мл) и перемешивали при температуре окружающей среды в течение 20 ч. Реакционную смесь затем разбавляли водой (250 мл) и экстрагировали дважды диэтиловым эфиром. Раствор в диэтиловом эфире промывали водой, затем дважды промывали насыщенным солевым раствором, сушили (Να₂8Ο₄) и выпаривали в вакууме с получением 2-цианометил-(2,3-дигидробензо[1,4]диоксина) в виде белого твердого вещества.

¹Н ЯМР (СЭС1₃): δ 6,89 (м, 4Н), 4,50 (м, 1Н), 4,31 (дд, 1=2,3, 11,5 Гц, 1Н), 4,08 (дд, 1=6,2, 11,6 Гц, 1Н), 2,78 (д, 1=6,1 Гц, 2Н).

2-Цианометил-(2,3-дигидробензо[1,4]диоксин) растворяли в ТГФ (50 мл) и к раствору добавляли 1 М ВН3 в ТГФ (80 мл, 80 ммоль) и реакционную смесь кипятили с обратным холодильником в течение 5 ч, затем перемешивали при температуре окружающей среды в течение 16 ч. При охлаждении на ледяной бане добавляли 2 Ν НС1 до достижения рН 1,0. Реакционную смесь затем перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре и упаривали в вакууме с получением масла. Данное масло распределяли между 3 Ν ΝαΟΙΙ и диэтиловым эфиром и раствор в диэтиловом эфире промывали насыщенным солевым раствором, сушили (№₂8О₄) и выпаривали в вакууме с получением неочищенного 2-(2,3-дигидробензо[1,4]диоксин-2-ил)этиламина.

М8 (М+Н)⁺ 180.

Неочищенный 2-(2,3-дигидробензо[1,4]диоксин-2-ил)этиламин в диоксане (100 мл) смешивали с сульфамидом (3,0 г, 31 ммоль) и нагревали при кипении с обратным холодильником в течение 2 ч. Раствор охлаждали и упаривали в вакууме с получением оранжевого твердого вещества, которое очищали колоночной хроматографией (БСМ/МеОН - 10:1) с получением твердого белого вещества. Твердое ве

- 18 015514 щество перекристаллизовывали из ЭСМ, получая указанное в заголовке соединение в виде твердого вещества.

М8 (М-1) 257. Т.пл. 101-103°С (испр.).

¹Н ЯМР (СЭС1₃): δ 6,86 (м, 4Н), 4,70 (м, 1Н), 4,52 (с, 2Н), 4,30 (м, 2Н), 3,94 (дд, 1=7,4, 11,3 Гц, 1Н),

3,43 (дд, 1=6,4, 12,9 Гц, 2Н), 1,94 (дд, 1=6,5, 12,9, 2Н).

Элементный анализ:

найдено: С, 46,48; Н, 5,60; Ν, 10,81; 8, 12,41;

вычислено: С, 46,50; Н, 5,46; Ν, 10,85; 8, 12,41.

Пример 10. (28)-(-У-(6,7-Дихлор-2,3-дигидробензо[1,4]диоксин-2-илметил)сульфамид (соединение #29)

4,5-Дихлоркатехин (8,6 г, 48 ммоль) и карбонат калия (6,64 г, 48 ммоль) перемешивали в ДМФА (200 мл). Добавляли (2К)-глицидилтозилат (9,12 г, 40 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при 60°С в течение 24 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, затем разбавляли ледяной водой (600 мл) и экстрагировали диэтиловым эфиром (4 раза). Объединенный органический раствор промывали 3 раза 10% карбонатом калия, дважды насыщенным солевым раствором, сушили (Мд8О₄) и упаривали в вакууме с получением вязкого масла (28)-2-(6,7-дихлор-2,3-дигидробензо[1,4]диоксин)метанола.

Масло из (28)-2-(6,7-дихлор-2,3-дигидробензо[1,4]диоксин)метанола (6,4 г, 27 ммоль) растворяли в пиридине (50 мл), охлажденном до 0°С. Затем добавляли п-толуолсульфонилхлорид (5,2 г, 27 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 ч. Реакционную смесь разбавляли диэтиловым эфиром и 1 Ν НС1 (750 мл) и органический слой отделяли и промывали 2 раза 1 Ν НС1 (250 мл), один раз водой (150 мл), дважды насыщенным солевым раствором, сушили (Мд8О₄) и упаривали в вакууме с получением светло-желтого твердого (28)-2-6,7-дихлор-2,3-дигидробензо[1,4]диоксин-2-илметилового эфира толуол-4-сульфоновой кислоты.

¹Н ЯМР (СЭС1₃): δ 7,79 (д, 1=8,3 Гц, 2Н), 7,36 (д, 1=8,0 Гц, 2Н), 6,94 (с, 1Н), 6,83 (с, 1Н), 4,37 (м, 1Н), 4,2 (м, 3Н), 4,03 (дд, 1=6,3, 11,7 Гц, 1Н), 2,47 (с, 3Н).

(28)-2-6,7-дихлор-2,3-дигидробензо[1,4]диоксин-2-илметиловый эфир толуол-4-сульфоновой кислоты (8,0 г, 20,5 ммоль) смешивали с фталимидом калия (6,1 г, 33 ммоль) в ДМФА (75 мл) и нагревали при кипении с обратным холодильником в течение 1 ч, охлаждали до комнатной температуры и выливали в интенсивно перемешиваемую воду (0,5 л) и затем перемешивали 30 мин. Белое твердое вещество фильтровали и твердое вещество промывали несколько раз водой, 2% \аО11 и снова водой и затем оставляли сохнуть на воздухе, получая (28)-2-(6,7-дихлор-2,3-дигидробензо[1,4]диоксин-2-илметил)изоиндол-1,3-дион (6 г, 80%) в виде белого порошкообразного твердого вещества.

Белое порошкообразное твердое вещество смешивали с гидразином (1,06 г, 33 ммоль) в Е!ОН (80 мл) и нагревали при кипении с обратным холодильником в течение 2 ч, затем охлаждали до комнатной температуры. Добавляли 1 Ν НС1 для установления рН реакционной смеси до рН 1,0 и реакционную смесь затем перемешивали в течение 15 мин. Белое твердое вещество фильтровали и промывали свежеперегнанным Е!ОН (твердое вещество отбрасывали) и фильтрат упаривали в вакууме до получения твердого вещества, которое распределяли между диэтиловым эфиром и разбавленным водным \аОН. Раствор в диэтиловом эфире сушили (\сь8О.|) и выпаривали в вакууме с получением вязкого масла из (28)2-аминометил-(6,7-дихлор-2,3-дигидробензо[1,4]диоксина).

¹Н ЯМР (СЭС1₃): δ 6,98 (с, 1Н), 6,96 (с, 1Н), 4,25 (дд, 1=2,0, 11,2 Гц, 1Н), 4,15 (м, 1Н), 4,0 (м, 1Н), 2,97 (д, 1=5,5 Гц, 2Н).

Порцию данного масла (3,8 г, 16 ммоль) и сульфамид (3,1 г, 32,4 ммоль) нагревали при кипении с обратным холодильником в диоксане (100 мл) в течение 2 ч и сырой продукт очищали флэш-колоночной хроматографией (ЭСМ:МеОН 20:1) с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества, которое перекристаллизовывали из смеси этилацетат/гексан с получением указанного в заголовке соединения в виде белого кристаллического твердого вещества.

М8 [М-Н]^- 311,0. Т. пл. 119-121°С.

[α]η = -53,4° (с = 1,17, М).

¹Н ЯМР (ДМСО дб): δ 7,22 (с, 1Н), 7,20 (с, 1Н), 6,91 (уш.с, 1Н), 6,68 (уш.с, 2Н), 4,35 (м, 2Н), 4,05 (дд, 1=6,5, 11,5 Гц, 1Н), 3,15 (м, 2Н).

Элементный анализ:

найдено: С, 34,52; Н, 3,22; Ν, 8,95; С1, 22,64; 8, 10,24; вычислено: С, 34,64; Н, 2,68; Ν, 8,87; С1, 22,94; 8, 10,35.

- 19 015514

Пример 12. (28)-(-)-У-(7-Метил-2,3-дигидробензо[1,4]диоксин-2-илметил)сульфамид (соединение #19)

Указанное в заголовке соединение готовили, следуя процедуре примера 4, исходя из 4-метилкатехина, и получали белое твердое вещество, которое перекристаллизовывали из смеси этилацетат/гексан с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества.

М8 [М-Н]^- 257.

¹Н ЯМР (СЭС1₃): δ 6,76 (м, 1Н), 6,66 (м, 2Н), 4,80 (м, 1Н), 4,57 (уш.с, 1Н), 4,40 (м, 1Н), 4,28 (м, 1Н), 4,03 (дд, Д=6, 9, 11,4 Гц, 1Н), 3,45 (м, 2Н), 2,25 (с, 3Н).

Элементный анализ:

вычислено: С, 46,50; Н, 5,46; Ν, 10,85; 8, 12,41; найдено: С, 46,65; Н, 5,60; Ν, 10,84; 8, 12,61.

Пример 13. Доминантные-подчиненные отношения (Ό8Κ) в анализе ΐη νίνο на крысе.

Э8Р-анализ разделен на две модели: модель снижения доминантного поведения (Кебисйоп о£ Эоттап! Вейкпчог Мобе1, (КОВМ)) мании и модель снижения подчиненного поведения (Вебисйоп о£ 8иЪт188Гуе ВеТахчог Мобе1, (Κ.8ΒΜ)) депрессии. ΚΏΒΜ, где доминантные животные обработаны тестируемым соединением, является прогнозной в отношении способности тестируемого соединения лечить манию. К.8ВМ, где доминантные животные обработаны тестируемым соединением, является прогнозной в отношении способности тестируемого соединения лечить депрессию.

Самцов 8ргадие Т)а\у1еу (140-160 г) из СИаг1е8 Ктуег ЬаЬога1ог1е8 У'йтшШоп, МА использовали в данном анализе. Партии крыс получали с двухнедельными интервалами. Каждая партия проходила через пятидневный карантин, период однонедельной акклиматизации и процедуру однонедельного отбора, с последующей пятинедельной обработкой данных отобранных пар лекарственным средством или наполнителем.

Крыс размещали по четыре на клетку. Доступ к корму ограничивали до одного часа в сутки после тестирования от среды до четверга. После тестирования в среду крысы имели свободный доступ к корму до воскресенья, в которое их лишали корма, чтобы они проголодались снова. Никогда крыс не лишали воды. Примененные периоды с отнятием корма оказывали слабое влияние на увеличение массы, между тем как средняя масса крыс была примерно 300 г в конце исследования. При завершении опыта крыс умерщвляли обезглавливанием, кровь из туловища и головной мозг собирали для опытов ΐη νίΐΐΌ и измерений концентрации лекарственного средства.

Основной тестирующий аппарат состоял из двух камер, соединенных переходом, достаточно большим, чтобы позволить одной крысе одновременно проходить. На полу в средней точке перехода был контейнер с нодслащенным молоком. Данный основной аппарат повторяли, чтобы в целом четыре пары крыс можно было подвергать одновременно видеонаблюдению. Камера может различать крыс, маркированных различными цветами. Таким образом, крысиные головы окрашивали в целях видеонаблюдения красным цветом в одной клетке и желтым цветом в другой клетке. Только одно животное одновременно могло иметь удобный доступ к кормушке, но оба животных могли пить молоко в течение пятиминутного ежедневного сеанса. В течение пятиминутных ежедневных сеансов время, затрачиваемое в зоне кормушки каждой крысой, регистрировали программным обеспечением для видеонаблюдения и сохраняли в текстовом файле.

Тест начинали с произвольного распределения крыс по парам. Каждого члена пары помещали в противоположную камеру тестирующего аппарата. Регистрировали время, потраченное каждым животным в зоне кормушки. В течение первой недели (пять дней) тестирования животные приучались к новой окружающей среде. Доминирование присваивали животному с самым высоким показателем в течение второй недели тестирования, если были достигнуты три критерия. Во-первых, должна быть значительная разница (двухсторонний критерий Стьюдента, Р<0,05) между средними показателями суточного питья обоих животных. Во-вторых, показатель доминантного животного должен быть по меньшей мере на 25% выше, чем показатель подчиненного животного. Наконец, не должно быть никаких перемен в течение недели отбора пар, когда предполагаемая подчиненная крыса превосходила своего доминантного партнера в отдельных случаях. В идеале имели место, кроме того, минимальные перемены в течение недели акклиматизации. Примерно от двадцати пяти до тридцати трех процентов от начальных пар животных достигали данных критериев и только с данными парами продолжали исследование.

Значительные различия между временем, потраченным на кормушке доминантной и подчиненной крысами, определяли с помощью ΑΝΟνΑ, используя программное обеспечение ОгарИРаб Рп8т (ОгарИРаб 8ой^аге, 1пс. 8ап Э|еро, СА) с последующим двухсторонним критерием Стьюдента (Р<0,05). Производили сравнение между группами обработки, используя нормализованные величины уровня доминантности в парах животных. Уровень доминантности представляет собой величины, которые измеряют со

- 20 015514 циальные отношения между субъектами пар. Уровень доминантности (ЭЬ) = ΕΤΏ-ΕΤ8, где ΕΤΏ представляет собой время у кормушки доминантных крыс и ΕΤ8 представляет собой время у кормушки подчиненных крыс. Нормализацию проводили согласно формуле:

уровень доминантности (неделя η в %) = (уровень доминантности (неделя п))/(уровень доминантности (неделя 2)).

Статистическую значимость разницы в уровнях доминантности между контрольной группой (пары крыс, где как доминантные, так и подчиненные крысы были обработаны наполнителем) и группой лечебной обработки (подчиненные крысы были обработаны лекарственным средством и доминантные крысы наполнителем) определяли с помощью ΑΝΟνΑ, затем критерием Стьюдента. Величину времени начала активности при 50% ответа (АОТ-50) и минимальный и максимальный ответ на лекарственное средство вычисляли на основе снижения величины уровня доминантности, применяя нелинейный регрессионный анализ (СгарБРаб 8ойгаге, 1пс., Зап Ωίοβο. СА). Упорядоченные ЭЬ величины применяли для данного вычисления, где ЭБ величины для недель лекарственной обработки нормализовали как процент от величины второй недели (предобработка) данной пары согласно вышеприведенной формуле. При данных установочных параметрах минимум ответа (ЭЬ) определял положительную активность лекарственного средства, соответствуя эффективности, так как ЭЬ величины всегда снижались, если ответ к лекарственному средству был положительным. В случае отрицательного ответа на лекарственное средство (ухудшение симптомов) ЭЬ величины повышались. Если лекарственное средство не обладало такой активностью, максимум ответа не превышал 100%. Любая максимальная ЭЬ величина, значительно превышающая контрольную величину (примерно 100%), указывала на отрицательную активность лекарственного средства.

Соединение #8 оценивали по ΚΌΒΜ крыс, следуя процедуре, описанной более подробно ниже.

Группы доминантных крыс обрабатывали перорально ОЭ соединением #8; при 0,05 мг/кг (п=4), при 0,5 мг/кг (п=6), при 2,5 мг/кг (п=6), при 5,0 мг/кг (п=6) и при 50,0 мг/кг (п=3). Контрольную группу доминантных крыс с наполнителем обрабатывали 0,5% метилцеллюлозой (п=3) и вторую контрольную группу доминантных крыс обрабатывали интраперитонеально ОЭ вальпроатом натрия при 30 мг/кг (п=6 от 2 исследований п=3 каждой).

Все обработки проводили приблизительно за 1 ч до тестирования. Все обработки начинались в субботу после второй тестирующей недели (неделя отбора). Соединение #8 вводили перорально (р.о.).

Когда доминантных животных обрабатывали соединением #8 при 0,05, 0,5 и 50,0 мг/кг, разница между доминантной и подчиненной крысами утрачивалась после первой недели обработки и после второй недели обработки при дозе 2,5 и 5,0 мг/кг. Аналогично, когда доминантных животных обрабатывали вальпроатом натрия, разница между доминантной и подчиненной крысами также утрачивалась после первой недели обработки. В данном исследовании вседозволенность доминантных крыс, обработанных соединением #8 или вальпроатом натрия, наблюдали как идущую к повышению. Таким образом, обработанные доминантные крысы позволяли их подчиненным партнерам увеличивать время их пребывания на кормушке.

Чтобы сравнивать эффекты различных лекарственных средств и доз, данные нормализовали по отношению к начальным контрольным недельным значениям. Самый сильный эффект соединения #8 наблюдали в дозе 0,5 мг/кг со значительной разницей в величинах уровня доминантности (ЭЬ) между крысами, обработанными наполнителем, и соединением, начиная со второй недели и продолжаясь на протяжении обработки в 5 недель. Более высокие дозы соединения #8 (2,5, 5,0 и 50,0 мг/кг) показали более слабый ответ, который существенно не отличался от ответа, наблюдаемого от дозы 0,5 мг/кг.

В сравнении, животные, обработанные вальпроатом натрия (30 мг/кг), постоянно показывали пониженный доминантный уровень после второй недели обработки с эффектом, повышающимся в последующие недели. Эффект хлорида лития (100 мг/кг) значительно отличался от контроля только после третьей недели обработки.

Для оценки времени начала активности (АОТ) фиксировали средние суточные величины времени пребывания у кормушки доминирующих и подчиненных пар животных и вычисляли значительные различия между двумя этими группами с применением двухстороннего критерия Стьюдента. Первые сутки последовательного недостатка статистической значимости имели место после обработки соединением #8 при 0,05 мг/кг на 3 сутки; при 0,5 мг/кг на 4 сутки; при 2,5 мг/кг на 10 сутки; при 5,0 мг/кг на 11 сутки и при 50,0 мг/кг на 3 сутки.

Для сравнения времени начала активности (АОТ) между различными обработками оценивали время начала активности из графика нелинейной регрессии. Модель нелинейной регрессии строили для каждого лекарственного средства и дозы, нормализованной суточными ЭЬ значениями. АОТ₅₀ для соединения #8 при 0,05 и 0,5 мг/кг было значительно короче, чем аналогичное время для лития.

Эффекты соединения #8 в ΚΌΒΜ были зависимыми от дозы с вычисленными значениями ΕΌ₅₀ 0,03 ± 0,004 мг/кг [С1 = 0,01-0,04] и Е_тах 116,4 ± 2,3% [С1 = 109,2-123,6].

В данном анализе соединение #8 снижало доминантное поведение, указывая на то, что соединение является активным в качестве антиманиакального средства.

- 21 015514

Пример 14. Доминантные-подчиненные отношения (ΌδΗ) в анализе ίη νίνο на крысе.

ΌδΗ-анализ разделен на две модели: модель снижения доминантного поведения (Кейис1юп οΓ Эоттап1 ВсНатюг Μοάβΐ, (ΚΌΒΜ)) мании и модель снижения подчиненного поведения (Кейис1юп οΓ 8иЬт188Гуе ВсНатюг Μοάβΐ, (ΚδΒΜ)) депрессии. ΚΌΒΜ, где доминантные животные обработаны тестируемым соединением, является прогнозной в отношении способности тестируемого соединения лечить манию. ΚδΒΜ, где доминантные животные обработаны тестируемым соединением, является прогнозной в отношении способности тестируемого соединения лечить депрессию.

Самцов 8ргадие Оа\\'1еу крыс (140-160 г) из Сйаг1е8 ККег ^аЬο^аΐο^^е8 \νί1ιηίη§1οη. ΜΑ использовали в данном анализе. Партии крыс получали с двухнедельными интервалами. Каждая партия проходила через пятидневный карантин, период однонедельной акклиматизации и процедуру однонедельного отбора, с последующей пятинедельной обработкой данных отобранных пар лекарственным средством или наполнителем.

Крыс размещали по четыре на клетку. Доступ к корму ограничивали до одного часа в сутки после тестирования от среды до четверга. После тестирования в среду крысы имели свободный доступ к корму до воскресенья, в которое их лишали корма, чтобы они проголодались снова. Никогда крыс не лишали воды. Примененные периоды с отнятием корма оказывали слабое влияние на увеличение массы, между тем как средняя масса крыс была примерно 300 г в конце исследования. При завершении опыта крыс умерщвляли обезглавливанием, кровь из туловища и головной мозг собирали для опытов ίη νίΐτο и измерений концентрации лекарственного средства.

Основной тестирующий аппарат состоял из двух камер, соединенных переходом, достаточно большим, чтобы позволять одной крысе одновременно проходить. На полу в средней точке перехода был контейнер с подслащенным молоком. Данный основной аппарат повторяли, чтобы в целом четыре пары крыс можно было подвергать одновременно видеонаблюдению. Камера может различать крыс, маркированных различными цветами. Таким образом, крысиные головы окрашивали в целях видеонаблюдения красным цветом в одной клетке и желтым цветом в другой клетке. Только одно животное одновременно могло иметь удобный доступ к кормушке, но оба животных могли пить молоко в течение пятиминутного ежедневного сеанса. В течение пятиминутных ежедневных сеансов время, затрачиваемое в зоне кормушки каждой крысой, регистрировали программным обеспечением для видеонаблюдения и сохраняли в текстовом файле.

Опыт начинали с произвольного распределения крыс по парам. Каждого члена пары помещали в противоположную камеру тестирующего аппарата. Регистрировали время, потраченное каждым животным в зоне кормушки. В течение первой недели (пять дней) тестирования животные приучались к новой окружающей среде. Доминирование присваивали животному с самым высоким показателем в течение второй недели тестирования, если были достигнуты три критерия. Во-первых, должна быть значительная разница (двухсторонний критерий Стьюдента, Р<0,05) между средними показателями суточного питья обоих животных. Во-вторых, показатель доминантного животного должен быть по меньшей мере на 25% выше, чем показатель подчиненного животного. Наконец, не должно быть никаких перемен в течение недели отбора пар, когда предполагаемая подчиненная крыса превосходила своего доминантного партнера в отдельных случаях. В идеале имели место, кроме того, минимальные перемены в течение недели акклиматизации. Примерно от двадцати пяти до тридцати трех процентов от начальных пар животных достигали данных критериев и только с данными парами продолжали исследование.

Терминальные образцы крови (0,5-1,0 мл) собирали после опыта в гепаринизируемые пробирки. Образцы крови центрифугировали для удаления клеток и затем 200 мкл плазменного супернатанта переносили в чистый сосуд, помещенный в сухой лед, и впоследствии хранили при заморозке -80°С перед анализом. 200 мкл ацетонитрила, содержащего интернальный стандарт, добавляли к 100 мкл плазмы или ткани мозга, чтобы осадить белки и остатки ткани. Образцы центрифугировали и супернатант удаляли для анализа жидкостной хроматографией-утроенной квадрупольной масс-спектрометрией (ТС-Μδ-Μδ). Калиброванные стандарты готовили добавлением соответствующего объема основного раствора непосредственно в чистую плазму или гомогенаты ткани мозга и обрабатывали идентично собранным образцам. Калиброванные стандарты готовили в интервале 0,01-10 мкл для количественного определения. ЬСΕδΙ-Μδ/Μδ (негативный метод) анализ осуществляли, применяя многократный реактивный мониторинг (ΜΚΜ) для определения характеристичных ионов для тест-соединения.

Значительные различия между временем, потраченным на кормушке доминантной и подчиненной крысами, определяли с помощью ΑΝΟνΑ, используя программное обеспечение СгарйРай Ргып (СгарйРай δοΓ^Γ^, 1пс. δаη Охе^, СА) с последующим двухсторонним критерием Стьюдента (Р<0,05). Производили сравнения между группами обработки, используя нормализованные величины уровня доминантности в парах животных. Уровень доминантности представляет собой величины, которые измеряют социальные отношения между субъектами пар. Уровень доминантности (ΌΕ) = ΕΤΌ-ΕΤδ, где ΕΤΌ представляет собой время у кормушки доминантных крыс и ΕΤδ представляет собой время у кормушки подчиненных крыс. Нормализацию проводили согласно формуле:

уровень доминантности (неделя η в %) = (уровень доминантности (неделя п))/(уровень доминантности (неделя 2).

- 22 015514

Статистическую значимость разницы в уровнях доминантности между контрольной группой (пары крыс, где как доминантные, так и подчиненные крысы были обработаны наполнителем) и группой лечебной обработки (подчиненные крысы были обработаны лекарственным средством и доминантные крысы наполнителем) определяли с помощью ΑΝΟνΑ, с последующим критерием Стьюдента. Величину времени начала активности при 50% ответа (АОТ-50) и минимальный и максимальный ответ на лекарственное средство вычисляли на основе снижения величины уровня доминантности, применяя нелинейный регрессионный анализ (СтарйРаб 8ойгаге, 1пс. 8аи Ωίοβο. СА). Упорядоченные ЭЬ величины применяли для данного вычисления, где ЭБ величины для недель лекарственной обработки нормализовали как процент от величины второй недели (предобработка) данной пары согласно вышеприведенной формуле. При данных установочных параметрах минимум ответа (ЭЬ) определял положительную активность лекарственного средства, соответствуя эффективности, так как ЭЬ величины всегда снижались, если ответ к лекарственному средству был положительным. В случае отрицательного ответа на лекарственное средство (ухудшение симптомов) ЭЬ величины повышались. Если лекарственное средство не обладало такой активностью, максимум ответа не превышал 100%. Любая максимальная ЭЬ величина, значительно превышающая контрольную величину (примерно 100%), указывала на отрицательную активность лекарственного средства.

Соединение #8 оценивали по модели снижения подчиненного поведения (КЭВМ) крыс в депрессии (Ма1а1уп§ка, Е., Карр, К., Натта^ооб, Ό. апб Типп1с11ГГ, С. №иго5с1спсс апб ВюЬейауюта1 Κονίαν, 82 (2005) 306-313; Ма1а1уп§ка, Е. апб Кпарр, КД. №иго8с1епсе апб ВюЬейауюта1 Βονίον, 29 (2005) 715-737).

Более определенно, соединение #8 вводили подчиненным крысам перорально (р.о.) при 2,5 мг/кг (п=8), 12 мг/кг (п=12), 60 мг/кг (п=12) и 120 мг/кг (п=7) раз в сутки в течение 5 недель, в то время как доминантных партнеров дозировали наполнителем (0,5% водной метилцеллюлозой). В качестве контролей дополнительные группы крыс интраперитонеально (1.р.) обрабатывали флуоксетином при 10,0 мг/кг (п=10) и интраперитонеально (1.р.) и при 30,0 мг/кг (п=6). Все обработки проводили приблизительно за 1 ч до тестирования. Соединение #8 наблюдали для снижения подчиненного поведения дозозависимым способом.

Когда подчиненных животных обрабатывали соединением #8, существенная разница между доминантной и подчиненной крысами утрачивалась после первой недели обработки. Это сохранялось для всех примененных доз, указывающих на то, что начало активности было зависимым от дозы. Напротив, когда подчиненных животных обрабатывали флуоксетином, существенная разница между доминантной и подчиненной крысами утрачивалась после третьей недели обработки (этот метод анализа данных не принимал в расчет флюктуацию поведения, которая имеет место в контрольной группе). Чтобы сравнивать эффекты различных лекарственных средств и доз, данные нормализовали по отношению к начальным контрольным недельным значениям.

Величины уровня доминантности (ЭЬ) в группе подчиненных крыс, обработанных 2,5 мг/кг дозами соединения #8, незначительно отличались от контроля. Однако группа, обработанная соединением #8 при 12,0 мг/кг, показала ЭЬ-значения, существенно отличные от контролей, обработанных наполнителем, после второй, четвертой и пятой неделями обработки. Аналогично, группа, обработанная соединением #8 при 60 мг/кг, показала значительную разницу в ЭЬ-величинах относительно величин с наполнителем, начиная с первой недели и продолжаясь на протяжении 5 недель. В самой высокой дозе (120 мг/кг) соединения #8 ЭЬ-величины значительно отличались от контрольной группы после первой недели, однако данная значимость исчезала после второй недели обработки.

Животные, обработанные флуоксетином (10 мг/кг), постоянно показывали повышенную вседозволенность в течение первой недели обработки. По сравнению с животными, обработанными флуоксетином (10 мг/кг), группы, обработанные соединением #8, не показали данного эффекта. При дозе соединения #8 в 60,0 мг/кг разница в ЭЬ-величинах с величинами группы, обработанной флуоксетином, была статистически значимой при р<0,001 после первой недели и р<0,05 после второй недели обработки. Не было значительного различия между упорядоченными ЭЬ-уровнями пар, обработанных флуоксетином, и соединением #8 в течение последующих недель обработки.

Для оценки времени начала активности фиксировали средние суточные величины времени пребывания у кормушки доминирующих и подчиненных пар животных и вычисляли значительные различия между этими двумя группами с применением двухстороннего критерия Стьюдента. Первые сутки последовательного недостатка статистической значимости имели место после обработки соединением #8 при 12,0 мг/кг на 6-е сутки и при 60 мг/кг на 4-е сутки. Не было постоянной утраты значимости между временем пребывания у кормушки доминантных и подчиненных крыс после обработки соединением #8 при 2,5 и 120,0 мг/кг.

Для сравнения времени начала активности между различными обработками оценивали время начала активности из графика нелинейной регрессии. Модель нелинейной регрессии строили для каждого лекарственного средства и дозы, нормализованной суточными ЭЬ значениями. Время начала активности при 50% эффекте (АОТ₅₀) и Е_тах для соединения #8 при 2,5, 12 и 60 мг/кг было 2,1, 5,3 и 1,6 суток соответственно и незначительно отличалось в зависимости от доз. Максимум эффекта, полученного от данного анализа, составлял 52,4 ± 32,7% (8ЕМ), 87,9 ± 42,6% (8ЕМ) и 116,9 ± 29,5% (8ЕМ) для дозы 2,5, 12,

- 23 015514 мг/кг соответственно и также не отличался значительно в зависимости от доз.

Таким образом, эффект соединения #8 в К8ВМ анализе был зависимым от дозы с вычисленными значениями ΕΌ₅₀ 6,6 ± 0,8 мг/кг [СТ = 3,0-10,02] и Е_тах 131,4 ± 4,7% [СТ = 111,3-151,5].

В данном анализе соединение #8 снижало подчиненное поведение, указывая на то, что соединение является активным в качестве средства против депрессии.

Пример 15-17. Возбуждение и биполярная периодичность.

Дискуссия в современной литературе предполагает, что механизмы, лежащие в основе возбуждения, могут быть аналогичными механизму периодичности в биполярном расстройстве и/или могут быть связаны со стабилизацией настроения. Таким образом, анализы по возбуждению миндалин (=миндалевидного тела) и гиппокампальному возбуждению, описанные подробно в данной работе ниже, могут быть прогностичными в отношении способности тестируемых соединений для лечения периодичности, связанной с особенностью или симптоматикой биполярного расстройства (СНаетг 8.Ν., Во1тап, Е.Е. апй СоойГОп, Р.К. 8ое. ОГ Вю. РкуеЫаЕу, (1999), νο1. 45, р. 137-144; 81о11, Л.Ь. апй Зе^'егик, ^.Е. Наг\^гагй Ее\'. РкуеЫаЕу, 1и1у/Аидик1 (1996), νο1. 4, №. 2, р. 77-89).

Пример 15. Анализ по возбуждению миндалин (предупреждение возбуждения).

Вкратце, процедура анализа состояла в следующем. Взрослых самцов 8ргадие-Оау1еу крыс с массой 250-300 г получали от С’11аг1ек КАег, ^11ттд1оп, МА. Всех животных содержали в условиях 12:12 светло-темного цикла с предоставлением свободного доступа как к корму (Рго1аЬ КМН 3000), так и к воде, за исключением периодов удаления из жилой клетки для экспериментальных процедур. О животных беспокоились в плане совместимости с рекомендациями, детализированными в №Еопа1 КекеагеН СоипеЕ РиЬНеаИоп, Сшйе Гог !Не Саге апй Ике оГ ЬаЬога1огу Ашта1к, по контролируемой температуре, свободным от пестицидов средствам обслуживания. Стимулирования возбуждения рутинно проводили между 9 АМ-2 РМ, чтобы избегать любых циркадианных изменений.

Соединение #8 растирали с небольшим объемом 0,5% метилцеллюлозы, диспергировали ультразвуком в течение 10 мин и приводили к заключительному объему 0,5% метилцеллюлозой. Соединение #8 вводили системно (интраперитонеально, 1.р.) в объеме 0,04 мл/10 г массы тела и все опыты проводили при заранее определенном времени пикового эффекта за 0,5 ч после 1р. введения.

Способность соединения #8 блокировать экспрессию приступов возбужденных миндалин определяли следующим образом. Крыс анестезировали смесью кетамина (120 мг/кг, гр.) и ксилазина (12 мг/кг, гр.). При асептических условиях биполярный электрод (Р1ак!1е Опе, Коапоке, УА) стереотаксически имплантировали в правую базолатеральную миндалину (АР 2,2, МЬ-4,7, ^У-8,7; Рахшок апй \Уа1коп). Передние-задние и боковые измерения были от Вгедта, тогда как дорсальное-вентральное измерение было от поверхности черепа. Стерильные винты на черепе (3-4) имплантировали для независимого эталонного электрода. Электроды фиксировали, используя дентальный цемент и акрил. Рану затем закрывали, используя стерильные 18/8 М|еНе1 хирургические зажимы (КоЬо/, СаИйегкЬигд, МО). Мазь неомицинового антибиотика использовали для раны и однократную дозу пенициллина (60000 ГО, 1т, АдгЮаЬк) вводили каждой крысе перед возвратом их в чистые клетки в течение одной недели после оперативного выздоровления.

Возбуждение миндалин затем выполняли согласно следующему протоколу. Применяя краткую акклиматизацию (<5 мин) к регистрирующей камере, получали основные ЕЕС регистрационные записи (МР 100, Вюрае 8ук1етк ГОе., Со1е!а, СА). Затем крыс произвольно распределяли для получения либо наполнителя (0,5% метилцеллюлозы), либо соединения #8 (75 мг/кг, гр.) (п=10 крыс на группу). В день опыта однократную дозу соединения #8 или 0,5% метилцеллюлозы вводили за 30 мин до начала опыта для стимуляции миндалин (200 мкА в течение 2 с). Поведенческий показатель приступа и продолжительность АО регистрировали по крысам в каждой группе обработки. Поведенческие показатели приступа определяли, используя Каете шкалу; т.е. 0 = нет ответа; стадия 1 = чистка поверхности тела/гиперактивность; стадия 2 = покачивание головы/тремор; стадия 3 = односторонний клонус передних конечностей; стадия 4 = клонус с подъемом на задние лапы и 5 стадия = генерализованный тоническийклонический приступ с подъемом на задние лапы и падением (Каете, 1972). Активность следовой реакции после прекращения раздражения (АО) регистрировали в цифровой форме вплоть до 180 с после цепочки стимуляции и измеряли длительность начальной АО. Крыс рассматривали полностью возбужденными, когда они показывали пять непрерывных стадий 4 или 5 генерализованных приступов. Суточные стимуляции продолжали вплоть до 13 непрерывных суток во всех трех группах до тех пор, пока группы, обработанные наполнителем, не были полностью возбужденными (т. е. пять непрерывных стадий 4 или 5 генерализованных приступов). В это же время всем крысам предоставляли однонедельный раздражитель и период без лекарственного средства; после чего их всех повторно делали неполноценными в отсутствие лекарственного средства с помощью того же самого раздражителя, примененного в течение фазы восприимчивости (т.е. сутки 1-13). Крысы, обработанные соединением #8, затем были стимулированы раз в сутки до тех пор, пока не достигали общего возбужденного состояния.

Длительность следовой реакции после прекращения раздражения (АО) в группах, обработанных как наполнителем, так и соединением #8, показала прогрессирующее повышение на протяжении хода фазы восприимчивости возбуждения. Не наблюдалось никакой статистической разницы между группами

- 24 015514 обработок.

Соединение #8 предотвращает восприимчивость к общему генерализованному приступу возбуждения. Данный вывод основан на установленном факте, что показатель приступа при заключении на основе периода с лекарственным средством и периода без раздражителя оставался значительно более низким, чем таковой на крысах в группе, обработанной наполнителем (соединение #8 = 1,4 ± 0,40 против наполнитель = 4,6 ± 0,24). Кроме того, при стимуляции в отсутствие лекарственного средства показатель приступа у крыс в группе, обработанной соединением #8, повышался со скоростью, которая была параллельна скорости, наблюдаемой у крыс, обработанных наполнителем - при этом подтверждается заключение о том, что соединение #8 замедляло восприимчивость к возбуждению на несколько суток.

Результаты данного исследования показывают, что соединение #8 обладает способностью модифицировать развитие возбуждения в крысиной модели возбужденных миндалин в рамках неполной эпилепсии. Данные результаты совместимы с заключением о том, что соединение #8 обладает эффектами, модифицирующими заболевание. Данный вывод основан на установленном факте, что показатель приступа при заключении на основе периода с лекарственным средством и периода без стимулирования у крыс в группе, обработанной соединением #8, оставался значительно более низким, чем таковой у крыс, обработанных наполнителем. Кроме того, в том случае, если протокол стимуляции обобщали в отсутствие лекарственного средства, показатель приступа прогрессировал со скоростью, которая была параллельна скорости в группе, обработанной наполнителем.

Выявление того, что показатель приступа, но не длительность следовой реакции после прекращения раздражения, в группе обработки соединением, однонедельной после раздражителя и недели без лекарственного средства, был заметно ниже, чем таковой в группе, обработанной наполнителем, предполагает, что соединение #8 предотвращало восприимчивость вторично генерализованного приступа, но не фокального приступа.

Пример 16. Модель гиппокампального возбуждения (прерывание возбужденного состояния).

Приступы возбуждения обеспечивают экспериментальную модель фокальных приступов, позволяя ученым исследовать сложные структуры мозга, которые могут давать вклад в распространение и генерализацию из фокуса.

В представленной модели быстрого гиппокампального возбуждения взрослые самцы 8ргадиеОа\\!еу крыс (300-400 г) были хирургически имплантированы биполярными электродами, помещенными в гиппокампус. Крыс возбуждали повторяющейся электрической стимуляцией (50 Гц, 10 с цепь из 1 мс, бифазные 200 мкА импульсы каждые 30 мин в течение 6 ч в каждые последующие сутки для суммарных 60 стимуляций), дающей стадию 5 билатеральных моторных приступов. Одну неделю спустя крысы получали 2-3 сверхпредельные стимуляции, поставляемые каждые 30 мин перед обработкой тест-соединением для обеспечения стабильности поведенческой стадии приступа и длительности следовой реакции после прекращения раздражения. Через 15 мин после последней стимуляции однократную дозу наполнителя или тестируемого соединения вводили 1.р. (интраперитонеально). Через 15 мин каждую крысу затем подвергали стимуляции каждые 30 мин в течение 3-4 ч. После каждой стимуляции регистрировали индивидуальные показатели приступа и длительности следовой реакции после прекращения раздражения. Среднее значение ± 8ЕМ группы вычисляли по каждому параметру. Восемь крыс на дозу и минимум четыре дозы использовали для установления ΕΌ₅₀ величины. Эффективность измеряли как способность соединения модифицировать показатель приступа (тяжесть распространения) и длительности следовой реакции после прекращения раздражения (ΑΌΌ; возбудимость) генерализованных приступов.

При применении данного подхода соединение, которое снижает показатель приступа от 5 до 3 без какого-либо влияния на ΑΌΌ, наводит на мысль по использованию данного соединения для лечения вторично генерализованных приступов. Напротив, соединение, которое снижает показатель приступа от 5 до менее чем 1, а также и снижает ΑΌΌ, наводит на мысль по использованию данного соединения для лечения фокальных приступов. Таким образом, согласно теориям, представленным в современной литературе (СЕает1, 8.Ν., Во1тап, Е.Е. апб Сообтеш, Г.К. 8ое. о£ Βίο. РкуеЫайу, (1999), νοί. 45, р. 137-144; 8ΐο11, А.Ь. апб Бе^'егик, ЭД'.Е. Нагеагб Κν. РкуеЫайу, Л11у/Лидик1 (1996), νο1. 4, №. 2, р. 77-89), снижение показателя приступа и/или ΑΌΌ может быть также прогностичным в отношении способности тестируемого соединения лечить периодичность, связанную с биполярным расстройством.

Соединение #8 (приготовленное в 0,5% водном растворе метилцеллюлозы) проявляло противоконвульсантную активность в данной модели с ЕО₅₀=68,5 ± 1,3 мг/кг (соответствующую снижению показателя приступа при 45 мин и пику активности при 165 мин). Показатели приступа были значительно снижены от 5 до 1 в 4 из 8 крыс (р = 0,0003). Отсутствовал статистически значимый эффект на ΑΌΌ (р = 0,07). Этосуксимид был неэффективным в данной модели; тогда как фенитоин, карбамазепин и вальпроевая кислота значительно подавляли активность приступа, но в дозах, связанных с токсичностью.

В данной модели 6 из 8 крыс показали значительное снижение в общей активности приступа (показатель <3) после обработки соединением #8. Подобную защиту наблюдали для вальпроевой кислоты (при токсических дозах >300 мг/кг) и карбамазепина (при токсических дозах >26 мг/кг).

- 25 015514

Результаты сравнения из данного анализа представлены в табл. 4 ниже.

Таблица 4

Оценка соединения #8 и эталонных лекарственных средств в тесте по гиппокампальному возбуждению крыс

	Доза (мг/кг), ΐ.ρ.	Средний показатель приступа	Длительность следовой реакции после прекращения раздражения (% контроля)
Соединение #8	100 Τϋ50~100	2,1±0,5 (р=0,0003)	153±24% (р=0,07)
Этосуксимид	250 ТО50=18 9	5±0,1 (р=0,20)	78±13% (р=0,03)
'Фенитоин	30 ТО50=15	4,3±0,3 (р=0,02)	209±43% (р=0,02)
Карбамазепин	75 Τϋ5ο=2 6	2,3+0,6 (р=0,005)	72±13% (р=0,02)
Вальпроевая	350	0,3±0,2	3±1%
Кислота	Τϋ5θ=316	(р<0,0001)	(р<0,0001)

ΕΌ50 = средняя терапевтическая доза; ТЭ^ = средняя токсическая доза; р = парный 1-тест; односторонний

Пример 17. Модель на крысах с возбужденными миндалинами, невосприимчивыми к ламотриджину (прерывание возбужденного состояния).

Соединение #8 оценивали в модели (ΝΙΝΌ8) на крысах с возбужденными миндалинами, невосприимчивыми к ламотриджину (ЕТС). Возбуждение миндалин является менее тяжелым, чем гиппокампальное возбуждение, таким, что многие ΆΕΌ эффективны против приступов возбуждения миндалин, но не эффективны против гиппокампальных приступов возбуждения. Например, ламотриджин может значительно снижать показатель приступа возбуждения миндалин и ΆΌΌ (ΕΌ₅₀ = 25 мг/кг, ΐ.ρ., С1 = 4-50 мг/кг; показатель ~2; ΆΌΌ снизился на 62%), но не способен защищать против гиппокампальных приступов возбуждения.

По модели с возбуждением миндалин, невосприимчивым к ЬТС, крысам вводили дозы ЕТС (5 мг/кг, интраперитонеально (ΐ.ρ.), ежедневно (ς.6.)) в течение фазы восприимчивости возбуждения. Данная доза, как было показано, не влияет на самовозбуждение, но приводит к развитию полностью возбужденных крыс, которые не восприимчивы к противоконвульсантным эффектам ЕТС. После возбуждения (сверхпредельная стимуляция из 150 мкФ бифазного 60 Гц импульса тока в течение 1 с; ~2 недели) крыс делали неполноценными высокой дозой ЬТС (45 мг/кг, ΐ.ρ.) спустя одну неделю для обеспечения резистентности. После 3-4-суточного периода бессилия крысы получали 2-3 сверхпредельные стимуляции, поставляемые каждые 30 мин перед обработкой соединением #8 (или наполнителем) для обеспечения стабильности поведенческой стадии приступа и длительности следовой реакции после прекращения раздражения. Через пятнадцать минут после последней стимуляции вводили однократную дозу наполнителя или тест-соединения ΐ.ρ. Через 15 мин каждую крысу затем подвергали стимуляции каждые 30 мин в течение 3-4 ч. После каждой стимуляции регистрировали индивидуальные показатели приступа и длительности следовой реакции после прекращения раздражения. Среднее значение +8ΕΜ по группе вычисляли для каждого параметра.

Соединение #8 (75 мг/кг, ΐ.ρ., η = 9) значительно снижало показатель приступа и длительность следовой реакции после прекращения раздражения. Восемь из девяти крыс были защищены так, что показатель приступа снижался с 5 до 0,8 и длительность следовой реакции после прекращения раздражения снижалась на 86% (с 73 до 10 с). Четыре из девяти крыс проявляли атаксию и седативный эффект при данной дозе.

Пример 18. Тест подвешивания за хвост (острый).

В тесте подвешивания за хвост (Т8Т) для оценки соединений на антидепрессантную активность мышей подвешивали их хвостами к металлической или пластмассовой палочке, используя зажим или ленту скотча. Тест обычно является совсем коротким, 5-7 мин, и период времени, которое мыши проводят в неподвижности, регистрируют либо вручную, либо автоматическим устройством. Агенты, которые имеют антидепрессантную активность, снижают продолжительность неподвижности мышей в данном тесте.

Основной аппарат для анализа с подвешиванием за хвост состоял из желтой пластмассовой камеры (91x45x10 см), разделенной на четыре области шириной 25, 20, 20 и 25 см, отделенные желтыми пластмассовыми стенками толщиной в 0,75 см. Мышей подвешивали их хвостами, используя резиновый зажим (длина 7 см), прикрепленный к пластмассовой палочке, которую помещали на верхушке тестирующей камеры наполовину от ее полного размера. Каждый экспериментальный сеанс подвергали видеонаблюдению и анализировали по пяти животным в реальном времени компьютерным программным обеспе

- 26 015514 чением (Оергеззюп 8сап С1етег 8уз Шс.). Компьютерную оценку неподвижности калибровали с применением животных, дозированных лоразепамом, тогда как оценку подвижности калибровали с применением животных, обработанных высокой дозой дезипрамина. Контрольных, обработанных наполнителем животных и животных, обработанных соединением #8, анализировали калиброванными параметрами. Параметры устанавливали отдельно для темных (СН3/Не1 и С57Ы/61 линии) и белых мышей (Ва1Ь/с1 и Л/Ι линии). Желтый фон использовали для темных мышей и голубой фон использовали для регистрации белых мышей.

Способность тест-соединения снижать длительность неподвижности или повышать подвижность измеряли, применяя Т8Т процедуру, описанную выше. Срочная обработка клинически эффективными антидепрессантами и/или новыми соединениями, которые обладают потенциальными антидепрессантными свойствами, снижает длительность неподвижности и в то же время повышает подвижность в Т8Т.

Данные анализировали, используя программное обеспечение ОгарЬРаб РгБт (ОгарЬРаб 8ой^аге, Шс. 8ап О|едо. СА). Для сравнения влияния различных доз по различным лекарственным средствам на неподвижность в Т8Т применяли однофакторный дисперсионный анализ (ΑΝΟνΑ), затем критерий множественных сравнений Дуннетта/Эиппеи. Величины ΕΌ₅₀ и Е_тах вычисляли для ЭМЕ ΑΈΧ, ЭБХ и соединения #8, применяя нелинейный регрессионный анализ с однокомпонентным уравнением спада экспоненты для подгонки кривой. Величины ΕΌ₅₀ и Е_тах сравнивали, используя двуфакторный анализ ΑΝΟνΑ и роз!-Ьос тест Бонферрони/ВопГеггош.

Оценивали дозу-эффект для различных антидепрессантов и соединения #8 на СН3/Не1 мышах. Соединение #8 суспендировали в 0,5% метилцеллюлозе. Положительные контроли включали дулоксетин (ОБХ), венлафаксин (νΚΧ) и дезипрамин (ΌΜ^, которые растворяли в 0,5% метилцеллюлозе, и лоразепам (БОР), который суспендировали в 0,5% метилцеллюлозе в воде обработкой ультразвуком. Все лекарственные средства и наполнители вводили перорально (р.о.) чреззондовым кормлением в объеме 10 мл/кг.

Мышей заказывали 5-недельного возраста, и в начале опыта их масса составляла 20 ± 5 г. Животные содержались в группах по четыре в пластмассовых клетках при температуре окружающей среды 2123°С с автоматизированным 12/12-часовым свет/темнота циклом и имели доступ к воде и коммерческой пище для грызунов аб ПЬЬит.

Данную группу делили на восемь опытов, оценивающих эффекты соединения #8, положительных контролей (ΌΜΕ νΚΧ, ББХ) в разных дозах и отрицательного контроля (БОР) в дозе 5 мг/кг. Каждый опыт состоял из семи групп обработок с четырьмя животными на группу. В общем, использовали 28 животных на опыт. Каждые два последующих опыта (1 и 2, 3 и 4, 5 и 6 и 7 и 8) были точными копиями друг друга. Это давало общее число из восьми животных на группу обработки в конце исследования. Одна группа обработки из четырех животных в каждом опыте представляла собой группу, обработанную наполнителем. Кроме группы, обработанной наполнителем, оценивали эффекты ЭМ! при 6, 12, 30, 60 и 120 мг/кг и БОР при 5 мг/кг в опытах 1 и 2. В опытах 3 и 4 оценивали эффекты соединения #8 при 6, 12, 30, 60, 120 и 240 мг/кг. В опытах 5 и 6 оценивали эффекты ЭБХ при 6, 12, 30, 60 и 120 мг/кг и БОР при 5 мг/кг. В опытах 7 и 8 оценивали эффекты νΕΧ при 6, 12, 30, 60 и 120 мг/кг и БОР при 5 мг/кг. В ходе исследования одна мышь умерла из-за неудачного дозирования в группе, обработанной соединением #8 при 12 мг/кг, так что группа состояла из семи животных к концу исследования.

Соединение #8 и все тестируемые антидепрессантные лекарственные средства снижали период неподвижности и повышали период подвижности у СН3/Не1 мышей в течение 7-минутного тестирующего сеанса. Эффекты соединения #8 были статистически значимыми при 12, 60 и 120 мг/кг. Значимость определяли в сравнении с параллельными контролями, обработанными наполнителем.

ЭМБэффекты были статистически значимыми при 12, 30, 60 и 120 мг/кг. νΕΧ-эффекты были статистически значимыми при 6, 12, 30, 60 и 120 мг/кг. ΌΕΧ-эффекты были статистически значимыми при 60 и 120 мг/кг.

Величины ЕЭ₅₀ и Е_тах вычисляли из данных результатов нелинейным регрессионным анализом. Величины ЕЭ₅₀ и Е_тах приведены в табл. 5 ниже. Величины ЕО₅₀, вычисленные для неподвижности и подвижности, значительно не отличались от обработки до обработки. Величина ЕЭ₅₀ для соединения #8 была значительно меньше, чем величина ЕЭ₅₀ для ΌΕΧ, но не отличалась от величин ЕЭ₅₀ для ^ΜI и νΕΧ. Величины Е_тах, вычисленные для неподвижности и подвижности, значительно не отличались для соединения #8, но значительно отличались для всех тестируемых антидепрессантов. Величина Е_тах неподвижности для соединения #8 была также значительно меньше, чем в случае величин антидепрессантов.

- 27 015514

Таблица 5 Величины ΕΌ₅₀ и Е_тах для различных лекарственных средств в Т8Т

Подвижность
Препарат	Εϋ50 мг/кг	ЗЕМ ЕО50	С1
Соединение №8	3, 6	2, 9	-4,6-11.8
ϋΜΙ	24,4	9, 0	-0,5-49,3
νπχ	21,1	8,4	-2,1-44,4
ОЪХ	61, 5	20, 9	3,6-119,3
Препарат	Етах% С	ЗЕМ Етах	С1
Соединение №8	95,6	13,0	59,4-131,7
ΌΜΙ	195,7	24,9	126,7-264,7
УЬХ	412,6	53,9	263,0-562,2
ϋΓΧ	175,5	2 8,3	96,9-254,2
Неподвижность
Препарат	ЕП5о мг/кг	ЗЕМ Εϋ50	С1
Соединение №8	5, 6	3,3	1,7-12,1
ϋΜΙ	27,4	16, 0	11,3-55,0
УЬХ	25,0	15,4	8,8-55,1
оьх	31,4	15,7	22,4-42,6
Препарат	Етах% С	ЗЕМ Етах	С1
Соединение №8	22,2	6,1	2,8-41,6
ϋΜΙ	38,5	6, 3	18,5-58,5
УЬХ	63,7	11,1	28,4-98,9
оьх	80, 4	6, 4	59,9-100,9

Таким образом, исследования, описанные в данном примере, показывают, что соединение #8 обладает активностью, подобной антидепрессантной, измеренной с помощью теста с подвешиванием за хвост. ΕΌ₅₀ для соединения #8 была вычислена как 3,6 ± 2,9 мг/кг и Е_тах была вычислена как 22,2 ± 6,1% при состоянии исследования, проведенного авторами.

Пример 19. Тест принудительного плавания (острый).

Тест принудительного плавания (Р8Т) представляет собой обычно применяемую процедуру для скрининга соединений с возможными антидепрессантным свойствами. Данный тест также известен как тест поведенческой безнадежности. Грызуны, помещенные в привычные резервуары, наполненные водой, представляют собой широкий спектр поведений из бегства или неподвижности. Антидепрессантные лекарственные средства из разных классов заметно повышают поведение бегства/спасения и/или снижают латентность или длительность неподвижности. Так как данные эффекты являются характерными для клинически активных антидепрессантов, соединения с неизвестной клинической активностью, показывающие такие эффекты в Р8Т, интерпретируются как имеющие потенциал для лечения расстройств человеческого настроения.

Соединение #8 и мапротилин растворяли в 10% солютоле. Венлафаксин и дезипрамин растворяли в воде. Все лекарственные средства и их наполнители вводили перорально (р.о.) чреззондовым путем в объеме 5 мл/кг.

Использовали самцов 8ргадие Иа^1еу крыс (140-160 г) из СЪаг1е§ Кгуег ЬаБогаШпез Ш11т1пд!оп, МА. Животные проходили через период пятидневного карантина, прежде чем становятся объектами экспериментальной процедуры.

Животные содержались в группах по четыре в пластмассовых клетках при температуре окружающей среды 21-23°С с автоматизированным 12-часовым свет/темнота циклом и имели доступ к воде и коммерческой пище для грызунов ай НЪйит. Животных не брали в руки, кроме случаев регулярной замены подстилки до сессии плавания перед тестом.

Данное исследование делили на шесть опытов, оценивающих эффекты соединения #8, трех положительных контролей (дезипрамин, мапротилин, венлафаксин) и отрицательного контроля (лоразепам) в разных дозах. Каждый опыт состоял из семи групп обработок с η = 4 животными на группу. В общем, использовали 28 животных на опыт. Два последующих опыта (1 и 2, 3 и 4 и 5 и 6) были точными копиями друг друга. Это давало общее число из восьми животных на группу обработки в конце исследования. Одна группа обработки из η = 4 животных в каждом опыте представляла собой группу, обработанную наполнителем. Кроме группы, обработанной наполнителем, оценивали эффекты дезипрамина при 3, 6, 12, 30 и 60 мг/кг и лоразепама при 1 мг/кг в опытах 1 и 2. В опытах 3 и 4 оценивали эффекты соединения

- 28 015514 #8 при 3, 6, 12, 30, 60 и 120 мг/кг. В опытах 5 и 6 оценивали эффекты венлафаксина и мапротилина при 12, 30 и 60 мг/кг. В ходе исследования одна мышь умерла из-за неудачного дозирования в группе, обработанной дезипрамином при 12 мг/кг, так что группа состояла из семи животных к концу исследования.

Основной аппарат состоял из цилиндра (46 см высота х ~20 см диаметр), наполненного водой до глубины 30 см при температуре 25 ± 1°С. Автоматическую версию РТ8 использовали для проведения опытов. Водопроводные устройства для автоматического заполнения и слива воды соединяли четыре цилиндра. Цилиндры помещали в разделяющие камеры шириной 25 см, чтобы визуально разобщать животных. Каждый 5-минутный экспериментальный сеанс подвергали видеонаблюдению и анализировали в реальном времени компьютерным программным обеспечением (С1еуег 8у81еш8, 1пс.) по четырем животным одновременно. Временные периоды неподвижности, плавания, вскарабкивания и бегства регистрировали программным обеспечением. Определяли четыре активности, как указано ниже. Неподвижность: животное плавает в состоянии покоя или делает только те движения, которые необходимы для поддержания его головы выше воды; вскарабкивание: животное интенсивно движется вертикально, царапаясь повсюду у стенки цилиндра; плавание: животное движется горизонтально повсюду в цилиндре больше, чем необходимо, чтобы держать голову выше воды; бегство/спасение: сумма всех энергичных активных движений.

Способность тест-соединения снижать длительность или периодичность неподвижности, или изменения в периодах плавания, вскарабкивания и бегства измеряли, применяя Р8Т процедуру, описанную выше. Клинически эффективные антидепрессанты и/или новые соединения, которые обладают потенциальными антидепрессантными свойствами, снижают длительность или периодичность неподвижности в Р8Т при введении до тест-сеанса и в тест-сеансе. Анализ результатов в описанных исследованиях фокусировали на периоде неподвижности в течение 5-минутного сеанса.

В каждом опыте были два сеанса плавания. Первый, дотестовый сеанс плавания проводили в течение 15 мин. Затем через 48 ч был тест-сеанс 5-минутной длительности. После завершения сеанса плавания каждое животное помещали под теплую лампу в клетку с теплой подстилкой в течение приблизительно 15 мин, чтобы предупредить гипотермию.

Животных обрабатывали наполнителем или тест-соединением после завершения дотестового сеанса плавания, затем спустя 24 ч и затем незадолго до 5-минутного сеанса плавания; т.е. три инъекции вводили каждому животному между двумя сеансами плавания, которые происходили в 3 последующих суток. Время до тестового сеанса представляло собой 1 ч для дезипрамина, мапротилина, венлафаксина, лоразепама или 4 ч для соединения #8; время максимального эффекта в тесте максимальных электрошоковых приступов (МЕ8).

Данные анализировали, используя программное обеспечение СгарЬРад Рпвш (СгарЬРад 8ой^аге, 1пс. 8ап О|едо. СА). Для сравнения влияния различных доз по различным лекарственным средствам на неподвижность в Р8Т применяли однофакторный АNОVА, затем критерий множественных сравнений Дуннетта/ОиппеИ. Величины ΕΌ₅₀ и Е_тах вычисляли для дезипрамина и соединения #8, применяя нелинейный регрессионный анализ с однокомпонентным уравнением спада экспоненты для подгонки кривой. Величины ЕО₅₀ и Е_тах сравнивали, используя двусторонний критерий Стьюдента.

Все тестируемые антидепрессантные лекарственные средства снижали период неподвижности в течение 5-минутного тестирующего сеанса. Эффект дезипрамина был статистически значимым при 6 мг/кг, 12, 30 и 60 мг/кг. Вычисленная ЕЭ₅₀ для дезипрамина была равна 2,0 ± 0,1 мг/кг (С1 = 1,3-3,3 мг/кг) и его Е_тах была равна 50,0 ± 8,4 с (С1 = 31,8-57,7 мг/кг). Эффект обработки соединением #8 был статистически значимым при 12, 60 и 120 мг/кг по сравнению с контролями, обработанными наполнителем. Большая изменчивость между индивидуальными крысами компенсировала эффект 30 мг/кг дозы соединения #8, незначительно отличный от контроля. По этой причине данные по неподвижности для 30 мг/кг дозы не применяли в вычислении ЕЭ₅₀. Вычисленная ЕО₅₀ для соединения #8 была равна 5,6 ± 0,6 мг/кг (С1 = 2,215,6 мг/кг) и его Е_тах была равна 67,0 ± 11,6 с (С1 = 30,3-103,8 мг/кг). Величина ЕО₅₀ для соединения #8 значительно отличалась от величины ЕЭ₅₀ для дезипрамина при р<0,001 (двусторонний критерий Стьюдента). Не было статистически значимой разницы между величинами Е_тах для дезипрамина и соединения #8. Венлафаксин и мапротилин (положительные контроли) тестировали только в трех дозах из 12, 30 и 60 мг/кг. Неподвижности животных при 30 и 60 мг/кг дозах значительно отличались от контролей, обработанных наполнителем, как для венлафаксина, так и для мапротилина. Однако было слишком мало данных, чтобы вычислить ЕО₅₀ для этих двух лекарственных средств. Лоразепам (отрицательный контроль) был тестирован при 1 мг/кг и показал незначительное влияние на период неподвижности крыс в течение тестирующего сеанса. Результаты указывают, что соединение #8 обладает активностью, подобной антидепрессантной, в Р8Т.

- 29 015514

Таблица 6

Величины ΕΌ₅₀ и Е_тах для соединения #8 и ЭМ1 в Р8Т

	Εϋ5ο мг/кг	ЗЕМ ео50	С1 ео50	Етах %	ЗЕМ Етах	С1 Етах
Соединение #8	5,6	0, 6	2,2-15,6	57,0	11, 6	30,3-103,8
ΡΜΙ	2,0	0,1	1,3-3,3	50, 0	8,4	31,8-57,7

Пример 20. Модель хронического легкого стресса (хронического).

В модели хронического легкого стресса (С8М) крысы, подверженные множеству легких стрессфакторов в течение длительного периода времени, показывают, наряду с другими поведенческими, биохимическими и физиологическими ухудшениями, существенное снижение их быстроты реакции на поощряющий стимул. Данный дефицит обычно контролируют снижением потребления 1% раствора сахарозы, но его можно также видеть в других тестах, таких как помещение в предпочтительное состояние или интракраниальная самостимуляция. Так как гипочувствительность к поощрению, по-видимому, отражает утрату чувства наслаждения (неспособность получать удовольствие), которая является основным симптомом обширных депрессивных расстройств, С8М процедура может служить подходящим научным инструментом в изучениях механизмов антидепрессантного действия.

Самцов Ш18(аг крыс доставляли в лабораторию за два месяца перед началом опыта. За исключением описанного ниже, животных отдельно размещали с пищей и водой, свободно доступной, и содержали при 12-ч свет/темноте и в условиях постоянной температуры (22 ± 2°С) и влажности (50 ± 5%).

Животных сначала приучали потреблять 1% раствор сахарозы; обучение состояло из восьми 1-ч основных тестов, в которых была представлена сахароза, в жилой клетке, после 14 ч удаления корма и воды; потребление сахарозы измеряли взвешиванием предварительно взвешенных сосудов, содержащих раствор сахарозы, в конце теста. Затем потребление сахарозы контролировали при сходных условиях с интервалами в неделю на протяжении всего эксперимента.

На основе потреблений сахарозы в конечном основном тесте животных делили на две равноценные группы. Одна группа животных была предназначена для процедуры хронического легкого стресса в течение периода из 7 последующих недель. Каждая неделя стрессового режима состояла из двух периодов удаления корма или воды, двух периодов 45-градусного наклона клетки, двух периодов прерывистого освещения (включение и выключение света каждые 2 ч), двух периодов загрязненной клетки (250 мл воды в подстилке из опилок), одного периода парного содержания, двух периодов стробоскопической иллюминации низкой интенсивности (150 вспышка/мин) и трех периодов без стресса. Все стресс-факторы имели 10-14 ч продолжительности и применялись индивидуально и непрерывно, днем и ночью. Контрольные животные содержались в отдельных помещениях и не контактировали с животными под стрессом. Их отлучали от корма и воды в течение 14 ч перед каждым тестом с сахарозой, но другой корм и вода были свободно доступными в жилой клетке.

На основе потребления ими сахарозы после начальных 2 недель стресса как животные под стрессом, так и контрольные животные, каждые, были разделены затем на равноценные подгруппы (п=8), и в течение последующих пяти недель они получали 1 раз в сутки интраперитонеальное введение наполнителя (0,5% метилцеллюлоза, 1 мл/кг), соединения #8 при 12, 30 и 60 мг/кг, имипрамина при 10 г/кг или венлафаксина при 10 мг/кг в качестве эталонных обработок. Лекарственные средства вводили при приблизительно 10,00 и еженедельно проводили тесты с сахарозой 24 ч после последних инъекций лекарственного средства. Через пять недель все обработки были закончены и 24 ч спустя образцы крови или мозга были взяты от всех животных и представлены для дальнейшего биохимического анализа.

Животных индивидуально удаляли из их жилых помещений в другое помещение для принесения в жертву. Затем их обезглавливали в полупроизвольном порядке. Целый головной мозг удаляли, быстро замораживали в смеси сухой лед/гептан сразу после жертвоприношения и хранили в пластмассовых сосудах при -70°С. Кровь туловища для плазмы собирали в ΕΌΤΑ пробирки, которые содержали ΕΌΤΑ (приблизительно 1,6 мг/мл крови). ΕΌΤΑ кровь центрифугировали прямо при 1500хд в течение 10 мин при 4°С. Кровь аспирировали и хранили в пробирках Эппендорфа при -70°С.

Кроме того, 2 порции по 20 мл плазмы от животных, не подвергнутых какому-либо воздействию, готовили для получения кривой стандартного соединения для биоанализа.

Все результаты, полученные в данном исследовании, анализировали многофакторным дисперсионным анализом с тремя, относящимися к объекту факторами (стресс/контроль, обработки лекарственным средством и последовательные тесты с сахарозой). 1,81) тест Фишера использовали для ροδΐ-йое сравнений средних.

Хронический легкий стресс вызывал постепенное снижение в потреблении 1% раствора сахарозы. В конечном основном тесте все животные пили приблизительно 11 г раствора сахарозы. После начальных двух недель стресса поглощение оставалось на прежних уровнях в контролях, но падало до приблизительно 6 г у животных под стрессом, приводя к значительному групповому эффекту [Р(1,84) = 87,204; р<0,001]. Такое различие между контрольными животными и животными под стрессом, обработанными

- 30 015514 наполнителем, сохранялась на том же уровне в течение остатка эксперимента.

По сравнению с введением наполнителя имипрамин был неактивным в контролях [эффект обработки: Г(1,84) = 1,578; Ν8] и вызывал значительный эффект обработки: Г(1,84) = 22,651; р<0,001 и взаимодействие обработка х недели: Г(5,84) = 2,717; р=0,025 у животных под стрессом. Аналогично, венлафаксин был неактивным в контролях [эффект обработки: Г(1,84) = 0,208; Ν8] и вызывал значительный эффект обработки: Г(1,84) = 35,724; р<0,001 и взаимодействие обработка х недели: Г(5,84) = 3,219; р=0,010 у животных под стрессом.

По сравнению с показателями недели 0 повышения в потреблении сахарозы у животных под стрессом достигало статистической значимости через четыре недели после обработки имипрамином (р<0,05) и венлафаксином (р<0,01) и данный эффект оставался после этого. Одно животное под стрессом (№ 480) не отвечало на обработку венлафаксином, но его не исключали из статистического анализа.

По сравнению с введением наполнителя соединение #8 не вызывало значительных эффектов обработки в контроле [Г(3,168) = 1,198; Ν8] и у животных под стрессом [Г(3,168) = 1,676; Ν8], указывая на то, что соединение не является активным в СМ8 модели депрессии.

Пример 21. Анализ резидент/вторженец (также известный как анализ хронического социального стресса).

Поведенческий анализ резидент/вторженец применяют для скрининга соединений по активности, подобной антидепрессантной. Соединение #8 тестировали данным анализом с помощью серии опытов по процедуре, описанной в Куди1а, К., АЬитапа, Ν., Е1идде, О., Гисйз, Е., КиШег, Е., Науетапп-Кетеске, и., Вейауюга1 Вгат Кезеагсй, 162 (2005), р. 127-134.

Табл. 5-7 ниже представляют средние значения и величины стандартных отклонений для измеренных параметров по следующим соединениям, введенным р. о. (перорально): наполнитель, контрольные соединения - имипрамин при 10 мг/кг и венлафаксин при 10 мг/кг, соединение #8 при 60 мг/кг и соединение #8 при 120 мг/кг.

Таблица 5

	Доза	Потребление сахарозы, среднее ± 3ϋ
Обработка	мг/кг	Неделя 3	Неделя 4	Неделя 5
Наполнитель - без стресса	0	90,2 ± 2,5	89,0 ± 4,2*	91,7 ± 2,1*
Наполнитель - со стрессом	0	51,7 ± 26,7	69,3 ± 7,5	66,3 ± 6,1
Имипрамин - без стресса	10	87,9 ± 2,7	89,7 ± 5,3	91,0 ± 3,7
Имипрамин - со стрессом	10	70,5 ± 19,5	78,3 ± 15,1	73,6 ± 19,4
Венлафаксин - без стресса	10	88,4 ± 9,1	91,5 ±5,6	87,9 ± 15,0
Венлафаксин - со стрессом	10	74,5 ± 16,7	76,1 ± 18,2	73,3 ± 17,6
Соединение #8 - без стресса	60	90,9 ± 3,5	92,3 + 1,4	88,9 ± 7,4
Соединение #8 - со стрессом	60	92,1 ± 3,2*	89,5 + 6,9*	92,4 ± 4,5*
Соединение #8 - без стресса	120	83,6 ± 22,1	91,3 ± 4,6	89,3 ± 5,1
Соединение #8 - со стрессом	120	76,1 ± 20,8	75,5 ± 20, 6	87,4 ± 7,9*

* статистически значимо отличается от аналогичной величины для животных под стрессом, обработанных наполнителем

- 31 015514

Таблица 6

Влияние . резидент/вторженец на двигательную активность

Обработка	Дова мг/кг	Передвижение Средн.±3ϋ	Подъем на задние лапы Средн.±ЗП	Вдох через нос Средн.±3ϋ	Обнюхивание Средн.±30
Наполнитель - без стресса	0	неделя 1 8184,711597,2 неделя 5 8102,3+1805,6*	неделя 1 50,8110,2* неделя 5 46,8+7,6*	неделя 1 47,819,6 неделя 5 43+6,6*	неделя 1 24,5+4,9 неделя 5 29,815,3*
Наполнитель - со стрессом	0	неделя 1 5816,8+1589,6 неделя 5 3920,81887,3	неделя 1 28+11,2 неделя 5 1819,1	неделя 1 27,5110,8 неделя 5 14,5+6,7	неделя 1 15,815,7 неделя 5 912, 6
Имипрамин без стресса	10	неделя 1 8162,8+929,9 неделя 5 7278+1030	неделя 1 51,5+12,6 неделя 5 42,112,9	неделя 1 48,1+10,3 неделя 5 37,5+2,1	неделя 1 25,814,9 неделя 5 26,415,2
Имипрамин - со стрессом	10	неделя 1 6037,8+1382,8 неделя 5 5642,8+998,6	неделя 1 3019,5 неделя 5 27,817,4	неделя 1 27,517,9 неделя 5 24,3+5,1	неделя 1 14,4+4,4 неделя 5 17,313,4*
Венлафаксин - без стресса	10	неделя 1 9094,9+1832,7 неделя 5 8078,6+1665,2	неделя 1 48,3+11,2 неделя 5 40,118,9	неделя 1' 43,318,9 неделя 5 38,6+7,7	неделя 1 27,1+5,2 неделя 5 27+4,7
Венлафаксин - со стрессом	10	неделя 1 6233,611087,2 неделя 5 6250,1+789,2*	неделя 1 30,816,6 неделя 5 35,1+7,4	неделя 1 28,616,5 неделя 5 33,1+7,5*	неделя 1 14,9+3,5 неделя 5 18,3+3,6*
Соединение №8 без стресса	60	неделя 1 8288,612117,5 неделя 5 7922,9+1476	неделя 1 49,618,7 неделя 5 37,4+11,5	неделя 1 44,1+9,4 неделя 5 33,4+11,2	неделя 1 20,9+3,3 неделя 5 23,516,4
Соединение №8 - со стрессом	60	неделя 1 5858,51708,2 неделя 5 7080,911238,7*	неделя 1 26,5+6, 1 неделя 5 32,8+10,3	неделя 1 25+7,3 неделя 5 30,6111,1	неделя 1 1313,3 неделя 5 24,815,7*
Соединение №8 без стресса	120	неделя 1 8056,61867,2 неделя 5 8648,3+1060, 9	неделя 1 42110,6 неделя 5 36,516,3	неделя 1 37,618,4 неделя 5 33,515,9	неделя 1 22,8+3,7 неделя 5 ' 25,5+4,1
Соединение №8 - со стрессом	120	неделя 1 6168,311132,1 неделя 5 6444+1010,3*	неделя 1 29,3+7 неделя 5 30,1 + 6, 4	неделя 1 27,5+6,1 неделя 5 30,4+7,5	неделя 1 13+3,6 неделя 5 22,514,1*

* статистически значимо отличается от аналогичной величины для животных под стрессом, обработанных наполнителем

Таблица 7

Влияние резидент/вторженец на тест принудительного плавания

Обработка	Доза, мг/кг	Неподвижность в течение 5 мин: неделя 5, среднее!ЗВ
Наполнитель - без стресса	0	165,5+25*
Наполнитель - со стрессом	0	227140,2
Имипрамин - без стресса	10	125,3150,1
Имипрамин - со стрессом	10	157,5171,6
Венлафаксин - без стресса	10	181,8+27,6
Венлафаксин - со стрессом	10	190,4+36,8
Соединение №8 - без стресса	60	164,3±25,3
Соединение №8 - со стрессом	60	175,1±29,5
Соединение №8 - без стресса	120	136,7+34,9
Соединение №8 - со стрессом	120	128,3+37,4*

* статистически значимо отличается от аналогичной величины для животных под стрессом, обработанных наполнителем

Соединение #8 было активным в анализе резидент/вторженец, указывая на то, что следует ожидать,

- 32 015514 что соединение #8 будет активным в качестве антидепрессанта.

Пример 22.

В качестве специфического варианта осуществления пероральной композиции 100 мг соединения #8, полученного по методике примера 7, готовили в препаративной форме с достаточно тонкоизмельченной лактозой для обеспечения общего количества 580-590 мг, чтобы заполнить круглую твердую гелевую капсулу.

Хотя вышеизложенное описание дает принципы данного изобретения с примерами, обеспечивающими иллюстративную цель, следует подразумевать, что практика изобретения включает все обычные варианты, приспособления и/или модификации, которые входят в охват следующей формулы изобретения, и их эквиваленты.

Claims (18)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Способ лечения маниакального синдрома, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения формулы (I)

   I II / (СН₂)_а---Ν—8-—N δ

   А в которой К¹ и К², каждый независимо, выбраны из группы, состоящей из водорода и низшего ал кила;

   К⁴ выбран из группы, состоящей из водорода и низшего алкила;

   а представляет собой целое число от 1 до 2;

   выбран из группы, состоящей из где Ь представляет собой целое число от 0 до 4 и где с представляет собой целое число от 0 до 2; каждый К⁵ независимо выбран из группы, состоящей из водорода, низшего алкила и нитро;

   при условии, что когда представляет собой тогда а равно 1;

   или его фармацевтически приемлемой соли.
2. 2. Способ по п.1, где К¹ и К², каждый независимо, выбраны из группы, состоящей из водорода и низшего алкила;

   К⁴ выбран из группы, состоящей из водорода и низшего алкила;

   а представляет собой целое число от 1 до 2;

   сЬ выбран из группы, состоящей из

   - 33 015514 где Ь представляет собой целое число от 0 до 2 и где с представляет собой целое число от 0 до 1; каждый К⁵ независимо выбран из группы, состоящей из водорода, низшего алкила и нитро;

   при условии, что когда представляет собой тогда а равно 1;

   или его фармацевтически приемлемая соль.
3. 3. Способ по п.2, где К¹ и К², каждый независимо, выбраны из группы, состоящей из водорода и низшего алкила; К⁴ выбран из группы, состоящей из водорода и низшего алкила;

   а представляет собой целое число от 1 до 2;

   А з выбран из группы, состоящей из где Ь представляет собой целое число от 0 до 2 и где с равно 0;

   каждый К⁵ независимо выбран из группы, состоящей из водорода, низшего алкила и нитро; А при условии, что когда представляет собой (в⁵:

   Iтогда а равно 1;

   или его фармацевтически приемлемая соль.
4. 4. Способ по п.3, где К¹ и К², каждый независимо, выбраны из группы, состоящей из водорода и низшего алкила; К⁴ выбран из группы, состоящей из водорода и метила;

   а представляет собой целое число от 1 до 2;

   выбран из группы, включающей 2-(2,3-дигидробензо[1,4]диоксинил), 2(бензо [1,3] диоксолил), 2-(3,4-дигидро-2Н-бензо [1,4] диоксепинил), 2-(6-хлор-2,3-дигидробензо [1,4] диок- 34 015514 синил), 2-(6-фтор-2,3-дигидробензо[1,4]диоксинил), 2-(хроманил), 2-(5-фтор-2,3-дигидробензо[1,4]диоксинил), 2-(7-хлор-2,3-дигидробензо[1,4]диоксинил), 2-(6-хлорбензо[1,3]диоксолил), 2-(7-нитро-2,3дигидробензо[1,4] диоксинил), 2-(7-метил-2,3-дигидробензо[1,4] диоксинил), 2-(5-хлор-2,3-дигидробензо [1,4] диоксинил), 2-(6-бром-2,3-дигидробензо [1,4] диоксинил), 2-(6,7-дихлор-2,3-дигидробензо[1,4]диоксинил), 2-(8-хлор-2,3-дигидробензо[1,4]диоксинил), 2-(2,3-дигидронафто[2,3-Ь][1,4]диоксинил) и 2-(4-метилбензо[1,3]диоксолил);

   представляет собой 2-(3,4-дигидро-2Н-бензо[1,4]диоксепинил), тогда при условии, что когда а равно 1;

   или его фармацевтически приемлемая соль.
5. 5. Способ по п.4, где К¹ и К², каждый независимо, выбраны из группы, состоящей из водорода и низшего алкила; К⁴ выбран из группы, состоящей из водорода и метила;

   а представляет собой целое число от 1 до 2;

   группы, включающей 2-(бензо[1,3]диоксолил),

   2-(6-хлор-2,3-дигидробензо[1,4]диоксинил),

   2-(2,32-(7-хлор-2,3-дигидро2-(6-бром-2,3-дигидровыбран из дигидробензо [1,4] диоксинил), бензо [1,4] диоксинил), 2-(7-метил-2,3-дигидробензо[1,4] диоксинил), бензо [1,4] диоксинил) и 2-(6,7-дихлор-2,3-дигидробензо[1,4] диоксинил);

   или его фармацевтически приемлемая соль.
6. 6. Способ по п.1, где соединение формулы (I) выбрано из группы, состоящей из ^)-(-)-№(6-хлор2,3-дигидробензо[1,4]диоксин-2-илметил)сульфамида и его фармацевтически приемлемых солей.
7. 7. Способ лечения биполярного расстройства, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения формулы (I)

   А⁴ О η¹

   I II /^к (СН₂)_а--Ν-5—N

   А *_(|) в которой К¹ и К², каждый независимо, выбраны из группы, состоящей из водорода и низшего алкила;

   К⁴ выбран из группы, состоящей из водорода и низшего алкила;

   а представляет собой целое число от 1 до 2;

   выбран из группы, состоящей из где Ь представляет собой целое число от 0 до 4 и где с представляет собой целое число от 0 до 2; каждый К⁵ независимо выбран из группы, состоящей из галогена, низшего алкила и нитро;

   А при условии, что когда представляет собой или его фармацевтически приемлемой соли.

   - 35 015514
8. 8. Способ по п.7, где Κ¹ и Κ², каждый независимо, выбраны из группы, состоящей из водорода и низшего алкила; Κ⁴ выбран из группы, состоящей из водорода и низшего алкила;

   а представляет собой целое число от 1 до 2;

   выбран из группы, состоящей из где Ь представляет собой целое число от 0 до 2 и где с представляет собой целое число от 0 до 1; каждый Κ⁵ независимо выбран из группы, состоящей из галогена, низшего алкила и нитро;

   (А при условии, что когда представляет собой тогда а равно 1;

   или его фармацевтически приемлемая соль.
9. 9. Способ по п.8, где Κ¹ и Κ², каждый независимо, выбраны из группы, состоящей из водорода и низшего алкила; Κ⁴ выбран из группы, состоящей из водорода и низшего алкила;

   а представляет собой целое число от 1 до 2; й выбран из группы, состоящей из где Ь представляет собой целое число от 0 до 2 и где с равно 0;

   каждый Κ⁵ независимо выбран из группы, состоящей из галогена, низшего алкила и нитро; (У) при условии, что когда представляет собой тогда а равно 1;

   или его фармацевтически приемлемая соль.
10. 10. Способ по п.9, где Κ¹ и Κ², каждый независимо, выбраны из группы, состоящей из водорода и низшего алкила;

    - 36 015514

    К⁴ выбран из группы, состоящей из водорода и метила; а представляет собой целое число от 1 до 2;

    выбран из группы, включающей 2-(2,3-дигидробензо[1,4] диоксинил), 2(бензо[1,3]диоксолил), 2-(3,4-дигидро-2Н-бензо[1,4]диоксепинил), 2-(6-хлор-2,3-дигидробензо[1,4]диоксинил), 2-(6-фтор-2,3-дигидробензо[1,4] диоксинил), 2-(хроманил), 2-(5-фтор-2,3дигидробензо[1,4]диоксинил), 2-(7-хлор-2,3-дигидробензо[1,4]диоксинил), 2-(6-хлорбензо[1,3]диоксолил), 2-(7-нитро-2,3-дигидробензо[1,4]диоксинил), 2-(7-метил-2,3-дигидробензо[1,4]диоксинил), 2-(5хлор-2,3-дигидробензо[1,4]диоксинил), 2-(6-бром-2,3-дигидробензо[1,4]диоксинил), 2-(6,7-дихлор-2,3дигидробензо [1,4] диоксинил), 2-(8-хлор-2,3-дигидробензо[1,4] диоксинил), 2-(2,3-дигидронафто[2,3Ь][1,4] диоксинил) и 2-(4-метилбензо[1,3]диоксолил);

    А при условии, что когда представляет собой 2-(3,4-дигидро-2Н-бензо[1,4]диоксепинил), тогда а равно 1;

    или его фармацевтически приемлемая соль.
11. 11. Способ по п.10, где К¹ и К², каждый независимо, выбраны из группы, состоящей из водорода и метила;

    К⁴ выбран из группы, состоящей из водорода и метила;

    а представляет собой целое число от 1 до 2;

    выбран из группы, включающей 2-(бензо[1,3]диоксолил), 2-(2,3-дигидробензо[1,4] диоксинил), 2-(6-хлор-2,3-дигидробензо[1,4] диоксинил), 2-(7-хлор-2,3-дигидробензо[1,4] диоксинил), 2-(7-метил-2,3-дигидробензо[1,4]диоксинил), 2-(6-бром-2,3-дигидробензо[1,4]диоксинил) и 2(6,7-дихлор-2,3-дигидробензо[1,4]диоксинил);

    или его фармацевтически приемлемая соль.
12. 12. Способ по п.7, где соединение формулы (I) выбрано из группы, состоящей из (28)-(-)-Ы-(6-хлор2,3-дигидробензо [1,4] диоксин-2-илметил)сульфамида и его фармацевтически приемлемых солей.
13. 13. Способ лечения биполярной депрессии, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) в которой К¹ и К², каждый независимо, выбраны из группы, состоящей из водорода и низшего алкила;

    К⁴ выбран из группы, состоящей из водорода и низшего алкила;

    а представляет собой целое число от 1 до 2;

    выбран из группы, состоящей из где Ь представляет собой целое число от 0 до 4 и где с представляет собой целое число от 0 до 2; каждый К⁵ независимо выбран из группы, состоящей из галогена, низшего алкила и нитро;

    © при условии, что когда представляет собой

    - 37 015514 тогда а равно 1;

    или его фармацевтически приемлемой соли.
14. 14. Способ по п.13, где К¹ и К², каждый независимо, выбраны из группы, состоящей из водорода и низшего алкила; К⁴ выбран из группы, состоящей из водорода и низшего алкила;

    а представляет собой целое число от 1 до 2;

    (У)

    Уаа выбран из группы, состоящей из где Ь представляет собой целое число от 0 до 2 и где с представляет собой целое число от 0 до 1; каждый К⁵ независимо выбран из группы, состоящей из галогена, низшего алкила и нитро;

    или его фармацевтически приемлемая соль.
15. 15. Способ по п.14, где К¹ и К², каждый независимо, выбраны из группы, состоящей из водорода и низшего алкила; К⁴ выбран из группы, состоящей из водорода и низшего алкила;

    а представляет собой целое число от 1 до 2;

    й выбран из группы, состоящей из где Ь представляет собой целое число от 0 до 2 и где с равно 0;

    каждый К⁵ независимо выбран из группы, состоящей из галогена, низшего алкила и нитро; (У) при условии, что когда представляет собой

    - 38 015514 тогда а равно 1;

    или его фармацевтически приемлемая соль.
16. 16. Способ по п.15, где К¹ и К², каждый независимо, выбраны из группы, состоящей из водорода и низшего алкила;

    К⁴ выбран из группы, состоящей из водорода и метила;

    а представляет собой целое число от 1 до 2;

    выбран из группы, включающей 2-(2,3-дигидробензо [1,4]диоксинил), 2-(бензо[1,3]диоксолил), 2-(3,4-дигидро-2Н-бензо[1,4]диоксепинил), 2-(6-хлор-2,3-дигидробензо[1,4]диоксинил), 2-(6фтор-2,3-дигидробензо [1,4] диоксинил), 2-(хроманил), 2-(5-фтор-2,3-дигидробензо[1,4]диоксинил), 2-(7хлор-2,3-дигидробензо[1,4]диоксинил), 2-(6-хлорбензо[1,3]диоксолил), 2-(7-нитро-2,3-дигидробензо [1,4] диоксинил), 2-(7-метил-2,3-дигидробензо[1,4]диоксинил), 2-(5-хлор-2,3-дигидробензо[1,4]диоксинил), 2-(6-бром-2,3-дигидробензо [1,4]диоксинил), 2-(6,7-дихлор-2,3-дигидробензо [1,4]диоксинил), 2(8-хлор-2,3-дигидробензо [1,4] диоксинил), 2-(2,3-дигидронафто [2,3-Ь][1,4]диоксинил) и 2-(4метилбензо [1,3] диоксолил);

    представляет собой 2-(3,4-дигидро-2Н-бензо[1,4]диоксепинил), тогда при условии, что когда а равно 1;

    или его фармацевтически приемлемая соль.
17. 17. Способ по п.16, где К¹ и К², каждый независимо, выбраны из группы, состоящей из водорода и метила;

    К⁴ выбран из группы, состоящей из водорода и метила;

    а представляет собой целое число от 1 до 2;

    (θ) выбран из группы, включающей 2-(бензо[1,3]диоксолил), 2-(2,3-дигидробензо [1,4] диоксинил), 2-(6-хлор-2,3-дигидробензо[1,4]диоксинил), 2-(7-хлор-2,3-дигидробензо[1,4]диоксинил), 2-(7метил-2,3-дигидробензо[1,4]диоксинил), 2-(6-бром-2,3-дигидробензо[1,4]диоксинил) и 2-(6,7-дихлор-2,3дигидробензо [1,4]диоксинил);

    или его фармацевтически приемлемая соль.
18. 18. Способ по п.13, где соединение формулы (I) выбрано из группы, состоящей из (2δ)-(-)-Ν-(6хлор-2,3-дигидробензо[1,4]диоксин-2-илметил)сульфамида и его фармацевтически приемлемых солей.