EA007120B1 - Псевдополиморфные формы ингибитора вич-протеазы - Google Patents

Abstract

Раскрываются новые псевдополиморфные формы (3R,3aS,6aR)-гексагидрофуро[2,3-b]фуран-3-ил(1S,2R)-3-[[(4-аминофенил)сульфонил](изобутил)амино]-1-бензил-2-гидроксипропилкарбамата и способы их получения.

Description

Область изобретения

Настоящее изобретение относится к новым псевдополиморфным формам (3К,3а8,6аК)гексагидрофуро[2,3-Ь]фуран-3-ил(18,2К)-3-[[(4-аминофенил)сульфонил](изобутил)амино]-1-бензил-2гидроксипропилкарбамата, способу их получения, а также к их применению в качестве лекарственного средства.

Предпосылки изобретения

Кодируемые вирусами протеазы, которые имеют важное значение для репликации вируса, необходимы для процессинга предшественников вирусных белков. Помехи в процессинге предшественников белков ингибируют образование инфекционных вирионов. Таким образом, ингибиторы вирусных протеаз могут применяться для предупреждения или лечения хронических или острых вирусных инфекций. (3К,3а8,6аК)-гексагидрофуро[2,3-Ь]фуран-3-ил(18,2К)-3-[[(4-аминофенил)сульфонил](изобутил)амино]1-бензил-2-гидроксипропилкарбамат обладает ингибирующей активностью по отношению к ВИЧпротеазе и хорошо подходит для ингибирования вирусов Н1У-1, Н1У-2.

Структура (3К,3а8,6аК)-гексагидрофуро[2,3-Ь]фуран-3-ил(18,2К)-3-[[(4-аминофенил)сульфонил] (изобутил)амино]-1 -бензил-2-гидроксипропилкарбамата показана ниже

(X)

Соединение формулы (X) и способы его получения раскрываются в ЕР 715618, МО 99/67417, и8 6248775 и в Вюогдаше апй СЬепшП’т Ьейега, Уо1. 8, рр. 687-690, 1998, «Ро1еп1 Н1У рго1еа8е шЫЬйогз ίπеогрогайпд Ыдй-аГйпйу Р₂-1дапЙ8 апй (К)-(йуйгохуеШу1атто)8и1Гопат1йе 18о81еге», которые все включены в описание посредством ссылки.

Лекарства, применяемые при приготовлении фармацевтических составов для коммерческого использования, должны удовлетворять требованиям определенных стандартов, включая нормативы ОМР (Ооой МапиГаеШппд Ргаейее8) и 1СН (1п1егпайопа1 СопГегепее оп Нагтоп1/а11оп). Указанные стандарты включают технические требования, которые в широком диапазоне охватывают разнородные физические, химические и фармацевтические параметры. Именно учет этих параметров превращает приготовление фармацевтических составов в сложную техническую дисциплину.

Так, например, лекарство, используемое при приготовлении фармацевтических составов, должно удовлетворять требованиям приемлемой чистоты. Установлены нормативы, которые определяют пределы и характеристики примесей в новых лекарственных веществах, получаемых химическим синтезом, т. е. действительных и потенциальных примесей, которые наиболее вероятно образуются в процессе синтеза, очистки и хранения нового лекарственного вещества. Установлены нормативы для количества допустимых продуктов разложения лекарственного вещества или продуктов взаимодействия лекарственного вещества с наполнителем и/или контейнером или закрытой системой, с которыми оно контактирует.

Устойчивость является параметром, который также учитывается при создании фармацевтических составов. Хорошая устойчивость будет гарантировать поддержание требуемой химической целостности лекарственных веществ в течение срока годности фармацевтических составов, который определяет временной интервал, в течение которого можно полагаться на то, что продукт сохраняет свои качественные характеристики, если он хранится в соответствующих и предписанных условиях. В течение указанного периода лекарство можно вводить без риска или с минимальным риском, поскольку ни присутствие потенциально опасных продуктов разложения не может вызвать вредные последствия для здоровья реципиента, ни низкое содержание активного ингредиента не может привести к неполному лечению.

Различные факторы, такие как облучение светом, температура, кислород, влажность, чувствительность к рН в растворах, могут оказывать влияние на устойчивость и могут определять срок годности и условия хранения.

Биодоступность также является параметром, который учитывают при разработке формы для введения фармацевтически приемлемых составов. Биодоступность связана с количеством и скоростью, с которой исходная форма конкретного лекарства достигает большого круга кровообращения после введения лекарства. Биодоступность, которой обладает лекарство, связана, таким образом, с определением того, достигается ли терапевтически эффективная концентрация в месте(ах) действия лекарства.

Физико-химические факторы и фармакотехнические составы могут влиять на биодоступность лекарства. Так, для улучшения биодоступности необходимо учитывать некоторые свойства лекарства, та- 1 007120 кие как константа диссоциации, скорость растворения, растворимость, полиморфные формы, размер частиц.

Необходимо также выяснить, что выбранный фармацевтический состав может быть изготовлен, более предпочтительно, в промышленных масштабах.

В связи с различными и многочисленными техническими требованиями, а также влияющими на них параметрами трудно заранее предвидеть, какие фармацевтические составы окажутся приемлемыми. Так, неожиданно было обнаружено, что определенные модификации твердого состояния соединения формулы (X) положительно влияют на применимость фармацевтических составов.

Краткое описание изобретения

Настоящее изобретение относится к псевдополиморфным формам соединения формулы (X), применяемым для приготовления фармацевтических составов. Указанные псевдополиморфные формы улучшают фармацевтические составы за счет повышения их устойчивости и биодоступности. Их можно получить с достаточно высокой чистотой, которая приемлема для фармацевтического применения, в частности, при приготовлении лекарственного средства для ингибирования активности ВИЧ-протеазы у млекопитающих.

В первом аспекте, в настоящем изобретении раскрываются псевдополиморфы (3В,3а8,6аК)гексагидрофуро [2,3-Ъ] фуран-3-ил( 18,2К.)-3-[[(4-аминофенил)сульфонил](изобутил)амино]-1 -бензил-2гидроксипропилкарбамата.

Рассматриваемые псевдополиморфы включают спиртовые сольваты, в частности С1-С4 спиртовые сольваты; гидратные сольваты; алкановые сольваты, в частности С1-С4 хлоралкановые сольваты; кетоновые сольваты, в частности С1-С5 кетоновые сольваты; простые эфирные сольваты, в частности С1-С4 простые эфирные сольваты; циклические простые эфирные сольваты; сложноэфирные сольваты, в частности С1-С5 сложноэфирные сольваты; и сульфоновые сольваты, в частности С1-С4 сульфоновые сольваты соединения формулы (X). Предпочтительными псевдополиморфами являются фармацевтически приемлемые сольваты, такие как гидраты или этаноляты. Конкретными псевдополиморфами являются Форма А (этанолят), Форма В (гидрат), Форма С (метанолят), Форма Ό (ацетонат), Форма Е (дихлорметанат), Форма Е (этилацетатный сольват), Форма С (1-метокси-2-пропанолят), Форма Н (анизолят), Форма I (тетрагидрофуранат), Форма 1 (изопропанолят) соединения формы (X). Другим конкретным псевдополиморфом является Форма К (мезилат) соединения формулы (X).

Во втором аспекте, настоящее изобретение относится к способам получения псевдополиморфов. Псевдополиморфы соединения формулы (X) получают, смешивая соединение формулы (X) с органическим растворителем, водой, или смесями воды и смешивающихся с водой органических растворителей, и применяя любые подходящие методики для инициирования кристаллизации, с целью получения требуемых псевдополиморфов.

В третьем аспекте, изобретение относится к применению указанных псевдополиморфов для приготовления фармацевтических составов для ингибирования активности ВИЧ-протеазы у млекопитающих. В соответствии с использованием в фармации предпочтительный вариант осуществления настоящего изобретения относится к применению фармацевтически приемлемых псевдополиморфных форм соединения формулы (X) для лечения болезней млекопитающих, вызываемых вирусами Ηΐν, при необходимо сти такого лечения, при этом способ включает введение указанному млекопитающему эффективного количества фармацевтически приемлемой псевдополиморфной формы соединения формулы (X).

Следующие рисунки предоставляют дополнительную информацию о свойствах псевдополиморфов по настоящему изобретению.

Краткое описание рисунков

На фиг. 1, фиг. 2 и фиг. 3 приведены порошковые рентгенограммы Формы А (1:1).

На фиг. 4 представлено трехмерное изображение Формы А (1:1) с обозначенными атомами.

На фиг. 5 проводится сравнение спектров комбинационного рассеяния Форм А, В, Ό, Е, Е, Н (1:1) и аморфной формы в области деформационных колебаний карбонильной группы 1800-100 см^-1 и в области 3300-2000 см^-1.

На фиг. 6 проводится сравнение растянутых спектров комбинационного рассеяния Форм А, В, Ό, Е, Е, Н (1:1) и аморфной формы в области деформационных колебаний карбонильной группы 600-0 см^-1.

На фиг. 7 проводится сравнение растянутых спектров комбинационного рассеяния Форм А, В, Ό, Е, Е, Н (1:1) и аморфной формы в области деформационных колебаний карбонильной группы 1400-800 см^-1.

На фиг. 5, 6 и 7 Р1 соответствует Форме А, Р18 соответствует Форме В, Р19 соответствует аморфной форме, Р25 соответствует Форме Е, Р27 соответствует Форме Е, Р50 соответствует Форме Ό, Р68 соответствует Форме Н, Р69 соответствует Форме С, Р72 соответствует Форме I и Р81 соответствует Форме С.

На фиг. 8 приведена термограмма дифференциальной сканирующей калориметрии (ДСК) Формы А (1:1).

На фиг. 9 приведен инфракрасный спектр (ИК), на котором показаны колебания молекулярной структуры Формы А как кристаллического вещества.

- 2 007120

На фиг. 10 приведен ИК-спектр, на котором показаны колебания молекулярной структуры Формы В как кристаллического вещества.

Фиг. 11 - ИК-спектр форм А, В и аморфной формы в спектральном диапазоне от 4000 до 400 см^-1.

Фиг. 12 - ИК-спектр форм А, В и аморфной формы в спектральном диапазоне от 3750 до 2650 см^-1. Фиг. 13 - ИК-спектр форм А, В и аморфной формы в спектральном диапазоне от 1760 до 1580 см^-1. Фиг. 14 - ИК-спектр форм А, В и аморфной формы в спектральном диапазоне от 980 до 720 см^-1.

На фиг. 11, 12, 13 и 14 кривая А соответствует Форме А, кривая В соответствует форме В и кривая С соответствует аморфной форме.

Фиг. 15 - ДСК кривые термограмм Формы А (кривая Ό), формы А после адсорбции/десорбции (ΑΟ8/ΏΕ8) (кривая Е) и Формы А после ΑΟ8/ΌΕ8 исследований при гидратации (кривая Е).

Фиг. 16 - термогравиметрические (ТГ) кривые Формы А (кривая Ό) , Формы А после ΑΟ8/ΏΕ8 (кривая Е) и Формы А после ΑΟ8/ΏΕ8 исследований при гидратации (кривая Е).

Фиг. 17 - ТГ кривая Формы А при температуре 25°С в атмосфере сухого азота как функция времени.

Фиг. 18 - ΑΌ8/ΏΕ8 кривые Формы А.

Фиг. 19 - ΑΌ8/ΏΕ8 кривые исследований при гидратации Формы А.

Фиг. 20 - ΑΌ8/ΏΕ8 кривые Формы В.

Фиг. 21 - ИК спектр Формы К.

Фиг. 22 - спектр комбинационного рассеяния Формы К.

Фиг. 23 - ДСК кривая Формы К.

Фиг. 24 - ТГ кривая Формы К.

Фиг. 25 - ΑΌ8/ΏΕ8 изотерма Формы К, порция 1.

Фиг. 26 - ΑΌ8/ΏΕ8 изотерма Формы К, порция 2.

Подробное описание изобретения

Термин «полиморфизм» относится к способности химической структуры существовать в различных формах, при этом известно, что полиморфизм возникает во многих органических соединениях, в том числе лекарствах. Так, «полиморфные формы» или «полиморфы» включают лекарственные вещества, которые существуют в аморфной форме, в кристаллической форме, в безводной форме, в форме с различными степенями гидратации или сольватации, в форме с включенными молекулами растворителя, а также вещества, которые различаются по твердости, форме и размеру кристаллов. Различные полиморфы различаются по своим физическим свойствам, таким как растворимость, скорость растворения, устойчивость в твердой фазе, а также по поведению при изготовлении с точки зрения текучести порошка и прессования при таблетировании.

Термин «аморфная форма» означает форму, в которой отсутствует дальний трехмерный порядок. В аморфной форме положение молекул относительно любой другой является в основном хаотичным, т.е. отсутствует регулярное расположение молекул в структурной решетке.

Термин «кристаллический» определяется как форма, в которой положение молекул относительно любой другой организовано в виде трехмерной структурной решетки.

Термин «безводная форма» относится к определенной форме, практически не содержащей воды. «Гидратация» относится к процессу присоединения молекул воды к веществу, которое существует в определенной форме, а «гидраты» являются веществами, которые образованы присоединением молекул воды. «Сольватация» относится к процессу включения молекул какого-либо растворителя в вещество, которое существует в кристаллической форме. Таким образом, термин «сольват» определяется как кристаллическая форма, которая содержит как стехиометрические, так и нестехиометрические количества растворителя. Поскольку вода является растворителем, то сольваты также включают воду. Термин «псевдополиморф» применяется по отношению к полиморфным кристаллическим формам, которые содержат молекулы растворителя, включенные в структуру их решетки. Термин псевдополиморфизм часто используют для обозначения сольватов (Вугп, РГс1ГГсг, 8!о^е11, (1999) 8оШ-5!а!е СйетШгу оГ Огидк, 2'¹ Εά., опубликован 88С1, 1пс.).

В настоящем изобретении раскрываются псевдополиморфы (3К,3а8,6аК)-гексагидрофуро[2,3Ь]фуран-3 -ил(18,2К)-3-[[(4-аминофенил)сульфонил](изобутил)амино]-1 -бензил-2-гидроксипропилкарбамата.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения псевдополиморфами являются спиртовые сольваты, в частности С1-С4 спиртовые сольваты; гидратные сольваты; алкановые сольваты, в частности С1-С4 хлоралкановые сольваты; кетоновые сольваты, в частности С1-С5 кетоновые сольваты; простые эфирные сольваты, в частности С1-С4 простые эфирные сольваты; циклические простые эфирные сольваты; сложноэфирные сольваты, в частности С1-С5 сложноэфирные сольваты; и сульфоновые сольваты, в частности С1-С4 сульфоновые сольваты соединения формулы (X). Термин «С1-С4 спирт» означает насыщенные и ненасыщенные углеводороды с прямой и/или разветвленной цепью, содержащие от 1 до 4 атомов углерода и замещенные, по крайней мере, гидроксильной группой и необязательно замещенные алкоксигруппой, такие как, например, метанол, этанол, изопропанол, бутанол, 1-метокси-2пропанол и т.п. Термин «С1-С4 хлоралкан» означает насыщенные и ненасыщенные углеводороды с пря

- 3 007120 мой и/или разветвленной цепью, содержащие от 1 до 4 атомов углерода и замещенные по крайней мере одним атомом хлора, .такие как, например, дихлорметан. Термин «С1-С5 кетон» обозначает растворители общей формулы Я'-С(=О)-Я, где К. и Я' могут совпадать или различаться и означают метил или этил, такие как ацетон и т.п. Термин «С1-С4 простой эфир» означает растворители общей формулы Я'-О-Я, где Я и Я' могут совпадать или различаться и означают фенильную группу, метил или этил, такие как анизол и т.п. Термин «циклический простой эфир» обозначает 4-6-членные моноциклические углеводороды, содержащие один или два атома кислорода в цикле, такие как тетрагидрофуран и т.п. Термин «С1-С5 сложный эфир» означает растворитель общей формулы Я'-О-С(=О)-Я, где Я и Я' могут совпадать или различаться и означают метил или этил, такие как этилацетат и т.п. Термин «С1-С4 сульфоновый растворитель» обозначает растворители общей формулы Я-8О₃Н, где Я может быть насыщенным углеводородом с прямой или разветвленной цепью, содержащим от 1 до 4 атомов углерода, такие как мезилат, этансульфонат, бутансульфонат, 2-метил-1-пропансульфонат и т.п.

Предпочтительными формами являются такие псевдополиморфы по настоящему изобретению, которые являются фармацевтически приемлемыми, например гидраты, сольваты спиртов, такие как этаноляты.

В настоящем описании в качестве примера приводятся несколько псевдополиморфов, и они включают Форму А (этанолят), Форму В (гидрат), Форму С (метанолят), Форму Ό (ацетонат), Форму Е (дихлорметанат), Форму Р (этилацетатный сольват), Форму С (1-метокси-2-пропанолят), Форму Н (анизолят), Форму I (тетрагидрофуранат), Форму 1 (изопропанолят) или Форму К (мезилат) соединения формулы (X).

Могут существовать сольваты с разными степенями сольватации. Содержание растворителя в кристалле может меняться в пределах различных отношений в зависимости от применяемых условий. Кристаллические формы сольватов соединения формулы (X) могут включать вплоть до 5 молекул растворителя на одну молекулу соединения формулы (X) и существовать в различных сольватных состояниях, включая, среди прочих, кристаллы гемисольвата, моносольвата, дисольвата, трисольвата, кристаллы промежуточных сольватов и их смеси. Обычно отношение соединения формулы (X) к растворителю может быть в интервале от (5:1) до (1:5). Так, отношение может составлять в интервале от приблизительно 0,2 до приблизительно 3 молекул растворителя на 1 молекулу соединения формулы (X), в частности отношение может составлять в интервале от приблизительно 1 до приблизительно 2 молекул растворителя на 1 молекулу соединения формулы (X), предпочтительно отношение составляет 1 молекулу растворителя на 1 молекулу соединения формулы (X).

Могут существовать сольваты с разными степенями гидратации. Так, кристаллические формы сольватов соединения формулы (X) в определенных условиях могут дополнительно включать молекулы воды, которые частично или полностью входят в кристаллическую структуру. Поэтому термин «Форма А» используют в настоящем описании для обозначения этанолятных форм соединения формулы (X), содержащих вплоть до 5 молекул растворителя на 1 молекулу соединения формулы (X), промежуточных кристаллов сольвата и их смесей; при этом они необязательно включают дополнительные молекулы воды, которые частично или полностью входят в кристаллические структуры. То же самое относится к Формам В и далее ко всем формам вплоть до Формы К. Если возникает необходимость обозначить конкретную «Форму А», то отношение сольватации указывается после обозначения «Форма А», например одну молекулу этанола на одну молекулу соединения формулы (X) обозначают как Форма А (1:1).

Порошковая рентгенография представляет собой метод изучения параметров полиморфных форм, включая псевдополиморфы соединения формулы (X), и метод, позволяющий идентифицировать сольватные кристаллические формы на фоне других кристаллических и некристаллических форм соединения формулы (X). Так, порошковые рентгенограммы получают на порошковом дифрактометре РЫШрк Ρν 1050/80, модель Брэгга-Брентано. Порошки Формы А (1:1), с массой каждого образца приблизительно 200 мг, помещают в капиллярные стеклянные трубки диаметром 0,5 мм и анализируют, используя стандартные методы, известные из области техники. Рабочие параметры генератора рентгеновских лучей составляют 45 кВ и 32 мА, при этом в качестве источника излучения используют Ка линию меди. Вращение образца по оси хи не проводят, и данные получают с шагом 2-тета от 4 до 60°. Характеристические положения угла 2-тета для пиков Формы А (1:1), показанных на фиг. 1, 2 и 3, составляют: 7,04±0,5°, 9,24°±0,5°, 9,96±0,5°, 10,66±0,5°, 11,30±0,5°, 12,82±0,5°, 13,80±0,5°, 14,56±0,5°, 16,66±0,5°, 17,30±0,5°, 18,28±0,5°, 19,10±0,5°, 20,00±0,5°, 20,50±0,5°, 21,22±0,5°, 22,68±0,5°, 23,08+0,5°, 23,66±0,5°, 25,08±0,5°, 25,58±0,5°, 26,28±0,5°, 27,18±0,5°, 28,22±0,5°, 30,20±0,5°, 31,34±0,5°, 32,68±0,5°, 33,82±0,5°, 39,18±0,5°, 41,20±0,5°, 42,06±0,5° и 48,74±0,5°.

В другой серии аналитических экспериментов рентгеновская дифракция монокристалла Формы А (1:1) дает следующую конфигурацию кристаллов, приведенную ниже в табл. 1.

- 4 007120

Таблица 1. Кристаллические данные

Форма кристалла	Призма
Размеры кристалла	0,56 х 0,38 х 0,24 мм
Цвет кристалла	Бесцветный
Пространственная группа	Р 2x2121 орторомбическая
Температура	293 К
Параметры ячейки	а = 9, 9882 (6) А
	Ь = 16,1697(8) А
	с = 19,0284(9) А
	альфа(а) = 90°
	бета(З) = 90°
	гамма(у) = 90°
Объем	3158,7(3) А3
Молекулы/элементарная ячейка (Ζ)	4
Плотность, Мг/м3	1,248
μ (коэффициент линейной абсорбции)	1,340 мм'1
Г (ООО)	1272

Измерение интенсивности

Дифрактометр	Згетепз Р4
Излучение	Си Κα(λ= 1,54184 А)
Температура	Комнатная
2 Ощах	138,14°
Коррекция	Эмпирическая с помощью Ψ-сканирований
Количество измеренных отражений	Общее: 3912

Расшифровка структуры и обработка

Количество наблюдений	3467 [Γ2>2σ(Γ2)]
Разность (К)	0,0446

Полученная трехмерная структура Формы А (1:1) приведена на фиг. 4.

В табл. 2 представлены атомные координаты (х 10⁴) и параметры эквивалентного изотропного смещения (А² х 10³) для Формы А (1:1). Атомы пронумерованы как показано на рисунке 4. Дробные координаты х, у и ζ указывают положение атомов относительно начала координат элементарной ячейки. И(ец) определяют как одну треть от следа ортогонализованного тензора Иу.

Таблица 2

	X	У	ζ	ЩеЧ)
01	7778 (3)	2944(2)	9946(1)	70(1)
С2	7171(4)	3513(2)	9487 (2)	64(1)
СЗ	6831(3)	3046(2)	8823 (2)	52(1)
СЗА	7953(3)	2411(2)	8793(2)	55(1)
С 4	7527 (4)	1533(2)	8708 (2)	65(1)
С5	7425(5)	1241 (2)	9457 (2)	70(1)
Об	8501(3)	1642(2)	9809(1)	76(1)
С6А	8582(4)	2416(2)	9534(2)	62(1)
07	5533(2)	2702(1)	8945(1)	51(1)
08	5168(2)	2636(1)	7768 (1)	53(1)
С9	4791(3)	2534 (1)	8368 (1)	42(1)
N10	3590(2)	2256(1)	8562(1)	43(1)
СИ	2638 (3)	1916(2)	8068 (2)	44(1)
С12	2223(3)	1071 (2)	8310 (2)	58(1)
С13	3381(3)	501 (2)	8387 (2)	56(1)
С14	3937 (4)	340 (2)	9038 (2)	67(1)
С15	4989(5)	-200 (2)	9111(3)	80(1)
С16	5494(5)	-581(3)	8530 (3)	96(2)
С17	4975(6)	-413 (3)	7881(3)	98 (2)
С18	3926(5)	126(2)	7810 (2)	78(1)
С19	1423(3)	2464(2)	7976(2)	45(1)
020	494(2)	2112(1)	7502(1)	61(1)
С21	1829(3)	3307 (2)	7740(2)	48(1)
N22	699(3)	3880(1)	7721(1)	49(1)
С23	521(4)	4312 (2)	7048(2)	58(1)
С24	-61(4)	3785(2)	6473(2)	67 (1)
С25	-1453(5)	3497(3)	6654(2)	86(2)
С26	-47(7)	4247(3)	5779(2)	102 (2)
327	510(1)	4414(1)	8440(1)	50(1)
028	572(3)	3860(1)	9015(1)	61(1)
029	-693(2)	4873(1)	8345(1)	65(1)
СЗО	1854(3)	5080 (2)	8509(2)	50(1)
С31	1803(3)	5825(3)	8159(2)	54(1)
С32	2871(4)	6341(2)	8195 (2)	56(1)
СЗЗ	4033(4)	6133 (2)	8564(2)	55(1)
С34	4063(4)	5385(2)	8909(2)	59(1)
С35	2998(4)	4869(2)	8883 (2)	56(1)
N36	5076(3)	6667(2)	8596(2)	72(1)
С37	1920(10)	2231 (7)	5258 (4)	232(6)
С38	1310(10)	1590(6)	5564 (4)	191(5)
039	1768 (4)	1393(2)	6249 (2)	94 (1)

- 5 007120

В табл. 3 приведены параметры анизотропного смещения (А² х 10³) для Формы А (1:1). Экспоненциальный множитель анизотропного смещения имеет формулу -2л²[й²а*²и₁₁ + ... + 2йка*Ь*и₁₂]

Таблица 3

	ип	и22	и3з	и23	У13	С712
О1	65(2)	89	(2)	55(1)	-4(1)	-12(1)	-3(1)
С2	53(2)	68	(2)	71(2)	-7(2)	-8(2)	-11(2)
СЗ	38(2)	63	(2)	55(2)	4(1)	-2(1)	-12(1)
С ЗА	37 (2)	78	(2)	49(1)	9(1)	1(1)	-3(2)
С4	61(2)	74	(2)	61(2)	-4 (2)	-6(2)	10(2)
С5	72(3)	67	(2)	71(2)	8(2)	-11(2)	-7(2)
Об	78(2)	80	(2)	70(1)	16(1)	-21(1)	-8 (2)
С6А	47(2)	80	(2)	59(2)	5(2)	-6(2)	-7(2)
07	34(1)	69	(1)	50(1)	0(1)	-1(1)	-9(1)
08	42(1)	68	(1)	50(1)	3(1)	2(1)	-12(1)
С9	35(2)	41	(1)	49(1)	1(1)	-3(1)	3(1)
N10	31(1)	50	(1)	49(1)	-1(1)	1(1)	-2(1)
С11	32(2)	41	(1)	57(1)	-4(1)	0(1)	-2(1)
С12	44 (2)	42	(1)	87(2)	2(1)	2(2)	-4(1)
С13	50(2)	39	(1)	78 (2)	0(1)	8(2)	0(1)
С14	64(2)	56	(2)	80 (2)	0(2)	5(2)	9(2)
С15	68 (3)	72	(2)	100(3)	18(2)	7(2)	12(2)
С16	77 (3)	68	(2)	143 (4)	26(3)	34(3)	28 (2)
С17	114 (4)	72	(2)	109(3)	-6(2)	32(3)	38(3)
С18	89(3)	60	(2)	85(2)	-4(2)	10(2)	10(2)
С19	30(2)	44	(1)	61(1)	-3(1)	-5(1)	-5(1)
020	44 (1)	56	(1)	83(1)	-6(1)	-18 (1)	-6(1)
С21	36(2)	42	(1)	64(2)	2(1)	-4 (1)	-1(1)
N22	42(1)	47	(1)	57(1)	1(1)	0(1)	3(1)
С23	59(2)	50	(1)	64(2)	7(1)	-8(2)	1(2)
С24	79(3)	59	(2)	62(2)	1(1)	-11(2)	6(2)
С25	75(3)	83	(2)	101(3)	6(2)	-30(3)	-5(2)
С26	143(5)	99	(3)	65(2)	14(2)	-15(3)	-6(3)
327	44(1)	47	(1)	61(1)	2(1)	2(1)	1(1)
028	64 (2)	58	(1)	61(1)	9(1)	3(1)	-7(1)
029	46(1)	58	(1)	92 (2)	-4(1)	6(1)	10(1)
СЗО	50(2)	46	(1)	54(1)	2(1)	1(1)	1(1)
С31	50(2)	48	(1)	64 (2)	6(1)	-4 (2)	6(1)
С32	59(2)	45	(1)	65(2)	4(1)	2(2)	1(1)
СЗЗ	57(2)	55	(2)	52(1)	-4(1)	1(1)	-3(1)
С34	56(2)	63	(2)	59(2)	6(1)	-13(2)	-3(2)
С35	63(2)	52	(1)	53(1)	5(1)	-8(2)	-2(2)
N36	67 (2)	70	(2)	80(2)	4(2)	-5(2)	-19(2)
С37	290(10)	260	(Ю)	145(7)	68(7)	67(8)	120(10)
С38	280(10)	187	'(7)	104 (4)	1 (5)	-53(6)	-80(10)
039	99(2)	91	(2)	93(2)	1(2)	-13(2)	-28(2)

Спектроскопия комбинационного рассеяния широко применяется для выявления молекулярных структур, кристалличности и полиморфизма. Низкочастотные моды комбинационного рассеяния наиболее пригодны для определения различных типов молекулярной упаковки в кристалле. Спектры комбинационного рассеяния получают на спектрометре Вгикег ТТ-Катап КТ8100, снабженным фотоэлектрическим умножителем и оптическими многоканальными детекторами. Образцы, помещенные в кварцевые капиллярные трубки, возбуждают лазером на ионах аргона. Мощность лазера на образце устанавливают приблизительно 100 мВт, а спектральное разрешение составляет приблизительно 2 см^-1. Установлено, что Формы А, В, Ώ, Е, Т и Н (1:1) и аморфная форма имеют спектры комбинационного рассеяния, которые приведены на фиг. 5, 6 и 7.

Кроме того, для Форм А и В определение характеристик проводят с помощью μΑΤΚ (микрорегулирование полного отражения) приставки (Натек 8рШ-Реа с кристаллом 81). ИК спектры получают на приборе №ео1е! Мадпа 560 ТТ1К со светоделителем Се на КВг и детектором ΏΤΘ8 с окном КВг. Спектры измеряют с разрешением 1 см^-1 и каждый раз проводят по 32 сканирования в диапазоне от 4000 до 400 см^-1 и применяют коррекцию базовой линии. Волновые числа для Формы А представлены в следующей далее табл. 4.

Таблица 4

Волновые числа (см^-1) и относительные интенсивности полос поглощения (¹)

3454м, 3429м, 3364м, 3301ц, 3255м, 3089м, 3060м, 3041м, 3028м

2964м, 2905м, 2875м, 2856м, 2722νΜ, 2684чм, 2644νΜ, 2603чм, 2234чм

1704з, 1646м, 1595в, 1550т, 1503т, 1466м, 1453м, 1444м, 1413м 1373м, 1367м, 1340м, 1324т, 1314т, 1306т, 1290м, 1266т, 1244т, 1229т

1187м, 11463, 1124т, 1104т, 1090т, 1076т, 1052т, 1042з, 1038т,

1024з

978з, 971т, 944т, 909м, 890м, 876м, 841т, 792м, 768з, 742з,

732м, 697м, 674з, 645м, 630т

598м, 593м, 574т, 564з, 553чз, 538т, 533т, 531т, 526т, 508т,

501т, 491т, 471т, 458м, 445м, 442м, 436м, 428м, 418м ¹ν8 = очень сильный, 8 = сильный, т = средний, \ν = слабый, ν\ν = очень слабый, Ьг = широкий

ИК-спектр на фиг. 9 отражает колебательные моды молекулярной структуры как кристаллического вещества.

- 6 007120

Волновые числа, полученные для Формы В, представлены в приведенной далее табл. 5.

Таблица 5

Волновые числа (см'^{* 1}) и относительные интенсивности полос поглощения (¹)

3614м, 3361т, 3291πϊ_ζ 3088м, 3061м, 3043м, 3028м

2967м, 2905м, 2872м, 2222ум

1703в, 1631м, 1595в, 1553т, 1502м, 1467м, 1453м, 1444м, 1436м

1388νΜ, 1374νΜ, 1366м, 1355νΜ, 1340м, 1308т, 1291м, 1267т, 1245т

1187м, 11485, 1125т, 1105т, 1091т, 1077т, 1052т, 1044т, 10255 990т, 972м, 944т, 912м, 891м, 876νΜ, 862м, 843м, 836м, 792м, 769т, 757м, 743т, 717м, 699т, 672т

598м, 591м, 585м, 576т, 566т, 553νδ, 536т, 509м, 502т, 484м,

471м, 432νΜ, 425м, 418м ¹ν8 = очень сильный, 8 = сильный, т = средний, а = слабый, ντ = очень слабый, Ъг = широкий

ИК спектр на фиг. 10 отражает колебательные моды молекулярной структуры Формы В как кристаллического вещества.

С использованием того же самого метода аналитической ИК спектроскопии для Формы В и аморфной формы получают характеристики и сравнивают их с Формой А, как показано на фиг. 11-14. ИКспектры различных физических форм показывают явные спектральные отличия, и наиболее важные из них представлены в табл. 6.

Таблица 6

Волновые	числа (см Т) и относительные интенсивности поглощения (1)	полос
	Форма	А		Форма	В		Форма	С
3454т,	3429т	, 3353т,	3615т1	, 3356т	, 3291т,	3462т,	3362т,	, 3249т,
3255т,	3089м	, 3060т,	3089т,	, 3061т	, 3043м,	3062т,	3026т
3041м,	3028м		3027м
2963т, 2856т	2905т	, 2869т,	2966т,	, 2905т	, 2873т	2959т,	2871т
1704з,	164 6т	, 1596з,	1703з,	, 1630т	, 1595з,	1704з,	1628з	, 1596з,
1549з,	1503з		1552з,	, 1502т		1525з,	1502з
1306з,	1266з	, 1244з	1308з,	, 1267з	, 1245з	1312з,	1259з
1146з,	1104з	, 1090з,	1148з,	, 1105з	, 1090з,	1143з,	1090з,	, 1014з
1076з,	1052з	, 1042з,	1077з,	, 1052з	, 1044з,
1038з,	1023з		1024з
987з,	9713,	954з,	989з,	972з,	944з,	960з,	953з, !	950з,
945з,	912т,	909т,	925т,	915т,	912з,	944з,	937з, !	922з,
891з,	876з,	841з,	8913,	862з,	843з	832з
827з
792т,	768з,	742з,	792з,	769з,	744з,	750Ьг,	702з,	672з
697з,	674з		699з,	672з

¹ν8 = очень сильный, 8 = сильный, т = средний, а = слабый, ντ = очень слабый,

Ъг = широкий

Физические Формы А, В и аморфную форму идентифицируют путем интерпретации спектральных данных, при этом основное внимание уделяют полосам поглощения, специфичным для каждой формы. Уникальные и специфичные спектральные различия между формами обнаруживаются в 3 спектральных диапазонах: от 3750 до 2650 см^-1 (диапазон 1), от 1760 до 1580 см^-1 (диапазон 2) и от 980 до 720 см^-1 (диапазон 3).

Диапазон 1 (от 3750 до 2650 см'¹).

Фиг. 11 - Форма А показывает двойную полосу с максимумами поглощения при 3454 см^-1 и при 3429 см^-1. Форма В показывает одну полосу поглощения при 3615 см^-1, а аморфная форма показывает одну полосу поглощения при 3362 см^-1.

Диапазон 2 (от 1760 до 1580 см^-1).

Фиг. 12 - Форма А показывает одну полосу поглощения при 1646 см^-1, Форма В показывает одну полосу поглощения при 1630 см^-1, а аморфная форма показывает одну полосу поглощения при 1628 см^-1 с явно выраженной большей интенсивностью по сравнению с полосой Формы В. Кроме того, аморфная форма показывает менее интенсивную широкую полосу при 1704 см^-1 по сравнению с полосами форм А и В приблизительно при 1704 см^-1.

Диапазон 3 (от 980 до 720 см'¹).

Фиг. 13 - Форма А отчетливо показывает набор 5 полос поглощения при 911, 890, 876, 862 и 841 см^-1. Форма В показывает аналогичный набор, однако полоса при 876 см^-1 отсутствует. Аморфная форма показывает одну полосу поглощения приблизительно при 750 см^-1, а обе формы А и В показывают два максимума приблизительно при 7 68 см^-1 и 743 см^-1.

Термомикроскопия является еще одним полезным методом изучения кинетики в твердом состоянии. Можно количественно оценить кинетику процессов нуклеации из растворов или расплавов, включая анализ скорости нуклеации. Простейшим и широко применяемым методом является определение темпе- 7 007120 ратуры плавления. В частности, применяют прибор фирмы МеШег модели ЕР82 с нагреваемым столиком, который оснащают микроскопом фирмы Ьей^. Несколько частиц Формы А помещают на стеклянную пластину и наблюдают, нагревая столик со скоростью 10°С в минуту. Установлено, что интервал температуры плавления для Формы А (1:1) составляет от 90 до 110°С.

С точки зрения определения характеристик другим средством для проведения исследования является растворимость Формы А (1:1). Ее растворимость в различных растворителях при температуре приблизительно 23°С составляет следующее.

Таблица 7. Приблизительная растворимость для Формы А (1:1), в мг/мл

Растворитель	Приблизительная растворимость для Формы А (мг/мл)
Ацетон	106-211
Дихлорметан	105-209
1-Метокси-2-пропанол	160-213
Этилметилкетон	102-204
Этилацетат	71-107
Абсолютный этанол	<3,4
Гептан	<3, 4
Вода	<3,5
Изопропиловый эфир	<3,4
Метацианат	>200
Метанол	<3,4
2-Пропанол	<3, 4
Тетрагидрофуран	102-203
Толуол	<3,5

Дальнейшие исследования растворимости проводят в зависимости от рН. Так, растворимость Формы А (1:1) в воде измеряют в растворителях с различными значениями рН. Избыток растворяемого вещества уравновешивают растворителем при температуре 20°С в течение по меньшей мере 24 ч. После удаления нерастворившегося соединения концентрацию в растворе определяют с помощью УФ спектрометрии.

Таблица 8.

А(1:1) как

Растворитель	Растворимость (мг/100 мл раствора)
Вода	16 (рН 5,9)
Буфер рН 2 (цитрат/НС1)	18 (рН 2,0)
Буфер рН 3 (цитрат/НС1)	10 (рН 3,0)
Буфер рН 4 (цитрат/НС1)	9 (рН 4,0)
Ο,ΟΙΝ НС1	18 (рН 2,1)
0,1Ν НС1	83 (рН 1,1)
1,0Ν НС1	620 (рН 0,2)

Измеряют растворимость Формы А (1:1) в зависимости от количества НРРСИ (гидроксипропил-(3циклодекстрин). Избыток вещества уравновешивают растворителем в течение 2 дней при температуре 20°С. После удаления нерастворившегося соединения концентрацию в растворе определяют с помощью УФ спектроскопии.

А (1:1) в зависимости от НРВСИ

Таблица 9.

Растворитель	Растворимость в мг/100 мл раствора
Вода	0,16	(рН = 5,9)
5% ΗΡβΟϋ в воде	2,4	(рН = 5,8)
10% ΗΡβΟϋ в воде	6,5	(рН = 6,0)
20% ΗΡβϋϋ в воде	17	(рН = 6,0)
40% ΗΡβΟΩ в воде	40	(рН = 5,9)

Во втором аспекте настоящее изобретение относится к способам получения псевдополиморфов. Псевдополиморфы соединения формулы (X) получают, смешивая соединение формулы (X) с органическим растворителем, водой или смесями воды и смешивающихся с водой органических растворителей, применяя любые подходящие методики для инициирования кристаллизации и выделяя требуемые псевдополиморфы.

Под методиками инициирования кристаллизации понимают такие способы получения кристаллов, которые включают, среди прочих, растворение или диспергирование соединения формулы (X) в среде растворителя, доведение раствора или дисперсии соединения формулы (X) и растворителя(ей) до требуемой концентрации, доведение указанного раствора или дисперсии до требуемой температуры, прикладывание любого подходящего давления, удаление и/или отделение любого нежелательного вещества или примесей, сушку образовавшихся кристаллов с целью получения псевдополиморфов в твердом состоянии, если необходимо получить твердый продукт.

Доведение раствора или дисперсии соединения формулы (X) и растворителей до требуемой концентрации необязательно означает увеличение концентрации соединения формулы (X). В некоторых случаях предпочтительным могло бы быть уменьшение или сохранение концентрации. Под доведением

- 8 007120 указанного раствора или дисперсии до требуемой температуры понимают воздействие нагревания, охлаждения или сохранение температуры окружающей среды.

Способы, которые применяют для получения необходимой концентрации, являются обычными для данной области, и примерами являются испарение дистилляцией при атмосферном давлении, вакуумной дистилляцией, фракционной дистилляцией, азеотропной дистилляцией, пленочной дистилляцией, другие способы, хорошо известные из области техники, и их комбинации. Оптимальный процесс получения требуемой концентрации может также включать насыщение раствора соединения формулы (X) и растворителя, например, добавлением достаточного объема несольватирующего растворителя к раствору, с целью достижения точки насыщения. Другие подходящие способы насыщения раствора включают, например, добавление в раствор дополнительного количества соединения формулы (X) и/или выпаривание порции растворителя из раствора. Как указывается в настоящем описании, насыщенный раствор охватывает растворы в точке их насыщения или превышающие их точку насыщения, т.е. пересыщенные растворы.

Удаление и/или отделение любого нежелательного вещества или примесей может быть осуществлено очисткой, фильтрацией, промыванием, осаждением или подобными способами. Отделение, например, можно осуществить с помощью известных способов разделения жидких и твердых веществ. Способы фильтрации, известные специалистам, также могут применяться в способах по настоящему изобретению. Фильтрацию можно провести, среди прочих методов, центрифугированием или с использованием фильтра Бюхнера, фильтра или пластин Розенмунда или фильтр-пресса. Предпочтительно, предусмотренную в процессе фильтрацию или безопасную фильтрацию удобно использовать в качестве дополнения к указанному выше способу с целью повышения чистоты получаемой псевдополиморфной формы. Кроме того, для отделения примесей от целевых кристаллов могут применяться такие фильтрующие агенты как силикагель, ЛтЬосе!⁸, дикалит, диатомит и т.п.

Полученные кристаллы можно также высушить, и указанный процесс сушки необязательно можно применять на различных стадиях кристаллизации, если кристаллизацию проводят более чем в одну стадию. Процесс сушки включает все способы, известные специалистам, такие как нагревание, использование вакуума, циркуляция воздуха или газа, добавление осушителя, сублимационная сушка, сушка распылением, выпаривание и т.п. или любая их комбинация.

Способ кристаллизации псевдополиморфов соединения формулы (X) включает многочисленные комбинации способов и их вариантов. Так, например, кристаллизацию псевдополиморфов соединения формулы (X) можно осуществить путем растворения или диспергирования соединения формулы (X) в растворителе при подходящей температуре, при этом часть указанного растворителя испаряется, увеличивая концентрацию соединения формулы (X) в указанном растворителе или дисперсии, путем охлаждения указанной смеси и необязательно путем промывания и/или фильтрации и сушки полученных кристаллов сольвата соединения формулы (X). Необязательно псевдополиморфы соединения формулы (X) могут быть приготовлены путем растворения или диспергирования соединения формулы (X) в растворяющей среде, охлаждения указанного раствора или дисперсии и последующего фильтрования и сушки полученного полиморфа. Другим примером получения сольватов соединения формулы (X) может быть насыщение соединением формулы (X) растворяющей среды и необязательно фильтрация, промывание и сушка полученных кристаллов.

Образование кристаллов может протекать в течение более чем одного процесса кристаллизации. В некоторых случаях, по разным причинам, таким как повышение качества конечного сольвата, может потребоваться проведение одной, двух или большего количества дополнительных стадий кристаллизации. Например, псевдополиморфы по настоящему изобретению могут быть также получены путем добавления растворителя к исходному базовому материалу соединения формулы (X), перемешивания раствора при заданной температуре до полного растворения веществ, концентрирования раствора с помощью вакуумной дистилляции и охлаждения. Проводят первую кристаллизацию и образовавшиеся кристаллы вновь промывают растворителем, а потом растворяют соединение формулы (X) в растворителе с образованием требуемого псевдополиморфа. Проводят перекристаллизацию реакционной смеси, а затем охлаждают после проведения кипячения. Образовавшийся псевдополиморф необязательно отфильтровывают и дают ему высохнуть.

Путем растворения или диспергирования соединения формулы (X) в органическом растворителе, воде или смеси воды и смешивающегося с ней органического растворителя можно получить различные типы дисперсий, такие как суспензии, эмульсии, взвеси или смеси; или предпочтительно получить гомогенные однофазные растворы.

Растворяющая среда необязательно может содержать добавки, например, один или несколько диспергирующих агентов, поверхностно-активных веществ или других добавок или их смесей, выбранных из числа тех, которые обычно применяются при получении суспензий кристаллических веществ и которые подробно описаны в литературе. Использование добавок может быть полезным для модифицирования формы кристаллов путем увеличения их мягкости и уменьшения площади поверхности.

Растворяющую среду, содержащую раствор, необязательно можно перемешивать в течение определенного периода времени или энергично перемешивать с помощью миксера с большим сдвиговым уси

- 9 007120 лием, или гомогенизатора, или их комбинации, с целью получить требуемый размер частиц органического соединения.

Примеры органических растворителей, применимых по настоящему изобретению, включают С₁-С₄ спирты, такие как метанол, этанол, изопропанол, бутанол, 1-метокси-2-пропанол и т.п.; С₁-С₄ хлоралканы, такие как дихлорметан; С₁-С₄ кетоны, такие как ацетон; С₁-С₄ простые эфиры, такие как анизол и т.п.; циклические простые эфиры, такие как тетрагидрофуран; С₁-С₄ сложные эфиры, такие как этилацетат; С1-С4 сульфонаты, такие как мезилат, этансульфонат, бутансульфонат, 2-метил-1-пропансульфонат; и т. д.

Примеры смесей воды и смешивающегося с водой органического растворителя включают смеси воды со всеми вышеуказанными органическими растворителями при условии, что они растворимы в воде, в частности этанол/вода, например, в соотношении 50/50.

Предпочтительными растворителями являются фармацевтически приемлемые растворители. Тем не менее, фармацевтически неприемлемые растворители могут найти свое применения при получении фармацевтически приемлемых псевдополиморфов.

В предпочтительном способе растворитель является фармацевтически приемлемым растворителем, поскольку он позволяет получить фармацевтически приемлемый псевдополиморф. В наиболее предпочтительном способе растворителем является этанол.

В конкретном варианте осуществления настоящего изобретения фармацевтически приемлемые псевдополиморфы соединения формулы (X) могут быть получены из псевдополиморфных форм соединения формулы (X), которые необязательно могут быть фармацевтически приемлемыми. Например, Форма А может быть получена при использовании Формы 1 в качестве исходного соединения. Псевдополиморфы могут быть также получены при использовании аморфной формы в качестве исходного соединения.

В смеси воды и смешивающегося с водой органического растворителя количество воды может изменяться от приблизительно 5 об.% до приблизительно 95 об.%, предпочтительно от приблизительно 25 до приблизительно 75 об.%, более предпочтительно от приблизительно 40 до приблизительно 60 об.%.

Следует также отметить, что качество выбранного органического растворителя (абсолютного, денатурированного или другого) также оказывает влияние на конечное качество псевдополиморфа.

Регулирование температуры осаждения и внесение затравки могут дополнительно применяться для улучшения воспроизводимости процесса кристаллизации, распределения размера частиц и формы продукта. Кристаллизацию можно вызвать, не применяя затравки из кристаллов соединения формулы (X) или предпочтительно в присутствии кристаллов соединения формулы (X), которые вводят в раствор в качестве затравки. Затравку можно также вносить несколько раз при разных температурах. Количество вещества затравки зависит от количества раствора и может быть легко установлено специалистом.

Время кристаллизации на каждой стадии кристаллизации будет зависеть от применяемых условий, используемых способов и/или выбранных растворителей.

Измельчение больших частиц или агрегатов частиц после формирования кристаллов может быть проведено дополнительно, с целью получения требуемого или гомогенного размера частиц. Таким образом, кристаллические формы сольватов соединения формулы (X) после проведения преобразования необязательно измельчают. Дробление или измельчение относится к физическому разрушению больших частиц или агрегатов частиц с помощью методов и оборудования, хорошо известных из области техники для уменьшения размеров частиц порошков. Итоговые размеры частиц могут находиться в интервале от миллиметров до нанометров, при этом образуются нанокристаллы, микрокристаллы.

Выход процесса получения псевдополиморфов соединения формулы (X) может составлять 10% или более, а более предпочтительный выход может варьировать от 40 до 100%.

Преимущественно, выход варьирует от 70 до 100%.

Псевдополиморфы по настоящему изобретению предпочтительно имеют чистоту более 90%. Более предпочтительно, псевдополиморфы по настоящему изобретению имеют чистоту более 95%. Еще более предпочтительно, псевдополиморфы по настоящему изобретению имеют чистоту более 99%.

В третьем аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтическому составу, содержащему терапевтически эффективное количество псевдополиморфа соединения формулы (X) и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.

В одном из способов его осуществления настоящее изобретение относится к применению фармацевтически приемлемых псевдополиморфных форм соединения формулы (X), предпочтительно Формы А, при приготовлении лекарственного средства для лечения заболеваний, вызываемых ретровирусами, такими как ВИЧ инфекции, например синдром приобретенного иммунодефицита (СПИД) и СПИДсвязанный комплекс (АК.С).

В другом варианте его осуществления настоящее изобретение раскрывает способ лечения ретровирусной инфекции, например ВИЧ-инфекции, у млекопитающего, такого как человек, который включает введение нуждающемуся в этом млекопитающему эффективного антиретровирусного количества фармацевтически приемлемой псевдополиморфной формы соединения формулы (X), предпочтительно Формы А.

- 10 007120

Настоящее изобретение относится также к способу, в котором лечение ВИЧ вирусной инфекции включает снижение нагрузки Ηΐν. Настоящее изобретение относится также к способу, в котором лечение указанной ВИЧ вирусной инфекции включает увеличение количества СЭ4 + клеток. Настоящее изобретение относится также к способу, в котором лечение ВИЧ вирусной инфекции включает ингибирование активности ВИЧ-протеазы у млекопитающего.

Фармацевтически приемлемые псевдополиморфные формы соединения формулы (X), преимущественно Форма А, которые по тексту настоящего описания называют также активными фармацевтическими ингредиентами, могут вводиться любым путем, который подходит для состояния, лечение которого проводят, предпочтительно перорально. Следует, тем не менее, понимать, что предпочтительный путь может меняться, например, в зависимости от состояния пациента.

Для каждого из вышеуказанных применений и назначений требуемое количество активного ингредиента будет зависеть от ряда факторов, в том числе тяжести состояния, лечение которого проводят, и индивидуальности реципиента и, конечном счете, будет определено по назначению лечащего врача или ветеринара. Требуемая доза преимущественно может назначаться в виде одной, двух, трех, четырех или большего количества субдоз, которые вводят в течение дня через соответствующие промежутки времени.

При получении формы для перорального введения, псевдополиморфы по настоящему изобретению смешивают с подходящими добавками, такими как наполнители, стабилизаторы или инертные разбавители, и с помощью обычных средств придают им подходящую для введения форму, такую как покрытые оболочкой таблетки, твердые капсулы, водные, спиртовые или масляные растворы. Примерами подходящих инертных носителей являются гуммиарабик, магнезия, карбонат магния, фосфат калия, лактоза, глюкоза или крахмал, в частности кукурузный крахмал. В этом случае приготовление можно осуществить как с использованием сухих, так и влажных гранул. В качестве масляных наполнителей или растворителей подходят масла растительного или животного происхождения, такие как подсолнечное масло или масло печени трески. Подходящими растворителями для водных или водно-спиртовых растворов являются вода, этанол, растворы сахара или их смеси. В качестве дополнительных вспомогательных соединений для других форм введения препарата применимы также полиэтиленгликоли и полипропиленгликоли.

Для подкожного или внутривенного введения псевдополиморфы соединения формулы (X), если требуется, то и вместе с обычными используемыми в этом случае веществами, такими как солюбилизаторы, эмульгаторы или дополнительные вспомогательные вещества, переводят в раствор, суспензию или эмульсию. Псевдополиморфы соединения формулы (X) могут быть также лиофилизованы, и полученный таким образом лиофилизат можно использовать для получения препаратов для инъекции или инфузии. Подходящими растворителями являются, например, вода, физиологический солевой раствор или спирт, в частности этанол, пропанол, глицерин, а также растворы сахара, такие как растворы глюкозы или маннита, или, альтернативно, смеси различных указанных выше растворителей.

Подходящими фармацевтическими составами для введения в форме аэрозолей или спреев являются, например, растворы, суспензии или эмульсии псевдополиморфов соединение формулы (X) в фармацевтически приемлемом растворителе, таком как этанол или вода, или смеси указанных растворителей. Если необходимо, составы могут также дополнительно содержать вспомогательные фармацевтические соединения, такие как поверхностно-активные вещества, эмульгаторы и стабилизаторы, а также газноситель для распыления. Подобный препарат, как правило, содержит активное соединение с концентрацией приблизительно от 0,1 до 50%, в частности приблизительно от 0,3 до 3 мас.%.

Псевдополиморфы по настоящему изобретению могут также содержаться в составе, включающем частицы псевдополиморфа соединения формулы (X) микронного, нанометрового и пикометрового размера, при этом указанный состав может включать другие фармацевтические агенты и необязательно может быть переведен в твердую форму.

Бывает удобно готовить составы из псевдополиморфов по настоящему изобретению в форме наночастиц, на поверхности которых находится адсорбированный наночастицами модификатор поверхности в количестве, достаточном для поддержания эффективного среднего размера частиц менее чем 1000 нм. Как полагают, применимые модификаторы поверхности включают такие модификаторы поверхности, которые физически связываются с поверхностью антиретровирусного агента, но не связываются химически с антиретровирусным агентом.

Может также оказаться удобным хранить псевдополиморфы соединения формулы (X) в упаковках, которые защищают их механически от воздействия окружающей среды, от вредного биологического и химического воздействия и от разложения. Улучшить физическое состояние лекарственных веществ можно путем использования материалов для упаковки, которые не проницаемы для влаги, таких как запаянные газонепроницаемые пакеты. Хранение лекарственных продуктов, таких как таблетки, капсулы, можно осуществить, используя, например, алюминиевые блистеры.

Следует понимать, что в дополнение к уже указанным выше ингредиентам составы по настоящему изобретению включают другие агенты, применение которых является обычным в данной области техни

- 11 007120 ки применительно к рассматриваемому типу состава; например составы, пригодные для перорального введения, могут включать ароматизирующие или маскирующие вкус агенты.

Следующие примеры приводятся лишь для иллюстрации и их не следует рассматривать как какимлибо образом ограничивающие объем настоящего изобретения.

Пример 1.

Синтез в промышленном масштабе Формы А (1:1) проводят в соответствии со следующими стадиями. Вначале из изопропанола и (3К,3а8,6аК.)-гексагидрофуро[2,3-Ь]фуран-3-ил(18,2К.)-3-[[(4аминофенил)сульфонил](изобутил)амино]-1-бензил-2-гидроксипропилкарбамата готовят раствор. Раствор концентрируют вакуумной дистилляцией при температуре 70°С и давлении 200-500 мбар и охлаждают от температуры Т>35°С до температуры в интервале 15 и 20° в течение приблизительно 10 ч. Полученные кристаллы промывают 13 л свежего изопропанола и отфильтровывают. Далее проводят перекристаллизацию из смеси этанол/вода (90 л/90 л). Затем проводят еще одну стадию дистилляции, но на этот раз применяют 60 л этанола. Протекает перекристаллизация реакционной смеси из этанола, после которой проводят охлаждение от температуры кипения приблизительно до температуры минус 15°С в течение 10 ч. Образовавшийся этанолят отфильтровывают и дают ему высохнуть при температуре приблизительно 50°С и давлении приблизительно 7 мбар. Выход процесса составляет по крайней мере 75%.

Пример 2.

В другом примере получают смесь Формы Ό и Формы В. В процессе кристаллизации для получения Формы Ό в качестве растворителя применяют ацетон. Процесс кристаллизации включает стадию перемешивания исходного соединения (10 г) в 70 мл ацетона. Затем раствор кипятят с обратным холодильником до полного растворения соединения. Добавляют 40 мл воды, а затем раствор медленно охлаждают до комнатной температуры и оставляют перемешиваться на ночь. Образовавшиеся кристаллы отфильтровывают и сушат в вакуумном шкафу при температуре 50°С. В результате кристаллизации получают 7,6 г продукта, и выход указанного процесса составляет около 75%.

Пример 3.

В другом примере получают кристаллы Формы 1. В процессе кристаллизации для получения Формы 1 в качестве растворителя применяют изопропанол. Процесс кристаллизации включает в этом случае стадию растворения исходного вещества в горячем растворителе. Далее раствор охлаждают до комнатной температуры. Образовавшиеся кристаллы отфильтровывают и сушат в вакуумном шкафу при температуре 50°С. Кристаллы содержат приблизительно 50 моль.% изопропанола.

Пример 4.

В этом примере рассчитывают потерю массы для различных псевдополиморфов в термогравиметрических (ТГ) экспериментах. Термогравиметрия является методом, который определяет изменение массы образца по мере его нагревания, охлаждения или выдерживания при постоянной температуре. Образец с массой приблизительно от 2 до 5 мг помещают в тигель и устанавливают его в ТГ печь, модель Νοίζδοίι Тйетто-М1сгоЬа1апсе ТО 209, сопряженной со спектрометром Вгикег ΡΤΙΚ. УсеЮг 22. Образцы нагревают в атмосфере азота со скоростью 10°С/мин до конечной температуры 250°С. Предел обнаружения остаточных растворителей составляет порядка 0,1% для отчетливой поэтапной потери растворителя в узком интервале температур (несколько градусов Цельсия).

Получают следующие ТГ данные.

Форма А: потеря массы 4,2% наблюдается в интервале температур 25-138°С (этанол + небольшое количество воды) и 6,9% (этанол + СО₂) в интервале температур 25-200°С. Скорость потери этанола максимальна при 120°С. Выделение СО2 вызвано химическим разложением и наблюдается при температуре около 190°С.

Форма В: потеря массы 3,4% наблюдается в интервале температур 25-78°С (вода) и 5,1% в интервале температур 25-110°С (этанол + вода для Т>78°С). В интервале 110-200°С наблюдается дальнейшая потеря 1,1% массы (этанол).

Форма С: потеря массы 2,1% наблюдается в интервале температур 25-83°С (вода + метанол) и 4,2% в интервале температур 25-105°С (метанол для Т>83°С°, отчетливая стадия). В интервале 105-200°С наблюдается дальнейшая потеря 2,1% массы (метанол). Этанол в газовой фазе не обнаруживается.

Форма Ό: потеря массы 0,1% наблюдается в интервале температур 25-50°С, 4,2% в интервале температур 25-108°С (ацетон + этанол для Т>50°С), 8,2% в интервале температур 25-157°С (ацетон + этанол для Т>108°С) и 10,5% в интервале температур 25-240°С (ацетон + этанол для Т>157°С).

Форма Е: потеря массы 0,2% наблюдается в интервале температур 25-75°С (вода), 1,8% в интервале температур 25-108°С (дихлорметан + этанол для Т>75°С), 6,8% в интервале температур 25-157°С (дихлорметан + этанол для Т>108°С) и 8,8% в интервале температур 25-240°С (дихлорметан + этанол для Т>157°С).

Форма Р: потеря массы 0,1% наблюдается в интервале температур 25-50°С (вероятно вода), 1,7% в интервале температур 25-108°С (этилацетат + этанол для Т>50°С), 6,6% в интервале температур 25157°С (этилацетат + этанол для Т>108°С) и 9% в интервале температур 25-240°С (этилацетат + этанол для Т>157°С).

- 12 007120

Форма С: потеря массы 0,0% наблюдается в интервале температур 25-50°С, 3,7% в интервале температур 25-108°С (1-метокси-2-пропанол + этанол для Т>50°С, отчетливая стадия), 8% в интервале температур 25-157°С (1-метокси-2-пропанол + этанол для Т>108°С) и 12,5% в интервале температур 25240°С (1-метокси-2-пропанол + этанол для Т>157°С).

Форма Н: потеря массы 0,8% наблюдается в интервале температур 25-100°С (анизол + небольшое количество этанола) и 8,8% в интервале температур 25-200°С (анизол + этанол для Т>100°С).

Форма I: потеря массы 0,3% наблюдается в интервале температур 25-89°С (вода) и 11,0% в интервале температур 25-200°С (тетрагидрофуран для Т>89°С). Этанол в газовой фазе не обнаруживается.

Таблица 10 показывает приблизительные ожидаемые потери массы для различных форм при проведении ТГ экспериментов.

Потеря массы, % (М + х.БМ = 100%).

Таблица 10

Псевдополиморф	Т.кип. (°С)	Гемисольват	Моносольват	Дисольват	Трисольват
Форма ϋ	56	5,0	9,6	17,5	24,1
Форма Н	152	9,0	16,5	28,3	37,2
Форма Е	40	7,2	13,4	23,7	31,8
Форма С	119	7,6	14,1	24,8	33,1
Форма Г	76	7,4	13, 9	24,3	32,6
Форма А	78	4,0	7,8	14,4	20,2
Форма В	100	1,6	3,2	6,2	9,0
Форма С	65	2,8	5,5	10,5	14,9
Форма I	66	6,2	11,6	20,8	28,3

В другой серии исследований с помощью термогравиметрических методов все образцы Формы А, Формы А после адсорбции/десорбции и Формы А после тестов адсорбции/десорбции при гидратации помещают в алюминиевый тигель для образцов. ТГ кривые записывают на термогравиметре ТА 1п§1гитеп! Ηΐ-Кез ТСА 2950 в следующих условиях:

исходная температура: комнатная температура;

скорость нагрева: 20°С/мин; коэффициент разрешения: 4; конечные условия: 300°С или < 80 (мас./мас.); ТГ кривые образцов приведены на фиг. 16.

В таблице 11 приведены потери массы для исследуемых форм.

Таблица 11

	Форма А	ТГ (% изменения массы)
Вплоть до 80°С	> 80°С
Форма А		0,3	7,1
Форма после	АЦЗ/ЦЕЗ	2,9	4,0
Форма А после исследования А/ϋ при гидратации	5,4	0,5

Потеря массы при температуре вплоть до 80°С происходит в основном вследствие испарения присутствующего в образце растворителя (воды). Потеря массы при температуре выше 80°С происходит в основном вследствие испарения присутствующего в образце растворителя (этанолята).

ТГ кривая Формы А при 25°С в атмосфере сухого азота как функция времени представлена на фиг. 17. Потеря массы при 25°С после 10 ч составляет около 0,6%. Она связана с испарением растворителя.

Пример 5.

В другом примере проводят также измерения по методу дифференциальной сканирующей калориметрии (ДСК). С этой целью используют аналитическую систему Регкт Е1тег Э8С 204. Образец Формы А с массой от 2 до 5 мг помещают в ДСК тигель. Эксперимент проводят в открытом тигле. Образец уравновешивают при температуре приблизительно 30°С, а затем нагревают со скоростью 10°С/мин до конечной температуры 200°С. Данные ДСК получают в соответствии со стандартной методикой, используемой в данной области техники. Свойства Формы А определяют с помощью дифференциальной сканирующей калориметрии (ДСК), и она показывает сильно эндотермическую реакцию в интервале 80-119°С, в том числе пик около 105,6°С с дельта Н = -98,33 Дж/г в начале. Таким образом, кристаллы этанольного сольвата Формы А соединения формулы (X) (1:1) дают термограмму, которая приведена на фиг. 8.

В другой серии ДСК измерений изучают образцы Формы А, Формы А после адсорбции/десорбции и Формы А после тестов адсорбции/десорбции при гидратации. Образцы с массой приблизительно 3 мг помещают в перфорированные алюминиевые чашки Регкт Е1тег емкостью 30 мкл. Чашки закрывают подходящей крышкой и ДСК кривые записывают на приборе Регкт Е1тег Руп§ ДСК в следующих условиях:

исходная температура: 25°С;

скорость нагрева: 10°С/мин;

- 13 007120 конечная температура: 150°С;

расход азота: 30 мл/мин.

Форма А дает эндотермический сигнал приблизительно при 104,6°С с теплотой плавления 95,8 Дж/г, который вызван испарением этанолята и плавлением продукта. Форма А после ΑΏδ/ΌΕδ показывает широкий эндотермический сигнал вследствие присутствия смеси этанолята Формы А и гидратированной Формы В. Форма А после ΑΏδ/ΌΕδ тестов гидратации показывает эндотермический сигнал около 73,5°С с теплотой плавления 126 Дж/г, который вызван испарением воды и плавлением продукта. Термографические кривые приведены на фиг. 15.

Пример 6.

В другом примере проводят исследования устойчивости Формы А в трех разных условиях. Указанные условия включают 25°С и 60% относительной влажности, 40°С и 75% относительной влажности и 50°С. Проведенные исследования показывают, что при долговременном выдерживании в условиях 25°С и 60% относительной влажности количество этанола и воды является стабильным.

В таблице 12 приведены данные об устойчивости Формы А.

Долговременную стабильность в условиях 25°С/60% КН (относительной влажности) изучают, используя в качестве контейнера стеклянные бутылки коричневого цвета.

Таблица 12

Тест	Дата выпуска	0 месяцев	1 месяц	3 месяца
Остаточный растворитель: % (масс./масс.) этанол	7,5	7,6	7,6	7,1
% (масс./масс.) Вода	0,10	0,27	0,26	0,55

Пример 7.

Исследование адсорбции-десорбции.

Приблизительно 23 мг Формы А помещают в УТ1 анализатор сорбции пара, модель 8ΘΑ 100, и проводят определение изменения массы в зависимости от влажности атмосферы в следующих условиях: температура сушки: 4 0°С;

равновесие: < 0,05% в течение 5 или 60 мин;

интервал сбора данных: 0,05% или 2 мин;

температура: 25°С;

первый цикл КН (%) адсорбция: 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 95;

КН (%) десорбция: 95, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 10, 5;

второй цикл КН (%) адсорбция: 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 95;

КН (%) десорбция: 95, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 10, 5.

На стадии сушки регистрируют потерю 0,6 мас.%. Полученный высушенный продукт не является гигроскопичным, при большой относительной влажности он поглощает до 0,7% воды. В цикле десорбции регистрируют потерю 1,4 мас.%, что указывает на потерю продуктом этанолята. Полученный продукт после ΑΌ8/ΌΕ8 представляет собой смесь этанолятной формы и гидратированной формы.

Кривая ΑΏδ/ΌΕδ представлена на фиг. 18.

Исследование адсорбции-десорбции при гидратации.

Приблизительно 23 мг Формы А помещают в УТ1 анализатор сорбции пара, модель 8ΘΑ 100, и проводят определение изменения массы в зависимости от влажности атмосферы в следующих условиях:

равновесие: < 0,0005% в течение 5 или 90 мин;

интервал сбора данных: 0,05% или 2 мин;

температура: 25°С;

цикл КН (%) адсорбция/десорбция: 5,95; цикл повторяют 11 раз.

По окончании указанного теста регистрируют потерю массы 5,2%. Этот результат согласуется с ТГ данными (ТГ 5,4% вплоть до температуры 80°С). Этанолятная форма переходит в гидратную форму. Кривые испытаний ΑΌ8/ΌΕ8 при гидратации представлены на фиг. 19.

Пример 8.

Устойчивость Формы А исследуют после хранения соединения в контейнере для образцов, внутренний футляр которого изготовлен из одного ПЭНП (герметизация шнуром), а внешний футляр изготовлен из ПЭТФ/А1/ПЭ (Мор1аз!), который герметизируют путем запаивания. Исследования на долговременную стабильность в условиях 25°С/60% КН и исследования стабильности в ускоренных испытаниях при условиях 40°С/75% КН проводят в течение 6 месяцев, а данные для образцов, которые анализируют в различные периоды времени, приведены в следующих таблицах.

- 14 007120

Таблица 13. Долговременная стабильность при 25°С/60% КН

Тесты	Примечание	Технические требования	Дата выпуска	0 месяцев	1 месяц	3 месяца	6 месяцев
Полиморфизм ДСК	°С (начало) °С шах	Только для информации Только для информации	97,3 104	97,3 104,2	95.5 103.5	97,9 104,2	97,5 104
Остаточные растворители	%(масс./масс.) зтанол %(масс./масс.) 2-пропанол %(масс./масс.) ТГФ %(масс./масс.) ацетон %(масс./масс.) СН2С12	<= 10,0% <= 0,5% <= 0,5% <= 0,5% <= 0,06%	6,71 0,04 <0,01 <0,01 <0,01	6,31 0,04 <0,01 <0,01 <0,01	6,33 0,05 <0,01 <0,01 <0,01	6,40 0,05 <0,01 <0,01 <0,01	6,33 0,05 <0,01 <0,01 <0,01
Вода (КГ)	%(масс./масс.)	<= 7,0%	0,63	0,23	0,34	0,32	0,46
Порошковая рентгеновская дифракция		Только для информации	С	С	-	-	-

С: Кристалл

Таблица 14. Стабильности в ускоренных испытаниях при 40°С/75% КН

Тесты	Примечание	Технические требования	Дата выпуска	0 месяцев	1 месяц	3 месяца	6 месяцев
Полиморфизм ДСК	°С (начало) °С тах	Только для информации Только для информации	97,3 104	97,3 104,2	97,5 103,4	98,0 103,9	97,8 104,3
Остаточные растворители	%(масс./масс.) этанол %(масс./масс.) 2-пропанол %(масс./масс.) ТГФ %(масс./масс.) ацетон % (масс./масс.) СН2С12	<= 10,0% <= 0,5% <= 0,5% <= 0,5% <= 0,06%	6,71 0,04 <0,01 <0,01 <0,01	6,31 0,04 <0,01 <0,01 <0,01	6,73 0,05 <0,01 <0, 01 <0,01	6,32 0,05 <0,01 <0,01 <0,01	6,50 0,05 <0,01 <0,01 <0,01
Вода (КЕ)	% (масс. /масс.)	<= 7,0%	0,63	0,23	0,37	0,34	0,42
Порошковая рентгеновская дифракция		Только для информации	С	С	-	-	-

Форма А показывает химическую и кристаллографическую устойчивость в условиях, указанных в табл. 13 и 14.

Пример 9.

Устойчивость Формы А изучают после хранения соединения в контейнере для образцов, внутренний футляр которого изготовлен из одного ПЭНП (герметизация шнуром), а внешний футляр изготовлен из газонепроницаемого пакета (ЬР8), который герметизируют запаиванием. Исследования на долговременную стабильность в условиях 25°С/60% КН и исследование стабильности в ускоренных испытаниях при условиях 40°С/75% КН проводят в течение 6 месяцев, а данные для образцов, которые анализируют в различные периоды времени, приведены в следующих таблицах.

Таблица 15. Долговременная стабильность при 25°С/60% КН

Тесты	Примечание	Технические требования	Дата выпуска	0 месяцев	1 месяц	3 месяца	6 месяцев
Полиморфизм ДСК	°С (начало) °С тах	Только для информации Только для информации	97,3 104	97,3 104,2	96, 3 103,1	96,2 103,8	98,5 103,9
Остаточные растворители	%(масс./масс.) этанол %(масс./масс.) 2-пропанол %(масс./масс.) ТГФ %(масс./масс.) ацетон % (масс. /масс.) СН2С12	<= 10,0% <= 0,5% <= 0,5% <= 0,5% <= 0,0 6%	6,71 0,04 <0,01 <0,01 <0,01	6,31 0,04 <0,01 <0,01 <0,01	6,42 0,06 <0,01 <0,01 <0,01	6,35 0, 05 <0,01 <0,01 <0,01	6,52 0,05 <0,01 <0,01 <0,01
Вода (КЕ)	%(масс./масс.)	<= 7,0%	0,63	0,23	0,32	0,38	0,49
Порошковая рентгеновская дифракция		Только для информации	С	С	-	-	-

Таблица 16. Стабильности в ускоренных испытаниях при 40°С/75% КН

Тесты	Примечание	Технические требования	Дата выпуска	0 месяцев	1 месяц	3 месяца	6 месяцев
Полиморфизм ДСК	°С (начало) °С тах	Только для информации Только для информации	97,3 104	97,3 104,2	97,8 103,4	97,5 103,7	97,9 104,0
Остаточные растворители	%(масс./масс.) этанол %(масс./масс.) 2-пропанол %(масс./масс.) ТГФ %(масс./масс.) ацетон %(масс./масс.) СН2С12	<= 10,0% <= 0,5% <= 0,5% <= 0,5% <= 0,06%	6,71 0,04 <0,01 <0,01 <0,01	6,31 0,04 <0,01 <0,01 <0,01	6,35 0,06 <0,01 <0,01 <0,01	6,31 0,05 <0,01 <0,01 <0,01	6,30 0, 05 <0, 01 <0,01 <0,01
Вода (КЕ)	%(масс./масс.)	<= 7,0%	0, 63	0,23	0,31	0,36	0,51
Порошковая рентгеновская дифракция		Только для информации	С	С	-	-	-

Форма А показывает химическую и кристаллографическую устойчивость в условиях, указанных в таблицах 15 и 16.

Пример 10.

С целью изучения химической устойчивости Форму А хранят в течение 1, 4 и 8 недель в различных условиях. Указанные условия составляют 40°С/75% КН, 50°С, комнатная температура (КТ)/<5% КН, КТ/56% КН, КТ/75% КН и свет 0,3ба 1СН. После хранения соединение анализируют методом ВЭЖХ и

- 15 007120 проводят визуальную инспекцию. Метод ВЭЖХ, который применяют в данном исследовании, представляет собой методику 909 ВЭЖХ. Результаты испытаний приведены в следующей таблице.

Таблица 17

Условия	ВЭЖХ Суммарное	количество примесей	Внешний вид
1 неделя	4	недели	8 недель	1 неделя	4 недели	8 недель
Образец сравнения	1,07	-	-	светло-желтый	-	-
Свет 0,Зс1а 1СН	1,01	-	-	светло-желтый	-	-
40°С / 75% КН	1,03	0,98	0, 99	светло-желтый	светло-желтый	светло-желтый
50°С	1,05	1,08	1,06	светло-желтый	светло-желтый	светло-желтый
ВТ / < 5% КН	-	1,02	1,04	-	светло-желтый	светло-желтый
ВТ / 56% ВН	-	1,02	0,99	-	светло-желтый	светло-желтый
ВТ / 75% ВН	-	1,00	1,01	-	светло-желтый	светло-желтый

Делают вывод, что Форма А химически устойчива после хранения в указанных условиях.

Пример 11.

Различные фракции Формы В исследуют методами термогравиметрии (ТГ), дифференциальной сканирующей калориметрии (ДСК) и инфракрасной спектроскопии (ИК). Результаты тестов представлены в следующей таблице.

Таблица 18

Фракции	ТГ% изменения массы	ИК	ДСК
< 100°С	Максимум	(°С)	Дополнительный (°С)
Форма В фракция 1	5,65	гидрат, Ве£	69,1		-
после Αϋ3/ϋΕ5	4,30	Фгидрат, Ке£, + аморфное	-		-
Форма В фракция 2	5,91	-гидрат, Ве£	75, 6		-
после 5ά 40°С / 75% ВН	3,56	-гидрат, Ве£	74,1		-
Форма В фракция 3	3,13	±гидрат, Ве£, + аморфное	77,0		67,8
после 5ά 40°С / 75% ВН	2,33	±гидрат, Ве£, + аморфное	77,4	62,8

~ гидрат, КеГ: идентичен образцу сравнения

Пример 12.

Адсорбцию и десорбцию воды при температуре 25°С в различных условиях относительной влажности исследуют на образце Формы В массой 38 мг. Регистрируют изменение массы в зависимости от относительной влажности. Результаты приведены на фиг. 20. На стадии сушки для Формы В регистрируют потерю массы 5,6%. Полученный сухой продукт гигроскопичен, он поглощает в условиях высокой относительной влажности до 6,8% воды. После проведения цикла десорбции в образце сохраняется около 1,2% воды. Полученный продукт после ΆΌ8/ΟΕ8 представляет собой смесь гидрата и аморфного продукта.

Пример 13.

Растворимость Формы В в воде исследуют в растворителях с различными значениями рН. Избыток растворяемого вещества уравновешивают с растворителем при температуре 20°С в течение по меньшей мере 24 ч. После удаления не растворившегося соединения концентрацию в растворе определяют с помощью УФ-спектрометрии.

Таблица 19

Растворитель	Растворимость (мг/100 мл раствора)
Вода	10 (рН 5,1)
Буфер рН 2 (цитрат/НС1)	23 (рН 2,0)
Буфер рН 3 (цитрат/НС1)	13 (рН 3,0)
Буфер рН 4 (цитрат/НС1)	12 (рН 4,0)
Ο,ΟΙΝ НС1	18 (рН 2,1)
0,1Ν НС1	150 (рН 1,1)
1,0Ν НС1	510 (рН 0,14)

Пример 14.

Устойчивость кристаллической структуры Формы В исследуют после хранения соединения в течение двух недель при комнатной температуре (КТ) в условиях относительной влажности (КН)<5%, 56% и 75%, 50°С и 40°С/75% КН. Образцы исследуют методами термогравиметрии (ТГ), дифференциальной сканирующей калориметрии (ДСК), инфракрасной спектроскопии (ИК) и рентгеновской дифракции (ХКЭ). Результаты тестов представлены в следующей таблице.

- 16 007120

Таблица20

Условия	ТГ	ИК	Рентген, дифр.	дек	Внешний вид
<100°С	<225°С	Мах (°С)
0 дней	5, 65	0,16	Ке£	Ке£	69,1	слегка желтооранжевый
после ΑΟ3/ϋΕ3	4,30	0,18	*Ке£	-	-	слегка желтооранжевый
КТ/<5% КН	0,32	0,07	*Ке£	*Ке£	71,2	слегка желтооранжевый
КТ/56% КН	5,71	0,25	~Ке£	~Ке£	71, 0	слегка желтооранжевый
КТ/75% КН	6,20	0,10	~Ке£	~Ке£	71,5	слегка желтооранжевый
50°С	0,23	0,06	?*Ке£	*Ке£	76,4	слегка желтооранжевый
40°С/75% КН	5,77	0,07	~Ке£	±Ке£	70,4	слегка желтооранжевый

~КеГ: идентичный с образцом сравнения ±КеГ: похожий на образец сравнения / КеГ отличный от образца сравнения

Пример 15.

В соответствии с программой испытаний химической устойчивости Форму В хранят в течение 1, 4 и 9 недель в различных условиях. Указанные условия составляют 40°С/75% НН, 50°С, КТ/<5% НН, КТ/ 56% КН, КТ/75% КН и свет 0,34а 1СН. После хранения соединение анализируют методом ВЭЖХ и проводят визуальную инспекцию. Метод ВЭЖХ, который применяют в данном исследовании, представляет собой методику 909 ВЭЖХ. Результаты испытаний приведены в следующей таблице, и из полученных данных делаютя вывод, что Форма В является химически устойчивой.

Таблица 21

Условия	Сумма	ВЭЖХ примесей	Внешний вид
1 неделя	4	недели	9 недель	1 неделя	4 недели	9 недель
Образец сравнения Свет 0,36а	1,35 1,30		-	-	слегка желтооранжевый светло-	-	-
1СН				оранжевый
40°С / 75% КН	1,43		1,38	1,41	слегка желтооранжевый	оранжевый	светлооранжевый
50°С	1,46		1,50	1,46	слегка желтооранжевый	светлооранжевый	светлооранжевый
КТ / <5% КН	-		1,48	1,37	-	светлооранжевый	светлооранжевый
КТ / 56% КН	-		1,11	1,35	-	слегка желтооранжевый	светло- оранжевый
КТ / 75% КН	-		1,34	1,29	-	светлооранжевый	светлооранжевый

Пример 16.

Форму К получают добавлением метансульфоновой кислоты без растворителя к раствору Формы А в ТГФ при комнатной температуре. Затем Форму К смешивают с галогенидом щелочного металла, спрессовывают в виде пилюли (Европейская фармация) и анализируют методом инфракрасной спектроскопии (ИК) в следующих условиях:

прибор: спектрометр №со1е£ Мадпа 560 ЕТ1К;

количество сканирований: 32;

разрешение: 1 см^-1;

диапазон длин волн: от 4000 до 400 см^-1;

коррекция базовой линии: да;

детектор: ЭТО8 с окном КВг;

светоделитель: Ое на КВг;

галогенид щелочного металла: КВг (бромид калия).

ИК-спектр Формы К, как показано на фиг. 21, отражает колебательные моды молекулярной структуры мезилатного сольвата как кристаллического вещества.

- 17 007120

Таблица 22

Волновые числа (см^-1) и относительные интенсивности полос поглощения (¹)

3362т, 3064м

2985т, 2964т, 2906т, 2873т, 2632м, 2585м

1687з, 1627м, 1601м______________________________________________

1554т, 1495т, 1480м, 1470м, 1452м, 1443м, 1421м

1383м, 1373м, 1369м, 1345т, 1324т, 1314т, 1299м, 1268т, 1245т,

1221т, 1202з

1190з, 1166УЗ, 1122т, 1091т, 1077т, 10518, 1043з, 1023т, 1002т

992т, 969м, 943м, 912м, 888м, 867ум, 836м, 813ум

773т, 754м, 743т, 711м, 700т, 658т, 634м

581м, 556т, 505м, 472ум, 452ум, 435ум, 417ум ¹ν8 = очень сильный, = сильный, т = средний, ν = слабый, νν = очень слабый, Ъг = широкий

Пример 17.

Форму К помещают в стеклянную капиллярную ячейку и анализируют методом комбинационного рассеяния в следующих условиях:

тип комбинационного рассеяния: недисперсионное комбинационное рассеяние; прибор: модуль №со1е! ЕТ-Катап;

количество сканирований: 64; разрешение: 4 см^-1;

диапазон длин волн: от 3700 до 100 см^-1;

лазер: Νά:Υν04; частота лазера: 1064 см^-1;

детектор: 1пСаЛ8; светоделитель: СаЕ₂;

геометрия образца: 180° на отражение; поляризация: нет.

Спектр комбинационного рассеяния Формы К, как показано на фиг. 22, отражает колебательные моды молекулярной структуры мезилата как кристаллического вещества.

Таблица 23

Волновые числа (см'¹) и относительные интенсивности полос поглощения (¹)

3080т, 3068т, 3059т, 3043т, 3022м, 3006т

2989з, 2978з, 2962з, 2933уз, 2906т, 2871т

1685ум, 1628м, 1603з, 1585м, 1495м, 1479м, 1466м, 1450т, 1423м

1381м, 1346м, 1336м, 1313м, 1290м, 1271м, 1244м, 1230м, 1209т

1190м, 1182т, 1163ν5, 1122м, 1105м, 1090т, 1049уз, 1032м, ЮОЗз

968м, 955м, 941м, 914м, 897м, 877м, 866м, 845м, 823т, 814т

783т, 771т, 742м, 658м, 634т, 621м

577м, 561т, 534м, 524м, 497м, 451м, 436м

337м, 308м, 287м, 247м, 206м, 162т, 129т_________________________ ¹ν8 = очень сильный, 8 = сильный, т = средний, ν = слабый, ν\ν = очень слабый,

Ъг = широкий

Пример 18.

Приблизительно 3 мг Формы К помещают в стандартные алюминиевые чашки для образцов прибора для проведения термического анализа. Чашки закрывают подходящей крышкой и ДСК кривые записывают на приборе ТЛ-1п81штеп18 Р1000 МТЭ8С, снабженном холодильником К8С, в следующих условиях:

исходная температура: 25°С; скорость нагрева: 10°С/мин;

конечная температура: 200°С; расход азота: 50 мл/мин;

ДСК кривая, приведенная на фиг. 23, указывает на плавление с разложением кристаллического продукта. Плавление Формы К наблюдается при температуре 158,4°С. Вследствие разложения для доказательства кристалличности продукта можно использовать лишь расчет теплоты плавления.

Пример 19.

Форму К помещают в алюминиевый тигель для образцов. Кривые ТГ регистрируют на термогравиметре ТА 1п81гитеп1 Н1-Ке8 ТСЛ 2950 в следующих условиях:

исходная температура: комнатная температура; скорость нагрева: 20°С/мин;

коэффициент разрешения: 4; конечные условия: 300°С или 80 [(мас./мас.)%].

- 18 007120

ТГ кривая приведена на фиг. 24. Потеря массы приблизительно 0,2% вплоть до температуры 60°С связана с испарением растворителя. Потеря массы при температуре свыше 140°С определяется испарением и разложением продукта.

Пример 20. Адсорбция-десорбция.

Приблизительно 21 мг Формы К помещают в УТ1 анализатор сорбции пара, модель 8СЛ 100, и проводят определение изменения массы в зависимости от влажности атмосферы в следующих условиях:

температура сушки: 40°С;

равновесие: < 0,05% в течение 5 или 60 мин;

интервал сбора данных: 0,05% или 2,0 мин;

температура: 25°С;

первый цикл ЯН (%) адсорбция: 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 95;

ЯН (%) десорбция: 95, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 10, 5;

второй цикл ЯН (%) адсорбция: 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 95;

ЯН (%) десорбция: 95, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 10, 5.

Изотерма адсорбции-десорбции приведена на фиг. 25. Форма К является гигроскопичной. На начальной стадии сушки регистрируют потерю массы 0,3%, сравнимую с ТГ результатами. Форма К адсорбирует в условиях высокой относительной влажности вплоть до 1,5% воды. Продукт полностью высушивается во время цикла десорбции.

Другое исследование адсорбции и десорбции воды для Формы К при температуре 25°С в различных условиях относительной влажности проводят, используя около 18 мг мезилатного сольвата. Регистрируют изменение массы в зависимости от относительной влажности. Результат представлен на фиг. 26.

На стадии сушки для Формы К регистрируют потерю массы приблизительно 0,6%. Полученный сухой продукт является слегка гигроскопичным и адсорбирует в условиях высокой относительной влажности вплоть до 1,7% воды. Продукт полностью высушивается во время цикла десорбции.

Пример 21.

Растворимость Формы К в воде исследуют в растворителях с различными значениями рН. Избыток растворяемого вещества уравновешивают с растворителем при температуре 20°С в течение по меньшей мере 24 ч. После удаления нерастворившегося соединения концентрацию в растворе определяют с помощью УФ спектрометрии.

Таблица 24

Растворитель	Растворимость	(мг/100 мл раствора)
Вода	19	(рН 3,3)
Буфер рН 2 (цитрат/НС1)	21	(рН 2,0)
Буфер рН 3 (цитрат/НС1)	12	(рН 3,0)
Буфер рН 4 (цитрат/НС1)	11	(рН 4,0)
0,01Ν НС1	24	(рН 2,0)
20% ΗΡβΟϋ в воде	2100	(рН 1,6)

Пример 22.

Устойчивость кристаллической структуры порции 1 Формы К исследуют после хранения соединения в течение четырех недель при комнатной температуре (ЯТ) в условиях относительной влажности (ЯН) 75%, 50°С и 40°С/75% ЯН. Устойчивость кристаллической структуры порции 2 Формы К исследуют после хранения соединения в течение четырех недель при комнатной температуре (ЯТ) в условиях относительной влажности (ЯН) <5%, 56% и 75%, 50°С и 40°С/75% ЯН. Образцы исследуют методами термогравиметрии (ТГ), дифференциальной сканирующей калориметрии (ДСК) и инфракрасной спектроскопии (ИК). Результаты тестов представлены в следующей табл. 25.

Таблица 25

Соединение	Условия	ТГ	ИК	ДСК	Внешний вид
<80°С	<125°С	Максимум (°С)	Дополн. (°С)
Форма К Порция 1	0 дней КТ/75% КН 50°С 40°С/75% КН	0,47 2,87 0,32 1,48	0,15 0,19 0,14 3,71	Ке£ *Ке£ ~Ке£	143,7 146, 6 140, 6	64,3 45, 6	слегка оранжевый слегка оранжевый оранжевый коричневое масло
Форма К Порция 2	0 дней КТ/<5% КН КТ/56% КН КТ/75% КН 50°С 40°С/75% КН	0,16 0,00 0,27 1,82 0,12 3,26	0,11 0,03 0,03 0,07 0,12 3,08	Ке£ ~Ке£ ±Ке£ *Ке£ ~Ке£	155.8 156.9 154,6 149,2 156,8	67,0	слегка оранжевый слегка оранжевый слегка оранжевый слегка оранжевый слегка оранжевый коричневое масло

~Яе£: идентичный с образцом сравнения ±Яе£: похожий на образец сравнения / ЯеТ: отличный от образца сравнения

- 19 007120

Пример 23.

В соответствии с программой испытаний химической устойчивости, порцию 1 Формы К хранят в течение 1 и 4 недель в различных условиях. Указанные условия составляют 40°С/75% КН, 50°С, КТ/75% КН и свет 0,34а 1СН. Порцию 2 Формы К также хранят в течение 1 и 4 недель в различных условиях. Указанные условия составляют 40°С/75% КН, 50°С, КТ/<5% КН, КТ/56% КН, КТ/75% КН и свет 0,34а 1СН. После хранения соединение анализируют методом ВЭЖХ и проводят визуальный осмотр. Метод ВЭЖХ, который применяют в данном исследовании, представляет собой методику 909 ВЭЖХ. Результаты испытаний приведены в следующей табл. 26.

Таблица 26

Соединение	Условия	ВЭЖХ Сумма примесей	Внешний вид
		1 неделя	4 недели	1 неделя	4 недели
Форма К	Образец сравнения	3,57	-	слегка оранжевый	-
Порция 1	Свет 0,36а ЮН	2,93	-	слегка оранжевый	-
	40°С / 75% КН	5,36	>90*	слегка оранжевый	коричневое масло
	50°С	3,99	27,53	слегка оранжевый	оранжевый
	КТ / 75% КН	-	3, 61	-	светлооранжевый
Форма К	Образец сравнения	1,50	-	слегка оранжевый	-
Порция 2	Свет 0,36а ЮН	1,17	-	слегка оранжевый	-
	40°С / КН	1,75	>85*	слегка оранжевый	коричневое масло
	50°С	1,46	1,25	слегка оранжевый	слегка оранжевый
	КТ / < 5% КН	-	1,58	-	слегка оранжевый
	КТ / 56% КН	-	1,45	-	слегка оранжевый
	КТ / 75% КН	-	1,46	-	слегка оранжевый

Пример 24.

С целью исследования безопасности, переносимости и фармакокинетики Формы А после перорального введения дважды или трижды в день на здоровых субъектах проводят случайный двойной слепой опыт с плацебо-контролем и повышением многократных доз. Четыре дозы Формы А (400 мг Ь.1.4., 800 мг Ь.1.4., 800 мг ΐ.ΐ.4. и 1200 мг ΐ.ΐ.4.) испытывают в 4 группах, составленных из 9 здоровых субъектов. В каждой группе 6 субъектам вводят Форму А, а 3 субъекта получают плацебо в течение 13 дней в виде разовой дозы по утрам (Ь.1.4. = дважды в день, ΐ.ΐ.4. = трижды в день).

Форма А легко адсорбируется, и профили концентрация время для Формы А после повторных дозировок зависят от введенной дозы. Устойчивые концентрации в плазме крови достигаются в среднем в течение 3 дней, хотя значения С₀ь (концентрация во время введения) и АИС₂₄ь (площадь под кривой или биодоступность) слегка уменьшаются с течением времени для всех уровней дозировки. Величины АИС_24Ь и С₈₈,_ау (концентрация при среднем стабильном состоянии) пропорционально зависят от дозы (дневной дозы) для 400 мг Ь.1.4., 800 мг ΐ.ΐ.4. и 1200 мг ΐ.ΐ.4., однако более чем пропорционально зависят от дозы для 800 мг Ь.1.4. С_тах (максимальная концентрация) пропорциональна дозе за один прием. Менее 2% неизмененной Формы А выводится вместе с мочой для всех уровней дозировки.

Claims (14)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Псевдополиморф (3К,3а8,6аК)-гексагидрофуро[2,3-Ь]фуран-3-ил(18,2К)-3-[[(4-аминофенил) сульфонил](изобутил)амино]-1-бензил-2-гидроксипропилкарбамата.
2. 2. Псевдополиморф по п.1, где псевдополиморф представляет собой гидратный сольват, спиртовый сольват, алкановый сольват, кетоновый сольват, простой эфирный сольват, циклический простой эфирный сольват, сложноэфирный сольват, сульфоновый сольват.
3. 3. Псевдополиморф по любому из пп.1 или 2, где псевдополиморф представляет собой гидратный сольват, С1-С₄ спиртовый сольват, С_ГС₄ хлоралкановый сольват, С_ГС₅ кетоновый сольват, С_ГС₄ простой эфирный сольват, циклический простой эфирный сольват, С1-С5 сложноэфирный сольват, С1-С4 сульфоновый сольват.
4. 4. Псевдополиморф по п.1, где псевдополиморф представляет собой гидратный сольват, спиртовый сольват, алкановый сольват, кетоновый сольват, простой эфирный сольват, циклический простой эфирный сольват, сложноэфирный сольват.
5. 5. Псевдополиморф по любому из пп.1-4, который является фармацевтически приемлемым.
6. 6. Псевдополиморф по п.1, где псевдополиморф выбирают из Формы А (этанолят), Формы В (гидрат), Формы С (метанолят), Формы Ό (ацетонат), Формы Е (дихлорметанат), Формы Г (этилацетатный

   - 20 007120 сольват), Формы О (1-метокси-2-пропанолят), Формы Н (анизолят), Формы I (тетрагидрофуранат), Формы I (изопропаноэтят) , Формы К (мезилат).
7. 7. Псевдополиморф по п.1, где псевдополиморф выбирают из Формы А (этанолят), Формы В (гидрат), Формы С (метанолят), Формы □ (ацетонат), Формы Е (дихлорметанат), Формы Г (этилацетатный сольват), Формы О (1-метокси-2-пропанолят), Формы Н (анизолят), Формы I (тетрагидрофуранат), Формы I (изопропанолят).
8. 8. Псевдополиморф по п.1, где псевдополиморфом является Форма А (этанолят), Форма В (гидрат).
9. 9. Псевдополиморф по любому из пп.1-8, в котором отношение соединения к растворителю находится в диапазоне между (5:1) и (1:5).
10. 10. Псевдополиморф по п.9, в котором отношение соединения к растворителю составляет приблизительно 1:1.
11. 11. Псевдополиморф по любому из пп.1-10, который дополнительно включает молекулы воды.
12. 12. Способ получения псевдополиморфа по любому из пп.1-11, который включает стадии смешивания (3К,3а8,6аК)-гексагидрофуро [2,3 -Ь] фуран-3 -ил(18,2К)-3-[[(4-аминофенил)сульфонил](изобутил)амино]-1-бензил-2-гидроксипропилкарбамата с органическим растворителем, водой или смесями воды и смешивающихся с водой органических растворителей и инициирование кристаллизации.
13. 13. Фармацевтическая композиция, содержащая псевдополиморф по любому из пп.1-11 и фармацевтически приемлемый носитель и/или разбавитель.
14. 14. Применение псевдополиморфа по любому из пп.1-11 при приготовлении лекарственного средства для ингибирования активности ВИЧ-протеазы у млекопитающего.