DK173604B1 - Vektor for udtrykkelse i gær, bestående af et fremmed DNA-kodningssegment og en fremgangsmåde til udtrykkelse af DNA-kodningssegmentet i gær ved hjælp af en sådan vektor - Google Patents
Vektor for udtrykkelse i gær, bestående af et fremmed DNA-kodningssegment og en fremgangsmåde til udtrykkelse af DNA-kodningssegmentet i gær ved hjælp af en sådan vektor Download PDFInfo
- Publication number
- DK173604B1 DK173604B1 DK198305777A DK577783A DK173604B1 DK 173604 B1 DK173604 B1 DK 173604B1 DK 198305777 A DK198305777 A DK 198305777A DK 577783 A DK577783 A DK 577783A DK 173604 B1 DK173604 B1 DK 173604B1
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- yeast
- coding segment
- expression vector
- segment
- dna
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/80—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi
- C12N15/81—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi for yeasts
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
- C07K2319/02—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a signal sequence
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2730/00—Reverse transcribing DNA viruses
- C12N2730/00011—Details
- C12N2730/10011—Hepadnaviridae
- C12N2730/10111—Orthohepadnavirus, e.g. hepatitis B virus
- C12N2730/10122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Virology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Toys (AREA)
Description
i DK 173604 B1
For maksimal udtrykkelse af fremmede gener i mikroiologi-ske systemer er det sædvanligvis hensigtsmæssigt at anvende homologe reguleringselementer inden for udtrykkel-5 sesvektoren. Effektiviteten af udtrykkeisen (produktdannelsen) antages at være en funktion af og proportional med styrken af den anvendte promotor. Endvidere vil regulering af gen-udtrykkelsen ved hjælp af ernæringsfaktorer under kontrol af forsøgsudøveren tilveje-io bringe et velegnet manipulatorisk værktøj. De glycolyti-ske enzym-gener for gær, dvs. sådanne som koder for gly-ceraldehyd-3-phosphat-dehydrogenase (GAPDH), besidder de ovennævnte værdifulde egenskaber, dvs. høj grad af udtrykkelse (og er således ved interferens meget effektive 15 promotorer) og susceptibilitet til regulering ved komponenter af vækstmediet. F.eks. kan GAPDH omfatte så meget som 5% efter tørvægten af presset gær (Krebs, E.G., J.
Biol. Chem. (1953) 200:471). Disse enzymer er desuden stærkt inducerbare. Hvis gærkulturer f.eks. skiftes fra 20 vækst på acetat til glucose, vil aktiviteten af GAPDH forøges til det 200-dobbelte i forhold til koncentrationen af sukker i mediet (Maitra, P.K. og Lobo, Z., J. Biol.
Chem. (1971) 246:475). Disse resultater viser, at det transscriptionelle maskineri af disse gener er stærkt re-25 guleret, måske ved deltagelse af DNA-sekvenser, som er til stede i 5'-ikke-kodende sidereaktioner af generne.
Opfindelsen vedrører således isolation, produkter og anvendelsen af gærudtrykkelses-plasmider af DNA-fragmenter, 30 svarende til de 5'-ikke-kodende regioner af de regulerbare gener GAPDH i gær. Disse fragmenter, som indeholder DNA-sekvenser med stærk transscriptionspromoverende aktivitet, kaldes "promotorer". Disse er ideelle komponenter af DNA-vektorer til teknisk fremstilling af store mængder 35 proteiner, kodet af fremmede gener under deres transscriptionelle kontrol.
2 DK 173604 B1
Endvidere angår opfindelsen gær-udtrykkelsesplasmider, som omfatter en egnet terminator til at danne en "kassette" af promotor-fremmed gen-terminator. Tilstede-5 værelse af terminatoren forøger udtrykkeisen af det fremmede DNA.
Et tidligt forsøg på at udtrykke fremmed DNA i gær er mislykket (Beggs, J. D. et al./ Nature (19S0T~~283~: 2 8 5 j . I io denne rapport blev hæmoglobin DNA (indført sammen med sin egen promotor) transscriberet, men der var ikke splejset RNA. En række forklaringer for dette resultat er mulige, f.eks. en ukorrekt beliggenhed for initiering af transscription og/eller en dårlig evne hos gærcellerne til at 15 udføre splejsning af berørte sekvenser (introner).
Tre GAPDH-gener af gær er blevet klonet (Holland, M. J. et al., Basic Life Science (1981) 3^9:291), men deres promotorer har ikke været anvendt til at konstruere udtryk-20 kelses-systemer i gær ved rekombinant-metoden for DNA.
Ved den foreliggende opfindelse tilvejebringes hidtil ukendte promotorer for gær-udtrykkelsessystemer, hvorved der opnås forbedret udtrykkelse, som er fundet med passende ligerede terminatorer.
25
Det har overraskende vist sig, at de observerede høje niveauer af udtrykkelse er knyttet til tilstedeværelsen af en relativt lang del af den 5'-flankerende region af GAPDH-genet. Det viste sig, at GAPDH-promotoren er 30 indeholdt i et stykke DNA, der er betydeligt længere end forventet 5' fra translations-initerings-codonen.
Den foreliggende opfindelse angår en vektor for udtrykkelse i gær og af den i indledningen til krav 1 angivne 35 art.
3 DK 173604 B1
Vektoren er ejendommelig ved det i den kendetegnende del af krav 1 anførte.
Vektoren kan f.eks. kode for hepatitis B virus (HBV) 5 overfladeantigen (HBsAg), der er under transscriptionel kontrol af en gær-GAPDH-promotor eller en gær-PyK-promo-tor. Terminatorer kan også være tilknyttet på passende made. Udtrykkelsesvektoren har typisk en gær-replikati-onsoprindelse og en bakteriel replikationsoprindelse og 10 er i stand til at replicere i begge celletyper. Udtrykkelsesvektoren, anvendt til at transformere gærceller, vil give væsentlige mængder af proteinet, der er kodet af segmentet af fremmed DNA.
15 En foretrukken vektor er plasmidet pHBs-56GAP347/33 med deponeringsnummeret ATCC 20665; deponeret i overensstemmelse med Budapest-traktaten.
Endvidere angår opfindelsen en fremgangsmåde til udtryk-20 kelse af det i vektoren indeholdte DNA-kodningssegment i gær, hvilken fremgangsmåde er ejendommelig ved det i den kendetegnende del af krav 6 anførte. Ligeledes angår opfindelsen en fremgangsmåde til udtrykkelse af DNA-kod-ningssegmenter i gær, der koder for Hepatitis B overfla-25 deantigen eller en del deraf, hvilken fremgangsmåde er ejendommelig ved det i krav 7's kendetegnende angivne. En fremgangsmåde til fremstilling af Hepatitis B overfladeantigen eller en del deraf, hvilken fremgangsmåde er ejendommelig ved det i den kendetegnende del af krav 8 30 angivne, er ligeledes genstand for den foreliggende opfindelse. Endelig angår opfindelsen en fremgangsmåde, der er ejendommelig ved, at gær-udtrykkelsesvektoren omfatter gær 2 micron plasmid-DNA eller en del deraf.
35 Opfindelsen skal forklares ved hjælp af tegningen, hvor 4 DK 173604 B1 fig. 1 viser isolation og udformningen af GAPDH-promotor-fragment, fig. 2 er en DNA-sekvens af GAPDH-promotor-fragment, 5 fig. 3 viser strukturen af gær-udtrykkelsesplasmid, indeholdende GAPDH-promotor, , fig. 4 er en nucleotid-sekvens af pyrodruesyre-kinase 10 (PyK)-gen, fig. 5 strukturen for gær-udtrykkelsesplasmid indeholdende PyK-promotor-region.
15 I princippet har gær-udtrykkelsesplasmider særlige fordele, herunder de i det efterfølgende angivne. Gær kan dyrkes i stor målestok ved velkendte produktionsbetingelser. Derimod er bakterier, dyrket som kultur i stor målestok, udsat for det hyppigt forekommende problem med 20 "phage-out" . Gær synes også at have samme evne som animalske eller humane celler at kunne tilføre carbonhydrat-grupper til nylig syntetiserede proteiner, en evne bakterier ikke er i besiddelse af. Da cDNA-sekvenser er let tilgængelige, kan problemet med udtrykkelse af gener, der 25 indeholder introner, let undgås.
Den omhandlede vektor omfatter promotorer med usædvanlig høj effektivitet. En promotor er heri defineret som et DNA-segment, der kan fungere ved at indlede transscrip-30 tion af et tilsluttet DNA-segment. Transscription er syntesen af RNA (her defineret som messenger RNA eller mRNA), der er komplementært til den ene streng af det i promotor-regionen tilsluttede DNA. I eukaryoter katalyseres messenger RNA-syntese ved et enzym betegnet RNA-poly-35 merase II. De minimale essentielle elementer af promotorfunktionen er følgende: For at tilvejebringe et udgangs- 5 DK 173604 B1 punkt for initieringen af transscription og danne et bindingssæde for at gøre det muligt at udvælge den aktuelle streng af DNA som en støbeform for messenger RNA-syntese. Endvidere fungerer en eukaryotisk promotor til 5 at regulere den relative effektivitet af transscription af kodningssegmenter under kontrol heraf. En aktiv promotor er en, som frembringer syntese af forholdsvis store mængder mRNA, der er komplementært med en streng af det tilsluttende DNA-kodningssegment.
10
De strukturmæssige korrelationer for promotor-funktion er endnu ikke tydeligt opklaret. Et promotor-segment kan sædvanligvis identificeres som en region, der ligger nær ved 5'-enden af et givet strukturelt gen. (Referencerne 15 til 5'- og 3'-enderne af et gen vil forstås til at injicere de tilsvarende respektive ender af mRNA, der er transscriberet derfra, og disse korrelerer med henholdsvis NH-- og -COOH-endegrupperne i det kodede protein). Sammenligninger af nucleotid-sekvenserne for promotorer 20 for forskellige gener fra forskellige arter har kun afsløret nogle få korte regioner af nueleotid-sekvens med stor indbyrdes lighed. Mest bemærkelsesværdig for disse er TATA Box, der er et segment på 5-10 nucleotider, anbragt generelt ca. 70-230 nucleotider i retning fra sædet 25 for transscription-initiering, og med en sekvens generelt lignende TATAA. En oversigt af strukturmæssig sammenligning fremgår af Breathnach, R. og Chambon, P., Ann. Rev. of Biochem. (1981), 5£:349. TATA Box antages at fungere ved initiering af transscription.
30
Det fremmede gen vil være frit for eller i det væsentlige frit for codoner fra det normale strukturelle gen, knyttet til promotoren. Sædvanligvis ved det fremmede gen være sluttet til en ikke-kodende 3'-ende af den reguler-35 ende region, der omfatter promotoren, og således være fri for de aminosyrer ved N-terminus af endogent gen, der na- 6 DK 173604 B1 turligt er associeret med den regulatoriske region. Dvs. at færre end 3 codoner (9 nucleotider) vil være tilbageholdt med den regulatoriske region, når den er sluttet til det fremmede gen.
5
Tilstedeværelsen af terminator-sekvensen ved 3'-enden af kodningssegmentet forhøjer udtrykkeisen. Effekten er i almindelighed tilsvarende tilsætning af rho-faktoren til prokaryotiske transscriptionssystemer, hvori hastigheden io af frigivelsen af RNA-polymerase er forøget til at producere en forøgelse af hastigheden af reinitieringen af transscription. Det vil forstås, at medens terminator-se-kvenserne ikke kræves til påviselig udtrykkelse af fremmede DNA-segmenter, foretrækkes det på passende måde at 15 knytte dem til forhøjet udtrykkelse. Terminatorregionen kan være naturligt associeret med det samme eller forskellige strukturelle gener som promotor-regionen.
Den mest velegnede DNA-vektor for GAPDH-konstruktion 20 ifølge opfindelsen er en skyttel-vektor. Disse vektorer kan veksle som en skyttedel mellem en bakteriestamme, f.eks. E. coli, og gær, fordi de har en bakteriel repli-kationsoprindelse og en gær-replikationsoprindelse, se f.eks. Ammerer, G. et al., Recombinant DNA, Proc. Third 25 Cleveland Symposium Macromolecules (Walton, A. G., ed.), p. 185, Elsevier, Amsterdam (1981). En typisk bakteriel replikationsoprindelse er f.eks. afledt af pBR322. Den mest egnede gær-replikationsoprindelse er fundet i det ekstrachromosomale genetiske element, der er kendt som 2 30 micron-cirkel. I laboratoriestammer har 2 mikroplasmid DNA vist sig at være til stede i tilnærmelsesvis 50 kopier pr. celle og opretholdes stabilt. En oversigt heraf fremgår f.eks. af Curr. Topics Micro. Imm. (1982) 96:119.
Dette gærplasmid er også blevet bestemt (Hartley, J. L.
35 et al., Nature (1980) 286:860).
7 DK 173604 B1
Repræsentative prøver af plasmiderne og værtscellerne, der anvendes ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, er deponeret hos American Type Culture Collection, 12301 Parklawn Drive, Rockville, Maryland. Plasmid pHBS-56 5 GAP347/33 blev deponeret 18. februar 1983 og har fået ATCC-registreringsnummeret 20665. Deponeringen er foretaget i overensstemmelse med Budapesttraktaten.
Mange af de i de efterfølgende eksempler omtalte teknik-10 ker, reaktioner og adskillelsesprocedurer er i og for sig velkendte. Alle enzymer, med mindre andet er angivet, kan tilvejebringes fra en eller flere kommercielle kilder, såsom New England Biolabs, Beverly, Massachusetts; Collaborative Research, Waltham, Massachusetts; Miles Labora-15 tories, Elkhart, Indiana; Boehringer Biochemicals, Inc., Indianapolis, Indiana og Bethesda Research Laboratories, Rockville, Maryland. Puffere og reaktionsbetingelser for enzymprocesser blev valgt efter anbefaling fra leverandøren af hvert enkelt enzym, med mindre andet er angivet.
20 Standardmetoder for andre enzymreaktioner, gel-elektrofo-rese-separationer og E. coli transformation er beskrevet i Methods in Enzymology (1971) J58. Transformation af gær-protoplaster kan udføres som beskrevet af Beggs, Nature (1978) 275:104.
25
Stammen af E. coli, der egner sig til transformation, omfatter X1776; K12-stammen 294 (ATCC No. 31446); RR1 og HB101. Gærstammer XV610-8c med genotypen (a ade2 ade6 leu2 lysi trpl canl) og GM-3C-2, genotpe: (Leu2 Trpl His4 30 CYC1-1CYP3-1) (Faye, G. et al., Proc. Natl. Acad. Aci.
(1981) 78:2258)· kan typisk anvendes til gærtransformationer. Det vil dog forstås, at praktisk taget enhver gærart er velegnet til transformation. Bakterie kan dyrkes og udvælges i overennsstemmelse med en 35 procedure, som er beskrevet af Miller, J. H., Experiments in Mulecular Genetics, Cold Spring Harbor, New York 8 DK 173604 B1 (1972) . Gær kan dyrkes på følgende medier: YEPD med 1%
(w/v) gærekstrakt/ 2% (w/v) pepton og (w/v) glucose/ og, i tilfælde af plademedium, 3% (w/v) agar. YNB plus CAA
indeholder 6,7 g gærnitrogenbase (Difco Laboratories, 5 Minneapolis, Minnesota), 10 mg adenin, 10 mg uracil, 5 g casaminosyrer (CCA) (Difco), 20 g glucose; og i tilfælde af plademdier, 30 g agar pr. liter. Udvælgelse af tryp-tophanprototrofi kan ske på plader indeholdende 6,7 g gærnitrogenbase (mangel-aminosyre), supplementær med alle io vækstbetingelse for den stamme, der skal transformeres, med undtagelse af tryptophan.
EKSEMPEL 1 15 Kloning af gær-glyceraldehyd-3-phosphat-dehydroqenase (GAPDH) gen
Et komplementære DNA (CDNA) indeholdende gær-GAPDH-kodningssekvenser fremstilledes på følgende made: 20
PolyA+ RNA isoleredes fra gær af stamme A364A. Dobbeltstrenget cDNA blev syntetiseret ved hjælp af AMV omvendt transcriptase og E. coli DNA-polymerase I. Poly-dC-ender blev sat til det dobbelt-kædede cDNA-molekyle ved hjælp 25 af deoxynucleotid terminal transferase. Poly-dC-afsluttet cDNA blev modnet til poly-dG-afsluttet pBR322 og anvendt til transformering af E. coli HB101. 1000 Transformanter blev screenet ved koloni-hybridisering til mærket PolyA+ RNA, og en underafdeling blev yderligere undersøgt ved 30 restriktionsendonuclease-kortlægning og DNA-rækkefølgebe-stemmelse. Tre kloner indeholdende GAPDH-sekvenser blev isoleret fra portionen. En klon (pcGAP-9) indeholdt en indsætning på 1200 basepar (bp) og blev anvendt til det videre arbejde.
35 9 DK 173604 B1
Der blev fremstillet et gen-bibliotek ved indsætning af fragmenter, opnået efter partiel nedbrydning af total gær-DNA med restriktionsendonuclease Sau3A til lambda phage Charon 28, ifølge Blattner, F. R. et al., Science 5 (1977) 196:161-169. Flere fragmenter indeholdende gær GAPDH-kodningssekvenser blev isoleret ved screening af phage-basen med mærket DNA fra pcGAP-9. Gær GAPDH-genet af en af disse kloner blev underklonet i pBR322 som et 2,1 kb Hindi 11-fragment (pGAP-1, se fig. 1) eller som et 10 3,5 kb BamHI-fragment (pGAP-2). GAPDH-promotoraktive fragmenter isoleredes fra disse kloner. HindiII-Hhal-fragmentet på ca. 800 bp ligeredes til Hhal-Hindlll-frag-ment på ca. 350 kb. Det resulterende 1061 bp Hindlll-fragment isoleredes ved gel-elektroforese og klonedes i 15 pBR322, (pGAP-347), og sekvensen bestemtes (se fig. 2).
EKSEMPEL 2
Konstruktion af gærvektorer indeholdende GAPDH-promotor, 20 aktiv til udtrykning af HBsAg
En plasmid-vektor (pHBS-56GAP347/33) for udtrykkelse af HBV-overfladeantigen i gær under anvendelse af GAPDH-promotor- fragment blev konstrueret som angivet på fig. 3.
25
Total digestion af pGAP-347 med Sphl efterfulgt af partiel digestion med Hindlll gav et tilnærmelsesvis 1700 bp SphI-HindIII-fragment med ca. 1060 bp GAPDH-promotor og en 530 bp af pBR322. 1700 bp SphI-Hindlll GAPDH-promotor-30 fragment ligeredes med 840 bp Hindlll-Hindlll-fragmentet (indeholdende HBsAg-kodningsregion, 26 baser af 5'-ikke-kodningsregion og 128 bp 3'-ikke-kodningsregion, stammende fra pHBS-56) og dernæst med 350 bp Hindlll-Sphl-fragment indeholdende ADH-l-terminationsregion (isoleret 35 fra pHBS-56). 2900 bp SphI-fragmentet (kassette) isoleredes og klonedes i pHBS-56, forud dyrket med Sphl. Plasmid 10 DK 173604 B1 pHBS-56 (ATCC registernummer 40047, deponeret i overensstemmelse med Budapesttraktaten) er beskrevet i en samtidig ansøgning {serie nr. 402 330, indleveret 27.
juli 1982, med titlen "Synthesis of Human Virus Antigens 5 by Yeast" og indeholder hele 2 micron plasmid foruden en region med gær leu2-gen og amp-resistens locus af pBR322.
Det dannede plasmid (pHBS-56GAP347/33), hvori promotoren, genet og terminationsregionerne havde den rigtige orientering, blev isoleret og anvendt til transformering af 10 gærstammen AB102 MATa, pep4-3, leu2-3, leu2-112, ura 3- 52, his-4-580, cir°) eller stammen 2150-2-3 (MATa, adel, leu2-04, cir°) . Stammen AB102 er afledt fra SF657-9c ved behandling af 2 micron plasmider. Stammen 2150-2-3 er leveret fra en samling tilhørende Dr. Leland Hartwell fra 15 Washington Universitetet.
EKSEMPEL 3
Syntese af HBsAg i gær under GAPDH-promotorkontrol 20 (plasmid pHBS-56GAP347/33) 100 ml Kulturer af stamme AB102 indeholdende plasmid pHBS56-347/33 blev dyrket til en optisk densitet på 650 nm af 1. Cellefri lysater blev fremstillet ved omrøring 25 med glaskugler og fjernelse af celle-debris ved centrifugering. HBsAg blev målt ved hjælp af Abbott Ausraill radio immunopr øve, og proteinkoncentrationen blev bestemt ved hjælp af Coomassie-blåt-bindingsmetoden. Resultaterne fremgår af tabel 1. De viser, at GAPDH-promotoren er ca.
30 5 gange mere effektiv end ADH-1-promotoren for proteinud- trykkelsesproduktet i gær.
11 DK 173604 B1 TABEL 1. Syntese af HBsAg i gær.
(a) kontrol fra pHBS-56 (ADH-I promotor)
Exp# sAg Protein Spec, aktivitet (pg/ml) (mg/ml) (pg sAg/ml protein) 1 878 18 0,49 2 14 25 0, 56 3 12,4 20 0,62 (b) fra pHBS-56GAP347/33 (GAPDH-promotor)
Exp# sAg Protein Spec, aktivitet (pg/ml) (mg/ml) (pg sAg/ml protein) ΐ 36 Ϊ4 276 2 35 12 2,9 3 37 12,5 3,0
Tilsvarende resultater blev opnået ved at benytte gærstammen 2150-2-3 i stedet for stammen AB102 og ved at 5 gentage eksempel 3.
Claims (16)
1. Vektor for udtrykkelse i gær, kendetegnet ved, at den består af et fremmed DNA-kodningssegment, der 5 er under transscriptionel kontrol af en gær-glyceraldehyd-3-phosphat-dehydrogenase-promotor med sekvensen angivet på Fig. 2, hvilket segment er orienteret korrekt for transscription og har mindre end 3 codoner fra gær-glyceraldehyd-3-phosphat-dehydrogenase ved 5'-io enden af det nævnte fremmede DNA-kodningssegment.
2. Vektor ifølge krav 1, kendetegnet ved, at den omfatter en terminator, knyttet til 3'-enden af segmentet med fremmed DNA. 15
3. Vektor ifølge krav 1, kendetegnet ved, at den yderligere omfatter gær 2 micron plasmid DNA eller en del deraf.
4. Vektor ifølge krav 1, kendetegnet ved, at det fremmede DNA koder for hepatitis B overfladeantigen eller en del deraf.
5. Plasmid pHBS-56GAP347/33 med deponeringsnummer ATCC 25 20665.
6. Fremgangsmåde til udtrykkelse af det i vektoren ifølge krav 1 indeholdte DNA-kodningssegment i gær, k e n d e t egnet ved, 30 (a) at kodningssegmentet indsættes i en udtrykkelsesvek-tor fra gær, hvilken vektor er et DNA-segment, der indeholder en gær-glyceraldehyd-3-phosphat-dehydrogenase-promotor med sekvensen angivet på Fig. 2 og havende 35 mindre end 3 codoner fra 5'-enden af gær-glyceraldehyd-3-phosphat-dehydrogenase, hvilken promotor er nabostillet DK 173604 B1 13 - til 5'-enden af det indsatte DNA-kodningssegment og således orienteret, at transscription, der initieres i den nævnte promotor, omfatter kodningssegmentet, således at der opnås en kodningssegment-udtrykkelsesvektor, og 5 (b) at gærcellerne med kodningssegment-udtrykkelsesvek-toren transformeres.
7. Fremgangsmåde til udtrykkelse af et DNA-kodniningsseg-10 ment i gær, der koder for Hepatitis B overfladeantigen eller en del deraf, kendetegnet ved, at (a) at kodningssegmentet indsættes i en udtrykkelsesvek-tor fra gær til opnåelse af en kodningssegment-udtrykkel- 15 sesvektor, og (b) at gærcellerne med kodningssegment-udtrykkelsesvek-toren transformeres, 20 idet gær-udtrykkelsesvektoren omfatter en gær-glycer- aldehyd-3-phosphat-dehydrogenase promotor med sekvensen angivet på Fig. 2 og havende mindre end 3 codoner fra 5'-enden af glyceraldehyd-3-phosphat-dehydrogenase, således at promotor-segmentet er orienteret korrekt for 25 transscription af kodningssegmentet.
8. Fremgangsmåde til fremstilling af Hepatitis B overfladeantigen eller en del deraf, kendetegnet ved, 30 (a) at gærceller, der er transformeret med kodningsseg- ment-udtrykkelsesvektoren, der omfatter et DNA-kodningssegment kodende for Hepatitis B overfladeantigen eller en del deraf, dyrkes, og 35 (b) at Hepatitis B overfladeantigen eller en del deraf isoleres, DK 173604 B1 idet gær-kodningssegment-udtrykkelsesvektoren omfatter en gær-glyceraldehyd-3-phosphat-dehydrogenase-promotor med sekvensen angivet på Fig. 2 og havende mindre end 3 5 codoner fra 5'-enden af glyceraldehyd-3-phosphat-dehydrogenase, hvilket promotorsegment er orienteret korrekt for transscription af kodningssegmentet.
9. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af kravene io 6-8/ kendetegnet ved, at gær-udtrykkelsesvek- toren yderligere omfatter en terminator, der er knyttet til 3'-enden af den indsatte DNA-kodningssegment.
10. Fremgangsmåde ifølge krav 9, kendetegnet 15 ved, at den nævnte terminator omfatter alkoholdehydro- genase I i terminator fra gær.
11. Fremgangsmåde ifølge krav 9, kendetegnet ved, at den nævnte terminator består af GAPDH terminator 20 fra gær.
12. Fremgangsmåde ifølge krav 9, kendetegnet ved, at den nævnte terminator omfatter PyK terminator fra gær. 25
13. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af kravene 6-8, kendetegnet ved, at gær-udtrykkelsesvek-toren yderligere omfatter en gærcelle-replikation og er i stand til at replikere i en gærcelle. 30
14. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af kravene 6-8, kendetegnet ved, at gær-udtrykkelsesvek-toren yderligere omfatter en bakteriecelle-replikation og er i stand til at replikere i en bakteriecelle. 35 DK 173604 B1
15. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af kravene 6-8, kendetegnet ved, at gær-udtrykkelsesvek-toren yderligere omfatter en gærcelle-replikation og en bakteriecelle-replikation og er i stand til at replikere 5. gærceller eller bakterieceller. -
16. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af kravene 6-8, kendetegnet ved, at gær-udtrykkelsesvek-toren yderligere omfatter gær 2 micron plasmid-DNA eller ίο en del deraf.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DK199301074A DK173763B1 (da) | 1983-02-22 | 1993-09-23 | Vektor for udtrykkelse i gær med en PyK promotor og en fremgangsmåde til syntese af hepatitis B virus overfladeantigen ved hjælp af en sådan vektor |
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US46858983A | 1983-02-22 | 1983-02-22 | |
US46858983 | 1983-02-22 |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
DK577783D0 DK577783D0 (da) | 1983-12-15 |
DK577783A DK577783A (da) | 1984-08-23 |
DK173604B1 true DK173604B1 (da) | 2001-04-23 |
Family
ID=23860419
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
DK198305777A DK173604B1 (da) | 1983-02-22 | 1983-12-15 | Vektor for udtrykkelse i gær, bestående af et fremmed DNA-kodningssegment og en fremgangsmåde til udtrykkelse af DNA-kodningssegmentet i gær ved hjælp af en sådan vektor |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
EP (4) | EP0460716B2 (da) |
JP (2) | JPS59210888A (da) |
AT (3) | ATE93894T1 (da) |
CA (2) | CA1341116C (da) |
DE (3) | DE3482844D1 (da) |
DK (1) | DK173604B1 (da) |
SG (1) | SG48422A1 (da) |
Families Citing this family (75)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AU577259B2 (en) * | 1982-08-13 | 1988-09-22 | Zymogenetics Inc. | Glycolytic promters for regulated protein expression protease inhibitor |
JPS5931799A (ja) * | 1982-08-16 | 1984-02-20 | Science & Tech Agency | B型肝炎ウイルス遺伝子を組込んだ組換えプラスミド |
JPS5936699A (ja) * | 1982-08-20 | 1984-02-28 | Chemo Sero Therapeut Res Inst | シヤトルベクタ− |
US5422267A (en) * | 1984-05-22 | 1995-06-06 | Robert R. Yocum | Industrial yeast comprising an integrated glucoamylase gene |
EP0173997A1 (en) * | 1984-09-06 | 1986-03-12 | Chiron Corporation | Feline leukemia virus protein vaccines and their preparation |
EP0184575B1 (en) * | 1984-12-06 | 1993-04-28 | Fina Research S.A. | Transformed yeasts producing lysozyme, plasmids used for this transformation, and uses thereof |
EP0211767B1 (en) * | 1985-08-05 | 1991-03-06 | Merck & Co. Inc. | Method for increasing recombinant protein production in yeast species of the genus saccharomyces |
ES2028779T3 (es) * | 1985-10-03 | 1992-07-16 | Green Cross Corporation | Promotor de levadura y procedimiento para preparar proteina heterologa. |
JPH0655155B2 (ja) * | 1985-10-03 | 1994-07-27 | 株式会社ミドリ十字 | 蛋白質の製造方法 |
DK162900C (da) * | 1985-10-24 | 1992-05-11 | Danisco | Fremgangsmaade til ekspression af gener i gaer samt dna-fragment, rekombineret dna-segment og plasmider, hvor disse indgaar til brug ved udoevelse af fremgangsmaaden |
US4895800A (en) * | 1985-11-26 | 1990-01-23 | Phillips Petroleum Company | Yeast production of hepatitis B surface antigen |
JPS62236496A (ja) * | 1986-04-07 | 1987-10-16 | Green Cross Corp:The | HBsAgの製造方法 |
US4839283A (en) * | 1986-12-30 | 1989-06-13 | Zymogenetics, Inc. | Method of expressing alpha-1-antitrypsin in yeast |
DE10299017I2 (de) | 1987-06-22 | 2005-05-25 | Medeva Holdings Bv | Hepatitis-B-Oberfl{chenantigen enthaltendes Peptid. |
CA1340772C (en) | 1987-12-30 | 1999-09-28 | Patricia Tekamp-Olson | Expression and secretion of heterologous protiens in yeast employing truncated alpha-factor leader sequences |
AU644619B2 (en) | 1989-12-21 | 1993-12-16 | Advanced Technologies (Cambridge) Limited | Modification of plant metabolism |
FI103206B1 (fi) * | 1990-01-29 | 1999-05-14 | Novartis Ag | Uusi ilmentämisjärjestelmä sieniä varten |
US6194140B1 (en) | 1990-04-04 | 2001-02-27 | Chiron Corporation | HCV NS3 protein fragments having helicase activity and improved solubility |
ES2109336T3 (es) | 1990-11-26 | 1998-01-16 | Genetics Inst | Expresion de pace en celulas huesped y metodos de utilizacion de la misma. |
EP0491077A1 (en) * | 1990-12-19 | 1992-06-24 | Medeva Holdings B.V. | A composition used as a therapeutic agent against chronic viral hepatic diseases |
JPH08510240A (ja) | 1993-05-12 | 1996-10-29 | カイロン コーポレイション | C型肝炎ウイルスe2/ns1領域の保存モチーフ |
US5629167A (en) | 1994-04-19 | 1997-05-13 | Biocine S.P.A. | Detection of antibodies against Chlamydia trachomatis pgp3 antigen in patient sera by enzyme-linked immunosorbent assay |
JPH08173170A (ja) * | 1994-05-25 | 1996-07-09 | Kirin Brewery Co Ltd | キャンディダ・ユティリス酵母の形質転換系、およびそれによる異種遺伝子の発現 |
US5712249A (en) * | 1994-09-08 | 1998-01-27 | Ciba-Geigy Corporation | Use of insulin-like growth factors I and II for inhibition of inflammatory response |
JP2000507087A (ja) | 1995-12-22 | 2000-06-13 | ギスト ブロカデス ベスローテン ファンノートシャップ | ファフィア株を形質転換する改良法、そのようにして得られた形質転換したファフィア株及び前記方法における組換えdna |
CA2308606A1 (en) | 1997-11-06 | 1999-05-20 | Chiron S.P.A. | Neisserial antigens |
AU1979599A (en) | 1998-01-14 | 1999-08-02 | Chiron S.P.A. | (neisseria meningitidis) antigens |
US6087128A (en) * | 1998-02-12 | 2000-07-11 | Ndsu Research Foundation | DNA encoding an avian E. coli iss |
GB9808932D0 (en) | 1998-04-27 | 1998-06-24 | Chiron Spa | Polyepitope carrier protein |
BR9910089A (pt) | 1998-05-01 | 2004-06-08 | Chiron Corp | Composições e antìgenos de neisseria meningitidis |
RU2245366C2 (ru) | 1999-04-30 | 2005-01-27 | Чирон С.Р.Л. | Антиген neisseria, кодирующая его нуклеиновая кислота, их использование |
GB9911683D0 (en) | 1999-05-19 | 1999-07-21 | Chiron Spa | Antigenic peptides |
GB9916529D0 (en) | 1999-07-14 | 1999-09-15 | Chiron Spa | Antigenic peptides |
EP2275552B1 (en) | 1999-10-29 | 2015-09-09 | GlaxoSmithKline Biologicals SA | Neisserial antigenic peptides |
US6709863B2 (en) | 1999-12-08 | 2004-03-23 | Iowa State University Research Foundation | Nucleic acid molecules encoding multiple start codons and histidine tags |
PT2289545T (pt) | 2000-01-17 | 2016-09-06 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Vacina de omv suplementada contra meningococos |
MXPA03003690A (es) | 2000-10-27 | 2004-05-05 | Chiron Spa | Acidos nucleicos y proteinas de los grupos a y b de estreptococos. |
US7838287B2 (en) | 2001-01-25 | 2010-11-23 | Evolva Sa | Library of a collection of cells |
US8008459B2 (en) | 2001-01-25 | 2011-08-30 | Evolva Sa | Concatemers of differentially expressed multiple genes |
GB0107658D0 (en) | 2001-03-27 | 2001-05-16 | Chiron Spa | Streptococcus pneumoniae |
GB0107661D0 (en) | 2001-03-27 | 2001-05-16 | Chiron Spa | Staphylococcus aureus |
ES2312649T3 (es) | 2001-12-12 | 2009-03-01 | Novartis Vaccines And Diagnostics S.R.L. | Inmunizacion frente a chlamydia trachomatis. |
EP1572720A4 (en) | 2002-05-24 | 2008-12-24 | Nps Allelix Corp | PROCESS FOR THE ENZYMATIC PRODUCTION OF GLP-2 (1-34) AND GLP-2 (1-33) PEPTIDES |
EP2279746B1 (en) | 2002-11-15 | 2013-10-02 | Novartis Vaccines and Diagnostics S.r.l. | Surface proteins in neisseria meningitidis |
GB0308198D0 (en) | 2003-04-09 | 2003-05-14 | Chiron Srl | ADP-ribosylating bacterial toxin |
PL1704234T3 (pl) | 2003-11-21 | 2012-06-29 | Nps Pharma Inc | Wytwarzanie glukagonopodobnego peptydu 2 i analogów |
DE10356218A1 (de) * | 2003-12-03 | 2005-06-30 | Bayer Cropscience Ag | Verfahren zum Identifizieren von fungizid wirksamen Verbindungen basierend auf Pyruvatkinasen aus Pilzen |
GB2429207A (en) | 2004-02-02 | 2007-02-21 | Ambrx Inc | Modified human interferon polypeptides and their uses |
AU2005319099B2 (en) | 2004-02-02 | 2010-09-16 | Ambrx, Inc. | Modified human growth hormone |
KR101699142B1 (ko) | 2004-06-18 | 2017-01-23 | 암브룩스, 인코포레이티드 | 신규 항원-결합 폴리펩티드 및 이의 용도 |
EP1836298B1 (en) | 2004-12-22 | 2012-01-18 | Ambrx, Inc. | COMPOSITIONS OF AMINOACYL-tRNA SYNTHETASE AND USES THEREOF |
DK1828224T3 (da) | 2004-12-22 | 2016-07-18 | Ambrx Inc | Sammensætninger indeholdende, fremgangsmåder indbefattende, og anvendelser af ikke-naturlige aminosyrer og polypeptider |
WO2006113528A2 (en) | 2005-04-18 | 2006-10-26 | Novartis Vaccines And Diagnostics Inc. | Expressing hepatitis b virus surface antigen for vaccine preparation |
AU2005335491B2 (en) | 2005-08-18 | 2010-11-25 | Ambrx, Inc. | Compositions of tRNA and uses thereof |
BRPI0615420A2 (pt) | 2005-09-01 | 2011-05-17 | Novartis Vaccines & Diagnostic | vacinação múltipla que inclui meningococo do sorogrupo c |
PT2339014E (pt) | 2005-11-16 | 2015-10-13 | Ambrx Inc | Métodos e composições compreendendo aminoácidos não-naturais |
EP1968635B1 (en) | 2005-12-14 | 2014-09-17 | Ambrx, Inc. | Compositions containing, methods involving, and uses of non-natural amino acids and polypeptides |
US20110206692A1 (en) | 2006-06-09 | 2011-08-25 | Novartis Ag | Conformers of bacterial adhesins |
WO2008030613A2 (en) | 2006-09-08 | 2008-03-13 | Ambrx, Inc. | Hybrid suppressor trna for vertebrate cells |
DK2615108T3 (da) | 2006-09-08 | 2017-01-30 | Ambrx Inc | Modificeret humant plasmapolypeptid eller fc scaffolds og deres anvendelser |
KR20140012199A (ko) | 2007-03-30 | 2014-01-29 | 암브룩스, 인코포레이티드 | 변형된 fgf-21 폴리펩티드 및 그 용도 |
WO2008139591A1 (ja) * | 2007-05-11 | 2008-11-20 | Juridical Foundation The Chemo-Sero-Therapeutic Research Institute | 組換えアプロチニンの生産方法 |
AU2008326324B9 (en) | 2007-11-20 | 2012-11-15 | Ambrx, Inc. | Modified insulin polypeptides and their uses |
EP3103880A1 (en) | 2008-02-08 | 2016-12-14 | Ambrx, Inc. | Modified leptin polypeptides and their uses |
UA118536C2 (uk) | 2008-07-23 | 2019-02-11 | Амбркс, Інк. | Модифікований поліпептид бичачого гранулоцитарного колонієстимулювального фактора та його застосування |
EP3216800A1 (en) | 2008-09-26 | 2017-09-13 | Ambrx, Inc. | Modified animal erythropoietin polypeptides and their uses |
MX348657B (es) | 2008-09-26 | 2017-06-21 | Ambrx Inc | Microorganismos y vacunas dependientes de replicacion de aminoacidos no naturales. |
CN102753573A (zh) | 2009-12-21 | 2012-10-24 | Ambrx公司 | 经过修饰的牛促生长素多肽和其用途 |
NZ600363A (en) | 2009-12-21 | 2014-07-25 | Ambrx Inc | Modified porcine somatotropin polypeptides and their uses |
EP2571991A1 (en) | 2010-05-20 | 2013-03-27 | Evolva SA | Method of producing isoprenoid compounds in yeast |
BR112013003522B1 (pt) | 2010-08-17 | 2021-05-25 | Ambrx, Inc. | polipeptídeos relaxina modificados compreendendo um aminoácido não codificado naturalmente, seu método de preparação e seu uso, bem como ácido nucleico e célula hospedeira |
US9567386B2 (en) | 2010-08-17 | 2017-02-14 | Ambrx, Inc. | Therapeutic uses of modified relaxin polypeptides |
TWI480288B (zh) | 2010-09-23 | 2015-04-11 | Lilly Co Eli | 牛顆粒細胞群落刺激因子及其變體之調配物 |
KR20240024362A (ko) | 2014-10-24 | 2024-02-23 | 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 | 변형된 fgf-21 폴리펩티드 및 그의 용도 |
CN110637027A (zh) | 2017-02-08 | 2019-12-31 | 百时美施贵宝公司 | 包含药代动力学增强子的修饰的松弛素多肽及其用途 |
Family Cites Families (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
NZ199722A (en) * | 1981-02-25 | 1985-12-13 | Genentech Inc | Dna transfer vector for expression of exogenous polypeptide in yeast;transformed yeast strain |
GR76274B (da) * | 1981-08-04 | 1984-08-04 | Univ California | |
NZ201705A (en) * | 1981-08-31 | 1986-03-14 | Genentech Inc | Recombinant dna method for production of hepatitis b surface antigen in yeast |
JPS58146281A (ja) * | 1981-10-19 | 1983-08-31 | Suntory Ltd | 酵母細胞の形質転換法 |
US4446235A (en) * | 1982-03-22 | 1984-05-01 | Genentech, Inc. | Method for cloning human growth hormone varient genes |
EP0096910B1 (en) * | 1982-05-19 | 1989-04-19 | Unilever N.V. | Yeast of the genus kluyveromyces modified for the expression of preprothaumatin or its various allelic and modified forms or their maturation forms |
AU577259B2 (en) * | 1982-08-13 | 1988-09-22 | Zymogenetics Inc. | Glycolytic promters for regulated protein expression protease inhibitor |
JPH0716432B2 (ja) * | 1982-10-20 | 1995-03-01 | サントリー株式会社 | 酵母の高発現ベクタープラスミドを用いたペプチドの生産方法 |
-
1983
- 1983-10-25 CA CA000524802A patent/CA1341116C/en not_active Expired - Lifetime
- 1983-10-25 CA CA000439701A patent/CA1341302C/en not_active Expired - Lifetime
- 1983-12-15 DK DK198305777A patent/DK173604B1/da not_active IP Right Cessation
-
1984
- 1984-01-06 EP EP91114001A patent/EP0460716B2/en not_active Expired - Lifetime
- 1984-01-06 EP EP84300091A patent/EP0120551B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1984-01-06 DE DE8484300091T patent/DE3482844D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1984-01-06 AT AT89106868T patent/ATE93894T1/de not_active IP Right Cessation
- 1984-01-06 AT AT84300091T patent/ATE55151T1/de not_active IP Right Cessation
- 1984-01-06 DE DE3486431T patent/DE3486431T3/de not_active Expired - Lifetime
- 1984-01-06 EP EP96200286A patent/EP0732403A1/en not_active Withdrawn
- 1984-01-06 DE DE89106868T patent/DE3486206T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1984-01-06 AT AT91114001T patent/ATE138975T1/de not_active IP Right Cessation
- 1984-01-06 SG SG1996009565A patent/SG48422A1/en unknown
- 1984-01-06 EP EP89106868A patent/EP0329203B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1984-02-16 JP JP59026172A patent/JPS59210888A/ja active Granted
-
1992
- 1992-06-17 JP JP4200091A patent/JPH0724594B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP0732403A1 (en) | 1996-09-18 |
DE3486206D1 (de) | 1993-10-07 |
JPS59210888A (ja) | 1984-11-29 |
EP0460716B1 (en) | 1996-06-05 |
JPH0724594B2 (ja) | 1995-03-22 |
DK577783D0 (da) | 1983-12-15 |
SG48422A1 (en) | 1998-04-17 |
EP0329203B1 (en) | 1993-09-01 |
ATE55151T1 (de) | 1990-08-15 |
DE3486431T2 (de) | 1996-10-10 |
EP0120551A2 (en) | 1984-10-03 |
CA1341116C (en) | 2000-10-17 |
EP0460716B2 (en) | 1999-12-15 |
EP0460716A1 (en) | 1991-12-11 |
EP0120551B1 (en) | 1990-08-01 |
EP0120551A3 (en) | 1986-05-14 |
DE3482844D1 (de) | 1990-09-06 |
ATE93894T1 (de) | 1993-09-15 |
ATE138975T1 (de) | 1996-06-15 |
DE3486431D1 (de) | 1996-07-11 |
JPH05268984A (ja) | 1993-10-19 |
JPH0515431B2 (da) | 1993-03-01 |
DK577783A (da) | 1984-08-23 |
EP0329203A1 (en) | 1989-08-23 |
DE3486206T2 (de) | 1994-02-03 |
DE3486431T3 (de) | 2000-05-04 |
CA1341302C (en) | 2001-10-09 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
DK173604B1 (da) | Vektor for udtrykkelse i gær, bestående af et fremmed DNA-kodningssegment og en fremgangsmåde til udtrykkelse af DNA-kodningssegmentet i gær ved hjælp af en sådan vektor | |
USRE37767E1 (en) | Highly stable recombinant yeasts for the production of recombinant proteins | |
EP0292609B1 (en) | Process and signal sequence for the extracellular production of proteinaceous material | |
Vernet et al. | A family of yeast expression vectors containing the phage f1 intergenic region1 | |
CA1205026A (en) | Expression of polypeptides in yeast | |
US5116750A (en) | Selectable fusion protein having aminoglycoside phosphotransferase activity | |
Hadfield et al. | G418-resistance as a dominant marker and reporter for gene expression in Saccharomyces cerevisiae | |
JPS6371185A (ja) | ヒト・インターロイキン−1αの合成遺伝子 | |
US4935350A (en) | Materials and methods for controlling plasmid copy number and stability | |
EP0329684A1 (en) | Composite yeast vectors | |
JPH1014587A (ja) | 微生物によるヒト副甲状腺ホルモンの生産 | |
US5627046A (en) | Yeast promoter and its use | |
US5068185A (en) | Trains of yeast for the expression of heterologous genes | |
Nazos et al. | Identification of livG, a membrane-associated component of the branched-chain amino acid transport in Escherichia coli | |
Xia et al. | A copy‐number mutant of plasmid pSC101 | |
US6008051A (en) | Recombinant vector and process for cell flotation | |
DK173763B1 (da) | Vektor for udtrykkelse i gær med en PyK promotor og en fremgangsmåde til syntese af hepatitis B virus overfladeantigen ved hjælp af en sådan vektor | |
EP0173668A1 (en) | Recombinant saccharomyces | |
IE922007A1 (en) | Cloning and/or expression vectors, preparation and use | |
EP0234871A2 (en) | Regulatable expression of recombinant proteins in yeast | |
EP0180958B1 (en) | Recombinant plasmid and microbial strain transformed by said plasmid | |
JPH0832241B2 (ja) | 新規遺伝子、ベクター、それを用いた形質転換体、及びその利用 | |
JPH062063B2 (ja) | 新規dnaおよびその用途 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
B1 | Patent granted (law 1993) | ||
PUP | Patent expired |