BRPI0615420A2 - vacinação múltipla que inclui meningococo do sorogrupo c - Google Patents

Abstract

VACINAçáO MúLTIPLA QUE INCLUI MENINGOCOCO DO SOROGRUPO C Vários aprimoramentos às vacinas que incluem um antígeno conjugado meningocócico de sorogrupo C, que incluem: (a) a co-administração com antígeno acelular de 5. pertussis; (b) a co-administração com um antígeno de poliovírus inativado; (c) o fornecimento em um kit junto com um componente separado de conjugado pneumocócico, que pode estar na forma líquida; e (d) o uso combinado com um conjugado de antígeno pneumocócico, mas sem um adjuvante de fosfato de alumínio. Um kit pode ter: (a) um primeiro componente imunogênico que compreende uma formulação aquosa de um sacarídeo capsular conjugado de Streptococcus pneumoniae; e (b) um segundo componente imunogênico que compreende um sacarídeo capsular conjugado do sorogrupo C de Neisseria meningitidis.

Description

VACINAÇÃO MÚLTIPLA QUE INCLUI MENINGOCOCO DO SOROGRUPO C

Todos os documentos aqui citados são incorporados porreferência em sua totalidade.

CAMPO TÉCNICO

Esta invenção faz parte do campo da imunização depacientes contra múltiplos patógenos.

FUNDAMENTOS DA TÉCNICA

Vacinas contendo antígenos de mais de um organismopatogênico dentro de uma dose única são conhecidas comovacinas "multivalentes" ou "das". Várias vacinas combinadasforam aprovadas para uso humano na Europa e nos EUA,incluindo vacinas trivalentes para proteção contradifteria, tétano e coqueluche (vacinas "DTP"), e vacinastrivalentes para proteção contra sarampo, caxumba e rubéola* (vacinas "MMR").

Vacinas combinadas oferecem aos pacientes a vantagemde que eles recebem um número reduzido de injeções, o quegera a vantagem clínica de aumento da aceitação (porexemplo, vèja o capítulo 29 da referência 1) ,particularmente para vacinação pediátrica. Ao mesmo tempo,no entanto, elas apresentam dificuldade de fabricação emfunção de fatores que incluem: incompatibilidade física ebioquímica entre antígenos e outros componentes,interferência imunológica e estabilidade. Várias vacinascombinadas são reveladas nas referências 2 a 10.

Em 2005, um estudo amplamente divulgado [11] relatouque a imunogenicidade da vacina conjugada de sacarídeocapsular do sorogrupo C de N. meningitidis ("MenC")diminuía quando ela era administrada com um sacarídeoconjugado de S. pneumoniae nonovalente como vacinacombinada. Além disso, eram observadas respostas diminuídastanto ao conjugado co-administrado do tipo B de H.influenzae quanto ao toxóide diftérico co-administrado. Osautores concluíram que a vacina combinada "Pnc9-MenC" "podenão ser uma substituição adequada para vacinasglicoconjugadas de MenC ou pneumocócicas individuais". Alémdisso, eles sugeriram que a incompatibilidade pode nãoestar ligada à natureza combinada dos antígenos, e que "épossível que a administração das vacinas separadamentepudesse ter tido o mesmo efeito".

Dessa forma, ainda há necessidade de uma imunizaçãoque possa proteger contra MenC e penumococo, sem perdasignificativa da imunogenicidade desses dois componentes.Há uma necessidade adicional de uma imunização que possaproteger contra MenC, penumococo, difteria e Hib, sem perdasignificativa da imunogenicidade desses quatro componentes.De forma mais geral, ainda há necessidade de integração daimunização com MenC nos esquemas de imunização existentes.

APRESENTAÇÃO DA INVENÇÃO

Enquanto o estudo de referência 11 encontrou umaredução na imunogenicidade de MenC, essa redução não éobservada com a presente invenção. Comparada com o estudode referência 11, a invenção difere em vários aspectosfundamentais, os quais podem ser explorados individualmenteou combinados, para que se possa ter sucesso, e não oinsucesso da técnica estabelecida.

Enquanto o estudo de referência 11 usava um antígenode B. pertussis de célula inteira, e encontrou uma reduçãona imunogenicidade de MenC, em um primeiro aspecto dainvenção, um antígeno conjugado de MenC é co-administradocora antígenos acelulares de B. pertussis, e não foiobservada perda de imunogenicidade. Essa situação contrastacom a experiência prévia com conjugados de Hib, os quaissão geralmente compatíveis com pertussis de célula inteira,mas que têm sido relatados freqüentemente comoincompatíveis com pertussis acelular. Ela também contrastacom a experiência prévia com conjugados pneumocócicos, emque as respostas de anticorpos eram reduzidas quando co-administrados cora antígenos acelulares de B. pertussis, masnão eram reduzidas se fosse usado um antígeno celular [2].0 uso de antígenos acelulares, ao invés dos celulares,oferece vantagens em termos de segurança e de efeitoscolaterais.

Além disso, enquanto o estudo de referência 11administrou a vacina de MenC/Pnc9 ao mesmo tempo em que umavacina oral contra pólio ("OPV"), e encontrou uma reduçãona imunogenicidade de MenC, em um segundo aspecto dainvenção, um antígeno conjugado de MenC é co-administradocom uma vacina contra pólio em forma injetável, porexemplo, em uma vacina de poliovírus inativado ("IPV"), enão foi observada perda de imunogenicidade. 0 uso de IPV nolugar de OPV elimina o risco de paralisia por pólioassociada à vacina.

Além disso, enquanto o estudo de referência 11 usavauma composição de vacina em que os conjugados pneumocócicose de MenC eram fornecidos como uma combinação pré-misturada, e encontrou uma redução na imunogenicidade deMenC, em um terceiro aspecto da invenção, um antígenoconjugado de MenC é fornecido separadamente dos conjugadospneumocócicos, na forma de um kit de partes, e não foiobservada perda de imunogenicidade. Os conjugados de MenC epneumocócicos podem ser administrados a um pacienteseparadamente (por exemplo, em locais diferentes), ou podemser misturados no momento do uso para administraçãocombinada. A fabricação e a distribuição de um kit sãomenos convenientes do que para uma vacina combinadatotalmente liquida, mas esse tipo de kit é usado atualmente(por exemplo, no produto INFANRIX HEXA™), e ainconveniência pode ser mais do que compensada pelo aumentoda imunogenicidade e estabilidade dos antigenos.

Além disso, enquanto o estudo de referência 11utilizou uma composição de vacina em que os conjugadospneumocócicos e de MenC foram fornecidos como umacombinação liofilizada, e encontrou uma redução naimunogenicidade de MenC, em um quarto aspecto da invenção,um conjugado de antigeno pneumocócico é fornecido em umaforma líquida, e não foi observada perda deimunogenicidade. 0 conjugado de MenC pode estar na formaliofilizada, ou também pode estar em forma líquida. 0fornecimento do conjugado pneumocócico na forma líquidaevita a necessidade de sua reconstituição no momento douso, e também permite que ele seja usado para reconstituirquaisquer outros componentes imunogênicos que estão naforma liofilizada.

Adicionalmente, enquanto o estudo de referência 11usou uma composição de vacina em que os conjugadospneumocócicos e de MenC foram fornecidos combinados com umadjuvante de fosfato de alumínio, e encontrou uma reduçãona imunogenicidade de MenC, em um quinto aspecto dainvenção, um antigeno meningocócico conjugado é fornecidosem um adjuvante de fosfato de alumínio, e não foiobservada perda de imunogenicidade. O adjuvante de fosfatode alumínio pode ser trocado por um adjuvante de hidróxidode alumínio, ou é possível não incluir adjuvante algum dealumínio. Também são possíveis arranjos alternativosadicionais de sais de alumínio.

Finalmente, em um sexto aspecto da invenção, MenC e umconjugado pneumocócico são administrados com um antígenoacelular de pertussis e um antígeno de poliovírusinativado, ou com um destes, e os dois conjugados utilizama mesma proteína transportadora. O uso de uma proteínatransportadora comum reduz o número global de antígenosdiferentes que são apresentados simultaneamente ao sistemaimunológico, e também oferece mais conveniência durante afabricação. Caso sejam administrados mais de um conjugadopneumocócico, cada conjugado pneumocócico pode ter a mesmaproteína transportadora, ou podem ter proteínastransportadoras diferentes, mas pelo menos um dosconjugados pneumocócicos terá a mesma proteínatransportadora que o conjugado de MenC.

Esses seis aspectos da invenção serão descritos commais detalhe abaixo.

A Referência 3, publicada em dezembro de 2004,descreve um estudo no qual o INFANRIX HEXA™ (GSI) foi co-administrado em bebês, em coxas separadas, com MENINGITEC™(Wyeth). INFANRIX HEXA™ é fornecido como uma formulaçãolíquida D-T-Pa-HBsAg-IPV com um componente Hib liofilizadoadicional, e o componente Hib é ressuspenso com aformulação líquida pentavalente no momento do uso, paragerar uma vacina combinada hexavalente. MENINGITEC™ éfornecido como uma formulação líquida que contém umadjuvante de fosfato de alumínio. Em contraste, com oquinto aspecto da presente invenção, um antígenomèningocócico conjugado é fornecido sem um adjuvante defosfato de alumínio. Também em contraste com a referência3, em um sétimo aspecto da invenção, um antígenomèningocócico conjugado é fornecido em uma formaliofilizada. Essa forma liofilizada será reconstituída naforma aquosa antes da injeção, e a reconstituição podeutilizar: (a) uma formulação aquosa contendo D-T-Pa, paragerar uma vacina combinada, ou (b) um veículo aquososeparado, para co-administração com uma formulação contendoD-T-Pa.

A Referência 4 apresenta um estudo no qual uma vacinaconjugada de meningococo C foi co-administrada com umavacina pentavalente D-T-Pa-IPV-Hib. A Referência 5apresenta um estudo no qual uma vacina conjugada depneumococo C foi co-administrada com uma vacinapentavalente D-T-Pa-IPV-Hib. Nenhuma dessas vacinaspentavalentes incluía um componente HBsAg. A Referência 6apresenta estudos nos quais: (a) HBsAg foi administrado aomesmo tempo em que uma vacina pneumocócica conjugada embebês, e (b) vacinas D-T-Pa e Hib separadas foramadministradas ao mesmo tempo que uma vacina pneumocócicaconjugada em bebês. A Referência 7 descreve um estudo noqual uma vacina conjugada de meningococo C foi co-administrada com uma vacina tetravalente D-T-Pa-Hib. Em umoitavo aspecto da invenção, conjugados meningocócicos dosorogrupo C e pneumocócicos são administrados com umantígeno de superfície da hepatite B. Em um nono aspecto dainvenção, conjugados meningocócicos do sorogrupo C epneumocócicos são administrados com um antígeno depoliovirus inativado.

Esses nove aspectos da invenção serão descritos commais detalhes abaixo. Os nove aspectos podem ser exploradosindividualmente ou combinados.

A Referência 8 descreve um estudo no qual a vacinahexavalente D-T-Pa-HBV-IPV-Hib foi co-administrada com avacina pneumocócica conjugada heptavalente, mas não foramusados conjugados meningocócicos. As Referências 9 e 10descrevem várias vacinas combinadas possíveis, que podemincluir conjugados meningocócicos, mas faltam detalhesespecíficos, por exemplo, não há descrição do estado de 0-acetilação dos sacarídeos meningocócicos do sorogrupo Cpropostos.

Uso dos antígenos acelulares de pertussis

Em um primeiro aspecto da invenção, um antígenoconjugado de MenC ("MCC") é co-administrado com antígenosacelulares de B. pertussis, normalmente conhecidos como"Pa". O MCC e os antígenos Pa podem ser administrados a umpaciente separadamente, ou podem ser administrados como umavacina combinada.

Dessa forma, a invenção fornece um kit que compreendeum primeiro componente imunogênico e um segundo componenteimunogênico, em que: (a) o primeiro componente imunogênicocompreende um sacarídeo capsular conjugado do sorogrupo Cde N. meningitidis; e (b) o segundo componente imunogênicocompreende um antígeno acelular de B. pertussis.

Além dos antígenos acelulares de B. pertussis, osegundo componente imunogênico inclui, de preferência, umou mais de: um toxóide diftérico, um toxóide tetânico, umHBsAg, um antígeno de poliovírus inativado e,opcionalmente, um antígeno Hib conjugado.

O kit também pode incluir um componente que inclui umantígeno sacarídico pneumocócico conjugado.

A invenção também fornece uma composição imunogênicaque compreende: (a) um sacarídeo capsular conjugado dosorogrupo C de N. meningitidis; e (b) um antígeno acelularde B. pertussis. Além do MCC e dos antígenos acelulares deB. pertussis, a composição pode incluir um ou mais de: umtoxóide diftérico, um toxóide tetânico, um HBsAg, umantígeno de poliovírus inativado e, opcionalmente, umantígeno Hib conjugado. Ela também pode incluir um antígenosacarídico pneumocócico conjugado.

Uso de uma vacina injetável contra pólio

Em um segundo aspecto da invenção, um antígenoconjugado de MenC ("MCC") é co-administrado com um antígenode poliovírus injetável, por exemplo, a vacina inativadacontra pólio ("IPV"), também conhecida como vacina Salk. OMCC e os antígenos de IPV podem ser administrados a umpaciente separadamente, ou podem ser administrados como umavacina combinada.

Dessa forma, a invenção fornece um kit que compreendeum primeiro componente imunogênico e um segundo componenteimunogênico, em que: (a) o primeiro componente imunogênicocompreende um sacarídeo capsular conjugado do sorogrupo Cde N. meningitidis; e (b) o segundo componente imunogênicocompreende um antígeno de poliovírus inativado.

Além do IPV, o segundo componente imunogênico inclui,de preferência, um ou mais de: um toxóide diftérico, umtoxóide tetânico, um HBsAg, um antígeno acelular depertussis e, opcionalmente, um antígeno Hib conjugado.

0 kit também pode incluir um componente que inclui umantígeno sacarídico pneumocócico conjugado.

A invenção também fornece uma composição imunogênicaque compreende: (a) um sacarídeo capsular conjugado dosorogrupo C de N. meningitidis; e (b) um antígeno depoliovírus inativado. Além do MCC e dos antígenosacelulares de B. pertussis, a composição pode incluir um oumais de: um toxóide diftérico, um toxóide tetânico, umHBsAg, um antígeno acelular de pertussis e, opcionalmente,um antígeno Hib conjugado. Ela também pode incluir umantígeno sacarídico pneumocócico conjugado.0 fornecimento de MenC como um componente separado do kit

Em um terceiro aspecto da invenção, um antígenoconjugado de MenC ("MCC") é fornecido separadamente dosconjugados pneumocócicos ("PnC"), na forma de um kit departes.

Dessa forma, a invenção fornece um kit que compreendeum primeiro componente imunogênico e um segundo componenteimunogênico, em que: (a) o primeiro componente imunogênicocompreende um sacarídeo capsular conjugado do sorogrupo Cde N. meningitidis; e (b) o segundo componente imunogênicocompreende um sacarídeo capsular conjugado de S.pneumoniae.

0 primeiro componente pode adicionalmente incluir umou mais de: um toxóide diftérico, um toxóide tetânico, umantígeno de pertussis, e um HBsAg. Ele também pode incluirum antígeno de poliovírus inativado. Ele também podeincluir um antígeno Hib conjugado. Em que um desses seisantígenos adicionais é incluído no primeiro componente, noentanto, ele também não será incluído no segundocomponente.

O segundo componente pode adicionalmente incluir um oumais de: um toxóide diftérico, um toxóide tetânico, umantígeno de pertussis, e um HBsAg. Ele também pode incluirum antígeno de poliovírus inativado. Ele também podeincluir um antígeno Hib conjugado. Em que um desses seisantígenos adicionais é incluído no segundo componente, noentanto, ele também não será incluído no primeirocomponente.

Quando nem o primeiro nem o segundo componentecontiver um toxóide diftérico, o toxóide diftérico poderáser incluído dentro de um componente adicional do kit. Domesmo modo, quando nem o primeiro nem o segundo componentecontiver um toxóide tetânico, o toxóide tetânico poderá serincluído dentro de um componente adicional do kit. Do mesmomodo, quando nem o primeiro nem o segundo componentecontiver um antígeno de pertussis, o antígeno de pertussispoderá ser incluído dentro de um componente adicional dokit. Do mesmo modo, quando nem o primeiro nem o segundocomponente contiver um HBsAg, o HBsAg poderá ser incluídodentro de um componente adicional do kit. Do mesmo modo,quando nem o primeiro nem o segundo componente contiver umconjugado de Hib, o conjugado de Hib poderá ser incluídodentro de um componente adicional do kit. Do mesmo modo,quando nem o primeiro nem o segundo componente contiverIPV, o IPV poderá ser incluído dentro de um componenteadicional do kit.

Antígenos de difteria, tétano e coqueluche serãotipicamente incluídos juntos dentro do mesmo componente nokit.

Conjugados pneumocócicos líquidos

Em um quarto aspecto da invenção, um conjugado deantígeno pneumocócico é fornecido em uma forma líquida. Umconjugado de MenC co-administrado pode ser fornecido: (i)separadamente, na forma liofilizada; (ii) separadamente,também em uma forma líquida; ou (iii) misturado com oconjugado pneumocócico, em forma líquida.

Dessa forma, a invenção fornece um kit que compreendeum primeiro componente imunogênico e um segundo componenteimunogênico, em que: (a) o primeiro componente imunogênicocompreende uma formulação aquosa de um sacarídeo capsularconjugado de S. pneumoniae; e (b) o segundo componenteimunogênico compreende um sacarídeo capsular conjugado dosorogrupo C de N. meningitidis. 0 MCC no segundo componentepode ser uma formulação aquosa ou uma formulaçãoliofilizada.

0 primeiro e/ou segundo componente também pode incluirum ou mais de: um toxóide diftérico, um toxóide tetânico,antígenos de B. pertussis, um HBsAg, e um antígeno depoliovírus inativado. De preferência, todos esses cincoantígenos adicionais são incluídos no primeiro componenteou no segundo componente. Como alternativa, os cinco5 antígenos podem ser fornecidos como um terceiro componenteimunogênico no kit. O kit pode incluir um antígeno Hibconjugado no primeiro ou segundo (ou terceiro) componente.

A invenção também fornece uma composição imunogênicaque compreende um sacarídeo capsular conjugado de S.O pneumoniae e um sacarídeo capsular conjugado do sorogrupo Cde Ν. meningi tidis, em que a composição está em formaaquosa. A composição imunogênica, de preferência, tambéminclui um ou mais de: um toxóide diftérico, um toxóidetetânico, antigenos acelulares de B. pertussis, um HBsAg,um antigeno de poliovírus inativado e, opcionalmente, umantígeno Hib conjugado.

Adjuvante de fosfato de alumínio com MenC

Em um quinto aspecto da invenção, um antígenomeningocócico conjugado é fornecido sem um adjuvante defosfato de alumínio. O adjuvante de fosfato de alumíniopode ser trocado por um adjuvante de hidróxido de alumínio,ou é possível não incluir adjuvante algum de alumínio. Umconjugado pneumocócico co-administrado pode ser fornecidocom um adjuvante de fosfato de alumínio.

Dessa forma, a invenção fornece um kit que compreendeum primeiro componente imunogênico e um segundo componenteimunogênico, em que: (a) o primeiro componente imunogênicocompreende um sacarídeo capsular conjugado do sorogrupo Cde N. meningitidis, mas não inclui um adjuvante de fosfatode alumínio; e (b) o segundo componente imunogênicocompreende um sacarídeo capsular conjugado de S.pneumoniae.

Em arranjos preferidos, o primeiro componenteimunogênico não inclui um adjuvante de fosfato de alumínio,mas pode incluir um adjuvante de hidróxido de alumínio.Como alternativa, ele pode não incluir sais de alumínio,quando então ele pode incluir um adjuvante que não sejabaseado em alumínio, ou ele pode não incluir adjuvantealgum.

Em um arranjo alternativo, quando for permitidofosfato de alumínio no primeiro componente, o primeirocomponente pode incluir uma mistura de adjuvantes defosfato e hidróxido de alumínio. Dessa forma, a invençãotambém fornece uma composição imunogênica que compreende umsacarídeo capsular conjugado do sorogrupo C de N.meningitidis e um sacarídeo capsular conjugado de S.pneumoniae, em que a composição inclui um adjuvante dehidróxido de alumínio e um adjuvante de fosfato dealumínio.

Em um arranjo alternativo adicional, um adjuvante defosfato de alumínio é permitido no primeiro componente, e ocomponente de conjugado meningocócico é adsorvido em umadjuvante de fosfato de alumínio. Dessa forma, a invençãotambém fornece uma composição imunogênica que compreende umsacarídeo capsular conjugado do sorogrupo C de N.meningitidis e um sacarídeo capsular conjugado de S.pneumoniae, o conjugado do sorogrupo C de N. meningitidissendo adsorvido em um adjuvante de fosfato de alumínio. Ainvenção também fornece um kit que compreende um primeirocomponente imunogênico e um segundo componente imunogênico,em que: (a) o primeiro componente imunogênico compreende umsacarídeo capsular conjugado do sorogrupo C de N.meningitidis, que é adsorvido em um adjuvante de fosfato dealumínio; e (b) o segundo componente imunogênico compreendeum sacarídeo capsular conjugado de S. pneumoniae. 0conjugado pneumocócico também pode ser adsorvido em umadjuvante de fosfato de alumínio.

Ele pode adicionalmente incluir um ou mais de: umtoxóide diftérico, um toxóide tetânico, um antígeno depertussis, e um HBsAg. Ele também pode incluir um antígenode poliovírus inativado. Ele também pode incluir umantígeno Hib conjugado.

Proteínas transportadoras para MenC e PnC

Em um sexto aspecto da invenção, conjugados de MenC epneumocócicos são administrados com um antígeno acelular depertussis ou com um antígeno de poliovírus inativado, oucom ambos, e os dois conjugados utilizam a mesma proteínatransportadora. Apesar dos riscos de supressão induzidapelo veículo, verificou-se aqui que os conjugados de MenC epneumocócicos não interferem entre si, o que contrasta comas sugestões dos autores na referência 11.

Dessa forma, a invenção fornece uma composiçãoimunogênica que compreende: (a) um sacarídeo capsular de S.pneumoniae, conjugado a uma primeira proteínatransportadora, (b) um sacarídeo capsular do sorogrupo C deN. meningitidis, conjugado a uma segunda proteínatransportadora, e (c) um antígeno acelular de pertussise/ou um antígeno de poliovírus inativado, caracterizadopelo fato de que a primeira proteína transportadora e asegunda proteína transportadora são iguais. A composiçãotambém pode incluir um ou mais de: um toxóide diftérico, umtoxóide tetânico, um HBsAg e/ou um sacarídeo Hib conjugado.

A utilização "da mesma" proteína transportadora nãosignifica que haja uma única molécula de proteínatransportadora à qual tanto os sacarídeos pneumocócicosquanto os sacarídeos meningocócicos estão anexados (deacordo com a referência 12) . Em vez disso, os doisconjugados são separados entre si, mas o veículo usado noprimeiro conjugado é o mesmo veículo usado no segundoconjugado, por exemplo, os sacarídeos pneumocócicos estãoconjugados a CRM197, e os sacarídeos meningocócicos tambémestão conjugados a CRM197, mas não há CRM197 ao qual tantoos sacarídeos pneumocócicos quanto os sacarídeosmeningocócicos estejam conjugados. Dessa forma, osconjugados são preparados separadamente e sãosubseqüentemente combinados.

A invenção também fornece kits que incluem PnC, MCC eum ou ambos de Pa ou IPV:

um kit que compreende pelo menos um primeirocomponente imunogênico e um segundo componente imunogênico,em que: (a) um dos componentes compreende um sacarídeocapsular de S. pneumoniae, conjugado a uma primeiraproteína transportadora, (b) um dos componentes compreendeum sacarídeo capsular do sorogrupo C de N. meningitidis,conjugado a uma segunda proteína transportadora, (c) um doscomponentes compreende um antígeno acelular de pertussis,caracterizado pelo fato de que a primeira proteínatransportadora e a segunda proteína transportadora sãoiguais.

- um kit que compreende pelo menos um primeirocomponente imunogênico e um segundo componente imunogênico,em que: (a) um dos componentes compreende um sacarídeocapsular de S. pneumoniae, conjugado a uma primeiraproteína transportadora, (b) um dos componentes compreendeum sacarídeo capsular do sorogrupo C de N. meningitidis,conjugado a uma segunda proteína transportadora, (c) um doscomponentes compreende um antígeno de poliovírus inativado,caracterizado pelo fato de que a primeira proteínatransportadora e a segunda proteína transportadora sãoiguais.Todos os antígenos (a) , (b) e (c) estão presentesdentro do kit, mas nem todos eles são parte do mesmocomponente do kit. São possíveis os seguintes arranjos deantígenos, com até três componentes separados para os

<table>table see original document page 17</column></row><table>

Para o fornecimento de cada um de PnC, MCC, Pa e IPV,a invenção fornece um kit que compreende pelo menos umprimeiro componente imunogênico e um segundo componenteimunogênico, em que: (a) um dos componentes compreende umsacarídeo capsular de S. pneumoniae, conjugado a umaprimeira proteína transportadora, (b) um dos componentescompreende um sacarídeo capsular do sorogrupo C de N.meningitidis, conjugado a uma segunda proteínatransportadora, (c) um dos componentes compreende umantígeno acelular de pertussis; e (d) um dos componentescompreende um antígeno de poliovírus inativado,caracterizado pelo fato de que a primeira proteínatransportadora e a segunda proteína transportadora sãoiguais.

Todos os antígenos (a), (b), (c) e (d) estão presentesdentro do kit, mas nem todos eles são parte do mesmocomponente do kit. Estão englobados os seguintes arranjosde antígenos, com até quatro componentes separados para os

<table>table see original document page 17</column></row><table><table>table see original document page 18</column></row><table>

Tipicamente, os antígenos (c) e (d) serão parte domesmo componente.

Esses kits também podem incluir um ou mais de: umtoxóide diftérico, um toxóide tetânico, um HBsAg, e/ou umsacarideo Hib conjugado.

Caso a composição ou o kit inclua sacarideos de maisde um sorotipo de S. pneumoniae e/ou mais de um sorogrupode N. meningitidis, esse aspecto da invenção exige que amesma proteína transportadora seja usada por pelo menos umdos conjugados de S. pneumoniae e pelo menos um dosconjugados de N. meningitidis. Em algumas modalidades, amesma proteína transportadora será usada para todos osconjugados de S. pneumoniae e pelo menos um dos conjugadosde N. meningitidis. Em outras modalidades, a mesma proteínatransportadora será usada para pelo menos um dos conjugadosde S. pneumoniae e todos os conjugados de N. meningitidis.Em outras modalidades, a mesma proteína transportadora seráusada para todos os conjugados de S. pneumoniae e todos osconjugados de N. meningitidis. A escolha do veículo serádiscutida com mais detalhe abaixo.

Quando a composição ou o kit incluir um sacarideo Hibconjugado, a proteína transportadora no sacarideo Hibpoderá ser a mesma que o veículo nos conjugadospneumocócicos e meningocócicos, ou o conjugado de Hib podeusar um veículo diferente.

Quando a composição ou o kit incluir um toxóidetetânico, a proteína transportadora no conjugadopneumocócico e o conjugado meningocócico não será, depreferência, um toxóide tetânico. Em algumas modalidades,nem os conjugados pneumocócicos nem os conjugadosmeningocócicos possuem um veículo de toxóide tetânico.

Quando a composição ou o kit incluir um toxóidediftérico, a proteína transportadora no conjugadopneumocócico e no conjugado meningocócico não será, depreferência, um toxóide diftérico. Em algumas modalidades,nem os conjugados pneumocócicos nem os conjugadosmeningocócicos possuem um veículo de toxóide diftérico.

Quando a composição ou o kit incluir tanto um toxóidediftérico quanto um toxóide tetânico, a proteínatransportadora nos conjugados pneumocócicos emeningocócicos não será, de preferência, nem um toxóidediftérico nem um toxóide tetânico.Liofilização de MenC

Em um sétimo aspecto da invenção, um antígenomeningocócico conjugado do sorogrupo C é fornecido em umaforma liofilizada em um kit que também inclui umaformulação aquosa contendo D-T-Pa.

Dessa forma, a invenção fornece um kit que compreendeum primeiro componente imunogênico e um segundo componenteimunogênico, em que: (a) o primeiro componente imunogênicocompreende uma formulação aquosa de um toxóide diftérico,um toxóide tetânico e um antígeno acelular de B. pertussis;e (b) o segundo componente imunogênico compreende umsacarídeo capsular conjugado do sorogrupo C de N.meningitidis, na forma liofilizada.

0 conjugado liofilizado de MenC será reconstituído naforma aquosa, antes da injeção. A etapa de reconstituiçãopode usar: (a) a formulação aquosa contendo D-T-Pa, paragerar uma vacina combinada que inclui o conjugado de MenC,ou (b) um veículo aquoso separado, para gerar uma segundainjeção para co-administração com uma injeção contendo D-T-Pa1 quando então o kit pode incluir um veículo aquoso comoum componente adicional.

A formulação contendo D-T-Pa também pode incluir um ouambos de: um antígeno de superfície do vírus da hepatite Be um antígeno de poliovírus inativado.

Um antígeno Hib conjugado também pode ser incluídodentro do kit. Ele pode ser incluído na forma liofilizada(por exemplo, no mesmo recipiente que o componente de MenCliofilizado), ou dentro da formulação contendo D-T-Pa.

Administração de MenC, PnC e HbsAg

Em um oitavo aspecto da invenção, conjugadosmeningocócicos do sorogrupo C e pneumocócicos sãoadministrados com um antígeno de superfície da hepatite B.

Dessa forma, a invenção fornece uma composiçãoimunogênica que compreende: (a) um sacarídeo capsularconjugado de S. pneumoniae, (b) um sacarídeo capsularconjugado do sorogrupo C de N. meningitidis, e (c) umantígeno de superfície do vírus da hepatite Β. A composiçãotambém pode incluir um ou mais de: um toxóide diftérico, umtoxóide tetânico, um antígeno de B. pertussis, um antígenode poliovírus inativado, e/ou um sacarídeo Hib conjugado.A invenção também fornece um kit que compreende pelomenos um primeiro componente imunogênico e um segundocomponente imunogênico, em que: (a) um dos componentescompreende um sacarídeo capsular conjugado de S.pneumoniae, (b) um dos componentes compreende um sacarideocapsular conjugado do sorogrupo C de N. meningitidis, (c)um dos componentes compreende um antigeno de superfície dovírus da hepatite B.

Todos os antígenos (a) , (b) e (c) estão presentesdentro do kit, mas nem todos eles são parte do mesmocomponente do kit. São possíveis os seguintes arranjos deantígenos, com até três componentes separados para osantígenos (a) , (b) e (c) : <table>table see original document page 21</column></row><table>

0 kit também pode incluir um ou mais de: um toxóidediftérico, um toxóide tetânico, um antigeno de B.pertussis, um antigeno de poliovírus inativado, e/ou umsacarideo Hib conjugado. Esses antígenos adicionais podemser incluídos dentro do mesmo componente do kit comoqualquer um de (a) , (b) ou (c) , ou podem estar emcomponentes separados. Tipicamente, no entanto, um únicocomponente do kit pode incluir todos de: um HbsAg, umtoxóide diftérico, um toxóide tetânico, um antigeno de B.pertussis, e um antigeno de poliovírus inativado.Administração de MenC, PnC e IPV

Em um nono aspecto da invenção, conjugadosmeningocócicos do sorogrupo C e pneumocócicos sãoadministrados com um antigeno de poliovírus inativado.Dessa forma, a invenção fornece uma composiçãoimunogênica que compreende: (a) um sacarídeo capsularconjugado de S. pneumoniae, (b) um sacarídeo capsularconjugado do sorogrupo C de N. meningitidis, e (c) antígenode poliovírus inativado. A composição também pode incluirum ou mais de: um toxóide diftérico, um toxóide tetânico,um antígeno de B. pertussis, um HBsAg, e/ou um sacarídeoHib conjugado.

A invenção também fornece um kit que compreende pelomenos um primeiro componente imunogênico e um segundocomponente imunogênico, em que: (a) um dos componentescompreende um sacarídeo capsular conjugado de S.pneumoniae, (b) um dos componentes compreende um sacarídeocapsular conjugado do sorogrupo C de N. meningitidis, (c)um dos componentes compreende um antígeno de poliovírusinativado.

Todos os antígenos (a) , (b) e (O estão presentesdentro do kit, mas nem todos eles são parte do mesmocomponente do kit. São possíveis os seguintes arranjos deantígenos, com até três componentes separados para osantígenos (a) , (b) e (c) :

<table>table see original document page 22</column></row><table>

O kit também pode incluir um ou mais de: um toxóidediftérico, um toxóide tetânico, um antígeno de B.pertussis, um HBsAg, e/ou um sacarídeo Hib conjugado. Essesantígenos adicionais podem ser incluídos dentro do mesmocomponente do kit como qualquer um de (a) , (b) ou (c) , oupodem estar em componentes separados. Tipicamente, noentanto, um único componente do kit pode incluir todos de:um antígeno de poliovírus inativado, um toxóide diftérico,um toxóide tetânico, um antígeno de B. pertussis, e umHBsAg.

Combinações do primeiro, segundo, terceiro, quarto, quinto,sexto, sétimo, oitavo e nono aspectos

Os nove aspectos da invenção podem ser exploradosseparadamente, ou em combinações de 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 ou9 dos aspectos. Por exemplo, a invenção também fornece osseguintes kits:

um kit que compreende um primeiro componenteimunogênico e um segundo componente imunogênico, em que:

(a) o primeiro componente imunogênico compreende umsacarídeo capsular conjugado do sorogrupo C de N.meningitidis, e (b) o segundo componente imunogênicocompreende um antígeno acelular de B. pertussis e umantígeno de poliovírus inativado.

- um kit que compreende um primeiro componenteimunogênico, um segundo componente imunogênico e umterceiro componente imunogênico, em que: (a) o primeirocomponente imunogênico compreende um sacarídeo capsularconjugado do sorogrupo C de N. meningitidis; (b) o segundocomponente imunogênico compreende um antígeno acelular deB. pertussis e/ou um antígeno de poliovírus inativado; e(c) o terceiro componente imunogênico compreende umsacarídeo capsular conjugado de S. pneumoniae.

um kit que compreende um primeiro componenteimunogênico e um segundo componente imunogênico e,opcionalmente, um terceiro componente, em que: (a) oprimeiro componente imunogênico compreende um sacarídeocapsular conjugado do sorogrupo C de N. meningitidis, masnão inclui um adjuvante de fosfato de alumínio; (b) osegundo componente imunogênico compreende um antígenoacelular de B. pertussis e/ou um antígeno de poliovírusinativado; e (c) o terceiro componente opcional compreendeum sacarídeo capsular conjugado de S. pneumoniae.

um kit que compreende um primeiro componenteimunogênico e um segundo componente imunogênico, em que:(a) o primeiro componente imunogênico compreende umsacarídeo capsular conjugado do sorogrupo C de N.meningitidis; (b) o segundo componente imunogênicocompreende um toxóide diftérico, um toxóide tetânico, umantígeno acelular de B. pertussis, um antígeno desuperfície do vírus da hepatite B e um antígeno depoliovírus inativado, caracterizado pelo fato de que oprimeiro componente imunogênico é liofilizado e/ou nãoinclui um adjuvante de fosfato de alumínio.

um kit que compreende pelo menos um primeirocomponente imunogênico e um segundo componente imunogênico,em que: (a) um dos componentes compreende um sacarídeocapsular de S. pneumoniae, conjugado a uma primeiraproteína transportadora, (b) um dos componentes compreendeum sacarídeo capsular do sorogrupo C de N. meningitidis,conjugado a uma segunda proteína transportadora, (c) um doscomponentes compreende um antígeno acelular de pertussis,caracterizado pelo fato de que a primeira proteínatransportadora e a segunda proteína transportadora sãoiguais, e que o componente que contém o sorogrupo C de N.meningitidis é liofilizado e/ou não inclui um adjuvante defosfato de alumínio.etc.

A invenção também fornece as seguintes composiçõesimunogênicas:

uma composição imunogênica que compreende umsacarideo capsular conjugado do sorogrupo C de N.meningitidis, um antigeno acelular de B. pertussis e umantígeno de poliovírus inativado.

- uma composição imunogênica que compreende: (a) umsacarídeo capsular conjugado do sorogrupo C de N.meningitidis, (b) um antígeno acelular de B. pertussis e/ouum antígeno de poliovírus inativado; e (c) um sacarídeocapsular conjugado de S. pneumoniae.

- uma composição imunogênica que compreende: (a) umsacarídeo capsular de S. pneumoniae, conjugado a umaprimeira proteína transportadora, (b) um sacarídeo capsulardo sorogrupo C de N. meningitidis, conjugado a uma segundaproteína transportadora, e (c) um antígeno acelular depertussis, um antígeno de poliovírus inativado e umantígeno de superfície do vírus da hepatite B, em que aprimeira proteína transportadora e a segunda proteínatransportadora são iguais.

etc.

Antígenos para uso com a invenção

As composições e os kits da invenção compreendem umantígeno sacarídico conjugado do sorogrupo C de N.meningitidis. Tipicamente, eles também incluem pelo menosum antígeno sacarídico conjugado de S. pneumoniae.antígenos adicionais de outros patógenos, particularmentede bactérias e/ou vírus. Antígenos adicionais preferidossão selecionados de:- um toxóide diftérico ("D")

- um toxóide tetânico ("T")

- um antígeno de pertussis ("P"), que é tipicamenteacelular ("aP")

- um antígeno de superfície do vírus da hepatite B(HBV) ("HbsAg")

- um antígeno do vírus da hepatite A (HAV)

um sacarídeo capsular conjugado de Haemophilusinfluenzae do tipo b ("Hib")

- vacina de poliovírus inativado (IPV)

- um sacarídeo capsular conjugado do sorogrupo A de N.meningitidis ("MenA")

- um sacarídeo capsular conjugado do sorogrupo W13 5 deN. meningitidis ("MenW135")

- um sacarídeo capsular conjugado do sorogrupo Y de N.meningitidis ("MenY")

Mais de um desses antígenos adicionais podem serusados. As seguintes combinações de antígenos sãoparticularmente preferidas:

- Vacinas bivalentes: MenC-PnC.

- Vacinas tetravalentes: D-T-Pa-MenC.

- Vacinas pentavalentes: D-T-Pa-Hib-MenC; D-T-Pa-IPV-MenC; D-T-Pa-HBsAg-MenC; D-T-Pa-MenC-PnC.

- Vacinas hexavalentes: D-T-Pa-HBsAg-IPV-MenC; D-T-Pa-HBsAg-MenC-PnC.

- Vacinas heptavalentes: D-T-Pa-HBsAg-IPV-Hib-MenC; D-T-Pa-HBsAg- Hib-MenC-MenA.

Vacinas octavalentes: D-T-Pa-HBsAg-IPV-Hib-MenC-MenA; D-T-Pa-HBsAg-IPV-Hib-MenC-PnC.

Essas composições podem consistir nos antígenoslistados, ou podem ainda incluir antigenos de patógenosadicionais. Dessa forma, elas podem ser usadasindividualmente, ou como componentes de vacinas adicionais.

Sacarídeos conjugados de N. meningitidis

Antigenos meningocócicos conjugados compreendemantigenos sacaridicos capsulares de Neisseria meningitidisconjugados a proteínas transportadoras. Vacinasmonovalentes conjugadas contra o sorogrupo C foramaprovadas para uso humano, e incluem MENJUGATE™ [13],MENINGITEC™ e NEISVAC-C™. São conhecidas misturas deconjugados dos sorogrupos A + C [14,15] e misturas deconjugados dos sorogrupos A + C + W13 5 + Y foram relatadas[16-19] e foram aprovadas em 2005 como o produtoMENACTRA™.

A invenção utiliza pelo menos um sacarídeomeningocócico do sorogrupo C, mas também pode incluirsacarídeo de um ou mais dos sorogrupos A, W135 e/ou Y, porexemplo, A + C, C + W135, C + Y, A + C + W135, A + C + Y, C+ W13 5 + Y, A + C + W13 5 + Y. Quando é usado mais de umsorogrupo, prefere-se utilizar tanto o sorogrupo A quanto osorogrupo C.

O sacarídeo capsular meningocócico do sorogrupo C é umhomopolímero ligado em a2->9 de ácido siálico (ácido N-acetilneuramínico), tipicamente com grupos 0-acetil (OAc)nos resíduos C-7 ou C-8. 0 composto é representado como:

—>9)- Neu ρ NAc 7/8 OAc-(a2->.

Algumas das cepas de MenC (-12% de isolados invasivos)produzem um polissacarídeo desprovido desse grupo OAc. Apresença ou ausência de grupos OAc gera epitopos únicos, ea especificidade de ligação de anticorpo para o sacarídeopode afetar sua atividade bactericida contra cepas 0-acetiladas (OAc-) e des-O-acetiladas (OAc+) [20-22].Vacinas conjugadas de MenC licenciadas incluem sacarideostanto Oac- (NEISVAC-C™) quanto OAc+ (MENJUGATE™ eMENINGITEC™) . Os sacarideos do sorogrupo C usados com ainvenção podem ser preparados a partir de cepas OAc+ ouOAc-. Cepas preferidas para a produção de conjugados dosorogrupo C são cepas OAc+, de preferência, do sorotipo 16,de preferência, do soro-subtipo P1.7a,1. Dessa forma, cepasOAc+ C:16:P1.7a,1 são preferidas. Cepas OAc+ no soro-subtipo P1.1 também são úteis, por exemplo, a cepa C11.

O sacarideo capsular meningocócico do sorogrupo A é umhomopolimero de N-acetil-D-manosamina-l-fosfato ligado em(al—»6) -, com O-acetilação parcial nas posições C3 e C4. Aacetilação na posição C-3 pode ser de 70-95%. As condiçõesusadas para purificar o sacarideo podem produzir a des-0-acetilação (por exemplo, sob condições básicas), masprefere-se reter OAc na posição C-3. Dessa forma, depreferência pelo menos 50% (por exemplo, pelo menos 60%,70%, 80%, 90%, 95% ou mais) dos resíduos de manosamina são0-acetilados na posição C-3.

O sacarideo do sorogrupo W13 5 é um polímero deunidades dissacarídicas de ácido siálico-galactose. Damesma forma que o sacarideo do sorogrupo C, ele tem 0-acetilação variável, mas nas posições 7 e 9 de ácidosiálico [23]. A estrutura é escrita como: ->4)-D-Neup5Ac (7/90Ac) -a- (2->6) -D-Gal-a- (l-> .

O sacarideo do sorogrupo Y é similar ao sacarideo dosorogrupo W13 5, exceto que a unidade de repetiçãodissacarídica inclui glicose no lugar de galactose. Como osorogrupo W135, ela tem O-acetilação variável nas posições7 e 9 de ácido siálico [23] . A estrutura do sorogrupo Y éescrita como: ->4 ) -D-Neup5Ac (7/90Ac) -a- (2->6) -D-Glc-a- (l-> .

Os produtos MENJUGATE™ e MENINGITEC™ utilizam umaproteína transportadora CRM197, e esse veículo também podeser usado de acordo com a invenção. 0 produto NEISVAC-Cusa uma proteína transportadora de toxóide tetânico, e esseveículo também pode ser usado de acordo com a invenção, bemcomo pode ser usado toxóide diftérico. Outra proteínatransportadora útil para os conjugados meningocócicos é aproteína D de Haemophilus influenzae, que não está presenteem nenhuma das vacinas conjugadas aprovadas existentes.

A porção sacarídica do conjugado pode compreendersacarídeos de comprimento total preparados a partir demeningococos, e/ou ela pode compreender fragmentos desacarídeos de comprimento total. Os sacarídeos usados deacordo com a invenção são, de preferência, mais curtos doque os sacarídeos capsulares nativos observados embactérias. Dessa forma, de preferência os sacarídeos sãodespolimerizados, com a despolimerização ocorrendo após apurificação do sacarídeo, mas antes da conjugação. Adespolimerização reduz o comprimento da cadeia dossacarídeos. Um método de despolimerização envolve o uso deperóxido de hidrogênio [16] . 0 peróxido de hidrogênio éadicionado a um sacarídeo (por exemplo, para gerar umaconcentração final de H2O2 de 1%) , e a mistura é entãoincubada (por exemplo, em torno de 55°C) , até que tenhasido obtida uma redução desejada do comprimento da cadeia.Outro método de despolimerização envolve hidrólise ácida[17] . Outros métodos de despolimerização são conhecidos natécnica. Os sacarídeos usados para a preparação dosconjugados para uso de acordo com a invenção podem serobtidos por qualquer um desses métodos de despolimerização.A despolimerização pode ser usada a fim de fornecer umcomprimento da cadeia ótimo para imunogenicidade e/ou parareduzir o comprimento da cadeia para a manipulação físicados sacarídeos. Sacarídeos preferidos possuem os seguintesintervalos de graus médios de polimerização (Dp): A= 10-20; C = 12-22; W135 = 15-25; Y = 15-25. Em termos de pesomolecular, ao invés de Dp, os intervalos preferidos são,para todos os sorogrupos: < 100 kDa; 5 kDa-75 kDa; 7 kDa-50kDa; 8 kDa-35 kDa; 12 kDa-25 kDa; 15 kDa-22 kDa.

Conjugados meningocócicos com uma proporção desacarídeo:proteína (p/p) entre 1:10 (ou seja, proteína emexcesso) e 10:1 (ou seja, sacarídeo em excesso) podem serusados, por exemplo, proporções entre 1:5 e 5:1, entre1:2,5 e 2,5:1 ou entre 1:1,25 e 1,25:1. Uma proporção de1:1 pode ser usada, particularmente para o sorogrupo C.

Tipicamente, uma composição incluirá entre 1 pg e 20pg (medidos como sacarídeo) por dose de cada sorogrupo queestá presente.

A administração de um conjugado de preferência resultaem um aumento na titulação do ensaio sérico bactericida(SBA) para o sorogrupo relevante de pelo menos 4 vezes e,de preferência, pelo menos 8 vezes. As titulações do SBApodem ser medidas com o uso de complemento de coelho oucomplemento humano [24].

Os conjugados meningocócicos podem ou não seradsorvidos a um adjuvante de sal de alumínio.

Os conjugados meningocócicos podem ser liofilizadosantes do uso use de acordo com a invenção. Se liofilizada,a composição pode incluir um estabilizante, por exemplo,manitol. Ela também pode incluir cloreto de sódio.

Sacarídeos pneumocócicos conjugados

Antigenos pneumocócicos conjugados compreendemantigenos sacaridicos capsulares de Streptococcuspneumoniae conjugados a proteínas transportadoras [porexemplo, refs. 25 a 27]. Prefere-se incluir sacarídeos demais de um sorotipo de S. pneumoniae: misturas depolissacarídeos de 23 sorotipos diferentes são amplamenteusadas, bem como o são vacinas conjugadas compolissacarídeos de 5 a 11 sorotipos diferentes [28]. Porexemplo, PREVNAR™ [2 9] contém antigenos de sete sorotipos(4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F e 23F) com cada sacarídeoindividualmente conjugado a CRM197 por aminação redutora,com 2 μg de cada sacarídeo por dose de 0,5 ml (4 dosorotipo 6B).

As composições da invenção incluem, de preferência,antigenos sacaridicos para pelo menos os sorotipos 6B, 14,19F e 23F. Sorotipos adicionais são selecionados, depreferência, de: 1, 3, 4, 5, 7F, 9V e 18C. A coberturaheptavalente (como em PREVNAR™) , nonovalente (por exemplo,os 7 sorotipos de PREVNAR, mais 1 e 5), decavalente (porexemplo, os 7 sorotipos de PREVNAR, mais 1, 5 e 7F) eundecavalente (por exemplo, os 7 sorotipos de PREVNAR, mais1, 3, 5 e 7F) de sorotipos pneumocócicos é particularmenteútil.

A porção sacarídica do conjugado pode compreendersacarídeos de comprimento total preparados a partir depneumococos, e/ou ela pode compreender fragmentos desacarídeos de comprimento total. Os sacarídeos usados deacordo com a invenção são, de preferência, mais curtos doque os sacarídeos capsulares nativos observados embactérias, como descrito acima para os conjugadosmeningocócicos.

Conjugados pneumocócicos com uma proporção desacarídeo:proteína (p/p) entre 1:10 (ou seja, proteína emexcesso) e 10:1 (ou seja, sacarídeo em excesso) podem serusados, por exemplo, proporções entre 1:5 e 5:1, entre1:2,5 e 2,5:1 ou entre 1:1,25 e 1,25:1.

0 produto PREVNAR™ utiliza uma proteínatransportadora CRM197, e esse veículo também pode ser usadode acordo com a invenção. Veículos alternativos para usocom sacarídeos pneumocócicos incluem, sem limitação, umveículo de toxóide tetânico, um veículo de toxóidediftérico, e/ou uma proteína transportadora D de H.influenzae. 0 uso de veículos múltiplos para sorotipospneumocócicos mistos pode ser vantajoso [30], por exemplo,para incluir tanto uma proteína transportadora D de H.influenzae quanto, por exemplo, um veículo de toxóidetetânico e/ou um veículo de toxóide diftérico. Por exemplo,um ou mais (de preferência, todos) dos sorotipos 1, 4, 5,6B, IF1 9V, 14 e 23F podem ser conjugados a uma proteínatransportadora D de H. influenzae, o sorotipo 18C pode serconjugado a um toxóide tetânico, e o sorotipo 19F pode serconjugado a um veículo de toxóide diftérico.

Tipicamente, uma composição incluirá entre 1 Mg e 20μ5 (medidos como sacarídeo) por dose de cada sorotipo queesteja presente.

Antígenos de pertussisA Bordetella pertussis causa a coqueluche. Osantígenos de pertussis em vacinas são tanto celulares(célula inteira, na forma de células inativadas de B.pertussis) ou acelulares. A preparação de antígenoscelulares de pertussis é bem documentada [por exemplo, vejao capítulo 21 a ref. 1], por exemplo, ela pode ser obtidapor inativação por aquecimento de cultura de fase I de B.pertussis. De preferência, no entanto, a invenção utilizaantígenos acelulares.

Quando são usados antígenos acelulares, prefere-seusar um, dois ou (de preferência) três dos seguintesantígenos: (1) toxina detoxifiçada de pertussis (toxóide depertussis, ou "PT"); (2) hemaglutinina filamentosa ("FHA");(3) pertactina (também conhecida como a "proteína damembrana externa de 69 quilodáltons"). Esses três antígenossão preparados, de preferência, por isolamento de culturade B. pertussis crescidas em meio líquido de Stainer-Scholte modificado. PT e FHA podem ser isolados do caldo defermentação (por exemplo, por adsorção por gel dehidroxiapatita), enquanto pertactina pode ser extraída dascélulas por tratamento por calor e floculação (por exemplo,com ou uso de cloreto de bário) . Os antígenos podem serpurificados em etapas sucessivas de cromatografia e/ouprecipitação. PT e FHA podem ser purificados, por exemplo,por cromatografia hidrofóbica, cromatografia por afinidade,e cromatografia por exclusão de tamanho. A pertactina podeser purificada, por exemplo, por cromatografia por trocaiônica, cromatografia hidrofóbica e cromatografia porexclusão de tamanho. FHA e pertactina podem ser tratadoscom formaldeído, antes do uso, de acordo com a invenção. PTé detoxifiçado, de preferência, por tratamento comformaldeído e/ou glutaraldeido. Como alternativa a esseprocedimento de detoxificação química, o PT pode ser um PTmutante, no qual a atividade enzimática foi reduzida pormutagênese [31], mas prefere-se a detoxificação portratamento químico.

Antígenos celulares de pertussis são, de preferência,adsorvidos sobre um ou mais adjuvantes de sal de alumínio.Como alternativa, eles podem ser adicionados em um estadonão adsorvido. Quando for adicionada pertactina, depreferência, ela já estará adsorvida em um adjuvante dehidróxido de alumínio. PT e FHA podem ser adsorvidos em umadjuvante de hidróxido de alumínio ou de fosfato dealumínio. Prefere-se, principalmente, a adsorção de PT, FHAe pertactina ao hidróxido de alumínio.

As composições tipicamente incluirão: 1-50 μg/dose dePT; 1-50 pg/dose de FHA; e 1-50 pg de pertactina.Quantidades preferidas são de cerca de 25 pg/dose de PT,cerca de 25 pg/dose de FHA e cerca de 8 μg/dose depertactina.

Além de PT, FHA e pertactina, é possível incluirfímbrias (por exemplo, aglutinógenos 2 e 3) em vacinaacelular de pertussis.

Vacina de poliovírus inativado

O poliovírus causa a poliomielite. Ao invés de usaruma vacina de poliovírus oral, modalidades preferidas dainvenção usam IPV, como revelado com mais detalhe nocapítulo 24 da referência 1.

Os poliovírus podem crescer em cultura de células, euma cultura preferida utiliza uma linhagem de células Vero,derivadas de rim de macaco. As células Vero podemconvenientemente ser cultivadas em microveiculos. Após ocrescimento, os vírions podem ser purificados com o uso detécnicas, tais como ultrafiltração, diafiltração ecromatografia. Antes da administração aos pacientes, ospoliovírus devem ser inativados, e isso pode ser obtido portratamento com formaldeído.

A poliomielite pode ser causada por um dos três tiposde poliovírus. Os três tipos são similares, e causamsintomas idênticos, mas eles são antigenicamente muitodiferentes, e a infecção por um tipo não protege contrainfecção por outros. Prefere-se, portanto, usar trêsantígenos de poliovírus na invenção: poliovírus do Tipo 1(por exemplo, cepa Mahoney) , poliovírus do Tipo 2 (porexemplo, cepa MEF-1) e poliovírus do Tipo 3 (por exemplo,cepa Saukett). De preferência, os vírus crescem, sãopurificados e inativados individualmente, e são entãocombinados, gerando uma mistura final trivalente para usocom a invenção.

As quantidades de IPV são expressas tipicamente naunidade "DU" (a "unidade de antígeno D" [32]). Prefere-seutilizar entre 1-100 DU por tipo viral por dose, porexemplo, cerca de 80 DU de poliovírus do Tipo 1, cerca de16 DU de poliovírus do tipo 2, e cerca de 64 DU depoliovírus do tipo 3.

Os antígenos de poliovírus, de preferência, não sãoadsorvidos a qualquer adjuvante de sal de alumínio, antesde serem usados para a produção das composições dainvenção, mas eles podem ficar adsorvidos em adjuvantes dealumínio na composição de vacina durante estocagem.Toxóide diftérico

Corynebacterium difteriae causa a difteria. A toxinadif térica pode ser tratada (por exemplo, com o uso deformalina ou formaldeido) para remover a toxicidade, aomesmo tempo em que retém a habilidade para induziranticorpos antitoxina específicos após injeção. Essestoxóides diftéricos são usados em vacinas contra difteria,e são revelados com mais detalhes no capítulo 13 dareferência 1. Toxóides diftéricos preferidos são aquelespreparados por tratamento com formaldeido. 0 toxóidediftérico pode ser obtido por crescimento de C. difteriaeem meio de crescimento (por exemplo, meio de Fenton, oumeio de Linggoud e Fenton) , os quais podem sersuplementados com extrato bovino, seguido por tratamentocom formaldeido, ultrafiltração e precipitação. O materialde toxóide pode então ser tratado por um processo quecompreende filtração estéril e/ou diálise.

As quantidades de toxóide diftérico podem serexpressas em unidades internacionais (UI). Por exemplo, oNIBSC fornece o "Diphtheria Toxoid Adsorbed ThirdInternational Standard 1999" [33,34], que contém 160 UI porampola. Como alternativa ao sistema de UI, a "unidade Lf"(«unidades de floculação" ou a "dose limítrofe defloculação") é definida como a quantidade de toxóide que,quando misturada com uma Unidade Internacional deantitoxina, produz uma mistura de floculação ótima [35].

Por exemplo, o NIBSC fornece "Diphtheria Toxoid, Plain"[3 6] , que contém 3 00 LF por ampola, e também fornece "TheIst International Reference Reagent For Diphtheria ToxoidFor Flocculation Test" [37], que contém 900 LF por ampola.As composições tipicamente incluem entre 20 e 80 Lf detoxóide diftérico, tipicamente cerca de 50 Lf.

Por medidas UI, as composições tipicamente incluirãopelo menos 30 Ul/dose.

O toxóide diftérico é adsorvido, de preferência, em umadjuvante de hidróxido de alumínio.

Toxóide tetânico

Clostridium tetani causa o tétano. A toxina tetânicapode ser tratada para gerar um toxóide protetor. Ostoxóides são usados em vacinas antitetânicas, e sãorevelados com mais detalhes no capítulo 27 da referência 1.Toxóides tetânicos preferidos são aqueles preparados portratamento com formaldeído. O toxóide tetânico pode serobtido por crescimento de C. tetani em meio de crescimento(por exemplo, a meio de Latham derivado de caseína bovina),seguido por tratamento com formaldeído, ultrafiltração eprecipitação. 0 material pode então ser tratado por umprocesso que compreende filtração estéril e/ou diálise.

As quantidades de toxóide tetânico podem ser expressasem unidades internacionais (UI) . Por exemplo, o NIBSCfornece o "Tetanus Toxoid Adsorbed Third InternationalStandard 2000" [38,39], que contém 469 UI por ampola. Comoalternativa ao sistema de UI, a "unidade Lf ("unidades defloculação" ou a "dose limítrofe de floculação") é definidacomo a quantidade de toxóide que, quando misturada com umaUnidade Internacional de antitoxina, produz uma mistura defloculação ótima [35]. Por exemplo, o NIBSC fornece "Thelst International Reference Reagent for Tetanus Toxoid ForFlocculation Test" [40] que contém 1.000 LF por ampola.

As composições tipicamente incluirão entre 5 e 50 Lfde toxóide diftérico, tipicamente cerca de 20 Lf.

Por medidas UI, as composições tipicamente incluirãopelo menos 40 UI/dose.

O toxóide tetânico pode ser adsorvido em um adjuvantede hidróxido de alumínio, mas isso não é necessário (porexemplo, adsorção entre 0-10% do toxóide tetânico totalpode ser usado).

Antígenos do vírus da hepatite A

O vírus da hepatite A (HAV) é um dos agentesconhecidos que causam hepatite viral. As vacinas contra oHAV são reveladas no capítulo 15 da referência 1. Umcomponente de HAV preferido se baseia no vírus inativado, ea inativação pode ser obtida por tratamento com formalina.O vírus pode crescer em fibroblastos diplóides pulmonaresembriológicos humanos, por exemplo, células MRC-5. Uma cepade HAV preferida é a HM175, embora a cepa CR326F tambémpossa ser usada. As células podem crescer sob condições quepermitam o crescimento viral. As células são lisadas, e asuspensão resultante pode ser purificada por ultrafiltraçãoe cromatografia por permeação em gel.

A quantidade de antígeno de HAV, medida em UE(Unidades Elisa), é tipicamente de pelo menos cerca de 500UE/ml.

Antígeno de superfície do vírus da hepatite B

O vírus da hepatite B (HBV) é um dos agentesconhecidos que causam hepatite viral. O vírion do HBVconsiste em um núcleo interno circundado por umrevestimento protéico externo ou capsídeo, e o núcleo viralcontém o genoma do DNA viral. O componente principal docapsídeo é uma proteína conhecida como antígeno desuperfície do HBV ou, mais comumente, "HBsAg", que étipicamente um polipeptídeo de 226 aminoácidos, com um pesomolecular de -24 kDa. Todas as vacinas contra hepatite Bexistentes contêm HBsAg, e, quando esse antígeno éadministrado a uma pessoa normal, ele estimula a produçãode anticorpos anti-HBsAg que protegem contra a infecção por HBV.

Para a fabricação da vacina, o HBsAg foi feito de duasformas. 0 primeiro método envolve a purificação do antígenoem forma particulada a partir do plasma de portadorescrônicos de hepatite B, uma vez que é sintetizada umagrande quantidade de HBsAg no fígado, que é liberada nacorrente sangüínea durante uma infecção por HBV. A segundaforma envolve a expressão da proteína por métodos de DNArecombinante. 0 HBsAg para uso com o método da invenção, depreferência, é expresso de forma recombinante em células delevedura. Leveduras adequadas incluem, por exemplo,hospedeiros de Saccharomyces (por exemplo, S. cerevisiae)ou Hanensula (por exemplo, H. polymorpha).

De preferência, o HBsAg é não glicosilado.Diferentemente do HBsAg nativo (ou seja, como no produtopurificado a partir do plasma), HBsAg expresso porleveduras é geralmente não glicosilado, e essa é a formamais preferida do HBsAg para uso com a invenção, pois ela éaltamente imunogênica e pode ser preparada sem o risco decontaminação por produto sangüíneo.

O HBsAg estará geralmente na forma de partículassubstancialmente esféricas (diâmetro médio de cerca de 20nm), incluindo uma matriz lipídica que compreendefosfolipídeos. As partículas de HBsAg expressas em levedurapodem incluir fosfatidilinositol, que não é encontrado emvirions do HBV natural. As partículas também podem incluiruma quantidade atóxica de LPS a fim de estimular o sistemaimunológico [41]. 0 HbsAg preferido está na forma departículas que incluem uma matriz lipídica que compreendefosfolipídeos, fosfatidilinositol e polissorbato 20.

Todos os subtipos conhecidos de HBV contêm odeterminante comum "a". Combinado com outros determinantese subdeterminantes, foram identificados nove subtipos:

aywl, ayw2, ayw3, ayw4, ayr, adw2, adw4, adrq- e adrq+.

Além desses subtipos, surgiram outras variantes como, porexemplo, mutantes do HBV que foram detectados em indivíduosimunizados ("mutantes de fuga"). 0 subtipo de HBV maispreferido para uso com a invenção é o subtipo adw2. UmHBsAg preferido tem a seguinte seqüência de aminoácidos(ID. DE SEQ. N0 : 1):

<formula>formula see original document page 40</formula>

Essa seqüência difere das combinações mais próximas dabase de dados no aminoácido 117, que possui um resíduo Asnao invés de Ser. A invenção pode usar o ID. DE SEQ. N°: 1,ou uma seqüência que difere do ID. DE SEQ. N°: 1 por até 10(ou seja, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) substituiçõesúnicas de aminoácido.

Além da seqüência "S" , um antígeno de superfície podeincluir toda ou parte de uma seqüência pré-S, por exemplo,toda ou parte de uma seqüência pré-Sl e/ou pré-S2.

De preferência, o HBsAg é expresso: (1) sob o controlede um promotor acima de um gene de gliceraldeído-3 - fosfatodesidrogenase; e/ou (2) cora um finalizador de transcriçãoabaixo ARG3.

Gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase é uma enzimaglicolítica, e verificou-se que seu promotor éparticularmente adequado para o controle da expressão deHBsAg em S. cerevisiae [42] . Um promotor GAPDH preferidocompreende a seguinte seqüência de nucleotideos de 1.060-mer (ID. DE SEQ. N0: 2):

AAGC^TACC^GTTCTCACACGGAACACC^CTAATC-GACACACATTCGAtóTACTTTGACCCTATTTTC^GGACCTTGTC^CTTGAGCCCAAGAGAGCCAAGATTT^ATTTTCCTAΓ GAT^G^CTCÍ^C AGT AAG ACCC G T TGAAAAGAACT T ACCTGAAAAAAAC GAATAT ATACT AG CGT TG^rrCPG TPG^TCATTTTGAATAAAAAACACGCTTTTTCAGTTCGAGTTTATCATTATCAATACTGgggtgaacagtttat^cctggcatccactaaatataatggagcccgctttttaagctgrraTTCTr^^GCGrAACTACAGAGAACAGGGGCACAAACAGGCAAAAAACGGGCACAACCTCAATGGAG GA^ C^acctgc TGGAGTAAATGATGACACcaagaacttagtttcgaataaacacacataaacaaacaaa

Essa seqüência difere da seqüência na referência 42 daseguinte forma: (1) substituição A/C no nucleotídeo 42; (2)substituição T/A no nucleotídeo 194; (3) mutação C/A nonucleotídeo 301; (4) inserção de A no nucleotídeo 471; (5)substituição C/T no resíduo 569; (6) substituição T/C noresíduo 597; (7) inserção de T no nucleotídeo 604 (penta-Tno lugar de tetra-T) ; e (8) troca da seqüência 3' GCTT comum único A.

A invenção pode usar essa seqüência promotora de1.060-mer, ou uma seqüência que difere dessa seqüência de1.060-mer por até 20 (ou seja, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9,10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20) mutações0 pontuais, cada mutação pontual sendo a eliminação,substituição ou inserção de um único nucleotídeo.

A seqüência de 1.060-mer é, de preferência,imediatamente abaixo do códon de início ATG que codifica oterminal N do HBsAg (ID. DE SEQ. N°: 3):

<formula>formula see original document page 42</formula>

O gene ARG 3 em levedura codifica a enzima ornitinacarbamoiltransferase [43], e sua seqüência de finalizaçãode transcrição foi usada em vários sistemas de expressãorecombinante em levedura [44, 45, 46]. Ele é vantajoso parao controle da expressão de HBsAg em levedura,particularmente combinado a um promotor GAPDH.

O gene que codifica HBsAg tipicamente será umainserção em um plasmídeo. Um plasmídeo preferido inclui umpromotor GAPDH, seguido por uma seqüência que codificaHBsAg, seguido por um finalizador ARG3. Plasmideospreferidos também podem incluir um, dois ou todos os trêsde: (1) um marcador de seleção LEU2; (2) uma seqüência deplasmídeo de 2 μ, e/ou (3) uma origem de replicaçãofuncional em Escherichia coli [46]. Dessa forma, plasmídeospreferidos podem atuar como vetores shuttle entre levedurae E. coli.

Um plasmídeo entre 14.500 e 15.000 bp é preferido, porexemplo, entre 14.600 e 14.7 00 bp.

Quando for usado um marcador de seleção LEU2, a célulahospedeira deverá ser LEU2~ve (ou seja, uma auxotrófica deleucina). A célula hospedeira pode ser um mutante leu2-3leu2-112. Características adicionais de hospedeiros delevedura preferidos são his3 e/ou canl-11. O hospedeiro delevedura mais preferido é leu2-3 leu2-112 his3 canl-11como, por exemplo, a cepa DC5.

Um método preferido para a purificação de HBsAgenvolve, após a ruptura da célula: ultrafiltração;cromatografia por exclusão de tamanho; cromatografia portroca aniônica; ultracentrifugação; dessalinização; efiltração estéril. Os lisados podem ser precipitados após aruptura da célula (por exemplo, com o uso de um polietilenoglicol), deixando HBsAg em solução, pronto para ultrafiltração.

Após purificação, o HBsAg pode ser submetido à diálise(por exemplo, com cisteína) , que pode ser usada pararemover quaisquer conservantes mercuriais como, porexemplo, timerosal, que possam ter sido usados durante apreparação do HBsAg [47].

As quantidades de HBsAg são tipicamente expressas emmicrogramas, e uma quantidade típica de HBsAg por dose devacina é entre 5 e 5 pg, por exemplo, 10 pg/dose.

Embora o HBsAg possa ser adsorvido a um adjuvante dehidróxido de alumínio na vacina final (como no produto bemconhecido ENGERIX-B™) , ou possa permanecer não adsorvido,ele geralmente será adsorvido a um adjuvante de fosfato dealumínio [48].

Antígenos conjugados de Haemophilus influenzae do tipo bO Haemophilus influenzae do tipo b ("Hib") causameningite bacteriana. As vacinas contra Hib são tipicamentebaseadas no antigeno sacaridico capsular [por exemplo,capitulo 14 da ref. 1], cuja preparação é bem documentada[por exemplo, referências 49 a 58] .

O sacarídeo Hib pode ser conjugado a uma proteínatransportadora a fim de aumentar sua imunogenicidade,especialmente em crianças. Proteínas transportadorastípicas são toxóide tetânico, toxóide diftérico, o derivadode CRMl97 do toxóide diftérico, a proteína D de H.influenzae, e uma proteína do complexo da membrana externado sorogrupo B do meningococo. A proteína transportadora noconjugado de Hib é, de preferência, diferente das proteínastransportadoras nos conjugados meningocócicos, mas o mesmoveículo pode ser usado em algumas modalidades.

O toxóide tetânico é o veículo preferido, como usadono produto comumente denominado «PRP-T». PRP-T pode serfeito por ativação de um polissacarídeo capsular de Hib como uso de brometo de cianogênio, acoplando-se o sacarídeoativado a um vinculador de ácido adípico (como, porexemplo, (l-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida) ,

tipicamente o sal de cloridrato), e depois reagindo-se aentidade vinculador-sacarídeo com uma proteínatransportadora de toxóide tetânico.

A porção sacarídica do conjugado pode compreenderpolirribosilribitol fosfato (PRP) de comprimento total,como preparado a partir de bactérias Hib, e/ou fragmentosde PRP de comprimento total.

Podem ser usados conjugados de Hib com uma proporçãode sacarídeo:proteína (p/p) entre 1:5 (ou seja, proteína emexcesso) e 5:1 (ou seja, sacarídeo em excesso), porexemplo, proporções entre 1:2 e 5:1 e proporções entre1:1,25 e 1:2,5. Em vacinas preferidas, no entanto, aproporção de peso de sacarídeo para proteína transportadoraé entre 1:2 e 1:4, de preferência, entre 1:2,5 e 1:3.5. Emvacinas nas quais está presente toxóide tetânico, tantocomo um antígeno quanto como uma proteína transportadora, aproporção de peso de sacarídeo para proteína transportadorano conjugado pode ser entre 1:0,3 e 1:2 [59] .

As quantidades de conjugados de Hib são geralmenteapresentadas em termos de massa de sacarídeo (ou seja, adose do conjugado (veículo + sacarídeo) como um todo émaior do que a dose definida) a fim de evitar variaçõesdecorrentes da escolha do veículo. Uma quantidade típica desacarídeo Hib por dose é entre 1-30 pg, de preferência,cerca de 10 pg.

A administração do conjugado de Hib preferivelmenteresulta em uma concentração de anticorpo anti-PRP > 0,15pg/ml e, mais pref erivelmente, > 1 pg/ml, e esses são oslimiares da resposta-padrão.

Os conjugados de Hib podem ser liofilizados antes deseu uso de acordo com a invenção. Componentes adicionaistambém podem ser acrescentados antes da Iiofilização, porexemplo, como estabilizantes. Estabilizantes preferidospara inclusão são lactose, sacarose e manitol, além demisturas destes, por exemplo, misturas de lactose/sacarose,misturas de sacarose/manitol etc. Desse modo, a vacinafinal pode conter lactose e/ou sacarose. 0 uso de umaistura de sacarose/manitol pode acelerar o processo dem:secagem.Os conjugados de Hib podem ou não ser adsorvidos a umadjuvante de sal de alumínio. Prefere-se não adsorvê-los aum adjuvante de hidróxido de alumínio.Características das composições da invenção

Além dos componentes antigênicos descritos acima, ascomposições da invenção geralmente incluirão um componentenão antigênico. 0 componente não antigênico pode incluirveículos, adjuvantes, excipientes, tampões etc., comodescrito com mais detalhe abaixo. Esses componentes nãoantigênicos podem ter várias fontes. Por exemplo, elespodem estar presentes em um dos materiais de antígeno ouadjuvante que é usado durante a fabricação, ou podem seradicionados separadamente daqueles componentes.

As composições preferidas da invenção incluem um oumais veículos e/ou excipientes farmacêuticos..

Para o controle da tonicidade, prefere-se incluir umsal fisiológico, por exemplo, um sal de sódio. Prefere-secloreto de sódio (NaCl), que pode estar presente entre 1 e20 mg/ml.

As composições geralmente terão uma osmolalidade entre200 mOsm/kg e 400 mOsm/kg, de preferência entre 240-360mOsm/kg e, mais preferivelmente, cairão na faixa de 290-320mOsm/kg. Relatou-se previamente que a osmolalidade não temimpacto sobre a dor causada pela vacinação [60], mas, noentanto, prefere-se manter a osmolalidade nessa faixa.

As composições da invenção podem incluir um ou maistampões. Tampões típicos incluem: um tampão de fosfato, umtampão Tris, um tampão de borato, um tampão de succinato,um tampão de histidina, ou um tampão de citrato. Os tampõestipicamente serão incluídos na faixa de 5-20 mM.O pH de uma composição da invenção geralmente estaráentre 5,0 e 7,5 e, mais tipicamente, entre 5,0 e 6,0 parauma estabilidade ótima, ou entre 6,0 e 7,0.

As composições da invenção são, de preferência,estéreis.

As composições da invenção são, de preferência, nãopirogênicas, por exemplo, contendo < 1 UE (unidade deendotoxina, uma medida-padrão) por dose e, de preferência,< 0,1 UE por dose.

As composições da invenção, de preferência, nãopossuem glúten.

Quando os antigenos foram adsorvidos, uma composiçãopode ser uma suspensão com uma aparência turva. Essaaparência significa que uma contaminação microbiana nãoserá facilmente visível e, portanto, a vacinapreferivelmente contém um conservante. Isso éparticularmente importante quando a vacina for embalada emrecipientes multidoses. Conservantes preferidos parainclusão são 2 -fenoxietanol e timerosal. Recomenda-se, noentanto, não utilizar conservantes mercuriais (por exemplo,timerosal) sempre que possível. Prefere-se que ascomposições da invenção contenham menos cerca de 25 ng/mlde mercúrio.

A concentração de quaisquer sais de alumínio em umacomposição da invenção, expressa em termos de Al3+, é, depreferência, menos de 5 mg/ml por exemplo, < 4 mg/ml, < 3mg/ml, < 2 mg/ml, < 1 mg/ml etc.

As composições da invenção são administradas, depreferência, aos pacientes em doses de 0,5 ml. Subentende-se que referências às doses de 0,5 ml incluem variâncianormal, por exemplo, 0,5 ml ± 0,0 5 ml.

A invenção pode fornecer material a granel que éadequado para embalagem em doses individuais, que podementão ser distribuídas para administração aos pacientes. Asconcentrações mencionadas acima são tipicamenteconcentrações na dose embalada final e, portanto, asconcentrações na vacina a granel podem ser maiores (porexemplo, a serem reduzidas até as concentrações finais pordiluição).

O material residual dos componentes antigênicosindividuais também pode estar presente em quantidadesresiduais na vacina final produzida pelo processo dainvenção. Por exemplo, caso seja usado formaldeído parapreparar os toxóides de difteria, tétano e coqueluche,então o produto de vacina final pode reter quantidadesresiduais de formaldeído (por exemplo, menos de 10 Mg/ml,de preferência, < 5 Mg/ml) . Também podem ter sido usadosmeios ou estabilizantes durante a preparação do poliovírus(por exemplo, Meio 199), e esses podem seguir até a vacinafinal. Do mesmo modo, aminoácidos livres (por exemplo,alanina, arginina, aspartato, cisteína e/ou cistina,glutamato, glutamina, glicina, histidina, prolina e/ouhidroxiprolina, isoleucina, leucina, lisina, metionina,fenilalanina, serina, treonina, triptofano, tirosina e/ouvalina), vitaminas (por exemplo, colina, ascorbato etc.),fosfato dissódico, fosfato monopotássico, cálcio, glicose,sulfato de adenina, vermelho fenol, acetato de sódio,cloreto de potássio etc. podem ser retidos na vacina finala < 100pg/ml, de preferência < 10 pg/ml, cada. Outroscomponentes das preparações de antígeno como, por exemplo,neomicina (por exemplo, sulfato de neomicina,particularmente do componente de IPV), polimixina B (porexemplo, sulfato de polimixina B, particularmente docomponente de IPV) etc. também podem estar presentes, porexemplo, em quantidades subnanograma por dose.

Um possível componente adicional da vacina final quese origina nas preparações de antígeno surge da purificaçãosubtotal dos antígenos. Portanto, podem estar presentespequenas quantidades proteínas de B. pertussis, C.difteriae, C. tetani e/ou S. cerevisiae e/ou de DNAgenômico.

Quando for usado um componente de IPV, ele geralmenteterá crescido em células Vero. A vacina finalpreferivelmente contém menos de 50 pg/ml de DNA de célülaVero, por exemplo, menos de 50 pg/ml de DNA de célula Veroque tenha um comprimento > 50 pares de base.

Adjuvantes

As composições imunogênicas preferidas da invençãoincluem um adjuvante, e esse adjuvante preferivelmentecompreende um ou mais sais de alumínio e, particularmente,um adjuvante de fosfato de alumínio e/ou um adjuvante dehidróxido de alumínio. Componentes antigênicos usados parapreparar as composições da invenção preferivelmente incluemadjuvantes de alumínio antes de serem usados, ou seja, elessão "pré-misturados" ou «pré-adsorvidos» ao(s)adjuvante(s).

Adjuvantes de alumínio atualmente em uso sãotipicamente denominados adjuvantes de «hidróxido dealumínio» ou como de «fosfato de alumínio». Esses são nomesde conveniência, no entanto, uma vez que nenhum deles é umadescrição precisa do verdadeiro composto químico que estapresente (por exemplo, veja o capítulo 9 da referência 61) .A invenção pode usar qualquer um dos sais de "hidróxido" ou"fosfato" que são usados geralmente como adjuvantes.

Os adjuvantes conhecidos como "hidróxido de alumínio"são tipicamente sais de oxihidróxido de alumínio, que sãonormalmente pelo menos parcialmente cristalinos. 0oxihidróxido de alumínio, que pode ser representado pelafórmula AlO(OH), pode ser distinguido de outros compostosde alumínio, tais como hidróxido de alumínio Al(OH)3, porespectroscopxa por infravermelho (IR), em particular pelapresença de uma banda de adsorção a 1.070 cm"1 e um forteressalto a 3.090-3.100 cm"1 (capítulo 9 da ref. 61).

Os adjuvantes conhecidos como "fosfato de alumínio"são tipicamente hidroxifosfatos de alumínio, quefreqüentemente também contêm uma pequena quantidade desulfato. Eles podem ser obtidos por precipitação, e ascondições de reação e as concentrações durante aprecipitação podem influenciar o grau de substituição dehidroxila por fosfato no sal. Hidroxifosfatos geralmentepossuem uma proporção molar de P04/Al entre 0,3 e 0,99.Hidroxifosfatos podem ser distinguidos do AlPO4 exato pelapresença de grupos hidroxila. Por exemplo, uma banda deespectro IR a 3.164 cm"1 (por exemplo, quando aquecido até200°C) indica a presença de hidroxilas estruturais(capítulo 9 da ref. 61).

A proporção molar de P04/Al3+ de um adjuvante defosfato de alumínio será geralmente entre 0,3 e 1,2, depreferência, entre 0,8 e 1,2 e, mais pref erivelmente, 0,95± 0,1. 0 fosfato de alumínio será geralmente amorfo,particularmente para sais de hidroxifosfato. Um adjuvantetipico é hidroxifosfato de alumínio amorfo, com umaproporção molar de P04/A1 entre 0,84 e 0,92, incluído a 0,6mg Al3Vml- O fosfato de alumínio será geralmenteparticulado. Os diâmetros típicos das partículas estão nafaixa de 0,5-20 pm (por exemplo, cerca de 5-10 pm) apósqualquer adsorção de antígeno.

O PZC do fosfato de alumínio está inversamenterelacionado ao grau de substituição de hidroxila porfosfato, e esse grau de substituição pode variar,dependendo das condições de reação e da concentração dereagentes usada para a preparação do sal por precipitação.PZC também é alterado pela mudança da concentração de íonsfosfato livres em solução (mais fosfato = PZC mais ácido)ou por adição de um tampão como, por exemplo, um tampão dehistidina (torna o PZC mais básico). Fosfatos de alumíniousados de acordo com a invenção terão geralmente um PZCentre 4,0 e 7,0, mais preferivelmente entre 5,0 e 6,5, porexemplo, cerca de 5,7.

Uma solução de fosfato de alumínio usada para prepararuma composição da invenção pode conter um tampão (porexemplo, um tampão de fosfato ou um tampão de histidina ouum tampão Tris), mas isso nem sempre é necessário. Asolução de fosfato de alumínio é preferivelmente estéril esem pirogênio. A solução de fosfato de alumínio podeincluir íons fosfato aquosos livres, por exemplo, presentesem uma concentração entre 1,0 e 20 mM, de preferência,entre 5 e 15 mM e, mais pref erivelmente, cerca de 10 mM. Asolução de fosfato de alumínio também pode compreendercloreto de sódio. A concentração de cloreto de sódio está,de preferência, na faixa de 0,1 a 100 mg/ml (por exemplo,0,5-50 mg/ml, 1-20 mg/ml, 2-10 mg/ml) e é, maispref erivelmente, de cerca de 3 ± 1 mg/ml. A presença deNaCl facilita a medida correta do pH, antes da adsorção deantigenos.

Métodos de tratamento e administração da vacina

A invenção envolve a co-administração de antigenos dediferentes patógenos. Esses antigenos podem ser co-administrados na forma de uma vacina combinada (ou seja,uma única composição aquosa contendo múltiplos antigenos,de tal forma que sua administração imunize simultaneamenteum indivíduo contra múltiplos patógenos). Alternativamente,eles podem ser co-administrados separadamente a um paciente(por exemplo, em locais diferentes), mas substancialmenteao mesmo tempo,, por exemplo, durante a mesma consulta comum médico ou com outro profissional de saúde. Dessa forma,os diferentes antigenos podem ser para utilização separada,simultânea ou seqüencial, ou podem ser misturados antes douso. A administração de diferentes vacinas conjugadassimultaneamente, mas em locais diferentes, pode evitar osefeitos potenciais de supressão observados quando osconjugados compartilham uma proteína transportadora.

As composições da invenção são adequadas paraadministração a pacientes humanos, e a invenção fornece ummétodo para despertar uma resposta imunológica em umpaciente, que compreende a etapa de administração de umacomposição da invenção ao paciente.

A invenção também fornece uma composição da invençãopara uso na Medicina.

A invenção também fornece o uso de: (a) um sacarídeocapsular conjugado do sorogrupo C de N. meningitidis e (b)um antígeno acelular de B. pertussis, na fabricação de ummedicamento para a imunização de um paciente.

A invenção também fornece o uso de: (a) um sacarídeocapsular conjugado do sorogrupo C de N. meningitidis e (b)um antígeno de poliovírus inativado, na fabricação de ummedicamento para a imunização de um paciente.

A invenção também fornece o uso de: (a) um sacarídeocapsular conjugado do sorogrupo C de N. meningitidis, (b)um sacarídeo capsular conjugado de S. pneumoniae, (c) umantígeno de superfície do vírus da hepatite B, nafabricação de um medicamento para a imunização de umpaciente.

A invenção também fornece o uso de: (a) um sacarídeocapsular conjugado do sorogrupo C de N. meningitidis, (b)um sacarídeo capsular conjugado de S. pneumoniae, (O umantígeno de poliovírus inativado, na fabricação de ummedicamento para a imunização de um paciente.

A invenção também fornece o uso de: (a) um sacarídeocapsular conjugado do sorogrupo C de N. meningitidis; (b)um sacarídeo capsular conjugado de S. pneumoniae, (O umantígeno de poliovírus inativado, e (d) um antígenoacelular de B. pertussis, na fabricação de um medicamentopara a imunização de um paciente.

A invenção também fornece o uso de: (a) um sacarídeocapsular do sorogrupo C de N. meningitidis, conjugado a umaprimeira proteína transportadora, (b) um sacarídeo capsularde conjugado de S. pneumoniae a uma segunda proteínatransportadora, na fabricação de um medicamento para aimunização de um paciente, caracterizado pelo fato de que aprimeira proteína transportadora e a segunda proteínatransportadora são iguais.

As composições imunogênicas da invenção são, depreferência, vacinas, para uso na redução ou prevenção dedoenças como, por exemplo: meningite bacteriana, incluindomeningite meningocócica, meningite pneumocócica e meningitepor Hib; hepatite viral, incluindo infecções por HBV e HAV;difteria; tétano, ou trismo; coqueluche, ou pertussis; e/oupoliomielite.

Pacientes preferidos para a recepção das composiçõesda invenção possuem menos de 2 anos de idade, depreferência com idade entre 0-12 meses. Um grupo depacientes em particular tem idade entre 1 e 3 meses, e nãorecebeu previamente uma vacina meningocócica conjugada.Outro grupo de pacientes tem idade entre 3 e 5 meses, erecebeu previamente uma imunização com diftérico toxóide.

A fim de se obter eficácia plena, um esquema típico deimunização primária para uma criança pode envolver aadministração de mais de uma dose. Por exemplo, as dosespodem ser administradas em: 0, 2 e 4 meses (com o tempo 0sendo a primeira dose); 0, 1 e 2 meses; 0 e 2 meses; 0, 2 e8 meses etc. A primeira dose (tempo 0) pode seradministrada em torno de 2 meses de idade ou, algumas vezes(por exemplo, em um esquema de 0-2-8 meses), em torno de 3meses de idade.

As composições também podem ser usadas como doses dereforço, por exemplo, para crianças, no segundo ano devida.

As composições da invenção podem ser administradas porinjeção intramuscular, por exemplo, no braço, perna ou nasnádegas. Quando for usada uma administração separada,particularmente quando há duas composições separadas aserem co-administradas, tipicamente se injetam ascomposições em membros opostos, por exemplo, são injetadasno braço esquerdo e no braço direito.

Quando as composições da invenção incluírem umadjuvante com base em alumínio, pode ocorrer sedimentaçãodos componentes durante estocagem. A composição deve,portanto, ser agitada antes da administração a um paciente.A composição agitada será geralmente uma suspensão brancaturva.

Embalagem das composições da invenção

As composições da invenção podem ser colocadas emrecipientes para uso. Recipientes adequados incluem frascose seringas descartáveis (de preferência aquelas estéreis).

Quando uma composição da invenção for embalada emfrascos, esses serão feitos, de preferência, de vidro ou deum material plástico. 0 frasco, de preferência, éesterilizado antes de a composição ser adicionada a ele.Para se evitar problemas com pacientes sensíveis ao látex,os frascos, de preferência, são lacrados com uma tampa semlátex. 0 frasco pode incluir uma dose única de vacina, oupode incluir mais de uma dose (um frasco "multidoses") , porexemplo, 10 doses. Quando se utiliza um frasco multidoses,cada dose deve ser retirada com uma agulha e uma seringaestéreis sob condições assépticas rigorosas, tendo-se ocuidado de evitar a contaminação do conteúdo do frasco.Frascos preferidos são feitos de vidro incolor.

Um frasco pode ter uma tampa (por exemplo, um Luerlock) adaptada de tal forma que uma seringa pré-preenchidapossa ser inserida na tampa, o conteúdo da seringa possaser expelido dentro do frasco (por exemplo, parareconstituir material liofilizado nele contido), e oconteúdo do frasco possa ser removido de volta para aseringa. Após remoção da seringa do frasco, pode-se entãoanexar uma agulha, e a composição poderá então seradministrada a um paciente. A tampa localiza-se, depreferência, dentro de um lacre ou cobertura, de tal formaque o lacre ou cobertura tenha que ser removido, antes quese possa ter acesso à tampa.

Quando a composição for embalada em uma seringa, aseringa normalmente não terá uma agulha anexada a ela,embora uma agulha separada possa ser fornecida com aseringa para montagem e uso. Preferem-se agulhas desegurança. São típicas as agulhas de 2,54 centímetros/23gauge, 2,54 centímetros/25 gauge e 1,588 centímetro/25gauge. As seringas podem ser fornecidas com rótulosdestacáveis nos quais podem ser impressos o número do lotee a data de validade do conteúdo, para facilitar o controledos registros. 0 êmbolo da seringa tem, de preferência, umarolha para evitar que o êmbolo seja removido acidentalmentedurante a aspiração. As seringas podem ter uma tampa e/ouêmbolo de borracha de látex. As seringas descartáveiscontêm uma dose única de vacina. A seringa terá geralmenteuma tampa de proteção para lacrar a ponta, antes da fixaçãode uma agulha, e a tampa de proteção é feita, depreferência, de borracha de butil. Caso a seringa e aagulha sejam embaladas separadamente, a agulhapreferivelmente será adaptada com uma proteção de borrachade butil. Prefere-se uma borracha de butil cinza. Asseringas preferidas são aquelas comercializadas sob o nomecomercial "Tip-Lok"™.

Quando é usado um recipiente de vidro (por exemplo,uma seringa ou um frasco), prefere-se usar um recipientefeito de um vidro de borossilicato, e não de um vidro sodalime.

A invenção fornece vários kits. Os kits podemcompreender composições imunogênicas separadas, e essascomposições podem ser misturadas entre si de formaextemporânea no momento do uso, para gerar uma vacinacombinada, ou podem ser administradas separadamente (porexemplo, em locais diferentes), mas substancialmente aomesmo tempo. Dessa forma, as composições no kit podem serpara uso simultâneo separado ou seqüencial, ou podem sermisturadas. Quando as composições tiverem que sermisturadas, prefere-se que pelo menos uma delas estejainicialmente em forma aquosa, e que uma esteja inicialmentena forma liofilizada, de tal modo que a composiçãoliofilizada seja reativada pela composição aquosa nomomento do uso. Quando estiver presente um componenteliofilizado, ele tipicamente compreenderá um ou maisantígenos sacaridicos conjugados.

Composições típicas para inclusão separada em kits dainvenção incluem: uma composição que compreende um antígenoconjugado de MenC; uma composição que compreende umantígeno pneumocócico conjugado; uma composição que incluiantígenos acelulares de B. pertussis e/ou um antígeno depoliovírus inativado; e uma composição que inclui umconjugado de Hib.

Uma composição que inclua antígenos acelulares de B.pertussis tipicamente também incluirá um toxóide diftéricoe um toxóide tetânico. Ela também pode incluir um ou maisde: um HBsAg e/ou IPV. Dessa forma, uma composição do kitpoderia ser uma composição pentavalente D-T-Pa-HBsAg-IPV,ou um componente totalmente líquido D-T-Pa-HBsAg-IPV-Hib.

Cada composição no kit pode ser estocadaseparadamente, por exemplo, cada uma em um frasco ouseringa separada. Também é possível fornecer uma composiçãoem uma seringa e as outras em frascos. Quando oscomponentes tiverem que ser misturados de formaextemporânea no momento do uso, um arranjo alternativo parater recipientes separados será o uso de um recipientemulticâmaras. Uma seringa multicâmaras permite que ascomposições individuais sejam mantidas separadamentedurante a estocagem, mas que sejam misturadas ã medida queo êmbolo da seringa é ativado.

Quando não são fornecidas na forma de kit, ascomposições da invenção podem estar na forma totalmentelíquida.

Esquemas de imunização

Como mencionado anteriormente, um esquema típico deimunização primária para uma criança envolve aadministração de mais de uma dose. Por exemplo, as dosespodem ser administradas em: O, 2 e 4 meses (com o tempo Osendo a primeira dose); O, 1 e 2 meses; O e 2 meses etc. Aprimeira dose (tempo 0) é administrada normalmente em tornode 2 meses de idade.

Constatou-se que um esquema de 2 doses (por exemplo,com intervalo de 2 meses) não é inferior a um esquema maisdispendioso de 3 doses (por exemplo, com intervalo de 1mês). As vacinas não meningocócicas normais podem seradministradas entre as 2 doses do esquema de 2 doses.

Dessa forma, a invenção fornece um método detratamento de um paciente que recebeu previamente: (i) umadose única de um sacarideo capsular do sorogrupo C de N.meningitidis e (ii) mais de uma dose de um ou mais de umantígeno acelular de B. pertussis, antígeno de superfíciedo vírus da hepatite B e/ou poliovírus inativado, quecompreende a administração ao paciente de uma doseadicional de um sacarideo capsular do sorogrupo C de N.meningitidis. A dose adicional de MenC pode opcionalmenteser co-administrada com outros antígenos, como descritoanteriormente.

A invenção também fornece um método para despertar umaresposta imunológica em um paciente, que compreende asetapas de: (i) co-administração ao paciente de um sacarideocapsular do sorogrupo C de N. meningitidis e um ou mais deum antígeno acelular de B. pertussis, antígeno desuperfície do vírus da hepatite B e/ou poliovírusD inativado; e, a seguir, (ii) administração ao paciente deum ou mais de um antígeno acelular de B. pertussis,antígeno de superfície do vírus da hepatite B e/oupoliovírus inativado, sem a co-administração de umsacarideo capsular do sorogrupo C de N. meningitidis; e(iü) co-administração ao paciente de um sacarideo capsulardo sorogrupo C de N. meningitidis e um ou mais de umantígeno acelular de B. pertussis, antígeno de superfíciedo vírus da hepatite B e/ou poliovírus inativado. As etapas(i); (ii) e (iü) são realizadas, de preferência, em0 seqüência, em intervalos de pelo menos um mês. Elas podemser realizadas em torno de 2 meses de idade, em torno de 3meses e em torno de 4 meses. O método pode convenientementeser implementado pela administração de: (i) uma primeiravacina e uma segunda vacina; (ii) a segunda vacina, mas nãoa primeira vacina; e (iii) a primeira vacina e a segundavacina.

Em um esquema alternativo, as etapas (ii) e (iii)podem ser invertidas, ou seja, um paciente recebe a vacinado sorogrupo C na primeira e na segunda visita, mas não naterceira visita.

A invenção também fornece o uso de um sacarideocapsular conjugado do sorogrupo C de N. meningitidis nafabricação de um medicamento para a imunização de umpaciente, em que o paciente recebeu previamente: (i) ηdoses de um sacarideo capsular do sorogrupo C de N.meningitidis e (ii) mais de η doses de um ou mais de umantigeno acelular de B. pertussis, antigeno de superfíciedo vírus da hepatite B e/ou poliovírus inativado. 0 valorde η é, de preferência, 1.Geral

O termo "que compreende" engloba "que inclui", além de"que consiste", por exemplo, uma composição "quecompreende" X pode consistir exclusivamente em X, ou podeincluir algo adicional, por exemplo, X + Y.

A palavra "substancialmente" não exclui"completamente", por exemplo, uma composição que é"substancialmente livre" de Y pode ser completamente livrede Y. Quando necessário, a palavra "substancialmente" podeser omitida da definição da invenção.

O termo "cerca de", em relação a um valor numérico x,significa, por exemplo, χ ± 10%.

A menos que especificamente definido, um processo quecompreende uma etapa de mistura de dois ou mais componentesnão necessita de nenhuma ordem de mistura específica. Dessaforma, os componentes podem ser misturados em qualquerordem. Quando houver três componentes, dois componentespoderão ser combinados entre si, e depois a combinação podeser combinada ao terceiro componente etc.

Quando um antigeno for descrito como sendo "adsorvido"a um adjuvante, prefere-se que pelo menos 50% (por peso)daquele antigeno seja adsorvido, por exemplo, 50%, 60%,70%, 80%, 90%, 95%, 98% ou mais. Prefere-se que tanto otoxóide diftérico quanto o toxóide tetânico sejamtotalmente adsorvidos, ou seja, nenhum seja detectável nosobrenadante. A adsorção total de HBsAg também é preferida.

As quantidades de conjugados são geralmente fornecidasem termos de massa de sacarídeo (ou seja, a dose doconjugado (veículo + sacarídeo) como um todo é maior do quea dose definida) a fim de evitar variações em função daescolha do veículo.

Proteínas transportadoras típicas para uso emconjugados são toxinas bacterianas, por exemplo, toxinadiftérica [por exemplo, veja o capítulo 13 da ref. 1; refs.62-65] (ou seu mutante de CRM197 [66-69]) e toxinatetânica, normalmente na forma de toxóide (por exemplo,obtido por tratamento com uma substância química deinativação, por exemplo, formalina ou formaldeído) . Outrasproteínas transportadoras adequadas incluem, sem limitação,proteína da membrana externa de N. meningitidis [70] ,peptídeos sintéticos [71,72], proteínas de choque térmico[73,74], proteínas de pertussis [75, 76], citocinas [77],linfocinas [77] , hormônios [77] , fatores de crescimento[77] , proteínas artificiais que compreendem múltiplosepitopos de célula T CD4 + humana de vários antígenosderivados de patógenos [78] , por exemplo, N19 [79] ,proteína D de H. influenzae [80-82] , pneumolisina [83] ,proteína da superfície pneumocócica PspA [84], proteínas decaptação de ferro [85], toxina A ou B de C. difficile [86]etc .

Quando forem usados materiais animais (eparticularmente bovinos) na cultura de células, elesdeverão ser obtidos de fontes que sejam livres deencefalopatias espongiformes transmissíveis (TSEs) e, emparticular, livres de encefalopatia espongiforme bovina(BSE).

MODOS PARA A PRÁTICA DA INVENÇÃO

Deve-se entender que a invenção será descrita apenascomo exemplo, e que podem ser feitas modificações mantendo-se dentro do escopo e espírito da invenção.

Três doses em 2, 4 e 6 meses

Foi projetado um estudo para avaliar a segurança e aimunogenicidade da vacina MENJUGATE™ (sacarídeo capsularconjugado meningocócico do sorogrupo C) quando administradajunto com a vacina PREVN AR™ (sacarídeo capsularpneumocócico conjugado heptavalente) e/ou com o produtoINFANRIX-HEXA™ (D-T-Pa-HBsAg-IPV-Hib).

Novecentos e noventa e dois bebês, com idade de 2meses na inscrição, foram distribuídos em um de três gruposde vacinação, recebendo: (1) PREVN AR™ mais INFANRIX - HEXATM; ·(2) MENJUGATE™ mais INFANRIX - HEXA™; ou (3) MENJUGATEtm maisPREVNAR™ mais INFANRIX-HEXA™. As vacinas foramadministradas concomitantemente, mas em locais de injeçãoseparados. 0 estudo foi realizado com as vacinas sendoadministradas nas idades de 2, 4 e 6 meses.

Eritema local, endurecimento e edema foramligeiramente menores no grupo 3 do que no grupo 2(tipicamente em torno de 5% menos reações); a sensibilidadefoi a mesma em ambos os grupos. As reações sistêmicas foramsimilares em todos os grupos, mas foram tipicamente menoresno grupo 2, embora a menor incidência de diarréia tenhaocorrido no grupo 3. Em todos os casos, no entanto, asvacinas foram bem toleradas e seguras.

Para avaliar a imunogenicidade, foram medidas astitulações bactericidas (BCA) contra MenC em duas amostrasde sangue de cada indivíduo: a primeira foi retirada nomomento da primeira dose de vacina; a segunda foi retirada4-6 semanas apôs a terceira dose. O ensaio de BCA utilizoucomplemento humano.

Os resultados imunológicos do estudo foram incertos,porque Buttery e cols. [11] relataram previamente queconjugados meningocócicos do sorogrupo C eramimunologicamente incompatíveis com conjugados pneumocócicosmultivalentes. Em contraste, no entanto, o estudo dapresente invenção mostrou que 100% dos indivíduos nosgrupos (2) e O) obtiveram uma titulação bactericidaprotetora (ou seja, uma elevação das titulações de BCA >1:8 nas duas amostras de sangue) contra o sorogrupo C de N.meningitidis. Além disso, as GMTs (titulações da médiageométrica) entre ambos os grupos foram quase idênticas,mostrando que nenhum dos vários componentes diferentes deMenC da vacina interfere com a imunogenicidade do conjugadode MenC.

Os resultados de BCA foram os seguintes:

<table>table see original document page 64</column></row><table>

Imunogenicidade dos componentes de INFANRIX HEXA naofoi prejudicada. As titulações de anticorpos na segundaamostra de sangue contra o D, T, P1 Hib e HBsAg forammedidas por ELISA. As titulações de anticorpos contrapoliovírus foram medidas pelo teste padronizado deneutralização. Os resultados foram os seguintes:

<table>table see original document page 64</column></row><table><table>table see original document page 65</column></row><table>

A imunogenicidade dos componentes de PREVNAR nao toisignificativamente prejudicada. As percentagens depacientes com titulações de ELISA > 0,15 Mg/ml na segunda

<table>table see original document page 65</column></row><table>

Dessa forma, a resposta imunológica contra o sacarideode MenC não foi inferior nos grupos (2) e (3), comparadacom o grupo (1). A resposta imunológica contra os antigenoshexavalentes foi similar nos três grupos. Dessa forma, aresposta imunológica contra o sacarídeo pneumocócico nãofoi inferior no grupo (3), comparada com o grupo (1). Essesresultados são consistentes com a referência 3.Comparação entre os esquemas de 2 doses e de 3 doses

INFANRIX-HEXA™ pode ser administrada de acordo com umesquema primário de 3 doses em 2, 3 e 4 meses de idade.Como as vacinas conjugadas podem ser inibidas pela co-administração com antigenos acelulares de pertussis, foiprojetado um estudo para avaliar a segurança e aimunogenicidade da vacina MENJUGATE™ quando administradajunto com o produto INFANRIX-HEXA™ com esse esquema de 3doses. 0 conjugado meningocócico foi co-administrado comtodas as três doses hexavalentes (ou seja, em 2, 3 e 4meses de idade) ou foi administrado apenas com a primeira eterceira (ou seja, em 2 e 4 meses). As respostas de memóriacontra o conjugado meningocócico foram avaliadas pelaadministração de uma mistura não conjugada de sacarídeosdos sorogrupos A e C na idade de 12 meses, ao mesmo tempoem que uma dose adicional de INFANRIX - HEXA™, com coletasde sangue 7 ou 28 dias mais tarde.

Duzentos e quarenta e um bebês, com idade de 7-11semanas na inscrição, foram distribuídos em um de quatrogrupos de vacinação, recebendo: (D MENJUGATE™ maisINFANRIX-HEXA™ de acordo com o esquema de 3 doses, seguidopor A/C não conjugado e INFANRIX-HEXA™ em 12 meses, comcoleta de sangue 1 semana mais tarde; (2) o mesmo que ogrupo (1), mas com coleta de sangue 28 dias após o A/C nãoconjugado; (3) MENJUGATE™ mais INFANRIX-HEXA™ de acordocom o esquema de 2 doses, com INFANRIX-HEXA™ também sendoadministrado em 3 meses de idade, seguido por A/C nãoconjugado e INFANRIX-HEXA™ em 12 meses, com coleta desangue 1 semana mais tarde; (4) o mesmo que o grupo (3),mas com coleta de sangue 2 8 dias após o A/C não conjugado.Quando amais de uma dose ao mesmo tempo, elas eramadministradas concomitantemente, mas em locais de injeçãoseparados.

Não foram observadas diferenças clinicamenterelevantes em termos de efeitos colaterais locais entre osgrupos de tratamento e vacinas. Após a vacinação com MenPSA/C e a quarta injeção da vacina hexavalente em 12 meses,proporções maiores dos indivíduos em cada grupoapresentaram reações locais, comparada com após a primeira,segunda e terceira injeção com vacina hexavalente ouMenjugate™. A maioria das reações locais ocorreu em atédois dias após a injeção, e essas foram classificadas comoleves ou moderadas. Nenhum indivíduo relatou uma reaçãolocal grave ao conjugado meningocócico.

A incidência de reações sistêmicas despertadas, quandosomadas para todas as injeções, foi similar entre os quatrogrupos de tratamento. Na 2a visita, que permitiu acomparação das reações sistêmicas após co-administração deMenjugate™ com vacina hexavalente (grupos 1 e 2) com asreações após a vacina hexavalente isoladamente (grupos 3 e4), não foram observadas diferenças clinicamenterelevantes. A maioria das reações sistêmicas ocorreu entre6 horas e 2 dias após a injeção. Nenhum indivíduoapresentou temperatura retal > 40,5°C.

Um mês após a imunização primária com Menjugate , aspercentagens de pacientes vacinados que exibem titulaçõesprotetoras do SBA (titulação > 8) foram de 98% e 100% paraos esquemas de imunização de 2 doses e 3 doses,respectivamente. As titulações protetoras do SBApersistiram em 89% (grupo de 2 doses), versus 95% (grupo de3 doses) em 8 meses pós-vacinação. Ambos os esquemas deimunização induziram um aumento de mais de 100 vezes nastitulações da média geométrica do SBA medidas um mês após 2ou 3 imunizações.

Mediante uma única dose de ataque de MenPS A/C, osindivíduos imunizados primariamente com um dos esquemas deLO imunização de Menjugate™ apresentaram um aumento de 15vezes ou mais das GMTs do SBA, comparadas com as do pré-ataque. Isso eqüivale a um aumento de 1,09 vez observadoquando uma dose única de MenPS A/C era administrada embebês de 12 meses de idade não vacinados em um grupo decontrole histórico de um estudo prévio. O SBA determinado28 dias após o ataque com GMTs de MenPS A/C (grupos 2 e 4)tendeu a ser maior, comparado com aqueles determinados no7° dia (grupos 1 e 3) .

Des.a forma, os efeitos colaterais e outros perfis desegurança foram similares entre todos os quatro grupos devacinação.

As GMTs basais dos anticorpos contra antígeno desuperfície de hepatite B foram similares nos indivíduos nosgrupos dos esquemas de 2 doses e 3 doses (8,61 UI/l e 5,93UI/l)· Com um mês após as imunizações primárias, essastitulações aumentaram 52 vezes e 96 vezes, respectivamente,e concentrações de anticorpos protetores * 10 UI/l estavampresentes em 99% dos indivíduos de qualquer um dos grupos.

Dessa forma, duas injeções de conjugado meningocócico,administradas em 2 e 4 meses de idade, sensibilizaram osistema imunológico quanto à memória imunológica em bebêssaudáveis. Noventa e oito por cento dos indivíduos nosgrupos de 2 doses e 100% dos indivíduos no grupo de 3 dosesalcançaram uma titulação de hBCA > 1:8. A respostaimunológica induzida pelo esquema de 2 doses pode serconsiderada não-inferior àquela induzida pelo esquema de 3doses. Noventa e nove por cento de todos os indivíduosdesenvolveram titulações > 10 UI/1 em resposta aocomponente de hepatite B da vacinação hexavalente,demonstrando, dessa forma, não interferência com qualquerum dos esquemas meningocócicos de 2 doses ou de 3 doses.

Em conclusão, um esquema de 2 doses de conjugadomeningocócico, com intervalo de 2 meses em bebês abaixo 1ano de idade, foi imunogênico e induziu memóriaimunológica, quando administrado junto com a vacinahexavalente. 0 esquema de imunização de 2 doses para MenCnão é inferior ao esquema de 3 doses. Não há evidências deuma imunogenicidade reduzida dos antígenos D, T, aP, IPVfHBV ou Hib co-administrados.

Pode ser dada uma dose de reforço de conjugadomeningocócico a esses pacientes no segundo ano de vida.imunização heptavalente MenC D-T-aP-HBV-IPV-Hib de bebês

Reforçando os resultados descritos acima, a referência87 relata um estudo do uso concomitante da vacina conjugadade meningococo C (NEISVAC-C™, com um veículo de toxóidetetânico) com combinações baseadas em DTaP, de acordo comesquemas de duas vacinações, uma das quais incluíavacinação contra hepatite B no nascimento. Bebês saudáveisforam distribuídos aleatoriamente para receber: (i) D-T-aP-HBV-1PV/Hib (INFANRIX HEXA™) em 2, 4, e 6 meses ou (ü)HBV no nascimento, seguido por INFANRIX HEXA™ em 2 e 6meses mais D-T-aP-IPV/Hib em 4 meses. Em ambos os grupos,duas doses de conjugado MenC-TT foram co-administradas em 2e 4 meses, e comparadas com 3 doses do conjugado MenC-CRMl97 (MENINGITEC™) co-administradas em 2, 4 e 6 mesescom INFANRIX HEXA™.

Todos os pacientes que receberam NEISVAC-C tiveramconcentrações soro-protetoras de anticorpos anti-PRP 1 mêsapós a terceira dose de vacina, e todos tiveram titulaçõesde SBA-MenC > 1:8 após a segunda dose de NEISVAC-C . Essasrespostas não eram inferiores àquelas observadas após 3doses de DTaP-HBV-IPV/Hib e MENINGITEC™. As GMCs doanticorpo anti-PRP foram significativamente maiores nospacientes vacinados com NEISVAC-C™ do que nos pacientesvacinados com MENINGITEC™. As respostas imunológicas atodos os outros antígenos co-administrados não foramalteradas, com taxas de soro-proteção/soro-positividade >98,1% nos pacientes vacinados com NEISVAC-C .

Todos os esquemas foram bem tolerados, sem diferençasnos efeitos colaterais entre os grupos de estudo.

Dessa forma, concluiu-se que a co-administração de D-T-aP-HBV-IPV/Hib ou D-T-aP-IPV/Hib com duas doses de umconjugado de MenC com um veículo de toxóide tetânico erasegura, bem tolerada e imunogênica, sem prejuízo daresposta aos antígenos co-administrados.

REFERÊNCIAS (cujos conteúdos são aqui incorporados porreferência)

[1] Vaccínes. (eds. Plotkin e Orenstein). 4a edição,004, ISBN: 0-7216-9688-0.

[2] Dagan e cols. (2004) Infect. Immun. 72: 5.383-91.[3] Tejedor e cols. (2004) Pediatr. Infect. Dis. J23 :1.109-15.

[4] Halperin e cols. (2002) Clin. Invest. Med. 25:243-51.

[5] Schmitt e cols. (2003) Vaccine 21: 3.653-62.

[6] Shinefield e cols. (1999) Pediatr. Infect. Dis. J.18: 757-63.

[7] Slack e cols. (2001) J. Infect. Dis. 184: 1.617-20 .

[8] Tiehmann-Sehumann e cols. (2005) Pediatr. Infect.Dis. 24: 70-77.

[9] WO 02/00249.

[10] WO 02/080965.

[11] Buttery e cols. (2005) JAMA 293: 1.751-8.

[12] WO 99/42130.

[13] Jones (2001) Curr. Opin. Investig. Drugs 2: 47-49 .

[14] Costantino e cols. (1992) Vaccine 10: 691-8.

[15] Lieberman e cols. (1996) JAMA 275: 1.499-503.

[16] WO 02/058737.

[17] WO 03/007985.

[18] Rennels e cols. (2002) Pediatr. Infect. Dis. J21: 978-979.

[19] Campbell e cols. (2002) J. Infect. Dis 1861.848-1.851.

[20] Arakere e Fraseh (1991) Infect. Inmun. 5 9: 4.3494 .356 .

[21] Miehon e cols. (2000) Dev. Biol. 103: 151-160.

[22] Rubinstein e Stein (1998) J. Iwmunol. 141: 4.357332

[23] WO 2005/033148.

[24] W.H.O. Tech. Rep. Ser. 594: 51, 1976.

[25] Watson (2000) Pediatr. Infect. Dis. J. 19: 331-

[26] Rubin (2000) Pediatr. Clin. North Am. 47: 269-285, v.

[27] Jedrzejas (2001) Microbiol. Mol. Biol. Rev. 65:187-207.

[28] Zielen e cols. (2000) Infect. Immun. 68: 1.435-1.440.

[29] Darkes e Plosker (2002) Paediatr. Drugs 4: 609-630.

[30] WO 98/51339.

[31] Rappuoli e cols. (1991) TIBTECH 9 : 232-238.

[32] Módulo 6 do "WHO-s The immunological basis forimmunization series" (Robertson).

[33] Sesardic e cols. (2001) Biologicals 29: 107-22.

[34] NIBSC código: 98/560.

[35] Módulo 1 do "WHO's The immunological basis forimmunization series" (Galazka).

[36] NIBSC código: 69/017.

[37] NIBSC código: DIFT.

[38] Sesardic e cols. (2002) Biologicals 30: 49-68.

[39] NIBSC código: 98/552.

[40] NIBSC código: TEFT.

[41] Vanlandschoot e cols. (2005) J. Gen. Virol. 86:323-31.

[42] Patente Européia 0460716; Patente U.S. 5.349.059.

[43] Crabeel e cols. (1983) Proc. Natl. Acad. Sei. USA78: 5.026-30.[44] Cabezón e cols. (1984) Proc. Natl. Acad. Sei. USA81: 6.594-8.

[45] van der Straten e cols. (1986) DNA 5: 129-36.

[46] Harford e cols. (1987) Postgraduate MedicaiJournal 63(supl. 2): 65-70.

[47] WO 03/066094.

[48] WO 93/24148.

[49] Ramsay e cols. (2001) Lancet 357 (9.251): 195-196.

[50] Lindberg (1999) Vaccine 17 Supl. 2: S28-36.

[51] Buttery e Moxon (2000) J.R. Coll Physicians Lond34: 163-168.

[52] Ahmad e Chapnick (1999) Infect Dis. Clin. NorthAm. 13: 113-133, vii.

[53] Goldblatt (1998) J. Med. Microbiol. 47: 563-567.

[54] Patente Européia 0477508.

[55] Patente U.S. 5.306.492.

[56] WO 98/42721.

[57] "Conjugate Vaccines" (eds. Cruse e cols.) ISBN3805549326, particularmente vol. 10: 48-114.

[58] Hermanson (1996) «Bioconjugate Techniques" ISBN:0123423368 ou 012342335X.

[59] WO 96/40242.

[60] Nony e cols. (2001) Vaccine 27: 3.645-51.

[61] "Vaccine Design: The Subunit and AdjuvantApproach" (eds. Powell e Newman) Plenum Press 1995 (ISBN 0-306-44867-X).

[62] Patente U.S. 4.709.017.

[63] WO 93/25210.

[64] Patente U.S. 5.917.017.

[65] WO 00/48638.[66] Del Guidice e cols. (1998) Molecular Aspects ofMedicine 19: 1-70.

[67] Anônimo (Janeiro de 2002) Research Disclosure,453077.

[68] Anderson (1983) Infect. Iwmun. 39(1): 233-238.

[69] Anderson e cols. (1985) J. Clin. Invest 76(1):52-59.

[70] EP-A-0372501.

[71] EP-A-0378881.

[72] EP-A-0427347.

[73] WO 93/17712.

[74] WO 94/03208.

[75] WO 98/58668.

[76] EP-A-0471177.

[77] WO 91/01146.

[78] Falugi e cols. (2001) Eur J. Iwmunol. 31: 3.816-3.824 .

[79] Baraldo e cols. (2004) .Infect. Iwmun. 72(8):4.884-7 .

[80] EP-A-0594610.

[81] Ruan e cols. (1990) J. Immunol. 145: 3.379-3.384.

[82] WO 00/56360.

[83] Kuo e cols. (1995) Infect. Imwun. 63: 2.706-13.

[84] WO 02/091998.

[85] WOOl/72337.

[86] WO 00/61761.

[87] Tejedor e cols. (2006) Pediatr. Infect. Dis. J25713-20 .LISTAGEM DE SEQÜÊNCIA

<110>

<120>

<130>

<140><141 >

<150><151>

<1 50><1 51 >

<1 60>

<1 70>

<21 0><211 ><21 2><213>

<400>Met 6lu1

Ala GlyAsp Ser

Leu Gly50

Cys Pro65

Ile Ile

LeU Leu

Ser Thr

Gln Gly130

Gly Asn1 45

Tyr Leu

Val ProSer Ala

NOVARTIS VACCINES S DIAGNOSTICS GmbH & Co. KGVACINAÇÃO MÚLTIPLA OUE INCLUI fvlENINGOCOCO DO SOROGRUPO CP044644W0

PCT/ IB2006/.01 -09-2006

Val Ser210

Tyr Ile225

USSN 60/_

01 -09-2005

USSN 60/_

16-12-2005

SeqWin99, versão 1.021

226PRT

virus Hepatitis B1

Asn Ile Thr Ser Gly Phe Leu Gly Pro Leu Leu Val Leu Gln5 10 15

Phe Phe Leu Leu Thr Arg Ile Leu Thr Ile Pro Gln Ser Leu20 25 30

Trp Trp Thr Ser Leu Asn Phe Leu Gly Gly Ser Pro Val Cys35 40 45

Gln Asn Ser Gln Ser Pro Thr Ser Asn His Ser Pro Thr Ser55 60

Pro Ile Cys Pro Gly Tyr Arg Trp Met Cys Leu Arg Arg Phe70 75 80

Phe Leu Phe Ile Leu Leu Leu Cys Leu Ile Phe Leu Leu Val85 90 95

Asp Tyr Gln Gly Met Leu Pro Val Cys Pro Leu Ile Pro Gly100 105 110

Thr Thr Asn Thr Gly Pro Cys Lys Thr Cys Thr Thr Pro Ala115 120 125

Asn Ser Met Phe Pro Ser Cys Cys Cys Thr Lys Pro Thr Asp135 140

Cys Thr Cys Ile Pro Ile Pro Ser Ser Trp Ala Phe Ala Lys150 155 160

Trp Glu Trp Ala Ser Val Arg Phe Ser Trp Leu Ser Leu Leu165 170 175

Phe Val Gln Trp Phe Val Gly Leu Ser Pro Thr Val Trp Leu180 185 190

Ile Trp Met Met Trp Tyr Trp Gly Pro Ser Leu Tyr Ser Ile195 200 205

Pro Phe Ile Pro Leu Leu Pro Ile Phe Phe Cys Leu Trp Val215 220<210> 2

<211> 1060

<212> DNA

<213> Saccharotnyces cerevisiae

<400> 2

aagcttacea gttetcacac ggaacaccacctattttcga ggaecttgte acettgagecacttgatgca aattcccaaa gctaataacattgacctett aacaggttca gaegcgactgtacctgaaaa aaacgaatat atactagcgtctgaegcgga ggccaaggca aaaagattccgaataaaaaa cacgcttttt cagttcgagtatacgtaaat aattaatagt agtgattttcttaattctgc tgtaacccgt acatgcccaacatcgtaggt gtctgggtga acagtttattctttttaagc tggcatccag aaaaaaaaagccaaccatca gttcataggt ccattctcttaggcaaaaaa cgggcacaac cteaatggagacaaggcaat tgacccacgc atgtatctatgctctctctg atttggaaaa agctgaaaaacccctacttg actaataagt atataaagacatttcttaaa cttcttaaat tctacttttacaagaactta gtttcgaata aacacacata

<210> 3

<211> 1063

<212> DNA

<213> Saccharomyees cerevisiae

taatggaeac acattcgaaa tactttgacc 60

caagagagcc aagatttaaa ttttcctatg 120

tgcaagaeac gtacggtcaa gaagacatat 180

cctcatcagt aagacccgtt gaaaagaa.ct 240

tgaatgttag cgtçaacaac aagaagttta 300

ttgattacgt aagggagtta gaateatttt 360

ttatcattat eaataetgcc atttcaaaga 420

ctaactttat ttagtcaaaa aattageett 480

aataggggge gggttacaca gaatatataa 540

cctggcatcc actaaatata atggagcccg 600

aatcccagca ccaaaatatt gttttcttca 660

agcgcaacta cagagaacag gggcacaaac 720

tgatgcaacc tgcctggagt aaatgatgac 780

ctcattttct tacaccttct attaccttct 840

aaaggttgaa aecagttccc tgaaattatt 900

ggtaggtatt gattgtaatt ctgtaaatct 960

tagttagtct tttttttagt tttaaaacac 1020

aacaaacaaa 1060

<40Q> 3

aagcttacea gttetcacac ggaacaccac taatggaeac acattcgaaa tactttgacc

ctattttcga ggaccttgtc accttgagcc caagagagcc aagatttaaa ttttcctatg

acttgatgca aattcccaaa gctaataaca tgcaagaeac gtacggtcaa gaagacatat

ttgacctett aacaggttca gaegcgactg cctcatcagt aagacccgtt gaaaagaact

tacctgaaaa aaacgaatat atactagcgt tgaatgttag cgtcaacaac aagaagttta

ctgacgcgga ggccaaggca aaaagattcc ttgattacgt aagggagtta gaateatttt

gaataaaaaa cacgcttttt cagttcgagt ttatcattat caatactgcc atttcaaaga

atacgtaaat aattaatagt agtgattttc ctaactttat ttagtcaaaa aattageett

ttaattctgc tgtaacccgt acatgcccaa aataggggge gggttacaca gaatatataa

catcgtaggt gtctgggtga acagtttatt cctggcatcc actaaatata atggagcccg

ctttttaagc tggcatccag aaaaaaaaag aatcccagca ccaaaatatt gttttcttca

ccaaccatca gttcataggt ccattctctt agcgcaacta cagagaacag gggcacaaac

aggcaaaaaa cgggcacaac ctcaatggag tgatgcaacc tgcctggagt aaatgatgac

acaaggcaat tgacccacgc atgtatctat ctcattttct tacaccttct attaccttct

gctctctctg atttggaaaa agctgaaaaa aaaggttgaa accagttccc tgaaattatt

cccctacttg actaataagt atataaagac ggtaggtatt gattgtaatt ctgtaaatct

atttcttaaa cttcttaaat tctactttta tagttagtct tttttttagt tttaaaacaccaagaactta gtttcgaata aacacacata aacaaacaaa atg

601201802403003604 2048054060066072078084090096010201063

Claims (38)

1. Composição imunogênica caracterizada porcompreender um sacarídeo capsular conjugado deStreptococcus pneumoniae, um sacarídeo capsular conjugadodo sorogrupo C de Neisseria meningitidis e um antigeno depoliovirus inativado, em que a composição está em formaaquosa.

2. Composição, de acordo com a reivindicação 1,caracterizada por compreender ainda um antigeno desuperfície do vírus da hepatite B.

3. Composição, de acordo com a reivindicação 1 ou 2,caracterizada pelo fato da composição inclui um adjuvantede hidróxido de alumínio e um adjuvante de fosfato dealumínio.

4. Kit, caracterizado por compreender um primeirocomponente imunogênico e um segundo componente imunogênico,em que: (a) o primeiro componente imunogênico compreendeuma formulação aquosa de um sacarídeo capsular conjugado deStreptoeoeeus pneumoniae; e (b) o segundo componenteimunogênico compreende um sacarídeo capsular conjugado deNeisseria meningitidis sorogrupo C.

5. Composição ou kit, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 1, 2, 3 ou 4 , caracterizado pelo fato de queo sacarídeo capsular do sorogrupo C de N. meningitidis é OAc+.

6. Kit, de acordo com a reivindicação 4 ou 5,caracterizado pelo fato de que o primeiro componente nãoinclui um adjuvante de fosfato de alumínio.

7. Kit, de acordo com a reivindicação 4, 5 ou 6,caracterizado pelo fato de que o segundo componente nãoinclui um adjuvante de fosfato de alumínio.

8. Composição ou kit, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6 ou 7, caracterizado pelofato de que o conjugado do sorogrupo C de N. meningitidisnão é adsorvido a um adjuvante de fosfato de alumínio.

9. Composição ou kit, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 1, 2, 3, 4, 5 ou 6, caracterizado pelo fatode que o conjugado do sorogrupo C de N. meningitidis éadsorvido a um adjuvante de fosfato de alumínio.

10. Kit, de acordo com qualquer uma das reivindicações 4,5, 6, 7, 8 ou 9, caracterizado pelo fato de que osacarídeo capsular do sorogrupo C de N. meningitidis estána forma liofilizada.

11. Kit, de acordo com qualquer uma das reivindicações 4,5, 6, 7, 8, 9 ou 10, caracterizado pelo fato de que oprimeiro componente inclui um ou mais de: um toxóidediftérico, um toxóide tetânico, antígenos de B. pertussis,um antígeno de superfície do vírus da hepatite B e umantígeno de poliovírus inativado.

12. Kit, de acordo com qualquer uma das reivindicações 4 ,5, 6 7 8 9 ou 10, caracterizado pelo fato de que osegundo componente inclui um ou mais de: um toxóidediftérico, um toxóide tetânico, antígenos de B. pertussis,um antígeno de superfície do vírus da hepatite B e umantígeno de poliovírus inativado.

13. Kit, de acordo com a reivindicação 11 ou 12,caracterizado pelo fato de que o antígeno de poliovírusinclui antígeno do poliovírus do Tipo 1, poliovírus do Tipo 2 e poliovírus do Tipo 3.

14. Kit, de acordo com a reivindicação 11 ou 12,caracterizado pelo fato de que o antígeno de superfície dovírus da hepatite B está na forma de partículas que incluemuma matriz lipídica que compreende fosfolipídeos,fosfatidilinositol e polissorbato 20.

15. Kit, de acordo com qualquer uma das reivindicações-11, 12, 13 ou 14, caracterizado pelo fato de que o antígenode superfície do vírus da hepatite B possui a seqüência deaminoácidos ID. DE SEQ. N° : 1.

16. Composição ou kit, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13,-14 ou 15, caracterizado pelo fato de que um sacarídeocapsular de S. pneumoniae e um sacarídeo capsular dosorogrupo C de N. meningitidis são conjugados à mesmaproteína transportadora.

17. Composição ou kit, de acordo com a reivindicação-16, caracterizado pelo fato de que a mesma proteínatransportadora é um toxóide tetânico.

18. Composição ou kit, de acordo com a reivindicação-16, caracterizado pelo fato de que a mesma proteínatransportadora é uma proteína D de Haemophilus influenzae.

19. Composição ou kit, de acordo com a reivindicação-16, caracterizado pelo fato de que a mesma proteínatransportadora é uma CRMl97.

20. Composição ou kit, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13,-14, 15, 16, 17, 18 ou 19, caracterizado pelo fato de que oconjugado de S. pneumoniae possui uma proporção desacarídeo:proteína (p/p) entre 1:10 e 10:1.

21. Composição ou kit, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13,-14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20, caracterizado pelo fato deque o conjugado de N. meningitidis possui uma proporção desacarídeo:proteína (p/p) entre 1:10 e 10:1.

22. Composição ou kit, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13,-14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 ou 21, caracterizado pelo fatode que o conjugado de N. meningitidis está presente entre 1μg e 20 pg (medidos como sacarídeo) por dose.

23. Composição ou kit, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13,-14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 ou 22, caracterizado pelofato de que o conjugado de S. pneumoniae está presenteentre 1 pg e 20 pg (medidos como sacarídeo) por dose.

24. Composição ou kit, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13,-14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22 ou 23, caracterizadopelo fato de que a composição inclui antígenos sacarídicospara pelo menos os sorotipos 6B, 14, 19F e 23F de S.pneumoniae.

25. Composição ou kit, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13,-14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 ou 24, caracterizado,por compreender 2 -fenoxietanol.

26. Composição ou kit, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13,-14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 ou 25,caracterizado pelo fato de que a concentração de quaisquersais de alumínio é menos de 3 mg/ml.

27. Composição ou kit, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13,-14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 ou 26,caracterizado por ser usado em Medicina.

28. Método para despertar uma resposta imunológica emum paciente, caracterizado por compreender a etapa deadministração ao paciente de uma composição de qualquer umadas reivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12,-13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26 ou 27.

29. Uso de (a) uma formulação aquosa de um sacarídeocapsular conjugado de Streptococcus pneumoniae, e (b) umsacarídeo capsular conjugado do sorogrupo C de N.meningitidis, caracterizado pelo fato de ser para afabricação de um medicamento para a imunização de umpaciente.

30. Composição imunogênica caracterizada porcompreender: (a) um sacarídeo capsular conjugado de S.pneumoniae, (b) um sacarídeo capsular conjugado de uma cepaOAc+ do sorogrupo C de N. meningitidis, e (O um antígenode superfície do vírus da hepatite B.

31. Kit, caracterizado por compreender pelo menos umprimeiro componente imunogênico e um segundo componenteimunogênico, em que: (a) um dos componentes compreende umsacarídeo capsular conjugado de S. pneumoniae, (b) um doscomponentes compreende um sacarídeo capsular conjugado de-3 uma cepa OAc+ do sorogrupo C de N. meningitidis, (O um doscomponentes compreende um antígeno de superfície do vírusda hepatite B.

32. Composição imunogênica caracterizada porcompreender: (a) um sacarídeo capsular conjugado de S.-0 pneumoniae, (b) um sacarídeo capsular conjugado de uma cepaOAc+ do sorogrupo C de N. meningitidis, e (c) antígeno depoliovírus inativado.

33. Kit, caracterizado por compreender pelo menos umprimeiro componente imunogênico e um segundo componenteimunogênico, em que: (a) um dos componentes compreende umsacarideo capsular conjugado de S. pneumoniae, (b) um doscomponentes compreende um sacarideo capsular conjugado deuma cepa OAc+ do sorogrupo C de N. meningitidis, (c) um doscomponentes compreende um antígeno de poliovírus inativado.

34. Kit, caracterizado por compreender um primeirocomponente imunogênico e um segundo componente imunogênico,em que: (a) o primeiro componente imunogênico compreendeuma formulação aquosa de um toxóide diftérico, um toxóidetetânico e um antígeno acelular de B. pertussis; e (b) osegundo componente imunogênico compreende um sacarídeocapsular conjugado de uma cepa OAc+ do sorogrupo C de N.meningitidis, na forma liofilizada.

35. Kit, caracterizado por compreender um primeirocomponente imunogênico e um segundo componente imunogênico,em que: (a) o primeiro componente imunogênico compreende umsacarídeo capsular conjugado de uma cepa OAc+ do sorogrupoC de N. meningitidis; e (b) o segundo componenteimunogênico compreende um antígeno acelular de B. pertussise um antígeno de poliovírus inativado.

36. Kit, caracterizado por compreender um primeirocomponente imunogênico, um segundo componente imunogênico eum terceiro componente imunogênico, em que: (a) o primeirocomponente imunogênico compreende um sacarídeo capsularconjugado de uma cepa OAc+ do sorogrupo C de N.meningitidis; (b) o segundo componente imunogênicocompreende um antígeno acelular de B. pertussis e/ou umantígeno de poliovírus inativado; e (c) o terceirocomponente imunogênico compreende um sacarídeo capsularconjugado de S. pneumoniae.

37. Kit, caracterizado por compreender um primeirocomponente imunogênico e um segundo componente imunogênicoe, opcionalmente, um terceiro componente, em que: (a) oprimeiro componente imunogênico compreende um sacarideocapsular conjugado de uma cepa OAc+ do sorogrupo C de N.meningitidis, mas não inclui um adjuvante de fosfato dealumínio; (b) o segundo componente imunogênico compreendeum antígeno acelular de B. pertussis e/ou um antígeno depoliovírus inativado; e (O o terceiro componente opcionalcompreende um sacarídeo capsular conjugado de S.pneumoniae.

38. Composição imunogênica caracterizada porcompreender um sacarídeo capsular conjugado de uma cepaOAc+ do sorogrupo C de N. meningitidis, um antígenoacelular de B. pertussis e um antígeno de poliovírusinativado.