DK173330B1

DK173330B1 - Pyrido(3,2,1-ij)-1,3,4-benzoxadiazin-derivater, en fremgangsmåde til fremstilling deraf, disse forbindelser til anvendelse

Info

Publication number: DK173330B1
Application number: DK198704772A
Authority: DK
Inventors: Masahiro Aoki; Miyako Kamata; Tatsuo Ohtsuka; Nobuo Shimma; Kazuteru Yokose
Original assignee: Hoffmann La Roche
Priority date: 1986-09-12
Filing date: 1987-09-11
Publication date: 2000-07-24
Also published as: CN1017800B; AU7811487A; CZ281195B6; DZ1124A1; NZ221681A; CZ660487A3; JPH0826030B2; NO169125B; JPH0819120B2; CA1336905C; JPH07138256A; JPH0696578B2; PH23930A; KR880003954A; ZA876636B; MC1850A1; IE872444L; MX8302A; NO169125C; HUT47294A

Description

i DK 173330 B1

Den foreliggende opfindelse angår hidtil ukendte pyri-; do[3,2,1-ij]-1,3,4-benzoxadiazin-derivater, en fremgangsmåde til fremstilling deraf, disse forbindelser til anvendelse som farmaceutisk aktive stoffer, især til behandling af profylak-5 se af infektionssygdomme, anvendelse af forbindelser til fremstilling af medikamenter til behandling og profylakse af infektionssygdomme, pharmaceutiske præparater indeholdende disse og mellemprodukter, der er nyttige ved fremgangsmåden.

Europæisk patentansøgning nr. 0 047 005, finsk fremlæggelses-10 skrift nr. 76345, japansk patentansøgning nr. 57-88182 og japansk patentansøgning nr. 57-203085 beskriver pyrido[l,2,3-de][1,4]benzoxazinderivater med antibakteriel aktivitet.

De foreliggende opfindelse angår pyrido[1,2,3-ij]-1,3,4-benzoxadiazinderivater, som bl,a. adskiller sig fra de kendte 15 forbindelser ved at forbindelserne ifølge opfindelsen har en bredspektret antibakteriel effekt og er derfor nyttige i præparater til behandlingen eller profylaksen af infektionssygdomme .

Den foreliggende opfindelse angår især hidtil ukendte pyri-20 do[3,2,1-ij]-1,3,4-benzoxadiazin-derivater ifølge krav 1, som er anvendelige som virksomme ingredienser i antibakterielle midler.

De forskellige radikaler med formlen I, hvilke radikaler er defineret ovenfor, kan beskrives mere detaljeret som følger; 25 henvisninger til udtrykket "lavere" skal betegne en carbonkæ-de, fortrinsvis indeholdende op til ialt 7 carbonatomer, med mindre andet er angivet.

R er som defineret i krav 1.

Særligt foretrukne radikaler repræsenteret ved R i formlen 30 (I) er 1-piperazinyl, 4-methyl-1-piperazinyl, 4-(4-aminoben- zyl)-1-piperazinyl, 4-acetyl-l-piperazinyl, morpholino, 4-(methoxy-1-piperidyl, 4-hydroxy-1-piperidyl, 3-amino-l- 2 DK 173330 B1 pyrrolidinyl, 3- (aminomethyl)-1-pyrrolidinyl, 3-[(methylami-no)methyl]-1-pyrrolidinyl, 3-[(ethylamino)methyl]-1-pyrroli- - dinyl, 3-methoxy-1-pyrrolidinyl, 3-chlor-l-pyrrolidinyl, 1-imidazolyl, 4-methyl-1-imidazolyl og lignende.

5 De hidtil ukendte pyrido[3,2,1-ij]-1,3,4-benzoxadiazin-deri-vater med formlen (I) og deres farmaceutisk acceptable salte og hydrater eller solvater deraf og af disse salte fremstilles i overensstemmelse med den foreliggende opfindelse ved en fremgangsmåde, som er ejendommelig ved, de træk som er defi-10 neret i krav 14.

Fremgangsmåde A:

Som nævnt ovenfor kan de ønskede forbindelser vindes ved, at en forbindelse med den almene formel

O

(ud — ^CH, hvor X' er et halogenatom, og tilstedeværende carboxygrupper 15 eventuelt er beskyttede, omsættes med en amin med den almene formel R, hvor R er som defineret ovenfor, om nødvendigt efterfulgt af fjernelse af et beskyttende radikal.

Ved fremgangsmåde A er forbindelsen med formlen (III), som anvendes som udgangsforbindelse, en hidtil ukendt forbindel-20 se, og denne kan fx fremstilles i overensstemmelse med nedenstående reaktionsskema a) eller b).

ψ 3 DK 173330 B1 a) reduktion H5C2OCH-C(COOC2H5)2 χ·^Υ^νο2 -* χ,/Υ^««2 -L·*->

OH OH

(A) (B) H5C2OOC. H5C2OOC.

XV^ti \^οοο2*5 VCO°C2H5 x,JULmJ OH-beskyttelse ^ ^ j J cykllserlng

OH H OR' H

(C) (D)

XwVC00C2H5 x-^vVcooc2H5 Χ.ΛΛν^ > x,XINI _^-^sk_ytteIse> OR' Or· Ah2 (E) (F) *WVCOOC2H5 Χννν°00(:2Η5 alkylering afbeskyttelse T I -► Ir· i r2 ---*

OR' NHR" w ”"R

R" (G) (Η) χύτ”-·" OH nhr? O i .

A>’ (Va) (Illa) 4 DK 173330 B1 b) h5c2ooc cooc h oh Χίχ Y xrry 2H5 cyklisering OH-beskyttelse (C) (J)

<?H O

X^i.COOC2H5 Xv^A^COOCjHs åminering N-fa.eskvthel

Ar· Ar’ nh2 (E) < F) xvVyCOOC2H5 x^A-COOC2H5 alkylering JLm> afbeskvtte.1 se _ x y , -> x'^y^y -> OR* NHR" Ar· lu2 Å" ’ (G) (H) xwVC00Rm " Y ^ cyklisering ΑηΙηε?^ >Vr2'

R4 RJ

(Va) (IIla) . DK 173330 B1 hvor X' er som defineret ovenfor; R' er et beskyttende radikal såsom benzyl, methoxybenzyl, methoxymethyl, methoxy-ethoxymethyl, tetrahydropyranyl, allyl, t-butyl, t-butyldi-methylsilyl, acetyl, benzoyl og lignende; R" er et beskytten-5 de radikal, såsom formyl, acetyl, trifluoracetyl, benzoyl, ethoxycarbonyl, 2,2,2-trichlorethoxycarbonyl, phenoxycarbo-nyl, benzyloxycarbonyl, t-butoxycarbonyl og lignende, og R" er et hydrogenatom eller et ethylradikal.

Opfindelsen angår således også mellemprodukter med formlen 10 III, som defineret i krav 10.

Hvis forbindelsen med formlen (IV) indeholder en amino- eller monoalkylaminosubstituent, kan substituenten, hvis det ønskes, være beskyttet med et aminobeskyttende radikal såsom formyl, acetyl, trifluoracetyl, benzoyl, ethoxycarbonyl, 15 2,2,2-trichlorethoxycarbonyl, phenoxycarbonyl, benzyloxy carbonyl, t-butoxycarbonyl og lignende.

Reaktionen mellem forbindelsen med formlen (III) og aminen med formlen (IV) eller det hensigtsmæssigt beskyttede amin kan, hvis det ønskes, udføres med eller uden et opløsnings-20 middel, fortrinsvis ved forhøjet temperatur i tilstrækkelig lang tid til, at reaktionen i det væsentlige tilendebringes.

Den passende reaktionstemperatur er i området fra ca. 30°C til ca. 200°C, fortrinsvis fra 80°C til 150°C for at opnå en tilstrækkelig hurtig reaktionshastighed.

25 Reaktionen udføres fortrinsvis i nærværelse af en syre-accep-tor såsom triethylamin, pyridin, picolin, N,N-dimethylanilin, 1,8-diazabicyclo [5.4.0]undec-7-en, 1,4-diazabicyclo [2.2.2]oc-tan, alkalimetalhydroxider, alkalimetalcarbonater og lignende. Alternativt kan der anvendes et overskud af aminen med 30 formlen (IV) som syre-acceptoren.

Hensigtsmæssige opløsningsmidler til denne reaktion er non-reaktive opløsningsmidler såsom acetonitril, alkoholer, dimethylsulfoxid, dimethylformamid, dimethylacetamid, pyri- 6 DK 173330 B1 din, picolin, lutidin, N,N'-dimethylpropylenurinstof og lignende. Blandinger af to eller flere opløsningsmidler kan også anvendes.

Den beskyttende radikal kan om ønsket fjernes efter reaktio-5 nen ved fremgangsmåder, der er kendte af fagfolk. For eksempel, kan formylradikalet fjernes ved syre- eller basehydrolyse, fortrinsvis basehydrolyse, og benzyloxycarbonyl-radikalet kan fjernes ved hydrogenolyse.

Udgangsmaterialerne med formlen (III) kan eksemplificeres som 10 følger: 9,10-difluor-3-methyl-7-oxo-2,3-dihydro-7H-pyrido[3,2,1-ij]- 1,3,4-benzoxadiazin-6-carboxylsyre.

ethyl-9,10-difluor-3-methyl-7-oxo-2,3-dihydro-7H-pyrido-[3,2,1-ij]-1,3,4-benzoxadiazin-6-carboxylat, I 15 benzyl-9,10-difluor-3-methyl-7-oxo-2,3-dihydro-7H-pyrido- [3,2,1-ij]-1,3,4-benzoxadiazin-6-carboxylat og lignende.

Aminen med formlen (IV), som anvendes i den ovenstående reaktion, er fx piperazin, 4-methylpiperazin, 4-hydroxypi-peridin, 4-methoxypiperidin, 3-[(methylamino)methyl]pyrroli-20 din, 3-[ (ethylamino)methyl]pyrrolidin, 3-methoxypyrrolidin, 3-aminopyrrolidin, 3-(benzyloxycarbonylamino)pyrrolidin, imidazol eller 4-methylimidazol.

? DK 173330 B1

Fremgangsmåde B:

Den ønskede forbindelse kan vindes ved, at en forbindelse med den almene formel X R1 6 (V) R“N^ T I 2 I OH NHR^ ft5 hvor tilstedeværende amino-, hydroxy- og/eller carboxygrupper 5 kan være beskyttede, omsættes med formaldehyd eller paraformaldehyd og om ønsket, efterfulgt af fjernelse af et beskyttende radikal.

Ved fremgangsmåde B er forbindelsen med formlen V som udgangsforbindelse en hidtil ukendt forbindelse, og denne 10 forbindelse kan fremstilles i overensstemmelse med det ovenstående reaktionsskema a) eller b), eller ved at omsætte en forbindelse (H) eller (Va) med en amin med formlen (IV).

Opfindelsen angår således også mellemprodukter med formlen V, som defineret i krav II.

15 Reaktionen kan, om ønsket, udføres i et opløsningsmiddel såsom dioxan, tetrahydrofuran, acetonitril, chloroform, dimethylformamid, dimethylsulfoxid, N,N'-dimethylpropylen-urinstof, eddikesyre og lignende. Blanding af to eller flere opløsningsmidler kan også anvendes.

20 Reaktionen kan, om nødvendigt, udføres i nærværelse af en syrekatalysator såsom eddikesyre, saltsyre, svovlsyre, me-thansulfonsyre, p-toluensulfonsyre, pyridinium p-toluensulfo-nat, jern (III) chlorid, zincchlorid, chlortrimethylsilan, Nafion-H (perfluorineret harpikssulfonsyre: Aldrich Chemical 3 DK 173330 B1

Co., Inc.), Amberlyst-15 (stærkt sur, makroretikulær harpiks: Aldrich Chemical Co., Inc.) og lignende.

Reaktionstemperaturen kan varieres inden for et relativt bredt område. Generelt udføres reaktionen ved en temperatur 5 på mellem 20°C og 150°C.

I en foretrukket aspekt af fremgangsmåden, der er tilvejebragt ved den foreliggende opfindelse, anvendes ca. 1 mol eller moloverskud af formaldehyd hhv. paraformaldehyd.

10 Det amino- eller monoalkylaminobeskyttende radikal kan om ønsket fjernes efter reaktionen ved fremgangsmåder, der er kendt af fagfolk. Fx kan formylradikalet fjernes ved syreeller basehydrolyse, fortrinsvis basehydrolyse, og benzyloxy-carbonylradikalet kan fjernes ved hydrogenolyse.

15 Udgangsmaterialerne med formlen (V) kan eksemplificeres som følger: 6,7-difluor-Θ-hydroxy-1-(methylamino)-4-oxo-l,4-dihydro-3-quinolincarboxylsyre, ethyl-6,7-difluor-8-hydroxy-1-(methylamino)-4-oxo-l, 4-dihy-20 dro-3-quinolincarboxylat, i benzyl-6,7-difluor-8-hydroxy-l-(methylamino)-4-oxo-l, 4-dihy-dro-3-quinolincarboxylat, 6-fluor-8-hydroxy-7-(1-imidazolyl)-1-(methylamino)-4-oxo-l,4-d i hydro-3-quinolincarboxy1syre, 25 ethyl-6-fluor-8-hydroxy-7- (l-imidazolyl)-1-(methylamino)-4-oxo-1,4-dihydro-3-quinolincarboxylat, benzyl-6-fluor-8-hydroxy-7- (l-imidazolyl) -1- (methylamino) -4-oxo-1,4-dihydro-3-quinolincarboxylat, 9 DK 173330 B1 6- fluor-8-hydroxy-l-(methylamino)-7-(4-methyl-1-piperazinyl) - 4-oxo-1,4-dihydro-3-quinolincarboxylsyre, 7- [3- [ (benzyloxycarbonylethylami.no) methyl] -1-pyrrolidinyl] -6-fluor-8-hydroxy-1-(methylamino)-4-oxo-l,4-dihydro-3-quinolin- 5 c a rboxy1syre, 7- [3- (benzyloxycarbonylami.no) -1-pyrrolidinyl] -6-fluor-8-hydroxy-1-(methylamino)-4-oxo-l, 4-dihydro-3-quinolincarboxyl-syre, 7-[3-[(benzyloxycarbonylmethylamino)methyl]-4-methyl-1-pyrro-10 lidinyl]-6-fluor-8-hydroxy-1-(methylamino)-4-oxo-l,4-dihydro-3 -quinolincarboxylsyre, 7-[3-[(benzyloxycarbonylamino)methyl]-4-chlor-1-pyrrolidi-nyl]-6-fluor- 8-hydroxy-1-(methylamino)-4-oxo-l,4-dihydro-3-quinolincarboxylsyre og lignende.

15 Fremgangsmåde C: Når det ønskes at fremstille forbindelser med formlen I, hvor R betegner «70 ί v Λ -N N- (VIII) \_/ kan den ønskede forbindelse fremstilles ved, at den tilsvarende N-usubstituerede forbindelse med formlen I, omsættes 20 med et acetyleringsmiddel, fx eddikesyreanhydrid som beskrevet i eksempel 50.

Fremgangsmåde D: Når det ønskes at fremstille en forbindelse med formlen I, hvori R er gruppen = 25 kan disse forbindelser fremstilles ved lavere alkylering af den tilsvarende non-alkylerede forbindelse. O-alkyleringen 10 DK 173330 B1 kan udføres ved omsætning med en forbindelse med den almene formel ch3-y hvor Y er en fraspaltelig enhed.

5 Som fraspaltelig enhed Y kan fx nævnes halogenatomer såsom chlor, brom, iod, acyloxyradikaler såsom acetoxy, lavere alkansulfonyloxyradikaler såsom methansulfonyloxy, arylulfo-nyloxyradikaler såsom p-toluensulfonyloxy; eventuelt nitrere-de phenoxyradikaler såsom phenoxy, 4-nitrophenoxy; eller 10 succinimidooxy eller phthalimidooxy.·

Reaktionen kan om ønsket udføres i et opløsningsmiddel såsom dimethylformamid, dimethylacetamid, dimethylsulfoxid, N,N'-dimethylpropylenurinstof, dioxan, tetrahydrofuran, pyridin og lignende. Blandinger af to eller flere opløsningsmidler kan 15 også anvendes.

Reaktionen udføres fortrinsvis i nærværelse af en syreaccep-tor såsom triethylamin, pyridin, N,N-dimethylanilin, 1,4-diazabicyclo[2.2.2]octan, l,8-diazabicyclo[5.4.0]undec-7-ene, natriumhydrid, alkalimetalhydroxider, alkalimetalcarbonater ] 20 og lignende.

Reaktionstemperaturen kan varieres inden for et relativt bredt område. Generelt udføres reaktionen ved en temperatur på mellem ca. 0°C og 180°C, fortrinsvis mellem 0°C og 110°C.

Ved udførelse af fremgangsmåden, der tilvejebringes ifølge 25 den foreliggende opfindelse, anvendes 1 til 4 mol, fortrinsvis 1 til 2 mol methyleringsmiddel, baseret på ét mol af 3-hydroxy-l-piperidylforbindelsen.

Methyleringsmidlet kan fx være iodmethan.

En protonacceptor såsom et alkalimetalhydrid, fx. natrium-30 hydrid, tilsættes hensigtsmæssigt.

X1 DK 173330 B1

Fremgangsmåde F: Når det ønskes at fremstille en forbindelse med formlen I med en fri aminogruppe, kan disse forbindelser fremstilles fra de tilsvarende forbindelser med formlen I med denne gruppe i 5 beskyttet form.

Aminobeskyttende grupper er fx. lavere alkanoyl såsom acetyl; benzoyl; en alkoxycarbonylgruppe, fx t-butoxycarbonyl eller ethoxycarbonyl; en substitueret alkoxycarbonylgruppe, fx. trichlorethoxycarbonyl; phenoxycarbonyl; benzyloxycarbonyl; 10 p-nitrobenzyloxycarbonyl; en aralkylgruppe såsom trityl eller benzhydryl; eller en halogen-alkanoylgruppe såsom trifluor-acetyl.

De aminobeskyttende grupper kan fraspaltes ved syrehydrolyse (fx. t-butoxycarbonyl- eller tritylgruppen) eller ved basisk 15 hydrolyse (fx. trifluoracetylgruppen). Benzyloxycarbonyl og p-nitrobenzyloxycarbonyl fjernes ved hydrogenolyse.

Aminobeskyttende grupper, som kan fraspaltes ved syrehydrolyse, fjernes fortrinsvis ved hjælp af en lavere alkancar-boxylsyre, som kan halogeneres. Især anvendes myresyre eller 20 trifluoreddikesyre. Syrehydrolysen udføres normalt ved stuetemperatur, selv om den kan udføres ved en let forhøjet eller let nedsat temperatur (fx. en temperatur i området fra ca.

0°C til +40°C). Beskyttende grupper, som kan spaltes under basiske betingelser, hydrolyseres normalt med fortyndet 25 vandig kaustisk alkali ved 0°C til 30°C.

Fremgangsmåde G: Når det ønskes at fremstille en forbindelse med formlen I, hvor R- er «-o DK 173330 B1 kan denne forbindelse fremstilles ved halogenering af den tilsvarende hydroxy-substituerede forbindelse, )

Halogeneringsmidlet er fortrinsvis et thionylhalogenid, især thionylchlorid; eller phosphorholdigt trichlorid, phosphor-5 holdigt oxychlorid eller phosphorholdigt pentachlorid. Reaktionstemperaturen er fortrinsvis på mellem ca. 0°C og 80°C. Tilstedeværende carboxygrupper beskyttes fortrinsvis, fx. benzyleres, og frigøres derefter om ønsket igen, fx. ved hydrogenering (fjernelse af benzyl).

10 Fremgangsmåde H: Når det ønskes at fremstille en forbindelse med formlen I, hvor R er

«v-Q^-O

kan denne forbindelse fremstilles ved at reducere nitrogrupperne af en tilsvarende nitro-substitueret forbindelse med 15 formlen I. Reduktionen kan udføres ved hydrogenering i nærværelse af en ædelmetalkatalysator såsom palladium på kul. Reaktionen udføres hensigtsmæssigt i vand eller en lavere alkanol fx. methanol eller ethanol, om ønsket i blanding med andre opløsningsmidler, der er opløselige deri. Reaktions-20 temperaturen ligger normalt mellem ca. 10°C og ca. 40°C, fortrinsvis ved ca. stuetemperatur.

Fremgangsmåde K:

Fremstilling af de farmaceutisk acceptable salte af forbindelserne med formlen I eller hydraterne eller solvaterne af 25 saltene kan udføres på kendt måde per se; fx ved at en carboxylsyre med formlen I omsættes med en ækvivalent mængde af den ønskede base eller omvendt, at en fri base med formlen I omsættes med en organisk eller uorganisk syre. Reaktionen : udføres hensigtsmæssigt i et opløsningsmiddel såsom vand 30 eller et organisk opløsningsmiddel (fx. ethanol, methanol, acetone og lignende). Temperaturen, ved hvilken saltdannelsen 13 DK 173330 B1 udføres, er ikke kritisk. Saltdannelsen udføres generelt ved stuetemperatur, men den kan udføres ved en temperatur, der er lidt højere eller lavere end stuetemperatur, fx i området 0°C til +50°C.

5 Eksempler på farmaceutisk acceptable syrer, der er anvendelige ved den ovenstående fremgangsmåde er salt-, brom-, svovl-, phosphor-, salpeter-, myre-, eddike-, propion-, succin-, glycol-, mælke-, æble-, vin-, citron-, ascorbin-, malein-, hydroxymalein-, phenyleddike-, benzo-, 4-aminobenzo-10 , anthranilin, 4-hydroxybenzo-, salicyl-, aminosalicyl-, nicotin-, methansulfon-, ethan$ulfon-, hydroxyethansulfon-, benzensulfon-, p-toluensulfon-, glucon-, glucuron-, galac-turon-, asparagin- og glutaminsyre; methionin, tryptophan, lysin, arginin og lignende.

15 Syreadditionssaltene kan omdannes til fri form ved behandling med en base såsom et metalhydroxid, ammoniak og lignende.

Basesaltene af forbindelserne med den almene formel (I) kan fremstilles ved at en forbindelse med den almene formel (I) omsættes med en metalbase eller amin såsom et alkali- eller 20 jordalkalimetalhydroxid, eller en organisk amin. Eksempler på de metaller, der anvendes som kationer, er natrium, kalium, magnesium, calcium og lignende. Eksempler på aminer er di-ethanolamin, dibenzylethylendiamin, cholin, ethylendiamin og lignende.

25 Syreadditionssaltene eller basesaltene af forbindelserne med den almene formel (I) adskiller sig fra den tilsvarende frie form ved visse fysiske egenskaber såsom opløselighed i vand.

Forbindelserne med den almene formel (I) og deres farmaceutisk acceptable salte kan eksistere i uopløste såvel som 30 opløste former, herunder hydrerede former. Hydreringen kan udføres automatisk i løbet af fremstillingsprocessen eller kan ske gradvist som et resultat af et oprindeligt vandfrit produkts hygroskopiske egenskaber. Til den kontrollerede 14 DK 173330 B1 fremstilling af et hydrat kan et helt eller delvist vandfrit produkt udsættes for en fugtig atmosfære (fx. ved ca. +10°C til +40°C). Solvater med farmaceutisk acceptable opløsningsmidler såsom ethanol kan vindes under fx. krystallisering.

5 Visse forbindelser, der tilvejebringes ved den foreliggende opfindelse, har asymmetriske centre. Den rene D-isomer, rene L-isomer samt blandinger deraf, herunder racemiske blandinger, skal også betragtes som værende omfattet af den foreliggende opfindelse.

10 Forbindelserne, der er tilvejebragt ifølge den foreliggende opfindelse, udviser en bred antibakteriel aktivitet mod grampositive og gram-negative organismer og Mycoplasma og kan anvendes som midler til behandling og profylakse af infek- i tionssygdomme. In vitro- og in vivo-antibakterielle aktivite-15 ter af forbindelserne ifølge den foreliggende opfindelse er vist som følger: 1. In vitro antibakterielle aktiviteter

De in vitro antibakterielle aktiviteter af de repræsentative pyrido [3,2,1-ij]-1,3,4-benzoxadiazin-derivater ifølge den ? 20 foreliggende opfindelse blev testet ved standard agar-for tyndingsmetoden [se: Chemotherapy, 22, 1126 (1974)]. Deres minimale inhibitoriske koncentrationer (MIC, i μg/ml) er vist i tabel 1 og tabel 2. De her anvendte forbindelser blev fremstillet ved respektive eksempler som nævnt nedenfor.

15 DK 173330 B1 1 m 9» o ^ ^ ^ w β n f« η η π »· O O O 9 O O n ©ΟΟΟΟΟΟΟΟΟ-moO©

V> ^ 9k O 9t ^ M ^9>09W»tnV>n^A 5 W S

m β η π .η π n n νλλμλπνν^^ν Λρ-ιλ f ·» S s S % S s K K ** S S _S > .> ** UÉ 4HS s 9 O O 9 9 O 9 9Γ^^ρ.β99Π999β«»- π mm m m m m «- v> o in o o w inommm.-£m£NemNiF|£j • 9 9 p· 9 ^ v m ρ<»·βθθβπ^ΗβΝΝοη9 e- o" o1' o" e·' o- J* »s os O o" os o" os P? o- o- o* - o o’ o*' mm m m w _ .

*- m o in o © «β w o m p o η ,· λ 9 n .j 5 2 5 5 r- 9 o m e n ^ m fNMOr-v-er-iNinonrNor-o f- s m >, ·, s ·» N s s I, », K SJ'J* O O O O O O *- 99999009^999999 h s <jl

& I

P W

i ”3 S « 0 — oemmomm n m o m m 999999099 to 9 o ^ e o v o ^ ^ h n π n 4j2K o o θ o o o n m o o o © 00©© — όο©© o} ω

•η »Q

al -3 N

- IΓ

Tj 9 9 9 9 9 9 9 9 «

Vi Ti o tø m \ø tø r> o o o _ m X 5 OOOPOO 990^0099909 9 9 0 Μ «ί 9 O ΙΊ o O M O 9 Isn00«-0**990M90N0

ÉH O. O O O O O IN OOOOOO.nf ^O.ONOOO

VI V» VI vi ^ v| S £ n S !£ S mZZMf«iNomO'-oar40'- -o©ooo-<n*-o-no-o

W ^ J· S V ^ SS\SSSS».SS^KSSS

o o m o v ^ «Ν no o o o o o 9 e o o o o ο σ v· w» 5 n S S n 5 n SKS”"'’eb0"e·"0™ ^ o «η n n n m »- π6οβαο^ΝΝθΝΝβ··ο a o’* o“ o*' o·' o" rT o** o*' o- o” o* o"· o" os o** 0“ o“ o' © o* o' Π mm m m £ y n j n 9 ^ - S g V o.

l, ft« P K _ ZE5 „ H 5 οιλ Κ

i. H SS C 5 - 2 ZSSu> KB · mwoM

I " Ϊ N J r, * * g O ”"J5o S |s!!fl!!|Ss!Sé5É|=g5Sgéf

I ! ϊ ! 111 i I i ! I I ΐ ! I H i ! Ϊ · I

H *H ^ _. ^99teo»4^^3euJlcCqZ7

pS •MT|9nSSil4>4H4pøo«8iil!ai!SSM

1 ^SSlsHsi^tss!8^^85'^ m R"Pppp8Si5*5"-SJ!e-«a522il .8 179888888118285-535^^221:-3 < ^3' J5J3355^5SlII«*iog»S*Si I 3 „ ij „ v, „ £ j i H j ϋ 2 j ΐ £ j 2 j j| · DK 173330 B1 o R « »s ^ o o λ s S i S 5 § 2 s 2 I s s I s i 'd o o o o o o π ^-oooooo^oooeoeo § sn 5 cj μ η o m o * o n Γ,ββββΚ£!55δ152050 O r* S (Μ Π N n N O — Γ'·- _. 'v s I, ^ * >1 S KKSfc*»»i>«K s ·* ** » ·» ·< J* □ rj o o o o β β η ηοοββοβ-οβ'-'ίοβο il tj 9 ^ ^ *· 4S » 9* r# »- GL) Q) o r* + w *o

Dw ^ ψ- σ* o ▼ _ fi

tn · n «# m N

/1} Li fV O ^ p tfl U Øt O tO IA

• »Sum O m C 0$ Π *- « H y · m 9* ® M

i; J3 S j om h*v u η ό

d d S Nej: θ' ΠΝΝ* K < W N N SO

<y Q fi « NMHWN - - ^ Os N

'all |SSgiiiss5egs««sS3zs<g£g; s I I I 2 ΰ s s 3 5 S 5 s : 2 i ! a s : Ϊ « 5 | § : s ! £ £ b ll3333i&S.5l8j5ii|i55B^8l ' ? 8ΐϊ8888δ£--8ϊ«·αΛ2Ι·8·ί- 'nj H rij 3 -s ^ -s -s { ' "illlu?

_rt S] £··<£.£.>·£.>· )i~4.dOOi4h-«44J s jjBBB*· C

I ’ ssHi ti Hi I πι π * * Μ i i s 5 4 g # g £ 3 2 23£8s3;22£££££3a -m 1 DK 173330 B1

Js ° S · *· · Mooø«^e<ev*now «ον» n .- *n r«. n m f* « nn'-mmnmvi^nifltn irto • S 'T 5 o- -- ·" ·** -- o- «“ wT «Γ o' o* o** o- S r X f * tf ' * O* Ή ^ 1 % ϊ * i 1 li 8 ® n _ o A e e n o m η η κι η n tn n in in n S · β η n ^ η η in η n » n η η m <- η m n « Η o. o o o o o n ι·ιοηιβ<βοιηι·ιηηιηοια·Μΐα d)Q)v| ·- N N ΜιΛ Ψ- Ή »g Π λ te β · m m tJ+i o *- o o m o o O n i a ooooNon aoboonumDin > a o S p ί α o o o o o — tAN^rioo^nNON o r~ »n Λ W n S _S s * »»«IS NSSSS^^^N S s > K ·> 3 β. o o. o. o o. o Νβοοο^ΟΊ'-νο νηοοβ

4j *1 «I * I v| ^ >1 v| M

s m *- o* r* » Λ N *-

U NV N W

** *- a © ^ ν» r# «een

5f Λ p M ^ Λ U e O A <A

W νινί K Μ n »* · w h O m e β n ugl om^MSv *-*©<« C H «β e»ee«- nj μ β i! M _ f» pimm« fc 5 m η N e I I ; i i t ΐ I ! i e e s ; έ s Η : i 3 ! t Ϊ " Μΐ253!ΐ|38::ΐ?3*!Ϊ8ϊΠ:§> I »:I is 111 s i if s * * 11 * s 1 Is i g jj . . . . , i j s : : ΐ ^ ϊ ΐ 3 ϊ s

1 !!i I Π I i II I a 4!? I ! i «i I a Π I!! Π s » Π Η I 5 1 I Π I I M

DK 173330 B1 1 o o w w · w « nooopo^Q'evfemooo m n w> tn s «1 «η t/> * s s s s s s s s j» s λ n ^ λ j* *> s ^ J» j* _>»

9 ρ» p·* O *— »- Γ4 rtOOOOOOOOOO^OOO

irt __ 10

Zj 0» o vi o n ^ o rt tnteøøv^nnnort ø n w □ V> O Π *- O η N F· «ΝΐηΓ*0·ΐη»Πρ·ρ·ρ-Γ'Ιρ- tn f- tn 'S o oK oN e o η «»-οβ»·οπρ?ρΓβ'ηΛι-«^ s i υμ m π * mm ti H » o ø ø ø ø 9t nooøoeønø^rtrtoøø Σ! Φ ø n n s rt π n ø »*^*-eF>onp-«ø^No^ø Q k % s k s *t S HSnnS^SnS***»^H%% i* E o^o o o o o rT ne eoeoen*- onøooo U ΐ ø n ø m irt π mm

Qw N *- O N 0 O « ØONOØNØrtØ^OØjØN

m ♦ o o rt o «- f> ø Mf-OF.^oh'F.r'ONøOrte ^ Φ o o o o o o ^ løoooooonooo^ooo o! 3

I yJS M

T>M rt o o ø o o ø nooobøøøøoø o c o y Η n g ^ o X ~ m **«-'-NNomr**«-F»trt<Nf'»- ^ o o o o o *- noooooooF-eeisooo t i

»—I

0 10 o ø ø o ø O n nøø woønøøø n ø o o n rt v· rt n «- ø »· h ø ø η η ’ ^ n n n p- r- øl »·»*«*.*·» I n s o o o o e o n Møo^^oørtøeøø me «· n m ^ ø r% i ø n *- U NV IS e h ^ 0 o V 0 . . N 0 0 rt

Ai P *· ^ ø U 0 O 0 0 £E ftK2 m e 9 M 0 m m øi e n

Li’ S fi - m * J ^000 O {· ø ø ø T V

i. n n ø £ øi n n n ^ K < ø N n ø

«g. ^ N iJ 0 0 fN p- ~ øl M O U P-ISP

S S s é s i i s s i s E 8 ; « s s i s s » * ε ; g

I I s π i 3 · ^ S § * i e § ! ΐ I

I ia 11 IjlH n: t!S

1 5 5 s s s s s4 i l i *1111 Π η I i i si r5 ^j-5MVQhQ·^ u u b.a&* uv Ή ^18888881:85355--^^: 3 S S - « a i Π I π π ί « P ^ i M ^ < Μ H S S η 33β5ΰ£ΰί1:ί:£££·ΛΛ TABEL 2 19 DK 173330 B1

Antibakterielt spekter MIC (/zg/ml) Forbindelse (Eksempel Nr.) 5 Anaerobe mikroorganismer 5 30

Bacteroides fragilis ATCC 23745 0,78 0,20

Bacteroides fragilis NR 2579 3,13 1,56 10 Bacteroides fragilis NR 2582 0,78 0,39

Bacteroides fragilis NR 2583 0,39 0,10

Bacteroides fragilis NR 2584 0,78 0,78

Bacteroides distasonis NR 2578 0,78 0,78

Bacteroides thetaiotaomicron 15 NR 2588 1,56 0,78

Bifidobacterium adolescentis ATCC 15703 0,39 0, 10

Clostridium botulinum NR 2611 0,10 0,013

Clostridium perfringens NR 2612 0,39 0,10 20 Clostridium moniliforme ATCC 25546 0,78 0,10

Fusobacterium varium ATCC 8501 12,5 peptococcus prevotii ATCC 9321 1,56 0,39 peptococcus variabilis 25 ATCC 14955 0,78 0,20 peptostreptococcus anaerobius NR 2743 0,39 0,013 propionibacterium aenes ATCC 11828 0,78 0,78 30 Mycoplasma

Mycoplasma hominis NR 2952 0,10 0,10 20 DK 173330 B1 2. In vivo terapeutisk effektivitet

De in vivo antibakterielle aktiviteter af pyrido[3,2,1-ij]- 1,3,4-benzoxadiazin-derivater, der blev fremstillet i eksempel 5, eksempel 30 og eksempel 66 som nævnt nedenfor, blev 5 testet mod letal infektion af Escherichia coli ML4707, pseudomonas aeruginosa 4au542 og Streptococcus pneumoniae 6-001. ICR-mus, der vejede ca. 20 g, blev inficeret ved intraperito-neal injektion af en tilsvarende bakteriel suspension. Testforbindelserne blev administeret oralt eller subcutant ved 10 tidspunktet for injektion. Dødeligheden blev observeret i 5 dage. Den respektive 50% effektive dosis (ED50, mg/kg), som beskytter 50% af dyrene mod død forårsaget af infektion, er vist i tabel 3.

Tabel 3 21 DK 173330 B1

In vivo antibakteriel aktivitet mod systemisk infektion hos mus (ED50, mg/kg) 5 _____

Bakterie

Escherichia Pseudomonas Streptococcus

Forbindelse coli aeruginosa pneumoniae 10 ML4707 4au542 6-001 s.c. p.o. p.o. p.o.

Eksempel 5 0,06 0,11 13,4 10,3 15 Eksempel 30 0,10 0,62 57,0 65,9

Eksempel 66 - 0,51 - 3. Akut toxicitet

De respektive LD50-værdier af forbindelserne, der er vundet i 20 eksemplerne 5, 6, 17, 18, 30 og 56 som nævnt nedenfor, er mere end 2000 mg/kg. Den akutte toxicitet af disse forbindelser blev undersøgt ved oral administration i ICR-mus.

Forbindelserne, der er tilvejebragt ifølge den foreliggende opfindelse, udviser et bredt antimikrobielt spekter mod gram-25 positive, gram-negative bakterier og Mycoplasma, især mod de, som er resistente over for forskellige antibiotika såsom penicilliner, cephalosporiner, aminoglycosider og tetracycli-ner.

22 DK 173330 B1

Forbindelserne, der er tilvejebragt ifølge den foreliggende opfindelse, har lav toxicitet og en kraftig og bred anti-mikrobiel effektivitet. De beskyttende virkninger af forbindelserne ifølge den foreliggende opfindelse på systemiske 5 bakterielle infektioner i mus er større end virkningerne af syntetiske antibakterielle midler, som er kommercielt tilgængelige. Forbindelserne ifølge den foreliggende opfindelse kan derfor udnyttes effektivt til forebyggelse eller behandling af sygdomme, der er forårsaget af gram-positive og gram-10 negative bakterier og bakterioide microorganismer i mennesker eller dyr.

For eksempel kan sygdomme, der er forårsaget af nedennævnte mikroorganismer eller af blandinger af nedennævnte mikroorganismer, behandles og/eller forebygges: Staphylococcus, Strep-15 tococcus, Aerococcus, Enterococcus, Micrococcus, Lactobacillus, Bifidobacterium, Clostridium, Eubacterium, Peptococcus, Peptostreptococcus, Propionibacterium, Escherichia, Citrobac-ter, Campylobacter, Enterobacter, Klebsiella, Proteus, Pseudomonas, Serratia, Salmonella, Shigella, Vibrio, Aeromonas, 20 Haemophilus, Neisseria, Acinetobacter, Alcaligenes, Bordetel-la, Bacteroides, Fusobacterium, Mycoplasma og andre mikroorganismer.

Den foreliggende opfindelse angår yderligere de farmaceutiske præparater, der indeholder én forbindelse ifølge den foreli-25 ggende opfindelse samt et farmaceutisk præparat til behandling og profylakse af infektionssygdomme, der indeholder en forbindelse ifølge den foreliggende opfindelse.

Forbindelserne ifølge den foreliggende opfindelse kan administreres oralt eller non-oralt til mennesker eller dyr ved 30 forskellige konventionelle administrationsmetoder.

Forbindelserne ifølge den foreliggende opfindelse anvendes yderligere alene eller formuleret med hjælpestoffer, flydende fortyndingsmidler, bindemidler, glittemidler, befugtningsmid-ler osv., fx i form af almindelige medicinske præparater 23 DK 173330 B1 såsom tabletter, granulater, sukkerovertrukne tabletter, pulvere, kapsler, geler, tørt sirup, sirup, ampuller, suspensioner, væsker, emulsioner, salver, pastaer, cremer, suppositorier og lignende.

5 Opløsningsforsinkende midler, absorptionsaccelererende midler, overfladeaktive midler og lignende kan anvendes som andre additiver til formulering, dvs. at enhver form, som er farmaceutisk acceptabel, kan anvendes.

Forbindelserne ifølge til den foreliggende opfindelse kan 10 anvendes alene eller være en blanding af to eller flere forskellige slags forbindelser og mængden af forbindelserne er fra ca. 0,1 til 99,5 %, fortrinsvis 0,5 til 95% baseret på præparatets samlede vægt.

Præparatet ifølge den foreliggende opfindelse kan formuleres 15 i en kombination af forbindelsen ifølge den foreliggende opfindelse eller blandingen deraf med andre konventionelle forbindelser, som er farmaceutisk aktive.

En daglig dosis til en patient af den hidtil ukendte forbindelse ifølge den foreliggende opfindelse kan varieres, 20 afhængig af den individuelle person, dyrearterne, disses vægt og den tilstand, der skal behandles, men generelt ligger den i området fra 0,5 til 500 mg pr. 1 kg vægt, fortrinsvis fra ca. 1 til 300 mg.

Følgende eksempler belyser de foretrukne fremgangsmåder til 25 fremstilling af forbindelserne ifølge den foreliggende opfindelse.

24 DK 173330 B1

Fremstilling af udgangsmaterialer

Referenceeksempel

Fremstilling af diethyl-N-(3,4-difluor-2-hydroxyphenyl)amino-methylenmalonat 5 (a) En opløsning af 2,3-difluor-6-nitrophenol (500 mg) i methanol (7 ml) blev hydrogeneret over 5% Pd/C (60 mg) i 6 timer. Reaktionsblandingen blev filtreret i en nitrogenatmos-færestrøm, og filtratet blev inddampet under reduceret tryk til opnåelse af 414 mg råt 2-amino-5,6-difluorphenol.

10 (b) En blanding af ovennævnte amin (414 mg) og diethyl-et- hoxymethylenmalonat (618 mg) blev opvarmet ved 130°C i en nitrogenatmosfære i 5 minutter. Den resulterende krystallinske remanens blev tritureret med ethanol og filtreret til opnåelse af 590 mg diethyl-N-(3,4-difluor-2-hydroxyphenyl)-15 aminomethylenmalonat, smeltepunkt 178-180°C: MS m/z 315 (M+). Yderligere 59 mg krystaller blev vundet efter silicagelsøj-lechromatografi af modervæsken under anvendelse af CHCl3/ace-tone (20:1) som eluent.

Fremstilling af ethyl-8-benzyloxy-6,7-difluor-4-hydroxy-3-20 quinolincarboxylat (rute 1) (c) Til en blanding af diethyl-N-(3,4-difluor-2-hydroxyphe-nyl)aminomethylenmalonat (80 mg) og vandfrit kaliumcarbonat (70 mg) i tørt dimethylformamid (1,5 ml) blev tilsat benzyl-bromid (30 μΐ) . Blandingen blev omrørt ved stuetemperatur i 2 25 timer. Efter fjernelse af opløsningsmidlet under reduceret tryk, blev remanensen opløst i dichlormethan, og bundfaldet blev frafiltreret. Filtratet blev vasket med vand, tørret over vandfrit natriumsulfat og inddampet. Den krystallinske remanens blev vasket med n-hexan og omkrystalliseret af 30 methanol til opnåelse af diethyl-N-(2-benzyloxy-3,4-difluorp-henyl)aminomethylenmalonat (90 mg), smeltepunkt 87°C: MS m/z 405 (M+) .

DK 173330 B1 (d) En opløsning af ovennævnte malonat (280 mg) i diphenyl-ether (2,8 ml) blev opvarmet ved 250°C i 30 minutter i en nitrogenatmosfære. Efter afkøling af reaktionsblandingen, blev ethanolen, der var dannet i reaktionsmediet, fjernet 5 under reduceret tryk. Den mørkebrune opløsning blev sat på en silicagelsøjle (10 g) efterfulgt af successiv eluering med benzen, dichlormethan og dichlormethan/acetone (30:1). De rene fraktioner blev samlet, og opløsningsmidlet blev fjernet under reduceret tryk til opnåelse af den krystallinske rema-10 nens. Remanensen blev vasket med en blanding af n-hexan og ethylacetat til opnåelse af 90 mg ethyl-8-benzyloxy-6,7-difluor-4-hydroxy-3-quinolincarboxylat. En analytisk prøve, smeltepunkt 200-201°C: MS m/z 359 (M+), blev fremstillet ved omkrystallisation af methanol.

15 Fremstilling af ethyl-8-benzyloxy-6,7-difluor-4-hydroxy-3-quinolincarboxylat (rute 2)

Til en omrørt opløsning af ethyl-6,7-difluor-4,8-dihydroxy-3-quinolincarboxylat (300 mg) i tørt dimethylformamid (6 ml) blev tilsat vandfrit kaliumcarbonat (308 mg) og derefter 20 benzylchlorid (145 μΐ). Blandingen blev omrørt ved 55-65°C i 11 timer. Reaktionsblandingen blev fortyndet med vand (30 ml) og ekstraheret med chloroform. Ekstrakten blev tørret over vandfrit natriumsulfat og koncentreret under reduceret tryk. Remanensen blev chromatograferet på silicagel (7 g) under 25 anvendelse af acetone/chloroform (1:20) som eluent til opnåelse af 113 mg ethyl-8-benzyloxy-6,7-difluor-4-hydroxy-3-quinolincarboxylat, smeltepunkt 200-201eC; MS m/z 359 (M+), efter omkrystallisation af methanol.

Fremstilling af ethyl-8-benzyloxy-6,7-difluor-1-(formylmethy-30 lamino)-4-oxo-1,4-dihydro-3-quinolincarboxylat (e) Efter at en blanding af ethyl-8-benzyloxy-6,7-difluor-4-hydroxy-3-quinolincarboxylat (410 mg) og vandfrit kaliumcarbonat (315 mg) i tørt dimethylformamid (10 ml) var blevet omrørt ved stuetemperatur i 3 timer, blev 0-(2,4-dinitrophe- ^ DK 173330 B1 nyl)hydroxylamin (260 mg) tilsat. Blandingen blev omrørt ved stuetemperatur i yderligere 6,5 timer. Efter fjernelse af opløsningsmidlet under reduceret tryk blev vand (12 ml) sat til remanensen, og blandingen blev omrørt ved stuetemperatur 5 i 3 timer. Bundfaldet blev opsamlet ved filtrering og vasket med koldt vand og derefter med ether til opnåelse af 405 mg ethyl-l-amino-8-benzyloxy-6,7-difluor-4-οχο-1,4-dihydro-3-quinolincarboxylat. En analytisk prøve, smeltepunkt 143-144°C; MS m/z 374 (M+) , blev fremstillet ved omkrystallisa-10 tion af methanol.

(f) 98% Myresyre (0,60 ml) blev sat til eddikesyreanhydrid (1,51 ml) ved 0°C. Blandingen blev omrørt ved 0°C i 15 minutter, ved 50°C i 15 minutter og derefter afkølet til 0°C. Til denne opløsning blev dråbevis sat en opløsning af ovennævnte 15 amin (400 mg) i 98% myresyre (2,1 ml). Blandingen blev omrørt ved stuetemperatur i 2 dage. Reaktionsblandingen blev inddampet under reduceret tryk til opnåelse af den krystallinske remanens, som blev omkrystalliseret af ethanol, til opnåelse af 410 mg ethyl-8-benzyloxy-6,7-difluor-l-(formylamino)-4-20 oxo-1,4-dihydro-3-quinolincarboxylat, smeltepunkt 188-190°C: MS m/z 402 (M+) .

(g) En blanding af ovennævnte formamid (4 00 mg) , vandfrit i kaliumcarbonat (275 mg) og vandfrit dimethylformamid (17 ml) blev omrørt ved stuetemperatur i halvanden time. Methyliodid 25 (0,19 ml) blev sat til blandingen, og omrøring fortsattes i 2,5 timer. Opløsningsmidlet blev fjernet under reduceret tryk, og remanensen blev fordelt mellem chloroform og vand.

Den organiske fase blev tørret over vandfrit natriumsulfat og koncentreret til tørhed under reduceret tryk. Remanensen blev 30 omkrystalliseret af ethanol til opnåelse af 335 mg ethyl-8-benzyloxy-6,7-difluor-l- (formylmethylamino) -4-oxo-l,4-dihy-dro-3-quinolincarboxylat, smeltepunkt 180-181°C: MS m/z 416 (M+) .

27 DK 173330 B1

Fremstilling af 6,7-difluor-8-hydroxy-l- (methylamino)-4-oxo- 1,4 -dihydro- 3 - quinolincarboxylsyre (h) Ethyl-8-benzyloxy-6,7-difluor-l-(formylmethylamino)-4-oxo-1,4-dihydro-3-quinolincarboxylat (330 mg) blev hydroge- 5 neret over 5% Pd/C (50 mg) i chloroform (14 ml) i 4 timer. Reaktionsblandingen blev fortyndet med methanol (14 ml) og filtreret. Filterkagen blev vasket med chloroform/methanol (1:1). Det samlede filtrat blev inddampet, og remanensen blev omkrystalliseret af ethanol til opnåelse af 239 mg ethyl-6,7-10 difluor-l- (formylmethylamino) -8-hydroxy-4-oxo-l,4-dihydro-3-quinolincarboxylat, smeltepunkt 221-225°C (sønderdeling): MS m/z 326 (M+) .

(i) En blanding af ovennævnte ester (210 mg) og 0,5N natriumhydroxid (5,2 ml) blev opvarmet ved 100°C i 2 timer i en 15 nitrogenatmosfære. Reaktionsblandingen blev gjort sur med eddikesyre (0,16 ml). Det udskilte bundfald blev filtreret, vasket med vand og tørret under reduceret tryk til opnåelse af 168 mg 6,7-difluor-8-hydroxy-l-(methylamino)-4-oxo-l,4 -dihydro-3-quinolincarboxylsyre. En analytisk prøve, smelte-20 punkt 248-250°C (sønderdeling): MS m/z 270 (M+) , blev fremstillet ved omkrystallisation af ethanol.

EKSEMPEL 1

Fremstilling af 9,10-difluor-3-methyl-7-oxo-2,3-dihydro-7H-pyrido[3,2,1-ij]-1,3,4-benzoxadiazin-6-carboxylsyre 1 2 3 4 5 6

En blanding af 6,7-difluor-8-hydroxy-l-(methylamino)-4-oxo- 2 1,4-dihydro-3-quinolincarboxylsyre (105 mg) vundet i referen 3 ceeksempel (i), paraformaldehyd (150 mg) og tørt dioxan 4 (5 ml) blev opvarmet ved 100°C i 3 timer i en nitrogenatmos 5 fære. Efter fjernelse af opløsningsmidlet under reduceret 6 tryk blev dimethylformamid (20 ml) sat til remanensen, og blandingen blev omrørt i 20 minutter og derefter filtreret. Filterkagen blev vasket med dimethylformamid, og det samlede filtrat blev inddampet under reduceret tryk. Remanensen blev 28 DK 173330 B1 tritureret med vand og filtreret til opnåelse af 97 mg 9,10-difluor-3-methyl-7-oxo-2,3-dihydro-7H-pyrido[3,2,1-ij]-1,3,4-benzoxadiazin-6-carboxylsyre. En analytisk prøve, smeltepunkt 290-292°C (sønderdeling): MS m/z 282 (M+) blev fremstillet 5 ved omkrystallisation af dimethylformamid.

EKSEMPEL 4

Fremstilling af 9,10-difluor-2-[(dimethylamino)methyl]-3-methyl-7-oxo-2,3-dihydro-7H-pyrido[3,2,1-ij]-1,3,4-benzoxadi-az in-6-carboxylsyre-p-toluensulfonat 10 En suspension af 6,7-difluor-8-hydroxy-l-(methylamino)-4-oxo- 1.4- dihydro-3-quinolincarboxylsyre (50 mg) vundet i referenceeksempel (i), dimethylaminoacetaldehyd-dimethylacetal (37 mg) og p-toluensulfonsyre-monohydrat (53 mg) i tørt dioxan (2 ml) blev opvarmet ved 110°C i 17 timer i en nitro-15 genatmosfære. Efter at opløsningsmidlet var blevet fjernet under reduceret tryk, blev remanensen omkrystalliseret af methanol til opnåelse af 61 mg 9,10-difluor-2-[(dimethylami-no)methyl]-3-methyl-7-oxo-2,3-dihydro-7H-pyrido[3,2,1-ij]- 1.3.4- benzoxadiazin-6-carboxylsyre-p-toluensulfonat, smelte-20 punkt 232-236°C (sønderdeling) : FAB-MS m/z 340 (MH+) .

EKSEMPEL 5

Fremstilling af 9-fluor-3-methyl-10-(4-methyl-l-piperazinyl)- 7-oxo-2,3-dihydro-7H-pyrido[3,2,l-ij]-1,3,4-benzoxadiazin-S-carboxylsyre 1 2 3 4 5 6

En blanding af 9,10-difluor-3-methyl-7-oxo-2,3-dihydro-7H- 2 pyrido[3,2,1-ij]-1,3,4-benzoxadiazin-6-carboxylsyre (30 mg) 3 vundet i eksempel 1, N-methylpiperazin (47 μΐ) og tørt pyri- 4 din (3 ml) blev opvarmet ved 100-110°C i 9 timer i en nitro 5 genatmosfære. Pyridin blev fjernet under reduceret tryk, og 6 remanensen blev omkrystalliseret af methanol til opnåelse af 23 mg 9-fluor-3-methyl-10-(4-methyl-1-piperazinyl)-7-oxo-2,3- 29 DK 173330 B1 dihydro-7H-pyrido[3,2,l-ij]-i,3,4-benzoxadiazin-6-carboxylsyre, smeltepunkt 268-269°C (sønderdeling): MS m/z 362 (M+).

Følgende forbindelser blev vundet på analog måde som beskrevet i eksempel 5: «xxir L^!kcH3

Eksempel Smeltepunkt Rekrystalliserings- ^5 mfz nr. R_ »c middel • hO- 240^245 (dec.) MeOH 349 (MH+)* 9 O- >300 EtOH/CHCl3 349 (M+) 13 H0—Q\- 256^258 MeOH/CHCl3 363 (M*) 17 CHJJJ3" Ζ4Ζ<ν244 <dec·) DMF 377 (MH+)* 18 H PVi- 251*252 (dec.) EtOH 391 (MH+)* C2»5 19 Η Γ\- 239*241 (dec.) EtOH 405 (MH+)*

AcNs^l-V

21 rV- 284*286 (dec.) DMF ' 350 (MH+)* H(r 22 CH3n- 280*284 (dec.) Me0H/CHCl3/Et20 345 (MH+)* N·** „n DK 173330 B1 30 EKSEMPEL 29

Fremstilling af 10-[3-(benzyloxycarbonylamino)-1-pyrrolidi-nyl] - 9-fluor-3-methyl-7-oxo-2,3-dihydro-7H-pyrido-[3,2,1-ij]- 1,3,4-benzoxadiazin-6-carboxylsyre 5 En blanding af 9,10-difluor-3-methyl-7-oxo-2,3-dihydro-7H-' pyrido[3,2,1-ij]-1,3,4-benzoxadiazin-6-carboxylsyre (28 mg) vundet i eksempel 1, 3-(benzyloxycarbonylamino)-pyrrolidin (94 mg) og tør pyridin (3 ml) blev opvarmet ved 100°C i 3 timer i en nitrogenatmosfære. Pyridin blev fjernet under 10 reduceret tryk, og remanensen blev omkrystalliseret af methanol til opnåelse af 36 mg 10-[3-(benzyloxycarbonylamino)-l-pyrrolidinyl]-9-fluor-3-methyl-7-oxo-2,3-dihydro-7H-pyri-do[3,2,1-ij]-1,3,4-benzoxadiazin-6-carboxylsyre, smeltepunkt 227-230°C: MS m/z 482 (M+) .

15 EKSEMPEL 30

Fremstilling af 10-(3-amino-l-pyrrolidinyl)-9-fluor-3-methyl-7-oxo-2,3-dihydro-7H-pyrido[3,2,1-ij]-1,3,4-benzoxadiazin-6-carboxylsyre 10-[3-(benzyloxycarbonylamino)-1-pyrrolidinyl]-9-fluor-3-20 methyl-7-oxo-2,3-dihydro-7H-pyrido[3,2,1-ij]-1,3,4-benzoxadi- j azin-6-carboxylsyre (30 mg) vundet i eksempel 29 blev hydro generet over 5% Pd/C (10 mg) i dimethylformamid (2 ml) i 4,5 timer. Efter fjernelse af katalysatoren ved filtrering blev filtratet koncentreret under reduceret tryk. Remanensen blev 25 omkrystalliseret af methanol til opnåelse af 16 mg 10-(3- amino-1-pyrrolidinyl)-9-fluor-3-methyl-7-oxo-2,3-dihydro-7H-pyrido[3,2,l-ij]-1,3,4-benzoxadiazin-6-carboxylsyre, smeltepunkt 230-234°C (sønderdeling); MS m/z 348 (M+) .

3l DK 173330 B1 EKSEMPEL 37

Fremstilling af 9-fluor-10-(3-methoxy-l-pyrrolidinyl)-3-methyl-7-oxo-2,3-dihydro-7H-pyrido[3,2,1-ij]-1,3,4-benzoxadi-azin-6-carboxylsyre 5 Til en suspension af 9-fluor-10-(3-hydroxy-l-pyrrolidinyl)-3-methyl-7-oxo-2,3-dihydro-7H-pyrido[3,2,1-ij ]-1,3,4-benzoxadi-azin-6-carboxylsyre {100 mg) vundet i eksempel 21 i tørt dimethylformatnid (10 ml) blev tilsat 60% natriumhydrid i olie (30 mg) og methyliodid (40 μΐ). Efter omrøring af blandingen 10 ved stuetemperatur i 2 timer blev yderligere 60% natriumhydrid (30 mg) og methyliodid (40 μΐ) tilsat, og blandingen blev omrørt ved 45°C i 3 timer. Opløsningsmidlet blev derefter fjernet under reduceret tryk. Til remanensen blev tilsat koldt vand (2 ml) og 0,5N natriumhydroxid (2,3 ml), og 15 den resulterende suspension blev opvarmet ved 100°C i 2 timer. Reaktionsblandingen blev derefter afkølet til stuetemperatur, neutraliseret med eddikesyre og fortyndet med vand. Blandingen blev ekstraheret med chloroform, og ekstrakten blev vasket med vand, tørret over vandfrit natriumsulfat og 20 koncentreret under reduceret tryk til opnåelse af den krystallinske remanens, som blev chromatograferet på silicagel under anvendelse af acetone/chloroform (1:9) som eluent.

42 mg 9-fluor-10-(3-methoxy-l-pyrrolidinyl)-3-methyl-7-oxo- 2,3-dihydro-7H-pyrido(3,2,1-ij]-1,3,4-benzoxadiazin-6-car-25 boxylsyre, smeltepunkt 233-234°C; FAB-MS m/z 364 (MH+) , blev vundet efter omkrystallisation af methanol.

EKSEMPEL 38

Fremstilling af 9-fluor-10-(4-methoxy-l-piperidyl)-3-methyl-7-oxo-2,3-dihydro-7H-pyrido[3,2,l-ij]-l,3,4-benzoxadiazin-6 -30 carboxylsyre 9-Fluor-10-(4-methoxy-l-piperidyl)-3-methyl-7-oxo-2,3-dihy-dro-7H-pyrido[3,2,1-ij]-l,3,4-benzoxadiazin-6-carboxylsyre blev fremstillet ud fra 9-fluor-10-(4-hydroxy-1-piperidyl)-3- 32 DK 173330 B1 methyl-7-oxo-2,3-dihydro-7H-pyrido[3,2,1-ij] -1,3,4-benzoxadi-azin-6-carboxylsyre vundet i eksempel 13 analogt med eksempel 37, og blev vundet som krystaller, smeltepunkt 229-233°C (sønderdeling) : MS m/z 377 (M+) , efter omkrystallisation af 5 chloroform/n-hexan.

EKSEMPEL 40

Fremstilling af 9-fluor-3-methyl-7-oxo-10-[4-(2-oxo-n-pro-pyl)-1-piperazinyl]-2,3-dihydro-7H-pyrido[3,2,1-ij]-1,3,4-benzoxadiazin-6-carboxylsyre

10 En blanding af 9-fluor-3-methyl-7-oxo-10-(1-piperazinyl)-2,3-dihydro-7H-pyrido[3,2,1-ij]-1,3,4-benzoxadiazin-6-carboxylsyre (50 mg) vundet i eksempel 6, chloracetone (17 μΐ), triethylamin (40 μΐ) og tørt dimethylformamid (1 ml) blev opvarmet ved 80°C i 3,5 timer. De flygtige komponenter blev 15 derefter fjernet under reduceret tryk, og remanensen blev suspenderet i vand. Bundfaldet blev opsamlet ved filtrering og omkrystalliseret af en blanding af dichlormethan og methanol til opnåelse af 32 mg 9-fluor-3-methyl-7-oxo-10-[4-(2-oxo-n-propyl)-1-piperazinyl]-2,3-dihydro-7H-pyrido[3,2,1-ij]-20 1,3,4-benzoxadiazin-6-carboxylsyre, smeltepunkt 225-229°C

(sønderdeling), FAB-MS m/z 405 (MH+) .

Følgende forbindelser blev vundet på analog måde som beskrevet i eksempel 40.

EKSEMPEL 49 33 DK 173330 B1

Fremstilling af 10-[4-(3-carboxypropionyl)-1-piperazinyl]-9-fluor-3-methyl-7-oxo-2,3-dihydro-7H-pyrido[3,2,l-ij]-l,3,4-benzoxadiazin-6-carboxylsyre 5 En blanding af 9-fluor-3-methyl-7-oxo-10-(1-piperazinyl)-2,3-dihydro-7H-pyrido [3,2,l-ij]-l,3,4-benzoxadiaz in-6 -carboxylsyre (50 mg) vundet i eksempel 6, succinanhydrid (21,6 mg), triethylamin (40 μΐ) og tørt dimethylformamid (4 ml) blev opvarmet ved 80°C i 2 timer. Opløsningsmidlet blev derefter 10 fjernet under reduceret tryk, og remanensen blev suspenderet i vand. Bundfaldet blev opsamlet ved filtrering og omkrystal-liseret af en blanding af dichlormethan og methanol til opnåelse af 50 mg 10-[4-(3-carboxypropionyl)-1-piperazinyl]- 9- fluor-3-methyl-7-oxo-2,3-dihydro-7H-pyrido[3,2,1-ij]-1,3,4-15 benzoxadiazin-6-carboxylsyre, smeltepunkt 257-259°C (sønderdeling) : FAB-MS m/z 449 (MH+) .

EKSEMPEL 50

Fremstilling af 10-(4-acetyl-l-piperazinyl)-9-£l\ior-3-methyl-7-oxo-2,3-dihydro-7H-pyrido[3,2,1-ij] -1, 3,4-benzoxadiazin-6-20 carboxylsyre 10- (4 -Acetyl-1-piperazinyl) -9-fluor-3-methyl-7-oxo-2,3-dihy-dro-7H-pyrido[3,2,1-ij] -1,3,4-benzoxadiazin-6-carboxylsyre blev fremstillet ud fra 9-fluor-3-methyl-7-oxo-10-(1-piperazinyl) -2,3-dihydro-7H-pyrido[3,2,1-ij] -1,3,4-benzoxadiazin-6- 25 carboxylsyre vundet i eksempel 6 og eddikesyreanhydrid analogt med eksempel 49, og blev vundet som krystaller, smeltepunkt 294-296°C (sønderdeling); FAB-MS m/z 391 (MH+), efter omkrystallisation af dichlormethan/methanol.

EKSEMPEL 53 „ DK 173330 B1 34

Fremstilling af 10-[4-(4-aminobenzyl)-1-piperazinyl]-9-fluor- 3-methyl-7-oxo-2,3-dihydro-7H-pyrido[3,2,1-ij] -1,3,4-ben-z oxadi a z in-6-carboxylsyre 5 9-Fluor-3-methyl-10-[4-(4-nitrobenzyl)-1-piperazinyl]-7-oxo- 2,3-dihydro-7H-pyrido[3,2,1-ij]-1,3,4-benzoxadiazin-6-car-boxylsyre (100 mg) vundet i eksempel 47 blev hydrogeneret over 5% Pd/C (10 mg) i dichlormethan/methanol (1:1) i 2 timer. Efter fjernelse af katalysatoren ved filtrering, blev 10 filtratet koncentreret til tørhed under reduceret tryk.

Remanensen blev omkrystalliseret af ethanol til opnåelse af 69 mg 10-[4-(4-aminobenzyl)-1-piperazinyl]-9-fluor-3-methyl-7-oxo-2,3-dihydro-7H-pyrido[3,2,l-ij]-l,3,4-benzoxadiazin-6-carboxylsyre, smeltepunkt 237-238°C (sønderdeling); FAB-MS 15 m/z 454 (MH+) .

EKSEMPEL 54

Fremstilling af 10-[3-(aminomethyl)-1-pyrrolidinyl]-9-fluor-3 -me thy1-7-oxo-2,3-dihydro-7H-pyrido[3,2,1 - i j ] -1,3,4 -ben-zoxadiazin-6-carboxylsyre 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11

Blandingen af 10-[3-(acetylaminomethyl)-1-pyrrolidinyl]-9- 2 fluor-3-methyl-7-oxo-2,3-dihydro-7H-pyrido[3,2,l-ij]-l,3,4- 3 benzoxadiazin-6-carboxylsyre (40 mg) vundet i eksempel 19 og 4 IN natriumhydroxid (2,5 ml) blev opvarmet ved 100°C i 3 5 timer. Efter afkøling til stuetemperatur blev reaktionsblan- 6 dingen neutraliseret med eddikesyre, og det udskilte bundfald 7 blev opsamlet ved filtrering og omkrystalliseret af methanol 8 til opnåelse af 15 mg 10-[3-(aminomethyl)-1-pyrrolidinyl]-9- 9 fluor-3-methyl-7-oxo-2,3-dihydro-7H-pyrido[3,2,1-ij]-1,3,4- 10 benzoxadiazin-6-carboxylsyre, smeltepunkt 177-180°C (sønder- 11 deling); FAB-MS m/z 363 (MH+).

35 DK 173330 B1 EKSEMPEL 55

Fremstilling af 6-fluor-8-hydroxy-7-(1-imidazolyl)-1-(methy-lamino)-4-oxo-l,4-dihydro-3-quinolincarboxylsyre

Carbonyldiimidazol (32 mg) blev sat til en omrørt opløsning 5 af 6,7-difluor-8-hydroxy-1-(methylamino)-4-oxo-1,4-dihydro-3-quinolincarboxylsyre (50 mg) vundet i referenceeksempel (i) i tørt dimethylformamid (2 ml). Omrøring fortsattes ved stuetemperatur i 2 timer og derefter ved 80°C i 5 timer. Opløsningsmidlet blev fjernet under reduceret tryk, og remanensen 10 blev suspenderet i vand, og pH blev indstillet til pH 5 med eddikesyre. Det udskilte bundfald blev filtreret og vasket med methanol til opnåelse af 35 mg 6-fluor-8-hydroxy-7-(1-imidazolyl)-1-(methylamino)-4-oxo-l, 4-dihydro-3-quinolincar-boxylsyre som bleggult pulver, FAB-MS m/z 319 (MH+): 1H-NMR 15 (dg-DMSO) δ: 2,82 (3H,s), 7,10 (IH, d, J=10,7 Hz), 7,61 (IH, d), 7,75 (IH, d), 8,62 (lH,s), 8,92 (lH,s), 15,33 (IH, br,s) EKSEMPEL 56

Fremstilling af 9-fluor-10-(1-imidazolyl)-3-methyl-7-oxo-2,3-dihydro-7H-pyrido[3,2,1-ij] -1,3,4-benzoxadiazin-6-carboxyl-20 syre

En suspension af 6-fluor-8-hydroxy-7-(1-imidazolyl)-1-(methylamino) -4-oxo-l,4-dihydro-3-quinolincarboxylsyre (15 mg) vundet i eksempel 55 i en blanding af 35% formalin (1 ml) og dioxan (1 ml) blev opvarmet ved 100-110°C i halvanden time i 25 en nitrogenatmosfære. Opløsningsmidlet blev fjernet under reduceret tryk, og den krystallinske remanens blev vasket med methanol til opnåelse af 15 mg 9-fluor-10-(1-imidazolyl)-3-methyl-7-oxo-2,3-dihydro-7H-pyrido[3,2,1-ij] -1,3,4-benzoxadi-azin-6-carboxylsyre som lyserødt pulver. En analytisk prøve, 30 smeltepunkt >300°C; FAB-MS m/z 331 (MH+), blev fremstillet ved omkrystallisation af dimethylformamid og ether.

36 DK 173330 B1 9-Fluor-10 -(1-imidazolyl)-3-methyl-7-oxo-2,3-dihydro-7H-pyrido[3,2,l-ij]-1,3,4-benzoxadiazin-6-carboxylsyre blev også fremstillet ud fra 9,10-difluor-3-methyl-7-oxo-2,3-dihydro-7H-pyrido[3,2,1-ij]-1,3,4-benzoxadiazin-6-carboxylsyre og 5 imidazol i dimethylsulfoxid analogt med eksempel 5.

EKSEMPEL 57

Fremstilling af benzyl-9-fluor-10-(3-hydroxy-l-pyrrolidinyl)- 3-methyl-7-oxo-2,3-dihydro-7H-pyrido[3,2,l-ij] -1,3,4-benzoxadiazin- 6-carboxylat 10 En blanding af 9-fluor-10-(3-hydroxy-l-pyrrolidinyl)-3-me-thyl-7-oxo-2,3-dihydro-7H-pyrido[3,2,l-ij] -1,3,4-benzoxadiazin-6-carboxyl syre (10 mg) vundet i eksempel 21, vandfrit kaliumcarbonat (8 mg) og dimethylformamid (0,5 ml) blev omrørt ved stuetemperatur i halvanden time, og derefter blev 15 benzylbromid (10,8 mg) tilsat. Denne blanding blev omrørt ved stuetemperatur i 3 timer og inddampet under reduceret tryk.

Remanensen blev suspenderet i vand og ekstraheret med chloroform. Ekstrakten blev koncentreret til tørhed under reduceret tryk. Remanensen blev tritureret med ether til opnåelse af I 20 11 mg benzyl-9-fluor-10-(3-hydroxy-1-pyrrolidinyl)-3-methyl- j 7-oxo-2,3-dihydro-7H-pyrido[3,2,l-ij]-l,3,4-benzoxadiazin-6- carboxylat, smeltepunkt 196-198°C (sønderdeling): FAB-MS m/z 440 (MH+) .

EKSEMPEL 58 25 Fremstilling af benzyl-10-(3-chlor-1-pyrrolidinyl)-9-fluor-3-methyl-7-oxo-2,3-dihydro-7H-pyrido[3,2,l-ij]-1,3,4-benzoxadiazin- 6-carboxylat

Benzyl-9-fluor-10-(3-hydroxy-1-pyrrolidinyl)-3-methyl-7-oxo- 2,3-dihydro-7H-pyrido[3,2, l-ij] -1,3,4-benzoxadiazin-6-car-30 boxylat (8 mg) vundet i eksempel 57 blev opløst i 0,2 ml thionylchlorid og omrørt ved 60°C i 15 minutter. Reaktions- 37 DK 173330 B1 blandingen blev fortyndet med vand og ekstraheret med chloroform.

Ekstrakten blev koncentreret under reduceret tryk. Remanensen blev chromatograferet på silicagel (2 g) med chloroform til 5 opnåelse af 2,8 mg benzyl-10-(3-chlor-l-pyrrolidinyl)-9-fluor-3-methyl-7-ΟΧΟ-2,3-dihydro-7H-pyrido[3,2,1-ij]-1,3,4 -benzoxadiazin-6-carboxylat, smeltepunkt >300°C; FAB-MS m/z 458 (MH+), 460 (MH+2)+ .

EKSEMPEL 59 10 Fremstilling af 10-(3-chlor-l-pyrrolidinyl)-9-fluor-3-methyl-7-oxo-2,3-dihydro-7H-pyrido[3,2,1-ij]-1,3,4-benzoxadiazin-6-carboxylsyre

Benzyl-10-(3-chlor-1-pyrrolidinyl)-9-fluor-3-methyl-7-oxo- 2,3-dihydro-7H-pyrido[3,2,l-ij]-l,3,4-benzoxadiazin-6-car-15 boxylat (2,5 mg) vundet i eksempel 58 blev hydrogeneret over 5% Pd/C (1 mg) i chloroform.

Efter fjernelse af katalysatoren ved filtrering blev filtratet koncentreret til tørhed under reduceret tryk. Remanensen blev omkrystalliseret af ethanol til opnåelse af 1,0 mg 20 10-(3-chlor-l-pyrrolidinyl)-9-fluor-3-methyl-7-oxo-2,3-dihy- dro-7H-pyrido[3,2,1-ij]-1,3,4-benzoxadiazin-6-carboxylsyre, smeltepunkt 269-272°C (sønderdeling): FAB-MS m/z 368 (MH+), 370 (MH+2)+ .

EKSEMPEL 60 25 Fremstilling af 9-fluor-3-methyl-10-(4-methyl-l-piperazinyl)-7-oxo-2,3-dihydro-7H-pyrido[3,2,1-ij] -1,3,4-benzoxadiazin-6-carboxylsyre via fluorboranmellemproduktet (a) En blanding af 9,10-difluor-3-methyl-7-oxo-2,3-dihydro-7H-pyrido[3,2,1-ij]-1,3,4-benzoxadiazin-6-carboxylsyre 38 DK 173330 B1 (100 mg) vundet i eksempel 1 og 60% vandig fluoborsyre (1 ml) blev opvarmet ved 90°C i 12 timer. Efter afkøling af reaktionsblandingen til stuetemperatur blev bundfaldet opsamlet ved filtrering, vasket med methanol og tørret under reduceret 5 tryk til opnåelse af 110 mg råt 9,10-difluor-6-[[(difluor-boryl)oxy]carbonyl]-3-methyl-2,3-dihydro-7H-pyrido[3,2,1-ij]- 1,3,4-benzoxadiazin-7-on: FAB-MS m/z 331 (MH+) .

(b) Til en omrørt opløsning af ovennævnte boranme11emprodukt (33 mg) i dimethylsulfoxid (1 ml) blev sat N-methylpiperazin 10 (15 μΐ) og triethylamin (20 μΐ). Efter omrøring ved stuetem peratur i 3 timer blev reaktionsblandingen lyofiliseret. Remanensen blev krystalliseret af methanol til opnåelse af 28 mg 6-[[(difluorboryl)oxy]carbonyl]-9-fluor-3-methyl-10-(4 -methyl-l-piperazinyl)-2,3-dihydro-7H-pyrido[3,2,1-ij) -1,3,4-15 benzoxadiazin-7-on som gule krystaller, smeltepunkt 228-230°C (sønderdeling): FAB-MS m/z 411 (MH+) .

(c) Til en opløsning af ovennævnte boranmellemprodukt (5 mg) i 95% ethanol (1 ml) blev sat triethylamin (3 μΐ). Efter opvarmning under tilbagesvaling i 4 timer blev reaktions- 20 blandingen afkølet til stuetemperatur. Det udskilte bundfald blev opsamlet ved filtrering til opnåelse af 9-fluor-3-me-thyl-10-(4-methyl-1-piperazinyl)-7-oxo-2,3-dihydro-7H-pyrido-[3,2,1-ij]-l,3,4-benzoxadiazin-6-carboxylsyre. Smeltepunkt 268-269°C (sønderdeling).

25 EKSEMPEL 61

Fremstilling af 9-fluor-3-methyl-10-(4-methyl-l-piperazinyl)- 7-oxo-2,3-dihydro-7H-pyrido[3,2,1-ij]-1,3,4-benzoxadiazin-6-carboxylsyre via acetoxyboranroellemproduktet (a) En blanding af 9,10-difluor-3-methyl-7-oxo-2,3-dihydro-30 7H-pyrido[3,2,1-ij]-1,3,4-benzoxadiazin-6-carboxylsyre (100 mg) vundet i eksempel 1, eddikesyreanhydrid (1 ml) og triacetoxyboran (100 mg) blev opvarmet ved 140°C i 15 minut-] ter. Reaktionsblandingen blev inddampet under reduceret tryk.

39 DK 173330 B1

Remanensen blev tritureret med acetone og filtreret til opnåelse af 138 mg 6-[ [(diacetoxyboryl)oxy]carbonyl]-9,10-difluor-3-methyl-2,3 -dihydro-7H-pyrido[3,2,l-ij]-i,3,4-ben-zoxadiazin-7-on; FAB-MS m/z 411 (MH+) .

5 (b) Til en opløsning af ovennævnte boranmellemprodukt (41 mg) i dimethylsulfoxid (1 ml) blev tilsat N-methylpiperazin (15 μΐ) og triethylamin (20 μΐ). Efter at blandingen var blevet omrørt ved stuetemperatur i 2 timer, blev reaktionsblandingen lyofiliseret. Remanensen blev krystalliseret af methanol/et-10 her til opnåelse af 34 mg 6-[[ (diacetoxyboryl)oxy]carbonyl]-9-fluor-3-methyl-10-(4-methyl-1-piperazinyl)-2,3-dihydro-7H-pyrido[3,2,l-ij]-l,3,4-benzoxadiazin-7-on som gule krystaller: smeltepunkt 156-157°C (sønderdeling); FAB-MS m/z 491 (MH+) .

15 (c) Ovennævnte boranmellemprodukt (5 mg) blev suspenderet i acetone (0,1 ml) og tilsat koncentreret HC1 (2,5 μΐ) . Reaktionsblandingen blev omrørt ved stuetemperatur i 30 minutter og afkølet i isbad. Det udskilte bundfald blev opsamlet ved filtrering, og bundfaldet blev opløst i 95% ethanol (0,1 ml).

20 Til opløsningen blev sat triethylamin (2 μΐ), og blandingen blev tilbagesvalet i 1 time. Efter afkøling af opløsningen til stuetemperatur blev det udskilte bundfald opsamlet ved filtrering til opnåelse af 9-fluor-3-methyl-10-(4-methyl-1-piperazinyl)-7-oxo-2,3-dihydro-7H-pyrido[3,2,l-ij]-l,3,4-25 benzoxadiazin-6-carboxylsyre, smeltepunkt 268-269°C (sønderdeling) .

EKSEMPEL 6 6

Fremstilling a£ 10-(3-amino-l-pyrrolidinyl)-9-£luor-3-methyl-7-oxo-2,3-dihydro-7H-pyrido[3,2,1-ij] -1, 3,4-benzoxadiazin-6-30 carboxylsyre-hydrochlorid pH af en opløsning af 10-(3-amino-l-pyrrolidinyl)-9-fluor-3-methyl-7-oxo-2,3-dihydro-7H-pyrido[3,2,1-ij]-1,3,4-benzoxadi-azin-6-carboxylsyre (20 mg) vundet i eksempel 30 i vand 40 DK 173330 B1 (1 ml) blev indstillet til 1,0 med 6N-HC1. Den klare opløsning blev derefter lyofiliseret, og remanensen blev krystalliseret af vand/ethanol (1:2) til opnåelse af 19 mg 10-(3-amino-1-pyrrolidinyl)-9-fluor-3-methyl-7-oxo-2,3-dihydro-7H-5 pyrido[3,2,1-ij]-1,3,4-benzoxadiazin-6-carboxylsyre-hydroch-lorid, smeltepunkt 226-228°C (sønderdeling).

EKSEMPEL 67

Fremstilling af 9-fluor-3-methyl-10-(4-methyl-l-piperazinyl)-7-oxo-2,3-dihydro-7H-pyrido[3,2,1-ij1-1,3,4-benzoxadiazin-6-10 carboxylsyre-hydrochlorid 9-Fluor-3-methyl-10-(4-methyl-l-piperazinyl)-7-oxo-2,3-dihydro- 7H-pyr ido [3,2,1-ij]-1,3,4-benzoxadiazin-6-carboxylsyre-hydrochlorid blev vundet analogt med eksempel 66, smeltepunkt 264-266°C (sønderdeling).

15 EKSEMPEL 68

Fremstilling af natrium-9-fluor-3-methyl-10-morpholino-7-oxo- 2,3-dihydro-7H-pyrido[3,2,1-ij]-1,3,4-benzoxadiazin-6-car-boxylat 9-Fluor-3 -me thy1-10-morpholino- 7-oxo-2,3-di hydro-7H-pyri-20 do[3,2,1-ij]-1,3,4-benzoxadiazin-6-carboxylsyre (14 mg) vundet i eksempel 9 blev suspenderet i vand (0,4 ml), og IN natriumhydroxid (40 μΐ) blev tilsat under omrøring. Den klare opløsning blev lyofiliseret, og remanensen blev krystalliseret af vand/ethanol (1:4) til opnåelse af 12 mg natrium-9-25 fluor-3-methyl-10-morpholino-7-oxo-2,3-dihydro-7H-pyri- do [3,2,1-ij]-l,3,4-benzoxadiazin-6-carboxylat, smeltepunkt >300°C.

41 DK 173330 B1 EKSEMPEL 69

Fremstilling af 9-fluor-3-(2-£luorethyl)-10-(4-methyl-l-piperazinyl)-7-oxo-2,3-dihydro-7H-pyrido[3,2,1-ij]-1,3,4-b enz oxadi a z in- 6-carboxylsyre 5 9-Fluor-3- (2-fluorethyl)-10-(4-methyl-l-piperazinyl)-7-oxo- 2,3-dihydro-7H-pyrido [3,2,1-ij] -1,3,4-benzoxadiazin-6-car-boxylsyre blev fremstillet ud fra ethyl-8-benzyloxy-6,7-difluor-1- (formylamino) -4-oxo-l,4-dihydro-3-quinolincarboxy-lat vundet i referenceeksempel (f) ifølge en række procedurer 10 i referenceeksempel (g, h og i) (under anvendelse af 1-brom- 2-fluorethan i stedet for methyliodid), eksempel 1 og eksempel 5, og blev vundet som krystaller, smeltepunkt 220-224°C; MS m/z 394 (M+) efter omkrystallisation af methanol.

EKSEMPEL 80 15 Fremstilling af natrium-9-fluor-3-methyl-10-(4-methyl-l-piperazinyl) -7-OXO-2,3-dihydro-7H-pyrido [3,2,1-ij] -1,3,4-benzoxadiazin-6-carboxylat 9- Fluor-3-methyl-10- (4-methyl-l-piperazinyl) -7-oxo-2,3-dihy-dro-7H-pyrido(3,2,1-ij] -1,3,4-benzoxadiazin-6-carboxylsyre 20 (520 mg) blev opløst i 0,5N natriumhydroxid (2,88 ml). Den klare opløsning blev inddampet under reduceret tryk til opnåelse af 555 mg bleggult pulver, som blev omkrystalliseret af ethanol til opnåelse af 475 mg natrium-9-fluor-3-methyl- 10- (4-methyl-l-piperazinyl) -7-oxo-2,3-dihydro-7H-pyri- 25 do[3,2,l-ij]-1,3,4-benzoxadiazin-6-carboxylat, efter tørring i vakuum ved 80°C i 2 dage: smeltepunkt 252-254°C (sønderdeling) . FAB-MS m/z 385.

Følgende eksempler illustrerer farmaceutiske præparater indeholdende en forbindelse ifølge den foreliggende opfindel-30 se: 42 DK 173330 B1

EKSEMPEL A

Tæt sammenknyttede gelatinekapsler hver indeholdende følgende ingredienser blev fremstillet på i og for sig kendt måde: 9-Fluor-3-methyl-10-(4-methyl-1-5 piperazinyl)-7-oxo-2,3-dihydro-7H- pyrido[3,2,1-ij]-1,3,4-benzoxadiazin- 6-carboxylsyre 200mg

Luviskol (vandopløselig polyvinylpyrrolidon) 20mg

Mannitol 20mg 10 Talkum 15mg

Magnesiumstearat 2mg 257mg

EKSEMPEL B

Tabletter hver indeholdende følgende ingredienser blev frem-15 stillet på i og for sig kendt måde: 9-Fluor-3-methyl-10-(4-methyl-1-piperazinyl)-7-oxo-2,3-dihydro-7H-pyrido[3,2,1-ij]-1,3,4-benzoxadiazin- 6-carboxylsyre 200mg 20 Stivelse 44mg

Carboxymethylcellulosecalcium 30mg

Krystallinsk cellulose 40mg

Magnesiumstearat =6313 320mg

Claims

43 DK 173330 B1

1 XXT OH NHCH3 hvor R er som defineret i krav 1; og tilstedeværende amino-, hydroxy- og/eller carboxygrupper kan være beskyttede, om-15 sættes med formaldehyd eller paraformaldehyd, om nødvendigt efterfulgt af fjernelse af et beskyttende radikal, eller (c) til fremstilling af en forbindelse med formlen I, hvor R betegner 4-acetyl-l-piperazinyl, omsættes en forbindelse med formlen I, hvor R betegner den usubstituerede l-piperazinyl- 20 rest med et middel, der giver acetylgruppen, eller

47 DK 173330 B1 (d) til fremstilling af en forbindelse med formlen I, hvor R betegner 3-methoxy-l-piperidyl, methyleres en forbindelse med formlen I, eller R betegner den tilsvarende 3-hydroxy-1-piperidinylrest, 5 (e) til fremstilling af en forbindelse med formlen I med en fri aminogruppe spaltes aminobeskyttelsesgruppen fra en tilsvarende forbindelse med formlen I med en beskyttet aminogruppe, eller (f) til fremstilling af en forbindelse med formlen I, hvor R 10 betegner 3-chlor-l-pyrolidinyl, halogeneres en tilsvarende hydroxy-substitueret forbindelse med formlen I, hvor carboxyl syregruppen bærer et carboxybeskyttende radikal, og det carboxybeskyttende radikal spaltes fra, eller (g) til fremstilling af en forbindelse med formlen I, hvor R 15 betegner 4-(4-aminobenzyl)-1-piperazinyl, reduceres nitrogruppen af en tilsvarende nitro-substitueret forbindelse med formlen I, eller (h) til fremstilling af farmaceutisk acceptable salte, hydrater eller solvater af en forbindelse med formlen I eller 20 hydrater eller solvater af disse salte, omdannes en forbindelse med formlen I til et salt, hydrat eller solvat eller til et hydrat eller solvat af saltet.

1. Pyrido[3,2,1-ij]-1,3,4-benzoxadiazinderivater med den almene formel q XXX ch3 hvor R betegner 1-piperazinyl, som eventuelt er substitueret 5 i 4-stillingen med methyl, acetyl eller 4-aminobenzyl; mor-pholino; 1-pyrrolidino, som er substitueret i 3-stillingen med amino, aminomethyl, (methylamino)methyl, (ethylamino)-methyl, methoxy eller chlor; 1-imidazolyl, som kan være substitueret i 4-stillingen med methyl; eller 1-piperidyl som 10 er substitueret i 4-stillingen med hydroxy eller methoxy, samt farmaceutisk acceptable salte deraf og hydrater eller solvater af forbindelserne med den almene formel I eller deres salte.

2. Forbindelser ifølge krav 1, _ 15 kendetegnet ved, at gruppen R er Ji-.

3. Forbindelser ifølge krav l, kendetegnet ved, at gruppen R er

4. Forbindelse ifølge krav l, kendetegnet ved, at den er 9-fluor-3-methyl-10- (4-20 methyl-1-piperazinyl)-7-oxo-2,3-dihydro-7H-pyrido[3,2,1-ij]- 1,3,4-benzoxadiazin-6-carboxylsyre eller et farmaceutisk acceptabelt salt deraf eller et hydrat eller solvat af denne forbindelse eller af dette salt.

5. Forbindelse ifølge krav 1, 25 kendetegnet ved, at den er 9-fluor-3-methyl-7-oxo-10-(1-piperazinyl)-2,3-dihydro-7H-pyrido[3,2,1-ij]-1,3,4-benzoxadiazin-6-carboxylsyre eller et farmaceutisk accepta-

44 DK 173330 B1 belt salt deraf eller et hydrat eller solvat af denne forbindelse eller af dette salt.

6. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at den valgt blandt 9-fluor-3-5 methyl-10-morpholino-7-oxo-2,3-dihydro-7H-pyrido[3,2,1-ij]- 1,3,4-benzoxadiazin-6-carboxylsyre, 9-fluor-3-methyl-10- [3-[(methylamino)methyl]-1-pyrrolidinyl]-7-oxo-2,3-dihydro-7H-pyrido[3,2,1-ij]-1,3,4-benzoxadiazin-6-carboxylsyre, 9-fluor-10-(3-methoxy-l-pyrrolidinyl)-3-methyl-7-oxo-2,3-dihydro-7H-10 pyrido[3,2,1-ij]-1,3,4-benzoxadiazin-6-carboxylsyre, 10-[3-(aminomethyl)-1-pyrrolidinyl]-9-fluor-3-methyl-7-oxo-2,3-dihydro-7H-pyrido[3,2,l-ij]-1,3,4-benzoxadiazin-6-carboxylsyre, 9-fluor-10-{1-imidazolyl)-3-methyl-7-oxo-2,3-dihydro-7H-pyrido[3,2,1-ij]-1,3,4-benzoxadiazin-6-carboxylsyre, 9-15 fluor-3-methyl-10-(4-methyl-l-imidazolyl)-7-oxo-2,3-dihydro-7H-pyrido[3,2,l-ij]-1,3,4-benzoxadiazin-6-carboxylsyre, 9-fluor-10- (4 - hydroxy-1-piper idyl) -3-methyl-7-oxo-2,3-dihydro-7H-pyrido[3,2,l-ij]-1,3,4-benzoxadiazin-6-carboxylsyre, 10-(3-chlor-l-pyrrolidinyl)-9-fluor-3-methyl-7-oxo-2,3-dihydro-20 7H-pyrido[3,2,1-ij]-1,3,4-benzoxadiazin-6-carboxylsyre, 10-(4-acetyl-l-piperazinyl)-9-fluor-3-methyl-7-oxo-2,3-dihydro-7H-pyrido [3,2,1-ij]-1,3,4-benzoxadiazin-6-carboxylsyre, 9-fluor-10-(4-methoxy-l-piperidyl)-3-methyl-7-oxo-2,3-dihydro-7H-pyrido[3,2,l-ij]-i,3,4-benzoxadiazin-6-carboxylsyre.

7. Forbindelse ifølge krav l, kendetegnet ved, at den er 10-[3-[(ethylamino)-methyl]-1-pyrrolidinyl]-9-fluor-3-methyl-7-oxo-2,3-dihydro-' 7H-pyrido[3,2,1-ij]-1,3,4-benzoxadiazin-6-carboxylsyre eller et farmaceutisk acceptabelt salt deraf eller et hydrat eller 30 solvat af denne forbindelse eller af dette salt.

8. Forbindelse ifølge krav l, kendetegnet ved, at den er 10-(3-amino-l-pyrroli-dinyl)-9-fluor-3-methyl-7-oxo-2,3-dihydro-7H-pyrido[3,2,1-ij]-1,3,4-benzoxadiazin-6-carboxylsyre eller et farmaceutisk 45 DK 173330 B1 acceptabelt salt deraf eller et hydrat eller solvat af denne forbindelse eller af dette salt.

9. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at den er 10-[4-(4-aminobenzyl)-5 1-piperazinyl]-9-fluor-3-methyl-7-oxo-2,3-dihydro-7H-pyri-do[3,2,1-ij]-1,3,4-benzoxadiazin-6-carboxylsyre eller et farmaceutisk acceptabelt salt deraf eller et hydrat eller solvat af denne forbindelse eller af dette salt.

10. Forbindelser med den almene formel; O F'N^v^A^COOH I i <III> v ch3 10 hvor X' betegner et halogenatom.

11. Forbindelser med den almene formel X^^Jl^COOR1 6 (V) R“N X 1 2 I OH NHRZ ft5 hvor R er som defineret i krav 1.

12. Forbindelser ifølge et hvilket som helst af kravene 1-9 til anvendelse som farmaceutisk aktive stoffer. DK 173330 B1 4 6

13. Forbindelser ifølge et hvilket som helst af kravene 1-9, kendetegnet ved, at de er farmaceutisk aktive stoffer til behandling og profylakse af infektionssygdomme.

14. Fremgangsmåde til fremstilling af forbindelserne ifølge 5 et hvilket som helst af kravene 1-9, kendetegnet ved, at den omfatter, at (a) en forbindelse med den almene formel o JJ (III) ^ ch3 hvor X' er et halogenatom; og tilstedeværende carboxygrupper eventuelt er beskyttede, omsættes med en amin med den almene 10 formel, hvor R er som defineret i krav l, om nødvendigt efterfulgt af fjernelse af et beskyttende radikal, eller (b) en forbindelse med den almene formel O ___-C00H

15. Farmaceutisk præparat, kendetegnet ved, at det indeholder en forbindelse 25 ifølge et hvilket som helst af kraven 1-9.

16. Farmaceutisk præparat til behandling og profylakse af infektionssygdomme, kendetegnet ved, at det indeholder en forbindelse ifølge et hvilket som helst af kravene 1-9. 48 DK 173330 B1

17. Anvendelse af forbindelserne ifølge et hvilket som helst af kravene 1-9 til fremstilling af medikamenter til behandlingen og profylaksen af infektionssygdomme.