DK172411B1 - 7-Oxabicycloheptyl-substituerede heterocycliske amid-prostaglandin-analoge samt præparat til inhibering af blodpladeaggregering og bronchokonstriktion - Google Patents

Description

DK 172411 B1

Den foreliggende opfindelse angår hidtil ukendte 7-oxabicycloheptyl-substituerede heterocycliske amid-prosta-glandin-analoge, der er thromboxan A2 (TXA2)-receptor-antagonister eller kombinerede thromboxan A2-receptor-antagonis-5 ter/thromboxan-synthase-inhibitorer, der f.eks. kan anvendes ved behandlingen af thrombotiske og/eller vasospastiske lidelser, og som har en god virkningsvarighed. Disse forbindelser har den almene formel

10 Vm-Z-tCHPn-COOR

^>X·: 15 X0 O^y XR^ herunder alle stereoisomere deraf, i hvilken formel R betyder H eller et alkalimetalatom, m betyder 1, 2 eller 3, 20 n betyder 2, 3 eller 4, Z betyder -(CH2)2- eller -CH=CH-, R1 betyder H eller C-^-Cø-alkyl, og R^ betyder C^-Cg-alkyl, der eventuelt indeholder en C3-C8-cycloalkylgruppe eller en phenylgruppe.

25 Ifølge opfindelsen særligt foretrukne forbindelser er angivet i krav 2-6.

Opfindelsen angår også et præparat til inhibering af blodpladeaggregering og bronchokonstriktion, og dette præparat er ejendommeligt ved, at det indeholder en virksom 30 mængde af en forbindelse ifølge krav 1 samt et farmaceutisk acceptabelt bærestof derfor.

De her omhandlede alkylgrupper med henholdsvis 1-6 og 1-8 C-atomer omfatter såvel ligekædede som forgrenede grupper, f.eks. methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, 35 tert.butyl, isobutyl, pentyl, hexyl, isohexyl, heptyl, 4,4-dimethylpentyl, octyl og 2,2,4-trimethylpentyl og de for- 2 DK 172411 B1 skellige isomere deraf med forgrenet kæde.

De her omhandlede cycloalkylgrupper omfatter mættede cycliske carbonhydridgrupper indeholdende 3-8 carbonatomer, herunder cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl, 5 cycloheptyl og cyclooctyl.

Forbindelserne ifølge opfindelsen kan fremstilles på følgende måde.

Forbindelser ifølge opfindelsen, hvor Z betyder -CH=CH-, fortrinsvis på cis-formen, fremstilles ud fra 10 hydroxymethyl-forbindelsen med den almene formel (CH-) -CH=CH-(CEL ) -CO^alkyl ,— ' 2 m 2 n 2 . "Cff

\ I CH20H

der fremstilles som beskrevet i US patentskrift nr. 4.143.054, der underkastes en Jones-oxidation, ved hvilken 20 forbindelsen med formlen II omsættes med Jones' reagens (Cr03 opløst eller suspenderet i vandig svovlsyre, fremstillet som beskrevet af Fieser & Fieser i "Reagents for Organic Synthesis", bind I, side 142 (1967)), i nærværelse af acetone under en indifferent atmosfære, f.eks. argon, ved en tempe-25 ratur i området fra ca. -10 til ca. 20°C, til dannelse af den tilsvarende carboxylsyre med den almene formel III

(cV»-CH’CB-<CH2>n-C02,,lkyl - “ AT “

COOH

'0

Syren med formlen III i et indifferent organisk op-35 løsningsmiddel, f.eks. tetrahydrofuran, underkastes dernæst en carbodiimid-koblingsreaktion med et amid med den almene 3 DK 172411 B1

formel A

O .R1 I» /

A H.N-CH-C-N

2 1 \ 2 c- CH0 Rz 5 /2

HO

i nærværelse af dicyclohexylcarbodiimid (DCC) eller l-(3--dimethylaminopropy1)-3-ethylcarbodiimid-hydrochlorid (WSC)

10 og 1-hydroxybenzotriazol under en indifferent atmosfære, f.eks. argon, under anvendelse af et molært forhold mellem A og III i området fra ca. 1,2:1 til ca. 1:1, til dannelse af hydroxybisamidet med den almene formel IV

^(CH,) -CH=CH-(CH ) -COalky1 15 2 ® 2 n 2 '(J = ,

\ C—N—CH—C—N—R

\ l till I 2

N 0 OH CHo0H R

20 2

Hydroxybisamidet med formlen IV underkastes derpå cyclodehydratisering, idet en opløsning af forbindelsen IV i et indifferent organisk opløsningsmiddel, f.eks. tetrahy-drofuran, acetonitril eller chloroform, under en indifferent 25 atmosfære, f.eks. argon, behandles med triphenylphosphin og carbontetrachlorid i nærværelse af en aminbase, f.eks. tri-ethylamin, til dannelse af en oxazolin med den almene formel V: VCH'æ- (OT2 )n-c°2alky1 XTr>^ O Ο-j O ΈΓ

Alternativt behandles hydroxybisamidet med formlen 35 4 DK 172411 B1 IV med et sulfonylchlorid, f.eks. methansulfonylchlorid, og en aminbase, f.eks. triethylamin, efterfulgt af behandling med kaliumcarbonat i acetone til dannelse af en oxazolin med den almene formel V.

5 Oxazolinen med formlen V oxideres ved behandling med tnangandioxid eller nikkelperoxid, fortrinsvis nikkelperoxid, til dannelse af en oxazol med den almene formel IA' IA, (CH2 V-CH=CH~(CH2 )n-C02»lkyl " \Ov “ \J \ JO-?;*1 O O -/ o R2 15 Alternativt kan oxazolen med formlen IA' fremstilles

ud fra syren med formlen III

ttt iCH2>m‘CH=CH‘,CB2,n-C02*lky1 » 07

j XCOOH

ved en carbodiimid-kobling som beskrevet i det foregående, 25 men med den undtagelse, at man anvender A' i stedet for A til opnåelse af forbindelsen med formlen VI: 5 DK 172411 B1 CO-Pro / 2

A' H-N-CH

~ 2 \

CH2OH

5 ,--- (CH2)m-CH=CH-(CH2)n-C02alkyl VI / / cis \ u 10 \^>\ N _ CO Pro

\fY SV

O O CH2OH

15 hvor Pro er en konventionel beskyttende gruppe. Hydroxyamidet med formlen VI underkastes derpå en cyclodehydratisering og oxidation som beskrevet for forbindelsen IV og V til dannelse af en forbindelse med den almene formel VII

20 (CH2)m-CH=CB-<CH2)n-C02alkl’1 VI1 / / cis \irV°y“ 25 ° 0 ‘

Den beskyttende gruppe i formlen VII kan fjernes til dannelse af den tilsvarende syre med formlen VIII

<ra2>m-CH=CH-<CH2>n-C02alkr1 VIII / I--/ cis 35 som behandles med overskud af oxalylchlorid i nærværelse af et indifferent organisk opløsningsmiddel, f.eks. toluen, 6 DK 172411 B1

methylenchlorid eller chloroform, og om ønsket en katalytisk mængde dimethylformamid, idet der omrøres under en indifferent atmosfære, f.eks. argon, til dannelse af det rå syre-chlorid med den almene formel IX

(CH2)m-CH=CH-(CH2) -CO alkyl 1X / 1/ — \Tt>L· som behandles med et amin-hydrochlorid med formlen A"

Al HC1HN-R1

I5 I

R2 i nærværelse af en organisk base, f.eks. triethylamin, under en indifferent atmosfære, f.eks. argon, under anvendelse af 20 et molært forhold mellem IX og A" i området fra ca. 0,5:1 til ca. 1:1, fortrinsvis fra ca. 0,8:1 til ca. 1:1, til dannelse af en forbindelse med formlen IA': ^/<fCa2 )m-CH=CH-( CH2 >n-C02alkyl 25 / |7 Si- XTr>K, 30 Forbindelser med formlen I, i hvilken Z betegner -CH=CH-, der er den trans-dobbeltbundne isomer, kan fremstilles ud fra hydroxymethylforbindels en II, der indeholder en cis-dobbeltbinding. Forbindelsen II behandles med en beskyttende forbindelse, f.eks. tert.butyldimethylsilylchlorid 35 eller en anden silyl-beskyttende gruppe, som beskrevet i det foregående, i nærværelse af imidazol eller triethylamin og et indifferent organisk opløsningsmiddel, f.eks. methylen- 7 DK 172411 B1

chlorid eller tetrahydrofuran, til dannelse af den beskyttede forbindelse med formlen X

(CH2 )m-CH=CH- (“2 )n-C02alkyl

‘ ‘ \H

\ I CH2OPro O

10 En opløsning af den beskyttede alkohol med formlen X

i et indifferent organisk opløsningsmiddel, f.eks. methylen-chlorid eller acetone, behandles med overskud af ozon ved nedsat temperatur fra ca. -78 til ca. -60°C, efterfulgt af behandling med overskud af dimethylsulfid (molært forhold

15 mellem X og (CK^^S i området fra ca. 1:100 til ca. 1:5), eller triphenylphosphin, til dannelse af aldehydet med formlen XI

- QT

nT I NCH2-OPro 25 I tilfælde af forbindelser ifølge opfindelsen, hvor Z betyder -CH=CH- på trans-formen, og n har værdien 2, behandles aldehydet XI derpå med en blanding af lithiumbromid eller lithiumchlorid og trimethylphosphonoacetat og triethyl-amin i et indifferent organisk opløsningsmiddel, f.eks.

30 methylenchlorid eller chloroform, til dannelse af esteren med den almene formel XII

8 DK 172411 B1 (CH2)m“CH=CH-C02 alkyl “Ci - \ CH2-OPro X0

En opløsning af esteren med formlen XII i et indifferent organisk opløsningmiddel, f.eks. tetrahydrofuran,

10 ether eller dimethoxyethan, afkøles til en temperatur fra ca. -78 til 0°C og omsættes med diisobutylaluminiumhydrid i et aromatisk opløsningsmiddel, f.eks. toluen, i et tidsrum på fra ca. 0,5 til ca. 4 timer til dannelse af en alkohol med den almene formel XIII

(CH2 ^m“CH=CH-CH20H

/ 1/ trans 20 \ I CH2-OPro

O

Alkoholen med formlen XIII behandles med bromtriphe-nylphosphoniumbromid (fremstillet ved tilsætning af brom til triphenylphosphin i toluen eller et andet aromatisk 25 opløsningsmiddel under en indifferent atmosfære, f.eks. argon, ved en nedsat temperatur fra ca. -10 til ca. 10°C) i nærværelse af pyridin og toluen, ved en nedsat temperatur fra ca. -10 til ca. 10°C, til dannelse af et bromid med formlen XIV

30 ^ (CH, )_-CH=CH-CH_-Br XIV /"Y'f m trans \1 XCH2-OPro o 9 DK 172411 B1

En eddikesyrealkylester, f.eks. tert.butylacetat eller ethylacetat, behandles med en opløsning af LDA (lithi-umdiisopropylamid) i et indifferent organisk opløsningsmiddel såsom tetrahydrofuran ved en formindsket temperatur fra ca.

5 -78 til ca. -60°C i et tidsrum fra ca. 1/2 til ca. 2 timer, efterfulgt af tilsætning af en opløsning af et bromid med formlen XIV i et indifferent organisk opløsningsmiddel, f.eks. tetrahydrofuran, til dannelse af en ester med formlen XV (hvor n = 2) 10 (CH2 >m-CH=CH-(CH2 >n-C02alkyl XV / / trans 15 \l XcH2-°Pr° xo

I tilfælde af forbindelser ifølge opfindelsen, hvor Z betyder -CH=CH- på trans-formen, og n betyder 2, 3 eller 4, får aldehydet med formlen XI lov at reagere med et phos-20 phoniumsalt med formlen P

Br°" Φ

P (C6H5)3P-(CH2)n+i-CH2OH

25 i nærværelse af en stærk base, f.eks. kalium-tert.amylat, i toluen eller NaH/dimethylsulfoxid til dannelse af en forbindelse med formlen XIII'

30 MII, (CH2)m-CH=CH-(CH2)n-CH2OH

\ I CH2-OPro 35 ° som oxideres og esterificeres under anvendelse af metoder, der er kendt for fagmanden, til dannelse af en ester med 10 DK 172411 B1 formlen XV, hvor n betyder 2, 3 eller 4.

Esteren med formlen XV afbeskyttes derpå ved behandling af forbindelsen med formlen XV i methanol under en indifferent atmosfære, f.eks. argon, med saltsyre i methanol 5 (fremstillet ved tilsætning af acetylchlorid til methanol) til dannelse af en alkohol med formlen XVI

(CH2 >m-CH=C»-(CH2 >n-C02alkyl / (trans)

\TV-OH

Forbindelsen med formlen XVI kan derpå anvendes i 15 stedet for forbindelsen med formlen II som udgangsmateriale under anvendelse af den i det foregående beskrevne metode til dannelse af syre med formlen IIIA

(>n”C02alkyl IIIA / T^T (trans)

Cu

\ 1 COOH

'o 25 og derefter til dannelse af trans-forbindelsen med formlen IA" IA" (CH2)m-CH=CH-(CH2)n-C02alkyl ς&>~

N0 O—J o R

Esterne med formlen IA' og IA" kan omdannes til de 35 tilsvarende syrer, dvs. forbindelser med den almene formel il 11 DK 172411 B1

ς (CE ) -CH=CH-(CH ) -COOH

n>LC

ved behandling af esterne med en base, f.eks. lithiumhydrox-id, natriumhydroxid eller kaliumhydroxid, til dannelse af 10 det tilsvarende alkalimetalsalt, efterfulgt af neutralisation med en syre, f.eks. fortyndet saltsyre eller oxalsyre, til dannelse af syreforbindelserne ifølge opfindelsen.

Forbindelser med formlen I, i hvilken Z betyder -(CH2)2_# kan fremstilles ud fra syren med formlen I1 ved 15 at underkaste denne en hydrogenering under anvendelse af f.eks. en hydrogeneringskatalysator såsom palladium på trækul i nærværelse af et indifferent organisk opløsningsmiddel, f.eks. ethylacetat (EtOAc) eller eddikesyre (AcOH) til dannelse af syren ifølge opfindelsen med den almene formel I2

j2 (Ca2)m~(CB2h~(CB2)n-COOH

Wx:h<;

Syrerne med formlerne I1 eller I2 kan på kendt måde omdannes til de tilsvarende alkalimetalsalte.

Forbindelserne ifølge opfindelsen har fire asymmetri-30 centre som angivet ved stjernerne i den almene formel I. Det vil imidlertid være klart, at hver af de ovenfor angivne formler, der ikke har stjerne-angivelse, repræsenterer alle de mulige stereoisomere deraf. Alle de forskellige stereo-isomere former af forbindelserne med den almene formel I 35 ligger inden for opfindelsens rammer.

De forskellige stereoisomere former af forbindelserne ifølge opfindelsen, nemlig cis-exo-, cis-endo- og alle trans- 12 DK 172411 B1 -former og stereoisomere par kan fremstilles ved anvendelse af udgangsmaterialer og ved anvendelse af de fremgangsmåder, der er beskrevet i US patentskrift nr. 4.143.054. Eksempler på sådanne stereoisomere er angivet i det følgende:

<SJ2>m-z-<CH2>n-COOR

io V'T'W'v s /Rl \ m />c-\ 2

x0 H 0--/ XRZ

(cis-endo)

15 H

T,,.»(CH2)in“z“<CH2^n"COOR

Ib \ 20 I - 1 \ \_ II / 0 (cis-exo) 25

H

^f.""(CH2)m-Z-(CH2)n-COOR Ic / / 30 X 1 / i ^ N. O ΈΓ \lu2

‘ OHO—f XRZ

35 (trans) 13 DK 172411 B1

^H2>m-2-(CH2>n-COOR

'“H

id / ------ \ I '^n\ ° r1

roJ^C-V

(trans) 10

Kernen i hver af forbindelserne ifølge opfindelsen er angivet som følger: ^ <JT7 af bekvemmelighedshensyn. Det vil også forstås, at kernen i forbindelserne ifølge opfindelsen kan angives som følger:

Forbindelserne ifølge opfindelsen er thromboxan-re-25 ceptor-antagonister og er som sådanne anvendelige som inhibitorer for thromboxan-receptor-formidlede virkninger. Betegnelsen "thromboxan-receptor-antagonist" omfatter forbindelser, der er såkaldte thromboxan A2-receptor-antagonister, thromboxan A2-antagonister, thromboxan A2/prostaglan-30 din-endoperoxid-antagonister, TP-receptor-antagonister eller thromboxan-antagonister.

Forbindelserne ifølge opfindelsen er også thromboxan--synthetase-inhibitorer og kan således anvendes som inhibitorer for thromboxan-produktion.

35 De her omhandlede forbindelser kan anvendes som in hibitorer for blodpladefunktionen, dvs. til prævention og 14 DK 172411 B1 behandling af thrombotiske vasculære occlusive lidelser, hvad enten disse er fuldstændige eller partielle, f.eks. arteriel thrombose, herunder coronarthrombose, cerebral-thrombose, ophthalmisk thrombose, hepatisk thrombose, mesen-5 terisk thrombose, renal thrombose, thrombose i perifere arterier eller vasculære eller organtransplantationer, in-stabil angina, transiente iskæmiske anfald eller intermitterende claudication. Forbindelserne kan anvendes til hindring af thrombose efter vasculær beskadigelse fremkaldt 10 under diagnostiske eller terapeutisk procedurer, f.eks. endarterectomi eller angiografi. Forbindelserne kan anvendes til behandling eller prævention af lidelser, der er karakteriseret ved blodpladekonsumption og/eller aktivering, herunder blodpladeaktivering, dysfunktion og/eller tab under 15 extrakorporeal cirkulation, anvendelse af røntgenkontrast-midler, thrombotisk thrombocytopenia purpura, dissemineret intravasculær koagulation, purpura fulminans, hæmolytisk transfusionsreaktion eller hæmolytisk uremisk syndrom, systemisk lypus, cyclosporin-induceret renaltoksicitet, pul-20 monær hypertension, bivirkninger fra dialyse eller abdominal aortisk aneurisme-reparation. Forbindelserne kan anvendes ved behandlingen af venøs thrombose eller emboli, herunder pulmonær emboli, dyb venøs thrombose, hepatisk venethrombose og renal venethrombose.

25 Forbindelserne ifølge opfindelsen kan anvendes som inhibitorer for arteriel eller venøs vasokonstriktion. De kan således anvendes til hindring af vasokonstriktion forbundet med instabil angina, kronisk stabil angina og varianter deraf eller Prinzmetal's angina, Raynaud’s syndrom, 30 migrænehovedpine, vasospasmer i de coronare, cerebrale, ophthalmiske, hepatiske, mesenteriske, renale, perifere arterier eller vasculære transplantationer, vasculær beskadi-gelse, f.eks. som i forbindelse med kirurgi eller trauma. Hypertension i forbindelse med graviditet, det hepato-renale 35 syndrom og pulmonær hypertension er yderligere eksempler på vasokonstriktive lidelser, der lader sig behandle med for- 15 DK 172411 B1 bindeiserne ifølge den foreliggende opfindelse.

Forbindelserne ifølge opfindelsen kan anvendes som inhibitorer for bronchokonstriktion, dvs. luftvejs-hyper-respons, allergiske bronchospasmer, astma og bronchokonstrik-5 tivt respons på miljømæssige, inficerende, giftige eller mekaniske stimuli.

Forbindelserne ifølge opfindelsen kan anvendes som inhibitorer af iskæmisk og reperfusions-beskadigelse af forskellige væv, herunder myocardium, hud, hjerne, tarm 10 eller nyre, alene eller i kombination med andre midler, der skal genskabe blodstrømmen. Eksempelvis kan disse forbindelser anvendes til forbedring af post-iskæmisk myocardial funktion og formindskelse af størrelsen af myocardial in-farkt. Iskæmi, der forårsages af nedsat blodgennemstrømning 15 under diagnostiske eller terapeutiske procedurer, kan bedres ved behandling med disse forbindelser, idet de f.eks. formindsker den myocardiale lammelse, der iagttages efter by-pass-kirurgi. Desuden kan de være anvendelige til nedsættelse af vævsbeskadigelse forårsaget af et slagtilfælde.

20 Forbindelserne ifølge opfindelsen kan anvendes ved prævention eller behandling af andre tilstande, herunder forbrændinger, diabetisk retinopati, tumor-metastaser og tardiv dyskinesi. Forbindelserne kan også anvendes ved po-tentiering af diuretisk-induceret diurese.

25 Desuden kan thromboxan-receptor-antagonisterne ifølge opfindelsen anvendes sammen med et thrombolytisk middel, f.eks. t-PA, streptokinase, urokinase, prourokinase eller anisoyleret plasminogen-streptokinase-aktivatorkompleks (APSAC) inden for 6 timer fra en myocardial inf arkt. I så-30 danne tilfælde kan det thrombolytiske middel anvendes i mængder, der konventionelt benyttes, f.eks. som angivet i Physicians' Desk Reference, til nedsættelse af post-iskæmisk i myocardial beskadigelse.

Forbindelserne ifølge opfindelsen kan indgives oralt 35 eller parenteralt til forskellige pattedyrarter, der vides at være udsat for de nævnte lidelser, f.eks. mennesker, m 16 DK 172411 B1 katte, hunde og lignende, i en virksom mængde i dosisområdet fra ca. 0,1 til ca. 100 mg/kg, fortrinsvis fra ca. 0,2 til ca. 50 mg/kg, navnlig fra ca. 0,5 til ca. 25 mg/kg (eller fra ca. 1 til ca. 2500 mg, fortrinsvis fra ca. 5 til ca.

5 2000 mg) ved en dosering i enkeltdoser eller 2 til 4 delte daglige doser. Forbindelserne ifølge opfindelsen, har særlig lang varighed af virkningen, og disse forbindelser kan om ønsket indgivet i de ovennævnte doser én gang daglig, én gang hveranden dag eller om ønsket én gang dagligt to gange 10 om ugen.

Det aktive stof kan anvendes i et præparat såsom en tablet, en kapsel, en opløsning eller en suspension indeholdende fra ca. 5 til ca. 500 mg pr. dosisenhed af en forbindelse eller blanding af forbindelser med formlen I, eller i 15 topisk form til sårheling (0,01-5 vægt% forbindelse med formlen I, 1-5 behandlinger pr. dag). De kan sammensættes på konventionel måde sammen med et fysiologisk acceptabelt medium eller bærestof, strækkemiddel, bindemiddel, konserveringsmiddel, stabiliseringsmiddel eller smagsstof eller 20 lignende, eller sammen med et topisk bærestof, f.eks. Pla-stibase (mineralolie gelatineret med polyethylen), som påkrævet inden for accepteret farmaceutisk praksis. Som angivet i den ovenstående diskussion kan visse forbindelser yderligere tjene som intermediater for andre forbindelser i 25 gruppen.

Forbindelserne ifølge opfindelsen kan også indgives topisk til behandling af perifere vasculære lidelser og kan som sådanne anvendes til fremstilling af præparater i form af cremer og lotions.

30 Der er blevet udført sammenligningsforsøg med en forbindelse ifølge opfindelsen, nemlig forbindelsen (syren) ifølge krav 6, og en kendt forbindelse med samme virkning og en nært beslægtet struktur, nemlig indeholdende molekyl-delen

35 v!r»iUD

o H

17 DK 172411 B1 i stedet for molekyldelen T>S—0 i forbindelse med bestemmelse af inhibering af blodplade-aggregering og bestemmelse af toksiciteten. Forsøgene har vist, at forbindelsen ifølge opfindelsen er mindst 10 gange 10 kraftigere virkende end sammenligningsforbindelsen, og selv i det tilfælde, hvor dosis af forbindelsen ifølge opfindelsen kun er ca. 1/50 af dosis af sammenligningsforbindelsen, opnås der med forbindelsen ifølge opfindelsen bedre overlevelse.

De følgede eksempler belyser opfindelsen og repræsen-15 terer foretrukne udførelsesformer for denne. Med mindre andet er angivet, er alle temperaturer angivet i celciusgrader.

Eksempel 1 2 0 TIS - flof. 2 a (Z) . 3 a. 4 al 1 - 6- [3 [4 - Γ f (4-cvclohexvlbutvl) - amino ] - carbonvl 1 -2 -oxazol vi 1 - 7 -oxabicvclo Γ2.2 , Π hept-2 - vil -4-he-xensvre A. f (1, 1-Dimethvlethoxv)-carbonvlT-N-(4-cvclohexvlbutvl) -L-serinamid 25 Til en opløsning af 575 mg 4-cyclohexylbutylamin-hy- drochlorid (3,0 mmol), 615 mg tert.butyloxycarbonyl-L-serin (3,0 mmol eller 1,0 ækvivalenter), 405 mg 1-hydroxybenzo-triazol-hydrat (3,0 mmol eller 1,0 ækvivalenter) og 387 mg diisopropylethylamin (3,0 mmol eller 1,0 ækvivalenter) i 10 30 ml tør tetrahydrofuran (THF) under omrøring under argonatmosfære ved 0°C sættes der i en enkelt portion 618 mg 1,3 dicyclohexylcarbodiimid (3,0 mmol eller 1,0 ækvivalenter).

Der dannes langsomt en fældning. Efter 1 time opvarmes blandingen til stuetemperatur og omrøres i 4 timer. Efter for-35 tynding med ethylacetat filtreres blandingen, og filtratet vaskes med en saltopløsning med en pH-værdi på 1 (fremstillet 18 DK 172411 B1 ved blanding af vand, saltopløsning og 1 M vandig HCl-opløs-ning). Yderligere vaskning to gange med 1 M NaHC03, efterfulgt af tørring med Na2S04 og inddampning, giver 1,1 g af det rå amid som angivet i overskriften.

5 TLC (10% [10% koncentreret vandig NH3 i CH3OH] i CH2CI2-anisaldehyd):

Cyclohexylbutylamin-HCl 0,27

Amid angivet i overskriften 0,47 10 B. N-(4-Cvclohexvlbutvl)-L-serinamid

Til en opløsning af 1,1 g råt amid fra A i 4 ml CH2C12 ved stuetemperatur sættes der 4 ml trifluoreddikesyre. Blandingen omrøres i 4 timer. Efter fordampning af opløsningsmidlet fjernes resterende trifluoreddikesyre azeotropisk 15 ved rotationsfordampning med CHCI3. Ved flash-chromatografi (150 g silica, 10% [10% koncentreret vandig NH3 i CH3OH] i CH2CI2) fås der efter azeotropisk behandling med toluen og udsættelse for højvakuum 495 mg af den rene amin angivet i overskriften i form af et hvidt fast stof. Udbyttet af den 20 i overskriften angivne amin er totalt 68% beregnet på 4-cy-clohexylbutylamin-hydrochlorid.

TLC (10% [10% koncentreret vandig NH3 i CH3OH] i CH2CI2-anisaldehyd):

Amid fra A 0,47 25 Amin angivet i overskriften 0,17.

13C NMR (67,8 MHz i CDCI3): 173,4, 64,6, 56,3, 39,1, 37,3, 36,9, 33,1, 29,6, 26,5, 26,2, 24,0.

C . flS- riof. 2α (Z) ,3α. 4α1 1 - 6- Γ3 - (hvdroxvmethvl) -7-oxa-30 bicvclo Γ2.2.Π hent-2-vil-4-hexensvre-methvlester

Til en partiel opløsning af 36,27 g [4aR-(4aa,5S,8S,-8aS)]-octahydro-5,8-epoxy-lH-2-benzopyran-3-ol (fremstillet som beskrevet i US patentskrift nr. 4.143.054) (0,23 mol) og 127,34 g (0,37 mol) 3-carboxypropyl-triphenylphosphoniumbro-35 mid i 600 ml tør THF under argon ved 3°C sættes der dråbevis i løbet af 1 time en opløsning af 360 ml kalium-tert.amylat 19 DK 172411 B1 (0,68 mol af en 1,8 M toluenopløsning) under mekanisk omrøring. Reaktionstemperaturen når til at begynde med et maksimum på 8°C og aftager derefter til 4°C under resten af basetiIsætningen. Reaktionen forløber dernæst ved stuetem-5 peratur i 90 minutter. Der indføres et isbad med en temperatur på 0°C, og reaktionen standses ved tilsætning af 152 ml iseddike i løbet af 30 minutter. Opløsningsmidler fjernes i vakuum (azeotropisk behandling med toluen). Der tilsættes 640 ml vand og 50 ml koncentreret saltsyre med en pH-værdi 10 på 2,6. Efter fortynding med 640 ml ethylacetat, tilsætning af 14 9 g natriumchlorid og nogle få podekrystaller af 3-carb-oxypropyltriphenylphosphoniumbromid udføres der en kraftig omrøring i 15 minutter. Fældningen opsamles ved filtrering og vaskes med to portioner på hver 320 ml ethylacetat. Ethyl-15 acetatlaget skilles fra, det vandige lag ekstraheres med 2 x 200 ml ethylacetat, og de kombinerede ethylacetatlag tørres med magnesiumsulfat og koncentreres. Der tilsættes 507 ml 5%'s K2CO3, hvorpå der omrøres kraftigt i 1 time. Der forekommer ingen fældning. Reaktionsblandingen koncentreres til 20 en pasta og suspenderes i 508 ml vand. Efter flere timers kraftig omrøring fås der ingen fældning. Vandet dekanteres fra, og remanensen suspenderes i 200 ml vandig 5%'s K2CO3--opløsning. Efter kraftig omrøring opsamles der ved filtrering et lysebrungult fast stof, der skylles flere gange med 25 vand. De kombinerede vandige lag ekstraheres fem gange med en blanding af toluen og ether i forholdet 1:1 (230 ml pr.

gang). Efter afkøling af de kombinerede vandige lag med et isbad med en temperatur på 0°C tilsættes der koncentreret saltsyre til en pH-værdi på 2,5, efterfulgt af én ekstraktion 30 med 460 ml og dernæst to ganges ekstraktion med 230 ml pr. gang af ethylacetat. De kombinerede ethylacetatlag tørres med magnesiumsulfat og inddampes i vakuum, hvorved der fås 49,74 g af en ravfarvet olie. Triturering med 330 ml ether (stuetemperatur natten over) giver udskillelse af phosphorholdige 35 biprodukter i form af en olier. Etheropløsningen dekanteres fra den mørkerøde olie i en skilletragt, og olie, der over- 20 DK 172411 B1 føres ved dekanteringen, drænes bort (1,56 g). Inddampning af etheropløsningen i vakuum giver 43,08 g [IS-[Ια, 2α(Z) , -3a,4a]]-6-[3-hydroxymethyl-7-oxabicyclo[2,2,1]hept-2-yl]-4--hexensyre i form af en viskos, gul olie.

5 1H-NMR indikerer et produkt: triphenylphosphinoxid: ether-molforhold på 23,:1:1,8 (masse-procent 93:4,7:2,2). Udbytte eksklusive triphenylphosphinoxid/ether, 40,06 g (72,5%).

5,20 ml (0,073 mol) Acetylchlorid sættes dråbevis 10 til 80 ml methanol ved stuetemperatur under argonatmosfære. Acetylchlorid-methanol-opløsningen sættes derpå til en opløsning af 42,98 g (0,18 mol) i 700 ml methanol i én portion. Omrøringen fortsættes i 3 timer. Der tilsættes 0,09 mol (12,21 ml) triethylamin, methanol fjernes i vakuum, og re-15 manensen fordeles mellem 300 ml ethylacetat og 150 ml vand. Efter adskillelse af lagene ekstraheres det vandige lag med 150 ml ethylacetat, og de kombinerede ethylacetatlag vaskes med saltopløsning, tørres med natriumsulfat og inddampes i vakuum, hvorved der fås 43,06 g af en viskos, brungul olie.

20 Flash-chromatografi på 1350 g E. Merck Kieselgel 60-silicagel (240-400 mesh, 75/25 ether/hexaner, derefter ether, efter at det ønskede produkt begynder at elueres fra søjlen) giver 35,74 g af den i overskriften angivne ester i form af en viskos, lysegul olie, der er fri for triphenylphosphinoxid 25 ved NMR.

1H-NMR (CDC13, ref. TMS): δ 5,41-5,38, m (2H); 4,49, d, J = 4,69 Hz (IH); 4,22, d, J = 4,69 Hz (IH); 3,73-3,69, m (IH); 3,67, s, (3H), 3,60, m (IH); 2,37, br s (4H); 2,12-1,99, m (3H) ; 1,97-1,85, m (IH); 1,72, m (2H) ; 1,46, m (2H) .

30 13C-NMH (CDCI3, ref. 77,00): δ 173,50, 130,42, 128,63, 80,23, 79,22, 61,74, 51,49, 48,95, 46,45, 33,86, 29,69, 29,31, 25,94, 22,92.

21 DK 172411 B1 D. flS - Γΐ».2α(Ζ) ,3α.4α1 1 -6 - [3 - (carboxv) -7-oxabicvclo-f 2,2.11heDt-2-νΠ-4-hexensvre-methvlester

Til en opløsning af 2,43 g uren alkohol fra afsnit C (80% ren = 1,94 g, 7,6 mmol, forurenet med triphenylphos-5 phinoxid) i 40 ml acetone under argonatmosfære ved 0°C sættes der langsomt 8 ml af Jones' reagens (2,6 M i CrVI). Den røde farve af reagenset opretholdes frem til afslutningen af tilsætningen. Den resulterende, udfældede blanding omrøres i 20 minutter, inden der tilsættes 2-propanol til undertryk-10 kelse af overskud af reagens. Stadig ved 0°C tilsættes der 3 M vandig NaHCC>3-opløsning under omrøring, indtil alle salte er opløst. Der tilsættes saltopløsning, og dernæst udføres der en ekstraktion tre gange med ethylacetat. Efter tørring af ekstrakterne med natriumsulfat og opløsningsmid-15 delfordampning giver flash-chromatografi (150 g silica, 25%-40% [5% eddikesyre i ethylacetat] i hexangradient) efter azeotropisk fjernelse af eddikesyre med toluen 1,91 g af en olie. Denne olie er den urene syre angivet i overskriften (80% ren = 1,53 g, forurenet med triphenylphosphinoxid), og 20 den fås i et udbytte på 75%.

TLC (50% [5% eddikesyre i ethylacetat] i hexan-anis-aldehyd):

Alkohol fra afsnit C 0,33

Syre som angivet i overskriften 0,35.

25 13C-NMR (67,8 MHz i CDCl3): 175,3, 173,1, 129,1, 128,8, 78,0, 78,0, 51,6, 51,1, 47,4, 33,5, 28,8, 28,5, 26,9, 22,5.

E. flS- flor, 2a (Z) ,3a(R*) .4α11-6-Γ3-ΓΓΓ2-Γ (4-cvclohexvl- 30 -butvl)-aminol-1-(hvdroxvmethvl)-2-oxoethvll-ami no 1 -carbonyl 1 -7-oxabicvclo Γ2.2,Πhept-2-νΠ -4--hexensvre-methvlester

Til en opløsning af 733 mg uren syre fra afsnit D (80% ren = 586 mg, 2,2 mmol, 1,1 ækvivalenter, forurenet 35 med triphenylphosphinoxid) i 4 ml tør tetrahydrofuran (THF) under argon sættes der 3 56 mg 1,11-carbonyldiimidazol (2,2 22 DK 172411 B1 mmol, 1,1 ækvivalenter), og blandingen henstilles i 1 time.

Når der er dannet et stort rumfang fældning, tilsættes der 5 ml tør THF, og blandingen opvarmes forsigtigt til opnåelse af en opløsning (TLC viser en stabil acylimidazol). Efter 5 omrøring i 30 minutter tilsættes der en opløsning af 475 mg amin fra afsnit B (2,0 mmol) i 10 ml tør THF, idet der anvendes yderligere 5 ml THF til kvantitativ overføring af aminen. TLC af den homogene blanding efter 1 times omrøring ved stuetemperatur viser en meget langsom reaktion. THF 10 fordampes derpå ved at lede argon over blandingen natten over, indtil dens rumfang er formindsket til 2 ml, og der er dannet en fældning. Tilsætning af 5 ml THF bevirker genopløsning af hele fældningen. Efter yderligere 5 timers omrøring inddampes blandingen, og flash-chromatografi (150 15 g silica, 50%-100% ethylacetat i hexangradient, derpå 0%-10% CH3OH i ethylacetat-gradient) giver 230 mg ren hydroxy-bisamid som angivet i overskriften i form af en olie. Udbyttet af det i overskriften angivne hydroxybisamid er 23%.

Der isoleres også det isomere aminoesteramid (27%) 20 og 2:1-additionsproduktet (16%). Disse biprodukter kan i gode udbytter omdannes til det i overskriften angivne hydroxybisamid ved transesterificering med KCN i CH3OH ved stuetemperatur, omend aminoesteramidet kan isomeriseres spontant.

25 TLC (50% [10% eddikesyre i ethylacetat] i hexan-anis- aldehyd):

Amin fra afsnit B 0,00

Syre fra afsnit D 0,38

Acylimidazol 0,18 30 Hydroxybisamid angivet i overskrift 0,22

Aminoesteramid 0,04 2:l-addukt 0,33.

13C-NMR (67,8 MHz i CDCI3): 173,3, 172,8, 170,4, 129,2, 129,0, 78,9, 78,8, 62,7, 54,0,53,8, 51,3, 47,9, 39,4, 35 37,3, 36,9, 33,6, 33,1, 29,5, 29,4, 28,6, 27,2, 26,4, 26,1, 24,0, 22,6.

23 DK 172411 B1 F. fis - rig. 2α (Z) . 3a (R*) .4all-6- Γ3- Γ4- Γ Γ (4-cvclohexyl-butvl) -aminol -carbonvll -4,5-dihvdro-2-oxazolvll --7-oxabicvclo f2,2, 11 hept-2-νΠ -4 - hexensyre-methyl -ester 5 Denne kemiske fremgangsmåde er beskrevet af M.J.

Miller, P.G. Mattingly, M.A. Morrison og J.F. Kerwin, Jr., i J. Am. Chem. Soc., 102, 7026 (1980).

Til en opløsning af 240 mg (0,48 mmol) rent hydroxy-bisamid fra afsnit E i 3 ml tør THF under argon ved stuetem-10 peratur sættes der 189 mg triphenylphosphin (0,72 mmol, 1,5 ækvivalenter), 73 mg triethylamin (0,72 mmol, 1,5 ækvivalenter) og 89 mg CCI4 (0,58 mmol, 1,2 ækvivalenter), og blandingen opvarmes til tilbagesvaling. Efter 1 time tilsættes der en yderligere aliquot af CCI4 og af triethylamin, og 15 efter yderligere 2 1/2 time tilsættes der en aliquot af hver forbindelse igen. 2 Timer senere tilsættes der yderligere en aliquot af CCI4 og triethylamin og 1/2 aliquot (95 mg) triphenylphosphin. Efter 2 timer yderligere viser TLC til slut et fuldstændigt forbrug af hydroxybisamid fra 20 afsnit E, og den til at begynde med farveløse, homogene blanding har dannet en hvid fældning og bliver mørkere. Opløsningsmiddelfordampning efterfølges af flash-chromato-grafi (silica, 15% acetone i toluen), der giver 190 mg ren oxazolin som angivet i overskriften og i form af en olie.

25 Oxazolinen fås i et udbytte på 83%.

TLC (20% acetone i toluen-anisaldehyd):

Hydroxybisamid fra afsnit E 0,07

Oxazolin som angivet i overskrift 0,29.

13C-NMR (67,8 MHz i CDCI3): 173,1, 171,2, 169,1, 30 129,3, 128,9, 79,0, 78,9, 69,6, 68,3, 51,3, 48,2, 46,3, 39,0, 37,4, 36,9, 33,7, 33,1, 29,6, 29,5, 28,7, 27,1, 26,5, 26,2, 24,0, 22,7.

24 DK 172411 B1 G. flS - [ lot. 2 a ( Z) . 3cn. 4c*1 1 - 6- f3 - [4 - f f (4-cvclohexvlbu-tvl) -aminol -carbonvll -2-oxazolyll -7-oxabicvclo-f2,2.lihent-2-νΠ -4-hexensvre-methvlester

Denne kemiske metode er beskrevet af D.L. Evans, 5 D.K. Minster, U. Jordis, S.M. Hecht, A.L. Mazzu, Jr. og A.I. Meyers, i J. Org. Chem., 44, 497 (1979).

Til en opløsning af 190 mg (0,40 mmol) ren oxazolin fra afsnit F i 10 ml CHCI3 sættes der 200 mg utitreret NiC^, og den heterogene blanding omrøres ved stuetemperatur. TLC 10 viser nogen fremadskriden af reaktionen i den første time, men dernæst standser omsætningen. I løbet af 1 dag tilsættes der 5 yderligere aliguoter af reagenset, indtil omsætningen er fuldstændig. Blandingen fortyndes med ethylacetat og omrøres med 3 M vandig NaHCC^-opløsning, indtil den sorte 15 farve af det anvendte N1O2 forsvinder, og de fleste af de faste stoffer opløses. Ekstraktion tre gange med ethylacetat efterfølges af tørring med natriumsulfat og inddampning. Flash-chromatografi (silica, 25%-35% ethylacetat i hexan--gradient) giver 90 mg af ren oxazol som angivet i over-20 skriften i form af et fast stof. Oxazolen fås i et udbytte på 48%.

TLC (100% ethylacetat-anisaldehyd):

Oxazolin fra afsnit F 0,52

Oxazol som angivet i overskrift 0,81.

25 13C-NMR (67,8 MHz i CDCI3): 173,2, 163,8, 160,5, 140,4, 136,0, 129,4, 128,5, 79,5, 79,3, 51,4, 49,6, 46,4, 39,0, 37,4, 37,0, 33,7, 33,3, 29,8, 29,7, 28,9, 27,8, 26,6, 26,3, 24,2, 22,7.

30 H. TIS- flor. 2of (Z) 3af.4arl 1-6-f3-f4-ff (4-cvclohexvlbu- tvl) -aminol -carbonvl) -2-oxazolvll -7-oxabicvclo-- Γ2 2.11 hept-2-vll -4-hexensvre

Til 90 mg (0,19 mmol) ren oxazol fra afsnit G i 4 ml CH3OH ved stuetemperatur sættes der 2 ml af en 1,0 M vandig 35 NaOH-opløsning. Efter omrøring af blandingen i 1,3 timer tilsættes der i M vandig HCl-opløsning til nedsættelse af m 25 DK 172411 B1 pH-værdien til l. Der ekstraheres dernæst tre gange med ethylacetat. Ekstrakterne tørres med natriumsulfat, og ind-dampning af opløsningsmidlet giver den rå syre angivet i overskriften. Flash-chromatografi (25%-50% [5% eddikesyre i 5 ethylacetat] i hexan-gradient) giver efter azeotropisk fjernelse af eddikesyre med toluen 71 mg af den rene syre som angivet i overskriften i form af et fast stof. Udbyttet af den i overskriften angivne syre er 81%.

TLC (59% [5% eddikesyre i ethylacetat] i hexan-anis-10 aldehyd:

Oxazol fra afsnit G 0,43

Syre angivet i overskrift 0,25.

13C-NMR (67,8 MHz i CDCl3): 176,9, 163,9, 160,7, 140,9, 135,7, 129,5, 128,4, 79,5, 79,3, 49,6, 46,5, 39,1, 15 37,4, 36,9, 33,7, 33,2, 29,7, 29,7, 28,8, 27,8, 26,6, 26,2, 24,1, 22,5.

Eksempel 2 (IS- ί!ο!.2ο'(Ζ) .3«.4ot] 1 -6- Γ3- Γ4- Γ f (4-cvclohexvlbutvl) -methvl-2 0 amino]-carbonvll-2-oxazolvll -7-oxabicvcloΓ2.2.11hept-2-vll--4-hexensvre A. N-Γ(1,1-(Dimethvlethoxv)-carbonvll-0-(phenvlmeth-vl)-L-serin, 2-(trimethvlsilvl)-ethvlester

Denne kemiske metode er beskrevet af P. Sieber, Helv.

25 Chim. Acta, 60, 2711 (1977).

Til en opløsning af 20,7 g N-tert.butyloxycarbonyl--0-benzyl-(L)-serin (70 mmol), 11,0 g pyridin (139 mmol, 2,0 ækvivalenter) og 9,9 g 2-trimethylsilylethanol (84 mmol, 1,2 ækvivalenter) i 50 ml tør CH3CN, der omrøres under argon 30 ved 0°C, sættes der 15,8 g 1,3-dicyclohexylcarbodiimid (76 mmol, 1,1 ækvivalenter) i en enkelt portion. Der dannes en fældning, og efter 3 timers forløb opvarmes blandingen til stuetemperatur og omrøres i 12 timer. Der tilsættes en opløsning af 1,4 g oxalsyre-dihydrat (11 mmol, 0,15 ækvivalen-35 ter) i 3 ml dimethylformamid (DMF), og blandingen omrøres i 1 time, inden den filtreres. Filterkagen vaskes med ethyl- 26 DK 172411 B1 acetat, indtil hydratet er frit for den i overskriften angivne ester. Filtratet vaskes to gange med 1 M vandig HC1-opløsning samt saltopløsning og to gange med 1 M vandig NaHC03-opløsning. Ved tørring med natriumsulfat og inddamp-5 ning fås der 34,8 g af den rå, i overskriften angivne ester (79% ren = 27,6 g, forurenet med opløsningsmiddel og 2-tri-methylsilylethanol) i form af en olie i 100%'s udbytte.

TLC (50% [5% eddikesyre i ethylacetat] i hexan-anis-aldehyd): 10 N-Boc-O-benzyl-(L)-serin 0,40

Ester fra afsnit A 0,84.

13C-NMR (67,8 MHz i CDCl3): 170,5, 155,3, 137,5, 128,2 127,6, 127,4, 79,5, 73,0, 69,9, 63,6, 54,0, 28,1, 17,2, -1,7.

15 B. N-f(1.1-Dimethvlethoxv)-carbonvll-L-serin, 2- (tri- methvlsilvl)-ethvlester

Til en opløsning af 34,8 g rå ester fra afsnit A (79% ren = 27,6 g, forurenet med opløsningsmiddel og 2-tri-methylsilylethanol, 70 mmol) i 200 ml ethylacetat samt 300 20 ml eddikesyre ved stuetemperatur under argonatmosfære sættes der 10 g 10%'s Pd/C-katalysator. Blandingen omrøres derpå under en hydrogenatmosfære i 4 dage. TLC viser næsten fuldstændig ren omdannelse. Blandingen filtreres gennem en po-lycarbonatmembran, og efter afdampning af opløsningsmidlet 25 fjernes resterende eddikesyre ved azeotropisk behandling med toluen og CH2CI2. Flash-chromatografi (750 g silica, 10%-30% ethylacetat i hexan-gradient) giver 3,58 g rent udgangsmateriale, ester fra afsnit A (13% udbytte) og 26,49 g ren debenzyleret ester som angivet i overskriften i form 30 af en olie. Udbyttet af den i overskriften angivne ester er 78%.

TLC (25% ethylacetat i hexan-anisaldehyd):

Ester fra afsnit A 0,61

Ester fra afsnit B 0,28.

35 13C-NMR (67,8 MHz i CDCI3): 170,9, 155,6, 79,9, 63,8, 63,0, 55,8, 28,1, 17,2, -1,7.

27 DK 172411 B1 C. L-serin. 2-(trimethvlsilvl)-ethvlester-monohydro-chlorid

Denne kemiske metode er beskrevet af P. Sieber, R.H. Andreatta, K. Eisler, B. Kamber, B. Riniker og H. Rink i 5 Peptides: Proceeding of the Fifth American Peptide Symposium, M. Goodman og J. Meienhofer, Eds., Halsted Press, New York, side 543-545 (1977) .

Til en opløsning af 10,4 g af esteren fra afsnit B (34,1 mmol) i 200 ml diethylether sættes der 40 ml af en 10 ca. 6,5 M HC1-methanol-methylacetat-opløsning (260 mmol). (Denne opløsning fremstilles ved dråbevis at sætte 42 g (0,54 mmol) acetylchlorid til 35 g (1,1 mmol) methanol, idet der omrøres ved 0°C, efterfulgt af omrøring ved stuetemperatur i 2 timer). Blandingen omrøres derpå i 4 timer, 15 i løbet af hvilket tidsrum der langsomt udvikles gas. Under omrøring i et bad ved stuetemperatur tilsættes der forsigtigt i små portioner 32,8 g (390 mmol) NaHC03 til regulering af gasudviklingen under neutralisering. Blandingen filtreres dernæst gennem en glasfritte under anvendelse af 50% methanol 20 i diethylether til vaskning af filterkagen. Ved inddampning af opløsningsmidlet fås der 8,06 g af det halvfaste, rå, næsten rene amin-hydrochlorid som angivet i overskriften. Dette materiale er muligvis kun et partielt salt, men såfremt det antages, at der er tale om et rent l:l-salt, er udbyttet 25 98%.

TLC (10% [10% koncentreret vandig NH3 i CH3OH] i CH2C12-anisaldehyd:

Ester fra afsnit B 0,63

Amin fra afsnit C 0,22.

30 13C-NMR (67,8 MHz i CDCI3): 171,3, 63,9, 61,9, 55,5, 17,1, -1,8.

28 DK 172411 B1 D. [IS - [10f.2a(Z) ,3tt(R*) ,4al 1 - 6- Γ3 - Γ Γ (1- (hydroxymethyl) -2-OXO-2-[(trimethvlsilvl)-ethoxvl-ethvll-ami-nol carbonvll -7-oxabicvclo Γ2.2.Il hept-2-vIl -4-he-xensvre-methvlester 5 Til en opløsning af 9,40 g syre fra eksempel 1, afsnit D (85% ren = 7,99 g, 29,8 mmol), 8,04 g råt, næsten rent amin-hydrochlorid fra afsnit C (95% ren = 7,60 g, 31,6 mmol, 1,06 ækvivalenter), 4,43 g 1-hydroxybenzotriazol-hydrat (32,8 mmol, 1,1 ækvivalenter) og 4,24 g diisopropylethylamin 10 (32,8 mmol eller 1,1 ækvivalenter) i 50 ml tør tetrahydro- furan under omrøring under argonatmosfære ved stuetemperatur sættes der ca. 6,8 g 1,3-dicyclohexylcarbodiimid (33 mmol, 1,1 ækvivalenter) i en enkelt portion. Der dannes langsomt en fældning. Efter 16 timers forløb inddampes opløsningsmid-15 let, og flash-chromatografi (silica, 30%-100% ethylacetat i hexan-gradient) giver en olie indeholdende et fast stof. Dette materiale optages i diethylether, hvori det faste stof ikke opløses, og der filtreres. Ved inddampning fås der 9,45 g af næsten rent amid som angivet i overskriften 20 (90% rent = 8,51 g) i form af en klar olie. Udbyttet af det i overskriften angivne amid er 63%.

TLC (10% [10% koncentreret vandig NH3 i CH30H] i CH2CI2-anisaldehyd):

Amin fra afsnit C 0,37 25 Amid fra afsnit D 0,65.

TLC (50% [5% eddikesyre i ethylacetat] i hexan-anis-aldehyd):

Eksempel 1, afsnit D-syre 0,42

Amid fra afsnit D 0,36.

30 13C-NMR (67,8 MHz i CDCI3): 173,5, 172,4, 170,3, 129,4, 129,1, 79,2, 79,1, 63,9, 63,2, 54,6, 54,5, 51,4, 47,8, 33,7, 29,7, 28,5, 27,3, 22,7, 17,2, -1,7.

29 DK 172411 B1 E. flS- fla, 2of (Z) .3a(R*) 4a1 1-6- Γ3- f4,5-dihvdro-4-f f2-(trimethvlsilvl) -ethoxvl -carbonvll -2-oxazolvll - 7-oxabicvclo f2.2 . li hept-2-vll -4-hexensvre-methvl-ester 5 Til en opløsning af 8,3 g næsten rent amid fra afsnit D (90% rent = 7,5 g, 16,6 mmol) i 150 ml tør CH3CN under argonatmosfære ved stuetemperatur (stuetemperaturbad) sættes der 13,1 g triphenylphosphin (50 mmol, 3,0 ækvivalenter), 6,4 g diisopropylethylamin (50 mmol, 3,0 ækvivalenter) og 10 til slut 7,7 g CCI4 (50 mmol, 3,0 ækvivalenter). Efter omrøring i 2 timer tilsættes der 1 M vandig NaHCC^-opløsning, og blandingen ekstraheres tre gange med <2Η2<312. Efter tørring over natriumsulfat foretages der inddampning og flash-chro-matografi (silica, 20%-50% ethylacetat i hexan-gradient), 15 hvorved der fås 5,9 g af næsten ren oxazolin som angivet i overskriften (90% ren = 5,3 g) i form af en olie. Oxazolinen fås i et udbytte på 73%.

TLC (50% ethylacetat i hexan-anisaldehyd):

Amid fra afsnit D 0,20 20 Oxazolin fra afsnit E 0,44.

13C-NMR (67,8 MHz i CDCI3): 172,7, 170,7, 169,0, 129.0, 128,8, 78,3, 78,3, 69,0, 67,5, 63,2, 50,9, 48,1, 46.0, 33,4, 29,3, 28,4, 26,7, 22,4, 16,8, -2,0.

25 F. ΓIS- fla. 2a(Z) . 3a. 4ar1 1 -6- f3- Γ4- Γ Γ2- (trimethvlsilvl) - -ethoxvl -carbonvll -2-oxazolvll-7-Qyahicyclo f2.2,11-hept-2-vll-4-hexensvre-methvlester Denne kemiske metode er beskrevet af D.L. Evans, D.K. Minster, U. Jordis, S.M. Hecht, A.L. Mazzu, Jr. og 30 A.I. Meyers i J. Org. Chem., 44., 497 (1979) .

Til en opløsning af 5,1 g næsten ren oxazolin fra afsnit E (90% ren = 4,6 g, 10,5 mmol) i 50 ml CH2CI2 sættes der 10,1 g utitreret Ni02/ og den heterogene blanding omrøres ved stuetemperatur. (Exoterm reaktion resulterer i, at blan-35 dingen i nogen grad opvarmes). TLC viser en næsten fuldstændig reaktion efter 1 time. Der tilsættes derpå en yderligere 30 DK 172411 B1 aliquot NiC>2 (2,0 g). Efter 30 minutter er reaktionen fuldstændig, og der tilsættes 150 ml ethylacetat. Til reduktion og opløsning af nikkelsaltene tilsættes der 100 ml 3 M vandig NaHS03-opløsning og 200 ml 1 M vandig trinatriumcitratopløs-5 ning. Omrøring bevirker, at alle de faste stoffer opløses, og blandingen opvarmes. Adskillelse og ekstraktion to gange mere med ethylacetat (TLC viser fuldstændig ekstraktion af oxazolen angivet i overskriften) efterfølges af tørring med natriumsulfat og inddampning. Flash-chromatografisk rensning 10 af de 3,8 g råprodukt (150 g silica, 20%-75% ethylacetat i hexan-gradient) giver 2,60 g ren oxazol som angivet i overskriften i form af en olie. Oxazolen fås i et udbytte på 57%.

TLC (50% ethylacetat i hexan-anisaldehyd): 15 Oxazolin fra afsnit E 0,34

Oxazol fra afsnit F 0,58.

13C-NMR (67,8 MHz i CDCl3): 172,9, 164,5, 161,0, 143,3, 133,0, 129,1, 128,4, 79,0, 78,9, 63,0, 51,1, 49,5, 46,8, 33,5, 29,5, 28,7, 27,6, 22,5, 17,2, -1,8.

20 G. f 1S - flot.2of(Z) . 3or, 4al 1 - 6- Γ3 - (4 -carboxv-2-oxazo-lvl) -7-oxabicvclo (2,2,1) hept-2-vll -4-hexensvre--methvlester

Denne kemiske metode er beskrevet af P. Sieber, R.H.

25 Andreatta, K. Eisler, B. Kamber, B. Riniker og H. Ring i Peptides: Proceedings of the Fifth American Peptide

Symposion, M. Goodman og J. Meienhofer, Eds., Halsted Press,

New York, side 543-545 (1977).

Til en opløsning af 3,1 g ren oxazol fra afsnit F 30 (7,1 mmol) i 20 ml tørt DMF under argonatmosfære sættes der 12,0 g tetrabutylammoniumfluorid på silica (Fluka, 13,9 mmol, 1,96 ækvivalenter), og den heterogene blanding omrøres ved stuetemperatur i 6 timer. Blandingen fortyndes med 20 ml 1% F3CCO2H, 1% CH3OH, 98% ethylacetat og filtreres under 35 anvendelse af 40 ml af det samme opløsningsmiddel til vask-ning af filterkagen. Filtratet inddampes og behandles azeo- m 31 DK 172411 B1 tropisk tre gange med toluen til fjernelse af dimethylform-amidet. Det rå produkt renses på en ionbytterharpiks: efter vaskning af en 250 g søjle af AG 50W-X8 (hydrogenform) med vand og dernæst 50% CH3OH i vand, indtil det eluerede ma-5 teriale er farveløst, tilføres det rå produkt opløst i 40 ml 50% CH3OH i vand, og eluering udføres med det samme opløsningsmiddel. Herved fås der 2,65 g af næsten ren oxazol-syre som angivet i overskriften (90% ren = 2,38 g) i form af en olie. Oxazolsyren fås i et udbytte på 100%.

10 TLC (1% F3CC02H, 1% CH3OH, 98% ethylacetat-anisal- dehyd):

Oxazol fra afsnit F 0,46

Oxazolsyre fra afsnit G 0,15.

13C-NMR (67,8 MHz i CD3OD): 175,0, 166,7, 163,8, 15 145,6, 134,2, 130,4, 129,7, 80,7, 80,7, 52,0, 50,7, 47,7, 34,6, 30,5, 29,7, 28,9, 23,8.

H. N-Methvl-4-cvclohexvlbutvlamin-monohvdrochlorid

Til en opløsning af 750 mg 4-cyclohexylbutylamin-hy-20 drochlorid (3,9 mmol) og 1,08 g triethylamin (10,8 mmol, 2,8 ækvivalenter) i 10 ml tør THF under omrøring under argon ved 0°C sættes der 584 mg CICO2C2H5 (5,4 mmol, 1,4 ækvivalenter) . Efter opvarmning til stuetemperatur omrøres den heterogene blanding i 3 timer. Der fortyndes med diethylether 25 efterfulgt af to ganges vask med 1 M vandig HCl-opløsning.

Det organiske lag tørres med natriumsulfat og inddampes, hvorved der fås 950 mg råt ethylcarbamat-intermediat, en olie, der er forurenet med noget af imidet.

Til en opløsning af 950 mg råt ethylcarbamat-inter-30 mediat i 10 ml tør THF, der omrøres under argon ved 0°C, sættes der 950 mg lithiumaluminiumhydrid (25 mmol, 6,4 ækvivalenter) . Der udvikles gas, og blandingen opvarmes dernæst til tilbagesvaling i 2 timer. Efter genafkøling til 0°C og tilsætning af 20 ml diethylether tilsættes der forsigtigt 35 1,0 ml vand til sønderdeling af overskud af hydrid. Blandin gen genopvarmes til stuetemperatur, og under kraftig omrøring 32 DK 172411 B1 tilsættes der 1,0 ml 15% vandig NaOH-opløsning og derefter 3,0 ml vand. Blandingen filtreres, filterkagen vaskes med 10% [10% koncentreret vandig NH3 i CH3OH] i diethylether, og filtratet inddampes. Dette materiale inddampes flere 5 gange med CH3OH til fjernelsen af NH3, og der gøres til slut surt med koncentreret vandig HC1-opløsning. Ved azeo-tropisk fjernelse af vand med toluen og CH3OH fås der efter udsættelse for højvakuum 830 mg urent, sekundært amin-hydro-chlorid (80% rent = 660 mg, forurenet med tertiært amin-hy-10 drochlorid) i form af et fast stof. Produktet fås i et udbytte på 83% og anvendes uden rensning.

TLC (10% [10% koncentreret vandig NH3 i CH3OH] i CH2CI2-anisaldehyd): 4-Cyclohexylbutylamin 0,07 15 Carbamat-intermediat 0,89

Amin fra afsnit H 0,11.

I. flS - fla.2α(Z) . 3θί. 4o<1 1 - 6- [3 - Γ4 - [ f (4-cvclohexvlbu-tvl) -methvlaminol -carbonvll -2-oxazolvn -7-oxabi-2 0 cvclo Γ2.2.lihept-2-νΠ-4-hexensvre-methvlester

En prøve af uren oxazolsyre fra afsnit G (forurenet med tetrabutylammonium, men som den frie syre, 0,20 mmol) tørres ved azeotrop behandling med tørt DMF og toluen to gange (højvakuum). Dette materiale anbringes i 2 ml toluen, 25 og under omrøring af den heterogene blanding ved stuetemperatur under argon tilsættes der 127 mg oxalylchlorid (1,0 mmol, 5 ækvivalenter). Der udvikles gas, og efter 1 time tilsættes der yderligere 127 mg oxalylchlorid. Der udvikles igen gas, og blandingen omrøres natten over. TLC viser ren 30 omdannelse til syrechloridet med betegnelsen [IS-[Ια,2a(Z) , -3a, 4a] ] - 6 - [3 - [4 - (chlorcarbonyl) -2-oxazolyl] -7-oxabicyclo- [2,2,1]hept-2-yl]-4-hexensyre-methylester. Opløsningsmidlet inddampes, og der tilsættes toluen, og der inddampes påny til rensning af eventuelt tilbageværende oxalylchlorid.

35 Til det rå syrechlorid af syren fra afsnit G sættes der 4 ml CHCI3. Materialet opløses ikke helt. Under omrøring 33 DK 172411 B1 under argonatmosfære ved stuetemperatur tilsættes der 100 mg urent sekundært amin-hydrochlorid fra afsnit H (80% rent = 80 mg, forurenet med tertiært amin-hydrochlorid, 0,39 mmol, 2 ækvivalenter) og 145 mg triethylamin (1,4 mmol, 7 5 ækvivalenter). Efter omrøring ved stuetemperatur i 1 time fortyndes blandingen med ethylacetat, der tilsættes vand, og ekstraktion to gange med ethylacetat efterfølges af tørring med natriumsulfat og inddampning. Der fås herved 120 mg af det urene i overskriften angivne amid i form af et 10 gummiagtigt stof. Råproduktet anvendes uden rensning.

TLC (1% F3CC02H, 1% CH2OH, 98% ethylacetat-anisal- dehyd):

Oxazolsyre fra afsnit G 0,28

Syrechlorid-intermediat 0,78 15 Amid fra afsnit I 0,64.

J. TIS - fla.2α(Z) , 3α.4αΊ1-6-Γ3-Γ4-ΓΓ (4 -cvclohexvlbu-tvl) -methvlaminoT-carbonvll-2-oxazolvll-7-oxabi-cvclo Γ2,2.Πhept-2-νΠ-4-hexensvre 20 Til 120 mg urent amid fra afsnit I i 6 ml CH3OH ved stuetemperatur sættes der 2 ml 1,0 M vandig NaOH-opløsning. Efter omrøring af blandingen i 3 timer tilsættes der 1 M vandig HCl-opløsning til nedsættelse af pH-værdien til 1.

Der ekstraheres derpå tre gange med ethylacetat. Ekstrakterne 25 tørres med natriumsulfat, og inddampning af opløsningsmidlet giver den rå syre som angivet i overskriften. Flash-chroma-tografi (50%-100% [5% eddikesyre i ethylacetat] i hexan-gra-dient) giver efter azeotrop fjernelse af eddikesyre med toluen 70 mg af det rene produkt som angivet i overskriften 30 i form af en olie. Udbyttet af det i overskriften angivne produkt er totalt 72% ud fra den rene oxazolsyre fra afsnit G.

TLC (50% [5% eddikesyre i ethylacetat] i hexan-anis-aldehyd: 35 Amid fra afsnit I 0,36

Produkt fra overskriften af J 0,20 34 DK 172411 B1 13c_nmr (67,8 MHz i CDCI3. Der ses to konformationer. Linier, der klart kun skyldes én konformation, er angivet i parantes): 177,0, 163,1, (162,3), (162,9), 142,5, 136,4, 129,6, 128,5, 79,5, 79,4, (50,4), 49,7, (48,7), 46,7, 37,5, 5 37,0, (36,4), 34,1, 33,3, 29,7, 29,0, 27,9, (27,2), 26,6, 26,3, (24,2), (23,7), 22,9.

Eksempel 3 flS- riof. 2o;(Z) , 3α.4α1 1 -6- f3- Γ4- f (cvclohexvlamino) -carbonvll -10 -2-oxazolvll-7-oxabicvclo f2.2,lihept-2-νΙΊ-4-hexensvre A. f (1, 1-Dimethvlethoxv) -carbonvll -N-cvclohexvl-L--serinamid

Til en omrørt opløsning af 1,11 g (15,7 mmol) cyclo-hexylamin, 3,22 g (15,7 mmol) Boc-(L)-serin, 2,12 g (15,7 15 mmol) 1-hydroxybenzotriazol-hydrat og 2,73 ml (15,7 mmol) diisopropylethylamin i 30 ml THF under argon ved 0°C sættes der 3,23 g (15,7 mmol) 1,3-dicyclohexylcarbodiimid. Denne blanding omrøres ved stuetemperatur i 18 timer. Blandingen fortyndes med 200 ml ethylacetat, og fældningen skilles fra 20 ved filtrering. Fældningen skylles med 3 x 40 ml ethylacetat.

De kombinerede filtrater vaskes med 3 x 70 ml 1 N vandig HCl-opløsning og 2 x 80 ml mættet NaHC03-opløsning. Det organiske lag tørres med magnesiumsulfat, filtreres og koncentreres i vakuum. Det fremkomne materiale chromatograferes 25 på 140 g Merck-silicagel 60 under anvendelse af 2% CH3OH i CH2CI2 som elueringsmiddel, hvorved der fås 1,64 g (41%) af det i overskriften angivne amid.

TLC: silicagel, 4% CH3OH i CH2CI2» Rf = 0,24, CE(S04)2.

30 13C-NMR (67,5 MHz, CDCI3) δ: 170,1, 156,1, 80,2, 62,7, 48,1, 32,6, 32,6, 28,1, 28,1, 25,3, 24,5, 24,5, 24,5.

35 DK 172411 B1 B. flS - f la. 2α(Z) ,3g(R*) . 4α11 - 6 - f 3 - f ί Γ2 -(cvclohexyl-amino) -1- (hvdroxvmethvl)-2-oxoethvll-aminoΊ -carbonyl - 7-oxabicvcloΓ2.2.lihept-2-vil-4-hexensyre--methvlester 5 Til en omrørt opløsning af 1,06 g (3,73 mmol) amid fra afsnit A i 20 ml tørt CH2CI2 under argon ved 0°C sættes der 5 ml TFA. Blandingen omrøres ved 0°C i 2 timer og fortyndes med 50 ml toluen. Denne blanding koncentreres i vakuum. Til en blanding af dette amid-TFA-salt, 0,50 g (3,73 10 mmol) 1-hydroxybenzotriazol-hydrat, og 6 ml triethylamin i 20 ml DMF sættes der en opløsning af 1,00 g (3,73 mmol) af syren fra eksempel 1, afsnit D, i 10 ml DMF. Til denne blanding sættes dernæst 0,55 g (3,73 mmol) ethyl-3-(3-dimethyl-amino)-propyl-carbodiimid-hydrochloridsalt. Reaktionsblan-15 dingen omrøres ved stuetemperatur i 19 1/2 time og koncentreres i vakuum. Blandingen fortyndes med 400 ml ethylacetat og vaskes med 3 x 40 ml 1 N HC1-opløsning, 2 x 30 ml 0,2 N NaOH-opløsning, 1 x 30 ml mættet NaHC03-opløsning og 1 x 100 ml saltopløsning. Det organiske lag tørres med magnesi-20 umsulfat, filtreres og koncentreres i vakuum. Rensning udføres ved flash-chromatografi på 60 g Merck-silicagel 60 under anvendelse af 2% CH3OH i CH2CI2 som elueringsmiddel, hvorved der fås 6 90 mg (42%) af den i overskriften angivne alkohol.

25 TLC: silicagel, 4% CH3OH i CH2C12, Rf - 0,30,

Ce(S04)2.

13C-NMR (67,5 MHz, CDCI3) D: 173,3, 173,0, 169,6, 129,4, 129,0, 79,1, 78,9, 62,7, 54,4, 53,7, 51,4, 48,2, 48,0, 33,7, 32,6, 32,6, 32,6, 29,5, 28,6, 27,5, 25,3, 24,6, 30 24,6, 22,7.

C. flS - Γ lo;. 2α (Z) .3α(R*) . 4α1 1 - 6- Γ3 - Γ4 - Γ (cvclohexvl-amino)-carbonvll-4,5-dihvdro-2-oxazolvll-7-oxabi-cvclo Γ2,2,1)hept-2-vlf-4-hexensvre-methvlester 35 Til en omrørt opløsning af 680 mg (1,56 mmol) alkohol fra afsnit B og 0,82 ml (4,68 mmol) diisopropylethylamin i 36 DK 172411 B1 20 ml CH2C12 under argon ved 0°C sættes der 0,13 ml (1,63 mmol) methansulfonylchlorid. Denne blanding omrøres ved stuetemperatur i 1 time og koncentreres i vakuum. Det rå mesylat opløses i 20 ml acetone og kombineres med 647 mg 5 K2CO3. Den fremkomne blanding opvarmes til 54°C i 3 1/2 time, afkøles til stuetemperatur og fortyndes med 100 ml acetone. Fældningen skilles fra ved filtrering og skylles med 3 x 50 ml acetone. Filtratet koncentreres i vakuum og chromatograferes på 50 g Merck-silicagel 60 under anvendelse 10 af 2% CH3OH i CH2Cl2 som elueringsmiddel, hvorved der fås 540 mg (83%) af den i overskriften angivne oxazolin.

TLC: silicagel, 4% CH3OH i CH2Cl2, Rf = 0,42,

Ce (S04)2 .

13C-NMR (67,5 MHz, CDCI3) δ: 173,2, 170,4, 169,2, 15 129,5, 128,9, 79,1, 79,0, 69,7, 68,4, 51,4, 48,4, 47,8, 46,4, 33,8, 33,0, 32,8, 29,6, 28,9, 27,3, 25,4, 24,7, 24,7, 22,8.

D. fis- Γΐα. 2ot (Z) . 3a. 4of11 - 6- f3 - Γ4- f (cvclohexvlamino) -2 0 -carbonvll-2-oxazolvn-7-oxabicvclo Γ2,2,Πhept-2- -vll-4-hexensvre-methvlester

Til en omrørt opløsning af 530 mg (1,26 mmol) oxazolin fra afsnit C i 5 ml CH2Cl2 sættes der 1,06 g Ni02. Reaktionsblandingen omrøres ved stuetemperatur i 3 timer, hvor-25 efter der tilsættes yderligere 530 mg Ni02. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 1 time, og der tilsættes 530 mg Ni02 . Den fremkomne blanding omrøres i yderligere 80 minutter og fortyndes med 120 ml ethylacetat. Til den fremkomne blanding sættes der 10 ml 3 M NaHS02-opløsning og 70 ml 1 M 30 natriumcitratopløsning. Det organiske lag skilles fra, og det vandige lag ekstraheres med 2 x 100 ml ethylacetat. De kombinerede organiske ekstrakter vaskes med 100 ml saltopløsning, tørres med magnesiumsulfat, filtreres og koncentreres i vakuum. Det fremkomne materiale chromatograferes på 35 40 g Merck-silicagel 60 under anvendelse af 2% CH3OH i CH2C12 som elueringsmiddel, hvorved der fås 370 mg (70%) af den i 37 DK 172411 B1 overskriften angivne ester.

TLC: silicagel, 4% CH3OH i CH2C12, Rf = 0,64,

Ce(S04)2.

13C-NMR (67,5 MHz, CDCl3) 6: 173,2, 163,7, 159,6, 5 140,6, 136,1, 129,4, 128,5, 79,5, 79,3, 51,4, 49,6, 47,8, 46.6, 33,7, 33,0, 33,0, 29,7, 28,8, 27,8, 25,4, 24,9, 24,9, 22.7.

E. f 1S - f lof. 2a (Z) .3^.4^11 - 6- f 3 - Γ4- f (4-cvclohexvlamino) -10 carbonvl 1 -2 -oxazolvll -7-oxabicvclo Γ2.2. li heot-2- -vll-4-hexensvre

Til en omrørt opløsning af 360 mg (0,86 mmol) af esteren fra afsnit D og 10 ml vand i 60 ml THF sættes der 10 ml 1 N LiOH-opløsning. Denne blanding gennembobles med 15 argon i 10 minutter og omrøres ved stuetemperatur i 7 timer. Blandingen gøres sur til en pH-værdi på 2 ved tilsætning af 1 N HCl-opløsning og mættes med NaCl. THF-laget skilles fra, og det vandige lag ekstraheres med 4 x 80 ml ethylace-tat. De kombinerede organiske ekstrakter tørres med mag-2 0 nesiumsulfat, filtreres og koncentreres i vakuum. Rensning udføres ved flash-chromatografi på 40 g Merck-silicagel 60 under anvendelse af 4% CH3OH i CH2Cl2 som elueringsmiddel, hvorved der fås 300 mg (86%) af den i overskriften angivne syre.

25 TLC: silicagel, 6% CH3OH i CH2Cl2, Rf = 0,32,

Ce(SO4)2· 13C-NMR (67,5 MHz, CDCI3) δ: 176,9, 163,9, 160,0, 141,0, 129,5, 128,5, 79,5, 79,5, 48,1, 46,6, 33,7, 32,9, 32,9, 29,7, 28,9, 27,9, 25,5, 24,9, 24,9.

30 38 DK 172411 B1

Eksempel 4 flS- fla, 2or (Z) , 3or, 4or 11 -6- Γ3 - Γ4 - f Γ (2-cvclohexvlethyl) -amino! --carbonvll -2-oxazolvll-7-oxabicvclo f2.2.11hept-2-vll-4-he-xensyre 5 A. f(1.1 -dimethvlethoxv)-carbonvll-N-(2-cvclohexvl- ethvl)-L-serinamid

Til en omrørt opløsning af 2,00 g (15,7 mmol) 2-cyc-lohexylethylamin, 3,22 g (15,7 mmol) Boc-(L)-serin, 2,12 g (15,7 mmol) 1-hydroxybenzotriazol-hydrat og 2,73 ml (15,7 10 mmol) diisopropylethylamin i 40 ml THF under argon ved 0°C sættes der 3,23 g (15,7 mmol) 1,3-dicyclohexylcarbodiimid. Denne blanding omrøres ved stuetemperatur, og der tilsættes 10 ml DMF. Reaktionsblandingen omrøres derefter ved stuetemperatur i 18 timer, og blandingen fortyndes med 300 ml ethyl-15 acetat, og fældningen skilles fra ved filtrering. Fældningen skylles med 3 x 40 ml ethylacetat. Det kombinerede filtrat vaskes med 3 x 70 ml 1 N vandig HCl-opløsning og 2 x 80 ml mættet NaHC03-opløsning. Det organiske lag tørres med magnesiumsulfat, filtreres og koncentreres i vakuum. Det frem-20 komne materiale chromatograferes på 160 g Merck-silicagel 60 under anvendelse af 1:4 hexan-diethylether som eluerings-middel, hvorved der fås 1,91 g (39%) af det i overskriften angivne amid.

TLC: silicagel, 4% CH3OH i CH2Cl2, Rf = 0,34, 25 Ce(S04)2 13C-NMR (67,5 MHz, CDCl3) δ: 171,1, 80,3, 62,9, 37,3, 36,8, 35,2, 33,1, 33,1, 28,3, 28,3, 28,3, 26,4, 26,1, 26,1, B. flS - fla. 2 a (Z) . 3cif (R*) . 4αΊ 1 -6- Ϊ3- Γ f f2- f (2-cvclohe-30 xvlethvl) -aminol -carbonvll -7-oxabicvclo- f2,2. Π - hept-2-vll-4-hexensvre-methvlester

Til en omrørt opløsning af 1,28 g (3,73 mmol) af amidet fra afsnit A i 20 ml tørt CH2C12 under argon ved 0°C sættes der 5 ml TFA. Blandingen omrøres ved 0°C i 2 timer 35 og fortyndes med 50 ml toluen. Denne blanding koncentreres i vakuum. Til en omrørt opløsning af dette amin-TFA-salt, 39 DK 172411 B1 0,50 g (3,73 mmol) 1-hydroxybenzotriazol-hydrat, og 5 ml triethylamin i 20 ml DMF sættes der en opløsning af 1,00 g (3,73 mmol) af syren fra eksempel 1, afsnit D i 10 ml DMF.

Til den fremkomne blanding sættes der derpå 0,55 g (3,73 5 mmol) ethyl-3-(3-dimethylamino)-propyl-carbodiimid-hydro-chloridsalt. Reaktionsblandingen omrøres ved stuetemperatur i 17 timer og koncentreres i vakuum. Blandingen fortyndes med 400 ml ethylacetat og vaskes med 3 x 40 ml IN HCl-op-løsning, 2 x 30 ml 0,2 N NaOH-opløsning, 30 ml mættet NaHCC>3-10 -opløsning og 100 ml saltopløsning. Det organiske lag tørres med magnesiumsulfat, filtreres og koncentreres i vakuum. Rensning udføres ved flash-chromatografi på 60 g Merck-si-licagel 60 under anvendelse af 2% CH3OH i CH2C12 som elue-ringsmiddel, hvorved der fås 1,00 g (54%) af den i over-15 skriften angivne alkohol.

TLC: silicagel, 4% CH3OH i CH2C12, Rf = 0,30,

Ce(SO4)2 · 13C-NMR (67,5 MHz, CDCI3) δ: 173,4, 172,9, 170,4, 129,3, 129,0, 79,0, 78,9, 62,7, 54,2, 53,7, 51,4, 48,0, 20 37,3, 36,6, 35,3, 33,7, 32,9, 32,9, 29,5, 28,6, 27,3, 26,3, 26,0, 26,0, 22,7.

C. riS-ritt.2tt(Z) . 3of (R*) . 4α1 Ί -6-f3- Γ4- f Γ (2-cvclohe-xvlethvl) -aminol -carbonvll -4,5-dihvdro-2-oxazolvn -2 5 -7-oxabicvclo-(2.2.11 hept-2-vil -4-hexensvre-meth- vlester

Til en omrørt opløsning af 890 mg (1,80 mmol) af alkoholen fra afsnit B og 0,94 ml (5,40 mmol) diisopropyl-ethylamin i 30 ml CH2C12 under argon ved 0°C sættes der 30 0,14 ml (1,80 mmol) methansulfonylchlorid. Denne blanding omrøres ved stuetemperatur i 1 time og koncentreres i vakuum. Det rå mesylat opløses i 30 ml acetone og kombineres med 0,77 g K2CO3. Den fremkomne blanding opvarmes til tilbagesvaling i 4 timer, afkøles til stuetemperatur og fortyn-35 des med 100 ml acetone. Fældningen skilles fra ved filtrering og skylles med 3 x 50 ml acetone. Filtratet koncentreres i 40 DK 172411 B1 vakuum og chromatograferes på 60 g Merck-silicagel 60 under anvendelse af 2% CH30H i CH2CI2 som elueringsmiddel, hvorved der fås 480 mg (54%) af den i overskriften angivne oxazolin.

TLC: silicagel, 4% CH3OH i CH2C12, Rf = 0,42, 5 Ce(SO4)2· 13C-NMR (67,5 MHz, CDCI3) δ: 173,1, 171,2, 169,2, 129,4, 128,9, 79,1, 79,0, 69,6, 68,3, 51,4, 48,3, 46,3, 36,9, 36,8, 35,2, 33,7, 33,0, 32,9, 29,6, 28,8, 27,2, 26,3, 26,1, 26,1, 22,8.

10 D. flS- flor. 2ο; (Z) .3^. 4or1 !-6-f3-f4-ff (2 - cvclohexvl ethyl ) -aminol -carbonvll -2-oxazolvll-7-oxabicv-clo- [2,2,11hept-2-vll -4-hexensvre-methvlester

Til en omrørt opløsning af 48 0 mg (1,01 mmol) af 15 oxazolinen fra afsnit C i 20 ml 0Η2012 sættes der 480 mg NiC>2. Reaktionsblandingen omrøres ved stuetemperatur i 1 time, hvorefter der tilsættes yderligere 480 mg N1O2. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 3 timer, og der tilsættes 480 mg N1O2. Blandingen omrøres i yderligere 5 l/2 time, og 20 der tilsættes en yderligere portion N1O2 på 480 mg. Reaktionsblandingen omrøres i 1 1/2 time og fortyndes med 100 ml ethylacetat. Til den fremkomne blanding sættes der 20 ml 3 M NaHS03-opløsning og 30 ml 1 M natriumcitratopløsning.

Det organiske lag skilles fra, og det vandige lag ekstraheres 25 med 2 x 100 ml ethylacetat. De kombinerede organiske ekstrakter vaskes med 50 ml saltopløsning, tørres med magnesiumsulfat, filtreres og koncentreres i vakuum. Det fremkomne materiale chromatograferes på 45 g Merck-silicagel 60 under anvendelse af 2% CH3OH i CH2CI2 som elueringsmiddel, hvorved 30 der fås 200 mg (42%) af den i overskriften angivne ester.

TLC: silicagel, 4% CH3OH i CH2Cl2, Rf = 0,60,

Ce(SO4)2· 13C-NMR (67,5 MHz, CDCI3) δ: 173,1, 163,7, 160,4, 140,3, 136,0, 129,3, 128,4, 79,4, 79,3, 51,3, 49,6, 46,9, 35 36,9, 36,7, 35,2, 33,6, 33,0, 33,0, 29,7, 28,8, 27,7, 26,4, 26,0, 26,0, 22,7.

41 DK 172411 B1 E. TIS - Γ1 g . 2 α (Z) ,3o;.4a1 1 - 6 - i 3 - f4 - f f (2 - c vclohexvl -ethvl)-aminol-carbonyll-2-oxazolvl]-7-oxabicvclo-- {2.2. nhept-2-vll -4-hexensvre

Til en omrørt opløsning af 190 mg (0,40 mmol) af 5 esteren fra afsnit D og 4 ml vand i 30 ml THF sættes der 4 ml 1 N LiOH-opløsning. Den fremkomne blanding gennembobles med argon i 10 minutter og omrøres ved stuetemperatur i 5 timer. Blandingen gøres sur til en pH-værdi på 2 ved tilsætning af 1 N HCl-opløsning og mættes med NaCl. THF-laget 10 skilles fra, og det vandige lag ekstraheres med 4 x 25 ml ethylacetat. De kombinerede organiske ekstrakter tørres med magnesiumsulfat, filtreres og koncentreres i vakuum. Rensning udføres ved flash-chromatografi på 20 g Merck-silicagel 60 under anvendelse af 4% CH3OH i CH2CI2 som elueringsmiddel, 15 hvorved der fås 106,7 mg (59%) af den i overskriften angivne syre.

TLC: silicagel, 6% CH3OH i CH2C12, Rf = 0,32,

Ce(SO4)2· 13C-NMR (67,5 MHz, CDCI3) δ: 176,9, 163,9, 160,7, 20 140,8, 135,7, 129,4, 128,4, 79,5, 79,4, 49,6, 46,5, 36,9, 36,8, 35,2, 33,7, 33,0, 33,0, 29,6, 28,8, 27,8, 26,4, 26,1, 26,1, 22,6.

Eksempel 5 25 flS - Γΐα.2α(Ζ) . 3ar. 4αΐ 1 - 6- Γ3 - Γ4 - f f f2-4-chlorphenvl) -ethvll -aminol-carbonvll-2-oxazolvll-7-oxabicvclo f2.2.Ilhept-2-vll-4-hexensvre A. f(1,1-dimethylethoxv)-carbonvl]-N-f 2 -(4-chlor-phenvl)-ethvl)-L-serinamid 30 Til en omrørt opløsning af 2,44 g (15,7 mmol) 2-(4- -chlorphenyl)-ethylamin, 3,22 g (15,7 mmol) Boc-(L)-serin, 2,12 g (15,7 mmol) 1-hydroxybenzotriazol-hydrat og 2,73 ml (15,7 mmol) diisopropylethylamin i 30 ml THF under argon ved 0°C sættes der 3,23 g (15,7 mmol) 1,3-dicyclohexylcar-35 bodiimid. Denne blanding omrøres ved stuetemperatur, og der tilsættes 10 ml DMF. Reaktionsblandingen omrøres derpå ved 42 DK 172411 B1 stuetemperatur i 18 timer, og blandingen fortyndes med 200 ml ethylacetat, og fældningen skilles fra ved filtrering. Fældningen skylles med 3 x 40 ml ethylacetat. De kombinerede filtrater vaskes med 3 x 70 ml 1 N vandig HCl-opløsning og 5 2 x 80 ml mættet NaHC03-opløsning. Det organiske lag tørres med magnesiumsulfat, filtreres og koncentreres i vakuum.

Det fremkomne materiale chromatograferes på 160 g Merck-si-licagel 60 under anvendelse af en blanding af hexan og di-ethylether i forholdet 1:4 som elueringsmiddel, hvorved der 10 fås 2,56 g (48%) af det i overskriften angivne amid.

TLC: silicagel, 4% CH30H i CH2C12, Rf = 0,34,

Ce(SO4)2.

13C-NMR (67,5 MHz, CDCI3) δ: 173,1, 157,6, 139,2, 133,1, 131,4, 131,4, 129,4, 129,4, 80,8, 63,3, 58,0, 41,7, 15 35,6, 34,7, 28,7, 28,7, 28,7.

B. fis - flå. 2c»f(Z) .3ot(R*) . 4α1 Ί-6-Γ3-ΓΓ(2-ΓΓ2- (4-chlor-phenvl)-ethvll-aminol -1-(hydroxymethyl)-2-oxoeth-vl1 -aminol -carbonvll-7-oxabicvclo-f2,2.Πhept-2-20 -vil-4-hexensvre-methvlester

Til en omrørt opløsning af 1,28 g (3,73 mmol) af amidet fra afsnit A i 20 ml tørt CH2C12 under argon ved 0°C sættes der 5 ml TFA. Blandingen omrøres ved 0°C i 2 timer og fortyndes med 50 ml toluen. Denne blanding koncentreres 25 i vakuum. Til en omrørt opløsning af dette amin-TFA-salt, 0,50 g (3,73 mmol) 1-hydroxybenzotriazol-hydrat og 5 ml triethylamin i 20 ml DMF sættes der en opløsning af 1,00 g (3,73 mmol) af syren fra eksempel 1, afsnit D i 10 ml DMF.

Til denne blanding sættes der 0,55 g (3,73 mmol) ethyl-3-30 -(dimethylamino)-propyl-carbodiimid-hydrochloridsalt. Reak tionsblandingen omrøres ved steutemperatur i 17 timer og koncentreres i vakuum. Blandingen fortyndes med 400 ml ethylacetat og vaskes med 3 x 40 ml 1 N HCl-opløsning, 2 x 30 ml 0,2 N NaOH-opløsning, 30 ml mættet NaHCC^-opløsning og 100 35 ml saltopløsning. Det organiske lag tørres med magnesiumsulfat, filtreres og koncentreres i vakuum. Rensning udføres 43 DK 172411 B1 ved flash-chromatografi på 60 g Merck-silicagel 60 under anvendelse af 2% CH3OH i CH2C12 som elueringsmiddel, hvorved det fås 1,00 g (54%) af den i overskriften angivne alkohol.

TLC: silicagel, 4% CH3OH i CH2C12, Rf = 0,30, 5 Ce(S04)2 13C-NMR (67,5 MHz, CDCI3) δ: 173,5, 172,9, 170,6, 137,2, 132,1, 130,0, 130,0, 129,3, 120,1, 128,5, 128,5, 79.0, 78,9, 62,7, 54,1, 53,9, 51,4, 48,0, 40,8, 34,8, 33,7, 29,5 28,7, 27,3 22,7.

10 C. ns- ritt. 2a (Z) ,3a(R*) ,4α1 1 - 6- Γ3 - Γ4 - f Γ Γ2 - (4-chlor-phenvl)-ethvll-aminol-carbonvll-4.5-dihvdro-2-oxazolvll-7-oxabicvclo-Γ2,2.11hept-2-vll-4-hexen-svre-methvlester 15 Til en omrørt opløsning af 8 90 mg (1,80 mmol) af alkoholen fra afsnit B og 0,94 ml (5,40 mmol) diisopropyl-ethylamin i 30 ml CH2C12 under argon ved 0°C sættes der 0,14 ml (1,80 mmol) methansulfonylchlorid. Denne blanding omrøres ved stuetemperatur i 1 time og koncentreres i vakuum.

2 0 Det rå mesylat opløses i 30 ml acetone og kombineres med 0,77 g K2CC>3. Denne blanding opvarmes til tilbagesvaling i 4 timer, afkøles til stuetemperatur og fortyndes med 100 ml acetone. Fældningen skilles fra ved filtrering og skylles med 3 x 50 ml acetone. Filtratet koncentreres i vakuum og 25 chromatograferes på 60 g Merck-silicagel 60 under anvendelse af 2% CH3OH i CH2C12 som elueringsmiddel, hvorved der fås 480 mg (54%) af den i overskriften angivne oxazolin.

TLC: silicagel, 4% CH3OH i CH2C12, Rf = 0,42,

Ce(SO4)2 .

30 13C-NMR (67,5 MHz, CDCI3) δ: 171,6, 169,4, 169,3, 137.0, 132,3, 130,0, 130,0, 129,5, 129,0, 128,6, 128,6, 79,1, 79.0, 69,6, 68,3, 51,5, 48,2, 46,3, 40,0, 34,8, 33,8, 29,6, 28,9, 27,2, 22,8.

44 DK 172411 B1 D. TIS - \la.2a (Z) .3a. 4a) l - 6- Γ3 - Γ4- Γ f f2 - (4-chlorphenvl) --ethvll -aminol -carbonvll -2-oxazolvI1 -7-oxabicvclo-Γ2,2,Π hePt-2-νΠ-4-hexensvre-methvlester

Til en omrørt opløsning af 4 80 mg (1,01 mmol) af 5 oxazolinen fra afsnit C i 20 ml CH2C12 sættes der 480 mg Ni02. Reaktionsblandingen omrøres ved stuetemperatur i 1 time, hvorefter der tilsættes yderligere 480 mg Ni02. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 3 timer, og der tilsættes 480 mg Ni02. Den fremkomne blanding omrøres i yderligere 15 10 1/2 time, og der tilsættes derefter en portion Ni02 på 480 mg. Reaktionsblandingen omrøres i 1 1/2 time og fortyndes med 100 ml ethylacetat. Til den fremkomne blanding sættes der 20 ml 3 M NaHS02-opløsning og 3 0 ml 1 M natriumcitrat-opløsning. Det organiske lag skilles fra, og det vandige 15 lag ekstraheres med 2 x 100 ml ethylacetat. De kombinerede organiske ekstrakter vaskes med 50 ml saltopløsning, tørres ved hjælp af magnesiumsulfat, filtreres og koncentreres i vakuum. Det fremkomne materiale chromatograferes på 45 g Merck-silicagel 60 under anvendelse af 2% CH3OH i CH2C12 20 som elueringsmiddel, hvorved der fås 200 mg (42%) af den i overskriften angivne ester.

TLC: silicagel, 4% CH3OH i CH2C12, Rf = 0,60, CE(S04)2.

13C-NMR (67,5 MHz, CDCI3) δ: 173,2, 163,9, 160,6, 25 140,5, 137,2, 135,8, 132,2, 130,0, 130,0, 129,4, 128,6, 128,6, 128,5, 79,5, 79,3, 51,4, 49,6, 46,6, 40,1, 35,2, 33,7, 29,7, 28,9, 27,8, 22,7.

E. flS- flot. 2a (Z) , 3a. 4otl 1 -6- f3- Γ4- Γ Γ f2- (4-chlorphenvl) - 3 0 ethvll-amino)-carbonvll -2-oxazolvll-7-oxabicvclo- -Γ2.2.11hept-2-vll-4-hexensvre

Til en omrørt opløsning af 190 mg (0,40 mmol) af esteren af fra afsnit D og 4 ml vand i 30 ml THF sættes der 4 ml 1 N LiOH-opløsning. Denne blanding gennembobles med 35 argon i 10 minutter og omrøres ved stuetemperatur i 5 timer. Blandingen gøres sur til en pH-værdi på 2 ved tilsætning af 45 DK 172411 B1 1 N HC1-opløsning og mættes med NaCl. THF-laget skilles fra, og det vandige lag ekstraheres med 4 x 25 ml ethylace-tat. De kombinerede organiske ekstrakter tørres med magnesiumsulfat, filtreres og koncentreres i vakuum. Rensning 5 udføres ved flash-chromatografi på 20 g Merck-silicagel 60 under anvendelse af 4% CH3OH i CH2CI2 som elueringsmiddel, hvorved der fås 106,7 mg (59%) af den i overskriften angivne syre.

TLC: silicagel, 6% CH3OH i CH2CI2, Rf = 0,32, 10 Ce(S04)2· 13C-NMR (67,5 MHz, CDCI3) 6: 176,9, 175,4, 164,0, 160,9, 140,9, 137,2, 130,1, 130,1, 129,4, 128,6, 128,6, 79.6, 79,5, 49,6, 46,6, 40,2, 35,1, 33,7, 29,7, 28,9, 27,9, 22.6.

15

Eksempel 6 ns-ria;,2a(Z) . 3α. 4α1 Ί-6-Γ3-Γ4-ΓΓ (4-chlorphenvl) -amino] -carbonyl] -2-oxazolvn -7-oxabicvclo Γ2.2.11 hept-2-vll -4-hexensvre A. f(1,1-dimethvlethoxv)-carbonvll-N-(4-chlorphe-20 nvl)-L-serinamid

Til en omrørt opløsning af 2,00 g (15,7 mmol) 4-chlor-anilin, 3,22 g (15,7 mmol) Boc-(L)-serin, 2,12 g (15,7 mmol) 1-hydroxybenzotriazol-hydrat og 5,40 ml (31,2 mmol) diiso-propylethylamind i 40 ml DMF under argon sættes der 2,31 g 25 (15,7 mmol) ethyl-3-(3-dimethylamino)-propyl-carbodiimid- -hydrochloridsalt. Denne blanding omrøres ved stuetemperatur i 17 timer og koncentreres i vakuum. Blandingen fortyndes med 4 00 ml ethylacetat og vaskes med 3 x 70 ml 1 N vandig HCl-opløsning og 2 x 70 ml mættet NaHCC>3-opløsning. Det 30 organiske lag tørres med magnesiumsulfat, filtreres og koncentreres i vakuum. Det fremkomne materiale chromatograferes på 80 g Merck-silicagel 60 under anvendelse af 1 liter af en blanding af hexan og diethylether i forholdet 1:3 og 1 liter af en blanding af hexan og diethylether i forholdet 35 1:4 som elueringsmidler, hvorved der fås 1,02 g (21%) af det i overskriften angivne amid.

46 DK 172411 B1 TLC: silicagel, 4% CH3OH i CH2C12, Rf = 0,34,

Ce(S04)2.

B. Γ1S - f Ion. 2 a (Z) . 3a(R*) .4βΠ-6-Γ3-ΓΓΓ2 - r(4-chlor-5 phenyl)-aminol-1-(hydroxymethyl)-2-oxoethvll- amino 1 - carbonyl 1 -7-oxabicvclo- \2,2 . li hept-2-vll - 4-hexensyre-methylester

Til en omrørt opløsning af 1,02 g (3,24 mmol) af amidet fra afsnit A i 12 ml tør CH2Cl2 under argon ved 0°C 10 sættes der 3 ml TFA. Blandingen omrøres ved 0°C i 3 timer og fortyndes med 50 ml toluen. Denne blanding koncentreres i vakuum. Til en omrørt opløsning af dette amin-TFA-salt, 0,50 g (3,73 mmol) 1-hydroxybenzotriazol-hydrat og 5 ml triethylamin i 20 ml DMF sættes der en opløsning af 1,00 g 15 (3,73 mmol) af syren fra eksempel 1, afsnit D i 10 ml DMF.

Til denne blanding sættes der derefter 1- (3-dimethylamino-propyl)-3-ethylcarbodiimid-hydrochloridsalt. Reaktionsblandingen omrøres ved stuetemperatur i 17 timer og koncentreres i vakuum. Blandingen fortyndes med 400 ml ethylacetat og 2 0 vaskes med 3 x 30 ml 1 N HCl-opløsning, 2 x 30 ml 0,2 N NaOH-opløsning og 100 ml saltopløsning. Det organiske lag tørres med magnesiumsulfat og koncentreres i vakuum. Rensning udføres ved flash-chromatografi på 80 mg Merck-silicagel 60 under anvendelse af 2% CH3OH i CH2Cl2 som elueringsmiddel, 25 hvorved der fås 3 80 mg (22%) af den i overskriften angivne alkohol.

TLC: silicagel, 4% CH3OH i CH2C12, Rf = 0,31,

Ce(S04)2.

30 C. ns- Titt. 2a(Z) .3a(R») .4tt11 - 6- Γ3 - Γ4 - Γ Γ (4-chlorohe- nvl)-amino) -carbonvll -4,5-dihvdro-2-oxazolvl1 -7--oxabicvclo (2.2. llhept-2-νΠ -4-hexensvre-methvl-ester

Til en omrørt opløsning af 370 mg (0,80 mmol) af 35 alkoholen fra afsnit B og 0,42 ml (2,39 mmol) diisopropyl-ethylamin i 5 ml CHCI3 under argon ved 0°C sættes der 0,068 DK 172411 B1

Al ml (0,88 mmol) methansulfonylchlorid. Denne blanding omrøres ved stuetemperatur i 30 minutter og koncentreres i vakuum.

Det rå nusylat opløses i 10 ml acetone og kombineres med 0,70 g K2CO3. Denne blanding opvarmes næsten til tilbagesva-5 ling i 3 timer, afkøles til stuetemperatur og fortyndes med 100 ml acetone. Fældningen skilles fra ved filtrering og skylles med 3 x 30 ml acetone. Filtratet koncentreres i vakuum og chromatograferes på 35 g Merck-silicagel 60 under anvendelse af 2% CH30H i CH2Cl2 som elueringsmiddel, hvorved 10 der fås 210 mg (59%) af den i overskriften angivne oxazolin.

TLC: silicagel, 4% CH3OH i CH2Cl2, Rf = 0,68,

Ce(S04)2· 13C-NMR (67,5 MHz, CDCI3) 6: 173,2 170,0, 169,6, 135,8, 129,5, 129,4, 128,9, 128,9, 128,5, 120,9, 120,9, 15 79,2, 79,2, 69,4, 68,7, 51,4, 48,3, 46,4, 33,7, 29,6, 28,8, 27,2, 22,8.

D. flS - Γΐα,2α(Z) ,3of, 4of11 -6 - Γ3 - Γ4 - Γ F (4-chlorphenvl) --aminol -carbonvll -2-oxazolvll - 7-oxabicvclo-20 Γ2,2.11hept-2-vll-4-hexensvre-methvlester

Til en omrørt opløsning af 200 mg (0,45 mmol) oxazolin fra afsnit C i 3 ml 0Η2012 sættes der 200 mg Ni02. Reaktionsblandingen omrøres ved stuetemperatur i 1 1/2 time, hvorefter der tilsættes yderligere 200 mg Ni02. Blandingen 25 omrøres ved stuetemperatur i 1 1/2 time, og der 200 mg Ni02·

Den fremkomne blanding omrøres i yderligere 1 1/2 time, og der tilsættes en yderligere portion Ni02 på 200 mg. Reaktionsblandingen omrøres i 2 timer og fortyndes med 100 ml ethylacetat. Til den fremkomne blanding sættes der 5 ml 3 M 30 NaHSC>3-opløsning og 30 ml 1 M natriumcitratopløsning. Det organiske lag skilles fra, og det vandige lag ekstraheres med 2 x 100 ml ethylacetat. De kombinerede ekstrakter tørres med magnesiumsulfat, filtreres og koncentreres i vakuum.

Det fremkomne materiale chromatograferes på 15 g Merck-si-35 licagel 60 under anvendelse af 2% CH3OH i CH2Cl2 som elueringsmiddel, hvorved der fås 140 mg (70%) af den i over- 48 DK 172411 B1 skriften angivne ester.

TLC: silicagel, 4% CH3OH i CH2C12, Rf = 0,76,

Ce(S04)2 .

13C-NMR (67,5 MHz, CDCl3) D: 173,2, 164,2, 158,4, 5 141,4, 136,0, 135,9, 129,5, 129,3, 128,9, 128,9, 128,4, 121,1, 121,1, 79,6, 79,4, 51,4, 49,6, 46,6, 33,7, 29,7, 28,9, 27,9, 22,8.

E. f 1S - flot, 2 a (Z) , 3o?, 4al 1 - 6- Γ3- Γ4- Γ f (4-chlorphenvl) -10 -aminol-carbonvll -2-oxazolvll-7-oxabicvclof2.2.11- hept-2-vll-4-hexensvre

Til en omrørt opløsning af 135 mg (0,03 mmol) af esteren fra afsnit D og 3 ml vand i 15 ml THF sættes der 3 ml 1 N LiOH-opløsning. Denne blanding gennembobles med argon 15 i 10 minutter og omrøres ved stuetemperatur i 5 timer. Blandingen gøres sur til en pH-værdi på 2 ved tilsætning af 1 N HCl-opløsning og mættes med NaCl. THF-laget skilles fra, og det vandige lag ekstraheres med 4 x 15 ml ethylacetat. De kombinerede organiske ekstrakter tørres med magnesiumsulfat, 20 filtreres og koncentreres i vakuum. Rensning udføres ved flash-chromatografi på 15 Merck-silicagel 60 under anvendelse af 4% CH3OH i CH2C12 som elueringsmiddel, hvorved der fås 79,2 mg (61%) af den i overskriften angivne syre.

TLC: silicagel, 6% CH3OH i CH2Cl2, Rf = 0,36, 25 Ce(S04)2.

13C-NMR (67,5, MHz, CDCI3) δ: 179,0, 177,6, 164,2, 141.7, 136,0, 135,9, 129,4, 128,9, 128,5, 121,2, 121,2, 79.7, 79,5, 49,6, 46,6, 33,6, 32,3, 29,7, 28,9, 27,9, 22,6.

30 49 DK 172411 B1

Eksempel 7 flS- Γΐα.2α(Z) . 3α. 4αΊ 1 -6- i3 - f4 - f Γ f4 - (4-chlorphenvl) -butylΊ --aminol -carbonvll -2-oxazolvll -7-oxabicvclo Γ2.2 . llhePt-2-vll - 4-hexensvre 5 A. flS-Γ Ια. 2α(Ζ),3α.4α11-6-Γ3-[4-[ίΓ4- (4-chlorphenvl) - -butvl) -aminol -carbonvll -2-oxazolvll -7-oxabicvclo-Γ2.2.lihept-2-vll-4-hexensvre-methvlester 0,21 g uren forbindelse fra eksempel 2, afsnit G (50% ren = 0,11 g, 0,33 mmol) omrøres i ca. 4 ml toluen, og 10 der tilsættes 0,1 ml (1,14 mmol) oxalylchlorid. Der tilsættes 1 dråbe dimethylformamid, og blandingen omrøres i 2 timer ved stuetemperatur, hvorefter omsætningen er fuldstændig ifølge TLC. Reaktionsblandingen koncentreres i vakuum, og remanensen genkoncentreres to gange fra 2 ml toluen, hvorved 15 der fås en orange olie, nemlig [IS-[Ια, 2α (Z) , 3α, 4a] ]-6-(4--(chlorcarbonyl)-2-oxazolyl)-7-oxabicyclo[2,2,1]hept-2-yl]--4-hexensyre-methylester. Til denne olie sættes der ca. 3 ml CHCI3, efterfulgt af 0,11 ml (0,08 g eller 0,78 mmol) triethylamin og 0,13 g (0,71 mmol) 4-(4-chlorphenyl)-butyl-20 amin, og blandingen omrøres natten over ved stuetemperatur. Reaktionsblandingen fortyndes med ethylacetat og vand, det organiske lag skilles fra, og det vandige lag ekstraheres to gange med 20 ml ethylacetat. De organiske lag kombineres, vaskes med saltopløsning, tørres med magnesiumsulfat og 25 koncentreres i vakuum, hvorved der fås 0,43 g af en orange olie. Denne olie flash-chromatograferes (silica, 0%-100% ethylacetat i hexan-gradient) , hvorved der fås 0,26 g af den urene, i overskriften angivne methylester (50% ren = 0,13 g) i form af en olie. Produktet fås i et udbytte på 30 78%.

13C-NMR (67,8 MHz, CDCI3) δ: 172,8, 163,6, 160,3, 140.2, 140,2, 135,7, 131,0, 129,4, 129,1, 128,2, 128,0, 79.2, 79,1, 51,1, 49,4, 46,3, 38,4, 34,4, 33,5, 29,4, 28,6, 28,1, 27,6, 22,5.

35 50 DK 172411 B1 B. flS - fla. 2or (Z) .3α,4a1 1 - 6- f 3 - Γ4 - f f f4- (4-chlorphe-nvl)-butvll -aminol-carbonyl) -2-oxazolvll-7-oxabi-cvclo f2.2.11hept-2-vll-4-hexensvre 0,26 g uren ester fra afsnit A (50% ren = 0,13 g, 5 0,2 6 mmol) omrøres i ca. 30 ml 1 N NaOH og 2 ml THF i 8 timer ved stuetemperatur. Reaktionsblandingen koncentreres til fjernelse af THF og gøres sur til en pH-værdi på ca. 2 med koncentreret saltsyre. Der tilsættes ethylacetat, og det organiske lag skilles fra. Det vandige lag ekstraheres 10 to gange med ca. 2 0 ml ethylacetat. De organiske lag kombineres, vaskes med mættet natriumchloridopløsning, tørres med magnesiumsulfat og koncentreres i vakuum, hvorved der fås 0,2 g af en klar olie. Denne olie flash-chromatograferes (silica, 0,50% CH3OH, 0,25% CH3CO2H, 99,25% ethylacetat), 15 hvorved der fås 0,10 g rent produkt. Produktet fås i et udbytte på 79%.

13C-NMR (67,8 MHz, CDCI3) δ: 178,4, 164,4, 161,4, 141,0, 140,4, 135,6, 131,3, 129,6, 129,3, 128,5, 128,3, 79,5, 79,4, 49,6, 46,5, 38,8, 34,6, 33,6, 29,6, 28,9, 28,4, 20 27,8, 22,5.

Eksempel 8 flS-fla.2a(Z),3α.4α)1-6-Γ3-Γ4-f f(6-cvclohexvlhexvl)-aminol --carbonvl 1 -2-oxazolvll-7-oxabicyclo f2.2.lihePt-2-vll-4-he-25 xensvre

En opløsning af 0,4 9 g (0,97 mmol) af esteren fra eksempel 30 i 8 ml IN NaOH og 8 ml THF omrøres i 18 timer, hvorpå der koncentreres i vakuum til fjernelse af THF, og der gøres surt til en pH-værdi på 1,5 med 1 N HCl. Der til-30 sættes ethylacetat, og det organiske lag skilles fra. Det vandige lag ekstraheres to gange med 20 ml ethylacetat. De organiske lag kombineres, vaskes med saltopløsning, tørres med magnesiumsulfat og koncentreres i vakuum. Der fås et hvidt fast stof, som krystalliseres fra hexan og chloroform, 35 hvorved der fås 0,40 g (84%) rent produkt i form af et hvidt fast stof.

51 DK 172411 B1

Rf = 0,36 i 0,1% CH3COOH i (4% methanol i ethylace-tat). Synliggjort ved UV: Ce(S04)2· [a]f) = +30,2°, c = 0,58 g/100 ml CH3OH, smp. 82-83°C.

5 Eksempel 9 flS - [Ια. 2α (Z) . 3a,4a11-6-f3-f4-[[ (6-cvclohexvlbutvl) -aminoΊ -carbonvll -2-oxazolvn -7-oxabicvclo Γ2.2 , li hept-2-νΠ -4-hexen-svre-methvlester

Til en omrørt opløsning af 0,49 g (1,40 mmol) syre-10 chlorid, der er fremstillet som beskrevet i eksempel 2, afsnit I, samt en ukendt mængde Vilsmeier-salt i 10 ml chloroform sættes der 0,28 g (2,80 mmol) triethylamin og 0,38 g (2,1 mmol) 6-cyclohexylhexylamin som fremstillet i eksempel 30, afsnit C. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 10 15 timer, hvorefter den fortyndes med ethylacetat og vand. Det organiske lag skilles fra, og det vandige lag ekstraheres to gange med 20 ml ethylacetat. De organiske lag kombineres, vaskes med saltopløsning, tørres med magnesiumsulfat og koncentreres. Flash-chromatografi (0%-100% ethylacetat-he-20 xan-gradient) giver 0,17 g af det i overskriften angivne produkt i form af en klar olie i et udbytte på 25%. Rf = 0,46 i 1:1 ethylacetatrhexan.

Eksempel 10 25 flS-Γΐα,2α(Ζ),3α.4α11 -6-f3-Γ4-f f(6-cvclohexvlhexvl)-aminol--carbonvll -2-oxazolvl1 -7-oxabicvclo f2,2. llhept-2-vll -4-hexen-svre

En opløsning af 0,17 g (0,33 mmol) af esteren fra eksempel 32 i 5 ml 1 N NaOH og 2 ml tetrahydrofuran omrøres 30 ved stuetemperatur i 10 timer, koncentreres derpå i vakuum til fjernelse af THF og gøres sur til en pH-værdi på 1,5 med koncentreret saltsyre. Der tilsættes ethylacetat, og det organiske lag skilles fra. Det vandige lag ekstraheres to gange med 20 ml ethylacetat. De organiske lag kombineres, 35 vaskes med saltopløsning, tørres med magnesiumsulfat og koncentreres i vakuum. Der fås en klar olie, som chromato- 52 DK 172411 B1 graferes i en blanding af EtOAC og hexan i forholdet 1:1 med 0,25% CH3C00H, hvorved der fås 0,13 g (78%) af den i overskriften angivne forbindelse i form af en olie (indeholdende 2,5% af den cis-isomere af forbindelsen fra eksempel 5 31A. Rf = 0,36 i 4% CH30H, 0,1% CH3COOH, 95,5% EtOAc (UV, CE(S04)2), [a]D = +55° i CH3OH ved c = 0,50 g/100 ml.

Eksempel 11 ilS- flo?. 2a (Z) , 3 a, 4α?1 1 - 6- i3- Γ4- i (propvlamino) -carbonvll -2-10 -oxazolvll -7-oxabicvclo f2,2.11 hept-2-νΠ -4 -hexensvre-methvl-ester

Til en opløsning af 0,22 g (3,7 mmol) propylamin i 5 ml chloroform ved 0°C under argon sættes der 0,162 g (0,46 mmol) syrechlorid fremstillet som beskrevet i eksempel 2 15 afsnit I. Blandingen opvarmes til stuetemperatur og omrøres i 14 timer, hvorefter den fortyndes med chloroform og vand.

Det organiske lag skilles fra, og det vandige lag ekstraheres to gange med 20 ml chloroform. De organiske lag kombineres, vaskes med saltopløsning, tørres med magnesiumsulfat og 20 koncentreres. Flash-chromatografi (0%-75% EtOAc i hexan-gra-dient) giver 0,15 g af det i overskriften angivne produkt i form af en klar olie i et udbytte på 85%. Rf = 0,29 i 4% methanol i ethylacetat (UV, Ce(S04)2)· 13C-NMR (CDCI3): δ 173,0, 163,7, 160,4, 140,2, 136,0, 25 129,2, 128,4, 79,3, 79,2, 51,2, 49,5, 46,5, 40,5, 33,6, 29,6, 28,7, 27,7, 22,7, 22,6, 11,2.

Eksempel 12 flS- fla,2a (Z) , 3α. 4αΊ 1 -6- f3- Γ4- Γ (4-propvlamino) -carbonvll -2-30 -oxazolvll-7-oxabicvclo Γ2.2.11hept-2-vll-4-hexensvre

En opløsning af 0,15 g (0,39 mmol) af esteren fra eksempel 36 i 8 ml 1 N NaOH og 8 ml THF omrøres i 18 timer, koncentreres derpå i vakuum til fjernelse af THF og gøres sur til en pH-værdi på 1,5 med 1 N HC1. Der tilsættes ethyl-3 5 acetat, og det organiske lag skilles fra. Det vandige lag ekstraheres to gange med 20 ml ethylacetat. De organiske 53 DK 172411 B1 lag kombineres, vaskes med saltopløsning, tørres med magnesiumsulfat og koncentreres i vakuum. Der fås en klar olie, som krystalliseres fra hexan og chloroform, hvorved der fås 0,14 g (100%) rent produkt i form af et hvidt fast stof. Rf 5 = 0,41 i 0,1% CH3COOH, 4% methanol, 95,9% ethylacetat (UV,

Ce(SO4)2) · Smp. 117-118°C, [a]D = +42,12° ved c = 4,7 g/100 ml CH3OH.

Eksempel 13 10 flS- flty,2of(Z) . 3α. 4αΊ Ί - 6- Γ3 - Γ4 - f f (4-butvlphenvl) -aminol -carbonyl 1 -2 -oxazolvl 1 - 7 -oxabicvclo f2.2.11 hept-2-vll -4-hexen-svre-methvlester

Til en opløsning af 0,189 g (1,27 mmol) 4-butylanilin i 5 ml chloroform under argon ved 0°C sættes der 0,17 g 15 (0,48 mmol) syrechlorid, der er fremstillet som beskrevet i eksempel 2, afsnit I, og 0,145 g (1,44 mmol) triethylamin. Blandingen opvarmes til stuetemperatur og omrøres i 14 timer, hvorefter den fortyndes med chloroform og vand. Det organiske lag skilles fra, og det vandige lag ekstraheres med 20 ml 20 chloroform to gange. De organiske lag kombineres, vaskes med saltopløsning, tørres med magnesiumsulfat og koncentreres. Flash-chromatografi (0%-75% EtOAc i hexan-gradient) giver 0,16 g af det i overskriften angivne produkt i form af en klar olie i et udbytte på 69%. Rf = 0,87 i 4% methanol 25 i ethylacetat (UV, Ce(S04)2)· 13C-NMR (CDCI3): δ 173,1, 163,9, 158,2, 141,1, 139,0, 136,2, 129,4, 128,7, 128,4, 119,7, 79,4, 79,3, 51,3, 49,6, 46,6, 34,9, 33,6, 33,5, 29,7, 28,8, 27,8, 22,7, 22,1, 13,8.

30 Eksempel 14 flS-ΓΙα,2α(Z).3a.4a11-6-Γ3-Γ4-ΓΓ(4-butvlphenvl)-aminol-car-bonvll-2-oxazolvll-7-oxabicvclo Γ2.2,11 hept-2-νΠ-4-hexensvre En opløsning af 0,16 g (0,34 mmol) af esteren fra eksempel 38 i 8 ml IN NaOH og 8 ml THF omrøres i 18 timer, 35 koncentreres derpå i vakuum til fjernelse af THF og gøres sur til en pH-værdi på 1,5 med 1 N HC1. Der tilsættes ethyl- 54 DK 172411 B1 acetat, og det organiske lag skilles fra. Det vandige lag ekstraheres to gange med 20 ml ethylacetat. De organiske lag kombineres, vaskes med saltopløsning, tørres med magnesiumsulfat og koncentreres i vakuum. Der fås en klar olie, 5 som krystalliseres fra hexan og chloroform, hvorved der fås 0,13 g (87%) af det rene produkt i form af et gult fast stof. Rf = 0,47 i 0,1% CH3COOH, 4% methanol, 95,9% ethylacetat (UV, Ce(S04)2) Smp. 113-114°C. [a]D = +6,44°, c = 0,59 g/100 ml CH3OH.

10

Eksempel 15 TIS- Γlot. 2o? (Z) .3(2.4(311 - 6- f3 - Γ4 - Γ Γ (4-cvclohexvlbutvl) -aminol --carbonvll-2-oxazolvll -7-oxabicvclo(2,2.11 hept-2-vll -N- (phe-nvlsulfonvi)-4-hexenamid 15 Til en omrørt opløsning af 102 mg (0,5 mmol) l-(3- -dimethylaminopropyl) -3-ethylcarbodiimid-hydrochloridsalt og 66,7 mg (0,50 mmol) 4-dimethylaminopyridin i 50 ml DMF sættes der 8 0 mg (0,51 mmol) benzensulfonamid og 0,14 ml (1,00 mmol) (C2H5)3N, efterfulgt af 229 mg (0,50 mmol) af 20 syren fra eksempel 1. Denne blanding omrøres ved stuetemperatur i 18 timer og koncentreres i vakuum. Remanensen fordeles mellem 25 ml 1 N HCl-opløsning og 4 x 40 ml EtOAc. De kombinerede EtOAc-ekstrakter vaskes med 30 ml saltopløsning, tørres med magnesiumsulfat, filtreres og koncentreres i 25 vakuum. Det fremkomne materiale chromatograferes på 30 g Merck-silicagel 60 under anvendelse af 2% CH3OH i CH2CI2 som elueringsmiddel, hvorved der fås 250 mg af det i overskriften angivne sulfonamid. Dette produkt fordeles mellem 60 ml EtOAc og 2 0 ml vand. Det organiske lag tørres med 30 magnesiumsulfat, filtreres og koncentreres i vakuum, hvorved der fås 210 mg (70%) af den i overskriften angivne forbindelse i form af et fast stof. Smp. 154-156°C, TLC: silicagel, 4% CH30H/CH2C12, Rf = 0,46, Ce(S04)2· 13C-NMR (forb. angivet i overskrift) (CDC13, 67,5 35 MHz): δ 171,1, 170,5, 163,9, 161,1, 140,7, 139,0, 135,9, 133,5, 128,7, 128,2, 79,7, 79,7, 49,5, 46,4, 39,2, 37,4, 55 DK 172411 B1 37.0, 35,9, 33,3, 33,3, 29,7, 28,8, 27,9, 26,6, 26,3, 26,3, 24.1, 22,3.

Eksempel 16 5 flS-f Ια.2α(Ζ).3α.4α11-7-ί3-Γ-4Γί (4-cvclohexvlbutvl) -aminol --carbonvll-2-oxazolvll -7-oxabicvclo Γ2.2,Πhept-2-vll-5-hep-tensvre

Til en omrørt opløsning af 410 mg (0,84 mmol) af oxazolen fra eksempel 44 i 20 ml CH3OH sættes der 5 ml 1 N 10 NaOH-opløsning. Den fremkomne blanding omrøres ved stuetemperatur i 2 1/2 time og koncentreres i vakuum. Blandingen fordeles mellem 10 ml 1 N HCl-opløsning mættet med NaCl og 4 x 20 ml EtOAc. EtOAc-ekstrakterne tørres med magnesiumsulfat, filtreres og koncentreres i vakuum. Rensning udføres 15 ved flash-chromatografi på 20 g Merck-silicagel 60 under anvendelse af 150 ml 2% CH3OH i CH2CI2 som elueringsmiddel, efterfulgt af eluering med 4% CH3OH i CH2CI2 med 1% eddikesyre, hvorved der fås 370 mg (93%) af den rene, i overskriften angivne syre. Smp. 123-125°C. TLC: silicagel, 6% CH3OH

20 i CH2C12, Rf = 0,22, Ce(S04)2· 13C-NMR (forb. angivet i overskrift) (CDCI3, 67,5 MHz): δ 177,8, 164,0, 160,9, 140,9, 135,8, 130,5, 128,1, 79,4, 79,4, 49,8, 46,7, 39,2, 37,5, 37,0, 33,3, 33,3, 29,8, 28,9, 27,8, 26,6, 26,5, 26,3, 26,3, 24,4, 24,2.

25

Eksempel 17 flS-fla.2a(Z).3a.4a11-6-Γ3-Γ4-ΓΓ(7.7-dimethvloctvl)-aminol --carbonvll -2 -oxazolvll -7-oxabicvclo Γ2.2 , Π hept-2-vll -4-he-xensvre-methvlester 30 A. 3.3-Dimethvlbutanal

En opløsning af 9,4 ml (13,6 g eller 107 mmol) oxa-lylchlorid under argon i 500 ml CH2CI2 fremstilles i en 1000 ml-kolbe og afkøles til -60°C. En opløsning af 15,4 ml DMSO (18,5 g eller 235 mmol) i 25 ml CH2CI2 tilsættes drå-35 bevis i løbet af 10 minutter. Reaktionsblandingen omrøres i 10 minutter, og der tilsættes langsomt 10 g (98 mmol) 3,3- 56 DK 172411 B1 -dimethyl-1-butanol. Omrøring fortsættes i yderligere 20 minutter, inden der tilsættes 68,1 ml (49,5 g eller 489 mmol) (C2H5)3N, hvorefter reaktionsblandingen får lov at varme op til stuetemperatur, hvorpå der tilsættes 50 ml 5 vand. Blandingen adskilles, og det vandige lag ekstraheres én gang med 3 0 ml CH2Cl2· De organiske lag kombineres, og vaskes i rækkefølge med 1% vandig HCl, vand, mættet NaHC03, vand og mættet NaCl og tørres over magnesiumsulfat. Den filtrerede opløsning koncentreres under anvendelse af en 10 rotationsfordamper, hvorved der 3,3 g (3 3%) af den i overskriften angivne forbindelse i form af en gul olie. Det lave udbytte skyldes sandsynligvis produktets flygtighed.

13C-NMR (67,8 MHz, CDCI3): δ 203,3, 56,4, 31,0, 29,7.

15 B. (Z)-7.7-Dimethyl-4-octensvre

Til en omrørt opløsning af 13,72 g (31,9 mmol) 3-carb-oxypropyltriphenyl-phosphoniumbromid i 60 ml tør THF under argon ved -15°C sættes der dråbevis 32 ml (57,9 mmol) 1,72 N K-tert.amylat/toluen i løbet af 10 minutter. Den orange-20 farvede blanding omrøres i 1/2 time. Til blandingen sættes der langsomt 2,00 g (19,9 mmol) af aldehydet fra afsnit A som en opløsning i 5 ml THF. Reaktionsblandingen omrøres ved -15°C i 1 time og ved stuetemperatur i 20 timer. Til reaktionsblandingen sættes der dråbevis 12 ml CH3COOH til 25 standsning af reaktionen, hvorpå der koncentreres i vakuum. Remanensen fordeles mellem 100 ml EtOAc og 100 ml vand. Det vandige lag ekstraheres to gange mere med EtOAc (100 ml) .

De kombinerede organiske lag vaskes i rækkefølge med 1% vandig HCl, Η20, mættet NaHC03, H20 og mættet NaCl, tørres 30 med magnesiumsulfat og koncentreres i vakuum. Remanensen chromatograferes under eluering med 0,3% CH3COOH i (1%-100% EtOAc i hexan-gradient) , hvorved det fås 1,75 g (51%) af det ønskede, i overskriften angivne produkt.

13C-NMR (CDCI3): δ 179,8, 128,6, 128,4, 41,0, 34,1, 35 31,1, 29,2, 22,6.

57 DK 172411 B1 C. 7,7-Dimethvloctansvre

Til en omrørt opløsning af 1,2 g (7,04 mmol) af syren fra afsnit B i 8 ml CH3COOH sættes der 0,2 g platinoxid.

Den fremkomne blanding omrøres i 14 timer under en atmosfære 5 af hydrogen (boble). Reaktionsblandingen filtreres gennem en CelitA-pude. Filtratet koncentreres i vakuum, og remanensen fortyndes med 50 ml toluen og koncentreres igen. Denne proces gentages yderligere én gang, hvorved der fås 1,2 g (100%) af det ønskede, i overskriften angivne produkt i 10 form af en olie.

D. 7,7-Dimethvloctanamid

Til en omrørt opløsning af 1,21 g (7,02 mmol) af syren fra afsnit C i 50 ml toluen sættes der 3 ml oxalyl-15 chlorid. Reaktionsblandingen omrøres i 1 time ved stuetemperatur under argon og koncentreres i vakuum. Remanensen fortyndes med 20 ml toluen og koncentreres igen. Dette gentages til fjernelse af spor af oxalylchlorid. Remanensen omrøres ved stuetemperatur under argon i 5 ml CH3OH og 1,17 20 ml (8,43 mmol) (C2H5) 3!$, og der tilsættes et overskud på 2 ml 9 M methanolisk ammoniak. Efter omrøring i 16 timer fordeles reaktionsblandingen mellem 3 ml vand og 20 ml EtOAc.

Det vandige lag ekstraheres to gange yderligere med 20 ml EtOAc. De kombinerede organiske lag vaskes med NaCl, tørres 25 med magnesiumsulfat, filtreres og koncentreres i vakuum, hvorved der fås et halvfast stof. Dette halvfaste stof krystalliseres ved triturering med hexan, hvorved der fås 0,5 g (42%) af det ønskede, i overskriften angivne produkt i form af et fast stof.

30 13C-NMR (CDCI3) : δ 176,3, 43,9, 35,9, 30,2, 30,1, 29,3, 25,5, 24,2.

E. 7,7-dimethvloctanamin

Til en opløsning af 0,45 g (2,62 mmol) af amidet fra 35 afsnit D i 50 ml tør ether omrørt under argon ved 0°C sættes der 0,11 g (2,88 mmol) lithiumaluminiumhydrid. Der udvikles 58 DK 172411 B1 gas, og reaktionsblandingen omrøres ved stuetemperatur i 4 dage. Under kraftig omrøring standses reaktionen forsigtigt ved tilsætning af 0,02 ml vand, 0,02 ml 5% vandig NaOH og 0,072 ml vand. Der dannes en hvid fældning. Efter omrøring 5 i 1/2 time skilles den hvide fældning fra ved filtrering, og filtratet koncentreres i vakuum, hvorved der fås 0,4 g (89%) af den i overskriften angivne forbindelse i form af en gul olie. Denne olie krystalliseres ved triturering med hexan og CHCI3.

10 F . [IS - Γΐα. 2α(Ζ) . 3a. 4od 1 - 6- [3 - Γ4 - Γ Γ (7.7-dimethyl octyl) -aminol -carbonvll -2-oxazolvl1 -7-oxabicvclo-f22.11hept-2-vll-4-hexensvre-methvlester

Til en opløsning af 0,46 g (1,3 mmol) af syrechloridet 15 fremstillet ifølge eksempel 2, afsnit I plus en ukendt mængde Vilsmeier-salt i 5 ml CHCI3 under argonatmosfære ved stuetemperatur sættes der 0,25 ml (0,18 g eller 1,8 mmol) (C2-Η5)3Ν og 0,24 g (1,5 mmol) af aminen fra afsnit E. Reaktionsblandingen omrøres ved stuetemperatur i 16 timer, hvorpå 20 der fortyndes med EtOAc og vand. Det organiske lag skilles fra, og det vandige lag ekstraheres to gange med 20 ml EtOAc.

De organiske lag kombineres, vaskes med saltopløsning, tørres med magnesiumsulfat og koncentreres. Flash-chromatografi (0%-100% EtOAc i hexan-gradient) giver 0,20 g (32%) af det 25 ønskede, i overskriften angivne produkt i form af en olie.

Rf = 0,8 i 1% TFA, 1% CH3OH, 98% EtOAc.

13C-NMR (CDCI3): δ 172,8, 163,6, 160,2, 140,1, 135,9, 129,1, 128,3, 79,3, 79,1, 51,1, 49,4, 46,4, 43,9, 38,8, 33,5, 29,9, 29,5, 29,4, 29,1, 28,7, 27,6, 26,7, 24,1, 22,5.

30

Eksempel 18 TIS- Γΐα.2α(Z) . 3α, 4α11 - 6- Γ3 - Γ4- Γ [ (7.7-dimethvloctvl) -aminol --carbonvl 1 -2-oxazolvll-7-oxabicvclo[2.2.11hept-2-vll-4-he-xensvre 35 Der fremstilles en opløsning af 0,20 g (0,38 mmol) af esteren fra eksempel 46 i 10 ml IN NaOH og 10 ml THF.

59 DK 172411 B1

Reaktionsblandingen omrøres i 13 timer, koncentreres derpå i vakuum til fjernelse af THF og gøres sur til en pH-værdi på 2 med 1 N HC1. Der tilsættes EtOAc, og det organiske lag skilles fra. Det vandige lag ekstraheres to gange med 20 ml 5 EtOAc. De organiske lag kombineres, vaskes med saltopløsning og koncentreres i vakuum, hvorved der fås en klar olie. Denne olie chromatograferes (0,1% CH3COOH i (0%-50% EtOAc i hexan-gradient) ) , hvorved der fås 0,12 g (66%) af den i overskriften angivne syre i form af et hvidt fast stof med 10 smp. 68-69°C. Rf = 0,18 i 1:1 hexan-EtOAc med 0,05% CH3COOH.

[a]D = + 31,1° i CH3OH ved c = 0,46 g/100 ml.

13C-NMR (CDCI3): δ 176,8, 163,9, 160,7, 140,8, 135,7, 129,4, 128,4, 79,5, 79,3, 49,6, 46,5, 44,0, 39,1, 33,6, 30,1, 29,6, 29,4, 29,3, 28,8, 27,8, 26,8, 24,3, 22,5.

15

Eksempel 19 flS- Γΐα.2α (E) . 3a. 4of 11 -6- Γ3- Γ4- f Γ (4-cvclohexvlbutvl) -aminol --carbonyl] -2-oxazolvll -7-oxabicvclo Γ2.2.11 hept-2-vll -4-he-xensvre 20 A. flS- fla. 2a(Z) , 3α. 4α11 -7- Γ3- Γ fdimethyl (1.1-dimeth yl et hyl ) -silvll-oxvl-7-oxabicyclo-Γ2,2.11hept-2--vll-4-hexensvre-methvlester Til en omrørt opløsning af 20,57 g [IS-[Ια,2α(Z),3a,-4a]]]-7-[3-(hydroxymethyl)-7-oxabicyclo[2,2,1]hept-2-yl]-5-25 -heptensyre-methylester, der er fremstillet som beskrevet i US patentskrift nr. 4.143.054 (76,8 mmol) og 5,74 g imidazol (84,4 mmol eller 1,1 ækvivalenter) i 100 ml CH2C12 under argon ved 0°C sættes der 12,05 g tert .butyldimethylsilyl-chlorid (79,8 mmol, 1,04 ækvivalenter). Der dannes en fæld-30 ning. Blandingen opvarmes til stuetemperatur, og 10 minutter senere fortyndes den med diethylether (Et20), vaskes tre gange med vand og én gang med saltopløsning, tørres med natriumsulfat og koncentreres ved rotationsfordampning og derpå i højvakuum. Remanensen, der udgøres af 30,31 g næsten 35 ren sililether som angivet i overskriften, anvendes uden yderligere rensning. Udbyttet af den i overskriften angivne 60 DK 172411 B1 ester er praktisk taget kvantitativt.

TLC (50% EtOAc i hexaner = anisaldehyd): Udgangsmateriale 0,21

Ester angivet i overskriften 0,79 5 B. flS- (laf. 2a. 3a. 4a) 1 -3- f f f (1, 1-dimethvlethvl) -dime-thvlsilvll -oxvl -methvll -7-oxabicvclo Γ2,2.llheptan--2-acetaldehvd

En opløsning af 30,31 g næsten ren silylether fra 10 afsnit A (76,8 mmol) i 200 ml CH2C12 behandles ved -78°C med ozon, indtil en blå farve vedvarer i 25 minutter. Efter bortskylning af overskud af ozon med oxygen tilsættes der 48,0 g (CHg^S (770 mmol, 10 ækvivalenter), og blandingen opvarmes til stuetemperatur. Efter 1 times omrøring ved 15 stuetemperatur fjernes opløsningsmiddel og overskud af (CH3)2S ved rotationsfordampning. ^-H-NMR for råmaterialet afslører ufuldstændig reduktion af ozonidet. Efter genopløsning i CH2CI2 ved stuetemperatur tilsættes der derfor 20,2 g triphenylphosphin (77 mmol, 1,0 ækvivalenter). Denne blan-20 ding opvarmes på grund af en exoterm reaktion. Efter omrøring natten over er det meste af opløsningsmidlet fordampet, og der tilsættes hexan til fældning af triphenylphosphinoxid og triphenylphosphin. Fældningen skilles fra ved filtrering, og filtratet koncentreres inden flash-chromatografi (5%-15% 25 EtOAc i hexan-gradient), hvilket tillader isolering af 16,31 g rent, i overskriften angivet aldehyd i form af en olie.

TLC: 50% EtOAc i hexaner - anisaldehyd):

Silylether fra afsnit A 0,89

Aldehyd angivet i overskriften 0,76 30 Methyl-5-oxopentanoat 0,51 C. flS- Γΐα, 2α (E) , 3 α. 4o?1 1-4-Γ3-ΓΓ[(1.1-dimethvlethvl) --dimethvlsilvll -oxvl -methvll -7-oxabicvclo- Γ2.2.11-hept-2-νΠ-2-butensvre-methvlester 35 En kolbe indeholdende 3,3 g (37,9 mmol) LiBr anbringes under vakuum og opvarmes med en varmepistol til fjernelse 61 DK 172411 B1 af mulig fugtighed. Ved afkøling skylles kolben med argon, og der tilsættes 20 ml CH2CI2. Til denne omrørte blanding sættes der en opløsning af 5,44 g (29,9 mmol) trimethyl-phosphonoacetat i 30 ml CH2CI2/ efterfulgt af 4,0 ml (28,7 5 mmol) (C2H5)3N. Denne blanding omrøres i 15 minutter, hvorefter der i løbet af 1 minut tilsættes en opløsning af 5,4 g (maksimalt 19,0 mmol) af det rå aldehyd fra afsnit B i 35 ml CH2Cl2. Denne tilsætning ledsages af en svag eksoterm reaktion og dannelse af en klæbrig fældning. Blandingen 10 omrøres kraftigt natten over ved stuetemperatur. Reaktionsblandingen fordeles mellem 200 ml hexan og 100 ml 0,3 M HCl. Det vandige lag ekstraheres én gang med 100 ml diethyl-ether. De kombinerede organiske ekstrakter tørres med magnesiumsulfat, filtreres og koncentreres i vakuum. TLC-analyse 15 viser, at reaktionen ikke er løbet til ende (40-50%). Remanensen opløses derpå i 50 ml CH2C12, og der tilsættes 6,3 g (18,8 mmol) carbomethoxymethylentriphenylphosphoran. Denne opløsning omrøres ved steutemperatur i 22 timer og koncentreres derpå i vakuum. Remanensen tritureres med diethylether 20 og fortyndes med et lige så stort rumfang hexan. Blandingen afkøles i 2 timer, hvorefter det faste stof fjernes ved filtrering. Filtratet koncentreres i vakuum. Råproduktet renses ved chromatografi på 167 g silicagel under anvendelse af en blanding af hexan og diethylether i forholdet 4:1 som 25 elueringsmiddel, hvorved der fås 5,9 g (91%) af den i overskriften angivne ester.

TLC: silicagel, 2:1 hexan-ether, Rf = 0,6, vanillin.

13C-NMR (67,8 MHz i CDCI3): δ 148,8, 121,8, 79,9, 78,8, 61,9, 51,4, 44,8, 30,7, 29,5, 29,4, 25,9, 18,2, -5,4.

30 D. [IS-(Ια,2α(E).3α.4α) 1 -4-Γ3 Γ Γ Γ(1.1-dimethvlethvl)-dimethvlsilvll -oxvl -methvll -7-oxabicvclo Γ2.2 . Π -hept-2-vll-1-buten-l-ol

En opløsning af 5,2 g (15,3 mmol) af esteren fra 35 afsnit C i 80 ml THF afkøles til -78°C. Til denne omrørte opløsning sættes der dråbevis 50,0 ml af en 1,5 N DIBAL-H- 62 DK 172411 B1 -opløsning i løbet af 20 minutter. Reaktionsblandingen omrøres ved -78°C i 5 timer, hvorefter reaktionen standses ved tilsætning af en opløsning af 10 ml acetone i 10 ml toluen. Herefter tilsættes der langsomt 60 g af en blanding 5 af silicagel og vand i vægtforholdet 10:9. Efter at flere gram af den fugtige silicagel er blevet tilsat, fjernes det kolde bad. Reaktionsblandingen fortyndes med 200 ml ether. Temperaturen i kolben overvåges, og når den 10°C, nedsænkes kolben i et isbad. Dette omrøres i 1 time, hvorefter sili-10 cagelen fjernes ved filtrering. Filterkagen skylles med to portioner ether på hver 100 ml. De kombinerede filtrater tørres med magnesiumsulfat, filtreres og koncentreres i vakuum, hvorved der fås 5,05 g (mere end 100%) af den rå, i overskriften angivne alkohol.

15 TLC: silicagel, 2:1 hexan-ether, Rf = 0,1, vanillin.

13C-NMR (67,8 MHz i CDC13) : δ 131,6, 130,3, 79, 8, 78.8, 63,3, 61,8, 49,3, 45,4, 30,5, 29,5, 29,3, 25,9, 18,2, -5,4.

20 E. flS- fla. 2a (E) . 3a. 4ot1 T -4- Γ3- f f f (1.1-dimethvlethvl) - -dimethvlsilvll -oxvl -methvll -7-oxabicvclo [2,2.11-hept-2-vll-2-buten-1-bromid Til en kolbe indeholdende 0,83 g triphenylphosphin (3,17 mmol, 1,0 ækvivalenter), opløst i 10 ml toluen under 25 argonatmosfære ved 0°C, sættes der 0,51 g brom (3,17 mmol, 1,0 ækvivalenter) i en enkelt portion. Der dannes en gullig fældning og et orange, gummiagtigt stof. Det gummiagtige stof omdannes ved skrabning med en spatel til en mere frit-strømmende fældning. Blandingen opvarmes kortvarigt til 30 stuetemperatur og afkøles derpå igen til 0°C. Til blandingen sættes der dråbevis en opløsning af 1,04 g af alkoholen fra afsnit D (95% ren = 0,99 g eller 3,17 mmol) og 0,28 g pyridin (3,49 mmol, 1,1 ækvivalenter) i 5 ml toluen plus en 5 ml skylning. Blandingen omrøres ved 0°C i 30 minutter og opvar-35 mes dernæst til stuetemperatur. Omsætningen er ufuldstændig ifølge TLC. Efter 4 timer (ingen yderligere omsætning ifølge 63 DK 172411 B1 TLC) filtreres blandingen, og filtratet inddampes. Flash--chromatografi (3%-50% EtOAc i hexaner-gradient) tillader isolering af 880 mg af det i overskriften angivne bromid i form af en olie samt 190 mg uomsat alkohol fra afsnit D.

5 Udbyttet af det i overskriften angivne bromid er 74%.

TLC (25% EtOAc i hexaner - anisaldehyd):

Alkohol fra afsnit D 0,21

Bromid angivet i overskrift 0,75 13C-NMR (67,8 MHz i CDC13) : δ 135,6, 127,5, 79,8, 10 78,8, 61,8, 49,4, 45,3, 33,1, 30,5, 29,5, 29,4, 25,9, 18,2, -5,3.

F. f IS- flor. 2af (E) . 3or. 4α1 Ί - 6-Γ3 - Γ Γ Γ (1.1. dimethvlethvl) --dimethvlsilvll -oxvl -methvll- 7-oxabicvclo-15 Γ2,2 , 11 hept-2-νΠ -4-hexensvre-l, 1-dimethvlethvl- ester

Til en opløsning af LDA i THF (12,70 mmol, 1,15 ækvivalenter) , fremstillet ved langsom tilsætning af 1,08 ml 2,5 M C^gLi i opløsning af hexaner (2,7 mmol, 1,15 ækviva-20 lenter) til en opløsning af 303 mg diisopropylamin (3,0 mmol, 1,2 8 ækvivalenter) i 4 ml tør THF, omrøring ved 0°C under argon og derpå omrøring i 15 minutter, sættes der dråbevis under omrøring under argon ved -78°C en opløsning af 348 mg tert.butylacetat (t-BuOAc) (3,0 mmol, 1,28 ækvi- 2 5 valenter) i 3 ml tør THF i løbet af 15 minutter. Efter 1 times omrøring tilsættes der dråbevis en opløsning af 880 mg af bromidet fra afsnit E (2,35 mmol) i 3 ml tør THF med 2 x 2 ml vaskninger. Efter 8 timers omrøring ved -78°C viser TLC kun en partiel omsætning, og blandingen får lov at varme 30 meget langsomt op (ca. 8°C pr. time) til stuetemperatur.

TLC viser en yderligere omsætning, men stadig ufuldstændigt forbrug af bromid. Tilsætning af 1 ml mættet vandig NH4CI--opløsning efterfølges af tørring med natriumsulfat og ind-dampning. Remanensen flash-chromatograferes (5% EtOAc i 3 5 hexan) , hvorved der fås 550 mg af næsten rent, i overskriften angivet esterprodukt (97% rent = 534 mg). Udbyttet af den i 64 DK 172411 B1 overskriften angivne ester er 55%.

TLC (5% EtOAc i hexaner - anisaldehyd):

Bromid fra afsnit E 0,20

Ester angivet i overskriften 0,13 5 13C-NMR (67,8 MHz i CDC13): δ 172,4, 130,6, 129,6, 80.0, 79,8, 78,8, 61,9, 49,4, 45,8, 35,4, 30,8, 29,6, 29,4, 28.1, 25,9, 18,2, -5,3.

C. fis- (lcy, 2a (E) , 3α, 4α) 1 -6- f3- (hydroxymethyl) -7-oxa-10 bicvclo f2.2,11heot-2-νΠ-4-hexensvre-methvlester

Til en opløsning af 550 mg næsten ren ester fra afsnit F (97% ren = 534 mg, 1,30 mmol) i 20 ml CH3OH under omrøring ved stuetemperatur under argon sættes der 2 ml af en opløsning af tørt HCl i CH3OH (fremstillet ved tilsætning af 2 15 dråber acetylchlorid til 2 ml CH3OH ved stuetemperatur, hvorpå der henstilles i 1 minut). TLC viser fuldstændig omdannelse til et mellemprodukt efter 1 times forløb. Dette mellemprodukt omdannes derpå meget langsomt til produktet.

Ved tilsætning af 10 ml yderligere HCl i C^OH-opløsning 20 fremskyndes omsætningen. Efter 14 dage tilsættes der 2 ml (C2H5)3N og blandingen inddampes. Der fås herved 630 mg rå alkohol som angivet i overskriften.

TLC (50% EtOAc i hexaner - anisaldehyd):

Ester fra afsnit F 0,94 25 Intermediat 0,33

Alkohol angivet i overskriften 0,23 H. flS-fla.2a(E) . 3a. 4od1-6-r3-carboxv-7-oxabicvclo-Γ2.2.11 hent-2-vil-4-hexensvre-methvlester 30 Til en opløsning af 630 mg rå alkohol fra afsnit G i 20 ml acetone under argonatmosfære ved 0°C sættes der langsomt 4 ml af Jones' reagens (2,6 M i CrVI). Reagensets røde farve ændres ikke før mod afslutningen af tilsætningen. Den fremkomne, udfældede blanding får lov at varme op til stue-35 temperatur i 20 minutter, inden der genafkøles, og der tilsættes 2-propanol til sønderdeling af overskud af reagens.

65 DK 172411 B1

Stadig ved en temperatur på 0°C tilsættes der 3 M vandig NaHSC>3-opløsning under omrøring, indtil alle salte opløses.

Der tilsættes saltvandsopløsning, og dernæst foretages der 3 ganges ekstraktion med EtOAc. Efter tørring af ekstrakterne 5 med natriumsulfat og inddampning af opløsningsmiddel giver flash-chromatografi (silica, 25%-50% (5% eddikesyre i EtOAc) i hexan-gradient) efter azeotropisk fjernelse af eddikesyre med toluen 260 mg af den i overskriften angivne syre, der fås i et totalt udbytte på 75% ud fra esteren angivet i afsnit 10 F.

TLC (50% (5% CH3COOH i EtOAc) i hexan - anisaldehyd) : Alkohol fra afsnit G 0,32

Syre angivet i overskriften 0,36 13C-NMR (67,8 MHz i CDCI3): δ 177,1, 173,4, 130,4, 15 129,2, 78,2, 78,1, 51,9, 51,3, 47,4, 33,8, 32,4, 28,9, 28,8, 27,7 .

I · fis- [ lo?, 2α (E) , 3 a. 4α1 1 - 6- Γ3 - Γ4 - ΓΓ (4-cvclohexvlbu--tvl) -aminol -carbonvll -2-oxazolvll -7-oxabicvclo-2 0 Γ2.2.11hept-2-vil -4-hexensvre

Ved anvendelse af fremgangsmåden fra eksempel 1, idet der begyndes i afsnit E, men med den undtagelse, at man anvender syren fra afsnit H i stedet for syren fra afsnit D i eksempel 1, fås den i overskriften angivne forbindelse.

25 Smp. 122-125°C; TLC (50% [5% AcOH i EtOAc] i hexan; syre angivet i overskrift Rf = 0,33; 13C-NMR (CDCI3, 67,8 MHz): δ 176,9, 163,9, 160,7, 140,8, 135,6, 130,0, 128,8, 79,4, 79,1, 49,1, 46,5, 39,1, 37,4, 36,9, 33,7, 33,2, 33,0, 29,7, 29,5, 28,8, 27,5, 26,5, 30 26,2, 24,0.

66 DK 172411 B1

Eksempel 20 TIS - (lof.2Qf.3of.4of)1-3-f4-fi(4 - (cvclohexvlbutvl) -amino] -carbonyl 1 - 2 -oxazolvl 1 -7-oxabicvclo [2.2 . Π hept-2-vll -heptan-2--hexansvre 5 En opløsning af 130 mg af syren fra eksempel 1 i 10 ml ethylacetat og 1,0 ml eddikesyre afgasses ved en vakuumfyldnings -cyklus med argon. Til denne opløsning sættes der 34 mg 10%'s Pd/C, og atmosfæren ændres til hydrogenatmosfære ved to vakuumfyldnings-cykler. Der opretholdes et svagt 10 positivt tryk ved anvendelse af en hydrogenboble. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 22 1/2 time, fortyndes med CH2CI2 og filtreres gennem et polycarbonatfilter til fjernelse af katalysatoren. Filtratet koncentreres i vakuum, og remanensen fortyndes med toluen og genkoncentreres. Ved 15 tilsætning af ethylacetat til remanensen opløses en ringe mængde gellignende materiale ikke. Opløsningen afdekanteres og koncentreres i vakuum. Råproduktet opløses i den mindst muligt mængde varmt ethylacetat og fortyndes med ca. 3 rumfang hexan. Ved afkøling fremkommer der intet fast stof, men 20 efter henstand ved 5°C natten over dannes der imidlertid et hvidt, gellignende fast stof. Dette fjernes ved filtrering og tørres i vakuum. Det fremkomne hvide pulver tritureres i hexan, filtreres og tørres i vakuum, hvorved der fås 61 mg af den rene, i overskriften angivne syre med smp. 97°C (blød-25 gøring) og 122-123°C.

Analyse, beregnet for 026^40^2^51 C = 67,79%, H = 8,75%, N = 6,08% fundet: C = 67,58%, H = 8,79%, N = 5,97%.

TLC: silicagel, 4% CH3OH/CH2Cl, Rf = 0,35, Ce(S04)2.

30 [a]D = +23° (c = 0,68, CHC13).

13C-NMR (CDCI3, 67,5 MHz): δ 164,2, 160,8, 140,7, 135.9, 79,5, 79,4, 49,8, 47,2, 39,2, 37,5, 37,1, 33,7, 33,4, 29.9, 29,7, 29,2, 29,0, 28,1, 26,7, 26,4, 24,5, 24,2.

67 DK 172411 B1

Eksempel 21 flS- ila. 2a(Z) . 3α.4οτ11 -6- f3- Γ4- Γ Γ (4-cvclohexvlbutvl) -aminol --carbonvll -2-oxazolvll -7-oxabicvclo Γ2.2. llhept-2-νΐΊ-4-hexen-svre-methvlester 5 A. flS-fla.2a (Z) .3ot. (R*) . 4α1 1 -6- Γ3 - f Γ Γ2- r (4-cvclo- hexvlbutvl) -aminol -1- (hvdroxvmethvl) -2-oxoethvn --aminol-carbonvll-7-oxabicvclo f2,2.11hept-2-νΠ -4--hexensvre-methvlester

Til en omrørt blanding af 6,70 g (25,2 mmol) af syren 10 fra eksempel 1, afsnit D, 3,40 g (25,2, mmol) 1-hydroxyben-zotriazol-monohydrat og 8,97 g (25,2 mmol) TFA-salt af aminen fra eksempel 1, afsnit B i 100 ml DMF under argonatmosfære ved 0°C sættes der i rækkefølge 17,6 ml (126 mmol) (C2H5)3N og 4,82 g (25,2 mmol) 1-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylcar-15 bodiimid-hydrochloridsalt. Blandingen omrøres ved 0°C i 2 timer og ved stuetemperatur i 16 timer. Blandingen koncentreres i vakuum og fordeles mellem 800 ml EtOAc og 2 x 100 ml 1 N HCl-opløsning, 2 x 100 ml 0,2 N NaOH-opløsning og 100 ml mættet NaHC03-opløsning. Det organiske lag tørres 20 med magnesiumsulfat, filtreres og koncentreres i vakuum.

Det fremkomne materiale chromatograferes på 180 g Merck-si-licagel 60 under anvendelse af 2% CH3/OH/CH2CI2 som elue-ringsmiddel, hvorved der fås 4,75 g (39%) af det i overskriften angivne amid.

25 TLC: silicagel, 50% (5% AcOH i EtOAc) i hexan, Rf = 0,22, anisaldehyd.

B. flS- Γΐα.2β(Ζ) ,3α(R*) . 4α11-6-Γ3-Γ4-ΓΓ (4-cvclohexvl-butvl) -aminol -carbonvll -4,5-dihvdro-2-oxazolvll -3 0 -7-oxabicvclo Γ2.2 , Π hept-2-vll -4-hexensvre-methvl- ester

Til en omrørt blanding af 4,69 g (9,53 mmol) af amidet fra afsnit A i 60 ml tørt 0Η2012 under argonatmosfære ved 0°C sættes der i rækkefølge 2,66 ml (19,1 mmol) (C2H5)3N og 35 0,82 ml (10,5 mmol) mesylchlorid. Blandingen opvarmes ved 0°C i 1 time og fortyndes med 100 ml CH2CI2 og vaskes med 68 DK 172411 B1 30 ml mættet NaHC03-opløsning og 30 ml saltvandsopløsning.

Det organiske lag tørres med magnesiumsulfat, filtreres og koncentreres i vakuum. Det rå mesylat opløses i 60 ml acetone og kombineres med 5,0 g (36,2 mmol) K2CO3. Blandingen til-5 bagesvales i 4 1/2 time og afkøles til stuetemperatur. Det faste stof skilles fra ved filtrering og skylles med 4 x 40 ml acetone. Filtratet koncentreres i vakuum og chromatogra-feres på 120 g Merck-silicagel 60 under anvendelse af 2% CH2OH/CH2CI2 som elueringsmiddel, hvorved der fås 3,93 g 10 (86%) af den i overskriften angivne oxazolin.

TLC: silicagel, 20% acetone i toluen, Rf = 0,29, anisaldehyd.

C. [IS - ila.2α(Z) .3a.4al1 -6-Γ3 - (4 - ΓΓ(4-cvclohexvl-15 butvl)-aminol -carbonvll -2-oxazolvl1-7-oxabicvclo- Γ2,2,Π hept-2-νΙΊ-4-hexensvre-methvlester

Til en omrørt blanding af 3,90 g (8,23 mmol) oxazolin fra afsnit B i 80 ml tørt 0Η2Ο12 under argonatmosfære sættes der 9 g N1O2 . Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 40 20 minutter, hvorefter der tilsættes 4 g N1O2. Blandingen omrøres i yderligere 70 minutter, hvorpå der atter tilsættes 2 g NiC>2 · Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 2 timer og fortyndes med 120 ml EtOAc, 60 ml 3 M NaHSC>3-opløsning og 60 ml 1 M natriumcitratopløsning. Det vandige lag skilles 25 fra og ekstraheres med 4 x 150 ml EtOAc. De kombinerede EtOAc-ekstrakter tørres med magnesiumsulfat, filtreres og koncentreres i vakuum. Rensning udføres ved flash-chromato-grafi på 120 g Merck-silicagel 60 under anvendelse af 2% CH3OH/CH2CI2 som elueringsmiddel, hvorved der fås 1,85 g 30 (48%) af den i overskriften angivne oxazol.

TLC: silicagel, EtOAc, Rf = 0,81, anisaldehyd.

Claims (6)

1. 2. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet 25 ved, at den har den almene formel 30. o y XJt>s-v 35. hvilken R, m, n, R1 og R2 har de i krav 1 angivne betydninger, fortrinsvis hvor m betyder 1, og n betyder 2. DK 172411 B1
2. 3. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at den har den almene formel 5 ^(CH2 )m- ( ch2 )2“ (CH2 >n“'C00R \fr>=<, 10 i hvilken R, m, n, R1 og R2 har de i krav 1 angivne betydninger, fortrinsvis hvor m betyder 1, og n betyder 2.
3. 4. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet 15 ved, at R betyder H.
4. 5. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at den har den almene formel ( ch2 >n-C02H ” Cu xiry-K, 25 i hvilken m, n, R1 og R2 har den i krav 1 angivne betydning.
5. 6. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at den er [IS-[Ια, 2α(Z) ,3α,4a] ]-6-[3-[4-[ [ (4-cyclohex-yl-butyl)-amino]-carbonyl]-2-oxazolyl]-7-oxabicyclo[2,2,1]- 30 hept-2-yl]-4-hexensyre eller et alkalimetalsalt deraf.
6. 7. Præparat til inhibering af blodpladeaggregering og bronchokonstriktion, kendetegnet ved, at det indeholder en virksom mængde af en forbindelse ifølge krav 1 samt et farmaceutisk acceptabelt bærestof derfor. 35