DK149628B - Analogifremgangsmaade til fremstilling af 8-substitueret-4ae-amino-makrolider eller syreadditionssalte deraf - Google Patents

Description

149628

O

Opfindelsen angår en analogifremgangsmåde til fremstilling af hidtil ukendte 8-substitueret-4"-amino-makrolider som angivet i krav l's indledning, hvilken fremgangsmåde er ejendommelig ved det i krav l's kendetegnende del angivne.

Oleandomycin, dets fremstilling i forgæringsvæsker og dets anvendelse som antibakterielt middel er først beskrevet i U.S.-patentskrift nr. 2.757.123. Den naturligt forekommende forbindelse vides at have følgende struktur: 149628 2 N(CH.)0 Η 3 2 δη 2*Jl' γργ1 Ίί" Τ 14" Ο ‘"W-Α,η (5ch3

Den sædvanligt accepterede nummereringsmåde og stereokemiske repræsentation for oleandomycin og tilsvarende forbindelser er vist ved forskellige af stillingerne.

Der kendes adskillige syntetiske modifikationer af denne forbindelse, navnlig de hvori fra én til tre af de frie hydroxygrupper, der foreligger ved 2*-, 4"- og Il-stillingerne, er esterificerede som acetylestre. Endvidere er der i U,S,-patentskrift nr, 3.022.219 beskrevet tilsvarende modifikationer, hvori acetyl i de ovennævnte estre er erstattet med en anden, fortrinsvis uforgrenet lavere alkanoylgruppe med 3-6 C-atomer,

De semi-syntetiske antibakterielle oleandomycin-midler, der fremstilles ved fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse, og som er repræsenteret ved formlerne: „1 ?<CH3>2 ,1 V™3’2

Af -Λ „.

L" Ni i?" m"'j t"' EVy y s ^ V*sH2 I z OCH, OCH3 6 IV v 3 149628 r1 ?«»3>2 o^\7 ^ 0,% ro \ .

"v" \ "Π Γ"""ο o γ°γ 0 γγΝΝΗ2 vi och3 eller farmaceutisk acceptable syreadditionssalte deraf, hvor R og R^ hver er hydrogen eller alkanoyl med 2-3 C-atomer, er særligt anvendelige, og udmærker sig sammenlignet med oleandomycinet og dets estre kendt fra ovennævnte U.S.-patentskrifter, som antibakterielle midler over for Pasteurella multocida og Neisseria sicca, som demonstreret ved følgende forsøgsdata: 4 149628

-S

Λ ° >i ^ co co ιο σι Οι +> « p-1·» mn m e <u ,2 - - i ι ι ι ' ' ι ι ι ι iiiii i- •η u Έ o o o ho ooooo in o o cm G < 3 in injninmtn ninm h

O’ I 5? A ΛΛΑΛΛ AA

H = M

3 ø i 0 covø oo iDiflco co ø Ό r» m r-' m m r~ r-~ mm W C G ' ' ' ' ' ' I - 111'

13 -H OtHOOOOrHrHO OOOOOOOO O O CN O O O CN ØU OO O O OOOOOO O O i-HOOOH

i—1 I>- i—I i—] 1—1 i—I i—I i—I i—i i—! i—I i—i >—I '—I ' ! ! ' i o il hT oi >U|cocøcoioioooo cn o mr—Lnr'mmcNP' rH h i—1 — *» ". » ^ ^ I ^ '1' ø DSU Or—loooOf—it—loo omoooooooommcoo o o g OO O O OUIlilOOlflCOOMN O O v| VI 11 II CN CN CN CN NH IMIMH CN tH 1 o Λ Λ Λ Λ ΑΛΑ Λ 1¾ γ-ι » Pi Τ °ι 0|νν co ννο « cn ο co τ—11—ι t' r—11—ι ν m ι—I r—I I—( 33'·" >- ·. w PCU cocooooococooocNcomoooooooooocooooo > oo © Or—ι cNtnmoooooomo ο o © vi || II CN CN CN CM MrlriMNrl Η MHM 1

rH AA A AAA A

0 .H

e «pi u 0 DC K[ m m co m cn o m in cm o

fe CNCNt^CNrHCNCNCN ι-l CN

II If ' ' ' ' · ' - ' loioooooiocoooioiooooooooooocoooooo H oo o m ©ooooooooo oooo

pi Pi CN CN CN r-IHHCNCNCNCNCNCNCN CNCNCNH

t-l -*-> ΑΛΑ ΑΛΑ ΛΛΛ 6 -i- \ o &> u ϋ comm co m cn vo cn m

g BCNCNi^CNHmH CN

U DC ' ' ' ' ' ' V 11' I

' lOlOOOOOlOCOrHOOCOOOOOOOOO Ο lOOOO

U II II mm m mm mmmmmmmm m mmm

Η ΛΛΛ Λ Λ ΛΛΛΛΛΛΛ AAA

S H

> « P5

H

DCDCcncnocncnocn m o

rH i—! ι—1 ;—! r—i i—i 1—i i—1 CN rH

ØH II'' ' ' ' ' I '11' g rocooooococoo mcoomoooooooooioo o

Vl rH oo O .,I CN mCNOOOOOOOOO O v| 0 Pi li CN IN Η 1—I ι—ii—li—! CN H rH r—[i—I i—!

Pc , A

O

UI VO CN co 10 vo oo in m CO o romiH p- m m r- cn in in m h DC ' ' - » ~ ~ ^ - ..

SU rHcooooorHiHooiorHcNmmomooooomiHoooo oo ο o iHCNCNocNmoommcs omov| II II CN CN CN CN CN CN CN CN rH 1

ΛΛΛ Λ AAA A

tH

« Pi

Pi

Pi Pi Pi Pi Pi Pi Pi Pi u mcNcnotHr'O'orooiHrHeniomH'cnrHH'HCNcncorHr'Ocoo

OmOtHrHoOOOOCNOOCNlOCNOOCOCOOH'OrHOHH'OO

OOrHrHiHOH-OCNOOOCNCNHrHOOOOCNOOOOOOO

HHHHHHHNCNNmiOHHHNncll'p-COCOIOcnnt'MO

oooooooooooommmmmmmmmmmmioioioio 3 0 in g . · . . I . 0 W Vl · CP O' · · 0 OH g +)...o

•H 3= = = = = =00=0 ttifis liHOP: HUOfflH

cm m>ig 3 ft -HOrCO, cmnow

m <H (¾ Μ · -H Vl ggU>i g £ 0 rH

tn · ,α h = = 0 · +) mo* vr jc ...co mm··· .· m 0Qj aaorno λ -P +> S · +> m · . co 0 β: s : : : : HH: () "ØsOOrHH ϋΐ M -P +) ·Η

Vi +) +) -U >1". ΜΗ V II 3 Ii: ØØCCØ +: ω coco sbh: = pk ppuko pwhhz

*** HCNmN'iniOMOOioHCNmN'inioi'eoiOHCNMN'miBMa HrHtHHtHHrHrHtHtHCNCNCNCNCNCNCNCNCN

^ W N—ι» V«» S^> Vm* ^ W V Smc *»—«» S^.

5 149628

Fremstillingen af de omhandlede forbindelser kan illustreres ved følgende reaktionsskema, der viser fremstillingen af forbindelsen med formlen IV ud fra en ll,2’-dialkanoyl- eller 2'-alkanoyl-oleandomycin:

Tf *5. ?(CH3>2 _0 % fCH3’2 n. ii vs ti

RO*J> ._ NI U 0AoA

p ] --> RO*,,/ T"" Ί (C V * %V'--.0Ii o y'^o och3 ia qch3 (R - H eller C2-C3-alkanoyl, Ac N(CH3)2

Ac = C~-C7-alkanoyl) —0 I

°V^N V^Nj ROr

Ia-* f T

\£yy 0 113 OCH- J 0 (X = N-OH, N-OCH3 eller Ν-0-CCH.j) H„ _—p Ac ¥(CH3) 2

Ib-—---—-^ 0 yk

Raney-Ni, Pd/C eller Pt02 ^/N | |

s ROv> <,oA0A

(X = N-OH, N-OCH3 eller N-OCCH3) T

Vrr IV ’ 0CH3 6 149628

De omhandlede forbindelser med fonnierne V og VI kan fremstilles ifølge tilsvarende reaktionsskemaer.

Den indledende reaktion i disse reaktionsfølger er den selektive oxidation af 4"-hydroxygruppen. Denne oxidation omfatter, at forbindelsen 1' omsættes med N-chlorsuccinimid og dimethylsulfid, hvorefter der tilsættes en tertiær amin, såsom triethylamin.

I praksis bliver N-chlorsuccinimidet og dimethylsulfidet først kombineret i et reaktions-indifferent opløsningsmiddel ved ca. 0°C. Efter ti til tyve minutter indstilles temperaturen af den resulterende blanding på fra ca. 0 til ca. -25°C, og 4"-hydroxyforbindel-sen 1' tilsættes, idet ovennævnte temperatur opretholdes. Efter to til fire timers reaktionstid tilsættes den tertiære amin, og kølebadet fjernes.

Hvad angår reaktant-mængderne, kræves for hvert mol anvendt alkoholsubstrat ét mol af hver af N-chlorsuccinimid og dimethylsulfid. Ifølge forsøg har det vist sig fordelagtigt at anvende et overskud på 1-20 gange af succinimid- og sulfid-reaktanterne med henblik på at fremme reaktionens fuldendelse. Den anvendte tertiære amin skal svare til den anvendte molære mængde af succinimid.

Det ved reaktionen anvendte reaktions-indifferente opløsningsmiddel skal være et sådant, der i betydelig grad opløser reaktanterne og ikke i nogen væsentlig grad reagerer med hverken reaktanterne eller de dannede produkter. Da reaktionen gennemføres ved fra ca. 0 til ca. -25°C, foretrækkes det, at opløsningsmidlet foruden de ovennævnte karakteristika viser et frysepunkt under reaktionstemperaturen. Sådanne opløsningsmidler eller blandinger deraf, der opfylder disse kriterier, er toluen, ethylacetat, chloroform, methylenchlorid eller tetrahydrofuran. Opløsningsmidler, der opfylder de ovennævnte krav, men som har et frysepunkt over reaktionstemperaturen, kan også anvendes i mindre mængder i kombination med ét eller flere af de foretrukne opløsningsmidler. Det specielt foretrukne opløsningsmiddel til den nævnte reaktion er toluen indeholdende benzen.

Reaktionen betragtes som enestående, da oxidationen finder sted ved 4"-stillingen efterladende 11-stillingen praktisk talt upåvirket, når R er hydrogen.

Alkanoylgruppen ved 2'-stillingen kan fjernes ved en solvoly-sereaktion, hvor ketonforbindelsen la henstilles med omrøring sammen 7 149628 med et overskud af methanol natten over ved stuetemperatur. Fjernelse af methanolen og påfølgende rensning af inddampningsresten tilvejebringer den tilsvarende 2'-OH-forbindelse.

En 11-hydroxygruppe i ketonforbindelsen la kan acyleres ved at behandle nævnte forbindelse med to mol pyridin og et overskud af alkansyreanhydrid ved isbadtemperaturer. I praksis bliver den hydro-xy-holdige forbindelse sat til afkølet alkansyreanhydrid efterfulgt af tilsætning af pyridin. Når tilsætningerne er afsluttet, fjernes isbadet,og blandingen henstilles med omrøring natten over ved stuetemperatur. Produktet vindes ved hydrolyse af reaktionsblandingen med vand og påfølgende ekstraktion af produktet med ethylacetat. Alternativt kan overskud af alkansyreanhydrid-opløsningsmidlet fjernes under vakuum, og inddampningsresten renses på sædvanlig måde.

Adskillige synteseveje kan anvendes til omdannelse af forbindelsen la til oximen eller oximderivatet Ib, hvor X er N-OH, N-OCH, 0 eller N-O-CCH^, efterfulgt af reduktion af oximen eller oximderivatet til aminen med formlen IV.

Oximforbindelsen Ib fremstilles ved, at ketonforbindelsen la omsættes med hydroxylaminhydrochlorid i en opløsning af methanol-vand ved stuetemperatur. I praksis foretrækkes det, at der anvendes et overskud af hydroxylamin, og så meget som et overskud på tre gange tilvejebringer det ønskede mellemprodukt i gode udbytter. Anvendelse af stuetemperatur og et overskud af hydroxylamin gør det mu ligt at fremstille det ønskede oximderivat inden for en reaktionsperiode på én til to timer. Produktet isoleres ved at sætte reaktionsblandingen til vand efterfulgt af basificering til pH 9,5 og ekstraktion med et med vand ikke-blandbart opløsningsmiddel, såsom ethylacetat .

Når O-methylhydroxylamin-hydrochlorid anvendes i stedet for hydroxylamin-hydrochlorid, tilvejebringer reaktionen O-methyloxim-derivatet. Når der anvendes O-methylhydroxylamin, foretrækkes det at forlænge reaktionstiden til 6-12 timer. Isolering af produktet gennemføres på samme måde, som ovenfor beskrevet for oximderivatet.

Fremstilling af O-acetyloxim-derivatet (X = N-0-CCH3) foregår ved acetylering af den tilsvarende oxim. Ifølge forsøg bliver 1 mol oxim omsat med 1 mol eddikesyreanhydrid i nærværelse af 1 mol pyridin. Anvendelse af et overskud af anhydridet og pyridinen hjælper til reaktionens fuldstændiggørelse, og et overskud på to til tre gan- 8 149628 ge foretrækkes. Reaktionen gennemføres bedst i et aprotisk carbon-hydrid-opløsningsmiddel, såsom benzen eller toluen, ved stuetemperatur natten over. Efter endt reaktion tilsættes vand, og produktet fraskilles i carbonhydridlaget. Alternativt kan O-acetyl-derivatet fremstilles ved, at ketonforbindelsen behandles med O-acetylhydroxyl-amin-hydrochlorid under reaktionsbetingelser, der er anvendelige ved fremstillingen af oxim-derivatet, 0

Reduktion af forbindelsen Ib (X = N-OH, N-OCH^ eller N-O-CCH^) gennemføres ved katalytisk hydrogenering, ved hvilken en opløsning af oximen eller derivatet deraf i en lavere alkanol, såsom isopro-panol, og fortrinsvis en Raney-nikkel-, 10% palladium-på-trækul-eller platinoxid-katalysator rystes i en hydrogenatmosfære ved et indle-dende tryk på ca. 146 kg/cm ved stuetemperatur natten over. Fra-filtrering af den forbrugte katalysator efterfulgt af fjernelse af opløsningsmidlet fra filtratet tilvejebringer isolering af den ønskede 4"-deoxy-4"-amino-forbindelse IV. Hvis der som reduktionsopløsningsmiddel anvendes methanol, vil der indtræde solvolyse af en 2'-alkanoyl-gruppe. For at undgå fjernelse af en sådan gruppe er isopropanol det foretrukne opløsningsmiddel.

En anden, og foretrukken, vej fra ketonforbindelserne til de omhandlede 4"-deoxy-4"-amino-forbindelser med formlerne IV, V og VI omfatter kondensation af nævnte ketoner med ammoniumsaltet af en lavere alkansyre og påfølgende reduktion af den in situ udviklede imin.

I praksis bliver en opløsning af ketonen i en lavere alkanol, såsom methanol, behandlet med et ammoniumsalt af en alkansyre, såsom eddikesyre, og den afkølede reaktionsblanding reduceres ved katalytisk hydrogenering over palladium-på-trækul eller fortrinsvis med natriumcyanoborhydrid. Reaktionen får ved anvendelse af natrium-. cyanoborhydrid lov at forløbe ved stuetemperatur i adskillige timer, hvorefter der hydrolyseres, og produktet isoleres.

Selvom der kræves ét mol ammoniumalkanoat pr. mol keton, er det fordelagtigt at tilsætte et overskud for at sikre en hurtig dannelse af iminen. Så meget som et overskud på ti gange kan anvendes, uden at kvaliteten af slutproduktet påvirkes.

Det foretrækkes at anvende ca. to mol natriumcyanoborhydrid pr. mol keton.

149628 9

Reaktionstiden for reduktionen varierer fra to til tre timer ved stuetemperatur.

Som ovenfor nævnt, er det foretrukne opløsningsmiddel methanol, mens det foretrukne ammoniumalkanoat er ammoniumacetat. Isopropanol kan også anvendes som opløsningsmiddel og er særligt ønskeligt, når der skal undgås solvolyse af en 2 ' ^alkanoyl-rgruppe,

Ved isolering af de ønskede 4"-deoxy-4"-amino-oleandomycin-de-rivater fra eventuelle ikke-basiske biprodukter eller fra udgangsmateriale drages der fordel af slutproduktets basiske natur. Følgelig bliver en vandig opløsning af produktet ekstraheret over et område med gradvis stigende pH, således at neutrale eller ikke-basiske materialer ekstraheres ved lavere pH-værdier, og produktet ved en pH-værdi på ca. 9. De ekstraherende opløsningsmidler, enten ethylacetat eller diethylether, returvaskes med saltopløsning og vand, tørres over natriumsulfat og vindes ved fjernelse af opløsningsmidlet.

Yderligere rensning, om nødvendig, kan gennemføres ved søjle-chromatografi på silicagel ved kendte metoder.

Når reduktionen gennemføres ved katalytisk hydrogenering over palladium-på-trækul, bliver en opløsning af den pågældende keton i en lavere alkanol, såsom methanol eller isopropanol, behandlet med et ammoniumalkanoat, såsom ammoniumacetat, og 10% palladium-på-trækul, og den resulterende suspension rystes i en hydrogenatmosfære ved temperaturer på ca. 25-50°C, indtil den teoretiske mængde hydrogen er absorberet.

Hvad angår mængden af reaktanter, foretrækkes det, at et overskud på ti gange af ammoniumalkanoatet anvendes til at sikre fuldstændig omsætning inden for en rimelig tidsperiode. Mængden af katalysatoren kan variere fra 10% til 50%, på vægtbasis, af udgangs-ketonen. Det indledende hydrogentryk er ikke kritisk, og et tryk på 2 fra én atmosfære til ca. 1463 kg/cm foretrækkes med henblik på at afkorte reaktionstiden. Ved anvendelse af de ovennævnte parametre vil reaktionstiden variere mellem to og seks timer.

Ved afslutningen af den reduktive amineringsreaktion bliver den forbrugte katalysator frafiltreret, og filtratet inddampes til tørhed. Rensning af produktet foregår ved den ovennævnte metode, hvor natriumcyanoborhydrid anvendes som reducerende middel.

Som ovenfor nævnt, kan solvolyse af en 2'-alkanoyl-gruppe 10 143628 foregå ved at henstille 2'-alkanoyl-derivatet IV, V eller VI med omrøring i en methanolopløsning natten over ved stuetemperatur.

Ved udnyttelsen af den kemoterapeutiske aktivitet af de omhandlede forbindelser, der danner salte, anvendes naturligvis-farmaceutisk acceptable salte.

Eksempler på syrer, der tilvejebringer farmaceutisk acceptable anioner, er saltsyre, hydrogenbromidsyre, hydrogeniodidsyre, salpetersyre, svovlsyre eller svovlsyrling, phosphorsyre, eddikesyre, mælkesyre, citronsyre, vinsyre, ravsyre, maleinsyre, gluconsyre og aspara-ginsyre.

Stereokemien for de udgangsmaterialer, der fører til de omhandlede antibakterielle midler, svarer til stereokemien for det naturlige materiale. Oxidationen af 4"-hydroxy-gruppen til en ketongruppe og den påfølgende omdannelse af denne til 4"-aminogruppen indebærer en anledning for stereokemien af 4H-substituenten til at ændres fra stereokemien af det naturlige produkt. Når ketonforbindelserne omdannes til 4"-aminoforbindelserne ved en af de ovenfor beskrevne metoder, er det følgelig muligt, at der dannes to epi-mere aminer. Ifølge forsøg har det vist sig, at begge epimere aminer er tilstede i slutproduktet i varierende mængder afhængigt af valget af syntesemetode. Hvis det isolerede produkt består overvejende af én af de epimere, kan nævnte epimer renses ved gentagen omkrystallisation af et egnet opløsningsmiddel indtil konstant smeltepunkt. Den anden epimere, nemlig den der er til stede i mindre mængder i det oprindeligt isolerede materiale, er det overvejende produkt i modervæsken. Den kan udvindes derfra ved på området kendte metoder, såsom inddampning af modervæsken og gentagen omkrystallisation af inddamp-ningsresten til et produkt med konstant smeltepunkt eller ved chroma-tografi.

Selvom nævnte blanding af epimere kan opdeles ved på området kendte metoder, er det af praktiske grunde fordelagtigt at anvende nævnte blanding, således som den er isoleret fra reaktionen. Det er imidlertid ofte fordelagtigt at rense blandingen af epimere ved mindst én omkrystallisation af et egnet opløsningsmiddel, ved at underkaste den søjlechromatografi eller opløsningsmiddel-opdeling eller ved rivning i et passende opløsningsmiddel. Nævnte rensning vil, selvom den ikke nødvendigvis adskiller de epimere, fjerne sådanne fremmedmaterialer som udgangsmaterialer og uønskede biprodukter.

11 149628

Stereokemien for de enkelte epimere er ikke absolut klarlagt. Begge epimere af en given forbindelse udviser imidlertid samme type virkning, f.eks. som antibakterielle midler.

De hidtil ukendte 4"-deoxy-4"-amino-derivater vundet ved den foreliggende fremgangsmåde udviser in vitro-aktivitet over for forskellige gram-positive mikroorganismer, såsom Staphylococcus aureus og Streptococcus pyogenes, og over for visse gram-negative mikroorganismer, såsom de med sfærisk eller ellipsoid form (cocci). Deres aktivitet kan let påvises ved in vitro-prøver over for forskellige mikroorganismer i et hjerne-hjerte-infusionsmedium ved den sædvanlige dobbelt-række-fortyndings-teknik.

Til in vi tro-anvendelse, f.eks. til lokal anvendelse, vil det ofte være hensigtsmæssigt at kombinere det valgte produkt med en farmaceutisk acceptabel bærer, såsom vegetabilsk olie eller mineralolie eller en blødgørende creme. Produktet kan også opløses eller dispergeres i flydende bærere eller opløsningsmidler, såsom vand, alkohol, glycoler eller blandinger deraf eller andre farmaceutisk acceptable indifferente medier, dvs. medier der er uden skadelig indvirkning på den aktive bestanddel. Til sådanne formål vil det i almindelighed være acceptabelt at anvende koncentrationer af de aktive bestanddele på fra ca. 0,01 til ca. 10 vægtprocent baseret på den totale komposition.

Endvidere er mange af de omhandlede forbindelser aktive over for gram-positive og visse gram-negative mikroorganismer in vivo, såsom Pasteurella multocida og Neisseria sicca via orale og/eller parenterale indgiftsveje på dyr og mennesker. Deres in vivo-aktivitet er mere begrænset, hvad angår modtagelige organismer, og bestemmes ved den sædvanlige metode, der omfatter inficering af mus af i det væsentlige ensartet vægt med forsøgsorganismen og påfølgende oral eller subcutan behandling med forsøgsforbindelsen. I praksis får mus, f.eks. 10 mus, en intraperitoneal inokulation af passende fortyndede kulturer indeholdende ca. 1 til 10 gange (den laveste koncentration af organismer, der kræves for at bevirke 100% døde). Kontrolforsøg gennemføres samtidigt, ved hvilke mus får inokulum af lavere fortyndinger som et check på mulig variation i virulens hos forsøgsorganismen. Forsøgsforbindelsen indgives 0,5 time efter inokulation og igen 4, 24 og 48 timer senere. Overlevende mus holdes i fire dage efter den sidste behandling, og antallet af overlevende noteres.

12 149628 Véd anvendelse in vivo kan disse hidtil ukendte forbindelser indgives oralt eller parenteraltf f.eks. ved subcutan eller intra-muskulær injektion, i en dosis på fra ca. 1 mg/kg til ca. 200 mg/kg legemsvægt pr. dag. Det mest benyttede dosisområde ligger fra ca. 5 mg/kg til ca. 100 mg/kg legemsvægt pr. dag, og det foretrukne område ligger fra ca. 5 mg/kg til ca. 50 mg/kg legemsvægt pr. dag. Bærere, der egner sig for parenteral injektion, kan være enten vandige, såsom vand, isotonisk saltopløsning, isotonisk dextrose eller Ringer's opløsning, eller ikke-vandige, såsom fede olier af vegetabilsk oprindelse (bomuldsfrøolie, jordnødolie, majsolie, sesamolie), dimethyl-sulfoxid og andre ikke-vandige bærere, der ikke vil gribe ind i præparatets aktivitet, og som er ikke-toxiske i det anvendte volumen eller mængdeforhold (glycerol, propylenglycol, sorbitol). Endvidere kan der med fordel fremstilles kompositioner, der er egnede for fremstilling af opløsninger umiddelbart forud for anvendelse. Sådanne kompositioner kan omfatte flydende fortyndingsmidler, f.eks. propy-lenglycol, diethylcarbonat, glycerol eller sorbitol, puffermidler, hyaluronidase, lokalanæstetica og uorganiske salte til tilvejebringelse af ønskede farmakologiske egenskaber. Disse forbindelser kan også kombineres med forskellige farmaceutisk acceptable, indifferente bærere, omfattende faste fortyndingsmidler, vandige bærere og ikke-toxiske organiske opløsningsmidler, i form af kapsler, taKLet-ter, bolcher, pastiller, tørblandinger, suspensioner, opløsninger, elixirer og parenterale opløsninger eller suspensioner. I almindelighed anvendes forbindelserne i forskellige dosisformer ved koncentrationsniveauer på fra ca. 0,5 til ca. 90 vægtprocent baseret på den totale komposition.

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen beskrives nærmere gennem følgende eksempler og præparationer, hvoraf eksemplerne 1-14 og præparationerne illustrerer fremstilling af mellemprodukter, og eksemplerne 15-23 illustrerer fremstilling af slutprodukter ved den omhandlede fremgangsmåde.

Eksempel 1 2'-Acetyl-4"-deoxy-4"-oxo-oleandomycin.

Dimethylsulfid (0,337 ml) blev sat til en uklar opløsning af 467 mg N-chlorsuccinimid i 20 ml toluen og 6 ml benzen afkølet til 149628 13 -5°C og holdt under en nitrogenatmosfære. Efter omrøring ved 0°C i 20 minutter blev blandingen afkølet til -25°C, og der blev tilsat 1,46 g 2'-acetyloleandomycin og 15 ml toluen. Omrøring blev fortsat i 2 timer ved -20°C efterfulgt af tilsætning af 0,46 ml triethylamin. Reaktionsblandingen holdtes ved -20°C i yderligere 5 minutter og fik derefter lov at opvarme til 0°C. Blandingen blev under omrøring hældt i 50 ml vand og 50 ml ethylacetat. Den vandige blandings pH-værdi blev indstillet på 9,5 ved tilsætning af vandig natriumhydroxidopløsning. Det organiske lag blev derefter fraskilt, tørret over natriumsulfat og koncentreret i vakuum til et hvidt skum (1,5 g). Rivning med diethylether gav 864 mg råprodukt, der ved omkrystallisation to gange af methylenchlorid/diethylether gav 212 mg (14,5%) af det rene produkt, smp. 183^185,5^.

Analyse: Beregnet for C37Hg]_0i3N: C: 61/1/ H: 8/5/ N: 1/9·

Fundet: C: 60,9, H: 8,4, N: 1,9.

NMR (<5, CDC13): 5,60 (lH)m, 3,50 (3H)s, 2,73 (2H)m, 2,23 (6H)s og 2,03 (3H)s.

Eksempel 2 4"-Deoxy-4"-oxo-oleandomycin.

En opløsning af 1,0 g 2,-acetyl-4"-deoxy-4"-oxo-oleandomycin i 20 ml methanol blev henstillet med omrøring ved stuetemperatur natten over. Opløsningen blev koncentreret i vakuum, hvorved vandtes det ønskede produkt som et hvidt skum, 937 mg.

NMR (6, CDC13): 5,60 (lH)m, 3,50 (3H)s, 2,85 (2H)m og 2,26 (6H)s.

Eksempel 3 11,2'-Diacetyl-4"-deoxy-4"-oxo-oleandomycin.

A. Ved acetylering.

Til 4,0 ml eddikesyreanhydrid under en nitrogenatmosfære og afkølet til 0°C i et isbad blev der sat 727 mg 2'-acetyl-4"-deoxy-4"-oxo-oleandomycin. Efter 5 minutter blev der tilsat 0,158 ml pyri-din, og den uklare suspension blev henstillet med omrøring ved stuetemperatur natten over. Den resulterende opløsning blev afkølet i vand med et overliggende lag af ethylacetat, og pH blev indstillet på 7,2 ved tilsætning af fast natriumbicarbonat og derefter på 9,5 149628 14 under anvendelse af en IN natriumhydroxidopløsning. Det organiske lag blev fraskilt, vasket successivt med vand og en mættet saltopløsning og tørret over natriumsulfat. Fjernelse af opløsningsmidlet under reduceret tryk gav 588 mg af det ønskede produkt.

NMR (6, CDC13): 3,48 (3H)s, 2,63 (2H)m, 2,26 (6H)s og 2,06 (6H)s.

B. Ved oxidation.

Til 4,5 g N-chlorsuccinimid, 50 ml benzen og 150 ml toluen i en tør beholder udstyret med en magnetisk omrører og nitrogenindløb og afkølet til -5°C blev der sat 3,36 ml dimethylsulfid. Efter omrøring ved 0°C i 20 minutter blev indholdet afkølet til -25°C og behandlet med 5,0 g 11,2'-diacetyl-oleandomycin i 100 ml toluen. Afkøling og omrøring blev fortsat i 2 timer efterfulgt af tilsætning af 4,73 ml triethylamin. Reaktionsblandingen blev henstillet med omrøring ved 0°C i 15 minutter og derefter hældt i 500 ml vand. pH-Værdien blev indstillet på 9,5 med IN vandig natriumhydroxid, og det organiske lag blev fraskilt, vasket med vand og en saltopløsning og tørret over natriumsulfat. Fjernelse af opløsningsmidlet i vakuum gav 4,9 g (98%) af det ønskede produkt (identisk med produktet fremstillet i eksempel 3A som et skum) .

NMR (<S, CDC13): 3,48 (3H)s, 2,61 (2H)m, 2,23 (6H)s og 2,03 (6H)s.

Eksempel 4 ll-Acetyl-4"-deoxy-4"-oxo-oleandomycin.

En opløsning af 4,0 g 11,2'-diacetyl-4"-deoxy-4"-oxo-oleandomycin i 75 ml methanol blev henstillet med omrøring ved stuetemperatur natten over. Reaktionsblandingen blev koncentreret under reduceret tryk, hvorved vandtes produktet som et skum. En diethyletherop-løsning af inddampningsresten gav, efter behandling med hexan, 2,6 g af produktet som et hvidt fast stof, smp. 112-117°C.

NMR (6, CDC13): 3,43 (3H)s, 2,60 (2H)m, 2,23 (6H)S og 2,01 (3H)s.

149628 15

Eksempel 5 11,2'-Diacetyl-4"-deoxy-4"-oxo-oleandomycin.

En reaktionsblanding omfattende 1,0 g 11,2'-diacetyl-oleando-mycin, 7,09 ml dimethylsulfoxid og 9,44 ml eddikesyreanhydrid blev henstillet med omrøring ved stuetemperatur i 4 dage. Den resulterende gule opløsning blev sat til vand med et overliggende lag af benzen. pH-Værdien blev derefter indstillet med vandig IN natriumhydroxid til 9,5, og det organiske lag blev fraskilt, tørret over natriumsulfat og inddampet til tørhed i vakuum. Det gule olieagtige skum (1,14 g) blev chromatograferet over 20 g silicagel under anvendelse af chloroform-acetone 9:1 som eluat. Fjernelse af opløsningsmidlet fra fraktionerne gav 800 mg af det ønskede produkt (identisk med produktet vundet i eksempel 3) og 110 mg af et biprodukt.

Eksempel 6 21-Acetyl-8,8a-deoxy-8,8a-dihydrø-4"-deoxy-4"-oxo-oleandomycin.

Til en tør beholdér udstyret med en magnetisk omrører og nitrogenindløb, indeholdende 11,6 g N-chlorsuccinimid, 750 ml toluen og 250 ml benzen og afkølet til -5°C, blev der sat 6,0 ml dimethylsul-fid, og den resulterende opløsning blev henstillet med omrøring i 20 minutter. Temperaturen blev sænket yderligere til -20°C, og 25 g 2'-acetyl-8,8a-deoxy-8,8a-dihydro-oleandomycin i 500 ml toluen blev tilsat. Efter omrøring i 2 timer ved -20°C blev 11,4 ml triethylamin tilsat, og reaktionsblandingen fik gradvis lov at opvarme til 0°C.

Den blev derefter hældt i 1500 ml vand, og pH blev indstillet på 9,5 med IN natriumhydroxidopløsning. Det organiske lag blev fraskilt, vasket successivt med vand (3 gange) og en mættet saltopløsning (1 gang) og tørret over natriumsulfat. Fjernelse af opløsningsmidlet under reduceret tryk gav et skum, der ved omkrystallisation af di-ethylether gav 13 g (52,2%) af det rene produkt, smp. 197-199°C, NMR (δ, CDC13): 5,11 (lH)m, 3,51 (3H)s, 2,25 (6H)s og 2,03 (3H)s.

Eksempel 7 8,8a-Deoxy-8,8a-dihydro-4"-deoxy-4"-oxo-oleandomycin.

En suspension af 2,0 g 2'-acetyl-8,8a-deoxy-8,8a-dihydro-4"-deoxy-4"-oxo-oleandomycin i 100 ml methanol blev henstillet med om- 149628 16 røring ved stuetemperatur i 20 timer. Reaktionsblandingen blev koncentreret under reduceret tryk, hvorved vandtes 1,8 g af det ønskede produkt som et hvidt skum.

NMR (δ, CDC13): 5,30 (lH)m, 3,51 (3H)s og 2,26 (6H)s.

Eksempel 8 11,2'-Diacetyl-8,8a-deoxy-8,8a-dihydro-4"-deoxy-4"-oxo-oleandomycin.

Til en suspension af 13,0 g 2'-acetyl-8,8a-deoxy-8,8a-dihydro-4"-deoxy-4"-oxo-oleandomycin i 65,0 ml eddikesyreanhydrid afkølet i et isbad blev der sat 2,8 ml pyridin. Badet blev fjernet, og reaktionsblandingen blev henstillet med omrøring ved stuetemperatur natten over. Den resulterende opløsning blev derefter sat til 500 ml vand og 300 ml ethylacetat. pH-Værdien blev indstillet på 7,0 med fast natriumbicarbonat og derefter på 9,5 med 4N vandig natriumhydroxid. Det organiske lag blev fraskilt, vasket med vand (2 gange) og med saltopløsning (1 gang) og tørret over natriumsulfat. Fjernelse af opløsningsmidlet i vakuum gav det rå produkt som et skum.

Da chromatografi-resultater på den rå prøve tydede på ufuldstændig reaktion, blev det rå skum rekombineret med 28 ml pyridin og 79 ml eddikesyreanhydrid og henstillet med omrøring ved stuetemperatur i 72 timer. Reaktionsblandingen blev oparbejdet som ovenfor, hvorved vandtes 12,4 g af det ønskede produkt.

NMR (S, CDG13): 3,51 (3H)s, 2,26 (6H)s og 2,10 (6H)s.

Eksempel 9 ll-Acetyl-8,8a-deoxy-8,8a-dihydro-4"-deoxy-4"-oxo-oleandomycin.

En opløsning af 11,5 g ll,2'-diacetyl-8,8a-deoxy-8,8a-dihydro-4"-deoxy-4"-oxo-oleandomycin i 100 ml methanol blev henstillet med omrøring natten over ved stuetemperatur. Inddampning af reaktionsblandingen til tørhed under reduceret tryk gav 10,6 g af det rå produkt som et skum. Det rå materiale blev opløst i chloroform og anbragt på en silicagelsøjle. Efter at 3 liter chloroform var passeret gennem søjlen, blev produktet elueret med chloroform/methanol (19:1). Der blev på en automatisk fraktionsopsamler taget fraktioner på 800 dråber. Fraktioner 50-56, 57-62, 63-69 og 70-80 blev samlet og inddampet til tørhed i vakuum, hvorved vandtes 2,9 g af det rene produkt.

NMR (δ, CDC13): 3,55 (3H)s, 2,31 (6H)s og 2,05 (3H)s.

149628 17

Eksempel 10 2'-Acetyl-δ,8a-deoxy-8,8a-dihydro-oleandomycin.

Til en opløsning af 5/0 g 8,8a-deoxy-8/8a-dihydro-oleandomycin i 15 ml benzen blev der sat 0,73 ml eddikesyreanhydrid, og den resulterende reaktionsblanding blev henstillet med omrøring ved stuetemperatur i 1,5 time. Opløsningen blev sat til 100 ml vand, og pH blev indstillet på 7,5 med fast natriumbicarbonat og derefter på 9,5 med IN vandig natriumhydroxid. Efter 10 minutters omrøring blev det organiske lag fraskilt, vasket successivt med vand (2 gange) og med en mættet saltopløsning (1 gang) og derefter tørret over natriumsulfat. Fjernelse af opløsningsmidlet under reduceret tryk gav 4,9g af det ønskede produkt, smp. 202-204°C.

NMR (δ, CDC13): 5,05 (lH)m, 3,40 (3H)s, 2,25 (6H)s og 2,05 (3H)s.

Eksempel 11 11,2'-Diacetyl-8,8a-deoxy-8,8a-methylen-4"-deoxy-4"-oxo-oleandomycin.

Til en uklar opløsning af 434 mg N-chlorsuccinimid i 15 ml toluen og 5 ml benzen afkølet til -5°C blev der sat 0,327 ml dimethyl-sulfid. Efter omrøring i 20 minutter ved 0°C blev reaktionsblandingen afkølet til -25°C, og 500 mg 11,2'-diacetyl-8,8a-deoxy-8,8a-methylen-oleandomycin og 10 ml toluen blev tilsat. Omrøring blev fortsat i 2 timer ved -20°C efterfulgt af tilsætning af 0,46 ml tri-ethylamin og 1 ml toluen. Kølebadet blev fjernet, og reaktionsblandingen fik lov at opvarme til 0°C. Den blev derefter hældt i 50 ml vand og 50 ml ethylacetat. pH-Værdien blev forsigtigt indstillet på 9,5, og det organiske lag blev fraskilt, tørret og inddampet til tørhed. På denne måde vandtes 520 mg (100%) af det let våde ønskede produkt som et hvidt skum.

NMR (δ, CDC13): 3,50 (3H)s, 2,30 (6H)s, 2,06 (6H)s og 0,58 (4H)m.

Eksempel 12 ll-Acetyl-8,8a-deoxy-8,8a-methylen-4"-deoxy-4"-oxo-oleandomycin.

En opløsning af 400 mg 11,2'-diacetyl-8,8a-deoxy-8,8a-methy-len-4"-deoxy-4"-oxo-oleandomycin i 10 ml methanol blev, efter omrøring ved stuetemperatur natten over, koncentreret i vakuum, hvorved vandtes 270 mg af det ønskede produkt.

NMR (δ, CDC13): 3,46 (3H)s, 2,26 (6H)s, 2,03 (3H)s og 0,56 (4H)m.

18 149628

Eksempel 13 11,2' -Diacetyl-4 "-deoxy-4 "-oxo-oleandornycin-oxim.

Til en opløsning af 18,1 g hydroxylamin-hydrochlorid i 300 ml vand og 200 ml methanol blev der sat 50 g 11,2,-diacetyl-4"-deoxy-4"-oxo-oleandomycin, og reaktionsblandingen blev henstillet med omrøring ved stuetemperatur i 1 time. Den resulterende opløsning blev sat til vand, og pH blev derefter indstillet på 7,5 med fast natrium-bicarbonat og derefter på 9,5 med IN natriumhydroxid. Produktet blev ekstraheret over i ethylacetat, og de tørrede ekstrakter blev koncentreret til ca. 170 ml. Hexan blev sat til den opvarmede ethyl-acetatopløsning indtil uklarhedspunktet, og den uklare opløsning blev afkølet. Det udfældede produkt blev frafiltreret og tørret, 29,8 g, smp. 223,5-225°C.

NMR (δ, CDC13): 3,30 (3H)s, 2,65 (2H)m, 2,35 (6H)s og 2,10 (3H)s.

Eksempel 14 11,21-Diacetyl-4"-deoxy-4"-oxo-oleandomycin-O-acetyloxim.

Til en omrørt uklar opløsning af 20 g 11,2'-diacetyl-4"-deoxy-4"-oxo-oleandomycin-oxim i 250 ml benzen blev der sat 8,21 ml pyri-din efterfulgt af 9,62 ml eddikesyreanhydrid, og den resulterende reaktionsblanding blev henstillet med omrøring ved stuetemperatur natten over. Opløsningen blev hældt i vand, og det organiske lag blev, efter vask successivt med vand og en mættet saltopløsning og tørring, inddampet til tørhed. Omkrystallisation af det som inddamp-ningsrest vundne skum af ethylacetat-hexan gav 13,4 g af det rene produkt, smp. 198-202°C.

NMR (δ, CDC13): 3,38 (3H)s, 2,66 (2H)m, 2,33 (6H)s, 2,26 (3H)s og 2,10 (6H)s.

Eksempel 15 11-Acety1-4"-deoxy-4"-amino-oleandomycin.

Til en suspension af 10 g 10% palladium-på-trækul i 100 ml methanol blev der sat 21,2 g ammoniumacetat, og den resulterende grød blev behandlet med en opløsning af 20 g ll-acetyl-4"-deoxy-4"-oxo-oleandomycin i 100 ml af samme opløsningsmiddel. Suspensionen blev rystet ved stuetemperatur i en hydrogenatmosfære ved et indle- 2 19 149628 dende tryk på ca. 146 kg/cra . Efter 1,5 time blev katalysatoren frafiltreret, og filtratet blev under omrøring sat til en blanding af 1200 ml vand og 500 ml chloroform. pH-Værdien blev indstillet fra 6,4 til 4,5, og det organiske lag blev fraskilt. - Dét vandige lag blev, efter yderligere ekstraktion med 500 ml chloroform, behandlet med 500 ml ethylacetat, og pH blev indstillet til 9,5 med IN natriumhydroxid. Ethylacetatlaget blev fraskilt, og det vandige lag blev ekstraheret igen med ethylacetat. Ethylacetat-ekstrakterne blev samlet, tørret over natriumsulfat og inddampet til et gult skum (18,6 g), der ved krystallisation af diisopropylether gav 6,85 g (34,22%) af det rensede produkt, smp. 157,5-160°C.

NMR (6, CDC13): 3,41 (3H)s, 2,70 (2H)m, 2,36 (6H)s og 2,10 (3H)s.

Den anden epimer, der forelå i det rå skum i en mængde på 20-25%, vandtes ved gradvis koncentrering og filtrering af modervæskerne .

Eksempel 16

Under anvendelse af fremgangsmåden fra eksempel 15 og ud fra den pågældende 4"-deoxy-4"-oxo-oleandomycin blev der fremstillet følgende aminer: ! N(CH,)9 R l 3 2 v< Ύί

*sj » X^O^N

R°"%y <x“° jsL<°v 0CH3 149628 20 R R^ NMR (δ, CDC13)

ChJ- CH-C- 3,43 (3H)s, 2,70 (2H)m, 5 0 2,30 (6H)s og 2,10 (6H)s.

Η- H- 5,60 (lH)m, 3,36 (3H)s, 2,83 (2H)m og 2,30 (6H)s.

O

H- CH,C- 5,80 (lH)m, 3,43 (3H)s, Λ 2,80 (2H)m, 2,30 (6H)s og 2,10 (3H)s.

Eksempel 17 11-Acetyl-4"-deoxy-4"-amino-oleandomycin.

Til en omrørt suspension af 50 g ll-acetyl-4"-deoxy-4"-oxo-oleandomycin og 53 g ammoniumacetat i 500 ml methanol afkølet til -10°C blev der dråbevis i løbet af 1 time sat en opløsning af 3,7 g 85% natriumcyanoborhydrid i 200 ml methanol. Efter omrøring i 2 timer i kulden blev reaktionsblandingen hældt i 2,5 liter vand og 1 liter chloroform. pH-Værdien blev indstillet fra 7,2 til 9,5 ved tilsætning af IN natriumhydroxid, og det organiske lag blev fraskilt.

Det vandige lag blev vasket én gang med chloroform, og de organiske lag blev samlet. Chloroformopløsningen af produktet blev behandlet med 1,5 liter vand ved pH 2,5, og vandlaget blev fraskilt. pH-Værdien af det vandige lag blev indstillet fra 2,5 til 7,5 og derefter til 8,25, hvorefter der foretoges en ethylacetatekstraktion. Disse ekstrakter blev bortkastet, og pH blev til slut hævet til 9,9. Det vandige lag blev ekstraheret (2 x 825 ml) med ethylacetat, og ekstrakterne blev samlet og tørret over natriumsulfat. Fjernelse af opløsningsmidlet under reduceret tryk gav 23,9 g (47,7%) af produktet som et skum.

NMR (δ, CDC13): 3,41 (3H)s, 2,70 (2H)m, 2,36 (6H)s og 2,10 (3H)s.

Eksempel 18 4"-Deoxy-4"-amino-oleandomycin.

En opløsning af 20 g 2,-acetyl-4"-deoxy-4"-oxo-oleandomycin i 125 ml methanol blev, efter omrøring ved stuetemperatur natten over, behandlet med 21,2 g ammoniumacetat. Den resulterende opløsning blev afkølet i et isbad og behandlet med 1,26 g natriumcyanoborhydrid.

149628 21 Kølebadet blev derefter fjernet, og reaktionsblandingen blev henstillet med omrøring ved stuetemperatur i 2 timer. Reaktionsblandingen blev hældt i 600 ml vand og 600 ml diethylether, og pH blev indstillet fra 8,3 til 7,5. Etherlaget blev fraskilt, og det vandige lag blev ekstraheret med ethylacetat. Ekstrakterne blev sat til side, og pH af det vandige materiale blev indstillet på 8,25. Diethy1-ether- og ethylacetat-ekstrakterne tilvejebragt ved denne pH-værdi blev også sat til side, og pH blev hævet til 9,9. Diethylether- og ethylacetat-ekstrakterne ved dette pH blev samlet, vasket successivt med vand (1 gang) og med en mættet saltopløsning og tørret over natriumsulfat. Sidstnævnte ekstrakter, taget ved pH 9,9, blev koncentreret til et skum og chromatograferet på 160 g silicagel, idet chloroform anvendtes som påførings-opløsningsmiddel og indledende eluat. Efter elleve fraktioner, der var på 12 ml pr. fraktion, blev eluatet ændret til 5% methanol-95% chloroform. Ved fraktion 370 ændredes eluatet til 10% methanol-90% chloroform, og ved fraktion 440 anvendtes 15% methanol-85% chloroform. Fraktioner 85-260 blev samlet og inddampet til tørhed i vakuum, hvorved vandtes 2,44 g (12,92%) af det ønskede produkt.

NMR (δ, CDC13): 5,56 (lH)m, 3,36 (3H)s, 2,9 (2H)m og 2.26 (6H)S.

Eksempel 19 4"-Deoxy-4"-amino-oleandomycin.

En opløsning af 300 mg 2'-acety1-4"-deoxy-4"-amino-oleandomycin i 25 ml methanol blev henstillet med omrøring under en nitrogenatmosfære natten over ved stuetemperatur. Reaktionsblandingen blev koncentreret i vakuum, hvorved vandtes 286 mg (1QQ%). af det ønskede produkt som et hvidt skum, NMR (δ, CDC13): 5,56 (lH)m, 3,36 (3H)s, 2,90 (2H)m og 2.26 (6H)S.

149628 22

Eksempel 2 O

ll-Acetyl-8,8a-deoxy-8,8 a-dihydro-4"-deoxy-4"-amino-oleandomycin.

En opløsning af 2,15 g ll-acetyl-8,8a-deoxy-8,8a-dihydro-4"-deoxy-4"-oxo-oleandoniycin og 2,31 g ammoniumacetat i 15 ml methanol afkølet til 20°C blev behandlet med 136 mg natriumcyanoborhydrid. Efter omrøring i 45 minutter ved stuetemperatur blev reaktionsblandingen hældt i 60 ml vand og 60 ml diethylether, og pH blev indstillet fra 8,1 til 7,5. Etherlaget blev fraskilt og bortkastet, og pH af det vandige lag blev hævet til 8,0. Frisk ether blev tilsat, rystet med det vandige lag og bortkastet. pH-Værdien blev indstillet på 8,5, og processen blev gentaget. Til slut blev pH indstillet på 10,0, og 60 ml ethylacetat blev tilsat. Det vandige lag blev bortkastet, og ethylacetatet blev behandlet med 60 ml frisk vand. pH-Værdien af vandlaget blev indstillet på 6,0 med IN saltsyre, og ethylacetatlaget blev bortkastet. Det vandige lag blev successivt ekstraheret ved pH 6,5 - 7,0 - 7,5 - 8,0 og 8,5 med ethylacetat (60 ml), og de organiske ekstrakter blev sat til side. pH-Værdien blev til slut hævet til 10,0, og det vandige lag blev ekstraheret med ethylacetat. De ekstrakter, der var taget ved pH 8,0, 8,5 og 10,0 blev samlet og koncentreret i vakuum, hvorved vandtes 585 mg (27,27%) af et hvidt skum, der bestod af et par 4"-epimere.

NMR (δ, CDClg): 3,38 og 3,35 (3H) 2 singletter, 2,31 og 2,28 (6H) 2 singletter og 2,03 (3H).

Eksempel 21 8,8a-Deoxy-8,8a-dihydro-4 ,r-deoxy-4 "-amino-oleandomycin.

Natriumcyanoborhydrid (126 mg) blev sat til en opløsning af 1,86 g 8,8a-deoxy-8,8a-dihydro-4"-deoxy-4"-oxo-oleandomycin og 2,1 g ammoniumacetat i 10 ml methanol ved stuetemperatur. Efter 1 time blev reaktionsblandingen afkølet til 0°C og henstillet med omrøring i 2,5 time. Reaktionsblandingen blev hældt i 60 ml vand og 60 ml diethylether, og pH blev indstillet på 7,5. Etherlaget blev bortkastet, og det vandige lag blev indstillet successivt på 8,0 og 8,5, idet der blev ekstraheret med ether efter hver indstilling. Det vandige lag blev til slut indstillet på pH 10,0 og ekstraheret med ethylacetat. Frisk vand blev tilsat til ethylacetatekstrakten, og pH blev indstillet på 6,0. Ethylacetatlaget blev bortkastet, og det vandige lag blev indstillet successivt på pH 6,5 - 7,0 - 8,0 - 8,5 og 10,0, idet der vandige lag efter hver pH-indstilling blev ekstraheret med ethylacetat. Ethylacetatekstrakterne ved pH 7,5, 8,0 og 10,0 blev 149628 23 samlet og koncentreret til et skum, der blev genfortyndet i ethyl-acetat og ekstraheret med frisk vand ved pH 5,5. Det sure vandige lag blev successivt indstillet, som ovenfor, til pH 6,0 - 6,5 - 7,0, 7.5 - 8,0 og 10,0, idet der blev ekstraheret med diethylether efter hver indstilling. Etherekstrakterne ved pH 7,5, 8,0 og 10,0 blev samlet og inddampet til tørhed i vakuum, hvorved vandtes 166 mg (8,9%) af det ønskede produkt.

NMR (6, CDC13): 5,48 (lH)m, 3,40 (3H)s og 2,30 (6H)s.

Eksempel 22 ll-Acetyl-8,8a-deoxy-8,8a-methylen-4"-deoxy-4"-amino-oleandomycin.

Til en opløsning i methanol (30 ml) af 5,0 g ll-acetyl-8,8a-deoxy-8,8a-methylen-4"-deoxy-4"-oxo-oleandomycin og 5,2 g ammonium-acetat afkølet til 20°C blev der sat 300 mg natriumcyanoborhydrid. Reaktionsblandingen blev henstillet med omrøring ved stuetemperatur i 1 time og blev derefter hældt i 120 ml vand og 120 ml diethylether. Det vandige lag blev indstillet successivt på pH 7,5 - 8,0 - 8,5 og 10,0, idet der efter hver pH-indstilling blev ekstraheret med ethyl-acetat. Den sidste organiske ekstrakt opnået ved pH 10,0 blev behandlet med vand, og pH blev indstillet på 6. Det vandige lag blev behandlet igen som ovenfor, og pH blev indstillet på 7,0 - 7,5 - 8,0, 8.5 og 10,0, idet der efter hver ændring af pH blev ekstraheret med ethylacetat. Ethylacetatekstrakterne efter pH-ændringer ved 8,0, 8.5 og 10,0 blev samlet og koncentreret i vakuum, hvorved vandtes 1.5 g (30%) af det ønskede produkt.

NMR (δ, CDC13): 3,38 (3H)s, 2,30 (6H)s, 2,05 (3H)s og 0,65 (4H)m.

Eksempel 23 11,2'-Diacetyl-4"-deoxy-4"-amino-oleandomycin.

En suspension af 1 g Raney-nikkel, vasket med isopropanol, i 25 ml isopropanol indeholdende 250 mg 11,2'-diacetyl-4"-deoxy-4"-oxo-oleandomycin-O-acetyloxim blev rystet i en hydrogenatmosfære ved et indledende tryk på ca. 146 kg/cm ved stuetemperatur natten over. Reaktionsblandingen blev filtreret, og filtratet blev koncentreret under reduceret tryk, hvorved vandtes 201 mg af det ønskede produkt.

Alle 201 mg i methanol (10 ml) blev tilbagesvalet i 1 time, hvorved vandtes ll-acetyl-4"-deoxy-4"-amino-oleandomycin identisk med det i eksempel 15 fremstillede.

149628 24

Præparation A.

2'-Acetyl-8,8a-deoxy-8,8a-dihydro-oleandomycin.

la. 2'-Acetyl-8,8a-deoxy-oleandomycin.

Til en trehalset, rundbundet kolbe på 250 ml blev der sat zinkstøv (10 g) og mercurichlorid (1 g). Efter at de faste stoffer var godt sammenblandet, blev IN HCl (25 ml) tilsat, og blandingen blev omrørt kraftigt i 15 minutter. Det vandige overliggende materiale blev fjernet, og frisk IN HCl (25 ml) blev tilsat, og kolben blev anbragt under en carbondioxidatmosfære. En filtreret opløsning af chromtrichlorid (50 g i 65 ml IN HCl) blev hurtigt tilsat til zinkamalgamet. Blandingen blev omrørt under en carbondioxidatmosfære i 1 time, under hvilket tidsrum der udvikledes en lyseblå farve, hvilket tilkendegav tilstedeværelse af chromochlorid (CrC^)· Omrøring blev afbrudt efter 1 time, og zinkamalgamet fik lov at bundfælde i kolben.

En opløsning af 2'-acetyl-oleandomycin (29,2 g) i acetone (200 ml) og vand (100 ml) blev anbragt i en dryppetragt forbundet •til en trehalset rundbundet kolbe på 600 ml udstyret med mekanisk omrører foroven. Til denne kolbe blev der under en carbondioxidatmosfære og under omrøring sat opløsningen af 2'-acetyl-oleandomycin og den forud fremstillede opløsning af chromochlorid. Opløsningerne blev tilsat samtidigt med en sådan hastighed, at begge tilsætninger blev afsluttet samtidigt. Tilsætningen tog ca. 12 minutter. Efter 35 minutters omrøring ved stuetemperatur blev der til reaktionsblandingen sat vand (100 ml) og ethylacetat (100 ml), og omrøring blev fortsat i 15 minutter. Ethylacetatlaget blev fraskilt og vasket med vand (80 ml). Ethylacetatet blev fraskilt, og de vandige ekstrakter blev samlet og vasket med frisk ethylacetat (100 ml). Ethylacetatlaget blev fraskilt og vasket med vand (100 ml). Den organiske fase blev fraskilt, og de vandige vaskevæsker blev samlet og behandlet med natriumchlorid (75 g). Det yderligere ethylacetat, der udskiltes, blev fjernet ved hævertvirkning og forenet med de andre ethyl-acetatekstrakter. Vand blev sat til de samlede ethylacetatekstrakter, og der blev indstillet på pH 8,5 med natriumbicarbonat. Det organiske lag blev fraskilt, vasket med vand og mættet natriumchlorid og tørret over vandfrit natriumsulfat. Filtrering og afdampning af opløsningsmidlerne under reduceret tryk gav et hvidt fast stof, der blev krystalliseret af ethylacetat/heptan, hvorved vandtes den ønskede forbindelse, 8,4 g, smp. 183,5-185°C.

149628 25

Analyse: Beregnet for C37Hg3°i3N: C: 62,2, H: 9,0, N: 2,0.

Fundet: C: 62,0, H: 8,9, N: 2,0.

NMR (6, CDC13): 5,63 (lH)s, 5,58 (lH)s, 3,43 (3H)s, 2,36 (6H)s og 2,08 (3H)s.

Ib. 2'-Acetyl-8,8a-deoxy-8,8a-dihydro-oleandomycin.

Aluminiumfolie (4,0 g) skåret i stykker på ca. 6 mm og belagt med 290 ml af en vandig mercurichloridopløsning blev omrørt i 30-45 sekunder. Opløsningen blev dekanteret, og det amalgamerede aluminium blev vasket successivt med vand (2 gange), isopropanol (1 gang) og tetrahydrofuran (1 gang). Stykkerne blev overdækket med 45 ml tetra-hydrofuran, 45 ml isopropanol og 10 ml vand og derefter afkølet til 0°C i et isbad. En opløsning af 2,0 g 8,8a-deoxy-2'-acetyl-oleando-mycin i tetrahydrofuran, isopropanol og vand blev dråbevis sat til det amalgamerede aluminium ved en sådan hastighed, at temperaturen forblev ved 0°C. Efter endt tilsætning blev badet fjernet, og reaktionsblandingen blev henstillet med omrøring ved stuetemperatur natten over. De faste stoffer blev frafiltreret, og filtratet blev inddampet til tørhed i vakuum. Inddampningsresten blev behandlet med ethylacetat-vand, og pH blev indstillet på 9,0 med en mættet natri-umcarbonatopløsning. Den organiske fase blev fraskilt, vasket med vand og en mættet saltopløsning og tørret over natriumsulfat. Fjernelse af opløsningsmidlet gav 2,27 g af det Ønskede produkt (identisk med produktet i eksempel 10).

Præparation B.

11,2'-Diacetyl-8,8a-deoxy-8,8a-methylen-oleandomycin.

I en flammetørret trehalset kolbe på 200 ml udstyret med en dryppetragt, magnetisk omrører og et nitrogen-trykindløb blev der kombineret 16,4 g trimethylsulfoxoniumiodid og 3,4 g af en 50% oliedispersion af natriumhydrid. De faste stoffer blev blandet godt, og 43,2 ml dimethylsulfoxid blev tilsat via dryppetragten. Efter en time, da hydrogenudviklingen var standset, blev suspensionen afkølet til 5-10°C, og en opløsning af 22,6 g 11,2'-diacetyl-8,8a-deoxy-oleandomycin i 32 ml tetrahydrofuran og 16 ml dimethylsulfoxid blev tilsat i løbet af 10 minutter. Suspensionen blev omrørt ved stuetemperatur i 90 minutter og hældt i 300 ml vand og ekstraheret med to portioner ethylacetat på hver 300 ml. De organiske ekstrakter

Claims (3)

149628 blev vasket med vand og mættet natriumchloridopløsning, tørret over vandfrit natriumsulfat, filtreret og inddampet til tørhed under reduceret tryk. Inddampningsresten blev krystalliseret af ether, hvorved vandtes 8,9 g 11,2'-diacetyl-8,8a-deoxy-8,8a-methylen-oleando-mycin.

1. Analogifremgangsmåde til fremstilling af 8-substitueret-4"-amino-makrolider med formlen: A Vi A Ύχ E T T i (V a C VA Yy vv ° yL2 IV 0CH3 v och3 eller i N(CH,)_ r-r R DA/ V°\/\ R0,/| T..... ""i 0 \Anh, 0CH3 VI 149628 eller farmaceutisk acceptable syreadditionssalte deraf, hvor R og R1 hver er hydrogen eller alkanoyl med 2-3 C-atomer, kendetegnet ved, at en tilsvarende forbindelse med formlen: . mcHj« R1 I N(CH3)2 y\xx γγ R° I i R T *'Ί f\n (\ v1 χχ vYx I OCH, II °CH3 3 n(ch3)2 eller °Y^s ζΧ

0 III och3 hvor R og R^ er som ovenfor defineret, og X er NH, N-OH, N-OCH3 0 li eller N-OC-CH,, reduceres, idet 0 •J II (a) når X er N-OH, N-OCH3 eller N-OC-CH3, reduktionen gennemføres ved katalytisk hydrogenering, og (b) når X er NH, denne forbindelse fremstilles in situ ud fra den tilsvarende keton ved kondensation af ketonen med ammoniumsaltet af en lavere alkansyre, og reduktionen gennemføres ved katalytisk hydrogenering over palladium-på-trækul eller med natriumcyano-borhydrid, og at, om ønsket,