CS200536B2 - Method of producing epimeric 4-amino oleandomycin derivatives - Google Patents

Description

(54) Způsob výroby epimerních 4”-aminooleandomycinových derivátů

Vynález se týká způsobu výroby epimerních 4“-aminooleandomycinových derivátů a jejich adičních solí s kyselinami.

Oleandomycin, jeho výroba z fermentačních půd a jeho použití jako antibakteriálního činidla se poprvé popisuje v americkém patentovém spisu č. 2 757 123. Je známo, že sloučenina vyskytující se v přírodě má následující strukturu:

V různých polohách vzorce je uvedeno běžně používané Číslování a stereochemické uspořádání oleandomycinu a analogických sloučenin.

Je známo několik syntetických analogů shora zmíněné sloučeniny, zvláště pak ty látky, v nichž jedna až tři z volných hydroxylových skupin v polohách 2‘,4“ a 11 jsou esterifikovány acetylovými skupinami. Mimoto jsou v americkém patentovém spisu číslo 3 022 219 popsány podobné analogy, v nichž acetylový zbytek esterového seskupení je nahrazen jiným ačylovým zbytkem, zejména nižším alkanoylovým zbytkem se 3 až 6 atomy uhlíku.

Jak již bylo řečeno výše, předmětem vynálezu je způsob výroby epimerních 4“-aminooleandomycinových derivátů obecného vzor-

20053В ve kterém jednotlivé symboly R a Ri nezávisle na sobě znamenají vždy atom vodíku nebo acetylovou skupinu,

R3 znamená atom vodíku nebo alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku a

R’ představuje skupinu —СНз, —CH2—CH2— nebo — CH2— O—, a jejich farmauceticky upotřebitelných adičních solí s kyselinami, vyznačující se tím, že se sloučenina obecného vzorce II,

ve kterém

R, Ri a R‘ mají shora uvedený význam, kondenzuje s amoniakem nebo alkylaminem s 1 až 6 atomy uhlíku s kyselinou octovou a získaný produkt se podrobí redukcí, načež se popřípadě ve výsledném produktu, ve kterém R nebo/a Ri znamená acetylovou skupinu, převede tato skupina nebo skupiny na atom nebo atomy vodíku a získaná sloučenina se popřípadě převede na farmauceuticky upotřebitelnou adiční sůl s kyselinou.

V praxi se způsob podle vynálezu účelně provádí tak, žé se na keton obecného vzorce II v nižším alkoholu, jako v methanolu, působí octanem amonným a ochlazená reakční směs se podrobí reakci s natriumkyanborohydridem jako: redukčním činidlem. Reakce se. „nechá probíhat, při teplotě místnosti několik hodin, pak se provede hydrolýza a izolace produktu.: Na každý imol,ketonu obecného vzorce II je sice zapotřebí pouze jeden mol octanu amonného, octan amonný se však s výhodou používá v nadbytku, aby se dosáhlo rychlého vytvoření iminu. V daném případě je možno, bez ovlivnění kvality finálního produktu, použít až desetinásobného nadbytku.

Pokud jde o používané množství redukčního činidla vzhledem к výchozímu ketonu, používá se s výhodou cca 2 mol natriumkyanborohydridu na každý mol ketonu obecného vzorce II.

Reakční doba při redukcci se při teplotě místnosti pohybuje od 2 do 3 hodin.

Jak již bylo uvedeno výše, výhodným rozpouštědlem pro práci způsobem podle vynálezu je methanol, к danému účelu je však možno použít i isopropanol, který je zvlášť vhodný v případě, má-li se předejít solvolýze 2*-acetylové skupiny.

Při izolaci žádaných 4“-deo'xy-4“-.amino oleandomyícinových¹ derivátů od všech nebazických vedlejších produktu nebo od výchozího materiálu se s výhodou využívá bazického charakteru výsledných produktů. · V souhlase s tím se vodný roztok produktu . postupně extrahuje při zvyšujících se hodnotách pH, takže neutrální nebo nebazické látky se extrahují při nižších hodnotách pH a produkt při pH cca 9. Extrakty v rozpouštědlech, jimiž jsou buď ethylacetát, nebo diethylester, se promyjí roztokem chloridu sodného a vodou, vysuší se síranem sodným a rozpouštědlo se odpaří.

Je-li nezbytné další čištění produktu, lze jej uskutečnit známým způsobem chromatografií na silikagelu.

Shora popsanou reduktivní aminaci je možno uskutečnit i za jiných redukčních podmínek, než jen za podmínek dosažených přítomností natrlumkyanborohydridu. Při konverzi sloučenin obecného vzorce II na sloučeniny obecného vzorce I způsobem podle vynálezu je možno účelně použít i reakce s octanem amonným a vodíkem v přítomnosti katalyzátorů na bázi ušlechtilých kovů, jako paládia na uhlí.

V praxi je možno postupovat tak, že se к roztoku výchozího ketonu v nižším alkanolu, jako v methanolu nebo isopropanolu, přidá octan amonný, a 10% paládium na uhlí a vzniklá suspenze se třepe ve vodíkové atmosféře při teplotě zhruba od 25 do 50 °C až do pohlcení teoretického množství vodíku.

Pokud jde o vzájemné poměry reakčních složek, používá se к zajištění úplného průběhu reakce v přijatelné době s výhodou desetinásobný nadbytek octanu amonného. Množství katalyzátoru se může pohybovat od 10 do 50 % hmotnostních, vztaženo na výchozí keton. Počáteční tlak vodíku nehraje rozhodující roli. Pro zkrácení reakční doby se s výhodou pracuje za tlaku od 0,1 do

3,5 MPa. Při práci za shora popsaných podmínek se reakční doba pohybuje od 2 do 6 hodin.

Po ukončení reduktivní aminace se katalyzátor odfiltruje a filtrát se zahustí к suchu. Produkt se čistí způsobem uvedeným výše u popisu reakce za pobití natriumkyanborohydridu jako redukčního činidla.

Antibakteriálně účinné sloučeniny shora uvedeného obecného vzorce Г, ve kterém R3 představuje alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, se účelně připravují z ketonu obecného vzorce II a odpovídajícího aminu vzorce R3NHz, za použití natriumkyanborohydridu jako redukčního činidla. К udržení pH na hodnotě zhruba mezi 6 a 7 se přidává alkanová kyselina, s výhodou kyselina octová, v ekvimolárním množství vzhledem к výchozímu aminu. Namísto alkanové kyseliny lze rovněž použít odpovídající množství plynného chlorovodíku.

Poměr reakčních složek, reakční teplota, reakční doba a zpracování reakční směsi jsou nebo se provádějí vesměs analogicky jako v případě přípravy sloučenin obecného vzorce I, v němž Rs znamená atom vodíku, zá použití natriumkyanborohydridu jako redukčního činidla.

Jak již bylo uvedeno výše, je možno solvolýzu 2‘-acetylového zbytku uskutečnit tak, že se příslušný aminoderivát, odpovídající sloučenině obecného vzorce I, přes noc míchá v methanolickém roztoku při teplotě místnosti.

Při využívání chemoterapeutické účinnosti těch sloučenin podle vynálezu, které tvoří soli, se pochopitelně s výhodou používají farmaceuticky upotřebitelné soli. I když některé typy solí jsou, vzhledem ke své nerozpustnosti ve vodě, vysoké toxicitě nebo nekrystalickému charakteru, pro danou farmaceutickou aplikaci nevhodné nebo· méně žádoucí, lze nicméně tyto ve vodě nerozpustné nebo toxické soli převádět na odpovídající farmauceuticky upotřebitelné adiční soli s kyselinami.

Jako příklady kyselin poskytujících farmaceuticky vhodné kationty je možno uvést kyseliny chlorovodíkovou, bromovodíkovou, dusičnou, sírovou nebo siřičitou, fosforečnou, octovou, mléčnou, citrónovou, vinnou, jantarovou, maleinovou, glukonovou a asparágovou.

Stereochemíe výchozích látek, za kterých se získávají antibakteriální činidla podle vynálezu, odpovídá přírodnímu materiálu. Primární oxidace hydroxylové skupiny v poloze 4“ na ketoskupinu a následující převedení ketonu na 4“-aminoderlvát však umožňuje změnu stereochemíe substituentu v poloze 4“ ve srovnání s přírodním produktem. Převedou-li se tedy sloučeniny obecného vzorce II na aminy za použití způsobu podle vynálezu, lze očekávat směs dvou epimerních aminů. Experimentálně bylo potvrzeno, že v konečném produktu jsou přítomny oba epimerní aminy, a to v měnících se poměrech v závislosti na volbě syntetického postupu. Pokud představuje izolovaný produkt převážně jeden z epimerů, pak je možno přečistit tento epimer opakovanou krystaližací z vhodného rozpouštědla až do konstantní teploty tání. Druhý epimer, tj. ten, který byl v původně izolovaném pevném materiálu přítomen v menším množství, je převážně obsažen v matečných louzích. Odtud je možno tuto látku izolovat o sobě známými postupy, například zahuštěním matečného louhu a opakovanou krystaližací zbytku až do konstantní teploty tání nebo chromatografií.

I když je možno shora uvedenou směs epimerů dělit postupy, jejichž povaha je odborníkům jasná, pro praktické použití je výhodné použít tuto směs tak, jak hýla po provedení reakce izolována. Často je však výhodné přečistit směs epimerů nejméně jednou krystaližací z vhodného rozpouštědla, sloupcovou chromatografií, rozdělováním mezi rozpouštědla nebo triturací s vhodným rozpouštědlem. Při tomto čištění, kdy nemusí nezbytně nutně dojít k separaci epimerů, ' se odstraní nežádoucí látky, jako jsou výchozí sloučeniny a nevhodné vedlejší produkty.

Vyhodnocení absolutní stereochemíe epimerů není dosud skončeno. Oba epimery se však vyznačují stejným typem účinnosti, tj. antibakteriální účinností.

Nové 4”-amino-4”-deoxyo'leandom.ycinové deriváty podle vynálezu se vyznačují in vitro účinností proti četným druhům grampositivních mikroorganismů, jako je Staphylococcus aureus a Streptococcus pyogenes, jakož i proti některým gramnegativním mikroorganismům, jako jsou mikroorganismy kulovitého nebo elipsoidního tvaru (koky], Účinnost těchto látek se snadno dokáže testy in vitro na různých mikroorganismech v živném prostředí s extraktem z mozku a srdce, a to za použití obvyklé zřeďovací řady (dvojnásobné ředění]. Se zřetelem na svoji účinnost in vitro jsou popisované látky použitelné při místním podávání ve formě mastí, krémů a podobně; dále jsou použitelné pro sterilizování, například zařízení v nemocničních pokojích, dále jako průmyslové antimikrobiální prostředky, například při úpravě vody, kontrole odpadních kalů, ochraně nátěrů a dřeva.

K použití in vitro, například při místní aplikaci, se často výhodně mísí popisovaná sloučenina s farmaceuticky vhodným nosičem, jako je rostlinný nebo minerální olej, nebo změkčující krém. Podobně je možno rozpustit nebo dispergovat účinné látky v kapalných nosičích nebo rozpouštědlech, jako je voda, alkohol, glykoly nebo jejich směsi, nebo v dalších farmaceuticky vhodných prostředcích; to znamená v takových prostředcích, jež nemají škodlivý vliv na účinnou složku. V těchto případech je obvykle vhodné použít koncentraci účinné složky zhruba od 0,01 % do 10 %, vztaZenO na hmotnost celého preparátu.

Dále jsou četné ze sloučenin podle tohoto vynálezu účinné in vivo proti grampositivním a některým gramnegativním mikroorganismům, jako je Pasteurella multocida a Ne^se^a sicca, ať již při orálním nebo/a parenterálním podávání živočichům, včetně lidí. Účinnost těchto látek in vivo je více omezena vzhledem k citlivým organismům a stanovuje še obvyklými postupy na myších v podstatě jednotné hmotnosti, které se infikují pokusnými mikroorganismy a pak se jim orálně nebo subkutánně podá testovaná sloučenina. Při praktickém provádění se skupince myší, například desetičlenné, intraperitoneálně podá vhodná zředěná kultura obsahující přibližně jedno- až desetinásobek dávky LDioo (nejnižší koncentrace organismu nutná k usmrcení 100 % pokusných zvířat. Současně se provádějí kontrolní testy, kdy se myším podává inokulum s nižším ředěním ke sledování možných variací virulence testovaného organismu. Testovaná sloučenina se podává za 30 minut po inokulaci a aplikace se opakuje znovu za 4, 24 а 48 hodin. Přežívající mysl se udržují ještě dny po posledním podání testované látky, načež se zaznamená počet přežívajících exemplářů.

Při použití in¹ viivo se popisované nové sloučeniny mohou podávat orálně nebo parenterálně, například subkutánně nebo intramuskulárně injekcemi v denní dávce zhruba od 1 mg/kg do 200 mg/kg tělesné hmotnosti. Výhodné rozmezí dávek se pohybuje zhruba od 5 mg/kg do 100 mg/kg/den, přičemž nejvýhodnějším rozmezím je rozsah zhruba od mg/kg do 50 mg/kg/den. Jako vhodná nosná prostředí pro parenterální injekce je možno jmenovat vodné prostředí, jako je voda, fyziologický roztok chloridu sodného, isotonický roztok D-glukózy, Ringerův roztok, a dále nevodná prostředí, jako jsou rostlinné oleje (bavlněný, podzemnicový, kukuřičný, sesamovýj, dimethylsulfoxid a další nevodná nosná prostředí, která nejsou na závadu terapeutické účinnosti a jsou netoxická v použitém objemu a dávce (glycerol, propylenglykol, sorbitol). Dále pak je možno s výhodou připravovat prostředky pro improvizovanou přípravu roztoků před vlastním podáním. Takové prostředky mohou obsahovat kapalná ředidla, jako je například propylenglykol, diethylkarbonát, glycerol, sorbitol atd., tlumivé látky, hyaluronidázu, lokální anestetika a anorganické soli к dosažení vhodných farmakologických vlastností. Tyto sloučeniny je možno rovněž kombinovat s četnými inertními farmakologicky vhodnými nosiči, к nimž patří pevná ředidla, vhodná nosná prostředí, netoxická organická rozpouštědla, apod., a připravovat z nich kapsle, tablety, kosočtverečné pastilky, trocheje, suché směsi, suspenze, roztoky, elixíry a roztoky nebo suspenze к parenterálnímu podání. Obecně se používají sloučeniny v různých dávkách, přičemž koncentrace kolísá zhruba od 0,5% do 90 %, přepočteno na celkovou hmotnost prostředku.

Vynález ilustrují následující příklady provedení, jimiž se však rozsah vynálezu v žádném směru neomezuje.

Příklad 1 ll-Acetyl-4”-deoxy-4”-aminooleandomycin

К suspenzi 10 g 10% paládia na uhlí se v prostředí 100 ml methanolu přidá 21,2 g octanu amonného a získaná suspenze se smísí s roztokem 20 g ll-acetyl-4“-deoxy-4“-OKOOleandomycinu ve .100 ml stejného rozpouštědla. Suspenze se míchá při teplotě místnosti v atmosféře vodíku za počátečního tlaku 0,34 MPa, za 90 minut se katalyzátor odfiltruje a filtrát se vnese za míchání do směsi 1200 ml vody a 500 ml chloroformu. Hodnota pH se upraví z původní hodnoty 6,4 na 4,5, organická vrstva se oddělí, vodný podíl po další extrakci 500 ml chloroformu se smísí s 500 ml ethylacetátu a hodnota pH se upraví přidáním 1N roztoku hydroxidu sodného ha 9,5. Ethylacetátová vrstva se oddělí, vodný podíl se extrahuje znovu ethylacetátem, ethylacetátové roztoky se spojí a po vysušení bezvodým síranem sodným a zahuštění к suchu se z nich získá 18,6 g žlutého pěnovitého produktu, který se překrystaluje z diisopropyletheru. Získá-se 6,85 g čistého produktu, tajícího při 157,8 až 160 °C.

NMR spektrum (δ, CDCI3): 3,41 (3H) singlet, 2,70 (2H) multiplet, 2,36 (6H) singlet a 2,10 (3H) singlet.

Další epimer, který je obsažen - v suroivém pěnovitém produktu v množství 20 až 25 %, se získá postupnou koncentrací matečných louhů a filtrací.

Pří klad 2

Za použití postupu z příkladu 1 a za použití vhodných derivátů 4“-deoxy-4“-oxooleandomycinu lze připravit následující aminoderiváty:

R	Ri	NMR (δ, CDC13)
СНзСО—	СНзСО—	3,43 (3H) singlet, 2,70 (2H) multiplet, 2,30 (6H) singlet a 2,10 (6H) singlet;
H—	H—	5,60 (1H) multiplet, 3,36 (3H) singlet, 2,83 (2HJ multiplet a 2,30 (6H) singlet;
H—	СНзСО—	5,80 (1H) multiplet, 3,43 (3H) singlet, 2,80

(2H) multiplet, 2,30 (6H) singlet a 2,10· (3H] singlet.

Příklad 3 ·

H-Acetyl-4“-ůeoxy-4“-aminooleandomycin

K míchané suspenzi 50 g ll-acetyl-4“-de<oxy-4”-oxooleandomycinu a 53 g octanu amonného v 500 ml methanolu se po ochlazení na —10 '°C přikape během hodiny roztok 3,7 g 85% natriumkyanborohydridu ve 200 ml methanolu. Reakční směs se míchá 2 hodiny za chlazení, potom se vlije do směsi 2,5 litrů vody a 1 litru chloroformu, hodnota pH se přidáním · 1N roztoku · hydroxidu sodného upraví ze 7,2 na 9,5 a organická vrstva se oddělí. Vodný podíl se promyje jednou chloroformem a organické podíly se spojí. Chloroformový roztok produktu se spojí s 1,5 litru vody o hodnotě· pH 2,5 a vodný podíl se oddělí. Hodnota pH vodné vrstvy se upraví z 2,5 nejprve na 7,5, potom na 8,25 a vždy se provede extrakce ethylacetátem. Tyto extrakty se odloží. Hodnota pH vodného podílu se zvýší na 9,9 a vodný podíl se extrahuje dvakrát vždy 825 ml ethylacetátu. Extrakty se spojí a vysuší se síranem sodným. Oddestilováním rozpouštědla za sníženého' tlaku se izoluje 23,9 g produktu ve formě pěny.

NMR spektrum (5, CDClsj: 3,41 (3H) ·slnglet, 2,70 (2H) multiplet, 2,36 (6H) singlet a 2,10 (3HJ singlet.

Příklad 4

4”-Deoxy-4”-aminooleandomycln

Roztok 20 g 2‘-acetyl-4“-deoxy-4“oxooleandomycínu ve 125 ml methanolu se míchá při teplotě místnosti přes noc, pak se přidá 21,2 g octanu amonného, získaný roztok se ochladí v ledové lázni a přidá se k němu 1,26 g natriumkyanborohydridu. Chladicí lázeň se odstraní, reakční směs se míchá při teplotě místnosti 2 hodiny, potom se vlije do směsi 600 ml vody a 600 ml dlethyletheru a hodnota pH se upraví · z 8,3 na 7,5. Etherová vrstva se oddělí, · vodný podíl se extrahuje ethylacetátem, extrakty se odloží a hodnota pH vodného podílu se upraví na 8,25. Extrakty v diethyletheru a ethylacetátu se rovněž odloží a hodnota pH se zvýší na 9,9. Extrakty v diethyletheru a ethylacetátu, získané při této · hodnotě pH, se spojí, promyjí se postupně jednou vodou a nasyceným roztokem chloridu sodného, načež se vysuší bezvodým síranem sodným. Z tohoto vysušeného extraktu (získaného z vodných podílů o hodnotě pH 9,9) se zahuštěním izoluje pěnovltý produkt, který se chromatografuje na 160 g sílikagelu za použití chloroformu k přípravě sloupce 1 k počáteční eluci. Odebere se 11 frakcí po 12 ml, načež se provede eluce směsí 5 % methanolu a 95 % chloroformu. Po frakci č. 370 se' eluce provádí směsí 10 % methanolu a 90 % chloroformu, a po frakci č. 440 se použije soustava 15 % methanolu a 85 '% chloroformu. Frakce 85 až 260 se spojí a zahuštěním ve vakuu k · suchu se z nich získá 2,44 g žádaného produktu.

NMR ' spektrum (δ, CDCh): 5,56 (1H) multiplet, 3,36 (3H) singlet, 2,9 (2H) multlplet a 2,26 (6H) singlet.

Příklad 5

4”-Deoxy-4-aminooleandouiycin

Roztok 300 mg 2i-acetyl-4“-deoxy-4“-aminooleandomycinu ve 25 ml methanolu se míchá pod dusíkem přes ' noc při teplotě místnosti. Reakční směs se zahustí ve vakuu, čímž se získá 286 mg žádaného produktu ve formě bílé pěny.

NMR spektrum (δ, CDClj): 5,56 (1H) multiplet, 3,36 (3H) singlet, 2,90 · (2H) multiplet a 2,26 (6H) singlet.

Příklad 6

H-Acetyl-8,8a-deoxy-8,8a-dihydro-4“-deoxy-4”-aminooleandomycm

Roztok 2,15 g ll-acetyl-8,8a-deoxy-8,8a-díhydro-á^deoxy^^oxooleandomyclnu a 2,31 gramu octanu amonného v 15 ml methanolu se ochladí na · 20 °C a přidá se k němu 136 mg natriumkyanborohydridu. Reakční směs se míchá 45 minut při teplotě místnosti, načež se vlije do 60' ml vody a 60 ml diethyletheru, hodnota pH se upraví z 8,1 na 7,5, etherová vrstva se oddělí (není k potřebě) a hodnota pH vodného podílu se zvýší na 8,0. Přidá ses. čerstvý ether, protřepe se s vodným podílem, oddělí se (nenílk potřebě), hodnota pH vodného podílu se zvýší na 8,5 a extrakce etherem se opakuje. Hodnota pH ' se pak zvýší na 10,0 a ' přidá se 60 ml ethylacetátu. Vodný podíl se odloží, ethylacetátová vrstva se promyje 60 ml Čerstvé · . vody, hodnota pH vodné vrstvy se upraví přidáním 1N roztoku chlorovodíkové kyseliny na 6,0, ethylacetátová vrstva se oddělí a odloží. Vodný podíl se · postupně extrahuje při pH 6,5, 7,0, 7,5, 8,0 a 8,5 vždy za použití 60 ml ethylacetátu, organické extrakty se dají stranou, · hodnota pH se zvýší na 10,0 a vodný podíl se extrahuje ethylacetátem. Extrakty získané při pH 8,0, 8,5· a 10,0 se· spojí á zahuštěním ve vakuu se z nich získá 585 mg bílého pěnovitého produktu, který obsahuje pár 4“-epimerů.

NMR spektrum· (ιδ, CDC13): 3,38 a 3,35 (3H) 2 singlety, 2,31 a 2,28 (6H) 2 singlety a 2,03 (3H).

příklad 7

B.Sa-Deoxy-S.ea-dihydro^hdeoxy^^ammooleandomycin

K roztoku 1,86 g 8,8a-deoxy-8,8a-dihydro-4“-deoxy-4“-oxooleandomycinu a 2,1 g oc11

206536 tanu, amonného v · 10 ml methanolu se · přidá při teplotě místnosti ·· 126 · mg; · natriumkyan’ borohydridu. Po hodině se reakční směs ochladí na· 0 °C, 2,5 , · hodiny · se míchá, · načež se.ylije · do směsi 60 ml vody a 60 ml diethyletheru a hodnota pH se upraví na 7,5. Etherová vrstva se odloží, vodný podíl se postupně upraví na hodnotu pH 8,0 a 8,5, a to vždy s bezprostředně následující extrakcí etherem. Posléze se · hodnota pH vodného podílu upraví na 10,0, provede · se extrakce ethylacetátem, k extraktu v uvedeném rozpouštědle se přidá čerstvá voda a hodnota pH se upraví na 6,0. Ethylacetátový · roztok se odloží', hodnota pH vodného podílu se upraví postupně na pH 6,5, 7,0, 8,0, 8,5 a · 10,0 a po, každé úpravě pH se vodný rozdíl' extrahuje ethylacetátem. · Extrakty v tomto rozpouštědle, získané pří pH 7,5,· 8,0 a 10,0, se · spojí a zahustí se na pánovitý zbytek, který se rozpustí v ethylacetátu a tento roztok se extrahuje vodou o hodnotě pH 5,5. Hodnota pH okyselené vodné vrstvy se postupně upraví, stejně jako výše, na 6,0, 6,5, 7,0, 7,5, 8,0 a · 10,0, a vždy se _ provede extrakce diethyletherem. Extrakty v tomto rozpouštědle, získané při pH 7,5, 8,0 a 10,0, se spojí a zahuštěním ve vakuu se z nich získá 166 mg žádaného produktu.

NMR spektrum ('5, CDCI3): 5,48 (1H) multiplet, 3,40 (3H) singlet a 2,30 (6H) slnglet.

Příklade ll-Aeetyl-8,8a-deoxy-8,8a-methylen-4“-de- oxy-4“-aminooleandomycin

K roztoku 5,0 g ll-aeety--8,aa-deóxy-8,8amethylen+^deioxy^Loxo-oleandomy-cinu a 5,2 g octanu amonného ve 30 ml methanolu se po · · ochlazení na 20 °C přidá · 300 mg natriumkyanborohydridu, reakční směs se hodinu · míchá při teplotě místnosti, načež se vlije do 120 ml vody a · 120 · ml diethyletheru. Vodný podíl se zalkalizuje postupně na hodnotu pH 7,5, · 8,0, 8,5 a 10,0, přičemž se po každé úpravě pH provede · extrakce ethylacetátem. Finální organický extrakt získaný při pH 10,0 se smísí s vodou, hodnota pH se upraví · na 6, vodný podlí se · opět postupně zalkalizuje, stejně jako výše, na pH 7,0, 7,5, 8,0, 8,5 a 10,0 a vždy po změně pH se provede extrakce ethylacetátem. Ethylacetátové extrakty získané přt pH 8,0, 8,5 a 10,0 se spojí a zahuštěním ve vakuu se z nich získá 1,5 g žádaného produktu.

NMR spektrum (5, CDClsj: 3,38 (3H) singlet, 2,30 (6HJ singlet, 2,05 (3H) singlet a 0,65 (4H) multíplet.

Příklad 9 l12’-Diacetyl-4”-deoxyl4”ammooleandomyl cin

Suspenze 1 g Raney-niklu promytého isopropanolem, ve 25 ml isopropa.nolu obsahujícího · 250 mg 0-acetyloximu ll,2‘-diacetyl-4”-deoxy-4”-oxooleandomycinu, se ve vodíkové atmosféře přes noc třepe při teplotě místnosti za počátečního \tlaku· ¢^,,315 MPa. Reakční směs se zfiltruje a filtrát se zahustí za sníženého tlaku, čímž se · získá 201 mg žádaného produktu. .

Jednohodinovým varem celého · množství shora získaného produktu (201 mg) · v 10 ml methanolu se ^získá ll-acettl-4-“-deoxyl -4“-aminooleandomycin, · identický s· produktem připraveným v příkladu 1.

P říklad 10 4“-Deoxy-4“-ethylenaminooleandomycin . Ke směsi 25 ml methanolu s obsahem 4,59· g 4“-deoxy-4“l0xooleaňdomycinu, 6,6 ml 5M roztoku ethylaminu v ethanolu a 1,89 ml kyseliny octové se přidá 365 mg natriumkyanborohydridu v podílech o hmotnosti 50 · až 60 mg. Po jedňohodinovém míchání při teplotě místnosti · se reakční směs vylije do 110 ml vody a 120 ml ethylacetátu.

pH vodné vrstvy se postupně upravuje na hodnotu 7,5, 8,0, 8,5 a 10,0, přičemž po každé úpravě pH se směs extrahuje ethylacetátem. Poslední organický extrakt získaný při pH 10,0 se smísí s vodou a hodnota pH se upraví na 6. Vodná vrstva se znovu zpracuje shora popsaným způsobem a hodnota pH se postupně upravuje na 7,0, 7,5, 8,0, 8,5 a 10,0, přičemž pokaždé změně pH se provede extrakce ethylacetátem. Ethylacetátové extrakty získané při hodnotách pH 8,8, 8,5 a 10,0 se spojí · a . zahustí ve vakuu na pěnovitý zbytek. Produkt se dále čistí · chromatografií na 75 g silikagelu za použití acetonu · jako elučního činidla. Odebírají se frakce o objemu 4 ml. Frakce č. 62 až 104 se spojíí a po zahuštění za sníženého tlaku s z ntch získá 910 mg · žádaného produktu.

NMR spektrum (á CDCI3): 3,46 (3H) singlet, 2,36 (6H) singlet · a . 5,7 (1H) kvadruplet.

Přikladli . .

ll-Acettl·4“-deoxý-4“ethylaminooleandomycin

Analogickým ' způsobem· jako v příkladu 10 se 366 mg natriumkyanborohydiru po částech přidá k směsi · 5,82 g H-acetyl-4“-deoxy-4“-oxooleandomycinu, 16 ml ' 5,0 M roztoku ethylaminu v ethanolu a 27,4 ml 2,92M roztoku· chlorovodíku v ethanolu. Reakční směs se 1,5 hodiny míchá při teplotě· místnosti, pak se vylije do 120 ml vody a 120 ml ethylacetátu a zpracuje se analogickým způsobem jako v příkladu 10. · Získá se 1,2 g žádaného produktu. · NMR spektrum (5, CDC13): 3,35 (3H) singlet,· 2,36 (6H) singlet a 2,08 (3H) singlet.

Příklad 12

H-Acetyl-4”-deo,xy-4”-n-hexylaminooleandomycin

Postup popsaný v příkladu 10 se opakuje s tím, že se použije 4,8 g H-acetyl-4”-deoxy14”-oxooleanComycinu, 6,7 g n-hexylaminu,

3,78 ml kyseliny octové, 302 mg natriumkyanborohydridu a 25 . ml methanolu. Po chromatografii na 80 g silikagelu za použití chloroformu jako elučního činidla se získá 1,3 gramů žádaného produktu. NMR spektrum (5, CDC15): 3,40 (3H) singlet, 2,36 (6H) singlet a 2,08 (3H) singlet.

Claims (1)

1. PREDMÉT vynalezu

   Způsob výroby epimerních 4”-aminooleandomycinových derivátů obecného vzorce I, (li OCH₃ ve kterém jednotlivé symboly R a Ri nezávisle na sobě znamenají vždy atom vodíku nebo acetylovou skupinu,

   R3 znamená atom vodíku nebo alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku a

   R' představuje skupinu —CH3, —CH2— —CHz— nebo —CHz—O—, a jejich farmaceuticky upotřebitelných adičních solí s kyselinami, vyznačující se tím, že se sloučenina obecného vzorce II,

   R, Ri a R' mají shora uvedený význam, kondenzuje s amoniakem nebo alkylaminem s 1 až 6 atomy uhlíku a kyselinou octovou a získaný produkt se podrobí redukci, načež se popřípadě ve výsledném produktu, ve kterém R nebo/a Ri znamená acetylovou skupinu, převede tato skupina nebo skupiny na atom nebo atomy vodíku, a získaná sloučenina se popřípadě převede na farmaceuticky upotřebitelnou adíční sůl s kyselinou.