FI68404C - Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt anvaendbara 4"deoxi-4"-aminoerytromycin-a-derivat - Google Patents

Description

68404

Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten 4"-deoksi-4"-aminoerytromysiini-A-johdannaisten valmistamiseksi

Erotettu jakamalla hakemuksesta 780 354.

5 Tämän keksinnön kohteena on menetelmä uusien bakteerienvastaisten aineiden valmistamiseksi. Erityisesti keksinnön kohteena on menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten 4"-deoksi-4" aminoerytromysiini-A-10 johdannaisten valmistamiseksi, joiden kaava on

Ri J N (CiL) HO ? Oi 32 O S * CtCH3>2 R o 9¾ y\rx 15 R2° >//,✓? ^r'° R4 O ltt > 1 X. tai T H0 1 R3° nS, jC .^Y r^>

/ '0CH 0 A NH

3 X OCIL 2 20 111 IV 3 jossa R^, ja R^ tarkoittavat vetyatomia tai 2-3 hiili-atomia sisältävää alkanoyyliryhmää, on 2 - 3 hiili-atomia sisältävä alkanoyyliryhmä, R_ on vetyatomi tai 3 0 R2 ja R^ muodostavat yhdessä ryhmän £ tai R^ 3a R^ 25 muodostavat yhdessä n , sekä niiden farmaseuttisesti

-O

hyväksyttävien happoadditiosuolojen valmistamiseksi.

Erytromysiini on antibiootti, jota muodostuu vil-jeltäessä Streptomyces erythreus -kantaa sopivassa vil-jelyväliaineessa (US-patenttijulkaisu 2 653 899).Erytro-^ mysiiniä muodostuu kahta lajia, A ja B, joita voidaan esittää kaavalla 2

H

68404 v N (CU,) _ O v|4’ 3 2 0 .3^7 ^/N5' . HO „ S0 5 jllHO j R--^O 5" *Ί?Ρ 31τ°·'.^ν t>I4’ lg 2' y^ :i’oh ' 'OCH3 10

Erytromysiini R A “5h

B -H

15 Rakenekaavasta ilmenee, että antibiootti muodos tuu kolmesta pääosasta, jotka ovat sokeriosa kladinoosi, toinen sokeriosa, joka sisältää emäksisen aminosubstitu-entin nimeltä desosamiini, ja 14-jäseninen laktonirengas, josta käytetään nimitystä erytronolidi A tai B tai seu-20 raavassa makrolidirengas. Makrolidirenkaan numerointi on ilman pilkkuja, desosamiini-osassa käytetään yhtä pilkkua ja kladinoosi-osassa kahta pilkkua numeroissa.

Erytromysiinistä on valmistettu lukuisia johdannaisia pyrittäessä modifioimaan sen biologisia tai far-25 makodynaamisia ominaisuuksia.

US-patenttijulkaisussa 3 417 077 on kuvattu eryt-romysiinin ja etyleenikarbonaatin reaktiotuotteen olevan erittäin aktiivinen antibakteerinen aine. US-patentti-julkaisussa 3 884 903 on esitetty käyttökelpoisina anti-30 biootteina 4" -deoksi-4"-oksoerytromysiini A- ja B-johdannaisia .

Erytromysyyliamiini, erytromysiini-A:n 9-amino-johdannainen, on ollut laajan tutkimuksen kohteena /englantilainen patenttijulkaisu 1 100 505, Tetrahedron 35 Letters, 1645 (1967) ja Croatica Chemica Acta, 39, 273 (1967//, ja sen rakenteesta on jonkin verran ristiriita!- 3 68404 siä tietoja^Tetrahydron Letters, 157 (1970) ja englantilainen patenttijulkaisu 1 341 022/. US-patenttijulkaisussa 3 983 103 on ilmoitettu erytromysyyliamiinin sulfonamidijohdannaisten olevan käyttökelpoisia anti-5 bakteerisia aineita. Myös muilla johdannaisilla on ilmoitettu olevan antibakteerista vaikutusta in vitro ja in vivo ^Ryden, et ai., J. Med Chem., 16 1959 (1973) ja Massey, et ai., J. Med. Chem., 17, 105 (1974]_/.

Nyt on keksitty, että tietyt uudet 4"-deoksi-4”-10 aminoerytromysiini-A-johdannaiset ovat erinomaisia anti- bakteerisia aineita. Nämä yhdisteet ovat kaavojen

Ri <; N (Cl 1 ) - λαΥιΙ! R~0 .—L _ Ja T H0 1 'yX AXx 20 X CCH, ό X 1 NH_ m IV «,3 mukaisia ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttäviä hap- poadditiosuoloja, joissa kaavoissa R^ ja R^ on kumpikin 25 vety tai 2-3 hiiliatomia sisältävä alkanoyyli, R^ on 2-3 hiiliatomia sisältävä alkanovety, tai «2 ja 0 0 n m ovat yhdessä -C- ja R^ ja R^ ovat yhdessä -C-.

Näiden kemoterapeuttien edullisen yhdisteryhmän 30 muodostavat kaavan III mukaiset yhdisteet. Erityisen edullisia tämän ryhmän yhdisteitä ovat sellaiset, joissa 0 11 R2 ja R^ muodostavat yhdessä ryhmän -C-.

4 68404

Toisen edullisen antibakteeristen aineiden yhdisteryhmän muodostavat kaavan IV mukaiset yhdisteet. Niistä erityisen edullisia ovat sellaiset, joissa on vety, ja sellaiset, joissa R^ ja R^ muodostavat yhdessä ryhmän 5 O

II

-C-.

Esillä olevan keksinnön toisena kohteena ovat välituotteet, joista voidaan valmistaa kaavan III ja IV mukaisia antibakteerisia aineita. Näillä välituotteilla 10 on kaavat R, Λ nIchJ, 0 ? 0 Ϊ 3 2 . \ NtCH )

Vs _ vS ""'NCi 15 HO ι.,λ0Λ«^^ “Λ Ax ’* "Ά Av

s Xt*, 1 τ' CX

/ 'OCH* 0 S"' 0

3 ' OCIL

20 I II 3 joissa R^ on vety tai 2-3 hiiliatomia sisältävä alka- noyyli, R^ on 2 - 3 hiiliatomia sisältävä alkanoyyli,

O

11 25 Y on N-OH tai N-O-CCH^f R^ on ve^Yf tai R£ ja R^ voivat

O

M

yhdessä olla -C-.

Edullisia näistä välituotteista ovat kaavan I mukaiset yhdisteet, joista erityisen edullisia ovat vä-30 lituotteet, joissa R^ on vety tai asetyyli.

Toisen edullisen välituoteryhmän muodostavat kaavan II mukaiset yhdisteet, joista erityisen edullisia ovat sellaiset, joissa R^ on asetyyli.

Keksinnön kohteena on myös menetelmä kaavan I ja 35 kaavan II mukaisten välituotteiden valmistamiseksi 5 68404 Λ\ N(CH_), = O I 3 2 „ Ac N (CH ) _

vvri %s.VV

5 <»j> Ηο'γ'^'^' "2° Y 0'γ-Ο^'Ο^ ΗαΛ fC^y la V-k ri.o 5 ^ 'V <£.

3 ' OCH- I II 3 10 joissa kaavoissa Ac ja ovat kumpikin 2-3 hiili-atomia sisältävä alkanoyyli, R. on vety tai R ja R- o

II

15 voivat yhdessä olla -C-, jolle menetelmälle on tunnusomaista, että kaavojen, Λ\ N (CH ) = O I .Ac N(CHJ.

20 °yS π "vy \X

no,,,,-) v sf°\X0X

"-K & A, 33 κ,ο-Ι Λ

XX CC K&X

« ° /¾ s >^0« 1' II1 mukaiset yhdisteet saatetaan reagoimaan reaktioinertissä liuottimessa noin -30 - -65°C:ssa 1 moolin kanssa dime-30 tyylisulfoksidia ja 1 moolin kanssa trifluorietikkahap-poanhydridiä, minkä jälkeen reaktioseos saatetaan kosketuksiin vähintään 1 moolin kanssa trietyyliamiinia.

Tämän menetelmän edullisessa suoritusmuodossa kaavan 1' ja II' mukainen yhdiste hapetetaan reaktioiner-35 tissä liuottimessa, joka on metyleenikloridi.

6 68404

Toisessa keksinnön mukaisessa menetelmässä valmistetaan kaavojen Λ\ N(CHJ_ 5 = 0 I 3 2 .Ac N(CH_), γνη ”sA vy H0""f ho' «2° v ' ÖZW. u /¾

T 3 ' CC1L

I II 3 mukaiset yhdisteet, joissa kaavoissa Ac ja R2 on kumpikin 2-3 hiiliatomia sisältävä alkanoyyli, R on 15 3

D O

It vety, tai ja R^ voivat yhdessä olla -C-, jolle menetelmälle on tunnusomaista, että kaavojen Λ\ N (CU ) 20 Ξ O I 3 2 .Ac N(CH-),

°yS ^ ‘ VN \A

J“° λ la ** Y yVmY

P?1 R3° ~7>| |Ci) I· 3 II' ”5 mukaiset yhdisteet saatetaan reagoimaan reaktioinertissä 30 liuottimessa noin 0 - -25°C:ssa 1 moolin kanssa N-kloori-sukkinimidiä ja 1 moolin kanssa dimetyylisulfidia, minkä jälkeen reaktioseos saatetaan kosketuksiin vähintään 1 moolin kanssa trietyyliamiinia.

7 68404

Keksinnön mukaisessa menetelmässä reaktioinert-tinä liuottimena käytetään edullisesti tolueenia tai bentseeniä.

Koko keksinnössä sokerin ja makrolidirenkaan 5 substituenttien stereokemiallinen nimitys on sama kuin erytromysiini-A:ssa, poikkeuksena on ainoastaan mahdollinen 4"-aseman epimerisointi, jolloin käytetään luonnossa esiintyvän erytromysiini A:n nimityksiä.

Keksinnön mukaisia menetelmiä 4"-deoksi-4"-amino-10 erytromysiini-A:sta johdettujen antibakteeristen aineiden valmistamiseksi voidaan kuvata seuraavilla reaktio-kaavioilla, joissa lähtöaineena on 2'-alkanoyylierytro-mysiini-A tai sen johdannainen: 15

Ac Ac = \> Γ"32 Γ No Γ"3’2 °<yY.' n ογΥ ' n

20 »0„„> _v /‘C.O'SjA

| HO I ' 110 1 ho__I X L· O] c ΓΏ-,,/γ

S ϊχ^ΟΗ Y

^ 'OCH X 'OCH

25 1 ’ I (Y =0) ja 8 68404 Η°^Α ^X"3’2 HO γ ÄC\ rM3’2 "2°y r2°

r.o —L A —> D F I

5 rl ίγγ 3 Λ γ>Υ

<> >roH It'' lX

X OCH 0 YT0

, 3 x OCH

II’ II 3 10

Menetelmien ensimmäisenä osana yhdisteiden 1’ ja II’ hapetus(Y = O) saattamalla yhdiste I* ja II1 reagoimaan trifluorietikkahappoandhydridin ja dimetyylisulfoksidin kanssa ja lisäämällä sitten tertiääristä amiinia, kuten trietyyliamiinia.

Käytännössä reaktio suoritetaan viemällä trifluori-etikkahappoanhydridi ja dimetyylisulfoksidi reaktioinert-tiin liuottimeen noin -65°C:ssa. Noin 10 - 15 minuutin kuluttua alkoholia 1' ja II' lisätään sellaisella nopeu-della, että lämpötila pysyy noin -65°C:ssa eikä kohoa yli -30°C. Lämpötiloissa yli -30°C trifluorietikkahappo-anhydridi-dimetyylisulfoksidikompleksi ei ole pysyvä. Lämpötila pidetään -30 - 65°C:ssa noin 15 minuuttia ja alennetaan sitten -70°C:seen. Tertiäärinen amiini lisä-tään kerralla, ja reaktioseoksen annetaan lämmetä 10 - 15 minuutin ajan. Sitten reaktioseosta käsitellään vedellä, ja reaktiotuote eristetään.

Reagoivia aineita, trifluorietikkahappoanhydridiä ja dimetyylisulfoksidia tarvitaan kumpaakin 1 mooli yhtä 30 lähtöainealkoholimoolia kohti. Käytännössä on todettu, että reaktion nopeuttamiseksi on edullista käyttää an-hydridiä ja dimetyylisulfoksidia 1-5 -kertainen ylimäärä.

9 68404

Tertiäärisen amiinin määrän tulisi vastata käytetyn trifluorietikkahappoanhydridin määrää.

Tässä mentelmässä käytetyn reaktioinertin liuottimen tulisi olla sellainen, joka liuottaa riittävän 5 hyvin reagoivat aineet eikä reagoi huomattavammin reagoivien aineiden eikä reaktiotuotteiden kanssa. Koska tämä hapetus suoritetaan -30 - -65°C:ssa, on edullista, että edellä mainittujen ominaisuuksien lisäksi liuottimen jähmettymispiste on reaktiolämpötilan alapuolella.

10 Liuottimia tai liuotinseoksia, jotka täyttävät nämä vaatimukset, ovat tolueeni, metyleenikloridi, etyyliasetaatti, kloroformi ja tetrahydrofuraani. Sellaisia liuottimia, jotka muuten ovat edellä mainittujen vaatimusten mukaisia, mutta joiden jähmettymispiste on reaktio-15 lämpötilan yläpuolella, voidaan käyttää yhdessä edullisten liuottimien kanssa vähäisempinä määrinä. Erityisen edullinen liuotin menetelmässä käytettäväksi on metyleenikloridi .

Edullisia tällä menetelmällä valmistettuja yhdis-20 teitä ovat 2'-asetyyli-4"-oksoerytromysiini-A, 11,2'-deoksi-4"-oksoerytromysiini-A-6,9-hemiketaali ja 2'-asetyyli-4"-deoksi-4"-oksoerytromysiini-A-6,9-hemiketaa-ni-11,12-karbonaattiesteri.

Reaktioaika ei ole kriittinen ja se on riippuvai-25 nen reaktiolämpötilasta ja lähtöaineiden reaktiokyvystä. Lämpötiloissa noin -30 - -65°C reaktio on päättynyt 15 - 30 minuutissa.

Edullisimmassa reagenssien lisäysjärjestyksessä trifluorietikkahappoanhydridi yhdistetään ensin dimetyy-30 lisulfoksidin kanssa, ja sen jälkeen lisätään tarvittava alkoholi-yhdiste. Tässä ehdotettu lämpötilan pitäminen alle -30°C noudattaa myös Omura1 n et ai., J. Org. Chem., 41, 957 (1976) kantaa.

Toista keksinnön mukaista menetelmää välituottei-35 den valmistamiseksi, joista saadaan hyödyllisiä anti- bakteerisia aineita, voidaan esittää seuraavilla reaktio-kaavoilla : 10 68404 ? \ TVa ? \ «·<α.3»2 . -OCw

no—L ho 1 JL

V& V& , ^"3 OCH3 10 ' 1 (γ=0) ja 15 H° XAC<0 HO - N<CH .

20 poimii NcS VS

IU> j I _> 2 "Y γοΥ,Λ />1 Γο,,/0^/ R3° —jL Λ 25 * Λ'™ Κλ Λ 25 ' OCH, 0 >C0 II' 3 OCH, 11 II 3 Tämä toinen menetelmä käsittää hapetusreaktion, jossa yhdisteen 1' tai II', joissa Ac ja R_ ovat 2-3 30 1 hiiliatomia sisältäviä alkanoyyliryhmiä, on vety, tai

O

n R2 ja R^ ovat yhdessä ryhmä -C-, 4"-hydroksisubstituentti hapetetaan, jolloin saadaan 4"-deoksi-4"-oksoerytromysiini -A-yhdiste.

35 11 68404

Menetelmässä käytetään hapetusaineena N-kloori-sukkinimidiä ja dimetyylisulfidia. Käytännössä nämä kaksi reagenssia ensin yhdistetään reaktioinertissä liuottimes-sa noin 0°C:ssa. 10 - 20 minuutin kuluttua lämpötila las-5 ketään 0 - 25°C:seen, sitten lisätään alkoholi-yhdiste 1' tai II', ja lämpötila pidetään edelleen samana. 2-4 tunnin reaktioajan jälkeen reaktioseokseen lisätään tertiääristä amiinia, kuten trietyyliamiinia, reaktioseos hydrolysoidaan, ja siitä otetaan talteen haluttu tuote.

10 Reagensseja tarvitaan yksi mooli N-kloorisukkini- midiä ja 1 mooli dimetyylisulfidia yhtä alkoholi-yhdisteen moolia kohti. Kokeissa on todettu reaktion nopeuttamisen kannalta edulliseksi käyttää sukkinimidi- ja sulfidi-rea-gensseja 1-20 -kertainen ylimäärä. Käytetyn tertiäärisen 15 amiinin määrän tulisi vastata käytetyn sukkinimidin mooli-määrää .

Tässä keksinnön mukaisessa menetelmässä käytetyn reaktioinertin liuottimen tulisi olla sellainen, joka liuottaa riittävän hyvin reagoivat aineet eikä reagoi 20 huomattavammin reagoivien aineiden eikä reaktiotuotteiden kanssa. Koska reaktio suoritetaan noin 0 - -25°C;ssa, on edullista, että edellä mainittujen ominaisuuksien lisäksi liuottimen jähmettymispiste on reaktiolämpötilan alapuolella. Nämä vaatimukset täyttäviä liuottimia tai liuotinseok-25 siä ovat tolueeni, etyyliasetaatti, kloroformi, metyleeni-kloridi ja tetrahydrofuraani. Sellaisia liuottimia, jotka muuten ovat edellä mainittujen vaatimusten mukaisia, mutta joiden jähmettymispiste on reaktiolämpötilan yläpuolella, voidaan myös vähäisinä määrinä käyttää yhdessä yhden tai 30 useamman edullisen liuottimen kanssa. Erityisen edullinen liuotin tässä menetelmässä käytettäväksi on tolueeni-bentseeni.

Tällä menetelmällä valmistettuja edullisia yhdisteitä ovat 11,2'—diasetyyli—4 w—deoksi—4"—oksoerytromysiini 35 -A-6,9-hemiketaali, 2'-asetyyli-4"-deoksi-4"-oksoerytro- mysiini-A-6,9-hemiketaali-ll,12-karbonaattiesteri ja 2'- 12 68404 asetyyli-4"-deoksi-4’'-oksoerytromysiini A.

Reaktioaika ei ole kriittinen ja se on riippuvainen reagenssien pitoisuuksista, reaktiolämpötilasta ja reagenssien reaktiokyvyistä. Reaktiolämpötiloissa 5 0 - -25°C reaktioaika on noin 2-4 tuntia.

Kuten edellä mainittiin, reagenssien lisäys suoritetaan edullisesti lisäämällä alkoholi-yhdiste 1' tai II' etukäteen sekoitettuun sukkinimidi-johdannaisen ja dimetyylisulfidin seokseen.

10 Molempia tässä kuvattuja menetelmiä voidaan pitää yllättävinä, koska niissä hapetus tapahtuu selektiivisesti ainoastaan 4"-hydroksisubstituentin hapettuessa, muiden molekyylissä olevien sekundääristen alkoholien jäädessä muuttumattomiksi.

15 4"-deoksi-4"-okso-välituotteita, joilla on kaava %^*1χΛα,3)2

20 X

II °°Η3 25 jossa R^ ja R£ ovat kumpikin 2-3 hiiliatomia sisältävä alkanoyyli ja R^ on vety, valmistetaan käsittelemällä kaavan R1 N(CIL)., 3° O JL \X 3 2

‘“.Χ XtXX

Γ H0 1 no_L Js.

p-.,x°Y

'v 'X

' 'OCH I J

68404 13 mukaista yhdistettä, jossa Y on O, on 2-3 hiiliatomia sisältävä alkanoyyli, alkaanihappoanhydridillä (R2O) ia pyridiinillä.

Käytännössä ketoni I saatetaan kosketuksiin yli-5 määrin käytetyn anhydridin kanssa pyridiini-liuottimessa. Reaktiossa käytetään edullisesti jopa 4-kertaista ylimäärää anhydridiä.

Reaktio suoritetaan edullisesti huoneen lämpötilassa. Tällöin reaktioaika on noin 12-24 tuntia.

10 Alkanoyyliryhmän poistaminen välituoteketonin I (Y = 0) tai II 2'-asemasta suoritetaan solvolyysireak-tiossa, jossa 2'-alkanoyyli-4"-deoksi-4"-oksoertyromy-siini-A-johdannaista sekoitetaan metanoliylimäärän kanssa yön yli huoneen lämpötilassa. Poistamalla metanoli 15 ja tarpeen mukaan puhdistamalla jäännöksenä saatu tuote, saadaan kaavojen I (Y = 0) ja II mukaiset yhdisteet, joissa R^ on vety.

Kuten mainittiin, kaavojen I (Y = O) ja II mukaiset yhdisteet ovat välituotteita, joista saadaan esillä 20 olevan keksinnön mukaisia kaavojen III ja IV mukaisia 4"-deoksi-4"-aminoerytromysiini-A-antibakteerisia aineita. Tämän yhdisteryhmän edullisia välituotteita ovat 2'-asetyyli-4"-deoksi-4"-oksoerytromysiini-A-6,9-hemiketaali- 11,12-karbonaattiesteri ja 4"-deoksi-4"-oksoerytromysiini-25 A-6,9-hemiketaali-ll,12-karbonaattiesteri.

Kaavojen III ja IV mukaisten antibakteeristen aineiden valmistukseen ketoneista I (Y = O) ja II voidaan käyttää useita eri synteesiteitä.

Kaavan III mukaisten 4"-deoksi-4"-aminoerytromy-30 siini-A-yhdisteiden valmistus suoritetaan kondensoimal- la kaavan II mukainen ketoni alemman alkaanihapon ammo-niumsuolan kanssa ja sen jälkeen pelkistämällä in situ syntynyt imiini. Ilmaistu "alempi alkaanihappo" tarkoittaa tässä 2-4 hiiliatomia sisältävää happoa.

35 Käytännössä ketonin II liuosta alemmassa alkano- lissa, kuten metanolissa tai isopropanolissa, käsitellään 14 68404 alemman alkaanihapon, kuten etikkahapon, ammoniumsuoIällä, ja jäähdytettyä reaktioliuosta käsitellään pelkistys-aineella, kuten natriumsyaaniboorihydridillä. Reaktio suoritetaan huoneen lämpötilassa usemmman tunnin aikana, 5 minkä jälkeen reaktioseos hydrolysoidaan ja tuote eristetään.

Vaikka yhtä ketonimoolia kohti tarvitaan yksi mooli ammoniumalkanoaattia, on edullista käyttää tätä ylimäärin, jopa 10-kertainen ylimäärä, jotta imiinin muo-10 dostuminen tapahtuisi täydellisesti ja nopeasti. Tällaisella ylimäärällä ei näytä olevan paljoakaan haitallista vaikutusta tuotteen laatuun.

Ketonimoolia kohti käytettävä pelkistävän aineen määrä on edullisesti noin 2 moolia natriumsyaaniboori-15 hydridiä yhtä ketonimoolia kohti.

Reaktioaika vaihtelee riippuen reagenssien pitoisuuksista, reaktiokyvystä ja reaktiolämpötilasta. Edullisessa reaktiolämpötilassa, huoneen lämpötilassa, reaktio on olennaisesti päättynyt 2-3 tunnin kuluttua.

20 Kun alempi alkanoli-liuotin on metanoli, tapah tuu, kuten edellä mainittiin, 2'-asemassa olevan alkano-yyliryhmän solvolyysi. Tämän ryhmän poistumisen ehkäisemiseksi käytetään reaktiossa liuottimena edullisesti isopropanolia .

25 Edullinen ammoniumalkanoaatti tässä reaktiossa on ammoniumasetaatti.

Halutun lopputuotteen 4"-deoksi-4"-aminoerytro-mysiini-A-johdannaisen eristämiseksi ei-emäksisistä sivutuotteista tai lähtöaineista käytetään hyväksi lopputuot-30 teen emäksistä luonnetta. Tällöin tuotteen vesiliuos uutetaan asteittain kohotetussa pH:ssa, jolloin neutraalit tai ei-emäksiset aineet uuttuvat alemmilla pH-alu-eilla ja reaktiotuote pH:ssa yli 5. Uuttoliuottimet, etyyliasetaatti tai dietyylieetteri, uutetaan suolaliuok- 35 sella ja vedellä, kuivataan natriumsulfaatilla, ja tuote 15 68404 saadaan poistamalla liuotin. Mahdollinen lisäpuhdistus suoritetaan tunnetuilla menetelmillä pylväskromatogra-fisesti piihappogeelillä.

Kuten edellä jo mainittiin, 2'-alkanoyyliryhmän 5 solvolyysi 2"-alkanoyyli-4"-deoksi-4"-aminoerytromysii- ni-A-johdannaisesta voidaan suorittaa antamalla yhdisteen metanoliliuoksen seistä huoneen lämpötilassa yön yli.

Sellaisen kaavan II mukaisen ketonin pelkistävässä aminoinnissa, jossa ja muodostavat yhdessä

10 O

11 ryhmän -C-, ja R^ on 2-3 hiiliatomia sisältävä alkanoyy li tai vety, muodostuu sekä kaavan III että IV mukaisia amiineja. Tätä voidaan esittää seuraavalla reaktio-kaaviolla : 15 - R, H (CH3>2 »»Jv VA-i „ Χ°Χ.ΛΑ o.,,,/ ( ^ NH.OCOCH, I 1 4 3 N, 20 CK* NaCNBH3 II ^°ah o 25 (R2 + R3 = -C- ) \ ΐ,α,3>2 , N,CH )

- r° 1X vN VX

30 0=<oi X „ o-P......f H</T

• f^CL, VO.

OCH3 /"ocni

3S III IV

O O

{R2 + R3 = ~C_) (R3 + R4 = 68404 16

Saadut amiinit III ja IV voidaan sopivasti erottaa selektiivisellä kiteytyksellä dietyylieetteristä. Kiteytettäessä III:n ja IV: seos asetoni-vesiseoksesta, muodostaa kaavan IV mukainen amiini hemiketaalin, jol-5 join yhdiste III voidaan eristää ainoana tuotteena.

Kaavan IV mukaisen amiiniyhdisteen suora syntetisoiminen suoritetaan jo edellä käsitellyllä tavalla kondensoimalla ketoni I ammoniumalkanoaatin kanssa ja pelkistämällä in situ saatu imiini natriumsyaaniboori-10 hydridillä.

Kaavan IV mukaisia yhdisteitä, joissa ja R^ merkitsevät edellä määriteltyä, valmistetaan myös pelkistämällä edellä mainittu imiini vedyn ja sopivan hydrauskatalysaattorin avulla. Menetelmä suoritetaan 15 käsittelemällä sopivaa ketonia I alemmassa alkanolissa, kuten metanolissa, alemman alkaanihapon ammoniumsuolal-la, kuten ammoniumasetaatilla, lisäämällä hydrauskata-lysaattoria ja ravistelemalla reaktioseosta vetykehässä, kunnes reaktio on olennaisesti päättynyt.

20 Yhtä ketonimoolia kohti tarvitaan 1 moolia ammo- niumalkanoaattia, kuitenkin edullisesti käytetään ylimäärää, aina 10-kertaiseen ylimäärään asti, jotta imii-nin muodostus tapahtuisi täydellisesti ja nopeasti. Tällaisella ylimäärällä ei näytä olevan suurtakaan hai-25 tallista vaikutusta tuotteen laatuun.

Hydrauskatalysaattorina voidaan käyttää monia eri katalysaattoreita, edullisia ovat kuitenkin Raney-nik-keli ja 5 - 10-%:inen palladiumhiili. Niitä voidaan käyttää vaihtelevina määrinä riippuen siitä, miten no-30 peasti reaktion halutaan tapahtuvan. Edullisesti käyte tään 10 - 200 paino-% yhdisteen I määrästä.

Vetykaasun paine hydrausastiassa vaikuttaa myös reaktionopeuteen. Reaktioajan lyhentämiseksi on edullista käyttää alkupainetta 0,34 MPa. Sopivin lämpötila pel-35 kistyksen suorittamisessa on huoneen lämpötila.

17 68404

Reaktioaika riippuu useista eri tekijöistä, kuten lämpötilasta, paineesta, reagenssien pitoisuuksista ja reaktiokyvystä. Edellä mainituissa edullisissa reaktio-olosuhteissa reaktioaika on 12 - 24 tuntia.

5 Tuote eristetään suodattamalla katalysaattori ja haihduttamalla liuotin tyhjössä. Haihdutusjäännöstä käsitellään sitten vedellä, ja tuote eristetään ei-emäk-sisistä aineista uuttamalla emäksinen tuote vedestä vaihtelemilla pH-alueilla, kuten edellä kuvattiin.

10 Kuten edellä mainittiin, käytettäessä metanolia alempana alkanoliliuottimena, tapahtuu 2'-asemassa olevan alkanoyyliryhmän solvolyysi. Tämän ryhmän poistumisen ehkäisemiseksi on edullista käyttää liuottimena reaktiossa isopropanolia.

15 Toisessa synteesitiessä kaavan IV mukaisten 4"- deoksi-4"-aminoerytromysiini-A-ant.ibakteeristen aineiden valmistamiseksi suoritetaan ensin ketonin I (Y = 0) reaktio oksiimiksi tai oksiimijohdannaiseksi, so.

0

II

20 Y = N-OH, tai N-O-CCH^, ja sen jälkeen oksiimi tai oksiimi johdannainen pelkistetään.

Ketonin I (Y = O) oksiimi valmistetaan saattamalla ketoni reagoimaan huoneen lämpötilassa hydroksyy-liamiinihydrokloridin ja bariumsulfaatin kanssa meta-25 nolissa tai isopropanolissa. Käytännössä hydroksyyli- amiinia käytetään ylimäärin, jopa 3-kertainen ylimäärä, jolloin haluttua välituotetta saadaan hyvällä saannolla. Suorittamalla reaktio huoneen lämpötilassa ja käyttäen hydroksyyliamiinia ylimäärin, saadaan haluttua oksiimi-30 johdannaista 1-3 tunnin reaktioajassa. Bariumkarbo naattia käytetään käytetyn hydroksyyliamiinihydrokloridi-moolimäärän kaksinkertainen moolimäärä. Tuote eristetään lisäämällä reaktioseokseen vettä, säätämällä pH 9,5:een ja uuttamalla veden kanssa sekoittamattomalla 35 liuottimena, kuten etyyliasetaatilla.

68404 18

Toisena vaihtoehtona on, että reaktioseos suodatetaan, ja suodos haihdutetaan kuiviin tyhjössä. Jäännös jaetaan sitten veden, jonka pH on 9,0 - 9,5, ja veden kanssa sekoittamattoman liuottimen kesken.

5 Kaavan I mukaisen O-asetyylioksiimi-yhdisteen

O

II

(Y = N-O-CCH^) valmistamiseksi vastaava oksiimi asety-loidaan. Käytännössä tämä suoritetaan saattamalla yksi oksiimi-mooli reagoimaan yhden moolin kanssa etikkahap-10 poanhydridiä yhden pyridiini- tai trietyyli-amiini-moo-lin läsnäollessa. Käyttämällä anhydridiä ja pyridiiniä ylimäärin, edullisesti 30 - 40 %:n ylimäärä, reaktio tapahtuu täydellisemmin. Sopivimmin reaktio suoritetaan aproottisessa liuottimessa, kuten bentseenissä tai etyy-15 liasetaatissa, huoneen lämpötilassa yön yli. Reaktion päätyttyä seokseen lisätään vettä, pH säädetään 9,0:aan ja tuote eristetään liuotinkerroksesta.

Edullisia oksiimeja ja oksiimijohdannaisia, jotka ovat sopivia välituotteita 4"-deoksi-4"-aminoerytro-20 mysiini-A-antibakteeristen aineiden valmistuksessa, ovat 21-asetyyli-4"-oksoerytromysiini-A-oksiimi, 2'-asetyyli-4"-deoksi -4"-oksoerytromysiini-A-O-asetyylioksiimi, 4"-deoksi-4"-oksoerytromysiini-A-oksiimi ja 4"-deoksi-4" oksoerytromysiini-A-O-asetyylioksiimi. 0

II

25 Ketonijohdannaisten (Y = N-OH tai N-O-CCH^) pelkistys suoritetaan katalyyttisesti hydraamalla ravistelemalla oksiimin tai sen johdannaisen liuosta alemmassa alkanolissa, kuten isopropanolissa, Raney-nikkelika-talysaattorin läsnäollessa vetykehässä alkupaineessa 30 6,9 MPa huoneen lämpötilassa yön yli. Sen jälkeen kata lysaattori suodatetaan, liuotin poistetaan suodoksesta, jolloin saadaan haluttu kaavan IV mukainen 4"-deoksi-4"-amino-antibakteerinen yhdiste. Jos tässä pelkistyksessä käytetään liuottimena metanolia, voi siinä tapahtua 35 2'-alkanoyyliryhmän solvolyysi. Tämän sivureaktion vält tämiseksi liuottimena käytetään isopropanolia.

68404

Edullusia kaavojen III ja IV mukaisia 4"-deoksi-4"-aminoerytromysiini-A-johdannaisia ovat 4"-deoksi-4"-aminoerytromysiini-A-6,9-hemiketaali-ll,12-karbonaatti-esterin, 4"-deoksi-4"-aminoerytromysiini-A:n ja 4"-deoksi-5 4"-aminoerytromysiini-A-ll,12-karbonaattiesterin molemmat epimeerit.

Käytettäessä hyväksi sellaisten esillä olevan keksinnön mukaisten kaavojen III ja IV mukaisten yhdisteiden kemoterapeuttista aktiivisuutta, jotka muodostavat 10 suoloja, on tietenkin edullista käyttää farmaseuttisesti hyväksyttäviä suoloja. Vaikka jotkut tietyt suolat veteen liukenemattomuuden, korkean myrkyllisyyden tai kiteisen muodon puuttumisen vuoksi saattavat olla sopimattomia tai vähemmän sopivia tällaiseen farmaseuttiseen käyttöön, 15 niin veteen liukenemattomat tai myrkylliset suolat voidaan muuttaa vastaaviksi farmaseuttisesti hyväksyttäviksi emäksiksi hajottamalla ne, tai vaihtoehtoisesti ne voidaan muuttaa halutuiksi, farmaseuttisesti hyväksyttäsiksi suoloiksi .

20 Happoja, joiden anionit ovat farmaseuttisesti hyväksyttäviä, ovat esimerkiksi kloorivety-, bromivety-, jodivety-, typpi-, rikkihappo, rikkihapoke, fosfori-, etikka-, maito-, sitruuna-, viini-, meripihka-, maleiini-, glykoni- ja aspartiinihappo.

25 Kuten edellä mainittiin, esillä olevan keksinnön mukaisten antibakteeristen aineiden lähtöaineiden stereo-kemia on luonnon materiaaleissa esiintyvä. Hapetettaessa 4"-hydroksyyliryhmä ketoniksi ja muuttamalla sen jälkeen tämä ketoni 4"-amiiniksi, on mahdollista muuttaa 4"-substi-30 tuentin stereokemia luonnon tuotteesta poikkeavaksi. Muutettaessa yhdiste I (Y = O) tai II amiiniksi jollakin edellä kuvatulla tavalla on siten mahdollista, että syntyy kaksi amiini-epimeeriä. Kokeissa on havaittu, että lopputuotteessa on läsnä valitusta synteesimenetelmästä 35 riippuen eri suhteissa molempia amiini-epimeerejä. Jos eristetty tuote sisältää pääasiassa yhtä epimeeriä, voi- 68404 20 daan tämä epimeeri puhdistaa vakiosulamispisteeseen toistuvilla kiteytyksillä sopivasti liuottimesta. Toinen, alkuperäisessä eristetyssä tuotteessa pienempänä määränä esiintyvä epimeeri on pääasiallinen emäliuoksessa oleva 5 epimeeri. Se voidaan saada talteen alalla tunnetuin menetelmin, esimerkiksi haihduttamalla emäliuos ja suorittamalla jäännöksen toistuvia uudelleenkiteytyksiä, kunnes sulamispiste on vakio.

Vaikka näiden epimeeriseosten erottaminen alalla 10 tunnetuin menetelmin voidaankin suorittaa, niin käytännön syistä näitä seoksia käytetään edullisesti sellaisina kuin ne on eristetty. Usein on kuitenkin edullista puhdistaa epimeeriseos ainakin kerran kiteyttämällä sopivasta liuottimesta, suorittamalla puhdistus pylväs- tai 15 suurpainenestekromatografiällä, liuotinjaolla tai tritu- roimalla sopivassa liuottimessa. Tällaisella puhdistuksella, vaikkakaan sillä ei välttämättä saada epimeerejä erotettua, saadaan poistettua ylimääräiset aineet, kuten lähtöaineet ja ei-toivotut sivutuotteet.

20 Epimeerien absoluuttista stereokemiallista mää rittelyä ei suoritettu. Tietyn yhdisteen molemmilla epi-meereillä on kuitenkin samantyyppinen aktiivisuus, esim. antibakteerinen aktiivisuus.

Uusilla 4"-deoksi-4"-aminoerytromysiini-A-johdan-25 naisilla on in vitro aktiivisuutta monia eri fram-posi-tiivisia mikro-organismeja vastaan, joista esimerkkeinä mainittakoon Staphylococcus aureus ja Streptococcus pyogenes, ja tiettyjä gram-megatiivisia mikro-organismeja vastaan, kuten pallon- tai ellipsinmuotoisia (kokit) 30 mikro-organismeja vastaan. Niiden aktiivisuus on osoitettu in vitro -kokeissa aivo-sydän-infuusioväliaineessa eri mikro-organismeja vastaan käyttäen tavallista kaksinkertaisen sarjalaimennuksen tekniikkaa. In vitro -aktiivisuuden vuoksi ne ovat käyttökelpoisia paikalliseen käyt-35 töön salvoina, voiteina ym., sterilointitarkoituksiin, esim. potilashuoneen välineiden sterilointiin, sekä teol- 68404 21 lisiksi antimikrobeiksi, esim. veden käsittelyyn, liman-estoon, maalin ja puun säilöntään.

In vitro -käytössä, esim. paikallisesti käytettynä, on usein sopivinta sisällyttää valittu yhdiste far-5 maseuttisesti hyväksyttävään kantajaan, kuten kasvi-tai mineraaliöljyyn tai voidepohjaan. Ne voidaan myös liuottaa tai dispergoida nestemäisiin kantajiin tai liuottimiin, kuten veteen, alkoholiin, glykoleihin tai näiden seoksiin tai muihin farmaseuttisesti inertteihin vä-10 naineisiin, so. väliaineisiin, joilla ei ole haitallista vaikutusta aktiiviaineeseen. Tällaisissa valmisteissa käytetään aktiivista aineosaa yleensä noin 0,01 - noin 10 paino-% koko koostumuksen painosta.

Useat tämän keksinnön yhdisteistä ja niiden hap-15 poadditiosuoloista ovat lisäksi aktiivisia fram-positii-visia ja tiettyjä gram-negatiivisia mikro-organismeja, esim. Pasteurella multocida'a ja Neisseria sicca'a vastaan in vivo oraalisti ja/tai parenteraalisti annettuina eläimille ja ihmisille. Niiden in vivo -aktiivisuus hai-20 tallisia mikro-organismeja vastaan on rajoitettu, ja se voidaan määrittää tavallisella menetelmällä tartuttamalla olennaisesti samanpainoisia hiiriä koeorganismilla ja käsittelemällä niitä sen jälkeen oraalisti tai subtu-taanista koeyhdisteellä. Koe suoritetaan siten, että 25 esim. 10 hiirtä tartutetaan intraperitoneaalisti sopivasti laimennetulla viljelmällä, joka sisältää noin 1 - 10- kertaisen LD10Q-annoksen (LD1Q0 on alhaisin mik-ro-organismikonsentraatio, joka aiheuttaa 100-%risen kuoleman) . Saimalla suoritetaan kontrollikokeita, joissa 30 hiirille annetaan alhaisempia väkevyyksiä tartunta-ainetta koeorganismin elinvoiman mahdollisten vaihtelujen toteamiseksi. Koeyhdistettä annetaan 0,5 tuntia tartuttamisen jälkeen, ja anto toistetaan 24 ja 48 tunnin kuluttua. Eloon jääneitä hiiriä tarkkaillaan neljä vrk 35 viimeisen käsittelyn jälkeen, ja eloonjääneiden lukumäärä merkitään muistiin.

68404 22

In vivo käytettyinä näitä uusia yhdisteitä voidaan annostella oraalisti tai parenteraalisti, esim. ihonalaisena tai lihaksensisäisenä injektiona, annoksina noin 1 - noin 200 mg/kg kehon painoa vrk:ssa. Edulli-5 nen annostus on noin 5 - noin 100 mg/kg kehon painoa vrkrssa ja edullisimmin noin 5 - noin 50 mg/kg.

Parenteraalissa lääkeannossa ruiskeena voidaan väliaineena käyttää joko vesipitoista väliainetta, kuten vettä, isotonista suolaliuosta, isotonista dekstroosi-10 liuosta, Ringer'in liuosta, tai vedetöntä väliainetta, kuten kasviöljyä (puuvillasiemenöljy, maapähkinäöljy, maissiöljy, seesamöljy), dimetyylisulfoksidia tai muita vedettömiä väliaineita, jotka eivät vaikuta valmisteen terapeuttiseen tehoon eivätkä ole myrkyllisiä niinä mää-15 rinä kuin niitä käytetään (glyseroli, propyleeniglykoli, sorbitoli). Lisäksi voidaan edullisesti valmistaa koostumuksia, joista välittömästi ennen käyttöä valmistetaan liuos. Tällaiset koostumukset voivat sisältää haluttujen farmakologisten ominaisuuksien saamiseksi nestemäisiä 20 laimennusaineita, esim. propyleeniglykolia, dietyyli- karbonaattia, glyserolia, sorbitolia, jne., puskurointi-aineita, hyaluronidaasia, paikallispuudutusaineita ja epäorgaanisia suoloja. Nämä yhdisteet voidaan myös yhdistää erilaisten farmaseuttisesti hyväksyttävien inerttien 25 kantajien kanssa, kuten kiinteiden laimennusaineiden, vesipitoisten väliaineiden, myrkyttömien orgaanisten liuottimien kanssa, ja muodostaa kapseleiksi, tableteiksi, lotsengeiksi, trokeiksi, kuivaseoksiksi, suspensioiksi, liuoksiksi, eliksiireiksi ja parenteraaliliuoksik-30 si ja -suspensioiksi. Yhdisteitä käytetään yleensä eri annosmuotoina pitoisuuksina noin 0,5 - noin 90 paino-% koko koostumuksen painosta.

68404 23

Vertailukokeet R, ?(“3>2

0 V.X

5 Y '"''I I I Keksinnön J\OS0'' mukaisesti R4 HO | valmistettu 1 yhdiste i!f· VS ] ' lx ^ 10 o OCH3 MIC, yug/ml 15 R = -*NH~ R = NH? R = ^-'NH2 R = " ‘NH?

R = H R]=H R, =€H3CC> R1= H

R~= H r3= H Rl + R4= R3 + R4 =

Mikro-organismi R^= H R^= H -CO- -CO- 1) Staph, aur. 01A005 0.39 0.39 0.78 <0.10 2) " " 01A052 0.78 0.78 0.78 <0.10 3) " " 01A109 R >200 >200 >200 200 20 4) " " 01A110 R >200 >200 >200 200 5) " " 01A111 R - 0.39 <0.10 6) " " 01A087 RR >200 >200 >200 >200 7) " " 01A400 R 3.12 6.25 25 6.25 8) Strp. fae. 02A006 0.39 1.56 0.78 £0.10 9) Strp. pyog. 02C203 <0.10 <0.10 0.20 <0.10 10) " " 02C020 R - 200 25 11) Myco. smeg. 05A001 100 200 >200 50 12) B. sub. 06A001 1.56 0.39 0.78 <0.10 13) E. coli 51A229 50 25 25 1.56 14) " " 51A266 50 50 25 1.56 15) " H 5IA125 R 50 50 25 3.12 16) Ps. aerug. 52A104 200 >200 >200 100 17) Klebs. pn. 53A009 200 100 >200 6.25 18) " " 53A031 R >200 200 >200 6.25 iU 19) Erot. mira. 57C064 >200 >200 >200 100 20) Prot. norg. 57G001 >200 >200 >200 50 21) Salm. chol-su. 58B242 50 200 50 3.12 22) Sal. typhm. 58D009 50 100 100 3.12 23) " " 58D013-C 50 200 50 6.25 24) Past, multo. 59A001 1.56 1.56 0.39 <0.10 25) Serr. mar. 63A017 200 >200 >200 25 35 26) Ent. aero. 67A040 100 >200 100 6.25 27) Ent. eloa. 67B003 200 >200 100 12.5 28) Neiss. sic. 66C000 0.39 6.25 <0.10 <0.10 68404 24 ^(CH3>2

s 0r\x:O

RO,.„> 1 Vertailuyhdiste

!Α^Λ [. L

10 (! ÖSO CH-.

6 ' bcH3 1 J

15 Mikro-organismi R. = H

_ R1 = H

1) Staph, aur. 01A005 1.56 2) " " 01A052 1.56 3) " " 01A109 R >50 4) " " 01AL10 R >50 5) " " 01A111 R 0.39 2 0 6) " " 01A087 RR >50 7) " " 01A400 R 50 8) Step. fae. 02A006 0.39 9) Strp. pyog. 02C203 0.20 10) " " 02C020 R >50 11) Myco. smeg. 05A001 >50 12) B. sub. 06A001 0.20 13) E. coli 51A229 >50

Zb 14) " " 51A266 >50 15) " " 51A125 R >50 16) Ps. aerug. 52A104 >50 17) Klebs. pn. 53A009 >50 18) " " 53A031 R >50 19) Prot. mira. 57C064 20) Prot. morg. 57G001 >50 30 21) Salm. chol-su. 58B242 22) Sal. typhm. 58D009 >50

23) " " 58D013-C

24) Past, multo. 59A001 12.5 25) Serr. mar. 63A017 >50 • 26) Ent. aero. 67A040 >50 27) Ent. eloa. 67B003 >50 35 28) Neiss. sic. 66C000 12.5 25 HO Λ qJ!“3’2 68404 °''V Keksinnön 5 R_o—..L· .k ΰ. mukaisesti 3 >. γ"ο"'Γ I valmistettu ίο A k L yhdiste n " OCH-, , , 0 3 MIC, yug/ml 10 R =* NH- R = R = ^NH R =~NH_ R, = H R, = H A Ri = H 2 R, + R = R_ + R = RT + R_= Rl= CH-00 Mikro-organismi_-CO-_-op-_z-co-J ις= h j 1) Staph, aur. 01A005 £0.10 £0.10 0.39 3.12 2) " " 01A052 £0.10 £0.10 0.39 12.5 3) ” ’’ 01A110 R 200 200 >200 >200 15 4) " " 01A110 R 200 200 >200 >200 5) " " 01A111 R £0.10 £0.10 <0.1 >200 6) " ” 01A087 RR 200 200 >200 >200 7) " " 01A400 R 3.12 3.12 3.12 25 8) Strp. fae. 02A006 £0.10 £0.10 0.39 50 9) Strp. pyog. 02C203 £0.10 £0.10 <0.10 1.56 10) " " 02C020 R - 11) Myoo. smeg. 05A001 50 50 100 0.39 20 12) B. sub. 06A001 £0.10 £0.10 £0.10 1.56 13) E. coli 51A229 3.12 1.56 3.12 100 14) " " 51A266 3.12 1.56 3.12 200 15) ” " 51A125 R 3.12 3.12 6.25 200 16) Ps. aerug. 52A104 50 100 200 >200 17) Klebs. pn. 53A009 12.5 6.25 12.5 200 18) " " 53A031 R 6.25 6.25 50 >200 25 19) Prot. mira. 57C064 200 100 200 >200 20) Prot. morg. 57G001 50 50 200 >200 21) Salm. chol-su. 58B242 6.25 6.25 6.25 >200 22) Sal. typhm. 58D009 6.25 6.25 6.25 >200 23) " " 58D013-C 6.25 6.25 12.5 100 24) Past, multa. 59A001 £0.10 £0.10 £0.1 25 25) Serr. mar. 63A017 25 25 50 >200 26) Ent. aero. 67A040 6.25 6.25 50 >200 30 27) Ent. eloa. 67B003 25 25 25 >200 28) Neiss. sic. 66C000 £0.10 £0.10 £0.1 0.20

Tuloksista ilmenee, että keksinnön mukaisesti valmistetut yhdisteet ovat lukuisia mikro-organismeja vastaan aktiivisempia kuin vertailuyhdiste.

35 Seuraavien esimerkkien tarkoituksena on valaista keksin töä.

68404 26

Esimerkki 1 2'-asetyyli-4"-deoksi-4"-oksoerytromysiini-A o -65 Crseen jäähdytettyyn seokseen, jossa on 3 ml metyleenikloridia ja 0,328 ml dimetyylisulfoksidia, li-5 sätään typpikehässä 0,652 ml trifluorietikkahappoanhyd-ridiä. Noin minuutin kuluttua muodostuu valkea velli, mikä osoittaa, että on muodostunut trifluorietikkahap-poanhydridi-dimetyylisulfoksidi-kompleksi. Seokseen lisätään tipoittain liuos, jossa on 1,0 g 21-asetyylieryΙ-ΙΟ romysiini-A * etyyliasetaattia, joka on saatu kiteyttämällä 2'-asetyylierytromysiini-A etyyliasetaatista, 7 ml:ssa metyleenikloridia pitäen lämpötilan noin -65° Crssa. Seosta sekoitetaan noin -60°C:ssa 15 minuuttia, sitten se jäähdytetään -70°C:seen. Reaktioseokseen li-15 sätään nopeasti trietyyliamiinia (1,61 ml) ja jäähdytys-haude poistetaan. Liuosta sekoitetaan 15 minuuttia, sitten se lisätään 10 mlraan vettä, ja vesifaasin pH säädetään 10 reen. Orgaaninen faasi erotetaan, pestään peräkkäin vedellä (3 x 10 ml) ja suolaliuoksella (1 x 10 ml) 20 ja kuivataan natriumsulfaatilla. Liuotin haihdutetaan alennetussa paineessa, jolloin saadaan 929 mg raakatuo-tetta. Uudelleenkiteyttämällä metyleenikloridi-heksaanis-ta saadaan 329 mg puhdasta tuotetta, sp. 105 - 108°C.

NMR (S, CDC13): 3,28 (3H)s, 2,21 (6H)s ja 2,3 (3H)s.

25 Vastaavasti käyttäen lähtöaineena 2'-propionyyli- erytromysiini-A.etyyliasetaattia ja noudattaen edellä olevaa menetelmää, saadaan 2'-propionyyli-4"-deoksi-4"-oksoerytromysiini-A.

Esimerkki 2

30 4"-deoksi-4"-oksoerytromysiini-A

Liuosta, jossa on 4,0 g 2'-asetyyli-4"-deoksi-4"-oksoerytromysiini-A:ta 75 mlrssa metanolia, sekoitetaan huoneen lämpötilassa 20 tuntia. Liuotin poistetaan tyhjössä, ja jäännöksenä saatu valkea vaahto kiteytetään 35 metyleenikloridi-heksaanista, jolloin saadaan 3,44 g, sp. 170,5 - 172,5°C.

68404 27 NMR (£,CDC13)s 3,36 (3H)s ja 2,33 (6H)s.

Identtinen tuote saadaan, kun 2'-propionyyli-4"-deoksi-4"-oksoerytromysiini-A:ta käsitellään metanolilla huoneen lämpötilassa.

5 Esimerkki 3

21-asetyyli-4"-deoksi-4"-oksoerytromysiini-A

Liuokseen, jossa on 13,7 g 4"-deoksi-4"-oksoerytro-mysiini-A:ta 100 ml:ssa etyyliasetaattia, lisätään sekoittaen 2,3 ml etikkahappoanhydridiä ja saatua reaktio-10 seosta sekoitetaan huoneen lämpötilassa kaksi tuntia.

Liuos lisätään 100 ml:aan vettä, ja vesifaasin pH säädetään 6-n natriumhydroksidiliuoksella 9,5:ksi. Orgaaninen kerros erotetaan, kuivataan natriumsulfaatilla ja väke-vöidään, jolloin saadaan 14,5 g valkeaa vaahtoa, joka 15 kiteytetään uudelleen metyleenikloridi-heksaanista. Saatu yhdiste on identtinen esimerkissä 1 saadun kanssa.

Esimerkki 4 21-asetyyli-4n-deoksi-4"-oksoerytromysiini-A- oksiimi 20 500 ml:aan metanolia lisätään 10,8 g 2'-asetyy- li-4"-deoksi-4"-oksoerytromysiini-A:ta, 1,94 g hydrok-syyliamiinihydrokloridia ja 11,0 g bariumkarbonaattia, ja saatua suspensiota sekoitetaan huoneen lämpötilassa 3,5 tuntia. Seos suodatetaan, ja suodos haihdutetaan 25 alennetussa paineessa. Saatu vaahto liuotetaan etyyliasetaattiin, ja liuos uutetaan vedellä, jonka pH on säädätetty 9,5:ksi. Orgaaninen faasi erotetaan, kuivataan natriumsulfaatilla ja haihdutetaan tyhjössä, jolloin saadaan 10,6 g haluttua tuotetta. NMR ( £ , CDCl^): 30 3,33 (3H)s, 2,30 (6H)s ja 2,06 (3H)s.

Esimerkki 5 2'-asetyyli-4"-deoksi-4"-oksoerytromysiini-A-O-asetyylioksiimi

Liuokseen, jossa on 330 mg 2'-asetyyli-4"-deoksi-35 4"-deoksi-4"-oksoerytromysiini-A-oksiimia 30 ml:ssa 68404 28 etyyliasetaattia, lisätään sekoittaen 64,2 ^ul etikka-happoanhydridiä, ja reaktioseosta sekoitetaan yön yli. Lisätään vielä 15,8 ^.ul etikkahappoanhydridiä ja 23,4 yUl trietyyliamiinia, ja sekoitusta jatketaan neljä 5 tuntia. Reaktioseos lisätään sitten veteen, ja seoksen pH säädetään noin 9,0:ksi. Etyyliasetaattikerros erotetaan, kuivataan natriumsulfaatilla ja haihdutetaan kuiviin tyhjössä, jolloin saadaan 300 mg haluttua tuotetta. NMR (Sf CDCL3) : 3,38 (3H)s, 2,25 (6H)s, 2,20 10 (3H)s, 2,05 (3H)s ja 1,56 (3H)s.

Vastaavasti käyttämällä edellä olevassa menetelmässä 2'-propionyyli-4"-deoksi-4"-oksoerytromysiini-A:ta ja 4"-deoksi-4"-oksoerytromysiini-A-oksiimia 2'-asetyyli-4"-deoksi-4"-oksoerytromysiini-A-oksiimin si-15 jasta saadaan vastaavat O-asetyyli-johdannaiset.

Esimerkki 6 2'-asetyyli-4"-deoksi-4"-aminoerytromysiini-A Seosta, jossa on 14,0 g 21-asetyyli-4"-deoksi-4''-oksoerytromysiini-A-0-asetyylioksiimia ja 60 g iso-20 propanolilla pestyä Raney-nikkeliä 400 mltssa isopropanolia, sekoitetaan vetykehässä alkupaineessa 6,9 MPa yön yli huoneen lämpötilassa. Katalysaattori suodatetaan, ja suodos haihdutetaan. Jäännöksenä saatu valkea vaahto liuotetaan 400 ml:aan isopropanolia, ja liuokseen 25 lisätään uusi 50 g:n erä isopropanolilla vastapestyä

Raney-nikkeliä. Hydrausta jatketaan yön yli huoneen lämpötilassa vedyn alkupaineella 6,9 MPa. Katalysaattori suodatetaan ja suodos haihdutetaan kuiviin tyhjössä, jolloin saadaan haluttua tuotetta.

30 Esimerkki 7 Lähtien sopivasta O-asetyylioksiimista ja noudattamalla esimerkin 6 menetelmää, valmistetaan seuraa-vat 4"-aminoerytromysiini-A-analogit: 68404 29 R, \ N(CH ) : 0 3 2 Ογ^ 5 mn„y

I J!0 I

ho—L A.

A f°·: /°Y 0 ^X^H2

X OCIL

10 3 fl 15 H- 0 CH3CH2C-Esimerkki 8

20 4"-deoksi-4"-aminoerytromysiini-A

Liuosta, jossa 2,17 g 2'-asetyyli-4"-deoksi-4"-aminoerytromysiini-A:ta 50 ml:ssa metanolia, sekoitetaan huoneen lämpötilassa yön yli. Liuotin poistetaan alennetussa paineessa, ja jäännöksenä saatua vaahtoa 25 käsitellään kloroformin (50 ml) ja veden (50 ml) seok sella. Vesikerroksen pH säädetään 9,5:een, ja orgaaninen kerros erotetaan. Kloroformikerrosta käsitellään uudella vesierällä, ja pH säädetään 4,0:ksi. Happamen tuotteen sisältävän vesikerroksen pH säädetään emästä 30 lisäämällä asteittain arvoihin 5, 6, 7, 8 ja 9, ja jo kaisessa pH:ssa seos uutetaan uudella kloroformierällä. pH 6:ssa ja 7:ssä saadut uutteet sisältävät pääosan tuotteesta, ja nämä uutteet yhdistetään, niihin lisätään vettä ja pH säädetään 4:ksi. Vesikerroksen pH sää-35 detään jälleen arvoihin 5, 6 ja 7, ja joka pH:ssa uute taan kloroformilla. pH 6:ssa saatu kloroformiuute kui- 68404 30 vataan natriumsulfaatilla ja väkevöidään, jolloin saadaan 249 g tuotetta epimeeriseoksena.

NMR ( £ ,CDC13): 3,30 (lH)s, 3,26 (2H)S, 2,30 (6H)s ja 1,46 (3H)s.

5 Samankaltaisella menetelmällä valmistetaan 4"- deoksi-4"-aminoerytromysiini-A solvolysoimalla 2'-pro-pionyyli-4"-deoksi-4"-aminoerytromysiini-A.

Esimerkki 9 4"-deoksi-4"-aminoerytromysiini-A 10 Sekoitettuun liuokseen, jossa on 3,0 g 4"-deoksi- 4"-oksoerytromysiini A:ta 30 mlrssa metanolia, lisätään typpikehässä 3,16 g kuivaa ammoniumasetaattia. Viiden minuutin kuluttua reaktioseokseen huuhdotaan 5 ml :11a metanolia 188 mg natriumsyaaniboorihydridiä, ja reaktio-15 seosta sekoitetaan yön yli huoneen lämpötilassa. Vaaleankeltainen liuos kaadetaan 300 mlraan vettä, ja pH säädetään 6,Oraan. Vesifaasi uutetaan pH-arvoissa 6, 7, 7,5, 8, 9 ja 10 käyttäen uuttamiseen aina 125 ml dietyyli-eetteriä. pH-arvoissa 8, 9 ja 10 saadut uutteet yhdiste-20 tään ja pestään 125 ml :11a vettä. Erotettu vesikerros uutetaan eetterillä (1 x 100 ml) pH 7:ssä, etyyliasetaatilla (1 x 100 ml) pH 7:ssä, eetterillä (1 x 100 ml) pH 7,5:ssä, etyyliasetaatilla (1 X 100 ml) pH 7,5:ssä ja etyyliasetaatilla (1 x 100 ml) pH 8:ssä, 9:ssä ja 10:ssä.

25 pH-arvoissa 9 ja 10 saadut etyyliasetaattiuutteet yhdistetään, pestään kyllästetyllä suolaliuoksella ja kuivataan natriumsulfaatilla. Haihduttamalla liuotin tyhjössä, saadaan 30 mg halutun tuotteen epimeeriseosta norsunluun-värisenä vaahtona.

30 Esimerkki 10 4"-deoksi-4"-aminoerytromysiini-A (toinen epimeeri) Liuosta, jossa on 10,0 g 21-asetyyli-4"-deoksi-4"-aminoerytromysiini-A:n epimeeriseosta 150 mlrssa metanolia, sekoitetaan huoneen lämpötilassa typpikehässä 35 72 tuntia. Liuotin poistetaan tyhjössä, ja jäännös liu otetaan sekoittaen veden (150 ml) ja kloroformin (200 ml) 68404 31 seokseen. Vesikerros hylätään, ja lisätään uusi 150 ml:n annos vettä. Vesikerroksen pH säädetään 5 reen, ja kloro-formikerros erotetaan. Vesifaasin pH säädetään sitten arvoihin 5,5, 6, 7, 8 ja 9 ja uutetaan kun säädön jäl-5 keen 100 ml :11a kloroformia. pH-arvoissa 6, 7 ja 8 saadut uutteet yhdistetään, pestään peräkkäin vedellä ja kyllästetyllä suolaliuoksella ja kuivataan natriumsul-faatilla. Haihduttamalla liuotin alennetussa paineessa, saadaan 2,9 g 4"-deoksi-4"-aminoerytromysiini-A:n epi-10 meeriseosta. 1,9 g:n näytettä seoksesta trituroidaan dietyylieetterissä, jolloin osa liukenemattomasta vaahdosta kiteytyy. Kiinteä aine suodatetaan ja kuivataan, jolloin saadaan 67 mg 4"-deoksi-4"-aminoerytromysiini-A:n toista epimeeriä, sp. 140 - 147°C.

15 Esimerkki 11 11,2'-diasetyyli-4"-deoksi-4"-oksoerytromysiini-A-6,9-hemiketaali

Liuosta, jossa on 10 g 2'-asetyyli-4"-deoksi-4"-oksoerytromysiini-A:ta 250 mlrssa pyridiiniä, käsitel-20 lään 40 ml :11a etikkahappoanhydridiä, ja reaktioseoksen annetaan seistä huoneen lämpötilassa 10 vrk. Suurin osa liuottimesta poistetaan tyhjössä, ja jäljelle jäänyt vä-kevöite veden (150 ml) ja kloroformin (100 ml) seokseen. Vesifaasin pH korotetaan 9,0:aan, ja kloroformi erote-25 taan, kuivataan natriumsulfaatilla ja haihdutetaan kuiviin.

NMR ( CDC13): 3,33 (3H)s, 2,26 (6H)s, 2,10 (3H)s, 2,03 (3H)s ja 1,55 (3H)s.

Esimerkki 12 30 Käyttäen lähtöaineina sopivaa 4"-deoksi-4"-ok- soerytromysiini-A:ta ja tarvittavaa alkaanihappoanhydri-diä ja noudattamalla esimerkin 11 menetelmää, valmistetaan seuraavat yhdisteet: 68404 32 , R1 N (CH_) _ “χλ \λ ! 2

Η° —;L

A^CX

'cch3 10 !i h o o ch3c- ch3ch2c- o o 15 " 11 CH3CH2C- CH3CH2C- 0 o ch3ch2c- ch3c- 20 Esimerkki 13 ll-asetyyli-4"-deoksi-4"-oksoerytromysiini-A- 6.9- hemiketaali

Liuosta, jossa on 3,0 g ll,2'-diasetyyli-4"-deoksi-4”-oksoerytromysiini-A-9,6-hemiketaalia 50 ml:ssa 25 metanolia, sekoitetaan yön yli typpikehässä. Liuotin poistetaan tyhjössä, jolloin haluttua saadaan keltaisena vaahtona (3,0 g).

NMR (£,CDC13): 3,35 (3H)S, 2,31 (6H)S, 2,13 (3H) ja 1,55 (3H) s.

30 Samalla tavalla muutetaan esimerkin 13 menetel mällä esimerkin 12 yhdisteet ll-asetyyli-4"-deoksi-4"-oksoerytromysiini-A-6,9-hemiketaaliksi ja 11-propionyyli-4"-deoksi-4"-oksoerytromysiini-A-6,9-hemiketaaliksi.

Esimerkki 14 35 ll-asetyyli-4"-deoksi-4"-aminoerytromysiini-A- 6.9- hemiketaali 68404 33

Sekoitettuun liuokseen, jossa on 4,4 g asetyyli-4"-deoksi-4"-oksoerytromysiini-A-6,9-hemiketaalia ja 4,38 g ammoniumasetaattia 75 ml:ssa metanolia, lisätään 305 mg 85-%:ista natriumsyaaniboorihydridiä. Sekoitetaan 5 huoneen lämpötilassa yön yli, sitten reaktioseos kaadetaan 300 ml:aan vettä ja siihen lisätään 250 ml kloroformia. Vesikerroksen pH säädetään 9,8:ksi, ja kloro-formikerros erotetaan. Vesikerros uutetaan uudelleen kloroformilla, ja kloroformiuutteet yhdistetään, kuiva-10 taan natriumsulfaatilla ja haihdutetaan, jolloin saadaan valkea vaahto. Jäännöksenä saatu vaahto liuotetaan sekoittaen veden (125 ml) ja kloroformin (125 ml) seokseen ja pH säädetään arvoihin 5, 6, 7 ja 8 ja uutetaan jokaisen säädön jälkeen kloroformilla. pH-arvoissa 6 ja 7 15 saadut uutteet yhdistetään, pestään kyllästetyllä suolaliuoksella ja kuivataan natriumsulfaatilla. Haihduttamalla liuotin, saadaan 1,72 g haluttua tuotetta valkeana vaahtona. Tuote liuotetaan mahdollisimman pieneen die-tyylieetterimäärään, ja liuokseen lisätään sitten hek-20 saania, kunnes se alkaa samentua. Muodostunut kiteinen tuote suodatetaan ja kuivataan, saadaan 1,33 g tuotetta, sp. 204,5 - 206,5°C.

NMR (<$, CDC13):3,31 (2H)s, 3,28 (lH)s, 2,31 (6H)s, 2,11 (3H)s ja 1,5 (3H)s .

25 Esimerkki 15

Toistamalla esimerkin 14 menetelmä käyttäen sopivaa 4"-deoksi-4"~oksoerytromysiini-A:ta ja liuottimena isopropanolia metanolin sijasta, saadaan seuraavat yhdisteet: 68404 34 , Rl MCH,), ί0^Λ^Λ «2° *,,,> 5 HO ‘“^L o pL x^'f y (j yf:m2 /"‘cc*3 10 Rj^ Rj o o

It II

CH-jC- CH3C“

O O

CH,C- CH-.CH„C- i0 0 0 ch3ch2c- ch3ch2c- 0 o CH3CH2C ch3c~ ^ Esimerkki 16 2'-asetyylierytromysiini-A-6,9-hemiketaali-ll,12-karbonaattiesteri

Liuokseen, jossa on 13,2 g erytromysiini-A-6,9-hemiketaali-11,12-karbonaattiesteriä (US-patentti 3 417 077) 25 150 ml:ssa bentseeniä, lisättään 1,8 ml etikkahappoanhyd- ridiä, ja reaktioseosta sekoitetaan huoneen lämpötilassa 1,5 tuntia. Liuos kaadetaan 200 ml:aan vettä, ja vesifaasi tehdään emäksiseksi pH 9,Osaan. Bentseenikerros erotetaan, kuivataan natriumsulfaatilla ja haihdutetaan kuiviin, jol-30 loin saadaan 15,3 g valkeaa vaahtoa. Tätä vaahtoa tritu-roidaan 50 ml:ssa dietyylieetteriä, jolloin se kiteytyy. Suodattamalla ja kuivaamalla saadaan 12,6 g puhdasta tuotetta, sp. 224,5 - 228,5°C.

NMR (£, CDC13) : 3,36 (3H)s, 2,30 (6H)s, 2,06 (3H)s ja 1,61 35 (3H)s.

35 68404

Vastaavalla tavalla noudattamalla esimerkin 16 menetelmää ja käyttämällä etikkahappoanhydridin sijasta ekvivalenttista määrää propionihappoanhydridiä saadaan 21-propionyylierytromysiini-A-6,9-hemiketaali-ll,12-5 karbonaattiesteri.

Esimerkki 17 21-asetyyli-4"-deoksi-4"-oksoerytromysiini-A- 6,9-hemiketaali-ll,12-karbonaattiesteri -5°C:seen jäähdytettyyn suspensioon, jossa on 10 6,19 g N-kloorisukkinimidiä 150 ml:ssa tolueenia ja 50 ml:ssa bentseeniä, lisätään 4,46 ml dimetyylisulfidia. Sekoitetaan 20 minuuttia, sitten suspensio jäähdytetään -25°C:seen, ja siihen lisätään tipoittain 12,4 g 2'-ase-tyylierytromysiini-A-hemiketaali-11,12-karbonaattieste-15 riä osittain liuotettuna 80 ml:aan tolueenia. Lisäyksen aikana lämpötila pidetään -19- -25°C:ssa ja sitten vielä kaksi tuntia -25°C:ssa. Tämän jälkeen lisätään yhtenä annoksena 6,79 ml trietyyliamiinia. Jäähdytyshaude poistetaan, ja lämpötilan annetaan kohota -10°C:seen. Sitten 20 reaktioseos kaadetaan veteen, ja vesifaasin pH säädetään arvoon 8,4 - 9,0. Orgaaninen kerros erostetaan, kuivataan natriumsulfaatilla ja haidutetaan tyhjössä, jolloin saadaan valkea vaahto (14,0 g). Trituroimalla tätä vaahtoa dietyylieetterissä, se saadaan kiteytymään. Tuote 25 suodatetaan ja kuivataan, jolloin saadaan 11,3 g kiteistä ainetta, sp. 212 - 213,5°C.

NMR (£,CDC13): 5,26 (lH)t, 3,36 (3H)s, 2,30 (6H)s, 2,13 (3H)s, 1,63 (3H)s ja 1,50 (3H)s.

Vastaavalla tavalla noudattamalla esimerkin 17 30 menetelmää ja käyttämällä 2’-asetyyliesterin sijasta ekvivalenttista määrää 2'-propionyylierytromysiini-A-6,9-hemiketaali-ll,12-karbonaattiesteriä, saadaan 2'-propionyy li-4"-deoksi-4*-oksoerytromysiini-A-6,9-hemiketaali-ll, 12-karbonaattiesteri .

68404 36

Esimerkki 18 4"-deoksi-4"-oksoerytromysiini-A-6,9-hemiketaali- 11,12-karbonaattiesteri 42,9 g 2'-asetyyli-4"-deoksi-4"-oksoerytromysii-5 ni-A-6,9-hemiketaali-ll,12-karbonaattiesteriä lisätään 800 mlraan metanolia, ja liuosta sekoitetaan huoneen lämpötilassa 72 tuntia. Liuotin poistetaan tyhjössä, jolloin saadaan jäännöksenä 41 g tuotetta valkeana vaahtona. Se liuotetaan noin 100 mlraan asetonia, ja liuokseen lisä-10 tään varovasti vettä, kunnes saostuminen alkaa. Saatua kiteistä sakkaa sekoitetaan 40 minuuttia, sitten se suodatetaan ja kuivataan, jolloin saadaan 34,2 g haluttua tuotetta, sp. 186,5 - 183°C.

NMR (£, CDC13):5,66 (1H), 3,35 (3H)s, 2,35 (6H)s, 1,65 15 (3H)s ja 1,51 (3H)s.

Samalla tavalla saadaan sama tuote, kun edellä olevassa menetelmässä käytetään ekvivalenttista määrää 2'-propionyyli-4"-deoksi-4"-oksoerytromysiini-A-6,9-hemiketaali-ll , 12-karbonaattiesteriä 2'-asetyyliesterin 20 sijasta.

Esimerkki 19 4"-deoksi-4"-aminoerytromysiini-A-6,9-hemiketaali-ll ,12-karbonaattiesteri 189 g:aan 4"-deoksi-4"-oksoerytromysiini-A-6,9-25 hemiketaali-11,12-karbonaattiesteriä 1 200 mlrssa metanolia lisätään huoneen lämpötilassa sekoittaen 193 g am-moniumasetaattia. Viiden minuutin kuluttua saatu liuos jäähdytetään noin -5°C:seen, ja sitä käsitellään sen jälkeen 45 minuuttia 13,4 g:lla 85-%:ista natriumsyaani-30 boorihydridiä 200 mlsssa metanolia. Jäähdytyshaude poistetaan, ja reaktioseosta sekoitetaan huoneen lämpötilas sa yön yli. Reaktioseos haihdutetaan tyhjössä 800 mlrksi ja lisätään sekoittaen veden (1 800 ml) ja kloroformin (900 ml) seokseen. pH säädetään 6-n kloorivetyhapolla 35 arvoon 6,2 - 4,3, ja kloroformikerros erotetaan. Kloro-formikerros kaadetaan 1 litraan vettä, ja pH säädetään 37 68404 95,:een. Orgaaninen faasi erotetaan, kuivataan natrium-sulfaatilla ja haihdutetaan alennetussa paineessa, jolloin saadaan 174 g valkeaa vaahtoa. Tämä liuotetaan veden (1 1) ja etyyliasetaatin (500 ml) seokseen, ja pH 5 säädetään 5,5:een. Etyyliasetaattikerros erotetaan, ja vesikerroksen pH säädetään peräkkäin arvoihin 5,7 ja 9,5 ja uutetaan kunkin pH-säädön jälkeen 500 ml :11a etyyliasetaattia. 9,5:ssä saatu etyyliasetaattiuute kuivataan natriumsulfaatilla ja haihdutetaan kuiviin tyhjössä, 10 jolloin saadaan 130 g vaahtoa. 120 g tätä vaahtoa liuotetaan veden (1 1) ja metyleenikloridin (1 1) seokseen. Vesikerroksen pH säädetään peräkkäin arvoihin 4,4, 4,9 ja 9,4 ja uutetaan kun säädön jälkeen 1 litralla mety-leenikloridia. pH 9,4:ssä saatu metyleenikloridiuute 15 kuivataan natriumsulfaatilla ja haihdutetaan kuiviin alennetussa paineessa, jolloin saadaan 32 g tuotetta valkeana vaahtona. Kiteytettynä 250 ml:sta asetoni-vesi-seosta (1:1, v/v), saadaan 28,5 g kiteisiä epimeerejä.

NMR 100 MHz (£ ,CDCl3):5,20 (lH)m, 3,37 (l,5)s, 3,34 20 (1,5H)s, 2,36 (6H)s, 1,55 (3H)s ja 1,41 (3H)s.

Esimerkki 20 4"-deoksi-4"-aminoerytromysiini-A-6,9-hemiketaa-li-11,12-karbonaattiesteri-epimeerien erottaminen

Korkeapainenestekromatografiapylvääseen (1,3 x 25 9 cm), joka on täytetty formamidilla imeytetyllä GF 254 silikageelillä ja eluoidaan kloroformilla, viedään 200 mg epimeeriseosta. Paineessa 1,65 MPa kerätään 10 ml:n ja-keita nopeudella 4,76 ml/min. Jakeet 14 - 21 ja 24 - 36 otetaan talteen.

30 Jakeet 14 - 21 yhdistetään ja väkevöidään noin 50 ml:ksi. Lisätään 50 ml vettä, ja pH säädetään 9,0:ksi. Kloroformikerros erotetaan, kuivataan natriumsulfaatilla ja haihdutetaan, jolloin saadaan 106 mg valkeaa vaahtoa. Trituroimalla dietyylieetterillä, saadaan vaahto kitey-35 tymää. Kiteistä tuotetta sekoitetaan huoneen lämpötilassa tunnin ajan, sitten se suodatetaan ja kuivataan, saa- 68404 38 daan 31,7 mg, sp. 194 - 196°C.

NMR 100 MHz (£, CDC13): 5,24 (lH)d, 5,00 (lH)t, 3,40 (3H)s, 2,40 (6H)s, 1,66 (3H)s ja 1,40 (3H)s.

Jakeet 24 - 36 yhdistetään, ja yhdistettyjä ja-5 keitä käsitellään samoin kuin edellä, jolloin saadaan 47,1 mg tuotetta valkeana vaahtona, joka on identtistä esimerkissä 25 saadun kanssa.

Esimerkki 21

Suspensioon, jossa on 11,1 g 2'-asetyyli-4"-10 deoksi-4"-oksoerytromysiini-A-6,9-hemiketaali-ll,12-karbonaattiesteriä 300 ml:ssa isopropanolia, lisätään huoneen lämpötilassa sekoittaen 10,7 g ammoniumasetaat-tia. Viiden minuutin kuluttua reaktioseokseen lisätään 30 minuutin kuluessa 747 mg natriumsyaaniboorihydridiä 15 130 mlrssa isopropanolia, ja reaktioseosta sekoitetaan huoneen lämpötilassa yön yli. Vaaleankeltainen liuos kaadetaan 1 100 ml:aan vettä, johon lisätään 400 ml die-tyylieetteriä. pH säädetään 4,5:ksi, ja eetterikerros erotetaan. Vesikerroksen pH säädetään 9,5:ksi, ja se 20 uutetaan (2 x 500 ml) kloroformilla. Kloroformiuutteet yhdistetään, kuivataan natriumsulfaatilla ja väkevöi-dään, jolloin saadaan 7,5 g keltaista vaahtoa. Uudel-leenkiteyttämällä tämä dietyylieetteristä, saadaan 1,69 g, joka samoin kuin emäliuokset otetaan talteen 25 jatkokäsittelyä varten.

Edellä saatuihin emäliuoksiin lisätään 75 ml vettä, ja pH säädetään 5,0:ksi. Eetterikerros korvataan uudella 75 ml:n erällä eetteriä, ja pH säädetään 5,4:ksi. Eetteri korvataan etyyliasetaatilla, ja pH korotetaan 30 10:ksi. Emäksinen vesikerros uutetaan (2 x 75 ml) etyy liasetaatilla, ja ensimmäinen etyyliasetaattiuute kuivataan natriumsulfaatilla ja haihdutetaan kuiviin. Jäännöksenä saatu vaahto (1,95 g) lisätään veden (75 ml) ja dietyylieetterin (50 ml) seokseen, ja pH säädetään 35 5,05:ksi. Eetteri erotetaan, ja vesikerroksen pH sääde- 68404 39 tään peräkkäin arvoihin 5,4, 6,0, 7,05 ja 8,0, ja se uutetaan kunkin pH-säädön jälkeen 50 ml :11a dietyyli-eetteriä. Lopuksi pH säädetään 9,7:ksi, ja vesikerros uutetaan 50 ml :11a etyyliasetaattia. pH 6,0:ssa saa-5 tuun eetteriuutteeseen lisätään 75 ml vettä, ja pH säädetään 9,7:ksi. Eetterikerros erotetaan, kuivataan ja haihdutetaan tyhjössä, jolloin saadaan 460 mg valkeaa vaahtoa.

NMR 100 MHz (5, CDC13):5,20 (lH)t, 3,43 (2H)s, 3,40 10 (1H)s, 2,38 (6H)s, 2,16 (3H)s, 1,70 (3H)s ja 1,54 (3H) .

NMR-arvot osoittavat, että saatu tuote koostuu 2'-asetyyli-4"-deoksi-4"-aminoerytromysiini-A-6,9-hemi-ketaali-11,12-karbonaattiesteri-epimeereistä.

Edellä saatu 1,69 g tuotetta liuotetaan veden 15 (75 ml) ja dietyylieetterin (75 ml) seokseen, ja pH sää detään 4,7:ksi. Eetteri erotetaan, ja vesikerros uutetaan uudella eetterierällä (75 ml) pH-arvoissa 5,05 ja 5,4 ja etyyliasetaatilla (2 x 75 ml) pH 9,7:ssä. Yhdistetyt etyyliasetaattiuutteet kuivataan natriumsulfaatilla 20 ja haihdutetaan alennetussa paineessa, jolloin saadaan jäännöksenä 1,26 g valkeaa vaahtoa. Kiteyttämällä se, saadaan 411 mg tuotetta, sp. 193 - 196°C (hajoaa). Emä-liuos haihdutetaan kuiviin, ja jäännös liuotetaan kuumaan etyyliasetaattiin. Jäännös saa seistä huoneen läm-25 pötilassa yön yli. Saostunut kiteinen aine suodatetaan ja kuivataan, saadaan 182 mg lisää tuotetta, sp. 198 -202°C (hajoaa).

NMR 100 MHz ( <$ , CDCl3) : 5,10 (lH)t, 3,34 (2H)s, 3,30 (1H)s, 2,30 (6H)s, 2,08 (3H)s, 1,62 (3H)s ja 1,48 (3H)s. 30 NMR-arvot osoittavat, että saatu tuote koostuu 2'-asetyyli-4"-deoksi-4"-aminoerytromysiini-A-11,12-kar-bonaattiesteri-epimeereistä.

Samalla tavalla toistamalla esimerkin 21 menetelmä käyttäen lähtöaineena 2,-propionyyli-4"-deoksi-4"-35 oksoerytromysiini-A-6,9-hemiketaali-ll,12-karbonaatti-esteriä, saadaan 2'-propionyyli-4"-deoksi-4"-aminoeryt- 68404 40 romysiini-A-6,9-hemiketaali-ll,12-karbonaattiesteriä ja 2' -propionyyli-4"-deoksi-4"-aminoerytromysiini-A- 11,12-karbonaattiesteriä.

Esimerkki 22 5 Liuosta, jossa on 400 mg 2'-asetyyli-4"-deoksi- 4"-aminoerytromysiini-A-6,9-hemiketaali-ll,12-karbonaat-tiesteriä 20 ml:ssa metanolia, sekoitetaan huoneen lämpötilassa yön yli. Reaktioliuos kaadetaan 100 ml:aan vettä, minkä jälkeen lisätään 50 ml etyyliasetaattia.

10 pH säädetään 9,5:ksi, ja orgaaninen faasi erotetaan.

Uutto toistetaan vielä 50 ml:11a etyyliasetaattia. Yhdistetyt etyyliasetaattiuutteet kuivataan natriumsulfaa-tilla ja haihdutetaan, jolloin saadaan 392 mg valkeaa vaahtoa. Trituroimalla sitä dietyylieetterissä ja raa-15 puttamalla lasisauvalla, se saadaan kiteytymään. 30 minuutin seisotuksen jälkeen huoneen lämpötilassa kiteet suodatetaan ja kuivataan, jolloin saadaan 123 mg tuotetta, joka NMR-arvojen perusteella on identtistä esimerkissä 24 saadun tuotteen kanssa.

20 NMR 100 MHz ($ , CDCl3):3,26 (3H)s, 2,32 (6H)s, 1,61 (3H)s ja 1,44 (3H)s.

NMR-arvot osoittavat, että tämä kiteinen tuote on 4"-deoksi-4"-aminoerytromysiini-A-ll,12-karbonaatti-esterin toinen epimeeri.

25 Edellä olevasta kiteytyksestä saatu emäliuos haihdutetaan tyhjössä, jolloin saadaan 244 mg valkeaa vaahtoa. Se on identtinen esimerkissä 19 saadun tuotteen kanssa.

NMR-arvot osoittavat, että tämä tuote koostuu 30 4"-deoksi-4"-aminoerytromysiini-A-6,9-hemiketaali-ll,12- karbonaattiesteri-epimeereistä ja on identtinen esimerkin 19 tuotteen kanssa.

Esimerkki 23

Samankaltaisella menetelmällä kuin esimerkissä 35 22, saadaan metanolysoimalla 2'-propionyyli-4"-deoksi- 4"-aminoerytromysiini-A-6,9-hemiketaali-ll,12-karbonaaat- 68404 41 tiesteri 4"-deoksi-4"-aminoerytromysiini-A-ll,12-kar-bonaattiesteriä ja 4"-deoksi-4"-aminoerytromysiini-A- 6,9-hem±ketaali-ll,12-karbonaattiesteriä.

Esimerkki 24 5 8 g esimerkissä 19 saatua ei-kiteistä 4"-deoksi- 4"-aminoerytromysiini-A-ll,12-karbonaattiesteri-epimeeri-seosta liuotetaan 50 ml saan dietyylieetteriä. Tuote saadaan kiteytymään raaputtamalla lasisauvalla. Kiteistä tuotetta sekoitetaan 20 minuuttia, sitten se suodatetaan 10 ja kuivataan, saadaan 1,91 g, sp. 198,5 - 200°C.

NMR 100 MHz ( g, CDCl3) :3,26 (3H)s, 2,30 (6H)s, 1,61 (3H)s ja 1,45 (3H)s.

NMR-arvot osoittavat, että kiteinen tuote on 4"-deoksi-4"-aminoerytromysiini-A-ll,12-karbonaattiesterin 15 toinen epimeeri, joka on identtinen esimerkin 22 ketoni-yhdisteen kanssa.

Esimerkki 25 1 g esimerkissä 24 saatua epimeeriä liuotetaan 20 ml saan asetonia, ja liuosta kuumennetaan höyryhauteella, 20 kunnes se alkaa kiehua. Sitten lisätään 25 ml vettä, ja liuosta sekoitetaan huoneen lämpötilassa. Tunnin sekoittamisen jälkeen muodostunut sakka suodatetaan ja kuivataan, jolloin saadaan 581 mg tuotetta, sp. 147 - 149°C.

NMR 100 MHz (£,CDC1 )s 5,12 (lH)d, 3,30 (3H)s, 2,30 25 (6H)s, 1,62 (3H)s ja 1,36 (3H)s.

NMR-arvot osoittavat, että kyseessä on 4"-deoksi-4"-aminoerytromysiini-A-6,9-hemiketaali-ll,12-karbonaat-tiesterin toinen epimeeri, joka on identtinen esimerkin 20 jakeista 24 - 36 saadun epimeerin kanssa.

30 Esimerkki 26

4"-deoksi-4"-aminoerytromysiini-A

20 g 4"-deoksi-4"-oksoerytromysiini-A:ta, 31,6 g ammoniumasetaattia ja 10 g 10-%:ista palladiumhiiltä 200 mlsssa metanolia ravistellaan vetykehässä alkupai-35 neella 0,34 MPa yön yli. Katalysaattori suodatetaan, ja suodos haudutetaan kuiviin tyhjössä. Jäännös jaetaan 68404 42 veden ja kloroformin kesken pH 5,5:ssä. Vesikerros erotetaan, pH säädetään 9,6:ksi, sitten lisätään kloroformia. Orgaaninen kerros erotetaan, kuivataan natriumsul-faatilla ja haihdutetaan kuiviin alennetussa paineessa.

5 Jäännöksenä saatua valkeaa vaahtoa (19 g) trituroidaan 150 ml:ssa dietyylieetteriä huoneen lämpötilassa 30 minuuttia. Saatu kiinteä aine suodatetaan ja kuivatataan, jolloin saadaan 9,45 g toista epimeeriä, joka on identtinen esimerkissä 10 saadun kanssa.

10 Dietyylieetterisuodos haihdutetaan kuiviin, jol loin saadaan 6,89 g tuotetta, joka sisältää toista epimeeriä sekä jonkin verran epäpuhtauksia.

Esimerkki 27 4"-deoks i-4"-aminoerytromys i ini-A 15 2 g 4"-deoksi-4,'-oksoerytromysiini-A:ta, 3,1 g ammoniumasetaattia ja 2,0 g Raney-nikkeliä 50 mlrssa metanolia ravistellaan vetykehässä alkupaineella 0,34 MPa huoneen lämpötilassa yön yli. Lisätään vielä 3,16 g ammoniumasetaattia ja 2,0 g Raney-nikkeliä ja hydrausta 20 jatketaan vielä viisi tuntia. Kiinteät aineet suodatetaan, ja suodos haihdutetaan kuiviin tyhjössä. Jäännös lisätään sekoittaen vesi-kloroformiseokseen, ja pH säädetään arvoon 6,4 - 5,5. Vesifaasi erotetaan, pH säädetään 9,6:ksi, sitten lisätään kloroformia. Kloroformi-25 uute erotetaan, kuivataan natriumsulfaatilla ja haihdutetaan alennetussa paineessa, jolloin saadaan 1,02 g tuotetta keltaisena vaahtona. Sen vallitsevalla isomeerillä on 4"-asemassa päinvastainen konfiguraatio kuin esimerkin 10 tuotteella.

30 Esimerkki 28 2' -asetyyli-4',-deoksi-4"-aminoerytromysiini-B Liuokseen, jossa on 4,5 g 2'-asetyyli-4"-deoksi-4"-oksoerytromysiini-B:tä (US-patentti 3 884 903) 45 ml:ssa isopropanolia, lisätään typpikehässä sekoit-35 taen 4,66 g kuivaa ammoniumasetaattia. 10 minuutin kuluttua lisätään 376 mg natriumsyaaniboorihydridiä huuh- 68404 43 tomalla se 10 ml:ssa isopropanolia, ja reaktioseosta sekoitetaan huoneen lämpötilassa yön yli. Saatu vaaleankeltainen liuos kaadetaan 400 mitään vettä, ja pH säädetään 6,0 taan. Vesikerros uutetaan pH-arvoissa 6, 7, 7,5, 5 8, 9 ja 10 käyttäen jokaiseen uuttoon 250 ml dietyylieet- teriä. pH-arvoissa 8, 9 ja 10 saadut uutteet yhdistetään ja pestään 250 ml tila vettä. Erotettu vesikerros uutetaan eetterillä (1 x 100 ml) pH 7tssä, etyyliasetaatilla (1 x 100 ml) pH 7tssä, eetterillä (1 x 100 ml) pH 7,5tssä 10 eetterillä (1 x 100 ml) pH 7,5:ssä, etyyliasetaatilla (1 x 100 ml) pH 7,5:ssä ja etyyliasetaatilla (1 x 100 ml) pH-arvoissa 8, 9 ja 10. PH-arvoissa 9 ja 10 saadut etyy-liasetaattiuutteet yhdistetään, pestään, kyllästetyllä suolaliuoksella ja kuivataan natriumsulfaatilla. Liuos 15 poistetaan tyhjössä, jolloin halutun tuotteen epimeeri-seos saadaan kermanvärisenä vaahtona.

Vastaavalla tavalla valmistetaan 4"-deoksi-4"-aminoerytromysiini-B 4" -deoksi-4"-oksoerytromysiini-B:stä.

20 Esimerkki 29 4"-deoksi-4"-aminoerytromysiini-B Liuosta, jossa on 4,34 g 2'-asetyyli-4"-deoksi-4"-aminoerytromysiini-B:tä 100 ml:ssa metanolia, sekoitetaan yön yli huoneen lämpötilassa. Liuotin poistetaan 25 alennetussa paineessa, ja jäännöksenä saatua vaahtoa käsitellään kloroformin (100 ml) ja veden (100 ml) seoksella. Vesikerroksen pH säädetään 9,5:ksi, ja orgaaninen kerros erotetaan. Kloroformikerrokseen lisätään uusi erä vettä, ja pH säädetään 4,0:ksi. Happamen vesikerrok-30 sen, joka sisältää tuotteen, pH säädetään asteittain emästä lisäämällä arvoihin 5, 6, 7, 8 ja 9 ja uutetaan kussakin pH:ssa kloroformilla. pH-arvoissa 6 ja 7 saadut uutteet sisältävät pääosan tuotteesta, ja ne yhdistetään ja niitä käsitellään vedellä pH 4:ssä. Vesikerroksen pH 35 säädetään jälleen arvoihin 5, 6 ja 7 ja uutetaan kussakin pH:ssa kloroformilla. pH 6:ssa saatu kloroformiuute 68404 44 kuivataan natriumsulfaatilla ja haihdutetaan kuiviin, jolloin saadaan haluttu tuote epimeeriseoksena.

Esimerkki 30 4"-deoksi-4"-aminoerytromysiini-A-6,9-hemiketaali-5 11,12-karbonaattiesteri-aspartaatti 40°C:seen lämmitettyyn liuokseen, jossa on 1,0 g 4"-deoksi-4"-aminoerytromysiini-A-6,9-hemiketaali-ll,12-karbonaattiesteriä 6 ml:ssa asetonia, lisätään 20 ml vettä ja sen jälkeen 175 mg L-aspartiinihappoa. Seosta 10 kuumennetaan palautusjäähdyttäen 1,5 tuntia, sitten se suodatetaan kuumana. Suodoksesta haihdutetaan asetoni, ja väkevöity suodos kuivajäähdytetään, jolloin saadaan I, 1 g haluttua tuotetta valkoisena kiinteänä aineena.

Esimerkki 31 15 4,'-deoksi-4"-aminoerytromysiini-A-6,9-hemiketaali- II, 12-karbonaattiesteri-dihydrokloridi 7,58 g taan 4"-deoksi-4"-aminoerytromysiini-A- 6,9-hemiketaali-ll,12-karbonaattiesteriä 50 ml:ssa kuivaa etyyliasetaattia, lisätään 20 ml 1-n HCl-etyyliase-20 taattiliuosta, ja saatu liuos haihdutetaan kuiviin alen netussa paineessa. Jäännöstä trituroidaan eetterissä, suodatetaan, jolloin saadaan haluttu suola.

Samankaltaisella menetelmällä muutetaan keksinnön mukaiset amiiniyhdisteet di-happoandditiosuoloikseen.

25 Esimerkki 32 4"-deoksi-4"-aminoerytromysiini-A-6,9-hemiketaali-ll, 12-karbonaattiesteri-hydrokloridi

Toistetaan esimerkin 31 menetelmä muuten paitsi, että 1-n HCl-etyyliasetaattiliuosta lisätään 10 ml. Liuos 30 haihdutetaan kuiviin, jäännöksenä saatua mono-hydroklori-disuolaa trituroidaan eetterissä ja suodatetaan.

Vastaavalla tavalla muut keksinnön mukaiset amiiniyhdisteet muutetaan mono-happoadditiosuoloikseen.

Claims (6)

68404

1. N (CH ) _ p , , - Vs · vSVi1

10 R^0,Y ° X° ui R3° [V/V R3° ~Ol °o /<^™2 A' O*1* / 0CH3 2 Λχ,Λ 15 111 IV 3 jossa ja R^ tarkoittavat vetyatomia tai 2-3 hiili-atomia sisältävää alkanoyyliryhmää, on 2 - 3 hiili-atomia sisältävä alkanoyyliryhmä, R^ on vetyatomi tai 0 20 " R2 3a R3 muodostavat yhdessä ryhmän -C- tai R3 ja R^ 0 it muodostavat yhdessä ryhmän -C-, sekä niiden farmaseuttisesti hyväksyttävien happoadditiosuolojen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että yhdiste, jonka kaava on 25 R1 \ N(CHJ- o O = O I 3 2 .1 N(CH7), ΓΧ H0A^kil H0 11 o / r2°„ 'A. oAqA 30. tai ^ "f 1 H° (VT A/ R3°-k. A* X '0CH, o /*'·, Y”

1. Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten 4"-deoksi-4"-aminoerytromysiini-A-johdannaisten valmis-5 tamiseksi, joiden kaava on

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, 25 tunnettu siitä, että Y" on NH ja Y1 on NH, N - OH tai N - OCOCH^ ja että pelkistys on katalyytti-pelkistys .

3. Patenttivaatimukseni mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että pelkistys suoritetaan ve- 30 dyllä kun läsnä on Raney-nikkeliä, palladiumia hiilellä tai platinaoksidia.

3 O / 0CH 35 68404 jossa Y' ja Y" ovat NH, N - OH tai N-OCOCH^ pelkistetään, jolloin a) kun Y" on NH ja Y' on NH, N - OH tai N-OCOCII^ pelkistys suoritetaan katalyyttisesti hydrogenoimalla ja 5 b) kun Y' tai Y" on NH, joka on valmistettu in situ vastaavasta ketonista, jonka kaava on Λ\ N (CU,), : O I 3 2 , flCHJ, »vs -yS “vA \A

10 HO N X n^A vhol"' I 1 Γ H0 1 tai ^ T 1 V °"·/Υ 3 vi lC/γ v i 1V v 15 3 ' OCH I II 3 kondensoimalla mainittu ketoni alkaanihapon ammonium-suolan kanssa, pelkistys suoritetaan pelkistämällä hyd-ridillä, ja haluttaessa 20 c) kun R^ tai on vetyatomi, se muutetaan alkanoyyli-ryhmäksi ja/tai kun R^ tai R^ on alkanoyyliryhmä se muutetaan vetyatomiksi, ja haluttaessa d) muodostetaan farmaseuttisesti hyväksyttäviä suoloja.

4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että Y* ja Y" tarkoittavat molemmat iminoryhmää ja käytetään ylimäärä alkaanihapon 35 ammoniumsuolaa, edullisesti ammoniumasetaattia. 68404

5. Patenttivaatimuksen 4 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että pelkistin on natriumsya-noboorihydridi. p , 68404