SE445222B - Sett att framstella 4"-amino-oleandomycinderivat - Google Patents

Description

40 7800269-8 tioner, i vilka acetyl i de ovannämnda estrarna utbytts mot en annan företrädesvis oförgrenad, lägre alkanoyl med 3-6 kolatomer.

Uppfinningen avser ett sätt att framställa nya antibakteri- ella halvsyntetiska oleandomycin-derivat, som är 4"-amino- epimera föreningar med formeln Och farmaceutiskt godtagbara syraadditionssalter därav, varvid var och en av R och Rl representerar väte eller alkanoyl med 2-3 kolatomer; R2 väte; R3 väte eller alkyl med l-6 kolatomer; och A är metyl. _ En föredragen grupp av föreningar inom denna klass av kemo- terapeutika är de med den ovan angivna formeln IV. Speciellt före- dragna inom denna grupp är de föreningar, i vilka R2 och R3 var- dera representerar väte och R acetyl. Föredragna är också före- ningar med formlerna V och VI, i vilka R representerar acetyl.

Sättet enligt uppfinningen utmärkes av att man reducerar en förening med formeln eller 7800269-8 III där var och en av R och R1 representerar väte eller alkanoyl med 2-3 kolatomer; och X representerar NR3, NH, N-OH, N-OCH3 N-0 -CH3, varvid man O (a) när X representerar N-OH, N-OCH3 eller N-OÖ-CH3 genomför nämnda reduktion med hjälp av katalytisk hydrering, och (b) när X representerar NR3 eller NH, generar denna iminogrupp in situ ur de motsvarande ketonerna (X = O) med formlerna I, II ooh III genom kondensation av nämnda ketoner med ett amin- eller ammoniumsalt av en lägre alkansyra eller ammonium- eller aminsalt av en oorganisk syra, varpå man eventuellt (c) när R eller R1 representerar väte, omvandlar denna till alkanoyl, och/eller när R eller R1 representerar alkanoyl, om- vandlar denna till väte; (d) framställer farmaceutiskt godtagbara syraadditionssalter.

Ehuru föreningarna II, III, V och VI härrör från i natu- ren förekommande oleandomycin, skiljer de sig med avseende på 7800269-s 4 strukturen i 8-ställningen. I det naturliga materialet I och IV är denna struktur en epoxidring som àskâdliggöres enligt följande: Föreningar hänförande sig till II och V innehåller en metylgrupp i 8-ställningen med den angivna stereokemin och åskâdliggöres enligt följande: Den nomenklatur, som användes för benämning av de modifierade oleandomycinerna II och V är 8,8a-deoxi-8,8a-dihydro-oleando- mycin.

De föreningar III och VI som innehåller en cyklopropyl- ring i 8-ställningen benämnes 8,8a-deoxi-8,8a-metylen- oleandomycin och åskådliggöres enligt följande: 7800269-8 Detaljerad beskrivning av uppfinningen: Enligt det förfarande, -som tillämpas för syntetisering av de från 4"-deoxi-4"-amino-oleando- mycin härrörande antibakteriella medlen enligt förevarande uppfinning är följande schema, som utgår från ett ll,2'-dialkanoyl- eller 2'- alkanoyloleandomycin, belysande: (R = väte eller alkanoyl med 2-3 kolatomer; Ac = alkanloyl med 2-3 kolatomer) ll (X = N-OH, N-OCH3 eller N-0-CCH3) (forts.) 7800269-8 e I O fl (X = N-OH, N-OCHB eller N-OCCH5) Ovanstående schema kan också tillämpas för omvandling av föreningar IIA och IIIA till produkterna V respektive VI, vilka föreningar har formlerna: E 3 Åtš N o\ š g; (C113 ) 2 CH I, R 01": *\\\\CH3 f ufl° 0 C113 |||l| C33 w C33 CH al] o H 0,, 0 OH OCH IIA 3 IIIA °CH3 v; där R och Ac har ovan angivna betydelser. 50 40 7 7800269-8 Den första reaktionen i dessa sekvenser är den selektiva oxida-7 tionen av 4"-hydroxylgruppen. Detta förfarande innefattar omsätt- 1' av föreningarna IA, IIA eller IIIA med N-klorbärnstenssyraimid och dimetylsulfid åtföljd av tillsats av en tertiär amin, exempelvis trietylamin.

I praktiken förenas först N-klorbärnstenssyraimid och dimetyl- sulfíd i ett gentemot reaktionen inert lösningsmedel vid en tempera- tur av ungefär O°C. Efter 10-20 minuter injusteras temperaturen hos den så erhållna blandningen till ett värde mellan ca 0 och ca -25°C och substrat IA, IIA eller IIIA tillsättes medan nämnda temperatur upprätthålles. Efter 2-4 timmars reaktion tillsättes den tertiära aminen och kylbadet avlägsnas.

Beträffande de mängder, varmed reaktionskomponenterna användes, kan nämnas att det för varje mol använt alkoholsubstrat erfordras en mol N-klorbärnstenssyraimid och en mol dimetylsulfid. Experimentellt är det fördelaktigt att använda ett 1-20-faldigt överskott av bärn- stenssyraimiden och sulfiden, detta för att reaktionen snabbare skall fullbordas. Mängden använd tertiär amin bör svara mot den molara mängden använd bärnstenssyraimid.

Det gentemot reaktionen inerta, lösningsmedlet bör var ett scnmpåtagligt solubiliserar reaktionskomponenterna och icke reagerar i någon nämn- värd grad varken med reaktionskomponenterna eller de bildade pro- dukterna. Enär reaktionen genomföres vid en temperatur mellan ca O och ca -25°C föredrages att lösningsmedlet förutom de ovan angivna egenskaperna har en fryspunkt, som ligger under reaktionstemperaturen.

Iösningsmedel eller blandningar därav, som uppfyller dessa krav, är toluen, etylacetat, kloroform, metylenklorid och tetrahydrofuran. Iös- ningsmedel som uppfyller de ovan angivna kraven men som har en frys- punkt över reaktionstemperaturen kan också användas i små mängder i kombination med ett eller flera av de föredragna lösningsmedlen.

Speciellt föredraget lösningsmedel för förfarandet är toluen 'innehållande bensen.

Det ovan definierade förfarandet anses vara egenartat, enär oxidationen sker i 4"-ställningen medan ll-ställningen lämnas väsentligen opåverkad, när R är väte.

Alkanoylgruppen i 2'-ställningen avlägsnas genom solvolys, var- vid den 2'-alkanoyl-4"-deoxi-4*-oxo-oleandomycinbesläktade föreningen omröres i ett överskott på metanol hela natten vid rumstemperaturen.

Sedan man avlägsnat metanolen och renat återstoden erhållles föreningar 55 7800269-a 8 1, II eller' III, i vilka 121 av väte och x al» o. i Hydroxylgrupperna i ställningarna ll (R=H) och 2' (RfH) i ketonerna (X=0) I, II eller III kan acyleras genom behandling av nämnda föreningar med två mol pyridin och ett överskott på alkansyra- " ' anhydrid vid isbadstemperatur. I praktiken sättes den hydrowlhaltiga föreningen till kyld alkansyraanhydrid, varpå pyridinet tillsättes.

Sedan tillsatserna slutförts avlägsnas isbadet och blandningen om- röres hela natten vid rumstemperaturen. Produkten erhålles genom hydrolys av reaktionsblandningen med vatten och efterföljande extrak- tion av produkten med etylacetat. Alternativt kan överskottet på den som lösningsmedel använda alkansyraanhydriden avlägsnas i vakuum och det som återstod erhållna materialet renas på konventionellt sätt.

Föreningarna I, II och III, i vilka X är 0 och R och R1 har ovan angivna betydelser, är användbara som mellan- produkter för framställning av de LW-aminoantibakteriella medlen en- ligt förevarande uppfinning. Föredragna som mellanprodukter i denna grupp är 11,2ïdiacetyl-LL"-deoxi-lW-oxo-oleandomycin, ll-acetyl-LW- deoxi-IW-oxo-oleandomycin, lW-deoxi-LL"-oxo-oleandomycin, 2'-acetyl- 4" -deoxi-LUHoxo-oleandomycin , ll , 2 ' -diacetyl-B , Sa-deond-B , Ba-dihydro-LL" deond-llfl-oxo-oleandomycin, ll-acetyl-Sßa-deoxi-B,8a-dihydro-4"-deoxi-4' oxo-o leandomycin , 8 , 8a-deoxi-8 , Ba-dihydro-MJ' -deoad-li-'Hoxo-ole andomycin , 2' -acetyl-8 , 8a-deoxi-8 , Sa-dihydro-LL"-deoxi-lflßoxo-oleandomycin, ll , 2 ' - diacetyl-S ,8a-deoxi-_8 ßa-metylen-LL" -deoxi-lL"-oxo-o1eandomycin, ll- acetyl-B , 8a-deoxi-8 , Ba-metylen-ll" -deoxi-LL" -oxo-ole andomycin , 8 , 8a- deoxi-B , Sa-metylen-LL" -deoxi-llfi' -oxo-oleandomycin och 2 ' -acetyl-B , 8a- deoxi-B , 8a-metylen-4" -deozci-llflßoxo-oleandonrycin .

För framställning av de från 4"-deoxi-4"-amino-oleandomycin härrörande föreningarna kan man tillämpa flera olika syntesförfaran- den. Det första innefattar en inledande omvandling av 4"-deox:ï.-4"-oxo- föreningarna till oxim eller oximderivat, dvs. X - N-OH, N-OCH5 eller N-OäCHö, och åtföljande reduktion av oximen eller derivatet därav till aminen med formeln IV (Ra, E; = H), V eller VI.

Oximerna av ketonerna (X=O) framställes genom omsättning av nämnda ketoner med hydroaçylaminhydroklorid i en lösning av metanol- vatten vid rumstemperatur-en. I praktiken föredrages att använda ett överskott på hydroxylamin och vid användning av så mycket som ett B-faldigt överskott erhålles den önskade mellanprodukten i goda ut- byten. Vid tillämpning av en reaktionstemperatur överensstämmande med rumstemperaturen och användning av ett överskott av hydrozqlaminen kan man framställa det önskade oximderivatet på. 1-2 timar. Produkten isoleras genom att man till reaktionsblandningen sätter vatten, gör 50 55 40 9 7800269-8 reaktionsblandningen basisk till pH 9,5 och genomför extraktion med ett med vatten icke blandbart lösningsmedel, exempelvis etylacetat.

När man i stället för hydroxylamin-hydroklorid använder 0-metyl- hydroxylamin-hydroklorid, erhålles vid reaktionen O-metyloximderivatet.~ Vid användning av O-metylhydroxylamin föredrages att utsträcka reak- tionstiden till 6-12 timmar. Produkten isoleras på det sätt som här ovan angivits beträffande isoleringen avooximderivatet.

O-acetyloximföreningarna (X = N-OÖCH5) framställes genom acety- lering av den motsvarande oximen. Experimentellt omsättes en mol av oximen med en mol ättiksyraanhydrid i närvaro av en mol pyridin. Om man använder ett överskott på anhydriden och pyrídinet har reaktionen lättare att bli fullständig och det föredrages att använda ett 2-5- faldigt överskott. Reaktionen genomföras bäst i ett aprotiskt kolväte- lösningsmedel, exempelvis bensen eller toluen, vid rumstemperaturen hela natten. Sedan reaktionen slutförts tillsättes vatten och produk- ten separeras i kolväteskiktet. Alternativt kan O-acetylderivat fram- ställas genom att man behandlar den erforderliga ketonen med O-acetyl- hydroxylamin-hydroklorid under de reaktionsbetingelser, som är tillämp- liga för framställning av oximderivaten.

Föredragen oxim och föredragna oximderivat, som är användbara mellanprodukter för framställning av de från 4"-deoxi-4"-amino-oleando- mycin härrörande antibakteriella medlen är b1.a. ll,2'-diacetyl-4"- deoxi-4"-oxo-olenadomycínoxim, ll-acetyl-4"-deoxí-4"-oxo-oleandomycin- oxim, ll,2'-diacetyl-4"-deoxi-4"-oxo-oleandomwcin O-acetyloxim, ll- acetyl-4"-deoxi-4"-oxo-oleandomycin O-acetyloxim, ll,2'-díacetyl-8,8a- deoxi-8,Ba-díhydro-4"-deoxi-4"-oxo-oleandomycinoxim, l1-acetyl-8,8a- deoxi-8,8a-dihydro-4"-deoxi-4"-oxo-oleandomwcinoxim, ll,2'-diacetyl- 8,8a-deoxi-8,8a-dihydro-4"-deoxi-4"-oxo-oleandomcin O-acetyloxim, ll-acetyl-8,8a-deoxi-8,Ba-dihydro-4"-deoxi-4"-oxo-oleandomycin O- acetyloxim, ll,2'-diacetyl-8,8a-deoxi-8,8a-metylen-4"-deoxi-4"-oxo- oleandomwcinoxim, ll-acetyl-8,8a-deoxi-8,8a-metylen-4"-deoxi-4"-oxo- oleandomwcinoxim, ll,2'-diacetyl-8,8a-deoxi-8,8a-metylen-4"-deoxi-4“- oxo-oleandomycin O-acetyloxím och ll-aoetyl-8,8a-deoxi-8,8a-metylen- 4"-deoxi-4"-oxo-oleandomyoin O-acetyloxim. O Ketonderivaten (X=N-OH, N-OCH5 eller N-OÖCH5) reduceras genom katalytisk hydrering, varvid en lösning av oximen eller derivat därav i en lägre alkanol, som isopropanol, och som katalysator Raney-nickel, % palladium på träkol eller palladiumoxid skakas i en väteatmosfär vid ett ursprungligt tryck av 545 kPa vid rumstemperaturen hela natten.

Den förbrukade katalysatorn avfiltreras och lösningsmedlet avlägsnas från filtratet i och för isolering av det önskade 4"-deoxi-4"-amino- 55 40 7800269-8 10 substituera-de, antibakteriella medlet IV, V eller VI. Om metanol an- vändes som reduktionslösningsmedel sker solvolys av Z-alkanoylgruppen.

För att undvika att denna grupp avlägsnas föredrages isopropanol som lösningsmedel .

Det andra, och föredragna, sättet att ur ketonerna (X=O) I, II och III framställa de primära aminerna IV, V och VI innefattar kon- densation av nämnda ketoner med ammoniumsaltet av en lägre alkansyra och efterföljande reduktion av den in situ bildade iminen. Förutom ammoniumsalter av lägre alkansyror kan man använda andra ammonium- salter, såsom ammoniumsalter av oorganiska syror.

Vid praktisk tillämpning behandlas en lösning av ketonen I, II eller III (X=O) i en lägre alkanol, exempelvis metanol, med ett am- moniumsalt av en alkansyra, exempelvis ättiksyra, och den kylda reak- tionsblandningen behandlas med reduktionsmedlet natriumcyanoborhydrid.

Reaktionen får fortsätta vid rumstemperaturen i flera timmar, varpå hydrolys genomföras och produkten isoleras.

Ehuru en mol ammoniumalkanoat erfordras per mol keton, är det lämpligt att tillsätta ett överskott i ändamål att tillförsälma snabb bildning av iminen. Man kan använda ända upp till ett lO-faldigt över- skott utan att påverka slutproduktens kvalitet.

Beträffande den för användning avsedda mängden reduktionsmedel per mol keton kan nämnas, att man föredrar ca två mol natriumcyanobor- hydrid per mol keton.

Reaktionstiden för reduktionen varierar mellan 2 och 3 timmar vid omgivningens temperatur.

Såsom ovan påpekats föredrages metanol som lösningsmedel och ammoniumacetat som ammoniumalkanoat- Isopropanol kan också användas som lösningsmedel och är speciellt lämplig, när solvolys av ï-alkanoyl- gruppen skall undvikas.

Vid isolering av de önskade lW-deozd-LL"-amino-oleandomycinderi- vaten från de icke basiska biprodukterna eller utgångsmaterialet ut- nyttjar man slutproduktens basiska natur. Följaktligen extraheras en vattenlösning av produkten inom ett intervall av småningom stigande pH, så att neutrala eller icke basiska material extraheras vid lägre pH och produkten vid ett pH av ungefär 9. Extraktionslösningsmedlen, nämligen etylacetat eller dietyleter, tvättas med koksaltlösning och med vatten, torkas över natriumsulfat och produkten utvinnes genom avlägsnande av lösningsmedlet._ __ Ytterligare rening kan, om så erfordras, åstadkommas genom på i och för sig känt sätt genomförd kolonnkrromatografering på kiseldi- oiddgel. 40 11 78002-69-8 Den ovannämnda, reduktiva amineringen kan åstadkommas under andra reducerande betingelser förutom genom användning av natrium- cyanoborhydrid. Vissa platinametallkatalysatorer, såsom palladium på träkol, kan användas tillsammans med väte och ett ammoniumalkanoat för effektiv omvandling av föreningarna I, II och III (X=O) till IV, V respektive VI.

Experimentellt behandlas en lösning av den lämpliga ketonen i en lägre alkanol, såsom metanol eller isopropanol, med ett ammonium- alkanoat, såsom ammoniumacetat, och 10% palladium på träkol, och den så erhållna suspensionen skakas i väteatmosfär vid en temperatur mel- lan ca 25 och ca 50°C, till dess den teoretiska mängden väte absorberats.

Beträffande mängdförhållandet mellan reaktionskomponenterna kan nämnas, att man föredrar ett lO-faldigt överskott på ammoniumalkanoat för tillförsäkring av fullständig reaktion på rimlig tid. Mängden katalysator kan variera mellan 10 och 50 viktprocent räknat på vikt- mängden av den som utgângsmaterial använda ketonen. Begynnelsetrycket i vätgasen är icke av avgörande betydelse och ett tryck mellan en atmosfär och 3500 kPa föredrages för förkortning av reaktionstiden.

Med nämnda parametrar varierar reaktionstiden mellan 2 och 6 timmar.

Vid slutet av den reduktiva amineringen avfíltreras katalysa- torn och filtratet indunstas till torrhet. Produkten renas på ett sätt, som här ovan angives beträffande reningen av den produkt, som framställes med användning av natriumcyanoborhydrid som reduktions- medel. I Antibakteriella föreningar med formeln IV, i vilken R2 och R alkyl med l-6 kolatomer, syntetiseras bekvämt ur ketonen I (X=O) och lämplig amin R5NH2 med användning av natriumcyanoborhydrid som reduktionsmedel. För att hålla pH mellan ca 6 och ca 7 användes en alkansyra, exempelvis ättiksyra, i en molar mängd, som överens- stämmer med den molara mängden använd amin. Alternativt kan en mot- svarande mängd klorvätegas användas i stället för alkansyran.

Mängdförhållandet mellan reaktionskomponenterna, reaktionstempe- raturen och -tiden liksom även upparbetningen av den reduktiva amine- ringsreaktíonen överensstämer med de motsvarande parametrarna för den reaktion, som ger upphov till bildning av föreningar, i vilka var och en av R2 och R5 är väte och natriumcyanoborhydrid användes som är väte reduktionsmedel. .10 7800269-8 12 Såsom ovan påpekats kan 2'-alkanoylgruppen solvolyseras genom att man omrör nämnda derivat av aminen hänförande sig till IV, V eller VI i en metanollösning hela natten vid omgivningens temperatur.

Bland dessa föreningar föredrages på grund av antibakteriell användbarhet 4"-deoxi-4"-amino-oleandomycin, ll-acetyl-4“-deoxi-4"- amino-oleandomycin, ll,2'-diacetyl-4"-deoxi-4"-amino-oleandomycin, ll-acetyl-8,8a-deoxi-8,8a-dihydro-4"-deoxi-4"-amino-oleandomycin, 11,2'-diacetyl-8,8a-deoxi-8,8a-dihydro-4"-deoxi-4"-amino-oleandomycin, ll-acetyl-8,8a-deoxi-8,Ba-metylen-4"-deoxi-4"-amino-oleandomyoin och ll,2'-diacetyl-8,8a-deoxi-8,8a-metylen-4"-deoxi-4"-amino-oleandomycin.

När man utnyttjar den kemoterapeutiska aktiviteten hos de för- eningar enligt uppfinningen, vilka bildar salter, föredrages givetvis att använda de farmaceutiskt godtagbara salterna. Ehuru vattenolöslig- het, hög toxicitet eller bristande kristallinitet kan göra några speciella slag av salter olämpliga eller mindre önskvärda för använd- ning, exempelvis för en viss farmaceutisk applikation, kan de vatten- olösliga eller giftiga salterna omvandlas till de motsvarande farma- ceutiskt godtagbara baserna genom sönderdelning av saltet på ovan be- skrivet sätt eller också kan de omvandlas till något önskvärt, farma- eeutiskt godtagbart syraadditionssalt.

Som exempel på syror, som ger farmaceutiskt godtagbara anjoner, kan nämnas saltsyra, bromvätesyra, jodvätesyra, salpetersyra, svavel- syra och svavelsyrlighet, fosforsyra, ättiksyra, mjölksyra, citron- syra, vinsyra, bärnstenssyra, äppelsyra, glukonsyra och asparaginsyra.

De för framställning av de antibakteriella medlen enligt före- varande uppfinning använda utgàngsmaterialens stereokemi överensstäm- mer med de naturliga materialens. Oxidationen av 4"-hydroxylgruppen till en ketongrupp och den därpå följande omvandlingen av den så er- hållna ketonen till 4"-aminerna möjliggör en förändring av 4"-substi- tuentens stereokemi från den som gäller för den naturliga produkten.

Följaktligen är det vid omvandling på de här ovan beskrivna sätten av föreningarna I, II odnIII(X:O) till aminer möjligt att två epimera 'aminer bildas. Experimentellt är att märka, att båda de epimera aminer- na föreligger i slutprodukten i varierande mängder beroende på valet av syntesmetod. Om den isolerade produkten till övervägande del består av en av epimererna kan denna epimer renas genom upprepad kristallisa- 50 55 40 13 7800269-8 tion 1 ett lämpligt lösningsmeael ti11 kønstant smältpunkz. Den andra epímeren, dvs. den som föreligger i mindre mängd i det ursprungligen isolerade fasta materialet, blir den förhärskande produkten i moder- luten. Den kan utvinnas ur denna på känt sätt, exempelvis genom in- dunstníng av moderluten och upprepad omkristallisation av indunstnings- återstoden, till dess att man erhåller en produkt med konstant smält- punkt, eller också kan den utvinnas genom kromatografering.

Ehuru nämnda blandning av epimerer kan separeras på känt sätt är det av praktiska skäl fördelaktigt att använda nämnda blandning sådan den isoleras från reaktionen. Det är emellertid ofta fördelak- tigt att rena epimerblandningen genom åtminstone en omkristallisation i ett lämpligt lösningsmedel, kolonnkromatografering, fördelning mel- lan lösningsmedel eller triturering i ett lämpligt lösningsmedel. Även om man vid en sådan rening icke nödvändigtvis uppnår separation av epimererna avlägsnas främmande material, såsom utgångsmaterial och icke önskvärda biprodukter.

Den absoluta stereokemiska specificeringen har ännu icke helt fastställts. Båda epimererna av en given förening uppvisar emellertid samma typ av aktivitet, exempelvis som antibakteriella medel.

De här beskrivna, nya 4"-deoxí-4"-amino-olenadomycinderivaten uppvisar in vitro aktivitet gentemot ett flertal grampositiva mikro- organismer, såsom Staphylococcus aureus och Streptococcus pyogenes och gentemot vissa gramnegativa mikroorganismer, såsom de med sfärisk eller ellipsoid form (kocker). Deras aktivitet kan lätt demonstreras in vitro gentemot olika mikroorganismer i ett h¿ärna-hjärta-infusícns- medium genom den vanliga dubbla serieutspädningstekniken. Deras akti- vitet in vitro gör dem användbara för topisk applikation i form av salvor, krämer och liknande, för sterilisering, exempelvis av sjukrums- utensilier och som industriella antimikrobmedel, exempelvis för vat- tenbehandling, för slembekämpning, för träkonservering och som till- sats till mâlningsfärg.

För användning in vitro, exempelvis för topisk applikation, är det ofta bekvämt att blanda den valda produkten med en farmaceutiskt godtagbar bärare, exempelvis vegetabilisk olja eller mineralolja eller en uppmjukande kräm. De kan likaledes lösas eller dispergeras i vätske- formiga bärare eller lösningsmedel, såsom vatten, alkohol, glykoler eller blandningar därav eller andra farmaceutiskt godtagbara, inerta medier, dvs. medier, som icke har någon skadlig verkan på den aktiva beståndsdelen. För sådana ändamål är det i allmänhet godtagbart att använda koncentrationer av aktiva beståndsdelar från ca 0,01 till ca viktprocent räknat på den totala blandningen. » 55 40 7800269-s H Dessutom är många av föreningarna enligt förevarande uppfinning aktiva gentemot grampositiva och vissa gramnegativa mikroorganismer in vivo, såsom Pasteurella multocida och Neisseria sicca vid oral och/eller parenteral administration på människor och djur. Deras ak- tivitet in vivo är mera begränsad gentemot känsliga organismer och bestämmas på vanligt sätt innefattande behandling av möss, som alla har väsentligen samma vikt, med testorganismen och efterföljande ad- ministration av testföreningen på försöksdjuren oralt eller subkutant.

I praktiken ympas mössen, exempelvis tio stycken, intraperitonealt med lämpligt utspädda kulturer innehållande ungefär 1-10 gånger IJJloo (den lägsta koncentration av organismer som erfordras för att 100% av försöksdjuren skall dö). Kontrollprov genomföres samtidigt med möss, på vilka man ympar lägre utspädningar som kontroll beträffande möjliga variationer i testorganismens virulens. Testföreníngen ad- ministreras 0,5 timar efter ympningen och administrationen upprepas 4, 24 och 48 timar senare. Överlevande möss hålles i fyra dagar ef- ter den sista behandlingen och antalet överlevande antecknas.

Vid användning in vivo kan dessa föreningar administreras oralt eller parenteralt, exempelvis genom subkutan eller intramuskulär in- jiciering i doser mellan ca l och ca 200 mg/kg kroppsvikt och dag.

Gynnsam dosering ligger mellan ca 5 och ca 100 mg/kg kroppsvikt och dag och föredragen dosering mellan ca S och ca 50 mg/kg kroppsvikt och dag. lämpliga vehikler för parenteral injiciering kan antingen vara vattenhaltiga, såsom vatten, isotonisk koksaltlösning, isotonisk dextros, Ringerš lösning eller icke vattenhaltiga, såsom heta oljor av vegetabiliskt ursprung (bomullsfröolja, jordnötsolja, majsolja, sesamolja), dimetylsulfofid och andra icke vattenvehikler, som icke stör preparatets terapeutiska effektivitet och som är ogiftiga i de volymer eller proportioner, varmed de användes (glycerol, propylen- glykol, sorbitol). Dessutom kan man med fördel använda kompositioner lämpliga för framställning extempore av lösningar för administra- tionen. Sådana kompositioner kan innehålla vätskeformiga utspädnings- medel, exempelvis propylenglykol, dietylenkarhamat, glycerol, sorbi- tol etc; buffertsubstanser, hyaluronidas, lokalanestetika och oorga- niska salter, som tillförsälcrar önskvärda farmakologiska egenskaper.

Dessa föreningar kan också kombineras med olika farmaceutiskt godtag- bara, inerta bärare, b1.a. fasta utspädningsmedel, vattenhaltiga ve- hikler, ogiftiga, organiska lösningsmedel och beredas i form av kapslar, tabletter, pastiller, torrblandningar, suspensioner, lös- ningar, elixirer och parenterala lösningar eller suspensioner. I all- mänhet användes föreningarna i olika dosform med koncentration mellan 50 55 40 *S 7800269-8 ca 0,5 och ca 90 viktprooent räknat på totala blandningen.

I följande exempel belyses uppfinningen, men denna är givetvis icke begränsad till de i exemplen angivna detaljerna eller speciella åtgärderna utan innefattar allt det som faller inom de efterföljande kraven. Uppfinningen kan varieras utan att man därför frångår upp- finningsidên eller överskrider uppfinningens ram.

Exempel 1: 2'-Acetyl-4"-deoxi-4"-oxo-oleandomwcig. Dimetylsulfid (0,537 ml) sattes till en grumlig lösning av 467 mg N-klorbärnstensv syraimid i 20 ml toluen och 6 ml bensen kyld till -5°C och hallen under kväveatmosfär. Efter omrörning vid 0°C i 20 minuter kyldes blandningen till -25°C och 1,46 g 2'-acetyloleandomycin och 15 ml toluen tillsattes. Omæörningen fortsattes i 2 timmar vid -20°C, var- på 0,46 ml trietylamin tillsattes. Reaktionsblandningen hölls vid -20°G i ytterligare 5 minuter, varpå dess temperatur tilläts stiga till 0°0. Blandningen hälldes under omrörning i 50 ml vatten och 50 ml etylacetat. Den vattenhaltiga blandningens pH injusterades på 9,5 genom tillsats av en vattenlösning av natriumhydroxid. Den or- ganiska fasen avskildes därefter, torkades över natriumsulfat och indunstades i vakuum, varigenom man erhöll ett vitt skum, (1,5 g).

Vid triturering med dietyleter erhölls 864 mg råprodukt. Vid om- kristallisation av denna råprodukt två gånger i metylenklorid-diety1- eter erhölls 212 mg av den rena produkten, som hade en smältpunkt av 185-l85,S°C.

Analys - %C %H %N Beräknat för C57H¿l0l3N: 61,1 8,5 1,9 Funnet 60,9 8,4 1,9 WR (4, 0130191 5,60 (IHM, 3,50 (5H)B, 2,73 (ZIÛYII, 2,25 (GIÜS Oßh 2,03 (sms.

Det ovan beskrivna förfarandet upprepades men med användning av 2'-propionyloleandomycin som utgångsmaterial och man erhöll 2'-propio- nyl-4"-deoxi-4"-oxo-oleandomwein.

Qggmpel 2: 4"-Deogi-4"-oxo-oleandomcin. En lösning av 1,0 g 2'-acetyl- 4"-deoxi-4“oxo-oleandomcin i 20 ml metanol omrördes vid rumstempera- turen hela natten. Iösningen indunstades i vakuum och man erhöll den önskade produkten i form av ett vitt skum (957 mg).

NHR (6, GDCl3): 5,60 (lH)m, 3,50 (5H)s, 2,85 (2H)m och 2,26 (6H)s.

Exempel §: ll,2'-Diacegzl-4"-deoxi-4"-oxo-oleandomgcin.

A. Via aeetzlerigg: Till 4,0 ml ättiksyraanhydrid, som kylts till O°C i ett isbad och som hölls under kväveatmosfär, sattes 727 NB 2'-acetyl- 4"-deoxi-4"-oxo-oleandomvcin. Efter 5 minuter tillsattes 0,158 ml pyridin och den grumliga suspensionen omrördes hela natten vid rums- 50 40 27800269-s W tempel-smell. nen så erhållna lösningen nällees 1 vatten nnskiksee med etylacetat och pH injusterades på 7,2 genom tillsats av fast natriumbikarbonat och därefter på 9,5 med användning av lN%NaOH.

Den organiska fasen avskildes, tvättades först med vatten och där- efter med en mättad koksaltlösning och torkades över natriumsulfat.

Iösningsmedlet avlägsnades under reducerat tryck och man erhöll S88 mg av den önskade produkten. mm (s, cnclšy 5,48 (ams, 2,ea (zmn, 2,26 (sms een 2,06 (sms.

Det ovan beskrivna förfarandet upprepades med användning av de erforderliga utgångsmaterialen, nämligen 2'-alkanoyl-4“-deoxi-4"- oxo-oleandomvcin och acyleringsmedel för syntetisering av följande föreningar: ll-acetyl-2'-propionyl-4"-deoxi-4"-oxo-oleandomycin, ll- propiönyl-2'-acetyl-4"-deoxi-4"-oxn-oleandomycin och ll,2'-dipropio- nyl-4"-deoxi-4"-oxo-oleandomvcin.

B. Via oxidation: Till 4,5 g Nsklorbärnstenssyraimid, 50 ml bensen och 150 ml toluen i en torr kolv försedd md magnetisk omrörare och kväveinlopp och kyld till -5°C sattes 5,56 ml dimetylsulfid. Efter omrörning vid 0°G i 20 minuter kyldes innehållet till -25°C och be- handlades med 5,0 g lLZ-diacetyl-oleandolmycin i lOO ml toluen.

Kylningen och omrörningen fortsattes i 2 timmar, varpå 4,75 ml tri- etylamin tillsattes. Reaktionsblandningen omördes vid 0°C i 15 minu- ter och hälldes därefter i 500 ml vatten. pH injusterades på 9,5 med en l-normal vattenlösning av natriumhydroxid och den organiska fasen avskildes; tvättades med vatten, med en koksaltlösning, torkades över natriumsulfat och lösningsmedlet avlägsnades i vakuum, varige- nom man erhöll 4,9 g av den önskade produkten i form av ett skum, vilket visade sig vara identiskt med produkten enligt exempel 3A. man (s, 011015» 3,48 (ams, 2,61 (zmn, 2,2a (sms een 2,03 (sms.

Qgempel 4: ll-Acet1l:4"-deoxi-4"-oxo-oleandomggig. En lösning av 4,0 g ll,2'-diacetyl-4"-deoxi-4"-oxo-oleandomcin i 75 ml metanol omrördes vid rumstemperaturen hela natten. Reaktionsblandningen indunstades un- der reducerat tryck, varigenom man erhöll produkten i form av ett skum. En dietyleterlösning av indunstningsåterstoden gav vid behand- ling med hexan 2,6 g av produkten i form av en vit, fast substans med en smältpunkt av 112-1l?°C. mm (s, 011015» aAa (ams, 2,60 (amn, 2,2a (ams een 2,01 (ams.

Det ovan beskrivna förfarandet upprepades men med användning av ll,2'-»dipropionyl-4"-deoxi-4"-oxo-oleandomwcin oëh-ll-propionyl- 2'-acetyl-4"edepxo-4"-oxo-oleandomcin, varigenom man erhöll ll- propionyl-4"-deoxi-4"-oxo-oleandomwcin.

Exempel 5: ll,2f-Diacetzl-4"-deoxi-4"-oxo-oleandoggpin. En reaktions- 55 W 78ÛU2Ö9-8 blandning áv 1,o g 11,2'-<1iacevy1-°1eand°myein, 7,09 m1 aimecylsulf- oxid och 9,44 ml ättiksyraanhydrid omrördes vid rumstemperaturen i 4 dagar. Den därvid erhållna gula lösningen sattes till vatten över- skiktat med bensen. pH injusterades därefter med en 1-normal vatten- lösning av natriumhydroxid på 9,5 och den organiska fasen avskildes, torkades över natriumsulfat och indunstades i vakuum till torrhet. Det gula, oljeartade skummet (1,l4 g) kromatograferades över 20 g kisel- dioxidgel med användning av en blandning av kloroform och aceton i ' mängdförhållandet 9:1 som elueringsmedel. Iösningsmedlet avlägsnades från fraktionerna och man erhöll 800 mg av den önskade produkten och 110 mg av en biprodukt. _ Det ovan beskrivna oxidationsförfarandet upprepades med använd- ning av ll-acetyl-2'-propionyloleandomycin; 11,2'-dipropiony1oleando- mycin; och ll-propionyl-2'-acetyloleandomycin som utgångsmaterial, varvid man erhöll ll-acetyl-2'-propionyl-4"-deoxi-4"-oxo-oleandomcin; ll,2'-dipropionyl-4"-deoxi-4"-oxn-oleandomycin respektive l1-propionyl- 2'-acetyl-4"-deoxi-4"-oxo-oleandomycin. åggmpel 6: 2'-gcetyl¿8,8a-deogi-8,8a-dihydro-4"-deoxi;4"-oxo-oleanggf gggig. I en torr kolv försedd med magnetisk omrörare och kväveinlopp, vilken kolv innehöll en till -5°C kyld blandning av 11,6 g N¥klor- bärnstenssyraimid, 750 ml toluen och 250 ml bensen, satsades 6,0 ml dimetylsulfid och den så erhållna lösningen omrördes i 20 minuter.

Temperaturen sänktes ytterligare till -20°C och 25 g 2'-acetyl-8,8a- deoxi-8,8a-dihydro-oleandomcin i 500 ml toluen tillsattes. Efter omrörning i 2 timar vid -20°C tillsattes 11,4 ml trietylamin och reaktionsblandningens temperatur fick småningom stiga till 0°C. Reak- tionsblandningen hälldes därefter i 1500 ml vatten och pH injustera- des på 9,5 med lN>Na0H. Den organiska fasen avskildes, tvättades, först tre gånger med vatten, därefter en gång med en mättad koksalt- lösning och torkades över natriumsulfat, varpå lösningsmedlet av- lägsnades under reducerat tryck. Det därvid bildade skummet omkristal- liserades i dietyleter och man erhöll 15 g av den rena produkten med en smältpunkt av 197-l99°C.

NHR (8, 0DCl5)= 5,11 (1H)m» 3,51 (5H)B, 2,25 (6H)B Och 2,05 (3H)B- ågempel 7: 8.Ba-Deo;;;8,8a-dihydro-4"-deoxi-4"-oxo-oleandomycin.

En suspension av 2,0 g 2'-acetyl-8,8a-deoxi-8,8a-dihydro-4"-deoxi- 4"-oxo-oleandomycin i 100 ml metanol omrördes vid rumstemperaturen i 20 timmar. Reaktionsblandningen indunstades under reducerat tryck och man erhöll 1,8 g av den önskade produkten i form av ett vitt skum.

NHR (5, CDC15)= 5.50 (1H)m» 3.51 (5H)s och 2.26 (6H)s.

Exempel 8: ll,2'-Diacetyl-8,8a-deoxi-8,8a-dihydro-4"-deoxi-4"-oxo- 55 40 7800269-8 18 geandogzcín. Till en i ett isbad kyld suspension av 15,0 g 2'-acetyl- 8,8a-deoxi-8,Ba-dihydro-llfl-deoxi-lt"-oxo-oleandomycin i 65,0 ml ättik- syraanhydrid- sattes 2,8 m1 pyridin. Kylbadet avlägsnades och reaktions- blandningen omrördes vid rumstemperaturen hela natten. Den så erhållna lösningen sattes därefter till 500 ml vatten och 300 ml etylacetat. pH injusterades på 7,0 med fast natriumbikarbonat och därefter på 9,5 med en lß-normal vattenlösning av natriumhydrozcid. Den organiska fasen avskildes, tvättades två gånger med vatten och därefter en gång med en koksaltlösning och torkades över natriumsulfat, varpå lösnings- mealet avlägsnades i vakuum. man erhöll på detta sätt ràprodukcen i form av ett skum.

Enär resultat erhållna genom kromatografering av ett prov av råprodukten antyder ofullständig reaktion, kombinerades den i form av ett skum erhållna råprodukten med 28 ml pyridin och 79 ml ättik- syraanhydrid och det hela omrördes vid rumstemperaturen i 72 timmar.

Reaktionsblandningen upparbetades på ovan angivet sätt och man er- höll l2,4 g av den önskade produkten. mm (s, cnc15)= 5,51 (ams, 2,26 (ams och 2,10 (sms. ll-Pro io l-2'-acet 1-8 8a-deozd-8 Ba-dih dro-li-'fl-deozcl- E: xo-oleandogcin. Det i exempel 8 beskrivna förfarandet upprepades men utgående från 6,5 g 2'-acetyl-S,8a-deoxi-8ßa-dihydro-llfl-deozci- lW-oxo-oleandomycin, 40 ml propionsyraanhydrid och 14 ml pyridin.

Efter 72 timmars omsättning upparbetades blandningen på sätt som an- gives i exempel 8 och man erhöll den önskade produkten.

Exempel 10: ll-Acetyl-B , 8a-deoxi-8 , 8a-dih1dro-4"-deoad-lifl-oxo-oleando- gcin. En lösning av 11,5 g ll,2'-diacetyl-8,8a-deoxi-8,8a-dihydro- 4"-deofi-lvHoxo-oleandomycin i 100 ml metanol omrördes hela natten vid rumstemperatur-en, varpå reaktionsblandningen indunstades till torrhet under reducerat tryck. Man erhöll på detta sätt 10,6 g rå- produkt i form av ett skum. Råprodukten löstes i kloroform och lös- ningen hälldes i en kiseldioxidgelkolonn. Sedan 3 1 kloroform bringats att passera genom kolonnen eluerades produkten med kloroform/metanol (l9zl) . Fraktioner om vardera 800 droppar upptogs i en automatisk fraktionsuppsamlare. Fraktionerna 50-56, 57-62, 65-69 och 70-80 kom- binerades och indunstades i vakuum till torrhet, varigenom man erhöll 2,9 g av den rena produkten.

NHR (S, CDC15)= 3,55 (5198, 2.31 (6198 Och 2,05 (BEÛS- Exem el ll: ll-Pro ion 1-8 8a-deoaci-8 Ba-dih dro-4"-deo:d.-4"-oxo- oleandogzcin. Det i exempel 10 beskrivna förfarandet upprepades men utgående från ll-propionyl-.T-aoetyl-B,8a-deoxi-8ßa-dihydro-IW-deoxi- l-W-oxo-oleandomycin enligt exempel 9 och man erhöll den önskade, i 55 40 W 7800269-s rubriken till förevarande exempel angivna föreningen.

Exempel 12: 2'-Ace1_r_¶l-8,8a-deoxi-8ßa-dihzdro-oleandoggcin. Till en lösning av 5,0 g 8,8a-deox:L-8.Sa-djhydro-oleandomycin i 15 ml bensen sattes 0,75 ml ättiksyraanhydrid och den så erhållna reaktionsbland- ningen omrördes vid rumstemperaturen i 1,5 timar. lösningen sattes till 100 ml vatten och pH injusterades på 7,5 med fast natriumbikarbo- nat och därefter på 9,5 med en l-normal vattenlösning av natrium- hydroxid. Efter 10 minuters omrörning avskildes det organiska skiktet, tvättades först två gånger med vatten, därefter en gång med en mättad koksaltlösning, torkades över natriumsulfat, varpå lösningsmedlet avlägsnades under reducerat tryck. Man erhöll på detta sätt 4,9 g av den önskade produkten med en smältpunkt av 202-204°C.

NHR (8, CDCI5)= 5,05 (1H)m, 5,40 (3198, 2,25 (6108 0011 2,05 (5198- Det ovan beskrivna förfarandet upprepades men ättiksyraanhydri- den utbyttes mot en ekvivalent mängd propionsyraanhydrid och man er- höll 2 ' -propionyl-B , Ba-deoxi-B , Ba-dihydro-oleandomycin .

Exempel 15: 2'- Propionzl-Bßa-deoxi-S,Sa-dihydro-M-deon-LW-oxo- oleandogyjcin. Till en lösning av 575 ml toluen och 125 ml bensen sattes 5,8 g N-klorbämstenssyraimid och blandningen omrördes vid rumstemperaturen i 15 minuter. Reaktionsblandningen lqyldes till -5°C och försattes med 5,0 ml dimetylsulfid, varpå omrörningen fortsattes i ytterligare 20 minuter. Temperaturen sänktes till -20°C, varpå 12,8 g 2'-propionyl-8,8a-deoxi-8,8a-dihydro-oleandomycin i 250 ml toluen tillsattes. Efter 2 timmar tillsattes 5,7 ml diet-ylamin och kgylbadet avlägsnades. När reaktionstemperaturen stigit till 0°C kyldes bland- ningen i 750 ml vatten. pH 'injusterades på 9,5 med IN-NaOH och den organiska fasen avskildes. Efter tvättning med vatten tre gånger och med en mättad koksaltlösning, torkades den organiska fasen och in- dunstades under reducerat tryck, varigenom man erhöll den önskade produkten.

Exempel 14: ]_.l,ï-Diacetyl-Sßg-deog-Bßa-metylen-lt" -deoad-IW-oxo- oleandogqcin. Till en till -5°0 kyld, grumlig lösning av 454 mg N- klorbärnstenssyraimid i 15 ml toluen och 5 ml bensen sattes 0,527 ml dimetylsulfid. Efter omrörning i 20 minuter vid 0°C Iqyldes reaktions- blandningen till -25°C och försattes med 500 ml ll,2'-diacety1-8,8a- deoxi-Bßa-metylen-oleandomycin och 10 ml toluen. Omrörningen fort- sattes i 2 timmar vid -20°C, varpå 0,46 ml trietylamin och l ml toluen tillsattes. Kylbadet avlägsnades och reaktionsblandningens temperatur fick stiga till O°C. Den hälldes därefter i 50 ml vatten och 50 ml etylacetat. pH injusterades omsorgsfullt på 9,5 och den organiska fasen avskildes, torkades och indunstades till torrhet. På detta sätt lO 7800269-8 20 erhölls 520- mg av den något våta, önskade produkten i form av ett vitt skum.

NIIR (S, CDC15): 3,50 (3H)s, 2,50 (6H)s, 2,06 (6H)s och 0,58 (4H)m.

Exempel 15: Det i exempel 14 beskrivna förfarandet upprepades men utgående från lämpligt 8,8a-deoxi-8ßa-metylen-oleandomycin för fram- ställning av följande 8,8a-deoxi-8,8a-metylen-4"-deoxí.-4"-oxo-oleando- mycinderivat: (3 9. cflšcnec- cnšcnac- o H- cH É- 3 S? H- cnšcflzc- Exeqgel 16 : ll-Acetyl-B ,8a-de oxi-8 ,8a-mety1en-ll~"-deo:ci.-ll-" -oxo- oleandoggcin. En lösning av 400 mg 11,2'-diacetyl-8,8a-deoxi-8,8a- metylen-læ"-deofi-lW-oxo-oleandouzycin i 10 ml metanol omrördes vid rumstemperaturen hela natten, varpå den indunstades 'i vakuum. Han erhöll på detta sätt 270 mg av den önskade produkten.

ITMR (6, 013019: 3,46 (EIÜS, 2,26 (6H)s, 2,03 (5H)s och 0,56 (4H)m.

H veoozee-s Exemgel 12:' Det i exempel 16 beskrivna förfarandet upprepades men utgående från lämpligt 2'-alkano;7l-8,8a-deoxi.-8,8a-metylen-1+"-deo:d- ÅW-oxo-oleandongycin för framställning av följande föreningar: : RI = \o PHCHB) 2 CH Cfl R 0,, °' 3 v, “no o C113 nfl' ca CH\“\\ /Ij/'oaü 3 o 3 CH 8 3 *O OCH3 Ut smaterial Produkt R Bl R RI O O O 3- on en ö'- cn å- H- “Ha z 2 s C32 <2 se c Il ll cl? 9.

H- CH5C- H- H- ” H” _' H (n) H Exempel 18: 11 ,2'-Diace§1l-8,Ba-deoad-B,8a-metylen-4"-deoxí-4" -oxo- oleandegzcín. I en torr kolv försedd med kväveinlopp satsade-s 18 ml metylendiklorid och 1,97 m1 dimetylsulfozdd och den så erhållna lös- ningen kyldes till -60°C. Trifluorättiksyraanhydrid (5,9 ml) till- sattes småningom och omrörningen fortsattes i kyla i 10 minuter.

Reaktíonsblandningen kyldes ytterligare till -70°C och 5,34 8 11,2'- diacetyl-B,8a-deoxi-8ßa-metylen-oleandomycin i 27 ml metylendiklorid tillsattes droppvis med sådan hastighet, att temperaturen icke steg 7800269-s H över -50°C.' Sedan reaktionsblandningen 'kgylts på nytt till -?0°C till- sattes 9,69 ml tríetylamin och kylningen fortsattes i 10 minuter.

Reaktionsblandningens temperatur tilläts därefter stiga till -10°C, varpå reaktionsblandningen hälldes i 75 ml vatten. pH injusterades på 9,5 med IN-NaOH och metylendikloriden avskildes. Den organiska fasen tvättades därefter med vatten (2x5O m1) och med en mättad kok- saltlösning (lx2O ml), varpå den torkades över natriumsulfat. Iös- ningsmedlet avlägsnades i vakuum och man erhöll 6,2 g av produkten, som förutom en spårmängd föroreningar visade sig vara identisk med produkten enligt exempel 14.

Exempel 12: Det i exempel 18 beskrivna förfarandet upprepades men utgående från det erforderliga ï-alkanoyl-B,8a-deo:d.-8,8a-metylen- oleandomycinet för erhållande av följande lW-deozd-LW-oxoderivat: cušcfiac- cfišc- o _ gg EL H 5 O ll n- cnñcnac- o o "- en ca 5- cfišc 5 2 9. 9 - B 7800269-8 Exempel gg; ll,2'-Diacetyl-4"-deoxi-4"-oxo-oleandomvcin-ogim. Till en lösning av 18,1 g hydroxylaminhydroklorid i 300 ml vatten och 200 ml metanol sattes 50 g ll,2'-diacetyl-4"-deoxi-4"-oxo-oleandomvcin och reaktionsblandningen omrördes vid rumstemperaturen i en timme. Den så erhållna lösningen sattes till vatten och pH injusterades därefter på 7,5 med fast natriumbikarbonat och därefter på 9,5 med 1NëNaOH.

Produkten extraherades med etylacetat och de torra extrakten koncentre- rades till ungefär 170 ml. Hexan sattes till den upphettade etyl- acetatlösningen till grumlíngspunkten och den grumliga lösningen kyl- des. Den utfällda produkten avfiltrerades och torkades och man erhöll 29,8 g med en smältpunkt av 223,5-225°C. mm (69 cDCl3): 3130 (3H)s9 (an-Jm: (6H)5 Ûch 2910 (3H)3° Det ovan beskrivna förfarandet upprepades men utgående från O-acetylhydroxylamín-hydroklorid och erforderlig keton för erhållande av 2'-acetyl-4"-deoxi-4"-oxo-oleandomycin-O-acetyloxim och 2'-propio- nyl-4"-deoxi-4"-oxo-oleandomwcin-O-acetyloxim. 7800269-8 24 Exemgel 21:' Det i exempel 20 beskrivna förfarandet upprepades men utgående från lämpligt ll-'Hdeoxí-ÅP'-oxo-oleandonwcin för erhållande av följande orlmer: o Il H- cnšcflac- o o on 25- ca on 5- 5 2 o o ca ca ä- cH ö- 2 5 o o fl Ü cašcfiac- cnšcnac- o Il o cH en ö- H- 2 Exempel 24: 7800269-8 Exemgel 225 11-Acetll-4"-deoxi-4"-oxn-oleandogqcin-oxim. En lösning av 500 mg ll,2'-diacetyl-#”-deoxi-4"-oxo-oleandomein-øxim i 100 ml metanol omrördes i 72 timmar vid rumstemperaturen, varpå den indunsta- des till torrhet under reducerat tryck. Man erhöll på detta sätt ett skum, som efter omkrístallisation i etylacetat-hexan vägde 572 mg och hade en smältpunkt av 184-186°C. mm (s, cnc13)= 3,50 (arna, 2,66 (zlnm, 2,36 (ans och 2,10 (3103.

Exemgel 2§: Det i exempel 22 beskrivna förfarandet upprepades men utgående från erforderlig oxim för erhållande av följande föreningar: N (C33 ) 2 0 ena C113 *N-ou-n ocna Ut Produkt É É å H- H- H- o 'I H- cnšcnac- n- H- o o o II II cfišc- cfišcuzc- cašc- H- o o o on ö- ca ö- ca en ö- H- “Hß a 5 5 2 ° 9 9 II Y | ll,2'-Diacetyl-4"-deoxi-4"-oxo-oleandomgcin-O-acetyloxim.

Till en under omrörning hållen, grumlig lösning av 20 g 11,2'-diacetyl- 4"-deoxi-4"-oxo-oleandomycin-oxim i 250 ml bensen sattes 8,21 ml pyri- din och därefter 9,62 ml ättiksyraanhydrid. Den så erhållna reaktions- 7800269-8 26 blandningen omrördes vid rumstemperatur-en hela natten. lösningen häll- des i vatten och den organiska fasen tvättades först med vatten och därefter med en mättad koksaltlösning, varpå den torkades och indunsta- des till torrhet. Genom omlcrístallisation av indunstningsåterstoden (skum) i etylacetat-hexan erhölls 15,4 g av den rena produkten, som hade en smältpunkt av l98-202°C.

NHR (5, CDCl5)= 5,38 CBHJS, 2,66 (2H)m» 2,33 (6H)S» 2,26 (5H)S och ' 2,10 (6H)s.

Exemgel 22: Det i exempel 24 beskrivna förfarandet upprepades på nytt men utgående från lämplig onclm för erhållande av följande produkter: É il. o -o caë- cacaë- 5 2 o o cflcnë- onö- 3 2 5 o cflë- H4 o cacnë- a- 2 Egggpel 26: 11.2'-Díggetyl-4"-deoxifß"-oxo-oleandoggcin-O-metzloxím.

Till 50 ml vatten och 50 ml metanol sattes 1,25 g metoxiamin-hydro- _k1orid och 2,5 g ll,2'-diacetyl-4"-deoxi-4"-oxn-oleandomycin och den så erhållna reaktíonsblandningen omrördes vid rumstemperaturen hela natten. Iösingen sattes till vatten och pH injusterades på 7,5 med fast natriumbikarbonat och därefter på 9,5 med en l-normal vatten- 27 7-“8 (10269-8 lösning av'natriumhydroxid. Produkten extraherades med etylacetat och extraktet torkades över natriumsulfat. Genom indunstníng av lösnings- medlet i vakuum erhölls 2,4 g av den önskade produkten i form av ett vitt skum.

NMR (J, CDCl5): 3,88 (5H)s, 5,26 (5H)s, 2,56 (2H)m, 2,50 (6H)s och 2,06 (6H)s.

ExemQel_g1: Det i exempel 26 beskrivna förfarandet upprepades men utgående från metoxiamin-hydroklorid och det erforderliga 4"-deoxi- 4"-oxo-oleandomcinet för erhållande av följande föreningar: 2'-acetyl- 4"-deoxi-4"-oxo-oleandomycin-0-metyloxim, 2'-propíonyl-4"-deoxi-4"- oxo-oleandomycin-0-metyloxim, ll-acetyl-2'-propionyl-4"-deoxi-4”-oxo- oleandomcin-O-metyloxim, ll-propionyl-2'-acetyl-4"-oxo-oleandomycin- 0-metyloxim, ll-acetyl-4"-deoxi-4”-oxo-oleandomcin-0-metyloxim och ll-propíonyl-4"-deoxi-4"-oxo-oleandomycin-0-metyloxim.

Exempel 28: ll,2'-Diacetyl-8,8a:deoxi-8,8a-díhydro-4"-deoxi-4"-oxo- oleandogqpinfoxim. En lösning av 49,0 g 11,2'-diacetyl-8,8a-deoxi-8,8a- dihydro-4"-deoxi-4"-oxo-oleandomvcin och 18,1 g hydroxylamin-hydro- klorid i 500 ml vatten och 500 ml metanol omrördes vid rumstemperatu- ren i 1,5 timar. Den så erhållna lösningen sattes till 250 ml vatten och pH injusterades på 7,5 och 9,5 med fast natriumbikarbonat resp. 1N-NaOH. Produkten extraherades med etylacetat, extraktet torkades över natriumsulfat och indunstades till torrhet. Indunstningsåtersto- den omkristalliserades i etylaoetat-hexan och man erhöll den önskade produkten.

Exemgel 22: Det i exempel 28 beskrivna förfarandet upprepades men utgående från lämpligt 4"-deoxi-4"-oxo-oleandomvcin och erforderligt hydroxylaminderivat för erhållande av följande föreningar: 7800269-8 I N N-OH N-OH N-OH N-OH N-OH N-OCH5 N-OCH N-0CH5 N-OCH 55 lä vaoozea-s Exempel 50: ll,2'-Diacetyl-8,8a-deoxi-åL8a-dihvdro-lfl'-deoaci-U-oxo- oleandomycin-O-acetyloadm. Till en lösning av 9,9 g ll,2'-diacetyl- 8,8a-deoxi-8,Sa-dihydro-IL"-deofi-lß"-oxo-oleandomvcin-oxim och 4,1 ml pyridin i 125 ml bensen sattes 4,81 ml ättiksyraanhydrid och den så erhållna reaktionsblandningen omrördes vid rumstemperaturen hela nat- ten. Reaktionsblandningen hälldes i vatten och pH injusterades på 7,5 och 9, 5 med fast natriumbikarbonat respektive IN-NaOH. Bensenfasen avskildes, torkades över natriumsulfat och indunstades, varigenom man erhöll den önskade produkten i form av ett vitt skum.

Exempel ål: Det i exempel 50 beskrivna förfarandet upprepades ut- gående från lämplig oxim för framställning av följande föreningar: 2 ' -acetyl-S ,8a-deoxi-8 , 8a-dihydro-4" -deoxi-LP' -oxo-oleandomycin-O- acetyloxim, ll-propionyl-Z-acetyl-S,8a-deoxi-8,8a-dihydro-4"-deo1d- 4" -oxo-oleandomycin-O-acetyloadm, ll-propionyl-B , 8a-deoxi-8 , öa-dihydro - 4" -deoxi-lW-oxo-ole andomycin-O-acetyloxim , 2 ' -propionyl-S , Ba-deoxi- 8,8a-dihydro-4"-deoxi-ll"-oxo-oleandomycin-O-acetyloadm och ll-acetyl- 8 , Ba-deoxi-B , 8a-dihydro-4"-deo:ci-4" -oxo-ole andoxnycin-O-acetyloadm.

Exempel 52: ll-åropionyl-8ßa-deoxi-8,Ba-dihydro-IW-deofi-lU-oxo- oleandomzcin-oxim. En lösning av 500 ml ll-propionyl-Z'-acetyl-8,8a- deoxi-8,8a-dihydro-4"-deoxi-4"-oxo-oleandomycin-oxim i 100 ml meta- nol omrördes hela natten vid rumstemperaturen. Lösningen indunstades till torrhet och den i form av ett skum erhållna indunstningsåtersto- den renades genom omlcristallisation i etylacetat-hexan.

Det ovan beslmivna förfarandet upprepades för framställning av 8 , Ba-deozd-B , 8a-dihydro-1L"-deoxi-4" -oxo-oleandomycin-oacim ur 2 ' -acetyl- 8 , Ba-deoxzi-B , Sa-dihydro-Wfl-deoxal-l-L" -oxo-oleandomycin-oidm.

Exempel 55: i ' -Diacetyl-B , 8Ma¿deoxi-8, Ba-metylen-IL" -deoxi-lt" -oxo- oleandomycin-O-meizyloudm. En lösning av 90 mg ll,2'-diacetyl-8,8a- deoxi-8,8a-metylen-4"-deoxi.-4"-oxo-oleandonwcin och 45 mg metoxiamin- hydroklorid i 2 ml vatten och 2 ml metanol omrördes vid rumstempera- turen hela natten. Iösningen hälldesi vatten och pH injusterades på 7,5 och 9,5 med fast natriumbikarbonat respektive lN-NaOH. Produkten extraherades med etylacetat, den organiska fasen torkades och indunsta- des och man erhöll 89,2 mg av den önskade produkten.

NHR (6s CDC15)7 (3H)51 (lssïnss 3126 (løslnsa 2528 (Gïnsa 2,06 (6H)s och 0,56 (4H)m.

Exempel 34: ll,2'-Diacetyl-8,8a-deoxi-8,8a-mety1en-4"-deox:i.-4"-oxo- oleandoycin-oxim. Det i exempel 35 beskrivna förfarandet upprepades med användning av 10,0 g ll,2'-diacetyl-8.Ba-deoxi-B,8a-metylen-4"- deoxi-lflßoxo-oleandonwcin, 5,4 g hydroxylaminhydroklorid, 50 ml meta- nol och 50 ml vatten, varigenom man efter upparbetnizg erhöll -9,2 g 7800269-8 3” av den önskade produkten, som kan renas ytterligare genom omlcn-ístallisa- tion i etylacetat. Smältpunkt 177-180°C. . mm (69 CDC15)5 (115H)3s 3925 (l95H)59 2953 (6H)51 2906 (6H)5 och 0,55 (4H)m.

Exemgel få: Det i exempel 55 beskrivna förfarandet upprepades men utgående från den erforderliga hydrozqlamin-hydrokloriden och lämp- ligt 8,Ba-deozcí-S,8a-metylen-4"-deoad-ll-'ßoxo-oleandomycin för syn- tetiseríng av följande föreningar: 31 78-00269-8 N-OH N-OH N- OH N -OH N-OH N-OH N-OCH N-OCH N-OCH; 55 7 8 0 0 2 6 9 - 8 32 Exempe l 56 g ll , 2 ' -Diacet1l-8 , 8a-deozd-8 , 8a-mewlen-4" -deozd-U-oxo- oleandomycin-O-acetyloxim Till en suspension av 1,0 g ll,2'-diacetyl- 8,8a-deoxi-8,8a-metylen-4"-deoad-ÅP'-oxo-oleandomycin-ondm i 10 ml bensen sattes 0,18 m1 pyriam och därefter 0,24 m1 ättiksyraannyaria." ' Efter 2 timmars omrörning vid rumstemperaturen tillsattes ytterligare 0,09 ml pyridin och 0,12 ml ättiksyraanhydrid och omrörningen fort- sattes hela natten. Reaktionsblandningen hälldes i vatten och pH in- justerades på 7,5 och därefter på 9,5 genom tillsats av fast natríum- bikarbonat respektive lN-NaOH. Bensenfasen avskildes, torkades över natriumsulfat och indunstades i vakuum till torrhet, varigenom man erhöll 890 mg av den önskade produkten.

NHR (61 CDc15): 3931 (115H)ss (la5H)s1 (6H)5a 2916 (3H)$a 2,01 (6H)s och 0,55 (4H)m. - På samma sätt omvandlades oximerna enligt exempel 35 till sina O-acetylder ivat .

Ešempel 37: ll-Acetyl-IL"-deozd-ll-"-amj.n_¿o-ole_andon1;vci_g. Till en sus- pension av 10 g 10% palladium på träkol i 100 ml metanol sattes 21,2 g ammoniumacetat och den så erhållna uppslamningen behandlades med en lösning av 20 g ll-acetyl-l&-“-deox:i.-l|-"-oxo-oleandomycin i 100 ml av samma lösningsmedel. Suspensionen skakades vid rumstemperaturen i väteatmosfär med ett begynnelsetryck av 345 kPa. Efter 1,5 timmar av- filtrerades katalysatorn och filtratet sattes under omrörning till en blandning av 1200 ml vatten och 500 ml kloroform. pH injusterades från 6,1!- till 4,5 och den organiska fasen avskildes. Efter en ytter- ligare extraktion med 500 ml kloroform behandlades den vattenhaltiga fasen med 500 ml etylacetat, varpå pÉ injusterades på 9,5 med IN-NaOH.

Etylacetatfasen avskildes och den vattenhaltiga fasen extrsherades på nytt med etylacetat. Etylacetatextrakten kombinerades, torkades över natriumsulfat och indunstades till ett gult skum ( 18,6 g). Ur detta erhölls genom omlcristallisation i diisopropyleter 6,85 g av den renade produkten med en smältpunkt av l5?-l60°C. mm (ä, cnc15)= 3,41 (ams, 2,70 (amm, 2,36 (ams och 2,10 (ams.

Den andra epimeren, som förekom i det råa skummet i en mängd motsvarande 20-25%, erhölls genom småningom skeende koncentration och filtrering av moderluten.

Exempel 28: Det i exempel 5? beskrivna förfarandet upprepades ut- gående från lämpligt 4"-deozcí-Lflßoxo-oleandonwycin för framställning av följande aminer: ' 50 33 7800269-8 NHR (8, CDC1â) “ 3a45 (3H)51 2170 (2H)m| 2150 (6H)3 och 2,10 (6H)s. saso (1H)m9 š936 (5H)39 2985 (2H)m och 2,50 (6H s.

H- caöö- 5,80 Émšm, 3,43 H 2,80 (zum, (5 )31 2,50 6H s och 2,10 (5H)s.

Exemgel §2: Det i exempel 57 beskrivna förfarandet upprepades på nytt med användning av isopropanol som lösningsmedel och erforder- ligt 4"-deoxi-4"-oxo-oleandomwcin för erhållande av följande pro- dukter: 2'-propíonyl-4"-deoxi-4"-amino-oleandomycin, l1-acety1-2'- propionyl-4"-deoxi-4"-amino-oleandomycin, 1l-propionyl-2'-acetyl- 4"-deoxi-4"-amino-oleandomwcin och ll,2'-dipropionyl-4"-deoxi-4"- oxo-oleandomwcin.

Exempel 40: ll-Acetyl-4"-deoxi-4"-amino-oleandomycin. Till en till -lO°C kyld och under omrörning hållen suspension av 50 g ll-acetyl- 4"-deoxi-4"-oxo-oleandomwcin och 55 g ammoniumacetat i 500 ml meta- nol sattes droppvis under loppet av en timme en lösning av 5,7 g av en 85$%ig natriumborcyanohydrid i 200 ml metanol. Efter omrörning il 2 timar i kyla hälldes reaktionsblandningen i 2,5 liter-vatten och 1 liter kloroform. pH injusterades från 7,2 till 9,5 genom tillsats av lNëNaOH och den organiska fasen avskildes. Den vattenhaltiga fa- sen tvättades en gång med kloroform och de organiska faserna kombi- nerades. Kloroformlösníngen av produkten behandlades med 1,5 liter vatten vid pH 2,5 och vattenfasen avskildes. Vattenfasens pH injuste- rades från 2,5 till 7,5 och därefter till 8,25 och underkastades extraktion med etylacetat. De så erhållna extrakten kasserades och slutligt pH höjdes till 9,9. Vattenfasen extraherades med etylacetat (2x825 ml) och extrakten kombinerades och torkades över natriumsulfat. 50 55 7800269-8 34 Iösningsmedlet avlägsnades under reducerat tryck och man erhöll 25,9 g av produkten i form av ett skum. mm (3, 013015» 5,41 (ams, 2,70 (2H)m, 2,56 (6H)s och 2,10 (ams.

Exempel 41: LW-Decud-LL”-amino-oleandomzcin. En lösning av 20 g 2'- acetyl-lß"-deoxzi-IW-oxo-oleandouwcin i 125 ml metanol omrördes vid rumstemperaturen hela natten och behandlades därefter med 21,2 g ammoniumacetat. Den så erhållna lösningen kyldes i ett isbad och behandlades med 1,26 g natriumcyanoborhydrid. Kylbadet avlägsnades därefter och reaktionsblandningen omrördes vid rumstemperaturen i ' 2 timmar. Reaktionsblandningen hälldes i 600 ml vatten och 600 ml dietyleter och pH injusterades från 8,5 till 7,5. Eterfasen avskil- des och den vattenhaltiga fasen extraherades med etylacetat. Extralc- ten ställdes undan och den vattenhaltiga fasens pH injusterades på 8,25. Dietyleter- och etylacetatextrakten framställda vid detta pH ställdes också undan och pH höjdes till 9,9. Dietyleter- och etyl- acetatextrakten vid detta pH kombinerades, tvättades först en gång med vatten och därefter med en mättad koksaltlösning och torkades över natriumsulfat. Extrakten, som framställdes vid pH 9,9, koncen- trerades till ett skum och lcromatograferades på 160 g kiseldioxidgel med användning av 'kloroform som lösningsmedel och 'begynnelseeluerings- medel. Efter elva fraktioner om vardera 12 ml ändrades eluerings- medlet till 5% metanol - 95% kloroform. Vid fraktionen 570 ändrades elueringsmedlet till 10% metanol - 90% kloroform och vid fraktionen 440 användes 15% metanol - 85% kloroform. Fraktionerna 85-260 kombi- nerades och indunstades i vakuum till torrhet och man erhöll 2,44 g i av den önskade produkten. mm (81 CDCI5): 5s56 (IHM-na 5936 (äns: 219 (2E)m Och 2926 (6H)5- Exempel 42: Det i exempel 40 beskrivna förfarandet upprepades men utgående från isopropanol som lösningsmedel och lämpligt iW-deoxi- lW-oxo-oleandomycin för erhållande av följande föreningar: 11,21- diacetyl-IP'-deoscí-IW-amino-oleandomycin, 2'-propionyl-4"-deozci-4"- amino-oleandomycin, 2'-acetyl-lß"-deoJ-:i-lIN-amino-oleandonnycin, ll- acetyl-2' -propionyl-IL" -deoid-ll-'Hamino-oleandourycin , ll-propionyl- 2'-acetyl-l-lfl-deoxi-lt"-amino-oleandomycin och ll ,2'-dipropionyl-4"- deoxi-lk" -am:|'.no-o le andomycin . lgçgzpel 43: Ll-'Hbeoz-dè-lßïamuino-idomycin. En lösning av 300 g 2'- acetyl-lß"-deoJd-LW-amino-oleandomycin i 25 ml metanol omrördes under . kväveatmosfär hela natten vid rumstemperaturen. Reaktionshlandningen koncentrerades i vakuum och man erhöll 286 mg av den önskade produk- ten i form av ett vitt skum.

NHR (8, CD0l5): 5,56 (lH)m, 3,56 (5H)s, 2,90 (2H)m och 2,26 (6H)s. 7800269-8 Exempel 44: Det i exempel 45 beskrivna förfarandet upprepades men utgående från det erforderliga 2'-alkanoyl-4"-deoxi-4"-amino-oleando- mycinet för erhållande av följande föreningar: Él H..

H- H.. f? ° f? Ü O I' H- cnšcnac- H- H- Exempel 45: 11-Acetyl-8,8gfdeoxi-8,8g;g;hydro-4"~deoxi-4"-amino- oleandomycín. En lösning av 2,15 g 11-acetyl-8,8a-deoxi-8;8a-dihydro- 4"-deoxi-4"-oxo-oleandomycin och 2,51 5 ammoniumacetat i 15 ml meta- l5 nol kyldes till 20°C och behandlades med 136 mg natriumcyanoborhydríd.

Efter omrörning i 45 minuter vid rumstemperaturen hälldes reaktions- blandningen i 60 ml vatten och 60 ml dietyleter och pH injusterades från 8,1 till 7,5. Eterfasen avskildes och kasserades och den vatten- haltiga fasens pH höjdes till 8,0. Ny eter tillsattes, skakades med den vattenhaltíga fasen och kasserades. pH injusterades på 8,5 och 50 55 7800269-8 36 förfarandet upprepades. Slutligen injusterades pH på 10,0 och 60 ml etylacetat tillsattes. Den vattenhaltiga fasen kasserades och etyl- acetatfasen behandlades med 60 ml nytt vatten. Vattenfasens pH in- justerades på 6,0 med lN-HCl och etylacetatfasen kasserades. Den vattenhaltiga fasen extraherades successivt vid pH 6,5; 7,0; 7,5; 8,0 och 8,5 med 60 ml etylacetat och de organiska extrakten ställdes undan. pH höjdes slutligen till 10,0 och den vattenhaltiga fasen ext- raherades .» med etylacetat. Extrakten vid pH 8,0; 8,5 och 10,0 kombi- nerades och indunstades i vakuum, varigenom man erhöll 585 mg av ett vitt skum, som bestod av ett par av lW-epimerer.

NHR (8, 017019: 3,58 och 3,55.(5H) 2 singletter, 2,31 och 2,28 (6H) 2 singletter och 2,05 (3H).

Exempel 46: 8 , Ba-Deoxi-B , 8a-dihvdro-lI-"-deo:d.-4" -ago-oleandomvcin .

Natriumcyanoborhydrid (126 mg) sattes till en lösning av 1,86 g 8,821- deozd-S,ßa-dihydro-llfl-deoxi-IL"-oxo-oleandomycin och 2,1 g ammonium- acetat i 10 ml metanol vid rumstemperaturen. Efter en timme kzyldes reaktionsblandningen till 0°C och omrördes i 2,5 timmar. Reaktions- blandningen hälldes i 60 ml vatten och 60 ml dietyleter och pH in- justerades på 7,5. Eterfasen kasserades och den vattenhaltiga fasen injusterades successivt på pH 8,0 och 8,5 och extraherades med eter efter varje injustering. Den vattenhaltiga fasen injusterades slut- ligen på pH 10,0 och extraherades med etylacetat. Nytt vatten sattes till etylacetatextraktet och pH injusterades på 6,0. Etylacetatfasen kasserades och den vattenhaltiga fasen injusterades successivt på pH 6,5; 7,0; 8,0; 8,5 och 10,0, varvid den vattenhaltiga fasen efter varje pH-injustering extraherades med etylacetat. Etylacetateactrakten vid pH 7,5; 8,0 och 10,0 kombinerades och koncentrerades till ett skum, 'som rekonstituerades i etylacetat och extraherades med nytt vatten vid pH 5,5. liksom tidigare injusterades den sura, vattenhal- tiga fasen på pH 6,0; 6,5; 7,0; 7,5; 8,0 och 10,0 och extraherades med dietyleter efter varje injustering. Eterextrakten vid pH 7, 5; 8,0 och 10,0 kombinerades och koncentrerades till torrhet i vakuum, varigenom man erhöll 166 mg av den önskade produkten.

NHR (å, Gnclšfi 5,48 (IHM, 3.40 (5198 0011 2,50 (GIÜS- Exempel 14-2: Det i exempel 45 'besbivna förfarandet upprepades ut- gående från isopropanol som lösningsmedel och erforderligt 8,8a-deoxi- - 8,8a-dihydro-4"-deoxi-4“-oxo-oleandomycin för erhållande av följande föreningar : av 7800269-8 f få 0 u H- CH3C- Û Û n n CHSC- C113 C- O Û u n CH3CH2C~ CHBC- Ö u CHSCHZC- E' ågempel 48: ll-Acetyl-8,8a-deoxi-8,8a-metylen-4"-deoxi-4"-amino- oleandoglcin. Till 50 ml av en metanollösning av 5,0 g ll-acetyl- 8,8a-deoxi-8,8a-metylen-4"-deoxi-4"-oxo-oleandomcin och 5,2 g ammoniumacetat, som kylts till 20°C, sattes 500 m natriumcyano- borhydrid. Reaktionsblandningen omrördes vid rumstemperaturen i en time och hälldes därefter i 120 ml vatten och 120 ml dietyl- eter. Vattenfasen injusterades successivt på pH 7,5; 8,0; 8,5 och ,0 och extraherades efter varje pH-injustering med etylacetat.

Det slutliga organiska extraktet framställt vid pH 10,0 behandla- des med vatten och pH injusterades på 6. Vattenfasen behandlades återigen på ovan angivet sätt och pH injusterades på. 7,0; 7,5; 8,0; 8,5 och 10,0 och extraherades med etylacetat efter varje pH-ändring.

Etylacetatextrakten efter pH-ändringarna vid 8,0; 8,5 och 10,0 kombinerades och koncentrerades i vakuum, varigenom man erhöll 1,5 g av den önskade produkten.

NHR (&, GDc13): 5,58 (5H)s, 2,50 (sms, 2,05 (5H)s och 0,65 (4H)m. 7800269-8 'as Exempel 42: Det i exempel 48 beskrivna förfarandet upprepades ut- gående från isopropanol som lösningsmedel och lämpligt 8,8a-deoxí- 8,Sa-metylen-Li-'fl-deøxi-LL"-oxo-oleandomycin för syntetisering av föl- jande föreningar: ä.

E E; O 0 u CH ë ca3c- 3 0 O u n cn3c- cuscuzc- 0 0 u il CH3CH2C- CH3C- 0 0 u H ' CH3CH2C- CH3CH2C- O n 3.' CH3C~ 0 :I 3- 0330320- Exempel 50: ll,2'-Diacetyl-4"-deozci-4"-amino-oleandomvcin. Ned iso- propanol tvättat Baney-nickel (lg) suspenderat i 25 ml isopropanol innehållande 250 mg ll,2'-diacetyl-LIJ'-deoad-lß"-oxo-oleandomycin-O acetylofim skakades i väteatmosfär med ett begynnelsetryck av 545 kPa vid rumstemperatur-en hela natten. Reaktionsblandningen filtrerades och filtratet indunstades under reducerat tryck, varigenom man erhöll 201 mg av den önskade produkten. ' hölls i exempel 37. 39 7800269-8 Hela mängden produkt (201 mg) i metanol (10 ml) kokades under åter-flöde i en timme, varigenom man erhöll l1-acetyl-4"-deoxi-4"- amino-oleandomycin, som visade sig vara identiskt med det, som er- Exemgel 21: Det i exempel 50 beskrivna förfarandet upprepades ut- gående från det angivna 4"-deoxi-4"-oxo-oleandomwcinderivatet och den angivna katalysatorn, varigenom följande Ll-Ndeoxi-LUH-amino- oleandomycinder erhölls: n :Ii w 9:0 ?:o 0:0 | :u O m w wåå R1 Derivat oxim oxfim oxim' oxim» oximi 0-acecyloxim 0-acetyloxfim O-ace :yloxim O-metyloxim O-metyloxim O-metyloxim Katalysator Ni Pd/C Puoz 2:0 Palo Ni Ni Pa/c P:0 vd/c Pa/c 7800269-8 40 Exempel §2:'Med tillämpning av det i exempel 50 beskrivna förfarandet framställdes 8,8a-deoxí-8,8a-dihydro-4"-deoxí-4"-amino-oleandomeiner, som svarade mot rednktionsprodukterna av följande 4"-oxn-derivat med användning av angiven katalysator: N(ca3) 2 cn3 C213 *x R Kl X Katalysator o II a- cu3c- N-on m/c o o II II m3ca2c- ca3c- n-oa m. f? cn3c- u- N-oa ni o II ca3ca,c- a- u-oa 2:02 0 .

II n- ca3ca2c- N-oa m o o II II cnacazc- ca3c- N-oca3 2:02 o II n- ca3c- n-GCHB _ Pd/c f! ca3c- a- u-oca3 Pd/c o II ca ca c~ a- u-ocn Pro 3 z 3 z o o o _ Il II II casç- _ casc- n-o-ccua- 2:02 (Fortsättn.) 4 1 (Fortsättn.) É É; 0 0 n " CH3CH2C- CHSC- 0 I! CH3CH2C- H- 0 II CHBC- H- 7800269-8 x Katalysator o N-o-Éca3- Ni o x-o-ëcuß- Pd /C o N-o-ëcu - Ni 3 §§gggg;_§§: Det i exempel 50 beskrivna förfarandet upprepades på nytt, varvid man utgick från nedan angivet 8,8a-deoxi-8,8a-mety1en- 4"-deoxi-4"-oxo-oleandomycinderivat och ning av följande föreningar: katalysator för framställ- R R Utgångs- _ _; derivat Katalysator O O II II C330- CHSC- oxim Ni 0 0 ll II CH3C- CHBCEZC- oxim- PtOZ 0 0 II II CHBCHZC- CH3CH2C- oxlm. P 1:02 0 II u- ca3c- oxm va! c O Il caäc- H- oxim 2:02 (Fortsättn.) 50 zwHsz-ß 42 ortsa .) R ' R, Utgängs- Katalysator _ __ derivat o o cH5cH,ë- cašë- o-metyloxim Pa/C o cH5Ö_ H- o-metylovim Ni on o cnšë- cH5Ö_ o-acetyloxim Ni o cfišë- H- o-aeetyloxim Ni o o cašë- cfišö- o-aeecyioxim Pa/c Exempel 54: 4"-deoxi-4"-etylamino-oleandomycin. Till 95 ml metanol innehållande 4,59 g 4"-deoxi-4"-oxo-oleandomycin, 6,6 ml av en 5M-lösning av etylamin i etanol och 1,89 ml ättiksyra sattes 565 mg natriumcyanoborhydrid i portioner om 50-60 mg. Efter omrör- ning vid rumstemperflturen i en timme hälldes reaktionsblandningen i 110 ml vatten och 120 ml etylacetat.' Vattenfasen injusterades successivt på pH 7,5; 8,0; 8,5 och 10,0 och extraherades med etylacetat efter varje pH-injuste- ring. Det sista organiska extraktet, som erhölls vid pH 10,0, be- handlades med vatten och pH injusterades på 6. Vattenfasen behand- _lades åter igen på ovan angivet sätt och pH injusterades på 7,0; 7,5; 8,0; 8,5 och 10,0 och extraherades med etylacetat efter varje pH-injustering. Etylacetatextrakten efter varje pH-förändring vid 8,0; 8,5 och 10,0 kombinerades och indunstades i vakuum till ett skum. Produkten renades ytterligare genom kromatografering på 75 g kiseldioxidgel med användning av aceton som elueríngsmedel. Frak- tionerna 62-104 (varje fraktion bestod av 4 ml) kombinerades och indunstades under reducerat tryck och man erhöll 910 mg av den önskade produkten. NHR (5,C0Cl5): 5,46(5H)s, ?,36(6H)s och savvlfnq' NHR (69COCl5)3. 5s46(5H)- Exempel 55: 11-acetyl-4"-deoxi-4"-etvlamino-oleandomvcin.

På sätt som angives i exempel 54 sattes 566 mg natriumcyanobor- hydrid portionsvis till en lösning av 5,82 g 11-acetyl-4"-deoxi- 4"-oxo-oleandomycin och 16 ml av en 5M-lösning av etylamin i eta- nol i 27,4 ml av en 2,92 M-lösning av HCl i etanol. Efter omrör- ning vid rumstemperaturen i 1,5 timmar hälldes reaktionsbland- ningen i 120 ml vatten och 120 ml etylacetat och upparbetades på sätt som angives i exempel 54, varigenom man erhöll 1,9 g av den önskade produkten. una (¿L coc15)= 5,55(5H)s, a,36(6a)S och ?,08(5H)s. 43 7800269-8 Ešempel 56: 14-ecetvl-4“-deoxi-4"-n-hexvlamino-oleandomvcin.

Det i exempel 54 beskrivna förfarandet upprepedes utgående från 4,8 g 11-ecetyl-4"-deoxí-4"_0xo-øleandomycin, 6,7 8 n-hexylamin, ,78 ml ättiksyra, 302 mg natriumcyanoborhydrid och 25 ml metanol och man erhöll efter kromatografering på 80 g kiseldioxidgel med användning av kloroform som elueringsmedel 1,5 g av den önskade produkten. NHR (8,COCl3): 5,40(5H)s, 2,56(6H)s och 2,08(3H)s.

Exemgel §2: Men förfor på sätt som engives i exempel 54 utgående från lämplig 4"-deoïí-4"-oxo-oleandomycín, ísopropanol som lösningsmedel och amin för fremställníng ev följande föreningar g\° Rßo »ucßgz ' 2 'r R R R R OCH \\\CH3 _ __1_ i 0/1, “UÛ 0 C33 O II CH“““ I CH3 cH5c_ H- CH5- 3CH ugay 0 CH3 9 l CHB cflöc- H- 3-05117- g Nr1e3 o N ocu3 cnšê- H- 1-c5H7- cnšä- l H- O g-c5H11- GH 5 GH Ö c H 50- 50- 2 5- cfl Ö GH 5 ' c H ao' 50' å' 5 7 N H cnšë- cnšc- O t-c4H9- 50- 5 2 _ 5- cH 5 on ca c on cnöc- cnšcnzc- n-c6n13- 7800269-8 (Exempel Sf, fortsättn.) 44 h.) i“°sH11' n-CÉ- 3 7 Ef°4H9' flfcsglz' ca - Éfc n - §f°sH11' šf°s311' C2HS- Efceflls" šf°a 9' CZHS- 5f°4H9' Éfcsflll' 2f°e“13' 45 7800269-8 Exemnel 58: l1-Acet1l:4"-deoxi-4"-dimetylamino-oleandomycin. Två gram 11-acetyl-4"~deoxi-4"-aminc-oleandomwcin, 1 g 10 % palladium på trä- kol och 2,06 ml formalinlösning kombinerades i #0 ml metanol och skakades i väteatmosfär vid ett begynnelsetryck av 545 kPa hela nat- ten. Den förbrukade katalysatorn avfiltrerades och filtratet indunsta- des till torrhet under reducerat tryck. Indunstningsåterstoden (1397 g) kromatograferades på 40 g kiseldiczcidgel med användning av klcroform som första elueringsmedel. Efter fraktion nummer 25 (varje fraktion bestod av 650 droppar) satsades eluatet i 5% metanol i kloroform.

Fraktionerna 56-150 kombinerades och indunstades i vakuum och man erhöll 704 mg av den önskade produkten i form av ett vitt skum. mm (8, cncišy 3,35 (5198, 2,65 (arom, 2,50 (lama och 2,10 (ams.

Exemgel ä: Det i exempel 58 beskrivna förfarandet upprepades med den ändringen, att man som lösningsmedel använde isopropancl och er- forderligt 4"-deoxi-4"-amino-oleandomwcin för syntetisering av föl- jande föreningar: ff _1_ 0 0 II E cusc- m3 - 0 0 n II cH3c- cH3cu2 - 0 _u H- CH3C- 0 0 u Il CH3CH2C- C330- 0 n cuscazc- H- 0 O n 'f 0530320- CH3CH2C- 50 40 7800269-8 46 Exempel 60 z' ll-Acegvl-lß"-deoxi-IIJ'-amÅno-oleandolmgcin-dzlhydroklorid.

Till 7,28 g ll-acetyl-IL"-deoid-IW-amino-oleandomycin i 50 ml torrt etylacetat sattes 20 ml av en l-normal lösning av H01 i etylacetat och denså erhållna lösningen indunstades till torrhet under redu- cerat tryck. Indunstningsåterstoden triturerades med eter och filt- rerades och man erhöll det önskade saltet.

På liknande sätt omvandlades aminföreningarna enligt förevarande uppfinning till sina disyraadditionssalter." Exempel 61 : ll , 2 ' -Diacetyl-LL" -deoad-IU' -:Eino-oleandomvcin-hydroklorid.

Det i exempel 60 beskrivna förfarandet upprepades med den ändringen, att 10 ml av en l-normal lösning av H01 i etylacetat tillsattes. Iös- ningen indunstades till torrhet i vakuum och det som en indunstnings- återstod erhållna mono-hydrokloridsaltet triturerades med eter och filtrerades .

På liknande sätt omvandlades aminföreningarna enligt förevarande uppfinning till sina mono-syraadditionssalter.

E_xempel 62 : ll-Acetyl-llfl' -deoxi-LL"-amino-oleandomycin-aspartat .

Till 960 mg ll-acetyl-lß"-deozd-ÅW-amino-oleandomycin i 6 ml aoeton med en temperatur av 40°C sattes 18 ml vatten och därefter 175 mg asparaginsyra. Blandningen upphettades under återflödeskolming, till dess att det bildades en grumlig lösning. Blandningen filtrerades i hett tillstånd och det klara filtratet indunstades i och för avlägs- nande av acetonen. Den återstående lösningen frystorkades därefter, varigenom man erhöll produkten i form av en återstod.

Preparation A. 2'-Acetyl-8,8a-deoxi-8ßa-dihzdro-oleandoggcín. la. 2 ' -Acetyl-B , Ba-deozd-oleandogf cin.

En 250 ml rundkolv med 5 halsar beskickades med zinkpulver (10 g) och kvicksilver(II)klorid (1 g). Sedan de fasta materialen väl sam- manblandats tillsattes lN-HCI (25 ml) och 'blandningen omrördes kraf- tigt i 15 minuter. Det övre, vattenhaltiga skiktet avlägsnades och ny lN-HCl ( 25 ml) tillsattes, varpå kolvinnehållet sattes under kol- dioxzldatmosfär. En filtrerad lösning av 1u-om(III)klorid (50 g i 65 ml lN-HCl) sattes snabbt till zinkamalgamet. Blandningen omrördes i koldioxidatmosfär i en timme, varunder det utbildades en ljusblå färg, som visade närvaron av krom(II)klorid. Omrörningen avbröts efter en timme och zinkamalgamet fick avsätta sig på kolvens botten.

En lösning av Z-acewl-oleandomycin (29,2 g) i aoeton (200 ml) och vatten (100 ml) satsades i_en dropptratt monterad på _e_n 600 ml rundkolv med 5 halsar och försedd med en mekanisk omrörare med driv- anordning ovanför kolven. I kolven satsades under koldiozddatmosfär och under omrörning en lösning av ï-acetyl-oleandomycin och den på 55 40 41 7800269-8 ovan angivet sätt framställda krom(II)kloridlösningen. Iösningarna tillsattes samtidigt och med sådana hastigheter, att tillsatsen av båda slutfördes samtidigt. Detta tog ca 12 minuter. Efter 55 minu- ters omrörning vid rumstemperaturen tillsattes 100 ml vatten och 100 ml etylacetat till reaktionsblandningen och omrörningen fort- sattes i 15 minuter. Etylacetatfasen avskildes och tvättades med 80 ml vatten. Etylacetatet avskildes och de vattenhaltiga extrakten kombimeradès och eväecades med 1oo m1 nytt etylacetam. Etylaceeam- fasen avskildes och tvättades med 100 ml vatten.

Den organiska fasen avskildes och tvättvattnen kombinerades och behandlades med 75 S natriumklorid. Den ytterligare mängd etyl- acetat, som avskilde sig avtappades med hjälp av en sifon och kombi- nerades med de andra etylacetatextrakten. Vatten sattes till de kom- binerade etylacetatextrakten och det hela injusterades på pH 8,5 med natriumbikarbonat. Den organiska fasen avskildes, tvättades med vatten, med mättad natriumkloridlösning, torkades över vattenfritt natriumsulfat och fíltrerades, varpå lösningsmedlen indunstades un- der reducerat tryck och man erhöll den önskade föreningen i form av en vit, fast substans, som kristalliserade i etylacetat/heptan. Ut- byte 8,4 g, smältpunkt 183,5-l85°0.

Analys- %C %H %N Beräknat för 057H65O15N 62,2 9,0 g 2,0 Funnet 62,0 8,9 2,0 mm (s, anala» 5165 (1H)S9 5158 (nns, 5145 (äns, 2156 (Glas ÛCh 2,08 (3H)s. lb. gf-Acetyl-8,Ba-deoxi-8,8a-dihzdro-oleandomzcin.

Aluminiumfolie (4,0 g) skuren i 6 mm bitar och övertäckt med 290 ml av en vattenlösning av kvicksilver(II)klorid omrördes i 30-45 sekunder. lösningen avdekanterades och det amalgamerade aluminiumet tvättades först två gånger med vatten, därefter en gång med isopro- panol och till sist en gång med tetrahydrofuran. Bitarna överskikta- des med 45 ml tetrahydrofuran, 45 ml isopropanol och 10 ml vatten och kyldes därefter till 0°C i ett isbad. En lösning av 2,0 g 8,8a- deoxi-2'-acetyl-oleandomvcin i tetrahydrofuran, isopropanol och vat- ten sattes droppvis till det amalgamerade aluminiumet med sådan has- tighet, att temperaturen hölls vid 0°C. När tillsatsen slutförts av- lägsnades badet och reaktionsblandningen omrördes vid rumstempera- turen hela natten. De fasta beståndsdelarna avfiltrerades och filt- ratet indunstades i vakuum till torrhet. Återstoden behandlades med etylacetat-vatten och pH injusterades på 9,0 med en mättad natrium- 7800269-8 48 karbonatlösning. Den organiska fasen avskildes, tvättades med vatten, med en mättad koksaltlösning och torkades över natriumsulfat. Iös- ningsmedlet avlägsnades och man erhöll 2,27 g av den önskade produk- ten.

Pregaration B. 2a. ll,2'-Diacetyl-8,8a-deoxi-8,8a-metylen-oleandomgpin.

I en flamtorkad 200 ml kolv med 5 halsar försedd med en dropp- tratt, en magnetomrörare och ett övertryckskväveinlopp satsades 16,4- g trimetylsulfoxoniumjodid och 3,4 g av en 50%-ig oljedispersion av natríumhydrid. De fasta beståndsdelarna sammanblandades väl och 45,2 ml dimetylsulfoxid tillsattes via dropptratten. Efter en time sedan väteutvecklingen avklingat kyldes suspensionen till 5-l0°G och en lösning av 22,6 g ll,2'-diacetyl-8,8a-deoxi-oleandomwcin i 32 ml tet- rahydrofuran och 16 ml dimetylsulfoxid tillsattes under loppet av minuter. Suspensionen omrördes vid rumstemperaturen i 90 minuter, hälldes i 500 ml vatten och extraherades med etylaoetat (2x300 ml).

De organiska extrakten tvättades med vatten, med mättad natríumklorid- lösning, torkades över vattenfritt natriumsulfat, filtrerades och indunstades till torrhet under reducerat tryck. Återstoden kristalli- serades i eter och man erhöll 8,9 g ll,2'-diacetyl-8,8a-deoxi-8,8a- metylen-oleandomwcín.

Claims (5)

1. 0 15 20 25 30 35 49 7800269-8 Patentkrav l. Sätt att framställa 4"-amino-epimera föreningar med formeln VI Och farmaceutiskt godtagbara syraadditionssalter därav, varvid var och en av R och R1 representerar väte eller alkanoyl med 2-3 kolatomer; R2 väte; R3 väte eller alkyl med l-6 kolatomer; och A är metyl, k ä n n e t e c k n a t av att man reducerar en förening med formeln 10 15 20 25 30 35 III där var och en av R och R1 representerar väte eller alkanoyl med 2-3 kolatomer; och X representerar NR3, NH, N-OH, N-OCH3 N-Og-CH3, varvid man 8 (a) när X representerar N-OH, N-OCH3 eller N-OC-CH3 genomför nämnda reduktion med hjälp av katalytisk hydrering, och (b) när X representerar NR3 eller NH, generar denna iminogrupp in situ ur de motsvarande ketonerna (X = O) med formlerna I, II och III genom kondensation av nämnda ketoner med ett amin- eller ammoniumsalt av en lägre alkansyra eller ammonium- eller -aminsalt av en oorganisk syra, varpå man eventuellt (c) när R eller R1 representerar väte, omvandlar denna till alkanoyl, och/eller när R eller Rl representerar alkanoyl, omvandlar denna till väte; 7800269-a 51 (d) framställer farmaceutiskt godtagbara syraadditionssalter.

2. Sätt enligt krav l, k ä n n e t e c k n a t av att å? X är N-OH, N-OCH3 eller N-OC-CH3 och att reduktionen genom- föres som katalytísk hydrering.

3. Sätt enligt krav 2, k ä n n e t e c k n a t av att reduktionen åstadkommes med väte i närvaro av Raney-nickel, palladíum på träkol eller platínaoxid.

4. Sätt enligt krav l, k ä n n e t e c k n a t av att X är NR3 eller NH och att man använder ett överskott av ett ammonium- eller aminsalt av en lägre alkansyra, företrädes- vis ammonium- eller aminacetat.

5. Sätt enligt krav 4, k ä n n e t e c k n a t av att reduktionsmedlet är natriumcyanoborhydrid.