FI68059B - Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt anvaendbara havsyntetiska 4''-amino-oleandomycinderivat - Google Patents

Description

1 68059

Menetelmä terapeuttisesti käytettävien puolisynteettisten M"-amino-oleandomysiinijohdannaisten valmistamiseksi

Jakamalla erotettu hakemuksesta 780355 (patentti 65262) 5

Oleandomysiini, sen tuottaminen käyttämällä liemistä ja sen käyttö bakteereita vastustavana aineena on ensimmäisen kerran kuvattu US-patenttijulkaisussa nro 2 757 123. Luonnossa esiintyvällä yhdisteellä tiedetään 10 olevan seuraava rakenne: 8a Hv fCH3}2 HOV " 10 15 I'll 5I" 6' >13 3< 6” "k - -°.........

1 fl l h" o 2" s4^j,////oh 20 ' 0CH3

Oleandomysiinin ja samankaltaisten yhdisteiden tavanmukaisesta hyväksytty numerointikaavio ja stereokemial-linen esitys on ilmaistu eri asemineen.

25 Tämän yhdisteen useita synteettisiä muunnoksia tun netaan erityisesti ne, joissa yksi, kaksi tai kolme asemissa 2 1 , 4" ja 11 havaittavista vapaista hydroksyyliryhmis-tä on esteröity asetyyliestereiksi. Lisäksi US-patentti-julkaisussa nro 3 022 219 on kuvattu samanlaisia muunnok-30 siä, joissa asetyyli yllä mainituissa estereissä on korvattu muulla, edullisesti haarautumattomalla kolmesta kuuteen hiiliatomia sisältävällä alemmalla alkanoyylillä.

Keksinnön kohteena on menetelmä kaavan IV, V tai VI mukaisten terapeuttisesti käytettävien 4"-amino-olean-35 domysiinijohdannaisten ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävien happoadditiosuolojen valmistamiseksi, 2 68059 ;νΛ Ά’2 s, n(ch,

- f - ’f S | ' o I

s Rv r Y\X

i A R0 Y' A

v'j C ti n r°......<^x S | te3 Y' 'Ά OCH3 i | !*2 10 M 0GH9 IV V 3 N(CH„)0 - Ri n I 3 2 °Ύ< Vk RO „„ / 15 > ; 11 "Ύ ;nh2 0 OCHo

20 VI

jossa kaavassa R ja merkitsevät vetyä tai kaksi tai kolme hiiliatomia sisältävää alkanoyyliä; ja R, on vety tai

O

1-6 hiiliatomia sisältävä alkyyli.

25 Kaavan IV mukaiset yhdisteet muodostavat edullisim man ryhmän tässä kemoterapeuttisten aineiden luokassa. Erityisen edullisia tässä ryhmässä ovat yhdisteet, joissa R2 on vety ja R on asetyyli. Myös kaavojen V ja VI mukaiset yhdisteet, joissa R on asetyyli, ovat edullisia.

30 Yhdisteet V ja VI, vaikka ne kaikki ovatkin luon nossa esiintyvästä olenadomysiinistä johdettuja, eroavat siitä rakenteeltaan asemassa 8. Luonnon aineessa sekä yhdisteessä IV tämä rakenne on seuraavan kaltainen epoksidi-rengas: 3 68059

Yhdisteen V sukuiset yhdisteet sisältävät metyyli-ryhmän asemassa 8 siihen liittyvine stereokemiallisine rakenteineen ja ne kuvataan seuraavasti:

5 °yS

Kaavan V olenadomysiinimuunnoksia nimitetään 8,8a-10 deoksi-8 ,8a-dihydro-oleandomysiineiksi.

Ne kaavan VI mukaiset yhdisteet, jotka sisältävät syklopropyylirenkaan asemassa 8, on nimitetty 8,8a-deoksi-8,8a-metyleeni-olenadomysiineiksi ja ne kuvataan seuraavasti : 15 °Yh 20 Kaavojen IV, V ja VI mukaisia yhdisteitä valmiste taan siten, että i) pelkistetään yhdiste, jolla on kaava I, II tai III, R, N(CHJ0 1 \ 6 1 N(CH-)0 0 XT '' 0 1 r 3 l 2 5 Y v 1 ''ό Λ R0"r' ν-σ^ο-ν . f ) > i

1 L

'1 X X

CL/X ! J X] r""0„.rO·^

30 O L X C>V| X '' X

° ocHj ii rX

1 *ls *lat3>2 11 0CH3

Yn Vs- % y^ o-y li tl T^x ITI 0CH3 , 68059 joissa R ja ovat kumpikin vetyjä tai kaksi tai kolme hiiliatomia sisältäviä alkanoyylejä ja X on NR.,, N-OH, 0 N-OCH^ tai N-OC-CHg siten, että 0 a) a) kun X on N-OH, N-OCH^ tai N-OC-CH^ , mainittu 5 pelkistys suoritetaan katalyyttisella hydrauksella ja b) kun X on NR^, tämä iminoryhmä muodostetaan vastaavista kaavojen I, II tai III mukaisista ketoneista (X = 0) kondensoimalla mainittu ketoni alemman alkaani-hapon amiini- tai ammoniumsuolalla tai epäorgaanisen hapon 10 amiini- tai ammoniumsuolalla, ja pelkistys, joka on hydri-dipelkistys, suoritetaan in situ, ja haluttaessa ii) kun R tai R^ on vety, ne muutetaan vastaavasti alkanoyyliksi ja/tai kun R tai R^ on alkanoyyli, ne muutetaan vastaavasti vedyksi; ja/tai 15 iii) muodostetaan farmaseuttisesti hyväksyttävät

happoadditiosuolat. O

Ketonijohdannaisten (X = N-OH, N-OCH^ tai N-OCCH^) pelkistäminen suoritetaan katalyyttisellä hydrauksella, jossa johonkin alempaan alkanoliin, kuten isopropanoliin, 20 liuotettua oksiimia tai sen johdannaista sekä Raney-nik-keliä, 10-%:sta palladium-hiiliseosta tai platinaoksidi-katalysaattoria ravistellaan vetykaasussa huoneen lämpötilassa yön yli alkupaineen ollessa 50 naulaa neliötuu- 3 maila (noin 3,5 kg/cm ). Käytetty katalyytti suodatetaan 25 erilleen, minkä jälkeen poistamalla liuotin suodoksesta, saadaan haluttu kaavan IV, V tai VI mukainen bakteereja vastustava 4"-deoksi-4"-amino-substituoitu tuote eristetyksi. Jos pelkistämisessä käytetään liuottimena metano-lia, tapahtuu 2'-alkancyyliryhmän solvolyysi. Tämän osan 30 irtoamisen välttämiseksi suositellaan liuottimeksi isopropanolia .

Toinen, ja suositeltavampi tapa valmistaa kaavojen I, II tai III mukaisista ketoneista (X = 0) kaavojen IV, V ja VI mukaisia primäärisiä amiineja, käsittää mainittu-35 jen ketonien kondensoimisen alemman alkaanihapon ammoniumsuolalla ja edelleen in situ muodostuneen imiinin pelkisti 5 68059 tämisen. Alempien alkaanihappojen ammoniumsuolojen lisäksi voidaan myös käyttää muita, kuten epäorgaanisten happojen ammoniumsuoloja.

Käytännössä ketonia I, II tai III (X = 0) liuotet-5 tuna alempaan alkanoliin, kuten metanoliin, käsitellään alkaanihapon, kuten etikkähapon ammoniumsuolalla ja jäähdytettyä reaktioseosta käsitellään pelkistävällä aineella, natriumsyanoboorihydridillä. Reaktion annetaan tapahtua huoneen lämpötilassa useiden tuntien ajan ja sen jälkeen 10 suoritetaan hydrolyysi ja tuote erotetaan.

Vaikka ammoniumalkanoaattia tarvitaan yksi mooli yhtä ketonimoolia kohden, on edullista lisätä sitä ylimäärin imiinin nopean muodostumisen varmistamiseksi. Niinkin suurta kuin kymmenkertaista ylimäärää voidaan käyttää 15 heikentämättä lopullisen tuotteen laatua.

Mitä tulee käytettävän pelkistävän aineen määrään ketonin moolimäärän suhteen, on suositeltavaa käyttää noin kaksi moolia natriumsyanoboorihydridiä yhtä ketonimoolia kohden.

20 Pelkistyksen reaktioaika vaihtelee kahdesta kolmeen tuntiin huoneen lämpötilassa.

Kuten edellä on mainittu, edullinen liuotin on metanoli, edullisen ammoniumalkanoaatin ollessa ammonium-asetaatti. Isopropanolia voidaan myös käyttää liuottimena 25 ja on erityisen toivottavaa silloin, kun 2'-alkanoyyli-ryhmän solvolyysi on vältettävä.

Erotettaessa haluttuja 4"-deoksi-4"-amino-oleando-mysiinijohdannaisia mistä tahansa ei-emäksisistä sivutuotteista tai lähtöaineesta, käytetään hyväksi lopullisen 30 tuotteen emäksistä luonnetta. Täten tuotteen vesiliuos uutetaan asteittain kohottaen pH:ta niin, että neutraalit ja ei-emäksiset aineet uutetaan alemmilla pH-arvoilla ja tuote pH:n ollessa noin 9. Uuttamiseen käytettävät liuottimet, joko etyyliasetaatti tai dietyylieetteri, pestään 35 uuton jälkeen kyllästetyllä suolaliuoksella ja vedellä ja kuivataan natriumsulfaatilla, tuote saadaan poistamalla liuotin.

6 68059

Mikäli lisäpuhdistus on tarpeellinen, se voidaan suorittaa pylväskromatografisesti silikageelillä tunnettujen menetelmien mukaisesti.

Edellä mainittu pelkistävä aminointi voidaan nat-5 riumsyanoboorihydridin käytön ohella suorittaa muissa pel-kistysolosuhteissa. Joitakin jalometallikatalysaattoreita, kuten palladium-hiili-seosta voidaan käyttää vedyn ja am-moniumalkanoaatin kanssa tehokkaasti kaavojen I, II ja III (X = 0) yhdisteiden muuttamisessa kaavojen IV, V ja 10 VI vastaaviksi yhdisteiksi.

käytännössä soveliasta ketonia liuotettuna alempaan alxanoliin, kuten metanoliin tai isopropanoliin, käsitellään ammonium-alkanoaatilla, kuten ammoniumasetaa-tilla, ja 10-%:isella palladium-hiili-seoksella, ja saa-15 tua suspensiota ravistellaan vetykaasussa lämpötilan ollessa 25-50°C, kunnes teoreettinen määrä vetyä on absorboitunut .

Mitä tulee reagenssien määrien suhteisiin, on suositeltavaa käyttää kymmenkertaista ammoniumalkanoaatti-20 ylimäärää reaktion loppuun saattamiseksi kohtuullisessa ajassa. Katalysaattorin määrä voi vaihdella kymmenestä viiteenkymmeneen prosenttiin lähtöaineena käytetyn ketonin painosta. Vedyn alkupaine ei ole kriittinen ja suositel- laankin käytettäväksi yhden ilmakehän ja 500 naulan/ne- 2 25 liötuumaa (35 kg/cm ) välillä olevaa painetta reaktioajan lyhentämiseksi. Käytettäessä edellä mainittuja parametrejä, reaktioaika vaihtelee kahdesta kuuteen tuntiin.

Pelkistävän aminointireaktion päätyttyä käytetty katalysaattori suodatetaan pois ja suodos haihdutetaan 30 kuiviin. Tuotteen puhdistaminen suoritetaan, kuten yllä mainitussa menetelmässä, jossa natriumsyanoboorihydridiä käytettiin pelkistävänä aineena.

Kaavan IV mukaiset bakteereja vastustavat yhdisteet, joissa R on yhdestä kuuteen hiiliatomia sisältävä

O

35 alkyyli, voidaan mukavasti valmistaa käyttäen lähtöaineena ketonia I (X = 0) ja sopivaa amiinia , sekä pelkistä vänä aineena natriumsyanoboorihydridiä. pH:n pitämiseksi

II

7 68059 välillä 6-7 käytetään amiinin kanssa yhtä suuri moolimää-rä alkaanihappoa, kuten etikkahappoa. Vaihtoehtoisesti voidaan myös käyttää alkaanihapon sijasta vastaava määrä kloorivetykaasua. Reagenssien määrien suhde, reaktiolämpö-5 tila ja -aika ja pelkistävän aminointireaktion suorittamistapa ovat samat kuin vastaavat parametrit reaktiossa valmistettaessa yhdisteitä, joissa R^ on vety, ja natrium-syanoboorihydridiä käytetään pelkistävänä aineena.

Kaavan IV mukaiset bakteereja vastustavat yhdis-10 teet, joissa R^ on metyyli, valmistetaan alkyloimalla pelkistävästä kaavan IV 4"-deoksi-4"-amino-oleandomysiini, jossa R^ on vety, käyttäen formaldehydiä ja 10 %:ista pal-ladium-hiili-seosta.

Reagenssien määrien suhde, reaktiolämpötila, liuo-15 tin paine, reaktioaika ja suorittamistapa ovat samat kuin parametrit reaktiossa valmistettaessa yhdistettä IV, jossa Rg on vety, ja vetykaasua ja 10 %:ista palladiumia käytetään pelkistävänä aineena.

Lähtöaineina käytettäviä kaavan I, II tai III mu-20 kaisia yhdisteitä valmistetaan lähtien vastaavista kaavan I, II tai III mukaisista yhdisteistä, joissa X = OH ja R = 2 tai 3 hiilatomia sisältävä alkanoyyli. OH-ryhmä hapetetaan ketoniryhmäksi FI-hakemuksessa nro 780 35 5 (patentti 65262) kuvatulla tavalla.

25 2'-asemassa olevan alkanoyyliryhmän poistaminen ta pahtuu sulfolyysireaktiolla, jossa 2'-alkanoyyli-4"-deoksi-4"-okso-oleandomysiiniyhdistettä sekoitetaan yön yli ylimäärässä metanolia huoneen lämpötilassa. Kun metanoli on poistettu ja jäännös sitten puhdistettu, saadaan tuloksek-30 si kaavojen I, II ja III mukaiset yhdisteet, joissa R-^ on vety ja X on 0.

Ketonien (X = 0), I, II ja III asemissa 11 (R = H) ja 2' (R1 = H) olevat hydroksyyliryhmät voidaan asyloida käsittelemällä mainittuja yhdisteitä kahdella moolilla py-35 ridiiniä ja ylimäärällä alkaanianhydridiä jäähaudelämpötilassa. Käytännössä hydroksyyliryhmiä sisältävä yhdiste li- a 68059 sätään jäähdytettyyn alkaanianhydridiin, minkä jälkeen lisätään pyridiini. Kun lisäykset on suoritettu, jäähaude poistetaan ja seosta sekoitetaan huoneen lämmössä yön yli. Tuote saadaan hydrolysoimalla reaktioseos vedellä ja uut-5 tamalla se sitten etyyliasetaatilla. Vaihtoehtoisesti al-kaanianhydridin liikamäärä voidaan poistaa vakuumissa ja puhdistaa jäännös tavanomaisilla menetelmillä.

Edullisia kaavani, II tai III mukaisia välituotteita ovat 11,2 '-diasetyyl.i-4 "-deoksi-4 "-okso-oleandomysiini , 10 11'-asetyyli-4"-deoksi-4"-okso-oleandomysiini, 4"-deoksi- 4"-okso-oleandomysiini, 2'-asetyyli-H"-deoksi-4"-okso-oleandomysiini , 11,2'-diasetyyli-8,8a-deoksi-8,8a-dihyd-ro-4"-deoksi-4"-okso-oleandomysiini, 11-asetyyli-8 ,8 a-deoks i-8,8a-dihydro-4"-deoksi-4"-okso-oleandomysiini, 15 8,8a-deoksi-8,8a-dihydro-4"-deoksi-4"-okso-oleandomysiini, 2'-asetyyli-8,8a-deoksi-8,8a-dihydro-4"-deoksi-4"-okso-oleandomys iini, 11,2'-diasetyyli-8,8a-deoksi-8,8a-metylee-ni-4"-deoksi-4"-okso-oleandomysiini, 11-asetyyli-8,Sade oksi-8,8a-metyleeni-4"-deoks i-4"-okso-oleandomysiini, 20 8,8a-deoksi-8,8a-metyleeni-4"-deoksi-4"-okso-oleandomy- siini ja 2'-asetyyli-8,8a-deoksi-8,8a-metyleeni-4"-deoksi-4 "-okso-oleandomysiini.

Ketonien (X = 0) oksiimit valmistetaan antamalla mainittujen ketonien reagoida hydroksyyliamiinin hydro-25 kloridin kanssa metanoli-vesi-liuoksessa huoneen lämpötilassa. Käytännössä on syytä käyttää ylimäärin hydroksyy-liamiinia ja käytettäessä kolminkertaista ylimäärää saadaan halutulle välituotteelle hyvä saanto. Käytettäessä huoneen lämpötilaa ja ylimäärää hydroksyyliamiinia halu-30 tun oksiimijohdannaisen valmistuksessa reaktioaika saadaan 1-2 tuntiin. Tuote erotetaan sekoittamalla reaktio-seos veteen ja tekemällä se emäksiseksi niin, että pH on 9,5, ja uuttamalla se sitten veteen sekoittumattomalla liuottimelle, kuten etyyliasetaatilla.

35 Kun O-metyylihydroksyyliamiinin hydrokloridia käy tetään hydroksyyliamiinin hydrokloridin asemesta, reaktio 3 68059 antaa tulokseksi O-metyylioksiimijohdannaisen. Käytettäessä O-metyylihydroksyyliamiinia on edullista pidentää reak-tioaikaa 6-12 tuntiin. Tuotteen erottaminen suoritetaan samalla tavalla kuin edellä on oksiimijohdannaisella ku-5 vattu. 0 O-asetyylioksiimiyhdisteiden (X = N-OCCHg) valmistaminen tapahtuu asetyloimalla vastaava oksiimi. Kokeellisesti annetaan yhden oksiimimoolin reagoida yhden asetan-hydridimoolin kanssa yhden moolin pyridiiniä läsnäollessa. 10 Anhydridi- ja pyridiiniylimäärän käyttö jouduttaa reaktion loppuun viemistä ja on suositeltavaa käyttää kaksi-kolmi-kertaista ylimäärää. Reaktio suoritetaan edullisesti ap-roottisessa hiilivetyliuottimessa, kuten bentseenissä tai tolueenissa yön yli. Kun reaktio on saatettu loppuun, li-15 sätään vettä ja tuote erotetaan hiilivetykerrokseen. Vaihtoehtoisesti O-asetyylijohdannaiset voidaan valmistaa käsittelemällä tarvittavaa ketonia O-asetyylihydroksyyliamii-nin hydrokloridilla oksiimijohdannaisten valmistuksessa käytettävissä reaktio-olosuhteissa.

20 Bakteereja vastustavien 4"-deoksi-4"-amino-oleando- mysiinijohdannaisten valmistuksessa käyttökelpoisina välituotteina suositeltavia oksiimeja ja oksiimijohdannaisia ovat 11,2' -diasetyyli-4"-deoksi-4"-okso-oleandomysiiniok-siimi, ll-asetyyli-4"-deoksi-4 "-okso-oleandomysiinioksii-25 mi, 11,2'-diasetyyli-4"-deoksi-4"-okso-oleandomysiini-O-asetyylioksiimi, ll-asetyyli-4"-deoksi-4"-okso-oleandomy-siini-O-asetyylioksiimi, 11,2'-diasetyyli-8 ,8a-deoksi-8 ,8a-dihydro-4"-deoksi-4"-okso-oleandomysiinioksiimi, 11-asetyy-li-8 ,8a-deoksi-8,8a-dihydro-4 "-deoksi-4"-okso-oleandomy-30 siinioksiimi, 11,2'-diasetyyli-8,8a-deoksi-8 ,8a-dihydro-4"-deoks1-4"-okso-oleandomysiini-O-asetyylioksiimi, 11-asetyyl.i-8 ,8 a-deoksi-8,8a-dihydro-4"-deoksi-4"-okso-olean-domysiini-O-asetyylioksiimi, ll,2'-diasetyyli-8,8a-deoksi-8,8a-metyleeni-4"-deoksi-4"-okso-oleandomysiinioksiimi, 35 ll-asetyyli-8,8a-deoksi-8,8a-metyleeni-4"-deoksi-4"-okso-oleandomysiinioksiimi, 11,2'-diasetyyli-8 ,8a-deoksi-8 ,8a- 10 68059 metyleeni-4"-deoksi-4"-deoksi-4"-okso-oleandomysiini-O-ase-tyylioksiimi- ja ll-asetyyli-8,8a-deoksi-8,8a-metyleeni-4"-deoksi-4"-okso-oleandomysiini-O-asetyylioksiimi.

Keksinnön mukaisten yhdisteiden joukossa antibak-5 teerisen käyttökelpoisuutensa vuoksi edullisimpia ovat 4"-deoksi-4"-amino-oleandomysiini, ll-asetyyli-4"-deoksi-4"-amino-oleandomysiini, 11,2 '-diasetyyli-4"-deoksi-4"-amino-oleandomysiini, ll-asetyyli-8,8a-deoksi-8 ,8a-dihyd-ro-4"-deoksi-4"-amino-oleandomysiini, 11,2'-diasetyyli-10 8,8a-deoksi-8,8a-dihydro-4"-deoksi-4"-amino-oleandomysiini, ll-asetyyli-8,8a-deoksi-8,8a-metyleeni-4"-deoksi-4"-amino-oleandomysiini ja 11,2'-diasetyyli-8,8a-deoksi-8,8a-mety-leeni-4"-deoksi-4"-amino-oleandomysiini.

Käytettäessä hyväksi kyseisen keksinnön suoloja muo-15 dostavien yhdisteidenkemoterapeuttista vaikutusta, on suositeltavaa luonnollisesti käyttää farmaseuttisesti hyväksyttäviä suoloja. Vaikkakin veteen liukenemattomuus, korkea myrkyllisyys tai kiteisen luonteen puuttuminen voi tehdä jonkin tietyn suolalajin sopimattomaksi tai vähemmän toi-20 voitavaksi sellaisenaan käytettäväksi.jossain farmaseuttisessa sovellutuksessa, veteen liukenemattomat ja toksiset suolat voidaan muuttaa vastaaviksi farmaseuttisesti hyväksyttäviksi emäksiksi hajottamalla suola, kuten yllä on kuvattu, tai ne voidaan muuttaa miksi tahansa halutuksi 25 farmaseuttisesti hyväksyttäväksi happoadditiosuolaksi.

Esimerkkejä farmaseuttisesti hyväksyttäviä anio-neja tuottavista hapoista ovat kloorivety-, bromivety-, jodivety-, typpi- ja rikkihappo- ja riikihapoke sekä fosfori-, etikka-, maito-, sitruuna-, viini-, meripihka-, 30 maleiini-, glukoni- ja aspargaiinihappo.

Kyseisen keksinnön bakteereja vastustaviin aineisiin johtavien lähtöaineiden stereokemiallinen rakenne on sama kuin luonnossa esiintyvällä aineella. 4"-hydrok-syyliryhmän hapettaminen ketoniksi ja mainitun ketonin 35 sitä seuraava muuttaminen 4"-amiineiksi antaa tilaisuuden 4"-substituentin stereokemiallisen rakenteen poikkeamiselle il n 68059 luonnollisen tuotteen rakenteesta. Näin ollen, kun yhdisteet I, II ja III (X = 0) muutetaan amiineiksi jollakin edellä kuvatuista menetelmistä, on mahdollista, että muodostuu kaksi epimeeristä amiinia. Kokeellisesti on havait-5 tu, että molemmat epimeeriset amiinit ovat läsnä lopullisessa tuotteessa vaihtelevissa suhteissa riippuen synteesimenetelmän valinnasta. Mikäli eristetty tuote sisältää vallitsevasti yhtä epimeeriä, mainittu epimeeri voidaan puhdistaa kiteyttämällä uudelleen toistuvasti sopivasta 10 liuottimesta, kunnes vakio sulamispiste saavutetaan. Toinen epimeeri, jota oli vähäisessä määrin varsinaisessa eristetyssä kiinteässä tuotteessa, on vallitseva tuote emäliuok-sessa. Se voidaan ottaa sieltä talteen asiantuntijoiden tuntemilla menetelmillä, kuten esimerkiksi haihduttamalla 15 emäliuos kuiviin ja kiteyttämällä jäännös useita kertoja uudelleen, kunnes saavutetaan tuottelle vakio sulamispiste, tai käyttämällä kromatografisia menetelmiä.

Vaikka mainitusta seoksesta epimeerit voidaankin erottaa ammattimiesten tuntemilla menetelmillä, käytän-20 nöllisistä syistä on edullista käyttää mainittua seosta sellaisenaan reaktiosta eristettynä. Tavallisesti kuitenkin on edullista puhdistaa epimeeriseos kiteyttämällä se uudelleen ainakin yhden kerran jostakin sopivasta liuottimesta, suorittaa puhdistus pylväskromatografisesti, 25 liuotinositusmenetelmällä tai trituroimalla jostakin sopivasta liuottimesta. Mainittu puhdistaminen, vaikkakaan se ei epimeerejä erottaisikään, poistaa sellaiset ylimääräiset aineet, kuten lähtöaineet ja ei-toivotut sivutuotteet .

30 Epimeerien absoluuttista stereokemiallista esitys tä ei ole selvitetty. Tietyn yhdisteen molemmilla epimee-reillä on kuitenkin saman tyyppinen vaikutus esim. bakteereja vastustavina aineina.

Seuraavista taulukoista ilmenevät keksinnön mukais-35 ten yhdisteiden antibakteriaaliset ominaisuudet verrattuna oleandomysiinin vastaaviin ominaisuuksiin. Tulokset on ilmoitettu MIC-arvoina (tutkittavan yhdisteen pienin mah- 12 68059 elollinen pitoisuus, joka estää ko. mikro-organismin kasvun). Taulukossa I on esitetty tulokset kaavan IV mukaisille yhdisteille, jotka asemassa _ch2 5 8 (8a) sisältävät ryhmän 1^-' 0, taulukossa II on puoles taan esitetty tulokset kaavan V mukaisille yhdisteille, jotka asemassa 8 (8a) sisältävät ryhmän -CH^, taulukko III kuvaa tuloksia kaavan VI mukaisille yhdisteille, jotka 10 asemassa 8 (8a) sisältävät ryhmän CH2 , ja taulukko IV kuvaa tuloksia vertailuyhdisteelle, oleandomysiinille. Tuloksista ilmenee, että esillä olevan keksinnön mukaisten yhdisteiden antibakteriaalinen aktiivisuus etenkin organismien n:o 13,14,15 ja 24 suhteen on huomattavasti parempi 15 kuin vertailuyhdisteen.

Il 68059

TAULUKKO I

MIC, ^ug/ml.

Kaavan IV mukainen yhdiste, jossa = H

Mikro-organismi ^ ^ = H ^ = CH3CO

R = CH3CO R = H R = H

(1) Staph, aur. 01A005 1,56 3,12 6,25 (2) " " 01AO 52 3, 1 2 3,1 2 6,25 (3) " " 01A109 R >200 200 >50 (4) " " 01A110 >200 200 >50 (5) " " 01A111 R 0,78 0,1 0 0,78 (6) " " 01A087 RR >200 100 >50 (7) " " 01A400 R 1,56 3,12 6,25 (8) Strp. Fae. 02A006 1,56 3,12 3,12 (9) Strp. pyog. 02C203 0,78 >0,10 1,56 (10) " " 02C020 R >200 - >50 (11) Myco. smeg. 05A001 6,25 25 >50 (12) B. sub. 06A001 1,56 3,12 3,12 (13) E. coli 51A229 12,5 50 50 (14) " " 51A266 25 25 50 (15) " " 51A125 R 25 100 >50 (16) Ps. aerug. 52A104 >200 100 >50 (17) Klebs. pn. 53A009 25 100 >50 (18) " " 53A031 R 50 100 >50 (19) Prot. mira. 57C064 >200 >200 >50 (20) Prot. morg. 57G001 >200 100 >50 (21) Salm. chol-su. 58B242 50 100 (22) Sal. typhm. 58D009 50 100 >50 (23) " ” 58D013-C 25 100 (24) Past.multo. 59A001 1,56 6,25 6,25 (25) Serr. mar. 63A017 >200 100 >50 (26) Ent. aero. 67A040 50 - >50 (27) Ent.eloa. 67B003 100 - >50 (28) Neiss. sic. 66C000 _<0,10 <0,10 j ι4 68059

TAULUKKO II

MIC, ^ug/ml.

Kaavan V mukainen yhdiste Mikro-organismi R^ = H = H

R = H R = CH3CO

(1) Staph, aur. 01A005 6,25 3,12 (2) " " 01A052 6,25 3,12 (3) " " 01A109 R >200 >200 (4) " " 01A110 R >200 >200 (5) " " 01A111 R 0,78 0,78 (6) " " 01A087 RR >200 >200 (7) " " 01A400 R 6,25 3,12 (8) Strp. fae. 02A006 3,12 3,12 (9) Strp. pyog. 02C203 0,20 0,20 10) " " 02C020 R 50 200 11) Myco. smeg. 05A001 6,25 12,5 12) B. sub. 06A001 6,25 3,12 13) E. coli 51A229 100 25 14) " " 51A266 100 50 15) " " 51A125 R 100 50 16) Ps. aerug. 52A104 >200 >200 17) Klebs. pn. 53A009 200 100 18) " " 53A031 R >200 100 19) Prot. mira. 57C064 >200 >200 20) Prot. morg. 57G001 200 >200 21) Salm. Chol-su. 58B242 200 100 22) Sal. typhm. 58D009 200 50 23) " " 58D013-C 3,12 100 , 24) Past.multo. 59A001 >200 3,12 25) Serr. mar. 63A017 >200 >200 26) Ent.aero. 67A040 >200 100 27) Ent.cloa. 67B003 100 200 28) Neiss. sic. 66C000 0,20 £0,10 tl is 68059

TAULUKKO III

MIC, ^ug/ml.

Kaavan VI mukainen yhdiste Mikro-organismi = H

R = CH3CO

(1) Staph, aur. 01A005 0,78 (2) " " 01A052 1,56 (3) " " 01A109 R >200 (4) " " 01A110 R >200 (5) " " 01AI 11 R 0,78 (6) " " 01A087 RR >200 (7) " " 01A400 R 1,56 (8) Strp. gar. 02A006 1,56 (9) Strp. pyog. 02C203 0,20 (10) " " 02C020 R >200 (11) Myco. smeg. 05A001 (12) B. sub. 06A001 0,78 (13) E. Coli 51A229 25 (14) " " 51A266 50 (15) " " 51A125 R 50 (16) Ps. aerug. 52A104 >200 (17) Klebs. pn. 53A009 100 (18) " " 53A031 R 50 (19) Prot. mira. 57C064 >200 (20) Prot. morg. 57G001 >200 (21) Salm. chol-su. 58B242 100 (22) Sal. typhm. 58D009 25 (23) " " 58D013-C 25 (24) Past, multo. 59A001 3,12 (25) Serr. mar. 63A017 >200 (26) Ent. adro. 67A040 (27) Ent.eloa. 67A003 100 (28) Neiss. sic. 66C000 £ 0,10 16 68059

TAULUKKO IV

MIC, ^,ug/ml

Mikro-organismi Oleandomysiini (1) Staph, aur. 01A005 0,78 (2) " " 01A052 1,56 (3) " " 01A109 R 100 (4) " " 01A110 100 (5) " " 01 AI 11 R 0,78 (6) " " 01A087 RR 100 (7) " " 01A400 R 1,56 (8) Strp. fae. 02A006 1,56 (9) Strp. pyog. 02C203 0,78

(10) " " 02C020 R

(11) Myco. smeg. 05A001 100 (12) B. sub. 06A001 0,78 (13) E. coli 51A229 100 (14) " " 51A 2 6 6 1 00 (15) " " 51A125 R 100 (16) Ps. aerug. 52A104 100 (17) Klebs. pn. 53A009 100 (18) " " 53A031 R 100 (19) Prot. mira. 57C064 (20) Prot.morg. 57G001 100 (21) Salm. chol-su. 58B242 (22) Sal. typhm. 58D009 100

(23) " " 58D013-C

(24) Past, multo. 59A001 12,5 (25) Serr. mar. 63A017 100 (26) Ent. aero. 67A040 100 (27) Ent. eloa. 67B003 100 (28) Neiss. sic. 66C000 12,5 17 68059

Ulkoista käyttöä varten keksinnön mukaiset yhdisteet yhdistetään edullisesti farmaseuttisesti hyväksyttävään kantaja-aineeseen, kuten kasvi- tai mineraaliöljyyn tai ihon pehmennysvoiteeseen. Samalla tavalla se voidaan 5 liuottaa tai dispergoida nestemäisiin kantaja-aineisiin tai liuottimiin, kuten veteen, alkoholiin, glykoleihin tai niiden seoksiin tai muihin farmaseuttisesti hyväksyttäviin inertteihin väliaineisiin; se on, väliaineisiin, joilla ei ole vahingollista vaikutusta aktiiviin aine-10 osaan. Sellaisissa tarkoituksissa on yleisesti hyväksyttyä käyttää aktiivin aineosan konsentraatioita 0,01 - 10 % laskettuna koko valmisteen painosta.

Sisäisessä käytössä näitä uusia yhdisteitä voidaan antaa suun kautta tai parenteraalisesti, esim. ihon-15 alaisena tai lihaksensisäisenä ruiskeena, annostuksen ollessa 1-200 mg ruumiin painokiloa kohden päivässä. Edullinen annostusalue on noin 5-100 mg ruumiin painokiloa kohden päivässä. Parenteraaliseen ruiskeeseen sopivat kantaja-aineet voivat olla vettä sisältäviä, kuten vesi, 20 isotoninen suolaliuos, isotoninen dekstroosi, Ringerin liuos, tai vettä sisältämättömiä, kuten kasviperäiset rasvaöljyt (puuvillansiemen-, maapähkinä-, maissi-, see-samöljy), dimetyylisulfoksidi ja muuta vettä sisältämättömät kantoaineet, jotka eivät vaikuta valmisteen te-25 rapeuttiseen tehoon eivätkä ole myrkyllisiä käytettyinä tilavuuksina tai osuuksina (glyseroli, propyleeni-glykoli, sorbitoli). Niinikään voidaan tehdä valmisteita, jotka soveltuvat juuri ennen annostusta tapahtuvaan liuoksen valmistamiseen. Sellaisiin valmisteisiin voi 30 kuulua nestemäisiä laimentimia, esimerkiksi propyleeni-glykolia, dietyylikarbonaattia, glyserolia, sorbitolia, jne.; puskurointiaineita, hyaluronidaasia, paikallisia 18 6805 9 puudutusaineita ja epäorgaanisia suoloja haluttujen farmakologisten ominaisuuksien aikaansaamiseksi. Näitä yhdisteitä voidaan myös yhdistää useiden farmaseuttisesti hyväksyttävien inerttien kantaja-aineiden kanssa, joihin 5 kuuluvat kiinteät laimentimet, vettä sisältävät väliaineet, myrkyttömät orgaaniset liuottimet kapseleina, pyöreinä ja keilamaisina tabletteina, pastilleina, kuivina seoksina, suspensioina, liuoksina, eliksiireinä ja paren-teraalisina liuoksina ja suspensioina. Yleensä yhdistei-10 tä käytetään useissa annostusmuodoissa pitoisuuden vaihdellessa 0,5 - noin 90 %:iin koko valmisteen painosta.

Seuraavat esimerkit kuvaavat keksintöä.

Esimerkki 1 2’-asetyyli-V-deoksi-4"-okso-oleandomysiini 15 Dimetyylisulfidia (0,337 ml) lisätään 467 mg N- kloorisukkiini-imidiä 20 ml:ssa tolueenia ja 6 ml:ssa bentseeniä sisältävään sameaan liuokseen, joka on jäähdytetty -5°C:seen ja jota pidetään typpikaasussa. Kun seosta on sekoitettu 0°C:ssa 20 minuuttia, se jäähdyte-20 tään -25°C:seen ja siihen lisätään 1,46 g 2'-asetyyli-oleandomysiiniä ja 15 ml tolueenia. Sekoitusta jatketaan kaksi tuntia -20°C:ssa, minkä jälkeen lisätään 0,46 ml trietyyliamiinia. Reaktioseosta pidetään -20°C:ssa vielä viisi minuuttia ja sen annetaan sitten lämmetä 0°C:seen.

25 Seos kaadetaan koko ajan sekoittaen 50 ml:aan vettä ja 50 ml:aan etyyliasetaattia. Vesiseoksen pH säädetään 9,5:een lisäämällä natriumhydroksidin vesiliuosta. Tämän jälkeen orgaaninen kerros erotetaan, kuivataan natrium-sulfaatilla ja konsentroidaan vakuumissa valkoiseksi vaah-30 doksi (1,5 g).Triturointi dietyylieetterillä antaa 864 mg raakatuotetta, joka kahdesti uudelleen kiteytettynä mety-leenikloridi-dietyylieetteriseoksessa antaa 212 mg puhdasta tuotetta sp. 183-185,5°C.

il ι9 68059

Analyysi C^Hg^Q^N Laskettu: C 61,1 H 8,5 N 1,9 Saatu: C 60,9 H 8,4 N 1,9 NMR ( 4 , CDClg): 5,60 (lH)m, 3,50 (3H)s, 2,73 (2H)m, 2,23 5 (6H)s ja 2,03 (3H)s.

Noudattaen yllä kuvattua menetelmää ja käyttäen 2'-propionyylioleandomysiiniä lähtöaineena, saadaan 2’-propionyyli-4"-deoksi-4"-okso-oleandomysiini.

Esimerkki 2 10 4"-deoksi-4"-okso-oleandomysiini

Liuosta, joka sisältää 1,0 g 2'-asetyyli-4"-deok-si-4"-okso-oleandomysiiniä 20 ml:ssa metanolia, sekoitetaan huoneen lämpötilassa yön yli. Liuos konsentroidaan vakuumissa saaden haluttu tuote valkoisena vaahtona, 15 937 mg.

NMR (</, CDClg): 5,60 (lH)m, 3,50 (3H)s, 2,85 (2H)mja 2,26 ( 6H) s .

Esimerkki 3 11,2' -diasetyyli-4"-deoksi-4ll-okso-oleandomysiini 20 A. Asetyloimalla 4,0 ml:aan 727 mg 2'-asetyyli-4"-deoksi-4"-okso-oleandomy siiniä lisätään jäähauteella 0°C:seen jäähdytettyä asetanhydridiä typpikaasun läsnäollessa. Viiden minuutin kuluttua lisätään 0,158 ml pyridiiniä ja syn-25 tynyttä sameaa suspensiota sekoitetaan huoneen lämpötilassa yön yli. Syntynyt liuos sekoitetaan veteen, johon on lisätty kerrokseksi etyyliasetaattia, ja pH säädetään 7,2:een lisäämällä kiinteää natriumbikarbonaattia ja sitten 9,5:een käyttäen 1-n natriumhydroksidiliuosta.

30 Orgaaninen kerros erotetaan, pestään peräkkäin vedellä ja kyllästetyllä suolaliuoksella ja kuivataan natrium-sulfaatilla. Poistamalla liuotin alennetussa paineessa, saadaan 588 mg haluttua tuotetta.

NMR (cf, CDClg): 3,48 (3H)s, 2,63 (2H)m, 2,26 (6H)s ja 35 2,06 (6H)s.

20 6 3 0 5 9

Toistaen tätä menetelmää ja käyttäen tarvittavaa 2’-alkanoyyli-4"-deoksi-4"-okso-oleandomysiiniä ja asyloivaa ainetta, voidaan valmistaa seuraavat yhdisteet: 11-asetyyli-2 f -propionyyli-4 "-deoksi-4 "-okso-oleandomy siini , 11-pro-5 pionyyli-21-asetyyli-4"-deoksi-4M-okso-oleandomysiini ja 11,2' -dipropionyyli-4"-deoksi-4"-oksc-oleandomysiini.

B. Hapettamalla

Lisätään 3,36 ml dimetyylisulfidia kuivaan, -5°C:seen jäähdytettyyn magneettisekoittajalla ja typen sisäänvien-1G nillä varustettuun kolviin, jossa on 4,5 g N-kloorisukkii-ni-imidiä, 50 ml bentseeniä ja 150 ml tolueenia. Sekoitetaan 0°C:ssa 20 minuuttia, minkä jälkeen kolvin sisältö jäähdytetään -25°C:seen ja siihen lisätään 5,Q g 11,2-di-asetyyli-oleandomysiiniä 100 ml:ssa tolueenia. Jäähdytystä 15 ja sekoitusta jatketaan kahden tunnin ajan, jonka jälkeen lisätään 4,73 ml trietyyliamiinia. Reaktioseosta sekoitetaan 0°C:ssa 15 minuuttia, minkä jälkeen se kaadetaan 500 ml:aan vettä. pH säädetään 9,5:een 1-n natriumhydrok-sidin vesiliuoksella ja orgaaninen kerros erotetaan, pes-20 tään vedellä ja kyllästetyllä suolaliuoksella ja kuivataan natriumsulfaatilla. Poistamalla liuotin vakuumissa, saadaan 4,9 g haluttua, esimerkissä 3A valmistetun kanssa identtistä tuotetta vaahtona.

NMR (/,CDC1 ): 3,48 (3H)s, 2,61 (2H)m, 2,23 (6H)s ja 2,03 25 <6H)s.

Esimerkki 4 ll-asetyyli-4 ll-deoksi-4 "-okso-oleandomy siini

Liuosta, joka sisältää 4,0 g 11,21-diasetyyli-4"-deoksi-4"-okso-oleandomysiiniä 75 ml:ssa metanolia, sekoi-30 tetaan huoneen lämpötilassa yön yli. Reaktioseos konsentroidaan alennetussa paineessa, jolloin saadaan vaahtomainen tuote. Tämä jäännös liuotettuna dietyylieetteriin ja käsiteltynä heksaanilla antaa 2,6 valkoista kiinteää tuotetta, sp. 112-117°C.

35 NMR (/, CDC13): 3,43 (3H)s, 2,60 (2H)m, 2,23 (6H)s ja 2,01 (3H)s.

1) 21 68059

Samalla tavalla käyttäen 11,2'-propionyyli-4"-deoksi-4"-okso-oleandomysiiniä tai 11-propionyyli-2'-asetyyli-4"-deoksi-4"-okso-oleandomysiiniä yllä kuvatussa menetelmässä valmistetaan 11-propionyyli-4"-deoksi-4"-okso-oleandomys i ini.

5 Esimerkki 5 11,2’ -diasetyyli-4"-deoksi-4"-okso-oleandomysiini

Reaktioseosta , joka käsittää 1,0 g 11 ,2'-diasetyyli-olean-domysiiniä 7,09 ml dimetyylisulfoksidia ja 9,44 ml asetanhydridiä, 10 sekoitetaan huoneen lämpötilassa neljä päivää. Saatu keltainen liuos sekoitetaan veteen, johon lisätty kerrokseksi bentseeniä. Sen jälkeen pH säädetään 1-n natriumhydroksidin vesiliuoksella 9,5:een ja orgaaninen kerros erotetaan, kuivataan natriumsulfaatilla ja haihdutetaan kuiviin vakuumissa. Saatu keltainen öljymäinen vaahto 15 puhdistetaan kromatografisesti 20 g:11a silikageeliä käyttäen kloroformin ja asetonin 9:1 -seosta eluenttina. Poistamalla fraktioista liuotin, saadaan 800 mg haluttua tuotetta ja 110 mg sivutuotetta .

Samalla tavalla käytettäessä 11-asetyyli-2'-propionyyliole-20 andomysiiniä 11,2’-dipropionyylioleandomysiiniä tai 11-propionyy-li-2'-asetyylioleandomysiiniä lähtöaineena yllä kuvatussa hapetus-menetelmässä, saadaan vastaavasti tulokseksi 11-asetyyli-2'-pro-pionyyli-4"-deoks i-4"-okso-oleandomys i ini, 11,2'-dipropionyyli-4 deoksi-4"-okso-oleandomysiini ja 11-propionyyli-21-asetyyli-4 25 deoksi-4"-okso-oleandomysiini.

Esimerkki 6 2 '-asetyyli-8 ,8a-deoksi-8 , 8a-dihydro-4 "-deoksi-4 ''-okso-oleandomys iin i

Lisätään 6,0 ml dimetyylisulfidia -5°C:seen jäähdytettyyn 30 kuivaan, magneettisekoittajalla ja typpikaasun sisäänviennillä varustettuun kolviin, joka sisältää 11,6 g N-kloorisukkiini-imi-diä, 750 ml tolueenia ja 250 ml bentseeniä ja sekoitetaan näin saatua liuosta 20 minuuttia. Lämpötilaa alennetaan edelleen -20°C:seen ja lisätään 25 g 2'-asetyyli-8,8a-deoksi-8,8a-dihydro-35 oleandomysiiniä 500 ml:ssa tolueenia. Sekoitetaan kahden tunnin ajan -20°C:ssa, minkä jälkeen lisätään 11,4 ml trietyyliamiinia ja reaktioseoksen annetaan vähitellen lämmetä 0°C:seen. Se kaadetaan 68059 sitten 1 500 ml:aan vettä ja pH säädetään 9,5:een 1-n natriumhydr-oksidiliuoksella. Orgaaninen kerros erotetaan, pestään peräkkäin vedellä (3x) ja kyllästetyllä suolaliuoksella (1x) ja kuivataan natriumsulfaatilla. Poistamalla liuotin alennetussa paineessa, saa-5 daan tulokseksi vaahto, joka kiteytettynä uudelleen dietyylieette-ristä, antaa 13 g puhdasta tuotetta, sp. 197-199°C.

NMR (/', CDC13): 5,11 (1H)m, 3,51 (3H)s, 2,25 (6H)s ja 2,03 (3H)s.

Esimerkki 7 PO 8,8a-deoksi-8,8a-dihydro-4 "-deoksi^^okso-oleandomysiini

Suspensiota, joka sisältää 2,0 g 2'-asetyyli-8,8a-deoksi-8,8a-dihydro-4"-deoksi-4"-okso-oleandomysiiniä 100 mltssa metano-lia, sekoitetaan huoneen lämpötilassa 20 tuntia. Reaktioseos konsentroidaan alennetussa paineessa, jolloin saadaan 1,8 g haluttua 15 tuotetta valkoisena vaahtona.

NMR (</, CDC13): 5,30 (1H)m, 3,51 (3H)s ja 2,26 (6H)s.

Esimerkki 8 11,2* -diasetyyli-8,8a-deoksi-8,8a-dihydro-ä,l-deoksi-U,l-ok-so-oleandomysiini 20 . ...

Lisätään 2,8 ml pyndiiniä jäähauteella jäähdytettyyn 13,0 g 2 ’ -asetyyli-8,8a-deoksi-8,8a-dihydro-4"-deoksi-4"-okso-oleandomy-siiniä 65 ml:ssa asetanhydridiä sisältävään suspensioon. Haude poistetaan sitten ja reaktioseosta sekoitetaan huoneen lämpötilassa yön yli. Saatu liuos lisätään sitten 500 mitään vettä ja 300 ml:aan 25 etyyliasetaattia. pH säädetään 7,0:aan kiinteällä natriumbikarbonaatilla ja sitten 9,5 teen 4~n natriumhydroksidin vesiliuoksella. Orgaaninen kerros erotetaan, pestään vedellä (2x) ja suolaliuoksella (1x) ja kuivataan natriumsulfaatilla. Poistamalla liuotin va-kuumissa, saadaan raakatuote vaahtona.

30 Koska raakatuotteen koe-erän kromatografiset tulokset il mentävät, että reaktio ei ole tapahtunut täydellisesti, vaahtomai-nen raakatuote sekoitetaan 28 mitään pyridiiniä ja 79 mitään asetanhydridiä ja sekoitetaan huoneen lämpötilassa 72 tuntia. Reaktioseos käsitellään, kuten yllä ja saadaan 12,4 g haluttua tuotet-35 ta.

NMR (/, CDC13): 3,51 (3H)s, 2,26 (6H)s ja 2,10 (6H)s.

23

Esimerkki 9 68059 11-propionyyli-21-asetyyli-8,8a-deoksi-8,8a-dihydro-4n-de-oksi-Ul,-okso-oleandomysiini

Toistetaan esimerkin 8 menettely käyttäen lähtöaineina 5 6,5 g 2’-asetyyli-8,8a-deoksi-8,8a-dihydro-4"-deoksi-4"-okso-ole-andomysiiniä, 40 ml propionanhydridiä ja 14 ml pyridiiniä. 72 tunnin reaktioajan kuluttua seos käsitellään, kuten esimerkissä 8 on esitetty halutun tuotteen saamiseksi.

Esimerkki 10 11-asetyyli-8,8a-deoksi-8,8a-dihydro-4l1-deoksi-4’l-okso-olean-domysiini

Liuosta, joka sisältää 11,5 g 11,2’-diasetyyli-8,8a-deoksi-8,8a-dihydro-4"-deoksi-4"-okso-oleandomysiiniä 100 ml:ssa metanolia, sekoitetaan huoneen lämpötilassa yön yli. Haihduttamalla reaktio-15 seos kuiviin alennetussa paineessa, saadaan 10,6 g vaahtomaista raakatuotetta. Raakatuote liuotetaan kloroformiin ja liuos pannaan silikageelipylvääseen. Kun 3 1 kloroformia on virrannut pylvään läpi, tuote aluoidaan kloroformi/metanoliseoksella (19:1). Kahdeksan sadan tipan fraktiota kootaan automaattisella fraktionkerääjäl-20 lä. Fraktiot 50-56, 57-62, 63-69 ja 70-80 yhdistetään ja haihdutetaan kuiviin vakuumissa, jolloin saadaan 2,9 g puhdasta tuotetta.

NMR (<f, CDClg): 3,55 (3H)s, 2,31 (6H)s ja 2,05 (3H)s.

Esimerkki 11 11 -propionyyli-8,8a-deoksi-8,8a-dihydro-4"-deoksi-4t'-okso- 25 oleandomysiini Käyttäen lähtöaineena esimerkin 9 11-propionyyli-2'-asetyyli-8 , 8a-deoksi-8,8a-dihydro-4"-deoksi-4’'-okso-oleandomysiiniä ja noudattaen esimerkin 10 menetelmää valmistetaan haluttua tuote.

30 Esimerkki 12 21-asetyyli-8,8a-deoksi-8,8a-dihydro-oleandcmysiini 5,0 g 8,8a-deoks.i-8,8a-dihydro-oleandomys iiniä 15 ml:ssa bentseeniä sisältävään liuokseen lisätään 0,73 ml asetanhydridiä ja näin saatua reaktioseosta sekoitetaan huoneen lämpötilassa 1,5 35 tuntia. Liuos kaadetaan 100 ml:aan vettä ja pH säätetään 7,5:een 24 68059 kiinteällä natriumbikarbonaatilla ja sitten 9,5:een 1-n natrium-hydroksidin vesiliuoksella. Kymmenen minuutin sekoittamisen jälkeen orgaaninen kerros erotetaan ja pestään peräkkäin vedellä (2x) ja kyllästetyllä suolaliuoksella (1x) ja kuivataan sitten natrium-5 sulfaatilla. Poistamalla liuotin alennetussa paineessa, saadaan 4,9 g haluttua tuotetta, sp. 202-204°C.

NMR (/, CDC13): 5,05 (1H)m, 3,40 (3H)s, 2,25 (6H)s ja 2,05 (3H)s.

Samalla tavalla, korvaamalla asetanhydridi ekvivalenttisel-la määrällä propionanhydridiä valmistetaan 2'-propionyyli-8,8a-de-10 oksi-8,8a-dihydro-oleandomysiini.

Esimerkki 13 21-propionyyli-8,8a-deoksi-8,8a-dihydro-4"-deoksi-4”-okso-oleandomysiini

Liuokseen, joka sisältää 375 ml tolueenia ja 125 ml bent-15 seeniä, lisätään 5,8 g N-kloorisukkiini-imidiä ja seosta sekoitetaan huoneen lämpötilassa 15 minuuttia. Reaktioseos jäähdytetään -5°C:seen ja siihen lisätään 3,0 ml dimetyylisulfidia ja jatketaan sekoittamista vielä 20 minuuttia. Lämpötila alennetaan -20°C:seen, minkä jälkeen lisätään 12,8 g 21-propionyyli-8,8a-deoksi-8,8a-di-20 hydro-oleandomysiiniä 250 ml:ssa tolueenia. Kahden tunnin kuluttua lisätään 5,7 ml dietyyliamiinia ja jäähdytyshaude poistetaan. Kun reaktiolämpötila saavuttaa 0°C, seos kaadetaan 750 ml:aan vettä. pH säädetään 9,5teen 1-n natriumhydroksidiliuoksella ja orgaaninen kerros erotetaan. Vedellä (3x) ja kyllästetyllä suolaliuoksella 25 pesty orgaaninen faasi kuivataan ja konsentroidaan alennetussa paineessa halutun tuotteen saamiseksi.

Esimerkki 14 11 ,2,-diasetyyli-8,8a-deok.si-8,8a-mety leeni-4 "-deoksi-ä"- okso-oleandomysiini 30 --

Sameaan, -5°C:seen jäähdytettyyn, 434 mg N-kloorisukkiini-imidiä 15 ml:ssa tolueenia ja 5 ml:ssa bentseeniä sisältävään liuokseen lisätään 0,327 ml dimetyylisulfidia. Sekoitetaan 20 mi-nuuttia 0 C:ssa, minkä jälkeen reaktioseos jäähdytetään -25 C:seen 35 ja siihen lisätään 500 mg 11,2'-diasetyyli-8,8a-deoksi-8,8a-mety-leenioleandomysiiniä ja 10 ml tolueenia. Sekoitusta jatketaan kak-

II

25 68059 si tuntia -20°C:ssa ja sen jälkeen lisätään 0,46 ml tri-etyyliamiinia ja 1 ml tolueenia. Jäähdytyshaude poistetaan ja reaktioseoksen annetaan lämmetä 0°C:seen. Sitten se kaadetaan 50 ml:aan vettä ja 50 ml:aan etyyliasetaat-5 tia. Säädetään pH huolellisesti 9,5:een ja orgaaninen kerros erotetaan, kuivataan ja haihdutetaan kuiviin. Tällä tavalla saadaan 500 mg haluttua tuotetta hiukan kosteana valkoisena vaahtona.

NMR (c/ , CDC13) : 3,50 (3H)s, 2,30 (6H)s, 2,06 (6H)s ja 10 0,58 (4H)m.

Esimerkki 15 Käyttäen lähtöaineena sopivaa 8,8a-deoksi-8,8a-me-tyleenioleandomysiiniä ja noudattaen esimerkin 14 menetelmää, valmistetaan seuraavat 8,8a-deoksi-8,8a-metyleeni-15 4"-deoksi-4"-okso-oleandomysiinijohdannaiset: .A T“,,s Λ τχ 20 R0

0 Y

11 ΥΥ'ο ° 0CH~ 25 3 - h 0 0 CH.C- CH0CH0C- 30 J 61 Q 0 0 ch3ch2c- ch3c- 0 0 CH3CH2C- CH3CH2C- 0 3 5 " H- CH.C- ά 0 H- CH3CH2C- 26 68059

Esimerkki 16 ll-asetyyli-8,8a-deoksi-8,8a-metyleeni-4"-deoksi-*4 "-okso-oleandomysiini *400 mg 11,2’-diasetyyli-8,8a-deoksi-8,8a-metyleeni-5 4"-deoksi-4"-okso-oleandomysiiniä 10 ml:ssa metanolia si sältävä liuos, sen jälkeen, kun sitä on sekoitettu huoneen lämpötilassa yön yli, konsentroidaan vakuumissa, jolloin se antaa 270 mg haluttua tuotetta.

NMR (</, CDC13): 3,46 (3H)s, 2,26 (6H)s, 2,03 (3H)s ja 10 0,56 (4H)m.

Esimerkki 17

Toistamalla esimerkin 16 menettely ja käyttäen lähtöaineena sopivaa 2'-alkanoyyli-8,8a-deoksi-8,8a-metyleeni-4"-deoksi-4"-okso-oleandomysiiniä, saadaan seuraavat yh-15 disteet: . r, «“a’j r\ RO»-»/ \

20 .1 L

" \>fY i Y"° 0CH3 25 Lähtöaine: Tuote R ^ R ^ 0 0 0 CH3C" CH3CH2C- ch3c~ H- 0 0 0 ch3ch2c- ch3c- ch3ch2c- H- 0 0 0 35 CH3CH2C- CH3CH2C- CH3CH2C H- H- CH C- H- H- d 0 H- CH3CH2C- H- H- 27 68059

Esimerkki 18 11,2'-diasetyyli-8,8a-deoksi-8 ^a-metyleeni-U^-deok-si-Htl-okso-oleandomysiini

Kuivaan, typpikaasun sisäänviennillä varustettuun 5 kolviin pannaan 18 ml metyleenidikloridia ja 1,97 ml di-metyylisulfoksidia ja näin saatu liuos jäähdytetään -60°C:seen. Trifluoriasetanhydridiä (3,9 ml) lisätään vähitellen ja sekoitusta jatketaan kylmässä 10 minuuttia. Reaktioseos jäähdytetään edelleen -70°C:seen ja siihen li-10 sätään tipoittaan 5,34 g 11,2'-diasetyyli-8 ,8a-deoksi- 8,8a-metyleenioleandomysiiniä liuotettuna 27 ml:aan mety-leenidikloridia siten, että lämpötila ei kohoa -50°C:een yläpuolelle. Tämän jälkeen reaktioseos jäähdytetään takaisin -70°C:seen, siihen lisätään 9,69 ml trietyyliamiinia 15 ja pidetään sitä vielä 10 minuuttia -70°C:ssa. Reaktio-seoksen annetaan lämmetä -10°C:seen ja kaadetaan se sitten 7 5 ml:aan vettä. Säädetään pH 9,5 reen 1-n natriumhyd-roksidiliuoksella ja erotetaan metyleenidikloridi. Orgaaninen kerros pestään sitten vedellä (2 x 30) ja kylläste-20 tyllä suolaliuoksella (1 x 20) ja kuivataan natriumsulfaa-tilla. Poistettaessa liuotin vakuumissa, saadaan 6,2 g tuotetta, joka vähäistä epäpuhtautta lukuunottamatta on esimerkin 14 tuotteen kanssa identtinen.

Esimerkki 19 25 Toistamalla esimerkin 18 menettely ja käyttäen läh töaineena tarvittavaa 2'-alkanoyyli-8,8a-deoksi-8,8a-mety-leenioleandomysiiniä, saadaan seuraavat 4"-deoksi-4"-okso-johdannaiset:

30 .X

Vix

o I

0CH3 __ TT— 28 6 8 0 5 9 R R1 0 CH3CH2C- CH3^'

5 O

H- CH~C- 0 H- CH3CH2C-

0 O

10 CH3CH2S“ 0 o CH3CH2C- CH3CH2C-

Esimerkki 20 15 11,2' -diasetyyli-^-deoksi-V-okso-oleandomysiiniok- siimi

Liuokseen, joka sisältää 18,1 hydroksyyliamiinin hydrokloridia 300 mltssa vettä ja 200 ml:ssa metanolia, lisätään 50 g 11,2'-diasetyyli-4"-deoksi-4"-okso-oleandomy- 20 siiniä ja reaktioseosta sekoitetaan huoneen lämpötilassa tunnin ajan. Saatu liuos lisätään veteen ja pH säädetään sitten 7,5:een kiinteällä natriumbikarbonaatilla ja sen jälkeen 9,5 reen 1-n natriumhydroksidilla. Tuote uutetaan etyyliasetaattiin ja kuivatut uutteet konsentroidaan noin 25 170 mlrksi. Lisätään heksaania kuumennettuun etyyliasetaat-tiliuokseen samentumispisteeseen saakka ja sameahko liuos jäähdytetään. Saostuva tuote suodatetaan ja kuivataan, 29,8 g, sp. 2 2 3 , 5-22 5°C.

NMR (/, CDC13): 3,30 (3H)s, 2,65 (2H)m, 2,35 (6H)s ja 2,10 30 (3H) s.

Samalla tavalla käyttäen lähtöaineena O-asetyylihyd-roksyyliamiinin hydrokloridia ja tarvittavaa ketonia ja noudattaen yllä olevaa menetelmää, saadaan 2'-asetyyli-4· deoksi-4"-okso-oleandomysiini-O-asetyylioksiimi.

35 Esimerkki 21

Toistamalla esimerkin 20 menettely ja käyttäen lähtöaineena sopivaa 1+"-deoksi-*+"—okso-oleandomysiiniä , saadaan seuraavat oksiimit: 29 68059 "(CH3>2

°^rJ$ v,A

RQ,(llli>; VtP- Ό"^

> ,<V 0 Y

N ΌΜ/,Τ T

l| γ ^ N-OH

ο och3 10 R R]_ 0 15 H- CH3C- 2 H- ch3ch2£-

0 M

CH3C- ch3ch2c- 20 O o CH3CH2C- CH3^“ 0 n CH3CH2C- ch3ch2c- 25 ° CH3C- h" 0 CH3CH2C- h- H- H- 30

Esimerkki 22 11-asetyyli-U "-deoksi-1* M-okso-oleandomysiinioksiimi 500 mg nJ2’-diasetyyli-li,,-deoksi-4,'-okso-oleando-mysiinoksiimia 100 ml:ssa metanolia sisältävää liuosta se-35 koitetaan 72 tuntia huoneen lämpötilassa ja haihdutetaan se sitten kuiviin alennetussa paineessa. Näin saatu vaahto äo 6 8 0 5 9 kiteytetään uudelleen etyyliasetaatti-heksaani-seoksesta, 372 mg, sp. 184-186°C.

NMR (X , CDC13): 3,30 (3H)s, 2,66 (2H)m, 2,36 (6H)s ja 2,10 (3H)s.

5 Esimerkki 23 Käyttäen lähtöaineena tarvittavaa oksiimia ja noudattaen esimerkin 22 menetelmää, valmistetaan seuraavat yhdisteet : 10 Rl

o xA

"T I I

ro,A xAo/\ 15 x x ‘0l\ 'T"

" Vll-OH

o ! 0CH3 20 Lähtöaine Tuote R Rx R R1 0 H- CH C- H- H- 2 6 ^ ^ 0 H- CH CH C- H- H- 0 d Z0 0 ch3c- ch3ch2c- ch3c- h- 0 0 ° 30 CH3CH2C- ch3c- ch3ch2c- h- 0 0 0 CH3CH2C- CH3CH2C- CH3CH2C- h- f tl 68059

Esimerkki 24 11,2 *-diasetyyli-4"-deoksi-4"-okso-oleandomysiini-0-asetyylioksiimi

Sameaan, 20 g 11,2'-diasetyyli-4"-deoksi-4"-ckso-5 oleandomysiinioksiimia 250 ml:ssa bentseeniä sisältävään liuokseen lisätään koko ajan sekoittaen 8,21 ml pyridiiniä ja sen jälkeen 9,62 ml asetanhydridiä, ja näin saatua reak-tioseosta sekoitetaan huoneen lämpötilassa yön yli. Liuos kaadetaan veteen ja orgaaninen kerros, peräkkäin vedellä 10 ja kyllästetyllä suolaliuoksella pestynä ja kuivattuna, haihdutetaan kuiviin. Vaahtomainen jäännös kiteytettynä uudelleen etyyliasetaatti-heksaani-seoksesta antoi 13,4 g puhdasta tuotetta, sp. 198-202°C.

NMR (S , CDC13): 3,38 (3H)s, 2,66 (2H)m, 2,33 (6H)s, 2,26 15 (3H)s ja 2,10 (6H)s.

Esimerkki 25

Toistamalla esimerkin 24 menettely käyttäen lähtöaineena sopivaa oksiimia, saadaan seuraavat tuotteet: 20 N(CHo)0

dX I

°\/\ ^ u 1 25 R0//(/ s o^0

VVx S

0 Y N-0-CCH3 30 - 0CH3 H 32 K, 68059 O ό

Il ·· 5 CH3C- CH3CH2C- O · o

Il II

CH3CH2C~ CH3C- 0 CH3C- h- 10 o

II

ch3ch2c- H-

Esimerkki 26 ^ 11,2' -dia5etyyli-U'l-deoksi-Ull-okso-oleandomysiini-0-metyy- lioksiimi 50 ml:aan vettä ja 50 ml:aan metanolia lisätään 1,25 g met-oksiamiinin hydrokloridia ja 2,5 g 11,2'-diasetyyli-4"-deoksi-4 okso-oleandomysiiniä ja saatua reaktioseosta sekoitetaan huoneen 20 lämpötilassa yön yli. Liuos sekoitetaan veteen ja pH säädetään 7,5:een kiinteällä natriumbikarbonaatilla ja sitten 9,5:een 1-n nat-riumhydroksidin vesiliuoksella. Tuote uutetaan etyyliasetaatilla ja uute kuivataan natriumsulfaatilla. Poistettaessa liuotin vakuu-missa, saadaan 2,4 g haluttua tuotetta valkoisena vaahtona.

25 NMR («f, CDC13): 3,88 (3H)s, 3,26 (3H)s, 2,56 (2H)m, 2,30 (6H)s ja 2,06 (6H)s.

Esimerkki 27

Noudattamalla esimerkin 26 menetelmää ja käyttäen lähtöai-30 neena metoksiamiinin hydrokloridia ja tarvittavaa 4"-deoksi-4"- okso-oleandomysiiniä, valmistetaan seuraavat yhdisteet: 2'-asetyy-li-4"-deoksi-4,,-okso-oleandomysiini-O-metyylioksiimi, 2 ’ -propionyy-li-4"-deoksi-4"-okso-oleandomysiini-0-metyylioksiimi, 11 -asetyyli-2’-propionyyli-4"-deoksi-4"-okso-oleandomysiini-0-metyylioksiimi, 35 11-propionyyli-2'-asetyyli-4"-deoksi-4"-okso-oleandomysiini-0-me- tyylioksiimi, 11-asetyyli-4"-deoks.i-4 "-okso-oleandomysiini-O-me-tyylioksiimi ja 11-propionyyli-4"-deoksi-4"-okso-oleandomysiini-0-metyylioksiimi.

ti 33 68059

Esimerkki 28 11,21-diasetyyli-8,8a-deoksi-8,8a-dihydro-4"-deok-si-4"-okso-oleandomysiinoksiimi

Liuosta, joka sisältää 49 ,0 g 11,2'-diasetyyli-8,8a- 5 deoksi-8,8a-dihydro-4"-deoksi-4"-okso-oleandomysiiniä ja 18,1 g hydroksyyliamiinin hydrokloridia 300 ml:ssa vettä ja 300 mlrssa metanolia, sekoitetaan huoneen lämpötilassa 1,5 tuntia. Saatu liuos sekoitetaan 250 ml:aan vettä ja pH säädetään 7,5 reen ja 9,5 reen kiinteällä natriumbikar- 10 bonaatilla ja 1-n natriumhydroksidiliuoksella, vastaavasti. Tuote uutetaan etyyliasetaatilla, joka sitten kuivataan natriumsulfaatilla ja haihdutetaan kuiviin. Jäännös kiteytettynä uudelleen etyyliasetaatti-heksaani-seokses-ta antaa halutun tuotteen.

15 Esimerkki 29

Noudattamalla esimerkin 28 menetelmää ja käyttäen lähtöaineina asiaankuuluvaa 4"-deoksi-4"-okso-oleandomy-siiniä ja tarvittavia hydroksyyliamiinijohdannaisia, valmistetaan seuraavat yhdisteet: 20 j(ciy2 y\ x\ 'Ί °γ\ Yr 30 « 0CH3 31+ 68059 R \ χ

O

H- CH^C- N-OH

O O

C«3CH2C- CH3C- N-OH

O

<1

ai3C- H- N-OH

O

10 CH3CH2£- H- N-OH

O

H- CH3CH2C- N-OH

O 0

^3^2°" CH3C” N-OCH

15 O o « Il CB3C- ch3c“ N-OCH3

O

II

H- CH3C- N-OCH3

O

20 " ch3c- n- n-och3

O

CH3CH2C- h- N-OCH3 25 Esimerkki 30 11 ,2'-diasetyyli-8,8a-deoksi-8,8a-dihydro-Ull-deoksi-^ll-ok-so-oleandomysiini-O-asetyylioksiimi

Liuokseen, joka sisältää 9,9 g 11,2'-diasetyyli-8,8a-deok-si-8,8a-dihydro-4"-deoksi-4"-okso-oleandomysiinioksiimia ja 4,1 ml 30 pyridiiniä 125 ml:ssa bentseeniä, lisätään 4,81 ml asetanhydridiä ja saatua reaktioseosta sekoitetaan huoneen lämpötilassa yön yli. Reaktioseos kaadetaan veteen ja pH säädetään 7,5:een ja 9,5:een kiinteällä natriumbikarbonaatilla ja 1-n natriumhydroksidilla, vastaavasti. Bentseenikerros erotetaan, kuivataan natriumsulfaatilla 35 ja konsentroidaan, jolloin saadaan haluttu tuote valkoisena vaahtona .

il 35 68059

Esimerkki 31

Toistamalla esimerkin 30 menettely käyttäen lähtöaineena asiaankuuluvaa oksiimia, saadaan seuraavat yhdisteet: 2'-asetyyli-8 , 8a-deoksi-8,8a-dihydro-4n-deoksi-4"-okso-oleandomysiini-0-ase-5 tyylioksiimi, 11-propionyyli-2'-asetyyli-8,8a-deoksi-8,8a-dihydro-4"-deoksi-4"-okso-oleandomysiini-0-asetyylioksiimi , 11 -propionyy-li-8,8a-deoksi-8,8a-dihydro-4"-deoksi-4"-okso-oleandomysiini-0-asetyylioksiimi, 2'-propionyyli-8,8a-deoksi-8,8a-dihydro-4"-deok-si-4"-okso-oleandomysiini-0-asetyylioksiimi ja 11-asetyyli-8,8a-10 deoksi-8,8a-dihydro-4"-deoksi-4"-okso-oleandomysiini-O-asetyylioksiimi .

Esimerkki 32 11-propionyyli-8,8a-deoksi-8, 8a-dihydro-4"-deoksi-4"-okso-oleandomysiinioks iimi is.·

Liuosta, joka sisältää 500 mg 11-propionyyli-2'-asetyyli-8,8a-deoksi-8,8a-dihydro-4"-deoksi-4"-okso-oleandomysiinioksiimia 100 ml:ssa metanolia, sekoitetaan huoneen lämpötilassa yön yli. Liuos haihdutetaan kuiviin ja vaahtomainen jäännös puhdistetaan kiteyttämällä uudelleen etyyliasetaatti-heksaani -seoksesta.

20 Samalla tavalla valmistetaan 8,8a-deoksi-8,8a-dihydro-4"- deoksi-4"-okso-oleandomysiinioksiimi 2'-asetyyli-8,8a-deoksi-8,8 a-dihydro-4"-deoksi-4"-okso-oleandomysiinioksiimista.

Esimerkki 33 11,2' -diasetyyli-8,8a-deoksi-8,8a-metyleeni-4,l-deoksi-4tl-25 okso-oleandomysiini-O-metyylioksiimi

Liuosta, joka sisältää 90 mg 11,2'-diasetyyli-8,8a-deoksi-8,8a-metyleeni-4"-deoksi-4"-okso-oleandomysiiniä ja 45 mg metoksi-amiinin hydrokloridia 2 ml:ssa vettä ja 2 ml:ssa metanolia, sekoitetaan huoneen lämpötilassa yön yli. Liuos kaadetaan veteen ja pH 30 säädetään 7,5:een ja 9,5:een kiinteällä natriumbikarbonaatilla ja 1-n natriumhydroksidilla, vastaavasti. Tuote uutetaan etyyliasetaatilla ja orgaaninen kerros kuivataan ja konsentroidaan, jolloin saadaan 89,2 mg haluttua tuotetta.

NMR (<f, CDC13) : 5,56 (3H)s, 3,33 (1,5H)s, 3,26 (1,5H)s, 2,28 (6H)s, 35 2,06 (6H)s ja 0,56 (4H)m.

36 68059

Esimerkki 34 11,2' -diasetyyli-8 ,8a-deoksi-8 ^a-metyleeni^1'- deoks i-411-okso-oleandomys iin joksi imi

Toistamalla esimerkin 33 menettely käyttäen 10,0 g 5 11,2'-diasetyyli-8,8a-deoksi-8,8a-metyleeni-4"-deoksi- 4"-okso-oleandomysiiniä, 3,4 g hydroksyyliamiinin hydro-kloridia, 50 ml metanolia ja 50 ml vettä, saadaan tulokseksi 9,2 g haluttua tuotetta, joka voidaan edelleen puhdistaa kiteyttämällä uudelleen etyyliasetaatista, sp. 17 7-18 0°C.

10 NMR (4, CDC13): 3,35 (l,5H)s, 3,25 (l,5H)s, 2,33 (6H)s, 2,06 (6H)s ja 0,53 (4H)m.

Esimerkki 35

Noudattamalla esimerkin 33 menetelmää ja käyttämällä tarvittavaa hydroksyyliamiin hydrokloridia ja so-15 pivaa 8,8a-deoksi-8,8a-metyleeni-4"-deoksi-4"-okso-olean-domysiiniä, valmistetaan seuraavat yhdisteet: 20 R1X »‘“ah

r> X JL

V< '"[[ RO X o/ 25 fxjt 30 0CH3 ti 37 68059

R R X

0 0 CH3C- CH3CH2C- n-oh 0 0

5 CH3CH2C- ch3C- N-OH

0 0 CH3CH2C- CH3CH2C- n-oh 0

ln H- CH.C- N-OH

d 0 H- ch3ch2c- n-oh 0

CH c- H- N-OH

15 0 0 CH3CH2C- CH3C" N-OCH3 0 0 CH3CH2C- CH3CH2C- N-OCH3 0 20 H- CH3C- N-OCH3 0 CH3C- h- N-OCH3 2 5 Esimerkki 3 6 11,21-diasetyyli-8,8a-deoksi-8 ^a-metyleeni-^"-deok-si-4’l-okso-oleandomysiini-0-asetyylioksiimi

Suspensioon, joka sisältää 1,0 g 11,2'-diasetyyli-8,8a-deoksi-8,8a-metyleeni-4"-deoksi-4"-okso-oleandomysiini-30 oksiimia 10 ml:ssa bentseeniä, lisätään 0,18 ml pyridiiniä ja sen jälkeen 0,24 ml asetanhydridiä. Kahden tunnin sekoittamisen jälkeen huoneen lämpötilassa lisätään vielä 0,09 ml pyridiiniä ja 0,12 ml asetanhydridiä ja sekoittamista jatketaan yön yli. Reaktioseos kaadetaan veteen ja pH sääde-35 tään 7,5:een, sitten 9,5 reen lisäämällä kiinteää natriumbikarbonaattia ja 1-n natriumhydroksia, vastaavasti. Bent-seenikerros erotetaan, kuivataan natriumsulfaatilla 38 6 8 0 5 9 ja haihdutetaan kuiviin vakuumissa, jolloin saadaan 890 mg haluttua tuotetta.

NMR (/, CDC13): 3,31 (1,5H)s, 3,25 (1,5H)s, 2,25 (6H)s, 2,16 (3H)s, 2,01 (6H)s ja 0,55 (4H)m.

5 Samalla tavalla esimerkin 35 oksiimit muutetaan O-asetyyli- johdannaisikseen.

Esimerkki 37 11 -asetyyli-iV-deoksi-^-amino-oleandomysiini

Suspensioon, joka sisältää 10 g 10-%:ista palladium-hiili -seosta 100 mlrssa metanolia, lisätään 21,2 g ammoniumasetaattia ja saatua lietettä käsitellään 20 g :11a 11-asetyyli-4"-deoksi-4"-okso-oleandomysiiniä 100 ml:ssa samaa liuotinta. Suspensiota ravistellaan vetykaasussa alkupaineen ollessa 50 naulaa/neliötuuma (noin 2 3,5 kg/cm ). Katalysaattori suodatetaan pois 1,5 tunnin kuluttua 15 ja suodos lisätään koko ajan sekoittaen 1 200 ml vettä ja 500 ml kloroformia sisältävään seokseen. Säädetään pH 6,4:stä 4,5:een ja orgaaninen kerros erotetaan. Vesikerros, kun se on vielä uutettu 500 ml:11a kloroformia, käsitellään 500 ml:11a etyyliasetaattia ja pH säädetään 9,5:een 1-n natriumhydroksidilla. Etyyliasetaatti-20 kerros erotetaan ja vesikerros uutetaan vielä kerran etyyliasetaatilla. Etyyliasetaattiuutteet yhdistetään, kuivataan natriumsul-faatilla ja konsentroidaan keltaiseksi vaahdoksi (18,6 g), joka kiteytettynä di-isopropyylieetteristä antaa 6,85 g puhdasta tuotetta, sp. 157,5 - 160°C.

25 NMR (d\ CDC13): 3,41 (3H)s, 2,70 (2H)m, 2,36 (6H)s ja 2,10 (3H)s.

Toinen epimeeri, jota on vaahtomaisessa raakatuotteessa aina 20-25 %:iin, saadaan erilleen emäliuosten asteittaisella kon-sentroinnilla ja suodattamisella.

Esimerkki 38

Esimerkin 37 menetelmää noudattamalla käyttäen lähtöaineena sopivaa 4,,-deoksi-M"-okso-oleandomysiiniä valmistetaan seuraa-vat amiinit: 39 68059

RlV N(CH,)„ xX i 32

o ^ o/y X

::K r j 5 Rn - '< x0^\0y\ RO,,,/ \

,L .J

10 0 k^H2 och3 R R-j^ NMR U, CDC13) 0 0 15 CH3C- CH^C- 3,43 (3H)s, 2,70 C 2H)m, 2,30 (6H)s ja 2,10 (6H)s.

H- H- 5,60 (lH)m, 3,36 (3H)s, 2,83 (2H)m 20 0 ja 2,30 (6H)s.

H- CH3C- 5,80 (lH)m, 3,43 (3H)s, 2,80 (2H)m, 2 ,30 (6H)s ja 2,10 (3H)s.

25 Esimerkki 39 Jälleen noudattamalla esimerkin 37 menetelmään käyttäen lähtöaineena tarvittavaa 4"-deoksi-4"-okso-oleandomy-siiniä ja isopropanolia liuottimena, saadaan seuraavat tuotteet: 2'-propionyyli-4"-deoksi-4"-amino-oleandomysiini, 11-30 asetyyli-2'-propionyyli-4"-deoksi-4"-amino-oleandomysiini, ll-propionyyli-2'-asetyyli-4"-deoksi-4"-amino-oleandomysiini ja 11,2'-dipropionyyli-4"-deoksi-4"-amino-oleandomysiini. Esimerkki 40 11-asetyyli-4"-deoksi-4"-amino-oleandomysiini 35 Suspensioon, joka sisältää 50 g ll-asetyyli-4"-deoksi- 4 " -okso-oleandomy s iin iä ja 5 3 g ammoniunasetaattia 500 ml:ssa -10°C metanolia, lisätään tipoittaan koko ajan sekoittaen tunnin aikana.

_________ . _ its 1,0 68059 3,7 g 85-%:.ista boorisyanohydridiä liuotettuna 2 00 ml:aan metanolia. Sekoitetaan kaksi tuntia kylmässä ja kaadetaan reaktioseos 2,5 litraan vettä ja yhteen litraan kloroformia. Säädetään pH 7,2:sta 9,5:een lisäämällä 1-n natriumhydroksidia ja erotetaan orgaaninen 5 kerros. Vesikerros pestään kerran kloroformilla, orgaaniset faasit yhdistetään. Tuotteen kloroformiliuosta käsitellään 1,5 litralla vettä pH: ssa 2,5 ja vesikerros erotetaan. Vesifaasin pH säädetään 2,5:stä 7,5:een ja sitten 8,25:een ja sen jälkeen uutetaan etyyliasetaatilla. Nämä uutteet hylätään ja pH nostetaan lopuksi 9,9:ään. 10 Vesikerros uutetaan (2 x 825 ml) etyyliasetaatilla ja uutteet yhdistetään ja kuivataan natriumsulfaatilla. Poistettaessa liuotin alennetussa paineessa, saadaan 23,9 g vaahtomaista tuotetta.

NMR C J, CDClg): 3,41 (3H)s, 2,70 (2H)m, 2,36 (6H)s ja 2,10 (3H)s.

15 Esimerkki 41 4"-deoksi-9"-amino-oleandomysiini 20 g 2'-asetyyli-4"-deoksi-4"-okso-oleandomysiiniä 125 ml:ssa etanolia sisältävää liuosta sekoitetaan yön yli huoneen lämpötilassa ja käsitellään sitä sitten 21,2 g:lla ammoniumase-20 taattia. Saatu liuos jäähdytetään jäähauteessa ja sitä käsitellään 1,26 g:lla natriumsyanoboorihydridiä. Jäähdytyshaude poistetaan sitten ja reaktioseosta sekoitetaan huoneen lämpötilassa kaksi tuntia. Reaktioseos kaadetaan 600 ml:aan vettä ja 600 ml:aan di-etyylieetteriä ja pH säädetään 8,3:sta 7,5:een. Eetterikeeros ero-25 tetaan ja vesikerros uutetaan etyyliasetaatilla. Uutteet pannaan sivuun ja vesikerroksen pH säädetään 8,25:een. Tässä pH:ssa tehdyt dietyylieetteri- ja etyyliasetaattiuutteet pannaan myös sivuun ja pH nostetaan 9,9:ään. Tässä pH:ssa tehdyt dietyylieetteri- ja etyyliasetaattiuutteet yhdistetään, pestään peräjälkeen vedellä (1x) 00 ja kyllästetyllä suolaliuoksella ja kuivataan natriumsulfaatilla. Jälkimmäiset, pH:ssa 9,9 otetut uutteet konsentroidaan vaahdoksi, joka puhdistetaan kromatografisesti 160 g:11a silikageeliä käyttäen kloroformia kantoiiuottimena ja alkueluenttina. Kun on koottu 11 fraktiota, kukin määrältään 12 ml, eluentiksi vaihdetaan 5 % me-35 tanolia ja 95 % kloroformia sisältävä seos. Fraktion 370 kohdalla eluentiksi vaihdetaan 10 % metanolia ja 90 % kloroformia sisältävä seos ja fraktion 440 kohdalla käytetään seosta, joka sisältää 15 % 1,1 68059 metanolia ja 85 % kloroformia. Fraktiot 85-25C yhdistetään ja haihdutetaan kuiviin vakuumissa, jolloin saadaan 2,44 g haluttua tuotetta.

NMR (6 , CDC13): 5,56 (lH)m, 3,36 (3H)s, 2,9 (2H)m ja 2,26 5 (6H) s .

Esimerkki 42

Noudattamalla esimerkin 40 menetelmää ja käyttäen lähtöaineena sopivaa 4"-deoksi-4"-okso-oleandomysiiniä ja isopropanolia liuottimena, valmistetaan seuraavat yhdisteet: ll,2'-dia-10 setyyli-4M-deoksi”4"-amino-oleandomysiini, 2'-propionyyli-4"-deoksi-4"-amino-oleandomysiini, 2'-asetyyli-4"-deoksi-4"-amino-oleandomysiini, ll-asetyyli-2'-propionyyli-4"-deoksi-4 ’’-amino-oleandomysiini , ll-propionyyli-2 ’ -asetyyli-4 "-deok-si-4"-amino-oleandomysiini ja 11,2'-dipropionyyli-4"-deoksi-15 4"-amino-oleandomysiini.

Esimerkki 43 4 ’’-deoks i-4 ’’-amino-oleandomysiini

Sekoitetaan huoneen lämpötilassa typpikaasun läsnäollessa yön yli liuosta, joka sisältää 300 mg 2'-asetyyli-4"-20 deoksi-4"-amino-oleandomysiiniä 25 ml:ssa metanolia. Reaktio-seos konsentroidaan vakuumissa, jolloin saadaan haluttu tuote valkoisena vaahtona.

NMR U , CDC13): 5,56 (lH)m, 3,36 (3H)s, 2,90 (2H)m ja 2,26 (6H)s.

25 Esimerkki 44

Toistamalla esimerkin 43 menettely käyttäen lähtöaineena tarvittavaa 21-alkanoyyli-4"-deoksi-4"-amino-oleando-mysiiniä, saadaan seuraavat yhdisteet: 30 N(CH-)„ roc? Λ 35 ^ jp>,/°^ 5 Vs' 0CH3 42 _ Λ 68059 Lähtöaine Tuote - -1- * 0 0 o " ·» Il ca3»> CH3C- ch3c- h- 5 o o o ch3c- ch3ch2c- ch3c- h- 0 0 o ch3ch2c- ca3c- ch3ch2c- u- o o * o 10 " Il m ch3ch2c- ch3ch2c- ch3ch2c- H- 0 u- CH3CH2C- h- h- ^ Esimerkki 4 5 11-asetyyli-8,8a-deoksi-8,8a-dihydro-4"-deoksi-4"-amino-, oleandomysiini

Liuosta, joka sisältää 2,15 g 11-asetyyli-8,8a-deoksi-8,8a- dihydro-4,'-deoksi-4”-okso-oleandomysiiniä ja 2,31 g ammoniumase-“ ^ o taattia 15 ml:ssa 20 C:seen jäähdytettyä metanolia, käsitellään 136 mg:11a natriumsyanoboorihydridiä. Sekoitetaan sitten 45 minuuttia huoneen lämpötilassa ja kaadetaan sen jälkeen reaktioseos 60 ml:aan vettä ja 60 ml:aan dietyylieetteriä ja säädetään pH 8,1:stä 2 5

7,5:een. Eetterikerros erotetaan ja hylätään, ja vesikerroksen pH nostetaan 8,9:aan. Lisätään tuoretta eetteriä, ravistellaan vesi-kerroksen kanssa ja hylätään eetterikerros. Säädetään pH 8 , 5:een ja toistetaan äskeinen menettely. Lopuksi pH säädetään 10,Oraan ja lisätään 60 ml etyyliasetaattia. Vesikerros hylätään ja etyyliase-' 30 taattikerros käsitellään 60 ml :11a uutta vettä. Vesikerroksen pH

! säädetään 6,Oraan 1-n kloorivetyhapolla ja etyyliasetaattikerros hylätään. Vesikerros uutekaan peräkkäin pI!-arvo.illa 6,5, 7,C, 7,5, 8,0 ja 8,5 etyyliasetaatilla (60 ml) ja orgaaniset uutteet pannaan sivuun. Lopuksi pH nostetaan 10,0:aan ja vesikerros uutetaan etyy-35 liasetaatilla. Yhdistetään pH-arvoilla 8,0, 8,5 ja 10,0 kootut uut-

II

43 68059 teet ja konsentroidaan ne vakuumissa, jolloin saadaan 585 mg valkoista vaahtoa, joka koostuu 4"-epimeeriparista.

NMR (<f, CDC13) : 3,38 ja 3,35 (3H) 2 singlettiä, 2,31 ja 2,28 (6H) 2 singlettiä ja 2,03 (3H).

5 Esimerkki 46 8,8a-deoksi-8,8a-dihydro-4”-deoksi-4"-amino-oleandomysiini

Lisätään natriumsyanoboorihydridiä (126 mg) 1,86 g 8,8a-deoksi-8 , 8a-dihydro-4"-deoksi-4"-okso-oleandomysiiniä ja 2,1 g am-10 moniumasetaattia 10 ml:ssa metanolia sisältävään liuokseen huoneen lämpötilassa. Tunnin kuluttua reaktioseos jäähdytetään 0°C:seen ja sitä sekoitetaan 2,5 tuntia. Reaktioseos kaadetaan 60 ml:aan vettä ja 60 ml:aan dietyy1ieetteriä ja pH säädetään 7,5:een. Eetteriker-ros hylätään ja vesikerroksen pH säädetään ensin 8,0:aan ja sitten 15 8,5 :een uuttaen eetterillä kummankin säätämisen jälkeen. Lopuksi vesikerroksen pH säädetään 10,0:aan ja suoritetaan uutto etyyliasetaatilla. Etyyliasetaattiuutteeseen lisätään uutta vettä ja sen pH säädetään 6,0:aan. Etyyliasetaattikerros hylätään ja vesikerroksen pH säädetään peräkkäin arvoihin 6,5, 8,0, 8,5 ja 10,0 ja suo-20 ritetaan uutto kunkin pH-säädön jälkeen etyyliasetaatilla. Yhdistetään pH-arvoilla 7,5, 8,0 ja 10,0 saadut etyyliasetaattiuutteet ja konsentroidaan,ne vaahdoksi, joka liuotetaan uudestaan etyyliasetaattiin ja uutetaan tuoreella vedellä pH:ssa 5,5. Hapan vesi-kerros säädetään peräkkäin, kuten edellä pH-arvoihin 6,0, 6,5, 7,0, 25 7,5, 8,0 ja 10,0 ja uutetaan kunkin pH-säädön jälkeen dietyylieet- terillä. Yhdistetään pH-arvoilla 7,5, 8,0 ja 10,0 saadut uutteet ja haihdutetaan ne kuiviin vakuumissa, jolloin saadaan 166 mg haluttua tuotetta.

NMR U, CDC13): 5,48 (1H)m, 3,40 (3H)s ja 2,30 (6H)s.

30

Esimerkki 47

Toistamalla esimerkin 45 menettely käyttäen lähtöaineena tarvittavaa 8,8a-deoksi-8,8a-dihydro-4"-deoksi-4"-okso-oleandomy-siiniä ja liuottimena isopropanolia, saadaan seuraavat yhdisteet: 6 8059 n N(CH _ ) κι\ ! 3 3 0 ή Τ'! "'W In''' RO, \ vaO J \ 5 r '·· /

Uvy ( ν'1*»,

ίο I

OCH., N> -

15 H’ S T

CH C- CH C- J n 3 » « CH C1I C- CII C- 20 CH3CH2^- H-

Esimerkki 48 ll-asetyyli-8 ,8a-deoksi-8 ,8a-metyleeni-U’,-deoksi-U"-amino-oleandomysiini 25 Lisätään 300 mg natriumsyanoboorihydridiä 20°C:seen jäähdytettyyn liuokseen, joka sisältää 5,0 ll-asetyyli-8,8a-deoksi-8,8a-metyleeni-4"-deoksi-4"-okso-oleandomysiiniä ja 5,2 g ammoniumasetaattia 30 ml:ssa metanolia. Reaktioseosta sekoitetaan huoneen lämpötilassa tunnin ajan ja sitten kaadetaan 30 se 120 mitään vettä ja 120 mitään dietyylieetteriä. Vesikerrok-sen pH säädetään peräkkäin arvoihin 7,5, 8,0, 3,5 ja 10,0 ja suoritetaan uuttaminen etyyliasetaatilla kunkin pH-säädön jälkeen. Lopulliseen orgaaniseen pHtssa 10,0 saatuun uutteeseen lisätään vettä ja pH säädetään 6 teen. Vesikerrosta 35 käsitellään jälleen, kuten yllä ja pH säädetään arvoi- 45 68059 hin 7,0, 7,5, 8,0, 8,5 ja 10,0 suoritetaen etyyliasetaatilla uutto kunkin pH:n muuttamisen jälkeen. Yhdistetään pH-arvoil-la 8,0, 8,5 ja 10,0 saadut etyyliasetaattiuutteet ja konsentroidaan ne vakuumissa, jolloin saadaan 1,5 g halutrua tuo-5 tetta.

NMR (of, CDC13): 3,38 (3H)s, 2,30 (6H)s, 2,05 (3H)s ja 0,65 (4H)m.

Esimerkki 49

Seuraavat yhdisteet valmistetaan käyttämällä lähtöai-10 neena asiaankuuluvaa 8,8a-deoksi-8,8a-metyleeni-4"-deoksi- 4"-okso-oleandomysiiniä ja liuottimena isopropanolia ja noudattaen esimerkin 48 menetelmää: R ncch >2 α Ν'Λ νλ T¥«*0 V LXn„2 u 0CH3 R R1 25 0 0 Η 11 CH3-C- CH3C_ 0 0

CH3-C- CH3CH2-C

o o 30 CH3CH2C- ch3-C- 0 o CH3CH2C- CH3CH2C- 0 H- CH.-C- 35 0 H- CH3CH2C- 46 68059

Esimerkki 50 11,2 1 -diasetyyli-^-deoksi-^-amino-oleandomysiini

Suspensiota, joka sisältää 1 g isopropanolilla pestyä Raney-nikkeliä ja 250 mg li,2’-diasetyyli-4"-deoksi-5 4"-okso-oleandomysiini-0-asetyylioksiimia 25 ml:ssa isopropanolia, ravistellaan vetykaasussa alkupaineen ollessa 50 2 naulaa/neliötuuma (noin 3,5 kg/cm ) huoneen lämpötilassa yön yli. Reaktioseos suodatetaan ja suodos konsentroidaan alennetussa paineessa, jolloin saadaan 201 mg haluttua tuo- 10 tetta.

Keittämällä palauttaen koko 201 mg:aa metanolissa tunnin ajan, saadaan esimerkissä 37 valmistetun kanssa identtinen 11-asetyyli-4"-deoksi-4"-amino-oleandomysiini.

15 Esimerkki 51 Käyttämällä lähtöaineena mainittua 4"-deoksi-4"-okso-oleandomysiinijohdannaista ja noudattamalla esimerkin 50 menetelmää ja käyttäen määrättyä katalysaattoria, valmistetaan seuraavat 4',-deoksi-4"-amino~oleandomysiinit: 20 1Λ-» ΓΛ 'Λ Λ 25 R0///;> : XV", 30 0CH3 47 6 8 0 5 9 R Johdannainen Katalysaattori 0 0

" II

CH^C- CH^C- oksiimi jji 0 0

5 CH^C- CH^CH^C- oksiimi Pd/C

O'

II

CH^C- H- oksiimi ptO

0 2 II

CH-CH^C- H- ' oksiimi Pt.n 10 J 1 rcu2

H- oksiimi l’d/C

0 0

" II

CH3C- CH^C- O-asetyylioks. ^ 15 0 0 II „ CH3C- CH3CH2C- O-asetyylioks. M±

. 0 II

CK3C- O-asetyylioks. Pd/C

0 20 " H- CH3C- O-metyylioksiimi pt0 0 0 2

" II

CH3C- Cl^CH^C- O-metyylioksiimi Pd/C

0

II

CE^CT^C- H- O-metyylioksiimi p^/r

Esimerkki 52

Noudattamalla esimerkin 50 menetelmää, valmistetaan käyttä-3Q en mainittua katalysaattoria seuraavia 4"-okso -johdannaisien pel-kistystuotteita vastaavat 8,8a-deoksi-8,8a-dihydro-4"-deoksi-4"-amino-oleandomysiinit: 1,8 68059

R

°Υχγ~,

RO I/((| / ' \Q

5 " n °Y

l 1 p Y^x

o I

OCHo o 10 R X Katalysaattori 0

H- (OH g C - N-OH Pd/C

0 0 15 CH3CH2C- CH3C“ N-OH Ni 0 CH3C- H- N-OH Ni 0 CH3CH2C- H- N-OH Pt02 20 0 H- CH3CH2C- N-OH Ni 0 0 CH3CH2C- ch3c- N-OCH3 Pt02 o

25 H- CH3C- N-OCH3 Pd/C

0

CH3C- H- N-OCH3 Pd/C

O

CH3CH2C- H- N-OCH3 Pt02 30 0 0 0 CHgC- ch3c- N-0-CCH3- Pt02 (jatkuu)

II

68059 49 (j atkuu) R X Katalysaattori 5 0 0 0 CH3CH2C- CH3C- N-0-CCH3- Ni 0 0

CH3CH2C- H- N-0-CCH3- Pd/C

10 0 0 CH3C- H- N-0-CCH3- Ni 15 Esimerkki 53 Jälleen toistaen esimerkin 50 menettelyä käyttäen lähtöaineena esitettyä 8,8a-deoksi-8,8a-metyleeni-4"-deoksi-4"-okso-oleandomysiiniä sekä katalysaattoria, saadaan seu-20 raavat yhdisteet: N(CH3}2 25 i f

RO V<o\(]A

fW' oy 30 T | *2 °«3 50 6 8 0 5 9' r R Lähtöjohdan- Katalysaattori _ — nainen 0 0 H ·.

CH^C- CH^C- oksi imi Ni

• O O

5 CH^C- CHgCHjC- oksiimi Pt02 O 0

11 H

CB^CI^C- CH^Cl^C- oksiimi PtOj 0 n

H- CH^C- oksiimi Pd/C

10 0 CH^C- H- oksiimi Pt02

o O

Il 1«

CH^CH^- CH^C- O-metyylioksiimi Pd/C

O

15 ..

CH-jC- M- O-metyylioksiimi lil

O O

CHjC- CH^C- O-asetyylioksiimi Ni 0

II

20 CH3C- H- O-asetyylioksiimi Ni

O O

H 11

CH^C- CH^C- O-asetyylioksiimi Pd/C

Esimerkki 54 25 . ...

4"-deoksi-4"-etyyliamino-oleandomysiini

Seokseen, joka käsittää 4,59 g 4"-deoksi-4"-okso-oleando-mysiiniä, 6,6 ml etyyliamiinin 5-moolista etanoliliuosta ja 1,89 ml etikkahappoa 25 ml:ssa metanolia, lisätään 365 mg natriumsya-30 noboorihydridiä 50-60 mg:n annoksina. Sekoitetaan tunnin ajan huoneen lämpötilassa ja kaadetaan reakt.ioseos sitten 110 ml: aan vettä ja 120 ml: aan e tyyl iuse t:an t tia .

Vesikerroksen pH säädetään peräkkäin arvoihin 7,5, 8,0, 8,5 ja 10,0 ja suoritetaan uutto etyyliasetaatilla kunkin pH-säädön 35 jälkeen. Viimeinen pll:ssa 10,0 saatu orgaaninen uute käsitellään il C1 68059 vedellä ja pH säädetään 6:een. Vesikerros käsitellään jälleen, kuten yllä ja pH säädetään arvoihin 7,0, 7,5, 8,0, 8,5 ja 10,0 suorittaen uutto etyyliasetaatilla kunkin pH-muutoksen jälkeen. Yhdistetään pH-arvoilla 8,0, 8,5 ja 10,0 saadut etyyliasetaattiuut-5 teet ja konsentroidaan ne vakuumissa vaahdoksi. Tuote puhdistetaan edelleen kromatografisesti 75 g:11a silikageeliä käyttäen asetonia eluenttina. Fraktiot 62-104, kukin sisältäen 4 ml, yhdistetään ja konsentroidaan alennetussa paineessa, jolloin saadaan 910 mg haluttua tuotetta.

^ Esimerkki 55 11 -asetyyli-4,1-deoksi-4"-etyyliamino-oleandomysiini

Esimerkin 54 kaltaisella tavalla lisätään 366 mg natrium-syanoboorihydridiä annoksittain liuokseen, joka sisältää 5,82 g ^5 11-asetyyli-4"-deoksi-okso-oleandomysiiniä ja 16 ml etyyliamiinin 5-moolista etanoliliuosta 27,4 ml:ssa kloorivedyn 2,92-moolista etanoliliuosta. Kun reaktioseosta on sekoitettu huoneen lämpötilassa 1,5 tuntia, se kaadetaan 120 ml:aan vettä ja 120 ml:aan etyyliasetaattia ja käsitellään, kuten esimerkissä 54 saaden 1,2 g 20 haluttua tuotetta.

Esimerkki 56 11 -asetyyli-4tl-deoksi-4ll-n-heksyyliamino-oleandomysiini

Noudattamalla esimerkin 54 menetelmää käyttäen lähtöainei-25 na 4,8 g 11-asetyyli-4"-deoksi-4"-okso-oleandomysiiniä, 6,7 g n-heksyyliamiinia, 3,78 ml etikkahappoa, 302 mg natriumsyanoboo-rihydridiä ja 25 ml rfietanolia, saadaan 80 g: 11a silikageeliä kromatograf isesti puhdistamalla käyttäen eluenttina kloroformia 1,3 g haluttua tuotetta.

30 Esimerkki 57 Käyttämällä lähtöaineina asiaan kuuluvaa 4"-deoksi-4"-okso-oleandomysiiniä ja amiinia sekä isopropanolia liuottimena ja noudattaen esimerkin 54 menetelmää, valmistetaan seuraavat yhdisteet: 35 52 68059 RK NCCH3)2 °Λ °ΤΊ

RO«/„ Y

^ j5V° Y

^T| o I 0 OCH3 10 - Rj R3 0 15 CH32“ H- CH3- 0 CH3C- H- n-C3H?- 0 CH,C- H- i-C„H„- 20 d - J / 0 CH3C- H- B"C5H11" 0 0

tl M

CH3C- CH3C_ C2H5" 25 0 0 CH3C- ch3C- i-C3H?- 0 0 CH3C- ch3C- t-C4Hg- 30 0 0 ch3c- ch3ch2c- ch3- 0 0 CH3C- CH3CH2C- n-CgH13- (jatkuu) 35 53 68059 (jatkuu) R ^ R3

Ö O

Il II

5 CH3C- CH3CH2C- itaC5Hn"

O

II

CH3CH2C- h- n“C3ri7~

O

tl CH-CH-C- H- n-C,H0- 3 2 — 4 9

10 O

11 CH3CH2C- h- n-C6li13-

0 O

Il II

CH-CH„C- CH-C- CH-- J t. Λ 3 O o 15 CH3CH2C- CH3C-

O O

Il tl CH3CH2C- CH3C- n-C5ni;L-

0 O

20 CH3CV- CH3^- —“C5H11“ O o " 1.

CH3CH2C- CH^CH2C- C2H5- 0 o

Il II

CH.CK-C- CH_CH.,C- n-Cr H1 3 2 3 2 — o 13 25 0 0

H II

CH3CH2C- CH3CH2C- i“C4H9~ H- H- CH3~ 30 H- H- C2H5- H- K- t-C4K9- H- H- -“S” li' H- H- n-C,H.

- o 1j 35

Si, 68059

Esimerkki 58 ll-as etyyli-*4 "-deoksi-4lt-dimetyyliamino-oleandomvsi ini 2 g ll-asetyyli-4"-deoksi-4"-amino-oleandomysiiniä, 5 1 g 10-%:ista palladium-hiili -seosta ja 2,06 ml formaliini- liuosta sekoitetaan 4-0 ml: aan metanolia ja ravistellaan vety- kaasussa yön yli alkupaineen ollessa 50 naulaa/neliötuuma 2 (noin 3,5 kg/cm ). Käytetty katalysaattori suodatetaan pois ja suodos haihdutetaan kuiviin alennetussa paineessa. Jään-10 nöstuote (1,97 g) puhdistetaan kromatografisesti 40 g :11a silikageeliä käyttäen alkueluenttina kloroformia. 25 fraktion jälkeen, jotka käsittivät 650 tippaa kukin, eluentiksi vaihdetaan metanolin 3-%:inen kloroformiliuos. Fraktiot 36-150 yhdistetään ja konsentroidaan vakuumissa, jolloin 15 saadaan 704 mg haluttua tuotetta valkoisena vaahtona.

NMR (</, CDC13): 3,33 (3H)s, 2,63 (2H)m, 2,30 (12H)s ja 210 (3H)s.

Esimerkki 59 20 Noudattaen esimerkin 58 menetelmää, sillä poikkeuk sella, että liuottimena käytetään isopropanolia ja käyttäen lähtöaineena tarvittavaa 4"-deoksi-4"-amino-oleandomysiiniä, valmistetaan seuraavat yhdisteet: 25 . R.

’fiXX

RO*,/ V'Cs'-'”"

0 I x CH

0CH3 un3 35 il 55 6 8 0 5 9 - !i ° o

" M

CH3C- CH3C- 0 o " u CH3C“ CH3CH2C-

5 O

' Il H- CH3C-

0 O

ch3ch2c- ch3c- 0 10 CH3CH2C- k- 0 0 CH3CH2C- CH3CH2C- H- H- 15

Esimerkki 60 11 -asetyyli-t4"-deoksi-|4lt-amino-oleandomysiini dihydrokloridi 7,28 g: aan 11 -asetyyli-4,,-deoksi-4"-amino-oleandomysiiniä 20 50 ml:ssa kuivaa etyyliasetaattia lisätään 20 ml kloorivedyn 1-n etyyliasetaattiliuosta ja näin saatu liuos haihdutetaan kuiviin alennetussa paineessa. Jäännös kiteytetään hiertämällä eetteristä ja suodatetaan halutun suolan saamiseksi.

Samanlaisella menetelmällä muutetaan kyseisen keksinnön amii-25 niyhdisteet di-happoadditiosuoloikseen.

Esimerkki 61 11 ,2 1-diasetyyli-^"-deoksi-Ull-amino~oleandomysiinin hydro- kloridi

Noudatetaan esimerkin 60 menetelmää sillä poikkeuksella, et-30 tä lisätään 10 ml kloorivedyn 1-n etyyliasetaattiliuosta. Liuos haihdutetaan kuiviin vakuumissa ja jäljelle jäävä monohydrokloridi-suola kiteytetään hiertämällä eetteristä ja suodatetaan.

Samanlaisella menetelmällä muutetaan kyseisen keksinnön 35 amiiniyhdisteet mono-happoadditiosuoloikseen.

55 6 80 5 9

Esimerkki 62 11 -esetvy^-i~^ "-deoksi-u"-amino-oleandomysiinin asparaginaatti 960 mg:aan 11-asetyyli-4"-deoksi-4"-amino-oleandomysiiniä 6 mltssa 40°C asetonia lisätään 18 ml vettä ja sitten 175 mg as-5 paragiinihappoa. Seosta keitetään palauttaen, kunnes saadaan sameahko liuos. Seos suodatetaan kuumana ja kirkas suodos konsentroidaan asetonin poistamiseksi. Jäljelle jäävä liuos pakastekuivataan, jolloin jäljelle jää haluttu tuote.

Valmiste A

10 2,-asetyyli~8,8a-deoksi-8,8a-dihydro-oleandomysiini 1 a. 21-asetyyli-8,8a-deoksi-oleandomysiini

Pyöreään, 250 ml:n kolmikaulakolviin pannaan sinkkipölyä (10 g) ja elohopeat 2)kloridia (1 g). Kun kiinteät aineet on sekoitettu hyvin, lisätään 1-n HC1 (25 ml) ja seosta sekoitetaan voimak-15 kaasti 15 minuuttia. Supernatantti poistetaan veden pinnalta ja lisätään uutta HC1 (25 ml) ja kolviin johdetaan hiilidioksidia. Kromitrikloridin suodatettu liuos (50 g 65 ml:ssa 1-n HC1) lisätään nopeasti sinkkiamalgaamaan. Seosta sekoitetaan hiilidioksidi-kaasussa tunnin ajan, jolloin syntyvä vaalean sininen väri ilmaisee 20 kromit 2)kloridin (CrC^) läsnäolon. Sekoittaminen lopetetaan tunnin kuluttua ja sinkkiamalgaaman annetaan laskeutua kolvin pohjalle .

2'-asetyyli-oleandomysiiniä (29,2 g) liuotettuna asetoniin (200 ml) ja veteen (100 ml) pannaan yläpuolisella mekaanisella se-25 koittajalla varustettuun pyöreään 600 ml:n kolmikaulakolviin kiinnitettyyn tiputussuppiloon. Koko ajan sekoittaen hiilidioksidin läsnäollessa, lisätään tähän kolviin 2'-asetyyli-oleandomysiini-liuos ja aiemmin valmistettu kromi(2)kloridiliuos. Liuoksen lisätään yhtä aikaa siten, että kumpikin loppuu samalla hetkellä. Li-30 säys kestää noin 12 minuuttia. Sekoitetaan 35 minuuttia huoneen lämpötilassa ja lisätään sitten vettä (100 ml) ja etyyliasetaattia (100 ml) reaktioseokseen ja jatketaan sekoittamista 15 minuuttia. Etyyliasetaattikerros erotetaan ja pestään vedellä (80 ml). Etyyliasetaatti erotetaan ja uutevedet yhdistetään ja pestään uudella 35 etyyliasetaatilla (100 ml). Etyyliasetaattikerros erotetaan ja pestään vedellä (100 ml). Orgaaninen faasi erotetaan ja vesifaasit yh- 57 6 80 5 9 distetään ja käsitellään natriumkloridilla (75 g). Vielä erottuva etyyliasetaatti lapetaan pois ja yhdistetään muihin etyyliasetaat-tiuutteisiin. Lisätään vettä yhdistettyihin etyyliasetaattiuuttei-siin ja säädetään pH 8,5:een natriumbikarbonaatilla. Orgaaninen 5 kerros erotetaan, pestään vedellä, kyllästetyllä natriumkloridilla ja kuivataan vedettömällä natriumsulfaatilla. Suodattamalla ja haihduttamalla liuottimet alennetussa paineessa, saadaan valkea kiinteä aine, joka kiteytetään etyyliasetaatti/heptaani-seoksesta saaden tulokseksi haluttu tuote, 8,4 g, sp. 183,5 - 185°C.

10 Analyysi C37H63013N:

Laskettu: C 62,2 H 9,0 N 2,0 Saatu: C 62,0 H 8,9 N 2,0.

NMR (<f, CDC13): 5,63 (1H)s, 5,58 (1H)s, 3,43 (3H)s, 2,36 (6H)s ja 2,08 (3H)s.

15 1b. 2 *-asetyyli-8,8a-deoksi-8,8a-dihydro-oleandomysiini

Alumiinifoliota (4,0 g) leikattuna 1/4 tuuman palasiksi sekoitetaan 30-45 sekuntia 290 ml:ssa elohopea(2)kloridin vesiliuoksessa. Liuos dekantoidaan ja amalgamoitunut alumiini pestään peräk-20 käin vedellä (2x), isopropanolilla (1x) ja tetrahydrofuraanilla (1x). Palasien päälle kaadetaan 45 ml tetrahydrofuraania, 45 ml isopropanolia ja 10 ml vettä ja jäähdytetään sitten 0°C:seen jää-hauteessa. Lisätään tipoittain 2,0 g tetrahydrofuraaniin, isopro-panoliin ja veteen liuotettua 8,8a-deoksi-2'-asetyyli-oleandomysii-25 niä amalgamoituun alumiiniin siten, että lämpötila pysyy 0°C:ssa. Kun lisäys on suoritettu, poistetaan jäähaude ja seosta sekoitetaan huoneen lämmössä yön ajan. Kiinteät aineet suodatetaan pois ja suodos haihdutetaan kuiviin vakuumissa. Jäännös käsitellään etyyliasetaatti-vesi -seoksella ja pH säädetään 9,0:aan kyllästetyllä 30 natriumkarbonaattiliuoksella. Orgaaninen faasi erotetaan, pestään vedellä ja kyllästetyllä suolaliuoksella ja kuivataan natriumsul-faatilla. Poistamalla liuotin, saadaan 2,27 g haluttua tuotetta.

58

Valmiste B 68059 2a. 11,2'-diasetyyli-8,8a-deoksi-8,8a-metyleeni-oleandomy- siini

Liekillä kuivattuun, tiputussuppilolla, magneettisekoitta-5 jalla ja typpikaasun ahtopaineaukolla varustettuun 200 ml:n kolmi-kaulakolviin pannaan 16,4 g trimetyylisulfoksoniumjodidia ja 3,4 g natriumhydridin 50-%:ista öljydispersiota. Kiinteät aineet sekoitetaan hyvin ja lisätään tiputussuppilon kautta 43,2 ml dimetyyli-sulfoksidia. Tunnin kuluttua, kun vedyn kehittyminen on lakannut, 10 suspensio jäähdytetään 5-10°C:seen ja siihen lisätään 10 minuutin aikana 22,6 g 11,2 *-diasetyyli-8,8a-deoksi-oleandomysiiniä liuotettuna 32 ml:aan tetrahydrofuraania ja 16 ml:aan dimetyylisulfoksi-dia. Suspensiota sekoitetaan huoneen lämpötilassa 90 minuutin ajan ja kaadetaan se sitten 300 ml:aan vettä ja uutetaan kahdella 300 15 ml:n erällä etyyliasetaattia. Orgaaniset uutteet pestään vedellä ja natriumhydroksidin kyllästetyllä liuoksella, kuivataan vedettömällä natriumsulfaatilla, suodatetaan ja haihdutetaan kuiviin alennetussa paineessa. Jäännös kiteytetään eetteristä, jolloin saadaan 8,9 g 11,2'-diasetyyli-8,8a-deoksi-8,8a-metyleenioleandomysiiniä.

20

II

Claims (7)

68059

1. R0%> °γΛ In " ^ χ°'Υ° ν' S ] %nhr αγΛ Ijti,

15 OCH, ST »2 3 och3 iv v ^ r, «“ai °*A VS 20 RO /tins' γν A vvX h JYr°Y 25 ^ 1 Y OCH o VI d joissa kaavoissa R ja R^ merkitsevät vetyä tai kaksi tai kolme hiiliatomia sisältävää alkanoyyliä; ja R^ on vety tai 1-6-30 hiiliatomia sisältävä alkyyli, tunnettu siitä, että i) pelkistetään yhdiste, jolla on kaava I, II tai III, 50 68059 \ fCH3)2 N(CH3)2 "ΛΥι "vS^-Λ R0,///r q / \ T 1 s Γ ro /1 f 0/,,^ Os^ **L J v c£ V"a, OCHo 0 T

1. Menetelmä kaavan IV, V tai VI mukaisten terapeuttisesti käytettävien 4"-amino-oleandomysiinijohdannaisten ja 5 niiden farmaseuttisesti hyväksyttävien happoadditiosuolojen valmistamiseksi, ^ N(CH00 N(CH,)„ , °Λ °rS va

10 RoV1 VoVA J 11

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, t u n - O tt n e t t u siitä, että siinä X on N-OH, N-OCH^ tai N-OC-CH3 ja pelkistys suoritetaan katalyyttisellä hydrauksella.

3. Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelmä, tun nettu siitä, että pelkistys suoritetaan vedyllä Raney-nikkelin, palladium-hiiliseoksen tai platinaoksidin läsnäollessa.

3 OCH

10. II 3 R, N(CH3>2 ΝΛ ro , Illty Ύο-ko -k V^x OCH3 III 20 joissa R ja ovat kumpikin vetyjä tai kaksi tai kolme hiiliatomia sisältäviä alkanoyyleja ja X on NR3, N-OH, N-0CH3 0 M tai N-0C-CH3 siten, että 0 25 a) kun X on Ν-0Η, N-0CH3 tai N-0C-CH3 , mainittu pel kistys suoritetaan katalyyttisellä hydrauksella ja b) kun X on NR3, tämä iminoryhmä muodostetaan vastaavista kaavojen I, II tai III mukaisista ketoneista (X = 0) kondensoimalla mainittu ketoni alemman alkaanihapon amiini-30 tai ammoniumsuolalla tai epäorgaanisen hapon amiini- tai ammoniumsuolalla, ja pelkistys, joka on hydridipelkistys, suoritetaan in situ, ja haluttaessa, ii) kun R tai R^ on vety, ne muutetaan vastaavasti alkanoyyliksi ja/tai kun R tai R^ on alkanoyyli, ne muute- 35 taan vastaavasti vedyksi; ja/tai iii) muodostetaan farmaseuttisesti hyväksyttävät happo-additiosuolat. il 6' 68059

4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, t u n -10 n e t t u siitä, että siinä X on NR^ ja käytetään ylimäärin alemman alkaanihapon ammonium- tai amiinisuolaa, edullisesti ammonium- tai amiiniasetaattia.

5. Patenttivaatimuksen 4 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että siinä pelkistävä aine on natrium- 15 syanoboorihydridi. 62 68059