DK147943B - Analogifremgangsmaade til fremstilling af 4''-deoxy-4''-acylamidoderivater af oleandomycin-forbindelser, erythromycin-forbindelser eller erythromycin-6,9-hemiketal-forbindelser - Google Patents

Description

147943 i

Den foreliggende opfindelse angår en analogifrøajgangsrgåde til fremstilling af hidtil ukendte 4,,-deoxy-4n-acylamidoderivater af oleandctnycinforbindelser, erytbrcnycinforbindelser eller erytiuxnycin -6,9-hemiketalforbindelser med den i krav l's indledning angivne for-5 mel A eller syreadditionssalte deraf.

Oleandomycin og erythrorycin er macrolide antibiotica produceret ved fermentering og beskrevet i henholdsvis US-patentskrifter-ne nr. 2.757.123 og nr. 2.653.899. Talrige derivater af oleandomycin og af erythrcnycin A og B er blevet fremstillet i bestrabelse lo på at modificere deres biologiske og/eller farmakodynamiske egenskaber.

Ved fronstillingen af derivater af oleandomycin har man først og fremmest koncentreret sig αα dannelsen af estere af en eller flere af de i 2'-, 4"- og Il-stillingerne siddende hydrcnygrupper. Mo-15 no-, di- og triacylestere, hvori acyldelen er afledet af en lavere aliphatisk carbonhydrid-monocarboxylsyre med fra 2 til 6 carbonato-mer, er beskrevet i US-patentskrift nr. 3.o22.219. Æminohydrinderi-vater af oleandomycin er rapporteret af Kastens, et al., Khim. Gete-rosikl. Soedin (2) 168-71 (1974); C.A. 80, 145986η (1974). Forbin-2o delseme, for hvilke der ikke er rapporteret nogen nyttig anvendelse, fremstilles ved at behandle oleandomycin med en dialkylamin eller en heterocyclisk amin i et forseglet rør i 2o timer ved 30°C. Epoxid-delen i 8-stillingen er reaktionsstedet.

Forskellige monoestere og cycliske arihydrider af erythrcnycin 25 er rapporteret i Antibiotics Annual, 1953-1954, Proc. Symposium Antibiotics (Washington, D.C.), henholdsvis side 5oo-513 og 514-521. US-patentskrift nr. 3.417.o77 beskriver den cycliske carbonatester af erythrcnycin A, reaktionsproduktet af erythrcnycin A og ethylen-carbonat, som et aktivt, antibakterielt middel. US-pa-30 tentskrift nr. 3.884.903 beskriver 4"-deoxy-4"-oxo-ery-thromycin-A- og -B-derivater som nyttige antibiotica.

9-aminoderivatet af erythromycin A, betegnet som erythromycylamin, er i vidtgående grad blevet undersøgt og omdannet til derivater. Sulfonamidderivater af ery-35 thromycylamin er beskrevet i US-patentskrift nr.

3.983.103 som antibakterielle midler. N-alkylderivater af erythromycylamin rapporteres af Ryden, et al., J. Med.

Chem., 16, 1059 (1973), at have in vitro og in vivo anti- 2 147943 bakteriel virkning.

Det har nu vist sig, at de omhandlede 4"-deoxy-4"-acylamidoderivater af oleandomycin-forbindelser, erythromycin-forbindelser eller erythromycin-6,9-hemike-5 tal-forbindelser udviser værdifuld antibakteriel virkning såvel in vitro som in vivo ved administrering ad parenteral og oral vej, navnlig mod Gram-positive mikroorganismer. Mange af de heri beskrevne forbindelser udviser desuden virkning mod Gram-negative mikroorganismer.

10 De omhandlede forbindelser har nedenstående formler I-III, hvori bølgelinien, hvormed acylaminogruppen er tilknyttet i 4"-stillingen, er fælles for og omfatter begge epimere former: n(ch3)2 15 V* r2V|^s'

H,C T ICH, JL

^0 0 CK3 20 H3C^^s if' CH, Η I ΓλΟ 3 3 <1 1 il X /°\/CB3

xJ^ch3 Vi Y

å LA? ‘''Wnh-c-z 25 OCH3 h3C N(CH3)2

30 Vs] ]iH3 „JL X

R OL / A Jp CH- ‘X HO^Y‘ 3 rLl I . 11 B3C0^ - 1<P CH3

Ci15 i X, / chJ^voch3 · 3 147943 N(CH,)~ , -ys Vi

4H3C V 0VH3 o^Wh, IH

* °'T ]''' CH·* νι»'Ί [V ^ · π η · -‘μ 1 1 Η. * 10 c?He Q . 1 V yO. .CH.

γ “ιΥ V

. h3c Vch3 1 2 15 hvori hver af R og R hetegner hydrogen eller alkanoyl med fra 2 til 3 carbonatomer, R betegner hydrogen eller hydroxy, R4 betegner alkanoyl med fra 2 til 3 car- 4 3 bonatomer, eller R 0 og R taget sammen er 0

II

20 -O-C-O- 0 13 " eller RO og R taget sammen er -O-C-O-, Z betegner (a) -(CH2)m-C(CH3)3, 25 (b) W,<c£ / »-se eller (d) -(CH~) -heterocyclyl, hvor 30 Δ m m er 0 eller 1, 1 R er hydrogen, chlor, hydroxy, methyl, amino eller alk-oxy med fra 1 til 4 carbonatomer, X er hydrogen, hydroxy, chlor, brom, fluor, alkyl med 35 fra 1 til 4 carbonatomer eller alkoxy med fra 1 til 4 carbonatomer, Y har samme betydning som X eller er trifluormethyl eller carbalkoxy med fra 2-5 carbonatomer, og 4 147*43 heterocyclyl er thienyl, py.razinyl, pyridyl, furyl, imid-azolyl, thiazolyl, isothiazolyl, oxazolyl, isoxazolyl, thiadiazolyl, pyrrolyl, tetrazolyl eller monomethylderivater af nævnte heterocycliske grupper.

5 Forbindelserne med de ovenstående formler, indbe fattet de epimere former deraf, og deres farmaceutisk acceptable salte er effektive antibakterielle midler mod Gram-positive mikroorganismer, f.eks. Staphylococcus aureus og Streptococcus pyogenes, in vitro, og mange er 10aktive in vivo ved administrering ad parenteral og oral vej. Mange af forbindelserne (og deres salte) er også aktive mod visse Gram-negative mikroorganismer, såsom cocci, f.eks. Pasteurella multocida og Neisseria sicca.

Gunstige forbindelser blandt de omhandlede som følge 15af deres forholdsvis større virkning øg styrke, er de forbindelser, som har de i nedenstående tabel anførte betydninger, hvori alle Z-betydningerne gælder for formlerne I-III:

Fontel R2 R1 R^ OR^ _Z_ 20 I Η H eller GOCH^ H — (a) - m = 0,1/ H Η H eller OOCH3 H — (b) CH(R5)-<^£ hvor R5= H, -O-C (O) -O--- X Y C1 eller 0°¾ III H Heller 00013 <c) "^5^ 2 5 (d) - (CH2)m-heterocyclyl; m = 0

Foretrukne forbindelser blandt de omhandlede er de 30 gunstige forbindelser, hvori Z er -0(0^)3, CH2"\C?fY , , hvori Y er hydrogen, chlor eller fluor; 2-pyrazinyl, 4-methy1-5—thiazolyl, 4-methyl-5-oxazolyl og isoxazolyl.

35 Særlig foretrukne er de foretrukne forbindelser, hvori Z er en af de ovennævnte heterocyclyl grupper, og R1 er hydrogen.

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig 5 1479A3 ved det i krav l's kendetegnende del anførte.

.Forbindelserne med de ovenstående formler I-III kan således fremstilles ved acylering af det tilsvarende 4"-aminoderivat med et acyleringsmiddel som anført i 5 krav la). Acyleringsreaktionen kan udføres ved at bringe det pågældende 4"-aminoderivat i kontakt i et reaktionsindifferent opløsningsmiddel med et reaktivt derivat af den pågældende syre. Typiske reaktive derivater af syrerne er syrechloriderne, anhydri-10 derne (simple eller blandede), syreazidet, en aktiv ester eller thioester med f.eks. N-hydroxyphthalimid, N-hydro-xysuccinimid, en phenol eller thiophenol, og "kondensationsproduktet" med et "kondensationsmiddel", såsom et carbodiimid, en alkoxyacetylen, N,N1-carbonyldiimidazol, 15 Ν,Ν'-carbonylditriazol og hexahalogencyclotriphosphatri-aziner.

En hensigtmæssig udførelsesform for fremgangsmåden ifølge krav 1 a) består i, at acyleringsmidlet er ® , hvori hal betegner chlor eller brom, og at om- 20 z-c-ha-'- sætningen udføres i nærværelse af en syreacceptor. Egnede syreacceptorer er tertiære aminer, såsom trialkylaminer med fra 1-4 carbonatomer pr. alkylgruppe, N-methylanilin, pyridin, N-ethylpiperidin og N-methylmorpholin. Når der anvendes et vandigt system som opløsningsmiddel, kan der 25 som syreacceptor anvendes en uorganisk base, såsom et alkalimetalhydroxid. Acyleringen kan udføres i vandige eller ikke-vandige opløsningsmiddelsystemer. I vandige systemer udføres reaktionen almindeligvis ved en pH-værdi på fra ca. 6 til ca. 9 og ved en temperatur på ca. 0°C 30 til ca. 50°C. Den kan også udføres i ustabile emulsioner af vand og med vand ikke-blandbare organiske opløsningsmidler, såsom methylisobutylketon og lavere alkylaceta-ter, i pH-området fra ca. 2 til ca. 4. I ikke-vandige systemer udføres reaktionen ved fra ca. 0°c til ca. 50°C 35 i nærværelse af en opløsningsmiddelopløselig syreacceptor, såsom en tertiær amin som allerede angivet ovenfor.

En anden hensigtsmæssig udførelsesform for fremgangsmåden ifølge krav 1 a) består i, at acyleringsmidlet 147943 6

O

er η , og at reaktionen udføres i nærværelse af et Z-C-OH

kondensationsmiddel. Denne udførelsesform foretrækkes ofte af bekvemmelighedsgrunde, og på grund af reaktanternes tilgængelighed og det totale produktudbytte. Når man 5 anvender et carbodiimid som kondensationsmiddel, kan man benytte vandige eller ikke-vandige opløsningsmiddelsystemer. Når der anvendes et vandigt system, indstilles pH-værdien hensigtsmæssigt til området fra ca. 5 til ca.

8, og fortrinsvis fra ca. 6 til ca. 7. Ved en typisk 10 fremgangsmåde blandes syrereaktanten og carbodiimidet i ækvimolære mængder i et passende opløsningsmiddel (te-trahydrofuran, dioxan), og en opløsning af vand og et med vand blandbart organisk opløsningsmiddel (vand plus dioxan eller tetrahydrofuran) indeholdende den amino-15 macrolide reaktant tilsættes ved stuetemperatur. Blandingen omrøres i flere timer, indtil reaktionen er afsluttet. Der anvendes almindeligvis temperaturer på fra ca.

-5°C til ca. 30°C. I de fleste tilfælde anvendes der et overskud på op til ca. 10% af kondensationsmidlet. Det 20 acylerede produkt udvindes ved kendte fremgangsmåder.

Syreadditionssalte af de omhandlede forbindelser fremstilles let ved at behandle forbindelser med formlerne I-III med mindst en ækvimolær mængde af den pågældende syre i et reaktionsindifferent opløsningsmiddel. Når der 25 er mere end én basisk gruppe til stede i en forbindelse med formlerne I-m, muliggør tilsætningen af tilstrækkelig syre til at mætte hver basisk gruppe dannelse af poly-syreadditionssalte. Syreadditionssaltene udvindes ved filtrering, hvis de er uopløselige i det reaktionsindif-30 ferente opløsningsmiddel, ved udfældning ved tilsætning af et ikke-opløsningsmiddel for syreadditionssaltene, eller ved afdampning af opløsningsmidlet. Som repræsentative eksempler på sådanne salte kan der nævnes hydrochlo-ridet, hydrobromidet, phosphatet, sulfatet, formiatet, 35 acetatet, propionatet, butyratet, citratet, glycolatet, lactatet, tartratet, malatet, maleatet, fumaratet, glu-conatet, stearatet, mandelatet, pamoatet, benzoatet, suc-cinatet, lactatet, p-toluensulfonatet og aspartatet.

147943 7 11-monoalkanoyl-, 21 -monoalkanoyl- og ll,2'-dial-kanoy1-4"-deoxy-4"-amino-oleandomycinreaktanterne fremstilles ved reduktiv aminering af de tilsvarende 11-mono-alkanoyl-/ 21-monoalkanoyl- og ll,2'-dialkanoyl-4"-deoxy-54"- oxo - oleandomyciner under anvendelse af palladium-på-trækul, hydrogen (fra oa.· 0,07 til ca.- 35 kg/cm ) og airncni-umacetat i et passende opløsningsmiddel, såsom methanol og isopropanol, ved ca. 20-50°C. Alternativt kan natrium-cyanoborhydrid anvendes som reduktionsmiddel i stedet for 10 palladium-på-trækul og hydrogen. Det de-esterificerede derivat fremstilles bekvemt ved solvolyse af de tilsvarende 21-monoalkanoyl-4"-deoxy-4"-aminooleandomyciner.

De nødvendige 4"-deoxy-4"-oxo-oleandomycinestere fremstilles ved selektiv oxidation af 4"-hydroxygruppen i 15 tilsvarende Qle^idQS^ycinestete under anyendelse af N-cfclorsucxdnimid og dimethylsulfid, efterfulgt af tilsætning af én tertiær amin, sår* sesn triethylamin. N-chlorsuccinimidet og dimethyl sulfidet kombineres i et reaktionsindifferent opløsningsmiddel ved ca. 0°C. Efter 10 til 20 minutter indstilles temperaturen ^ af den opnåede blanding til fra ca. 0°C til ca. -25°C, og den pågældende oleandomycinester tilsættes. Reaktionsblandingen omrøres i fra ca. 2 til ca. 4 timer, hvorefter den tertiære amin tilsættes, og kølebadet fjernes. Til accelerering af reaktionen er det fordelagtigt at anvende 25 et overskud på fra 1 til 20 gange af N-chlorsuccinimid-og dimethylsulfid-reaktanterne. Den tertiære amin anvendes i en ækvimolær mængde i forhold til det anvendte iST-chlor-succinimid.Egnede reaktionsindifferente opløsningsmidler til reaktionen er toluen, benzen, ethylacetat, chloroform, 3Qmethylenchlorid og tetrahydrofuran. Alternativt anvendes dimethylsulfoxid-acetanhydrid eller dimethylsulfoxid-trifluoracetanhydrid som oxidationsmiddel.

De ønskede 4 " -deoxy-4 ” -amino- oleandartycinderivater kan isoleres ved, at man benytter sig af deres basiske natur.

35En vandig opløsning af det rå aminoderivat ekstraheres over et craråde med gradvis stigende pH, således at neutrale eller ikke-basiske materialer ekstraheres ved lavere pH-værdier og produktet ved en pH-værdi på ca. 10. Ekstrak- 147943 8 tionsopløsningsmidlerne, ethylacetat eller diethylether, tilbagevaskes med saltvand og vand, tørres over natrium-sulfat og inddampes til opnåelse af produktet.

Det nødvendige 4"-deoxy-4"-amino-erythromycin A og 5b og 4"-deoxy-4"-amino-erythromycin-A-ll,12-carbonat og -6,9-hemiketal kan også fremstilles ved de ovenfor beskrevne reaktioner. Alternativt fremstilles 4"-deoxy-4"-amino-erythromycin A og B og 4"-deoxy-4"-amino-erythromycin- A-ll, 12 -carbonat-6, 9 -hemiketal ved oxidation af det 10 tilsvarende 4"-hydroxyderivat med 1 mol dimethylsulfoxid og 1 mol trifluoracetanhydrid i et reaktionsindifferent opløsningsmiddel ved ca. -30°C til ca. -65°C, efterfulgt af behandling af reaktionsblandingen med ca. 1 mol tri-ethylamin. Methylenchlorid er et passende reaktionsin-15 different opløsningsmiddel til denne oxidation. Reprssen-. tative fremgangsmåder til fremstilling af de nødvendige udgangsmaterialer er angivet nedenfor.

De stereokemiske forhold for de udgangsmaterialer, der fører til de omhandlede anti-bakterielle forbindelser, er ^ 20som for det naturlige materiale. Oxidation af 4"-hydroxy-gruppen i oleandomycin, erythromycin A og B og erythro-mycin-A-ll,12-carbonatester-6,9-hemiketal til en keton og påfølgende omdannelse af denne keton til 4"-aminerne giver mulighed for, at 4”-substituentens stereokemi' 25ændrer sig fra den i det naturlige produkt foreliggende.

Når 4"-oxo-reaktanterne omdannes til aminer, er det følgelig muligt, at der dannes epimere aminer. I praksis bemærker man, at begge epimere aminer er til stede i slutproduktet i varierende forhold afhængig af valget af 30 syntesemetoden. Hvis det isolerede produkt består overvejende af én af epimerene, kan denne epimer renses ved sådanne fremgangsmåder som gentagen krystallisation af et passende opløsningsmiddel til opnåelse af konstant smeltepunkt. Den anden epimer, den der er til stede i 35mindre mængde i det oprindeligt isolerede materiale, er det fremherskende produkt i moderluden. Den kan udvindes derfra ved for den sagkyndige kendte metoder, f.eks. ved inddampning af moderluden og gentagen omkrystallisation 9 147943 af remanensen til et produkt med konstant smeltepunkt eller ved chromatografi. Selvom blandingen af epimere aminer kan adskilles ved for den sagkyndige kendte fremgangsmåder, er det af praktiske grunde ofte fordelagtigt 5 at anvende denne blanding som den isoleres fra reaktions-blandingen. Ved anvendelse af den epimere blanding af 4"-aminoreaktanterne opnås der selvsagt en epimer blanding af de acylerede produkter. Den således fremstillede epimere blanding kan adskilles ved for den sagkyndige lOkendte fremgangsmåder. Begge epimere af en given forbindelse ud.viser imidlertid den samme type virkning, og selvom en adskillelse af dem er ønskelig, er den ikke altid nødvendig.

De heri anførte forbindelser med formlerne I-III ud-15 viser in-vitro-virkning mod flere forskellige Gram-positive mikroorganismer og mod visse Gram-negative mikroorganismer, såsom de med sfærisk eller ellipsoid form (cocci). Deres virkning påvises let ved in-vitro-prøver mod forskellige mikroorganismer i et hjerne-hjerte-in-20 fusionsmedium ved den sædvanlige dobbelte seriefortyndingsmetode .

For et repræsentativt udvalg af de omhandlede forbindelser, angivet ved deres eksempelnumre refererende til de nedenstående udførelseseksempler, er der i den 25 efterfølgende tabel angivet in-vitro-data i form af de minimale hæmningskoncentrationer (MIC) for forbindelserne over for forskellige mikroorganismer. Tilsvarende MIC-værdier er angivet for to af de nærmest beslægtede kendte forbindelser, oleandomycin og erythromycin A.

30 Det ses, at de omhandlede forbindelser generelt har bedre antibakteriel virkning mod en eller flere af de afprøvede mikroorganismer end de kendte forbindelser.

35 147943 ίο rt •H - #

U

wrto oo p o βν dj « oo

Oj ϋ O ^ CM CM 0Ί CO f^· •rt U O ' ·* ** ·* ·*· *· *· 0J *ri vO O O O O O © ©

£5(Λ VO

———-------- rt Η 0 Η Ό _.· · H rf U I-Γ CO N VO 1Λ ^ ΙΛ

g 3 0 0 f> H in IN in. CM

\ AJ JJ o ·» «* *» *fc *· ·» oi « h < 'q cn h vo m m vo

3L SJ 5 ov CN · H

ό· 6 vn 0

H

a _;_________ I—1 ' """“ 1"" 0)

Λ (0 <tf +» a Eh nJ , g M

7 Q, § O O O O O O O O

1 CJ 60 CM Η Η Η Η H CM H

,. MOO ‘ ^ · » ·» ·* ·* ·» » « u ^CN O. O. O. O, O. O O.

w P.O v| v| vj v.| v| v| ’> a 1,1 "·. ; . “ H ' -i" I . ' · .

ei • « O O O VO v0 O 00 Ov ,c s o h.h m in cm n " CW CJ <· » *· w ο*. «* ·*» m

fl M <i Ο. Ο. Η Η Ο Ο O

S3S v| • nm o o o oo o ov eo »0 3 0 Η H .CM P* Η Π P«. · & S) O ·» k w w w *. *- « £ < O. O. O O O, O O' & 3 o vi vi »i -¾ Γ ‘ •is 0) to x h cm cn »n vo r*· m 147943 11 ‘ ·*· .

(d ' H ' P (Μ vO vO ' Οί O O 60 (UO^u^u^ CO I·"» CM fv ω td o » «. ·« “ . *· . ~ “ to α ο co η h ooo.o

-H U U <D -H VO

3 to vo (d 5 s a ·-* a . a a a a fc 8o « N VO* d* H <T o'

i) +1 O H

0) H <; id dm ' 1 ASvO ___________ to • cmO ο' ο σ» ’ο ο ο o ftgo ” *1 H~ 1 1 *1 Ί 2 O O 0.0 0.0 0 0 £0U ...vl V| v| Vl M fto · Q£ ·'. _ . m ον o\ · eo ο σι σι eo

j-ι rj q CM CO CO IV CM CO CO (V

J-j'gji o' o' o* cT o* o" cT o’

•P id H

w td o ΙΛ CO CO ' CO O 00 c o . oi in ^ f- f" C** CM |V Η ΙΛ

ggo . O O O O O O. *H

OlOO v ΛΜ · · · . 1 a (d .Q.........—i 1 1 1 -- «—! <u i1 Q) w eo σι ο H cm cn sr m

-¾ Η Η Η Η Μ H

H

147943 12 __ g I Γ 1 ~~ n 0

<H

/% «X» a 13 •rJ , μ η b o \D to vo ov ov cv

Ui (J Ο ιΛ in in Λ Μ on *η •Η U Ο ·» ·· I ·* ·” ~ ~ ~ <u*ho H CM Η Η Ο Ο Ο 55 W © Η η r-i « r-t *a ϊ U Η in Ν ΙΟ ίνί ο 3 Ο Ο «Μ r-l ΙΠ Η Η ΙΠ Η 4J 4J Ο tft ^ «« ·» ta «κ Μ Η < «0 ιη Λ Η Λ Μ Η <η

Β 3 (Λ OJ

Λ β Λ ίβ Ο • em _ a, <u ο ο oo ο » ον σ> ον οι ¢0 cn Hr^Hi^cnHcnm M0U ·. ·> ·» ·> ·» »· » ·» υ >% ίΜ Ο, Ο Ο, Ο Ο 0.0 ο ΙΓ. ο,ο ν| ν] fii • COO νΟ Ο VO Ον ον 00 νΟ Λ3θ m m cm m <η η η» m C, Ci < ·» fe fe fe fe fe fe fe (8 μ < Μ Ν Ο Η Ο Ο Ο Η u 3 i-t Η Η ΙβΟ • tsin so ον νο οο ον οο νο ί 3 ο m m m ιη t·» cn r*< m C« ¢) O tatataKtaMtata C ^ < rt <S O H O ©'© rt W 3 r-l rt U O O .·; r-ϊ 0) ft

S

S vOr-OOOvOt-lCMCn

jji HHHHCNCNCNCN

H______ - 147943 13 Φ •ri (Μ β\ tn tn U tn Η CO ^ ^ 01 φ ο «Μ <Λ © ιΛ ΐΛνΟΝνβ οι υ ο Η Λ Λ η

Η DO

φ ·Η \Ω 3 αίνο Φ Η Φ Η Ί3 ιλ «j ΙΛ φ ·Η ^1» ^ ιη ν « m tn cm tn £ 3 O 9 ni η N cm h cm cm

-P «Ρ O

ui rH fa; Φ Φ cn Οι £ tn 01 Φ . Φ ro

Π, φ O G\ O CO CM O VO O O

Φ tjicM HcncMi^Htntnmm

£ &CM CO O ° ° n H H-H

ω αο . rn ί CO in m in in ιΛ J 2 2 H m CM CM CM CM CM H.

-g k. h. «. ·» ·» ·* » «· » (¾ jo cocmO'Ævovocovoco Φ Μ H .

-μ 3 H

CO Φ o „ m m e\ cm m cm m vo • <2 tn cm cm co h cm H cm m i-i £30 «. ·» ·* ·» 0k Μ Μ» M **

OiQ)OvO V0 Ο CO Ο CO Ο p*i CO

Φ J-ι <!

-μ 3 H

w Φ o

H

Φ i*

$ srinvon*coctOHCM

^ CMCMCMCMCM<N<OC0<O

_w______'_______________ 1479A3 14 ττ •*·Η tf G η td ·· Η Η & Ο •Η

U

S «Ο Λ S 2 S

WOO *Λ , ** α «η ίο w 04 m m in Ο η ο

KtavOMH^Nnj ι _______„i

Ο I

H C3 ί Ό

Lj Μ .J (Λ (Λ CO ¢0 I

300 S σ Λ <Ό <η fs ! J *J Ο β» ΙΟ ·»·*.·»«►! η η < · m to m νη Λ y ο ο ο ·, 5 3 Ον 04 04 «Ί «-i '

Ρκ Β “1 I

i (Α ί α - ί • c ο 1/1 α, ο) ο σν οο οο to ό ο ο «ν Οι 0) 60 04 ΟΟ Ρ» Γ>· ΙΛ ιη Η Η Ο t-i ^ Ο U ^ Κ Η ^ Κϊ 6 £3 ° ° ° Η Η ?! ?ι ° ?ι! ! t ^ammmmrnmm mmm|

Pi LO

• W O vD ΙΛ ' CO O σ> sD : ,c 3 o m h 04 η -o γν h o m Q* &J <f * * ·». ·*. «» *»- «Μ

tS U < H « tø « Η o O O H

4J 3 Η V

UDO

• tn ιλ co to Vø co o o o\ !

,3 3 0 0* ΙΛ Η 1Λ1-* O- 04 04 PV

¢, y O " t* * ** * ·» ^ ·» **, re M < O H (0 H ro O O O O i il 3 H i η «o H !! 0) « i*

S oosrinoo-oooooH

jjj oocncnnnoocn»i<· M 111____ 15 147943 .. " 1 f . :*mrn ' I·— - - « ^ ......I mi , 1 t π* r|

Jrf o co £® Φ ° Zj p* r>> w id o . i i I "· WOO q Q o •H o U Vl 0) -H vo v 1 3 W vo <d H id ss s a s s. a s a

3 0 0 Ο* rT Oj Ο Ο θ' O

•P +i o VI

W H <d id 3 o ft g m ra ® ΙΛ cm • P 01 ο Ο O CM O ft

m 2.S Η Η Η Ο Η Ο O

Q) 01CN ,. ·· »» ·* ·» » M 0 U O 0.0.0 0,0,0 •P >1<N vl V V vl vl to 0.0

Pi • woo ο ο σι O m cn Λ 3 Ο Η Η N <n Η Ο o o. Q) - ·» - *» _r *~ <d ρ < ο. ο ο ο ο ο o P 0 H v 1 V1 vl ta ido • w in σ\ ο ο ο ο ο o

,d d O r—I i—I N Ovl H CS

£23 o’ o*; o’; o~ cT o~ o ijØH Vl Vl in do i—I 0) 0.

ε 0) w cn cn sr m o oo a. *$ «σ sr sr sr sr *σ w 147943 16 M S-)· α) α) a a •Η ·Η ft ft

a) <D

cs •ί-ί u

1 Si cm 3 rt m » ' c SS

tSS o" o’ o' cs" S o o o a w o h v| v| « _ r-i !i r-ι Ό

- · * 8 u -J CV CM VO CM O

300 CM CM CO Η· «-) O inrMM

I · I m ft. M I* M Ik ·· ^ ^ ο ο Ο co λ ο h no

« SON

s« e wo •Λ . o å 3 o m cm cm 2J S 2 ,29 ¢1 s3fsj Ο Ο Ο CO 00 Ο I r—i r-i « Ο Ο ο Ο Ο Ο o o M 0.0 VI Vi • WO ιΛ ΙΛ ΙΛ \0 vO O VO VO o

~ 3 © O OO ΙΛ WO CM 1Λ m H

λ λ\ ^ * m * *► ' ·* ^ ^

S μ < O OO Ή Η O HrHO. u 3H VI

U OO

• «in in gv ov £ η h J2 3 Ο Ο Η H 00 00 H 00 . .

Cl jl o «*- ^ ·· —.

s S § o oo o o o o ° o u 3H vf

K itO

H

<D

fi Q) 01 O' O c~) CM CO «3" ΙΛ VO' x < m ta m m uo m

H

147943 17 ~ a

•H

¢) O . |A

8 3 o * W ^ Ί ‘S-hS cm" o £ no n n ό £ £ IS W NO Η ΙΛ CM rt CNrs a H « r-l »a 0 ·Η .Λ 1Λ 3 0 0' « Μ ιΛ ΙΛ

» Η < Ο Ο Ο VO* VO* ρΓ CM* Ο O

1J ; (Λ NT) Ift ift rt H -Λ “* ^ S «Λ « o

Q* 3 O 40 nO ΙΛ CO O CO CO CO NO

4) CO CM ΙΉ ιΛ CM Γ> CM Is* ^ Λ» ^

« &CM O H no O O O O O H

to 0.0

Cd ^ .0)0 CO CO CM NO ΙΛ ΝΛ

j;30 ιΛ Γ>· Is* Η . ΙΛ CM CM

ο, c) <r ι η 1 η. *> » ·" ·» 3 S 5 CM ο ο Μ Η NO νΟ *J 3 Η Η CA (Ο Ο .3 3 Ο CM CM ΙΛ Γη Η Η Γη ΙΛ Η α, ίΐ © » h. η. ·* *» » _«· κ “ β w < NO VO CM ο <Λ <Λ Ο Η cn U 3Η «-< η α ο .._ μ^μμμμ μμμβμμ 0) i1 ο 0) CO ΟΝΟ Η (Μ HftO to r· X LO Lf) NO NO NO NO Νβ ΝΟΝΟ

W

147943 18 o » -Η Μ ο ο «λ η ο ιλ ιο woo Ο »Λ , Μ ιη 'Η Ο Ο ^ w I ν ^ a ή ο [ y. ο cm νο ιη _ι »«'β,Ν Η Ν Η 1 ' :· ! . ___ « γ-( (« η Ό

Ο ·Η I

1-1 Ο Η 3 0 0: ιΛ Η * j ti Ο . * _ 00 2 Η < ο ιΛ οΓ ρΓ Ο Ο ^ £ Sm ^ " Η ;λ * ο 1 ’ L___^___^____ 1 Μ ο ο

! · C <·"! Ο CM

ο. <u Ο eo ο CM ο a 60 CM (S. I I «. ..

£ o o o o o o: «ί Λ* Λ Ο m . ΙΛ 0.0 Λ ; cί •«2m cm co so m ί 3 0 cm rt ρ» m m. -g .

{ Ρ» O < i« k« w I

• fl U< -vo cn ο η m * ; u 3 H · rt Ό

1 CA a O

ί _ - — ~~ • a m so so os o\ eo es 2

j:so m m cn cn n* cn M

0.00'ai «* ·». ». «» i "*

« W < r-j rH Ο Ο Ο Ο O

t> S H

MAO

Q) , I

0. * 0 < · ε °u ai 3 c λ c <0 00 Ο H CM Γ0 ίϊ·5+>·Η M vo - Ρ» pi p* p~ ¢) y >iU · W t-< >s U >i _____________o g q> 6 19 U7943

De omhandlede forbindelsers in-vitro-virkning gør dem nyttige ved topisk anvendelse i form af salver, cre-, mer og lignende. Til lægemiddelanvendelse, f.eks. til topisk anvendelse, vil det ofte være bekvemt at blande 5 det valgte produkt med en farmaceutisk acceptabel bærer, såsom en vegetabilsk eller mineralsk olie eller en blødgørende creme. Ligeledes kan det opløses eller disperge-res i flydende bærere eller opløsningsmidler, såsom vand, alkohol, glycoler eller blandinger heraf eller andre 10 farmaceutisk acceptable indifferente medier, dvs. medier, som ikke har nogen skadelig virkning på den aktive bestanddel. Til sådanne formål vil det almindeligvis være tilfredsstillende at anvende koncentrationer af aktive bestanddele på fra ca. 0,01 vægt% op til ca. 10 vægt%, 15 beregnet på den totale komposition.

Desuden er mange af de omhandlede forbindelser aktive mod Gram-positive og visse Gram-negative mikroorganismer in vivo ved administrering ad oral og/eller parenteral vej til dyr og mennesker. Deres in-vivo-virkning 20 er mere begrænset hvad angår påvirkelige organismer og bestemmes ved den sædvanlige fremgangsmåde, som består i, at man inficerer mus af væsentlig ensartet vægt med prøveorganismen dg derpå behandler dem oralt eller subcutant med prøveforbindelsen. I praksis giver man musene, f.eks.

2510, en intraperitoneal indpodning af passende fortyndede kulturer indeholdende ca. 1-10 gange LD^Qq (den laveste koncentration af organismer, som kræves for at give 100% døde). Der udføres samtidig kontrolforsøg, ved hvilke mus modtager podestof i lavere fortyndinger til kontrol 30af mulig variation i prøveorganismens virulens. Prøveforbindelsen administreres . 0,5 timer efter indpodning, og det gentages 4, 24 og 48 timer senere. Overlevende mus holdes i 4 dage efter den sidste behandling, og antallet af overlevende noteres.

35 Når de anvendes in-vivo, kan de omhandlede forbin delser administreres oralt eller parenteralt, f.eks. ved subcutan . eller intramuskulær injection, i en dosis på fra ca. 1 mg/kg til ca. 200 mg/kg legemsvægt pr. dag.

147943 20

Det gunstige dosisområde ligger fra ca. 5 mg/kg til ca.

100 mg/kg legemsvægt pr. dag, og det foretrukne område fra ca. 5 mg/kg til ca. 50 mg/kg legemsvægt pr. dag.

Bæremedier, der er egnet til parenteral injection, kan Svære enten vandige, såsom vand, isotonisk saltopløsning, isotonisk dextrose, eller Ringer's opløsning, eller ikke-vandige, såsom fede olier af vegetabilsk oprindelse (bomuldsfrøolie, jordnøddeolie, majsolie og sesamolie), dimethylsulfoxid og andre ikke-vandige bæremedier, som lOikke griber forstyrrende ind i præparatets terapeutiske virkning, og som er ikke-toxiske i det anvendte rumfang eller mængdeforhold (glycerol, propylenglycol, sorbitol).

Desuden kan der fordelagtigt fremstilles kompositioner, som er egnede til fremstilling på bestilling af opløsnin-15ger før administrering. Sådanne kompositioner kan omfatte flydende fortyndingsmidler, f.eks. propylenglycol, di-ethylcarbonat, glycerol eller sorbitol, pufringsmidler, hyaluronidase, lokalanæsthetica og uorganiske salte til tilvejebringelse af ønskede farmakologiske egenskaber.

20Disse forbindelser kan også kombineres med forskellige farmaceutisk acceptable indifferente bærere, herunder faste fortyndingsmidler, vandige bæremedier og ikke-toxiske organiske opløsningsmidler, i form af kapsler, tabletter, pastiller, dulcibletter, tørre blandinger, suspen-25sioner, opløsninger, elixirer og parenterale opløsninger eller suspensioner. Almindeligvis anvendes forbindelserne i forskellige doseringsformer i koncentrationer i området fra ca. 0,5 vægt% til ca. 90 vægt% af den totale komposition.

30 Fremgangsmåden ifølge opfindelsen belyses nærmere ved hjælp af de efterfølgende eksempler, .mens de efterfølgende preparationer illustrerer fremstillingen af udgangsmaterialer.

I hvert af eksemplerne 1-36 er den anvendte 11-ace-35tyl-4"-deoxy-4n-amino-oleandomycinreaktant den ifølge T47943 21 preparation E som hovedprodukt fremstillede epimer.

I eksemplerne 38-54 anvendes det enkelte epimere produkt fra preparation J som reaktant. Da konfigurationen af 4"-aminogruppen ikke er kendt med sikkerhed, er bølge-5linie-betegnelsen anvendt i den ovenstående formel.

I eksempel 55 anvendes den epimere 4"-deoxy-4"-amino-erythromycin-A-blanding fra preparation I som reaktant.

Eksempel 1 10ll-acetyl-4"-deoxy-4"-(2-phenylacetamido)-oleandomycin.

Til en opløsning af ll-acetyl-4"-deoxy-4"-amino- oleandomycin (2,88 g, 3,95 mmol) i tetrahydrofuran (60 ml) og vand (30 ml) ved stuetemperatur, indstillet på pH 8,0 ved tilsætning af fortyndet saltsyre, sættes dråbevis 15en opløsning af phenylacetylchlorid (0,549 ml) i tetrahydrofuran (4 ml) under omrøring over et tidsrum på 3 min.

pH-værdien holdes på 7,9 - 8,1 ved samtidig tilsætning af fortyndet vandig natriumhydroxidopløsning (IN). Reaktionsblandingen omrøres i fem minutter ved stuetemperatur 2o og hældes derefter under omrøring ud i en blanding af vand og ethylacetat (1:1), og pH-værdien indstilles på 9,0. Den organiske fase fraskilles, vaskes med vand og derefter med saltopløsning og tørres (Na2SO^). Ved afdampning af opløsningsmidlet opnås produktet som et hvidt 25 skum (3,2 g). Skummet opløses i en varm opløsning af vand (30 ml) og acetone (45 ml), og den opnåede opløsning koncentreres ved kogning til et rumfang på ca. 60 ml, på hvilket punkt produktet begynder at krystallisere.

Blandingen afkøles, og det faste stof frafiltreres og 2q tørres under vakuum. Udbytte = 2,61 g, smp. 154-157°C.

NMR: 6™^ 7,36 (s, 5H) , 5,8o (d, IH), 3,66 (s, 2H) , 3,40 (s, 3H?, 2,66 (m, 2H), 2,35 (s, 6H), 2,06 (s, 3H) .

Eksempel 2-24 35

Ved gentagelse af fremgangsmåden ifølge eksempel 1, men under anvendelse af det tilsvarende syrechlorid i stedet for phenylacetylchlorid opnås følgende forbindelser: 147943 22

NiCH^ ytrVv ° y b h3c-0//,/^ χΐ fx y XX,.,

V^^^vWH-C-Z

°CH3 23 147943 te

* . * * * * * * ‘ ' *C

*** A l»> Λ rf—W

as S S SIS SS ss SB' SB S m m VO CM VO CM VO CM VO <M VO m σι m vo m .......- » £ tarn cn co torn mm era »jo JJJ..2.

- H

vo vo mm o in vo vo vo vo «« moo «vo vo m vo m t** m vo cn von von von eo*'

».·*· «.»> »·» r f r «·. r· f r.CM

mm mm mm mm mm mm mm m m i-4 » » » » » » » » » » » *“ ^ "“»w * W n ^ ^—. ί'ίί OO 050 SO SS SS SS SS SS SS SS sms ϋ i-4 m ι-t m i-ι m i-ι m hn h m t-4 m 1-4 m <° w ^ to % s «g 'os eg ise ·ο js si si Swi Ή VOO O 00 H GO f-iVO OGO m co oo oo co in ovt" σ vo σι vo σ. vo tf»<o vovo or» 00 _T° ». — - », r. ·. r. — ·» ·>»· r ^ »m mm mm mm mm mm mm vom mm te ^te ^te ^te ^te ^te ^te ^te ^te SC ^11-- SB 33 32 32 S3 23 23 33 33 33 330 33033 ® D3 ® ® ® S OCSffl »f mm rjt m m v nm «s« m m m m ^ m m m· m m ·σ vo te ^ ^ v .* * » kb« ^ - - - »to» g » » 03 03 03 £»01 £»» £»» » _» Sww w m m q voovo mooo moo vo i—i oo co o vo n n o m vo r—i m^o m^o r-4 <3-1-4 nvfO m v o o -σ h omm ·> s r. ·. > ·- V k ► v ^ ► «···* » » » ·>*.»· · » ‘ t»mm r»mm r»mm r»mm r»mm r»mm r»mm r*mm É — 3 m o vo μ U % r~ CO 03 _ om o ^ r-4 m h vo — vo vo i vo i +i m i—I f-4 1—4 IT) r-4 ΙΠ Tj r-4 • III · I * -H · aior»H r» σν m >C! igvo m vo vom co ja - ^ ta. H i-4 r-4 f»| Η H ^ 1-4 «· -» *» -"L ® rr i-» S J7,r as M· M· VO s o

vo vo S S S O vo . O

nu o m vo vo m U m η η o υυ s o s uo&i fafaosy

III I I 1 I I

cn ** m m m m* m

w tel* W ^ W W

I I I II I I I

mmm m m m mm S S S S ' s s s s OCJUCJCJO00

rH

0) i·

Olm m *a< m vo r» oo σ »

M

24 1479A3 * * * in S * % % % * *

a? be r]U SS EE BE EE SB

rocs m CS * CJ VO «« NVO H Cl CJ

-to m g MS "S fflffl MM MS Ό £ £ . . ___ _ . Q ww w w w w ww w on _ vo oo in in é. m in mm vo M coco o oo vo co vo »-f\i com <o m con cj vo r* „„ r ·. η ·.·» ·. » ·.·* »· *- - nca m {M » m cj m οι m m vo ci cj m H * * · ^ * · *-> be ** ** * % fc ^ * % · - · to CJ 33 ci — <- —»—» >—>—·— *··.*«

SQ 33 33 33 g3 33 33 η 33 53 33S3 SS SSS SS

g4 ο f-inn h m m «. h cm h ci . "C cj ci m m mm <o * g d ^ ^ % dj ^ ^ ^ ^ ^ ^ ^ ^ ^ k ^ ^

S >0 Μ Μ <0 Μ Μ ^ Ό £ Ό £ £ £ gMM MM

2 WWW WWW VO *w«w WW WW WWW ww fO vo hhh co h co m - wh om ho m h vo mm a\ r-4 oo o —cj oovo o\ vo in t· c* ^ o mo r r r n <· r in -·· · > *· · m m cj in m cj - inci in ci c»cj c^mcj mci % h % ^ S S «Μ» B* % * · % % · % % · ^ *

ESS SEE in E SSS BBS BBS BSE SB

nP CN V© «Φ cn VO r4<O <n CH <n m cn ίΠ Η Λ Π CN CN *«© t-4VO

%

SfflM θ’ Μ M .QMM gMM gMM >dMffl gMM MM

Oww WWW WWW WWW WWW WWW WWW ww m vo vo ο h in m m vo m co in vo vo vo in o o o vo vo vo o Η V© CO rH VO (Ή r? Π Ο Η <n Ο H CO O V0^*H v© v© m ©> <n k «. fc K ^ tk I» «v * K ^ ^ ** ^ ·* r*cncN r* n cn r^cncN r·* <n cn r- <n cn co <n cn co cn cn co cn in “g w ^ • ci i R C· Λ U m W m ci w

O i—I (VJ * " 03 Η Η O VO

^ I H 03id ,. m I vo TP

in h ^ :H H in η H

• - i h 5 *2 · · i i B vo o\ ·· *3 "jj β *» m c* cj

,«m ο η*3 £ ci « cj in "C

w Η H C-S Λ Η — Η Η H

>1 ^ ^ Λ

f*4 H U

% % I I I

8 8» 11¾

N m ms g E H

SB !B VO Η Η o

0 0 01-1^ >1>|N

1 I I >« >ι Φ *0 <0 m «a· —» C S3 Η H )4 W W H (U a> J4 n -w i i cj r s > >1 φ cj cj w a 4J a o* -y as as as i i t ι i

Cj cj cj cj m cj m H

H

0) § igoHCjci^mvop»

Η Η Η Η Η Η Η H

w 147943 25 «Η ^ ™ -α «. «. * g; ~ * - ~ S S * · Ό gjg KES ^sKO BIS S3 S · S S3 g *5 H* HWH cnS cnio cn «. ΝΠ δ w tn

«. » > * «.CO CN * * * * ,Τ'"' c «Γ C

« W «01 CQ 04 01« WM m _ B ™ -H

ww ww w « * ww —<-w '—CO —^

rt —. m <D

oo in VO in io S3 vo vo vein £ ·* ®® 5 oo ro h ro *r »io r· ro η* ro ro cn ve« h *» ** ·· *· ·» ·*· ·* ·* os ro cn in cm ro K % ro cn ro<N ro^ N« ih

ro in « C 10 S

H - «. - <» ·. ν'-* - - fc* *· ® fc * M 0 cq ej *-n *—> rf—s *»» *—i *·* * cn ^ ~ ~ di w SO 53 33 S3 S3 S3 Ό S3 S3 S3» S3 S3» 0

Eh u HIN Η (N Η -ro H CN Η CN H * fO <N .μ η

«3 M - s 2 H

0£ ·» k * » % w ru »*“ » * »w * % S CJ

S T3S Ό S Ό *c3S 2S 3~i P * 2 ww ww w© < —»w w—« ro μ u

^3» VO

i—i 00 rH in f*1 «w SS VO O CO r-* ^ f i2 ^2 0·*Η CQ VO σ> vø O Γ0 CN σι Γ- VØ mCN *T r-t Q) nj

·*·. ·»·»*. ►·· *- ·* *“ ^!* * H

m cn vo cn r* * * in cn in cn ·η j

+-+ £ *** Ό* CQ

* % . » - . » g w - - · - * · *S · W H

KB S3 KBB K^co BKB SSB * * S ** -P 'd *3» co co tn co co in H vo *3* co co co co tn o co hvo φ g *. 4J 0) % % % % * * * *CN · * * * * * * J* * * * * M > g tø CO g tø tø g OT g tø tø S tø W gWCQ Ό « nj β WWW WWW ww %Jg WWW WWW WWW WW ^ co $»]

co o oo co o vo o ro se o co o h in co 2Ϊ115 ^ a) U

VO *3» O ^ Tf o Tf ^ Ifl ^ vO^*H CO CO O CO CN O «Π rg φ

c·.·. » >- s «... ·. CN ·,·.·. ·.··» ·.».·. ' β rjJ

r- ro (N MON M*1 r)'·' P*r0CN M fO IN Γ~ CO fN UlfN dC

-> , SS

• λ -P

0 g —

·— ¢) § Λ ss -P

• Ό X Ά Ό X ·

U ^ M _ · 0 SS H

o cn oo Φ co in si rd - ^ r- ro+j H r* « Λ O o

H H 5 H H H gOlM-H

• i i h I i * § C ft IS H £ S ^2°S? 3 5 S θ Η Η Η 15-HM& Λ M-l >d

d id <D

as > M &> m +i — K ·"* m h o •v if> yø n·^* id^si

K KU s ^ H (U

io in —« io S3 _tn\i| U O ro O « *> Jp fi iji d n ro —. K ro U « - η μ fe.K U ^ 7t rf jT'Co+i

u o o o 9 U S«N<M

1 I I Λ w ·ω w ,y CN KB ro CN ^ ΤΓ HQ) — u u -- 7 « V α, h

1 ^ I ·, £ L 0 <U -P

CN I iJ CN <N 7 i1 I tu S< S3 w ·. S3 S3 J- Srodss O Q O O U U υ η ϋ ·ΰ _, U -Η 0 Γ* B H p .

% Ό -Η 0i |ι « α co σι o H cn ro S «S »id Λ «Η Η CN CN CN CN «Nw^£ 4C .

s 26 U7943

Eksempel 25 L(+)-ll-acetyl-4"-deoxy-4"-(2-hydroxy-2-phenylacetamido)-oleandomyc in.

5 N-hydroxysuccinimid (296 mg, 2,97 mmol) sættes un der omrøring til en opløsning af L(+)-mandelsyre (391 mg, 2.57 mmol) i tetrahydrofuran (20 ml). Efter fuldstændig opløsning tilsættes der dicyclohexylcarbodiimid (531 mg, 2.57 mmol). Reaktionsblandingen omrøres i en time ved 10 stuetemperatur og filtreres derefter til fjernelse af di-cyclohexylurinstof. Filterkagen vaskes med tetrahydrofuran (5 ml), og det samlede filtrat og vaskeopløsning behandles med ll-acetyl-4"-deoxy-4"-amino-oleandomycin 1,5 g, 2,05 mmol) under en nitrogenatmosfære ved stuetem-15 peratur. Reaktionsblandingen omrøres i en time og hældes derefter ud i en blanding af methylenchlorid og vand (1:1).

Den organiske fase fraskilles og hældes sammen med et ligeså stort rumfang vand, og under omrøring indstilles pH på 10,5. Den organiske fåse ir askilles og vaskes efter hin-20 anden med vand og saltopløsning og tørres derpå (Na2S04).

Ved inddampning af ekstrakten opnås det rå produkt som et hvidt skum (1,51 g). Skummet opløses i en varm opløsning af acetone (20 ml) og vand (20 ml), og den opnåede opløsning inddampes ved atmosfæretryk under kogning, indtil 25 den bliver uklar. Koncentratet omrøres i 1,5 time ved stuetemperatur, hvorefter det faste stof fjernes ved filtrering og tørres ved 60°C i højvakuum. Udbytte = 962 mg af hvide krystaller. Smp. 236,5-240°C (dec.).

NMR: 7,45 (m, 5H) , 6,91 (d, IH), 5,16 (s, IH) , 3,31 30 3 (s, 3H), 2,68 (m, 2H), 2,35 (s, 6H), 2,08 (s, 3H).

Eksempel 26 ll-acetyl-4"-deoxy-4"-(pivaloylamido)oleandomycin 25 Til en opløsning, ved stuetemperatur, af lH-tetra- zolyl-l-eddikesyre (795 mg, 5,92 mmol) i tetrahydrofuran (10 ml) sættes under omrøring pivaloylchlorid (0,728 ml, 5,92 mmol). Blandingen bliver uklar og omrøres i 15 minut- 147943 27 ter. Den sættes derpå dråbevis (5,5 ml) under omrøring til en opløsning af ll-acetyl-4"-deoxy-4"-amino-oleando-mycin (1,5 g, 2,05 mmol) i vand (15 ml) og tetrahydrofu-rah (30 ml) ved stuetemperatur og pH 8,0. pH-værdien hol-5 des på 7,9-8,1 ved samtidig tilsætning af 1 N NaOH efter behov. Reaktionsblandingen hældes derefter ud i en omrørt blanding af ethylacetat og vand, og pH indstilles på 10,5.

Den organiske fase fra skilles, vaskes efter hinanden med vand og saltopløsning og tørres derpå (NagSO^). Ved af-10 dampning af opløsningen opnås produktet som et hvidt skum (1,52 g).

NMR: δ™^ 5,83 (d, IH), 3;,38 (s, 3H) , 2,66 (m, 2H) , 2,§3 (s, 6H), 2,08 (s, 3H), 1,10 (s, 9H).

15 Eksempel 27-36 ll-acetyl-4"-deoxy-4"-(2-fluorbenzamido)-oleandomycin.

Til en opløsning af ll-acetyl-4"-deoxy-4"-amino-oleandomycin (1,50 g, 2,05 mmol) i tetrahydrofuran (35 ml) og vand (15 ml) ved stuetemperatur, indstillet på pH 8,0 20 ved tilsætning af fortyndet saltsyre, sættes dråbevis en opløsning af 2-fluorbenzoylchlorid (o,27 ml) i tetrahydrofuran (5 ml) under omrøring over et tidsrum på tre minutter. pH-værdien holdes på 7,9-8,1 ved samtidig tilsætning af fortyndet vandig natriumhydroxidopløsning (IN). Reak-25 tionsblandingen omrøres i fem minutter ved stuetemperatur og hældes derefter under omrøring ud i en blanding af vand og ethylacetat (1:1), og pH indstilles på 9,0. Den organiske fase fraskilles, vaskes med vand og derefter med saltopløsning og tørres (Na2SO^). Ved afdampning af 30 opløsningsmidlet opnås produktet som et hvidt skum (1,61 g).

TMS

11MRi 6cdci3 7,40 (m' 4H)' 3'50 (s' 3H)' 2'70 2H)' 2,38 (s, 6H), 2,10 (s, 3H).

De følgende forbindelser fremstilles på lignende 35 måde udfra de tilsvarende syrechlorider [Z-C(0)C1] og ll-acetyl-4"-deoxy-4"-amino-oleandomycin.

147943 28 n(ch,), / . H I J 2 " > l* ch3go*, ^S*"" ; lx Ύ Ύ\ s . 0CH3 147943 29 b a a a a a a a a

MMm cMfMnnnfO

S S to 8 ^ 3 w ^ 3 vo o i-h m m m m in m vo r*· in vo · m ^ v 'i' mmmc'ioimmmm % % « · « % k i * · * · ^ · a a aa a a aa aa aa aa m m mm m m mm η n mm H ci * > « « ·. * »» *» ** *»

tn 01 01 01 01 01 ε « |O^0 UV

m ο .π vo in m o vo vooo vo o inco m<Qt m οι o <v c* mo m o ovpH ho ^ *, *„ ». to »» ·» «· ♦ ·» ·* ·-·* *·*» tn o m m mm m m ion ion nn iow SO ...

EhU .....-.......- -fc - * «Ο A ^ ^ A A A Λ Λ Λ Λ Λ Λ ^ ^ ^ Λ aa aa aa aa aa aa aa aa aa 06 nm mm h vo h m nm h vo h vo m vo n vo z Ί3οί «to tj « >d « ό ^ra _g _E _« E o m vo mo moo mm mm o m com vo o coco mo o h i—i m mo o o h m o m o mm torn »cm vo m ion von t" cm p» m vo m r* m « « ^ k ^ ^ ^ * * * * * ^ ^ 3:35 aa aa aa aa aa aa aa aa

rf vo VVO *J* IN Tf VO VVO Η N m m m m H(M

ε« ε« es 8« e« ε ε es e ε så w w w w w w ^ ^w co en vo vo vo oo æ ro m «-* vo in m cø ooo <ηβ9 q· m Nm m vo mm m m ^ vo m vo p- ό e* vo rs(v| p- m r-. m f»N γ»ν p- m t*» m von p· n ri >1 ri

S

X > vo Ot

ϋ sL

<q> a >» ej O *3· i-» Xt r-l N VO'—'TB >ϊ +{ ·* g g a voHcgjt« go vo g >i <u 8 «

m m o m n *ri i -ri in B B H fe o & ri A

SUUUU'W-U'-'-P

VO I I I I I I t i grnmmmmmmm

H

<» I1 m coovOHNm^mvo ^mmmmmmmmm fe 30 147943

Eksempel 37 4"-deoxy-4(2-phenylacetamido)erythromycin-A-11, 12-car-bonatester-6,9-hemiketal.

Phenacetylchlorid (1,52 iranol) og 4"-deoxy-4"-amino-5 erythromycin-A-6,9-hemiketal-ll,12-carbonatester (1,45 mmol) omsættes ved fremgangsmåde ifølge eksempel 1. Reaktionsblandingen hældes ud i vand-ethylacetat, og pH-vær-dien af den opnåede blanding indstilles på 5. Ethylacetat-laget fraskilles og sættes til et ligeså stort rumfang 10 vand. pH indstilles på 9,5 under omrøring, og ethylacetat-fasen fraskilles, vaskes først med vand og derefter med saltopløsning og tørres (Na2S0^). Ved fjernelse af opløsningsmidlet under formindsket tryk opnås produktet som en blanding af epimer-A- og epimer-B-formerne (953 mg).

15 Produktet chromatograferes på en silicalgelsøjle (40 g), som er påfyldt og elueres med chloroform-acetoi£ (3:1), og der opsamles fraktioner på hver 800 dråber. Fraktionerne 6-60 hældes sammen og inddampes til tørhed til opnåelse af én epimer (A) af det i overskriften nævnte 20 produkt som et elfenbensgult skum (370 mg) . Fraktionerne 101-150 hældes sammen til opnåelse af den anden epimer (107 mg),.som et elfenbénsgult skum. Fraktionerne 61-100 indeholder en blanding af epimere (114 mg) og oparbejdes ikke yderligere.

25 NMR. TMS .

NMR. «CDCl3.

Epimer A: 7,38 (s, 5H), 5,88 (d, IH), 3,63 (s, 2H), 3,21 (s, 3H), 2,35 (s, 6H), 1,61 (s, 3H).

Epimer B: 7,43 (s, 5H), 5,85 (d, IH), 3,65 (s, 30 2H), 3,31 (s, 3H), 2,31 (s, 6H), 1,63 (s, 3H).

35 147943 31

Eksempel 38-56

Fremgangsmåde ifølge eksempel 1 gentages, idet der dog anvendes 4"-deoxy-4"-amino-erythromycin A som den macrolide reaktant og de tilsvarende syrechlorider til 5 opnåelse af følgende forbindelser: N (CH3> 2 N° ν,,Α.

"o·^ A

' ’VVV

o II." CH3 147943 32 » · * · * · ^ ^ . ^ ^ % '

»SK SS KB KB B S3 BK KB SS

cq m cm tn cm ro cnve 10 H ro cm n cm cn Hvo % ^ % % % % ^ ^ ^ ^ ^ ^ ^ ^ ^ con co n m tn oi to tn ' tn tn tn tn nol 'd tn avo m in oro rotø m m o o m con h o igqi tø Tf tø Tp ot <o ro tn tø tø o* tø «d· o o· ·· «· «·*· ·« r ·· ·» ·· ^ ► ••fc ► ·*“ ·" ro H ro h ro h ro cn cm in H <o h fon tø cm * fe fe fe fe fe fe fe fe ^ ^ % % % * * ffe^fe «feofe Λ ^ -» Λ BS BB BB BB B 8B BS BB 8B’

Htø H tø Η lO H CO (O H 10 HIØ i—I tø «SCO

ro cqoocm OM'dMOW tn jd ^n 2 ® 2 ® 3® P 8 «o roa rom mm tom m Ha OO iøh tøm am oo· h m mm m ot m om ot m om

Pf I» K *. r> *· r» ·* ·- *- ·- ·* ·* ·* ·* S m es tø cm tø cm tøm m tø cm tø cm in cm r~ m 2 .. ;............

KB SS KB KBK SE BK KB KB KKK

mm mm o· m m1 n m h m mm o· m tn tn hcmco tn tn raw ε tn ε tn tn ;d _tn jn ^tn jn ^S^cn oi mm mm oo tø tø tø o tø mtø oo tøtø aam τρ m tø cm mm h tø o* ot o· tøm H m hcm mao· r*. m r*m r- m p~ m h m h r-* m p*m p*m pmn

m· «Η >* --j -μ A

_ g g g g Sd g Λ d p g 3 η h 3

.: ,14,¾.¾ J4^>Ai+>4J

^ “ “ “ “ ώ£ m ^ d ^ 2 ,r_l m £ +> +> +> H -P &ιΛ (7>λ

^ 0)2 U ti ·ΰ ti κ Φ ε Ό <u ε 0) S

4 Å -X.3 -Η Η Ή ·Η ,β§ ij w 3 tn p 5 m S o. £ > > > > >i.3 >i3 I S^S1 5 £ £ £ η-ομλ a m —« • ^ tn s o· tø tu K o o·

ni tø o m K

nn fi a ro B tø

Hd Η K :tø U

m O O 0 fci H H

K · mn ii mi i >i >t

to B0)mcM — — m c C

ri tøs w w m h '-'«UD

i Ohi i BO liCÆ

CM CM CL CM CM O w <M 4J 4J

S 8^88 o o S Λ cm a g øa ot o h cMm H m tø

Jg:m m O· O· "» M· Μ* Μ· M·

M

m- 33 147943 * s * to % · % » % A * % · « · * * · ^ * ^ · **+>**> *» S3 ^ ci) *-%#-» so a as as s« hs s« sec — ssss ss <M ro A co Η'-' to M to η to « h to cm η co ro - So % % % « *iø · <B * * * * * in * * % * * * 0] Ql *0(0 Μ(1λ UJ 0)0) 0)0) * Ό Cl) 03 0) 0)0) ww> ww w ..SB W ·_>>_· fi) η ww ww —· —- to vo oo io ro 1/1 o <o a on in ro h in ·>* neon in co vov em TP * *. * v r>v vov n<* to v io v rov «. ·. v ». kM Q 10* * k k k SC ·* * k k k * ton m ro vo ss ^ Η to h coh -vo «ηπη coh η » <** k k * * · * k.00 kk % k k k k S* k k k k k k ΛΛΛ Λ1-4 n S — I—·—· 1-4 0) —·—k — —

SS SSS S * HS SS SS - SSSS SS

HIØ CO CM CO Η*ίΊ 10 Η 10 i-4 10 « ΗΌ HIØ fM 10 n o) 0) o 1-4 k k * * * * 0)« k k * * Λ "0* k k k k * k al rj »do) s 0) 0) Ό *-»0) Ό0) <a tn g W Ό o) Ό o) jg Q ·—— Wk-»«-» kifi) 53 >-> k·’"·* k-»w fg ww**w kl —» &4 U v in o o «o o co o ro lø co ·. * v ro oiø in 10 cm * h æ o o uh oi en σιιον σι co h *-ro co ro co ro *»—. h ro v ro in ro p£ k k k. Jk k k k k k [S H k k k k k k S in ru ίο ro h 10 * * ro in ru m cm ro ι*·μιομ r- cm g k-k 0) k k k k k k k k ffi k—1 . k k k k k i—. k k k k k k k ^k^k Ikkkkk kk in S «— l-kl—k Iklk g 0) ΛΛ ΛΛ

SB S SSS S · H ros SS SS r-4w SSSS SS

v ro η ro iø m H co CM v ro v to cm co ro ro H ro ·* * * © * * * ·> *» <ή m ·* «· * · »· w^j* ^%¾¾ % * g 0) S 03 M g 03 Λ 03 g 03 g 03 Λ ^ g 0) g 0) OO) W ^ H WW WW WfT) ww ww w o oo co tn vo to vo B ro p-ι o vo in h vo * oe ion hh h m m co m ^r^»in vo r* m cm nn m ^ vo co ro m a\ p* K ^ ·_ ». k #» r* *- t* *k s* økffi »· k *i ». ·* » r- ro p*cocm r* co h r- ro r* ro p* ro r· cm p* ro p- ro p^cq Ϊ <*» s 03 g 3 _ c § λ 5 w s ·§» . In .

H 0) ^ ^ “1.

• J. *ί Η ·Η 1 .η

I 3 36 I s S

f—i >· 1—4 « o

ο. in ro M

V S — -k S (Q

S lø v — V iø —I

10 U g v S U S

V U <-k 10 S 10 CM4J

g o to y lø cj Hl 03 iø to S ro U ro U v U S a &, H S Hil

fat) O OOO >i V H

ii w i i i h a * >, rs ro B ro es es So 03 ro Λ

k-*w CJ WWWJg^)k_4J

II I I I I 3 JC I <u mm iø ommiMjJtMg ss k s s s i i s i

o CJ Q CJ EJ CJ CN CM CJ tN

H

.Φ p.

6jk.e øi oHMtovin iø ®vv v in in in in mm m ji w 147943 34

Eksempel 57 4"-deoxy-4"-[4-(1,2,3-thiadiazolyl)-carboxamido]oleandomycin.

A. . Til en 25°C varm opløsning af 2'-acetyl-4"-deoxy-5 4"-amino-oleandomycin (2,0 g, 2,7 mmol) og triethylamin (0,.77 ml, 5,5 mmol) i tørt methylenchlori'd (20 ml) sættes under omrøring l,2,3-thiadiazol-4-carboxylsyrechlorid (0,41 g, 2,7 mmol) i én portion. Efter 10 minutter omrøres reaktionsblandingen med methylenchlorid (80 ml) og ^ vand (100 ml), og pH indstilles derefter til 9,5 med 1 N vandig natriumhydroxidopløsning. Det organiske lag fraskilles, vaskes fire gange med et ligeså stort rumfang vand og tørres (NajSO^). Opløsningsmidlet fjernes under formindsket tryk til opnåelse af det rå produkt san et •1-5 gulbrunt skum (2,5 g). Ved chroma tograf i på silicagel (200 g silicagel, 3 1/2 cm x 49 cm søjle, eluering med chloroform: isopropanol 95:5 på volumenbasis) opnås rent 2,-acetyl-4" -deoxy-4"- [4- (1,2,3-thiadiazolyl) carboxamido] -oleandomycin som et.farveløst, amorft skum (1,4 g).

20 NMR: <5™^ 3,51 (s, 3H) , 2,10 (s, 3H) .

B. 2 '-.Scetylderivatet omrøres i 24 timer ved 25°C i methanol (30 ml), og methanolet fjernes derefter i vakuum til opnåelse af den i overskriften nævnte for- 25 bindelse som et hvidt, amorft skum (1,3 g, 60,3%).

NMR: 9,25 (s, IH), 3,50 (s, 3H) , 2,32 (s, 6H) . 3

Massespektrum: m/e = 256, 158.

Eksemplerne 58-78 30 Ved at gå frem son i eksempel 57 fremstilledes de i neden stående tabel anførte forbindelser, idet der dog anvendtes det tilsvarende syrechlorid i stedet for l,2,3-thiadiazol-4-carbaxylsyre-chlorid.

I de tilfalde,hvor 2'-acetyl-4"-deoxy-4"-(acylamido) olean-35 domycin-precursoren for en given 4"-deoxy-4"-(acylamido)-oleandomycin ikke er angivet,isoleredes precursoren ikke før deacetylering.

147943 35 n(ch3)2 ° v; H3CS lP3 ,O^O^CH3 UOo,,^ ^S**' h3c^X CH, *\^Ζγ°γ3ο ° Ν^ΝΗ-ί-Ζ OCH3

De under Z-variablen anførte %værdier angiver udbyttet af den pågældende forbindelse beregnet på basis af den som udgangsforbindelse benyttede 2'-acetyl-4"-de-oxy-4"-amino-oleandomycin.

147943 36 α> . ^ ο ·· 0) g OO OO 00 00 ta 3 in mm m <0 5-) ι-l η η η

2 -P

B ». -- - gi e\ o m m a *a> in in io in] M CN m m

I - · C

(β m ^ (U W

g "— «a. *. * p · ·*· «» * LO O'! " P · oo o m a a) — . » „i •.«a' ο σι * <D —

m P o 33 x mm 3 S S £ S S .j p - - H a SK

- to ^ h <p v o io mio tniOH gjn n » n 0»

- r- - -i-> O-P oo -P

^ ro ·» *. n 0 - -- - - >, m - - — O — ON SB π3ΚΡΜΒ«ΜΒ0β^-^ t! N p U) 0) b - ---- a) h a — ——— o -Q-oo b <dw a^ > m > cr> h E > n) > m tp co P · ο io m c r- τρ r- o r- <u oo ^ . S oo H C ;|| φ ^ oo Ί* c -π n bn +j pq - C oil -P m co α b pq ci ® ·. ·. b nu ·.·.*. «*.<!) 3«ο.β b b p - 50 com co ro c m oo m m m r; ø — Cm &Ό Ό b -P to b 0 - > Ό b ø *o 0)-0 - - -- ·.«.*_ r- 0)-^:- g pm » g m a p cam g to ---

.. o a— BBSS cm -HE BB SSm OH! - σ» -P B

os p r- tn rtHvo p ^ η n h m h m β m p r- h m 2 ø - Cm ru - u -O- <D - ϋ _S -P oo -P m ---'+>oo - - - -- n +) o » · -P oo >i - - ra P - g g m m oBBramnajom m o m G -d rn — — — CJ -ΰ O — w— H P - BB (G Ό 0 — ig. m o «. ¢) p , _ ?n a oo co co -a o p

g > μ > rtNN £ > 0O OH OH ¢1 E > ®H

in« Tfion β s* i-iTr mm cco - - -P ^ m C-HB ---¾ oq<i)-*-*---H-P(i)mmB CQ ø - CB -Pm cnoomc B C m σι m r- m — μ > — — C B Cm

H

>1 i—i

O

N

(0

•P

C

P

ip fP o

>1 >. B

rp ip "P

ea HO 0 I Η H

>1 N N m >, >t

H C (0 (0 l Η H

3“i ·Ρ *P ·Ρ Η O 0

Ό — N —. B — B — >t — N N

•H dp «$<*> -P dP +) dP C <#> (0 rtj dP

pp- pm o m OO-Pm-ρ ·ρρ> ^ >i ·>. b · m - 0 * C B -

OiH- am -Pm H p- g p- +» -Pin lio i rr |io imimi l m i* — m — m — p" — co — -¾1 p· — co

B

m U

PS O

B B B B B U B

J

S*C0 (J\ to i-iC>lf0

QlT) IDVD VD^^o VO

147943 37 d) i ^ a) ..

wg eo (0 3 “]

(0 U H

S 4J

^ ft q. in ώ1 « . 4 ^ I ^ k ^ ^ ^ « « % h i « f « S3 S3 SS BB XX SB X E XS 33¾ 33® 33 X 33 33 nn cue nw n u cia <*i vo <*> vo co vo <-ιλ w vo ρί vo coo] mol οι oi tool (ooi 0101 oioi oioi 6 β m mm η iso <ca in o vo η» γί η σισ <n *p η· o cm r* h inri ιη<> ττν rr eo τρ cm <ή nn rH1 vo n m 01 y ^ ^ ^ · ~ jq (η οι η μ n (s to (N n N ci n pi cm ro cm t*- ro ro cm ro cm fU ............

·· XX BB BBX BB SSS SS SS SS SSS SS SSS

(jj hvo h en rinci η ro h fo w hco η n rim hhvo in ft ncin i ..........................

oioi oioi oioioi oica to ai oi ai to to to oi oi coin cm vo »p ro oo mm as h vo o cn *r q o\ m Η o oo H in r— co oq <rj oo oo ^ c- o cv moo os m v m vo cn m n co *p o ^ o . . *, ^ r Λ. ^ « (· ^ ·.·»·» K K ·»*··

00<N CO CN r-CNCM P*·* CN P-CMCJ Γ'*» CM CN OJ P^VOCM P-PO 00 CM CM

r-i H

H H H i“4 >1 Η Η H HS^I >1 O O ^

OOOOHHNN H

NNNNOOflUl O

flJflltJRlNNXX N

•HHHHBJflOO [8 Δ Δ Δ XX X 01 (0 g

4J4J+J +> ' O 0·Η·Η O

NI I I II III I

in in *r rpm m ro m τ

i i i i i i I i. I

HHHHHHHH H

>i >i»— >i >i—> >t >i—» Sjt·'-» >i— <-l ^ A A dP A Δ OP Δ Λ <#> A <#> Α Λ* >ι Η Δ

+) 4J «ρ 4J +1 ο +> +> Η -Ρ m 4J Η Μ >ι 4J

(η (Q»(i) <u ~ <υ <u *« ω ·» a) ►. 3 n d> g goo g gH g go go £ <N <W C g i i vo i i ^p i ir* i vo i m ι o i *p *p w (M nw rr rp ^ in ^ en ** cm A in fO (Ί fl m m w

N : S S S

S O O O u o S U S U SSSS s <

H

0) (h g m vo ^ oo σι o H cm co tp m <u vo vo vo vo vo r- r- r* 01

Ai w 147943 38 o ( "ε Q) ·· to g oo oo to 2 in in (3 k >H r-4 s +» qS α σι ft cn

w! CM CM

% · ^ « % « ·

93« BS BBS

n vo .H ci i-ι <-4 io to to % % H % to to to to g g to nnooOH ono 1-4 CM »S' Mvrn

Cfl ϋ *· ·» k —

SO ci cm r* m aor-cM

«Ο * « Η « I « % «

.. ss BBB BSB

OS h cn HfHso η h m S

s v » » k » k » .

tata ta to co g g to in æ h cn in o in in ovvorp vo eo n*

Ik I« to In te »« k to co cm γ*-· vo cm aor^cn

H

>1

H

0

N

<9

X

' 0 N I η*

I H

H >1 >ι Η Ό A >1 Ή M k k 0 3 >i S Ή ft -

1 I I

CM rt CM

CM .

OS

B B B

i—!>

(D

S*.

« r*· oo $ * r* **

X

H

147943 39

Eksempel 79 4"-deoxy-4"-nicotinamido-oleandomycin.

Til en opløsning af 2' -acetyl-4 "-deoxy-4 "-amino-oleandoiiy-cin (2,0 g, 2,7 ntnol) i 35 ml acetone og 15 ml vand, holdt véd 5 pH 7,9-8,0 ved tilsætning af 1 N vandig natriumhydroxidopløsning, sættes nicotinoylchlorid-hydrochlo-rid (3,12 g, 14,8 mmol) portionsvis i løbet af ca. 1 time. Reaktionsblandingen hældes derefter ud i en omrørt blanding af 300 ml ethylacetat og 300 ml vand, og pH ind-10 stilles på 9,5 med 1 N vandig natriumhydroxidopløsning.

Det organiske lag fraskilles, vaskes to gange med 300 ml-portioner vand og tørres over vandfrit natriumsulfat.

Ved fjernelse af opløsningsmidlet i vakuum opnås råt 21-acetyl-4"-deoxy-4"-nicotinamido-oleandomycin som et 15 gult skum. Ved chromatografi på silicagel (idet der først elueres med chloroform og til sidst med 9:1 chloroform/ isopropanol-blandinger på volumenbasis) opnås 530 mg rent amorft 2'-acetyl-4"-deoxy-4"-nicotinamido-oleandomycin (23,5% udbytte). Ved omrøring natten over af hele 20 produktmængden på 530 mg i 25 ml methanol ved 25°C efterfulgt af fjernelse, af opløsningsmidlet i vakuum opnås den i overskriften anførte forbindelse i kvantitativt udbytte som et farveløst skum.

rpMQ

NMR: 6CDC1 8,66 (m' 1H)' 8,05 (m' 1H)' 1,39 25 IH), 3,41 (s, 3H),3 2,64 (s, 6H).

Eksempel 80 4"-deoxy-4"-picolinamido-oleandomycin.

Til en 25°C varm opløsning af 2'-acetyl-4" -deoxy-30 4"-amino-oleandomycin (6,0 g, 8,2 mmol) og 2-picolinsyre (1,10 g, 9,0 mmol) i 75 ml methylenchlorid sættes N,N'-dicyclohexylcarbodiimid (1,80 g, 9,0 mmol). Efter omrøring i 1,5 timer ved 25°C (i løbet af hvilket tidsrum der dannes et tungt bundfald af Ν,Ν'-dicyclohexylurinstof) 35 tilsættes der yderligere 2-picolinsyre (1,1 g, 9,0 mmol) og Ν,Ν'-dicyclohexylcarbodiimid (1,8 g, 9,0 mmol) og blandingen omrøres ved 25°C i yderligere en time. Reaktionsblandingen filtreres derefter gennem diatoméjord.

147943 40

Filtratet omrøres med 100 ml vand, medens pH indstilles på 9,5 med vandigt 1 N natriumhydroxidopløsning. Det organiske lag fraskilles, vaskes med to 100 ml-portioner vand og tørres over vandfrit natriumsulfat, og opløsnings-5 midlet fjernes i vakuum til opnåelse af råt 2'-acetyl-4"-deoxy-4"-picolinamido-oleandomycin (10,5 g). Det rå produkt omrøres ved 25°C natten over i 150 ml methanol. Ved fjernelse af opløsningsmidlet i vakuum opnås det i overskriften anførte produkt i rå form. Ved chromatografi på 10 silicagel (150 g), idet der elueres med chloroform i begyndelsen og senere med chloroform/is opropanol (95:5 på volumenbasis) opnås 4,5 g 4"-deoxy-4"-picolinamido-ole-andomycin som et farveløst amorft skum (69,3%). 1,5 g af det amorfe produkt krystalliseres af ethylacetat til op-15 nåelse af krystallinsk 4"-deoxy-4"-picolinamido-oleando-mycin som ækvimolært ethylacetat-solvat, 1,2 g, smp.

140°-143°C.

NMR: 5™^ 8,13 (s, 4H),3,44 (s,3H),2,30 (s., 6H) , 2,OS (s, 3H). 3 20

Eksempel 81-85

Fremgangsmåden ifølge eksempel 79 gentages, idet man dog anvender den tilsvarende syre i stedet for 2-pi-colinsyre og det tilsvarende 4"-deoxy-4"-amino-macrolid 25 til dannelse af følgende forbindelser: 81. 2'-acetyl-4"-deoxy-4"-(2-thienyl)carboxami- do-oleandomycin som et farveløst, amorft skum i 65% udbytte.

rpMS

^cdcI (s, IH), 7,39 (s, IH), 6,99 (m, 30 IH), 3,40 (s, 3l), 2,25 (s, 6H), 2,06 (s, 3H).

82. 4"-Deoxy-4n-(2-thienyl)carboxamido-oleando- mycin.

TMS

NMBi 7,49 (m, 3H), 7,04 (m, 3H), 3,43 (s, 3H), 2,29 (s, βΐ).

147943 41 83· 4"-Deoxy-4"-(3-isoxazolyl)carboxamido- oleandomycin- NMR: 2,27 (s, 6H), 3,40 (s, 3H), AB mønster med véd 6,72# Hg ved 8,37 (J^g — IH 2# 2H).

5 Mas ae spektrum: m/e 239, 158.

84. 4n-Deoxy-4"-(3-isoxazolyl)carboxamido- erythromycin A som et næsten hvidt skum.

NMRi 8,51 (d, IH), 7,15 (d# IH), 6,85 (d, IH), 3,40 (s, 2,33 (s, 6H), 1,50 (s, 3H).

10 85· 4"-Deoxy-4"-(picolinamido)erythromycin Asom et hvidt krystallinsk fast stof; smp. 150°-J.56°C (dec.).

NMRi 7,90 (m, 4H), 3,31 (s, 3H) , 2,30 (s, 6H), 1,46 (s, 3h.

Eksempel 86 4"-deoxy-4"-phenylacetamido-oleandomycin-phosphat.

Til en opløsning af 4"-deoxy-4"-phenylacetamido-oleandomycin (6,0 g, 7,5 mmol) i ethylacetat sættes phosphorsyre (0,79 g, 6,8 mmol af 85% HgPO^) ved 0°C. Phosphatsaltet udskilles som en krystallinsk masse og udvindes ved filtrering og tørres.

NMRifi™^ 7,33 (s, 5H) , 3,66 (s, 2H) , 3,36 (s, 3H), 2,89 (s, 6H)?

Preparation A

25 11,2* -diacetyl-4"-deoxy-4"-oxo-oleandomycin.

Til 4,5 g N-chlorsuccinimid, 50 ml benzen og 150 ml toluen i en tør kolbe forsynet med magnetomrører og nitrogentilførsel og afkølet til -5°C sættes 3,36 ml di-methylsulfid. Efter omrøring ved 0°c i 20 minutter afkø-20 les indholdet til -25°C og behandles med 5,0 g ll,2'-di-v acetyl-oleandomycin i 100 ml toluen. Afkølingen og omrøringen fortsættes i 2 timer efterfulgt af tilsætning af 4,73 ml triethylamin. Man lader reaktionsblandingen omrøre.. ved 0°C i 15 minutter, og hælder den derefter ud 35 i 500 ml vand. pH-værdien indstilles på 9,5 med 1 N van-.* digt natriumhydroxidopløsning, og det organiske lag fraskilles, vaskes med vand og en saltopløsning og tørres 42 147943 over natriumsulfat. Ved fjernelse af opløsningsmidlet i vakuum opnås 4,9 g af dét ønskede produkt som et skum.

NMR (60 MHz) (ppm): 3,48 (s, 3H) , 2,61 (m, 2H), 2,23 (s, 2H) og 2,03 3(s, 6H).

5 Preparation B.

ll-acetyl-4"-deoxy-4"-oxo-oleandomycin.

En opløsning af 4,0 g ll,2,-diacetyl-4"-deoxy-4"-oxo-oleandomycin i 75 ml methanol omrøres ved stuetemperatur natten over. Reaktionsblandingen koncentreres 10 under formindsket tryk til opnåelse af produktet som et skum. En diethyletheropløsning af remanensen giver ved . behandling med hexan 2,6 g af produktet som et hvidt fast stof, smp. 1120-117°C.

NMR (60 MHz) (ppm): 3,43 (s, 3H) , 2,60 (m, 15 2H), 2,23 (s, 6H) og 2,01 3(s, 3H).

Preparation C

2,-acetyl-4"-deoxy-4"-oxo-oleandomycin.

Dimethylsulfid (0,337 ml) sættes til en uklar opløsning af 467 mg N-chlorsuccinimid i 20 ml toluen og 20 6 ml benzen afkølet til -5°C og holdes under en nitrogenatmosfære. Efter omrøring ved 0°C i 20 minutter afkøles blandingen til -25°C, og der tilsættes 1,46 g 2'-acetyl-oleandomycin og 15 ml toluen. Omrøringen fortsættes i to timer ved -20°C efterfulgt af tilsætning af 0,46 ml tri-25 ethylamin. Reaktionsblandingen holdes ved -20°C i yderligere 5 minutter, og man lader den derpå opvarme til 0°C. Blandingen hældes under anrøring ud i 50 ml vand og 50 ml ethylacetat.

Den vandige blandings pH indstilles på 9,5 ved tilsætning af vandigt natriumhydroxidopløsning. Det organiske lag 30 fraskilles derpå, tørres over natriumsulfat og koncentreres i vakuum til et hvidt skum (1,5 g). Efter triturering med diethylether opnås 864 mg råt produkt, som efter omkrystallisation to gange af methylenchlorid - diethylether giver 212 mg af det rene produkt, smp. 183°-185,5°C.

35 t 147943 43

Analyses Beregnet for C37Hgi°i3N: C 61,1, H 8,5, N 1,9%. Fundet: C 60,9, H 8,4, N 1,9%.

NMR (60 MHZ) 6™^ (ppm) : 5,60 (m, 1H) , 3,50 (s, 3H) , 2,73 (m, 2H), 2,233(s, 6H) og 2,03 (s, 3H).

5 Preparation D

4"-deoxy-4"-oxo-oleandomycin.

En opløsning af 1,0 g 2'-acetyl-4"-deoxy-4"-oxo-oleandomycin i 20 ml methanol omrøres ved stuetemperatur natten over. Opløsningen koncentreres i vakuum til op-lOnåelse af det ønskede produkt som et hvidt skum, der udgør 937 mg.

NMR (60 MHz) (PPm) : 5,60 (m, IH) , 3,50 (s, 3H), 2,85 (m, 2H) og 2,26 ?s, 6H).

Preparation E

15 ll-acetyl-4"-deoxy-4"-amino-oleandomycin

Til en suspension af 10% palladium-på-trækul (10 g) i methanol (100 ml) sættes ammoniumacetat (21,2 g), og den opnåede opslemning behandles med en opløsning af ll-acetyl-4 "-deoxy-4"-oxo-oleandomycin (20 g) i 100 ml af 20 det samme opløsningsmiddel. Suspensionen omrystes ved stuetemperatur i en hydrogenatmosfære ved et begyndelsestryk på 3,5 kg/cm3. Efter 1,5 timer frafiltreres katalysatoren, og filtratet sættes under omrøring til en blanding af vand (1200 ml) og chloroform (500 ml). pH-værdien ind-25 stilles fra 6,4 til 4,5, og det organiske lag fraskilles.

Det vandige lag behandles, efter en yderligere ekstraktion med chloroform (500 ml), med ethylacetat (500 ml), og pH-værdien indstilles på 9,5 med 1 N natriumhydroxidopløsning. Ethylacetatlaget fraskilles, og det vandige 20 lag ekstraheres igen med ethylacetat. Ethylacetatékstrakterne hældes sammen, tørres over natriumsulfat og koncentreres til et gult skum (18,6 g), som ved krystallisation af diisopropylether giver 6,85 g renset produkt, smp.

157,5°-160°C, hvilket produkt ved NMR-data og tyndtlags-35 chromatografi (TLC) påvistes at være en enkelt epimer med hensyn til C-4"-stillingen. Det anvendte TLC-system 147943 44 er CHC13:CH3OHsNH4OH (9:2:0,1) på silicagelplader. Udviklingssystemet vanillin:H3P04:C2H3OH (5 g:50 ml: 100ml) sprøjtes på TLC-pladerne og opvarmes til ca. 80-100°C. Hovedepimeren er mindre polær end den i mindre 5 mængde forekommende epimer.

NMR (δ, CDC13): 3,41 (3H)s, 2,70 (2H)m, 2,36 (6H)s og 2,10 (3H)s.

Den anden epimer, der forekommer i det rå skum i en mængde på 20-25%, opnås ved gradvis koncentrering og 10 filtrering af moderludene.

På lignende måde fremstilles 2'-acetyl-4"-deoxy-4"-amino-oleandomycin (begge C-4"-epimere) ud fra 21-acetyl -4 "-deoxy-4"-oxo-oleandomycin, idet der dog anvendes isopropanol som opløsningsmiddel.

15

Preparation P.

4"-deoxy-4"-amino-oleandomycin

En opløsning af 2'-acety1-4"-deoxy-4"-oxo-oleandomycin (20 g) i methanol (125 ml) behandles, efter omrø-ring ved stuetemperatur natten over, med ammoniumacetat (21,2 g). Den opnåede opløsning afkøles i et isbad og behandles med natriumcyanoborhydrid (1,26 g). Kølebadet fjernes derpå, og reaktionsblandingen omrøres ved stuetemperatur i 2 timer. Reaktionsblandingen hældes ud i 25 vand (600 ml) og diethylether (600 ml) og pH-værdien indstilles fra 8,3-7,5. Etherlaget fraskilles, og pH-vær-dien af det vandige lag indstilles på 8,25. De ved denne pH-værdi opnåede diethylether- og ethylacetatekstrakter sættes også til side, og pH-værdien hæves til 9,9. Di-30 ethylether- og ethylacetatekstrakterne med denne pH-værdi hældes sammen, vaskes efter hinanden med vand (lx) og en mættet saltopløsning og tørres over natriumsulfat. De sidste ekstrakter, taget ved pH 9,9, koncentreres til et skum og chromatograferes på silicags.l (160 g), idet 35 der anvendes chloroform som påfyldningsopløsningsmiddel og første elueringsmiddel. Efter 11 fraktioner, hvor der tages 12 ml pr. fraktion, ændres elueringsmidlet til 5% U79A3 45 methanol - 95% chloroform. Ved fraktion 370 ændres elu-eringsmidlet til 10% methanol - 90% chloroform, og ved fraktion 440 anvendes 15% methanol - 85% chloroform.

Fraktionerne 85-260 hældes sammen og koncentreres i va-5kuum til tørhed til tilvejebringelse af 2,44 g af det ønskede produkt.

NMR (δ, CDC13): 5,56 (, IH), 3,36 (s, 3H), 2,9 (m, 2H) og 2,26 (s, 6H).

Preparation G.

10 2,-acetyl-4,,-deoxy-4"-oxo-erythromycin A.

Til 3 ml methylenchlorid og 0,328 ml dimethylsul-foxid, afkølet til ca. -65°C og holdt under en nitrogenatmosfære, sættes 0,652 ml trifluoracetanhydrid. Efter ca. 1 minut dannes der en hvid opslemning, hvilket angi-15 ver tilstedeværelsen af trifluoracetanhydrid - dimethyl-sulfoxid-komplekset. Til den opnåede opslemning tilsættes dråbevis en opløsning af 1,0 g 2'-acetylerythromycin-A-ethylacetat, opnået ved omkrystallisation af 2'-acetyl-erythromycin A af ethylacetat, i 7 ml methylenchlorid, 20 idet temperaturen holdes ved ca. -65°C. Den opnåede blanding omrøres i 15 minutter ved ca. -60°C og afkøles derefter til -70°C. Der sættes hurtigt triethylamin (1,61 ml) til reaktionsblandingen, og kølebadet fjernes. Efter omrøring i 15 minutter sættes opløsningen til 10 ml vand, 25 og pH-værdien af den vandige fase indstilles på 10. Den organiske fase fraskilles , vaskes efter hinanden med vand (3 x 10 ml) og saltopløsning (1 x 10 ml) og tørres over natriumsulfat. Ved fjernelse af opløsningsmidlet under formindsket tryk opnås 929 mg af det rå produkt. Ved om-30 krystallisation af methylenchlorid - hexan opnås 320 mg af det rensede produkt, smp. 105-108°C.

NMR (6, CDC13): 3,28 (s, 3H), 2,21 (s, 6H) og 2,03 (s, 3H).

35 147943 46

Preparation Η.

4"-deoxy-4"-oxo-erythromycin A.

En opløsning af 4,0 g 2'-acetyl-4"-deoxy-4"-oxo-erythromycin A i 75 ml methanol omrøres ved omgivelsernes 5 temperatur i 20 timer. Opløsningsmidlet fjernes i vakuum, og det tilbageblevne hvide skum omkrystalliseres af me-thylenchlorid - hexan, 3,44 g, smp. 170,5-172,5°C.

NMR (δ, CDC13): 3,36 (s, 3H) og 2,33 (s, 6H).

Preparation I.

10 4"-deoxy-4"-amino-erythromycin A Fremgangsmåde (a).

Til en omrørt opløsning af 3,0 g 4"-deoxy-4"-oxo-ery thromyc in A i 30 ml methanol under en nitrogenatmosfære sættes 3,16 g tørt ammoniumacetat. Efter 5 minutters 15 forløb vaskes 188 ml natriumcyanoborhydrid ned ireaktionsblandingen med 5 ml methanol, og reaktionsblandingen omrøres ved stuetemperatur natten over. Den lysegule opløsning hældes ud i 300 ml vand og pH-værdien indstilles på 6,0. Den vandige blanding ekstraheres ved pH 6, T, 7,5, 20 8, 9 og 10 under anvendelse af 125 ml diethylether til hver ekstraktion. Ekstrakterne ved pH 8, 9 og 10 hældes sammen og vaskes med 125 ml friskt vand. Det vandige lag ekstraheres med ether (1 x 100 ml) ved pH 7, ethylacetat (1 x 100 ml) ved pH 7, ether ( 1 x 100 ml) ved pH 7,5, 25 ethylacetat (1 x 100 ml) ved pH 7,5, og ethylacetat (1 x 100 ml) ved pH 8, 9 og 10. Ethylacetatekstrakterne ved pH 9 og 10 hældes sammen, vaskes med en mættet saltopløsning og tørres over natriumsulfat. Ved fjernelse af opløsningsmidlet i vakuum opnås 30 mg af en epimer blan-3Q ding af det ønskede produkt som et elfenbensfarvet skum. Fremgangsmåde (b).

20 g 4"-deoxy-4"-oxo-erythromycin A, 31, 6 g ammoniumacetat og 10 g 10% palladium-på-trækul i 200 ml methanol rystes ved omgivelsernes temperatur i en hydro-35 genatmosfære ved et begyndelsestryk på 3,5 kg/cm2 natten over.

Den brugte katalysator frafiltreres, og filtratet koncentreres til tørhed i vakuum. Remanensen fordeles mellem vand - chloroform ved en pH-værdi på 5,5. Det vandige 1479A3 47 lag fraskilles, pH indstilles på 9,6, og der tilsættes chloroform. Det organiske lag fraskilles, tørres over natriumsulfat og koncentreres under formindsket tryk til tørhed. Det tilbageblevne hvide skum (19 g) tritureres 5 med 150 ml diethylether ved stuetemperatur i 30 minutter.

Det opnåede faste stof frafiltreres og tørres til opnåelse af 9,45 g af en enkelt epimer, som ikke kan skelnes fra den i preparation J fremstillede.

Diethyletherfiltratet koncentreres til tørhed til 10 opnåelse af 6,89 g produkt bestående af den anden epimer plus nogle urenheder.

Fremgangsmåde (c) 2 g 4"-deoxy-4"-oxo-erythromycin A, 3,1 g ammoniumacetat og 2,0 g Raney-nikkel i 50 ml methanol rystes 15 ved stuetemperatur i en hydrogenatmosfære ved et begyndel- 2 sestryk på 3,5 kg/om natten over. Der tilsættes yderligere 3,16 g ammoniumacetat og 2,0 g Raney-nikkel, og hydrogeneringen fortsættes i yderligere 5 timer. Det faste stof frafiltreres, og filtratet koncentreres til tørhed i va-20 kuum. Remanensen sættes under omrøring til en blanding af vand - chloroform, og pH indstilles fra 6,4· til 5,5.

Den vandige fase fraskilles, pH indstilles til 9,6 og frisk chloroform tilsættes. Chloroformekstrakten fraskil-les, tørres over natriumsulfat og koncentreres under for-25 mindsket tryk til opnåelse af 1,02 g af produktet som et gult skum. Den overvejende isomer har den modsatte konfiguration ved 4" end den i preparation J fremstillede forbindelse.

Preparation J

30 4"-deoxy-4"-amino-erythromycin A (enkelt epimer).

En opløsning af 10,0 g af den epimere blanding af 2'-acety1-4"-deoxy-4"-amino-erythromycin A i 150 ml méthanol omrøres ved stuetemperatur under nitrogen i 72 timer. Opløsningsmidlet fjernes i vakuum, og remanensen 35 opløses i en omrørt blanding af 150 ml vand og 200 ml chloroform. Det vandige lag bortkastes, og 150 ml friskt vand tilsættes. pH-værdien af det vandige lag indstilles 147943 48 på-5, og chloroformlaget fraskilles. pH-værdien af den vandige fase indstilles derefter på 5, og chloroformlaget fraskilles. pH-værdien af den vandige fase indstilles derefter på 5,5, 6, 7, 8 og 9, idet der ekstraheres efter 5hver indstilling med 100 ml frisk chloroform. Chloroform-ekstrakterne ved pH 6, 7 og 8 hældes sammen, vaskes efter hinanden med vand og tørres over natriumsulfat.

Ved fjernelse af opløsningsmidlet under formindsket tryk opnås 2,9 g af en epimer blanding af 4"-deoxy-4"-amino-10 erythromycin A. En prøvemængde på 1,9 g af blandingen tritureres med diethylether, hvorved noget af det uopløs-te skum krystalliserer. Det faste stof frafiltreres og tørres til opnåelse af 67 mg af en enkelt epimer af 4"-deoxy-4"-amino-erythromycin A, smp. 140-147°C.

15 Preparation K

11,2'-diacetyl-4"-deoxy-4"-oxo-erythromycin-A-6,9-hemi-ketal.

En opløsning af 10 g 2'-acetyl-4"-deoxy-4”-oxo-erythromycin A i 250 ml pyridin behandles med 40 ml 20 acetanhydrid, og den opnåede reaktionsblanding henstilles ved stuetemperatur i 10 dage. Størstedelen af opløsningsmidlet fjernes i vakuum, og det tilbageblevne koncentrat sættes til en blanding af 150 ml vand og 100 ml chloroform. pH-værdien af den vandige fase hæves til 9,0,og 25 chloroformen fraskilles, tørres over natriumsulfat og koncentreres til tørhed.

NMR (6, CDC13): 3,33 (s, 3H), 2,26 (s, 6H), 2,10 (s, 3H) 2,03 (s, 3H) og 1,55 (s, 3H).

Preparation L

30 ll-acetyl-4"-deoxy-4"-oxo-erythromycin-A-6,9-hemiketal.

En opløsning af 3,0 g 11,2'-diacety1-4"-deoxy-4"-oxo-erythromycin-A-6,9-hemiketal i 50 ml methanol om-røres unden en nitrogenatmosfære natten over. Opløsningsmidlet fjernes i vakuum til opnåelse af det ønskede pro-35 dukt (3,0 g) som et gult skum.

NMR (δ, CDC13); 3,35 (s’, 3H) , 2,31 (s, 6H) , 2,13 147943 49 (3H) og 1,55 (s, 3H).

Preparation Μ 11-acety1-4"-deoxy-4"-amino-erythromycin-A-6,9-hemiketal.

Til en omrørt opløsning af 4,4 g ll-acetyl-4n-5 deoxy-4"-oxo-erythromycin-A-6,9-hemiketal og 4,38 g ammoniumacetat i 75 ml methanol sættes 305 mg 85%'s natrium-cyanob.orhydrid. Efter omrøring ved stuetemperatur natten over hældes reaktionsblandingen ud i 300 ml vand, hvortil der derpå sættes 250 ml chloroform. pH-værdien af det 10 vandige lag indstilles på 9,8, og chloroformlaget fraskilles. Det vandige lag ekstraheres igen med chloroform, og chloroformekstrakterne hældes sammen, tørres over natriumsulfat og koncentreres til et hvidt skum. Det tilbageblevne skum opløses i en omrørt blanding af 125 ml 15 vand og 125 ml frisk chloroform, og pH indstilles på 4,9.

Chloroformlaget fraskilles og bortkastes, og det vandige lag indstilles på pH 5, 6, 7 og 8, idet det ekstraheres efter hver indstilling med f^isk chloroform. Ekstrakterne fra det vandige lag ved pH 6 og 7 hældes sammen, vaskes 20 med en mættet saltopløsning og tørres over natriumsulfat.

Ved fjernelse af opløsningsmidlet opnås 1,72 g af det ønskede produkt som et hvidt skum. Produktet opløses i en minimal mængde af diethylether og behandles derefter med hexan til dannelse af uklarhed. Det krystallinske 25produkt, som dannes, frafiltreres og tørres, 1,33 g, smp.

204,5-206,5°C.

NMR (6, CDC13): 3,31 (s, 2H), 3,28 (s, IH) , 2,31 (S, 6H), 2,11 (s, 3H) og 1,5 (s, 3H).

Preparation N

21-acetylerythromycin-A-6,9-hemiketal-ll,12-carbonatester.

Til en opløsning af 13,2 g erythromycin-A-6,9-hemiketal-11,12-carbonatester (U.S.patentskrift 3.417.077) i 150 ml benzen sættes 1,8 ml acetanhydrid, og reaktionsblandingen omrøres ved stuetemperatur i 1,5 timer. Op-33 løsningen hældes ud i 200 ml vand, og den vandige fase gøres basisk til pH 9,0. Benzenlaget fraskilles, tørres U7943 50 over natriumsulfat og koncentreres i vakuum til 15,3 g af et hvidt skum. Ved triturering med 50 ml diethylether krystalliserer skummet. Ved frafiltrering og tørring af produktet opnås 12,6 g rent produkt, smp. 224,5-228,5°C.

5 NMR (6, CDC13)s 3,36 (s, 3H), 2,30 (s, 6H), 2,06 (s, 3H) og 1,61 (s, 3H).

Preparation O

21-acetyl-4"-deoxy-4"-oxo-erythromycin-A-6,9-hemiketal-10 11,12-carbonatester.

Til en suspension af 6,19 g N-chlorsuccinimid i 150 ml toluen og 50 ml benzen afkølet til -5°c sættes 4,46 ml dimethylsulfid. Efter omrøring i 20 minutter afkøles den opnåede suspension til -25°C,og der tilsættes 15dråbevis 12,4 g 2,-acetylerythromycin-A-6,9-hemiketal-11,12—carbonatester, delvis opløst i 80 ml toluen. Temperaturen, der holdes mellem -19°C og -25°C under tilsætningen, holdes ved -25°C i 2 timer. Ved slutningen af dette tidsrum tilsættes på en gang 6,79 ml triethyl-20 amin. Kølebadet fjernes, og man lader temperaturen stige til -10°C. Reaktionsblandingen hældes derefter ud i vand, og den vandige fase indstilles fra 8,4 til 9,0. Det organiske lag fraskilles, tørres over natriumsulfat og koncentreres i vakuum til et hvidt skum (14,0 g). Triture-25 ringen af remanensen med diethylether bevirker, at skummet krystalliserer. Ved frafiltrering og tørring af produktet opnås 11,3 g krystallinsk stof, smp. 212-213,5°C.

NMR (δ, CDC13): 5,26 (t, IH), 3,36 (s, 3H), 2,30 (s, 6H), 2,13 (s, 3H), 1,63 (s, 3H) og 1,50 (s, 3H).

30 Preparation P

4"-deoxy-4"-oxo-erythromycin-A-6,9-hemiketal-ll,12-car-bonatester.

42,9g 2'-acetyl-4"-deoxy-4"-oxo-erythromycin-A-6,9-hemiketal-ll,12-carbonatester sættes til 800 ml me-35 thanol, og man omrører den opnåede opløsning ved stuetemperatur i 72 timer. Ved fjernelse af opløsningsmidlet 147943 51 i vakuum bliver der 41 g af produktet tilbage som et hvidt skum. Det tilbageblevne materiale opløses i ca.

100 ml acetone efterfulgt af omhyggelig tilsætning af vand til udfældningspunktet. Det dannede krystallinske 5 stof omrøres i 40 minutter, hvorefter det frafxltreres og tørres til opnåelse af 34,2 g af det ønskede produkt, smp. 186,5-188°C.

NMR (6, CDCl3): 5,66 (t, IH), 3,35 (s, 3H), 2,35 (s, 6H), 1,65 (s, 3H) og 1,51 (s, 3H).

10 Preparation Q

4"-deoxy-4"-amino-erythromycin-A-6,9-hemiketal-11,12-carbonatester.

Til 189 g 4"-deoxy-4"-oxo-erythromycin-A-6,9-hemiketal-ll,12-carbonatester i 1200 ml methanol ved 15 stuetemperatur sættes under omrøring 193 g ammoniumacetat.

Efter 5 minutter afkøles den opnåede opløsning til ca.

-5°C og behandles derpå med 13,4 g 85% natriumcyanobor-hydrid i 200 ml methanol over et tiIsætningstidsrum på 45 minutter. Kølebadet fjernes, og reaktionsblandingen 20 omrøres ved stuetemperatur natten over. Reaktionsblandingens rumfang formindskes til 800 ml i vakuum og sættes til en omrørt blanding af 1800 ml vand og 900 ml chloroform. pH-værdien indstilles fra 6,2 til 4,3 med 6 N saltsyre, og chloroformlaget fraskilles. Chloroformlaget hæl-25 des sammen med 1 1. vand, og pH-værdien indstilles på 9.5. Den organiske fase fraskilles, tørres over natriumsulfat og koncentreres under formindsket tryk til opnåelse af 174 g af et hvidt skum. Det tilbageblevne materiale opløses i en blanding af 1 1. vand og 500 ml ethylacetat, 30 og pH indstilles på 5,5. Ethylacetatlaget fraskilles, og det vandige lag indstilles efter hinanden på pH 5,7 og

9.5, idet man efter hver pH-indstilling ekstraherer med 500 ml frisk ethylacetat. Ethylacetatekstrakten ved pH

9,5 tørres over natriumsulfat og koncentreres i vakuum 35 til tørhed til opnåelse af 130 g. 120 g af det tilbageblevne skum opløses i en blanding af 1 1. vand og 1 1. methylenchlorid. pH-værdien af det vandige lag indstil- 147943 52 les efter hinanden på 4,4, 4,9 og 9,4, idet man efter hver indstilling ekstraherer med 1 1. frisk methylen-chlorid. Methylenchloridekstrakten ved pH 9,4 tørres over natriumsulfat og koncentreres under formindsket 2 tryk til opnåelse af 32 g af produktet som et hvidt skum.

Ved krystallisation af 250 ml acetone - vand (1:1, v.ol: viol) opnås 28,5 g af de krystallinske epimerer.

NMR 100 Mz (δ, CDC13): 5,20 (lH)m, 3,37 (l,5H)s, 3,34 (1,5H)s, 2,36 (6H)s, 1,66 (3H)s og 1,41 (3H)s.

g Preparation R

Adskillelse af epimerene af 4"-deoxy-4,,-amino-erythro-mycin-A-6,9-hemiketal-ll,12-carbonatester.

Til en højtryksvæskechromatografikolonne (3 x 9 cm) pakket med Gf 254 silicagel imprægneret med forne mamid og elueret med chloroform, tilføres 200 mg. Der A 2 3 anvendes et tryk på 17 kg/cm med en hastighed på 4,76 cm pr. minut, og der anvendes en fraktionsstørrelse på 10 ml. Fraktionerne 14 til og med 21 og 24 til og med 36 opsamles.

20 Fraktionerne 14 til og med 21 hældes sammen og koncentreres til ca. 50 ml. Der tilsættes vand (50 ml), og pH-værdien indstilles på 9,0. Chloroformlaget adskilles, tørres over natriumsulfat og koncentreres til opnåelse af 106 mg af et hvidt skum. Triturering med diethyl-25 ether bevirker, at skummet krystalliserer. Efter omrøring ved stuetemperatur i 1 time frafiltreres det krystallinske produkt og tørres, 31,7 mg, smp. 194-196°C.

NMR 100 Mz (δ, CDC13): 5,24 (lH)d, 5,00 (IH)t, 3,40 (3H)s, 2,40 (6H)s, 1,66 (3H)s og 1,40 (3H)s.

30 Fraktionerne 24 til og med 36 hældes sammen og oparbejdes som ovenfor til opnåelse af 47,1 mg produkt som et hvidt skum, hvilket produkt er identisk med det materiale, der opnås fra den epimere blanding i Preparation Q ved omkrystallisation af varmt acetone - vand 35 (1 g Ρ^. 25 ml vand, 20 ml acetone). NMR-data angiver, at det er en enkelt epimer.

NMR 100 Mz (δ, CDClj): 5,12 (lH)d, 3,30 (3H)s, 2,30 (6H)s, 1,62 (3H)s, 1,36 (3H)s.

147943 53

Preparation S

Epimer 2'-acety1-4"-deoxy-4"-amino-erythromycin-A-ll,12-carbonates ter og dens 6,9-hemiketal.

Til en suspension af 11,1 g 2'-acetyl-4"-deoxy-5 4"-oxo-erythromycin-A-6,9-hemiketal-ll,12-carbonatester i 300 ml isopropanol ved stuetemperatur sættes under omrøring 10,7 g ammoniumacetat. Efter 5 minutter tilsættes der 747 mg natriumcyanoborhydrid i 130 ml isopropanol over et tidsrum på 30 minutter, og den opnåede reaktions-10 blanding omrøres ved stuetemperatur natten over. Den lysegule opløsning hældes ud i 1100 ml vand, hvortil der derpå sættes 400 ml diethylether. pH indstilles på 4,5, og etherlaget fraskilles. Det vandige lag gøres basisk til pH 9,5 og ekstraheres med chloroform (2 x 500 ml). Chlo-15 roformekstrakterne hældes sammen, tørres over natriumsulfat og koncentreres til opnåelse af 7,5 g af et gult skum. Ved omkrystallisation af det tilbageblevne materiale af diethylether opnås 1,69 g, som bevares sammen med moderludene.

20 Moderluden behandles med 75 ml vand, og pH ind stilles på 5,0. Etherlaget erstattes med 75 ml frisk ether, og pH indstilles på 5,4. Etheren erstattes med ethylacetat, og pH hæves til 10. Det basisk gjorte vandige lag ekstraheres med ethylacetat (2 x 75 ml) og den 25 første ethylacetatekstrakt tørres over natriumsulfat og koncentreres til tørhed. Det tilbageblevne skum (1,96 g) sættes til en blanding af 75 ml vand og 50 ml diethylether, og pH indstilles på 5,05. Etheren fraskilles, og de vandige lag indstilles efter hinanden på pH 5,4, 6,0 30 7,05 og 8,0, idet det ekstraheres efter hver pH-indstil- ling med 50 ml frisk diethylether. pH-værdien indstilles tilsidst på 9,7 og det vandige lag ekstraheres med 50 ml ethylacetat. Etherekstrakten ved pH 6,0 hældes sammen med 75 ml vand, og pH indstilles på 9,7. Etherlaget fraskil-35 les, tørres og koncentreres i vakuum til opnåelse af 460 mg af et hvidt skum.

HMR 100 Mz (δ, CDC13): 5,20 (lH)t, 3,43 (2H)s, 3,40 (IH) s, 2,38 (6H)s, 2,16 (3H)s, 1,70 (3H)s og 1,54 (3H).

147943 54 NMR-dataene angiver, at produktet er epimerene af 2'-acetyl-4"-deoxy-4"-amino-erythromycin-A-6,9-hemi-ketal-11,12-carbonatester.

De ovenfor angivne 1,69 g opløses i en blanding 5 af 75 ml vand og 75 ml diethylether, og pH indstilles på 4,7. Etheren fraskilles, og det vandige lag ekstraheres yderligere med frisk ether (75 ml) ved pH 5,05 og 5,4 og med ethylacetat (2 x 75 ml) ved pH 9,7. De samlede ethyl-acetatekstrakter tørres over natriumsulfat og koncentre-res under formindsket tryk til opnåelse af 1,26 g af et hvidt skum. Ved krystallisation af dette materiale opnås 411 mg produkt, smp. 193-196°C (dec.). Moderluden koncentreres til tørhed, og remanensen opløses i varmt ethylacetat. Man lader opløsningen henstå natten over 15 ved stuetemperatur. Det krystallinske stof, som fælder ud, frafiltreres og tørres, .182 mg, smp. 198-202°C (deci til opnåelse af yderligere produkt.

NMR 100 MZ (δ, CDC13): 5,10 (lH)t, 3,34 (2H)s, 3,30 (IH)s, 2,30 (6H)s, 2,08 (3H)s, 1,62 (3H)s og 20 1,48 (3H) s.

NMR-dataene angiver, at produktet er epimerene af 2'-acetyl-4"-deoxy-4"-amino-erythromycin-A-11,12-carbonatester.

Preparation T.

25 Generel fremgangsmåde. α-alkoxyphenyleddikesyre.

Den tilsvarende benzen med formlen XYCgH^, hvori X og Y har de ovenfor anførte betydninger, sættes til vandfrit chloral i et molært forhold på 4,24:1,00, og 30 blandingen omrøres og afkøles til 0°C. Der sættes portionsvis aluminiumchlorid (0,33 mol) til blandingen under kraftig omrøring, idet temperaturen holdes ved 0-5°C.

Når tilsætningen af aluminiumchloridet er endt, lader man reaktionsblandingens temperatur stige til 15-18°C.

35 Blandingen omrøres i 1 time og afkøles derefter til 0-2°C. Den amrøres ved denne temperatur i yderligere 60 timer, og hældes derefter ud i et ligeså stort rumfang 147943 55 isvand. Phenyl-trichlormethyl-carbinolderivatet ekstra-heres med n-butylacetat eller n-butanol (2 x 250 ml).

Den samlede ekstrakt vaskes med vand (3 x 100 ml) og tørres derpå over natriumsulfat. Ved fjernelse af op-5 løsningsmidlet opnås carbinolen, der om ønskes renses ved vakuumdestillation.

Carbinolen opløses i den alkohol, der svarer til den ønskede alkoxygruppe, og sættes derefter dråbevis til en tilbagesvalende opløsning af den samme alkohol inde-10 holdende mindst 3 ækvivalenter KOH (beregnet på carbinolen) . Reaktionsblandingen tilbagesvales i 3 timer efter endt tilsætning og inddampes derefter til tør .hed. Remanensen tages op i vand, pH-værdien indstilles på 3,5, og den vandige blanding ekstraheres med et passende opløs-I5 ningsmiddel (n-butylacetat, ether, methylenchlorid).

Ekstrakten vaskes med saltopløsning efterfulgt af vand og tørres derpå (Na2SO^) og inddampes til tørhed til opnåelse af produktet.

Claims (5)

147943

1. Analogifremgangsmåde til fremstilling af 4"-deoxy-4"-acylamidoderivater af oleandomycin-forbindelser, erythromycin-forbindelser eller erythromycin-6,9-hemike-tal-forbindelser, hvilke derivater har formlen A 5 0 R ----NH-C-Z A hvori R betegner 10 _0 2 I J 1 °VX B “'""ri H,C Y |CH, li 1 Ri0 y '"'rU 3 A-l Hj^l fCCH3 „ ysyv 0 1^71/ 20 och3

25 H3c n(ch3,2 *-vS

30 E °'Y »TV 3 r3J I . a_2 CH0 . 3_ ,-v\'v I 3 C2H5 ‘ Q. Jk % jCH, \/ V/ 3. ch3 ^och3 147943 n(ch3)2 9¾ 2 1 aoi. R 4_3 > °\1? 3 a-3 eller R 0'«γ^ ^'T' H3^^« ^ CH? ,.χ · fx 3 10 c2H5 Q^JL. cV,,,/° V°H3 a3c^ocH3 hvori hver af R"*" og R2 betegner hydrogen eller alkanoyl 3 med fra 2 til 3 carbonatomer, R betegner hydrogen eller 4 hydroxy, R betegner alkanoyl med fra 2 til 3 carbonato- 4 3 0 ner, eller R 0 og R taget sammen er m

0 -O-C-O- , eller on 1 3 II R 0 og R taget sammen er -0-C-0-, Z betegner (a) (CH^-CCC^ (b) -ch(r5)-/5TX 25 (c) -@c eller (d) (CH2)m~heterocycly1, hvor 30 m er 0 eller 1, R^ er hydrogen, chlor, hydroxy, methyl, amino eller al-koxy med fra 1 til 4 carbonatomer, X er hydrogen, hydroxy,chlor, brom, fluor, alkyl med fra 1 til 4 carbonatomer eller alkoxy med fra 1 til 4 carbonatomer, 35. har samme betydning som X eller er trifluormethyl eller carbalkoxy med fra 2 til 5 carbonatomer, og heterocyclyl er thienyl, pyridyl, pyrazinyl, furyl, imi-dazolyl, thiazolyl, isothiazolyl, oxazolyl, isoxazolyl,