FI68058C - Foerfarande foer framstaellning av 4''-deoxi-4''-acylamidoderivat av oleandomycin erytromycin och erytromycinkarbonat anvaendbara som antibiotika - Google Patents

Description

Π^ΞΤ| ΓΒ1 «11 KUULUTUSjULKAISU . nc-o ®Tj l" (11) UTLÄGGNINGSSKRIFT 6oU5o * (45> 1 (51) Kv.lk.*/lnt.CI.4 C 07 H 17/08 SUOMI —FINLAND (21) Pttenttihskemus — Patenttnsöknlng 79000*1

(22) Hakemispäivä — Ansökningsdag η 2 n 1 7Q

iFh 3 ' * (23) Alkupäivä — Giltighetsdag 02 01 79 (41) Tullut julkiseksi — Blivit offentlig

Patentti- ja rekisterihallitus Nähtäväksipä™ ja kuul.julkalsun pvm. - ’ ’

Patent- och registerstyrelsen ' ' Ansökan utiagd och utl.skriften publicerad zy . UJ.op (32)(33)(31) Pyydetty etuoikeus — Begärd prioritet 03.01.78 29.08.78 USA(US) 866722, 937640 (71) Pfizer Inc., 235 East *i2nd Street, New York, New York, USA(US) (72) Frank Christian Sciavolino, East Lyme, Connecticut, USA(US) (74) Oy Kolster Ab (54) Menetelmä antibiootteina käytettävien oleandomysiin in , erytromysiinin ja erytromysi inikarbonaatin V'-deoksi-V'-asyyliamidojohdannaiSten valmistamiseksi - Förfarande för framstäl 1 ning av V-deoxi-V-acy 1 -amidoderivat av oleandomycin, erytromycin och erytromycinkarbonat användbara som antibiotika

Keksinnön kohteena on menetelmä kaavan A mukaisten puolisynteettisten H"-asyyliamido-makrolidiantibioottien tai niiden farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen valmistamiseksi, 0

II

R NH-C-Z A

jossa R on 2 68058 R„ N(CH-). r 0 O0 \ i 3 2 H3C l NW2 H3CCr^l'(:H3 f· I °γ-\ ’""A\

R1°"T S0"^®3 ROf-T JALA

1 Rl im .......f ho^-o^o^ch “O, 2fv°y®3 R3— k Λ«3 «3 RAMX il·· h3ch"'"1 fr°r o r C25 “yAA* 0CH3 0 CH3”V0CH3 A-l A-2 tai ch3 n(ch3)2

RA

V "f V0 “3 3H3C "vVi f 0 So γ CH3 H3C 0CH3 joissa R-^ ja R2 merkitsevät vetyatomia tai alkanoyyliryhmää, joka sisältää 2-3 hiiliatomia; R3 on vetyatomi tai hydroksiryhmä; R^ on 2-3 hiiliatomia sisältävä alkanoyyliryhmä; R^O ja R3 yhdessä muodostavat ryhmän 0 il -0-C-0; 0 R-^0 ja R3 yhdessä muodostavat ryhmän -0-C-0; Z on (a) (CH0) -C(CH,)0, 2 m 3 3 (b) -CH(R5) -<@)

Yt - -@k, 3 68058 (d) (CH2)m~heterosyklyyli; m on O tai 1; R5 on vety- tai klooriatomi, hydroksi-, metyyli-, amino-tai 1-4 hiiliatomia sisältävä alkoksiryhmä; Y' on vety-, kloori-, bromi- tai fluoriatomi, 1-4 hiiliatomia sisältävä alkyyliryhmä tai 1-4 hiiliatomia sisältävä alkoksiryhmä, tai trifluorimetyyli- tai 2-5 hiiliatomia sisältävä karbalk-oksiryhmä; sillä edellytyksellä, että kun on muu kuin vety, Y' on vety; heterosyklyyli on tienyyli, pyridyyli, pyratsiniyyli , furyyli, imidatsolyyli, tiatsolyyli , isotiatsolyyli, oksatso-lyyli, isoksatsolyyli, pyrrolyyli, tiadiatsolyyli, tai mainittujen heterosyklyylien monometyylijohdannainen.

Kaavassa A aaltoviiva kuvaa molempia epimeerisiä muotoja.

Oleandomysiini ja erytromysiini ovat makrolidiantibioot-teja, jotka valmistetaan käymismenetelmillä ja jotka on kuvattu US-patenteissä 2 757 123 ja 2 653 899. Lukuisia oleandomysiinin ja erytromysiinien A ja B johdannaisia on valmistettu yritettäessä modifioida niiden biologisia ja/tai farmakodynaamisia ominaisuuksia.

Oleandomysiinin johdannaisten muodostaminen on kohdistettu pääasiallisesti esteriryhmien muodostukseen yhdessä tai useammissa 2'-, 4"- ja 11-asemissa sijaitsevista hydroksiryhmistä. Mono-, di- ja triasyylijohdannaiset, joiden asyyliryhmä on johdettu 2-6 hiiliatomia sisältävistä alemmista alifaattisista hiilivetymono-karboksyylihapoista, on kuvattu US-patentissa 3 022 219. Oleandomysiinin aminohydriinijohdannaisia on esitetty julkaisussa Kastons, et. ai., Khim. Geterosikl. Soedin (2) 168-71 (1974); C.A. 80, 145986η (1974). Yhdisteet, joille ei ole ilmoitettu mitään käyttötarkoitusta, on valmistettu käsittelemällä oleandomysiiniä dialk-yyliamiinilla tai heterosyklisellä amiinilla suljetussa putkessa 20 tunnin ajan 30°C:ssa. Epoksidiryhmä 8-asemassa on reaktiokohta.

Erytromysiinin erilaisia monoestereitä ja syklisiä anhydri-dejä on lueteltu julkaisuissa Antibiotics Annual, 1953-1954, Proc. Symposium Antiobiotics (Washington, D.C.), sivut 500-513 ja 514-521. US-patentti 3 417 077 kuvaa erytromysiini A:n syklisen kar- 4 68058 bonaattiesterin, erytromysiini A:n ja etyleenikarbonaatin reaktiotuotteen, aktiiviseksi antibakteeriseksi aineeksi. US-patentti 3 884 903 kuvaa H"-deoksi-V-okso-erytromysiini A ja 3 johdannaiset käyttökelpoisiksi antibiooteiksi.

Erytromysiini A:n 9-aminojohdannaista, tunnettu erytro-mysyyliamiinina, on tutkittu laajasti ja siitä muodostettu johdannaisia. Erytromysyyliamiinin sulfonamidijohdannaisia on kuvattu US-patentissa 3 983 103 antibakteerisina aineina. Erytromysyyliamiinin N-alkyylijohdannaiSten on julkaisussa Ryden, et. ai., J. Med. Chem., 16. 1059 (1973) ilmoitettu olevan in vitro ja in vivo antibakteerisesti aktiivisia.

Nyt on havaittu, että tietyt oleandomysiinin, erytromysii-nien A ja B, erytromysiinikarbonaatin ja erytromysyyliamiinin H"-deoksi-4"-aminojohdannaisten asyylijohdannaiset ovat antibak-teerisesti erittäin aktiivisia in vitro sekä in vivo parenteraa-lisesti ja oraalisesti annettaessa, erikoisesti Gram-positiivisia mikro-organismeja vastaan. Monilla tässä kuvatuissa yhdisteistä on myös tehoa Gram-negatiivisiin mikro-organismeihin.

Kaavojen A-l, A-2 ja A-3 mukaiset yhdisteet, joihin kuuluvat niiden epimeeriset muodot ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat, ovat tehokkaita antibakteerisia aineita Gram-positiivisia mikro-organismeja vastaan, esim. Staphylococcus aureus ja Streptococcus pyogenes, in vitro ja monet ovat aktiivisia in vivo annettaessa parenteraalisesti ja oraalisesti. Monet yhdisteistä (ja niiden suoloista) ovat myös aktiivisia tiettyjä Gram-nega-tiivisia mikro-organismeja (kuten kokit, esim. Pasteurella multo-cida ja Nesseria sicca) vastaan.

Edullisia tämän keksinnön mukaisia yhdisteitä suhteellisesti suuremman aktiivisuutensa ja tehonsa vuoksi ovat seuraavat: tl 5 68058

Kaava R2 R3 OR^ Z

A-l H H tai COCH0 H — (a) -(CH0) -C(CH„)0; 3 2 m 3 3 ’ m = 0, 1; A-2 H H tai C0CH3 H — (b) CH(R5) ~(CV> -0-C(0)-0- -- '—^ Y.

(R,0+R„) jossa Rr=H, 1 Cl, tai 0CH3 A-3 H H tai C0CH3 -0-C(0)-0- (c) —(θ5 (r4o+r3) '-^γ.

Erikoisen edullisia näistä yhdisteistä ovat ne, joissa Z on -C(CH3>3, -«2-~(^f ’ jossa Y on vetyatomi, klooriatomi tai fluoriatomi; 2-pyratsinyyli-, 3-metyyli-5-tiatsolyyli-, 4-metyyli-5-oksatsolyyli- ja isoksatso-lyyliryhmä.

Erikoisen edullisia ovat lisäksi yhdisteet, joissa Z on joku yllä mainituista heterosyklyyliryhmistä ja R^ on vetyatomi.

Ylläolevien kaavojen A-l, A-2 tai A-3 mukaiset yhdisteet valmistetaan asyloimalla vastaava 4"-aminojohdannainen sopivalla asylointiaineella. Asylointireaktio suoritetaan saattamalla sopiva 4"-aminojohdannainen reaktiolle inertissä liuottimessa reagoimaan sopivan asylointiaineen reaktiivisen johdannaisen kanssa. Tyypillisiä asylointlaineiden reaktiivisia johdannaisia ovat happoklo-ridit, anhydridit (yksinkertaiset tai seka-anhydridit), happoatsi-di, aktiivinen esteri tai tioesteri, joka on muodostettu esim. N-hydroksftaali-imidin, N-hydroksimeripihkahappoimidin, fenolin tai tiofenolin kanssa, ja "kondensoitumistuote", joka on muodostettu "kondensointiaineen" kuten karbodi-imidin, alkoksiasetylee-nin, Ν,Ν’-karbonyylidi-imidatsolin, N,N'-karbonyylitriatsolin ja heksahalogeenisyklotrifosfatsiinien kanssa.

6 68058 Tämän keksinnön mukainen edullinen asylointimenettely käsittää kaavojen A-l, A-2 tai A-3 mukaisten yhdisteiden sopivan 4"-aminoprekursorin reaktion sopivan asylointlaineen happokloridin tai bromidin) kanssa happoakseptorin läsnäollessa. Sopivia happo-akseptoreita ovat tertiääriset amiinit, kuten 1-4 hiiliatomia alkyyliryhmää kohti sisältävät trialkyyliamiinit, N-metyyliani-liidi, pyridiini, N-etyylipiperidiini ja N-metyylimorfoliini. Käytettäessä vesisysteemiä liuottimena voidaan epäorgaanista emästä kuten alkalimetallihydroksidia käyttää happoakseptorina. Asy-lointi voidaan suorittaa vesipitoisessa tai vedettömässä liuotin-systeemissä. Vesipitoisissa systeemeissä reaktio suoritetaan tavallisesti pH:ssa välillä noin 6 - noin 9 ja lämpötilassa välillä noin 0°C - noin 50°C. Se voidaan myös suorittaa epästabiileissa veden ja veteen sekoittumattomien orgaanisten liuottimen kuten metyyli-isobutyyliketonin ja alempien alkyyliasetaattien emulsioissa pH-alueella noin 2 - noin 4. Vedettömissä systeemeissä reaktio suoritetaan välillä noin 0°C - noin 50°C liuottimeen liukenevan happoakseptorin, kuten tertiäärisen amiinin,läsnäollessa .

Edelleen edullinen on sopivan 4"-aminoyhdisteen reaktio sopivan asyloivan aineen happomuodon kanssa karbodi-imidin läsnäollessa. Tätä menetelmää pidetään usein edullisena mukavuussyistä, lisäksi reaktion lähtöaineet ovat helposti saatavissa, ja tuotteen saanto on hyvä. Käytettäessä karbodi-imidiä konden-soivana aineena voidaan käyttää vesipitoisia tai vedettömiä liuo-tinsysteemejä. Käytettäessä vesisysteemiä pH säädetään edullisesti alueelle noin 6 - noin 7. Tyypillisessä menetelmässä reagoiva happo ja karbodi-imidi sekoitetaan ekvimolaarisissa suhteissa sopivassa liuottimessa (tetrahydrofuraani, dioksaani), ja veden ja veteen sekoittuvan orgaanisen liuottimen liuos (vettä ja diok-saania ja tetrahydrofuraania), joka sisältää reagoivan aminomak-rolidin, lisätään huoneen lämpötilassa. Seosta sekoitetaan useita tunteja, kunnes reaktio on täydellisesti tapahtunut. Yleensä käytetään lämpötiloja välillä noin -5°C - 30°C. Useimmissa tapauksissa käytetään kondensoivaa ainetta enintään 10 % ylimäärin. Asyloitu tuote otetaan talteen alalla tunnettuja menetelmiä käyttäen.

il 7 68058 Tämän keksinnön mukaisten yhdisteiden happoadditiosuolat valmistetaan helposti käsittelemällä kaavojen A-l, A-2 tai A-3 mukaisia yhdisteitä vähintään ekvimolaarisellä määrällä sopivaa happoa reaktiolle inertissä liuottimessa. Kun läsnä on usempia kuin yksi emäksinen ryhmä kaavojen A-l, A-2 ja A-3 mukaisissa yhdisteissä, hapon lisääminen riittävässä määrin tyydyttämään jokaisen emäksisen ryhmän saa aikaan polyhappoadditiosuolojen muodostuksen. Happoadditiosuolat oteen talteen suodattamalla, mikäli ne ovat liukenemattomia reaktiolle inerttiin liuottimeen, saostamalla happoadditiosuolaa liuottamatonta liuotinta lisäten tai haihduttamalla liuotin. Esimerkkejä tällaisista suoloista ovat hydroklo-ridi, hydrobromidi, fosfaatti, sulfaatti, formiaatti, asetaatti, propionaatti, butyraatti, sitraatti, glykolaatti, laktaatti, tartraatti, malaatti, maleaatti, fumaraatti, glukonaatti, stea-raatti, mandelaatti, pamoaatti, bentsoaatti, sukkinaatti, laktaatti, p-tolueenisulfonaatti ja aspartaatti.

Lähtöaineet 11-monoalkanoyyli-, 2'-monoalkanoyyli- ja 11,2'-dialkanoyyli-4"-deoksi-4"-amino-oleandomysiini valmistetaan vastaavien 11-monoalkanoyyli-, 2'-monoalkanoyyli- ja 11,2'-dialkanoyyli-4"-deoksi-4"-okso-oleandomysiinien pelkistävällä aminoinnilla käyttäen palladiumia hiilellä, vetyä (paineessa noin 6,9 kPa - 3449 kPa) ja ammoniumasetaattia sopivassa liuottimessa, kuten metanoli ja isopropanoli, noin 20 - 50°C:ssa. Vaihtoehtoisesti voidaan käyttää natriumboorihydridiä pelkistävänä aineena palladiumin hiilellä ja vedyn asemesta. De-este-röidyt johdannaiset valmistetaan mukavasti vastaavien 2'-monoalkanoyyli- 4"-deoksi-4"-amino-oleandomysiinien solvolyysillä.

Välttämättömät 4"-deoksi-4"-okso-oleandomysiiniesterit valmistetaan hapettamalla selektiivisesti 4"-hydroksiryhmä käyttäen N-kloorimeripihkahappoimidiä ja dimetyylisulfidia, jota seuraa tertiäärisen amiinin, kuten trietyyliamiinin, lisäys. N-kloorimeripihkahappoimidi ja dimetyylisulfidi yhdistetään reaktiolle inertissä liuottimessa noin 0°C:ssa. 10-20 minuutin kuluttua saadun seoksen lämpötila säädetään välille noin 0°C -noin 25°C ja sopiva oleandomysiiniesteri lisätään. Reaktioseosta sekoitetaan noin 2 - noin 4 tunnin ajan, jonka jälkeen tertiääri-nen amiini lisätään ja jäähdytysjauhe poistetaan. Reaktion kiih 8 68058 dyttämiseksi on edullista käyttää 1-20 kertaista ylimäärää reagoivia aineita N-kloorimeripihkahappoimidiä ja dimetyylisulfidia. Tertiääristä amiinia käytetään ekvimolaarisessa määrin käytettyyn N-kloorimeripihkahappoimidiin nähden. Sopivia reaktiolle inert-tejä liuottimia varten ovat tolueeni, bentseeni, etyyliasetaatti, kloroformi, metyleenikloridi ja tetrahydrofuraani. Vaihtoehtoisesti käytetään dimetyylisulfoksidi-etikkahappoanhydridiä tai dimetyylisulf oksidi-trifluorietikkahappoanhydridiä hapettimina.

Halutut 4"-deoksi-4"-amino-oleandomysiinijohdannaiset eristetään käyttämällä hyödyksi niiden emäksistä luonnetta. Raa’an aminojohdannaisen vesiliuos uutetaan jatkuvasti kasvavalla pH-alueella, niin että neutraalit ja ei-emäksiset aineet tulevat uutetuiksi alemmassa pH:ssa ja tuote pH:ssa noin 10. Uuttavat liuottimet, etyyliasetaatti ja dietyylieetteri, pestään takaisin suolavedellä ja vedellä, kuivataan natriumsulfaatilla ja haihdutetaan tuotteen valmistamiseksi.

Tarpeelliset 4"-deoksi-4"-amino-erytromysiini A ja B ja 4"-deoksi-4"-amino-erytromysiini A 11,12-karbonaatti ja 6,9-hemi-ketaali voidaan myös valmistaa yllä kuvatuilla reaktioilla. Vaihtoehtoisesti 4"-deoksi-4"-amino-erytromysiinit A ja B, 4"-deoksi-4"-amino-erytromysiini A 11,12-karbonaatti 6,9-hemiketaali valmistetaan hapettamalla vastaava 4"-hydroksijohdannainen yhdellä moolilla dimetyylisulfoksidia ja trifluorietikkahappoanhydridiä kutakin reaktioinertissä liuottimessa noin -30°C - noin -65°C:ssa, jota seuraa reaktioseoksen käsittely noin yhdellä moolilla trietyyliamiinia. Metyleenikloridi on sopiva reaktio-inertti liuotin tähän hapetukseen. Esimerkkimenetelmiä tarpeellisten lähtöaineiden valmistamiseksi on annettu alla.

Esillä olevan keksinnön mukaisiin antibakteerisiin aineisiin johtavien lähtöaineitten stereokemia on luonnon aineen kaltainen. Oleandomysiinin, erytromysiinien A ja B, erytsomysiini A 11,12-karbonaatti 6,9-hemiketaaliesterin 4"-hydroksiryhmien hapetus ketoniksi ja seuraava mainitun ketonin muuttaminen 4"-amii-neiksi antaa mahdollisuuden 4"-substituentin stereokemian muuttamiseksi verrattuna luonnon tuotteeseen. Samoin, kun 4"-okso-lähtöaineet muutetaan amiineiksi, on mahdollista, että muodostuu epimeerisiä amiineja. Käytännössä on huomattu, että molempia 9 68058 epimeerisiä amiineja on läsnä lopputuotteessa vaihtelevissa suhteissa riippuen synteettisen menetelmän valinnasta. Jos eristetty tuote muodostuu pääasiassa yhdestä epimeeristä, mainittu epimeeri voidaan puhdistaa sellaisilla menetelmillä kuin toistuva kiteytys sopivasta liuottimesta vakiosulamispisteeseen saakka. Toinen epimeeri, se jota alkuperäisessä eristetyssä aineessa on pienempi määrä, on emäliuoksen vallitseva tuote. Se voidaan ottaa siitä talteen menetelmillä, jotka ovat alan asiantuntijalle tuttuja, esimerkiksi haihduttamalla emäliuos ja toistuvasti kiteyttämällä uudelleen jäännös vakiosulamispisteiseksi tuotteeksi tai kroma-tografisesti. Vaikka epimeeristen amiinien seos voidaan erottaa alan asiantuntijoitten tuntemilla menetelmillä, käytännön syistä on toistuvasti edullista käyttää mainittua seosta sellaisenaan reaktioseoksesta eristettynä. <+"-amino-lähtöaineiden epimeerisen seoksen käyttö tuottaa tietenkin asyloitujen tuotteitten epimeerisen seoksen. Näin saatu epimeerinen seos voidaan eristää alan asiantuntijoiden tuntemilla menetelmillä. Kuitenkin molemmat annetun yhdisteen epimeerit ovat samantyyppisesti aktiivisia ja niiden erottaminen, vaikkakin toivottu, ei ole aina välttämätön.

Oheisten kaavojen A-l, A-2 ja A-3 mukaisilla yhdisteillä on in vitro aktiivisuus useita Gram-positiivisia mikro-organismeja vastaan ja tiettyjä Gram-negatiivisia mikro-organismeja vastaan, kuten niitä, jotka muodoltaan ovat palloja tai ellipsejä (cocci). Niiden aktiivisuus näkyy helposti in vitro-kokeissa erilaisia mikro-organismeja vastaan aivot-sydän-infuusiovälineessa tavallista kaksinkertaista sarjalaimennustekniikkaa käyttäen. Niiden in vitro aktiivisuus tekee ne käyttökelpoisiksi paikallisessa käytössä voiteiden ja vastaavien muodossa, sterilointitar-koituksissa, esim. sairaalavälineet; ja teollisina antimikrobisina aineina, esimerkiksi veden käsittelyssä, liman torjunnassa, maalin ja puun suoja-aineena.

In vitro käytössä, esim. paikallisesti käytettäessä on usein käytännöllistä yhdistää valittu tuote farmaseuttisesti hyväksyttävään kantaja-aineeseen kuten kasvis- tai mineraaliöljyyn tai pehmittävään voiteeseen. Samalla lailla ne voidaan liuottaa tai dispergoida nestemäisiin kantaja-aineisiin tai liuottimiin, 10 68058 kuten vesi, alkoholi, glykolit tai niiden seokset tai muut farmaseuttisesti hyväksyttävät inertit välineet; so. väliaineet, joilla ei ole haitallista vaikutusta aktiiviseen aineosaan. Tällaisissa tarkoituksissa on yleensä hyväksyttävää käyttää aktiivisia aineosia väliltä noin 0,01 - noin 10 paino-% laskettuna kokcnais-seoksen painosta.

Lisäksi monet tämän keksinnön mukaiset yhdisteet ovat aktiivisia Gram-positiivisia ja tiettyjä Gram-negatiivisia mikro-organismeja vastaan in vivo suun kautta ja/tai parenteraalisesti annettuna eläimille (ihminen mukaanlukien). Niiden in vivo aktiivisuus on rajoittuneempi mitä tulee herkkiin elimiin ja se määritetään tavallisella menetelmällä, joka sisältää oleellisesti sa-manpainoisten hiirien infektoinnin kokeiltavalla organismilla ja sitten niiden käsittelyn suuhun tai ihon alle kokeiltavalla yhdisteellä. Käytännössä hiiriin, esim. 10 kpl, istutetaan intra-peritoneaalisesti sopivasti laimennetut viljelmät, jotka sisältävät suunnilleen 1-10 kertaa LD-^qq (alin konsentraatio organismeja, joka tarvitaan tuottamaan 100 % kuolemat). Vertailukokeita tehdään samanaikaisesti, joissa hiiriin istutetaan alemmat laimennukset tarkistuksena kokeiltavan organismin myrkyllisyydessä esiintyvästä mahdollisesta vaihtelusta. Kokeiltavaa yhdistettä annetaan 0,5 tuntia infektoinnin jälkeen ja käsittely toistetaan 4, 24 ja 48 tuntia myöhemmin. Hengissä säilyneitä hiiriä säilytetään 4 päivää viimeisen käsittelyn jälkeen ja henkiin jääneitten lukumäärä merkitään muistiin.

In vivo käytettyinä nämä uudet yhdisteet voidaan antaa suuhun tai parenteraalisesti, esim. ruiskeena ihoon tai lihakseen annoksen välillä noin 1 mg/kg - noin 200 mg/kg ruumiin painosta päivää kohti. Suosittu annosalue on välillä 5 mg/kg ruumiin painosta päivää kohti ja edullinen alue välillä noin 5 mg/kg -50 mg/kg ruumiin painosta päivää kohti. Parenteraaliseen ruiskeeseen sopivat sideaineet voivat olla joko vesipitoisia, kuten vesi, isotoninen suolaliuos, isotoninen dekstroosi, Ringer'in liuos tai vedettömiä, kuten kasvisperäiset öljyt (puuvillasiemen-, maapähkinä-, maissi-, seesamiöljy), dimetyylisulfoksidi ja muut vedettömät sideaineet, jotka eivät vaikuta terapeuttisen valmisteen tehoon ja ovat myrkyttömiä käytetyssä tilavuudessa tai suh- il 68058 teessä (glyseroli, propyleeniglykoli, sorbitoli). Lisäksi voidaan tehdä edullisesti seoksia, jotka soveltuvat liuosten valmistamiseen juuri ennen antoa. Tällaiset seokset voivat sisältää nestemäisiä laimentimia; esim. propyleeniglykolia, dietyylikarbonaat-tia, glyserolia, sorbitolia jne; puskureita, hyaaliuronidaasia, paikallispuudutusaineita ja epäorgaanisia suoloja haluttujen farmakologisten ominaisuuksien saamiseksi. Nämä yhdisteet voidaan myös yhdistää erilaisiin farmaseuttisesti hyväksyttäviin inert-teihin kantaja-aineisiin, joihin kuuluvat kiinteät laimentimet, vesipitoiset sideaineet, myrkyttömät orgaaniset liuottimet kapseleiden, tablettien, pastillien, rakeiden, kuivaseosten, suspensioiden, liuosten, eliksiirien ja parenteraalisten liuosten tai suspensioiden muodossa. Yleensä yhdisteitä käytetään erilaisissa annosmuodoissa konsentraatioalueilla välillä noin 0,5 % - noin 90 % kokonaisseoksen painosta.

Seuraava taulukko kuvaa esillä olevan keksinnön mukaisten yhdisteiden antibakteriaalista aktiivisuutta. Taulukossa on esitetty yhdisteiden minimiestopitoisuudet (MIC jig/ml) eri mikro-organismien kasvuun nähden in vitro-kokeissa. Vertailuyhdisteenä on käytetty oleandomysiiniä.

1,2 68058

Keksinnön mukaisten yhdisteiden in vitro-tiedot (MIC pg/ml.) ! ; 1 \ ; I Tuote Staph. Staph. Strep. Pasturella Neisseria I esimer- aureus aureus pyogenes multocida sicca ; kistä 01Δ005 01A400R 02C203 ; 59AQ01_j 66C000 I 1 <0.10 <0.10 <0.10 0.78 ! 0.78 j--I-—-1-1-'-1 I 2 <0.10 <0.10 <0.10 ; 3.12 j 0.20 ; -;--1-\ 3 0.20 1.56 <0.10 ; 1.56 | 0.20 4 j 0.78 1.56 <0.10 . 6.25 0.39 !

j I

.» ...........- . . . . . -i..- ... ..... I. I... - ' I . I. , .. I .11 I

5 , <0.10 0.20 <0.10 25 0.39 ! --,-j-1-1 j 6 0.39 0.78 0.20 , 12.5 | 0.78 7 0.78 0.39 <0.10 6.25 0.78 ;

i I

--,-i--

8 6.25 6.25 0.20 6.25 3.12 I

; I

__:_i-j-r 9 0.78 0.39 0.20 ; 12.5 1.56

; I I

. - - — jr - - . . ----------------- - - -1 — — i ... - 4 10 0.78 : 0.39 <0.10 6.25 : 1.56 j

; i I

--f......... j-i-!--1- 11 0.78 0.78 0.39 ‘ __I-1-!----1 12 0.20 ; 0.20 <0.10 0.39 0.39

I I

I I i ---i-1---1 r 13 0.78 ; 0.39 . <0.10 1.56 j 0.78 ; j 14 <0.10 0.39 j <0.10 6.25 j 0.20 -------j- 15 1.56 : 0.78 0.20 6.25 > 0.78 ! I ;

II

13 68058

. ” -"i ' ” I

Tuote ' Staph. ' Staph, Strep. Pasturella ; Neisseria i esimer- aureus aureus pyogenes : multocida ) sicca kistä ; 01A005 01A400R 02C203 | 59A001_| 66C0C0_ 16 1,56 1.56 <0.10 , 6.25 ! 1.56 i 17 12.5 12.5 0.78 i 25 12.5 _;___;_I__

18 0.39 0.20 : <0.10 3.12 I

j — .. _ 1 , , , . ------ , , - I........ - - --- 191 1.56 1.56 0.78 1.56 ! 1.56 : ' ! ! !-:-1-1-1-!-- 20 0.78 0.39 0.39 3.12 i 1.56 I I ! I ; 21 0.39 0.39 ' 0.1 3.1 0.39 i 22 ' 0.78 0.78 0.39 1.56 ; 0.39 23 1.56 1.56 0.39 3.1 I 0.39 , -1----,-: · 24 j 6.25 3.1 3.1 25 '12.5 I 1 -------j.

25 6.25 12.5 0.39 12.5 3.12 -----1-i- 26 0.39 0.78 0.20 3.1 j 0.39 -----j- 27 3.12 6.25 0.78 25 j >50 -----j-- 28 6.25 ! 6.25 3.12 i --i----l 29 3.12 j 6.25 i 1.56 25 j >50 1 30 6.25 j 6.25 1.56 12.5 6.25 i 31 1.56 6.25 1.56 25 j 12.5 I : ! J ; 1 I .

D(-)-muoto 68058 I ! I i · t 1 Tuote Staph. , Staph. Strep. , Pasturella ' Neisseria esimer- aureus ; aureus pyogenes j multocida | sicca ikistä 01A005 ; 01A400R 02C203 I 59A001 j 66C000

I ! I

,___I_j_^_ i 32 3.1 3.1 1.56 25 6.25 j I , j j L — — - - - ---I - -1-- I - -- - .

33 1 0.78 ; 1.56 0.39 25 25 ι-1-:-'--- 34 - 1.56 3.1 0.78 6.25 j 12.5

! ; I

35 3.1 i 6.25 0.78 25 25 ---j--i---! 36 1.56 ; 3.1 ' 1.56 25 j 25 j ! 37 <0.10 j 0.20 : <0.10 0.78 0.20

t ! i I

I , I

! I

--1-j-1----- 38 0.78 1 0.78 j <0.10 12.5

ι I

---j---, 39 0.20 <0.10 : <0.10 0.39 0.20 i ---1---i 40* 0.20 0.39 ' 0.025 0.39 1 3.12 i _j__ j

41 0.39 1.56 <0.10 0.7 8 0~. 39 I

~ j 42 0.39 <0.10 j <0.10 0.39 <0.10

i I

-1-|----f 43 <0.10 <0.10 <0.10 1.56 - 1 j 44 <0.10 0.20 j <0.10 j <0.10 0.78 ---j-1-1-j 45 0.20 0.39 i 0.025 j 0.78 | ! ---1--ι-1-1 46 0.20 <0.10 <0.10 j 0.39 - j ι ! -1--j-- 47 ! 0.10 0.05 j <0.012 0.10 i_L_:__ * 1:1 R,S-seos.

II

6805 8 τ---1-'-i-;-:--1

Tuote Staph. ; Staph. Strep. Pasturella > Neisseria \ esimer- aureus j aureus pyogenes multocida I sicca | kistä 01A005 01A400R 02C203 59A001 j 66C000 ; 48 0.20 j 0.39 0.02 0.39 0.78 : I i I ' -K- . .. >.. -!-!--; 49 0.05 ; 0.05 0.05 0.2 j 0.2 i I 1 i [ : 1 ; . -i ., , . — - - ,,.. ---------------1-, 50 i 0.1 0.05 0.02 0.2 . 0.02 j _i__,___j_: 51 : 0.1 0.05 . 0.02 0.39 j 0.1 _I__i_j_;__ : 52 I 0.39 1.56 : 0.39 1 3.1 12.5 i :1.

i-i--i-!-1- 1 53 j 0.39 1.56 0.39 3.1 6.25 j___ I__ ! 54 0.1 0.20 0.006 0.02 0.02

J-1____!_L

55 0.39 1.56 j - 1.56 ! -----j---- 56* 0.39 1.56 j <0.10 3.12 ; <0.10 ; ; <o.io <o.io | <0.10 0.20 <0.10 - - ................—-i : 62 0.39 0.78 0.025 j 12.5 : 12.5 J----1-1-« ; 63 ί 3.12 12.5 1.56 >50 j 25 I i j-----j--- ; 64 1.56 ! - 1.56 >50 «12.5

I I

--1---1- 65 0.78 ; _ 0.39 25 i 6.25 ! i 66 1.56 - 0.78 0.78 . 50 -|—-J--^-1- 67 3.12 I _ 1.56 1.56 j 12.5 t _I__!_

* epimeeri A

epimeeri B

i6 6 8 0 5 8 ---j-i-;-1

Tuote Staph. Staph. . Strep. Pasturella Neisseria esimer- aureus aureus j pyogenes ' multocida ;sicca kistä 01A005 : 01A400R ί 02C203 : S9A001 '660000 --1-1---i 69 0.39 0.78 > 0.10 ' 25 25 ----!_!_!_, 71 3.12 - ; 0.78 50 | 12.5 -i-i-i-; 72 3.12 3.12 I 1.56 12.5 ; 50 _j_;_j_· 73 0.39 0.78 | 0.05 : 12.5 ! >50 i ! I ! 75 6.25 ’ - 0.78 ! 50 , 12.5 -;---i-!- 76 j 6.25 12.5 1.56 50 50 -j-i--i-i-1 77 j12.5 - 6.25 ! 50 25 78 j 0.78 0.78 0.78 ; 6.25 6.25

: ί : : I

' ----- t *--f ------ -—I

79 3.1 0.78 0.20 | 6.25 3.1 ! I--i--i---i ! 81 3.12 : 3.12 0.78 ; 12.5 12.5 i j ! 82 0.78 j 1.56 0.78 ! 12.5 6.25 __I___;_, 83 1.56 6.25 0.78 50 25 j - , . ..... .......... - 84 3.12 6.25 1.56 50 25 j __I_ _.

85 1.56 j 6.25 0.78 50 25 87 1.56 . 3.12 >50 25 0.05 i i --i----__________________ 88 0.39 0.78 0.006 12.5 12.5

89 0.39 1.56 - 3.1 I

j

II

17 68058 i ; ~ — i ; ; ! Tuote ; Staph. Staph. Strep. Pasturella j Neisseria ! ί i . I .

! esimer- ‘aureus | aureus pyogenes multocida j sicca I kistä I QIAO0 5 01A4Q0R 02C203 59A001 66C00_ i 90 . 0.78 j12.5 - >50 6.2 ' ~ ! 0.39 j = 072 50 25 oleando- , ! i mysiini j : j ____;_I______j__

Seuraavissa esimerkeissä ei ole pyritty ottamaan talteen maksimimäärää tuotettua ainetta eikä optimoimaan annetun tuotteen saantoa. Esimerkit ovat pelkästään menetelmää ja sillä saatavia tuotteita kuvaavia.

Kussakin esimerkeistä 1-36 on käytetty reagoiva aine 11-asetyyli-4"-deoksi-4"-amino-oleandomysiini on valmistuksen E mukaisesti saatu suurempi epimeerimäärä. Esimerkin 59 reagoiva aine ll-asetyyli-4"-deoksi-4"-amino-oleandomysiini on 4"-aminojohdan-naisten epimeerinen seos.

Esimerkit 37-53 käyttävät reagoivana aineena valmistuksen J ainoaa epimeeristä tuotetta. Koska 4"-aminoryhmän konfiguraatiota ei tunneta varmuudella, ylläolevissa kaavoissa on käytetty aalto-viivamerkintää.

Esimerkit 54 ja 60 käyttävät valmistuksen I epimeeristä 4"-deoksi-4"-amino-erytromysiini A seosta reagoivana aineena.

Esimerkki 1 11-asetyyli-4"-deoksi-4"-(2-fenyyliasetamido)-oleandomysiini ll-asetyyli-4"-deoksi-4"-amino-oleandomysiinin (2,88 g, 3.95 mmoolia) liuokseen tetrahydrofuraanissa (60 ml) ja vedessä (30 ml) huoneen lämpötilassa, pH:hon 8,0 säädettynä laimealla kloorivetyhapolla, lisätään fenyyliasetyylikloridin (0,549 ml) liuos tetrahydrofuraanissa (4ml) tipoittain sekoittaen kolmen minuutin aikana. pH pidetään välillä 7,9-8,1 lisäämällä samanaikaisesti laimeaa natriumhydroksidin vesiliuosta (IN). Reaktioseosta sekoitetaan viiden minuutin ajan huoneen lämpötilassa ja sitten se kaadetaan sekoittaen vesi-etyyliasetaatti seokseen (1:1), ja pH säädetään 9,0:ksi. Orgaaninen faasi erotetaan, pestään vedellä, sitten suolavedellä ja kuivataan (Na2So^). Liuottimen haihdutus 18 68058 tuottaa tuotteen valkeana vaahtona (3,2 g). Vaahto liuotetaan kuumaan veden (30 ml) --- asetonin (45 ml) liuokseen ja saatu liuos väkevöidään keittämällä noin 60 ml tilavuuteen, jossa pisteessä tuote alkaa kiteytyä. Seos jäähdytetään, kiinteä aine suodatetaan pois ja kuivataan tyhjössä. Saanto = 2,61 g, sp. 154° - 157°C.

NMR: cf QQQ2. ^,36 (s, 5H) , 5,80 (d, 1H) , 3,66 (s, 2H) , 3,40 (s, 3H) , 2,66 (m,32H), 2,35 (s, 6H), 2,06 (s, 3H) .

Esimerkit 2-24

Esimerkin 1 menettelyn toistaminen käyttämällä sopivaa happokloridia fenasetyylikloridin asemasta tuottaa seuraavat yhdisteet: 68058 19 *T* MP* ^·* Ρτ* Μρ* ιμ·* Ρ*Η

iNvS Csl 3 CN so OJVD

com cn cn min cnen vo^o m in o m <o so ^ m r* cn ^om « · ·· I t » ·

n (N m CN m CN m CN

m pH * *. ^ -. * ** .. *· WO -— --· P—

Σ Q XX XX XX XX

6-1 U rH CN rH CN rH CN rH CN

*o * * ·· s %«> ·»«.

x 3J. S3 S3 ό 3

WO O 00 H 00 rH W

σι r- σι w o> w σι w in cn in cn in cn in cn

^ 32 X 32 rr- 22 23 r— X X — - X

q_^j n n * m fi ^ γί η h· m cn I v ^ , s s *"· § gcncnajwcQgcntngcnw ------ ^ ^ w w K / \ ^ m m o wow m o co moo /'“‘"V V—v g.’ rr rr m m -a· o . m *r o pH^h J5 “·{ y η V—^ r~ m cn r— m cn t— m cn i— m cn *,/· in o —-i/ " \ Ο · r-

n / sC o m o rr rH

/ — W H- W I

J.-*\ m i—I p—I rH in /\_ j * Ο t— rH Γ- v ^ p, ·- w m w w

Γ Lj rH rH rH rH

o'' t

CPKJ

m

Mp*

P*M

rr ΤΓ p— --.

32 x tj· »a·

vo W X X

NO O W W

pH r-l O O

U U fa fa

I I I I

m tr cn m

I I I I

CN CN CN CN

X X X X

o o o o

•H

,γ

,Y

ä - g cn m in

•H

W

W

20 68058 * * * S — * * * * * * » <*-«* «b «k «. «k in 53 XX XX XX X cn ES χ X H ^ {N VO (N ff\ N « m CO CN cl CN * - - m * * ·» ta ' ^ -g ta ta m cow tom tn tn to—' mg mg w h on vo vo vo vo nm oo vo ^ co mm n· .

von vo n vo n co· corn oo vo . cn ·· ·· ·· · cn ·· ·· n n es n n n cn n n cn m cn - n — m. , H ta ta ta ta ta ta ta s · — «k ^ V I 2

CO CJ —·—« . N — "ta — X— ----.-. —— X CN

SG XX XX XX x n x XXX xxx h n CJ H (N h cn (—I cn (H n h n n —i n n - o ' * g x ^ · *- - » - ^ m — tatata tatatam ^— S t3 js 3Ή SS Ό^ω TJmm ό m m -- H n vo o oo noo oo oo n m i—ir-ii—i co n oo n· ovo vo vo O r oo · O σν h oo^ro .cn * · · · · · · (Ό · ··· «*·1/Ί un CN LH CN lo CS un cn LO rn CN LO ro CN - * * «—k,

XXX XXX XXX XCNX.XXX xxx m ^ X

τρηη vf n n tj> n n ν' vo n* cn vo n· cn vo Hn '»ta * - - -ta* * m ta - - - »»» m ' - gjom m cn m σ1 tn tn g .Q en g m cn t? tn tn λ tn ui vo H oo oo o vo n n o m vo i-h m vo vo o h m nnvo i—t 'T o cn n· o o h h omn h w n i—ινοη tt n o » · * ··· ··« ·«· ··· ··· «·« f' n (N i n cm r^fncN r> n n r^nes r^nes t- n cn ✓-s 'ti o $ m ti • vo ^ <τι CJ oo jö n c/a > o n H > VO H (N · ^ w ^ I C fN | H « a f-t m Sh m h ... g

i · l · l r-, m -H

<JV CM ·Η <N VO ΟΊ .. O O

'ti »n co P <n n o h.® n H H P,H H H v“i4 £ > Ν' Ν' N·

n· — X X X

— X N· VO VO VO

^ VO X n o U

X CJ vo o O O in n vo n u n n nx

U X Ο X X X VO

e* CJ X CJ cj CJ cj

I t I I I I I

·* <n «r cn n τγ-

Ι I I I I I CJ

CN CN CN CN CN CN

x X X X X X X

cj cj u u cj u cj

•H

ac u cd '

gVOHCOinOHCN H H H H

m

H

21 68058 Π; ~ XX 3333 EX X XX 3333

(N ^ (Ν CO CN CO e-im m (N U3 ι—I CO

c/3 u; in in οι ε' OS’ E en en w tn mm mm co co oooo σ com com ο n co m com m co r~~ com mm • · ·· «· I « · ·· ·· mm mm mm com m mm mm m rH r k . k k k k k «. · k ' k k v ^ SQ EX EE S3 33 33 33 X 33 33 33 33 33

Eh U p—im mm tt m mmm mm mm mm <o OS s » » . > - ~ ~ k » « ' > - ~ Σ OS VS ΕΞ Ε<η^Λ η ιιι Ό E Ό Ξ mm om mo mmo mm mo mm 03 co cn co m r~ m m o mo oo co cnco • · · I ·· ··· I» ·· ·· mm mm mm mmm mm mm com

% % · S ^ I s ^ I V S k k k k « S k I

mmm mmm mmm m m co mco τ m m mmm E <n in Gwin Ό <n cn £ <n cn cn cn £ cn cn. ε cn cn mom co co co moo ococo coo moco m o co mmo mmo co ·<τ m cocom <r» m co m o mmo mmm mmm comm comm oom mmm mmm m ^ m Λ O m ~— o m m o o m co >- m i co *3· m m m m <—i m m m I >1111 03 —. m m m o m P^m (0 m m m m m cn) ,—ι —m m m m m

*rH

rH

, & •Η ·Η Ή rH rH QJ rr JT> I I f s· ? m g g £ m --.

m m £ % +3 · r

& £ S -f 2 " U

S S £ £ £ ‘rn T

-M +-> Ok (¾ +J - kL

m m m m m CJ O

X

r* 0 03 (

Em ·*τ m co m co oc ‘7 m m m m mm m (/3 w 22 68058 * - E * * - EE * · un* ,-**-* *-*^-* *r vo --

* rr. O EE EE · EE

rH *- —< (NUO (N VO (N* (Nm • tn *mcN *» »* * —- ** tn m tn tn tn tn tn g cn ^ m m -μ vo E vo vo vo m vo · ajo μ h* * vo r- m r- m mm vo rH <u «—N ·· ·· · · ·

m e * m cn ro cn ro * (Ncn H

ro in (Λ — -fj.

rH * · * * * «* k 32 * * fd

cn cj — rH — — -* ~m — — X

2Q E vo EE EE E EE S· £H U rH * m rH (N H (N rH* m<N £ ‘o tn · g

E * (N * * * * *^-r * * W

Σ ό Ό S Og tn cn tn _.

2 — O * *- — m >—*-r m ur —. vo h m · E voo m rH m· m vo ή

omtN <n r~ r* vo mm ·*τ h W

Γ- * * mm mm n· * mm S

— g —3 ^ 33 ^ ^ ^ * · v *i* ^ *» 3: . CO ZZ X ZZ 233333 33· 33 X 33 Zl un .H us rrn m rrroro un o ro hi,o ϊ~\

• (—I

* * CN · * * * * * * *** ** φ g tn g tn tn g tn tn g tn tn «atn g> • ro J5 o ro 33 o ro o h in n ro un uo h uo -Vh'

wr m * vo rH mmo mmo vom rH

. · · m · · > ... > . . . . Ή r~- m -h r~mm r- m m r* m m mm ω |2

rs -P

^ un O

o. S tn co m *15 ~ .5-3 S 5 S 0 §> .8-1¾ - - ά I f

s! s s I I

tn O - m 3 °i h mm Ή H *·*

Oo n· — 71 y s O K *· ero —> VO E _r Ό m U to m m y S tn n E m U E —>O.H.r

U Ch ή vo m ή E

O U U U ECPU

*-r j | -- M Φ C

g d d rd Z 2 S ^ U *- t--J 4-J i—r -t-j I 1 2 I O di <L· mm'-- m 3 μ

* E E E ~ -PC D

a o cj tj υ .3 3 μ ‘-μ φ

3 I ft S

? S S S

§ O rH CN ro TT

.H CN CN (N (N (Ν'-*—, co <d .3 ω ^ ^ tl ?3 6805 8

Esimerkki 25 L( + )- ll-asetyyli-4"-deoksi-4"-(l-hydroksi.-2-fen yyli-asetdmido)oleandomys ii n i N-hydroksimeripihkahappoimidia (296 mg, 2,97 mmoolia) lisätään sekoittaen liuokseen, joka sisältää L( + )-man"e 1ihappoa (391 mg, 2,57 mmoolia) tetrahydrofuraanissa (20 ml). Kun liukeneminen on täydellinen, lisätään disykloheksyylikarbod.i-imidiä (531 mg, 2,57 mmoolia). Reaktioseosta sekoitetaan tunnin ajan huoneen lämpötilassa ja suodatetaan sitten disykloheksyy1iurean poistamiseksi. Suoda!inkakku pestään tetrahydrofuraanilla (5 ml) ja yhdistetty suodos ja pesuliuos käsitellään 11-asetyyli-4"-deoksi-4"-amino-oleandomysiinillä (1,5 g, 7,05 mmoolia) typpi atmosfäärissä huoneen lämpötilassa. Reaktioseosta sekoitetaan tunnin ajan ja se kaadetaan sitten metyleenik.loridi-vesi seokseen (1:1). Orgaaninen faasi erotetaan, yhdistetään samaan tilavuuteen vettä ja pH säädetään 10,5:ksi sekoittaen. Orgaaninen faasi erotetaan ja pestään peräkkäin vedellä ja suolavedellä ia kuivataan sitten (Na^SO^). Uutteen haihdutus tuottaa raakatuotteen valkoisena vaahtona (1,51 g). Vaahto liuotetaan kuumaan asetonin (70 ml) — veden (70 ml) liuokseen ja saatu liuos haihdutetaan normaalissa iImanpaineessa keittämällä, kunnes se samenee. Väkevöitettä sekoitetaan 1,5 tunnin ajan huoneen lämpötilassa, jonka jälkeen kiin-

O

teä aine poistetaan suodattamalla ja kuivataan 60 O:ssa tyhjössä. Saanto = 962 mg valkeita kiteitä. Sp. 236,5° - ?40°0, (haj.).

NM K : 7,45 (m, 5H), 6,91 (d, 1H), 5,16 (s. 1H), 3,31 (s, 3 H), 2,6$ (m, 2H), 2,35 (s, 6H), 2,08 (s, 3H).

Esimerkki 26 ll-asetyyli-4"-decksi-4"-(pivaloyyliamido)oleandomys i i n i lH-tetratsolyyli-l-etikkahapon (795 mg, 5,92 mmoolia) liuokseen tetrahydrofuraanissa (10 ml) lisätään sekoittaen huoneen lämpötilassa pivaloyy1ikloridia (0,728 ml, 5,92 moolia). Seos samenee ja sitä sekoitetaan 15 minuutin ajan. Sitten se lisätään sekoittaen tipoittain (5,5 ml) 11-asetyy1i-4"-deoksi-4"-amino-oleandomysiinin (1,5 g, 7,05 mmoolia) liuokseen vedessä (15 ml) ja tetrahydrofuraanissa (30 ml) huoneen lämpötilassa ia pH:ssa 8,0. pH pidetään välillä 7,9 - 8,1 samanaikaisesti lisäämällä IN NaOH tarpeen mukaan. SUten reaktioseos kaadetaan etyy1iasemaatti-vesiseokseen sekoittaen ja pH säädetään 10,5:ksi. Orgaaninen faasi ^ 63058 erotetaan, pestään peräkkäin vedellä ja suolavedellä ja kuivataan sitten (^280^). Liuottimen haihduttaminen antaa tuotteen valkoisena vaahtona (1,52 g).

NMR: 5’83 (d’ 1H)> 3’38 (s’ 3H), 2’66 (m> 2H)’ 2,33 (s, 6H), ?,G§ (s, 3H), 1,10 (s, 9H).

Esimerkit 27-3S

11-asetyyl i-4 "-deoksi-4M- ( 2-f luor ibent samido )-oleandomysi ini 11-asetyyli-4"-deoksi-4"-ami no-oleandomysi i n in (1,50 g, 2,05 mmoolia) liuokseen tetrahydrofuraanissa (35 ml) ja vedessä (15 ml) huoneen lämpötilassa, säädettynä pH:hon 8,0 laimeaa kloori-vetyhappoa lisäämällä, lisätään 2-fluoribentsoyylikloridin (0,27 ml) liuokseen tetrahydrofuraanissa (5 ml) tipoitta in sekoittaen 3 minuutin aikana. pH pidetään 7,9-8,i:ssä samanaikaisesti lisäten laimeaa natriumhydroksidin vesiliuosta (IN). Reaktioseosta sekoitetaan viiden minuutin ajan huoneen lämpötilssa ja sitten se kaadetaan sekoittaen vesi-etyyliasetaattiseokseen (1:1) ja pH säädetään 9,0;ksi» Orgaaninen faasi erotetaan, pestään vedellä, sitten suolavedellä ja kuivataan (1^280^). Liuottimen haihduttaminen tuottaa tuotteen valkoisena vaahtona (1,61 g).

NMR: 7,40 (m, 4H), 3,50 (s, 3H), 2,70 (ra, 2H), 2,38 (s, 6H)? 2,10 (s, 3H)„

Seuraavat yhdisteet valmistetaan samalla tavalla sopivista happoklorideista (Z-C(0)Cl·/ ia 11-asetyy1i-4"-deoksi-4"-amino-oleandomys i inistä.

s°, h «‘«»»a

CH-.CQ

'"S O

^ν,Χ^ν-ΝΗ-C-Z

OCH3 25 6 805 8 *^ *-* *r* «* CM CM ΓΟ CM CM ' ro ro ro m ^ ^ ^ V «· £Ecn££tnencnin voOi-Hmmminmin cm cm ro cm cm m ro ro ro 5: ~ s; ro ro ro ro ro ro (Nro h ro roro h m en en enenen tn Sen^tnenen^tn

ro o H u: ΙΠ ro O M3 MD CO MD O LT. CO

ro *«3» un O M1 ^ in O CM O <TN r—I I—*o r-H · · ·«· · ····»···

en U ro ro ro cm ro ro vocMMDCNrocNMDCM

Σ Q

£hU ..................

‘ re E EE EE EE EE EE EE EE EE· E γηπ mm i—ivo ih m rH m h io h o m vo mvo Σ 2........... ' ' -.....

T3 tn en tn ό m ό tn ό tn ε en g tn ε tn ε tn mvo mo moo vnm mm om cam voo coca mo o h r-im ma oo i—im om o^r mm vo cn *r m vo m 'vo m vo m r-· m γ~ m vo m ρ~ m '»vo'h'vo m τ vo ,^r vo i—i (N mm mm .—im

£ w ^ tn Eg £ tn E ^en Et g^ E E E E

CO ΓΟ MD MD MD CO ΟΟΓΟ ΓΟ H MD tD LT) CO O CO ΓΟ CC

Tr ro cm ro lo md roro m ro o* md in md c^ <d o r- cm r- cm ' r- cm c^cm r- cm cm r- cm md cm r- cm /-s

r~H

£

i—I

*3* O

E l· vo t

o S

TJ« r— Ή N1 ^VO S rr 3?" . , ^ ξ; ^ O O E vo ^ ^

OO vou>^a;S

menu m>icgc

uO ΞΞ SlD r"H [li ^ tU I *X

= ouou^^cl·^ 1 1 II I j I (

ζ_) CM CM CM CM c\- C\j r\' CO

•H

u

^COO^OrHCMrO^TLiOMD

.pcMCMrororororororo en w 68058

Esimerkit 37-55

Esimerkin 1 menettely toistetaan käyttäen reagoivana rnakro-lidina 4"-deoksi-4"-amino-erytromysiini A:ta ja sopivia happoklo-rideita, jolloin saadaan seuraavat yhdisteet: h N <CH3k 0 Λ X.·'·..

!, j I, HO i, - jjq λΛ ^ ^

1 I

HO

'Λ ϋνν s I ,r 1 yv-^NH-c-z o /· / "och3 il ? 7 6 8 G 5 8 04 ro m n n n ro vo vo ro ro (Ί n oi ro h vo in tn tn oi n ra « m on «in «in « m «3 «

CO VO ."O LO O O Π ID U0 OO O LO torn H O

o τ oh1 vo τ co to ro in un vo ή ο-o' o o· n H O H ro H ro 04 IN « H ro ,—i ΓΟ H vo 04 £ 3 hCo H ro m H Ifl r-i KO r—t \£J CN Π m r—I »* <» V*. ««· *» ** "* «* *» ·* ^ *· ** *“ mu ΌΟ 03« 03« -Ό « « 03« 03« 03« E « £ u o n CO ro ro rouO oro ro H M O O Π H O ro coro o o· h ro roro ro av ro Oro oro Oro « - ...... · · · ......

2 in n o 04 o 04 oro ro to rs 004 in 04 r~ ro 2 in to in o o' ro o' 04 ro 1—(ro into o*ro roro H 04 ro «« « « E « E « « 03« E « E m E « E « « lOuO ro in OO OOO Oo roo OO 00 co co to o*ro -O 01 roro r—1 10 τ cv o* oro n ro >—(oi 00001 O' ro r~ ro o-ro r- ro h in h Γ" ro r~ to O- ro O ro h

LI SS

~ ί i -S -S

u - > > m $ E

~ £ g g S g Se e 'S a;

. V jd S § e- g ”go |L

d fl Q E *rj -rl O Ή -HO CO -H O Ή O r3 O « O

co 5? n .p o o -P o op p o -p op a)p op r-* « & 00 pj O r~J S H <3 1—i <u « « «« «o «« ro O tpto H (rf rd «ro «ro 03« >P >> >P > !> ·>> >> >> >> ^ r—l *-—' ^ ^ *H i»-% Cm P o· 10 g = U ^ S vo O m 2

mi -P o co K VO

Cl h X vo CJ

in <U u O U Cp

2 vTP, I l ro I 1 -H -H

VO 33 to ro 04 — — CO rP pj CJ vo ^ ^ co h — O <$ I U · I I =0 ice

CN CNR (N CN U w CN CU QJ

^ «-« ^ — m* 4_i ±j G G $ G G uG cj ,4, ^ 2 P' co en o H 04 co «· m g, ro ro co p- P- p- p p- p- •Ή U)

W

6 3 0 5 8 28 - n (N n n n pH — n cn n cn n - h n - So -- -- - m · Ό - -- -- — m -- cn tn w tn n — tn enin men · Όΐη η m co co nm on o om inn <—i m . « h a m tj« on h· - - · -r p- Ν' co -r io — nrr . · · . · -— tn in · · « · · · · n f—1 mn OS'—" 1—1 n h on - co ιο h m ^ ~ - --. -.co ........κ - -- 0 e κ o κ κ · ηΞ ke kk — κκ h vo η cn η pH - cn m .hio ,η co - γηο n tn - tn o r-\ - - - - - -'— - tn- - - *> jq *3· » - cnu Ό to Stntn o '-'tn x: en xj w — · s tn SQ --- -,-)¾ — — — —— <n — — £h u n· m o o e on o n o 00·. vn om mm n - h o on en co -r onrH «n a n co n ·— .nm K ·. ... . t-· .· · . r- K >· S m in co η n m-- n m in in cn n p- cn 2 - to

KK KKK K^^f ηκ KK1 KK 5 ~ KK

τη pHnm mrHn η ι»η -τη nn . . - - o ^ ·» ·»*»·* *· *» (*“) C/3 < ·*> ·>» *» *» [fi -» «» S tn £_n tn JS _tn λ tn tn g tn xi . s tn o co comm mmK nn om mn m - o co h cn neon «rr n> m m p- n cn nn m — mn • -.............k · .

r- n 1- n n r- n .H p- n r-n r-n γ-in r-n

Λ O

u C ai 0 ^ I § g m • 1-1 C e -H o ή ai 3 ® o +- 1 rH g C 3 £ n M e :tti > > ^ — > — — m -TK — K m -T .—. -3.

— mu K h* o rt u — m k m KO n u m u tso m n K n u n

UK U Γη H K

KU O U U U 21

It ~ t I I n >, nn 3; ncNCNj>,>, II I 111¾¾ _CN JN u 04 CN CN tpj u u a u u u cn cn

•H

2 k

^ m Γ- 00 CT) O H CN CO

• H ^ ^ N- LO LT> LO LO

tn

W

29 68058 as as as x cm m m m «· «« ** s to cn w w

Ο IQ LD CO

ΚΩ rr m τ • · ♦ ·

m r-ι m rH

·» ^ ·· *> as as as as

CN ID

m ·. *. ^

C/l U Ό ϊΐ T3 W

2D —^ ——

E·4 CJ

*o O O n h tt m in m 05 . · · ·

2 VO CM Γ** CM

z:

•ft «I *· K

mm (—I m £ tn cn cn

ic m H H

mm <j\ r*·** r* m cm • o

U

0 r-J

in (i 2 co **

i—H

•rH f—I

- £ rn >> = o ^ to u -μ oi Φ

f—H *H

^ H-> n u , I J-

-r I

^ * H

ro rd T £

I -P

CM & Ö Λ

*H

E lo lO

ω

W

3U 68058

Esimerkki 56 4"-deoksi-4"-(2-fenyyliasetamido)-erytromysiini A 11,12-karbonaattiesteri-6,9-hemiketaali

Fenasetyylikloridi (1,92 mmoolia) ja 4"-deoksi-4"-amino-erytromysiini A 6 ,9-hemiketaali-ll, 12-karbonaattiesteri (1,45 mmoo-lia) saatetaan reagoimaan esimerkin 1 menettelyn mukaan. Reaktio-seos kaadetaan vesi-etyyliasetaattiin ja saadun seoksen pH säädetään 5:ksi. Etyyliasetaattikerros erotetaan ja lisätään samaan tilavuuteen vettä. pH säädetään 9,5:ksi sekoittaen, etyyliasetaatti-faasi erotetaan, pestään ensin vedellä, sitten suolavedellä ja kuivataan (Na2S0[+). Liuottimen poistaminen alennetussa paineessa tuottaa tuotteen epimeeri A- ja epimeeri B-muotojen seoksena (953 mg). Tuote kromatografoidaan silikageelipylväällä (40 g), käyttäen eluent-tina kloroformi-asetonia (3:1), ja otetaan talteen fraktioita kukin 800 tippaa. Fraktiot 6-60 yhdistetään ja haihdutetaan kuiviin, jolloin saadaan toinen otsikkotuotteen epimeeri (A) norsunluun värisenä vaahtona (370 mg). Fraktiot 101-150 yhdistetään, jolloin saadaan toinen epimeeri (107 mg) norsunluunvärisenä vaahtona. Fraktiot 61-100 sisältävät epimeerien seoksen (114 mg), eikä niitä käsitellä pitemmälle.

TMS

NMR- cdci3*

Epimeeri A: 7,38 (s, 5H), 5,88 (d, 1H), 3,63 (s, 2H) , 3,21 (s, 3H), 2,35 (3, 6H) , 1,61 (s, 3H).

Epimeeri B: 7,43 (s, 5H), 5,85 (d, lii), 3,6 5 (s, 2H) , 3,31 (s, 3H), 2,31 (s, 6H), 1,63 (s, 3H).

Esimerkit 57-61 4"-deoksi-4"-pivaloyyliamido-9(S)-erytromysyyliamiini 4"-deoksi-4"-pivaloyyliamido-erytromysiinin A (1,5 g, 1,83 mmoolia), vedettömän hydratsiinin (0,582 ml) 18,3 mmoolia) ja meta-nolin (35 ml) seosta keitetään palautusjäähdyttäen yli yön typpi-atmosfäärissä. Sitten lisätään toinen annos vedetöntä hydratsiinia (0,582 ml) ja seosta keitetään palautusjäähdyttäen vielä 6 tunnin ajan. Seos haihdutetaan kuiviin alennetussa paineessa, joi.loin saadaan hydratsoni valkoisena vaahtona (1,52 g).

Hydratsoniin (0,760 g, 0,915 mmoolia) metanolissa (20 ml) lisätään natriumnitriitin (316 mg) liuos vedessä (2 ml). Seosta sekoitetaan ja se jäähdytetään välille 0° - 5°C ja sitä käsitellään sitten n 3i 6 8 0 5 8 tipoittain kloorivetyhapolla (2,01 ml 3N, 6,15 mmoolia) sellaisella nopeudella, ettei lämpötila nouse yli 10°C tai pH putoa alle 1,0. Seosta sekoitetaan 5 minuutin ajan HCl-lisäyksen päätyttyä ja sitten se säädetään pH:hon 8 IN NaOH lisäämällä. Natriumboorihydridiä (27,4 mg, 0,72 mmoolia) lisätään sitten se säädetään pH:hon 8 IN NaOH lisäämällä. Natriumboorihydridiä (27,4 mg, 0,72 mmoolia) lisätään sitten ja reaktioseosta sekoitetaan 5 - 10°C:ssa 30 minuutin ajan. Sitten pH lasketaan 2,5:een lisäämällä 6N HC1 ja seosta sekoitetaan 10 minuutin ajan 5° - 10°C:ssa. Vettä (75 ml) ja metyleeniklo-ridia (25 ml) lisätään reaktioseokseen ja pH säädetään 10,5:ksi. Me-tyleenikloridifaasi erotetaan ja vesifaasi uutetaan metyleeniklori-dilla (x 25 ml). Yhdistetyt uutteet pestään suolavedellä (1 x 25 ml), kuivataan (N^SO^) ja haihdutetaan kuiviin, jolloin saadaan raaka-tuote vaahtona. (633 mg).

Raakatuote liuotetaan mahdollisimman pieneen tilavuuteen me-tyleenikloridi-vettä (1:1) ja uutetaan pH-arvoilla 2,5, 3,3 ja 10,0.

(Ohutkerroskromatograf ia systeemissä 6 CHCl^-l CH^OH-O ,1 NIILOt! osoittaa halutun tuotteen olevan pH 10 uutteessa), pH 10 uute kuivataan (Na^SO^) ja haihdutetaan alennetussa paineessa, jolloin saadaan valkoista vaahtoa (341 mg). Se puhdistetaan liuottamalla vesi (30 ml)-etyyliasetaattiin (30 ml) ja uuttamalla seos phrssa 4,8. Orgaaninen faasi erotetaan, tuoretta etyyliasetaattia lisätään ja uuttamismenet-tely toistetaan pH-arvoilla 5,5, 5,8 ja 10,0. pH 10 uute kuivataan (Is^SO^), haihdutetaan kuiviin ja jäännöksen kloroformiliuos kroma-tografoidaan formamidissa kyllästetyllä silikageelipylväällä (12 g) käyttäen kloroformia eluenttina. Viiden ml fraktiot otetaan talteen. Fraktiot 4-30 yhdistetään, haihdutetaan kuiviin ja jäännös liuotetaan vesi (30 ml)-etyyliasetaattiin (30 ml). Seos uutetaan yllä kuvatulla tavalla, mutta pH-arvoissa 6,0, 6,5, 6,8 ja 10. pH 10 uute kuivataan (Na^SO^) ja haihdutetaan alennetussa paineessa tahmean vaahdon saamiseksi. Vaahto liuotetaan metyleenikloridiin (30 ml) ja uutetaan vedellä (2 x 30 ml) pHrssa 10. Metyleenikloridiliuos kuivataan sitten ja haihdutetaan alennetussa paineessa, jolloin saadaan otsikko-tuote valkoisena vaahtona (123 mg), NMRrcf™^ 5,94 (d, 1H), 3,37 (s, 3H), 2,32 (s, 3H), 1,30 (s, 9H) . 3

Samalla tavalla valmistetaan seuraavat 4"-deoksi-4"-asyyli-amido-9(S)-erytromysyyliamiinit, joiden asyyliamidoryhmät on alla 32 6 8 0 5 8 esitetty, sopivista 4"-deoksi-4"-asyyliamidoerytromysiini A johdannaisista. Esimerkkien 61-64 reaktioseoksia käsitellään lisäämällä niihin vesi (20 ml)-etyyliasetaattia (30 ml) mieluummin kuin vesi-metyleenikloridia.

NMR· ^

Esimerkki _Z___^3__ 58 CH2-(2-FC6H4) 7.25 (m, 4H), 6.03 (d, 1H), 3.68 (s. 2H) , 3.35 (s , 3H) , 2.31 (s , 6H).

59 CH2-(3-ClCgH^) 7.33 (m, 4H), 6.08 (d, 1H), 3.63 (s , 2H) , 3,36 (s , 3H) , 2.33 (s, 6H).

60 2-tienyyli 7.61 (m, 2H), 7,15 (m, 1H), 6.36 (d, 1H) , 3,40 (s, 3H) , 2.36 (s , 6H).

61 CH2-(3 ,4-Cl2CgH3) 7.26 (m, 3H), 6.06 (d, 1H), 3.60 (s, 2H), 3,30 (s, 3H), 2.30 (s , 6H).

Esimerkki 62 4"-deoksi-4"-(1,2,3-tiadiatsolyyli)-karboksiamido-oleando- mysiini A. 25°C:eiseen 2 '-asetyyli.-4 "-deoksi-4 "-amino-oleandomysii-nin (2,0 g, 2,7 mmoolia) ja trietyyliamiinin (0,77 ml, 5,5 mraoo-lia) liuokseen kuivassa metyleenikloridissa (20 ml) lisätään sekoittaen, 1,2,3-tiadiatsoli-4-karboksyylihappokloridia (0,41 g, 2,7 mmoolia) yhtenä annoksena. 10 minuutin kuluttua reaktioseokseen sekoitetaan metyleenikloridia (80 ml) ja vettä (100 ml), ja pH säädexään sitten 9,5:ksi IN naxriumhydroksidin vesiliuoksella. Orgaaninen kerros erotetaan, pestään neljä kertaa samoilla tilavuuksilla vettä ja kuivataan (Na.-jSO^). Liuotin poistetaan alennetussa paineessa, jolloin saadaan raaka tuote vaalean ruskeana vaahtona (2,5 g), Silikageeli-kromatografia (200 g silikageeliä; 3 1(2 cm x 49 cm pylväs; tilavuus-suhteessa 95:5 kloroformi: isopropanolia eluointi) tuottaa puhdasta 2-asetyyli-4"-deoksi-4"-Z4-(1,2,3-tiadiatsolyyli)karboksiamido-olean- 33 6 8 0 5 8 domysiiniä värittömänä amorfisena vaahtona (1,4 g).

TM^ NMR :$ 3,51 (s, 3H), 2,10 (s, 3H).

B. 2'-aselyyli johdannaista sekoitetaan 24 tunnin ajan 25°C:ssa metanolissa (30 ml) ja sitten metanoli poistetaan tyhjössä, jolloin saadaan otsikkoyhdiste valkoisena amorfisena vaahtona (1,3 g, 60,3 %).

NMR:^™^ 9,25 (s, 1H) , 3,50 (s, 3H), 2,32 (s , 6H ) . 3

Massaspektri: m/e: 256, 158.

Esimerkit 63-83

Seuraamalla esimerkin 62 menettelyä valmistettiin taulukoidut yhdisteet käyttämällä sopivaa happokloridia 1,2 , 3-tiadiatsoli- 4-karboksyylihappokloridin asemesta.

Niissä tapauksissa, joissa ei ole ilmoitettu 2-asetyyli-4"-doksi-4"-(asetyyliamido)oleandomysiiniprekursoria annetulle 4"-deok-si-4M-(asyyliamido)oleandomysiinille, prekursoria ei eristetty ennen deasetylointia.

^2 N (CH >

-0 \ I

o '/ °·., -L..

H-cV \PH3 l J

H0.,,f - ..0' 0 'ch3

H3C/,/,k /¾. CH

H/ I X 0,i 3<? O U- ρττ i_ 1

Il I ^NH-C-Z

0 1 °ch3 Z-muuttujan alla ilmoitetut prosenttiarvot esittävät tietyn yhdisteen saantoa laskettuna lähtöaineena käytetystä 2'-asetyyli-4"-deoksi-4"-amino-oleandomysiinistä.

3 4 63058

CU

"e I g

CO 33 CO OS

q) ϋ LO LO LO

Pj 1 —i rH r-1

CO

P - H c> o un in

(rt . un m KO

g cn cn rsi cn

LO

-zT

t/} m CO | .—. Cst .—. .—. «o CT1 *·

n 9¾ CP X ^ " X X X X h H IX

op r i—1-~3 t" PX p r—i o ro .o ^ oo ro cm ·Η CU K oo «- ·η <0- ~ ~ P C · ·· ~ - ' CO p IN G · H >Ν Λ £ (0 iH <- P rH E o ^ H K ' ' > ~—» H N -M PX ---------- ---- H 0 I-1 I—I CN p ΡΠ P h"1 P p PÖ O <-D p; H H p n ω h S Λ C o U3 £ ΐ ft - ^ i' Of' W H X3 S )ll a - 1—1 o cqc cn-ry o cQcoMoocN^tNoÄrC O PQ tη co HU ^ <!t ·· -X <C P — . . . . p o .y < p —

Σ Q <hH(T' oo ro M fflo) ηΓ| (V CQ Λ '-phO

H r i <C — H · <C — C H P <C < C 03 pc _ ftc; PC ai co χΓ o) cv 3 C CO X ~ ' · N ........ ^4, cnp-

II] h ^ tl) (¾ J· ("M .—. -—s h -—- /^> Γ0 [>· CN

.· co^bo χ: χ x * -m x x x χ ^ ή ω^-μ CJ X00 Γ h h us S00 (1) - ΗΠ r.n c W oo a) «· — O il 03 O (θ'·" cv G cv O to -—' i? .ro p p — -n p -H K O * -ro p -H 'X, *- H ~ k HHOO^-^L^pOO (—i i—| ro «. H p lO = = UI » H Λί U3 <fl UI U) N Q -~ΗΛ^ 0 P 1 t\ w — — o 03 in ---- — — K P p O P >. -

•H P3 CO ' Ή XJ CO (0 i—I Pr i—| ·Η X3 CO CO

^ ^ Γ £ -g £ ~ CO rH O ^ > £ P W

M M p r. h- o ro £ jg Qj o H τ ro in 11CQ z< Ä PH

P 'O . · · f) i .... < c £ PJ- E9 ^f0 3. PC cn co γμ CQ CQ (D * cn n i~- oi Xs (DO CQ oQ o ' <C3\fcoo < K f.n — P PC ^ K im

•H

i—I

ä I-i o

CO

; ^ P

I cfp p

I H -H

| -H -HP

i H H HO

«2 3 £ £ -S .h

rH H H I H r—I

O O Ή pH pH

h c co cn i >, >

rH Ή p P Ή i—) r—I

CO p P H O O

Ό p θ'» ·Η H r-> pH^- CO co Ή •H p o\° P o\° p c\° ΡΗιίΡ P po\°

L COJ o LO OOPCNIp plH

Ph Ph r O'' ρ^Φ^'Η •r^»'

Qj CXco -h cn -H g p pi_n

1 Id I CD | CN | LO | ILO

lei cn— LO— j- — cn — h- H — i m

PC

H | CJ

— 1 o ! x: I x s s u n •H .

2 S 00 H- LO LO O- CO 03

•pP3 toto COCOco CO

CO

w

II

68058 α> 's

•H

L

yj CO

φ LOI

rH

(Λ Φ £

fil S

mrorovonLO n LO m LO rnLUcroLcrOLO,—im π x ro ·χ> i « m m m n en to un un m tn ra m ji ai E n oi un un un m ,-h »r oi o »r oc in o »r co m o n ^ cm o n *-r r~ o oi r~- r—i n rH n -r rr OI t ιη »r oi --rrNlrrr^rorn^-.·^ lo ^ n UI U ...... .... ........ ....

2 C ro n m oi m rj ro n ro oi ro rl ro oi ro oi r-~ ro >-o rl ro oi

E-< U

Ό » » « » · - » » > ^ » » » - " - ·· ns ns x x x x x x x x x x ns ns x x x ns x x x qj —i vC i ro i—iroro H o h n n r-iro rt o (—i ro r· rom uoo h n o 2 2 ^ - - - - - - »» - ~ - - - - ~ -........

un un un un un un un un un un un un un un un un un un ms un un un run un m co in n LO o* ro co n n ao i—1 mo o oi »ro n to r~ h c co un o o; co ro cc co o r~ o ση r~ r-in o co un ~r in co m τ un m ro»r g »r o co oi co n o- oi oi o- oi r— oi oi r~ οι ό n uin r- lc oi o- o» ro oi h Ή Ή

I—I i—I

•H *rl CO pl» Ή

•H ·Η ·Η ·Η I—I I—I Po rC rH

.—I r—1 r—I rH Co Co Γ—I r—I Co

Co Co Cr pc *>> Pc O O r' ^>CoCoiHrH(flun >h

I—lr—IrHl—I O O H H Q

OOOOWWOO m

υηωυηυη-μ-Ηωυη -H

4-^+^4-1 -M rrt Π3 -i2 ^ T}

rC(TjcörflCÄVjOG W

•H ·Η -H -H X X V> Vi X

03 -*-> 4-J HO 0-H-H 0

III I I III I

uouno-j-LnLOooLn rr I I I I I I I I · •Η ·Η ·γΗ *rH *rH * i-1 *rH Ή *rr Ό i—I rH r—I rH rH I—I <—I rH I—I rl r-j

>, >1^ >i >|H Co όο >, > S

Co CodP S Cod'0 >> CcclP COdP i^cJP Cc >. >L

Η +-> -3- -P 40 μ ph μιη 4Η 4 un h οι φ ». φ φ «· φ φ * Φ ^ Φ " to H m a ε® e eh ε a m a g e οι ή c a

I I 1C I I rt- I Γ— I te |. LO i Φ I

j- j£f- V—- CM (>J 'w' JZt zt ^ LO '·—' ro ^ CM J··* CM

ΓΟ ΓΟ ΓΟ -r- — -r·

oi rj rj O

X O O O

cj x u x rj x x x x x <

* rH

e O rH CM CO -H- LO CO 1"» CO CJ> O

• H ^ C" Γ-- t'- l""· C— C—· i"»» 00 ω w 36 68058

(U

X

e Ή -fa αο 03 Λί in ιη & U) <ϋ ' ω οο ;/) m ·<τ ^ ΓΜ <Ν ·«, · ·» «·, S *· ·

CO VjO H m r4 r-t \D

en en en en E £ en

ro rn CO O H O CM O

f-H TT (N TT -TT Cl 'TT rn en o · · · · ...

SG m (N rn co r^* (N 6* U

e *· «» ·» * «· *

Ci H n r—^ r—! Ό H H m en en enenen E £ en in co h in e n in O *~T G> O CO tJ* co α mch oo Γ" rn

•H

f—I

£ 0 en -μ rd en tn o

3- -H

'4 3 £ £ £ 3 S f * S <H a

I I I

Cm CO OJ

♦ i

Ci

,H X X X

en H cnj co w oo oo co il 37 6 8 0 5 8

Esimerkki 84 4 ’ -deok s i-4"-nikot i .iniamido-oleandomysii ni 4"-deoks i-4 "-amino-oleandomys i inin (2,0 g, 2,7 mmoolia) liuokseen 35 ml:ssa asetonia ja 15 ml:ssa vettä, inka pidettiin pH:ssa 7,9 - 8,0 lisäämällä IN natriumhydroksidin vesiliuosta, lisätään nikotinoyylikloridibydrokloridia (3,1? g, 14,8 mmoolia) annoksittain noin tunnin aikana. Sitten reaktioseos kaadetaan sekoitettuun 300 ml etyyliasetaattia ja 300 ml vettä sisältävään seokseen; ja pH säädetään 9,5:ksi IN natriumhydroks idin vesiliuoksen avulla. Orgaaninen kerros erotetaan, pestään kahdesti 300 ml vesi-annoksilla ja kuivataan vedettömällä natriumsulfaatilla. Liuottimen poisto tyhjössä tuottaa raakaa 2'-asetyyli-4"-deoksi-nikofiiniamido-oleandomysiinia keltaisena vaahtona, Silikagee1ikromatografia (aluksi kloroformilla eluoiden ja lopuksi 9:1 tilavuudesta kloroformi / i.sopropancl i- seokse 1 la ) tuottaa 530 mg puhdasta amorfista ?'-asetyyli-4"-deoksi-4"-nikot iiniamido-oleandomysi iniä (23,5 % ... Γ) saanto). Koko 530 mg näytteen yli yön sekoittaminen 25 C:ssa 25 ml:ssa metanolia ja seuraava liuottimen poisto tyhjössä tuottaa otsikkoyhdisteen kvantitatiivisella saannolla värittömänä vaahtona.

NMR: 8’66 (m> 1H)’ 8>05 (m’ 1H)’ 7’39 (m’ 1H), 3,41 (s, 3H)5 2,64 (s, 6H).

Esimerkki 85 4"-deoksi-4”-pikoliiniamido-oleandomysi i ni 25°C:eiseen 2"-asetyyli-4"-decksi-4"-amino-oleandomysiirin (6,0 g, 8,2 mmoolia) ja 2-pikoliinihapon (1,10 g, 9,0 mmoolia) liuokseen metyleenikloridissa (75 ml) lisätään N«Ν'-disykloheksvy-likarbodi-imidiä, 1,5 tunnin sekoittamisen jälkeen 25^0:ssa (jona aikana muodostuu raskas N,N'-disykloheksyy1iureasakka) lisätään vielä 2-pikoliinihappoa (1,1 g, 9,0 mmoolia) ja N,N *-disyklohek^yyli-karbodi-imidiä (1,8 g, 9,0 mmoolia), ja seosta sekoitetaan 250°C:ssa vielä tunnin ajan. Sitten reaktioseos suodatetaan piimään läpi. Suodosta sekoitetaan 100 ml:n kanssa vettä säätäen pH 9,5:ksi IN natriumhydroksidin vesiliuoksella. Orgaaninen kerros erotetaan, pestään kahdella 100 ml vesiannoksella, kuivataan vedettömällä nn·-riumsulfaari1la ja liuotin poistetaan tyhjössä, jolloin saadaan raakaa 2'-asetyyli-4"-deoksi-4"-pikoliiniamido-oleandomysiiniä (10,5 g). Kaakatuotetta sekoitetaan 25°C:ssa yli yön 150 ml:ssa metanolia. Liuottimen poisto tyhjössä antaa otsikkotuotteen raakamuodossa.

38 6 8 0 5 8

Silikageelikromatografia (150 g), eluoiden aluksi kloroformilla ja myöhemmin kloroformi/isopropanolilla )95:5 tilavuudesta) tuottaa 9,5 g 9"-deoksi-9"-pikoliiniamido-oleandomysiiniä värittömänä amorfisena vaahtona (69,3 %). 1,5 g amorfista tuotetta kiteytetään etyyliasetaatista, jolloin saadaan kiteistä 9"-deoksi-9"-pi koi i iniamido-oleandomysi i n iä ekvimolaariseria etyy liasetaatt i-solvaattina 1,2 g, sp. IM 0-193°C.

NMR 8’13 (m’ 4H)’ 3’44 (s’ 3H)’ 2,30 (s, 6H), 2,0.5 (s, 3H).

Esimerkit 86-90

Esimerkin 89 menettely toistetaan käyttäen sopivaa happoa 2-pikoliinihapon asemesta ja sopivaa 9"-deoksi-9"-amino-makrolidia seuraayien yhdisteiden tuottamiseksi: 86 . ?’-asetyyli-9"-deoksi-9"-(2-tienyyli)karboksiamido- oleandomysiini värittömänä, amorfisena vaahtona 65 % saannolla.

, TM9 NMR: <£^1 7,46 (3, 1H)’ 7’39 (s’ 1H)' (m’ 1H), 3,90 (s, 3H)3 2,25 (s, 6H), 2,06 (s, 3H).

87. 9"-deoks i-9"-(2-tienyyliIkarhoksiamido-oleandomys iin i.

NMR: 7,99 (, 3H), 7,09 (m, 3H), 3,93 (s, 3H), 2,29 (s, 6H)? 88. 9"-deoksi-9"-(3-isoksatsolyyli)-karboksiamido-oieando-mysiini.

NMR: 2,27 (3, 6K), 3,90 (s, 3H), AB kuvio jossa kohdalla^6,72, Hg kohdalla 8,37 (J^g = 1Hz, 2H). Massaspektri: m/e 239, 158.

89 . 9"-deoksi-9"-(3-isoksatsolyyli)karboksiamidoerytromysiini A likaisen valkoisena vaahtona.

NMR: <f 8,51 (d, 1H), 7,15 (d, 1H), 6,85 (d, 1H), 3,90 (s, 3H), 2,3^ (s, 6H), 1,50 (s, 3H).

90. 9"-deoksi-9"-(pikoliiniamido)erytromysiini A valkeana kiteisenä kiinteänä aineena; sp. 150-156°C (haj.).

NMR:i™^T 7,90 (m, 9H), 3,31 (s, 3H), 2,30 (s, 6H), 1,96 (s, 3H). 3 3 9 68058

Esimerkki 91 4"-deoksi-4"-fenyyliasetamido-oleandomysiinifosfaatti 4"-deoksi-4"-fenyyliasetamido-oleandomysiinin (6,0 g, 7 ,5 mmoolia) liuokseen etyyliasetaatissa lisätään f osfor.ihappoa (0,79 g, 6,8 mmoolia 85 % H^PO^) 0°C:ssa. Fosfaattisuola erottuu kiteisenä massana ja otetaan talteen suodattamalla ja kuivataan.

7,33 (s, 5H) , 3,66 (s, 2H), 3,36 (s , 3H), 2,89 % (1, 6H) .

Valmistus A

11,2'-diasetyyli-4"-deoksi-4"-okso-oleandomysiini 4,5 g:aan N-kloorimeripihkahappoimidiä, 50 ml:aan bentsee-niä ja 150 ml:aan tolueenia kuivassa kolvissa, joka on varustettu magneettisekoittimellä ja typen sisääntulolla ja jäähdytetty -5°C:seen, lisätään 3,36 ml dimetyylisulfidia. Kun on sekoitettu 0°C:ssa 20 minuutin ajan, sisältö jäähdytetään -25°C:seen ja sitä käsitellään 5,0 g :11a 11,2'-diasetyylioleandomysiiniä 10 ml:ssa to-lueeniä. Jäähdyttämistä ja sekoittamista jatketaan 2 tunnin ajan, jota seuraa 4,73 ml trietyyliamiinia lisäys. Reaktioseoksen annetaan reagoida 0°C:ssa 15 minuutin ajan, ja sitten se kaadetaan 500 mlraan vettä. pH säädetään 9,5:ksi IN natriumhydroksidin vesiliuoksella ja orgaaninen kerros erotetaan, pestään vedellä ja suolavesiliuoksella ja kuivataan natriumsulfaatilla. Luottimen poisto tyhjössä antaa 4,9 g haluttua tuotetta vaahtona.

NMR: (60 MHz)^™^ (ppm) : 3,48 (3, 3H) , 2,61 (m, 2H) , 2,23 (s, 2H), ja 2 ,033(s, 6H).

Samalla tavalla valmistetaan seuraavat 11,2’-dialkanoyyli-4"-deoksi-4"-okso-oleandomysiinit vastaavista 11,2'-dialkanoyyli-oleandomysiineistä:

11,2'dipropionyyli-ll-asetyyl.i-2-' propionyyli-ll-propionyyli-2-'asetyyli Valmistus B

11-asetyyli-4"-deoksi-4"-okso-oleandomysiini Liuoksen, joka sisältää 4,0 g 11,2’-diasetyyli-4"-deoksi-4"-okso-oleandomysiiniä 75 ml:ssa metanolia, annetaan reagoida huoneen lämpötilassa yli yön. Reaktioseos väkevöidään alennetussa 40 6 8058 paineessa, jolloin saadaan tuote vaahtona. Jäännöksen dietyylieet-teriliuos heksaanilla käsiteltäessä antaa 2,6 g tuotetta valkoisena kiinteänä aineena, sp. 112-117°C.

NMR: (60 MHz)^™^ (ppm) : 3,43 (s. 3H), 2,60 (m, 2H), 2,23 (s, 6H), ja 2,013(s. 3H).

Seuraamalla ylläkuvattuja menettelyjä valmistetaan 11-pro-pionyyli-4"-deoksi-4"-oleandomysiini 11,2 ' -dipropionyyli-4"-deok-si-4 M-okso-oleandomysiinistä.

Valmistus C

2'-asetyyli-4"-deoksi-4"-okso-oleandomysiini

Dimetyylisulfidia (0.337 ml) lisätään sameaan liuokseen, joka sisältää 467 mg N-kloorimeripihkahappomidiä 20 ml:ssa to-lueenia ja 6 ml:ssa bentseeniä jäähdytettynä -5°C:seen ja pidettynä typpiatomosfäärissä. Kun on sekoitettu 0°C:ssa 20 minuutin ajan, seos jäähdytetään -25°C:seen ja 1,46 g 2' -asetyyli-oleando-mysiiniä ja 15 ml tolueenia lisätään. Sekoittamista jatketaan 2 tunnin ajan -20°C:ssa, jota seuraa 0,46 ml trietyyliamiinia lisäys. Reaktioseosta pidetään -20°C:ssa vielä 5 minuutin ajan ja sitten sen annetaan lämmetä 0°C:seen. Seos kaadetaan sekoittaen 50 ml:aan vettä ja 50 ml:aanetyyliasetaattia. Vesiliuoksen pH säädetään 9,5:ksi lisäämällä natriumhydroksidin vesiliuosta. Orgaaninen kerros erotetaan sitten, kuivataan natriumsulfaatilla ja väkevöidään tyhjössä valkoiseksi vaahdoksi (1,5 g), Dietyyli-eetterin kanssa jauhaminen antaa 864 mg raakatuotetta, joka uudelleen kiteytettäessä kahdesti metyleenikloridi-dietyylieetteristä antaa 212 mg puhdasta tuotetta, sp. 183-185 ,5°C.

Analyysi: laskettu C„Hcl0 N:lle: C, 61,1; H, 8,5; N, 1,9. Saatu; o / b 1 1 o C, 60,9; H, 8,4; N, 1,9.

NMR: (60 MHz) ό (ppm): 5,60 (m, 1H), 3,50 (s, 3H) , 2,73 (m, 2H), 2,23 (s? 6H) , ja 2,03 (s, 3H).

II

141 68058

Samalla tavalla valmistetaan 2'-propionyyli-4"-deoksi-4"-okso-oleandomysiini-2'-propionyyli-oleandomysiinistä.

Valmistus D

4"-deoksi-4"-okso-oleandomysiini

Liuoksen, joka sisältää 1,0 g 2'asetyyli-4"-deoksi-4"-okso-oleandomysiiniä 20 ml:ssa metanolia, annetaan reagoida huoneen lämpötilassa yli yön. Liuos väkevöidään tyhjössä, jolloin saadaan haluttu tuote valkoisena vaahtona, 937 mg.

NjMR (60 MHz)^™^ (ppm) : 5,60 (m, 1H) , 3,50 (s, 3H) , 2,85 (m, 2H), ja 2,20 (s, 6H) .

Samalla tavalla hydrolysoidaan 2'-propionyyli-4"-deoksi-4"-okso-oleandomysiini-4"-deoksi-4"-okso-oleandomysiiniksi.

Valmistus E

1-asetyyli-4 "-deoksi-4"-amino-oleandomy s iin.i 10 %:seen palladium-hiilellä (10 g) suspensioon metanolis-sa (100 ml) lisätään ammoniumasetaattia (21,2 g) ja saatua lietettä käsitellään ll-asetyyli-4"-deoksi-4"-okso-oleandomysiinin (20 g) liuoksessa 100 ml:ssa samaa liuotinta. Suspensiota ravistellaan huoneen lämpötilassa vetyatmosfäärissä alkupaineessa 345kPa.

1,5 tunnin kuluttua katalysaattori suodatetaan pois ja suodos lisätään sekoittaen veden (1200 ml) ja kloroformin (500 ml) seokseen. pH säädetään 6,4:stä 4,5 reen ja orgaaninen kerros erotetaan. Vesikerros, vielä käsiteltynä kloroformilla (500 ml), käsitellään etyyliasetaatilla (500 ml) ja pH säädetään 9,5:ksi IN natrium-hydroksidilla. Etyyliasetaattikerros erotetaan ja vesikerros uutetaan jälleen etyyliasetaatilla. Etyyliasetaattiuutteex yhdistetään, kuivataan natriumsulfaatilla ja väkevöidään keltaiseksi vaahdoksi (18,6 g), joka di-isopropyylieetteristä kiteytettäessä tuottaa 6,85 g puhdistettua tuotetta, sp. 157,5 - 160°C, jonka NMR-tulokset ja ohutkerroskromatografia (TLC) osoittavat yhdeksi epi- 1,2 68058

meeriksi C-4’’-asemassa. Käytetty TLC-systeemi on CHCl^ : CH^OH iNII^OH

(9:2:0,1) silikageelilevyillä. Kehityssysteemi vanilliini:

HqP0. :C Hj.0H (5 g:50 ml: 100 ml) suihkutetaan TLC-levyille, jotka 3 ^ ^ ^ o .

on kuumennettu noin 80-100 C:seen. Päätuote-epimeen on vähemmän poolista kuin sivutuote-epimeeri.

NMR: (0 , CDC1 ): 3,41 (3H)s, 2,70(2H)m, 2,36 (6H)s, ja 2,10 (3H)s.

Toinen epimeeri, jota raakavaahdossa on määrältään 20-25 %, saadaan vähitellen väkevöimällä ja suodattamalla emäliuoksia.

Samalla tavalla valmistetaan seuraava 4"-deoksi-4"-amino-poleandomysiinin (molemmat C-4"-epimeerit) mono-alkanoyyli- ja di-alkanoyyliesterit sopivista mono-alkanoyyli- ja di-alkanoyyli-4"-deoksi-4"-okso-oleandomysiineistä. Kun valmistetaan 2-esteri, isopropanolia käytetään liuottimena.

11,2’-diasetyyli-2 ' -asetyyli-2’-propionyyli-11,2'-dipropionyyli-11-propionyyli-ll-asetyyli-2-propionyyli-ll-propionyyli-2-asetyyli-Valmistus F

4"-deoksi-4"-amino-oleandomysiini 2'-asetyyli-4" -deoksi-4"-okso-oleandomysiinin (20 g) liuosta metanolissa (125 ml), sen jälkeen kun sitä on sekoitettu huoneen lämpötilassa yli yön, käsitellään ammoniumasetaatilla (21,2 g). Saatu liuos jäähdytetään jäähauteessa ja sitä käsitellään natrium-syaanoboorihydridillä (1,26 g). Jäähdytyshaude poistetaan sitten ja reaktioseoksen annetaan reagoida huoneen lämpötilassa 2 tunnin ajan. Seos kaadetaan veteen (600 ml) ja dietyylieetteriin (600 ml) ja 68058 pH säädetään 8,3:sta 7,5:een. Eetterikerros erotetaan ja vesi-kerroksen pH säädetään 8,2S:ksi. Dietyylieetteri- ja etyyiiase-taattiuutteet, jotka tehdään tässä pH:ssa, laitetaan myös sivuun, ja pH nostetaan 9,9:ksi. Dietyylieetteri- ja etyyliasetaattiuut-teet tässä pH:ssa yhdistetään, pestään peräkkäin vedellä (lx) ja kyllästetyllä suolavedellä ja kuivataan natriumsu1faatill a. Jälkimmäiset uutteet, otettu pH:ssa 9,9, väkevöidään vaahdoksi ja kromatogra foidaan s il ikagee 1 i 1 lä (160. g) käyttäen kloroformia panostus 1iuottimena ja alkueluenttina. Kun on otettu 11 fraktiota, 12 ml fraktiota kohti, eluentti vaihdetaan seokseksi 5 % metano-lia- -95 % kloroformia. Fraktion 370 kohdalla eluentti vaihdetaan seokseksi 10 % metanolia--90 % kloroformia ja fraktaon 440 kohdalla käytetään 15 % metanol. i a--8 5 % kloroformia. Fraktiot 8 5- 260 yhdistetään ja väkevöidään tyhjössä kuiviin, jolloin saadaan 2,44 g haluttua tuotetta.

NMR (S', CDCl 3) : 5,56 (m, 1H), 3,36 (s, 3H), 2,9 (m, 2H) ja 2,26 (s, 6H).

Valmistus G

2 1 -asetyyl i-4''-deoksi-4"-okso-erytromysi ini A

3 ml:aan met.yleeniklor idia ja 0,328 ml:aan dimetyylisulfok-sidia, jotka on jäähdytetty noin -65°C:seen ja joita pidetään typ-piatmosfäärissä, lisätään 0,652 ml trifluorietikkahappoanhydridiä. Noin minuutin kuluttua muodostuu valkoinen liete viitaten trifluoriet ikkahappoanhydr idi dime tyyl isulfoksidikompleksin läsnäoloon. Saatuun lietteeseen lisätään tipoittain liuos, joka sisältää 1,0 g 2’-asetyylierytromysiini A etyyliasetaattia, joka on saatu kiteyttämällä 2’-asetyylierytromysiini A uudelleen etyleeniasetaatista, 7 ml:ssa metyleenikloridia pitäen lämpötilan noin -65°0:ssa. Saadun seoksen annetaan reagoida 15 minuutin ajan noin -60°C:ssa ja, se jäähdytetään sitten -70°C:seeri. Trietyyliamiinia (1,61 ml) lisätään nopeasti reaktioseokseen ja jäähdytyshaude poistetaan.

Kun on sekoitettu 15 minuutin ajan, liuos lisätään 10 ml:aan vettä ja vesifaasin pH säädetään 10:ksi. Orgaaninen faasi erotetaan, pestään peräkkäin vedellä (3 x 10 ml) ja suolavesiliuoksella (1 x 10 ml) ja kuivataan natriumsulfaati1la. Liuottimen poisto alennetussa paineessa antaa 929 mg raakatuotettä. Uudelleen kiteytys metyleenikloridi-heksaanista antaa 320 mg puhdistettua tuotetta, sp. 105-108°C.

44 68058 NMR (cf, CDC13) : 3,28 (s, 3H), 2,21 Cs, 6H), ja 2,03 (s, 3H).

Samalla tavalla 21-propionyylierytromysiini A etyyliasetaatista lähtien ia seuraamalla ylläkuvattua menettelyä saadaan 2 ' -propionyyl i-4'’-deoksi-1·* " - okso-eryt romys i ini A.

Valmistus H

4"-deoksl-4"-okso-erytromysi ini A

Liuoksen, joka sisältää 4,0 g 2' -asetyyli-4"-deoksi-4''-okso-erytromysiini A 75 ml:ssa metanolia, annetaan reagoida ympäröivässä lämpötilassa 20 tunnin ajan· Liuotin poistetaan tyhjössä ja jäljelle jäänyt valkoinen vaahto kiteytetään uudelleen metyleeni-kloridi-heksaanista. 3,44 g, sp. 170,5 - 172 , 5°C.

NMR (<£, CDC13) : 3,36 (s, 3H) ja 2,33 (s, 6H).

Valmistus I

4"-deoksi-4"-amino-erytromysiini A Menetelmä (a)

Sekoitettuun liuokseen, joka sisältää 3,0 g 4"-deoksi-4"-okso-erytromysiini A 30 ml:ssa metanolia typpi atmosfäärissä, lisätään 3,16 g kuivaa ammoniumasetaattia· 5 minuutin kuluttua 188 g natriumsyaanoboorihydridiä pestään reaktioseokseen 5 ml :11a metanolia ja reaktioseoksen annetaan reagoida huoneen lämpötilassa yli yön. Vaalean keltainen liuos kaadetaan 300 ml:aan vettä ja pH säädetään 0,0:ksi. Vesipitoinen osa uutetaan pH:ssa 6, 7, 7,5, 8, 3 ja 10 käyttäen 125 ml dietyylieetteriä jokaisessa uutossa. Uutteet kohdilta pH 8, 9 ja 10 yhdistetään ja pestään 125 ml:11a tuoretta vettä. Erotettu vesikerros uutetaan eetterillä (1 x 100 ml) pH:ssa 7, etyyliasetaatilla (1 x 100 ml) pH:ssa 7, eetterillä (1 x 100 ml) pH:ssa 7,5, etyyliasetaati11a (1 x 100 ml) kohdalla pH 7,5 ja etyyliasetaatilla (1 x 1G0 ml) pH:ssa 8, 9 ja 10. Etyyli asetaattiuutteet pH:sta 9. ja 10 yhdistetään, pestään kyllästetyllä suolayesi1iuoksella ja kuivataan natriumsulfaati11a. Liuottimen poisto tyhjössä antaa 30 mg halutun tuotteen epimeeristä seosta norsunluun värisenä vaahtona.

Samalla tavalla valmistetaan 4"-deoksi-4M-amino-erytromy-siini B 4"--deoks i-4"-oksoerytromys iini B:stä.

68058 4b

Menetelmä (b) 20 g H"-decksi-4"-okso-erytromysiin1 A, 31,6 g ammoniumase-taattia ja 10 g 10 % palladiumia hiilellä 200 ml:ssä metanolia ravistellaan ympäröivässä lämpötilassa vetyatmosfäärissä aikapaineessa 345 kPa yli yön. Käytetty katalysaatΐori suodatetaan ja saodos väkevöidään kuiviin tyhjössä. Jäännös jaetaan vesi-kloro-formiin pH:ssa 5,5. Vesikerros erotetaan, pH säädetään 9,6:ksi ja kloroformia lisätään. Orgaaninen kerros erotetaan, kuivataan narri umsulfaat illa ja väkevöidään alennetussa paineessa kuiviin. Jäljelle jäänyt valkoinen vaahto (19 g) jauhetaan 150 ml:ssa di-etyylieetteriä huoneen lämpötilassa 30 minuutin ajan. Saadut kiinteät aineet suodatetaan ja kuivataan, jolloin saadaan 9,45 g yhtä epimeeriä, jota ei voi erottaa valmistuksen J epimeeristä.

Di etyy1ieetterisuodos väkevöidään kuiviin, jolloin saadaan 6,89 g tuotetta, joka koostuu toisesta epimeeristä s^kä joistakin epäpuhtauksista.

Menetelmä (c) 2 g 4"-deoksi-4"-okso-erytromysiini A, 3,1 g ammoniumase-taattia ja 2,0- g Raney-nikkeliä 50 ml:ssa metanolia ravistellaan huoneen lämpötilassa vetyatmosfäärissä alkupa aneessa 345 kPa yli yön. Lisätään edelleen ammoniumasetaattia 3,16 g ja 2,0 g Raney-nikkeliä ja hydrausta jatketaan vielä 5 tunnin ajan. Kiinteät aineet suodatetaan ja suodos väkevöidään kuiviin tyhjössä. Jäännös lisätään sekoittaen vesi-kloroformi seokseen ja pH säädetään 6,4:stä 5,5:een- Vesifaasi erotetaan, pH säädetään 9,6:ksi ja tuoretta kloroformia lisätään. Kloroformiuute erotetaan, kuivataan natrium-sulfaatilla ja väkevöidään alennetussa paineessa, jolloin saadaan 1,02 g tuoretta keltaisena vaahtona. Vai1 itseva 1 la isomeerillä on vastakkainen koritiguraat io asemassa 4" kuin valmistuksen J yhdisteellä.

Valmistus J

4"-deoksi-4"-amino-erytromysiini A (yksi epimeeri)

Liuoksen, joka sisältää 16,0 g 2'-asetyyli-4"-deoksi-4"-amino-erytromysiinin A epimeeristä seosta 150 ml:ssa metanolia, annetaan reagoida huoneen lämpötilassa typpiatmosfäärissä 72 tunnin ajan. Liuotin poistetaan tyhjössä ja jäännös liuotetaan sekoitettuun liuokseen, joka sisältää 150 ml vettä ja 200 ml kloroformia.

1,6 68058

Vesikerros heitetään pois ja 150 ml tuoretta vettä lisätään.

Vesikerroksen pH säädetään 5:ksi ja kloroformikerros erotetaan. Vesifaasin pH säädetään sitten kohdille 5,5, 6, 7, 8 ja 9, uurtaen se jokaisen säädön jälkeen 100 ml :11a tuoretta kloroformia. Klo-roformiuutteet kohdilta pH 0, 7 ja 8 yhdistetään, pestään peräkkäin vedellä ja kuivataan natriumsu1 faati1la. Liuottimen poisto alennetussa paineessa antaa 2,9 g 4"-decksi-4"-amino-erytromysii-nin A epimeeristä seosta. 1,9 g näytettä seoksesta jauhetaan di-etyyiieetterin kanssa, joka saa aikaan pienen liukenemattoman vaahtomäärän kiteytymisen. Kiinteät aineet suodatetaan ja kuivataan, jolloin saadaan 67 mg yhtä epimeeriä 4"-deoksi-4"-amino-erytromysiini A, sp. 140-147°C.

Valmistus K

11,21-diasetyyli-4"-deoksi-4"-okso-erytromysiini A 6,9-hemi- ketaa1i

Liuosta, joka sisältää 10 g 2’-a setyyli-4”-deoksi-4”-okso-erytromysiini A 250 ml:ssa pyridiiniä, käsitellään 40 ml:11a etik-kahappoanhydridiä ja saadun reaktioseoksen annetaan seistä huoneen lämpötilassa 10 päivän ajan. Suurin osa 1iuottimes+a poistetaan tyhjössä ja jäljelle jäänyt väkeyöite lisätään seokseen, joka sisältää 150 rn 1 vettä ja 100 ml kloroformia. Vesiliuoksen pH nostetaan 9,0:ksi ja kloroformi erotetaan, kuivataan natriumsul-faatilla ja väkevöidään kuiviin.

NMR (ö, CDC13): 3,33 (s, 3H), 2,26 (s, 6H), 2,10 (s, 3H) , 2,03 (s, 3H) ja 1,55 (s, 3H).

Samalla tavalla, mutta lähtemällä sopivasta '-‘"-deoks i-4"-okso-erytromysiini A:sta ja tarvittavasta a Ikäänikarboksyylihappo-anhydridistä, syntetisoidaan seuraavat yhdisteet:

II

47 68058

Rn S(CH3)^ “Vtx

OCH

R1 R2 0 0

II II

ch3c- ch3ch2c- 1 °> CH3CH2C- ch3ch2c- 0 0 CH3CH2(i- CH3C-

Yalmistus L

ll-asetyyli-VT-deoksi-V^okso^erytromysiini A 6,9-hemi - ketaali

Liuoksen, joka sisältää 3,0 g 11,21-diasetyyli-4"-deoksi-4"-okso-'-erytronjysiini A 9-, O-hemiketaalia 50 ral;ssa metanolia, annetaan reagoida typpiatmosfäärissä yli yön. Liuotin poistetaan tyhjössä, jolloin saadaan haluttu tuote (3,0 g) keltaisena vaahtona.

NMR (6, CDC13); 3,35 (s, 3H), 2,31 (s, 6H), 2,13 (3H) ja 1,55 (s, 3H1.

Samalla tavalla muutetaan valmistuksessa L luetellut yhdisteet yllä kuvatulla menettelyllä 1l-asetyyli-4"-deoksi^4"-okso-erytromysi ini A 6,9-hemiketaali ksi ja. ll'-propionyy 1 i-4"-deoksi-4"-okso-erytroTnysiini A 6,9-heiniketaal iksi.

48 68058

Valmistus M

11-asetyyli-4"-deoksi-4"-amino-erytromysiini A 6,9-hemike- taal i

Sekoitettuun liuokseen, joka sisältää 4,4 g il-asetyyli-4 "-deo.ksi-4 ,!-okso-ery tromys i i ni A 6,9-hemiketaalia ja 4,38 g ammofi iumasetaat t i a 7 S ml:ssa metanolia, lisätään 305 mg 85 % natriumsyaanoboorihydridiä. Kun on sekoitettu huoneen lämpötilassa yli yön, reaktioseos kaadetaan 300 ml:aan vettä, johon sitten väsätään 250 ml kloroformia. Vesikerroksen pH säädetään 9,8:ksi ja kioroformikerros erotetaan. Vesikerros uutetaan kloroformi 1 la jälleen ja kloroformiuutteet yhdistetään, kuivataan natriumsulfaa-tiila ja väkevöidään, valkoiseksi vaahdoksi. Jäljelle jäänyt vaahto liuotetaan sekoitettuun seokseen, joka sisältää 125 ml vettä ja 125 ml tuoretta kloroformia ja pH säädetään 4,9:ksi. Kloroformi erotetaan ja heitetään pois ja vesikerroksen pH säädetään kohdille 5, 6, 7 ja 8 uuttaen jokaisen säädön jälkeen tuoreella kloroformilla. Vesifaasin uutteet kohdilta pH 6 ja 7 yhdistetään, pestään kyllästetyllä suolavesiliuoksella ja kuivataan natriumsulfaatil la. Liuottimen poisto tuottaa 1,72 g haluttua tuotetta valkoisena vaahtona. Tuote liuotetaan mahdollisimman pieneen määrään dietyyli-eetteriä ja sitä käsitellään seuraavaksi heksaanilla, kunnes se samenee. Kiteinen tuote, joka muodostuu suodatetaan ja kuivataan, 1,33 g, sp. 204,5-206,5°C.

N MR (<£', CDC13 ) : 3,31 (s, 2H), 3,28 (s, 1H), 2,31 (s, 6H) , 2,11 (s, 3H) ja 1,5 (s, 3H).

Samalla tavalla, mutta lähtien sopivasta 4"-deoksi-4"-okso-erytromysiini A:sta ja substituoimalla isopropanoli1la meta-noli reaktioliuottimena, saadaan seuraavat yhdisteet: 49 63058 S (CH3) 2 i 1 ,,^α och3 R]_ __·*- «u 9 0

- |T „ H

^h3c- ch3c~ ί 9 CH3C- ch3ch2c- i) s ch3ch2c- ch3ch2c- 9 0 I !1 ch3ch2c- ch3c- 0 il ch3ch2c- h

Valmistus N

2 1-a.setyylierytromysiini A 6,9-hemiketaali 11,1 2-karbonaat- tiesteri

Liuokseen, joka sisältää 13,2 g erytromysiini A 6,9-hemike-taali 11 ,12-ka.rbonaattiesteriä (U.S, 3,417,077 ) 150 ml: ssa bent-seeniä, lisätään 1,8 ml etikkahappoanhydridiä ja reaktiosaoksen annetaan reagoida huoneen lämpötilassa 1,5 tunnin ajan. Liuos kaadetaan 200 ml;aan yettä ja vesifaasi tehdään emäksiseksi pH;hon 9-,0., Rentseenikerros erotetaan, kuivataan natriumsulf aat illa ja yäkevöidään tyhjössä 15,3:ksi g;ksi valkeata vaahtoa. Jauhettaessa 50 ml dietyylieetterin kanssa vaahto kiteytyy. Tuotteen suodatus ja kuivaus antavat 12,6 g puhdasta tuotetta, sp. 224,5-228,5°C.

50 6 80 5 8 NMR (*f, CDC13): 3,36 (s, 3H), 2,30 (s, 6H), 2,06 (s, 3H) ja 1,61 (s, 3H).

Samalla tavalla substItuoiden ekvivalentilla määrällä propionihappoanhydridiä etikkahappoanhydridi yllä kuvatussa menettelyssä valmistetaan propionyyli-erytromysiini A 6,9-hemike-taali 11,2-karbonaattiesteri.

Valmistus J

2 ’ -asetyyli-4"-deoksi-4"-okso-erytromysiini A 6,9-hemike-taali 11,1?-karbonaattiesteri

Suspensioon, joka sisältää 6,19 g N-kloorimeripihkahappo-imidiä ISO ml:ssa tolueenia ja 50 ml:ssa bentseeriiä jäähdytettynä ~5°0:seen lisätään 4,46 ml dimetyylisulfidia. Kun on sekoitettu 20 minuutin ajan, saatu suspensio jäähdytetään -25°C:seen ja 12,4 g 2’-asetyylierytromysiini A 6,9-hemiketaa 1i 11,12-karbo-naattiesteriä, osittain liuotettuna 80 ml:aan tolueenia, lisätään tipoittaan. Lämpötila, joka lisäyksen ajan pidetään välillä -19 --25°C, pidetään -25°C:ssa 2 tunnin ajan. Tämän ajan lopulla 6,79 ml trietyyliamiinia lisätään kaikki kerralla. Jäähdytyshaude poistetaan ja lämpötilan annetaan nousta -10°C:seen. Reaktioseos kaadetaan sitten veteen ja vesifaaai säädetään 8,4:sta 9,0:aan. Orgaaninen kerros erotetaan vaahdoksi (14,0 g). Jäännöksen jauhaminen dietyylieetterin kanssa aiheuttaa vaahdon kiteytymisen. Tuotteen suodatus ja kuivaus antaa 11,3 g kiteistä ainetta, sp. 212-213,5°C.

NMR (<1, CDC13) : S,26 (t, 1H), 3,36 (s, 3H), 2,30 (s, 6H), 2,13 (s, 3H), 1,63 (s, 3H), ja 1,50 (s, 3H),

Samalla tavalla valmistetaan 2'-propionyyli-4"-deoksi-4"-okso-erytromysiini A 6,9-hemiketaali 11,12-karbonaattiesteri korvaamalla 2"-asetyyliesteri ekvivalentilla määrällä 2"-propionyyli-erytromysiini A 6,9-hemiketaali 11,12-karbonaattiesteri.

Valmistus P

4"-deoksi-4"-okso-erytromysiini A 6,9-hemiketaa 1i 11,12- karbonaatt iesteri 42,9 g 2'-asetyyli-4"-deoksi-4"-erytromysiini A 6,9-hemiketaali 11,12-karbonaattiesteriä lisätään 800 ml:aan metanolia ja saadun liuoksen annetaan reagoida huoneen lämpötilassa 72 tunnin ajan. Poistettaessa liuotin tyhjössä jäljelle jää 41 g tuotetta valkoisena vaahtona. Jäljelle jäänyt aine liuotetaan noin 100 ml:aan ti si 6 8 0 5 8 asetonia, iota seuraa veden varovainen lisääminen saostuspastee-seen asti. Saadun kiteisen kiinteän aineen annetaan seistä 40 minuutin ajan ja sitten tämä suodatetaan ja kuivataan, jolloin saadaan 34,2 g haluttua tuotetta, sp. 186,5 - 188°C.

NMR («£, CDC i 3): 5,66 (t, 1H), 3,35 (s, 3H), 2,35 (s, 6H), 1,65 (s, 3H) ja 1,51 (s, 3H).

Valmistus Q

4"-deoksi-4"-amino-erytromysiini A 6,9-hemiketaali 11,12- karbonaatriesteri 189 g:aan 4"-deoksi-4"-oksi-erytromysiini A 6,9-hemiketaa-li 11,12-karbonaattiesteriä 1200 ml:ssa metanolia huoneen lämpötilassa lisätään sekoittaen 193 g ammoniumasetaattia. 5 minuutin kuluttua saatu liuos jäähdytetään noin -5°C:seen ja sitä käsitellään sen jälkeen 13,4 g:11a 85 % natriumsyaanoboorihydridiä 200 ml:s-sa metanolia 45 minuutin 1isäysaikänä. Jäähdytyshaude poistetaan ja reaktioseoksen annetaan reagoida huoneen lämpötilassa yli yön. Reaktioseoksen tilavuus pienennetään 800 ml:ksi tyhjössä ja se lisätään sekoitettuun 1800 .ml vettä ja 900 ml kloroformia sisältävään seokseen. pH säädetään 6,2:sta 4,3:een 6N kloorivetyhapo1la ja kloroformikerros erotetaan. Kloroformi yhdistetään 1 l:aan vettä ja pH säädetään 9,5:ksi. Orgaaninen faasi erotetaan, kuivataan natriumsulfaati11a ja väkevöidään alennetussa paineessa, jolloin saadaan 174 g valkoista vaahtoa. Jäljelle jäänyt aine liuotetaan seokseen, joka sisältää 1,1 vettä ja 500 ml etyyliasetaaf-ia ja pH säädetään 5,5;ksi. Etyyliasetaattikerros erotetaan ja vesiker-ros säädetään peräkkäin pH:hon 5,7 ja 9,5 uuttaen jokaisen pH-sää-dön jälkeen 500 ml:lla tuoretta etyyliasetaattia. Etyy1iasetaat-tiuute pH:ssa 9,5 kuivataan natriumsuifaati1la ja väkevöidään tyhjössä kuiviin, 130 g, 120 g jäljelle jäänyttä vaahtoa liuotetaan seokseen, joka sisältää 1 1 vettä ja 1 1 metyleenikloridia. Vesikerroksen pH säädetään kohdalle 4,4, 4,9 ja 9,4 peräkkäin uuttaen joka säädön jälkeen 1 1:11a tuoretta metyleenikloridia. Mety-leenikloridiuute kohdalla pH 9,4 kuivataan natriumsulfaatilla ja väkevöidään alennetussa paineessa, jolloin saadaan 32 g tuotetta valkoisena vaahtona. Kiteytys 250 ml:sta asetoni-vettä (1:1, til:til) antaa 28,5 g kiteisiä epimeerejä.

NMR 100 Mz (X, CDC13): 5,20 (lH)m, 3,37 (l,5H)s, 3,34 (1,5H)s, 2,36 (6H)s, 1,66 (3H)s ja 1,41 (3H)s.

” 68058

Valmistus R

4"-deoks i-4 ”-amino-erytromysi ini A 6 , 9-hemiketaal i 11,12-karbonaa ttiesterin epimeerien erot t;amineri Korkeapaine-nestekromatografiapylvääseen (3,0 cm x 9 cm) täytetty Cf 254 si1ikageeli1lä, joka on kyllästetty formamidilla la eluoitu kloroformilla, panostetaan 200 mg. 1656 kPa painetta käytetään nopeudella 4,76 cm^ minuutissa ia sovelletaan fraktioko-koa 10. ml. Fraktiot 14-21 ja 24-36 kerätään.

Fraktiot 14-21 yhdistetään ia väkevöidään noin 50 ml:ksi. Vettä (50 mi) lisätään ja, pH säädetään 9,0 : ksi . Kloroformi kerros erotetaan, kuivataan natriumsulfaati11a ja väkevöidään, jolloin saadaan 105 mg valkoista vaahtoa. Jauhaminen dietyylieetterin kanssa saa aikaan vaahdon kiteytymisen. Kun on sekoitettu huoneen lämpötilassa tunnin ajan, kiteinen tuote suodatetaan ja kuivataan, 31,7 mg, sp. 194-196°C.

NMR 100 Mz (<3, CDCl^); 5,24 (lH)d, 5,00. (IH)t, 3,40 (3 H)s, 2,40 (6 H)s, 1,66 (3H)s, ja 1,40 (3H)s.

Fraktiot 24-36 yhdistetään ja niitä käsitellään kuten yllä, jolloin saadaan 47,1 mg tuotetta valkoisena vaahtona, joka on identtinen sen aineen kanssa, joka saatiin valmistuksen Q epimee-risestä seoksesta kiteyttämällä uudelleen kuumasta asetoni-vedestä (1 g 25 ml vettä kohti, 20 ml asetonia); NMR-tulokset viittaavat yhteen epiipeeriin.

NMR 100 Mz (ci, CDC13): 5,12 (lH)d, 3,3 0. (3H)s, 2,3 0 (6H)s, 1,62 (3H)s, 1,36 (3H)s.

Valmistus S

F.pimeerinen 2 ' -asetyv 1 i-4"-deoks i -4"-aminoerytromysi ini A 11, 1 2^-karhonaaftiesteri ja sen 6,9-hemiketaali Suspensioon, joka sisältää 11,1 g 21-asetyyli-4"-deoksi-4"-okso-erytromysiini A 6,9-hemiketaali 11,12-karbonaattiesteriä 300 ml:ssa isopropanolia huoneen lämpötilassa lisätään sekoittaen 10,7 g ammoniumasetäättia.. 5 minuutin jälkeen lisätään 747 mg natriumsyaanoboorihydridiä 130 mltssa isopropanolia 30 minuutin aikana ja saadun reaktioseoksen annetaan reagoida huoneen lämpötilassa yli yön. Vaalean keltainen liuos kaadetaan 1100 ml:aan vettä, johon sitten lisätään 400 ml dietyylieetteriä. pH säädetään 4,5:ksi ja eetterikerros erotetaan. Vesikerros tehdään emäksiseksi pH:hon 53 63058 9,5 ia uutetaan (2 x 500 ml). kloroformilla. Kloroformiuutteet yhdistetään, kuivataan natriumsulfaatilla ia väkevdidään, jolloin saadaan 7,5 g keltaista vaahtoa. Jäljelle jääneen aineen uudelleen kiteyttäminen dietyy Lieetteristä tuottaa 1,69 g, joka säilytetään yhdessä emä liuosten kanssa.

Emä 1 tuos käsitellään 75 ml:11a vettä ja pH säädetään 5,0:ksi. Eetterikerros korvataan 75 ml :11a tuoretta eetteriä ja pH säädetään 5,4:ksi. Eetteri korvataan etyyliasetaatil la ja pH nostetaan 10:ees. Emäksiseksi tehty vesikerros uutetaan (2 x 75 ml) etyyliasetaatilla ja ensimmäinen etyyliasetaattiuute kuivataan natriumsulfaati1 la ja väkevöidään kuiviin. Jäljelle jäänyt vaahto (1,96 g) lisätään seokseen, joka sisältää 75 ml vettä ja 50 ml dietyyli eetteriä, ja pH säädetään 5,05 : ksi , Eetteri erotetaan ja vesikerros säädetään peräkkäin kohdille pH 5,9, 6,0, 7,(.15 ja 8,0 uuttaen jokaisen pH-säädön jälkeen 50 ml :11a tuoretta dietyyl ieetteriä. pH säädetään lopuksi kohdalle 9,7 ja vesikerros uutetaan 50 ml :11a etyyliasetaattia. Eetteriuute kohdalta pH 6,0 yhdistetään 75 rahaan yettä ja pH säädetään 9,7;ksi. Eetterikerros erotetaan, kuivataan ja väkevöidään tyhjössä, jolloin saadaan 460 mg valkoista vaahtoa.

NMR 10.0 Mz (cT, CDC13): 5,20 (lH)t, 3,43 (2H)s, 3,40 (1H)s, 2,38 (6H)s, 2,16 (3H)s, 1,70 (3H)s, ja 1,54 (3H ).

NMR-tulokset viittaavat tuotteen olevan 2'-asetyyli-4"-deoksi-4"-amino-erytromysiini A 6,9-hemiketaali 11,12-karbonaatti-esferin epimeerit.

Yllä esitetty 1,69 g liuotetaan seokseen, joka sisältää 75 ml vettä ja 75 ml di etyylieetteriä ja pH säädetään 4,7:ksi. Eetteri erotetaan ja. vesikerros uutetaan edelleen tuoreella eetterillä (75 ml) pH:ssa 5,05 ja 5,4 ja etyyliasetaatilla (2 x 75 ml) pH:ssa 9,7. Yhdistetyt etyyliasetaattiuutteet kuivataan natrium-sulfaatilla ja väkevöidään alennetussa paineessa, jolloin saadaan .1,26 g valkoista vaahtoa. Tämän jäljelle jääneen aineen kiteytys antaa 411 mg tuotetta, sp. 193-196°C. (haj.). Emäiiuos väkevöidään kuiviin ja jäännös liuotetaan kuumaan etyyliasetaattiin. Liuoksen annetaan seisoa yli yön huoneen lämpötilassa. Kiteiset kiinteät aineet, jotka saostuvat, suodatetaan ja kuivataan, 182 mg, sp. 198-2Q2 C (haj.), tuotteen määrän lisäämiseksi.

5" 68058 NMR 1Q0 Hz (A, CDC13): 5,10 (lH)t, 3,34 (2H)s, 3,30 (1H)s, 2,30 (6H)s, 2,08 (3H)s, 1,62 (3H)s, ja 1,48 (3H)s.

NMR-tulokset osoittavat tuotteen olevan 2'-asetyyli-4"-deoksi-4"-amino-erytromysiini A 11,12-karbonaattiesterin epimeerit.

Samalla tavalla, mutta lähtien 3'-propionyyli-4"-deoksi-4"-okso-erytromysiini A 6,9.-hemiketaalit 11,12-karbonaatt iesteri stä, saadaan 2’-propionyyli-4"-deoksi-4"-amino-erytromysiini A 6,9-hemiketaali 11,12-karbonaattiesterin ja 2'-propionyyli-4"-deoksi-4"-amino-erytromysiini A 11,12-karbonaattiesterin epimeerit.

Valmistus T

Yleinen menetelmä - Alfa-alkoksifenyylietikkahapot

Sopiva kaavan XYCgH^ mukainen bentseeni, jossa X ja Y ovat kuten tässä on määritelty, lisätään vedettömään kloraaliin mooli-suhteessa 4,24:1,00 ja seosta sekoitetaan ja jäähdytetään 0°C:seen. Alumiinikloridia (0,33 moolia) lisätään annoksittain seokseen voimakkaasti sekoittaen, pitäen lämpötilan välillä 0-5°C. Kun alu-miinikloridin lisäys on päättynyt, reaktioseoksen lämpötilan annetaan nousta välille 15-18°C. Seosta sekoitetaan tunnin ajan ja sitten se jäähdytetään välille 0-2°C. Sitä sekoitetaan tässä lämpötilassa vielä 60 tuntia ja sitten se kaadetaan samaan tilavuuteen j äävettä. Fenyyli-trikloorimetyylikarbino1i j ohdannainen uutetaan n-butyyliasetaa+i1la tai n-butanolilla (2 x 250 ml). Yhdistetty uute pestään vedellä (3 x 100 ml) ja sitten se kuivataan natriumsulfaati11a. Liuottimen poistaminen tuottaa, karbinolin, joka puhdistetaan haluttaessa tyhjötislauksella.

Karbinoli liuotetaan haluttua alkoksiryhmää vastaavaan alkoholiin ja lisätään sitten tipoittaan palautusjäähdyttäen keitettyyn saman alkoholin liuokseen, joka sisältää vähintään 3 ekvivalenttia KOH (laskettuna karbinolista). Reaktioseosta keitetään palautusjäähdyttäen 3 tunnin ajan lisäyksen päättymisen jälkeen ja sitten se haihdutetaan kuiviin. Jäännös otetaan veteen, pH säädetään 3,5:ksi ja vesiseos uutetaan sopivalla liuottimena (n-butyyliasetaatti, eetteri, metyleenikloridi), Uute pestään suolavedellä, jota. seuraa vesi ja kuivataan sitten (Na^SO^) ja haihdutetaan kuiviin tuotteen saamiseksi.

il

Claims (4)

55 68058

1. Menetelmä kaavan A mukaisten puolisynteettisten u"-a'3yy-liamido-makrolidiantibioottien tai niiden farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen valmistamiseksi, 0 _ Il R ' NH-C-Z A jossa R on R N(CH ) :- -,0 -2 HqC h. N(CH. ) 0. <" 0„ 3:. n I 3 2 H~C ‘ν'8 i ΓΗ 2* j 0 ' Y. RlV k O^V^CHg r ji^3! -l n~c.JP- Ach3 R- [ i 3 H O''1 , f0-'0· ^»3 H n':-'· .-CH, H3C 01 2-\ li" , H3C 1 j 0.-.,/¾ ·./ 3 Y γη öv \ i ,λ

0. I 2 3 j| CH3\/ QCH3 Ö CH^'OCH. O ö A-l A-2 CH R2 N(CH3)2 HO -;x °- H3C - T-nJ-CH3j J, tal V X' --° o CHj A_3 R3 -t, CH h3c- 3.-1 roh o-i 3 C2H5 °- -Λ L

0 CH3 ' y-, ^ '0CI-U H3C joissa R^ ja R^ merkitsevät vetyatomia tai alkanoyyliryhmää, joka sisältää 2-3 hiiliatomia; R^ on vetyatomi tai hydroksiryhmä; R^ on 2-3 hiiliatomia sisältävä alkanoyyliryhmä; R^0 ja R^ yhdessä muodostavat ryhmän 0 !l -0-C-0-; 56 6 8058 o '! R O ja R„ yhdessä muodostavat ryhmän -Q-C-0-; _L o Z on (a) (CH0) -C(CH-)., Z m o o (b) -CHCRj.) -/q\ Y' (c) tai Y' (d) (CH2)m~heterosyklyyli; m on 0 tai 1; R5 on vety·* tai klooriatomi, hydroksi-, metyyli-, amino-tai 1-4 hiiliatomia sisältävä alkoksiryhmä; Y' on vety-, kloori-, bromi-, tai fluoriatomi, 1-4 hiili-atomia sisältävä alkyyliryhmä tai 1-4 hiiliatomia sisältävä alkok-siryhmä, tai trifluorimetyyli- tai 2-5 hiiliatomia sisältävä karbalkok-siryhmä; sillä edellytyksellä, että kun R^ on muu kuin vety, Y' on vety; heterosyklyyli on tienyyli, pyridyyli, pyratsinyyli, fu-ryyli , imidatsolyyli, tiatsolyyli, isotiatsolyyli, oksatsolyyli, isoksatsolyyli, pyrrolyyli, tiadiatsolyyli, tai mainittujen hete-rosyklyylien monometyylijohdannainen; tunnettu siitä, että kaavan B mukainen yhdiste R x/ NH2 B jossa R merkitsee samaa kuin edellä, saatetaan reagoimaan reaktio-inertissä liuottimessa asylointlaineen kanssa, jonka asyyliryhmä on 0 I i z-c- jossa Z merkitsee samaa kuin edellä; ja haluttaessa muodostetaan sen farmaseuttisesti hyväksyttävä happoadditiosuola. 57 6 3 0 5 8

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnet-t u siitä, että asylointaine on 0 H Z-C-halogeeni jossa halogeeni on kloori tai bromi ja reaktio suoritetaan happo-akseptorin läsnäollessa.

3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnet- t u siitä, että asylointiaine on 0 H Z-C-OH ja reaktio suoritetaan kondensoivan aineen läsnäollessa.

4. Munkä tahansa patenttivaatimuksen 1-3 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kaavan A mukainen yhdiste, jossa R2 on alkanoyyliryhmä, käsitellään metanolilla. 68058