DK149629B - Analogifremgangsmaade til fremstilling af 4ae-deoxy-4ae-carbamat- eller -dithiocarbamatderivater af oleandomycin eller oleandomycinestere - Google Patents

Description

i 149629

Den foreliggende opfindelse angår en analogi-fremgangsmåde til fremstilling af hidtil ukendte 4"-deoxy-4"-carbamat- eller -dithiocarbamatderivater af oleandomycin eller oleandomycinestere, hvilke 5 derivater har den i krav 11 s indledning angivne formel II, eller farmaceutisk acceptable syreadditionssalte heraf.

Oleandomycin, et makrolidt antibiotikum produceret ved fermentering, blev først beskrevet i US-patentskrift 10 nr. 2.757.123. Det har den formel, hvis absolutte konfiguration er vist nedenfor: -0 Wz

Y HO. JL

15 H.Cvj 1/3 0A0 A

10 3 y ti U CU.

H0***|ii 1 3 H3C /j V°Al\

Π CH, [ J

o 3 AA"- 011

20 I

och3

Det består af tre strukturelle hovedtræk: L-oleandrose- delen, desosamindelen og oleandoliddelen.

25

Ved fremstilling af derivater af oleandomycin har man primært koncentreret sig om dannelsen af estere ved én eller flere af de tre i 2'-, 4"- og 11-stillingerne siddende hydroxygrupper. Mono-, di- og triacylestere, 30 hvori acyIdelen er afledet af en lavere alifatisk carbon-hydridmonocarboxylsyre med fra 2-6 carbonatomer, er beskrevet i US-patentskrift nr. 3.022.219.

Aminohydrinderivater af oleandomycin er rapporteret af Kastrons et al., Khim. Geterosikl Soedin (2), 35 168-171 (1974)? C.A. 80, 145986η (1974). Disse forbindelser, for hvilke der ikke rapporteres nogen nyttig anvendelse, fremstilles ved at behandle oleandomycin med en dialkylamin eller en heterocyclisk amin i et forseglet 149629 2 rør i 20 timer ved 30°C. Epoxiddelen i 8-stillingen er reaktionsstedet.

Det har nu vist sig, at de omhandlede 4"-deoxy-4"-carbamat- eller -dithiocarbamatderivater af oleando-5 mycin eller oleandomycinestere udviser værdifuld anti-bakteriel virkning in vitro, og mange af dem udviser in-vivo-virkning ved administrering ad parenteral og oral vej, navnlig mod Gram-positive mikroorganismer.

De omhandlede forbindelser har nedenstående formel II, 10 hvori bølgelinien, hvormed den substituerede amino-gruppe er tilknyttet i 4"-stillingen, er fælles for og omfatter begge epimere former: N(CH3)2 15 o s.A......Λ n r TI ?h3 Jl L· H3C"vJ l'·’ i y \3 ro......r γ 3 'm f\. 3 20 H3C°nA .....V<H3 I “3 Uh. i 3

J C-X-R

och3 149629 3 (ii) en anden undergruppe bestående af -CH2 hvori Z^ har den ovennævnte betydning, 5 (iii) en tredje undergruppe bestående af & Λ hvori Z betegner hydrogen, chlor, brom, carbalk- jq oxy med fra 1-4 carbonatomer i alkoxygruppen, alkoxy med fra 1-4 carbonatomer eller alkyl med fra 1-4 carbona tomer, og, når X er S, (iv) en fjerde undergruppe bestående af -CH2-pyridyl.

15 Under opfindelsen falder også fremstillingen af de farma ceutisk acceptable salte af forbindelserne med ovenstående formel II. Som repræsentative eksempler på sådanne salte kan der nævnes hydrochloridet, hydrobromidet, phosphatet, sulfatet, formiatet,acetatet, propionatet, butyratet, ci-2o tratet, glycolatet, lactatet, tartratet, malatet, male-atet, fumaratet, gluconatet, stearatet, mandelatet, pa-moatet, benzoatet, succinatet, lactatet, p-toluensulfo-natet og aspartatet.

Gunrstige forbindelser som følge af deres større 25 biologiske virkning i forhold til virkningen af andre heri beskrevne forbindelser er forbindelser med formlen 12 3 II, hvori R er alkanoyl, R er hydrogen, og X og R har de nedenfor anførte betydninger: 3

X _' R

30 O (CH )-Z1 Z1 = Η n = 1-4 n 2n , , S (C H_ )-Zx Z1 = Η n = 1-4 n 2n ..

Z1 = OH n = 2-4 0 ch2-<G^ 35 S -CH--pyridyl Δ 1

Foretrukne forbindelser er de, hvori R er acetyl, 2 3 R er hydrogen, og X og R har de nedenfor anførte betydninger: X _R3 4 149629 0 (CnH2n>-Z!· ^ = H » = 2 S (CH_)-Z1 ZX = Η n = 1,2 n Zn , 5 Z1 = OH n = 2

= H

S -CH2-(2-pyridyl) 10 Forbindelserne med formel II, indbefattet de epi- mere former heraf, og deres farmaceutisk acceptable salte er effektive antibakterielle midler mod Gram-positive mikroorganismer, f.eks. Staphylococcus aureus og Streptococcus pyogenes, in vitro, og mange er aktive in vivo 15 ved administrering ad parenteral og oral vej. Mange af forbindelserne (og deres salte) er også aktive mod visse Gram-negative mikroorganismer, såsom cocci, f.eks. Pas-teurella multocida og Neisseria sicca.

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig 20 ved det i krav l's kendetegnende del anførte.

Forbindelserne med den ovenstående formel II kan således ved fremgangsmåde a) ifølge opfindelsen fremstilles ved, at man omsætter en forbindelse med formlen III

25 2 ,N(CIV7 H3CvJ li 3 0xk0>vCH3 >--οη, in

J h r»*'j vu J

3C A I "‘0 W0*3

0 3YN

OCH- 35 1 2 hvori R og R har de ovennævnte betydninger, i et reaktionsindifferent opløsningsmiddel med et acylerings- 3 3 middel med formlen Cl-C(=X)X-R , hvori X og R har de 5 U9S29 ovennævnte betydninger, i nærværelse af en syreacceptor.

Et overskud af aminreaktanten med formlen III kan anvendes som syreacceptoren. Alternativt kan der som syreacceptoren anvendes en tertiær alkylamin, såsom 5 en trialkylamin med fra 3-12 carbonatomer, og fortrinsvis triethylamin, eller andre almindeligt anvendte tertiære organiske baser, såsom pyridin, N,N-dimethyl-anilin eller N-methylmorpholin.

Omsætningen udføres almindeligvis i en indifferent 10 atmosfære for at undgå mulige virkninger af atmosfærisk oxygen på reaktanterne.

Det molære forhold mellem forbindelsen 3

Cl-C(=X)X-R og aminreaktanten med formlen III kan variere inden for vide grænser, f.eks. fra ca. 1:1 til ca.

15 3:1. Molære forhold på mindre end 1:1 undgås af økonomi ske grunde for at sikre maksimal omsætning af aminreaktanten, der normalt er den mindst let tilgængelige af reaktanterne. Forhold større end 3:1 anvendes sjældent, da de ikke synes at forbedre udbyttet af slutproduktet. An-20 vendelse af en anden syreacceptor end aminreaktanten med formlen III selv giver tilfredsstillende produktudbytter ved anvendelse af fra ca. 1:1 til ca. 3:1 mol af aminre-tanten i forhold til acyleringsmidlet. Reaktionen er i det væsentlige en acyleringsreaktion.

25 Egnede reaktionsindifferente opløsningsmidler (dvs. sådanne som ikke reagerer i nogen kendelig grad med reaktanterne eller produkterne) er dimethyletheren af ethylenglycol, tetrahydrofuran, n-dibutylether, di-ethylether, toluen, acetonitril, chloroform og methylen-30 chlorid. Hovedkriteriet for opløsningsmidlet er, at det forbliver flydende ved de forholdsvis lave temperaturer, ved hvilke omsætningen udføres, og naturligvis at det bringer reaktanterne i opløsning i kendelig grad, om ikke fuldstændigt.

35 Omsætningen udføres hensigtsmæssigt ved tempera turer fra ca. -80°C til ca. -30°C. I dette temperaturområde opnås en tilfredsstillende reaktionshastighed, og sidereaktioner elimineres eller begrænses til det mindst 6 149629 mulige.

En alternativ fremgangsmåde består i, at man omsætter aminreaktanten med formlen XIX med en passende forbindelse med formlen C1-C(=X)X-R under for den sag-5 kyndige velkendte Schotten-Baumann-betingelser. En gunstig fremgangsmåde består if at man udfører omsætningen i vandig acetone ved en pH-værdi på ca. 8 og ved stuetemperatur .

Hvis de nødvendige reaktanter med formlen 10 C1-C(=X)X-R ikke står til rådighed eller er kendt fra litteraturen, fremstilles de bekvemt ved kendte fremgangsmåder. Når X er oxygen,består fremgangsmåden i omsætning af phosgen med den tilsvarende hydroxylforbindel-se med formlen HO-R3. Omsætningen udføres almindeligvis 15 ved temperaturer på fra ca. 0-15°C i et passende opløsningsmiddel, såsom benzen, toluen, tetrahydrofuran, di-oxan eller diethylether, i nærværelse af en syreaccep-tor, såsom en af de ovenfor anførte. Når X er svovl, fremstilles de nødvendige forbindelser på tilsvarende 20 måde ved omsætning af thiophosgen med den tilsvarende thioforbindelse (HS-R ) under i det væsentlige samme betingelser som de ovenfor beskrevne. Produkterne isoleres ved kendte fremgangsmåder.

Til fremstilling af forbindelser med formlen II, 25 hvori X er svovl, omsætter man ved fremgangsmåde b) ifølge opfindelsen en forbindelse med formlen III i et reaktionsindifferent opløsningsmiddel med carbondi- 3 sulfid og en halogenforbindelse med formlen hal-R , 3 hvori R har den ovenfor anførte betydning, og hal 30 betegner chlor eller brom, i nærværelse af en syreac-ceptor. Egnede opløsningsmidler til denne alternative fremgangsmåde er de ovenfor vedrørende acyleringsreak-tionen anførte.

Fremgangsmåde b) udføres også ved lave temperatu-35 rer, hensigtsmæssigt ved temperaturer på fra ca. -50°C til ca. stuetemperatur. Den generelle fremgangsmåde består i, at man sætter carbondisulfid til en opløsning 149629 7 af aininoreaktanten med formlen III i nærværelse af en syreacceptor ved en temperatur på ca. -50°C efterfulgt af tilsætning af halogenreaktanten. Efter endt tilsætning af halogenreaktanten lader man alminde-5 ligvis reaktionsblandingen opvarme gradvis til fra ca.

0°C til stuetemperatur, hvorefter produktet isoleres ved en heri beskrevet oparbejdningsmetode.

Som anført ovenfor kan et overskud af aminoreak-tanten med formlen III tjene som syreacceptor 10 ved fremgangsmåde b). Som følge af den forholdsvis ringe tilgængelighed af aminoreaktanten, foretrækkes det imidlertid at anvende en tertiær base, såsom en trialkyl-amin, quinolin, pyridin eller anden tertiær base, som syreacceptor. Aminen med formlen III og halogenreaktan- 3 15 ten (hal-R ) anvendes almindeligvis i ækvimolære mængder. Syreacceptoren anvendes ofte i overskud.

Denne fremgangsmåde er særlig nyttig til fremstilling af forbindelser, hvori X er svovl, som følge af den manglende-tilgængelighed af dithiosyrederivater med form-20 len Cl-C(=S)S-R3.

Da aminreaktanten med formlen III er en blanding af epimere ved 04", opnås der ved de ovenfor beskrevne reaktioner en blanding af epimere (gengivet ved en bølgelinie i forbindelser med formlen II), der om ønsket 25 kan adskilles. Søjlechromatografi af en chloroformopløs-ning af det rå produkt på silicagel og eluering med passende opløsningsmidler, f.eks. chloroform-3% methanol, er en bekvem fremgangsmåde til adskillelse af epimerene.

I den foreliggende beskrivelse med...illustrerende eksemp-30 ler er det underforstået, at selv om forbindelserne er opført som 4"-substitueret-amino-derivater, er begge epimere og blandinger heraf medregnet. Anvendelse af en enkelt 04"-epimer af en reaktant med formlen III giver selvsagt det tilsvarende acylerede derivat.

35 Syreadditionssalte af de omhandlede forbindelser fremstilles let ved at behandle forbindelser med formlen II med mindst en ækvimolær mængde af den pågældende syre i et reaktionsindifferent opløsningsmiddel for forbindel- 8 149629 sen med formlen II. Når der er mere end én basisk amino-gruppe til stede i en forbindelse med formlen II/ muliggør tilsætningen af tilstrækkelig syre til at mætte hver basisk gruppe dannelse af polysyreadditionssalte. Syre-5 additionssaltene udvindes ved filtrering, hvis de er uopløselige i det reaktionsindifferente opløsningsmiddel, ved udfældning, ved tilsætning af et ikke-opløsningsmid-del for det pågældende salt, eller ved afdampning af opløsningsmidlet. 11-Monoalkanoyl-,2 '-monoalk-anøyl og 10 11,2'-dialkanoy1-4"-deoxy-4"amino-oleandomycinreaktanter ne (formel ILI) fremstilles ved reduktiv aminering, af· de tilsvarende 11-monoalkanoyl-, 21-monoaikyl- og 1.1,2'-dialkanoyl-4"-deoxy-4"-oxo-oleandomyciner under anvendelse af palladium-på-trækul, hydrogen og ammoniumacetat i et passende op-15 løsningsmiddel (CHgOH, i-C^H^OH). Alternativt kan der anvendes natriumcyanoborhydrid som reduktionsmiddel i stedet for palladium-på-trækul og hydrogen. Det de-este-rificerede derivat fremstilles bekvemt ved hydrolyse af den tilsvarende 2,-monoalkanoyl-4"-deoxy-4"-amino-olean-20 domycin.

De heri beskrevne hidtil ukendte oleandomycinde-rivater udviser in-vitro-virkning mod flere forskellige Gram-positive mikroorganismer og mod visse Gram-negative mikroorganismer, såsom de med sfærisk eller ellipsoid 25 form (cocci). Deres virkning påvises let ved in-vitro-prøver mod forskellige mikroorganismer i et hjerne-hjerte infusionsmedium ved den sædvanlige dobbelte seriefortyndingsmetode .

Som tidligere nævnt kendes der fra DSA-patent-30 skrifterne nr. 2.757.123 og 3.022.219 henholdsvis oleandomycin og acylestere af oleandomycin, og endvidere kendes der fra tysk offentliggørelsesskrift nr.

2.654.627 med de her omhandlede forbindelser nært beslægtede oleandomycinacylesterderivater, jf. de i den 35 første af nedenstående tabeller anførte symbolbetydninger .

For et repræsentativt udvalg af de omhandlede forbindelser er der nedenfor angivet in-vitro-data i 9 149629 fom af de minimale hæmningskoncentrationer (MIC) (Tabel I) over for forskellige mikroorganismer og in-vivo-data i fom af PD5Q-værdier over for Staphylococcus aureus 005 (Tabel II), og til sammenligning 5 er der angivet tilsvarende MIC-værdier og PD^-værdier for de fra tysk offentliggørelsesskrift kendte, nært-beslægtede oleandomycinacylesterderivater, samt PDj-q-værdier for oleandomycin. Det ses, at de omhandlede forbindelser generelt har bedre antibakteriel virkning 10 end de kendte forbindelser. Specielt viser de i Tabel II anførte data en signifikant forskel i in-vivo-virk-ningen mellem de omhandlede forbindelser og oleandomycin, og desuden viser PD^q-værdierne et langt større virkningsniveau for de omhandlede forbindelser sammen-15 lignet med de fra tysk offentliggørelsesskrift nr.

2.654.627 kendte forbindelser.

10 149629

Forsøgsdata N(CH,), 5 VS %ch, ϊ 1 l· ^O^S)^CH3 ,#*/X \i* K3C'"‘' ^1 VCH3 »s-"kV;0......r°yH3 io 3 γν • OCH3

Forbin- R1 r2 r· r" Reference delse-----K-- II-a CH CO CH,C0 =CH, OH i

II- b H J H J =CH“ OH > A

15 ιιι-a ch3co ch3co ch2-ch2 OH f

III- b Η H QH2-CH2 OH I

IV- 1 CH3CO H Qh2—O NHC(S)SCH2CgH5 Λ IV-2 CHjCO Η ςΗ2—O NHC(0)0C2H5 IV-3 CH CO H CH~—-p NHC(S)SCH, 20 5 ' 1

IV-4 CH3CO H CHj—O NHC(S)SCH2pyridvl S B

IV-5 CK3CO II Cn2—O NHC(S}SCH2CH2OH

IV-6 CH3CO η ζΗ2-Ρ3 KHC(0)0CH2CgH5 IV-7 CHCO H Ch*—O HHC(0)0C,H_ / 3 r 2 / 6o ^ 25 II-C CH CO CII-CO =CH OCOCH ''j II- d CF.CO CHICO =CK2 OCOCK:?

m-c CHjCO ch3co ch2ch2 ocock3 L A

III- d Me3Si CH3CO CH2-CtI2 OCOCH3 30 A: forbindelser kendt fra tysk offentliagørelsesskrift nr. 2.654.627 B: forbindelser ifølge henholdsvis eksemplerne 1, 2, 3, 4, 5, 6 og 7 i nærværende beskrivelse 11 149629

Tabel I

Sammenlignende MIC-værdier (pg/ml)'

Forbin-I Staphu Staph. ÉT Klebsiella Salm.

5 Joicp aureus aureus B. coli pn. typhoss 01A0Q5 01A400R subtilis ~ 51A266 53A009 58D009 Π-a 3,12 >200 3,12 >200 >200 >200 IX-b 6,25 25 - >200 >200 ttt-s 0,20 3,12 0,7S >200 >200 >200 IIX-b < 0,20 1,56 0,39 >200 >200 >200 IV-1 0,78 0,39 0,20 . >200 >200 >200 IV-2 ' 0,78 3,12 0,39 * >200 200 100 10 IV-3 0,39 1,56 0,78 200 >200 25 IV-4 0,78 1,56 0,20 200 >200 >200 IV-5 1,56 0,20 0,78 200 >200 200 IV-6 0,78 0,20 <0,10 100 100 50 IV-7 1,56 3,12 Ϊ2,5 >200 >200 >200 15

Tabel IX

Sammenlignende værdier af PD50 (mg/kg) over for Staphylococcus aureus 005

Forbindelse__s-_c-·___ P* -

Il-a >200 >200 20 H-b 100 >200 II-c >200 >200 II- d >200 >200 IXX-a - 62 III- b 75 75 III-c - I50

III- a >200 10Q

IV- 1 12,5 110 IV-2 3 10 25 iv-3 3 80% beskyttelse ved 50 mg /kg IV-4 8 28 IV-5 9 12.5 IV-5 8 70% beskyttelse ved 50 mg /kg IV-7 8 115

Oleandomycin 10 50 149629 12

De omhandlede forbindelsers in-vitro-virkning gør dem nyttige til topisk anvendelse i form af salver, cremer og lignende. Til lægemiddelanvendelse, f.eks. til topisk anvendelse, vil det ofte være bekvemt at 5 blande det valgte produkt med en farmaceutisk acceptabel bærer, såsom en vegetabilsk eller mineralsk olie eller en blødgørende creme. Ligeledes kan det opløses eller dispergeres i flydende bærere eller opløsningsmidler, såsom vand, alkohol, glycoler eller blandinger 10 heraf eller andre farmaceutisk acceptable indifferente medier, dvs. medier, som ikke har nogen skadelig virkning på den aktive bestanddel. Til sådanne formål vil det almindeligvis være tilfredsstillende at anvende koncentrationer af aktive bestanddele på fra ca. 0,01 15 vægt-% til ca. 10 vægt-%, beregnet på den totale komposition.

Desuden er mange af de omhandlede forbindelser aktive mod Gram-positive og mod visse Gram-negative mikroorganismer in vivo ved administrering ad oral og/eller 20 parenteral vej til dyr og mennesker. Deres in-vivo-virk-ning er mere begrænset hvad angår påvirkelige organismer og bestemmes ved den sædvanlige fremgangsmåde, som består i, at man inficerer mus af i det væsentlige ensartet vægt med prøveorganismen og derpå behandler dem oralt 25 eller subcutant med prøveforbindelsen. I praksis giver man musene, f.eks. 10, en intraperitoneal indpodning af passende fortyndede kulturer indeholdende ca. 1 til 10 gange LD10Q (den laveste koncentration af organismer, som kræves for at give 100% døde). Der udføres samtidig 30 kontrolforsøg, ved hvilke musene modtager podestof i lavere fortyndinger til kontrol af mulig variation i prøveorganismens virulens. Prøveforbindelsen administreres 0,5 timer efter indpodning, og det gentages 4, 24 og 48 timer senere. Overlevende mus holdes i 4 dage efter den 35 sidste behandling, og antallet af overlevende noteres.

Når de anvendes in-vivo, kan de behandlede forbindelser administreres oralt eller parenteralt, f.eks.

149629 13 ved subcutan eller witramusculær injektion, i en dosis på fra ca. 1 mg/kg til ca. 200 mg/kg legemsvægt pr. dag.

Det gunstige dosisområde ligger fra ca. 5 mg/kg til ca.

100 mg/kg legemsvægt pr. dag, og det foretrukne område 5 fra ca. 5 mg/kg til ca. 50 mg/kg legemsvægt pr. dag. Bæremedier, der er egnet til parenteral injektion, kan være enten vandige, såsom vand, isotonisk saltopløsning, isotonisk dextrose eller RLttger's opløsning, eller ikke-vandige, såsom fede olier af vegetabilsk oprindelse 10 (bomuldsfrøolie, jordnøddeolie, majsolie og sesamolie), dimethylsulfoxid og andre ikke-vandige bæremedier, som ikke griber forstyrrende ind i præparatets terapeutiske virkning, og som er ikke-toksiske i det anvendte rumfang eller mængdeforhold (glycerol, proylenglycol, sorbitol).

15 Desuden kan der fordelagtigt fremstilles kompositioner, som er egnede til fremstilling på bestilling af opløsninger før administrering. Sådanne kompositioner kan omfatte flydende fortyndingsmidler, f.eks. propylenglycol, diethylcarbonat, glycerol eller sorbitol, pufringsmidler, 20 hyaluronidase, lokalanæsthetica og uorganiske salte til tilvejebringelse af ønskede farmakologiske egenskaber.

Disse forbindelser kan også kombineres med forskellige farmaceutisk acceptable indifferente bærere, herunder faste fortyndingsmidler, vandige bæremedier og ikke-tok-25 siske organiske opløsningsmidler, i form af kapsler, tabletter, pastiller, dulcibletter, tørre blandinger, suspensioner, opløsninger, eliksirer og parenterale opløsninger eller suspensioner. Almindeligvis anvendes forbindelserne i forskellige doseringsformer i koncen-30 trationer i området fra ca. 0,5 vsgt-% til ca. 90 vægt-% af den totale komposition.

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen belyses nærmere ved hjælp af de efterfølgende eksempler, medens de efterfølgende præparationer belyser fremstillingen af 35 udgangsmaterialer.

149629 14

Eksempel 1 ll-Acetyl-4"-deoxy-4"-(benzylthio-thiocarbonyl)amino-oleandomycin.

En opløsning af ll-acetyl-4"-deoxy-4"-amino-ole-5 andomycin (2,0 g, 2,75 mmol) i tetrahydrofuran (15 ml) i en rundbundet trehalset kolbe, forsynet med magnetomrø-rer, et calciumchlorid-tørrerør og tildrypningstragt, af-køes til -50°C. Opløsningen omrøres, og der tilsættes triethylamin (0,4 ml, 2,8 mmol) efterfulgt af carbondi-10 sulfid (0,25 ml, 4 mmol). Blandingen omrøres ved -50°C i 10 minutter, hvorefter der tilsættes benzylbromid (0,33 ml, 2,75 mmol). Kølebadet fjernes, og man lader blandingen opvarme. Efter ca. 1/2 time (temperatur - 0°C) hældes blandingen ud i diethylether (200 ml). Den lille 15 mængde hvidt fast stof, som fælder ud, frafiltreres.

Etherfiltratet koncentreres under formindsket tryk til et hvidt skum. Skummet fordeles mellem chloroform og vand (pH 3), og faserne adskilles. Chloroformfasen eks-traheres igen med frisk vand (pH 5,5), og faserne adskil-20 les. Chloroformfasen ekstraheres endnu engang med vand (pH 8), og faserne adskilles. Chloroformfasen tørres (Na2SO^) og koncentreres under formindsket tryk til opnåelse af et hvidt skum (1,4 g). Skummet chromatograferes på silicagel (100 g) under anvendelse af acetone som elu-25 eringsmiddel. Fraktioner på hver 15 ml opsamles. Fraktionerne 17-26 hældes sammen og inddampes til opnåelse af 0,456 g af et hvidt skum (19% udbytte).

NMR (60 MHz) (ppm): 7,38 (s, 5H), 4,55 (s, 2H), 3,48 (s, 3H), 2,68 (å, J=2, 2H), 2,33 (s, 6H), 2,11 30 (s, 3H).

Eksempel 2 ll-Acetyl-4"-deoxy-4"-(ethoxycarbonyl)amino-oleandomycin.

En opløsning af ll-acetyl-4"-deoxy-4"-amino-ole-35 andomycin (10 g, 13,7 mmol) og triethylamin (3 ml) i tetrahydrofuran (100 ml) omrøres og afkøles til -78°C under en nitrogenatmosfære.

En opløsning af ethylchlorformiat (1,4 ml) i tetrahydrofuran (2 ml) tilsættes over et tidsrum på 1 mi- 149629 15 nut. Næsten øjeblikkeligt dannes der et hvidt bundfald, men omrøringen fortsættes i 1/2 time. Chloroform (50 ml) og vand (5 ml) sættes til reaktionsblandingen, som derefter inddampes til opnåelse af en gul olie. Olien for-5 deles mellem ethylacetat (100 ml) og vand (100 ml), og pH-værdien indstilles på 3,4. Ethylacetatfasen fraskilles, og den vandige fase ekstraheres med friske portioner ethylacetat ved hver af pH-værdierne 5,0, 6,1, 6,4, 7,5 og 9,5. Ekstrakterne fra ekstraktionerne ved pH 6,1 10 og 6,4 hældes sammen, tørres (Na2SO^) og inddampes til tørhed til opnåelse af 5,2 g af et lysegult skum. Skummet chromatograferes på silicagel (250 g) under anvendelse af acetone som elueringsmiddel. Fraktioner af hver 100 ml rumfang opsamles. Fraktionerne 8-23 hældes sammen og 15 inddampes under formindsket tryk til opnåelse af et hvidt skum (3,7 g). Det krystalliseres ved opløsning i et minimalt rumfang isopropanol (vio ml) og derpå langsom tilsætning af vand (vio ml) under hurtig omrøring. Blandingen omrøres, indtil udfældningen er fuldendt, og det fa-20 ste stof frafiltreres derpå og tørres i en vakuumovn ved stuetemperatur til opnåelse af 2,48 g hvide krystaller, smp. - bliver blødt ved ^98°C, smelter ved 106-108°C (udbytte = 23%).

NMR (60 MHz) fi^1 (ppm): 3,43 (s, 3H) , 2,66 (d, 25 J=2, 2H), 2,32 (s, 6H), 2?08 (s, 3H).

Massespektrum m/e = 216.

Ved gentagelse af de foregående eksempler, men under anvendelse af de tilsvarende reaktanter, opnås føl- 2 gende forbindelser med formlen II, hvor R i alle 30 tilfælde er hydrogen.

149629 lo 16 w CO ** o *· 4J0 - a — -co a — 03 - — vo a co - co a

(U 04 a - CM CM -VD

— ί4 co ui - - oi - C h - - — CM · — - — 01 — a -.οι π— a— — a a -a — m b a cia 00 vo —· 01 VO 00 -CO -CM -O' CM - V H - Ό - 01 - · -CO 01 CO - 10 CM *—01 '—' CM — CO - —

H 00 01 - — II a CM

Βϋ CO- C- CO a CO - 0

2 Q - —. VO 00 H — - CO

0 cm co -a - ο -Ό 01 ffl— - cq - —. cm cm - Lf> **— in tri cm

-CM W CM -CM

—, ^ - · - - VO CO to - * - N Β - -CM—. — - — VO O -CM— — a co— g n a a— a - -Ona a 2 a -"loco cow mcMOM (D B co co **. Lf) * ·*·«* VD * 5-} *· **» *- 0 to ^vD^diO ω v μ v », ifl to vn -- -a --- -¾ — — — — — 01 co co — a a r--rf i cm r- γ-h co co vo cm co 0 0 a ’ΦΟί - or-o ^ co co -- co vo Ή ^ 2 - (0 co -- - - - -oioi - -- - S ro — r- cm cm co cm t'- — — r— cm cm co 01 E1 id tJl

gain Η H CM CM CM

<u fd M «id a £ Q) \ vo 0

Mg H CO

2 — CM CM

Q) +1 +1 > Λ

03 VO Η ιΗ σι vo VO

i—! i—I rH (H i t

rH

>t fd

H

5M

>1 a a m co i 0 a

B CM CM VO

— a 0 1 ο I in in CO CM CM CM a a a a a a vo cm u 0 0 u u 0 H I 0 0 o d o _ a| < <ί «< >< i< a xi a m a ο o o t—1

(D

a g 0 co o' a vo r- co 01

H

in 0 a r-H «—1 149629 17

Præparation A

11-Acety1-4"-deoxy-4"-amino-oleandomycin.

Til en suspension af 10% palladium-på-trækul (10 g) i methanol (100 ml) sættes ammoniumacetat (21,2 g), 5 og den opnåede opslemning behandles med en opløsning af ll-acetyl-4"-deoxy-4"-oxo-oleandomycin (20 g) i 100 ml af det samme opløsningsmiddel. Suspensionen omrystes ved stuetemperatur i en hydrogenatmosfære ved et begyndelsestryk på 3,5 at. Efter 1,5 timer frafiltreres katalysato-10 ren, og filtratet sættes under omrøring til en blanding af vand (1200 ml) og chloroform (500 ml). pH-Værdien indstilles fra 6,4 til 4,5, og det organiske lag fraskil les. Det vandige lag behandles, efter en yderligere ekstraktion med chloroform (500 ml), med ethylacetat (500 15 ml), og pH-værdien indstilles på 9,5 med 1 N natriumhydroxidopløsning. Ethylacetatlaget fraskilles, og det vandige lag ekstraheres igen med ethylacetat. Ethylace-tatekstrakterne hældes sammen, tørres over natriumsulfat og koncentreres til et gult skum (18,6 g), som ved kry-20 stallisation af diisopropylether giver 6,85 g af det rensede produkt, smp. 157,5-160°C.

NMR (6, CDC13): 3,41 (3H)s, 2,70 (2H)m, 2,36 (6H)s og 2,10 (3H)s.

Den anden epimer, der forekommer i det rå skum i 25 en mængde på 20-25%, opnås ved gradvis koncentrering og filtrering af moderludene.

Præparation B

30 4"-Deoxy-4"-amino-oleandomycin.

En opløsning af 2'-acetyl-4"-deoxy-4"-oxo-olean-domycin (20 g) i methanol (125 ml) behandles, efter omrøring ved stuetemperatur natten over, med ammoniumacetat (21,2 g). Den opnåede opløsning afkøles i et isbad 35 og behandles med natriumcyanoborhydrid (1,26 g). Kølebadet fjernes derpå, og reaktionsblandingen omrøres ved stuetemperatur i 2 timer. Reaktionsblandingen hældes ud i vand (600 ml) og diethylether (600 ml), og pH-værdien

Claims (2)

149629 indstilles fra 8,3 til 7,5. Etherlaget fraskilles, og den vandige fase ekstraheres aed ethylacetat. Ekstrakterne sættes til side, og pH-værdien af det vandige lag indstilles på 8,25. De ved denne pH-værdi opnåede di-5 ethylether- og ethylacetatekstrakter sættes også til side, og pH-værdien hæves til 9,9. Diethylether- og ethyl-acetatekstrakterne med denne pH-værdi hældes sammen, vaskes efter hinanden med vand (lx) og en mættet saltopløsning og tørres over natriumsulfat. De sidste ekstrakter, 10 taget ved pH 9,9, koncentreres til et skum og chromato-graferes på silicagel (160 g), idet der anvendes chloroform som påfyldningsopløsningsmiddel og første eluerings-middel. Efter 11 fraktioner, hvor der tages 12 ml pr. fraktion, ændres elueringsmidlet til 5% methanol-95% chloroform. Ved fraktion 370 ændres elueringsmidlet til 15 10% methanol-90% chloroform, og ved fraktion 440 anvendes 15% methanol-85% chloroform. Fraktionerne 85-260 hældes sammen og koncentreres i vakuum til tørhed til tilvejebringelse af 244 g af det ønskede produkt. NMR (δ, CDC13): 5,56 (IH) m, 3,36 (3H) s, 2,9 20 (2H) m og 2,26 (6H)s.

1 H3CJ ROiu,/ °>ACH3 o T NH2 och3 1 2 .hvori R og R har de ovennævnte betydninger, i et reak-15 tionsindifferent opløsningsmiddel med et acyleringsmiddel med formlen X II , Cl-C-X-R·3 3 hvori X og R har de ovennævnte betydninger, i nærværelse 20 af en syreacceptor, eller b) til fremstilling af en forbindelse med formlen II, hvori X er S, omsætter en forbindelse med formlen III i et reaktionsindifferent opløsningsmiddel med carbondi-sulfid og en forbindelse med formlen

25 R3-hal 3 hvori R har den ovenfor anførte betydning, og hal betegner chlor eller brom, i nærværelse af en syreaccep-tor, 30 hvorefter en opnået forbindelse med formlen II, hvori R2 er alkanoyl, om ønsket underkastes behandling med methanol til opnåelse af en forbindelse med formlen II, hvori 2 R er hydrogen, og hvorefter en opnået forbindelse med formlen II om ønsket omdannes til et farmaceutisk accep-35 tabelt syreadditionssalt heraf.

1. Analogifremgangsmåde til fremstilling af 4"-deoxy-4"-carbamat- eller-dithiocarbamatderivater af ole-25 andomycin eller oleandomycinestere, hvilke derivater har formlen II „ N(CHJ„ r2o

30. R3Cy II 11 ti -^CH_ 3H c' I 0\<VCBL 11 *

35. NH-C-X-R3 och3 149629 5 2 hvori hver af R og R betegner hydrogen eller alkanoyl med fra 2-3 carbonatomer, X er 0 eller S, og o 5. er valgt blandt (i) en første undergruppe beståen de af: -(cnH2n>-zl hvori Z1 betegner hydrogen, chlor, brom,carbalkoxy med fra 1-4 carbonatomer i alkoxygruppen, hydroxy, alkoxy 10 med fra 1-4 carbonatomer eller dimethylamino, og n er et helt tal fra 1 til 4, med de forbehold, at n er et helt tal fra 2 til 4, når er hydroxy, chlor, brom eller dimethylamino, og er andet end hydroxy eller dimethylamino, når X er 0, 15 (ii) en anden undergruppe bestående af hvori Zhar den ovennævnte betydning, 20 (iii) en tredje undergruppe bestående af: & 25 hvori Z2 betegner hydrogen, chlor, brom, carbalkoxy med fra 1-4 carbonatomer i alkoxygruppen, alkoxy med fra 1-4 carbonatomer eller alkyl med fra 1-4 carbonatomer, og, når X er S, (iv) en fjerde undergruppe bestående af:

30 -CH2-pyridyl, eller farmaceutisk, acceptable syreadditionssalte heraf, kendetegnet ved, at man 35 149629 a) omsætter en forbindelse med formlen III -0 2 R t> 5 °T1 I

2. Fremgangsmåde ifølge krav lal, kendetegnet ved, at molforholdet mellem acyleringsmid-let og forbindelsen med formlen III er mindst 1:1.