DK158473B - Cycliske ethere af 9-deoxo-9a-aza-9a-homoerythromycin a og dettes 4ae-epimer, forbindelser til anvendelse som udgangsmateriale ved deres fremstilling, farmaceutiske praeparater indeholdende de cycliske ethere og anvendelse af de cycliske ethere til fremstilling af laegemidler - Google Patents

Description

x DK 158473 B

Denne opfindelse angår hidtil ukendte cycliske ethere af 9-deoxo-9a-aza-9a-homoerythromycin A og dettes 4"-epimer samt farmaceutisk acceptable syreadditionssalte deraf, som har nyttige antibakterielle egenskaber. Opfindelsen angår også anvendelsen af disse forbindelser til fremstilling af lægemidler og farmaceutiske præparater ® indeholdende forbindelserne samt derivater af 9-deoxo-9a-aza-9a-homoerythromycin A til anvendelse som udgangsmateriale ved fremstilling af nogle af forbindelserne.

Erythromycin A er et makrolid-antibiotikum fremstillet ved gæring og beskrevet i US patentskrift nr. 2 653 899.

Der er fremstillet talrige derivater af erythromycin A under bestræbelser på at modificere dettes biologiske og/eller farmakodynamiske egenskaber. Estere af ery-15 thromycin A med mono- og dicarboxylsyrer er beskrevet i Antibiotics Annual, 1953-1954, Proc. Symposium Antibiotics (Washington, DC), side 500-513 og 514-521. I US patentskrift nr. 3 417 077 beskrives cycliske carbonatestere af erythromycin A, reaktionsproduktet af 20 erythromycin A og ethylencarbonat, som et aktivt antibakterielt middel.

I US patentskrift nr. 4 328 334 beskrives 9-deoxo-9a-aza-9a-homoerythromycin A, som benævnes 11-aza-lO-deoxo-lO-

OC

dihydroerythromycin A. Da denne forbindelse er et ringekspanderet (homo)-derivat af erythromycin A, hvor nitrogen (aza) er det ekstra atom i ringsystemet, foretrækkes nomenklaturen 9-deoxo-9a-aza-9a-homoerythromycin A til betegnelse af det grundlæggende ringsystem for 30 forbindelserne ifølge opfindelsen.

N-methyl-derivatet af 9-deoxo-9a-aza-9a-homoerythromycin A er beskrevet i belgisk patentskrift nr. 892 357 samt den tilsvarende britiske patentansøgning nr. 2 094 293 A 35 samt i US patentskrift nr. 441 981. Den 4"-epimere af 2

DK 158473 B

nævnte N-methyl-derivat omtales i US patentansøgning nr.

441 979, og US patentskrift nr. 4 382 085 omtaler 4"-epi-erythromycin A, hvor 4"-0H-gruppen har den aksiale konfiguration. 4"-OH i erythromycin A har den ækvatoriale 5 konf iguration.

Det har nu vist sig, at visse cycliske ethere af 9-deoxo-9a-aza-9a-homoerythromycin A og dettes 4"-epimer er virksomme antibakterielle midler mod Gram-positive og 10 Gram-negative bakterier, og, at de især har en over raskende lang halveringstid i kroppen i sammenligning med det ovennævnte N-methyl-derivat kendt fra BE 892 357, hvilket er særlig betydningsfuldt m.h.t. forskellige vigtige mikroorganismer, først og fremmest Haemophilus 15 influenzae.

Den foreliggende opfindelse angår således cycliske ethere af 9-deoxo-9a-aza-9a-homoerythromycin A og dettes 4"-epimer med den almene formel: 20 N(CH-.}_9 \

\0H JV X

i »4 Sa yi. v°^° 10

25 11 I

HO^J 1 3^^· (X) /o

^ |1 4" I

/%, 30 *0CH3 / hvori n betyder 1, 2 eller 3, og bølgelinien ved 4"-0H-gruppen betegner begge epimere former, idet 4"-0H-gruppen 35 dog har den ækvatoriale konfiguration, når n = 1, og farmaceutisk acceptable syreadditionssalte deraf. Når n er 2 eller 3, varierer de epimere former af forbindelsen

DK 158473B

3 i strukturel henseende kun ved konfigurationen af det chirale center ved 4"-stillingen, dvs., 4"-0H-gruppen er enten aksial eller ækvatorial. Den aksiale konfiguration betegnes med en optrukken eller kileformet forbindel-5 seslinie og den ækvatoriale med en brudt forbindelseslinie mellem OH-gruppen og 4"-stillingen. Betegnelserne "aksial" og "ækvatorial" anvendes til betegnelse af de to mulige chirale epimere ved C-4" i henseende til 4"-hydroxyl og -hydrogen.

10

Opfindelsen angår således også farmaceutisk acceptable syreadditionssalte af forbindelserne med formel (I), som er nyttige til samme formål som forbindelserne med formel (I). Som eksempler på sådanne salte kan nævnes: 15 hydrochlorider, hydrobromider, sulfater, phosphater, for mi ater, acetater, propionater, butyrater, citrater, glycolater, lactater, tartrater, malater, maleater, fumarater, gluconater, stearater, mandelater, pamoater, benzoater, succinater, lactater, p-toluensulfonater og 20 aspartater.

Opfindelsen angår endvidere forbindelser til anvendelse som udgangsmateriale ved fremstilling af forbindelserne med formlen (I) hvori n er 2 eller 3. Disse forbindelser 25 har den almene formel: ?(CH3>2 H2N-(CH2)m \ OH || 30 Β0/γ V>

ho-JL

f\ O (II) -och3 4

DK 158473 B

hvori n betyder 2 eller 3, og bølgelinien ved 4"-0H-gruppen betegner den aksiale eller ækvatoriale konfiguration ved denne stilling, eller er farmaceutisk acceptable syreadditionssalte deraf.

5

Forbindelserne med formlerne (I) og farmaceutisk acceptable syreadditionssalte deraf er effektive anti-bakterielle midler over for Gram-positive mikroorganismer, f.eks. Staphylococcus aureus og Streptococcus 10 pyogenes, og over for Gram-negative mikroorganismer, f.eks. Pasteurella multocida og Neisseria sicca, in vitro. Desuden udviser forbindelserne med formlen (I) betydelig aktivitet over for Neisseria gonorrhoea og Haemophilus in vitro samt mod mange Gram-positive og 15 Gram-negative mikroorganismer in vivo. I deres oralt anti-infektive aktivitet ligner forbindelserne med formlen (I) 9-deoxo-9a-methyl-9a-aza-9a-homoerythromycin A, og de adskiller sig klart fra den tilsvarende 9a-desmethyl-forbindelse, 9-deoxo-9a-aza-9a-homoerythromycin 20 A, som ikke udviser nogen praktisk oral aktivitet in vivo.

De forbindelser med formlen (I), hvori n er 3, fremstilles ved cyanoethylering af de tilsvarende 9-deoxo-9a-25 aza-9a-homoerythromycin A-epimere. Et overskud af acrylonitril tjener både som reaktant og opløsningsmiddel. Omsætningen gennemføres sædvanligvis ved tilbagesvalingstemperatur for acrylonitril-opløsningsmidlet, dvs. ca. 77 °C, indtil omsætningen er fuldstændig. Man 30 kan anvende lavere temperaturer, f.eks. 50 °C, men dette undgås på grund af den længere reaktionstid. Man kan arbejde ved højere temperaturer under anvendelse af et andet opløsningsmiddel end overskydende acrylonitril. Et sådant opløsningsmiddel bør være reaktionsinert, dvs. at 35 det ikke reagerer med reaktanter og/eller produkter på en måde, som skader udbyttet af det ønskede cyanethyl-derivat. Et reaktionsinert opløsningsmiddel kan na- 5

DK 158473 B

turligvis anvendes ved en vilkårlig reaktionstemperatur.

Egnede opløsningsmidler er alkoholer med 1-4 carbon-atomer, ethere (cycliske og acycliske), såsom dioxan, tetrahydrofuran, diethylether, diethylenglycol og di-5 methylether, aromatiske carbonhydrider, såsom benzen, toluen og xylen. Det foretrækkes imidlertid at anvende overskydende acrylonitril som opløsningsmiddel.

Reaktionsforløbet kontrolleres ved tyndtlags-kromatografi 10 (TLC) på silicagel-plader, som elueres med CH^Cl^/CH^- OH/koncentreret NH^OH (6/1/0,1) og fremkaldes med en spray af vanillin/ethanol/HgPO^ og varme.

Produktet udvindes som et næsten hvidt skum ved 15 afdampning af opløsningsmidlet. Det kan anvendes direkte som det er i næste procestrin. TLC viser, at produktet i hovedsagen er det ønskede monocyanethylerede produkt. Spormængder af mere polære produkter blev konstateret ved TLC.

20

Det således fremstillede 9a-cyanethyl-derivat omdannes til det tilsvarende 9a-(r-aminopropyl)-derivat (II) ved hydrogenering over Raney-nikkel ved en nedenfor beskreven fremgangsmåde. Det omdannes til den tilsvarende cycliske 25 ether med 7-leddet ring ved omsætning med mindst støkiometriske mængder af både isoamylnitrit og iseddike ved en nedenfor nærmere beskrevet fremgangsmåde. Det tilsvarende 9a-(r-acetoxypropyl)-derivat fremstilles som biprodukt.

30

De forbindelser med formlen (I), hvori n er 2, fremstilles ved alkylering af den tilsvarende 4"-OH-epimere af 3'-N-oxidet af 9-deoxo-9-aza-9a-hydroxy-9a-homoery-thromycin A med fortrinsvis et overskud af brom-35 acetonitril i et reaktionsinert opløsningsmiddel ved temperaturer fra 20 til 100 °C, dog fortrinsvis ved stuetemperatur. Egnede opløsningsmidler er chlorerede 6

DK 158473 B

carbonhydrider, såsom methylenchlorid og chloroform, aromatiske carbonhydrider, såsom benzen, toluen og xylen, og ethere, såsom diethylenglycol, dimethylether, dioxan, tetrahydrofuran og diethylether.

5

Omsætningen gennemføres i nærværelse af en syre-acceptor, dvs. en organisk base, såsom en C^_^-trialkylamin eller pyridin, eller en uorganisk base, såsom et alkali-metalcarbonat eller -hydrogencarbonat. Syre-acceptoren 10 anvendes i ækvimolært forhold til bromacetonitrilet, som sædvanligvis anvendes i overskud for at sikre optimal omdannelse af homoerythromycin-forbindelsen til forbindelsen med formlen

15 ' O

T

NCCH312 o /· S0;;;,/fAv NC-CH^-47 20 '4 (III)

BO huf Y

25 ' 0 /¾ •*och3 hvori bølgelinien ved 4"-0H-gruppen betegner den aksiale eller ækvatoriale konfiguration ved denne stilling.

30

Ved katalytisk hydrogenering af forbindelsen med formlen (III) over Pd/C i et reaktionsindifferent opløsningsmiddel, såsom ethanol, fjernes 9a- og 31-oxid-grupperne til dannelse af 9a-cyanmethyl-derivatet af 9-deoxo-9a-35 aza-9a-homoerythromycin A eller dets 4"-epimer.

DK 158473B

7

Det således fremstillede 9a-cyanmethyl-derivat reduceres til det tilsvarende 9a-(0-aminoethyl)-derivat med formlen (II) ved hjælp af natriumborhydrid i nærværelse af cobaltchlorid i hydroxylgruppeholdige eller ikke-hy-5 droxylgruppeholdige opløsningsmidler ved stuetemperatur.

Til denne reduktion foretrækkes molforhold mellem CoC^ og NaBH^ på ca. 1:5. I praksis anvendes et overskud af NaBH^, f.eks. op til 10 mol NaBH^ pr. mol substrat. Omsætning af 9a-(0-aminoethyl)-derivatet med mindst 10 støkiometriske mængder af både isoamylnitrit og iseddike fører til dannelse af den tilsvarende cycliske ether med 6-leddet ring.

Den cycliske ether med 5-leddet ring med formlen (I) (n = 15 1/ 4"-OH = ækvatorial konfiguration) fremstilles ved omsætning af 9-deoxo-9a-aza-9a-homoerythromycin A med 1-4 ækvivalenter af både formaldehyd, fortrinsvis som 37 % vandig opløsning, og myresyre i et reaktionsinert opløsningsmiddel, fortrinsvis ved stuetemperatur. Typiske 20 opløsningsmidler er halogenerede carbonhydrider, såsom methylenchlorid, chloroform og carbontetrachlorid.

Det kritiske træk ved denne reaktion er anvendelsen af relativt lav reaktionstemperatur. Reaktionen gennemføres 25 uden vanskelighed ved fra ca. 15 °C til ca. 30 °C, fortrinsvis ved 20-25 °C. Hvis omsætningen gennemføres ved forhøjet temperatur, f.eks. tilbagesvalingstemperatur, fås 9a-methyl-derivatet, dvs. der foregår reduktiv methylering. Ved forhøjede temperaturer, f.eks.

30 over ca. 50 °C, sker der udelukkende methylering. Men ved reaktionsbetingelserne for den foreliggende fremgangsmåde sker der dannelse af cyclisk ether mellem 11/5-OH- og 9a-aza-grupperne. 1

Syreadditionssaltene af forbindelserne ifølge opfindelsen fremstilles let ved behandling af forbindelserne med formlerne I eller II med mindst en ækvimolær mængde af 8

DK 158473 B

den tilsvarende syre i et reaktionsinert opløsningsmiddel eller, når der er tale om hydrochlor idsalte, med pyridinhydrochlorid. Da forbindelserne med formlerne I og II indeholder mere end én basisk gruppe, skal der 5 tilsættes tilstrækkeligt med syre, således at alle basiske grupper kan indgå i dannelsen af polysyre-additionssalte. Syreadditionssaltene udvides ved filtrering, hvis de er uopløselige, i det reaktionsinerte opløsningsmiddel, ved udfældning ved tilsætning af et 10 ikke-opløsningsmiddel for syreadditionssaltet eller ved afdampning af opløsningsmidlet.

En række Gram-positive mikroorganismer og visse Gramnegative mikroorganismer, f.eks. mikroorganismer med 15 sfærisk eller ellipsoidal form (cocci), påvirkes af forbindelser med formlen I. Deres in vitro aktivitet demonstreres uden vanskelighed ved in vitro forsøg mod forskellige mikroorganismer i et hj erne/hj erte-in fusionsmedium ved den sædvanlige serie-dobbeltfor-20 tyndingsteknik. Takket være deres in vitro aktivitet er de nyttige til topisk påføring i form af salver, cremer og lignende, til sterilisation, f.eks. af redskaber i sygestuer, samt som industrielle anti-mikrobielle midler, f.eks. til behandling af vand, slamkontrol og præser-25 vering af maling og træ.

Til anvendelse in vitro, f.eks. til topisk anvendelse, vil det ofte være hensigtsmæssigt på i sig selv kendt måde at indarbejde det udvalgte produkt i lotioner, 30 salver, cremer, geler eller lignende. Til sådan anvendelse vil det sædvanligvis være acceptabelt at anvende koncentrationer af den aktive forbindelse på fra ca. 0,01 vægt-% op til ca. 10 vægt-%, beregnet på det samlede materiale. Doseringsformen påføres infektionsstedet ad 35 libitum, mindst en gang om dagen.

9

DK 158473 B

Forbindelserne ifølge opfindelsen med formlen I er endvidere aktive mod Gram-positive og visse Gram-negative mikroorganismer in vivo indgivet oralt eller parenteralt til dyr og mennesker. Deres aktivitet in vivo er mere 5 begrænset i henseende til påvirkelige organismer, og den bestemmes på gængs måde ved inficering af mus med praktisk taget ensartet vægt med prøveorganismen og påfølgende oral eller subkutan behandling med prøveforbindelsen. I praksis gives mus, f.eks. 10 mus, en 10 intraperitoneal podning af passende fortyndede kulturer indeholdende ca. 1-10 gange LDioO (den laveste koncentration af organismer, som giver 100 % dødsfald).

Der gennemføres samtidig kontrolforsøg, ved hvilke mus podes med lavere fortyndinger som kontrol for mulige 15 variationer i prøveorganismens giftvirkning. Prøveforbindelsen indgives 30 minutter efter podningen og derpå igen 4, 24 og 48 timer senere. Overlevende mus holdes under kontrol 4 dage efter sidste behandling, og antallet af overlevende bestemmes.

20

Ved anvendelse in vivo kan forbindelserne ifølge opfindelsen indgives oralt eller parenteralt, f.eks. ved subkutan eller intramuskulær injektion i en dosering på fra ca. 1 mg/kg til ca. 200 mg/kg legemsvægt pr. dag. Den 25 foretrukne dosering er fra ca. 5 mg/kg til ca. 100 mg/kg legemsvægt pr. dag, og det særligt foretrukne område ligger fra ca. 5 mg/kg til ca. 50 mg/kg legemsvægt pr. dag. Bærestoffer egnede til parenteral injektion kan være vandige, f.eks. vand, isotonisk saltopløsning, isotonisk 30 dextroseopløsning eller Ringer's opløsning, eller ikke vandige, såsom fedtolier af vegetabilsk oprindelse, såsom bomuldsfrøolie, jordnøddeolie, majsolie eller sesamolie, dimethylsulfoxid samt andre ikke-vandige medier, der ikke skader den aktive forbindelses terapeutiske effektivitet, 35 og som er ugiftige i den anvendte mængde, såsom glycerol, propylenglycol eller sorbitol. En anden foretrukken præparatform er præparater egnede til fremstilling af

DK 158473 B

10 opløsninger forud for indgivelsen. Sådanne præparater kan indeholde flydende fortyndingsmidler, f.eks. pro-pylenglycol, diethylcarbonat, glycerol og sorbitol, puffere, hyaluronidase, lokalt bedøvende midler og uor-5 ganiske salte til tilvejebringelse af ønskelige farmakologiske egenskaber. Disse præparater kan også kombineres med forskellige farmaceutisk acceptable indifferente bærestoffer, såsom faste fortyndingsmidler, vandige bærestoffer og ugiftige organiske opløsnings-10 midler i form af kapsler, tabletter, drageer, tørre pul vere, suspensioner, opløsninger, eliksirer og parenterale opløsninger eller suspensioner. Forbindelserne ifølge opfindelsen anvendes sædvanligvis i forskellige doseringsformer i koncentrationer, som varierer fra ca.

15 0,5 vægt-% til ca. 90 vægt-% af det totale materiale.

I den følgende tabel 1 sammenlignes in vitro aktiviteten af tre forbindelser ifølge opfindelsen med aktiviteten af erythromycin A og aktiviteten af det fra BE 892 357 20 kendte N-methylderivat af 9-deoxo-9a-aza-9a-homoery- thromycin A over for forskellige Gram-positive og Gramnegative mikroorganismer. De tre forbindelser ifølge opfindelsen er erythromycin A derivaterne med formel I, hvori n er hhv. 2 og 3, og 4"-epimeren med formlen I, 25 hvori n er 3. 1 35

DK 158473B

11

Tabel 1 In vitro aktivitet MIC (ug/ml) 5 Forbin- Streptococcus Staphylococcus Escherichia Haemophilu delse pyogenes aureus coli influenzae

ES I ER CER ES ER

10 Erythromycin A *0,025 0,10 6,25 >50 1,56 100 3,12 BE 892 357 *0,025 0,39 25 >50 0,78 6,25 0,78 15 1/ n=3, 4"-ækv.- OH *0,025 0,20 25 >50 0,78 6,25 0,78 20 1/ n=3, 4"-aks.- OH *0,025 0,39 25 >50 0,39 3,12 0,78 I, n=2, 25 4"-ækv.- OH 0,05 0,39 25 >50 1,56 25 1,56 *Gennemsnitlig MIC fra otte stammer.

30 ES: Erythromycin A-susceptible, ER: erythromycin A-resistent, I

inducerbart erythromycin A-resistent, CER: konstitutivt e thromycin A-resistent.

I den følgende tabel 2 sammenlignes de orale farma-35 kokinetiske egenskaber af to af forbindelserne ifølge opfindelsen og det fra BE 892 357 kendte N-methylderivat og erythromycin A. De to forbindelser ifølge opfindelsen 12

DK 158473 B

er erythromycin A derivatet med formlen I, hvori n er 3, og dettes 4"-epimer.

Tabel 2 Orale farmakokinetiske egenskaber 5 laboratoriedyr

Forbin- Dyr Oral dosis Cnax* AUC Halveringst delse (mg/kg) (ng/ml) (ng/ml h) (h) 10 BE 892 357 Rotte 50 1,3 9,5 7,7

Mus 50 1,6 10,0 6,4

Beaglehund 10 1,4 23,4 21,0 15 Abe 10 0,43 2,9 8,7 I, n=3, 4"-ækv.- 0H Rotte 50 0,7 5,5 7,2 20 Beaglehund 10 0,9 25,5 24,3

Abe 10 0,3 2,4 10,9 I, n=3, 25 4"-aks.- OH Rotte 50 0,5 5,3 13,2

Erythromycin A Rotte 50 0,6 1,54 2,1 30 Mus 50 0,9 1,5 1,2

Beaglehund 10 2,5 5,2 1,5

Abe 10 0,2 0,2 0,6 35 *C : Maximumkoncentration af antibioticumet i max serum/plasma.

DK 158473B

13

Det ses af tabel 1, at aktiviteten af forbindelserne ifølge opfindelsen alment er af samme størrelse som af det fraBE 892 357 kendt N-methylderivat, og af tabel 2 fremgår, at forbindelserne ifølge opfindelsen har en 5 endnu længere halveringstid i kroppen end det kendte N-methylderivat.

I det følgende belyses opfindelsen nærmere ved en række eksempler. I disse eksempler har man ikke bestræbt sig på 10 at udvinde den maximale mængde fremstillet produkt eller at optimere udbyttet af et givet produkt.

I alle eksempler betegner udtrykket "vanillin/ethanol/-Η^ΡΟ^ spray" og "vanillin/H^PO^ spray” en opløsning af 15 1,0 g vanillin, 100 ml ethanol og 100 ml H^PO^.

Eksempel 1

4”-epi-9-deoxo-9a-(β-cyanethyl)-9a-aza-9a-homoerythro-20 mycin A

11,6 g (15,8 mmol) 4"-epi-9-deoxo-9a-aza-9a-homoerythro-mycin A blev opløst i 100 ml acrylonitril. Opløsningen blev opvarmet under tilbagesvaling i 19 timer og derpå 25 koncentreret i vakuum, hvilket gav et elfenbensfarvet skum. TLC-undersøgelse (silicagel-plader; eluering med CH2Cl2/CH3OH/koncentreret NH^OH = 6:1:0,1; vanillin/HgPO^ spray med varme; = 0,51) viste et enkelt (mindre polært) dominerende produkt med blot spormængder af (mere 30 polære) urenheder. Det rå produkt blev anvendt i næste trin uden yderligere rensning. 1 2 3 C-NMR [CDClg, (CH3)4Si intern standard] ppm: 177,92 2 (lacton ^.0=0), 118,86 (-C=N), 102,49 (C-l'), 96,04 (C- 3 35 1"), 40,25 [(CH3)2N-].

14

DK 158473 B

Eksempel 2 4"-epi-9-deoxo-9a-(r-aminopropyl)-9a-aza-9a-homoerythro-mycin A 5

Til en opløsning af 12,8 g (16,2 mmol) 4"-epi-9-deoxo-9a- (Ø-cyanethyl)-9a-aza-9a-homoerythromycin A i 250 ml absolut ethanol sattes 12,8 g Raney-Ni-katalysator (50 % vandbefugtet), og opløsningen blev hydrogeneret i et 2 10 Parr-apparat ved 3,52 kg/cm i 19 timer. TLC-analyse (silicagel-plader; eluering med CHCl^/CH^OH/koncentreret NH^OH = 6:1:0,1; vanillin/HgP04 spray med varme; Rf = 0,13) viste fuldstændig omsætning. Efter frafiltrering af katalysatoren blev filtratet koncentreret til et skum i 15 vakuum. Råproduktet blev opløst i ca. 100 ml me- thylenchlorid. Denne opløsning blev omrystet med samme volumen af en mættet vandig natriumhydrogencarbonat-opløsning, hvorefter den organiske fase blev skilt fra, tørret med natriumsulfat og koncentreret i vakuum til et 20 elfenbensfarvet skum (10,5 g). Hele prøven blev kry stalliseret fra varm ether, hvilket gav 4,0 g produkt, smp.: 135 °C (dec).

13C-NMR [CDClg, (CHgJ^Si intern standard] ppm: 117,07 25 (lacton ^JC=0), 102,22 (C-l'), 95,77 (C-l"), 40,30 [(ch3)2n-i. 1 35

DK 158473B

Eksempel 3 15 4"-epi-9, ll-deoxo-ll/>, 9a-(epoxypropano)-9a-aza-9a-homo-erythromycin A [formel (I), n = 3, 4”-aksial hydroxy] og 5 4"-epi-9-deoxo-9a-(r-acetoxypropyl)-9a-aza-9a-homoery-

thromycin A

Til en opløsning af 3,37 g (4,3 mmol) 4"-epi-9-deoxo-9a-(r-aminopropyl)-9a-aza-9a-homoerythromycin A i 20 ml 10 chloroform sattes 574 mg (0,66 ml; 4,9 mmol) isoamylnitrit og 511 mg (8,52 mmol) iseddike, hvorefter blandingen blev kraftigt opvarmet under tilbagesvaling i 1 time. TLC-analyse viste fuldstændig omsætning og tilstedeværelse af to hovedkomponenter (silicagel TLC-15 plader momentant neddyppet i en formamid/acetone- opløsning og derpå lufttørret; eluering med CHCl ^/acetone 1:1; vanillin/HgPO^ spray med varme). Reaktionsblandingen blev omrørt med 50 ml 10 % vandig kaliumcarbonatopløsning, hvorefter den organiske fase 20 blev skilt fra, vasket med 50 ml mættet saltopløsning, tørret over natriumsulfat og koncentreret i vakuum til et farveløst skum (3,17 g).

Formamid-behandlet silicagel blev fremstillet ved 25 tilsætning af 120 ml formamid til en godt omrørt opslæmning af 500 g silicagel (maskevidde 38-63 Mm) i 600 ml acetone og efterfølgende rotorafdampning af opløsningsmidlet indtil der blev opnået et fritstrømmende pulver. Råproduktet blev kromatograferet på 300 g 30 formamid-imprægneret silicagel med eluering med CHClg/hexan = 98:2, idet opsamlede fraktioner blev analyseret tyndtlags-kromatografisk (under anvendelse af ovennævnte TLC-system). Herved blev der isoleret reaktionsprodukter - den (mindst polære) titelforbindelse 35 (344 mg, 10 % udbytte) og 4"-epi-9-deoxo-9a-(r- acetoxypropyl)-9a-aza-9a-homoerythromycin A (400 mg, 11 % udbytte) som farveløse amorfe faste stoffer.

DK 158473B

16

Ved en anden analogt gennemført syntese blev den kro-matograferede titelforbindelse (162 mg) omkrystalliseret fra acetone/vand (udbytte 94 mg, smeltepunkt 139-141 °C).

5 4"-epi-9, ll-deoxo-11/5,9a-(epoxypropan)-9a-aza-9a-homoery- thromycin A: 1H-NMR (CDClg) δ: 2,28 [6H, s, (CH3)2N-], 3,28 (3H, s, cladinose CH30-); 13C-NMR [CDC13, (CH3)4 Si intern standard] ppm: 176,28 (lacton =0), 102,36 (ΟΙ’), 96,18 (C-l"), 40,26 [(CH3)2-N-]; massespektrum (m/e) 10 74 (molekylion), 616,4, 599,4, 458,3, 442,3, 158,2, 127,1.

4"-epi-9-deoxo-9a-(r-acetoxypropyl)-9a-aza-9a-homoery-thromycin A: 1H-NMR (CDC13) δ: 2,02 15 (3H, s, CH -C-), y 2,27 [6H, s, (CH3)2N-3, 3,28 (3H, s, cladinose CH30-).

20 Eksempel 4

9-Deoxo-9a-(g-cyanethyl)-9a-aza-9a-homoerythromycin A

1,0 g 9-deoxo-9a-aza-9a-homoerythromycin A blev opløst i 25 10,0 ml acrylonitril. Blandingen blev tilbagesvalet i 6

timer og derpå omrørt natten over ved stuetemperatur. Derefter blev blandingen koncentreret i vakuum til et gyldenbrunt skum. Kromatografi af råproduktet på si-licagel (40 g; maskevidde 63-212 um), hvor der blev 30 elueret med en CH2Cl2/CH3OH/koncentreret NH^OH

10:1:0,01 opløsningsmiddelblanding, og fraktionerne blev undersøgt tyndtlags-kromatografisk (silicagelplader; CH2Cl2/CH3OH/koncentreret NH^OH = 6:1:0,1 elueringssy- stem; vanillin/H3P04 spray-indikator med varme; Rf = 35 0,57), gav 605 mg (56 % udbytte) af titelforbindelsen som et farveløst skum.

17

DK 158473 B

1H-NMR (CDClg) δ: 2,34 [6H, s, (CH^N-], 3,33 (3H, s, cladinose CH^O-); 13C-NMR [CDClg, (CH3)4 Si intern standard] ppm: 177,62 (lacton^/C = 0), 118,5 (-C N), 103,01 (C-l'), 95,91 (C-l"), 40,33 [(CH3)2N-].

5

Eksempel 5

9-Deoxo-9a-(t-aminopropyl)-9a-aza-9a-homoerythromycin A

10 Til en opløsning af 47 g (59,6 mmol) 9-deoxo-9a-(0- cyanethyl)-9a-aza-9a-homoerythryomycin A i 520 ml ethanol sattes 47 g Raney-Ni-katalysator (50 % vandbefugtet), og opløsningen blev hydrogeneret i et Parr-apparat ved 3,52 2 kg/cm i 2,75 timer. TLC-analyse (silicagel-plader; 15 eluering med CHC13/CHgOH/koncentreret NH^OH = 6:1:0,01; vanillin/HgPO^ spray med varme) viste, at omsætningen var ufuldstændig. Der blev sat yderligere 25 g frisk katalysator til blandingen, og hydrogeneringen ved 3,52 kg/cm blev fortsat i endnu 1,25 timer. Derpå blev 20 katalysatoren frafiltreret, og filtratet blev koncentreret i vakuum til et farveløst skum. Råproduktet blev opløst i 600 ml ethylacetat. Opløsningen blev omrørt med 800 ml vand, og derpå blev pH-værdien indstillet på 9,5 med 6 N natriumhydroxidopløsning. Den organiske fase 25 blev tørret over natriumsulfat og koncentreret i vakuum til et skum. Kromatografi på silicagel (800 g/maskevidde 63-212 urn) under eluering med CHClg/CHgOH/koncentreret NH40H = 6:1:0,05; Rf = 0,15) gav 14,7 g (31 % udbytte) af den rene titelforbindelse som et farveløst skum. Krystal-30 lisation af 1,1 g materiale fra diethylether gav 545 mg farveløse krystaller, smp.: 180-183 °C. 1 H-NMR (CDC13) 6: 2,30 [6H, s, (CH^N-], 3,32 (3H, s, cladinose CHgO-); 13C-NMR [CDClg, (CH3)4 Si intern 35 standard] ppm: 177,01 (lacton^X = 0), 102,69 (C-l'), 95,27 (C-l"), 40,33 [(CH3)2N-].

Eksempel 6 18

DK 158473B

9,11-deoxo-llfl,9a-(epoxypropan)-9a-aza-9a-homoerythro-mycin A [formel (I), n = 3, 4"-ækvatorial hydroxy] og 9-5 deoxo-9a-(r-acetoxypropyl)-9a-aza-9a-homoerythromycin A

Til en opløsning af 6,24 g (7,90 mmol) 9-deoxo-9a-(r-aminopropyl)-9a-aza-9a-homoerythromycin A i 128 ml chloroform sattes 1,01 g (1,16 ml; 8,63 mmol) isoamylnitrit 10 og 0,97 g (0,92 ml; 16,2 mmol) iseddike, hvorefter blandingen blev kraftigt opvarmet under tilbagesvaling i 1 time. Blandingen blev omrørt med 150 ml vand, hvorefter pH-værdien blev indstillet på 8,0 med mættet vandig natriumhydrogencarbonat-opløsning. Den organiske fase 15 blev skilt fra og vasket med samme volumen vand, tørret over natriumsulfat og koncentreret i vakuum til et gult skum. TLC-analyse viste to komponenter i råproduktet (silicagelplader momentant neddyppet i en 15:85 formamid/acetoneopløsning og derpå lufttørret; eluering 20 med CHCl^/acetone = 1/1; vanillin/H3P04 spray med varme).

Formamid-behandlet silicagel blev fremstillet ved tilsætning af 360 ml formamid til en godt omrørt opslæmning af 900 g silicagel (maskevidde 38-63 um) i 25 1800 ml acetone og efterfølgende rotorafdampning af opløsningsmidlet, indtil der blev opnået et fritstrøm-mende pulver. Råproduktet (5,8 g) blev kromatograferet på de 900 g formamid-imprægneret silicagel, idet der først blev elueret med 2 liter CHCl^/hexan = 7:3, og derpå med 30 3 liter CHClg/hexan = 8:2. Der blev opsamlet fraktioner på 5 ml som blev analyseret ved tyndtlags-kromatografi som beskrevet ovenfor. Således blev der isoleret to reaktionsprodukter - den (mindst polære) titelforbindelse (0,79 g; udbytte: 13 %) og 9-deoxo-9a-(r-acetoxypropyl)-35 9a-aza-9a-homoerythromycin A (0,76 g, udbytte: 12 %) -som farveløse amorfe faste stoffer.

19

DK 158473 B

9,ll-Deoxo-110,9a-(epoxypropan)-9a-aza-9a-homoerythro-mycin A: 1H-NMR (CDClg) δ: 2,30 I6H, s (CH^N-], 3,33 (3H, s, cladinose CHgO-); 13C-NMR (CDC13) ppm: 176,3 (lacton^C=0), 103,2 (C-l'), 96,2 (C-l"), 40,4 [(CH3)2N-5 ]; massespektrum (m/e) 616, 599, 458, 442, 158, 127.

9-Deoxo-9a-(r-acetoxypropyl)-9a-aza-9a-homoerythromycin A: XH-NMR (CDCL·.) «: 2,01 (3H, s, CH,,-C-), 2,29

* U

0 10 [3H, s, (CH3)2-N-j, 3,31 (3H, s, cladinose CHgO-); massespektrum (m/e) 834,6.

Eksempel 7 15 9-deoxo-9a- (cyanmethyl) -9a-aza-9a-homoerythromycin_A- 31,9a-bis-N-oxid

Til en opløsning af 11,0 g (14,4 mmol) 9-deoxo-9a-20 hydroxy-9a-aza-9a-homoerythromycin A-3’-N-oxid i 138 ml chloroform sattes 79 g (0,57 mol) vandfrit kaliumcarbonat og 69 g (0,58 mol) bromacetonitril. Blandingen blev omrørt ved stuetemperatur i 5,25 timer. TLC-analyse (silicagel-plader, eluering med CHClg/CHgOH/koncentreret 25 NH^OH = 6:1:0,1; vanillin/HgPO^ spray med varme) viste forbrug af udgangsforbindelsen og dannelse af et (mindre polært) produkt (R^ = 0,28) med blot spormængder af urenheder. Reaktionsblandingen blev filtreret, og filtratet koncentreret i vakuum til en viskos olie. Olien 30 blev omrørt med 600 ml diethylether, hvilket gav et farveløst, granulært fast materiale, som blev frafiltreret og vasket med 100 ml ether før lufttørring.

Den således fremstillede titelforbindelse (10,4 g, udbytte: 89,9 % af et farveløst granulært fast materiale) 35 blev anvendt som det var i det følgende eksempel.

Eksempel 8

DK 158473B

20

9-deoxo-9a-aza-9a-cyanmethyl-9a-homoerythromycin A

5 1,0 g af den i eksempel 7 fremstillede forbindelse, 10 ml ethanol og 0,25 g 5 % Pd på kul blev anbragt i en 50 ml Parr-beholder, hvorefter beholderen gentagne gange blev skyllet med nitrogen. Derpå blev beholderen påfyldt hydrogen (69 kPa), hvorefter der blev hydrogeneret i 4,5 10 timer ved stuetemperatur. Reaktionsblandingen blev dernæst udtaget fra beholderen, filtreret og koncentreret i vakuum, hvorved der fremkom et skum. Dette skum blev taget op i 100 ml methylenchlorid, hvorefter der blev tilsast 100 ml vand, hvorefter pH-værdien blev bragt op 15 på 9,5 ved tilsætning af 6 N NaOH. Methylenchloridlaget blev skilt fra, tørret (Na2S04) og inddampet til tørhed i vakuum, hvilket gav 700 mg af et skum. Kromatografi på silicagel (21 g, maskevidde 63-212 um) eluering med CH^C^/MeOH/koncentreret NH^OH, 18:1:0,05 og inddampning 20 af eluatet gav 135 mg af titelproduktet.

Rf [silicagel-plader, elueringssystem CHClg/CH^OH/kon-centreret NH^OH = 6:1:0,1; vanillin/H^PO^ spray med varme] = 0,61.

25 1H-NMR (CDClg) 6: 2,26 [6H, s, (CHg^N-], 3,28 (3H, s, cladinose CHgO-); 13C-NMR [CDClg, (CH3)4Si intern standard]ppm: 178,0 (lacton ^C=0), 116,76 (-C=N), 102,78 (C-l'), 95,16 (C-l"), 40,30 [(CH^N-].

30

Eksempel 9

9-deoxo-9a-(fl-aminoethyl)-9a-aza-9a-homoerythromycin A

35 1/17 g (0,0309 mol) blev tilsat en blanding af 2,4 g (3,1 mmol) 9-deoxo-9a-cyanmethyl-9a-aza-9a-homoerythromycin A, 72 ml methanol og 0,792 g (6,1 mmol) vandfrit CoCl2 ved

DK 158473B

21 stuetemperatur. Der skete en exoterm reaktion med stor opskumning. Blandingen blev omrørt ved stuetemperatur i 2 timer, hvorefter den blev koncentreret under reduceret tryk (aspirator) til en sort olieagtig remanens.

5 Remanensen blev taget op i 50 ml 1:1 vand/-methylenchlorid-opløsning. Derpå blev pH-værdien indstillet på 2,5 ved hjælp af 1 N HCl, og blandingen blev omrørt i 10 minutter. Den vandige fase blev skilt fra, og der tilsattes 25 ml methylenchlorid, hvorefter pH-værdien 10 blev indstillet på 9,5 ved hjælp af 1 N NaOH. Derpå blev den organiske fase skilt fra, der tilsattes et lige så stort volumen vand, og pH-værdien blev indstillet på 2,0 ved tilsætning af 1 N HCl. Igen blev den vandige fase skilt fra, der tilsattes 25 ml methylenchlorid, og pH-15 værdien blev hævet til 9,5 ved tilsætning af 1 N NaOH.

Den organiske fase blev skilt fra, tørret (Na2S04) og koncentreret under reduceret tryk, hvorved der fremkom 1,15 g af et hvidt skum af et råprodukt.

20 Dette råprodukt blev renset ved søjle-kromatografi af 1,05 g råprodukt på 30 g silicagel maskevidde 63-212 nm under eluering med CHCl^/CH^OH/NH^OH 86:1:0,1) og opsamling af fraktioner på 5 ml. Fraktionerne 80-150 indeholdt det ønskede (mere polære) materiale. Disse 25 fraktioner blev forenet og koncentreret til et lille volumen under reduceret tryk. Koncentratet blev vasket med mættet vandig natriumhydrogencarbonat-opløsning, tørret (Na2S04) og afdampet i vakuum til et skum. Derved fremkom 75 mg af titelproduktet.

30

Eksempel 10 9,11-deoxo-11fl,9a-(epoxyethan)-9a-aza-9a-homoerythromycin A 35 [Formel (I), n = 2, 4"-ækvatorial hydroxy] li

DK 158473B

22

En blanding af 0,38 g (0,488 irnnol) 9-deoxo-9a-(Æ-ami-noethyl)-9a-aza-9a-homoerythromycin A, 4 ml chloroform, 0,072 ml (0,536 mmol) isoamylnitrit og 0,056 ml (0,976 mmol) iseddike opvarmet under tilbagesvaling i 1 time.

5 Tilsætningen af isoamylnitrit og iseddike blev gentaget, og blandingen tilbagesvalet i endnu 2 timer. Efter afkøling blev der tilsat 10 ml chloroform og 15 ml mættet vandig natriumhydrogencarbonat-opløsning, og pH-værdien blev indstillet på 9,5 ved tilsætning af 1 N NaOH. Den 10 organiske fase blev skilt fra, tørret (Na2S04) og koncentreret ved reduceret tryk, hvilket gav 0,37 g af et gyldentbrunt skum. Ved søjle-kromatografi på 55 g formamid-behandlet silicagel (fremstillet som beskrevet i eksempel 3) under anvendlese af chloroform/hexan (90:10) 15 som elueringsmiddel og opsamling af fraktioner på 5 ml fremkom titelforbindelsen i fraktionerne 81-130. De forenede fraktioner blev vasket med vand, tørret (Na2S04) og koncentreret under reduceret tryk til et hvidt fast materiale. Dette blev taget op i methylenchlorid, 20 hvorefter opløsningen blev filtreret og inddampet i vakuum, hvilket gav 26,5 mg produkt i form af et hvidt, fast materiale. 1 C-NMR [CDClg, chloroform intern standard] ppm: 117,71 25 (lacton-carbonyl), 103,36 (C-l'), 95,97 (C-l"), 40,40 [(CHg)2N-]; massespektrum (m/e) 602, 444, 428.

Eksempel 11 30 9,11-deoxo-110,9a-(epoxymethan)-9a-aza-9a-homoerythro-

mycin A

[Formel (I), n = 1, 4"-ækvatorial hydroxy] 35 En opløsning bestående af 10,0 g (13,64 mmol) 9-deoxo-9a-aza-9a-homoerythromycin A, 1,19 g (1,10 ml, 14,0 mmol) 37 % vandigt formaldehyd og 0,488 g (0,40 ml, 0,01 mol) 23

DK 158473 B

myresyre i 150 ml chloroform blev omrørt ved stuetemperatur (ca. 25 °C) i 70 timer. TLC-analyse (silicagel-plader, eluering med C^C^/CHgOH/koncentreret NH^OH = 6:1:0,1; vanillin/H^PO^ spray med varme) viste en 5 kompleks blanding indeholdende mindst 5 komponenter. Blandingen blev omrørt med mættet vandig natriumhydrogencarbonat-opløsning (400 ml), og pH-værdien af det vandige lag blev indstillet til 9,5 med 6 N natriumhydroxid. Den organiske fase blev skilt fra, 10 tørret over natriumsulfat og koncentreret i vakuum til et farveløst skum. Det rå produkt blev kromatograferet på silicagel (405 g; maskevidde 63-212 um; eluering med C^C^/CHgOH/koncentreret NH^OH = 12:1:0,05), hvilket gav 563 mg (5,5 % udbytte) af den rene titel forbindelse som 15 et farveløst skum. Rf (silicagel-plader; C^C^/CHgOH/koncentreret NH^OH = 6:1:0,1 = 0,5.

^C-NMR [CDC13, (CH3)4Si intern standard] ppm: 173,37 (1acton = 0), 103,48 (C-l'), 97,07 (C-l"), 83,31 (C- 20 5), 81,01 (-0-CH2-N-), 78,01, 76,11 75,56, 40,24 [(CH3)2N-]; massespektrum (m/e) 588, 571, 430, 414, 158, 127.

Eksempel 12 25

Under anvendelse af de i eksempel 7, 8 og 9 beskrevne fremgangsmåder, men under anvendelse af passende udgangsmaterialer fremstilledes de nedenfor angivne forbindelser.

30 N CCH )

S°-,A

ΛΑ ':voch3

DK 158473B

24 5

Rx 4"-OH

CH2CN aksial og dennes 3',9a-bis-N-oxid CH2CH2NH2 aksial 10

Eksempel 13

Gentagelse af den i eksempel 3 beskrevne fremgangsmåde, men under anvendelse af 9a-(Ø-aminoethyl)-derivatet 15 beskrevet i eksempel 12 som reaktant fører til dannelse af et ether-derivat med en 6-leddet ring, hvor 4"-OH-gruppen har aksial konfiguration.

20 25 1 35

DK 158473B

25

Præparation A

9-deoxo-9a-aza-9a-hydroxy-9a-homoerythromycin A-3'-N-oxid 5 Til en opløsning af 10,0 g 9-deoxo-9a-aza-9a- homoerythromycin A i 40 ml methanol sattes dråbevis ialt 50 ml af en 30 % vandig hydrogenperoxid-opløsning i løbet af 5-10 minutter under omrøring. Efter omrøring natten over ved stuetemperatur blev reaktionsblandingen under 10 omrøring hældt ud på en opslæmning af 200 g is, 200 ml ethylacetat og 100 ml vand. Overskydende hydrogenperoxid blev fjernet ved forsigtig dråbevis tilsætning af mættet vandig natriumsulfitopløsning, indtil der vistes en negativ iod-stivelse-reaktion. Derpå blev lagene adskilt, 15 og det vandige lag blev vasket to gange med 200 ml portioner af ethylacetat. De tre organiske ekstrakter blev forenet, tørret over vandfrit natriumsulfat og inddampet, hvilket gav 8,6 g råt 9-deoxo-9a-aza-9a-hydroxy-9a-homoerythromycin A-3'-N-oxid som et farveløst 20 skum.

Råproduktet viste sig tilfredsstillende til anvendelse ved den nedenfor beskrevne fremstillingsprocedure, men rensning blev let opnået ved silicagel-kromatografi under 25 eluering med et methylenchlorid/methanol/koncentreret ammoniumhydroxid-system (12:1:0,1). Kromatograferingens forløb blev fulgt ved tyndtlags-kromatografi på silicagel-plader under anvendelse af systemet methylenchlorid/methanol/koncentreret ammoniumhydroxid 30 (9:1:0,1). Pladerne blev fremkaldt med en vanillin sprayindikator [ethanol (50 ml): 85 % H^PO^ (50 ml): vanillin (1,0 g)] med varme.

XH-NMR (CDC13) 6: 3,21 [6H, s, (CH3)2N->0], 3,39 (3H, s, 35 cladinose CHgO-). MS: større toppe ved m/e 576 (ion fra desosamin-fragmentering), 418 (aglycon-ionminus begge sukkerarter). Begge toppe indikerer -N-OH komponent i

DK 158473B

26 aglycon.

Præparation B

5 4tt-epx--erythromycin A-oxim 50 g (0,0646 mol) 4"-epi-erythromycin A blev opløst i 265 ml pyridin. Dernæst tilsattes 112,2 g (1,615 mol) hydroxylamin-hydrochlorid, og opslæmningen blev omrørt i 10 16 timer. Reaktionsblandingen blev koncentreret til en tyk opslæmning, fortyndet med 300 ml 2-propanol, omrørt omhyggeligt og filtreret med 3 x 100 ml 2-propanol til vask. Filtratet og vaskevæskerne blev forenet, inddampet til et vandopløseligt skum og æltet med ether, hvorved 15 der fremkom 100 g råt titelprodukt i form af hydrochloridsaltet. Produktet blev renset ved fordeling mellem CH2C12 og vandig NaHCOg indstillet til en pH-værdi på 9,5 med fortyndet NaOH. Det vandige lag blev fraskilt og vasket først med ethylacetat og derpå med ether. Alle 20 organiske lag blev forenet, tørret (Na2S04) og inddampet, hvilket gav 59,5 g titelprodukt som et hvidt skum. TLC:

Rf = 0,5 (60:10:1 CH2Cl2/CH3OH/koncentreret NH4OH9.

’’H-NMR (CDClg) 6: 2,31 [6H, s, (CH3)2N-), 3,32 (3H, S, 25 cladinose CHgO-).

Præparation C

4”-epi-9a-aza-9a-homoerythromycin A 30 59,2 g (0,0787 mol) af det i præparation B fremstillede produkt blev opløst i 400 ml acetone. Hertil sattes en opslæmning af 60 g NaHC03 i 225 ml H20. 36,3 g (24,5 ml) methansulfonylchlorid i 50 ml acetone blev tilsat 35 portionsvis i løbet af 10 minutter, idet temperaturen blev holdt under 30 °C ved hjælp af et kølebad. Blandingen blev omrørt i 4,5 timer, hvorefter acetonen

DK 158473B

27 blev afdampet. Der sattes 400 ml CH2C12 til den vandige remanens, hvis pH-værdi blev indstillet på 5,6 med 6 N HC1. Det vandige lag blev skilt fra, vasket med endnu to portioner CH2C12 og derpå indstillet på pH 9,5 med 6 N 5 NaOH. Den basiske opløsning blev ekstraheret to gange med frisk CH2CI2, en gang med ethylacetat og en gang med ether. De basiske organiske ekstrakter blev forenet, tørret (Na2S04) og inddampet, hvilket gav 41 g af titelproduktet som et elfenbensfarvet skum. TLC R^ = 0,4 10 (60:10:1 CH 2 C12/CH3OH/koncentreret NH^OH).

1H-NMR (CDClg) 6: 2,27 [6H, s (CH3)2N-], 3,29 (3H, S, cladinose CHgO-); 13C-nmr [CDC13, (CH3)4Si intern standard] ppm: 177,24 (lacton^X=0), 163,53 (amid ^C=0), 15 102,29 og 95,24 (C-3, C-5), 40,22 [(CH^N-].

Præparation D

4"-epi-9-deoxo-9a-aza-9a-homoerythromycin A

20 40 g af den i præparation C fremstillede forbindelse blev opløst i 600 ml CHgOH. 45 g NaBH^ blev tilsat i løbet af 45 minutter, idet temperaturen blev holdt under 38 °C. Reaktionsblandingen blev omrørt i 64 timer, hvorefter den 25 blev inddampet til en tyk opslæmning indeholdende overskydende borhydrid og borester-kompleks af produktet. Sidstnævnte blev fordelt mellem 500 ml CH2C12 og 500 ml vand, og den efterfølgende arbejdsgang blev gentaget tre gange: pH-værdien blev under omrøring indstillet på 2,5 30 med fortyndet HC1, blandingen blev omrørt kraftigt i 25 minutter, og det vandige lag blev skilt fra, forenet med 500 ml frisk CH2C12, indstillet til en pH-værdi på 9,5 med fortyndet NaOH, hvorefter CH2Cl2-laget blev skilt fra. Sidstnævnte CH2Cl2-lag blev tilsat 500 ml frisk vand 35 til gentagelse af arbejdsgangen. Efter tredie trin blev pH 9,5 CH2Cl2-laget tørret (Na2S04) og inddampet, hvilket gav 34 g råt titelprodukt som et skum, der blev 28

DK 158473B

krystalliseret fra 150 ml varm isopropylether ved afkøling og fortynding med 300 ml pentan, hvilket gav 25,8 g renset titelprodukt i form af hvide krystaller.

TLC Rf = 0,5 (9:1 CHClg/diethylamin); Rf = 0,1 (90:10:1 5 CH2Cl2/CH3OH/koncentreret NH40H), smp.: 170-180 °C.

1H-NMR (CDClg) δ: 2,26 [6H, s, (CH3)2-N], 3,28 (3H< s, cladinose CHgO-O-); ^C-NMR [CDClg, (CH3)4Si intern standard] ppm: 179,44 (lacton ^C=0), 103,57 og 96,70 (C-10 3, C-5), 41,50 [(CH3)2-N-].

Præparation E

4"-epi-9-deoxo-9a-hydroxy-9a-aza-9a-homoerythromycin A-15 3 *-N-oxid 3,0 g af det i præparation D fremstillede produkt blev under omrøring under N2 opløst i 15 ml 1:1 THF/CHgOH.

Derpå tilsattes 5 ml 30 % H202· Efter 30 minutter blev 20 der tilsat yderligere 2,5 ml 30 % H202· Efter endnu 30 minutters forløb blev reaktionsblandingen forsigtigt udhældt i 1:1 CH2C12/H20 indeholdende overskydende Na2S03 (exoterm reaktion). pH-værdien var 9. Det vandige lag blev vasket først med frisk CH2C12 og derpå med 25 ethylacetat. De organiske lag blev forenet, tørret (Na2S04) og inddampet, hvilket gav 2,7 g af titel- produktet, TLC Rf - 0,15 (60:10:1 CH2C12/CH30H/- koncentreret NH40H). 1 35 1H-NMR (CDClg) δ: 3,21 [6H, s, (CH^N 0], 3,38 (3H, s, cladinose CHgO-); MS: større toppe ved m/e 576 (ion fra desosamin-fragmentering ved C-5), 418 (N-hydroxy-aglycon-ionminus begge sukkerarter). Begge toppe indikerer -Ν-0Η komponent i aglycon.

Claims (6)

1. Cycliske ethere af 9-deoxo-9a-aza-9a-homoerythromycin 5 A og dettes 4”-epimer med den almene formel: . n(chJ2 K' “»vS o tinif yv H0—L (X) 15 (//'q I ο,,/γ .................{*·---------1 y% OCH3 20 hvori n betyder 1, 2 eller 3, og bølgelinien ved 4"-0H-gruppen betegner den aksiale eller ækvatoriale konfiguration ved denne stilling, idet 4”-0H-gruppen dog 25 har den ækvatoriale konfiguration, når n = 1, og farmaceutisk acceptable syreadditionssalte deraf.

2. Forbindelser ifølge krav 1, kendetegnet ved, at n = 2. 30

3. Forbindelser ifølge krav 1, kendetegnet ved, at n = 3.

4. Derivater af 9-deoxo-9a-aza-9a-homoerythromycin A til 35 anvendelse som udgangsmateriale ved fremstilling af forbindelser ifølge krav 1 med formlen (I), hvori n er 2 eller 3, kendetegnet ved, at de har den almene DK 158473B formel: N (CH3) 2 ν-«"Λ 0Λ„Α uJy ·\*\'ν Kotins' p H01 X «“> ^ '/ι P\

10. V/ °!" I I 0 . /¾. / v, OCH3 15 hvori m betyder 2 eller 3, og bølgelinien ved 4"-0H-gruppen betegner den aksiale eller ækvatoriale konfiguration ved denne stilling, eller er farmaceutisk acceptable syreadditionssalte deraf.

5. Farmaceutisk præparat, kendetegnet ved, at det indeholder en antibakterielt virksom mængde af en forbindelse ifølge krav 1 og et farmaceutisk bærestof.

6. Anvendelse af en forbindelse ifølge krav 1 til 25 fremstilling af lægemidler. 1 35