DE714707C

DE714707C - Verfahren zur Anreicherung und Gewinnung eines die Leukocytenbildung foerdernden Stoffes aus Leber

Info

Publication number: DE714707C
Application number: DEB187531D
Authority: DE
Inventors: Dr Edwin Baumann; Dr Adolf Hagedorn; Dr Erich Rabald
Original assignee: Boehringer Mannheim GmbH
Current assignee: Roche Diagnostics GmbH
Priority date: 1938-06-26
Filing date: 1938-06-26
Publication date: 1941-12-05

Description

Verfahren zur Anreicherung und Gewinnung eines die Leukocytenbildung fördernden Stoffes aus Leber Vorliegendes Verfahren hat die Anreiehening und Gewinnung eines die Bildung der weißen Blutkörperchen fördernden Wirkstoffes aus Leber zum Gegenstand.
Während über die Eigenschaften und das Verhalten des die Erythrocytenbildung fördernden Faktors, weicher bekanntlich in der Leber vorkommt, schon Näheres benannt ist, sind die Eigenschaften des die Leukocytenbildung fördernden Faktors so gut wie unbekannt.
Es wurde nun gefunden, daß der die Bildung der weißen Blutkörperchen fördernde Faktor sich gleichfalls in der Leber vorfindet.
Es wurde weiter gefunden, daß dieser Faktor von dem die Bildung der roben Blutkörperchen begünstigenden, auf Grund seines unterschiedlichen Verhaltens gegenüber organischen Lösungsmitteln und der Einwirkung von Wärme getrennt werden kann. Es hat sich nämlich gezeigt, daß aus den durch Extraktion der Leber mit Wasser oder wäßrigen Lösungen gewonnenen Extrakten, die beide Faktoren enthalten, der die Leukocytenbildung fördernde Faktor dadurch ausgefällt und somit von dem antianämischen Faktor getrennt werden kann, daß man zu diesen Extrakte wasserlösliche organische Lösungsmittel hinzufügt, bis die Konzentration an diesen etwa 600/o beträgt. Dabei bleibt der antianämische Faktor noch in Lösung, zu dessen Ausfällung noch höhere Konzentrationen an den organischen Lösungsmitteln benötigt werden.
Das Verfahren vorliegender Erfindung zur Abtrennung eines die Leukocytose fördernden Faktors, insbesondere für Injektionszwecke, besteht demgemäß darin, daß man den ihn enthaltenden Flüssigkeiten oder Extrakten von Leber, die gegebenenfalls unter Anwendung von Hitze hergestellt sind, nach zweckmäßig in der Hitze vorgenommener Eneeiweißung mit Wasser mischbare organische Lösung mittel zusetzt, bis die Konzentration an letzteren etwa 6a% beträgt. Durch Wiede -auflösung der Fällungsprodukte in Wasser oder verdünnten wäßrigen Lösungen und Fällung durch Zugabe größerer Mengen an organischen Lösungsmitteln. wobei man diese Operationen gegebenenfalls noch ein- oder mehrmals wiederholt, erhält man den diL Leukocytenbildung fördernden Stoff weitgehend frei von andersartigen Beimengungen.
Die zulei erhaltenen Lösung können nach Sterilisierung ohne weiteres Verwendung finden. Gegebenenfalls kann man sich bei dem Verfahren einer Kontrolle der in Frage kommenden Lösungen und Fraktionen auf ihren Gehalt an dem die Leukocytenbildung fördernden Faktor durch Auszählung eines nach Injektion der Lösungen gewonnenen Blutbildes bedienen.
Beispiele 1. 3,6kg fein zerkleinerte Rinderleber werden mit 10 l Wasser zum Sieden erhitzt. Dann nird die Lösung durch Zugabe von go ccm fünffach normaler Essigsäure und weiteres Erhitzen für etwa 5 Minuten auf 95° enteiweißt.
Man trennt von der wäßrigen Flüssigkeit da Fett ab, filtriert heiß und neutralisiert mit Natriumbicarbonat. Es werden dann 20 l Aceton zu der abgekühlten Lösung unter Rühren zugefügt. Der hierbei ausfallende Siederschlag wird abgesaugt; er kann gegebenenfalls nochmals in Wasser gelöst und mit etwa dem dreifachen Volumen Aceton erneut gefällt werden. Dann wird mit Aceton und Äther getrocknet. Die erhaltene Substanz stellt ein rein weißes Pulver dar, das zu 6o mg in 2 ccm Wasser gelöst innerhalb von 4 bis 6 Stunden eine Leukocytensteigerung von 6- bis Yooc auf 12- bis 16000 hervorruft. Die Injektionslösung wird durch kurzes Kochen sterilisiert.
2. Man verfährt gemäß Beispiel W untel- Ersatz des Acetons durch Äthylalkohol.

Claims

P A T E N T A N S P R U C H: Verfahren zur Anreicherung und Gewinnung eines die Leukocytenbildung fördernden Faktors, insbesondere für Injektionszwecke dadurch gekennzeichnet, da man Leber mit Wasser oder wäßrigen Flüssigkeiten extrahiert, den gewonnenen Extrakten nach Enteiweißung mit Wasser mischbare organische Lösungsmittel zusetzt, bis die Konzentration an diesen etwa 6o0'o beträgt, worauf man die Fällungsprodukte gegebenenfalls durch ein- oder mehrmaliges Auflösen in Wasser oder verdünnten wäßrigen Lösungen und Fällen aus diesen mittels Zugabe größerer Mengen organischer Lösungsmittel weiter reinigt und die zuletzt erhaltenen Lösung gen oder die durch Lösen der in fester Form erhaltenen Wirkstoffe hergestellten Lösungen sterilisiert.