DE69229471T2

DE69229471T2 - Biologische färbemittelzusammensetzung, verfarren zu seiner herstellung und verwendung zur markierung der umrisse von epithel karsinomen

Info

Publication number: DE69229471T2
Application number: DE69229471T
Authority: DE
Inventors: Pier Cipriani; Mark Malmros; Raymond Tucci
Original assignee: Zila Inc
Current assignee: Zila Inc
Priority date: 1991-10-31
Filing date: 1992-10-07
Publication date: 1999-11-25
Anticipated expiration: 2012-10-08
Also published as: EP0565668A1; EP0565668B1; US5372801A; JPH06507419A; WO1993008847A1; ES2133143T3; EP0565668A4; JP3549880B2; GR3031233T3; KR100242727B1; CA2097695C; AU2778892A; DE69229471D1; KR930703022A; CA2097695A1; DK0565668T3; ATE181510T1; AU661727B2

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft biologische Farbstoffzusammensetzungen und Verfahren zur Herstellung und Verwendung solcher Zusammensetzungen.
Insbesondere betrifft die Erfindung eine verbesserte biologische Farbstoffzusammensetzung, ein verbessertes Herstellungsverfahren und ein verbessertes Gebrauchsverfahren für die In-situ-Darstellung von Epithelkrebs.
In einer weiteren und spezifischeren Hinsicht betrifft die Erfindung Zusammensetzungen sowie Herstellungs- und Gebrauchsverfahren, bei denen die Spezifität biologischer Farbstofftests für Epithelkrebs verbessert wird, indem zufälliges Färben von nichtkanzerösem Gewebe reduziert wird, so daß die Anzahl falscher Positivergebnisse verringert wird.
In einer anderen Hinsicht betrifft die Erfindung biologische Farbstoffzusammensetzungen mit einer verbesserten chemischen Beständigkeit und demzufolge mit einer verbesserten klinischen Konsistenz und Lagerdauer.
In noch einer anderen und spezifischeren Hinsicht betrifft die Erfindung biologische Farbstoffzusammensetzungen zur Verwendung im Nachweis von oralem Epithelkrebs, die einen besseren Geschmack haben und für den Patienten daher angenehmer sind.
Toluidinblau O, auch als Toloniumchlorid [*1] bekannt, ist ein Basisfärbemittel der Thiazingruppe. Über die Verwendung von Toluidinblau O als klinischen Farbstoff zur In-situ-Darstellung von Dysplasie und Karzinom, um die Auswahl von Stanzbiopsieorten in Patientinnen mit Verdacht auf Gebärmutterhalskrebs zu unterstützen, wurde 1963 berichtet. (Richart, Am. J. Obstet. Gyn. 86: 703 1963). Danach wurde über Toluidinblau O als In-vivo-Farbstoff zur Darstellung von oralen intraepithelial-neoplastischen Veränderungen berichtet (Niebel et al., J. Am. Dent. Assoc. 68: 801 1964). Anschließend wurde in mehr als zwei Dutzend Veröffentlichungen der Nutzen von Toluidinblau O als Insitu-Farbstoff für den Nachweis und zur Unterstützung der Diagnose von Oralkarzinomen demonstriert. 1989 berichteten Rosenbero. et al. von einer Meta-Analyse von 16 bedeutenden klinischen Studien unter Verwendung von Toluidinblau O zur Diagnose von Mundkrebs und wiesen eine Empfindlichkeit von 93,5% und eine Spezifität von 73,3% aus (Rosenberg et al., Oral Surg, Oral Med, Oral Path, 67: 621 1989).
Die Spezifität des Toluidinblau-O-Tests durch visuelle Bestimmung der Färbemittelaufnahme von bestimmten Läsionen wird durch die unspezifische Färbung von Schleimhautgewebe verringert. Eine solche unspezifische Färbung kann durch eine sachgemäße Entfärbung nach dem Farbstoffauftrag mit einer 1%igen Essigsäurelösung in gewisser Weise begrenzt werden.
Das an Mashberg am 23. März 1982 ausgestellte US- Patent 4,321,251 offenbart ein Verfahren zur Reduzierung falscher Negativergebnisse und falscher Positivergebnisse des Toluidinblau-O-Tests in bezug auf bösartige Läsionen der Mundhöhle. Das Verfahren nach Mashberg macht von einer 6-Stufen-Prozedur Gebrauch, die nach 10 bis 14 Tagen wiederholt wird. Jede Wiederholung der Prozedur beinhaltet eine Vorspülung mit Essigsäure, zwei Vorspülungen mit Wasser, eine Spülung mit Toluidinblau-O-Lösung, eine Nachspülung mit Essigsäure und eine Nachspülung mit Wasser. Wird im ersten Wiederholungslauf eine Läsion gefunden, dann wird der spezifische Bereich 10 bis 14 Tage danach noch einmal gefärbt, wobei ein zweites Positivergebnis zu einer positiven Diagnose führt.
Die von Mashberg angewendeten, relativ umständlichen Prozeduren und die relativ geringe Testspezifität des Toluidinblau-O-Tests in dem Fall, daß solche komplizierten Prozeduren nicht angewendet werden, haben den Gebrauch des Toluidinblau-O-Tests für Mundkrebs stark eingeschränkt. Es wäre von großem Vorteil, wenn die Spezifität des Tests bei gleichzeitiger Reduzierung der Komplexität der Testverfahren erhöht werden könnte.
Zusätzlich zu den umständlichen bekannten Prozeduren mit der Verwendung von Toluidinblau O als biologische Farbstoffzusammensetzung, wurde sein Gebrauch im Nachweis von Mundkrebs durch die begrenzte Lagerdauer und den schlechten Geschmack der zubereiteten Farbstoffzusammensetzungen gehemmt. Es wäre von Vorteil, Zusammensetzungen bereitzustellen, die eine verbesserte Stabilität aufweisen, um die Lagerfähigkeit zu verlängern und den Abbau von Aromastoffen in den zubereiteten Zusammensetzungen gering zu halten.
Wir haben jetzt Zusammensetzungen, Herstellungs- und Gebrauchsverfahren entdeckt, bei denen die Spezifität des Toluidinblau-O-Farbstofftests für Epithelkrebs verbessert wird, jedoch unter Anwendung vereinfachter Prozeduren zur Herstellung und Verwendung der Farbstoffzusammensetzung. Unsere Entdeckung basiert auf zwei Prinzipien, nämlich darauf, daß die Toluidinblau-O-Farbstofflösung frisch zubereitet werden sollte und/oder daß Leuko-Toluidinblau O, das in der Farbstoffzusammensetzung enthalten ist - entweder durch Einführung mit der Chromo-Form oder durch In-situ-Bildung durch Reduktion der Chromo-Form - zur Chromo-Form oxidiert und in der Chromo-Form gehalten werden sollte, wenn der Farbstoff auf die mutmaßlichen Krebsorte aufgebracht wird.
Wir haben außerdem entdeckt, daß die klinische Konsistenz, die Lagerfähigkeit und der Geschmack von Toluidinblau-O-Zusammensetzungen wesentlich verbessert werden, wenn der pH-Wert der hergestellten Lösung mit einer geeigneten Puffersubstanz im Bereich zwischen etwa 3,5 und etwa 5,0 geregelt wird. Solche gepufferten Zusammensetzungen sind im Nachweis von Mundkrebs klinisch konsistenter, da die Färbeeigenschaften des Färbemittels vom pH-Wert abhängig sind und eine gepufferte Farbstoffzusammensetzung durch geringfügige Abweichungen des Speichel-pH-Wertes verschiedener Patienten weniger beeinflußt wird. Ferner wird der Abbau des Färbemittels und der Abbau der Aromastoffe, die normalerweise empfindlich auf pH-Effekte reagieren, durch eine solche Pufferung gering gehalten.
Zur Herstellung einer frischen Farbstoffzusammensetzung wird vorzugsweise eine Brausetablette, die eine wirksame, zuvor gewählte Menge des Färbemittels enthält, in einer zuvor gewählten Menge eines wäßrigen Lösungsmittels aufgelöst. Zum Umwandeln der Leuko- Form des Färbemittels in die Chromo-Form wird in die Farbstoffzusammensetzung ein pharmazeutisch akzeptables Oxidationsmittel für Leuko-Toluidinblau O einbezogen.
Die Spezifität des Toluidinblau-O-Tests zur Darstellung von Krebs wird entweder durch die frische Zubereitung der Farbstoffzusammensetzung oder durch die Oxidation von Leuko-Färbemittel, das in der Zusammensetzung vorhanden ist, vor dem Auftragen verbessert. Eine optimale Verbesserung der Spezifität des Tests wird durch die Anwendung beider Prozeduren erreicht.
In einer Ausgestaltung der Erfindung umfaßt eine biologische Farbstoffzusammensetzung zur In-situ- Darstellung von Epithelkrebs demzufolge Toluidinblau O und ein pharmazeutisch akzeptables Oxidationsmittel für Leuko- Toluidinblau O. In einer anderen Ausgestaltung der Erfindung umfaßt eine trockene Zusammensetzung zur Herstellung eines biologischen Farbstoffes zur In-situ- Darstellung von Epithelkrebs Toluidinblau O, ein pharmazeutisch akzeptables Oxidationsmittel für Leuko- Toluidinblau O und ein Aufschäumungsmittel.
In noch einer anderen Ausgestaltung der Erfindung umfaßt ein Verfahren zur Herstellung eines biologischen Farbstoffs zur In-situ-Darstellung von Epithelkrebs die folgenden Schritte: Auflösen von Toluidinblau O in einem pharmazeutisch akzeptablen Lösungsmittel und Kontaktieren einer solchen Lösung mit einem pharmazeutisch akzeptablen Oxidationsmittel für Leuko-Toluidinblau O.
Gemäß noch einer anderen Ausgestaltung der Erfindung umfaßt ein Verfahren zur Herstellung eines biologischen Farbstoffes zur In-situ-Darstellung von Epithelkrebs die folgenden Schritte: Herstellen einer trockenen Zusammensetzung und anschließend Auflösen der trockenen Zusammensetzung in einem wäßrigen Lösungsmittel. Die trockene Zusammensetzung umfaßt Toluidinblau O und ein wasserlösliches, pharmazeutisch akzeptables Oxidationsmittel für Leuko-Toluidinblau O.
In noch einer anderen Ausgestaltung der Erfindung umfaßt ein Verfahren zur Verwendung bei der Darstellung von Krebs in Epithelgewebe die folgenden Schritte: Auflösen von Toluidinblau O in einem therapeutisch akzeptablen Lösungsmittel, Kontaktieren der Lösung mit einem therapeutisch akzeptablen Oxidationsmittel für Leuko- Toluidinblau O und Auftragen der kontaktierten Lösung auf das Epithelgewebe an der Stelle vermuteter Krebsorte.
In noch einer anderen Ausgestaltung der Erfindung, die zur Darstellung von Mundkrebs nützlich ist, enthält die Farbstoffzusammensetzung einen Aromastoff und ist gepuffert, um eine Verschlechterung des Aromas zu vermeiden.
In noch einer anderen Ausgestaltung stellt die Erfindung ein Verfahren zur Verwendung bei der Darstellung von Krebs in oralem Epithelgewebe bereit, das das Kontaktieren des Gewebes an der Stelle mutmaßlicher Krebsorte mit der zuvor beschriebenen aromatisierten, gepufferten Zusammensetzung umfaßt.
Handelsübliches Toluidinblau O ist von begrenzter Reinheit, und aus handelsüblichem Färbematerial hergestellte Lösungen können mit unlöslichem Material kontaminiert werden. Demzufolge ließ man in der Vergangenheit frisch zubereitete Lösungen eine Zeitlang stehen, damit sich das unlösliche Material vor dem Gebrauch absetzt und um eine Autoxidation von Leuko-Toluidinblau O, das in der Lösung möglicherweise vorliegt, zu ermöglichen.
Da die Farbstofflösungen von typischen praktischen Ärzten selten benutzt wurden, wurden Stabilität und Färbeeigenschaften älterer Färbelösungen angezweifelt. Ferner war die Zubereitung frischer Farbstoffzusammensetzungen zeitaufwendig, wodurch praktische Ärzte eher dazu geneigt waren, ältere Lösungen zu verwenden. Ferner neigte der pH-Wert solcher früherer Lösungen dazu, über die Lagerdauer der Lösungen zu variieren, so daß beim Gebrauch in der Mundhöhle von Personen mit geringfügigen Variationen im oralen pH-Wert inkonsistente klinische Ergebnisse erzielt wurden. Aufgrund der pH-Instabilität über die Lagerdauer verschlechterten sich schließlich Aromastoffe, die normalerweise für eine pH-Wert-Variation anfällig sind.
Zwar können frische Zusammensetzungen direkt in flüssiger Form hergestellt werden, doch wird die Herstellung frischer Farbstoffzusammensetzungen durch das Beifügen einer zuvor gewählten Menge an Toluidinblau-O- Pulver in eine Brausetablette vereinfacht, die aus Komponenten besteht, die in einem pharmazeutisch akzeptablen Lösungsmittel hochlöslich sind und die, nach dem Desintegrieren und Auflösen der Tablette, reagieren, um eine Fülle von Gasbläschen zu bilden, die die Auflösung des Färbemittels und die Bildung einer Lösung mit durch und durch gleichmäßiger Färbemittelkonzentration unterstützen. Ein Menge des Toluidinblau-O-Pulvers wird in die Brausetablette gegeben, die nach dem Auflösen in einer zuvor gewählten Menge an Lösungsmittel die gewünschte Färbemittel-Endkonzentration in der Lösung erzielt.
Die Tablettenkomponenten, die die Aufschäumungswirkung erzielen, werden aus solchen ausgewählt, die in pharmazeutisch akzeptablen Brausetablettenzusammensetzungen des Standes der Technik gut bekannt sind, wie z. B. sogenannte pharmazeutische "Fusiongranulations"-Gemische. Es sind zum Beispiel Gemische aus relativ schwachen organischen Säuren und relativ schwachen organischen Basen geeignet, die reagieren, um Kohlendioxid zu bilden und freizugeben, sowie beliebige andere nichttoxische, feste, wasserlösliche Verbindungen, die mit der Entwicklung von Gas in einer Menge, die ausreicht, um das Mischen und Auflösen der anderen Komponenten der Zusammensetzung zu fördern, in oder mit Wasser reagieren. Um die Oxidation der Leuko-Form des Toluidinblau O zu vereinfachen, sollten die Aufschäumungsmittel oder deren Reaktionsprodukte offensichtlich nicht als chemische Reduktionsmittel wirken. Typische illustrative Beispiele geeigneter Aufschäumungszusammensetzungen sind u. a. Citronensäure/Natriumbicarbonat, Weinsäure/Kaliumcarbonat. Zu anderen geeigneten Säuren gehören Malein- oder Apfelsäure. Geeignete, in Fachkreisen bekannte Binder und Antischaummittel können ebenfalls der Aufschäumungsformulierung beigefügt werden. Zu geeigneten Bindern gehört beispielsweise Polyvinylpyrrolidon. Ein geeignetes Antischaummittel ist Dimethylpolysiloxan. Aromastoffe werden normalerweise nach Bedarf hinzugefügt.
Die Entstehung von Kohlendioxidbläschen in der Lösung hilft beim Löslichmachen der anderen Komponenten, vor allem von Toluidinblau O, das nur eine begrenzte Wasserlöslichkeit und somit eine mäßige Auflösungsgeschwindigkeit aufweist. Durch Einbeziehen einer festen Form von Wasserstoffperoxid, einer Form, die nach dem Auflösen in Wasser Wasserstoffperoxid bildet, wie Calciumperoxid oder Ureacarbamid (Ureaperoxid), reagiert das Wasserstoffperoxid auch mit dem Natriumbicarbonat in einer Oxydoreduktionsreaktion mit der Freigabe eines molekularen Sauerstoffs. Um eine mögliche Reduktion von Toluidinblau O in Lösung zu vermeiden, müssen die stöchiometrisch eingestellte Menge der organischen Säure, die Alkalibase (z. B. Natriumbicarbonat) und das Peroxid so bestimmt werden, daß, nachdem das Bicarbonat durch Reaktion erschöpft ist, ein Überschuß an Wasserstoffperoxid in der resultierenden Lösung verbleibt, so daß Toluidinblau O vorwiegend in der oxidierten Form übrigbleibt, wobei eventuell vorhandene reduzierte Leuko-Form des Färbemittels mit der vorhandenen verbleibenden Peroxidkonzentration erneut oxidiert wird.
Zum Umwandeln von Leuko-Färbemittel in der Zusammensetzung in die Chromo-Form werden pharmazeutisch akzeptable Oxidationsmittel gewählt, d. h. sie sind nichttoxisch und verursachen keine unerwünschten Nebenreaktionen wie eine Verschlechterung des Färbemittels. Fachkundige werden in der Lage sein, geeignete Oxidationsmittel für den erfindungsgemäßen Gebrauch durch Routinetests bekannter nichttoxischer, milder Oxidationsmittel auszuwählen. Gemäß den derzeit bevorzugten Ausgestaltungen der Erfindung wird für direkt zubereitete Flüssigzusammensetzungen zum Beispiel vorzugsweise wäßriges Wasserstoffperoxid verwendet. Bei Trockengemischen, wie beispielsweise in Brausetabletten formuliert, können verschiedene feste, wasserlösliche "Per-"Verbindungen verwendet werden, die nach dem Auflösen in wäßrigen Lösungsmitteln Peroxidradikale liefern, wie Ureaperoxid, Natriumperborattetrahydrat, Natriumpercarbonat und dergleichen, die in wäßrigen Lösungen Wasserstoffperoxid bilden. Es wird eine ausreichende Menge Peroxid verwendet, um eine Peroxidkonzentration in der wäßrigen Farbstoffendzusammensetzung von etwa 0,25-1% zu erzielen, um den Oxidationszustand des Färbemittels in der gewünschten Chromo-Form zu halten. Zu anderen geeigneten Oxidationsmitteln gehören Natriumperborat, Natriumperoxid, Natriumperiodat, Calciumperoxid und dergleichen.
Die erfindungsgemäßen Farbstoffzusammensetzungen sind vorzugsweise so formuliert, daß eine Färbemittelendlösung erzeugt wird, die im wesentlichen isotonisch ist und einen pH-Wert im Bereich von etwa 2,5 bis 7,0, vorzugsweise von 4,0 bis 5,0 hat. Dies kann durch Zugabe eines angemessenen Flüssigkeitspuffersystems in eine Flüssigkeitsformulierung oder durch Zugabe eines Feststoffpuffersystems in eine trockene Zusammensetzung erreicht werden. Bei einer Aufschäumungszusammensetzung wird ein stöchiometrischer Überschuß des Puffers verwendet, um den korrekten, gewünschten pH-Wert der wäßrigen Färbemittel- Endzusammensetzung nach dem Auflösen und Reagieren der Aufschäumungskomponenten aufrechtzuerhalten.
In einer derzeit bevorzugten erfindungsgemäßen Ausgestaltung wird eine 1%ige Toluidinblau-O-Lösung beispielsweise mit einem 1,0 M Essigsäure-Natriumacetat- Puffer auf einen pH-Wert von 4,0 gepuffert. Andere geeignete Puffer können von Fachkundigen in bezug auf diese Offenbarung und durch Routinetests ausgewählt werden. Zu anderen geeigneten Puffern gehören zum Beispiel Citronensäure-Natriumcitrat oder gemischte Säure-Salz- Systeme wie Citronensäure-Natriumphosphat und dergleichen. Die Wahl der Pufferkomponenten und ihrer Konzentrationen wird durch den gewünschten pH-Wert der gepufferten Lösung sowie durch die gewünschte Pufferkapazität bestimmt.
In flüssigen Zusammensetzungen ist das Lösungsmittel ein wäßriges Lösungsmittel; gemäß der bevorzugten Ausgestaltung der Erfindung beinhaltet das Lösungsmittel einen pharmazeutisch akzeptablen (d. h. nichttoxischen, reaktionsunfähigen) Alkohol, wie z. B. Ethylalkohol, um das Eindringen des Färbemittels in das Epithelgewebe zu verbessern. Solche Lösungsmittel führen zu keiner merklichen Beeinträchtigung des Gewebefärbemechanismus und tragen selbst zu keiner Reduktion von Chromo-Toluidinblau O in die Leuko-Form des Färbemittels bei.
In einer bevorzugten Formulierung wird das Toluidinblau-O-Pulver in einer Lösung aus Essigsäure, Ethylalkohol und Wasser mit Zugabe von Wasserstoffperoxid in einer Menge aufgelöst, die ausreicht, um den Oxidationszustand des Toluidinblau-O in der Chromo-Form zu halten. Wasserstoffperoxidstabile Aromastoffe werden der Formulierung zugegeben, um den Geschmack der Färbemittelspüllösung zu verbessern. Wird die Färbemittelspüllösung nicht im oralen Bereich gebraucht, dann kann der Aromastoff aus der Formulierung weggelassen werden.
Wenn es erwünscht ist, daß das Toluidinblau O in einer einfachen, praktischen Einzelgebrauchsform verfügbar ist, so können alle kritischen Komponenten der Färbemittelspüllösung als trockenes Pulvergemisch zubereitet werden, das direkt oder in Kombination mit anderen Inhaltsstoffen in einer sich schnell auflösenden Tablette verwendet werden kann. Das Pulvergemisch oder die Tablette kann dann in einem praktischen Behälter verpackt werden, um mit Wasser und/oder anderen Lösungsmitteln wie Wasser und Ethylalkohol vermischt und aufgelöst zu werden.
Die vorliegende Erfindung betrifft auch das Formulieren eines Brausepulver- oder -tablettengemischs, das ein Oxidationsmittel enthält, um eine eventuelle Reduktion des Färbemittels in die Leuko-Form zu kompensieren, wenn dieses in Lösung aufgelöst ist. Dies kann auf verschiedene Weisen erreicht werden, die dem Fachkundigen offensichtlich sind. Zum Beispiel können alle Zusammensetzungskomponenten in einer einzelnen Tablette formuliert werden. Alternativ können das Oxidationsmittel und das Färbemittel in separaten Tabletten formuliert werden, die beide dem wäßrigen Lösungsmittel beigefügt werden, um die Farbstoffendzusammensetzung zu erzeugen.
Die Färbemittelmenge in der trockenen oder flüssigen Formulierung wird vorzugsweise so eingestellt, daß sich eine Toluidinblau-Konzentration von etwa 1 Gew.-% in der Farbstoffendzusammensetzung ergibt, wenn auch höhere Konzentrationen verwendet werden können und geringere Konzentrationen wenigstens teilweise effektiv sind, z. B. zwischen etwa 0,5 und etwa 3,5 Gew.-%.

ARBEITSBEISPIELE

Die folgenden Beispiele sollen die Praxis der Erfindung und die besten Arbeitsweisen illustrieren, die zur Zeit bekannt sind. Diese Beispiele dienen lediglich Illustrationszwecken und sollen den Umfang der Erfindung in nicht beschränken.

BEISPIEL I

Dieses Beispiel illustriert die Herstellung einer frischen Färbemittellösung aus separaten flüssigen und festen Komponenten. Es werden die folgenden Komponenten vermischt.
20 Gramm Toluidinblau O (gereinigt)
200 ml Essigsäure, U. S. P.
168 ml Ethylalkohol, U. S. P.
14,28 ml Wasserstoffperoxid, 35% U. S. P.
3 ml Aromastoffe (z. B. Traube)
1614 ml gereinigtes H&sub2;O, U. P. S., Q. S. auf 2000 ml Endvolumen

BEISPIEL II

Dieses Beispiel illustriert die Herstellung einer frischen Färbemittellösung aus vorgemischten Feststoffkomponenten, die danach in Wasser aufgelöst werden.
Die folgenden Trockenkomponenten werden gründlich vermischt.
Toluidinblau O 24 Teile
Citronensäure 48 Teile
Natriumcitrat 30 Teile
Ureacarbamid 6 Teile
Dieses Trockengemisch kann über längere Zeiträume gelagert werden; eine frisch zubereitete Färbemittellösung kann kurz vor dem Gebrauch hergestellt werden, indem eine ausreichende Gewichtsmenge dieses Gemischs in Wasser aufgelöst wird, um eine Toluidinblau-O-Endkonzentration von 1 Gew.-% zu erzeugen.

BEISPIEL III

Dieses Beispiel illustriert ein Verfahren, bei dem die Komponenten einer Färbemittel-Endzusammensetzung in zwei separaten Tabletten kombiniert werden, wobei eine das Oxidationsmittel und die andere die restlichen Komponenten enthält.

Tablette A

Gew.-%
Natriumperborat 20,0
Sorbitol 77,8
Polyethylenglykol 2,0
Siloxanpolymer 0,2

Tablette B

Gew.-%
Citronensäure 35,0
NaHCO&sub2; 25,0
Toluidinblau O 20,0
kationisches Tensid 3,0
Aroma 3,0
Süßungsmittel 2,0
Sorbitol 8,0
Polyethylenglykol 2,0
Natriumbenzoat 1,8
Siloxanpolymer 0,2
Tablette A und Tablette B werden zusammen in einem verschlossenen Einwegbehälter verpackt. Die Färbemittelendformulierung wird in dem Behälter hergestellt, indem Wasser oder Wasser-Ethylalkohol zugegeben wird, so daß ein Färbemittelendgehalt von etwa 1 Gew.-% erzeugt wird.

BEISPIEL IV

Dieses Beispiel illustriert die Herstellung einer Einzeltablettenformulierung.
Gew.-%
Citronensäure 35,0
NaHCO&sub2; 25,0
Toluidinblau O 20,0
kationisches Tensid 3,0
Aroma 3,0
Süßungsmittel 2,0
Ureaperoxid 8,0
Polyethylenglykol 2,0
Natriumbenzoat 1,8
Siloxanpolymer 0,2
In den Beispielen III und IV werden Sorbitol, Glykol und Siloxanpolymere als Tablettierungshilfen zugegeben. Konservierungsstoffe und antimikrobielle Wirkstoffe wie Natriumbenzoat können ebenfalls zugegeben werden. Süßungsmittel und Aromastoffe, die in der Mundspülungstechnik gut bekannt sind, können ebenfalls als fakultative Zusätze verwendet werden.

BEISPIEL V

Dieses Beispiel beschreibt die derzeit bevorzugte Formulierung, die die Prinzipien der vorliegenden Erfindung verkörpert:
Toluidinblau O 10,00 Gramm
Eisessig 43,75 ml
Natriumacetat-Trihydrat 24,50 Gramm
SD-Alkohol (95% Ethylalkohol) 42,00 ml
Wasserstoffperoxid (30%) 3,70 ml
Dragoco-Traubengeschmack 2,00 ml
gereinigtes Wasser 908,60 ml
Die Inhaltsstoffe dieser Formulierung werden vermischt, so daß 1000 ml einer 1%igen Toluidinblau-O- Lösung mit einem pH-Wert von 4,0 erzeugt werden, die mit 1,0 M Essigsäure-Acetatpuffer gepuffert ist.

BEISPIEL VI

Das Beispiel illustriert die bevorzugte Praxis des erfindungsgemäßen Krebsnachweisverfahrens, unter Verwendung der Formulierung aus Beispiel V zu Illustrationszwecken:
Der Patient [*2] wird angewiesen, die Mundhöhle zunächst etwa 30 Sekunden lang mit etwa 10 ml Wasser zu spülen, um losen Debris und Schleim zu beseitigen.
Der Patient [*2] spült den Mund dann etwa 30 Sekunden lang mit etwa 10 ml 1%iger Essigsäure aus, um überschüssigen Speichel zu beseitigen.
Mit einem Baumwollapplikator, der mit der Zusammensetzung aus Beispiel V getränkt ist, wird die Färbemittelzusammensetzung direkt auf eine Läsionsstelle und das umgebende Gewebe aufgetragen. Die Färbemittelzusammensetzung bleibt etwa 30 bis 60 Sekunden lang auf der Applikationsstelle.
Der Patient spült den Mund dann etwa 30 Sekunden lang mit etwa 10 ml 1%iger Essigsäure aus, um überschüssiges Färbemittel zu beseitigen; anschließend spült er den Mund schließlich mit etwa 10 ml Wasser aus.
Durch Beobachten des Färbemusters kann die Anwesenheit von Krebsgewebe erkannt werden.
Für den Nachweis von eventuellem Krebsgewebe im gesamten Mundbereich kann der Patient die gesamte Mundhöhle ca. 30 Sekunden lang mit ca. 10 ml der Zusammensetzung aus Beispiel V spülen, anstatt daß die Färbemittelzusammensetzung mit dem Baumwollapplikator auf bestimmte Stellen aufgetragen wird. Ansonsten entspricht das Verfahren einer solchen allgemeinen Spülung dem oben beschriebenen Verfahren.
Nachdem die Erfindung so beschrieben wurde, daß Fachkundige sie nachvollziehen und praktizieren können, und nachdem die derzeit bevorzugte Ausgestaltung offenbart wurde, wird folgendes beansprucht:

Claims

1. Biologische Farbstoffzusammensetzung zur In-situ- Darstellung von Epithelkrebs, umfassend:

(a) Toluidinblau O; und

(b) ein pharmazeutisch akzeptables Oxidationsmittel für Leuko-Toluidinblau O.

2. Zusammensetzung nach Anspruch 1 in trockener Form zur In-situ-Darstellung von Epithelkrebs, umfassend:

(a) Toluidinblau O;

(b) ein pharmazeutisch akzeptables Oxidationsmittel für Leuko-Toluidinblau O; und

(c) ein Aufschäumungsmittel.

3. Verfahren zur Herstellung einer biologischen Farbstoffzusammensetzung [*1] zur In-situ-Darstellung von Epithelkrebs, umfassend die folgenden Schritte:

(a) Auflösen von Toluidinblau O in einem pharmazeutisch akzeptablen Lösungsmittel; und

(b) Kontaktieren einer solchen Lösung mit einem pharmazeutisch akzeptablen Oxidationsmittel für Leuko- Toluidinblau 0.

4. Verfahren zur Herstellung einer wäßrigen biologischen Farbstoffzusammensetzung zur In-situ-Darstellung von Epithelkrebs, umfassend die folgenden Schritte:

(a) Herstellen einer trockenen Zusammensetzung, umfassend:

(i) Toluidinblau O,

(ii) ein wasserlösliches, pharmazeutisch akzeptables Oxidationsmittel für Leuko-Toluidinblau O und

(iii) ein Aufschäumungsmittel; und

(b) Auflösen der genannten trockenen Zusammensetzung in einem wäßrigen Lösungsmittel.

5. Verwendung einer Zusammensetzung, umfassend:

(a) Toluidinblau O;

(b) ein pharmazeutisch akzeptables Lösungsmittel; und

(c) ein pharmazeutisch akzeptables Oxidationsmittel für Leuko-Toluidinblau;

bei der Herstellung eines Medikamentes zur Darstellung von Epithelkrebs in Epithelgewebe.

6. Zusammensetzung nach Anspruch 1, ferner umfassend eine Puffersubstanz, um den pH-Wert im Bereich zwischen 2,5 und 7,0 zu halten.

7. Zusammensetzung nach Anspruch 6, bei der der pH-Wert im Bereich zwischen 3,5 und 5,0 gehalten wird.

5. Zusammensetzung nach Anspruch 6, ferner umfassend einen Aromastoff.

9. Biologische Farbstoffzusammensetzung nach Anspruch 1 zur In-situ-Erfassung von Epithelkrebs, umfassend:

(a) Toluidinblau O;

(b) Wasserstoffperoxid in einer geringfügigen Menge, die ausreicht, um das genannte Toluidinblau 0 in Chromo-Form zu halten;

(c) einen wäßrigen Ethylalkohollösungsmittelträger;

(d) einen in dem genannten Träger löslichen Aromastoff; und

(e) eine Puffersubstanz, die den pH-Wert der genannten Zusammensetzung im Bereich zwischen 3,5 und 5,0 hält.

10. Verwendung der Zusammensetzung nach Anspruch 9 bei der Herstellung eines Medikamentes zur Darstellung von Epithelkrebs in oralem Epithelgewebe.