CZ20013504A3 - Sloučeniny k in vivo obarvování a způsoby pouľití k identifikaci dysplastické tkáně - Google Patents
Sloučeniny k in vivo obarvování a způsoby pouľití k identifikaci dysplastické tkáně Download PDFInfo
- Publication number
- CZ20013504A3 CZ20013504A3 CZ20013504A CZ20013504A CZ20013504A3 CZ 20013504 A3 CZ20013504 A3 CZ 20013504A3 CZ 20013504 A CZ20013504 A CZ 20013504A CZ 20013504 A CZ20013504 A CZ 20013504A CZ 20013504 A3 CZ20013504 A3 CZ 20013504A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- minutes
- solution
- compound
- compounds
- add
- Prior art date
Links
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title claims abstract description 45
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 24
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 title abstract description 10
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims abstract description 7
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims abstract description 6
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims abstract description 6
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 3
- 150000002431 hydrogen Chemical group 0.000 claims abstract 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 12
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 8
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 claims description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 abstract description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 47
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 42
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 32
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 30
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 25
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 22
- 239000000047 product Substances 0.000 description 20
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 20
- JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L zinc dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Zn+2] JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 20
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 18
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 18
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 17
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 16
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 15
- KMUONIBRACKNSN-UHFFFAOYSA-N potassium dichromate Chemical compound [K+].[K+].[O-][Cr](=O)(=O)O[Cr]([O-])(=O)=O KMUONIBRACKNSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 13
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 13
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 12
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 12
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 10
- 235000005074 zinc chloride Nutrition 0.000 description 10
- 239000011592 zinc chloride Substances 0.000 description 10
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 9
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 9
- 239000000463 material Substances 0.000 description 8
- RNVCVTLRINQCPJ-UHFFFAOYSA-N o-toluidine Chemical compound CC1=CC=CC=C1N RNVCVTLRINQCPJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000012465 retentate Substances 0.000 description 8
- HNONEKILPDHFOL-UHFFFAOYSA-M tolonium chloride Chemical compound [Cl-].C1=C(C)C(N)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 HNONEKILPDHFOL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 7
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 description 7
- FKLJPTJMIBLJAV-UHFFFAOYSA-N Compound IV Chemical compound O1N=C(C)C=C1CCCCCCCOC1=CC=C(C=2OCCN=2)C=C1 FKLJPTJMIBLJAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 6
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 6
- WHLSUYBVBOSJOQ-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxysulfonothioyl-4-n,4-n-dimethylbenzene-1,4-diamine Chemical compound CN(C)C1=CC=C(N)C(S(O)(=O)=S)=C1 WHLSUYBVBOSJOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 5
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 5
- 229920001903 high density polyethylene Polymers 0.000 description 5
- 239000004700 high-density polyethylene Substances 0.000 description 5
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 5
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 5
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 5
- 239000005341 toughened glass Substances 0.000 description 5
- QZHXKQKKEBXYRG-UHFFFAOYSA-N 4-n-(4-aminophenyl)benzene-1,4-diamine Chemical compound C1=CC(N)=CC=C1NC1=CC=C(N)C=C1 QZHXKQKKEBXYRG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 239000008139 complexing agent Substances 0.000 description 4
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 4
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 4
- 238000004896 high resolution mass spectrometry Methods 0.000 description 4
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 4
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 4
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 4
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 240000007651 Rubus glaucus Species 0.000 description 3
- 235000011034 Rubus glaucus Nutrition 0.000 description 3
- 235000009122 Rubus idaeus Nutrition 0.000 description 3
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 3
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 3
- 238000002101 electrospray ionisation tandem mass spectrometry Methods 0.000 description 3
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 3
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 3
- 230000002572 peristaltic effect Effects 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 3
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 3
- 210000004872 soft tissue Anatomy 0.000 description 3
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 3
- 239000012085 test solution Substances 0.000 description 3
- SPJXGIDHWJCRSL-UHFFFAOYSA-N 2-[[4-methyl-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]pentanoyl]amino]-4-methylsulfanylbutanoic acid Chemical compound CSCCC(C(O)=O)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)OC(C)(C)C SPJXGIDHWJCRSL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BZORFPDSXLZWJF-UHFFFAOYSA-N N,N-dimethyl-1,4-phenylenediamine Chemical compound CN(C)C1=CC=C(N)C=C1 BZORFPDSXLZWJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 239000003535 biological staining Substances 0.000 description 2
- JQOREDBDOLZSJY-UHFFFAOYSA-H bis(2,2-dioxo-1,3,2,4-dioxathialumetan-4-yl) sulfate hexahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.[Al+3].[Al+3].[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O JQOREDBDOLZSJY-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 2
- NCMHKCKGHRPLCM-UHFFFAOYSA-N caesium(1+) Chemical compound [Cs+] NCMHKCKGHRPLCM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000001793 charged compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- JZCCFEFSEZPSOG-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate pentahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.[Cu+2].[O-]S([O-])(=O)=O JZCCFEFSEZPSOG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 2
- 238000002330 electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 239000012156 elution solvent Substances 0.000 description 2
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 2
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 2
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 2
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 2
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 2
- 238000011017 operating method Methods 0.000 description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 2
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- PODWXQQNRWNDGD-UHFFFAOYSA-L sodium thiosulfate pentahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.[Na+].[Na+].[O-]S([S-])(=O)=O PODWXQQNRWNDGD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- SWWQQSDRUYSMAR-UHFFFAOYSA-N 1-[(4-hydroxyphenyl)methyl]-1,2,3,4-tetrahydroisoquinoline-6,7-diol;hydrochloride Chemical group Cl.C1=CC(O)=CC=C1CC1C2=CC(O)=C(O)C=C2CCN1 SWWQQSDRUYSMAR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BDKLKNJTMLIAFE-UHFFFAOYSA-N 2-(3-fluorophenyl)-1,3-oxazole-4-carbaldehyde Chemical compound FC1=CC=CC(C=2OC=C(C=O)N=2)=C1 BDKLKNJTMLIAFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 1
- 101100438156 Arabidopsis thaliana CAD7 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150071647 CAD4 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100322652 Catharanthus roseus ADH13 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100087088 Catharanthus roseus Redox1 gene Proteins 0.000 description 1
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N DMSO Substances CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000002064 Dental Plaque Diseases 0.000 description 1
- IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N Dimethyl sulfoxide Chemical compound [2H]C([2H])([2H])S(=O)C([2H])([2H])[2H] IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N 0.000 description 1
- 206010058314 Dysplasia Diseases 0.000 description 1
- 101000606535 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase epsilon Proteins 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 239000012901 Milli-Q water Substances 0.000 description 1
- 229920002145 PharMed Polymers 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010036790 Productive cough Diseases 0.000 description 1
- 102100039665 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase epsilon Human genes 0.000 description 1
- 229910000831 Steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 238000002441 X-ray diffraction Methods 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- DIZPMCHEQGEION-UHFFFAOYSA-H aluminium sulfate (anhydrous) Chemical compound [Al+3].[Al+3].[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O DIZPMCHEQGEION-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 1
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 1
- 238000005266 casting Methods 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 239000007859 condensation product Substances 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 229910000365 copper sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate Chemical compound [Cu+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- SOCTUWSJJQCPFX-UHFFFAOYSA-N dichromate(2-) Chemical compound [O-][Cr](=O)(=O)O[Cr]([O-])(=O)=O SOCTUWSJJQCPFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910001873 dinitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000428 dust Substances 0.000 description 1
- 238000000132 electrospray ionisation Methods 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 230000009841 epithelial lesion Effects 0.000 description 1
- 238000010265 fast atom bombardment Methods 0.000 description 1
- 238000004992 fast atom bombardment mass spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 230000007760 free radical scavenging Effects 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 238000010562 histological examination Methods 0.000 description 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 1
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 239000010781 infectious medical waste Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 238000009413 insulation Methods 0.000 description 1
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 1
- 230000000622 irritating effect Effects 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 231100000647 material safety data sheet Toxicity 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000005022 packaging material Substances 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- -1 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 description 1
- 239000012264 purified product Substances 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000007363 ring formation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002390 rotary evaporation Methods 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 238000007423 screening assay Methods 0.000 description 1
- 238000010517 secondary reaction Methods 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 229940087562 sodium acetate trihydrate Drugs 0.000 description 1
- WXMKPNITSTVMEF-UHFFFAOYSA-M sodium benzoate Chemical compound [Na+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1 WXMKPNITSTVMEF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000004299 sodium benzoate Substances 0.000 description 1
- 235000010234 sodium benzoate Nutrition 0.000 description 1
- AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L sodium thiosulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=S AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000019345 sodium thiosulphate Nutrition 0.000 description 1
- 210000001584 soft palate Anatomy 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000010959 steel Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 229940006280 thiosulfate ion Drugs 0.000 description 1
- DHCDFWKWKRSZHF-UHFFFAOYSA-L thiosulfate(2-) Chemical compound [O-]S([S-])(=O)=O DHCDFWKWKRSZHF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229960001555 tolonium chloride Drugs 0.000 description 1
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 1
- 230000000472 traumatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004506 ultrasonic cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000013022 venting Methods 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
- A61K49/006—Biological staining of tissues in vivo, e.g. methylene blue or toluidine blue O administered in the buccal area to detect epithelial cancer cells, dyes used for delineating tissues during surgery
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/02—Stomatological preparations, e.g. drugs for caries, aphtae, periodontitis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D279/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one nitrogen atom and one sulfur atom as the only ring hetero atoms
- C07D279/10—1,4-Thiazines; Hydrogenated 1,4-thiazines
- C07D279/14—1,4-Thiazines; Hydrogenated 1,4-thiazines condensed with carbocyclic rings or ring systems
- C07D279/18—[b, e]-condensed with two six-membered rings
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D279/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one nitrogen atom and one sulfur atom as the only ring hetero atoms
- C07D279/10—1,4-Thiazines; Hydrogenated 1,4-thiazines
- C07D279/14—1,4-Thiazines; Hydrogenated 1,4-thiazines condensed with carbocyclic rings or ring systems
- C07D279/18—[b, e]-condensed with two six-membered rings
- C07D279/20—[b, e]-condensed with two six-membered rings with hydrogen atoms directly attached to the ring nitrogen atom
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D279/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one nitrogen atom and one sulfur atom as the only ring hetero atoms
- C07D279/10—1,4-Thiazines; Hydrogenated 1,4-thiazines
- C07D279/14—1,4-Thiazines; Hydrogenated 1,4-thiazines condensed with carbocyclic rings or ring systems
- C07D279/36—[b, e]-condensed, at least one with a further condensed benzene ring
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Oncology (AREA)
- Optics & Photonics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Sanitary Thin Papers (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
- Nitrogen- Or Sulfur-Containing Heterocyclic Ring Compounds With Rings Of Six Or More Members (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
- Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Indole Compounds (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
Sloučeniny k in vivo obarvováni a způsoby použiti k identifikaci dysplastické tkáně
Dosavadní stav techniky
Většina epiteliálních lézi vzniká v důsledku poraněni. Další léze však představují dysplastické nádory, z nichž některé mohou být nezhoubné, ale některé mohou být buďto zhoubné, anebo mohou být prekancerózámi. Navíc je mnoho dysplastických lézí malých a jsou snadno přehlédnuty při rutinní inspekci klinickými lékaři, zejména pak takové léze, které jsou v tělních dutinách, jako je například dutina ústní.
Je znám in vivo diagnostický test,· který identifikuje a ohraničuje podezřelou dysplastickou tkáň. Tento skríninkový test používající toluidinovou modř 0 (tolonium chlorid) pro selektivní barvení in vivo kancerózní a prekancerózní tkáně, je obecně popsán v patentu United States Patent 4321251, autor Mashberg, a v patentu United States Patent 5372801 autoři Tucci et al. Je-li suspektní dysplastické tkáň identifikována pomocí Mashbergova protokolu, může být odebrán bioptický vzorek pro histologické vyšetření, aby mohlo být potvrzeno, je-li léze kancerózní nebo prekancerózní. Kity k provedení tohoto testu obsahující předem rozmíchané barvivo a promývací roztoky ve správném množství a koncentracích jsou licensovány společností Žila, lne., a jsou komerčně dostupné v několika zemích pod ochranými známkami ORASCREEN® a ORATEST®.
Popis vynálezu
Tento vynález se týká nových biologických barvících sloučenin, které jsou užitečné pro lidské in vivo topické podání.
V dalším aspektu se vynález týká in vivo způsobů použiti takových nových sloučenin k identifikaci podezřelé dysplastické, tj. abnormální tkáně.
V ještě dalším ohledu se vynález týká nových sloučenin a in vivo diagnostických metod a jejich použiti, které jsou speciálně přizpůsobeny k detekci suspektní dysplastické tkáně v orální dutině, zejména kancerózní a prekancerózní tkáně.
Osobám znalým oboru budou z následujícího detailního popisu a obrázků zřejmé různé formy vynálezu a jejich provádění.
Stručný popis obrázků
Na Obrázku 1 je uvedeno schéma zobrazující postup syntézy nových sloučenin, které jsou předmětem předkládaného vynálezu.
Stručný popis vynálezu
Objevil jsem sloučeniny, které jsou užitečné pro selektivní in vivo biologické obarvování a ohraničeni dysplastické tkáně. Tyto sloučeniny mají strukturální vzorec _N.
kde X je vodík, metyl, nebo Y; Y je -NH-R nebo vodík;
a R je metyl nebo
Tyto sloučeniny zahrnují pro ilustraci
6 ·«
••toet ll I I l
I
-CHj
«· Φ» ě ·®9 9 9
-» · « φφ Φ ® · Φ·♦
---e__e_e_-------e-------·----♦---··.
• · · · * © β « ©=© e · · · 9©·· ···· · · ··♦ ······ ··
Stručný popis výrobního postupu
Sloučeniny, které jsou předmětem předkládaného vynálezu jsou syntetizovány postupem, který je podobný (s výjimkami vyznačenými níže) postupu popsanému v patentu United States Patent 418055 vydaného 30 listopadu 1889 Dandlinkerovi et al pro výrobu toluidinové modře O (TBO). Dandlinkerova syntéza je sérií tří oxidačních kroků: (1) oxidace N,N-dimetyl-pfenvlendiaminu, například dvojchromanem draselným, za vzniku 2amino -5- dimetylaminofenyl thiosulfonové kyseliny; (2) kondensace thiosulfonové kyseliny s o-toluidinem za vzniku odpovídající indamin-thiosulfonové kyseliny, například v přítomnosti komplexující látky při teplotě varu po dobu 30 minut, za vzniku toluidinové modři O. Reakční směs je poté ochlazena a reakční produkt reakčního komplexu uzavírajícího :kruh je vysolen. Purifikace . komplexu může být dosažena opětovným rozpuštěním a opětovnou precipitací.
Postupy přípravy sloučenin, které jsou předmětem předkládaného vynálezu se liší od Dandlikerovi syntézy v tom, že komplexující látka je přidána před třetím oxidačním krokem, přednostně během prvního oxidačního kroku a nové produkty, které jsou předmětem předkládaného vynálezu jsou izolovány a separovány od precipitovaného komplexu vysoko-účinnou kapalinovou chromatografií (HPLC)
Stručný popis použití produktů pro detekci epiteliálních nádorů.
Nové sloučeniny, které jsou předmětem vynálezu, jsou použity ve shodě s Mashbergovým protokolem za účelem selektivního barvení dysplastické epiteliální tkáně s tou výjimkou, že každá z těchto sloučenin je použita místo toluidinové modři O. Předkládaný vynález se také týká způsobu in vivo detekce dysplastické tkáně u člověka, kterýžto způsob zahrnuje krok aplikace preparátu na lidskou epiteliální tkáň, a kterýžto preparát obsahuje jeden z výše popsaných nových produktů nebo jejich směsí.
•' · · · · · ···« 'β· ece eeee ··
Detailní popis výrobního postupu přípravy produktů, které jsou předmětem předkládaného vynálezu.
Na Obr. 1 je uvedeno schéma, které zobrazuje postup přípravy nových sloučenin, které jsou předmětem předkládaného vynálezu.
Výchozí materiál 10 pro syntézu je komerčně dostupný, N,Ndimetyl-a-fenylen diamin o vysoké čistotě.
Vznik první reakční směsi
Vodný roztok výchozího materiálu je oxidován 11, přednostně při teplotě nižší než 10°C, obzvláště při teplotě nižší než 5°C, reakcí s vhodnou oxidační látkou 12, například dvojchromanem draselným 12, za přítomnosti kyseliny, síranu hlinitého a činidla 13 (které je schopno tvořit meziprodukt(y) a je ' r používáno v pozdější fázi postupu ke tvorbě komplexů se složkami reakčního produktu, například se jedná . o chlorid zinečnatý. Poté' je přidán zdroj thiosuulfátóvých iontů 14, například thiosulfát sodný, aby došlo ke vzniku reakční směsi 15 obsahující první meziprodukt 2-Amino-5- dimetylaminofenyl thiosulfonovou kyselinu.
Tvorba druhé reakční směsi
První reakční směs 15 je poté dále podrobena reakci, přednostně při teplotě ne větší než 10°C, s další oxidační látkou 16, například dvojchromanem. draselným a o-toluidin hydrochloridem 17, v kondenzačním kroku 18, za vzniku druhého meziproduktu, kondenzačního produktu, indamin thiosulfonové kyseliny, v druhé reakční směsi 19.
Tvorba třetí reakční směsi
Druhá reakční směs 19 je poté dále oxidována 21, přednostně přidáním vhodné oxidační látky 22, například dvojchromanu draselného, při teplotě ne větší než zhruba 10°C. Toto je následováno přidáním síranu měďnatého, látky tvořící komplexy s chloridem zinečnatým, kyseliny, a zahřátím na 100°C, aby se uzavřel indaminový kruh, za vzniku finálního reakčního produktu v třetí reakční směsi 24. V tomto bodu je reakční produkt separován ze třetí reakční směsi a purifikován.
Separace/purifikace třetího reakčního produktu Například v předkládané přednostní předmětem předkládaného vynálezu, precipitován z třetí reakční směsi s vhodnou formě postupu, který je je reakční produkt tvorbog komplexu 24 například chloridem zinečnatým
Precipitát roztokem rozpuštěn reakčního komplexující látkou 25, za vzniku komplexní zink chloridové dvojité soli, je zfiltrován 26 z tekuté fáze a promyt chloridu sodného 27. Promytý retentát je poté znovu 28 v kritickém1 2 objemu vody 29 za vzniku roztoku produktu 30, který je poté zfiltrován 31 za účelem odstranění nerozpuštěných pevných látek je přidán k filtrátu objemu/.koncentraci, aby chloridu zinečnatého.
se
32a, které jsou odstraněny. Poté chlorid sodný 33 v kritickém2 znovu precipitovala dvojitá sůl
Produkt ve formě dvojité soli je separován ze směsi filtrací za vzniku retentátu 34. Jak je indikováno přerušovanou čárou '35, může být retentát 34 znovu rozpuštěn, zfiltrován, znovu precipitován a znovu izolován mnohokrát, aby se dosáhlo požadovaného stupně čistoty a výtěžku rea~kčního produktu komplexu dvojité soli. Finální.purifikovaný komplexní produkt v retentátu 34 je poté znovu rozpuštěn ve vodě a nové sloučeniny, které jsou předmětem předkládaného vynálezu, jsou izolovány a separovány pomocí HPLC postupů popsaných níže.
1 Pokud je použito příliš mnoho vody, dochází k zabránění izolace reakčního produktu. Pokud je použito příliš málo vody (1) nedochází k rozpuštění veškerého reakčního produktu, což snižuje výtěžek a (2) snižuje čistotu produktu.
2 Pokud je použito příliš málo chloridu sodného, nedochází k vysolení veškerého produktu, což snižuje výtěžek. Pokud je použito příliš mnoho chloridu sodného, dochází k precipitaci nečistot spolu s reakčním produktem, což snižuje čistotu produktu.
• 9 v, .. «9 ό «e · · * · · * ·· ♦ · ♦ ♦ ·· • ·· · · · · ·
Příklady provedeni vynálezu
Následující příklady jsou prezentovány, aby ilustrovaly provedení vynálezu tak, aby umožnily osobám znalým oboru vytvořit nové sloučeniny, které jsou předmětem vynálezu, a provádět nové diagnostické způsoby za použití nových sloučenin, které spolu tvoří různé formy vynálezu, a dále aby ukázaly osobám znalým oboru v současnosti nej lepší způsoby použití různých forem vynálezu. Tyto příklady jsou prezentovány pouze jako ilustrační a neomezují rozsah vynálezu, který je definován pouze připojenými patentovými nároky.
Příklad 1
Vvrnbní nn.qtnr) ’
Tento příklad ilustruje přesné postupy přípravy série komplexového barvivového produktu a separaci nových sloučenin, které jsou předmětem vynálezu, z komplexového produktu pomocí HPLC.
Příprava roztoků hrubých materiálů
Vybavení/materiál
A. Váhy Ohaus TP15KS
B. Váhy AnD BV150KAI.......... ' ' .........
C. Váhy Fairbanks H90-5150
D. Váhy WB25/1-20W
E. Míchací zaříz;ení Cole Parker (51201-30) a Thermolyne (S25535)
F. Nástroje k přípravě vzorků, jako jsou například ocelové lžičky, odměrné válce, atd.
G. Erlyenmeyrovy nádoby, kádinky, demižony a další příslušné laboratorní sklo
H. Nálepky k označení vytvořených roztoků
Bezpečnost:
Při práci s chemikáliemi podle MSDS směrnic by měli být používány ochranné prostředky, jako jsou například rukavice, ochranné brýle, laboratorní pláště a respirátory.
| e· 99 | 9 9 • a · a | 99 • a | e ee |
| 9 | |||
| • · » ·«·« '·.· | 9 9 | 9 9 9« | 9 ♦ ·· |
Postup přípravy roztoků s hrubým materiálem:
K 1364,2 g (± 5,5 g) kyseliny chlorovodíkové přidejte 1364,2 (± 5,5 g) USP purifikované vody. Promíchávejte, až je roztok čirý.
K 1779,1 (± 7,0 g) hexahydrátu síranu hlinitého přidejte 2548,9 g (+ 10,0 g) USP purifikované vody. Promíchávejte, až je roztok čirý.
K 7384,6 g (± 30,0 g) chloridu zinečntého přidejte 2786,7 g (± 11,0 g) USP purifikované vody. Promíchávejte, až je roztok čirý.
K 1526,6 g (±6,0 g) pentahydrátu thiosulfátu sodného přidejte 2043,6 g (±8,0 g) USP purifikované vody. Promíchávejte, až je roztok čirý.
K 509,7 g (± 2,0 g) pentahydrátu síranu měďnatého přidejte 1613,1 g (±6,0 g) USP purifikované vody. Promíchávejte, až je roztok čirý.
K 600,0 g (±2,0 g) kyseliny sírové přidejte 600,0 g (±2,0 g) USP purifikované vody. Promíchávejte, až je roztok čirý.
K 70,4 kg (± 250 g) chloridu sodného přidejte 234,4 kg (± 850 g) USP purifikované vody. Promíchávejte, až je roztok čirý.
Syntéza
Vybavení a materiál pro syntézu
LFE kontrolní panel (3000) galonové plášťové purifikační tanky z tvrzeného skla s víkem (E71224) ···
Dva 100 galonové plášťové purifikačni tanky z tvrzeného skla s víkem (Pl, PT-001) (P2, L-13621) '10
FTS recirkulační chladič (RC96C032) a 500 galonový tank ke skladování studené tekutiny (500 CST)
Tři mixéry Caframo (BDC-1850 (Rl, 18500961) (Pl, 18501148) (P2,
185101173) s hřídelí a rotorem
Bleskový mixér (L1U08) (201550)
Tři výměníky tepla (Gardner Machinery) (Rl, 01960763) (Pl, 01960764) fP2. OftQSn727)
Tři 12 kW plášťové recirkulátory tekutiny (Watlow, BLC726C3S20)
Tři recirkulační pumpy (Sta-Rite, JBHD-62S, C48J2EC15) ·
Digitální peristaltická pumpa Masterflex (A94002806)
Peristaltická pumpa Masterflex (L95003320)
Peristaltická pumpa Cole Parmer (B96002074)
Filtrační jednotka Neutsche (70-2038, 43421-1)
Dvě Buchnerovy filtrační jednotky (Zll, 624-6, Z10, 441-8)
Vakuová pumpa Siemens galonový sběrný tank z tvrzeného skla s víkem (86854, E1641186)
Vzduchový kompresor (DF412-2) (9502312538)
Kontrolní zařízeni průtoku (3—5500) (69705069190)
6« ·♦ · 0'0 ·· · • · 9 '· · · » · · 00 0 .______ ... 0 .00 « »00»
-- -X- ' ,.. __ .. ;... ,4. ; .· S- 9 ©,·® 0 0 · ·0 » · · t··»· • 000 '00 00· »000 ·'· 0·®
Šest kontrolních zařízení pro série produktů (3-5600) (č.1,
69705069191, č. 2, 69705069199, č. 3, 69705069194, č. 4,
69705068829, č. 5, 69705058205, č. 6, 69.705069195)
Šest průtokových senzorů (č. 1, 69704295165, č. 2, 69704024995, č. 3, 69704024994, č. 4, 69704025027, č. 5, 69612178606, č. 6, 69703120990)
Čtyři membránové pumpy (Ml)
Čtyři pulzní supresory (A301H) (č.2, 15557, č. 3, 15561, č. 4,
5 R R O ř <í . Ί W 01
-U f X- · f -J- S / >
Čtyři regulátory vzduchu (CFR10)
Čtyři solenoidni ventily (používané s regulátory vzduchu)
Čtyři senzory pro nízký průtok (FS-50Ó)
Tři solenoidni ventily (EASM5V16W20)
Vzduchový filtr/regulátor (TIR)PTPE/ F06R113AC
Filtrační média, polypropylen (7211-1)
Filtrační média, Whatman Grade 52
Hadičky PharMed (-18, -82, -90) pH metr Hanna 9321 (1303675) Orion 620 (001911)
Spektrofotometr 20 (3MU7202070)
Vakuová pec Fisher Scientific (9502-033) • e *5 ®· β © e · e· · · · ···
--- ----,________________;—.------------------, ----------------------_·—ee—_----9 —1— ·.
©*····· · · ··«· ·« ·*.· »*·« ·· ··
Pec s nuceným oběhem vzduchu VWR 1370 FM (1370FM)
Prachový/mlhový respirátor
Laboratorní mlýnek Thomas Wiley (3375-E10)
Mixér Patterson-Kelley (Blendmaster, C416578)
Váhy OHAUS TS4D
Váhy OHAUS IP15KS
Váhy Mettler AG104
Váhy AnD BV150KAI
Váhy Fairbanks H90-5150
Tiskárna OHAUS AS123
Tiskárna OHAUS AS142
Multifunkčni tiskárna AD-8121
Jehličková tiskárna Citizen iDP 3540
HPLC Hewlett Packard (1050)
Ultrazvukové čistící zařízení (8892-DTH, QCC9601 005C)
Teplotní záznamové zařízení typ K Thermocouple (KTx, 6292753,
6355146)
Erlenmeyerovy nádoby (81, 61, 41, 11)
Kádinky (8 1, 6 1, 500 ml, 250 ml) ·· · ΰί ««· e ·· e 9 · · «· » · · ·· · ____________________________________—______________________________________9« ,9_____♦_____!· ·___·___________ ‘ “ 13
Demižony (41, 10 1, 50 1)
Sudy HDPE (55 galonů, 100 galonů)
Volumetrické nádoby (100 ml)
Plastový trychtýř
Pasteurovy pipety a baňky, a volumetrické pipety (10 ml, 5 ml) a baňka
Vážící papír
Lžičky
Balící materiál (nádoby, vička, cedulky)
Roztoky hrubého materiálu t9 ·· * ·· 9 99 • 9 9 9 999 9 9 999
--, , : —.--------—--------— - -----------------------------------— --------------------------9~~9'9 '---------'9~ 9 ~9~ 9 9'
...... - - 9 9 99 9 9 99 99 ±4 9 9 9 9 9 9 99
9999 99 999 9999 9*99
Syntéza: Krok 1
Syntéza 2-amino -5- dimetylaminofenyl thiosulfonové kyseliny:
Zkontrolujte integritu USP. vodního systému. Do reaktoru přidejte navážené množství purifikované vody USP stupně (28000 g ± 100,0 g) a promíchávejte při 190 ±10 ot./minutu.
Přidejte N,N- dimetyl -1,4- fenylendiamin (5,128 mol, 720,0 g ± 3,0 g) . Materiál by měl být přidán ve formě prášku (bez hrudek). Promíchávejte 10 minut (± 5 minut).
Přidejte kyselinu chlorovodíkovou (6N,
1136,9 g ± 5,0 g) .
minut (±
Odeberte vzorek reakční směsi o objemu přibližně 10 ml za použití plastové odměrky. Zkontrolujte pH. Hodnota pH musí být v rozmezí 2,8-3,8 při teplotě 25°C ± 5°C.
Přidejte roztok hexahydrátu síranu hlinitého )4328,0 + 21,0 g) .
Promíchávejte 10 minut (± 5 minut) při 275 ± 10 ot./minutu.
Přidejte roztok chloridu zinečnatého (3641, 5 ± 18,0 g) .
Ochlaďte n teplotu 4°C ± 1°C.
Jakmile teplota (PV1) dosáhne 4°C ± 1°C přidávejte roztok dvojchromanu draselného (6532,4 g ± 32,0 g) po dobu 20 minut (± 5 minut). Po dokončení přidávání promíchávejte 20 minut (± 5 minut) .
Při udržování teploty pod méně než zhruba 10°C přidejte roztok pentahydrátu thiosulfátu sodného (3570,2 g ± 18,0 g)Promíchávejte roztok při teplotě 10°C po dobu 30 minut (± 5 minut) .
/ • ·
C' · · · · · · · · · ·
J. O g © © be © e © ©©©· ·· ··· ·©·· ·· ···
Změňte nastavení na 60°C. Po dosažení teploty (PV1) 60,0°C ±
3,0°C promíchávejte reakční směs 5 minut (± 3 minuty) a změňte nastavení na LFE kontrolním zařízení na 10,0.
Jakmile dosáhne teplota 13,0°C ± 2,0°C, zkontrolujte pH.
Hodnota pH musí být v rozmezí 3,1-4,1 při teplotě 25°C ± 5°C.
Syntéza: Krok 2
Syntéza Indamin thiosulfonové kyseliny
Navažte o-toluidin (604,4 g ± 2,5 g) a ochlaďte na 18°C + 3°C. Přidejte pomalu k o-toluidinu kyselinu chlorovodíkovou (6 N, 1230,7 g ± -5,0 g) . Odstraňte o-toluidin hydrochlorid z ledové 'o. Přidejte roztok 3 minuty).
(6532,4 g ± 32,0 g) dokončení přidávání promíchávejte 10 minut (± 5 minut).
Změňte nastavení kontrolního zařízení (SPI) na 60,0. Jakmile, teplota reakční směsi dosáhne 60,0°C ± 3°C, promíchávejte směs 25 minut (± 5 minut). Vytvoří se precipitát tvořený zeleným indaminem.
Syntéza: Krok 3
Syntéza dvojité soli' chloridu zinečnatého:
Nastavte kontrolní zařízení LFE na 7,0. Jakmile teplota reakční směsi dosáhne 10,0°C ± 3°C, přidejte roztok dvojchromanu draselného (6532,4 g ± 32,0 g) po dobu 20 minut (,± 5 minut). Po dokončení přidávání promíchávejte 20 minut.
Přidávejte roztok dvojchromanu draselného (5225,9 ± 26,0 g) po dobu 20 minut (+ 5 minut). Po dokončení přidávání promíchávejte 20 minut (± 5 minut).
azne a ocnxaare rozto k reakční směsi a promíchávejte 5 minut (+
Přidávejte roztok dvojchromanu draselného po 'dobu 20 minut (± 5 minut). Po ··” · e 4 • ·· ·
Přidejte roztok chloridu zinečnatého (3641,5 g ± 18,0
g) ·
Promíchávejte 20 minut (± 5 minut) při
350 ± ίο otáčkách/minutu.
Přidejte pentahydrát síranu měďnatého (2122,8 g ± 10,0
g) Promíchávejte 15 minut (± 5 minut).
^Změňte nastavení kontrolního zařízení teplota reakční směsi dosáhne 67,0°C (SPI) na 100,0 ± 3°C začněte
Jakmile přidávat roztok kyseliny sírové do dosažení pH 2,9 ±
0, 3 přidáním alikvót (500 ml,
250, až 10 minut po každém přidáni a kontrolujte pH.
Jakmile teplota reakční směsi dosáhne
100,0°C ± 3°C promíchávejte směs 35 . ± 5 minut.
Změňte nastavení kontrolního zařízení (SPI) na 35,0. Jakmile teplota reakční směsi dosáhne 70,0°C ± 3°C, změňte nastavení kontrolního zařízení. (SPI) na 2,5. Ochlaďte na 2,5°C + 2,0°C po dobu 4 až 18 hodin.
Purifikace: Krok 1
Zfiltrujte reakční směs přes vhodné filtrační médium (Whatman Grade 52).
Je-li reaktor prázdný, navažte 24,0 kg ±150 g USP vody. Uzavřete reaktorový spodní ventil a přidejte do reaktoru 15% roztok NaCl. Roztok krátce promíchejte. Je-li filtrace dokončena, přidejte roztok NaCl do filtrační jednotky, aby se promyl retentát.
Zkontrolujte stav 100 galonového purifikačního tanku č. 1 z tvrzeného skla s pláštěm a ujistěte se, že tank je čistý a opatřete tank HDPE' víkem míchadlem Caframo, míchací hřídelí, šroubem a teplotní sondou umístěnou do termální jamky. Zkontrolujte, že spodní ventil je vypnut a vývod je uzavřen.
-Φ---e-c
Navažte 190,0 kg ± 1,0 Kg USP vody do HDPE nádoby a přeneste vodu do Purifikačního tanku 1. Promíchejte směs při 350 / ot./minutu. Jakmile je promytí retentátu roztokem NaCl dokončeno, přidejte za promíchávání retentát do Purifikačního tanku 1.
hodin.
Purifikačniho tanku na 75,0 dosáhne 75,0°C + 3°C změňte
40,0.
Promíchávejte směs po dobu 2 az 4
Nastavte LFE kontrolní zařízení (SPI).
Jakmile teplota zařízení (PV1) nastavení kontrolního zařízení na
Promíchávejte směs při teplotě 40°C a 350 ot./minutu po.dobu 12 až 36 hodin.
Odeberte vzorek (prostřednictvím spodního ventilu) o objemu přibližně 50 ml. Změřte 1,0 m,1 vzorku pomocí 1,0 ml pipetou a nářeďte na 100 ml ve volumetrické 100 ml nádobě. Poté odeberte 10,0 ml tohoto roztoku 10,0 ml pipetou a nařeďena 100 ml ve volumetrické 100 ml nádobě. Změřte absorbanci tohoto vzorku za použití přístroje Spectronic 20+. Absorbance vzorku by měla být větší nebo rovná 0,220.
Purifikace: Krok 2
Zfiltrujte reakční směs přes filtrační médium ve filtrační jednotce. Stáhněte filtrát do kalibrované HDPE nádoby s víkem
Opatřete 100 galonový purifikační tank č. 2 z tvrzeného skla s pláštěm víkem, michadlem Caframo, míchací hřídelí, šroubem a teplotní sondou umístěnou do termální jamky.
• 4
Do čisté nádoby HDPE navažte stejné množství 30% roztoku NaCl, jako je objem roztoku zaznamenaný výše, a to za použití následujícího vzorce:
(ml roztoku)(116,9 g roztoku NaCl/ 100,0 ml roztoku NaCl) = g roztoku NaCl ml
11ΛΧ filtrátu a zkontrolujte pH.
Hodnota pH musí být v rozmezí 3,0 - 4,0. Přeneste filtrát do Purifikačního tanku 2.
Promíchejte roztok při 350 ot/minutu.
Přidejte roztok chloridu zinečntého (1636,3 g ± 6,5 g).
Přeneste roztok NaCl (váhově) do Purifikačního tanku 2.
Nastavte LFE kontrolní zařízení Purifikačního tanku 2 na 75,0 (SPI).
| Dosáhne-li teplota směsi (PV1) 75,0°C ± 3°C, | změňte | nastavení |
| na kontrolním zařízení na 5,0. | ||
| Ochlaďte za 6 hodin na teplotu 5°C a udržujte 4,0°C po dobu 4 až 24 hodin. | na této | teplotě ± |
| Zpracování | ||
| i. Filtrace | ||
| Zfiltrujte směs přes kalibrované filtrační | médium | (Whatman |
Grade 52) ve filtrační jednotce.
Navažte 12 kg ± 50 g 30% roztoku chloridu sodného a nařeďte 12 kg ± 50 g USP vody. Promyjte retentát 15% roztokem chloridu sodného přidáním roztoku přímo do Btichnerovy nádoby. Je-li filtrace ukončena, opatrně odstraňte filtrační papír obsahující produkt.
ii. Vysušeni
Umístěte purifikovaný komplex reakčního produktu do pece a sušte při teplotě 50,0°C + 3,0°C 5 ± 1 hodinu.
Odstraňte komplexní produkt z pece s nuceným oběhem vzduchu a umístěte jej do vakuové pece. Sušte při teplotě 45,0°C ± 3,0°C při 28'' Hg ± 2'' 10 ± 2 hodiny.
iii. Mletí
Instalujte
Připevněte
0,5 mm okénko do čistou nádobu k laboratorního mlýnku Thomas Wiley. propusti. Dveře komory musí být
Uzavřete na dně násypky, násypky a násypky. Dostatečně posuvnou závěrku přidejte vysušený komplexní produkt.
Zapněte mlýnek a mírně otevřete posuvnou pomalu plňte mlýnek produktem, . aby nezpomalilo, nebo aby nedošlo k ucpání mlýnku.
odstraňte
Vraťte víko víko zpět závěrku.
se mletí
Je-li mletí dokončeno, opatrně odstraňte nádobu od propusti
v. Míšení
Přeneste produkt do laboratorního mísiče Patterson-Kelly a uzavřete víko. Nastavte timer na 15 minut ± 5 minut.
HPLC za účelem izolace a separace
Tento příklad popisuje vhodný HPLC postup pro izolaci a separaci nových sloučenin, které jsou předmětem vynálezu, z vysušeného, namletého a smíchaného komplexního produktu připraveného tak, jak je popsáno výše.
A. Zařízení a vybavení
1. HPLC chromatografické postupy
a. HPLC chromatografický systém HP1100
b. Diode-array detektor HP1100 • ·
c. Kvartérní HPLC pumpa HP1100
2. Sběr frakcí a purifikace
a. 10 kanálový kolektor frakcí ISCO Foxy Jr.
b. Rotační odparka Buchi, model R-124
c. Náplň Sep-pak, Cis, Varian
3. Hmotová spektrometrie
a. Hmotová spektrometrie s elektronovým dopadem (EI-MS)
1. Zařízení na hmotovou spektrometrii: VG Analytical ZAB
2-SE
2. Zdroj teploty: 200°C
Q KT 4—4 T ΖΛ 4- ΤΛ» ΤΛ Λ · . IMQjJCLX CLChLLUllU· l V
4. Snímač vzorku: pevný
5. Teplota snímače: 280°C snímač
b. Kapalinová chromatografie/hmotová spektrometrie (LC/MS)
1. Binární pumpa HPllOOs vakuovým odvzdušňovacím zařízením
2. Rozpouštědlo A: voda:ACN (88:12) v/v obsahující 0,1% TEA
3. Rozpouštědlo B: voda:ACN (1:1) v/v obsahující 0,1% TEA.
4. Gradient: 0% rozpouštědla B se vzestupem na 30% rozpouštědla B za 18 minut, se vzestupem rozpouštědla B po 27 minutách, udržovat 3 minuty.
5. Průtok: 1,5 ml/minutu
6. Kolona: Kolona Cis 4,6 x 250 mm, 5 um, Water Symmetry)
7. Teplota kolony: 40°C
8. Detektor: variabilní vlnová délka v UV oblasti, 290 nm
9. Zařízení na hmotovou spektrometrii: VG Bio-Q trojitý čtrvrtpólový hmotový spektrometr
10.Operační způsob: Elektrosprejová ionizace (+ESI)
11.Zdroj teploty: 80°C
c. Fast Atom Bombardment (FAB-MS)
1. Zařízení na hmotovou spektrometrii: VG Analytical ZAB 2-SE • · • é · .. · .. . · ♦T'· · ·’ • · v · * · · «· ·*· «··· í»e ®®
2. Vkládáni vzorku: pistole na césiové ionty
3. Datový systém: VH Analytical 11-250J s PDP 11/73
d. Hmotový spektrometr s elektrosprejováním (ESI-MS)
1. Zařízení na hmotovou spektrometrii: VG Biotech Bio-Q s čtvrtpólovým analyzátorem
2. Operační způsob: negativní iontová přímá nefúze
3. Injekční objem: 50-75 ul
4= Elučn.í rozpouštědlo: 50% vodný ACN obsahující 0,1% FA
5. Průtok: lOuL/minutu
e. Hmotová spektrometrie s elektrosprejováním /hmotová spektrometrie (ESI—MS/MS)
1. Zařízení na hmotovou spektrometrii: VG Quattro II BioQ trojitý čtvrtpólový analyzátor
2. Kolizní plyn: argon
3. Alikvóty vzorků: 50-75 ul
4. Eluční rozpouštědlo: 50% vodný ACN obsahující 0,1% TFA
5. Průtok: 10 ul/minutu
f. Hmotová spektrometrie s vysokým rozlišením (HR-MS) . 1. Zařízení na hmotovou spektrometrii: VG Analytical ZÁB 2-SE
2. Vkládání vzorku: pistole na césiové ionty
3. Datový systém: VH Analytical 11-250J s PDP 11/73
4. Nukleární magnetická rezonanční spektrometrie (NMR)
a. 400 MHz Varian lnová NMR
5. Rentgenová difrakce jednotlivých krystalů
a. Automatický difraktometr jednotlivých krystalů Nonius CAD4, model 586
b. Cu rentgenová trubice, jemný fokus (λ = 1,5418 A)
c. Fotografické připojení s náhodnou orientací, polaroid, model.57-3
6β6
d. Datový sběrný software EXPRESS
e. Datový interpretační software MOLEN
B. Chemikálie, činidla a standardy
1. Chemikálie a činidla
a. Acetonitril (ACN), pro HPLC
b. Metanol (MeOH) pro HPLC
c. Chloroform (CHCI3, pro HPLC
d. Ledová kyselina octová (GAA) pro ACS
e. Kyselina chlorovodíková (HCI, pro ACS
f. Mili-Q voda
g. Trietylamin (TEA, pro HJPLC
h. Octan amonný, pro AR
i. Pelety hydroxidu sodného (NaOH), p.a.
j. Dusíkový plyn, nulový stupeň
k. Metanol, deuterovaný (d4-MeOH)
l. Dimetyl sulfoxid, deuterovaný (d6-DMSO)
m. Voda, deuterovaná (D20)
n. Kyselina chlorovodíková, deuterovaná (DCI)
o. Tetrafenylborát sodný, p.a.
Iniciálni preparativni HPLC systém 2 pro sběr frakci se sloučeninami
Iniciálni sběr frakcí
Vodná ředící látka - Připravte roztok 0,1 M kyseliny octové a upravte pH na 6,1 ± 0,1 pomocí NaOH.
Mobilní: fáze A - 88:12 Vodná ředící látka: ACN
Mobilní fáze B - 50:50 Vodná ředicí látka: ACN
Příprava vzorku: Připravte 15 mg/ml roztoku vysušeného smíšeného komplexního reakčního produktu ve vodné ředící látce. Naneste roztok v 30 až 40 ml alikvótách na separátní 10 g Ci8 ·· c« ** ♦ ©>
* · · · ·· · · · «' ·· _________________________: ___________________________________________________________________________________________________ © ©©_________. ©__________W _ © * © ·’ · » ' · ·' >« i · ·©«· ·· ··· ···· ·· ··
SPE kolony, promyjte přibližně 20 ml vodné ředící látky a poté promyjte přibližně 10 ml vody. Proveďte eluci přibližně 10 ml0,01 N HC1 v MeOH. Na rotační odparce odpařte čistý vzorek do sucha a znovu rozpusťte ve vodné ředící látce.
Chromatografický systém:' HPLC systém AP 1100 se zahřívačem kolony je vybaven 7 um, 30,0 cm x 7,8 mm Cis kolonou, vhodným UV detektorem pro detekci při 290 nm a diodě array, průtok je nastaven na 5,0 ml/minutu a teplota kolony na 20°C. Je použita následující gradientově eluce:
| Mobiln | i řfáze | |
| A | n | |
| XT. | ||
| 0 | 80 | 20 |
| 15 | 60 | 40 |
| 15,1 | 0 | 100 |
| 25 | 0 | 100 |
| : 25,1 | 80 | 20 |
Postup: 900 ul alikvóty vzorku jsou injikovány do chromatografického systému a frakce, které jsou předmětem zájmu, jsou sbírány za použití multikanálového kolektoru frakcí. Jakmile jsou posbírány všechny frakce, je každá frakce odpařena na rotační odparce, aby se odstranila většina ACN, frakce jsou poté zakoncentrovány na koloně Cis SPE, promyty vodou a eluovány přibližně 5 ml 0,01 N HC1 v MeOH. Na rotační odparce odpařte do sucha eluent a ponechejte stranou pro další purifikaci.
Finální sběr frakcí
Mobilní fáze A - 88:12 0,1% TEA:ACN
Mobilní fáze B - 50:50 0,1% TEA:ACN
Příprava vzorku: Připravte roztoky vysušených frakcí z iniciálních frakcí a nařeďte je mobilní fází A.
9'9 ’·· 4 9> «9·-♦ • ♦ é 9 * 9 9· ίί _______, ________________________________________________ «·· 9 9 > '*· ~ ' ~ ------------ž~W---------''— ---------·—9—«—e ~ě — · e — ® * >—
Ζ4 ' ’ ‘ f t · · · : »eGQO <9 9 9'9 ··'·'· ·! · ···
Chromatografický systém: HPLC systém AP 1100 se zahřívačem kolony je vybaven 7 um, 30,0 cm x 7,8 mm Ci8 kolonou, vhodným UV detektorem pro detekci při 290 nm a diodě array, průtok je nastaven na 5,0 ml/minutu a teplota kolony na 30°C. Je použita následující gradientová eluce:
| % mobilní fáze | ||
| Čas (min) | A | B |
| 0 | 73 | 27 |
| 8 | 70,6 | 29,4 |
| 8,1 | 45 | 55 |
| r\ | A £ | 55 |
| 16 | 25,5 | 74,5 |
| 16,1 | 73 | 27 |
Postup: 900 ul alikvóty vzorku jsou injikovány do chromatografického systému a frakce, které, jsou předmětem zájmu, jsou sbírány za použití multikanálového kolektoru frakcí. Jakmile jsou posbírány všechny frakce, je každá frakce odpařena na rotační odparce, aby se odstranila většina ACN, frakce jsou poté zakoncentrovány na koloně Cis SPE, promyty vodou a eluovány přibližně 5 ml 0,01 N HC1 v MeOH. Frakce jsou poté vysušeny proudem dusíku a ponechány stranou pro další analýzy k identifikaci.
Charakterizace sloučeniny IV
Separace a Izolace
Sloučenina IV je izolována za použití semi-prepartivní HPLC metody. Frakce je sebrána, většina ACN je odstraněna na rotační odparce a frakce je dále zakoncentrována za použití kolony Cis SPE, promyta vodou, a eluována přibližně 5 ml - 0,01 N HC1 v MeOH. Frakce je poté vysušena proudem dusíku. Část materiálu je znovu rozpuštěna v mobilní fázi a injikována do HPLC systému, aby se zjistila čistota frakce. IV vykazuje čistotu okolo 95% a 8,2 mg je «©·· ··
Tato část Sloučeniny testováno pomocí NMR.
Analýzy hmotovou spektrometrií
Předběžná LC-MS hmotová spektrální data umletého, smíšeného, komplexního reakčního produktu ukazují, že molekulová váha Sloučeniny IV je přibližně 375,3 m/z. Další HR-MS studie za použití frakcí sebraných z LC-MS ukazují pro sloučeninu IV molekulovou hmotu 375, 1655 m/z a molekulární vzorec C32H23N4S1.
Dceřinné ionty 375 m/z mateřského iontu Sloučeniny IV jsou vyšetřeny pomocí pozitivní ESI-MS/MS. Tvar fragmentace vykazuje predominantní ztráty 16 amu a 44 amu z molekulárního iontu
Tato Sloučenina a její N- a N,N- dimetylované deriváty, Sloučeniny V a VI, jsou tvořeny ze sekundární reakce (TBO a nadbytku výchozího materiálu o-toluidinu.
Charakterizace Sloučeniny I
Separace a izolace
Sloučenina I je izolován za pomoci semi-prepartivní HPLC metody. Frakce je sebrána, většina ACN je odstraněna na rotační odparce a frakce je dále zakoncentrována za použití kolony Ci8 SPE, promyta vodou, a eluována přibližně 5 ml 0,01 N HC1 v MeOH. Frakce je poté vysušena proudem suchého dusíku. Část materiálu je znovu rozpuštěna v mobilní fázi a injikována do HPLC systému, aby se zjistila čistota frakce. Tato část Sloučeniny I vykazuje čistotu okolo 95% a 18,9 mg je testováno pomocí NMR.
Analýzy hmotovou spektrometrií
Předběžná LC-MS hmotová spektrální data vysušeného, smíšeného, komplexního reakčního produktu ukazují, že molekulová váha Sloučeniny IV je přibližně 284,1 m/z. Další HR-MS studie za použití frakcí sebraných z LC-MS ukazují pro sloučeninu I molekulovou hmotu 284,1223 m/z a molekulární vzorec Ci6Hi6N3Si.
Dceřinné ionty 284 m/z mateřského iontu Sloučeniny I jsou vyšetřeny pomocí pozitivní ESI-MS/MS. Navržená struktura a tvar fragmentace vykazuje predominantní ztráty 16 amu, 30 amu, a 59 amu z molekulárního iontu Sloučeniny I. Sloučenina I a její Na N,N- dimetylované deriváty, Sloučeniny II a II, jsou tvořeny z jiné demetylové molekuly po vychytání volných radikálů metylovou skupinou na odpovídající mateřský TBO izomer.
Sloučeniny II, III, V a VI jsou izolovány a charakterizovány postupy popsanými výše pro izolaci a charakterizaci Sloučenin VI a I. :
Přiklad 2
Protokol klinického testováni
Příprava roztoků ke klinickému testu
Tento příklad ilustruje použití každého z produktů podle Příkladu 1 pro identifikaci dysplázie v dutině ústní.
Sloučenina I, malinová dochucující látka (IFF malina IC 563457), trihydrát octanu sodného jako pufrovací látka a H2O2 (30% USP) konzervační látka (viz patent US Patent 5372801), jsou rozpuštěny v purifikované vodě (USP, v ledové kyselině octové a SD 18 etyl alkoholu za vzniku testového roztoku o složení uvedeném v Tabulce A:
Tabulka A
| Složka | Váhové % |
| Sloučenina I | 1,00 |
| Dochucující látka | 0,20 |
| Pufrovací látka | 2,45 |
| Konzervační látka | 0,41 |
| Kyselina octová | 4,31 |
| Etyl alkohol | 7,48 |
| Voda | 83,85 |
| Celkem | 100,00 |
·' W W - W ▼ < · * « —----—·—·--—w----9—-9 — e--©'--Φ • © · * · '· ·' · ·· · · βββ e c© c ee ee
Jsou připraveny promývací testové roztoky pro promýváni předem i poté s 1% (váhově) kyselinou octovou v purifikované vodě, benzoátem sodným jako . konzervační látkou a malinovou dochucující látkou.
Klinický protokol
Pacient má nasazenu ochranu oblečení. Je očekávána expektorace, takže je pacient vybaven 10 uncovým šálkem, který může být znehodnocen v nádobě s infekčním odpadem, nebo jehož obsah může být přímo vylit do středu výlevky, aby se zabránilo obarvení výlevky. Povrchy nebo předměty, které by mohly být obarveny jsou přikryty nebo odstraněny z testovací oblasti.
Je provedeno vizuální vyšetření nádoru v dutině ústní, bez použití jakýchkoli instrumentů, které by mohly způsobit zářezy v měkkých tkáních. Jsou zaznamenány poznámky týkající se vzhledu měkkých tkání a zubů pře obarvením.
Pacient proplachuje dutinu ústní přibližně 15 ml roztoku pro promýváni předem po dobu 20 sekund a expektoruje, aby odstranil nadbytek slin a došlo ke vzniku konzistentního prostředí v dutině ústní. Tento krok je poté opakován použitím dalšího roztoku k promýváni předem.
Pacient poté proplachuje a kloktá vodu po dobu 20 sekund a expektoruje.
Pacient poté proplachuje a kloktá 30 ml testovaného roztoku po dobu 1 minuty a expektoruje.
Pacient poté proplachuje 15 ml roztoku pro následné proplachování po dobu 20 sekund a expektoruje. Tento krok je poté opakován.
Pacient poté proplachuje a kloktá vodou po dobu 20 sekund a expektoruje. Tento krok je poté opakován.
Poté provedena observace dutiny ústní za použití příslušných technik vyšetření měkké tkáně, pokud je jejich použití nezbytné, jako jsou retrakce, dobře nastavené osvětleni a zvětšení. Je zaznamenáno umístění, velikost, morfologie, barva a povrchové charakteristiky suspektních lézí, které se modře obarvily.
Aby se snížil výskyt falešně pozitivních výsledků, je pacient znovu vyšetřen podle stejného protokolu za 10-14 dnů. Tato doba umožňuje zhojení jakýchkoli ulcerativních nebo traumatických lézí, nebo iritační etiologii lézí při prvním vyšetření. Pozitivní barvení po druhém vyšetření suspektní oblasti zjištěné při prvním vyšetření je považováno za známku kancerózní nebo prekancerózní tkáně a je provedena biopsie k potvrzení tohoto závěru.
Časné erytropastické léze se barví modře, často tečkovitě nebo políčkovitě. Je však normální, že se barvivo zadržuje na nepravidelných papilárních štěrbinách na dorzu jazyka, což není pozitivní známka. Jsou rozeznávány další oblasti, které se barví modře, ale nejsou považovány za pozitivní. Ty zahrnují dentální plak, gingivální okraje každého zubu, difúzní zbarvení měkkého patra vlivem barviva přeneseného ze zadrženého barviva na dorzu jazyka a ulcerózní léze. Ve všech případech, kde je. léze vysoce suspektní, ale nedochází k pozitivnímu obarvení v tomto testu, je nicméně nutné odebrat biopsii.
Příklady 3-7
Postupy popsané výše jsou zopakovány s výjimkou toho, že jsou použity Sloučeniny II, III, IV, V a VI místo Sloučeniny I. Jsou získány podobné výsledky.
- 5 ί
Popisem mého vynálezu tak, aby bylo umožněno osobám znalým oboru rozumět a používat vynález a identifikací současně nejpřednostnějšich způsobů vynálezu nárokuji:
Claims (7)
- PATENTOVÉ NÁROKY \ ·1. Sloučenina mající strukturální· vzorecX x kde X je vodík, metyl, nebo Y; Y je -NH-R nebo vodík;R je metyl nebo
- 2. Sloučenina mající strukturální vzorec
- 3. Sloučenina mající strukturální vzorec
- 5. Sloučenina mající strukturální vzorec
- 6. Sloučenina mající strukturální vzorec·.· ©· <· ' ’9®· ;· « · ·· . ;·♦ '· ·-----* ----·©._ --©„ • · · 9 · ««es ©9 >'·· ·♦·♦ o o « o ©o
- 7. Sloučenina mající strukturální vzorec
- 8. Ve způsobu detekce dysplastické tkáně zahrnující krok aplikace preparátu biologického barviva na epiteliální tkáň, který selektivně obarvuje dysplastickou tkáň, -^ah-r-nug^ zlepšení V aplikaci sloučeniny mající strukturální vzorec podle patentového nároku 1.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PCT/US2000/002602 WO2001054696A1 (en) | 2000-01-31 | 2000-01-31 | In vivo stain compounds and methods of use to identify dysplastic tissue |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ20013504A3 true CZ20013504A3 (cs) | 2002-04-17 |
Family
ID=21741026
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ20013504A CZ20013504A3 (cs) | 2000-01-31 | 2000-01-31 | Sloučeniny k in vivo obarvování a způsoby pouľití k identifikaci dysplastické tkáně |
Country Status (23)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6830743B1 (cs) |
| EP (1) | EP1165087B1 (cs) |
| JP (1) | JP2003520816A (cs) |
| KR (1) | KR100641972B1 (cs) |
| CN (1) | CN1219515C (cs) |
| AT (1) | ATE303810T1 (cs) |
| AU (1) | AU784639B2 (cs) |
| BR (1) | BR0009427A (cs) |
| CA (1) | CA2366759A1 (cs) |
| CZ (1) | CZ20013504A3 (cs) |
| DE (1) | DE60022487T2 (cs) |
| DK (1) | DK1165087T3 (cs) |
| EA (1) | EA003939B1 (cs) |
| ES (1) | ES2248061T3 (cs) |
| HU (1) | HUP0201634A3 (cs) |
| IL (1) | IL145589A0 (cs) |
| MX (1) | MXPA01009797A (cs) |
| NO (1) | NO322012B1 (cs) |
| PL (1) | PL349999A1 (cs) |
| SK (1) | SK13782001A3 (cs) |
| TR (1) | TR200102815T1 (cs) |
| TW (1) | TWI250157B (cs) |
| WO (1) | WO2001054696A1 (cs) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7462346B2 (en) * | 2001-08-28 | 2008-12-09 | Zila Biotechnology, Inc. | Light-stabilized(in vivo) stain composition and method of manufacture |
| US20050089472A1 (en) * | 2003-10-22 | 2005-04-28 | Shovers Aaron H. | Monitoring the status of a condition of an animal through visually observable indicia |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4321251A (en) * | 1979-12-19 | 1982-03-23 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Detection of malignant lesions of the oral cavity utilizing toluidine blue rinse |
| JPS63187154A (ja) * | 1987-01-29 | 1988-08-02 | Kishida Kagaku Kk | 酸素検知剤 |
| ES2133143T3 (es) * | 1991-10-31 | 1999-09-01 | Zila Inc | Composicion de tincion biologica, procedimiento de preparacion y procedimiento de utilizacion para la deteccion del cancer epitelial. |
| US5942410A (en) * | 1997-07-07 | 1999-08-24 | Oncometrics Imaging Corp. | Composition and method for staining cellular DNA, comprising thiazine derivative metabisulfite and methanol or ethanol |
| US6417003B1 (en) * | 1993-01-14 | 2002-07-09 | Zila, Inc. | Method and kit for epithelial cancer screening |
| ATE253380T1 (de) * | 1996-01-16 | 2003-11-15 | Zila Inc | Verfahren und mittel zur in-vivo erkennung von mundhöhlenkrebs und von präkanzerösen zuständen |
| CA2249227A1 (en) * | 1997-01-20 | 1998-07-23 | Kyowa Medex Co., Ltd. | Methods and reagents for quantitatively determining ascorbic acid |
| DE19716586C1 (de) * | 1997-04-21 | 1998-08-06 | Continental Ag | Verfahren zum Ermitteln der Profiltiefe eines Fahrzeugreifens am fahrenden Fahrzeug |
| US6194573B1 (en) * | 1997-11-13 | 2001-02-27 | Zila, Inc. | Process for manufacture of in vivo stain composition |
| US6649144B1 (en) * | 2000-02-28 | 2003-11-18 | Zila, Inc. | Method for detecting and killing epithelial cancer cells |
-
2000
- 2000-01-31 SK SK1378-2001A patent/SK13782001A3/sk unknown
- 2000-01-31 JP JP2001554680A patent/JP2003520816A/ja not_active Withdrawn
- 2000-01-31 EA EA200101028A patent/EA003939B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2000-01-31 IL IL14558900A patent/IL145589A0/xx unknown
- 2000-01-31 HU HU0201634A patent/HUP0201634A3/hu unknown
- 2000-01-31 ES ES00915730T patent/ES2248061T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-01-31 BR BR0009427-7A patent/BR0009427A/pt not_active Application Discontinuation
- 2000-01-31 TR TR2001/02815T patent/TR200102815T1/xx unknown
- 2000-01-31 DE DE60022487T patent/DE60022487T2/de not_active Expired - Fee Related
- 2000-01-31 PL PL00349999A patent/PL349999A1/xx not_active Application Discontinuation
- 2000-01-31 MX MXPA01009797A patent/MXPA01009797A/es not_active Application Discontinuation
- 2000-01-31 EP EP00915730A patent/EP1165087B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-01-31 AU AU36956/00A patent/AU784639B2/en not_active Ceased
- 2000-01-31 KR KR1020017012461A patent/KR100641972B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2000-01-31 CN CNB008058539A patent/CN1219515C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2000-01-31 US US09/937,632 patent/US6830743B1/en not_active Expired - Fee Related
- 2000-01-31 CZ CZ20013504A patent/CZ20013504A3/cs unknown
- 2000-01-31 DK DK00915730T patent/DK1165087T3/da active
- 2000-01-31 AT AT00915730T patent/ATE303810T1/de not_active IP Right Cessation
- 2000-01-31 CA CA002366759A patent/CA2366759A1/en not_active Abandoned
- 2000-01-31 WO PCT/US2000/002602 patent/WO2001054696A1/en active IP Right Grant
- 2000-02-29 TW TW089103482A patent/TWI250157B/zh not_active IP Right Cessation
-
2001
- 2001-09-28 NO NO20014720A patent/NO322012B1/no unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| NO20014720L (no) | 2001-11-27 |
| DE60022487T2 (de) | 2006-07-13 |
| EA200101028A1 (ru) | 2002-02-28 |
| KR20010108431A (ko) | 2001-12-07 |
| CA2366759A1 (en) | 2001-08-02 |
| DK1165087T3 (da) | 2005-11-21 |
| EA003939B1 (ru) | 2003-10-30 |
| MXPA01009797A (es) | 2002-11-04 |
| JP2003520816A (ja) | 2003-07-08 |
| CN1219515C (zh) | 2005-09-21 |
| HUP0201634A3 (en) | 2009-08-28 |
| AU784639B2 (en) | 2006-05-18 |
| ATE303810T1 (de) | 2005-09-15 |
| NO322012B1 (no) | 2006-08-07 |
| PL349999A1 (en) | 2002-10-21 |
| SK13782001A3 (sk) | 2002-02-05 |
| DE60022487D1 (de) | 2005-10-13 |
| EP1165087A4 (en) | 2003-04-02 |
| NO20014720D0 (no) | 2001-09-28 |
| IL145589A0 (en) | 2002-06-30 |
| EP1165087A1 (en) | 2002-01-02 |
| ES2248061T3 (es) | 2006-03-16 |
| US6830743B1 (en) | 2004-12-14 |
| KR100641972B1 (ko) | 2006-11-02 |
| CN1345241A (zh) | 2002-04-17 |
| HUP0201634A2 (en) | 2002-09-28 |
| AU3695600A (en) | 2001-08-07 |
| TR200102815T1 (tr) | 2002-05-21 |
| TWI250157B (en) | 2006-03-01 |
| EP1165087B1 (en) | 2005-09-07 |
| BR0009427A (pt) | 2002-07-16 |
| WO2001054696A1 (en) | 2001-08-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US6086852A (en) | In vivo stain composition, process of manufacture, and methods of use to identify dysplastic tissue | |
| WO2013097771A1 (zh) | 用于上皮组织肿瘤细胞的检测剂组合物及其制备方法 | |
| EP0966957A2 (en) | In vivo stain composition, process of manufacture, and methods of use to identify dysplastic tissue | |
| JP2013241472A (ja) | 実質的に純粋なフルオレセイン | |
| WO1999025388A1 (en) | In vivo stain composition, process of manufacture, and methods of use to identify dysplastic tissue | |
| CZ20013504A3 (cs) | Sloučeniny k in vivo obarvování a způsoby pouľití k identifikaci dysplastické tkáně | |
| AU781042B2 (en) | Methylene blue diagnostic agent and diagnostic methods for detection of epithelial cancer | |
| ZA200107818B (en) | In-vivo Stain compounds and methods of use to identify dysplastic tissue. | |
| CA2250731C (en) | In vivo stain composition, process of manufacture, and methods of use to identify dysplastic tissue | |
| AU757963B2 (en) | In vivo stain composition, process of manufacture, and methods of use to identify dysplastic tissue | |
| US20060110326A1 (en) | Toluidine blue o drug substance and use thereof for in vitro staining and chemotherapeutic treatment of dysplastic tissues | |
| MXPA98009501A (en) | Compositions for in vivo staining, manufacturing process and methods of use to identify displasi tissues | |
| EP1534346A2 (en) | Toluidine blue o drug substance and use thereof for in vivo staining and chemotherapeutic treatment of dysplastic tissues | |
| NZ537344A (en) | Toluidine blue O drug substance and use thereof for in vivo staining and chemotherapeutic treatment of dysplastic tissues |