DE69013425T2

DE69013425T2 - Pseudomonasmutant, yzh-Stamm und Verfahren zur Herstellung der 851yzh-Nährlösung mittels dieses Stammes.

Info

Publication number: DE69013425T2
Application number: DE69013425T
Authority: DE
Inventors: Zhenhua Yang
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 1989-07-17
Filing date: 1990-06-25
Publication date: 1995-12-14
Anticipated expiration: 2010-06-26
Also published as: CN1047695A; AU631663B2; EP0408933A3; KR0151858B1; CA2020633C; EP0408933B1; JPH04144678A; JP2621100B2; CA2020633A1; DE69013425D1; AU5892990A; CN1023899C; KR910003089A; EP0408933A2

Description

GEBIET DER ERFINDUNG

Die vorliegende Erfindung betrifft die Erzeugung einzelligen Proteins aus Pflanzenprotein durch Fermentation oder Inkubation, wobei Geräte für die Massenproduktion vom industriellen Typ verwendet werden. Das einzellige Protein wird durch die Wirkung eines Mutantenstranges von Pseudomonas auf Pflanzenprotein erzeugt. Das sich ergebende Produkt ist eine Nährstoff flüssigkeit oder -lösung oder ein daraus hergestelltes festes Produkt, das von Menschen und Tieren eßbar ist.

HINTERGRUND DER ERFINDUNG

Fermentation ist eine alte und weithin praktizierte Technik, die verwendet wurde, um Lebensmittel und Getränke zu erzeugen, so wie Sauerteigbrot, Sauerkraut aus Kohl, Wein und Bier. In einigen Regionen der Welt wird Ackerland zunehmend für Nicht- Lebensmittel-Zwecke verwendet wird oder andere Nahrungsmittel erzeugende Quellen mittels des Fermentationsverfahrens werden gesucht. In der Vergangenheit sind viele Mikroorganismen untersucht worden, und Ansätze sind gemacht worden, sie an industrielle Fermentationsverfahren anzupassen, um Proteine zu erzeugen, insbesondere einzelliges Protein, das leicht von de menschlichen Körper absorbiert werden kann.
Das US-Patent Nr. 4,877,739 offenbart eine Gruppe autogener Antiamonia-Azotobakterien mit 851 Gelb bezeichnet, die aus Azotobacter Vinelandii mutiert worden sind, mit der Fähigkeit der Antiamonia-Nitrofixierung. Dieser Mikroorganismus kann auch zum Herstellen einer Flüssigkeit aus einzelligem Protein verwendet werden, die mit Se, Zn, Ve, Vb, Vk, Antikrebs- und Antialterungs-tonischen Medikamenten angereichert ist. Er kann auch zum Erzeugen von Bacteria manure, eel, Tierfutter, Zusätzen, antiseptischen Substanzen und Bindemitteln verwendet werden.
Unsere Erfindung offenbart einen Prozeß zum Herstellen einzelligen Proteins aus Pflanzenprotein mit einem Mutantenstrang von Pseudomonas oder natürlichen Mutanten oder induzierten Mutanten des genannten Mutantenstranges. Das sich ergebende Fermentationsprodukt, entweder eine Nährstofflösung, ein festes Nährstoffprodukt oder ein Produkt, das davon abgeleitet ist, ist von Menschen und Tieren eßbar. Die Nährstofflösung der vorliegenden Erfindung hat die Wirkungen des Antialterns, des Stimulierens und Verbesserns der Hämogenese bei Tieren, des Schutzes der Magenschleimhaut von Tieren und Menschen, insbesondere, offensichtlich des Verhinderns von Krebszellenwachstum in vitro und in vivo in Tieren und Menschen, selbst das Umwandeln der Krebszellen in ihren normalen Status.

ZUSAMMENFASSUNG DER ERFINDUNG

Diese Erfindung stellt ein Verfahren zum Erzeugen einer Nährstofflösung aus einzelligem Protein vor, das reich an mehr als zwanzig (20) Aminosäuren ist, wie sie vom menschlichen Körper gefordert werden, und an verschiedenen Spurenelementen, mittels einer Mutanten von Pseudomonas oder natürlicher Mutanten und induzierter Mutanten davon, in dem herkömmlichen industriellen Fermentationsverfahren. Der Strang des Mikroorganismus Pseudomonas, als Strang YZH bezeichnet, ist insbesondere nützlich beim Herstellen einzelligen Proteins aus einem Sojabohnenmaterial, obwohl er auch mit anderem Pflanzenmaterial verwendet werden kann, so wie Stärke, Kartoffeln, Süßkartoffeln. Sojabohnen oder Sojabohnenprotein, das mit dem Strang 851 YZH gemäß der vorliegenden Erfindung bebrütet oder fermentiert worden ist, wird in wirksamer Weise in eine einzelliges Protein umgewandelt, das von dem menschlichen Körper leicht assimiliert wird. Typischerweise wird diese Fermentation in wässrigem Medium durchgeführt, um eine Nährstofflösung aus einzelligem Protein zu erzeugen, die hierin als 851 YZH-Nährstofflösung oder 851 YZH NS bezeichnet wird. Wie hierin benutzt bedeutet Lösung, Flüssigkeit oder Nährstofflösung eine richtige Lösung oder eine Suspension oder Mischung eines Feststoffes in einer Flüssigkeit, um eine sich ergebende Lösung zu liefern - wie fluide Masse.
Der Mikroorganismus dieser Erfindung ist eine Mutante von Pseudomonas, die als Strang YZH bezeichnet wird, wobei der Pseudomonas all die identifizierenden Eigenschaften der Probe hat, die bei der American Type Culture Collection, 12301 Parklawn Drive, Rockville, Maryland, 20852 hinterlegt worden ist, und der die A.T.C.C. Hinterlegung-Nr. 53980 zugeordnet ist.
Diese Erfindung betrifft auch das Verwenden des Pseudomonas- Strang YZH, in einem herkömmlichen industriellen Fermentationsprozeß, um eine Nährstofflösung mit einzelligem Protein zu erzeugen, was das Verwenden von Pseudomonas YZH oder kultiviertem Pseudomonas YZH als den einzelliges Protein produzierenden Strang in einem Produktionsmedium umfaßt, das ein Sojabohnen-, von Sojabohnen abgeleitetes Protein- oder Stärkemedium sein kann, oder andere Medien, die für die Herstellung von einzelligen Proteinen geeignet sind. Zusätzlich betrifft die Erfindung auch Wirkungen der Nährstofflösung auf Säugetiere und Menschen.

DIE KURZBESCHREIBUNG DER ZEICHNUNG

Figur 1 ist ein Schaubild des zellularen Wachstumes der menschlichen Magen-Adenocarcinom-Zelle, der MGC80-3-Zelle, in vitro durch die Wirkung von 851 YZH-Nährstofflösung, wobei der Prozentanteil die Konzentration der Lösung darstellt.
Figur 2 ist ein Schaubild des zellularen mitotischen Index der MGC80-3-Zellen in vitro durch die Wirkung der 851 YZH-Nährstofflösung.
Figur 3 ist eine Ansicht der MGC80-3-Zellen unter dem Phasenkontrastmikroskop.
Figur 4 ist eine Ansicht der MGC80-3-Zellen, die mit 15%iger 851 YZH-Lösung behandelt worden sind, angefärbt mit Hämatoxylin-Erosin (H.E.), unter dem Phasenkontrastmikroskop.
Figur 5 ist eine Scanner-Eektronenmikrophotographie der MGC80- 3-Zellen.
Figur 6 ist eine Scanner-Eektronenmikrophotographie der MGC80- 3-Zellen, die mit 20%iger 851 YZH-Nährstofflösung behandelt worden sind.
Figur 7 ist eine Transmissions-Elektronenmikrophotographie der MGC80-3-Zelle, wobei:
N: Nucleus Nu: Nucleolus
G: Golgi-Komplex M: Mitochondrium
ER: Endoplasmatisches Reticulum.
Figur 8 ist eine Transmissions-Elektronenmikrophotographie der MGC80-3-Zellen, die mit 20%iger 851 YZH-Nährmittellösung behandelt sind.

DIE GENAUE BESCHREIBUNG DER ERFINDUNG

Der Mikroorganismus dieser Erfindung ist ein mutanter Pseudomonas, der mit Pseudomonas YZH bezeichnet wird und alle Kennzeichen der bei der American Type Culture Collection hinterlegten Probe hat, der die A.T.C.C. Hinterlegungs-Nr. 53980 zugeordnet ist. Der Strang YZH wird in Sojabohnen oder von Sojabohnen abgeleitetem Material gefunden und davon abgetrennt. Die Kennzeichen des Stranges YZH sind, daß er eine stumpfe Stange in hellgelber Farbe ist, er wenigstens ein Flagellum hat, der Thallus eine Größe von 0,5 - 0,7 x 1,2 - 2,0 um hat, er ein chemosynthetischer Heterotroph ist, er unfähig ist, wasserlösliches Pigment zu erzeugen, er nicht die Fähigkeit hat, intrazellulares Poly-β-Hydroy-Butyrat zu bilden und Arginin-Dihydrolase zu erzeugen, er keine Denitrifizierungswirkung hat, er die Fähigkeit hat, Nitrate zu reduzieren und Gelatine zu verflüssigen, er zwingend aerob ist, die Wachstumstemperatur etwa 10 - 41ºC ist, der bevorzugte pH- Wert 4,5 - 9,0 ist, der Gehalt an Guanin und Cytosin in der DNA des Stranges 65,4 - 67,7 mol% ist und die DNA des Stranges ein Y-Fragment enthält, das durch eine spezielle Y-Fragment- DNA-Sonde erfaßt werden kann. Diese gesamten Merkmale wie oben erwähnt sind die unterscheidenden Merkmale des YZH-Stranges von den anderen Arten von Pseudomonas. Wenn der Strang YZH in einem stickstoffhaltigen Medium verwendet wird, wie es in dieser Erfindung gelehrt wird, kann er eine Lösung aus einzelligem Protein erzeugen, die an mehr als zwanzig (20) Aminosäuren und einer Vielfalt von Spurenelementen und Vitaminen angereichert ist. Eine Analyse von 100 ml-Proben der Nährstofflösung, die von YZH erzeugt worden ist, hat gezeigt, daß sie den folgenden Bereich an Substanzen enthält: 350 - 800 mg Aminosäuren, 0,2 - 0,5 mg Vitamin E, 0,05 - 0,1 mg Vitamin B2, 0,7 - 1,0 mg Vitamin PP oder Niacin, 0,04 - 0,08 ppm Se, 0,2 - 0,5 ppm Zn, 0,8 - 0,24 ppm Mo, 0,08 - 0,24 ppm Co, 0,05 - 0,06 ppm Mn, 0,07 - 0,2 ppm Cu und 0,1 - 0,7 ppm Fe; 1,21 - 1,38 g Trockensubstanz, 1,21 - 2,2 g Proteine, 0,11 - 0,13 g Lipide und weitere Substanzen.
Der Prozeß zum Herstellen von 851 YZH NS durch die Verwendung der YZH-Pseudomonas umfaßt die folgenden Schritte:
Ein Kulturniedium zum Kultivieren von YZH wird in einen herkömmlichen Fermentationsbehälter gebracht, der mit einer Mischeinrichtung und einer Gaseinlaß/Auslaßeinrichtung ausgestattet ist, so daß der Behälterinhalt homogenisiert und auch durch das Einführen gefilterter aseptischer Luft belüftet werden kann, die von YZH und anderen begleitenden Mikroorganismen während der Zeitdauer des Kultivierens benötigt wird. Das Kulturmedium besteht aus Sojobohnen oder Stärke oder anderen geeigneten Materialien wie hierin angeboten. Es wird in einem zweischrittigen Prozeß erschlossen, wobei eine erste, zweite 851 YZH-Samenkultur über 38 - 54 Stunden verwendet wird. Nachdem das Erschließen beendet ist, wird der sich ergebende Thallus in ein zuvor autoklaviertes Erzeugungsmedium aus Sojabohnen, Stärke oder anderem geeigneten Material für eine dritte kontinuierliche Kultur oder Inkubation inokuliert. Das Erzeugermedium kann andere Materialien enthalten, so wie ernährungsmäßig wichtige Spurenelemente, zusätzlich zu Sojabohnen oder Stärke, wie es zuvor beschrieben ist. Wenn einmal der Thallus für etwa 24 - 27 Stunden inokuliert worden ist, wobei gefilterte aseptische Luft durch die Masse strömt, sind die Inkubationsbedingungen: Belüftungsrate von 1:0,6 - 1,2 (Masse/Luft) vv min; Mixgeschwindigkeit von 180 - 260 Upm und die Temperatur 28 - 38ºC. Nachdem die Inkubation beendet ist, wird die sich ergebende Kulturbrühe autoklaviert und abgeerntet. Die Brühe (Nährstofflösung oder Flüssigkeit) kann direkt verpackt werden, um ein Produkt zu ergeben, das für die menschliche Verwendung geeignet ist. Alternative Produkte können auch erhalten werden, um eine Vielfalt von Anforderungen zu erfüllen, mittels anderer Verarbeitungsprozesse. Zum Beispiel kann die Kulturlösung zentrifugiert und ausgefällt und dann mittels einer dünnen Membran oder Superfiltration filtriert werden, um ein Produkt zu ergeben, das direkt von Menschen und Tieren gegessen werden kann.
Weiterhin wir die filtrierte Lösung weiter mit einem organischen Lösemittel, so wie Alkohol, Aceton-Äthylacetat extrahiert oder mit einem Säulenextraktor, so wie einer Ionenaustauschsäule, einer Weitapertur-Harzsäule, extrahiert, um ein Endprodukt zu ergeben, das konzentrierte Nahrungskomponenten enthält. Die Kulturlösung kann in irgendeiner optionalen Weise zu Lebensmittel oder Medikamenten hinzugefügt werden, um ein Produkt zu erzeugen, das 851 YZH-Pseudomona enthält. Die Lösung kann auch getrocknet werden, um ein festes Produkt zu ergeben, und die Lösung kann als Ersatz für Wasser und Eier beim Backen von Brot, Kuchen und dergleichen, oder in anderen Nahrungsmitteln verwendet werden. Die Kulturlösung kann auch bei kosmetischen Präparationen verwendet werden.
Bei dem obenbeschriebenen Verfahren sind die folgenden Produktionsmedien benutzt worden. Die Komponenten sich gewichtsanteilsmäßig aufgelistet, wobei Wasser den Rest bildet. Geeignete Mengen an Spurenelementen, die für den menschlichen Körper zusätzlich zu diesen Medien notwendig sind, werden hinzugefügt. Die Benzoesäure oder Sodiumbenzoat können auch in den Medien benutzt werden. Die Mengen solcher Elemente sind typischerweise in dem Bereich von 1,5 - 100 ppm.

1. Sojabohnenmedium

Sojabohnen 5 - 10%
oder Sojabohnenmilch oder Bohnekuchen 5 - 15% (bezogen auf das Gewicht der Sojabohnen)
Hefeextrakt 0,02 - 0,5%
oder Hefepulver 0,02 - 0,5%
oder Pepton, Rindfleischextrak 0,02 - 0,3%
CaCO&sub3; 0,05 - 0,25%
KH&sub2;PO&sub4; 0,02 - 0,1%
MgSO&sub4; 0,01 - 0,05%
NaCl 0,01 - 0,04%
Na&sub2;MoO&sub4; 5,0 - 30ppm
Na&sub2;SeO&sub3; 2,5 - 15ppm
ZnSO&sub4; 2,5 - 40ppm
CoCl&sub2; 5,0 - 20ppm

2. 1640-Medium

Das Medium 1640 ist wohlbekannt und kann auch für die Kultur von YZH-Pseudomonas verwendet werden.
Die 851 YZH-Nährstofflösung, verwendet wie sie ist, oder in irgendeiner ihrer Formen, besitzt heilsame Wirkungen, einschließlich des Förderns und des Schützens der Gesundheit der Tiere, insbesondere des Verhinderns des Wachstums von Krebszellen in vivo und in vitro bei Tieren und Menschen. Um vollständiger die heilsamen Wirkungen der 851 YZH NS und ihre Ableitungen zu zeigen, werden die folgenden Experimente und ihre Ergebnisse vorgelegt.

Experiment 1. Anti-Lipid-Peroxidativ-Effekt

Das freie Sauerstoff-Radikal, das freie Hydroxy-Radikal und Peroxid, insbesondere Lipid-Peroxid im Körper von Menschen und Tieren, sind eine der Gründe des Absterbens von Zellen und des Verursachens von akuten und chronischen Krankheiten und Senilität bei Menschen und Tieren. Einige Nahrungsmittel oder Drogen, die einen Effekt direkt oder indirekt auf Anti-Lipid- Peroxid haben, können in der Lage sein, Krebs oder Tumore und Senilität bei Menschen und Tieren zu verhindern, die nicht genug Anti-Peroxid-Kapabilität haben oder eine Hyperaktivität von Lipid-Peroxid haben (Harman, D. Free Radical, in Mol. Biol. Aging & Diseases 1984, Raven Press, New York, Seiten 1 - 12).
Kunming-Mäuse, die 17,8 ± 1,75 g wogen, wurden verwendet und zufällig in mehrere Gruppen aufgeteilt (A. B. C), von zehn Mäusen, jeweils gemäß dem Körpergewicht. Eine dieser Gruppen war die Kontrollgruppe (A), allen Mäusen wurde dieselbe Diät gegeben, und den Mäusen der Gruppe (C), mit Ausnahme der Kontrollgruppe und der Gruppe (B), wurde über dreizehn aufeinanderfolgende Tage 851 YZH-Nährstofflösung gegeben. Der Gruppe A und B wurde Leitungswasser gegeben. Alle Mäuse wurden am 14. Tag getestet. Nach dem Testen wurde den Mäusen der Gruppe (A) am 14. Tag Paraffinöl verabreicht (ein Lösungsmittel CCl&sub4;), interperitoneal mit etwa 4 ppm. Den Mäusen der Gruppe (B) und der Gruppe (C) wurde CCl&sub4; interperitoneal am 14. Tag um 16.00 Uhr verabreicht. Die Verabreichungsmenge war 1,87 mmol/kg.
Am 15. Tag wurden die Tiere getötet, und Leberproben wurden präpariert. Malonaldehyd (MDA) in der Leber wurde entsprechend dem Verfahren von Hiroshi Ohkawa u.a. (Anal. Biochem., 95: 351 - 356 (1979)) analysiert. 1,1,1,3,3-Tetramethoxypropan (Japan TCI, E, P, Qualität) wurde als der Standard für die Analyse von Lipid-Peroxid benutzt. MDA wurde spektrophotometrisch in n mol/g bestimmt und die Daten wurden statistisch analysiert (H ± SD) Die Ergebnisse wurden wie unten gegeben: Tabelle 1 P-Wert Gruppe Nr. der Maus MDA n mol/g liver vergl. m.d. Kontr.-Gruppe (A) vergl. m.d. CCl-4 Gruppe (B) Kontr.
Die Ergebnisse geben an, daß 851 YZH NS starke Anti-Lipid- Peroxid-Aktivität besitzt, indem der MDA-Pegel wesentlich gesenkt wird. Diese Eigenschaft könnte beim Bekämpfen des Alterns nützlich sein.

Experiment 2. Wirkung von 851 YZH NS auf den Gesamtgehalt an Hämoglobin und Leukozyten und Klassifikation von WBC von neugeborenen Mäusen.

Zwölf (12) schwangere Kunming-Mäuse erhielten eine normale Diät und Leitungswasser. Nach der Geburt wurden die zwölf Mäuse mit ihren jeweiligen Neugeborenen zufällig in die Kontrollgruppe (A) und eine 851 YZH NS-Testgruppe (B) aufgeteilt. Die obengenannten Mäuse der Kontrollgruppe A wurden auf einer normalen Diät und Leitungswasser gehaltn, die Mäuse der Gruppe B jedoch hatten ihre Diät mit einem Zusatz von 851 YZH NS während der Säugedauer und nach dem Entwöhnen. Die Testdauer lief über 15 Tage nach dem Entwöhnen. Am Ende der 15tägigen Zeitdauer wurde eine Blutprobe der neugeborenen Mäuse aus dem Augapfel der neugeborenen Mäuse für die Analyse entnommen. Die Ergebnisse waren wie folgt: Tabelle 2 Wirkung von 851 YZH NS auf Gesamt-Leukozyten und Hämoglobin Gruppe Nr. Neugeborenes Hämoglobin P** Gesamt-WBC Kontrolle * Verglichen mit der Kontrollgruppe ** Beides getestet, verglichen mit der Kontrollgruppe. Tabelle 3 Wirkung von 851 YZH NS auf die Klassifikation von WBC Gruppe Nr. Neugeborenes Neutrophil P1* Lymphozyten P2* * Verglichen mit der Kontrollgruppe, beide getestet.
Die obigen Daten geben an, daß das Füttern mit 851 YZH NS, das mehr als 20 Aminosäuren, mehrere unterschiedliche Vitamine und verschiedene Spurenelemente enthält, zu einer Zunahme der Lymphozyten bei den neugeborenen Mäusen führt, was als eine Stimmulierung und Verbesserung der Fähigkeit einer Maus, diese Zellen zu produzieren, genommen werden kann.

Experiment 3 Therapeutische Wirkung von 851 YZH NS bei akuter Verletzung bei der Magenschleimhautentzündung von Ratten.

16 männliche und weibliche Wistar-Ratten, die 220 ± 20 g wogen, wurden in diesem Experiment benutzt. Diese Ratten wurden zufällig in die Kontrollgruppe (A) und in die 851 YZH NS-Gruppe (B) aufgeteilt. Der Gruppe A wurde eine normale Diät zugeführt und Leitungswasser gegeben. Die Gruppe B hatte eine Diät, die 851 YZH NS enthielt, wobei jede von ihnen etwa 8 ml der Lösung pro Tag hatte. Nachdem sie 15 Tage gefüttert worden waren, hatten zwei Gruppen von Ratten 14 Stunden lang nichts zu essen. Jeder Ratte wurde 2,5 mg Indometacin, einmal täglich, über zwei Tage gegeben. Zwei Tage später wurden die Ratten getötet und ihre Mägen entfernt und gewaschen, und mit bloßem Auge betrachtet.
6 Ratten in Gruppe A, 2 Ratten in Gruppe B hatten akute Blutungen in der Magenschleimhaut, jedoch waren die Blutungen der Mäuse in Gruppe A deutlich schwerer. Das Bluten bei der Magenschleimhautentzündung von 6 Ratten aus der Gruppe A und 2 Ratten aus der Gruppe B war lokal beschränkt, sozusagen punktartig, streifig oder gestreckt. Diffuse Blutung der Magenschleimhaut trat bei einer Ratte der Gruppe A auf. Während jedoch die Gruppe A 6 - 12 Punkt-Blutungen zeigte, zeigte die 851 YZH NS-Gruppe nur 2 - 5 Punkt-Blutungen. Diese Ergebnisse zeigen an, daß die Verabreichung von 851 YZH NS die Magenschleimhautblutungen signifikant reduzieren kann.

Experiment 4 Wirkung von 851 YZH NS auf die chronische Gastritis beim Menschen.

20 Patienten mit chronischer Gastritis wurden durch pathologische Untersuchung diagnostiziert. Sie waren 21 - 62 Jahre alt, 10 männlich und 10 weiblich, und sie hatten alle offensichtliche klinische Symptome.
Die ganzen Patienten wurden zufällig in zwei Gruppen aufgeteilt, die Kontrollgruppe und die Testgruppe, jede Gruppe bestand aus 10 Patienten. Der Kontrollgruppe wurde Vitamin C über 21 Tage verabreicht. Der Testgruppe wurde oral 851 YZH NS verabreicht, dreimal am Tag, jedesmal 80 ml, über 3 Wochen. Die Ergebnisse wurden wie unten gegeben: Tabelle 4 Symptome Kontrollgruppe YZH NS-Gruppe geheilt gebessert Verhältnis Unbehagen im Unterleib Distension im Unterleib Säurerückfluß Aufstoßen Übelkeit & Erbrechen Magersucht
Wie oben angemerkt kann, verglichen mit der Kontrollgruppe, 851 YZH NS die klinischen Symptome von Magenstörungen verbessern und chronische Gastritis erleichtern.

Experiment 5 Wirkung von 851 YZH NS aus das Krebszellenwachstum

Das 851 YZH NS unserer Erfindung besaß ein großes Hemmvermögen auf das Wachstum carcinomer Zellen, zum Beispiel auf menschliche Magen-Adenocarcinom-Zellen, MGC80-3-Zellen. Diese Zellen wurden einzeln mit 10%iger, 15%iger und 20%iger 851 YZH NS behandelt, um gute Ergebnisse zu liefern (Siehe Figur 1 und Figur 2).

Experiment 6 Wirkung von 851 YZH NS auf menschliche Krebszellen, unter dem Elektronenmikroskop beobachtet.

Menschliche Magen-Adenocarcinome, MGC80-3-Zellen, behandelt mit 15%iger 851 YZH NS, zeigten, daß es eine offensichtliche morphologische Änderung gab, die in den Zellen auftrat, welche mit H.E. angefärbt waren, unter dem Phasenkontrastmikroskop. (Siehe Figur 2 und Figur 3). In Figur 4 und Figur 5 zeigten Scanner-Elektronenmikrophotographien der MGC80-3-Zellen, daß übermäßig Filopodien am Rand der MCG80-3-Zellen vorlag und Mikrovilli ihre Zellenoberflächen dicht bedeckten. Nach der Behandlung mit 20%iger 851 YZH NS jedoch verschwanden die Mikrovilli an der Oberfläche der Zellen. Die Zellen hatten lange zytoplasmatische Vorsprünge und Lamellipodien am Zellrand und entstanden mit vielen faltenähnlichen Strukturen und Bläschen.
In Figur 6 und Figur 7 zeigte die Transmissions-Elektronenmikrophotographie, daß die MGC80-3-Zelle durch ein hohes Nukleus-Zytoplasma-Verhältnis, unregelmäßige Nukleus-Form, großen Nukleolus, zunehmendes Heterochromatin und sich nicht entwickelnde Organellen im Zytoplasma usw. gekennzeichnet war.
Nach der Behandlung mit 20%iger 851 YZH NS über etwa 7 - 9 Tage hatten die MCG80-3-Zellen eine Anzahl ultrastruktureller Änderungen produziert, ähnlich denen ihrer entsprechenden normalen Zellen, beispielsweise war der Nukleus (N) regelmäßig, der Nukleolus (Nu) verkleinert, das Heterochromatin reduziert und das Euchromatin erhöht, der Golgi-Komplex (G) und das Mitochondrium (M) waren entwickelt und das grobe endoplasmatische Reticulum (RER) nahm zu, wie in Figur 7 angegeben. Die obigen Ergebnisse zeigen an, daß 851 YZH NS eine Wirkung des Verhinderns oder des Abtötens der Krebszellen in vitro zeigt, wobei selbst Krebszellen in ihre normalen Zellen zurückumgewandelt werden können. Die Inhibierungs- und Tötungswirkung auf die Krebszellen wird nach 12 - 24 Stunden bei der Behandlung mit der Nährstofflösung stattfinden. Diejenigen Zellen, die nicht getötet werden, werden in der Nährstofflösung kontinuierlich über etwa 7 - 9 Tage kultiviert. Sie können sich nach und nach in ihre entsprechenden normalen Zellen ändern.
Experiment 7 Das Ergebnis der Heterotransplantation mit den MGC80-3-Zellen und den Zellen, die mit 15%iger 851 YZH NS behandelt worden sind, bei Mäusen.
30 Kunming-Mäuse, die 17,5 ± 1,65 g wogen, wurden zufällig in drei Gruppen (A, B, C) aufgeteilt, wobei jede Gruppe 10 Mäuse hatte.
Den gesamten Mäusen der Gruppe A, B, C wurden die MGC80-3- Zellen in die linken Vorderbeine gegeben. Nach dem Füttern über 14 Tage wurden die Mäuse getötet. Es wurde gefunden, daß es tumorartige Fälle an der Achselhöhe am linken Vorderbein bei Mäusen aller Gruppen gab.
Jedoch wurde den Mäusen der Gruppe A und C in die rechten vorderen Beine MGC80-3-Zellen verabreicht, die 3 Tage lang mit 15%iger NS behandelt worden waren. Nachdem die Mäuse (20) über 3 Tage gefüttert worden waren, hatten 10 Mäuse in den Achselhöhlen der rechten vorderen Beine kleine Knötchen.
Zusätzlich wurde den Mäusen der Gruppe C MGC80-3-Zellen, die 10 Tage lang mit 15%iger NS behandelt worden waren, in ihre rechten vorderen Beine gegeben. Keine der Mäuse hatte Tumore.
Die Ergebnisse zeigen an, daß 851 YZH NS eine starke hemmende Wirkung auf Krebs- oder Tumorwachstum im Tierkörper hat.

Beispiel 1

Ein 5 Tonnen-Fermentationsbehälter, ausgestattet mit Misch- und Belüftungseinrichtungen, wurde auf 40% Kapazität beladen. Das Fermentationsmedium war ein 10%iges Sojabohnenmedium, das, bezogen aufs Gewicht, aus 200 kg Sojabohnen bestand, die durch Auswählen, Waschen, Mahlen und Entfernen der Reste verarbeitet wurden, 800 g Hefeextrakt, 1000 g KH&sub2;PO&sub4;, 100 g MgSO&sub4;, 5 kg CaCO&sub3;, 400 g NaCl, 20 g Na&sub2;MoO&sub4;,5 g Na&sub2;SeO&sub3;, 20 g ZnSO&sub4;, 20 g CoCl&sub2;, 1 kg Benzoesäure und Wasser. Das Inokulum betrug 10% und bestand aus einem YZH-Pseudomonas, das über 48 Stunden in einem Zehntel Gewicht des obengenannten Mediums in einem 0,5 Tonnen-Brutfermentationsbehälter kultiviert worden war, der mit 200 Kilogramm beladen worden war. Die YZH-Pseudomonas wurden in zwei Stufen als eine erste, zweite Brutkultur für etwa 48 Stunden hinzugefügt. Das Inokulum wurde bei einer Temperatur von 30ºC, einer Rührgeschwindigkeit von 260 Upm und einer Belüftungsrate von 1 : 0,8 v/v nin (Masse/Luft) kultiviert. Nachdem die Brütkultur beendet war, wurde das Inokulum in den 5 Tonnen-Fermentationstank für eine dritte kontinuierliche Bebrütung hinzugefügt. Das Fermentationsmedium und das Inokulum konnten in dem Fermentationsbehälter über eine Zeitdauer von 48 Stunden reagieren. Die sich ergebende Brühe (Nährstofflösung) wurde dann bei 90ºC und barometrischem Druck über eine halbe Stunde autoklaviert, auf einem Fließband in Flaschen abgefüllt und wieder bei einer erhöhten Temperatur über eine halbe Stunde autoklaviert, um das Endprodukt zu ergeben. Das Endprodukt, eine Lösung, kann getrocknet werden, um ein festes Produkt zu liefern. Die Analyse von 100 ml der Brühe zeigte, daß sie 2,2% Trockenmaterial enthielt, 1,38% Proteine, 0,13% Lipide, 0,09% Kohlehydrate und Vitamine und Mineralien wie es in Tabelle 5 gezeigt ist. Tabelle 5 Analytischer Bericht über 851 YZH NS Bestandteile Einheit Menge Eßbarer Teil Wasser Protein Lipide Kohlehydrat Wärmekapazität Eßbare Zellulose Asche Vitamin Aspartat Glutamat Serin Prolin Glycin Alanin Treonin Valin Methionin Isoleucin Leucin Tyrosin Phenylalanin Lysin Tryptophan Histidin Arginin Myristinsäure Palmitinsäure Stearinsäure Oleinsäure

Beispiel 2

Der in dem Beispiel 1 benutzte Behälter wurde verwendet. Das Fermentationsmedium war ein 15%iges Sojabohnenmilchmedium (bezogen auf das Gewicht der Sojabohnen) was aus 850 g Hefeextrakt, 1100 g KH&sub2;PO&sub4;, 250 g MgSO&sub4;, 4 g CaCO&sub3;, 430 g NaCl, 30 g Na&sub2;NoO&sub4;, 5 g Na&sub2;Se&sub0;&sub3;, 15 g ZnSO&sub4;, 15 CoCl&sub2;, 1 kg Natriumbenzoat und Wasser. Das Inokulum war 1% und bestand aus YZH-Pseudomonas, das in zwei Stufen als eine erste und zweite Brutkultur über etwa 50 Stunden hinzugefügt wurde. Das Inokulum wurde bei einer Temperatur von 27ºC, einer Rührgeschwindigkeit von 200 Upm und einer Belüftungsrate von 1 : 1 v/v min (Masse/Luft) kultiviert. Nachdem die Brutkultur beendet war, wurde das Inokulum in den 5 Tonnen-Behälter für eine dritte kontinuierliche Inkubation eingefügt. Das Fermentationsmedium und das Inokulum konnten in dem Fermentationsbehälter über eine Zeitdauer von etwa 65 Stunden reagieren. Die sich ergebende kultivierte Brühe wurde autoklaviert und bei 110ºC und barometrischem Druck für etwa 1 Stunde autoklaviert und abgeernten und wieder bei 120ºC und dem Druck, der dem Fachmann bekannt ist, über 2 Stunden autoklaviert, um ein Endprodukt zu ergeben, das unsere Nährstofflösung ist.
Die in der vorstehenden Beschreibung, in der Zeichnung sowie in den Ansprüchen offenbarten Merkmale der Erfindung können sowohl einzeln als auch in beliebiger Kombination für die Verwirklichung der Erfindung wesentlich sein.

Claims

1. Ein Mutantenstamm von Pseudomonas&sub1; als YZH identifiziert und dazu in der Lage, Pflanzenprotein in einzelliges Protein umzuwandeln, wobei der Stamm eine stumpfe Stange in hellgelber Farbe ist, mit wenigstens einem Flagellum, einem chemosynthetisch heterotrophen Aerobionten, nicht dazu fähig, wasserlösliches Pigment zu erzeugen und intrazellulares Polyhydroxy-butyrat zu bilden und Arginin-Dihydrolase zu erzeugen und ohne denitrifizierende Wirkung und in der Lage, Nitrate zu reduzieren und Gelantine zu Verflüssigen, wobei die Wachstumstemperatur etwa 10 - 41ºC liegt, wobei der bevorzugte pH-Wert 4,5 - 9,0 ist, wobei der Gehalt an Guanin und Cytosin in der DNA des Stammes 65,4 - 67,7 mol% beträgt und die DNA des Stammes ein Y-Fragment enthält und wobei der Stamm indentifizierbare Eigenschaften der Probe hat, die bei der American Type culture Collection, 12301 Parklaw Drive, Rockville, Maryland, 20852 hinterlegt worden ist und der die A.T.C.C. Hinterlegungsnummer 53980 zugeordnet ist.

2. Der Mutantenstamm von Pseudomonas gemäß Anspruch 1, wobei das Y-Fragment in der DNA des Stranges durch eine spezielle Y-Fragment-DNA-Sonde nachgewiesen wird.

3. Verfahren zum Herstellen einer Einzelzellen-Protein-Nährlösung durch Verwenden des Mutantenstammes von Pseudomonas, wie nach Anspruch 1 beansprucht, als ein Lösungs- Erzeugerstamm, und in dem das Pflanzenprotein enthaltende Medium in einer Fermentationsprozedur benutzt wird, um die Nährlösung zu erzeugen.

4. Verfahren nach Anspruch 3, bei dem das Pflanzenprotein enthaltende Medium ein wässriges Medium ist, das (bezogen auf das Gewicht) aufweist:

Sojabohnenmedium

Sojabohnen 5 - 15 %

oder Sojabohnenmilch oder Bohnenkuchen 5 - 15 % (bezogen auf das Gewicht der Sojabohnen)

oder Hefepulver 0,2 - 0,5 %

oder Pepton, Fleischextrakt 0,02 - 0,3 %

CaCO&sub3; 0,05 - 0,25 %

KH&sub2;PO&sub4; 0,02 - 0,1 %

MgSO&sub4; 0,01 - 0,05 %

NaCl 0,01 - 0,04 %

Na&sub2;MoO&sub4; 5,0 - 30 ppm

Na&sub2;SeO&sub3; 2,5 - 15 ppm

ZnSO&sub4; 2,5 - 40 ppm

CoCl&sub2; 5,0 - 20 ppm.

5. Nährlösung, mit einer wässrigen Lösung aus einzelligem Protein und Spurenelementen, wobei die Nährlösung durch Fermentation eines Pflanzenprotein enthaltenden Mediums erhalten wird, wie es in Anspruch 4 beschrieben ist, mit dem Mutantenstamm von Pseudomonas, wie in Anspruch 1 beansprucht.

6. Nährlösung nach Anspruch 5 zur Verwendung als ein Medikament mit einer Anti-Alterungswirkung bei Säugetieren.

7. Nährlösung nach Anspruch 5 zur Verwendung als ein Medikament mit der Wirkung des Anregens und Verbesserns der Blutbildung bei Säugetieren.

8. Nährlösung nach Anspruch 5 zur Verwendung als ein Medikament mit der therapeutischen Wirkung auf stomatische Fehlordnungen bei Säugetieren und Menschen.

9. Nährlösung nach Anspruch 5 zur Verwendung als ein Medikament mit der Wirkung des Hemmens des Krebszellenwachstums und des Umwandelns der Krebszellen in normale Zellen bei Säugetieren und Menschen.

10. Nährlösung nach Anspruch 5 zur Verwendung als ein Medikament mit der Wirkung des therapeutischen Effekts bei akuter Blutung der Magenschleimhaut bei Säugetieren.

11. Produkt, das die Nährlösung nach Anspruch 5 oder den Mutantenstamm von Pseudomonas nach Anspruch 1 enthält, als Additive oder Ersatznahrungen bei Nahrungsmitteln oder Drogen für Menschen oder Tiere.