DE60318330T2 - 5-XANTHYLSäURE PRODUZIERENDER MIKROORGANISMUS - Google Patents
5-XANTHYLSäURE PRODUZIERENDER MIKROORGANISMUS Download PDFInfo
- Publication number
- DE60318330T2 DE60318330T2 DE60318330T DE60318330T DE60318330T2 DE 60318330 T2 DE60318330 T2 DE 60318330T2 DE 60318330 T DE60318330 T DE 60318330T DE 60318330 T DE60318330 T DE 60318330T DE 60318330 T2 DE60318330 T2 DE 60318330T2
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- kccm
- corynebacterium ammoniagenes
- xanthylic acid
- culture
- cjxsp
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- 244000005700 microbiome Species 0.000 title description 8
- DCTLYFZHFGENCW-UUOKFMHZSA-N 5'-xanthylic acid Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](COP(O)(O)=O)O[C@H]1N1C(NC(=O)NC2=O)=C2N=C1 DCTLYFZHFGENCW-UUOKFMHZSA-N 0.000 claims abstract description 25
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 25
- 241000186145 Corynebacterium ammoniagenes Species 0.000 claims abstract description 20
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 abstract description 20
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 abstract description 20
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 abstract description 4
- 230000035772 mutation Effects 0.000 abstract description 4
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 abstract description 3
- VZUNGTLZRAYYDE-UHFFFAOYSA-N N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine Chemical compound O=NN(C)C(=N)N[N+]([O-])=O VZUNGTLZRAYYDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 2
- 230000005855 radiation Effects 0.000 abstract description 2
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 21
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 8
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 8
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 8
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 7
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 7
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 6
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 6
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 6
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 5
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 5
- RQFCJASXJCIDSX-UHFFFAOYSA-N 14C-Guanosin-5'-monophosphat Natural products C1=2NC(N)=NC(=O)C=2N=CN1C1OC(COP(O)(O)=O)C(O)C1O RQFCJASXJCIDSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 4
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 4
- RQFCJASXJCIDSX-UUOKFMHZSA-N guanosine 5'-monophosphate Chemical compound C1=2NC(N)=NC(=O)C=2N=CN1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O RQFCJASXJCIDSX-UUOKFMHZSA-N 0.000 description 4
- 235000013928 guanylic acid Nutrition 0.000 description 4
- BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate (anhydrous) Chemical compound [Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 229910000359 iron(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 4
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 4
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 4
- 229940099596 manganese sulfate Drugs 0.000 description 4
- 239000011702 manganese sulphate Substances 0.000 description 4
- 235000007079 manganese sulphate Nutrition 0.000 description 4
- SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate Chemical compound [Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 3
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 3
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 3
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 3
- 229910000365 copper sulfate Inorganic materials 0.000 description 3
- ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate Chemical compound [Cu+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 239000012499 inoculation medium Substances 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 3
- LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 9H-xanthine Chemical compound O=C1NC(=O)NC2=C1NC=N2 LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonium chloride Substances [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000186216 Corynebacterium Species 0.000 description 2
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 2
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002219 ammoniagenic effect Effects 0.000 description 2
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 2
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 2
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 2
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 2
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 2
- 229960000344 thiamine hydrochloride Drugs 0.000 description 2
- 235000019190 thiamine hydrochloride Nutrition 0.000 description 2
- 239000011747 thiamine hydrochloride Substances 0.000 description 2
- DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M thiamine hydrochloride Chemical compound Cl.[Cl-].CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229940086388 thiamine hydrochloride 5 mg Drugs 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- 229940047022 zinc sulfate 10 mg Drugs 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000005757 colony formation Effects 0.000 description 1
- 229940098081 copper sulfate 0.8 mg Drugs 0.000 description 1
- 230000009615 deamination Effects 0.000 description 1
- 238000006481 deamination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 229930010796 primary metabolite Natural products 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 239000002213 purine nucleotide Substances 0.000 description 1
- 150000003212 purines Chemical class 0.000 description 1
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 238000009423 ventilation Methods 0.000 description 1
- 229940075420 xanthine Drugs 0.000 description 1
- NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L zinc sulfate Chemical compound [Zn+2].[O-]S([O-])(=O)=O NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000368 zinc sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960001763 zinc sulfate Drugs 0.000 description 1
- 229940079232 zinc sulfate 15 mg Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/18—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing at least two hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, e.g. rifamycin
- C12P17/182—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring heteroatoms in the condensed system
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/15—Corynebacterium
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
- Fachgebiet
- Die Erfindung bezieht sich auf einen Mikroorganismus, der 5'-Xanthylsäure herstellt. Im besonderen bezieht sich die Erfindung auf die Auswahl eines mutierten Stamms von Corynebacterium ammoniagenes KCCM 10340 zur Förderung der Vermehrungsaktivität, wodurch die stationäre Phase der Vermehrung bei früher Kultur schnell überwunden und 5'-Xanthylsäure bei der selben Gärungsdauer im Kulturmedium mit einer hohen Ausbeute und hoher Konzentrationsrate angesammelt werden kann.
- Stand der Technik
- Die 5'-Xanthylsäure ist ein Zwischenprodukt im Nukleinsäure-Biosyntheseprozess, der eine wichtige physiologische Bedeutung im Körper von Tieren und Pflanzen besitzt, die in Nahrungsmitteln, als Medizinbedarf und in verschiedenen anderen Anwendungsgebieten verwendet werden. Die Erfindung bezieht sich auf einen mutierten Stamm eines bekannten Stamms von Corynebacterium ammoniagenes KCCM 10340, der 5'-Xanthylsäure durch ein direktes Gärungsverfahren in einer hohen Ausbeute und hohen Konzentrationsrate im Vergleich zur bestehenden Technik produziert.
- Die 5'-Xanthylsäure ist ein Zwischenprodukt des Purinnukleotid-Biosyntheseprozesses und ein wichtiges Material zur Herstellung von 5'-Guanylsäure. Bei einem weit verbreiteten Verfahren zur Herstellung von 5'-Guanylsäure mit hohem Feinheitsgrad und hoher Qualität handelt es sich um ein mikrobielles Gärungsverfahren, bei dem zunächst 5'-Xanthylsäure hergestellt und auf enzymatische Weise in 5'-Guanylsäure umgewandelt wird und folglich ist zur Herstellung von 5'-Guanylsäure eine entsprechende Menge von 5'-Xanthylsäure erforderlich. Bei herkömmlichen Verfahren zur Herstellung von 5'-Xanthylsäure handelt es sich um eine Chemosynthese, eine Deaminierung von 5'-Guanylsäure, die als das Ergebnis der Zersetzung von Ribonukleinsäure in Hefe hergestellt wird, ein Gärungsverfahren zur Zugabe von Xanthin als Vorläufermaterial im Gärungsmedium, ein Gärungsverfahren zur Verwendung eines mutierten Stamms eines Mikroorganismus, ein Verfahren zur Zugabe von antibiotischem Material (
JP 1477/42 JP 20390/44 JP 3825/42 JP 3838/42 - Die meisten Mikroorganismen erreichen mit der Zeit einen Zustand, bei dem das Volumen nicht weiter ansteigt, wenn die Kultur bei den gleichen Bedingungen fortgeführt wird, und insbesondere steigt die Konzentration von Mikroorganismen, die primären Metabolit, ein vermehrungsabhängiges Produkt, herstellen, nicht weiter an. Verursacht wird dies hauptsächlich durch ein begrenztes Angebot an gelöstem Sauerstoff. Verfahren zur Verbesserung des Belüftungs- und Aufschüttelzustandes zur Beseitigung der Beschränkung des Angebots an gelöstem Sauerstoff werden zwar eingesetzt, doch bestehen diesbezüglich technische und wirtschaftliche Beschränkungen bei der Produktion selbst. Um diese Beschränkung zu überwinden und die Ausbeuterate und Konzentration von 5'-Xanthylsäure durch Erhöhung des Volumens von Mikroorganismen und verschiedenen physiologischen Aktivitäten bei einem begrenzten Angebot an gelöstem Sauerstoff zu erhöhen, waren wir Erfinder der Ansicht, dass das Verfahren der Produktion des neuen Mikroorganismus, der unter den selben Bedingungen eine überlegene Vermehrung zeigt, nützlich wäre. Folglich haben die Erfinder Untersuchungen angestellt und sind zu der Erkenntnis gelangt, dass ein mutierter Stamm, der die stationäre Phase der Vermehrung schnell überwinden kann und eine überlegene Vermehrung zeigt, am effektivsten ist und 5'-Xanthylsäure mit einer hohen Ausbeute und hoher Konzentrationsrate im Vergleich zur bestehenden Technik herstellen kann und dies wurde in dieser Erfindung erreicht.
- Offenlegung der Erfindung
- Die Erfindung bezieht sich auf Corynebacterium ammoniagenes CJXSP 0201 (KCCM-10448), bei dem es sich um einen mutierten Stamm von Corynebacterium ammoniagenes KCCM 10340 handelt, der 5'-Xanthylsäure hergestellt.
- Erhalten wird der Stamm CJXSP 0201 durch Adaptation von Corynebacterium ammoniagenes KCCM 10340 als Elternstamm durch ein spontanes Mutationsverfahren und Auswahl eines mutierten Stamms daraus. Das spontane Mutationsverfahren wird wie folgt durchgeführt. 5 mL Nährstoffmedium (Glukose 20 g/L, Pepton 10 g/L, Hefeextrakt 10 g/L, Natriumchlorid 2,5 g/L, Harnstoff 3 g/L, Adenin 150 mg/L, Guanin 150 mg/L, pH 7,2) wurden in ein Reagenzglas mit einem Durchmesser von 18 mm gegossen und im Einklang mit den üblichen Verfahren unter Druck sterilisiert. Anschließend wurde das Reagenzglas mit Corynebacterium ammoniagenes KCCM 10340 beimpft und unter Schütteln bei 200 U/Min, 30°C für eine Dauer von 18 Stunden in Kultur genommen und das Ergebnis wurde als Beimpfungskultur verwendet. 50 μL der Beimpfungskultur wurden zur Beimpfung zum Schütteln in einen 500 mL-Erlenmeyer-Kolben gegeben, der sterilisiert worden war, und in den 40 mL Minimalmedium (Glukose 20 g/L, primäres Kaliumphosphat 1 g/L, sekundäres Kaliumphosphat 1 g/L, Harnstoff 2 g/L, Ammoniumsulfat 3 g/L, Magnesiumsulfat 1 g/L, Calciumchlorid 100 mg/L, Eisen(II)sulfat 20 mg/L, Mangansulfat 10 mg/L, Zinksulfat 10 mg/L, Biotin 30 μg/L, Thiaminhydrochlorid 0,1 mg/l, Kupfersulfat 0,8 mg/L, Adenin 20 mg/L, Guanin 20 mg/L, pH 7,2) zugegeben worden waren. Anschließend erfolgte eine Kultur unter Schütteln bei 200 U/Min, 30°C für eine Dauer von 24 Stunden und bei Erreichen der frühen Log-Phase der Vermehrung wurde ein weiterer schüttelbarer 500 mL-Erlenmeyer-Kolben, in den 40 mL Minimalmedium zugegeben worden waren, zum Schütteln mit 50 μL der Kultur beimpft. Und bei erneutem Erreichen der frühen Log-Phase der Vermehrung (optische Dichte = 0,5 (λ = 562 nm)) wurde ein weiterer 500 mL-Erlenmeyer-Kolben, in den wiederum das Minimalmedium zugegeben worden war, zum Schütteln mit 50 μL der Kultur beimpft. Dieser Prozess, nämlich die Subkultur oder Passage, wurde 20-fach wiederholt. Die letztlich erhaltene Kultur wurde auf einer Petrischale mit Minimalmedium, die 1,5% Agar enthielt, ausgestrichen und die Kultur im Inkubator bei 30°C bis zur Bildung von Kolonien durchgeführt. Aus den Kolonien wurden diejenigen Kolonien ausgewählt, die eine relativ schnelle Vermehrungsrate als überlegene mutierte Stämme zeigen, ausgewählt. Und aus diesen wurden ein Stamm mit der Bezeichnung CJXSP 0201, der eine überlegene 5'-Xanthylsäure-Produktivität und Vermehrungsrate zeigte, isoliert und gemäß der Vereinbarung von Budapest am 21. November 2002 unter der Zugangsnummer KCCM 10448 beim Koreanischen Zentrum für mikrobielle Kulturen hinterlegt. Die Dauer bis zur Koloniebildung beträgt 38 Stunden bei KCCM 10340, einem bekannten Stamm, während der erfindungsgemäße Stamm CJXSP 0201 31 Stunden benötigt; daher ist CJXSP ein mutierter Stamm mit der Eigenschaft einer überlegenen Vermehrung.
- BESTER MODUS ZUR DURCHFÜHRUNG DER ERFINDUNG
- Beispiel 1
-
- Verwendete Stämme: Corynebacterium ammoniagenes KCCM 10340, Corynebacterium ammoniagenes CJXSP 0201
- Beimpfungsmedium: Glukose 30 g/L, Pepton 15 g/L, Hefeextrakt 15 g/L, Natriumchlorid 2,5 g/L, Harnstoff 3 g/L, Adenin 150 mg/L, Guanin 150 mg/L, pH 7,2
- Gärungsmedium: (1) Medium A: Glukose 60 g/L, Magnesiumsulfat 10 g/L, Eisen(II)sulfat 20 mg/L, Zinksulfat 10 mg/L, Mangansulfat 10 mg/L, Adenin 30 mg/L, Guanin 30 mg/L, Biotin 100 μg/L, Kupfersulfat 1 mg/L, Thiaminhydrochlorid 5 mg/l, Calciumchlorid 10 mg/L, pH 7,2 (2) Medium B: primäres Kaliumphosphat 10 g/L, sekundäres Kaliumphosphat 10 g/L, Harnstoff 7 g/L, Ammoniumsulfat 5 g/L
- Gärungsverfahren: 5 ml des Beimpfungsmediums wurden in ein Reagenzglas mit einem Durchmesser von 18 mm gegossen und im Einklang mit den üblichen Verfahren unter Druck sterilisiert. Nach der Sterilisation wurde jeweils mit Corynebacterium ammoniagenes KCCM 10340 und Corynebacterium ammoniagenes CJXOL 0201 beimpft und die Kultur unter Schütteln bei 180 U/Min, 30°C für eine Dauer von 18 Stunden durchgeführt. Das Ergebnis wurde als Beimpfungskultur verwendet. Anschließend wurden Medium A und Medium B als Gärungsmedium getrennt im Einklang mit den üblichen Verfahren unter Druck sterilisiert und es wurden 29 mL Medium A und 10 mL Medium B zum Schütteln in einen sterilisierten 500 mL-Erlenmeyer-Kolben gegossen und dieser mit 1 mL der vorstehend erwähnten Beimpfungskultur beimpft und eine Gärung bei 200 U/Min, 30°C für eine Dauer von 90 Stunden durchgeführt. Nach Abschluss der Gärung zeigte die angesammelte Menge 5'-Xanthylsäure im Medium, dass die Menge in KCCM 10340 bei 23,0 g/L und die Menge in CJXSP 0201 bei 24,7 g/L lag. (Die Konzentration der angesammelten 5'-Xanthylsäure ist als 5'-Natriumxanthat·7H2O angegeben.)
- Beispiel 2
-
- Verwendete Stämme: die selben wie in Beispiel 1.
- Primäres Beimpfungsmedium: das selbe Beimpfungsmedium wie in Beispiel 1.
- Sekundäres Beimpfungsmedium: Glukose 60 g/L, primäres Kaliumphosphat 2 g/L, sekundäres Kaliumphosphat 2 g/L, Magnesiumsulfat 1 g/L, Eisen(II)sulfat 22 mg/L, Zinksulfat 15 mg/L, Mangansulfat 10 mg/L, Kupfersulfat 1 mg/L, Calciumchlorid 100 mg/L, Biotin 150 μg/L, Adenin 150 mg/L, Guanin 150 mg/L, Thiaminhydrochlorid 5 mg/l, Schaumverhinderungsmittel 0,6 mL/L, pH 7,2
- Gärungsmedium: Glukose 151 g/L, Phosphorsäure 32 g/L, Kaliumhydroxid 25 g/L, Adenin 198 mg/L, Guanin 119 mg/L, Eisen(II)sulfat 60 mg/L, Zinksulfat 42 mg/L, Mangansulfat 15 mg/L, Kupfersulfat 2,4 mg/L, Alaniat 22 mg/L, NCA 7,5 mg/L, Biotin 0,4 mg/L, Magnesiumsulfat 15 g/L, Cystinat 30 mg/L, Histidinat 30 mg/L, Calciumchlorid 149 mg/L, Thiaminhydrochlorid 15 mg/L, Schaumverhinderungsmittel 0,7 mL/L, CSL 27 mL/L, Kaktusfeigenextrakt 6 g/L, pH 7,3
- Primäre Beimpfungskultur: 50 mL des primären Beimpfungsmediums wurden zum Schütteln in einen 500 mL-Erlenmeyer-Kolben gegossen und unter Druck bei 121°C für eine Dauer von 20 Minuten sterilisiert. Nach dem Abkühlen wurde mit Corynebacterium ammoniagenes KCCM 10340 bzw. Corynebacterium ammoniagenes CJXOL 0201 beimpft und die Kultur unter Schütteln bei 180 U/Min, 30°C für eine Dauer von 24 Stunden durchgeführt.
- Sekundäre Beimpfungskultur: Das sekundäre Beimpfungsmedium wurde in 5 L-Versuchsgärungsbäder gegossen (jeweils 2 L) und unter Druck bei 121°C für eine Dauer von 10 Minuten sterilisiert. Nach dem Abkühlen wurde mit 50 mL der vorstehend genannten primären Beimpfungskultur beimpft und die Kultur bei einer Sauerstoffzufuhr von 0,5 vvm, bei 900 U/Min, 31°C für eine Dauer von 24 Stunden durchgeführt. Während des Kulturprozesses wurde der pH-Wert des Mediums durch Anpassung mit Ammoniaklösung bei 7,3 gehalten.
- Gärungsverfahren: Das Gärungsmedium wurde in 30 L-Versuchsgärungsbäder gegossen (jeweils 8 L) und unter Druck bei 121°C für eine Dauer von 20 Minuten sterilisiert. Nach dem Abkühlen wurden jeweils (1,5 L) mit der vorstehend genannten sekundären Beimpfungskultur beimpft und bei einer Sauerstoffzufuhr von 1 vvm eine Kultur bei 400 U/Min, 33°C durchgeführt. Sobald die Restzuckermenge bei dem Kulturprozess unter 1% absank, wurde sterilisierte Glukose zugeführt und die Gesamtzuckermenge im Gärungsmedium wurde bei 30% gehalten. Während des Kulturprozesses wurde der pH-Wert des Mediums durch Anpassung mit Ammoniaklösung bei 7,3 gehalten und der Prozess dauerte 90 Stunden. Nach Abschluss der Gärung zeigte die angesammelte Menge von 5'-Xanthylsäure im Medium, dass die Menge in KCCM 10340 bei 137,2 g/L und die Menge in CJXSP 0201 bei 146,8 g/L lag. (Die Konzentration der angesammelten 5'-Xanthylsäure ist als 5'-Natriumxanthat 7H2O angegeben.)
- Industrielle Anwendbarkeit
- Bei der Erfindung wurde Corynebacterium ammoniagenes KCCM 10340 als Elternstamm verwendet und mit UV-Strahlung, Mutationsderivaten wie N-Methyl-N'-nitro-n-nitrosoguanidin (NTG) nach der üblichen Verfahrensweise behandelt. Der Stamm KCCM 10340 besitzt eine Widerstandsfähigkeit gegenüber osmotischem Druck, der durch die im Verlauf des Kulturprozesses angesammelte hohe Konzentration von 5'-Xanthylsäure, die hohe Konzentration von Glukose und verschiedenen Kohlenstoffquellen, die zum Kulturmedium zugegeben worden waren, verursacht wird, was zu dem hohen osmotischen Druck außerhalb des Bakterienkörpers, Hemmung der normalen physiologischen Aktivität der 5'-Xanthylsäure-herstellende Zelle und Senkung der 5'-Xanthylsäure-Herstellung führt. Um einen Stamm zu erhalten, der unter den selben Bedingungen die Eigenschaft einer verstärkten Vermehrungsaktivität besitzt, wurde gemäß der Erfindung Corynebacterium ammoniagenes KCCM 10340 modifiziert und ein mutierter Stamm ausgewählt, der die stationäre Phase der Vermehrung bei früher Kultur schnell überwinden kann, wodurch es möglich wurde, 5'-Xanthylsäure im Kulturmedium mit einer hohen Ausbeute und einer hohen Konzentrationsrate bei der selben Gärungsdauer anzusammeln.
Claims (2)
- Corynebacterium ammoniagenes CJXSP 0201 (Aufnahmenummer („Accession Number"): KCCM 10448), das die stationäre Phase der Vermehrung bei früher Kultur schnell überwinden und 5'-Xanthylsäure produzieren kann.
- Verfahren zur Herstellung von 5'-Xanthylsäure, dadurch gekennzeichnet, dass Corynebacterium ammoniagenes CJXSP 0201 (Aufnahmenummer („Accession Number"): KCCM 10448) von Anspruch 1 verwendet wird.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020020078694A KR20040051731A (ko) | 2002-12-11 | 2002-12-11 | 5’-크산틸산을 생산하는 미생물 |
| KR2002078694 | 2002-12-11 | ||
| PCT/KR2003/002704 WO2004053110A1 (en) | 2002-12-11 | 2003-12-10 | Microorganism producing 5'-xanthylic acid |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DE60318330D1 DE60318330D1 (de) | 2008-02-07 |
| DE60318330T2 true DE60318330T2 (de) | 2009-01-15 |
Family
ID=36117095
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DE60318330T Expired - Lifetime DE60318330T2 (de) | 2002-12-11 | 2003-12-10 | 5-XANTHYLSäURE PRODUZIERENDER MIKROORGANISMUS |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US7456010B2 (de) |
| EP (1) | EP1572982B1 (de) |
| JP (1) | JP4035135B2 (de) |
| KR (1) | KR20040051731A (de) |
| CN (1) | CN1277915C (de) |
| AT (1) | ATE382080T1 (de) |
| AU (1) | AU2003302758A1 (de) |
| BR (2) | BRPI0314900B1 (de) |
| DE (1) | DE60318330T2 (de) |
| DK (1) | DK1572982T3 (de) |
| MX (1) | MXPA05004143A (de) |
| RU (1) | RU2312137C2 (de) |
| WO (1) | WO2004053110A1 (de) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100686561B1 (ko) * | 2005-11-25 | 2007-02-26 | 씨제이 주식회사 | Ｇｍｐ 저분해 활성을 갖는 코리네박테리움 암모니아게네스ｃｊｘｃｖ19 ｋｃｃｍ-10692ｐ 및 변이주의 고속선별방법 |
| KR101072708B1 (ko) * | 2008-12-17 | 2011-10-11 | 씨제이제일제당 (주) | ５＇－크산틸산 생산능이 향상된 미생물 및 이를 이용한 ５＇－크산틸산의 생산방법 |
| EP2711013A4 (de) | 2011-05-18 | 2015-03-04 | Ajinomoto Kk | Immunstimulans für tiere, futter damit und herstellungsverfahren dafür |
| JP6702932B2 (ja) * | 2017-12-27 | 2020-06-03 | 富士フイルム株式会社 | 細胞撮像制御装置および方法並びにプログラム |
Family Cites Families (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS423838Y1 (de) | 1964-04-29 | 1967-03-04 | ||
| JPS423825Y1 (de) | 1965-06-10 | 1967-03-04 | ||
| JPS421477Y1 (de) | 1966-10-05 | 1967-01-30 | ||
| JPS4420390Y1 (de) | 1966-10-08 | 1969-09-01 | ||
| US4438196A (en) * | 1982-09-28 | 1984-03-20 | Miles Laboratories, Inc. | Immobilization of biocatalysts on granular carbon |
| JP3016883B2 (ja) * | 1991-02-19 | 2000-03-06 | 協和醗酵工業株式会社 | 発酵法による５’−キサンチル酸の製造法 |
| JP3472026B2 (ja) | 1996-03-26 | 2003-12-02 | 富士通株式会社 | ログ情報採取解析装置 |
| DE29608213U1 (de) | 1996-05-06 | 1996-09-05 | Trw Repa Gmbh | Gurtstraffer für einen Sicherheitsgurt |
| JP2000295996A (ja) * | 1999-02-08 | 2000-10-24 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | プリンヌクレオチドの製造法 |
| JP2001089980A (ja) | 1999-09-21 | 2001-04-03 | Teijin Ltd | 金属光沢を呈する編地 |
| KR100344017B1 (ko) * | 2000-04-08 | 2002-07-20 | 제일제당주식회사 | 5'-크산틸산을 생산하는 미생물 |
| KR100402322B1 (ko) * | 2001-01-05 | 2003-10-22 | 씨제이 주식회사 | 5'-크산틸산을 고수율로 생산하는 미생물 코리네박테리움암모니아게네스 씨제이엑스피002 및 그를 이용한5'-크산틸산 생산방법 |
| KR100402320B1 (ko) * | 2001-01-05 | 2003-10-22 | 씨제이 주식회사 | 5'-크산틸산을 고수율로 생산하는 미생물 코리네박테리움암모니아게네스 엔브이4-82-9 및 그를 이용한 5'-크산틸산생산방법 |
| KR100429925B1 (ko) * | 2001-12-28 | 2004-05-03 | 씨제이 주식회사 | 5'-크산틸산을 생산하는 미생물 |
| KR100505925B1 (ko) * | 2002-12-11 | 2005-08-03 | 씨제이 주식회사 | 5’-크산틸산을 생산하는 미생물 |
| KR100542568B1 (ko) * | 2003-12-10 | 2006-01-11 | 씨제이 주식회사 | 5'-크산틸산을 생산하는 미생물 |
-
2002
- 2002-12-11 KR KR1020020078694A patent/KR20040051731A/ko not_active IP Right Cessation
-
2003
- 2003-12-10 AT AT03812726T patent/ATE382080T1/de not_active IP Right Cessation
- 2003-12-10 DE DE60318330T patent/DE60318330T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2003-12-10 MX MXPA05004143A patent/MXPA05004143A/es active IP Right Grant
- 2003-12-10 BR BRPI0314900-5A patent/BRPI0314900B1/pt unknown
- 2003-12-10 DK DK03812726T patent/DK1572982T3/da active
- 2003-12-10 WO PCT/KR2003/002704 patent/WO2004053110A1/en active IP Right Grant
- 2003-12-10 JP JP2004558539A patent/JP4035135B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2003-12-10 RU RU2005111596/13A patent/RU2312137C2/ru active
- 2003-12-10 BR BR0314900-5A patent/BR0314900A/pt active IP Right Grant
- 2003-12-10 CN CNB200380101789XA patent/CN1277915C/zh not_active Expired - Lifetime
- 2003-12-10 US US10/531,971 patent/US7456010B2/en active Active
- 2003-12-10 EP EP03812726A patent/EP1572982B1/de not_active Expired - Lifetime
- 2003-12-10 AU AU2003302758A patent/AU2003302758A1/en not_active Abandoned
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| MXPA05004143A (es) | 2005-10-05 |
| US20060094084A1 (en) | 2006-05-04 |
| DK1572982T3 (da) | 2008-05-13 |
| EP1572982A4 (de) | 2005-12-21 |
| WO2004053110A1 (en) | 2004-06-24 |
| RU2005111596A (ru) | 2006-03-20 |
| KR20040051731A (ko) | 2004-06-19 |
| AU2003302758A1 (en) | 2004-06-30 |
| JP2006509505A (ja) | 2006-03-23 |
| EP1572982B1 (de) | 2007-12-26 |
| JP4035135B2 (ja) | 2008-01-16 |
| CN1705738A (zh) | 2005-12-07 |
| RU2312137C2 (ru) | 2007-12-10 |
| US7456010B2 (en) | 2008-11-25 |
| EP1572982A1 (de) | 2005-09-14 |
| BR0314900A (pt) | 2005-08-02 |
| ATE382080T1 (de) | 2008-01-15 |
| DE60318330D1 (de) | 2008-02-07 |
| BRPI0314900B1 (pt) | 2020-08-11 |
| CN1277915C (zh) | 2006-10-04 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DE102011088151A1 (de) | Mikroorganismus mit erhöhter L-Valin Produktivität und Verfahren zur Herstellung von L-Valin unter Verwendung desselben | |
| JPH03232497A (ja) | 発酵法によるｌ―グルタミンの製造方法 | |
| DE60129157T2 (de) | L-lysin produzierende mikroorganismen und verfahren zur herstellung von l-lysin unter deren verwendung | |
| EP1323831B1 (de) | Corynebakterien die 5'-xanthylsäure überproduzieren | |
| DE60318330T2 (de) | 5-XANTHYLSäURE PRODUZIERENDER MIKROORGANISMUS | |
| DE60307403T2 (de) | Bakterien und Verfahren zur Herstellung von Riboflavin durch Fermentation | |
| US7608435B2 (en) | Microorganism producing 5′-xanthylic acid | |
| KR100344017B1 (ko) | 5'-크산틸산을 생산하는 미생물 | |
| JP4177334B2 (ja) | ５’−キサンチル酸を生産する微生物 | |
| KR100344018B1 (ko) | 5'-크산틸산을 생산하는 미생물 | |
| DE2209078A1 (de) | Verfahren zur biotechnischen Herstellung von Ribosiden heterocyclischer organischer Basen | |
| DE2418365A1 (de) | Verfahren zur herstellung von l-arginin durch fermentierung | |
| DE1695325B2 (de) | Verfahren zur fermentativen herstellung von nicotinamidadenindinucleotid | |
| DE1570027C3 (de) | Verfahren zur fermentativen Herstellung von Flavin-adenin-dinucleotid | |
| DE1277856B (de) | Verfahren zur Herstellung von Uridylsaeure | |
| WO2006059877A1 (en) | Microorganism producing 5'-xanthylic acid and production method of 5'-xanthylic acid using the same | |
| DE1795356C3 (de) | Verfahren zur Hersteilung von Inosin und 5'-Guanosinmono-,di-undtriphosphorsäure auf fermentativem Wege | |
| DE1695325C3 (de) | Verfahren zur fermentativen Herstellung von Nicotinamidadenindinucleotid | |
| US4725541A (en) | Process for producing L-histidine by fermentation | |
| DE1517831C (de) | Verwendung von Fermentationsflussig keiten zur Gewinnung von Flavinadenindi nucleotid | |
| DE2037763C (de) | Verfahren zur biotechnischen Her Stellung von I Tryptophan | |
| DE1294310B (de) | Verfahren zur Herstellung von 5'-Inosinsaeure durch Zuechten von Mikroorganismen | |
| DE2044907A1 (en) | L-threonine, fermentation culture prepn | |
| DE1807622B (de) | Verfahren zur biotechnischen Herstellung von Inosin | |
| DE1517860A1 (de) | Verfahren zur Herstellung von 5'-Inosinsaeure |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| 8327 | Change in the person/name/address of the patent owner |
Owner name: CJ CHEILJEDANG CORP., SEOUL, KR |
|
| 8364 | No opposition during term of opposition |