DE60202954T2

DE60202954T2 - Tetrahydrochinolin-derivate zur behandlung von krankheiten ausgelöst durch zu hohem oder zu niedrigem oestrogenspiegel

Info

Publication number: DE60202954T2
Application number: DE60202954T
Authority: DE
Inventors: Brendan Owen WALLACE
Original assignee: Eli Lilly and Co
Current assignee: Eli Lilly and Co
Priority date: 2001-05-22
Filing date: 2002-05-09
Publication date: 2006-01-05
Anticipated expiration: 2022-05-10
Also published as: ES2236536T3; EP1401446A1; JP2004531559A; CA2444787A1; US6962928B2; EP1401446B1; WO2002094268A1; DK1401446T3; ATE288755T1; PT1401446E; DE60202954D1; US20040132770A1

Description

HINTERGRUND DER ERFINDUNG
Die vorliegende Erfindung betrifft die Verwendung von 2-substituierten 1,2,3,4-Tetrahydrochinolinen und Derivaten davon für die Herstellung eines Arzneimittels zur Hemmung von Krankheiten, die im Zusammenhang stehen mit einer Östrogendeprivation oder mit einer aberrierenden physiologischen Antwort auf endogenes Östrogen.
Die Menopause, der Übergang bei Frauen aus der reproduktiven in die nicht reproduktive Phase des Lebens, ist gekennzeichnet durch die Einstellung der Menstruation und tritt bei einem durchschnittlichen Alter von 50 Jahren auf. Der postmenopausale Zustand ist gekennzeichnet durch Veränderungen in den Konzentrationen oder Werten von zirkulierenden Geschlechtshormonen, wobei die deutlichste die Reduktion in den Plasmakonzentrationen oder Werfen von 17β-Östradiol auf weniger als 10% von prämenopausalen Werten oder Konzentrationen ist. Klinische und epidemiologische Untersuchungen zeigten, dass der postmenopausale Zustand ein wichtiger Risikofaktor ist für eine Anzahl von chronischen Störungen, besonders Osteoporose und kardiovaskuläre Erkrankungen. Im Hinblick auf die Tatsache, dass die gegenwärtige Lebensdauer von Frauen etwa 80 Jahre beträgt, verbringen Frauen etwa ein Drittel ihres Lebens in dem postmenopausalen Zustand. Dies bedeutet, dass das Potential für chronische Effekte des postmenopausalen Zustands auf die Gesundheit von Frauen heute größer ist als um die Jahrhundertwende, als die Lebenserwartung beträchtlich kürzer war.
Osteoporose beschreibt eine Gruppe von Krankheiten, die gekennzeichnet sind durch den Nettoverlust an Knochenmasse pro Volumeneinheit. Die Konsequenz dieses Verlustes an Knochenmasse und die daraus resultierende Knochenfraktur ist das Versagen des Skeletts, eine angemessene Strukturunterstützung für den Körper bereitzustellen. Das am meisten verletzliche Knochengewebe aufgrund der Effekte der postmenopausalen Osteoporose ist der Trabekelknochen. Dieses Gewebe wird oft als schwammig oder spongiosa bezeichnet und ist insbesondere konzentriert nahe den Enden des Knochens (in der Nähe der Gelenke) und in den Wirbeln des Rückgrats oder der Wirbelsäule. Das trabekuläre Gewebe ist gekennzeichnet durch kleine osteoide Strukturen, die untereinander verbunden sind sowie mit dem festeren und dichteren Kortikalgewebe, das die Außenoberfläche und den mittleren Schaft des Knochens ausmacht. Dieses untereinander verbundene Netzwerk von Trabekeln gibt der äußeren Kortikalstruktur seitlichen Halt oder seitliche Stütze und ist entscheidend für die biomechanische Stärke der Gesamtstruktur.
Als Folge der Einstellung der Menses verlieren die meisten Frauen von etwa 20% bis etwa 60% der Knochenmasse in dem trabekulären Teil des Knochens innerhalb von 3 bis 6 Jahren. Dieser rapide Verlust ist im Allgemeinen verbunden mit einer Zunahme der Knochenresorption und -bildung. Der resorptive Cyclus ist jedoch dominanter, und das Ergebnis ist ein Nettoverlust an Knochenmasse.
Bei der postmenopausalen Osteoporose ist es in erster Linie die Nettoresorption und der Nettoverlust der Trabekeln, was zum Versagen und Bruch von Knochen führt. Im Licht des Verlusts der Trabekeln bei postmenopausalen Frauen ist es nicht überraschend, dass die weit verbreiteten Frakturen solche sind, die im Zusammenhang stehen mit Knochen, die stark abhängig sind von der trabekulären Stützung, z.B. den Wirbeln, dem Hals und den das Gewicht tragenden Knochen, wie der Femur und der Unterarm. In der Tat sind eine Hüftfraktur, Colles Frakturen und Wirbelquetschungsfrakturen Kennzeichen von postmenopausaler Osteoporose.
Es wird geschätzt, dass es allein in den Vereinigten Staaten 25 Millionen Frauen gibt, die von dieser Erkrankung betroffen sind. Die Ergebnisse der Osteoporose sind persönlich schmerzvoll und auch Grund für großen wirtschaftlichen Verlust aufgrund ihrer Chronizität und des Bedarfs an umfangreicher und langfristiger Betreuung (Unterbringung im Krankenhaus und Pflege und Betreuung zu Hause). Dies gilt insbesondere bei älteren Patienten. Außerdem besteht, obwohl Osteoporose in der Regel nicht für einen lebensbedrohenden Zustand gehalten wird, eine 20%ige bis 30%ige Sterblichkeitsrate bezogen auf die Hüftfrakturen bei älteren Frauen. Ein großer prozentualer Anteil dieser Sterblichkeitsrate kann direkt in Verbindung gebracht werden mit postmenopausaler Osteoporose.
Derzeit ist eine allgemein akzeptierte Methode zur Behandlung von Störungen, die in dem postmenopausalen Zustand die Folge aus dem Abbau von Östrogenwerten sind, die Östrogenersatztherapie. Die Therapie kann die Form der Verabreichung von Östrogen allein in der so genannten widerstandslosen oder ungehinderten Östrogenersatztherapie (ERT) oder in Form einer gemeinsamen Verabreichung oder Coadministration von Östrogen und Progestin in einer so genannten hormonellen Ersatztherapie(HRT)-Kur einnehmen. Es gibt jedoch größere Schwierigkeiten oder Probleme oder Anfälligkeiten, die verbunden sind mit der chronischen Verabreichung von Östrogen bei postmenopausalen Frauen, die zu tun haben mit unerwünschten Nebenwirkungen auf die Brust und den Uterus. Frauen auf ERT entwickeln Endometriumkrebs in Verhältnissen, die drei- bis sechsmal höher sind als bei Nichtbenutzern nach 3 bis 6 Jahren der Verwendung; nach 10 Jahren der ERT ist das Risikoverhältnis auf das zehnfache angestiegen.
Um diese schädlichen Effekte der ERT zu bekämpfen, wird die gemeinsame Verabreichung oder gemischte Verabreichung von Progestin zusammen mit Östrogen bei einer kombinierten Hormonersatztherapie (HRT) eingesetzt, da Progestin wirkt, um die Uterusstimulation zu begrenzen und daher das Risiko von Uteruskrebs zu reduzieren.
Wegen dieser bekannten und verdächtigen oder gefürchteten Schwierigkeiten oder Probleme der Östrogentherapie war die Verschreibung von und Zustimmung der Patienten zu einer chronischen Östrogenersatztherapie gering. Es wurde geschätzt, dass in den Vereinigten Staaten unter postmenopausalen Frauen, denen eine ERT oder HRT vorgeschrieben wurde, weniger als 40% eine Therapie über 1 Jahr hinaus fortsetzten.
Als Folge gibt es einen Bedarf für die Entwicklung von Mitteln für die postmenopausale Therapie, die das ideale pharmakologische Profil besitzen: z.B. Mittel, welche die nützlichen Effekte oder Wirkungen von Östrogen auf das Skelettgewebe und das kardiovaskuläre System erzeugen ohne die unerwünschten Nebenwirkungen von Östrogen auf die Brust und den Uterus hervorzurufen. Mittel, die ein solches Östrogenprofil besitzen, würden die Wirkungen des Östrogenmangels in bestimmten Geweben umkehren, während sie gleichzeitig umgehen oder versagen in Geweben zu wirken, in denen Östrogen unerwünschte Nebenwirkungen erzeugt. Der Begriff selektive Östrogenrezeptor-Modulatoren oder „SERM" wurde auf solche Verbindungen angewendet, die dieses selektive Gewebeprofil besitzen. SERM sind definiert als Verbindungen, die Östrogenagonismus in ein oder mehr gewünschten Zielgeweben, wie Knochen, Leber, etc., erzeugen, zusammen mit Östrogenantagonismus und/oder minimalem (das heißt klinisch bedeutungslosem) Agonismus in reproduktiven Geweben, wie der Brust oder dem Uterus.
KURZE ZUSAMMENFASSUNG DER ERFINDUNG
Die vorliegende Erfindung stellt die Verwendung einer therapeutisch wirksamen Menge einer Verbindung bereit der Formel
worin
R¹ steht für -H, -OH, -O(C₁-C₄-Alkyl), -OCOC₆H₅, -OCO(C₁-C₆-Alkyl) oder -OSO₂(C₂-C₆-Alkyl);
R² und R³ jeweils unabhängig voneinander stehen für -H, -OH, -O(C₁-C₄-Alkyl), -OCOC₆H₅, -OCO(C₁-C₆-Alkyl), -OSO₂(C₂-C₆-Alkyl) oder Halogen;
R⁴ steht für 1-Piperidinyl, 1-Pyrrolidinyl, Methyl-1-pyrrolidinyl, Dimethyl-1-pyrrolidinyl, 4-Morpholino, Dimethylamino, Diethylamino, Diisopropylamino oder 1-Hexamethylenimino;
n steht für 1, 2 oder 3;
oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes davon bei der Herstellung eines Arzneimittels zur Hemmung von Krankheiten, die im Zusammenhang stehen mit einer Östrogendeprivation.
Bei einer weiteren Ausführungsform oder alternativen Ausführungsform der medizinischen Verwendung der vorliegenden Erfindung werden die Verbindungen der vorliegenden Erfindung eingesetzt bei der Herstellung von einem Arzneimittel für die Behandlung von Krankheitszuständen, die verbunden sind mit einer aberrierenden physiologischen Antwort auf endogenes Östrogen, einschließlich einer Uterusfibroseerkrankung oder Uterusfibrose, Endometriose und von Östrogen abhängigen Krebsen.
DETAILLIERTE BESCHREIBUNG DER ERFINDUNG
Die in der Beschreibung der hierin beschriebenen Verbindungen verwendeten allgemeinen Begriffe haben ihre üblichen Bedeutungen. Z.B. bezieht sich „C₁-C₆-Alkyl" auf gerade oder verzweigte aliphatische Ketten mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen, die Reste einschließen, wie Methyl, Ethyl, Propyl, Isopropyl, Butyl, n-Butyl, Pentyl, Isopentyl, Hexyl, Isohexyl und dergleichen. Gleichermaßen bezieht sich „C₁-C₄-Alkyl" auf gerade oder verzweigte aliphatische Ketten mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, die Reste einschließen, wie Methyl, Ethyl, Propyl, Isopropyl, Butyl, n-Butyl und dergleichen. Auf die gleiche Weise bezieht sich der Begriff „C₁-C₄-Alkoxy" auf eine C₁-C₄-Alkylgruppe, die durch ein Sauerstoffatom gebunden ist und Reste einschließt, wie z.B. Methoxy, Ethoxy, n-Propoxy, Isopropoxy und dergleichen.
Der Begriff „Halogen" bezieht sich auf Brom, Chlor, Fluor und Iod.
Wie in dieser Beschreibung verwendet, bezieht sich der Begriff „Stereoisomer" auf eine Verbindung, die aus den gleichen Atomen aufgebaut ist, die durch die gleichen Bindungen gebunden sind, aber verschiedene dreidimensionale Strukturen aufweisen, die nicht untereinander austauschbar sind. Die dreidimensionalen Strukturen werden Konfigurationen genannt. Wie hierin verwendet, bezieht sich der Begriff „Enantiomer" auf zwei Stereoisomere, deren Moleküle, die sich nicht zur Deckung bringende oder überlagerbare Spiegelbilder voneinander darstellen. Der Begriff „chirales Zentrum" bezieht sich auf ein Kohlenstoffatom, an das vier verschiedene Gruppen befestigt sind. Wie hierin verwendet, bezieht sich der Begriff „Diastereomere" auf Stereoisomere, die keine Enantiomere sind. Außerdem werden zwei Diastereomere, die eine verschiedene Konfiguration nur an einem chiralen Zentrum aufweisen, hierin als „Epimere" bezeichnet. Die Begriffe "Racemat", „racemisches Gemisch" oder „racemische Modifikation" beziehen sich auf ein Gemisch von gleichen Teilen von Enantiomeren.
Der Begriff „enantiomere Anreicherung", wie er hierin verwendet wird, bezieht sich auf die Erhöhung der Menge von einem Enantiomer verglichen zu dem anderen. Ein geeignetes Verfahren, um die enantiomere Anreicherung auszudrücken, die erreicht wird, ist das Konzept des enantiomeren Überschusses oder „ee" (enantiomeric excess), der gefunden wird unter Verwendung der folgenden Gleichung:
worin E¹ für die Menge des ersten Enantiomers und E² für die Menge des zweiten Enantiomers steht. Wenn das Anfangverhältnis der zwei Enantiomere 50:50 ist, wie es in einem racemischen Gemisch vorliegt, und eine enantiomere Anreichung erreicht wird, die ausreicht, um ein Endverhältnis von 70:30 zu erzeugen, ist der ee in Bezug auf das erste Enantiomer daher 40%. Wenn das Endverhältnis 90:10 beträgt, ist der ee in Bezug auf das erste Enantiomer jedoch 80%. Ein ee von größer als 90% ist bevorzugt, ein ee von größer als 95% ist besonders bevorzugt, und ein ee von größer als 99% ist ganz besonders bevorzugt. Die enantiomere Anreicherung wird leicht bestimmt durch Leute vom Fach unter Verwendung von Standardtechniken und Verfahren, wie Gas- oder Hochleistungsflüssigchromatographie mit einer chiralen Säule. Die Auswahl der geeigneten chiralen Säule, Elutionsmittel und notwendigen Bedingungen, um eine Trennung des enantiomeren Paars zu bewirken, ist innerhalb des Wissens eines Fachmanns. Außerdem können die speziellen Stereoisomere und Enantiomere der Verbindungen der Formel I von einem Fachmann hergestellt werden unter Verwendung der gut bekannten Techniken und Verfahren, wie solchen, die offenbart sind von J. Jacques et al., „Enantiomers, Racemates, and Resolutions", John Wiley and Sons, Inc., 1981, und E. L. Eliel und S. H. Wilen, „Stereochemistry of Organic Compounds", (Wiley-Interscience 1994), und in der europäische Patentanmeldung EP 0 838 448 A , veröffentlicht am 29. April 1998. Beispiele von Racemattrennungen schließen Umkristallisationstechniken oder chirale Chromatographie ein.
Einige der Verbindungen der vorliegenden Erfindung weisen ein oder mehr chirale Zentren auf und können in einer Vielzahl von stereoisomeren Konfigurationen vorliegen. Als eine Folge dieser chiralen Zentren treten die Verbindungen der vorliegenden Erfindung als Racemate, Gemische von Enantiomeren und als einzelne Enantiomere sowie Diastereomere und Gemische von Diastereomeren vor. Alle solchen Racemate, Enantiomere und Diastereomere liegen im Schutzbereich der vorliegenden Erfindung.
Die Begriffe „R" und „S" werden hierin wie üblich in der organischen Chemie verwendet, um die spezielle Konfiguration von einem chiralen Zentrum anzugeben. Der Begriff „R" (Rectus) bezieht sich auf die Konfiguration eines chiralen Zentrums mit einer Beziehung von Gruppenprioritäten (höchste bis zweitniedrigste) im Uhrzeigersinn, wenn in Richtung der Bindung geblickt wird, die auf die Gruppe der niedrigs ten Priorität weist. Der Begriff „S" (Sinister) bezieht sich auf die Konfiguration eines chiralen Zentrums mit einer Beziehung der Gruppenprioritäten (höchste bis zweitniedrigste) gegen den Uhrzeigersinn, wenn entlang der Bindung auf die Gruppe mit der niedrigsten Priorität geblickt wird. Die Priorität der Gruppen basiert auf ihren Ordnungszahlen (in der Reihenfolge der abnehmenden Ordnungszahl). Eine Teilliste von Prioritäten und einer Diskussion über Stereochemie ist enthalten in „Nomenclature of Organic Compounds: Principles and Practice" (J. H. Fletcher et al., Hrsg., 1974) auf den Seiten 103 bis 120.
Die Angabe „
" bezieht sich auf eine Bindung, die nach vorne aus der Seiten- oder Papierebene hervorragt.
Die Angabe „
" bezieht sich auf eine Bindung, die nach hinten aus der Papierebene wegragt. Die Angabe „
" bezieht sich auf eine Bindung, wobei die Stereochemie nicht definiert ist.
Wie hierin verwendet, schließt der Begriff „Östrogen" Steroidverbindungen ein, die östrogene Aktivität aufweisen, wie z.B. 17β-Östradiol, Östron, konjugiertes Östrogen (Premarin^®), equines Östrogen (Pferdeöstrogen), 17a-Ethinylöstradiol und dergleichen. Wie hierin verwendet, schließt der Begriff „Progestin" Verbindungen ein, die Aktivität als Progestativa zeigen, wie z.B. Progesteron, Norethylnodrel, Nongestrel, Megestrolacetat, Norethindron und dergleichen.
Bevorzugte Verbindungen dieser Erfindung schließen Verbindungen der Formel I ein, worin R⁴ für 1-Pyrrolidinyl oder 1-Piperidinyl steht. Eine weitere bevorzugte Unterklasse der bevorzugten 1-Pyrrolidinyl- oder 1-Piperidinylverbindungen schließen solche Verbindungen ein, worin R¹, R² und R³ jeweils unabhängig stehen für -H, -OH oder -OCH₃.
Besonders bevorzugte Verbindungen der Formel 1 schließen solche ein, die alle oben genannten Beschränkungen aufweisen, das heißt Verbindungen, worin R¹, R² und R³ jeweils unabhängig stehen für -H, -OH oder -OCH₃, insbesondere worin R¹ und R² für -OH stehen und R³ für -H steht, oder worin R¹ und R³ für -OH stehen und R² für -H steht; R⁴ für 1-Pyrrolidinyl oder 1-Piperidinyl steht; und n für 2 steht.
Obwohl die Verbindungen der Formel I in Form der freien Base oder Säureformen in der vorliegenden Erfindung verwendet werden können, ist es bevorzugt, eine pharmazeutisch annehmbare Salzform herzustellen und zu verwenden. Daher bilden die bei dieser Erfindung verwendeten Verbindungen pharmazeutisch annehmbare Säure- oder Basenadditionssalze mit einer großen Verschiedenheit von organischen und anorganischen Säuren und Basen und schließen die physiologisch annehmbaren Salze ein, die oft in der pharmazeutischen Chemie verwendet werden. Solche Salze sind auch Teil dieser Erfindung. Typische anorganische Säuren, die verwendet werden, um solche Salze zu bilden, schließen Chlorwasserstoff-, Bromwasserstoff-, Iodwasserstoff-, Salpeter-, Schwefel-, Phosphor-, Hypophosphorsäure und dergleichen ein. Salze, die abgeleitet sind aus organischen Säuren, wie aliphatischen Mono- und Dicarbonsäuren, durch Phenyl substituierten Alkansäuren, Hydroxyalkan- und Hydroxyalkandisäuren, aromatischen Säuren, aliphatischen und aromatischen Sulfonsäuren, können auch verwendet werden. Solche pharmazeutisch annehmbare Salze schließen daher Acetat, Phenylacetat, Trifluoracetat, Acrylat, Ascorbat, Benzoat, Chlorbenzoat, Dinitrobenzoat, Hydroxybenzoat, Methoxybenzoat, Methylbenzoat, o-Acetoxybenzoat, Naphthalin-2-benzoat, Bromid, Isobutyrat, Phenylbutyrat, b-Hydroxybutyrat, Butin-1,4-dioat, Hexin-1,4-dioat, Caprat, Caprylat, Chlorid, Cinnamat, Citrat, Formiat, Fumarat, Glykolat, Heptanoat, Hippurat, Lactat, Malat, Maleat, Hydroxymaleat, Malonat, Mandelat, Mesylat, Nicotinat, Isonicotinat, Nitrat, Oxalat, Phthalat, Terephthalat, Phosphat, Monohydrogenphosphat, Dihydrogenphosphat, Metaphosphat, Pyrophosphat, Propiolat, Propionat, Phenylpropionat, Salicylat, Sebacat, Succinat, Suberat, Sulfat, Bisulfat, Pyrosulfat, Sulfit, Bisulfit, Sulfonat, Benzolsulfonat, p-Bromphenylsulfonat, Chlorbenzolsulfonat, Ethansulfonat, 2-Hydroxyethansulfonat, Methansulfonat, Naphthaline-1-sulfonat, Naphthalin-2-sulfonat, p-Toluolsulfonat, Xylolsulfonat, Tartrat, und dergleichen ein. Bevorzugte Salze sind die Hydrochlorid- und Oxalatsalze.
Typische Basen, die verwendet werden, um pharmazeutisch annehmbare Additionssalze zu bilden, sind anorganische Basen, wie Natriumhydroxid, Kaliumhydroxid, Alkalicarbonate oder -bicarbonate, Calciumcarbonat, Magnesiumcarbonat und dergleichen. Außerdem können organische Basen eingesetzt werden, um Additionssalze zu bilden, z.B. Alkylamine, wie Triethylamin, Dimethylamin, i-Propylamin und dergleichen.
Die pharmazeutisch annehmbaren Säure- oder Basenadditionssalze werden typischerweise gebildet durch Umsetzen einer Verbindung der Formel I mit einer äquimolaren oder Überschussmenge von Säure oder Base. Die Reaktanden werden im Allgemeinen in einem gemeinsamen Lösemittel kombiniert, wie Diethylether oder Ethylacetat. Das Salz kristallisiert normalerweise aus der Lösung aus innerhalb von etwa 1 h bis 10 Tagen und kann durch Filtration isoliert werden, oder das Lösemittel kann durch herkömmliche Mittel abgestreift werden.
Spezielle Beispiele der Verbindungen, die unter den Schutzbereich der Verbindungen der Formel I fallen, schließen die folgenden Verbindungen und ihre pharmazeutisch annehmbaren Salze ein, sind aber nicht darauf beschränkt:
1-(4-Hydroxyphenyl)-1-[4-(2-piperidin-1-ylethoxy)phenyl]-1,2,3,4-tetrahydrochinolin-6-ol;
1-(4-Hydroxyphenyl)-1-[4-(2-pyrrolidin-1-ylethoxy)phenyl]-1,2,3,4-tetrahydrochinolin-6-ol;
1-(3-Hydroxyphenyl)-1-[4-(2-piperidin-1-ylethoxy)phenyl]-1,2,3,4-tetrahydrochinolin-6-ol;
1-(3-Hydroxyphenyl)-1-[4-(2-pyrrolidin-1-ylethoxy)phenyl]-1, 2,3,4-tetrahydrochinolin-6-ol;
1-(4-Hydroxyphenyl)-1-[4-(2-piperidin-1-ylethoxy)phenyl]-1,2,3,4-tetrahydrochinolin-6-ol;
1-(4-Hydroxyphenyl)-1-[4-(2-pyrrolidin-1-ylpropoxy)phenyl]-1,2,3,4-tetrahydrochinolin-6-ol;
1-(3-Hydroxyphenyl)-1-[4-(2-piperidin-1-ylpropoxy)phenyl]-1,2,3,4-tetrahydrochinolin-6-ol;
6-Methoxy-2-(4-methoxyphenyl)-1-[4-(2-piperidin-1-ylethoxy)phenyl]-1,2,3,4-tetrahydrochinolin;
6-Methoxy-2-(4-methoxyphenyl)-1-[4-(2-pyrrolidin-1-ylethoxy)phenyl]-1,2,3,4-tetrahydrochinolin;
6-Methoxy-2-(3-methoxyphenyl)-1-[4-(2-piperidin-1-ylethoxy)phenyl]-1,2,3,4-tetrahydrochinolin;
6-Methoxy-2-(3-methoxyphenyl)-1-[4-(2-pyrrolidin-1-ylethoxy)phenyl]-1,2,3,4-tetrahydrochinolin;
6-Methoxy-2-(4-methoxyphenyl)-1-[4-(2-piperidin-1-ylpropoxy)phenyl]-1,2,3,4-tetrahydrochinolin; und
6-Methoxy-2-(4-methoxyphenyl)-1-[4-(2-pyrrolidin-1-ylpropoxy)phenyl]-1,2,3,4-tetrahydrochinolin.
Die Verbindungen der Formel (I) können hergestellt werden durch Anwendung von Verfahren und Techniken, die gut bekannt und anerkannt sind bei den Fachleuten. Z.B. werden einige der Verbindungen der Formel (I) offenbart in dem US-Patent US 3 994 902 A , das durch Bezugnahme in diese Beschreibung einverleibt ist, als wenn es selbst beschrieben ist. Alternativ ist ein allgemeines Syntheseschema zur Herstellung der Verbindungen der Formel (I) im Schema A gezeigt, worin alle Substituenten, sofern es nicht anders angegeben ist, so wie zuvor definiert sind.
SCHEMA A
Im Schema A stehen R^1a, R^2a und R^3a jeweils unabhängig für -H, -OH oder -OPg, wobei Pg für eine Hydroxyschutzgruppe steht, und A für eine geeignete Aktivierungsgruppe steht, die unten weiter definiert ist. In den Verbindungen der Formel (1a), (1b), (2), (3) und den folgenden stehen die Pg-Schutzgruppen R^1a, R^2a und R^3a für phenolische Schutzgruppen von dem Typ, der gelehrt wird von T. Greene et al. in Kapitel 3 von „Protective Groups in Organic Synthesis," 2. Ausgabe, John Wiley & Sons, Inc., New York, 1991, Seiten 143 bis 170. Die bevorzugten Schutzgruppen sind Alkylethergruppen, wobei Methyl besonders bevorzugt ist.
Im Schema A, Stufe 1, kann das 2-Phenylchinolin der Formel (2) hergestellt werden entweder durch Umsetzen von R^1a-substituiertem Chinolin der Formel (1a) mit einem R^2a-, R^3a-substituierten Phenyllithium oder R^1a-substituiertem Chinolin-N-oxid (1b) mit einem R^2a,R^3a-substituierten Phenylmagnesiumhalogenid unter Grignard-Bedingungen. Die Grignard-Reaktion und die Reaktionen oder Umsetzungen unter Verwendung lithiumorganischer Verbindungen sind von dem Typ, der gelehrt wird von Gilman et al., J. Am. Chem. Soc. 68, 2017 (1946); Gilman und Gainer, J. Am. Chem. Soc. 69, 887 (1947); und D. L. Comins, J. D. Brown, Tetrahedron Lett. 27, 4549 (1986).
Z.B. wird das R^1a-substituierte Chinolin-N-oxid (1b) mit Methylchlorformiat bei einer Temperatur im Bereich von etwa –90°C bis etwa –50°C, besonders bevorzugt etwa –78°C, umgesetzt. Die Reaktion oder Umsetzung wird typischerweise durchgeführt unter wasserfreien Bedingungen in einem geeigneten aprotischen organischen Lösemittel, wie wasserfreiem Tetrahydrofuran. Das R^1a-substituierte Chinolin-N-oxid (1b) und das Methylchlorformiat liegen vorzugsweise in der Reaktionszone in einer etwa äquimolaren Menge vor. Ein geringer Überschuss von einem Reaktanden ist nicht schädlich für die Umsetzung. Man lässt die Umsetzung über einen Zeitraum fortschreiten, der im Bereich liegt von etwa 20 min bis etwa 5 h. Eine im Wesentlichen äquimolare Menge von R^2a,R^3a-substituiertem Phenylmagnesiumhalogenid wird dann zugegeben. Die Umsetzung wird dann gestoppt mit einer Protonenquelle, wie z.B. Natriumbicarbonat oder Methanol. Das Lösemittel wird entfernt, und das erhaltene Gemisch wird extrahiert, konzentriert und gemäß den im Stand der Technik bekannten Techniken gereinigt.
Geeignete R^1a-substituierte Chinoline der Formel (1a) und geeignete R^1a-substituierte Chinolin-N-oxide (1b) sind kommerziell erhältlich oder werden hergestellt nach Techniken oder Verfahren, die in der Technik gut bekannt sind.
Ferner sind geeignete R^2a,R^3a-substituierte Phenyllithiumverbindungen und R^2a,R^3a-substituierte Phenylmagnesiumhalogenide kommerziell erhältlich oder werden nach im Stand der Technik gut bekannten Techniken hergestellt. Z.B. wird eine Lösung von dem geeigneten R^2a,R^3a-substituierten Phenyl mit einer lithiumorganischen Verbindung, wie n-Butyllithium oder tert.-Butyllithium, besonders bevorzugt tert.-Butyllithium, über einen Zeitraum, der im Bereich von 5 min bis 30 min liegt und besonders bevorzugt etwa 15 min beträgt, bei einer Temperatur, die im Bereich liegt von etwa –90°C bis etwa –50°C, besonders bevorzugt –78°C, umgesetzt. Die lithiumorganische Verbindung wird in der Menge von etwa 1,0 bis 1,1 Äquivalente für jedes Mol von R^2a,R^3a-substituiertem eingesetztem Phenyl vorliegen, und wird vorzugsweise in einer etwa äquimolaren Menge vorliegen. Die Reaktion oder Umsetzung wird typischerweise unter wasserfreien Bedingungen durchgeführt in einem geeigneten aprotischen organischen Lösemittel, wie Tetrahydrofuran.
Im Schema A, Stufe 2, wird das 2-Phenyl-1,2,3,4-tetrahydrochinolin der Formel (3) hergestellt durch Reduktion des 2-Phenylchinolins der Formel (2). Z.B. wird 2-Phenylchinolin der Formel (2) in einem geeigneten alkoholischen Lösemittel, wie absolutem Ethanol, gelöst. Natriummetall wird dann zugegeben, und das Reaktionsgemisch lässt man auf Raumtemperatur kühlen. Das Reaktionsgemisch kann dann verdünnt werden mit Wasser und extrahiert werden mit einem geeigneten organischen Lösemittel, wie Methylenchlorid, Ethylacetat oder Chloroform. Die vereinigten Extrakte können dann gewaschen werden mit Wasser und Salzlösung, die organische Phase wird abgetrennt und getrocknet, und das Lö semittel wird im Vakuum verdampft, um das 2-Phenyl-1,2,3,4-tetrahydrochinolin der Formel (3) bereitzustellen, das ohne weitere Reinigung verwendet werden kann.
Alternativ kann die Reduktion des 2-Phenylchinolins der Formel (2) erreicht werden unter Verwendung von Natriumborhydrid in Ethanol mit einem Nickelchloridkatalysator nach einem Verfahren, das analog beschrieben wird von Nose und Kudo, Chem. Pharm. Bull. 36, 1529 (1988).
Im Schema A, Stufe 3, kann das 1,2-disubstituierte 1,2,3,4-Tetrahydrochinolin der Formel (5) hergestellt werden durch Arylierung des 2-Phenyl-1,2,3,4-tetrahydrochinolins der Formel (3) mit dem substituierten Benzoylderivat der Formel (4).
Z.B. kann das 2-disubstituierte 1,2,3,4-Tetrahydrochinolin der Formel (5) hergestellt werden durch Arylierung des 2-Phenyl-1,2,3,4-tetrahydrochinolins der Formel (3) mit dem substituierten Halogenidderivat der Formel (4) gemäß den Verfahren, die gezeigt sind in J. F. Hartwig et al., "Room Temperature Palladium-Catalyzed Amination of Aryl Bromides and Chlorides and Extended Scope of Aromatic Bond Formation with a Commercial Ligand", J. Org. Chem. 64, 5575 bis 5580 (1999).
Geeignete Verbindungen der Formel (4) können hergestellt werden, wie beschrieben und analog gezeigt in der internationalen PCT-Anmeldung mit der Veröffentlichungsnummer WO 98 48 793 A, veröffentlicht am 05. November 1998, deren Offenbarung hierin durch Bezugnahme einverleibt wird.
In den Verbindungen der Formel (4) wird die aktivierende Gruppe A ausgewählt aus Gruppen, die in der Technik gut bekannt sind, um aromatische Verbindungen zu aktivieren für die Zwecke der Ausführung von Kupplungsreaktionen und schließen Halogenide, wie Chlorid, Bromid oder Iodid, ein.
Wenn eine -OC(O)(C₁-C₆-Alkyl)- oder -OC(O)C₆H₅-Gruppe gewünscht ist an R¹, R², und/oder R³, wird eine Mono-, Di- oder Trihydroxyverbindung der Formel I umgesetzt mit einem Mittel, wie Acylchlorid, -bromid, -cyanid oder -azid, oder mit einem geeigneten Anhydrid oder einem gemischten Anhydrid. Die Umsetzungen werden geeigneterweise ausgeführt in einem basischen Lösemittel, wie Pyridin, Lutidin, Chinolin oder Isochinolin, oder in einem tertiären Aminlösemittel, wie Triethylamin, Tributylamin, Methylpiperidin und dergleichen. Die Umsetzung kann auch ausgeführt werden in einem inerten Lösemittel, wie Ethylacetat, Dimethylformamid, Dimethylsulfoxid, Dioxan, Dimethoxyethan, Acetonitril, Aceton, Methylethylketon und dergleichen, dem mindestens ein Äquivalent von einem Säurefänger, wie einem tertiären Amin, zugegeben worden ist. Wenn es gewünscht wird, können Acylierungskatalysatoren, wie 4-Dimethylaminopyridin oder 4-Pyrrolidinopyridin, verwendet werden. Siehe z.B. Haslam et al., Tetrahedron, 36: 2409 bis 2433 (1980).
Die Acylierungsumsetzungen oder -reaktionen, welche die zuvor genannten R¹-R²- und/oder R³-Gruppen bereitstellen, werden bei moderaten Temperaturen ausgeführt im Bereich von etwa –25°C bis etwa 100°C, häufig unter einer inerten Atmosphäre, wie Stickstoffgas. Umgebungstemperatur ist in der Regel jedoch ausreichend für die Umsetzung.
Solche Acylierungen der Hydroxygruppe können auch ausgeführt werden durch säurekatalysierte Umsetzungen der entsprechenden Carbonsäuren in inerten organischen Lösemitteln oder pur. Säurekatalysatoren, wie Schwefelsäure, Polyphosphorsäure, Methansulfonsäure und dergleichen, werden verwendet.
Die zuvor genannten R¹-, R²- und/oder R³-Gruppen können auch bereitgestellt werden durch Bildung eines aktiven Esters der entsprechenden Säure, wie den Estern, die gebildet werden durch bekann te Reagenzien, wie Dicyclohexylcarbodiimid, Acylimidazole, Nitrophenole, Pentachlorphenol, N-Hydroxysuccinimid und 1-Hydroxybenzotriazol. Siehe z.B. Bull. Chem. Soc. Japan, 38: 1979 (1965), und Chem. Ber., 788 und 2024 (1970).
Wenn eine Verbindung gewünscht wird, in der R¹, R² und/oder R³ für -OSO₂(C₄-C₆-Alkyl) stehen, wird die geeignete Ausgangsmono-, -di- oder -trihydroxyverbindung umgesetzt mit z.B. einem Derivat der entsprechenden Sulfonsäure, wie einem Sulfonylchlorid, -bromid- oder Sulfonylammoniumsalz, wie gelehrt von King und Monoir, J. Am. Chem. Soc., 97: 2566 bis 2567 (1975). Die Mono-, Di- oder Trihydroxyverbindung kann auch umgesetzt werden mit dem geeigneten Sulfonsäureanhydrid. Solche Umsetzungen werden ausgeführt unter Bedingungen, wie sie oben erklärt werden in der Diskussion der Umsetzung mit Acylhalogeniden und dergleichen.
Verbindungen der Formel I können hergestellt werden, sodass R¹, R² und/oder R³ für verschiedene biologische Schutzgruppen stehen oder vorzugsweise die gleiche biologische Schutzgruppe. Bevorzugte Schutzgruppen schließen -CH₃, -C(O)C(CH₃)₃, -C(O)C₆H₅ und -SO₂(CH₂)₃CH₃ ein.
BEISPIELE
Alle Umsetzungen werden unter einer Stickstoffatmosphäre ausgeführt. Alle Lösemittel sind von ACS-Qualität (ACS grade) und werden wie bereitgestellt verwendet. Alle Reagenzien sind kommerziell erhältlich und werden ohne weitere Reinigung verwendet, sofern es nicht anders angegeben ist. LCMS-Daten werden aufgezeichnet bei 35°C auf einem Hewlett Packard 1100 Serie. Das verwendete Verfahren ist 5% Acetonitril – 95% Wasser (0,05% TFA) bis 95% Acetonitril – 5% Wasser (0,05% TFA) über einen Zeitraum von 2 min und wird 3 min lang gehalten auf einer Waters Symmetry C18 2,1 50 mm Säufe. ¹H NMR-Spektren werden bei 400 MHz aufgezeichnet auf einem Varian 400 Spektrometer in CDCl₃ (δ 7,26), sofern es nicht anders angegeben ist.
Präparation 1 6-Methoxy-2-(4-methoxyphenyl)chinolin
Ein 500 ml Rundkolben wird beladen mit 6-Methoxychinolin-N-oxid (8 g, 0,04566 mol) und unter Stickstoff gesetzt. Der Feststoff wird dann gelöst in wasserfreiem THF (100 ml) und auf –78°C mit einem Trockeneis-/Acetonbad gekühlt, woraufhin etwas des gelösten Feststoffs beginnt zu kristallisieren. Aus einem Tropftrichter wird Methylchlorformiat (4,4 ml, 0,05694 mol) tropfenweise zugegeben. Das Bad wird 10 min nach der Zugabe entfernt und nach 20 min ersetzt. Eine tropfenweise Zugabe von 0,5 M Anisylmagnesiumbromid (112 ml, 0,0560 mol) wird dann durchgeführt. Das Bad wird nach der Zugabe entfernt, und das Reaktionsgemisch lässt man auf Raumtemperatur erwärmen. Die Reaktion wird gelöscht oder gequenscht mit 5% Natriumbicarbonatlösung. Das THF wird im Vakuum entfernt, und das erhaltene Gemisch wird mit Wasser verdünnt und mit Methylenchlorid extrahiert. Die Extrakte werden gesammelt und mit wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und konzentriert. Das rohe Produkt wird durch Flashchromatographie (2 bis 5% EtOAc/Dichlormethan) gereinigt, um 6,30 g (52%) des gewünschten Produkts zu ergeben. ¹H NMR: δ 8,03–8,11 (m, 4H), 7,78 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,37 (dd, J = 9 Hz, 3 Hz, 1H), 7,03–7,07 (m, 3H), 3,94 (s, 1H), 3,88 (s, 1H), LCMS: 2,188 min, 266 (M+).
Präparation 2 6-Methoxy-2-phenylchinolin
6-Methoxy-2-phenylchinolin wird auf eine Art und Weise hergestellt, die analog ist zu der von der Präparation 1 unter Verwendung von Phenylmagnesiumbromid. ¹H NMR: δ 8,07–8,15 (m, 4H), 7,84 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,50–7,54 (m, 2H), 7,42–7,46 (m, 1H), 7,39 (dd, J = 9 Hz, 3 Hz, 1H), 7,10 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 3,95 (s, 3H).
Präparation 3 6-Methoxy-2-(4-methoxyphenyl)-1,2,3,4-tetrahydrochinolin
Ein 500 ml Rundkolben wird mit der Verbindung der Präparation 1 (3 g, 0,01131 mol) und absolutem Ethanol (150 ml) beladen. Das Gemisch wird unter Stickstoff gesetzt und zum Rückfluss gebracht. Natriummetallpellets oder -stückchen werden periodisch zugegeben bis kein Ausgangsmaterial nach DC (30% EtOAc/Hexan) verbleibt. Das Reaktionsgemisch wird auf Raumtemperatur gekühlt, mit Wasser verdünnt und mit Methylenchlorid extrahiert. Die vereinigten Extrakte werden dann mit Wasser und Salzlösung gewaschen. Die organischen Bestandteile werden abgetrennt und mit wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet. Das Lösemittel wird im Vakuum entfernt, um 3,05 g (100%) eines goldenen Öls zu ergeben. Keine Reinigung ist notwendig. ¹H NMR: δ 7,32 (etwa d, J = 8,4 Hz, 2H), 6,89 (etwa d, J = 8,8 Hz, 2H), 6,61–6,65 (m, 2H), 6,49 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 4,31 (dd, J = 10 Hz, 2,8 Hz, 1H), 3,81 (s, 3H), 3,75 (s, 3H), 2,90–2,99 (m, 1H), 2,73 (dt, J = 16,4 Hz, 4,6 Hz, 1H), 2,04–2,10 (m, 1H), 1,91–2,01 (m, 1H).
Präparation 4 6-Methoxy-2-phenyl-1,2,3,4-tetrahydrochinolin
6-Methoxy-2-phenyl-1,2,3,4-tetrahydrochinolin wird hergestellt in einer Art und Weise, die analog ist zu der von der Präparation 3 unter Verwendung von 6-Methoxy-2-phenylchinolin. ¹H NMR: δ 7,28–7,43 (m, 5H), 6,63–6,67 (m, 2H), 6,52 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 4,38 (dd, J = 9,0 Hz, 3,0 Hz, 1H), 3,76 (s, 3H), 2,91–3,00 (m, 1H), 2,74 (dt, J = 16,8 Hz, 4,6 Hz, 1H), 2,09–2,15 (m, 1H), 1,95–2,05 (m, 1H).
Präparation 5 6-Methoxy-2-(3-methoxyphenyl)chinolin
Zu einer Lösung von 6-Methoxychinolin-N-oxid (175 mg, 1,0 mmol) in THF (3 ml) wird bei Raumtemperatur Methylchlorformiat (77 μl, 1,0 mmol) zugegeben. Das Gemisch wird auf 0°C gekühlt, und 3-Methoxyphenylmagnesiumbromid (2 ml von 1 M, 2 mmol) wird tropfenweise zugegeben. Das Gemisch wird 16 h lang gerührt, während auf Raumtemperatur erwärmt wird. Das Lösemittel wird im Vakuum entfernt, und der erhaltene Rückstand wird zwischen Wasser und CH₂Cl₂ verteilt. Die organische Phase wird mit Wasser und Salzlösung gewaschen, über MgSO₄ getrocknet, filtriert und konzentriert. Flashchromatographie (0 bis 20% EtOAc/Hexan) ergibt als Ausbeute 6-Methoxy-2-(3-methoxyphenyl)chinolin (123 mg, 46% Ausbeute).
¹H NMR: δ 3,90 (s, 3H), 3,92 (s, 3H), 6,97 (etwa d, 1H), 7,08 (s, 2H), 7,38 (m, 2H), 7,65 (d, 1H), 7,71 (etwa s, 1H), 7,81 (d, 1H), 8,10 (m, 2H).
Präparation 6 6-Methoxy-2-(3-methoxyphenyl)-1,2,3,4-tetrahydrochinolin
Zu einer gerührten Lösung von 6-Methoxy-2-(3-methoxyphenyl)chinolin (96 mg, 0,36 mmol) in EtOH (3 ml) wird bei 0°C NiCl₂·6H₂O (86 mg, 0,36 mmol) zugegeben. Das Reaktionsgemisch wird 30 min lang gerührt vor der Zugabe von NaBH₄ (55 mg, 1,45 mmol). Das Gemisch wird 16 h lang gerührt während einem Erwärmen auf Raumtemperatur. Eine zusätzliche Portion von NaBH₄ (50 mg) wird dann zugegeben, und das Rühren wird 3 h lang fortgesetzt. Das Lösemittel wird im Vakuum entfernt, und der erhaltene Rückstand wird zwischen Wasser und CH₂Cl₂ verteilt. Die organische Phase wird mit Wasser und Salzlösung gewaschen, über MgSO₄ getrocknet, filtriert und konzentriert. Flashchromatographie (0 bis 50% EtOAc/Hexan) ergibt als Ausbeute 6-Methoxy-2-(3-methoxyphenyl)-1,2,3,4-tetrahydrochinolin.
¹H NMR: δ 1,95 (m, 1H), 2,08 (m, 1H), 2,71 (m, 1H), 2,90 (m, 2H), 3,7s (s, 3H), 3,81 (s, 3H), 4,34 (dd, 1H), 6,50 (d, 2H), 6,71 (m, 2H), 6,81 (dd, 1H), 6,95 (m, 2H), 7,25 (m, 1H).
BEISPIEL 1 6-Methoxy-2-(4-methoxyphenyl)-1-[4-(2-piperidin-1-ylethoxy)phenyl]-1,2,3,4-tetrahydrochinolin
Ein 50 ml Rundkolben wird mit der Verbindung der Präparation 3 (103,8 mg, 0,3854 mmol), 1-[2-(4-Bromphenoxy)ethyl]piperidin (128,0 mg, 0,4504 mmol, Internationale PCT-Anmeldung mit der Veröffentlichungsnummer WO 98 48 793 A, veröffentlicht am 05. November 1998), Natrium-tert.-butoxid (58,1 mg, 0,6045 mmol), Palladium(II)-acetat (10,1 mg, 0,04499 mmol) und trockenem Toluol (15 ml) beladen. Mehrere Tropfen von Tri-tert.-butylphosphin werden zugegeben aus einer 1 ml Insulinspritze. Zwei weitere Zugaben von Palladium(II)-acetat (24,7 mg, 0,1100 mmol; 17,6 mg, 0,07840 mmol) werden in 1 h Intervallen ausgeführt. Mehrere Tropfen von Tri-tert.-butylphosphin werden nach jeder Palladiumzugabe zugegeben. Die zugegebene Gesamtmenge beträgt 24,7 mg (0,1221 mmol). Der Umsetzung folgt eine LC/MS. Das Reaktionsgemisch wird durch Kieselgel mit 0 bis 10% MeOH/Dichlormethan filtriert. Das Filtrat wird konzentriert, und das rohe Produkt wird durch Flashchromatographie (1 bis 5% MeOH/Dichlormethan) gereinigt, um 90,3 mg (49,6%) als ein Öl zu erhalten. Einige unbekannte Verunreinigungen liegen vor. Das Produkt wird weiter verwendet ohne weitere Reinigung. Teil-¹H NMR: δ 7,16 (etwa d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,01 (etwa d, J = 8,8 Hz, 2H), 6,74–6,79 (m, 4H), 6,53–6,62 (m, 3H), 4,72 (t, J = 4,5 Hz, 1H), 4,11 (t, J = 6 Hz, 2H), 3,75 (s, 3H), 3,72 (s, 3H), 2,18–2,27 (m, 1H), 2,04–2,12 (m, 1H), LCMS: 2,637 min, 473 (M+).
BEISPIEL 2 6-Methoxy-2-(4-methoxyphenyl)-1-[4-(2-pyrrolidin-1-ylethoxy)phenyl]-1,2,3,4-tetrahydrochinolin
6-Methoxy-2-(4-methoxyphenyl)-1-[4-(2-pyrrolidin-1-ylethoxy)phenyl]-1,2,3,4-tetrahydrochinolin wird hergestellt auf eine Art und Weise analog zu der von Beispiel 1 unter Verwendung von 1-[2-(4-Bromphenoxy)ethyl]pyrrolidin (Internationale PCT-Anmeldung mit der Veröffentlichungsnummer WO 98 48 793 A, veröffentlicht am 05. November 1998). ¹H NMR: δ 7,17 (etwa d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,04 (etwa d, J = 8,4 Hz, 2H), 6,79–6,81 (m, 4H), 6,58–6,64 (m, 3H), 4,74 (breites s, 1H), 4,18 (breites s, 2H), 3,77 (s, 3H), 3,74 (s, 3H), 3,05 (breites s, 2H), 2,85 (breites s, 4H), 2,19–2,27 (m, 1H), 2,05–2,17 (m, 1H), 1,91 (breites s, 6H), LCMS: 2,447 min, 459 (M+).
BEISPIEL 3 1-(4-Hydroxyphenyl)-1-[4-(2-piperidin-1-ylethoxy)phenyl]-1,2,3,4-tetrahydrochinolin-6-ol
Ein 25 ml Rundkolben wird mit der Verbindung von Beispiel 1 (90,3 mg, 0,1911) und Dichlormethan (10 ml) beladen. Die Lösung wird unter Stickstoff gesetzt und auf 0°C gekühlt vor der Zugabe von 1,0 M Bortribromid in Dichlormethan (0,90 ml, 0,90 mmol). Die Reaktion wird verfolgt durch LC/MS bis sie vollständig ist. Die Umsetzung oder Reaktion wird gelöscht oder gequenscht mit Methanol und vor- oder präadsorbiert an Kieselgel. Das rohe Produkt wird dann isoliert durch Flashchromatographie (1 bis 10% MeOH/Dichlormethan). Das Produkt wird wieder chromatographiert durch Präadsorption und Flashchromatographie (100% Aceton). Der erhaltene Feststoff wird umkristallisiert aus Chloroform, um 20,7 mg (24,4%) des gewünschten Produkts zu ergeben. ¹H NMR[CD₃OD(δ 3,30)]: δ 6,99 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,09 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 6,80 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 6,65 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 6,37–6,45 (m, 3H), 4,65 (t, J = 4,6 Hz, 1H), 4,08 (t, J = 6 Hz, 2H), 2,83 (etwa s, 2H), 2,45–2,70 (m, 6H), 2,12–2,23 (m, 1H), 2,00–2,12 (m, 1H), 1,67 (m, 4H), 1,50 (breites s, 2H), LCMS: 2,177 min, 445 (M+).
BEISPIEL 4 1-(4-Hydroxyphenyl)-1-[4-(2-pyrrolidin-1-ylethoxy)phenyl]-1,2,3,4-tetrahydrochinolin-6-ol
1-(4-Hydroxyphenyl)-1-[4-(2-pyrrolidin-1-ylethoxy)phenyl]-1,2,3,4-tetrahydrochinolin-6-ol wird hergestellt in einer Art und Weise analog zu Beispiel 3 unter Verwendung der Verbindung von Beispiel 2. Das Produkt wird gereinigt durch Umkehrphase und wird als TFA-Salz erhalten. ¹H NMR [CD₃OD (δ 3,30)]: δ 7,02–7,08 (m, 4H), 6,88 (etwa d, J = 6,8 Hz, 2H), 6,65 (etwa d, J = 6,8 Hz, 2H), 6,46–6,49 (m, 2H), 6,39–6,40 (m, 1H), 4,67 (t, J = 5,2 Hz, 1H), 4,25 (t, J = 5 Hz, 2H), 3,66–3,74 (m, 2H), 3,60 (t, J = 5 Hz, 2H), 3,16–3,22 (m, 2H), 2,62–2,72 (m, 1H), 2,50–2,58 (m, 1H), 2,16–2,22 (m, 3H), 2,02–2,09 (m, 3H), LCMS: 2,119 min, 431 (M+).
Biologisches Testverfahren
Allgemeines Herstellungsverfahren
ER Bindungsassay
Ein kompetiver Bindungsassay wird in einem Puffer durchgeführt, der 50 mM Hepes, pH 7,5, 1,5 mM EDTA, 150 mM NaCl, 10% Glycerin, 1 mg/ml Ovalbumin und 5 mM DTT enthielt, unter Verwendung von 0,025 μCi pro Vertiefung oder Gefäß an ³H-Östradiol (NEN #NET517 bei 118 Ci/mmol, 1 mCi/ml), 10 ng/Gefäß oder Vertiefung ER alpha oder ER beta Rezeptor (PanVera). Kompetive oder konkurrierende Verbindungen werden zugegeben bei 10 verschiedenen Konzentrationen. Nicht spezifische Bindung wird bestimmt in Gegenwart von 1 μM von 17-B Östradiol. Die Bindungsreaktion (140 μl) wird 4 h lang bei Raumtemperatur inkubiert, dann werden 70 μl von kaltem DCC-Puffer zugegeben zu jeder Reaktion (DCC-Puffer enthält pro 50 ml Assaypuffer 0,75 g Aktivkohle (Sigma) und 0,25 g Dextran (Pharmacia)). Die Platten wurden 8 min auf einer Kreisschüttelvorrichtung gemischt. Die Platten werden dann bei 3.000 U/min bei 4°C 10 min lang zentrifugiert. Ein Aliquot von 120 μl des Gemisches wird auf eine andere weiße flache Grundplatte mit 96 Vertiefungen oder Gefäßen überführt (Costar) und 175 μl von Wallac Optiphase "Hisafe 3" Szintillationsflüssigkeit wird zu jedem Gefäß oder jeder Vertiefung gegeben. Die Platten werden versiegelt oder verschlossen und kräftig auf einer Kreisschüttelvorrichtung geschüttelt. Nach einer Inkubation von 2,5 h werden die Platten in einem Wallac Microbeta Zähler gelesen. Die Daten werden verwendet, um einen IC50-Wert und die %-Inhibierung oder -Hemmung bei 10 μM zu berechnen. Der K_d-Wert für ³H-Östradiol wird bestimmt durch Sättigungsbindung an ER alpha und ER beta Rezeptoren. Die IC₅₀-Werte für Verbindungen werden überführt in K_i unter Verwendung der Cheng-Prusoff-Gleichung, und K_d wird bestimmt durch einen Sättigungsbindungsassay.
Ishikawa alkalischer Phosphataseassay
Ishikawa humane Endometriumtumorzellen werden erhalten in MEM (Minimalmedium (minimum essential medium), mit Earle's Salzen und L-Glutamin, Gibco BRL, Gaithersburg, MD), ergänzt mit 10% fötalem Rinderserum (FBS) (V/V), (Gibco BRL). 1 Tag vor dem Assay wird das Wachstumsmedium gewechselt in das Assaymedium, DMEM/F-12 (3:1) (Dulbecco's Modified Eagle Medium: Nutrient Mixture F-12, 3:1 Mixture, phenol red-free, Gibco BRL), ergänzt mit 5% Dextran beschichtetem, Aktivkohle abgestreiftem fötalen Rinderserum (DCC-FBS) (Hyclone, Logen, UT), L-Glutamin (2 mM), MEM Natriumpyruvat (1 mM), HEPES (N-[2-Hydroxyethyl]piperazin-N'-[2-ethansulfonsäure] 2 mM) alle von Gibco BRL). Nach einer Inkubation über Nacht werden alle Ishikawa Zellen gespült mit Dulbecco's Phosphat gepufferter Salzlösung (1×) (D-PBS) ohne Ca⁺² und Mg⁺² (Gibco BRL), und trypsiniert durch eine 3 min Inkubation mit 0,25% Trypsin/EDTA, Phenolrot-frei (Gibco BRL). Die Zellen werden resuspendiert in dem Assaymedium und eingestellt auf 250.000 Zellen/ml. Etwa 25.000 Zellen in einem 100 μl Medium werden zugegeben zu Mikrokulturplatten mit flachem Boden und 96 Gefäßen oder Vertiefungen (Costar 3596) und bei 37°C inkubiert in einem mit 5% CO₂ befeuchteten Inkubator über einen Zeitraum von 24 h. Am nächsten Tag werden Reihenverdünnungen der Verbindungen hergestellt in einem Assaymedium (bei der 6fachen Endkonzentration in dem Assay). Der Assay wird in einem dualen Modus durchgeführt, Agonisten- und Antagonistenmodi. Für den Agonistenmodus erhalten die Platten 25 μl/Gefäß oder Vertiefung von dem Assaymedium, gefolgt von 25 μl/Gefäß oder Vertiefung von verdünnten Verbindungen (bei den 6fachen Endkonzentrationen). Für den Antagonistenmodus erhalten die Platten 25 μl/Gefäß oder Vertiefung 6 nM E₂ (β-Östradiol, Sigma, St. Louis, MO), gefolgt von 25 μl/Vertiefung oder Gefäß von verdünnten Verbindungen (bei den 6fachen Endkonzentrationen). Nach einer zusätzlichen Inkubation über einen Zeitraum von 48 h bei 37°C in einem mit 5% CO₂ befeuchteten Inkubator werden die Medien aus den Vertiefungen oder Gefäßen gesaugt; und 100 μl frisches Assaymedium wird zu jeder Mikrokultur gegeben. Reihenverdünnungen der Verbindungen werden hergestellt und zu den Zellen, wie oben beschrieben, zugegeben. Nach einer zusätzlichen Inkubation über 72 h bei 37°C in einem mit 5% CO₂ befeuchteten Inkubator wird der Assay oder Test gelöscht oder gequenscht durch Entfernung der Medien und durch zweimaliges Spülen der Platten in Dulbecco's Phosphat gepufferter Salzlösung (1×) (D-PBS) (Gibco BRL). Die Platten werden 5 min lang getrocknet und bei –70°C über mindestens 1 h eingefroren. Die Platten werden dann aus dem Gefrierfach entfernt und auf Raumtemperatur aufgetaut. Zu jedem Gefäß oder jeder Vertiefung werden 100 μl 1-Step^TM PNPP (Pierce Chemical Company, Rockford, IL) gegeben. Nach Inkubation über einen Zeitraum von 20 min werden die Platten auf einem Spektrophotometer bei 405 nm gelesen. Die Daten werden zu einer linearen Interpolation gefittet, um EC50- (für den Agonistenmodus) oder IC50- (für den Antagonistenmodus) Werte abzuleiten. Bei dem Agonistenmodus wird eine %-Wirksamkeit für jede Verbindung berechnet gegenüber der Antwort auf Tamoxifen. Bei dem Antagonistenmodus wird eine %-Wirksamkeit für jede Verbindung berechnet gegenüber E2 (1 nM) allein.
MCF-7 Proliferationsassay oder -test
MCF-7 Brustadenokarzinomzellen (ATCC HTB 22) werden in MEM (Minimalmedium (minimal essential medium), Phenolrot-frei, Gibco BRL) ergänzt mit 10% fötalem Rinderserum (FBS) (V/V), L-Glutamin (2 mM), Natriumpyruvat (1 mM), HEPES ((N-[2-Hydroxyethyl]piperazin-N'-[2-ethansulfonsäure] 10 mM), nicht essentiellen Aminosäuren (0,1 mM) und Penicillin Streptomycin (1×) erhalten. 7 Tage vor dem Test oder der Untersuchung werden die MCF-7 Zellen in Assaymedien oder Testmedien überführt, die die gleichen waren wie die Erhaltungsmedien, außer dass sie ergänzt waren mit 10% Dextran beschichtetem über Aktivkohle abgestreiftem fötalen Rinderserum (DCC-FBS) Assaymedium anstelle von 10% FBS. Die MCF-7 Zellen werden aus den Kolben entfernt unter Verwendung von 10× Trypsin EDTA (Phenolrot-frei, Gibco BRL) und verdünnt auf 1× in (Ca++/Mg++ freiem HBSS (Phenolrot-frei). Die Zellen werden eingestellt auf 80.000 Zellen/ml im Assaymedium oder Testmedium. Etwa 8.000 Zellen (100 μl) werden in jedes Gefäß oder jede Vertiefung gegeben in Cytostar T Szintillationsplatten (Amersham) mit 96 Vertiefungen oder Gefäßen und bei 37°C inkubiert in einem mit 5% CO₂ befeuchteten Inkubator über 24 h, um Zellanhaftung zu erlauben und Equilibrierung nach der Überführung. Serienverdünnungen der Arzneimittel werden hergestellt in dem Assaymedium bei der 4fachen der gewünschten Endkonzentration. Ein 50 μl Aliquot der Arzneimittelverdünnungen (bei der 4fachen Endassaykonzentration) wird überführt, um die Gefäße oder die Vertiefungen zu duplizieren, gefolgt von 50 μl Assaymedium für den Agonistenmodus oder 50 μl von 40 pM von E2 für den Antagonistenmodus auf ein Endvolumen von 200 μl. Für jede der Agonistenplatten wird ein Grundwert oder eine Grundkonzentration (Media) und ein maximal stimulierter Wert oder maximal stimulierte Konzentration (mit 1 μM E2) bestimmt. Für jede der Antagonistenplatten wird ein Grundwert (Media) und ein E2 (10 pM) allein als Kontrolle bestimmt. Nach zusätzlichen 48 h bei 37°C in einem mit 5% CO₂ befeuchteten Inkubator werden 20 μl von Assaymedium, die 0,01 μCi von ¹⁴C-Thymidin (52 mCi/mmol, 50 μCi/μl, Amersham) enthielten, zu jedem Gefäß oder jeder Vertiefung gegeben. Die Platten werden über Nacht in dem gleichen Inkubator inkubiert und dann auf dem Wallac Mikrobeta Zähler gezählt. Die Daten werden Bemittelt, um einen IC50 und eine %-Inhibierung oder -Hemmung bei 1 μM für den Antagonistenmodus zu berechnen. Für den Agonistenmodus wird ein EC50 und % der maximalen E2-Stimulierung und Konzentration der maximalen Stimulierung berechnet.
TABELLE
Allgemeines Rattenpräparationsverfahren
75 Tage alte (sofern es nicht anders angegeben ist) weibliche Sprague Dawley Ratten (Gewichtsbereich von 200 bis 225 g) werden von den Charles River Laboratories (Portage, MI) erhalten. Die Tiere werden entweder beidseitig ovariektomiert (OVX) oder einem operativen Sham-Verfahren bei den Charles River Laboratories unterzogen und dann nach 1 Woche geliefert. Nach der Ankunft werden sie in Metallhängekästen in Gruppen von 3 oder 4 pro Käfig gehalten und haben freien Zugang zu Futter (Calciumgehalt etwa 0,5%) und Wasser für 1 Woche. Die Raumtemperatur wird bei 22,2°C ± 1,7°C mit einer minimalen relativen Luftfeuchte von 40% gehalten. Die Lichtperiode im Raum betrug 12 h Licht und 12 h Dunkelheit.
Dosierungskurgewebesammlung: Nach einer einwöchigen Akklimatisierungsperiode (daher zwei Wochen nach der OVX) wird die tägliche Dosierung mit einer Verbindung der Formel (I) ("F-I") begonnen. 17α-Ethinylöstradiol oder F-I wird oral gegeben, sofern es nicht anders angegeben ist als eine Suspension in 1% Carboxymethylcellulose oder gelöst in 20% Cyclodextrin. Den Tieren werden die Dosierungen täglich über 4 Tage gegeben. Nach der Dosierungskur werden die Tiere gewogen und anästhesiert mit Ketamin: Xylazin (2:1, v:v) Gemisch und eine Blutprobe wird gesammelt durch Herzpunktierung. Die Tiere werden dann durch Erstickung mit CO₂ getötet, der Uterus wird entfernt durch einen Mittellinienschnitt und ein nasses Uterusgewicht wird bestimmt. 17α-Ethinylöstradiol wird erhalten von Sigma Chemical Co., St. Louis, MO.
Uterus Eosinophil Peroxidase (EPO)-Test oder -Assay
Die Uteri von oben werden bei 4°C gehalten bis zum Zeitpunkt der enzymatischen Analyse. Die Uteri werden dann homogenisiert in 50 Volumina von 50 mM Trispuffer (pH 8,0), der 0,005% Triton X-100 enthielt. Bei der Zugabe von 0,01% Wasserstoffperoxid und 10 mM o-Phenylendiamin (Endkonzentrationen) in Trispuffer wird eine Zunahme in der Absorption beobachtet über einen Zeitraum von 1 min bei 450 nm. Die Gegenwart von Eosonophilen in dem Uterus ist ein Anzeichen von Östrogenaktivität von einer Verbindung. Die maximale Geschwindigkeit von einem 15 Sekunden Intervall wird bestimmt über den anfänglichen linearen Teil der Reaktionskurve.
Hemmung oder Inhibierung des Knochenverlusts (Osteoporose) Testverfahren
Unter Durchführung des allgemeinen Herstellungsverfahrens, das oben beschrieben ist, werden die Ratten täglich über 35 Tage hinweg (6 Ratten pro Behandlungsgruppe) behandelt und durch Ersti ckung mit Kohlendioxid am 36. Tag getötet. Der 35 Tageszeitraum ist ausreichend, um eine maximale Reduktion in der Knochendichte zu erlauben, wie hierin beschrieben, gemessen. Zum Zeitpunkt der Tötung werden die Uteri entfernt, von belanglosem Gewebe freipräpariert, und die flüssigen Inhalte werden ausgetrieben vor der Bestimmung des feuchten Gewichts, um einen Östrogenmangel zu bestätigen, der im Zusammenhang steht mit der vollständigen Ovariektomie. Das Uterusgewicht wird routinemäßig um etwa 75% reduziert als Antwort auf die Ovariektomie. Die Uteri werden dann in 10% neutral gepuffertes Formalin gegeben, um eine nachfolgende histologische Analyse zu erlauben.
Die rechten Femuren werden herausgeschnitten und digitalisierte Röntgenstrahlen erzeugt und analysiert durch ein Bildanalyseprogram (NIH Image) an der distalen Metaphyse. Der proximale Aspekt der Tibiae von diesen Tieren wird ebenfalls gescannt durch quantitative Computertomographie. Gemäß den obigen Verfahren werden F-I oder Ethinylöstradiol (EE₂) in 20% Hydroxypropyl-β-cyclodextrin oral den Testtieren verabreicht. F-I ist auch brauchbar in Kombination mit Östrogen oder Progestin.
Uterusfibrose Testverfahren
Test 1: Zwischen 3 und 20 Frauen, die Uterusfibrose aufweisen, werden F-I verabreicht. Die Menge der verabreichten Verbindung beträgt von 0,1 bis 1.000 mg/Tag, und der Zeitraum der Verabreichung beträgt 3 Monate. Die Frauen werden während des Zeitraums der Verabreichung beobachtet, und bis zu 3 Monate nach der Unterbrechung der Verabreichung hinsichtlich der Effekte auf die Uterusfibrose.
Test 2: Das gleiche Verfahren wird verwendet wie in Test 1, außer dass der Zeitraum der Verabreichung 6 Monate beträgt.
Test 3: Das gleiche Verfahren wird verwendet wie in Test 1, außer dass der Zeitraum der Verabreichung 1 Jahr beträgt.
Test 4: Verlängerte Östrogenstimulierung wird verwendet, um Leiomyom-Bildung (leiomyomata) in geschlechtsreifen weiblichen Versuchskaninchen zu induzieren. Den Tieren werden 3 bis 5 Mal pro Woche durch Injektion über 2 bis 4 Monate oder bis Tumoren auftreten Östradiol dosiert. Die Behandlung besteht aus F-I oder verabreichtem Träger täglich über 3 bis 16 Wochen, und dann werden die Tiere getötet, und die Uteri entnommen und hinsichtlich einer Tumorregression analysiert.
Test 5: Gewebe aus humanen Leiomyomen wird in die peritoneale Kavität und/oder Uterusmyometrium von geschlechtsreifen, kastrierten, weiblichen, nackten Mäusen implantiert. Exogenes Östrogen wird zugeführt, um das Wachstum des explantierten Gewebes zu induzieren. In einigen Fällen werden die gesammelten Zellen in vitro vor der Implantation kultiviert. Die Behandlung bestehend aus F-I oder Träger, wird verabreicht durch Magenspülung auf einer täglichen Basis über 3 bis 16 Wochen, und die Implantate werden dann entfernt und gemessen hinsichtlich eines Wachstums oder einer Regression. Zum Zeitpunkt der Tötung werden die Uteri entnommen und der Status des Organs bestimmt.
Test 6: Gewebe aus humanen Uterusfibrosetumoren wird gesammelt und bereitgehalten in vitro als primäre nicht transformierte Kulturen. Chirurgische Proben werden durch ein steriles Filter oder Sieb gedrückt oder alternativ aus dem umgebenden Gewebe genommen, um eine einzelne Zellsuspension zu erzeugen. Die Zellen werden in Medien gehalten, die 10% Serum und Antibiotikum enthalten. Die Raten des Wachstums in Gegenwart und Abwesenheit von Östrogen werden bestimmt. Die Zellen werden untersucht hinsichtlich ihres Vermögens den komplementären Bestandteil C3 zu erzeugen, und ihrer Antwort auf Wachstumsfaktoren und Wachstumshormon. In vitro Kulturen werden untersucht hinsichtlich ihrer proliferativen Antwort in der Folge auf die Behandlung mit Progestinen, GnRH, F-I und Träger. Die Konzentrationen oder Werte von Steroidhormonrezeptoren werden wöchentlich untersucht, um zu bestimmen, ob wichtige Zelleigenschaften in vitro beibehalten werden. Gewebe aus 5 bis 25 Patienten wird verwendet.
Test 7: Die Fähigkeit von F-I (Verbindungen der Formel I), die durch Östrogen stimulierte Proliferation von vom Leiomyom abgeleiteten ELT-Zelllinien zu hemmen oder zu inhibieren, wird bestimmt im Wesentlichen wie beschrieben in Fuchs-Young et al., "Inhibition of Estrogen-Stimulated Growth of Uterine Leiomyomas by Selective Estrogen Receptor Modulators", Mol. Car., 17 (3): 151 bis 159 (1996), deren Lehre durch Bezugnahme hierin einverleibt ist.
Endometriose Testverfahren
Test 1: 12 bis 30 erwachsene weibliche Ratten vom CD-Stamm werden als Testtiere verwendet. Sie werden in drei Gruppen mit gleicher Anzahl aufgeteilt. Es wird der Östruscyclus aller Tiere aufgezeichnet. Am Tag des Proöstrus wird bei jedem Weibchen eine Operation durchgeführt. Bei den Weibchen jeder Gruppe wird das linke Uterushorn entfernt, in kleine Quadrate geschnitten, und die Quadrate werden lose an verschiedene Stellen benachbart zum Mesenteriumblutfluss angenäht. Zusätzlich werden den Weibchen in Gruppe 2 die Ovarien entfernt. Am Tag nach der Operation erhalten die Tiere in den Gruppen 1 und 2 intraperitoneale Injektionen von Wasser über 14 Tage, während die Tiere in Gruppe 3 intraperitoneale Injektionen von 1,0 mg F-I pro kg Körpergewicht über den selben Zeitraum erhalten. Nach 14 Tagen der Behandlung wird jedes Weibchen getötet, und die endometrialen Explantate, Nebennieren, der verbleibende Uterus und die Ovarien, wo dies möglich ist, werden entfernt und zur histologischen Untersuchung präpariert. Die Ovarien und Nebennieren werden gewogen.
Test 2: 12 bis 30 erwachsene weibliche Ratten vom CD-Stamm werden als Testtiere verwendet. Sie werden in zwei gleiche Gruppen aufgeteilt. Der Östruscyclus aller Tiere wird aufgezeichnet. Am Tag des Proöstrus wird bei jedem Weibchen eine Operation durchgeführt. Den Weibchen jeder Gruppe wird das linke Uterushorn entfernt, in kleine Quadrate geschnitten, und die Quadrate werden lose an verschiedene Stellen benachbart zum Mesenteriumblutfluss angenäht. Etwa 50 Tage nach der Operation erhalten die zur Gruppe 1 gehörenden Tiere intraperitoneale Injektionen von Wasser über 21 Tage, während die Tiere der Gruppe 2 intraperitoneale Injektionen von 1,0 mg von F-I pro kg an Körpergewicht über den gleichen Zeitraum erhalten. Nach 21 Tagen der Behandlung wird jedes Weibchen getötet, und die endometrialen Explantate und Nebennieren werden entfernt und gewogen. Die Explantate werden gemessen als Maß des Wachstums. Die Östruscyclen werden aufgezeichnet.
Test 3: Autographien von Endometriumgewebe werden verwendet, um Endometriose in Ratten und/oder Kaninchen zu induzieren. Weibliche Tiere bei Reproduktionsreife werden einer beidseitigen Oophorektomie unterzogen, und Östrogen wird exogen bereitgestellt, um einen spezifischen konstanten Hormonspiegel bereitzustellen. Autologes Endometriumgewebe wird im Peritoneum von 5 bis 150 Tieren implantiert, und Östrogen wird zur Induktion des Wachstums des explantierten Gewebes bereitgestellt. Die Behandlung, die aus einer Verbindung der vorliegenden Erfindung besteht, wird durch Magenspülung täglich 3 bis 16 Wochen verabreicht, und die Implantate werden entfernt und hinsichtlich des Wachstums oder der Regression gemessen. Zum Zeitpunkt der Tötung wird das intakte Horn des Uterus entnommen, um den Status oder Zustand des Endometriums zu bestimmen.
Test 4: Gewebe von humanen Endometriumläsionen wird in das Peritoneum von geschlechtsreifen, kastrierten, weiblichen, nackten Mäusen implantiert. Exogenes Östrogen wird bereitgestellt, um das Wachstum des explantierten Gewebes zu induzieren. In manchen Fällen werden die entnommenen Endometriumzellen in vitro vor der Implantation kultiviert. Die Behandlung, durch Magenspülung verabreichtes F-I, besteht auf einer täglichen Basis über 3 bis 16 Wochen, und die Implantate werden entfernt und gemessen hinsichtlich des Wachstums oder einer Regression. Zum Zeitpunkt der Tötung werden die Uteri entnommen, um den Status oder Zustand des intakten Endometriums zu untersuchen.
Test 5: Gewebe aus humanen Endometriumläsionen wird gewonnen und in vitro als primäre nicht transformierte Kulturen gehalten. Operationsproben werden durch ein steriles Netz oder Sieb gedrückt oder alternativ dazu von umgebendem Gewebe getrennt, um eine Einzelzellsuspension bereitzustellen. Die Zellen werden in Medien gehalten, die 10% Serum und Antibiotikum enthalten. Die Raten des Wachstums in Gegenwart und Abwesenheit von Östrogen werden bestimmt. Die Zellen werden auf ihre Fähigkeit zur Bildung der komplementären Komponente C3 und ihrer Antwort auf Wachstumsfaktoren und Wachstumshormon untersucht. In vitro Kulturen werden auf ihre proliferative Antwort untersucht nach der Behandlung mit Progestinen, GnRH, F-I und Träger. Die Werte oder Konzentrationen an Steroidhormonrezeptoren werden wöchentlich untersucht, um zu bestimmen, ob die wichtigen Zelleigenschaften in vitro erhalten bleiben. Gewebe von 5 bis 25 Patienten wird verwendet.
Verwendung einer Verbindung der Formel (I) in Verbindung mit Östrogen Peri- und postmenopausale Frauen durchlaufen oft eine Hormonersatztherapie (HRT), um negative Folgen zu bekämpfen, die in Verbindung stehen mit der Senkung in zirkulierendem endogenen Östrogen, z.B. um Hitzewallungen zu behandeln. Die HRT war jedoch mit erhöhten Risiken von bestimmten Krebsen, einschließlich Uterus- und Brustkrebs, verbunden. F-I kann eingesetzt werden in Verbindung mit der HRT, um diese Risiken zu hemmen.
Prävention oder Verhinderung von Brustkrebs
Diese Erfindung betrifft auch die Verabreichung von F-I an einen Empfänger, der das Risiko birgt von Neuem Brustkrebs zu entwickeln. Der Begriff „von Neuem" oder „de novo", wie hierin verwendet, bedeutet den Mangel an Transformation oder Metamorphose zunächst oder in erster Linie von normalen Brustzellen zu kanzerösen oder malignen Zellen. Eine solche Transformation kann stattfinden in Stadien in den gleichen oder Tochterzellen über einen Evolutionsprozess oder kann auch auftreten bei einem einzelnen entscheidenden Ereignis. Dieser de novo Prozess steht im Gegensatz zu der Metastase, Kolonisierung oder Ausbreitung von bereits transformierten oder malignen Zellen von der Stelle des primären Tumors an neue Orte.
Eine Person, die kein besonderes Risiko birgt Brustkrebs zu entwickeln, ist eine, die de novo Brustkrebs entwickeln kann, kein Anzeichen oder keinen Verdacht der Möglichkeit oder des Potenzials der Erkrankung über normalem Risiko aufweist und die nie eine Diagnose hatte die Erkrankung zu haben. Der größte Risikofaktor, der beiträgt zu der Entwicklung von einem Brustkarzinom ist eine persönliche Vorgeschichte eines Leidens unter der Erkrankung oder eines früheren Auftretens der Erkrankung, selbst wenn sie in Remission ist ohne Anzeichen ihrer Gegenwart. Ein weiteres Risiko ist die Familien-vorgeschichte der Erkrankung.
Eine Induktion von Brustkrebsen bei Ratten durch Verabreichung des Karzinogens N-Nitroso-N-methylharnstoff ist ein gut anerkanntes Tiermodell für die Untersuchung von Brustkrebs und wurde als geeignet gefunden für die Analyse des Effekts von chemopräventiven Mitteln.
In zwei getrennten Untersuchungen werden 55 Tage alten weiblichen Sprague Dawley Ratten eine intravenöse (Studie 1) oder intraperitoneale (Studie 2) Dosierung von 50 mg N-Nitroso-N-methylharnstoff pro kg Körpergewicht über 1 Woche vor einem Füttern nach Belieben von einer Ernährung gegeben, in die verschiedene Mengen von F-I, (Z)-2-[4-(1,2-Diphenyl-1-butenyl)phenoxy]-N,N-dimethylethanaminbase (Tamoxifenbase) oder Kontrolle gemischt sind.
In der Studie 1 ergeben die Ernährungsdosierungen von 60 mg/kg an Ernährung und 20 mg/kg an Ernährung ungefähr vergleichbare Dosen von 3 und 1 mg/kg Körpergewicht für die Testtiere.
In der Studie 2 ergeben die Ernährungsdosierungen von 20, 6, 2 und 0,6 mg/kg der Ernährung ungefähr vergleichbare Dosierungen von 1, 0,3, 0,1 und 0,03 mg/kg Körpergewicht der Testtieren.
Die Ratten werden beobachtet hinsichtlich eines Auftretens von Toxizität und werden gewogen und nach Tumorbildung abgetastet einmal in der Woche. Die Tiere werden nach 13 Wochen (Studie 1) getötet oder nach 18 Wochen (Studie 2), und die Tumore wurden bestätigt und bei einer Autopsie gewogen.
Therapeutische Verfahren der Verwendung und Dosierungen
Die vorliegende Erfindung stellt auch die Verwendung von Verbindungen der Formel I bereit zur Hemmung einer Krankheit, die im Zusammenhang steht mit einer Östrogendeprivation und zur Hemmung einer Krankheit, die im Zusammenhang steht mit einer aberrierenden physiologischen Antwort auf endogenes Östrogen, und umfasst gegebenenfalls ein Verabreichen an einen Patienten von einer wirksamen Menge von Östrogen oder Progestin. Diese Verwendungen sind besonders brauchbar zur Behandlung von Osteoporose und zur Senkung von Serumcholesterin, da der Patient die Nützlichkeiten von jedem pharmazeutischen Mittel erhält, während die Verbindungen der vorliegenden Erfindung unerwünschte Nebenwirkungen von Östrogen und Progestin hemmen. Die Aktivität dieser Kombinationsbehandlungen in einem beliebigen der postmenopausalen Tests oben zeigt an, dass die Kombinationsbehandlungen nützlich sind zur Linderung der Symptome von postmenopausalen Symptomen bei Frauen.
Verschiedene Formen von Östrogen und Progestin sind kommerziell erhältlich. Auf Östrogen basierende Mittel schließen z.B. ein Ethinylöstrogen (0,01 bis 0,03 mg/Tag), Mestranol (0,05 bis 0,15 mg/Tag) und konjugierte Östrogenhormone, wie Premarin^® (Wyeth-Ayerst; 0,3 bis 2,5 mg/Tag). Auf Progestin basierende Mittel schließen z.B. ein Medroxyprogesteron, wie Provera^® (Upjohn; 2,5 bis 10 mg/Tag), Norethylnodrel (1,0 bis 10,0 mg/Tag) und Nonethindron (0,5 bis 2,0 mg/Tag). Eine bevorzugte auf Östrogen basierende Verbindung ist Premarin^®, und Norethylnodrel und Norethindron sind bevorzugte Mittel basierend auf Progestin.
Das Verfahren der Verabreichung von jedem auf Östrogen und Progestin basierenden Mittel stimmt überein mit dem, was im Stand der Technik bekannt ist. Für die Mehrzahl der Verfahren der vorliegenden Erfindung werden Verbindungen der Formel 1 kontinuierlich verabreicht von 1 bis 3 Mal täglich. Jedoch kann eine cyclische Therapie besonders nützlich sein bei der Behandlung von Endometriose oder kann akut verwendet werden während schmerzvoller Attacken der Erkrankung. Im Fall der Restenose kann die Therapie beschränkt werden auf kurze (1 bis 6 Monate) Intervalle, folgend auf medizinische Verfahren, wie Angioplastie.
Wie hierin verwendet, bezieht sich der Begriff "Patient" auf ein warmblütiges Lebewesen oder einen warmblütigen Säuger, das/der einer Hemmung oder Inhibierung einer Krankheit bedarf, die im Zusammenhang steht mit Östrogendeprivation oder das/der einer Hemmung einer Erkrankung bedarf, die im Zusammenhang steht mit einer aberrierenden physiologischen Antwort auf endogenes Östrogen. Es ist selbstverständlich, dass Versuchskaninchen, Hunde, Katzen, Ratten, Mäuse, Hamster und Primaten, einschließlich Menschen, Beispiele von Patienten sind innerhalb des Schutzbereichs der Bedeutung von diesem Begriff. Bevorzugte Patienten schließen Menschen ein. Besonders bevorzugte Patienten schließen postmenopausale weibliche Menschen ein.
Wie hierin verwendet, ist der Begriff "hemmt" oder "inhibiert" definiert, um seine allgemein anerkannte Bedeutung einzuschließen, die das Vermeiden oder Vorbeugen, Verhindern, Einschränken und Verlangsamen, Stoppen oder Umkehren eines Fortschreitens oder eines Schwerheitsgrads und unter Kontrolle halten und/oder das Behandeln bestehender Merkmale einschließt. Das vorliegende Verfahren schließt sowohl eine medizinisch therapeutische als auch/oder prophylaktische Behandlung wie jeweils anwendbar oder soweit angemessen ein.
Der Begriff "Östrogendeprivation" bedeutet den Zustand einzuschließen, bei dem der optimale Wert von Östrogen abwesend ist oder nicht vorliegt. Dieser Wert oder diese Konzentration ist verschieden von einem Gewebe zu einem anderen in Abhängigkeit von der Funktion des Gewebes. Daher kann in einigen Fällen Östrogendeprivation die vollständige Abwesenheit von Östrogen sein, während in anderen Fällen die Deprivation Östrogenwerte oder Östrogenkonzentrationen einschließen kann, die zu niedrig sind für eine angemessene oder einwandfreie Gewebefunktion. Bei menschlichen Frauen sind die zwei häufigsten Ursachen für Östrogendeprivation Menopause und Ovariektomie, obwohl andere Zustände oder Bedingungen ursächlich sein können. Östrogendeprivation kann zu Zuständen führen, die Osteoporose und kardiovaskuläre Effekte, wie Hyperlipidämie, Proliferation von glatten Aortamuskelzellen (Restenose), Senkung in der Stickoxidproduktion (Hypertension) und Senkung in der Produktion des Enzyms PAI-1 (Plasminogen Activator Inhibitor-1), das heißt Thrombose, einschließen.
Die Reduktion oder Verbesserung von anderen Pathologien, die im Zusammenhang stehen mit der Menopause, wie Harninkontinenz, vaginale Trockenheit, Erhöhung des Auftretens einer Autoimmunerkrankung und Verlust von Hautfarbe können auch erreicht werden durch Verabreichung der Verbindungen der Formel I.
Zusätzlich zu ihrer Nützlichkeit bei der Behandlung von Zuständen, die im Zusammenhang stehen mit Östrogendeprivation als Folge auf die Menopause sind die Verbindungen der vorliegenden Erfindung auch nützlich bei der Behandlung von Krankheitszuständen, die im Zusammenhang stehen mit einer unangemessenen Antwort auf endogenes Östrogen in Geweben, sowohl vor als auch nach der Menopause.
Ein Beispiel eines pathologischen Zustands, der im Zusammenhang steht mit anomalen Zellantworten auf endogenes Östrogen in Gewebe ist östrogenabhängiger Brustkrebs. Östrogenabhängige Brusttumorzellen proliferieren in Gegenwart von Östrogen, und die Behandlung dieser Erkrankung war es, alle Wirkungen von Östrogen auf diese Zellen zu stoppen.
Eine andere östrogenabhängige Pathologie ist Uterusfibrose (Uterusfibroseerkrankung). Im Wesentlichen ist Uterusfibrose ein Zustand, bei dem es eine Ablagerung von fibroidem Gewebe oder Fibrosegewebe an der Wand des Uterus gibt. Dieser Zustand ist eine Ursache von Dysmenorrhoe und Unfruchtbarkeit bei Frauen. Die genaue Ursache dieses Zustands wird nur wenig verstanden, aber Anzeichen lassen in Erwägung ziehen, dass es eine unangemessene Antwort von Fibrosegewebe auf Östrogen ist. Die üblichste Behandlung von Uterusfibrose schließt operative Verfahren ein, die sowohl kostspielig als auch manchmal Ursache von Komplikationen sind, wie die Bildung von Unterleibsanwachsungen und Infektionen.
Eine noch andere Erkrankung in dieser Kategorie ist Endometriose, ein Zustand von schwerer Dysmenorrhoe, die begleitet ist von schwerem Schmerz, Bluten in die Endometriummassen oder peritoneale Kavität und oft zu Unfruchtbarkeit führt. Die Ursache der Symptome von diesem Zustand scheinen ektopisches Endometriumwachstum zu sein an Orten in ungeeigneten Geweben, die unangemessen oder ungeeignet antworten auf eine Hormonsteuerung oder -kontrolle.
Wie hierin verwendet, bedeutet der Begriff "therapeutisch wirksame Menge" eine Menge einer Verbindung der vorliegenden Erfindung, die in der Lage ist, die Symptome der verschiedenen pathologischen Zustände, die hierin beschrieben sind, zu lindern. Die spezielle Dosis einer gemäß dieser Erfindung verabreichten Verbindung wird natürlich bestimmt durch die speziellen Umstände, die den Fall umgeben, einschließlich z.B. der verabreichten Verbindung, dem Verabreichungsweg, dem Zustand, in dem sich der Patient befindet, und der pathologische Zustand, der behandelt wird. Eine typische tägliche Dosis für die Verwendung bei Menschen wird einen nicht toxischen Dosierungswert von etwa 1 mg bis etwa 600 mg/Tag einer Verbindung der vorliegenden Erfindung enthalten. Bevorzugte tägliche Dosen oder Dosierungen werden im Allgemeinen von etwa 15 mg bis etwa 300 mg/Tag betragen. Am meisten bevorzugt sind Dosis- oder Dosierungsbereiche, die 10 mg, 20 mg, 30 mg, 40 mg, 50 mg, 60 mg, 70 mg, 80 mg, 90 mg und 100 mg darstellen, die einmal bis dreimal am Tag verabreicht werden.
Die Verbindungen dieser Erfindung können verabreicht werden durch eine Vielzahl von Verabreichungswegen oder -routen, einschließlich der oralen, rektalen, transdermalen, subkutanen, intravenösen, intramuskulären und intranasalen. Diese Verbindungen werden vorzugsweise vor der Verabreichung formuliert, wobei die Auswahl entschieden wird durch den betreuenden Arzt. Daher ist ein weiterer Gesichtspunkt der vorliegenden Erfindung eine pharmazeutische Zusammensetzung, die eine wirksame Menge einer Verbindung der Formel I umfasst, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon, gegebenenfalls enthaltend eine wirksame Menge von Östrogen oder Progestin, und einen) pharmazeutisch annehmbaren/annehmbares Träger, Verdünnungsmittel oder Hilfsstoff.
Die wirksamen Gesamtinhaltsstoffe in solchen Formulierungen umfassen von 0,1 Gew.-% bis 99,9 Gew.-% der Formulierung. Mit "pharmazeutisch annehmbar" ist gemeint, dass der Träger, das Verdünnungsmittel, der Hilfsstoff und das Salz kompatibel oder verträglich ist mit den anderen Inhaltsstoffen der Formulierung und nicht schädlich ist auf den Empfänger davon.
Pharmazeutische Formulierungen der vorliegenden Erfindung können hergestellt werden durch in der Technik bekannte Verfahren unter Verwendung von gut bekannten und leicht erhältlichen Inhaltsstoffen. Z.B. können die Verbindungen der Formel I mit oder ohne eine Östrogen- oder Progestinverbindung formuliert werden mit üblichen Hilfsstoffen, Verdünnungsmitteln oder Trägern und in Tabletten, Kapseln, Suspensionen, Pulver und dergleichen gebildet werden. Beispiele von Hilfsstoffen, Verdünnungsmitteln und Trägern, die geeignet sind für solche Formulierungen, schließen die folgenden ein: Füller oder Füllstoffe und Extender oder Streckmittel, wie Stärke, Zucker, Mannit und Kieselsäurederivate, Bindemittel, wie Carboxymethylcellulose und andere Cellulosederivate, Alginate, Gelatine und Polyvinylpyrrolidon; Befeuchtungsmittel, wie Glycerin; Zerfallhilfsmittel oder Tablettensprengmittel, wie Calciumcarbonat und Natriumbicarbonat; Mittel zum Hinauszögern oder Hemmen der Auflösung, wie Paraffin; Resorptionsbeschleuniger, wie quartäre Ammoniumverbindungen; oberflächenaktive Mittel, wie Cetylalkohol, Glycerinmonostearat; adsorptive Träger, wie Kaolin und Bentonit; und Schmiermittel, wie Talk, Calcium- und Magnesiumstearat und feste Polyethylglykole.
Die Verbindungen können auch als Elixiere oder Lösungen für die herkömmliche orale Verabreichung formuliert werden oder als Lösungen, die geeignet sind für die parenterale Verabreichung, z.B. durch intramuskuläre, subkutane oder intravenöse Verabreichungen oder Verabreichungswege. Zusätzlich sind die Verbindungen gut geeignet zur Formulierung als Dosierungsformen mit anhaltender oder nachhaltiger Freisetzung oder Abgabe und dergleichen. Die Formulierungen können so zusammengesetzt sein, dass sie den wirksamen Inhaltsstoff oder Wirkstoff nur oder vorzugsweise an einem besonderen physiologischen Ort abgeben, möglicherweise über einen gewissen Zeitraum. Die Beschichtungen, Umhüllungen und Schutzmatrizen können z.B. aus polymeren Substanzen oder Wachsen bestehen.
Die Verbindungen der Formel I allein oder in Kombination mit einem pharmazeutischen Mittel der vorliegenden Erfindung werden im Allgemeinen in einer herkömmlichen Formulierung verabreicht.

Claims

Verwendung einer Verbindung der Formel
worin R¹ steht für -H, -OH, -O(C₁-C₄-Alkyl), -OCOC₆H₅, -OCO(C₁-C₆-Alkyl) oder -OSO₂(C₂-C₆-Alkyl); R² und R³ jeweils unabhängig voneinander stehen für -H, -OH, -O(C₁-C₄-Alkyl),), -OCOC₆H₅, -OCO(C₁-C₆-Alkyl), -OSO₂(C₂-C₆-Alkyl) oder Halogen; R⁴ steht für 1-Piperidinyl, 1-Pyrrolidinyl, Methyl-1-pyrrolidinyl, Dimethyl-1-pyrrolidinyl, 4-Morpholino, Dimethylamino, Diethylamino, Diisopropylamino oder 1-Hexamethylenimino; n steht für 1, 2 oder 3; oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes davon bei der Herstellung eines Arzneimittels zur Hemmung einer Krankheit, die im Zusammenhang steht mit einer Östrogendeprivation.
Verwendung nach Anspruch 1, worin n für 2 steht, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
Verwendung nach entweder Anspruch 1 oder 2, worin R¹ für -OH steht, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 3, worin R⁴ für 1-Piperidinyl steht, oder pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 4, worin eines von R² oder R³ für -OH steht, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
Verwendung nach Anspruch 1, worin die Verbindung der Formel I steht für: 6-Methoxy-2-(4-methoxyphenyl)-1-[4-(2-piperidin-1-yl-ethoxy)-phenyl)-1,2,3,4-tetrahydrochinolin; 6-Methoxy-2-(4-methoxyphenyl)-1-[4-(2-pyrrolidin-1-yl-ethoxy)-phenyl]-1,2,3,4-tetrahydrochinolin; 1-(4-Hydroxyphenyl)-1-[4-(2-piperidin-l-yl-ethoxy)-phenyl]-1,2,3,4-tetrahydrochinolin-6-ol; und 1-(4-Hydroxyphenyl)-1-[4-(2-pyrrolidin-1-yl-ethoxy)-phenyl]-1,2,3,4-tetrahydrochinolin-6-ol; oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
Verwendung nach Anspruch 1, worin die Verbindung der Formel I für 1-(4-Hydroxyphenyl)-1-[4-(2-piperidin-1-yl-ethoxy)-phenyl]-1,2,3,4-tetrahydrochinolin-6-ol steht, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
Verwendung nach Anspruch 1, worin die Verbindung der Formel I für 1-(4-Hydroxyphenyl)-1-[4-(2-pyrrolidin-1-yl-ethoxy)-phenyl]-1,2,3,4-tetrahydrochinolin-6-ol steht, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 8, worin das Symptom der Östrogendeprivation für Knochenverlust steht.
Verwendung nach Anspruch 9, worin der Knochenverlust für Osteoporose steht.
Verwendung einer Verbindung der Formel
worin R¹ steht für -H, -OH, -O(C₁-C₄-Alkyl), -OCOC₆H₅, -OCO(C₁-C₆-Alkyl) oder -OSO₂(C₂-C₆-Alkyl); R² und R³ jeweils unabhängig voneinander stehen für -H, -OH, -O(C₁-C₄-Alkyl),), -OCOC₆H₅, -OCO(C₁-C₆-Alkyl), -OSO₂(C₂-C₆-Alkyl) oder Halogen; R⁴ steht für 1-Piperidinyl, 1-Pyrrolidinyl, Methyl-1-pyrrolidinyl, Dimethyl-1-pyrrolidinyl, 4-Morpholino, Dimethylamino, Diethylamino, Diisopropylamino oder 1-Hexamethylenimino; n steht für 1, 2 oder 3; oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes davon bei der Herstellung eines Arzneimittels zur Hemmung einer Krankheit, die im Zusammenhang steht mit einer aberrierenden physiologischen Antwort auf endogenes Östrogen.
Verwendung nach Anspruch 11, worin n für 2 steht, oder ein pharmazeutisch. annehmbares Salz davon.
Verwendung nach einem der Ansprüche 11 oder 12, worin R¹ für -OH sieht, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
Verwendung nach einem der Ansprüche 11 bis 13, worin R⁴ für 1-Piperidinyl steht, oder pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
Verwendung nach einem der Ansprüche 11 bis 14, worin eines von R² oder R³ für -OH steht, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
Verwendung nach Anspruch 11, worin die Verbindung der Formel I steht für: 6-Methoxy-2-(4-methoxyphenyl)-1-[4-(2-piperidin-1-yl-ethoxy)-phenyl]-1,2,3,4-tetrahydrochinolin; 6-Methoxy-2-(4-methoxyphenyl)-1-[4-(2-pyrrolidin-1-yl-ethoxy)-phenyl]-1,2,3,4-tetrahydrochinolin; 1-(4-Hydroxyphenyl)-1-[4-(2-piperidin-1-yl-ethoxy)-phenyl]-1,2,3,4-tetrahydrochinolin-6-ol; und 1-(4-Hydroxyphenyl)-1-[4-(2-pyrrolidin-1-yl-ethoxy)-phenyl]-1,2,3,4-tetrahydrochinolin-6-ol; oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
Verwendung nach Anspruch 11, worin die Verbindung der Formel 1 für 1-(4-Hydroxyphenyl)-1-[4-(2-piperidin-1-yl-ethoxy)-phenyl]-1,2,3,4-tetrahydrochinolin-6-ol steht, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
Verwendung nach Anspruch 11, worin die Verbindung der Formel 1 für 1-(4-hydroxyphenyl)-1-[4-(2-pyrrolidin-1-yl-ethoxy)-phenyl]-1,2,3,4-tetrahydrochinolin-6-ol steht, oder in pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
Verwendung nach einem der Ansprüche 11 bis 18, wobei die Krankheit, die im Zusammenhang steht mit einer aberrierenden physiologischen Antwort auf endogenes Östrogen, für Östrogen-abhängigen Krebs steht.
Verwendung nach Anspruch 19, worin der Krebs für Brustkrebs steht.
Verwendung nach den Ansprüchen 11 bis 18, worin der Krebs, der im Zusammenhang steht mit einer aberrierenden physiologischen Antwort auf endogenes Östrogen, für Endometriosis steht.
Verwendung nach den Ansprüchen 11 bis 18, worin die Krankheit, die im Zusammenhang steht mit einer aberrierenden physiologischen Antwort auf endogenes Östrogen, für Uterusfibrose steht.