DE3028594A1 - Neue planothiocin-antibiotika - Google Patents

Description

Die Erfindung betrifft neue, Schwefel enthaltende Antibiotika der Planothiocin-Reihe, ausgewählt aus der Gruppe Planothiocin-A_f -B, -C, -D, -E, -F und -G.

Die physiko-chemischen Eigenschaften der Planothiocine sind in der folgenden Tabelle 1 angegeben. Die biologischen Eigenschaften der Planothiocine sind in Tabelle 2 aufgeführt.

Wie angegeben, sind Planothiocine Schwefel enthaltende Antibiotika. Schwefel enthaltende Antibiotika sind Thiostrepton, Thiopeptine, Sulfomycine, Siomycine, A-59, Pepthiomycine, Thermothiocin, Sporangiomycine, Althiomycin, A-7413, Nosiheptid, L-13365, Actinothiocin, A-10947 und 35665RP u.a.

Nosiheptid hat die identische Aminosäurezusammensetzung, verglichen mit Planothiocin-A. Keine anderen Antibiotika mit der gleichen Aminosäurezusammensetzung wie Planothiocin-B sind bekannt. Nosiheptid besitzt einen maximalen Al s.orptionspeak bei 416 m/U (E^_cm = 124) und 440 m/U (E^_0n = 104,8), Jedoch zeigt Planothiocin-A keine solchen Absorptionspeaks. Nosiheptid liegt in Form hellgelblicher Kristalle vor, wohingegen Planothiocin-A in Form farbloser oder weißer Kristalle vorliegt. Die Rf-Werte bei der Silikagelchromatographie unterscheiden sich voneinander, d.h. Rf « 0,87 mit CHCl^/Methandl (3:1) und Rf = 0,71 mit Ä'thylacetat/Methanol/ Wasser CiO:2:1) für Nosiheptid.

Wie angegeben, sind Planothiocin-A und -B neu und nicht identisch mit anderen bekannten, Schwefel enthaltenden Antibiotika.

Substanzen mit der gleichen Aminosäurezusammensetzung, verglichen mit Pianothiocin-C, -D und -E sind Nosiheptid und Planothiocin-A. Eine Substanz mit der gleichen Aminosäurezusammensetzung, verglichen mit Planothiocin-F und -G ist Pianothio cin-B.

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Tabelle 1 Pianothiocin-A

Pianothio cin-B

(1) Schmelzpunkt

266 bis 269 C (Zers.)

259 bis 262°C (Zers.)

(2) Elementaranalyse

C 49,4796 H 3,5396
N 13,2596 S 13,7396

C 49,3796
N 13,3096

H 3,4596 S 14,1996

(3) Molekulargewicht

1438 (minimales Molekulargew, durch Aminosäureanalyse; 1 Molekül Threonin ist in 1 Molekül der Verbindung enthalten)'

1350 (minimales Molekulargew, durch Aminosäureanalyse; 1 Molekül Threonin ist in 1 Molekül der Verbindung enthalten)

(4) optische Drehung

+19,6 (C=O,7, Pyridin) [a]§3_ +95,4 (C=O,5, Pyridin)

Ultraviolett-Absorptionsspektr.

(Sch)
( )

Schulter
^E1 cm

Fig. 1, in Methanol, maximale Absorptionspeaks bei 217 m/U (629,5), 239 m/u(Sch)(487,7) ,260 m/u (Sch)(347,4), '330 iyi (317,9) '

Fig. 2, in angesäuertem Methanol (1 Tropfen 0,1 N HCl), maximale Absorptionspeaks bei 219 m/i (Sch) (644,9), 240 m/u(Sch)(508,8),259 m/u (Sch)(371,9), 330 _m/u(323,5) '

Fig. 3, in alkalischem Methanol (1 Tropfen 0,1N NaOH) max.Absorptionspeaks bei 234 m/u(Sch)(589,5), 299 m/u(Sch) (284,2)/328 m/U (Sch) (231,6) '

Fig. 5,in Methanol, maximale Absorptionspeaks bei 218 m/u (540,4), 239 mAi(Sch)(423,8), « 260 m/i(Sch) (294,5), 330 m yu -*a (276,6) ,

Fig. 6, in angesäuertem Methanol (1 Tropfen 0,1N HCl), max.Absorptionspeaks bei 219 m/u(566,O), 239 m/u(Sch)(468,1),'259 m/u(Sch) (335,3), 331 nyu (302,1) Fig. 7, in alkalischem Methanol (1 Tropfen 0,1N NaOH) max.Absorptionspeaks bei 239 m/u (Sch)(5i4,0), 297 m/u(263,8), 329 hfl (262,1) ^

Tabelle 1 (Fortsetzung)

(6) Infrarot-Absorptionsspektrum (KBr-Tablette)

Fig. 4; 3380, 3110, 2980, 1730, 1650, 1520, 1480, 1410, 1380, 1330, 1300, 1230, 1160, 1150, 1100, 1060, 1020, 990, 930, 910, 830, 780, 750 und 700 cm-1

Fig. 8; 3380, 3110, 2980, 1720,
1650, 1520, 1480, 1410, 1370, 1330, 1300, 1230, 1160, 1145, 1060, 1020, 990, 930, 910, 830, 780, 740 und
700 cm~¹

(7) Farbreaktion

positiv: entfärbt Kaliumpermanganat und Jod; negativ: Bisen(III)-Chlorid, Ninhydrin und Molisch

positiv: entfärbt Kaliumpermanganat und Jod;
negativ: Eisen(IIl)-chlorid,
Ninhydrin und Molisch

ο(8) Löslichkeit

löslich in CHCI3-Methanol, Pyridin, DMSO und Eisessig; unlöslich in Benzol, Aceton, Petroläther und Hexan

löslich in CHCl3-Methanol,
Pyridin, DMSO und Eisessig;
unlöslich in Benzol, Aceton,
Petroläther und Hexan

weiße Kristalle (nadeiförmig) weiße Kristalle (nadeiförmig)

S(9) Natur

cn ι. ■ ■ ι

^o(i0)Farbe

(11)Aminosäureanalyse (bestimmt durch einen
Aminosäureautoanalyzer,
ninhydrinpositive Fraktionen von 6N HCl bei
105⁰C während 20 h
Hydrolysat)

schwach sauer

schwach sauer

Threonin und 2 Komponenten ninhydrinpo s i tiv

Threonin und 1 Komponente
ninhydrinpositiv

Tabelle 1 (Fortsetzung)

OO CD O O CD

Ol O

(12) Rf-Werte (Silikagel-f, Produkt
der Tokyo Kasei Co.)

CHCl^/Methanol/Essigsäure(10:1:O,1) Rf = 0,26 Rf = 0,42

CHCl^/Methanol (3:1) Rf=O,2 Rf=O,27

Äthylacetat/foethanol/Wasser(10:2:1) Rf = 0,15 Rf = O,15

Acetonitril/Wasser (10:2) Rf = 0,43 Rf = 0,55

Butanol/Essigsäure/Wasser (3:1:1) Rf = 0,80 Rf = 0,83

(13) Stabilität stabil bei sauren und stabil bei sauren und

neutralen Bedingungen; neutralen Bedigungen;

instabil bei alkalischen instabil bei alkalischen

Bedingungen Bedingungen

CD K) OO

Tabelle 1 (Fortsetzung)

(6) IR-Absorptionsspektrum (KBr-Tablette)

Fig.12

3360,3100,1730,

1650,1520,1470,

1410,1375,1330,

1300,1230,1160,

1140,1100,1050,

1010 980,930,

910,830.780,

740 cm-"¹

1160,1140,110C 1060,1020,990, 940,910,840. 780,750 cm"¹

Fig.20

j3100,1730,

1650:1520,1470,

1410I1360,1330,

130011230,1160,

114OJ1O9O,1O1O,

980,$60,940,

910,^30.780,

cfm"¹

Fig.24

3380,3100,

1720,1650,

1520,1470,

1410,1370,

1330,1300,

1230,1160,

1140,1060,

1020,980,

960,930,

900,830,

780,750cm ^Ί

Fig.28

3380,3100,1710, 1650,1570,1520, 1470,1410,1360, 1330,1230,1150, 1140,1060,1010, 980,940,910, 820,780,740 cm"'

(7) Farbreaktion

po sitiv:entfärbt Kaliumpermanganat: negativ:Eisen(III)· chlo rid,Ninhydrin, Molisch

dito

dito

dito

dito

(8) Löslichkeit

löslich in CHCl*, Pyridin, DMF,DMSO; unlöslich in Benzol, Aceton,Petrolather, Wasser

dito

dito

dito

dito

(9) Natur	schwach sauer	dito	dito	dito	dito
(10) Farbe	weiß	dito	dito	dito	dito

(11) Aminosäure- Threonin und 2 ninanalyse(bestimmt hydrinpositive Kommit einem Amino- ponenten säureautoanalyzer,
ninhydrinpositive
Fraktionen von 6N
HCl bei 105⁰C,währ.
20 h Hydrolysat;

dito

dito

Threonin und 2 ninhydrinpo sitive Komponente

dito

Tabelle 1 (Fortsetzung)

Pianothiocin-C

Pianothiocin-D Planothiocin-E Planothiocin-F Planothiocin-G

(1)Schmelzpunkt

247-251 C(Zers.) 254-258°C(Zers.) 245-247 C(Zers.)258-26O°C(Z.) 262-264⁰C(Z)

(2)	Elementaranalys e	47,8196	48,1896	48,3196
	C:	3,42	3,58	3,36
	H:	13,62	13,26	13,41
	N:	13,85	15,61	13,92
	S:

49,8396	49,2696
3,54	3,42
14,70	13,70
15,29	15,96

(3) Molekulargew. (Aminosäureanalyse)

1200-1500

1200-1500 1200-1500

1200-1500

1200-1500

(4)opt.Drehung[a]i (Pvridin) ^u

20

+28,4(C=O,9)

+31,4(C=O,7) +45,5(C=O,7) +107,8(C=O,8) +122,4 (C=O,4)

^- (5) UV-Absorptions- ° spektrum

"-J A ft/

cn ( ) — E
_o ^v ' - 1cm

(Sch)=Schulter

alkalisches Methanol = 1 Tropfen
0,1N NaOH in
Methanol

angesäuertes Methanol = 1 Tropfen
0,1 N HCl in Methanol

Fig.9,max.Abs. Peak b.218(721), 240(Sch)(499 260(Sch)(322 u. 330 in/u (327 (in Methanol

Fig.11,in alk. Methanol,max. Abs.P.b.233 (Sch)(611),299 (271),329ημ (241) ^Γ

Fig.13,in Methanol ,max.Abs.Peak b.217(764),240 (Sch)(502),260 (Sch)(276)und 330 m_/U(343)

Fig.15,in alk. Meth.,max.Abs.P. b.232(Sch)(676), 300(282) und 329 m/u(248)

Fig.10, in ange- Fig.14, in anges. säuertem Methanol,Methanol,gleiche gleiche Werte wie Werte wie die in die in Methanol Methanol Fig.17,in Methanol, max. Abs.Peak b. 217(756),240 (Sch)(534), 260(Sch)(308), 329 m_/U(207) Fig.19,in alk. Meth.,max.Abs. P.b.233(Sch) (662),299(272), 329 nyu (207)

Fig.18, in anges. Methanol, gleiche Werte wie die in Methanol

Fig.21, in Methanol, max.Abs.P. b.217(744) 4()6i

Fig.25, in Methanol, max.Abs.P. ^ b.217(770). 240(Sch) ' 522)und 33Om,u(35O) Fig.27,in alk.Meth., max.Abs.P.b. 240(519), 299(247)und 329 uyi(284)

Fig.22,in an-Fig.26,in anges.Methanol,ges .Methanol, gleiche Werte gleiche Werwie die in te wie die Methanol in Methanol

() 260m/i (333) 33OnAi (333) Fig. £3,in alk.Meth., max.Abs.P. b.240(515), 330 m_/U(291)

Tabelle 1 (Fortsetzung)

(12) Rf-Wert (Silikagel-f, Produkt
der Tokyo Kasei Co.)

CHC^/Methanol/Essigsäure

(20:1:0,1) Rf = 0,43 Rf = 0,57 Äthylacetat/Methanol/Essigsäure (10:1:0,2) Rf = 0,49 Rf = 0,41 Acetonitril/Wasser(iO:i) Rf = 0,42 Rf = 0,37 Chloroform/Methanol(iO:i) Rf = 0,85 Rf = 0,87

Rf s 0,57 Rf = 0,67 Rf = 0,79

Rf
Rf
Rf

0,55
0,49
0,92

Rf
Rf
Rf

0,65 0,49 0,92

Rf Rf

Rf

0,49 0,41 0,94

	Akute	Toxizität (Maus. i.p. mg/kg)	1	PTC-A PTC-B	Tabelle 2	PTC-E	PTC-F	PTC-G
O		500 500 es traten keine	PTC-C PTC-D	500	500	500
O		500 500 Todesfälle auf

PTC = Planothiocin

Tabelle 2 (Fortsetzung)

Minimale Hemmkonzentration (MIC; γ/ml)

PTC-A

PTC-B

PTC-C

PTC-D

PTC-E

PTC-F

PTC-G

	Staphylococcus aureus ATCC 6538p	0,008	0,016	0,008	<	0,004	0,016	0,031	0,016	I
	" " MS353	0,016	0,031	0,008		0,004	0,016	0,031	0,016
	" " MS353 C36	0,016	0,031	0,008		0,004	0,016	0,031	0,016
	" " MS353 AO	0,008	0,031	0,008		0,004	0,016	0,031	0,016
	" » 0116	0,008	0,031	0,008	<	0,008	0,016	0,031	0,016
	tr η 0119	0,008	0,016	0,008	<	0,004	0,016	0,031	0,016
co CJ	" " 0126	0,016	0,031	0,008	<	0,004	0,016	0,031	0,016
CJ CD	η π 0127	0,016	0,031	0,008		0,008	0,016	0,031	0,016
CD	" epidermidis sp.al-1	0,031	0,063	0,016	>	0,016	0,063	0,125	0,016
CD	Streptococcus pyogenes N.Y.5	< 0,002	0,004	<0,002	"7 7	0,002	0,004	<0,002	<0,002	co O
cn	ti η -y 022	0,004	0,008	0,004	7	0,004	0,008	0,004	0,004	NJ OO
O	" faecalis 1501	0,25	>1	0,5	1	71	71	71	U I CO
	" agalactiae 1020	0,063	1	0,25	1	1	>1	0,5
	Sarcina lutea ATCC 9341	0,004	0,008	<0,002	0,002	0,008	0,008	0,002
	Micrococcus flavus ATCC 10240	0,004	0,008	<0,002	0,002	0,008	0,008	0,002
	Corynebacterium diphtheriae P.W.	8 0,004	< 0,002	<0,002	0,002	0,004	0,004	0,002
	Bacillus subtilis ATCC 6633	0,031	0,063	0,031	0,016	0,031	>1	0,063
	Escherichia coIi NIHJ-JC2 π "Β	71	71	>1	ι	71	>i
	Klebsiella pneumoniae ATCC10031	71	y 1		•1	>1	^1	71
	Salmonella typhosa H901	71	>^	71	1	71	71	71

Vergleicht man Nosiheptid mit Planothiocin-C, -D- und -E, so besitzt Nosiheptid die zuvor erwähnten Eigenschaften, wohingegen Planothiocin-C, -D und -E keine Absorptionspeaks im sichtbaren Bereich zeigen und in Form weißer Kristalle vorliegen. 35665RP-Substanz ist ein Derivat von Nosiheptid und besitzt einen Absorptionspeak von 405 m/u

Die Rf-Werte an Silikagel-Dünnschichtchromatographie für Planothiocin-C, -D, -E, -F und -G unterscheiden sich von denen für Nosiheptid, Planothiocin-A und -B wie folgt:

Nosiheptid: (1)⁺ Rf = 0,35, (2)** Rf = 0,27, (3)⁺⁺⁺ Rf = 0,29, (4)⁺⁺⁺⁺ Rf = 0,62;

Planothiocin-A: (I)⁺ Rf = 0,2, (2)⁺⁺ Rf = 0,13, (3)⁺⁺⁺ Rf = 0,19, (4)⁺⁺⁺⁺ Rf = 0,05;

Planothiocin-B: (I)⁺ Rf = 0,43, (2)⁺⁺ Rf = 0,22, (3)⁺⁺⁺ Rf = 0,18, (4)⁺⁺⁺⁺ Rf = 0,05;

Lösungsmittelsysteme:

+ CHCl-z/Methanol/Essigsäure = 20:1:0,1; ++ Äthylacetat/Methanol/Es sigsäure = 10:1:0,2; +++ Acetonitril/Wasser = 10:1; ++++ CHCl,/Methanol = 10:1.

Andere physikalisch-chemische Eigenschaften, wie die optische Drehung, unterscheiden sich von denen bekannter, Schwefel enthaltender Antibiotika. Als Ergebnis sind somit Planothiocin-C, -D, -E, -F und -G nicht mit bekannten, Schwefel enthaltenden Antibiotika identisch. Die erfindungsgemäßen Planothiocine sind somit neue Antibiotika.

Ein Planothiocin liefernder Mikroorganismus ist Actinomycetales, isoliert aus einer Bodenprobe eines Paprikafelds in Mihama-cho, Mikata-gun, Fukui-ken, Japan, und wird dem Genus Actinoplanes zugeordnet und als Actinoplanes sp. A12526 bezeichnet. Dieser Stamm wurde im Institute for

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Microbiological Industry and Technology, M.I.T.I., Japan, unter der Nummer FERM-P Nr. 5063 hinterlegt.

Die taxonomischen Eigenschaften dieses Stammes sind wie folgt.

(I) Morphologische Eigenschaften

Beobachtungen auf Stärke-anorganischem Salzagarmedium bei der Züchtung bei 30°C während 1 bis 14 Tagen sind wie folgt. Das Substratmycelium ist wellenförmig oder gewunden, verzweigt, hat einen Durchmesser von 0,8 bis 1,0/um und zeigt keine Bildung von Lufthyphen.

Sporangien werden an der kurzen Sporangiophore gebildet, die von dem Substratmycelium ausgeht. Die Formen der Sporangien sind kugelförmig oder elliptisch, 5 bis 10 χ 5 bis 15/um in der Größe und enthalten viele Sporangiosporen. Die Sporangiosporen sind fast kugelförmig oder subkugelförmig, haben einen Durchmesser von 1 bis 1,5/um und durch viele Härchen enthaltende Flagella frei beweglich.

(II) Zusammensetzung der Diaminopimelinsäure

Die Diaminopimelinsäure, die durch Analyse der gesamten Zelle festgestellt wurde, liegt als Hauptkomponente im meso-Typ und als Nebenkomponente im Hydroxy-Typ vor.

(III) Kultureigenschaften auf verschiedenen Medien

Die Beobachtungen, die man bei Bestimmung der Kultureigenschaften in verschiedenen Medien bei 30°C während 14 Tage-Kulturen macht, sind in der folgenden Tabelle 3 aufgeführt. Man beobachtet eine geringfügige Bildung von nichtgereiften, gewachsenen Luftmycelia auf vielen Medien. Die Angabe der Farbe beruht auf dem Anzeigesystem in "Color Harmony Manual", 4. Ed., 1958, publiziert von Container Corporation of America.

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Tabelle 3 Kultureigenschaften auf verschiedenen Medien

Medium

Wachsturn

Sporangium Farbe des Substratmyceliums Losliches Pigment

Saccharose- gut Nitratagar

Glucose-Asparagin-schlecht agar

Glycerin-Asparaginagar geringf.

schlecht leichtes Melonengelb (3ea) geringfügig helle Weizenfarbe (2ea)

keins

If

OJ O	anorganische SaI- ze-Stärkeagar	gut	gut	mittel
CD CD to	Tyrosinagar schlecht bis geringf,	Il	geringfügig »
CD	Hafermehlagar	η	schlecht
cn	Hefe-Malzagar	It	Il
	Bennett's Agar	schlecht	geringfügig
	Emerson's Agar	mittel	schlecht
	Nähragar	gut	keins
	Hickey und Tresner-Agar	mittel bis schlecht
	Pepton Czapeck's Agar	mittel

farblos

bernsteinfarben (31c) bis hellbernsteinfarben (3ic)

farblos bis hellelfenbeinfarben(2ca)

bernsteinfarben (3nc-31c)
goldfarben(3ne)bis zlmtfarben(31e)
topasfarben (3ne)
bernsteinfarben (3pc - 3nc)
farblos

ti

korkfarbenes Dunkelgelb

ro s tbraun-o rangefarben (4nc)

korkfarbener Dunkelgelb (4ie)

keins

(IV) Physiologische Eigenschaften

Die physiologischen Eigenschaften werden im folgenden aufgeführt.

(1) Ausnutzung von Kohlenstoffquellen

Kohlenstoff-	Ausnutzung	Kohlenstoff- Ausnutzung
quelle		quelle
L-Arabinose	+	Salicin +
D-XyIose	+	D-Galactose +
D-Glucose	+	Glycerin +
D-Fructose	+	L-Sorbose
D-Mannose	+	Trehalose +
D-Mannit	+	a-Melibiose +
Inosit	+	D-Ribose +
L-Rhamnose	+	Maltose +
Saccharose	+	Melezitose +
ß-Lactose	+	D-Cellobiose +
Raffinose	-	D-Sorbit
Cellulose	-	Dulcit
Stärke	+

+ = positiv; - = negativ; + = schwach positiv

(2) Wachstumstemperatur: 7 bis 40°C,

(3) Peptonisierung und Koagulation von Magermilch: positif,

(4) Melaninbildung: Tyrosinagarmedium - negativ; Pepton-Hefe-Eisenagannedium - positiv,

(5) Stärkehydrolyse: positiv,

(6) Cellulosezersetzung: negativ,

(7) Caseinhydrolyse: positiv,

(8) Tyrosinzersetzung: positiv,

(9) Gelatineverflüssigung: positiv

(10) Xanthinzersetzung: negativ,

(11) Hypoxanthinzersetzung: negativ,

(12) Bildung von Schwefelwasserstoff: positiv,

(13) Nitratreduktion: positiv.

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Entsprechend den obigen taxonomisehen Angaben, gemäß denen der Stamm A12526 Sporangia tragende Sporangiophoren enthält, die auf dem verzweigenden Substratmycelium wachsen, kugelförmig oder elliptisch geformte Sporangien aufweist, sphärisch oder subsphärisch geformte Sporangiosporen mit leicht beweglichen, polaren Flagella besitzt und meso-Diaminopimelinsäure enthält, gehört dieser Stamm zum Genus Actinoplanes.

Planothiocine können bevorzugt aus Kulturbrühe des obigen Stammes Actinoplanes sp.A12526 erhalten werden. Der obige Stamm ist nur ein Beispiel und Planothiocine einschließlich Planothiocin-A, -B, -C, -D, -E, -F und -G erzeugende Mikroorganismen können verwendet werden. Beispielsweise können Planothiocine erzeugende Mikroorganismen, die zum Genus Actinoplanes gehören, oder ihre Mutanten verwendet werden.

Planothiocine können durch aerobe Kultur von Planothiocine liefernden Stämmen, die zum Genus Actinoplanes gehören, in an sich bekannten, Antibiotika ergebenden Medien gezüchtet werden. Man kann feste oder flüssige Medien verwenden, und für die Herstellung in industriellem Maßstab ist eine submerse Belüftungskultur bevorzugt.

An sich bekannte Nährmedien für Mikroorganismen, die assimilierbare Kohlenstoffquellen, wie Glucose, Saccharose, Lactose, Maltose, Stärke, Melasse oder Glycerin, und assimilierbare Stickstoffquellen, wie Maisquellwasser, Sojabohnenpulver, Baumwollsamenpulver, Weizengluten, Pepton, Fleischextrakt, Hefeextrakt, Trockenhefe, Caseinhydrolysat, Ammoniumsalze oder Nitrat, enthalten, können verwendet werden. Zu dem Medium können je nach Bedarf Phosphat, Carbonat, Sulfat und Salze von Magnesium, Calcium, Kalium, Natrium, Kobalt, Eisen(II) oder Mangan zugegeben werden.

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Die Züchtungstemperatur hängt von dem Wachstum der Mikroorganismen und der Bildung der Planothiocine ab. Bevorzugt beträgt die Temperatur 25 bis 3O⁰C. Die Züchtungszeit hängt von den Bedingungen ab und beträgt normalerweise 2 bis 4 Tage. Die Züchtung wird beendigt, wenn die maximale Potenz der Planothiocine in dem Medium erreicht worden ist.

Planothiocine werden hauptsächlich in dem Mycelium und teilweise in dem KuIturfiltrat hergestellt.

Ein Verfahren zur Isolierung und Reinigung der Planothiocin-A, -B, -C, -D, -E, -F und -G-Komponenten aus Pianothioeinen ist wie folgt. Gezüchtete, nasse Mycelia und Filtrat werden erhalten, indem man die Kulturbrühe des obigen, Planothiocine bildenden Stamms filtriert oder zentrifugiert.

Das Kulturfiltrat enthält geringe Mengen an Planothiocinen und bevorzugt können die Antibiotika aus den Kulturmycelia isoliert werden. Planothiocine können aus nassen Mycelia durch Zugabe von Aceton extrahiert werden. Der Acetonextrakt wird im Vakuum konzentriert und erneut durch Zugabe von Äthylacetat extrahiert. Der Äthylacetatextrakt wird im Vakuum konzentriert, wobei man einen braunlichen, öligen Sirup erhält. Ein bräunliches Präzipitat wird erhalten, indem man Hexan zugibt. Das Präzipitat wird in einem Gemisch aus Chloroform und Methanol aufgelöst und im Vakuum unter Bildung eines hellbräunlichen Präzipitats nach der Entfernung des Chloroforms konzentriert. Dieser Vorgang wird wiederholt, wobei man ein gräulich-weißes Präziptit erhält, welches rohes Pianothiocin. ist und Planothiocin-A, -B, -C, -D, -E, -F und -G enthält. Das Rohprodukt wird in einem Gemisch aus Chloroform und Methanol (3:1) gelöst und durch Zugabe von Silikagelpulver getrocknet. Das Gemisch wird der Silikagel-Säulenchromatographie unterworfen und mit Chloroform/Methanol/Essigsäure (20:1:0,1) entwickelt.

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Eine Gruppe aktiver Fraktionen, die hauptsächlich Planothiocin-F und -G; Piano thiocin-D und -E; Piano thiocin-B und -C; und Planothiocin-A enthalten, wird erhalten.

Eine aktive Fraktion, die Pianothiocin-F und -G enthält, wird im Vakuum konzentriert, wobei man ein weißes Pulver erhält, das gereinigt wird,indem man es der Silikagel-Säulenchromatographie unterwirft und mit einem Gemisch aus Chloroform und Methanol (25:1) eluiert. Eine aktive Fraktion, die Piano thiocin-E und -D enthält, kann gereinigt werden, indem man konzentriert und an einer Silikagelsäule chromatographiert, wobei man mit einem Gemisch aus Äthylacetat/Methanol/Essigsäure (20:1:0,2) entwickelt. Eine aktive Fraktion, die Pianothiocin-B und -C enthält, kann nach dem gleichen, oben beschriebenen Verfahren gereinigt werden. Weiße Kristalle von Planothiocin-A werden erhalten, indem man das Konzentrat der aktiven Fraktion, die Planothiocin-A enthält, in einem Gemisch aus Chloroform und Methanol (2:1) löst und das Chloroform für die Umkristallisation entfernt.

Die so erhaltenen Planothiocine können für therapeutische oder prophylaktische, antibakterielle Mittel oder als Futterzusatzstoffe für Viehbestände, Geflügel oder Fisch verwendet werden.

Futterzusatzstoffe für eine .wachstumsaktivierende Wirkung, wie eine Erhöhung der Futterausbeute und . des Wachstums beim Schwein, enthalten bevorzugt 1 bis 20 ppm Planothiocine. Eine wachstumsaktivierende Wirkung kann bei Geflügel erreicht werden, indem man 1 bis 10 ppm Futterzusatzstoffe zugibt. Bei Fischen werden 0,1 bis 100 ppm zu dem Futter zugegeben.

Für die Zugabe der Planothiocine kann im Handel erhältliches Futter verwendet werden.

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Für eine antibakterielle therapeutische oder prophylaktische Verwendung können 1 bis 500 ppm eingesetzt werden. Planothiocine enthaltendes Futter kann in Form eines Gemisches, einer Paste, einer Tablette, eines Granulats, in Form von Pellets oder als Sirup vorliegen. Antibakterielle therapeutische oder prophylaktische Wirkungen und eine das Wachstum begünstigende Wirkung werden erhalten, wenn man die Zusammensetzungen an Vieh, Geflügel oder Fische verfüttert. Weiterhin wird eine Erhöhung in der Vermehrungswirkung bzw. Zeit für die Empfängnis und Laichzeit beobachtet .

Planothiocine verbleiben nicht in den Organen und Geweben des Viehs, des Geflügels und der Fische nach der Verabreichung. Man beobachtet keine akuten toxischen Symptome und teratogenen Wirkungen.

Die folgenden Beispiele erläutern die Erfindung. In der Beschreibung und den Ansprüchen sind die Prozentgehalte durch das Gewicht ausgedrückt.

Beispiel 1

Ein Medium (pH 6,5, 100 ml), das 296 Glucose, 2% lösliche Stärke, 1% Caseinhydrolysat, 1% Hefeextrakt und 0,296 CaI-ciumcarbonat enthält, wird 20 min bei 120⁰C in einem 500 ml Erlenmeyerkolben sterilisiert. Eine öse voll Actinoplanes sp. A12526 in Agarschrägmedium wird zum Inokulieren dieses sterilisierten Mediums verwendet und dann wird 4 Tage bei 30⁰C unter Schütteln bei 250 U/min geschüttelt. Das gleiche Kulturmedium wird hergestellt und unter gleichen Bedingungen wird kultiviert. Diese Impfkultür (insgesamt 200 ml) wird zum Inokulieren eines sterilisierten Mediums der gleichen .Zusammensetzung (20 1) in einer 30 1 Kolben-Fermentationsvorrichtung verwendet und 2 Tage bei 30⁰C und 300 U/min und 20 l/min Belüftung kultiviert. 10 1 dieses Kulturmediums werden zum In-

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okulieren eines sterilisierten Mediums verwendet, das 3% Saccharose, 2% Sojabohnenpulver, O,3# CaCO,, 0,00196 CoCl₂.6H₂O und 0,001% MgSO₄.7Η_£0 enthält (pH 6,5, 200 ml), und in einem 250 1 Tank 3 Tage bei 3O⁰C, 200 U/min und einer Belüftungsrate von 200 l/min kultiviert. Nach der Zugabe von 5 kg Filterhilfsmittel "Perlite" wird das so erhaltene Kulturmedium zur Abtrennung von nassen Mycelia und Filtrat filtriert. Die Antibiotika sind sowohl im Mycelium als auch im Filtrat, hauptsächlich im Mycelium, enthalten.

80 1 Aceton werden zu den nassen Mycelia zugegeben, dann wird 3 h heftig gerührt und filtriert. Der Acetonextrakt wird im Vakuum bis auf 20 1 konzentriert. 20 1 Äthylacetat werden zugegeben und dann wird der pH-Wert der wäßrigen Schicht auf 3»0 eingestellt. Nach heftigem Rührem wird die Äthylacetatschicht abgetrennt. 10 1 Äthylacetat werden weiter in die verbleibende, wäßrige Schicht gegeben, dann wird heftig gerührt und die Äthylacetatschicht abgetrennt. Die Äthylacetats chi chten werden vereinigt. 30 1 der vereinigten organischen Schicht werden im Vakuum konzentriert; man erhält einen bräunlichen, öligen Sirup. 2 1 Hexan werden zu diesem Sirup zugesetzt, um eine bräunliche Substanz auszufallen, die durch Zentrifugieren gesammelt wird. Der Niederschlag wird in 1500 ml eines Gemisches aus Chloroform und Methanol (5:2) gelöst und zur Ausfällung einer hellbräunlichen Substanz konzentriert, welche durch Zentrifugieren gesammelt wird. Der Niederschlag wird erneut in einem Gemisch aus Chloroform und Methanol (5:2) gelöst und im Vakuum zur Ausfällung einer gräulichen Substanz konzentriert.

Nach der Filtration wird die Substanz im Vakuum getrocknet; man erhält ein rohes Pulver (15,2 g), das Pianothiocin-A, -B, -C, -D, -E, -F und -G enthält.

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Beispiel

15 g des in Beispiel 1 erhaltenen rohen Pulvers werden in 2 1 eines Gemisches aus Chloroform und Methanol (3:1) gelöst. 300 g Silikagelpulver werden zu der Lösung zugesetzt und dann wird im Vakuum getrocknet, wobei man ein Gemisch aus Silikagel erhält. Dieses Silikagelgemisch wird auf den oberen Teil einer Silikagelsäule (1500 ml) gegeben, die mit einem Lösungsmittelgemisch aus Chloroform/Methanol/Essigsäure (20:1:0,1) gepackt ist. Die Eluierung erfolgt mit dem gleichen Lösungsmittelgemisch. Die aktiven Fraktionen, die Pianothiocinkomponenten enthalten, werden wie folgt eluiert.

Fraktionen Nr. 11 - 13: Pianothiocin-F und -G

Fraktionen Nr. 14 - 16: Planothiocin-D und -E

Fraktionen Nr. 17 - 24: Pianothiocin-B und -C

Fraktionen Nr. 46 - 60: Planothiocin-A.

Die aktiven Fraktionen Nr. 46-60 werden gesammelt und im Vakuum zur Ausfällung von Planothiocin-A konzentriert. Die Niederschläge werden durch Zentrifugieren gesammelt, in einem Gemisch aus Chloroform und Methanol (2:1) gelöst und bei Zimmertemperatur zur Entfernung des Chloroforms stehengelassen. Man erhält gereinigtes Planothiocin-A in Form weißer Kristalle (6,9 g).

Beispiel 3

Die aktiven Fraktionen Nr. 11-13, die Pianothiocin-F und -G enthalten, werden gesammelt und im Vakuum unter Bildung eines weißen Pulvers (80 mg) konzentriert. Das Pulver wird in einem Lösungsmittelgemisch aus Chloroform und Methanol (25:1) gelöst und auf eine Säule aus Silikagel (150 ml) gegeben, die mit dem gleichen Lösungsmittelgemisch gepackt ist, und dann wird mit dem gleichen Lösungsmittel eluiert.

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Das Eluat wird in je 7 g-Fraktionen fraktioniert» Pianothiocin-G wird in den aktiven Fraktionen Nr. 23-2? festgestellt. Pianothiocin-F wird in den aktiven Fraktionen Rr. 30-37 festgestellt. Jede der aktiven Fraktionen wird gesammelt und im Vakuum konzentriert, wobei man weiße, feine Nadelkristalle erhält. Die filtrierten Kristalle werden in Chloroform gelöst und bei Umgebungstemperatur stehengelassen. Dabei kristallisieren weiße, feine Kristalle aus Planothiocin-G und -F. Die Kristalle werden abfiltriert und getrocknet; man erhält gereinigtes Piano thiocin-G (6 mg) und Planothiocin-F (22 mg).

Beispiel 4

Die aktiven Fraktionen Nr. 14-16, die Pianothiocin-D und -E enthalten, werden gesammelt, im Vakuum konzentriert und auf eine Säule aus Silikagel (150 ml) gegeben, die zuvor mit Äthylacetat/Methanol/Essigsäure (20:1:0,2) gepackt worden war. Die Elution erfolgt mit dem gleichen Lösungsmittelgemisch (11 g/1 Fraktion). Die Fraktionen Nr. 23-29 werden als aktive Fraktion, die Pianothiocin-E enthält, gesammelt. Piano thiocin-D wird in den Fraktionen Nr. 35-49 festgestellt, Jede der aktiven Fraktionen wird im Vakuum konzentriert und dann wird zur Ausfällung von Planothiocin-E und -D Hexan zugegeben. Jeder Niederschlag wird in einem Gemisch aus Chloroform/Methanol (5:3) gelöst und Chloroform wird durch Konzentration entfernt, wobei Planothiocin-E und -D in Form weißer, feiner Nadelkristalle ausfällt. Die Kristalle werden filtriert und getrocknet; man erhält gereinigtes Planothiocin-E 683 mg) und Planothiocin-D (74 mg).

Beispiel 5

Die aktiven Fraktionen Nr. 17-24, die Pianothiocin-B und -C enthalten, werden gesammelt, im Vakuum konzentriert und auf eine Silikagelsäule (200 ml) gepackt, die zuvor mit Äthylacetat/Methanol/Essigsäure (20:1:0,2) gepackt worden war.

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Die Elution erfolgt mit dem gleichen Lösungsmittelgemisch (15 g/1 Fraktion). Pianothiocin-C wird in den Fraktionen Nr. 30-47 und Pianothiocin-B in den Fraktionen Nr. 70-88 festgestellt. Jede der aktiven Fraktionen wird im Vakuum konzentriert und zur Ausfällung von Planothiocin-C und -B mit Hexan versetzt. Jedes Präzipitat wird in einem Gemisch aus Chloroform/Methanol (5:3) gelöst und zur Entfernung von Chloroform und zur Ausfällung von weißem, kristallinem Planothiocin-C und -B konzentriert. Die Kristalle werden filtriert und getrocknet; man erhält gereinigtes Planothiocin-C (137 mg) und Pianothiocin-B (160 mg) in Form weißer, feiner Nadelkristalle.

Beispiel 6

Ein Medium (pH 7|O, 100 ml), das 196 Dextrin, 2% Glucose, 2% lösliche Stärke, 196 Caseinhydrolysat (Warenzeichen: NZ-Amine Type A), 1% Hefeextrakt und 0,2% CaCO, in einem 500 ml Erlenmeyerkolben enthält, wird 20 min bei 120⁰C sterilisiert. Eine ösevoll Actinoplanes sp. A12526 in Agarschrägkulturmedium wird zur Inokulierung dieses sterilisierten Mediums verwendet und dann wird 4 Tage bei 250 U/min und 30°C unter Schütteln kultiviert. Diese Impfkultür (200 ml) wird zur Inokulierung eines sterilisierten Mediums verwendet, das 396 Saccharose, 296 Sojabohnenpulver, 0,396 CaCO,, 0,001% CoCl₂.6H₂O und 0,00196 MgSO^.7H₂O (20 l) in einer 30 1 Kolbenfermentationsvorrichtung enthält, und dann wird 4 Tage bei 30⁰C und 200 U/min und 20 l/min Belüftung kultiviert.

Die so erhaltene Kulturbrühe wird zur Abtrennung der Mycelia und der überstehenden Flüssigkeit zentrifugiert. 10 1 Aceton werden zu den nassen Mycelia zugegeben, dann wird 3 h gerührt und anschließend filtrL ert. Der Acetonextrakt wird auf 2 1 konzentriert, dann wird der pH-Wert auf 6,5 eingestellt, 2 1 Äthylacetat werden zugegeben und

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dann wird heftig gerührt. Die Äthylacetatschicht wird konzentriert; man erhält einen bräunlichen, öligen Sirup. 200 ml Hexan werden zu dem Sirup gegeben. Die ausgefallene, bräunliche Substanz wird zentrifugiert und in einem Gemisch aus Chloroform und Methanol (5:1)(200 ml gelöst. Die Lösung wird zur Abdestillation des Chloroforms konzentriert. Ein gräulich-weißer Niederschlag wird durch Zentrifugieren gesammelt und getrocknet; man erhält ein Gemisch (240 mg, Reinheit » 60#), das Planothiocin-A und -B enthält.

170 mg des Gemisches werden in Chloroform/Methanol/Essigsäure (13:1:0,1) gelöst und auf eine Säule aus Silikagel (120 ml) gegeben, die zuvor mit dem gleichen Lösungsmittelgemisch gepackt worden war. Die Eluierung erfolgt mit dem gleichen Lösungsmittelgemisch für je 18 g/1 Fraktion. Die aktiven Fraktionen, die Pianothiocin-B enthalten, werden in den Fraktionen Nr. 9-15 festgestellt. Planothiocin wird in den aktiven Fraktionen bei den Fraktionen Nr. 16-46 festgestellt. Jede Fraktion wird gesammelt, zur Ausfällung weißer Kristalle konzentriert, die durch Zentrifugieren gesammelt werden. Die Kristalle werden in 20 ml eines Gemisches aus Chloroform/Methanol (2:1) gelöst und zur Entfernung des Chloroforms bei Umgebungstemperatur stehengelassen. Dabei kristallisieren Planothiocin-A- und -B in Form weißer Nadelkristalle aus-. Die so gebildeten Kristalle werden abfiltriert und getrocknet; man erhält Planothiocin-A (59 mg) und Planothiocin-B (23 mg).

Weiße nadeiförmige Kristalle von Planothiocin-A (50 mg), die bei dem obigen Verfahren erhalten wurden, werden in 10 ml einer Lösungsmittelmischung aus Essigsäure/Chloroform/ Methanol (3:1:1) gelöst. Die so ausgefällten, farblosen, prismenartigen Kristalle werden abfiltriert und getrocknet; man erhält Planothiocin-A in Form farbloser, prismenartiger Kristalle (29 mg).

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Bezugsbeispiel 1

Das Gemisch aus Pianothiocin-A und Pianothiocin-B (Planothiocin-A:Planothiocin-B = 93:7) wird mit einem Futter (künstliche Milch für Ferkel), welches 22,44% Rohprotein, 5,14% Rohfett, 0,74% rohe Cellulose, 6,16% rohe Asche, 1,25% Calcium und 0,95% Phosphor; DCP 21,38%, TDN 87,41%, enthält, vermi seht.

Zwei Gruppen von Ferkeln, je 10 in einer Gruppe, die 25 Tage alt sind, werden 4 Wochen gefüttert, wobei eine Gruppe mit dem Vergleichsfutter (keine Zugabe von Antibiotika), 0,5 ppm zugegebenem Futter (Futter, das 0,5 ppm Antibiotika enthält) und 5 ppm zugegebenem Futter gefüttert wurde. Die andere Gruppe wurde mit einem Vergleichsfutter (ohne Zugabe von Antibiotika), 10 ppm zugegebenem Futter (Futter, das 10 ppm Antibiotika enthält) und 20 ppm zugegebenem Futter gefüttert.

Die Ergebnisse des mittleren Körpergewichts, die Zunahme des mittleren Körpergewichts und das Verhältnis der Zunahme des mittleren Korpergewichts sind in Tabelle 4 angegeben. Wie aus der Tabelle folgt, beobachtet man wachstumsfördernde Wirkungen.

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Körpergewicht

Tabelle 4
Vergleich

0,5 ppm zugegeben

5 ppm zugegeben

Gruppe 1

zu Beginn

-1

am Ende Erhöhung²

Verhältnis der Erhöhung

5,5+1,08 5,6+1,26 5,4+1,39 15,1 + 2,76 16,2 +2,32 16,6 + 2,15 9,5+1,97 10,6+1,32 11,2+1,21*

100

110

118

Körpergewicht

Vergleich

10 ppm zugegeben

20 ppm zugegeben

Gruppe 2

zu Beginn

am Ende

ρ Erhöhung

5,8+1,07 5,8+0,87 5,7+1,15

15,4+2,14 17,2+1,95 16,8+2,33 9,7 + 1,33 11,5+1,27⁺⁺ 11,1 +1,27⁺

Verhältnis der Erhöhung

100

119

114

(1) mittleres Körpergewicht + Standardabweichung(kg)

(2) mittleres erhöhtes Körpergewicht + Standardabweichung (kg)

++ signifikante Differenz mit 1% Abweichung + signifikante Differenz mit 5% Abweichung.

Bezugsbeispiel 2

Ein Gemisch aus Planothiocin-A und -B (Verhältnis = 93:7) wird mit einem Geflügelfutter vermischt, das 20,096 Rohprotein, 3,4% Rohfett, 3,4% rohe Cellulose, 5,5% Rohasche, 1,03% Calcium, 0,83% Phosphor und 0,43% anorganisches Phosphat enthält und 70,3% TDN und eine Gesamtenergie von 34 cal/1000 g aufweist.

Zwei Gruppen von Küken, jeweils eine männliche und eine weibliche Gruppe, 25 Küken in jeder Gruppe, werden 4 Wochen mit einem Kontrollfutter (keine Zugabe von Antibiotika), mit einem Futter, dem 0,5 ppm Antibiotika zugegeben sind (Futter, das 0,5 ppm Antibiotika enthält), einem Futter,

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das 10 ppm Antibiotika enthält, und einem Futter, das 20 ppm Antibiotika enthält, gefüttert.

Wie aus der folgenden Tabelle 5 hervorgeht, wurde eine das Wachstum begünstigende Wirkung beobachtet.

In der Tabelle wurden bei der männlichen Gruppe signifikante Unterschiede beobachtet.

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Tabelle 5

Körpergewicht Vergleich 0,5 ppm 5 ppm 10 ppm 20 ppm

Zugabe Zugabe Zugabe Zugabe

weiblichezu Beginn¹44,32+2,9444,12+2,6544,32+2,4844,0+2,47 44,16+2,67

Gruppe ^_n J_1n^I 720,5+60,3 769,6+55,0 759,0+63,2 787,8+69,2 806,0+53,1

mittlere ,Er- . . , . , ,

höhung 676,2+60,0 725,4+54,5 714,7+62,4 743,7+68,5 761,8+52,9

männlichezu Beginn¹44,20+2,9644,20+3,2144,48+2,5244,32+3,1644,48+2,97

Gruppe am Ende¹ 784,4+70,9 823,1+45,6 839,2+62,7 868,7+61,6 863,2+47,7

co mittlere Er- . ,^ ,

ο höhung 742,2+71,1 778,9+45,0 794,7+63,3 824,4+61,9 818,8+48,6

(1) mittleres Körpergewicht + Standardabweichung (g) '

° (2) mittleres erhöhtes Körpergewicht + Standardabweichung (g) ο

+ signifikante Differenz mit einer Abweichung von 1% '

++ signifikante Differenz mit einer Abweichung von 5%

D¹W

5 pu

(fö φ

8·

<D

■ - 34-

L e e r s e 11

Claims (8)

Patentansprüche

1. Planothiocin-AntiMotika, ausgewählt aus der Gruppe Pianothiocin-A, Planothiocin-B, Planothiocin-C, Planothiocin-D, Pianothiocin-E, Pianothiocin-F und Planothiocin-G.

2. Pianothiocin-A mit den folgenden Eigenschaften:

(1) Schmelzpunkt: 266 bis 269°C (Zers.),

(2) Elementaranalyse: C 49,47%, H 3,53%, N 13,25%, S 13,73%,

(3) Molekulargewicht: 1438 (minimales Molekulargewicht, berechnet durch Aminosäureanalyse unter der Annahme, daß 1 Molekül Threonin in 1 Molekül der Verbindung vorhanden ist),

(4) optische Drehung: [«]q = +19,6 (c = 0,7, Pyridin)

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(5) Ultraviolett-Absorptionsspektrum: Fig. 1 (in Methanol), Fig. 2 (in angesäuertem Methanol), Fig. 3 (in alkalischem Methanol),

(6) Infrarot-Absorptionsspektrum: Fig. 4,

(7) Farbreaktion: positiv - entfärbt Kaliumpermanganat und Jod; negativ - Eisen(IIl)-Chlorid, Ninhydrin und Molisch,

(8) Löslichkeit: löslich in einem Gemisch aus CHCl,-Methanol, Pyridin, DMSO, Eisessig; unlöslich in Benzol, Aceton, Petrolather und Hexan,

(9) Natur: schwach sauer, (10) Farbe: weiße Kristalle.

3. Planothiocin-B mit den folgenden Eigenschaften:

(1) Schmelzpunkt: 259 bis 262°C (Zers.),

(2) Elementaranalyse: C 49,3796, H 3,4596, N 13,3090, S 14/1996,

(3) Molekulargewicht: 1350 (minimales Molekulargewicht, berechnet durch Aminosäureanalyse unter der Annahme, daß 1 Molekül Threonin in 1 Molekül der Verbindung vorhanden ist),

(4) optische Drehung: [oc]Jp = +95,4 (c = 0,5, Pyridin),

(5) Ultraviolett-Absorptionsspektrum: Fig. 5 (in Methanol), Fig. 6 {in angesäuertem Methanol), Fig. 7 (in alkalischem Methanol),

(6) Infrarot-Absorptionsspektrum: Fig. 8,

(7) Farbreaktion: positiv - entfärbt Kaliumpermanganat und Jod; negativ - Eisen(III)-chlorid, Ninhydrin und Molisch,

(8) Löslichkeit: löslich in einem Gemisch aus CHCl,-Methanol, Pyridin, DMSO und Eisessig; unlöslich in Benzol, Aceton, Petroläther und Hexan,

(9) Natur: schwach sauer, (10) Farbe: weiße Kristalle.

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4. Pianothiocin-C mit den folgenden Eigenschaften:

(1) Schmelzpunkt: 247 bis 251°C (Zers.)»

(2) Elementaranalyse: C 47,81%, H 3,42%, N 13,62%, S 13,85%,

(3) Molekulargewicht: 1200 bis 1500 (bestimmt durch Aminosäureanalyse),

(4) optische Drehung: [cc]q = +28,4 (c = 0,9, Pyridin),

(5) tlltraviolett-Absorptionsspektrum: Fig. 9 (in Methanol), Fig. 11 (in alkalischem Methanol),

(6) Infrarot-Absorptionsspektrum: Fig. 12,

(7) Farbreaktion: positiv - entfärbt Kaliumpermanganat und Jod; negativ - Eisen(lII)-chlorid, Ninhydrin und Molisch,

(8) Löslichkeit: löslich in CHCl₃, Pyridin, DMF und DMSO; unlöslich in Benzol, Aceton, Petroläther und Hexan sowie Wasser;

(9) Natur: schwach sauer, (10) Farbe: weiße Kristalle.

5. Planothiocin-D mit den folgenden Eigenschaften:

(1) Schmelzpunkt: 254 bis 258°C (Zers.),

(2) Elementaranalyse: C 48,18%, H 3,58%, N 13,26%, S 15,61%,

(3) Molekulargewicht: 1200 bis 1500 (bestimmt durch Aminosäureanalyse),

(4) optische Drehung: [oc]q° = +31,4 (c = 0,7, Pyridin),

(5) Ultraviolett-Absorptionsspektrum: Fig. 13 (in Methanol), Fig. 15 (in alkalischem Methanol),

(6) Infrarot-Absorptionsspektrum: Fig. 16,

(7) Farbreaktion: positiv - entfärbt Kaliumpermanganat und Jod; negativ - Eisen(IIl)-chlorid, Ninhydrin und Molisch,

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(8) Löslichkeit: löslich in CHCl₃, Pyridin, DMF und IMSO; unlöslich in Benzol, Aceton, Petroläther und Wasser,

(9) Natur: schwach sauer,
(10) Farbe: weiße Kristalle.

6. Planothiocin-E mit den folgenden Eigenschaften:

(1) Schmelzpunkt: 245 bis 247°C (Zers.),

(2) Elementaranalyse: C 48,31%, H 3,3696, N 13,41%, S 13,92%,

(3) Molekulargewicht: 1200 bis 1500 (bestimmt durch Aminosäureanalyse),

(4) optische Drehung: U⁰Oq = +45,5 (c =0,7, Pyridin),

(5) Ultraviolett-Absorptionsspektrum: Fig. 17 (in Methanol), Fig. 19 (in alkalischem Methanol),

(6) Infrarot-Absorptionsspektrum: Fig. 20,

(7) Farbreaktion: positiv - entfärbt Kaliumpermanganat und Jod; negativ - Eisen(III)chlorid, Ninhydrin, Molisch,

(8) Löslichkeit: löslich in CHCl₅, Pyridin, DMF und DMSOj unlöslich in Benzol, Aceton, Petroläther und Vasser,

(9) Natur: schwach sauer,
(10) Farbe: weiße Kristalle.

7. Planothiocin-F mit den folgenden Eigenschaften:

(1) Schmelzpunkt: 258 bis 260°C (Zers.),

(2) Elementaranalyse: C 49,83%, H 3,54%, N 14,70%, S 15,29%,

(3) Molekulargewicht (1200 bis 1500 (bestimmt durch Aminosäureanalyse),

(4) optische Drehung: O]^⁰ = +107,8 (c = 0,8, Pyridin),

(5) Ultraviolett-Absorptionsspektrum: Fig. 21 (in Methanol), Fig. 23 (in alkalischem Methanol),

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(6) Infrarot-Absorptionsspektrum: Fig. 24,

(7) Farbreaktion: positiv - entfärbt Kaliumpermanganat und Jod; negativ - Eisen(III)-chlorid, Ninhydrin und Molisch,

(8) Löslichkeit: löslich in CHCl₃, Pyridin, DMF

und IMSO; unlöslch in Benzol, Aceton, Petroläther und Wasser,

(9) Natur: schwach sauer, (10) Farbe: weiße Kristalle.

8. Pianothtocin-G mit den folgenden Eigenschaften:

(1) Schmelzpunkt: 262 bis 264° C (Zers.),

(2) Elementaranalyse: C 49,2696, H 3,4296, N 13,7096, S 15,9696,

(3) Molekulargewicht: 1200 bis 1500 (bestimmt durch Aminosäureanalyse),

(4) optische Drehung: [a]g° = +122,4 (c = 0,4, Pyridin),

(5) Ultraviolett-Absorptionsspektrum: Fig. 25 (in Methanol), Fig. 27 (in alkalischem Methanol),

(6) Infrarot-Absorptionsspektrum: Fig. 28,

(7) Farbreaktion: positiv - ßntfärbt Kaliumpermanganat und Jod; negativ - Eisen(III)-chlorid, Ninhydrin und Molisch,

(8) Löslichkeit: löslich in CHCl₃, Pyridin, DMF und DMSO; unlöslich in Benzol, Aceton, Petroläther und Wasser,

(9) Natur: schwach sauer, (10) Farbe: weiße Kristalle.

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