DK149964B - Fremgangsmaade til fremstilling af en blanding af antibiotiske stoffer betegnet planothiociner - Google Patents

Description

i 149964

Opfindelsen angår en fremgangsmåde til fremstilling af en blanding af hidtil ukendte antibiotiske stoffer betegnet planothiociner eller en eller flere af de enkelte komponenter betegnet planothiocin -A, -B, -C, -D, -E, -F og -G, og denne fremgangsmåde er ejendommelig ved det i kravet anførte.

Fysisk-kemiske egenskaber af planothiocinerne fremgår af tabel 1 i det følgende. Biologiske egenskaber af planothiocinerne fremgår af tabel 2.

Som vist er planothiocinerne svovlholdige antibiotica.

Blandt svovlholdige antibiotica kendes thiostrepton, thio-peptiner, sulfomyciner, siomyciner, A-59f pepthiomyciner, thermothiocin, sporangiomyciner, althiomycin, A-7413, nosi-heptid, L-13365, actinothiocin, A-10947 og 35665RP.

Nosiheptid har en aminosyresammensætning, som er identisk med den hos planothiocin-A. Der kendes ingen antibiotica med samme aminosyresammensætning som planothiocin-B.

1%

Nosiheptid har maksimumabsorptionstop ved 416 mp (E i cm = 124) og 440 my (E^^ cm = 104,8), men planothiocin-A har ingen absorptionstoppe. Nosiheptid er bleggullige krystaller, medens planothiocin-A er farveløst eller danner hvide krystaller.

Planothiocin-C, -D og -E har samme aminosyresammensætning som nosiheptid og planothiocin-A. Planothiocin-F og -G har samme aminosyresammensætning som planothiocin-B.

2 149964 i

o I

1 Φ Η I

oM G ft * · ®

2,3¾ g H rO

h G g η ,χ ·> η H *G

g h G pmo o- k ft (β Φ,α h o,w a id cd cm Ό o ft Ή G G G A φ ΦΦΟ -PS G >> Ο Η OG. HGk

m ©,ΧΉ G tQS - *<0 -—^ON

I >© >> P ~ G ft H O)

G ^ HH ft G σ>Α G O^-v ft H G CM

H hO -POG S CO - G .X S O ft O G ^¾.¾¾. bO S - 3 CM -ft HG« G G ·- 0 -η act! æ o a g σ\ w°weJ 2 2^ * ·ΗΗ<1Ή κ*-ΡΗ » H »CM Η A ,G ®0^ £ © «. H*® >» O X-'-'w HGftA G G «Η G G A-ft >> JX G -ft O ft g 22*5^!·

OG h i» ··> Φ II S G G * S S H CM

G © ©OH Οΐ GO ON-' ^ 2 A CO

GOIIIIHGO o »-ft M G « AA ,X S—'CM H G O >> S —' H A— -P G CM - M -H '—' ft S ffi CO S H O w © G A HX *

M g G · -ft G ft g S -A H G G

—.. 3 G G * G ft S 3<-MA © g dd S

« - g G ft A GS -PSOw x ra

o H © ^ CTt G O G H * H

O G G G G GCOVO N

^.¾¾. -Η >>H © + S H CM lOSVOJd

CMC^O g M G M CM SAM -HOS

VO PAfA w II -H , ·> H ww G - c\i ~ - G~ *-2 CTi-^s

!J\ fA AQ A © COVO VO'-'ftft C" . ACO

> -4" H O CM > - - H S S i3CM «

‘ A · AvO · O · A

cn II II A ^ bOftCMC^ bØJUCTtCTN bOHGvO

A · 8 tIO-JN Ή HA Ή»Φ(Μ

CM O «3 rjl — ft G—'—' ft Js; CM CM ft O

2 ·

G G o I G. « I

. -H O G ftE-^ «G

H g H H G -ft ft __ G

rø G O <7\ « Φ O =Q G Add

H ® Η ·Η MAC" G-P I ·> W

© G r-i G G G CM -4" °G G _? H ftOJs-'

G © >, >i G A G O ΟΓ1 wGOO

G ^ b *d Φ ft S *“'—^ G Ή -d*^- O IA G.

h <( U ©H 3^ G CM10* Η M'—S

1 G ^¾¾. G H r»i -S A— H ft OG

G -H AA bO O dd C" H -dd '-'G <0 G G^®

Η H AS S S Φ - XOttO G g ^ CM

O <D λ *. ^ H O Cfl CM'w' H CQ^^· 3 W fO

O Ό AA HG O Svo OG G S'-' HG H WE II wft G G-ΐ Φ-Η. * G © fX ·· S G S 2- S X 3^·

go II ll· © ·- · OH ft Λ3«Β GSCM

O G H®G„ ^ OgQ G S'—'— >X S y G s EM o w ft G '-O ©h Ca ω

©W g >1 G Ό G C^- CM S X-^JO H -ACO

pj w g H G Φ * ,GH Λ φ CT H^ CM CM

ft - - 3G-H© CT. G CM -<J\ G S G A © æ —-

O g G G Η H ©'-"'' G W “ * dd O

O -H G O Φ SO Ο-C- G - O A H © G Φ Φ Ό + Φ «Η ω-η- ft-00 ^ G Fi Φ dd σ» C^A -H G G G H >ISA Γί S “A S to VO -ij-CM ΒΜ·Η II 00^ ,H y H S „w CM - « —WGG - ft~3- H CT>g _ ft

CTv A AP H O w ©. CM hA ft AH O ftvO

H CM GES CMW S -G S ~

- CO · G'-' · · O G H

M3 || || A ^ bO O ,Μ O bOH Gid° bO OChA

VO -j- « HH © A H -©wA.h©-HCTiCM

CM O !3 H — ftG'-'A ft O >wA ft G G CM—' ©

G G I

>> OG

H HG» G G Ji G G G G ® ^

G bø G © I Ό S

G 83 OHM H^. O

iB > GOGS 3HH

G Η H O 3 X W

G >> 3d >HG M

© id M G G G ·· . g © HG ft.id ^ ^

ft© H G G G © X

gH O ft H O ft M

© © g O 3 w M —- /—s ^ ^ -----

H CM A -ft A

S»/ 'w' ' '«—' 3 149964 h h . t ρ i p *d a ·> ·η β Ob β β β +3 β >3

Ρ ·Η r»> P (DC

Pi β A P A Η -H

***£3*0 ,ί(ί Η β oooo 3 >> * *h »g $ s mrovoto ·η i h mm -p vaioooo η β ο τ) d H w ^ hhh cd *h fi ® oe h as x β p « -p xs fj • > « * ,β ·Η Ρ ·Ρ OOlAO «Η ·> -P ϋ - P β CM f>—d" i—M td Π P » Ρ β H 2 ΜΛΗΟΜ -H SO P *2 g H H H a wm β . CQ Λ β Ο O β Ο Ο I g Ρ — ft

» ► » » ·Η τΗ Η Q β ® S

οοοοο β λλ η b S

00 HMD ΓΛΟ > - Ο Ο Η · NS Ρ Λ OV^-HCftt" β+>·Η«θβββ Η CM Η Η Ρ Ρ β Η tC ·Η Ρ Ρ Η Η !H(J fcrl ϋ ti ίΗ cd »..►*·. CHtO ΡΟ -Ρ W) ΟΟΟΟΟ Ρ 60 *Η S ·· · · , » Ο ΗΟΟΙΌσι-ί 60 Μ β h Η C\J θ'» Ch- ·· ·· ·Η ·Η ί ^ Μ ^ ΓΟΗ Η > > Η Η W « ΗΗ 00 Ή ·Η Ρ Ρ β "Ρ «»»«.. .μ -ρ 10 CQ -Ρ Ρ Ο Ή •ΟΟΟΟΟ Η Ρ Β Β 60 Τ) Ρ Μ 6000 CM Ο CM 00 Ρ 60 Η Η «0 Η β Ο •HK-unfCio t- ο ρ ft A > > Λ ft fclCtHHH ρ, β Ο Ο Μ A +3 Β 3 I '2 >1 «..·.·> g; >ΟΡιΡ , ΟΟΟΟ β h Μ 'Ρ inr^vO γ-η ·η Λ ·* ·η » *· , Ρ

MDiOHOM Η β Η Π3 Ο β I

Η Η Η a Ρ *0 ·Η Ο -β βρ h^T β Ο ,Μ Ο β β Ρ Ο .β β β Ρ - - - - ·Η pw-p-p .¾ Ρ -Ρ ΟΟΟΟΟ *Η ·> ,β Η Ρ Ρ Ρ Η β ΙΛΟΟίΛΙΛΟ Ρ - ·ΰ +3 Ο Μ Η Η Ρ ο-κΛΗσ\[>- ·ρ·η ρ · ρ § «ρρβ

Η Η Η 60 Ρ β θ Ο β β-Ρ OS

β β Ο W * Ρ s_xtflft>- ·>·.·>·>· ·Η pH IS β Η a Η ΟΟΟΟΟ β 60 Λ,Ρ Ω ΡΟβ β Ο-Ρ cOHvoChm >β uo «λ ν β Cd ρ X η (ΤΝ-ί Η ΟΜ> ββ·ΗΡΗ«β·ΡΧ Η Μ (Μ Η Η ΡΒ β ·Η Ο β ΡΡΡ Η CM Ο «Η β β Η Εβ ·Η £> Α,β Ρ t ft - ~ « in ο φ Ο ΟΌ +3 60 β Ο Ο Ο Ο Ο Ρ ft «Η S ;· ·· , « 0·Η ΗωίΛΟΜΟΟ 60 60 bh „ is H<f CM Ο £*· ·· ·· ·Η ·Η 3 μ G *ϋ ·· ΓΛΗ η Η > > Η Η η Μ ·Η>, ·Η ·Η Ρ Ρ β Μ +> Ρ Ρ -Ρ Ρ Οβ 10 Ο Ο Ο Ο ·Η Ρ Β Β 60 Ό Ρ·Η 6000 CM ΟνΟ ίΛ Ρ 60 Η Η Ρ ·Η ββ gRSSS00 S, S § I S I 5' i — 15 -p

1 ρ·β<Η P

to^> βϋ P w β+> ►»'O t»

OP P h β ~H

•HH O-g PO o -p fit β 5 β° β ftp ρ Ή η οιητ)

Ji+j Ο £ β·ΗΟ Ο >,Ρ ,^Ηί Α Dl h β Η β ϊί .ρ,ορο ο ·β ρ·β®ρ·0β PPM Η Ρ SSitrtåSig W ^ -ρ ,β jj 4J h0 0) Ρ ιΗ ic tis ρ ·η β β-Ρ -·ρ ο Β 3 Ρ Η Ρ r^S Μ £"Η

w p +> Ρ Ρ Å! Ρ O-Pg-PffiCM

• β Μ > Β Ρ > β Μ ·2 ·Η Η <Η Ρ β Η β β β α Ρ ft Ρ Ρ S if. Ο ·Η Η Η ρ «Η Ο ^<5 <Η Ρ>—'2 ΑΆ-Ρ φ ro η /-\ z-Ν ^ S"* ^ Ρ VD 0^ 00 CTi Ο Η ζ-{ ^ ^ γΗ Η

W W

i 4 149964 u +3 3 Q) 3 β .¾ 3

bO -H

P H to Φ x β β H 3 0) CO (0 (0 Η *3 β 3 0) 3 3 cm t> m in ro 3 to > a

•ί (Μ H tn CO > β H

* * * » ·» Η Η Φ

OOO OO H+3-HbO

•H 3 O

il li il il ii γΟ,ω <ο·η 3 4^+3 «Η«Η<Η 'H'H +>333 os os os os os wh op (0 u +> 3 3 3 3 Λ 3 faO Ή Ο H 3 3 Λ 3 in H 3 3 3 3 3 H -3 β -3 3 Q)<1) vO Ο ΙΛ IO O 3 bO > 3 CM CM Η <f 00 > β Η κ « ·» ·* ·Η i—I 3

OOO OO H-P-HbO

•H 3 £> β

II II II II II 3 -H

3 -P +3 tH'H'H «Η <H +3333 02 02 02 OS OS 3H 3.0 +3 3 X β ·3 3 r*> β -3 3 3 .—v -3 0 3 !> CM β β X 3

ft ·Η ^ ·· ·· P

TO H

~ -3 Η O ··

+( φ/—Ν ·· Ο H

1 Η β 3 « » IO 3 β'"'*

3 · O Λ ·3 !>>H

bOO Η +> β 3 30 0··Η 3 3 3 ··

Ο β OS > X

•Η Ή 3 Η β ΉΗ Η 3 Λ 3 ••'"^ ·· Ό Ή 8 # ·· i Η -3 ·· +> 333 +3 +3 Η Η 3 3 w« SO 3 3 -ri m +> 3 H S +3 ·· β 3 +3 ·Η Ο ••w 3+3 +3 β -3 >» ·· Ο CM ·Η Η ·Η Ο β .¾ ^ 3 β Ο Η «Η % Ο _Ρ ΓΓ\ Η ·· Ο β ·Η w ^ Η r-ϊ +3 3 -Ο I υ Ο ΛΟ 3+3 3 η «Haw w +3η ο β -μ 02 β Ο Ο θ'-- 3 & 3 Η <Η (J) Χ-Ν

& Η CM

3 Η Ή Β w ^ 5 , , Sw 149964

C5 β s IS CM I - I P

| s -4· * p ft IS in 3 H ft -- P p C 3 - 3 g O'—''-"”' itj O in ✓-w-N 3 Φ •H W O Sr)^ aO ΗβΟΐΟΐIS-4· ΒΟΉ Ο·'-' Ο II X o iilin 33 3ΦΗ·4·€0 oofcO ο ϋ ή al o g ni ^ ,c ,α > in cm cm h · S ,

•HOC in *—' g H ww Η P tO Η Ο H

3 ~h. .¾ H - -PIS -<D e P, *0 MO

p voh ^¾^¾¾. l <r in h ftH ft ft ^ S 3 ° g- g g ., S

O CM <0 eO CM O VO - CM O pCM g g CM g-Pggg CMtOgtO

C 1 Tj CM -4- IS Cn O CM · β O · ,¾ H g 'Λ ΒΛ

to CMP -·.-·· O CM 60c0 3'dOOhOBXOOCnO\ bOP S P

h vote cummin cm η ήλ,ο a><i-m hh toneten cm ;H 2 2 2 (¾ CM x> -4- HH H + (x,+> to F CM m pH H S+> CM CM m ft S 3 g - I I * g, fi r·' g -4 m^s I - I +5 IS 00 3 ftC-H tn 3 H ft - P+>

β W » I g O'-'inm'-' 3 B

•ri v-r O llrlf wmm Η β ΟΌΙΛΗ 3-3 Η o r-N O II g X β ftr-v—fn (0 (0 M BHCTi O O bQ O O (i O ,C,a>inCM H *-S ,

•Η O β m w ·Η a H Β ,Μ'-' Η P 3 Η O H

ej ø,j i—I * CQ »<]) S pi *0 W O

P IOH 'SRiR’SR’SR ) CO HH ftH w ft ff) S g O ft ft CM fifi •ri cm tu m<f o tn c - cm o p cm ft ft g cm g p g g cm 3 φ 3 β ? -3 COlftlSCM O i" · β O SS · ,¾ Η fi · ,C S ,fi te 00 P « - - - O O 603 10-3000 botoxooo bopgp η uv® cnm-4-m cm η ήλρ φ-4-votn ήή 3 h -4- m η φ to φ pil CM -3 -4" HH H + pH P 3 ί> CM CM tn pH H g P CM m pH g M g m i ro -3 -4-co men ft p ic Λ i φ mo i - i men g p ,

rj S r-v p ,Q > -in m 3 H Pi CM CM 3 P

H 3 C'- Φ 3 ·-*---- -ΟΊ 3 Φ o W - g a ftVO'-'r-'Cn HfiO-C'-'CM ΟΉ o r-N o o ooin^^o άΐ3ΒΦΝΐο h _ •HOW) O II HgPISWBm ΛΡ >10 - *6

rj o β in O *H pwwww -Η P 3 VO'-' -Η O H

PC^-H H W - x O - 3 g ft'—'CM 00 o W O

O -4" H ^¾¾.¾¾.¾¾. i o 3 -H ft ft ft ft en g 3 O'-' f- Hfi fi β CM® HVO H CM * in HSPSSSS H Ξ P ^ CM·”' ·3 Φ 3 3 ) -3 mm<ren o - · -ft ·ϋΉΡ*ν^ t>03 S3 η ιή p - - - - o m to h p s-ο o <j\ to rax οή ο h p g p pLi <f ω rommm cm -4· ή o oh<hocm hh3h. 3.3-cm tn φ to φ CM -3 ~4- HH H + Ph β B CM CM CM m PhH aP S S'—' S ® Θ I I - · ft

O fi 3 -4-CM'-' I .P g P

is r-v χ* ftvOOVO 3 H ft ftO PP

β to is p i o tsmts .xopgoft 3 φ •h w - φ spwwcMr-N πβ owing btjh o r~N o o g 3 β z^-Nwtn 3 3«m - Ο O 60 Ο II s o g 3r>4 ,¾ JD C\jr->cn H -g

•Η Ο β in Ο Η ·Η ·Η M m ·Η P 3 VO CM HOH

rj CO Η H W -X+JS-wWw - Φ gOMO -OMO

p inn ’SR-SR-^3.i ^ mtOftH w inggajvo- i ocM®rorovoH -4- HgpcMftftft hb H 2 2 2 3 <-3 HincMiO o - · -o g g g •^rj '"'CM ro -fl |i

ro 4- P « - » - ο Η bOH 3-30 0 0 60 3 X 00 -4" 60P g P

H m φ commin cm m •Hop®-4‘vom ήή 3 o mcmcm ·η φ 3 φ dl CMti 4 HH H + Pn33>CMCMm PhH S ---------- Ph g 3 g o i i ”h m IC g cm i - i tn en

es 3 ftt^ OH 3 H ft CM CM P P

•h 3 en g o·^ ftmw x o ρ -m ρ φ

Ow -HP-r^gm Η β O Όλ - 3 -3 H

o r-N o O X fi 3.,¾ O - -r-N 3 3 3 Φ H'—· 3

H O bo O II 3 o g BHOrv>H Λιθ >HH -S

x; O β in O a H WCM CMNO ΉΡ3 VO Η Η O H

PHH H W +>C0 CM CM β - Φ B ft'-'CM H - O 3 O

o inn ^R'sR'sR^. , - ftH ft -mm3 h S 3 ολφ4 o β β fi CM Φ H CM CM in ? -4- en P CM B'-''-^-'Λ Η Β Ρ Λί ft CM H 3 Φ 3 3 Ϊ-3 ro-4-νοω o - · o cn^ p -ilHfingw »xlgx! h is p ---- o ro 603-3oenAJft®b03X ow<n 6op gp pii -t φ ismmm cm cm Ήθ®·ί4ΜΕΒ hhbh ften 3 η φ 3 φ CM-3-4"HH H + Ph 3 > c\|'-~-' ^ feH SP StM S PnBWg 3 ·· s ········ ρ φ h P OiCgOT I I ΦΡΡ-ΗΟ

3 Ρ I 3 P 3 -3 Φ «3 fi H

3 t 60Φ pmn ®fi bh SPEC 3 Ρ p SBP O CM r-x H O O 3 -30 ΛΗ Ρ δ > iS'-' P^ fi OHgHHAJ X 3H ΡΦΟΗ ,o · ρ φ H3® a ή hpo μ b »oiao φρκο 'η c 3 ^OB^'—'C^ftP Η *Φ β S «3 fi W φ>, X C In 3 H 3 Ρ Ρ ·· ·· H 13 3 PS3

BH ΦΗΗΗβΡΡΟ^ί'-''-'3·· ΛΡ-3 A H ft Φ 3 ΗΒ3ΡΟ>,Ρ3Φ Λ ^ΙΗΗΡ Ρ HP

g Ηβ Oflffi ftH ftH3ft 3 HO -Φ 3fi - Φ Η 3 Φ 3 8^3 Ο pw 333ww 3fiOS 3'ΦΟΒ φ ,Ο <-> ✓ ν 1 η cm m <r in

Eh vy w w 6 ί49964 οοοοοοο .

Η CM νΟ ΙΛ Η Η-3- ' ΝΙΛ^ΗΟ ΟΜ>· ° .ο ο ο ο ΟΟΟΟΟΟΟ -Ρ +1 -Ρ -Ρ Η G -Ρ

m ο[^η ΓΛνε <fco-p -ρ μ j StI'® S

S Hin<J-CMO(7vC- ·Η Η £ id d Τ* S

^Η.Η.Η.Ί:- ^ " * Ώ gfftg Μ ΟΟΟΟΟΟΟΗ SSioS' .¾5 comt-fcvd-cocMi £rd£§

£ 1ΛΜ0 <1" ΙΛΗ CTtOO S S f5 m S

ΙΟγΙΗγΙΗ O -P= ®·« ΟΟΟΟΟΟΟ <M Ν-ίΛνΟ CM ΙΛ0Ο .

NvMOHOOiN

..- HOP,

-·. O O O O O O OH O O O O °Sr,JJ

^ O CM IN DOMO VO ΙΛ I -P -P ^ "2 w T* Jti α

w Η ΙΛΙΛ CM O OMX) S -Ρ -Ρ -Ρ -P S

.ΙΛΗΗΗΗ OH H id id *d Έ?- S

“00000000 o -S > 2 rd oomno-itoom PStIS4 fOMO-j-roHcncnis gh-pe KVHHHH £:?«.§ ΟΟΟΟΟΟΟ I.

IOM<VOH<fCD ..g ,

N<ffOHOmN

ΊΊ.'Ι.Ί.Ί .«O O OO H-P-P

0 0 0-000 OH -Ρ -P +1 -P G G G

O CM CO ΙΛΟΟΜΟ KM -P +1 -P -P -d = 2

0 h inrocMOC^co S h -g £ ;d h?sS

se, OOOOOOOO B *d ^ f! CO ΙΛΗΟ-4-ΟΟΗΙΛ r ΙΛΜ3<1- ΙΛΗ CTvCTiN +1 - w *< ” ΙΛΗΗΗΗ ( ,

HO

ΟΟΟΟΟΟΟΗ ® g< ΙΛίΛΟΟ-ί O (Λ<Τ I ° «

t> ΙΛ ΓΛ CM H CTiCO S Λ _ ° B* S

TTtititi.o £ i i eSs OOOOOOOO-P +1 -P -P -H ij o

ONCMO<fNHin -Ρ H ^ ^ g'OPG

,n H ΙΛ-4-ίΛΗΟΟΜΝ H Tti ΓΛΗΗΗΗΗ Ti P-Svi

ΓΗ----......- G G G

.oooooooo

hn 00 LACO-d'MDvO-ti· CO -P S-P S

ΛΤ ΙΛΜΟ-ί (OH O OMS = - ΙΛΗΗΗΗΗ ^ ^

............ - Ι-ΡΙΛ - -in H

οοοοοοο ctittiH o G φ a> o <h -p ΙΛ IN fOVO ΙΛΝΛΟΟ ^ Sti G I CO H G Si Ρ Λ ·Η tN<f ΙΛΗ O CTiN t λ, cti G G H Ti O-P . n ®

Η Η Η Η Η «Η 3 bO Φ Η Η Η ·· -Ρ Φ bO G O

- -,Ίρ ---- ti * fl Ή G o ·· G W)®ra , ° ® ft oo^oooch φ s bo s <H 2 § B p 3

r., O CM NfCtO 00 ΙΛΙ .· hO g · ~ ·Η ft O H til 3 G G G H

Sj humocmhctooe ;> g g > Ti - η en φ - φ ta -h ® g ΙΛΗΗΗΗ 0*HH®HHG Φ-Ξ CQ G H G G Tti

.............. 41 G ft 41 ft'H tQ top S Φ O -P O O S

.* OOOOOOOO Ηϊ>ε cd O G BH - Η N G Ti bD Ti Φ ft.G

TU)trtH04HH<r tn ft ti bOHTi H O fo Pc G-P G Cd H ft £ ti

rd (fUO-ilQHOmN O cd Η Φ Λ S ftffi S ΟΦΦΠ5 !> > ,G O H

·** ΙΛΗΗΗΗΗ P,<HH GOÆ OO P 3 ,Ω P< > ω Si P .¾ £ I cd

o, Φ Η CQ

G CQ g >> I ·> ^-S Oc S tti H G lo

o CQ g cj H Cd H tid S O W

nioP^-v o Ti citi ti ft d ιλ ft CQ Φ ΓΪ -Ρ Η Φ G Φ CtiTi ftVOO φ^> ” Ρφ -Ρ Λ el > Ο £,«H Η S-Ρ (, υ» Η tisi bO ID -Ρ ti (4 ti Hl

Cd Η U G-PGGjucdTti-PCQ

Η s S' cd φ H ® κ>ιβ tH*H ^ , P

C t®4J G Φ -P to φ Φ G'H ft >OH

m S S CQ Hi Φ O-P G -Ρ Φ CM O

gH G > s cd>GcQ>> —H G - G

H G H g G HOlOGIOOHHti rj'dS Cd P td cd etiOOO'HOti^ H H+VC- *H O ^ <H dwti-Pft^K-Pti Φ n ^ ^

Cd vo S 00 O' O H

H w — — '— Η H

V^· ' 149964 7 σ\ σ\ η -ί . d <( -4“ I ·Η Ο - - - ο ο ο -ρ Ο Ο Ο Ο fio I ·Ρ

Cd ·Η ·Η II II II II HÆ Τ)

ftP

«Η «Η <Η «Ν

Pi & Ρύ øi d I Η ο s in σ> ν ο ο -ρ VDVO-iCTi d Ο ft Ρ ·*«»·»» cd ·Η I ·Η Ο Ο Ο Ο HP ό ftp

II II II II

<Η l·) !η <Η d

Pi ai Pi Pi I η ο ο ο Η Ρ βο I Ρ

Cd ·Η ·Η t'- ΙΛ <Τ\ CM Η Λ ·ΰ ιη ιη <f ctv ftp ψ\ *k «t Λ ο ο ο ο ιι ιι ιι ιι . d I ·Η ο Ή <Η <4 Ή Η Ο Ω Ρ ft pi ft cd d ο · cd Η ·Η 20 * C- Η t> C- m 4 η co ο ο" ο ο d I Η Ο II II II II Ο Ο -Ρ doo ρ CH 'Η 'Η <Η Cd ·Η I Η

Pi Pi Pi Pi ΗΛ ti ftp ιο Φ w in <t <1- <r co do ·* ·* λ ·» I ·Η Ρ Ο Ο Ο Ο oocqp d Ο I Ρ II II II ·· cd ·Η ΤΙ Η Ρ

<Η «Η «Η «Η ftP

ft cd pd od d I ·Η ω o o d IL, d o <β o φ φ >·, cd ·Η I O &0Ό i μ Η,β ind® 0 Φ ftp ·η τι d P ^

ft^“** ·Η H

Ο Φ Τ3 -O d TJ ··

«Η >> Φ H

1 ·Η Μ··'-' -—- O ft

Η Φ Φ H ·· CM ·· H

g) tg ,Μ " ·>

Mcd-HOHOO W) cd ft Ό o HH "Λ 0 ·ΰ .. ρ .. w o

ή o ΐ cd d 2 &P

H |>1 $H ί H fl (d E S

^ -H X ·· P d cd ^

p co o ·· Φ ·· cd P

cd H S > Φ P

w o O O S Φ

P H cd dcM *·Η ·· P

d xi d Cd— — ·· H

O d<H Λ Ρ H O

Ρ B P Cd -H S ρ w >P Φ P d d to

1 x S φ ρ o · X

Η«ΗΡΟΗΡ (M O

ft Ό ·· cd do P

Η ΙΌ H Od H

Φ'~'ΗΪ>>ΡΟ Φ P

P CM O Ρ Φ H P d

cd h td ρ o p cd X

E-i^oocdo H cd 8 149964 rj vOv£>V£>VOVOVOVDV£)VO(M<j· CMOJCNj rO^ ^ ^ ^ | ·Η HHHHHHHHHOO OOOVO V- ^

00 OOOOOOOOOOOOOOOOO.. A a A

rj η Γ5 Λ Λ ** ·* ' ' φ ·Η -¾ OOOCOOOOOOO 'ooooo rli V, A-P v d HHHHHHHHUAcM-i· ® ® ^ ^ ^ Ι·Η |ΓιΙΟ(ΛΙΓΙΙΛ1Γ\Κ>ΙΛΝθΟ Ο Ο Ο V- >->«>- Ο ΟΟ ΟΟΟΟΟΟΟΟΗΟΟΟΟΟΟΟα Λ αΛΑ C Οϋι - - - a a a a - a - Λ Λ ~ *· 5-HI ooooooooooo ooo

H i V

A-P

d vOVOVD'OVDUJVOVDtA-iCO QO 00 r-J

| -H HHHHHHHHVOOO *Vs V> OOO ΚΛ

OOH OOOOOOOOOOOa OOOOOOOO

1 O a O o' o'* O o <D CD O o O O 6 O A A Λ A

Η i

A-P

d -3--3- ^-3-00-3--3-(1)^01-3- W N ftl VD

1 -S · OOOOOOOOHOO O O O

OOQ OOOOOOOOOOOV^OOOOa A Λ Λ rt ο I ...»«-..·.·.·>·»·····> S-H ooooooooooo oooo

V V V V

d COCOCOOO-COCOCOCOVDCJO- OJCMCNJ H ^ w ^ Ι·Η OOOOOOOOHOO mOOOfO^’V-V^·^ 00 OOOOOOOOOOOlACMOOOO - ΑΛΛ h nn S-Hl ooooooooooooooooo

Hi \J V V V

A-P

d OHHHHVOHHIA-iGO 2 5 N (O

1 -Η Η ΙΛ ΙΟ 1Λ to H mrOMD O Ο "V- O O O'-OV-.^'V-^ OOfP ooooooooooo.. ο ο ο ο λ λ λ. a rjol Λ·»·*·* S-H ooooooooooo oooo

Hi' V

A-P

d ®(CVOCOODCOlQ(DH(M3 tn333H

IH ΟΗΗΟΟΟΗΗίΑΟΟ(Λ>ΌΟΟΟ(0\^ν-.ν-.ν- oo<! ooooooooooocmoooooaaaa rJOl λλλλ·.·*·*·*·*·*·*·*·»·*·*·'·'

ttfH OOOOOOOOOOOOOOOOO

Hi ,/

A-P V

H

d I CO ,

O A Η · H

•H CO VO Ο Π) & -p fA fo <; i _ · o co mo a ooo, q d vo m ra m W -3- h

.p m to in · CM Η O CM Φ fO

d umintncDChvDN mixcMOH Q cti m o

φ O (Cl IA HHCMCMH · O IT\ Η -H VO CM O

O EHCQCQCQHHHH'dSHH 2 inVDO E-j

d <SSSOOOO-H .« Η Ο Φ ^ <! H

0 gOJCQtQ-H-3-UiOl O

1 raraMMrawttWd<D<D'H-pm(H-POj]a 5S ddddddddraCCHocnciEHW tf K

ω φΦΦΦΦΦΦΦτίΦΦΦα) A <! Η ·η _ /-v -o dJHfHddddd-HbOfaoOHora-Η fepqdtd +3 d dP^d^c3iicSAoo<i>cood,dra ora

cO φ cOcOcdCOtOcOcOcOOl^i^iCObOEHp H'rlTHgO

rad <-n AA'HoJOcOSHHHdi

+3 Φ Hraramrararararara h d ·Η ο ο Φ A

d & £dddddddddrarararac&<HH-Pood>>

ο h oooooooooddddra ^ i A -P

cp rj \o oooooooooooo-pra®dn)aS

-__ <3 ooooooooooooopd-praHHcdco

JH J-OOOOOOOOOOOOOHOO i i Η H

OOOOOOOOOOOOO OCO WOCHH

CM H HHHHHHHHHOOOOdOiflHHOQ) co t^t^i^^i^i^^t^S+i-p-p-PdoraHd^-Hd H s oiiiiiiiii aaaah o d h φ g ra o φ -π ftftp.p.AAAAAæraajæpd^Hiiig

,α d HcOcOaJa5cti(ticOC(5ctSddf-ikdOdOOOO)H

φ .3 jj^+j+s+j+j+s^+j+s-P-P+’cdHoaJWMHn)

EH s SCO COCQCOCQCOCQCQCOCOCOCOCOCOSOPPWMWCO

149964 9 Når man sammenligner nosiheptid med planothiocin-C, -D og -E, har nosiheptid de ovenfor anførte egenskaber, medens planothiocin-C, -D og -E ikke har nogen absorptionstoppe i det synlige område og er hvide krystaller.

35665RP-stoffet er et derivat af nosipehtid og har ab- 1% sorptionstop ved 405 mp (E lem = 107).

Rf-værdierne ved tyndtlagschromatografi på silieagel er for planothiocin-C, -D, -E, -F og -G anført ovenfor og er forskellige fra værdierne for nosiheptid, planothio-cin-A og B, som er som følger:

Nosiheptid: (1)* RF = 0,35, (2)**Rf = 0,27, (3)***

Rf = 0,29, (4)****Rf « 0,62 Planothiocin-A: (1)* Rf = 0,25, (2)**Rf =0,13 (3)***Rf = 0,19, (4)**** RF = 0,05 Planothiocin-B: (1)* RF = 0,43, (2)** Rf = 0,22 (3)*** Rf = 0,18, (4)**** Rf = 0,05, Opløsningsmiddelsystemer: * CHCl^: methanol: eddikesyre = 20:1:0,1 **ethylacetat: methanol: eddikesyre = 10:1:0,2 ***acetonitril: vand = 10:1 **** CHCl^: methanol = 10:1 Andre fysisk-kemiske egenskaber såsom optisk rotation er forskellige fra dem af kendte svovlholdige anti-biotica.

Den planothiocindannende mikroorganisme er isoleret fra en jordprøve fra en paprikamark i Mihama-cho, Mikata-gun, Fukui-ken, Japan, og den henføres til slægten Acti-noplanes og betegnes Actinoplanes sp. A12526. Den nævnte stamme er deponeret i Institute for Microbiological Industry and Technology, M.I.T.I., Japan under nr. FERM-P nr. 5063.

De taksonomiske egenskaber af denne stamme er som følger: 10 149964 (I) Morphologiske egenskaber:

Observationer på agarmedium af stivelse og uorganiske salte dyrket ved 30°C i 10-14 dage er som følger:

Substratmyceliet er bølgende og forgrenet, 0,8-1,0 μ i diameter uden dannelse af lufthyfer.

Sporangier dannes på den korte sporangiofor, som dukker op af substratmyceliet. Formerne af sporangier er kugleformet eller elliptisk, 5-10 x 5-15 μ i størrelse og indeholdende mange sporangiosporer. Sporangiosporer er mest kugleformede eller subkugleformede, 1-1,5 μ i diameter og bevægelige ved polytrikøse flagella.

(II) Sammensætning af diaminopimelinsyre:

Diaminopimelinsyre detekteret ved helcelleanalyse er af mesotypen for størstepartens vedkommende og af hydroxyty-pen for den mindre parts vedkommende.

(III) Dyrkningsegenskaber i forskellige medier:

Observationerne resulterer i dyrkningskarakteristikker i forskellige medier ved 50°C i 14 dage som vist i tabel 3. Der iagttages en smule dannelse af umodent luftmycelium på mange medier.

Angivelsen af farver er baseret på "Color Harmony Manual”, 4. udgave, 1958 fra Container Corporation of America, 11

14996A

+» s 60+3 U'-' H © +> ρ p p Ρ P ^ ·Ρ ^ ·Ρ fl® f © g φ φ φ © φ © © © © © £! ·Η ©

tø w ρ ρ p -P ρ P Ρ Ρ Ρ P fn<f P

§ * Έ fc Έ β a a b S 5 S S

HP ·Η Η Η ·Η Η ·Η Η ·Η ·Η ·Η Λ ·Η ft Ο

S ✓"S

1 (0 Ο I ¢0 Η 2

+5 ή *Η Η Ο 2^^ S

© © to α> cvj β © <f β © C ρν^ ^ © Η '— - ρ to 2 © Ρ ΚΝ Λ γ. m ν_^ © >, © β Ο ' Ο 03 φ ,2 Ν Η >>© Η I β ω η 3ε η , Ηί μ Λ ^ δ ? ”.3 a 1 ι s i ·£ "s s

S «ΗΗ β © Η β β .O

co ω o 'ti 03 o οι o to ro o © β l © O Η ® 0 H S βν^^ρ,φβ β bC © > © > H to H tO tO Η β . p •H > S S Λ © ^ ^ “ w P ·θ^ b fL{ Li ^ *> cd cd > »*p »y

Hto © © β > β > ft ft > b b 'g ©ft >·,{>>© © © to o o © © o ø HH«H β Ή β-Ρ-Ρβ'Η^ί β 03 β • ο ή 'π 00 _| o£ri g ·Η © p β bO Η bO h0 bO Ρ ^ ^ η ·η Η Φ ·Η ·Η ·Η β © β © η< β 00 Η «© «© 70 »CO HH «© Η © ό“<0 ό Εη © β β tH *Η 70 *H Ρ Ρ 'Ρ Ρ £Ρ 'S ^ 'S ja © ο© ·η »cd ^0 «to β η ·η © β ·© S ΐ Ό Τθ Η g Η g Λ! Ο £ 01 ft 40

β CO

© be , © Η Μ ·Η b£ Ρ .

β Μ Μ Η Η +3 Η bO»Cd _, Ρ ©

β© ·β Η °Cd 70 Ρ Ρ TO 70 7070(-)¾ TO

Jsj .isj Ο β <Η Ο Η Ο Ο Ο Ο β 70 Ο

β{Β b0«d fao β bObO bo bo «© Ρ bO

>. > 'P °© τΟ Β Q 'Ο β β β ti © h0 b0 © β h0 © © „ jd © © bo β *· © Ρ β ·Η Ρ © Ρ bO I © “ β bo © Ρ β , κ “ Ρ © Ρ Η © Ρ ^ ^ •η ρ © © ω ρ ρ © 22 β © ρ, © © β© ©Μ β © g ip,© I β ©bO bO © β Η ft β ©03©©' © bO© © © ©

•Η © © I ,5 O) bO ©I WbObO N

>p o I H © 03 © HP ©-©O O

© β © O Ρ Ρ β ©Η «·β© I

S © © β ft© H g© P O hp >> β ij o © ro > ω ©Θ © © β © o O O O bO-Ή o β I β Ρ P M p O β >> Ρ Ρ β > p β © P O ft ©HH O © >> ©æ © S 8 Ρ © cocOOtu E-) K bO pq ft S W ft 12 149964 (IV) Fysiologiske egenskaber:

Fysiologiske egenskaber illustreres som følger: 1) Udnyttelse af carbonkilde,.

Carbonkilde udnyttelse Carbonkilde udnyttelse L-arabinose + salicin + E-xylose + E-galactose + E-glucose + glycerol + E-fructose + L-sorbose E-mannose + trehalose + E-mannitol + oc-melibiose + inositol + E-ribose + L-rhamnose + maltose + sucrose + melezitose + β-lactose + E-cellobiose + raffinose — E-sorbitol — cellulose — dulcitol - stivelse + (+ = positiv - = negativ) + = svagt positiv 149964 13 2) væksttemperatur; 7-40°C.

3) Peptonisering og koagulation af skummet mælk: positiv.

4) Melanindannelse: Tyrosin-agar-medium: negativ.

Pepton-gær-jem-agarmedium: positiv.

5) Stivelsehydrolyse: Positiv.

6) Cellulosesønderdeling: negativ.

7) Caseinhydrolyse: positiv.

8) Tyrosinsønderdeling: positiv.

9) PiydendegøreIse af gelatine: positiv.

10) Xanthinsønderdeling: negativ.

11) Hypoxanthinsønderdeling: negativ.

12) Hydrogensulfiddannelse: positiv.

13) nitratreduktion: positiv.

Ifølge ovenstående taksonomiske data, hvor stammen A12526 har sporangiehærende sporangioforer båret på forgrenende substratmycelium, sfærisk eller elliptisk sporangium, sfæriske eller subsfæriske sporangiosporer med bevægelige polare flagella og meso-diaminopimelinsyre, tilhører denne stamme slægten Aotinoplanes.

Planothiociner fremstilles .ved aerob dyrkning af nævnte planothiocindannende stammer tilhørende slægten Aotinoplanes i et gængs antibioticumproduktionsmedium. Paste eller flydende medier kan benyttes, og til fremstilling i industriel målestok foretiækkes submers luftningskultur.

Gængse næringsmedier til mikroorganismer indeholdende assimilerbare carbonkilder såsom glucose, saccharose, lactose, maltose, stivelse, melasse eller glycerol og assimilerbare nitrogenkilder såsom majsstøbevæske, sojabønnepulver, bomuldsfrøpulver, hvedegluten, pepton, kødekstrakt, gærekstrakt, tørgær, caseinhydrolysat, ammoniumsalt eller nitrat kan benyttes. Phosphat, oarbonat, sulfat og salte af 14 149964 magnesium, calcium, kalium, natrium, cobalt, jern eller mangan kan tilsættes mediet efter behov.

Dyrkningstemperaturen afhænger af væksten af mikroorganismen og produktionen af planothiociner. Fortrinsvis ligger temperaturen på 25-30°C,

Dyrkningstiden afhænger af betingelserne og er normalt 2-4 dage. Dyrkningen afsluttes, når den maksimale styrke af planothiociner i mediet er nået.

Planothiociner produceres i hovedsagen i myceliet og delvis i kulturfiltratet.

En teknik til isolering og rensning af planothiocin--A, -B, -0, -D, -E, -F -Gr—komponenter sr som følger:

Dyrket vådt mycelium og filtrat fås ved filtrering eller centrifugering af dyrkningsvæsken af ovennævnte plano-thiocinproducerende stamme.

Dyrkningsfiltratet indeholder små mængder af planothiociner, og fortrinsvis kan antibiotica isoleres fra dyrkede mycelier. Planothiociner kan ekstraheres fra vådt mycelium ved tilsætning af acetone. Acetoneekstrakten inddampes i vakuum og genekstraheres ved tilsætning af ethylacetat. Ethylacetatekstrakten inddampes i vakuum til opnåelse af en brunlig olieagtig sirup. Der fås en brunlig udfældning ved tilsætning af hexan. Udfældningen opløses i en blanding af chloroform og methanol og inddampes i vakuum til opnåelse af en blegbrunlig udfældning efter fjernelse af chloroform.

Denne operation gentages til opnåelse af en grålighvid udfældning, som er rå planothiociner indeholdende planothiocin-A, —B, —C , —D , —E , —F og — Gr, Råproduktet opløses i en blanding af chloroform og methanol (3*1) og tørres ved tilsætning af silicagelpulver.

Denne blanding benyttes til silicagelsøjlechromatografi med chloroform : methanol : eddikesyre (20 : 1 : 0,1) som elue-ringsmiddel.

Der kan fås en gruppe af aktive fraktioner, som i hovedsagen indeholder planothiocin-F og -0, planothiocin-D og -E, planothiocin-B og -C samt planothiocin-A.

149964 15

En aktiv fraktion indeholdende planothiocin-F og -G inddampes i vakuum til opnåelse af et hvidt pulver» som renses ved chromatografi på silicagelsøjle under eluering med en blanding af chloroform og methanol (25 : 1).

En aktiv fraktion indeholdende planothiocin-E og -3) kan renses ved inddampning og chromatografi på silicagelsøjle under eluering med en blanding af ethylacetat : methanol : eddikesyre (20 : 1 :0,2).

ligeledes kan en aktiv fraktion indeholdende plano-thiocin-B og -0 renses ved ovennævnte fremgangsmåde.

Hvide krystaller af planothiocin-A kam fås ved opløsning af koncentratet af aktiv fraktion indeholdende planothiocin-A i en blanding af chloroform : methanol (2 :l) og fjernelse af chloroformet til krystallisation*

De således opnåede pianothiociner kan benyttes til terapeutiske eller profylaktiske antibakterielle præparater eller fodertilsætningsstoffer til kvæg, fjerkræ eller fisk.

Fodertilsætningsstoffer til fremme af væksten f.eks. af grise indeholder fortrinsvis 1-20 dele pr* million plano-thiociner. Den vækstfremmende virkning på fjerkræ kan opnås ved tilsætning af 1-10 dele pr. million af fodertilsætningsstofferne. Til fisk tilsættes 0,1 - 100 dele pr. million i foderet.

I handelen gående foderstoffer kan benyttes til tilsætning af planothiociner. Til antibakteriel terapeutisk eller profylaktisk brug kan der benyttes 1-500 dele pr. million.

Foder indeholdende planothiociner kan oparbejdes til foretrukne typer såsom blandinger, pasta, tabletter, granulat eller sirup.

Antibakteriel terapeutisk eller profylaktisk virkning og vækstfremmende virkning opnås ved fodring af besætning, fjerkræ eller fisk med præparaterne. X det sidste tilfælde iagttages en forøget gydning.

Planothiocinerne forbliver ikke i organerne og vævene på kvæg, fjerkræ og fisk. Der iagttages ingen akutte forgiftningssymptomer eller nogen teratogen virkning.

Nedenstående eksempler illustrerer opfindelsen. Procentangivelser gælder vægt/rumfang, med mindre andet angives.

149964 16

Eksempel 1.

Et medium (pH 6,5» 100 ml) indeholdende glucose 2$, opløselig stivelse 2$, caseinhydrolysat 1$, gærekstrakt 1$ og calciumearbonat 0,2$ i en 500 ml erlenmeyerkolbe steriliseres ved 120°C i 20 minutter. En podenålfuld af Actino-planes sp. A12526 i agarskråkulturmedium podes i dette steriliserede medium og rystedyrkes ved 250 omdrejninger pr. minut ved 30° C i 4 dage. Samme kulturmedium fremstilles og dyrkes under de samme betingelser. Denne podekultur (200 ml i kombination) podes i et sterilt medium af samme sammensætning (20 liter) i en 30 liter fermenteringsbeholder og dyrkes ved 30°C i 2 dage ved 300 omdrejninger pr. minut med en luftning på 20 liter pr. minut. Samme kulturmedium (10 liter) podes i et steriliseret medium indeholdende saccharose 3$, sojabønnepulver 2$, CaCO^ 0,3$, CoCl2, 6H20 0,001$ og Mg S0^, 7H20 0,001$ (pH ca. 6,5 200 liter) i 250 liter beholder og dyrkes ved 30°G i 3 dage ved 200 omdrejninger pr. minut, luftningshastighed 200 liter pr. minut.

Det således opnåede dyrkede medium filtreres efter tilsætning af filterhjælpemiddel (5 kg) til adskillelse af vådt mycelium og filtrat. Der findes antibiotika både i mycelium og filtrat, især mycelium.

Acetone (80 liter) sættes til det våde mycelium, og man omrører kraftigt i 3 timer og filtrerer. Acetoneekstrakten inddampes i vakuum til 20 liter. Der tilsættes ethylace-tat (20 liter), og man indstiller det vandige lag til pH 3,0. Efter kraftig omrøring fraskilles ethylacetatlaget. Ethyl-acetat (10 liter) sættes yderligere til det resterende vandige lag, og man omrører kraftigt og fraskiller ethylacetatlaget. Ethylacetatlagene slås sammen. Den samlede organiske fase (30 liter) inddampes i vakuum til opnåelse af en brunlig olieagtig sirup. Hexan (2 liter) sættes til denne sirup til fældning af det brunlige stof, som samles ved centrifugering. Udfældningen opløses i en blanding (500 ml) af chloroform og methanol (5 s 2) og inddampes til udfældning af en blegbrun substans, som samles ved centrifugering. Udfældningen opløses igen i en blanding af chloroform og methanol (5 : 2) og inddampes i vakuum til udfældning af en grå sub- 149964 17 stans.

Efter filtrering tørres denne substans i vakuum til opnåelse af en blanding af planothiocin-Af’-B,-C,-Df-Ef-F og-G. Eksempel 2,

Et råt pulver (15 g) fra eksempel 1 opløses i en blanding (2 liter) af chloroform og methanol (5 i l). Sili-cagelpulver (300 g) sættes til opløsningen og tørres i vakuum til opnåelse af silicagelblandingen. Denne silicagel-blanding anbringes øverst i en silicagelsøjle (1500 ml) pakket med en blandet opløsning af chloroform : methanol : eddikesyre (20 : 1 : 0,1), Eluering udføres med samme opløsningsmiddelblanding.

Aktive fraktioner indeholdende planothiocinforbindel-ser elueres som følgeT·:

Fraktion nr..11-13: planothiocin-F og -G.

Fraktion nr, 14-16: planothiocin-D og -E.

Fraktion nr. 17-24: planothiocin-B og -C.

Fraktion nr. 46-60: planothiocin-A.

Aktive fraktioner nr. 46-60 samles og inddampes i vakuum til udfældning af planothiocin-A. Udfældningerne samles ved centrifugering, opløses i en blanding af chloroform : methanol (2 : 1) og henstår ved stuetemperatur til fjernelse af chloroform og til opnåelse af renset planothiocin-A som hvide krystaller (6,9 g).

Aktive fraktioner nr. 11-13 indeholdende planothio-cin-F og -G samles og inddampes i vakuum til opnåelse af et hvidt pulver (80mg). Pulveret opløses i et blandet opløsningsmiddel af chloroform og methanol (25 : 1) og anbringes på en silicagelsøjle (150 ml) pakket med samme opløsningsmiddelblanding og elueres med samme opløsningsmiddel. Eluatet fraktioneres for hver 7 g fraktioner, Planothiocin-G findes i de aktive fraktioner nr. 23-27« Planothiocin-F findes i de aktive fraktioner nr. 30-37. De aktive fraktioner samles og inddampes i vakuum til opnåelse af fine hvide nålekrystaller. Filtrerede krystaller opløses i chloroform og henstår ved stuetemperatur til udkrystallisation af fine hvide 149964 18 krystaller af planothioein-G og -F. Hver krystallisation filtreres og tørres til opnåelse af renset planothiocin-G (6 mg) og planothiocin-F (22 mg).

Aktive fraktioner nr. 14-16 indeholdende planothio-ein-D og -E samles, inddampes i vakuum og anbringes på en søjle af silicagel (150 ml^ som i forvejen er pakket med ethylacetat : methanol : eddikesyre (20 : 1 : 0,2). Eluering foretages med samme opløsningsmiddelblanding (11 g/'l fraktion). Fraktionerne nr. 23-29 samles som en aktiv fraktion indeholdende planothiocin-E. Planothiocin-D findes i fraktionerne nr. 35-49. Hver aktiv fraktion inddampes i vakuum, og der tilsættes hexan til fældning af planothiocin-E og -X). Hver udfældning opløses i en blanding af chloroform : methanol (5 : 3), og chloroformet fjernes ved inddampning til udfældning af planothiocin-E og -D som fine hvide nåleformede krystaller. Krystallerne frafiltreres og tørres og giver rent planothiocin-E (83 mg) og planothiocin-D (74 mg).

De aktive fraktioner nr. 17-24 indeholdende planothio-cin-B og -C samles, inddampes i vakuum og anbringes på en søjle af silicagel (200 ml), som i forvejen er pakket med ethylacetat : methanol : eddikesyre (20 : 1 : 0,2). Elueringen foretages med samme opløsningsmiddelblanding (15 g pr. fraktion). Planothiocin-C findes i fraktionerne nr. 30-47, og planothio-cin-B findes i fraktionerne nr. 70-88. Hver af de aktive fraktioner inddampes i vakuum, og man tilsætter hexan til fældning af planothiocin-C og -B. Hver udfældning opløses i en blanding af chloroform : methanol (5:3) og inddampes til fjernelse af chloroform og til udfældning af hvidt krystallinsk planothiocin-C og -B. Krystallerne filtreres fra og tørres, og man får renset planothiocin-C (137 mg) og planothiocin-B (160 mg) som fine hvide nåleformede krystaller.

Eksempel λ .

Et medium (pH 7»0 100 ml) indeholdende dextrin 1$, glycose 2$, opløselig stivelse 2$, caseinhydrolysat 1$, gærekstrakt 1$ og CaCO^ 0,2$ i en 500 ml erlenmeyerkolbe steriliseres ved 120°C i 20 minutter. En podenålfuld af Actinopla- 19 U4964 nes sp. A12526 i agarskråflademedium podes i dette steriliserede medium og dyrkes under omrystning ved 250 omdrejninger pr. minut ved 30°C i fire dage. Denne podekultur (200 ml) podes i et sterilt medium indeholdende saccharose 3#, sojabønnepulver 2#, CaCO^ 0,3$, CoCl2, 6 HgO 0,001# og MgSO^, 7 H20 0,001# (20 liter) i en 30 liter forgæringsbeholder og dyrkes ved 30°C i 4 dage ved 200 omdrejninger pr. minut og med 20 liter/minut gennemluftning.

Den således opnåede dyrkningsvæske centrifugeres til adskillelse mellem mycelium og supernatant. Man sætter acetone (10 liter) til det våde mycelium, og man omrører i 3 timer og filtrerer. Acetoneekstrakten inddampes til 2 liter og indstilles til en pH-værdi på 6,5» og man tilsætter ethyl-acetat (2 liter) og omrører kraftigt. Ethylacetatlaget inddampes til opnåelse af en brunlig olieagtig sirup. Man sætter hexan (200 ml) til siruppen. Den udfældede brunlige substans centrifugeres og opløses i en blanding af chloroform : methanol (5 il) (200 ml). Opløsningen inddampes til afde-stillation af chloroformet. Den gråhvide udfældning samles ved centrifugering og tørres, hvorved man får en blanding (240 mg, renhed 60#) indeholdende planothiocin-A og -B.

Blandingen (170 mg) opløses i chloroform : methanol : eddikesyre (13 ! 1 J 0,1) og hældes på en søjle af silicagel (120 ml), som i forvejen er pakket med samme opløsningsmiddelblanding. Eluerlng foretages med samme opløsningsmiddelblanding for hver 18 g pr. fraktion. De aktive fraktioner indeholdende planothiocin-B findes i fraktionerne nr. 9-15. Planothiocin-A findes i de aktive fraktioner ved fraktionerne nr. 16-46. Hver fraktion samles, inddampes til udfældning af hvidekrystaller, som samles ved centrifugering, og krystallerne opløses i en blanding af chloroform : methanol (2 : l) (20 ml) og henstår ved stuetemperatur til fjernelse af chloroformet, hvorved planothiocin-A og -B omkrystalliseres som hvide nåleformede krystaller.

De således dannede krystaller samles ved filtrering og tørres til opnåelse af planothiocin-A (59mg) og planothio-cin-B (23 mg).

U9964 20

Hvide nåleformede krystaller af planothiocin-A (50 mg) opnået ved ovenstående proces opløses i en blandet opløsning (10 ml) af eddikesyre : chloroform : methanol (3 s 1 si)*

De således udfældede farveløse prismekrystaller samles ved filtrering og tørres til opnåelse af planothio-cin-A som farveløse prismeformede krystaller (29 mg). Heferenceeksempel 1.

Blandingen af planothiocin-A og planothiocin-B (planothiocin-A : planothiocin-B =93 : 7) blandes med foder (kunstig mælk til smågrise) omfattende råprotein 22,44$»råfedt 5,14$, r& cellulose 0,74$, rå aske 6,16$, calcium 1,25$ og phosphor 0,95$; DCP (Digestive Crude Protein) 21,38$, TDF (Total Digestible Hutrient) 87,41$ (alle procentsatser undtagen for DCP og TDN er angivet ved vægt/vægt).

To grupper af smågrise med 10 grise i hver gruppe og 25 dage gamle fodres i 4 uger, idet den ene gruppe modtager kontrolfoder uden tilsætning af antibiotikum, 0,5 ppm tilsat foder (foder indeholdende 0,5 ppm antibiotika) og 5 ppm tilsat foder, og i den anden gruppe med kontroifoder (intet anti-bioticumfoder), 10 ppm tilsat foder (foder indeholdende 10 ppm antibiotica) og 20 ppm tilsat foder.

Hesultaterne af middellegemsvægt, forøget middellegemsvægt og forholdet for den forøgede legemsvægt fremgår af tabel 4. Som vist i tabellen iagttages der en god vækstfremmende virkning.

149964 21

Tabel 4« legemsvægt_ kontrol 0.5 ppm tilsat 5 ppm tilsat begyndelses- 5,5 + 1,08 5,6 + 1,26 5,4 + 1,39 vægtig slutvægt1^ 15,1 + 2,76 16,2 + 2,32 16,6 + 2,15

H

X

g vægtforøgelse2^ 9,5 + 1,97 10,6 + 1,32 11,2 + 1,21 u forøgelses- 1,1 forhold 100 110 118 legemsvægt Kontrol 10 ppm tilsat 20 ppm tilsat begyndelses- vægt 1' 5,8 + 1,07 5,8 + 0,87 5,7 + 1,15

CM

g slutvægt1^ 15,4 + 2,14 17,2 + 1,95 16,8 + 2,33 p “ « vægtforøgelse*' 9,7 + 1,33 11,5 + 1,27 11,1 + 1,27 forøgelsesforhold 100 119 114 M9964 22 1) Gennemsnitlig legemsvægt + standardafvigelse (kg) 2) Gennemsnitlig legemsvægtforøgelse + standard-forøgelse (kg).

s* Significant forskel med 1% risiko.

s Significant forskel med 5% risiko.

Referenoeekesmpel 2.

Blandingen af planothiocin-A og -B (forhold = 93 J 7) "blandes med fjerkræfoder omfattende råt protein 20,0$, råt fedt 3,4%, råcellulose 3,4%, rå aske 5,5%, calcium 1,03%, phosphor 0,83% og uorganisk phosphat 0,43%; TDN 73,3% og totalenergi 34 Cal/1000 g.

To grupper kyllinger, hver hangruppe og hungruppe, 25 kyllinger i en gruppe, fodres i 4 uger med kontrolfoderet (ingen tilsætning af antibiotiea), 0,5 ppm tilsat foder (foder indeholdende 0,5 ppm antibiotiea), 5 ppm tilsat foder, 10 ppm tilsat foder og 20 ppm tilsat foder.

Som vist i tabel 5 iagttages der en god vækstfremmende virkning.

I tabellen iagttages der i hangruppen significant forskel, men små karakteristiske spredningsværdier iagttages i hungruppen.

23 H9964 C'- pisHcn+>a\i>-vo (flvjo ·> ·> CO ·- » ·>

(Ο - ΙΛ CM to CM CD

h cm in in h 4 4 +3 +1 +1 +1 +> +1 +1 +1 θ M3 S 00 _ p Η O 00 P -i CM ffl Π *t ·> » p ft ·* 4 M3 H 4 tn 00 o 4 o *vo o 4 vo *h CM BUIS ftl 00*00

VO

+j +> h vo σν (0 to ·> *> ·*

W IS CM in ω m H H

H -P" ·* H VO VO

•H » O' CO *H , 43 CM VO VO +3 +| +1 +1 § +l +l +l g a t- » 0 ° ® t 0 4 00" 0 4 t'- m 0 4 vo * cm

H -4· 00 jj|4 H 00 CO

CM

43cocM4-pinisfn to 4 ·> «to·· ·> ~ co - m cm to cm cm m H CM VO VO H VO vo £ +1 +1 +1 +3 +1 +1 +1 s cm a co p m 0 p 4 cm Q m. » P ·* ·» 4 σ« 4 -4 σν 4 in -4· in h in -4 m Siov O- *IS 00 *IN 'Τ' mi ω H 43 43 Φ t0 t0 _ ® pram to h vo 0 to cOHvOOinHCM h pi τΐ « » » -H · in in · <d

43 CM in 4 43 m 4 -4 ^-vbO

in in ... to -H

a +1 . , a +1 +1 +1 w ,> p 4-1 4-1 P -,¾

p CM P O tD CO

Η M3 4 CM 1—I 03 m V

lf3 “ “ ·* lp ·> ·» ·> i—I H cK

• 4 03 in · -4 m CO Φ tO H

O -4 M3 * CM O 4 CM IN bO T3 λ in

N- * IN 00 * O' -H C O

> to X 0 VO *H 43 ·Η

-4 σνσνπ lOtow-H

03 m 0 ·>·>·> ΤΡ,-ημ ·.·.» CM Ο Η P 4-1 k ’j4 hcmooh r^n- to h O vO 10 Ο Ό 43 u 4-1 P 4-1 4-1 4- p bO Ό Tl P 4-1 4-1 +3 tfl 8 © g p cm p 0 43 £ a a ommcMocM-4CM ω w

SHH

4 O vO 4 -4 CM -Η ω g g 4 CM Ν- 4004 N-VO in c*- 43 0) w w

bO Η P P

^ æ h 0 0

j /-. /-. t> <D *H *H

CM H CM to Ό

+J to 43 <1) a Tl -P -P

bo 03 bO W P-Hfip {BHffiHboatqto > φ > 0) Φ X ,*! CQ bO tQ bO H 43 Ή -rl

+3 φ /-. φ +3 φ /-* ®. HPtMCM

bltQHPbtWHP (DbO-H-H

»H-POfflH-PO 5PS.S,

>0) b£) <H >0) bO <H Ό P bO bO

W'dSHW’dffiH ·ΗΟ·Η·Η

ad>'®SC>® S«H«ltQ

<ϋ£>43τίΦΪ>>43Ό btbOpO blbDpO _ η η ω a η n w a h cm * *

sddruSunii oddrur^uBH