DE2821242A1 - 15-oxidierte sterinverbindungen und deren verwendung zur hemmung der biosynthese von sterinen - Google Patents

Description

15-oxidierte Sterinverbindungen und deren Verwendung zur. Hemmung der Biosynthese von Sterinen

Die vorliegende Erfindung betrifft 15-oxidierte (15-sauerstoffhaltige) Stero!verbindungen (Sterinverbindungen), diese Verbindungen enthaltende Arzneimittel sowie deren Verwendung zur Hemmung der Biosynthese von Mevalonsäure einschließlich sämtlicher Wirkungen, die sich von der Hemmung der Biosynthese von Mevalonsäure ableiten. Von der Hemmung der Biosynthese von Mevalonsäure abgeleitete Effekte umfassen die Unterdrückung der Biosynthese von Sterolen mit einer daraus resultierenden Verringerung der Serumcholesterinspiegel bei tierischen Organismen und der Hemmung des Wachstums von Mikroorganismen und von Zellen. Die erfindungsgemäßen 15-oxidierten Sterole sind weiterhin wirksam zur Appetitunterdrückung; es wird angenommen, daß diese Wirkung relevant ist mit der Hemmwirkung der vorgenannten Verbindungen auf die Biosynthese von Mevalonsäure und davon abgeleiteten Produkten, insbesondere Cholesterin.

809847/0937

j 282124a

-Jt-

Die Unterdrückung der Biosynthese von Sterolen sowohl in vivo als auch in vito ist häufig erwünscht. Zum Beispiel ist es häufig erwünscht, die Bildung des Sterins Cholesterin in tierischen Organismen, einschließlich des Menschen, zu unterdrükken, wodurch der Serumcholesterinspiegel der Tiere erniedrigt wird.

Die Konzentration von Cholesterin im Blutserum ist mit einer Anzahl von Krankheiten, insbesondere Arteriosklerose, korreliert. Die Arteriosklerose ist ein Zustand, der durch die Bildung von Plaques im Arteriensystem gekennzeichnet ist. Cholesterin und Cholesterolester sind die Hauptkomponenten dieser Plaques. Obwohl die Ursache dieser Krankheit noch nicht vollständig bekannt ist, hat es den Anschein, daß erhöhte Serumcholesterinspiegel zu der Entwicklung und dem Fortschreiten der Arteriosklerose beitragen.

Cholesterin leitet sich in Tieren von zwei Quellen ab: die erste ist die Aufnahme und Absorption des Nahrungs-Cholesterins, und die zweite ist die Biosynthese von Cholesterin aus Acetat durch Zellen von zahlreichen Körperorganen, wie Leber, Eingeweide und Haut. Die Biosynthese von Cholesterin und anderen Sterolen aus Acetat im Körper umfaßt eine komplexe Reaktionsfolge; eine Stufe davon ist die Umwandlung von 3-Hydroxy-3-methylglutaryl-Coenzym A in Mevalonsäure. Diese Reaktion wird als ein Hauptregulationspunkt in der normalen Biosynthese von Cholesterin in Zellen angesehen. Wenn die Biosynthese von Mevalonsäure in vivo gehemmt werden kann, wird die Produktion von Sterolen verringert; hierdurch können die Serumcholesterinspiegel gesenkt werden.

In der GB-PS 860 303 werden bestimmte Aryloxycarbonsäureester, wie der Methylester von 2-(4'Chlorphenoxy)-isobuttersäure zur Senkung der Cholesterinspiegel beschrieben. Obwohl diese Verbindung eine beträchtliche Bedeutung bei der klinischen Humanbehandlung erlangt hat, ist sie aus zahlreichen Gründen doch nicht so wirksam wie dies erwünscht ist. Dem entsprechend sind wirksamere Verbindungen zur Senkung der Cholesterinspiegel von großem Interesse und großer Bedeutung.

809847/0937

-Z-

Fettsucht ist ebenfalls ein ernsthaftes Gesundhextsproblem. Die Korrelation zwischen Übergewicht und einer Anzahl von Krankheiten, insbesondere cardiovasculäre Krankhexten, ist bekannt. Für zahlreiche Personen ist es - oft aus psychologischen oder anderen Gründen - schwierig oder unmöglich, eine Gewichtskontrolle oder Abmagerungsdiäten einzuhalten. Aus diesem Grund werden Methoden zur sicheren und wirksamen Appetitunterdrückung sehr notwendig gebraucht.

Im Rahmen der vorliegenden Erfindung wurde gefunden, daß bestimmte 15-oxidierte Sterole, von denen zahlreiche neue Verbindungen sind, die Biosynthese von Mevalonsäure und Sterolen wirksam hemmen. Von der Biosynthese der Mevalonsäure leiten sich eine Anzahl erwünschter Wirkungen ab, einschließlich der Unterdrückung der Cholesterxnbildung in Tieren, wodurch die Serumcholesterinspiegel gesenkt werden können.

Weiterhin umfaßt das Wachstum und die Teilung von Zellen höherer Organismen und bestimmter Mikroorganismen, wie Hefe und Pilze, die Bildung von Sterolen. Dementsprechend kann durch die Hemmung der Biosynthese von Mevalonsäure und die dadurch bewirkte Verminderung der Sterolbildung die Hemmung des Wachstums von normalen und von Tumorzellen bewirkt werden. Weiterhin hat die Hemmung der Biosynthese von Sterolen eine Hemmwirkung auf das Wachstum gewisser Mikroorganismen, wodurch durch Pilze und Hefen bewirkte Infektionen bekämpft werden können.

Zusätzlich zu ihrer Rolle in der Sterolbiosynthese ist die Mevalonsäure ein wichtiger Vorläufer einer Anzahl wichtiger Zellbestandteile. Obwohl man im allgemeinen davon ausgeht, daß Bakterien Sterole nicht enthalten oder benötigen, ist daher für ihr Wachstum und für ihre Teilung die Synthese von Mevalonsäure und davon abgeleiteten Verbindungen erforderlich. Die Hemmung der Mevalonsäure-Biosynthese sollte dementsprechend das Bakterienwachstum hemmen.

Im Rahmen der vorliegenden Erfindung wurde auch gefunden, daß die 15-oxidierten Sterole und ihre Derivate wirksam zur Appetitunterdrückung sind. Obwohl der Mechanismus, durch welchen die 15-oxidierten Sterole als Appetitzügler fungieren, nicht bekannt

809847/0937

28212U

ist, wird angenommen, daß diese Wirkung in gewisser Weise mit der Hemmwirkung der 15-oxidierten Sterole auf die Mevalonsäure- oder Sterolbiosynthese zusammenhängt.

Im Rahmen der vorliegenden Erfindung wird ein Verfahren zur Hemmung der Biosynthese von Mevalonsäure einschließlich aller davon abgeleiteten Wirkungen zur Verfügung gestellt. Dieses Verfahren umfaßt die Verabreichung der die Mevalonsäure-Biosynthese hemmenden 15-oxidierten Sterole an einen Wirt. In der vorliegenden Beschreibung umfaßt der Begriff "15-oxidierte Sterole" (bzw. "15-sauerstoffhaltige Sterine") Sterole, die oxidierte (sauerstoffhaltige) Funktionen an den 3- und 15-Positionen haben.

Geeignete 15-oxidierte Sterole, die in zur Hemmung der Biosynthese von Mevalonsäure wirksamen Mengen verabreicht werden, haben die allgemeine Formel

in der bedeuten: 0 0

R₁ -OH, =0, -OR₄, OCR₅, -OC(CH₂)_nCOH, eine Sulfatgruppe oder ein Mg-, Na- oder K-SaIz einer Sulfatgruppe;

0 K R₂ -OH, =0 oder -OCR₅;

R₃ g\H, ßH oder eine (KC^- bis C_g-Alkylgruppe;

R₄ eine C₁- bis C,-Alkylgruppe, vorzugsweise eine C₃~Alkylgruppe;

809847/0937

- bis

Sr -

282124a

R_g eine C₁- bis C_?f)-aliphatische Gruppe, eine substituierte

C₁- bis C_?f,-aliphatische Gruppe oder eine Phenylgruppe; und

η eine ganze Zahl von 2 bis 6, vorzugsweise von 2 bis 4.

Die Grundringstruktur kann gesättigt oder ungesättigt sein. Vorzugsweise hat sie eine Doppelbindung zwischen entweder den

C_- und C₀- oder zwischen den C₀- und C₁.-Atomen. Wenn die / ο ο 14

Grundringstruktur eine Doppelbindung zwischen den C„- und C .-Atomen hat, ist kein R--Substituent vorhanden. Wenn es für die R₁- und R_-Substituenten möglich ist, in mehr als einer sterischen Position zu sein, können sie entweder in der <S*- oder ß-Position sein. Die Grundsterolstruktur kann natürlich Substituenten enthalten, welche die Eigenschaften der Verbindung an von R₁, R und R., verschiedenen Positionen nicht nachteilig beeinflußt.

Die vorliegende Erfindung betrifft weiterhin Arzneimittel sowie die Verwendung solcher Mittel, wobei die Mittel pharmakologisch verträgliche Träger in Kombination mit einer nichttoxischen, aber wirksamen Menge eines 15-oxidierten Sterols des vorstehend beschriebenen Typs enthalten. Diese Arzneimittel können zur Hemmung der Biosynthese von Mevalonsäure und zur Erzielung von " von der Hemmung der Biosynthese von Sterolen abgeleiteten Wirkungen, wie der Hemmung des Zellwachstums und der Senkung des Serumcholesterins, verwendet werden. Die erfindungsgemäßen Arzneimittel können auch zur Appetitunterdrückung verwendet werden,

Die vorliegende Erfindung betrifft weiterhin neue 15-oxidierte Sterole der allgemeinen Formel

809847/0937

2821245,

in der bedeuten:

0 0 0

Ii Il "

R₁ -OH, =0, -OR₁, OCRc, -OC(CH-) COH, eine Sulfatgruppe

oder ein Mg-, Na- oder K-SaIz einer Sulfatgruppe;

O R₂ -OH, =0 oder -OCR₅

₃ «IH, ßH oder eine 0LC₁ - bis Cg-Alkylgruppe; ,. eine C₁- bis C,-Alkylgruppe;

R₅ eine C₁- bis C_2Q-aliphatische Gruppe, eine substituierte C₁- bis C₀ _-aliphatische Gruppe, oder eine Phenylgruppe; und

eine ganze Zahl von 2 bis 6,

wobei die R₁- und R„-Substituenten, wenn sie nicht =0 sind, sich entweder in der ¹X,- oder ß-Position befinden können, mit der Maßgabe, daß, falls zwischen den C„- und C₁.-Atomen eine

-OH ist, R„ nicht -OH ist; falls R_{3 1} R₃ nicht -OH ist; falls R₃ oO-Methyl und R₁ -OCH_ ist, R„ nicht =0 oder -OH ist; und falls R₁ und

Doppelbindung ist und und

-OH ist,
, R„ nic
-OH sind, keine OH-Gruppe an das C_-Atom gebunden ist.

Die erfindungsgemäßen 15-oxidierten Sterole können in Abhängigkeit von dem erwünschten speziellen Sterol nach verschiedenen Verfahren hergestellt werden. Geeignete Zwischenprodukte zur Herstellung der erfindungsgemäßen Sterole sind 3ß-Benzoyloxyverbindungen der allgemeinen Formel

C-O

809847/0937

Al

■ -7 -

Solche 3ß-Benzoyloxy-verbindungen können durch Hydrolyse in die entsprechenden 3-Hydroxyverbindungen umgewandelt werden. Die Reduktion, zum Beispiel mit Lithiumaluminiumhydrid, ergibt 3ß,15-Diole.

Ein weiteres geeignetes Zwischenprodukt zur Herstellung der erfindungsgemäßen 15-oxidierten Sterole sind 3ß-Benzoyloxy, 14c(/, 15<fo-epoxy-Verbindungen der allgemeinen Formel

Diese Verbindungen können mit einem Reduktionsmittel zu den entsprechenden 3ß, 15cC-Diolen umgesetzt werden.

Die erfindungsgemäßen 15-oxidierten Sterolverbindungen können entweder als solche oder in Verabreichungseinheitsformen in Verbindung mit üblichen pharmazeutischen Trägerstoffen verabreicht werden. Geeignete Verabreichungseinheitsformen hängen etwa von der speziellen Wirkung ab, die mit den Sterolen erreicht werden soll.

Typische Verabreichungseinheitsformen umfassen orale Verabreichungsformen, wie Tabletten, Kapseln, Pulver, Granulate oder oral verabreichbare Lösungen. Andere Verabreichungseinheitsformen umfassen sublinguale und bukkale Verabreichungsformen, äußerlich anwendbare Verabreichungsformen und parenterale Verabreichungsformen zur subcutanen, intramuskulären oder intravenösen Verabreichung.

809847/0937

_Xi 282124 ί

Gewünschtenfalls können die 15-oxidierten Sterole in einfacher Weise zu Dosiseinheitsformen verarbeitet werden, die sich für die besondere Verabreichungsart eignen, wobei die Menge des aktiven Wirkstoffs jeder Dosiseinheit so gewählt ist, daß eine oder mehrere Einheiten für jede therapeutische Verabreichung erforderlich sind. Jede Dosiseinheit enthält vorzugsweise etwa 5 bis etwa 1000 mg einer oder mehrerer aktiven 15-oxidierten Sterolverbxndungen.

Die Dosis des aktiven 15-oxidierten Sterols, das zur Erzielung einer erwünschten Wirkung erforderlich ist, variiert über einen weiten Bereich und hängt etwa von der Art des betreffenden verabreichten 15-oxidierten Sterols, der erwünschten Wirkung und der Verabreichungsart ab. Typischerweise beträgt eine geeignete Dosis etwa 0,1 bis etwa 140 mg aktives 15-oxidiertes Sterol pro Kilogramm Körpergewicht und Tag. Typischerweise wird eine geeignete 1 bis 4 mal täglich verabreicht.

Geeignete pharmazeutische Träger- und Hilfsstoffe, die zur Formulierung von Verabreichungseinheiten verwendet werden können, sind bekannt. Wenn zum Beispiel das 15-oxidierte Sterol in Form einer festen Zusammensetzung, wie einer Tablette, verabreicht werden soll, kann das aktive 15-oxidierte Sterol mit einem pharmazeutischen Träger, wie Gelatine, Stärke, Laktose, Magnesiumstearat, Talkum, Gummi arabicum usw. vermischt werden. Tabletten können mit Sucrose oder mit anderen Verbindungen nach bekannten Methoden überzogen werden, um den Zerfall im Magen zu verzögern und dadurch eine verlängerte Wirkung über einen verlängerten Zeitraum zu gewährleisten.

Kapsel-Zubereitungen können durch Vermischen des aktiven 15-oxidierten Sterols mit einem inerten pharmakologisch verträglichen Füllstoff oder Verdünnungsmittel und Einfüllen des erhaltenen Gemisches in eine harte Gelatinekapsel oder in eine weiche Kapsel erhalten werden. Eine Sirup- oder Elixier-Zubereitung kann die aktiven 15-oxidierten Sterole zusammen mit einem Süßstoff, wie Sucrose, antiseptischen Verbindungen und/oder geeigneten Färbemitteln enthalten.

809847/0937

Äußerlich anwendbare Zubereitungen können durch Vermischen der aktiven 15-oxidierten Sterole mit geeigneten Salbengrundlagen hergestellt werden. Typische Salbengrundlagen sind Polyvinylalkohol, wachsartige Polyäthylenglycole usw. oder andere nichttoxische, lipophile Verbindungen oder Träger.

Eine parenteral verabreichbare Flüssigkeit ist herstellbar durch Auflösen oder Suspendieren des aktiven Wirkstoffs in einer sterilen Trägerflüssigkeit, wie Wasser oder Kochsalzlösung, einem nicht-flüchtigen flüssigen Polyäthylenglycol oder einem öl pflanzlichen oder tierischen Ursprungs, wie Dorschleberöl, Olivenöl usw. Parenteral verabreichbare Flüssigkeiten können vorteilhafterweise ebenfalls bekannte Gleitmittel, Bakterizide und Fungizide, Tonizitätsanpassungsitiittel, Lokalanästhetika, Stabilisatoren usw. beinhalten.

Der Mechanismus, nach welchem die aktiven 15-oxidierten erfindungsgemäßen Sterole wirken, ist nicht vollständig bekannt. Es ist jedoch gezeigt worden, daß die aktiven Verbindungen die Biosynthese von Sterolen aus Acetat hemmen, jedoch nicht die Biosynthese von Sterolen aus Mevalonsäure. Da Mevalansäure ein wesentliches Zwischenprodukt im biochemischen Syntheseweg, bei welchem Sterole aus Acetaten gebildet werden, darstellt, ist es klar, daß die 15-oxidierten Sterole die Mevalonsäurebildung hemmen.

Es ist bekannt, daß eine Stufe in der Biosynthese von Sterolen aus Acetat die Umwandlung von 3-Hydroxy-3-methylglutaryl-Coenzym A in Mevalonsäure umfaßt. Die Geschwindigkeit dieser Reaktion wird durch das Enzym HMG-CoA-Reduktase kontrolliert. Es wird angenommen, daß die erfindungsgemäßen 15-oxidierten Sterole durch eine gewisse Einwirkung auf die HMG-CoA-Reduktase wirken, entweder durch Herabsetzen ihrer Aktivität oder durch Beschränken ihrer Menge in dem System durch Zerstörung oder Unterdrükkung ihrer Bildung. Zellen,die sich dauernd teilen, wie Zellen der Epidermis, des sich entwickelnden Gehirns, Vertiefungen der Eingeweideschleimhaut und spontan entstehende Tumoren, synthe-

809847/0937

4*

- ao -

28212U

tisieren Cholesterin in vivo mit relativ hohen Geschwindigkeiten; Zellen in der Interphase, wie Zellen des Muskels und des ausgewachsenen Gehirns tun dies nicht. Versuche mit Zellkulturen zeigen, daß die Zellteilung in vito ebenfalls eine Cholesterinsynthese erfordert. Dem entsprechend wirkt die Hemmung der Cholesterinbildung durch Blockieren der Biosynthese von Mevalonsäure auf die in vivo-Replikation von Zellen ein, die sich normalerweise in einem Teilungsstadium befinden. Die Unterdrückung der Cholesterinbildung durch das Blockieren der Biosynthese von Mevalonsäure bewirkt natürlich auch die Senkung der Serumcholesterxnspiegel.

Die Beispiele erläutern die Erfindung. Insbesondere erläutern die Beispiele weitere bevorzugte Ausführungsformen der vorliegenden Erfindung, einschließlich bevorzugter Verfahren zur Herstellung zahlreicher aktiver 15-oxidierter Sterole. Weiterhin erläutern die Beispiele die Wirkung der 15-oxidierten Sterole bezüglich der Hemmung der Sterolsbiosynthese einschließlich der in vivo-Hemmung bei Ratten mit einer daraus resultierenden Senkung der Serumcholesterinspiegel.

809847/0937

V\ -

BEISPIEL 1

Herstellung von 5cf^-Cholest-8 (14)-en-3ß-ol-on 3ß-Benzoyloxy-5(^-cholest-8 (14)-en-15-on wurde entsprechend dem von Knight et al., J. Biol. Chem. Band 241, S. 1502 (1966) hergestellt. Der Schmelzpunkt,das Infrarotspektruni, die Elementaranalyse und das Massenspektrum des Produkts bestätigten seine Struktur. Das Produkt zeigte eine einzige Komponente bei der Dünnschichtchromatographie-Analyse in drei verschiedenen Systemen.

1,0 g 3ß-Benzoyloxy-5«C-cholest-8 (14) -en-15-on wurden in 350 ml Äthanol gelöst. 20 ml Wasser und 60 ml konzentrierte Schwefelsäure wurden nach und nach zugegeben, und das erhaltene Gemisch wurde 12 Stunden unter Rückfluß erhitzt, gekühlt, unter vermindertem Druck auf 1/2 seines Volumens eingeengt und mit 1000 ml einer 0,5 m NaCl-Lösung verdünnt. Der erhaltene Niederschlag wurde gesammelt und zweimal aus Aceton-Methanol-Wasser umkristallisiert.

Die Kristalle wurden in Aceton ausgelöst und in Gegenwart von Norite A 15 Minuten erwärmt. Die Lösung wurde durch Hyflo Super-Cel (Johns-Manville Corp.) filtriert, und das Super-Cel wurde mit Methanol (zweifaches Volumen des Acetons) gewaschen. Die Aceton- und Methanollösungen wurden vereinigt, und nach Zugabe von Wasser wurden 660 mg (83 % Ausbeute) eines kristallinen Produkts gebildet, das gesammelt und im Vakuum getrocknet wurde. Bei dem Produkt handelte es sich um 5*--Cholest-8(14)-en-3ß-ol-15-on der Formel

809847/0937

λ!

28212U

und die Struktur des Produkts wurde durch Infrarot-(IR) , Ultraviolettspektral-(UV), kernmagnetische Resonanzspektral- (NMR) und Massenspektral-(MS) Analysen bestätigt. Die Verbindung zeigte eine einzige Komponente bei der dünnschichtchromatographischen Analyse auf Silicagel G-Platten unter Verwendung von 10 % Äther in Benzol und 35 % Äthylacetat in Chloroform als Lösungsmittelsysteme.

BEISPIEL 2

Herstellung von 5oL-Cholest-8 (14) -en-3ß_f 15-diolen 3,97 mMol 3ß-Bnzoyloxy-cholest-8(14)-en-15on in 104 ml Äther wurden mit 16 mMol Lithiumaluminiumhydrid zwei Stunden bei Raumtemperatur reduziert·. Das überschüssige Reagens wurde durch nach und nach erfolgende Zugabe von Äthylacetat, einer gesättigten Lösung von Ammoniumchlorid und Wasser zersetzt. Die Extraktion mit Äther ergab 2,6 g Produkt, das der Chromatographie auf einer aktivierten Kieselsäure-Säule (75 χ 3 cm) unterworfen wurde.

Unter Verwendung von Benzol-Äther (90:10) als Elutionsmittel wurden Fraktionen von jeweils 25 ml gesammelt. Es wurden 672 mg eines epimeren Diols, als Diol A bezeichnet, in den Fraktionen 250 bis 375 eluiert. Nach vierfachem Umkristalliesieren aus Aceton-Wasser wurde bei der dünnschichtchromatographischen Analyse in drei verschiedenen Systemen eine Komponente festgestellt. 930 mg eines zweiten epimeren Diols, als Diol B bezeichnet, wurde in den Fraktionen 425 bis 650 eluiert. Nach dreifachem Umkristallisieren aus Aceton-Wasser zeigte die Verbindung eine einzige Komponente bei der dünnschichtchromatographischen Analyse in drei verschiedenen Systemen.

Die Elementar-, IR-, UV-, NMR-, MS- und röntgenkristallographischen Analysen bestätigten, daß die Diole A und B die nachstehend aufgeführte Struktur haben, wobei die 15-Hydroxygruppe des Diols A sich in der (Tt-Position und die 15-Hydroxygruppe des Diols B in der ß-Position befinden:

809847/0937

- in -

282124

BEISPIEL 3

Herstellung von 5<k, 14ß-Cholest-7-en-3ß, 15-diolen Die Behandlung von 3ß-Benzoyloxy-cholesta-5,7-dien mit HCl-Gas in Chloroform nach der Methode von Knight et al., J.Biol.Chem., Band 241, S. 1502 (1966) ergab in 70-prozentiger Ausbeute ein Produkt, das bei 148 bis 150⁰C schmolz und ein Gemisch von zwei Isomeren enthielt. Die NMR-Analyse ergab, daß die Probe annähernd 73 % 3ß-Benzoyloxy-5(k-cholesta-7,14-dien enthielt.

Dieses Produkt (75 g; 148 mMol) wurde in 3000 ml wasserfreiem Äther unter leichtem Erwärmen auf einem Dampfbad gelöst. Die Lösung wurde in ein Eisbad verbracht und auf 18⁰C abgekühlt. Zu dieser Zeit wurde eine Lösung von 63,6 g m-Chlorperbenzoesäure in 400 ml Äther zugegeben. Das Gemisch wurde gerührt und 5 Stunden bei 0⁰C und anschließend 24 Stunden bei -15°C stehengelassen. Das ausgefallene Produkt wurde auf einem Filter gesammelt, mit kaltem Äther gewaschen und aus Aceton-Wasser umkristallisiert, wobei 3ß-Benzoyloxy-14(i-, 15(^-epoxy-54cholest-7-en (40,2 g; 52 % Ausbeute) mit der Strukturformel

80 9847/0937

erhalten wurde.

Die Struktur dieser Verbindung wurde durch IR-, NMR- und MS-Analysen bestätigt. Die Verbindung zeigte eine einzige Komponente bei der dünnschichtchromatographischen Analyse (TLC) auf Silicagel G-Platten (Lösungsmittelsysteme: 35 % Äthylacetat in Chloroform und 10 % Äther in Benzol).

Das 3ß-Benzoyloxy-14d, 15d-epoxy-5(L-cholest-7-en (2,0 g; 3,96 mMol) wurde in 20 ml wasserfreiem Tetrahydrofuran gelöst. Es wurden 200 ml wasserfreier Äther zugegeben, und die Lösung wurde auf 0⁰C abgekühlt. 20 ml Bortrifluorid-Ätherat wurden unter Rühren langsam zugegeben. Nach 30-minütigem Stehen bei 0⁰C unter gelegentlichem Rühren wurde das Gemisch in Wasser gegossen und intensiv mit Äther extrahiert. Die vereinigten Extrakte wurden über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und unter vermindertem Druck zur Trockne eingedampft.

Der so erhaltene Rückstand (1,96 g) wurde auf einer Silicagel-Säure unter Verwendung ansteigender Konzentration (0,5, 7,5 und 10 %) von Äther in Benzol als Elutionsmittel chromatographiert. Es wurden 24 ml-Fraktionen (16 min pro Fraktion) gesammelt. Die Inhalte der Fraktionen 70 bis 100 wurden vereinigt, und der nach dem Eindampfen des Lösungsmittels erhaltene Rückstand wurde aus Aceton-Wasser umkristallisiert, wobei 3ß-Benzoyloxy-5d., 14ß-cholest-7-en-15~on (860 mg, 43 % Ausbeute) erhalten wurden. Die Struktur dieses Zwischenprodukts wurde durch IR-, NMR- und MS-Analysen bestätigt. Die Verbindung zeigte eine

809847/0937

. η υ ^ u

282124a

einzige Komponente bei TLC-Analysen auf Silicagel G-Platten (Lösungsmittelsysteme: 35 % Äthylacetat in Choroform, 10 % Äther in Benzol und Benzol).

2,33 g 3ß-Benzoyloxy-5oU 14ß-cholest-7-en-15-on (4,62 mMol) wurden in 150 ml wasserfreiem Äther gelöst und mit Lithiumaluminiumhydrid (2,80 g; 73,9 mMol) versetzt. Das so erhaltene Gemisch wurde eine Stunde bei 25⁰C gerührt. Nach dem Abkühlen des Gemisches auf O⁰C wurde zur Zersetzung des überschüssigen Hydrids vorsichtig Eis zugegeben. Das Gemisch wurde in eine 0,34 m wäßrige Natriumchloridlösung gegossen und gründlich mit Äther, der 5 % Methylenchlorid enthielt, extrahiert. Die vereinigten Extrakte wurden über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und unter Verwendung von Druck zur Trockne eingedampft, wobei 1,80 g eines weißen Feststoffes erhalten wurden.

Die präparative Dünnschichtchromatographie auf Silicagel PF (1 mm Dicke; Lösungsmittel: 20 % Äther in Benzol; zweifache Entwicklung) zeigte zwei Komponenten (R_f 0,22 und 0,34). Die Komponente mit R^ 0,22 wurde mit warmem Chloroform extrahiert, filtriert und aus Aceton-Wasser umkristallisiert, wobei 5 , 14ß-Cholest-7-en-3ß.15ß-diol (1,51 g; 81 % Ausbeute) erhalten wurde.

Die Komponente mit R^ 0,34 aus der präparativen Dünnschichtchromatographie wurde mit warmem Chloroform eluiert und nach Kristallisation aus Aceton-Wasser wurde 5cS-, 14ß-Cholest-7-en-3ß,15^-diol (167 mg; 9 % Ausbeute) erhalten.

Beide Verbindungen zeigten eine einzige Komponente bei den TLC-Analysen auf Silicagel G-Platten (Lösungsmittelsysteme: 35 % Äthylacetat in Chloroform und 10 % Äther in Benzol). Die Struktur der beiden Verbindungen wurde röntgenkristallographische, IR-, NMR- und MS-Analysen bestätigt und entsprach der Formel

809847/0937

2921242-

- VZ -

BEISPIEL 4 Herstellung von

3ß-Benzoyloxy-14ci-methyl-5tfu-cholest--7-en--'I5-on wurde nach der Methode von Knight et al., J. Biol. Chern., Bd. 241, Seite 1502 (1966) hergestellt. Zu 1,00 g (1,92 mMol) dieses Produkts in 190 ml Äthanol wurden 4,0 g Kaliumhydroxid in 5 ml Wasser gegeben. Das erhaltene Gemisch wurde 1,5 Stunden unter Rückfluß unter Stickstoff erhitzt. Nach dem Einengen des Volumens auf etwa die Hälfte des ursprünglichen Volumens wurde das Gemisch in 1000 ml einer 0,86 m Natriumchloridlösung gegossen und gründlich mit 5 % Methylenchlorid enthaltendem Äther extrahiert. Die vereinigten Ätherextrakte wurden über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck zur Trockne eingedampft. Der erhaltene Rückstand wurde aus Methanol-Wasser kristallisiert, wobei 14<j/-Methyl-5</v/-cholest-7-en-3ß-ol-15-on (0,760 g; 95 % Ausbeute) der Formel

erhalten wurde.

809847/0937

282124 χ

-YI-

Dia Struktur der Verbindung wurde durch IR-, NMR- und MS-Analysen bestätigt. Die Verbindung zeigte eine einzige Komponente bei den dünnschxchtchromatographisehen Analysen auf Silicagel G-Platten (Lösungsmittelsysteme: 10 % Äther in Benzol, 35 % Äthylacetat in Chloroform und 10 % Äther in Hexan) und bei den Gas-Flüssigkeits-chromatographischen Analysen auf 3 % OV-1- und 3 % OV-17-Säulen (Säulentemperatur 270⁰C).

BEISPIEL 5

Herstellung von 14fl--Methyl-5&/-cholest-7-en-3ß, 15-diolen 3ß-Benzoyloxy-14d^-methyl-cholest-7-en-15-on wurden nach der Methode von Knight et al., J. Biol., Chem., Band 241, S. 1502 (1966) hergestellt- 100 mg dieses Produkts wurden- mit 200 mg Lxthiumalumxniumhydrid bei Raumtemperatur während 12 Stunden reduziert. Das überschüssige Reagens wurde Zugabe von Äthylacetat zersetzt. Dann wurde Wasser zugegeben, und das erhaltene Gemisch wurde mit Äther extrahiert.

Der nach dem Eindampfen des Lösungsmittels erhaltene ölige Rückstand wurde auf einer aktivierten Kieselsäure-Säule chromatographiert. Unter Verwendung von Benzol-Äther (90:10) als Elutionsmittels wurden Fraktionen von jeweils 16 ml gesammelt. 26 mg eines Diols, als Diol A bezeichnet, wurden in den Fraktionen 9 bis 13 eluiert und aus Äthylacetat umkristallisiert, wobei 18 mg Produkt erhalten wurden. 46 mg eines zweiten Diols, als Diol B bezeichnet, wurden in den Fraktionen 18 bis 30 eluiert und aus Äthylacetat umkristallisiert, wobei 26 mg Produkt erhalten wurden.

Die Elementar-, MS-, NMR- und die röntgenkristallographische Analyse bestätigten, daß die Diole die nachstehende Strukturformel hatten, wobei die 15-Hydroxygruppe des Diols A in der ß-Position und die 15-Hydroxygruppe des Diols B in der O^- war:

809847/0937

28212U

- ve -

BEISPIEL 6

Herstellung von 14(L-Äthyl-5di-cholest-7-en-3ß-ol-15-on und 3ß-Äthoxy-1 4o\räthyl-5<A.-cholest-7~en-15-on 5<A.-Cholest-8(14)-en-3ß-ol-15-on (10,0 g; 24,9 mMol) , hergestellt wie in Beispiel 1, wurden zu einer gerührten Lösung von Kalium-tbutoxid, hergestellt durch Auflösen von 17,3 g Kaliummetall in 819 ml t-Butylalkohol, zugegeben. 127,4 ml Äthyljodid wurden auf einmal zu dem Reaktionsgemisch gegeben, und das Rühren wurde 1,75 Stunden fortgesetzt. Das Volumen des Reaktionsgemisches wurde auf etwa 1/3 des ursprünglichen Volumens unter vermindertem Druck reduziert. Wasser wurde zugegeben, und das erhaltene Gemisch wurde gründlich mit Äther extrahiert. Die vereinigten Extrakte wurden über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck zur Trockne eingedampft. Der erhaltene Rückstand wurde der Mitteldruck-Flüssigkeitschromatographie (4,22 kg/cm²; 60 p.s.i.) unter Verwendung einer SiIicagel-(0,032 bis 0,063 mm)-Säule (100 cm χ 2,5 cm) unterworfen. Unter Verwendung von 10 % Äther in Benzol als Elutionsmittel wurden Fraktionen·von 20 ml (Durchflußrate: 12 ml pro Minute) gesammelt.

Die Inhalte der Fraktionen 75 bis 88 wurden vereinigte und nach Verdampfung des Lösungsmittels unter vermindertem Druck aus Aceton-Wasser kristallisiert, wobei 14ct-Äthyl-5c(.-cholest-7-en-3ß-ol-15-on (4,5 g; 42,2 % Ausbeute) der Formel

809847/0937

282124a,

erhalten wurde.

Die Struktur der Verbindung wurde durch IR-, NMR- und MS-Analysen bestätigt. Die Verbindung zeigte eine einzige Komponente bei den dünnschxchtchromatographischen Analysen auf Silicagel G-Platten unter Verwendung eines Lösungsmittelsystems von 10 % Äther in Benzol und 35 % Äthylacetat in Choroform und bei den Gas-Flüssigkeits-chromatographischen Analysen auf 3 % OV-1- und 3 % OV-17-Säulen (Säulentemperatur 250⁰C).

Die Inhalte der Fraktionen 25 bis 29 aus der Mitteldruck-Silicagel-Säulenchromatographie wurden vereinigt und nach dem Eindampfen des Lösungsmittels unter vermindertem Druck aus Aceton-Wasser kristallisiert, wobei 3ß-Äthoxy-14c^-äthyl-5cC-cholest-7-en-15-on (2,1 g; 18,5 % Ausbeute) mit der Strukturformel

erhalten wurde.

809847/0937

Die Struktur dieser Verbindung wurde durch IR-, NMR- und MS-Analysen bestätigt. Die Verbindung zeigte eine einzige Komponente bei den Dünnschicht- und Gas-Flüssigkeits-chromatographischen Analysen unter Verwendung der vorstehend für 3ß-Äthoxy-14<£-äthyl-5A.-cholest-7-en-1 5-on beschriebenen Methoden.

BEISPIEL 7

Herstellung von Bis-3ß, ISoL-acetoxy-i^-äthyl-Sct-cholest-T-en und 3ß-Acetoxy--14d.-äthyl-5ct-cholest-7-en-15ß-ol Zu 14ct-Äthyl-54-cholest-7-en-3ß-ol-15-on (2,0 g; 4,6 mMol) , hergestellt wie in Beispiel 6, in 300 ml Äther wurde Lithiumaluminiumhydrid (3,0 g; 79,1 mMol) zugegeben. Nach zweistündigem Rühren bei Raumtemperatur wurde das Reaktionsgemisch auf 0⁰C abgekühlt und Eis wurde vorsichtig zugegeben, um das nicht umgesetzte Hydrid zu zersetzen. Das erhaltene Gemisch wurde in eine 0,34 η Natriumchlorid-Lösung gegossen und gründlich mit 5 % Methylenchlorid enthaltendem Äther extrahiert. Die vereinigten Ätherextrakte wurden über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck zur Trockne eingedampft. Der Rückstand (1,92 g) wurde aus Aceton-Wasser kristallisert, wobei ein weißer Feststoff (1,89 g; 94,5 % Ausbeute) erhalten wurde.

Das kristallisierte Produkt wurde der Mitteldruck-Flüssigkeitschromatographie (7,03 kg/cm²; 100 p.s.i.) unter Verwendung einer Silicagel- (0,032 bis 0,063 mm)-Säule (118 χ 1,5 cm) unterworfen. Unter Verwendung von 10 % Äther in Benzol als Elutionsmittel wurden 20 ml-Fraktionen (Durchflußrate 5 ml pro Minute) gesammelt. Die Inhalte der Fraktionen 54 bis 78 wurden vereinigt und nach Verdampfen des Lösungsmittels aus Aceton-Wasser kristallisiert, wobei ein weißer Feststoff (1,78 g; 89 %) vom Fp. 171-173°C erhalten wurde. Dieses Produkt schien ein Gemisch von 14t^-Äthyl-5oC-cholest-7-en-3ß, 15 diol (70 %) und 14öt-Äthyl-5d-cholest-7-en-3ß, 15ß-diol (30 %) zu sein.

Bei den dünnschichtchromatographischen Analysen auf Silicagel G-Platten unter Verwendung von drei verschiedenen Lösungsmittelsystemen (10 %Äther in«ae4iao/l- 2Q«%«Äthylacetat in Petroläther

282124

- -2-1 -

und 35 % Äthylacetat in Chloroform) oder bei der Gas-Flüssigkeits-Chromatographie der freien Sterole auf 3 % OV-1- oder 3 % OV-17-Säulen (Säulentemperatur 270⁰C) konnte keine Auflösung der zwei Epimeren beobachtet werden.

Zu dem wie vorstehend beschrieben erhaltenen Epimerengemisch (2,00 g; 4,65 mMol) in 15 ml Pyridin wurden 15 ml Essigsäureanhydrid zugegeben. Nach 24-stündigem Stehen bei Raumtemperatur unter Stickstoff wurde das Gemisch in Wasser gegossen und gründlich mit 5 % Methylenchlorid enthaltendem Äther extrahiert. Die vereinigten Ätherextrakte wurden nacheinander mit Wasser, kalter, wäßriger HCl (5 %) , wäßriger Natriumcarbonat-Lösung (5 %) und Wasser gewaschen. Die erhaltene Ätherlösung wurde über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck zur Trockne eingedampft, wobei ein weißer Rückstnad (2,34 g) erhalten wurde.

Der weiße Rückstand, der zwei Hauptkomponenten und zwei Spurenkomponenten bei der dünnschichtchromatographischen Analyse auf einer Silicalgel G-Platte (Lösungsmittel: Benzol) zeigt, wurde der Mitteldruck-Flüssigkeitschromatographie (4,22 kg/cm²; 60 p.s.i.) unter Verwendung einer Silicalgel- (0,032 bis 0,063 mm)-Säule (100 cm χ 2,5 cm) unterworfen. Unter Verwendung von 1,25 % Äther in Benzol als Elutionsmittel wurden 20 ml-Fraktionen (Durchflußrate 5 ml pro Minute) gesammelt.

Die Inhalte der Fraktionen 41 bis 58 wurden vereinigt und nach dem Verdampfen des Lösungsmittels aus Aceton-Wasser kristallisiert, wobei Bis-3ß, 15dL-acetoxy-1 4d-äthyl-5oL-cholest-7-en (1,31 g; 54,8 % Ausbeute) der Formel

809847/0937

2821240,

erhalten wurde.

Die Struktur der Verbindung wurde durch IR-, NMR- und MS-Analysen bestätigt. Die Verbindung zeigte eine einzige Komponente bei den dünnschichtchromatographisehen Analysen auf Silicalgel G-Platten (Lösungsmittelsysteme: Benzol, 10 % Äther in Benzol, 10 % Äther in Hexan und 35 % Äthylacetat in Chloroform) und bei den Gas-Flüssigkeits-chromatographischen Analysen auf 3 % OV-1- und 3 % OV.17-Säulen (Säulentemperatur 270⁰C).

Die Inhalte der Fraktionen 72 bis 90 aus der Mitteldruck-Flüssigkeitschromatographie wurden vereinigt und nach dem Verdampfen des Lösungsmittel aus Aceton-Wasser kristallisiert, wobei 3ß-Acetoxy-14oU-äthyl-5d-cholest-7-en-15ß-ol (0,46 g; 20,9 % Ausbeute) der Strukturformel

erhalten wurde.

Die Struktur der Verbindung wurde durch IR-, NMR- und MS-Analysen bestätigt. Die Verbindung zeigte eine einzige Komponente bei den dünnschichtchromatographischen Analysen auf Silicagel G-Platten (Lösungsmittelsysteme: Benzol, 10 % Äther in Benzol, 10 % Äther in Hexan und 35 % Äthylacetat in Chloroform) und bei den Gas-Flüssigkeits-chromatographischen Analysen auf 3 % OV-1- und 3 % OV-17-Säulen (Säulentemperatür 270⁰C).

809847/0937

282124a.

- 23 -

BEISPIEL 8

Herstellung von 1 4&-Äthyl-5dl-cholest-7-en-3ß, 1 5ß-diol 3ß-Acetoxy-14ce-äthyl-5c/l-cholest-7-en-15ß-ol (0,50 g; 1,06 mMol) , hergestellt wie in Beispiel 7, in 50 ml Äther wurde mit Lithiumaluminiumhydrid (1,00 g; 0,97 mMol) während 2 Stunden reduziert. Das erhaltene Reaktionsgemisch wurde entsprechend der in Beispiel 7 beschriebenen Methode zur Gewinnung der 3ß,15-Diole verarbeitet, wobei ein weißer Feststoff (0,44 g) erhalten wurde. Nach dem Kristallisieren des weißen Feststoffs aus Aceton-Wasser wurde 14 -Äthyl-5 -cholest-7-en-3ß,15ß-diol (0,42 g; 93 % Ausbeute) erhalten. Die IR-, NMR- und MS-Analysen bestätigten die Strukturformel des Produkts

Die Verbindung zeigte eine einzige Komponente bei den dünnschichtchromatographischen Analysen auf Silicagel G-Platten (Lösungsmittelsysteme: 10 % Äther in Benzol, 35 % Äthylacetat in Chloroform) und bei den Gas-Flüssigkeits-chromatographischen Analysen des Bis-3ß,15ß-trimethylsiloxy-derivats auf 3 % OV-1- und 3 % OV-17-Säulen (Säulentemperatur 250⁰C).

BEISPIEL 9

Herstellung von 3ß-Methoxy-1 4CL-methyl-5&-cholest—7-en-15-on 3ß-Benzoyloxy-5&.-cholest-8(14)-en-15-on (11,0 g; 21,8 mMol) wurde zu einer gerührten Lösung von Kalium-t-butoxid, hergestellt durch Auflösen von 18,4 g Kaliummetall in 1000 ml t-Butylalkohol, zugegeben. Nach 15-minütigem Rühren bei Raumtemperatur wurden 110 ml Methyljodid auf einmal zugegeben, und das Gemisch wurde weitere 12 Stunden gerührt. Dann wurde Wasser zugegeben, und das erhaltene Gemisch wurde gründlich mit

809847/0937

Äther extrahiert. Die vereinigten Ätherextrakte wurden über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck zur Trockne eingedampft. Der erhaltene Rückstand wurde auf einer Aluminiuitioxid-Säule (400 g; neutrales Aluminiumoxid, Grad 1; 140 cm χ 2 cm) chromatographiert. Unter Verwendung von Benzol als Elutionsmittel wurden Fraktionen von 24 ml (1,5 ml pro Minute) gesammelt.

Die Inhalte der Fraktionen 35 bis 46 wurden vereinigt, und der nach dem Verdampfen des Lösungsmittels unter vermindertem Druck erhaltene Rückstand wurde aus Aceton-Wasser kristallisiert, wobei 3ß,Methoxy-14d,-methyl-5(/Lr-cholest-7-en-15-on (5,63 g; 60,3 Ausbeute) der Formel

erhalten wurde.

Die Struktur der Verbindung wurde durch IR-, NMR- und MS-Analysen bestätigt. Die Reinheit betrug über 98 %, auf der Basis der Gas-Flüssigkeits-chromatographischen Analysen auf 3 % OV-1- und 3 % OV-17-Säulen (Säulentemperatur 250⁰C). Weiterhin zeigte die Verbindung eine einzige Komponente bei den dünnschxchtchromatographischen Analysen auf Silicagel G-Platten (Lösungsmxttelsysteme: 10 % Äther in Benzol, 10 % Äther in Hexan, 35 % Äthylacetat in Chloroform und 20 % Äthylacetat in Petroläther).

Die Inhalte der Fraktionen 10 bis 16 wurden vereinigt, und der nach Verdampfen des Lösungsmittels unter vermindertem Druck erhaltene Rückstand wurde aus Chloroform-Methanol kristalli-

809847/0937

282124 a

-ZS-

siert, wobei 3ß-Benzoyloxy-14c(.-methyl-5$--cholest-7-en-15-on (1,65 g; 14,6 % Ausbeute) erhalten wurde. Das Produkt zeigte eine einzige Komponente bei den dünnschichtchromatographischen Analysen auf Silicagel G-Platten (Lösungsmittel sy steine: Benzol, 10 % Äther in Benzol und 10 % Äther in Hexan).

BEISPIEL 10

Herstellung von 3ß-Methoxy-14ol-methyl-5^-cholest-7-en-15ß-ol und 3ß-Methoxy-14(j-methyl-5(^-cholest-7-en-15oü-ol Lithiumaluminiumhydrid (2,0 g; 52,7 mMol) wurden zu einer Lösung von 3ß-Methoxy-14<l-inethyl-5c/L-cholest-7-en-15-on (1,0 g; 2,33 mMol) in 100 ml Äther gegeben. Nach einstündigem Rühren bei Raumtemperatur wurde das Reaktionsgemisch auf 0⁰C abgekühlt und vorsichtig mit Eis versetzt, um das nicht umgesetzte Hydrid zu zersetzen. Das erhaltene Gemisch wurde in eine 0,34 η NaCl-Lösung (300 ml) gegossen und gründlich mit 5 % Methylenchlorid enthaltendem Äther extrahiert. Die vereinigten Ätherextrakte wurden über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck zur Trockne eingedampft, wobei ein farbloses Glas (0,95 g) erhalten wurde. Dieses Produkt wurde der präparativen Dünnschichtchromatographie auf Silicagel-PF-Platten (1 mm Dicke; Lösungsmittelsystem: 10 % Äther in Benzol) unterworfen. Es wurden zwei Komponenten mit R_ 0,36 und 0,24 erhalten.

Die weniger polare Komponente (R_f 0,36) wurde von der Platte mit warmem Chloroform eluiert und ergab nach dem Verdampfen des Lösungsmittels 3ß-Methoxy-1 4<A.-methyl-5ct-cholest-7-en-1 5ß-ol (410 mg; 40,8 % Ausbeute) als farbloses Glas. Die polarere Komponente (R_f 0,24) wurde von der Platte mit warmem Chloroform extrahiert und ergab nach Verdampfen des Lösungsmittels 3ß-Methoxy-14a-methyl-5d-cholest-7-en-15öC-ol (272 mg; 27,1 % Ausbeute) als farbloses Glas.

Beide Verbindungen zeigten eine einzige Komponente bei den dünnschichtchromatographischen Analysen auf Silicagel G-Platten (Lösungsmittelsysteme: 10 % Äther in Benzol, 35 % Äthylacetat in Chloroform) und bei den Gas-Flüssigkeits-chromatographischen Analysen auf 3 % OV-1- und 3 % OV-17-Säulen (Säulentemperatur 250⁰C). Die IR-, NMR- und MS-Analysen bestätigten die Struktur der beiden Verbindungen als

809847/0937

282124α

BEISPIEL 11

Herstellung von 5<fc-Cholest-8 (14) -en-3ß, 7<£ ,15£-triol Zu 3ß-Benzoyloxy~14i76-, 15(7L-epoxy-5öL-cholest-7-en (5,0 g; 9,91 mMol) in 810 ml Äthanol wurde eine Lösung von 28 g KOH in 90 ml Wasser gegeben, und das erhaltene Gemisch wurde 5 Stunden unter Rückfluß erhitzt. Nach dem Einengen des Volumens unter vermindertem Druck auf etwa 1/4 des ursprünglichen Volumens wurde das Gemisch in 1000 ml kaltes Wasser gegossen.

Der erhaltene Niederschlag (3,87 g) wurde gesammelt und auf einer Silicalgel-(130 g; 250 bis 74 Mikron (60-200 mesh))-Säule (60 cm χ 2 cm) chromatographiert. Die Säule wurde nacheinander mit Chloroform (200 ml), einem Gemisch aus Chloroform und Äthylacetat (1:1; 200 ml) und Äthylacetat eluiert. Fraktionen von 20 ml wurden gesammelt.

Die Fraktionen 45 bis 100, die das Hauptprodukt enthielten, wurden vereinigt, und das Lösungsmittel wurde unter vermindertem Druck eingedampft. Der erhaltene Rückstand wurde aus Aceton-Wasser umkristallisiert, wobei 5d-Cholest-8 (14)-en-3ß, 7 £ ,15£- triol (2,20 g; 53 % Ausbeute) mit der Strukturformel

809847/0937

- 27 -

282124a

erhalten wurde.

Die Struktur der Verbindung wurde durch IR-, NMR- und MS-Analysen bestätigt. Die Verbindung zeigte eine einzige Komponente bei den dünnschichtchromatographischen Analysen auf Silicagel G-Platten (Lösungsmittelsysteme: 35 % Äthylacetat in Chloroform und Äthylacetat). Das Tris-trimethylsilylätherderivat der Verbindung zeigte eine einzige Komponente bei den Gas-Flüssigkeits-chromatographischen Analysen auf 3 % OV-1- und 3 % OV-17-Säulen (Säulentemperatur 250⁰C).

BEISPIEL 12

Herstellung von 5d-Cholest-8(14)-en-3,7,15-trion Zu 5flL-Cholest-8(14)-en-3ß,7£,15£,-triol (300 mg; 0,72 mMol) in wasserfreiem Methylenchlorid (60 ml) wurde eine Suspension von Pyridiniumchlorochromat (1,10 g; 5,15 mMol) in 30 ml wasserfreiem Methylenchlorid gegeben. Das gerührte Reaktionsgemisch wurde 30 Minuten unter einer Stickstoffatmosphäre gehalten und dann in Äther gegossen. Die abgetrennte Ätherphase wurde nacheinander mit Wasser, kalter 5 % HCl, 5 % Na^CO- und Wasser gewaschen. Die Ätherlösung wurde über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck zur Trockne eingedampft.

Portionen des erhaltenen gelben Rückstands (266 mg) wurden dünnschichtchromatographischen Analysen auf Silicagel G-Platten unterworfen, welche eine Hauptkomponente (Lösungsmittelsysteme: 35 % Äthylacetat in Chloroform und 50 % Äthylacetat in Benzol)

809847/0937

282124.*

anzeigten. Das Produkt wurde der Mitteldruck-Flüssigkeitschromatographie (4,22 kg/cm²; 60 p.s.i.) unter Verwendung einer Silicalgel-(0,032 bis 0,063 mm)-Säule (118 cm χ 1,5 cm) unterworfen. Unter Verwendung von 10 % Äthylacetat in Chloroform als Elutionsmittel wurden Fraktionen von 20 ml (Durchflußrate 5 ml pro Minute) gesammelt. Die Inhalte der Fraktionen 36 bis 40 wurden vereinigt und nach dem Verdampfen des Lösungsmittels aus Aceton-Wasser kristallisiert, wobei 5<*--Cholest-8 (14) -en-3,7,15-trion (170 mg; 57 % Ausbeute) mit der Strukturformel

erhalten wurde.

Die Struktur wurde durch IR-, NMR- und MS-Analysen bestätigt. Die Verbindung zeigte eine einzige Komponente bei der Gas-Flüssigkeits-chromatographischen Analyse auf einer 3 % OV-1-Säμle. Eine entsprechende Analyse auf einer 3 % OV-17-Säule zeigte die Anwesenheit einer geringen (ca. 8 %) Verunreinigung als Schulter auf der distalen Seite des Hauptpeaks.

BEISPIEL 13

Herstellung von ^ot-Äthyl-Sdl-cholest^-en-Sß, 15<i-diol Zu Bis-3ß, 15dl-acetoxv-14<k-äthyl-5A.-cholest-7-en (1,00 g; 1,94 mMol) in 100 ml Äther wurde Lithiumaluminiumhydrid (2,00 g; 52,7 mMol) gegeben. Nach 3-stündigem Rühren bei Raumtemperatur wurde das Reaktionsgemisch auf 0⁰C gekühlt und Eis wurde vorsichtig zugegeben, um das nicht umgesetzte Hydrid zu zersetzen. Das Gemisch wurde in eine 0,34 m Natriumchloridlösung gegossen und gründlich mit 5 % Methylenchlorid enthaltendem Äther extrahiert.

809847/0937

282124^

Die vereinigten Ätherextrakte wurden über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck zur Trockne eingedampft. Der erhaltene Rückstand (0,79 g) wurde aus Wasser-Aceton kristallisiert, wobei "Kct-Äthyl-Soi-cholest-7-en-3ß,15öl-diol (0,76 g; 91,1 % Ausbeute) der Formel

cH_acrt₃ ο Η

erhalten wurde.

Die Struktur der Verbindung wurde durch IR-, NMR- und MS-Analysen bestätigt. Die Verbindung zeigte eine einzige Komponente bei den dünnschichtchromatographischen Analysen auf Silicagel G-Platten (Lösungsmittelsysteme: 10 % Äther in Benzol, 35 % Äthylacetat in Chloroform) und bei den Gas-Flüssigkeits-chromatographischen Analysen des Bis-3ß-15iA--trimethylsiloxyderivats auf 3 % OV-1- und 3 % OV-17-Säulen (Säulentemperatur 250⁰C).

BEISPIEL 14

Herstellung von 3ß-Acetoxy-14gL-n-propyl-5tA.-cholest-7-en-1 5-on 5<H.-Cholest-8 (14)-en-3ß-ol-15-on (10,0 g; 24,9 mMol) wurde zu einer gerührten Lösung von Kalium-t-butoxid, hergestellt durch Auflösen von Kalummetall (17,3 g) in t-Butylalkohol (819 ml; getrocknet über einem Linde-Typ 3A-Molekularsieb) gegeben. n-Propyl-jodid (140 ml) wurden auf einmal zu dem Reaktionsgemisch gegeben, und das Rühren wurde 4 Stunden fortgesetzt. Das Volumen des Reaktionsgemisches wurde unter vermindertem Druck auf etwa 1/3 des ursprünglichen Volumens vermindert. Wasser wurde zugegeben, und das erhaltene Gemisch wurde gründlich mit Äther extrahiert. Die vereinigten Extrakte wurden über wasser-

809847/0937

28212U IE

freiem Magnesiumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck zur Trockne eingedampft.

Der erhaltene Rückstand wurde der Mitteldruck-Flüssigkeitschromatrographie (4,22 kg/cm²; 60 p.s.i.) unter Verwendung einer Silicalgel-(0,032 bis 0,063 mm; 910 g)-Säule (100 cm χ 2,5 cm) unterworfen. Unter Verwendung von 5 % Äther in Benzol als EIutionsmittel wurden Fraktionen von 20 ml (Durchflußrate 5 ml pro Minute) gesammelt. Die Inhalte der Fraktionen 102 bis 192 wurden vereinigt und nach Verdampfen des Lösungsmittels unter vermindertem Druck aus Aceton-Wasser kristallisiert, wobei rohes 14OL-Ii-PrOPYl-SCIr-ChOIeSt-T-Bn-SB-Ol-ISOn (4,5 g; 41 % Ausbeute) als weißer kristalliner Feststoff vom Fp 119-123⁰C erhalten wurde.

Während das Produkt bei den dünnschichtchromatographischen Analysen auf Silicagel G-Platten in zwei verschiedenen Lösungsmittelsystemen (10 % Äther in Benzol, 35 % Äthylacetat in Chloroform) eine einzige Komponente zeigte, ergaben die Gas-Flüssigkeits-chromatographxschen Analysen auf sowohl 3 % OV-1- als auch 3 % OV-17-Säulen die Anwesenheit von etwa 10 % einer weniger polaren Komponente.

Das rohe 14<t-n-Propyl-5cC-cholest-7-en-3ß-ol-15-on (5,0 g; 11,4 mMol) wurde in 50 ml wasserfreiem Pyridin gelöst, und es wurden 50 ml Essigsäureanhydrid zugegeben. Nach 24-stündigem Stehen beim Raumtemperatur unter Stickstoff wurde das Reaktionsgemisch in Wasser gegossen. Das erhaltene Gemisch wurde gründlich mit 5 % Methylenchlorid enthaltendem Äther extrahiert. Die vereinigten Extrakte wurden nacheinander mit Wasser, kalter wäßriger HCl, wäßrigem Natriumcarbonat (5 %) und Wasser gewaschen. Die erhaltene Ätherlösung wurde über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck zur Trockne eingedampft.

Der erhaltene weiße Feststoff (5,2 g) wurde der Mitteldruck-Flüssigkeitschromatographie (4,22 kg/cm²; 60 p.s.i.) unter Verwendung einer Silicagel-(0,032 bis 0,63 mm; 910 g)-Säule (100 cm χ 2,5 cm) unterworfen. Unter Verwendung von Benzol als

809847/0937

282124*

Elutionsmittel wurden 20 ml-Fraktionen (Durchflußrate 5 ml pro Minute) gesammelt. Die Inhalte der Fraktionen 130 bis 178 wurden vereinigt und nach Verdampfen des Lösungsmittels unter vermindertem Druck aus Aceton-Wasser kristallisiert, wobei 3ß-Acetoxy-14ct-n-propyl-5cC-cholest-7-en-15-on (4,1 g; 74 % Ausbeute) in Form von weißen Kristallen vom Fp 110-111⁰C erhalten wurden.

Die Verbindung zeigte eine einzige Komponente bei den dünnschichtchromatographischen Analysen auf Silicalgel G-Platten (Lösungsmittelsysteme: Benzol, 10 % Äther in Benzol, 10 % Äther in Hexan und 35 % Äthylacetat in Chloroform) und bei den Gas-Flüssigkeits-chromatographischen Analysen auf 3 % OV-1- und 3 % OV-17-Säulen (Säulentemperatur 27O⁰C). Die IR-, NMR- und MS-Analysen bestätigten die Struktur als

BEISPIEL 15

Herstellung von 1 4oL-n-Propyl-5el-cholest-7-en-3ß-ol-1 5-on 3ß-Acetoxy-14d-n-propyl-5drcholest-7-en-15-on (300 mg; 0,62 mMol) wurde in absolutem Äthanol (63,4 ml) gelöst und mit 7,14 η KOH (3,35 ml) versetzt. Das erhaltene Gemisch wurde unter Stickstoff 2 Stunden unter Rückfluß erhitzt und nach Verminderung des Volumens unter vermindertem Druck auf etwa 1/2 des ursprünglichen Volumens in Wasser gegossen. Das Gemisch wurde gründlich mit 5 % Methylenchlorid enthaltendem Äther extrahiert, und die vereinigten Extrakte wurden über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck zur Trockne eingedampft.

809847/0937

282124a

Der erhaltene weiße Feststoff wurde aus Aceton-Wasser kristallisiert, wobei ^d^-n-Propyl-Scl-cholest-V-en-Sß-ol-IS-on (264 mg; 96 % Ausbeute) der Formel

erhalten wurde.

Die Struktur wurde durch IR-, NMR- und MS-Analyse bestätigt. Die Verbindung zeigte eine einzige Komponente bei den dünnschichtchromatographischen Analysen auf Silicagel G-Platten (Lösungsmittelsysteme: 10 % Äther in Benzol, 10 % Äther in Hexan und 35 % Äthylacetat in Chloroform) und bei den Gas-Flüssigkeits-chromatographischen Analysen des freien Sterols und seines Trimethylsilylätherderivats auf 3 % OV-1- und 3 % OV-17-Säulen (Säulentemperatur 270⁰C).

BEISPIEL 16

Herstellung von Bis-3ß, 1 5ol-acetoxy-1 4ol-n-propyl-5Ä/-cholest-7-en und 3ß-Acetoxy-14oL-n-propyl-5(A_/-cholest-7-en-15ß-ol Zu 14QL-n-Propyl-5cL-cholest-7-en-3ß-ol-15-on (3,0 g; 6,2 mMol) in 300 ml Äther wurde Lithiumaluminiumhydrid (6,0 g; 158 mMol·) gegeben. Nach 2-stündigem Rühren bei Raumtemperatur wurde das Reaktionsgemisch auf 0⁰C abgekühlt und vorsichtig mit Eis versetzt, um das nicht umgesetzte Hydrid zu zersetzen. Das Gemisch wurde-dn eine 0,34 η Natriumchloridlösung gegossen und gründlich mit 5 % Methylenchlorid enthaltendem Äther extrahiert.

Die vereinigten Ätherextrakte wurden über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck zur Trockne eingedampft. Der Rückstand (2,59 g) wurde aus Aceton-Wasser kristallisiert, wobei ein weißer Feststoff (2,03 g; 33 % Ausbeute)

809847/0937

282124

vom Fp. 104,5-105,5⁰C erhalten wurde. Dieses Material schien ein Gemisch von 14&-n-Propyl-5d-cholest-7-en-3ß, 15ci.-diol (64 %) und ^cL-n-Propyl-SoL-cholest-V-en-SßriSß-diol (36 %) zu sein.

Zu einer Lösung des Gemisches der epimeren Diole (2,0 g; 4,50 mMol) in wasserfreiem Pyridin (15 ml) wurde Essigsäureanhydrid (15 ml) gegeben. Nach 24-stündigem Stehen bei Raumtemperatur unter Stickstoff wurde das Gemisch in Wasser gegossen und gründlich mit 5 % Methylenchlorid enthaltendem Äther extrahiert. Die vereinigten Ätherextrakte wurden nacheinander mit Wasser, kalter wäßriger HCl (5 %), wäßrigem Natriumcarbonat (5 %) und Wasser gewaschen und über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet. Der nach dem Verdampfen des Lösungsmittels erhaltene Rückstand (2,32 g) wurde der Mitteldruck-Flüssigkeitschromatographie (4,22 kg/cm²; 60 p.s.i.) unter Verwendung einer Silicagel-(0,032 bis 0,063 mm; 910 g)-Säule (100 cm χ 2,5 cm) unterworfen. Unter Verwendung von 1 % Äther in Benzol als Elutionsmittel wurden 20 ml-Fraktionen (Durchflußrate 5 ml pro Minute) gesammelt.

Die Inhalte der Fraktionen 40 bis 62 wurden vereinigt und nach Verdampfen des Lösungsmittels unter vermindertem Druck aus Aceton-Wasser kristallisiert, wobei Bis-3ß, 15(£-acetoxy-1 4(/c-npropyl-5cO-cholest-7-en (1,29 g; 53,8 % Ausbeute) als weißer kristalliner Feststoff vom Fp. 128-129⁰C erhalten wurde.

Die Verbindung zeigte eine einzige Komponente bei den dünnschichtchromatographischen Analysen auf Silicagel G-Platten (Lösungsmittel sy sterne: Benzol, 10 % Äther in Benzol, 10 % Äther in Hexan und 35 % Äthylacetat in Chloroform) und bei den Gas-Flüssigkeits-chromatographischen Analysen auf 3 % OV-1- und 3 % OV-17-Säulen (Säulentemperatur 270⁰C). Die folgende Struktur wurde durch IR-, NMR- und MS-Analysen bestätigt:

809847/0937

- 3-4 -

28212U

Die Inhalte der Fraktionen 78 bis 94 aus der Silicalgel-Säule wurden vereinigt und nach dem Verdampfen des Lösungsmittels unter vermindertem Druck aus Aceton-Wasser kristallisiert, wobei 3ß-Acetoxy-14ol-n-propyl-5cL-cholest-7--en-15ß--ol (0,48 g; 22 % Ausbeute) vom Fp. 103,5-104,5⁰C erhalten wurde. Durch IR-, NMR- und MS-Analysen wurde die folgende Struktur bestätigt:

CK-C-O

Die Verbindung zeigte eine einzige Komponente bei den dünnschichtchromatographischen Analysen auf Silicagel G-Platten (Lösungsmittelsysteme: Benzol/ 10 % Äther in Benzol, 10 % Äther in Hexan und 35 % Äthylacetat in Chloroform) und bei den Gas-Flüssigkeits-chromatographischen Analysen auf 3 % OV-1- und 3 % OV-17-Säulen (Säulentemperatur 270⁰C).

809847/0937

- 25 -

BEISPIEL 17

Herstellung von ^d-n-Propyl-SpU-cholest^-en-Sß, 15(fc-diol Zu Bis-3ß-15öl-acetoxy-14(Ar-n-propyl-50i,-cholest-7-en (200 mg; 0,38 mMol) in 50 ml Äther wurde Lithiumaluminiumhydrid (500 mg; 13,2 mMol) gegeben. Nach 3-stündigem Rühren bei Raumtemperatur wurde das Reaktionsgemisch auf 0⁰C abgekühlt und vorsichtig mit Eis versetzt, um das nicht umgesetzte Hydrid zu zersetzen. Das erhaltene Gemisch wurde in eine 0,34 η Natriumchloridlösung gegossen und gründlich mit 5 % Methylenchlorid enthaltendem Äther extrahiert. Die vereinigten Ätherextrakte wurden über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck zur Trockne eingedampft.

Der so erhaltene Rückstand (146 mg) wurde aus Aceton-Wasser kristallisiert, wobei 14Ä-— n-Propyl-Sd-cholest-T-en-Sß, 15o£-diol (135 mg; 80 % Ausbeute) der Formel

Wo

erhalten wurde.

Die Struktur wurde durch IR-, NMR- und MS-Analysen bestätigt. Die Verbindung zeigte eine einzige Komponente bei den dünnschichtchromatographischen Analysen auf Silicagel G-Platten (Lösungsmittelsysteme: 10 % Äther in Benzol, Chloroform, 35 % Äthylacetat in Chloroform) und bei den Gas-Flüssigkeits-chromatographischen Analysen des freien Sterols und seines Bis-3ß, 15öL-trimethylsiloxyderivats auf 3 % OV-1- und 3 % OV-17-Säulen

(Säulentemperatur 270⁰C).

809847/0937

MA

BEISPIEL 18 Herstellung von 14(1-

-T-Sn-SB, 150-diol

Zu Sß-Acetocy-^Arn-propyl-Sö^-cholest-V-en-ISß-ol (200 mg; 0,41 mMol) in 50 ml Äther wurde Lithiumaluminiumhydrid (500 mg; 13,2 mMol) gegeben. Nach 3-stündigem Rühren bei Raumtemperatur wurde das Reaktionsgemisch auf 0⁰C abgekühlt und vorsichtig mit Eis versetzt, um das überschüssige Hydrid zu zersetzen. Das erhaltene Gemisch wurde in eine 0,4 η Natriumchloridlösung gegossen und gründlich mit 5 % Methylenchlorid enthaltendem Äther extrahiert. Die vereinigten Ätherextrakte wurden über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck zur Trockne eingedampft.

Der so erhaltene Rückstand (152 mg) wurde aus Aceton-Wasser kristallisiert, wobei 1 4cL-n-Propyl-5oL-cholest-7-en-3ß, 15ß-diol (145 mg; 79 % Ausbeute) der Formel

Die Struktur der Verbindung wurde durch IR-, NMR- und MS-Analysen bestätigt. Die Verbindung zeigte eine einzige Komponente bei den dünnschichtchromatographisehen Analysen auf SiIicagel G-Platten (Lösungsmittelsysteme: 10 % Äther in Benzol, Chloroform, 35 % Äthylacetat in Chloroform) und bei den Gas-Flüssigkeits-chromatographischen Analysen des freien Sterols und seines Bis-3ß,15<£-trimethylsiloxyderivats auf 3 % OV-1- und 3 % QV-17-Säulen (Säulentemperatur 270⁰C).

809847/0937

282124

BEISPIEL 18A

Herstellung von Sß-Hexadecanoyloxy-^c^-äthyl-SoQ-cholest-7-en-15d-ol, 3ß-Hexadecanoyloxy-1

und Bis-3ß, 1 5(fc-hexadecanoyloxy-14d-äthyl-5<ft^cholest-7-en Zu einem Gemisch von i^-Äthyl-Sol-cholest-T-en-Sß, 15</L,-diol und 14cL-Äthyl-5<t,-cholest-7-en-3ß,15ß-diol (4,40 g; 10,2 rtiMol; ca. 70:30 Gemisch der 15cL·- und 15ß-Hydroxy-Epimeren, wie die Gas-Flüssigkeits-chromatographische Analyse des 3ß-Trimethylsiloxyderivats) in wasserfreiem Pyridin (22 ml) wurde Hexadecanoylchlorid (3,10 g; 11,3 mMol) gegeben. Das Reaktionsgemisch wurde unter Stickstoff eine Stunde unter Rückfluß erhitzt und nach dem Abkühlen auf Raumtemperatur in Wasser gegossen. Das erhaltene Gemisch wurde gründlich 5 % Methylenchlorid enthaltendem Äther extrahiert. Die organische Phase wurde nacheinander mit Wasser, kalter 0,6 η HCl, 0,46 m Na„CO-, und Wasser gewaschen und über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet. Ein Teil des weißen Rückstands (5,35 g) der nach dem Verdampfen des Lösungsmittels erhalten wurde, wurde dünnschxchtchromatographisch auf einer Silicagel G-Platte (Lösungsmittel: Benzol) analysiert. Es wurden drei Hauptkomponenten (R^-Werte: 0,20, 0,45 und 0,79) festgestellt. Das Gemisch wurde der Mitteldruck-Chromatographie (4,22 kg/cm²; 60 p.s.i.) auf einer Silicagel-(0,032 bis 0,063 mm; 910 g)-Säule (100 cm χ 2,5 cm) unterworfen. Unter Verwendung eines Gemisches von Hexan und Benzol (10:90) als Elutionsmittel wurden 20 ml-Fraktionen (Durchflußrate 5 ml pro Minute) gesammelt.

Die Inhalte der Fraktionen 10 bis 23 wurden vereinigt, und der nach dem Verdampfen des Lösungsmittels erhaltene Rückstand wurde aus Aceton bei -40⁰C kristallisiert, wobei Bis-3ß, 15(Ä,-hexadecanoyloxy-14</t-äthyl-5ö(.-cholest-7-en (1,15 g; 12 % Ausbeute) der Formel

809847/0937

282124α

- 38 -

erhalten wurde.

Die Inhalte der Fraktionen 52 bis 86 aus der Silicagel-Säule wurden vereinigt, und der nach dem Verdampfen des Lösungsmittels erhaltene Rückstand wurde aus Aceton bei -40⁰C umkristallisiert, wobei 3ß-Hexadecanoyloxy-14cC-äthyl-5oC-cholest-7-en-15ß-ol (1,62 g; 24 % Ausbeute) der Formel

erhalten wurde.

Die Inhalte der Fraktionen 117 bis 135 aus der Silicagel-Säule wurden vereinigt, und der nach dem Verdampfen des Lösungsmittels erhaltene Rückstand wurde aus Aceton bei -40⁰C umkristallisiert, wobei 3ß-Hexadecanoyloxy-14ob-äthyl-5(Archolest-7-en-15tfl-ol (2,35 g; 34 % Ausbeute) der Formel

erhalten wurde.

809847/0937

Die Strukturen dieser drei Verbindungen wurden durch IR-, NMR- und MS-Analysen bestätigt. Alle drei Verbindungen zeigten eine einzige Komponente bei den dünnschichtchromatographxsehen Analysen auf Silical G-Platten unter Verwendung einer Vielzahl von Lösungsmittelsystemen.

BEISPIEL 19

Herstellung von Bß-Hexadecanoyloxy-^oL-äthyl-Sd-cholest-7-en-15-on

Eine Lösung von Pyridiniuinchlorochromat (581 mg; 2,69 mMol) in wasserfreiem Methylenchlorid (5 ml) wurde auf einmal zu einer Lösung von 3ß-Hexydecanoyloxy-14<i-äthyl-5<k-cholest-7-en-15ß-ol (300 mg; 0,45 mMol) gegeben. Nach 30-minütigem Rühren bei Raumtemperatur (24⁰C) unter Stickstoff wurde das Gemisch in 400 ml Äther gegossen und nacheinander mit Wasser, kalter 0,6 η HCl, 0,47 m Na„CO,. und Wasser gewaschen. Die erhaltene Ätherlösung wurde über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck zur Trockne eingedampft, wobei ein hellgelber Rückstand (284 mg) erhalten wurde. Die dünnschichtchromatographische Analyse auf einer Silicagel G-Platte (Lösungsmittel; Benzol) zeigte eine Hauptkomponente (etwa 95%) mit einem R^- Wert von 0,50.

Das Produkt wurde der Mitteldruck-(7,03 kg/cm²; 100 p.s.i·)-Silicagel-(0,032 bis 0,063 mm; 388 g)-Säulen(118 cm χ 1,5 cm)-Chromatographie unterworfen. Unter Verwendung von Benzol als Elutionsmittel (Durchflußrate 5 ml pro Minute) wurden 20 ml-Fraktionen gesammelt. Die Inhalte der Fraktionen 12 bis 35 wurden vereinigt, und der nach dem Verdampfen des Lösungsmittels erhaltene Rückstand wurde aus Aceton-Wasser kristallisiert, wobei 3ß-Hexadecanoyloxy-14d-äthyl-5cA7-cholest-7-en-15-on (207 mg; 89 % Ausbeute) der Formel

809847/0937

erhalten wurde.

Die Struktur wurde durch IR-, NRM- uns MS-Analysen bestätigt. Die Verbindung zeigte eine einzige Komponente bei den dünnschichtchromatographischen Analysen auf Silicagel G-Platten (Lösungsmittelsysteme: Benzol, 10 % Hexan in Toluol, 10 % Äther in Hexan und Petroläther-Äther-Essigsäure).

Die Behandlung von 3ß-Hexadecanoyloxy-14ck-äthyl-5<A,-cholest-7-en-15Λ--Ο1 mit Pyridiniumchlorochromat unter den vorstehend beschriebenen identischen Bedingungen ergab 3ß-Hexadecanoyloxy-14ctäthyl-5ci-cholest-7-en-15-on mit demselben Schmelpunkt, Infrarotspektrum, kernmagnetischem Resonanzspektrum, Massenspektrum und dünnschichtchromatographischem Verhalten wie vorstehend beschrieben für das von der 15ß-Hydroxyverbindung abgeleitete 15-Keton.

BEISPIEL 20

Herstellung von 3ß-Benzoyloxy-7(A--chlor-5oL-cholest-8 (1 4)-en-15ß-ol

3ß-Benzoyloxy-14Ci-, 15<fc-epoxy-5<Ä.-cholest-7-en (2,00 g; 3,96 HiMoI), hergestellt wie vorstehend beschrieben, wurde in 500 ml Chloroform gelöst und in einem Trockeneis-Aceton-Bad auf -25⁰C abgekühlt. Trockenes HCl-Gas wurde 3 Stunden durch die Lösung geleitet. Das Reaktionsgemisch wurde gründlich mit kaltem Wasser gewaschen, bis die Waschwässer gegen Lackmus neutral waren, und die organische Phase wurde über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösungsmittel wurde unter vermindertem Druck verdampft, der erhaltene feste Rückstand wurde dreimal aus Aceton-Wasser umkristallisiert, und 1,97 g (92 % Ausbeute) eines Feststoffes wurden erhalten. Das Produkt war 3ß-Benzoyloxy-7<^- chlor-5^-cholest-8(14)-en-15ß-ol der Formel

809847/0937

282124

	X	C-CT	'S	-Cl	f
					ι
1
ο Ι
	OH

Die Struktur des Produkts wurde durch IR-, NMR-, optische Drehungs-, Elementar- und niedrig und hoch auflösende Massenspektral-Analysen bestätigt. Darüber hinaus wurde die Struktur bestätigt durch die Ergebnisse der röntgenkristallographischen Analyse des 3ß-p-Brombenzoyloxyderivats (das in derselben Weise wie vorstehend beschrieben aus 3ß-p-Brombenzoyloxy-14<ji_r 15<Arepoxy-5d-cholest-7-en hergestellt wurde).

Die Verbindung zeigte eine einzige Komponente bei den dünnschichtchromatographischen Analysen auf Silicagel G-Platten unter Verwendung der Lösungsmittelsysteme 1O % Äther in Hexan und 1O % Toluol in Hexan.

BEISPIEL 21

Herstellung von 3ß-Äthoxy-1 4d-äthyl-5(Archolest-7-en-15-ol Zu 3ß-Äthoxy-14<L-äthyl-5<A--cholest-7-en-15-on (1,0 g; 2,19 mMol) in100 ml Äther wurde Lithiumaluminiumhydrid (2,0 g; 52,7 mMol·) gegeben. Nach 2-stündigem Rühren bei Raumtemperatur wurde das Reaktionsgemisch auf 0⁰C abgekühlt und vorsichtig mit Eis versetzt, um das nicht umgesetzte Hydrid zu zersetzen. Das erhaltene Gemisch wurde in eine 0,35 m NaCl-Lösung gegossen und gründlich mit 5 % Methylenchlorid enthaltendem Äther extrahiert. Die vereinigten Extrakte wurden über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck zur Trockne eingedampft. Der erhaltene Rückstand (0,97 g) wurde aus Aceton-Wasser kristallisiert, wobei ein Gemisch (0,94 g; 94 % Ausbeute)

809847/0937

282124a

von Sß-Äthoxy-^d-äthyl-S^-cholest-T-en-ISß-ol und 3ß-Äthoxy-1 ^-äthyl-SGl-cholest-T-en- 15Λ-ο1 erhalten wurden. Die IR-, NMR- und MS-Analysen ergaben die folgenden Strukturen für diese Verbindungen:

Die dünnschichtchromatographischen Analysen auf Silicagel G-Platten unter Verwendung von fünf verschiedenen Lösungsmittelsystemen und die Gas-Flüssigkeits-chromatographischen Analysen auf 3 %0V-1- und 3 % OV-17-Säulen (Säulentemperatur 270⁰C) zeigten lediglich eine Komponente. Die Gas-Flüssigkeits-chromatographische Analyse des Trimethylsilylätherderivats auf 3 % OV-1- und 3 % OV-17-Säulen (Säulentemperatur 250⁰C) zeigte jedoch die Anwesenheit von zwei Komponenten an.

BEISPIEL 22

Herstellung von Sß-Hexadecanoyloxy-Sot-cholest-S (14) -en-1 5-on Hexadecanoylchlorid (2,2 g; 8,0 mMol) wurde zu einer Lösung von 5d-Cholest-8(14)-en-3ß-ol-15-on (2,0 g; 5,0 mMol) in 10 ml wasserfreiem Pyridin gegeben. Das erhaltene Gemisch wurde unter Rückfluß 1 Stunde unter einer Stickstoffatmosphäre erhitzt.. Nach dem Abkühlen auf Raumtemperatur wurde das Reaktionsgemisch in Wasser gegossen und gründlich mit 5 % Methylenchlorid enthaltendem Äther extrahiert. Die vereinigten Ätherextrakte wurden nacheinander mit Wasser, kalter wäßriger 5-prozentiger Chlorwasserstoff säure, wäßrigem 5-prozentigem Natriumcarbonat und Wasser gewaschen und über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet.

Der nach dem Verdampfen des Lösungsmittels erhaltene Rückstand

809847/0937

282124α

U8

43 -

wurde der Silicalgel-Säulenchromatographie (140 g; 250 bis 74 Mikron; (60-200 mesh); 140 cm χ 2 cm) unterworfen. Unter Verwendung von Benzol als Elutionsmittel wurden 24 ml-Fraktionen (Durchflußrate 1,5 ml pro Minute) gesammelt. Die Inhalte der Fraktionen 9 bis 40 wurden vereinigt und nach dem Verdampfen des Lösungsmittels unter vermindertem Druck aus Aceton-Wasser umkristallisiert, wobei Sß-Hexädecanoyloxy-Sdcholest-8(14)-en-15-on (3,80 g; 59,5 % Ausbeute) der Formel

erhalten wurde.

Die Struktur der Verbindung wurde durch IR-, NMR- und MS-Analysen bestätigt. Die Verbindung zeigte eine einzige Komponente bei den dünnschichtchromatographischen Analysen auf SiIicagel G-Platten in drei verschiedenen Losungsmittelsystemen (Benzol, 10 % Äther in Benzol und Petroläther-Hexan-Essigsäure).

BEISPIEL 23

Herstellung von Sß-Hemisuccinoyloxy-SgC-cholest-S(14)-en-15-on Bernsteinsäureanhydrid (2,5 g; 24,9 mMol) wurde zu einer Lösung von 5ct-Cholest-8(14)-en-3ß-ol-15-on (2,0 g; 5,0 mMol) in 20 ml wasserfreiem Pyridin gegeben. Das erhaltene Gemisch wurde 5 Stunden unter Rückfluß unter einer Stickstoffatmosphäre erhitzt. Nach Abkühlen auf Raumtemperatur wurde das Reaktionsgemisch in 0,034 η Natriumchloridiösung gegossen und 5 % Methylenchlorid enthaltender Äther (250 ml) zugegeben. Die abgetrennte Ätherphase wurde nacheinander mit kalter 5-prozentiger Chlorwasserstoffsäure und Wasser gewaschen und über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet.

809847/0937

- 44 -

Der nach dem Verdampfen des Lösungsmittels erhaltene Rückstand wurde dreimal aus Aceton-Wasser umkristallisiert. Die erhaltenen Kristalle wurden 20 Minuten mit Norite A in Aceton behandelt, durch Hyflo Super-Cel filtriert und Erniedrigen der Temperatur auf -78°C kristallisiert. Das erhaltene kristalline Produkt (1,8 g; 73 % Ausbeute) erwies sich bei den IR-, NMR- und MS-Analysen als 3ß-Hemisuccinoyloxy~5a(,-cholest-8 (14) -en-15-on der Formel

Die Verbindung zeigte bei den dünnschichtchromatigraphischen Analysen auf Silicagel G.Platten unter Verwendung von Methanol oder Äthanol als Entwickler lediglich eine Komponente.

BEISPIEL 24

Herstellung von 5ck-14ß-Cholest-7-en--1 5ß-ol-3-on Zur Komponente 1 (200 ml) der "Bio-Dynamics-(BMC Division)-Cholesterol-Auto-Test" wurde "Cholesterinoxidase" (6,0 ml; Komponente 3 des "Cholesterol-Auto-Test") gegeben, und das erhaltene Gemisch wurde mit 600 ml destilliertem Wasser verdünnt. 5(A,,14ß-Cholest-7-en-3ß,15ß-diol (126 mg; 0,315 mMol) in 35 ml Isopropanol wurde zugegeben, und das erhaltene Gemisch wurde unter Schütteln bei 37°C 7 Stunden inkubiert. Das Gemisch wurde viermal mit 100 ml-Portionen Chloroform extrahiert. Die Extrakte wurden vereinigt, über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet, und das Volumen wurde unter vermindertem Druck auf etwa 6 ml reduziert.

Das erhaltene Material wurde der präparativen Dünnschichtchromatographie auf sechs Silicagel G-Platten (750 Mikron Dicke) unter

809847/0937

282124

So

45 -

Verwendung von Äther als Entwickler unterworfen. Das erwünschte Produkt wurde von den Platten mit Chloroform eluiert und nach Verdampfen des Lösungsmittels unter vermindertem Druck aus Aceton-Wasser kristallisiert, wobei 83,2 mg (66 %) 5&,14ß-Cholest-7-en-15ß-ol-3-on als Nadeln vom Fp. 90,5 - 91,5°C erhalten wurden. Durch IR-, NMR- und MS-Analysen wurde die Struktur des Produkts festgestellt als

Die Verbindung zeigte eine einzige Komponente bei der dünnschichtchromatographisehen Analyse auf einer Silical G-Platte (Lösungsmittel: Äther). Bei der Gas-Flüssigkeits-chromatographischen Analyse des Trimethylsxlylätherderxvats auf einer 3 % OV-17-Säule (Säulentemperatür 250⁰C) zeigte eine Reinheit von mindestens 98,9 % an.

BEISPIEL 25

Herstellung von 5(A-, 14ß-Cholest-7-en-15ol-Ol-3-on Zu Komponente 1 (180 ml) des "Bio-Dynamics-(BMC Division)-Cholesterol-Auto-Test" wurde Cholesterinoxidase (5,5 ml; Komponente 3 des"Cholesterol-Auto-Test") gegeben, und das erhaltene Gemisch wurde mit 540 ml destilliertem Wasser verdünnt. 5öC, 14ß-Cholest-7-en-3ß, 15(iL-diol (105 mg; 0,262 mMol) in Isopropanol (35 ml) wurde zugegeben, und das erhaltene Gemisch wurde unter Schütteln bei 37°C inkubiert. Nach 5-stündiger Inkubation wurde die Lösung wolkig. Weitere 10 ml Isopropanol wurden langsam zugegeben, und die Inkubation wurde weitere 2,25 Stunden fortgesetzt. Das Gemisch wurde viermal mit Chloroform (100 ml-Portionen) extrahiert. Die Extrakte wurden vereinigt, über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und auf ein Volumen von etwa

S09847/0937

5Λ

- 4-6 -

4 ml konzentriert.

Das erhaltene Material wurde der präparativen Dünnschichtchroinatographie auf sechs Silicagel G-Platten (750 Mikron Dicke) unter Verwendung von Äther als Entwickler unterworfen. Das erwünschte Produkt wurde von den Platten mit Chloroform eluiert und nach Verdampfen des Lösungsmittels unter vermindertem Druck aus Aceton-Wasser kristallisiert, wobei 75,3 mg (72 % Ausbeute) 5d, 14ß-Cholest-7-4n-15(i-ol-3-on als feine Nadeln vom Fp. 121 - 122⁰C erhalten wurden. Durch IR-, NMR- und MS-Analysen wurde die Struktur des Produkts bestätigt als

Die Verbindung zeigte eine einzige Komponente bei der dünnschichtchromatographischen Analyse auf einer Silicagel G-Platte (Lösungsmittel: Äther). Die Gas-Flüssigkeits-chromatographische Analyse des Trimethylsilylätherderivats auf einer 3 % OV-I7-Säule (Säulentemperatur 250⁰C) zeigte eine Reinheit von mindestens 98,6 % an.

BEISPIEL 26

Herstellung von 1 4^-Äthyl-5d-cholest-7-en-1 5<A,~ol-3-on Zu Komponente 1 (250 ml) des "Bio-Dynamivs-(BMC Division)-Cholesterol-Auto-Test" wurde "Cholesterinoxidase" (16 ml; Komponente 3 des Cholesterol-Äuto-Test) gegeben und das erhaltene Gemisch wurde mit 734 ml destilliertem Wasser verdünnt. 14ct-Äthyl-5()_b-cholest-7-en-3ß,15ii-diol (100 mg) in 20 ml Isopropanol wurde zugegeben, und das erhaltene Gemisch wurde unter Schütteln bei 37°C während 4,5 Stunden inkubiert. Das Gemisch wurde zweimal mit 100 ml-Portionen Chloroform extrahiert, und

809847/Q937

SiL

28212U

das Volumen der vereinigten Extrakte wurde unter vermindertem Druck auf etwa 6 ml reduziert.

Dieses Material wurde der präparativen Dünnschichtchromatograhie auf Silicagel G-Platten (750 Mikron Dicke) unter Verwendung von Äther als Entwickler unterworfen. Das erwünschte Produkt wurde von den Platten mit Äther eluiert und nach dem Verdampfen des Lösungsmittels unter vermindertem Druck zweimal aus Äther-Methanol kristallisiert, wobei 85,3 mg (85 % Ausbeute) 14oO-Äthyl-5öL-cholest-7-en-15d-ol-3-on vom Fp. 114 - 115⁰C erhalten wurde.

Die Verbindung zeigte eine einzige Komponente bei der Gas— Flüssigkeits-chromatographischen Analyse auf einer 3 % OV-17-· Säule (Säulentemperatur 260⁰C). Durch IR-, NMR- und MS-Analysen wurde die Struktur des Produkts bestätigt als

BEISPIEL 27

Herstellung von 3ß-Acetoxy-14(Am-butyl-5(^/-cholest-7-en-15-on 5drCholest-8(14)-en-3ß-ol-15-on (10,0 g; 24,0 mMol) wurde zu einer gerührten Lösung von Kalium-t-butoxid, hergestellt durch Auflösen von 20,0 g Kaliummetall in 1000 ml t-Butylalkohol, gegeben. n-Butyljodid (300 ml) wurde auf einmal zu dem Reaktionsgemisch gegeben, und das Rühren wurde 12 Stunden bei Raumtemperatur fortgesetzt. 400 ml Wasser wurden zugegeben, und das erhaltene Gemisch wurde zweimal mit 1000 ml-Portionen Äther extrahiert. Die vereinigten Extrakte wurden mit 200 ml Wasser gewaschen, über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck zur Trockne eingedampft,wobei ein gelblicher Rückstand erhalten wurde.

809847/0937

Der Rückstand wurde mit Essigsäureanhydrid und Pyridin behandelt und der Mitteldruck-(422 kg/cm² (60 p.s.i,))-Silicagel-(0,032 bis 0,063 mm)-Säulenchromatographie unter Verwendung von 10 % Äther in Benzol als Elutionsmittel unterworfen. Nach dem Kristallisieren aus Aceton-Wasser und wiederholten (3) Reinigungen durch Mitteldruck-Flüssigkeitssäulenchromatographie wurden 900 mg Produkt erhalten. Nach dem Kristallisieren aus Aceton-Wasser wurden 850 mg Sß-Acetoxy-'Kcu-n 7-en-15-on in Form weißer Nadeln erhalten.

Die Verbindung zeigte eine einzige Komponente bei den dünnschichtchromatographischen Analysen auf Silicagel G-Platten in acht verschiedenen Lösungsmittelsystemen (Äther, 35 % Äthylacetat in Chloroform, 20 % Äther in Chloroform, 20 % Äther in Benzol, 10 % Äther in Benzol, Chloroform, Benzol und 10 % Hexan in Benzol) und bei den Gas-Flüssigkeits-chromatographischen Analysen auf 3 % OV-1- und 3 % OV-17-Säulen (Säulentemperatur 280⁰C). Durch IR-, NMR- und MS-Analysen wurde die Struktur bestätigt als

BEISPIEL 28

Herstellung von 1 44-n~Butyl-5(A,-cholest-7'-en-3ß-ol-15-on Ein Gemisch von 3ß-Acetoxy-14<7l-n-butyl-5<fc-cholest-7-en-15-on (150 mg), 93 % Äthanol (53 ml) und KOH (1,05 g) wurde 1,5 Stunden unter Rückfluß erhitzt. Nach der Verminderung des Volumens auf etwa 1/2 des ursprünglichen Volumens wurde das Gemisch in eine 0,86 η Natriumchloridlösung (200 ml) gegossen, und das

809847/0937

282124 χ

erhaltene Gemisch wurde gründlich mit 5 % Methylenchlorid enthaltendem Äther extrahiert. Die vereinigten Extrakte wurden mit Wasser gewaschen, über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck zur Trockne eingedampft. Der so erhaltene Rückstand (130 mg) wurde aus Aceton-Wasser kristallisiert, wobei 120 mg (87 % Ausbeute) an feinen Nadeln von

T-en-Sß-ol-IS-on der Struktur

erhalten wurde.

Die Strukturformel wurde durch IR-, NMR- und MS-Analysen bestätigt. Die Verbindung zeigte eine einzige Komponente bei den dünnschichtchromatographischen Analysen auf Silicagel G-Platten in acht verschiedenen Lösungsmittelsystemen (Äther, 35 % Äthyl— acetat in Chloroform, 20 % Äther in Chloroform, 20 % Äther in Benzol, 10 % Äther in Benzol, Chloroform, Benzol und 10 % Hexan in Benzol). Die Reinheit betrug über 99 %, wie durch Gas-Flüssigkeits-chromatographische Analysen des Trimethylsilylätherderivats auf 3 % OV-1- und 3 % OV-17-Säulen (Säulentemperatur 270⁰C) festgestellt wurde.

BEISPIEL 29

Herstellung von Bis-3ß, 1 5cL-acetoxy-1 4cL-n-butyl-5oL-cholest-7-en und 3ß-Acetoxy-14&-n-butyl-5Gl-cholest-7-en-15ß-ol Zu 3ß-Acetoxy-14c{-n-butyl-5oi-cholest-7-en-15-on (647 mg; 1,3 mMol) in 30 ml Äther wurde Lithiumaluminiumhydrid (1,2 g; 32 mMol) gegeben. Nach 3 Stunden wurde das Reaktionsgemisch auf 0⁰C abgekühlt und vorsichtig mit Äthylacetet zur Zersetzung des nicht umgesetzten Hydrids versetzt. Das erhaltene Gemisch

809847/0937

£5

8t) -

282124a,

wurde in eine 0,86 η Natriumchlorxdlösung (200 ml) gegossen und zweimal mit 5 % Methylenchlorid enthaltendem Äther extrahiert -

Die vereinigten Extrakte wurden über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck zur Trockne eingedampft, wobei ein weißer Rückstand (570 mg) erhalten wurde. Dieses Material zeigte bei der dunnschxchtchromatographischen Analyse auf einer Silicagel G-Platte (Lösungsmittelsystem: 10 % Äther in Benzol) zwei Komponenten.

Der weiße Rückstand (570 mg) wurde in 10 ml wasserfreiem Pyridin gelöst und mit 10 ml Essigsäureanhydrid versetzt. Nach 15-stündigem Stehen bei Raumtemperatur wurde das Reaktionsgemisch in Eis gegossen, und das erhaltene Gemisch wurde zweimal mit 200 ml-Portionen Äther, der 5 % Methylenchlorid enthielt, extrahiert. Die vereinigten Extrakte wurden nacheinander mit Wasser, kalter 1 η HCl, wäßrigem 5-prozentigem Natriumcarbonat und Wasser gewaschen, über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck zur Trockne eingedampft.

Der so erhaltene Rückstand (620 mg) wurde der Mitteldruck-Flüssigkeitschromatographie auf einer Silicagel-(0,032 bis 0,063 mm)-Säule unter Verwendung von 1 % Äther in Benzol als Elutionsmittel unterworfen. Die Inhalte der Fraktionen entsprechend der erwarteten Beweglichkeit des Diacetats wurden vereinigt und nach dem Verdampfen des Lösungsmittels aus Aceton-Wasser kristallisiert, wobei Nadeln von Bis-3ß,15cL-acetoxy-14o^-n-butyl-5(Archolest-7-en erhalten wurden. Durch IR-, NMR- und MS-Analysen wurde die Struktur bestätigt als

809847/0937

- zn -

Die Verbindung zeigte eine einzige Komponente bei den dünnschichtchromatographischen Analysen auf Silicagel G-Platten in acht verschiedenen Lösungsmittelsystemen (Äther, 35 % Äthylacetat in Chloroform, 20 % Äther in Chloroform, 20 % Äther in Benzol, 10 % Äther in Benzol, Chloroform, Benzol und 10 % Hexan in Benzol) .

Die Inhalte der Fraktionen mit der erwarteten Beweglichkeit des Monoacetats wurden vereinigt und nach dem Verdampfen des Lösungsmittels unter vermindertem Druck aus Aceton-Wasser kristallisiert, wobei feine Nadeln von 3ß-Acetoxy-14cL-n-butyl-5(/\7-cholest-7-en-15ß-ol (190 mg) erhalten wurden.

Die Verbindung zeigte eine einzige Komponente bei den dünnschichtchromatographischen Analysen auf Silicagel G-Platten in acht verschiedenen Lösungsmittelsystemen (Äther, 35 % Äthylacetat in Chloroform, 20 % Äther in Chloroform, 20 % Äther in Benzol, 10 % Äther in Benzol, Chloroform, Benzol und 10 % Hexan in Benzol) und eine Reinheit über 99 % bei der Gas-Flüssigkeitschromatographischen Analyse des Trimethylsxlylätherderxvats auf einer 3 % OV-17-Säule. Die Struktur wurde durch IR-, NMR- und MS-Analysen bestätigt als

809847/0937

282124Λ

BEISPIEL 30

Herstellung von 1 4<A.-n-Butyl-5&,-cholest-7-en-3ß, 15QÜ-diol· Zu Bis-SßjiScAT-acetoxy-i^-n-butyl-Sol-cholest-T-en (200 mg; 0,37 inMol) in 30 ml Äther wurde Lithiumaluminiumhydrid (400 mg; 10,5 mMol) gegeben. Nach 2 Stunden bei Raumtemperatur wurde das Reaktionsgemisch auf 0⁰C abgekühlt und vorsichtig Äthylacetat zur Zersetzung des nicht umgesetzten Hydrids zugegeben. Das Gemisch wurde in eine 0,86 η Natriumchloridlösung gegossen und zweimal mit 5 %Methylenchlorid enthaltendem Äther extrahiert. Die vereinigten Extrakte wurden über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck zur Trockne eingedampft.

Der Rückstand (180 mg) wurde der Mitteldruck-Flüssigkeitschromatographie auf einer Silicagel-(0,032 bis 0,063 mm)-Säule unter Verwendung von 15 % Äther in Benzol als Elutionsmittel unterworfen. Die Inhalte der Fraktionen entsprechend der Beweglichkeit des erwünschten Diols wurden vereinigt und nach Verdampfen des Lösungsmittels unter vermindertem Druck aus Aceton-Wasser kristallisiert, wobei Nadeln von 14c^-n-Butyl-5c(/-cholest-7-en-3ß,15oL-diol (128 mg) mit der Strukturformel

erhalten wurden.

Die Struktur durch IR-, NMR- und MS-Analysen bestätigt. Die Verbindung zeigte eine einzige Komponente bei den dünnschichtchromatographischen Analysen auf Silicagel G-Platten in acht verschiedenen Lösungsmittelsystemen und eine Reinheit von über 99 % bei der Gas-Flüssigkeits-chromatographischen Analyse des Trimethyl-

8098 47/09 37

282124 58

silylätherderivats auf einer 3 % OV-17-Säule (Säulentemperatur 270⁰C).

BEISPIEL 31

Herstellung von 14&-n-Butyl-5(fc-cholest-7-en-3ß, 15ß-diol Zu 3ß-Acetocy-14c6-n-butyl-5cC-cholest-7-en-15ß-ol (100 mg; 0,20 mMol) in 30 ml Äther wurde Lithiumaluminiumhydrid (200 mg; 5,26 mMol) gegeben. Nach 2 Stunden bei Raumtemperatur wurde das Reaktionsgemisch auf 0⁰C abgekühlt und vorsichtig mit Äthylacetat zur Zersetzung des überschüssigen Hydrids versetzt. Das Gemisch wurde in eine 0,86 η Natriumchloridlösung gegossen und zweimal mit 5 % Methylenchlorid enthaltendem Äther extrahiert. Die vereinigten Extrakte wurden über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck zur Trockne eingedampft .

Der glasige Rückstand (180 mg) wurde der Mitteldruck-Flüssigkeitschromatographie auf einer Silicagel-(0,032 bis 0,063 mm) ~ Säule unter Verwendung von 15 % Äther in Benzol als Elutionsmittel unterworfen. Die Inhalte der Fraktionen entsprechend der Beweglichkeit des erwünschten Diols wurden vereinigt und nach dem Verdampfen des Lösungsmittels wurde 14jt-n-Butyl-5sc-cholest-7-en-3ß,15ß-diol (80 mg) als weißer, armorpher Feststoff erhalten, der aus Aceton-Wasser oder Methanol-Wasser nicht kristallisiert werden konnte.

Die Verbindung zeigte eine einzige Komponente bei den dünnschichtchromatographischen Analysen auf Silicagel G-Platten in acht verschiedenen Lösungsmittelsystemen und eine Reinheit von mindestens 98,5 %, bestimmt durch Gas-Flüssigkeits-chromatographische Analyse des Trimethylsilylätherderivats auf einer 3 % OV-17-Säule (Säulentemperatür 270⁰C). Die Struktur wurde durch IR-, NMR- und MS-Analysen als

809847/0937

si -

bestätigt.

BEISPIEL 32

Herstellung von 3^Jb-Benzoyloxy-5(^-cholest-8 (1 4)-en-1 5-on Eine Lösung von Diäthylazodxcarboxylat (0,87 g; 5,0 mMol) in 5 ml Tetrahydrofuran wurde tropfenweise zu einer gerührten Lösung von 5A-Cholest-8(14)-en-3ß-ol-15-on (1,00 g; 2,5 mMol), Triphenylphosphin (1,97 g; 7,5 mMol) und Benzoesäure (0,61 g; 5,0 mMol) in 30 ml wasserfreiem Tetrahydrofuran gegeben. Nach 14-stündigem Rühren wurde das Gemisch in Wasser gegossen und mit 5 % Methylenchlorid enthaltendem Äther extrahiert. Die vereinigten Extrakte wurden über wasserfreiem Magnesiumsulfat ger trocknet und unter vermindertem Druck zur Trockne eingedampft.

Der erhaltene hellgelbe Feststoff wurde der Silicagel-(100 g; 250 bis 53 Mikron (60 - 300 mesh))-Säulen-(60 cm χ 2,0 cm)-Chromatographie unterworfen. Unter Verwendung von Benzol als Elutionsmittel wurden 24 ml-Fraktionen (Durchflußrate 1,5 ml pro Minute) gesammelt. Die Inhalte der Fraktionen 40 bis 95 wurden vereinigt und nach dem Verdampfen des Lösungsmittels unter vermindertem Druck aus Aceton-Wasser kristallisiert, wobei kristallines 3il-Benzoyloxy-5c\rcholest-8 (1 4) -en-15-on erhalten wurde. Durch IR-, NMR- uns MS-Analysen wurde die Struktur bestätigt als

809847/0937

ORfG'NAi

Die Verbindung zeigte eine einzige Komponente bei den dünnschichtchroraatographischen Analysen auf Silicagel G-Platten (Lösungsmittelsysteme: Benzol, 10 % Äther in Benzol, 10 % Äther in Hexan, 5 % Aceton in Chloroform und 35 % Äthylacetat in Chloroform).

BEISPIEL 33

Herstellung von 5oL-Cholest-8 (14) -en-3(^-ol-15-on Zu Sd-Benzoyloxy-Sc^-cholest-S (14)-en-15-on (500 mg; 1.00 mMol) in absolutem Äthanol (175 ml) wurde Wasser (10 ml) und konzentrierte Schwefelsäure (30 ml) gegeben. Nach dem Erhitzen des Gemisches unter Rückfluß während 24 Stunden in einer Stickstoffatmosphäre wurde das Volumen auf etwa 1/2 des ursprünglichen Volumens unter vermindertem Druck eingeengt und das Gemisch in Wasser gegossen. Das Gemisch wurde gründlich mit 5 % Methylenchlorid enthaltendem Äther extrahiert, und die vereinigten Extrakte wurden unter vermindertem Druck zur Trockne eingedampft.

Der erhaltene hellgelbe Rückstand wurde zweimal aus Aceton-Wasser kristallisiert. Die Kristalle wurden in Aceton gelöst und in Gegenwart von entfärbendem Kohlenstoff (Norite A) 15 Minuten erwärmt. Die Lösung wurde durch Hyflo Super-Cel (Johns-Manville Corp.) filtriert, und das Super-Cel wurde mit Methanol gewaschen. Die Aceton- und Methanollösungen wurden vereinigt, und nach Zugabe von Wasser wurde ein kristallines Produkt (326 mg; 82 % Ausbeute) gebildet, das gesammelt und im Vakuum getrocknet wurde. Durch IR-, NMR- uns MS-Analysen wurde das Produkt als 5o"c-Cholest-8 (14)-en-3öt~ol-15-on mit der Strukturformel

809847/0937

(ολ

56 -

282124a

bestätigt.

Die Verbindung zeigte eine einzige Komponente bei den dünnschichtchromatographischen Analysen auf Silicagel G-Platten (Lösungsmittelsysteme: 10 % Äther in Benzol, 5 % Aceton in Chloroform und 35 % Äthylacetat in Chloroform) und bei den Gas-Flüssigkeits-chromatographischen Analysen auf 3 % OV-1- und 3 % OV-17-Säulen (Säulentemperatur 270⁰C).

BEISPIEL 34

Herstellung von 3&-Benzoyloxy-1 4cL-äthyl-5gj-cholest-7-en-1 5-on Eine Lösung von Diäthylazodicarboxylat (1,74 g; 10,0 mMol) in Tetrahydrofuran (10 ml) wurde tropfenweise zu einer gerührten Lösung von 14d,-Äthyl-5rt,-cholest-7-en-3ß-ol-15-on (2,14 g; 5,0 mMol), Triphenylphosphin (3,93 g; 15,0 mMol) und Benzoesäure (1,22 g; 10,0 mMol).in 60 ml wasserfreiem Tetrahydrofuran gegeben. Nach 14-stündigem Rühren wurde das Gemisch in Wasser gegossen und mit 5 % Methylenchlorid enthaltendem Äther gründlich extrahiert. Die vereinigten Extrakte wurden über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck zur Trockne eingedampft.

Der erhaltene hellgelbe Feststoff wurde der Mitteldruck-(7,03 kg/cm² (100 p.s.i.))-Flüssigkeitschromatographie auf einer Silicagel-(388 g; 0,032 bis 0,063 mm)-Säule (118 cm χ 1,5 cm) unterworfen.Unter Verwendung von Benzol als Elutionsmittel wurden 20 ml-Fraktionen (Durchflußrate 1,5 ml pro Minute ) gesammelt. Die Inhalte der Fraktionen 13 bis 50 wurden vereinigt und nach Verdampfen des Lösungsmittels unter vermindertem Druck

809847/0937

282124

aus Aceton-Wasser kristallisiert, wobei kristallines 3oC-Benzoyloxy-14oL-äthyl-5o\j-cholest-7-en-15-on (2,45 g; 92 % Ausbeute) erhalten wurde.

Die Verbindung zeigte eine einzige Komponente bei den dünnschichtchromatographischen Analysen auf Silicagel G-Platten (Lösungsmittelsysteme: Benzol, 10 % Äther in Benzol und 10 % Äther in Hexan). Die Struktur wurde durch IR-, NMR- uns MS-Analysen als .

	\	k
	Ii *	ι
	Il ι .
O I
		O
	2

bestätigt.

BEISPIEL 35

Herstellung von 1 4oL-Äthyl-5a,-cholest-7-en-3<^--ol-15-on Zu 3cC-Benzoyloxy-14o\,-äthyl-5öL-cholest-7-en-15-on (1,0 g; 1,0 mMol) in absolutem Äthanol (190 ml) wurde eine Lösung von KOH (4,0 g) in Wasser (10 ml) gegeben. Nach 2-stündigem Erhitzen unter Rückfluß unter einer Stickstoffatmosphäre wurde das Volumen des Gemisches unter vermindertem Druck auf etwa 100 ml reduziert. Das Gemisch wurde in Wasser gegossen und gründlich mit 5 % Methylenchlorid enthaltendem Äther extrahiert. Die vereinigten Extrakte wurden über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck zur Trockne eingedampft. Der erhaltene weiße Rückstand wurde aus Aceton-Wasser kristallisiert, wobei HoL-Äthyl-S^
(0,72 g; 89 % Ausbeute) erhalten wurde.

Die Verbindung zeigte eine einzige Komponente bei den dünnschichtchromatographischen Analysen auf Silicagel G-Platten

809847/0937

282124a,

(Lösungsmittelsysteme: 10 % Äther in Benzol, 5 % Aceton in Chloroform und 35 % Äthylacetat in Chloroform) bei den Gas-Flüssigkeits-chromatographischen Analysen auf 3 % OV-1- und 3 % OV-17-Säulen (Säulentemperatur 270⁰C). Die Struktur wurde durch IR-, NMR- und MS-Analysen bestätigt als

BEISPIEL 36

Herstellung von 5(k-Cholest-8 (14) -en-1 5d-ol-3-on Zu Komponente 1 (180 ml) des "Biodynamics-(BMC Division)-Cholesterol-Auto-Test" wurde "Cholesterinoxidase" (5,5 ml; Komponente 3 des Cholesterol-Auto-Tests) gegeben und das erhaltene Gemisch wurde mit destilliertem Wasser (540 ml) verdünnt. 5<A,-Cholest-8 (1 4)-en-3ß, 15<A--diol (105 mg; 0,26 iriMol) in Isopropanol (40 ml) wurde zugegeben, und das erhaltene Gemisch wurde unter Schütteln 8 Stunden bei 37⁰C inkubiert.

Eine gesättigte Natrxumchlorxdlösung (200 ml) wurde zugegeben, und das Gemisch wurde fünfmal mit 100 ml-Portionen Chloroform extrahiert. Die vereinigten organischen Extrakte wurden über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck zur Trockne eingedampft.

Der erhaltene Rückstand wurde der Silicagel-(150 g; 210 bis 44 Mikron (70 bis 325 mesh))-Säulen-(90 χ 2,0 cm)-Chromatographie unter Verwendung von 10 % Äther in Benzol als Elutionsmittel (Durchflußgeschwindigkeit 5 ml pro Minute) unterworfen. Es wurden 20 ml-Fraktionen gesammelt. Die Inhalte der Frak-

809847/0937

tionen 25 bis 45 wurden vereinigt und nach Verdampfen des Lösungsmittels unter vermindertem Druck aus Aceton-Wasser kristallisiert, wobei 5<i-Cholest-8(14)-en-15cL-ol-3-on (88 mg; 85 % Ausbeute) der Formel

	I
*	^ ^r '■■'-■ ι
■ in

erhalten wurde.

Die Struktur der Verbindung wurde durch IR-, NMR- und MS-Analysen bestätigt. Die Verbindung zeigte eine einzige Komponente bei den dünnschichtchromatographischen Analysen auf Silicagel G-Platten (Lösungsmittelsysteme: 10 % Äther in Benzol, 35 % Äthylacetat in Chloroform und 5 % Aceton in Chloroform) und eine Reinheit von über 98 % bei den Gas-Flüssigkeits-chromatographischen Analysen auf 3 % OV-1- und 3 % OV-17-Säulen (Säulentemperatur 270⁰C).

BEISPIEL 37

Herstellung von 5c^-Cholest-8 (1 4)-en-15-on-3ß-pyridiniumsulfat Pyridinschwefeltrioxid (5,0 g) wurde zu 5<^-Cholest-8 (14) -en-3ßol-15-οη (2,0 g; 5,0 mMol) in wasserfreiem Chloroform (50 ml; Äthanol-frei; getrocknet über einem Linde-Molekularsieb, Type 3A) gegeben. Das erhaltene Gemisch wurde bei Raumtemperatur 3 Stunden gerührt. Das überschüssige Reagens wurde abfiltriert, mit einer geringen Menge Chloroform gewaschen, und das Filtrat wurde in einem Trockeneis-Aceton-Bad auf -40⁰C abgekühlt und durch Hyflo Super-Cel (Johns-Manville Corp.) filtriert. Das Chloroform-Filtrat wurde mit Hexan versetzt, bis es wolkig wurde, wobei bei anschließender Kühlung auf 0⁰C ein weißer Niederschlag erhalten wurde. Dieses Material wurde abfiltriert und in einem Vakuumexsiccator 100 Stunden bei Raumtemperatur zur

809847/0937

28212U

- so -

Entfernung sämtlicher Lösungsmittelspuren belassen. Das Produkt, 5<^-Cholest-8 (14)-en-15-on-3ß-yl-pyridiniumsulfat (2,4 g; 86 % Ausbeute) hatte die folgende Strukturformel, wie durch IR-, NMR- und MS-Analysen bestätigt wurde:

Das Produkt zeigte eine einzige Komponente bei den dünnschichtchromatographischen Analysen auf Silicagel G-Platten (Lösungsini ttelsysteme: 25 % Äthylacetat in Methanol und 25 % Äthylacetat in Äthanol).

BEISPIEL 38

Herstellung von 5&-Cholest-8(14)-en-15-on-3ß-yl-kaliumsulfat-(monohydrat)

Sct-Cholest-eC'Uj-en-IS-on-Sß-yl-pyridiniumsulfat (1,0 g; 1,79 mMol) wurde in destilliertem Wasser (50 ml) bei Raumtemperatur gelöst, und eine wäßrige gesättigte Kaliumchloridlösung wurde langsam zu der gerührten Mischung zugegeben. Nach 15 Minuten wurde die erhaltene Suspension filtriert, mit Wasser gewaschen und in einem Vakuumexsiccator mehrere Stunden getrock net. Der erhaltene weiße Rückstand (0,85 g; 89 %) wurde durch IR-, NMR- und MS-Analysen bestimmt als 5ä-Cholest-8(14)-en-15-on-3ß-yl-kaliumsulfat-(monohydrat) mit der Formel

809847/0937

O _ U

K OSO

282124

BEISPIEL 38A Herstellung von 5^-Cholest-8(14)-3,15-dion

Zu einer wasserfreien Methylenchloridlösung von 5o6-Cholest-8 (14)-en-3ß,15ol-diol (0,4 g; 1,0 mMol in 20 ml) wurde eine Lösung von Chromtrioxid (3 g) in einer Mischung von wasserfreiem Methylenchlorid (40 ml) und wasserfreiem Pyridin (3 ml) gegeben. Das Reaktionsgemisch wurde 15 Minuten unter Stickstoff gerührt, mit Äther versetzt, und die Lösung wurde mit kalter 5-prozentiger Chlorwasserstoffsäure und Wasser gewaschen. Die Lösung wurde mit Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und unter vermindertem Druck eingedampft, wobei ein Rückstand (0,35 g) erhalten wurde, der durch präparative Dünnschichtchromatographie (Kieselsäure; Lösungsmittel: Benzol) gereinigt wurde. Das Produkt wurde aus Aceton-Wasser umkristallisiert (Ausbeute: 0,332 g; 84 %). Durch IR-, NMR- und MS-Analysen wurde gezeigt, daß es sich um 5ct-Cholest-8 (1 4)-3,15-dion der Formel

handelte.

809847/0937

to

BEISPIEL 39

Herstellung von 14&-Äthyl-5d,-cholest-7-en-15-oxo--3ß--ylkaliumsulfat-(monohydrat)

Zu einer auf Raumtemperatur befindlichen gerührten Lösung von 14t£-Äthyl-5-jC-cholest-7-en-15-on-3ß-yl-pyridiniumsulfat (500 mg; 0,85 mMol) in destilliertem Wasser (25 ml) wurde eine gesättigte wäßrige Kalxumchloridlösung (15 ml) langsam zugegeben. Nach 10 Minuten wurde die gerührte Suspension filtriert, mit destilliertem Wasser gewaschen und in einem Vakuumexsiccator mehrere Stunden getrocknet. Der weiße Rückstand (418 mg, 87 %) erwies sich durch die IR-, NMR- uns MS-Analysen als 14ot_/-Äthyl-5c^t— cholest-7-en-15-on-3ß-y!-kaliumsulfat-(monohydrat) der Formel

BEISPIEL 40

Herstellung von 1 4d-Äthyl-5(j-cholest-7-en-1 5-on-3ß-yl-pyridiniumsulfat

14d-Äthyl-50L-cholest-7-en-3ß-ol-15-on (1,0 g; 2,33 mMol) wurde in wasserfreiem Chloroform (25 ml; Äthanol-frei; getrocknet über einem Linde-Molekularsieb, Typ 3A) aufgelöst. Pyridin-Schwefeltrioxid (2,5 g) wurde zugegeben, und das Gemisch wurde 3 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Das überschüssige Reagens wurde abfiltriert und mit einer kleinen Menge Chloroform gewaschen. Das Filtrat wurde in einem Trockeneis-Aceton-Bad auf -40⁰C gekühlt und durch Hyflo Super-Cel (Johns-Manville Cor.) filtriert. Hexan wurde zu dem Chloroform-Filtrat zugegeben,bis es wolkig wurde. Beim Abkühlen auf 0⁰C wurde ein weißer Niederschlag gebildet, der abfiltriert und in einen Vakuumexsiccator 100 Stunden bei Raumtemperatur verbracht wurde, um sämtliche

809847/0937

Lösungsmittelspuren zu entfernen. Das Produkt (1,2 g; 88 % Ausbeute) erwies sich durch IR-, NMR- und MS-Analysen als 144,-Äthyl-5&-cholest-7-en-15-on-3ß-yl-pyridiniumsulfat der Strukturformel

Die Verbindung zeigte eine einzige Komponente bei den dünnschichtchromatographischen Analysen auf Silicagel G-Platten (Lösungsmittelsysteme: 25 % Äthylacetat in Methanol und 25 % Äthylacetat in Äthanol).

BEISPIEL 41

Wirkung von Sß-Hexadecanoyloxy-Scü-cholest-S (1 4)-en-15-on und 3ß-Hemisuccinoyloxy-5ct-cholest-8 (14) -en-1 5 on auf den Serumcholesterinspiegel bei Ratten

Männliche Ratten des Sprague-Dawley-Stamms wurden mit Purina-Rattenfutter ad libidum gefüttert. Die Ratten wurden während der gesamten Untersuchung und mindestens 4 Tage vor dem Beginn der Untersuchung bei einem Hell-(7 Uhr morgens bis 6 Uhr abends) -Dunkel-(6 Uhr abends bis 7 Uhr morgens)-Zyklus gehalten.

3ß-Hexadecanoyloxy-5<t-cholest-8 (14)-en-15-on (5 mg; gelöst in 0,25 ml Triolein), nachstehend als "Palmitatester" bezeichnet, oder Sß-Hemisuccinoyloxy-Sd-cholest-S(14)-en-15-on (5 mg; suspendiert in 0,25 ml Triolein unter Verwendung eines genau passenden, nur aus Glas bestehenden Homogenisators), nachstehend als "Hemisuccinatester" bezeichnet, wurden subcutan einmal pro Tag um ungefähr 12 Uhr an jeweils 8 und 6 Ratten verabreicht. 8 Kontrolltiere erhielten tägliche Injektionen von Triolein (0,25 ml).

809847/0937

28212«,

Die Kontrolltiere hatten ein anfängliches mittleres Körpergewicht von 163,5 g (+ 5,6, mittlere Standardabweichung (S.E.M.)). Die Ratten, die Palmitat- und Hemisuccinatester erhielten, hatten ein mittleres Körpergewicht von 178,5 g (+ 5,5, S.E.M.) bzw. 170,0 g (+ 4,7, S.E.M.).

Den Ratten wurden periodisch Blutproben entnommen, und die Serumcholesterinkonzentrationen wurden (doppelt) nach der Methode von Abell et al., J. Biol. Chem., Bd. 195, S. 357-366 (1966) gemesen. Die Ergebnisse sind in Tabelle I zusammengestellt.

Wegen der Tatsache, daß die Gruppen der Ratten hinsichtlich ihrer Serumcholesterinspiegel vor dem Beginn des Experiments nicht angepaßt wurden, waren die ursprünglichen mittleren Werte der Serumcholesterinspiegel für die Triolein-, Palmitatester- und Hemisuccinatestergruppen nicht identisch. Trotz dieses Umstands zeigen die in Tabelle I zusammengestellten Ergebnisse klar signifikante Abnahmen der Serumcholesterinspiegel nach 3, 6, 9 und 12 Behandlungstagen mit dem Palmitatester und dem Hemisuccinatester, verglichen mit dem Mittelwert für dieselben Ratten vor Beginn der Verabreichung der Verbindung. Im Gegensatz hierzu zeigten die Ratten, die tägliche Triolein-Injektionen erhielten, eine signifikante Änderung des Serumcholesterinspiegels. Weiterhin war der Mittelwert der Serumcholesterinspiegel bei den Palmitat- und Hemisuccinatestergruppen nach 12-tägiger Behandlung signifikant niedriger als der entsprechende Mittelwert der Serumcholesterinspiegel der mit Triolein behandelten Ratten.

Die Wirkungen des Palmitatesters und des Hemisuccinatesters auf die Serumcholesterinspiegel der einzelnen Ratten wurde ebenfalls analyisiert. Tabelle I zeigt die Mittelwerte der prozentualen Senkung der Cholesterinspiegei, bezogen auf die ursprünglichen Spiegel derselben Ratten und gibt ebenfalls die Variationen dieser Werte an. Bei jeder Ratte in beiden Gruppen wurden signifikante Senkungen der Cholesterinspiegei beobachtet. Die prozentuale Senkung des Cholesterinspiegels nach 12-tägiger Behandlung mit dem Palmitatester beträgt 22,7 bis 48,9 %. Die prozentuale Senkung des Cholesterinspiegels nach 12-tägiger Behandlung mit dem Hemisuccinatester beträgt 28,5 bis 46,3 %.

809847/0937 ^ ,„.^., ..,

282124

ίο

Die Analyse der Serumsterole der Ratten nach 12-tätiger Behandlung mit entweder dem Palmitatester oder dem Hemisuccinatester durch Gas-Flüssigkeitschromatographie (3 % OV-1 auf Gas-Chrom Q) zeigte keine nachweisbare Anhäufung ( 1 %) von von Cholesterin verschiedenen Sterolen an.

Es wurden keine signifikanten Unterschiede im Wachstum der mit 5 mg pro Tag von entweder den Palmitat- oder den Hemisuccinatester behandelten Ratten beobachtet^ verglichen mit der Gruppe, die lediglich Triolein erhielt. Die durchschnittliche prozentuale Gewichtszunahme während der gesamten Versuchszeit bei den Palmitat-, Hemisuccinat- und Trioleingruppen betrug (Mittelwert + S.E.M.) 40,5 + 4,6, 40,7 + 1,6 und 43,6 + 3,3.

Es traten keine signifikanten Unterschiede zwischen den Mittelwerten der Lebergewichte der mit Triolein behandelten Ratten (9,6 g +_ 0,4, S.E.M.) und der Hemisuccinatester-behandelten Ratten (10,7 g + 0,4, S.E.M.) auf. In ähnlicher Weise traten keine signifikanten Unterschiede zwischen den mittleren Lebergewichten, ausgedrückt aus Prozentsatz des Gesamtkörpergewichts, zwischen den mit Triolein behandelten Ratten (4,09 % + 0,08, S.E.M.) und den mit Hemisuccinatester behandelten Ratten

(4,36 % + 0,08, S.E.M.) auf.

Die Mittelwerte der Lebergewichte der mit Triolein behandelten Ratten (9,7 g + 0,4, S.E.M.) unterschieden sich von denen mit Palmitatester behandelten Ratten (11,4 g + 0,5, S.E.M.). In ähnlicher Weise unterschied sich der Mittelwert der Lebergewichte, ausgedrückt als Prozentsatz des Gesamtkörpergewichts, der mit Triolein behandelten Ratten (4,09 % + 0,08, S.E.M.) vom Mittelwert der mit Palmitatester behandelten Ratten (4,53 % + 0,09, S.E.M.).

809847/0937

Tabelle I

Wirkungen von Triolein, Sß-Hexadecanoyloxy-SoC-cholest-S (14) en-15-on (Palmitatester) und 3ß-Hemisuccinoyloxy--5o(-cholest-8(14)-en-15-on (Hemisuccinatester) auf die Serumcholesterin-

spiegel von Ratten

oo O (O OO

σ to co

O O

"pt f"

rl

πί

m ο

Tag O 3 6 9 12	Serumcholesterin, mg pro 100 ml . (Mittelwert + S.E.M.)	Triolein	Palmitatester	Hemisuccinatester	^Senkung (Mittelwert + S.E.M.)	Hemisuccinatester
82.6 ± 2.3 79.6 ± 2.5 76.4 ± 3.0 82.1 ± 2.0 79.4 ± 2.2	91.6 ± 2.6 74.9 ± 3.9 75.8 ± 5.0 77.9 ± 5.9 61.4 ± 3.9	89.1 ± 2.6 78.6 ± 2.4 72.5 + 1.9 72.3 ± 1.6 58.8 ± 2.8	Palmitatester	13.5 + 4.4 18.1 ± 4.1 18.4 ± 3.5 33.9 + 2.9
18.2 ± 3.3 15.7 ± 4.4 14.5 ± 2.9 33.2 ± 2.7

fs»

N>

282124^

BEISPIEL 42

Der Versuch wurde im allgemeinen wie in Beispiel 41 durchgeführt, wobei 3ß-Äthoxy-14^_/-äthyl-5oL-cholest-7-en-15-on (5 mg) in Triolein (0,25 ml) jeder von 8 Ratten subcutan einmal pro Tag verabreicht wurde. 8 Kontrolltiere erhielten tägliche Triolein-Injektionen (0,25 ml). Die Kontrolltiere hatten ein anfängliches mittleres Körpergewicht von 143,7 g (+ 6,3, S.E.M.) und die das Steroidalketon erhaltenden Ratten hatten ein anfängliches mittleres Körpergewicht von 141,8 g (+ 2,9, S.E.M.).

In ähnlicher Weise wurde 5o\,-Cholest-8 (14)-en-3ß-ol-15-on (2 mg) in 0,2 ml Olivenöl oder 5,0 mg in 0,5 ml Olivenöl einer Gruppe von Ratten subcutan einmal pro Tag verabreicht. Die 2 mg-Dosis wurde 12 Ratten verabreicht, wobei eine gleiche Anzahl von Ratten tägliche Injektionen von 0,2 ml Olivenöl erhielten. 5 mg-Dosen wurden jeder von 6 Ratten verabreicht, während 6 Kontrolltiere tägliche Injektionen von 0,5 ml Olivenöl erhielten. Die in dieser Untersuchung verwendeten Ratten hatten ein anfängliches Gewicht zwischen 110 und 190 g.

Die mittleren Serumcholesterinwerte für die Kontroll- und Experimentiertiere sind in Tabelle II zusammengestellt. Signifikante Senkungen der Serumcholesterinspiegel, verglichen mit den Kontrollratten, wurden bei den Ratten beobachtet, die täglich subcutane Injektionen der 15-oxidierten Sterole erhielten. Die mittleren Serumcholesterinspiegel der mit Olivenöl und mit Triolein behandelten Tiere schwankten während der Untersuchungszeit nicht signifikant. Die durchschnittliche prozentuale Senkung der Serumcholesterinspiegel bei den einzelnen Ratten, die mit dem 14ct/-Äthyl-15-keton (Tag 27 gegenüber Tag 0) behandelt wurden, betrugen 12,1 bis 34,9. Der Mittelwert war 25,0 (+ 2,3, S.E.M.).

Es traten keine signifikanten Unterschiede im Wachstum der mit den 15-oxidierten Sterolen und der mit Triolein oder Olivenöl behandelten Ratten auf.

8 0 9847/0937

- ββ -

Tabelle II

282124α,

Wirkungen von 3ß-Äthoxy-14c<--äthyl-5oC-cholest-7-en-15-on und 5oL-Cholest-8 (14)-en-Sß-ol-IS-o auf die Serumcholesterxnspxegel von Ratten

	Serumcholesterin, mg pro 100 ml (Mittelwert + S.E.M.)	3ß-Äthoxy-14A-äthyl- 5d--cholest-7-en- 15-on	% Senkung, ver glichen mit Triolein-behan- delten Ratten
Tag	Triolein	89,1 + 2,2	—
0 •3	88,9 + 2,2	77,3 + 2,1	4,8
6	81,2 + 2,8	80,1 + 2,3	3,4
10	82,9 + 3,0	78,5 + 3,3	3,8
15	81,6 + 3,5	73,1 + 2,3	11,5
21	82,6 + 3,8	66,8 + 2,6	18,3
27	81,8 + 3,3*	5d-Cholest-8(14)-en- 3ß-ol-15-on (2 mg)	% Senkung, ver glichen mit Oli- venöl-behandelten Ratten
Tag	Olivenöl (0,2 ml)	64,5 + 2,5	12
3	73,7 + 2,9	5oL-Cholest-8 (14) -en- 3ß-ol-15-on (5 mg)	% Senkung, ver glichen mit Oli- venöl-behandelten Ratten
Tag	Olivenöl (0,5 ml)	59,6 + 2,2	22
3	79,5 + 5,8

* Die Zahlen für diesen Mittelwert und für S.E.M. wurden berechnet unter Auslassung einer Ratte, die einen sehr niedrigen Serumcholesterxnspxegel (55,3 mg pro 100 ml) an diesem Tag aufwies. Unter Einschluß dieses Wertes wird ein mittlerer Serumcholesterxnspxegel von 78,5 + 4,2 (S.E.M.) erhalten.

809847/0937

BEISPIEL 43 282 1 24

Männliche Ratten des Sprague-Dawley-Stamms wurden erhalten von den Sprague-Dawley-Farmen (Madison, Wisconsin). Die Ratten wurden bei einem Hell-(7.00 Uhr morgens bis 5.30 Uhr abends)-Dunkel-(5.30 abends bis 7.00 Uhr morgens)-Zyklus gehalten und mit einer Cholesterin-freien Testdiät(von United States Biochemical Corporation, Cleveland, Ohio) während 13 Tagen vor dem Beginn der Untersuchungsperiode gefüttert. 6 Tage vor dem Beginn der Untersuchungsperiode wurden Blutproben zur Bestimmung der Serumcholesterinkonzentration entnommen und, basierend auf den Ergebnissen dieser Analysen, wurden die Ratten in drei Gruppen eingeteilt, die annähernd die gleiche mittlere Serumcholesterinkonzentration hatten. Die Ratten wurden dann einzeln in Metabolismuskäfigen (Econo-Metabolism Units, Maryland Plastics, New York, New York) 6 Tage vor dem Beginn der Untersuchungsper.iode untergebracht. Die Tiere wurden bei dem HeIl-Dunkel-Zyklus während der ganzen Untersuchungsperiode gehalten.

Die einzelnen Tiere wurden täglich während der ganzen Untersuchungsperiode gewogen und die Nahrungsaufnahme der einzelnen Ratten wurde in ähnlicher Weise täglich festgehalten. Ein signifikantes Verstreuen des Futters oder ein Beschmutzen des Futters durch Fäces oder Urin war wegen der Konstruktion der Metabolismuskäfige und der verwendeten Futterbehältnisse nicht möglich.

Blutproben wurden aus der Schwanzvene zwischen 8.15 Uhr morgens und 9.30 Uhr morgens entnommen; niemals wurden mehr als etwa 0,5 ml Blut abgezogen. Das Serum wurde durch Zentrifugieren des Bluts unter Verwendung von Sure-Sep Junior (General Diagnostics, Division of Warner Lambert Company, Morris Plains, New Jersey) während 20 Minuten bei 2000 bis 2500 UpM in einer Tischzentrifuge (Dynac, Clay Adams Model 0091) erhalten. Die Serumcholesterinkonzentration wurde nach einer Abänderung des "Cholesterol Auto Test"(Bio-Dynamics, BMC Division), der in Bio-Dynamics/bmc Cholesterol Instruction (überarbeitet Dezember 1975) beschrieben ist, bestimmt.

809847/0937

- 7t) -

282124^

5(3L-Cholest-8 (14)-en-3ß-ol-15-on (500 rag), hergestellt und gereinigt wie in Beispiel 1 beschrieben, wurde in kleinen Portionen zu 500 g der Cholesterin-freien Testdiät in einer verschlossenen 2-Liter-Glasflasche zugegeben. Nach jeder Zugabe des Sterols zu der Diät wurde die Flasche gründlich gerollt und geschüttelt. Die erhaltene, in Bezug auf das 5^-Cholest-8(14)-en-3ß-ol-15-on 0,1-prozentige Diät wurde bei 4°C gelagert. Vor der Verwendung zum Füttern wurde die Diät auf Raumtemperatur (etwa 25⁰C) erwärmen gelassen.

Die Ratten wurden in 3 Gruppen eingeteilt, die nachstehend wie folgt bezeichnet sind:

1. Ad libidum-Gruppe: 6 Ratten mit freiem Zugang zu der Cholesterin-freien Testdiät,

2. Ketongruppe: 7 Ratten mit freiem Zugang zu der Cholesterinfreien Testdiät, die 0,1 % 5ö^-Cholest-8 (14)-en-3ß-ol-1 5-on enthielt,

3. "paar-gefütterte" (pair-fed) Gruppe: 7 Ratten mit Zugang

zu der Cholesterin-freien Testdiät, jedoch nur in der Menge, die von dem jeweiligen Gegenstück der einzelnen Ratte in der Ketongruppe am Vortag verbraucht wurde.

Bei Beginn der Untersuchungsperiode hatten die mittleren Serumcholesterinkonzentrationen (mg pro 100 ml Serum +_ mittlere Standardabweichung) für die drei Gruppen die folgenden Werte:

Ad libidum 71,4 + 2,4

Keton 71,2 + 0,9

paar-gefüttert 69,0 + 2,9.

Bei Beginn der Untersuchungsperiode waren folgende mittlere Körpergewichte (+ mittlere Standardabweichung) vorhanden:

Ad libidum 125,3 + 4,4

Keton 130,4 + 4,4

paar-gefüttert 128,0 + 4,0.

Die vorstehenden Werte zeigen, daß die Gruppen bezüglich ihrer mittleren Körpergewichte und ihrer mittleren Serumcholesterinkonzentrationen gut angepaßt waren.

809847/0937

Das der Diät wie vorstehend beschrieben beigemischte 5<t-Cholest-8(14)-en-3ß-ol-15-on hatte eine ausgeprägte Wirkung bezüglich der Senkung der Serumcholesterinkonzentrationen. Der mittlere Serumcholesterinspiegel (mg pro 100 ml Serum) bei den Ratten, die 0,1 % 5d-Cholest-8(14)-en-3ß-ol-15-on in der Diät erhielten, sank von einem Anfangswert von 71,2 auf einen Wert von 50,1 am Tag 4 und auf 36,9 am Tag 8 der Untersuchungsperiode. Die Mittelwerte der Serumcholesterxnkonzentratxon in der ad libidum-Gruppe und in der paar-gefütterten Gruppe änderten sich während der Untersuchungsperiode nicht signifikant. Die Ergebnisse sind in Tabelle III zusammengestellt.

Tabelle III

Serumcholesterxnkonzentratxon (mg pro 100 ml) Tag 0 4 8

ad libidum 71,4+2,4 69,9+2,7 70,5+2,4

Keton 71,2+0,9 50,1+2,3 36,9+3,3

paar-gefüttert 69,0+2,9 71,8+4,2 74,9+4,5

Die Daten betreffend die Serumcholesterinspiegel für die drei Gruppen als Prozentsatz des Wertes des Anfangsspiegels (Tag 0) der einzelnen Ratten nach 4 und 8 Tagen sind in Tabelle IV zusammengestellt. Es trat keine signifikante Änderung in der Serumcholesterxnkonzentratxon bei der ad libidum-Gruppe oder bei der paar-gefütterten Gruppe auf. Jedoch betrug der Mittelwert für die Prozentsätze des Serumcholesterinspiegels am Tag 4 und Tag 8 der Untersuchungsperiode, verglichen mit den ursprünglichen Werten, 70,5 % bzw. 51,8 %.

Tabelle IV

Serumcholesterinkonzentration in Prozent der anfänglichen Spiegel bei einzelnen Ratten

ad libidum Keton paar-gefüttert

Tag	4	98,	9 +	6	,3	70	,5 +	3	,6	96,	1	± 8,	1
Tag	8	99,	O +	2	,2	51	,8 +	4	,4	109,	1	+ 6,	1

809847/Ö937

282124^

Der durchschnittliche tägliche Futterverbrauch der Ratten in den drei Gruppen an den Tagen 2 bis 7 betrug:

ad libidum 15,5 g

Keton 6,6 g

paar-gefüttert 6,2 g.

Das Gewicht des täglich verbrauchten Futters der Ratten in allen drei Gruppen ist in Tabelle V zusammengestellt. Wie aus den Daten dieser Tabelle hervorgeht, war der Futterverbrauch der Ratten, die die 0,1 % Keton enthaltende Diät erhielten, signifikant geringer als die jener der Ratten in der ad libidum-Gruppe.

Die Änderung des mittleren Körpergewichts für die Ratten in den drei Gruppen während der gesamten Untersuchungsperiode ist in Tabelle VI zusammengestellt. Der Mittelwert für die ad libidum-Gruppe stieg von 125,3 g zu Beginn der Untersuchung auf 166,3 g am Ende der Untersuchung an. Der Mittelwert für die Ketongruppe fiel von einem Anfangswert von 130,4 g auf 117,3 g am Ende der Untersuchung. Der Mittelwert für die paar-gefütterte Gruppe fiel in ähnlicher Weise von einem Anfangswert von 128,0 g auf einen Wert von 113,6 g bei Beendigung der Untersuchung.

Die mittlere prozentuale Änderung des Körpergewichts von den anfänglichen Werten der einzelnen Ratte in den drei Gruppen ist in Tabelle VII zusammengestellt. Die Daten zeigen, daß die Änderungen des Körpergewichts bei den Tieren, die mit der Keton enthaltenden Diät gefüttert wurden, auf einer Herabsetzung der Futteraufnähme beruhten. Die paar-gefütterten Tiere, die lediglich die Futtermenge erhielten, welche von der Keton-behandelten Gruppe verbraucht wurde, zeigten Körpergewichtsänderungen, die ähnlich sind jenen der Keton-behandelten Tiere. Daß die bemerkenswerte Abnahme der Serumcholesterinkonzentrationen bei den mit dem Keton behandelten Ratten nicht auf einer Herabsetzung des Futterverbrauchs beruhten, geht zwar daraus hervor, daß die Serumcholesterinspxegel der paar-gefütterten Gruppe (deren Nahrungsaufnahme- und Körpergewichtswerte im wesentlichen gleich waren wie die Werte der Keton-behandelten Gruppe) keine Abnahme während der Untersuchungsperiode zeigten.

809847/0937

282124 Z

Tabelle V

Futterverbrauch (g)

Tag.	Ad libidum	Keton ■	paar-gefüttert
O	12.2 ± 0.7	10.4 ± 0.7	14.2 ± 0.9
1	15.1 ± 0.6	5.1 ± 0.3	10.2 ± 0.6
2	15.1 ± 0.5	7.1 ± 0.3	5.0 ± 0.3
3	14.5 ± 0.7	5.5 ± 0.3	7.1 ± 0.3
4	13.7 ± 1.3	7.1 ± 0.5	5.4 ± 0.3
5	16.7 ± 0.7	5.8 ± 0.5	7.0 ± 0.5
6	16.8 ± 0.5	6.6 ± 0.5	5.8 ± 0.4
7	16.1 ± 0,4	7.5 ± 0.5	6.9 ± 0.5

Tabelle VI

Korpergewxcht (g)

Tag	Ad libidum	Keton	paar-gefüttert
0	125.3 ± 4.4	130.4 ± 4.4	128.0 ± 4.0
1	123.2 ± 4.3	126.6 ± 4.8	128.9 ± 2.5
2	131.1 ± 4.5	121.4 ± 4.4	128.1 ± 2.2
3	138.2 ± 4.4	120.6 +4.6	122.9 ± 2.8
4	141.5 ± 3.2	118.5 ± 4.0	121.3 ± 2.3
5	147.0 ± 5.1	119.4 ± 4.3	117.7 ± 2.2
6	155.7 ± 4.7	118.9 ±4.8	117.4 ± 2.5
7	162.0 ± 4.6	116.5 ± 4.9	114.6 ±2.4
8	166.3 ± 4.6	117.3 ± 4.7	113.6 ± 3.2

809847/0937

-M-

282124«,

Tabelle VII

Prozentuale Änderung des anfänglichen Gewichts bei einzelnen Ratten

Tag	Ad libidum	Keton	paar-gefüttert
1	- 1.7 ± 0.4	- 3.0 ± 0.7	+ 1.1 ± 1.7
2	+ 4.6 ± 0.6	- 7.0 ± 0.7	+ 0.4 ± 1.8
3	+10.3 ± 0.7	- 7.7 ± 0.7	- 3.8 ± 1.0
4	+12.3 ±1.9	- 9.1 ± 0,7	- 5.0 ± 1.4
5	+17.4 ±1.6	- 8.5 + 0.5 -	- 7.7 ± 1.6
6	+24.3 ± 0.9	- 8.7 ± 1.0	- 8.0 ± 1.7
7	+30.1 ± 1.3	-10.8 ± 1.3	-10.2 ± 1.8
8	+31.7 ± 1.9	-10.2 ± 0.9	-11.1 ± 1.7

809847/0937

go "?*" 282124&

BEISPIEL 44

Hemmung der Sterolbiosynthese in L-Zellen und in primären Kulturen von Mäuseleberzellen

Die Wirkung von zahlreichen 15-oxidierten Sterolen auf die Sterolbiosynthese in L-Zellen und in primären Kulturen von Mäuseleberzellen wurde im wesentlichen unter den im einzelnen bereits früher (A.A. Kandutsch und H.W. Chen, J. Biol. Chem., Band 248, S. 8408 - 8417 (1973) und A.A. Kandutsch und H.W. Chen, J. Biol. Chem., Band 249, S. 6057 - 6061 (1974) ) beschriebenen Bedingungen geprüft.

Die primären Leberzellkulturen wurden aus 16 Tage alten (57BL/6J)-Föten hergestellt und in serumfreiem, chemisch definiertem Medium, wie in den vorstehenden Literaturste11en beschrieben, wachsen gelassen. Die L-Zellen, eine Sublinie von NCTC Klin 929 Mäusefibroblasten, wurden in einem serumfreien, chemisch definierten Medium, wie in vorstehenden Literaturstellen beschrieben, wachsen gelassen. Diese L-Zellen sind transformierte Fibroblasten, die als bösartig angesehen werden, da sie als Tumoren wachsen, wenn sie in den Mäusestamm, von dem sie ursprünglich erhalten wurden, injiziert werden.

Die Herstellung der steroidhaltigen Medien, die Verfahren zur

14 Bestimmung der Umwandlung von (1- C)-Acetat in Deigitonin-

präzipitable Sterole, Fettsäuren und CO₂ und die Methoden zur Messung von DNA, Protein und HMG-CoA-Reduktase wurden wie in den vorgenannten Literaturstellen beschrieben durchgeführt. Die L-Zellkulturen wurden 4 Stunden mit den 15-oxidierten Sterolen

14

(Sterinen) und ihren Derivaten vorinkubiert, dann wurde (1- C)-Acetat in einer Konzentration von 4 μΜοΙ pro ml (4μΰί pro ml) zugegeben; oder die L-Zellkulturen wurden 5 Stunden mit den 15-oxidierten Sterolen inkubiert, bevor sie zur Bestimmung der mikrosomalen HMG-CoA-Reduktase-Aktivitat geerntet wurden.

Die Bedingungen für die Inkubation der 15-oxidierten (15-sauerstoffhaltigen) Sterole oder ihrer Derivate in Leberzellkulturen waren ähnlich denen, wie sie für die L-Zellkulturen beschrieben wurden, mit der Ausnahme, daß die Kulturen mit den Testverbin-

809847/0937

-H-

2821243,

düngen 12 Stunden inkubiert wurden, bevor das markierte Acetat zugegeben wurde oder bevor sie für die Enzymbestimmung geerntet wurden.

Die Testverbindungen wurden über einen Bereich von mindestens vier Konzentrationen geprüft, und die Bestimmung wurde wiederholt, bis die zur Hervorrufung einer 50-prozentigen Hemmung erforderliche Konzentration der Testverbindung sich auf dem steil abfallenden Teil eines Diagramms befand, in dem die Aktivität gegen die Konzentration aufgetragen war. Um jede mögliche Wirkungen von allgemeinen Unterschieden im Zellmetabolismus zu ver-

14 ringern, wurden dxe Raten der Sterolsynthese aus (1- C)-Acetat berechnet als das Verhältnis von ( C)-Sterolen zu ( C)-Fettsäuren, wie dies in den vorstehend zitierten Publikationen von Kandutsch und Chen beschrieben ist.

In den nachstehend beschriebenen Versuchen mit den 15-oxidierten Sterolen hatte keine der Testverbindungen eine signifikante Wirkung auf die Einbauraten des markierten Acetats in Fettsäuren oder auf die Oxidationsrate zu Kohlendioxid. Das Fehlen eines Hemmeffekts auf die letztgenannten Parameter des Metabolismus zeigt ebenfalls, daß die 15-oxidierten Sterole und ihre Derivate im allgemeinen unter den Versuchsbedingungen nicht toxisch auf die Zellen wirken.

Beispiele von Wirkungen einer Anzahl oxidierter Derivate von Cholesterin (welche keine 15-oxidierten Sterole einschließen) auf die Sterolsynthese in diesen Zellkultursystemen sind in den vorstehend zitierten Artikeln von Kandutsch und Chen publiziert worden. Die zur Erzielung einer 50-prozentigen Hemmung der Sterolbiosynthese erforderlichen Sterolkonzentratxonen, wie sie von Kandutsch und Chen angegeben werden, sind wie folgt:

809847/0937

282124a,

Zur 50-prozentigen Hemmung der Sterolsynthese erforderliche Konzentration (μΜοΙ)

L-ZeIl-	primäre Kulturen
kulturen	von Leberzellen
	> 5.200
1,7	37,0
3,7	6,0
0,07	1,0

Cholesterin

Cholest-5-en-3ß-ol-22-on Cholest-5-en-3ß,22«£-diol Cholest-5-en-3ß,25-diol

Es sollte beachtet werden, daß reines Cholesterin in Leberzellkultursystemen inaktiv ist. 25-Hydroxycholesterin war vor der vorliegenden Erfindung der stärkste Inhibitor der Sterolsynthese dieses Typs gewesen.

Die Ergebnisse von Studien einer Anzahl von 15-oxidierten Sterolen auf die Sterolsynthese in L-Zellkulturen und in primären Leberzellkulturen sind in Tabelle VIII zusammengestellt. Aus den Daten dieser Tabelle geht hervor, daß eine sehr große Anzahl der Verbindungen eine 50-prozentige Hemmung der Sterolsynthese in den L-Zellen bei einer Konzentration von 10 m oder weniger bewirkt. 1 4<^r-Äthyl-5dt-cholest-7-en-3ß, 15cL-diol bewirkte eine 50-prozentige Hemmung der Sterolsynthese in den L-Zellen bei

einer Konzentration von 5x10 in. 14oL-Äthyl-5^,-cholest-7-en-15A.-ol-3-on und 14(j^-Äthyl-5(l-cholest-7-en-3oL-ol-15-on sind außerordentlich aktiv und ergeben im wesentlichen eine 100-prozentige Hemmung der Sterolsynthese bei einer Konzentration von 10 m.

Da die Leber eine Hauptstelle für die Biosynthese von Cholesterin in tierischen Zellen darstellt, ist der Befund, daß eine beträchtliche Anzahl der Verbindungen hemmend auf die Sterolsynthese in Leberzellen wirkt, von besonderer Bedeutung. Es sollte beachtet werden, daß 14oL-Äthyl-5dl-cholest-7-en-3ß, 15<Ä_-diol in dieser Beziehung außerordentlich aktiv ist und eine 50-prozentige Hem-

mung der Sterolsynthese bei einer Konzentration von 6 χ 10 m wirkt, was beträchtlich niedriger ist als der früher berichtete niedrigste Wert von 10 m für 25-Hydroxycholesterin.

809847/0937

2821244

Tabelle VIII

Zur 50-prozentigen Hemmung -der Sterolsynthese erforderliche Konzentration (μΜοΙ)

5a-Cholest-8(14)-en-3ß-ol-15-om 5a-Cholest-8(14)-en-3ß,15ß-diol 5a-Cholest-8(14)-en-3ß,15a-diol

5a-Cholest-8(14)-en-3ß^,155-triöl 5a-Cholest-8(14)-en-3a-ol-15-one Sß-Hemisuccinoyloxy-Sa-cholest-SCW) -en-15-on Sß-Hexadecanoyloxy-Sa-cholest-S(14)-en-15-on

5a,14ß-Cholest-7-en-3 β,15ß-diol 5a,14ß-Cholest-7-en-3ß,15a-diol 5a,14ß-Cholest-7-en-15ß-ol-3-on 5a,14ß-Cholest-7-en-15a-ol-3-on

14a-Methyl-5a-cholest-7-en-3ß-ol-15-on 14a-Methyl-5a-cholest-7-en-3ß,15ß-diol 14a-Methyl-5a-cholest-7-en-3ß,15a-diol 3ß-Methoxy-14a-methyl-5a-cholest-7-en~15-on 3ß-Methoxy-14a-methyl-5a-cholest-7-en-15ß-ol 3ß-Methoxy-14a-methyl-5a-cholest-7-en-15a-ol

L-ZeIl-	prxmäre I
kulturen	Cul—
	türen von
0.1	Leberzellen
1.8	4.0
3.7	10.3
5.0	31.0
0.5	4.8
3.2

1.0	2.5
3.2	7.5
0.25
2.0
0.3	4.5
0.5
0.3	1.8
20.0
1.4	3.5
0.3	1.9

809847/0937

14a-Sthyl-5a-cholest-7-ea-3ß,15ß-diol 14a-Ä thyl-Sa-cholest-y-en-Sß,15a-dlol 14a-^.thyl-5a-cholest-7-en-3ß-ol-15-oa ■-.■ 3 β- >-thyl -Mo-äthyl-Sa-cholest^-en-lS-ol 3 ß-S thoxy-14ct-äthyl-5a-cholest-7-ea-15-on

3 ß-Hexadecanoyloxy-14a- Sthyl-5a-cholest-7

en-15a-ol
3ß-Hexadecanoyloxy-l4a-äthyl-5a-cholest-7 en-15ß-ol

14a-n-Propyl-5a-cholest-7-en-3ß,15ß-diol 14a-n-Propyl-5a-choles t-7-en-3ß,15a-diol 14a-n-Propyl-5a-cholest-7-en-3ß-ol-15-on

282124^

L-ZeIlkultüren

7.0

> 15.0

3g-Acetoxy-14a-äthyl-5a-cholest-7-en-15ß-ol ' 0.03

4.1 1.1 3.4

primäre Kulturen

von Leberzellen

0.4	0.8
0.05	0.06
0.3	2.1
0.7	4.3
>22.0
< 0.1*
< 0.1*

14a-n-Butyl-5a-cholest-7-en-3ß,15a-diol 14a-n-Butyl-5a-cholest-7-en-3ß,15ß-diol 14a-n-Butyl-5a-cholest-7-en-3ß-ol-15-on 5.0 4.4 8.3

* Bei dieser Konzentration wurde im wesentlichen 100-prozentige Hemmung beobachtet.

809847/0937

Sb

BEISPIEL 45

282124z

Verringerung der HMG-CoA-Reduktase in Zellen durch 15-oxidierte

Sterole

Eine Anzahl der 15-oxidierten Sterole wurde ebenfalls bezüglich ihrer Wirkungen auf die Aktivität und/oder die Spiegel des Enzyms HMG-CoA-Reduktase (3-Hydroxy-3-methylglutaryl-Coenzym A-Reduktase) in den L-Zellen und in den Leberzellen geprüft. Wie vorstehend beschrieben, katalysiert dieses Enzym die Reduktion von 3-Hydroxy-3-methylglutaryl-Coenzym A zu Mevalonsäure, einem wichtigen Zwischenprodukt bei der Biosynthese von Sterolen und einer Anzahl anderer wesentlicher, in Zellen vorkommender Verbindungen♦

Unter Verwendung der von Kandutsch und Chen beschriebenen Methoden in dem im vorstehenden Beispiel zitierten Artikel wurden die Konzentrationen zahlreicher 15-oxidierter Sterole, die zur Erniedrigung der Aktivitäten von HMG-CoA-Reduktase um 50 % benötigt werden, bestimmt, und zwar in den Zellen der L-Zellen in Kultur und in den Primärkulturen von Leberzellen. Die bei diesen Untersuchungen erhaltenen Daten sind in Tabelle IX zusammengestellt .

Tabelle IX

Zur 50-prozentigen Erniedrigung der Aktivität der HMG-CoA-Reduktase erforderliche Konzentrationen (μΜοΙ) in

5a-Cholest-8(14)-en-3g-ol-15-on ■ 5a-Cholest-8(14)-en-3 3,158-diol

5a,14e-Cholest-7-en-3ß,15e-diol 5a,143-Cholest-7-en-33,15a-diol

L-ZeIl- Kulturen	primären Kulturen von Leberzellen
0.3	4.0
2.5	16.1
1.9	18.0
4.5	6.0
6.7	12.5

809847/0937

Bh

14a-Methyl-5a-choles t-7-en-3 3,15 ß-diol 14a-Methyl-5a-cholest-7-en-3ß,15a-diol 3 ß-Methoxy-14a-methy1-5(X-ChOles t-7-en-15 ß-ol 3ß-Methoxy-14a-mettiyl-5a-cholest-7-en-15a-ol 33-Acetoxy-14a-£thyl-5a-cholest-7-ea-15ß-ol 14a-Sthyl-5a-cholest-7-en-3ß-ol-15-on

3g-Hemlsucciaoyloxy-5a-cholest-8(14)-en-15-on 3.0

	Leberzellen
282124 %	2.8
μ-Mol in L-ZeIl- primären Kulturan ^uren	4.3
	2.0
0.3	3.5
1.2	1.6
0.3
3.7	2.1
3.0
0.13
1.9

Ein Vergleich der Daten in Tabelle III mit den Daten in Tabelle VIII zeigt, daß bei vielen, jedoch nicht allen der Verbindungen die Konzentrationen, die erforderlich sind, um eine 50-prozentige Erniedrigung des Spiegels der Enzymaktivität für HMG-CoA-Reduktase in den Zellen zu bewirken, sehr ähnlich sind zu den Konzentrationen, die über dieselben Verbindungen erforderlich sind, um eine 50-prozentige Hemmung der Sterolbiosynthese zu bewirken.

BEISPIEL 46

Es wurde ein weiterer Versuch durchgeführt, der im wesentlichen entsprechend dem Verfahren von Beispiel 43 vorgenommen wurde. Bei diesem Versuch wurde 5cArCholest-8 (1 4)-en-3ß-ol-15-on der Cholesterin-freien Testdiät in einer Konzentration von 0,2 % einverleibt.

Bei Beginn der Untersuchungszeit hatten die mittleren Körpergewichte in Gramm (;+ mittlere Standardabweichung) für die drei Gruppen die folgenden Werte:

809847/0937

-Ra-

282124a

ad libidum 141,2 + 6,6 Keton 152,3 + 5,5

paar-gefüttert 153,2 +_ 6,4

Bei Beginn der Untersuchungsperiode hatten die mittleren Serumcholersterinkonzentrationen (mg pro 100 ml Serum + mittlere Standardabweichung) für die drei Gruppen die folgenden Werte:

ad libidum 74,3+3,9

Keton 80,5 + 2,8

paar-gefüttert 91,4 + 3,6.

Es ist ersichtlich, daß die Gruppen bei diesem Versuch nicht besonders gut angepaßt waren, insbesondere bezüglich der ursprünglichen mittleren Serumcholesterinkonzentrationen. Trotz dieser Tatsache hatte das der Diät einverleibte 5rfL-Cholest-8(14)-en-15-on-3ß-ol eine ausgeprägte Wirkung auf die Serumcholesterinkonzentration.

Die Ergebnisse dieses Versuchs sind in Tabelle X zusammengestellt. Wie in dieser Tabelle dargestellt, fiel der mittlere Serumcholesterinspiegel (mg pro 100 ml Serum) der Ratten, die 0,2 % 5ci-Cholest-8 (14)-en-3ß-ol-15-on in der Diät erhielten, vom Anfangswert von 80,5 auf einen Wert von 73,2 am Tag 4, 32,2 am Tag 7 und 30,3 am Tag 9. Der mittlere Serumcholesterinspiegel bei der ad libidum-Gruppe stieg am Tag 3 leicht an, war aber im wesentlichen während der ganzen Untersuchungsperiode unverändert. Bei diesem Versuch blieb jedoch die mittlere Serumcholesterinkonzentration in der par-gefütterten Gruppe während der Untersuchungsperiode nicht unverändert. Die Serumcholesterinkonzentration fiel von einem Anfangswert von 91,4 auf 62,9 am Tag 7 und auf 55,1 am Tag 9, vermutlich als Ergebnis der ausgeprägten Futterbeschränkung in diesem Versuch.

809847/0937

282124.it

Tabelle X Serumcholesterinkonzentration, mg pro 100 ml

Tag ad libidum Keton paar-gefüttert

0	74.3 ± 3.9	80	.5 ± 2	.8	91.	4 ± 3.	6
4	80.1 ± 3.9	73	.2 ± 3	.0	91.	8 ± 6.	0
7	81.2 ±3.2	32	.2 ± 5	.9	62.	9 ± 4.	5
9	81.8 ± 1.6	30	.3+6	.2	55.	1 ± 6.

Die Werte der Serumcholesterinspiegel für die drei Gruppen, ausgedrückt in Prozent des Wertes des ursprünglichen Spiegels (Tag 0) der einzelnen Ratten nach 4, 7 und 9 Tagen sind in Tabelle XI zusammengestellt.

Tabelle XI

Serumcholesterinspiegel, Prozent der ursprünglichen Spiegel der einzelnen Ratten

Tag ad libidum Keton paar-gefüttert

• 4 109.9 ± 6.1 91.6 ± 4.3 101.0 ± 4.1 \

7 111.1 ± 7.4 40.6 ± 7.9 70.2 ± 5.3 j

9 111.9 ± 6.0 37.9 ± 8.8 60.9 ± 8.0

Die Änderungen der mittleren Körpergewichte für die Ratten in den drei Gruppen während der gesamten Untersuchung sind in Tabelle XII zusammengestellt. Die Mittelwerte für die ad libidum-Gruppe stiegen von 141,2 g zu Beginn des Versuchs auf 178,2 g am Ende des Versuchs an. Der Mittelwert für die Keton-Gruppe fiel von einem Anfangswert von 152,3 g auf 122,3 g am Ende des Versuchs ab. Der Mittelwert für die paar-gefütterte ' Gruppe fiel in ähnlicher Weise von einem Anfangswert von 153,2 g auf einen Wert von 114,4 g am Ende des Versuchs ab.

809847/0937 ORIGINAL INSPECTED

Tabelle XII
Körpergewicht, g

28212«

Tag	ad libidum	Keton	paar-gefüttert
O	141.2 ± 6.6	152.3 ± 5.5	153.2 ± 6.4
1	143.5 ± 7.1	151.3 ± 4.7	157.2 + 8.0
2	149.7 ± 7.3	145.4 + 4.9	152.9 ± 7.6
3	153.0 ± 7.9	139.0 ± 4.8	145.1 ± 7.4
4	161.4 ± 6.5	137.4 ± 4.9	139.0 ± 7.0
5	165.4 ± 6.6	134.5 ± 4.5	133.1 ± 6.7
6	170.4 ± 6.6	130.7 ± 5.1	127.6 ± 3.9
7	177.3 ± 7.1	127.7 ± 5.2	120.1 ± 3.9
8	178.2 ± 7.8	122.3 ± 5.8	114.4 + 4.0

Aus den Daten der Tabelle XIII geht hervor, daß der Futterverbrauch der Ratten, die die 0,2 % Keton-Diät erhielten, signifikant geringer war als jener der Ratten in der ad libidum-Gruppe.

Tabelle XIII
täglicher Futterverbrauch, g

Tag	ad libidum	Keton	paar-gefüttert
0	12.4 ± 1.3	7.2 ± 0.6	13.6 ± 1.4
1	13.2 + 1.4	4.4 ± 1.1	3.8 ± 0.9
2	14.0 ± 1.6	4.8 ± 0.4.	4.3 ± 0.4
3	16.5 ± 0.4	4.8 ± 0.2	4.5 ± 0.4
4	15.1 ± 0.8	5.5 ± 0.4	4.5 ± 0.4
5	16.7 ± 0.5	5.5 ± 0.3	5.3 ± 0.4
6	17.8 ± 0.3	5.4 ± 0.2	5.4 ± 0.3
7	14.5 + 1.1	5.1 ± 0.2	5.1 ± 0.2
8	15.9 ± 0.7	4.3 ± 0.6	4.9 ± 0.3

809847/0937

9ο -#*- 282124*

Am Tag 8 des Versuchs wurde bemerkt, daß 4 der Ratten in der Keton-Gruppe Diarrhöeentwickelten- Eine dieser Ratten verendete am folgenden Tag. Zwei andere Ratten dieser Gruppe hatten am Tag 9 dünne Stühle.

BEISPIEL 47

Ein weiteres Ernährungsexperiment wurde mit 5otr-Cholest-8 (14)-en-3ß-ol-15-on unter Verwendung von 7 Wochen alten Mäusen durchgeführt. 5 Mäuse wurden mit dem Keton in einer Konzentration von 0,2 % in einer Diät, die im wesentlichen frei von tierischen Sterolen war, 8 Tage gefüttert. 5 paar-gefütterte Kontrollmäuse wurden mit derselben Diät gefüttert, der kein Keton beigegeben war. Die mittlere Plasmacholesterinkonzentration in der Keton-Gruppe nach dem 8-tägigen Versuch betrug 35,8 (+ 3,6, mittlere Standardabweichung) mg pro 100 ml Plasma, während der entsprechende Wert für die paar-gefütterte Gruppe 114,4 +_ 3,4, (mittlere Standardabweichung) betrug. Es sollte beachtet werden, daß die gut angepaßte Paar-Fütterung bei Mäusen dieses Alters sehr schwierig ist wegen der geringen verbrauchten Futtermengen, und daß man dies bei solchen Versuchen sehr genau bestimmen muß. Die Keton-Gruppe zeigte eine durchschnittliche Abnahme des Körpergewichts während der Untersuchungszeit von 5,9 g (+_ 0,1, mittlere Standardabweichung). Die paar-gefütterte Kontrollgruppe zeigte eine durchschnittliche Abnahme des Körpergewichts von 2,4 g (+0,1, mittlere Standardabweichung).

Bei zwei weiteren oxidierten Sterolen, nämlich 25-Hydroxycholesterin und 7-Ketocholesterin, von denen gezeigt wurde, daß sie eine starke Hemmwirkung auf die Sterolsynthese in L-Zellen in Kultur und in primären Kulturen von Mäuseleberzellen haben, wurde gefunden, daß diese Verbindungen keine signifikante Plasmacholesterin-senkende Wirkung in Mäusen haben (A.A.Kandutsch, H.-J. Heiniger und H.W. Chen, Biochimica et Biophysica Acta, Bd. 486, S. 260-272, 1977).

809847/0937

QA

Zusammenfassend betrifft die Erfindung 15-oxidierte Sterole, welche die Fähigkeit zur Hemmung der Biosynthese von Mevalonsäure haben und weitere, sich von ihrer Fähigkeit zur Hemmung der Biosynthese von Mevalonsäure abgeleitete Wirkungen aufweist. Die 15-oxidierten (15-sauerstoffhaltxgen) Sterole (Sterine) haben die allgemeine Formel

in der bedeuten:

L· -OH, =0, -OR₄, OCRc, -OC(CH₂) COH, eine Sulfatgruppe oder ein Mg-, Na- oder K-SaIz einer Sulfatgruppe;

ti -OH, 0 oder -OCR₅;

_ (JuH, ßH oder eine (KP-,- bis C,-Alkylgruppe;

R. eine C..- bis C_fi-Alky!gruppe, vorzugsweise eine C^-Alkylgruppe;

- bis

R₁- eine C₁- bis C„_n-aliphatische Gruppe, eine substituierte

C..- bis C₂₀-aliphatische Gruppe oder eine Phenylgruppe; und η eine ganze Zahl von 2 bis 6, vorzugsweise von 2 bis 4.

Die Rundringstruktur kann gesättigt oder ungesättigt sein, und wenn es für die R₁- und R„-Substituenten möglich ist, in mehr als einer sterischen Position zu sein, können sie entweder in der -oder ß-Position sein. Die Grundsterolstruktur (Grundsterinstruktur) kann natürlich auch Substituenten enthalten,

die die Eigenschaften der Verbindung an von R₁ , schiedenen Positionen nicht nachteilig beeinflussen.

809847/0937

R„ und R-. ver

Claims (1)

1. PATENTANWÄLTE

   2821244

   A. GRÜNECKER

   CHPL-ING.

   H. KlNKELDEY

   DR-ING.

   W. STOCKMAIR

   DR-ING. - AeE (CALTEOQ

   K. SCHUMANN

   DR RER NAT. ■ DIPt-PHVS

   P. H. JAKOB

   DIPL-INa

   G. BEZOLD

   Dn RERNAT- DlPL-CHEM

   8 MÜNCHEN

   MAXIMILIANSTRASSE

   16. Mai 1978 P 12 757

   Dr. Be/mi

   Patentansprüche

   1. Verfahren zur Senkung des Serumcholesterins, dadurch gekennzeichnet , daß man einem Wirt oral eine zur Senkung des Serumcholesterins (Serumcholesterals) ausreichende Menge eines Serumcholesterin senkenden 15-oxidierten Sterols verabreicht, wobei das 15-oxidierte Sterol die allgemeine Formel hat

   809847/0937

   _₂_ 282124a,

   in der bedeuten:

   0 0 0

   It Il Il

   R -OH, =0, OR., OCR₅, -OC(CH₂) COH, eine Sulfatgruppe oder ein Mg-, Na- oder K-SaIz einer Sulfaigruppe;

   R₂ -OH, =0 oder OCR₅;

   R₃ c^H, ßH oder eine 0Cc₁- bis C_g-Alkylgruppe; R₄ eine C₁- bis Cg-Alkylgruppe

   Rc- eine C₁- bis C_2f)-aliphatische Gruppe, eine substituierte C₁- bis C„„-aliphatische Gruppe oder eine Phenylgruppe; und

   η eine ganze Zahl von 2 bis 6,
   wobei die R₁- und R_- Substituen
   sind, sich entweder in der <A_~ oder ß-Position befinden.

   wobei die R₁- und R_- Substituenten, wenn sie nicht =0

   2. Verfahren nach Anspruch 1,- dadurch gekennzeichnet, daß man als 15-oxidiertes Sterol 5&-Cholest-8(14)-en-3ß-ol-15-on einsetzt.

   3. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man als 15-oxidiertes Sterol 5drCholest-8(14)-en-3ß,15ß-diol einsetzt.

   4. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man als 15-oxidiertes Sterol 5d--Cholest-8 (1 4) -en-3ß, 15<fc-diol einsetzt.

   5. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man als 15-oxidiertes Sterol 5<A* 1 4ß-Cholest-7-en-3ß, 15<Ä7-diol einsetzt.

   6. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man als 15-oxidiertes Sterol 5<^ 14ß-Cholest-7-en-3ß,15ß-diol einsetzt.

   809847/0937

   282124a;

   7. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man als 15-oxidiertes Sterol 14ol-Methyl~5o(-cholest-7-en-3ß-ol-15-on einsetzt.

   8. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man als 15-oxidiertes Sterol 14drMethyl-5c/L-cholest-7-en-3ß, 15ß-diol einsetzt.

   9. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man als 15-oxidiertes Sterol 14d-Methyl-5<A.-cholest-7-en-3ß, 15dv--diol einsetzt.

   10. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man als 15-oxidiertes Sterol 3ß-Methoxy-14<£-methyl-5öL-cholest-7-en-15-on einsetzt.

   11. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man als 15-oxidiertes Sterol 3ß-Äthoxy-14öl-äthyl-5(A.-cholest-7-en-15cL-"ol einsetzt.

   12. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man als 15-oxidiertes Sterol Sß-Methoxy-^oL-methyl-S&r-cholest-7-en-15d.-ol einsetzt.

   13. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man als 15-oxidiertes Sterol 14c(-Äthyl-5o\-cholest-7-en-3ßol-15-on einsetzt.

   14. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man als 15-oxidiertes Sterol 14</u-Äthyl-5(Archolest-7-en-3ß, 15o^r-diol einsetzt.

   15. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man als 15-oxidiertes Sterol 14(A.-Äthyl-5cL-cholest-7-en-15<Ar-ol-3-on einsetzt.

   16. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man als oxidiertes Sterol ein Sterol einsetzt, das eine Doppelbindung zwischen den C_R- und C₁.-Atomen hat und keinen

   809847/0937

   28212U

   R_-Substituenten aufweist.

   17. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man ein oxidiertes Sterol einsetzt, das eine Doppelbindung zwischen den C-- und C_Q-Atomen aufweist.

   7 ο

   18. Verfahren zur Appetitunterdrückung, dadurch gekennzeichnet, daß man eine zur Appetitunterdrückung ausreichende Menge eines appetitunterdrückenden 15-oxidierten Sterols nach einem der Ansprüche 1 bis 17 verabreicht.

   19. Verfahren zur Unterdrückung des Zellwachstums, dadurch gekennzeichnet, daß man eine zur Unterdrückung des Zellwachstums ausreichende Menge eines zellwachstumsunterdrückenden 15-oxidierten Sterols nach einem der Ansprüche 1 bis 17 verabreicht.

   Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 19, dadurch gekennzeichnet, daß man das 15-oxidierte Sterol in einer Menge entsprechend etwa 0,1 mg bis etwa 140 mg pro Tag pro Kilogramm Körpergewicht verabreicht.

   15-oxidierte Sterole der Formel

   809847/0937

   ORIGINAL INSPECTED

   282124

   in der bedeuten: O OO

   R. -OH, =0, -OR., OCR₅, -OC(CH₂)_nCOH, eine Sulfatgruppe oder ein Mg-, Na- oder K-SaIz einer SuIfatgruppe;

   f/
   -OH, =0 oder OCR₅;

   R₃ ^H, BH oder eine (tC-- bis Cg-Alkylgruppe; R. eine C₁- bis C_fi-Alkylgruppe;

   R₁- eine C₁- bis C₂₀-aliphatische Gruppe, eine substituierte C₁- bis C„_-aliphatische Gruppe, oder eine Phenylgruppe; und

   η eine ganze Zahl von 2 bis 6,

   wobei die R₁- und R₂-Substituenten, wenn sie nicht =0 sind, sich entweder in der öt-oder ß-Position befinden können, mit der Maßgabe, daß, falls zwischen den C„- und C₁.-Atomen eine Doppelbindung ist und R₁ -OH ist, R_ nicht -OH ist; falls R₃OC-Methyl und R₁ -OH ist, R₃ nicht -OH ist; falls R₃ <Ä/-Methyl und R "OCH₃ ist, R₃ nicht =0 oder -OH ist; und falls R₁ und R„ -OH sind, keine OH-Gruppe an das C₇-AtOm gebunden ist.

   22. Arzneimittel, gekennzeichnet durch einen Gehalt von mindestens einer Verbindung der Formel gemäß Anspruch 1.

   809847/0937