FR2485021A1 - Nouveaux sterols 15-oxygenes - Google Patents

Abstract

A.NOUVEAUX STEROLS 15-OXYGENES. B.CES STEROLS REPONDENT A LA FORMULE: (CF DESSIN DANS BOPI) DANS LAQUELLE LA STRUCTURE DU NOYAU

Description

La présente invention concerne certains composés stéroli- ques

15-oxygénés, les compositions pharmaceutiques contenant les- dits composés stéroliques 15-oxygénés, ainsi que l'application desdits composés dans l'inhibition de la biosynthèse de l'acide 5 mévalonique, y compris tous les effets dérivés de l'inhibition. de la biosynthèse de l'acide mévalonique. Les effets dérivés de l'inhibition de la biosynthèse de l'acide mévalonique comprennent la suppression de la biosynthèse de stérols avec un abaissement résultant des taux sériques de cholestérol, chez les animaux, et 10 l'inhibition de la croissance des microorganismes et des cellules. Les stérols 15-oxygénés de la présente invention sont-également efficaces dans la suppression de l'appétit, cet effet étant suppo- sé lié à leur activité inhibitrice sur la biosynthèse de l'acide mêvalonique et des produits qui en sont dérivés, plus particuliêrement le cholestérol. Dans de nombreux cas, la suppression de la biosynthèse des stérols, in vivo ou in vitro est souhaitable. Par exemple,' il est souvent souhaitable de supprimer la formation du stérol cons- titué par le cholestérol, chez les animaux, ainsi que les êtres 20 humains, pour pouvoir abaisser chez eux le taux sérique de cho- lestérol. On a fait la corrélation entre la concentration en choles- térol du sérum sanguin et un certain nombre de maladies, en parti- culier, l'athérosclérose. L'athérosclérose est un état qui se 25 manifeste par la formation de plaques dans-le système artériel. Le cholestérol et les esters de cholestérol, sont des constituante ~( majeurs desdites plaques. Bien que l'étiologie de la maladie ne soit pas complètement connue, il apparaît qu'un taux élevé de cholestérol sérique contribue au développement et à la progressioz 30 de l'athérosclérose. Le-cholestérol présent chez les animaux, vient de deux sour ces, la première étant l'ingestion et l'absorption du cholestérol du régime alimentaire et la seconde étant la biosynthèse du cho- lesterol à partir d'acétates par des cellules de divers organes 35 du corps, par exemple le foie, les intestins et la peau. La bio- synthèse du cholestérol et d'autres stérols à partir d'un acétate dans le corps met en jeu une succession complexe de réactions dont l'une est la conversion du 3-hydroxy-3-méthylglutaryl- Coenzyme A en acide mévalonique. Cette réaction est considérée 40 comme un point de régulation majeur dans la biosynthèse normale 2485021 du cholestérol dans les cellules. Si la biosynthèse de l'acide mévalonique peut être inhibée in vivo, la production de stérols se trouve alors réduite et les taux sériques de cholestérol peu- vent être par suite abaissés. 5 Dans le brevet britannique n 860.303, on a proposé d'uti- liser certains esters d'acides aryloxy-carboxyliques, tels que l'ester méthylique de l'acide 2-(4'-chlorophénoxy)-isobutyrique, dans la suppression des taux sanguins de cholestérol. Bien que ledit composé ait acquis une importance notable dans le traite- 10 ment clinique chez les êtres humains, pour différentes raisons, il n'est pas aussi efficace que souhaité. Par suite, il est de grand intérêt et important de continuer à trouver des composés plus efficaces pour supprimer les taux sériques de cholestérol. L'obésité constitue également un sérieux problème de santé. 15 La corrélation entre un poids en excès et un certain nombre de maladies, en particulier, les maladies cardiovascuilaires, est bien connue. Pour des raisons souvent psychologique parmi d'au- tres, de nombreuses personnes trouvent difficile ou impossible de s'imposer un contrôle de poids ou des régimes amaigrissants. 20 Pour cette raison, on a fortement besoin de recourir à des tech- niques de suppression de l'appétit, d'une manièresûre et efficace. Conformément à la présente invention, on a découvert que certains stérols 15-oxygénés, parmi lesquels de nombreux sont des 25 composés nouveaux, sont efficaces dans l'inhibition de la bio- synthèse de la l'acide mévalonique et de stérols. Un certain nom- bre d'effets souhaitables peuvent dériver de l'inhibition de la biosynthèse de l'acide mévalonique, y compris la suppression de la formation du cholestérol chez les animaux et les êtres humains, 30 avec en conséquence un abaissement des taux sériques de cholesté- rol. De plus, la croissance et la prolifération des cellules d'organismes supérieurs et de certains microorganismes, tels que les levures et les champignons, impliquent la formation de stérols. 35 Par suite, l'inhibition de la biosynthèse de l'acide mévalonique, et ainsi la réduction de la formation de stérols, sont efficaces dans l'inhibition de la croissance des cellules, aussi bien nor- males que tumorales. En outre, l'inhibition de la synthèse biologique des stérols a pour effet d'inhiber la croissance de 40 certains microorganismes, en combattant ainsi les infections dues 2 . --.- .3 2485021 aux champignons et aux levures. En plus de son rôle dans la biosynthèse des stérols, l'aci- de mévalonique est un précurseur important d'un certain nombre

d'autres constituants imoortants des cellules. Ainsi, bien que 5 l'on.considère généralement que les bactéries ne contiennent pas ou ne nécessitent pas de stérols, leur croissance et leur proli- fération exigent la synthèse de l'acide mevalonique et des pro- duit$ qui en dérivent. Par suite., l'inhibition de ia biosynthèse de l'acide mévalonique devrait inhiber la croissance bactérienne. 10 On a également trouvé dans le cadre de la présente inven- -tion, que les stérols 15-oxygénés-et leurs dérivés sont efficaces dans la suppression de l'appétit. Bien que le mécanisme suivant lequel les stérols 15-oxygénés agissent pour supprimer l'appétit f~ ne soit pas connu, on pense que cet effet est. dune certaine ma- 15 nière relié à l'activité inhibitrice des stérols ].5-oxygénés sur la biosynthèse-de l'acide mévalonique ou des stérols. Conformément à la présente invention, on propose un procédé pour inhiber la biosynthêse de l'acide mévalonique, y-compris ta tous-les effets qui en dérivent. Ledit procédé consiste A admi- 20 nistrer à-un hôte des stérols 15-oxygénés inhibiteurs de la bio- synthèse de l'acide mévalonique. L'expression "stérols 15-oxygénés' utilisée dans le cadre de l'invention, désigne des stérols por- teurs de fonctions oxygénées en positions 3 et 15. Les-'stérols 15-oxygénés convenables, qui sont administrés 25 enquantités efficaces pour inhiber la biosynthèse de l'acide mé- - C.valonique, ont une structure correspondant à la formule générale suivante : 30 35 R 3 RQ- 40 - ~4- ~2485021 -4 dans laquelle : O. I l! R1 est -OH, =0, -OR4, OCR5, -OC(CH2)nCOH, un groupement sulfate, ou un sel de Mg, Na oB K d'un groupement sulfate; '2 est -OH, =0, ou -OR5 ; 5 R3 est ocH, PH, ou un groupement "-alkyle en C1 à C6 ; R4 est un groupement alkyle.en C1 à C6 et, de préférence, un grou- pement alkyle en C1 à C3.; R5 est un groupement aliphatique en C1 à C20, un groupement aliphatique substitué en C5 à C20, ou un groupement phényle ; et 10 n est un nombre entier de 2 à 6 et, de préférence,-.de 2 à 4. La structure du noyau de base peut être saturée ou insatu- rée et,. de Dréférence, il. existe une double liaison entre les atomes de carbone en 7 et 8 ou en 8 et 14. Lorsqu'il existe une double liaison entre les atomes de carbone en 8 et 14, il niy a 15 pas de substituant R3. Lorsqu'il est possible que les substitu- ants R1 et R2 soient en plus d'une position stérique, ils peuvent être respectivement en position ô ou t . Il est bien entendu que la structure du stérol de base peut contenir des substituants qui n'altèrent-pas de façon défavorable les propriétés du composé, 20 dans-des positions autres-que celles de R1, R2 'Et R3. La présente invention concerne également des compositions pharmaceutiques et l'application desdites compositions, compre- nant un véhicule pharmaceutiquement acceptable en combinaison avec une quantité non toxique mais efficace d'un stérol 15-oxygéné ( 25 du type décrit ci-dessus. Lesdites compositions pharmaceutiques peuvent être utilisées pour inhiber la biosynthèse de la l'acide mévalonique, et les effets dérivés de l'inhibition de la biosynthèse de stérols, tels que l'inhibition de la croissance des cel- lules et la suppression du cholestérol sérique. On peut. également 30 employer lesdites compositions pharmaceutiques pour supprimer l'appétit. L'invention concerne également-les nouveaux stérols 15- oxygénés ayant la structure de formule générale suivante 35 40 5 2485021 5 10 R3 C ~ dans laquelle-: 0 0 R1 est -011, =0, -OR4, 0CR5, , OC(CH2)nCOH, un groupement sulfate, 15 14 C- 5 ou un sel de M Na ou K d'un groupement-' sulfate ; R2 est -OH,'=O, ou -OCR5 , R3 est H, H, ou un groupement 0<-alkyle en C1 à C6; R4 est un groupement "-alkyle en Cl à C6 20 R5 est un groupement aliphatique en C1 à C20, ug'roupement ali- phatique substitué en C5 à C20, ou un groupement phényle ; et nest un nombre entier de 2 à 6, lesdits substituants R et R2, autres que dans le cas o ils re- présentent =0, étant respectivement en position c ou à , à condi- 25 tion que lorsqu'il-existe une double liaison entre les positions 8 et 14 et que R1 est -OH, R2 ne soit pas -OH ; lorsque R3est d-méthyle et R1 est -OH, R2 ne soit pas -OH ; lorsque R3 est 4-méthyle et R1est -0C13, R2 ne soit pas =O ou -OH ; et lorsque R1 et R2 sont -OH, qu'il n'y ait pas de groupement -OH lié à l'at< 30 me de carbone en position 7. On décrira maintenant un mode de mise en oeuvre préféré de l'invention. On peut préparer les stérols 15-oxygénés de l'invention par un certain nombres de.techniques de synthèse différentes, selon 35 le stérol particulier désiré. Des intermédiaires utiles pour pré- parer les stérols de l'invention sont des commosés 3p-benzoyloxy ayant la formule générale suivante 40' 2485021 6 O R3:_ 10 Lesdits composés 3p-benzoyloxy peuvent être convertis en composés -3p-hydroxy correspondants par hydrolyse. Par réduction, par exem- 15 ple avec l'hydrure de lithium-aluminium, on obtient des 3 ,15- diols. D'autres intermédiaires utiles pour la préparation des sté-

rols 15-oxygénés de la présente invention, sont des composés 20 3p-benzoyloxy, 14&,15G-époxy ayant la formule générale suivante : 25 30 On peut faire réagir lesdits composés avec un agent réducteur en obtenant les 3p,15C-diols correspondants. On peut administrer les composés de stérols 15-oxygénés de 35. la présente invention tels quels ou dans des formes d'administra- tion unitaires en combinaison avec des. véhicules pharmaceutiques classiques. Les formes d'administration unitaires dépendent dans une certaine mesure de l'effet particulier recherché à atteindre avec les stérols. 40 5 2485021 Les formes d'administration unitaires types comprennent des formes d'administration par voie orale, telles que les comprimes, capsules, poudres, granules et solutions orales. D'autres formes d'administration unitaires comprennent des formes d'administrat- 5 -tion sublinguale et buccale, des formes d'applicationstopiques, et des formes d'applications parentérales utiles pour l'adminis- tration par voie sous-cutanée, intramusculaire ou intraveineuse. Si on le désire, on peut convenablement incorporer les sté- rols 15-oxygénés à des formes d'unités dosées pour le mode particulier d'administration choisie, la quantité d'ingrédients ac- tifs de chaque dose unitaire étant telle, qu'une ou plusieurs unités soient requises pour chaque administration thérapeutique. Chaque dose unitaire contient de préférence d'environ 5 mg à ( environ 1000 mg de composés de stérols 15-oxygénés actifs. 15 La dose de stérols 15-oxygénés actifs nécessaire pour ob- tenir un effet désiré, varie dans de grandes limites, dans une certaine mesure selon la nature du stérol 15-oxygéné particulier administré, l'effet désiré et le :mode d'administration. De fa- çon typique, une dose convenable est comprise entre environ 20 0,1 mg et environ 140 mg de stérols 15-oxygénés actifs par kg de poids du corps par jour. De façon typique, une d6'se convenable peut être administrée à raison de 1 à 4 fois par jour. Les véhicules pharmaceutiquesconvenables que l'on peut utiliser pour établir la formuledes unités d'administration 25 sont bien connus dans la technique. Par exemple, si le stérol ~( 15-oxygéné est destiné à être administré sous-la forme d'une composition solide telle qu'un comprimé, le stérol 15-oxygéné actif peut être mélangé avec un véhicule pharmaceutique tel que la gélatine, l'amidon, le lactose, le stearate de magnésium, le 30 talc, la gomme arabique ou analogues. Les comprimés peuvent être revêtus de saccharose ou par d'autres agents, en utilisant des techniques connues, en vue de retarder leur désintégration dans l'estomac et assurer ainsi le maintien de l'action pendant un intervalle de temps prolongé. - 35 Les préparations sous forme de capsules peuvent être obte- nues en mélangeant les stérols 15-oxygénés actifs avec une -charge ou un diluant pharmaceutique inerte et en remplissant à l'aide du mélange résultant, une capsule de gélatine rigide ou une capsule molle. Une préparation de sirop ou d'élixir peut contenir les 40 stérols 15-oxygénés actifs conjointement avec un agent sucrant, 7 2485021 tel que le saccharose, des-composés antiseptiques et/ou des colo- rants convenables. Les préparations topiques peuvent être obtenues en mélangeant les stérols 15-oxygénés actifs avec un onguent ou des bases 5 de pommades convenables. De telles bases typiques sont l'alcool polyvinylique, le polyéthylèneglycol cireux, et analogues, ou d'autres agents ou véhicules lipophiles non toxiques. On peut préparer un liquide parentéral en mettant en solu- tion ou en suspension, l'ingrédient actif dans un véhicule liqui- 10 de stéril tel que -l'eau ou une solution saline, un polyethylene- glycol liquide -non volatil ou une huile d'origine végétale ou animale, par exemple l'huile de foie de morue, l'huile d'olive - et analogues. On peut également incorporer aux liquides parenté- raux de-façon avantageuse des substances connues choisies parmi 15 les lubrifiants, batéricides et fongicides, des agents d'ajuste- ment de la tonicité, les anesthésiques locaux, des stabilisants, et autres. Le mécanisme suivant lequel agissent les stérols 15-oxygénés actifsde la présente invention, n'est pas entièrement compris. 20 Toutefois, on a pu démontrer que les composés actifs inhibent la biosynthèse des stérols àa partir d'acétates, sahn-toutefois inhi- ber la biosynthèse des stérols à partir d'un acide mévalonique. Comme l'acide mévalonique est un intermédiaire essentiel dans la voie biochimique par laquelle les stérols sont formés à partir 25 des acétates, il est clair que les stérols 15-oxygénés inhibent la formation d'acide-mévalonique. Il est connu qu'un stade de la-biosynthèse des stérols à partir d'acétates implique la conversion du 3-hydroxy-3-méthyl- glutaryl-Coenzyme A (HMG-CoA) en acide mévalonique. La vitesse de 30 cette réaction est réglée par l'enzyme HMG-CoA réductase. On admet que les stérols 15-oxygénés de la présente invention agissent en intervenant d'une certaine manière sur la ELFIG-CoA réductase, soit

par un abaissement de son activité ou par une limitation de sa quantité dans le système par destruction ou par suppression de sa 35 formation. - Des cellules en prolifération constante, telles que celles de l'épiderme, du cerveau en cours de développement, des replis de la muqueuse intestinale, ainsi que des tumeurs spontanées, effec- tuent la synthèse du cholestérol à des vitesses relativement éle- - 40 vées in vivo. Des cellules en interphase, telles que celles des 8 < - -. 9' ~2485021 muscles et du cerveau à maturité n'en produisent pas. Des essais sur des cellules de culture démontrent que la division des cellules in vitro exige également une synthèse de cholestérol. Par'suite, une - inhibition de la formation de cholestérol par blocage de la 5 biosynthèsede l'acide mévalonique altère la reproduction, in vivo, de cellules qui se trouvent normalement à l'état de proli- fération. Bien entendu, la suppression de la formation de choles- térol par blocage de la biosynthèse de l'acide mévalonique a éga- lement pour effet d'abaisser les taux sériques de cholestérol. 10 Les exemples suivants illustrent avec plus de détails les modes de mise en oeuvre préférés de la présente invention, y com- pris des modes de mise en oeuvre préférée techniques pour la syn- thèse de divers stérols 15-oxygénés actifs. Les exemples suivants C ' illustrent également l'effet des stérols 15-oxygénés dans l'inhi- 15 . bition de la biosynthêse des stérols, y compris l'inhibition in vivo chez le rat avec une diminution résultante des taux sériques de cholestérol. Lesdits exemples sont donnés ici à titre indica- tif seulement pour illustrer diverses caractéristiques de la pré- sente invention, sans nullement limiter celle-ci'. dans son cadre 20 et son esprit. Exemple 1 Préparation de la 54-cholest-8 (14) -én-33-ol-15-one On prépare la 3p-benzoyloxy-5"-cholest-8(14)-én-1i5-one sui- vant la technique de Knight et coll., J. Biol. Chem., Vol. 241, 25 p. 1502 (1966). Le point de fusion, le spectre infrarouge, l'ana- ~( lyse élémentaire et le spectre de masse du produit, confirment sa structure. Le produit révèle un seul constituant dans les analyses par chromatographie sur couche mince, dans trois systèmes diffé- rents. 30 On'dissout la 3h-benzoyloxy-5"-cholest-8(14)-én-15-one (1,0 en éthanol (350 ml)..On ajoute successivement de l'eau (20 ml) et de l'acide sulfurique concentré (60 ml) et on chauffe le mélange résultant au reflux pendant 12 heures, on le refroidit, on le ré- duit à la moitié de son volume sous pression réduite et on le dili 35 avec une solution de NaCl 0,5 M1 (1.000 ml). On recueille le préci- pité résultant et on le recristallise deux fois à partir d'acétone méthanol-eau. On dissout les cristaux en acetone et on chauffe en présence de Norite A pendant 15 minutes. On filtre la solution à travers di 40 Hyflo Super-Cel (mis sur le marché par la Firme Johns-M!anville la0~ ~2485021 CorD.) et on lave le Super-Cel avec du methanol (deux fois le vo- lume de l'acétone). On combine les solutions d'acétone et de mé- thanol et, après addition d'eau, il se forme 660 mg (rendement 83 %) d'un produit cristallise que l'on recueille et sèche sous 5 vide. Le produit est la 5v-cholest-8(14)-én-3e-ol-15-one ayant la formule suivante : 10 15 14O On confirme la structure du produit par des analyses en infrarouge (i.r.), le spectre ultraviolet (u.v.), le spectre de résonance magnétique nucléaire (r.m.n.) et le spectre de masse 20 (s.m.). Le composé montre un seul constituant dans les analyses par chromatographie sur couche mince sur plaquesà-e gel de silice G , en utilisant des systèmes de solvants comprenant 10 % d'éther en benzène et 35 % d'acétate d'éthyle en chloroforme. Exemple 2 25 Préparation des 5"-cholest-8(14)-ène-39,15-diols On réduit la 3F-benzoyloxy-cholest-8(14)-én-15-one (3,97 mmoles) en éther (104 ml), avec de l'hydrure de lithium-aluminium (16 mmoles) pendant deux heures à la température ambiante. On dé- compose le réactif en excès par l'addition successive d'acétate 30 d'éthyle, d'une solution saturée de chlorure d'ammonium, et d'eau. Par extraction avec de l'éther, on obtient 2,6 g d'une substance que l'on soumet à la chromatographie sur une colonne d'acide sili- cique activé (75 x 3 cm). En utilisant le système benzène-éther (90:10) comme solvants 35 éluants, on recueille des fractions ayant un volume de 25 ml. 672 mg d'un diol épimère, désigné diol A, élue dans les fractions 250 à 375. Apres recristallisation quatre fois à partir. d'acétone- eau, on observe la présence d'un constituant par analyse en chroma- tographie sur couche mince dans trois systèmes différents. 930 mg 40 d'un second diol épimère, désigné diol B, élue dans les fractions il ~~ 2485021 425 à 650. Apres recristallisation trois fois à partir d'acétone- eau, le composé montre un seul constituant dans l'analyse par chromatographie sur couche mince dans trois système différents. Les analyses élémentaires, i.r., u.v., r.m.n., s.m. et cris5 tallographiques par rayons X, confirment que les diols A et B

ont la structure suivante, le groupement 15-hydroxy du diol A étant en position X , tandis que le groupement 15-hydroxy du diol B est en position - 10 ( 015 1-40~~~~~ 20 . .~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~- 4 Exemple 3 Preparation des 5E, 145-cholest-7-ène-3g,15-diols 25 Par traitement du 3p-benzoyloxy-cholesta-5,7-diène avec HCl gazeux dans du chloroforme, selon la méthode de Knight et coll. J. Biol. Chem., Vol. 241, p. 1502 (1966), on obtient un produit (rendement 70 %) qui fond à 148-150 C et qui contient un mélange de deux isomères. L'analyse en r.m.n. indique que l'échantillon 30 contient environ 73 % de 34-benzoyloxy-5t-cholesta-7,14-diène. On dissout cette substance (75 g ; 148 mmoles) dans de l'éther anhydre (3000 ml) en chauffant modérément au bain de va- peur. On place la solution dans un bain de glace pour la refroidir jusqu'à 18 C en ajoutant à ce moment une solution d'acide m-chloro. 35 perbenzoique (63,6 g) en éther (400 ml). On laisse le mélange agiti reposer à 0 C pendant 5 heures, puis à -15 C pendant 24 heures. On recueille sur un filtre la substance ayant précipité, on la lave avec de l'éther froid et on la recristallise à partir d'acétone-eax en obtenant le 3P-benzoyloxy-14U, 15"-époxy-5"-cholest-7-ène (40,2c 40 rendement 52 %) ayant la formule structurale suivante : 12 Y-U.V. II 5 1 2~~~% 10 - La structure de ce composé a été confirmée par des analyses en i.r., r.m.n. et s.m.. Le composé a montré un seul constituant 15 dans des analyses par chromatographie sur couche mince (CCM) sur des plaques de gel de silice G (systèmes de solvants : 35 % d'acétate d'éthyle en chloroforme et 10 % d'éther en benzène). On dissout le 3#-benzoyloxy-14o,15C-époxy-5"-cholest-7-êne (2,0 g ; 3,96 mmoles) dans du tétrahydrofurane sec (20 ml). On 20 ajoute de l'éther sec (200 ml) et on refroidit le solution à 0 C. 20 On ajoute lentement en agitant, de l'éthérate de trifluorure de bore (20 ml). Après avoir laissé reposer à 0 C pendant 30 minutes, en agitant occasionnellement, on verse le mélange dans de l'eau et on l'extrait à fond avec de l'éther. On sèche les extraits com- 25 binés sur du sulfate de magnésium anhydre, on filtre et on évapore à siccité sous pression réduite. On soumet le résidu (1,96 g) ain- si obtenu à une chromatographie sur une colonne de gel de silice en utilisant des concentrations croissantes (0,5 - 7,5 et 10 %) d'éther en benzène comme solvant éluant. On recueille des frac- 30 tions d'un volume de 24 ml (16 minutes par fraction). On rassemble 30 les contenus des fractions 70-100 et on recristallise le résidu ob- tenu par évaporation du solvant, à partir d'acétone-eau en obtenant la 3pbenzoyloxy-5c,14p-cholest-7-én-15-one (860 mg ; rendement 43 %). On confirme la structure de cet intermédiaire par analyses 35 i.r., r.m.n. et s.m.. Le composé montre un seul constituant en ana- lyses CCM sur plaques de gel de silice G (systèmes de solvants : 35 % d'acétate d'éthyle en chloroforme, 10 % d'éther en;benzène, et benzène). On dissout la 3p-benzoyloxy-5e,14~-cholest-7-én-15-one (2,33 40 g ; 4,62 mmoles) en éther anhydre (150 ml) et on ajoute de 1 Z QC A 1 - 13 2485021 l'hydrure de lithium-aluminium (2,80 g ; 73,9 mmoles) et on agite le mélange résultant à 25 C pendant une heure. Après refroidisse- ment du mélange à 0 C, on ajoute de la glace avec précaution pour décomposer l'hydrure en excès. On verse le mélange dans du chlo- 5 rure de sodium aqueux 0,34 M et on l'extrait à fond avec de l'éther contenant du chlorure de méthylène (5 %). On sèche les extraits combinés sur du sulfate de magnésium anhydre et on les évapore à siccité sous pression réduite en obtenant un solide blanc (1,80 g). 10 La chromatographie préparative sur couche mince de gel de silice PF (1 mm d'épaisseur ; solvant, 20 % d'éther en benzène ; développée deux fois) indique deux constituants (Rf 0,22 et 0,34) On extrait le constituant de Rf 0,22 avec du chloroforme chaud, t( on le filtre et on le recristallise à partir d'acétone-eau en ob- 15 tenant le 5c1l4g-cholest-7-ène-3p,15ê-diol (1,51 g ; rendement 81 %). On élue le constituant de Rf 0,34 de la chromatographie préparative sur couche mince, avec du chloroforme chaud et après cristallisation à partir d'acétone-eau, on obtient le 5K,140- 20 cholest-7-ène-3 ,15o-diol (167 mg ; rendement 9 %). Les deux composés précités révèlent un seue-constituant par analyses CCM sur des plaques de gel de silice G (systèmes de sol- vants : 35 % d'acétate d'éthyle en chloroforme et 10 % d'éther en benzène). La structure des deux composés est confirmée par les 25 analyses cristallographiques aux rayons X, i.r., r.m.n. et s.m., comme suit : 30 35 40 14 2485021 Exemple 4 Préparation de la 14~-Méthyl-5"-cholest-7-én-3f-ol-15-one On préparela 3p-benzoyloxy-14d-méthyl-5c-cholest-7-én-15-one selon la méthode de Knight et coll., J. Biol. Chem., Vol. 241, p. 5 1502 (1966).. A 1,00 g (1,92 mmole) de cette substance en éthanol (190 ml), on ajoute de l'hydroxyde de potassium (4,0 g) dans de l'eau (5 ml). On chauffe le mélange résultant au reflux pendant

1 heure 1/2 sous azote. Après réduction du volume à environ la moitié de sa valeur initiale, on verse le mélange dans du chloru- 10 re de sodium 0,86 M (1000 ml) et on l'extrait à fond avec de l'éther contenant du chlorure de méthylène (5 %). On sèche les extraits éthériques combinés sur du sulfate de magnésium anhydre et on les évapore à siccité sous pression réduite. On cristallise le résidu résultant à partir de méthanol-eau en obtenant le 14(- 15 méthyl-5c-cholest-7-én-3p-ol-15-one (0,760 g ; rendement 95 %) ayant la formule suivante : i 20i 25 La structure du composé a été confirmée par analyses i.r., 30 r.m.n. et s.m.. Le composé montre un seul constituant aux analyses par chromatographie en couche mince sur plaques de gel de silice G (systèmes de solvants : 10 % d'éther-en benzène, 35 % d'acétate d'éthyle en chloroforme, et 10 % d'éther en hexane) et aux analy- ses chromatographiques en phase gaz-liquide sur des colonnes à 3 % 35 de VO-1 et 3 % de VO-17 (température de colonne, 2700C). ExemDle 5 Préparation des 14(-méthyl-5o-cholest-7-ène-3p, 15-diols On prépare la 3p-benzoyloxy-14(-méthyl-cholest-7-én-15-one en suivant la méthode de Knight et coll., J. Biol. Chem., Vol. 241, 40 p. 1502 (1966). On réduit 100 mg de cette substance avec 200 mg ~~15 ~2485021 d'hydrure de lithium-aluminium à la température ambiante pendant 12 heures. On décompose le réactif en excès par l'addition d'acé- tate d'éthyle. On ajoute de l'eau et on extrait le mélange résul- tant avec de l'éther. 5 On soumet le résidu huileux obtenu par évaporation du sol- vant à une chromatographie sur une colonne d'acide silicique acti- vé. En utilisant le système benzène-éther (90:10) comme solvants éluants, on recueille des fractions de volume égal à 16 ml. On élue 26 mg d'un premier diol, dénommé Diol A, dans les fractions 10 9-13 et on le recristallise à partir d'acétate d'éthyle en obte- nant 18 mg de produit. On élue 46 mg d'un second diol, dénommé Diol B, dans les fractions 18-30, que l'on recristallise a partir ~( d'acétate d'éthyle en obtenant 26 mg de produit. Les analyses élémentaires, s.m., r.m.n. et cristallographi- 15 ques aux rayons X confirment que les diols ont la formule structu- rale suivante, le groupement 15-hydroxy du Diol A étant en posi- tion , tandis que le groupement 15-hydroxy du Diol B est en po- sition : 20 25Ho<CL '~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~o.~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ 30 Exemple 6 Préparation de la 14î-éthyl-5c-cholest-7-én-3g-ol-15-one et de la 39-éthoxy-14~-éthyl--5c-cholest-7-én-15-one La 5"-cholest-8(14)-én-3-ol-15-one (10,0 g ; 24,9 mmoles), 35 préparée comme dans l'exemple 1, est ajoutée à une solution agitée de t-butoxyde de potassium, préparé en dissolvant du potassium métal (17,3 g) dans de l'alcool t-butylique (819 ml). On ajoute de l'iodure d'éthyle (127,4 ml) en une seule fois au mélange réaction- nel et on poursuit l'agitation pendant une heure 3/4. On réduit le 40 volume du mélange réactionnel pour l'amener à environ un tiers de 2485021 sa valeur initiale, sous pression réduite. On ajoute de l'eau, puis on extrait à fond le mélange résultant avec de l'éther. On sèche les extraits combinés sur du sulfate de magnésium anhydre et on les évapore à siccité sous pression réduite. On soumet le 5 résidu résultant à une chromatographie en phase liquide sous pression moyenne (4,2 kg/cm2) en utilisant une colonne (100 cm x 2,5 cm) de gel de silice (0,032-0,063 mm). En utilisant 10 % d'éther en benzène comme solvant éluant, on recueille des frac- tions ayant un volume de 20 ml (débit, 5 ml par minute). 10 On rassemble les contenus des fractions 75 à 88 et, après évaporation du solvant sous pression réduite, on lescristallise à partir du système acetone-eau en obtenant la 14d-éthyl-59- cholest-7-én-3*-ol-l5-one (4,5 g ; rendement 42,2 % ayant la for- me structurale suivante : 15 20 25 On a confirmé la structure dudit composé par des analyses i.r., r.m.n. et s.m.. Le composé révèle un seul constituant aux analyses chromatographiques en couche mince sur des plaques de 30 gel de silice G en utilisant un système de solvants comprenant 10 % d'éther de benzène et 35 % d'acétate d'éthyle en chloroforme et aux analyses chromatographiques en phase gaz-liquide des sté- rols libres sur colonnes à 3 % de VO-1 ou 3 % de VO-17 (tempéra- ture de colonne 250 C). 35 On rassemble les contenus des fractions 25 à 29 provenant de la chromatographie sur colonne de gel de silice sous pression moyenne et, après évaporation du solvant sous pression; réduite, on les cristallise à partir d'acétone-eau en obtenant la 3f-éthoxy14c-éthyl-5C-cholest-7-én-15-one (2,1 g ; rendement 18,5 %), ayant 40 la formule structurale suivante : 16 5 11~~~~~~~~~~ Z6U Z 1 II 10 C 4vciMO0 La structure du produit est confirmé par des analyses i.r., t( r.m.n. et s.m.. Le composé a montré un seul constituant aux ana- lyses par chromatographie en couche mince et en phase gaz-liquide 15 en utilisant la méthode décrite ci-dessus pour la 3--éthoxy-14Xéthyl-5"-cholest-7-én-15-one.

-Exenmele 7 Préparation du Bis-3É-,159-acétoxy-14O-éthyl-5;-cholest-7- -ne et du 3B-actoxy-14~-éthyl-56-cholest-7-én-15-o 20 A la 14O-éthyl-5"-cholest-7-én-3f-ol-15-one'<(2,0 g ; 4,6 mmoles), préparée comme dans l'exemple 6, en éther (300 ml), on ajoute de l'hydrure de lithium-aluminium (3,0 g ; 79,1 mmoles). Apres avoir agiter pendant 2 heures à la température ambiante, on refroidit le mélange réactionnel a 0 C et on y ajoute avec précau- 25 tion de la glace pour dé-composer l'hydrure n'ayant pas réagi. On ~( verse le mélange résultant dans une solution de chlorure de sodium 0,34 N et on l'extrait à fond avec de l'éther contenant du chloru- re de méthylène (5 %). On sèche les extrait éthériques combinés sur du sulfate de magnésium anhydre et on les évapore a siccité 30 sous pression réduite. On cristallise le résidu (1,92 g) à partir d'acétone-eau en obtenant un solide blanc (1,89 g ; rendement 94,5 %). On soumet la substance cristallisée à une chromatographie en phase liquide sous pression moyenne (7 kg/cm2) en utilisant une 35 colonne (118 cm x 1,5 cm) de gel de silice (0,032-0,063 mm). En recourant à 10 % d'éther en benzène comme solvant éluant, on re- cueille des fractions ayant chacune un volume de 20 ml (débit, 5 m par minute). On rassemble les contenus des fractions 54 à 78, et après évaporation du solvant, on les cristallise à partir d'acéton 40 M . ef r ^e - 2485021 eau en obtenant un solide blanc (1,78 g ; 89 %)qui fond à 171- 173 C. Cette substance apparait comme un mélange de 14"-éthyl-5c- cholest-7-ène-3p, 15U-diol et de 14A- éthyl-5"-cholest-7-ène-3p, 15 diol (30 %). 5 Pas de dédoublement des deux épimères ne peut être observé à l'analyse par chrormatogra'hie'en couche mince sur des plaques de gel de silice G en utilisant 3 systèmes de solvants différents (10 % d'éther en benzène, 20 % d'acétate d'éthyle en éther de pé- trole, et 35 % acétate d'éthyle en chloroforme) ou par chromato- 10 graphie en phase gaz-liquide du stérol libre sur colonnes à 3 % de VO-1 ou 3 % de VO-17 (température de colonne, 270"C). Au mélange épimèr.e (2,00 g ; 4n65 mmoles), obtenu comme dé- crit ci-dessus, en pyridine (15 ml)-on ajoute de l'anhydride acé- tique (15 ml). Apres avoir laissé reposer à la température ambian- 15 te pendant 24 heures sous. azote, on verse le mélange dans de l'eau et on l'extrait à fond avec de l'éther contenant du chlorure de méthylène (5 %). On lave successivement les extraits éthériques combinés avec de l'eau, HC1 aqueux froid (5 %), du carbonate de sodium aqueux (5 %) et de l'eau. On-sèche la solution d'éther ré- 20 sultante sur du sulfate de magnésium anhydre et on l'évapore à siccité sous pression réduite en obtenant un résidu blanc (2,34 g). On soumet le résidu blanc, qui révèle deux constituants majeurs et deux constituants à l'état de traces par analyse chromatographique en couche mince sur une plaque de gel de silice G (solvant benzè- 25 ne), à une chromatographie en phase liquide sous pression moyenne (4,2 kg/cm2) en utilisant une colonne (100 cm x 2,5 cm) de gel de silice (0,032-0,063 mm). En utilisant 1,25 % d'éther en benzène comme solvant éluant, on recueille les fractions de 20 ml de volu- me (débit, 5 ml par minute). 30 On rassemble les contenus des fractions 41 à 58 et, après évaporation du solvant, on les cristallise à partir du système acetone-eau en obtenant le bis-3p, 1S(-acétoxy-14c(-éthyl-5"- cholest- 7-éne 1,31 g : rendement 54,8 %) ayant la formule suivante 35 40 18 - -~19 ~2485021 ,~~~~~~~~ ' Il 3~~~~~~~~~ 10 La structure dudit produit a été confirmée par les analyses i.r., r.m.n. et s.m.. Le composé a révélé un seul constituant aux analyses par chromatographie en couche mince sur plaques de gel de silice G (systèmes de solvants : benzène, 10 % d'éther en 15 benzène, 10 % d'éther en hexane, et 35 % d'acétate d'éthyle en chloroforme) et aux analyses chromatographiques en phase gaz- liquide sur des colonnes à 3 % de VO-1 et 3 % de VO-17 (tempéra- ture de colonne, 270 C). On rassemble les contenus des fractions 72 à 90 résultant 20 de la chromatographie en phase liquide sous pression moyenne et, 20 après évaporation du solvant, on les cristallise à partir d'acé- tone-eau en obtenant le e-acetoxy-14p-éthyl-5a-cholest-7-én-15 - ol (0,46 g ; rendement 20,9 %) ayant la structure suivante : (25 30 La structure dudit composé a été confirmée par analyses i.r., r.m.n. et s.m.. Le composé a révélé un seul constituant aux ana- 35 lyses par chromatographie en couche mince sur plaques de gel de silice G (systèmes de solvants benzene, 10 % d'éther;en benzène, 10 % d'éther en hexane, et 35 % d'acétate d'éthyle en chloroforme) et aux analyses chromatihraDhiques en phase gaz-liquide sur colon- 40 nes à 3 % de VO-1 et 3 % de VO-17 (température de colonne, 270 C). 20 2485021 Exemple 8 Préparation du 14C-éthyl-5e-cholest-7-ène-3p,15p-diol On réduit le 3p-acétoxy-14"-éthyl-5o-cholest-7-én-15P-ol (0,50 g ; 1,06 mrnole), préparé comme dans l'exemple 7, en éther, avec de l'hydrure de lithium-aluminium (1,00 g ; 0,97 mmole)

5 pendant 2 heures. On traite le mélange réactionneI résultant sui- vant le mode opératoire décrit dans l'exemple 7 pour récupérer les 3e,15-diols en obtenant un solide blanc (0,44 g). Par cris- tallisation du solide blanc à partir d'acétone-eau, on recueille 10 le 14o-éthyl-5o-cholest-7-ène-3?,15P-diol (0,42 g ; rendement 93 %). Les analyses par i.r., r.m.n. et s.m. confirment que le produit a la formule structurale suivante : 15 20 n.'o Le composé révèle un seul constituant aux analyses chroma- tographiques en couche mince sur des plaques de gel de silice G 25 (svstèmes de solvants 10 % d'éther en benzène, 35 % d'acétate- 25 d'éthyle en chloroforme) et à l'analyse chromatographique en pha- se gaz-liquide du dérivé bis-3 ,15p-triméthylsiloxy sur colonnes à 3 % de VO-1 et 3 % de VO-17 (température de colonne, 250"C). Exemple 9 30 30 Préparation de la 3~ -Mêthoxy-14"-méthyl-5d<-cholest-7-én-15- one On ajoute la 3~-benzoyloxy-5"-cholest-8(14)-én-15-one (11,0 g 21,8 mmoles) à une solution agitée de t-butoxyde de potassium, préparé en dissolvant du potassium métal (18,4 g) dans de I'alco- 35 ol t-butylique (1.000 ml). Après avoir agité à la température ambiante pendant 15 minutes, on ajoute de l'iodure de méthyle (110 ml) en une seule fois et on poursuit l'agitation pendant 12 heures. On ajoute de l'eau et on extrait à fond le mélange résul- tant avec de l'éther. On sèche les extraits éthériques combinés 40 sur du sulfate de magnésium anhydre et on évapore à siccité sous ~~~21 ~2485021 pression réduite. On soumet le résidu résultant à une chromato- graphie sur colonne d'alumine (400 g ; alumine neutre, qualité 1; 140 cm x 2 cm). En utilisant le benzène comme solvant éluant, on recueille des fractions de 24 ml de volume (1,5 ml par minute). 5 On rassemble les contenus des fractions 35 à 46 et on cris- tallise le résidu obtenu après évaporation du solvant sous pres- sion réduite, à partir d'acétone-eau en obtenant la 3p-méthoxy- 14-méthyl-5"-cholest-7-én-15-one (5,63 g ; rendement 60,3 %) ayant la formule suivante : 10 15 20 On a confirmé la structure dudit compose pair analyses i.r., r.m-n. et s.m.. La pureté dépasse 98 % d'après les analyses chro matographiques en phase gaz-liquide sur colonnes à 3 % de VO-1 et 3 % de VO-17 (température de colonne, 250"C). De plus, le composé révèle un seul constituant aux analyses chromatographiques en 25 couche mince sur plaques de gel de silice G (systèmes solvants : ~( 10 % d'éther en benzene, 10 % d'éther en hexane, 35 % d'acétate d'éthyle en chloroforme et 20 % d'acétate d'éthyle en éther de pétrole). On rassemble les contenus des fractions 10 à 16 et on cris- 30 tallise le résidu obtenu par évaporation du solvant sous pression réduite, à partir du chloroforme-méthanol en obtenant la 3 benzoyloxy-14o~-méthyl-5K-cholest-7-én-15-one (1,65 g ; rendement 14,6 %). Le produit révèle un seul constituant aux analyses chro- matographiques en couche mince sur plaques de gel de silice G 35 (systèmes de solvants : benzène, 10 % d'éther en benzène et 10 % d'éther en hexane). Exemple 10 Preéaration du 3e-Méthoxy-144-méthyl-5c-cholest-7-én-15$-ol et du 3e-:.!éhoxy-14<-méthyl-5"-cholest-7-én-15"-ol 40 On ajoute de L'hydrure de lithium-aluminium (2,0 g ; 52,7 22 2485021 mmoles) à une solution de 3p-méthoxy-14~-méthyl-5K-cholest-7-én- 15-one (1,0 g ; 2,33 mmoles) en éther (100 ml). Après avoir agité pendant 1. heure à la température ambiante, on refroidit le mélan- ge à 0 C et on y ajoute avec précaution de la glace pour décompo- 5 ser l'hydrure n'ayant pas réagi. On verse le mélange réactionnel dans une solution de NaCl 0,34 N (300 ml) et on l'extrait à fond avec de l'éther contenant du chlorure de méthylène (5 %) on sèche les extraits éthériques combinés sur du sulfate de magnésium anhi- dre et on évapore à siccité sous pression réduite, en obtenant un 10 verre incolore (0,95 g). On soumet cette substance à une chromato- graphie préparative en couche mince sur plaques de gel de silice PF (1 mm d'épaisseur ; système de solvants, 10 % d'éther en ben- zène). On observe deux constituants de Rf 0,36 et 0,24. On élue le constituant le moins polaire (Rf 0,36) à partir 15 de la plaque avec du chloroforme chaud et on obtient,-par évapo- ration du solvant, le 3p-méthoxy-14(-méthyl-5"-cholest-7-én-15~-ol (410 mg ; rendement 40,8 %) sous forme d'un verre incolore. On extrait le constituant le plus polaire (Rf 0,24) à partir de la plaque avec du chloroforme chaud et on obtient, après évaporation 20 du solvant, le 3p-méthoxy-14c.-méthyl-5o-cholest-7-én-15L-ol (272mg rendement 27,1 %) sous forme d'un verre incolores Les deux composés montrent un seul constituant aux analyses chromatographiques en couche mince sur plaques de gel de silice G (systèmes de solvants : 10 % d'éther en benzène, 35 % d'acétate 25 d'éthyle en chloroforme) et aux analyses chromatographiques en phase gaz-liquide sur colonnes à 3 % de VO-1 et 3 % de V0-17 (température de colonne, 250 C). Les analyses par i.r., r.m.n. et s.m. confirment la structure des deux composés comme suit :

30 35 3 40 2485021 23. Exemptle 11 Préparation du 5S-holest-8(14)-êne-3 ,7~,15~-triol Au 3p-benzoyloxy-14(,15-époxy-5~-cholest-7-ène (5,0 g ; 9,91 mmoles) en méthanol (810 ml), on ajoute une solution de KOH 5 (28 g) dans l'eau (90 ml) et on chauffe le mélange résultant au reflux pendant 5 heures. Après réduction du volume à environ 1/4 de sa valeur initiale sous pression réduite, on verse le mélange dans de l'eau froide (1.000 ml). On recueille le précipité résultant (3,87 g) et on le soumet 10 à une chromatographie sur une colonne (60 cm x 2 cm) d'un gel de silice (130 g ; 0,074-0,246 mm). On élue successivement la colon- ne avec du chloroforme (.200 ml), un mélange de chloroforme et d'acétate d'éthyle (1:1 ; 200 ml), et de l'acétate d'éthyle. On recueille des fractions ayant chacune un volume de 20 ml. On ras- 15 semble des fractions 45 à 100, qui contiennent le produit princi- -15 pal et on évapore le.solvant sous Dression réduite. On recristal- lise le résidu résultant à partir d'acétone-eau en obtenant le 5d-cholest-8(14)-ène-3p,74,15;-triol (2,2.0 g ; rendement 53 %) ayant la structure suivante : 20 i 25 ( .-309 30 La structure du composé est confirmée par analyses i.r., r.m.n. et s.m.. Le composé présente un seul constituant-aux analy- ses chromatographiques en couche mince sur des plaques de gel de silice G (systèmes de solvants : 35 % d'acétate d'éthyle en chlo- roforme et acétate d'éthyle). Le dérivé éther de tris-triméthyl35 silyle du composé présente un seul constituant aux analyses chromatographiques en phase gaz-liquide sur colonnes à 3 % de VO-1 et 3 % de VO-17 (température de colonne, 250 C). Exemnle 12 PrépDaration de la5 "-cholest-8(14)-êne-3,7,15-trione 40 Au 5"-cholest-8(14)-ène-3.,7:,,I5,-triol (300 mg ; 0,72 mmole 2485021 en chlorure de méthylène sec (60 ml), on ajoute une suspension de chlorochromate de pyridinium. (1,10 q ; 5,15 mmoles) en chlo- rure de méthylène sec (30 ml). On maintient le mélange réaction- nel agité sous une atmosphère d'azote pendant 30 minutes, puis on le verse dans de l'éther. On lave successivement la phase d'éther séparée avec de l'eau, HC1 à 5 % froid, Na2CO3 à 5 %, et de l'eau. On sèche la solution d'éther sur du sulfate de magné- sium anhydre et on l'évapore à siccité sous pression réduite. On soumet des fractions du résidu jaune résultant (266 mg) 10 à des analyses chromatographiques en couche mince sur plaques de gel de silice G qui indiquent un constituant principal (systèmes de solvants: 35 % d'acétate d'éthyle en chloroforme et 50 % d'acétate d'éthyle en benzène). On soumet le produit à une chro- matographie en phase liquide sous pression moyenne (4,2 kg/cm2) 15 en utilisant une colonne (118 cm x 1,5 ce) de gel de silice (0,032-0,063 mm). En utilisant 10 % d'acétate d'éthyle en chloro- forme comme solvant éluant, on recueille des fractions ayant cha- cune un volume de 20 ml (débit, 5 ml par minute). On rassemble les contenus des fractions 36 à 40 et, après évaporation du sol- 20 vant, on les cristallise à partir d'acétone-eau en obtenant la 5o-cholest-8(14)-ène-3,7,15-trione (170 mg ; rendement 57 %), ayant la structure suivante : 25 30 O La structure a été confirmée par analyses i.r., r.m.n. et s.m.. Le produit a révélé un seul constituant par analyses chroma- 35 tographiques en phase gaz-liquide sur colonne à 3 % de VO--I. Une nalyse similaire sur colonne à 3 % de VO-15 indique la présence d'une imureté mineure (environ 8 %), par un épaulement du-c6té le plus éloigné du pic principal. Exemole 13 40 Préparation du 14*-éthyl-5 -cholest-7-ène-3, 15tS-diol 24 2485021 25 Au bis-3p-,15e-acétoxy-14~-éthyl-5<-cholest-7-ène (1,00 g ; 1,94 mmole) en éther (100 ml), on ajoute de l'hydrure de lithium- aluminium. (2,00 g ; 52,7 mmoles). Après avoir agité pendant 3 heures à la température ambiante, on laisse refroidir le mélange réactionnel à 0 C et on y ajoute avec précaution de la glace pou2 décomposer l'hydrure n'ayant pas réagi. On verse le mélange dans une solution de chlorure de sodium 0,34 M et on l'extrait à fond avec de l'éther contenant du chlorure de méthylène (5 %). On sèche les extraits éthériques combinés sur du sulfate de 10 magnésium anhydre et on les évapore à siccité sous pression ré- duite. On cristallise le résidu résultant (0,79 g)' à partir d'a- cétone-eau en obtenant le 14"-éthyl-5&-cholest-7-êne-3p,15a-diol (0,76 g, rendement 91,1 %) ayant la formule suivante : 15 ,~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ - 20J 2 2 rAI S~~~~~~~~~rt i b,0a'1 La structure du composé est confirmée par des analyses i.r., 25 r.m.n. et s.m.. Le composé montre un seul constituant aux analy- ~( ses chromatographiques en couche mince sur plaques de gel de sili ce G (systèmes de solvants : 10 % d'éther en benzène, 35 % d'acétate d'éthyle en chloroforme) et aux analyses chromatographiques en phase gaz-liquide du dérivé bis-3p,15M-triméthylsiloxy sur des 30 colonnes à 3 % de VO-1 et 3 % de VO-17 (température de colonne, 2500C) Exemile 14 Préparation de la 39-acétoxy-14d-n-propyl-5"-cholest-7-én-

15-one 35 On ajoute la 5ot-cholest-8(14)-én-3~-ol-15-one (10,0 g ; 24,' mmoles) à une solution agitée de t-butoxyde de potassium, prépar. en dissolvant du potassium métal (17,3 g) dans de I'alcool t-but3 lique (819 ml) ; séché sur un tamis moléculaire Linde type 3A). On ajoute de l'iodure de n-propyle (140 ml) en une seule fois au 40 mélange réactionnel et on poursuit l'agitation pendant 4 heures. 2485021 On réduit le volume du mélange réactionnel à environ 1/3 de sa valeur initiale sous pression réduite. On ajoute de l'eau et on extrait à fond le mélange résultant avec de l'éther. On sèche les extraits combinés sur du sulfate de magnésium anhydre et on 5 les évaDore à siccité sous pression réduite. On soumet le résidu résultant à une chromatographie en phase liquide sous pression moyenne (4,2 kg/cm2) en utilisant une co- lonne (100 cm x 2,5 cm) de gel de silice (0,032-0,063 mm ; 910 g). En utilisant 5 % d'éther en benzène comme solvant éluant, on re- 10 cueille des fractions ayant chacune un volume de 20 ml (débit, 5 ml par minute). On rassemble les contenus des fractions 102 à 192 et, après évaporation du solvant sous pression réduite, on les cristallise à partir d'acétone-eau en obtenant la 14C-n-pro- pyl-5c-cholest-7-én-3p-ol-15-one brute (4,5 g ; rendement 41 %) 15 sous forme d'un solide cristallisé blanc fondant à 119-123 C. Tandis que le produit révèle un seul constituant par analy- ses chromatographiques en couche mince sur plaques de gel de si- lice G dans deux systèmes de solvants différents (10 % d'éther en benzène, 35 % d'acétate d'éthyle en chloroforme), des analyses 20 chromatographiques-en phase gaz-liquide montrent aussi bien suf colonnes à 3 % de VO-1 que à 3 % de VO-17, la preésence (environ 10 %) d'un constituant moins polaire. On dissout la 14(-n-propyl-5o-cholest-7-én-3 -ol-15-one brute (5,0 g ; 11,3 mmoles) dans de la pyridine sèche (50 ml) et on y 25 ajoute de l'anhydride acétique (50 ml). Après avoir laissé reposer à la température ambiante pendant 24 heures sous azote, on verse le mélange réactionnel de l'eau. On extrait à fond le mélange ré- sultant avec de l'éther contenant du chlorure de méthylène (5 %). On lave successivement les extraits combinés avec de l'eau, HC1 30 aqueux froid, du carbonate de sodium aqueux (5 %), et de l'eau. On sèche la solution d'éther résultante sur du sulfate de magné- sium anhydre et on l'évapore à siccité sous pression réduite. On soumet le solide blanc résultant (5,2 g) à une chromato- graphie en phase liquide sous pression moyenne (4,2 kg/cm2) en 35 utilisant une colonne (100 cm x 2,5 xm) de gel de silice (0,032- 0,063 mi ; 910 g). En utilisant du benzène comme solvant éluant, on recueille des fractions ayant chacune un volume de 20 ml (débit, 5 ml par minute). On rassemble les contenus des fractions 130 à 178 et, après évaporation du solvant sous pression réduite, on les 40 cristallise à partir d'acétone-eau en obtenant la 3ê-acétoxy-14"- 26. ~~27 ~2485021 n-propyl-5"-cholest-7-én-15-one (4,1 g ; rendement 74 %) sous la forme de cristaux blancs fondant à 110-111 C. Le composé présente un seul constituant aux analyses chromatographiques en couche mince sur des plaques de gel de silice G (systèmes de solvants 5 benzène, 10 % d'éther en benzène, 10 % d'éther en hexane et 35 % d'acétate d'éthyle en chloroforme) et aux analyses chromatogra- phiques en phase gaz-liquide sur colonnes à 3 % de VO-1 et 3 % de VO-17 (température de colonne, 2700C). Des analyses en i.r., r.m.n. et s.m. confirment la structure suivante : 10 ( 15 Csn, C-O JCIAqr' 20 Exemple 1-5 Préparation de 1a 14À-n-propyl-5K-cholest-7-én-3-ol-15-one On dissout la 3p-acétoxy-14t-n-propyl-5"-choiest-7-én-15-one (300 mg ; 0,62 mmole) dans de l'éthanol absolu (63,4 ml) et on y ajoute KOH 7,14 N (3,35 ml). On chauffe le mélange résultant au 25 reflux pendant deux heures sous azote et après réduction de volu- ~( me à environ la moitié de sa valeur initiale sous pression réduitE on le verse dans de l'eau. On extrait à fond le'mélange avec de l'éther contenant du chlorure de méthylène (5'%) et on sèche les extraits combinés sur du sulfate de magnésium anhydre, puis on 30 les évapore à siccité sous pression réduite. On cristallise le solide blanc résultant à partir d'acétone- eau en obtenant la 14c-n-propyl-5c-cholest-7-én-3f-ol-15-one (264 mg ; rendement 96 %) ayant la formule suivante 35 -U 9AQN4 1 28 5 Ho~~~ 3 10 La structure est confirmée par les analyses i.r., r.m.n. et s.m.. Le composé présente un seul constituant aux analyses chro- matographiques en couche mince sur plaques de gel de silice G (systèmes de solvants : 10 % d'éther en benzène, 10 % d'éther en hexane, et 35 % d'acétate d'éthyle en chloroforme) et aux analy- 15 ses chromatographiques en phase gaz-liquide du stérol libre et de son dérivé éther de triméthylsilyle sur colonnes à 3 % de VO-1 et 3 % de VO-17 (température de colonne, 270"C). Exemple 16 Préparation du Bis-3 ,154-acétoxy-149-n-propyl-5<-cholest-7- 20 20 ène et du 3p-acétoxy-14c-n-propDyl-5OC-cholest-7-én-15 -ol

A la 14"-n-propyl-5m-cholest-7-én-3 -ol-15-one (3,0 g ; 6,2 mmoles) en éther (300 ml) on ajoute de l'hydrure de lithium-alumi- nium (6,0 g ; 158-mmoles). Après avoir agité pendant deux heures à la température ambiante, on refroidit le mélange réactionnel à 25 O0C et on y ajoute avec précaution de la glace pour décomposer l'hydrure n'ayant pas réagi. On verse le mélange dans une solution de chlorure de sodium 0,34 N et on l'extrait à fond avec l'éther contenant du chlorure de méthylène (5 %). On sèche les extraits d'éther combinés sur du sulfate de ma- 30 gnésium anhydre et on les évapore à siccité sous pression réduite. On cristallise le résidu (2,59 g) à partir d'acétone-eau en obte- nant un solide blanc (2,53 g ; rendement 93 %) qui fond à 104,5- 105,5 C. Cette substance apparaît comme un mélange de 14"-n-propyl- 5q-cholest-7-ène-3p,15"-diol (64 %) et de 14ç-n-propyl--5(-cholest- 35 7-ène-3f,15~-diol (36 %). A une solution du mélange des diols épimères (2,0;g ; 4,50 mmoles) en pyridine sèche (15 ml), on ajoute de l'anhydride acéti- que (15 ml). Apres avoir laissé reposer pendant 24 heures à la température ambiante sous azote, on verse le mélange dans de l'eau 40 2485021 et on l'extrait a fond avec de l'éther contenant du chlorure de méthylène (5 %). On lave successivement les extraits éthériques combinés avec de l'eau, HC1 aqueux froid (5 %), du carbonate de sodium aqueux (5 %), et de l'eau et on les sèche sur du sulfate 5 de magnésium anhydre. On soumet le résidu (2,32 g) obtenu par éva poration du solvant à une chromatographie en phase liquide sous pression moyenne (4,2 kg/cm2) en utilisant une colonne (100 cm x 2,5 cm) de gel de silice (0,032-0,063 mm ; 910 g). En utilisant 1 % d'éther en benzene comme solvant éluant, on recueille des 10 fractions ayant chacune 20 ml de volume (débit, 5 ml par minute). On rassemble les contenus des fractions 40 à 62 et, après évaporation du solvant sous pression réduite, on les cristallise - à partir d'acetone-eau en obtenant le bis-3p, 15o-ac6toxy-14"-n- propyl-5"-cholest-7-ène (1,28 g ; rendement 53,8 %) sous forme 15 d'un solide blanc cristallisé fondant à 128-129 C. Le composé présente un seul constituant aux analyses chroma- tographiques en couche mince sur plaques de gel de silice G (sys- tèmes de solvants : benzène, 10 % d'éther en benzène, 10 % d'éthe en hexane, et 35 % d'acétate d'éthyle en chloroforme) et aux ana- 20 lyses chromatographiques en phase gaz-liquide sur colonnes à 3 % de VO-1 et 3 % de VO-17 (température de colonne..-270 C). La struc ture suivante est confirmée par les analyses i.r., r.m.n. et s.m. 25 ( 30 o C - 30~~~~~ CA-C- o}-C t'F On rassemble les contenus des fractions 78 à 94 et, après évaporation du solvant sous pression réduite, on les cristallise 35 à partir d'acétone-eau en obtenant le 3p-acétoxy-14"-n-propyl-5c- cholest-7-én-15p-ol (0,48 g ; rendement 22 %), fondant à 103,5- 104,5 C. Par analyses i.r., r.m.n. et s.m., on confirme la struc- ture comme suit : 40 ~r 2485021 30 5 Cmili~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ o~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ - [c.-O 10 Le composé présente un seul constituant aux analyses chromatographiques en couche mince sur plaques de gel de silice G (sys- C ~tèmes de solvants : benzène, 10 % d'éther en benzène, 10 % d'étner en hexane, et 35 % d'acétate d'éthyle en chloroforme) et aux ana- 15 lyses chromatographiques en phase gaz-liquide sur colonnes à 3 % de VO-1 et 3 % de VO-17 (température de colonne, 270 C)_ Exemple 17 Préparation du 14K-n-proDyl-5cd-cholest-7-ene-3, 15ç,diol Au bis-3p, 15c-acétoxy-14X-n-proDyl-5%-cholest-7-ène (200 mg; 0 0,38 mmole) en éther (50 ml), on ajoute de l'hydrure de lithium- 20 aluminium (500 mg ; 13,2 mmoles). Apres avoir agité pendant 3 heu- res à la température ambiante, on refroidit le mélange réactionnel à 0 C et on y ajoute avec précaution de la glace pour décomposer l'hydrure n'ayant pas réagi. On verse le mélange résultant dans 25 une solution de chlorure de sodium 0,34 N et on l'extrait à fond ~( avec de l'éther contenant du chlorure de méthylène (5 %). On sè- che les extraits éthériques combinés sur du sulfate de magnésium anhydre et on les évapore à siccité sous une pression réduite. On cristallise le résidu (146 mg) ainsi obtenu, en recueil- 30 lant le 14c-n-propyl-5(-cholest-7-ène-3p,15r-diol (135 mg ; rende- ment 80,4 %)-ayant la formule suivante : 3540 40 2 3 -31 2485021 On confirme la structure à des analyses i.r., r.m.n. et s.m. Le composé présente un seul constituant aux analyses chromatogra- phiques en couche mince sur plaques de gel de silice G (systèmes de solvants: 10 % d'éther en benzene, chloroforme, 35 % d'acéta- 5 te d'éthyle en chloroforme) et aux analyses chromatographiques en phase gaz-liquide du stérol libre et de son dérivé bis-3p,15m- triméthylsoloxy sur colonnes à 3 % de VO-1 et à 3 % de VO-17 (température de colonne, 270 C). Exemple 18 10 Préparation du 14"-n-Tpropyl-5c-cholest-7-ène-3?,15g-diol Au 3p-acétoxy-14"-n-propyl-5~-cholest-7-én-15p-ol (200 mg ;

0,41 mmole) en éther (50 ml), on ajoute de l'hydrure de lithium- aluminium (500 mg ; 13,2 mmoles). Après avoir agité pendant 3 he- res à latempérature ambiante, on refroidit le mélange réaction- 15 nel à 0 C et on y ajoute avec précaution de la glace pour décom- poser l'hydrure en excès. On verse le mélange résultant dans une solution de chlorure de sodium 0,34 N et on l'extrait à fond avec de l'éther contenant du chlorure d'éthylène (5 %). On sèche les - extraits éthériques combinés sur du sulfate de magnésium anhydre 20 et on les évapore à siccité sous pression réduite. On cristallise le résidu (152 mg) ainsi obtenu à partir d'acétone-eau en recueil- lant le 14"-n-propyl-5"-cholest-7-ène-3~,15 -diol (145 mg; rendement 79 %) ayant la formule suivante : 25 (. 30 35 La structure du composé est confirmée par les analyses ir., r.m.n. et s.m.. Le composé présente un seul constituant aux ana- lyses chromatographiques en couche mince sur plaques de gel de si- lice G (systèmes de solvants : 10 % d'éther en benzène, chlorofor- me, 35 % d'acétate d'éthyle en chloroforme) et aux analyses chro- 40 matographiques en phase gaz-liquide du stérollibre et de son 2485021 dérivé bis-3P,15C-triméthylsiloxy sur colonnes à 3 % de VO-1 et à 3 % de VO-17 (température de colonne, 270 C). Exemple 18A Préparation des 3p-hexadécanoyloxyv-1-4"-éthyl-5"-cholest-7-én 5 -15c-ol, 3&-hexadécanoyloxy-14b-éthyl-5o(-cholest-7-én-15f-ol, et bis-3~,15"-hexadécanoyloxy-14(-éthyl-5e-cholest-7-êne A un mélange de 14-éthyl-5O-cholest-7-ène-3p,15(-diol et 140-éthyl-5"-cholest-7-ène-3p,15 -diol (4,40 g ; 10,2 mmoles ; mélange environ 70:30 des épimères 15e- et 15P-hydroxy, comme in- 10 diqué par l'analyse chromatographique en phase gaz-liquide du dé- rivé 3f-triméthylsiloxy) dans de la pyridine sèche (22 ml), on ajoute du chlorure d'hexadécanoyle (3,10 g ; 11,3 mmoales). On chauffe le mélange réactionnel au reflux pendant une heure sous azote et, après refroidissement à la température ambiante, on le 15 verse dans de l'eau. On extrait à fond le mélange résultant avec de l'éther con- tenant du chlorure de méthylène (5 %). On lave successivement la phase organique avec de l'eau, RC1 0,6 N froid, Na2CO3 0,47 M, et de l'eau, puis on la sèche sur du sulfate de magnésium anhydre. 20 On analyse une partie du résidu blanc (5,35 g) obtenus par évapo- ration du solvant, par chromatographie en couche mince sur une plaque de gel de silice G (solvant, benzène). On observe trois constituants majeurs (valeurs Rf de 0,20, 0,45 et 0,79). On soumet le mélange à une chromatographie sur colonne (100 cm x 2,5 cm) de 25 gel de silice (0,032-0,063 mm ; 910 g) sous pression moyenne (4,2 kg/cm2). En utilisant un mélange d'hexane et de benzène (10:90) comme solvants éluants, on recueille des fractions ayant chacune 20 ml de volume (débit, 5 ml par minute). On rassemble les contenus des fractions 10 à 23 et on recristallise le résidu obtenu 30 par évaporation du solvant, à partir d'acétone à -40"C en obte- nant le bis-3 ,150-hexadécanoyloxy-14"-éthyl-5"-cholest-7-ène (1,15 g ; rendement 12 %) ayant la formule suivante : 35 40 32 2485021 33 (r-1~~~. C.1~ ~~~4'1- Co 10 On rassemble les contenus des fractions 52 à 86 provenant dE la colonne de gel de silice et on recristallise le résidu obtenu, après évaporation du solvant, à partir d'acétone à -40 C, en ob- tenant le 3ê-hexadécanoyloxy-14d-éthyl-5<-cholest-7-én-15 -ol 15 À (1,62 g ; rendement 24 %) ayant la formule suivante : 200 25 c. On rassemble les contenus des fractions 117 à 135 provenant de la colonne de gel de silice et on recristallise le résidu obtE 30 nu, après évaporation du solvant, à partir d'acétone à -400C en obtenant le 3p-hexadécanoyloxy-14"-gthyl-5"-cholest-7-én-15"-ol (2,35 g ; rendement 34 %) ayant la formule suivante : 35 0o C.q Ii(.ÄC.0 Ii I 40 5 c ( , . 2485021 On confirme les structures de tous les trois composés par des analyses i.r., r.m.n. et s.m.. Tous les trois composés pré- sentent un seul constituant aux analyses chromatographiques en couche mince sur plaques de gel de silice G, en utilisant une va- 5 Àriété de systèmes de solvants. ExemDle 19 Préparation de la 3p-hexadécanoyloxy-14"-éthyl-5"-cholest- 7-én-15-one On ajoute une solution de chlorochromate de pyridinium (581 10 mg ; 2,69 rmmoles) en chlorure de méthylène sec (5 ml) en une seu- le fois à une solution de 3p-hexadécanoyloxy-14o-éthyl-5c-cholest -7-én-15P-ol (300 mg ; 0,45 mmole). Apres avoir agité à la tempé- rature ambiante (24 C) pendant 30 minutes sous azote, on verse le mélange dans de l'éther (400 ml) et on le lave successivement 15 - avec de l'eau, HC1 0,6 N froid, Na2CO3 0,47 r et 4de l'eau. On sèche la solution d'éther résultante sur du sulfate de magnésium anhydre et on l'évapore siccité sous pression réduite en obtenant un résidu jaune clair (284 mg). L'analyse par chromatographie en couche mince sur une plaque de gel de silice G (solvant, benzène) 20 indique un constituant majeur (environ 95 %) avec une vaLeur Rf de 0,50.

On soumet la substance à une chromatographie sur colonne (118 cm x 1,5 cm) de gel de silice (0,032-0,063 mm ; 388 g) sous pression moyenne (7 kg/cm2). En utilisant du benzène comme solvant 25 éluant (débit, 5 ml par minute), on recueille des fractions ayant chacune 20 ml de volume. On rassemble les contenus des fractions 12 à 35 et on recristallise le résidu obtenu, après évaporation du solvant, à partir d'acétone-eau en obtenant la 3ê-hexadécanoy- loxy-14"-éthyl-5v-cholest-7-6n-15-one (207 mg ; rendement 89 %) 30 ayant la formule suivante : 35 (i 0 40 34 2485021 On confirme la structure par des analyses i.r., r.m.n. et s.m.. Le composé présente un seul constituant aux analyses chro- matographiques en couche mince sur plaques de gel de silice G (systèmes de solvants : benzene, 10 % d'hexane en toluene, 10 % 5 d'éther en hexane,. et éther de pétrole-éther-acide acétique). Un traitement du 3?-hexadécanoyloxy-14"-éthyl-5(-cholest-7- én-15"-ol avec du chlorochromate de pyridinium dans des condi- tions identiques à celles qui sont décrites ci-dessus, fournit la 3~-hexadécanoyloxy-144-éthyl-5c-cholest-7-én-15-ol ayant les mê- 10 10 imes points de fusion, spectre infrarouge, spectre de résonance magnétique nucléaire, spectre de masse et comportement chromato- graphique en couche mince que ceux décrits ci-dessus à propos de la 15-cétone dérivée du composé 15p-hydroxy. (Exemple 20 15 Préparation du 3A-benzoyloxy-7a-chloro-5e-cholest-8(14)-én- 15-ol- On dissout le 3pbenzoyloxy-l4",15f-époxy-5d-cholest-7-ène (2,00 g ; 3,96 mmoles), préparé de la manière décrite ci-dessus, dans du chloroforme (500 ml) et on-le refroidit à -250C dans un 20 bain de glace sèche-acétone.- On fait passer du HC1 sec à travers la solution pen6ant 3 heures. On lave abondamment le mélange ré- actionnel avec de l'eau froide, jusqu'à ce que les eaux de lavage soient neutres au papier tournesol et on sèche la phase organique sur du sulfate de magnésium anhydre. On évapore le solvant sous 25 pression réduite, on recristallise.le résidu solide résultant 3 fois a partir d'acétone-eau et on recueille 1,97 g (rendement 92%] d'un produit solide. Ledit produit est le 3p-benzoyloxy-7d-chloro5&-cholest-8(14)-én-15p-ol ayant la formule suivante : 30 35 40 Iz r, 36 2485021 La structure du produit est confirmée par les analyses, à savoir en infrarouge (i.r.), le spectre de résonance magnétique nucléaire (r.m.n.), le pouvoir rotatoire optique, l'analyse él- mentaire et le spectre de masse de faible et haute résolution. 5. De plus, la structure attribuée est confirmée par les résultats de l'analyse cristallographique aux rayons X du dérivé 3_-D- bromobenzoyloxy (préparé de la même manière que décrit ci-dessus au sujet du 3 -p-bromobenzoyloxy-14 , 1i5-époxy-5c-cholest-7- ne). Le composé présente un seul constituant aux analyses chroma- 10 tographiques en couche mince sur plaques de gel de silice G en utilisant des systèmes de solvants comprenant 10 % d'éther en hexane et 10 % de toluène en hexane. - Erxem-l'e 21 Préparation du 3"-gthoxy-14"0-éthyl-3(-cholest-7-én-15-ol 15 - A la 3p-éthoxy-14,-éthyl-5c-cholest-7-én-15-one (1,0 g ; 2,19 mmoles) en éther (100 ml), on ajoute de l'hydrure de lithium- aluminium (2,0 g ; 52,7 mmoles). Apres avoir agité pendant 2 heu- res à la température ambiante, on refroidit le mélange réaction- nel à 0oC et on y ajoute avec prêcaution de la glace pour décom- 20 poser l'hydrure n'ayant pas réagi. On verse le mélange réaction nel dans une solution de NaCl 0,35 M et on l'extrait à fond avec de l'éther contenant du chlorure de méthylène (5 %). On sèche les extraits combinés sur du sulfate de magnésium anhydre et on les évapore à siccité sous pression réduite. On cristallise le résidu 25 résultant (0,97 g) à partir d'acétone-eau en obtenant un mélange (0,94.g ; rendement 94 %) de 3p-éthoxy-14c-éthyl--1-cholest-7-én- 15V-ol et 3p-éthoxy-14c-éthyl-5"-cholest-7-én-15I-ol. Les struc- tures suivantes sont révélées par les composés par les analyses i.r., r.m.n. et s.m. : 30 35 40 ' ~37~2485021 Des analyses par chromatographie en couche mince sur des plaques de gel de silice G, en utilisant cinq systèmes de sol- vants différents, et par chromatographie er. phase gaz-liquide sur colonnes à 3 % de VO-1 et 3 % de VO-17 (température de colon- 5 ne, 270 C) n'ont révélé qu'un seul constituant. Toutefois, une analyse du dérivé éther de triméthysilyle par chromatographie en phase gaz-liquide sur colonnes à 3 % de VO-1 et 3 % de VO-17 (température de colonne, 250 C) indique la présence de deux cons- tituants. 10 Exemple 22 Préparation de la 3 -hexadécanoyloxy-5M-cholest-8(14) -én-15- one On ajoute du chlorure d'hexadécanoyle (2,2 g ; 8,0 mmoles) 3 une solution de 5e-cholest-8(14)-én-3 -ol-15-one (2,0 g ; 5,0 15 mmoles) dans de la pyridine sèche (10 ml) et on chauffe le mélan- ge résultant au reflux pendant une heure sous une atmosphère d'azote. Apres avoir laissé refroidir à la température ambiante, on verse le mélange réactionnel dans de l'eau et on l'extrait -

fond avec de l'éther contenant du chlorure de méthylène (5 %). On 20 lave successivement les extraits éthériques combinés avec de l'eau, de l'acide chlorhydrique aqueux a 5 % froid, du carbonate de sodium aqueux à 5 % et de l'eau, puis on les sèche sur du sul- fate de magnésium anhydre. On soumet le résidu obtenu par évaporation du solvant, à une 25 chromatographie sur colonne de gel de silice (140 g ; 0,074-0,246 t nmm ; 140 cm x 2 cm). En utilisant le benzène comme solvant éluant on recueille des fractions ayant chacune 24 ml de volume (débit, 1,5 ml par minute). On rassemble -les contenus des fractions 9 à 40 et, après évaporation du solvant sous pression réduite, on les 30 recristallise à partir d'acétone-eau et d'acétone en obtenant la 3e-hexadécanoyloxy-5o-cholest-8(14)-én-15-one (3,80 g ; rendement 59,5 %) ayant la formule suivante 35 40 O n 2485021 C 3(CRa) lq O' 5~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ 1O 10 La structure du composé est confirmée par les analyses i.r., r.m.n. et s.m.. Le composé présente un seul constituant aux ana- lyses chromatographiques en couche mince sur plaques de gel de C( silice G dans trois systèmes de solvants différents (benzene, 10 % d'éther en benzène, et éther de pétrole-he"aae-acide acéti- 15 que. Exemple 23 Préparation- de la '3-hémisuccinoyloxy-5o-cholest-8 (14) -én- 15-one On ajoute de l'anhydride succinique (2,5 g ; 24,9 mmoles) à 20 une solution-de 5c-cholest-8(14)-én-3p-Ql-15-oneié(2,0 g ; 5,0 mmoles) dans de la pyridine sèche (20 ml) et on chauffe le mélan- ge résultant au reflux pendant 5 heures sous une atmosphère d'azo- te. Après avoir laissé refroidir à la température ambiante, on verse le mélange réactionnel dans du chlorure de sodium 0,034 N 25 et on y ajoute de l'éther (250 ml) contenant du chlorure de méthy- lène (5 %). On lave successivement la phase d'éther séparée avec de l'acide chlorhydrique aqueux à 5 % froid et de l'eau, puis on la sèche sur du sulfate de magnésium anhydre. On recristallise trois fois à partir-de l'acétone-eau le ré- sidu obtenu par évaporation du solvant. On traite les cristaux ré- sultants avec de la Norite A en acétone pendant 20 minutes, on les filtre à travers du Hyflo Super-Cel et on les cristallise en abais- sant la température à -78 C. Le produit cristallisé résultant (1,8 g ; rendement 73 %) se révèle aux analyses i.r., r.m.n. et s.m., 35 comme la 3>-hémisuccinoyloxy-5"-cholest-8(14)-én-15-one ayant la formule suivante : A tN iV 2485021 \, .-4,-. (. Li 2485021 Le composé présente un seul constituant aux analyses chroma- tographiques en couche mince sur plaques de gel de silice G, en utilisant le méthanol ou l'éthanol comme solvants révélateurs. - Exemple 24 5 Preéoarationi de la 5'b--,'14&-cholest-7-én-15p-ol-3-one Au constituant 1 (200 ml) du Droduit Cholesterol Auto Test mis sur le marché par la Firme Bio-Dynamics (Division BMC), on ajoute de la "cholestérol oxydase" (6,0 ml ; constituant 3 du Cholesterol Auto Test et on dilue le mélange résultant avec de 10 l'eau distillée (600 ml). On ajoute du 5<,14~-cholest-7-ène-4, 15p-diol (126 mg ; 0,315 mmole) en isopropanol (35 ml) et on fait incuber le mélange résultant en le secouant à 37 C pendant 7 heu- res. On extrait le mélange 4 fois avec des portions de 100 ml de chloroforme. On combine les extraits, on les sèche sur du sulfate 15 de magnésium anhydre et on réduit le volume à environ 6 ml sous pression réduite. On soumet la substance résultante à une chromatographie pré- parative en couche mince sur six plaques de gel de silice G (de 750 microns d'épaisseur) en utilisant de l'éther comme solvant 20 révélateur. On dilue le produit désiré à partir des plaques avec du chloroforme et, après évaporation du solvant sous pression ré- duite, on le cristallise à partir d'acétone-eau en obtenant 83,2 mg (rendement 66 %) de 5t,14e-cholest-7-én-15 -ol-3-one sous for- me d'aiguilles fondant à 90,5-91,5 C. Par les analyses i.r., r.m.n. 25 et s.m., on détermine la structure du produit comme suit : 30 35 Le composé présente un seul constituant à l'analyse chroma- tographique en couche mince sur une plaque de gel de silice G (sol- vant : éther). L'analyse chromatographique en phase gaz-liquide du dérivé éther de triméthvylsilyle sur une colonne à 3 % de VO-17 (température de colonne, 250 C) indique que la pureté est d'au 40 moins98,9 %. 2485021 Exemple 25 Préparation de la 5d,14b-cholest-7-én-15o-ol-3-one Au constituant 1-(180 ml) du produit Cholesterol Auto Test mis sur le marché par la Fime Bio-Dynamics (Division BMC), on 5 ajoute de la "cholestérol cxydase" (5,5 ml ; constituant 3 du Cholesterol Auto Test) et on dilue le mélange résultant avec de l'eau distillée (540 ml). On ajoute du 5e,14p-cholest-7-ène-3p- 150(-dol (105 mg ; 0,262 mmole) en isopropanol(35 ml) et on fait incuber le mélange résultant en le secouant a 37 C. Apres 5 heu- 10 res .,d'incubation, la solution devient-trouble. On ajoute lentement de l'isopropanol supplémentaire (10 ml) et on poursuit l'in- cubation pendant 2 heurs 1/4 supplémentaires. On extrait le mé-

lange quatre fois avec du chloroforme (fractions de 100 ml) et on tC rassemble les extraits, on les sèche sur du sulfate de magnésium anhydre, et on les concentre jusqu'à un volume d'environ 4 ml. On soumet la substance résultante à une chromatographie pré- parative en couche mince sur six plaques de gel de silice G (750 microns d'épaisseur) en utilisant de l'éther comme solvant révé- lateur. On élue le produit désiré à partir des plaques avec du 20 chloroforme et, après évaporation du solvant à pression réduite, 20 on le cristallise à partir d'acétone-eau en obtenant 75,3 mg (rendement 72 %) de 5a,14P-cholest-7-én-15c-ol-3-one sous forme d'aiguilles fines, fondant à 121-122 C. Par les analyses i.r., r.m.n. et s.m., on confirme la structure du produit comme suit : 25 , 30 I ~~~~~~~~~~~~f -35 Le composé présente un seul constituant à l'analyse chromato graphique en couche mince sur une plaque de gel de silice G (solvant : éther). L'analyse chromatographique en phase gaz-liquide du dérivé éther de triméthylsilyle sur une colonne à 3 % de V0-17 (température de colonne, 2500C) indique que la pureté est d'au moins 98,6 % ~V 2485021 Exemple 26 Préparation de la 140-éthyl-5K-cholest-7-én-150-ol-3-one Au constituant 1 (250 ml) du produit Cholesterol Auto Test mis sur le marché par la Firme Bio-Dynamics (Division BMC) on ---5 - ajoute de 1-a "cholestérol oxydase" (16 mrl) ; constituant 3 du 5 Cholesterol Auto Test) et on dilue le mélange résultant avec de l'eau distillée (734 ml). On ajoute du 14e-éthyl-5b-cholest-7-ène -3p,15c-diol (100 mg) en isopropanol (20 ml) et on fait incuber le mélange résultant en le secouant à 37 C pendant 4 heures 1/2. - 0 -On -extrait le mélange deux. fois avec des fractions de 100 ml dée chloroforme et on réduit le volume des extraits combinés à envi- ron 6 ml sous pression réduite. On soumet ladite substance à une chromatographie prêparative en couche mince sur des plaques de gel de silice G (750 microns 15 d'épaisseur) en utilisant de l'éther comme sorft révélateur. On élue le produit désiré à-partir des plaques. avec de l'éther et, après évaporation du solvant sous pression réduite, on le cristal- lise deux fois à partir d'éther-méthanol en obtenant 85,3 mg (ren- dement 85 %) de 14&-éthyl-5t-cholest-7-én-150(-ol-3-one fondent à - 2Q 114-1157C. 20 Le composé présente-un seul constituant à l'analyse chroma- tographique en phase gaz-liquide sur une colonne à 3 % de VO-17 (température de colonne, 270 C). Par analyses i.r., r.m.n. et s.m., on confirme la structure du produit comme suit : ( 25 30 ~~~~35 - ~Exemple 27 35 Préparation de la 3~-acétoxy-14<-n-butyl-56cholest-7-én-15- one On ajoute de la 5c-cholest-8(14)-én-3p-ol-15-one (10,0 g ; 24,9 mmoles) à une solution agitée de t-butoxyde de potassium, n préparée en dissolvant du potassium métal (20,0 g) dans de --X 43 2485021 l'alcool t-butylique (1.000 ml). On ajoute de l'iodure de n- butyle (300 ml) en une seule fois au mélange réactionnel et on poursuit l'agitation pendant 12 heures à la température ambiante. On ajoute ee l'eau.(400 ml) et on extrait deux fois le mélange 5 résultant avec des fractions de 1000 ml d'éther. Onr lave les ex- traits combinés avec de l'eau (200 ml), on les sèche sur du sul- fate de magnésium anhydre et-on les évapore à siccité sous pres- sion réduite en obtenant un résidu jaunâtre. On traite le résidu de l'anhydride acétique et dela pyridine 10 et on le soumet à une chromatograohie sur colonne.de gel de sili- ce (de 0,032-0,063 mm) sous pression moyenne (7 kg/cm 2), en uti- lisant 10 % d'éther en benzène comme solvant éluant. Après cris- t ~ tallisation à partir d'acétone-eau et purifications chromatogra- phiques sur-colonne de liquide sous pression moyenne répétées 15 _(3), on obtient 900 mg de produit. Par cristallisation à partir d'acétone-eau, on recueille 850 mg de 3~-acétoxy-14"-butyl-5<- cholest-7-én-15-one, sous la forme d'aiguilles blanches. Le composé présente un seul constituant aux analyses chroma- tographiques en couche mince sur plaques de gel de silice G dans 20 huit systèmes de solvants différents (éther, 35 % d'acétate d'éthyle en chloroforme, 20 % d'éther en chloroforme, 20 % d'éther en benzène, 10 % d'éther en benzène, chloroforme, benzène, et 10% d'hexane en benzène) et aux analyses chromatographiques en phase gaz-liquide sur colonnes à 3 % de VO-1 et 3 % de VO-17 (tempéra- 25 ture de colonne, 280 C). Par analyses i.r., r.m.n. et s.m., on C - confirme la structure comme suit : 30 - 35 C.1~~~ co CltaCiAaCA3 ~30~3 35 ci r'-C Exemple-28 Préparation de la l14.-n-butyl-5o-cholest-7-én-3e-ol-15-one On soumet un mélange de 3p-acétoxy-14(-n-butyl-5c-cholest-7- 40 én-15-one (150 mg), d'éthanol à 93 % (53 ml) et de KOH (1,05 g) à -~4~~ ~2485021 un chaufface au reflux pendant 1 heure 1/2. Après réduction du volume à environ la moitié de sa valeur initiale, on verse le mélange dans une solution de chlorure de sodium 0,86 N (200 ml) et on extrait à fond le mélange résultant avec de l'éther conte-

5 nant du chlorure de méthylène (5 %). On lave les extraits combi- nés avec de l'eau, on les sèche sur du sulfate de magnésium anhy- dre et on les évapore à siccité sous pression réduite. On cris- tallise le résidu (130 mg) ainsi obtenu à partir d'acétone-eau en obtenant 120 mg (rendement 87 %) d'aiguilles fines de 141-n- 10 butyl-5o-cholest-7-énx-3"ol-15-one, ayant la structure suivante : \/ 15 I j~~~~~~~~~~ 20 : - .La formule structurale est confirmée par analyses i.r., r.m.n. et s.m.. Le composé présente un seul constituant aux analy- ses chromatographiques en couche mince sur plaques de gel de sili- ce G dans huit systèmes de solvants différents (éther, 35 % d'acé- 25 tate d'éthyle-n -chloroforme, 20 % d'éther en chloroforme, 20 % d'éther en benzène, 10 % d'étheren benzène, chloroforme, benzène, et 10 % d'hexane en benzène). La pureté est supérieure à 99 % d'après les analyses chromatographiques en phase gaz-liquide du dérivé éther de triméthylsilyle sur des colonnes à 3 % de VO-1 et 30 3 % de VO-17 (température de colonne, 270 C). Exemple-29 Préparation des Bis-3i,15 -acêtoxy-14~-n-butyl-5"-cholest-7- éne- et 3 -acétoxy-14"-n-butyl-5~-cholest-7-én-15-ol A la 3p-acétoxy-14"-n-butyl-5c-cholest-7-én-15-one (647 mg ; 35 1,3 mmole) en éther (30 ml) on ajoute de l'hydrure de lithium-alu- minium (1,2 g ; 32 mmoles). Après 3 heures, on refroidit le mélan- ge réactionnel à 0 C et on y ajoute avec précaution de-l'acétate d'éthyle pour décomposer l'hydrure n'ayant pas réagi. On verse le mélange résultant dans une solution de chlorure de sodium 0,86 N 40 (200 ml) et on l'extrait deux fois avec de l'éther contenant du 45 2485021 chlorure de méthylène (5 %). On sèche les extraits combinés sur du sulfate de magnésiumi anhydre et on les évapore à siccité sous pression réduite en ob- tenant un résidu blanc (570 mg). Cette substance présente deux 5 constituants à l'analyse chromatographique en couche mince sur une plaque de gel de silice G (systèmes de solvants : 10 % d'é- ther en benzène). On dissout le résidu blanc (570 mg) en pyridine sèche (10 m] et on y ajoute de l'anhydride acétique (10 ml). Après avoir lais- 10 sé reposer pendant 15 heures à température ambiante, .on verse le mélange réactionnel dans de la glace et on l'extrait deux fois avec des fractions de 200 ml d'éther contenant du chlorure de mé--thylène (5 %). On lave successivement les extraits combinés avec- de l'eaun HC1 IN froid, du carbonate de sodium aqueux à 5 %, et 15 de l'eau, on les sèche sur du sul.fate de magnésium anhydre et on les évapore à siccité sous pression réduite. On soumet le résidu (620 mg) à une chromatographie en phase liquide sous pression moyenne sur une colonne de gel de. solice (0,032-0,063 mm) en utilisant-1 % d'éther en benzène comme-solvan 20 éluant. On réunit les contenus des fractions correspondant à la mobiiité attendue pour le diacétate et, après évaporation du solvant, on les.cristallise à partir d'acétone-eau en obtenant des aiguilles de bis-3 ,-15~-acétoxy-l4(-n-butyl-5o-cholest-7-ène. Par analyses i.r., r.m.n. et s.m., on confirme la structure comme suit 25 30 C.14 cç) ~ ~ ~ C~a'A 35 Le composé présente un seul constituant aux analyses chromatographiques en couche mince sur plaques de gel de silice G dans huit systèmes de solvants différents (éther, 35 % d'acétate d'éth'. le en chloroforme, 20 % d'éther en chloroforme, 20 % d'éther en benzène, 10 % d'éther en benzène, chloroforme, benzène, et 10 % 40 d'hexane en benzène). 2485021 On réunit les contenus des fractions ayant la mobilité at- tertdue pour le monoacétate et, après évaporation du solvant sous pression réduite, on les cristallise à partir d'écétone-eau en obtenant des aiguilles fines de 3p-acétoxy-14"-n-butyl-5c-cholest 5 -7-én-15P-ol (190 mg). -Le composé présente-un seul constituant auk analyses chromatographiques en couche mince sur plaques de gel de silice G dans huit systèmes de solvants différents (éther, 35 % d'acétate d'é- thyle en chloroforme , 20 % d'éther en chloroforme, 20 % d'éther 10 en benzène, 10 % d'éther en benzène, chloroforme, benzène, et 10 % d'hexane en benzène) et une pureté supérieure à 99 % à l'a- nalyse chromatographique en phase gaz-liquide du dérivé d'éther de trim6thylsilyle sur une colonne à 3 % de VO-17. La structure est confirmée-par analyses i.r., r.m.n. et s.m. comme suit : 15 20 I 3 25 Exeln*ile '30 Préparation du 14e-~-bUtyl--5-cholest-7-ène-3*,lSd-diol Au bis -3p,15c-acétoxy-14~-n-butyl-5O-cholest-7-ène (200 mg ; 0,37 mmole) en éther (30 ml), on ajoute- de l'hydrure de lithium- 30- aluminium (400 mg ; 10,5 mroles). Après 2 heures à la température ambiante, on refroidit le mélange réactionnel à 0C et on y ajoute avec précaution de l'acétate d'éthyle pour décomposer l'hydrure n'ayant pas réagi. On verse le mélange dans une solution de chlo- rure de sodium. de 0,86 N et on l'extrait deux fois avec de l'éther 35 contenant du chlorure de métylène (5 %). On sèche les extraits combinés sur du sulfate de magnésium et on les évapore à siccité

sous pression réduite. On soumet le résidu (180 mg) à une chromatographie en phase liquide sous pression moyenne sur une colonne de gel de silice 40 (0,032-0,063 mm) en utilisant 15 % d'éther en benzène comme solvant 2 Z485021 éluant. On rassemble les contenus des fractions correspondant à la mobilité du diol désiré et, après évaporation du solvant sous pression réduite, on les cristallise à partir d'acétone-eau en obtenant des aiguilles de 14"-n-butyl-5"-cholest-7-ène-3i,15c- 5 diol (128-mg) ayant la formaule structurale suivante : 10 ( tO3 14o 15 La structure est confirmée par des analyses i.r., r.m.n. et s.m.. Le composé présente un seul constituant aux analyses chro- matographiques en couche mince sur plaques de gel de silice G - 20 dans huit systèmes de solvants différents et. montre une pureté supérieure à 99 % à l'analyse chromatographique--en phase gaz-li- quide du dérivé éther de triméthylsilyle sur une colonne à 3 % de VO-17 (température de colonne, 270 C). Exemple 31 25 . Preparation' du 4'l-n-butyl-5"-cholest-7-ène-3 ,15~-diol ( Au3P-acé.toxy-14*-n-butyl-5"-cholest-7-én-15P-ol (100 mg ; 0,20 mmole) en éther (30 ml), on ajoute de l'hydrure de lithium aluminium (200 mg ; 5,26 mmoles). Après 2 heures a la température ambiante, on refroidit le mélange réactionnel à 0 C et on y ajoute 30 de l'acétate d'éthyle avec précaution pour décomposer l'hydrure en excès. On verse le mélange dans une solution de chlorure de so- dium 0,86 N et on l'extrait deux fois avec de l'éther contenant du chlorure de méthylène (5 %). On sèche les extraits combinés sur du sulfate de magnésium anhydre et on les évapore à siccité sous 35 pression réduite. On soumet le résidu vitreux (180 mg) à une chromatographie en phase liquide sous pression moyenne sur une colonne de gel de sili ce (0,032-0,063 mm) en utilisant 15 % d'éther en benzène comme sol vant éluant. On rassemble les contenus des fractions correspondant 40 à la mobilité du diol désiré et, après évaporation du solvant, on '2485021 obtient le 14"-n-butyl-5e-cholest-7-ène-3p,15f-diol (80 mag) sous forme d'un solide blanc amorphe qui ne peut pas être obtenu sous forme cristallisée à partir d'acétone-eau ou methaiol-eau. Le composé présente un seul constituant aux analyses chroma- 5 tographiques en qouche mi.nce.sur plaques de gel de silice G dans- huit systèmes de solvants différents et il a une pureté d'au moins 98,5 % d'après l'analyse chromatographique en phase gaz- liquide du dérivé éther de triméthylsilyle sur une colonne à 3 % de VO-17 (température de colonne, 270 C). La structure est con- 10 firmée par des analyses i.r., r.m.n. et s.m. comme suit : (~~~ 15~ ~~~~~~~~C 20 O iai Exemple 32 Préparation de la 3o(-benzoyloxy-5d-cholest-8(14)-én-15-one On ajoute goutte à goutte une solution d'azodicarboxylate 25 diethylique (0,87 g ; 5,0 mmoles)- entétrahydrofurane (5-ml) à- une solution agitée de 5OL-cholest-8(14)-én-3p-ol-15-one (1,00 ; 2,5 mmoles), de triphénylphosphine (1,97 g ; 7,5 zmoles) et d'aci- de benzoique (0,61 g ; 5,0 mmoles) en têtrahydrofurane sec (30 ml). Après-avoir agité pendant 14 heures, on verse le mélange dans de 30 l'eau et on l'extrait à froid avec de l'éther contenant du chloru- re de méthylène (5 %). On sèche les extraits combinés sur du sul- fate de magnésium anhydre et on les évapore à siccité sous pres- sion réduite. On soumet le solide jaune clair résultant à une chromatogra- 35 phie sur colonne (60 cm x 2,0 cm) de gel de silice (100 g ; 0,048- 0,246 mm). En utilisant du benzène comme solvant éluant, on re- ciyei1le des fractions ayant chacune 24 ml de volume (débit, 1,5 mI par minute). On rassemble les contenus des fractions 40 à 95 et, après évaporation du solvant sous pression réduite, on les cristal40 lise à partir d'acétone-eau en obtenant la 3e-benzoyloxy-5oc-cholest 2485021 -8(14)-én-15-one cristallisée. Pax analyses i.r., r;m.n. et s.m., on confirm.e la structure comme suit : 5 -( 10 À ( . Le composé présente un seul constituant aux analyses chroma- 15 ..-tographiques en couche mince sur .laques -de gel de silice G (sys- .. .tèmes.de solvants : benzène, 10 % d'éther en benzène, 10 % d'éthe: en hexane, 5 % d'acétone en chloroforme, et 35 % d'acétate d'éthy le enchloroforme). .-~~ ~ Exemple 33 20. Préparation de la 5--cholest-8(14)-én-3e-ol-15-one 'A la 3"-benzoyloxy-5M- cholest-8(14)6n-15-ẻ G500 mg; 1,00 * mmole) en éthanol absolu (175 ml), on ajoute de l'eau (10 ml-) et de l'acide sulfurique concentré (30 ml). Après avoir chauffé le mélange au reflux pendant 24 heures.dans une atmosphère d'azote, 25 .on réduit le .volume à environ la moitié de sa valeur initiale sou: ~( pression réduite et on le verse dans Ileau. On extrait à fond le mélange avec de l'éther contenant du chlorure de méthylène (5 %) et on évapore les extraits combinés .à siccité .sous pression ré- duite. 30 .On cristallise deux fois le. résidu jaune clair résultant à partir d'acétone-eau. On dissout les cristaux en acétone et on le chauffe en présence de carbone décolorant (Norite A) pendant 15

minutes. On filtre la solution à travers du Hyflo Super-Cel (mis sur le marché par la Firme Johns-Manville Corp.) et on lave le 35 Super-Cel avec du méthanol. On réunit les solutions d'acétone et de méthanol et, après l'addition d'eau, il se forme un produit - cristallisé (326 mg ; rendement 82 %) que-l'on recueille et sèche sous vide. Les analyses i.r., r.m.n. et s.m. confirment le produi et la 5&-cholest-8(14)-én-3o-ol-15-one, ayant la formule structu- 40 rale suivante : - : * ~~~~~~~~~~~) LZOSBf - D W.Mâb 2485021 Le composé présente un seul constituant aux analyses chromatographiques en couche mince sur plaques de gel de silice G (sys- tèmes de solvants : 10 % d'éther-en benzène, 5 % d'acétone en chloroforme, et 35 % d'acétate d'éthyle en chloroforme) et aux analyses chromatographies en-phase gaz-liquide sur colonnes à 3 1- de VO-1 et 3 % de VO-17 (température de colonne, 270 C). Exemple 34 Préparation de la 3c-benzoyloxy-14<-éthyl-5*-cholest-7-én- . 5 ' 15-one .0 - ..-..Q-On ajoute -goutte-a. goutteune solution -d'azodicarboxylate diéthylique (1,74 g ; 10,0 mmoles) en tétrahydrofurane (10 ml) à une solution agitée de 14v-éthyl-5o-cholest-7-én-3--ol-15-one (2,14 g ; 5,0 mmoles), de triphénylphosphine (3,93 g ; 15,0 mmo- ~C les) et d'acide benzoique (1,22 g ; 10,0 mmoles) en têtrahydrofu- 15 rane sec (60 ml). Apres avoir agité pendant 14 heures, on verse le mélange dans de l'eau et on l'extrait à fond avec de l'éther' contenant du chlorure de .méthylène (5 %). On sèche les extraits combinés sur du sulfate de magnésium anhydre et on les évapore à siccité sous pression réduite. 20 -- - On soumet le solide jaune clair résultant à une chromatogra- phie en phase liquide sous pression moyenne (7 kg/cm2) sur une co- lonne (118 cm x 1,5 cm) de gel de silice (388 g ; 0,032-0,063 mm). En utilisant du benzène comme solvant éluant, on recueille des fractions de 20 ml de volume chacune (débit, 1,5 ml par minute). 25 On rassemble les contenus des fractions 13 à 50 et, après évapora- ~( tion du solvant sous pression réduite, on les cristallise à partiz d'acétone-eau en obtenant la 3O-benzoyloxy-14<-éthyl-5<-cholest-7- én-15-one cristallisée (2,45 g ; rendement 92 %). Le composé présente un seul constituant aux analyses chroma- 30 tographiques en couche mince sur plaques de gel de silice G (sys- tèmes de solvants : benzene, 10 % d'éther en benzene, et 10 % d'éther en hexane). La structure est confirmée par analyses i.r., r.m.n. et s.m. comme suit : 35 40 I 2485021 s~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ 0 ~-.-~ ~Exemple 35 Préparation de la 14o(-éthyl-5~-cholest-7-én- 34-oI-15-one i.' A la 3d-benzoyloxy-14c-éthyl-5i-cholest-7-én-15-one (1,0 g ; 1,9 mmole) en éthanol abslolu (190 ml), on ajoute une solution de KOH (4,0 g) dans l'eau (10 ml). Après chauffage au reflux dans une atmosphère d'azote pendant 2 heures, on réduit le volume du mélan- ge à environ 100 ml sous pression réduite. On verse le mélange 2 tà dans de l'eau et on l'extrait à fond avec de 'iéther contenant du chlorure de méthylène (5 %). On sèche les extraits combinés sur du sulfate de magnésium anhydre et on les évapore à siccité sous pression réduite. On cristallise le résidu blanc résultant à par- tir d'acétone-eau en obtenant la 14"-éthyl-5e-cholest-7-én-3~-ol15-one (0,72 g , rendement 89 %). Le composé présente un seul constituant aux analyses chroma- tographiques en couche mince sur plaques de gel de silice G (sys- tèmes de solvants :10 % d'éther en benzène, 5 % d'acétone en chlo- roforme, et 35 % d'acétate d'éthyle en chloroforme), et aux analy- ses chromatographiques en phase gaz-liquide sur colonnes à 3 % de VO-1 et 3 % de VO-17 (température de colonne, 270"C). La structure est confirmée par analyses i.r., r.m.n. et s.m., comme suit : s.' 2485021 EXemple 36 Préparation de la 5o-choles-t-8(14)-én-15c-ol-3-one Au constituant 1 (180 ml) du produit Cholesterol Auto Test mis sur le marché par la Firme Bio-Dynamics (Division BMC), on 5 -ajoute-de la "cholestérol oxydase" (5,5 ml ;-constituant 3 du Cholesterol Auto Test) et on dilue le mélange résultant avec de l'eau distillée (540 ml). On ajoute du 5c-cholest-8(14)-ène-3p, 15c-diol (105 mg ; 0,26 mmole) en isopropanol (40 ml) et on fait incuber le mélange résultant eh le secouant pendant 8heures à 1 37 C. On ajoute une solution saturée (200 ml) de chlorure de sodiu et on extrait le mélange cinq fois avec des fractions de 100 ml de chloroforme. On sèche les extraits organiques combinés sur du sulfate de magnésium anhydre et on les évapore à siccité sous 1!, pression réduite. On soumet le résidu résultant à une chromatographie sur co- lonne (90 cm x 2,0 cm) de gel de silice (150 g ; 0,044-0,208 mm) en utilisant 10 % d'éther en benzene comme solvant éluant (débit, 5 ml par minute). On recueille des fractions ayant chacune 20 ml 2(o de volume. On rassemble les contenus des fractions 25 à 45 et,. après évaporation du solvant sous pression réduite, on les cris- tallise à partir d'acétone-eau en obtenant la 5(-cholest-8(14)-én

15k-ol-3-one (88 mg ; rendement 85 %) ayant la formule suivante : 2-' 3<' on La structure du composé est confirmée par analyses i.r., r.m.n. et s.m.. Le composé présente un seul constituant aux analy ses chromatographiques en couche mince sur plaques de gel de sili ce (systèmes de solvants : 10 % d'éther en benzene, 35 % d'acétat d'éthyle en chloroforme, et 5 % d'acétone en chloroforme) et une pureté supérieure à 90 % aux analyses chromatographiques en phase 2485021 gaz-liquide sur colonnes à 3 % de VO-1 et 3 % de VO-17 (tempéra- ture de colonne, 270 C). ExemDle 37 Préparation du 54-cholest-8(14-4n-15-on-3e-yl-sulfate de pyridinium . On ajoute le complexe pyridine-anhydride sulfurique (5,0 g) à la 5K-cholest-8(14)-én-3f-ol-15-one (2,0 g ; 5,0 mmoles) en chloroforme sec (50 ml ; exempt d'éthanol ; séché sur un tamis moléculaire Lindej type 3A). On agite le mélange résultant à la i température ambiante pendant 3 heures. On élimine le réactif en excès par filtration, on le lave avec un faible volume de chloro- forme et on refroidit le filtrat à -40 C dans un bain de glace' sèche-acétone et on le filtre à travers du Hyflo SuDer-Cel (mis sur le marché par la Firme Johns Manville Corps.). On ajoute de l'hexane au filtrat chloroformique jusqu'à ce elun trouble ap- paraisse, en refroidissant alors à 0 C pour en obtenir un préci- pité blanc. On recueille cette substance par filtration et on la - place dans un dessiccateur sous vide pendant 100 heures à la tem- pérature ambiante pour éliminer toutes les traces de solvant. -Le produit, à savoir le-5"-cholest-8 (14) -én-15-on-3,.-yl-sulfate de pyridinium (2,4 g ;-rendement 86 %), présente la formute structu- rale suivante comme le confirment les analyses i.r., r.m.n. et s.m. : !', NO o-o Le produit présente un seul constituant aux analyses chromatogra- phiques en couche mince sur plaques de gel de silice G;(systèmes de solvants : 25 % d'écétate d'é.thyle en méthanol et 25 % d'acéta- te d'éthyle en éthanol). iJ ~~55 ~2485021 Exemple 38 Preparation du 5e-cholest-8(14)-én-15-on-3&-yl-sulfate de potassium (monohydrate) On dissout le 5U-cholest-8(14)-én-15-on-3p-yl.-sulfate de py- 5 ridinium (1,0 g ; 1,79 mmole) dans de l'eau -distillée (50 ml) à- la températureambiante et on ajoute lentement au mélange agité, .*...une solution aqueuse- saturée de chlorure de potassium. Apres 15 minutes, on filtre la suspension résultante, on la lave avec de l'eau et on la sèche dans un dessiccateur sous vide pendant plu- 10 -sieurs heures. Le résidu blanc résultant (0,85 g ; 89 %) se révè- le aux analyses i.r., r.m.n. et s.m., être le 5D-cholest-8(14)-én -15-on-3p-yl-sulfate de potassium (monohydrate) ayant la structu- - re suivante : c~~~~~~~~~ 15 20 a -O * ' 0 - ~~o 25 Exemple 38A Préparation de la 5"-cholest-8(14)-ène-3,15-dione Q( ~ A une solution en chlorure de méthylène sec de 5c-cholest8(14)-ène-3 ,15c-diol (0,4 g ; 1,0 mmole dans 20 ml), on ajoute une solution d'anhydride chromique (3 g) dans un mélange de chlo- 30 rure de méthylène sec (40 ml) et de pyridine sèche (3 ml). On agi- te le mélange réactionnel pendant 15 minutes sous azote, on y ajoute de l'éther et on lave la solution avec de l'acide chlorhy- drique à 5 % froid et de l'eau. On sèche la solution sur du sulfa- te de magnésium, on la filtre et on l'évapore sous pression rédui- 35 te en obtenant un résidu (0,35 g) que l'on purifie par chromato- graphie préparative en couche mince (acide silicique ; solvant : benzène). On recristallise le produit à partir d'acétone-eau (ren- dement : 0,332 go 84 %) et il se révèle d'après les analyses i.r., r.m.n. et s.m., comme la 5d-cholest-8(14)-ène-3,15-dione ayant la 40 formule suivante : S&i ~ ~ 2485021 2485021 Exemple 39 Préparation 'du '1'4"-éthyl'-5-cholest-7-en-15-oxo-3e-yl-sulfa te de Potassium A une solution agitée à la température ambiante de 14'-éthy .-5t-cholest- -.n--15-on-3p-yl-sulfate -de pyridine (500 mg ; 0,85 mmole) dans de l'eau distillée (25 ml) , on ajoute lentement une solution aqueuse saturée de chlorure de potassium (15 ml). Après 10 minutes, on filtre la suspension agitée, on la lave avec de l'eau dishillée et. on la sèche dans un dessidcateur sous vide 10 pendant plusieurs heures. Le résidu blanc (418 mg, 87 %) se révê le, par les analyses i.r., r.m.n. et s.m., comme le 14e-éthyl-5" cholest-7-én-15-on-3 -yl-sulfate de potassium (monohydrate) ayan la formule suivante : 15 .20 ..o~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~.eó .3! O 25 x Eemple 40 Preparation du 14"-éthy1l-5X-cholest-7-én-15-on-3 -yl-sulfat de pyridine On dissout la 14o-éthyl-5o -cholest-7-én-3 -ol-15-one (1,0 g 2,33 mmoles) dans du chloroforme sec (25 ml ; exempt d'6thanol ; 30 séché sur un tamis moléculaire Linde, type 3A}. On ajoute le com plexe pyridine-anhydride suifurique (2,5 g) et on agite le mélan à la température ambiante pendant 3 heures. On élimine le réacti en excès par filtration et on le lave avec un faible volume de chloroforme. On refroidit le filtrat a -40"C dans un bain de gla 35 sèche-acétone et on le filtre à travers du Hyflo Super-Cel (mis

sur le marché par la Firme Johns-Manville Corp.). On ajoute de l'hexane au filtrat chloroformique jusqu'à l'apparition d'un tro ble. Par refroidissement à 0C, il se forme un précipité blanc q l'on recueille par filtration et que l'on place dans un dessicca 40 teur sous vide pendant 100 heures à la température ambiante pour 2485021 éliminer toutes les -traces de solvant. Le produit (1,2 g ; rende- ment 88 %) se révèle aux analyses i.r., r.m.n. et s.m., comme le -14L-éthyl-5(-cholest-7-én-15-on-3 -yl-sulfate de pyridinium, ayant la structure suivante : 5 10 Il' : OfIt-oS.o:A /It - Le composé présente un seul constituant aux analyses chroma- tographiques en couche mince sur des plaques de gel de silice G (systèmes de solvants : 25 % d'acétate d'éthyle en méthanol et 20 25 % d'acétate d'éthyle en éthanol). Exemple 41 ...- Effet de la 3p-hexadécanoyloxy-5c-cholest-8(14)-én-15-one et de la 3f-hémisuccinoyloxy-5&-cholest-8(14)-én-15-one sur les taux sériques de cholestérol chez le rat 25 On a alimenté ad libitum des rats mîles de l'espèce Sprague- Dawley avec provende pour rats Purinà' . Les. rats ont. été maintenus dans un cycle d'éclairement (7 heures du matin - 6 heures de l'après-midi) - obscurité (6 heures. de l'après-midi.- 7 heures du matin) pendant.toute 1'étude et pendant une durée d'au moins 4 30 jours avant le commencement de celle-ci. . La 3p-hexadécanoyloxy-5L-cholest-8(14)-én-15_-one (5 mg ; dis- sous dans 0,25 ml de trioléine) désignée ci-après "palmitate" ou ester palmitique, ou la 3p-hémisuccinoyloxy-5d-cholest-8(14)-én- 15-one (5 mg ; mis en suspension dans 0,25 ml de trioléine en uti- 35 lisant un homogénéiseur entièrement en verre et muni de garnitures d'étanchéité), désignée ci-après "hérisuccinate" ou ester hémisuc- cinique, ont été administrées par volie sous-cutanée une fois par jour à chacun des rats de groupes respectifs de huit et six rats. Des animaux témoins (8) ont reçu quotidiennement des injections 40 de triôloine (0,25 ml). Les animaux témoins avaient un poids du 2485021 corps moyen initial de 163,5 g (+ 5,6, éC4H type par rapport à la moyenne (E.T.d.)). Les rats recevant 1t ,,,lmmitate et l'hémis;ccinate avaient respectivement des valet% ,. du poids du corps moyennes initiales de 178,5 g (+ 5,5, E.Tdi.) et de 170,0 g (+ 5 4,7, E.T.M.). On a périodiquement fait de, torilèvements sanguins *. chez les rats et -mesuré les -concentration" "oriques de .cholesté- rol, en double, par la. méthode -de Abell e .,,l.-, J. Biol. Chem., Vol. 195, p. 357-366 (1966). Les résultat:. -:rlt -indiqués dans le Tableau I. 10 . Du fait. ques groupes de rats n'-étaietni '?aS assortis en ce qui concerne, les taux sériques de cholesté,l, avant le début de l'expérimentation, les valeurs moyennes i --l i. ales des taux séri- ques de cholestérol pour les groupes recey81.j la trioléine, le palmitate et l'hémisuccinate n'étaient pae Ildentiques. Malgré ce 15 --fait,.les. résultats présentés dans le Tab]-.1t I indiquent claire- ment des diminutionsnotables des taux Séi'-lttes de cholestérol -- après un traitement pendant 3, 6, 9 et 12 i)qtrs avec l'ester pal- mitique et l'ester hémisuccinique, par Cotn;sraison avec la valeur À moyenne pour les mêmes rats avant le début <il. l'administration du 20 composé. Au contraire, les rats recevant -,;i injections quoti- diennes de trioléine n'ont pas montré de \ i, t jj ns notables du taux sérique de cholestérol. De plus, la '-M1,ur moyenne des taux &ériques de cholestérol dans les groupes r,:,:,vant le palmitate et l'hémisuccinate après 12 jours de traitement, a été nettement plus 25 faible que la valeur moyenne correspondante ,les taux sériques de cholestérol chez les rats traités à la tri.a16tne .... On a .également analysé les effets -de l',st palmitique et de l'est hémisuccinique sur les taux sériques ",< cholestérol chez les rats individuels. Dans le Tablçau I,-on P0 ;,snte -es valeurs moyen 30 nes de la réduction en poqrcentage des ta\ux -6riques de cholesté- rol par rapport aux taux initaux chez les anes rats et on présen- te également des expressions en ce qui con ,-,,ne les variations des dites valeurs. Une réduction notable des tinz sériques de choles- térol a été observée chez chaque rat des C.,,l: groupes. La réduc- 35 tion en pourcentage du taux sérique de chc';&,,t;4rol après 12 jours de traitement par l'ester palmitique étai '",iprise entre 22,7 % et 48,9 %. La réduction en pourcentage du :.x sérique de cholesté rol après 12 jours de traitement par l'essi, h6misuccinique était comprise entre 28,5 % et 46,3 % 40 Une analyse des stérols sériques cher 1:i- rats, après 12 2485021 jours de traitement avec l'ester palmitique ou avec lVester hésmi- succinique par chromatographie en phase gaz-liquide (3 % de VO-1 sur un Gaz-Chrom Q n'a indiqué aucune accumulation décelable (inférieure à 1 %) de stérols autres que le cholestérol. 5 . On n'a observé aucune différence notable dans la croissance des rats traités avec 5 mg par jour de palmitate ou d'hémisucci- nate, par comparaison avec le groupe recevant la.trioléine seule.

Le gain de poids en pourcentage toyen sur toute la durée de 1'ex-périmentation a été respectivement dans les groupes recevant le 10 palmitate, l'hémisuccinate et la trioléine (moyenne E.T.M1.) -- - 40,5 + 4,6, 40,7 + 1,6 et 43,6 + 3,3. II n'y a pas eu-de différence notable entre les valeurs moyennes des poids du foie chez les rats traités à la trioléine (9,6 g 0,4, E.T.M.) et les rats traités à l'ester hémisuccini- 15 -que--(10,6 g + 0,4, E.T.M.). De façon semblable, il n'y a pas eu. de différence notable entre les valeurs moyennes des poids du foie exprimés en pourcentage du poids du corps total, entre les rats traités à la trioléine (4,09 % 0,08, E;T.M.) et les rats trai tés à l'ester hémisuccinique (4,36 % 0,08, E.T.M.). - -20 - Les valeurs moyennes des poids du foie des rats traités à la trioléine (9.,6 g i 0,4, E.T.M.) ont été différents de--ceux des - rats traités à l'ester palmitique (11,4 g 0,5, E.T.M.). De fa- çon semblable, la valeur moyenne des poids du foie, exprimée en pourcentage du poids du corps total, des rats traités à la trio- 25 .léine (4,9 % + 0,08, E.T.M.) a été différente de la valeur moyen- ne des rats traités à l'ester palmitique (4,53 % + 0,09, E.T.M.). 30 35 40 TABLEAU I EFFETS DE TRIOLEINE, 3P-iIEXADECANOYLOXY-5-CHÈLEST-8(14) EN-15-ONE (PALMITATE) ,.ET 3F-HEMISUCCINOYkOXY-5s- CHOLEST-8(14)- EN -15-ONE (HEMISUCCINATE)1 SUR LES TAUX SERIQUES DE.CHOLESTEROL CHEZ LE RAT Cholestérol sérique - mg pour 100 ml (Moyenne f E.T.M.) % Réduction (MOyenne + E.T.M.) Trioléine itate Hémis cinate Palmitate H misuccinate Triol~ine Palmitate 1 H&misuccinate 1 Palmit ate 1éiuciae . .~~~~~~~~~~~~~~~~~~~Hm sui ae 1 2;3 2,5 3,0 2,0 2,2 91t6 + 74,9 + 75, 8 + 77,9 61,4 2,6 3,9 5,0 5/,9 3%9 89jl 78, 6 72>5 72, 3 58, 8 + 2,6 t 2,4 t 1',9 ' l' 1,6 t 2,8 18,; 2 + 15, 7;t 14,5 + 33,2 3,3 4,4 2,9 2,7 13,5 + 4,4 18 1 + 4,1 18;,4 3;5 339 + 2;9 Jour o 0 3 6 9. 12 82,6 79/6 76;4 + 821 i 79,4 t 1 ESTER tu Co VI. N ) ____ 2485021 Exemple 42 En suivant d'une manière générale le mode opératoire décrit dans l'exemple 41, on a administré par voie sous-cutanée, une fois par jour à chacun des rats parmi un groupe de huit rats, de --5- la 3p-éthoxy-14D-éthyl-5"-cholest-7-én-15-one (5 mg) dans de la. trioléine (0,25 ml). Des animaux témoins (8) ont reçu quotidiennement des injections de trioléine (0,25 ml). Les animaux témoins avaient un poids .du corps moyen initial de 143,7 g (+ 6,3, E.T.M.) et les rats recevant la cétone stéroidique avaient un poids du -10_ corps moyen initial. de 141,8 g ( 2,9, E.T.M.).- "- - De façon semblable, on a administré par voie sous-cutanée une.fois par jour, à chacun des-rats d'un groupe donné la 54- cholest-8(14)-én-3p-ol-15-one (2 mg dans 0,2 ml d'huile d'olive ou 5,0 mg dans 0,5 ml d'huile d'olive). On a administré la dose 15 de 2 mg à 12 rats, tandis qu'un même'nombre de rats ont reçu quo-' - tidiennement des injections de 0,2 mI d'huile d'olive. On a ad- ministré les doses de 5 mg à chacun des rats parmi un groupe de 6 rats, tandis que 6 animaux témoins ont reçu quotidiennement des injections de 0,5 ml d'huile d'olive. Les rats utilisés dans cet- 20 te étude pesaient initialement entre 110 et 190 g. : : . Les -valeurs sériques de cholestérol moyennes des animaux - témoins et des animaux soumis à l'expérimentation sont présen- tées dans le Tableau II. On a observé des réductions notables des taux sériques de cholestérol (par rapport aux rats témoins) chez 25 les rats recevant quotidiennement des injections:sous-cutanées de stérols 15-oxygénés. Les taux sériques de cholestérol chez les animaux traités -à l'huile d'olive et à -la--trioléine ne différaient pas de façon notable pendant la -période de l'étude.- La réduction- moyenne des taux sériques de cholestérol exprimée en pourcentage 30 chez les rats traités avec la 14"-éthyl-15-cétone (au 27ème jour par rapport à un jour 0) était comprise entre 12,1 et 34,9. La valeur moyenne était de 25,0 (+ 2,3, E.T.M.). Il n'y a pas eu de différence notable dans la croissance des rats traités aux stérols 15-oxygénés et les rats traités à la tri- 35 oléine ou à l'huile d'olive. 40 - 6Q~ ~2485021 TABLEAU II - EFFETS DE 3 -ETHOXY-14"-ETHYL-5-CHOLEST- 7N-15-ONE ET 5e-CHOLEST-8(14)-EN-3 -OL-15-ONE SUR LES TAUX SERIQUES DE CHOLESTEROL CHEZ LE RAT Cholesterol sérique, mg pour 100 ml (Moyenne + E.T.M.) Jour Trioléine 3/3-Ethoxy-14--éthyl-5q- % Réduction par rapport à cholest-7-èn-15-0one des rats traités par la trioleine 0.-.889 + 2,2 8911 22 - - 3 . - ._ 6' 8112 2,8 . 773 21 - 418 10 82>9 3,0 801 2/3 . 3/4 15 8116 315 785 . 3,3 3,8 21 82,6 3/8 7311 213 1115 27 81,8 33 66 8 2/6 18,3 Jour Huile d!.olive 5"-cholest-8(14)-én-3p-olRéduction (par rapport à (0,2 ml) 15-one-(2 rg) ies rats traités par l'huile .'olive) 3 73 7 2;9 64,5 215 12 Jour Huile d'olive 5<-cholest-8(14)-én-5p-ol- % Réduction (par rapport a . . (0,5 ml) 15-one-(5 mg) . 'e s rats traités par l'huile l'olive) 3 79,5 5;8 5916 _ 212 22 .* Les valeurs pour cette moyenne et la E.T.M. ont été calculées

après élimination d'un rat dont le taux sérique de cholestérol était très has (55,3 mg pour 100 ml), ce jour-là. En introdui- sant néanmoins cette valeur, on obtient un taux sérique de cholestérol moyen de 78,5 + 4,2 (E.T.M.). C ( 2485021 Exemple 43 Des rats males de la souche Sprague-Dawrley ont été achetés à Sprague-Dawley Farms (Madison, Wisconsin, U.S.A.). On a maintenu les rats dans un cycle d'éclairement (7 heures du matin - 5 heu- 5 res 1/2 _del'après-midi) - obscurité- (5 heures -1/2 de l'apres- midi - 7 heures du matin) et on les a alimentés avec la ration alimentaire -exempte de cholestérol mise sur le marché sous le nom de Cholesterol Free Test Diet (United States Biochemical Corpora- tion, Cleveland, Ohio) pendant une durée de 13 jours avant le dé- * 10 but de la période d'expérimentation. .6 jours avant le début de la - -période de -l'expérimentation, on a effectué des prélèvements san- guins pour déterminer la concentration sérique de cholestérol et, c -:'d'après.:les résultats de ces analyses, on a-réparti -les rats en - trois groupes qui présentaient respectivement à peu près la même - - concentration--sérique- de -cholestérol moyenne. AOn a logé individuẻ .ellement -les rats dans. des _cages métaboliques (mises sur le mar---ché sous le nom de (Econo-Metabolism Units, Maryland Plastics, New York, New York) pendant 6 jours avant le début de la période - - d'expérimentation. On- a maintenu les animaux dans le cycle d' éclairement - oQbscurité pendant toute la durée de l'exuérimentation. . .On a pesé quotidiennement les animaux individuels pendant toute-- la durée de l'expérimentation. La consommation de nourriture par les rats individuels a été semblablement enregistrée quotidienne- ment. Aucun renversement notable des aliments ou aucune contamina- 25 tion de ceux-ci par les fèces ou l'urine n'était-possible du fait t( de la nature de la cage métabolique et des réceptacles de nourri- ture utilisés. Les prélèvements sanguins ont été faits dans la veine codale le matin entre 8 heures 1/4 et 9 heures 1/2 et en aucun cas, on a 30 retiré plus que 0,5 ml environ de sang. Le sérum a été recueilli par-centrifugation du sang en utilisant le. Sure-Sep Junior (Gene- ral Diagnostics, Division de Warner Lambert Company, Morris Plains New Jersey) pendant 20 minutes à 2000-2500 tr/min dans une centtri- fugeuse de tule (mise sur le marché par Dynac, Clay Adams Mdel 35 0091). On a déterminé la concentration sérique de cholestérol par une modification du Cholesterol Auto Test (Bio-Dynamics, Division BMIC) telle que décrite dans le manuel Bio-Dynamics/bmc Cholesterol Instruction (édition revue en décembre 1975). On a ajouté par petites fractions la 5X-cholest-8(14)-én-3P- 40 ol-15-one (500 mg), préparée et purifiée comme décrit dans 2485021 l'exemple 1, à 500 g ae la ration exempte de cholestérol ChoIles- terol Free Test Diet dans un flacon en verre de 2 litres bouch. Après chaque addition du stérol à la ration, on a imprimé forte- ment au flacon une rotation et des secousses. La ration résultan- 5 te à O,1% en ce qui concerne la 5d-cholest-8(14)-én-3 -ol-15-one .... -a été magasinée à 4 C.- -Avant son utilisation pour la nourriture, on a laissé la ration -se réchauffer -à la température ambiante (environ 25 C). On a divisé les rats en trois groupes désignés comme suit : 10 1. Le groupe "Ad libitum" - 6 rats ayant libre accès à la ration d'essai exempte de cholestérol. - - 2. Le groupe-"Cétone" - 7 rats ayant libre accès à la ration d'es ... . .sai.,exempte de cholestérol cQntenant 0,1 % de.-- 5-cholest-8(14)- C 0n-3p-ol-15-one. 15 .3. .Le .groupe 'Apparié"- - 7. rats ayant accès -à la ration d'essai;- exempte de cholestérol, mais-seulement dans la quantité consommée par leur contrepartie individuelle dans le groupe "Cétone" le jou précédent. - --- . .Au début-,de la--pêriode - d '-expérimentation, -les concentrations - 20 -.sériques de cholestérol.moyennes. (mg par 100 ml de sérum + écart type par rapport à.la moyenne) pour les trois groupes, ont été les suivantes : Ad libitum 71,4 2,4 - - Cétone - 71,2 0,9 Apparié - 69,0 + 2,9 25 . Au-début de la période d'expérimentation, les valeurs moyen- nes du poids du corps (+ écart type par rapport à la moyenne) ont été les suivantes : Ad libitum 125,3 1 4,4 Cétone - 130,4 + 4,4 30 Apparié - 128,0 4,0 Ainsi, les groupes ont été bien assortis en ce qui concerne le poids du corps moyen et la concentration sérique de cholestérol moyenne. La 5<-cholest-8(14)-én-3p-ol-15-one administrée dans la ratio 35 comme décrit ci-dessus a eu un effet prononcé sur l'abaissement de concentrations sériques de cholestérol. Le taux sérique de choles- térol moyen (mg par 100 ml de sérum) des rats recevant;la dose de 0,1 % de 5S-cholest-8(14)-én-3p-ol--15-one dans la ration, a dimi- nué une valeur initiale de 71,2 à une valeur de 50,1 au quatrième 40 jour et de 36,9 au huitième jour de la période d'expérimentation'. 66 ,2485021 Les valeurs moyennes de la concentration sérique de cholestérol

dans le groupe "Ad libitum" et dans le groupe "Apparié" n'ont pas varié de façon notable pendant la période d'e.xpérimentation. Les résultats sont présentés dans le Tableau III. 5 .. TABLEAU III ......-.. CONCENTRATION SERIQUE DE CHOLESTEROL (mg pour 100 ml) Jour 0 4 8 Ad bilitum 71,4 + 2,4 69,9 + 2,7 70,5 + 2,4 Cétone 71,2 + 0,9 50,1 + 2,3 36,9 + 3,3 À10- ..Apparié - 69,0 .+ 2,9 71,8 + 4,2 74,9 + 4,5 .... Les résultats en ce quiconcerne les taux sériques de cho- lestérol-pour--ies trois.groupes en pourcentage de la valeur du taux initial (jour 0) chez-les rats individuels après le 4ème et t le 8ème jours sont présentés dans le Tableau IV. Il n'y a pas de . 15 -variation notable de la concentration sériqt* de eholestérol . . .. chez le. groupe "Ad. libitum" :ou .chez -le groupe .:Appari-l". Toute- . fois, la valeur moyenne du pourcentage du taux sérique de choles- t.. térol le 4ème et.le 8ème jours de la .priode par rapport aux *- -.--leurs initiales est respectivement de 70,5 %-et 51,8 %. . 20 ..-- .TABLEAU- IV . ~~~~~~.- . .. . :. .- ...... CONCE.TRATION SERIQUE DE CHOLESTEROL - POURCENTAGE DES TAUX INITIAUX CHEZ LES RATS INDIVIDUELS Ad libitum Cétone ApDarié 4ème jour 98,9 + 6,3 70,5 + 3,6 96,1 + 8,1 25 : , 8ème jour 99,0 + 2,2 51,8 + 4,4 I19,1 + 6,1 - La consommation de nourriture quotidienne moyenne du 2ème . jour au 7ème jours était la suivante chez les-rats des trois grou- pes : Ad libitum 15,5 g 30 Cétone - 6,6 g Apparié - 6,2 g - Le poids de la consommation de nourriture quotidienne chez les rats de tous les trois groupes est présenté dans le Tableau V. Comme onpeu -le voir d'après les résultats présentés dans ledit 35 .tableau, la consommation de nourriture chez les rats recevant la ration contenant 0,1 % de cétone est nettement inférieure a celle des rats du groupe "Ad libitum". La variation .des poids du corps moyens des rats des trois groupes pendant toute la durée de l'étude, est représentée dans le 40 Tableau VI. La valeur moyenne pour le groupe "Ad libitum" est -~64- ~2485021 accrue de 125,3 g au début de l'expérimentation à 166,3 g à la fin de celle-ci. La valeur moyenne du groupe "Cétone" s'est abais- sée d'une valeur initiale de 130,4 g à 117,3 g à la fin de l'ex- périmentation. La valeur moyenne en ce qui concerne le groupe 5 "Apparié" s'est abaissée de façon semblable d'une valeur initiale de 128,0 g à une valeur de~113,6 g à la fin de l'expérimentation. La variation de poids du corps moyenne en pourcentage par rapport aux valeurs initiales des rats individuels des trois grou pes est montrée dans le Tableau VI. Les résultats réunis montrent 10 que les variations du poids du corps observées chez les animaux nourris avec la ration contenant la cétone étaient dues à une sup- pression de l'ingestion de nourriture. Des animaux nourris dans le groupe "Apparié" (recevant seulement la quantité de nourriture ( ' consommée par le groupe traité par la cétone) ont montré des va- 15 riations de poids du corps. semblable$.à cellesdes animaux trai- tés par la cétone. Le fait que la diminution prononcée à des concentrations sériques de cholestérol chez les rats traités à la cétone n'était pas due à une réductio de la consommation de nour- riture est clairement.montré par le fait que les taux sériques de 20 cholestérol du groupe "Apparié" (chez lequel les valeurs de con- sommation de nourriture et des poids du corps ,éaient essentiel- lement les mêmes que celles du groupe traité par la cétone) ne présentent pas d'abaissement pendant la période de l'étude. 25 (~~~~~ 30 35 40 2485021 TABLEAU V CONSOMMATION DE NOURRITURE (g) Jour Ad libitum Cétone Apparié -... . . . .. . À .. ,:....-. 0. 1212 017 1014. 0S7. 14,2 + 019 1 1511 0;6 51 + 0 f3 10,2 016 2 15}i1 + 0;5 711 + 0t3 510 + 0,3 3 14f5 + 0,7 5r5 + 013 7,1 013 4 1317 1,3 711 015 5J4 + 613 5 16;7 017 5,8 05 7/0 + 0,5 6 -16,8-- 0,5 - 6-j 015-- 518: 0,4 7 1611i 04 715 05 6t9 015 TABL-EAU VI -POIDS DU CORPS (g) Jour Ad libitum Cétone Apparié .,. ,~~~~~~~~~~~~~~~~~~ . 0 125,3 + 4,4 130f4 4,4 128 0 4>0 1 .12312 4,3 12616 418 128?9 2,5 2 131fl + 4,5 121%4 - 4;4 12811 2,2 3 13812 _ 4;4 1206 416 122r9 218 4 141r5 312 11815 + 410 121>3 + 213 5 147,0 511 11914 413 117r7 t 212 6 15517 - 4,7 11819 + 48 11714 + 215 7 16210 416 116j5 + 419 114,6 t 2,4 8 166,3 _ 416 117,3 + 4 7 113 6- 3,2 i t !1 2485021 TABLEAU VII VARIATION DE POIDS EN POURCENTAGE PAR RAPPORT AU POIDS INITIAL CHEZ DES RATS INDIVIDUELS C Jour Ad libitum Cétone Apparié 1 - 117 04 - 310 07 + 11 + l7 2 + 4606 7 06 7t0 017+ 014 -+ 8 3 +1013 070 7 7+ 017 - 38 +110 4 +1213 + lr9 - 9rl + 017 - 510 + 14 5 +17/4 116 - 85 + 0f5 - 7/7 -+.l-6 6 +2413 + 09 - 817 + lro0- 8t0 +lr7 7 +30X1 1)3 -1018 + 1X3 -10,2 118 8 +3117 + 119 -1012 + 0/9 -11l1 1l, ( 2485021 Exemple 44 Inhibition de la biosynthèse des stérols dans les cellules L et dans les cultures primaires de cellules de foie de souris On a déterminé d'effet de divers stérols 15-oxygénés sur la

5 biosynthèse des stérols dans les cellules L et dans des cultures primaires de cellules de foie de souris essentiellement dans les conditions décrites en détails antérieurement (A.A. Kandutsch et H.W. Chen, J. Biol. Chem., Vol. 248, p. 8408-8417 (1973), et A.A. Kandutsch et H.W. Chen, J. Biol. Chem., Vol. 249, p. 6057-6061 10 (1974)). Les cultures primaires de cellules de foie ont été préparées à partir de foetus (57BL/6J) agês de 16 jours et on les a déve- loppées dans un milieu chimiquement défini (exempt de sérum) tel que décrit dans les publications précitées. On fait croître les 15 cellules L, une sous-lignée'de fibroblastes de Souris NCTC clone 929. Ces cellules L se transforment en fibroblastes qui sont con- sidérés comme des cellules malignes car elles se développent en tumeurs lorsqu'on les injecte à la souche de souris à partir des- quelles elles ont été initialement obtenues. 20 La préparation des milieux contenant les stéro!des, les pro- tocoles d'essais de la conversion du (1-14C)acétate en stérols précipitables par la digitonine, des acides gras et du CO2 ainsi que les méthodes de mesure de l'ADN, des protéines et d- la HMIG- CoA réductase-ont été celles qui sont décrites dans les articles 25 publiés. On a préincubé des cultures de cellules L avec les sté- rols 15-oxygénés et leurs dérivés pendant 4 heures, puis on a 1 4 ajouté le (1-14C)acétate à la concentration de 4 Imoles par ml (4 Ci par ml ou on a incubé les cultures de cellules L pendant 5 heures avec les stérols 15-oxygénés avant de les récolter pour 30 la détermination de l'activité microsomique de la HMG-CoA réduc- tase. Les conditions d'incubation des stérols 15-oxygénés ou de leurs dérivés avec les cultures de cellules de foie étaient sem- blables à celles décrites au sujet des cultures de cellules L ex- 35 cepté que l'on a incubé les cultures avec les composés soumis aux tests pendant 12 heures avant d'y ajouter l'acétate marqué ou avant de les récolter pour le dosage enzymatique. Les composés examinés ont été soumis aux test dans une gamme d'au moins 4 concentrations et on a répété l'essai jusqu'à ce que 40 la concentration du composé examiné nécessaire pour nroduire une 2485021 inhibition de 50 % est située sur la branche fortement descendan- te d'une courbe d'activité en fonction de la concentration. Pour tous effets pqsib1es. de différeuDçes généralisées dans le métabo- lisme cellulaire, on a calculé des taux de synthèse de stérols a 5 partir de (1-14C)acétate en tant que rapport entre les ( 14C)sté- rôls et les (4C)acides'gras, tels que décrits dans les articies de Kandutsch et Chen. précités. Dans les expérimentations avec les stérols 15-oxygénés pré- sentées ci-dessous, aucun des composés examines n'a eu d'effet 10 notable sur les taux auxquels l'acétate marqué a été incorporé dans les acides gras ou-oxydé en anhydride carbonique. Cet absen- ce d'effet inhibiteur sur-les derniers paramètres du métabolisme indique également que les stérols 15-6xygénés et leurs dérivés ne sont pas d'une manière générale toxiques vis-à-vis des cellu- .15 les dans les conditions'de l'études.... . ..Les exemples des effets.d'un.certain nombre-de dérivés oxy- génés du cholestérol (à l'exclusion de stérols 15-oxygénês) sur 'la synthèse des stérols dans ces systèmes de culture de cellules ont été publiés dans les-deux articles de Kandutsch et Chen, pré- 20 cités. Les concentrations-de stérols requises mour obtenir une- inhibition à 50 % de la biosynthèse-de stérols, telles que décri- tes par Kandutsch et Chen, sont les suivantes : Concentrations (8M)-requises pour une inhibition à 50 % de la synthèse des stérols 25? ~25 -- - .~ -:~. -Cellules LCultures primaires ( de cultures de cellules de foie Cholestérol . ..---.... > 5.200 Cholest-5-én-3p-ol-22-one 1,7 37,0 Cholest-5-ène-3p,22ú-diol 3,7 6,0 *30 Cholest-5-ène-3p,25-diol 0,07 1,0 Il y a lieu d'observer que le cholestérol pur lui-même est - inactif dans le système de culture des cellules du foie. Le 25- hydroxycholestérol s'est révélé l'inhibiteur de synthèse de stérol le plus puissant de ce type de composés antérieurement à la pré- 35 sente invention.. Les résultats d'études de l'action d'un certain'nombre de stérols 15-oxygénés sur la synthèse des stérols dans des cultures de cellules L et des cultures primaires de cellules de foie, sont présentés dans le Tableau VIII. Comme le montrent les résultats de 40 ce tableau, un très grand nombre de composés ont provoqué une 2485021 inhibition à 50 % de la synthèse des stérols dans les cellules L. à la concentration de 10-6M ou moins. Le 14c-éthyl-50-cholest-7- ène-3~,15"-diol a entraîné une inhibition à 50 % de.la synthèse des stérols dans les cellules L à la concentration de 5 x 10 8X. . 5 .La 14%-éthyl-5c-cholest-7-én-15"-ol-3-one..et la 14OC-éthyl-'5- - cholest-7-én-3(-ol-15-one sont extraordinairement actives, en as- surant sensiblement une inhibition à 100 % de la synthèse des .. stérols à la concentration de 10 7M. Comme le foie est un site majeur de la biosynthèse du cho-

10 lestérol'dans les cellules animales, la découverte de l'action inhibitrice d'un nombre important de composés sur la synthèse des stérols dans les cellules de foie est particulièrement impor- ..tante. Il faut remarquer .que le 14e-éthyl-5c-choiest-7-ène-3p, 15so -k -diol est extraordinairement actif à cet égard et engendre une 15 inhibition-à 50--% de la synthèse des stérols-à la concentration de 6 x. Q iH qui est considérablemeit inférieure..- l&. valeur.la plus basse antérieurement signalée, à savoir 10-6M pour le 25- hydroxycholestérol. 20 'TABLEAU VIII - 20'- Concentrations ' i'M)'requises pour un,e inhibition a 50% de la synthsse de stérols. Cultures de Cultures - cellules L primair.s de cellules du 25 fi 25a-Cholest-8(14)-én-3e-ol-15-one 0X1 oie40 (' 5a-Cholest-8(14)-én-3a,158-diol 18 . 103 / 5a-Cholest-8(14)-Ne3g,i15-diol 37 31;0 30 5î-Cholest-8(14)-eè438;7Z,15Z-tiol 51 4/8. I ~ ~ ~ ~ ~ 30~~~~~~~~~~~04 5a-Cholest-8(14)-et1-3c0-ol-p5-one . . 05.. 3_-Hémisuccinoyloxy-5c-chôlest-8(14)-en-15-one 3}2 30-Hexadécanoyloxy-5ct-cholest-8(14)-en-15-one >16 35 5cL,14e-Cholest-7-ènL33,15-diol 1 25 5,14_-Cholest-7-_n%3$,15a-diol 32 7;5 5c,14S-Cholest-7-en-15i-ol-3-one 025 - 40 ~7+~ ~2485021 Cultures de Cultures cellules L primaires cellules du foie ~5 ;~5c,14S-Cholest-7-ern-15cL-ol-3-one 2,0 14a-Methyl-5c-cholest-7-en-3e-ol-15-one 0X3 415 14a@-Méthyl-5~-cholest-7-enk-38,15C-diol 0. 5 --- ~10 14a-Methyl-5!-cholest-7-enf3e,15a-diol 0,3 1/8 3e-Hlthoxy-14a-méthyl-5a-cholest-7-én-15-one20r0 --- 3 B-Methoxy-14a-methyl-5a-cholest-7-eén-.15 B-ol1,4 3,5 C . 3B-M~thoxy-14"-methyl-5a-cholest-7-en-15a-ol 0t3 lt9 ( . 0. , 15 14*-Ethyl-5~-cholest-7-e~3$,15 -diol 0,4 0, 8 14a-Ethyl-5a-cholest-7-&è3B,15a-diol 0,05 0, 06 20 14a-Ethyl-5a-cholest-7-edn-3 -ol-15-one 0r3 2,1 3e-Ethoxy-14cL-ethyl-5cL-cholest-7-eé--15-olOr,7-' 4/3 38-Ethoxy-14act-ethyl-5a-cholest-7-en-15-one>22tO --14acL-Ethyl-5"-cholest-7-en-15a-ol-3-one < Or1* --14cL-Ethyl-5a-cholest-7-én-3a-ol-15-one < 0,1' - 3 --Hexadécanoyloxy-14cLa-ethyl-5a-cholest-7- en-15a-ol 7,0 3 -Hexadécanoyloxy-14et-Ethyl-5a-cholest-7- 30 - en-15 -ol > 15,0o 3O-Acétoxy-14 -,thyl-5a-cholest-7-n-15e-ol 0,03 35 14_-n-Propyl-5-cno les t-7-e-3, 15.5-diol 4,1 - 14a-n-Propyl-5a-cholest-7-e~3e,15=-diolI 11 -14c-n-Propyl-5a-cholest-7-en-38-ol-15-one 34 --- 40 ~7q~ ~2485021 Cultures de Cultures celfules L primaires de cellules du foie - 5 14a-n-Butyl-5a-cholest-7-èn-36,15a-di l 5* --14aO-n-Butyl-5a-cholest-7-èe43C,15e-dioL 4 4 --14a-n--Butyl-5a-choiest-7-en-3$-ol-15-one 83 -- 10 *une inhibition essentieilement de 100% a été observée à cette concentra- tion 15 -' EXeêpIe 45 5 Abaissement des teneurs- en HMG-CoA réductase dans les cellu-20 les par les stérols '15-oxyg-énés On a également testé les stérols 15-oxygénés pour leurs ef- fets sur l'activité et/ou les teneurs en enzyme U14G-CoA réductase (3-hydroxy-3-méthylglutaryl coenzymne A réductase) dans les cellu-' les L et dans les cellules de foie. Comme mentionné ci-deMus, 25 cette enzyme catalyse la réduction de la 3-hydroxy-3-méthylgluta- ryl coenzyme A en donnant l'acide mévalonique qui est un intermé~-- diaire essentiel dans la biosynthèse des stérols et d'un certain nombre d'autres composés essentiels des cellules. En utilisant la technique décrite par Kandutsch et Chen, dans 30 l'article cité dans l'exemple précédent, les concentrations de divers stérols 15-oxygénés nécessaires pour abaisser les taux d'ac- tivité de la HMG-CoA réductase de 50 % ont été déterminées dans les cellules des cultures suivantes : cultures de cellule et cultures primaires de cellules de foie. Les résultats de ces es- 35 sais sont indiqués dans le Tableau IX. 35~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ 40 2485021 .75 TABLEAU IX Concentrations ( M) Requises pour une Réduction de 50 % de l'Activité de la HMG-CoA réductase dans : Cultures Cultures. Primaires '-.~~~ dZ]~~ae Cellu- de cellules du Foie lesL 5c-Cholast-8 (14)-en-3 -ol-15-one 5a-Cholest-8 (14) -e~38,15 -diol 5"t-Cholest-8 (14)- 4n%3e, 7Z,l5-triol 5=,14{e-Cholest-7-~ez/-35,15$-diol 5c, 14$-Cnolest-7-4e3 B,15e-dio1 14c-Méthyl-5c-cholest-7-en-38-ol-15-one 14c-Héthyl-5--cholest-7-e3$8,15e-diol 14-HMéthyl-5~-cholest-7-~-3e,15"-dio1l 3 B-M~éthoxy-14~-methyl-5"-cholest--7-e6-15$-oI 3ei-Méthoxy-14ct-methyl-5c-cholest-7-en-15c-ol 3$-Acétoxy-14a-ethyl-5a-cholest-7-é'n-15-ol1 14--Ethyl-5=-cholest-7-en-3 -ol-15-one 3B-HRmisuccinoyloxy-5c.-cholest-8 (14) -n-15-oni 013 215 19 475 6 7 023 10732 0X13 O; 13 179 e 3;0 4O 16;1 18;0 . 6.>0 - 2)8 473 2;0' 3)5 1,6 2>1 i. On peut voir par une comparaison des valeurs du Tableau IX 30 avec les valeurs du Tableau VIII qu'avec de nombreux, mais pas touE les composés, les concentrations requises pour engendrer une réduction de 50 % du taux d'activité enzymatique de la HMG-CoA réductase dans les cellules ont été très semblables aux concentra- tions requises pour que les mêmes composés entraînent une inhibi- 35 tion à 50 % de la biosynthèse des stérols. 40 5 10 C, 15 20 25 I 2485021 Exemple '46

On a procédé a une autre expérimentation en suivant essen- t4el tement le protocole de l'exemple 43, dans laquelle on a in- C%%vP'ré la 5c-cholest-8(14)-én-3~-ol-15-one à la ration exemote 5 de ,'holestérol librement accessible en elle-même au premier grou- Pu dl'animaux, à savoir le produit Cholesterol Free Test Diet à U'%~ concentration de 0,2 %. A l'origine de la période expérimentale, les valeurs moyen- ` nf du poids du corps (g) (E écart type par rapport à la moyenne) 10 dea trois groupes d'anixaux -étaient les suivantes : Ad libitum - 141,2 + 6,6 Cétone - 152,3 + 5,5 Apparié - i53,2 + 6,4 A l'origine de la période expérimentale, les concentrations 15 Sei`ques moyennes de cholestérol (mg par 100 ml de sérum écart P~' rapport à la moyenne) des trois groupes d'animaux étaient les Svtanrtes : Ad libitum - 74,3 + 3,9 Cétone - 80,5 + 2,8 20 ~20 Apparié 91,4 + 3,6 Comme on peut ainsi le voir, les groupes de cette expérimen- te tion particulière n'étaient particulièrement bien assortis, no- t'mnent en ce qui concernait les concentrations sériques moyennes de cholestérol initiales. Malgré ce fait, le 5"-cholest-8(14)-én- 25- 25- i'n-3~-o0 administré dans la ration a eu un effet prononcé sur la concentration sérique de cholestérol. Les résultats de cette expérimentation sont présentés dans 1 'ableau X. Comme le montre ce tableau, le taux sérique moyen dé Cholestérol (mg par 100 ml de sérum) chez les rats recevant la dt30 d.de 0,2 %. de 54-cholest-8(14-én-3p-ol-15-one dans. la ration, rs~t trouvé abaissé d'une valeur initiale de 80,5 à une valeur d 73,2 le 4ème jour, 32,2 le 7ème jour et 30,3 le 9ème jour. Le taux sérique moyen de cholestérol chez le groupe "Ad libitum" s'est ~;ï6 . très légèrement au 3ème jour, mais restait essentiellement 35 i%"`h-ngé pendant toute la durée de l'expérimentation. Toutefois, Cd1. cette expérimentation particulière, la concentration sérique t'Yotnne de cholestérol dans le groupe "Apparié", ne restait pas i""l'-ange pendant toute la durée de l'expérience. La concentration sm~ boue du cholestérol a chuté d'une valeur initiale de 91,t a 640 au 7ème jour et à 55,1 au 9ème jour, vraisemblablement par 2485021 suite de la restriction prononcée de nourriture dans cette expé-- rience. TABLEAU 10 - CONCENTRATION SERIQUE DE CHOLESTEROL (mg par 100 ml) - ,,Jour Ad.libitum Cétone Apparié 0 74,3 + 3,9 80,5 + 2,8 91,4 + 3,6 4 80,1 + 3,9 73,2 + 3,0 91,8 + 6,0 7 81,2 + 3,2 32,2 + 5,9 62,9 + 4,5 9 81,8 + 1,6 30,3 + 6,2 55,1 + 6,5 10 Les résultats. des taux sériques de cholestérol chez les trois groupes, sont présentés en pourcentages de la valeur du taui initial (jour 0) chez les rats individuels après 4, 7 et 9 jours, dans le Tableau XI. *TABEAU XI ~15 .-TAUX SERIQUES DE.-CHOLESTEROL-- POURCENTAGE DES . - , TAUX INITIAUX QRE.Z LES. RATS INDIVIDUELS Jour Ad libitum Cétone Apparié 4 109,9 + 6,1 91,6 + 4,3 101,0 + 4,1 7 111,1 + 7;4 40,6 + 7,9 70,2 + 5,3 20 9 111,9 ± 6,0 37,9 -+ 8,8 60,9 + 8,0 Les variations..des .poids moyens du corps des rats des trois groupes au cours de l'étude, sont représentées dans le Tableau XII. La valeur moyenne pour le groupe "'Ad libitum" s'est accrue de 141,2 g au début de l'expérience a 178,2 g a la fin de celle- 25 ci. La valeur moyenne pour le groupe?.Cétone" s'est abaissée d'ủnE 25 valeur initiale-de 152,3 g à 122,3 g à la fin de l'expérience. La valeur moyenne du groupe "Apparié" s'-est abaissée de façon sembla- ble d'une valeur initiale de 15-3,2- g .--une valeur de.114,4 g à la fin de l'expérience. 30 / 35./ 40 - 6 * I..OZI 6 1C ; 9/LZI -LI9 ;_ I/úEI IA I .fiL :F1S'i{Sl 'L91. 'E1P 9/.L ;, <E 9 -L :- 6Z T 0 18 Z ILtI I 9 ; Z E L 8/ úJZZt z ú: ! zi t ú ; L 0ci ItS ; tlOú lS s LETú g ; O'7ú6' 8 19 r 0t6ú1 6t9 T*z4 7 ú- v 4, E1ú SIS; ú'Zç1 8a z 8L1 . ICL T 919 -T- 9t9 ; el i I- 8L '9(L9 - 9 '9 tF c 'LLT f[:LI IV 191. Z/I g ú9T .0(lEç1 L 681T ç 1útT z 1117 A. Z (b) sdzoo np SPTod IIX naiavLI zO.58tZ i 11 ti 11 8 L- 9 :- Z '1 I. O" .. .. .1 Co.r.e montré par les valeurs du Tableau XIII, la tion de nourriture par les rats absorbant la ration à cétone a été nettement inférieure à celle des rats du "ad libituz". - 5 TABLEAU XIII CONSOMMATION DE NOURRITURE QUOTIDIENNE (g) Jour Ad libitum- Cétone Apparié 10 O- 12r4 + 113- 712 016 13t6 + 1,4 1 13,2 114 4,4 111 3,8 0,9 2 1i40 __'16 4t8 0,4 43 0,4 15 *15 3 165 0 r4 4,8 0r2 4/5 - 014 4 15,1 -08 5r5 014 4t5 014 5 16,7 015 55 01,3- 53 014 6 17t8 0;3 54 0O2 5,4 013 20 7 1 1:a _ 0. 5.1 0.2 2485021 consor.-'ia- 0,2 % de groupe -.-Au 8ême jour de l'expérimentation, on a observé que 4 parmi les rats du groupe "cétone" ont eu la diarrhée. L'un d'eux est - mort le -jour suivant. Deux autres rats de ce groupe ont présenté des selles liquides au 9ème jour. 30 35 40 I rts --X -- - -I- I8 15,9 + 0,7 4t3 + 06 4X9 0,3. ,,,. , , , ; 2485021 Exemple 47 On a procédé à une autre expérience de gavage avec introduc- - tion de--53-eholest-8 (14)--én-3 -ol-15-one dans -la ration alimen- taire, en .utilisant des souris agées de 7 semaines. On a adminis-

5 .... tré la cétone à.5_souris,.à la-dose de 0,2 % dans une ration essentiellement exempté-dé stérols d'origine animale pendant 8- - * jours. On a administré à.5 souris témoins appariées, la même ra- tion à laquelle n'était toutefois pas ajoutée de cétone. La con- .- - .centration moyenne de cholestérol dans. le plasma - dans le groupe - '1D --"Cétone" après l',experienca qui a duré 8 jours, était de 35,8. (:- 3,6, écart type par rapport à la moyenne) mg par 100 ml de plasmz . tandis que la valeur correspondante pour le groupe "Apparié" était - le 114,4 C: -3,4. é6art -type' par raport à -la moyenne>-. Il y a.- - -lieu-de remarquer qu'il est'--très difficile de réaliser chez des---- - 15-- -souris -de--cetage,. une-alimentation appariée très - étroitement as- -sortie par suite des faibles.quantités.de nourriture qui sont con- sommées et qui peuvent étre'déterminées-avec précision dans de telles expériences. Le groupe. "Cétone" a présenté pendant la du- -- ..- rée - de.l-' étude une-diminution moyenne du poids -du corps de 5, 9 -g- 20 (+ 0,1 écart..typ.e par-rapport à la-moyenne) Le, groupe témoin -- ' ."Apparié" a présenté une..diminution-moyenne du poids du corps de ... 2,4 g ( ±0,1Ol, écart type-par rapport à la moyenne). -- Chez deux autres stérols oxygénés,.à savoir la 25-hydroxy- cholestérol et 7-cétocholestérol, dont on a démontré une forte- 25 action inhibitrice sur la. synthès, ~des -stérols'dans les cellules, ^ ~ L en culture et dans des cultures primaires de cellules de foie - À -de souris, on n'a trouvé aucun effet d'abaissement notable du -- cholestérol du plasma chez la souris (A.A. Kandutsch, HE.-J.- Heini-- ger, et H.W. Chen, Biochimica et Biophysica Acta, 486, 260-272, 30 1977. B-ien.que la présente-invention-ait été décrite en rapport- - avec des-modes de mise-en oeuvre préférés, il est entendu que l'on peut y apporter diverses modifications et variantes sans toutefois s'écarter du cadre de l'esprit de-ladite invention. - 35 40 2485021

Claims (1)

1. REVENDICATIONS

   A titre de produits industriels nouveaux, les stérols 15 oxygé- nés de formule : 5 10 ~~~~~~R3 R2 R1 1 dans laquelle : 15 la structure du noyau de base peut être saturée ou insaturée, R1 est -OH, =O, -OR4, --CR5, OC(CE2)n COH, un groupement sulfate ou un sel de Mg, Na-ou K d'un groupement sulfate, 20 R2 est -OH, =0 cu -OR5, R3 est inexistant quand il y a une double liaison entre les atomes de carbone 8 et 14 ou représentesH, H H ou un groupement oS-alkyle en C1 à C6, R4 est un groupement alkyle en C1 à C6, 25 R5 est un groupement aliphatique en C1 à C20, n est un nombre entier de 2 à 6, et lesdits substituants R1 et R2, autres que lorsqu'ils sont =O, sont soit en position < soit en position 0 ; R2 ne pouvant être -OH ou =0 quand il existe une dcuble liaison 30 entre les atomes de carbone 8 et 14 et R1 représente -OH; R1 ne pouvant être -OLCH3 ou =0 quand il y a une dcuble liaison entre les atomes de carbone 8 et 14 et R2 représente =0; R2 ne pouvant représenter =0 cu -OH quand R3 est o-méthyle et 35 R1 est -OCH3 ou -OH; l'atome de carbone en 7 ne pouvant porter un groupe -OH quand R1 et R2 sont -OH; R1 et R2 ne pouvant représenter tous les deux -OCE3 ou -OH quand le stérol est satu- ré et R3 =H; et R2 ne pouvant représenter -OH quand il existe une double liaison entre les atomes de carbone 7 et 8, R1 représente -OH et R3 = H.