DE2858726C2 - Arzneimittel zur senkung des serumcholesterinspiegels - Google Patents
Arzneimittel zur senkung des serumcholesterinspiegelsInfo
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Description
Die vorliegende Erfindung betrifft Arzneimittel zur Senkung
des Serumcholesterinspiegels, enthaltend neben einem
üblichen pharmazeutischen Trägerstoff ein 15-oxidiertes
Sterol.
Die Unterdrückung der Biosynthese von Sterolen sowohl in vivo
als auch in vitro ist häufig erwünscht. Zum Beispiel ist es
häufig erwünscht, die Bildung des Sterins Cholesterin in tierischen
und menschlichen Organismen zu unterdrücken,
wodurch der Serumcholesterinspiegel erniedrigt
wird.
Die Konzentration im Blutserum ist mit einer
Anzahl von Krankheiten, insbesondere Arteriosklerose, korreliert.
Die Arteriosklerose ist ein Zustand, der durch die
Bildung von Plaques im Arteriensystem gekennzeichnet ist.
Cholesterin und Cholesterolester sind die Hauptkomponenten dieser
Plaques. Obwohl die Ursache dieser Krankheit noch nicht vollständig
bekannt ist, hat es den Anschein, daß erhöhte Serumcholesterinspiegel
zu der Entwicklung und dem Fortschreiten der
Arteriosklerose beitragen.
Cholesterin leitet sich in Tieren von zwei Quellen ab: die erste
ist die Aufnahme und Absorption des Nahrungs-Cholesterins,
und die zweite ist die Biosynthese von Cholesterin aus Acetat
durch Zellen von zahlreichen Körperorganen, wie Leber, Eingeweide
und Haut. Die Biosynthese von Cholesterin und anderen
Sterolen aus Acetat im Körper umfaßt eine komplexe Reaktionsfolge;
eine Stufe davon ist die Umwandlung von 3-Hydroxy-3-
methylglutaryl-Coenzym A in Mevalonsäure. Diese Reaktion wird
als ein Hauptregulationspunkt in der normalen Biosynthese von
Cholesterin in Zellen angesehen. Wenn die Biosynthese von Mevalonsäure
in vivo gehemmt werden kann, wird die Produktion von
Sterolen verringert; hierdurch können die Serumcholesterinspiegel
gesenkt werden.
In der GB-PS 8 60 303 werden bestimmte Aryloxycarbonsäureester,
wie der Methylester von 2-(4′Chlorphenoxy)-isobuttersäure zur
Senkung der Cholesterinspiegel beschrieben. Obwohl diese Verbindung
eine beträchtliche Bedeutung bei der klinischen Humanbehandlung
erlangt hat, ist sie aus zahlreichen Gründen doch
nicht so wirksam wie dies erwünscht ist. Dementsprechend sind
wirksamere Verbindungen zur Senkung der Cholesterinspiegel von
großem Interesse und großer Bedeutung.
Tetrahedron Letters 49, S. 4401-4404 (1976) beschreibt
5α,14β-Cholest-7-en-3β, 15-diole, von denen gezeigt wurde,
daß sie potente Inhibitoren der Sterin-Biosynthese sind.
Diese Angaben beziehen sich jedoch auf die Inhibierung
der Sterin-Biosynthese in Zellkultursystemen.
Die Inhibierung der Sterin-Biosynthese in L-Zellen und
in primären Kulturen von Leberzellen durch eine Reihe
anderer 15-oxidierter Sterole wird weiterhin in Fed.
Proc. A. Soc. Biol. 35 (1976), S. 1697 beschrieben.
Bei zwei anderen oxidierten Sterolen, nämlich 25-Hydroxycholesterin
und 7-Ketocholesterin, von denen gezeigt wurde, daß sie
eine starke Hemmwirkung auf die Sterolsynthese in L-Zellen in
Kultur und in primären Kulturen von Mäuseleberzellen haben,
wurde gefunden, daß diese Verbindungen keine signifikante Plasmacholesterin-senkende
Wirkung in Mäusen haben (A. A. Kandutsch,
H.-J. Heiniger und H. W. Chen, Biochimica et Biophysica Acta,
Bd. 486, S. 260-272, 1977).
Im Rahmen der vorliegenden Erfindung wurde gefunden, daß
bestimmte 15-oxidierte Sterole, von denen zahlreiche
neue Verbindungen sind, die Biosynthese von Mevalonsäure
und Sterolen wirksam hemmen. Von der Biosynthese der
Nevalonsäure leiten sich eine Anzahl erwünschter Wirkungen
ab, einschließlich der Unterdrückung der Cholesterinbildung
in Tieren, wodurch die Serumcholesterinspiegel gesenkt
werden können.
Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein Arzneimittel
zur Senkung des Serumcholesterinspiegels, enthaltend neben
einem üblichen pharmazeutischen Trägerstoff als Wirkstoff
ein 15-oxidiertes Sterol der allgemeinen Formel
in der bedeuten:
R₁ -OH, =O, -OR₄,
R₁ -OH, =O, -OR₄,
eine Sulfatgruppe oder
ein Mg-, Na- oder K-Salz einer Sulfatgruppe;
R₂ -OH, =O oder
R₂ -OH, =O oder
R₃ αH, βH oder eine α-C₁- bis C₆-Alkylgruppe;
R₄ eine C₁- bis C₆-Alkylgruppe; vorzugsweise eine C₁- bis C₃-Alkylgruppe;
R₅ eine C₁- bis C₂₀-aliphatische Gruppe, eine substituierte C₁- bis C₂₀-aliphatische Gruppe oder eine Phenylgruppe; und
n eine ganze Zahl von 2 bis 6, vorzugsweise von 2 bis 4,
wobei, falls R₁ -OH bedeutet, R₂ nicht -OH ist und die bezüglich den R₁- und R₂-Substituenten möglichen α- oder β-steroisomeren Formen eingeschlossen sind.
R₄ eine C₁- bis C₆-Alkylgruppe; vorzugsweise eine C₁- bis C₃-Alkylgruppe;
R₅ eine C₁- bis C₂₀-aliphatische Gruppe, eine substituierte C₁- bis C₂₀-aliphatische Gruppe oder eine Phenylgruppe; und
n eine ganze Zahl von 2 bis 6, vorzugsweise von 2 bis 4,
wobei, falls R₁ -OH bedeutet, R₂ nicht -OH ist und die bezüglich den R₁- und R₂-Substituenten möglichen α- oder β-steroisomeren Formen eingeschlossen sind.
Die erfindungsgemäß eingesetzten 15-oxidierten Sterole können in Abhängigkeit
von dem erwünschten speziellen Sterol nach verschiedenen
Verfahren hergestellt werden. Geeignete Zwischenprodukte
zur Herstellung der Sterole sind 3β-Benzoyl
oxyverbindungen der allgemeinen Formel
Solche 3β-Benzoyloxyverbindungen können durch Hydrolyse in
die entsprechenden 3-Hydroxyverbindungen umgewandelt werden.
Die Reduktion, zum Beispiel mit Lithiumaluminiumhydrid, ergibt
3β,15-Diole.
Ein weiteres geeignetes Zwischenprodukt zur Herstellung der erfindungsgemäß
eingesetzten 15-oxidierten Sterole sind 3β-Benzoyloxy, 14α,
15α-epoxyverbindungen der allgemeinen Formel
Diese Verbindungen können mit einem Reduktionsmittel zu den
entsprechenden 3β,15α-Diolen umgesetzt werden.
Die erfindungsgemäß eingesetzten Sterole können
in Verabreichungseinheitsformen in
Verbindung mit üblichen pharmazeutischen Trägerstoffen verabreicht
werden. Geeignete Verabreichungseinheitsformen hängen
etwa von der speziellen Wirkung ab, die mit den Sterolen erreicht
werden soll.
Typische Verabreichungseinheitsformen umfassen orale Verabreichungsformen,
wie Tabletten, Kapseln, Pulver, Granulate oder
oral verabreichbare Lösungen. Andere Verabreichungseinheitsformen
umfassen sublinguale und bukkale Verabreichungsformen,
äußerlich anwendbare Verabreichungsformen und parenterale Verabreichungsformen
zu subcutanen, intramuskulären oder intravenösen
Verabreichung.
Gewünschtenfalls können die 15-oxidierten Sterole in einfacher
Weise zu Dosiseinheitsformen verarbeitet werden, die sich für
die besondere Verabreichungsart eignen, wobei die Menge des
aktiven Wirkstoffs jeder Dosiseinheit so gewählt, daß eine
oder mehrere Einheiten für jede therapeutische Verabreichung
erforderlich sind. Jede Dosiseinheit enthält vorzugsweise etwa
5 bis etwa 1000 mg einer oder mehrerer aktiven 15-oxidierten
Sterolverbindungen.
Die Dosis des aktiven 15-oxidierten Sterols, das zur Erzielung
einer erwünschten Wirkung erforderlich ist, variiert über einen
weiten Bereich und hängt etwa von der Art des betreffenden verabreichten
15-oxidierten Sterols, der erwünschten Wirkung und
der Verabreichungsart ab. Typischerweise beträgt eine geeignete
Dosis etwa 0,1 bis etwa 140 mg aktives 15-oxidiertes Sterol pro
Kilogramm Körpergewicht und Tag. Tpyischerweise wird eine geeignete
ein- bis viermal täglich verabreicht.
Geeignete pharmazeutische Träger- und Hilfsstoffe, die zur Formulierung
von Verabreichungseinheiten verwendet werden können,
sind bekannt. Wenn zum Beispiel das 15-oxidierte Sterol in Form
einer festen Zusammensetzung, wie einer Tablette, verabreicht
werden soll, kann das aktive 15-oxidierte Sterol mit einem pharmazeutischen
Träger, wie Gelatine, Stärke, Laktose, Magnesiumstearat,
Talkum oder Gummiarabicum vermischt werden. Tabletten
können mit Sucrose oder mit anderen Verbindungen nach
bekannten Methoden überzogen werden, um den Zerfall im Magen zu
verzögern und dadurch eine verlängerte Wirkung über einen verlängerten
Zeitraum zu gewährleisten.
Kapsel-Zubereitungen können durch Vermischen des aktiven 15-oxidierten
Sterols mit einem inerten pharmakologisch verträglichen
Füllstoff oder Verdünnungsmittel und Einfüllen des erhaltenen
Gemisches in eine harte Gelatinekapsel oder in eine weiche Kapsel
erhalten werden. Eine Sirup- oder Elixier-Zubereitung kann
die aktiven 15-oxidierten Sterole zusammen mit einem Süßstoff,
wie Sucrose, antiseptischen Verbindungen und/oder geeigneten
Färbemitteln enthalten.
Äußerlich anwendbare Zubereitungen können durch Vermischen
der aktiven 15-oxidierten Sterole mit geeigneten Salbengrundlagen
hergestellt werden. Typische Salbengrundlagen sind Polyvinylalkohol
oder wachsartige Polyätherenglycole oder andere
nichttoxische, lipophile Verbindungen oder Träger.
Eine parenteral verabreichbare Flüssigkeit ist herstellbar
durch Auflösen oder Suspendieren des aktiven Wirkstoffs in einer
sterilen Trägerflüssigkeit, wie Wasser oder Kochsalzlösung,
einem nicht-flüchtigen flüssigen Polyäthylenglycol oder einem
Öl pflanzlichen oder tierischen Ursprungs, wie Dorschleberöl oder
Olivenöl. Parenteral verabreichbare Flüssigkeiten können
vorteilhafterweise ebenfalls bekannte Gleitmittel, Bakterizide
und Fungizide, Tonizitätsanpassungsmittel, Lokalanästhetika
Stabilisatoren beinhalten.
Der Mechanismus, nach welchem die 15-oxidierten erfindungsgemäß
eingesetzten Sterole wirken, ist nicht vollständig bekannt. Es
ist jedoch gezeigt worden, daß die aktiven Verbindungen die
Biosynthese von Sterolen aus Acetat hemmen, jedoch nicht die
Biosynthese von Sterolen aus Mevalonsäure. Da Mevalonsäure ein
wesentliches Zwischenprodukt im biochemischen Syntheseweg, bei
welchem Sterole aus Acetaten gebildet werden, darstellt, ist es
klar, daß die 15-oxidierten Sterole die Mevalonsäurebildung
hemmen.
Es ist bekannt, daß eine Stufe in der Biosynthese von Sterolen
aus Acetat die Umwandlung von 3-Hydroxy-3-methylglutaryl-Coenzym A
in Mevalonsäure umfaßt. Die Geschwindigkeit dieser Reaktion
wird durch das Enzym HMG-CoA-Reduktase kontrolliert. Es wird
angenommen, daß die erfindungsgemäß verwendeten 15-oxidierten Sterole
durch eine gewisse Einwirkung auf die HMG-CoA-Reduktase wirken,
entweder durch Herabsetzen ihrer Aktivität oder durch Beschränken
ihrer Menge in dem System durch Zerstörung oder Unterdrückung
ihrer Bildung. Zellen, die sich dauernd teilen, wie Zellen
der Epidermis, des sich entwickelnden Gehirns, Vertiefungen der
Eingeweideschleimhaut und spontan entstehenden Tumoren, synthe
tisiertem Cholesterin in vivo mit relativ hohen Geschwindigkeiten;
Zellen in der Interphase, wie Zellen des Muskels und des
ausgewachsenen Gehirns tun dies nicht. Versuche mit Zellkulturen
zeigen, daß die Zellteilung in vitro ebenfalls eine Cholesterinsynthese
erfordert. Dementsprechend wirkt die Hemmung
der Cholesterinbildung durch Blockieren der Biosynthese von
Mevalonsäure auf die in vivo-Replikation von Zellen ein, die
sich normalerweise in einem Teilungsstadium befinden. Die Unterdrückung
der Cholesterinbildung durch das Blockieren der Biosynthese
von Mevalonsäure bewirkt natürlich auch die Senkung des
Serumcholesterinspiegels.
Die Beispiele erläutern die Erfindung. Insbesondere erläutern
die Beispiele weitere bevorzugte Ausführungsformen der vorliegenden
Erfindung, einschließlich bevorzugter Verfahren zur
Herstellung zahlreicher aktiver 15-oxidierter Sterole. Weiterhin
erläutern die Beispiele die Wirkung der 15-oxidierten Sterole
bezüglich der Hemmung der Sterolbiosynthese einschließlich der
in vivo-Hemmung bei Ratten mit einer daraus resultierenden
Senkung der Serumcholesterinspiegel.
Die Behandlung von 3β-Benzoyloxy-cholesta-5,7-dien mit HCl-Gas
in Cloroform nach der Methode von Knight et al.,
J. Biol. Chem., Band 241, S. 1502 (1966) ergab in 70-prozentiger
Ausbeute ein Produkt, das bei 148 bis 150°C schmolz und ein
Gemisch von zwei Isomeren enthielt. Die NMR-Analyse ergab, daß
die Probe annähernd 73% 3β-Benzoyloxy-5α-cholesta-7,14-dien
enthielt.
Dieses Produkt (75 g; 148 mMol) wurde in 3000 ml wasserfreiem
Äther unter leichtem Erwärmen auf einem Dampfbad gelöst. Die
Lösung wurde in ein Eisbad verbracht und auf 18°C abgekühlt.
Zu dieser Zeit wurde eine Lösung von 63,6 mg m-Chlorperbenzoesäure
in 400 ml Äther zugegeben. Das Gemisch wurde gerührt und
5 Stunden bei 0°C und anschließend 24 Stunden bei -15°C stehengelassen.
Das ausgefallene Produkt wurde auf einem Filter
gesammelt, mit kaltem Äther gewaschen und aus Aceton-Wasser
umkristallisiert, wobei 3β-Benzoyloxy-14α,15α-epoxy-5α-cholest-
7-en (40,2 g; 52% Ausbeute) mit der Strukturformel
erhalten wurde.
Die Struktur dieser Verbindung wurde durch IR-, NMR- und
MS-Analysen bestätigt. Die Verbindung zeigte eine einzige
Komponente bei der dünnschichtchromatographischen Analyse
(TLC) auf Silicagel G-Platten (Lösungsmittelsystem: 35%
Äthylacetat in Chloroform und 10% Äther in Benzol).
Das 3β-Benzoyloxy-14α,15α-epoxy-5-α-cholest-7-en(2,0 g;
3,96 mMol) wurde in 20 ml wasserfreiem Tetrahydrofuran gelöst.
Es wurden 220 ml wasserfreier Äther zugegeben, und die Lösung
wurde auf 0°C abgekühlt. 20 ml Bortrifluorid-Ätherat wurden
unter Rühren langsam zugegeben. Nach 30-minütigem Stehen bei
0°C unter gelegentlichem Rühren wurde das Gemisch in Wasser
gegossen und intensiv mit Äther extrahiert. Die vereinigten
Extrate werden über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet,
filtriert und unter vermindertem Druck zur Trockne eingedampft.
Der so erhaltene Rückstand (1,96 g) wurde auf einer Silicagel-Säure
unter Verwendung ansteigender Konzentration (0,5, 7,5 und
10%) von Äther in Benzol als Elutionsmittel chromatographiert.
Es wurden 24-ml-Fraktionen (16 min pro Fraktion) gesammelt.
Die Inhalte der Fraktionen 70 bis 100 wurden vereinigt, und
der nach dem Eindampfen des Lösungsmittels erhaltene Rückstand
wurde aus Aceton-Wasser umkristallisiert, wobei 3β-Benzoyloxy-
5α,14β-cholest-7-en-15-on (860 mg, 43% Ausbeute) erhalten
wurden. Die Struktur dieses Zwischenprodukts wurde durch IR-,
NMR- und MS-Analysen bestätigt. Die Verbindung zeigte eine
einzige Komponente bei TLC-Analysen auf Silicagel G-Platten
(Lösungsmittelsysteme: 35% Äthylacetat in Chloroform, 10%
Äther in Benzol und Benzol).
2,33 g 3β-Benzoyloxy-5α,14α-cholest-7-en-15-on (4,62 mMol)
wurden in 150 ml wasserfreiem Äther gelöst und mit Lithium
aluminiumhydrid (2,80 g; 73,9 mMol) versetzt. Das so erhaltene
Gemisch wurde eine Stunde bei 25°C gerührt. Nach dem Abkühlen
des Gemisches auf 0°C wurde zur Zersetzung des überschüssigen
Hydrids vorsichtig Eis zugegeben. Das Gemisch wurde
in eine 0,34 m wäßrige Natriumchloridlösung gegossen und
gründlich mit Äther, der 5% Methylenchlorid enthielt, extrahiert.
Die vereinigten Extrate wurden über wasserfreiem
Magnesiumsulfat getrocknet und unter Verwendung von Druck zur
Trockne eingedampft, wobei 1,80 g eines weißen Feststoffes erhalten
wurde.
Die präparativen Dünnschichtchromatographie auf Silicagel PF
(1 mm Dicke; Lösungsmittel: 20% Äther in Benzol; zweifache
Entwicklung) zeigte zwei Komponenten (Rf 0,22 und 0,34). Die
Komponente mit Rf 0,22 wurde mit warmem Chloroform extrahiert,
filtriert und aus Aceton-Wasser umkristallisiert, wobei 5α,14β-
Cholest-7-en-3β,15β-diol (1,51 g; 81% Ausbeute) erhalten
wurde.
Die Komponente mit Rf 0,34 aus der präparativen Dünnschichtchromatographie
wurde mit warmem Chloroform eluiert und nach
Kristallisation aus Aceton-Wasser wurde 5α,14β-cholest-7-en-
3β,15α-diol (167 mg; 9% Ausbeute) erhalten.
Beide Verbindungen zeigten eine einzige Komponente bei den
TLC-Analysen auf Silicagel G-Platten (Lösungsmittelsysteme:
35% Äthylacetat in Chloroform und 10% Äther in Benzol). Die
Struktur der beiden Verbindungen wurde röntgenkristallographische,
IR-, NMR- und MS-Analysen bestätigte und entsprach der
Formel
3β-Benzoyloxy-14α-methyl-5α-cholest-7-en-15-on wurde nach der
Methode von Knight et al., J. Biol. Chem., Bd. 241, Seite 1502
(1966) hergestellt. Zu 1,00 g (1,92 mMol) dieses Produkts in
190 ml Äthanol wurden 4,0 g Kaliumhydroxid in 5 ml Wasser gegeben.
Das erhaltene Gemisch wurde 1,5 Stunden unter Rückfluß
unter Stickstoff erhitzt. Nach dem Einengen des Volumens auf
etwa die Hälfte des ursprünglichen Volumens wurde das Gemisch
in 1000 ml einer 0,86-m-Natriumchloridlösung gegossen und gründlich
mit 5% Methylenchlorid enthaltendem Äther extrahiert. Die
vereinigten Ätherextrakte wurden über wasserfreiem Magnesiumsulfat
getrocknet und unter vermindertem Druck zur Trockne
eingedampft. Der erhaltene Rückstand wurde aus Methanol-Wasser
kristallisiert, wobei 14α-Methyl-5α-cholest-7-en-3β-ol-15-on
(0,760 g; 95% Ausbeute) der Formel
erhalten wurde.
Die Struktur der Verbindung wurde durch IR-, NMR- und MS-Analysen
bestätigt. Die Verbindung zeigte eine einzige Komponente
bei den dünnschichtchromatographischen Analysen auf
Silicagel-G-Platten (Lösungsmittelsysteme: 10% Äther in Benzol,
35% Äthylacetat in Chloroform und 10% Äther in Hexan) und
bei den Gas-Flüssigkeits-chromatographischen Analysen auf
3% OV-1- und 3% OV-17-Säulen (Säulentemperatur 270°C).
3β-Benzoyloxy-14α-methyl-cholest-7-en-15-on wurden nach der
Methode von Knight et al., J. Biol., Chem., Band 241, S. 1502
(1966) hergestellt. 100 mg dieses Produkts wurden mit 200 mg
Lithiumaluminiumhydrid bei Raumtemperatur während 12 Stunden
reduziert. Das überschüssige Reagens wurde durch Zugabe von Äthylacetat
zersetzt. Dann wurde Wasser zugegeben, und das erhaltene
Gemisch wurde mit Äther extrahiert.
Der nach dem Eindampfen des Lösungsmittels erhaltene ölige
Rückstand wurde auf einer aktivierten Kieselsäure-Säule chromatographiert.
Unter Verwendung von Benzol-Äther (90 : 10) als
Flutionsmittel wurden Fraktionen von jeweils 16 ml gesammelt.
26 mg eines Diols, als Diol A bezeichnet, wurden in den Fraktionen
9 bis 13 eluiert und aus Äthylacetat umkristallisiert,
wobei 18 mg Produkt erhalten wurden. 46 mg eines zweiten Diols,
als Diol B bezeichnet, wurden in den Fraktionen 18 bis 30
eluiert und aus Äthylacetat umkristallisiert, wobei 26 mg
Produkt erhalten wurden.
Die Elementar-, MS-, NMR- und die röntgenkristallographische
Analyse bestätigten, daß die Diole die nachstehende Strukturformel
hatten, wobei die 15-Hydroxygruppe des Diols A in der
β-Position und die 15-Hydroxygruppe des Diols B in der α-Position
war:
5α-cholest-8(14)-en-3β-ol-15-on (10,0 g; 24,9 mMol)
wurden zu einer gerührten Lösung von Kalium-t-butoxid,
hergestellt durch Auflösen von 17,3 g Kaliummetall in
819 ml t-Butylalkohol, zugegeben. 127,4 ml Äthyljodid wurden
auf einmal zu dem Reaktionsgemisch gegeben, und das Rühren wurde
1,75 Stunden fortgesetzt. Das Volumen des Reaktionsgemisches
wurde auf etwa 1/3 des ursprünglichen Volumens unter vermindertem
Druck reduziert. Wasser wurde zugegeben, und das erhaltene
Gemisch wurde gründlich Mit Äther extrahiert. Die vereinigten
Extrakte wurden über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet
und unter vermindertem Druck zur Trockne eingedampft. Der erhaltene
Rückstand wurde der Mitteldruck-Flüssigkeitschromatographie
(0,413 MPa) unter Verwenden einer Silicagel-
(0,032 bis 0,063 mm)-Säule (100 cm×2,5 cm) unterworfen.
Unter Verwendung von 10% Äther in Benzol als Elutionsmittel
wurden Fraktionen von 20 ml (Durchflußrate: 12 ml pro
Minute) gesammelt.
Die Inhalte der Fraktionen 75 bis 88 wurden vereinigte und nach
Verdampfung des Lösungsmittels unter vermindertem Druck aus
Aceton-Wasser kristallisiert, wobei 14α-Äthyl-5α-cholest-7-en-
3β-ol-15-on (4,5 g; 42,2% Ausbeute) der Formel
erhalten wurde.
Die Struktur der Verbindung wurde durch IR-, NMR- und MS-Analysen
bestätigt. Die Verbindung zeigte eine einzige Komponente
bei den dünnschichtchromatographischen Analysen auf
Silicagel G-Platten unter Verwendung eines Lösungsmittelsystems
von 10% Äther in Benzol und 35% Äthylacetat in Chloroform und
bei den Gas-Flüssigkeits-chromatographischen Analysen auf 3%
OV-1- und 3% OV-17-Säulen (Säulentemperatur 250°C).
Die Inhalte der Fraktionen 25 bis 29 aus der Mitteldruck-
Silicagel-Säulenchromatographie wurden vereinigt und nach dem
Eindampfen des Lösungsmittels unter vermindertem Druck aus
Aceton-Wasser kristallisiert, wobei 3β-Äthoxy-14α-äthyl-5α-
cholest-7-en-15-on (2,1 g; 18,5% Ausbeute) mit der Strukturformel
erhalten wurde.
Die Struktur dieser Verbindung wurde durch IR-, NMR- und MS-
Analysen bestätigt. Die Verbindung zeigte eine einzige Komponente
bei den Dünnschicht- und Gas-Flüssigkeits-chromatographischen
Analysen unter Verwendung der vorstehend für
3β-Äthoxy-14α-äthyl-5α-cholest-7-en-15-on beschriebenen
Methoden.
Zu 14α-Äthyl-5α-cholest-7-en-3β-ol-15-on (2,0 g; 4,6 mMol),
hergestellt wie in Beispiel 4, in 300 ml Äther wurden Lithium
aluminiumhydrid (3,0 g; 79,1 mMol) zugegeben. Nach zweistündigem
Rühren bei Raumtemperatur wurde das Reaktionsgemisch
auf 0°C abgekühlt und Eis wurde vorsichtig zugegeben, um das
nicht umgesetzte Hydrid zu zersetzen. Das erhaltene Gemisch
wurde in eine 0,34 n Natriumchlorid-Lösung gegossen und gründlich
mit 5% Methylenchlorid enthaltendem Äther extrahiert.
Die vereinigten Ätherextrakte wurden über wasserfreiem Magnesiumsulfat
getrocknet und unter vermindertem Druck zur
Trockne eingedampft. Der Rückstand (1,92 g) wurde aus Aceton-
Wasser kristallisiert, wobei ein weißer Feststoff (1,89 g;
94,5% Ausbeute) erhalten wurde.
Das kristallisierte Produkt wurde der Mitteldruck-Flüssigkeits
chromatographie (0,689 MPa) unter Verwendung
einer Silicagel-(0,032 bis 0,063 mm)-Säule (118×1,5 cm)
unterworfen. Unter Verwendung von 10% Äther in Benzol als
Elutionsmittel wurden 20-ml-Fraktionen (Durchflußrate 5 ml
pro Minute) gesammelt. Die Inhalte der Fraktionen 54 bis 78
wurden vereinigt und nach Verdampfen des Lösungsmittels aus
Aceton-Wasser kristallisiert, wobei ein weißer Feststoff
(1,78 g; 89%) vom Fp. 171-173°C erhalten wurde. Dieses Produkt
schien ein Gemisch von 14α-Äthyl-5α-cholest-7-en-3β,15-diol
(70%) und 14α-Äthyl-5α-cholest-7-en-3β,15β-diol (30%)
zu sein.
Bei den dünnschichtchromatographischen Analysen auf Silicagel
G-Platten unter Verwendung von drei verschiedenen Lösungsmittelsystemen
(10% Äther in Benzol, 20% Äthylacetat in Petroläther
und 35% Äthylacetat in Chloroform) oder bei der Gas-Flüssigkeits-
Chromatographie der freien Sterole auf 3% OV-1- oder
3% OV-17-Säulen (Säulentemperatur 270°C) konnte keine Auflösung
der zwei Epimeren beobachtet werden.
Zu dem wie vorstehend beschriebenen erhaltenen Epimerengemisch
(2,00 g; 4,65 mMol) in 15 ml Pyridin wurden bei 15 ml Essigsäureanhydrid
zugegeben. Nach 24-stündigem Stehen bei Raumtemperatur
unter Stickstoff wurde das Gemisch in Wasser gegossen und
gründlich mit 5% Methylenchlorid enthaltendem Äther extrahiert.
Die vereinigten Ätherextrakte wurden nacheinander mit Wasser,
kalter, wäßriger HCl (5%), wäßriger Natriumcarbonat-Lösung
(5%) und Wasser gewaschen. Die erhaltene Ätherlösung wurde
über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und unter vermindertem
Druck zur Trockne eingedampft, wobei ein weißer Rückstand
(2,34 g) erhalten wurde.
Der weiße Rückstand, der zwei Hauptkomponenten und zwei Spurenkomponenten
bei der dünnschichtchromatographischen Analyse
auf einer Silicagel G-Platte (Lösungsmittel: Benzol) zeigt,
wurde der Mitteldruck-Flüssigkeitschromatographie (0,413 MPa)
unter Verwendung einer Silicagel-(0,032 bis
0,063 mm)-Säule (100 cm×2,5 cm) unterworfen. Unter Verwendung
von 1,25% Äther in Benzol als Elutionsmittel wurden 20-ml-
Fraktionen (Durchflußrate 5 ml pro Minute) gesammelt.
Die Inhalte der Fraktionen 41 bis 58 wurden vereinigt und nach
dem Verdampfen des Lösungsmittels aus Aceton-Wasser kristallisiert,
wobei Bis-3β,15α-acetoxy-14α-äthyl-5α-cholest-7-en
(1,31 g; 54,8% Ausbeute) der Formel
erhalten wurde.
Die Struktur der Verbindung wurde durch IR-, NMR- und MS-Analysen
bestätigt. Die Verbindung zeigte eine einzige Komponente
bei den dünnschichtchromatographischen Analysen auf
Silicagel G-Platten (Lösungsmittelsysteme: Benzol, 10% Äther
in Benzol, 10% Äther in Hexan und 35% Äthylacetat in Chloroform)
und bei den Gas-Flüssigkeits-chromatographischen Analysen
auf 3% OV-1- und 3% OV-17-Säulen (Säulentemperatur 270°C).
Die Inhalte der Fraktionen 72 bis 90 aus der Mitteldruck-
Flüssigkeitschromatographie wurden vereinigt und nach dem Verdampfen
des Lösungsmittel aus Aceton-Wasser kristallisiert, wobei
3β-Acetoxy-14α-äthyl-5α-cholest-7-en-15β-ol (0,46 g;
20,9% Ausbeute) der Strukturformel
erhalten wurde.
Die Struktur der Verbindung wurde durch IR-, NMR- und MS-Analysen
bestätigt. Die Verbindung zeigte eine einzige Komponente
bei den dünnschichtchromatographischen Analysen auf
Silicagel G-Platten (Lösungsmittelsystem: Benzol, 10% Äther
in Benzol, 10% Äther in Hexan und 35% Äthylacetat in Chloroform)
und bei den Gas-Flüssigkeits-chromatographischen Analysen
auf 3% OV-1- und 3% OV-17-Säulen (Säulentemperatur 270°C).
3β-Acetoxy-14α-äthyl-5α-cholest-7-en-15β-ol (0,50 g; 1,06 mMol),
hergestellt wie in Beispiel 5, in 50 ml Äther wurde mit Lithiumaluminiumhydrid
(1,00 g; 0,97 mMol) während 2 Stunden reduziert.
Das erhaltene Reaktionsgemisch wurde entsprechend der in Beispiel
5 beschriebenen Methode zur Gewinnung der 3β,15-Diole
verarbeitet, wobei ein weißer Feststoff (0,44 g) erhalten
wurde. Nach dem Kristallisieren des weißen Feststoffs aus Aceton-
Wasser wurde 14-Äthyl-5-cholest-7-en-3β,15β-diol (0,42 g;
93% Ausbeute) erhalten. Die IR-, NMR- und MS-Analysen bestätigten
die Strukturformel des Produkts
Die Verbindung zeigte eine einzige Komponente bei den dünn
schichtchromatographischen Analysen auf Silicagel G-Platten
(Lösungsmittelsysteme: 10% Äther in Benzol, 35% Äthylacetat
in Chloroform) und bei den Gas-Flüssigkeits-chromatographischen
Analysen des Bis-3β-15β-trimethylsiloxy-derivats auf 3% OV-1-
und 3% OV-17-Säulen (Säulentemperatur 250°C).
3β-Benzoyloxy-5α-cholest-8(14)-en-15-on (11,0 g; 21,8 mMol)
wurde zu einer gerührten Lösung von Kalium-t-butoxid, hergestellt
durch Auflösen von 18,4 g Kaliummetall in 1000 ml
t-Butylalkohol, zugegeben. Nach 15-minütigem Rühren bei Raumtemperatur
wurden 110 ml Methyljodid auf einmal zugegeben, und
das Gemisch wurde weitere 12 Stunden gerührt. Dann wurde Wasser
zugegeben, und das erhaltene Gemisch wurde gründlich mit
Äther extrahiert. Die vereinigten Ätherextrakte wurden über
wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und unter vermindertem
Druck zur Trockne eingedampft. Der erhaltene Rückstand wurde
auf einer Aluminiumoxid-Säule (400 g; neutrales Aluminiumoxid,
Grad 1; 140 cm×2 cm) chromatographiert. Unter Verwendung von
Benzol als Elutionsmittel wurden Fraktionen von 24 ml (1,5 ml
pro Minute) gesammelt.
Die Inhalte der Fraktionen 35 bis 46 wurden vereinigt, und der
nach dem Verdampfen des Lösungsmittels unter vermindertem Druck
erhaltene Rückstand wurde aus Aceton-Wasser kristallisiert, wobei
3β,Methoxy-14α-methyl-5α-cholest-7-en-15-on (5,63 g;
60,3 Ausbeute) der Formel
erhalten wurde.
Die Struktur der Verbindung wurde durch IR-, NMR- und MS-Analysen
bestätigt. Die Reinheit betrug über 98%, auf der
Basis der Gas-Flüssigkeits-chromatographischen Analysen auf
3% OV-1- und 3% OV-17-Säulen (Säulentemperatur 250°C). Weiterhin
zeigte die Verbindung eine einzige Komponente bei den
dünnschichtchromatographischen Analysen auf Silicagel G-Platten
(Lösungsmittelsysteme: 10% Äther in Benzol, 10% Äther
in Hexan, 35% Äthylacetat in Chloroform und 20% Äthylacetat
in Petroläther).
Die Inhalte der Fraktionen 10 bis 16 wurden vereinigt, und der
nach Verdampfen des Lösungsmittels unter vermindertem Druck
erhaltene Rückstand wurde aus Chloroform-Methanol kristalli
siert, wobei 3β-Benzoyloxy-14α-methyl-5α-cholest-7-en-15-on
(1,65 g; 14,6% Ausbeute) erhalten wurde. Das Produkt zeigte
eine einzige Komponente bei den dünnschichtchromatographischen
Analysen auf Silicagel G-Platten (Lösungsmittelsysteme:
Benzol, 10% Äther in Benzol und 10% Äther in Hexan).
Lithiumaluminiumhydrid (2,0 g; 52,7 mMol) wurden zu einer Lösung
von 3β-Methoxy-14α-methyl-5α-cholest-7-en-15-on (1,0 g;
2,33 mMol) in 100 ml Äther gegeben. Nach einstündigem Rühren
bei Raumtemperatur wurde das Reaktionsgemisch auf 0°C abgekühlt
und vorsichtig mit Eis versetzt, um das nicht umgesetzte Hydrid
zu zersetzen. Das erhaltene Gemisch wurde in eine 0,34 n NaCl-
Lösung (300 ml) gegossen und gründlich mit 5% Methylenchlorid
enthaltendem Äther extrahiert. Die vereinigten Ätherextrate
wurden über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und unter
vermindertem Druck zur Trockne eingedampft, wobei ein farbloses
Glas (0,95 g) erhalten wurde. Dieses Produkt wurde der präperativen
Dünnschichtchromatographie auf Silicagel-PF-Platten
(1 mm Dicke; Lösungsmittelsystem: 10% Äther in Benzol) unterworfen.
Es wurden zwei Komponenten mit Rf 0,36 und 0,24 erhalten.
Die weniger polare Komponente (Rf 0,36) wurde von der Platte
mit warmem Chloroform eluiert und ergab nach dem Verdampfen des
Lösungsmittels 3β-Methoxy-14α-methyl-5α-cholest-7-en-15β-ol
(410 mg; 40,8% Ausbeute) als farbloses Glas. Die polarere
Komponente (Rf 0,24) wurde von der Platte mit warmem Chloroform
extrahiert und ergab nach Verdampfen des Lösungsmittels
3β-Methoxy-14α-methyl-15α-cholest-7-en-15α-ol (272 mg; 27,1%
Ausbeute) als farbloses Glas.
Beide Verbindungen zeigten eine einzige Komponente bei den dünn
schichtchromatographischen Analysen auf Silicagel G-Platten
(Lösungsmittelsysteme: 10% Äther in Benzol, 35% Äthylacetat
in Chloroform) und bei den Gas-Flüssigkeits-chromatographischen
Analysen auf 3% OV-1- und 3% OV-17-Säulen (Säulentemperatur
250°C). Die IR-, NMR- und MS-Analysen bestätigten die Struktur
der beiden Verbindungen als
Zu Bis-3β,15α-acetoxy-14α-äthyl-5α-cholest-7-en (1,00 g; 1,94 mMol)
in 100 ml Äther wurde Lithiumaluminiumhydrid (2,00 g;
52,7 mMol) gegeben. Nach dreistündigem Rühren bei Raumtemperatur
wurde das Reaktionsgemisch auf 0°C gekühlt und Eis wurde vorsichtig
zugegeben, um das nicht umgesetzte Hydrid zu zersetzen.
Das Gemisch wurde in eine 0,34 m Natriumchloridlösung gegossen
und gründlich mit 5% Methylenchlorid enthaltendem Äther extrahiert.
Die vereinigten Ätherextrakte wurden über wasserfreiem Magnesiumsulfat
getrocknet und unter vermindertem Druck zur
Trockne eingedampft. Der erhaltene Rückstand (0,79 g) wurde
aus Wasser-Aceton kristallisiert, wobei 14α-Äthyl-5α-cholest-
7-en-3β,15α-diol (0,76 g; 91,1% Ausbeute) der Formel
erhalten wurde.
Die Struktur der Verbindung wurde durch IR-, NMR- und MS-Analysen
bestätigt. Die Verbindung zeigte eine einzige Komponente
bei den dünnschichtchromatographischen Analysen auf
Silicagel G-Platten (Lösungsmittelsysteme: 10% Äther in Benzol,
35% Äthylacetat in Chloroform) und bei den Gas-Flüssigkeits-
chromatographischen Analysen des Bis-3β-15α-trimethylsil
oxyderivats auf 3% OV-1- und 3% OV-17-Säulen (Säulentemperatur
250°C).
5α-Cholest-8(14)-en-3β-ol-15-on (10,0 g; 24,9 mMol) wurde zu
einer gerührten Lösung von Kalium-t-butoxid, hergestellt durch
Auflösen von Kaliummetall (17,3 g) in t-Butylalkohol (819 ml;
getrocknet über einem Linde-Typ-3A-Molekularsieb) gegeben.
n-Propyl-jodid (140 ml) wurden auf einmal zu dem Reaktionsgemisch
gegeben, und das Rühren wurde 4 Stunden fortgesetzt. Das
Volumen des Reaktionsgemisches wurde unter vermindertem Druck
auf etwa 1/3 des ursprünglichen Volumens vermindert. Wasser
wurde zugegeben, und das erhaltene Gemisch wurde gründlich mit
Äther extrahiert. Die vereinigten Extrakte wurden über wasser
freiem Magnesiumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck
zur Trockne eingedampft.
Der erhaltene Rückstand wurde der Mitteldruck-Flüssigkeitschro
matographie (0,413 MPa) unter Verwendung einer
Silicalgel-(0,032 bis 0,063 mm; 910 g)-Säule (100 cm×2,5 cm)
unterworfen. Unter Verwendung von 5% Äther in Benzol als Elutionsmittel
wurden Fraktionen von 20 ml (Durchflußrate 5 ml pro
Minute) gesammelt. Die Inhalte der Fraktionen 102 bis 192
wurden vereinigt und nach Verdampfen des Lösungsmittels unter vermindertem
Druck aus Aceton-Wasser kristallisiert, wobei rohres
14α-n-Propyl-5α-cholest-7-en-3β-ol-15-on (4,5 g; 41% Ausbeute)
als weißer kristalliner Feststoff vom Fp 119-123° erhalten
wurde.
Während das Produkt bei den dünnschichtchromatographierten Analysen
auf Silicagel G-Platten in zwei verschiedenen Lösungsmittelsystemen
(10% Äther in Benzol, 35% Äthylacetat in Chloroform)
eine einzige Komponente zeigte, ergaben die Gas-Flüssigkeits-
chromatographischen Analysen auf sowohl 3% OV-1- als auch
3% OV-17-Säulen die Anwesenheit von etwa 10% einer weniger
polaren Komponente.
Das rohe 14α-n-Propyl-5α-cholest-7-en-3β-ol-15-on (5,0 g;
11,4 mMol) wurde in 50 ml wasserfreiem Pyridin gelöst, und es
wurden 50 ml Essigsäureanhydrid zugegeben. Nach 24-stündigem
Stehen bei Raumtemperatur unter Stickstoff wurde das Reaktionsgemisch
in Wasser gegossen. Das erhaltene Gemisch wurde gründlich
mit 5% Methylenchlorid enthaltendem Äther extrahiert. Die
vereinigten Extrakte wurden nacheinander mit Wasser, kalter
wäßriger HCl, wäßrigem Natriumcarbonat (5%) und Wasser gewaschen.
Die erhaltene Ätherlösung wurde über wasserfreiem Magnesiumsulfat
getrocknet und unter vermindertem Druck zur Trockne
eingedampft.
Der erhaltene weiße Feststoff (5,2 g) wurde der Mitteldruck-
Flüssigkeitschromatographie (0,413 MPa) unter Verwendung
einer Silicagel-(0,032 bis 0,63 mm; 910 g)-Säule
(100 cm×2,5 cm) unterworfen. Unter Verwendung von Benzol als
Elutionsmittel wurden 20-ml-Fraktionen (Durchflußrate 5 ml pro
Minute) gesammelt. Die Inhalte der Fraktionen 130 bis 178 wurden
vereinigt und nach Verdampfen des Lösungsmittels unter vermindertem
Druck aus Aceton-Wasser kristallisiert, wobei 3β-Acetoxy-
14α-n-propyl-5α-cholest-7-en-15-on (4,1 g; 74% Ausbeute)
in Form von weißen Kristallen vom Fp. 110-111°C erhalten wurden.
Die Verbindung zeigte eine einzige Komponente bei den dünn
schichtchromatographischen Analysen auf Silicalgel G-Platten
(Lösungsmittelsysteme: Benzol, 10% Äther in Benzol, 10% Äther
in Hexan und 35% Äthylacetat in Chloroform) und bei den Gas-
Flüssigkeits-chromatographischen Analysen auf 3% OV-1- und
3% OV-17-Säulen (Säulentemperatur 270°C). Die IR-, NMR- und
MS-Analysen bestätigten die Struktur als
3β-Acetoxy-14α-n-propyl-5α-cholest-7-en-15-on (300 mg; 0,62
mMol) wurde in absolutem Äthanol (63,4 ml) gelöst und mit
7,14 n KOH (3,35 ml) versetzt. Das erhaltene Gemisch wurde unter
Stickstoff 2 Stunden unter Rückfluß erhitzt und nach Verminderung
des Volumens unter vermindertem Druck auf etwa 1/2
des ursprünglichen Volumens in Wasser gegossen. Das Gemisch
wurde gründlich mit 5% Methylenchlorid enthaltendem Äther extrahiert,
und die vereinigten Extrakte wurden über wasserfreiem
Magnesiumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck zur
Trockne eingedampft.
Der erhaltene weiße Feststoff wurde aus Aceton-Wasser kristallisiert,
wobei 14α-n-Propyl-5α-cholest-7-en-3β-ol-15-on (264 mg;
96% Ausbeute) der Formel
erhalten wurde.
Die Struktur wurde durch IR-, NMR- und MS-Analyse bestätigt.
Die Verbindung zeigte eine einzige Komponente bei den dünnschicht
chromatographischen Analysen auf Silicagel G-Platten
(Lösungsmittelsysteme: 10% Äther in Benzol, 10% Äther in
Hexan und 35% Äthylacetat in Chloroform) und bei den Gas-
Flüssigkeits-chromatographischen Analysen des freien Sterols
und seines Trimethylsilylätherderivats auf 3% OV-1- und 3%
OV-17-Säulen (Säulentemperatur 270°C).
Zu 14α-n-Propyl-5α-cholest-7-en-3β-ol-15-on (3,0 g; 6,2 mMol)
in 300 ml Äther wurde Lithiumaluminiumhydrid (6,0 g; 158 mMol)
gegeben. Nach zweistündigem Rühren bei Raumtemperatur wurde das
Reaktionsgemisch auf 0°C abgekühlt und vorsichtig mit Eis versetzt,
um das nicht umgesetzte Hydrid zu zersetzen. Das Gemisch
wurde in eine 0,34 n Natriumchloridlösung gegossen und gründlich
mit 5% Methylenchlorid enthaltendem Äther extrahiert.
Die vereinigten Ätherextrakte wurden über wasserfreiem Magnesiumsulfat
getrocknet und unter vermindertem Druck zur Trockne
eingedampft. Der Rückstand (2,59 g) wurde aus Aceton-Wasser
kristallisiert, wobei ein weißer Feststoff (2,03 g; 33% Ausbeute)
vom Fp. 104,5-105,5°C erhalten wurde. Dieses Material schien
ein Gemisch von 14α-n-Propyl-5α-cholest-7-en-3β,15α-diol (64%)
und 14α-n-Propyl-5α-cholest-7-en-3β,15β-diol (36%) zu sein.
Zu einer Lösung des Gemisches der epimeren Diole (2,0 g;
4,50 mMol) in wasserfreiem Pyridin (15 ml) wurde Essigsäureanhydrid
(15 ml) gegeben. Nach 24-stündigem Stehen bei Raumtemperatur
unter Stickstoff wurde das Gemisch in Wasser gegossen
und gründlich mit 5% Methylenchlorid enthaltendem Äther
extrahiert. Die vereinigten Ätherextrakte wurden nacheinander
mit Wasser, kalter wäßriger HCl (5%), wäßrigem Natriumcarbonat
(5%) und Wasser gewaschen und über wasserfreiem Magnesiumsulfat
getrocknet. Der nach dem Verdampfen der Lösungsmittel erhaltene
Rückstand (2,32 g) wurde der Mitteldruck-Flüssigkeitschromatographie
(0,413 MPa) unter Verwendung einer Silicagel-
(0,032 bis 0,063 mm; 910 g)-Säule (100 cm×2,5 cm) unterworfen.
Unter Verwendung von 1% Äther in Benzol als Elutionsmittel
wurden 20-ml-Fraktionen (Durchflußrate 5 ml pro Minute)
gesammelt.
Die Inhalte der Fraktionen 40 bis 62 wurden vereinigt und nach
Verdampfen des Lösungsmittels unter vermindertem Druck aus
Aceton-Wasser kristallisiert, wobei Bis-3β-acetoxy-14α-n-
propyl-5α-cholest-7-en (1,29 g; 53,8% Ausbeute) als weißer
kristalliner Feststoff vom Fp. 128-129°C erhalten wurde.
Die Verbindung zeigte eine einzige Komponente bei den dünnschicht
chromatographischen Analysen auf Silicagel G-Platten (Lösungs
mittelsysteme: Benzol, 10% Äther in Benzol, 10% Äther in
Hexan und 35% Äthylacetat in Chloroform) und bei den Gas-Flüssigkeits-
chromatographischen Analysen auf 3% OV-1- und 3% OV-17-Säulen
(Säulentemperatur 270°C). Die folgende Struktur wurde
durch IR-, NMR- und MS-Analysen bestätigt:
Die Inhalte der Fraktionen 78 bis 94 aus der Silicalgel-Säule
wurden vereinigt und nach dem Verdampfen des Lösungsmittels
unter vermindertem Druck aus Aceton-Wasser kristallisiert, wobei
3β-Acetoxy-14α-propyl-5α-cholest-7-en-15β-ol (0,48 g; 22%
Ausbeute) vom Fp. 103,5-104,5°C erhalten wurde. Durch IR-,
NMR- und MS-Analysen wurde die folgende Struktur bestätigt:
Die Verbindung zeigte eine einzige Komponente bei den dünnschichtchromatographischen
Analysen auf Silicagel G-Platten
(Lösungsmittelsysteme: Benzol, 10% Äther in Benzol, 10%
Äther in Hexan und 35% Äthylacetat in Chloroform) und bei den
Gas-Flüssigkeits-chromatographischen Analysen auf 3% OV-1- und
3% OV-17-Säulen (Säulentemperatur 270°C).
Zu Bis-3β-15α-acetoxy-14α-n-propyl-5α-cholest-7-en (200 mg;
0,38 mMol) in 50 ml Äther wurde Lithiumaluminiumhydrid (500 mg;
13,2 mMol) gegeben. Nach 3-stündigem Rühren bei Raumtemperatur
wurde das Reaktionsgemisch auf 0°C abgekühlt und vorsichtig mit
Eis versetzt, um das nicht umgesetzte Hydrid zu zersetzen. Das
erhaltene Gemisch wurde in eine 0,34 n Natriumchloridlösung
gegossen und gründlich mit 5% Methylenchlorid enthaltendem
Äther extrahiert. Die vereinigten Ätherextrakte wurden über
wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und unter vermindertem
Druck zur Trockne eingedampft.
Der so erhaltene Rückstand (146 mg) wurde aus Aceton-Wasser
kristallisiert, wobei 14α-n-Propyl-5α-cholest-7-en-3β,15α-diol
(135 mg; 80% Ausbeute) der Formel
erhalten wurde.
Die Struktur wurde durch IR-, NMR- und MS-Analysen bestätigt.
Die Verbindung zeigte eine einzige Komponente bei den dünnschichtchromatographischen
Analysen auf Silicagel G-Platten
(Lösungsmittelsysteme: 10% Äther in Benzol, Chloroform, 35%
Äthylacetat in Chloroform) und bei den Gas-Flüssigkeits-chromatographischen
Analysen des freien Sterols und seines Bis-3β,
15α-trimethylsiloxyderivats auf 3% OV-1- und 3% OV-17-Säulen
(Säulentemperatur 270°C).
Zu 3β-Acetoxy-14α-propyl-5α-cholest-7-en-15β-ol (200 mg;
0,41 mMol) in 50 ml Äther wurde Lithiumaluminiumhydrid (500 mg;
13,2 mMol) gegeben. Nach 3-stündigem Rühren bei Raumtemperatur
wurde das Reaktionsgemisch auf 0°C abgekühlt und vorsichtig mit
Eis versetzt, um das überschüssige Hydrid zu zersetzen. Das erhaltene
Gemisch wurde in eine 0,4 n Natriumchloridlösung gegossen
und gründlich mit 5% Methylenchlorid enthaltendem Äther
extrahiert. Die vereinigten Ätherextrakte wurden über wasserfreiem
Magnesiumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck
zur Trockne eingedampft.
Der so erhaltene Rückstand (152 mg) wurde aus Aceton-Wasser
kristallisiert, wobei 14α-n-Propyl-5α-cholest-7-en-3β,15β-diol
(145 mg; 79% Ausbeute) der Formel
Die Struktur der Verbindung wurde durch IR-, NMR- und MS-
Analysen bestätigt. Die Verbindung zeigte eine einzige Komponente
bei den dünnschichtchromatographischen Analysen auf Silicagel
G-Platten (Lösungsmittelsysteme: 10% Äther in Benzol,
Chloroform, 35% Äthylacetat in Chloroform) und bei den Gas-
Flüssigkeits-chromatographischen Analysen des freien Sterols
und seines Bis-3β,15α-trimethylsiloxyderivats auf 3% OV-1- und
3% OV-17-Säulen (Säulentemperatur 270°C).
Zu einem Gemisch von 14α-Äthyl-5α-cholest-7-en-3β,15α-diol und
14α-Äthyl-5α-cholest-7-en-3β,15β-diol (4,40 g; 10,2 mMol;
ca. 70 : 30 Gemisch der 15α- und 15β-Hydroxy-Epimeren, wie die
Gas-Flüssigkeits-chromatographische Analyse des 3β-Trimethylsiloxyderivats)
in wasserfreiem Pyridin (22 ml) wurde Hexadecanoylchlorid
(3,10 g; 11,3 mMol) gegeben. Das Reaktionsgemisch
wurde unter Stickstoff eine Stunde unter Rückfluß erhitzt
und nach dem Abkühlen auf Raumtemperatur in Wasser gegossen.
Das erhaltene Gemisch wurde gründlich 5% Methylenchlorid enthaltendem
Äther extrahiert. Die organische Phase wurde nacheinander
mit Wasser, kalter 0,6 n HCl, 0,46 m Na₂CO₃ und Wasser
gewaschen und über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet. Ein
Teil des weißen Rückstands (5,35 g) der nach dem Verdampfen des
Lösungsmittels erhalten wurde, wurde dünnschichtchromatographisch
auf einer Silicagel G-Platte (Lösungsmittel: Benzol) analysiert.
Es wurden drei Hauptkomponenten (Rf-Werte: 0,20, 0,45 und 0,79)
festgestellt. Das Gemisch wurde der Mitteldruck-Chromatographie
(0,413 MPa) auf einer Silicagel-(0,032 bis 0,063 mm;
910 g)-Säule (100 cm×2,5 cm) unterworfen. Unter Verwendung
eines Gemisches von Hexan und Benzol (10 : 90) als Elutionsmittel
wurden 20 ml-Fraktionen (Durchflußrate 5 ml pro Minute) gesammelt.
Die Inhalte der Fraktionen 10 bis 23 wurden vereinigt, und der
nach dem Verdampfen des Lösungsmittels erhaltene Rückstand wurde
aus Aceton bei -40°C kristallisiert, wobei Bis-3β,15α-hexadecanoyloxy-
14α-äthyl-5α-cholest-7-en (1,15 g; 12% Ausbeute)
der Formel
erhalten wurde.
Die Inhalte der Fraktionen 52 bis 86 aus der Silicagel-Säule
wurden vereinigt, und der nach dem Verdampfen des Lösungsmittels
erhaltene Rückstand wurde aus Aceton bei -40°C umkristallisiert,
wobei 3β-Hexadecanoyloxy-14α-äthyl-5α-cholest-7-en-15β-ol (1,62 g;
24% Ausbeute) der Formel
erhalten wurde.
Die Inhalte der Fraktionen 117 bis 135 aus der Silicagel-Säule
wurden vereinigt, und der nach dem Verdampfen des Lösungsmittels
erhaltene Rückstand wurde aus Aceton bei -40°C umkristallisiert,
wobei 3β-Hexadecanoyloxy-14α-äthyl-5α-cholest-7-en-15α-ol
(2,35 g; 34% Ausbeute) der Formel
erhalten wurde.
Die Strukturen dieser drei Verbindungen wurden durch IR-, NMR-
und MS-Analysen bestätigt. Alle drei Verbindungen zeigten eine
einzige Komponente bei den dünnschichtchromatographischen Analysen
auf Silicalgel G-Platten unter Verwendung einer Vielzahl
von Lösungsmittelsystemen.
Eine Lösung von Pyridiniumchlorochromat (581 mg; 2,69 mMol)
in wasserfreiem Methylenchlorid (5 ml) wurde auf einmal zu
einer Lösung von 3β-Hexydecanoyloxy-14α-äthyl-5α-cholest-7-en-
15β-ol (300 mg; 0,45 mMol) gegeben. Nach 30-minütigem Rühren
bei Raumtemperatur (24°C) unter Stickstoff wurde das Gemisch in
400 ml Äther gegossen und nacheinander mit Wasser, kalter 0,6 n
HCl, 0,47 m Na₂CO₃ und Wasser gewaschen. Die erhaltene Ätherlösung
wurde über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und
unter vermindertem Druck zur Trockne eingedampft, wobei ein hellgelber
Rückstand (284 mg) erhalten wurde. Die dünnschichtchromatographische
Analyse auf einer Silicagel G-Platte (Lösungsmittel:
Benzol) zeigte eine Hauptkomponente (etwa 95%) mit einem Rf-
Wert von 0,50.
Das Produkt wurde der Mitteldruck-(0,689 MPa)-
Silicagel-(0,032 bis 0,063 mm; 388 g)-Säulen (118 cm×1,5 cm)-
Chromatographie unterworfen. Unter Verwendung von Benzol als
Elutionsmittel (Durchflußrate 5 ml pro Minute) wurden 20 ml-
Fraktionen gesammelt. Die Inhalte der Fraktionen 12 bis 35 wurden
vereinigt, und der nach dem Verdampfen des Lösungsmittels
erhaltene Rückstand wurde aus Aceton-Wasser kristallisiert, wobei
3β-Hexadecanoyloxy-14α-äthyl-5α-cholest-7-en-15-on (207 mg;
89% Ausbeute) der Formel
erhalten wurde.
Die Struktur wurde durch IR-, NMR- und MS-Analysen bestätigt.
Die Verbindung zeigte eine einzige Komponente bei den dünnschichtchromatographischen
Analysen auf Silicagel G-Platten
(Lösungsmittelsysteme: Benzol, 10% Hexan in Toluol, 10% Äther
in Hexan und Petroläther-Äther-Essigsäure).
Die Behandlung von 3β-Hexadecanoyloxy-14α-äthyl-5α-cholest-7-en-
15α-ol mit Pyridiniumchlorochromat unter den vorstehend beschriebenen
identischen Bedingungen ergab 3β-Hexadecanoloxy-14α-
äthyl-5α-cholest-7-en-15-on mit demselben Schmelzpunkt, Infrarotspektrum,
kernmagnetischem Resonanzspektrum, Massenspektrum
und dünnschichtchromatographischem Verhalten wie vorstehend
beschrieben für das von der 15β-Hydroxyverbindung abgeleitete
15-Keton.
Zu 3β-Äthoxy-14α-äthyl-5α-cholest-7-en-15-on (1,0 g; 2,19 mMol)
in 100 ml Äther wurde Lithiumaluminiumhydrid (2,0 g; 52,7 mMol)
gegeben. Nach 2-stündigem Rühren bei Raumtemperatur wurde das
Reaktionsgemisch auf 0°C abgekühlt und vorsichtig mit Eis versetzt,
um das nicht umgesetzte Hydrid zu zersetzen. Das erhaltene
Gemisch wurde in eine 0,35 m NaCl-Lösung gegossen und
gründlich mit 5% Methylenchlorid enthaltendem Äther extrahiert.
Die vereinigten Extrakte wurde über wasserfreiem Magnesiumsulfat
getrocknet und unter vermindertem Druck zur Trockne eingedampft.
Der erhaltene Rückstand (0,97 g) wurde aus Aceton-
Wasser kristallisiert, wobei ein Gemisch (0,94 g; 94% Ausbeute)
von 3β-Äthoxy-14α-äthyl-5α-cholest-7-en-15β-ol und 3β-Äthoxy-
14α-äthyl-5α-cholest-7-en-15α-ol erhalten wurden. Die IR-,
NMR- und MS-Analysen ergaben die folgenden Strukturen für diese
Verbindungen:
Die dünnschichtchromatographischen Analysen auf Silicagel G-
Platten unter Verwendung von fünf verschiedenen Lösungsmittelsystemen
und die Gas-Flüssigkeits-chromatographischen Analysen
auf 3% OV-1- und 3% OV-17-Säulen (Säulentemperatur 270°C)
zeigten lediglich eine Komponente. Die Gas-Flüssigkeits-chromatographische
Analyse des Trimethylsilylätherderivats auf 3% OV-
1- und 3% OV-17-Säulen (Säulentemperatur 250°C) zeigte jedoch
die Anwesenheit von zwei Komponenten an.
Zur Komponente 1 (200 ml) der "Bio-Dynamics-(BMC Division)-
Cholesterol-Auto-Test" wurde "Cholesterinoxidase" (6,0 ml;
Komponente 3 des "Cholesterol-Auto-Test") gegeben, und das erhaltene
Gemisch wurde mit 600 ml destilliertem Wasser verdünnt.
5α,14β-Cholest-7-en-3β,15β-diol (126 mg; 0,315 mMol) in 35 ml
Isopropanol wurde zugegeben, und das erhaltene Gemisch wurde
unter Schütteln bei 37°C 7 Stunden inkubiert. Das Gemisch wurde
viermal mit 100 ml-Portionen Chloroform extrahiert. Die Extrakte
wurde vereinigt, über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet,
und das Volumen wurde unter vermindertem Druck auf
etwa 6 ml reduziert.
Das erhaltene Material wurde der präparativen Dünnschichtchromatographie
auf sechs Silicagel G-Platten (750 Mikron Dicke) unter
Verwendung von Äther als Entwickler unterworfen. Das erwünschte
Produkt wurde von den Platten mit Chloroform eluiert und nach
Verdampfen des Lösungsmittels unter vermindertem Druck aus
Aceton-Wasser kristallisiert, wobei 83,2 mg (66%) 5α,14β-
Cholest-7-en-15β-ol-3-on als Nadeln vom Fp. 90,5-91,5°C erhalten
wurden. Durch IR-, NMR- und MS-Analysen wurde die
Struktur des Produkts festgestellt als
Die Verbindung zeigte eine einzige Komponente bei der dünnschichtchromatographischen
Analyse auf einer Silicalgel G-Platte (Lösungsmittel:
Äther). Bei der Gas-Flüssigkeits-chromatographischen
Analyse des Trimethylsilylätherderivats auf einer 3% OV-17-
Säule (Säulentemperatur 250°C) zeigte eine Reinheit von mindestens
98,9% an.
Zu Komponente 1 (180 ml) des "Bio-Dynamics-(BMC Division)-
Cholesterol-Auto-Test" wurde Cholesterinoxidase (5,5 ml; Komponente
3 des "Cholesterol-Auto-Test") gegeben, und das erhaltene
Gemisch wurde mit 540 ml destilliertem Wasser verdünnt. 5α,14β-
Cholest-7-en-3β,15α-diol (105 mg; 0,262 mMol) in Isopropanol
(35 ml) wurde zugegeben, und das erhaltene Gemisch wurde unter
Schütteln bei 37°C inkubiert. Nach 5-stündiger Inkubation wurde
die Lösung wolkig. Weitere 10 ml Isopropanol wurden langsam zugegeben,
und die Inkubation wurde weitere 2,25 Stunden fortgesetzt.
Das Gemisch wurde viermal mit Chloroform (100 ml-Portionen)
extrahiert. Die Extrakte wurden vereinigt, über wasserfreiem
Magnesiumsulfat getrocknet und auf ein Volumen von etwa
4 ml konzentriert.
Das erhaltene Material wurde der präparativen Dünnschichtchromatographie
auf sechs Silicagel G-Platten (750 µm Dicke)
unter Verwendung von Äther als Entwickler unterworfen. Das erwünschte
Produkt wurde von den Platten mit Chloroform eluiert
und nach Verdampfen des Lösungsmittels unter vermindertem Druck
aus Aceton-Wasser kristallisiert, wobei 75,3 mg (72% Ausbeute
5α,14β-Cholest-7-4n-15α-ol-3-on als feine Nadeln vom Fp.
121-122°C erhalten wurden. Durch IR-, NMR- und MS-Analysen
wurde die Struktur des Produkts bestätigt als
Die Verbindung zeigte eine einzige Komponente bei der dünnschichtchromatographischen
Analyse auf einer Silicagel G-Platte
(Lösungsmittel: Äther). Die Gas-Flüssigkeits-chromatographische
Analyse des Trimethylsilylätherderivats auf einer 3% OV-17-
Säule (Säulentemperatur 250°C) zeigte eine Reinheit von mindestens
98,6% an.
Zu Komponente 1 (250 ml) des "Bio-Dynamics-(BMC Division)-
Cholesterol-Auto-Test" wurde "Cholesterinoxidase" (16 ml;
Komponente 3 des Cholesterol-Auto-Test) gegeben und das erhaltene
Gemisch wurde mit 734 ml destilliertem Wasser verdünnt.
14α-Äthyl-5α-cholest-7-en-3β,15α-diol (100 mg) in 20 ml Isopropanol
wurde zugegeben, und das erhaltene Gemisch wurde unter
Schütteln bei 37°C während 4,5 Stunden inkubiert. Das Gemisch
wurde zweimal mit 100 ml-Portionen Chloroform extrahiert, und
das Volumen der vereinigten Extrakte wurde unter vermindertem
Druck auf etwa 6 ml reduziert.
Dieses Material wurde der präparativen Dünnschichtchromatographie
auf Silicagel G-Platten (750 µm Dicke) unter Verwendung
von Äther als Entwickler unterworfen. Das erwünschte Produkt
wurde von den Platten mit Äther eluiert und nach dem Verdampfem
des Lösungsmittels unter vermindertem Druck zweimal aus Äther-
Methanol kristallisiert, wobei 85,3 mg (85% Ausbeute) 14α-Äthyl-
5α-cholest-7-en-15α-ol-3-on vom Fp. 114-115°C erhalten wurde.
Die Verbindung zeigte eine einzige Komponente bei der Gas-
Flüssigkeits-chromatographischen Analyse auf einer 3% OV-17-
Säule (Säulentemperatur 260°C). Durch IR-, NMR- und MS-Analysen
wurde die Struktur des Produkts bestätigt als
5α-Cholest-8(14)-en-3β-ol-15-on (10,0 g; 24,0 mMol) wurde zu
einer gerührten Lösung von Kalium-t-butoxid, hergestellt durch
Auflösen von 20,0 g Kaliummetall in 1000 ml t-Butylalkohol,
gegeben. n-Butyljodid (300 ml) wurde auf einmal zu dem Reaktionsgemisch
gegeben, und das Rühren wurde 12 Stunden bei Raumtemperatur
fortgesetzt. 400 ml Wasser wurden zugegeben, und das
erhaltene Gemisch wurde zweimal mit 1000 ml-Portionen Äther extrahiert.
Die vereinigten Extrakte wurden mit 200 ml Wasser gewaschen,
über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und unter
vermindertem Druck zur Trockne eingedampft, wobei ein gelblicher
Rückstand erhalten wurde.
Der Rückstand wurde mit Essigsäureanhydrid und Pyridin behandelt
und der Mitteldruck-(0,413 MPa)-Silicagel-
(0,032 bis 0,063 mm)-Säulenchromatographie unter Verwendung von
10% Äther in Benzol als Elutionsmittel unterworfen. Nach dem
Kristallisieren aus Aceton-Wasser und wiederholten (3) Reinigungen
durch Mitteldruck-Flüssigkeitssäulenchromatographie
wurden 900 mg Produkt erhalten. Nach dem Kristallisieren aus
Aceton-Wasser wurden 850 mg 3β-Acetoxy-14α-n-butyl-5α-cholest-
7-en-15-on in Form weißer Nadeln erhalten.
Die Verbindung zeigte eine einzige Komponente bei den dünnschichtchromatographischen
Analysen auf Silicagel G-Platten in
acht verschiedenen Lösungsmittelsystemen (Äther, 35% Äthylacetat
in Chloroform, 20% Äther in Chloroform, 20% Äther in
Benzol, 10% Äther in Benzol, Chloroform, Benzol und 10% Hexan
in Benzol) und bei den Gas-Flüssigkeits-chromatographischen
Analysen auf 3% OV-1- und 3% OV-17-Säulen (Säulentemperatur
280°C). Durch IR-, NMR- und MS-Analysen wurde die Struktur bestätigt
als
Ein Gemisch von 3β-Acetoxy-14α-n-butyl-5α-cholest-7-en-15-on
(150 mg), 93% Äthanol (53 ml) und KOH (1,05 g) wurde 1,5 Stunden
unter Rückfluß erhitzt. Nach der Verminderung des Volumens
auf etwa 1/2 des ursprünglichen Volumens wurde das Gemisch in
eine 0,86 n Natriumchloridlösung (200 ml) gegossen, und das
erhaltene Gemisch wurde gründlich mit 5% Methylenchlorid enthaltendem
Äther extrahiert. Die vereinigten Extrakte wurden mit
Wasser gewaschen, über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet
und unter vermindertem Druck zur Trockne eingedampft. Der so
erhaltene Rückstand (130 mg) wurde aus Aceton-Wasser kristallisiert,
wobei 120 mg (87% Ausbeute) an feinen Nadeln von
14α-n-Butyl-5α-cholest-7-en-3β-ol-15-on der Struktur
erhalten wurde.
Die Strukturformel wurde durch IR-, NMR- und MS-Analysen bestätigt.
Die Verbindung zeigte eine einzige Komponente bei den
dünnschichtchromatographischen Analysen auf Silicagel G-Platten
in acht verschiedenen Lösungsmittelsystemen (Äther, 35% Äthylacetat
in Chloroform, 20% Äther in Chloroform, 20% Äther in
Benzol, 10% Äther in Benzol, Chloroform, Benzol und 10% Hexan
in Benzol). Die Reinheit betrug über 99%, wie durch Gas-
Flüssigkeits-chromatographische Analysen des Trimethylsilylätherderivats
auf 3% OV-1- und 3% OV-17-Säulen (Säulentemperatur
270°C) festgestellt wurde.
Zu 3β-Acetoxy-14α-n-butyl-5α-cholest-7-en-15-on (647 mg;
1,3 mMol) in 30 ml Äther wurde Lithiumaluminiumhydrid (1,2 g;
32 mMol) gegeben. Nach 3 Stunden wurde das Reaktionsgemisch
auf 0°C abgekühlt und vorsichtig mit Äthylacetat zur Zersetzung
des nicht umgesetzten Hydrids versetzt. Das erhaltene Gemisch
wurde in eine 0,86 n Natriumchloridlösung (200 ml) gegossen
und zweimal mit 5% Methylenchlorid enthaltendem Äther extrahiert.
Die vereinigten Extrakte wurden über wasserfreiem Magnesiumsulfat
getrocknet und unter vermindertem Druck zur Trockne eingedampft,
wobei ein weißer Rückstand (570 mg) erhalten wurde.
Dieses Material zeigte bei der dünnschichtchromatographischen
Analyse auf einer Silicagel G-Platte (Lösungsmittelsystem:
10% Äther in Benzol) zwei Komponenten.
Der weiße Rückstand (570 mg) wurde in 10 ml wasserfreiem Pyridin
gelöst und mit 10 ml Essigsäureanhydrid versetzt. Nach 15-stündigem
Stehen bei Raumtemperatur wurde das Reaktionsgemisch in
Eis gegossen, und das erhaltene Gemisch wurde zweimal mit 200 ml-
Portionen Äther, der 5% Methylenchlorid enthielt, extrahiert.
Die vereinigten Extrakte wurden nacheinander mit Wasser, kalter
1 n HCl, wäßrigem 5prozentigem Natriumcarbonat und Wasser gewaschen,
über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und unter
vermindertem Druck zur Trockne eingedampft.
Der so erhaltene Rückstand (620 mg) wurde der Mitteldruck-
Flüssigkeitschromatographie auf einer Silicagel-(0 ,032 bis
0,063 mm)-Säule unter Verwendung von 1% Äther in Benzol als
Elutionsmittel unterworfen. Die Inhalte der Fraktionen entsprechend
der erwarteten Beweglichkeit des Diacetats wurden vereinigt
und nach dem Verdampfen des Lösungsmittels aus Aceton-
Wasser kristallisiert, wobei Nadeln von Bis-3β,15α-acetoxy-
14α-n-butyl-5α-cholest-7-en erhalten wurden. Durch IR-, NMR-
und MS-Analysen wurde die Struktur bestätigt als
Die Verbindung zeigte eine einzige Komponente bei den dünnschichtchromatographischen
Analysen auf Silicagel G-Platten in acht
verschiedenen Lösungsmittelsystemen (Äther, 35% Äthylacetat in
Chloroform, 20% Äther in Chloroform, 20% Äther in Benzol,
10% Äther in Benzol, Chloroform, Benzol und 10% Hexan in Benzol).
Die Inhalte der Fraktionen mit der erwarteten Beweglichkeit des
Monoacetats wurden vereinigt und nach dem Verdampfen des Lösungsmittels
unter vermindertem Druck aus Aceton-Wasser kristallisiert,
wobei feine Nadeln von 3β-Acetoxy-14α-n-butyl-5α-
cholest-7-en-15β-ol (190 mg) erhalten wurden.
Die Verbindung zeigte eine einzige Komponente bei den dünnschichtchromatographischen
Analysen auf Silicagel G-Platten in
acht verschiedenen Lösungsmittelsystemen (Äther, 35% Äthylacetat
in Chloroform, 20% Äther in Chloroform, 20% Äther in Benzol,
10% Äther in Benzol, Chloroform, Benzol und 10% Hexan in Benzol)
und eine Reinheit über 99% bei der Gas-Flüssigkeitschromatographischen
Analyse des Trimethylsilylätherderivats auf
einer 3% OV-17-Säule. Die Struktur wurde durch IR-, NMR- und
MS-Analysen bestätigt als
Zu Bis-3β,15α-acetoxy-14α-n-butyl-5α-cholest-7-en (200 mg;
0,37 mMol) in 30 ml Äther wurde Lithiumaluminiumhydrid (400 mg;
10,5 mMol) gegeben. Nach 2 Stunden bei Raumtemperatur wurde das
Reaktionsgemisch auf 0°C abgekühlt und vorsichtig Äthylacetat
zur Zersetzung des nicht umgesetzten Hydrids zugegeben. Das
Gemisch wurde in eine 0,86 n Natriumchloridlösung gegossen und
zweimal mit 5% Methylenchlorid enthaltendem Äther extrahiert.
Die vereinigten Extrakte wurden über wasserfreiem Magnesiumsulfat
getrocknet und unter vermindertem Druck zur Trockne eingedampft.
Der Rückstand (180 mg) wurde der Mitteldruck-Flüssigkeitschromatographie
auf einer Silicagel-(0,032 bis 0,063 mm)-Säule unter
Verwendung von 15% Äther in Benzol als Elutionsmittel unterworfen.
Die Inhalte der Fraktionen entsprechend der Beweglichkeit
des erwünschten Diols wurden vereinigt und nach Verdampfen
des Lösungsmittels unter vermindertem Druck aus Aceton-Wasser
kristallisiert, wobei Nadeln von 14α-n-Butyl-5α-cholest-7-en-
3β,15α-diol (128 mg) mit der Strukturformel
erhalten wurden.
Die Struktur durch IR-, NMR- und MS-Analysen bestätigt. Die Verbindung
zeigte eine einzige Komponente bei den dünnschichtchromatographischen
Analysen auf Silicagel G-Platten in acht verschiedenen
Lösungsmittelsystemen und eine Reinheit von über 99% bei
der Gas-Flüssigkeits-chromatographischen Analyse des Trimethylsilylätherderivats
auf einer 3% OV-17-Säule (Säulentemperatur
270°C).
Zu 3β-Acetoxy-14α-n-butyl-5α-cholest-7-en-15β-ol (100 mg;
0,20 mMol) in 30 ml Äther wurde Lithiumaluminiumhydrid (200 mg;
5,26 mMol) gegeben. Nach 2 Stunden bei Raumtemperatur wurde das
Reaktionsgemisch auf 0°C abgekühlt und vorsichtig mit Äthylacetat
zur Zersetzung des überschüssigen Hydrids versetzt. Das
Gemisch wurde in eine 0,86 n Natriumchloridlösung gegossen und
zweimal mit 5% Methylenchlorid enthaltendem Äther extrahiert.
Die vereinigten Extrakte wurden über wasserfreiem Magnesiumsulfat
getrocknet und unter vermindertem Druck zur Trockne eingedampft.
Der glasige Rückstand (180 mg) wurde der Mitteldruck-Flüssigkeitschromatographie
auf einer Silicagel-(0,032 bis 0,063 mm)-
Säule unter Verwendung von 15% Äther in Benzol als Elutionsmittel
unterworfen. Die Inhalte der Fraktionen entsprechend der
Beweglichkeit des erwünschten Diols wurden vereinigt und nach
dem Verdampfen des Lösungsmittels wurde 14α-n-Butyl-5α-cholest-
7-en-3β,15β-diol (80 mg) als weißer, armopher Feststoff erhalten,
der aus Aceton-Wasser oder Methanol-Wasser nicht kristallisiert
werden konnte.
Die Verbindung zeigte eine einzige Komponente bei den dünnschichtchromatographischen
Analysen auf Silicagel G-Platten in
acht verschiedenen Lösungsmittelsystemen und eine Reinheit von
mindestens 98,5%, bestimmt durch Gas-Flüssigkeits-chromatographische
Analyse des Trimethylsilylätherderivats auf einer 3%
OV-17-Säule (Säulentemperatur 270°C). Die Struktur wurde durch
IR-, NMR- und MS-Analysen als
bestätigt.
Eine Lösung von Diäthylazodicarboxylat (1,74 g; 10,0 mMol) in
Tetrahydrofuran (10 ml) wurde tropfenweise zu einer gerührten
Lösung von 14α-Äthyl-5α-cholest-7-3β-ol-15-on (2,14 g;
5,0 mMol), Triphenylphosphin (3,93 g; 15,0 mMol) und Benzoesäure
(1,22 g; 10,0 mMol) in 60 ml wasserfreiem Tetrahydrofuran
gegeben. Nach 14-stündigem Rühren wurde das Gemisch in Wasser
gegossen und mit 5% Methylenchlorid enthaltendem Äther gründlich
extrahiert. Die vereinigten Extrakte wurden über wasserfreiem
Magnesiumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck zur
Trockne eingedampft.
Der erhaltene hellgelbe Feststoff wurde der Mitteldruck-
(0,689 MPa)-Flüssigkeitschromatographie auf einer
Silicagel-(388 g; 0,032 bis 0,063 mm)-Säule (118 cm×1,5 cm)
unterworfen. Unter Verwendung von Benzol als Elutionsmittel
wurden 20 ml-Fraktionen (Durchflußrate 1,5 ml pro Minute) gesammelt.
Die Inhalte der Fraktionen 13 bis 50 wurden vereinigt
und nach Verdampfen des Lösungsmittels unter vermindertem Druck
aus Aceton-Wasser kristallisiert, wobei kristallines 3α-Benzoyloxy-
14α-äthyl-5α-cholest-7-en-15-on (2,45 g; 92% Ausbeute)
erhalten wurde.
Die Verbindung zeigte eine einzige Komponente bei den dünnschichtchromatographischen
Analysen auf Silicagel G-Platten (Lösungsmittelsysteme:
Benzol, 10% Äther in Benzol und 10% Äther
in Hexan). Die Struktur wurde durch IR-, NMR- und MS-Analysen
als
betätigt.
Zu 3α-Benzoloxy-14α-äthyl-5α-cholest-7-en-15-on (1,0 g;
1,0 mMol) in absolutem Äthanol (190 ml) wurde eine Lösung von
KOH (4,0 g) in Wasser (10 ml) gegeben. Nach 2-stündigem Erhitzen
unter Rückfluß unter einer Stickstoffatmosphäre wurde
das Volumen des Gemisches unter vermindertem Druck auf etwa
100 ml reduziert. Das Gemisch wurde in Wasser gegossen und
gründlich mit 5% Methylenchlorid enthaltendem Äther extrahiert.
Die vereinigten Extrakte wurden über wasserfreiem Magnesiumsulfat
getrocknet und unter vermindertem Druck zur Trockne eingedampft.
Der erhaltene weiße Rückstand wurde aus Aceton-Wasser
kristallisiert, wobei 14α-Äthyl-5α-cholest-7-en-3α-ol-15-on
(0,72 g; 89% Ausbeute) erhalten wurde.
Die Verbindung zeigte eine einzige Komponente bei den dünnschichtchromatographischen
Analysen auf Silicagel G-Platten
(Lösungsmittelsysteme: 10% Äther in Benzol, 5% Aceton in
Chloroform und 35% Äthylacetat in Chloroform) bei den Gas-
Flüssigkeits-chromatographischen Analysen auf 3% OV-1- und
3% OV-17-Säulen (Säulentemperatur 270°C). Die Struktur wurde
durch IR-, NMR- und MS-Analysen bestätigt als
Zu einer auf Raumtemperatur befindlichen gerührten Lösung von
14α-Äthyl-5α-cholest-7-en-15-on-3β-yl-pyridiniumsulfat (500 mg;
0,85 mMol) in destilliertem Wasser (25 ml) wurde eine gesättigte
wäßrige Kaliumchloridlösung (15 ml) langsam zugegeben. Nach
10 Minuten wurde die gerührte Suspension filtriert, mit destilliertem
Wasser gewaschen und in einem Vakuumexsiccator mehrere
Stunden getrocknet. Der weiße Rückstand (418 mg; 87%) erwies
sich durch die IR-, NMR- und MS-Analysen als 14α-Äthyl-5α-
cholest-7-en-15-on-3β-yl-kaliumsulfat-(monohydrat) der Formel
14α-Äthyl-5α-cholest-7-en-3β-ol-15-on (1,0 g; 2,33 mMol) wurde
in wasserfreiem Chloroform (25 ml; Äthanol-frei; getrocknet
über einem Linde-Molekularsieb, Typ 3A) aufgelöst. Pyridin-
Schwefeltrioxid (2,5 g) wurde zugegeben, und das Gemisch wurde
3 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Das überschüssige Reagens
wurde abfiltriert und mit einer kleinen Menge Chloroform gewaschen.
Das Filtrat wurde in einem Trockeneis-Aceton-Bad auf
-40°C gekühlt und durch Hyflo Super-Cel (Johns-Manville Cor.)
filtriert. Hexan wurde zu dem Chloroform-Filtrat zugegeben, bis
es wolkig wurde. Beim Abkühlen auf 0°C wurde ein weißer Niederschlag
gebildet, der abfiltriert und in einen Vakuumexsiccator
100 Stunden bei Raumtemperatur verbracht wurde, um sämtliche
Lösungsmittelspuren zu entfernen. Das Produkt (1,2 g; 88%
Ausbeute) erwies sich durch IR-, NMR- und MS-Analysen als
14α-Äthyl-5α-cholest-7-en-15-on-3β-yl-pyridiniumsulfat der
Strukturformel
Die Verbindung zeigte eine einzige Komponente bei den dünnschichtchromatographischen
Analysen auf Silicagel G-Platten
(Lösungsmittelsysteme: 25% Äthylacetat in Methanol und 25%
Äthylacetat in Äthanol).
Männliche Ratten des Sprague-Dawley-Stamms wurden mit
Purina-Rattenfutter ad libidum gefüttert. Die Ratten wurden
während der gesamten Untersuchung und mindestens 4 Tage vor
dem Beginn der Untersuchung bei einem Hell-(7 Uhr morgens
bis 6 Uhr abends)-Dunkel-(6 Uhr abends bis 7 Uhr morgens)-
Zyklus gehalten.
3β-Äthoxy-14α-äthyl-5α-cholest-7-en-15-on (5 mg) in
Triolein (0,25 ml) wurde jeder von 8 Ratten subcutan einmal pro Tag
verabreicht. Kontrolltiere erhielten tägliche Triolein-
Injektionen (0,25 ml). Die Kontrolltiere hatten ein anfängliches
mittleres Körpergewicht von 143,7 g (±6,3, S.E.M) und die das
Steroidalketon erhaltenden Ratten hatten ein anfängliches mittleres
Körpergewicht von 141,8 g (±2,9, S.E.M).
Den Ratten wurden periodisch Blutproben entnommen, und
die Serumcholesterinkonzentrationen wurden (doppelt) nach
der Methode von Abell et al., J. Biol. Chem., Bd. 195,
S. 357-366 (1966) gemessen.
Die mittleren Serumcholesterinwerte für die Kontroll- und Experimentiertiere
sind in Tabelle I zusammengestellt. Signifikante
Senkungen der Serumcholesterinspiegel, verglichen mit den Kontrollratten,
wurden bei den Ratten beobachtet, die täglich subcutane
Injektionen der 15-oxidierten Sterole erhielten. Die
mittleren Serumcholesterinspiegel der mit Triolein
behandelten Tiere schwankten während der Untersuchungszeit
nicht signifikant. Die durchschnittliche prozentuale Senkung
der Serumcholesterinspiegel bei den einzelnen Ratten,
die mit dem 14α-Äthyl-15-keton (Tag 27 gegenüber Tag 0) behandelt
wurden, betrugen 12,1 bis 34,9. Der Mittelwert war 25,0
(±2,3, S.E.M.).
Es traten keine signifikanten Unterschiede im Wachstum der mit
den 15-oxidierten Sterolen und der mit Triolein
behandelten Ratten auf.
Claims (7)
1. Arzneimittel zur Senkung des Serumcholesterinspiegels,
enthaltend neben einem üblichen pharmazeutischen
Trägerstoff als Wirkstoff ein 15-oxidiertes Sterol der
allgemeinen Formel
in der bedeuten:
R₁ -OH, =O, OR₄, eine Sulfatgruppe oder eine Mg-, Na- oder K-Salz einer Sulfatgruppe;
R₂ -OH, =O oder R₃ αH, βH oder eine αC₁- bis C₆-Alkylgruppe
R₄ eine C₁- bis C₆-Alkylgruppe;
R₅ eine C₁- bis C₂₀-aliphatische Gruppe, eine substituierte C₁- bis C₂₀-aliphatische Gruppe oder eine Phenylgruppe; und
n eine ganze Zahl von 2 bis 6, wobei, falls R₁-OH bedeutet, R₂ nicht -OH ist und die bezüglich den R₁- und R₂-Substituenten möglichen α- oder β-stereoisomeren Formen eingeschlossen sind.
R₁ -OH, =O, OR₄, eine Sulfatgruppe oder eine Mg-, Na- oder K-Salz einer Sulfatgruppe;
R₂ -OH, =O oder R₃ αH, βH oder eine αC₁- bis C₆-Alkylgruppe
R₄ eine C₁- bis C₆-Alkylgruppe;
R₅ eine C₁- bis C₂₀-aliphatische Gruppe, eine substituierte C₁- bis C₂₀-aliphatische Gruppe oder eine Phenylgruppe; und
n eine ganze Zahl von 2 bis 6, wobei, falls R₁-OH bedeutet, R₂ nicht -OH ist und die bezüglich den R₁- und R₂-Substituenten möglichen α- oder β-stereoisomeren Formen eingeschlossen sind.
2. Arzneimittel nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet,
daß es 14α-Methyl-5α-cholest-7-en-3β-ol-15-on enthält.
3. Arzneimittel nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet,
daß es 3β-Methoxy-14α-methyl-5α-cholest-7-en-15-on
enthält.
4. Arzneimittel nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet,
daß es 3β-Äthoxy-14α-äthyl-5α-cholest-7-en-15α-ol enthält.
5. Arzneimittel nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet,
daß es 3β-Methoxy-14α-methyl-5α-cholest-7-en-15α-ol
enthält.
6. Arzneimittel nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet,
daß es 14α-Äthyl-5α-cholest-7-en-3β-ol-15-on enthält.
7. Arzneimittel nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet,
daß es 14α-Äthyl-5-α-cholest-7-en-15α-ol-3-on enthält.
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