DE2547349C2 - Verfahren zur Gewinnung von N-Acetylneuraminsäure aus einem Protein-Konzentrat - Google Patents

Verfahren zur Gewinnung von N-Acetylneuraminsäure aus einem Protein-Konzentrat

Info

Publication number
DE2547349C2
DE2547349C2 DE2547349A DE2547349A DE2547349C2 DE 2547349 C2 DE2547349 C2 DE 2547349C2 DE 2547349 A DE2547349 A DE 2547349A DE 2547349 A DE2547349 A DE 2547349A DE 2547349 C2 DE2547349 C2 DE 2547349C2
Authority
DE
Germany
Prior art keywords
acid
supernatant
acetylneuraminic acid
protein concentrate
protein
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired
Application number
DE2547349A
Other languages
English (en)
Other versions
DE2547349A1 (de
Inventor
Des Erfinders Auf Nennung Verzicht
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Union Cooperative Agricole Laitiere de la Manche
Original Assignee
Union Cooperative Agricole Laitiere de la Manche
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Union Cooperative Agricole Laitiere de la Manche filed Critical Union Cooperative Agricole Laitiere de la Manche
Publication of DE2547349A1 publication Critical patent/DE2547349A1/de
Application granted granted Critical
Publication of DE2547349C2 publication Critical patent/DE2547349C2/de
Expired legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H13/00—Compounds containing saccharide radicals esterified by carbonic acid or derivatives thereof, or by organic acids, e.g. phosphonic acids
    • C07H13/02—Compounds containing saccharide radicals esterified by carbonic acid or derivatives thereof, or by organic acids, e.g. phosphonic acids by carboxylic acids
    • C07H13/04—Compounds containing saccharide radicals esterified by carbonic acid or derivatives thereof, or by organic acids, e.g. phosphonic acids by carboxylic acids having the esterifying carboxyl radicals attached to acyclic carbon atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
    • A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
    • A23C9/14—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations in which the chemical composition of the milk is modified by non-chemical treatment
    • A23C9/142—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations in which the chemical composition of the milk is modified by non-chemical treatment by dialysis, reverse osmosis or ultrafiltration
    • A23C9/1425—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations in which the chemical composition of the milk is modified by non-chemical treatment by dialysis, reverse osmosis or ultrafiltration by ultrafiltration, microfiltration or diafiltration of whey, e.g. treatment of the UF permeate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23J—PROTEIN COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS; WORKING-UP PROTEINS FOR FOODSTUFFS; PHOSPHATIDE COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS
    • A23J1/00—Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites
    • A23J1/20—Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites from milk, e.g. casein; from whey
    • A23J1/205—Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites from milk, e.g. casein; from whey from whey, e.g. lactalbumine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/64—Proteins; Peptides; Derivatives or degradation products thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/98—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution of animal origin
    • A61K8/981—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution of animal origin of mammals or bird
    • A61K8/986—Milk; Derivatives thereof, e.g. butter
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/827—Proteins from mammals or birds
    • Y10S530/832—Milk; colostrum
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/827—Proteins from mammals or birds
    • Y10S530/833—Whey; cheese

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Water Supply & Treatment (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Dairy Products (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Fodder In General (AREA)

Description

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Gewinnung von N-Acetylneuraminsäure aus einem Proteinkonzentrat, das aus in Käsereien in herkömmlicher Weise aus Milch von Widerkäuern gewonnenem oder rekonstituiertem Lactoserum durch Ultrafiltration an Membranen mit einer Ausschlußgrenze für Molekulargewichte zwischen 10 000 und SO 000 erhalten wird.
Es ist bekannt, daß das in Käserein gewonnene Lactoserum eine gelbliche Flüssigkeit ist, die nach Entfernung von Fettstoffen mittels Zentrifugieren hauptsächlich aus Lactose, Proteinen und Mineralstoffen besteht.
Es ist bereits bekannt, das in Käsereien gewonnene Lactoserum zu behandeln, um die durch dieses verursachten Verunreinigungen zu beseitigen und die Proteine wiederzugewinnen, die im Lactoserum enthalten sind. Das Lactoserum wird in den ivlilchhöfen und Käserien in großen Mengen gewonnen, wobei das Lactoserum in den Käsereien von der Milch herstammt, die einer enzymatischen Behandlung unterworfen worden ist, und zwar insbesondere nach dem herkömmlichen Auspressen. Es ist ebenfalls bekannt, die Proteine des Lactoserums mittels Ultni filtration zu entfernen.
Es ist bekanni, daß N-Acetylneuraminsäure in den Kohlenhydrat-Proteinkomplexen bei Tieren vorhanden ist. Diese Verbindungen werden zur Zeit entweder aus Naturstoffen hergestellt wie beispielsweise aus den Submaxillaris-Drüsen von Rindern oder Schafen oder durch Synthese.
Der vorliegenden Erfindung lag die Aufgabe zugrunde, ein Verfahren zur Gewinnung von N-Acetylneuraminsäure aus Lactoserum oder rekonstituiertem Lactoserum zu entwickeln.
Die Erfindung betrifft daher ein Verfahren zur Gewinnung von N-Acetylneuraminsäure aus einem Proteinkonzentrat, das aus in Käsereien in herkömmlicher Weise aus Milch von Widerkäuern gewonnenem Lactoserum oder rekonstituiertem Lactoserum durch Ultrafiltration an Membranen mit einer Ausschlußgrenze für Molekulargewichte zwischen 10 000 und 50 000 erhalten wird, das dadurch gekennzeichnet ist, daß man
A) das Proteinkonzentrat 30 Minuten auf etwa 95" C oder eine längere Zeit auf eine niedrigere Temperatur erhitzt und den hierdurch erhaltenen überstand abtrennt,
B) die in diesem Überstand enthaltener» Proteine mit Phosphorwolframsäure ausfällt,
C) den gemäß Verfahrensstufe B) erhaltenen Protein-Niederschlag abtrennt und mit diesem Niederschlag eine saure Hydrolyse in an sich bekannter Weise durchführt,
D) den gemäß Verfahrensstufe C) erhaltenen Überstand abtrennt, neutralisiert und daraus in an sich bekannter Weise durch aufeinanderfolgendes Chromatographieren an einem Kationen- und Anionenaustauscher und Eluieren des Anionenaustausehers N-Acetylneuraminsäure gewinnt.
Bei einer bevorzugten Ausführungsform wird in der Verfahrensstufe A) ein mit Wasser auf einen Protein-Trockengehalt in der Größenordnung von 10% verdünntes Proteinkonzentrat eingesetzt.
Als Ausgangsmaterial für das Verfahren nach der Erfindung verwendet man Lactoserum aus Käsereien, das von der Milch von Wiederkäuern, wie beispielsweise Kühen, Ziegen, Schafe. Büffel, stammt. Diese Lactoseren erhält man insbesondere nach einer enzymatischen
■»ο Transformation und insbesondere nach dem Abpressen der Milch. In gleicher Weise läßt sich ein entwässertes Lactoserum verwenden, dem man Wasser zusetzt, bevor man es rekonstituiert, um es als flüssiges Lactoserum für das Verfahren nach der Erfindung zu verwenden.
Die Ultrafiltration wird in üblicher Weise an Membranen mit einer Ausschlußgrenze für Molekulargewichte zwischen 10 000 und 50 000 durchgeführt.
Der aus der Ultrafiltration herstammende Rückstand
so enthält N-Acetylneuraminsäure. B«"vorder Rückstand in Verfahrensabschnitt A) bearbeitet wird, kann man in vorteilhafter Weise die Konzentration der darin enthaltenden Proteine einstellen. Dies kann beispielsweise durch Verdünnung mittels Wasser geschehen bis ein Trockengehalt in der Größenordnung von 10% erreicht wird.
In der Verfahrensstufe A) führt man eine selektive Denaturierung der löslichen Proteine durch eine thermische Ausflockung durch. Dadurch werden die
Albumine und Globuline ausgefällt. Im Überstand bleiben als Glycoproteine die Proteasen und Peptone zurück. Bei dieser Behandlungsstufe wird über einen ausreichenden Zeitraum und bei einer Temperatur erwärmt, die ausreichen, um die Ausfällung der Proteine zu erhalten mit der Ausnahme der Sialoglycoproteine.
Beispielsweise wird 30 Minuten lang auf eine Temperatur von 95°C erhitzt. Falls man bei einer niedrigeren Temperatur arbeitet, muß die Uehandliings-
dauer entsprechend verlängert werden. Auf diese Weise erhält man einen isolierbaren Proteinniederschlag und einen Oberstand, der die N-Acetylneuraminsäure enthält. Um die Abtrennung zu erleichtern, wird das Produkt beispielsweise bis auf eine Temperatur von 4° C abgekühlt. Dies kann in einem normalen Eisschrank geschehen. Der Oberstand und der Proteinniederschlag können dann anschließend in üblicher Weise und vorzugsweise durch Zentrifugierung getrennt werden.
Der aus der Verfahrensstufe A) stammende Oberstand wird anschließend mit einem Reaktionsmittel in Kontakt gebracht, das alle darin enthaltenen Proteine ausfällt Zu diesem Zweck verwendet man Phosphorwolframsäure. Die für die Ausfällung von Proteinen bekannte Trichloressigsäure eignet sich nicht bei dem vorliegenden Verfahren, da es nur einen Teil der Proteine aus dem Überstand ausfällt. Die Bedingungen bei der Verwendung der Phosphorwolframsäure sind nicht kritisch, man arbeitet jedoch in vorteilhafter Weise bei Raumtemperatur.
Man kann in einem saueren Milieu arbeiten, wie beispielsweise in der Gegenwart von Schwefelsäure. Die Konzentration der Phosphorwolframsäure kann in einem Vorversuch festgestellt werden. Normalerweise verwendet man 5 g Phosphorwolframsäure je Liter des Überstandes. Größere Mengen Phosphorwolframsäure bringen keine Vorteile und müssen dann im Verlaufe des weiteren Verfahrens mitgeschleppt werden. Man läßt mit der Phosphorwolframsäure so lange reagieren, bis die Proteine aus dem Überstand ausgefällt worden sind. Bei dem vorliegenden Fall dauert das einige Minuten, wie beispielsweise 5 Minuten bei 25° C
Nach der Behandlung mit Phosphorwolframsäure wird der Proteinniederschlag %n herkömmlicher Weise vom Überstand getrennt wie beispielsweise durch Absauen. Der Niederschlag wird so gew nnen, und der Überstand verworfen. Im Verlaufe der Verfahrensstufe C) hydrolysiert man den im Verfahrensabschnitt B) abgetrennten Niederschlag. Die Hydrolyse wird mittels Säuren durchgeführt Als Säure wird vorzugsweise Schwefelsäure verwendet, es können jedoch auch alle anderen Säuren verwendet werden, wobei nach der Neutralisation leicht ausfällbare Salze gebildet werden sollen. In dieser Hinsicht eignet sich die Salzsäure weniger, da die Chlorionen schwer zu entfernen sind. Die Hydrolyse kann in vorteilhafter Weise bei höheren Temperaturen durchgeführt werden, soll jedoch die Temperatur von 98° C nicht überschreiten. Normalerweise wird etwa bei 900C gearbeitet. Die Säure wird in einer mittleren Konzentration verwendet wie beispielsweise unter 0,5 N und vorzugsweise bei 0.1 N. Die Dauer der Hydrolyse soll ausreichen, um eine vollständige Hydrolyse zu erreichen. Dieser Zeitraum liegt bei etwa einer Stunde.
Das Hydrolyseprodukt wird dann abgekühlt und es bildet sich ein Niederschlag. Der Niederschlag und der Überstand werden in herkömmlicher Weise getrennt wie beispielsweise durch Zentrifugieren. Der Niederschlag wird verworfen, während der Überstand weiter verwendet wird.
In dem Verfahrensabschnitt D) des Verfahrens nach der Erfindung wird der Überstand in verschiedener Weise behandelt, um die N-Acetylneuraminsäure zu extrahieren. Zunächst wird eine Neutralisierung des Überstandes durchgeführt, um die freien SOi -Ionen. b5 die noch im Überstand enthalten sind, als unlösliche Salze zu entfernen. Dies erreicht man am besten durch Zusatz von Bariumhydroxyd im Überschuß, um die
20
25
30
35 Sulfationen zu entfernen.
Dabei wird mit einem Überschuß an Bariumionen etwa beim Neutralpunkt gearbeitet. Anschließend werden die ausgefällten Salze, nämlich die Bariumsulfatsalze, entfernt. Der Überstand wird gegebenenfalls konzentriert und dann über Harzsäulen geführt Zunächst wird über kationischen Harz geführt, um die Demineraiisierung des Oberstandes durchzuführen. Dazu verwendet man beispielsweise das unier der Bezeichnung »DOWEX«® AG 50 WX 8 (H®-Form) vertriebene Harz. Anschließend wird der Oberstand über eine Säule mit einem anionischen Harz geführt, um die N-Acetylneuraminsäure zu binden. Dazu wird das unter der Bezeichnung »DOWEX«® AG 1 X 8 Formiat vertriebene Harz verwendet. Anschließend wird die Säuie mit destilliertem Wasser gewaschen und die N-Acetylneuraminsäure mittels Ameisensäure eluiert, falls man ein anionisches Harz in der Formiatform verwendet Dazu wird beispielsweise eine 0,3molare Ameisensäure verwendet
Man erhält schließlich eine Lösung, aus der man mittels Lyophilisation ein N-Acetylneuraminsäure-Pu!- ver mit hohem Reinheitsgrad isolieren kann.
Beispielsweise kann auch nach der Neutralisation, der Abtrennung des Bariumsulfates und der Klärung des Oberstandes bis zur Trockne eingedampft werden. Das dabei erhaltene Pulver wird dann einer Lösungsmittelextraktion unterworfen, J. h., daß das Pulver durch ein Lösungsmittel oder durch ein Lösungsmittelgemisch aufgenommen wird, in dem die N-Acetylneuraminsäure löslich ist. Dies kann beispielsweise mittels Äthanol oder einer Aceton- Wassermischung geschehen. Die N-Acetylneuraminsäure word anschließend durch Abdampfen des Lösungsmittels isoliert
Die Analyse des Verfahrensproduktes ergab folgende Ergebnisse:
2.
3.
4. 5.
Feuchtigkeit:
0,6-0,7%
Papierchromatographie:
Es wurde ein einziger Bestandteil nachgewiesen, der durch das spezifische Reagenz für Sialinsäuren (Orcinolreagenz; Ehrlichs Reagenz) nachgewiesen wurde und den Rf-Wert der N-Acetylneuraminsäure besitzt.
Gaschromatographie:
Zwei Bestandteile wurden festgestellt:
N-Acetylneuraminsiure: 98%
N-Glycolneuraminsäure: 2%
Drehwert:
[λ] 589.2-31.°90 (Literatur: -32°)
Spektralanalyse:
a) Ultraviolett:
In einer l°/oigen wäßrigen Lösung erhält man ein Absorptionsspektrum, das identisch ist mit dem der handelsüblichen Proben.
b) Sichtbares:
Das Apsorptionsspektrum der Einfärbung, das durch das Niazi und State-Reagenz für Diphenylamine erhalten wird, ist identisch mit dem der handelsüblichen Proben.
Massenspektrographie:
Zwei Bestandteile wurden identifiziert:
N-Acetylneuraminsäure: 98%
N-Glycolneuraminsäure: 1-2%
Außerdem wurde eine unbekannte Substanz festgestellt, die weniger als 1% des Präparates ausmacht.
In den folgenden Beispielen werden bevorzugte Ausführungsformen des Verfahrens nach der Erfindung im einzelnen erläutert:
Beispiel 1
Aus 1000 Litern Kuhmilch wurden in herkömmlicher ]0 Weise 900 Liter Lactoserum in der Käserei hergestellt. Diese 900 Liter Lactoserum wurden in einer Ultrazentrifuge, die mit einer Membran IRIS 3042 ausgestattet war und eine Trennkraft von 15 000 hatte, ultrafiltriert. Das Lactoserum v/urde in die Ultrazentrifuge unter einem Druck von 3 Bar und bei einer Temperatur, die etwa bei Raumtemperatur lag, eingeführt.
In dieser Verfahrensstufe erhielt man 870 Liter Uiirafiltrat, das die Glycopeptide enthielt. Der bei der Ultrafiltration erhaltene Rückstand bestand aus einem Proteinkonzentrat mit einem 20%igen Gehalt an Feststoffen, der etwa 100 g N-Acetylneuraminsäure in gebundener Form enthielt Der Rückstand wurde verdünnt, bis man einen Trockengehalt von 10% erhielt. Anschließend wurden die Proteine durch Erwärmung auf 95° C über einen Zeitraum von 30 Sekunden ausgeflockt. Dann wurde bei 4° C gekühlt und zentrifugiert, wobei man einen Rückstand erhielt, der 60% des anfänglichen Volumens ausmachte. Dies entspricht etwa 50 g N-Acetylneuraminsäure. Der Oberstand wurde durch Zugabe von Phosphorwolframsäure behandelt, wobei 5 g dieser Verbindung je einem Liter des Überstandes zugesetzt wurden und die Reaktion wurde unter Rühren 5 Minuten lang bei 25° C durchgeführt. Der dabei erhaltene Niederschlag wurde j5 abgetrennt und der Überstand verworfen. Der Niederschlag enthielt 22 g N-Acetylneuraminsäure in gebundener Form.
Dieser Niederschlag wurde einer sauren Hydrolyse unterworfen, wobei man eine 0,1 normale Schwefelsäure 60 Minuten lang bei 90°C einwirken ließ. Um die Abtrennung des Niederschlages zu erleichtern, wurde auf 4°C abgekühlt und anschließend der Niederschlag vom Überstand mittels Zentrifugieren abgetrennt. Der Niederschlag wurde verworfen und der Überstand, der etwa 20 g N-Acetylneuraminsäure enthielt, weiter bearbeitet.
Der Überstand wird neutralisiert, indem eine wäßrige gesättigte Lösung von Bariumhydroxyd zugesetzt wird, bis ein neutraler pH-Wert erreicht wurde. Dadurch wurden die überschüssigen Sulfationen ausgefällt, und zwar in Form von Bariumsulfat. Anschließend wurde geklärt und das Bariumsulfat entfernt. Der dabei erhaltene Überstand enthielt 19 g N-Acetylneuraminsäure. Dieser Überstand wurde konzentriert, und zwar beispielsweise, indem sein Volumen um das vier- bis sechsfache reduziert wurde. Dies kann in vorteilhafter Weise erreicht werden durch Verwendung eines Rotationsverdampfers, wobei unter Vakuum, bei einer Temperatur von 45'C und bei einem Druck von 20 bis 30 mm Hg gearbeitet wurde. Anschließend läßt man die so erhaltene konzentrierte Lösung zwecks Demineralisierung über eine Säule laufen, die mit einem kationischen Harz beladen war wie beispielsweise DOWEX® AG 50 WX 8 (H®-Form). Anschließend ließ man die erhaltene Lösung über eine Säule laufen, die mit einem anionischen Harz wie l^OWEX® AG 1 X 8-Formiat beladen war, um die N-Acetylneuraminsäure zu binden. Anschließend wurde die Säule mit doppelt destilliertem Wasser gewaschen und die N-Acetylneuraminsäure mittels einer 03molaren Ameisensäure eluiert. Auf diese Weise konnten 70% der auf dem anionischen Harz fixierten N-Acetylneuraminsäure wiedergewonnen werden. Die Lyophilisation der ameisensäurehaltigen Lösung ergab 13 g eines sehr reinen N-Acetyineuraminsäurepulvers.
Beispiel 2
Bei diesem Beispiel wurde unter identischen Bedingungen wie im Beispiel 1 gearbeitet, es wurde jedoch von 1000 Litern Schafmilch ausgegangen. Bei diesem Beispiel erhielt man fast äquivalente Ergebnisse.
Beispiel 3
Bei diesem Beispiel wurde wie in Beispiel 1 gearbeitet mit der Ausnahme, daß von einem flüssigen Lactoserum ausgegangen wurde, das durch Regenerierung von pulverförmigem Lactoserum hergestellt wurde. Für die Herstellung von 900 Litern flüssigem Lactoserum mußten 50 kg Lactoserumpulver verwe.vdet werden.

Claims (1)

Patentansprüche:
1. Verfahren zur Gewinnung von N-Acetylneuraminsäure aus einem Protein-Konzentrat, dais aus in Käsereien in herkömmlicher Weise aus Milch von Wiederkäuern gewonnenem Lactoserum oder rekonstituiertem Laetoserum durch Ultrafiltration an Membranen mit einer Ausschlußgrenze für Molekulargewichte zwischen 10 000 und 50 000 erhalten wird, dadurch gekennzeichnet, daß man
A) das Protein-Konzentrat 30 Minuten auf etwa 95° C oder eine längere Zeit auf eine niedrigere Temperatur erhitzt und den hierdurch erhaltenen Überstand abtrennt,
B) die in diesem Oberstand enthaltenen Proteine mit Phosphorwolframsäure ausfällt,
C) den gemäß Verfahrensstufe B) erhaltenen Protein-Niederschlag abtrennt und mit diesem Niederschlag eine saure Hydrolyse in an sich bekannter Weise durchführt
D) den gemäß Verfahrensstufe C) erhaltenen Überstand abtrennt, neutralisiert und daraus in an sich bekannter Weise durch aufeinanderfolgendes Chromatographieren an einem Kationen- und Anionenaustauscher und Eluieren des Anionenaustauschers N-Acetylneuraminsäure gewinnt.
Z Verfahren nach Anspruch t, dadurch gekennzeichnet, daß man in die Verfahrensstufe A) ein mit Wasser auf einen Protein-Trocker.gehalt in der Größenordnung von 10% verdünntes Protein-Konzentrat einsetzt
DE2547349A 1974-10-22 1975-10-22 Verfahren zur Gewinnung von N-Acetylneuraminsäure aus einem Protein-Konzentrat Expired DE2547349C2 (de)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR7435495A FR2288473A1 (fr) 1974-10-22 1974-10-22 Procede de traitement du lactoserum de fromagerie, notamment en vue de l'extraction de glycoproteides et d'acide sialique

Publications (2)

Publication Number Publication Date
DE2547349A1 DE2547349A1 (de) 1976-05-06
DE2547349C2 true DE2547349C2 (de) 1983-09-15

Family

ID=9144365

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DE2547349A Expired DE2547349C2 (de) 1974-10-22 1975-10-22 Verfahren zur Gewinnung von N-Acetylneuraminsäure aus einem Protein-Konzentrat

Country Status (17)

Country Link
US (1) US4042575A (de)
JP (1) JPS5823400B2 (de)
AU (1) AU498773B2 (de)
BE (1) BE834542A (de)
CA (1) CA1055413A (de)
CH (1) CH610729A5 (de)
DE (1) DE2547349C2 (de)
DK (1) DK148357C (de)
FI (1) FI59701C (de)
FR (1) FR2288473A1 (de)
GB (1) GB1519815A (de)
IT (1) IT1048074B (de)
LU (1) LU73609A1 (de)
NL (1) NL7512339A (de)
NO (1) NO145009C (de)
NZ (1) NZ179009A (de)
SE (1) SE441832B (de)

Families Citing this family (29)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CH630243A5 (fr) * 1978-05-11 1982-06-15 Nestle Sa Procede de recuperation des proteines du lactoserum.
FR2459619B1 (fr) * 1979-06-26 1983-07-29 Agronomique Inst Nat Rech Procede pour l'obtention a partir de lactoserum, d'un produit enrichi en alpha-lactalbumine et applications dudit procede
AU569047B2 (en) * 1982-09-14 1988-01-21 Igi Biotechnology Inc. Conversion of clarified dairy whey lactose permeates to culture media and other commercially useful products
US4816252A (en) * 1985-04-15 1989-03-28 Protein Technology, Inc. Product and process for transferring passive immunity to newborn domestic animals using ultrafiltered whey containing immunoglobulins
US5198213A (en) * 1985-04-15 1993-03-30 Protein Technology, Inc. Method of disease treatment utilizing an immunologically whey fraction
CH671879A5 (de) * 1987-02-26 1989-10-13 Nestle Sa
JP2631470B2 (ja) * 1987-05-15 1997-07-16 雪印乳業株式会社 感染防御剤
US5344820A (en) * 1987-05-15 1994-09-06 Snow Brand Milk Products Co., Ltd. Infection protectant
DD273543A3 (de) * 1987-09-14 1989-11-22 Univ Rostock Verfahren zur herstellung von saeuglings- und diaetnahrungen mit hypoantigener, bifidogener wirkung
DE3743440A1 (de) * 1987-12-21 1989-06-29 Gauri Kailash Kumar Verfahren zum trennen der geloesten und ungeloesten bestandteile von milch
JP2684179B2 (ja) * 1987-12-21 1997-12-03 雪印乳業株式会社 抗炎症剤
JPH0631286B2 (ja) * 1987-12-24 1994-04-27 雪印乳業株式会社 シアル酸類含有組成物の製造法
US5112636A (en) * 1989-01-13 1992-05-12 Immunopath Profile, Inc. Hypoallergenic butter and process of making
US5064674A (en) * 1989-01-13 1991-11-12 Immunopath Profile, Inc. Hypoallergenic milk products and process of making
US5204134A (en) * 1989-01-13 1993-04-20 Immuno Path Profile, Inc. Hypoallergenic milk products from natural and/or synthetic components and process of making
US4954361A (en) * 1989-01-13 1990-09-04 Immunopath Profile, Inc. Hypoallergenic milk products and process of making
US5186971A (en) * 1989-01-13 1993-02-16 Immunopath Profile, Inc. Hypoallergenic milk products and process of making
CH681543A5 (de) * 1990-04-27 1993-04-15 Nestle Sa
JP3035833B2 (ja) * 1991-01-21 2000-04-24 雪印乳業株式会社 シアル酸類含有組成物の製造方法
US5248418A (en) * 1991-02-20 1993-09-28 Eastman Kodak Company 2-stage ultrafiltration system for photographic emulsions
DK170035B1 (da) * 1992-05-04 1995-05-08 Md Foods Amba Fremgangsmåde til regulering af mælketørstofbestanddele i koncentrerede mælkeprodukter i forbindelse med ultrafiltrering
US5707678A (en) * 1995-04-12 1998-01-13 Galagen Inc. Method for microfiltration of milk or colostral whey
US5670196A (en) * 1995-04-12 1997-09-23 Galagen Inc. Method for microfiltration of milk or colostral whey
WO1998014071A1 (en) 1996-10-01 1998-04-09 John Stephen Ayers Process for isolating glycomacropeptide from dairy products with a phenylalanine impurity of 0.5 %w/w
NZ507335A (en) * 2000-10-05 2004-10-29 New Zealand Dairy Board Bone health compositions derived from milk comprising an acidic protein fraction but that does not contain CGMP
EP1798237A1 (de) * 2005-12-16 2007-06-20 Pharmatex Italia Srl Prozess zur Reinigung von Makrolid-Antibiotika
CN101686716B (zh) * 2007-06-25 2013-12-18 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 益生元
CN108997450A (zh) * 2018-06-28 2018-12-14 燕生（福建）生物工程有限公司 一种结晶方式从燕窝中提取燕窝酸的方法
CN116998555A (zh) * 2023-08-02 2023-11-07 安徽天凯生物科技有限公司 一种同时制备零糖乳蛋白、唾液酸及脱盐乳清粉的方法和装置

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR1536183A (fr) * 1966-06-27 1968-08-27 Genvrain S A Amélioration à l'extraction des protéines du lactosérum
FR2232999B1 (de) * 1973-06-18 1976-11-12 Claudel Sa

Also Published As

Publication number Publication date
CH610729A5 (de) 1979-05-15
FI59701C (fi) 1981-10-12
BE834542A (fr) 1976-04-15
FR2288473A1 (fr) 1976-05-21
FI59701B (fi) 1981-06-30
CA1055413A (en) 1979-05-29
FR2288473B1 (de) 1977-03-18
LU73609A1 (de) 1977-05-24
SE7511694L (sv) 1976-04-23
IT1048074B (it) 1980-11-20
US4042575A (en) 1977-08-16
AU8590575A (en) 1977-04-28
JPS5823400B2 (ja) 1983-05-14
NZ179009A (en) 1978-04-03
JPS5191358A (de) 1976-08-10
DK148357C (da) 1985-12-09
NO145009C (no) 1981-12-28
DK472875A (da) 1976-04-23
AU498773B2 (en) 1979-03-22
FI752934A (de) 1976-04-23
NL7512339A (nl) 1976-04-26
NO145009B (no) 1981-09-14
SE441832B (sv) 1985-11-11
GB1519815A (en) 1978-08-02
DK148357B (da) 1985-06-17
NO753531L (de) 1976-04-23
DE2547349A1 (de) 1976-05-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DE2547349C2 (de) Verfahren zur Gewinnung von N-Acetylneuraminsäure aus einem Protein-Konzentrat
DE2547354C2 (de) Verfahren zur Gewinnung von N-Acetylneuraminsäure aus einem Protein-Konzentrat
DE69836909T2 (de) Verfahren zur behandlung eines gmp enthaltenden milchprodukts
DE69102401T2 (de) Verfahren zur Herstellung von kappa-Casein-Glycomakropeptid.
DE69300674T2 (de) Verfahren zur isolierung von lactoferrin und lactoperoxidase aus milch und milchprodukten.
DE69000720T2 (de) Verfahren zur herstellung von kappa-casein-glykomakropeptiden.
DE2319581C2 (de) Verfahren zur chromatographischen Fraktionierung von Molke
DE69220374T2 (de) Verfahren zur Gewinnung von Alpha-Lactalbumin und Beta-Lactoglobulin aus einem Molkeproteinprodukt
DE69122936T2 (de) Verfahren zur Herstellung von Sialsäure
DE3623474C2 (de) Verfahren zur Extraktion von Lactotransferrin in der Milch und pharmazeutische Zusammensetzungen
DE69131284T2 (de) Sekretionskörper enthaltende Zusammensetzung
DE3876967T2 (de) Kontinuierliches verfahren zur gewinnung von gelatine aus knochenpulver und hergestellte gelatine.
EP2617727B1 (de) Verfahren zur Ausbeuteverbesserung bei der Gewinnung von im Wesentlichen mineralstofffreier Lactose aus Molke
DE69110151T2 (de) Formulierte Milch für Kleinkinder analog der Muttermilch.
EP0433885B1 (de) Verfahren zur Fraktionierung von Milch oder Milcherzeugnissen
DE60009778T2 (de) Verfahren zur Herstellung einer Zusammensetzung mit hohem Gangliosidgehalt
DE4227666A1 (de) Verfahren zur Gewinnung natürlicher Milchproteine
DE2821392C3 (de) Verfahren zur Gewinnung von Milchproteinen
DE2855827C2 (de) Verfahren zur Gewinnung von Human-Chorion-Somatomammotropin
DE2424118B2 (de) Verfahren zur herstellung von hochreinem kallikrein
DE2333884C3 (de) Verfahren zum Herstellen von hochgereinigtem Humanalbumin
DE3045910C2 (de)
AT326470B (de) Verfahren zur herstellung eines eiweissproduktes aus sojabohnen
DE2559588B2 (de) Verfahren zur Reinigung von Kallidinogenase
DE1492047C (de) Verfahren zur Gewinnung eines Poly peptids mit immunisierender Wirkung

Legal Events

Date Code Title Description
8128 New person/name/address of the agent

Representative=s name: HAIN, L., DIPL.-ING., PAT.-ANW., 8000 MUENCHEN

D2 Grant after examination
8364 No opposition during term of opposition
8339 Ceased/non-payment of the annual fee