DE2559588B2

DE2559588B2 - Verfahren zur Reinigung von Kallidinogenase

Info

Publication number: DE2559588B2
Application number: DE2559588A
Authority: DE
Inventors: Chizuko Hino Tokio Nakahara; Kiyochika Higashi-Yamato Tokio Tokuyasu; Takeshi Sayama Saitama Yokobori
Original assignee: Seikagaku Corp
Current assignee: Seikagaku Corp
Priority date: 1975-12-05
Filing date: 1975-12-10
Publication date: 1980-07-31
Also published as: CH624991A5; DE2555587A1; DE2559588A1; US3994782A; CA1061269A; DE2559588C3; GB1522358A; CA1057221A; DE2555587B2; FR2334689A1; FR2334689B1; DE2555587C3; GB1522359A

Description

Die Erfindung bezieht sich auf ein Verfahren zur Reinigung von Kallidinogenase, wobei ein aus dem Pancreas eines Säugetiers gewonnener Kallidinogenase enthaltender wäßriger Extrakt einer Adsorptions-Eluierungsbehandlung unterworfen wird, wobei diese wäßrige Lösung mit einem schwach basischen Anionanaustauscher bei einer Temperatur, bei welcher sich Kallidinogenase nicht zersetzt, vorzugsweise bei Raumtemperatur, und bei einem pH-Wert von mehr als etwa 4, jedoch unterhalb etwa 8 in Berührung gebracht wird und die Kallidinogenasefraktion an dem Anionenaustauscherharz adsorbiert wird, und die Kallidinogenase mit einer wäßrigen Lösung eines Ammoniumsalzes einer schwachen Säure bei einer Temperatur, bei welcher sich die Kallidinogenase nicht zersetzt, vorzugsweise bei Raumtemperatur, und bei einem pH-Wert von etwa 6 bis 7 eluiert und die Kallidinogenase gesammelt wird.

Es ist bereits bekannt, Kallidinogenase, ein Kreislaufhormon, aus dem »Pancreas von Säugetieren«, wie es hier angegeben wird, beispielsweise dem Pancreas von Säugetieren selbst, einem Pulver des Pancreas oder dem kallidinogenase-haltigen Extrakt des Pancreas zu extrahieren und die extrahierte rohe Kallidinogenase zu reinigen.

Das übliche Verfahren zur Extraktion vor, Kallidinogenase aus dem Pancreas von Säugetieren umfaßt die Behandlung eines Pancreas mit hohem Fettgehalt zur Fettentfernung, wofür jedoch ein kompliziertes Verfahren erforderlich ist, und die anschließende Extraktion des entfetteten Pacreas mit Wasser bei erhöhter Temperatur bei einem pH-Wert von etwa 4 bis etwa 7. Wenn die Fettentfernungsbehandlung bei diesem Verfahren weggelassen wird, werden Extraktionsarbeitsgang und die Arbeitsweise zur Abtrennung und Sammlung der wäßrigen Phase äußerst schwierig. Das Verfahren zeigt auch den Nachteil, daß selbst nach der Durchführung der Fettentfernungsbehandlung der Extraktionsarbeitsgang und die Abtrennung der wäßrigen Phase noch schwierig sind und daß die Ausbeute an Kallidinogenase niedrig ist

Gemäß einem verbesserten Verfahren wird der vorstehend beschriebene Extraktionsarbeitsgang unter Anwendung einer wäßrigen Lösung eines Alkalisalzes,

ίο wie Natriumchlorid oder eines Ammoniumsalzes in Gegenwart eines organischen Lösungsmittels bei eirem pH-Wert von 5,5 bis 9,7 durchgeführt (vgl. J P-Patentveröffentlichung 17 041/73). Obgleich dieses Verfahren gegenüber dem Verfahren, bei welchem keine Salze verwendet werden, überlegen ist, ist es jedoch mit Nachteilen infolge der Anwendung von organischen Lösungsmitteln verbunden. Weitere Verbesserungen hinsichtlich der Ausbeute (Aktivität), der Wärmestabilität und der Trübung der Kallidinogenase während der Extraktionsstufe sind noch erwünscht Es sind ferner verschiedene Arbeitsweisen hinsichtlich der Reinigung von kallidinogenase-haltigen wäßrigen Extrakten, die aus dem Pancreas von Säugetieren erhalten wurden, durch Adsorptions-Elutions-Verfahren bekannt. Beispielsweise wurden zwei Arten von Reinigungsverfahren vorgeschlagen, wovon die eine Art auf der Anwendung eines Nicht-Harz-Materials vom Polysaccharidtyp beruht, die beispielsweise ein Verfahren umfaßt, wobei die rohe Kallidinogenase an einer

jo schwach basischen Anionenaustauschcellulose adsorbiert wird und abgetrennt wird (vgl. JP-Patentveröffentlichung 11 697/62), und ein Verfahren, welches den Zusatz eines Blei- oder Zinksalzes zu einer wäßrigen kallidinogenase-haltigen Lösung umfaßt, wobei der erhaltene KaJiidinogenase-niederschlag an einer schwach basischen Anionanaustauschcellulose oder einem vernetzten Dextran adsorbiert und abgetrennt wird (vgl. J P-Patentveröffentlichung 56 889/73, entsprechend der DE-OS 21 54 557), während die andere Art auf der Anwendung von Ionenaustauscherharzen beruht, welche beispielsweise ein Verfahren umfassen, das den Zusatz eines Proteinausfällungsmittels zu einem Extrakt von Gewebezellen des Pancreas, Adsorption der erhaltenen Kallidinogenase an einem makroporösen stark basischen Anionenaustauscherharz und deren Abtrennung umfaßt (vgl. JP-Patentveröffent!ichung 10 37 15/73).

Die Verfahren, bei denen als Adsorptionsmittel ein Nicht-Harzmaterial vom Polysaccharidtyp verwendet wird, haben den Nachteil, daß die physikalische Festigkeit des Ionenaustauschermaterials nicht ausreichend ist und eine Verunreinigung durch Mikroorganismen leicht auftritt, so daß sie deshalb für die großtechnische Durchführung nicht geeignet sind.

Andererseits hat die andere Art den Vorteil, daß die vorstehenden Störungen vermieden werden, ist jedoch unzufriedenstellend beispielsweise hinsichtlich der Eluierung des gewünschten Produktes und der Entfernung von unerwünschten Kininase.

w) Aufgabe der Erfindung ist daher die Schaffung eines Verfahrens zur Reinigung von Kallodinogenase, wonach die Entfernung der unerwünschten Kininase zufriedenstellend ermöglicht und Kallidinogenase in zufriedenstellender Wirksamkeit gewonnen werden

ti^ri kann.

Die Lösung dieser Aufgabe erfolgt gemäß der Erfindung durch ein Verfahren zur Reinigung von Kallidinogenase, wobei ein aus dem Pancreas eines

Säugetiers gewonnener KaUidinogenase enthaltender wäßriger Extrakt einer Adsorptions-Eiuierungsbehandlung unterworfen wird, wobei diese wäßrige Lösung mit einem schwach basischen Anionenaustauscher bei einer Temperatur, bei welcher sich KaUidinogenase nicht s zersetzt, vorzugsweise bei Raumtemperatur, und bei einem pH-Wert von mehr als etwa 4, jedoch unterhalb etwa 8 in Berührung gebracht wird und die KaJlidinogenasefraktion an dem A.nionenaustauscherharz adsorbiert wird, und die KaUidinogenase mit einer wäßrigen ι ο Lösung eines Ammoniumsalzes einer schwachen Säure bei einer Temperatur, bei welcher sich die KaUidinogenase nicht zersetzt, vorzugsweise bei Raumtemperatur, und bei einem pH-Wert von etwa 6 bis 7 eluiert und die KaUidinogenase gesammelt wird, das dadurch gekennzeichnet ist, daß als schwach basischer Anionenaustauscher ein ffhwach basisches Anionenaustauscherharz vom Geltyp und Nicht-Polysaccharidtyp verwendet wird.

Mit Hilfe des Verfahrens gemäß der Erfindung kann jo ein größerer Teil der unerwünschten Kininase vollständig in der Waschstufe nach der Adsorption entfernt werden und die adsorbierte KaUidinogenase kann mit guter Wirksamkeit und guten Gewinnungsverhältnissen bei der anschließenden Eluierstufe eluiert und zurückgewonnen werden, was weniger zeitraubend als bei den bisherigen Verfahren ist Es wurde auch gefunden, daß dieser überlegene Reinigungseffekt nicht erhalten wird, wenn ein stark basisches Anionenaustauscherharz vom Geltyp oder ein makroporöses schwach basisches Anionenaustauscherharz verwendet werden; dieser einzigartige Effekt wird lediglich bei Verwendung des schwach basischen Anionenaustauscherharzes vom Geltyp und Nicht-Polysaccharidtyp erhalten.

Wie aus den nachstehenden Vcrgleichsversuchen κ hervorgeht, können nach dem Verfahren gemäß der Erfindung bessere Ergebnisse erzielt werden als im Fall der Anwendung der Alkalisalze oder Ammoniumsalze gemäß der JP-Patentanmeldung 17 041/73, wobei die gemäß der Erfindung erzielbare Verbesserung selbst dann nicht erreicht werden kann, wenn Salze von Calcium oder Aluminium verwendet werden.

Das verwendete Pancreas von Säugetieren kann ein verdünntes oder zerkleinertes Produkt des rohen Pancreas von Säugetieren, wie Schweinen, Kühen, Pferden oder Walen sein oder ein acetonbehandeltes Pancreaspulver oder ein Wasserextrakt des Pancreas. Gemäß der Erfindung ist es nicht notwendig, das rohe Pancreas einer komplizierten Entfettungsbehandlung vorhergehend zu unterziehen, und es kann das rohe Pancreas in geeigneter Verdünnung für die Durchführung der Extraktion direkt verwendet werden.

Das Reinigungsverfahren geht von einem aus dem Pancreas eines Säugetieres gewonnenen KaUidinogenase enthaltenden wäßrigen Extrakt aus, der nach beliebigen Verfahren erhalten werden kann.

Es wurde gefunden, daß mit einem makroporösen, stark basischen Anionenaustauscherharz und einein makroporösen schwach basischen Anionenaustauscherharz die Eluierung der daran adsorbierten Kallidinoge- fco nase langsam ist und daß zur vollständigen Eluierung und Abtrennung eine große Menge an Lösungsmittel iind ein langer Zeitraum erforderlich ist, und weiterhin die Verunreinigungen die abgetrennte KaUidinogenase begleiten, daß jedoch bei Anwendung eines schwach b5 basischen Anionenaustauscherharzes von Geltyp und Nicht-Polysaccharidtyp die daran adsorbierte KaUidinogenase sehr rasch unter Anwendung einer wäßrigen Lösung eines Ammoniumsalzes einer schwachen Säure a!s Eluierlösungsmittel eluiert wird und leicht von den Verunreinigungen abgetrennt werden kann.

Entsprechend dem Reinigungsverfahren gemäß der Erfindung wird der kallidinogenase-haltige wäßrige Extrakt durch eine Säule eines schwach basischen Anionenaustauscherharzes von Geltyp, wobei dieses Harz nicht dem Polysaccharidtyp angehört, geführt, um den Kontakt zwischen dem wäßrigen Extrakt und dem Ionenaustauscherharz sicherzustellen und dadurch die Kallidinogenasefraktion an dem Ionenaustauscherharz zu adsorbieren. Der Adsorptionsarbeitsgang kann bei einem pH-Wert von etwa 5 bis etwa 7, insbesondere etwa 6 ± 0,5 ausgeführt werden. Bei pH-Werten außerhalb des erfindungsgemäß angegebenen Bereiches wird die Kallidinogena?e deaktiviert und bei einem pH-Wert von oberhalb etwa 8 nimmt die Menge der nicht adsorbierten KaUidinogenase za Infolgedessen werden Ausbeute und Reinheit der KaUidinogenase verringert

Die an dem schwach basischen Anionenaustauscherharz vom Geltyp und Nicht-Polysaccharidtyp adsorbierte KaUidinogenase wird unter Anwendung einer wäßrigen Lösung eines Ammoniumsalzes einer schwachen Säure bei einem pH-Wert von etwa 6 bis etwa 7 eluiert. Die Adsorption und Elution werden vorzugsweise bei Raumtemperatur ausgeführt. Das Salz kann aus dem Eluat durch Maßnahmen, wie Dialyse oder Ultrafiltration abgetrennt werden und das erhaltene Produkt kann bei Temperaturen unterhalb der Zersetzungstemperatur der KaUidinogenase, üblicherweise unterhalb etwa 60⁰C, getrocknet werden. Die Trocknung kann beispielsweise durch Lyophilisierung oder Sprühtrocknungsverfahren erfolgen.

Das bei der Durchführung des vorstehenden Reinigungsverfahrens eingesetze schwach basische Anionenaustauschharz vom Geltyp und Nicht-Polysaccharidtyp besteht vorzugsweise aus einem Harz mit einem sekundären oder tertiären Amin als Austauschgruppe. Beispiele hierfür sind Harze vom Divinylbenzolacrylattyp und Harze vom Styroldivinylbenzoltyp.

Um den Effekt des schwach basischen Anionenaustauschharzes vom Geltyp und Nicht-Polysaccharidtyp zu zeigen, wurde der folgende Versuch einerseits unter Anwendung von einem Harz vom Divinylbenzolacrylattyp (DIAION WA 10) als schwach basisches Anionenaustauschharz vom Geltyp und Nicht-Polysaccharidtyp gemäß der Erfindung und andererseits unter Anwendung eines makroporösen schwach basischen Anionenaustauscherharzes (DIAION WA 30), eines stark basischen Anionenaustauschharzes vom Geltyp (DIAION SA 21A) und eines makroporösen stark basischen Anionenaustauschharzes (DlAION HPA 10) durchgeführt.

Das Versuchsverfahren bestand darin, daß 300 ml eines Extraktes von rohem Schweinepancreas (3 BAEE-Einheiten/ml als KaUidinogenase) durch eine Säule (3 χ 25 cm) jedes der vorstehend aufgeführten Ionenaustauschharze geführt werden, das Harz mit einer 0,2-m-Lösung von Ammoniumacetat (pH 6,0) gewaschen wurde und der Extrakt unter Anwendung einer 0,4-m-Lösung von Ammoniumacetat (pH 6,0) mit einer Strömungsgeschwindigkeit von 500 ml/Std. eluiert wurde, wobei das Eluat in Fraktionen jeweils mit einem Volumen von 19 ml je Versuchsrohr gesammelt wurde. Die Ergebnisse sind in Tabelle I zusammengefaßt.

In der Tabelle I ist die KaUidinogenase in BAEE-Einheiten angegeben.

Die Carboxypeptidase (CPase) wird durch die HPLA-Zersetzungsaktivität (Hippuryi-L-0-phenyllactat) angegeben. Eine HPLA-Einheit i.;t die erforderliche Menge an CPase zur Zersetzung von 1 μ-Mol HPLA je 1 min, falls die CBase auf HPLA einwirkt Die Bestimmung der HPLA-Zersetzungsaktivität wurde erfindungsgemäß als Verfahren zur Feststellung der Kininasefraktion bei der Chromatographie angewandt.

Tabelle I

	Erste Fraktion	Erfindungsgemäß	CPase	Vergleich 1	CPase	Vergleich 2	CPase	Vergleich	3	CPase
Ionenaustauschharz	l.bis 16.	DIAION WA 10	39 000	DIAION WA 30	107 000	DIAION SA 21A	50 000	DIAION	HPA 10	88 000
Eigenschaften des	Versuchsrohr	Schwach basisch,	38 400	Schwach basisch	31200	stark basisch	15000	stark basisch	80 000
lonenaustav.schharzes	(0-304 ml)	Geltyp	(98)	makroporös	(29)	Geltyp	(30)	makroporös	(91)
Menge des Extraktes von	Zweite Fraktion	300 ml		300 ml		300 ml		300 ml
Schweinepancreas	17. bis 46.		250		61360		890		3000
Enzyme	Versuchsrohr	*KA)**	(0,6)	KA	(57)	KA	(2)	KA	(3)
Adsorbierte Menge	(305-874 ml)	SOO		900		800		900
Menge der während der Wäsche	Dritte Fraktion	0		0		0		0
eluierten Enzyme	47. bis 96.	(0)	0	(0)	14 250	(0)	0	(0)	2000
	Versuchsrohr		(0)		(13)		(0)		(2)
	(875-!824 ml)	790		190		92		420
	(99)		(21)		(H)		(47)
		0		144		0		0
Menge des		(0)		(0,1)		(0)		(0)
eluierten	0		405		0		380
Enzyms	(0)	(45)	(0)	(42)


	0	300	0	50
	(0)	(33)	(0)	(6)

*) KA bedeutet Kallidinogenase.

Die Wei te in Klammern geben die Prozentsätze des Betrages des eluierten Enzyms, bezogen auf die Menge des an dem Ionenaustauschharz adsorbierten Enzyms an.

Die biologische Aktivität der Kelndinogenase in solchen eluierten Fraktionen, welche eine BAEE-Zersetzungsaktivität hatten, wurde durch Einöhung des Blutströmungsverfahrens festgestellt und die biologische Aktivität der Kininase in solchen eluierten Fraktionen, die eine HPLA-Zersetzungsakiivität hatten, wurde durch das Schrumpfungsverfahren des glatten Muskels am Rattenuterus festgestellt (sh. Hiroshi Moriya, »Basic Lectures in the Development of Medicines«, Band 5, Pharmacological Test Methods, so Seite 974, japanische Veröffentlichung der Chijin Shokan Company, Tokyo, 1971.

Es ist aus den Ergebnissen der Tabelle 1 ersichtlich, daß nach dem Reinigungsverfahren gemäß der Erfindung unter Anwendung eines schwach basischen Anionenaustauschharzes vom Geltyp und Nicht-Polysaccharidtyp etwa 99% der Kaliidinogenase in der · ersten Fraktion von 304 ml eluiert und gewonnen wurden und daß die Eluierungs- und Gewinnungswirksamkeit weit überlegen gegenüber denjenigen war, .ie bo sie im Fall der Anwendung von stark basischen Anionenaustauschharzen von Geltyp, makroporösen stark basischen Anionenaustauschharzen und makroporösen schwach basischen Anionenaustauschharzen erhalten wurden. Die Ergebnisse zeigen auch, daß die μ Menge der CPase, eir.er unerwünschten Verunreinigung, weit kleiner bei den erfindungsgemäßen Versuchen als bei den Vergieichsversuchen ist; zum Zeitpunkt der Wäsche des Harzes vor der Eluierung kann ein größerer Teil (98%) der adsorbierten CPase entfernt werden; praktisch die gesamte Kailädinogenase (99%) kann in der frühen Stufe der Eluierung eluiert und gewonnen werden, wobei die Menge an CPase sehr klein (0.6%) ist und die gereinigte Kallidinogenase, die durch einen Kreislauf von Adsorption-Elution-Verfahren erhalten wurde, eine sehr gute Qualität hat.

Die folgenden Beispiele erläutern die Erfindung im einzelnen. In diesen Beispielen betrugen die essentiellen Pancreasgehalte etwa 50 Gew.-°/o, bezogen auf eingesetzte Pancreas. Das Pancreas wurde ohne Entfernung des Fettes verwendet.

Kininaseaktivität ist in Kininaseeinheiten angegeben, Eine Kininaseeinheit ist die erforderliche Menge, um 1 ng Bradykinin je min zu zersetzen.

Beispiel 1

300 g rohes Schweinepancreas wurde zerschnitzelt und 900 ml Wasser zugesetzt und der pH-Wert des Gemisches auf 6 eingestellt. 6,25 g (Konzentration 0,03 m) Magnesiumacetat wurden zum Gemisch zuge- und gebenallesgründlich verinischt. Das Gemisch wurde bei etwa 50⁰C während 1,5 Std. stehengelassen. Das Gemisch wurde bei Raumtemperatur zur Entfernung der das Fett enthaltenden Oberschicht stehengelassen. Die Bodenschicht wurde einer Zentrifugalabscheidung unterworfen, wobei 800 ml des Extraktes erhalten wurden. Der Extrakt wurde durch eine Säule (3 χ 25 cm) eines schwach basischen Anionenaustauschharzes vom (ieityp und Nicht-Poiysaccharidtyp DA!N WA 10). gepuffer i mit einer 0,1 ό-111-Lüsung

von AiTimoniumacetat (pH 6,0). gegeben und nach der Wäsche des Harzes mit einer 0,2m·Ammoniuniacetatlösunj; eluiert (pH 6,0).

Das Salz wurde aus dem Eluat entfernt und die erhaltene Kallidinogenasefraktion lyophilisiert, wobei 148 mg (117,7 KU/mg) Kallidinogenase erhalten wurden. Die Kininase-Einheit dieses Produktes je Kallidinogeniise-Einheit (KU) betrug lediglich 0,5.

Beispiel 2

30 g eines acetongetrockneten Pancreaspulvers wurden gut mit ihrer 30fachen Wassermenge vermischt und der pH-Wert des Gemisches auf 6 eingetstellt- 3,2 g (Konzentration 0.05m) Magnesiumsulfat wurden zum Gemisch zugesetzt und alles gründlich vermischt. Das Gemisch wurde bei etwa 45⁰C während 2 Std. stehengelassen. Das Gemisch wurde dann bei Raumtemperatur stehengelassen und die Oberschicht, welche Feststoffe, wie unlösliches Protein enthielt, wurde entfernt. Die Bodenschicht wurde einer Zentrifugalabtrennung unterworfen und 550 ml Extrakt erhalten. Der Extrakt wurde durch eine Kolonne (3 χ 25 cm) eines schwach basischen Anionenaustauschharzes vom Geltyp und Nicht-Poiysaccharidtyp (AMBERLITE IRX 68), gepuffert mit einer 0,15m-Ammoniumacetatlösung (pH 6,0), gegeben und nach der Wäsche des Harzes mit 600 ml einer 0,2m-Ammoniumacetatlösung (pH 6,0) wurde der Extrakt mit einer O,4m-Ammoniumacetatlösung (pH 6,0) eluiert.

Dns Salz wurde aus dem Eluat entfernt und die erhaltene Kallidinogenasefraktion lyophilisiert, so daß 156 mg (142,3 KU/mg) Kallidinogenase erhalten wurden. Die Kininase-Einheit dieses Produktes je Kallidinogenase-Einheit (KU) betrug lediglich 1.

Beispiel 3

A) 500 g rohes Schweinepancreas wurde zerschnitzelt und :2000 ml Wasser wurden zugesetzt Der pH-Wert des Gemisches wurde auf 6,0 eingestellt. 12 g (Konzentration 0,05m) Magnesiumsulfat wurden zu dem vorstehenden Gemisch zugesetzt und alles gründlich vermischt. Das Gemisch wurde bei etwa 50⁰C während ■■> 1,5 Std. stehengelassen. Der als Bodenschicht abgeschiedene Extrakt wurde abgenommen und die Kallidinogenase in einer Menge entsprechend 36 000 Kaiiidinogenaseeinheiten (KU) erhalten.
B) 500 g rohes Schweinepancreas wurde zerschnitzelt

ίο und 2000 ml Wasser wurden zugesetzt. Der pH-Wert des Gemisches wurde auf 6,0 eingestellt. 13 g (Konzentration 0,03m) Magnesiumacetat wurden zum Gemisch zugegeben und alles gründlich vermischt. Das Gemisch wurde bei etwa 55° C während 1 Std. stehengelassen.

Der ais Bodenschicht abgetrennte Extrakt wurde abgenommen und Kallidinogenase in einer Menge entsprechend 37 000 KU erhalten.

Die nach A) oder B) erhaltenen Extrakte wurden erfindungsgemäß jeweils in der gleichen Weise wie in Beispiel 1 eluiert und getrocknet, wobei 257 mg bzw. 241 mg Kallidinogenase erhalten wurden. Die Kallidinogenaseaktivitäten betrugen 108,3 KU/mg bzw. 126,2 KU/mg.

Beispiel 4

100 g acetongetrocknetes Pulver von Schweinepancreas wurde mit 3000 ml Wasser vermischt und der pH-Wert des Gemisches auf 6 eingestellt. 16 g (Konzentration 0,025m) Magnesiumacetat wurden zu dem Gemisch zugegeben und alles gut vermischt Das Gemisch wurde bei etwa 50⁰C während 1,5 Std. stehengelassen. Der als Bodenschicht abgeschiedene Extrakt wurde abgenommen und Kallidinogenase in einer Menge entsprechend 73 000 KU erhalten.

Der vorstehend erhaltene Extrakt wurde erfindungsgemäß in der gleichen Weise wie in Beispiel 2 eluiert und getrocknet und dabei 355 mg Kallidinogenase erhalten. Die Kallidinogenaseaktivität dieses Produktes betrug 98,5 KU/mg.

Claims

Patentansprüche:

1. Verfahren zur Reinigung von Kallidinogenase, wobei ein aus dem Pancreas eines Säugetiers gewonnener Kallidinogenase enthaltender wäßriger Extrakt einer Adsorptions-Eluierungsbehandlung unterworfen wird, wobei diese wäßrige Lösung mit einem schwach basischen Anionenaustauscher bei einer Temperatur, bei welcher sich Kallidinogenase nicht zersetzt, vorzugsweise bei Raumtemperatur, und bei einem pH-Wert von mehr als etwa 4, jedoch unterhalb etwa 8 in Berührung gebracht wird und die Kallidinogenasefraktion an dem Anionenaustauscherharz adsorbiert wird, und die Kallidinogenase mit einer wäßrigen Lösung eines Ammoniumsalzes einer schwachen Säure bei einer Temperatur, bei welcher sich die Kallidinogenase nicht zersetzt, vorzugsweise bei Raumtemperatur, und bei einem pH-Wert von etwa 6 bis 7 eluiert und die Kallidinogenase gesammelt wird, dadurch gekennzeichnet, daß als schwach basischer Anionenaustauscher ein schwach basisches Anionenaustauscherharz vom Geltyp und Nicht PoIysaccharidtyp verwendet wird.

2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man als schwach basischen Anionenaustauscher ein Harz mit einem sekundären oder tertiären Amin als Austauschgruppe verwendet.