DE2506712B2 - Verfahren zur Bestimmung von Cholesterin - Google Patents

Verfahren zur Bestimmung von Cholesterin

Info

Publication number
DE2506712B2
DE2506712B2 DE19752506712 DE2506712A DE2506712B2 DE 2506712 B2 DE2506712 B2 DE 2506712B2 DE 19752506712 DE19752506712 DE 19752506712 DE 2506712 A DE2506712 A DE 2506712A DE 2506712 B2 DE2506712 B2 DE 2506712B2
Authority
DE
Germany
Prior art keywords
cholesterol
determination
actinomyces
streptomyces
esterase
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
DE19752506712
Other languages
English (en)
Other versions
DE2506712C3 (de
DE2506712A1 (de
Inventor
Klaus Dr.Rer.Nat. Beaucamp
Wolfgang Dr.Phil.Nat. Gruber
Gunter Lang
Hans Moellering
Peter Dr. Rer.Nat. Roeschlau
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Roche Diagnostics GmbH
Original Assignee
Boehringer Mannheim GmbH
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Boehringer Mannheim GmbH filed Critical Boehringer Mannheim GmbH
Publication of DE2506712A1 publication Critical patent/DE2506712A1/de
Publication of DE2506712B2 publication Critical patent/DE2506712B2/de
Application granted granted Critical
Publication of DE2506712C3 publication Critical patent/DE2506712C3/de
Expired legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
    • C12Q1/44—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving esterase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
    • C12N9/18—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/60—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving cholesterol

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)

Description

■ >
■»>
Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf ein Verfahren zur Bestimmung von Gesamtcholesterin oder von gebundenem Cholesterin gemäß dem Oberbegriff des Anspruchs 1.
Cholesterin liegt in biologischem Material, wie z. B, Serum u. dgl., teils in freier Form, teils in gebundener Form als Ester vor. Zur Bestimmung von gebundenem Cholesterin oder des gesamten Cholesterins ist es erforderlich, das in gebundener Form vorliegende Cholesterin zuerst freizusetzen. Dies erfolgte bisher durch Verseifung entweder unter alkalischen Bedingungen, beispielsweise mit alkoholischer Kalilauge oder mit Cholesterinesterase. Nach der Verseifung kann das freigesetzte Cholesterin dann nach einer der bekannten Methoden, entweder chemisch oder enzymatisch, bestimmt werden. Die chemische Bestimmung kann beispielsweise nach dem Verfahren von Liebermann-Burchard erfolgen, die enzymatische Bestimmung kann mittels Cholesterinoxydase, Cholesterindehydrogenase oder Cholesterindehydrase erfolgen. Da bekannterweise die einzelnen Cholesterinester als auch das freie Cholesterin bei den chemischen Bestimmungsmethoden unterschiedliche Extinktionskoeffizienten haben, ist es erforderlich, die Cholesterinester durch Verseifung in freies Cholesterin überzuführen.
Bei dem aus der DE-AS 2 224132 bekannten Verfahren erfolgt die Verseifung der Cholesterinester mit Cholsterincsterase aus Pankreas oder Leber. Dieses Verfahren beseitigt die Nachteile der alkalischen Freisetzung und gestattet eine vollenzymatische Cho-Iesterinbestimmung. Ein Nachteil dieses Verfahrens liegt jedoch darin, daß die erwähnte bekannte Cholesterinesterase das im biologischen Material in Form von Estern sehr unterschiedlicher Säuren vorliegende gebundene Cholesterin mit erheblich unterschiedlicher Geschwindigkeit spaltet und außerdem die Spaltraten nicht quantitativ sind, sondern nur maximal 80% erreichen (J. of Biol. Chem. 244, 1937 bis 1945 [1969]). Daher kann dieses Enzym nur in Kombination mit einer Reaktion zufriedenstellend im Rahmen der Cholesterinbestimmung eingesetzt werden, welche freigesetztes Cholesterin gleich aus dem Gleichgewicht abzieht.
Aufgabe der Erfindung ist es daher ein Verfahren zur Bestimmung von Gesamtcholesterin oder gebundenem Cholesterin zu schaffen, welches die obenerwähnten Nachteile beseitigt.
Erfindungsgemäß gelingt dies durch ein Verfahren zur Bestimmung von Gesamtcholesterin oder gebundenem Cholesterin durch Freisetzung des gebundenen Cholesterins mit Cholesterinesterase und anschließende Bestimmung des freigesetzten Cholesterins nach bekannten Methoden, welches dadurch gekennzeichnet ist, daß gebundenes Cholesterin mit Cholesterinesterase aus Mikroorganismen, ausgenommen Candida rugosa, freigesetzt wird.
Die Erfindung beruht auf der überraschenden Feststellung der Tatsache, daß in Mikroorganismen nicht nur Cholesterinesterase vorhanden ist, was nicht vorhersehbar war, sondern daß die Cholesterinesterase
aus Mikroorganismen den bekannten Cholesterin* esterasen anderen Ursprungs überlegen ist, eine quantitative Spaltung der verschiedenen vorkommenden Cholesterinester mit etwa gleicher Geschwindigkeit durchfuhrt und außerdem auch insgesamt wesentlich rascher spaltet als das bisher bekannte Enzym. Aufgrund dieser Eigenschaften kann das erfindungsgemäße Verfahren auch in Kombination mit nichtenzymatischen Cholesterinbestimmungsmethoden vorteilhaft angewendet werden und die vollenzymatische Cholesterinbestimmung wird erheblich verbessert, was insbesondere eine wesentlich leichtere Adaption des Verfahrens auf die Durchführung in Analysenautomaten ermöglicht.
Aus Nocardia restrictus war zwar bereits eine Steroidesterase bekannt, hierbei handelt es sich jedoch um ein anderes Enzym, welches die 3/3-Stellung nicht angreift. Da alle Cholesterinester eine 3/3-Estergruppe enthalten, stellen sie kein Substrat dieses bekannten Enzyms dar.
Die Verwendung einer Cholesterinesterase aus dem Mikroorganismus Candida rugosa bzw. cynlindracea zur Freisetzung von gebundenem Cholesterin bei einem Verfahren zur Bestimmung von Gesamtcholesterin ist bereits in der älteren Anmeldung DE-OS 2315501 vorgeschlagen.
Es wurde gefunden, daß verschiedene Mikroorganismen besonders aktive Cholesterinesterasen enthalten und daher im Rahmen des erfindungsgemäßen Verfahrens ohne Abtrennung und Reinigung der Cholesterinesterasen direkt eingesetzt werden können. Dies hat neben der besonders einfachen Zugänglichkeit auch den Vorteil, daß bei Unterlassung jeder Trennung und Anreicherung der Cholesterinesterase die Gefahr vermieden wird, daß aus.v.er in der Praxis meist vorliegenden Mischung mehrerer, für verschiedene Cholesterinester spezifischer Cholesterinesterasen eine Trennung derselben, die eine quantitative Erfassung alles gebundenen Cholesterins sehr erschweren würde, vermieden wird.
Hinzu kommt noch, daß die Reinigung der meist in Lipoidmembranen gebundenen Cholesterinesterasen umständlich ist und daher zu einem Präparat führt, das aufgrund seines Preises für eine Routinediagnostik weniger gut geeignet ist als ein ohne jegliche Enzymreinigung brauchbares Mikroorganismenpräparat.
Besonders vorteilhafte Ergebnisse werden beim erfindungsgemäßen Verfahren unter Verwendung einer Cholesterinesterase aus Aspergilius spec. WS 90030 erhalten. Dieser Mikroorganismus kann direkt als soleher oder in aufgeschlossener Form, beispielsweise als Acetontrockenpulver im Rahmen der Erfindung eingesetzt werden. Ebenso ist aber natürlich auch die Verwendung eines angereicherten Cholesterinesterasepräparates aus diesem Mikroorganismus möglich, wobei sin besonderer Vorteil darin besteht, daß eine gewisse Anreicherung hier sehr einfach erzielt werden kann. Ähnlich günstige Eigenschaften wurden gefunden bei
Actinomyces aureoverticillium WS 90002 Aetinomyees cyaneofuscatus WS 90003
Actinomyces griseomycini WS 90004 Actinomyces longisporus-fl. WS 90005 Actinomyces malachiticus WS 90006 Actinomyces roseolus WS 90007 Actinomyces toxytricini WS 90008 Actinomyces variabilis WS 90009 Streptomyces spec. WS 90010 Streptomyces autotrophjcus WS 90011 Streptomyces canescens WS 90012 Streptomyces chartreusis WS 90013 Streptomyces michiganensis WS 90014 Streptomyces murinus WS 90015 Streptomyces hachijoensis WS 90016 Streptomyces caelestes WS 90017 Streptomyces tendae WS 90018 Nocardia rubra WS 90019 Candida mycoderma WS 90020 Candida albicans WS 90021 Candida albicans WS 90022 Candida albicans WS 90023 Candida spec. WS 90024 Cunninghamella elegans WS 90025 Mucor mucedo WS 90026 Rhizopus spec. WS 90027 Penicillium spec. WS 90028 Aspergilius spec. WS 90029
Wie bereits erwähnt, besteht ein besonders wichtiger Vorteil des erfindungsgemäßen Verfahrens darin, daß mit den Cholesterinesterasepräparaten aus Mikroorganismen eine raschere und quantitative Freisetzung des Cholesterins aus seinen Estern möglich ist. Insbesondere mit dem obenerwähnten bevorzugten Mikroorganismus ist es möglich, durch direkten Zusatz desselben in einer sehr geringen Menge und unter Beibehaltung der pH-Wert- und Temperaturbedingungen, wie sie bei der nachfolgenden enzymatischen Cholesterinbestimmung erwünscht sind, innerhalb weniger Minuten eine quantitative Freisetzung des Cholesterins zu erzielen. Dabei wurde gefunden, daß die üblichen Stabilisierungsmittel auf Kohlehydratbasis, welche für solche Mikroorganismen verwendet werden, im Rahmen des vollenzymatischen Verfahrens der Cholesterinbestimmung nicht stören. Wie erwähnt, kann für das erfindungsgemäße Verfahren auch eine abgetrennte und angereicherte Cholesterinesterase aus Mikroorganismen verwendet werden. Eine geeignete Anreicherung läßt sich erzielen, indem von einem Acetontrockenpulver des Mikroorganismus ausgegangen wird und dieses einer Dialyse, einer Behandlung mit schwach-basischem Anionenaustauscher und einer Ammonsulfatfraktionierung unterzogen wird. Auf diese Weise gelingt leicht eine 20- bis 30fache Anreicherung der Cholesterinesterase. Als schwach-basischer Anionenaustauscher erwies sich ein mit Diäthylaminoäthanolgruppen modifiziertes Präparat auf Kohlehydratbasis als besonders geeignet. Bei der Ammonsulfatfraktionierung wird vorzugsweise die Fraktion zwischen 1,8 und 2,4 Mol Ammonsulfat gewonnen. Die so erhaltene Enzymfraktion wird anschließend vorzugsweise auf dem genannten Austauschermaterial chromatographiert.
Besonders günstige Ergebnisse wurden im Rahmen der Erfindung mit Mikroorganismen erhalten, welche auf einem Cholesterinesterhaltigen Nährmedium gezüchtet wurden. Hierbei kann der Cholesterinester oder eine Cholesterinestermischung als einzige Konlenstöffquelle während der Züchtung zugesetzt werden oder zusammen mit einer anderen Kohlenstoffquelle verwendet werden. Besonders bevorzugt wird die Verwendung von Mikroorganismen, die in einem mehrstufigen Züchtungsverfahren erhalten wurden, wobei sie in der ersten Stufe auf einem geeigneten Kohlenstofflieferanten, wie Glycerin, und in der zweiten Stufe auf einem Cholesterinester gezüchtet wer-
den. Ein geeignetes Zuchtungsverfahren ist beispielsweise in den deutschen Offenlegungsschriften 2224133 und 2307518 beschrieben.
Die Wirksamkeit der Cholesterinesterase wird vorzugsweise durch Zusatz oberflächenaktiver Substanzen gesteigert. Besonders bevorzugt wird ein Zusatz von Hydroxypoiyäthoxydodecan,
Wie bereits erwähnt, wird besonders bevorzugt das Verfahren der Erfindung vollenzymatisch durchgeführt, d. h. die anschließende Cholesterinbestimmung erfolgt ebenfalls enzymatisch, z. B. unter Verwendung von Cholesterinoxydase, Cholesterindehydrase oder Cholesterindehydrogenase.
Ein weiterer Gegenstand der Erfindung ist ein Reagens zur Bestimmung von Cholesterin, bestehend aus Cholesterinesterase aus Mikroorganismen, ausgenommen Candida rugosa, und einem Reagens zur Bestimmung von freiem Cholesterin.
Das Reagens kann zusätzlich übliche Lösungsmittel, Stabilisatoren oder/und oberflächenaktive Substanzen enthalten.
Mit dem erfindungsgemäßen Verfahre-! und Reagens läßt sich eine außerordentlich rasche und vollständige Verseifung von gebundenem Cholesterin durchführen. Beispielsweise wird unter den Bedingungen der Cholesterinbestimmung mit Cholesterinoxydase erfindungsgemäß eine quantitative Spaltung von gebundenem Cholesterin innerhalb von 1 bis 3 Minuten bei einem Zusatz von Aspergillus sp. WS 90030 Acetontrockenpulver in einer Menge zwischen 0,1 und 0,3 mg erzielt.
Das folgende Beispiel erläutert die Erfindung weiter.
Beispiel
10 g Diammoniumhydrogenphosphat werden in 100 ml Wasser gelöst und mit 85%iger Phosphorsäure auf pH 7,0 eingestellt. Dann werden 105 U Katalase zugesetzt. Mit der so erhaltenen Lösung wird eine Mischung von 0,2 ml Acetylaceton, 10 ml Methanol und 0,1 g Hydroxypoiyäthoxydodecan auf 100 ml aufgefüllt. Zu dieser Lösung werden 2,5 U Cholesterinesterase aus Rhizopus spec. (WS 90027) gegeben.
5,0 ml der so erhaltenen Lösung werden mit 0,02 ml Serum bzw. 0,02 ml einer Cholesterin-Standard-Lösung mit einem Gehalt von 200 mg% Cholesterin gemischt. Aliquotes der serumhaltigen sowie der cholesterinstandardhaltigen Probe werden mit je 0,1 U Cholesterinoxydase versetzt und 60 Minuten bei 37° C inkubierL Dann wird dsr gebildete Farbstoff bei 405 nm photometrisch gemessen unter Berücksichtigung des Proben-Leerwertes.
Der Cholesteringehalt der serumhaltigen Probe betrug - unter Benutzung eines Standards als Bezugsgrößc - 154 mg% Gesamtcholesterin. Die Kontrollbestimmung mit Cholesterinesterase aus Candida rugosa ATCC14830 anstelle von Cholesterinesterase aus Rhizopus spec. (WS 90027) ergab den gleichen Wert.

Claims (8)

Patentansprüche:
1. Verfahren zur Bestimmung von Gesamtcholesterin oder gebundenem Cholesterin durch Freisetzung des gebundenen Cholesterins mit Cholesterinesterase und anschließende Bestimmung des freigesetzten Cholesterins nach bekannten Methoden, dadurch gekennzeichnet, daß gebundenes Cholesterin mit Cholesterinesterase aus Mikroorganismen, ausgenommen Candida rugosa, freigesetzt wird.
2. Verfahren nach Anspruch I1 dadurch gekennzeichnet, daß eine Cholesterinesterase aus Rhizopus spec. WS 90027 oder Aspergillus spec. WS 90030 verwendet wird.
3. Verfahren nach Anspruch I1 dadurch gekennzeichnet, daß eine Cholesterinesterase aus
Actinomyces aureoverticillium WS 90002 Actinomyces cyaneofuscatus WS 90003 Actinomyces griseomycini WS 90004
Actinomyces longisporus-fl. WS 90005 Actinomyces malachiticus WS 90006
Actinomyces roseolus WS 90007
Actinomyces toxytricini WS 90008
Actinomyces variabilis WS 90009
Streptomyces spec. WS 90010
Streptomyces autotrophicus WS 90011 Streptomyces canescens WS 90012
Streptomyces chartreusis WS 90013
Streptomycs michiganensis WS 90014
Streptomyces murinus WS 90015
Streptomyces hachijoensis WS 90016
Streptomyces caelestes WS 90017
Streptomyces tendae WS 90018
Nocardia rubra WS 90019
Candida mycoderma WS 90020
Candida albicans WS 90021
Cancida albicans WS 90022
Candida albicans WS 90023
Candida spec. WS 90024
Cunninghamella elegans WS 90025
Mucor mucedo WS 90026
Penicillium spec. WS 90028
Aspergillusspec. WS 90029
verwendet wird.
4. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, daß die Bestimmung votlenzymatisch durch Kombination mit einer enzymatischen Bestimmung für freies Cholesterin durchgeführt wird.
5. Verfahren nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, daß Cholesterinesterase und ein Enzym zur Bestimmung von freiem Cholesterin gleichzeitig zugesetzt werden.
6. Verfahen nach einem der Ansprüche 1 bis 5, dadurch gekennzeichnet, daß eine Cholesterin* esterase aus einem Mikroorganismus verwendet wird, der auf einem Cholesterinesterhaltigen Nährmedium gezüchtet wurde.
7. Reagens zur Bestimmung von Cholesterin, bestehend aus Cholesterinesterase aus Mikroorganismen, ausgenommen Candida rugosa, und einem System zur Bestimmung von freiem Cholesterin.
8. Reagens nach Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, daß es eine Cholesterinesterase aus einem Mikroorganismus gemäß Anspruch 2 oder 3 enthält.
DE19752506712 1974-03-01 1975-02-18 Verfahren zur Bestimmung von Cholesterin Expired DE2506712C3 (de)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
AT167974A AT335626B (de) 1974-03-01 1974-03-01 Verfahren und reagens zur bestimmung von gesamtcholesterin oder gebundenem cholesterin

Publications (3)

Publication Number Publication Date
DE2506712A1 DE2506712A1 (de) 1975-09-04
DE2506712B2 true DE2506712B2 (de) 1979-08-30
DE2506712C3 DE2506712C3 (de) 1980-05-14

Family

ID=3518642

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DE19752506712 Expired DE2506712C3 (de) 1974-03-01 1975-02-18 Verfahren zur Bestimmung von Cholesterin
DE19752559875 Granted DE2559875B1 (de) 1974-03-01 1975-02-18 Verfahren zur Bestimmung von Cholesterin

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DE19752559875 Granted DE2559875B1 (de) 1974-03-01 1975-02-18 Verfahren zur Bestimmung von Cholesterin

Country Status (2)

Country Link
AT (1) AT335626B (de)
DE (2) DE2506712C3 (de)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3884764A (en) * 1974-03-25 1975-05-20 Eastman Kodak Co Method and composition for blood serum cholesterol analysis
DE3032377A1 (de) * 1980-08-28 1982-04-01 Battelle-Institut E.V., 6000 Frankfurt Verfahren zur bestimmung von gesamtcholesterin
DE4018152A1 (de) * 1990-06-06 1991-12-12 Boehringer Mannheim Gmbh Cholesterinesterasen mit variabler substrat-spezifitaet

Also Published As

Publication number Publication date
AT335626B (de) 1977-03-25
DE2506712C3 (de) 1980-05-14
DE2506712A1 (de) 1975-09-04
DE2559875C2 (de) 1980-07-31
ATA167974A (de) 1976-07-15
DE2559875B1 (de) 1979-10-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DE2315501C3 (de) Verfahren zur Bestimmung von Cholesterin
DE2409696C2 (de) Prüfvorrichtung zur Bestimmung von Cholesterin
DE2265121C3 (de) Enzympräparat zur Bestimmung von Cholesterin und Verfahren zu seiner Herstellung
CH645891A5 (de) Verfahren zur herstellung von monacolin k.
DE2724758B2 (de)
DE2649749C2 (de)
DE2627111C2 (de) Verfahren zur chemischen oder enzymatischen Isomerisierung einer Aldose oder eines Aldosederivates zur entsprechenden Ketose oder zum entsprechenden Ketosederivat
DE3046241A1 (de) Verfahren und reagenz zur bestimmung von cholesterin
DE3309271C2 (de) Verfahren zur Herstellung von immobilisierten Mikroorganismen
DE3300633A1 (de) Verfahren zur herstellung von rhamnose oder fucose
DE2506712C3 (de) Verfahren zur Bestimmung von Cholesterin
CH638470A5 (de) Verfahren zum abbau von cyanursaeure.
DE2631045A1 (de) Verfahren zur verbesserung der aktivitaet von oxidoreduktase
DE2459087C3 (de) Verfahren und Reagenz zur Bestimmung von Serumtriglyceriden
DE1230751B (de) Verfahren zur Herstellung von Lipase durch Zuechten von Mikroorganismen
DE2412301A1 (de) Verfahren zur herstellung eines insolubilisierten enzyms
DE3138602C2 (de)
DE2559875C3 (de)
DE2804356C2 (de) Verfahren zur Hydrolyse von proteingebundenen Cholesterinestern
EP0144798B1 (de) Verfahren und Reagenz zur Bestimmung von Glycerin mittels eines kompetitiven Inhibitors für Glycerinkinase
DE2917891C2 (de) Verfahren zur Herstellung von Acyl-CoA-Synthetase
WO1982000833A1 (en) Method for the determination of total cholesterol
DE2408752C2 (de) Verfahren zur Gewinnung von Cholesterin und Cholesterinestern aus Rückständen der Fettverarbeitung
DE2635040C2 (de) Reagenz zur Hydrolyse von Glyzerin-Fettsäureestern, sowie Verfahren zur Analyse einer wäßrigen Flüssigkeit mit einem Gehalt an Glyzerin-Fettsäureestern
DE1642654C3 (de) Verfahren zur mikrobiologischen Herstellung eines stabilen gereinigten Lipase-Präparates und pharmazeutisches Mittel, welches dieses enthält

Legal Events

Date Code Title Description
OI Miscellaneous see part 1
OI Miscellaneous see part 1
C3 Grant after two publication steps (3rd publication)
AG Has addition no.

Ref country code: DE

Ref document number: 2649749

Format of ref document f/p: P