DE3138602C2 - - Google Patents

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Description

Die Erfindung betrifft ein Reagens zur Beseitigung einer Trübung in einer biologischen Probe, wie beispielsweise menschlichem Blutserum, zur Verwendung bei einer photometrischen Analyse der Probe.
Aus EP-A-4 857 ist es auch schon bekannt, die hohen Konzentrationen an oberflächenaktiven Mitteln zu verringern, indem man diese gemeinsam mit bekannten niedrigmolekularen organischen Verbindungen einsetzt.
Eine Trübung in Serum- und Plasmaproben stellt gewöhnlich eine bedeutende Schwierigkeit für die klinische photometrische Analyse dar. Sie ergibt falsche Daten und häufig irreführende Bestimmungen von Serumbestandteilen. Man nimmt an, daß die Trübung hauptsächlich durch die Erhöhung des Gehaltes an Triglyceriden im Serum von Patienten verursacht wird, die unter Hyperlipoproteinämie mit oder ohne Erhöhung des Gesamtcholesteringehaltes leiden. Eine abnorme Erhöhung des Cholesteringehaltes im Serum korreliert erwiesenermaßen mit einem hohen Arterio­ sklerose-Risiko. Die Bestimmung von Cholesterin und Triglyceriden ist deswegen von Bedeutung, da genaue Daten dem Arzt die Diagnostizierung von Hyperlipoproteinämie sowie die Vorhersage bestimmter Herzkrankheiten erleichtern. Andere Untersuchungen, wie die Bestimmung von Aspartat-Aminotransferase (GOT), Alanin-Aminotransferase (GPT) und Lactat-Dehydrogenase (LDH) usw., werden durch die gleichen Schwierigkeiten wie die Cholesterin- oder Triglycerid-Bestimmung, wie oben erwähnt, beeinträchtigt, wenn trübe Proben zur Untersuchung vorliegen.
Klinische Untersuchungen von trübem Serum sind bisher derart gehandhabt worden, daß man die Proben in großen Mengen an einem oberflächenaktiven Mittel, wie beispielsweise polyoxyethylierter Laurinsäure (US-PS 38 53 465 und US-PS 41 84 848), behandelte. Da lediglich oberflächenaktive Mittel verwendet werden, waren zum Herbeiführen einer wirksamen Klärung große Mengen an diesem Mittel erforderlich. Hohe Konzentrationen an oberflächenaktiven Mitteln führen aber häufig zu einer Wechselwirkung mit anderen chemischen oder enzymatischen Umsetzungen und verursachen eine Komplizierung der Analyse.
Aufgabe der Erfindung ist die Schaffung eines weiteren Reagenzes, das eine Klärung von getrübten biologischen Proben ohne die Anwendung hoher Konzentrationen an oberflächenaktiven Mitteln herbeiführt, wenn die Probe auf einen bestimmten Bestandteil, wie beispielsweise Cholesterin, hin photometrisch analysiert werden soll.
Gegenstand der Erfindung ist ein Reagens zur Trübungsbeseitigung einer biologischen Probe zur Verwendung bei einer photometrischen Analyse der Probe, das dadurch gekennzeichnet ist, daß es mindestens ein oberflächenaktives Mittel der Formel
worin R eine Alkyl- oder Alkenylgruppe mit 5 bis 17 Kohlenstoffatomen bedeutet und x und y ganze Zahlen sind, deren Summe nicht größer als 11 ist, sowie ein Enzym enthält, das aus Cholesterin-Esterase, Lipase oder einem Gemisch daraus besteht.
Durch die Mitverwendung eines Enzyms (Cholesterin- Esterase oder Lipase), das dem oberflächenaktiven Mittel zugesetzt wird, kann der Vorteil erzielt werden, daß das oberflächenaktive Mittel nur in einer verhältnismäßig niedrigen Konzentration vorhanden zu sein braucht.
Der genaue Mechanismus der Trübungsklärung aufgrund des Einsatzes des erfindungsgemäßen Reagenzes ist noch nicht bekannt. Möglich ist jedoch, daß in den Fällen, in denen Patienten unter Hyperlipämie leiden, die in den Serumproben gefundene Trübung hauptsächlich auf einen erhöhten Gehalt an Triglyceriden zurückzuführen ist. Triglyceride sind wasserunlöslich und normalerweise im Inneren des Fettkerns mit Cholesterin­ estern in dem Lipoproteinkomplex verborgen. Die Herbeiführung einer Klärung einer lipämischen Probe muß durch die Spaltung des Lipoproteins mit Hilfe eines oberflächenaktiven Mittels, wie beispielsweise des Laurinsäure­ diethanolamids (DEA), und anschließende Hydrolyse der Triglyceride durch die Enzymbase herbeigeführt werden. Das oberflächenaktive Mittel hilft auch mit bei der Auflösung von Fettsäuren, die dabei in Freiheit gesetzt werden. Ohne Enzym gibt es keine Klärung der Trübung.
Das beschriebene Reagens wird üblicherweise in wäßriger, gepuffter Form eingesetzt.
Vorzugsweise enthält das erfindungsgemäße Reagens in wäßriger, gepufferter Form 0,05 bis 2,5 g oberflächenaktives Mittel pro dl und insbesondere 0,1 bis 0,5 g oberflächenaktives Mittel pro dl sowie mindestens 0,025 Einheiten Cholesterin-Esterase pro ml, bezogen auf die Gesamtmenge des Reagenzes. Das erhaltene Reagens besitzt einen pH-Wert im Bereich von 5,5 bis 7,0.
Wenn das Reagens eine Lipase als Enzym enthält, beträgt der Gehalt an oberflächenaktivem Mittel 0,05 bis 2,5 und vorzugsweise 0,1 bis 0,5 g/dl sowie der Gehalt an Enzym mindestens 1,0 Einheiten pro ml des erhaltenen Reagenzes, das einen pH-Wert im Bereich von 5,5 bis 8,0 besitzt.
Bei beiden Enzymformulierungen kann der verwendete Puffer ein Maleatpuffer sein, und zwar in Form des Natrium- oder Kaliumsalzes; ferner ein Phosphat-, Borat-, Citrat-, Succinat-, Imidazolacetat-, Trispuffer usw.
Es kann jedoch jeder beliebige geeignete Puffer verwendet werden. Ein derartiger Puffer ist jeder Puffer, der einen konstanten pH-Wert in dem gewünschten Bereich aufrechterhält, ohne eine der Komponenten zu stören.
Wenn ein Maleatpuffer verwendet wird, beispielsweise das Kalium- oder Natriumsalz, wird er in einer Menge zugesetzt, daß eine 0,05 M bis 0,5 M-Lösung erhalten wird und der pH-Wert der erhaltenen Formulierung 5,0 bis 7,0 beträgt.
Ähnliche Konzentrationen werden für die anderen Puffer angewandt.
Zusätzlich zu den genannten Komponenten kann ein Mittel zur Erhöhung der Löslichkeit bei dem erfindungs­ gemäßen Reagens zugesetzt werden. Ein derartiges löslichkeits­ erhöhendes Mittel kann jedes Material sein, das das oberflächenaktive Mittel beim Löslichmachen unterstützt. Beispielsweise eignen sich Salze der Gallensäuren hierfür besonders, wie beispielsweise Natriumcholat, Natriumdes­ oxycholat usw.
In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform besteht das oberflächenaktive Mittel aus einer Verbindung der obigen Formel, in der R einen Alkylrest bedeutet. Weiter ist es bevorzugt, daß das oberflächenaktive Mittel aus einer Verbindung der obigen Formel besteht, in der x und y jeweils 1 bedeuten.
Ein ebenfalls bevorzugtes Reagens enthält ein oberflächenaktives Mittel der obigen Formel, in der R eine Alkylgruppe, insbesondere Laurylgruppe, bedeutet und die Summe von x und y 5 sowie das Enzym eine Lipase ist. Formulierungen mit diesem Reagens enthalten zweck­ mäßigerweise Polyethylenglykol-p-isooctylphenylether oder andere geeignete oberflächenaktive Mittel.
Ein weiteres bevorzugtes Reagens, das eine wirksame Klärung trüber Proben im pH-Bereich von 2 bis 10 bewirkt, enthält ein Gemisch aus zwei oberflächenaktiven Mitteln, nämlich von Laurinsäurediethanolamid (x = y = 1) und ethoxy­ liertem Laurinsäureamid (x + y = 5).
Unter Verwendung dieser genannten oberflächenaktiven Mittel werden entsprechende Enzymformulierungen hergestellt.
Geeignete oberflächenaktive Mittel der obigen allgemeinen Formel sind beispielsweise Laurinsäuredietha­ nolamid, Myristinsäure-diethanolamid, Caprinsäure-dietha­ nolamid, Ölsäure-diethanolamid und Kokossäurediethanol­ amid. Vorzugsweise besteht das oberflächenaktive Mittel aus Laurinsäure-diethanolamid.
Wenn das Reagens mit einer biologischen Probe vereinigt wird, beseitigt es wirksam die Trübung in der Probe und gestattet, daß die Probe genau photometrisch analysiert werden kann.
Typische photometrische Bestimmungen, die unter Verwendung des genannten Reagenzes durchgeführt werden können, sind beispielsweise Bestimmungen von Cholesterin, Triglyceriden und Kreatinphosphatkinase.
Die Enzymkomponente kann von einer tierischen Quelle stammen, beispielsweise aus Pankreasgewebe, oder von einem Mikroorganismus.
Proben, die sich von dem erfindungsgemäßen Reagens wirksam klären und zur Analyse vorbereiten lassen, sind beispielsweise menschliches Blutserum und Plasma.
Das Reagens gemäß der Erfindung gestattet außerdem wegen der Wechselwirkung zwischen dem oberflächenaktiven Mittel und dem Enzym den Einsatz geringerer Enzymmengen, als sie normalerweise beispielsweise bei der Cholesterin­ bestimmung verwendet werden. In letzterer Hinsicht kann die Verwendung geringerer Mengen ohne Erniedrigung der Reaktionsgeschwindigkeiten als Verbesserung der Geschwindigkeit der enzymatischen Umsetzung angesehen werden.
Die üblichste klinische Bestimmung von Cholesterin in einer biologischen Flüssigkeit ist die Bestimmung von Gesamtcholesterin, das sowohl freies Cholesterin als auch Cholesterinester umfaßt. Sowohl Cholesterin als auch seine Ester sind im Serum mit anderen Lipiden und verschiedenen Proteinen in mikromolekularen Komplexen vorhanden, die Lipoproteine genannt werden, und Cholesterin­ ester sind normalerweise als der Hauptbestandteil (60 bis 80%) des Gesamtcholesterins vorhanden. Wie bereits erwähnt, sind sie normalerweise im Inneren des Komplexes verborgen, d. h. Enzymen gegenüber unzugänglich. Bei der Bestimmung von Gesamtcholesterin durch ein vollständig enzymatisches Verfahren - gleich ob automatisiert oder von Hand - müssen zunächst Cholesterin und Cholesterinester durch ein geeignetes oberflächenaktives Mittel in Freiheit gesetzt werden. Die Cholesterinester werden anschließend durch Cholesterin-Esterase zu freiem Cholesterin hydrolysiert, das seinerseits durch Cholesterin-Oxidase zu Cholestenon und Wasserstoff­ peroxid oxidiert wird.
Das beschriebene Verfahren kann automatisch durchgeführt werden, wie beispielsweise durch Verwendung eines automatischen Analysengerätes, oder auch von Hand.
Bei der Herstellung der Reagenzien gemäß der Erfindung zur Verwendung beim Analysieren wird eine wäßrige Lösung hergestellt, die außer dem oberflächenaktiven Mittel und dem Enzym weitere Materialien enthält, die dem Fachmann bekannt sind und für derartige Zwecke verwendet werden.
Beispielsweise werden zur Bestimmung von Cholesterin die folgenden Bestandteile in den angegebenen Konzentrations­ bereichen verwendet:
Bestandteil
Cholesterinbestimmung
Peroxidase
0,8-2,0 Einh/ml
Cholesterin-Oxidase 0,025-0,3 Einh/ml
Cholesterin-Esterase 0,025-0,3 Einh/ml
Oberflächenaktives Mittel 0,05-0,5 g/dl
Natriumcholat 0,05-0,5 g/dl
Natrium-p-hydroxybenzoat 2,5-6 g/dl
4-Aminoantipyrin 0,5-2,0 mM
Maleinsäure 0,1-0,5 M
pH 5,5-7,0
Verhältnis Probe/Reagens 100-400
Bei der obigen Formulierung ist es bevorzugt, Cholesterin-Esterase aus einer tierischen Quelle, wie beispielsweise aus Pankreas, zu verwenden; jedoch werden äquivalente Ergebnisse mit Cholesterin-Esterase aus einem Mikroorganismus erhalten.
Beispiel 1 Trübungsbeseitigung als Funktion von Cholesterin-Esterase
3 ml Klärungsreagens mit einem Gehalt an Kaliummaleat (0,1 M), Natriumcholat (0,25 g/dl), Laurinsäure-diäthanolamid (0,2 g/dl), Cholesterin- Esterase (0,08 Einheiten pro ml bis 0,8 Einheiten pro ml), und einem End-pH-Wert von 6,0 werden mit 0,025 ml lipämischem Serum (Triglyceride von etwa 1400 mg/dl) vermischt. Das Umsetzungsgemisch wird innerhalb 10 Min. bei einer Temperatur von 45°C klar. Die zum Klären verwendete Cholesterin-Esterase kann aus Pankreas oder aus einem Mikroorganismus stammen.
Beispiel 2 Verwendung zur Bestimmung von Cholesterin
Für die Endpunktchemie, wie in diesem Beispiel erläutert, werden die Bestandteile zur Cholesterin­ bestimmung in das Reagenz zur Beseitigung der Trübung eingeschlossen.
3 ml einer Zusammensetzung, die 0,125 Einheiten Cholesterin-Esterase je ml, 0,125 Einheiten Cholesterin- Oxidase je ml, 1,6 Einheiten Peroxidase je ml, ferner 4-Aminoantipyrin (0,6 mM), Natriumhydroxybenzoat (25 mM), sowie 0,25 g Natriumcholat pro dl, 0,2 g Laurin­ säure-diäthanolamid je dl und Kaliummaleat (0,1 M) enthielt und einen pH-Wert von 6,0 aufwies, wurden mit 0,025 ml einer lipaemischen Serumprobe vermischt. Das Gemisch wurde anschließend 4 bis 5 Minuten bei 45°C bebrütet. Danach wurde das Gesamtcholesterin durch Messung der Farbintensität bei 520 nm bestimmt. Ohne die Trübungsbeseitigung durch das Laurinsäure-diäthanolamid und die Cholesterin-Esterase führt die Cholesterin­ bestimmung in den dann trüben Proben stets zu falschen Ergebnissen.
Beispiel 3 Trübungsbeseitigung durch Candida Lipase (Candida Cylindracea)
3 ml eines Trübungsbeseitigungsreagenzes mit einem Gehalt von 0,2 g Laurinsäure-diäthanolamid je dl, 0,25 g Natriumcholat pro dl und 25 Einheiten Lipase je ml, sowie Maleatpuffer und einem pH-Wert von 6,0 werden mit 0,025 ml lipämischem Serum vermischt. Die trübe Probe wird nach 5minütiger Bebrütung bei 45°C klar.
Wird eine äquivalente Menge eines Trübungsbeseitigungsmittels verwendet, das ein Gemisch aus Laurinsäure- diethanolamid und ethoxyliertem Laurinsäureamid (x + y = 5) verwendet, so werden vergleichbare Ergebnisse der Trübungsbeseitigung erzielt.
Beispiel 4
3 ml eines Trübungsbeseitigungsreagenzes mit einem Gehalt von 0,2 g eines oberflächenaktiven Mittels der Formel
worin x + y = 5 ist, je dl, 0,4 g Polyethylenglykol- p-isooctylphenylether (Triton X-100) je dl, ferner Kaliummaleat (0,2 M) und 25 Einheiten Lipase je ml, sowie einem pH-Wert von 6,0 werden mit 0,05 ml einer lipämischen Probe vermischt und bei 45°C bebrütet. Nach drei Minuten wird die trübe Probe klar.
Die Geschwindigkeit der Trübungsbeseitigung wird durch Erhöhung der Pufferkonzentration erhöht.
Ähnliche Ergebnisse werden durch Anwendung höherer Konzentrationen an ethoxyliertem Laurinsäureamid (x + y = 5) ohne Mitwirkung von Triton X-100 erzielt.
Beispiel 5 A. Zusammensetzung
Es wird eine Zusammensetzung für ein diagnosti­ sches Reagenz in Form einer wäßrigen Lösung von einem Liter hergestellt, wobei die folgenden Bestandteile verwendet werden:
Bestandteil
Konzentration
Äpfelsäure|11,6 g
KOH 10,0 g
EDTA (K₂) 2,7 mM
Natriumcholat 5,8 mM
Natrium-p-hydroxybenzoat 25,0 mM
4-Aminoantipyrin 0,6 mM
Laurinsäure-diethanolamid 2,0 g
Cholesterin-Esterase 125 Einheiten
Cholesterin-Oxidase 125 Einheiten
Meerrettich-Peroxidase 800 Einheiten
Der pH-Wert wird auf 6,0 eingestellt.
Der Reagens kann aufbewahrt und in Form einer wäßrigen Lösung verwendet werden, oder die Lösung kann auf herkömmliche Weise gefriergetrocknet und mit Wasser rekonstituiert werden, wenn sie gebrauchsfertig gemacht werden soll.
B. Bestimmung von Gesamtcholesterin
3 ml des obigen Reagenzes werden mit 0,025 ml Serum oder rekonstituiertem Serumstandard vermischt, das bzw. der bis zu 500 mg Cholesterin pro dl enthält. Die Umsetzung wird 4 bis 5 Minuten lang bei 45°C durchgeführt. Die Extinktion der Proben bei 525 nm wird gegen eine Blindprobe aus dem Reagens gemessen.
Beispiel 6 Trübungsbeseitigung bei der Bestimmung der Aktivität von Kreatinphosphatkenase (CPK) von lipämischem Serum
2 ml Imidazolacetatpuffer (0,1 M) vom pH-Wert 6,7 mit einem Gehalt an 0,4% Laurinsäurediethanolamid, 25 Einheiten Cholesterin-Esterase aus Pankreas je dl, 0,25 g Natriumcholat pro 100 ml sowie Thioglycerin (20 mM) werden mit 0,05 ml lipämischem Serum vermischt. Nach 15minütiger Bebrütung bei 37°C sinkt der Wert für die Trübung bei 340 nm von einer optischen Dichte (O. D.) von 2,3 auf eine solche von 0,02. Die klare Probe wird anschließend mit 1 ml CPK-Reagens vermischt, das Kreatin­ phosphat (116,7 mM), ADP (6,7 mM), AMP (16,7 mM), EDTA (6,7 mM), NADP (6,7 mM), 125 Einheiten Hexokinase pro dl und 100 Einheiten Glukose 6-phosphat Dehydrogenase (6 PDH) pr dl, hergestellt in Imidazolacetatpuffer (0,1 M) vom pH-Wert 6,7, enthält. Die Aktivität der CPK wird bei 340 nm und 37°C in Form des herkömmlichen Verfahrens messend verfolgt.

Claims (19)

1. Reagens zur Trübungsbeseitigung in einer biologischen Probe zur Verwendung bei einer photometrischen Analyse der Probe, dadurch gekennzeichnet, daß es mindestens ein oberflächenaktives Mittel der Formel worin R eine Alkyl- oder Alkenylgruppe mit 5 bis 17 Kohlenstoffatomen bedeutet und x und y ganze Zahlen sind, deren Summe nicht größer als 11 ist, sowie ein Enzym enthält, das aus Cholesterin-Esterase, Lipase oder einem Gemisch daraus besteht.
2. Reagens gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß es in wäßriger, gepufferter Form vorliegt, daß das oberflächenaktive Mittel der in Anspruch 1 angegebenen Formel, in der x + y nicht größer als 5 ist, in einer Konzentration von 0,05 bis 2,5 g/dl und das Enzym als Cholesterin-Esterase und in einer Konzentration von mindestens 0,025 Einheiten je ml der erhaltenen Zusammensetzung vorliegen und die Zusammensetzung einen pH-Wert im Bereich von 5,5 bis 8,0 besitzt.
3. Reagens gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß es in wäßriger, gepufferter Form vorliegt, daß das oberflächenaktive Mittel in einer Konzentration von 0,05 bis 0,5 g/dl und das Enzym als Lipase und in einer Kon­ zentration von mindestens 1,0 Einheiten pro ml der erhaltenen Zusammensetzung vorliegen und die Zusammensetzung einen pH-Wert im Bereich von 2,0 bis 10,0 besitzt.
4. Reagens gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das oberflächenaktive Mittel ein solches der Formel gemäß Anspruch 1 ist, in der R eine Alkylgruppe bedeutet und die Summe von x und y 5 ist, und daß das Enzym eine Lipase ist.
5. Reagens gemäß Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, daß es außerdem Polyethylenglykol-p-isooctyl-phenylether (Triton X-100) enthält.
6. Reagens gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß es in wäßriger, gepufferter Form vorliegt, daß das oberflächenaktive Mittel aus einem Gemisch aus Laurinsäure- diethanolamid und ethoxyliertem Laurinsäureamid (x + y = 5 gemäß Formel aus Anspruch 1) besteht und daß das Gemisch in einer Konzentration von 0,05 bis 2,0 g/dl der erhaltenen Zusammensetzung vorliegt und die Zusammensetzung einen pH-Wert im Bereich von 2,0 bis 10,0 aufweist.
7. Reagens gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß es ein oberflächenaktives Mittel der in Anspruch 1 angegebenen Formel, worin R eine Alkyl- oder Alkenylgruppe mit 5 bis 17 Kohlenstoffatomen bedeutet und x und y jeweils 1 sind, sowie ein Enzym enthält, das aus Cholesterin-Esterase oder Lipase oder einem Gemisch daraus besteht.
8. Reagens gemäß Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, daß es in wäßriger, gepufferter Form vorliegt, daß das oberflächenaktive Mittel in einer Konzentration von 0,05 bis 2,5 g/dl und das Enzym in Fom von Cholesterin- Esterase und in einer Konzentration von mindestens 0,025 Einheiten pro ml der erhaltenen Zusammensetzung vorliegen und die Zusammensetzung einen pH-Wert im Bereich von 5,5 bis 7,0 aufweist.
9. Reagens gemäß Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, daß es in wäßriger, gepufferter Form vorliegt, daß das oberflächenaktive Mittel in einer Konzentration von 0,05 bis 2,5 g/dl und das Enzym in Form einer Lipase und in einer Konzentration von mindestens 1,0 Einheiten pro ml der erhaltenen Zusammensetzung vorliegen und daß die Zusammen­ setzung einen pH-Wert im Bereich von 5,5 bis 8,0 aufweist.
10. Reagens gemäß den Ansprüchen 2, 8 und 9, dadurch gekennzeichnet, daß der Puffer ein Maleat in einer Konzentration von 0,05 M bis 0,5 M ist und der pH-Wert der erhaltenen Zusammensetzung bei 5,0 bis 7,0 liegt.
11. Reagens gemäß Anspruch 8 und 9, dadurch gekennzeichnet, daß es ein Mittel zur Erhöhung der Löslichkeit enthält.
12. Reagens gemäß Anspruch 11, dadurch gekennzeichnet, daß Natriumcholat oder Natriumdesoxycholat in einer Konzentration von 0,25 g/dl in der gesamten Zusammensetzung enthalten ist.
13. Reagens gemäß Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, daß es ein oberflächenaktives Mittel der in Anspruch 7 angegebenen Formel enthält, in der R eine Alkylgruppe bedeutet.
14. Reagens gemäß Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, daß das oberflächenaktive Mittel ein solches der im Anspruch 7 angegebenen Formel ist, in der R eine Alkenyl­ gruppe bedeutet.
15. Reagens gemäß Anspruch 14, daß das oberflächenaktive Mittel Ölsäure-diethanolamid oder Kokossäure-diethanolamid ist.
16. Reagens gemäß Anspruch 13, dadurch gekennzeichnet, daß es als oberflächenaktives Mittel Laurinsäure-diethanolamid enthält.
17. Reagens gemäß den Ansprüchen 1 und 7, dadurch gekennzeichnet, daß es ein Enzym enthält, das tierischen Ursprungs ist oder von einem Mikroorganismus stammt.
18. Reagens gemäß Anspruch 17, dadurch gekennzeichnet, daß es als Enzym Cholesterin-Esterase aus tierischem Pankreasgewebe enthält.
19. Reagens gemäß den Ansprüchen 8 und 9, dadurch gekennzeichnet, daß das oberflächenaktive Mittel in einer Konzentration von 0,1 bis 0,5 g/dl der erhaltenen Zusammensetzung vorliegt.
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