DE2314631A1 - Verfahren zur kultivierung eines aeroben mikroorganismus - Google Patents
Verfahren zur kultivierung eines aeroben mikroorganismusInfo
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Description
DR. MÜLLER-BORE DIFL.-FHYS. DR. MANITZ DIPL-GHEM. DR. DEUFEL
DIPL.-ING. FlNoTbRWALD DIPL.-.NG. GRÄMKOW
4, Um
:i'anabe oeiyaku Go., Ltd.
Osaka,' Japan
Osaka,' Japan
Verfahren zur Kultivierung eines aeroben Mikroorganismus
309840/0449
ORIGINAL INSPECTED
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Kultivierung eines
aeroben Mikroorganismus in einem wäßrigen Nährmedium.
Bs ist bekannt, daß bei der Durchführung der Kultivierung eines
aeroben Mikroorganismus in einem flüssigen Medium das Wachstum des aeroben Mikroorganismus oder die Ansammlung eines
fermentativen Produktes durch den Mikroorganismus beeinflußt wird durch die Sauerstoffübertragungsrate in das Medium, Da
Sauerstoff in Wasser schwer löslich ist, führt daher der Mangel an in dem Medium.gelöstem Sauerstoff oftmals zu-einem schwachen
Wachstum eines aeroben Mikroorganismus oder zu einer schlechten Ausbeute an einem fermentativen Produkt,
Es sind bereits verschiedene Methoden oder Techniken zur Erhö -.
hung der Säuerst off Überführungsrate aus der gasphase in das
flüssige Medium,.bekannt. So kann z, B,. die Geschwindigkeit, mit
der Sauerstoff in die Lösung eintritt, dadurch erhöht werden, daß die Form des Fermentierungsgefäßes verbessert wird (z. B,
durch Einzahnung der Seitenwände eines Kolbens), oder daß die Rührgesehwindigkeit oder die Belüftungsmenge gesteigert wird,
oder daß der Partialdruok des Sauerstoffs in der G-asphase erhöht
wird. Die bekannten Methoden sind jedoch nicht geeignet,
eine hohe Konzentration an gelöstem; Sauerstoff in dem'flüssigen
Medium aufrecht zu erhalten,. Hinzu kommt, daß Mikroorganismen, die die Fähigkeit haben, in einem Medium zu ■ wachsen, das, nur
Kohlenwasserstoff verbindungen als Kohl ens tp,ff quelle enthält *
wie sie zur fermentativen Herstellung von beispielsweise Aminosäuren,
Enzymen und Goenzymen verwendet werden, eine große Menge an gelöstem Sauerstoff für ihr Wachstum brauchen,: wobei es sich
als nachteilig erweist, daß üblichebekannte Belüftungs-Bührtechniken
nicht ausreichen^ um den Sauerstoffbedarf der-artiger
Mikroorganismen zu deekqn, \ ·.- : ; . ~-■_■ /-— ■ .
Aufgabe der Erfindung ist es, ein verbessertes Fermentierungsverfahren
anzugeben, das es ermöglieht>. die Sauerstoffüberfüh-
23U631
rungsrate aus der Gasphase in die flüssige Phase zu erhöhen sowie das Wachstum oder die Vermehrung eines aeroben Mikroorganismus
oder die Ansammlung eines fermentativen Produktes in einem Nährmedium zu fördern, oder die Ausbeute an Mikro—
Organismuszellen oder fermentativem Produkt zu erhöhen. Das Fermentierungsverfahren soll ferner ermöglichen, den gelösten
Sauerstoff in einer ausreichend hohen Konzentration in einem wäßrigen Nährmedium aufrecht zu erhalten sowie die zur Kultivierung
eines aeroben Mikroorganismus erforderliche Zeit abzukürzen.
Gegenstand der Erfindung ist ein Verfahren zur Kultivierung eines aeroben Mikroorganismus in■einem wäßrigen Nährmedium,
das dadurch gekennzeichnet ist, daß man die Kultivierung in Gegenwart einer mit Wasser nicht mischbaren inerten organischen
Flüssigkeit mit hoher Sauerstofflöslichkeit durchführt.
Zur Durchführung "des Verfahrens der Erfindung sind als inerte
organische Flüssigkeit mit einer hohen Sauerstofflöslichkeit (im folgenden kurz mit "inerte organische Flüssigkeit" bezeichnet)
z. B. eine flüssige Fluorokohlenstoffverbindung und ein Siliconöl niedriger Viskosität verwendbar. Der zur Durchführung
des Verfahrens der Erfindung verwendbare flüssige Fluorokohlenstoff weist typischerweise 1 bis 20 Kohlenstoffatome auf.
Typische, in besonders vorteilhafter Weise verwendbare derartige Fluor okohl ens t off e zind z. B. Perfluorotributylamin (chemische
Formel G12F27N, Fp = 1740C, spezifisches Gewicht 1,87,
Sauerstofflöslichkeit 39 ml/100 ml Flüssigkeit bei 25°C, gehandelt
von Minnesota Mining & Manufacturing Company unter dem Handelsnamen "Inert Liquid FG-43"), Perfluoro-2-butylfuran
(chemische Formel GgF16O, Kp = 1020G, spezifisches Gewicht 1,77,
Sauerstofflöslichkeit 49 ml/100 ml Flüssigkeit bei 25°C, gehandelt
von der 3M-Company unter dem Handelsnamen "Inert Liquid FC-75" oder "Inert Liquid FC-80"), Perfluoro-n-heptan (chemische
Formel G7F16, Kp = 115°G, spezifisches Gewicht 1,73, Sauerstoff-
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lösliclikeit 42 ml/100 ml Flüssigkeit bei 25°C, gehandelt von
der 3M Company unter dem Handelsnamen "L-18221*), Perfluoronaphtalin
(chemische Formel C10F.,, Kp = 1420C, spezifisches
Gewicht 1,95, Sauerstofflöslichkeit 45" ml/100 ml Flüssigkeit bei 25°C, gehandelt von der Allied Chemical Corporation unter
dem Handelsnamen "PP 5"), Perfluoro-1-methyl-naphtalin (chemische
Formel C11F10, Ep = 1600C, spezifisches Gewicht 1,97,
Sauerstofflöslichkeit 42 ml/100 ml Flüssigkeit bei 250C, gehandelt
von der Allied Chemical Corporation unter dem Handelsnamen "PP 9"), Perfluoro-N-methyl—morpholin (chemische Formel
C5F11KO, Kp = 500C, spezifisches Gewicht 1,70, Sauerstofflöslichkeit
42 ml/100 ml Flüssigkeit bei 200C, gehandelt von der
3M Company unter dem Handelsnamen "Inert Liquid FC-78"),
1,2,2,2-Tetrafluoroäthyläther von P erfluoro(2,5,8-trimethyl-3,6,9-trioxa—1-dodecanol
(chemische Formel C1.F_0.H, Kp =
193°C, spezifisches Gewicht 1,763, gehandelt von der E. I. Dupont unter dem Handelsnamen "Freon E "), Perfluoro-1-methyldecalin
(chemische Formel G-J1F20, Kp = 160 C, spezifisches Gewicht
1,972, Sauerstofflöslichkeit 43 ml/100 ml Flüssigkeit bei 370O).
Die zur Durchführung des Verfahrens der Erfindung verwendbaren
Siliconöle niedriger Viskosität sind z. B. solche mit einer Viskosität von 0,65 bis 15 Centipoise. So ist z. B. für diesen
Zweck ein SiliconÖl verwendbar mit einem Molekulargewicht von 316 (Kp = 146°C, spezifisches Gewicht 0,85, Sauerstofflöslichkeit
100 ml/100 ml Flüssigkeit bei 25°C, gehandelt von der Dow Corning Corporation unter dem Handelsnamen "DC-200-1CD").
Obwohl zur Durchführung aerober Kultivierungsprozesse Siliconöle mit einer Viskosität von 3000 bis 5000 Centipoise als Antischaummittel
bereits verwendet wurden,., sind derartige hochviskose
Öle zur Durchführung des Verfahrens der Erfindung nicht verwendbar.
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23U631 - 5Γ-
Die inerte organische Flüssigkeit wird dem wäßrigen Nährmedium vorzugsweise in einer Menge von etwa 5 bis 80 $ (Y/V) insbesondere
von 8 bis 40 $ (V/V) zugesetzt. In der Regel ist die SauerstoffÜberführungsrate
umso besser, je größer die Menge an inerter organischer Flüssigkeit ist. Es ist jedoch unnötig, den
Sauerstoff in einem Überschuß, bezogen auf die Säuerstoffaufnahme
des Mikroorganismus, zuzuführen,und die in der Praxis dem Nährmedium zugesetzte Menge an inerter organischer Flüssigkeit
hängt daher von der Grund-Sauerstoffaufnahme des Mikroorganismus ab. Die inerte organische Flüssigkeit kann vor und/oder nach
der Sterilisation des Nährmediums zugesetzt werden. Wird die inerte organische Flüssigkeit nach der Sterilisation des Nährmediums
zugesetzt, so muß sie vor der Zugabe sterilisiert werden.
Zur Durchführung der Kultivierung aerober Mikroorganismen nach der Erfindung sind übliche bekannte Nährstoffquellen verwendbar.
Typische geeignete Nährstoffquellen für Kohlenstoff sind z. B.
Monosaccharide (ζ. B. Glucose, Lactose, Galactose, und Saccharose), Polysaccharide (z. B. Stärke und Dextrin), Zuckeralkohole
(z. B. Sorbitol und Mannitol), Polyalkohole (z. B. Glycerin) und organische Säuren (z. B. Essigsäure, Fumarsäure und Citronensäure),
und geeignete Stickstoffquellen sind z. B. Pepton, Fleischextrakt, Hefeextrakt, Kornquelliquor, Baumwollsamentreber, Sojabohnenpulver,
Erdnußpulver, Proteinhydrolysate, anorganische Nitrate und organische oder anorganische Ammoniumsalze, und anorganische
Elemente sind ebenfalls verwendbar. In einigen Fällen kann dem Nährmedium eine Vorläuferverbindung oder andere geringfügige
Komponente zugesetzt werden, die bei der fermentativen
Produktion einer Aminosäure, einer Nucleinsäure oder eines Anti—
bioticums erforderlich ist. Erforderlichenfalls kann außerdem auch ein oberflächenaktives Mittel zugesetzt werden.
Die zur Durchführung des Verfahrens der Erfindung verwendete inerte organische Flüssigkeit dient dazu, die Sauerstoffüber-
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führungsrate aus der Gasphase in die flüssige Phase zu erhöhen.
Die erfindungsgemäß verwendbare inerte organische Flüssigkeit
dient ferner dazu, Sauerstoff direkt in die flüssige Phase zu liefern, da der an der inerten organischen Flüssigkeit adsorbierte
Sauerstoff während der Kultivierung in das Medium fiei— gesetzt wird. Es erweist sich daher als vorteilhaft, das erfindungsgemäße
Verfahren unter Belüftung, Rühren und/oder Schütteln
durchzuführen. In diesem Zusammenhang ist jedoch darauf hinzuweisen, daß das Verfahren der Erfindung auch ohne Belüftung,
Rühren und/oder Schütteln durchführbar ist. So kann z. B. eine geringe Menge der inerten organischen Flüssigkeit aus dem Nährmedium
nach einer geeigneten Kultivierungszeit entnommen werden und die auf diese Weise abgetrennte inerte organische Flüssigkeit
wird mit frischer Luft oder Sauerstoff gas in Kontakt gebracht, um deren Sauerstoffgehalt zu erhöhen, worauf die inerte—
organische Flüssigkeit erneut dem Fermentationsmedium zugesetzt wird. Durch Wiederholung dieser Prozedur während der Kultivierung
kann die Konzentration .an in dem Nährmedium gelösten* Sauerstoff
immer bei einem so hohen Niveau gehalten werden, daß die aerobe Kultivierung in besonders vorteilhafter Weise durchführbar
ist.
Nach Beendigung der Kultivierung eines aeroben Mikroorganismus kann der Fluorokohlenstoff oder das Siliconöl von dem flüssigen
Medium leicht abgetrennt werden aufgrund der Dichteunterschiede
zwischen den Komponenten. Außerdem können die auf diese Weise isolierten Fluorokohlenstoffe oder Siliconöle erfindungsgemäß
erneut verwendet werden.
Das Verfahren der Erfindung kann die Fermentierung oder Kultivierung
aerober Mikroorganismen ungewöhnlich stark fördern. So wird z. B. erfindungsgemäß das Wachstum oder die Vermehrung eines
Stammes von Actinomy-ceten (z* B'. Si^eptomyces, Micromonospora),
Hefen (z. B. Saccharomyces), Pilzen (z. B. Aspergillus) und Bakterien
(z. B. Proteus, Escherichia, Serratia, Pseudomonas, Acro-
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mobacter, Corynebacterium, Micrococcus, Brevibacterium, Acetobacter),
oder die Produktivität an wertvollen fermentativen Produkten (ζ. B. Aminosäuren, Antibiotica, Enzymen, Coenzymen und
Vitaminen) merklich erhöht. Außerdem kann die zur Fermentierung oder Kultivierung dieser Mikroorganismen erforderliche Zeit verkürzt
werden wegen der merklichen Erhöhung der Wachsturnsrate dieser
Mikroorganismen oder der Produktivität an fermentativen Produkten.
Die folgenden Beispiele sollen die Erfindung näher erläutern.
500 ml eines wäßrigen Nährmediums mit einem Gehalt an 20 $ (G/V)
Sorbit, 1 % (G/V) Kornquelliquor und 0,3 i° (G/V) Calciumcarbonat
wurden in einen 1-Liter-Fermenter eingebracht. Eine gewisse Menge
an Perfluorotributylamin (Handelsname "Inert Liquid FC-43") wurde
dem Nährmedium zugesetzt. Das Medium wurde in einem Autoclaven sterilisiert und anschließend auf 3O0C abgekühlt. Das Nährmedium
wurde sodann mit Acetobacter suboxydans ATGC 621 beimpft.
Danach' wurde das Medium bei 30 C unter Belüftung (250 ml/min.)
und Rühren (500 UpM) kultiviert, bis die Oxydation von Sorbitol zu Sorbose vervollständigt war. Die Ergebnisse der Kultivierung
sind in Tabelle I aufgeführt.
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— Sl —
Tabelle Γ
Menge an zugesetztem
Perfluorotributylamin (a) (B) (C) (D)
Perfluorotributylamin (a) (B) (C) (D)
S (V/V)
(Mol Sorbose/ml Std.) (Std.) (Std.)
0 5,8 χ 10"5
10 7,2 χ 10"5
20 8,9 χ 10~5
40 9,6 χ 10~5
In der Tabelle bedeuten:
(A) die maximale Fermentationsgeschwindigkeit, d. h. die maximale
Geschwindigkeit der Oxydation von Sorbitol zu Sorbose,
(B) die Dauer der maximalen Fermentierungsgeschwindigkeit, d. h,
die Zeitspanne, während welcher die maximale Fermentierungsgeschwindigkeit
zu beobachten ist,
(C) die zur Vervollständigung der Fermentierung erforderliche
Zeit und .
(D) die Ausbeute an Sorbose, d. h. die Umwandlungsrate von Sorbitol in Sorbose. " - ■
| 8 - | 24 | 27 | 96 |
| 6 - | 18- | . 20 | 97 |
| 5 - | 14 | 15 | 95 |
| 5 - | 12 | 12 | 96 |
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100 ml eines wäßrigen Nährmediums der in Beispiel 1 angegebenen
Zusammensetzung wurden in einen 500 ml-Schüttekolben eingebracht·
20 ml Perfluorotributylamin (Handelsname "Inert Liquid FC-43") wurden dem Nährmedium zugesetzt. Das Nährmedium
wurde durch Autoclavenbehandlung sterilisiert und anschließend
auf 30°C abgekühlt. Das Nährmedium wurde sodann mit Acetobacter suboxydans ATCC 621 inokuliert. Danach wurde das Nährmedium bei
300C unter Schütteln (140 Cyclen/min,, Anschlagsfrequenz 8,5 cm)
kultiviert. Die maximale Permentierungsgeschwindigkext (5,21 χ
10~* Mol Sorbose/ml.Std.) wurde während 10 bis 28 Stunden nach
Kultivierungsbeginn beobachtet. Die Fermentierung war nach etwa
30 Stunden vollständig.
Wurde die Kultivierung ohne Perfluorotributylamin durchgeführt, so war die Fermentierung in 40 Stunden vollständig bei einer
maximalen Permentierungsgeschwindigkext von 3»8 χ 10 Mol
Sorbose/ml-Std.
Die Kultivierung von Acetobacter suboxydans ATCC 621 wurde nach
dem in Beispiel 2 beschriebenen Verfahren durchgeführt, jedoch mit der Ausnahme, daß 100 ml Siliconöl (Handelsname "DC-200-ICS^
anstelle von Perfluorotributylamin verwendet wurden· In diesem Falle war die Fermentierung in etwa 20 Stunden vollständig bei
einer maximalen Fermentierungsgeschwindigkeit von 7,45 χ 10 Mol Sorbose/ml.Std.
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20 g Glucose, 6 g Diammoniumphosphat, 2,5 g L-Asparaginsäure,
5 g Hefeextrakt, 1 g Trinatriumcitrat, 0,25 g Magnesiumsulfat-.7
Hydrat, 2 mg Zinksulfate7 Hydrat und 1 mg Eisen(II)sulfat
wurden in 1 1 V/asser gelöst. 500 ml des wäßrigen Mediums wurden auf einen pH—Wert von 5,0 eingestellt und in einen 1 Liter-Ferment
er eingebracht. Eine bestimmte Menge an Perfluorotributylamin
(Handelsname "Inert Liquid FG-43") wurde dem Nährmedium zugesetzt.
Das Nährmedium wurde durch Autoclavenbehandlung sterilisiert und anschließend auf 300G gekühlt* Danach wurde das
Medium mit Hefe (Saccharomyces cerevisiae) beimpft. Danach wurde das Medium kultiviert bei 30 G unter Belüftung (250 ml/min.) und
Rühren (500 ITpM), bis das Wachstum der Hefe aufhörte. Die ergebnisse
der Kultivierung sind in der folgenden !Tabelle II aufgeführt.
Menge an zugesetztem P erfluorotributylamin
* CW)
25 50
| Tabelle II | (B) | (0) |
| (A) | (l/Std.) | (Std.) |
| (Std.) | 0,14 | 48 |
| .10 - 30 | 0,19 | 40 |
| 10 - 17 | 0,22 | 30 |
| 10-20 | ||
In der Tabelle bedeuten:
(A) die Dauer der aktiven Phase der Vermehrung,
(B) die spezifische Wachstumsrate, d. h« die Wächstumsrate
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(g/ml Std.) der Hefe in der aktiven Phase der Vermehrung/
Konzentration/ml an Hefezellen im Medium, und
(G) die zur Vervollständigung der Kultivierung erforderliche Zeit.
500 ml eines wäßrigen Nährmediums mit einem Gehalt an 20 /»
(G/V) Glycerin, 1,5 i° (G/V) Kornquelliquor, 0,5 1° (G/V) Ammoniumfumarat
und 1 fo (G/V) Calciumcarbonat wurden in einen 1-Liter-Fermenter
eingebracht. Eine bestimmte Menge an Perfluorotributylamin
(Handelsname "Inert Ldquid FO-43") wurde dem Medium
zugesetzt. Das Medium wurde durch Autoclavenbehandlung sterilisiert und anschließend auf 300C gekühlt. Danach wurde
das Medium mit Acetobacter suboxydans ATOO 621 beimpft. Anschließend
wurde das Medium kultiviert bei 300C unter Belüftung
(250 ml/min.) und Rühren (500 UpM), bis die Umwandlung des Glycerins in Dihydroxyaceton vervollständigt war. Die Ergebnisse
der Kultivierung sind in der folgenden Tabelle III aufgeführt.
Zugesetzte Menge an (A)
Perfluorotributylamin (Mol Dihydroxy-
<fo (V/V) aceton/ml Std.)
0 3,8 χ 10"5
20 5,2 χ 10"5
40 6,3 x 10~5
60 7,2 χ 10"5
| (B) | ) | (C) |
| (Std. | 65 | (Std.) |
| 16 - | 60 | 72 |
| 15 - | 50 | 64 |
| 12 - | 45 | 56 |
| 10 - | 56 | |
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In der Tabelle bedeuten:
(a) die maximale Fermentierungsgeschwindigkei.t, d. h. die maximale
Geschwindigkeit der Umwandlung von Glycerin in Dihydroxyaceton,
(B) die Dauer der maximalen Fermentierungsgeschwindigkeit und
(C) die zur Vervollständigung der Fermentierung erforderliche
Zeit. ·
100 ml eines wäßrigen Nährmediums mit einem Gehalt an 3 ^
(G/V) Stärke, 4 ^ (G/V) Baumwollsamentreber, 0,2 <fo (G/v) Hefe-^
extrakt, 0,5 $ (G/v) natriumchlorid, 0,3 % (G/V) Calciumcarbonat
und 0,002 fo (G/V) Kupfer(II)sulfat.5 Hydrat wurden bei
1210C 20 Minutenlang durch Autoclavenbehandlung sterilisiert.
Eine Öse voll Streptomyces humidas var. sp. MORD 038? (hinterlegt
bei der Agricultural Research Service Culture Collection des United States Department of Agriculture unter der Eingangs—
nummer WRRL 3885) wurde dem Medium zur Beimpfung zugesetzt,
worauf das Nährmedium bei 27 C 72 Stunden lang unter Belüftung
und Rühren kultiviert wurde. Auf diese Weise wurde die Impfkultur
erhalten.
100 ml eines wäßrigen ITährmediums mit einem Gehalt an 20 f>
(G/V) Maltosesirup (Maltosegehalt 50,- 60 β, gehandelt von der
Hayashibara Co., Ltd. unter dem Handelsnamen "Malt Rup")>
4 0A (G/V) Baumwollsamentreber, 1 fo (G/V) Natriumchlorid, 0,6 °/o.
(G/V) Calciumcarbonat und 0,004 °/° (G/V) Kupfer(ll)sulfat.5 Hydrat
wurden in einen 500 ml—Erlenmeyer—Kolben eingebracht. Eine bestimmte
Menge an Perfluorotributylamin (Handelsname "Inert Liquid FC-43") wurde dem Nährmedium zugesetzt» Das Medium wurde
sodann bei 1210C 20 Minuten lang durch Autoclavenbehandlung ste-
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rilisiert und anschließend gekühlt, 3,1 nil der angegebenen
Impfkultür wurden dem Medium zugesetzt. Danach wurde das ifährmedium
bei 27°G unter Schütteln (140 Cyelen/min.) kultiviert.
Die Menge {Einheiten/ral) an im Nährmedium angereichertem Antibioticum
YA-56 ist in der folgenden Tabelle IV aufgeführt.
Meng© an aufesst&%eai Eultivierungsaeit
lii
(V/¥) U Sage 15 Sag© 16 fage
0 7»5i7»0) 15,2(7*4) 33,0(7,3)
IQ ' 1O,ÖC7»1) 17,1(7,3) 36,0(7,1)
15 i4»2(St9) 23,2(7,0) 43,0(7,0)
20 15#2{6t9) 22,7(7,0 46#0(7,O
In obiger Satefelle ist au feeä'Chteia.2
1. Die Menge an ia SShrffledium angereicherten Antibioticum
YA-'56 wurde toestiamt mit Hilfe der Zylinderplattenjaethode
unter Verwendung von Escherichia coli NIHi als eapfindlieher
ffiikroorganisaus und
2. die in -Klaamer angegebenen Werte bedeuten die pH-Werte des
Mediums*
309840/0
50 ml eines wäßrigen Nährmediums mit einem Gehalt an 2,0 $
(G/V) Polypepton, 0,5 % (G/V} Fleischextrakt,. 1 $ (O/V) Glucose,
1 $ (G/V) Galciumcarbonat und 0,5 $ iö/^l Natriumchlorid
wurden im Autoelaven sterilisiiert. Das Medium wurde mit einer
Öse voll Streptomyces Fra^-i^ae 131-5OS 3 iaeimpft;, worauf das
Nährmedium bei 25°ö 48 Stunden lang unter SöMltteln kultiviert
wurde. Mit diese Weise wurde täi®
50 ml eines wäßrigen Sfährmediums der angegebenen Zusammensetzung
wurden in einen 250 ml-Erlenmeyerkolben eingebracht. Eine bestimmte
Menge an Perfluorotributylamin (Handelsname "Inert
Liquid PG-43") wurde dem Medium ,zugesetzt. Das'-Kährmedium wurde
sodann bei 1210G 20 Minuten lang durch Autoclavenbehandlung
sterilisiert, worauf es gekühlt wurde.. Danach wurde 1 ml Impfkultur
dem Medium zugesetzt» Anschließend wurde das Medium bei 25°C unter Schütteln (150 Gyclen/min.) kultiviert. Die Menge
(mcg/ml) des im Nahrmedium -angereicherten Antibiotrcums ITeomycin
ist in der folgenden Tabelle V aufgeführt.
Menge an augesefeztem J^ltfjvi^^g^ieit
S tbie 3 l-age 5 lage
0
20
23U631
In obiger Tabelle ist zu beachten:
1. Die Menge des an im Nährmedium angereicherten Antibioticums
Neomycin wurde bestimmt mit Hilfe der Zylinderplattenmethode unter Verwendung von Staphylococcus aureus Terashima als
empfindlicher Mikroorganismus und
2. die in Klammer angegebenen Werte bedeuten die pH—Werte des
Mediums.
3 0 9 8 4 0 / iH 4 9
Claims (9)
- Patentansprüche'1. Verfahren zur Kultivierung eines aeroben Mikroorganismus in einem wäßrigen Nährmedium, dadurch gekennzeichnet, daß man die Kultivierung in Gegenwart einer mit Wasser nicht mischbaren inerten organischen Flüssigkeit mit hoher Sauerstofflöslichkeit durchführt.
- 2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man als mit Wasser nicht mischbare inerte organische Flüssigkeit mit hoher Sauerstoffloslichkeit einen flüssigen Fluorokohlenstoff verwendet.
- 3· Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man als mit Wasser nicht mischbare inerte organische Flüssigkeit mit hoher Sauerstoffloslichkeit ein Siliconöl niedriger Viskosität verwendet.
- 4. Verfahren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß man als flüssigen Fluorokohlenstoff einen solchen mit 1 bis 20 Kohlenstoffatomen verwendet.
- 5. Verfahren nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, daß man als Siliconöl mit niedriger Viskosität ein solches mit 0,65 bis 15 Centipoise verwendet.
- 6. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man die mit Wasser nicht mischbare inerte organische Flüssigkeit mit hoher Sauerstoffloslichkeit dem Währmedium in einer Konzentration von 5 bis 80 % (V/V) zusetzt. . - '309840/044923H631
- 7. "Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man die mit Wasser nicht mischbare inerte organische Flüssigkeit mit hoher Sauerstofflöslichkeit dem Nährmedium in einer Konzentration von 8 bis 40 $ (V/V) zusetzt.
- 8. Verfahren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß man als flüssigen Fluorokohlenstoff Perfluorotributylamin, Perfluor o-2-butylf uran, Perfluoro-n-heptan, Perfluoro-naphtalin, Perfluoro-1-methyl-naphtalin, Perfluoro-H-methyl-morpholin, 1,2,2,2-Tetrafluoroäthyläther von Perfluoro-(2,5,8-trimethyl-3,6,9-trioxa-dodecanol) oder Perfluoro-1-methyl-decalin verwendet.
- 9. Verfahren nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, daß man ein Siliconöl mit einer Viskosität von 1 Oentipoise und einem Molekulargewicht von 316 verwendet.309840/0449
Applications Claiming Priority (2)
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE4205820A1 (de) * | 1992-02-26 | 1993-09-02 | Plaas Link Andreas Dr | Anordnung und verfahren zur sauerstoffversorgung und zur durchmischung von bioreaktoren |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE4205820A1 (de) * | 1992-02-26 | 1993-09-02 | Plaas Link Andreas Dr | Anordnung und verfahren zur sauerstoffversorgung und zur durchmischung von bioreaktoren |
| DE4205820C2 (de) * | 1992-02-26 | 2001-10-04 | Plaas Link Andreas | Anordnung und Verfahren zur Sauerstoffversorgung und zur Durchmischung von Bioreaktoren |
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