DE2108043C3 - Peptide und ihre Verwendung bei der Bekämpfung von Hochdruck - Google Patents

Description

Die Erfindung betrifft als Inhibitoren der Umwandlung von Angiotensin I in Angiotensin H wirksame Peptide der Zusammensetzung:

Pyroglutamyl-tryptophyl-prolyl-arginyl-prolylthreonyl-prolyl-glutaminyl-isoleucylprolyl-prolin und

Pyroglutamyl-glycyl-glycyl-tryptophyl-prolylarginyl-prolyl-glycyl-prolyl-glutamylisoleucyl-prolyl-prolin.

Die Peptide der Erfindung können als solche oder in Form ihrer pharmakologisch verträglichen Säureadditionssalze als Arzneistoffe zur Behandlung von essentiellem Hochdruck verwendet werden. Beispiele für diese Salze sind die Hydrochloiide, Hydrobromide, Acetate und Halogenacetate, wie die Trifluoracetate und Dichloracetate.

Die Peptide der Erfindung hemmen die Umwandlung von Angiotensin I in Angiotensin II. Bei einer Konzentration von etwa 0,05 bis etwa 10mcg/ml hemmen sie die Umwandlung von Angiotensin I, dessen Konzentration 5 mMol beträgt, zu 50%. Bei einer Dosis von etwa 0,5 bis etwa 5 mg/kg verringern die Peptide der Erfindung wirksam den Hochdruck bei der Ratte. Zu

is diesem Zweck können sie parenteral zusammen mit üblichen Trägerstoffen verabfolgt werden.

In der folgenden Tabelle sind die Ergebnisse von Vergleichsversuchen zusammengestellt, in denen die Wirkung der erfindungsgemäßen Peptide bzw. des aus Nature, 225 (1970), S. 379 bekannten Pentapeptids auf die durch Angiotensin I induzierte Änderung des Blutdrucks bei anästhetisierten Ratten untersucht wurde. Hierbei wurde die von S. L Engel, T. R. Schaeffer, B. I. Gold und B. Rubin, Proc. Soc. Exp. Biol.

Med., Bd. 140 (1972) S. 240-244 beschriebene Versuchsmethodik angewandt.

Tabelle

Testverbindung

Struktur

Hemmung der Pressor-Eflekte von Angiotensin 1
Dosis, Zahl der max. Hemmung 50% Erholung

mg/kg, iv Tiere (% + SE)

Zeit, min

Vergleichsverbindung

Beispiel 1 Beispiel 2

Pyr-Lys-Trp-Ala-Pro

2,0 8,0

Pyr-Trp-Pro-Arg-Pro-Thr-Pro-Gln-Ile-Pro-Pro 0,5

Pyr-Gly-Gly-Trp-Pro-Arg-Pro-Gly-Pro-Glu- 2,0 Ile-Pro-Pro g q

28.3 ± 3,6

85.4 ± 5,5

53,2 ± 4,5

82.2 ±6,1

87.5 ± 8,2

41,5 ±9,8

73.3 ± 10,6

4 4

11
30
33

6 9,5

Die Beispiele erläutern die Erfindung. Sämtliche Aminosäuren haben die L-Konfiguration, sofern nichts anderes angegeben ist.

Beispiel 1

a) Pyroglutamyl-tryptophyl-prolyl-nitroarginylprolyl-O-benzylthreonyl-prolin

Ausgehend von 8 g tert.-Butyloxycarbonyl-prolin-Polystyrolharz, das 0,187 mMol Prolin je g Harz enthält, werden folgende Reaktionsschritte durchgeführt:

1. Vier Waschungen mit Dichlormethan, wasserfreiem Äthanol und Essigsäure.

2. Eine Waschung mit 1 η-Salzsäure während 5 Minuten und eine Waschung während 25 Minuten.

3. Vier Waschungen mit Essigsäure, wasserfreiem Äthanol und Chloroform.

4. Zwei Waschungen mit einem Gemisch von Chloroform und Triäthylamin.

5. Vier Waschungen mit Chloroform und Dichlormethan.

6. Kopplung mit dem Aminosäurederivat in Gegenwart von Dicyclohexylcarbodiimid in Dichlormethan.

Dieses Verfahren wird nacheinander zur Kopplung der folgenden Aminosäurederivate durchgeführt:

tert.-Butyloxycarbonyl-O-benzyl-threonin;

tert.-Butyloxycarbonyl-prolin;

tert.-Butyloxycarbonyl-nitroarginin;

tert- Buty Ioxycarbony !prolin;

tert.-Butyloxycarbonyl-tryptophanund

Pyroglutaminsäure.

Im Falle der Nitroarginin-, Tryptophan und Pyroglutaminsäurederivate ist das Lösungsmittel ein Gemisch aus Dichlormethan und Dimethylformamid (2,5 :1). Das partiell geschützte Peptid Pyroglutamyltryptophyl-prolyl-nitroarginyl-prolyl-O-benzylthreonyl-prolin wird vom Harz mit Bromwasserstoffsäure in Trifluoressigsäure, die Anisol und Mercaptoäthanol enthält, abgespalten.

b)Pyroglutamyl-tryptophyl-proIyl-arginyl-

prolyl-threonyl-prolyl-glutaminyl-isoleucyl-

prolyi-prolin

Das in Abschnitt a) erhaltene Peptid wird mit Glutaminyl-isoleucyl-prolyl-prolin-benzylester (stufenweise hergestellt aus Prolinbenzylester) mit Hilfe von Dicyclohexylcarbodiimid gekoppelt Die Schutzgruppen werden am Ende der Synthese durch katalytische Hydrierung abgespalten. Das erhaltene Polypeptid hat folgende Eigenschaften:

Rf-Wert bei der Dünnschichtchromatographie an SilicagelO,05(Dioxan/Wasser = 9 :1)

Rf-Wert bei der Papierchromatographie 0,53 (n-Butanol/Pyridin/Essigsäure/Was-

ser = 30:20:6:24)

Aminosäure-Analyse (Molverhältnis): Thr 0,94; GIu 2,06; Pro 4,5; lie 0,96; Arg 1,0.

Beispiel 2

Pyroglutamyl-glycyl-glycyl-tryptophyl-prolyl-

arginyl-prolyl-glycyl-prolyl-glutamyl-isoleucyl-

prolyl-prolin

Ausgehend von 10 g Butyloxycarbonyl-prolin-Polystyrolharz, das 0,2 mMol Prolin je g Harz enthält, werden gemäß Beispiel 1 folgende Aminosäuren gekoppelt: Prolin, Isoleucin, Glutaminsäure, Prolin, ίο Glycin, Prolin, Nitroarginin, Tryptophan, Glycin, Glycin und Pyroglutaminsäure. Im Falle des Nitroarginins, Tryptophane und der Pyroglutaminsäure ist das Lösungsmittel ein Gemisch aus Dichlormethan und Dimethylformamid (2,5 :1). Als Aminoschutzgruppe wird die tert-Butyloxycarbonylgruppe verwendet Für sämtliche Kondensasationsstufen mit Ausnahme der von Glutaminsäure, bei der y-Benzyl-tert-butyloxycarbonyl-glutaminsäure eingesetzt wird, wird Dicyclohexylcarbodiimid verwendet. Die Abspaltung des Polypeptids von der Harzmatrix erfolgt gemäß Beispiel 1. Die Schutzgruppen werden anschließend durch katalytische Hydrierung abgespalten.
Das erha'tene Polypeptid hat folgende Eigenschaften: Rf-Wert bei der Dünnschichtchromatographie an Silicagel 0,17 (Methanol)

Aminosäure-Analyse (Molverhältnis): GIu 2,01; Pro 5,4; GIy 2,7; He 0,95; Arg 0,93.

Claims (3)

Patentansprüche:

1. Pyroglutamyl-tryptophyl-prolyl-arginyl-prolylthreonyl-prolyl-glutaminyl-isoleucyl-prolylprolin.

2. Pyroglutamyl-glycyl-glycyl-tryptophyl-prolylarginyl-prolyl-glycyl-prolyl-glutamyl-isoleucyl-prolyl-prolin.

3. Verwendung der Peptide nach Anspruch 1 und 2 bei der Bekämpfung von Hochdruck.