DE2005658B2 - Verfahren zur herstellung von des-phenylalanin hoch b 1-insulin - Google Patents
Verfahren zur herstellung von des-phenylalanin hoch b 1-insulinInfo
- Publication number
- DE2005658B2 DE2005658B2 DE19702005658 DE2005658A DE2005658B2 DE 2005658 B2 DE2005658 B2 DE 2005658B2 DE 19702005658 DE19702005658 DE 19702005658 DE 2005658 A DE2005658 A DE 2005658A DE 2005658 B2 DE2005658 B2 DE 2005658B2
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- insulin
- acid
- reaction
- des
- tert
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Substances N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 33
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 title claims description 17
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims 3
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 claims description 13
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 claims description 13
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 9
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 4
- 101000993800 Sus scrofa Insulin Proteins 0.000 claims description 3
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 3
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 claims description 3
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylacetamide Chemical compound CN(C)C(C)=O FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims description 2
- HGNKNSVAQIVPMU-UHFFFAOYSA-N azido n-diazocarbamate Chemical compound [N-]=[N+]=NOC(=O)N=[N+]=[N-] HGNKNSVAQIVPMU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- LGUHADBEXWHGIZ-UHFFFAOYSA-N butyl n-diazocarbamate Chemical compound CCCCOC(=O)N=[N+]=[N-] LGUHADBEXWHGIZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- -1 phenyl-thiocarbamoyl Chemical group 0.000 claims description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 2
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims 6
- QKFJKGMPGYROCL-UHFFFAOYSA-N phenyl isothiocyanate Chemical compound S=C=NC1=CC=CC=C1 QKFJKGMPGYROCL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 4
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims 3
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 claims 3
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims 2
- 150000003857 carboxamides Chemical class 0.000 claims 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 claims 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 claims 2
- 150000002540 isothiocyanates Chemical class 0.000 claims 2
- BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L potassium carbonate Chemical compound [K+].[K+].[O-]C([O-])=O BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N Alanine Chemical compound CC([NH3+])C([O-])=O QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N N-Methylpyrrolidone Chemical compound CN1CCCC1=O SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 241000244510 Pinus canariensis Species 0.000 claims 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 claims 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 claims 1
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 claims 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 claims 1
- 125000003917 carbamoyl group Chemical group [H]N([H])C(*)=O 0.000 claims 1
- VQXINLNPICQTLR-UHFFFAOYSA-N carbonyl diazide Chemical compound [N-]=[N+]=NC(=O)N=[N+]=[N-] VQXINLNPICQTLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 claims 1
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 claims 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 claims 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 claims 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 claims 1
- 229940113088 dimethylacetamide Drugs 0.000 claims 1
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 claims 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 claims 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 claims 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 claims 1
- 239000004026 insulin derivative Substances 0.000 claims 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims 1
- 239000010871 livestock manure Substances 0.000 claims 1
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 claims 1
- 229940117953 phenylisothiocyanate Drugs 0.000 claims 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims 1
- 229910000027 potassium carbonate Inorganic materials 0.000 claims 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 claims 1
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 claims 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims 1
- 125000000446 sulfanediyl group Chemical group *S* 0.000 claims 1
- 125000002023 trifluoromethyl group Chemical group FC(F)(F)* 0.000 claims 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 101001011741 Bos taurus Insulin Proteins 0.000 description 2
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 2
- IXIBAKNTJSCKJM-BUBXBXGNSA-N bovine insulin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3NC=NC=3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)C(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 IXIBAKNTJSCKJM-BUBXBXGNSA-N 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ABJSOROVZZKJGI-OCYUSGCXSA-N (1r,2r,4r)-2-(4-bromophenyl)-n-[(4-chlorophenyl)-(2-fluoropyridin-4-yl)methyl]-4-morpholin-4-ylcyclohexane-1-carboxamide Chemical compound C1=NC(F)=CC(C(NC(=O)[C@H]2[C@@H](C[C@@H](CC2)N2CCOCC2)C=2C=CC(Br)=CC=2)C=2C=CC(Cl)=CC=2)=C1 ABJSOROVZZKJGI-OCYUSGCXSA-N 0.000 description 1
- KTVJBCFRSVIVNO-UHFFFAOYSA-N 1-butyl-2-isothiocyanatobenzene Chemical compound CCCCC1=CC=CC=C1N=C=S KTVJBCFRSVIVNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JYKYYPPZLPVIBY-UHFFFAOYSA-N 1-isothiocyanato-2-methylbenzene Chemical compound CC1=CC=CC=C1N=C=S JYKYYPPZLPVIBY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NXHSSIGRWJENBH-UHFFFAOYSA-N 1-isothiocyanato-4-nitrobenzene Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=C(N=C=S)C=C1 NXHSSIGRWJENBH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FEXIEMAAKBNTFK-UHFFFAOYSA-N 4-nitropyridine Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=NC=C1 FEXIEMAAKBNTFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M Bicarbonate Chemical compound OC([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108010005991 Pork Regular Insulin Proteins 0.000 description 1
- ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-M Thiocyanate anion Chemical compound [S-]C#N ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000003178 anti-diabetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003472 antidiabetic agent Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N bromophenol blue Chemical compound C1=C(Br)C(O)=C(Br)C=C1C1(C=2C=C(Br)C(O)=C(Br)C=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000004744 butyloxycarbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-N hydrogen thiocyanate Natural products SC#N ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000005740 oxycarbonyl group Chemical group [*:1]OC([*:2])=O 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 235000015277 pork Nutrition 0.000 description 1
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/62—Insulins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Description
Bei der Reaktion von tert. Butyloxycarbonyl-azid
mit Insulin entsteht überraschenderweise unter den ge- G,u. berechnet 7 gefunden 7,00;
nannten Bedingungen des Verfahrens der Erfindung
ganz überwiegend das N*<ai>, N«<B29>-Di-tert. Butyl- GIy: berechnet 4, gefunden 3,98;
oxycarbonyl-insulin, dessen noch freie Aminogruppe 60 pne: berechnet 2, gefunden 2,06;
am Phenylalanin31 nun selektiv mit einem Phenyliso-
thiocyanat umgesetzt wird. Bei der anschließenden Lys: berechnet L gefunden 1,01.
Behandlung des Reaktionsproduktes mit einer starken
Säure, bevorzugt Trifluoressigsäure, werden gleich- Das erfindungsgemäß hergestellte Des-Phenylala-
zeitig die beiden tert. Butyloxycarbonylgruppen und 65 ninB1-insulin besitzt die bereits bekannten Eigendas
Phenylalanin31 (als Thiazolinon) abgespalten. schäften der Verbindung. Seine vorteilhafte und
Als Ausgangsprodukt kommt Insulin verschiedener spezielle Verwendung als Arzneimittel (als Antidiabeti-Spezies
in Frage, bevorzugt verwendet man Rinder- cum) beruht auf einigen gegenüber Insulin veränderten
physikalischen Eigenschaften, ζ. B. der veränderten kann auch 10 Minuten bei 500C oder 5 Minuten
Löslichkeit der Verbindung. unter Rückfluß vorgenommen werden.
Beispiele Beispiel 2
Die nachfolgenden Beispiele sollen die Erfindung S Man setzt 1 g Rindei-Insulin nach Beispiel 1 um und
näher erläutern. Zur Charakterisierung der acylierten erhält 710 mg Des-PhenylaIaninB1-insulin (Rind).
Insuline diente die Papierelektrophorese (6 Stunden . .
Insuline diente die Papierelektrophorese (6 Stunden . .
Volt: in Essigsäure/Ameisensäure pH 2: Anfärben B e ι s ρ ι e 1 3
mit Bromphenolblau); zur Kontrolle der Abspaltung Man setzt Ig Rinder-Insulin nach Beispiel 1 um,
von Phenylalanin dienten die Elektrophorese und die io führt jedoch die Reaktion b) während SO Stunden bei
Aminosäure-Analyse. +50C in 85prozentigem Pyridin durch.
Ausbeute: 695 mg Des - Phenylalanin01- insulin
Beispiel 1 (Rind).
a) 1 g (0,167 mMol) Schweine-Insulin werden in 15
70 ecm 80prozentigem Dimethylacetamid aufge- Man setzt 1 g Schweine-Insulin räch Beispiel 1 um,
nom^en. Man gibt 1,45 g (10 mMol) tert. Butyl- führt jedoch die Reaktion b) während 1 Stunde bei
oxycarbonyl-azid und 3,3 ecm (3,3 mMol)l N Na- 400C durch.
triumbicarbonat zu und rührt 5 Stunden bei 35° C. Ausbeute: 725 mg Des-Phenylalanin81-insulin
Dann wird die Lösung im Vakuum bei höchstens 20 (Schwein).
50° C Badtemperatur eingeengt. Den Rückstand Beispiel 5
verreibt man mit Äther und erhält 1,275 g salzhaltiges Produkt, das nach Digerieren mit 20 ecm Man setzt 1 g Misch-Insulin (Rind und Schwein) 2prozentige Essigsäure 945 mg N<*<Al> · N«(B28)- nach Beispiel 1 um, stellt jedoch in Reaktion b) mit Di-tert. Butyloxycarbonylinsulin (Schwein) ergibt. 25 0,3 mMol 4-Nitro-phenylisothiocyanat während 2 Stun-
50° C Badtemperatur eingeengt. Den Rückstand Beispiel 5
verreibt man mit Äther und erhält 1,275 g salzhaltiges Produkt, das nach Digerieren mit 20 ecm Man setzt 1 g Misch-Insulin (Rind und Schwein) 2prozentige Essigsäure 945 mg N<*<Al> · N«(B28)- nach Beispiel 1 um, stellt jedoch in Reaktion b) mit Di-tert. Butyloxycarbonylinsulin (Schwein) ergibt. 25 0,3 mMol 4-Nitro-phenylisothiocyanat während 2 Stun-
b) Diese Verbindung wird in 4 ecm 95prozentigem den bei Raumtemperatur die entsprechende 4-Nitro-Pyridin
gelöst. Man gibt 0,0365 ecm Phenyliso- phenylthiocarbamoyl-Verbindung her.
thioc^anat zu und rührt 4 Stunden bei Raum- R . . . ,
temperatur. Dann wi-d im Vakuum bei höchstens Beispiel
5O0C Badtempc-atur auf ein kleines Volumen ein- 30 Man setzt Ig Rinder-Insulin nach Beispiel 1 um,
geengt und die Verbindung mit Äther ausgefällt. stellt jedoch in Reaktion b) mit 0,4 mMol 4-Chlor-
Ausbeute: 820 mg N*<Al>
· N"<B28>-Di-tert. Butyl- phenylisothiocyanat während 3 Stunden bei Raum-
oxycarbonyl - N"<B1>
- phenylthiocarbamoyl - in- temperatur die entsprechende 4-Chlorphenylthiocarb-
sulin (Schwein). amoyl-Verbindung her.
c) 820 mg der nach b) hergestellten Verbindung 35 . . . _
werden 1 Stunde in 8,5 ecm Trifluoressigsäure bei B e > s ρ 1 e 1 /
Raumtemperatur aufbewahrt. Auf Zusatz von Man setzt 1 g Schweine-Insulin nach Beispiel 1 um, 100 ecm Äther fallen 720 mg Des-PhenylalaninBl- stellt jedoch in Reaktion b) mit 0,3 mMol 3-Trifluorinsulin (Schwein) aus, die in bekannter Weise bei methylphenylisothiocyanat während 2 Stunden bei pH 5,0 bis 5.5 zur Kristallisation gebracht werden 40 Raumtemperatur die entsprechende 3-Trifluormethylkönnen. Die Behandlung mit Trifluoressigsäure thiocarbamoyl-Verbindung her.
werden 1 Stunde in 8,5 ecm Trifluoressigsäure bei B e > s ρ 1 e 1 /
Raumtemperatur aufbewahrt. Auf Zusatz von Man setzt 1 g Schweine-Insulin nach Beispiel 1 um, 100 ecm Äther fallen 720 mg Des-PhenylalaninBl- stellt jedoch in Reaktion b) mit 0,3 mMol 3-Trifluorinsulin (Schwein) aus, die in bekannter Weise bei methylphenylisothiocyanat während 2 Stunden bei pH 5,0 bis 5.5 zur Kristallisation gebracht werden 40 Raumtemperatur die entsprechende 3-Trifluormethylkönnen. Die Behandlung mit Trifluoressigsäure thiocarbamoyl-Verbindung her.
Claims (2)
1. Verfahren zur Herstellung von Des-Phenyl- weise so durchgeführt, daß man 1 mMol Insulin in der
alaninB1-insulin, dadurch gekennzeich- 5 30-bis 70fachen Gewichtsmenge eines N.N'-Dialkyln
e t, daß man Insulin in einer Mischung, die aus carbonsäureamides, welches bis zu etwa 25°/o Wasser
einem N.N'-Dialkylcarbonsäureamid mit insge- enthalten kann, suspendiert bzw. löst. Als Dialkylsamt
3 bis 6 Kohlenstoffatomen und einer wäßrigen carbonsäureamid werden beispielsweise verwendet:
Pufferlösung von einem pH-Wert von 8,0 bis 9,0 Dimethylformamid, DimeÜrylacetamid, Diäthylformbesteht,
mit einem Überschuß an tert. Butyloxy- io amid oder N-Methylpyrrolidon. Anschließend werden
carbonyl-azid bei Raumtemperatur oder leicht er- 20 bis 75 mMol tert. Butyloxycarbonyl-azid und eine
höhten Temperaturen umsetzt, anschließend mit Pufferlösung in 2,5- bis 4facher Volumenmenge, be-2
bis 4 Äquivalenten eines unsubstituierten oder zogen auf das Gewicht des eingesetzten Insulins, zumit
einem negativen Substituenten versehenen gegeben und anschließend 3 bis 6 Stunden bei etwa
Phenylisothiocyanats umsetzt und das Reaktions- 15 35 bis 400C gerührt. Als Pufferlösung können z. B.
produkt mit einer starken Säure behandelt. 1 N-A:kalibicarbonat oder Alkaliphosphatpuffer von
2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekenn- pH 8,0 bis 9,0 verwendet werden. Die Reaktionszeichnet,
daß als starke Säure Trifluoressigsäure temperatur kann auch auf etwa 500C gesteigert werverwendet
wird. den, bevorzugt sind jedoch etwa 35 bis 40 C. Die Um-
20 setzung läuft bereits bei Raumtemperatur ab, jedoch
wird dann die 4- bis 6fache Zeit benötigt.
Zur intermediären Isolierung des Di-tert. Butyjoxy-
Zur intermediären Isolierung des Di-tert. Butyjoxy-
carbonylinsulins fällt man entweder direkt mit Äther
aus oder bringt die Lösung zuerst bei höchstens 50^C
25 Badtemperatur im Vakuum zur Trockne und verreibt
dann mit Äther. Zur Entfernung der Puii>.rsalze dige-
Gegenstand der Erfindung ist ein Verfahren zur riert man mit der 5-bis 1Ofachen Gewichtsmenge 1-bis
Herstellung von Des-PhenylalaninB1-insulin, das da- 2prozentiger Essigsäure und Wasser und trocknet im
durch gekennzeichnet ist, daß man Insulin in einer Vakuum über P2O5.
Mischung, die aus einem Ν,Ν'-Dialkylcarbonsäure- 30 Zur Herstellung der Phenylthiocarbamoylverbinamid
mit insgesamt 3 bis 6 Kohlenstoffatomen und dung löst man das Produkt vorteilhaft in der etwa 20-einer
wäßrigen Pufferlösung von einem ρ H-Wert von bis 50fachen Menge etwa 60- bis 95prozentigen wäß-8,0
bis 9,0 besteht, mit einem Überschuß an tert. Butyl- rigen Pyridins — bevorzugt 80- bis 95prozentig — fügt
oxycarbonyl-azid bei Raumtemperatur oder leicht er- 1,5 bis 4 mMol eines Phenylsenföls zu, das gegebenenhöhten
Temperaturen umsetzt, anschließend mit 2 bis 35 falls substituiert sein kann. An Stelle des Pyridins kann
4 Äquivalenten eines unsubstituierten oder mit nega- auch Dimethylformamid als Lösungsmittel verwendet
tiven Substituenten versehenen Pbenylisothiocyanats werden. Als Substituenten des Phenylsenföls kommen
umsetzt und das Reaktionsprodukt mit einer starken negative Substituenten wie z. B. Chlor, Nitro- oder
Säure wie z. B. Trifluoressigsäure behandelt. Trifluormethyl in Frage. Man rührt 3 bis 20 Stunden
Des-PhenylalaninBl-insuIin wurde bisher aus Fluo- 40 — vorzugsweise 3 bis 6 Stunden — bei Raumtemperescein-
oder Phenyl-thiocarbamoylB1-insulin durch ratur. wobei man zweckmäßig bei auftretender Trü-Edman-Abbau
erhalten. Beim Umsatz des Insulins mit bung (Hinweis auf beginnende Denaturierung des
den entsprechenden Isothiocyanaten zu den Thio- Reaktionsproduktes) die Umsetzung beendet. Man
carbamoylverbindungen entstehen aber stets Ge- kann auch unter entsprechende- Verkürzung bzw.
mische, da drei vorhandene Aminogruppen in unter- 45 Verlängerung der Reaktionszeit bei etwa 40 oder bei
schiedlichem Maße reagieren können. Diese Gemische 0 His 100C arbeiten.
mußten bisher mühsam durch Säulenchiomatographie Nach beendeter Reaktion vvird das Reaktionspro-
in 8 M-Harnstoff oder durch Gel-Elektrophorese ge- dukt mit Äther ausgefällt, 1 bis 2 Stunden in der etwa
trennt werden, ehe man nach Edman-Abbau einheit- lOfachen Gewichtsmenge Trifluoressigsäure aufbeliche
Verbindungen erhielt. Solche Trennungen sind 50 wahrt, wiederum mit Äther ausgefällt und in bekannter
aber nur in kleinem Maßstab möglich und dienten bis- Weise bei einem pH-Wert von 5,0 bis 5,5 kristallisiert,
her vor allem analytischen Zwecken. Die Aminosäureanalyse der Verbindung zeigt die er-
Demgegenüber läßt sich das erfindungsgemäße Ver- wartete Zusammensetzung. Eine typische Analyse mit
fahren mühelos in größeren Maßstab übertragen, was Glutaminsäure als Bezugssubstanz lautet z. B. für die
den besonderen Vorteil dieses Verfahrens ausmacht. 55 interessierenden Aminosäuren:
Priority Applications (25)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19702005658 DE2005658C (de) | 1970-02-07 | Verfahren zur Herstellung von Des-Phenylalanin hoch B 1-Insulin | |
| EG49/71A EG10440A (en) | 1970-02-07 | 1971-02-01 | Process for the preparation of des-phenylalamin b1-insuli |
| IL36124A IL36124A (en) | 1970-02-07 | 1971-02-02 | Process for the preparation of desphenylalanin b1-insulin |
| NLAANVRAGE7101360,A NL168502C (nl) | 1970-02-07 | 1971-02-02 | Werkwijze voor het bereiden van des-fenylalanine b1-insuline en dit insuline-derivaat bevattende geneesmiddelen. |
| SU1619741A SU385436A3 (de) | 1970-02-07 | 1971-02-03 | |
| ZA710673A ZA71673B (en) | 1970-02-07 | 1971-02-03 | Process for the preparation of des-phenylalanin b1-insulin |
| CH166371A CH569700A5 (de) | 1970-02-07 | 1971-02-04 | |
| ES387934A ES387934A1 (es) | 1970-02-07 | 1971-02-04 | Procedimiento para la preparacion de des-fenilalanin b1-in-sulina. |
| YU256/71A YU34786B (en) | 1970-02-07 | 1971-02-04 | Process for preparing des-phenylalanine-bi-insulin |
| NO440/71A NO133590C (de) | 1970-02-07 | 1971-02-05 | |
| DK53071A DK139577C (da) | 1970-02-07 | 1971-02-05 | Fremgangsmaade til fremstilling af des-phenylalaninb1-insulin |
| FI310/71A FI53304C (fi) | 1970-02-07 | 1971-02-05 | Foerfarande foer framstaellning av des-fenylalanin b1-insulin |
| SE7101434A SE370935B (de) | 1970-02-07 | 1971-02-05 | |
| CS87271*#A CS155966B2 (de) | 1970-02-07 | 1971-02-05 | |
| CA104,546A CA945143A (en) | 1970-02-07 | 1971-02-05 | Process for the preparation of des-phenylalanin b1-insulin |
| AT99271A AT308293B (de) | 1970-02-07 | 1971-02-05 | Verfahren zur Herstellung von Des-Phenylalanin<B1>-insulin |
| US00113097A US3801564A (en) | 1970-02-07 | 1971-02-05 | Process for the preparation of des-phenylalanine b1-insulin |
| BE762575A BE762575A (fr) | 1970-02-07 | 1971-02-05 | Procede de preparation de la des-phenylalanine b1 - insuline |
| IE137/71A IE34934B1 (en) | 1970-02-07 | 1971-02-05 | Process for the preparation of des-phenylalanine bi - insulin |
| FR7103898A FR2104735B1 (de) | 1970-02-07 | 1971-02-05 | |
| BG016760A BG17979A3 (bg) | 1970-02-07 | 1971-02-06 | Метод за получаване на дез- фенила- ланин в1- инсулин |
| PL1971146070A PL81164B1 (de) | 1970-02-07 | 1971-02-06 | |
| JP46005174A JPS5136276B1 (de) | 1970-02-07 | 1971-02-08 | |
| RO65848A RO58860A (de) | 1970-02-07 | 1971-02-08 | |
| GB2126071A GB1340924A (en) | 1970-02-07 | 1971-04-19 | Process for the preparation of desphenylalanine b1-insulin |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19702005658 DE2005658C (de) | 1970-02-07 | Verfahren zur Herstellung von Des-Phenylalanin hoch B 1-Insulin |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DE2005658A1 DE2005658A1 (de) | 1971-09-02 |
| DE2005658B2 true DE2005658B2 (de) | 1973-01-11 |
| DE2005658C DE2005658C (de) | 1973-08-02 |
Family
ID=
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0046979A1 (de) * | 1980-09-03 | 1982-03-10 | Hoechst Aktiengesellschaft | Analoga des Insulins |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0046979A1 (de) * | 1980-09-03 | 1982-03-10 | Hoechst Aktiengesellschaft | Analoga des Insulins |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| BG17979A3 (bg) | 1974-03-05 |
| IL36124A0 (en) | 1971-04-28 |
| DK139577C (da) | 1979-09-03 |
| CA945143A (en) | 1974-04-09 |
| NL168502B (nl) | 1981-11-16 |
| JPS5136276B1 (de) | 1976-10-07 |
| EG10440A (en) | 1977-09-30 |
| NL7101360A (de) | 1971-08-10 |
| AT308293B (de) | 1973-06-25 |
| FR2104735A1 (de) | 1972-04-21 |
| DK139577B (da) | 1979-03-12 |
| GB1340924A (en) | 1973-12-19 |
| NO133590B (de) | 1976-02-16 |
| FI53304C (fi) | 1978-04-10 |
| CS155966B2 (de) | 1974-06-24 |
| RO58860A (de) | 1975-10-15 |
| US3801564A (en) | 1974-04-02 |
| YU25671A (en) | 1979-09-10 |
| DE2005658A1 (de) | 1971-09-02 |
| NL168502C (nl) | 1982-04-16 |
| PL81164B1 (de) | 1975-08-30 |
| SU385436A3 (de) | 1973-05-29 |
| ZA71673B (en) | 1971-10-27 |
| FI53304B (de) | 1977-12-30 |
| BE762575A (fr) | 1971-08-05 |
| YU34786B (en) | 1980-03-15 |
| IE34934L (en) | 1971-08-07 |
| ES387934A1 (es) | 1973-06-01 |
| SE370935B (de) | 1974-11-04 |
| IL36124A (en) | 1975-02-10 |
| FR2104735B1 (de) | 1975-04-18 |
| NO133590C (de) | 1976-05-26 |
| IE34934B1 (en) | 1975-10-01 |
| CH569700A5 (de) | 1975-11-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DE1941512A1 (de) | Technische Herstellung von Jodisoxazolverbindungen | |
| DE1793517A1 (de) | N.N.'-Di-tert.Butyloxycarbonyl-insulin und Verfahren zu seiner Herstellung | |
| DE2005658C (de) | Verfahren zur Herstellung von Des-Phenylalanin hoch B 1-Insulin | |
| DE2005658B2 (de) | Verfahren zur herstellung von des-phenylalanin hoch b 1-insulin | |
| DE949568C (de) | Verfahren zur Herstellung von ªŠ-Acyl-lysinen | |
| DE1204666B (de) | Verfahren zur Herstellung von Arylsulfonyl-aethylthioschwefelsaeuren bzw. deren Alkalisalzen | |
| AT243817B (de) | Verfahren zur Herstellung von N-(5'-Nitro-2'-furfuryliden)-1-amino-hydantoin | |
| DE1153029B (de) | Verfahren zur Herstellung von o-Aminophenol-ª‰-hydroxyaethylsulfon-schwefelsaeureestern | |
| DE855995C (de) | Verfahren zur Herstellung von Nitrosopteridinen | |
| DE889154C (de) | Verfahren zur Herstellung substituierter Pteridine | |
| DE883151C (de) | Verfahren zur Herstellung substituierter Pteridine | |
| AT216145B (de) | Verfahren zur Herstellung von neuen therapeutisch wertvollen Verbindungen | |
| DE700919C (de) | Verfahren zur Gewinnung von Dulcit | |
| AT201238B (de) | Verfahren zur Herstellung neuer Penicillinsalze | |
| DE281083C (de) | ||
| DE2224382C3 (de) | Verfahren zur Herstellung von 4-Hydroxy-pyrazolo eckige Klammer auf 3,4-d eckige Klammer zu pyrimidin | |
| DE213155C (de) | ||
| DE960098C (de) | Verfahren zur Herstellung von 2-Benzolsulfonamido-4-methyl-6-oxy-pyrimidinen | |
| DE961626C (de) | Verfahren zur Herstellung von ªŠíñªŠ-Carbonyl-dilysin | |
| DE514505C (de) | Verfahren zur Darstellung der 1-Methyl-5-chlorbenzol-2-carbonsaeureamid-3-thioglykolsaeure | |
| DE968485C (de) | Verfahren zur Herstellung von Guanididen organischer Sulfosaeuren | |
| DE854802C (de) | Verfahren zur Herstellung von 4, 4'-Diaminodiphenylsulfoxyd | |
| DE2042299A1 (en) | Acyl derivs of insulin - with modified solubility | |
| DE2149467A1 (de) | Haarfaerbemittel | |
| DE1643476A1 (de) | alpha-Methylglutathione und Verfahren zu deren Herstellung |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C3 | Grant after two publication steps (3rd publication) | ||
| 8339 | Ceased/non-payment of the annual fee |