DE1467945C3 - Verfahren zur Herstellung eines gegen Würmer und Protozoen wirksamen Antibiotikums - Google Patents

Description

anfängliche pH-Wert des Mediums kann zwischen 4 und 7,5 liegen, obschon der bevorzugte Wert 6,5 ist. Die Temperatur liegt zwischen 24 und 28⁰C, die Fermentation wird 72 bis 120 Stunden lang durchgeführt, wobei der pH-Wert sich am Ende der Fermentation zur alkalischen Seite verschiebt. Im Anschluß daran erfolgt die Herstellung des Antibiotikums, indem man periodisch eine bestimmte Menge des Bodens abzieht, die halbe Menge n-Butanol zusetzt, das Ganze zur Extraktion durchrührt und. das Butanol durch Zentrifugieren abtrennt, worauf man das Butanol unter Vakuum verdampft. Der Rest wird mit Methanol extrahiert und gefiltert. Die Lösung wird bis zum Eintrocknen verdampft und die Menge des Antibiotikums, die zurückbleibt, bestimmt. Diese gravimetrische Bestimmung gibt zufriedenstellende Resultate und Ausbeuten von 85 bis 90 % von in dem Kulturboden enthaltenen Antibiotikum. Im allgemeinen findet die maximale Produktion des Antibiotikums nach, der Inokulierung des Kulturbodens in 3 bis 5 Tagen statt, wenn ein untergetauchter Boden verwendet wird, und in 8 bis 15 Tagen, wenn eine Oberflächenkultur benutzt wird. Das gemäß der Erfindung hergestellte Antibiotikum kann von dem Kulturboden durch Extraktion und Absorption gewonnen werden. Die erstgenannte Methode wird zur Herstellung größerer Mengen bevorzugt, da die Ausbeute hierbei besser ist. Zur Extraktion des Antibiotikums von dem Filtrat des Kulturbodens werden wasserunlösliche polare, organische Lösungsmittel bevorzugt, zur Extraktion von dem Pilz kann man aliphatische Alkohole wie Methanol, Äthanol, Butanol, Propanol, Isopropanol, Methyl- und Äthyl-Cellosolve (Äthylenglukose-monomethyl- (bzw. äthyl)-äther), wäßriges Azeton u. dgl. benutzen. Bevorzugt erfolgt die Extraktion duich Filtrieren des Bodens und getrennte Extraktion des Filtrates und des Pilzes. Von dem Mycelium oder Pilz kann das Antibiotikum mit allen, niedrigen Alkoholen, wie Methanol und Äthanol, Isopropanol, wäßrigem Azeton, Methyl- und Äthyl-Cellosolve, Pyridin, Dimethyl-Formamid, extrahiert werden.

Das in dem organischen Lösungsmittel enthaltene Antibiotikum kann durch Eindampfen im Vakuum gewonnen werden, wobei es als Rohprodukt anfällt. Man kann, das Antibiotikum auch mittels Aktivkohle, Magnesium-Aluminium-Silikat u. dgl. adsorbieren. Eluieren des Antibiotikums ist nur teilweise mittels organischer Lösungsmittel möglich, in denen es löslich ist.

Wenn nur das bevorzugte Extraktionsverfahren angewandt wird,, wird der Kulturboden gefiltert und das Filtrat mit V» Volumen n-Butanol extrahiert. Das Butanol wird abgetrennt, im Vakuum auf V₂₀ d^es Volumens konzentriert und das Antibiotikum durch Benutzen eines damit mischbaren Lösungsmittels wie Azeton ausgefällt,· man kann statt Azeton auch eine Mischung von miteinander mischbaren Lösungsmitteln wie Azeton und Benzin benutzen. Das rohe Antibiotikum wird einer weiteren Reinigung unterworfen. Der Pilz kann zweimal mit n-Butanol extrahiert werden, und man kann den für die Filtration beschriebenen Prozeß ausführen. Vorzugsweise extrahiert man das Mycelium mit Methanol oder Äthanol und filtriert dann. Der Methanol- oder Äthanolextrakt wird mit entfärbender Kohle behandelt und verdampft bis zur Entfernung des Alkohols. Das Antibiotikum bleibt gewöhnlich als weißer Rückstand, meist in kristalliner Form zurück. Die erhaltenen Kristalle werden durch Filtration abgetrennt und zwecks weiterer Reinigung rekristallisiert.

Zur Reinigung des rohen oder gegebenenfalls schon vorgereinigten Produktes wird dieses in 30 bis 45% warmem Äthanol oder Methanol gelöst, mit entfärbender Aktivkohle behandelt, in warmem Zustand gefiltert, auf Raumtemperatur gekühlt und auf dieser Temperatur 4 bis 6 Stunden gehalten, worauf man das Produkt über Nacht in einen Kaltraum mit einer Temperatur von 5°C überführt. Große Mengen nagelscharfer, weißer Kristalle werden gebildet, die gefiltert, dann mit Wasser gewaschen und getrocknet werden. Das Antibiotikum »Antiamoebin« hat folgende Eigenschaften:

Art:

Neutrales Polypeptid.
Form und Farbe:

Weiße, buscheiförmige Nadeln, leicht, bitter und geruchlos.

Schmelzpunkt:
219 bis 220⁰C (d)
Optische Aktivität:

(«)? + 10 (C, 1,02% in Methanol)
(«) S⁵ + 10 (C, 1,03 % in DMF)

U. V.-Absorptionsmaxima:
Endabsorption

I. R.:

3320-3290 (gebundenes NH). 1650,1530 (CO und NH-Deformation), 1078, 695 CM"¹.

Löslichkeit:

Löslich in Methanol, Äthanol, Butanol, n-Propanol, Isopropanol, Pyridin, Eisessig, Dimethylformamid, wäßrigem Azeton, feuchtem Methyläthylketon und Methyl- und Äthyl-Cellosolve. Unlöslich in Wasser, Chloroform, Äther, Benzin, Äthylazetat, Butylazetat, Azeton, Toluol, Tetrachlorkohlenstoff, Dioxan, Benzol, Schwefelkohlenstoff, Methylchlorid und ÄthylenglykoL

Weitere Reaktionen:

Negativ: Fehlingsche Ferri-Chloridlösung, Benediet-, Nolisch-, Sokaguchi-Test, sowie Reaktion mit Ninhydrin, Biuret und Änthron. Positive Xanthoproteinreaktion. Nach einstündiger Alkalihydrolyse positive Biuret-Reaktion, Hydrolyse mit 6 η-Salzsäure in einem verschlossenem Rohr während 16 Stunden ergibt 11. positive Ninhydrin-Flecken bei zweidimensionaler Papierchromatographie. Die folgenden Aminosäuren werden bestimmt durch ein- und zweidimensionale Papierchromatographien mit Hilfe von Standard-Aminosäuren. Prolin, «-Aminoisobuttersäure, Phenylalanin, Valin, Leucin, Hydroxyprolin, Lysin und Glutaminsäure.
Analyse: C 56,11, H 7,56, N 13,56%.
Halogen- und Schwefelreaktionen sind negativ.

Die U.V.- und I. R.-Spektren von Antiamoebin in Nujol sind auf den Zeichnungen dargestellt;

5 6

F i g. 1 zeigt das UV-Spektrum und die F i g. 2 und 3 aus dem rohen Antibiotikum bestehen, fallen an. Der das IR-Spektrum für zwei verschiedene Bereiche. Schlamm wird gefiltert, mit Azeton gewaschen und

getrocknet. Zu der ButanoUösung wird nach Ab-

B e i s D i e 1 1 filtrieren des Schlammes die dreifache Menge Azeton

_ra . . 5 gegeben und die Lösung 24 Stunden lang bei 10⁰C

B Herstellung von Antiamoebin gehalten. Der kremige gelbe Niederschlag wird ge-

Zunächst wird ein Inokulum-Boden folgender filtert, mit Azeton gewaschen und getrocknet.
Zusammensetzung hergestellt: Das so erhaltene rohe Antiamoebin wird mehrfach

mit Wasser gewaschen, bis kein gelblichgefärbter

Sojabohnenmehl 2,0 % io Stoff mehr abgegeben wird und in warmem, 45 %igem

Glukose 2,0% Methanol aufgelöst und bei 50⁰C auf dem Wasser-Ammoniumsulfat 0,3 % bad gehalten. Man gibt einen Überschuß von Anti-Natriumchlorid 0,25 % amoebin hinzu, bis es sich nicht mehr auflöst. An-

Calziumkarbonat 0,6 % schließend wird Aktivkohle (1 % des Methanol-

pH 6,5 bis 7 *5 extraktes) zugefügt und in warmem Zustand filtriert.

Die Lösung wird dann 3 bis 4 Stunden lang bei Raumtemperatur gehalten und dann in einen kalten

Das Medium von 50 1 wird bei 15 lbs. 30 Minuten Raum gebracht und dort über Nacht bei 5°C stehenlang sterilisiert und bei Kühlung auf 28 ⁰C mit 48 Stun- gelassen. Große Mengen von nadelscharfen Kristallen den vegetativ gewachsenen E. poonensis ATCC 16 411 20 fallen in Bündeln aus; sie werden gefiltert, mit destilinokuliert (geimpft). Das Inokulum, das man Vorzugs- liertem Wasser gewaschen und getrocknet. Eine zweite weise benutzt, erzeugt man vorher in Schüttelflaschen; Kristallisation kann in der gleichen Weise ausgeführt r~ es wird unter dem Mikroskop für starkes Wachstum werden. Aus 80 kg Mycelium wurden 2,5 kg rohes \.B berechnet. Während der Wachstumsperiode in den Antiamoebin gewonnen, die 1,8 kg des reinen Anti-50 1 Boden wird belüftet und umgerührt. Dies erfolgt 25 biotikums ergaben,
unter sterilen Bedingungen. Es werden 0,5 Volumen .

Luft pro Volumen Kulturboden und Minute benutzt. B e 1 s ρ 1 e 1 2

Das Inokulum wird nach 58stündigem Wachstum Der Fermentationsprozeß wird in derselben Weise

in einen Fermentationstank überführt, der 1001 ausgeführt, wie in Beispiel 1 beschrieben. Der Pilz, eines Mediums mit folgender Zusammensetzung 30 der den Hauptteil des Antibiotikums enthält, wird enthält: gefiltert, während der pH-Wert des Nährbodens auf

5 eingestellt wird. Der Pilz wird gewaschen und mit

Sojabohnenmehl 2,5 % Methanol extrahiert, wobei für die erste Extraktion

Glukose 3,0 % 1,5 1 Methanol pro Kilogramm Pilz und für die zweite

Ammoniumsulfat 0,5 % ₃₅ Extraktion 11 Methanol pro Kilogramm Pilz benutzt

Natriumchlorid 0,25 % werden. Das Methanol wird gefiltert und das Extrakt

Calziumkarbonat 0,5% _mi_t Aktivkohle zum Entfärben behandelt und ge-

pH 6,5 bis 6,8 filtert, wobei 0,5 % Aktivkohle benutzt werden. Das

Extrakt wird im Vakuum bei einer Temperatur von 40 45 bis 50⁰C verdampft. Dies ist wegen des in dem

Das Medium wird durch Erhitzen unter Druck Methanolextrakt enthaltenen Wassers möglich. 6001 bei ungefähr 110⁰C 30 Minuten lang sterilisiert. Die des Methanolextraktes werden auf. 301 eingedampft; Temperatur wird auf 28 ⁰C gesenkt, und das Inokulum dabei scheidet sich Antiamoebin als weißer Schlamm * von 501 aseptisch in dieses Gefäß eingebracht. aus, der größtenteils kristallisiert ist. Die rohen (^ Während der Wachstumsperiode wird der Boden 45 Kristalle werden gefiltert, mit Wasser gewaschen und gerührt und sterile Luft in einer Menge von 0,5 bis getrocknet. Anschließend werden sie in 45 % Methanol 1 Volumen pro Volumen Boden und Minute einge- enthaltendem Äthanol aufgelöst, mit Aktivkohle blasen. Das Wachstum des Myceliums und die Anti- behandelt, gefiltert und in der gleichen Weise, wie in · biotikumproduktion wird von Zeit zu Zeit gravi- Beispiel 1 beschrieben, rekristallisiert,
metrisch bestimmt. Nach 96 bis 120 Stunden, die 50 Das Nährbodenfiltrat wird mit Aktivkohle beüblicherweise benötigt werden, wird der pH-Wert des handelt, wobei 2 g pro Liter Nährboden benutzt Bodens auf 5 eingestellt und eine Filtration vorge- werden. Die Aktivkohle wird mit Butanol, Methanol nommen. Das Filtrat wird gesammelt und mit oder Äthanol herausgelöst und die so erhaltene Lösung V₃ Volumen n-Butanol extrahiert, wobei ein Extraktor eingedampft. Auf diese Weise wird Antiamoebin zum Durchmischen und Überführen des Antibioti- 55 durch Rekristallisation von dem so erhaltenen Stoff kums vom Boden in das Lösungsmittel benutzt wird. gereinigt. Aus 80 kg Mycelium wurden 2,2 kg rohes Das Mycelium wird in ähnlicher Weise zunächst mit Antiamoebin gewonnen, die 1,675 kg reines Anti-1,5 Volumen Butanol pro Kilogramm Mycelium biotikum ergaben,
extrahiert, worauf eine zweite Extraktion erfolgt, bei Beist>iel3

der man 11 Butanol pro Kilogramm Mycelium be- 60 .

nutzt. Nach gründlicher Extraktion unter Umrühren Der Fermentationsprozeß wird, wie bei Beispiel 1

wird das Butanol abfiltriert und stehengelassen. Es und 2 beschrieben, durchgeführt und der Pilz mit wird mit dem Butanolextrakt des Bodenfiltrates ge- Äthyl- oder Methylcellosolve extrahiert, das Extrakt mischt. Die Butanolextrakte unterwirft man zur Ent- konzentriert, um das rohe Antibiotikum zu erhalten, fernung der Salze u. dgl. einer Wäsche mit Wasser, 65 Das Rohprodukt wird, wie vorstehend beschrieben, worauf man sie im Vakuum auf ungefähr 301 konzen- weiterbehandelt. Aus 15 kg Mycelium wurden 0,45 kg triert. Die ButanoUösung hat zu Beginn ein Volumen rohes Antiamoebin gewonnen, die 340 g reines Antivon ungefähr 6001. Große Mengen von Schlamm, die biotikum ergaben. . . .

Beispiel 4

Die Fermentation erfolgt wieder in der in den Beispielen 1 und 2 beschriebenen Weise, und der Pilz wird mit wäßrigem Azeton oder Dimethylformamid extrahiert, das Extrakt konzentriert und das rohe Antibiotikum gereinigt und kristallisiert.

Beispiel 5

Die Fermentation erfolgt wie gemäß Beispiel 1 und 2. Der Pilz wird mit heißem Amylalkohol oder Zyklohexanol extrahiert und das Extrakt konzentriert, um rohes Antibiotikum zu erhalten.

Die Aktivität des Produktes wird durch eine biologische Versuchsmethode zur Bestimmung der antiprotozoalen Aktivität bestimmt, wobei Tetrahymena pyriformis und Entamoeba histolytica benutzt werden. Bei den Versuchen wurde Tetrahymena pyriformis benutzt.

Es wurden Kulturen verwendet, die auf einem Sojabohnenextrakt und Erdnußmehl-Sud erhalten wurden.

Antiamoebin-Standardmaterial wurde verwendet und eine wäßrige Lösung von 1 mg pro Milliliter hergestellt. Das Antibiotikum muß vorher in einigen Tropfen Äthanol aufgelöst werden. Gleiche Mengen einer flüssigen Tetrahymena-Kultur, die 2 · 10⁴ Zellen pro Milliliter enthielten, wurden in Röhrchen gefüllt. Durch übliche Auflösung wurde eine Konzentration des Antibiotikums von 1 bis 100 μg pro Milliliter in der Abstufung 1-10-20-30-40 μg/nil usw. erhalten. Nach der Durchmischung und einer Inkubationszeit von einer Stunde bei 24° C wurde die Lösung in jedem Rohr unter dem Mikroskop untersucht. Die Konzentration, bei der ein 100%iges Absterben der Zellen vorlag, wurde bestimmt. In den nächsten Untersuchungsreihen wurden Lösungen zwischen der Konzentration, bei der 100%iges Absterben vorhanden war, und der nächstniedrigen Konzentration untersucht, und die Konzentration bestimmt, bei der ein 100%iges Absterben in 60 Minuten auftritt. Für reines Antiamoebin lag die Konzentration für das Absterben bei 46 bis 48 [Ag pro Milliliter.

Ein im Laboratorium gezüchteter Stamm von E.

histolytica wurde ebenfalls untersucht. Die Amoeben waren in flüssigem Balamuth-Boden gezüchtet worden, und die 48 Stunden alten Kulturen, die bei einer Inkubationstemperatur von 37° C erhalten wurden, sind untersucht worden. Die Amoeben wurden mit rischem Balamuth-Boden, der Reismehl enthielt, emischt. Die Anzahl der Amoeben wurde so verteilt; daß ungefähr 5 bewegungsfähige Amoeben pro 0,05 ml Lösung vorhanden waren. Es wurde eine Lösung von Antiamoebin mit demselben Lösungsmittel hergestellt und zunächst in einigen Tropfen Äthanol gelöst; das Balamuth-Medium, das die Trophoziten enthielt, wurde in Röhrchen verteilt und das Antibiotikum zugegeben, um die gewünschte Endkonzentration zu erhalten. Die Inkubationszeit betrug 48 Stunden bei 37⁰C, nach der Proben genommen wurden, die unter dem Mikroskop auf aktive Trophoziten untersucht wurden. Die Beobachtung nach 48stündiger Inkubationszeit bei 37° C gab folgendes Bild:

15	Kontrolle: (kein	mehr als 45 bewegungsfähige
	Zusatz von Anti	Trophoziten pro Feld.
	biotikum)
	1/100 mg/ml	vollständiges Absterben,
20		keine Amoeben.
	1/200 mg/ml	desgl.
	1/300 mg/ml	desgl.
	1/400 mg/ml	desgl.
	1/500 mg/ml	desgl.
25	1/600 to 1/900 mg/ml	das gleiche. Eine oder höch
		stens zwei Amoeben bei
		1/900 mg/ml.
	1/1000 mg/ml	eine oder zwei aktive, be
		wegliche Amoeben in 0,05 ml.
30	1/2000 mg/ml	langsames Wachstum; ein bis
		zwei Amoeben pro 0,05 ml.
	1/2500 mg/ml	mehr als zwei Amoeben pro
		0,05 ml.
	1/5000 mg/ml	mehr als 10 Amoeben pro
35		0,05 ml.
	1/10 000 mg/ml	mehr als 10 Amoeben pro
		0,05 ml.

Die Wirksamkeit des Antiamoebins gegen Amoeben liegt zwischen 0,5 bis 1,25 μg/ml. Die Aktivität für nicht bekannte Anwendungsfälle kann nach derselben Methode bestimmt werden. Das Antibiotikum ist oral nicht giftig; 10 g pro Kilogramm Körpergewicht wurden gut von Mäusen, Ratten, Mehrschweinchen, Hunden usw. vertragen. Die therapeutische Dosis zum Heilen von durch Protozoen oder Würmer hervorgerufenen Infekten bei Menschen und Tieren liegt bei nur 5 mg pro Kilogramm Körpergewicht, die* oral eingenommen werden. Die Behandlungszeit ist weniger als 5 Tage für die vollständige Heilung; der therapeutische Effekt dieses Antibiotikums ist gut nachweisbar.

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Claims (1)

1 2

Um in wirtschaftlicher Weise maximale Ausbeuten

Patentanspruch: des Antibiotikums zu erhalten und dieses leicht abtrennen zu können, werden bestimmte Kulturböden

Verfahren zur Herstellung des Antibiotikums verwendet. Bevorzugte Kohlehydratquellen sind in

Antiamoebin durch Züchten von Pilzstämmen in 5 dem Kulturboden Glukose, Rohrzucker und Stärke

einem Kulturboden, der assimilierbare Kohle- vorhanden. Andere Quellen können beispielsweise

hydrate, Stickstoff und anorganische Salze enthält, Dextrin, Melasse und Milchzucker sein. Als Stickstoff-

und Abtrennen des erzeugten Antibiotikums, da- quellen können Getreide, Sojabohnen und Erdnuß-

durch gekennzeichnet, daß man als mehl, verschiedene Hülsenfrüchte, bei bestimmten

Stämme die Organismen Emericellopsis synnema- io Destillationen anfallende Lösungen, Kasein, amino-

ticola ATCC16 540, Emericellopsis poonensis saure Gemische sowie pflanzliche und tierische Pep-

ATCC 16 411 oder Cephalosporium pimprina tone u. dgl. verwendet werden. Anorganische Stick-

ATCC 16 541 verwendet. stoffträger bestehen aus Nitraten und Ammoniumsalzen; die anorganischen Nährsalze, die in das 15 Medium eingebracht werden, bestehen aus üblichen

Salzen, die fähig sind, Natrium-, Kalium-, Calzium-,

Phosphat-, Chlorid-, und Sulfationen od. dgl. zu erzeugen. Die wesentlichen Spurenelemente, die das

Die Erfindung bezieht sich auf ein Verfahren zur Wachstum des Pilzes fördern und höhere Ausbeuten Herstellung des gegen Würmer und Protozoen wirk- 20 ergeben, werden ebenfalls in den Kulturboden einsamen Antibiotikums Antiamoebin durch Züchten gebracht. Derartige Spurenelemente sind häufig als von Pilzstämmen in einem Kulturboden, der assimilier- ν Verunreinigungen in den Ausgangsstoffen vorhanden, r bare Kohlehydrate, Stickstoff und anorganische Salze Zur Erläuterung des Verfahrens zur Herstellung v.i enthält, und Abtrennen des erzeugten Antibiotikums. von Antiamoebin wird die Behandlung eines Stammes In den vergangenen Jahren ist über verschiedene 25 von Emericellopsis poonensis beschrieben. Die gleichen gegen Protozoen wirksame Antibiotika, wie z. B. Resultate erhält man auch mit den beiden anderen Paramomycin, Antiprotozoin, Hamycin, Puromycin, vorstehend erwähnten Stämmen Cephalosporium Afzalomycin-F, berichtet worden, die gegen Enta- pimprina und Emericellopsis synnematicola. Der moeba histolytica, Trypanosoma curzil, Trichomonas E. poonensis SLA-I kann auf einem Kulturboden bei vacinalis und andere Protozoen benutzt wurden, die 30 Temperaturen von etwa 24 bis 37°C gezüchtet werden, Krankheiten bei Menschen und Tieren verursachen. der verschiedene Nährstoffe enthält; die optimale Man ist zur Zeit noch bemüht, ein wirksames Amoe- Temperatur liegt bei 28⁰C. Geeignete Kulturböden bicid gegen Entamoeba histolytica, wodurch in den sind solche aus Kartoffelstärke, aus Glukose-Peptonen Tropen Amöbiasis hervorgerufen wird, zu finden, das sowie die sogenannten Sabouraud- oder Czapeksais Mittel gegen Leber- und Darminfektionen Ver- 35 Böden. Der Pilz wächst als weiße Kolonie, die einen wendung finden soll und gleichzeitig ungiftig ist. Luftpilz entwickelt, und eine große Anzahl sphärischer Paramomycin steuert lediglich Darminfektionen, Konidium-Massen entsteht auf Konidiumsporen, was während andere Chemikalien wie Emetinhydrochlorid, typisch für Cephalosporium ist. Nach einer Inku-Arsen enthaltende Mittel, Gluacarubin, Camoquin, bationszeit von ungefähr 10 bis 15 Tagen erscheinen lange Behandlungszeiten erfordern und schädliche 4° schwarze Punkte, die über die Kolonie verteilt sind. Nebeneffekte hervorrufen. Keine der obenerwähnten, Hierbei handelt es sich um das Endstadium des Pilzes, gegen Protozoen wirksamen Antibiotika und Chemi- das dem Emericellopsis-Stadium entspricht. Zur Herkalien besitzen enthelmintische (vermifuge) Eigen- stellung des Antibiotikums sind 6 bis 8 Tage alte schäften. . Kolonien geeignet, die eine Vielzahl von Konidien (.^

Die für Menschen und Tiere zur Zeit üblichen 45 besitzen.

Behandlungsarten zum Entfernen von Würmern sind Zur Herstellung begrenzter Mengen des Antibiotisehr verschieden. Es werden Piperazinsalze verordnet, kums können Schüttelflaschen und Oberflächenum Spul- und Madenwürmer zu entfernen; ferner kulturen in Flaschen verwendet werden. Zur Her- * benutzt man Bephenium- und Zinnsalze für Band- stellung größerer Mengen benutzt man Fermentationswürmer, Tetrachloräthylen und organische Phosphor- 5° Gefäße aus rostfreiem Stahl, mit Einrichtungen zum Verbindungen gegen Hakenwürmer usw. Es sind auch Belüften und Umrühren. Ferner ist eine Temperaturtoxische Verbindungen bekannt, die erhebliche Nach- kontrolle und die Möglichkeit erforderlich, sterile Wirkungen zeigen. Da bessere und sichere Arzneimittel Bedingungen zu schaffen. Bei einer bevorzugten Ausfehlen, müssen diese verordnet werden. Keine dieser führungsform läßt man das vegetative Inokulum des Mittel ist methodisch wirksam, so daß zur Zeit weder 55 Pilzes in einem Zuchtgefäß wachsen und inokuliert Antibiotika noch Chemikalien vorhanden sind, mit mit einem reinen Kulturboden, mit Konidien, Askodenen das Mikrostadium bei Toxocara und aus- sporen, Pilzen oder Mischungen hiervon. Wenn das gewachsenen Würmern bei Filariasis behandelt werden vegetative Wachstum mit dem jungen und schnell können. wachsenden Pilz stattgefunden hat, wird das Inokulum Die Aufgabe, die der Erfindung zugrunde liegt, 60 aseptisch in große Tanks überführt. Das Medium, besteht darin, das gegen Protozoen und Würmer in dem das vegetative Inokulum entwickelt wird, kann wirksame Antibiotikum Antiamoebin durch Züchten dasselbe oder ein anderes sein, wie das, das man für von Pilzstämmen in einem Kulturboden und Ab- die Herstellung des Antibiotikums benutzt,
trennen des erzeugten Antibiotikums herzustellen; Wie es bei der Herstellung von Antibiotika durch die Erfindung besteht darin, daß man als Stämme die 65 Züchtung üblich ist, wird sterile Luft durch den Organismen Emericellopsis synnematicola ATCC Kulturboden geleitet, die durch Umrühren verteilt 16 540, Emericellopsis poonensis ATCC 16 411 oder wird. Die Luftmenge ändert sich von 0,1 bis 1 Volumen Cephalosporium pimprina ATCC 16 541 verwendet. Luft in der Minute pro Volumen Kulturboden. Der