CZ59198A3 - Způsob výroby glutamátu (pyridoxal-5´fosfáto) hořečnatého a při tom získaných meziproduktů - Google Patents

Description

Způsob výroby glutamátu (pyridoxal-5'fosfáto) horečnatého a při tom získaných meziproduktů

Oblast techniky

Vynález se týká způsobu výroby glutamátu (pyridoxal-5'-fosfáto) hořečnatého. Vynález se vztahuje zejména k novému způsobu pro výrobu glutamátu (pyridoxal-5'-fosfáto) hořečnatého počínajícímu od kyselé adiční soli pyridoxinu, jako hydrochloridu pyridoxinu, v němž je pyridoxal-5'-fosfát získán jako meziprodukt.

Dosavadní stav techniky

Glutamát (pyridoxal-5'-fosfáto) horečnatý je znám z patentu DÉ 24 61 742. V této publikaci je tato látka navržena jako lék pro prevenci a léčbu metabolických poruch, zejména pro ovlivňování hladiny tuků a cholesterolu. DE 40 16 963 se týká použití glutamátu (pyridoxal-5'-fosfáto) hořečnatého pro snížení peroxidů vázaných na bílkoviny nízké hustoty (LDL) a pro předcházení cévních (vaskulárních) škod.

Při úvaze o významu, glutamátu (pyridoxal-5'-fosfáto) hořečnatého jako léku existuje potřeba pro novou, jednodušší a hospodárnější syntézu pro tuto látku. Proto je cílem tohoto vynálezu poskytnout syntézu tohoto typu.

Podstata vynálezu

Daný. cíl je řešen podle vynálezu poskytnutím syntézy glutamátu (pyridoxal-5'-fosfáto) hořečnatého, v níž je pyridoxal-5'-fosfát získáván jako meziprodukt. Pyridoxal-5'-fosfát Se hromadí ve formě vodného roztoku, z něhož může být, je-li to nutné, pyridoxal-5'-fosfát izolován. Avšak získaný roztok pyridoxal-5'-fosfátu může rovněž reagovat za výhodných podmínek na konečný produkt, aniž by byl pyridoxal-5'-fosfát izolován. Tím jsou vynechány kroky potřebné podle dosavadního stavu pro čištění a sušení pyridoxal-5'-fosfátu.

Další bod vynálezu se týká skutečnosti, že pcrcínaje^-pyriďoxinem a zejména jeho kyselou adiční solí, jako je hydrochlorid pyridoxinu, je ·· ··· · ·· * * · · * ···· * * · · · · · · · · · y · · · · · · · ·· · · · • · · · · ··» ··· ··· ·« ·4· «« «· pyridoxal-5 -fosfát vyráběn ve vysokém výtěžku podle nového způsobu s p-fenetidyl pyridoxal- a p-fenetidyl-pyridoxal-5'-fosfátem jako meziprodukty.

Hlavní podstatou tohoto vynálezu je způsob syntézy glutamátu (pyridoxal-5'-fosfáto) horečnatého, jenž je charakterizován tím, že:

A) pyridoxin nebo jeho kyselá adiční sůl je oxidován oxidem manganičitým na pyridoxal;

B) pyridoxal reaguje s p-fenetidinem za vzniku Schiffovy zásady p-f eneti.dyl-pyridoxalu;

C) p-fenetidyl-pyridoxal je selektivně fosforylován na

5'-hydroxymetylové skupině za vzniku p-fenetidyl-pyridoxal-5 fosfátu;

D) p-fenetidyl-pyridoxal-5'-fosfát je bydrolyzován za vzniku alkalické soli pyridoxal-5'-fosfátu;

E) ionty alkalického kovu jsou odstraněny za účelem získání pyridoxal5 '-fosfátu;

F) pyridoxal-5'-fosfát reaguje s reakčním produktem alkoholátu horečnatého a kyseliny L-glutamové; a

G) vzniklý glutamát (pyridoxal-5'-fosfáto) horečnatý je izolován.

V následujícím reakčnjm schématu je představeno přednostní ztělesnění vynálezu.

«· ··»·

pyridoxine hydrochloride (6) nvríHnváí ΖΧΊ ^----—i

OArA-nhpnřitT^ ,1 s j---r-wi.vwixji-pjixuuXai (**J

L-giutamic acid (8) magnesium ethyJaie (9)

H

| HO—p—o-H₅C_x

O OH

O]

OH

HO—i

CH, |—0-H)

CH*

OH

CH.

magnesium glutamate (10) pyridoxal-5’-phosphate (2) pára-phenetidyl- pyridoxal-5’-phosphate (3)

magnesium pyřidóxal-5'-phosphaie glutamaie (1)

4449

Molekulární hmotnost daných sloučenin:

oxid manganicitý para-fenetidin para-fenitidyl-pyridoxal para-fenitidyl-pyridoxal-5'-fosfát pyridoxal pyridoxal-5'-fosfát monohydrát pyridoxal-5'-fosfátu hydrochlorid pyřidoxinu glutamát (pyridoxal-5'-fosfáto) horečnatý C dihydrát glutamátu (pyridoxal-5'fosfáto) hořečnatého (1')

Ukázalo se, že je výhodné prováděl diskontinuálně ve vhodných zařízeních vyloučením světla a/nebo vzduchu.

• 4 1 • 4 4 4 4 4 1	»44 4 444 44 444 » 4 4 4 4 4 »44 44 44
Mn02		86,9	g/mol
(7)	CbHi i NO	137,0	g/mol
(4)	Cl 6 Hl 8 N2 03	286,0	g/mol
(3)	Cl 6 Hl 9 N2 Oe P	366,0	g/mol
(5)	Cb Hs N03	167,0	g/mol
(2)	Cb Hi o NOe P	247,0	g/mol
(2')	CbHi 2 NO7 P	265,0	g/mol
(6)	CbHi 2CINO3	205,5	g/mol
) C3 Hi i Mg2 . s N2 09 P	432,0	g/mol
Cl 3 Hl 5 Mg2 . 5 N2 Ol 1 P	464,0	g/mol
I jednotlivé kroky syntézy
s	řízenou teplotou ;	a pH s

Aby bylo možné sledovat chemickou reakce v jakékoliv době, je možné provádět např. kontroly procesu během jeho průběhu. Kontroly procesu tohoto typu mohou zahrnovat různé analýzy, jako např. HPLC analýzy, jež mohou být spolehlivě prováděny v krátkém časovém období (15 minut).

Kromě toho se ukázalo jako vhodné uvolnění produktu z každého kroku pro další zpracování až po provedení příslušné analýzy a testu čistoty.

* 5 k

Jednotlivé kroky dané syntézy jsou podrobně objasněny dále.

Podle daného vynálezu je pyridoxin, přednostně ve formě kyselé adiční soli jako je hydrochlorid pyřidoxinu (6), nejprve oxidován na pyridoxal (5). Vhodným oxidačním činidlem je oxid manganičitý, který je vhodně používán v aktivované formě. Oxidace je pak přednostně prováděna v roztoku kyseliny sírově za řízené teploty a pH a rovněž s vyloučením světla. Stupeň reakce může být kontinuálně vyšetřován pomocí vhodného analytického systému (např. HPLC). Je zvlášť výhodné zastavit reakci, jakmile je celé množství pyřidoxinu zoxidováno. Proti

0000

» 0000 * 0 00 00 * 00 0000 0

0 0 0 0 0 00 00· 00 00 známým způsobům oxidace hydrochloridu pyridoxinu (6) může být zmenšeno množství vedlejších produktů oxidace, čímž může být zvětšen výtěžek pyridoxalu (5).

Popsaná oxidace kyselé adiční soli pyridoxinu na pyridoxal (5) oxidem manganičitým je v typickém případě prováděna v kyselém prostředí bez dodržování zvláštních podmínek ohledně teploty a pH. Avšak při provádění oxidace oxidem manganičitým při konstantní hodnotě pfí 5,1 a konstantní teplotě 1.4°C je dosaženo dalšího zvětšení výtěžku a minimalizace vzniku vedlejších produktů.

Reakční směs může být tudíž podrobena dalšímu zpracovávání pro příslušnou separaci, např. filtrací, vysráženého materiálu stejně jako zreagovaného nebo nezreagovaného oxidačního činidla, např. solí

manganu.	Tak je	rovněž možné	regenerovat nézréagované	oxidační
činidlo,	tj. oxid	manganičitý, a	znovu je přidávat později	do daného
procesu.
Izolace	pyr i doxalu	(5) může být	prováděna odborně školenou	osobou v

daném oboru podle nových způsobů bez obtíží.

Avšak podle vynálezu není izolace nutná a získaný může být použit přímo jako vodný roztok pyridoxalu kroku.

roztok pyridoxalu v dalším reakčním

Vodný roztok pyridoxalu (5), přednostně se vztahující k reakčnímu roztoku získanému oxidací, je uveden na slabě kyselou hodnotu pfí a přednostně na hodnotu 4,5. Potom je přidáván p-fenetidin (7), a to výhodně v mírném přebytku. Po skončení reakce je oddělena (přednostně odfiltrována) vzniklá sraženina, např. promýváním vodou a/nebo organickým rozpouštědlem, dále je čištěna a nejlépe sušena, čímž je získán p-fenetidyl-pyridoxal (4).

Nadbytečný p-fenetidin (7) může být regenerován. Jestliže ionty pocházející z oxidačního činidla, jako jsou manganaté ionty, jsou obsaženy v získaném roztoku po separaci sraženiny, mohou být rovněž regenerovány srážením např. pomocí louhu.

• » A f A · · · · • · · A A « · • ··♦ · AAA

9 9 9 9 A A A A a • · A · « A • AA 999 99 99

Schiffova zásada p-fenetidyl-pyridoxal (4) je podroben dalšímu zpracovávání pro selektivní fosfořylaci 5'-hydroxymetylskupiny za vzniku p-fenetidyl-pyridoxal-5'-fosfátu (3). Fosforylace probíhá reakcí p-fenetidyl-pyridoxalu (4) s vhodným fosforylačním činidlem. Např. vhodná je reakce s kyselinou polyfosforečnou.

V tomto případě probíhá fosforylace nejlépe za řízených teplotních podmínek (4-25°C) a také s vyloučením světla. Pro optimální reakční průběh se ukázalo být před reakcí výhodné upravit granulometrické složení vysušeného p-fénetidyl-pyridoxalu (4) na velikost částic £ 500 um. Kromě toho je výhodné míchat p-fenetidyl-pyridoxal (4) a kyselinu polyfosforečnou před reakcí co nejdokonáleji, např. v hnětacím zařízení. Stupeň reakce může být stále vyšetřován pomocí vhodného analytického systému (např. HPLC). Zvláště se dává přednost zastavení reakce, jakmile je celé množství p-fenetidyl-pyridoxalu (4) zfosforylováno.

Podle zvlášť výhodného ztělesnění jsou kyselina polyfosforečná a p-fenetidyl-pyridoxal použity v poměru 4-6 dílů na 1 díl.

Ve výše popsané reakci se tvoří 5'-polyfosforečnany p-fenetidylpyridoxalu. Potom následným přidáním vody a kyseliny probíhá částečná hydrolýza za vzniku a srážení p-fenetidyl-pyridoxal-5'-fosfátu (3). Srážení může být podporováno přídavkem louhu. Získaná sloučenina je čištěna obvyklým způsobem, např. promýváním vodou a/nebo organickým rozpouštědlem. Může být sušena a izolována, ale většinou je zpracovávána jako vlhká sraženina pro účely další syntézy.

Fosforečnan hromadící se v důsledku nadbytku polyfosforečnanu .může reagovat s hydroxidem vápenatým na fosforečnan vápenatý a může být podle volby snadno skladován s malým rizikem a/nebo dále zpracováván nebo likvidován.

Působením vodného alkalického roztoku, nejspíše při hodnotě pH více než 12,5, na p-fenetidyl-pyridóxal-5'-fosfát (3) pak dochází k hydrolýze za vzniku pyridoxal 5'-fosfátu (2) a p-fenetidinu (7). Vzniklý p-fenetidin a alkalická sůl pyridoxal 5'-fosfátu mohou být separovány jakýmkoliv vhodným způsobem. p-fenetidin (7) může být odloučen z vodného roztoku extrakcí vhodným organickým rozpouštědlem,

4 · 4 » »

• 4«·· * 4 44 · · 4 4444 4

4 4 4 «4

4*4 44 44 např. alifatickým nebo aromatickým uhlovodíkem jako např. toluenem.

Alternativně může být p-fenetidin (7) separován podle výhodného ztělesnění vynálezu pomocí odlučovacího zařízení typu kapal.ina-kapal ina. Separace tohoto typu šetří čas, je ekologičtější, účinnější, snadnější a tím i hospodárnější než extrakce.

V tomto reakčním kroku regenerovaný p-fenetidin (7) může být vyčištěn např. pomocí destilace a pak znovu použit v prvním reakčním kroku

Alkalická sůl pyridoxal-5'-fosfátu (2) může být vysrážena ze získaného vodného roztoku zahušťováním. Daná sraženina může být pak dále čištěna např. promýváním nebo rekrystalizací.

Aby se z alkalické soli pyridoxal-5'-fosfátu (2) vyrobil glutamát (pyridoxal-5'-fosfáto) horečnatý (1), musí být/ nejprve odstraněny alkalické ionty. Pro tento účel může být použit jakýkoliv vhodný způsob. Např. získaný vodný roztok alkalické soli pyridoxál-5'-fosfátu může být podroben iontoměničovému postupu. Takto získaný roztok může být - po případném zahuštění - použit přímo pro syntézu glutamátu (pyridoxal-5'-fosfáto) horečnatého (1). Lze rovněž izolovat volný pyridoxal-5'-fosfát (2) z vodného roztoku a vyčistit danou sloučeninu podle obvyklých způsobů známých v oboru vzdělaným a zkušeným osobám. Pro další krok syntézy může být v tomto případě použit vodný roztok předtím izolovaného a vyčištěného pyridoxal-5'-fosfátu (2).

Vodný roztok pyridoxal-5'-fosfátu (2) je přidáván k roztoku, který byl získán reakcí alkoholátu horečnatého glutamové (8)..Etylát hořečnatý (9) alkoholát hořečnatý, protože etanól s vodou a přidáním kyseliny je zvlášť upřednostňován jako je pak uvolňován reakcí, jež nevadí farmaceutické kvalitě vyrobené aktivní složky jákýmikoliv nežádoucími zbytky. Směs je pak přidána k vhodnému rozpouštědlu, nejspíše etanolu. Reakce je nejlépe prováděna v chladu s vyloučením vzduchu a světla, poněvadž to nevede k vytváření žádných vedlejších produktů. Glutamát (pyridoxal-5'-fosfáto) hořečnatý (1) může být oddělen ze suspenze např. filtrací. Produkt získaný tímto způsobem může být čištěn promýváním a/nebo rekrystalizací a nato sušen.

Použitím etylátu horečnatého a etanolu je po separaci glutamátu :

0·* 0 ···· ·· ·0 0· 0 0 0 · · < 00·· 0 0 0 ·

0* 0 00 · 0 · 0 0 0 0 0 0 0 0 00 000 00 ·0 (pyridoxal-5'-fosfáto) horečnatého (1) získán roztok, jenž se skládá z vody a etanolu. Roztok může být jednoduše zlikvidován nebo může být destilací rozdělen na své složky.

V následujícím je daný vynález objasněn dále na příkladě. V tomto příkladě probíhá syntéza glutamátu (pyridoxal-5'-fosfáto) hořečnatého (1) s pomocí následujícího vybavení:

a) míchací nádoba s řízenou teplotou (0 až 100°C) se zařízením ke sledování a měření pH;

b) hnětači zařízení s řízenou teplotou (0 až 100°C) se silným ozubeným převodem v rozmezí nízké rotační rychlosti;

c) extrakční zařízení (vodná/organická fáze) a/nebo odlučovač kapalina-kapalina;

d) katexová jednotka;

e) filtračnízáří zení a/nebo odlučovač pevná látka-kapalina; a

f) sušicí zařízení.

Analýzy HPLC byly prováděny za následujících podmínek:

1. Systém

a) chromatografický systém:

Jednotka Shiraadzu obsahující: kapalinový chromatograf LC-10AS;

automatický injektor (vstřikovací tryska SIL-10A Auto Injector; SPD-10AV (UV-VIS; spektrofotometr ický detektor); komunikační sběřnicový modul CBM-.10A; software CLASS-LC10; osobní počítač PC 486, 40 MHz; Desk Jet 560 C Hewlett Packard.

Stacionární fáze (kolona)

Hypersil ODS 5ym 250x4,6 mm S vložkou před kolonou 20x4,6 mm

Mobilní fáze (eluent) vodný roztok 0,001 m'KH2PO4 s H3 P04 nastaveno na pH = 3.

Průtok 1,5 ml/min

Vstřik(ování) 5 μΐ

Detekce . 295 nm

Analytická doba 15 min

4« ··♦♦

·· * * 4 4 · 44·· * 4 4444 4 4 4· * 44 4 44 4·«4 · * 4 4 4 4 >4 • ··· 44 444 44 4*

b) příprava: malé (např. kapkovité) zbývající množství podobné velikosti, jak je možné z reakční směsi (např. dvě kapky kapaliny), je rozpuštěno v pěti kapkách 10% kyseliny sírové.

Podmínky HPLC

2. Systém

a) chromatografický systém:

Jednotka Shimadzu obsahující: kapalinový chromatograf LC-10AS;

automatické vstřikovací zařízení SIL.-10A Auto Injector; SPD-10AV (UV-VIS; spektrofotometrický detektor); komunikační sběrnicový modul CBM-10A; software CLASS-LC10; osobní počítač PC 486, 40 MHZ; Desk Jet 560 C Hewlett Packard.

Stacionární fáze (kolona) Hypersil ODS 5pm 250 x 4,6 s předkolonovou náplní

Mobilní fáze (eluent)

A = vodný roztok 0,001 s H3PO4 nastaveno na pH

B 3 acetonitril

Průtok

Vstřik(ování) Detekce

Analytická doba mm x 4,6 mm

5% B

Μ KH2PO4 = 3.

1,5 ml/min 5 pl 295 nm 10 min

b) příprava: malé (např. kapkovité) zbývající množství podobné velikosti reakční směsi (např. dvě.kapky kapaliny) je rozpuštěno v pěti kapkách 10% kyseliny sírové.

Příklady provedení vynálezu

Příklad výroby

První krok

Výroba p-fenétídyi-pyridoxalu (4) z hydrochloridu pyridoxinu (6)

4444 · ··· * · 4 4 «4 #

444

44

4 4 4

4 44

4 4 4

4 ·

44

100 g hydrochloridu pyridoxinu (6) je rozpuštěno v 1500 g vody a studeným roztokem 4N hydroxidu sodného nastaveno na pH 5,10. Získaný roztok je při teplotě 14°C za silného míchání přidán k 75 g aktivovaného oxidu manganičitého.

Reakce začíná ihned po přidání oxidu manganičitého a hodnota pH se zvětšuje, jestliže není stále upravována. Přidáváním 10¾ kyseliny sírové po částech je hodnota pH reakční suspenze udržována konstantní na 5,10 ± 0,10 za intenzivního míchání a udržování teploty (14 + 2°C). Průběh reakce je sledován pomocí HPL.C (systému 1) ve formě kontrol prováděných během procesu. Asi po 10 hodinách je celé množství hydrochloridu pyridoxinu přeměněno na pyridoxal. Poté je nadbytečný oxid manganičitý - nezreagovaný a znečištěný pyridoxalem odfiltrován, třikrát promyt se zhruba 300 g deionizované vody a vysušen při 120°C. Je získáno zpět 25 g oxidu manganičitého, který může být znovu použit. Spojené vodné roztoky jsou nejprve podrobeny membránové filtraci (0,8 pm) a pak jsou pomocí 10¾ kyseliny sírové nastaveny na pH 4,5. Pak je 80 g čerstvě předestilovaného p-fenetidinu přidáno po částech za velmi intenzivního míchání k roztoku pyridoxalu. Tím se hodnota pH zvětší zhruba na 4,7 a reakční produkt se náhle vysráží. Ten je dále míchán půl hodiny a pak zfiltrován. Zbývající p-fenetidin je regenerován pomocí odlučovače z filtrátu, který bude likvidován.

Daná sraženina je třikrát suspendována filtrována. Dále je suspendována á 700 g n-heptanu. n-heptanový nashromážděné zbytky, p-fenetidinu kroku.

v 700 g deionizované vody a filtrována pomocí Ultra-Turaxu v filtrát je opět destilován a jsou uchovány do konce třetího

Zbytek získaný tímto způsobem je sušen při 120°C a proséván na velikost částic < 500 pm. Je získáno 124,8 g (~ 89,7¾ teoretického výtěžku) jemného, velmi lehkého žlutooraňžového prášku p-fenetidylpyridoxalu (4).

• 0 «00· ) 0 « ) 0 0 0 0

000

0 0 i 0 0 I

00

Druhý krok

Výroba p-fenetidyl-pyridoxal-5'-fosfátu (3) z p-fenetidyl-pyridoxalu (4).

1000 g kyseliny polyfosforečné je umístěno do hnětacího zařízení s řízenou teplotou a ochlazeno na 10°C. Ke kyselině je za intenzivního chlazení pomalu přidáváno po malých částech 250 g ρ-fenetidyl-pyridoxalu (4). Schiffova zásada pyridoxalu se pomalu rozpouští ve fosforylačním činidle ža červeného zbarvení. Vznikající reakční teplo musí být intenzívně odváděno takovým způsobem, aby teplota reakční směsi nepřesáhla 25°C. Zvýšení teploty zhruba ná dvojnásobek této hodnoty vede přibližně k 20%-ní ztrátě na výtěžku. Po přidání veškerého množství p-fenetidyl-pyridoxalu je reakční směs dále míchána za intenzivního chlazení (< 25°C) přes noc. Následujícího dne by již pomocí HPLC (systému 1) ρ-fenetidyl-pyridoxal. Fosforylace neměl být zjištěn žádný další je tím ukončena. Nato je do směšovacího zařízení přidáno přibližně 2125 g ledu a reakční suspenze je dále míchána za intenzivního chlazení pa dobu tří hodin. Přitom se tvoří homogenní, hořčicově zbarvená hmota, jež se pomalu přidává k 75 g 95-97%-ní studené kyseliny sírové, homogenizuje se a zahřívá po dobu zhruba 30 minut na 80°C, přičemž dochází k hydrolýze polyfosforečnanů. Hydrolýza je sledována pomocí HPLC (systému 2), čímž se pozná přesný okamžik zastavení hydrolýzy (což je založeno na úplném zmizení vrcholu (píku) odpovídajícího polyfosforečnanů). Konec hydrolýzy je doprovázen rychlým ochlazením reakčního roztoku na 10°C. Tím se fosforylační produkt začne srážet. Pak se přibližně 7500 g roztoku 2 N NaOH předchlazeného zhruba na 10°C pomalu přidává za intenzivního míchání a chlazení, dokud hodnota p.H reakční suspenze není 2,10. Oranžověhnědý vysrážený reakční produkt se tím dobře filtruje a promývá, a to třikrát, vždy zhruba s 500 g deionizované vody. Zfiltrovaná sraženina je použita přímo pro třetí krok syntézy.

Nicméně, pokud by se. produkt tohoto kroku sušil, mělo by se tak stát při 105°C. Získalo by se 263,4 g (~ 82,3¾ teoretického výtěžku) oranžověhnědého jemného prášku p-fenetidyl-pyridoxal-5'-fosfátu (3).

• fl ···· flfl flfl • · · « · · · • · ··♦ · fl flfl flflfl · fl flflfl fl · • · · flflfl fl flfl flfl* flfl flfl

Třetí krok

Výroba pyridoxal-5'-fosfátu (2) z p-fenetidyl-pyridoxal-5'-fosfátu (3)

100 g a/nebo odpovídající množství vlhké sraženiny p-fenetidyl-pyridoxal-5'fosfátu (3) získané ve druhém kroku je přidáno k 700 g roztoku 2 N NaOH. Schiffova zásada je hydrolyzována na pyridoxal-5'-fosfát a p-fenetidyl při pH > 12,5. V případě, že dané množství louhu není dostatečné k získání pH > 12,5 - na účet vlhké sraženiny -, použije se nezbytné množství dalšího roztoku 2N NaOH. Trojnásobnou extrakcí, vždy s 300 g toluenu je p-fenetidin z roztoku odstraněn a roztok toluenu se předes.t i lu je . Jako alternativa k extrakci toluenem může být pro oddělení p-fenetidinu odlučovač organické a vodné fáze. Nashromážděné zbytky p-fenetidinu z prvního a třetího kroku mohou být vyčištěny destilací a znovu použity.

Pyridoxal-5'-fosfát je přítomen na konci této odlučovací operace jako sodná sůl ve vodném roztoku. Pomocí 800 ml katexu, např. Amperlitu typu IR-120 (1,9 mVal/ml), je sodný ion z pyridoxal-5'-fosfátu odstraněn a získá še čistý vodný roztok pyridoxal-5'-fosfátu. 2500 ml eluátu obsahuje 57-63 g (78,6-86,9 $ teoretického výtěžku) pyridoxal5'-fosfát (2), Ten je zahuštěn za vakua při teplotě max. 40°C zhruba na 500 ml a použit pro výrobu glutamátu (pyridoxal-5'-fosfáto) horečnatého (MPPG). Pyridoxal-5'-fosfát syntetizovaný tímto způsobem může být v tomto bodě rovněž izolován (nová syntéza pyridoxal-5'-fosfátu).

Čtvrtý krok

Výroba glutamátu (pyridoxal-5'-fosfáto) horečnatého z pyridoxal-5'-fosfátu (2)

540 g deionizované vody je umístěno do reakční nádoby a ochlazeno na 0-3°C. V dusíkové atmosféře a s vyloučením světla je přidáno 62,58 g etylátu horečnatého (9), jež jsou rozpuštěny za příslušného míchání. Tím se teplota zvětší zhruba na 10°C. Po jejím ochlazení na 3°C je přidáno 31,85 g kyseliny glutamové (8) a směs. je míchána dalších .10 minut.

• 444444 44 ·· ♦ · 4 4 4 · 4 4 4 • · · 444 β 4 44 • 4 · 4 4 4 44 4 4 4 • · 4 4 · 4 ·

Pak se k právě vyrobenému roztoku glutamátu hořečhatého přidává po malých částech během 60-90 minut 500 ml roztoku pyridoxal-5-fosfátu z třetího kroku (ξ 11,6% roztok). Přitom je třeba dbát na to, aby hodnota pH roztoku zůstávala v rozmezí 8-9. Potom je reakční směs dále míchána po dobu 3-5 hodin a výsledný roztok je zfiltrován.

Do mísící nádoby je umístěno 2000 ml etanolu, jenž je pod dusíkatou . atmosférou a s vyloučením světla ochlazen ná 0°C,

Dále je výše uvedený roztok přidáván po kapkách za stálého míchání. *' Suspenze dosažená tímto způsobem je dále míchána po dobu zhruba 15 hodin, pak je zfiltrována a promyta celkovým množstvím 200 rol etanolu.

Pak je celý produkt suspendován ve 100 ml etanolu a znovu zfiltrován. Vlhký produkt je sušen v sušárně při teplotě max, 60°C. Je získáno 94,5-99,5 g (94-99% teoretického výtěžku) glutamátu (pyridoxal~5-fosfáto) horečnatého (1).

·· ·4«·

• · • 44 4 • 4 4 «

♦ · · 44 4»

Claims (10)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   1. Způsob výroby glutamátu (pyridoxal-5'-fosfáto) horečnatého vyznačující se tím, že:

   A) pyridoxin nebo jeho kyselá adiční sůl je oxidována oxidem manganičítým na pyridoxal;

   li

   B) pyridoxal reaguje s p-fenetidinem za vzniku Schiffovy zásady » p-fenetidyl-pyridoxalu;

   C) p-fenetidyl-pyridoxal je selektivně fosforylován na 5'-hydroxymetylové skupině za vzniku p-fenetidyl-pyridoxal-5'fosfátu;

   D) p-fenetidyl-pyridoxal-5'-fosfát je hydrolyzován za vzniku alkalické soli pyridoxal-5'-fosfátu;

   E) alkalické ionty jsou odstraněny, aby byl získán pyridoxal-5'fosfát;

   F) pyridoxal-5'-fosfát reaguje s reakčním produktem alkoholátu horečnatého a kyseliny L-glutamové; a

   G) je izolován vzniklý glutamát (pyridoxal-5'-fosfáto) horečnatý.
2. 2. Způsob podle nároku 1 vyznačující se tim, že v kroku A je použit hydrochlorid pyridoxinu.

   •
3. 3. Způsob podle nároku 1 nebo 2 vyznačující se tím, že oxidace v kroku

   A je prováděna aktivovaným oxidem manganičitým v roztoku kyseliny sírové při hodnotě pH 5,1 a za konstantní teploty 14°Č.
4. 4. Způsob podle jednoho z nároků 1-3 vyznačující se tím, že v kroku B je použit pyridoxal obsahující reakční roztok z oxidace.

   'Γ ‘T ·*·

   9*9

   99 9999 ·9 99 • · 9 9 · 9 * • · 999 · · 99 * · · 9 9 ·»9 9 9 »9 « «9 »99 «9 9

   4· 99 //$r
5. 5. Způsob podle jednoho z nároků 1-4 vyznačující se tím, že fosforylace v kroku C je prováděna reakcí p-fenetidyl-pyridoxalu s kyselinou polyfosforečnou.
6. 6. Způsob podle nároku 5 vyznačující se tím, že kyselina polyfosforečná a p-fenetidyl-pyridoxal jsou použity v poměru 4 díly k 1 dílu.
7. 7. Způsob podle jednoho z nároků 1-6 vyznačující se tím, že »’ hydrolýza v kroku D probíhá pomocí roztoku alkalického hydroxidu,
8. 8. Způsob podle jednoho z nároků 1-7 vyznačující se tím, že odstranění alkalických iontů v kroku E probíhá pomocí iontoměniče.
9. 9. Způsob podle jednoho z nároků 1-8 vyznačující se tím, že jako alkoholát hořečnatý v kroku F je použit etylát hořečnatý.
10. 10. Způsob výroby pyridoxal-5'-fosfátu vyznačující se tím, že:

    A) pyridoxin nebo jeho kyselá adiční sůl je oxidována oxidem manganičitým na pyridoxal;

    B) pyridoxal reaguje s p-fenetidinem za vzniku Schiffóvy zásady p-fenetidyl-pyridoxalu;

    C) p-fenetidyl-pyrídoxal je selektivně fosforylován na 5'-hydroxymetylskupině za vzniku p-fenetidýl-pyridoxal-5'-fosfátu;

    D) p-fenetidyl-pyridoxal-5-fosfát je hydrolyzován za vzniku alkalické soli pyridoxal-5'fosfátu;

    E) alkalické ionty jsou odstraněny, aby byl získán pyridoxal-5'fosfát;

    F) pyridoxal-5'-fosfát získaný v kroku E je izolován a sušen.