CZ298206B6

CZ298206B6 - Deriváty 6-merkaptocyklodextrinu a farmaceutický prostredek

Info

Publication number: CZ298206B6
Application number: CZ20021814A
Authority: CZ
Inventors: Zhang@Mingqiang; Palin@Ronald; Jonathan Bennet@David
Original assignee: N.V. Organon
Priority date: 1999-11-29
Filing date: 2000-11-23
Publication date: 2007-07-18
Also published as: NO2010019I1; ES2237496T3; CY2008018I1; DE60017947T2; EP1259550A1; PE20010902A1; CN1188428C; CZ20021814A3; AU5438001A; USRE44733E1; WO2001040316A1; JP2003515623A; NO328790B1; HU227451B1; NO20022522L; IL149423A0; NL300356I2; MXPA02004940A; CA2390463A1; NO20022522D0

Abstract

Derivát 6-merkaptocyklodextrinu obecného vzorce I, kde m je 0 az 7 a n je 1 az 8 a m + n = 7 nebo 8; R je (C.sub.1-6.n.)-alkylen, poprípade substituovaný 1 az 3 skupinami OH, nebo (CH.sub.2.n.).sub.o.n.-fenylen-(CH.sub.2.n.).sub.p.n.-; o a p jsou nezávisle 0 az 4; X je COOH, CONHR.sub.1.n., NHCOR.sub.2.n., SO.sub.2.n.OH, PO(OH).sub.2.n., O(CH.sub.2.n.-CH.sub.2.n.-O).sub.q.n.-H, OH nebo tetrazol-5-yl; R.sub.1.n. je H nebo (C.sub.1-3.n.)-alkyl; R.sub.2.n. je karboxyfenyl; q je 1 az 3; nebo jeho farmaceuticky prijatelné soli. Tento derivát 6-merkaptocyklodextrinu je velmi vhodný pro pouzití pri reverzaci neuromuskulárního bloku indukovaného lécivy.

Description

Deriváty 6-merkaptocyklodextrinu a farmaceutický prostředek

Oblast techniky

Předkládaný vynález se tyká derivátů 6-merkaptocyklodextrinu, jejich použití pro výrobu farmaceutického prostředku pro reverzaci (odvrácení) neuroníuskulárního bloku indukovaného léčivy a soupravy pro poskytnutí neuromuskulárního bloku a jeho reverzaci.

Dosavadní stav techniky

Neuromuskulárně blokující látky (neuroníuseular blocking agent, (NMBA, nazývané také svalová relaxans) se rutinně používají při provádění anestezie pro umožnění endotracheální intubace a pro dosažení chirurgického přístupu do tělních dutin, zvláště do břicha a hrudníku, bez překážek způsobených vůlí ovládanými nebo reflexními svalovými pohyby. Látky NMBA se také používají při péči o kriticky nemocné pacienty s intenzivní terapií pro umožnění spolupráce s mechanickou ventilací v případech, kdy se ukázaly jako nedostatečné samotné zklidnění a analgczic, a pro zabránění prudkých pohybů svalů spojených s léčbou elektrošoky.

Na základě mechanizmu působení se látky NMBA dělí do dvou kategorií: depolarizující a nedcpolarizující. Depolarizující neuromuskulárně blokující látky sc vážou na nikotinacctylcholinové receptory (nicotinic acetylcholin receptors, nAChR) v neuromuskulárním spojení podobným způsobem jako endogenní neuropřenašeč acetylcholin. Tyto látky stimulují počáteční otevření iontového kanálu za vzniku kontrakcí známých jako fascikulace. Protože se však tato léčiva pouze relativně pomalu rozkládají cholinesterázovými enzymy ve srovnání s velmi rychlou hydrolýzou acetylcholinu acetylcholinestcrázami, vážou se mnohem déle než acetylcholin, což způsobí přetrvávající depolarizaci koncové ploténky, a tím neuromuskulární blok. Nejlepším známým příkladem depolarizující látky NMBA je sukcinylcholin (suxamethonium).

Nedepolarizující neuromuskulárně blokující látky soutěží s acetylcholinem o vazbu na svalové receptory nAChR, ale na rozdíl od depolarizujících látek NMBA neaktivují iontový kanál. Blokují aktivaci kanálu acetylcholinem a tím zabrání depolarizaci buněčné membrány, a v důsledku toho dojde k ochabnutí svalů. Většina klinicky používaných látek NMBA patří k nedepolarizujícím. Patři sem tubokurarin, atrakurium. (cis)atrakurium, mivakurium, pankuronium, vekuronium, rokuronium a rapakuroníum (Org 9487).

Na konci chirurgického zákroku nebo období intenzivní péče se pacientovi často podává látka s reverzačními účinky na NMBA, aby se usnadnilo obnovení svalové funkce. Většina běžně používaných reverzačních látek jsou inhibitory acetylcholinesterázy (AChE), jako je neostigmin, edrofonium a pyridostigmin. Protože tato léčiva působí mechanizmem zvýšení hladiny acctylcholínu na neuromuskulárním spojení inhibicí rozkladu acetylcholinu, nejsou vhodná pro reverzaci depolarizujících NMBA jako je sukcinylcholin. Použití inhibitorů AChE jako reverzačních látek vede k problémům se selektivitou, protože těmito látkami je zesilován neuronální přenos do všech synapsí (jak somatických, tak i autonomních), při kterém se účastní neuronální přenašeč acetylcholin. Tato neselektivita může vést k mnoha vedlejším účinkům způsobeným nesclcktivní aktivací muskarinových a nikotinacetylcholinových receptorů včetně brady kardie. snížení krevního tlaku, zvýšeného slinění, nevolnosti, zvracení, břišních křečí, průjmu a zúžení bronchů. Proto mohou být v praxi tyto prostředky použity pouze po nebo společně s podáním atropinu (nebo glykopyrrolátu) pro antagonizaci muskarinových účinků acetylcholinu na muskarinových receptorech v autonomních parasympatíckých neuroefcktorových spojeních (například v srdci). Použití antagonisty muskarinacetylcholinového receptorů (mAChR) jako jc atropin způsobí řadu vedlejších účinků, například tachykardie, sucho v ústech, rozmazané vidění, obtíže s vyprazdňováním močového měchýře a dále může ovlivnit srdeční vodivost.

- 1 CZ 298206 B6

Další problém s anticholinesterázovými látkami spočívá v tom. že aby bylo možno dosáhnout rychlého zotavení neuromuskulární funkce, musí být přítomna zbytková neuromuskulární aktivita (>10% záškubové aktivity). Příležitostně, bud' v důsledku přecitlivělosti pacienta nebo náhodného předávkováni, může podání látek NMBA způsobit úplné a přetrvávající blokování ncuro> muskulární funkce (..hluboký blok). V současnosti neexistuje žádné spolehlivé léčení pro odvrácení takového ..hlubokého bloku. Pokusy předejít „hlubokému bloku vysokými dávkami inhibitorů AChE vede k riziku indukce „cholincrgní krize, jejímž důsledkem je celá řada symptomů souvisejících se zvýšenou stimulací nikotinových a muskarinových receptorů.

ίο V evropské patentové přihlášce EP 99 306 411 (zveřejněné jako WO 01/12202 A2) (AKZO NOBEL N. V.) bylo popsáno použití chemických chclatačních látek (nebo sekvcstračních látek) jako reverzačních prostředků. Byly popsány chemické chelatační látky schopné vytvořit komplex host - hostitel použitelné pro výrobu farmaceutického prostředku pro reverzaci neuromuskulárního bloku indukovaného léčivy. Použití chemických chclatačních látek jako reverzačních prost15 ředků pro látky NMBA má výhodu v tom, že tyto látky účinkují při reverzaci účinku jak dcpolarizujících. tak nedepolarizujících látek NMBA. Jejich použití nezvyšuje hladinu acetylcholinu. a proto vyvolávají méně vedlejších účinků a žádné vedlejší účinky spojené se stimulací muskarinových a nikotinových receptorů. kc které dochází s reverzačními prostředky působícími na AChE. Navíc není zapotřebí kombinovaného použití inhibitoru AChE a antagonisty ntAChR 20 (např. atropinu), zatímco chemické chelatační látky mohou být dále bezpečně používány pro reverzaci „hlubokého bloku. Příklady těchto chemických chclatačních látek jak se popisují v EP 99 306 411 (zveřejněné jako WO 01/12202 A2) byly zvoleny z různých tříd většinou cyklických organických sloučenin, které jsou známé pro jejich schopnost vytvářet ve vodném roztoku inkluzní komplexy s různými organickými sloučeninami, například cyklické oligosacharidy, 2? cyklofany, cyklické peptidy, kalixareny. crown ethery' a azacrown ethery.

Cyklodextriny..

třída cyklických molekul obsahujících šest nebo více a-D-glukopyranózových jednotek navázaných v polohách 1.4 α-vazbanii jako vamylóze. a jejich deriváty, byly identifikovány 30 v EP99 306 411 (zveřejněné jako WOOl/12202 A2) jako zvláště užitečné při reverzaci mnoha běžné používaných neuromuskulárních blokujících látek nebo svalových relaxans jako je rokuronium, pankuronium. vekuronium, rapakuronium. mivakurium, atrakurium, (cis)atrakurium, sukcinylcholin a tubokurarin.

CZ 298206 Β6

Podstata vynálezu

Nyní bylo zjištěno, že vysoce účinné in vivo při reverzaci působení neuromuskulárnč blokujících látek jsou deriváty 6-merkaptocyklodcxtrmu obecného vzorce I ch₂oh

Vzorec I kde m je 0 až 7 a n je 1 až 8 a m + n = 7 nebo 8;

R je (C, Jalkylen, popřípadě substituovaný I až 3 skupinami 011, nebo (CHty-fenvlen(CHOp-;

o a p jsou nezávisle 0 až 4;

X je COOH, CONHR;, N1ICOR₂, SO₂OH. PO(OH)₂. O(CH₂-CH₂-O)_q- H. OH nebo tetrazol-5-yl;

R_t je H nebo (Ci ;)-alkyl;

R₂ je karboxyfenyl;

q je I až 3;

nebo jejich farmaceuticky přijatelné soli.

Ochrana jako taková se nežádá pro následující deriváty 6-merkaptocyklodextrinu:

6-per -deoxy-6-per-(2-11 y d ro xy e t h v 11 h i o)-p-cy k 1 odextr i n a

6-pe7'-deoxy-6-/2í7'-(2-hydroxyethylthio)-v-cyklodextrin, které sc popisují v Ling, C. a Darey.

R. (J. Chem. Soc. Chem. Comm.. 1993. (2). 203 - 205);

6-mono-deoxy-6-mono-(2-hydroxyethylthio)-p-cyklodextrin. který se popisuje v Fuj i ta.

K. a další (Tetr. Letters2l, 1541 - 1544, 1980);

6-per-teoxy-6-per(karboxymethylthio) β-cyklodextrin, který se popisuje v Guillo, F. a další (Bull. Chem. Soc. Chim. Fr. 132 (8),857- 866. 1995);

6-mono-dcoxy-6-rnono-(karboxymethylthioj-p-cyklodextrin. který se popisuje v Akiie.

T. a další (Chem. Letí., 1994 (6), 1089- 1092);

6A,6B-dideoxy-6A.6B-bisj(o-karboxyfenyl)thio]-fF-cyklodcxtnn a

- j CZ 298206 B6

6A.6B-dideoxy-6A,6B-bis(karboxymcthylthio)-P-cyklodextrin, které se popisují vTubashi. I. a další (J. Am.Chem. Sou.. 108. 4514 - 4518. 1986: a

6-per-dcox.y 6—pťr—(2,3—dihydroxypropylthio)—β—cyklodextrín, který sc popisuje v Baer. Η. H. 5 a Santoyo-Gonzalcz. F. (Karb. Res.. 280. 315-321, 1996),

Tyto deriváty 6-merkaptocyklodextrinu z dosavadního stavu techniky byly v každém případě popsány v souvislosti s odlišnými použitími.

io Výše uvedené deriváty 6-merkaptocyklodcxlrinu podle dosavadního stavu techniky však spadají do hlavního provedení předkládaného vynálezu, které se týká použití derivátu 6-merkaptocyklodextrinu obecného vzorce 1 pro výrobu farmaceutického prostředku pro reverzaci neuromusku Jarního bloku indukovaného léčivy .

Vynález se v jednom provedení týká derivátů 6 -merkaptocyklodextrinu obecného vzorce 1, kde m je 0 až 7 a n je 1 až 8 a m + im 7 nebo 8;

X je COOI1, OH nebo CONHCfk

R je (C| (,')- alky len nebo (CH2)₍-fenylcn-(CH_;)_p;

o a p jsou nezávisle 0 až 4:

nebo jejich farmaceuticky přijatelné soli, s vyloučením následujících látek:

/;ez-deoxy-6-/jer-(2-hydroxyethylthio)-[3-cyklodcxtrim

6-mono-deoxy-6-mono-(2-hydroxyethylthio)-(kcyklodextrin;

6-/7er-deoxy-6-/2er-(2-hydroxyethylthio)-Y-cyklodcxtrim

6-/?er-deoxy-6-/>er-(karboxymetliylt.liioH3-cyklodextrin;

6-mono-dcoxy 6-moncHkarboxymclhylthio)-p-cyklodextrin;

6A,6B-dideoxy-6A,6B-bis[(o-karboxyfenyl)thio]-[3-cyklodextrin: a

6A,6B-dideoxy-6A,6B-bis(karboxymethylthiol)-[3-cyklodextrin.

Termín (Ci ₍₁)alkylem jak se používá v definici vzorce l, znamená dvoj vazný uhlíkatý radikál s přímým nebo rozvětveným řetězcem obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, jako jc methylen, ethylen(1,2-cthandiyl). propylen( 1-methyl-1,2-elhandiyl), 2-methyl-1,2- ethandiyl, 2,2-dimcthyl 1.2ethandiyl, 1,3-propandiy 1, 1.4-butandiyl, 1,5-pcntandiyl a 1,6-hexandiyl.

Termín fcnvlcn znamená dvojvaznou skupinu, jejíž volné valence mohou být umístěny ve vzájemné poloze buďortho. mela nebo para.

Termín (C_{( 3})-alkyI znamená alkylovou skupinu s rozvětveným nebo přímým řetězcem, obsahu50 jící 1 až 3 atomy uhlíku, tj. methyl, ethyl, propyl a izopropvl.

Termín karboxyfenyl znamená fenylovou skupinu, která je substituována v jakékoli z poloh ortho, meta nebo para karboxylovou skupinou. Výhodná je skupina ortho-karboxy fenyl.

-4CZ 298206 B6

Sloučeniny vzorce I. kde n ni je 7, jsou deriváty β-cyklodextrinu. sloučeniny, kde n - m je 8, jsou odvozeny od v-cyklodcxtrinu.

Výhodné jsou deriváty 6-mcrkaptocyklodextrinu vzorce I. kde X je COOH. nebo jejich farmaceuticky přijatelné soli.

Výhodnější jsou deriváty 6-mcrkapto γ-cyklodextrinu vzorce I, kde n je 8, R jc (C| alkylen a X je COOH.

Zvláště výhodné deriváty 6-merkaptocyklodextrinu podle vynálezu jsou následující látky:

6-pé’r-deoxy-6“pťr-(2-karboxyethyl)thio-VH;yklodextrin:

6-/>er-dcoxy 6-/?ťM3-karboxypropyl)thio-7-cyklodcxtrin;

6-/?er-deoxy-6-/?er-(4-karboxyfenyl)thio-v-cyklodextrin;

6-per*-deoxy·-6-per (4-karboxyfenylmethy|)thio-y-cyklodcxtrin;

6-/?er-dcoxy-6 -pír-(2-karboxypropyl)thio-y-cykIodextrin; a

6-/?e/’-deoxy-6-/?č^jr-( 2—su 11 belhy I )th io-y-cyk lodextrin.

Deriváty 6-merkaptocyklodextrinu vzorce 1 mohou být připraveny reakcí C6-aktivovaného cyklodextrinového derivátu vzorce 11 s alkylthiolovým, ary laiky Ithiolovým nebo arylthiolovým derivátem odpovídajícím vzorci H-S-R-X. kde RaX mají stejný význam jako bylo definováno výše, v přítomnosti anorganicko nebo organické báze.

Vzorec IL kde m jc 0 až 7. n je 1 až 8. m + n = 7 nebo 8 a Y znamená odštěpíte lnou skupinu, kterou inůže být halogenid (CL Br nebo 1), esterová funkční skupina kyseliny sírové nebo sulfonové, jakojc tosylát, a naftalensulfonát nebo triflát.

Deriváty 6-merkaptocyklodcxtrinu vzorce I mohou být také připraveny reakcí derivátu 6-ynebo -β-cyklodextrinu vzorce III s alky lačním činidlem, např. alkylhalogcnidem, ary laiky lha logenidem, alkylsulfonátcm. arylalkylsulfonálem. odpovídajícím vzorci Y-X-R, kde Υ, X a R mají významy definované výše, nebo s reakčním činidlem obsahujícím dvojnou vazbu, jako jc například vinylalkan. akry lát apod., nebo epoxidem v přítomnosti anorganické nebo organické báze,

Obecný vzorec Π1, kde m je 0 až 7. n jc 1 až 8. m + n = 7 nebo 8.

Alternativní způsoby syntézy pro přípravu derivátů 6-merkaptocyklodexlrinu podle vynálezu jsou odborníkům v oboru známé. Chemické reakce týkající se derivatizace eyklodextrinů jsou dobře dokumentované (viz například: Comprehensive Supramolccular Chemistry, díly 1-11. Atvvood J. L.. Dav i es J. E. D.. MacNicol D. D.. Vogtle F.. ed. Elscvicr Science Ltd., Oxford. UK, 1996).

Farmaceuticky přijatelné soli derivátů 6-mcrkaplocyklodextrinu vzorce I. kde X znamená skupinu karboxylové kyseliny COOH, skupinu sulfonové kyseliny SO^OH. skupinu fosfonovc kyseliny PO(OH)? nebo skupinu tetrazol-5-yI. mohou být získány působením organické báze nebo minerální báze, jako jc hydroxid sodný, draselný nebo lithny na kyselinu.

Deriváty 6-merkaptocyklodextrinu nebo jejich farmaceuticky přijatelné soli nebo sol váty pro použití v rámci předkládaného vynálezu se podávají parenterálně. Injekční cesta může být intravenózní, subkutánní, intradermální. intramuskulární nebo intraarteriální. Výhodná je intravenózni cesta. Přesná použitá dávka bude nutně záviset na potřebách jednotlivého pacienta, kterému se farmaceutický prostředek podává, stupně svalové aktivity, která má být obnovena, a úsudku specialisty na anestézii/péči v kritickém stavu. Jc uvažována také mi motel ní aplikace chemických chclatačních látek podle vynálezu, například míšením chemické chelatační látky s krví při dialýze nebo při plazmaforcze.

V dalším provedení se vynález týká kilu pro dosažení neuromuskulárního bloku a jeho rcvcrzacc. který obsahuje (a) neuromuskulárně blokující prostředek, a (b) derivát 6-mcrkaptocyklodextrinu obecného vzorce I, schopný vytvořit komplex host - hostitel s neuromuskulárně blokujícím prostředkem. Kitem podle vynálezu se míní prostředek, který obsahuje oddělené farmaceutické prostředky, tj. neuromuskulárně blokující prostředek a derivát 6-merkaptocyklodextrinu vzorce I, tj. reverzační prostředek. Složky takového kitu jsou určeny pro postupné použití, tj. v případě potřeby se pacientovi podá neuromuskulárně blokující prostředek, a potom sc v čase, kdy je požadováno obnovení svalově funkce, podá reverzační prostředek, tj. derivát 6-mcrkaptocyklodextrinu podle předkládaného vynálezu.

Výhodný kit podle předkládaného vynálezu obsahuje derivát 6 -merkaptocyklodextrinu vzorce I a neuromuskulárně blokující prostředek, který je zvolený ze skupiny rokuronium, vekuronium, pankuronium, rapakuronium, mivakurium. atrakurium (cis)atrakurium. tubokurarin a suxamethonium. Zvláště výhodný kit podle vynálezu obsahuje jako neuromuskulárně blokující prostředek rokuronium.

Ve směsí s farmaceuticky vhodnými pomocnými látkami a farmaceuticky vhodnými kapalinami, například jak sc popisuje ve standardní referenční příručce Genaro a další. Remington'* Pharmaccutical Sciences, (18. vydání, Mack Publishing Company, 1990, část 8: Pharmaceutical Preparations and Their Manufacture; viz zvláště kapitolu 84: ,.Parenteral preparátions”. str. 1545 1589: a kapitolu 85: Jntravenous admixtures. str. 1570 - 1580) mohou být deriváty

-6CZ 298206 B6

6-merkaptocyklodextrinu aplikovány vc formě roztoku, například pro použití ve formě injekčního preparátu.

Farmaceutický prostředek muže být alternativně předkládán v zásobnících pro jednotkovou dávku nebo větší počet dávek, jako jsou například uzavřené lahvičky a ampulc, a může byt skladován v lyofilizovaném stavu, který vyžaduje před použitím pouze přidání sterilního kapalného nosiče, například vody.

Vynález dále zahrnuje farmaceutický prostředek jak bylo popsáno výše, v kombinaci s příbalovým materiálem vhodným pro uvedeny prostředek, kde tento přibal o vý materiál obsahuje instrukce pro použití prostředku, jak bylo popsáno výše.

Vynález je ilustrován na následujících příkladech.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

6-Mono-deoxy-6-mono-(4-karboxyfcnyl jthio-y-cyklodextrin, sodná sůl

Do kulové baňky obsahující pyridin (120 ml) byl přidán suchý v-cyklodextrin (2,0 g, 1.54 mmol) pod dusíkem při laboratorní teploto. Po rozpuštění byl přidán roztok 2-naftalensulfonylchloridu (1,05 g, 4.64 mmol) v pyridinu (20 ml) a směs byla míchána 24 hod. Reakce byla ukončena vodou (50 ml) a byla odpařena do sucha za poskytnutí surového 6-mono-O-(2'-naftalensuliony Ij-y-cyklodextrinu.

Hydrid sodný (0,38 g. 15,83 mmol) byl suspendován v suchém dimethylformamidu (20 ml). Potom byla k suspenzi přidána kyselina 4-merkaptobenzoová (0,7 g. 4,55 mmol) a získaná směs byla míchána 20 min. Ke směsi byl přidán v-cyklodcxlrinnosylát (3.2 g. 2.12 mmol) a reakční směs byla zahřívána na 100 °C 90 min. Po ochlazení byl přidán aceton pro vy srážení pevné látky, která byla znovu vysrážena ze směsi voda/accton. Látka byla polom rozpuštěna ve vodě (20 I), pil bylo upraveno na 7,0 přidáním 2N kyseliny chlorovodíkové a potom byla provedena chromatografie na koloně Sephadcx DEAE A-25. Vhodné frakce byly spojeny, dialyzovány, potom dvakrát vysráženy ze směsi voda/aceton, za získání 400 mg sloučeniny uvedené v názvu. ‘HNMR v DMSO δ 7,4 až 7,8 (ArH). 5,0 až 5,2 (8 H), 4,13 (1 Π), 3,7 až 4,0 (29 H). 3,7 až 3.4 (17 H), 3,25 (I H) ppm. NMR v DMSO δ 129,9 a 127,5 (ArC). 103,3 a 102,9 (Cl a Cl'). 85,0 (C 4'). 81,6 (C 4), 73,8 (C 3). 73.5 (C 2), 72,2 (C 5), 70,8 (C 5'). 60,6 (C 6), 34.3 (C 6') ppm. Elcktrorozprašovací MS |M4-H]’ = 1455.7 a |M+Na]’ = 1477,7.

Příklad 2

Mono--deoxy-6-mono-(2-karboxYfenyl)thio“7-cyklodextrin. sodná sul

Hydrid sodný (60% disperze v oleji, 0,18 g. 4,5 mmol) byl najednou přidán ke kyselině thiosalicylové (0,34 g, 2.2 mmol) v DMF (25 ml) a smčs byla míchána při teplotě laboratoře 30 min. Ke směsi byl potom přidán surový roztok 6-mono-O-(2'-naftalensulfony l)-y-cyklodextrinu (2,5 g. 1,45 mmol) v DMF (15 ml) a zahříván na 70 ^CC 24 hod. Směs byla ochlazena a reakce byla ukončena vodou (20 ml) před odpařením do sucha. Potom byla ke zbytku přidána voda a získaný roztok byl vlit do acetonu (250 ml) pro dosažení vy srážení. Získaná pevná látka byla oddělena filtrací a rozpuštěna ve vodě (10 ml) před čištěním na koloně Sephadex DEAE Λ-25 s elucí vodou a potom 0,2N NaOH. Frakce obsahující produkt byly spojeny a odpařeny na nízký objem a dialyzovány (prahová hodnota molekulové hmotnosti 1000) při čtyřnásobné výměně vnější vody. Vnitřní roztok byl odpařen na nízký objem a vlit do acetonu (100 ml). Pevná látka byla oddělena filtrací a sušena ve vakuu při 70 °C za získání sloučeniny uvedené v názvu (235 mg) jako bílé pevné látky. 'H NMR (D?O) δ 7,50 - 7.10 (4 H, m, Ar-11), 5,14 (8 H, m. CyD 1-H). 4,16(1 H, m. CyD 5-H), 3,98 3,85 (26 H. m, CyD 3,5.2,4~H), 3,70 3,61 (20 H, m,

CyD 2.3.4.6—II), 3.15 (1 H, ni, CyD 6-H) ppm; Fílektrorozprašovací MS m/z 1477,6 pro [M-rNa]’, vypočteno pro CisbtaNaO.jiS Mh = 1455,304.

Příklad 3

6--Pěr-deoxy-ó--per--(3-karboxy feny I)thio-y-eyklodextrin, sodná sůl

-8CZ 298206 B6

Trifenylfosfin (30,1 g, 15 ekv.) byl rozpuštěn za míchání v suchém DMF (160 ml). K tomuto roztoku byl přidán jod (30,5 g, 15.6 ekv.) v průběhu 10 min. přičemž došlo k vývinu tepla. Potom byl přidán suchý γ-cyklodextrin (10 g, 7,7 mmol) a směs byla zahřívána na 70 °C 24 hod. Směs byla ponechána ochladit, byl přidán methoxid sodný (3,1 g sodíku v 50 ml methanolu) a směs byla míchána 30 min před vlitím na methanol (800 ml) a odpařením do sucha. Ke zbytku byla přidána voda (500 ml) a pevná látka byla oddělena filtrací a promyta vodou (3 x 100 ml), potom acetonem (3 x 100 ml), a sušena ve vakuu při 70 °C za poskytnutí 6-per deoxy-6-/x^jr-jod-veyklodextrinu jako žluté pevné látky (16.2 g). která byla použita bez dalšího čištění.

K roztoku kyseliny 3-merkaptobcnzoové (1.0 g, 10 ekv.) v DMF (30 ml) byl přidán 60% hydrid sodný dispergovaný v oleji (476 mg, 22 ekv.) po částech v průběhu 30 min. Směs byla ochlazena a byl přidán 6-/7w-deoxy-6-/?ťr-jod-v-cyklodcxtrin (1,4 g) v DMF (30 ml). Směs byla potom míchána při 70 °C 24 hod. Směs byla ponechána ochladit na laboratorní teplotu a reakce byla ukončena přidáním vody (20 ml), před odpařením na nízký objem. Roztok byl vlit do acetonu (500 ml) a sraženina byla oddělena filtrací, rozpuštěna ve vodě (20 ml) a dialyzována (prahová hodnota molekulové hmotnosti 1000) při čtyřnásobné výměně vnější vody. Vnitřní roztok byl odpařen na nízký objem a vlit do acetonu (250 ml). Pevná sraženina byla oddělena filtrací a sušena ve vakuu při 70 °C za získání sloučeniny uvedené v názvu (1.45 g) jako bílé pevné látky: 'H NMR (D_;O) δ 7.77 (8 H. br s, Ar H). 7,55 (8 11, d. ,1 = 6,0 Hz. Ar-H). 7,71 (16 II. m. Ar-H). 5.16 (8 H. s, CyD l-H). 4.00 - 3,94 (16 H. m. CyD 3. 5-H), 3,58 - 3,53 (16 H. m. CyD 4. 2-11). 3,43 - 3,40 (8 II, m, CyD 6-H). 3,24 - 3,20 (8 H, rn, CyD 6-E); Elektro rozprašovací m/z 1190.6 pro [M-8Na+6H]² , vypočteno pro C_I04Hi().iNa₈O.₍₈S_s Mh - 2562,39.

Příklad 4 deoxy-6-pí?r-(2-karboxyethyl)thio-y-cyklodextrin. sodná sůl

Kyselina 3-merkaptopropionová (1,22 ml, 14,0 mmol) byla rozpuštěna v suchem DMF (45 ml) pod při teplotě laboratoře. K tomuto roztoku byl ve třech částech přidán hydrid sodný (1.23 g. 30,8 mmol, 60%) a směs byla míchána dalších 30 min. K této směsi byl potom po kapkách přidán roztok ó-pťr-deoxy-ó-^ťr-jod-y-cyklodextrinu (3,12 g. 1,40 mmol) v 45 ml suchého DMF. Po přidání byla reakční směs zahřívána na 70 °C 12 hod. Po ochlazení byla ke směsi přidána voda (10 ml) a objem byl ve vakuu snížen na 40 ml a byl přidán ethanol (250 ml), což vedlo k vy srážení. Pevná sraženina byla oddělena filtrací a dialyzována 36 hod. Objem byl potom snížen na 20 ml ve vakuu. K roztoku byl přidán ethanol, a sraženina byla oddělena filtrací a sušena za poskytnutí v názvu uvedené sloučeniny jako bílé pevné látky (1,3 g, 43 %). 'H-NMR DO 5 2.47 -2.51 (m. 1611): 2,84-2,88 (m. 1611): 3,00 - 3,02 (t, 8H); 3,11 -3,14 (t, 8H); 3.62-3,68 (m, 16H); 3.92 - 3,97 (m, 811); 4,04 - 4,06 (m, 811); 5,19 (m.8H) ppm. MS FIA +iont při 2024,9 m/z.

- 9 CZ 298206 B6

Příklad 5

6-Per-deoxy-6-per-(5-karboxypentyl)thio-Y-cyklodextrin, sodná sůl

Sloučenina uvedená v názvu byla připravena podobným způsobem jak bylo popsáno pro příklad 4 reakcí kyseliny 6 merkaptohexanové (1,34 g, 0,90 mmol) s 6-/?f/--deoxy-6-/?er-jod-Ycyklodextrinem. 'll-NMR D,0 δ 1.40 (s. 1611); 1,57 - 1.64 (m. 32H); 2.17- 2.21 (m. 16H); 2,67 - 3.00 (tn, 16H); 2.85 - 2,90 (m. 8H); 3.15 3,20 (m. 8H); 3,52 - 3.59 (m. 8H); 3,60 - 3,63 (m. 811); 3,87 - 3,93 (m. I6H); 5,16 (s, 8H) ppm. MS FIA +ionty při 2362.2, 2213. 2065 a 1919 m/z.

Příklad 6

-Perdeoxy-6-/?c/--(3-karboxypropyi)thio-Y-cyklodcxtrin. sodná sůl

Sloučenina uvedená v názvu byla připravena podobným způsobem jak bylo popsáno v příkladu 4, reakcí kyseliny 4-merkaptomáselné (1,10 g. 0,009 mol) s 6-ptv-deoxy-6-/?ťr-jod-y-cyklodextrinem. ‘H-NMR DO δ 1,87- 1,88 (m, I6H); 2,27-2,30 (m, I6H); 2,67-2.71 (ni, I6H); 2,98 - 3,00 (m, 811); 3,13 - 3,16 (m, 8H): 3.61 -3,63 (m. I6H); 3.94 -4.03 (m. I6H); 5,21 (s. 811) ppm. MS FIA +iont při 2138,8 m/z.

- 10CZ 298206 Β6

Příklad 7 ó-P^-deoxy-ó-^ťr-karboxymethylthio-Y-cyklodcxtrin, sodná sůl

Hydrid sodný (60% disperze, 0,34g, 8.60 mmol) byl přidán k míchanému roztoku ethyl—2— merkaptoacetátu (0,92ml, 8,40 mmol) v DMF (20 ml) v atmosféře dusíku při teplotě laboratoře. Po ukončení šumění (15 min) byl do systému přidán /;c/--6-dcoxy-/?er-6-y-cyklodextrin (2,17g, 1,00 mmol). Po dalších 5 min byla teplota zvýšena na 70 °C a reakce byla ponechána míchat 17 hod. Po ochlazení byl DMF odstraněn ve vakuu. Byl přidán methanol (50 ml) a krémová bílá pevná látka pomalu krystalizovala z roztoku. Látka byla odfiltrována za odsávání, prornyla methan o lem a sušena, za poskytnutí 6 deoxy h-/?er-karbethoxy methyl tli io-y-cyklodcxtrinu jako pevné látky (1,74 g. 82%). 5_H(d6 - dmso) 4,95 - 4,85 (811, m, 8 x anomerní CH). 4,05 (16H, q, 8 x CFLCIh), 3,85 - 3.75 (8H, m), 3,60-3.50 (8H, m), 3.40 - 3,20 (32H, bs, 8 x CH₂SC'H₂), 3,20 - 3.10 (8H. m), 2.95 - 2.85 (8H. m). 1,20 (24H, t, 8 x CILCHOK IM roztoku hydroxidu sodného (7 ml) byl přidán 6“/wr-dcoxy-6-/w--karbcthoxymcthylthioy cyklodextrin (1,00 g, 0,47 mmol) a reakční směs byla ponechána míchat při teplotě laboratoře. Po 18 hod byl čirý roztok dialyzován 8 hod. přičemž voda (2 I) byla vyměňována každé 2 hod. Potom byl obsah dialyzační trubice vyprázdněn do baňky a voda byla odpařena ve vakuu za poskytnutí sloučeniny uvedené v názvu jako bílé pevné látky (0.62 g. 64 %), Sh(D₂O) 5.21 (811, d. 8 x anomerní CH), 4.18-4.05 (8H, m), 4,00 (8H. dd), 3,78 (8H.dd). 3,70 (8H, dd). 3.40 (I6H, dd). 3,20 (8H. d), 3,02 (811, dd). <Y(D_?O) 178,1, 101,6, 82,8, 73,0, 72,7, 71,8, 39.0. 34,1 LC/MSTOF 1889 m/z.

Příklad 8

6-/^>e/'-deoxy-6-/)ť/*-(4-karboxyfenyl)lhio-y-cyklodextrin, sodná sůl

K roztoku kyseliny 4-merkaptobenzoové (856 mg) v DMF (30 ml) byl po částech přidáván 60% hydrid sodný dispergovaný v oleji (372 mg) v průběhu 30 min. Směs byla ochlazena a najednou byl přidán pťr-ó-deoxy-per-ó-brom-v-cyklodextrin (1.0 g) a směs byla míchána při 70 °C 24 hod. Směs byla ponechána ochladit na teplotu laboratoře a reakce byla ukončena vodou 5 (20 ml) před odpařením na malý objem. Roztok byl vlit do ethanolu (250 ml) a sraženina byla oddělena filtrací, rozpuštěna ve vodě (20 ml) a dialyzována (prahová hodnota molekulové hmotnosti 1000) s čtyřnásobnou výměnou vnější vody. Vnitřní roztok byl odpařen na nízký objem a vlit do acetonu (250 ml). Pevná sraženina byla oddělena filtrací a sušena ve vakuu při 70 °C za získání sloučeniny uvedené v názvu (1,2 g) jako bílé pevné látky. ^lH NMR (D₃O. 343 K.) δ 7,70 io (16 H, d. J - 8,1 Hz, Ar-H). 7,23 (16 H, dj = 7,3 Hz, Ar Η),\15 (8 H. s' CyD 1-H), 4.003.96 (16 H, m. CyD 3,5-H), 3,55 - 3,53 (24 H, m. CyD 6'. 4,2 H), 3,15 (8 H, m. CyD 6-H)i MALD1-TOF m/z2383,7 pro [M-Na^lIJ, vypočteno pro CHuHi^NasO^Ss Mh 2562,39.

Příklad 9

-Per-deoxy-ó per (4 karboxymethylfenyl)thio-y-cyklodextrin. sodná sůl

K roztoku kyseliny 4-merkaptofenyloctové (10 ekv.) v DMF (50 ml) byl po částech přidán 60% hydrid sodný voleji (22 ekv.) v průběhu 30 min. Směs byla ochlazena a najednou byl přidán per-6-deoxy-/?er-6-brom-y-cyklodcxtrin (1.0 g) a směs byla míchána při 70 °C 24 hod. Směs byla ponechána ochladit na laboratorní teplotu a reakce byla ukončena přidáním vody (20 ml) před odpařením na malý objem. Roztok byl polom vlit do acetonu (250 ml) a sraženina byla oddělena filtraci, suspendována ve vodě (20 ml) a dialyzována (prahová hodnota molekulové hmotnosti 1000) se čtyřnásobnou výměnou vnější vody. Vnitřní roztok byl odpařen na malý objem a vlit do acetonu (250 ml). Pevná sraženina byla oddělena filtrací a sušena ve vakuu při 70 °C za získání sloučeniny uvedené v názvu (1,44 g) jako bílé pevné látky. 'HNMR (DO. 343K) δ 7,15 (16 H, d, J = 8,0 Hz, Ar H), 6,99 (16 H. d, J = 8.0 Hz, Ar-H)/4,98 (8 H, s, CyD

1-H). 3,90- 3,72 (16H.ni. CyD 3,5-H), 3,51 - 3,43 (16 H, m, CyD 4,2-H), 3,28 (24 H, m,

CFb-Ar, CyD 6'-H), 3,15- 3.10 (1 II, ni, CyD 6-H); MALDI-TOF m/z 2495,8 pro [MNa_x+H₆], vypočteno pro Ci^HiidNasO.^Ss Mh = 2674,6.

- 12 CZ 298206 B6

Příklad 10

6-/Trdcox\-6-/?cr(3-amidopropy I )thio—γ-cyklodextrin

Do směsi ó-pťr-deoxy-ó-per-thio-y-cyklodextrinu (500 mg; připravené jak je popsáno v příkladu 17) a jodidu draselného (5 mg) v DMF (10 ml) byl přidán 4-clilorbutamid (673 mg; Trios a další, Biochemistry 1975, 14. 5233), Byl přidán uhličitan cezný (1.8 g) a reakční směs byla zahřívána na 60 °C přes noc, Získaná směs byla vlita do acetonu, zfiltrována, promyta ethanolem a vodou a potom sušena ve vakuu (118 mg; 16,2 %). 'H NMR (DMSO/D₂O) δ 4,9 (11 ]. s), 3,8 ίο (1H. m), 3,6 (1H, m). 3.4 (2H, m), 3,05 (1H. m). 2,85 (1H, m), 2.2 (2H, m), 1,75 (2H, m). Elektrorozprašovací hmotnostní spektrum M l I (m/z) 2105.

Příklad 11 ó-/Vr-deoxy-6-/?er(5-hydroxy-3-oxa pentyl)thio-γ-cyklodextrin

2-(2-Merkaptoethoxy)cthanol (1.4 g, 11.6 mmol) byl rozpuštěn v DMF (20 ml) a míchán při teplotě laboratoře v atmosféře dusíku. Potom byly přidány per-h--brom y cyklodextrin (2 g. 20 1,12 mmol) a uhličitan cezný (3,2 g. 9,86 mmol) a získaná suspenze byla míchána při 60 °C přes noc v atmosféře dusíku. Po ochlazení na laboratorní teplotu byla suspenze vlita do acetonu (200 ml) a nerozpustný materiál byl izolován filtrací, promyt acetonem (3 x) a usušen ve vakuu. Surový produkt byl rozpuštěn v deionizované vodě (20 ml) a dialyzován (10 hod). Obsah dialyzační membrány byl potom zakončentrován ve vakuu za získání 1 g požadovaného produktu jako 25 krémové pevně látky. ^lH NMR(D₂0.400 MHz): 8 2.81, 3.00 (m, 2411), 3.21 -3,31 (d, 8H), 3,49 (t. 811). 3.55 - 3,75 (m. 56H), 3,82 (t, 8H), 3.89 (t, 811), 5.1 I (d. 8H). ESI-MS: 2175 (M-H)’.

- 13CZ 298206 B6

Příklad 12

6--Per-deoxy-6-pťr[2(2-karboxybenzoyΊ)amino)ethyllthío—γ--cyklodextrin. sodná sůl

Per-ó-mcrkapto-y-cyklodextrin (1 g. 0.7 mmol: viz příklad 17) byl rozpuštěn v DMF (10 ml) a míchán při teplotě laboratoře v atmosféře dusíku. Byly přidány N-(2-bromethyl)ftalimid (1.57 g, 6,17 mmol) a uhličitan cezný (2 g, 6.17 mmol) a získaná suspenze byla míchána při 60 °C přes noc v atmosféře dusíku. Po ochlazení na laboratorní teplotu byl DMF odstraněn ve vakuu a byla přidána voda (100 ml) za důkladného míchání. Sraženina byla izolována filtraci, promyta vodou (3 x) a usušena ve vakuu, za získání 1.67 g krémové pevné látky. Potom byl k surovému produktu přidán vodný hydroxid sodný (1M. 20 ml) (600 mg) a získaný roztok byl míchán při teplotě laboratoře přes noc v atmosféře dusíku. Roztok byl potom dialyzován s deionizovanou vodou až do dosažení konstantní hodnoty pil a obsah dialyzační membrány byl usušen ve vakuu, za získání 500 ing požadovaného produktu jako sklovité pevné látky. 'H NMR (DO, 400 MHz): δ 2,76- 2,96 (m, 24H). 3,10 - 3,30 (m, 8H), 3,35 - 3,62 (m, 32H). 3.78- 3,95 (m, 16H), 5,02 (d, 8H), 7,30 - 7,62 (m. 32H): ESI-MS: 1477 (M-2H)³.

Příklad 13 ó-^er-dcoxy 6-/7í*r(2-hydroxycthyl)thio-Y-cyklodcxtrin

K míchanému roztoku 2-mcrkaptoethanoiu (10,85 g, 10 ckv.) v DMF (500 ml) pod dusíkem byl přidán 60% hydrid sodný dispergovaný v oleji (11.7 g, 21 ekv.), po částech v průběhu 30 min. Směs byla míchána při teplotě laboratoře 90 min. Byl přidán per-6-deoxy-6 -/w-brom-y-cyklodextrín (25,0 g) a směs byla zahřívána na 70 °C 24 hod. Směs byla ponechána ochladit na teplotu laboratoře a reakce byla ukončena přidáním vody (50 ml) před odpařením na malý objem. Zbytek byl převeden do vody (100 ml) a vlit do směsi I : 1 methanol/aceton (500 ml). Vytvořená pevná látka byla oddělena filtrací, rozpuštěna ve vodě (500 ml) a dialyzována (prahová hodnota molekulové hmotnosti 1000) při několikanásobné výměně vnější vody. Vnitřní roztok byl odpařen na nízký objem a potom rekrystalizován z horké vody za získání sloučeniny uvedené v názvu (8,5 g) jako bílých krystalů křížového tvaru. ^]H NMR (400 MHz: DMSO) 5 5,91 (16 H, br $, 2,3-OH). 4.92 (8 11, s, Í-H), 4,71 (8H, t, J - 4,4 Hz, SCH₂CH₂(9//), 3,75 [8H, t. J = 8,0 Hz, 3-H (nebo 5H)]« 3,60 - 3,50 [2411, m, 5-H (nebo 3-11), SCH₂C7/₂OH], 3,40 - 3,30 (16H. m. 4-H, 2-H), 3,08 (811. d, J- 13,6 Hz, 6-H), 2,82 (8H, dd, J- 13,6, 6,8 Hz, 6-H), 2,66 (16H, t, J - 6.8 Hz,

- 14CZ 298206 B6

SČV/^CHjOH); m/z (elektrorozprašování) 1775.4 pro [M-H] , vypočteno pro C_wH_h2S_rO₄₀

Mh = 1776,45.

Příprava této sloučeniny podobným způsobem byla již publikována: J, Chem. Soc., Chem. ? Commun., 203 (1993).

Příklad 14 ίο 6-Pí'r-dcoxy-6-/?er(N-methylamidomethyl)thio-v-cyklodextrin

K míchanému roztoku N-mcthylmerkaploacetamidu (0,58 g, 10 ekv.) v DMF (30 ml) pod dusíkem byl přidán 60% hydrid sodný dispergovaný v oleji (0.22 g. 10 ekv.) po částech v průběhu 30 min. Směs byla míchána při teplotě laboratoře 30 min. Byl přidán per-6-dcoxy-6-/?er-brom γ-cyklodextrin (1,0 g) a směs byla zahřívána na 60 až 70 °C 48 hod. Směs byla ponechána ochladit na teplotu laboratoře a reakce byla ukončena přidáním vody (20 ml) před odpařením na malý objem. Zbyly roztok byl vlit do ethanolu (100 I). Vytvořená pevná látka byla oddělena filtrací, rozpuštěna ve vodě (200 ml) a dialyzována (prahová hodnota molekulové hmotnosti 1000). při čtyřnásobné výměně vnější vody. Vnitřní roztok byl odpařen na malý objem a vlit do ethanolu 20 (100 ml). Sraženina byla oddělena filtrací a sušena ve vakuu, za získání sloučeniny uvedené v názvu (0,55 g) jako bílé pevné látky. 'H NMR (400 MHz; D₂O) 6 5.29 (811? d, .1 = 4,0 Hz. 1H). 4,10 (8H, br t. J 9.6 Hz, 5-H), 4.05 (8H. t, J - 9.8 Hz, 3-H), 3,83 (8H, dd. J = 10.0. 3,6 Hz. 2 H), 3.74 (8H. t. J 9,2 Hz, 4-H), 3.58 - 3,49 [ 16H. AB systém, SmC(O)NHCHÚ, 3,36 (8H, br d, J - 12.8 Hz, 6-H), 3,07 (8H, dd, J - 14,0, 8,4 Hz, 6-H), 2,94 (24H, s, SCH₂C(O)NHCW,);

m/z (elektrorozprašování) 1991,7 pro [Μ H] , vypočteno pro CyjHjjoNxSsOjo Mh - 1992,54.

Příklad 15

6 ftv-dcoxy 6 /xT(2-karboxypropyl)thio-y-cyklodextrin, sodná sůl

Hydrid sodný (60% suspenze v oleji) (0.44 g) byl přidán k rnethyl-3-merkapto-2-mcthylpropionátu (1,474 g; J. Med. Chem., 1994, 1159) v dimethylformamidu (25 ml). Po 30 min byl přidán /jer-6-deoxy-/wr-6-brom-y-cyklodextrin (2,25 g), rozpuštěný v d i methyl formám idu (25 ml). 35 Byl přidán krystal jodidu sodného a směs byla zahřívána na 75 °C přes noc. Rozpouštědlo bylo oddestilováno a zbytek byl krystalizován z methanolu za poskytnutí methylesteru (1,3 g). Hmot nostní spektrometrie (M-H) 2224: '(4 NMR (dmso D,,): 0 1.41 (d, 24H). 2.68 (m. 16H). 2.80 (m. 16H). 3.00 (m. 8H), 3.61 (3. 2411). 3.79 (m, 8H), 4.95 (s. 8H).

Tento produkt byl potom míchán přes noc s roztokem hydroxidu sodného (M, 13 ml). Získaná směs byla /filtrována, dialyzována až do dosažení neutrální reakce a odpařena do sucha za získání sloučeniny uvedené v názvu (1.13 g). Hmotnostní spektrometrie (M-H) 2112; '11 NMR (D₂O): δ 1,15 (d. 24H). 2.5 (m, 8H). 2.65 (m, 8H). 2.8 -3.1 (m, 24H). 3,65 (m. 16H), 4.0 (m. 16H). 5,2 (s. 8H).

Příklad 16

6-Per-d e o xy -6-per( 3 -k a rboxv p ro py I )t h i o- β-c y k I od e x t r i n. sod n á s ů I

Per-ó-deoxy-pcr-ó-brom-p-cyklodextrin (2,25 g), methyl^l-mcrkaptobutyrát (1,7 g; Tctrahedron 1998, 2652), uhličitan cezný (4.24 g) a dimethylformamid (25 ml) byly míchány a společně zahřívány tři dny. Směs byla ochlazena, vlita do vody a /filtrována. Pevná látka byla promyta methanolem a sušena (2.1 g). Tato látka byla míchána přes noc s roztokem hydroxidu sodného (M, 21 ml), /filtrována a filtrát byl dialyzován až do dosažení neutrální reakce. Získaný roztok byl odpařen do sucha za získání sloučeniny uvedené v názvu (1.7 g). Hmotnostní spektrometrie (M-H) 1848,8. 'HNMR (D>O): δ 1,75 (m, 16H), 2,15 (m. 16H). 2,6 (m, 16H), 2,85 (m. 8H), 3,05 (m. 811), 3,55 (m, 1611), 3,87 (m, 16H), 5,07 (s, 8H).

Příklad 17

6-Per-deoxy-6-/w*(2-sulfocthyl)thio-7-cyklodextrin, sodná sůl

A: /’ť/-6-deoxy-/?er-6-thio-y-cyklodextrin

Fe/'-6-dcoxy-/?ť/⁴-6-brom-y--cyklodextrin (20 g). thiomočovina (13,5 g) a dimethylformamid (100 ml) byly společně zahřívány tři dny při 65 °C a potom byl přidán cthanolamin (20 ml) a zahřívání pokračovalo dvě hodiny. Směs byla ochlazena, zředěna ledovou vodou a produkt byl oddělen na centrifuze. Pevná látka byla dvakrát promyta vodou a sušena ve vakuu při 65 ^ŮC, za poskytnutí thiolu (7,34 g). Hmotnostní spektrometrie (M-H) 1424. 'H NMR (dmso D₆): δ 2,52 (m. 8H). 3,20 (d. 8H), 3,35 (m, 1611), 6,65 (t, 811). 7,75 (t, 8H), 5,0 (s, 8H).

- 16CZ 298206 B6

B: 6-Per-dcoxy-6-/7er(2-sulfoethyl)thio-y-cyklodextrin. sodná sul

Výše získaný per-ihiol (1 g), sodná sul kyseliny 2-bromethansulfonovc (1.42 g). uhličitan cezný 5 (2,2 g) a dimethylformamid (10 ml) byly míchány a zahřívány přes noc při 64 °C. Většina rozpouštědla byla odpařena ve vakuu a zbytek byl rozpuštěn ve vodě. Byt přidán roztok hydrogenuhličitanu sodného (5 % hmotnostních. 5 ml) a roztok byl třikrát dialyzován s vodou. Tento roztok by! odpařen do sucha a zbytek byl rozpuštěn v roztoku hydrogenuhličitanu sodného (10 ml), dialyzován a odpařen jako dříve. Tento postup byl opakován, získaná pevná látka byla 10 rozpuštěna v malém množství vody a odpařena do sucha za poskytnutí sloučeniny uvedené v názvu (1.18 g). 'HNMR (D.O): 8 3.9 (m. 24H). 3.2 (m. 2411). 3.55 -3.65 (ni. I6H). 3.9 (m. 811).

4.05 (m. 811). 5.15 (s.8H) i? Příklad 18

6-/’er-deoxy-6-/?ťr(2,2 dí( hydroxy methy 1)—3—hydroxypropyl)tliio—γ—cyklodcxtrín

P^-ó-deoxy-per-ó-thio-y-cyklodextrin (500 mg: příklad 17). 3-brom-2,2-dihydroxymcthyl20 propanol (670 mg), uhličitan cezný (550 mg) a dimethylformamid (10 ml) byly zahřívány a míchány 35 dnů při 65 °C, dokud nebyla analýzou LCMS prokázána konverze na požadovaný produkt. Směs byla odpařena do sucha, rozpuštěna ve vodě, dialyzována proti vodě, odpařena na malý objem a vy srážena acetonem. Sušení ve vakuu poskytlo sloučeninu uvedenou v názvu (550 mg). Hmotnostní spektroskopie PIA (Μ-II) 2369. 'HNMR (DjO): δ 2.84 (ηι_Ί I6H). 3,15 25 (m, 8H). 3,24 (m, 8H), 3,69 (s, 64H). 3,85 - 4.19 (m, 1611). 5,25 (s, 8H).

Příklad 19

6-Per-deoxy - 6-per(3-(tetrazol-5-yI)pvopyl)thio—γ—cyklodcxtrin, sodná sul

Per-6 deoxy-/?e/--6-thio-y-cyklodextnn (I g). 4-brombutyronitril (1 g). uhličitan cezný (1 g) a dimethylformamid (10 ml) byly společně míchány při 60 °C přes víkend. Směs byla ochlazena, byla přidána voda a sraženina byla oddělena na centrifuze. Po promytí a usušení byl získán 35 per-butyronitril (1,4 g). Tento produkt (1 g). azid sodný (1,3 g), Iriethylaminhydrochlorid (2,8 g)

- 17CZ 298206 Β6 a dimethylformamid (13 ml) byly společné míchány a zahřívány 7 dnu při 100 ^DC. Směs byla ochlazena, zředěna vodou, okyselena a vy srážená látka byla odfiltrována. Tento materiál byl promyt vodou, sonikován s mcthanolcm. oddělen na centrifuze, sušen a rozpuštěn v roztoku hydroxidu sodného (M, 10 ml), zfiltrován a dialyzován až do dosažení neutrální reakce. Získaný roztok byl odpařen do sucha za poskytnutí v názvu uvedené sloučeniny (600 mg). Hmotnostní spektrometrie (M-2H) 1152,8. ‘H NMR (D₂O): o 1.95 (m. 1611). 2,55 (m, 1611), 2,85 (m, 24H), 3.05 (d. 8H), 3.5 (m. 811), 3,6 (m. 811). 3,9 (m. 16H), 5.06 (s, 8H).

Příklad 20

Reverzace neuromuskulární blokády u anestetizováných morčat in vivo

Samci morčat Dunkin-Hartley (tělesná hmotnost; 600 až 900 g) byli anestetizováni i.p. podáním 10 mg/kg pentobarbitonu a 1000 mg/kg urethanu. Po tracheotomii byla zvířata uměle ventilována použitím přístroje Harvard smáli animal ventilátor. Do karotidy byl umístěn katétr pro kontinuální monitorování tepenného krevního tlaku a odběr vzorků krve na analýzu plynu v krvi. Od signálu tlaku krve byla odvozena srdeční frekvence. Byl stimulován sciatický nerv (pravoúhlé pulzy trvání 0,5 ms v intervalech 10 s (0.1 Hz) při supramaxdimálním napětí, s použitím přístroje Grass S88 Stimulator) a byla měřena síla kontrakcí m. gastrocnemius použitím převodníku Grass FT03 forcedísplacement transducer. Kontrakce, krevní tlak a srdeční frekvence byly zaznamenávány na vícekanálovém zapisovači Grass 7D rccordcr. Katctry byly umístěny v oboujugulárních žílách. Jeden katétr byl použit pro kontinuální infuz.t neuromuskulámé blokujícího prostředku. Rychlost infůze neuromuskulárního prostředku byla zvyšována až do získání rovnovážného bloku 85 až 90 %. Druhý katétr byl použit pro podávání zvyšujících sc dávek reverzačního prostředku. V průběhu kontinuální infůze neuromuskulárně blokujícího prostředku byly podávány jednotlivé dávky se zvyšující se koncentrací reverzačního prostředku. Na konci experimentu byla vynesena naměřená síla svalových kontrakcí proti koncentraci reverzačního prostředku a s použitím technik regresní analýzy byla vypočtena koncentrace pro 50% reverzaci.

Výsledky pro reverzaci ncuromuskulamího bloku indukovaného svalovým relaxans rokuroniumbromidem (Roc) prostřednictvím derivátů 6-merkaptocykIodextrinu z příkladů 1 až 19 jsou uvedeny v tabulce 1. Pro porovnání jsou rovněž zahrnuty reverzační aktivity výchozích sloučenin β cyklodexlrinu a γ-cyklodcxtrinu.

- 18CZ 298206 B6

Tabulka I

Dávka (ED50, pmol.kg'¹), která poskytne 50% reverzaci ustáleného neuromuskuJárního bloku u anestetizovaných morčat a koncentrace při maximální reverzaci.

Sloučenina	ED₆o pmol.kg*¹	% max. reverzace při konc. (pmol.kg'¹)

γ-cyklodextrin (γ-CDj	4	104 (47)
β-cyklodextrin (β-CD)	20	93 (113)
6-mono-deoxy-6-mono-(4-karboxyfer»yl)thio-y-cyklodextrin, sodná sůl (příklad 1)	0,94	102 (8,0)
6-mono-deoxy-6-mono-(2-karboxyfenyl)thio-y-cyklodextrir (příklad 2)	1,30	93 (11)
6-per-deoxy“6-per-(3-karboxyfenyl)thio-y-cyklodextrin (příklad 3)	0,28	102 (1,28)
6-per-deoxy-6-pe/‘“(2-karboxyethyl)thio-Y-cyklodextrin, sodná sůl (příklad 4)	0.09	97 (0,53)
6-per-deoxy-6-per-(5‘karboxypentyl)thio-v-cykladextrin, sodná sůl (příklad 5)	0,74	78 (2,5)
6-per-deoxy-6-per-(3-karboxypropyl)thiO’7’Cyklodextrin, sodná sůl (příklad 6)	0,09	108 (0,48)
S-per-deoxy-G-per-karboxymethyithio-y-cyklodextrin, sodná sůl (příklad 7)	0.21	88 (1,92)
6-per-deoxy-6-per-(4-karboxyfenyí)thio-y<yklodextrin_:sodná sůl (příklad 8)	0,10	95 (0,48)
6-pa/^r-deoxy-6-per-(4-karboxyfenylmethyl)thio-Y- cykiodextrin, sodná sůl (přiklad 9)	0,13	100 (0,50)
S-per-deoxy-6-per-(3-amidopropy!)thio-y-cyklodextrin (příklad 10)	0,57	94 (33)

- 19CZ 298206 B6

Sloučenina	ED_5ů pmol.kg'¹	% max. reverzace při konc. (pmol.kg’¹)
6-per-deoxy-6-per-(5-hydroxy-3-oxa-pentyl)thio-vcyklodextrin (přiklad 11)	0,47	92 (2,1)
6’per-deoxy-6-per-[(2(2-karboxybenzoyl)amino)ethyl]-thio-γ-cyklodextrin, sodná sůl (příklad 12)	0,085	95 (0,48)
6-per-deoxy-6-per-(2-hydroxyethyl)thio-Y-cyklodextrin (příklad 13)	0,20	96 (2,0)
6-per-deoxy-6-per-(N-methylamidomethyl)thio-ycyklodextrin (příklad 14)	1,54	102 (7,3)
6-per-deoxy-6-per-(2-<arboxypropy!)-t'TOy-cyklodextnn. sodná sůl (přiklad 15)	0,10	103 (0,48)
6-per-deoxy-6-per-(3-karboxypropyí)thio-p-cyklodextrin_tsodná sůl (příklad 16}	0,5	100 (3,2)
6'per-deoxy“6-per-(2-sulfoethyl)thío-Y-cyklodextrin, sodná sůl (příklad 17)	0,055	106 (1,7)
6-per-deoxy-6-per“(2,2-di(hydroxymethyl)-3-hydroxy- -propyl)thio-y-cyklodextrin (příklad 18)	2,9	63 (4,9)
6-per-deoxy-6-per’(3-(tetrazol-5-yl)propyl)thio-Y- -cyklodextrin, sodná sůl (příklad 19)	0,22	109 (1,2)

Claims

1. Derivát 6-merkaptocyklodextrinu obecného vzorce I

Vzorec I kde m je 0 az 7 a n jc 1 až 8 a m + n 7 nebo 8;

R je (C( (Jalkvlen, popřípadě substituovaný 1 až 3 skupinami OH, nebo (CH-ty fenylen(CH₂)_p-:

o a p jsou nezávisle 0 až 4:

15 X je COOH, CONHRj, NHCOR₂, S()_?OH, PO(OH)₂, O(CH₂-CH₂-O)₍-H, OH nebo letrazol-5-yl;

Ri je H nebo (C_t ýtyalkyl;

20 R₂ je karboxyfcnyl:

q je I až 3;

nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli, s vyloučením následujících sloučenin:

6-per-deoxy-6-per-(2-hydroxyethylthio)-P-cyklodcxtrin;

6-mono-dcoxy-6 mono—(2—hydroxyethylthio)—[3—cyklodextrin;

.to 6-/w’-deoxy-6-per-(2~hydroxyethyllhio) -γ-cyklodextrin;

ó-per-dcoxy-ó-per (karboxymethylthio)-p-cyklodextrin;

6-mono-deoxy-6-mono-(karboxymcthylthio)-p~cyklodextrin:

6A,6B-didcoxy- 6Λ.6Β bis[(o-karboxyfenyl)thio]-[3-cyklodextrin:

6A.6B dideoxy-6A,6B-bis(karboxymethylthiol)-3-cyklodextrin; a

40 6-per-deoxy-6 -per (2,3-dihydroxypropylthio)-[3-cyklodextrin.

2. Derivát 6-merkaptocyklodextrinu podle nároku 1, kde R, m a n jsou definovány jako v nároku 1 a X jc COOH nebo SO₂OII; nebo jeho farmaceuticky přijatelná sůl.

3. Derivát 6- merkaptocyklodextrinu podle nároku 1. kde m je 0; n je 81 R je (C, ₆)-alkylen nebo (CHak-fenylen-fCHiJp: o a p jsou nezávisle 0 až

4: a X je COOII nebo SO₂OH: nebo jeho farmaceuticky přijatelná sul.

5 4. Derivát 6-merkaptocyklodextrinu podle některého z nároku 1 až 3, kterým je:

6-pcv-deoxy -6-per- (2-karboxyethyljthio-v-cyklodextrim

6-/?ťr-dcoxy-6-/?ťr-(3-karboxy propyl )thio-'f-cyklodextrin;

6-/?er-deoxy-6-/?ď/H4-karboxyfenyl)thio-7-cyklodextrin;

6-per-deoxy-6-/?er-(4-karboxyfcnylmethyl)thio γ cyklodextrin;

15 6-per-deoxy 6-/?t'r--(2-karboxypropyIjthio-y-cyklodextrin; a

6-/?er-deoxy-6-pťr-42-sulfoethy I )thio—γ—cy klodextrin;

nebo jeho farmaceuticky přijatelná sůl.

5. Derivát 6-merkaptocyklodextrinu obecného vzorce 1 podle nároku I pro použití jako léčivo.

6. Použití derivátu 6-merkaptocyklodextrinu obecného vzorce I podle nároku 1 pro výrobu farmaceutického prostředku pro reverzaci neuromusku farního bloku indukovaného léčivy.

7. Kit pro dosažení neuromuskulárního bloku a jeho reverzacc, v y z n a č u j í c í sc tím. že zahrnuje (a) neuromuskulárně blokující prostředek: a (b) derivát 6-mcrkaptocyklodextrinu obecného vzorce 1 podle nároku 1.

30

8. Kit podle nároku 7, v y z n a č u j i c i se t í m , že neuromuskulárně blokující prostředek je zvolený ze skupiny rokuronium, vek uroní um. pankuronium. rapakuronium. niivakurium. (cis)atrakurium, tubokurarin a suxamethonium.

9. Kit podle nároku 7. vyznačuj ící se t í m , žc neuromuskulárně blokujícím prostřed35 kem j e rokuron iuni.

10. farmaceutický prostředek obsahující derivát 6-merkaptocyklodextrinu obecného vzorce I

Vzorec I kde ni je 0 až 7 a n je 1 až 8 a m + n = 7 nebo 8;

R je (C| fjalkylen. popřípadě substituovaný 1 až 3 skupinami OH. nebo (CHA-fenvlen(CH₂)_p-;

o a p jsou nezávisle 0 až 4;

X je COOH. CONHRj. NHCOR₂. SO₂OII. PO(OH)₂. O(CH₂ CH-Oty-H. OH nebo tetrazol5 5-yl:

Ri je H nebo (Ci alkyk

R₂ je karboxyfenyk o

q je 1 až 3;

nebo jeho farmaceuticky přijatelnou sůl spolu s farmaceuticky přijatelnými pomocnými látkami.