CZ20021814A3

CZ20021814A3 - Deriváty 6-merkaptocyklodextrinu a farmaceutický prostředek

Info

Publication number: CZ20021814A3
Application number: CZ20021814A
Authority: CZ
Inventors: Mingqiang Zhang; Ronald Palin; David Jonathan Bennet
Original assignee: Akzo Nobel N. V.
Priority date: 1999-11-29
Filing date: 2000-11-23
Publication date: 2002-08-14
Also published as: BE2008C047I2; DK1259550T3; BRPI0015947B8; LU91501I2; EP1259550A1; US20040029833A1; DE122008000068I2; SK7262002A3; USRE44733E1; JP4563972B2; PL203012B1; IL149423A0; SK286282B6; DE60017947T2; FR08C0052I1; AU776536B2; HUP0203755A2; CY2008018I2; WO2001040316A1; ZA200203538B

Description

Deriváty 6-merkaptocyklodextrinu a farmaceutický prostředek

Oblast techniky

Předkládaný vynález se týká derivátů 6-merkaptocyklodextrinu, jejich použití pro výrobu farmaceutického prostředku pro reverzaci (odvrácení) neuromuskulárního bloku indukovaného léčivy a soupravy pro poskytnutí neuromuskulárního bloku a jeho reverzaci.

Dosavadní stav techniky

Neuromuskulárně blokující látky (neuromuscular blocking agent, (NMBA, nazývané také svalová relaxans) se rutinně používají při provádění anestézie pro umožnění endotracheální intubace a pro dosažení chirurgického přístupu do tělních dutin, zvláště do břicha a hrudníku, bez překážek způsobených vůlí ovládanými nebo reflexními svalovými pohyby. Látky NMBA se také používají při péči o kriticky nemocné pacienty s intenzívní terapií pro umožnění spolupráce s mechanickou ventilací v případech, kdy se ukázaly jako nedostatečné samotné zklidnění a analgézie, a pro zabránění prudkých pohybů svalů spojených s léčbou elektrošoky.

Na základě mechanismu působení se látky NMBA dělí do dvou kategorií: depolarizující a nedepolarizující. Depolarizující neuromuskulárně blokující látky se vážou na nikotinacetylcholinové receptory (nicotinic acetylcholin receptors, nAChR) v neuromuskulárním spojení podobným způsobem jako endogenní neuropřenašeč acetylcholin. Tyto látky stimulují počáteční otevření iontového kanálu za vzniku kontrakcí známých jako fascikulace. Protože se však tato léčiva pouze relativně pomalu rozkládají cholinesterázovými enzymy ve srovnání s velmi rychlou hydrolýzou • · • · · · acetylcholinu acetylcholinesterázami, vážou se mnohem déle než acetylcholin, což způsobí přetrvávající depolarizaci koncové ploténky a tím neuromuskulární blok. Nejlepším známým příkladem depolarizující látky NMBA je sukcinylcholin (suxamethonium).

Nedepolarizující neuromuskulárně blokující látky soutěží s acetylcholinem o vazbu na svalové receptory nAChR, ale na rozdíl od depolarizujících látek NMBA neaktivují iontový kanál. Blokují aktivaci kanálu acetylcholinem a tím zabrání depolarizaci buněčné membrány, a v důsledku toho dojde k ochabnutí svalů. Většina klinicky používaných látek NMBA patří k nedepolarizujícím. Patří sem tubokurarin, atrakurium, (cis)atrakurium, mivakurium, pankuronium, vekuronium, rokuronium a rapakuronium (Org 9487).

Na konci chirurgického zákroku nebo období intenzívní péče se pacientovi často podává látka s reverzačními účinky na NMBA, aby se usnadnilo obnovení svalové funkce. Většina běžně používaných reverzačních látek jsou inhibitory acetylcholinesterázy (AChE), jako je neostigmin, edrofonium a pyridostigmin. Protože tato léčiva působí mechanismem zvýšení hladiny acetylcholinu na neuromuskulárním spojení inhibicí rozkladu acetylcholinu, nejsou vhodná pro reverzaci depolarizujících NMBA jako je sukcinylcholin. Použití inhibitorů AChE jako reverzačních látek vede k problémům se selektivitou, protože těmito látkami je zesilován neuronální přenos do všech synapsí (jak somatických, tak i autonomních), při kterém se účastní neuronální přenašeč acetylcholin. Tato neselektivita může vést k mnoha vedlejším účinkům způsobeným neselektivní aktivací muskarinových a nikotinacetylcholinových receptorů včetně bradykardie, snížení krevního tlaku, zvýšeného slinění, nevolnosti, zvracení, břišních křečí, průjmu a zúžení bronchů. Proto mohou být v praxi tyto prostředky použity pouze po nebo společně s podáním atropinu (nebo glykopyrrolátu) pro antagonizaci muskarinových účinků acetylcholinu na muskarinových receptorech v autonomních parasympatických neuroefektorových spojeních (například v srdci). Použití antagonisty

- 3 • 9 ···· ·9 ·· • * · · ♦ 9 · • ···· · · · • · · 9 · · 9 muskarinacetylcholinového receptoru (mAChR) jako je atropin způsobí řadu vedlejších účinků, například tachykardie, sucho v ústech, rozmazané vidění, obtíže s vyprazdňováním močového měchýře a dále může ovlivnit srdeční vodivost.

Další problém s anticholinesterázovými látkami spočívá v tom, že aby bylo možno dosáhnout rychlého zotavení neuromuskulární funkce, musí být přítomna zbytková neuromuskulární aktivita (>10 % záškubové aktivity). Příležitostně, buď v důsledku přecitlivělosti pacienta nebo náhodného předávkování, může podání látek NMBA io způsobit úplné a přetrvávající blokování neuromuskulární funkce („hluboký blok“). V součastnosti neexistuje žádné spolehlivé léčení pro odvrácení takového „hlubokého bloku“. Pokusy předejít „hlubokému bloku“ vysokými dávkami inhibitorů AChE vede k riziku indukce „cholinergní krize“, jejímž důsledkem je celá řada symptomů souvisejících se zvýšenou stimulací nikotinových a muskarinových receptorů.

V evropské patentové přihlášce 99,306,411 (AKZO NOBEL N.V.) bylo popsáno použití chemických chelatačních látek (nebo sekvestračních látek) jako reverzačních prostředků. Byly popsány chemické chelatační látky schopné vytvořit komplex host - hostitel použitelné pro výrobu farmaceutického prostředku pro reverzaci neuromuskulárního bloku indukovaného léčivy. Použití chemických chelatačních látek jako reverzačních prostředků pro látky NMBA má výhodu v tom, že tyto látky účinkují při reverzaci účinku jak depolarizujících, tak nedepolarizujících látek NMBA. Jejich použití nezvyšuje hladinu acetylcholinu, a proto vyvolávají méně vedlejších účinků a žádné vedlejší účinky spojené se stimulací muskarinových a nikotinových receptorů, ke které dochází s reverzačními prostředky působícími na AChE. Navíc není zapotřebí kombinovaného použití inhibitoru AChE a antagonisty mAChR (např. atropinu), zatímco chemické chelatační látky mohou být dále bezpečně používány pro reverzaci „hlubokého bloku“. Příklady těchto chemických chelatačních • · · ♦ * látek jak se popisují v EP 99,306,411 byly zvoleny z různých tříd většinou cyklických organických sloučenin, které jsou známé pro jejich schopnost vytvářet ve vodném roztoku inkluzní komplexy s různými organickými sloučeninami, například cyklické oligosacharidy, cyklofany, cyklické peptidy, kalixareny, crown ethery a azacrown ethery.

Cyklodextriny,

třída cyklických molekul obsahujících šest nebo více a-Dglukopyranózových jednotek navázaných v polohách 1,4 cc-vazbami jako v amylóze, a jejich deriváty, byly identifikovány v EP 99,306,411 jako zvláště užitečné při reverzaci mnoha běžně používaných neuromuskulárních blokujících látek nebo svalových relaxans jako je rokuronium, pankuronium, vekuronium, rapakuronium, mivakurium, atrakurium, (cis)atrakurium, sukcinylcholin a tubokurarin.

Podstata vynálezu

Nyní bylo zjištěno, že vysoce účinné in vivo při reverzaci působení neuromuskulárně blokujících látek jsou deriváty 6merkaptocyklodextrinu obecného vzorce I • · · ch₂oh

Vzorec m je O až 7 a n je 1 až 8 a m + n = 7 nebo 8;

R je (Ci-ejalkylen, popřípadě substituovaný 1 nebo (CH2)o-fenylen-(CH₂)p-; io o a p jsou nezávisle 0 až 4;

X je COOH, CONHRi, NHCOR2, SO2OH, PO(OH)₂, O(CH₂-CH₂-O)_q-H, OH nebo tetrazol-5-yl;

R-ι je H nebo (Ci_₃)-alkyl;

R₂ je karboxyfenyl;

q je 1 až 3;

nebo jejich farmaceuticky přijatelné soli.

Ochrana jako taková se nežádá pro následující deriváty 6merkaptocyklodextrinu:

6-per-deoxy-6-per-(2-hydroxyethylthio)-p-cyklodextrin a

6-per-deoxy-6-per-(2-hydroxyethylthio)-y-cyklodextrin, které se popisují v Ling, C. a Darcy, R. (J. Chem. Soc. Chem. Comm., 1993, (2), 203 - 205);

6-mono-deoxy-6-mono-(2-hydroxyethylthio)-p-cyklodextrin, který se popisuje v Fujita, K. a další (Tetr. Letters 21, 1541 - 1544, 1980);

6-per-deoxy-6-per-(karboxymethylthio)-3-cyklodextrin, který se popisuje v Guillo, F. a další (Bull. Chem. Soc. Chim. Fr. 132 (8), 857 866, 1995);

až 3 skupinami OH, • · · ·

- 6 6-mono-deoxy-6-mono-(karboxymethylthio)-p-cyklodextrin, který se popisuje v Akiie, T. a další (Chem. Lett., 1994 (6), 1089 - 1092);

6A,6B-dideoxy-6A,6B-bis[(o-karboxyfenyl)thio]-p-cyklodextrin a

6A,6B-dideoxy-6A,6B-bis(karboxymethylthiol)-p-cyklodextrin, které se popisují v Tubashi, I. a další (J. Am. Chem. Soc., 108, 4514 4518, 1986; a

6-per-deoxy-6-per-(2,3-dihydroxypropylthio)-p-cyklodextrin, který se popisuje v Baer, Η. H. a Santoyo-Gonzalez, F. (Karb. Res., 280, 315 - 321, 1996).

io Tyto deriváty 6-merkaptocyklodextrinu z dosavadního stavu techniky byly v každém případě popsány v souvislosti s odlišnými použitími.

Výše uvedené deriváty 6-merkaptocyklodextrinu podle dosavadního stavu techniky však spadají do hlavního provedení předkládaného vynálezu, které se týká použití derivátu 6merkaptocyklodextrinu obecného vzorce I pro výrobu farmaceutického prostředku pro reverzaci neuromuskulárního bloku indukovaného léčivy.

Vynález se v jednom provedení týká derivátů 620 merkaptocyklodextrinu obecného vzorce I, kde m je0až7anje1až8am + n = 7 nebo 8;

X je COOH, OH nebo CONHCHs;

R je (Ci-6)-alkylen nebo (CH2)₀-fenylen-(CH₂)_p;

o a p jsou nezávisle 0 až 4;

nebo jejich farmaceuticky přijatelné soli, s vyloučením následujících látek:

6-per-deoxy-6-per-(2-hydroxyethylthio)-p-cyklodextrin;

6-mono-deoxy-6-mono-(2-hydroxyethylthio)-p-cyklodextrin;

• · *

6-per-deoxy-6-per-(2-hydroxyethylthio)-y-cyklodextrin;

6-per-deoxy-6-per-(karboxymethylthio)-3-cyklodextrin;

6-mono-deoxy-6-mono-(karboxymethylthio)-3-cyklodextrin;

6A,6B-dideoxy-6A,6B-bis[(o-karboxyfenyl)thio]-p-cyklodextrin; a

6A,6B-dideoxy-6A,6B-bis(karboxymethylthiol)-p-cyklodextrin.

Termín (C^jalkylen, jak se používá v definici vzorce I, znamená dvojvazný uhlíkatý radikál s přímým nebo rozvětveným řetězcem obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, jako je methylen, ethylen(1,2-ethandiyl), propylen(1-methyl-1,2-ethandiyl), 2-methyl-1,2io -ethandiyl, 2,2-dimethyl-1,2-ethandiyl, 1,3-propandiyl, 1,4-butandiyl,

1,5-pentandiyl a 1,6-hexandiyl.

Termín fenylen znamená dvojvaznou skupinu, jejíž volné valence mohou být umístěny ve vzájemné poloze buď ortho, meta nebo para.

Termín (Ci_₃)alkyl znamená alkylovou skupinu s rozvětveným nebo přímým řetězcem, obsahující 1 až 3 atomy uhlíku, tj. methyl, ethyl, propyl a isopropyl.

Termín karboxyfenyl znamená fenylovou skupinu, která je substituována v jakékoli z poloh ortho, meta nebo para karboxylovou skupinou. Výhodná je skupina ortho-karboxyfenyl.

Sloučeniny vzorce I, kde n + m je 7, jsou deriváty βcyklodextrinu, sloučeniny, kde n + m je 8, jsou odvozeny od ycyklodextrinu.

Výhodné jsou deriváty 6-merkaptocyklodextrinu vzorce I, kde X 25 je COOH, nebo jejich farmaceuticky přijatelné soli.

Výhodnější jsou deriváty 6-merkapto-y-cyklodextrinu vzorce I, kde n je 8, R je (Ci_6)-alkylen a X je COOH.

Zvláště výhodné deriváty 6-merkaptocyklodextrinu podle vynálezu jsou následující látky:

6-per-deoxy-6-per-(2-karboxyethyl)thio-y-cyklodextrin;

6-per-deoxy-6-per-(3-karboxypropyl)thio-y-cyklodextrin;

6-per-deoxy-6-per-(4-karboxyfenyl)thio-y-cyklodextrin;

6-per-deoxy-6-per-(4-karboxyfenylmethyl)thio-y-cyklodextrin; 6-per-deoxy-6-per-(2-karboxypropyl)thio-y-cyklodextrin; a 6-per-deoxy-6-per-(2-sulfoethyl)thio-y-cyklodextrin.

Deriváty 6-merkaptocykiodextrinu vzorce I mohou být připraveny reakcí C6-aktivovaného cyklodextrinového derivátu vzorce II s alkylthiolovým, arylalkylthiolovým nebo arylthiolovým derivátem odpovídajícím vzorci H-S-R-X, kde R a X mají stejný význam jako bylo definováno výše, v přítomnosti anorganické nebo organické báze.

Vzorec II, kde m je 0 až 7, n je 1 až 8, m + n = 7 nebo 8 a Y znamená odštěpitelnou skupinu, kterou může být halogenid (Cl, Br nebo I), esterová funkční skupina kyseliny sírové nebo sulfonové, jako je tosylát, a naftalensulfonát nebo triflát.

Deriváty 6-merkaptocyklodextrinu vzorce I mohou být také připraveny reakcí derivátu 6-thiol-y- nebo -β-cyklodextrinu vzorce III s alkylačním činidlem, např. alkylhalogenidem, arylalkylhalogenidem, alkylsulfonátem, arylalkylsulfonátem, odpovídajícím vzorci Y-X-R, kde

9 9 99 ·

9 • 9 9

Π ········ 999

- y - 9 99999 · 9 9 · · · · * · ·

Υ, X a R mají významy definované výše, nebo s reakčním činidlem obsahujícím dvojnou vazbu, jako je například vinylalkan, akrylát apod,, nebo epoxidem v přítomnosti anorganické nebo organické báze.

io Obecný vzorec III, kde m je 0 až 7, n je 1 až 8, m + n = 7 nebo

8.

Alternativní způsoby syntézy pro přípravu derivátů 6merkaptocyklodextrinu podle vynálezu jsou odborníkům v oboru známé. Chemické reakce týkající se derivatizace cyklodextrinů jsou dobře dokumentované (viz například: Comprehensive Supramolecular Chemistry, díly 1-11, Atwood J. L., Davies J. E. D., MacNicol D. D., Vogtle F., ed; Elsevier Science Ltd., Oxford, UK, 1996).

Farmaceuticky přijatelné soli derivátů 6-merkaptocyklodextrinu vzorce I, kde X znamená skupinu karboxylové kyseliny COOH, skupinu

2o sulfonové kyseliny SO2OH, skupinu fosfonové kyseliny PO(OH)2 nebo skupinu tetrazol-5-yl, mohou být zísány působením organické báze nebo minerální báze, jako je hydroxid sodný, draselný nebo lithný na kyselinu.

Deriváty 6-merkaptocyklodextrinu nebo jejich farmaceuticky přijatelné soli nebo solváty pro použití v rámci předkládaného vynálezu se podávají parenterálně. Injekční cesta může být intravenózní, subkutánní, intradermální, intramuskulární nebo intraarteriáin i. Výhodná je intravenózní cesta. Přesná použitá dávka bude nutně záviset na potřebách jednotlivého pacienta, kterému se farmaceutický

- 10 • * · prostředek podává, stupně svalové aktivity, která má být obnovena, a úsudku specialisty na anestézii/péči v kritickém stavu. Je uvažována také mimotělní aplikace chemických chelatačních látek podle vynálezu, například míšením chemické chelatační látky s krví při dialýze nebo při plasmaferéze.

V dalším provedení se vynález týká kitu pro dosažení neuromuskulárního bloku a jeho reverzace, který obsahuje (a) neuromuskulárně blokující prostředek, a (b) derivát 6merkaptocyklodextrinu obecného vzorce I, schopný vytvořit komplex io host - hostitel s neuromuskulárně blokujícím prostředkem. Kitem podle vynálezu se míní prostředek, který obsahuje oddělené farmaceutické prostředky, tj. neuromuskulárně blokující prostředek a derivát 6merkaptocyklodextrinu vzorce I, tj. reverzační prostředek. Složky takového kitu jsou určeny pro postupné použití, tj. v případě potřeby se pacientovi podá neuromuskulárně blokující prostředek, a potom se v čase, kdy je požadováno obnovení svalové funkce, podá reverzační prostředek, tj. derivát 6-merkaptocyklodextrinu podle předkládaného vynálezu.

Výhodný kit podle předkládaného vynálezu obsahuje derivát 620 merkaptocyklodextrinu vzorce I a neuromuskulárně blokující prostředek, který je zvolený ze skupiny rokuronium, vekuronium, pankuronium, rapakuronium, mivakurium, atrakurium, (cis)atrakurium, tubokurarin a suxamethonium. Zvláště výhodný kit podle vynálezu obsahuje jako neuromuskulárně blokující prostředek rokuronium.

Ve směsi s farmaceuticky vhodnými pomocnými látkami a farmaceuticky vhodnými kapalinami, například jak se popisuje ve standardní referenční příručce Gennaro a další, Remingtonů Pharmaceutical Sciences, (18. vydání, Mack Publishing Company, 1990, část 8: Pharmaceutical Preparations and Their Manufacture; viz zvláště kapitolu 84: „Parenteral preparations“, str. 1545 - 1569; a kapitolu 85: „Intravenous admixtures“, str. 1570 - 1580) mohou být ·» ··* · o• * · ·

- 11 99 * * · · • · · • ··· ·· ©«·· ** *· » Ο · * · * · » · * · · · · · » · 9 9 9 · · » 9 9 9 9 9

9 9 99 9 9 99 9 · deriváty 6-merkaptocyklodextrinu aplikovány ve formě roztoku, například pro použití ve formě injekčního preparátu.

Farmaceutický prostředek může být alternativně předkládán v zásobnících pro jednotkovou dávku nebo větší počet dávek, jako jsou například uzavřené lahvičky a ampule, a může být skladován v lyofilizovaném stavu, který vyžaduje před použitím pouze přidání sterilního kapalného nosiče, například vody.

Vynález dále zahrnuje farmaceutický prostředek jak bylo popsáno výše, v kombinaci s příbalovým materiálem vhodným pro io uvedený prostředek, kde tento příbalový materiál obsahuje instrukce pro použití prostředku, jak bylo popsáno výše.

Vynález je ilustrován na následujících příkladech.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

6-Mono-deoxv-6-mono-(4-karboxyfenvl)thio-Y-cvklodextrin, sodná sůl

Do kulové baňky obsahující pyridin (120 ml) byl přidán suchý γ-cyklodextrin (2,0 g, 1,54 mmol) pod dusíkem při laboratorní teplotě.

Po rozpuštění byl přidán roztok 2-nanaftalensulfonylchloridu (1,05 g, 4,64 mmol) v pyridinu (20 ml) a směs byla míchána 24 hod. Reakce

- 12 40 · • 4 4 ··>

• 444» • 4

4 4 4 4

44«

4 4

00 i :· :

···

0 0

0094 byla ukončena vodou (50 ml) a byla odpařena do sucha za poskytnutí surového 6-mono-O-(2’-naftalensulfonyl)-y-cyklodextrinu.

Hydrid sodný (0,38g, 15,83 mmol) byl suspendován v suchém dimethylformamidu (20 ml). Potom byla k suspenzi přidána kyselina 4s merkaptobenzoová (0,7g, 4,55 mmol) a získaná směs byla míchána 20 min. Ke směsi byl přidán γ-cyklodextrinnosylát (3,2g, 2,12 mmol) a reakční směs byla zahřívána na 100 °C 90 min. Po ochlazení byl přidán aceton pro vysrážení pevné látky, která byla znovu vysrážená ze směsi voda/aceton. Látka byla potom rozpuštěna ve vodě (20 ml), io pH bylo upraveno na 7,0 přidáním 2N kyseliny chlorovodíková a potom byla provedena chromatografie na koloně Sephadex DEAE A-25. Vhodné frakce byly spojeny, dialyzovány, potom dvakrát vysráženy ze směsi voda/aceton, za získání 400 mg sloučeniny uvedené v názvu. ¹H NMR v DMSO δ 7,4 až 7,8 (ArH), 5,0 až 5,2 (8 H), 4,13 (1 H), 3,7 až 4,0 (29 H), 3,7 až 3,4 (17 H), 3,25 (1 H) ppm. ¹³C NMR v DMSO δ 129,9 a 127,5 (ArC), 103,3 a 102,9 (C1 a ď), 85,0 (C 4’), 81,6 (C 4),

73,8 (C 3), 73,5 (C 2), 72,2 (C 5), 70,8 (C 5’), 60,6 (C 6), 34,3 (C 6’) ppm. Elektrorozprašovací MS [M+H]⁺ = 1455,7 a [M+Na]⁺ = 1477,7.

Příklad 2

6-Mono-deoxv-6-mono-(2-karboxvfenvl)thio-Y-cyklodextrin, sodná sůl

Hydrid sodný (60% disperze v oleji, 0,18 g, 4,5 mmol) byl najednou přidán ke kyselině thiosalicylové (0,34 g, 2,2 mmol) v DMF • Φ φφφφ φ · φφφφ φφ φ φ * * φφφ • φφφφ φ φ • · φ · ·

- 13 φφφ φφ φφφφ (25 ml) a směs byla míchána při teplotě laboratoře 30 min. Ke směsi byl potom přidán surový roztok 6-mono-0-(2’-naftalensulfonyl)-y-cyklodextrinu (2,5 g, 1,45 mmol) v DMF (15 ml) a zahříván na 70 °C 24 hod. Směs byla ochlazena a reakce byla ukončena vodou (20 ml) před odpařením do sucha. Potom byla ke zbytku přidána voda a získaný roztok byl vlit do acetonu (250 ml) pro dosažení vysrážení. Získaná pevná látka byla oddělena filtrací a rozpuštěna ve vodě (10 ml) před čištěním na koloně Sephadex DEAE A-25 s elucí vodou a potom 0,2N NaOH. Frakce obsahující produkt byly spojeny a odpařeny io na nízký objem a dialyzovány (prahová hodnota molekulové hmotnosti 1000) při čtyřnásobné výměně vnější vody. Vnitřní roztok byl odpařen na nízký objem a vlit do acetonu (100 ml). Pevná látka byla oddělena filtrací a sušena ve vakuu při 70 °C za získání sloučeniny uvedené v názvu (235 mg) jako bílé pevné látky. ¹H NMR (D₂O) δ 7,50 - 7,10 (4

H, m, Ar-H), 5,14 (8 H, m, CyD 1-H), 4,16 (1 H, m, CyD 5-H), 3,98 3,85 (26 H, m, CyD 3,5,2,4,-H), 3,70 - 3,61 (20 H, m, CyD 2,3,4,6-H), 3,15 (1 H, m, CyD 6-H) ppm; Elektrorozprašovací MS m/z 1477,6 pro [M+Na]⁺, vypočteno pro C55H83NaO₄iS Mh = 1455,304.

Příklad 3

6-Per-deoxy-6-per-(3-karboxvfenyl)thio-Y-cvklodextrin, sodná sůl

H OH

- 14 ♦ · · • · · • · · • ···· • · • ·« ♦ · ·· ··»· • · • · ··

99

9 9 9 • · ·

9 9 9

9 9

9· 9999

Trifenylfosfin (30,1 g, 15 ekv.) byl rozpuštěn za míchání v suchém DMF (160 ml). K tomuto roztoku byl přidán jod (30,5 g, 15,6 ekv.) v průběhu 10 min, přičemž došlo k vývinu tepla. Potom byl přidán suchý γ-cyklodextrin (10 g, 7,7 mmol) a směs byla zahřívána na

70 °C 24 hod. Směs byla ponechána ochladit, byl přidán methoxid sodný (3,1 g sodíku v 50 ml methanolu) a směs byla míchána 30 min před vlitím na methanol (800 ml) a odpařením do sucha. Ke zbytku byla přidána voda (500 ml) a pevná látka byla oddělena filtrací a promyta vodou (3 x 100 ml), potom acetonem (3 x 100 ml), a sušena io ve vakuu při 70 °C za poskytnutí 6-per-deoxy-6-per-jod-Y-cyklodextrinu jako žluté pevné látky (16,2 g), která byla použita bez dalšího čištění.

K roztoku kyseliny 3-merkaptobenzoové (1,0 g, 10 ekv.) v DMF (30 ml) byl přidán 60% hydrid sodný dispergovaný v oleji (476 mg, 22 ekv.) po částech v průběhu 30 min. Směs byla ochlazena a byl přidán 6-per-deoxy-6-per-jod-y-cyklodextrin (1,4 g) v DMF (30 ml). Směs byla potom míchána při 70 °C 24 hod. Směs byla ponechána ochladit na laboratorní teplotu a reakce byla ukončena přidáním vody (20 ml), před odpařením na nízký objem. Roztok byl vlit do acetonu (500 ml) a sraženina byla oddělena filtrací, rozpuštěna ve vodě (20 ml) a dialyzována (prahová hodnota molekulové hmotnosti 1000) při čtyřnásobné výměně vnější vody. Vnitřní roztok byl odpařen na nízký objem a vlit do acetonu (250 ml). Pevná sraženina byla oddělena filtrací a sušena ve vakuu při 70 °C za získání sloučeniny uvedené v názvu (1,45 g) jako bílé pevné látky: ¹H NMR (D₂O) δ 7,77 (8 H, br s,

Ar-H), 7,55 (8 H, d, J = 6,0 Hz, Ar-H), 7,71 (16 H, m, Ar-H), 5,16 (8 H, s, CyD 1-H), 4,00 - 3,94 (16 H, m, CyD 3, 5-H), 3,58 - 3,53 (16 H, m, CyD 4, 2-H), 3,43 - 3,40 (8 H, m, CyD 6-H), 3,24 - 3,20 (8 H, m, CyD 6-H); Elektrorozprašovací m/z 1190,6 pro [M-8Na+6H]²', vypočteno pro Cio4H-io4Nag048S8 Mh ⁼ 2562,39.

9* «999 • · « 9 99

- 15 Příklad 4

6-Per-deoxv-6-per-(2-karboxvethyl)thio-Y-cvklodextrin, sodná sůl

99

9

999* · *

9 9

9 9 «9 9999

io Kyselina 3-merkaptopropionová (1,22 ml, 14,0 mmol) byla rozpuštěna v suchém DMF (45 ml) pod N₂ při teplotě laboratoře. K tomuto roztoku byl ve třech částech přidán hydrid sodný (1,23 g,

30,8 mmol, 60%) a směs byla míchána dalších 30 min. K této směsi byl potom po kapkách přidán roztok 6-per-deoxy-6-per-jod-y15 -cyklodextrinu (3,12 g, 1,40 mmol) v 45 ml suchého DMF. Po přidání byla reakční směs zahřívána na 70 °C 12 hod. Po ochlazení byla ke směsi přidána voda (10 ml) a objem byl ve vakuu snížen na 40 ml a byl přidán ethanol (250 ml), což vedlo k vysrážení. Pevná sraženina byla oddělena filtrací a dialyzována 36 hod. Objem byl potom snížen na 20 ml ve vakuu. K roztoku byl přidán ethanol, a sraženina byla oddělena filtrací a sušena za poskytnutí v názvu uvedené sloučeniny jako bílé pevné látky (1,3 g, 43%). ¹H-NMR D₂O δ 2,47 - 2,51 (m, 16H); 2,84 - 2,88 (m, 16H); 3,00 - 3,02 (t, 8H); 3,11 - 3,14 (t, 8H); 3,62 - 3,68 (m, 16H); 3,92 - 3,97 (m, 8H); 4,04 - 4,06 (m, 8H); 5,19 (m, 8H) ppm. MS FIA +iont při 2024,9 m/z.

- 16 • 0 · • · · · · » · · 0 · «« ··0· • · • •00

I • *0 ·» ·· • 0 · · ♦ · 0

0 0 0

0 0

0000

Příklad 5

6-Per-deoxv-6-per-(5-karboxypentyl)thio-Y-cyklodextrin, sodná sůl

CO₂Na io Sloučenina uvedená v názvu byla připravena podobným způsobem jak bylo popsáno pro příklad 4 reakcí kyseliny 6-merkaptohexanové (1,34 g, 0,90 mmol) s 6-per-deoxy-6-per-jod-y-cyklodextrinem. ¹H-NMR D₂O δ 1,40 (s, 16H); 1,57 - 1,64 (m, 32H); 2,17 - 2,21 (m, 16H); 2,67 - 3,00 (m, 16H); 2,85 - 2,90 (m, 8H); 3,15 15 3,20 (m, 8H); 3,52 - 3,59 (m, 8H); 3,60 - 3,63 (m, 8H); 3,87 - 3,93 (m,

16H); 5,16 (s, 8H) ppm. MS FIA +ionty při 2362,2, 2213, 2065 a 1919 m/z.

Příklad 6

6-Pe/--deoxy-6-per-(3-karboxypropyl)thio-y-cyklodextrin, sodná sůl

H OH • « · φ * 9 • · • 9 9·

- 17 • 9 · • » 9 9 • 99 *

999999 9

9 · *

9999 · ·· ···

99

9 9 9 · ♦

9 9 · 9

9999

Sloučenina uvedená v názvu byla připravena podobným způsobem jak bylo popsáno v příkladu 4, reakcí kyseliny 4merkaptomáselné (1,10 g, 0,009 mol) s 6-per-deoxy-6-per-jod-y-cyklodextrinem. ¹H-NMR D₂O δ 1,87 - 1,88 (m, 16H); 2,27 - 2,30 (m, 16H); 2,67 - 2,71 (m, 16H); 2,98 - 3,00 (m, 8H); 3,13 - 3,16 (m, 8H); 3,61 - 3,63 (m, 16H); 3,94 - 4,03 (m, 16H); 5,21 (s, 8H) ppm. MS FIA +iont při 2138,8 m/z.

Příklad 7

6-Per-deoxv-6-per-karboxvmethylthio-Y-cvklodextrin, sodná sůl

Hydrid sodný (60% disperze, 0,34g, 8,60 mmol) byl přidán k míchanému roztoku ethyl-2-merkaptoacetátu (0,92ml, 8,40 mmol) v DMF (20 ml) v atmosféře dusíku při teplotě laboratoře. Po ukončení šumění (15 min) byl do systému přidán per-Q-deoxy-per-6-\od-y-cyklodextrin (2,17g, 1,00 mmol). Po dalších 5 min byla teplota zvýšena na 70 °C a reakce byla ponechána míchat 17 hod. Po ochlazení byl DMF odstraněn ve vakuu. Byl přidán methanol (50 ml) a krémová bílá pevná látka pomalu krystalizovala z roztoku. Látka byla odfiltrována za odsávání, promyta methanolem a sušena, za poskytnutí 6-per-deoxy-6-per-karbethoxymethylthio-y-cyklodextrinu jako pevné látky (1,74 g, 82%). ÓH(d6 - dmso) 4,95 - 4,85 (8H, m, 8 x anomerní CH), 4,05 (16H, q, 8 x CH₂CH₃), 3,85 - 3,75 (8H, m), 3,60 - 18 • 4 4

4 4

4 4 • 4444 4

4

4« 4444 *

• 44·

444

44

4 4 4

4 4

4 4 « 4 44 4 4

3,50 (8Η, m), 3,40 - 3,20 (32Η, bs, 8 x CH₂SCH₂), 3,20 - 3,10 (8H, m), 2,95 - 2,85 (8H, m), 1,20 (24H, t, 8 x CH₂CH₃).

K 1M roztoku hydroxidu sodného (7 ml) byl přidán 6-per-deoxy-6-per-karbethoxymethylthio-y-cyklodextrin (1,00 g, 0,47 mmol) a reakční směs byla ponechána míchat při teplotě laboratoře. Po 18 hod byl čirý roztok dialyzován 8 hod, přičemž voda (2 I) byla vyměňována každé 2 hod. Potom byl obsah dialyzační trubice vyprázdněn do baňky a voda byla odpařena ve vakuu za poskytnutí sloučeniny uvedené v názvu jako bílé pevné látky (0,62 g, 64%), óh(D₂O) 5,21 (8H, d, 8 x io anomerní CH), 4,18 - 4,05 (8H, m), 4,00 (8H, dd), 3,78 (8H, dd), 3,70 (8H, dd), 3,40 (16H, dd), 3,20 (8H, d), 3,02 (8H, dd). 5_C(D₂O) 178,1,

101,6, 82,8, 73,0, 72,7, 71,8, 39,0, 34,1 LC/MS TOF 1889 m/z.

Příklad 8

6-Per-deoxy-6-per-(4-karboxyfenyl)thio-Y-cvklodextrin, sodná sůl

K roztoku kyseliny 4-merkaptobenzoové (856 mg) v DMF (30 ml) byl po částech přidáván 60% hydrid sodný dispergovaný v oleji (372 mg) v průběhu 30 min. Směs byla ochlazena a najednou byl přidán per-6-deoxy-per-6-brom-y-cyklodextrin (1,0 g) a směs byla míchána při 70 °C 24 hod. Směs byla ponechána ochladit na teplotu laboratoře a reakce byla ukončena vodou (20 ml) před odpařením na

Μ 9999 • · • 9 9« ·» ·

Β 9 9

9 9

9 9 9 9

9

9 9 9 9 • *

- 19 • 9

9«

9» 99

9 9 9

9 «

9 9 9 9

9 9 9 • 9 99*9 malý objem. Roztok byl vlit do ethanolu (250 ml) a sraženina byla oddělena filtrací, rozpuštěna ve vodě (20 ml) a dialyzována (prahová hodnota molekulové hmotnosti 1000) s čtyřnásobnou výměnou vnější vody. Vnitřní roztok byl odpařen na nízký objem a vlit do acetonu (250 ml). The Pevná sraženina byla oddělena filtrací a sušena ve vakuu při 70 °C za získání sloučeniny uvedení v názvu (1,2 g) jako bílé pevné látky. ¹H NMR (D₂O, 343K) δ 7,70 (16 H, d, J = 8,1 Hz, Ar-H), 7,23 (16 H, d, J = 7,3 Hz, Ar-H), 5,15 (8 H, s, CyD 1-H), 4,00 - 3,96 (16 H, m, CyD 3,5-H), 3,55 - 3,53 (24 H, m, CyD 6’,4,2-H), 3,15 (8 H, io m, CyD 6-H); MALDI-TOF m/z 2383,7 pro [M-Na₈+H₆], vypočteno pro

C₁₀4Hi04Na₈O4₈S₈ Mh ⁼ 2562,39.

Příklad 9

6-Per-deoxv-6-per-(4-karboxvmethvfenyl)thio-Y-cvklodextrin, sodná sůl

K roztoku kyseliny 4-merkaptofenyloctové (10 ekv.) v DMF (50 ml) byl po částech přidán 60% hydrid sodný v oleji (22 ekv.) v průběhu 30 min. Směs byla ochlazena a najednou byl přidán per-625 -deoxy-per-6-brom-y-cyklodextrin (1,0 g) a směs byla míchána při 70 °C 24 hod. Směs byla ponechána ochladit na laboratorní teplotu a reakce byla ukončena přidáním vody (20 mi) před odpařením na malý objem. Roztok byl potom vlit do acetonu (250 ml) a sraženina byla oddělena filtrací, suspendována ve vodě (20 ml) a dialyzována • 9

- 20 9 • 99

9 9 999 9 ** 9999 99 ·9

9 · 9 » &

9·<9 99 9 • « 9 9 9 9 • · « · 9 • 9 99« 99 9··9 (prahová hodnota molekulové hmotnosti 1000) se čtyřnásobnou výměnou vnější vody. Vnitřní roztok byl odpařen na malý objem a vlit do acetonu (250 ml). Pevná sraženina byla oddělena filtrací a sušena ve vakuu při 70 °C za získání sloučeniny uvedené v názvu (1,44 g) jako bílé pevné látky. ¹H NMR (D₂O, 343K) δ 7,15 (16 H, d, J = 8,0 Hz, Ar-H), 6,99 (16 H, d, J = 8,0 Hz, Ar-H), 4,98 (8 H, s, CyD 1-H), 3,90 3,72 (16 H, m, CyD 3,5-H), 3,51 - 3,43 (16 H, m, CyD 4,2-H), 3,28 (24 H, m, CH₂-Ar, CyD 6’-H), 3,15 - 3,10 (1 H, m, CyD 6-H); MALDI-TOF m/z 2495,8 pro [M-Na₈+H₆], vypočteno pro Cn₂Hi₂oNa₈0₄8S8 io Mh = 2674,6.

Příklad 10 e-Per-deoxv-e-jPerfS-amidopropyDthio-Y-cyklodextrin

2o Do směsi 6-per-deoxy-6-per-thio-y-cyklodextrinu (500 mg;

připravené jak je popsáno v příkladu 17) a jodidu draselného (5 mg) v DMF (10 ml) byl přidán 4-chiorbutamíd (673 mg; Fries a další, Biochemistry 1975, 14, 5233). Byl přidán uhličitan česný (1,8 g) a reakční směs byla zahřívána na 60 °C přes noc. Získaná směs byla vlita do acetonu, zfiltrována, promyta ethanolem a vodou a potom sušena ve vakuu (118 mg; 16,2 %). ¹H NMR (DMSO/D₂O) δ 4,9 (1H, s), 3,8 (1H, m), 3,6 (1H, m) 3,4 (2H, m), 3,05 (1H, m), 2,85 (1H, m),

2,2 (2H, m), 1,75 (2H, m). Elektrorozprašovací hmotnostní spektrum M-H (m/z) 2105.

·* ··»· • · · • · ··· • · · « · · ·· 191 ·» · • · 4 • · · • ···· • · ···♦ *

- 21 ·· ·· • · · ·

II i 1 · ·

III 11 1111

Příklad 11

6-Per-deoxv-6-per(5-hvdroxv-3-oxa-pentvl)thio-Y-cvklodextrin

ίο 2-(2-Merkaptoethoxy)ethanol (1,4 g, 11,6 mmol) byl rozpuštěn v DMF (20 ml) a míchán při teplotě laboratoře v atmosféře dusíku. Potom byly přidány per-6-brom-Y-cyklodextrin (2 g, 1,12 mmol) a uhličitan česný (3,2 g, 9,86 mmoí) a získaná suspenze byla míchána při 60 °C přes noc v atmosféře dusíku. Po ochlazení na laboratorní teplotu byla suspenze vlita do acetonu (200 ml) a nerozpustný materiál byl izolován filtrací, promyt acetonem (3 x) a usušen ve vakuu. Surový produkt byl rozpuštěn v deionizované vodě (20 ml) a dialyzován (10 hod). Obsah dialyzační membrány byl potom zakoncentrován ve vakuu za získání 1 g požadovaného produktu jako krémové pevné látky. ¹H NMR (D₂O, 400 MHz): δ 2,81, 3,00 (m, 24H), 3,21 - 3,31 (d, 8H), 3,49 (t, 8H), 3,55 - 3,75 (m, 56H), 3,82 (t, 8H), 3,89 (t, 8H), 5,11 (d, 8H). ESI-MS: 2175 (M-H)'

Příklad 12

6-Per-deoxv-6-perf(2(2-karboxybenzoyl)amino)ethvnthio-Y-cyklo-dextrin, sodná sůl ·

- 22 • · · · ·

Per-6-merkapto-y-cyklodextrin (1 g, 0,7 mmol; viz příklad 17) byl rozpuštěn v DMF (10 ml) a míchán při teplotě laboratoře v atmosféře dusíku. Byly přidány N-(2-bromethyl)ftalimid (1,57 g, 6,17 mmol) a uhličitan česný (2 g, 6,17 mmol) a získaná suspenze byla míchána při io 60 °C přes noc v atmosféře dusíku. Po ochlazení na laboratorní teplotu byl DMF odstraněn ve vakuu a byla přidána voda (100 ml) za důkladného míchání. Sraženina byla izolována filtrací, promyta vodou (3 x) a usušena ve vakuu, za získání 1,67 g krémové pevné látky. Potom byl k surovému produktu přidán vodný hydroxid sodný (1M, 20 ml) (600 mg) a získaný roztok byl míchán při teplotě laboratoře přes noc v atmosféře dusíku. Roztok byl potom dialyzován s deionizovanou vodou až do dosažení konstantní hodnoty pH a obsah dialyzační membrány byl usušen ve vakuu, za získání 500 mg požadovaného produktu jako sklovité pevné látky. ¹H NMR (D₂O, 400 MHz): δ 2,76 20 2,96 (m, 24H), 3,10 - 3,30 (m, 8H), 3,35 - 3,62 (m, 32H), 3,78 - 3,95 (m, 16H), 5,02 (d, 8H), 7,30 - 7,62 (m, 32H); ESI-MS: 1477 (M-2H)²

Příklad 13

6-Per-deoxv-6-per(2-hvdroxvethvl)thio-Y-cyklodextrin

• ♦ · ····«· · · ·· • · · · · · · · · · • · · ····· · · ·

ΛΛ · ···· ··· · · · · ·

- 2Ó - · ······· ···· · ·· ··· ·· ····

Κ míchanému roztoku 2-merkaptoethanoíu (10,85 g, 10 ekv.) v DMF (500 ml) pod dusíkem byl přidán 60% hydrid sodný dispergovaný v oleji (11,7 g, 21 ekv.), pú částech v průběhu 30 min.

Směs byla míchána při teplotě laboratoře 90 min. Byl přidán per-Q5 -deoxy-6-per-brom-y-cyklodextrin (25,0 g) a směs byla zahřívána na 70 °C 24 hod. Směs byla ponechána ochladit na teplotu laboratoře a reakce byla ukončena přidáním vody (50 ml) před odpařením na malý objem. Zbytek byl převeden do vody (100 ml) a vlit do směsi 1 : 1 methanol/aceton (500 ml). Vytvořená pevná látka byla oddělena io filtrací, rozpuštěna ve vodě (500 ml) a dialyzována (prahová hodnota molekulové hmotnosti 1000) při několikanásobné výměně vnější vody.

Vnitřní roztok byl odpařen na nízký objem a potom rekrystalizován z horké vody za získání sloučeniny uvedené v názvu (8,5 g) jako bílých krystalů křížového tvaru. ¹H NMR (400 MHz; DMSO) δ 5,91 (16 H, br s,

2,3-OH), 4,92 (8 H, s, 1-H), 4,71 (8H, t, J 4,4 Hz, SCH₂CH₂O/-/), 3,75 [8H, t, J 8,0 Hz, 3-H (nebo 5-H)], 3,60 - 3,50 [24H, m, 5-H (nebo 3-H), SCH₂CH₂OH], 3,40 - 3,30 (16H, m, 4-H, 2-H), 3,08 (8H, d, J 13,6 Hz,

6-H), 2,82 (8H, dd, J 13,6, 6,8 Hz, 6-H), 2,66 (16H, t, J 6,8 Hz, SC/7₂CH₂OH); m/z (elektrorozprašování) 1775,4 pro [M-Hj, vypočteno pro C64H11₂S₈O₄₀ Mh = 1776,45.

Příprava této sloučeniny podobným způsobem byla již publikována: J. Chem. Soc., Chem. Commun., 203 (1993).

Příklad 14

6-Per-deoxv-6-per(N-methvlamidomethvl)thio-Y-cyklodextrin

-24 K míchanému roztoku N-methylmerkaptoacetamidu (0,58 g, 10 ekv.) v DMF (30 ml) pod dusíkem byl přidán 60% hydrid sodný dispergovaný v oleji (0,22 g, 10 ekv.) po částech v průběhu 30 min. Směs byla míchána při teplotě laboratoře 30 min. Byl přidán per-Q5 -deoxy-6-per-brom-y-cyklodextrin (1,0 g) a směs byla zahřívána na 60 až 70 °C 48 hod. Směs byla ponechána ochladit na teplotu laboratoře a reakce byla ukončena přidáním vody (20 ml) před odpařením na malý objem. Zbylý roztok byl vlit do ethanolu (100 ml). Vytvořená pevná látka byla oddělena filtrací, rozpuštěna ve vodě (200 ml) a io dialyzována (prahová hodnota molekulové hmotnosti 1000), při čtyřnásobné výměně vnější vody. Vnitřní roztok byl odpařen na malý objem a vlit do ethanolu (100 ml). Sraženina byla oddělena filtrací a sušena ve vakuu , za získání sloučeniny uvedené v názvu (0,55 g) jako bílé pevné látky. ¹H NMR (400 MHz; D₂O) δ 5,29 (8H, d, J 4,0 Hz,

1-H), 4,10 (8H, br t, J 9,6 Hz, 5-H), 4,05 (8H, t, J 9,8 Hz, 3-H), 3,83 (8H, dd, J 10,0, 3,6 Hz, 2-H), 3,74 (8H, t, J 9,2 Hz, 4-H), 3,58 - 3,49 [16H, AB systém, SCH₂C(O)NHCH₃], 3,36 (8H, br d, J 12,8 Hz, 6-H), 3,07 (8H, dd, J 14,0, 8,4 Hz, 6-H), 2,94 (24H, s, SCH₂C(O)NHCH₃); m/z (elektrorozprašování) 1991,7 pro [M-H]', vypočteno pro

C₇₂Hi₂₀N₈S₈0₄o Mh ⁼ 1992,54.

Příklad 15

6-Pef-deoxv-6-per(2-karboxypropyl)thio-Y-cvklodextrin, sodná sůl

O

I

H

O • · · ··· · * · · ··· · ···· · · · ··· ·

Hydrid sodný (60% suspenze v oleji) (0,44 g) byl přidán k methyl-3-merkapto-2-methylpropionátu (1,474 g; J. Med. Chem., 1994, 1159) v dimethylformamidu (25 ml). Po 30 min byl přidán per-6-deoxy-per-6-brom-y-cyklodextrin (2,25 g), rozpuštěný v dimethyl5 -formamidu (25 ml). Byl přidán krystal jodidu sodného a směs byla zahřívána na 75 °C přes noc. Rozpouštědlo bylo oddestilováno a zbytek byl krystalizován z methanolu za poskytnutí methylesteru (1,3 g). Hmotnostní spektrometrie (M-H) 2224; ¹H NMR (dmso D₆): δ 1,41 (d, 24H), 2,68 (m, 16H), 2,80 (m, 16H), 3,00 (m, 8H), 3,61 (3, ίο 24H), 3,79 (m, 8H), 4,95 (s, 8H).

Tento produkt byl potom míchán přes noc s roztokem hydroxidu sodného (M, 13 ml). Získaná směs byla zfiltrována, dialyzována až do dosažení neutrální reakce a odpařena do sucha za získání sloučeniny uvedené v názvu (1,13 g). Hmotnostní spektrometrie (M-H) 2112;

¹H NMR (D₂O): δ 1,15 (d, 24H), 2,5 (m, 8H), 2,65 (m, 8H), 2,8-3,1 (m, 24H), 3,65 (m, 16H), 4,0 (m, 16H), 5,2 (s, 8H).

Příklad 16.

6-Per-deoxy-6-per(3-karboxypropyl)thio-8-cyklodextrin, sodná sůl

Per-6-deoxy-per-6-brom-p-cyklodextrin (2,25 g), methyl-4-merkaptobutyrát (1,7 g; Tetrahedron 1998, 2652), uhličitan česný (4,24 g) a dimethylformamid (25 ml) byly míchány a společně zahřívány tři dny. Směs byla ochlazena, vlita do vody a zfiltrována. Pevná látka byla promyta methanolem a sušena (2,1 g). Tato látka

- 26 ··· · byla míchána přes noc s roztokem hydroxidu sodného (M, 21 ml), zfiltrována a filtrát byl dialyzován až do dosažení neutrální reakce. Získaný roztok byl odpařen do sucha za získání sloučeniny uvedené v názvu (1,7 g). Hmotnostní spektrometrie (M-H) 1848,8. ¹H NMR (D₂O): s δ 1,75 (m, 16H), 2,15 (m, 16H), 2,6 (m, 16H), 2,85 (m, 8H), 3,05 (m,

8H), 3,55 (m, 16H) 3,87 (m, 16H), 5,07 (s, 8H)

Příklad 17

6-Per-deoxy-6-per(2-sulfoethyl)thio-Y-cyklodextrin, sodná sůl

A: Per-6-deoxv-per-6-thio-Y-cyklodextrin

Per-6-deoxy-per-6-brom-y-cyklodextrin (20 g), thiomočovina (13,5 g) a dimethylformamid (100 ml) byly společně zahřívány tři dny při 65 °C a potom byl přidán ethanolamin (20 mi) a zahřívání pokračovalo dvě hodiny. Směs byla ochlazena, zředěna ledovou vodou a produkt byl oddělen na centrifuze. Pevná látka byla dvakrát promyta vodou a sušena ve vakuu při 65 °C, za poskytnutí thiolu (7,34 g). Hmotnostní spektrometrie (M-H) 1424. ¹H NMR (dmso D₆): δ 2,82 (m, 8H), 3,20 (d, 8H), 3,35 (m, 16H), 6,65 (t, 8H), 7,75 (t, 8H), 5,0 (s, 8H).

B: 6-Per-deoxy-6-per(2-sulfoethyl)thio-y-cyklodextrin, sodná sůl

Výše získaný per-thiol (1 g), sodná sůl kyseliny 2bromethansulfonové (1,42 g), uhličitan česný (2,2 g) a dimethylformamid (10 ml) byly míchány a zahřívány přes noc při 64 °C.

φ φ φφφ· • Φ φφ φ φ φ φ φ · φ

- 27 • ΦΦΦ φ φ φ

Většina rozpouštědla byla odpařena ve vakuu a zbytek byl rozpuštěn ve vodě. Byl přidán roztok hydrogenuhličitanu sodného (5 % hmotnostních, 5 ml) a roztok byl třikrát dialyzován s vodou. Tento roztok byl odpařen do sucha a zbytek byl rozpuštěn v roztoku hydrogenuhličitanu sodného (10 ml), dialyzován a odpařen jako dříve. Tento postup byl opakován, získaná pevná látka byla rozpuštěna v malém množství vody a odpařena do sucha za poskytnutí sloučeniny uvedené v názvu (1,18 g). ¹H NMR (D₂O): δ 3,9 (m, 24H), 3,2 (m, 24H), 3,55 - 3,65 (m, 16H), 3,9 (m, 8H), 4,05 (m, 8H), 5,15 (s, 8H)

Příklad 18

6-Per-deoxy-6-per(2,2-di(hydroxvmethvl)-3-hvdroxvpropyl)thio-Y-cyklodextrin

Per-6-deoxy-per-6-thio-y-cyklodextrin (500 mg; příklad 17), 320 -brom-2,2-dihydroxymethylpropanol (670 mg), uhličitan česný (550 mg) a dimethyiformamid (10 ml) byly zahřívány a míchány 35 dnů při 65 °C, dokud nebyla analýzou LCMS prokázána konverze na požadovaný produkt. Směs byla odpařena do sucha, rozpuštěna ve vodě, dialyzována proti vodě, odpařena na malý objem a vysrážená acetonem. Sušení ve vakuu poskytlo sloučeninu uvedenou v názvu (550 mg). Hmotnostní spektrometrie FIA (M-H) 2369. ¹H NMR (D₂O): δ 2,84 (m, 16H), 3,15 (m, 8H), 3,24 (m, 8H), 3,69 (s, 64H), 3,85 - 4,19 (m, 16H), 5,25 (s, 8H).

·· · ·* 44 4 4 « 4 · · ·

- 28 Příklad 19

6-Per-deoxy-6-per(3-(tetrazol-5-vl)propyl)thio-Y-cvklodextrin₁ sodná sůl

Per-6-deoxy-per-6-thio-y-cyklodextrin (1 g), 4-bromobutyronitril (1 g), uhličitan česný (1 g) a dímethylformamid (10 ml) byly společně io míchány při 60 °C přes víkend. Směs byla ochlazena, byla přidána voda a sraženina byla oddělena na centrifuze. Po promytí a usušení byl získán per-butyronitril (1,4 g). Tento produkt (1 g), azid sodný (1,3 g), triethylaminhydrochlorid (2,8 g) a dímethylformamid (13 ml) byly společně míchány a zahřívány 7 dnů při 100 °C. Směs byla ochlazena, zředěna vodou, okyselena a vysrážená látka byla odfiltrována. Tento materiál byl promyt vodou, sonikován s methanolem, oddělen na centrifuze, sušen a rozpuštěn v roztoku hydroxidu sodného (M, 10 ml), zfiltrován a dialyzován až do dosažení neutrální reakce. Získaný roztok byl odpařen do sucha za poskytnutí v názvu uvedené sloučeniny (600 mg). Hmotnostní spektrometrie (M2H) 1152,8. ¹H NMR (D₂O); δ 1,95 (m, 16H), 2,55 (m, 16H), 2,85 (m, 24H), 3,05 (d, 8H), 3,5 (m, 8H), 3,6 (m, 8H), 3,9 (m, 16H), 5,06 (s, 8H).

Příklad 20

Reverzace neuromuskulární blokády u anestetizovanych morčat in vivo

Samci morčat Dunkin-Hartley (tělesná hmotnost: 600 až 900 g) byli anestetizováni i.p. podáním 10 mg/kg pentobarbitonu a 1000 mg/kg urethanu. Po tracheotomii byla zvířata uměle ventilována • 9 • ·

9

- 29 99 99 * · 9

9 9

9 9 • 99

9· 9999 použitím přístroje Harvard smáli animal ventilátor. Do karotidy byl umístěn katétr pro kontinuální monitorování tepenného krevního tlaku a odběr vzorků krve na analýzu plynů v krvi. Od signálu tlaku krve byla odvozena srdeční frekvence. Byl stimulován sciatický nerv (pravoúhlé pulsy trvání 0,5 ms v intervalech 10 s (0,1 Hz) při supramaxdimálním napětí, s použitím přístroje Grass S88 Stimulator) a byla měřena síla kontrakcí m. gastrocnemius použitím převodníku Grass FT03 forcedisplacement transducer. Kontrakce, krevní tlak a srdeční frekvence byly zaznamenávány na vícekanálovém zapisovači Grass 7D recorder. io Katétry byly umístěny v obou jugulárních žílách. Jeden katétr byl použit pro kontinuální infúzi neuromuskulárně blokujícího prostředku. Rychlost infúze neuromuskulárního prostředku byla zvyšována až do získání rovnovážného bloku 85 až 90 %. Druhý katétr byl použit pro podávání zvyšujících se dávek reverzačního prostředku. V průběhu kontinuální infúze neuromuskulárně blokujícího prostředku byly podávány jednotlivé dávky se zvyšující se koncentrací reverzačního prostředku. Na konci experimentu byla vynesena naměřená síla svalových kontrakcí proti koncentraci reverzačního prostředku a s použitím technik regresní analýzy byla vypočtena koncentrace pro

50% reverzaci.

Výsledky pro reverzaci neuromuskulárního bloku indukovaného svalovým relaxans rokuroniumbromidem (Roc) prostřednictvím derivátů 6-merkaptocyklodextrínu z příkladů 1 až 19 jsou uvedeny v tabulce I. Pro porovnání jsou rovněž zahrnuty reverzační aktivity výchozích sloučenina β-cyklodextrinu a γ-cyklodextrinu.

ιΓ.

• ·

- 30 Tabulka I

Dávka (ED₅₀, pmol.kg'¹), která poskytne 50% reverzaci ustáleného neuromúskulárního bloku u anestetizovaných morčat a koncentrace při maximální reverzaci.

Sloučenina	ed₅₀ pmol.kg'¹	% max. reverzace při konc. (pmol.kg'¹)

γ-cyklodextrin (γ-CD)	4	104 (47)
β-cyklodextrin (β-CD)	20	93 (113)
6-mono-deoxy-6-mono-(4-karboxyfenyl)thio-y-cyklodextrin, sodná sůl (příklad 1)	0,94	102 (8,0)
6-mono-deoxy-6-mono-(2-karboxyfenyl)th ίο-γ-cyklodextrin (příklad 2)	1,30	93 (11)
6-per-deoxy-6-per-(3-karboxyfenyl)thio-y-cyklodextrirl (příklad 3)	0,28	102 (1,28)
6-per-deoxy-6-per-(2-karboxyethyl)thio-y-cyklodextrin, sodná sůl (příklad 4)	0,09	97 (0,53)
6-per-deoxy-6-per-(5-karboxypentyl)thio-y-cyklodextrin, sodná sůl (příklad 5)	0,74	78 (2,5)
6-per-deoxy-6-per-(3-karboxypropyl)thio-y-cyklodextrin, sodná sůl (příklad 6)	0,09	108 (0,48)
6-per-deoxy-6-per-karboxymethylthio-y-cyklodextrin, sodná sůl (příklad 7)	0,21	88 (1,92)
6-per-deoxy-6-per-(4-karboxyfenyl)thio-y-cyklodextrin, sodná sůl (příklad 8)	0,10	95 (0,48)
6-per-deoxy-6-pe/--(4-karboxyfenylmethyl)thio-y- cyklodextrin, sodná sůl (příklad 9)	0,13	100 (0,50)
6-per-deoxy-6-per-(3-amidopropyl)thio-y-cyklodextrin (příklad 10)	0,57	94 (33)

I • I

- 31 ·· ·· í r :

• ftft • ftft • · ··· ·

Sloučenina	ed₅₀ pmol.kg'¹	% max. reverzace při konc. (pmol.kg’¹)
6-per-deoxy-6-per-(5-hydroxy-3-oxa-pentyl)thio-y- cyklodextrin (příklad 11)	0,47	92 (2,1)
6-per-deoxy-6-per-[(2(2-karboxybenzoyl)amino)ethyl]-thio- -γ-cyklodextrin, sodná sůl (příklad 12)	0,085	95 (0,48)
6-per-deoxy-6-per-(2-hydroxyethyl)thio-y-cyklodextrin (příklad 13)	0,20	96 (2,0)
6-per-deoxy-6-per-(N-methylamidomethyl)thio-y- cyklodextrin (příklad 14)	1,54	102 (7,3)
6-per-deoxy-6-per-(2-karboxypropyl)-thio-y-cyklodextrin, sodná sůl (příklad 15)	0,10	103 (0,48)
6-per-deoxy-6-per-(3-karboxypropyl)thio-3-cyklodextrin, sodná sůl (příklad 16)	0,5	100 (3,2)
6-per-deoxy-6-per-(2-sulfoethyl)thio-y-cyklodextrin, sodná sůl (příklad 17)	0,055	106 (1,7)
6-per-deoxy-6-per-(2,2-di(hydroxymethyl)-3-hydroxy- -propyl)thio-Y-cyklodextrin (příklad 18)	2,9	63 (4,9)
6-per-deoxy-6-per-(3-(tetrazol-5-yl)propyl)thio-y-cyklodextrin, sodná sůl (příklad 19)	0,22	109 (1,2)

Zastupuje:

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

Derivát 6-merkaptocyklodextrinu obecného vzorce I /ML ΆΜΊ

99 9· ϊ r I • 99

9 9 9 • · ··♦· kde m je 0 až 7 a n je 1 až 8 a m + n = 7 nebo 8;

R je (Cvej-alkylen, popřípadě substituovaný 1 až 3 skupinami OH, nebo (CH₂)₀-fenylen-(CH₂)_p-; o a p jsou nezávisle 0 až 4;

Xje COOH, CONHRi, NHCOR2, SO₂OH, PO(OH)₂, O(CH₂-CH₂-O)_q-H, OH nebo tetrazol-5-yl;

Rí je H nebo (Ci.₃)-alkyl;

R₂ je karboxyfenyl; q je 1 až 3;

nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli, s vyloučením následujících sloučenin:

6-per-deoxy-6-per-(2~hydroxyethylthio)-p-cyklodextrin;

6-mono-deoxy-6-mono-(2-hydroxyethylthio)-p-cykiodextrin;

6-per-deoxy-6-per-(2-hydroxyethylthio)-y-cyklodextrin;

99 9

6-per-deoxy-6-per-(karboxymethylthio)-p-cyklodextrin;

6-mono-deoxy-6-mono-(karboxymethylthio)-p-cyklodextrin;

6A,6B-dideoxy-6A,6B-bis[(o-karboxyfenyl)thio]-p-cyklodextrin;

6A,6B-dideoxy-6A,6B-bis(karboxymethylthiol)-p-cyklodextrin; a

5 6-per-deoxy-6-per-(2,3-dihydroxypropylthio)-p-cyklodextrin.
2. Derivát 6-merkaptocyklodextrinu podle nároku 1, kde R, m a n jsou definovány jako v nároku 1 a X je COOH nebo SO₂OH; nebo jeho farmaceuticky přijatelná sůl.
3. Derivát 6-merkaptocyklodextrinu podle nároku 1, kde m je 0; n je 8; R je (C^ej-alkylen nebo (CH₂)₀-fenylen-(CH₂)_p; o a p jsou nezávisle 0 až 4; a X je je COOH nebo SO₂OH; nebo jeho farmaceuticky přijatelná sůl.
4. Derivát 6-merkaptocyklodextrinu podle některého z nároků 1 až 3, kterým je:

6-per-deoxy-6-per-(2-karboxyethyl)thio-Y-cyklodextrin;

6-per-deoxy-6-per-(3-karboxypropyl)thio-y-cyklodextrin;

20 6-per-deoxy-6-per-(4-karboxyfenyl)thio-Y-cyklodextrin;

6-per-deoxy-6-per-(4-karboxyfenylmethyl)thio-Y-cyklodextrin; 6-per-deoxy-6-per-(2-karboxypropyl)thio-Y-cyklodextrin; a

6-per-deoxy-6-per-(2-sulfoethyl)thio-Y-cyklodextrin; nebo jeho farmaceuticky přijatelná sůl.

- 34 4 ·

4 4«

4 4444

44 4444

4 4 4

4 4 444

4 4 4 ·

44 44 • 4 4 4

4 4 4

4 4 4

4 4 4

44 4444
5. Derivát 6-merkaptocyklodextrinu obecného vzorce I podle nároku 1 pro použití v lékařství.
6. Použití derivátu 6-merkaptocyklodextrinu obecného vzorce I

5 podle nároku 1 pro výrobu farmaceutického prostředku pro reverzaci neuromuskulárního bloku indukovaného léčivy.
7. Kit pro dosažení neuromuskulárního bloku a jeho reverzace, vyznačující se tím, že zahrnuje (a) io neuromuskulárně blokující prostředek; a (b) derivát 6merkaptocyklodextrinu obecného vzorce I podle nároku 1.
8. Kit podle nároku 6, vyznačující se tím, že neuromuskulárně blokující prostředek je zvolený ze skupiny

15 rokuronium, vekuronium, pankuronium, rapakuronium, mivakurium, (cis)atrakurium, tubokurarin a suxamethonium.
9. Kit podle nároku 7, vyznačující se tím, že neuromuskulárně blokujícím prostředkem je rokuronium.
10. Farmaceutický prostředek obsahující derivát 6-merkapto-cyklodextrinu obecného vzorce I

Vzorec I

- 35 ···«··· · · · · 0 · « · · · ···· • ••0 0 ·0 ··· *0 0000 kde mje0až7anje1 až8am + n = 7 nebo 8;

R je (Ci-6)-alkylen, popřípadě substituovaný 1 až 3 skupinami OH, nebo (CH₂)o-fenylen-(CH₂)p-;

5 o a p jsou nezávisle 0 až 4;

Xje COOH, CONHRi, NHCOR₂, SO₂OH, PO(OH)_2i O(CH₂-CH₂-O)_q-H, OH nebo tetrazol-5-yl;

Rt je H nebo (Ci_₃)-alkyl;

R₂ je karboxyfenyl;

10 q je 1 až 3;

nebo jeho farmaceuticky přijatelnou sůl spolu s farmaceuticky přijatelnými pomocnými látkami.
11. Způsob reverzace neuromuskulárního bloku indukovaného léčivy 15 u pacienta, který zahrnuje parenterální podávání účinného množství derivátu 6-merkaptocyklodextrinu obecného vzorce I podle nároku 1 tomuto pacientovi.