CZ294066B6

CZ294066B6 - Synergická biocidní kompozice

Info

Publication number: CZ294066B6
Application number: CZ2000539A
Authority: CZ
Inventors: Dagmar Antoni-Zimmermann; Rüdiger Baum; Thomas Wunder; Hans-Jürgen Schmidt
Original assignee: Thor Chemie Gmbh
Priority date: 1997-08-20
Filing date: 1998-08-20
Publication date: 2004-09-15
Also published as: HUP0003297A3; KR20010023049A; NO20000749L; WO1999008530A1; NO20000749D0; BR9811955B1; TR200000437T2; EP0900525A1; KR100397259B1; CA2299227A1; PT1005271E; ATE227082T1; MXPA00001460A; CZ2000539A3; JP3992433B2; BR9811955A; DK1005271T3; AU731655B2; MX212024B; EP1005271A1

Abstract

Biocidní kompozice, která obsahuje alespoň dvě biocidně aktivní látky, z nichž jedna je 2-metylizotiazolin-3-on. Kompozice obsahuje jako další biocidně účinnou látku 1,2-benzizotiazolin-3-on, přičemž kompozice obsahující 5-chlor-2-metylizotiazolin-3-on jsou vyloučeny. Ve srovnání se svými jednotlivými komponentami má kompozice podle vynálezu synergickou biocidní aktivitu.ŕ

Description

Synergická biocidní kompozice

Oblast techniky

Vynález se týká biocidní kompozice (sestavy) jako přídavku k látkám, jež by mohly být napadeny škodlivými mikroorganismy. Zejména je vynález zaměřen na biocidní kompozici s minimálně dvěma biocidními účinnými látkami, jež působí synergicky, přičemž jednou z účinných látek je 2-metylizotiozolin-3-on.

Dosavadní stav techniky

Biocidní prostředky jsou používány v mnoha oblastech, např. k boji proti škodlivým bakteriím, houbám nebo řasám. Již dlouho je známo používání 4-izotiozolin-3-onu v takových kompozicích (které jsou označovány také jako 3-izotiozolon), jelikož se mezi nimi nacházejí velmi účinné biocidní sloučeniny.

Jednou z těchto sloučenin je 5-chlor-2-metylizotiazolin-3-on. Vykazuje sice dobrý biocidní účinek, má ale při své praktické manipulaci různé nevýhody. Např. u osob, které tím trpějí, uvolňuje tato sloučenina často alergie. V mnohých zemích také existují zákonná omezení pro hodnotu AOX průmyslových odpadních vod, tzn. ve vodách nesmí být překročena určitá koncentrace organických sloučenin chloru, bromu a jódu, jež jsou adsorbovatelné na aktivním uhlí. To pak brání použití 5-chlor-2-metylizotiozolinu-3-onu v žádoucím rozsahu. Dále stabilita této sloučeniny za určitých podmínek, např. při vysokých hodnotách pH nebo v přítomnosti nukleofílních látek nebo redukčních prostředků, není dostatečná.

Dalším známým izotiazolin-3-onem s biocidním účinkem je 2-metylizotiazolin-3-on. Tato sloučenina se sice vyhýbá různým nevýhodám 5-chlor-2-metylizotiazolin-3-onu, např. vysokému riziku alergií, má ale podstatně menší biocidní účinek. Jednoduchá výměna 5-chlor2-metylizotiazolin-3-onu za 2-metylizotiazolin-3-on není proto možná.

Je již také známo používání kombinací z různých izotiazolin-3-onů nebo kombinací nejméně jednoho izotiazolin-2-onu a jiných sloučenin. Např. v EP 0676 140 Al je popsána synergická biocidní kompozice, která obsahuj 2-metylizotiazolin-3-on (2-metyl-3-izotiazolon) a 2-noktylizotiazolin-3-on (2-n-oktyl-3-izotiazolon).

Z patentu US 5 328 926 jsou známy synergické biocidní kompozice, které jsou kombinací z l,2-benzizotiazolin-3-onu a jódpropargylové sloučeniny (jódpropinylové sloučeniny). Jako taková sloučenina je uváděn např. 3-jódpropargyl-N-butylkarbamát. Písemně však ale nejsou publikovány žádné biocidní kompozice, které kromě l,2-benzizotiazolin-3-onu a 3-jódpropargyl-N-butylkarbamátu obsahují ještě další biocidní účinné látky.

V JP 01 224 306 (Chemical Abstracts, sv. 112, č. 11, 12. března 1990, referát č. 93924) je popsána biocidní kompozice, jež se skládá z 2-metylizotiazolin-3-onu, l,2-benzizotiazolin-3onu a 5-chlor-2-metylizotiazolin-3-onu.

JP 06 092 806 (Chemical Abstracts, sv. 121, č. 11, 12. září 1994, referát č. 127844) se vztahuje k biocidním kompozicím, jež obsahují izotiozolin, l,2-benzizotiazolin-3-on a propanol nebo derivát propanolu. Jako izotiazolin je např. jmenován 2-metylizotiazolin-3-on a jako derivát propanolu např. 2-brom-2-nitropropan-l,3-diol. Není uveden ale žádný odkaz na kompozici, která obsahuje speciálně 2-metylizotiazolin-3-on, l,2-benzizotiazolin-3-on a 2-brom-2-nitropropan-l,3-diol a současně neobsahuje 5-chlor-2-metylizotiazolin-3-on.

-1 CZ 294066 B6

Podstata vynálezu

Vynález má za základ úkol specifikovat biocidní kompozici, která je zlepšena tím, že její komponenty působí společně synergicky a proto mohou být použity při současném nasazení v menších koncentracích ve srovnání s nezbytnými koncentracemi v případě jednotlivých komponent. Tak mohou být člověk a životní prostředí méně zatíženy, stejně jako náklady na boj proti škodlivým mikroorganismům mohou být sníženy.

Tento úkol řeší tento vynález biocidní kompozicí s nejméně dvěma biocidními účinnými látkami, z nichž jedna je 2-metylizotiazolin-3-on. Kompozice se vyznačuje tím, že jako další biocidní účinnou látku obsahuje l,2-benzizotiazolin-3-on, přičemž jsou odtud vyjmuty biocidní kompozice s obsahem 5-chlor-2-metylizotiazolin-3-onu.

Biocidní kompozice podle vynálezu má výhodu, že může nahradit dosud v praxi používané, ale nevýhodami ohledně zdraví a životního prostředí postižené biologicky účinné látky, např. 5-chlor-2-metyIizotiazolin-3-on. Kromě toho může být biocidní kompozice podle vynálezu vyráběna v nutném případě jen s vodou jako příznivým médiem. Přitom přídavek emulgátorů, organických rozpouštědel a/nebo stabilizátorů není nutný. Dále vynález umožňuje přidání dalších biologicky aktivních látek přizpůsobit kompozici speciálním cílům, např. ve smyslu zvýšeného biocidního účinku, zlepšené dlouhodobé ochrany látek napadnutých mikroorganismy, zlepšené snášenlivosti s chránícími látkami nebo zlepšeného toxikologického nebo ekotoxikologického chování.

Biocidní kompozice podle vynálezu obsahuje 2-metylizotiazolin-3-on a l,2-benzizotiazolin-3on normálně v hmotnostním poměru (50 až 1):(1 až 50), přednostně ve hmotnostním poměru (15 až 1):1 až 8), zejména ve hmotnostním poměru (4 až 1):(1 až 4). Zcela zvlášť je upřednostněn hmotnostní poměr 1:1.

V biocidní kompozici jsou přítomny 2-metylizotiazolin-3-on a l,2-benzizotiazolin-3-on ve hmotnostní koncentraci přednostně od 0,5 do 50 hmotn. %, zejména 1 až 20, hmotn., a zvlášť zejména od 2,5 do 10 hmotn., vždy vztaženo na celkovou biocidní kompozici.

Je účelné, aby biocidní kompozice podle vynálezu byly používány v kombinaci s polárním nebo nepolárním kapalným médiem. Přitom může být toto médium předem dáno v biocidní kompozici a/nebo v konzervující substanci.

Upřednostněným polárním kapalným prostředím jsou voda, alifatický alkohol s 1 až 4 uhlíkovými atomy, např. etanol a izopropanol, glykol, např. etylénglykol, dietylénglykol,

1,2-propylénglykol, dipropylénglykol a tripropylénglykol, glykoléter, např. butylglykol a butyldiglykol, glykolester, např. butyldiglykolacetát nebo 2,2,4-trimethylpentandiolmonoizomáselnan, polyetylénglykol, polypropylénglykol, Ν,Ν-dimetylformamid nebo směs z takových látek. Polárním kapalným prostředím je zejména voda, přičemž odpovídající biocidní kompozice je, co se týče hodnoty pH, nastavena přednostně neutrálně nebo slabě alkalicky, např. na hodnotu pH od 7 do 9. Přitom pak existuje 2-metylizotiazolin-3-on v rozpuštěné formě a 1,2-benzizotiazolin-3-on v jemně disperzní formě nebojsou obě biologicky účinné látky rozpuštěny.

Jako nepolární kapalná prostředí slouží např. aromatické uhlovodíky, přednostně xylen a toluen.

Biocidní kompozice může být tak současně kombinována s polárním a nepolárním kapalným prostředím.

Biocidní kompozice podle vynálezu může navíc vedle 2-metylizotiazolin-3-onu a 1,2-benzizotiazolin-3-onu obsahovat ještě jednu nebo více dalších biologicky aktivních látek, které jsou vybírány v závislosti na příslušné aplikaci. Specifické příklady pro takové další biologicky účinné látky jsou specifikovány následovně:

-2CZ 294066 B6

Benzylalkohol

2.4- dichlorbenzylalkohol

2-fenoxyetanol

2- fenoxyetanolhemiformal(dehyd)

Fenyletylalkohol

5-brom-5-nitro-1,3-dioxan

Formaldehyd a formaldehydové primární (depotní) látky

Dimetyloldimetylhydantoin

Glyoxal

Glutardialdehyd

Kyselina sorbová

Kyselina benzoová

Kyselina salicylová

Ester kyseliny p-hydroxybenzoové

Chloracetamid

N-metylolchloracetamid

Fenoly, jako p-chlor-m-krezol a o-fenylfenol

N-4netylmočovina

N,N'-dimetylmočovina

Benzylformal(dehyd)

4.4- dimetyl-l ,3-oxazolidin

1.3.5- hexahydrotriazinové deriváty Kvartémí amoniové sloučeniny, jako

N-alkyl-N,N-dimetylbenzylamoniumchlorid a di-n-decyldimetylaminoniumchlorid Cetylpyridiniumchlorid

Diguanidin

Polybiguanidin

Chlorhexidin

1.2- dibrom-2,4-dikyanobutan

3.5- dichlor-4-hydroxybenzaldehyd

Etylénglykolhemiformaldehyd

Tetra-(hydroxymetyl)-fosfoniové soli

Dichlorofén

2.2- dibromamid kyseliny 3-nitrilopropionové

3- j ód-2-propionyl-N-butylkarbamát

Metyl-N-benzimidazol-2-ylkarbamát

2-n-oktylizotiazolin-3-on

4.5- dichlor-2-n-oktylizotiazolin-3-on

4.5- trimetylén-2-metylizotiazolin-3-on

Di-N-metylamid kyseliny 2,2'-ditiodibenzoové

Deriváty benzizotiazolinonu

2-tiokyanometyltiobenztiazol

C-formaldehydy, jako

2-hydroxymetyl-2-nitro-l,3-propandiol

2-brom-2-nitropropan-l ,3-diol

Metylénbistiokyanát

Reakční produkty alantoinu

Jako další takové biocidní biologicky aktivní látky jsou upřednostňovány 3-jód-2-propinyl-Nbutylkarbamát, 2-n-oktylizotiazolin-3-on, formaldehyd nebo formaldehydová depotní látka, jakož i 2-brom-2-nitropropan-l,3-diol.

-3CZ 294066 B6

Příklady pro formaldehydovou výchozí nebo depotní látku jsou N-formaldehydy, jako

N,N'-dimetylolmočovina N-metylolmočovina Dimetyloldimetylhydantoin N-metylolchloracetamid Reakční produkty allantoinu Glykolformaldehydy, jako Etylénglykoformaldehyd Butyldiglykolformaldehyd Benzylformaldehyd

Biocidní kompozice podle vynálezu může vedle toho obsahovat ještě další běžné složky, jež jsou odborníkovi na poli biocidů známy jako přídavné látky. Jsou to např. zahušťovací prostředky, odpěňovače, látky k nastavování hodnoty pH, aromatické vonné látky, dispergační pomocné prostředky a barviva.

2- metylizotiazolin-3-on a l,2-benzizotiazol-3-on jsou známé látky. 2-metylizotiazolin-3-on může být např. vyráběn podle patentu US 5 466 818. Přitom získaný produkt může být čištěn např. sloupcovou chromatografií.

l,2-benzizotiazolin-3-on může být získán běžně obchodně, např. pod obchodním názvem Acticide^(R) BW 20 a Acticide^(R) BIT ze společnosti Thor Chemical GmbH.

3- jód-2-propionyl-N-butylkarbamát lez rovněž získat obchodně, např. ze společnosti Troy Chemical Company pod obchodními názvy Polyphase^(R), Polyphase® AF-1 a Polyphase^(R)NP-1 nebo od firmy Olin Corporation pod obchodním názvem Omacide^(R) IPBC 100.

Také 2-n-oktylizotiazolin-3-on lze získat obchodně, např. od firmy Thor Chemie GmbH pod obchodním názvem Acticide^(R) OIT.

Nakonec lze obchodně získat i 2-brom-2-nitroproan-l,3-diol, např. od firmy Boots pod obchodním názvem Myacide^(R> AS.

U biocidní kompozice podle první formy provedení tohoto vynálezu se jedná o systém, u něhož kombinace z 2-metylizotiazolin-3-onu a 1,2-benzizotiazolin-3-onu rozvíjí synergicky biocidní účinek, který je větší než ten, jenž vykazuje každá ze samotných těchto sloučenin.

Také pokud biocidní kompozice podle dalších forem provedení tohoto vynálezu obsahuje vedle dvousložkové kompozice z 2-metylizotiazolin-3-onu a l,2-benzizotiazolin-3-onu navíc jednu z dalších biocidních účinných látek 3-jód-2-propionyl-N-butylkarbamátu, 2-n-oktylizotiazolin-3-onu, formaldehydu nebo formaldehydové primární nebo depotní látky nebo 2-brom2-nitropropan-l,3-diolu, je dosaženo synergického biocidního účinku, který je větší než účinek, jenž vykazuje buď předem uvedená dvousložková kombinace a každá ze samotných těchto látek.

Jestliže se použije daná dvousložková kombinace s jednou z předem uvedených dalších biocidních účinek látek, obsahuje 2-metylizotiazolin-3-on a l,2-benzizotiazolin-3-on přednostně ve hmotnostním poměru 1:1. Může být ale také zvolen každý další jiný hmotnostní poměr, pokud je přitom docíleno synergického účinku.

Biocidní kompozice podle vynálezu může být používán ve velmi rozdílných oborech. Hodí se např. pro použití v nátěrových prostředcích, omítkách, ligninových sulfonátech, produktech obsahujících kasein nebo škrob, butimenový emulzích, tenzidových roztocích, motorových palivech, čisticích prostředcích, kosmetických produktech, ve vodných cirkulacích, polymerních disperzích

-4CZ 294066 B6 a chladicích mazivech proti napadení např. baktériemi, vláknitými houbami, kvasinkami a řasami.

Při praktickém použití může být biocidní kompozice nasazena bud’ jako hotová směs, nebo odděleným přidáním biocidů a ostatních složek ke kompozici do konzervující látky.

Příklady objasňují daný vynález.

Příklady provedení vynálezu

Ve všech příkladech, v nichž byla použita směs biologicky aktivních látek z MET a BIT, jakož i navíc další biocidní účinná látka, činil hmotnostní poměr MET kBIT 1:1. 1 ppm značí milióntou část, tedy 11 ppm = 10⁴% hmotn.

Příklad 1

Tímto příkladem se prokáže synergismus (synergický účinek)obou hlavních biologicky aktivních látek v biocidní kompozici podle tohoto vynálezu.

Za tímto účelem byly vyrobeny vodné směsi s rozdílnými koncentracemi 2-metylizotiazolin-3onu (MIT) a l,2-benzizotiazolin-3-onu a účinek těchto směsí se zkoušel na mikroorganismu Escherichia coli (Intemational Mycological Institute - Mezinárodní mykologický ústav, kmenové číslo IMI362054).

Vodné směsi obsahovaly kromě biocidních komponent a vody ještě živné prostředí (médium), totiž Muller-Hintonův bujón (obchodní produkt „Měrek č. 10393“). Buněčná hustota Eschicheria coli činil zhruba 10⁶ nároků/ml. Inkubační doba byla 72 hodin při 25 °C. Každý vzorek byl inkubován na inkubační třepačce při otáčkách 120 ot./nin.

V následující tabulce jsou uvedeny použité koncentrace MIT a BIT. Dále je z toho zřejmé, zda docházelo k růstu mikroorganismu (symbol „+“) nebo ne (symbol „-„).

Tabulka I tak ukazuje také minimální inhibiční koncentrace (Hemm) (MIK). Odtud vyplývá při použití samotného MIT hodnota MIK 17,5 ppm a při použití samotného BIT hodnota MIK 25 ppm. Oproti tomu jsou MIK-hodnoty směsí z MIT a BIT význačně nižší, tzn. že MIT a BIT působí ve své kombinaci synergicky.

Vystupující synergie (synergický účinek) se dá číselně vyjádřit pomocí výpočtu synergického indexu uvedeného v tabulce II. Výpočet tohoto indexu se provádí podle způsobu F.C. Kulla et al., Applied Microbiology, sv. 9 (1961), str. 538. Zde se vypočte synergický index podle následujícího vzorce:

Synergický index SI = Qh/Qa + Qi/Qb·

-5CZ 294066 B6

Tabulka I

Hodnota MIK u Eschericha coli při inkubační době 27 hodin

Koncentrace MIT Koncentrace BIT (ppm)

Při použití tohoto vzorce na zde zkoumaný biocidní systém mají veličiny ve vzorci následující význam:

Q_a = koncentrace BIT v biocidní směsi z BIT a MIT

Qa = koncentrace BIT jako jediného biocidu

Qb = koncentrace MIT v biocidní směsi z MIT a BIT

Qb= koncentrace MIT jako jediného biocidu

Jestliže synergický index vykáže hodnotu nad 1, znamená to, že dochází k antagonismu. Má-li synergický index hodnotu 1, znamená to, že dochází k adici účinku obou biocidních látek.

Jestliže má synergický index hodnotu pod 1, znamená to, že trvá synergismu obou biocidních látek.

Tabulka II

Výpočet synergického indexu u Escherichia coli při inkubační době 72 hodin

MIK při koncentraci	Σ konc. BIT+MIT	Konc. BIT	Konc. MIT	Qa/QA	Qt/Qa	Syn. index Q^Qa+Q^Qb
Qa(ppm)	Qb (PPm)	Qa + Qb (ppm)	(hmotn. %)	(hmotn. %)			Q./Q_A + Qb/Q_B
0	17,5	17,5	0,00	100,00	0,00	1,00	1,00
1	15	16	6,3	93,8	0,04	0,86	0,90
2,5	10	12,5	20,0	80,0	0,10	0,57	0,67
7,5	7,5	15	50,0	50,0	0,30	0,43	0,73
12,5	5	17,5	71,4	28,6	0,50	0,29	0,79
20	2,5	22,5	88,9	11,1	0,80	0,14	0,94
25	0	25	100,0	0,00	1,00	0,00	1,00

-6CZ 294066 B6

Z tabulky II je zřejmé, že optimální synergismus, tzn. nejnižší synergický index (0,67) směsi ΜΙΊ7ΒΙΤ, leží u směs z 80 hmotn. % MIT a 20 hmotn. %.

Příklad 2

Podobně jako u příkladu 1 je ukázán synergismus obou biologicky aktivních látek MIT a BIT vůči mikroorganismu Pseudomonas putida.

Pokusné násady dostaly opět Muller-Hintonův bujón jako živné prostředí. Buněčná hustota činidla zhruba 10⁶ zárodků/ml. Inkubační doba trvání 48 hodin při 25 °C. Každý vzorek byl inkubován na třepačce při otáčkách 120 U/Min.

Z následující tabulky III jsou patrné MIK-hodnoty zkoumaných biocidních kompozic. Hodnota

MIK při nasazení samotného MIT činidla 12,5 ppm a při použití samotného BIT 60 ppm.

Tabulka III

Hodnoty MIK u Pseudomona putida

-8CZ 294066 B6

Při současném nasazení MIT a BIT došlo k souhlasnému účinku (synergismu). Výpočet synergického indexu vyplývá z tabulky IV. Na základě toho ležel u Pseudomonas putida nejnižší synergický index (0,50) u směsi z 3,8 hmotn. % MIT a 96,2 hmotn. % BIT.

Tabulka IV

Výpočet synergického indexu u Pseudomonas putida při inkubační době 48 hodin

MIK při koncentraci	Σ konc. BIT+MIT Qa + Qb(PPm)	Konc. BIT (hmotn. %)	Konc. MIT (hmotn. %)	Q/Qa	Qb/Qa	Synergický index Q./Q_A + Qb/QB
Q.(ppm)	Qb (PPm)
0	12,5	12,5	0,0	100,00	0,0	1,00	1,00
2,5	10	12,5	20,0	80,0	0,04	0,80	0,84
5	7,5	12,5	40,0	60,0	0,08	0,60	0,68
15	5	20	75,0	25,0	0,25	0,40	0,65
20	2,5	22,5	88,9	11,1	0,33	0,20	0,53
25	1	26	96,2	3,8	0,42	0,08	0,50
40	0,5	40,5	98,8	1,2	0,67	0,04	0,71
60	0	60	100,0	0,0	1,00	0,00	1,00

Příklad 3

Podobně jako v příkladu 1 je zde ukázáno synergické působení MIT a BIT vůči mikroorganismu Pseudomonas stutzeri.

Pokusné násady měly opět Míiller-Hintonův bujón jako živné médium. Buněčná hustota byla cca 10⁶ buněk/ml. Inkubační doba činidla 72 hodin při 25 °C. Každý vzorek byl inkubován při otáčkách 120U/min na inkubační třepačce. Z následující tabulky V jsou zřejmé hodnoty MIK zkoumaných biocidních kompozic. Hodnota MIK při použití samotného MIT činidla 12,5 ppm a při použití samotného BIT 20 ppm.

-9CZ 294066 B6

Tabulka V

Hodnoty MIK u Pseudomonas stutzeri při inkubační době 72 hodin

Koncentrace MIT Koncentrace BIT (ppm)

Při současném použití MIT a BIT došlo k výskytu synergického působení. Výpočet synergického indexu vyplývá z tabulky VI. Podle toho ležel v případě Pseudomonas stutzeri nejnižším synergický index (0,65) u směsi z 50 hmotn. % MIT a 50 hmotn. % BIT:

Tabulka VI

Výpočet synergismu u Pseudomonas stutzeri při inkubační době 72 hodin

MIK při koncentraci	Σ konc. BIT+MIT Q. + Qb (ppm)	Konc. BIT (hmotn. %)	Konc. MIT (hmotn. %)	Qh/Qa	Qb/Qn	Synergický index Q?Qa + Qb/Qe
Q.(PPm)	Qb(PPm)
0	12,5	12,5	0,0	100,0	0,0	1,00	1,00
0,5	10	10,5	4,8	95,2	0,03	0,80	0,83
5	5	10	50,0	50,0	0,25	0,40	0,65
10	2,5	12,5	80,0	20,0	0,50	0,20	0,70
15	1	16	93,8	6,3	0,75	0,08	1,00
20	0	20	100,0	0,0	1,00	0,00	0,00

-10CZ 294066 B6

Příklad 4

Podobně jako v příkladu 1 se prokazuje synergické působení obou biologicky účinných látek MIT a BIT vůči mikroorganismu Klebsiella pneumoniae.

Testované násady obsahovaly opět Můller-Hintonův bujón jako živné médium. Buněčná hustota činidla zhruba 10⁶ buněk/ml. Inkubační doba trvala 72 hodin při 25 °C. Každý vzorek byl inkubován na inkubační třepačce při otáčkách 120 U/min.

Z následující tabulky VII jsou patrné MIK-hodnoty vyšetřovaných biocidních kompozic. MIK-hodnota při nasazení samotného MIT činidla 20 ppm a při nasazení samotného BIT 25 ppm.

Tabulka VII

Hodnoty MIK u Klebsiella pneumoniae při inkubační době 72 hodin

Koncentrace MÍT Koncentrace BIT (ppm)

Při současném použití MIT a BIT nastalo synergické působení. Výpočet synergického indexu vyplývá z tabulky VIII. Na základě toho leží u Pseudomonas aeruginosa nejnižší synergický index (0,68) u směsi z 50 hmotn. MIT a 50 hmotn. % BIT.

-11 CZ 294066 B6

Tabulka VIII

Výpočet synergického indexu u Klebsiella pneumoniae při inkubační době 72 hodin

MIK při koncentraci	Σ konc. BIT+MIT Qa+Qb (ppm)	Konc. BIT (hmotn. %)	Konc. MIT (hmotn. %)	Q,/Qa	Qb/Qa	Syn. index Q./Qa+Qi/Qb Q./Q_A+Qb/Q_B
Q.(PPm)	Qb (PPm)
0	20	20	0,0	100,0	0,0	1,00	1,00
2,5	12,5	15	16,7	83,3	0,10	0,63	0,73
5	10	15	33,3	66,7	0,20	0,50	0,70
7,5	7,5	15	50,0	50,0	0,30	0,38	0,68
15	5	20	75,0	25,0	0,60	0,25	0,85
25	0	25	100,0	0,0	1,00	0,00	1,00

Příklad 5

Podobně jako v příkladu 1 se prokazuje synergický účinek obou biologicky účinných látek MIT a BIT vůči mikroorganismu Pseudomonas aeruginosa.

Pokusné násady obsahovaly zase Můller-Hintonův bujón jako živné prostředí. Buněčná hustota činila 10⁶ buněk/ml. Inkubační doba činila 48 hodin při 25 °C. Každý vzorek byl inkubován na inkubační třepačce při otáčkách 120 U/min.

Z následující tabulky IX jsou patrné MIK-hodnoty zkoumaných biocidních kompozic. MIK-hodnota při nasazení samotného MIT činila 30 ppm a při nasazení samotného BIT 150 ppm.

Tabulka IX

Hodnoty MIK u Pseudomonas aeruginosa při inkubační době 48 hodin

Koncentrace MIT Koncentrace BIT (ppm)

(ppm)	200	175	150	125	100	75	50	25	10	5	0
50	-		-	-	-	-	-	-	-	-	-
40	-		-	-	-	-	-	-	-	-	-
30	-		-	-	-	-	-	-	-	-	-
20	-		-	-	-	-	-	-	-	+	+
10	-		-	-	-	-	-	+	+	+	+
5	-		-	-	-	+	+	+	+	+	+
2,5	-		-	-	+	+	+	+	+	+	+
1	-		-	+	+	+	+	+	+	+	4-
0	-		-	+	+	+	+	+	+	+	+

- 12CZ 294066 B6

Při současném použití MIT a BIT došlo k synergickému působení. Výpočet synergického indexu vyplývá z tabulky X. Na základě toho pak existoval u Pseudomonas aeruginosa nejnižší synergický index (0,67) u směsi z 16,7 hmotn. % MIT a 83,3 hmotn. % BIT.

Tabulka X

Výpočet synergického indexu u Pseudomonas aeruginosa při inkubační době 48 hodin

MIK při koncentraci	Σ konc. BIT+MIT Q.+Qb (ppm)	Konc. BIT (hmotn. %)	Konc. MIT (hmotn. %)	Q/Qa	Qb/Qa	Synergický index Qs/Qa+Qi/Qb
BIT Q»(PPm)	MIT Qb (PPm)
0	30	30	0,0	100,0	0,0	1,00	1,00
10	20	30	33,3	66,7	0,07	0,67	0,73
50	10	60	83,3	16,7	0,33	0,33	0,67
100	5	105	95,2	4,8	0,67	0,17	0,83
125	2,5	127,5	98,0	2,0	0,83	0,08	0,92
150	0	150	100,0	0,0	1,00	0,00	1,00

Příklad 6

Byla připravena biocidní kompozice z následujících komponent:

Komponenta

Množství (hmotn. %) methylizotiazolin-3-on (98 hmotn. %)

1,2-benzizotiazolin-3-on (ve formě směsi ze 74,6 hmotn. % BIT a 25,4 hmotn. % vody; obchodní produkt „Acticide^(R) BIT“ firmy Thor Chemie GmbH) Polyetylénglykol (středová molekula) hmotnost 400 g/mol

5,1

6,7

88.2

100,0

Hotovou formulací biocidní kompozice je čirý (průzračný) roztok, z čehož lze zpětně usuzovat na polyetylénglykol. Tento roztok se hodí pro použití např. v nátěrových prostředcích, polymemích disperzí, maltových systémů na omítku a chladicích a mazacích látek proti napadení baktériemi, vláknitými houbami a kvasinkami.

Příklad 7

Byla připravena biocidní kompozice z následujících složek:

Komponenta Množství (hmotn. %) methylizotiazolin-3-on (ve formě roztoku hmotn. % MIT ve vodě) 25

1,2-benzizotiazolin-3-on (ve formě suspenze 20 hmotn. % BIT ve vodě; obchodní produkt „Acticide^ BW 20“ firmy Thor Chemie GmbH) 25 zahušťovadlo na bázi xantogenanu (obchodní produkt „Rhodopol

-13 CZ 294066 B6

MD“ firmy Rhóne-Poulenc)

„Drewplus T 4202“ firmy Drew Ameroid)

Voda

0,4

0,1

49.5

100,0

V hotové formulaci či struktuře biocidní kompozice existuje BIT v jemně suspendované formě. Formulace se hodí pro ta použití, jež jsou specifikována v předcházejícím v daném popisu.

Příklad 8

Jiná biocidní kompozice byla připravena z následujících komponent:

Komponenta	Množství (hmotn. %)
1,2-benzizotiazolin-3-on (jako směs ze 74,6 hmotn. % BIT) a 25,č hmotn. % vody) Voda Roztok hydroxidu sodného (50 hmotn. % ve vodě) 2-metylizotiazolin-3-on (98 hmotn. %)	3,35 92,8 1,3 2,55 100,00

Ke směsi BITu s vodou (hmotnostní poměr 74,6:25,4) bylo přidána další voda a pak byla směs přidáním roztoku hydroxidu sodného převedena na roztok, který vzniká v důsledku tvorby odpovídající sodné soli. Nakonec byl přidán MIT. Hotová formulace byla čitý roztok a měla hodnotu pH cca 8,2.

Hotová formulace biocidní kompozice se hodí pro ty aplikační účely, jež jsou uvedeny v předcházející části.

Příklad 9

Biocidní kompozice podle vynálezu byly začleněny do nanášecí hmoty A, která slouží k nanášení nátěrů na fasády. U této nanášecí hmoty se jedná o omítku na bázi vodné polymerní disperze, kterou lze získat v obchodě pod označením „Granol KR 3.0“ (firma Steinwerke Kupferdreh GmbH). Přídavek biocidní kompozice podle vynálezu sloužil ke konzervaci nanášecí hmoty před jejím použitím, tzn. během skladování vjejích obalech.

Aktuálně bylo vždy 50 g nanášecí hmoty A smíseno s biocidy specifikovanými v následující tabulce XI. Uvedená množství biocidu se vztahují na množství nanášecí hmoty A. Ve směsích MIT/BIT byly oba biocidy přítomny ve hmotnostním poměru 1:1.

Kromě slepé zkoušky bez přidání biocidní látky byl každý vzorek nanášecí hmoty A smíchán s 1 ml standardního bakteriálního inokula (uměle pěstované tkáně naočkované do živného prostředí), které obsahuje následující bakteriální kmeny:

Shewanella putrefacies

Alcaligenes faecelis

Serratia liquefaciens

-14CZ 294066 B6

Klebsiela species

Próteus penneri/vulgaris Providencia rettgeri Pseudomonas auruginosa Pseudomonas stutzeri

Escherichia coli Corynebacterium pseudodiphteriae Cellulomonas flavigena Corynebacterium species

Buněčná hustota inokula ležela v rozmezí od 10¹⁰ do 3.10¹⁰ buněk či zárodků/ml, buněčná hustota daných vzorků v rozmezí od 2.10⁸ do 6.10⁸ zárodků/g. Vzorky byly uloženy 7 dní při 30 °C. Potom byl z každého vzorku vytvořen proužek na živné desce, jenž byl 48 hodin uložen při 30 °C a pak byl posouzen ohledně bakterilního vzrůstu. Přitom bylo použito následující hodnotící měřítko:

= žádný vzrůst = minimální vzrůst až do 10 kolonií = lehký vzrůst až do 100 kolonií = mírný vzrůst až do 300 kolonií = rozměrný vzrůst, jednotlivé kolonie j sou ještě rozeznatelné = silný vzrůst, příliš mnoho kolonií ke spočítání, ale celkový povrch není zarostlý = plošný vzrůst, sotva jsou patrné jednotlivé kolonie, celková plocha prouž- ku rozrostlá

Jestliže byl bakteriální vzrůst posouzen hodnotou pod 6, přidalo se k příslušnému původnímu 50 g vzorku druhé bakteriální inokulum výše uvedeného druhu a uložilo se opět na 7 dní při 30 °C. Potom byl opětovně na živné desce vytvořen proužek, který byl pak opět po skladovací době 48 hodin při 30 °C opět vyšetřen na svůj bakteriální vzrůst.

Jestliže u nějakého vzorku dosáhl bakteriální vzrůst daného proužku hodnotu 6, byla tím zkouška tohoto vzorku ukončena. Pokud nějaký vzorek této hodnoty nedosáhl, byl opět výše uvedeným způsobem smíchán s bakteriálním inokulem a uložen a pak přezkoušen pomocí příslušného proužku. Tento postup byl v nutném případě opakován, přičemž na příslušný vzorek byly přidány nejvýše čtyři bakteriální inokula.

V tabulce XI jsou shrnuty výsledky pro nanášecí hmotu A.

Tabulka XI

Nanášecí kompozice A

Biocid (hmotn. %)____________ bez

BIT 0,005

0,01

0,015

0,02

0,03

Bakteriální vzrůst (7 dní + 48 h po 4. očkování) (vzrůst již po 1. inokulaci) (vzrůst již po 1. inokulaci) (vzrůst již po 1. inokulaci) (vzrůst již po 2. inokulaci) (vzrůst již po 2. inokulaci) (vzrůst již po 3. inokulaci)

-15CZ 294066 B6

Tabulka XI - pokračování

Biocid (hmotn. %)____________

MIT 0,005

0,01

0,015

0,02

0,03

Bakteriální vzrůst (7 dní + 48 h po 4, očkování) 6

MIT/BIT 0,0055

0,010

0,0150

0,020

0,03 0

Z tabulky XI je zřejmé, že vzorek bez přídavku biocidní látky vykázal již po prvním naočkování či inokulaci plný bakteriální vzrůst.

V případě přídavku samotného BIT byl plný bakteriální vzrůst při 0,05 hmotn. % již po prvním naočkování, při 0,015 hmotn. % BIT po druhém naočkování a při 0,03 hmotn. % BIT po třetím naočkování.

V případě přídavku samotného MIT bylo dosaženo plného bakteriálního vzrůstu až po čtyřech naočkováních (inokulacích), a sice při nejmenším množství biocidu 0,05 hmotn. %. Ale také při vyšších koncentracích biocidu 0,01, 0,015 a 0,02 hmotn. % MIT byl ještě zjištěn rovnoměrný až silný bakteriální vzrůst. Jen u vzorku s nejvyšší koncentrací 0,03 hmotn. % nebyl ani po čtyřech naočkováních zjištěn žádný bakteriální vzrůst.

Naproti tomu se biocidní kompozice zMIT a BIT podle vynálezu ukázala jako podstatně účinnější. Po čtyřech inokulacích nastal jen u nejmenší koncentrace 0,005 hmotn. % MIT/BIT ještě značný bakteriální vzrůst. Při vyšších koncentracích v rozmezích od 0,01 do 0,03 hmotn. % MIT/BIT bylo bakteriálnímu vzrůstu v nanášecí kompozice A úplně zabráněno.

Příklad 10

Příklad 9 byl opakován, avšak s použitím nanášecí hmoty B místo nanášecí hmoty A.

U nanášecí hmoty B se jedná o obzvlášť na emise chudou omítku na bázi polymerní disperze, kterou lze získat obchodně pod označením „Granol KR 3.0 LF“ (firma Steinwerke Kurferdreh GmbH).

Výsledky s použitím nanášecí kompozice B jsou shrnuty v následující tabulce XII.

-16CZ 294066 B6

Tabulka XII

Nanášecí kompozice

Biocid (hmotn. %)	Bakteriální vzrůst (7 dní + 48 h po 4. očkování)
bez	(vzrůst již po 1. inokulaci)
BIT 0,005	(vzrůst již po 1. inokulaci)
0,01	(vzrůst již po 1. inokulaci)
0,015	(vzrůst již po 2. inokulaci)
0,02	(vzrůst již po 2. inokulaci)
0,03	(vzrůst již po 3. inokulaci)
MIT 0,005	4
0,01	1
0,015	1
0,02	0
0,03	0
MIT/BIT 0,005	5
0,01	0
0,015	0
0,02	0
0,03	0

Výsledky s nanášecí kompozicí B odpovídají dalekosáhle výsledkům u nanášecí kompozice A.

Také v případě nanášení kompozice B došlo již po prvním naočkování k úplnému bakteriálnímu vzrůstu.

Při použití samotného BIT bylo možno pozorovat po třetí inokulaci úplné bakteriální napadení.

Při používání samotného MIT by mohlo být po čtvrtém naočkování zcela zabráněno bakteriálnímu vzrůstu jen s nejvyššími koncentracemi.

Naproti tomu se s kombinací MIT/BIT dospělo k úplnému potlačení bakteriálního vzrůstu již s relativně nízkou koncentrací 0,01 hmotn. %.

Příklad 11

Podobně jako v příkladu 1 je prokázáno synergické působení obou biologicky účinných látek MIT a BIT vůči mikroorganismu Aspergillus niger.

Zkušební násady obsahovaly jako živné prostředí Sabourandův maltózový bujón. Koncentrace spor činila zhruba 10⁶/ml. Inkubační doba činila 96 hodin při 25 °C. Každý vzorek byl inkubován na třepačce s dobou otáček 120 U/min.

Z následující tabulky XIII jsou zřejmé hodnoty minimálních inhibičních koncentracích zkoumaných biocidních kompozic. Hodnota MIK při použití samotného MIT činila 750 ppm a při použití samotného BIT 100 ppm.

-17CZ 294066 B6

Tabulka XIII

Hodnoty MIK ohledně Aspergillus niger při inkubační době 96 hodin

Koncentrace MIT Koncentrace BIT (ppm)

(ppm)	150	100	75	50	25	10	5	0
750	-	-	-	-	-	-	-	-
500		-	-	-	-	-	+	+
250		-	-	-	-	+	4-	+
100		-	-	-	+	4	+	+
75		-	-	-	+	+	4-	4-
50		-	-	+	+	+	+	+
25		-	-	+	+	+	+	+
10		-	4-	4·	4-	+	+	4
0		-	+	+	4-	4*	+	+

Při současném nasazení MIT a BIT nastal synergismus. Výpočet synergického indexu vyplývá z tabulky XIV. Podle toho existoval u Aspergillus niger nejnižší synergický index (0,57) u směsi z 50 hmotn. % MIT a 50 hmotn. % BIT.

Tabulka XIV

Výpočet synergického indexu u Aspargillus niger při inkubační době 96 hodin

MIK při k MIT Qa(PPm)	oncentraci BIT Qb (PPm)	Σ konc. BIT+MIT Q. + Qb(ppm)	Konc. MIT (hmotn. %)	Konc. BIT (hmotn. %)	Qa/QA	Qi/Qb	Synergický index Qh/Qa+Qi/Qb
0	100	100	0,0	100,0	0,0	1,00	1,00
25	75	100	25,0	75,0	0,03	0,75	0,78
50	75	125	40,0	60,0	0,07	0,75	0,82
50	50	100	50,0	50,0	0,07	0,50	0,57
75	75	150	50,0	50,0	0,10	0,75	0,85
75	50	125	60,0	40,0	0,10	0,50	0,60
100	50	150	66,7	33,3	0,13	0,50	0,63
250	50	300	83,3	16,7	0,33	0,50	0,83
250	25	275	90,9	9,1	0,33	0,25	0,58
500	25	525	95,2	4,8	0,67	0,25	0,92
500	10	510	98,0	2,0	0,67	0,10	0,77
750	0	750	100,0	0,0	1,0	0,00	1,00

-18CZ 294066 B6

Příklad 12

Podobně jako v příkladu 1 se prokazuje synergické působení obou biologicky aktivních látek MIT a BIT vůči mikroorganismu Penicillium funiculosum.

Testované sestavy obsahovaly Sabouraudův maltózový bujón jako živné médium. Koncentrace spor byla zhruba 10⁶ na 1 ml. Inkubační doba činila 96 hodin při 25 °C. Každý vzorek byl inkubován na inkubační třepačce při otáčeních 120 U/min.

Z následující tabulky XV lze vidět MIK-hodnoty vyšetřovaných biocidních kompozic. Hodnota MIK při použiti samotného MIT činila 200 ppm a při použití samotného BIT 40 ppm.

Tabulka XV

Hodnoty minimálních inhibičních koncentrací u Penicillium funiculosum při inkubační době 96 hodin

Koncentrace MÍT Koncentrace BIT (ppm)

(ppm)	75	50	40	30	20	15	10	0
200	-	-	-	-	-	-	-	-
150	-	-	-	-	-	-	-	+
100	-	-	-	-	-	-	-	+
75	-	-	-	-	-	-	+	+
50	-	-	-	-	-	+	+	+
25	-	-	-	-	-	+	+	+
10	-	-	-	-	-	+	+	+
5	-	-	-	+	+	+	+	+
0	-	-	-	+	+	+	+	+

Při současném použití MIT a BIT došlo k synergickému účinku. Výpočet synergického indexu vyplývá z tabulky XVI. Na základě toho ležel u Penicillium funiculosum nejnižší synergický index (0,55) u směsi ze 33,3 hmotn. % MIT a 66,7 hmotn. % BIT.

-19CZ 294066 B6

Tabulka XVI

Výpočet synergického indexu u Penicillium funiculosum při době inkubace 69 hodin.

MIK při k MIT Qa(ppm)	oncentraci BIT Qb (ppm)	Σ konc. BIT+MIT Q. + Qb (ppm)	Konc. MIT (hmotn. %)	Konc. BIT (hmotn. %)	Q?Qa	Qb/Qn	Synergický index Q_a/Q_A + Qb/Q_B
0	40	40	0,0	100,0	0,0	1,00	1,00
10	30	40	25,0	75,0	0,05	0,75	0,80
10	20	30	33,3	66,7	0,05	0,50	0,55
25	30	55	45,5	54,5	0,13	0,75	0,88
25	20	45	55,6	44,4	0,13	0,50	0,63
50	20	70	71,4	28,6	0,25	0,50	0,75
75	20	95	78,9	21,1	0,38	0,50	0,88
75	15	90	83,3	16,7	0,38	0,38	0,75
100	15	115	87,0	13,0	0,50	0,38	0,88
100	10	110	90,9	9,1	0,50	0,25	0,75
200	0	200	100,0	0,0	1,00	0,00	1,00

Příklad 13

Podobně jako v příkladu 1 se prokáže synergický účinek směsi biologicky aktivních látek, jež obsahuje kromě MIT a BIT ještě navíc 3-jód-2-propionyl-N-butylkarbamát (IPBC), vůči mikroorganismu Aspergillus niger.

Zkušební sestavy obsahovaly Sabouraudův maltózový bujón jako živné prostředí. Koncentrace sport se pohybovala kolem 10⁶/ml. Doba inkubace činila 72 hodin při 25 °C. Každý vzorek byl inkubován na inkubační třepačce při otáčkách 120 U/min.

Z následující tabulky XVII jsou patrné hodnoty MIK zkoušených biocidních kompozic. Hodnota MIK při nasazení samotné směsi MIT/BIT činila 150 ppm a při použití samotného IPBC 2,5 ppm.

-20CZ 294066 B6

Tabulka XVII

Hodnoty MIK pro Aspergillus niger při době inkubace 72 hodin

Koncen-

Při použití předem uvedené směsi z MIT a BIT a přídavku IPBC došlo k synergickému působení. Výpočet synergického indexu vyplývá z tabulky XVIII. Podle toho existoval v případě Aspergillus niger nejnižší synergický index (0,80) u směsi z na jedné straně 99,0 hmotn. % MIT/BIT a na druhé straně 1,0 hmotn. % IPBC.

Tabulka XVIII

Výpočet synergického indexu u Aspergillus niger při inkubační době 72 hodin

MIK při koncentraci MIT/BIT IPBC	Σ konc. ΒΠ7ΜΙΤ + IPBC Qa + Qb(PPm)	Konc. MIT/BIT (hmotn. %)	Konc. IPBC (hmotn. %)	Q./Qa	Qb/Qa	Synergický index Q/Qa + Qi/Qb
Q>(ppm)	Qb (PPm)
150	0	150	100,0	0,0	1,00	0,00	1,00
75	0,75	75,75	99,0	1,0	0,50	0,30	0,80
75	1	76	98,7	1,3	0,50	0,40	0,90
50	1,5	51,5	97,1	2,9	0,33	0,60	0,93
0	2,5	2,5	0,0	100,0	0,00	1,00	1,00

Příklad 14

Podobně jako v příkladu se ukáže synergismus směsi biologicky aktivních látek, která vedle MIT a BIT obsahuje ještě navíc IPBC, vůči mikroorganismu Penicillium funiculosum.

-21 CZ 294066 B6

Zkušební sestavy obsahovaly Sabouraudův maltózový bujón jako živné prostředí. Koncentrace spor byla zhruba 10⁶ na mol. Doba inkubace činila 72 hodin při 25 °C. Každý vzorek byl inkubován na inkubační třepačce při otáčkách 120 U/min.

Z následující tabulky XIX lze vidět hodnoty MKI vyšetřovaných biocidních kompozic. Hodnota MIK při použití samotné směsi ΜΙΊ7ΒΙΤ činidla 20 ppm a při použití samotného IPBC 0,75 ppm.

Tabulka XIX

Hodnoty MIK v případě Penicillium Funiculosum při inkubační době 72 hodin

Koncentrace MIT/BIT Koncentrace IPBC (ppm)

(ppm)	2	1,75	1,5	1,25	1	0,75	0,5	0,3	0,2	0,1	0
50			-								-
45											-
40											-
35											-
30											-
25											-
20											-
15											+
12,5										+	+
10										+	+
7,5						-	-	4“	+	+	+
0						-	+	+	+	+

Při použití předem uvedené směsi z MIT a BIT a přídavku IPBC došlo k synergickému účinku. Výpočet synergického indexu vyplývá z tabulky XX. Na základě toho byl u Penicillium funiculosum zjištěn nejnižší synergický index (0,77) u směsi z na jedné straně 98,0 hmotn. % MIT/BIT a na druhé straně 2,0 hmotn. % IPBC.

Tabulka XX

Výpočet synergického indexu u Penicillium funiculosum při době inkubace 72 hodin

MIK při koncentraci MIT/BIT IPBC	Σ konc. MIT/BIT+ IPBC Qa + Qb (ppm)	Konc. MIT/BIT (hmotn. %)	Konc. IPBC (hmotn. %)	Q./Qa	Qi/Qb	Synergický. index Ω./Οα + Ωβ/Οβ
Q.(PPm)	Qb (PPm)
0	0,75	0,75	0,0	100,0	0,0	1,00	1,00
10	0,3	10,3	97,1	2,9	0,50	0,40	0,90
10	0,2	10,2	98,0	2,0	0,50	0,27	0,77
12,5	0,2	12,7	98,4	1,6	0,63	0,27	0,89
15	0,1	15,1	99,3	0,7	0,75	0,13	0,88
20	0	20	100,0	0,0	1,00	0,00	1,00

-22CZ 294066 B6

Příklad 15

Podobně jako v příkladu 1 je ukázáno synergické působení směsi biologicky účinných látek, která vyjma MIT a BIT obsahuje ještě navíc 2-n-oktylizotiazolin-3-on (OIT), vůči mikroorganismu Aspergillus niger.

Zkušební sestavy obsahovaly Sabouraudův maltózový bujón jako živné prostředí. Koncentrace spor byla zhruba 10⁶/ml. Inkubační doba činila 72 hodin při 25 °C. Každý vzorek byl inkubován na třepačce při době otáček 120 U/min.

Z následující tabulky XXI jsou zřejmé hodnoty MIK zkoumaných biocidních kompozic. Hodnota MIK při nasazení samotné směsi ΜΓΓ/ΒΙΤ činila 100 ppm a při nasazení samotného OIT 5 ppm.

Tabulka XXI

Hodnoty MIK v případě Aspergillus niger při době inkubace 72 hodin

Končen-

Při použití předem uvedené směsi z MIT a BIT a přídavku OIT došlo k synergickému účinku. Výpočet synergického indexu vyplývá z tabulky XXII. Podle toho byl u Aspargillus niger zjištěn nejnižší synergický index (0,80) u směsi z na jedné straně 92,3 hmotn. % MIT/BIT a na druhé straně 7,7 hmotn. % OIT a rovněž u směsi z na jedné straně 98,4 hmotn. % MIT/BIT a na druhé straně 1,6 hmotn. % OIT.

-23 CZ 294066 B6

Tabulka XXII

Výpočet synergického indexu u Aspargillus niger při době inkubace 72 hodin

MIK při koncentraci	Σ konc. MIT/BIT + OIT Qa + Qb(PPm)	Konc. MIT/BIT (hmotn. %)	Konc. OIT (hmotn. %)	Qb/Qa	Qb/Qa	Synergický index Q/Qa + Qb/Qe
ΜΠ7ΒΙΊ Q.(PPm)	OIT Qb (PPm)
0	5	5	0,0	100,0	0,0	1,00	1,00
30	2,5	32,5	92,3	7,7	0,30	0,50	0,80
40	2,5	42,5	94,1	5,9	0,40	0,50	0,90
60	0,5	61	98,4	1,6	0,60	0,20	0,80
80	0,5	80,5	99,4	0,6	0,80	0,10	0,90
100	0	100	100,0	0,0	1,00	0,00	1,00

Příklad 16

Podobně jako u příkladu 1 je zde prokázán synergický účinek směsi biologicky aktivních látek, jež vyjma MIT a BIT obsahuje navíc OIT, vůči mikroorganismu Penicillium funiculosum.

Zkušební sestavy obsahovaly Sabouraudův maltózový bujón jako živné médium. Koncentrace spor byla cca 10⁶ na ml. Inkubační doba činila 72 hodin při 25 °C. Každý vzorek byl inkubován na inkubační třepačce při otáčkách 120 U/mit.

Z následující tabulky XXIII jsou zřejmé hodnoty MIK vyšetřovaných biocidních sestav. Hodnota MIK při nasazení samotné směsi MIT/BIT činila 50 ppm a při použití samotného OIT 5 ppm.

Tabulka ΧΧΠΙ

Koncentrace MIT/BIT Koncentrace OIT (ppm)

(ppm)	5	2,5	1	0,5	0,25	0
75	-	-	-	-	-	-
50	-	-	-	-	-	-
25	-	-	-	-	-	-
15	-	-	-	-	-	-
10	*	-	-	-	-	+
5	-	-	-	-	+	+
0	-	-	-	-	+	+

Při použití předem uvedené směsi z MIT a BIT, jakož i přídavku OIT nastal příslušný synergismus. Výpočet synergického indexu vyplývá z tabulky XXIV. Podle toho byl u Penicillium funiculosum zjištěn nejnižší synergický index (0,50) u směsi z na jedné straně 93,8 hmotn. % MIT/BIT a na druhé straně 6,2 hmotn. % OIT.

-24CZ 294066 B6

Tabulka XXIV

Výpočet synergického indexu u Penicillium funiculosum při době inkubace 72 hodiny

MIK při koncentraci	Σ konc. MIT/BIT + OIT Q. + Qb (ppm)	Konc. MIT/BIT (hmotn. %)	Konc. OIT (hmotn. %)	Qh/Qa	Qb/Qa	Synergický index Q^Qa +Qb/Qa
ΜΠ7ΒΙΊ Q«(ppm)	OIT Qb (ppm)
0	5	5	0,0	100,0	0,0	1,00	1,00
5	2,5	7,5	66,7	33,3	0,10	0,50	0,60
10	2,5	12,5	80,0	20,0	0,20	0,50	0,70
15	2,5	17,5	85,7	14,3	0,30	0,50	0,80
15	1	16	93,8	6,2	0,30	0,20	0,50
25	1	26	96,2	3,8	0,50	0,20	0,70
25	0,5	25,5	98,0	2,0	0,50	0,10	0,60
25	0,25	25,25	99,0	1,0	0,50	0,05	0,55
50	0	50	100,0	0,0	1,00	0,00	1,00

Příklad 17

Podobně jako v příkladu 1 se ukazuje synergické působení směsi biologicky účinných látek, jež 10 obsahuje kromě MIT a BIT ještě navíc ÓIT, vůči mikroorganismu Saccharomyces cerevisiae.

Testované násady obsahovaly Sabouraudův maltózní bujón jako živné prostředí. Buněčná hustota činila zhruba 10⁶ jednotek/ml. Doba inkubace činila 72 hodiny při 25 °C. Každý vzorek byl inkubován při otáčkách 120 U/mit na inkubační třepačce.

Z následující tabulky XXV lze vidět hodnoty MIK zkoumaných biocidních kompozic. Hodnota MIK při použití samotné směsi MIT/BIT činila 40ppm a při použití samotného OIT 5 ppm.

-25CZ 294066 B6

Tabulka XXV

Hodnoty MIK u Saccharomyces cerevisiae při inkubační době 72 hodin

Koncentrace MIT/BIT

Koncentrace OIT (ppm)

(PPm)	20	15	12,5	10 7,5	5	2,5	1	0,5	0,25	0
100		-	-	-	-	-	-	-	-	-
80		-				-	-	-	-	-
70						-	-	-	-	-
60						-	-	-	-	-
50						-	-	-	-	-
40						-	-	-	-	-
30						-	-	-	-	+
-20						-	+	+	+	+
15						+	+	+	+	+
10						+	+	4*	+	+
5	-		-	-		+	+	+	+	+
0						+	+	+	+	+

Při použití předem uvedené směsi z MIT a BIT a přídavku OIT došlo k synergickému účinku. Výpočet synergického indexu vyplývá z tabulky XXVI1. Na základě toho existoval v případě Saccharomyces cerevisiae nejnižší synergický index (0,80) u směsi z na jedné straně 99,2 hmotn. % MIT/BIT a na druhé straně 0,8 hmotn. % OIT.

Tabulka XXVI

Výpočet synergického indexu ohledně Saccharomyces cerevisiae při době inkubace 72 hodin

MIK při koncentraci	Σ konc. MIT/BIT+ OIT Qa + Qb (ppm)	Konc. MIT/BIT (hmotn. %)	Konc. OIT (hmotn. %)	Q./Qa	Qb/Qa	Synergický index Q./Qa + Qb/Qe
MIT/BIT Q.(ppm)	OIT Qb (PPm)
0	5	5	0,0	100,0	0,0	1,00	1,00
30	0,5	30,5	96,8	3,2	0,75	0,20	0,95
30	0,5	30,5	98,4	1,6	0,75	0,10	0,85
30	0,25	30,25	99,2	0,8	0,75	0,05	0,80
40	0	40	100,0	0,0	1,00	0,00	1,50

Příklad 18

Podobně jako u příkladu 1 je ukázán synergismus směsi biologicky aktivních látek, která obsahuje vyjma MIT a BIT ještě navíc OIT, vůči mikroorganismu Pseudomonas euruginosa.

-26CZ 294066 B6

Zkušební sestavy obsahovaly Miiller-Hintonův bujón jako živné médium. Buněčná hustota činila cca 10⁶ zárodků na 1 ml. Doba inkubace činila 144 hodiny při 25 °C. Každý vzorek byl inkubován při otáčkách 120 U/mit na inkubační třepačce.

Z následující tabulky XXVII jsou patrné hodnoty MIK vyšetřovaných biocidních kompozic. Hodnota MIK při nasazení samotné směsi MIT/BIT činidla 30 ppm a při nasazení samotného OIT vykazovala při 800 ppm.

-27CZ 294066 B6

Tabulka XXVII

O '	i i	4*	4*	+	+	+
		1 i	1 1	4-	4*	4'	4“	+
w>
r« O	t	1 1	1 1	+	+	+ .	+	•t
o ♦—i	í	t 1	i a	+	+	+	4~	4-

<r>

<·»« + + o

O I rI < · I 4*

	o o 00	I	f 1 1	1 1	• ' +
	H
•	1—f
Q tí O	« ř	8 Cu Cl	V-> t-	o	o t	o	o <N	n r4	o 1—i	o

~ a

-28CZ 294066 B6

Při použití výše uvedené směsi zMIT a BIT a přídavku OIT došlo k působení synergického účinku. Výpočet synergického indexu vyplývá z tabulky XXVIII. Podle ní byl u Pseudomonas auruginosa zjištěn nejnižší synergický index (0,53) u směsi z na jedné straně 44,4 hmotn. % MIT/BIT a na druhé straně 55,6 hmotn. % OIT.

Tabulka XXVIII

Výpočet synergického indexu u Pseudomonas aeruginosa při inkubační době 144 hodin

MIK při koncentraci	Σ konc. MIT/BIT+ OIT Qa + Qb (ppm)	Konc. MIT/BIT (hmotn. %)	Konc. OIT (hmotn. %)	Q./Qa	Qb/Qe	Synergický index Q_s/Qa + Qi/Qb
MIT/BIT Qa(ppm)	OIT Qb (PPm)
0	900	900	0,0	100,0	0,0	1,00	1,00
5	700	705	0,7	99,3	0,13	0,78	0,90
10	600	610	1,6	98,4	0,25	0,67	0,92
10	500	510	2,0	98,0	0,25	0,56	0,81
10	400	410	2,4	97,6	0,25	0,44	0,69
15	300	315	4,8	95,2	0,38	0,33	0,71
15	200	215	7,0	93,0	0,38	0,22	0,60
20	100	120	16,7	83,3	0,50	0,11	0,61
20	75	95	21,1	78,9	0,50	0,08	0,58
20	50	70	28,6	71,4	0,50	0,06	0,56
20	25	45	44,4	55,6	0,50	0,03	0,53
40	0	40	100,0	0,0	1,00	0,00	1,00

Příklad 19

Podobně jako v příkladu 1 se ukazuje synergismus směsi biologicky účinných látek, která kromě MIT a BIT obsahuje ještě navíc formaldehyd (HCHO), vůči mikroorganismu Escherichia coli.

Zkušební násady obsahovaly Můller-Hintonův bujón jako živné prostředí. Buněčná hustota vykazovala cca 10⁶ buněk/ml. Inkubační doba činila 48 hodin při 25 °C. Každý vzorek byl inkubován při otáčkách 120 U/min na inkubační třepačce.

Z následující tabulky XXIX jsou zřejmé hodnoty MIK vyšetřovaných biocidních kompozic. Hodnota MIK při nasazení samotné směsi MIT/BIT činila 25 ppm a při nasazení samotného HCHO 300 ppm.

-29CZ 294066 B6

Tabulka XXIX

Hodnoty MIK u Escherichia coli při době inkubace 48 hodin

Koncen-

Při použití předem uvedené směsi z MIT a BIT stejně jako přídavku HCHO došlo ke vzniku synergického účinku. Výpočet synergického indexu vyplývá z tabulky XXX. Podle toho nejnižší synergický index (0,77) byl u Escherichia coli zjištěn u směsi z na jedné straně 23,1 hmotn. % MIT/BIT a na druhé straně 76,9 hmotn % HCHO:

Tabulka XXX

Výpočet synergického indexu u Escherichia coli při inkubační době 48 hodin

MIK při koncentraci	Σ konc. BIT/MIT + HCHO Qa + Qb (ppm)	Konc. MIT/BIT (hmotn. %)	Konc. HCHO (hmotn. %)	Q_s/Qa	Qi/Qb	Synergický index Q./Q_A + Qb/Q_B
MIT/BIT Q.(PPm)	HCHO Qb (PPm)
0	300	300	o,o	100,0	0,0	1,00	1,00
7,5	200	207,5	3,6	96,4	0,30	0,67	0,97
12,5	100	112,5	11,1	88,9	0,50	0,33	0,83
15	50	65	23,1	76,9	0,60	0,17	0,77
25	0	25	100,0	0,0	1,00	0,00	1,00

Příklad 20

Podobně jako u příkladu 1 je zjištěno synergické působení směsi biologicky aktivních látek, která obsahuje kromě MIT a BIT ještě navíc HCHO, vůči mikroorganismu Pseudomonas aeruginosa.

-30CZ 294066 B6

Testované sestavy obsahovaly Miiller-Hintonův bujón jako živné médium. Buněčná hustota vykazovala zhruba 10⁶ buněk či zárodků na 1 ml. Inkubační doba činila 48 hodin při 25 °C. Každý vzorek byl inkubován při otáčkách 120 U/min na inkubační třepačce.

Z následující tabulky XXXI lze vidět hodnoty MIK zkoumaných biocidních kompozic. Hodnota MIK při použití samotné směsi MIT/BIT činila 30 ppm a při použití samotného HCHO 300 ppm.

Tabulka XXXI

Hodnoty MIK v případě Pseudomonas aeruginosa při době inkubace 48 hodin

Koncentrace MIT/BIT Koncentrace HCHO (ppm)

Při nasazení předem jmenované směsi z MIT a BIT a přídavku HCHO byl vyvolán synergický účinek. Výpočet synergického indexu vyplývá z tabulky XXXII. Podle toho byl u Pseudomonas aeruginosa pozorován nejnižší synergický účinek (0,75) u směsi z na jedné straně 11,1 hmotn. % MIT/BIT a na druhé stryně 88,9 hmotn. % HCHO.

Tabulka XXXII

Výpočet synergického indexu u Pseudomonas aeruginosa při době inkubace 48 hodin

MIK při koncentraci	Σ konc. BIT/MIT + HCHO Qa + Qb (ppm)	Konc. MIT/BIT (hmotn. %)	Konc. HCHO (hmotn. %)	Qa/Q_A	Qb/Qa	Synergický index Q./Qa+Qb/Qa
MIT/BIT Qa(PPm)	HCHO Qb (PPm)
0	300	300	0,0	100,0	0,0	1,00	1,00
7,5	200	207,5	3,6	96,4	0,25	0,67	0,92
12,5	100	112,5	H,1	88,9	0,42	0,33	0,75
15	100	115	13,0	87,0	0,50	0,33	0,83
20	50	70	28,6	71,4	0,67	0,17	0,83
30	0	30	100,0	0,0	1,00	0,00	1,00

-31 CZ 294066 B6

Příklad 21

Podobně jako v příkladu 1 je prokázáno synergické působení směsi biologicky aktivních látek, jež obsahuje kromě MIT a BIT ještě navíc 2-brom-2-nitropropan-l,3-diol (BNPD), vůči mikroorganismu Penicillium funiculosum.

Zkušební sestavy obsahovaly Sabouraudův maltózový bujón jako živné prostředí. Koncentrace spor činila zhruba 10⁶/ml. Inkubační doba činila 72 hodiny při 25 °C. Každý vzorek byl inkubován při otáčkách 120 U/min na inkubační třepačce.

Z následující tabulky XXXIII lze vidět hodnoty MIT zkoumaných biocidních kompozic. Hodnota MIK při použití samotné směsi MIT/BIT činila 25 ppm a při nasazení samotného BNDP 600 ppm.

Tabulka XXXIII

Hodnoty MIK ohledně Penicillium funiculosum při době inkubace 72 hodin

Konc.

Při použití výše uvedené směsi zMIT a BIT a přídavku BNPD došlo k jejich synergickému působení. Výpočet synergického indexu vyplývá z tabulky XXXIV. Podle toho byl u Penicillium funiculosum zjištěn nejnižší synergický index (0,67) u směsi z na jedné straně 11,1 hmotn. % MIT/BIT a na druhé straně 88,9 hmotn. % BNPD.

-32CZ 294066 B6

Tabulka XXXIV

MIK při koncentraci	Σ konc. MIT/BIT+ BNPD Q. + Qb(Ppm)	Konc. MIT/BIT (hmotn. %)	Konc. BNPD (hmotn. %)	Q./Qa	Qí/Qb	Synergický index Q^Qa + Qi/Qb
MIT/BIT Q.(ppm)	BNPD Qb (Ppm)
25	0	25	100	0,0	1,00	0,00	1,00
20	25	45	44,4	55,6	0,80	0,04	0,84
20	50	70	28,6	71,4	0,80	0,08	0,88
15	50	65	23,1	76,9	0,60	0,08	0,68
15	100	115	13,0	87,0	0,60	0,17	0,77
12,5	100	112,5	11,1	88,9	0,50	0,17	0,67
12,5	150	162,5	7,7	92,3	0,50	0,25	0,75
12,5	200	212,5	5,9	94,1	0,50	0,33	0,83
10	200	210	4,8	95,2	0,40	0,33	0,73
7,5	300	307,5	2,4	97,6	0,30	0,50	0,80
7,5	400	407,5	1,8	98,2	0,30	0,67	0,97
0	600	600	0,0	100,0	0,00	1,00	1,00

PATENTOVÉ

Claims

1. Biocidní kompozice jako přísada k látkám, které mohou být napadány škodlivými mikroorganismy, přičemž biocidní kompozice vykazuje nejméně dvě biocidní účinné látky, z nichž jednou je 2-metylizotiazolin-3-on, vyznačující se tím, že tato biocidní kompozice obsahuje jako další biologicky účinnou látku l,2-benzizotiazolin-3-on, vyjma biocidních kompozicí obsahujících 5-chlor-2-metylizotiazolin-3-on.

2. Biocidní kompozice podle nároku I,vyznačující se tím, že obsahuje 2-metylizotiazolin-3-on a l,2-benzizotiazolin-3-on ve hmotnostním poměru (50-1):(1-50).

3. Biocidní kompozice podle nároku 2, vyznačující se tím, že obsahuje 2-metylizotiazolin-3-on a l,2-benzizotiazolin-3-on ve hmotnostním poměru (15-1):(1-8).

4. Biocidní kompozice podle jednoho z nároků 1 až 3, vyznačující se tím, že obsahuje 2-metylizotiazolin-3-on a l,2-benzizotiazolin-3-on v celkové koncentraci od 1 do 20 hmotn. %, vztaženo na celkovou biocidní kompozici.

5. Biocidní kompozice podle jednoho z nároků 1 až 4, vyznačující se tím, že obsahuje polární a/nebo nepolární kapalné médium.

6. Biocidní kompozice podle nároku 5, v y z n a č u j í c í se tím, že jako polární kapalné médium obsahuje vodu, alifatický alkohol s 1 až 4 uhlíkovými atomy, glykol, glykoléter, glykolester, polyetylénglykol, polypropylénglykol, Ν,Ν-dimetylformamid nebo směs z takových látek.

7. Biocidní kompozice podle nároku 6, vyznačující se tím, že polárním kapalným prostředím je voda a kompozice vykazuje hodnotu pH od 7 do 9.

8. Biocidní kompozice podle nároku 5, v y z n a č u j í c í se t í m, že jako nepolární kapalné prostředí obsahuje xylen a/nebo toluen.

-33 CZ 294066 B6

9. Biocidní kompozice podle jednoho z nároků 1 až 8, vyznačující se tím, že obsahuje navíc 3-jód-2-propinyl-N-butylkarbamát jako biocidní účinnou látku.

10. Biocidní kompozice podle nároku 9, vyznačující se tím, že hmotnostní poměr 5 kompozice z 2-metylizotiazolin-3-onu a l,2-benzizotiazolin-3-onu na jedné straně a 3-jód-2- propionyl-N-butylkarbamátu na druhé straně leží v rozsahu od 1:10 do 100:1.

11. Biocidní kompozice podle jednoho z nároků 1 až 10, vyznačující se tím, že obsahuje navíc 2-n-oktylizotiazolin-3-on jako biocidní aktivní látku.

12. Biocidní kompozice podle nároku 11, vyznačující se tím, že hmotnostní poměr kombinace z 2-metyIizotiazolin-3-onu a l,2-benzizotiazolin-3-onu na jedné straně a 2-n-oktyIizotiazolin-3-onu na straně druhé leží v rozsahu od 1:10 do 100:1.

15

13. Biocidní kompozice podle jednoho z nároků 1 až 12, vy z n ač uj í c í se tím, že obsahuje navíc formaldehyd nebo formaldehydový primární materiál jako biocidní aktivní látku.

14. Biocidní kompozice podle nároku 13, vyznačující se tím, že hmotnostní poměr kombinace ze 2-metylizotiazolin-3-onu a l,3-benzizotiazolin-3-onu najedná straně aformal-

20 dehydu na formaldehydového primárního materiálu na straně druhé leží v rozsahu od 1:100 do 10:1.

15. Biocidní kompozice podle jednoho z nároků 1 až 14, vyznačující se tím, že obsahuje navíc 2-brom-2-nitropropan-l,3-diol jako biocidní účinnou látku.

16. Biocidní kompozice podle nároku 15, vyznačující se t í m, že hmotnostní poměr kombinace z 2-metylizotiazolin-3-onu a l,2-benzizotiazolin-3-onu na straně jedné a 2-brom-2-nitropropan-l,3-diolu na straně druhé leží v rozmezí od 1:10 až 10:1.

30

17. Biocidní kompozice podle jednoho z nároků 9 až 16, vyznačující se tím, že obsahuje 2-metylizotiazolin-3-on a l,2-benzizotiazolin-3-on ve hmotnostním poměru 1:1.

18. Použití biocidní kompozice podle některého z nároků 1 až 17 pro boj se škodlivými mikroorganismy.