CZ289488B6 - Merkaptoalkanoylový a acylmerkaptoalkanoylový derivát oxazepinu, thiazinu a thiazepinu, způsob jeho přípravy, meziprodukt pro jeho přípravu a farmaceutický prostředek, který ho obsahuje - Google Patents

Abstract

Merkaptoalkanoylov² a acylmerkaptoalkanoylov² deriv t oxazepinu, thiazinu a thiazepinu obecn ho vzorce I, kde znamen A skupinu obecn ho vzorce (a) kde znamen R.sub.1.n. a R.sub.12.n. na sob nez visle atom vod ku, alkylovou skupinu s 1 a 5 atomy uhl ku s p° m²m nebo s rozv tven²m °et zcem, skupinu -CH.sub.2.n.-cykloalkylovou se 3 a 6 atomy uhl ku v cykloalkylov m pod lu, -CH.sub.2.n.-fenylovou, -CH.sub.2.n.-naftylovou, -CH.sub.2.n.-thienylovou nebo -CH.sub.2.n.-thiazolylovou nebo R.sub.1.n. a R.sub.12.n. spolu vytv °ej skupinu cykloalkylovou s 5 atomy uhl ku, R.sub.2.n. atom vod ku nebo skupinu obecn ho vzorce (b) kde znamen R.sub.6.n. alkylovou skupinu s 1 a 4 atomy uhl ku nebo fenylovou skupinu, X atom kysl ku nebo s ry, R.sub.3.n. atom vod ku, alkylovou skupinu s 1 a 4 atomy uhl ku, Y skupinu CH.sub.2.n. nebo atom kysl ku, za podm nky, e v p° pad , kdy znamen Y atom kysl ku, znamen m slo 1, n 1 nebo 2, m 0 nebo 1 a r 0 nebo 1 a jeho farmaceuticky p°ijateln s l, je vhodn² pro v²robu farmaceutick²ch prost°edk pro o et°ov n kardiovaskul rn ch nemoc .\

Description

Merkaptoalkanoylový a acylmerkaptoalkanoylový derivát oxazepinu, thiazinu a thiazepinu, způsob jeho přípravy, meziprodukt pro jeho přípravu a farmaceutický prostředek, který ho obsahuje

Oblast techniky

Vynález se týká merkaptoalkanoylových a acylmerkaptoalkanoylových derivátů oxazepinu, thiazinu a thiazepinu, které jsou použitelné jako inhibitory enzymu konvertujícího angiotensin. Některé tyto deriváty se vyznačují rovněž inhibiční účinností neutrální endopeptidasy. Vynález se také týká způsobu přípravy těchto derivátů a meziproduktů pro jejich přípravu. Vynález se rovněž týká farmaceutických prostředků, které tyto nové selektivně dvojitě působící inhibitory obsahují.

Dosavadní stav techniky

Jakkoliv jsou známy četné účinné látky pro výrobu léčiv pro ošetřování kardiovaskulárních nemocí, jako je vysoký krevní tlak a selhání srdce po překrvení, věnuje se stálé úsilí vývoji nových účinných látek pro tento obor. Vynález je výsledkem takového vývoje.

Podstata vynálezu

Podstatou vynálezu je merkaptoalkanoylový a acylmerkaptoalkanoylový derivát oxazepinu, thiazinu a thiazepinu obecného vzorce I

kde znamená

A skupinu obecného vzorce

kde znamená

Ri a R12 na sobě nezávisle atom vodíku, alkylovou skupinu s 1 až 5 atomy uhlíku s přímým nebo s rozvětveným řetězcem, skupinu -CH2-cykloalkylovou se 3 až 6 atomy uhlíku v cykloalkylovém podílu, -CHr-fenylovou, -CHr-naftylovou, -CHr-thienylovou nebo -CHr-thiazolylovou nebo R_t a R_n spolu vytvářejí skupinu cykloalkylovou s 5 atomy uhlíku,

- 1 CZ 289488 B6

R₂ atom vodíku nebo skupinu obecného vzorce

Re - C - _t kde znamená

Re alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku nebo fenylovou skupinu,

X atom kyslíku nebo síry,

R₃ atom vodíku, alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku,

Y skupinu CH₂ nebo atom kyslíku, za podmínky, že v případě, kdy znamená Y atom kyslíku, znamená m číslo 1, η 1 nebo 2, m 0 nebo 1 a r 0 nebo 1 a jeho farmaceuticky přijatelná sůl.

Výrazem „alkylová skupina“ se vždy míní alkylová skupina s 1 až 5 atomy uhlíku s přímým nebo s rozvětveným řetězcem.

Výrazem „cykloalkylová skupina“ se vždy míní cykloalkylová nasycená skupina se 3 až 6 atomy uhlíku, nejvýhodněji skupina cyklopropylová, cyklobutylová, cyklopentylová a cyklohexylová.

Způsob přípravy merkaptoalkanoylového a acylmerkaptoalkanoylového derivátu oxazepinu, thiazinu a thiazepinu podle nároku 1 obecného vzorce I, kde jednotlivé symboly mají shora uvedený význam, spočívá podle vynálezu v tom, že se

a) kopuluje acylmerkaptopostranní řetězec obecného vzorce II

O O

II li

Rj-c —S--(CH₂) _r——C —OH ^R12 ^R1 kde jednotlivé symboly mají v nároku 1 uvedený význam nebo jeho aktivovaná forma s aminem obecného vzorce III (II)j

(III)_Z kde jednotlivé symboly mají v nároku 1 uvedený význam, v přítomnosti kopulačního činidla a

-2 CZ 289488 B6

b) odstraňuje se acylová skupina

O

Re - C a popřípadě se získaný ester karboxylové kyseliny, tedy v případě, že R₃ znamená alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, převádí na volnou kyselinu, tedy na sloučeninu, kde R₃ znamená atom vodíku.

Jednoduchou a nejvýhodnější sloučeninou obecného vzorce 1 je [4S-[4a(R*),7a,10aP]]oktahydro-4-[(2-merkapto-l-oxo-3-fenylpropyl)amino]-5-oxo-7H-pyrido[2,l-b][l,3]thiazepin7-karboxylová kyselina vzorce

a její farmaceuticky přijatelná sůl.

Sloučeniny obecného vzorce I jsou dvojitými inhibitory se schopnosti inhibovat enzym přeměňující angiotensin i neutrální endopeptidasu. Jsou tedy sloučeniny obecného vzorce I se zahrnutím jejich farmaceuticky vhodných solí užitečné při upravování fyziologických podmínek, kde se ukázalo být vhodným použití inhibitorů enzymu, přeměňujícího angiotensin. Do takových stavů patří onemocnění a stavy, charakterizované abnormalitami krevního tlaku, tlaku v očích a ledvinách se zahrnutím kardiovaskulárních onemocnění, zvláště hypertenze a srdečních selhání po přetížení, dále se to týká glaukomu, ledvinových onemocnění, jako je selhání a zástava ledvin, diabetická nefropathie a ledvinové potíže, které jsou důsledkem použití cyklosporinů a dalších imunosupresních látek. Další stavy, kde se uvádí použití inhibitorů enzymu, přeměňujícího angiotensin, zahrnují cirhosu jater, inhibice postupující atherosklerózy, prevence či léčbu hypertenzní nebo diabetické retinopathie, zlepšení myokardiální dysfunkce v průběhu nebo po infarktu myokardu a prevence restinosy po angioplastice. Dvojité inhibitory jsou rovněž použitelné při léčbě fyziologických stavů, kdy se ukazuje, že jsou k použití inhibitory neutrální endopeptidasy. Tyto stavy zahrnují tedy kardiovaskulární onemocnění, zvláště pak vysoký tlak, hyperaldosteronemii, ledvinová onemocnění, glaukom, jakož i úlevu při akutních a chronických bolestech. Jsou tedy sloučeniny obecného vzorce I použitelné při snižování krevního tlaku a dvojité inhibitory obecného vzorce I jsou navíc použitelné pro tyto účely s přihlédnutím k jejich vlastnostem jako diuretika a natruretika. Dvojité inhibitory jsou zvláště použitelné při léčbě srdečních selhání při přílišné námaze.

Sloučeniny obecného vzorce I a jejich farmaceuticky vhodné soli se mohou tedy podávat v tomto smyslu v množstvích podobných oněm, jež se obvykle používají při inhibitorech enzymu, přeměňujícího angiotensin. Tak například lze podávat sloučeniny obecného vzorce I postiženému, jako je člověk, v množství od asi 0,1 mg do asi 100 mg na kg hmotnosti těla a den, s výhodou od asi

0,5 mg do asi 25 mg na kg hmotnosti těla za den. Přitom se sloučeniny obecného vzorce I s výhodou podávají orálně, ale parenterální cesty se dají použít, například formou subkutánních, intramuskulámích nebo intravenosních injekcí, a právě tak je možno použít i aplikování topické. Denní dávku lze podávat najednou nebo se může rozdělit na dvě až čtyři dávky, podávané během dne.

Inhibitory obecného vzorce I lze podávat v kombinaci s lidským ANF 99-126. Taková kombinace pak bude obsahovat inhibitor obecného vzorce I v množství od asi 1 do asi 100 mg na kg hmotnosti těla a lidský ANF 99-126 v množství od asi 0,001 do asi 0,1 mg na kg hmotnosti těla.

Inhibitory obecného vzorce I lze podávat v kombinaci s jinými třídami farmaceuticky aktivních sloučenin. To může být například diuretikum, činidlo, blokující průchod vápníku aktivátor průchodu draslíku, činidlo, snižující obsah či podíl cholesterolu, β-blokující činidlo atd.

Inhibitory obecného vzorce I a jejich farmaceuticky vhodné soli, jakož i další farmaceuticky vhodné přísady se mohou vhodně upravovat k použití, jak to bylo výše uvedeno. Takové přípravky pro orální podávání zahrnují tablety, kapsle a elixíry a mezi vhodné přípravky pro parenterální podávání patří sterilní roztoky a suspenze. Vhodné přípravky pro léčbu glaukomu rovněž obsahují topické kompozice, jako jsou roztoky, masti i pevné přísady, jak je to popisováno v americkém patentovém spise 4 442 089. K tomuto použití vyhovuje dávka asi 10 až 500 mg aktivní složky po zpracování do fyziologicky vhodného nosiče, excipientu, pojivá, konzervačního činidla, stabilizátoru, příchutě atd.

Další příklady popisují blíže provedení podle tohoto vynálezu. Teploty jsou uváděny ve stupních Celsia. Chromatografie na tenké vrstvě byla prováděna na silikagelu, pokud není výslovně uvedeno jinak.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

Kyselina {4S-[4a(R*),7α, 1 OaPJ }-oktahydro-4-[(2-merkapto-l -oxo-3-fenylpropyl)amino]-5oxo-7H-pyrido[2,1 —b] [ 1,3]oxazepin-7-karboxylová

a) Sůl (S)-2-ftalimido-4-hydroxybutanové kyseliny a triethylaminu

K roztoku 3,0 g (25,2 mmol) L-homoserinu a 2,670 g (25,2 mmol) uhličitanu sodného v 60 ml vody se přidá 5,570 g (25,4 mmol) N-karbethoxyftalimidu. Reakční směs se míchá 2 hodiny za teploty místnosti, roztok se okyselí přidáním 6 N chlorovodíkové kyseliny a potom se provede extrakce do ethylesteru kyseliny octové. Získaný extrakt v uvedeném rozpouštědle se promyje solankou, vysuší se bezvodým síranem sodným, a filtruje se do roztoku 4,0 ml triethylaminu v 40 ml methylenchloridu. Zakalený roztok se zahustí a triturováním zbytku s ethylesterem kyseliny octové a ethyletherem se získá 5,11 g sloučeniny, jak je uvedena v názvu, to ve formě bílé pevné látky o t.t. 142-144 °C. Chromatografie na tenké vrstvě (5% kyseliny octové v ethylesteru kyseliny octové): Rf = 0,36.

[a]_D = -6,2° (c = 0,8, CHClj).

Analýza:

pro C18H26N2O5 vypočteno: 61,70 % C, 7,48 % H, 7,99 % N nalezeno: 61,45 % C, 7,47 % H, 7,84 % N

-4CZ 289488 B6

b) Sůl kyseliny (S)-2-ftalimido-4-(trifenylmethoxy)-butanové a triethylaminu

Homogenní roztok 1,890 g (5,4 mmol) produktu z části a) v 20 ml chloroformu a 80 μΐ triethylaminu se míchá po přidání 1,590 g (5,70 mmol) trifenylchlormethanu 2,5 hodiny za teploty místnosti, načež se roztřepává mezi ethylester kyseliny octové a 150 ml 0,1 N roztoku kyseliny chlorovodíkové. Organický podíl se promyje solankou a vodou, znovu vodou, vysuší se bezvodým síranem sodným a filtruje do roztoku 1,0 ml triethylaminu v 30 ml methylenchloridu. Takto získaný roztok se zahustí až do oiejovitého zbytku, ten se znovu rozpustí v malém množství směsi methylenchloridu a ethylesteru kyseliny octové, a takto získaný koncentrovaný roztok se trituruje s ethyletherem, až se zakalí. Směs se potom očkuje, ponechá v klidu za teploty místnosti, vyloučená sraženina se odfiltruje, promyje ethylesterem kyseliny octové a ethyletherem, načež se sušením ve vakuu získá 2,538 g sloučeniny, jak je uvedena v nadpise, ve formě bílé pevné látky, t.t. 165-170 °C (za rozkl.). Chromatografie na tenké vrstvě (10% methanolu v chloroformu), R_f=0,23.

[a]_D - +7,0° (c = 1,2, chloroform).

c) Kyselina (S)-2-ftalimido-6-hydroxyhexanová

K roztoku 1,030 g (7,0 mmol) (+)-L-s-hydroxynorleucinu (připraveného podle postupu Bodanszky-ho a spol., J. Med. Chem. 21, 1030-1035, 1978) 745 g (7,0 mmol) uhličitanu sodného v 12 ml vody se přidá 1,495 g (7,0 mmol) N-karbethoxyftalimidu, a reakční směs se míchá 2 hodiny za teploty místnosti. Vzniklý roztok se po filtraci ochladí na 0 °C a okyselením 6 N roztokem kyseliny chlorovodíkové vznikne bílá sraženina. Ta se odfiltruje, suší ve vakuu při 80 °C hodinu; výsledkem je 1,297 g sloučeniny, jejíž složení je uvedeno v nadpise, t.t. 162163 °C.

[a]_D - -35,7° (c = 1,3, methanol).

d) Methylester kyseliny (S)-2-ftalimido-6,6-dimethoxyhexanové

Suspenze 3,752 g (13,5 mmol) produktu zčásti c) a 2,178 g (6,7 mmol) uhličitanu česného v 44 ml dimethylformamidu se po přidání 3,0 ml, tedy 6,84 g (48,2 mmol) methyljodidu míchá 2 hodiny za teploty místnosti, zředí se potom přidáním ethylesteru kyseliny octové a roztok se postupně promývá vodou, obsahující malé množství hydrogensiřičitanu sodného, vodou 50% nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou, načež se vysuší bezvodým síranem sodným. Po filtraci se vydestilováním rozpouštědla z filtrátu ve vakuu získá 3,825 g bezbarvého oleje, který je dle vyhodnocení chromatografií na tenké vrstvě homogenní (aceton a směs hexanů, 1 : 1), Rf = 0,37.

K roztoku 1,37 ml, tedy 2,00 g (15,7 mmol) oxalylchloridu v 50 ml suchého methylenchloridu se po vychlazení na -78 °C přikapává roztok suchého dimethylsulfoxidu (2,24 ml, tedy 2,47 g, 31,6 mmol) v 2 ml methylenchloridu. Po 10ti minutách se přidá roztok 3,825 g (13,1 mmol) výše uvedeného alkohol-esteru v 10 ml methylenchloridu, za dalších 15 minut 8,0 ml triethylaminu, a reakční směs se míchá za chlazení na -78 °C 5 minut, načež se vyhřeje na 0 °C. Po zředění směsí ethylesteru kyseliny octové a diethyletheru se vzniklý roztok postupně promývá 1 N roztokem kyseliny chlorovodíkové, vodou a solankou, vysuší se bezvodým síranem sodným, a po filtraci se z filtrátu vydestilují rozpouštědla ve vakuu. Získá se tím očekávaný aldehyd jako homogenní olej dle vyhodnocení chromatografií na tenké vrstvě (aceton a směs hexanů 1:1), R_f=0,48.

K roztoku výše uvedeného aldehydu v 17 ml methanolu a 17 ml methylenchloridu se přidá 1,7 ml trimethylesteru kyseliny orthomravenčí a pak 180 g monohydrátu kyseliny p-toluensulfonové. Směs se míchá 1,5 hodin za teploty místnosti, načež se roztřepává mezi ethylester kyseliny octové a 50% roztok hydrogenuhličitanu sodného. Organická vrstva se po promytí vodou

-5CZ 289488 B6 a solankou vysuší bezvodým síranem sodným, a po filtraci se z filtrátu vydestilují organická rozpouštědla ve vakuu. Zbytek se čistí bleskovou chromatografií (silikagel Měrek, ethylester kyseliny octové a směs hexanů 1:1), frakce Čistého produktu se spojí a krystalováním ze směsi ethylesteru kyseliny octové a hexanu se získá 3,45 g analyticky čisté látky, jejíž složení je uvedeno v nadpise, to jako prvá dávka s následující druhou v množství 215 mg. Jsou to bílé jehličky, t.t. 69-70 °C, chromatografie na tenké vrstvě (ethylester kyseliny octové a směs hexanů 1 : 1), R_f=0,35.

[a]_D = -27,4 °C (c = 1,5, chloroform).

Analýza:

pro Ci₇H₂iNO₆ vypočteno: 60,89 % C, 6,31 % H, 4,18 % N nalezeno: 60,80 % C, 6,32 % H, 4,16 % N

e) Methylester kyseliny [S-(R⁺,R⁺)]-2-{[2-ftalimido-4-(trifenylmethoxy)-l-oxobutyl]amino}-6,6-dimethoxyhexanové

K suspenzi 2,540 g (7,57 mmol) produktu z části d) v 18 ml methanolu se přidá 378 μΐ, tedy 390 mg (7,80 mmol) monohydrátu hydrazinu; mícháním se za 10 minut směs zhomogenizuje, míchá se pak dále za teploty místnosti po 3 dny, vzniklá suspenze se filtruje, z filtrátu se vydestiluje methanol ve vakuu, zbytek se rozmíchá v methylenchloridu a po filtraci se znovu rozpouštědlo vydestiluje. Ve formě bezbarvého oleje se takto získá surový amin jako meziprodukt. Mezitím se k roztoku 4,622 g (7,80 mmol) triethylaminové soli z části b) v 50 ml methylenchloridu přidá za chlazení na 0 °C 3,519 g (7,95 mmol) benzotriazol-l-yloxytris-(dimethylamino)-fosfoniumhexafluorfosfátu, směs se míchá 35 minut, dále se přidá roztok výše uvedené aminu v 15 ml methylenchloridu, a po 10ti minutách uchovávání za chlazení na 0 °C a dvou hodinách při 20 °C se roztok rozděluje mezi ethylether a vodu. Organická vrstva se promyje nasyceným (z 50%) roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou, vysuší se bezvodým síranem sodným a po filtraci se rozpouštědlo vydestiluje ve vakuu. Zbytek se čistí bleskovou chromatografií na silikagelu (Měrek), ethylacetát a hexan 6:4; získá se tím 3,580 g čisté látky, jak je její složení uvedeno v nadpise, to ve formě bílé pěny. Chromatografie na tenké vrstvě (ethylester kyseliny octové a směs hexanů 6:4), Rf = 0,32.

[a]o = + 26,2° (c - 0,6, chloroform).

f) Methylester kyseliny [S-(R⁺,R⁺)]-2-[(2-ftalimido-4-hydroxy-l-oxobutyl)amino]-6,6-dimethoxyhexanové

K roztoku 5,420 g (8,0 mmol) produktu z části e) v 60 ml methanolu se přidá 520 mg monohydrátu kyseliny p-toluensulfonové, reakční směs se míchá za teploty místnosti 1,5 hodin, načež se rozděluje mezi ethylester kyseliny octové a zředěný roztok hydrogenuhličitanu sodného. Po oddělení fází se vodný podíl extrahuje znovu do ethylesteru kyseliny octové, spojené organické extrakty se promyjí solankou, po vysušení bezvodým síranem sodným a filtraci se rozpouštědla z filtrátu vydestilují ve vakuu. Zbytek se čistí bleskovou chromatografií na silikagelu (Měrek, ethylester kyseliny octové a směs hexanů, 8:2) dále pak 5% methanolu v ethylesteru kyseliny octové a získá se tím 2,860 g sloučeniny, jak je její složení uvedeno v nadpise, to ve formě bezbarvého oleje. Chromatografie na tenké vrstvě (ethylacetát a směs hexanů, 7 : 3), Rf = 0,26.

[a]_D = + 18,7° (c = 1,3, chloroform).

-6CZ 289488 B6

g) Methylester kyseliny 4S-(4a,7a,10aP)-oktahydro-4-ftalimido-5-oxo-7H-pyrido[2,l-b]- [ 1,3]oxazepin-7-karboxylové

Do roztoku 2,10 g (4,95 mmol) produktu z části f) v 100 ml methylenchloridu se přidá 240 mg iontoměničové pryskyřice Amberlite^R 15, předem promývané postupně 6 N roztokem chlorovodíkové kyseliny, vodou, tetrahydrofuranem a methylenchloridem. Reakční směs se míchá za teploty místnosti 2,5 hodin, roztok se filtruje, rozpouštědla se vydestilují a čistěním bleskovou chromatografií na silikagelu (Měrek, ethylester kyseliny octové a směs hexanů 6 : 4) s následujícím použitím 100% ethylesteru kyseliny octové se získá 1,40 g sloučeniny, jejíž složení je uvedeno v nadpise, to ve formě bílé pěny.

h) Kyselina (S)-2-(acetylthio)benzenpropanová

Do roztoku 30,0 g (181,0 mmol) D-fenylalaninu a 73,5 g bromidu draselného v 365 ml 2,5 N roztoku kyseliny sírové se vnese 10,3 g (280 mmol) dusitanu sodného, a to během hodiny za udržování teploty reakční směsi na 0 °C. Reakční směs se míchá za chlazení na 0 °C další hodinu, potom ještě hodinu za teploty místnosti, roztok se extrahuje do etheru, roztok v etheru vodou, načež se roztok v etheru vysuší bezvodým síranem sodným. Po filtraci se ether vydestiluje ve vakuu a destilací olejovitého zbytku se získá 25,7 g kyseliny (R)-2-brom-3-benzenpropanové, t.v. 141 °C (73 Pa).

[a]p = + 14,5° (c = 2,4, chloroform)

Směs 7 ml (97,9 mmol) kyseliny thiooctové a 5,48 g (97,9 mmol) hydroxidu draselného v 180,5 ml acetonitrilu se míchá pod argonem za teploty místnosti hodinu a 45 minut. Po ochlazení se v ledové lázni přidá do reakční směsi roztok 20,4 g (89 mmol) kyseliny (R)-2brom-3-benzenpropanové v 20 ml acetonitrilu, což trvá 10 minut.

Reakční směs se potom míchá pod argonem 5 hodin za teploty místnosti, filtruje se a acetonitril se po filtraci vydestiluje ve vakuu. Olejovitý zbytek se rozpustí v ethylesteru kyseliny octové, roztok se promyje 10% roztokem hydrogensiřičitanu sodného a vodou. Dále se ethylester kyseliny octové vydestiluje ve vakuu a získá se tak 19,6 g surového produktu. Surový produkt se čistí použitím odpovídající soli dicyklohexylaminu za použití izopropyletheru jako rozpouštědla při krystalizaci. Analyticky čistý vzorek soli dicyklohexylaminu a kyseliny (S)-2-(acetylthio)benzenpropanové se připraví překrystalováním z ethylesteru kyseliny octové, t.t. 146-147 °C.

[cc]d ⁼ -39,6° (c = 1,39, chloroform).

Analýza: pro C11H12O3S. C12H23N vypočteno: 68,11 % C, 8,70 % H, 3,45 % N, 7,91 % S nalezeno: 67,93 % C, 8,71 % H, 3,37 % N, 7,94 % S

Volnou kyselinu lze regenerovat rozdělováním soli dicyklohexylaminu mezi 5% roztok hydrogensiřičitanu sodného a ethylesteru kyseliny octové, čímž se získá kyselina (S)-2(acetylthio)benzenpropanová.

[a]_D = -70,1° (c = 1,91, chloroform)

Analýza: pro CnH₁₂O₃S vypočteno: 58,91 % C, 5,39 % H, 14,30 % S nalezeno: 58,73 % C, 5,41 % H, 14,53 % S

-7CZ 289488 B6

i) Methylester kyseliny {4S-[4a(R*),7a,10aP]}oktahydro-4-[2-(acetylthio)-l-oxo-3-fenylpropyl]amino-5-oxo-7H-pyrido[2,1 —b] [ 1,3]oxazepin-7-karboxylové

Do roztoku 620 mg (1,66 mmol) produktu ze stupně g) v 10 ml methanolu se přidá 85 μΐ, tedy 88 mg (1,75 mmol) monohydrátu hydrazinu a roztok se míchá za teploty místnosti 44 hodin. Po filtraci se pevný podíl na filtru promyje methanolem, filtrát se zbaví destilací ve vakuu rozpouštědel, zbytek se trituruje s methylenchloridem, znovu filtruje a oddestilováním těkavých podílů se získá surový amin jako zakalený olej, výtěžek asi 400 mg.

Ke studenému roztoku (0 °C) 410 mg (1,83 mmol) kyseliny (S)-2-(acetylthio)benzenpropanové a 250 μΐ, tedy 182 mg (1,80 mmol) triethylaminu v 10 ml methylenchloridu se přidá výše uvedený amin ve formě roztoku v 8 ml methylenchloridu; dále se přidá 808 mg (1,83 mmol) benzotriazol-l-yloxytris-(dimethylamino)-fosfonium-hexafluorfosfátu a vzniklý čirý, takřka bezbarvý roztok se míchá 40 minut při 0 °C a dále 2 hodiny za teploty místnosti. Směs se rozděluje mezi směs ethylesteru kyseliny octové a ethyletheru a vodu. Organická vrstva se promyje postupně 50% nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou, vysuší se bezvodým síranem sodným a po filtraci se z filtrátu rozpouštědla vydestilují. Zbytek se čistí bleskovou chromatografií na silikagelu (Měrek, 60-70 % ethylesteru kyseliny octové v hexanech) a získá se tím 601 mg čisté látky, jejíž složení je uvedeno v nadpise, to ve formě bílé pěny. Chromatografie na tenké vrstvě (ethylester kyseliny octové a směs hexanů 6 : 4): Rf = 0,27.

j) Kyselina {4S-[4a(R*),7a, 1 OaP]}-oktahydro-4-[(2-merkapto-l-oxo-3-fenylpropyl)amino]-5-oxo-7H-pyrido[2,l-b][l,3]oxazepin-7-karboxylová

Za vychlazení na 0 °C se roztok 590 mg (1,32 mmol) produktu z části i) v 10 ml methanolu zbaví kyslíku probubláváním argonem, načež se přidá 7 ml 1 N roztoku hydroxidu sodného, rovněž zbaveného kyslíku probubláváním argonem. Reakční směs se míchá 15 minut, teplota se nechá potom vystoupit na 20 °C a v míchání za zavádění argonu se pokračuje po dobu dalších 4,5 hodin. Potom se reakční směs okyselí přidáním 5% roztoku hydrogensiřičitanu draselného, zředí se vodou, extrahuje do ethylesteru kyseliny octové a získaný extrakt se promyje vodou a solankou. Po vysušení bezvodým síranem sodným se filtrát zahustí na objem asi 3 ml, tento zbytek se rozmíchá do ethylesteru kyseliny octové a malého množství hexanu, vyloučený pevný podíl se odfiltruje a sušením ve vakuu se takto získá 413 mg sloučeniny, jejíž složení je uvedeno v nadpise, t.t. 180,5 °C (za rozkl.). Chromatografie na tenké vrstvě (2% octové kyseliny v ethylesteru kyseliny octové), R_f = 0,39.

[a]o - -37,6° (c = 0,36, methanol).

Vysokotlaková kapalinová chromatografie: kolona YMC S3 ODS (6,0 na 150 mm), eluování % A : 90 % vody, 10 % methanolu, 0,2 % kyseliny fosforečné, % B : 10 % vody, 90 % methanolu, 0,2 % kyseliny fosforečné.

Průtoková rychlost: 1,5 ml/min

Detekce: 220 nm, t_R = 6,73 min (95,7%)

Analýza:

pro C20H28N2O4S .0,12 ethylesteru kyseliny octové vypočteno: 58,05 % C, 6,24 % H, 6,95 % N, 7,96 % S nalezeno: 58,23 % C, 6,34 % H, 6,83 % N, 7,81 % S

-8CZ 289488 B6

Příklad 2

Kyselina {3R[3a(S*),6a,9ap]}-hexahydro-3-[(2-merkapto-l-oxo-3-fenylpropyl)amino]-4oxo-2H,6H-pyrido[2,l-b][l,3]thiazin-6-karboxylová

a) N-[(F eny lmethoxy)-karbony l]-L-cystein

K roztoku 4,658 (9,16 mmol) N,N'-bis-[(fenylmethoxy)karbonyl]-L-cystinu v 35 ml methanolu se přidá 23 ml 2 N roztoku kyseliny sírové, načež se po malých dávkách vnáší 2,442 g (37,3 mmol) práškovaného zinku. Reakční směs se zahřívá 1,5 hodin na 70 °C, ještě za tepla se filtruje a zahustí na rotační odparce. Zbylý roztok se extrahuje do ethyletheru, roztok v etheru se promyje vodou a solankou. Po vysušení bezvodým síranem sodným a filtraci se z filtrátu vydestiluje ve vakuu rozpouštědlo, zbylý olej se rozpustí v chloridu uhličitém, roztok se vychladí na 0 °C a přidáním krystalku se vyvolá vylučování sraženiny. Získaný pevný podíl se odfiltruje a promytím studeným chloridem uhličitým se izoluje 2,647 g produktu. Matečný louh se zbaví rozpouštědla a bleskovou chromatografií na silikagelu (Měrek, ethylester kyseliny octové, potom 4% kyselina octová v ethylesteru kyseliny octové) se získá další produkt, po krystalování 246 mg. Celkový výtěžek produktu činí 2,894 g. Chromatografování na tenké vrstvě (5 % kyseliny octové v ethylesteru kyseliny octové), R_f = 0,58.

b) S-Acetyi-N-[(Fenylmethoxy)karbonyl]-L-cystein.

K homogennímu roztoku 2,70 g (10,6 mmol) produktu zčásti a) v 30 ml vody, zbavenému kyslíku probubláváním argonem a obsahujícímu 2,140 g (21,4 mmol) hydrogenuhličitanu draselného se přidá 8,0 ml, tedy 8,66 g (84,8 mmol) anhydridu kyseliny octové, a za 10 minut uchovávání za teploty místnosti se směs okyselí přidáním 10% roztoku chlorovodíkové kyseliny. Po extrakci do ethyletheru se získaný roztok promyje dvakrát vodou a solankou, vysuší se bezvodým síranem sodným, filtruje a filtrát se zbaví rozpouštědla destilací ve vakuu. Zbylý olej se destiluje azeotropně třikrát s toluenem a dvakrát se směsí ethyletheru a hexanu, načež olej zkrystaluje. Zbytek se trituruje se směsí ethyletheru a hexanu, odfiltrováním pevného podílu se takto získá 2,19 g produktu, čistého, složení, jež je uvedeno v nadpise. Chromatografíe na tenké vrstvě (5% kyseliny octové v ethylesteru kyseliny octové), Rf = 0,56.

c) Methylester kyseliny (S)-2-{N-[(fenylmethoxy)-karbonyl-S-acetyl-L-cysteinyl]amino}6,6-dimethoxyhexanové

K suspenzi 1,158 g (3,45 mmol) methylesteru kyseliny (S)-2-ftalimido-6,6-dimethoxyhexanové (viz příprava v příkladu 1 d) v 12 ml methanolu se přidá 176 μΐ, tedy 182 mg (3,63 mmol) monohydrátu hydrazinu, během 10ti minut je směs homogenní, míchá se za teploty místnosti 67 hodin, získaná suspenze se filtruje, z filtrátu se oddestiluje rozpouštědlo, zbytek se rozmíchá do methylenchloridu, a po filtraci se znovu oddestiluje rozpouštědlo. Ve formě bezbarvého oleje se izoluje surový amin jako meziprodukt. Mezitím se k částečné suspenzi 1,185 g (3,98 mmol) produktu zčásti b) v 14 ml methylenchloridu přidá 555 μΐ, tedy 403 mg (3,98 mmol) triethylaminu, získaný homogenní roztok se ochladí na 0 °C, přidá se k němu výše uvedený amin ve formě roztoku v 7 ml methylenchloridu, dále pak 1,762 g (3,98 mmol) benzotriazol-l-yloxytris(dimethylamino)-fosfoniumhexafluorborátu a reakční směs se míchá při 0 °C 2,5 hodin, dále 45 minut za teploty místnosti. Po oddestilování rozpouštědla se zbytek rozděluje mezi ethylester kyseliny octové a vodu, organický roztok se promyje z 50 % nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, solankou, vysuší se bezvodým síranem sodným a po filtraci se filtrát zbaví rozpouštědla. Zbytek se bleskově chromatografuje na silikagelu (Měrek, směs ethylesteru kyseliny octové a hexanů 65:35), a získá se tak 1,15 g čistého produktu složení, uvedeného v nadpise, to ve formě bílé pěny. Chromatografíe na tenké vrstvě (ethylester kyseliny octové a směs hexanů 75:25) R_f= 0,42.

-9CZ 289488 B6

Analýza:

pro C₂₂H₃₂N₂O₈S vypočteno: 54,53 % C, 6,68 % H, 5,78 % N, 6,62 % S nalezeno: 54,79 % C, 6,72 % H, 5,77 % N, 6,95 % S

d) Methylester kyseliny [3R-(3a,6a,9aP)]-l-hexahydro-3-{[(fenylmethoxy)-karbonyl]- amino}-4-oxo-2H,6H-pyrido[2,1 —b] [ 1,3]thiazin-6-karboxylové

Do roztoku 1,040 g (2,15 mmol) produktu z části c) v 12 ml methanolu se po vypuzení vzduchu argonem a po vychlazení na 0 °C přidá 490 μΐ, tedy 463 mg (2,14 mmol) roztoku natriummethoxidu v methanolu (25 % dle hmotnosti). Za 20 minut se reakční směs rozruší přidáním nasyceného roztoku chloridu amonného, zředí se vodou a vše se extrahuje do ethylesteru kyseliny octové. Získaný extrakt se promyje vodou a solankou, vysuší se bezvodým síranem sodným, a po filtraci se z filtrátu vydestiluje rozpouštědlo. Zbytek se opět rozpustí v 200 ml methylenchloridu a po přidání 820 mg iontoměničové pryskyřice Amberlyte^R 15, předem promyté postupně 6 N roztokem chlorovodíkové kyseliny, vodou, tetrahydrofuranem a methylenchloridem se vše míchá za teploty místnosti 3 hodiny. Potom se roztok filtruje, filtrát zbaví rozpouštědla a bleskovou chromatografií na silikagelu (Měrek, ethylester kyseliny octové a směs hexanů 65:35) se získá 757 mg sloučeniny, jejíž složení je uvedeno v nadpise, to ve formě bezbarvého oleje. Chromatografie na tenké vrstvě (ethylester kyseliny octové a směs hexanů, 75 : 25), R_f = 0,58.

e) Methylester kyseliny [3R-(3a,6a,9a3)]-hexahydro-3-amino-4-oxo-2H,6H-pyrido[2,l-b][1,3 ]thiazin-6-karboxylové

Roztok 752 mg (1,99 mmol) produktu ze stupně d) v 15 ml suchého methylenchloridu se smíchá za teploty místnosti s 620 μΙ, tedy 872 mg (4,36 mmol) trimethylsilanu, reakční směs se míchá 3 hodiny, rozhasí se vodou, a po přidání malého množství 10% roztoku kyseliny chlorovodíkové se vše extrahuje do ethyletheru. Vrstvy se oddělí, roztok v etheru se extrahuje ještě vodou, spojené vodné podíly se alkalizují na pH 13 přidáním 10% roztoku hydroxidu sodného, následuje dvojí extrakce do methylenchloridu. Spojený roztok v uvedeném rozpouštědle se vysuší bezvodým síranem sodným, roztok se filtruje a filtrát se zbaví rozpouštědla. Výsledkem je 290 mg surového produktu složení, jak je uvedeno v nadpise, bezbarvý olej, chromatografie na tenké vrstvě (10% methanolu v methylenchloridu), Rf = 0,38.

f) Methylester kyseliny (3R-[3a(S*),6a,9ap]}-hexahydro-3-[2-(acetylthio)-l-oxo-3-fenylpropyl]amino-4-oxo-2H,6H-pyrido[2,1 —b] [ 1,3]thiazin-6-karboxylové

K vychlazenému roztoku (0°C) 294 mg (1,31 mmol) kyseliny (S)-2-(acetylthio)benzenpropanové a 180 μΐ, tedy 131 mg (1,29 mmol) triethylaminu v 8 ml methylenchloridu se přidá roztok 287 mg (1,17 mmol) produktu z části e) v 6 ml methylenchloridu. Dále se přidá 575 mg (1,30 mmol) benzotriazol-l-yloxytris-(dimethylamino}-fosfoniumhexafluorfosfátu a čirý, takřka bezbarvý roztok se míchá při 0 °C po dobu 1 hodiny, dále ještě hodinu za teploty místnosti. Po oddestilování rozpouštědla na rotační odparce se zbytek roztřepává mezi ethylester kyseliny octové a 5% roztok hydrogensiřičitanu draselného. Organická vrstva se promývá postupně vodou, 50% nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou, vysuší se bezvodým síranem sodným, a po filtraci se rozpouštědlo oddestiluje. Zbytek se čistí bleskovou chromatografií na silikagelu (Měrek, ethylester kyseliny octové a směs hexanů, 1 : 1) a získá se tak 412 mg čisté látky složení, jak je uvedeno v nadpise a to ve formě bílé pěny. Chromatografie na tenké vrstvě (ethylester kyseliny octové a směs hexanů), Rf = 0,27, [a]_D = -107,0° (c = 0,6, chloroform).

-10CZ 289488 B6

g) Kyselina {3R-[3a(S*),6a,9ap]}-hexahydro-3-[(2-merkapto-l-oxo-3-fenylpropyl)amino]—4-oxo-2H,6H-pyrido[2,l-b][l,3]thiazin-6-karboxylová

K roztoku 406 mg (0,90 mmol) produktu z části f) v 5 ml methanolu, vychlazenému na 0 °C a zbavenému kyslíku probubláváním argonu se přidá 5 ml 1 N roztoku hydroxidu sodného, rovněž zbaveného kyslíku argonem. Po hodinovém míchání se teplota roztoku nechá vystoupit na teplotu místnosti a v míchání pod argonem se pokračuje další hodinu. Směs se dále okyselí přidáním 5% roztoku hydrogensiřičitanu draselného, zředí se vodou a extrahuje do ethylesteru kyseliny octové. Roztok v tomto rozpouštědle se promyje vodou, solankou, vysuší se bezvodým síranem sodným a z připraveného filtrátu se vypudí rozpouštědlo. Zbytek se čistí dvakrát bleskovou chromatografií na silikagelu (Měrek, 2 % kyseliny octové v ethylesteru kyseliny octové). Frakce se testují z hlediska produktu vysokotlakovou kapalinovou chromatografií. Odpovídající vhodné frakce se spojí, zbaví rozpouštědla a zbytek se destiluje dvakrát azeotropně s ethylesterem kyseliny octové. Zbytek se potom rozpustí v malém množství ethylesteru kyseliny octové, koncentrát se trituruje s hexanem, rozpouštědla se oddestilují a zbytek se suspenduje v hexanu, který se opět oddestiluje a sušením zbytku ve vakuu se získá 98,3 mg sloučeniny, jejíž složení je uvedeno v nadpise, to ve formě tvrdé bílé pěny. Chromatografie na tenké vrstvě (2 % kyseliny octové v ethylesteru kyseliny octové): R_f = 0,46.

[a]_D = -57,0°, C = 0,4 (chloroform)

Vysokotlaková kapalinová chromatografie: kolona YMC S3 ODS (6,0 na 150 mm), eluování:

% A: 90 % vody, 10 % methanolu, 0,2 % kyseliny fosforečné, a % B: 10 % vody, 90 % methanolu, 0,2 % kyseliny fosforečné, průtoková rychlost 1,5 ml/min, detekce při 220 nm; t_R = 8,33 min. (retenční doba) 95,0 %).

Analýza:

pro C18H22N2O4S2.0,2 ethylesteru kyseliny octové vypočteno: 54,79 % C, 5,77 % H, 6,80 % N, 15,56 % S nalezeno: 54,59 % C, 6,04 % H, 6,59 % N, 15,17 % S

Příklad 3

Kyselina 4S-[4a(R*),7a, 10aP)]-oktahydro-4-[(2-merkapto-l-oxo-3-fenylpropyl)amino]-5oxo-7H-pyrido[2,1 -b] [ 1,3]thiazepin-7-karboxylová

a) Methylester kyseliny [S-(R*,R*)]-2-{[-2-ftalimido-4-(acetylthio)-l-oxobutyl]amino}6,6-dimethoxyhexanové kyseliny

Ke studenému roztoku (0°C) 1,143 g (4,36 mmol) trifenylfosfmu v 20 ml tetrahydrofuranu se přidá 860 μΐ, tedy 883 mg (4,37 mmol) diizopropylazidodikarboxylátu. Během 5ti minut vznikne bílá sraženina, a po 30ti minutách se přidá roztok 928 mg (2,19 mmol) methylesteru kyseliny S(R*,R*)-2-[(2-ftalimido-4-hydroxy-l-oxobutyl)amino]-6,6-dimethoxyhexanové, jak byl popsán v příkladu l(f), v 8 ml tetrahydrofuranu a dále 312 μΐ, tedy 332 mg (4,36 mmol) kyseliny thiooctové. Reakční směs se míchá při 0 °C po dobu 1,25 hodiny a potom se roztřepává mezi z 50 % nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a ethylester kyseliny octové. Organický podíl se promyje solankou, vysuší se bezvodým síranem sodným a po filtraci se z filtrátu rozpouštědlo vydestiluje. Zbytek se rozpustí v malém množství ethylesteru kyseliny octové a malým podílem hexanu se vysráží trifenylfosfinoxid. Směs se filtruje, filtrát se zpracuje bleskovou chromatografií na silikagelu (Měrek, ethylester kyseliny octové a hexany, 65 :35) a získá se tím 894 mg sloučeniny jejíž složení je uvedeno v nadpise, ve formě bezbarvého oleje. Chromatografie na tenké vrstvě (ethylester kyseliny octové : směs hexanů 75 : 25), Rf = 0,43.

-11CZ 289488 B6

b) Methylester kyseliny [4S-(4a,7a,10aP)]-oktahydro-4-ftalimido-5-oxo-7H-pyrido[2,l-b]- [ 1,3]thiazepin-7-karboxylové

Do roztoku 814 mg (1,65 mmol) produktu z části a) v 15 ml methanolu se po ochlazení na 0 °C a vypuzení kyslíku argonem přidává za uvedené teploty 1,05 ml (4,6 mmol) 25% roztoku (dle hmotnosti) natriummethoxidu v methanolu, za 5 minut se reakční směs rozruší přidáním nasyceného roztoku chloridu amonného a po zředění vodou se extrahuje do ethylesteru kyseliny octové. Organický extrakt se promyje vodou a solankou, vysuší se bezvodým síranem sodným a po filtraci se filtrát zbaví rozpouštědla. Zbytek se opět rozpustí v 180 ml methylenchloridu a roztok se míchá s 285 mg Amberlytu ^R 15, který byl předem postupně promýván 6 N roztokem chlorovodíkové kyseliny, vodou, tetrahydrofuranem a pak methylenchloridem. Míchání po dobu 46 hodin za teploty místnosti je zakončeno filtrací, a po oddestilování rozpouštědla následuje blesková chromatografie na silikagelu (Měrek, ethylester kyseliny octové a směs hexanů, 1:1), čímž se získá 314 mg sloučeniny, jak je její složení uvedeno v nadpise, ve formě bílé pěny. Triturováním této pěny s ethyletherem se získá čistý produkt ve formě bílé pevné látky, t.t. 147— 148 °C, chromatografie na tenké vrstvě (ethylester kyseliny octové a směs hexanů, 75 :25), R_f=0,56.

[a]p ~ -143,2° (c = 0,6, chloroform).

c) Methylester kyseliny {4S-[4a(R*),7a,10aP]}-oktahydro-4-{[2-(acetylthio)-l-oxo-3fenylpropyl]-amino}-5-oxo-7H-pyrido[2,1 -b] [ 1,3]thiazepin-7-karboxylové

280 mg (0,72 mmol) produktu z části c) se rozpustí v 8 ml methanolu, do roztoku se přidá 42 μΐ, tj. 43,3 mg (0,86 mmol) monohydrátu hydrazinu a reakční směs se míchá 67 hodin za teploty místnosti, filtruje se a filtrát se spojí s methanolickým podílem po propláchnutí pevné látky na filtru. Po oddestilování rozpouštědla se zbytek trituruje s methylenchloridem, znovu se filtruje a zahuštěním filtrátu se získá surový amin jako žlutý olej, výtěžek asi 205 mg.

Do roztoku 178 mg (0,79 mmol) kyseliny (S)-2-(acetylthio)benzenpropanové a 111 μΐ, tedy 80 mg (0,80 mmol) triethylaminu se po vychlazení na 0 °C v prostředí 3 ml methylenchloridu přidá výše uvedený amin ve formě roztoku v 7 ml methylenchloridu. Dále se přidá 353 mg (0,80 mmol) benzotriazol-l-yloxytris(dimethylamino)-fosfonium-hexafluorfosfátu, takto připravený roztok se míchá hodinu při 0 °C, dále 2 hodiny za teploty místnosti, rozpouštědlo se oddestiluje a zbytek se roztřepává mezi ethylester kyseliny octové a 5% roztok hydrogensiřičitanu draselného.

Organický podíl se promývá postupně vodou, z 50 % nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou, vysuší se bezvodým síranem sodným, a po filtraci se z filtrátu vydestiluje rozpouštědlo. Zbytek se čistí bleskovou chromatografií na silikagelu (Měrek, ethylester kyseliny octové a směs hexanů, 1 : 1) a získá se tím, 272 mg produktu, jehož složení je uvedeno v nadpise, to ve formě bílé pěny.

d) Kyselina {4S[4a(R*),7a, 10aP)}-oktahydro-4-[(2-merkapto-l-oxo-3-fenylpropyl)amino]-5-oxo-7H-pyrido[2,1 -b] [ 1,3 ]thiazepin-7-karboxylová

Za teploty místnosti se 227 mg (0,49 mmol) produktu z části c) rozpustí v 5 ml methanolu, roztok se zbaví kyslíku probubláváním argonem a přidá se 8 ml 1 N roztoku hydroxidu sodného, zbaveného rovněž kyslíku argonem. Směs se míchá hodinu, po okyselení 10% roztokem chlorovodíkové kyseliny se zředí vodou a následuje extrakce do ethylesteru kyseliny octové. Organický extrakt se promyje vodou a solankou, vysuší se bezvodým síranem sodným a po filtraci se filtrát zahustí. Zbylý pevný podíl, se rozmíchá do ethylesteru kyseliny octové, pevný podíl se odfiltruje a filtrát se zpracuje bleskovou chromatografií na silikagelu (Měrek, 1 % kyseliny octové v ethyl

-12CZ 289488 B6 esteru kyseliny octové). Vhodné frakce se spojí, zbaví rozpouštědel a triturováním zbytku s ethylesterem kyseliny octové a diethyletherem se získá další podíl pevné látky. Spojením pevných podílů se isoluje celkem 150 mg produktu, jehož složení je uvedeno v nadpise, t.t. 216-217 °C (rozkl.). Chromatografie na tenké vrstvě (2 % kyseliny octové v ethylesteru kyseliny octové), R_f=0,56.

[a]_D = -72,6° (c = 0,28, dimethylformamid).

Vysokotlaková kapalinová chromatografie, kolona YMC S3 (6,0 na 150 mm), eluování použitím 40 % A : 90 % vody, 10 % methanolu - 0,2 % kyseliny fosforečné, a % B : 10 % vody, 90 % methanolu a 0,2 % kyseliny fosforečné, průtoková rychlost 1,5 ml za minutu, detekce při 220 nm, retenční doba = 9,48 min (97,4 %).

Analýza:

pro C19H24N2O4S2. 0,14 ethylesteru kyseliny octové vypočteno: 55,82 % C, 6,02 % H, 6,66 % N, 15,24 % S nalezeno: 55,53 % C, 6,01 % H, 6,63 % N, 14,91 % S

Příklad 4

Kyselina {4S-[4a(R*),7a,9aP]}-oktahydro-4-[(2-merkapto-l-oxo-3-fenylpropyl)-amino]-5oxopyrrolo[2,1 —b] [ 1,3]oxazepin-7-karboxylová

a) Kyselina (S)-2-ftalimido-5-oxo-5-(fenylmethoxy)pentanová

Do roztoku 17,49 g (73,70 mmol) γ-benzylesteru kyseliny L-glutamové v 180 ml vodného roztoku 7,81 g (73,70 mmol) uhličitanu sodného a 120 ml dioxanu se přidá 16,50 g (75,27 mmol, 1,02 ekv.) N-karbethoxyftalimidu, reakční směs se míchá 4,5 hodin, potom se okyselí přidáním 30 ml 6 N roztoku chlorovodíkové kyseliny a vše se extrahuje dvakrát vždy do 400 ml ethylesteru kyseliny octové. Spojený roztok v tomto rozpouštědle se promyje použitím 200 ml 50 % solanky, 200 ml solanky, a po vysušení bezvodým síranem sodným a filtraci se zahuštěním a sušením ve vakuu získá 41,4 g surového oleje. Ten se rozpustí v 100 ml ethyletheru, k roztoku se přidá 14 ml dicyklohexylaminu a vše se ponechá v klidu v ledničce přes noc. Potom se ethylether oddestiluje na rotační odparce, olejovitý zbytek se rozpustí v ethylesteru kyseliny octové a hexanu, vyloučený krystalický podíl se odsaje, promyje hexanem a sušením ve vakuu se takto získá 21,21 g sloučeniny, jejíž složení je uvedeno v nadpise, ve formě soli sdicyklohexylaminem. Suspenze této soli v 200 ml ethylesteru kyseliny octové se promyje třemi podíly po 50 ml 5% roztoku hydrogensíranu draselného, dále použitím 50 ml solanky, vše se vysuší bezvodým síranem hořečnatým a po filtraci se zahuštěním filtrátu izoluje 13,5 g produktu, jak je uveden v nadpise, ve formě bílé pěny. Chromatografie na tenké vrstvě (3 % kyseliny octové ve směsi 9 :1 ethylesteru kyseliny octové a heptanu), Rf = 0,30.

b) Methylester kyseliny (S)-2-ftalimido-5-oxo-5-(fenylmethoxy)pentanové

Do roztoku 13,22 g (36,0 mmol) produktu zčásti a) a 5,86 g (18,0 mmol) uhličitanu česného v 100 ml dimethylformamidu se přidá 8,1 ml (129,6 mmol, 3,6 ekv.) methyljodidu a vzniklý žlutý roztok se míchá 2,5 hodin, načež se roztřepává mezi 300 ml ethylesteru kyseliny octové a 250 ml vody. Organický extrakt se promyje použitím 200 ml 5% roztoku hydrogenuhličitanu sodného a solankou, vysuší se bezvodým síranem hořečnatým, a po filtraci se zahuštěním filtrátu získá takto 13,68 g žlutého oleje. Ten se čistí chromatografováním na koloně silikagelu 5 na 20 cm za eluování směsí 30 % ethylesteru kyseliny octové v hexanu.

-13CZ 289488 B6

Odpovídající frakce se spojí a zahuštěním se získá 10,0 g produktu, jehož složení je uvedeno v nadpise.

Chromatografie na tenké vrstvě (ethylester kyseliny octové : Hexan), R_f = 0,45

c) Methylester kyseliny (S)-2-ftalimido-4-(karboxy)butanové

Do roztoku 10,0 g (26,22 mmol) produktu z části b) v 115 ml ethylesteru kyseliny octové se přidá 1,90 g 20% hydroxidu palladnatého na aktivním uhlí ve funkci katalyzátoru a získaná suspenze se míchá 2,5 hodin v uzavřené nádobě v atmosféře vodíku. Po filtraci se podíl na filtru promyje pečlivě ethylesterem kyseliny octové a zahuštěním spojených organických roztoků ve vakuu, jakož i vysušením produktu ve vakuu se získá 7,29 g surového produktu, jehož složení je uvedeno v nadpise, ve formě bílé pevné látky, t.t. 137-138 °C. Chromatografie na tenké vrstvě (10 % methanolu v methylenchloridu), R_f = 0,43.

d) Methylester kyseliny (S)-2-ftalimido-5-oxo-5-(ethylthio)pentanové

Do roztoku 7,27 g (24,95 mmol) produktu z části c) v 125 ml methylenchloridu se za chlazení na 0°C a pod argonem přidá 4,81 ml (64,92 mmol, 2,6 ekv.) ethanthiolu, 609 mg (4,99 mmol, 0,2 ekv.) 4-dimethylaminopyridinu a 5,27 g (27,47 mmol, 1,1 ekv.) hydrochloridu ethyl-3-(3dimethylamino)propylkarbodiimidu, reakční směs se dále míchá 2 hodiny za teploty 0 °C, hodinu za teploty místnosti, po zahuštění reakční směsi se zbytek zředí přidáním 400 ml ethylesteru kyseliny octové, roztok se promyje použitím 200 ml hydrogensíranu draselného, 200 ml nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a 200 ml solanky, vysuší se bezvodým síranem sodným a po filtraci se filtrát zahustí. Sušením zbytku ve vakuu se získá takto 8,30 g sloučeniny, jak je uvedena v nadpise, a to v olejovité formě. Chromatografie na tenké vrstvě (ethylester kyseliny octové/hexan, 1:1), R_f= 0,47.

e) Methylester kyseliny (S)-2-ftalimido-5-oxopentanové

Do suspenze 8,30 g (24,75 mmol) produktu ze stupně d) a 1,24 g 10% palladia na uhlí v prostředí 150 ml acetonitrilu se pod argonem přikapává 7,91 ml (49,5 mmol, 2 ekv.) triethylaminu. Po míchání za teploty místnosti 45 minut se směs filtruje a filtrát se zahustí s tím, že se zbytek suší ve vakuu. Tento surový zbytek se čistí chromatografováním na koloně silikagelu (5 na 25 cm) za eluování směsí 25 % ethylesteru kyseliny octové/hexanu (41.) a pak 35 % ethylesteru kyseliny octové/hexanu (21.). Odpovídající frakce se spojí a získá se tak 5,60 g sloučeniny, jak je uvedena v nadpise.

Chromatografie na tenké vrstvě (ethylester kyseliny octové a hexan, 1 : 1), R_f = 0,32

f) Methylester kyseliny (S)-2-ftalimido-5,5-dimethoxypentanové

K roztoku 5,60 g (20,34 mmol) produktu z části e) v 60 ml methanolu a 40 ml methylenchloridu se vnese 3,8 ml (34,59 mmol, 1,7 ekv.) trimethylesteru kyseliny orthomravenčí a 280 mg monohydrátu kyseliny p-toluensulfonové. Reakční směs se míchá 1,5 hodin za teploty místnosti, rozruší se potom přidáním 2 ml nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, zahustí a zbytek se rozděluje mezi 400 ml ethylesteru kyseliny octové a 100 ml vody. Roztok v organickém rozpouštědle se promyje použitím 100 ml nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, 100 ml solanky, vysuší se bezvodým síranem hořečnatým, a po filtraci se filtrát zahustí; surový olejovitý zbytek se čistí chromatografováním na koloně silikagelu 5 na 20 cm za eluování směsí 30 % ethylesteru kyseliny octové v hexanu (21.). Odpovídající frakce se spojí, zahustí a sušením ve vakuu se izoluje 6,20 g produktu, jehož složení je uvedeno v nadpise. Chromatografie na tenké vrstvě (ethylester kyseliny octové/hexan, 1 : 1), Rf = 0,40.

-14CZ 289488 B6

g) Methylester kyseliny (S)-2-amino-5,5-dimethoxypentanové

Do roztoku 6,16 g (19,18 mmol) produktu zčásti f) v 125 ml methanolu se přidá 0,98 ml (20,14 mmol, 1,05 ekv.) monohydrátu hydrazinu, reakční směs se míchá 6 dní za teploty místnosti, vzniklá suspenze se filtruje, filtrát se zahustí, zbytek se trituruje s methylenchloridem, opět filtruje, a filtrát se zahustí. Sušením ve vakuu se izoluje 3,57 g sloučeniny, jak je uvedena v nadpise, ve formě zakaleného oleje. Chromatografie na tenké vrstvě (10% methanolu v methylenchloridu), Rf= 0,41.

h) Methylester kyseliny [S-(R*,R*)]-2-{[2-ftalimido-4-(trifenylmethoxy)-l-oxobutyl]amino}-5,5-dimethoxypentanové

V 100 ml methylenchloridu se rozpustí ll,62g (19,60 mmol, 1,05 ekv.) soli triethylaminu 15 a kyseliny (S)-2-ftalimido-4-(trifenylmethoxy)butanové, jak byla připravena v příkladu 1 b), a po ochlazení na 0°C se přidá 8,67 g (19,60 mmol, 1,05 ekv.) benzotriazol-l-yloxytris(dimethylamino)-fosfoniumhexafluorfosfátu. Reakční směs se míchá za chlazení na 0 °C 45 minut, načež se přidá roztok 3,57 g (18,67 mmol) produktu zčásti g) v 50 ml methylenchloridu. Po prodlení 10 minut za chlazení na 0 °C a 2 hodiny za teploty místnosti se roztok 20 roztřepává mezi 300 ml ethylesteru kyseliny octové a 100 ml vody. Roztok v organickém rozpouštědle se promyje použitím 100 ml z 50 % nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a 100 ml solanky, vysuší se bezvodým síranem hořečnatým a po filtraci se filtrát zahustí. Zbytek se čistí chromatografováním na koloně silikagelu 5 na 25 cm za eluování směsí ethylesteru kyseliny octové a hexanu (1 : 1); získá s tak 8,58 g sloučeniny, jak je uvedena v nadpise.

Chromatografie na tenké vrstvě (ethylester kyseliny octové a hexan, 1:1), R_f = 0,20.

i) Methylester kyseliny [S-(R*,R*)]-2-[(2-ftalimido-4-hydroxy-l-oxobutyl)-amino]-5,5dimethoxypentanové

Do roztoku 8,58 g (12,91 mmol) produktu zčásti h) v 100 ml methanolu se přidá 850 g monohydrátu kyseliny p-toluensulfonové, reakční směs se míchá 3,5 hodin za teploty místnosti a rozděluje se potom mezi 200 ml ethylesteru kyseliny octové a 100 ml z 10 % nasyceného hydrogenuhličitanu sodného. Fáze se oddělí, vodný podíl se extrahuje do 100 ml ethylesteru kyseliny octové, spojené extrakty v uvedeném rozpouštědle se promyjí solankou, po vysušení bezvodým síranem hořečnatým a nezbytné filtraci se filtrát zahustí. Zbytek se čistí chromatografováním na koloně silikagelu (5 na 20 cm) za eluování směsí ethylesteru kyseliny octové a hexanu 8 : 2 (11.), dále za použití 1% methanolu v ethylesteru kyseliny octové (21). Odpovídající frakce se spojí, zahustí ve vakuu a sušením ve vakuu se získá 4,33 g produktu složení, jak je uvedeno v nadpise. Chromatografie na tenké vrstvě (ethylester kyseliny octové a hexan, 8 : 2), R_f = 0,21.

j) Methylester kyseliny [4S-(4a,7a,9ap)]-oktahydro-4-ftalimido-5-oxopyrrolo[2,l-b][l,3]oxazepin-7-karboxylové

Do roztoku 1,89 g (4,48 mmol) produktu z části i) v 90 ml methylenchloridu se přidá 400 mg iontoměničové pryskyřice Amberlyte^R 15, jež byla předtím promyta následně 6N roztokem kyseliny chlorovodíkové, vodou, tetrahydrofuranem a methylenchloridem. Reakční směs se míchá 3 hodiny za teploty místnosti, filtruje se, filtrát se zahustí a bleskovou chromatografií na koloně silikagelu (5 na 15 cm) za eluování směsí ethylesteru kyseliny octové a hexanu (6 : 4) se 50 získá 1,51 g sloučeniny, jak je uvedena v nadpise, ve formě bílé pěny. Chromatografie na tenké vrstvě (ethylester kyseliny octové a hexan, 8 : 2), R_f = 0,32.

-15CZ 289488 B6

k) Methylester kyseliny [4S-(4a,7a,9ap)]-4-aminooktahydro-5-oxopyrrolo[2,l-b][l,3]oxazepin-7-karboxylové

Do roztoku 764 mg (2,13 mmol) produktu zčásti j) v 15 ml methanolu se přidá 109 μΐ (2,24 mmol, 1,05 ekv.) monohydrátu hydrazinu a reakční směs se míchá za teploty místnosti 4 dny. Potom se filtruje a pevný podíl se promyje methanolem. Filtrát se zahustí, zbytek se trituruje s methylenchloridem, a po nové filtraci se filtrát zahustí. Zbytek se čistí chromatografováním na koloně silikagelu (2 na 15 cm) za eluování roztokem 3% methanolu v methylenchloridu (31.), potom za použití 10% methanolu v methylenchloridu (11.). Potřebné frakce se spojí a zahuštěním se získá 451 mg sloučeniny, jejíž složení je uvedeno v nadpise, to ve formě oleje. Chromatografíe na tenké vrstvě (10 % methanolu v methylenchloridu), R_f = 0,18.

l) Methylester kyseliny {4S-[4a(R*),7a,9ap]}-oktahydro-4-{[2-(acetylthio)-l-oxo-lfenylpropyl]-amino}-5-oxopyrrolo[2,1 —b] [ 1,3]oxazepin-7-karboxyíové

Suspenze 870 mg (2,14 mmol, 1,14 ekv.) soli dicyklohexylaminu a kyseliny (S)-2-acetylthio-3benzenpropanové, připravené jak to bylo popsáno v příkladu 1 h) v 70 ml ethylesteru kyseliny octové se promyje pěti podíly po 20 ml 5% roztoku hydrogensíranu draselného, dále za použití 20 ml 50% roztoku solanky a 20 ml solanky. Po vysušení bezvodým síranem sodným a filtraci se filtrát zahustí a sušením zbytku ve vakuu přes noc se získá kyseliny (S)-2-(acetylthio)benzenpropanová.

Tato volná kyselina se rozpustí v 10 ml suchého methylenchloridu, roztok se vychladí v lázni z ledu a soli na 0°C, přidá se 298 μΐ (2,14 mmol) triethylaminu a potom roztok 430 mg, 1,88 mmol) produktu zčásti k) v 10 ml methylenchloridu a ještě 947 mg (2,14 mmol) benzotriazol-l-yloxytris-(dimethylamino)-fosfoniumhexafluorfosfátu (1,14 ekv.). Vzniklý roztok se míchá za chlazení na 0 °C po dobu 50ti minut, dále za teploty místnosti 3 hodiny. Reakční směs se zhustí, zředí přidáním 150 ml ethylesteru kyseliny octové, roztok se promyje použitím 50 ml 0,5 N roztoku chlorovodíkové kyseliny, vodou (50 ml), dále použitím 50 ml nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, vodou (50 ml) a 50 solanky. Po vysušení a filtraci se filtrát zahustí do sucha. Surový produkt se absorbuje na Calitu ^R a chromatografuje se na koloně silikagelu (5 na 10 cm) za eluování směsí 60 % ethylesteru kyseliny octové v hexanu (31). Vhodné frakce se spojí a zahustí. Získá se tím 779 mg čistého produktu, jehož složení je uvedeno v nadpise. Chromatografíe na tenké vrstvě (ethylester kyseliny octové a hexan, 6 : 4), R_f = 0,17.

m) Kyselina {4S-[4a(R*),7a,9ap]}-oktahydro-4-[(2-merkapto-l-oxo-3-fenylpropyl)amino]-5-oxopyrrolo[2,1 —b] [ 1,3 ]oxazepin-7-karboxy lová

Roztok 754 mg (1,74 mmol) produktu z části 1) v 15 ml methanolu se zbaví kyslíku zaváděním argonu po 30 minut, ochladí se na 0 °C v lázni z ledu a soli, a potom se do tohoto roztoku přikapává předem připravený roztok, zbavený kyslíku argonem (30 minut), 12 ml 1,0 N roztoku hydroxidu sodného, přičemž po dobu přidávání se stále zavádí argon. Reakční směs se míchá 3 hodiny za chlazení na 0 °C, okyselí se za teploty 0 °C přidáním 5% hydrogensulfátu draselného na pH 1, načež následuje extrakce ethylesterem kyseliny octové, a to třemi podíly po 100 ml. Spojený organický extrakt se promyje použitím 100 m 50% roztoku solanky, dále za použití 100 ml solanky, po vysušení bezvodým síranem sodným se roztok filtruje, filtrát se zahustí do sucha a sušením ve vakuu se získá bílá pěna. Zbytek se čistí chromatografováním na koloně silikagelu 2,5 na 15 cm za eluování pomocí 500 ml ethylesteru kyseliny octové, potom 0,3 % kyseliny octové v ethylesteru kyseliny octové (11.). Vhodné frakce se spojí, zahustí, znovu se odpaří za spolupoužití chloroformu a sušením ve vakuu přes noc při 50 °C nad oxidem fosforečným se získá sloučenina, jejíž složení je uvedeno v nadpise, to ve formě bílé pěny, t.t. 88-92 °C.

-16CZ 289488 B6 [a]_D = -63,8° (c = 1,0, methanol).

Chromatografie na tenké vrstvě (1 % kyseliny octové v ethylesteru kyseliny octové), Rf= 0,24.

‘H-NMR: 400 MHz, CDC1₃: δ 1,80-2,31 (m's, 7H), 3,10 (m, 1H), 3,27 (m, 1H), 3,63 (m, 1H), 4,0 (m, 1H), 4,20 (m, 1H), 4,49 (m, 1H), 4,75 (m, 1H), 5,23 (m, 1H), 7,19-7,30 (m's, 5H), 7,52 (d, 1H, J = 6 Hz).

^,3C-NMR: 100 MHz, CDC1₃: δ 26,4, 32,0, 32,6, 41,2, 44,2, 53,0, 59,4, 70,6, 89,47, 126,9, 128,4, 129,3, 137,4, 171,2,171,6,174,8.

Analýza:

pro C18H22N2O5S . 0,85 H₂O vypočteno: 54,91 % C, 6,07 % H, 7,12 % N, 8,14 % S nalezeno: 54,85 % C, 5,68 % H, 7,18 % N, 8,14 % S

Vysokotlaková kapalinová chromatografie: retenční doba 13,5 min (96,7%, UF 220), kolona YMC S-3 ODS (C-18), 6,0 na 150 mm, 30 % B : a až 100 % B : a, lineární gradient 25 minut. A = 90 % vody v methanolu + 0,2 % kyseliny fosforečné,

B = 90 % methanolu ve vodě + 0,2 % kyseliny fosforečné, průtoková rychlost 1,5 ml za minutu.

Příklad 5

Kyselina {4S-[4a(R*),7a,9ap]}-oktahydro-4-[(2-merkapto-l-oxo-3-fenylpropylamino]-5oxopyrrolo[2,1 —b] [ 1,3]thiazepin-7-karboxylová

a) Methylester kyseliny [S-(R*,R*)]-2-[-2-ftalimido-4-(acetylthio)-l-oxobutyl]amino-5,5dimethoxypentanové

Do roztoku 1,26 g (4,79 mmol, 1,5 ekv.) trifenylfosfitu v 15 ml suchého tetrahydrofuranu se za chlazení na 0 °C přidá 943 μΐ (4,79 mmol) diizopropylesteru kyseliny azodikarboxylové, vzniklá bílá suspenze se míchá 30 minut a potom se do ní vnese roztok 1,35 g (3,20 mmol) methylesteru kyseliny [S-(R*,R*)]-2-[(2-ftalimido-4-hydroxy-l-oxobutyl)amÍno]-5,5-dimethoxypentanové (příprava viz příklad 4 i) v 15 ml suchého tetrahydrofuranu, nato 343 μΐ (4,79 mmol) kyseliny thiooctové a reakční směs se opět míchá za teploty 0 °C po dobu 1,5 hodiny. Dále se roztřepává mezi 150 ml ethylesteru kyseliny octové a 100 ml 50% roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Vrstva organického rozpouštědla se promyje solankou, vysuší se bezvodým síranem hořečnatým, filtruje se a filtrát se zahustí. Zbytek se adsorbuje na Celit-u ^R, suší ve vakuu, a dále se surový materiál čistí chromatografií na koloně silikagelu 2,5 na 15 cm za eluování směsí ethylesteru kyseliny octové a hexanu (11) a směsi těchže rozpouštědel 6 : 4 (11.). Odpovídající sobě frakce se spojí a zahuštěním ve vakuu se takto získá 1,35 g sloučeniny, jejíž složení je uvedeno v nadpise, ve formě oleje. Chromatografie na tenké vrstvě (ethylester kyseliny octové : hexan, 8 : 2),R_f=0,42

b) Methylester kyseliny [S-(R*,R*)]-2-[(2-ftalimido-4-merkapto-l-oxobutyl)-amino]-5,5dimethoxypentanové

Roztok 1,33 g (2,76mmol) produktu zčásti a) v 25 ml methanolu se zbaví kyslíku probubláváním argonem a po vychlazení na 0 °C se k němu přidá 1,52 ml (6,63 mmol, 2,4 ekv.) hmotnostně 25% roztoku natriummethoxidu v methanolu. Za 3 minuty se reakční směs rozruší přidáním 3 ml nasyceného roztoku chloridu amonného, zředí se vodou, a extrahuje do ethylesteru

-17CZ 289488 B6 kyseliny octové (100 ml). Extrakt v tomto rozpouštědle se promyje použitím 50 ml vody, 50 ml solanky, vysuší se bezvodým síranem sodným, a po filtraci se filtrát zahustí. Zbytek se čistí chromatografováním na koloně silikagelu 5 na 15 cm za eluování směsí ethylesteru kyseliny octové a hexanu, nejprve 1 : 1 (31), potom 8 : 2 (21). Frakce s očekávaným produktem se spojí a zahuštěním se takto získá 853 mn sloučeniny uvedené v nadpise, jako olej. Chromatografie na tenké vrstvě (ethylester kyseliny octové : hexan, 8 : 2), Rf = 0,43.

c) Methylester kyseliny [4S-(4a,7a,9aP)]-oktahydro-4-ftalimido-5-oxopyrrolo[2,l-b][l,3]thiazepin-7-karboxylové

Roztok 847 mg (1,93 mmol) produktu z části b) v methylenchloridu (20 ml) se smíchá s 700 mg iontoměničové pryskyřice Amberlyte ^R 15, jež byla předtím promývána postupně 6N roztokem chlorovodíkové kyseliny, vodou, tetrahydrofuranem a methylenchloridem. Vše se míchá za teploty místnosti 17 hodin, potom se směs filtruje, roztok se zahustí a bleskově chromatografuje na koloně silikagelu 2,5 na 15 cm za eluování směsí ethylesteru kyseliny octové a hexanu (1:1) čímž se získá 691 mg sloučeniny, uvedené v nadpise, ve formě bílé pěny. Chromatografie na tenké vrstvě (ethylester kyseliny octové a hexan (8 : 2), R_f = 0,48.

d) Methylester kyseliny [4S-(4a,7a,9aP)]-4-aminooktahydro-5-oxopyrrolo[2,1 —b][ 1,3]thiazepin-7-karboxylové

K roztoku 899 mg (2,40 mmol) produktu zčásti c) v 17 ml methanolu se přidá 122 μΐ (2,52 mmol, 1,05 ekv.) monohydrátu hydrazinu a reakční směs se míchá 3 dny za teploty místnosti. Po filtraci se pevný podíl promyje methanolem, filtrát se zahustí, zbytek se trituruje s methylenchloridem, opět filtruje, zahustí a sušením ve vakuu se získá 572 mg sloučeniny, uvedené v nadpise, ve formě zapáleného oleje. Chromatografie na tenké vrstvě (10 % methanolu v methylenchloridu), Rf = 0,13.

e) Kyselina {4S-[4a(R*),7a,9aP]}-oktahydro-4-{[2-(acetylthio)-l-oxo-3-fenylpropyl]amino} -5-oxopyrrolo[2,1 -b] [ 1,3 ]thiazepin-7-karboxylová

Suspenze 1,045 g (2,58 mmol, 1,1 ekv.) soli kyseliny (S)-2-(acetylthio)benzenpropanové s dicyklohexylaminem, jak byla připravena v příkladu lh, v 100 ml ethylesteru kyseliny octové se promyje použitím pěti podílů po 25 ml 5% roztoku hydrogensíranu draselného, 25 ml 50% roztoku solanky a 25 ml roztoku solanky, vysuší se bezvodým síranem sodným, a po filtraci se filtrát zahustí. Sušením ve vakuu po dobu jedné hodiny se získá kyselina (S)-2-(acetylthio)benzenpropanová.

Takto získaná vodná kyselina se rozpustí v 10 ml suchého methylenchloridu, roztok se ochladí v lázni z ledu a soli na 0 °C, přidá se 360 μΐ (2,58 mmol) triethylaminu, dále 1,141 g (2,58 mmol) benzotriazol-l-yloxytris-(dimethylamino)fosfoniumhexafluorfosfátu a roztok 572 mg (2,34 mmol) produktu zčásti d) v 10 ml methylenchloridu. Takto připravená reakční směs se míchá 30 minut za teploty 0 °C, potom ještě 2,5 hodin za teploty místnosti, zahustí se, zbytek se zředí ethylesterem kyseliny octové (100 ml), roztok se promyje za použití 50 ml 0,5 N roztoku chlorovodíkové kyseliny, 50 ml vody, 50 ml nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a 50 ml solanky. Po vysušení bezvodým síranem hořečnatým a filtraci se filtrát zahustí do sucha, surový produkt se adsorbuje na Celit-u ^R a chromatografuje na koloně silikagelu 5 na 10 cm za eluování směsí ethylesteru kyseliny octové a hexanu, nejprve s obsahem 25 % (51.), potom 30 % (21.), 35% (21.) a 40% (21.) uvedeného esteru. Odpovídající frakce se spojí a opět chromatografují za použití soustavy téhož gradientu. Odpovídající frakce se opět spojí a zahustí, čímž se získá 490 mg čisté látky, jejíž složení je uvedeno v nadpise. Chromatografie na tenké vrstvě (ethylester kyseliny octové a hexan, 1 : 1), R_f = 0,16.

-18CZ 289488 B6

f) Kyselina {4S-[4a(R*),7a,9aPJ}-oktahydro-4-[(2-merkapto-l-oxo-3-fenylpropyl)amino]-5-oxopyrrolo[2,l-b][l,3]thiazepin-7-karboxylová

Roztok 490 mg (1,09 mmol) produktu z části e) ve směsi 8 ml methanolu a 4 ml tetrahydrofuranu se zbaví kyslíku argonem, který se zavádí 30 minut, ochladí se v lázni z ledu a soli na 0 °C, načež se přikapává 10 ml 1,0 N roztoku hydroxidu sodného, který byl rovněž zbaven kyslíku zaváděním argonu po 30 minut a argon se pak zavádí dále po celou dobu přidávání louhu. Reakční směs se dále míchá 3 hodiny za chlazení na 0 °C, za téže teploty se okyselí přidáním 5% hydrogensíranu draselného až na pH 2, následuje extrakce třikrát vždy do 75 ml ethylesteru kyseliny octové. Extrakty se spojí, vše se promyje použitím 75 ml solanky a po vysušení bezvodým síranem sodným a filtraci se filtrát zahustí do sucha a sušením zbytku ve vakuu se získá 489 mg bílé pěny. Tento zbytek se čistí chromatografováním na koloně silikagelu 2,5 na 15 cm za eluování směsí ethylesteru kyseliny octové a heptanu 9:1, 400 ml a téže směsi s obsahem 0,5% octové kyseliny (11.). Odpovídající frakce se spojí, zbytek se po zahuštění oddestiluje s methylenchloridem a dalším sušením ve vakuu se získá 428 mg produktu. Čistý materiál se krystaluje ze směsi ethylesteru kyseliny octové, methanolu a hexanu. Krystaly se odsají, pečlivě se promyjí ethyletherem, a sušením ve vakuu po dobu noci za teploty 40 °C nad oxidem fosforečným se získá 305 mg sloučeniny, jak je uvedena v nadpise, ve formě bílých krystalů, t.t. 206-208 °C.

[<x]d ⁼ -96,3° (c = 1,0, methanol).

Chromatografie na tenké vrstvě, 5% kyseliny octové ve směsi ethylesteru kyseliny octové a heptanu, Rf = 0,29.

’Η-NMR: 400 MHz, CDCl₃/2 kapky CD₃OD: δ 1,94 (m, 1H), 2,02 (d, 1H, J = 9 Hz), 2,08 (m, 1H), 2,20-2,55 (M's, 4H), 2,95 (m, 1H), 3,08 (m, 1H), 3,23 (m, 1H), 3,27 (m, 1H), 3,59 (m, 1H), 4,54 (t, 1H, J= 7,3 Hz), 4,60 (m, 1H), 5,23 (m, 1H), 7,18-7,34 (m's, 5H), 7,63 (d, 1H, J = 6 Hz).

¹³C-NMR: 100 MHz:CDC1₃/2 kapky CD₃OD: δ 27,6, 31,1, 32,1, 32,9, 41,1, 44,0, 52,8, 60,4, 62,2,126,77,128,3,129,0,137,4, 170,2,171,4,172,6

Analýza:

pro CUH22N2O4S2. 0,08 H2O vypočteno: 54,60 % C, 5,64 % H, 7,07 % N, 16,19 % S nalezeno: 54,65 % C, 5,54 % H, 7,02 % N, 15,80 % S

Vysokotlaková kapalinová chromatografie, retenční doba 13,0 min (98,8%, UF 220), kolona YMC S-3 ODS (C—18), 6,0 na 150 mm, 40% B : A - 100 % B : A, lineární gradient 25 minut, A = 90 % vody/methanol + 0,2 % fosforečné kyseliny,

B = 90 % methanol/voda + 0,2 % fosforečné kyseliny průtoková rychlost: 1,5 ml/min.

Příklad 6

Kyselina {4S-[4a(R*),7a,9ap]}-oktahydro-4-[(2-merkapto-l-oxo-3-fenylpropylamino}-5oxopyrrolo[2,l-b][l,3]thiazepin-7-karboxylová

Produkt z příkladu 5 se dá připravit také takto:

-19CZ 289488 B6

a) N-[(Fenylmethoxy)-karbonyl]-L-homoserin

23,57 g (94,58 mmol) N-(benzyloxykarbonyloxy)sukcinimidu se vnese do roztoku 10,24 g (85,98 mmol) L-homoserinu a 7,95 g (94,58 mmol, 1,1 ekv.) hydrogenuhličitanu sodného ve směsi 100 ml vody a 100 ml acetonu. Reakční směs se míchá po dobu noci za teploty místnosti, aceton se oddestiluje za sníženého tlaku na rotační odparce, vodný roztok se protřepá dvakrát vždy s 75 ml methylenchloridu. Vodná vrstva se potom okyselí na pH 2 přidáním 6 N roztoku kyseliny chlorovodíkové, následuje dvakrát extrakce do 250 ml ethylesteru kyseliny octové, extrakty se spojí a organická vrstva se promyje dvakrát za použití 100 ml vody, potom solankou, vysušením nad bezvodým síranem sodným se po filtraci a zahuštění získá zbytek a sušením tohoto ve vakuu 19,54 g sloučeniny, uvedené v nadpise, jako pevná bílá látka. Chromatografie na tenké vrstvě (ethylester kyseliny octové - butanol - kyselina octová - voda 2 : 1 : 1 : 1), R_f=0,74.

b) N-[(F eny lmethoxy)-karbony l]-O-(trifeny lmethy l)-L-homoserin

Do suspenze 19,50 g (77,04 mmol) produktu z části a) v 250 ml chloroformu se přidá 12,35 ml (88,59 mmol, 1,14 ekv.) triethylaminu, dále se přidá do homogenní směsi 24,70 g (88,59 mmol) trifenylmethylchloridu a reakční směs se míchá 3 hodiny. Zahustí se dále za sníženého tlaku na rotační odparce, následuje roztřepávání mezi 400 ml ethylesteru kyseliny octové a 200 ml 5% roztoku hydrogensíranu draselného. Organická vrstva se promyje použitím 200 ml 5% roztoku hydrogensíranu draselného, dvakrát vždy za použití 200 ml vody, dále 200 ml solanky, vysuší se bezvodým síranem sodným a po filtraci se zahuštěním filtrátu získá 45,5 g látky. Tento zbytek se chromatografuje na koloně silikagelu 10 na 30 cm za eluování směsí ethylesteru octové kyseliny a hexanu 8:2. Výsledkem je 8,76 g čisté látky, jejíž složení je uvedeno v nadpise.

c) Methylester (S)-2-amino-5,5-dimethoxypentanové kyseliny.

Do roztoku 3,35 g (10,43 mmol) methylesteru kyseliny (S)-2-ftalimido-5,5-dimethoxypentanové (příprava viz příklad 4 f) v 70 ml methanolu se přidá 531 μΐ (10,95 mmol, 1,05 ekv.) monohydrátu hydrazinu a roztok se míchá 6 dní za teploty místnosti. Po filtraci se pevný podíl na filtru promyje methanolem, filtrát se zahustí, zbytek se trituruje s methylenchloridem, opět následuje filtrace, zahuštění filtrátu a sušením ve vakuu se ve výtěžku 1,89 g získá ve formě zakaleného oleje produkt, jehož složení je uvedeno v nadpise. Chromatografie na tenké vrstvě (10 % methanolu v methylenchloridu), R_f = 0,39.

d) Methylester kyseliny [S-(R*,R*)]-{2-[fenylmethoxy)karbonyl}-amino]-4-(trifenylmethoxy)-1 -oxobutylamino-5,5-dimethoxypentanové

Do roztoku 5,28 g (10,65 mmol, 1 ekv.) produktu z části b) v 50 ml suchého methylenchloridu se za teploty 0 °C přidá 1,48 ml (10,65 mmol) triethylaminu a dále 1,85 g (9,68 mmol) produktu zčásti c) v prostředí 30 ml suchého methylenchloridu a ještě 4,71 g (10,65 mmol, 1,1 ekv.) benzotriazol-l-yloxytris-(dimethylamino)-fosfoniumhexafluorfosfátu. Reakční směs se míchá hodinu při 0 °C, dále 2 hodiny za teploty místnosti, načež se roztřepává mezi 100 ml ethylesteru kyseliny octové a 150 ml vody. Vrstva v organickém rozpouštědle se promyje za použití 200 ml z 5 % nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, dvakrát za použití 200 ml solanky, vysuší se nad bezvodým síranem hořečnatým, filtruje a filtrát se zahustí, načež se adsorbuje na Celit-u ^R a čistí chromatografováním na koloně silikagelu 7 na 20 cm za eluování nejprve směs 40 % ethylesteru kyseliny octové v hexanu (31.), dále 50 % ethylesteru kyseliny octové v hexanu (21), čímž se získá 4,84 g sloučeniny, jak je uvedena v nadpise.

Chromatografie na tenké vrstvě (ethylester kyseliny octové a hexan, 1 : 1), Rf = 0,22.

-20CZ 289488 B6

e) Methylester kyseliny [S-(R*,R*)]-{2-[(fenylmethoxy)karbonyl]-amino}—4-hydroxy-loxobutylamino-5,5-dimethoxypentanové.

Do roztoku 4,80 g (7,18 mmol) produktu z části d) v 70 ml methanolu se přidá 300 mg monohydrátu kyseliny p-toluensulfonové, reakční směs se míchá za teploty místnosti 2 hodiny, načež se roztřepává mezi 400 ml ethylesteru kyseliny octové a 200 ml z 25 % nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Obě fáze se oddělí, vodný podíl se znovu extrahuje do 100 ml ethylesteru kyseliny octové, extrakty v tomto rozpouštědle se spojí, celek se promyje solankou, vysuší se bezvodým síranem hořečnatým, a po filtraci se filtrát zahustí. Zbytek se čistí chromatografováním na koloně silikagelu 5 na 20 cm za eluování směsí 7 : 3 (11.), 8 : 2 (11) ethylesteru kyseliny octové a hexanu, dále za použití 10% methanolu v ethylesteru kyseliny octové (21.). Vhodné frakce se spojí a zahuštěním ve vakuu se získá 2,92 g sloučeniny jež je uvedena v nadpise.

Chromatografie na tenké vrstvě (ethylester kyseliny octové: hexan, 8 : 2), R_f = 0,09.

f) Methylester kyseliny [S-(R*,R*)]-2-{2-[(fenylmethoxy)karbonyl]-amino}-4-(acetylthio)l-oxobutylamino-5,5-dimethoxypentanové

Do roztoku 3,06 g (11,65 mmol, 1,7 ekv.) trifenylfosfinu v 40 ml suchého tetrahydrofuranu se přidá 2,27 ml (11,65 mmol) diizopropylesteru kyseliny azodikarboxylové. Vzniklá bílá suspenze se míchá po 30 minut, načež se k ní přidá roztok 2,92 g (6,85 mmol) produktu z části e) v suchém tetrahydrofuranu s následným přidáním 833 μΐ (11,65 mmol) kyseliny thioloctové. Směs se míchá za chlazení na 0 °C po 2 hodiny, načež se roztřepává mezi 300 ml ethylesteru kyseliny octové a 200 ml 50% roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Podíl, ve vrstvě ethylesteru kyseliny octové se promyje solankou, vysuší se bezvodým síranem hořečnatým, a po filtraci se zahustí, zbytek se adsorbuje na Celit-u ^R a suší ve vakuu. Surový materiál se čistí chromatografií na koloně silikagelu, 5 na 20 cm, to za eluování směsí ethylesteru kyseliny octové a hexanu (1:1) (31.). Odpovídající frakce se spojí, zahustí a sušením ve vakuu se získá takto 2,58 g sloučeniny, jež je uvedena v názvu, to ve formě takřka bílé pevné látky.

Chromatografie na tenké vrstvě (ethylester kyseliny octové a hexan, 8 : 2), Rf = 0,40

g) Methylester kyseliny [S-(R*,R*)]-2-{[(fenylmethoxy)-karbonyl]-amino}-4-merkapto-loxobutylamino-5,5-dimethoxypentanové

Do roztoku 2,56 g (5,28 mmol) produktu z části f) v 50 ml methanolu se po vypuzení kyslíku argonem za teploty 0 °C přidává 3,62 ml (15,84 mmol, 3 ekv.) roztok natriummethoxidu (25 % hmotnostně) v methanolu. Po 10ti minutách se směs rozruší přidáním 40 ml nasyceného roztoku chloridu amonného, zředí se přidáním 100 ml vody a extrahuje do 300 ml ethylesteru kyseliny octové.

Extrakt v ethylesteru kyseliny octové se promyje za použití 100 m vody a 150 ml solanky, vysuší se bezvodým síranem hořečnatým, a po filtraci se filtrát zahustí. Zbytek se čistí chromatografováním na koloně silikagelu 5 na 20 cm za eluování směsí 1 : 1 ethylesteru kyseliny octové a hexanu (31.). Předpokládané frakce se spojí a zahuštěním se získá 1,99 g sloučeniny, jak je uvedena zde v nadpise, to ve formě oleje.

Chromatografie na tenké vrstvě (ethylester kyseliny octové: hexan, 8 : 2), R_f = 0,43.

h) Methylester kyseliny [4S-(4a,7a,9ap)]-oktahydro-4-[(fenylmethoxy)-karbonyl]-amino5-oxopyrrolo[2,l-b][l,3]thiazepin-7-karboxylové

K. roztoku 2,16 g (4,88 mmol) produktu z příkladu g) v 50 ml methylenchloridu se přidá 620 mg iontoměničové pryskyřice Amberlyte ^R 15, předtím promyté 6 N roztokem kyseliny chlorovo

-21CZ 289488 B6 dikové, vodou, tetrahydrofuranem a methylenchloridem. Reakční směs se míchá za teploty místnosti 3 hodiny, potom se filtruje, zahustí a zbytek se bleskově chromatografuje na koloně silikagelu 5 na 20 cm za eluování směsí ethylesteru kyseliny octové a hexanu 6:4a získá se tím 1,34 g sloučeniny, jak je uvedena v názvu ve formě bílé pěny. Chromatografie na tenké vrstvě (ethylester kyseliny octové a hexan, 8 :2), Rf - 0,51.

i) Methylester kyseliny [4S-(4a,7a,9ap)]-4-aminooktahydro-5-oxopyrrolo[2,1—b] [ 1,3]thiazepin-7-karboxylové

Roztok produktu z části h) (1,20 g, 3,17 mol) se oddestiluje třikrát s toluenem a suší se přes noc, potom se v prostředí 40 ml suchého methylenchloridu po přidání 632 μΐ (4,44 mmol, 1,4 ekv.) jodtrimethylsilanu míchá přes noc za teploty místnosti pod argonem. Směs se rozruší přidáním 50 ml vody, přidá se 5 ml 10% roztoku kyseliny chlorovodíkové na pH 1 a protřepává s 50 ml ethylesteru kyseliny octové. K vodnému podílu se přidá 10% roztok hydroxidu sodného, vše se extrahuje třikrát do methylenchloridu, spojené extrakty se vysuší bezvodým síranem sodným, po filtraci se filtrát zahustí a sušením ve vakuu se získá 396 mg sloučeniny, jak je uvedena v názvu, ve formě čirého oleje. Chromatografie na tenké vrstvě (10% methanolu v methylenchloridu), R_f=0,10.

j) Kyselina (4S-[4a(R*),7a,9aP]}-oktahydro-4-[(2-merkapto-l-oxo-3-fenylpropyl)amino]-5-oxopyrrolo[2,1 —b] [ 1,3]thiazepin-7-karboxylová

Do roztoku kyseliny (S)-2-(acetylthio)-benzenpropanové v suchém methylenchloridu se přidá triethylamin, dále se přidá produkt z části i) v methylenchloridu a ještě benzotriazol-l-yloxytris(dimethylamino)-fosfoniumhexafluorfosfát. Takto připravený roztok se zpracuje, jak je to popsáno v příkladu 5 e) za vzniku methylesteru kyseliny {4S-[4a(R*)-7a,9aP]}-oktahydro-4[2-(acetylthio}-l-oxo-3-fenylpropyl]amino-5-oxopyrrolo[2,1—b] [ 1,3]thiazepin-7-karboxylové.

Suspenze tohoto methylesteru jako produktu se v prostředí methanolu a tetrahydrofuranu zbaví kyslíku vypuzením argonem, ochladí se na 0°C a přidá se roztok 1,0 N hydroxidu sodného, rovněž zbavený kyslíku argonem. Zpracováním, jak je to popsáno v příkladu 5 f) se získá produkt složení uvedeného v nadpise.

Příklad 7

Kyselina {4S-[4a(R*),7a,9ap]}-oktahydro-4-[(3-cyklohexyl-2-merkapto-l-oxopropyl)amino]-5-oxopyrrolo[2,l-b][l,3]-thiazepin-7-karboxylové

a) Sůl kyseliny p-toluensulfonové a methylesteru kyseliny [4S-(4a,7a,9ap)}-4-aminooktahydro-5-oxopyrrolo[2,l-b][l,3]thiazepin-7-karboxylové

Roztok 738 mg (1,95 mmol) methylesteru kyseliny [4S-(4a,7a,9aP)-oktahydro—4—[(fenylmethoxy)-karbonyl]-amino-5-oxopyiTolo[2,1 —b] [ 1,3]thiazepin-7-karboxylové (příprava viz příklad 6 h) v 25 ml suchého methylenchloridu se destiluje třikrát s toluenem a pak se suší ve vakuu po dobu noci. Po přidání 389 μΐ (2,73 mmol, 1,4 ekv.) jodtrimethylsilanu se reakční směs míchá pod argonem za teploty místnosti, po dvou hodinách se k reakční směsi přidá další podíl 40 μΐ jodtrimethylsilanu, a v míchání se pokračuje 30 minut. Směs se potom rozruší přidáním 9,7 ml roztoku 0,4 M chlorovodíkové kyseliny ve směsi methanolu a dioxanu (9 :1), a míchá se pak po 5 minut. Těkavé podíly se vydestilují ve vakuu na rotační odparce a zbytek se roztřepává mezi vodu a ethylester kyseliny octové. Oddělená vrstva roztoku v ethylesteru kyseliny octové se promyje vodou, spojené vodné podíly se promyjí ethylesterem kyseliny octové, vodná fáze se ochladí na 0 °C a hodnota pH se upraví na 10,3 (sledováno pH metrem) přidáním 1,0 N roztoku hydroxidu sodného. Vodný podíl se potom extrahuje třikrát do methylenchloridu, potom se

-22CZ 289488 B6 vodný podíl nasytí chloridem sodným a extrahuje se znovu třikrát do methylenchloridu. Spojené extrakty se vysuší bezvodým síranem sodným, po filtraci se filtrát zahustí ve vakuu a sušením ve vakuu se získá 455 mg volného aminu ve formě čirého oleje. Chromatografíe na tenké vrstvě (10% methanolu v methylenchloridu), Rf = 0,28.

Získaný volný amin se rozpustí v 5 ml ethylesteru kyseliny octové, přidá se 354 mg (1 ekv.) monohydrátu kyseliny p-toluensulfonové v 1 ml ethylesteru kyseliny octové. Ihned se začnou tvořit bílé krystalky, směs se ponechá 30 minut v ledničce za teploty 5 °C, krystaly se odfiltrují, dobře se promyjí ethylesterem kyseliny octové a ethyletherem a sušením přes noc ve vakuu se získá 639 mg produktu, jak je uveden v nadpise, to ve formě bílé pevné látky.

b) Sůl dicyklohexylaminu a kyseliny (S)-2-(acetylthio)-3-cyklohexylpropanové kyseliny.

Roztok 5,20 g (31,5 mmol) D-fenylalaninu v 75 ml 2M roztoku chlorovodíkové kyseliny v 500 ml Parrově hydrogenačním zařízení se zbaví kyslíku zaváděním dusíku, přidá se 640 mg (2,82 mmol) oxidu platičitého a v uzavřené nádobě se začne s hydrogenováním za tlaku 280 KPa s doplněním pokud je to nutné. Celková spotřeba vodíku byla dvojnásobná za 6 hodin. Po vypuzení vodíku plynným dusíkem se reakční směs filtruje Celit-em ^R, podíl na filtru se promyje horkou vodou, filtrát se zahustí na objem asi 40 ml a tento zbytek se ponechá za teploty 5 °C po dobu noci. Vyloučené pevné podíly se odfiltrují, promyjí malým množstvím studené vody a sušením ve vakuu za teploty 60 °C se získá 5,46 g hydrochloridu kyseliny (R)-2-amino3-cyklohexylpropanové.

Do míchaného roztoku 2,81 g (13,5 mmol) tohoto hydrochloridu v 32 ml 2,5 N roztoku sírové kyseliny se za teploty místnosti přidá 10,0 g (84 mmol) bromidu draselného, reakční směs se ochladí na -4 °C a po částech se během hodiny přidává 1,75 g (25,4 mmol) dusitanu sodného, přičemž se teplota udržuje stále pod 0 °C. Reakční směs pění, začne se vylučovat olej. Po skončeném přidávání se reakční směs míchá hodinu, teplota se nechá vystoupit na teplotu místnosti a v míchání se pokračuje další hodinu. Potom se reakční směs extrahuje dvakrát do etheru, extrakt se vysuší bezvodým síranem hořečnatým a po filtraci se zahuštěním filtrátu získá bezbarvý olej (2,3 g) kyseliny (R)-2-brom-3-cyklohexylpropanové.

Do míchané suspenze 1,07 g (9,36 mmol) draselné soli kyseliny thiooctové v 15 ml suchého acetonitrilu se za teploty 0 °C a pod argonem přidává během 10ti minut roztok 2,20 g (9,36 mmol) kyseliny (R)-2-brom-3-cyklohexylpropanové v 3 ml acetonitrilu. Reakční směs se vytemperuje na teplotu místnosti a míchá pak 16 hodin, vzniklá suspenze se filtruje a zahustí pak filtrát. Zbytek se znovu rozpustí v ethylesteru kyseliny octové, roztok se promyje jednou 5% roztokem hydrogensíranu draselného, vysuší se bezvodým síranem sodným, a po filtraci se filtrát zahustí. Žlutý olejovitý zbytek (2,21 g) se rozpustí v etheru, a k roztoku se přidá roztok 1,8 ml dicyklohexylaminu (9,0 mmol) v 5 ml etheru. Škrábáním povrchu skleněné baňky skleněnou tyčinkou se získá 2,38 g bílého krystalického produktu složení, jak bylo uvedeno v nadpise, t.t. 159-161 °C.

[a]_D = -41,2° (c = 1,0, chloroform).

Analýza:

pro C23H41NSO3 vypočteno: 67,11 % C, 10,04 % H, 3,40 % N, 7,79 % S nalezeno: 66,95 % C, 10,12 % H, 3,25 % N, 7,88 % S

c) Methylester kyseliny {4S-[4a(R*),7a,9aPJ}-oktahydro-4-{[2-(acetylthio)-3-cyklohexyll-oxopropyl]-amino}-5-oxopyrrolo[2,1 —b] [ 1,3]thiazepin-7-karboxylové

Suspenze 289 mg (0,69 mmol, 1,05 ekv.) soli dicyklohexylaminu s kyselinou (S)-2-(acetylthio)3-cyklohexylpropanové v 15 ml ethylesteru kyseliny octové se promyje za použití 3 dávek po

-23CZ 289488 B6 ml hydrogensíranu draselného, 10 ml 50% roztoku solanky a 10 ml solanky. Vysuší se (bezvodým síranem hořečnatým), a po filtraci se filtrát zahustí, odpaří se dvakrát s methylenchloridem a sušením ve vakuu po dobu jedné hodiny se získá v olejové formě kyselina (S)—2— (acetylthio)-3-cyklohexylpropanová.

Tato volná kyselina se rozpustí v 5 ml suchého methylenchloridu, roztok se ochladí v lázni z ledu a soli na 0 °C, do roztoku se vnese 96 μΐ (0,89 mmol, 1,05 ekv.) triethylaminu, dále 275 mg (0,66 mmol) produktu zčásti a), triethylamin v množství 92 μΙ (0,66 mmol) a posléze 305 mg (0,69 mmol) benzotriazol-l-yl-oxytris-(dimethylamino)fosfoniumfluorfosfátu. Takto připravený roztok se míchá za chlazení na 0 °C hodinu, dále 2 hodiny za teploty místnosti. Reakční směs se zahustí, zředí přidáním ethylesteru kyseliny octové, promyje se použitím 20 ml 5% roztoku hydrogensíranu draselného, dále použitím 20 ml 50% nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, 20 ml solanky, a vysuší se použitím bezvodého síranu hořečnatého. Po filtraci se filtrát zahustí do sucha, surový produkt se adsorbuje na Celit-u ^R a chromatografuje se na koloně silikagelu (2,2 na 10 cm) za eluování 40%-ty ethylesteru kyseliny octové v hexanu. Odpovídající frakce se spojí a zahustí, čímž se získá 246 mg čisté látky, jak je její složení uvedeno v nadpise. Chromatografie na tenké vrstvě (ethylester kyseliny octové a hexan, 8 : 2), R_f = 0,53.

d) Kyselina {4S[4a(R*),7a,9aP]}-oktahydro-4-[(3-cyklohexyl-2-merkapto-l-oxopropyl)amino]-5-oxopyrrolo[2,1 —b] [ 1,3]thiazepin-7-karboxylová

Roztok produktu z části c) se v množství 245 mg (0,54 mmol) zbaví v prostředí 6 ml methanolu kyslíku argonem, který se zavádí po 30 minut, potom se roztok vychladí na 0 °C a přikapává se během 30ti minut 1,0 N roztok hydroxidu sodného, zbavený kyslíku zaváděním argonu po 30 minut, to v množství 5 ml, přičemž se argon zavádí během přidávání a po dobu celé reakce.

Reakční směs se míchá za chlazení na 0 °C po 2 hodiny, okyselí se za uvedené teploty na pH 2 přidáním hydrogensíranu draselného a vše se potom extrahuje třemi podíly po 20 ml ethylesteru kyseliny octové. Spojený organický extrakt se promyje použitím 50%ního roztoku solanky (20 ml), dále 20 ml solanky, a po vysušení bezvodým síranem hořečnatým a filtraci se filtrát zahustí do sucha. Zbytek se čistí chromatografií na koloně silikagelu 2,5 na 10 cm za eluování 300 ml směsí ethylesteru kyseliny octové a heptanu (7 : 3) a 500 ml téže směsi s obsahem 1 % kyseliny octové. Vhodné frakce se spojí, methylenchlorid se použije při oddestilování rozpouštědel jako pomocné rozpouštědlo a sušením ve vakuu se získá 172 mg sloučeniny, uvedené v nadpise, jako bílá pěna.

[a]_D = -116,9° (c = 0,5, methanol).

Chromatografie na tenké vrstvě (1 % kyseliny octové v ethylacetátu), Rf = 0,35.

’Η-NMR: 400 MHz, CDC1₃: δ 0,91 (m, 2H), 1,22 (m, 3H), 1,44 (m, 1H), 1,55 (m, 1H), 1,68 (m's, 5H), 1,83 (m, 1H), 1,97 (m's, 2H), 2,12 (m, 1H), 2,19-2,40 (m's, 3H), 2,53 (m, 1H), 2,96 (m, 1H), 3,38 (m's, 2H), 4,62 (t, 1H, J = 6,8 Hz), 4,70 (m, 1H), 5,25 (m, 1H), 7,55 (d, 1H, J = 6,4 Hz).

ⁿC-NMR: 100 MHz, CDC1₃. δ 26,0, 26,1, 27,5, 31,5, 32,3, 33,0, 33,3, 35,2, 40,7, 43,0, 52,9, 60,6,62,5,170,9,172,7,175,3.

Analýza:

pro C18H28N2O4S2 vypočteno: 53,98 % C, 7,05 % H, 6,99 % N, 16,01 % S nalezeno: 53,97 % C, 7,18 % H, 6,84 % N, 15,75 % S

-24CZ 289488 B6

Vysokotlaková kapalinová chromatografie, retenční doba 16 min. (nad 99%, UF 217), kolona YMC S-3 ODS (C-18) 6,0 na 150 mm, 50 % B : A - 100 % B : A, lineární gradient 25 minut.

A = 90 % vody v methanolu + 0,2 % kyseliny fosforečné,

B = 90 % methanolu ve vodě + 0,2 % kyseliny fosforečné, průtoková rychlost 1,5 ml/min.

Příklad 8

Kyselina {4S-[4a(R*),7a,9aP] }-oktahydro-4-[(2-merkapto-1 -oxohexyl)-amino]-5-oxopyrrolo[2,1 —b] [ 1,3]thiazepin-7-karboxylová

a) Kyselina (S)-2-bromhexanová

Do míchaného roztoku 5,0 g (38 mmol) D-norleucinu se v prostředí 77 ml 2,5 N roztoku kyseliny sírové vnese za teploty místnosti 15,9 g (133 mmol) bromidu draselného, reakční směs se ochladí na -10 °C a přidává se po částech 3,94 g (57 mmol) dusitanu sodného v pevném stavu. Teplota se udržuje v rozmezí -10 °C až -5 °C, po skončením přidávání se pěnící reakční směs míchá hodinu, teplota se nechá vystoupit na 20 °C a za této teploty se v míchání hodinu pokračuje. Dále se reakční směs extrahuje dvakrát do etheru, roztok v tomto rozpouštědlo se promyje jednou vodou, vysuší se bezvodým síranem hořečnatým, a po filtraci se zahuštěním filtrátu získá 3,3 g surového produktu složení, jak je uvedeno v nadpise.

b) Sůl kyseliny (S)-2-(acetylthio)hexanové a dicyklohexylaminu

Do míchané suspenze 2,11 g (18,5 mmol) draselné soli kyseliny thiooctové v 50 ml suchého acetonitrilu se přidá za teploty místnosti a pod argonem roztok 3,27 g (16,0 mmol) produktu z části a) v 26 ml acetonitrilu a reakční směs se míchá 5 hodin. Vzniklá suspenze se filtruje, filtrát se zahustí, zbytek se rozpustí v ethyletheru a roztok se promyje jednou 5% roztokem hydrogensíranu draselného a jednou solankou, a po vysušení bezvodým síranem hořečnatým se po filtraci filtrát zahustí. Zbytek se rozpustí v 64 ml etheru a do roztoku se přidá 3,4 ml (16,8 mmol) dicyklohexylaminu. Zahuštěním roztoku v etheru a triturováním zbytku s hexanem vznikne bílá pevná látka, jež se překrystaluje ze směsi ethyletheru a hexanu za vzniku produktu složení, uvedeného v názvu. Matečný louh se zahustí a dvojím překrystalováním se získá v celkovém výtěžku 2,2 g sloučeniny složení, jak je uvedeno v nadpise, t.t. 145-147 °C.

[a]o - -33,8° (c = 1,08, chloroform).

c) Methylester kyseliny {4S-[4a(R*),7a,9ap]}-oktahydro-4-{[2-(acetylthio)-l-oxohexyl]amino}-5-oxopyrrolo[2,1-b] [ 1,3]thiazepin-7-karboxylové

Suspenze 255 mg (0,69 mmol, 1,05 ekv.) dicyklohexylaminové soli z příkladu 8, část b) v 15 ml ethylesteru kyseliny octové se promyje třikrát za použití 5 ml 5% hydrogensulfátu draselného, dále 10 ml solanky, a po vysušení bezvodým síranem hořečnatým a filtraci se filtrát zahustí, zbytek se dvakrát oddestiluje s methylenchloridem, a sušením hodinu ve vakuu se získá v olejovité formě volná kyselina.

Získaný olej se rozpustí v 6 ml suchého methylenchloridu, roztok se ochladí v ledové lázni na 0 °C, přidá se 96 μ! (0,69 mmol, 1,05 ekv.) triethylaminu, potom 275 mg (0,66 mmol) soli kyseliny p-toluensulfonové a methylesteru kyseliny {4S-[4a,7a,9aPJ}-4-amino-oktahydro-5-oxopyrrolo[2,l-b][l,3]thiazepin-7-karboxylové (příprava viz příklad 7 a), dále 92 μΐ (0,66 mmol) triethylaminu a posléze 305 mg (0,69 mmol) benzotriazol-l-yloxytris-(dimethylamino)fosfoniumhexafluorfosfátu. Takto připravený roztok se míchá za teploty 0 °C hodinu, dále 2 hodiny za teploty místnosti, zahustí se, zředí přidáním ethylesteru kyseliny octové a po promytí

-25CZ 289488 B6 za použití 20 ml 5% roztoku hydrogensíranu draselného, 20 ml z 50% nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a 20 ml solanky a vysušení bezvodým síranem hořečnatým a filtraci se filtrát zahustí do sucha. Surový produkt se adsorbuje na Celit-u ^R a chromatografováním na silikagelové koloně 2,5 na 10 cm za eluování směsí 40% ethylesteru kyseliny octové v hexanu se 5 vhodné frakce spojí, zahustí a získá se tak 258 mg čisté látky složení uvedeného v nadpise.

Chromatografie na tenké vrstvě (ethylester kyseliny octové a hexan, 8 : 2), Rf = 0,54.

d) Kyselina {4S-[4a(R*),7a,9aP]}-oktahydro-4-[(2-merkapto-l-oxohexyl)-amino]-5-oxoio pyrrolo[2,1 —b] [ 1,3]thiazepin-7-karboxylová

Roztok 255 mg (0,54 mmol) produktu z části c) v 5 ml methanolu se zbaví kyslíku argonem (30 minut zavádění), ochladí se na 0 °C a po kapkách se přidává do tohoto roztoku roztok 5 ml 1,0 N hydroxidu sodného, ze kterého byl předtím také 30 minut vypuzován kyslík argonem.

Argon se také zavádí po celou dobu přikapávání, reakční směs se míchá 2 hodiny za chlazení na 0 °C, okyselí se za této teploty přidáním 5% hydrogensíranu draselného na pH 2, následuje extrakce třikrát do 20 ml ethylesteru kyseliny octové. Extrakty se spojí a po promytí použitím 20 ml 50% solanky a 20 ml solanky se organický roztok vysuší bezvodým síranem hořečnatým, načež se po filtraci filtrát zahustí do sucha. Zbytek se čistí chromatografováním na koloně 20 silikagelu 2,5 na 10 cm za eluování směsí ethylesteru kyseliny octové a heptanu 7 : 3 (300 ml) a dále 500 ml směsi ethylesteru kyseliny octové a heptanu s obsahem 1 % kyseliny octové. Zahuštěním odpovídajících spojených frakcí za použití methylenchloridu jako pomocného rozpouštědla a následujícím sušením ve vakuu se získá 170 mg sloučeniny, jejíž složení je uvedeno v nadpise, ve formě bílé pěny.

[a]o - -135,1° (c = 0,5, methanol).

Chromatografie na tenké vrstvě (1 % kyseliny octové v ethylesteru kyseliny octové), Rf = 0,32.

^lH-NMR (400 MHz, CDC1₃): δ 0,89 (t, 3H, J = 7 Hz), 1,32 (m, 4H), 1,73 (m, 1H), 1,96 (m, 2H),

2,00 (d, 1H, J= 8,6 Hz), 2,11 (m, 1H), 2,32 (m's, 3H), 2,52 (m, 1H), 2,98 (m, 1H), 3,32 (m's,

2H), 4,61 (t, 1H, J = 7,1 Hz), 4,72 (m, 1H), 5,25 (m, 1H), 7,63 (d, 1H, J = 6,4 Hz),

62,42,170,7, 172,5, 174,0.

Analýza:

pro C] 5H24N4O4S2O . 0,08 H₂O vypočteno: 49,79 % C, 6,73 % H, 7,74 % N, 17,72 % S nalezeno: 49,90 % C, 6,92 % H, 7,63 % N, 17,57 % S

Vysokotlaková kapalinová chromatografie, retenční doba 9,4 min (nad 99 %, UF 220), kolona YMC S-3 ODS (C-18), 6,0 na 150 mm, 50 % B:A až 100 % B:A, lineární gradient, 25 minut.

A = 90 % vody v methanolu + 0,2 % kyseliny fosforečné

B = 90 % methanolu ve vodě + 0,2 % kyseliny fosforečné

Průtoková rychlost: 1,5 ml/min.

-26CZ 289488 B6

Příklad 9

Kyselina {4S-[4a(R*),7a,9ap]}-oktahydro-4-[(2-merkapto-l-oxo-4-methylpentyl)-amino]5 5-oxopyrrolo[2,1 —b] [ 1,3]thiazepin-7-karboxylová

a) Kyselina (S)-2-brom-4-methylpentanová

Do míchaného roztoku 3,0 g (23 mmol) D-leucinu v 47 ml 2,5 N roztoku kyseliny sírové se io přidává za teploty místnosti 9,5 g (80 mmol) bromidu draselného, reakční směs se ochladí na 10 °C a po částech se přidává 2,4 g (34 mmol) dusitanu sodného, přičemž se teplota udržuje v rozmezí -10 °C až -5 °C. Po skončeném přidávání se reakční směs udržuje po vytemperování na teplotu místnosti takto za míchání hodinu, extrahuje se dvakrát do etheru, roztok v etheru se promyje jednou vodou, a po vysušení bezvodým síranem hořečnatým a filtraci se zahuštěním 15 filtrátu získá 2,7 g surového produktu, jak je uveden v nadpise.

b) Sůl kyseliny (S)-2-(acetylthio)-4-methylpentanové a dicyklohexylaminu

Do míchané suspenze 1,7 g (15,0 mmol) draselné soli kyseliny thiooctové v 50 ml suchého 20 acetonitrilu se přidává za teploty místnosti pod argonem roztok 2,6 g (13 mmol) produktu z části

a) v 17 ml acetonitrilu a reakční směs se míchá 4 hodiny. Vzniklá suspenze se filtruje, filtrát se zahustí, zbytek se rozpustí v ethyletheru, roztok se promyje jednou 5% roztokem hydrogensíranu draselného a jednou solankou, vysuší se bezvodým síranem hořečnatým a po filtraci se filtrát zahustí. Zbytek se rozpustí v 64 ml etheru, přidá se dicyklohexylamin (2,7 ml, 14 mmol) a z roz25 toku se ihned začnou vylučovat podíly bílé pevné látky. Po filtraci se takto získá 2,0 g soli, jak je uvedena v nadpise, t.t. 153-158 °C.

[a]_D = -54,5° (c = 0,61, chloroform).

c) Methylester kyseliny {4S-[4a(R*),7a,9aPJ}-oktahydro-4-[2-(acetylthio)-l-oxo-4methylpentyl]-amino-5-oxopyrrolo[2,1 -b] [ 1,3]thiazepin-7-karboxylová

Míchaná suspenze 234 mg (0,63 mmol) soli dicyklohexylaminu zčásti b) v 15 ml ethylesteru kyseliny octové se promyje třikrát vždy za použití 5 ml 5% vodného roztoku hydrogensíranu 35 draselného, organický extrakt se potom vysuší bezvodým síranem hořečnatým, po filtraci se filtrát zahustí do sucha a zbytek se oddestiluje ještě dvakrát s hexanem. Zbylý olej se rozpustí v 6 ml methylenchloridu, roztok se míchá pod dusíkem za chlazení na 0 °C, přidá se 88 μΐ (0,63 mmol) triethylaminu, potom 249 mg (0,06 mmol) soli kyseliny p-toluensulfonové a methylesteru kyseliny {4S-(4a,7a,9a3)}-4-aminooktahydro-5-oxopyrrolo[2,l-b][l,3]thiaze40 pin-7-karboxylové (příprava viz příklad 7a), ještě další podíl 84 μΐ (0,60 mmol) triethylaminu a za 10 minut 279 mg (0,63 mmol) benzotriazol-l-yloxytris-(dimethylamino)-fosfoniumhexafluorfosfátu. Po hodině se teplota reakční směsi nechá vystoupit na 20 °C, reakční směs se míchá 2 hodiny a získaný bezbarvý roztok se zahustí za teploty pod 30 °C ve vakuu, olejovitý zbytek se opět rozpustí v ethylesteru kyseliny octové, roztok se promyje jednou 5% roztokem hydrogen45 síranu draselného, jednou nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a jednou solankou.

Potom se organická vrstva vysuší bezvodým síranem hořečnatým, a po filtraci se filtrát zahustí na 5 g silikagelu. Bleskovou chromatografií na koloně 2,5 na 15 cm za eluování směsí ethylesteru kyseliny octové a hexanu 1 : 1 se získá 203 mg sloučeniny složení, uvedeného v nadpise, to jako bílá pevná látka, t.t. 101 - 103 °C.

[a]_D = -157,5° (c = 1,04, chloroform).

Chromatografie na tenké vrstvě, ethylester kyseliny octové a hexan, 1 : 1, Rf = 0,19.

-27CZ 289488 B6

d) Kyselina {4S-[4a(R*),7a,9ap]}-oktahydro-4-[(2-merkapto-l-oxo-4-methylpentyl)amino]-5-oxopyrrolo[2,1 -b] [ 1,3]thiazepin-7-karboxylová

Roztok 184 mg (0,44 mol) produktu zčásti c) v 5 ml methanolu se zbaví kyslíku zaváděním dusíku po 10 minut, ochladí se na 0°C a přikapává se potom 5 ml IN roztoku hydroxidu sodného, rovněž zbaveného kyslíku zaváděním dusíku; ten se potom pomalu zavádí po dobu trvání reakce vůbec. Za 2 hodiny se reakční směs okyselí přidáním 2 ml 6 M roztoku chlorovodíkové kyseliny, kyselý roztok se extrahuje dvakrát do ethylesteru kyseliny octové, tyto extrakty se spojí, roztok se po vysušení bezvodým síranem hořečnatým zahustí. Zbytek se odpaří ještě po přidání hexanu, a triturováním zbytku se směsí methanolu a vody se získá 132 mg sloučeniny, jak je uvedena v nadpise, ve formě krystalické pevné látky, t.t. 94-96 °C.

[a]_D = -158,6° (c = 0,42). Použit methanol.

Chromatografie na tenké vrstvě (ethylester kyseliny octové - hexan - kyselina octová 4 : 4 : 0,1), R_f=0,13

Analýza:

pro C15H24N2S2O4.0,75 H2O vypočteno: 48,17 % C, 6,87 % H, 7,49 % N, 17,15 % S nalezeno: 48,33 % C, 6,51 % H, 7,37 % N, 16,82 % S

Vysokotlaková kapalinová chromatografie, retenční doba 17,6 min (99,2%), kolona YMC S3 ODS (C-18), 6,0 na 150 mm.

Lineární gradient (25 min) 0 % až 100 % B : A, 15 min, 1,5 ml/min.

A = 90 % vody v methanolu + 0,2 % kyseliny fosforečné

B = 90 % methanolu ve vodě + 0,2 % kyseliny fosforečné.

220 nm.

Příklad 10

Kyselina {4S-[4a(R*),7a,10a3)}-oktahydro-4-[(2-merkapto-l-oxo-3-fenylpropyl]-amino]5-oxo[ 1,4]oxazino[3,4-b] [ 1,3]oxazepin-7-karboxylová

a) 2-Propenylester kyseliny 2,2,2-trichloracetimidové

Do suspenze 945 mg (31,5 mmol) 80% hydridu sodíku, promyté dvakrát za použití 25 ml hexanu, v 30 ml suchého etheru se přikapává roztok 21,4 ml, tedy 18,3 g (315 mmol) 2-propen-l-olu v 45 ml suchého etheru, reakční směs se míchá pod argonem po 20 minut, ochladí se na 0 °C v lázni z ledu a soli, načež se ještě přidává během 15 minut 30 ml, tedy 42,3 g (0,30 molu) trichloracetonitrilu. Hnědý roztok se míchá za teploty 0 °C 40 minut, potom 10 minut za teploty 10 °C a 10 minut za teploty místnosti. Zahuštěním reakční směs vznikne sirup, ke kterému se přidá směs 1,2 ml methanolu a 30 ml pentanu a vmíchání se energicky pokračuje 5 minut. Vyloučí se něžně hnědá sraženina, jež se odsaje, promyje dvakrát pentanem vždy za použití 30 ml a zahuštěním spojených filtrátů se dále získá mírně hnědá kapalná látka. Ta se opět rozpustí v 50 ml pentanu, roztok se míchá několik minut, získaná suspenze se filtruje a získaná sraženina se promyje pentanem (30 ml), přičemž tento postup se opakuje nejméně ještě jednou. Zahuštěním čirého filtrátu a sušením ve vakuu se takto připraví 54,0 g sloučeniny, jak je uvedena v nadpise ve formě mírně červeno-hnědé zbarvené kapaliny. Ta se uchovává vhexanovém roztoku za teploty 10 °C.

-28CZ 289488 B6

b) Methylester N-ftaloyl-L-serinu

Suspenze 25 g (161 mmol) methylesteru L-serinu v 350 ml vody se zředí přidáním 250 ml dioxanu, do získaného čirého roztoku se přidá 17 g (1,0 ekv.) pevného uhličitanu sodného a dále 37 g (1,05 ekv.) N-karbethoxyftalimidu. Reakční směs se dále pak míchá 2,5 hodin pod argonem za teploty místnosti, extrahuje se třikrát do 500 ml ethylesteru kyseliny octové, extrakty se spojí a vše se promývá postupně za použití 250 ml 5% roztoku hydrogenuhličitanu sodného, 250 ml 5% hydrogensíranu draselného a 250 ml solanky. Po vysušení bezvodým síranem sodným a filtraci se filtrát zahustí do sucha a zbytek suší ve vakuu. Směs produktů se chromatografuje na silikagelu (kolona Měrek) za eluování směsmi ethylesteru kyseliny octové a hexanu 1 : 3 a 1 : 2, vhodné frakce se spojí, zahustí do sucha a sušením ve vakuu se izoluje 31 g sloučeniny, jak je uvedena v nadpise, ve formě hustého sirupu.

Chromatografie na tenké vrstvě (ethylester kyseliny octové a hexan, 1 : 1), R_f= 0,52.

c) Methylester N-ftaloyl-0-(2-propenyl)-L-serinu

Do roztoku 7,37 g (29,5 mmol) produktu z části b) v 30 ml suchého methylenchloridu se přidá roztok 11,97 g (59,1 mmol) produktu z části a) v cyklohexanu (60 ml) a dále 0,37 ml kyseliny trifluormethansulfonové. Reakční směs se míchá za teploty místnosti pod argonem 20 hodin, vyloučená sraženina se odsaje, promyje se nejmenším možným množstvím methylenchloridu a spojené filtráty se promyjí za použití 30 ml 5% roztoku hydrogenuhličitanu sodného a 30 ml vody, dále se organický roztok vysuší bezvodým síranem sodným, po filtraci se filtrát zahustí do sucha a zbytek se suší ve vakuu. Surová směs produktů se chromatografuje na koloně silikagelu (Měrek) za eluování kolony směsí ethylesteru kyseliny octové a hexanu (1 : 9). Odpovídající frakce se spojí, roztok se zahustí do sucha a sušením ve vakuu se takto připraví 7,56 g sloučeniny, jak je uvedena v nadpise, ve formě čirého, hustého sirupu.

Chromatografie na tenké vrstvě (ethylester kyseliny octové a hexan, 1 : 1), Rf = 0,70.

d) Methylester N-ftaloyl-O-(acetaldehyd)-L-serinu

Roztok 2,5 g (8,64 mmol) produktu z části c) ve směsi 46,4 ml suchého methylenchloridu a 4,6 ml methanolu se vychladí na -78 °C v lázni z pevného ledu a acetonu a zavádí se ozon (asi 15 minut), až modrá barva setrvává. Do směsi se potom zavádí 10 minut dusík, lépe až modrá barva zmizí, přidá se 14,0 ml (0,19 mmol) dimethylsulfidu (22,1 ekv.), teplota směsi se nechá vystoupit na 20 °C a pod dusíkem se směs míchá 2,5 hodin. Dále se zahustí směs do sucha, zbylý sirup se rozpustí v 50 ml ethylesteru kyseliny octové, roztok se promyje použitím 15 ml vody a 15 ml solanky, vysuší se bezvodým síranem hořečnatým a po filtraci se filtrát zahustí do sucha s následným sušením zbytku ve vakuu.

Surový produkt se chromatografuje na koloně silikagelu (Měrek) za eluování kolony směsí ethylesteru kyseliny octové a hexanu 1 : 9, potom 1 : 4 a 1 : 2 za vzniku 1,54 g produktu, jehož složení je uvedeno v nadpise.

Chromatografie na tenké vrstvě (ethylester kyseliny octové a hexan, 1 : 1), Rf = 0,33.

e) Methylester N-ftaloyl-O-(2,2-dimethoxyethyl)-L-serinu

Kroztoku 1,54 g (5,29 mmol) produktu zčásti d) ve směsi 8,3 ml methylenchloridu a 8,3 ml suchého methanolu se přidá 0,84 ml (7,68 mmol, 1,45 ekv.) trimethylesteru kyseliny orthomravenčí a 92 mg monohydrátu kyseliny p-toluensulfonové, reakční směs se potom míchá pod argonem za teploty místnosti 2,5 hodin, načež se roztřepává mezi 50 ml ethylesteru kyseliny octové a 15 ml nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Spojený organický roztok se

-29CZ 289488 B6 promyje použitím 15 ml vody, 15 ml solanky a suší se bezvodým síranem sodným. Po filtraci se zahuštěním filtrátu do sucha získá zbytek ten se suší ve vakuu a surový produkt se chromatografuje na koloně silikagelu (Měrek) za eluování kolony směsí ethylesteru kyseliny octové a hexanu (1 : 4), a získá se tím 1,35 g sloučeniny jak je uvedena v nadpise, ve formě hustého, ale širšího sirupu.

Chromatografie na tenké vrstvě (ethylester kyseliny octové a hexan, 1 : 1), Rf = 0,58.

f) Methylester 0-(2,2-dimethoxyethyl)-L-serinu

Do roztoku 2,0 g (5,93 mmol) produktu zčásti e) v 14 ml suchého methanolu se přidá 0,30ml (6,1 ml) hydrazinhydrátu a reakční směs se míchá 4 dny pod argonem. Vzniklá suspenze se filtruje, vysrážený podíl na filtru se promyje dvěma dávkami po 14 ml methanolu, filtrát se zahustí do sucha. Sirup se opět rozpustí v methylenchloridu a filtruje se dvakrát, až se neobjevuje žádná sraženina. Zahuštěním čirého filtrátu se takto připraví 1,17 g sloučeniny, jak je uvedena v nadpise; tvoří mírně žlutý sirup.

Chromatografie na tenké vrstvě (methylenchlorid:methanol, 9 : 1), Rf = 0,54.

g) N-[(Fenylmethoxy)-karbonyl]-O-[( 1, l-dimethylethyl)dimethylsilyl]-L-homoserin

Do roztoku 3,0 g (11,85 mmol) N-[(fenylmethoxy)-karbonyl]-L-homoserinu (příprava viz příklad 6 a) v 65 ml suchého dimethylformamidu se přidá 10,72 g (71,1 mol) (1,1-dimethylethylj-dimethylsilylchloridu, dále 9,65 g (0,14 mmol) imidazolu a reakční směs se míchá za teploty místnosti pod argonem 24 hodin. Dále se zředí přidáním 207 ml methanolu, v míchání za teploty místnosti se pokračuje 24 hodin, a reakční směs se zahustí potom do konsistence sirupu. Ten se rozpustí v 200 ml ethylesteru kyseliny octové, roztok se promyje dvakrát vždy za použití 75 ml 10% roztoku kyseliny citrónové, dále solankou, vysuší se bezvodým síranem sodným, a po filtraci se filtrát zahustí do sucha, zbytek se suší ve vakuu. Surová směs produktů se čistí chromatografováním na koloně silikagelu (Měrek) za eluování kolony nejprve směsí ethylesteru a hexanu (1 : 1), dále směsí téhož esteru a kyseliny octové (99,5 : 0,5), vhodné frakce se spojí, zahustí a několikerým oddestilováním s toluenem se získá sloučenina, jak je uvedena v nadpise, výtěžek 3,56 g, to ve formě voskovité pevné látky.

Chromatografie na tenké vrstvě (ethylester kyseliny octové : kyselina octová, 95 : 5), Rf = 0,82.

h) Methylester N-{O-[( 1, l-dimethylethyl)-dimethylsilyl] }-N-{ [(fenylmethoxy)-karbonyl]L-homoseiyl}-O-(2,2-dimethoxyethyl)-L-serinu

Roztok 2,18 g (5,93 mmol) produktu zčásti g) v suchém methylenchloridu se vychladí v lázni z ledu a soli na 0 °C a střídavě se do něj přidává roztok 1,71 g (5,65 mmol) produktu z části f v 5 ml suchého methylenchloridu, 0,78 ml (5,65 mmol) triethylaminu a 2,63 g (6,0 mmol) benzotriazol-l-yloxytris-(dimethylamino)-fosfoniumhexafluorofosfátu. Reakční směs se míchá 30 minut za teploty 0 °C, dále hodinu a 45 minut za teploty místnosti, načež se roztřepává mezi 100 ml ethylesteru a to dvakrát s 30 ml vody, organické extrakty se spojí a vše se promyje za použití 20 ml z 50% nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a 25 ml solanky, po vysušení bezvodým síranem sodným a filtraci se filtrát zahustí do sucha a zbytek se suší ve vakuu. Surová směs produktů se chromatografuje na koloně silikagelu (Měrek) za eluování směsí ethylesteru kyseliny octové a hexanu v poměru nejprve 1 : 4, potom 1 : 3 a 1 : 1, čímž se získá 2,38 produktu složení uvedeného v nadpise.

Chromatografie na tenké vrstvě (ethylester kyseliny octové a hexan, 1 : 1), Rf = 0,40.

-30CZ 289488 B6

i) Methylester kyseliny [4S-(4a,7a, 10ap)]-oktahydro-4-[(fenylmethoxy)-karbonylamino]5-oxo[ 1,4]oxazino[3,4-b] [ 1,3]oxazepin-7-karboxylové

Do roztoku 1,0 g (1,8 mmol) produktu zčásti h) v 50 ml suchého methylenchloridu se přidá iontoměničová pryskyřice Amberlyt^R 15 (v kyselé formě) a 0,1 methanolu, reakční směs se míchá za teploty místnosti pod argonem 3 dny, pryskyřice se odfiltruje, promyje malým množstvím methylenchloridu a filtrát se zahustí na sirup. Surová takto získaná směs produktů se chromatografuje na koloně silikagelu za eluování směsí ethylesteru kyseliny octové a hexanu (1 :1). Získá se tak 339 mg produktu, jak je uveden v názvu.

Chromatografie na tenké vrstvě (ethylester kyseliny octové a hexan, 3 : 1), R_f = 0,53.

j) Methylester kyseliny [4S-(4a,7a, 10ap)]-oktahydro-4-amino-5-oxo[l,4]oxazino[3,4-b][ 1,3]oxazepin-7-karboxylové

Do roztoku 771 mg (2,04 mmol) produktu připraveného, jak to bylo popsáno v části j) v 25 ml suchého methanolu se přidá jako katalyzátor 125 mg 10% palladia na uhlí a reakční směs se v uzavřené nádobě hydrogenuje 16 hodin. Filtruje se potom vrstvou Celit-u^R, tato vrstva se promyje dvěma podíly po 25 ml methanolu, čirý filtrát se zahustí ve vakuu do sucha a sušením ve vakuu se získá 448 g sloučeniny, jak je uvedena v nadpise, ve formě sirupu.

Chromatografie na tenké vrstvě (methylenchlorid a methanol, 9:1), Rf = 0,22.

k) Methylester kyseliny {4S-[4a(R*),7a,10ap]}-oktahydro-4-{[2-(acetylthio)-l-oxo-3fenylpropyl]-amino}-5-oxo[ 1,4]oxazino[3,4—b] [ 1,3]oxazepin-7-karboxylové

V prostředí 70 ml ethylesteru kyseliny octové se suspenduje 813 mg (2,01 mmol) soli dicyklohexylaminu a kyseliny (S)-2-(acetylthio)benzenpropanové, roztok se promyje pětkrát vždy za použití 9,3 ml 5% roztoku hydrogensíranu draselného a 9,3 ml solanky, vysuší se bezvodým síranem hořečnatým) filtruje, a po filtraci se zahuštěním filtrátu do sucha získá zbytek, který se suší ve vakuu.

Získaná volná kyselina se rozpustí v 12 ml suchého methylenchloridu, roztok se ochladí v lázni z ledu a soli na 0 °C a přidávají se střídavě tyto složky: roztok 448 mg (1,84 mmol) produktu zčásti j) v 4,0 suchého methylenchloridu, 0,25 ml triethylaminu (1,80 mmol) a 823 mg (1,86 mmol) benzotriazol-l-yloxytris-(dimethylamino)-fosfoniumhexafluorfosfátu, reakční směs se potom míchá při 0 °C hodinu, dále 2 hodiny za teploty místnosti pod argonem. Zbaví se rozpouštědel zahuštěním do sucha a získaný sirup se znovu rozpustí v 60 ml ethylesteru kyseliny octové, roztok se promyje dvakrát použitím 11 ml 0,5 N roztoku kyseliny chlorovodíkové, 11 ml vody a 11 ml solanky, vysuší se bezvodým síranem sodným, a po filtraci se filtrát zahustí do sucha, zbytek se suší ve vakuu. Chromatografováním surové směsi produktů dvakrát na koloně silikagelu (Měrek) za eluování každé kolony směsmi ethylesteru kyseliny octové a hexanu (1 : 1, 1 : 2) se získá 665 mg sloučeniny, jak je uvedena v nadpise, a to ve formě sirupu.

Chromatografie na tenké vrstvě (ethylester kyseliny octové a hexan, 3:1), Rf = 0,30.

l) Kyselina {4S-[4a(R*),7a,10aP]}-oktahydro-4-[(2-merkapto-l-oxo-3-fenylpropyl)amino]-5-oxo[l,4]oxazino[3,4-b][l,3]-oxazepin-7-karboxylová

Roztok 650 mg (1,44 mmol) produktu zčásti k) v 13 ml methanolu se proplachuje argonem 30 minut, ochladí se v lázni z ledu a soli na 0 °C, načež se za této teploty přikapává 5,84 ml 1,0 N roztoku hydroxidu sodného, předtím zbaveného kyslíku zaváděním argonu po 30 minut. Argon se potom zavádí po celou dobu provádění reakce. Reakční směs se míchá 5 hodin za chlazení na 0 °C, rozruší se za této teploty přidáním 25,4 ml 5% roztoku hydrogensíranu

-31CZ 289488 B6 draselného, teplota se nechá vystoupit na 20 °C a následuje extrakce do ethylesteru kyseliny octové (třikrát 50 ml) s tím, že se organické extrakty spojí, po promytí použitím 15 ml solanky vysuší bezvodým síranem sodným a filtrát po filtraci se zahustí do sucha, zbytek se suší ve vakuu. Surový produkt se trituruje se směsí hexanu a methylenchloridu (130 : 7), a pevný podíl se chromatografuje na koloně silikagelu (Měrek) za eluování kolony ethylesterem kyseliny octové a hexanem (nejprve 1 : 2, potom 1:1), potom za použití směsi methylenchlorid: methanol : kyselina octová (100 : 4,0: 0,2). Odpovídající frakce se spojí, zahustí do sucha a odpaří několikrát s toluenem. Vznikne tak 364 mg sloučeniny, jak je uvedena v nadpise, která se suší ve vakuu po 9,0 hodin. Získaný produkt se trituruje potom se směsí methylenchloridu a hexanu (1 : 10), s 50 ml hexanu a dvakrát s 50 ml pentanu, přičemž prvá pentanová frakce se míchá 4 hodiny a další pentanová frakce přes noc pod argonem. Rozpouštědlo se oddekantuje a pevný podíl se suší 6 hodin ve vakuu za vzniku čisté sloučeniny složení, jak je uvedeno v nadpise. Látka tvoří amorfní pevnou pěnovitou hmotu, [a]_D = -49,1° (c = 0,48, methanol).

Chromatografíe na tenké vrstvě (toluen : kyselina octová, 5 : 1), Rf= 0,17.

Analýza:

pro C₁₈H₂₂N₂O₆S . 0,56 H₂O vypočteno: 53,45 % C, 5,76 % H, 6,93 % N, 7,92 % S nalezeno: 53,45 % C, 5,53 % H, 6,75 % N, 7,48 % S

Vysokotlaková kapalinová chromatografíe, retenční doba 10,45 min (98,3 %), kolona YMS S3 ODS (C = 18), 6,0 na 150 mm, 44 % soustavy (10 % vody - 90 % methanolu + 0,2 % kyseliny fosforečné /56 % soustavy (90 % vody, 10 % methanolu + 0,2 % kyseliny fosforečné), isokraticky, 1,5 ml /min.

Příklad 11

Kyselina {4S-[4a(R*),7a,10ap]}-oktahydro-4—[(2-merkapto-l-oxo-3-fenylpropyl)-amino]5-oxo-7H-pyrido[2,l-b][l,3]thiazepin-7-karboxylová

Produkt z příkladu 3 se dá připravit také tímto způsobem:

a) N-[(Fenylmethoxy)-karbonyl]-0-[( 1, l-dimethylethyl)dimethylsilyl]-L-homoserin

Do roztoku 41,56 mmol N-[(fenylmethoxy)-karbonyl]-L-homoserinu (příprava viz příklad 6a) v 125 ml dimethylformamidu se přidá 37,5 g (249 mmol) [(l,l-dimethylethyl)dimethylsilyl]chloridu, dále pak 33,95 g (498 mmol) imidazolu a takto připravená reakční směs, tedy mírně zažloutlý roztok se míchá za teploty místnosti 22 hodin. Dále se přidá 500 ml methanolu a reakční směs se míchá dalších 6 hodin, načež se methanol a největší podíl dimethylformamidu oddestiluje ve vakuu. Zbytek se rozpustí v 800 ml ethylesteru kyseliny octové, tento roztok se promyje dvakrát za použití 300 ml 10% roztoku kyseliny citrónové, vodné podíly se spojí a celek se extrahuje do 300 ml ethylesteru kyseliny octové. Spojený roztok v tomto rozpouštědle se promyje vodou a solankou, vysuší se bezvodým síranem sodným, filtrát se po filtraci zahustí a po odpaření zbytku s hexanem se získá bílá práškovaná hmota. Tento produkt se suší ve vakuu a získá se tak 12,942 g sloučeniny, jak je uvedena v nadpise.

b) Methylester kyseliny [S-(R*,R*)]-2-{4-[(l,l-dimethylethyl)-dimethylsilyl]oxy}-l-oxo2-{ [(fenylmethoxy)karbonyl]amino} butylamino-6,6-dimethylhexanové

Do roztoku 22,78 g (61,97 mmol) produktu z části a) v 100 ml methylenchloridu, ochlazeného na 0 °C, se přidá 6,81 ml (61,97 mmol) N-methylmorfolinu, dále pak 8,37 g (61,97 mmol) hydroxybenzotriazolu a 10,6 g (51,64 mmol) methylesteru kyseliny (S)-2-amino-6,6-dimethoxy

-32CZ 289488 B6 hexanové (příprava viz příklad 1 e) v 50 ml methylenchloridu, a dále ještě 11,88 g (61,97 mmol) l-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)karbodiimidu. Reakční směs se míchá při 0 °C po dobu hodiny, potom přes noc za teploty místnosti. Dále se reakční směs zahustí ve vakuu a zbytek se zředí přidáním 600 ml ethylesteru kyseliny octové, získaný roztok se promyje použitím 200 ml 5% roztoku hydrogensíranu draselného, 0,5 N hydroxidu sodného (200 ml), vodou a solankou, načež se vysuší bezvodým síranem sodným. Filtrát se zahustí, zbytek se rozpustí v ethyletheru (150 ml), vzniklá suspenze se filtruje, pevný podíl se odsaje a promyje dokonale ethyletherem. Zahuštěním filtrátu ve vakuu do sucha se získá 30 g surového produktu, jak je složení uvedeno v nadpise, to ve formě olejovitého produktu, kteiý se použije bez jakéhokoli čistění pro další reakci.

Chromatografie na tenké vrstvě (ethylester kyseliny octové a hexan, 8 : 2), Rf = 0,55.

c) Methylester kyseliny [S-(R*,R*)]-2-{4-hydroxy-l-oxo-2-[(fenylmethoxy)-karbonyl]amino}butyl-amino-6,6-dimethoxyhexanové

Do roztoku 30 g produktu z části b) v 150 ml methanolu se po ochlazení na 0 °C přidá 1,96 g monohydrátu kyseliny p-toluensulfonové, reakční směs se míchá za chlazení na 0 °C 2 hodiny a rozruší se potom přidáním vodného roztoku 1,3 g hydrogenuhličitanu sodného (1,3 této soli v 100 ml vody). Směs se zahustí ve vakuu a zbytek se roztřepává mezi 400 ml ethylesteru kyseliny octové a 150 ml vody. Vodná fáze se oddělí, extrahuje se dvakrát do 150 ml ethylesteru kyseliny octové, organické roztoky se spojí a celek se vysuší po promytí 10% roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou (dvakrát) bezvodým síranem sodným, po filtraci se filtrát zahustí do sucha. Zbytek se podrobí bleskové chromatografii na koloně silikagelu 10 na 25 cm za eluování 80% ethylesteru kyseliny octové v hexanu (51). ethylesterem kyseliny octové (31). a2% methanolu vethylesteru kyseliny octové (51). Odpovídající frakce se spojí, zahustí se a zbytek se suší ve vakuu. Výsledkem je 17,45 g sloučeniny, jak je uvedena v nadpise, jako bledě žlutý olej.

Chromatografie na tenké vrstvě (ethylester kyseliny octové a hexan, 8 : 2), Rf = 0,17.

d) Methylester kyseliny [S-(R*,R*)]-2-{4-[methansulfonyl)-oxy]-l-oxo-2-{[(fenylmethoxy)-karbonylamino]butyl}-amino-6,6-dimethoxyhexanové

Do roztoku 17,40 g (39,50 mmol) produktu zčásti c) (po trojnásobné destilaci stoluenem a sušením ve vakuu po dobu noci) v 250 ml methylenchloridu se po ochlazení na -15 °C (led a aceton) přidá čerstvě předestilovaný triethylamin v množství 8,26 ml (59,28 mmol) a potom se přikapává 3,67 ml (47,4 mmol) methansulfonylchloridu. Reakční směs se míchá za teploty -15 °C po 30 minut, rozruší se přidáním 100 ml nasyceného roztoku chloridu amonného, získaná směs se míchá 5 minut, zředí se přidáním 600 ml ethylesteru kyseliny octové a promyje se 5% roztokem hydrogensíranu draselného, solankou, vysuší se (bezvodým síranem sodným), a po filtraci se filtrát zahustí do sucha. Zbytek se suší ve vakuu a získá se tak 20,40 g sloučeniny, jak je uvedena v nadpise, to ve formě žlutého oleje, který se takto použije pro další reakci, přímo, bez čistění.

Chromatografie na tenké vrstvě (ethylester kyseliny octové a hexan, 8.2), Rf = 0,35.

e) Methylester kyseliny [S-(R⁺,R⁺)]-2-(4-acetylthio)-l-oxo-2-{[(fenylmethoxy)-karbonylamino]-butyl-amino}-6,6-dimethoxyhexanové

Do roztoku 5,09 ml (71,10 mmol) kyseliny thiooctové v 100 ml methanolu se přidá 10,81 g (33,18 mmol) uhličitanu česného a roztok se zahustí ve vakuu. Pevný podíl se trituruje třikrát se suchým acetonem, načež se sušením ve vakuu nad oxidem fosforečným po dobu noci získá takto thiooctan česný.

-33CZ 289488 B6

Roztok 20,40 g (39,50 mmol) produktu zčásti d) v 150 ml suchého dimethylformamidu se přidává via kanula do suspenze 10,576 g (50,85 mmol) thiooctanu česného v 50 ml dimethylformamidu. Získaný žlutý roztok se míchá pod argonem za teploty místnosti po dobu noci, potom se zahustí za vysokého vakua, aby se tak odstranil pokud možno veškerý dimethylformamid. Zbytek se rozpustí v ethylesteru kyseliny octové (11.), roztok se promyje použitím 200 ml hydrogenuhličitanu sodného, dále za použití čtyř podílů po 200 ml vody, 400 ml solanky, a čtyř podílů po 200 ml vody. Po vysušení bezvodým síranem sodným se filtrát zahustí a zbytek se oddestiíuje třikrát s toluenem. Následným sušením ve vakuu se získá takto 20 g sloučeniny, jak je uvedena v nadpise, to ve formě mírně nahnědlé či nažloutlé pevné látky, jež se použije pro další reakci bez čištění.

Chromatografie na tenké vrstvě (ethylester kyseliny octové a hexan, 8 : 2), R_f = 0,47.

f) Methylester kyseliny [S-(R*,R*)]-2-[4-merkapto]-l-oxo-2-[(fenylmethoxy)-karbonylaminobutylamino]-6,6-dimethoxyhexanové

Roztok 20 g (39,50 mmol) produktu z části e) v 250 ml methanolu se vychladí na 0 °C, a 15 minut se do roztoku zavádí argon. Za stálého zavádění argonu se přikapává 9,17 ml (40 mmol) 25% roztoku (hmotnostně) methoxidu sodného v methanolu. Reakční směs se míchá 5 minut, potom se reakční směs rozruší přidáním 200 ml nasyceného roztoku chloridu amonného, a směs se roztřepává mezi ethylester kyseliny octové (11.) a 200 ml vody. Vodný podíl se extrahuje použitím 200 ml ethylesteru kyseliny octové, spojené extrakty v tomto rozpouštědle se promyjí použitím 400 ml nasyceného roztoku chloridu amonného, 400 ml solanky, po vysušení bezvodým síranem sodným a filtraci se filtrát zahustí ve vakuu a získá se tím 17,5 g sloučeniny složení, jak je uvedeno v nadpise, to ve formě žlutého oleje, který se použije pro další reakci bez jakéhokoli čistění.

Chromatografie na tenké vrstvě (ethylester kyseliny octové a hexan, 8 : 2), R_f = 0,45.

g) Methylester kyseliny [4S-(4a,7a,10ap)-oktahydro-4-[(fenylmethoxy)-karbonylamino]-5oxo-7H-pyrido[2,1 -b] [ 1,3]thiazepin-7-karboxylové

Do roztoku 17,5 g (38,3 mmol) produktu zčásti f) v 600 ml methylenchloridu se přidá 6g iontoměničové pryskyřice Amberlyte^R 15, předem upravené 6N roztokem kyseliny chlorovodíkové, vodou, tetrahydrofuranem a methylenchloridem s následným vysušením. Suspenze se míchá pod argonem za teploty místnosti 18 hodin, potom se filtruje, filtrát se zahustí a zbytek se adsorbuje na Celit-u ^R, dále se čistí na koloně silikagelu 10 na 30 cm za eluování směsí 20-30 % ethylesteru kyseliny octové v hexanu. Předpokládané frakce se spojí a zahuštěním ve vakuu do sucha se získá 9,18 g sloučeniny, jež je uvedena v nadpise, to ve formě žlutého oleje.

Chromatografie na tenké vrstvě (ethylester kyseliny octové a hexan, 1 : 1), R_f - 0,32.

h) Methylester kyseliny [4S-(4a,7a, 10aP)]-oktahydro-4—amino-5-oxo-7H-pyrido[2,1-b][1,3 ]thiazepin-7-karboxy lové

Do roztoku produktu z příkladu výše, část g (9g, 23,19 mmol), který se třikrát oddestiíuje stoluenem a suší ve vakuu přes noc, se vprostřed! 150 ml methylenchloridu přidá 4,95 ml (34,78 mmol) jodtrimethylsilanu po kapkách. Vzniklý žlutý roztok se míchá pod argonem za teploty místnosti po dobu 1,5 hodin, rozruší se přidáním 120 ml 0,4 N roztoku kyseliny chlorovodíkové ve směsi methanolu a dioxanu, těkavé podíly se oddestilují ve vakuu a zbytek se roztřepává mezi 500 ml etheru a 700 ml vody. Organická fáze se extrahuje za použití 150 ml 0,1 N roztoku kyseliny chlorovodíkové, spojené kyselé vodné extrakty se ochladí na 0 °C, a po alkalizaci přidáním 1 N roztoku hydroxidu sodného na pH 10,5 (sledováno pH-metrem) se vše extrahuje do methylenchloridu (čtyřikráte do 400 ml). Spojené organické extrakty se promyjí solankou, vysuší se bezvodým síranem sodným, a po filtraci se zahuštěním ve vakuu získá 6,45 g

-34CZ 289488 B6 sloučeniny, jak je uvedena v nadpise, ve formě žlutého oleje, který se použije pro další reakci bez jakéhokoliv čistění.

Chromatografie na tenké vrstvě (methanol a methylenchlorid, 1 : 9), Rf = 0,20.

i) Kyselina {4S-[4a(R*),7a,10aP]}-oktahydro-4-[(2-merkapto-l-oxo-3-fenylpropyl)amino]-5-oxo-7H-pyrido[2,1 —b] [ 1,3]thiazepin-7-karboxylová

Do vychlazeného roztoku (0 °C) soli triethylaminu a kyseliny (S)-(2-acetylthio)-benzenpropanové v methylenchloridu se přidá roztok produktu z části h) v methylenchloridu a dále benzotriazol-l-yloxytris-(dimethylamino)fosfoniumhexafluorfosfát. Reakční směs se zpracuje jako v postupu, popsaném v příkladu 3 c) za vzniku methylesteru kyseliny {4S-[4a(R*),7a,10a3]}~ oktahydro-4-[2-(acetylthio)-l-oxo-3-fenylpropylamino]-5-oxo-7H-pyrido[2,l-b][l,3]thiazepin-7-karboxylové.

K roztoku tohoto methylesteru jako produktu v methanolu, zbaveného kyslíku, se přidá 1 N roztok hydroxidu sodného, to podle postupu z příkladu 3d), a získá se tím produkt, jak je uveden v nadpise.

Příklad 12

Kyselina {4S-[4a(R*),7a,10ap]}-oktahydro~4-[2-(merkaptomethyl)-l-oxo-3-fenylpropylamino]-5-oxo-7H-pyrido[2,1 -b] [1,3 ]thiazepin-7-karboxylová

a) Sůl kyseliny (S)-2-(acetylthio)methylbenzenpropanové a efedrinu

Roztok 17,3 g (105 mmol) (lR,2S)-(-)-efedrinu v 175 ml diethyletheru se přidá naráz do roztoku 50,0 g (210 mmol) kyseliny 2-[(acetylthio)-methyl]benzenpropanové v 175 ml diethyletheru. Poté, co se nechá reakční směs stát za teploty místnosti 16 hodin, odfiltruje se krystalická sůl efedrinu (19,7 g), t.t. 114-125 °C.

[a]_D = -40,6° (c = 1, methanol). Další množství pevného podílu (8,9 g), t.t. 121-126 °C, [a]_D = -47,2° (c = 1, methanol) se získá z roztoku stáním za teploty místnosti po dobu dalších 20 hodin. Pevné podíly se spojí a překrystalují z 1500 ml acetonitrilu. Po 16ti hodinách za teploty místnosti se takto získá 20,8 g látky o t.t. 125-130 °C, [a]_D = -48,9° (c = 1, methanol). Tato látka se překrystaluje týmž způsobem z 300 ml acetonitrilu; získá se tím, 18,7 g sloučeniny o t.t. 128— 130 °C, [a]_D = -48,9° (c = 1, methanol). Třetí krystalizaci z 225 ml acetonitrilu se získalo 17,4 g krystalické soli efedrinu a kyseliny (S)-2-[(acetylthio)-methyl]-benzenpropanové, t.t. 128129 °C, [a]_D = -50,2° (c = 1, methanol).

Analýza:

pro C_I2H_nO₃S . C_i0H₁₅NO vypočteno: 65,48 % C, 7,24 % H, 3,47 % N, 7,95 % S nalezeno: 65,46 % C, 7,34 % H, 3,21 % N, 8,00 % S

b) Methylester kyseliny {4S-[4a(R*),7a, 10aP]}-oktahydro-4-[2-(acetylthio)-methyl]-loxo-3-fenylpropylamino-5-oxo-7H-pyrido[2,l-b][l,3]thiazepin-7-karboxylové

Míchaná suspenze 333,1 mg (0,822 mmol) soli efedrinu zčásti a) v 5 ml ethylesteru kyseliny octové se promyje třikrát použitím 5 ml dávky roztoku 1 N kyseliny chlorovodíkové, organický extrakt se promyje solankou, vysuší se bezvodým síranem hořečnatým, a po filtraci se filtrát zahustí stím, že se zbytek suší 30 minut ve vakuu. Zbylý olej se rozpustí v 2 ml methylenchloridu, roztok se míchá pod dusíkem za chlazení na 0 °Č, a přidává se k němu roztok 200,0 mg

-35CZ 289488 B6 (0,774 mmol) methylesteru kyseliny [4S-(4a,7a,10aP)]-oktahydro-4-amino-5-oxo-7H-pyrido[2,l-b][l,3]thiazepin-7-karboxylové (příprava viz příklad 3, c) v 6 ml methylenchloridu, dále 0,113 ml (0,813 mmol) triethylaminu a posléze 360,0 mg (0,813 mmol) benzotriazol-1yloxytris-(dimethylamino)fosfoniumhexafluorfosfátu. Za teploty 0 °C se reakční směs míchá, teplota se nechá pomalu vystoupit na 20 °C a po 19 hodinách se reakční směs zahustí ve vakuu, zbytek se rozpustí v ethylesteru kyseliny octové a získaný roztok se promyje jednou 5% roztokem hydrogensíranu draselného (20 ml) jednou týmž objemem nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a pak solankou. Organický podíl se vysuší bezvodým síranem hořečnatým, a po filtraci se zahuštěním filtrátu získá žlutý pěnovitý produkt. Ten se čistí bleskovou chromatografií na silikagelu (0,062-0,050 mm) za tlaku 70 až 140 KPa dusíku s eluováním směsí ethylesteru kyseliny octové a hexanu (4:3). Výsledkem je 303 mg produktu ve formě čirého oleje.

c) Kyselina {4S-[4a(R*),7a, 10ap]}-oktahydro-4-[(2-(merkaptomethyl)-l-oxo-3-fenylpropyl]-amino-5-oxo-7H-pyrido[2,l-b][l,3]thiazepin-7-karboxylová

Roztok 303 1 mg (0,635 mmol) produktu z části b) v 6,5 ml methanolu se zbaví kyslíku zaváděním dusíku, ochladí se na 0 °C a přidává se 6,5 ml 1 N roztoku hydroxidu sodného, rovněž zbaveného kyslíku dusíkem. Za stálého zavádění dusíku se reakční směs míchá při 0 °C hodinu, potom se teplota, ponechá vystoupit na 20 °C a po celkem 3 hodinách reakce se reakční směs okyselí na pH 1 přidáním 5% roztoku hydrogensíranu draselného a extrahuje do ethylesteru kyseliny octové, organické podíly se spojí, vše se promyje vodou, solankou a po vysušení bezvodým síranem sodným a filtraci se zahuštěním filtrátu ve vakuu získá takto 219 mg sloučeniny, jak je uvedena v nadpise, to ve formě bílé pevné látky, t.t. 200 °C (za rozkl.).

Chromatografie na tenké vrstvě (ethylester kyseliny octové, kyselina octová a hexan 6:0,01 : 3,99), R_f= 0,15.

Vysokotlaková kapalinová chromatografie, retenční doba 26,3 min, nečistoty: 27,0 min. Kolona YMC S-3 ODS (C—18) 6,0 na 150 mm, 0 % ažlOO % B : A, 30 min. lineární gradient s 10ti min. zdržením, 1,5 ml/min.

A = 90 % vody v methanolu + 0,2 % kyseliny fosforečné,

B = 90 % methanolu ve vodě + 0,2 % kyseliny fosforečné, 220 nm

Analýza:

pro C₂oH260₄N₂S₂.0,11 C₄H₈O₂.0,07 CH₂C1₂ vypočteno: 56,22 % C, 6,21 % H, 6,39 % N, 14,63 % S nalezeno: 56,46 % C, 6,28 % H, 6,31 % N, 14,59 % S

Příklad 13

Kyselina {4S-[4a(R*),7a,10ap]}-oktahydro-4-[(2-merkapto-4-methyl-l-oxopentyl)-amino]5-oxo-7H-pyrido[2,1 —b] [ 1,3]thiazepin-7-karboxy lová

a) Kyselina (R)-2-brom-4-methylpentanová

Do míchaného roztoku 3,0 g (23 mmol) D-leucinu v 47 ml 2,5 N roztoku kyseliny sírové se přidá za teploty místnosti 9,5 g (80 mmol) bromidu draselného, reakční směs se ochladí na -10 °C a po částech se přidává 2,4 g (34 mmol) dusitanu sodného, přičemž se teplota udržuje v rozmezí -10° až -5 °C. Po skončeném přidávání se reakční směs míchá ještě hodinu, teplota se nechá vystoupit na 20 °C a v míchání se pokračuje ještě hodinu. Dále se reakční směs extrahuje dvakrát do etheru, roztok v etheru se promyje jednou vodou, vysuší se bezvodým síranem hořečnatým a po filtraci se filtrát zahustí. Získá se tím 2,7 g surové látky, jak je její složení uvedeno v nadpise.

-36CZ 289488 B6

b) Sůl dicyklohexylaminu a kyseliny (S)-2-(acetylthio)-4-methylpentanové

Do míchané suspenze 1,7 g draselné soli kyseliny thiooctové (15,0 mmol) v 50 ml suchého acetonitrilu se vnese za teploty místnosti a pod argonem roztok 2,6 g (13 mmol) produktu z části

a) v 17 ml acetonitrilu, reakční směs se míchá 4 hodiny, vzniklá suspenze se filtruje a zahustí. Zbytek se znovu rozpustí v ethylesteru kyseliny octové, ten se oddestiluje, zbytek se rozpustí v diethyletheru, roztok se promyje jednou 5% roztokem hydrogensíranu draselného a jednou solankou, vysuší se bezvodým síranem hořečnatým, a po filtraci se filtrát zahustí. Zbytek se rozpustí v 64 ml etheru, do roztoku se přidá 2,7 ml (14 mmol) dicyklohexylaminu. Z roztoku se začne ihned vylučovat bílá pevná látka, a po odfiltrování tohoto podílu se získá 2,0 g sloučeniny, jak je uvedena v nadpise, t.t. 153-158 °C, [a]_D = -54,5° (c = 0,61, chloroform).

c) Methylester kyseliny {4S-[4a(R*),7a,10aP]}-oktahydro-4-[2-(acetylthio)-4-methyl-loxopentyl]-amino-5-oxo-7H-pyrido[2,l-b][l,3]thiazepin-7-karboxylové

Míchaná suspenze 403,3 mg (1,09 mmol) produktu z části b) v 5 ml ethylesteru kyseliny octové se promyje třikrát za použití 5 ml 5% roztoku hydrogensíranu draselného, organické extrakty se spojí, vše se promyje solankou a po vysušení bezvodým síranem sodným a filtraci se zahuštěním filtrátu získá zbytek, který se suší 30 minut. Zbylý olej, 179,4 mg (0,943 mmol) se rozpustí v 2 ml methylenchloridu, roztok se vychladí za míchání pod dusíkem na 0 °C a do tohoto roztoku se přidá 232,0 mg (0,898 mmol) methylesteru kyseliny [4S-(4a,7a,10aP)]-oktahydro-4-amino5-oxo-7H-pyrido[2,l-b][l,3]thiazepin-7-karboxylové (příprava viz příklad 3 c) vprostřed! 6 ml methylenchloridu, dále 0,131 ml (0,943 mmol) triethylaminu a konečně 417,1 mg (0,943 mmol) benzotriazol-l-yl-oxytris-(dimethylamino)-fosfoniumhexafluorfosfátu. Reakční směs se míchá hodinu za chlazení na 0 °C a dále 3,5 hodin za teploty místnosti. Po celkové době

4,5 hodin se reakční směs zahustí ve vakuu a zbytek se rozpustí v ethylesteru kyseliny octové. Získaný roztok se promyje jednou za použití 20 ml 5% roztoku hydrogensíranu draselného, jednou za použití 20 ml nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a jednou za použití solanky. Organická vrstva se vysuší bezvodým síranem hořečnatým, a po filtraci se filtrát zahustí za vzniku žluté pěny. Ta se čistí bleskovou chromatografií na silikagelu zde již uvedené kvality za tlaku dusíku, jak byl uveden, a eluováním směsí ethylesteru kyseliny octové a hexanu (2 : 3) se získá 209,4 mg sloučeniny, jak byla uvedena v nadpise, to ve formě čirého oleje.

d) Kyselina {4S-[4a(R⁺),7a,10ap]}-oktahydro-4-[(2-merkapto-4-methyl-l-oxopentyl)amino]-5-oxo-7H-pyrido[2,l-b][l,3]thiazepin-7-karboxylová

Roztok 209,4 mg (0,486 mmol) produktu z části c) v 5 ml methanolu se zbaví kyslíku zaváděním dusíku, ochladí na 0 °C, přidá se 5 ml 1 N roztoku hydroxidu sodného, zbaveného kyslíku zaváděním dusíku, a reakční směs se míchá hodinu za teploty 0 °C za stálého zavádění dusíku, načež se teplota reakční směsi nechá vystoupit na 20 °C. Celkem po 2,5 hodinách se reakční směs okyselí na pH 1 přidáním 5% roztoku hydrogensíranu draselného, následuje extrakce do ethylesteru kyseliny octové, organické podíly se spojí, promyjí vodou, solankou, a po vysušení bezvodým síranem sodným se filtrují a filtrát se zahustí ve vakuu. Čistěním bleskovou chromatografií na silikagelu uvedených vlastností za uvedeného tlaku dusíku a za eluování dusíkem za použití směsi ethylesteru kyseliny octové/kyseliny octové a hexanu 6: 0,01 :3,99) se získá 142,0 mg sloučeniny, jak je uvedena v názvu, za vzniku bílé pevné látky. Chromatografíe na tenké vrstvě ethylesteru kyseliny octové : kyseliny octové a hexanu (6 : 0,1 : 3,9) Rf = 0,20. [a]o = -103,0° (c = 0,43, chloroform).

Vysokotlaková kapalinová chromatografíe, retenční doba = 26,7 min, kolona YMC S-3 ODS (C18), 6,0 na 150 mm 0 až 100 % B.

A: 30 min. lineární gradient a 10 min pozdržení, 1,5 ml/min.

A = 90 % vody v methanolu + 0,2 % fosforečné kyseliny,

B = 90 % methanolu ve vodě + 0,2 % fosforečné kyseliny

-37CZ 289488 B6

Analýza:

pro C16H26O4N2S2.0,19 C4H8O2.0,18 C7H16.0,9 H₂O vypočteno: 50,87 % C, 7,63 % H, 6,58 % N, 15,07 % S nalezeno: 50,57 % C, 7,20 % H, 6,83 % N, 14,75 % S.

Příklad 14

Kyselina {4S-[4a(R*),7a,9ap]}-oktahydro-4-[(2-merkapto-l-oxybutyl)amino]-5-oxopyrrolo[2,1 —b] [ 1,3]thiazepin-7-karboxylová

a) Kyselina (R)-2-brombutanová

7.85 g (65,94 mmol) bromidu draselného se vnese do roztoku 2,0 g (19,40 mmol) kyseliny (R)— 2-aminobutanové v 25 ml 2,5 N roztoku kyseliny sírové, směs se ochladí na 0 °C a v několika dávkách se pomalu přidává 2,06 g (29,87 mmol) dusitanu sodného. Během tohoto pochodu se teplota reakční směsi udržuje pod 2 °C, reakční směs se dále míchá hodinu za teploty 0 °C a 16 hodin za teploty místnosti, načež se extrahuje několikrát dávkami po 50 ml ethylesteru kyseliny octové. Spojený roztok v tomto rozpouštědle dvakrát za použití 50 ml vody, jednou za použití 50 ml solanky a po vysušení bezvodým síranem hořečnatým se zahuštěním filtrátu získá

2.86 g sloučeniny uvedené v nadpise, ve formě surového oleje.

b) Sůl dicyklohexylaminu a kyseliny (S)-2-(acetylthio)butanové

Do suspenze 2,14 g (18,77 mmol) draselné soli kyseliny thiooctové v 15 ml acetonitrilu se za míchání za teploty místnosti přikapává 15 minut roztok 2,83 g (17,07 mmol) kyseliny (R)-2brombutanové v 15 ml acetonitrilu a reakční směs se po míchání 16 hodin za teploty místnosti filtruje. Filtrát se ve vakuu zahustí a zbylý olej se rozpustí v 30 ml ethyletheru. Roztok v etheru se promyje dvakrát za použití 20 ml 5% roztoku hydrogensíranu draselného, dvakrát použitím vždy 20 ml vody, dvakrát týmž objemem solanky a po vysušení bezvodým síranem hořečnatým a filtraci se k filtrátu přidají 3,4 ml (17,07 mmol) dicyklohexylaminu. Reakční směs se míchá za teploty místnosti 2 hodiny a vyloučený podíl sraženiny se odsaje: 1,24 g produktu, tj. soli dicyklohexylaminu. Další podíl 724 mg této soli se získá z filtrátu.

c) Methylester kyseliny {4S-[4a(R*),7a,9ap]}-oktahydro-3-[2-(acetylthio)-l-oxobutylamino]-5-oxopyrrolo[2,l-b][l,3]thiazepin-7-karboxylové

V 15 ml ethylesteru kyseliny octové se rozpustí 227 mg (0,66 mmol) soli dicyklohexylaminu jako produktu z části b), roztok se promyje třemi podíly po 10 ml roztoku hydrogensíranu draselného, jednou použitím 10 ml solanky, a po vysušení bezvodým síranem hořečnatým a filtraci se zahuštěním filtrátu ve vakuu získá 108 mg kyseliny (S)-2-(acetylthio)-butanové ve formě čirého oleje.

K roztoku 108 mg (0,66 mmol) této volné kyseliny v 5 ml suchého methylenchloridu se po ochlazení na 0 °C přidá 90 μΐ (0,66 mmol) triethylaminu, dále 250,0 mg (0,66 mmol) soli kyseliny p-toluensulfonové a methylesteru kyseliny [4S-(4a,7a,9ap)]-4-aminooktahydro-5oxopyrrolo[2,l-b][l,3]-thiazepin-7-karboxylové, připravené z produktu, popsaného v příkladu 5d a druhý podíl 90 μΐ (0,66 mmol) triethylaminu. Reakční směs se míchá za chlazení na 0 °C 20 minut, potom se najednou přidá 292 mg (0,66 mmol) benzotriazol-l-yloxytris(dimethylamino)fosfoniumhexafluorfosfátu a reakční směs se míchá hodinu při 0 °C. Ponechá se v ledničce 56 hodin, dále se míchá 3 hodiny za teploty místnosti, zahustí se ve vakuu, zbytek se rozpustí v 30 ml ethylesteru kyseliny octové a roztok se promyje postupně za použití vždy 20 ml 5% roztoku hydrogensíranu draselného, hydrogenuhličitanu sodného (nasyceného roztoku), a solanky, vysuší se bezvodým síranem hořečnatým a po filtraci se zahuštěním filtrátu získá

-38CZ 289488 B6 surový olej, ten se čistí bleskovou chromatografií na silikagelu (Měrek), 25 na 100 mm za použití směsi ethylesteru kyseliny octové a hexanu, 2:3. Výsledkem je 208 mg látky, uvedené v nadpise, ve formě bílé napěněné hmoty.

d) Kyselina {4S-[4a(R*),7a,9ap]}-oktahydro-4-[(2-merkapto-l-oxobutyl)amino]-5-oxopyrrolo[2,1 —b] [ 1,3]thiazepin-7-karboxylová

Roztok 225 mg (0,559 mmol) produktu z části c) v 5 ml methanolu se proplachuje argonem 30 minut, ochladí se na 0 °C a přikapává se 5 ml 1 M roztoku hydroxidu sodného, rovněž zbaveného kyslíku argonem, což za chlazení na 0 °C trvá 30 minut. Za uvedené teploty se reakční směs míchá 3 hodiny za neustálého přívodu argonu, potom se okyselí na pH 2 5% roztokem hydrogensíranu draselného. Reakční směs se extrahuje třemi dávkami po 40 ml ethylesteru kyseliny octové, roztok v tomto rozpouštědle se po spojení výtřepků vysuší bezvodým síranem hořečnatým, a zahuštěním ve vakuu se získá jako surový produkt pěna. Bleskovou chromatografií na silikagelu (Měrek) 25 na 180 mm, 3 % kyseliny octové v ethylacetátu se získá bílá pěna, jež se rozpustí v methylenchloridu a triturováním s hexanem se získá 176 mg sloučeniny, uvedené v nadpise, opět ve formě kompaktní bílé pěny, [a]_D = -125,4° (c = 1,0 chloroform).

Chromatografie na tenké vrstvě, methanol a methylenchlorid 1 :9, Rf = 0,16.

Vysokotlaková kapalinová chromatografie, retenční doba 15,5 min (97%, UF220nM, kolona YMC S-3 ODS (C—18) 120 A, 6 na 150 mm, 0% B:A až 100 % B : A. Lineární gradient 25 minut.

A = 90 % vody v methanolu + 0,2 % kyseliny fosforečné, B = 90 % methanolu ve vodě + 0,2 % kyseliny fosforečné, průtoková rychlost 1,5 ml/min.

Analýza:

pro C13H20N2O4S2.0,8 H2O vypočteno: 46,10 % C, 6,66 % H, 7,52 % N, 17,21 % S nalezeno: 46,00 % C, 6,17 % H, 7,52 % N, 16,82 % S

Příklad 15

Kyselina {4S-[4a(R*),7a,9aP]}-oktahydro-4-[(2-merkapto-l-oxopentyl)-amino]-5-oxopyrrolo[2,1 —b] [ 1,3]thiazepin-7-karboxylová

a) Kyselina (R)-2-brompentanová

Podle postupu z příkladu 14(a), ale za použití D-norvalinu místo kyseliny (R)-2-aminobutanové se získá kyselina (R)-2-brompentanová jako čirá kapalina.

b) Sůl dicyklohexylaminu a kyseliny (S)-2-(acetylthio)pentanové

Reakcí kyseliny (R)-2-brompentanové s draselnou solí kyseliny thiooctové v acetonitrilu podle postupu z příkladu 15 b) se získá ve formě bílé pevné látky dicyklohexyl-aminová sůl kyseliny (S)-2-(acetylthio)pentanové.

-39CZ 289488 B6

c) Methylester kyseliny {4S-[4a(R⁺),7a,9ap]}-oktahydro-4-[2-(acetylthio)-l-oxopentyl]amino-5-oxopyrrolo[2,l-b][l,3]thiazepin-7-karboxylové

Reakcí volné kyseliny zdicyklohexylaminové soli zčásti b) smethylesterem kyseliny [4S— (4a,7a,9a3)]-4-aminooktahydro-5-oxopyrrolo[2,l-b][l,3]thiazepin-7-karboxylové podle postupu z příkladu 14 c) se získá produkt, jak je jeho složení uvedeno v nadpise, ve formě bílé pěny.

d) Kyselina {4S-[4a(R*),7a,9aPJ}-oktahydro-4-[(2-merkapto-l-oxopentyl)-amino]-5-oxopyrrolo[2,1 -b] [ 1,3]thiazepin-7-karboxylová

K roztoku produktu z části c) v methanolu se přidá 1 M roztok hydroxidu sodného, reakční směs se zpracuje podle postupu z příkladu 14 d) a získá se tím produkt, uvedený v nadpise, ve formě kompaktní bílé pěny, [a]o - -122,8° (c = 1,0, CDC1₃). Chromatografie na tenké vrstvě za použití směsi methanolu a methylenchloridu 1 : 9, Rf = 0,15.

Vysokotlaková kapalinová chromatografie, retenční doba 20,5 min (97 %, UF 220 nM), kolona YMC S-3 ODS (C—18, 120 A), 6 na 150 mm, 0 % B : A - 100 % B : A, lineární gradient, 25 minut.

A = 90 % vody v methanolu + 0,2 % kyseliny fosforečné

B = 90 % methanolu ve vodě + 0,2 % kyseliny fosforečné, průtoková rychlost = 1,5 ml/min.

Analýza:

pro C14H22N2S2O4.0,65 H₂O . 0,20 C^H^ vypočteno: 48,63 % C, 7,01 % H, 7,46 % N, 17,08 % S nalezeno: 48,86 % C, 6,70 % H, 7,24 % N, 16,74 % S

Příklad 16

Kyselina {4S-[4a(R*),7a,9ap]}-oktahydro-4-[(2-merkapto-4,4-dimethyl-l-oxopentyl)]amino-5-oxopyrrolo[2,1 -b] [ 1,3]thiazepin-7-karboxylová

a) Kyselina (R)-2-brom-4,4-dimethylpentanová

Roztok 950 mg (6,55 mmol) kyseliny (R)-2-amino-4,4-dimethylpentanové v 13 ml (33 mmol)

2,5 N vodného roztoku kyseliny sírové se ochladí na -5 °C a po přidání 2,72 g (22,9 mmol) bromidu draselného se k čirému roztoku přidává po částech 680 mg (9,86 mmol) dusitanu sodného, přičemž se teplota udržuje během 25ti minut v rozmezí 0 až 3 °C. Hodinu se reakční směs míchá při 0 °C, hodinu a půl za teploty místnosti, zředí se pak vlitím do 10 ml vody a reakční produkt se extrahuje do 60 ml etheru. Roztok se promyje použitím 20 ml vody, 20 ml solanky, vysuší se bezvodým síranem hořečnatým a filtrát se zahustí ve vakuu. Ve formě bezbarvé kapaliny se získá látka, uvedená v nadpise.

b) Kyselina (S)-2-(acetylthio)-4,4-dimethylpentanová

Do suspenze 750 mg (6,58 mmol) draselné soli kyseliny thiooctové v 10 ml acetonitrilu, vysušeného molekulárním sítem se po ochlazení na 0 °C přidává během 5 minut roztok kyseliny (R)-2-brom-4,4-dimethylpentanové z části a) v 2 ml acetonitrilu, teplota reakční směsi se nechá vystoupit na 20 °C, reakční směs se takto míchá 2,5 hodin a suspenze se filtruje. Filtrát se zahustí ve vakuu, zbytek se zředí přidáním 5 ml etheru, roztok se promyje dvěma dávkami po 50 ml vodného roztoku simatanu sodného, dále použitím 25 ml solanky, a po vysušení bezvodým síranem hořečnatým se filtrát zahustí ve vakuu. Bledě žlutý olej se čistí bleskovou chromatografií

-40CZ 289488 B6 na silikagelové koloně (Měrek), 12 na 3 cm, 10 % methanolu v methylenchloridu a získá se tím 575 mg sloučeniny, uvedené v nadpise, ve formě bledě žlutého oleje.

c) Methylester kyseliny {4S-[4a(R*),7a,9ap]}-oktahydro-4-[2-(acetylthio)-4,4-dimethyl-loxopentyl]-amino-5-oxopyrrolo[2,1 —b] [ 1,3]thiazepin-7-karboxylové

Čilý roztok 148 mg (0,72 mmol) produktu z části b) v 5 ml methylenchloridu (předestilovaného přes hydrid vápníku) se ochladí na 0 °C a přidá se roztok soli kyseliny p-toluensulfonové a methylesteru kyseliny [4S-(4a,7a,9aP]-4-aminooktahydro-5-oxopyrrolo[2,l-b][l,3]thiazepin-7-karboxylové v množství 250,0 mg (0,60 mmol), připravené z materiálu, jak to bylo popsáno v příkladu 5d), v 3 ml methylenchloridu rovněž předestilovaného přes hydrid vápníku. Dále se přidá 122 mg (1,2 mmol) triethylaminu a 319 mg (0,72 mmol) benzotriazol-l-yloxytris(dimethylamino)-fosfonium-hexafluorfosfátu. Reakční směs se míchá za chlazení na 0 °C 24 hodin, dále 5 hodin za teploty místnosti, zahustí se ve vakuu, zbytek se rozpustí v 50 ml ethylesteru kyseliny octové a organický roztok se promyje za použití 50 ml 5% vodného roztoku hydrogensíranu draselného, 50 ml 50% nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a týmž objemem solanky. Po vysušení bezvodým síranem sodným a zahuštěním filtrátu ve vakuu se čistí takto připravený surový produkt bleskovou chromatografií na 20 g silikagelu (Měrek) s využitím ethylesteru kyseliny octové, a získá se tak 244 mg sloučeniny, jak je uvedena v nadpise, ve formě bílé pěny.

d) Kyselina {4S-[4a(R*),7a,9aP]}-oktahydro-4-[(2-merkapto-4,4-dimethyl-l-oxopentyl)amino-5-oxopyrrolo[2,1—b][ 1,3]thiazepin-7-karboxylová

Čirý roztok 240 mg (0,56 mmol) produktu z části c) v 2 ml methanolu se propláchne zaváděním dusíku, ochladí se na 0 °C a do roztoku se přikapává za neustálého chlazení na 0 °C a zavádění argonu 2,27 ml (2,24 mmol) 1 N roztoku hydroxidu sodného. Reakční směs se míchá 3 hodiny při 0 °C, 3 hodiny za teploty místnosti, potom se okyselí na pH 1 5% vodným roztokem hydrogensíranu draselného, stále za zavádění argonu. Produkt se extrahuje do 50 ml methylenchloridu (zbaveného kyslíku argonem), promyje se solankou, vysuší bezvodým síranem sodným a po filtraci zahustí ve vakuu. Surový produkt se překiystaluje ze směsi methylenchloridu a hexanu a získá se tím 75 mg sloučeniny, jak je uvedena v nadpise, jako bílá pevná látka, t.t. 124-126 °C, [a]_D = -175 °C (c = 0,25, methanol).

Chromatografie na tenké vrstvě za použití směsi kyselina octová: methanol: methylenchlorid 1 : 5 : 94, Rf= 0,65.

Vysokotlaková kapalinová chromatografie, retenční doba kolona YMC, S-3 ODS (C—18) 6,0 na 150 mm, 1,5 ml/min, lineární gradient 0 až 100 % během 30 minut, pufr.

A = methanol, voda, kyselina fosforečná 10 : 90 : 0,2

B = methanol, voda, kyselina fosforečná 90 : 10 : 0,2,

24,4 min 95 % celkové oblasti píku při 254 nm.

Analýza:

pro C16H26N2O4S2.0,13 CéH^ vypočteno: 52,24 % C, 7,28 % H, 7,26 % N, 16,62 % S nalezeno: 51,97 % C, 7,26 % H, 7,09 % N, 16,23 % S

-41CZ 289488 B6

Příklad 17

Kyselina {4S-[4a,(R*),7a,9ap]}-oktahydro-4-[(2-merkapto-l-oxopropyl)-amino]-5-oxo5 pyrrolo[2,1 -b] [ 1,3]thiazepin-7-karboxylová

a) Kyselina (R)-2-brompropanová

Podle postupu z příkladu 14a, ale za použití D-alaninu místo kyseliny (R)-aminobutanové se 10 získá ve formě lehce nažloutlého oleje kyselina (R)-2-brompropanová

b) Kyselina (S)-2-(acetylthio)-propanová

Do lehce nazelenalého roztoku 3,94 g (34,5 mmol) draselné soli kyseliny thiooctové v 150 ml 15 ácetonitrilu se přidá roztok 4,8 g (31 mmol) kyseliny (3)-2-brompropanové v 12 ml ácetonitrilu pod argonem a za teploty místnosti. Vzniklá bílá suspenze se míchá 2 hodiny za teploty místnosti, potom se filtruje a filtrát se zahustí ve vakuu. Zbytek se zředí přidáním 100 ml ethylesteru kyseliny octové, roztok se promyje použitím 50ml 10% vodného roztoku hydrogensíranu draselného a solankou, vysuší se bezvodým síranem sodným a po filtraci se filtrát zahustí ve 20 vakuu. Získá se tak 4,61 g surového produktu, který se čistí bleskovou chromatografií na 60 g silikagelu Měrek s použitím směsi kyseliny octové, ethylesteru kyseliny octové a hexanu 1 :45 :54. Získá se tak 3,7 g sloučeniny, uvedené v nadpise ve formě mírně žlutého oleje, [a]_D = -114° (c = 0,50, methanol).

c) Methylester kyseliny {4S-[4a,(R*),7a,9ap]}-oktahydro-4-[2-(acetylthio)-l-oxopropyl]amino-5-oxopyrrolo[2,1—b] [ 1,3]thiazepin-7-karboxylové

Čirý roztok 86 mg (0,58 ml) kyseliny (S)-2-(acetylthio)-propanové v 5 ml methylenchloridu, který byl destilován přes hydrid vápníku, se ochladí na 0 °C a přidá se roztok 200,0 mg 30 (0,46 mmol) soli kyseliny p-toluensulfonové a methylesteru kyseliny [4S-(4a,7a,9aP)]-4amínooktahydro-5-oxopyrrolo[2,1 —b] [ 1,3]thiazepin-7-karboxylové (připravené z materiálu, popsaného v příkladu 5 d), v 5 ml methylenchloridu, předestilovaného přes hydrid vápníku, dále 98 mg (0,97 mmol) triethylaminu a 255 mg (0,58 mmol) benzotriazol-l-yloxytris-(dimethylaminoý-fosfoniumhexafluorfosfátu. Reakční směs se míchá 22 hodin při 0 °C, dále 2 hodiny za 35 teploty místnosti, zahustí se ve vakuu a zbytek se zředí přidáním 100 ml ethylesteru kyseliny octové. Po promytí za použití 30 ml 5% roztoku hydrogensíranu draselného, 50% vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a solankou se filtrát po vysušení bezvodým síranem sodným zahustí ve vakuu. Surový takto získaný produkt se čistí bleskovou chromatografií na 40 g silikagelu (Měrek) za použití dále ethylesteru kyseliny octové a získá se tak ve formě bílé pevné 40 látky o t.t. 143-145 °C produkt, jak je jeho složení uvedeno v nadpise.

d) Kyselina {4S-[4a,(R*),7a,9ap]}-oktahydro-4-[(2-merkapto-l-oxopropyl)-amino]-5oxopyrrolo[2,1 —b] [ 1,3]thiazepin-7-karboxylová

Do čirého roztoku 180 mg (0,48 mmol) produktu z části c) v 2 ml methanolu se za pochlazení na -10 °C a pod argonem přidává dále pod argonem po kapkách 1,95 ml (1,95 mmol) 1 N vodného roztoku hydroxidu sodného, reakční směs se dále míchá za zavádění argonu a při 0 °C po 3 hodiny, okyselí se na pH 1 5% vodným roztokem hydrogensíranu draselného, rovněž pod argonem. Produkt se extrahuje do 100 ml ethylesteru kyseliny octové (za kterého byl vypuzen 50 vzduch dusíkem), roztok se promyje solankou, vysuší se bezvodým síranem sodným a po filtraci se filtrát zahustí ve vakuu. Dále se surový produkt čistí bleskovou chromatografií na 40 g silikagelu (Měrek), soustava kyselina octová - methanol - methylenchlorid 1 : 5 : 94 a získá se tak 154 mg sloučeniny, jak je uvedena v nadpise, ve formě bílé pevné látky o t.t. 150-152 °C, [«]d ~ -156° (c = 0,50, methanol).

-42CZ 289488 B6

Chromatografíe na tenké vrstvě za použití téže soustavy, R_f = 0,28.

Vysokotlaková kapalinová chromatografíe, kolona YMC, S-3 ODS (C-18), 6,0 na 150 mm,

1,5 ml/min lineární gradient 0-100 % B během 30 minut

Pufr A : methanol/voda/fosforečná kyselina 10 : 90 : 0,2

Pufr B : methanol/voda/fosforečná kyselina 90 : 10 : 0,2

Retenční doba 14,69 min, nad 95 % v celkovém prostoru píku při 254 nm.

Analýza:

pro C₁₂H₁₈N₂O₄S₂.0,7 CH₃COOH vypočteno: 44,61 % C, 5,82 % H, 7,71 % N, 17,64 % S nalezeno: 44,76 % C, 5,71 % H, 7,81 % N, 17,76 % S

Příklad 18

Kyselina {4S-[4a(R*),7a,9aP]}-oktahydro-4-[(3-cyklopropyl-2-merkapto-l-oxopropyl)amino]-5-oxopyrrolo[2,l-b][l,3]thiazepin-7-karboxylová

a) Kyselina (R)-2-[(fenylmethoxy)-karbonylamino]-4-pentenová

Směs 2,8 g (24,3 mmol) D-allylglycinu, 25 ml 1 M vodného roztoku hydroxidu sodného a 10 ml tetrahydrofuranu (vydestilovaného zketylu) se míchá za teploty místnosti až do vzniku homogenní soustavy, která se vychladí v lázni z ledu. Potom se do prudce míchaného tohoto roztoku přidá asi 5 ml 1,0 M vodného roztoku hydroxidu sodného a přikapává se asi 1 g benzylesteru kyseliny chlormravenčí. To se opakuje dále ještě čtyřikrát, až se spotřebuje celkem 28 ml 1,0 M vodného roztoku hydroxidu sodného a 4,80 g (95%, 27 mmol) benzylesteru kyseliny chlormravenčí. Reakční směs se míchá 15 minut při 0 °C, potom 30 minut za teploty místnosti, extrahuje se dále do 50 ml etheru, vodný podíl se okyselí na pH 1,5 přidáním asi 10 ml 6 N roztoku kyseliny chlorovodíkové a následuje třikrát extrakce do 50 ml etheru. Spojené roztoky v etheru se vysuší bezvodým síranem hořečnatým a zahuštěním filtrátu ve vakuu se takto získá 6,01 g sloučeniny, jak je uvedena v nadpise, ve formě bezbarvého oleje.

b) Fenylmethylester kyseliny (R)-2-[(fenylmethoxy)karbonyI]amino-4-pentenové

Do roztoku 5,96 g (23,9 mmol) produktu z části a) tohoto příkladu v 25 ml bezvodého dimethylformamidu se přidá za teploty místnosti 4,28 g (13,1 mmol) uhličitanu česného. Reakční směs se míchá 20 minut a dále se rychle přidá za mírně exotermní reakce 4,5 g (26,3 mmolu) ben2ylbromidu a reakční směs se dále míchá 30 minut, načež se roztřepává mezi 100 ml vody a 100 ml etheru. Organická vrstva se oddělí, promyje se třikrát za použití 100 ml dávek vody, 50 ml solanky, vysuší se bezvodým síranem hořečnatým a zahuštěním filtrátu ve vakuu se izoluje olej. Tento surový produkt se čistí bleskovou chromatografií na silikagelu (Měrek), 24 na 5,0 cm za použití směsí ethylesteru kyseliny octové a hexanu 1 : 10, potom 1 : 4, a získá se tak 6,13 g produktu, jehož složení je uvedeno v nadpise, ve formě bezbarvého oleje.

c) Fenylmethylester kyseliny (R)-a-{[(fenylmethoxy)karbonyl]-amino}-cyklopropanpropanové

Do roztoku 5,78 g (17,1 mmol) produktu zčásti b) v 60 ml bezvodého etheru se přidá 65 mg (0,29 mmol) octanu palladnatého, vše se míchá 10 minut, potom se směs ochladí na 0 °C a během 15ti minut se přidává po částech roztok diazomethanu v etheru, připravený z 12 g N-methyl-N'nitro-N-nitrosoguanidinu, v 120 ml etheru. Po míchání 15 minut se reakční směs rozruší přidáním 1 ml ledové kyseliny octové, směs se přepraví do děličky, tam se promyje použitím

-43CZ 289488 B6

100 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, 50 ml solanky, vysuší se bezvodým síranem hořečnatým a zahuštěním filtrátu ve vakuu se připraví žlutý olej. Ten se čistí bleskovou chromatografií na silikagelu (Měrek), 20 na 5,0 cm, ethylester kyseliny octové a hexan, 1:4a získá se tak 5,74 g sloučeniny, jak je uvedena v nadpise, ve formě bezbarvého 5 oleje.

d) Kyselina (R)-a-aminocyklopropanpropanová

Do roztoku 5,71 g (16,2 mmol) produktu zčásti c) v 75 ml methanolu se přidá 1,14 g 10% 10 palladia na uhlí jako katalyzátor v prostředí methanolu a vše se míchá v atmosféře vodíku v uzavřené nádobě za teploty místnosti 48 hodin. Z reakční směsi se odfiltruje katalyzátor, který se propláchne teplou vodou a filtrát se potom přes 0,4 μΜ polykarbonátový membránový filtr. Dále se filtrát zahustí ve vakuu a zbude 2,03 g sloučeniny, jak je uvedena v nadpise, ve formě bílé pevné látky.

e) Kyselina (S)-a-(acetylthio)cyklopropanpropanová

Směs 2,00 g (15,5 mmol) produktu z části d) v 30 ml 2,5 N vodného roztoku kyseliny sírové se míchá za teploty místnosti, až je homogenní, načež se vychladí na -5 °C a v jedné dávce se do 20 směsi přidá 6,50 g (54,6 mmol) bromidu draselného, směs se dále míchá, až je homogenní, načež se v malých dávkách během asi 25 minut přidává 1,60 g (23,2 mmol) dusitanu sodného. Reakční směs se udržuje stále na teplotě pod 0 °C, míchá se za 0 °C další hodinu, potom 1,5 hodiny za teploty místnosti. Zředí se potom přidáním 30 ml vody a vše se extrahuje třemi dávkami po 30 ml etheru. Etherové extrakty se spojí, vše se promyje použitím 25 ml solanky, vysuší se bezvodým 25 síranem hořečnatým a zahuštěním ve vakuu se takto dospěje k 2,82 g surové kyseliny (R)-abromcyklopropanpropanové, jež se získá ve formě bledě žlutého oleje.

Roztok takto získané surové kyseliny (R)-a-bromcyklopropanpropanové se v prostředí 10 ml acetonitrilu vnáší během 5ti minut do míchané suspenze 1,83 g (16,1 mmol) draselné soli 30 kyseliny thiooctové v 20 ml acetonitrilu za chlazení směsi v lázni z ledu a soli. Za teploty 0 °C se míchá reakční směs hodinu, potom 16 hodin za teploty místnosti, filtruje se a zahuštěním filtrátu ve vakuu se získá olej. Ten se čistí rozdělováním mezi 50 ml etheru a 50 ml 5% vodného roztoku simatanu sodného. Organická vrstva se potom po oddělení promyje použitím 25 ml solanky, vysuší se bezvodým síranem hořečnatým a zahuštěním filtrátu ve vakuu se připraví žlutý olej. 35 Ten se čistí bleskovou chromatografií na silikagelu (Měrek), 12 na 5,0 cm, soustava methanol a methylenchlorid 1:19a získá se tak 1,52 g sloučeniny uvedené v nadpise, jako žlutý olej.

f) Methylester kyseliny {4S-[4a(R*),7a,9ap]}-oktahydro-4-[2-(acetylthio)-3-cyklopropyll-oxopropyl]amino-5-oxopyrrolo[2,1 —b] [ 1,3]thiazepin-7-karboxylové

292 mg (0,66 mmol) benzotriazol-l-yloxytris-(dimethylamino)-fosfoniumhexafluorfosfátu se přidá v jedné dávce do směsi 250 mg (0,60 mmol) soli kyseliny p-toluensulfonové amethylesteru kyseliny [4S-(4a,7a,9aP)]-oktahydro-4-amino-5-oxopyrrolo[2,l-b][l,3]thiazepin-7karboxylové (příprava z materiálu, popsaného v příkladu R d), 3 ml methylenchloridu (destilo45 váného přes hydrid vápníku), 121 mg (1,20 mmol) triethylaminu a 122 mg (0,65 mmol) produktu z části e) v 3 ml methylenchloridu, destilovaného přes hydrid vápníku). Reakční směs se míchá hodinu za 0 °C, potom 1,5 hodin za teploty místnosti. Rozděluje se dále mezi 20 ml ethylesteru kyseliny octové a 20 ml 1 M vodného roztoku hydrogensíranu draselného, organická vrstva se oddělí, promyje použitím 20 ml 5% vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, 20 ml solan50 ky, vysuší se bezvodým síranem hořečnatým a zahuštěním filtrátu ve vakuu zbude olej. Ten se čistí bleskovou chromatografií na silikagelu (Měrek), 12 na 3,0 cm, ethylester kyseliny octové a hexan, 1:1a získá se tak 191 mg sloučeniny, uvedené v nadpise ve formě pevné bílé pěny.

-44CZ 289488 B6

g) Kyselina {4S-[4a(R*),7a,9ap]}-oktahydro-4-[(3-cyklopropyl-2-merkapto-l-oxopropyl)-amino]-5“OxopynOlo[2,1 -b] [ 1,3]thiazepin-7-karboxylová

Roztok 185 mg (0,45 mmol) produktu z části f) se v prostředí 3 ml methanolu zbaví kyslíku argonem, který se zavádí 10 minut při 0 °C, načež se přidají 3 ml 1 M roztoku hydroxidu sodného ve vodě, ze kterého byl rovněž odstraněn kyslík zaváděním argonu 10 minut. Reakční směs se míchá 2,5 hodin za teploty místnosti za nepřerušovaného přívodu argonu, načež se okyselí přidáním 20 ml 1 M roztoku hydrogensíranu draselného a extrahuje do 20 ml ethylesteru kyseliny octové. Organický extrakt se promyje použitím 20 ml solanky, vysuší se bezvodým síranem sodným a zahuštěním ve vakuu se získá gumovitá látka, která se rozetře s bezvodým etherem a z roztoku se zahuštěním ve vakuu olejové vývěvy získá 121 mg sloučeniny, jak je uvedena v nadpise, ve formě bílé pěny, [a]o = -103° (c = 0,23, methanol). Chromatografie na tenké vrstvě v soustavě kyselina octová, methanol, methylenchlorid 1 : 10 : 90, R_f = 0,46.

Vysokotlaková kapalinová chromatografie, kolona YMC S-3 ODS, 6,0 na 150 mm, 1,5 ml/min, lineární gradient 0-100 % B během 30ti minut, pufr A: methanol/voda/kyselina fosforečná 10 : 90 : 0,2 pufr B: methanol/voda/kyselina fosforečná 90 : 10 : 0,2,

20,7 minut nad 97 % píku celkové plochy při 254 nm.

Analýza:

pro C15H22N2O4S2.0,20 H₂O vypočteno: 49,77 % C, 6,23 % H, 7,74 % N, 1 Ί,Ί 1 % S nalezeno: 50,01 % C, 6,27 % H, 7,50 % N, 17,40 % S

Příklad 19

Kyselina [4S-(4a,7a,9aP)]-oktahydro-4-[(l-merkaptopentyl)karbonylamino]-5-oxopyrrolo[2,1 —b] [ 1,3]thiazepin-7-karboxylová

a) Kyselina 1-merkaptocyklopentankarboxylová

Roztok lithiumdiizopropylamidu se připraví pod dusíkem z 5,4 ml (38,5 mmol) diizopropylaminu a 15,4 ml (38,5 mmol) 2,5 M roztoku n-butyllithia v hexanu v prostředí 17,6 ml tetrahydrofuranu, přičemž se teplota udržuje v rozmezí -3 až 0 °C. Po míchání 15 minut se přidává během 25 minut za teploty 0 až 3 °C roztok 2,0 g (17,5 mmol) kyseliny cyklopentankarboxylové v 2 ml tetrahydrofuranu. Po 15ti minutách za teploty 0 °C se chladicí lázeň odstraní a reakční směs se míchá ještě 15 minut, kdy se nechá vystoupit teplota na 15 °C. Mléčně zakalená reakční směs se podchladí na -78 °C a za udržování této teploty se přidává 618,0 mg (19,3 mmol) síry. Teplota reakční směsi se nechá vystoupit na 20 °C, po 70ti hodinách se reakční směs znovu ochladí na 0 °C, rozruší se přidáním vody a rychle se okyselí na pH 1 přidáním 6 N roztoku kyseliny chlorovodíkové. Po extrakci do ethylesteru kyseliny octové (3 dávky po 30 ml) se spojený organický roztok promyje solankou, vysuší se bezvodým síranem hořečnatým a po filtraci se filtrát zahustí ve vakuu. Získá se tím 2,62 g sloučeniny, jak je uvedeno v nadpise, ve formě žlutého oleje.

b) Kyselina l-(acetylthio)cyklopentankarboxylová

Do roztoku 1,44 g (9,89 mmol) produktu zčásti a) v 20 ml IN roztoku hydroxidu sodného (zbaveného kyslíku dusíkem) se přidá za teploty 0 °C 0,93 ml (9,89 mmol) anhydridu kyseliny octové. Ještě se přidá 13 ml tetrahydrofuranu s úmyslem převést vzniklý olej do roztoku. Reakční směs se míchá hodinu při 0 °C (pH 7), nechá se pak teplota vystoupit na 20 °C, přidá se další podíl 0,47 ml (4,9 mmol) anhydridu kyseliny octové, jakož i 2,04 g (14,8 mmol) uhličitanu

-45CZ 289488 B6 draselného až k dosažení hodnoty pH 10, dále 4 ml tetrahydrofuranu. Po míchání přes noc za teploty místnosti se reakční směs okyselí na pH 1 přidáním IN chlorovodíkové kyseliny a vše se extrahuje do ethylesteru kyseliny octové. Extrakty v tomto rozpouštědle se spojí, roztok se promyje solankou, vysuší se bezvodým síranem hořečnatým a po filtraci se filtrát zahustí ve vakuu za vzniku 1,61 g žluté pevné látky. Ta se překrystaluje dvakrát ze směsi ethylesteru kyseliny octové a hexanu za vzniku 614 mg sloučeniny, jak je uvedena v nadpise, ve formě lehce hnědé pevné látky, t.t. 119,5-121,5 °C.

c) Methylester kyseliny [4S-(4a,7a,9aP)]-oktahydro-4-[l-(acetylthio}-cyklopentylkarbonyl]-amino-5-oxopyrrolo[2,1 —b] [ 1,3]thiazepin-7-karboxylové

Do roztoku 94,5 mg (0,502 mmol) produktu zčásti b) v 3,6 ml methylenchloridu se za teploty 0 °C a pod dusíkem přidává 70 μΐ (0,502 mmol) triethylaminu a potom v jediné dávce 198,9 mg (0,478 mmol) soli kyseliny p-toluensulfonové a methylesteru kyseliny [4S-(4a,7a,9ap)]-4— aminooktahydro-5-oxopyrrolo[2,l-b][l,3]thiazepin-7-karboxylové (připravené z materiálu, popsaného v příkladu 5 d), to v jediné dávce, a potom 66,6 μΐ (0,478 mmol) triethylaminu. Reakční směs se míchá 5 minut za teploty 0 °C, dále se vnese 222,0 mg (0,502 mmol) benzotriazol-l-yloxytris(dimethylamino)-fosfoniumhexafluorfosfátu, a reakční směs se míchá hodinu za chlazení na 0 °C, dále 2,25 hodin za teploty místnosti, zahustí se potom ve vakuu a zbytek se rozděluje mezi ethylester kyseliny octové a 5% roztok hydrogensíranu draselného (20 ml). Organická vrstva se promyje roztokem z poloviny nasyceným hydrogenuhličitanu sodného a solankou, vysuší se bezvodým síranem hořečnatým, a po filtraci se zahuštěním filtrátu připraví čirý olej. Čistěním bleskovou chromatografií za eluování směsí ethylesteru kyseliny octové a hexanu se získá 169,4 mg sloučeniny, jak je uvedena v nadpise, ve formě čirého oleje.

d) Kyselina [4S-(4a,7a,9aP)]-oktahydro-4-[( l-merkaptocyklopentyl)-karbonylamino]-5oxopyrrolo[2,1 —b] [ 1,3]thiazepin-7-karboxylová

Roztok 167,3 mg (0,404 mmol) produktu zčásti c) v 4 ml methanolu, zbavený kyslíku zaváděním dusíku, se ochladí na 0 °C, a přidá se 1 N roztok hydroxidu sodného v množství 4 ml, rovněž zbavený kyslíku zaváděním dusíku. Reakční směs se míchá 1,5 hodin při 0 °C, přičemž se stále zavádí dusík, potom se teplota reakční směsi nechá vystoupit na teplotu místnosti, po celkem 3 hodinách se reakční směs okyselí na pH 1 přidáním 5% roztoku hydrogensíranu draselného, a následuje extrakce do ethylesteru kyseliny octové. Organické výtřepky se spojí, vše se promyje vodou (20 ml), solankou, a po vysušení bezvodým síranem sodným a filtraci se zahuštěním ve vakuu s následným odpařením z hexanu získá pevná bílá látka. Ta se rozpustí v bezvodém dioxanu a lyofilizováním se získá 110 mg sloučeniny, jak je uvedena v nadpise, ve formě bílé pevné látky, [a]o = -106,5° (c = 0,68, chloroform).

Chromatografie na tenké vrstvě, ethylester kyseliny octové, hexan a kyselina octová, 7 : 2,9 : 0,1, R_f=0,12.

Vysokotlaková kapalinová chromatografie, retenční doba 21,5 min, kolona YMC S-3 ODS (C 18) 6,0 na 150 mm, O-100 %B: A, 30 minut lineární gradient a 10minut pozdržení,

1,5 ml/min.

A = 90 % vody, 10 % methanolu a 0,2 % kyseliny fosforečné,

B = 90 % methanolu, 10 % vody a 0,2 % kyseliny fosforečné,

220 nm.

Analýza: pro C_I5H₂₂N₂O₄S₂.0,15 C₄H_gO₂.0,7 H₂O . 0,08 C₆H,₄ vypočteno: 49,37 % C, 6,63 % H, 7,16 % N, 16,39 % S nalezeno: 49,03 % C, 6,37 % H, 7,21 % N, 16,65 % S

-46CZ 289488 B6

Příklad 20

Kyselina [4S-(4a,7a, 10aP)]-4-[(2-karboxy-l-oxo-3-fenylpropyl)-amino]-oktahydro-5-oxo7H-pyrido[2,1 —b] [ 1,3]thiazepin-7-karboxylová

a) Monoethylester kyseliny 3-(fenylmethyl)-propandiové

Roztok 2,5 g (10 mmol) diethylesteru kyseliny 3-(fenylmethyl)propandiové v 10 ml tetrahydrofuranu se míchá po dobu noci s 10 ml 1 N roztoku hydroxidu lithného. Reakční směs se potom okyselí přidáním 11 ml 1 N roztoku kyseliny chlorovodíkové a vše se extrahuje do dvou dávek po 50 ml ethylesteru kyseliny octové. Extrakt v ethylesteru kyseliny octové se promyje solankou, vysuší se bezvodým síranem sodným a zahustí ve vakuu. Koncentrát se dále chromatografuje na 80 g silikagelu za použití soustavy rozpouštědel methanol (5 %) a chloroform. Vhodné frakce se spojí a zahuštěním se izoluje 1,23 g produktu, jak je uveden v nadpise.

b) Methylester kyseliny [4S-(4a,7a, 10ap)]-4-[2-(ethoxykarbony 1)-1 -oxo-3-fenylpropylamino]-oktahydro-5-oxo-7H-pyrido[2,l-b][l,3]thiazepin-7-karboxylové

V 5 ml methylenchloridu se rozpustí 0,222 g (1 mmol) produktu zčásti a) a 0,258 g (1 mmol) methylesteru kyseliny [4S-(4a,7a, 10ap)]-oktahydro-4—amino-5-oxo-7H-pyrido[2,1 —b] [1,3]thiazepin-7-karboxylové (příprava viz příklad 3 c) a roztok se ochladí na 0 °C. Po přidání 0,14 ml (1 mmol) triethylaminu se reakční směs míchá hodinu, přidá se 0,442 g (1 mmol) benzotriazol-l-yloxytris-(dimethylamino)-fosfoniumhexafluorfosfátu, reakční směs se míchá hodinu při 0 °C a 2,5 hodin za teploty místnosti. Zředí se přidáním 50 ml methylenchloridu, roztok se promyje vodou, 10% roztokem hydrogensíranu sodného, nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vysuší se bezvodým síranem sodným, filtruje se a zahustí ve vakuu. Zbytek se chromatografuje na silikagelu za použití 30 % ethylesteru kyseliny octové v hexanu. Odpovídající frakce se spojí a zahuštěním ve vakuu se získá 0,22 g produktu, jak je uveden v nadpise.

c) Kyselina [4S-(4a,7a, 10ap)]-4-[(2-karboxy-l-oxo-3-fenylpropyl)-amino]-oktahydro-5oxo-7H-pyrido[2,l-b][l,3]thiazepin-7-karboxylová

V prostředí 5 ml tetrahydrofuranu se míchá 0,22 g (0,476 mmol) produktu z části b) s 5 ml 1 N roztoku hydroxidu lithného za teploty místnosti po 3 hodiny. Reakční směs se okyselí na pH 2 přidáním 1 N roztoku chlorovodíkové kyseliny, zahustí se ve vakuu a zbytek se rozpustí v ethylesteru kyseliny octové, roztok se promyje vodou, solankou, vysuší se bezvodým síranem sodným a po filtraci se zahustí ve vakuu na objem 3 ml, kdy začne látka krystalovat. Po stání přes noc při 0 °C se pevný podíl odfiltruje a sušením se získá 0,16 g sloučeniny, jak je uvedena v nadpise, jako bílá pevná látka, t.t. 159-162 °C, [a]_D = -84,92° (c = 0,7 methanol).

Chromatografie na tenké vrstvě (chloroform/methanol, 9 : 1), Rf = 0,23, 0,28.

Vysokotlaková kapalinová chromatografie, retenční doba 16,15, 16,35 min, UF 254 nm, kolona YM S-3 ODS (C—18), 6,0 na 150 mm, 3u konec kolony, lineární gradient 50 - 90% vodného methanolu s obsahem 0,2 % kyseliny fosforečné, 20 min., 1,5 ml/min. (44,9 %, 55,1 % směsi izomerů).

Analýza:

pro C20H24N2SO6.0,1 H₂O vypočteno: 56,89 % C, 5,78 % H, 6,66 % N, 7,59 % S nalezeno: 56,98 % C, 5,68 % H, 6,58 % N, 7,15 % S

-47CZ 289488 B6

Příklad 21

Kyselina [4S-(4a(R*),7a, 10aP)]-oktahydro-4-[(2-merkapto-l-oxo-3-fenylpropyl)amino]-5oxo-[ 1,4]oxazino[3,4-b][ 1,3]thiazepin-7-karboxylová

a) Methylester 0-(2,2-dimethoxyethyl)-N-{N-[(fenylmethoxy)-karbonyl]-L-homoseryl}-Lserinu

Roztok 5,56 g (10 mmol) methylesteru N-{O-[(l,l-dimethylethyl)-dimethylsilyl]}-N-[(fenylmethoxy)-karbonyl]-L-hompseryl-O-(2,2-dimethoxyethyl)-L-serinu (příprava viz příklad 10 h) v 65 ml methanolu se ochladí na 0 °C v lázni z ledu a soli, a po přidání 386 mg (2,0 mmol) monohydrátu kyseliny p-toluensulfonové se reakční směs míchá 1,5 hodin za chlazení na 0 °C. Reakční směs se rozruší přidáním 198 mg hydrogenuhličitanu sodného, rozpuštěného v 20 ml vody a po míchání 5 minut se oddestiluje methanol. Vodná fáze se extrahuje dvěma podíly po 200 ml ethylesteru kyseliny octové, spojený organický extrakt se promyje použitím 110 mg vody, 80 ml 5% roztoku hydrogenuhličitanu sodného a 80 ml solanky, vysuší se bezvodým síranem sodným, a po filtraci se zahuštěním filtrátu do sucha získaný podíl suší ve vakuu.

Získaný surový produkt se čistí chromatografováním na koloně silikagelu (Měrek) s tím, že se kolona eluuje soustavami ethylester kyseliny octové a hexan 2:1, jakož i týž ester a methanol 98 : 2 a získá se tak 3,975 g sloučeniny, jak je její složení uvedeno v nadpise, ve formě sirupu.

Chromatografie na tenké vrstvě (ethylester kyseliny octové a hexan, 4 : 1), R_f - 0,17.

b) Methylester O-(2,2-dimethyloxyethyl)-N-[O-(methylsulfonyl)]-N-[(fenylmethoxy)karbonyl]-L-homoseryl-L-serinu

Roztok 3,975 g (8,98 mmol) produktu z části a) v 52 ml suchého methylenchloridu se ochladí na -15 °C, a po přidání 1,82 ml (13,1 mmol) triethylaminu a 0,82 ml (10,6 mmol) methansulfonylchloridu se reakční směs míchá 30 minut za uvedené teploty -15 °C. Potom se reakční směs rozruší přidáním 19 ml 25% roztoku chloridu amonného, teplota se nechá vystoupit na 20 °C, vše se zředí přidáním 750 ml ethylesteru kyseliny octové, organický roztok se promyje použitím 100 ml 5% roztoku hydrogensíranu draselného, 100 ml z 50% nasyceného roztoku solanky a 100 ml nasycené solanky. Po vysušení bezvodým síranem sodným a filtraci se zahuštěním filtrátu do sucha a dalším sušením ve vakuu přidá 4,9 g sloučeniny, jak je uvedena v nadpise, ve formě voskovité pevné látky.

Chromatografie na tenké vrstvě (ethylester kyseliny octové a hexan, 4 :1), R_f = 0,32.

c) Methylester N-[S-acetyl-N-(fenylmethoxy)-karbonyl]-L-homocysteinyl-O-(2,2dimethoxyethyl)-L-serinu

Do roztoku 2,6 ml kyseliny thioloctové v 40 ml suchého methanolu se přidá 5,56 g (17,04 mmol) uhličitanu česného, reakční směs se míchá 10 minut a zahustí se do sucha. Zbylá pevná látka se trituruje s acetonem (sedm podílů po 8 ml) a zbylá takřka bílá látka se suší ve vakuu. Získá se tím 4,39 g česné soli kyseliny thioloctové.

Do suspenze 2,43 g (1,3 ekv.) česné soli kyseliny thioloctové v 8,0 ml suchého dimethylformamidu se přidá roztok 4,9 g (8,98 mmol) produktu z části b) v 24 ml suchého dimethylformamidu a vše se míchá za teploty místnosti 16 hodin, a to pod argonem. Směs se potom zředí přidáním litru ethylesteru kyseliny octové, roztok se promývá postupně dvakrát za použití 150 ml 5% roztoku hydrogenuhličitanu sodného, dvakrát za použití 150 ml vody a za použití 150 ml solanky. Po vysušení bezvodým síranem sodným a filtraci se filtrát zahustí do sucha, zbytek se suší ve vakuu. Surový získaný produkt se chromatografuje na silikagelu (kolona Měrek) za eluování

-48CZ 289488 B6 kolony soustavami ethylester kyseliny octové a hexan, 1 : 1 a 2 : 1 a získá se tak 3,93 g sloučeniny, jak je uvedena v nadpise, jako voskovitá pevná látka.

Chromatografie na tenké vrstvě (ethylester kyseliny octové a hexan, 4 : 1), Rf = 0,63.

d) Methylester O-(2,2-dimethoxyethyl)-N-{N-[(fenylmethoxy)-karbonyi]-L-homocysteinyl}-L-serinu

Roztok 200 mg (0,49 mmol) produktu z části c) v 8,0 ml methanolu se zbaví kyslíku argonem, zaváděným 30 minut, a po ochlazení na 0 °C v lázni z ledu a vody se přidává 0,11 ml (0,5 mmol) 25% roztoku natriummethoxidu v methanolu, přičemž se zavádění argonu udržuje po celou dobu přidávání i po dobu provádění reakce. Po 5ti minutách stání za 0 °C se reakční směs rozruší přidáním 2,3 ml 25% roztoku chloridu amonného, a roztřepává se mezi ethylester kyseliny octové (dvakrát 12 ml a vodu (2,3 ml). Organické extrakty se spojí, celek se promyje použitím

4,6 ml 25% roztoku chloridu amonného, dále 4,6 ml solanky, vysuší se bezvodým síranem sodným, a po filtraci se filtrát zahustí do sucha a sušením zbytku ve vakuu se získá 183,2 mg sloučeniny, uvedené v nadpisu, to ve formě bílé pevné látky.

Chromatografie na tenké vrstvě, ethylester kyseliny octové a hexan, 4 : 1, R_f = 0,62.

e) Kyselina [4S-(4a,7a, 10aP)]-oktahydro-5-oxo-4-[(fenylmethoxy)-karbonylamino]-[ 1,4]oxazino[3,4-b][l,3]thiazepin-7-karboxylová

Do roztoku 50 mg (0,11 mmol) produktu z části d) v 2,0 ml suchého methylenchloridu se přidá 13 mg Amberlyte ^R 15 (v kyselé formě) a reakční směs se míchá za teploty místnosti 3 dny pod argonem, přidá se ještě 13 mg Amberlyte ^R 15 a v míchání se pokračuje 3 dny. Oddekantovaný roztok se potom chromatografuje na koloně silikagelu (Měrek) za eluování kolony směsí ethylesteru kyseliny octové a hexanu nejprve 1:3, potom 1 : 1, a získá se tak 21,1 mg produktu, jak je uveden v nadpise, ve formě sirupu.

Chromatografie na tenké vrstvě (ethylester kyseliny octové a hexan, 4 : 1), R_f = 0,70.

f) Methylester kyseliny [4S-(4a,7a,10ap)]-oktahydro-4-amino-5-oxo[l,4]oxazino[3,4-b][1,3]thiazepin-7-karboxylové

Do roztoku 421 mg (1,01 mmol) produktu z části e) v 25 ml suchého methylenchloridu se přidá 0,72 ml (5,06 mmol) trimethylsilyljodidu a reakční směs se míchá pod argonem 1,75 hodin. Sirup, jak se získá po zahuštění do sucha, se roztřepává mezi 50 ml ethyletheru a dvakrát 25 ml 0,2 N roztoku kyseliny chlorovodíkové, vodný podíl se upraví na hodnotu pH 10 přidáním 25 ml nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, a po přidání 2,0 g chloridu sodného se trojnásobnou extrakcí vždy do 75 ml methylenchloridu získá po zahuštění 219 mg sloučeniny, jak je uvedena v nadpise, a to jako sirup. Při druhém využití vhodné fáze za přidání 2,0 g chloridu sodného a novou extrakcí dvěma podíly po 100 ml methylenchloridu se získá dalších 37 mg tohoto produktu.

Chromatografie na tenké vrstvě (methylenchlorid a methanol, 9 : 1), Rf= 0,23.

g) Methylester kyseliny {4S-[-4a(R*),7cc,10aP]}-oktahydro-4—[-2-(acetylthio)-l-oxo-3fenylpropyl]-amino-5-oxo[ 1,4]oxazino[3,4-b] [ 1,3]thiazepin-7-karboxylové

V 42 ml ethylesteru kyseliny octové se suspenduje 516 mg (1,32 mmol, 1,2 ekv.) soli dicyklohexylaminu a kyseliny (S)-2-(acetylthio)benzenpropanové a po promytí za použití pěti podílů po 6,0 ml 5% roztoku hydrogensíranu draselného a 6,0 ml solanky se roztok vysuší bezvodým síranem hořečnatým, filtruje se a filtrát se zahustí do sucha.

-49CZ 289488 B6

Zbytek se suší ve vakuu, získaná volná kyselina se rozpustí v suchém methylenchloridu (9,5 ml), roztok se ochladí v lázni z ledu a soli na 0 °C a přidává se postupně 285,5 mg (1,09 mmol) produktu ze stupně f), rozpuštěného v 4,2 suchého methylenchloridu, 0,14 ml (1,15 mmol) triethylaminu a 484 mg (1,09 mmol) benzotriazol-l-yloxytris-(dimethylamino)-fosfoniumhexafluorfosfátu. Reakční směs se míchá za teploty místnosti hodinu, dále za teploty místnosti ještě 2 hodiny pod argonem, načež se zbaví rozpouštědla oddestilováním. Zbylý sirup se rozpustí v 40 ml ethylesteru kyseliny octové, roztok se promyje dvakrát 0,5 N roztokem chlorovodíkové kyseliny, vždy za použití 6,6 ml, dále vodou (rovněž 6,6 ml) a stejným objemem solanky. Po vysušení bezvodým síranem sodným a filtraci se filtrát zahustí ve vakuu do sucha, a suší se pak zbytek ve vakuu. Surový produkt se chromatografuje na silikagelu (kolona Měrek) za eluování směsí ethylesteru kyseliny octové a hexanu nejprve 1 : 2, potom 1 : 1, a získá se tak 382,9 mg sloučeniny, uvedené v nadpise, jako sirup.

Chromatografie na tenké vrstvě (ethylester kyseliny octové a hexan, 1 : 1), R_f - 0,28.

h) Kyselina {4S-[-4a(R*),7a,10aP]}-oktahydro-4—[(2-merkapto-l-oxo-3-fenylpropyl)~ amino]-5-oxo[ 1,4]oxazino[3,4—b] [ 1,3]thiazepin-7-karboxylová

Z roztoku 382,9 mg (0,82 mmol) produktu z části g) v 9,0 ml methanolu se vypuzuje vzduch zaváděném argonu po 30 minut, a po ochlazení na 0 °C v lázni z ledu a soli se přidá 3,32 ml (4,0 ekv.) 1,0 N roztoku hydroxidu sodného, ze kterého byl vypuzován kyslík argonem po dobu 30ti minut. Zavádění argonu se potom udržuje po celou dobu provádění reakce. Reakční směs se míchá při 0 °C 5 hodin, dále hodinu za teploty místnosti, hodnota pH se upraví na 2,0 přidáním 14,5 ml 5% roztoku hydrogensíranu draselného, teplota se nechá vystoupit na teplotu místnosti a směs se extrahuje dvakrát do 50 ml ethylesteru kyseliny octové. Spojený organický extrakt se promyje použitím 10 ml solanky, vysuší se bezvodým síranem sodným), a po filtraci se filtrát zahustí do sucha, zbytek se suší ve vakuu. Získaný sirup se potom zahustí ještě dvakrát po přidání 25 ml hexanu, a získaná pevná pěna se chromatografuje na koloně silikagelu (Měrek) s tím, že se kolona eluuje za použití směsí toluen a kyselina octová 100:1, 50:1, 20:1 a získá se tak 212 mg sloučeniny, uvedené v nadpise, jako pevná látka, t.t. 224-226 °C.

[a]_D = -50,2° (c = 0,45, methanol).

Chromatografie na tenké vrstvě (toluen : kyselina octová, 5:1), Rf = 0,28.

Vysokotlaková kapalinová chromatografie, retenční doba 5,37 min (UF 220 nm) (98,9 %). Kolona YMS S-3 ODS (C-18), 6 na 150 mm:

% (10 % vody-90 % methanolu + 0,2 % kyseliny fosforečné % (90 % vody-10 % methanolu + 0,2 % kyseliny fosforečné, isokratické.

Analýza:

pro C18H22N2O5S2.0,14 H2O vypočteno: 52,34 % C, 5,44 % H, 6,78 % N, 15,53 % S nalezeno: 52,58 % C, 5,57 % H, 6,44 % N, 15,16 % S

Příklad 22

Kyselina {4S-[4a(R*),7a, 10aP]}-oktahydro-4-[(2-merkapto-l-oxo-3-fenylpropyl)-amino]5-oxo-7H-pyrido[2,l-b][l,3]thiazepin-7-karboxylová

Produkt z příkladů 3 a 11 se dá rovněž připravit takto:

-50CZ 289488 B6

a) Sůl kyseliny p-toluensulfonové a methylesteru [4S-(4a,7a, 10ap)]-oktahydro-4-amino-5oxo-7H-pyrido[2,l-b][l,3]thiazepin-7-karboxylové

Do roztoku 6,11 g methylesteru kyseliny [4S-(4a,7a,10aP)]-oktahydro-4-amino-5-oxo-7Hpyrido[2,l-b][l,3]thiazepin-7-karboxylové vaši 100 ml ethylesteru kyseliny octové se přidá roztok 4,52 g monohydrátu kyseliny p-toluensulfonové v 3 ml methanolu a 20 ml ethylesteru kyseliny octové. Ihned se tvoří sraženina, směs se potom zředí přidáním dalšího podílu ethylesteru kyseliny octové a pevný podíl se odfiltruje, promyje se ethyletherem a sušením ve vakuu se získá 7,908 g sloučeniny, jak je uvedena v nadpise ve formě bledě žluté látky o čistotě 98 %; t.t. 179-181 °C (za rozkl.).

b) Methylester kyseliny [4S-4a(R*),7a,10aP)]-oktahydro-4-[2-(acetylthio)-l-oxo-3-fenylpropyl]-amino-5-oxo-7H-pyrido[2,l-b][l,3]thiazepin-7-karboxylové

K suspenzi 636 mg (1,48 mmol) produktu z části a) v 5 ml methylenchloridu a 1 ml dimethylformamidu se přidá 163 μΐ, tedy 150 mg (1,48 mmol) N-methylmorfolinu a potom 208 mg (1,52 mmol) l-hydroxy-7-azabenzotriazolu. K mírně žlutému roztoku se potom přidává 333 mg (1,48 mmol) kyseliny (S)-2-(acetylthio)-benzenpropanové v roztoku v 5 ml methylenchloridu, reakční směs se vychladí v lázni z ledu a soli, dále se přidá 2,88 mg (1,50 mmol) ethyl-3(dimethylamino)-propylkarbodiimidu, a reakční směs se míchá za chlazení na 0 °C hodinu, dále 1,5 hodin za teploty místnosti. Rozpouštědlo se vydestiluje za použití rotační odparky, a zbytek se roztřepává mezi ethylesteru kyseliny octové a 0,5 N roztok kyseliny chlorovodíkové. Roztok v ethylesteru kyseliny chlorovodíkové se promývá postupně dvakrát vodou, z 50% nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, a solankou, po vysušení bezvodým síranem sodným a filtraci se zahuštěním filtrátu získá 651,2 mg sloučeniny, jak je uvedena v nadpise, ve formě bílé pěny.

c) Kyselina {4S-[4a(R*),7a,10ap]}-oktahydro-4-[(2-merkapto-l-oxo-3-fenylpropyl)amino]-5-oxo-7H-pyrido[2,l-b][l,3]thiazepin-7-karboxylová

K roztoku methylesteru jako produktu z části b) v methanolu, který byl zbaven kyslíku, se přidá

N roztok hydroxidu sodného podle postupu z příkladu 3 d) a získá se tím sloučenina, jak je uvedena v nadpise.

Příklad 23

Kyselina {4S[-4a(R*),7a, 10aPJ}-oktahydro-4—[(2-merkapto-l-oxo-3-fenylpropyl)-amino]5-oxo-7H-pyrido[2,l-b][l,3]thiazepin-7-karboxylová

Produkt z příkladů 3,11 a 22 se dá rovněž připravit takto:

a) N-[(Fenylmethoxy)-karbonyl]-L-methionin

V dvoulitrové baňce, vybavené mechanickým míchadlem a vnitřním teploměrem, se rozpustí v 1000 ml destilované vody 61,65 g (1,541 mol) hydroxidu sodného. Za teploty místnosti se do roztoku přidá 100,0 g (0,670 mol) L-methioninu, roztok se potom ochladí v ledové lázni na vnitřní teplotu 3 °C a během 10 minut se přidává 110 ml (0,737 mol) benzylesteru kyseliny chlormravenčí. Po 15ti minutách indukční periody stoupne během 30ti minut vnitřní teplota z 3 °C na 12 °C a potom se sníží během 15 minut na 0 °C. Za této teploty se míchá reakční směs hodiny, v průběhu té doby se z počátku zakalení reakční směs stane homogenní, lázeň z ledu se odstraní, a reakční směs se nechá vytemperovat během hodiny na teplotu místnosti. Potom se přelije do děličky, kde se promyje hexanem (dvakrát 300 ml), vodný podíl se okyselí přidáním 6 N roztoku chlorovodíkové kyseliny na pH 5 a zředí se přidáním 600 ml ethylesteru kyseliny

-51CZ 289488 B6 octové. Směs se ještě okyselí na pH 2, organická vrstva se oddělí, vodný podíl se extrahuje dále do třech dávek po 600 ml ethylesteru kyseliny octové. Organické extrakty se spojí, vše se promyje použitím 750 ml solanky, vysuší se bezvodým síranem hořečnatým, a po filtraci se zahuštěním filtrátu ve vakuu získá jasně žlutý olej. Tento surový olejovitý produkt se rozpustí v 500 ml toluenu, a roztok se zahustí na polovinu objemu. Přidá se další podíl 750 ml toluenu a roztok se zahustí tak, že zbude 630 ml toluenu. Tento roztok se uchovává za teploty 5 °C po dobu noci a během té doby produkt vykiystaluje z roztoku. Pevný podíl se opět rozpustí vyhřátím na teplotu místnosti. Přidá se 134 ml toluenu a několik krystalů, a dále za mechanického míchání 500 ml heptanu v dávkách po 30 ml v intervalech 10 minut (což trvá asi 3 hodiny). V tu chvíli začne produkt krystalovat z roztoku, během 1,5 hodin se přidá další dávka 1020 ml heptanu, a vzniklá suspenze se míchá 2 hodiny. Produkt se odsaje, promyje třikrát za použití 150 ml směsi toluenu a heptanu 1 : 2, dále za použití třech dávek po 500 ml heptanu, a sušením na vzduchu se získá 158,6 g sloučeniny, jak je uvedeno v nadpise ve formě bílé pevné látky, t.t. 66 °C, [a]o = -1,5° (c= 1,95% ethanol).

Chromatografie na tenké vrstvě (ethanol/voda, 3 :1), Rf = 0,78.

Analýza:

pro C13H17NO4S vypočteno: 55,11 % C, 6,05 % H, 4,94 % N nalezeno: 54,96 % C, 6,20 % H, 4,83 % N

b) Methylester N-[(fenylmethoxy)-karbonyl]-L-methioninu

V třílitrové baňce, vybavené mechanickým míchadlem a přívodem argonu se rozpustí ve 2 litrech methanolu 100,0 g (0,353 mol) produktu zčásti a) a přidá se 6,71 g (0,035 mol) monohydrátu kyseliny p-toluensulfonové. Reakční směs se míchá pod argonem 21 hodin, přidá se 4,9 ml triethylaminu a reakční směs se míchá dalších 15 minut. Dále se zahuštěním reakční směsi ve vakuu získá bledě žlutý olej, který se rozpustí v 900 ml ethylesteru kyseliny octové a roztok se promyje použitím 740 ml 1 N roztoku chlorovodíkové kyseliny, dále dvakrát za použití 740 ml hydrogenuhličitanu sodného a 740 ml solanky. Organická vrstva se vysuší bezvodým síranem hořečnatým, filtruje se a zahustí ve vakuu na lehce žlutý olej. Olej se odpaří za použití hexanu, dvakrát 100 ml a získá se tak 98,22 g sloučeniny, jak je uvedena v nadpise, jako bílá pevná látka.

c) Methylester sulfoxidu N-[(fenylmethoxy)-karbonyl]-L-methioninu

V třílitrové baňce, vybavené mechanickým míchadlem, se rozpustí v 1675 ml methanolu 97,95 g (0,329 mol) produktu z části b) za přidání 215 ml vody. Roztok se potom ochladí v ledové lázni, přidá se 28,5 g (0,339 mol) hydrogenuhličitanu sodného a potom se přidává během 25 minut v malých dávkách 44,0 g (0,329 mol) N-chlorimidu kyseliny jantarové tak, že vnitřní teplota nepřestoupí 7 °C. Směs se míchá v ledové lázni hodinu, potom se nechá teplota vystoupit na teplotu místnosti během hodiny a reakční směs se zahustí ve vakuu z asi 75% oddestilováním methanolu, zředěním za použití 1000 ml ethylesteru kyseliny octové s tím, že se roztok promyje použitím 500 ml solanky. Vrstva solanky se znovu extrahuje za použití dvou dávek po 200 ml ethylesteru kyseliny octové, organické extrakty se spojí, po vysušení bezvodým síranem hořečnatým se filtrát zahustí ve vakuu na čirý, vazký olej. Ten se ještě oddestiluje za použití toluenu (3 dávky po 100 ml) a zbylá rozpouštědla se vydestilují za vysokého vakua tak, že zbude produkt, jak je jeho složení uvedeno v nadpise, jako čirý olej, který ztuhne na bílou pevnou látku (131,4 g). Podle vyhodnocení NMR obsahuje surový produkt hmotnostně 12 % imidu kyseliny jantarové a 9 % toluenu. Produkt je směsí diastereoizomerů sulfoxidů.

d) Methylester S-[(acetyloxy)-methyl]-N-[(fenylmethoxy)-karbonyl]-L-homocysteinu

Do litrové baňky, obsahující produkt zčásti c) (102,8 g korigované hmotnosti, 0,328 mol) se přidá 480 ml toluenu, 32,3 g (0,394 mol) octanu sodného a 186 ml (1,970 mol) anhydridu

-52CZ 289488 B6 kyseliny octové. Získaná směs se zahřívá do varu pod zpětným chladičem (118 °C) pod argonem 18 hodin a temně hnědá reakční směs se nechá vychladnout na teplotu místnosti. Po hodině stání za teploty místnosti se reakční směs velmi zhustí pevnými podíly, které se rozpustí po přidání 100 ml ethylesteru kyseliny octové a reakční směs se částečně zahustí ve vakuu za vzniku viskosního hnědého zbytku. Ten se ještě destiluje za použití 240 ml toluenu, aby se tak odstranil anhydrid kyseliny octové, zbytek se zředí přidáním 1000 ml ethylesteru kyseliny octové a roztok se promyje opatrně nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, čtyřikrát po 680 ml. Organická vrstva se pak promyje za použití solanky (450 ml), vysuší se bezvodým síranem hořečnatým, a po filtraci se zahuštěním filtrátu ve vakuu získá zbytek, ze kterého se zbylá rozpouštědla vydestilují za vysokého vakua a vzniku lehce hnědé pevné látky. Ta se rozpustí v 450 ml n-butylesteru kyseliny octové za zahřátí na 35 °C a za míchání. Po ochlazení na teplotu místnosti se přidává do roztoku za míchání během 15 minut pomalu 200 ml hexanu. V tu chvíli začne z roztoku krystalovat produkt. Během 30 minut se přidá další dávka 700 ml hexanu a získaná suspenze se míchá 3 hodiny. Produkt se odfiltruje a promyje za použití 200 ml směsi 1 : 2 n-butylesteru kyseliny octové a hexanu, dvakrát za použití 240 ml směsi 1 : 4 n-butylesteru kyseliny octové a hexanu a dvakrát za použití 250 ml hexanu. Získaný produkt se suší na vzduchu a dělí sušením za hlubokého vakua se získá 87,7 g sloučeniny, jak je uvedena v nadpise, to ve formě bledě hnědé pevné látky, t.t. 73 °C [a]_D = -1,6° (c = 1,95 % ethanol).

Chromatografie na tenké vrstvě (5 % methanolu v methylenchloridu), R_f = 0,80.

Analýza pro C_I6H₂iNO₆S vypočteno: 54,07 % C, 5,95 % H, 3,94 % N nalezeno: 53,48 % C, 5,74 % H, 3,82 % N.

e) S-Acetyl-N-[(fenylmethoxy)-karbonyl]-L-homocystein

V litrové baňce se roztok 83,0 g (0,233 mol) produktu z části d) v 415 ml tetrahydrofuranu zbaví vzduchu zaváděním argonu po 30 minut. V jiné dvoulitrové baňce, vybavené mechanickým míchadlem a přívodem argonu, se zavádí do roztoku 86,8% (62,7 g, 0,969 mol) hydroxidu draselného v 280 ml vody po dobu 15 minut argon.

Roztok v tetrahydrofuranu se přidá k roztoku hydroxidu draselného rychle za vnitřní teploty 20 °C, to za použití hadičky a energického míchání pod argonem. Baňka, obsahující produkt z části d) se opláchne použitím 20 ml tetrahydrofuranu (do kterého byl zaváděn argon po dobu 15 minut) a tyto podíly se přidají do reakční směsi. Za 30 minut je reakční směs čirá a dvoufázová, projeví se exotermní reakce až do 28 °C.

Po dalších dvou hodinách se reakční směs ochladí na vnitřní teplotu 1 °C a v jedné dávce se přidá 2,75 g (0,073 mol) hydridu boritosodného: exotermní reakce až do 6,8 °C. Reakční směs se míchá dalších 20 minut při 0 °C a potom se během 30 minut nechá vytemperovat na 11 °C. Dále se reakční směs ochladí na 0 °C a během 10ti minut se přidává 68,6 ml (0,727 mol) anhydridů kyseliny octové; projeví se to exotermní reakcí s vzestupem teploty na 10 °C, ale teplota klesne v reakční směsi zpět na 4 °C před skončením přidávání. Chladicí lázeň se odstraní a reakční směs se míchá 45 minut za teploty místnosti.

Po zahuštění asi na polovinu se směs okyselí na pH 2 přidáním 175 ml 6N roztoku kyseliny chlorovodíkové a extrahuje se potom dvakrát do 1,1 litru ethylesteru kyseliny octové, extrakty se spojí, celek se promyje použitím 560 ml solanky, organická vrstva se odbarví aktivním uhlím po vysušení bezvodým síranem hořečnatým se filtruje a zahuštěním filtrátu se získá žlutý olej. K tomu se přidá 380 ml butylesteru kyseliny octové, roztok se zahustí ve vakuu za teploty 45 °C na polovinu původního objemu, přidá se druhý podíl 190 ml téhož esteru a zahustí tak, že ve směsi zbude 190 ml n-butylesteru kyseliny octové. Pomalu se potom přidává 300 ml heptanu do zákalu, přidá se krystalek jako očko a během 15ti minut vykrystaluje bílá pevná látka. Během

-53CZ 289488 B6

30ti minut se pomalu přidává druhý podíl 570 ml heptanu a vzniklá suspenze se míchá po dobu noci za teploty místnosti. Produkt se odfiltruje, promyje dvakrát za použití 275 ml směsi nbutylesteru kyseliny octové a heptanu (1 :3) a dvakrát za použití 275 ml hexanu, suší se na vzduchu, potom za vysokého vakua a výsledkem je 50,1 g sloučeniny uvedené v nadpise, ve formě bílé pevné látky, t.t. 73-74 °C, [a]_D = -1,3° (c = 1,95%ní ethanol).

Chromatografie na tenké vrstvě (ethanol/voda, 3 :1), R_f= 0,83.

Analýza:

pro Ci₄H₁₇NO₅S vypočteno: 54,01 % C, 5,50 % H, 4,50 % N nalezeno: 53,88 % C, 5,45 % H, 4,44 % N

Filtrát se zahustí, až zbude 100 ml butylesteru kyseliny octové, přidá se 310 ml heptanu, jak to bylo popsáno výše a získá se tím druhý podíl 8,4 g sloučeniny, uvedené v nadpise, takže celkový výtěžek produktu činí 58,5 g.

f) Methylester kyseliny [S-(R*,R*)-[4-(acetylthio)-l-oxo-2-(fenylmethoxykarbonylaminobutylamino)]-6,6-dimethoxyhexanové

Ve směsi 600 ml methylenchloridu a 90 ml dimethylformamidu se rozpustí 0,456 mol) S-acetylN-[(fenylmethoxy)]karbonyl-L-homocysteinu, přidá se 64,72 g (0,479 mol) hydroxybenzotriazolu ve formě hydrátu, reakční směs se ochladí v ledové lázni a přidá se do ní roztok 93,7 g (0,456 mol) methylesteru kyseliny (S)-2-amino-6,6-dimethoxyhexanové (příprava viz příklad 1

e) v 600 ml methylenchloridu. Dále se přidá ještě 91,83 g (0,479) hydrochloridu ethyl-3(dimethylamino)-propylkarbodiimidu, reakční směs se míchá hodinu při 0 °C, potom 2 hodiny za teploty místnosti, po skončení se zahustí ve vakuu a zbytek se roztřepává mezi 3 litry ethylesteru kyseliny octové a litr nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Organický extrakt se promyje litrem vody, litrem 5% roztoku hydrogensíranu draselného, znovu týmž objemem vody a potom solanky, vysuší se bezvodým síranem sodným a zahuštěním filtrátu ve vakuu se takto izoluje 238 g surového produktu. Ten se rozpustí v 300 ml směsi ethylesteru kyseliny octové a methylenchloridu (1 : 1), a roztok se pustí přes vrstvu silikagelu Měrek 10 na 15 cm. Eluováním sedmi litry směsi ethylesteru kyseliny octové a hexanu (8 :2) a potom za použití 4 litrů ethylesteru kyseliny octové se získá 205,28 g sloučeniny, uvedené v nadpise.

g) Methylester kyseliny [4S-(4a,7a,10ap)]-oktahydro-4-[(fenylmethoxy)-karbonylamino]5-oxo-7H-pyrido[2,l-b][l,3]thiazepin-7-karboxylové

Roztok 205,28 g (0,412 mol) produktu z části f), vysušeného odpařováním za použití směsi methylenchloridu a toluenu, ve dvou litrech methanolu se ochladí v ledové lázni na 0 °C, a argonem se 30 minut vypuzuje vzduch. Přidá se potom 95,1 ml (1,01 ekv.) hmotnostně 25% roztoku natriummethoxidu v methanolu, a to rychle za stálého zavádění argonu, reakční směs se míchá ještě 10 minut, rozruší se přidáním litru nasyceného roztoku chloridu amonného, zředí se přidáním 0,5 litru vody, a po přidání 3 1 ethylesteru kyseliny octové se směs rozdělí na 2 části, z nichž každá se odděleně zahustí ve vakuu, aby se tak odstranily těkavé organické podíly (ethylester kyseliny octové a methanol). Zahuštěné zbytky se spojí, vše se zředí přidáním litru ethylesteru kyseliny octové, organická vrstva se oddělí a propláchne použitím 500 ml nasyceného roztoku chloridu amonného. Spojené vodné podíly se znovu extrahují do litru ethylesteru kyseliny octové, organické extrakty se spojí, vše se promyje litrem vody a dvěma dávkami po litru solanky, následuje vysušení bezvodým síranem sodným, filtrace a zahuštění filtrátu. Zbytek se ještě znovu odpaří za použití methylenchloridu a sušením ve vakuu se takto získá 182,65 g volné sulfhydrylové sloučeniny produktu z části f).

Z tohoto volného sulfhydrylového meziproduktu se množství 0,400 mol rozpustí v 4 1 methylenchloridu, a po přidání 20,8 ml (0,400 mol) kyseliny trifluoroctové se reakční směs zahřívá

-54CZ 289488 B6 hodin do varu pod zpětným chladičem, po ochlazení se zahustí ve vakuu. Získaný zbytek se rozpustí ve dvou litrech ethylesteru kyseliny octové, roztok se promyje použitím 400 ml 0,1 N roztoku kyseliny chlorovodíkové, litru vody, litru nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a litru vody, a po dalším promytí litrem solanky a vysušení bezvodým síranem sodným a filtraci se filtrát zahustí. Zbytek se odpaří po přidání methylenchloridu a sušením ve vakuu se potom získá 166,24 g sloučeniny, uvedené v názvu.

h) Methylester kyseliny [4S-(4a,7a, 10ap)]-oktahydro-4-amino-5-oxo-7H-pyrido[2,1-b][ 1,3]thiazepin-7-karboxylové

Pod argonem se přidá 76,6 ml (0,538 mol) jodtrimethylsilanu do roztoku 162,43 g (0,414 mol) produktu z části g) v 1,5 1 methylenchloridu. Reakční směs se míchá 1,5 hodin, zahustí se potom ve vakuu a zbytek se roztřepává do litru ethylesteru kyseliny octové a 700 ml 1 N roztoku kyseliny chlorovodíkové (pH 1,2); vyvíjí se oxid uhličitý. Vrstva ethylesteru kyseliny octové se oddělí a extrahuje do 300 ml 1 N roztoku kyseliny chlorovodíkové. Spojené kyselé vodné podíly se promyjí litrem ethylesteru kyseliny octové, ochladí se na 0 °C a alkalizováním za použití asi 275 ml 4N roztoku hydroxidu sodného na pH 10,0 upravená vodná vrstva se nasytí vnášením pevného chloridu sodného a extrahuje se potom do pěti podílů po litru methylenchloridu. Organické extrakty se spojí, celek se vysuší bezvodým síranem sodným, a po filtraci se filtrát zahustí ve vakuu. Zbytek se rozpustí v litru methylenchloridu, který se propláchne použitím 0,5 litru solanky, a po vysušení bezvodým síranem sodným a filtraci se zahuštěním filtrátu získá 98,8 g sloučeniny, uvedené v nadpise.

i) Methylester kyseliny {4S-[4a,(R*),7a,10aPJ}-oktahydro-4-[2-(acetylthio)-l-oxo-3fenylpropyl]-amino-5-oxo-7H-pyrido[2,l-b][l,3]thiazepin-7-karboxylové

Sůl dicyklohexylaminu a kyseliny (S)-2-(acetylthio)benzenpropanové v množství 173,1 g (0,427 mol) se roztřepává mezi litr ethylesteru kyseliny octové a 800 ml 10% hydrogensíranu draselného, organická vrstva se oddělí, promyje se litrem 5% hydrogensíranu draselného, litrem 50% solanky a litrem solanky, vysuší se bezvodým síranem sodným a zbytek se několikrát odpařuje s methylenchloridem. Dalším sušením zbytku přes noc ve vakuu se získá 97,3 g surové kyseliny (S)-2-(acetylthio)benzenpropanové.

Roztok 0,427 mol této látky v 900 ml methylenchloridu se ochladí v ledové lázni a přidá se do něj roztok 100,28 g (0,388 mol) produktu zčásti h) v 600 ml methylenchloridu, 154,1 ml (0,388 mol) triethylaminu a posléze 188,9 (0,427 mol) benzotriazol-l-yloxytris-(dimethylaminoj-fosfoniumhexafluorfosfátu. To v jediné dávce. Po hodinovém uchovávání při 0°C a dvou hodinách za teploty místnosti se reakční směs zahustí ve vakuu a zbytek se rozpustí v dvou litrech ethylesteru kyseliny octové, organický roztok se zahustí ve vakuu, zbytek se znovu rozpustí ve dvou litrech uvedeného rozpouštědla, organický roztok se promyje použitím 0,5 1 solanky, litru 0,5 N roztoku chlorovodíkové kyseliny, litru vody, dvou litrů nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, litru vody a litru solanky. Po vysušení bezvodým síranem sodným a filtraci se filtrát zahustí. V tu chvíli se vodné výtřepky, obsahující produkt (podle vyhodnocení chromatografií na tenké vrstvě) reextrahují do ethylesteru kyseliny octové, extrakty v tomto rozpouštědle se spojí, vše se zpracuje obvyklým postupem a získá se tím jako produkt žlutý olej. Ten se nanese na silikagelovou vrstvu 15 na 15 cm v roztoku 1 : 1 ethylesteru kyseliny octové a hexanu a vrstva se eluuje sedmi litry směsi 1 : 1 ethylesteru kyseliny octové a hexanu, potom za použití 4 litrů směsi 6 : 4 těchže rozpouštědel a posléze 2 litrů směsi 7 : 3 těchže rozpouštědel. Filtráty, obsahující požadovaný a očekávaný produkt se zahustí a získá se tak 123,57 g sloučeniny, uvedené v nadpise.

-55CZ 289488 B6

j) Kyselina [4S-4a(R*),7a, 10afi]-oktahydro-4-[(2-merkapto-l-oxo-3-fenylpropyl)amino]-5-oxo-7H-pyrido[2,l-b][l,3]thiazepin-7-karboxylová

Do dvanácti-litrové tříhrdlé baňky, vybavené přikapávací nálevkou a mechanickým míchadlem, se vnese roztok 96,0 g (0,207 mol) produktu z části i) v 1,1 litru methanolu. Do roztoku se zavádí 30 minut argon, potom se roztok ochladí v ledové lázni na vnitřní teplotu + 7 °C a během hodiny se přidává celkem 1,45 1 1 N roztoku hydroxidu sodného, do kterého byl 30 minut předtím zaváděn argon. Do směsi se zavádí stále argon během přidávání.

Reakční teplota vystoupí na +12 °C a tak se udržuje během přidávání nadále, reakční směs se míchá dalších 30 minut, vytemperuje se v lázni s vodou na teplotu místnosti a míchá se za zavádění argonu 2,5 hodin. Během 15-20 minut se přikapává asi 250 ml 6N roztoku kyseliny chlorovodíkové až k dosažení hodnoty pH 2. Během okyselování se vyloučí gumovitá sraženina, ale během míchání po další dvě hodiny se sraženina změní do formy bílé pevné látky a ta se odsaje na nálevce ze slinutého skla 600 ml. Následným promytím pevné látky litrem vody a pak dvěma litry bezvodého etheru a sušením ve vakuu se takto získá 70,3 g produktu, uvedeného v nadpise, to ve formě jemné bílé látky, t.t. 218-220 °C (za rozkl.).

Chromatografíe na tenké vrstvě (kyselina octová a ethylester této kyseliny, 1 : 99), Rf = 0,48.

Vysokotlaková kapalinová chromatografíe (retenční doba, kolona YMC S-3 ODS 6,0 na 150 mm, 1,5 ml/min), izokraticky 60 % B pufr A = methanol/voda/kyselina fosforečná (10:90:0,2) a pufr B = methanol/voda/kyselina fosforečná (90:10:0,2) = 9,33 min, 99,3 % píku z celkového plochy při 220 nm.

Analýza:

pro C19H24N2O4S vypočteno: 55,86 % C, 5,92 % H, 6,86 % N, 15,70 % S nalezeno: 55,83 % C, 5,83 % H, 6,96 % N, 15,70 % S

Příklad 24

Methylester kyseliny {4S-[4a(R*),7a,10ap]}-oktahydro-4-[2-(acetylthio)-l-oxo-3-fenylpropyl-amino]-5-oxo-7H-pyrido[2,1 —b] [ 1,3]-thiazepin-7-karboxylové

Kondenzační reakce, popsané v příkladech 3(c), 11 (o), 22(b) a 23(i) se dají provádět rovněž takto:

Roztok 1,83 g (8,14 mmol) kyseliny (S)-2-(acetylthio)benzenpropanové a 2,11 g (8,17 mmol) methylesteru kyseliny [4S-(4a,7a, 1 OaP)]-oktahydro-4-amino-5-oxo-7H-pyrido[2,1 —b][ 1,3]thiazepin-7-karboxylové se v 20 ml suchého methylenchloridu podchladí na 0 °C a najednou se přidá 1,77 g (9,32 mmol) hydrochloridu ethyl-3-(dimethylamino)propylkarbodiimidu, načež se reakční směs míchá za teploty 0 °C po 6 hodin a zahustí se až do vzniku olejovité pěny. Tento zbytek se roztřepává mezi 100 ml ethylesteru kyseliny octové a 50 ml 1 N roztoku chlorovodíkové kyseliny, organická fáze se promyje za použití 50 ml 1 N roztoku chlorovodíkové kyseliny, dvakrát za použití 50 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a použitím 50 ml nasyceného vodného roztoku chloridu sodného, vysuší se bezvodým síranem sodným, a po filtraci se zahuštěním ve vakuu získá 3,43 g sloučeniny, jak je uvedena v nadpise, ve formě bílé pěny.

-56CZ 289488 B6

Příklad 25

Sůl 1,1-dimethylethylaminu a kyseliny {4S-[4a(R*),7a,10aP]}-oktahydro—4-[(2-merkapto-loxo-3-fenylpropyl)-amino]-5-oxo-7H-pyrido[2,l-b][l,3]thiazepin-7-karboxylové

Tříhrdlá baňka objemu 15 ml, vybavený zpětným chladičem, se třikrát evakuuje a naplní pak argonem. Potom se naplní vnesením 0,20 g kyseliny {4S[4a(R*),7a,10a3J}-oktahydro-4-[(2merkapto-1 -oxo-3-feny lpropyl)-amino]-5-oxo-7H-pyrido[2,1 -b] [ 1,3 ]thiazepin-7-karboxy lově a 1,0 ml směsi 1 : 1 absolutního alkoholu a acetonitrilu, zbavené vzduchu; jak se heterogenní směs míchá, přikapává se 53,0 μΐ (1,03 ekv.) terc.-butylaminu, během 3 minut je reakční směs homogenní po přidání veškerého aminu. Roztok (vnitřní teplota 20 °C) se pomalu zředí na konečný objem 10 ml přikapáváním acetonitrilu. Po dalším míchání po dobu 2 hodin se pevné podíly odfiltrují a po jednom promytí 100% acetonitrilem (5 ml) se tyto podíly suší na vzduchu, potom za vysokého vakua 2 hodiny, aby se tak odstranila zbylá rozpouštědla a získá se tak 0,2 g sloučeniny uvedené v nadpise, jako bílá krystalická pevná látka.

Výše uvedený materiál se spojí s podíly z dalších provedení reakce, a vše se překrystaluje takto:

Tříhrdlá baňka objemu 25 ml, vybavená zpětným chladičem, magnetickým míchadlem a přikapávací nálevkou, se třikrát evakuuje a naplní argonem. Po vnesení 0,37 g 1,1-dimethylaminové soli jako produktu a 2,28 ml směsi 59 % acetonitrilu v ethanolu se baňka s obsahem vyhřeje na 29 - 32 °C, čímž se pevné podíly rozpustí, roztok se zředí přidáním 27 ml acetonitrilu, zahřívací lázeň se odstraní, baňka se ochladí na teplotu místnosti a po hodině dalšího míchání se směs filtruje a odfiltrované pevné podíly se promyjí použitím 10 ml acetonitrilu. Po dalším sušení na vzduchu a za vysokého vakua, aby se tak odstranily zbytky rozpouštědel, se získá takto sloučenina, jak je její složení uvedeno v nadpise, ve výtěžku 0,29 g jako bílá krystalická pevná látka, t.t.: smrštění při 160 °C s pomalým táním a rozkladem, jak se teplota zvyšuje na 190-191 °C; zbylý sklovitý materiál roztaje rychle.

Příklad 26

Methylester kyseliny [4S-(4a,7a, 10aP)]-oktahydro-4-amino-5-oxo-7H-pyrido[2,1 —b][ 1,3]thiazepin-7-karboxylové

Tento meziprodukt z příkladu 3(c) a 1 l(h) i 23(h) se může připravovat také takto:

a) Diethylester kyseliny 2-(acetylamino)-2-[4-(acetyloxy)butyl]propandiové

Míchaná suspenze 60,8 g (2,532 mol) 95% hydridu sodíku v 500 ml bezvodého dimethylformamidu se pod argonem ochladí v ledové lázni na 0 °C. Potom se v průběhu 45 minut přikapává roztok 500 g (2,302 mol) diethylesteru kyseliny acetamidomalonové v 1,2 1 dimethylformamidu za udržování teploty pod 18 °C. Po skončení reakce se nechá teplota zakaleného roztoku postupně vystoupit na teplotu místnosti, a po míchání hodinu za teploty místnosti se přidá 471 g (2,417 mol) 4—brombutylesteru kyseliny octové. Reakční směs se míchá 18 hodin za teploty 5960 °C, vzniklá suspenze se ochladí na teplotu místnosti, rozruší se přidáním 40 ml absolutního ethanolu a 4 ml ledové kyseliny octové, míchá se dále asi 15 minut, vlije se do 10% roztoku chloridu lithného a vše se extrahuje dvakrát do 3 1 ethylesteru kyseliny octové. Spojený extrakt v tomto rozpouštědle se promyje třikrát použitím tří litrů 10% roztoku chloridu lithného, vysuší se bezvodým síranem sodným a zahuštěním filtrátu ve vakuu se získá 750 g sloučeniny, jak je uvedena v nadpise, jako olej.

-57CZ 289488 B6

b) Kyselina 2-(acetylamino)-6-hydroxyhexanová

Do pětilitrové tříhrdlé baňky, vybavené teploměrem, magnetickou míchačkou a vzduchem chlazeným zpětným chladičem se vnese 730 g (2,2 mol) produktu z části a), po přidání 300 ml absolutního ethanolu se dále přidá 1,6 1 (9,6 mol) 6 N roztoku hydroxidu sodného. Reakční směs se zahřívá 5 hodin na 68 až 70 °C za vzniku homogenního roztoku, potom se reakční směs ochladí na teplotu místnosti a pomalu se přidává 1,32 1 6N roztoku chlorovodíkové kyseliny až k hodnotě pH 1,3. Na baňku se pak nasadí krátký nástavec k oddestilování ethanolu, jak se teplota pomalu zvyšuje na 87-90 °C a na této teplotě se reakční směs udržuje 8,5 hodin. Lze pozorovat malý vývoj oxidu uhličitého. Celkový objem destilátu: 600 ml, pH konečného roztoku 3,0. Reakční směs se zahustí ve vakuu až do odpaření veškerého podílu vody, načež se zahustí za použití toluenu, dva podíly po 500 ml. Polopevná hmota se trituruje s absolutním ethanolem (1 : 1), filtruje se a pevný podíl propláchne dalším množstvím 500 ml absolutního ethanolu. Zahuštěním filtrátu ve vakuu se získá 509 g surového oleje (čistota 82%), ale obsahujícího ethanol a toluen.

c) Kyselina (S)-2-amino-6-hydroxyhexanová

V 3,3 1 vody se rozpustí 443 g surového produktu z části b), obsahujícího určitý podíl toluenu a ethanolu (vlastní hmotnost = 394 g) a přidává se 1 N roztok hydroxidu lithného až k dosažení hodnoty pH 7,5; je třeba asi 1,53 1. Směs se vyhřeje na 35 °C, přidá se acylasa (0,4 g, z prasečí ledviny, stupeň 1) a reakční směs se míchá 24 hodin. Ke skončení této doby činila hodnota pH 7,33, byla upravena znovu na hodnotu 7,5 přidáním 1N roztoku hydroxidu lithného (asi 2 ml), byla přidána další acylasa (0,4 g) a reakční směs byla míchána po dobu dalších 17 hodin (pH 7,3). Potom byla hodnota pH upravena na 5,9 kyselinou octovou, bylo přidáno 20 g Celit-u ^R a aktivního uhlí (rovněž 20 g), reakční směs byla vyhřátá na 92 °C, udržována takto 5 minut, filtrována potom vrstvou Celit-u ^R a filtrát byl zahuštěn ve vakuu na polotuhou pastu o hmotnosti 441 g. Ta byla triturována s 900 ml směsi vody, ethanolu a dimethylformamidu (1:5:10), přičemž určité přihřátí bylo nutné k rozrušení původního tvaru polopevné hmoty. Reakční směs byla uchovávána v ledničce přes noc, filtrována a podíl na filtru byl promyt za použití 200 ml výše uvedené směsi rozpouštědel, takže se získá 214 g surového materiálu (asi 40 % N-acetylovaného). Ten se suspenduje v 500 ml methanolu, po zahřátí na parní lázni se reakční směs odstaví na 2 hodiny a filtruje. Tento postup se opakuje ještě jednou a získá se tak 108 g sloučeniny, uvedené v nadpise, [a]_D = + 22° (c = 1,44, 6N roztok chlorovodíkové kyseliny.

Jinak se stupně b) a c) mohou provést rovněž takto:

b) Kyselina 2-(acetylamino)-6-hydroxyhexanová

Do pětilitrové, tříhrdlé baňky s mechanickým míchadlem a teploměrem, spojeným s termočlánkem, se vnese 631 g (1,933 mol) produktu ze stupně a) a 259 tetrahydrofuranu a do míchaného roztoku se přidává během 40 minut 1385 ml (8,31 mol) 6N roztoku hydroxidu sodného. Proběhne silná exotermní reakce a je třeba chladit reakční směs v ledové lázni, aby se teplota zachovala pod 60 °C. Reakční směs se potom vyhřeje do mírného varu pod zpětným chladičem (teplota lázně 67-68 °C) a udržuje takto 5,5 hodin.

Dále se reakční směs míchá přes noc (16,5 hodin) za teploty místnosti, hodnota pH se sníží z 12,75 na 1,30 postupným přidáváním 1150 ml (6,9 mol) 6 N roztoku chlorovodíkové kyseliny za udržování teploty asi na 25 °C. Destilační směs se potom vyhřeje pod krátkým nástavcem, až se projeví destilace a únik plynu (oxidu uhličitého), což nastane při teplotě 72,3 °C v lázni, 70 °C v destilačním nástavci a pokračuje se až do chvíle, kdy průběh destilace ustane a vývoj plynu je pak velmi chabý (teplota lázně 94,1°, v nástavci 50 °C). Vydestiluje se 410 ml, zbytek v baňce

-58CZ 289488 B6 v lázni má pH 3,9. V zahřívání se pokračuje ještě 10 minut, a to se již vůbec nevyvíjí plyn. Celková doba destilace od jejího počátku: 7,5 hodin.

Reakční směs se dále míchá po dobu noci za teploty místnosti, načež se čirá reakční směs (pH 3,50) zahustí ve vakuu na rotační odparce (lázeň 60 °C) a pastovitý zbytek se rozmíchá do 750 ml absolutního ethanolu. Vzniklá krystalická suspenze se zbaví rozpouštědla na rotační odparce ve vakuu olejové vývěvy, teplota lázně 60 °C a pastovitý zbytek se rozetře dvakrát s 750 ml absolutního ethanolu. Ke konečnému zbytku se přidá 1500 ml absolutního ethanolu a směs se míchá v lázni teploty 60 °C až do vzniku jemné krystalické suspenze, tedy asi 20 minut, načež se míchá ještě 20 minut za teploty místnosti. Suspenze se odsaje, podíl na filtru se promyje dvakrát použitím vždy 300 ml absolutního ethanolu. Filtráty jsou mírně zakalené a čeří se dále filtrací vrstvou Celit-u ^R. Takto připravený čirý filtrát se zahustí na rotační odparce a získá se tak 434,6 g produktu, jak je uveden v nadpise, ve formě ambrově-zbarveného hustého sirupu.

Chromatografie na tenké vrstvě (methanol, octová kyselina a voda (10 : 1 : 1), Rf = 0,59.

c) Kyselina (S)-2-amino-6-hydroxyhexanová

Do pětilitrové, tříhrdlé baňky, vybavené míchadlem a teploměrem, se vnese 434 g (1,93 mol) produktu z části b) a 3 litry vody, pH zakaleného roztoku se upraví z 4,05 na 7,50 přidáním 705 ml 1 N roztoku hydroxidu lithného, roztok se vyhřeje na 36 °C a přidá se 0,710 g acylasy z prasečí ledviny, směs se dále míchá 23,5 hodin za teploty 35-36 °C, dále se ochladí na teplotu místnosti a hodnota pH se upraví z 7,0 na 5,9 přidáním 4,4 ml ledové kyseliny octové. Po přidání 29 g Celit-u ^R a 29 g aktivního uhlí se teplota reakční směsi zvýší za míchání na 91 °C, zahřívání se přeruší a směs se nechá chladnout na teplotu místnosti. Suspenze se potom filtruje filtračním papírem 18,5 cm a podíl na filtru se dokonale promyje vodou. Bezbarvé filtráty (asi 3,9 1) se zahustí na rotační odparce při 60 °C a získá se tak 476 g čirého, hustého oleje. Po přidání 720 ml absolutního ethanolu se reakční směs míchá, až vznikne homogenní krystalická suspenze, rozpouštědlo se oddestiluje a k pevnému bílému zbytku se přidá 1584 ml absolutního ethanolu. Suspenze se potom protáčí 15 hodin (přes noc) v rotační odparce a filtruje se přes kolečko 18,5 cm. Podíl na filtru se promyje absolutním ethanolem, totiž sedmi podíly po 100 ml, a sušením ve vakuu do konstantní váhy se získá 85,8 g bílého, krystalického produktu, jak je jeho složení uvedeno v nadpise.

Chromatografie na tenké vrstvě za použití soustavy methanol, voda a kyselina octová (10 : 1 : 1), R_f=0,62.

Analýza:

pro C₆Hi₃NO₃ vypočteno: 48,25 % C, 8,94 % H, 9,38 % N nalezeno: 48,66 % C, 8,77 % H, 9,43 % N

d) Methylester kyseliny S-(R*,R*)-2-[4-(acetylthio)-l-oxo-2-(fenylmethoxy)-karbonylamino-butylamino]-6-hydroxyhexanové

Suspenze 1,0 g (6,8 mmol) kyseliny (S)-2-amino-6-hydroxyhexanové v 20 ml methanolu se míchá pod argonem za teploty místnosti a přidává se 1,9 ml (15 mmol) trimethylsilylchloridu. Takto připravená reakční směs se míchá za teploty místnosti 18 hodin a podíl objemu rozpouštědla se sníží asi na 3,5 ml oddestilováním za sníženého tlaku. Přidá se 5 ml acetonitrilu, roztok se ochladí na -10 °C, přidá se dále 4,15 ml (23,8 mmol) N,N-diizopropylethylaminu a roztok se ochladí na -40 °C, obsahuje methylester kyseliny (S)-2-amino-6-hydroxyhexanové.

V oddělené nádobce se roztok 2,117 g (6,8 mmol) S-acetyl-N-[(fenylmethoxy)-karbonyl]homocysteinu (příprava viz příklad 23 e) v 5 ml acetonitrilu ochladí na 0 °C a přidá se k němu

-59CZ 289488 B6

1,20 ml (6,8 mmol) Ν,Ν-diizopropylethylaminu. V ještě další nádobce se rozpustí 0,14 g (0,68 mmol) hydrátu hydroxybenzotriazolu a 1,450 g (6,8 mmol) methansulfonyloxybenzotriazolu v acetonitrilu a roztok se ochladí na -18 °C. Dříve zde nahoře připravený S-acetyl-N[(fenylmethoxy)-karbonyl]-homocystein se přikapává do tohoto roztoku za udržování vnitřní teploty pod -10 °C. Reakční směs se míchá 3 hodiny za teploty v rozmezí -18 °C až -12 °C a vzniklý roztok se potom přikapává do výše uvedeného roztoku, obsahujícího methylester kyseliny (S)-2-amino-6-hydroxyhexanové, a to za chlazení na -40 °C. Během 18ti hodin se nechá teplota reakční směsi vystoupit na 16 °C, reakční směs se vlije do 50 ml ethylesteru kyseliny octové a 50 ml 1 N roztoku chlorovodíkové kyseliny. Vše se přepraví do dětičky, vrstvy se oddělí, vodný podíl se extrahuje dvakrát do 50 ml ethylesteru kyseliny octové, organické podíly se spojí a vše se promyje použitím 100 ml 1 N roztoku chlorovodíkové kyseliny a 100 ml nasyceného roztoku chloridu sodného. Po vysušení bezvodým síranem hořečnatým a filtraci se zahuštěním filtrátu získá bílá pevná látka, k té se přidá 20 ml terc.-butylmethyletheru a vzniklá směs se míchá za teploty místnosti 4 hodiny. Po filtraci se podíl na filtru promyje terc.-butylmethyletherem a sušením se získá 2,087 g sloučeniny, jak je uvedena v nadpise, t.t. 89-90 °C.

e) Methylester kyseliny [S-(R*,R*)]-2-[4-(acetylthio)-l-oxo-2-(fenylmethoxy)-karbonylamino-butylamino]-6-oxohexanové

Do roztoku 546 μΐ (6,27 mmol) oxalylchloridu v 16 ml suchého methylenchloridu se za teploty -65 °C (v reakční směsi) přikapává roztok 905 μΐ (12,54 mmol) dimethylsulfoxidu v 13 ml methylenchloridu, a to během 12 minut za udržování vnitřní teploty v rozmezí -65 až -60 °C. Dalším přidáním 1,90 g (4,18 mmol) produktu zčásti d) v 7 ml methylenchloridu během 20 minut vznikne zakalená reakční směs, použitím dalšího podílu 1 ml methylenchloridu se dokončí přelití zmíněného alkoholu do reakční nádoby a reakční směs se potom míchá 40 minut za chlazení na -65 °C. Dále se přidá Ν,Ν-dioxopropylethylamin v množství 3,7 ml (20,90 mmol), čímž vznikne čirý roztok, reakční směs se dále míchá 30 minut při -65 °C, teplota se nechá vystoupit za 2 hodiny na -18 °C a reakční směs se rozruší přidáním 30 ml 10% vodného roztoku hydrogensíranu draselného, dále pak se nechá teplota vystoupit na 20 °C. Po zředění přidáním 25 ml vody se obě fáze oddělí, vodný podíl se ještě extrahuje dvakrát použitím vždy 25 ml methylenchloridu, organické extrakty se spojí, celek se promyje 25 ml 10% vodného roztoku hydrogensíranu draselného, dále dvěma dávkami po 25 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, 25 ml solanky, a po vysušení bezvodým síranem hořečnatým a filtraci se zahuštěním filtrátu ve vakuu získá 1,84 g sloučeniny, jak je uvedena v nadpise, jako bílá pevná látka.

f) Methylester kyseliny [4S-(4a,7a,10aů)]-oktahydro-4-[(fenylmethoxy)-karbonyl-amino]5-oxo-7H-pyrido[2,1 —b] [ 1,3]thiazepin-7-karboxylové

Suchá baňka se pod argonem naplní 1,76 g (3,89 mmol) produktu zčásti e), přidá se 17 ml methanolu, roztok se ochladí na 0 °C a argon se zavádí dalších 25 minut. Během asi 15 sekund se přidá 983 μΙ (4,28 mmol) roztoku natriummethoxidu v methanolu (25 %, hmotnostně), po hodině se reakční směs rozruší přidáním 20 ml 1 N kyseliny chlorovodíkové, teplota se nechá vystoupit na 20 °C, přidá se 35 ml ethylesteru kyseliny octové a po promíchání se vrstvy oddělí. Vodný podíl se extrahuje dvakrát do 15 ml ethylesteru kyseliny octové, spojené organické frakce se promyjí použitím 15 ml 1 N roztoku kyseliny chlorovodíkové, solankou, a po vysušení bezvodým síranem hořečnatým a filtraci se zahuštěním filtrátu ve vakuu získá 1,69 g methylesteru kyseliny [S-(R*,R*)]-2-[(4—merkapto-l-oxo-2-([(fenylmethoxy)-karbonylamino]-butylamino}-6-oxohexanové ve formě bílé pěny.

Roztok této bílé pěny a 305 μΐ (3,95 mmol) kyseliny trifluoroctové v 17 ml methylenchloridu se zahřívá 2,25 hodin do varu pod zpětným chladičem, načež se po ochlazení na teplotu místnosti reakční směs zahustí a zbytek se rozpustí v 25 ml ethylesteru kyseliny octové. Tento roztok se promyje dvěma dávkami po 20 ml hydrogenuhličitanu sodného, dále solankou, a po vysušení

-60CZ 289488 B6 bezvodým síranem hořečnatým a filtraci se zahuštěním filtrátu ve vakuu získá 1,50 g sloučeniny, jak je uvedena v nadpise, jako bílá pěna.

g) Methylester kyseliny [4S-(4a,7a, 10ap)]-oktahydro-4-amino-5-oxo-7H-pyrido[2,l-b]- [ 1,3]thiazepin-7-karboxylové

Působením jodtrimethylsilanu na produkt z části f) za použití postupu z příkladu 23 h) nebo 11 h) se odstraní krycí skupina na dusíku a vznikne tak očekávaný 4-aminoderivát.

Příklad 27

Kyselina (S)-2-ftalimido-6-hydroxyhexanová

Tento meziprodukt z příkladu 1 c) se dá připravit také tímto způsobem:

K roztoku 730 g (2,2 mol) diethylesteru kyseliny 2-acetylamino-2-[4-(acetyloxy)butyl]propandiové (příprava viz příklad 24 a) v 300 ml absolutního ethanolu se přidá 1,61 6 N vodného roztoku hydroxidu sodného, reakční směs se zahřívá 5 hodin na 70-76 °C, potom se za teploty 90-95 °C oddestiluje většina ethanolu, reakční směs se ochladí a okyselí na pH 1,3 za použití 6 N roztoku kyseliny chlorovodíkové (potřeba asi 1,3 1) a zahříváním na 90-100 °C začne probíhat dekarboxylace. Po jejím skončení se ochladí surová reakční směs na teplotu místnosti.

Potom se reakční směs vyhřeje na 35 °C, přidá se asi 600 ml 6 N roztoku hydroxidu sodného a dále roztok 1 N hydroxidu sodného k úpravě pH na hodnotu 7,5. Konečný objem směsi: asi 5,3 1. Do této směsi se přidá 0,6 g acylasy I z prasečí ledviny, reakční směs se míchá přes noc za teploty 35 °C za hodnoty pH 7,25. Tato hodnota se upraví na 7,5, přidá se další podíl 300 mg acylasy a po míchání po dobu noci se jeví být reakce asi z 90 % skončena. Přidá se do ní 20 g aktivního uhlí a 20 g Celit-u ^R, směs se vyhřeje na 85 °C a udržuje na této teplotě 10 minut, ochladí se na 50 °C a filtruje. V tu chvíli činí celkový objem filtrátu asi 4,9 1. Filtrát se ochladí na 5 °C a přidáním pevného uhličitanu sodného se upraví hodnota pH na 9,3, přidá se 263,04 g (1,2 mol) N-karbethoxyftalimidu v jediné dávce a najednou a dále se přidává uhličitan sodný tak, jak je to třeba k udržení hodnoty pH na 9,3. Po dvou hodinách při 5 °C následují 3 hodiny za teploty místnosti, hodnota pH klesne na 8,5 a většina reagujících složek se rozpustí. Reakční směs se filtruje, ochladí se na 5 °C a okyselí se přidáním 6 N roztoku kyseliny chlorovodíkové na pH2,3. Vysrážený pevný podíl se odfiltruje, promyje se použitím 200 ml studené vody, a sušením ve vakuu se takto připraví 220 g sloučeniny, uvedené v nadpise.

Příklad 28

Kyselina [4S-(4a,7a,10aP)]-oktahydro-4-[(2-merkapto-3-(l-naftalenyl)-l-oxopropylamino]5-oxo-7H-pyrido[2,l-b][l,3]thiazepin-7-karboxylová

a) Diethylester kyseliny (acetylamino)-l-naftalenylmethylpropandiové

Do roztoku 5,613 g (67,8 mmol) natriumethoxidu v 100 ml ethanolu (21% roztok NaOC2H₅ v EtOH) se přidá 14,74 mg (67,8 mmol) diethylesteru kyseliny acetamidomalonové, dále 10,0 g (45,2 mmol) 1-brommethylnafitalenu, a takto připravený roztok se míchá hodinu za teploty místnosti. Zahuštěním reakční směsi vznikne oranžový olej, kteiý se rozpustí v ethylesteru kyseliny octové a roztok se promyje z 50 % nasyceným roztokem chloridu amonného a potom solankou, vysuší se bezvodým síranem sodným, a po filtraci se filtrát zahustí za vzniku oranžové pevné látky. Pevný podíl se překrystaluje z ethylesteru kyseliny octové a hexanu za vzniku béžové zbarvených krystalů, znečistěných výchozím derivátem malonové kyseliny. Pevný podíl se rozpustí ve směsi ethylacetátu a hexanu (1 : 1) a roztok se čistí bleskovou chromatografií na

-61CZ 289488 B6 silikagelu (Měrek) za použití stejné soustavy. Frakce, obsahující čistý produkt, se spojí a zahuštěním se takto připraví 10,225 g produktu ve formě bílé pevné látky, t.t. 105-108 °C, Rf = 0,57 (50 % ethylesteru kyseliny octové v hexanu).

b) Kyselina a-amino-l-naftalenpropanová

Roztok 16,182 g (47,5 mmol) produktu zčásti a) se suspenduje do 100 ml 48% bromovodíkové kyseliny a pod argonem se reakční směs zahřívá do varu pod zpětným chladičem 14 hodin. Sůl produktu s bromovodíkem se odfiltruje z roztoku ve formě bílé pevné látky, ta se rozpustí v 500 ml teplé vody (50 °C) a roztok se neutralizuje přidáváním koncentrovaného vodného roztoku amoniaku. Produkt se z roztoku vysráží jako jemná bílá látka, odfiltruje se a sušením za vysokého vakua přes noc (asi 18 hodin) se takto získá 8,335 g látky, jemná vířivá pevná látka, t.t. 264 °C.

c) Kyselina a-brom-l-naftalenpropanová

Do roztoku 4,000 g (18,6 mmol) produktu z části b) a 7,63 g (63,2 mmol) bromidu draselného v 35 ml 2,5 N roztoku kyseliny sírové se za teploty 0 °C přidává během hodiny roztok 1,92 g (27,8 mmol) dusitanu sodného, reakční směs se míchá další hodinu při 0 °C, potom se teplota nechá vystoupit na 20 °C a v míchání se pokračuje 2,5 hodin. Dále se reakční směs extrahuje třikrát do etheru, výtřepky v etheru se spojí a organický roztok se promyje vodou a solankou, vysuší se bezvodým síranem sodným a po filtraci se filtrát zahustí. Zbytek tvoří oranžový olej, který se čistí bleskovou chromatografií na silikagelu (Měrek) za použití 70% ethylesteru kyseliny octové v hexanu s obsahem 1% kyseliny octové, aby se snížila tvorba ocasů. Frakce, obsahující brómovaný produkt, se spojí a zahuštěním se připraví mírně znečištěný produkt ve formě oranžového oleje, který tuhne stáním přes noc. R_f = 0,40 (40 % ethylesteru kyseliny octové v hexanu + 1 % kyseliny octové).

d) Kyselina a-(acetylthio)-l-naftalenpropanová

Do suspenze 0,912 g (8,00 mmol) draselné soli kyseliny thiooctové v 300 ml ácetonitrilu se přidá za teploty 0 °C 2,030 g (7,27 mmol) produktu z části d) ve formě roztoku v 3 ml ácetonitrilu. Roztok se míchá hodinu při 0 °C, teplota se potom nechá vystoupit na 20 °C a v míchán se pokračuje 15 hodin. Z reakční směsi se odfiltruje bromid draselný a zahuštěním reakční směsi i filtrátu se izoluje oranžový olej, který se rozpustí v ethylesteru kyseliny octové, získaný roztok se promyje 10% roztokem hydrogensíranu draselného a solankou a dále se vysuší bezvodým síranem sodným. Po filtraci se zahuštěním filtrátu připraví oranžový olej, který se čistí bleskovou chromatografií na silikagelu (Měrek) za použití soustavy 50% ethylesteru kyseliny octové v hexanu + 1 % octové kyseliny, aby se snížila tvorba ocasů. Frakce, obsahující žádaný produkt, jsou znečištěny látkou o R_f = 0,43. Tyto frakce se spojí a zahuštěním se získá oranžový olej. Surový produkt se čistí přes sůl dicyklohexylaminu tak, že se oranžový olej rozpustí v etheru a přidá se ekvivalent dicyklohexylaminu (1,32 g, 7,27 mmol) do roztoku. Odpovídající sůl dicyklohexylaminu se získá ve dvou dávkách hnědých krystalů (1,45 g), stále ještě mírně znečistěných příměsmi. Krystaly se suspendují v ethylesteru kyseliny octové, roztok se protřepává třikrát s 10% roztokem hydrogensíranu draselného. Organická vrstva se potom promyje vodou a solankou, vysuší se bezvodým síranem sodným, filtruje se a zahuštěním filtrátu se připraví 875 mg produktu ve formě žlutého oleje, Rf = 0,40 (40 % ethylesteru kyseliny octové v hexanu + 1 % kyseliny octové).

e) Methylester kyseliny [4S-(4a,7a, 10aP)]-oktahydro-[2-(acetylthio)-3-(l-naftalenyl)-loxopropyl]-amino-5-oxo-7H-pyrido[2,1 —b] [ 1,3]thiazepin-7-karboxylové

Roztok racemické kyseliny jako produktu z příkladu 28, část d) v methylenchloridu a roztok methylesteru kyseliny [4S-(4a,7a,10afi)]-oktahydro-4-amino-5-oxo-7H-pyrido[2,l-b][l,3]thiazepin-7-karboxylové v methylenchloridu se nechají reagovat za přítomnosti triethylaminu

-62CZ 289488 B6 a benzotriazol-l-yloxytris-(dimethylamino)-fosfoniumhexafluorfosfátu podle postupu z příkladu 23 i) za vzniku produktu, jak je jeho složení uvedeno v nadpise.

f) Kyselina [4S-(4a,7a, 10aP)]-oktahydro-4-[2-merkapto-3-(l-naftalenyl)-l-oxopropyl]amino-5-oxo-7H-pyrido[2,1 —b] [1,3]thiazepin-7-karboxylová

Roztok produktu z části e) v methanolu se zpracuje za použití 1 N roztoku hydroxidu sodného podle postupu z příkladu 23 j) za vzniku produktu, jak je uveden v nadpise.

Příklad 29

Kyselina {4S-[4a(R*),7a, 10aPJ}-oktahydro-4-[2-merkapto-l-oxo-3-(2-thiazolyl}-propylamino]-5-oxo-7H-pyrido[2,1 —b] [1,3]thiazepin-7-karboxylová

a) Kyselina (S)-a-(acetylthio)-2-thiofenpropanová

Do roztoku 1,37 g, (8,03 mmol) p-(2-thienyl)-D-alaninu v 25 ml 2,5 N roztoku chlorovodíkové kyseliny se přidá bromid draselný v množství 3,0 g (40,1 mmol), a to pod argonem za teploty místnosti. Reakční směs se míchá 10 minut, ochladí se na 0°C a vnáší se do ní 720 mg (10,44 mmol) dusitanu sodného. Za 2,5 hodin se nechá teplota reakční směsi vystoupit na 20 °C, směs se dále míchá hodinu, načež se roztřepává mezi vodu a ethylester kyseliny octové, organická vrstva se po oddělení vysuší bezvodým síranem sodným, a po filtraci se filtrát zahustí. Zbytek se čistí bleskovou chromatografií na silikagelu (Měrek) za eluování 1% kyseliny octové ve směsi 3 :1 hexanu a ethylesteru kyseliny octové.

Ve výtěžku 760 mg se ve formě žlutého oleje připraví takto kyselina (R)-a-chlor-2-thiofenkarboxylová.

Do roztoku 750 mg (4,73 mmol) výše uvedeného chloridu v 15 ml dimethylformamidu se za teploty místnosti a pod argonem přidá 2,95 g (14,19 mmol) česné soli kyseliny thiooctové. Po dvouhodinovém míchání se reakční směs roztřepává mezi 10% roztok hydrogensíranu draselného a ethylester kyseliny octové, organická oddělená vrstva se promyje solankou, vysuší se bezvodým síranem sodným a po filtraci se filtrát zahustí, zbytek se potom čistí bleskovou chromatografií na silikagelu (Měrek) za eluování 1% kyseliny octové ve směsi 4: 1 hexanu a ethylesteru kyseliny octové, takže se získá 500 mg sloučeniny, jak je její složení uvedeno v nadpise, ve formě oleje.

Chromatografie na tenké vrstvě (2% kyseliny octové v směsi 3 : 1 ethylesteru kyseliny octové a hexanu), Rf - 0,73.

b) Methylester kyseliny {4S-[4a(R*),7a,10ap]}-oktahydro-4—[2-(acetylthio)-l-oxo-3-(2thienyl)-propylamino]-5-oxo-7H-pyrido[2,l-b][l,3]-thiazepin-7-karboxylové

Provede se reakce roztoku kyseliny jako produktu z části a) v methylenchloridu a roztoku methylesteru kyseliny [4S-(4a,7a, 10aP)]-oktahydro-4-amino-5-oxo-7H-pyrido[2,1 —b] [1,3]thiazepin-7-karboxylové rovněž v methylenchloridu za přítomnosti triethylaminu a benzotriazol-l-yloxytris-(dimethylamino)-fosfoniumhexafluorfosfátu podle postupu z příkladu 23 i) za vzniku sloučeniny, jak je uvedena v nadpise.

-63CZ 289488 B6

c) Kyselina {4S-[4a(R*),7a,10aP]}-oktahydro-4-[2-merkapto-l-oxo-3-(2-thienyl)propylamino]-5-oxo-7H-pyrido[2,1 —b] [ 1,3]thiazepin-7-karboxylová

Na roztok produktu z části b) v methanolu se působí 1 N roztokem hydroxidu sodného za použití postupu z příkladu 23 j) a vzniku sloučeniny, jak je její složení uvedeno v nadpise.

Příklad 30

Kysel ina {4S-[4a(S *),7α, 10 β] }-oktahydro-4-[(2-merkapto- l-oxo-3-fenyIpropyl)-amino]-5oxo-7H-pyrido[2,1 -b] [ 1,3]thiazepin-7-karboxylová

a) Sůl dicyklohexylaminu a kyseliny (R)-2-(acetylthio)benzenpropanové

Podle postupu z příkladu 1 h), ale za použití L-fenylalaninu místo D-fenylalaninu se získá sůl dicyklohexylaminu a kyseliny (R)-2-(acetylthio)benzenpropanové.

b) Methylester kyseliny {4S-[4a(S*),7a,10ap]}-oktahydro-4-[2-(acetylthio)-l-oxo-3-fenylpropylamino]-5-oxo-7H-pyrido[2,l-b][l,3]thiazepin-7-karboxylové

Míchaná suspenze 353,5 mg (0,872 mmol) soli dicyklohexylaminu a kyseliny (R)-2-(acetylthio)benzenpropanové v 5 ml ethylesteru kyseliny octové se promývá třikrát vždy použitím 5 mi 5% roztoku hydrogensíranu draselného. Organické extrakty se spojí, promyjí solankou, a po vysušení bezvodým síranem hořečnatým a filtraci se zahuštěním filtrátu do sucha, sušením ve vakuu a dvojí destilací s hexanem získá olejovitá kyselina (R)-2-(acetylthio)benzenpropanová.

Ze získané volné kyseliny se 181,4 mg (0,809 mmol) rozpustí v 2 ml methylenchloridu a roztok se míchá pod dusíkem při 0 °C. K roztoku se přidá roztok 200 mg (0,774 mmol) methylesteru kyseliny [4S-(4a,7a,10aP)]-oktahydro-4-amino-5-oxo-7H-pyrido[2,l-b][l,3]thiazepin-7karboxylové v 6 ml methylenchloridu, dále 0,11 triethylaminu (0,813 mmol) a posléze 360 mg (0,813 mmol) benzotriazol-l-yloxytris(dimethylamino)-fosfoniumhexafluorfosfátu. Reakční směs se míchá za chlazení na 0 °C a reakční teplota se nechá vystoupit pomalu na 20 °C. Celkem po 20ti hodinách se reakční směs zahustí ve vakuu. Zbytek se rozpustí v ethylesteru kyseliny octové a roztok se promyje 5% roztokem hydrogensíranu draselného, nasyceným roztokem chloridu sodného, nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou. Organická vrstva se vysuší bezvodým síranem hořečnatým, po filtraci se filtrát zahustí za vzniku žluté pevné látky. Čistěním bleskovou chromatografií za eluování soustavou ethylester kyseliny octové a hexan (2:3) se připraví takto 261,7 mg sloučeniny, jak je uvedena v nadpise, ve formě žlutého oleje.

c) Kyselina {4S-[4a,7a, 1Oap] }-oktahydro-4-[2-merkapto-l -oxo-3-fenylpropyl)-amino]-5oxo-7H-pyrido[2,1 —b] [ 1,3]thiazepin-7-karboxylová

Roztok 261,1 mg (0,562 mmol) produktu z části b) v 6 ml methanolu se zbaví vzduchu probubláváním dusíkem, ochladí se na 0 °C a přidá se do něj 6 ml 1 N roztoku hydroxidu sodného, rovněž zbaveného vzduchu dusíkem. Reakční směs se míchá hodinu při 0 °C za stálého zavádění dusíku, potom se nechá teplota vystoupit na 20 °C a 30timinutovým mícháním za této teploty vznikne čirý roztok. Po 5,5 hodinách se reakční směs okyselí na pH 1 5% roztokem hydrogensíranu draselného, po extrakci do ethylesteru kyseliny octové se organické výtřepky spojí, vše se vytřepe vodou a solankou, vysuší se bezvodým síranem sodným a po filtraci se filtrát zahustí ve vakuu. Čistěním bleskovou chromatografií v soustavě ethylester kyseliny octové, kyselina octová a hexan (6 : 0,01 : 3,99) se získá 190 mg sloučeniny, jak je uvedena v nadpise, to jako bílá pevná látka, [a]_D = -87,5° (c = 0,51, chloroform).

-64CZ 289488 B6

Chromatografie na tenké vrstvě v soustavě ethylester kyseliny octové, kyselina octová a hexan (6,0:0,1 : 3,99) R_f= 0,20.

Vysokotlaková kapalinová chromatografie, retenční doba 25,3 min, kolona YMC S-3 ODS (ΟΙ 8), 6,0 na 150mm, 0% až 100 % B.A, 30min. lineární gradient a 10min. pozdržení, 1,5 ml/min.

A = 90 % vody v methanolu + 0,2 % kyseliny fosforečné,

B = 90 % methanolu ve vodě + 0,2 % kyseliny fosforečné, 220 nm.

Analýza:

pro C19H24O4N2S0.0,15 C4H8O2.0,15 C7H]6.0,39 H2O vypočteno: 55,89 % C, 6,45 % H, 6,31 % N, 14,45 % S nalezeno: 56,19 % C, 6,50 % H, 6,71 % N, 13,96 % S

Příklad 31

Kyselina [4S-(4a,7a,9ap)]-oktahydro-4-{[2-merkapto-l-oxo-3-(4-thiazolyl)-propyl]amino}-5-oxopyrrolo[2,l-b][l,3]thiazepin-7-karboxylová

a) Kyselina (R)-2-amino-3-(4~thiazolyl)-propanová

Roztok 10 ml 4N chlorovodíkové kyseliny vdioxanu se přidá do roztoku 2,0 g (7,3 mmol) kyseliny (R)-2-{[(l,l-dimethoxyethoxy)-karbonyl]-amino}-3-(4—thiazolyl)propanové v 2 ml dioxanu, reakční směs se míchá za teploty místnosti 3 hodiny, zahustí se ve vakuu a zbytek se rozpustí v 3 ml vody. Hodnota pH se upraví na 6,5 přidáním 1 N roztoku hydroxidu sodného a tento roztok se pustí kolonou 20 ml Dowex-u ^R AG(50⁺), kolona se eluuje použitím 300 ml vody, frakce, obsahující produkt se zahustí ve vakuu a výtěžkem je 0,94 g látky, uvedené v nadpise.

b) Kyselina (R)-2-brom-3-(4-thiazolyl)propanová

Roztok 0,516 produktu zčásti a) (3 mmol) a 1,19 g (10,1 mmol) bromidu draselného ve směsi 5,94 ml vody a 0,43 ml kyseliny sírové se míchá 5 minut při -10 °C, načež se po malých dávkách vnáší 0,318 g (4,61 mmol) dusitanu sodného během 10ti minut. Reakční směs se míchá dalších 10 minut při 0 °C a hodinu za teploty místnosti, extrahuje se třemi podíly po 100 ml etheru, roztok v etheru se promyje dvakrát po 20 ml solanky, vysuší se bezvodým síranem sodným a po filtraci se zahuštěním filtrátu ve vakuu připraví tímto způsobem 0,37 g sloučeniny, uvedené v nadpise, [a]_D = +37,35° (c = 0,7, methanol). Druhé provedení vychází z 2,67 mmol produktu z části a) a za použití stejného postupu se takto získá dalších 0,35 g produktu, jak je uvedeno jeho složení v nadpise.

c) Kyselina (S)-2-(acetylthio)-3-(4-thiazolyl)propanová

Směs 0,72 g (3,05 mmol produktu z části b) a 0,35 g (3,05 mmol) draselné soli kyseliny thiooctové se míchá v prostředí 9 ml acetonitrilu přes noc za teploty místnosti a potom hodinu po vyhřátí na 30 °C. Směs se zředí přidáním 100 ml ethylesteru kyseliny octové, filtruje se, filtrát se zahustí ve vakuu. Zbytek se znovu rozpustí v 100 ml ethylesteru kyseliny octové, roztok se promyje dvakrát použitím 50 ml vody, dále solankou (20 ml) a vysuší se bezvodým síranem sodným. Po filtraci se zahuštěním filtrátu ve vakuu se získá tímto způsobem 0,52 g sloučeniny, uvedené v nadpise, [a]_D = -15,89° (c = 0,6, methanol).

-65CZ 289488 B6

d) Methylester kyseliny [4S-(4a,7a,9aP)]-oktahydro-4-[2-(acetylthio)-l-oxo-3-(4thiazolyl)-propyl]amino-5-oxopyrrolo[2,l-b][l,3]thiazepin-7-karboxylové

V 5 ml methylenchloridu se za teploty 0 °C rozpustí 0,367 g (0,882 mmol) soli kyseliny ptoluensulfonové a methylesteru kyseliny [4S-(4a,7a,9aP)]-4-aminooktahydro-5-oxopynOlo[2,l-b][l,3]thiazepin-7-karboxylové (připravené z materiálu popsaného v příkladu 5 d), do roztoku se dále přidá 0,12 ml (0,868 mmol) triethylaminu, dále pak 0,2 g (0,865 mmol) produktu zčásti c) a další podíl 0,12 ml (0,865 mmol) triethylaminu. Ještě se do reakční směsi vnese 0,383 g (0,865 mmol) benzotriazol-l-yloxytris-(dimethylamino)-fosfoniumhexafluorfosfátu, reakční směs se míchá hodinu při 0 °C a 4 hodiny za teploty místnosti; zahustí se ve vakuu, zbytek se rozpustí v 60 ml ethylesteru kyseliny octové, organický extrakt se promyje použitím 10 ml 5% vodného roztoku hydrogensíranu draselného, dvakrát solankou, vždy 10 ml, vysuší se bezvodým síranem sodným, a po filtraci se filtrát zahustí ve vakuu. Získaný surový materiál se chromatografuje na silikagelu (100 g, Měrek) za užití 0,2 % methanolu v ethylesteru kyseliny octové. Zahuštěním frakcí, obohacených pomalejším izomerem, ve vakuu se získá 0,134 g sloučeniny, jak je uvedena v nadpise.

e) Kyselina [4S-(4a,7a,9aP)]-oktahydro-4-[(2-merkapto-l-oxo-3-(4-thiazolyl)-propyl]amino-5-oxopyrrolo[2,l-b][l,3]thiazepin-7-karboxylová

V prostředí 3 ml methanolu se rozpustí 0,135 g (0,29 mmol) produktu z části d) a do roztoku se za chlazení na 0 °C zavádí po 30 minut argon. Potom se do roztoku přidá 1,32 ml 1 N roztoku hydroxidu sodného, ze kterého byl vzduch rovněž vypuzen argonem a reakční směs se míchá za chlazení na 0 °C a za zavádění argonu hodinu, dále pak 2 hodiny za teploty místnosti. Přidáním 20 ml 5% vodného roztoku hydrogensíranu draselného se reakční směs rozruší, organické podíly se extrahují do třech dávek ethylesteru kyseliny octové po 50 ml, spojený roztok v tomto rozpouštědle se promyje solankou, vysuší se bezvodým síranem sodným, filtruje se a po filtraci se čirý roztok zahustí ve vakuu. Zbytek se chromatografuje na 40 g silikagelu (Měrek) za použití chloroformu s obsahem 5 % methanolu a 0,5 % kyseliny octové. Odpovídající frakce se spojí, zahustí a zbytek se roztřepává mezi 20 ml ethylesteru kyseliny octové a 5% vodný roztok hydrogensíranu draselného. Roztok v ethylesteru kyseliny octové se promyje vodou a solankou, vysuší se bezvodým síranem sodným, a filtrát se zahustí ve vakuu. Lyofilizací zbytku z 4 ml dioxanu se takto získá 36 mg sloučeniny, jejíž složení je uvedeno v nadpise jako směs izomerů 70 : 30. T.t. 95-115 °C, [a]_D = -191,7° (c = 0,06, chloroform).

Chromatografie na tenké vrstvě za použití soustavy chloroform : methanol: kyselina octová (8 : 2 : 0,2), R_f= 0,59.

Vysokotlaková kapalinová chromatografie, retenční doba 3,06 min, kolona YMC S-R ODS (ΟΙ 8) 6,0 na 150 mm, ukončení kolony 3u, isokraticky 60% vodný methanol s obsahem 0,2% kyseliny fosforečné, 25 min., 1,5 ml/min, 95,4 %).

Analýza:

pro C₁₅Hi9N₃O₄S₃.0,2 C₄HgO₂ · 0,9 H₂O vypočteno: 43,59 % C, 5,19 % H, 9,65 % N, 22,09 % S nalezeno: 43,54 % C, 4,89 % H, 9,44 % N, 21,90 % S

-66CZ 289488 B6

Příklad 32

1000 tablet, z nichž každá obsahuje tyto složky:

kyselinu {4S-[4a(R*),7a, 1 Oap]}-oktahydro-4-[(2-merkapto-l-oxo-3-fenylpropyl)-amino]-5-oxo-7H-pyrido[2,l-b][ 1,3]-thiazepin-7-karboxylovou 100mg kukuřičný škrob 100mg želatinu 20mg

Avicel (mikrokrystalická celulóza) 50mg hořečnatou sůl kyseliny stearové 5mg

275 mg se připraví z dostačujících množství na velikost smícháním produktu z příkladu 3 a kukuřičného škrobu s vodným roztokem želatiny. Směs se vysuší a semele potom nájemný prášek. Přimísí se Avicel a hořečnatý sůl kyseliny stearové za současného granulování. Ze směsi se potom lisují tablety na tabletovacím zařízení tak, že se vyrobí 1000 tablet, obsahujících po 100 mg aktivní složky.

Podobným postupem se mohou připravit tablety s obsahem 200 mg produktu z příkladu 1,2,4 až 23, 25 a 28 až 31.

Podobný postup lze použít pro přípravu tablet nebo kapslí, obsahujících od 10 mg do 500 mg aktivní složky.

Průmyslová využitelnost

Merkaptoalkanoylové a acylmerkaptoalkanoylové deriváty oxazepinu, thiazinu a thiazepinu a jejich farmaceuticky vhodné sole jsou vhodné pro výrobu farmaceutického prostředku pro ošetřování kardiovaskulárních nemocí, jako je vysoký krevní tlak a selhání srdce po překrvení.

Claims (8)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   1. Merkaptoalkanoylový a acylmerkaptoalkanoylový derivát oxazepinu, thiazinu a thiazepinu obecného vzorce I kde znamená

   A skupinu obecného vzorce kde znamená

   Ri a Rn na sobě nezávisle atom vodíku, alkylovou skupinu s 1 až 5 atomy uhlíku s přímým nebo s rozvětveným řetězcem, skupinu -CH2-cykloalkylovou se 3 až 6 atomy uhlíku v cykloalkylovém podílu, -CH2-fenylovou, -CH2-naftylovou, -CFh-thienylovou nebo -CH2~thiazolylovou nebo R] a R₎₂ spolu vytvářejí skupinu cykloalkylovou s 5 atomy uhlíku,

   R₂ atom vodíku nebo skupinu obecného vzorce

   O

   Ró- C - _z kde znamená

   R₆ alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku nebo fenylovou skupinu,

   X atom kyslíku nebo síry,

   R₃ atom vodíku, alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku,

   Y skupinu CH2 nebo atom kyslíku, za podmínky, že v případě, kdy znamená Y atom kyslíku, znamená m číslo 1, η 1 nebo 2, m 0 nebo 1 a r 0 nebo 1 a jeho farmaceuticky přijatelná sůl.

   -68CZ 289488 B6
2. 2. Merkaptoalkanoylový a acylmerkaptoalkanoylový derivát oxazepinu, thiazinu a thiazepinu podle nároku 1 obecného vzorce I, kde znamená

   R₂ atom vodíku nebo skupinu obecného vzorce

   O

   H3C - C R₃ atom vodíku, r 0 nebo 1,

   Ri skupinu benzylovou, cyklopropylmethylovou nebo alkylovou se 3 až 5 atomy uhlíku s přímým nebo s rozvětveným řetězcem,

   R]2 atom vodíku, η 1 nebo 2, m 0 nebo 1,

   X atom kyslíku nebo síry a

   Y skupinu CH₂ nebo atom kyslíku za podmínky, že v případě, kdy znamená Y atom kyslíku, znamená m číslo 1.
3. 3. Merkaptoalkanoylový a acylmerkaptoalkanoylový derivát oxazepinu, thiazinu a thiazepinu podle nároku 2 obecného vzorce I, kde znamená

   X atom síry,

   Y skupinu CH₂, n 2, m 1, r 0 nebol,

   R₂ atom vodíku,

   Ri skupinu benzylovou nebo izobutylovou a

   R12 atom vodíku, nebo

   X atom síiy,

   Y skupinu CH₂, n 1, m 1, r 0,

   R₂ atom vodíku,

   Ri skupinu benzylovou a

   R12 atom vodíku, nebo

   X atom síry,

   Y skupinu CH₂, n 2, m 0,

   -69CZ 289488 B6 r 0,

   R₂ atom vodíku,

   Ri skupinu benzylovou, cyklopropylmethylovou, n-butylovou, izobutylovou, n-propylovou nebo -CH₂C(CH₃)₃ a

   R12 atom vodíku, nebo

   X atom kyslíku,

   Y skupinu CH₂, n 2, m 1, r 0,

   R₂ atom vodíku,

   Ri skupinu benzylovou a

   Ri₂ atom vodíku, nebo

   X atom kyslíku,

   Y skupinu CH₂, n 2, m 0, r 0,

   R₂ atom vodíku,

   Ri skupinu benzylovou a

   Ri₂ atom vodíku, nebo

   X atom kyslíku,

   Y atom kyslíku, n 2, m 1, r 0,

   R₂ atom vodíku,

   Ri skupinu benzylovou a

   Ri₂ atom vodíku, nebo

   X atom síry,

   Y atom kyslíku, n 2, m 1, r 0,

   R₂ atom vodíku,

   Ri skupinu benzylovou a

   Ri₂ atom vodíku.

   -70CZ 289488 B6
4. 4. Merkaptoalkanoylový a acylmerkaptoalkanoylový derivát oxazepinu, thiazinu a thiazepinu podle nároku 3 obecného vzorce I, vybraný ze souboru zahrnujícího [4S-[4a(R*),7a,10aP]]oktahydro-4-[(2-merkapto-l-oxo-3-fenylpropyl)amino]-5-oxo-7Hpyrido[2,1 —b] [ 1,3]thiazepin-7-karboxylovou kyselinu;

   [4S-[4a(R*),7a,10aP]]oktahydro-4-[(2-merkapto-l-oxo-3-fenylpropyl)amino]-5-oxo-7Hpyrido[2,l-b][l,3]thiazepin-7-karboxylovou kyselinu ve formě 1,1-dimethylethylaminové soli;

   [4S-[4a(S*),7a,10ap]]oktahydro-4-[(2-merkapto-l-oxo-3-fenylpropyl)amino]-5-oxo-7Hpyrido[2,1 —b][ 1,3]thiazepin-7-karboxylovou kyselinu;

   [4S-[4a(R*),7a,10aPJ]oktahydro-4-[(2-(merkaptomethyl)-l-oxo-3-fenylpropyl)amino]-5oxo-7H-pyrido[2,l-b][l,3]thiazepin-7-karboxylovou kyselinu;

   [4S-[4a(R*),7a,10aP]]oktahydro~4-methyl-l-oxopentyl)amino]-5-oxo-7H-pyrido[2,l-b][l,3]thiazepin-7-karboxylovou kyselinu;

   [3R-[3a(S*),6a,9ap]]hexahydro-3-[(2-merkapto-l-oxo-3-fenylpropyl)amino]-4-oxo-2H,6Hpyrido[2,l-b][l,3]thiazin-6-karboxylovou kyselinu;

   [4S-[4a(R*),7a,9ap]]oktahydro-4-[(2-merkapto-l-oxo-3-fenylpropyl)amino]-5-oxopyrrolo[2,l-b][l,3]thiazepin-7-karboxylovou kyselinu;

   [4S-[4a(R*),7a,9aP]]oktahydro-4-[(3-cyklopropyl-2-merkapto-l-oxopropyl)amino]-5oxopyrrolo[2,1 —b] [ 1,3]thiazepin-7-karboxylovou kyselinu;

   [4S-[4a(R*),7a,10aP]]oktahydro-4-[(2-merkapto-4-methyl-l-oxopentyl)amino]-5-oxo-7Hpyrrido[2,1 —b] [ 1,3]thiazepin-7-karboxylovou kyselinu;

   [4S-[4a(R*),7a,9a3J]oktahydro-4-[(2-merkapto-l-oxo-4-methylpentyl)amino]-5oxopyrrolo[2,l-b][l,3]thiazepin-7-karboxylovou kyselinu;

   [4S-[4a(R*),7a,9aP]]oktahydro-4-[(2-merkapto-l-oxopentyl)amino]-5-oxopyrrolo[2,l-bJ[ 1,3]thiazepin-7-karboxylovou kyselinu;

   [4S-[4a(R*),7a,9aP]]oktahydro-4-[(2-merkapto-4,4-dimethyl-l-oxopentyl)amino]-5oxopyrrolo[2,1 —b] [ 1,3]thiazepin-7-karboxylovou kyselinu;

   [4S-[4a(R*),7a,10ap]]oktahydro-4-[(2-merkapto-l-oxo-3-fenylpropyl)amino]-5-oxo-7Hpyrido[2,l-b][l,3]oxazepin-7-karboxylovou kyselinu;

   [4S-[4a(R*),7a,9ap]]oktahydro-4-[(2-merkapto-l-oxo-3-fenylpropyl)amino]-5-oxopyrrolo[2,l-b][l,3]oxazepin-7-karboxylovou kyselinu;

   [4S-[4a(R*),7a, 10aP]]oktahydro-4-[(2-merkapto-l-oxo-3-fenylpropyl)amino]-5-oxo[ 1,4]oxazino[3,4-b][l,3]oxazepin-7-karboxylovou kyselinu; a [4S-[4a(R*),7a, 10ap]]oktahydro-4-[(2-merkapto-l-oxo-3-fenylpropyl)amino]-5-oxo[ 1,4]oxazino[3,4-b][l,3]thiazepin-7-karboxylovou kyselinu.

   -71CZ 289488 B6
5. 5. Merkaptoalkanoylový derivát thiazepinu podle nároku 1, kterým je [4S-[4a(R*),7a,10aP]Joktahydro-4-[(2-merkapto-1 -oxo-3-feny lpropyl)amino]-5-oxo-7H-pyrrido[2,1 -b] [ 1,3]thiazepin-7-karboxylová kyselina vzorce a jeho farmaceuticky přijatelná sůl.
6. 6. Farmaceutický prostředek pro ošetřování kardiovaskulárních nemocí, jako je vysoký krevní tlak a selhání srdce po překrvení, vyznačující se tím, že obsahuje farmaceuticky vhodný nosič a alespoň jeden merkaptoalkanoylový nebo acylmerkaptoalkanoylový derivát oxazepinu, thiazinu a thiazepinu podle nároku 1 obecného vzorce I, kde jednotlivé symboly mají v nároku 1 uvedený význam, nebo jeho farmaceuticky přijatelnou sůl.
7. 7. Derivát oxazepinu, thiazinu a thiazepinu obecného vzorce III ( IIDf kde znamená

   X atom kyslíku nebo síry, η 1 nebo 2, m 0 nebol,

   Y skupinu CH₂ nebo atom kyslíku, za podmínky, že Y znamená atom kyslíku pouze v případě, kdy m znamená číslo 1,

   R₃ atom vodíku nebo alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, jakožto meziprodukt pro přípravu merkaptoalkanoylového a acylmerkaptoalkanoylového derivátu oxazepinu, thiazinu a thiazepinu podle nároku 1.
8. 8. Způsob přípravy merkaptoalkanoylového a acylmerkaptoalkanoylového derivátu oxazepinu, thiazinu a thiazepinu podle nároku 1 obecného vzorce I, kde jednotlivé symboly mají v nároku 1 uvedený význam, vyznačující se tím, že se

   -72CZ 289488 B6

   a) kopuluje sloučenina obecného vzorce II — OH (II), kde jednotlivé symboly mají v nároku 1 uvedený význam nebo jeho aktivovaná forma s aminem obecného vzorce III (III), kde jednotlivé symboly mají v nároku 1 uvedený význam, v přítomnosti kopulačního činidla a popřípadě

   b) odstraní se acylová skupina

   O

   Re - C a popřípadě se získaný ester karboxylové kyseliny, tedy v případě, že R3 znamená alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, převede na volnou kyselinu, tedy na sloučeninu, kde R₃ znamená atom vodíku.